TWI571634B

TWI571634B - 毒品檢測方法及系統

Info

Publication number: TWI571634B
Application number: TW103143702A
Authority: TW
Inventors: 陳建甫; 閻侑君; 胡一君; 陳守義; 張煥宗
Original assignee: 國立中興大學
Priority date: 2014-12-15
Filing date: 2014-12-15
Publication date: 2017-02-21
Also published as: TW201621317A

Description

毒品檢測方法及系統

本發明係關於一種毒品檢測方法及系統，尤指一種可攜式毒品檢測系統及其使用方法。

毒品，廣義上泛指可以對人體造成傷害的化學物質、毒物、毒劑，在日常生活口語中可以特指被人類當做嗜好品所濫用的功能性藥物。為了防止毒品影響社會大眾，毒品受各國法律高度管制；若非作為醫療用途，持有或製造運輸販賣毒品等行為會被判以重刑。

尿液檢驗是國內外毒品檢驗的主要方法，由於藥物會在體內代謝，在使用毒品三至四天後，可能呈陰性結果。毛髮檢體由於可如同錄影帶般，記錄下受檢者知用藥歷程，經數月甚至數年後仍可回溯檢驗，近年來已逐漸在國內興起，也常見於司法案件上。

口腔液體為毒品辨識及定量測試的替換基質，唾液能反應出近期毒品使用並與自由血清中毒品濃度有相對關係。相較於採血或尿液，使用唾液作為檢測樣品更具備便宜、快速、低傳染風險等優點，且非侵入式樣品採集可在監視下進行，避免採樣過程中發生樣品調換造假等問題。目前，串聯式質譜儀可在少量唾液樣品中執行多種毒品分析，並提供高正確性檢驗結果。然而，因其檢測過程複雜耗時、設備體積大、及動力需求等，進而限制此系統用於遠距檢測。此外，現有的可攜式唾液檢測產品檢測所需樣品量較多，且無法達到高數據重複性、簡單操作、相同唾液採樣量與高回復率、高靈敏度和高專一性等要素。

有鑑於此，目前亟需開發一種可攜式唾液檢測產品，以期解決上述現有產品問題進而有效利用。

本發明之主要目的係在提供一種毒品檢測方法，俾能藉由免疫專一性結合、呈色，將產生之顏色變化以一數值方式輸出。有別於傳統上之比色方法，本發明係能藉由紅、綠、藍三原色之間相互的比值，達到檢測濃度值定量分析的功效。

本發明之另一目的係在提供一種毒品檢測系統，尤指一種嶄新之試紙分析平台，免除複雜設備的使用並縮短數據分析及傳送所需時間，能在資源匱乏的環境下對樣品中毒品濃度進行高靈敏度的檢測。

為達成上述目的，本發明提供一種毒品檢測方法，包括下列步驟：(A)提供一檢測試紙，該檢測試紙包含一第一免疫單元；然後(B)施加一樣品於該檢測試紙上，該樣品包含一第二免疫單元，該第一免疫單元係與該第二免疫單元結合；(C)施加一呈色劑，該呈色劑係與該第一免疫單元或該第二免疫單元結合而產生一顏色變化；然後(D) 以一封閉工作平台偵測該檢測試紙，其中該封閉工作平台包括一光源、一偵測單元及一輸出單元，該光源照射該檢測試紙，該偵測單元偵測經該光源照射後之該檢測試紙之一顏色訊號，且該輸出單元將該顏色訊號以一數值方式輸出。

於本發明之毒品檢測方法中，「然後」一詞表示先後進行順序，換言之，在本發明中，步驟(A)之後可先進行步驟(B)亦可先進行步驟(C)，本技術領域中具有通常知識者可依實際需求而簡單調整。當完成步驟(B)和步驟(C)之後，再進行步驟(D)。

本發明另提供一種毒品檢測系統，包括：一檢測試紙，包含一第一免疫單元；一呈色劑，係與該第一免疫單元或一樣品中之一第二免疫單元結合而產生一顏色變化；以及一封閉工作平台，包括一光源、一偵測單元及一輸出單元，其中該光源照射該檢測試紙，該偵測單元偵測經該光源照射後之該檢測試紙之顏色訊號，且該輸出單元將該顏色訊號以一數值方式輸出。

在本發明之毒品檢測方法/系統中，檢測的毒品種類並未限制，可包括常見毒品，例如至少一種選自由：K他命(Ketamine)、四氫大麻酚(tetrahydrocannabinol)、鴉片(opium)、安非他命(amphetamine)、古柯鹼(cocaine)、及苯二氮泮(benzodiazepines)、嗎啡(morphine)、海洛英(heroin)、古柯鹼(cocaine)、大麻(HEMP)、搖頭丸(MDMA)、麥角乙二胺(LSD)、苯環利定(PCP)、甲酮(ketone)、狄芬諾西萊 (diphenoxylate)、潘他唑新(pentazocine)、西洛西賓(psilocybine)、液態快樂丸(GHB)、副甲氧基安非他命(PMA)、對--甲氧基甲基安非他命(para-methoxymethamphetamine)、西可巴比妥(secobarbital)、異戊巴比妥(amobarbital)、硝甲西泮(nimetazepam)、4-溴-2,5-二甲氧基苯基乙基胺(4-Bromo-2,5-dimethoxy henethylamine)、4-甲基甲基卡西酮(4-Methcathinone)、氟硝西泮(flunitrazepam)、三唑他(Halcion)、佐沛眠(zolpidem)、三氮二氮平(alprazolam)、二氮平(diazepam)、色胺類5、一氧化二氮(N₂O)、及氧化亞氮(NO)所組群組。一般而言，毒品係指具有成癮性、濫用性及對社會危害性之麻醉藥品與其製品及影響精神物質與其製品。

該第一免疫單元可為抗原或抗體，其附著在該檢測試紙上且專一性辨識該第二免疫單元並與該第二免疫單元結合。當該第一免疫單元為抗原時，該第二免疫單元為抗體；反之，當該第一免疫單元為抗體時，第二免疫單元為抗原。舉例說明：在該檢測試紙上附著一特定毒品抗體之情況下，若待測樣品中含有一對應該毒品抗體之毒品抗原，則其會與檢測試紙上的毒品抗體進行專一性鍵結。

該呈色劑可與該第一免疫單元或該第二免疫單元結合，換言之，當該第一免疫單元與該第二免疫單元專一性結合後，為了觀察到此專一性結合現象，施加一與該第一免疫單元或該第二免疫單元結合之呈色劑，即可以肉眼或儀器評估呈色結果。更佳地，該呈色劑可包含一帶有該第二免疫單元之酵素，如此一來，該酵素將與該樣品中之第二免疫單元競爭該第一免疫單元之結合位置。該呈色劑並無特別制，可使用本技術領域中常用之呈色劑，例如可使用辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase；HRP)與四甲基聯苯胺(3,3’,5,5’-Tetramethylbenzidine，TMB)，HRP水解TMB會產生穩定的藍色沉澱，利於顏色判讀。

由於毒品屬於小分子，較佳使用競爭型的免疫分析方法。例如：該第一免疫單元為毒品抗體，該第二免疫單元為毒品抗原，該毒品抗體附著在該檢測試紙上且專一性辨識該毒品抗原；接著，加入帶有HRP之毒品抗原，再加入樣品；其中，相較於該毒品抗原與該毒品抗體間之結合力，該帶有HRP之毒品抗原與該檢測試紙上之毒品抗體間之結合力較弱。在此情況下，當樣品中包含毒品抗原時，該毒品抗原會移除鍵結較弱的該帶有HRP之毒品抗原，並與該檢測試紙上之毒品抗體結合，因此，呈色結果較不明顯；反之，若樣品中不包含毒品抗原，呈色結果較為顯著。

在本發明中，創建一封閉的工作平台，該工作平台用於偵測該檢測試紙。其中該封閉工作平台包括一光源、一偵測單元及一輸出單元。該光源照射該檢測試紙，例如，該光源為發光二極體之燈光光源，該光源產生均勻之可見光光源或是紫外光光源(若使用紫外光燈源，則需要在接收器前多設置濾光片)，使得於每次檢測前，利用可見光顏色標準比色條或是螢光標準亮度試紙進行標準校正，以期達到試驗後試紙或相關比色或螢光生醫檢測元件進行自動顏色或是強度比對判讀，以達到精確客觀的檢驗結果。之後藉由該偵測單元，該偵測單元可為含有影像擷取單元之裝置，例如：掃描器、相機、平板或智慧手機，然後將經該光源照射後之該檢測試紙產生之顏色訊號，藉由該輸出單元將該顏色訊號以一數值方式輸出，在本發明之一實施態樣中，該輸出單元可為智慧型手機。另外，在本發明中，為了免除複雜設備之使用以及縮短數據分析及傳送所需要的效率，更可將輸出資訊透過雲端運算進行資料儲存以及讀取，或是進行離線計算，減少現場所需設備。

因此，為了避免使用複雜的設備和減少所需的資源，微流體試紙及雲端被用於實驗結果的產生、數據的儲存以及讀取。微流體試紙被用於生醫感測以及資源匱乏環境中的分析，因其具有成本效益高、廢棄物容易處理、簡單製造、需要樣品量少、潤濕性的優點(這有助於減少外部的流量控制系統)，以及易於儲存及運送。此外，本發明所揭示的微流體試紙之偵測樣品量僅需微量(μL)，且傳統上之比色真測手法需要數小時以上的反應時間，然而，本發明所揭示的檢測試紙總需時間為6分鐘內即可完成。另外，本發明所揭示的檢測方法可以同時檢測多種從樣品中的不同分析物，並從掃描器或智慧型手機中擷取影像並獲得定性或是定量的結果。在本發明中，智慧型手機被使用基於其可攜帶性，重量輕，及時圖像記錄和數據傳輸功能，適合於資源受限的環境使用。

據此，本發明之毒品檢測方法/系統利用試紙分析平台並結合可攜式、低成本的顏色判讀器，可在郊外進行唾液採樣，並進行高效篩選與監控目標對象是否吸食毒品。本發明之系統可達到高數據重複性、簡單操作、低唾液採樣量、高靈敏度和高專一性等要素，提供一耐用且快速的即時毒品檢測平台，可達到路邊、臨檢處、或警局進行毒品吸食快速檢測之目的。

1‧‧‧檢測試紙

11‧‧‧檢測格

2‧‧‧第一免疫單元

3,3’‧‧‧第二免疫單元

4‧‧‧結合體

41‧‧‧HRP

5‧‧‧TMB

6‧‧‧封閉工作平台

61‧‧‧光源

62‧‧‧訊號處理區

7‧‧‧雲端處理器

8‧‧‧塑膠試片

81‧‧‧夾槽口

圖1A係本發明一較佳實施例之毒品檢測方法/系統示意圖。

圖1B係本發明一較佳實施例之檢測試紙示意圖。

圖2A-2B係本發明一較佳實施例之偵測極限測試結果圖。

圖3A-3B係本發明一較佳實施例之RGB比值分析測試結果圖。

圖4係本發明一較佳實施例之溫度測試結果圖。

圖5係本發明一較佳實施例之清洗時間測試結果圖。

圖6係本發明一較佳實施例之K他命抗體濃度測試結果圖。

圖7係本發明一較佳實施例之K他命-HRP濃度測試結果圖。

為讓本發明之上述和其他目的、特徵、和優點能更明顯易懂，下文特舉出實施例，並配合所附圖式，作詳細說明如下。

下文中，將以實施例並配合圖式詳細說明本發明。值得注意的是，這些實施例提供許多可行之創作概念並可實施於各種特定情況。然而，在此所討論之這些特定實施例僅用於舉例說明本創作之製造及使用方法，但非用於限定本發明之範圍。因此，本發明說明書之描述與圖式亦僅僅作為說明之用而非用來限定本發明。應可瞭解，本發明的實施例可利用各種其他組合和環境，並且在不脫離本發明之精神和範圍內，亦可作任意之更動與潤飾。

實施例1：毒品檢測方法/系統

請參照圖1，其為使用本發明之毒品檢測系統進行毒品檢測方法之流程示意圖。首先，將一檢測試紙1放置於加熱器上以120度C加熱10分鐘後，將加熱器溫度維持在40度C進行接續步驟，其中該檢測試紙1與加熱器間插置有一抗沾黏膜；施加一第一免疫單元2，靜置1分鐘待其乾燥；施加牛血清蛋白(Bovine serum albumin，BSA)進行阻塞(blocking)，靜置1分鐘待其乾燥；施加樣品與呈色劑，其中該樣品包含一第二免疫單元3，該第二免疫單元3係與該第一免疫單元2結合，該呈色劑包含：該第二免疫單元3’與辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase，HRP)41之結合體4、與四甲基聯苯胺(3,3’,5,5’-Tetramethylbenzidine，TMB)5，於此步驟中，先施加該第二免疫單元3’與HRP 41之結合體4，靜置1分鐘待其乾燥，再施加3μL樣品，靜置1分鐘待其乾燥，經磷酸緩衝鹽溶液(phosphate buffer saline，PBS)於超音波震盪機內清洗15秒後，靜置於加熱器上1分鐘待其乾燥，再施加TMB 5，立即有顏色變化而達反應終點，完成免疫反應。

該檢測試紙1請見圖1B，其中包含複數個檢測格11，並以英文字母作為編號利於欄位辨識，該檢測試紙1兩側印有紅色(R)、綠色(G)、藍色(B)，作為標準顏色，拍照後可利於校正顏色、光線等環境差異，並且，可再額外印出檢量線的閾值(cut-off value)顏色，可藉由顏色深淺比對直接做初步判讀。此外，可使用一塑膠試片8固定該檢測試紙1，該塑膠試片8具有夾槽，可夾住該檢測試紙1兩側之標準顏色處，夾槽口標示為81，如此一來，該檢測試紙1不會在檢測過程中被汙染或是因濕潤而變形。

而後，將該檢測試紙1置入一封閉工作平台6中，該封閉工作平台6內具有一光源61、一訊號處理區62，該訊號處理區62包含一偵測單元及一輸出單元，該光源61係形成一均勻光場，提高檢測準確度，該偵測單元可為一智慧型手機，蒐集經光源照射後之該檢測試紙1之顏色訊號，並將該顏色訊號以數值形式儲存，另外，前述之訊號處理區62更可包含一影像擷取單元、一演算法計算單元、一系統校正裝置以及一訊號傳輸與顯示裝置，例如：該顏色訊號經過演算法計算並經由該系統校正裝置校正後，並藉由一輸出單元，例如：智慧型手機或平板電腦，之後，將處理過後之顏色訊號輸出，例如：上傳至雲端處理器7儲存。

於此，該檢測試紙1沒有特別限制，可為親水性層析試紙，例如一纖維薄膜，像是纖維素、聚醯胺膜、聚亞醯胺、或聚酯薄膜，較佳可為纖維素薄膜；而每一檢測格外圍較佳以疏水性蠟圍繞，避免檢測格中液體溢流。該抗沾黏膜可為鐵氟龍膜、PEG膜、臘膜等疏水性膜，其係用以避免樣品、抗原、抗體或呈色劑沾黏到加熱器上。

於此，該第一免疫單元2使用K他命抗體，取8.89μg/mL稀釋100倍，即加入88.9μg/mL。該第二免疫單元3為樣品中之K他命抗原，其係與檢測試紙1上之K他命抗體專一性結合。該第二免疫單元3’與辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase，HRP)41之結合體4使用K他命-HRP，以30倍稀釋後使用0.033μg/μL。

於此，本發明之毒品檢測方法中使用加熱器和超音波兩種設備進行免疫反應，然而亦可使用兼具加熱和清洗功能的設備進行快速免疫反應。

因人眼判讀顏色容易有誤差，且結果也容易因人而異。本發明將以建構一封閉工作平臺6，平臺內將提供穩定之光源61，其中，該光源係為發光二極體(LED)、或紫外燈。在本發明中，藉由供應白光以及紫外發光二極體之作為光源，使產生均勻之可見光光源或是紫外光光源，之後，藉由訊號處理區62中之電腦視覺方法在於每次檢測前，利用可見光顏色標準比色條或是螢光標準亮度試紙進行標準校正，以期達到試驗後試紙或相關比色或螢光生醫檢測元件進行自動顏色或是強度比對判讀，以達到精確客觀的檢驗結果。

另一方面，本發明所搭配檢測軟體將可與較低成本的視覺軟、硬體系統來整合使用，例如：本發明之影像擷取單元、演算法計算單元、系統校正裝置、訊號傳輸與顯示裝置、以及輸出單元，其皆可包含該軟體或該硬體，更具體而言，該軟體之功能包含：取樣區域以及校正區能夠手動/自動定位、對於標準片進行可見光顏色以及螢光強度校正功能；試紙取樣區域顏色自動比對判讀、輸出紅色(R)、綠色(G)、藍色(B)、藍色比紅色(B/R)、紅色比綠色(R/G)以及綠色比藍色(G/B)等數值，並具備將影像轉成灰階圖片進行灰階值之分析的功能；螢光經過濾片組後可以獲得相對螢光特定波長訊號；檢測原始資料檔案可儲存於記憶體中或是雲端進行重覆存取與分析；可將檢測結果報告以HTML或EXCEL格式輸出；以文字檔輸出檢測結果存檔；無線傳輸功能之可擴充性。

關於硬體部分，舉例而言，如攝影機等級不足將無提供CCD或CMOS晶片之顏色校準功能、光溫白平衡補償調整，此些將限縮電腦視覺顏色量測精準度。但如試紙顏色比對所需之量測精準度並不需要那麼高的話，則攝影機無以上調整功能者或許將還不致影響電腦視覺之顏色判別結果；如Webcam USB攝影機等級不足時，穩定度不夠造成影像顏色漂移致使電腦顏色判別失准，或規格與最後實際系統整合發生不相容時。此時則需更換他牌更適合之攝影機。在打光問題方面，當Webcam USB攝影機本身所提供之光源不適合此專案所需之影像處理時，基於分析的樣品所需將利用軟體來校正其RGB值或是灰階值，最後能夠讓不同樣品測試誤差<5%；白光LED以及紫外LED電源供應必須為內建式，並提供穩定以及低耗電性等要求。

實施例2：偵測極限測試

取兩組樣品，第一組為K他命+PBS(使用緩衝試劑調配，即模擬有使用唾液採集器的條件)，第二組為K他命+人口唾液(先以0.22μm孔徑的篩網過濾唾液後再加入K他命)，K他命濃度分別有10²、10¹、10⁰、10^-1、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5μg/mL，並有不加K他命之控制組。利用實施例1所述之檢測系統進行毒品檢測，第一組和第二組的結果分別如圖2A、2B所示在K他命濃度於10^-5至10²μg/mL之間對應之紅色/藍色比值(R/B)。於圖2A中，可算出K他命濃度於10^-5至10^-1μg/mL之間的R²值(判定係數，Coefficient of Determination)為0.9928，偵測極限為10^-5μg/mL。於圖2B中，可算出K他命濃度於10^-5至10^-1μg/mL之間的R²值為0.9948，偵測極限為10^-4μg/mL。因此，目前衛福部規定標準為：偵測極限需達10^-1μg/mL，而本發明之偵測極限可達10^-4μg/mL，為衛福部規定標準之1/1000。

實施例3：RGB比值分析測試

取兩組樣品，第一組為K他命+PBS(使用緩衝試劑調配，即模擬有使用唾液採集器的條件)，第二組為K他命+人口唾液(先以0.22μm孔徑的篩網過濾唾液後再加入K他命)，K他命濃度分別有10²、10¹、10⁰、10^-1、10^-2、10^-3、 10^-4、10^-5μg/mL，並有不加K他命之控制組。利用實施例1所述之檢測系統進行毒品檢測，第一組和第二組的結果分別如圖3A、3B所示在K他命濃度於10^-5至10²μg/mL之間對應之紅色/綠色(R/G)、紅色/藍色(R/B)、及綠色/藍色(G/B)比值。於圖3A及3B可看出：G/B比值容易飽和(第一組於10^-3μg/mL即達飽和，第二組於10^-1μg/mL即達飽和)，R/G比值結果與K他命濃度間呈低線性關係，而R/B比值結果與K他命濃度間呈高線性關係，因此，對於K他命毒品檢測而言，R/B比值為較佳之分析依據。然而，其他毒品種類不限於此。

實施例4：溫度測試

取K他命+人口唾液(先以0.22μm孔徑的篩網過濾唾液後再加入K他命)作為樣品，K他命濃度分別有10²、10¹、10⁰、10^-1、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5μg/mL，並有不加K他命之控制組。利用實施例1所述之檢測系統進行毒品檢測，除了將加熱器溫度分別維持在30、40、及50度C進行免疫反應，實驗結果如圖4所示在K他命濃度於10^-5至10²μg/mL之間對應之紅色/藍色比值(R/B)。於圖4可看出：當免疫反應於30度C下進行時，反應溫度不足，K他命抗原和K他命抗體結合較不穩定，呈色不明顯；於40度C下進行免疫反應時，K他命抗原和K他命抗體結合穩固，可清楚觀察到明顯的顏色變化；另於50度C下進行免疫反應時，因溫度過高而可能使已結合的K他命抗原和K他命抗體解離變性或被破壞，使部分顏色變化已無順序性，即未與K 他命濃度呈正比。因此，對於K他命毒品檢測而言，較佳於40度C進行免疫反應，分析結果較為精準。然而，其他毒品種類不限於此。

實施例5：清洗時間測試

取K他命+人口唾液(先以0.22μm的篩網過濾唾液後再加入K他命)作為樣品，K他命濃度分別有10²、10¹、10⁰、10^-1、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5μg/mL，並有不加K他命之控制組。利用實施例1所述之檢測系統進行毒品檢測，除了將超音波清洗時間分別設定為5秒、10秒、15秒、20秒、及25秒，實驗結果如圖5所示在K他命濃度於10^-5至10²μg/mL之間對應之紅色/藍色比值(R/B)。由圖5可看出：超音波清洗時間為5秒鐘時，無法徹底清除未結合的K他命抗原和K他命抗體，導致加入TMB後藍色呈色現象不明顯；超音波清洗時間為10秒鐘時，因清洗時間不足，無法有效清除殘留物，干擾呈色訊號；又超音波清洗時間為20及25秒時，因清洗時間過長，一併清除已附著的K他命抗原和K他命抗體，使呈色訊號偏淡且與K他命濃度間未呈線性關係。因此，對於K他命毒品檢測而言，較佳超音波清洗時間為15秒，分析結果較為精準。然而，其他毒品種類不限於此。

實施例6：K他命抗體濃度測試

取K他命+人口唾液(先以0.22μm孔徑的篩網過濾唾液後再加入K他命)作為樣品，K他命濃度分別有10²、10¹、10⁰、10^-1、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5μg/mL，並有不加K 他命之控制組。利用實施例1所述之檢測系統進行毒品檢測，除了分別使用濃度1/10倍、1/100倍、1/200倍、1/400倍、及1/600倍之K他命抗體(濃度為8.89μg/mL)，實驗結果如圖6所示在K他命濃度於10^-5至10²μg/mL之間對應之紅色/藍色比值(R/B)。由圖6可看出：抗體濃度過高(1/10倍)或過低(1/200倍、1/400倍、及1/600倍)時，顏色呈色無法有效區別，與K他命濃度間未呈線性關係，其中在抗體濃度1/100倍(即加入88.9μg/mL)時與K他命-HRP(30倍稀釋，濃度為0.033μg/μL)搭配能夠有最明顯的顏色變化，與K他命濃度間呈線性關係，分析結果較為精準。然而，本發明不限於此，本技術領域中具有通常知識者可依照實際條件而調整所需抗體濃度。

實施例7：K他命-HRP濃度測試

取K他命+人口唾液(先以0.22μm孔徑的篩網過濾唾液後再加入K他命)作為樣品，K他命濃度分別有10²、10¹、10⁰、10^-1、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5μg/mL，並有不加K他命之控制組。利用實施例1所述之檢測系統進行毒品檢測，除了分別使用濃度1/10倍、1/30倍、1/60倍、1/100倍、及1/300倍之K他命-HRP(濃度為0.033μg/μL)，實驗結果如圖7所示在K他命濃度於10^-5至10²μg/mL之間對應之紅色/藍色比值(R/B)。由圖7可看出：不同濃度的K他命-HRP會影響與K他命競爭結合位置的效果，若使用濃度過高的K他命-HRP(1/10倍)會造成競爭過度，使各K他命濃度下之顏色呈色皆相同，而使用濃度1/60倍之K他命-HRP時，於 K他命濃度10^-3μg/mL時即達到顏色飽和，無鑑別力；使用濃度1/100倍及1/300倍之K他命-HRP時，因濃度過低而無法進行有效的競爭；其中在K他命-HRP濃度為1/30倍(即加入0.033μg/μL濃度)時與K他命(88.9μg/mL)搭配能夠有最明顯的顏色變化，與K他命濃度間呈線性關係，分析結果較為精準。然而，本發明不限於此，本技術領域中具有通常知識者可依照實際條件而調整所需K他命-HRP濃度。

上述實施例僅係為了方便說明而舉例而已，本發明所主張之權利範圍自應以申請專利範圍所述為準，而非僅限於上述實施例。