TWI417102B - New anti - cancer compound - Google Patents

Description

抗癌新化合物雙當歸醯基皂苷

本專利要求獲得以下美國專利申請書和國際專利申請書的權利：美國專利申請書(N0.11/131,551,2005年5月17日遞交)，美國專利申請書(N0.11/117,760,2005年4月27日遞交)，以及接續申請(Continuation－in Part application)書(美國專利N0.10/906,303,2005年2月14日遞交)，國際專利申請書的接續申請(N0.PCT/US04/43465,2004年12月23日遞交，它是2004年10月8日遞交的國際專利申請書N0.PCT/US04/33359的接續申請，它要求獲得2004年10月8日遞交的美國專利申請書60/617，379,2004年9月27日遞交的美國專利申請書60/613,811和2004年9月7日遞交的美國專利申請書60/607,858中所要求的權力)。這些正在審定的專利申請書的內容因而應全面地納入本專利申請書中。

各種出版物的內容在本專利申請書中被廣泛引用，以便能更好地闡明本專利申請書中所要獲得的權利。

發明領域

本發明涉及雙當歸醯基皂苷的抗癌新化合物的結構及其製備方法。

發明背景

近些年來，從植物提取物中探尋新的藥物或保健品的熱潮在世界各國興起並獲得了很大的成功，在治療腦病和腦保健方面就有如銀杏葉的提取物用於擴張微血管以提高腦功能；紫杉的提取物治療癌症；小金絲桃的提取物治療抑鬱症和人參提取物可用於增智等。中藥和民間草藥是探尋新的藥物和保健品的寶庫，上面提到的三種植物都是常用的中藥。本發明涉及的植物文冠果也是一種民間草藥。

文冠果是無患子科(Sapindaceae)文冠果屬(Xanthoceras)的植物，拉丁文名Xanthoceras sorbifolia Bunge，俗名又叫文冠花，文光果，文冠樹，文官果，崖木瓜和西拉森登等，英文名叫叫“黃角樹”(Goldenhorn,Yellowhorn)。落葉灌木或小喬木，可達8米高；奇數羽狀複葉；總狀花序，花白色，雜性；蒴果初為綠色，果殼厚，木質，成熟黑褐色，卵球形，多數原產於中國，主要分佈於中國北部，野生或栽培，種子含油脂可達50%以上，可食用，莖葉可入藥，治風濕，種仁在民間用於治遺尿症。種子，花和葉可食，可用於救荒。

但是，對文冠果的深入開發研究才是近年來的事。如陳英傑Tadahiro Takeda，Yukio Ogihara等人1984和1985年在日本藥物化學學報(Chem.Pharm.Bull.)上發表了四篇對文冠果化學研究的文章(1984，32(9)：3378－3383；1985,33(1)：127－134；1985,1985 33(3)：1043－1048；1985,33(4)：1387－1394)報導了從文冠果種子分離出的四種新皂苷(Bunkankasaponin A.B.C.D)，它們的化學結構如下：(A)22－O－acetyl－21－O－(4－O－acetyl－3－O－angeloyl)－β－D－fucopyranosyl－3－O－[β－D－glucopyranosyl－(1→2)－β－D－glucuronopyranosyl]protoaecigenin，(B)22－O－acetyl－21－O－(3,4－di－O－angeloyl)－β－D－fucopyranosyl－3－O－[β－D－glucopyranosyl－(1→2)－β－D－glucuronopyranosyl]protoaecigenin，(C)28－O－acetyl－21－O－(4－O－acetyl－3－O－angeloyl)－β－D－fucopyranosyl－3－O－[β－D－glucopyranosyl－(1→2)－β－D－glucuronopyranosyl]protoaecigenin，(D)28－O－acetyl－21－O－(3,4－di－O－angeloyl)－β－D－fucopyranosyl－3－O－[β－D－glucopyranosyl－(1→2)－β－D－glucuronopyranosyl]protoaecigenin。他們還提出了前皂苷元(Prosapogenin)的結構：16－O－acetyl－21－O－(3,4－di－O－angeloyl－β－D－fucopyranosyl)protoaecigenin，22－O－acetyl－21－O－(3,4－di－O－angeloyl－β－D－fucopyranosyl)protoaecigenin 3－O－β－D－glucuronopyranoside，21－O－(3,4－di－O－angeloyl)－β－D－fucopyranosyltheasapogenol B,21－O－(4－O－acetyl－3－O－angeloyl)－β－D－fucopyranosyltheasapogenolB,21－O－(4－O－acetyl－3－O－angeloyl)－β－D－fucopyranosyl－22－O－acetylprotoaes cigenin。但是，這些化合物的功能並沒有進一步研究。含有當歸醯基功能集團的三萜類皂苷化合物的參考文章：Laurence Voutquenne et al.“Haemolytic acylated triterpenoil saponins from Harpullia austro－caledonica”Phytochemistry 66(2005)825－835.

Laurence Voutquenne,cecile Kokougan.catherine Lavaud,Isabelle Pouny,Marc Litaudon.“Triterpenoid saponins and Acylated prosapogenins from Harpullia austro－caledonica.”Phytochemistry 59(2002)825－832.

Zhong Jaing,Jean－francois Gallard,Marie－Therese Adeline,Vincent Dumontet,Mai Van Tri,Thierry Sevenet,and Mary Pais“Six Triterpennoid Saponins from Maesa laxiflora.”.J.Nat.Prod.(1999),62,873－876.

Young Seo,John M.Berger,Jennine Hoch,Kim M Neddermann,Isia Bursuker,Steven W.Mamber and David G.Kingston.“A new Triterpene Saponin from Pittosporum viridiflorum from the Madagascar Rainforest“.J.Nat.Prod.2002,65,65－68.

Xiu－Wei Yang,Jing Zhao,Xue－Hui Lui,Chao－Mei Ma,Masao Hattori,and Li He Zhang“Anti－HIV－1 Protease Triterpenoid Saponins from the Seeds of Aesculus chinensis.”J.Nat.Prod.(1999),62,1510－1513.

Yi Lu,Tatsuya Umeda,Akihito Yagi,Kanzo Sakata,Tirthankar Chaudhuri,D.K.Ganguly,Secion Sarma.“Triterpenoid Saponins from the roots of the tea plant(Camellia sinensis var.Assamica).”Phytochchemistry 53(2000)941－946.

Sandra Apers,Tess E.De Bruyne,Magda Claeys,Arnold J.Viletinck,Luc A.C.Pieters.“New acylated triterpenoid saponins from Maesa laceceolata.”Phytochemistry 52(1999)1121－1131.

Ilaria D’Acquarica,Maria Cristina,Di Giovanni,Francesco Gasparrini,Domenico Misiti,Claudio D’Arrigo,Nicolina Fagnano,Decimo Guarnieri,Giovanni Iacono,Giuseppe Bifulco and Raffaele Riccio.“Isolation and structure elucidation of four new triterpenoid estersaponins from fruits of the Pittosporumtobira AIT.”Tetrahedron 58(2002)10127－10136.

從植物提取物中篩選抗癌藥物是當前探尋新的抗癌藥物的重要方面。癌症是造成現代人類死亡的重要原因之一。致癌的原因是個種各樣的，癌症可由不同類型的細胞畸變引起，因而會有各種不同的癌症。

卵巢癌在引起婦女死亡的病因中占第五位。婦科病中可造成死亡的重要病因。在美國，1.4－2.5%的婦女可能患卵巢癌，老年婦女患卵巢癌的危險更高。55到74歲的婦女有50%以上的死亡於卵巢癌。35到54歲的婦女約25%以上的死亡於卵巢癌(見http：//www.nlm.hih.gov/medlineplus/ecny/article/000889.htm)。

卵巢癌在引起婦女死亡率極高的原因在於，首先，病症不明顯，容易誤診。當診斷出時，癌細胞已轉移。同時，卵巢癌常把惡性細胞轉移到子宮，膀胱，腸和腸網膜，在發現這些細胞以前，他們已開始形成新的腫瘤。另外，對卵巢癌沒有可靠監測的系統，50%的患卵巢癌的婦女不能在癌症初期得到診斷。

本專利提供的從文冠果提取物分離出的化合物(或人工合成的)和其組合物，抗卵巢癌的潛力極大。

有關本專利的發明背景的詳細材料還請看國際PCT專利申請書(N0.PCT/US04/33359,2004年10月8日遞交)和美國專利申請書(N0.10/906,303,2005年2月14日遞交)的有關章節。

發明概要

下面是本發明專利的扼要摘要，為了使發明的重點條款明顯，另一些條款的內容可能被簡化甚至略去，但是，這不表明本發明專利僅限於這些在摘要中提到的內容。

本發明申請的專利涉及六種新化合物，它們是Y1,Y2,Y或Y3,Y8,Y9和Y10。它們的化學結構如圖下所示：

這六種化合物的名稱，化學名稱和分子式見表1。

這六種化合物具有抗癌作用，可抑制人卵巢癌和其他癌細胞的生長(見第2，3和4圖)。

本發明公開這六種抗癌化合物共有的功能集團，它們都有雙當歸醯基。即雙當歸醯酰基決定了皂苷化合物的抗癌作用。化合物Y，Y2，Y8和Y10的雙當歸醯基分別連接在三萜皂苷原母核的碳21β位和22α位上(見第5圖)。化合物Y1和Y9的雙當歸醯基分別連接在一個糖鏈的糖的碳3位和4位上(見第6圖)。這六種化合物的雙當歸醯基反位連接在處於相鄰的碳原子上(見第7圖)。糖鏈連接在三萜皂苷原的碳3位上。組成皂苷的糖鏈中可有一至多個D－葡萄糖，D－半乳糖，L－鼠李糖，L－阿拉伯糖，D－木糖，糖醛酸，D－葡萄糖醛酸，D－半乳糖醛酸組成。這六種化合物的抗癌作用並未因連接在三萜皂苷原的碳15位和24位上的功能集團改變而消失。

上述化合物中的功能集團被替代，去除，和/或添加新的化學集團，是本申請權利申請範圍內的一種利權要求，只要這種替代，去除，和/或添加新的化學集團並不根本改變該化合物的生物活性，這種改變後的化合物仍包括在本專利要求的權利範圍之內。

這六種化合物是用色譜法，包括高效液相色譜(HPLC)和速效液相色譜(FPLC)法分離提純出來的(請參見第8，9，10，11，12和13圖)。化合物Y提純分離的方法請參見第11A圖。

提純的化合物Y的IC50為1.5μg/ml,原提取物(化合物Y從中提出)的IC50為20μg/ml，說明抑制癌細胞生長的作用提純後的化合物比原提取物要高出很多倍(比較第2和14圖)。而且，提純的化合物Y對抑制人卵巢癌細胞有更強的作用(請參見第15圖)。提純的化合物Y1，Y2，Y8，Y9和Y10也有抑制人癌細胞生長的作用，同樣對卵巢癌細胞有更強的抑制作用(請參見第3和4圖)。

十一種人的癌細胞被用來檢測文冠果提取物的抗癌活性，含有上述化合物或類似化合物的文冠果提取物都表現出較高的抑制人卵巢癌細胞生長的活性(請參見第14，15，16圖和表3.1)。本專利公開的具有抗癌活性的文冠果提取物，可以抗卵巢癌，膀胱癌，前列腺癌，血癌和骨癌，但又不限於這些癌症。

這些新的化合物是從植物中，如無患子科(Sapindaceae)的文冠果(Xanthoceras sorbifolia)，或其他自然資源中提取分離出來的，也可通過人工合成獲得。

本發明專利還公開了從文冠果的果殼，葉，枝幹，果柄，種殼，根和樹皮製備具有生物活性的化合物的工藝過程和方法。文冠果的提取物中除了含有皂甙化合物外，還含有黃酮類，香豆素，生物鹼，有機酸，單寧，糖類，糖苷，蛋白和其他化合物。經檢測試驗證明，文冠果皂苷化合物對癌細胞有強的抑制作用。這些化合物或其組合物(compositions)可調節很多細胞活動途徑的環節或受體，包括G－蛋白受體，Fas蛋白受體，酪氨酸激酶，有機分裂原和其受體。這些化合物可文冠果(Xanthoceras sorbifolia)，或其他自然資源中提取分離出來的，也可通過人工合成獲得。本專利公開的這些文冠果的化合物，包括具有化合物Y，Y1，Y2，Y8，Y9和Y10的化學結構的化合物，可以抗膀胱癌，宮頸癌，前列腺癌，肺癌，乳房癌，血癌，結腸癌，肝癌，腦癌，骨癌和卵巢癌，但又不限於這些癌症。

本發明專利公開的齊墩果三萜類皂苷化合物，其基本結構，有一至多個糖鏈，有兩個當歸醯基側鏈，當歸醯基或位於五環母核的碳21和22位，或通過醯化作用連在一個糖的碳3和碳4拉上。齊墩果三萜類皂苷化合物含有雙當歸醯基決定了它具有抗癌活性。

本發明專利公開的齊墩果三萜類皂苷化合物，有兩個當歸醯基側鏈，當歸醯基位於五環母核的碳21β和22α位。齊墩果三萜類皂苷化合物含有雙當歸醯基決定了它具有抗癌活性。

本發明專利公開的齊墩果三萜類皂苷化合物，有一至多個糖鏈，有兩個當歸醯基側鏈，當歸醯基通過醯化作用連在一個糖的碳上。齊墩果三萜類皂苷化合物含有雙當歸醯基決定了它具有抗癌活性。

本發明專利公開的齊墩果三萜類皂甙化合物，位於五環母核的碳21β和(或)22α位，通過醯化作用和糖鏈連在一起，其中糖鏈的一個糖的的碳3和碳4位和當歸醯基相連。

雙當歸醯基是反位連接在處於相鄰的碳原子上，含有雙當歸醯基決定了齊墩果三萜類皂苷化合物具有抗癌活性。含有一個當歸醯基的齊墩果三萜類皂苷化合物的抗癌活性比含有雙當歸醯基齊墩果三萜類皂苷化合物弱，溶血作用也弱。

本發明專利還公開了上述化合物的鹽類。

本發明專利還公開了含有有效劑量上述化合物的藥物和它的載體。

本發明專利還公開了從文冠果提取物中分離和提純化合物的方法，其工藝過程如下：．採收文冠果樣品，清選，乾燥；．粉碎文冠果樣品，得文冠果樣品粉；．用適量的一種或幾種有機溶劑浸提文冠果樣品粉(適當的次數和時間，得機溶劑浸提液)；．收集浸提液，再回流熱提(適當的次數)；．收集合併提取液；．回收有機溶劑得流浸膏；．乾燥和滅菌流浸膏，得粉狀文冠果提取物；．把粉狀文冠果提取物分離成一至多個成分；．檢測出上述成分中的具有生物活性的成分；．用速效液相色譜(FPLC)分離和提純上述具有生物活性的成分；．再用高效液相色譜(HPLC)分離出具有生物活性的化合物。

本發明專利還公開了用核磁共振(NMR)譜和質譜測定上述被分離出具有生物活性的化合物化學結構的方法：質子NMR，C－NMR，化合物的二維HMQC和HMBC核磁共振譜，NOESY和COSY核磁共振譜；MALDI－TOF和ESI－MS質譜。

本發明專利公開的這些化合物和其衍生物有強的抗癌作用。其作用機制很複雜，可調節可調節下列又不限於下列細胞活動途徑的環節或受體，如G蛋白細胞和其受體，Fas蛋白細胞和其受體，賴氨酸激酶和其受體，分裂素和其受體，轉化生長因數α(TGF－alpha)和轉化生長因數(TGF－beta)，轉化生長因數信號途徑和SMAD編譯調節基因，Ras－MAP激酶鏈信號途徑，基因調控蛋白Myc等通路的生化環節或其受體被不適當地活化或動過分活躍，會引起癌細胞的生成和增殖。本發明提供的文冠果提取物和新皂苷化合物，可調節這些生物通路活動的生化環節或其受體，防止癌變。由於基因突變癌細胞的殺死細胞的信號被阻斷了。因而，癌細胞就不斷的分裂，導致了癌變。本發明提供的文冠果提取物和新皂甙化合物，可疏通阻滯癌細胞“自殺”信號傳遞的通路，使癌細胞“自殺”。等的代謝活動。

圖式簡單說明

第1圖，從文冠果提取物分離提純出來的6個有抗癌活性的皂苷化合物的化學結構。

第2圖，化合物Y的抗癌活性。用卵巢癌細胞(OCAR－3)作MTT檢測，詳見實驗實例3。橫坐標：濃度(μg/ml)，縱坐標：癌細胞生長(%)，IC50約為1－1.5μg/ml。A：點刻度，B：線刻度。

第3圖，化合物Y1和Y2抑制卵巢癌細胞(OCAR－3)的生長(%)。

第4圖，用卵巢癌細胞(OCAR－3)作MTT檢測，測定化合物Y，Y8，Y9和Y10的抗癌活性。

第5圖，皂苷化合物Y，Y2，Y9和Y10都具有抗癌活性的共識結構(consensus structure)。

第6圖，皂苷化合物Y1和Y9都具抗癌活性的共識結構(consensus structure)。

第7圖，六個有抗癌活性的皂苷化合物Y，Y1，Y2，Y8，Y9和Y10共同具有的雙當歸醯基這一功能集團。(A)當歸醯基位於三萜五環母核的碳21β和22α位。(B)通過酰化作用連在一個糖的碳3和碳4位上。雙當歸醯基是反位連接在處於相鄰的碳原子上。

第8圖，用帶有μbondapak C18柱的HPLC從文冠果提取物分離出的組分。詳見實驗實例2。

第9圖，文冠果提取物10－80%FPLC梯度洗脫圖。橫坐標：組分(5 ml/組分)，縱坐標：光密度(245nm)。

第10圖，用膀胱細胞作MTT檢測，測定文冠果提取物的生物活性。文冠果提取物是從FPLC分離提純的組分，從第9圖可以看出，組分5962(即組分Y)抑制膀胱細胞的生長，而組分610，1116和1724對胱細胞的生長稍有刺激作用。橫坐標：濃度(μg/ml)，縱坐標：細胞生長(%)。

第11圖，文冠果提取物組分Y的HPLC(使用Dlta Pak C18柱)45%乙腈等梯度洗脫圖。組分Y(Y3)，Y1，Y2被很好地分離開來，然後被提純出來。A和B分別顯示組分Y(Y3)和Y2的純度。

第12圖，文冠果提取物組分Y8，Y9和Y10的45%乙腈等梯度洗脫圖。組分Y8，Y9和Y10被很好地分離開來。

第13圖，提純後的文冠果提取物組分Y8，Y9和Y10的HPLC圖譜。

第14圖，卵巢癌細胞經文冠果提取物處理後(MTT檢測)的細胞的生長曲線。這是11種癌細胞MTT檢測的一種。結果顯示，卵巢癌細胞對文冠果提取物最敏感。其他10種癌細胞MTT檢測的結果見第16A，16B，16C圖。橫坐標：濃度(μg/ml)，縱坐標：細胞生長(%)。

第15圖，卵巢癌細胞和宮頸癌細胞對化合物Y的敏感程度的比較。MTT檢測結果表明，卵巢癌細胞的IC50約為1－1.5μg/ml，而宮頸癌細胞的IC50為20μg/ml以上(也見第16C圖)。說明對化合物Y的敏感程度卵巢癌細胞比宮頸癌細胞要高得多，也進一步肯定了化合物Y對抑制癌細胞有選擇性。

第16A圖，10種癌細胞經文冠果提取物處理後(MTT檢測)的細胞的生長曲線。根據對文冠果提取物的敏感程度，這11種癌細胞可分成四類(2)敏感：膀胱癌細胞和骨癌細胞(見第16A圖)。橫坐標：濃度(μg/ml)，縱坐標：細胞生長(%)。

第16B圖，10種癌細胞經文冠果提取物處理後(MTT檢測)的細胞的生長曲線。根據對文冠果提取物的敏感程度，這11種癌細胞可分成四類：(3)稍敏感：前列腺癌細胞，乳腺癌細胞和腦癌細胞，白細胞和肝癌細胞(見第16B圖)。橫坐標：濃度(μg/ml)，縱坐標：細胞生長(%)。

第16C圖，10種癌細胞經文冠果提取物處理後(MTT檢測)的細胞的生長曲線。根據對文冠果提取物的敏感程度，這11種癌細胞可分成四類：(4)欠敏感：結腸癌細胞，宮頸癌細胞和肺癌細胞(見第16C圖)。橫坐標：濃度(μg/ml)，縱坐標：細胞生長(%)。

第17圖，化合物Y的化學結構，分子式：C_{5 7} H_{8 8} O_{2 3} ，化學名稱：3－0－[β－D－半乳糖吡喃醯基(1→2)]－α－L－阿拉伯糖呋喃醯基(1→3)－β－D－葡萄糖醛酸吡喃醯基－21,22－0－雙當歸醯基－3β,15α,16α,21β,22α,28－六羥基齊墩果－12－烯五環三萜皂苷。

第18圖，化合物Y的質子核磁共振譜。

第19圖，化合物Y的二維HMQC核磁共振譜。

第20圖，化合物Y的HMBC的二維核磁共振譜。

第21圖，化合物Y的質譜(MALDI－TOF,EMC)：Y＋Mtrix(CHCA)＋Agiotension 1“兩點較准”。 第22圖，化合物Y的化合物Y的質譜(ESM－MS)。

第23圖，化合物Y1的化學結構，分子式：C_{6 5} H_{1 0 0} O_{2 7} ，化學名稱：3－0－[β－D－半乳糖吡喃醯基(1→2)]－α－L－阿拉伯糖呋喃醯基(1→3)－β－D－葡萄糖醛酸吡喃醯基－22－0－(3,4－雙當歸醯基)－α－L－鼠李糖吡喃醯基－22－0－乙醯基－3β,16α,21β,22α,28－五羥基齊墩果－12－烯五環三萜皂苷。

第24圖，化合物Y1的質子核磁共振譜。

第25圖，化合物Y1的二維HMQC核磁共振譜。

第26圖，化合物Y1的HMBC的二維核磁共振譜。

第27圖，化合物Y1的COSY核磁共振譜。

第28圖，化合物Y2的化學結構和化學名稱。

第29圖，化合物Y2的質子核磁共振譜。

第30圖，化合物Y2的二維HMQC水平1的核磁共振譜。

第31圖，化合物Y2的C13核磁共振譜。

第32圖，化合物Y2的二維HMBC水平1的核磁共振譜。

第33圖，化合物Y2的的二維HOHAHA(TOCSY)水平1的核磁共振譜。

第34圖，化合物Y2的質譜。

第35圖，化合物Y8的化學結構。

第36圖，化合物Y8的H核磁共振譜。

第37圖，化合物Y8的C13核磁共振譜。

第38圖，化合物Y8的二維HMQC水平1的核磁共振譜。

第39圖，化合物Y9的化學結構。

第40圖，化合物Y9的H核磁共振譜。

第41圖，化合物Y9的二維HMQC水平1的核磁共振譜。

第42圖，化合物Y9的二維HMBC水平1的核磁共振譜。

第43圖，化合物Y10的化學結構。

第44圖，化合物Y10的H核磁共振譜。

第45圖，化合物Y10的C13核磁共振譜。

第46圖，化合物Y10的二維HMQC水平1的核磁共振譜。

第47圖，化合物R1的化學結構和化學名稱。

第48圖，化合物R1的質子核磁共振譜。

第49圖，化合物R1的二維HMQC核磁共振譜。

第50圖，化合物R1的二維HMBC的核磁共振譜。

第51圖，化合物R1的二維COSY核磁共振譜。

第52圖，化合物R1的C13核磁共振譜。

第53圖，化合物054的化學結構。

第54圖，化合物054的質子核磁共振譜。

第55圖，化合物054的二維HMQC核磁共振譜。

第56圖，化合物054的二維HMBC的核磁共振譜。

第57圖，文冠果提取物的吸收光譜。橫坐標：波長(nm)，縱坐標：光密度。文冠果提取物在波長207nm，278 nm和500 nm現示出最大吸收。

第58圖，化合物Y4的質子核磁共振譜。

第59圖，化合物Y4的二維HMQC核磁共振譜。

第60圖，用HPLC提純組分R。A：FPLC(iso－30)的組分10進一步用HPLC分離；B：在同樣條件下，其中的主要組分進行進一步的液相色譜分離提純。

第61圖，用HPLC20%的乙腈等梯度(iso－20)洗脫組分O。

第62圖，組分O54，O28和O34(從iso－20得到的)重新色譜分離提純。

第63圖，A，一皂苷化合物的化學結構，其中R1＝當歸醯基，R2＝當歸醯基,R3＝OH或H，R4＝H，OH，CH3，CH2OR6，或COOR6(R6＝H，acetyl或R5)；R5＝H或糖鏈，糖鏈中的糖有D－葡萄糖，D－半乳糖，L－鼠李糖，L－阿拉伯糖，D－木糖和糖醛酸：D－葡萄糖醛酸和D－半乳糖醛酸，及其衍生物，R6＝H或Ac，R7＝H，OH，CH₃ ，CH₂ OR6或COO R6(R6＝H，醯基或糖鏈)。在五環母核的碳23，24，25，26，27，29和30與CH₃ ，或CH₂ OH，或烷基，或醯基或它們衍生物相聯接。B：一皂苷化合物的化學結構，其中R1＝當歸醯基,R2＝當歸醯基，R3＝Ac或H，R4＝H或OH；R6＝H，Ac或R5；R5＝H或糖鏈，糖鏈中的糖有D－葡萄糖，D－半乳糖，L－鼠李糖，L－阿拉伯糖，D－木糖和糖醛酸：D－葡萄糖醛酸和D－半乳糖醛酸，及其衍生物，在五環母核的碳23，24，25，26，27，29和30與CH₃ ，或CH₂ OH，或烷基，或醯基或它們衍生物相聯接。

第64圖，從FPLC得到的的組分5657的HPLC(iso－45)圖譜。

第65圖，化合物X對卵巢癌細胞生長的影響。

第66圖，化合物X的H的質子核磁共振譜。

第67圖，化合物X的二維HMQC核磁共振譜。

第68圖，化合物X的二維HMBC的核磁共振譜。

第69圖，化合物X的C13核磁共振譜。

第70圖，化合物X的化學結構。

第71圖，化合物X的質譜(MALDI－TOF)1。

第72圖，化合物X的質譜(MALDI－TOF)2。

第73圖，化合物Y的溶血作用。

第74圖，A，化合物Y除去了黨歸醯基；B，化合物Y除去了糖鏈。

第75圖，化合物的化學結構。

較佳實施例之詳細說明

本專利申請的各種參考文獻放置在說明書的結尾,權利要求書之前,將本發明公開的內容參考文獻合為一體,其目的是為了更好地描述截至目前為止,技術人員所能夠瞭解的最新技術發展。

本專利提供的化學結構式(1)： 其中R₁ 和R₂ 代表當歸醯基；R₃ 代表OH或H；R₄ 代表CH₃ 或CH₂ OH；R₇ 代表H；R₅ 代表D－葡萄糖或D－半乳糖；R₆ 代表L－阿拉伯糖。根據化學結構式(1)和其功能集團可組合成的任一化合物，它的鹽類，酯類及其衍生物，都屬於本專利申請要求權力的範圍。

本專利提供的化學結構式(2)： 其中R₁ 和R₂ 代表當歸醯基；R₃ 和R₄ 代表Ac或H；R₅ 代表CH₃ 或CH₂ OH。根據化學結構式(2)和其功能集團可組合成的任一化合物，它的鹽類，酯類及其衍生物，都屬於本專利申請要求權力的範圍。

本專利提供的化學結構式(3)： 其中R₁ 和R₂ 代表當歸醯基；R₃ 代表OH或H；R₄ 代表CH₃ ，CH₂ OH或烷基及其衍生物；R₆ 代表Ac或H；R₅ 代表糖鏈，糖鏈中的糖含有一或一個以上的糖，或糖醛酸，或D－葡萄糖，或D－半乳糖，或L－鼠李糖，或L－阿拉伯糖，或D－木糖，或D－葡萄糖醛酸，或D－半乳糖醛酸或其衍生物或上述其任何組合或具有以上糖鏈同樣功能的集團組成。在本專利中，R₁ ，R₂ 和R₆ 也可是順芷醯基，千里光醯基或任一含有2－5碳的有機酸的醯基，上述任一有機酸的醯基也可連接在糖的碳3和4位上，組成雙醯基功能集團，如雙當歸醯基。

根據化學結構式(3)和其功能集團可組合成的任一化合物，它的鹽類，酯類及其衍生物，都屬於本專利申請要求權力的範圍。

本專利提供的化學結構式(3A)： 其中R₁ 和R₂ 代表當歸醯基；R₃ 代表OH或H；R₆ 代表Ac或H；R₅ 代表H或糖鏈，糖鏈中的糖含有一或一個以上的糖，或糖醛酸，或D－葡萄糖，或D－半乳糖，或L－鼠李糖，或L－阿拉伯糖，或D－木糖，或D－葡萄糖醛酸，或D－半乳糖醛酸或其衍生物或上述其任何組合或具有以上糖鏈同樣功能的集團組成。在五環母核的碳23，24，25，26，27，29和30與CH₃ ，或CH₂ OH，或烷基，或醯基或它們衍生物相聯接。或R₁ 和R₂ 或R₆ 代表當歸醯基，其中之一連在糖鏈中的糖的相鄰的炭原子上。當歸醯基也可被順芷醯基，千里光醯基或任一含有2－5碳的有機酸的醯基代替。根據化學結構式(3)和其功能集團可組合成的任一化合物，它的鹽類，酯類及其衍生物，都屬於本專利申請要求權力的範圍。

本專利提供的化學結構式(4)： 其中 R₁ 和R₂ 代表當歸醯基；R₃ 和R₆ 代表Ac或H；R₄ 代表OH或H；R₇ 代表CH₃ ，CH₂ OH或烷基及其衍生物；R₅ 代表糖鏈，糖鏈中的糖含有一或一個以上的糖，或糖醛酸，或D－葡萄糖，或D－半乳糖，或L－鼠李糖，或L－阿拉伯糖，或D－木糖，或D－葡萄糖醛酸，或D－半乳糖醛酸或其衍生物或上述其任何組合或具有以上糖鏈同樣功能的集團組成。或R₁ 和R₂ 代表當歸醯基；R₃ 和R₆ 代表Ac或H；R₄ 代表OH或H；R₇ 代表CH₃ ，CH₂ OH或烷基及其衍生物；R₅ 代表糖鏈，糖鏈中的糖含有一或一個以上的糖，或糖醛酸，或D－葡萄糖，或D－半乳糖，或L－鼠李糖，或L－阿拉伯糖，或D－木糖，或D－葡萄糖醛酸，或D－半乳糖醛酸或其衍生物或上述其任何組合或具有以上糖鏈同樣功能的集團組成。在五環母核的碳23，24，25，26，27，29和30與CH₃ ，或CH₂ OH，或烷基，或醯基或它們的衍生物或具有以上同樣功能的集團相聯接。在本專利中，R₁ ，R₂ ，R₃ 和R₆ 也可是順芷醯基，千里光醯基或任一含有2－5碳的有機酸的醯基或具有以上同樣功能的集團相聯接。

根據化學結構式(4)和其功能集團可組合成的任一化合物，它的鹽類，酯類及其衍生物，都屬於本專利申請要求權力的範圍。

本專利提供的化學結構式(5)： 其中R₁ ，R₂ ，R₃ ，R₄ ，和R₅ 可代表下述不同的功能集團：．其中R₁ 和R₂ 代表當歸醯基；R₃ 代表OH或H；R₄ 代表CH₂ OH；R₅ 代表糖鏈，一或多個。

．其中R₁ 和R₂ 代表當歸醯基，或任一含有5碳的有機酸的醯基；R₃ 代表OH或H；R₄ 代表CH₂ OR₆ 或COOR₆ (R₆ 代表H)；R₅ 代表糖鏈，一或多個。

．其中R₁ 和R₂ 中的一個代表當歸醯基，另一個是乙醯基，順芷醯基，千里光醯基或任一含有2－5碳的有機酸的醯基；R₃ 代表OH或H；R₄ 代表CH₂ OR₆ 或COOR₆ (R₆ 代表當歸醯基)；R₅ 代表糖鏈，一或多個。

．其中R₁ 和R₂ 中的一個是糖鏈或鼠李糖，並且至少兩個當歸醯基，或兩個當歸醯，乙醯基，順芷醯基，千里光醯基的任一組合或兩個醯基或兩個任一含有2－5碳的有機酸的醯基連接在該糖上。

．其中在五環母核的碳23，24，25，26，27，29和30可和CH₃ ，CH₂ OH，CHO，COOH，烷基，乙醯基或它們的衍生物相聯接。

．其中R₅ 代表D－葡萄糖或D－半乳糖或L－阿拉伯糖，或上述其任何組合．其中R₅ 代表糖鏈，糖鏈中含有一或一個以上的糖，或糖醛酸，或D－葡萄糖，或D－半乳糖，或L－鼠李糖，或L－阿拉伯糖，或D－木糖，或D－葡萄糖醛酸，或D－半乳糖醛酸或其衍生物或上述其任何組合或具有以上糖鏈同樣功能的集團組成．其中R₅ 代表H。

．其中R₄ 代表H，CH₃ 或OH。

．其中化合物具有化學結構式(5)及包含二個或以上當歸醯基具有有抗癌或抗病毒作用。

．其中雙當歸醯基是反位連接在處於相鄰的碳原子上。

根據化學結構式(5)和其功能集團可組合成的任一化合物，它的鹽類，酯類及其衍生物，都屬於本專利申請要求權力的範圍。

上述化合物中的功能集團被替代，去除，和/或添加新的化學集團，是本專利權利申請範圍內的一種要求，只要這種替代，去除，和/或添加新的化學集團並不根本改變該化合物的生物活性，這種改變後的化合物仍包括在本專利申請要求的權利範圍之內。

本專利提供的下述化學結構式：

A：；或B：或C：其中R₁ 和R₂ 代表當歸醯基，乙醯基，順芷醯基，千里光醯基或任一含有2－5碳的有機酸的醯基，每一化合物至少含有上述一種醯基中的兩個分子，形成雙醯基。這雙醯基反位連接在處於同一平面上的相鄰的碳原子上，或直接連在五環母核上，或連在糖鏈上。糖鏈中含有一或一個以上的糖，或糖醛酸，或D－葡萄糖，或D－半乳糖，或L－鼠李糖，或L－阿拉伯糖，或D－木糖，或D－葡萄糖醛酸，或D－半乳糖醛酸或其衍生物或上述其任何組合或具有以上糖鏈同樣功能的集團組成。

本發明專利還公開了從文冠果或其他鼠李科植物中分離和提純皂苷化合物的方法，其工藝過程如下：．採收文冠果樣品，清選，乾燥；．粉碎文冠果樣品，得文冠果樣品粉；．用適量的一種或幾種有機溶劑浸提文冠果樣品粉,得機溶劑浸提液；．收集浸提液，再回流熱提；．收集合併提取液；．回收有機溶劑得流浸膏；．乾燥和滅菌流浸膏，得粉狀文冠果提取物；．用高效液相色譜(HPLC)和速效液相色譜(FPLC)把粉狀文冠果提取物分離成一至多個成分；．檢測出上述成分中的具有生物活性的成分；．用速效液相色譜(FPLC)分離和提純上述具有生物活性的成分；．再用高效液相色譜(HPLC)分離出具有生物活性的化合物。

本發明專利公開了6種有抗癌活性的皂苷化合物：化合物Y，Y1，Y2，Y8，Y9和Y10。

1，合物Y，分子式：C_{5 7} H_{8 8} O_{2 3} ，化學結構如下(見第17圖)： 3－0－[β－D－半乳糖吡喃醯基(1→2)]－α－L－阿拉伯糖呋喃醯基(1→3)－β－D－葡萄糖醛酸吡喃醯基－21,22－0－雙當歸醯基－3β,15α,16α,21β,22α,28－六羥基齊墩果－12－烯五環三萜皂甙。該化合物是從文冠果中提出來的，命名為Xanifolia－Y，屬於齊墩果三萜皂甙，有含三個糖的糖鏈，連接在五環母核的碳3位，在五環母核的碳21和22位有當歸醯基。該化合物有抗癌活性。

這一化學結構是根據H－NMR,HMBC HMQC二維核磁共振和質譜(MALDI－TOF,EMC)的方法確定的(請見圖18－22和表5.1)。

2，合物Y1，分子式：C_{6 5} H_{1 0 0} O_{2 7} ，化學結構如下(見第23圖)： 3－0－[β－D－半乳糖吡喃醯基(1→2)]－α－L－阿拉伯糖呋喃醯基(1→3)－β－D－葡萄糖醛酸吡喃醯基－21－0－(3,4－雙當歸醯基)－α－L－鼠李糖吡喃醯基－22－0－乙醯基－3β,16α,21β,22α,28－五羥基齊墩果－12－烯五環三萜皂苷。該化合物是從文冠果中提出來的，命名為Xanifolia－Y1，屬於齊墩果三萜皂苷，有兩個糖鏈，含三個糖的糖鏈連接在五環母核的碳3位，在五環母核的碳21位還有一個糖鏈，含一個糖，該糖的碳3和4位連有當歸醯基。該化合物有抗癌活性。

這一化學結構是根據H－NMR,HMBC，HMQC和COSY二維核磁共振和質譜(MALDI－TOF)的方法確定的(請見圖24－27)。

3，合物Y2，分子式：C_{5 7} H_{8 8} O_{2 4} ，化學結構如下(見第28圖28)： 3－0－[β－D－葡萄糖吡喃醯基(1→2)]－α－L－阿拉伯糖呋喃醯基(1→3)－β－D－葡萄糖醛酸吡喃醯基－21,22－0－雙當歸醯基－3β,15α,16α,21β,22α,24α,28－七羥基齊墩果－12－烯五環三萜皂苷。該化合物是從文冠果中提出來的，命名為Xanifolia－Y2，屬於齊墩果三萜皂苷，有一個糖鏈，含三個糖，糖鏈連接在五環母核的碳3位，在五環母核的碳21和22位連有當歸醯基。該化合物有抗癌活性。

這一化學結構是根據H－NMR,C－NMR，HMBC，HMQC和COSY二維核磁共振和質譜(MALDI－TOF)的方法確定的(請見圖29－34)。

4，化合物Y8，分子式：C_{5 7} H_{8 7} O_{2 3} ，化學結構如下(見圖35)： 3－0－[β－葡萄糖吡喃醯基(1→2)]－α－阿拉伯糖呋喃醯基(1→3)－β－葡萄糖醛酸吡喃醯基－21,22－0－雙當歸醯基－3β,16α,21β,22α,24α,28－六羥基齊墩果－12－烯五環三萜皂苷。該化合物是從文冠果中提出來的，命名為Xanifolia－Y8，屬於齊墩果三萜皂苷，有一個糖鏈，含三個糖，糖鏈連接在五環母核的碳3位，在五環母核的碳21和22位連有當歸醯基。該化合物有抗癌活性。

這一化學結構是根據H－NMR,C13－NMR，和HMQC二維核磁共振的方法確定的(請見第36圖)。

5，合物Y9，分子式：C_{6 5} H_{1 0 0} O_{2 7} ，化學結構如下(見第39圖)： 3－0－[β－半乳糖吡喃醯基(1→2)]－α－阿拉伯糖呋喃醯基(1→3)－β－葡萄糖醛酸吡喃醯基－21－0－(3,4－當歸醯基)－α－鼠李糖吡喃醯基－28－0－乙醯基－3β,16α,21β,22α,28－五羥基齊墩果－12－烯五環三萜皂苷。該化合物是從文冠果中提出來的，命名為Xanifolia－Y9，屬於齊墩果三萜皂苷，有兩個糖鏈，含三個糖的糖鏈連接在五環母核的碳3位，在五環母核的碳21位還有一個糖鏈，含一個糖，該糖的碳3和4位連有當歸醯基。該化合物有抗癌活性。

這一化學結構是根據H－NMR,HMBC和HMQC二維核磁共振的方法確定的(請見第40－42圖)。

6，合物Y10，分子式：C_{5 7} H_{8 7} O_{2 2} ，化學結構如下(見第43圖)： 3－0－[β－半乳糖吡喃醯基(1→2)]－α－阿拉伯糖呋喃醯基(1→3)－β－葡萄糖醛酸吡喃醯基－21,22－0－雙當歸醯基－3β,16α,21β,22α,28－五羥基齊墩果－12－烯五環三萜皂苷。該化合物是從文冠果中提出來的，命名為Xanifolia－Y10，屬於齊墩果三萜皂苷，有一個糖鏈，含三個糖，糖鏈連接在五環母核的碳3位，在五環母核的碳21和22位連有當歸醯基。該化合物有抗癌活性。

這一化學結構是根據H－NMR,C13－NMR，和HMQC二維核磁共振的方法確定的(請見第44－46圖)。

本發明專利公開的皂苷化合物，由三萜皂苷原和一個至多個糖鏈構成，它們的化學功能集團是雙當歸醯基，即具有雙當歸醯基的皂苷化合物就有抗癌活性。當歸醯基可連在三萜五環母核的碳21和22位，或連在糖鏈的一個糖的碳3和4位，該糖鏈連在三萜五環母核的碳21和/或22位。糖鏈中含有一或一個以上的糖，或糖醛酸，或D－葡萄糖，或D－半乳糖，或L－鼠李糖，或L－阿拉伯糖，或D－木糖，或D－葡萄糖醛酸，或D－半乳糖醛酸或其衍生物或上述其任何組合或具有以上糖鏈同樣功能的集團組成。其他醯基如順芷醯基，千里光醯醯或任一含有2－5碳的有機酸的醯基也可取代個當歸醯基，使三萜皂苷化合物有抗癌活性。

上述化合物中的功能集團被替代，去除，和/或添加新的化學集團，是本專利權利申請範圍內的一種要求，只要這種替代，去除，和/或添加新的化學集團並不根本改變該化合物的生物活性，這種改變後的化合物理應仍包括在本專利申請要求的權利範圍之內。

本發明專利提供文冠果提取物抗癌活性的MTT檢測方法，用十一種人的癌細胞進行MTT檢測：HTB－9(膀胱)，HeLa－S3(宮頸)，DU145(前列腺)，H460(肺)，MCF－7(乳腺)，k562(白細胞)，HCT116(結腸)，HepG2(肝)，U20S(骨)，T98G(腦)，和OVCAR－3(卵巢)。檢測結果表明這十一種人的癌細胞對文冠果提取物的敏感程度不同，卵巢癌細胞最敏感，膀胱和骨癌細胞名癌細敏感，前列腺，白細胞，肝，乳腺和腦癌細胞稍敏感，結腸，肺和宮頸癌細胞欠敏感(請見表3.1)。

用色譜法，包括高效液相色譜(HPLC)和速效液相色譜(FPLC)法進一步提純分離文冠果提取物(請見第8和9圖)。從第8圖可見，經高效液相色譜(HPLC)文冠果提取物被分離成a－z 26個組分。這26個組分經MTT檢測，高效液相色譜的組分5962(請見第10圖)，即高效液相色譜的組分Y(請見第8圖)具有抗癌活性。組分5962進一步成4個組分：Y1，Y2，Y3和Y4(請見第11圖)。組分6356進一步成5－6個組分，即化合物Y5，Y6，Y7，Y8，Y9和Y10。組分Y1，Y2和Y3(或Y)具有抗癌活性(請見第2－3圖)也被分離出來。組分Y8，Y9和Y10也有抗癌活性(請見第4圖)也被分進一步純化。

對這些化合物用卵巢癌細胞進行MTT檢測，結果表明化合物Y的IC50為1.5μg/ml,原提取物(化合物Y從中提出)的IC50為20μg/ml,說明抑制卵巢癌細胞生長的作用提純後的化合物比原提取物要高出很多倍(比較第2和14圖)。而且，提純的化合物Y抑制人卵巢癌細胞和抑制宮頸癌細胞的作用比，活性更強(請參見第15圖)。

本專利提供了植物中提出和鑒定具有生物活性物質的方法，包括從無患子科的文冠果和其他植物中鑒定和提出具有生物活性物質的方法。用色譜法，包括高效液相色譜(HPLC)和速效液相色譜(FPLC)和質譜(MALDI－TOF)的方法確定化合物的化學結構。用癌細胞的MTT檢測，鑒定化合物的抗癌活性。

本專利提供了這些具有抗癌活性的化合物，即Y，Y1，Y2，Y8，Y9和Y10的化學結構(見第1圖)，本專利用Ys專指這些具有抗癌活性的化合物，命名為Xanifoila－Ys。

本專利提供了，從組分Y分離提純的化合物Y，Y1，Y2，Y8，Y9和Y10都一致具有的化學功能集團，即反位連接在處於相鄰的碳原子上雙當歸醯基。例如，化合物Y，Y2，Y8和Y10的雙當歸醯基分別連接在三萜皂苷原母核的碳21β位和22α位上(見第5圖)。化合物Y1和Y9的雙當歸醯基分別連接在一個糖鏈的糖的碳3位和4位上(見第6圖)。這六種化合物的雙當歸醯基反位連接在處於相鄰的碳原子上(見第7圖)。

本專利提供了由上述化合物和適當的載體或藥物載體組成的組合物(composition)。本專利還提供了由一定劑量的上述化合物和適當的藥物載體組成的藥物。本專利還提供由上述化合物，它的鹽類，酯類或它們的衍生物，或它們的代謝物組成的組合物。

本專利提供由上述組合物或藥物組成的供治療卵巢癌的藥物或組合物。本專利還提供由上述組合物或藥物組成的供治療其他癌症的組合物或藥物，如膀胱癌和骨癌。本專利還提供由上組合物或藥物組成的抗腫瘤的組合物或藥物。本專利還提供由上述組合物或藥物組成的供治療皮膚癌和KB癌。

本發明專利公開的這些化合物和其衍生物有強的抗癌作用。其作用機制很複雜，可調節可調節下列又不限於下列細胞活動途徑的環節或受體，如G蛋白細胞和其受體，Fas蛋白細胞和其受體，賴氨酸激酶和其受體，分裂素和其受體，轉化生長因數α(TGF－alpha)和轉化生長因數(TGF－beta)，轉化生長因數信號途徑和SMAD編譯調節基因，Ras－MAP激酶鏈信號途徑，基因調控蛋白Myc等通路的生化環節或其受體被不適當地活化或動過分活躍，會引起癌細胞的生成和增殖。本發明提供的文冠果提取物和新皂甙化合物，可調節這些生物通路活動的生化環節或其受體，防止癌變。由於基因突變癌細胞的殺死細胞的信號被阻斷了。因而，癌細胞就不斷的分裂，導致了癌變。本發明提供的文冠果提取物和新皂甙化合物，可疏通阻滯癌細胞“自殺”信號傳遞的通路，使癌細胞“自殺”。等的代謝活動。

本專利還提供由上述組合物或藥物組成的供抗病毒的組合物或藥物。本專利還提供由上述組合物或藥物組成的供抗溶血作用(hemolytic)的組合物或藥物。

本專利還提供由上述組合物或藥物組成的供治療以下疾病的組合物或藥物：長期靜脈功能不全，末梢水腫(peripheral edema)，高血脂，長期靜脈炎，靜脈曲張，靜脈綜合征，靜脈停止，祛痰藥，大腦器質性驚厥，大腦迴圈紊亂，大腦水腫，精神病，經痛，痔，episiotomies,haemonhoids,術後水腫，腿痛，瘙癢，下肢水腫，血栓，血栓性靜脈炎和胃潰瘍痙攣。

本專利還提供由上述組合物或藥物組成的供治療夜尿和尿頻的組合物或藥物。本專利還提供由上述組合物或藥物組成可改善膀胱傳遞給神經中樞信號的功能的組合物或藥物，以治療深度睡眠，鬆弛膀胱以增加儲尿量，從而防止夜尿。

本專利還提供化合物用於鬆弛逼尿肌，逼尿肌由於年齡增長，各種壓力，精神緊張，反應過激，情緒波動，反射亢進和膀胱無法抑制可引起逼尿肌緊張，誘發遺尿。本專利還提供化合物用於抑制乙醯膽鹼酶(AchE)的合成，調解乙醯膽鹼(Ach)的釋放，吸收和分解，從而改善大腦中樞系統和泌尿系統資訊的傳遞過程，避免遺尿的發生。本專利還提供化合物用於調解制尿賀爾蒙(ADH)的釋放，從而減少腎臟產尿的數量。

本發明提供的皂苷化合物可抑5－羥色氨的吸收。5－羥色氨的存在可維持和加強人的深度睡眠。文冠果提取物抑5－羥色氨的吸收，從而打破深度睡眠，使人在膀胱尿滿時可以驚醒，避免尿床。本發明提供的皂苷化合物可改善睡眠警覺系統，有助防止睡眠麻痹的(sleep paralysis)的發生。本發明提供的皂苷化合物有助於膀胱和括約肌的生長發育，提高儲尿量和減少排尿次數，從而避免遺尿的發生。

本專利還提供由上述化合物組成的組合物或藥物，以防治腦老化和腦血管病，增進記憶和開發智力，治療夜尿，遺尿，失禁，尿頻和弱智，老年癡呆，柏金遜症等由於腦功能不健全或障礙所引起的病症，並可防治風濕，關節炎，血管硬化症，血液迴圈病，心絞痛，冠心病，頭痛，眩暈，腎病和雷諾氏綜合症。

本專利還提供由上述化合物組成的組合物用於抗MS，抑制動脈瘤形成，抗哮喘，ANTIBRADYKINIC，抑制毛細血管出血，抑制頭痛，抑制頸臂痛，抗子癇，抗水腫，抗腦炎，抗會厭炎，抗滲出，抗感冒，抗骨折，抗齦炎，治療血液病，抗皰疹，抗組氨休克，抗關節積水，抗腦膜炎，抗牙周炎，抗靜脈炎，抗胸膜炎，antiraucedo，抗扁桃體炎，抗潰瘍，抗靜脈曲張，抗眩暈，抗腫瘤；可促進皮質類固醇生成，利尿，殺菌，溶血；用作抗氧化劑，玻璃酸酶抑制劑，利淋巴藥，促納尿排泄藥，殺蟲劑，垂體興奮藥，胸腺溶解藥，血管保護藥，靜脈滋補藥。

本專利的上述要求在美國專利N0.10/906,303(2005年2月14日遞交)，國際專利申請書的接續申請(N0.PCT/US04/43465,2004年12月23日遞交)，2004年10月8日遞交的國際專利申請書(N0.PCT/US04/33359)和美國專利申請書No.11/131551,2005年5月17日遞交中都有詳盡的描述，內容因而應全面地納入本專利申請書中。

本專利還提供由上述組合物可調節細胞中的酶的活動，如膀胱細胞中的酶的活動。本專利還提供由上述組合物可調節細胞的組成部分及其受體的活動，以促進細胞生長中。本專利的上述要求在美國專利申請書No.60/675,284,(2005年4月27日遞交)，有詳盡的描述，內容因而應全面地納入本專利申請書中。

本專利還提供由上述組合物可作用於監控細胞增值的生化途徑。本專利的這一要求在美國專利N0.10/906,303(2005年2月14日遞交)，國際專利申請書的接續申請(N0.PCT/US04/43465,2004年12月23日遞交)和2004年10月8日遞交的國際專利申請書(N0.PCT/US04/33359)有詳盡的描述，內容因而應全面地納入本專利申請書中。

本專利提供了可抗癌的三萜皂苷化合物或其衍生物，都一致具有的化學功能集團，即反位連接在相鄰的碳原子上當歸醯基或順芷醯基，千里光醯基。當歸醯基分別連接在三萜皂苷原母核的碳21β位和22α位上，或分別連接在一個糖鏈的糖的碳3位和4位上，該糖鏈連在三萜皂苷原母核的碳21β位或22α位上。這些種化合物可從植物中，主要是鼠李科(Sapindaceae)植物中分離提出，鼠李科有140－150個屬和1400－2000種植物。本專利的上述要求在美國專利申請(No.60/675,282)(2005年4月27日遞交)有詳盡的描述。

本發明專利也公開了不具有雙當歸醯基的皂苷化合物，初步試驗結果，不具有抗癌活性。它們也是從文冠果中提出的三萜皂苷化合物。

1，合物R1，分子式：C_{6 6} H_{1 O 6} O_{2 9} ，化學結構如下(見圖47)： 3－0－[當歸醯基－(1－3)－β－D－葡萄糖吡喃醯基－(1－6)]－β－D－葡萄糖吡喃醯基－28－0－α－L－鼠李糖吡喃醯基－(1→2)－β－D－葡萄糖吡喃醯基－(1－6)－β－D－葡萄糖吡喃醯基－3β,21β,22α,28－四羥基齊墩果－12－烯五環三萜皂苷。該化合物是從文冠果提取物組分R中提出來的，命名為Xanifolia－R1，屬於齊墩果三萜皂苷，有兩個糖鏈，僅有一個當歸醯基。

這一化學結構是根據H－NMR,C13－NMR，HMBC，HMQC和COSY二維核磁共振和質譜(MALDI－TOF)的方法確定的(請見圖48－52)。

2，合物054，分子式：C_{6 0} H_{I O 0} O_{2 8} ，化學結構如下(見圖53)： 3－0－β－D－葡萄糖吡喃醯基－(1－6)]－β－D－葡萄糖吡喃醯基－28－0－α－L－鼠李糖吡喃醯基－(1→2)－β－D－葡萄糖吡喃醯基－(1－6)－β－D－葡萄糖吡喃醯基－3β,21β,22α,28－四羥基齊墩果－12－烯五環三萜皂苷。該化合物是從文冠果提取物組分0中提出來的，命名為Xanifolia－054，屬於齊墩果三萜皂苷，有兩個糖鏈，沒有一個當歸醯基。該化合物無抗癌活性。

這一化學結構是根據H－NMR，HMBC和HMQC二維核磁共振的方法確定的(請見第54－56圖)。

3，從文冠果提取物組分X除了提出化合物Ys,R1和O54,還提純分離出其他化合物。其中一個是化合物X。分子式：C_{5 8} H_{9 2} O_{2 2} ，化學結構如下(見第70圖)： 3－0－{[β－D－半乳糖吡喃醯基(1→2)]－[α－L－阿拉伯糖呋喃醯基(1－3)]－β－D－葡萄糖醛酸吡喃糖苷丁酯}－21－O－乙醯基－22－O－當歸醯基－3β,16α,21β,22α,28－五羥基齊墩果－12－烯五環三萜皂苷。該化合物是從文冠果提取物組分X中提出來的，命名為Xanifolia－X，屬於齊墩果三萜皂苷，有一個糖鏈，僅有一個當歸醯基。

下麵通過實例進一步說明本專利公開的文冠果生物活性物質的製備方法。

實驗實例之一從文冠果植物中製備粗提取物的方法，其工藝過程如下：．採收文冠果樣品，其包括果殼，果柄，種殼，種仁，葉，枝幹，根，樹皮；．清選，乾燥，粉碎文冠果樣品，得文冠果樣品粉；．用種有機溶劑浸提文冠果樣品粉4－5次，每次20－35小時，(有機溶劑和樣品粉比例：2：1)，得有機溶劑浸提液；．收集浸提液，再回流熱提2－3次，溫度80℃，適當的次數)；．收集合併提取液，得文冠果二次有機溶劑浸提液；．回收有機溶劑得流浸膏；．乾燥和滅菌流浸膏，得粉狀文冠果粗提取物。

實驗實例之二用高壓液相色譜(HPLC)分離提純文冠果粗提取物方法和材料：色譜柱採用C18逆相μbondapak柱(Water P/N 27324)，用乙腈(10%－80%)為流動相，三氟乙酰酸(TFA，0.005%)為平衡溶液。文冠果粗提取物樣品溶入TFA(0.005%)中，濃度為1mg/ml。進樣20μg。用乙腈進行梯度洗脫，在70分鐘內，濃度由10%升到80%，流速0.5ml/分。然後，在濃度80%時再保持10分鐘(70－80分)。然後，乙腈濃度降到10%並保持25分鐘。組分檢測吸收波長207nm，記錄紙速度0.25cm/分，光密度(OD)滿程0.128。

所用儀器：Waters Model 510溶劑傳送系統；Waters 484吸收率可調探測器；Waters 745/745B資料調製器。

光譜吸收分析：文冠果提取物溶在10%乙腈－TFA中，用分光光度計(SpectronicIns.Model Gene Sys2)在波長200－700nm檢測文冠果提取物的吸收光譜。

結果：HPLC圖譜顯示，有60－70個峰。其中有4個為主要的峰，10個中等的峰，餘者為小峰，其中27個主要的峰按乙腈洗脫液的濃度遞增的順序編號為a－z(見第21圖)。三個被檢測到的最大吸收波長：207nm，278nm，和500nm(見第57圖)。

下面通過實例進一步說明本專利公開的MTT法檢測文冠果提取物的細胞特異性毒性反應的方法實驗實例之三用MTT法檢測文冠果提取物對人體癌細胞生長的影響方法和材料：下列11種人體癌細胞是從美國模式菌種保藏中心(American Type Culture Collection)獲得：HTB－9(膀胱)，HeLa－S3(宮頸)，DU145(前列腺)，H460(肺)，MCF－7(乳腺)，k562(白細胞)，HCT116(結腸)，HepG2(肝)，U20S(骨)，T98G(腦)，和OVCAR－3(卵巢)。HeLa－S3(宮頸)，DU145(前列腺)，MCF－7(乳腺)，HepG2(肝)和T98G(腦)細胞培養在MEN(Earle鹽)培養基上。HTB－9(膀胱)，H460(肺),562(白細胞)和OVCAR－3(卵巢)培養在RPMI－1640培養基上，其他細胞培養在McCoy－5A培養基上。這些培養基都要添加10%的牛胎兒血清，穀氨酰胺和抗菌素。在CO₂ 濃度為5%，溫度為37℃的培養箱內培養。

檢測方法基本按照Carmicheal et al.1987的方法，僅個別地方小有改動。這些細胞培養在有96個小穴的培養皿的小穴中24小時；每穴1萬HTB－9(膀胱)，HeLa－S3(宮頸)，H460(肺)，HCT116(結腸)，T98G(腦)，和OVCAR－3(卵巢)的細胞；每穴1.5萬DU145(前列腺)，MCF－7(乳腺)，HepG2(肝)和U20S(骨)的細胞；每穴4萬k562(白細胞)。然後，將文冠果提取物的試樣放入穴中，再培養48小時肝和骨癌細胞72小時，乳腺癌細胞96小時。然後，MTT(0.5mg/ml)加入每個穴中，培養1小時。產生的formazan溶於DMSO，然後用ELISA讀數器(Dynatech,Model R700)測它的O.D.值(TD)。加入試樣前的MTTO.D.值(TO)也要測出。每種細胞生長的百分數(%G)可按下面公式求出：%G＝(TD－TO/TC－TO)x 100(TC是對照細胞組的O.D.值)當TO<TD時，則細胞特異性毒性反應(LC)值為：% LC＝(TD－TO/TO)x 100結果：在這11種癌細胞中，可根據它們對文冠果提取物的敏感的程度(癌細胞生長被抑制的程度)分為4組：最敏感，敏感，稍敏感和欠敏感。最敏感的是卵巢癌細胞；敏感的是膀胱，骨，前列腺和白血病癌細胞；稍敏感(有點敏感)的是肝，乳房和腦癌細胞；欠敏感(不太敏感)的是結腸，宮頸和肺癌細胞(第14，15和16A，16B，16C圖)。它們的LC50值見表3.1。

同時發現，低濃度的文冠果粗提取物可稍稍刺激膀胱，骨，和肺細胞的生長，這時因為文冠果粗提取物含有刺激細胞或組織的生長的物質(第16A和16C圖)。

用膀胱細胞檢測從FPLC獲得的文冠果提取物個組分(第10圖)的對細胞生長的影響，結果表明，只有組分5962(即Y)抑制細胞的生長(第9圖)。

細節描述(3)下面通過實例進一步說明本專利公開的分離提純文冠果活性成分的方法。

實驗實例之四從文冠果粗提取物分離提純文冠果活性成分方法和材料：色譜柱採用十八碳烷基活化的矽膠柱，2 X 28cm，用乙腈(10%)和三氟乙酰酸(TFA，0.005%)平衡後食用。文冠果粗提取物樣品溶入TFA(10%)中，濃度為100mg/ml。進樣1－2 ml。用乙腈進行梯度洗脫，濃度由10%升到80%，總容積500 ml。檢測吸收波長254nm。從乙腈濃度10%到72%，每組分收集5 ml。

所用儀器：AKTA－FPLC,P920泵，監測器UPC－900,Frac－900。

結果：FPLC洗脫圖譜顯示，有4－5個主要的組分(見第9圖)。這些組分再用HPLC分析，其中27個主要的在圖8按順序編號為a－z特別的的成分，再在FPLC的組分圖譜上定位。經FPLC分離的組分被分為7組，並用於膀胱細胞生長的MTT檢測。結果表明，只有組分#5692(即HPLC組分Y)對膀胱細胞生長有抑制作用(第10圖)。在以後的實驗中還發現組分序號大於62的也對膀胱細胞生長有抑制作用。從組分63－65分離出的成分就對膀胱細胞生長有抑制作用(見第4，12和13圖)。

實驗實例之五用HPLC分離提純Ys系列化和物方法：採用備好的Waters Delta Pak C18－300A色譜柱。45%的乙腈等梯度洗脫，流動速率：1.0ml/分。檢測吸收波長207nm，收集有峰的組分，並真空冷凍乾燥。

結果：Ys系列化和物：Y1，Y2，Y或Y3，Y4被很好地分離出來，並分別予以收集(第11A和12B圖)。對Y重新用HPLC逆相C18色譜柱分析，仍是單一的峰(第11和12圖)。對Y8，Y9和Y10重新用HPLC反相C18色譜柱分析，仍都是單一的峰(第第13圖)。

提純Ys系列化和物為白色無定形粉末，可溶於醇，如甲醇和乙醇，50%的乙腈和100%的吡啶。

實驗實例之六用MTT法檢測Ys系列化和物對人體癌細胞生長的影響方法見實驗實例之三。結果表明化合物Y對卵巢癌細胞(OVCAR－3)有很強的抑制作用，LC50為1.5 ug/ml，比文冠果粗提物要高出10倍以上(第14圖)。化合物Y對人體癌細胞生長的抑制作用還有選擇性，如第15圖所示，Y對卵巢癌細胞生長的抑制作用比抑制宮頸癌細胞要高得多。第3和4圖分別顯示化合物Y1，Y2，和化合物Y，Y8，Y9，Y10對卵巢癌細胞(OVCAR－3)生長的抑制作用。

細節描述(4)下面通過實例進一步說明本專利公開的新化合物化學結構的確定的方法實驗實例之七化合物Y(即Y3)的化學結構的確定方法：核磁共振(NMR)法分析純的文冠果提取物Y組分樣品溶在含有0.05% TMS(V/V)的吡啶－D5(pydine－D5)中，用帶有QXI探頭(¹ H/^{1 3} C/^{1 5} N/^{3 1} P)的Bruker Avance 600 MHz核磁共振儀，獲得所有樣品的298k核磁共振譜。一維¹ H的核磁共振譜的掃描次數(16－128)取決於樣品的濃度。二維HMQC核磁共振譜，譜寬6000 x 24000Hz，t1和t2維的資料點分別為2024 x 256，掃描次數為4－128。二維HMBC核磁共振譜，譜寬6000 x 30000 Hz，t1和t2維的資料點分別為2024 x 256，掃描次數為64。這些二維資料通過數學演算和運用XWIN－NMR軟體進行Fourier變換，最後得到的二維HMQC和HMBC核磁共振譜的矩陣的規模分別是2048 x 256和2048 x 512(data points，F2 x F1)。

質譜分析文冠果提取物樣品的質量通過MALDI－TOF和ESL－MS質譜法來測定。

1)ALDI－TOF質譜法首先將樣品溶於乙腈中，然和CHCA母液混合(α－氰－4－羥基肉矽酸10mg/ml，溶於50：50水/乙腈和0.1% TFA中)。分子量通過高解析度的質譜儀測定。

2)SI－MS質譜法樣品通過LCQ DECA XP Plus(Thermo Finningan製造)質譜儀來測定。樣品用電噴霧電離(ESI)，溶劑是乙腈。

結果質子核磁共振譜如第18圖所示，二維HMQC和HMBC核磁共振譜的資料分別如第19和20圖所示。表5.1是二維核磁共振譜的資料化學位移資料和由這些資料而確定的化學功能集團。

化合物Y根據MALDI－TOF和ESL－MS質譜法測定的圖譜如第21和22圖所示，化合物Y的質量為1140.57，和理論的推算值相符。

根據這些資料和分析，化合物Y(即Y3)的化學結構如下圖(第17圖)所示：第17圖化合物Y(即Y3)的化學結構

3－0－[β－D－半乳糖吡喃醯基(1→2)]－α－L－阿拉伯糖呋喃醯基(1→3)－β－D－葡萄糖醛酸吡喃醯基－21,22－0－雙當歸醯基－3β,15α,16α,21β,22α,28－六羥基齊墩果－12－烯五環三萜皂苷。

結論從文冠果提出的化合物Y是齊墩果三萜皂苷，在母核碳3位有含有三個糖的糖鏈，在母核碳21和22位有雙當歸醯基。分子式：C_{5 7} H_{8 8} O_{2 3} 。有很強的抗癌活性。

實驗實例之八化合物Y1的化學結構的確定方法：近似於化合物Y(即Y3)的化學結構的確定，請見實驗實例之七。

結果氫－核磁共振譜如第24圖所示，二維HMQC，HMBC和COSY核磁共振譜的資料分別如第25，26和27圖所示。表6.1是二維核磁共振譜的資料化學位移資料和由這些資料而確定的化學功能集團。

根據這些資料和分析，化合物Y1的化學結構如下圖(及第23圖)所示：化合物Y1的化學結構

3－0－[β－D－半乳糖吡喃醯基(1→2)]－α－L－阿拉伯糖呋喃醯基(1→3)－β－D－葡萄糖醛酸吡喃醯基－21－0－(3,4－雙當歸醯基)－α－L－鼠李糖吡喃醯基－22－0－乙醯基－3β,16α,21β,22α,28－五羥基齊墩果－12－烯五環三萜皂苷。

結論從文冠果提出的化合物Y1是bisdesmosidic多羥基齊墩果三萜皂苷，在母核碳3位有一個含有三個糖的糖鏈，在母核碳21位還有一個糖鏈，含一個糖，該糖的碳3和4位連有當歸醯基。分子式：C_{6 5} H_{1 0 0} O_{2 7} 。該化合物有抗癌活性。實驗實例之九化合物Y2的化學結構的確定方法：近似於化合物Y(即Y3)的化學結構的確定，請見實驗實例之七。

結果：氫的一維和二維核磁共振譜，如第24圖所示，^{1 3} C的二維HMQC，HMBC和COSY核磁共振譜,以及質譜(MALDI－TOF)法的資料分別如第29－34圖所示。表7.1是一維和二維核磁共振譜的資料化學位移資料和由這些資料而確定的化學功能集團。

根據這些資料和分析，化合物Y2的化學結構如下圖(及第28圖)所示：第28圖化合物Y2的化學結構

3－0－[β－D－葡萄糖吡喃醯基(1→2)]－α－L－阿拉伯糖呋喃醯基(1→3)－β－D－葡萄糖醛酸吡喃醯基－21,22－0－雙當歸醯基－3β,15α,16α,21β,22α,24α,28－七羥基齊墩果－12－烯五環三萜皂苷。

結論從文冠果提出的化合物Y2是齊墩果三萜皂苷，在母核碳3位有含有三個糖的糖鏈，在母核碳21和22位有雙當歸醯基。分子式：C_{5 7} H_{8 8} O_{2 4} 。有很強的抗癌活性。

實驗實例之十化合物Y4的化學結構的分析結果：化合物Y4的質子核磁共振譜，如第58圖所示，二維HMQC核磁共振譜，如第59圖所示。

實驗實例之十一從文冠果粗提取物分離提純化合物Y8，Y9和Y10(1)用FPLC從文冠果粗提取物分離分離文冠果提取物方法：近似於實驗實例之四從文冠果粗提取物分離提純文冠果活性成分的方法。

結果：FPLC洗脫圖譜顯示，有4－5個主要的組分(見第9圖)。這些組分再用HPLC分析，4－5主要的成分從組分63，64和65(用乙腈45%等梯度分析)近一步分離出來，這就是Y8，Y9和Y10。這些成分收集起來，重新用HPLC反相C18色譜柱分析，仍都是單一的峰(第13圖)。

(2)用MTT法檢測Y8，Y9和Y10對人體癌細胞生長的影響方法見實驗實例之三。結果表明化合物Y8，Y9和Y10對卵巢癌細胞(OVCAR－3)都有抑制作用，LC50分別為3，4和1.5 ug/ml(第4圖)。

實驗實例之十二化合物Y8的化學結構的確定方法：近似於化合物Y(即Y3)的化學結構的確定，請見實驗實例之七。

結果：氫的核磁共振譜和^{1 3} C的二維HMQC核磁共振譜，以及質譜法的資料分別如第36－38圖所示。表9.1是一維和二維核磁共振譜的資料化學位移資料和由這些資料而確定的化學功能集團。

根據這些資料和分析，化合物Y8的化學結構如下圖(及第35圖)所示：化合物Y8的化學結構

3－0－[β－葡萄糖吡喃醯基(1→2)]－α－阿拉伯糖呋喃醯基(1→3)－β－葡萄糖醛酸吡喃醯基－21,22－0－雙當歸醯基－3β,16α,21β,22α,24α,28－六羥基齊墩果－12－烯五環三萜皂苷。分子式：C_{5 7} H_{8 7} O_{2 3} 。該化合物是從文冠果中提出來的，屬於齊墩果三萜皂苷，有一個糖鏈，含三個糖，糖鏈連接在五環母核的碳3位，在五環母核的碳21和22位連有當歸醯基。該化合物有抗癌活性。

實驗實例之十三化合物Y9的化學結構的確定方法：近似於化合物Y(即Y3)的化學結構的確定，請見實驗實例之七。

結果：氫的核磁共振譜和^{1 3} C的二維HMQC核磁共振譜,以及質譜法的資料分別如圖40－42所示。表10.1是一維和二維核磁共振譜的資料化學位移資料和由這些資料而確定的化學功能集團。

根據這些資料和分析，化合物Y9的化學結構如下圖(及第35圖)所示：化合物Y9的化學結構

3－0－[β－半乳糖吡喃醯基(1→2)]－α－阿拉伯糖呋喃醯基(1→3)－β－葡萄糖醛酸吡喃醯基－21－0－(3,4－當歸醯基)－α－鼠李糖吡喃醯基－28－0－乙醯基－3β,16α,21β,22α,28－五羥基齊墩果－12－烯五環三萜皂苷。分子式：C_{5 6} H_{1 0 0} O_{2 7} 。該化合物是從文冠果中提出來的，屬於齊墩果三萜皂苷，有兩個糖鏈，含三個糖的糖鏈連接在五環母核的碳3位，在五環母核的碳21位還有一個糖鏈，含一個糖，該糖的碳3和4位連有當歸醯基。該化合物有抗癌活性。

實驗實例之十四化合物Y10的化學結構的確定方法：近似於化合物Y(即Y3)的化學結構的確定，請見實驗實例之七。

結果：氫的核磁共振譜和^{1 3} C的二維HMQC核磁共振譜,以及質譜法的資料分別如圖40－42所示。表11.1是一維和二維核磁共振譜的資料化學位移資料和由這些資料而確定的化學功能集團。

根據這些資料和分析，化合物Y10的化學結構如下圖(第43圖)所示：第43圖化合物Y10的化學結構

3－0－[β－半乳糖吡喃醯基(1→2)]－α－阿拉伯糖呋喃醯基(1→3)－β－葡萄糖醛酸吡喃醯基－21,22－0－雙當歸醯基－3β,16α,21β,22α,28－五羥基齊墩果－12－烯五環三萜皂苷。分子式：C_{5 7} H_{8 7} O_{2 2} 。該化合物是從文冠果中提出來的，屬於齊墩果三萜皂苷，有一個糖鏈，含三個糖，糖鏈連接在五環母核的碳3位，在五環母核的碳21和22位連有當歸醯基。該化合物有抗癌活性。

實驗實例之十五從文冠果提取物中分離提純化合物R方法：(1)用FPLC和HPLC提純從文冠果粗提取物分離出的活性成分方法：近似於實驗實例之四從文冠果粗提取物分離提純文冠果活性成分的方法，不同的是30%的乙腈等梯度洗脫用於HPLC分離提純化合物R。

結果：從FPLC梯度洗脫出的組分39，40和41集中一起，進一步用30%的乙腈等梯度在ODC－C18柱上提純。6個可鑒定的的成分兩組收集起來，組分6－13近一步用HPLC特化。這些組分進一步用30%的乙腈等梯度在DeltaPak柱上分離出4－5個成分，成份R1為主成份(第60A圖)。提純的R1被收集起來(第60B圖)。

提純的R1化和物為白色無定形粉末，可溶於醇，如甲醇和乙醇，50%的乙腈和100%的吡啶。

(2)化合物R1的化學結構的確定方法：近似於化合物Y(即Y3)的化學結構的確定，請見實驗實例之七。

結果：核磁共振譜和及質譜法的資料分別如第48－52圖所示。根據這些資料和核磁共振譜的資料化學位移資料分析，化合物R1的化學結構如下圖(及第47圖)所示：第47圖化合物R1的化學結構

3－0－[當歸醯基－(1－3)－β－D－葡萄糖吡喃醯基－(1－6)]－β－D－葡萄糖吡喃醯基－28－0－α－L－鼠李糖吡喃醯基－(1→2)－β－D－葡萄糖吡喃醯基－(1－6)－β－D－葡萄糖吡喃醯基－3β,21β,22α,28－四羥基齊墩果－12－烯五環三萜皂苷。分子式：C_{6 5} H_{1 0 6} O_{2 9} 。該化合物是從文冠果提取物組分R中提出來的，屬於齊墩果三萜皂苷，有兩個糖鏈，僅有一個當歸醯基。

實驗實例之十六從文冠果提取物中分離提純化合物O方法：(1)用FPLC和HPLC提純從文冠果粗提取物分離出的活性成分方法：近似於實驗實例之四從文冠果粗提取物分離提純文冠果活性成分的方法，不同的是20%的乙腈等梯度洗脫用於HPLC分離提純化合物O。

結果：從FPLC梯度洗脫出的組分，進一步用20%的乙腈等梯度在HPLC上分析。通過和原圖譜比較，組分O被鑒定和收集出來，近一步用HPLC純化。在洗脫譜上可辨認出16種可鑒定的組分(第61圖)。組分28，34和54進一步提純(第62和63圖)，即分別為化合物028，034和054。

提純的028和034化和物為淡黃色無定形粉末，可溶於醇，如甲醇和乙醇，50%的乙腈和100%的吡啶。提純的054化和物為白色無定形粉末，可溶於醇，如甲醇和乙醇，50%的乙腈和100%的吡啶。

(2)化合物O54的化學結構的確定方法：近似於化合物Y(即Y3)的化學結構的確定，請見實驗實例之七。

結果：核磁共振譜和及質譜法的資料分別如第54－56圖所示。根據這些資料和核磁共振譜的資料化學位移資料分析，化合物O54的化學結構如下圖(見第53圖)所示：第53圖化合物O54的化學結構

3－0－β－D－葡萄糖吡喃醯基－(1－6)]－β－D－葡萄糖吡喃醯基－28－0－α－L－鼠李糖吡喃醯基－(1→2)－β－D－葡萄糖吡喃醯基－(1－6)－β－D－葡萄糖吡喃醯基－3β,21β,22α,28－四羥基齊墩果－12－烯五環三萜皂苷。分子式：C_{6 0} H_{1 0 0} O_{2 8} 。該化合物是從文冠果提取物組分O中提出來的，屬於bisdesmosidic多羥基齊墩果三萜皂苷，在母核碳3位有一個含有兩個糖的糖鏈，在母核碳28位還有一個糖鏈，含三個糖，無當歸醯基。

實驗實例之十七從文冠果提取物中分離提純化合物X方法：(1)用FPLC和HPLC提純從文冠果粗提取物分離出的活性成分方法：近似於實驗實例之四從文冠果粗提取物分離提純文冠果活性成分的方法，不同的是用HPLC進一步分離提純含化合物X的組分56和57。

結果：在色譜上可辨認出5個主峰和7個小峰，化合物X在洗脫譜中的中間部位(第64圖)。化合物X收集後冷凍乾燥保存。

提純的化合物X為白色無定形粉末，可溶於乙腈。

(2)用MTT法檢測化合物X對人體癌細胞生長的影響方法見實驗實例之三。結果表明化合物X對卵巢癌細胞(OVCAR－3)稍有抑制作用，LC50為27 ug/ml(第65圖)。

實驗實例之十八化合物X的化學結構的確定方法：近似於化合物Y(即Y3)的化學結構的確定，請見實驗實例之七。

結果：化合物X的質子和^{1 3} C核磁共振譜資料分別如第66和69圖所示。二維HMQC和HMBC的核磁共振譜資料分別如第67和68圖所示。表15.1是二維核磁共振譜的資料化學位移資料和由這些資料而確定的化學功能集團。

化合物X的根據MALDI－TOF和ESL－MS質譜法測定的圖譜如第71和72所圖示，化合物Y的質量為1140.60，和理論的推算值相符。

根據這些資料和核磁共振譜的資料化學位移資料分析，化合物X的化學結構如下圖(及見第70圖)所示：化合物X的化學結構

3－0－{[β－D－半乳糖吡喃醯基(1→2)]－[α－L－阿拉伯糖呋喃醯基(1－3)]－β－D－葡萄糖醛酸吡喃糖苷丁酯}－21－O－乙醯基－22－O－當歸醯基－3β,16α,21β,22α,28－五羥基齊墩果－12－烯五環三萜皂苷。分子式：C_{5 8} H_{9 2} O_{2 2} 。該化合物是從文冠果提取物組分X中提出來的，屬於齊墩果三萜皂苷，有一個糖鏈，僅有一個當歸醯基。

細節描述(5)下面通過實例進一步說明本專利公開的化合物的溶血作用和抗病毒作用的確定方法實驗實例之十九化合物Y的溶血作用的確定方法和材料：人的血漿從Houston Gulf Coast Blood Center獲得。紅血球用下面方法提取：用PBS將溶在EDTA的人的血漿稀釋(1：1)，置於Histopaque－1077(SIGMA)下，然後離心5分鐘(400 rpm)。收集紅血球，並用PBS沖洗三次。用PBS配製10%的紅血球懸浮液備用。50 ul的紅血球懸浮液加進在2 ml of不同濃度的皂苷溶液中，用渦環將它們混合勻，在室溫靜置換30分後，離心5分鐘(3000 rpm)。在540 nm測它的確上清液光吸收。

Xanifolia－Y(#63Y)的溶血作用和皂苷標凖品(SIGMA)，七葉樹皂苷比較。

結果：Xanifolia－Y(#63Y)的溶血作用(IC50＝1 ug/ml)比皂苷標凖品(SIGMA)和七葉樹皂苷都強(IC50＝5 ug/ml)，見圖(73A)。Xanifolia－Y(#63Y)含雙當歸醯基，七葉樹皂苷含一當歸醯基，皂苷標凖品是Quillaia樹皮皂苷混合。

實驗實例之二十堿和酸水解後的化合物Y的溶血作用和抗癌活性的變化化合物Y經堿水解後，當歸醯基被去掉，化合物Y經酸水解後，糖鏈被去掉，然後測定它的溶血作用和抗癌活性。結果表明，糖鏈被去掉後的化合物溶血作用和抗癌活性減弱(第74B圖)，當歸醯基被去掉後的化合物，溶血作用和抗癌活性都消失了(第74A圖)。說明了糖鏈對溶血有幫助作用，但不是決定作用(第73B圖)。

實驗實例之二十一化合物Y的抗病毒作用的確定方法：實驗有五種處理1，五種不同濃度的化合物Y預處理HIV病毒，2，從處理過的HIV病毒中去掉化合物Y。

3，把處理過的HIV病毒和細胞混合。

4，測細胞的病理學反應。

5，陰性對照；細胞無HIV病毒。

6，陽性對照；把未處理過的HIV病毒和細胞混合。

結果：化合物Y具有抗HIV病毒的活性。

最後，應說明的是，儘管本專利申請對諸條款的說明已描述的儘量的詳盡，但是在一些方面可能作改變，或新的發明也可能含在另外的條款中。這種改變可見于在新的發明中。引用別的專利和文獻僅為了更還好地說明而不是限制本專利的發明。

參考文獻

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第1圖，從文冠果提取物分離提純出來的6個有抗癌活性的皂苷化合物的化學結構。

第2圖，化合物Y的抗癌活性。用卵巢癌細胞(OCAR－3)作MTT檢測，詳見實驗實例3。橫坐標：濃度(μg/ml)，縱坐標：癌細胞生長(%)，IC50約為1－1.5μg/ml。A：點刻度，B：線刻度。

第3圖，化合物Y1和Y2抑制卵巢癌細胞(OCAR－3)的生長(%)。

第4圖，用卵巢癌細胞(OCAR－3)作MTT檢測，測定化合物Y，Y8，Y9和Y10的抗癌活性。

第5圖，皂苷化合物Y，Y2，Y9和Y10都具有抗癌活性的共識結構(consensus structure)。

第6圖，皂苷化合物Y1和Y9都具抗癌活性的共識結構(consensus structure)。

第7圖，六個有抗癌活性的皂苷化合物Y，Y1，Y2，Y8，Y9和Y10共同具有的雙當歸醯基這一功能集團。(A)當歸醯基位於三萜五環母核的碳21β和22α位。(B)通過酰化作用連在一個糖的碳3和碳4位上。雙當歸醯基是反位連接在處於相鄰的碳原子上。

第8圖，用帶有μbondapak C18柱的HPLC從文冠果提取物分離出的組分。詳見實驗實例2。

第9圖，文冠果提取物10－80%FPLC梯度洗脫圖。橫坐標：組分(5 ml/組分)，縱坐標：光密度(245nm)。

第10圖，用膀胱細胞作MTT檢測，測定文冠果提取物的生物活性。文冠果提取物是從FPLC分離提純的組分，從第9圖可以看出，組分5962(即組分Y)抑制膀胱細胞的生長，而組分610，1116和1724對胱細胞的生長稍有刺激作用。橫坐標：濃度(μg/ml)，縱坐標：細胞生長(%)。

第11圖，文冠果提取物組分Y的HPLC(使用Dlta Pak C18柱)45%乙腈等梯度洗脫圖。組分Y(Y3)，Y1，Y2被很好地分離開來，然後被提純出來。A和B分別顯示組分Y(Y3)和Y2的純度。

第12圖，文冠果提取物組分Y8，Y9和Y10的45%乙腈等梯度洗脫圖。組分Y8，Y9和Y10被很好地分離開來。

第13圖，提純後的文冠果提取物組分Y8，Y9和Y10的HPLC圖譜。

第14圖，卵巢癌細胞經文冠果提取物處理後(MTT檢測)的細胞的生長曲線。這是11種癌細胞MTT檢測的一種。結果顯示，卵巢癌細胞對文冠果提取物最敏感。其他10種癌細胞MTT檢測的結果見第16A，16B，16C圖。橫坐標：濃度(μg/ml)，縱坐標：細胞生長(%)。

第15圖，卵巢癌細胞和宮頸癌細胞對化合物Y的敏感程度的比較。MTT檢測結果表明，卵巢癌細胞的IC50約為1－1.5μg/ml，而宮頸癌細胞的IC50為20μg/ml以上(也見第16C圖)。說明對化合物Y的敏感程度卵巢癌細胞比宮頸癌細胞要高得多，也進一步肯定了化合物Y對抑制癌細胞有選擇性。

第16A圖，10種癌細胞經文冠果提取物處理後(MTT檢測)的細胞的生長曲線。根據對文冠果提取物的敏感程度，這11種癌細胞可分成四類(2)敏感：膀胱癌細胞和骨癌細胞(見第16A圖)。橫坐標：濃度(μg/ml)，縱坐標：細胞生長(%)。

第16B圖，10種癌細胞經文冠果提取物處理後(MTT檢測)的細胞的生長曲線。根據對文冠果提取物的敏感程度，這11種癌細胞可分成四類：(3)稍敏感：前列腺癌細胞，乳腺癌細胞和腦癌細胞，白細胞和肝癌細胞(見第16B圖)。橫坐標：濃度(μg/ml)，縱坐標：細胞生長(%)。

第16C圖，10種癌細胞經文冠果提取物處理後(MTT檢測)的細胞的生長曲線。根據對文冠果提取物的敏感程度，這11種癌細胞可分成四類：(4)欠敏感：結腸癌細胞，宮頸癌細胞和肺癌細胞(見第16C圖)。橫坐標：濃度(μg/ml)，縱坐標：細胞生長(%)。

第17圖，化合物Y的化學結構，分子式：C_{5 7} H_{8 8} O_{2 3} ，化學名稱：3－0－[β－D－半乳糖吡喃醯基(1→2)]－α－L－阿拉伯糖呋喃醯基(1→3)－β－D－葡萄糖醛酸吡喃醯基－21,22－0－雙當歸醯基－3β,15α,16α,21β,22α,28－六羥基齊墩果－12－烯五環三萜皂苷。

第18圖，化合物Y的質子核磁共振譜。

第19圖，化合物Y的二維HMQC核磁共振譜。

第20圖，化合物Y的HMBC的二維核磁共振譜。

第21圖，化合物Y的質譜(MALDI－TOF,EMC)：Y＋Mtrix(CHCA)＋Agiotension 1“兩點較准”。

第22圖，化合物Y的化合物Y的質譜(ESM－MS)。

第23圖，化合物Y1的化學結構，分子式：C_{6 5} H_{1 0 0} O_{2 7} ，化學名稱：3－0－[β－D－半乳糖吡喃醯基(1→2)]－α－L－阿拉伯糖呋喃醯基(1→3)－β－D－葡萄糖醛酸吡喃醯基－22－0－(3,4－雙當歸醯基)－α－L－鼠李糖吡喃醯基－22－0－乙醯基－3β,16α,21β,22α,28－五羥基齊墩果－12－烯五環三萜皂苷。

第24圖，化合物Y1的質子核磁共振譜。

第25圖，化合物Y1的二維HMQC核磁共振譜。

第26圖，化合物Y1的HMBC的二維核磁共振譜。

第27圖，化合物Y1的COSY核磁共振譜。

第28圖，化合物Y2的化學結構和化學名稱。

第29圖，化合物Y2的質子核磁共振譜。

第30圖，化合物Y2的二維HMQC水平1的核磁共振譜。

第31圖，化合物Y2的C13核磁共振譜。

第32圖，化合物Y2的二維HMBC水平1的核磁共振譜。

第33圖，化合物Y2的的二維HOHAHA(TOCSY)水平1的核磁共振譜。

第34圖，化合物Y2的質譜。

第35圖，化合物Y8的化學結構。

第36圖，化合物Y8的H核磁共振譜。

第37圖，化合物Y8的C13核磁共振譜。

第38圖，化合物Y8的二維HMQC水平1的核磁共振譜。

第39圖，化合物Y9的化學結構。

第40圖，化合物Y9的H核磁共振譜。

第41圖，化合物Y9的二維HMQC水平1的核磁共振譜。

第42圖，化合物Y9的二維HMBC水平1的核磁共振譜。

第43圖，化合物Y10的化學結構。

第44圖，化合物Y10的H核磁共振譜。

第45圖，化合物Y10的C13核磁共振譜。

第46圖，化合物Y10的二維HMQC水平1的核磁共振譜。

第47圖，化合物R1的化學結構和化學名稱：R1 ：3-0-[當歸醯基-(1-3)-β-D-葡萄糖吡喃醯基-(1-6)]-β-D-葡萄糖吡喃醯基-28-0-α-L-鼠李糖吡喃醯基-(1→2)-β-D-葡萄糖吡喃醯基-(1-6)-β-D-葡萄糖吡喃醯基-3β,21β,22α,28-四羥基齊墩果-12-烯五環三萜皂苷。

第48圖，化合物R1的質子核磁共振譜。

第49圖，化合物R1的二維HMQC核磁共振譜。

第50圖，化合物R1的二維HMBC的核磁共振譜。

第51圖，化合物R1的二維COSY核磁共振譜。

第52圖，化合物R1的C13核磁共振譜。

第53圖，化合物054的化學結構。

第54圖，化合物054的質子核磁共振譜。

第55圖，化合物054的二維HMQC核磁共振譜。

第56圖，化合物054的二維HMBC的核磁共振譜。

第57圖，文冠果提取物的吸收光譜。橫坐標：波長(nm)，縱坐標：光密度。文冠果提取物在波長207nm，278nm和500nm現示出最大吸收。

第58圖，化合物Y4的質子核磁共振譜。

第59圖，化合物Y4的二維HMQC核磁共振譜。

第60圖，用HPLC提純組分R。A：FPLC(iso-30)的組分 10進一步用HPLC分離；B：在同樣條件下，其中的主要組分進行進一步的液相色譜分離提純。

第61圖，用HPLC20%的乙腈等梯度(iso-20)洗脫組分O。

第62圖，組分O54，O28和O34(從iso-20得到的)重新色譜分離提純。

第63圖，A，一 皂苷化合物的化學結構，其中R1=當歸醯基，R2=當歸醯基，R3=OH或H，R4=H，OH，CH3，CH2OR6，或COOR6(R6=H，acetyl或R5)；R5=H或糖鏈，糖鏈中的糖有D-葡萄糖，D-半乳糖，L-鼠李糖，L-阿拉伯糖，D-木糖和糖醛酸：D-葡萄糖醛酸和D-半乳糖醛酸，及其衍生物，R6=H或Ac，R7=H，OH，CH₃ ，CH₂ OR6或COO R6(R6=H，醯基或糖鏈)。在五環母核的碳23，24，25，26，27，29和30與CH₃ ，或CH₂ OH，或烷基，或醯基或它們衍生物相聯接。B：一皂苷化合物的化學結構，其中R1=當歸醯基，R2=當歸醯基，R3=Ac或H，R4=H或OH；R6=H，Ac或R5；R5=H或糖鏈，糖鏈中的糖有D-葡萄糖，D-半乳糖，L-鼠李糖，L-阿拉伯糖，D-木糖和糖醛酸：D-葡萄糖醛酸和D-半乳糖醛酸，及其衍生物，在五環母核的碳23，24，25，26，27，29和30與CH₃ ，或CH₂ OH，或烷基，或醯基或它們衍生物相聯接。

第64圖，從FPLC得到的的組分5657的HPLC(iso-45)圖譜。

第65圖，化合物X對卵巢癌細胞生長的影響：卵巢癌細 胞生長的曲線 。

第66圖，化合物X的H的質子核磁共振譜。

第67圖，化合物X的二維HMQC核磁共振譜。

第68圖，化合物X的二維HMBC的核磁共振譜。

第69圖，化合物X的C13核磁共振譜。

第70圖，化合物X的化學結構。

第71圖，化合物X的質譜(MALDI-TOF)1。

第72圖，化合物X的質譜(MALDI-TOF)2。

第73圖，化合物Y的溶血作用；A：化合物Y和皂苷標準品，七葉樹皂苷的溶血作用比較；B：化合物Y和除去糖的、除去當歸醯基的Y溶血作用比較；C：化合物Y抗癌活性除去當歸醯基後消失；D：化合物Y抗癌活性除去糖鏈後下降。

第74圖，A， 化合物Y除去了當歸醯基；B，化合物Y除去了糖鏈。

第75圖，化合物的化學結構。

Claims (28)

1. 一種化合物，其包含化學結構(1)如下： 其中R₁ =當歸醯基，R₂ =當歸醯基；R₃ =OH或H；R₄ =CH₃ 或CH₂ OH；R₇ =H；R₆ =L-阿拉伯糖；R₅ =糖鏈，糖鏈中的糖含有D-葡萄糖或D-半乳糖，它的鹽類，或酯類。
2. 一種化合物，其包含化學結構(2)如下： 其中R₁ =當歸醯基，R₂ =當歸醯基；R₃ =Ac或H；R₄ =Ac或H；R₅ =CH₃ 或CH₂ OH，它的鹽類，或酯類。
3. 一種化合物，其包含化學結構(3)如下： 其中R₁ =當歸醯基，R₂ =當歸醯基；R₃ =OH或H；R₄ =CH₃ 或CH₂ OH；R₆ =Ac或H；R₅ =糖鏈，糖鏈中含有3個糖，或糖醛酸，或D-葡萄糖，或D-半乳糖，或L-鼠李糖，或L-阿拉伯糖，或D-木糖，或D-葡萄糖醛酸，或D-半乳糖醛酸，它的鹽類，或酯類。
4. 一種化合物Y3，其包含化學結構如下： ，其化學式：3-0-[β- D-半乳糖吡喃醯基(1→2)]-α-L-阿拉伯糖呋喃醯基(1→3)-β-D-葡萄糖醛酸吡喃醯基-21,22-0-雙當歸醯基-3β,15α,16α,21β,22α,28-六羥基齊墩果-12-烯五環三萜皂苷，或它的鹽類。
5. 一種化合物Y1，其包含化學結構如下： ，其化學式：3-0-[β- D-半乳糖吡喃醯基(1→2)]-α-L-阿拉伯糖呋喃醯基(1→3)-β-D-葡萄糖醛酸吡喃醯基-22-0-(3,4-雙當歸醯基)-α-L-鼠李糖吡喃醯基-21-0-乙醯基-3β,16α,21β,22α,28-五羥基齊墩果-12-烯五環三萜皂苷，或它的鹽類。
6. 一種化合物Y2，其包含化學結構如下： ，其包含化學式：3-0- [β-D-葡萄糖吡喃醯基(1→2)]-α-L-阿拉伯糖呋喃醯基(1→3)-β-D-葡萄糖醛酸吡喃醯基-21,22-0-雙當歸醯基-3β,15α,16α,21β,22α,24α,28-七羥基齊墩果-12-烯五環三萜皂苷，或它的鹽類。
7. 一種化合物Y8，其包含化學結構如下： ，其包含化學式：3-0- [β-葡萄糖吡喃醯基(1→2)]-α-阿拉伯糖呋喃醯基(1→3)-β-葡萄糖醛酸吡喃醯基-21,22-0-雙當歸醯基-3β,16α,21β,22α,24α,28-六羥基齊墩果-12-烯五環三萜皂苷，或它的鹽類。
8. 一種化合物Y9，其包含化學結構如下： ，其包含化學式：3-0- [β-半乳糖吡喃醯基(1→2)]-α-阿拉伯糖呋喃醯基(1→3)-β-葡萄糖醛酸吡喃醯基-21-0-(3,4-當歸醯基)-α-鼠李糖吡喃醯基-28-0-乙醯基-3β,16α,21β,22α,28-五羥基齊墩果-12-烯五環三萜皂苷，或它的鹽類。
9. 一種化合物Y10，其包含化學結構如下： ，其包含化學式：3-0- [β-半乳糖吡喃醯基(1→2)]-α-阿拉伯糖呋喃醯基(1→3)-β-葡萄糖醛酸吡喃醯基-21,22-0-雙當歸醯基-3β,16α,21β,22α,28-五羥基齊墩果-12-烯五環三萜皂苷，或它的鹽類。
10. 一種能抑制腫瘤細胞生長的組合物，其特徵在於包含如申請專利範圍第1-9項中任一項的化合物和醫學上可接受的載劑。
11. 如申請專利範圍第10項之組合物，其中該組合物係用於治療卵巢癌。
12. 一種能抑制病毒生長的組合物，其包含如申請專利範圍第1-9項中任一項作為活性作用物質的化合物和醫學上可接受的載劑。
13. 一種化合物X，其包含化學結構如下： ，其化學式：3-0- {[β-D-半乳糖吡喃醯基(1→2)]-[α-L-阿拉伯糖呋喃 醯基(1-3)]-β-D-葡萄糖醛酸吡喃糖苷丁酯}-21-O-乙醯基-22-O-當歸醯基-3β,16α,21β,22α,28-五羥基齊墩果-12-烯五環三萜皂苷。
14. 一種化合物，其包含化學結構(5)如下： 其中R₁ 是當歸醯基，乙醯基或含有雙當歸醯基的糖鏈(雙當歸鼠李糖吡喃醯基)；-R₂ =是當歸醯基，乙醯基或H；R₃ =OH或H；R₄ =CH₂ OH或CH₂ OR₆ (R₆ =乙醯基)；R₅ =糖鏈或其衍生物，糖鏈中含有3個糖，糖醛酸，D-葡萄糖，D-半乳糖，L-鼠李糖，L-阿拉伯糖，D-木糖，D-葡萄糖醛酸，或D-半乳糖醛酸；碳位置24含有CH₃ 或CH₂ OH；其中選擇為(1)：R₅ 含有半乳糖吡喃醯基，阿拉伯糖呋喃醯基，葡萄糖醛酸吡喃醯基，R₁ 含有當歸醯基，R₂ 含有當歸醯基，R₄ =CH₂ OH；(2)：R₅ 含有半乳糖吡喃醯基，阿拉伯糖呋喃醯基，葡萄糖醛酸吡喃醯基，R₁ 含有(雙當歸鼠李糖吡喃醯基)，R₂ 含有乙醯基，R₄ =CH₂ OH；(3)：R₅ 含有葡萄糖吡喃醯基，阿拉伯糖呋喃醯 基，葡萄糖醛酸吡喃醯基，R₁ 含有當歸醯基，R₂ 含有當歸醯基，R₄ =CH₂ OH；(4)：R₅ 含有半乳糖吡喃醯基，阿拉伯糖呋喃醯基，葡萄糖醛酸吡喃醯基，R₁ 含有(雙當歸鼠李糖吡喃醯基)，R₂ 含有OH，R₄ 含有CH₂ O乙醯基；(5)：R₅ 含有半乳糖吡喃醯基，阿拉伯糖呋喃醯基，葡萄糖醛酸吡喃糖苷丁酯，R₁ 含有乙醯基，R₂ 含有當歸醯基，R₄ =CH₂ OH。
15. 一種組成物，其包含如申請專利範圍第14項作為活性作用物質的化合物和醫學上可接受的載劑。
16. 如申請專利範圍第15項之組成物，其中該化合物之化學結構(5)中，R₅ 含有半乳糖吡喃醯基，阿拉伯糖呋喃醯基，葡萄糖醛酸吡喃醯基，R₁ 含有當歸醯基，R₂ 含有當歸醯基，R₄ =CH₂ OH。
17. 如申請專利範圍第15項之組成物，其中該化合物之化學結構(5)中，R₅ 含有半乳糖吡喃醯基，阿拉伯糖呋喃醯基，葡萄糖醛酸吡喃醯基，R₁ 含有(雙當歸鼠李糖吡喃醯基)，R₂ 含有乙醯基，R₄ =CH₂ OH。
18. 如申請專利範圍第15項之組成物，其中該化合物之化學結構(5)中，R₅ 含有葡萄糖吡喃醯基，阿拉伯糖呋喃醯基，葡萄糖醛酸吡喃醯基，R₁ 含有當歸醯基，R₂ 含有當歸醯基，R₄ =CH₂ OH。
19. 如申請專利範圍第15項之組成物，其中該化合物之化學結構(5)中，R₅ 含有半乳糖吡喃醯基，阿拉伯糖 呋喃醯基，葡萄糖醛酸吡喃醯基，R₁ 含有(雙當歸鼠李糖吡喃醯基)，R₂ 含有OH，R₄ 含有CH₂ O乙醯基。
20. 如申請專利範圍第15項之組成物，其中該化合物之化學結構(5)中，R₅ 含有半乳糖吡喃醯基，阿拉伯糖呋喃醯基，葡萄糖醛酸吡喃糖苷丁酯，R₁ 含有乙醯基，R₂ 含有當歸醯基，R₄ =CH₂ OH。
21. 一種如申請專利範圍第15-20項中任一項之組成物使用於製備用於治療癌症之藥物的用途。
22. 一種如申請專利範圍第1-9項之化合物之提取方法，其包含下列步驟：(a)用有機溶劑浸提文冠果或其他無患子科植物樣品粉，得機溶劑浸提液；(b)收集機溶劑浸提液；(c)回流熱提收機溶劑浸提液，得第二提取物；(d)回收有機溶劑，得流浸膏；(e)乾燥和滅菌第二提取物，得粉狀粗提取物；(f)用速效液相色譜(FPLC)和高效液相色譜(HPLC)把粉狀文冠果提取物(g)分離成一至多個成分(監測吸收波長207或254)；(h)檢測出上述成分中的具有生物活性的成分；(i)用速效液相色譜(FPLC)提純和分離上述具有生物活性的成分；(j)再用高效液相色譜(HPLC)分離出具有生物活性的化 合物。
23. 如申請專利範圍第1-9項中任一項之化合物，可以用化學方法合成。
24. 如申請專利範圍第1-9項中任一項之化合物，可以從自然資源或產品中提取。
25. 如申請專利範圍第14項的化合物，其用於治療癌症或抑制病毒。
26. 一種抑制癌細胞生長的組合物，其包含如申請專利範圍第14項的化合物和醫學上可接受的載劑。
27. 一種抑制病毒、真菌和細菌生長的組合物，其特徵在於包含如申請專利範圍第14項的化合物和醫學上可接受的載劑。
28. 一種能抑制HIV病毒或急性呼吸道綜合症病的組合物，其特徵在於包含如申請專利範圍第14項的化合物和醫學上可接受的載劑。