TWI487710B - 調控ｄｎａ複製之核酸分子 - Google Patents

Description

調控DNA複製之核酸分子

本發明係關於一種調控DNA複製之核酸分子，其可結合至病毒DNA複製起始點的序列，調控DNA複製。

DNA複製是任何生物的最重要機制之一，也是生物因而能繁殖後代的關鍵因素。此機制將DNA複製成為相同的兩個產物。在任何細胞或病毒的基因體，DNA複製起始於一個個的複製起始點，在此起始點，DNA複製酶(DNA polymerase)會在其他蛋白的幫忙下，複製DNA。

EB病毒為皰疹病毒家族之一。世界各地包括台灣地區在內此病毒的感染率很高。EB病毒可能引起人類感染性單核白血球增多症，同時也與許多人類重要的腫瘤，如鼻咽癌，鼻咽部之細胞淋巴瘤，以及器官移植病人常發生的B細胞淋巴瘤，還有小兒噬血症候群等有密切的關係。

台灣為EB病毒好發地區，尤其年紀較小的孩童較常感染EB病毒；EB病毒會侵入身體導致扁桃腺炎，初期會有喉嚨痛、發燒等症狀，有時還會使血液中淋巴球增加、淋巴腺腫、肝脾腫大、肝炎、膽囊炎，嚴重時甚至會出現腦炎、脊髓炎；而若EB病毒影響到腦部，少數會造成患者出現視幻覺，看的東西會扭曲變形，稱為「愛麗絲夢遊仙境症候群」。前述EB病毒的傳染性強，會經由空氣與口沫傳染，必須早期發現早期治療，才不致傳染給他人。

EB病毒的基因組大小為165kb的雙股DNA。EB病毒主要會攻擊B淋巴球細胞。在B淋巴球細胞株中，只有少量的病毒基因會持續表現但是並不會生產病毒顆粒(virus particles)，這種感染模式稱為潛伏性感染。潛伏感染的EB病毒具有完整病毒基因組約170 Kbp。潛伏感染病毒複製時會仿照宿主細胞的複製子(replicons)進行複製，EB病毒的基因組或是僅帶有EB病毒核抗原-1(Epstein-Barr virus nuclear antigen 1，EBNA1)序列與oriP 序列的質體會在宿主細胞分裂的S期與宿主的基因體一起進行複製。被EB病毒持續性感染的細胞中有少部份的細胞會自發性從持續性感染轉變成急性感染。

EB病毒複製之潛伏階段需要EB病毒核抗原-1(EBNA1)維持病毒染色體。在潛伏狀態時，EB病毒核抗原-1(EBNA1)被認為是EB病毒複製、保留(retention)與切割所需之唯一EB病毒編碼蛋白質，在潛伏感染與溶胞感染(lytic infection)時，EB病毒核抗原-1(EBNA1)蛋白質會連接EB病毒染色體之複製起始點oriP 序列，幫忙進行DNA的複製。

oriP 序列由二個可分離的序列因子(element)-雙向對稱因子(dyad symmetry element,DS element)以及密切重複因子(familiar repeats element,FR element)所組成，皆含有體內及活體外之EB病毒核抗原-1(EBNA1)連接位。二因子間由960鹼基對隔開。FR因子由一30-bp重複的21個不完美複本所組成，且含有20個EB病毒核抗原-1(EBNA1)連接位，而DS因子含有4個EB病毒核抗原-1(EBNA1)連接位。DS因子顯示在EB病毒核抗原-1(EBNA1)存在下有效啟動DNA合成(Hsiehet al .,1993)。

桿狀病毒為無脊椎動物病毒，主要的寄主為鱗翅目昆蟲。目前研究最多的桿狀病毒為加州苜蓿夜蛾核多角體病毒(Ac MNPV)屬於桿狀病毒第一型。Ac MNPV可以感染多種昆蟲細胞，但無法感染家蠶細胞。可感染家蠶細胞的病毒為Bm NPV，此病毒可造成家蠶很大的病害，造成農業的損失。此病毒與Ac MNPV的基因組具有高度相似性。桿狀病毒表現系統廣泛的用來表現外源蛋白，該系統常使用的啟動子為核多角體啟動子(polh )。Ac MNPV的晚期表現因子(lef )會增強polh 啟動子的表現。先前的研究發現將Ac MNPV的p143 置換成Bm NPV的p143 可以使Ac MNPV感染家蠶(Croizier et al.,1994)。顯示該基因在病毒感染的專一性扮演重要角色。同時，p143 也被發現含有一個DNA複製起始點(Wu et al.,1996)。

對於調節基因表現而言，RNA干擾(RNAi)為一種使用雙股RNA(dsRNA)來沉默基因表現的過程，其包含有miRNA、siRNA與dsRNA等。miRNAs為長約21~23核苷酸的調節RNA，且為非編碼RNA，並在不同的基因轉錄後表現上有相當大的影響。RNAi由兩步驟處理途徑(two-step processing pathways)生成，該途徑是由二個主要的核醣核酸酶III核酸內切酶(RNase III endonucleases)作用：Drosha與Dicer。Drosha是多蛋白質複合體的一部份，於細胞核內使初始miRNA形成約具60至70個核苷酸之彎折先驅物(stem-loop precursors)(pre-miRNA)(Leeet al .,2003)。在細胞質中，該pre-miRNA被Dicer切割為具22個核苷酸之成熟miRNA。該成熟miRNA作為單股RNAs整合為核醣核蛋白複合體，該核醣核蛋白複合體已知為RNA誘導沈默複合物。前述複合物藉由鹼基配對使miRNA導至標靶mRNA，使得該標靶mRNA抑制轉譯或降解(Bartel,2004;Bartel and Chen,2004)。

因此，若能證實有確切的miRNA可向下調節EB病毒之複製，將可使載體表現系統中的這些miRNAs數量上升以拮抗EB病毒之複製，可望阻止EB病毒之感染甚至是潛伏感染。另外，進一步研究桿狀病毒感染的專一性是否是受到寄主miRNA的調控。這個發明將來也可以用來防止家蠶桿狀病毒(Bm NPV)感染家蠶，提高蠶絲業的產量。

本發明為提出一種調控DNA複製之核酸分子，其中該核酸分子係被送入一細胞內且與該對應的ori 複製起始點序列結合，包括調控人類皰疹病毒及昆蟲桿狀病毒在質體上之DNA複製。為調控前述人類皰疹病毒及桿狀病毒之感染甚至是潛伏感染，本發明之目的係提供一種抑制人類皰疹病毒(Epstein-Barr virus,EBV)複製與桿狀病毒複製之核酸分子，其中該核酸分子係被送入一感染EB病毒之細胞內且與該EB病毒的oriP 序列結合。另外在昆蟲細胞中的核酸分子係被送入桿狀病毒感染之細胞內亦會抑制桿狀病毒基因之複製。

在本發明一實施例中，該核酸分子係結合至該oriP 序列之一DS因子或一FR因子，其中該DS因子或FR因子包含複數個EB病毒核抗原-1(Epstein-Barr virus nuclear antigen 1，EBNA1)連接位，進一步地，該核酸分子結合至該複數個EB病毒核抗原-1(EBNA1)連接位，以減弱EB病毒核抗原-1(EBNA1)與oriP 序列之結合程度。在本發明另一實施例中，該核酸分子係為一miRNA或一siRNA，且該miRNA係選自於由hsa-miR-155(SEQ ID NO：1)、hsa-miR-216b(SEQ ID NO：7)、hsa-miR-628-3p(SEQ ID NO：4)及hsa-miR-3145-3p(SEQ ID NO：3)所組成之群組。

本發明又一目的係提供一種RNA分子用於抑制人類皰疹病毒複製之用途，其中該RNA分子係結合至該EB病毒的oriP 序列，其中該RNA分子係結合至該oriP 序列之一DS因子或FR因子。

在本發明另一實施例中，該核酸分子係結合至桿狀病毒的p143 複製起始點，以減弱調控病毒複製的因子與p143 複製起始點序列之結合程度。在本發明之一實施例中，該核酸分子係為一miRNA或一siRNA，且該miRNA係選自於由bmo-miR-305(SEQ ID NO：11)與bmo-miR-206(SEQ ID NO：12)所組成之群組。

EB病毒與桿狀病毒之複製可經由本發明核酸分子所抑制，亦可利用該些miRNA設計siRNA以調節EB病毒與桿狀病毒之複製，因此，本發明之RNA分子具有專一性干擾潛伏EB病毒與桿狀病毒複製調節的用途，阻止EB病毒之感染甚至是潛伏感染。故miRNA或siRNA可作為一種治療EB病毒感染或潛伏感染之有效物質，且在桿狀病毒中可以增加桿狀病毒表現系統外源蛋白的表現能力。

以下將配合圖式進一步說明本發明的實施方式，下述所列舉的實施例係用以闡明本發明，並非用以限定本發明之範圍，任何熟習此技藝者，在不脫離本發明之精神和範圍內，當可做些許更動與潤飾，因此本發明之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。

【參考文獻】

1.Hsieh,D. J.,Camiolo,S. M. and Yates,J. L.(1993). Constitutive binding of EBNA1 protein to the Epstein-Barr virus replication origin,oriP,with distortion of DNA structure during latent infection.EMBO J . 15,4933-44.

2.Croizier,G.,Croizier,L.,Argaud,O.,and Poudevigne,D.(1994). Extension of Autographa californica nuclear polyhedrosis virus host range by interspecific replacement of a short DNA sequence in the p143 helicase gene.Proc Natl Acad Sci U S A. 91 ,48-52.

3.Wu,Y. and Carstens,E. B.(1996). Initiation of baculovirus DNA replication: early promoter regions can function as infection-dependent replicating sequences in a plasmid-based replication assay.J Virol . 70,6967-6972.

4.Lee,Y.,Ahn,C.,Han,J.,Choi,H.,Kim,J.,Yim,J.,Lee,J.,Provost,P.,Radmark,O.,Kim,S.(2003). The nuclear RNase III Drosha initiates microRNA processing.Nature 525,415-419.

5.Bartel,D. P.(2004). MicroRNAs: genomics,biogenesis,mechanism,and function.Cell 116,281-297.

6.Bartel,D. P. and Chen,C. Z.(2004). Micromanagers of gene expression: the potentially widespread influence of metazoan microRNAs.Nature Reviews Genetics 5,396-400.

7.Takada,K.,Horinouchi,K.,Ono,Y.,Aya,T.,Osato,T.,Takahashi,M. and Hayasaka. S.(1991). An Epstein-Barr virus-producer line Akata: establishment of the cell line and analysis of viral DNA.Virus Genes . 1991 5,147-56.

8.Pearson M,Bjornson R,Pearson G,Rohrmann G.(1992). TheAutographa californica baculovirus genome: evidence for multiple replication origins.Science . 257:1382-84.

如於本文中所使用且除非其它方面有指出，否則所採用的名稱“一”意謂著“一種”、“至少一種”或“一或多種”。除非其它方面由上下文所需求，否則於本文中所使用的單一名稱應該包括複數，及複數名稱應該包括單一。

在某些具體實例中，將miRNA或siRNA送入細胞內，該細胞可為經分離的細胞(例如，在細胞培養中)或為與想要抑制標靶基因的表現性之患者相關的細胞。亦可在體外治療方法中使用該細胞，其中該細胞採自患者。

如於本文中所使用，措辭“減弱表現性”(參照至基因)意謂著給予或表現出一RNA分子(例如，siRNA)的量，來減低oriP 依賴複製。如於本文中所使用，名稱“調控”、“抑制”、“沉默”及“減弱”指為EBNA1的表現性具有可偵測的減低(如與在缺乏本發明之RNA分子下，該oriP 依賴複製的表現性比較)。

本發明實施例中，實施例1取得可能調控EB病毒之複製之miRNA，特別是取得能調控oriP -依賴複製的miRNA，並將所取得之數種miRNA分別轉染進人類胚胎腎臟細胞與EB病毒持續性感染之細胞(細胞係依akata,Takadaet al .,1991所製造)，再以量化PCR觀察EB病毒核抗原-1(EBNA1)之複製情形；實施例2把實施例1所取得的數種miRNA進行相同細胞轉染，並做螢光酶活性分析，若螢光酶活性降低，即oriP -依賴複製被調控，也就是EB病毒之複製被抑制；在實施例3中，利用凝膠電泳位移分析研究在實施例1取得之數種miRNA和oriP 序列之間的結合能力，利用這些結合關係，可以就這些miRNA作延伸，例如延伸設計siRNA作為與miRNA相同用於具專一性干擾潛伏EB病毒之複製調節，且於實施例4證實這些miRNA具有抑制EB病毒複製的效果，並於實施例5提出另一miRNA並證實其具有抑制EB病毒複製的效果。另外，在桿狀病毒感染的細胞所產生的miRNA抑制病毒複製的實施例則詳述於實例6。

關於本發明之實施例1~6，係詳述如下：

實施例1： 可能抑制oriP -依賴複製之miRNA取得

利用miRanda algorithm軟體分析，習知計算miRNA target，關於分數的計算(Score)方式如下：每個鹼基配對(base-pairing)會得到一個特定分數A：U=5；G：C=5；G：U=2；Gap opening：-9.0；Gap extension-4.0；All other base pairs(mismatches)=-3，另外每一個鹼基配對位置(Position)s(i)會乘上一個權重值(Weight)w(i)，位置2-8屬於seed區域，權重值較高。s(i)為1的w(i)為1.0；s(i)為2-8的w(i)為4.0；s(i)為9-21的w(i)為1.0；最後將所有位置的數值加總，就是miRNA target的分數(Score)，Score=SUM(over i)[w(i)s(i)]。預測hsa-miR-3117(product ID PM10827，Ambion Inc)、 hsa-miR-155、hsa-miR-3145、hsa-miR-628、hsa-miR-216為含有oriP 序列之DS或FR因子的目標位點之細胞miRNAs，如第一A圖所示，所預測的miRNA序列表示於第一B圖。

以量化PCR評估miRNA對oriP -依賴複製之效果

為探討該些細胞在oriP -依賴複製之效果，合成上述之miRNA，並將這些miRNA分別以含有oriP 序列且表現EB病毒核抗原-1(EBNA1)之一質體(pREP4，質體圖譜如第二A圖所示，購於Invitrogen)共同轉染進人類胚胎腎臟細胞(HEK293)。

收集轉染後72小時之細胞並萃取總細胞DNA，利用量化PCR測量被轉染細胞中含有oriP 序列之質體pREP4的量，因質體pREP4表現EB病毒核抗原-1(EBNA1)，故質體pREP4的量亦代表EBNA1的量。結果如第二B圖所示，圖中顯示在轉染實施例1的數種miRNAs的細胞比轉染控制組miRNA(控制組的轉染條件與其他的miRNA相同，但是該miRNA不會對質體與細胞中的任何基因產生影響)細胞中含有oriP 序列之質體pREP4的量顯著較低，係為這些miRNA對oriP -依賴複製有負向調節的作用。包含oriP 質體之拷貝數(copy number)在一些miRNA存在時下降。這些對oriP -依賴複製有負向調節的作用之miRNA包括hsa-miR-155(SEQ ID NO：1)、hsa-miR-216b(SEQ ID NO：7)、hsa-miR-628-3p(SEQ ID NO：4)與hsa-miR-3145-3p(SEQ ID NO：3)，然而hsa-miR-3117-5p(SEQ ID NO：8)及hsa-miR-3117-3p(SEQ ID NO：9)並未有對oriP 複製的顯著影響。

實施例2： 以螢光酶活性分析評估miRNA對oriP -依賴複製之效果

另外，將人類胚胎腎臟細胞(HEK293)轉染由實施例1分析而得的6種miRNA(hsa-miR-155(SEQ ID NO：1)、hsa-miR-216b(SEQ ID NO：7)、hsa-miR-628-3p(SEQ ID NO：4)與hsa-miR-3145-3p(SEQ ID NO：3)，以及hsa-miR-3117-5p(SEQ ID NO：8)與hsa-miR-3117-3p(SEQ ID NO：9))及pREP4-luc，其中在pREP4質體中插入螢光酶基因，並且受勞斯肉瘤病毒(Rous sarcoma virus，RSV)啟動子之控制。

請參考第三圖，該圖係為細胞轉染特定miRNAs與pREP4-luc之螢光酶活性分析。係於細胞轉染後72小時作螢光酶活性分析之結果。由螢光酶活性分析數據顯示，轉染抑制oriP -依賴複製之miRNA的細胞之螢光酶活性降低，而螢光酶活性的降低係為抑制oriP -依賴複製之結果，故轉染和oriP 無關的miRNA對結果沒有影響。

實施例3： miRNA抑制oriP -依賴複製之途徑

為了解miRNA如何抑制oriP -依賴複製，利用凝膠電泳位移分析(gel mobility shift assay)研究在miRNA和oriP 序列之間的結合能力。因為hsa-miR155被預測擁有oriP 序列之DS因 子與FR因子連結位點，這個實驗分析這些特定miRNA的功能。DS因子與FR因子雙股DNA末端標定上DIG-11-dUTP。凝膠電泳位移分析的結果顯示純化的EB病毒核抗原-1(EBNA1)於活體外可結合上DS因子或FR因子，可於第四A圖與第四B圖之第2道的箭頭處條帶位移看出(紅箭頭)。在第四A圖及第四B圖之第3道的實驗數據亦顯示miR155可拮抗EBNA1與DS因子及FR因子之鍵結，因為位移的條帶(紅箭頭)濃度大量減少。顯示miR155(SEQ ID NO：1)與DS及FR的oriP 核酸序列可直接結合。

實施例4： 以定量PCR分析EB病毒持續性感染細胞株(Akata)評估miRNA對oriP -依賴複製之效果

將EB病毒持續性感染的細胞株(Akata)轉染由實施例1分析而得的miRNA(hsa-miR-155，SEQ ID NO：1)。收集轉染後72小時之細胞並萃取總細胞DNA，利用量化PCR測量EB持續感染的細胞(Akata)中含有DS序列片段的基因複製量，第五圖所示，圖中顯示在轉染hsa-miR-155的EB持續性感染細胞比轉染控制組miRNA的細胞中含有DS序列片段的量顯著較低。顯示該hsa-miR-155(SEQ ID NO：1)亦會影響EB病毒持續性感染細胞的病毒拷貝數。

實施例5： 細胞miRNA hsa-miR-651也可抑制複製因子(EBNA-1)並間接調控oriP 之複製

經由電腦分析，預測hsa-miR-651(SEQ ID NO：10)含有調控oriP 複製之因子(EBNA-1)的目標位點之細胞miRNAs，如第六圖所示。

為探討hsa-miR-651(SEQ ID NO：10)在影響EBNA-1之效果，合成上述該miRNA，並分別以含有表現EB病毒核抗原-1(EBNA1)之一質體(pREP4，質體圖譜如第二A圖所示，購於Invitrogen)轉染進人類胚胎腎臟細胞(HEK293)。收集轉染後72小時之細胞並萃取總蛋白質，利用蛋白質電泳分析被轉染細胞中含有EBNA-1蛋白質的量，結果如第七圖所示，圖中顯示在轉染hsa-miR-651(SEQ ID NO：10)的細胞比轉染控制組miRNA細胞中含有EBNA-1的蛋白質表現量顯著較低，係為hsa-miR-651(SEQ ID NO：10)對EBNA-1有負向調節的作用。

實施例6： 取得可抑制桿狀病毒p143 複製之miRNA

經由電腦分析，預測bmo-miR-305(SEQ ID NO：11)、bmo-miR-260(SEQ ID NO：12)為含有p143 複製起始點序列的目標位點之細胞miRNAs，如第八圖所示。

以量化PCR評估miRNA對p143 複製起始點複製之效果

為探討該些細胞在p143 複製起始點依賴複製之效果，合 成上述之miRNA，並分別以含有p143 複製起始點序列之質體(pABhLp143，質體圖譜如第九圖所示)轉染進昆蟲細胞(Sf-21)。

收集轉染後72小時之細胞並萃取總細胞DNA，利用量化PCR測量被轉染細胞中含有p143 序列之質體的量，第十A圖所示，圖中顯示在轉染含有p143 複製起始點序列的目標位點之miRNAs的細胞比轉染控制組miRNA細胞中含有p143 序列之質體的量顯著較低，係為這些miRNA對p143 複製起始點-依賴複製有負向調節的作用。包含p143 質體之拷貝數(copy number)在一些miRNA存在時下降。這些對p143 複製起始點依賴複製有負向調節的作用之miRNA包括bmo-miR-305(SEQ ID NO：11)、bmo-miR-206(SEQ ID NO：12)。另外在病毒的實驗上也得到相同的結果，miRNA會影響病毒的DNA拷貝數(第十B 圖)。

綜上所述，且由實施例1至5可知，oriP -依賴複製可經由miRNAs與oriP 序列直接結合而被細胞miRNAs調節。因此，如果我們使載體表現系統中的這些miRNAs數量上升，或是利用新設計的siRNA拮抗oriP 序列，或是拮抗oriP 序列中的DS因子或FR因子，即可阻止EB病毒之感染甚至是潛伏感染。故miRNA或siRNA可用於具專一性干擾潛伏EB病毒之複製調節的用途，可作為一種治療潛伏EB病毒感染之有效方法。另外由實例6可以知道在桿狀病毒所感染的細胞亦具有會調控病毒複製的miRNA，故利用這種調節作用可以抑制病毒DNA複製原點，包括p143 以及同源區域(homologous region， 文獻[Pearson et al.,1992]為發現此段基因之存在)，可作為防治桿狀病毒感染有用昆蟲，如家蠶的一種有效方式。

第一A圖係為細胞miRNAs分別連接上oriP 序列中的DS與FR因子之示意圖與miRNA序列。

第一B圖係為細胞miRNA序列表示圖。

第二A圖係為pREP4質體圖譜；在被轉染細胞中，此載體包含完整oriP 序列與EBNA1表現。

第二B圖係為不同被轉染細胞中含有oriP 序列之質體pREP4的量。細胞轉染特定的細胞miRNA以及含有oriP and EBNA-1之質體(pREP4)，轉染之細胞在轉染72小時後收集。萃取總細胞DNA並以量化PCR量化pREP4。偵測質體DNA的量設為100%，以標準化轉染控制組miRNA後細胞內質體DNA的量。

第三圖係為細胞轉染特定miRNAs與pREP4-luc之螢光酶活性分析。y-軸：相對螢光酶活性；x-軸：轉染之miRNA。

第四圖係為miR155干擾EBNA-1結合上oriP 序列之示意圖。與oriP 之DIG-標定(A)DS區域或是(B)FR區域共同培養之純化的EBNA-1蛋白質。

第五圖係為EB病毒持續感染細胞(Akata)轉染特定miRNAs之基因複製變化分析。y-軸：相對基因複製量；x-軸：轉染之miRNA。

第六圖係為細胞bmo-miR-651分別連接上EBNA-1序列之示意圖。

第七圖係為為不同被轉染細胞中含有EBNA-1蛋白質表現量。細胞轉染bmo-miR-651以及含有EBNA-1之質體(pREP4)，轉染之細胞在轉染72小時後收集。萃取總蛋白質並以蛋白質電泳分析EBNA-1表現量。

第八圖係為家蠶細胞miRNAs分別連接上p143 複製起始點序列之示意圖與該序列。

第九圖係為pABpLp143質體簡圖；在被轉染細胞中，此載體包含完整p143 複製起始點序列與報告基因(luciferase)表現。

第十A圖係為不同被轉染細胞中含有p143 複製起始點序列之質體的量。細胞轉染特定的細胞miRNA以及含有p143 複製起始點序列之質體(pABpLp143)，轉染之細胞在轉染72小時後收集。萃取總細胞DNA並以量化PCR量化pABpLp143。偵測質體DNA的量設為100%，以標準化轉染控制組miRNA後細胞內質體DNA的量。

第十B圖係為家蠶細胞的miRNA與桿狀病毒共同感染昆蟲細胞後分析該病毒基因複製能力的變化分析。y-軸：質體DNA複製量；x-軸：轉染時間點。

<110>　中央研究院

<120>　調控DNA複製之核酸分子

<160>　12

<210>　1

<211>　23

<212>　DNA

<213>　人工序列

<220>

<223>　hsa-miR-155

<400>　1

<210>　2

<211>　22

<212>　DNA

<213>　人工序列

<220>

<223>　hsa-miR-3145

<400>　2

<210>　3

<211>　24

<212>　DNA

<213>　人工序列

<220>

<223>　hsa-miR-3145 3p

<400>　3

<210>　4

<211>　22

<212>　DNA

<213>　人工序列

<220>

<223>　hsa-miR-628 3p

<400>　4

<210>　5

<211>　21

<212>　DNA

<213>　人工序列

<220>

<223>　hsa-miR-628 5p

<400>　5

<210>　6

<211>　22

<212>　DNA

<213>　人工序列

<220>

<223>　hsa-miR-216 a

<400>　6

<210>　7

<211>　22

<212>　DNA

<213>　人工序列

<220>

<223>　hsa-miR-216 b

<400>　7

<210>　8

<211>　20

<212>　DNA

<213>　人工序列

<220>

<223>　hsa-miR-3117 5p

<400>　8

<210>　9

<211>　21

<212>　DNA

<213>　人工序列

<220>

<223>　hsa-miR-3117 3p

<400>　9

<210>　10

<211>　22

<212>　DNA

<213>　人工序列

<220>

<223>　hsa-miR-651

<400>　10

<210>　11

<211>　23

<212>　DNA

<213>　人工序列

<220>

<223>　bmo-miR-305

<400>　11

<210>　12

<211>　22

<212>　DNA

<213>　人工序列

<220>

<223>　bmo-miR-206

<400>　12

Claims (13)

1. 一種核酸分子用於製備抑制病毒複製之藥物的用途，其中該核酸分子與一感染該病毒之細胞內的病毒DNA之ori 複製起始點序列結合而獲得，以抑制病毒之複製；且該核酸分子選自於由hsa-miR-155(SEQ ID NO：1)、hsa-miR-216b(SEQ ID NO：7)、hsa-miR-628-3p(SEQ ID NO：4)、hsa-miR-3145-3p(SEQ ID NO：3)、hsa-miR-651(SEQ ID NO：10)、bmo-miR-305(SEQ ID NO：11)及bmo-miR-206(SEQ ID NO：12)所組成之群組。
2. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該病毒係為一EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)或一桿狀病毒。
3. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該核酸分子係與該EB病毒的oriP 序列結合。
4. 如申請專利範圍第3項所述之用途，其中該核酸分子係結合至該oriP 序列之一DS因子。
5. 如申請專利範圍第3項所述之用途，其中該核酸分子係結合至該oriP 序列之一FR因子。
6. 如申請專利範圍4項或第5項所述之用途，其中該DS因子或FR因子包含複數個EB病毒核抗原-1(Epstein-Barr virus nuclear antigen 1，EBNA1)連接位。
7. 如申請專利範圍第6項所述之用途，其中該核酸分子結合至該複數個EB病毒核抗原-1(EBNA1)連接位，以減弱EB病毒核抗原-1(EBNA1)與oriP 序列之結合程度。
8. 如申請專利範圍1項所述之用途，其中該核酸分子係與該桿狀病毒的P143 或同源區域序列結合。
9. 如申請專利範圍8項所述之用途，其中該核酸分子係結合至該P143 或同源區域序列之具有複製起始點之區域。
10. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該核酸分子與該EB病毒的EBNA-1序列結合。
11. 一種核酸分子之用途，其係用於製備調控一感染EB病毒細胞之病毒複製之醫藥組合物，其中該細胞係為一感染病毒之細胞，且該核酸分子係結合至該EB病毒的oriP 序列；且該核酸分子係選自於由hsa-miR-155(SEQ ID NO：1)、hsa-miR-216b(SEQ ID NO：7)、hsa-miR-628-3p(SEQ ID NO：4)、hsa-miR-3145-3p(SEQ ID NO：3)及hsa-miR-651(SEQ ID NO：10)所組成之群組。
12. 如申請專利範圍第11項所述之用途，其中該核酸分子係結合至該oriP 序列之一DS因子。
13. 如申請專利範圍第11項所述之用途，其中該核酸分子係結合至該oriP 序列之一FR因子。