1329648 玖、發明說明 (發明說明應敘明：發明所屬之技術領域、先前技術，内容、實施方式及，式簡單说明） C發明所屬之技術領域3 發明領域 本發明係關於包括癌症等疾病之診斷及治療技術，本 5 發明所涉及之疾病的類型包括衍生自上皮細胞的癌症以及 惡性淋巴瘤，本發明亦關於其他的病症，諸如腫瘤發生前 的狀態、腸道激躁症和病毒與其他的感染。極為可能的是 ，本發明亦可應用在其他疾病和病症上。 10 發明背景 腺苷三磷酸(ATP)可活化已知為P2X受體的配體-閘控 之嗓吟功能性受體（purinergic receptors)，受體的次類型 P2X|至P2X7已被鑑定出來，目前已知，不同的ρ2χ受體 次類型會出現在很多的細胞中，包括了上皮細胞以及包括 15 有淋巴細胞、胸腺細胞、巨唾細胞和樹狀細胞的白血球細 胞。 P2X受體可讓約離子和其他諸如卸和鈉之陽離子通透 ’一經由一 P2X受體而使妈離子流入一細胞係與細胞的死 亡有關。 20 一般相信，在很多的細胞類型中，該P2X7次類型係涉 及細胞凋亡或計畫性細胞死亡，在ATP存在下，表現在一 細胞表面的該P2X7受體能夠在一秒内打開通過該細胞膜的 釣通道’持續暴露在ATP中可在數秒至數十秒内導致大孔 6 1329648 玖、發明說明 洞的形成，而使得過多的鈣流入（注滿）該細胞，導致細胞 凋亡。 例如，人類或大鼠的P2X7受體之胺基酸序列為已知的 ，從美國專利案第6,133,434號（Buell等人）可得知，亦可 5 參考本說明書的第1圖。 例如在上皮癌症細胞的情況中，暴露在ATP中一般不 會造成細胞凋亡，目前已發現，這類細胞會表現無法形成 孔洞的P2X7受體，這種受體被視為非功能性受體。 在諸如前列腺PC3和乳房MCF7之人類的癌細胞株中 10 ，以及在包括嚅齒類動物之融合瘤的動物細胞株中，發現 位在該細胞表面上之P2X7受體係為一非功能性的形態。 5玄專患有惡性淋巴瘤之病患的B -細胞係表現有非功能性 P2X?受體，淋巴瘤係從逃離了細胞溶解之破壞作用的惡性 株而發展出來，此過程造成惡性B-淋巴細胞的逐漸累積， 15 並且因此而造成淋巴結腫大和/或脾腫大。 t發明内容3 發明概要 在一第一態樣中，本發明提供一用於一疾病或病症之 偵測的探針，該探針係用於辨別功能性P2X7受體和非功能 20 性p2X?受體，較佳地’該探針係藉由偵測關於腺苷三碟酸 (ATP)結合至該受體之改變，或是藉由偵測一或多種為 P2X?受體的孔洞形成所需之蛋白質結合上的改變，以用於 辨別功能性和非功能性P2X?受體。在一可任擇的實施例中 7 1329648 玖、發明說明 ’該探針係偵測暴露在缺少結合ATP 下的一或多個部分之 p2X7受體，此受體部分可包括一 ρ2χ7單體。 本發明亦提供一種用以偵測一疾病或病症的方法，該 方法包括使用本發明之探針來辨別功能性P2X?受體和非功 5能性Ρ2Χ7受體，提供一受體表現的圖像，以及將該受體表 現的圖像與一正常的圖像作比較，例如，該改變連同該探 針本身可如上所陳述被偵測。 該探針可為天然或合成的，較佳地，該探針係為一抗 體’其係為多株、單株、重組、一擬人化抗體、一人類抗 10體或其等之一適當片段，該抗體係較佳地為針對一位於一 鄰接於一用於結合ΑΤΡ之位置的細胞外區段（domain)之受 體的一抗原決定基’在人類P2X7受體的情況中，該探針係 較佳地用以辨別其中具有一在胺基酸21〇為該反構型的脯 胺酸序列的功能性受體，以及其中具有一在胺基酸21〇為 15該順構型的脯胺酸序列的非功能性受體，以使得於該局部 蛋白質結構中有顯著的改變。 該探針可使用任何為習於此藝者所容易思及之適合的 技術來予以製備。 該探針可透過偵測發生於一用於結合ATP之位置上之 20 其他形態的改變，來辨別功能性和非功能性受體，此係落 入本發明之範鳴内，例如，所偵測到的改變或許是在某— 胺基酸而非於上所提及的捕胺酸，此一胺基酸的一個例子 係為Prol99，當Pro 199為順構型時，會顯著地改變該局部 8 1329648 玖、發明說明 蛋白質結構。而另一個例子，所偵測到的改變或許為某些 其他的態樣》 該探針亦可適用於偵測其他偵測在功能性狀態上未改 變之P2X7受體的其他區域，該等缺少了結合Ατρ的單體 5 次單元之形態或許可使用該探針來予以偵測，即所選擇之 抗原決定基可特定地偵測出只有當ATp未結合時該受體可 進入之表面的一區域的形狀’該探針可偵測一或多種蛋白 質在結合上的改變，例如孔洞形成所必需之辅助性或其他 蛋白質’此等蛋白質的例子係為但非-限制於層粘蛋白 10 (laminin)、整合蛋白（integrin)、β-肌動蛋白（beta_actin)、 〇：-辅肌動蛋白（alpha-actinin)和超絨毛蛋白（superviinn)。 在本發明中’一種P2X?次類型-特定抗體可被使用來 特定地偏測或結合至非功能性Ρ2χ7受體，該非功能性 P2X?受體係被表現於形成腫瘤生成前的組織之部份的細胞 15内或之上、非常早期之腫瘤生成組織、已發展之腫瘤生成 組織以及任何可表現非功能性MX?受體的腫瘤生成細胞上 ，因此，該P2X?受體只有當處於該閉合_閘控或非功能性 的形態時可被偵測或結合，雖然該Ρ2χ7受體能正常地被表 現在該等細胞膜中，且能夠同時部分地執行一通道的功能 20 〇 再者，該等缺少了結合ΑΤΡ的單體次單元之形態亦可 藉由該探針抗體予以偵測，因為所選擇之抗原決定基可特 定地偵測出只有當ΑΤΡ未結合時可進入之表面的一區域的 形狀。 9 1329648 玖、發明說明 在本發明中，該等非功能性P2X?受體可藉由使用一針 對一抗原決定基的抗體而被偵測或結合，該抗原決定基經 過了 一源自於該功能性受體結構上形態的改變，目前已發 現°亥専非功此性受體之胺基酸序列可相同於該等功能性 5受體之胺基酸序列，所以，於該等受體中該形態改變的原 因係與該等受體和ATP之間的作用有關，如上所述，該等 ATP为子係作為受體的同效劑，所以當Ατρ被結合至該等 文體時，它們能夠打開一通過該細胞膜之通道以用於鈣離 子的流入，因此，非功能性係由於缺少了該等ATp同效劑 1〇與该等受體之適當的結合所引起，造成之原因可包括透過 生成的缺乏或促進降解的速率，造成ATp局部之可用性的 缺乏，如果ATP結合至該等受體被破壞，會改變該受體的 形態，此改變可藉由使用一特別設計用來結合至該蛋白質 之區域的抗體來予以偵測，而該區域係會受到Ατρ之結合 15 的影響。 在人類P2X7受體的情況中，涉及該形態改變的特定序 列可包括Pro210，在缺少結合ATP之下，pr〇21〇係經過一 自該反式轉變為該順式之形態的改變，因此，在人類ρ2χ7 受體的情況中，一為被產生之抗體所對抗之適當的抗原決 20定基序列必須包括Pro21〇，且可延伸至此殘基的任一側， 直到可引起一抗體反應所需要之適當程度，藉由非限制的 例子，此可包括一從Gly200延伸至Cys216的片段，再者 ’一與其他哺乳類動物相似的片段，諸如鼠類當其能與 人類組織父叉反應時可被使用，例如，雖然相較於人類的 10 玖、發明說明 序列，在鼠類序列中有二個胺基酸的取代，鼠類之Gly200 至Cys216之相同片段可被使用（例如，參考美國專利第 6，133,434 號）。 在该非人類受體的情況下，該特定的序列可藉由適合 5 的實驗來予以確定。 根據本發明之非功能性P2X?受艎的偵測可顯示一分佈 杈式，其中功能性受體（因此為正常的細胞）基本上仍然不 會被標5己，然而，起初在該等細胞之細胞核以及細胞質中 ，在腫瘤生成前之—非常早期的階段，P2X?受體之非功能 1〇性的形態可被偵測，例如，在上皮細胞癌的情況中，使用 本發明的方法可能可早於一般癌症病癥出現（係藉由活組織 檢查的蘇木精和曙紅（「H&E」）染色的組織玻片予以偵測） 的數年内偵測出腫瘤生成前之狀態，因此，諸如前列腺、 皮膚和乳房的癌症可在遠早於現況下而被偵測出，而具有 15早期引入治療的好處。 該等藉由本發明之探針與方法予以偵測的疾病和病症 之完整範圍尚未被確定，然而，一般相信的是，該等疾病 和病症包括諸如前列腺、乳房、皮膚、肺、子宮頸、子宮 、胃'食道、膀胱、結腸以及陰道癌等之上皮細胞癌症， 20以及包括惡性淋巴瘤的血癌，腸道激躁症和經諸如HIV之 病毋或其他諸如結核分枝桿菌⑷ 之病原生物之傳染，傳染會造成非功能性受體的表現，一 者係直接地透過抑制功能性所需之輔選因子，或是透過作 用為抑制於上皮或其他細胞之P2X7功能之輔選因子的正 玖、發明說明 向調控，以使仔該党傳染之細胞較少經由細胞洞亡而被破 壞。 除非其他的指明，在此所使用之「疾病或病症」一詞 係意欲包括如前段所說明之所有此等特定的疾病和病症。 5 在該等腸道㈣症（「脱」）之特定病例中，現在已經 發現到，具有此病症之病患中，其腸黏膜係變成正向-調控 ’腸勒膜於出現在該上皮下的基質之廣泛分佈的淋巴細胞 中會正常地表現P2X7受體’在受到影響之病患中，從十二 指腸至直腸的黏膜可觀察到此種增加的表現，該增加的表 1〇現可在不同的區域被發現，或是在更嚴重的情況令可大致 地增加於該腸道的全長中。 在该等最輕微罹病的情況中，所有的ρ2χ7受體係被正 向調控，但該萃係全部為功能性的且它們不會穿過該上皮 ’在更嚴重的情況中，所有的P2X7受體的表現更高，且於 15该腸之大部份罹病的範圍中所表現之受體係為非功能性的 ，例如，位於盲腸黏膜，且會穿過該上皮，該最嚴重的情 況係為，其中所有P2X?受體的表現更為增加且大部分之受 體為非功能性的，並伴隨著增加上皮細胞的穿透。 正如已經討論過的，P2X?受體之非功能性的肇因係由 2〇於缺乏ATP同效劑至該受體之適當的結合，造成之原因係 〇括透過生成的缺乏，或是藉由ATp之外-腺答三碟酸酶 (ecto-ATPase)之酵素的降解而促進降解的速率，造成於 ATP局部之可用性的缺乏；如果破壞ATp與該受體的結合 ,該受體之形態係如已討論的情況下被改變，且可使用本 12 1329648 玖、發明說明 發明之探針來予以偵測，但是，所有P2X7受體之分佈的偵 測最好使用一 P2X7受體之細胞外區段的其他區域的抗原決 定基來達成，該等區域並不會受到ATP結合的影響，經由 偵測為功能性和非功能性形態所共有的抗原決定基，諸如 5 Val65-Lys81，該探針可以偵測功能性狀態未被改變之P2X7 受體的區域。使用一或二種P2X7次類型-特定的抗體以特 定地辨別所有P2X7分佈以及為非功能性且表現於腸黏膜中 之受體的比例係落入本發明的範圍中，因此，同時使用該 二種抗體可以偵測總受體數量與此等僅出現於閉合-閘控或 10 非功能性形態之受體通道。 該第一抗體係用於偵測總P2X7受體的表現，包含有或 是被連接在上本發明之抗體的探針可以提供用於IBS之偵 測的第二抗體，其不只辨別功能性和非功能性P2X7受體， 而且亦予許用於偵測該受體之功能狀態未改變的其他區域 15 ，該等抗體可被分開或一起使用，可能地，它們可組合使 用。 不同於非功能性P2X7受體的偵測，所有P2X7受體的 偵測可決定該病症之嚴重性，於胃腸黏膜中之非功能性 P2X7受體的表現發生於一模式中，該模式中之正常細胞本 20 質上仍然不會被標記，其後，P2X7的非功能性的形態係首 先在上皮下的基質中被偵測到，其係從該徵候群輕度病例 中的隔離斑（isolated patches)到廣泛表現於具有非功能性受 體滲入該上皮之隔離斑的胃腸道全長中。 13 1329648 玖、發明說明 本發明亦提供一種診斷腸道激躁症的方法，其包含偵 測細胞和/或組織之P2X?表現圖像，並將該圖像與一正常 細胞和/或組織之預先表現圖像作一比較，較佳地該 P2X7表現圖像之偵測包括一或多種抗體的使用，再者，此 5 一抗想或此等抗體係較佳為不同於本發明之探針，因為它 們無法偵測出關於ATP結合至該等P2X?受體之改變。此 等抗體之製備係為一熟習此藝者所能易於思及的。 本發明亦包括用以診斷腸道激躁症之一或多種抗體的 使用。 10 於下文中會討論此一病症的治療方法，其係與本發明 的第三個態樣有關聯。 該診斷可使用標準免疫細胞化學技術之標準顯微鏡。 此診斷亦可被使用於活體内viv〇)。 藉由使用原位影像技術來偵測身體組織中之分佈，可 15達成使用該探針和本發明之方法的診斷，另外，可使用標 準顯微鏡、共焦顯微鏡以及螢光活化的細胞分離，一般的 免疫細胞化學技術（用於測試淋巴、前列腺、乳房、皮膚、 肺、子宮、膀胱、子宮頸、胃、食道、結腸和相近的活組 織檢查）以及細針吸引術（乳房和其他組織以及諸如取自於 20子宮頸癌偵測之細胞塗片）可被使用。 就活體内的診斷而言，較佳的是，該探針為一種於不 含動物成分下所製備的人類抗體或是區段，該抗體較佳為 破一具有短-生命期的放射性標誌所標記，其藉由掃瞄技術 ’諸如正子射出斷層掃瞄（PET掃瞄儀），來偵測，此類影 14 1329648 玖、發明說明 像可以偵測身體任一處經標記抗體的聚集，因而產生非功 能性受體存在以及任何腫瘤存在的信號，理想地此一檢 測應僅被進行於原發性癌症偵測之後，且為用於檢查次發 性癌症的目的，或是在藉由一血液檢測而已偵測到一或多 5種腫瘤存在可能性的一般性篩檢之後（參見下文卜 本發明的探針和方法可被用來提供一種用於偵測非功能性 P2X?受體及hence癌症或癌症前的病症的血液檢測，例如 種螢光標s己抗體形式的探針（單株或多株）可被用於流 式細胞儀對抗該病患的血液細胞分液，為了偵測於在不同 10閘控的淋巴細胞上結合至非功能性受體，包括T淋巴細胞 ' B淋巴細胞或是巨噬細胞。 在另一種形式的血液檢測中，該探針較佳為採用一種 接於基質上經標s己抗體的形式，為一套組所提供，而能 夠藉由該固定化的抗體結合至正性白血球之顏色反應的呈 15現來偵測’此一套組可適合用於開業醫師。 於一獐相似的血液檢測中，本發明的抗體探針可用作 為一種用於篩檢病患的診斷工具，該病患可能並未罹患癌 症但是經由一或多種淋巴細胞上P 2 X 7功能的喪失而抑制其 正常的細胞死亡途徑，此等病患可於巨噬細胞上表現非功 20此性觉體，而意謂了抑制該等巨喔細胞殺死受感染細胞的 能力’諸如該等受微生物感染的患者，像是結核分枝桿菌 (Mycobacterium tuberculosis)或其他感染物包括瘧疾 (malaria)和HIV;此等微生物會優先地於經由一或多種淋 巴細胞上P2X?功能喪失而抑制其正常細胞死亡途徑的患者 15 1329648 玖、發明說明 中增殖。 其他的技術可使用於本發明的探針和方法中。 本發明提供一種用以治療一疾病或病症的抗體，該抗 體係適用於辨別功能性P2X7受體和非功能性Ρ2χ7受體， 5且僅結合至非功能性受體，較佳地，該抗體係藉由偵測關 於腺苷三磷酸(ΑΤΡ)結合至該受體之改變，或是藉由偵測一 或多種為P2X?受體的孔洞形成所需之蛋白質結合上之改變 ’以用於辨別功能性Ρ2Χ7受體和非功能性ρ2χ7受體，且 僅結合至非功能性受體，在另一個具體例中，該抗體藉由 10偵測暴露在缺少結合ΑΤΡ下之受體部分，以用於辨別功能 性Ρ2Χ7受體和非功能性Ρ2Χ7受體。 用以治療疾病或病症的抗體可相同於使用來作為診斷 疾病或病症之探針的抗體，例如，此一抗體可被用來局部 地治療皮膚癌’就癌症的系統化治療而言，為了使不為所 15 欲之免疫反應的副作用減到最小，該抗體和其活性片段應 為人類抗體或是人類抗體的區段。 本發明之抗體可被用於治療包括人類之哺乳類動物的 疾病或病症，該等疾病或病症之實例已連同本發明之抗體 被說明如上。 20 本發明亦提供一種能夠引起本發明之第二態樣之抗體 產生的抗原決定基，該抗原決定基較佳為包括pr〇210且包 含Gly200至Cys216的片段（於該人類P2X7受體的序列） ，該抗原決定基應較佳地被連接至該C-終端的一 Cys殘基 上’該Cys殘基（Cys216)經由該化學的交聯劑-馬來醯亞胺 16 1329648 玖、發明說明 基己醯基-N-羥基琥珀酿亞胺（MCS)而交聯至白喉毒素，以 使得為該經連接之抗原決定基胜肽所採用的形態佔有一穩 定之脯胺酸構型。 此特定之胜肽形態係意欲被呈現於具有—或多種疾病 5或病症的人類或動物中，特別是諸如前列腺、乳房、皮膚 、肺、子宮頸 '子宮、胃、食道、膀脱、結腸和陰道癌的 上皮細胞癌症，以及惡性淋巴瘤、腸道激躁症和經諸如 HIV等病毒或其他諸如結核分枝桿菌之病原生物之傳染。 該病患將較佳地對於該施加之結合抗原決定基進行一免疫 10反應，且因此產生可辨識呈現在該等罹病細胞之表面的非 功能性P2X7受體的抗體，所以，該等抗體會結合至該等抗 原決定基且警告適當之免疫細胞去破壞該等複合細胞其 他用以起動細胞死亡的細胞亦可受到影響。 可以了解的是，於上所陳述的序列並非用以限制本發 15明的範圍’本發明的範圍包括能夠相似地產生—特定免疫 反應之任擇的序列以及載體和交聯劑，較佳地僅針對非功 月色性P2X7受體，較佳地為忽視所有表現於細胞表面上的功 能性受體，以避免副作用。 本發明之第二態樣中，亦提供使用於本發明之抗體的 20用途，其係作為一為了 一病患之一疾病或病症之治療的治 療用載劑，以藉由針對表現於該等細胞表面之不正常或非 功能性P2X?受體，而留下所有未改變之表現正常（功能性） 受體的細胞’來調節計畫性細胞死亡；本發明亦包含用以 引起如上述之抗體產生之抗原決定基的用途。 17 玖、發明說明 S玄發明亦提供為了 一病患之一疾病或病症的治療技術 或預防之藥學組成物，該組成物包括一藥學上有效劑量之 抗體，或一可引起此一抗體量的產生之抗原決定基，可調 節具有表現於該等細胞表面上之不正常或非功能性P2X7受 體之細胞的計畫性細胞死亡。 該抗體或抗原決定基之藥學上有效劑量將依據該病患 和該疾病或病症之性質而不同，此等差異可為習於此藝者 所確認》 本發明之藥學組成物可加入一藥學上可接受之載劑而 予以投藥’該㈣可為習知所了解之任__者或將來被發明 者，且適合於所欲之用途，除了載劑之外，本發明之藥學 組成物可包括其他成分，例如，係包括染劑、防腐劑、緩 衝液及抗氧化劑等。 本發明之藥學組成物可採用任何一種所欲的形式並可 予以投藥’例如，以一種藥膏、乳液、溶液、懸浮液、粉 末蕖片、膠囊、检劑或陰道藥检的形式。 本發明之藥學組成物可以任何適合的方式予以投藥， "亥方式係包括口服、非口服、靜脈内、肌肉内、皮下或局 部投藥。 本發明亦提供-種治療或預防一病患之一疾病或病症 法°亥方法包括投藥給該病患一依據本發明之藥學組 成物。 本發明亦提供本發明之藥學組成物的用途，其係用以 治療或預防一病患之一疾病或病症。 1329648 玖、發明說明 對於一習於此藝者而言，本發明藥學組成物的用途之 模式係需要為了最適宜的效果而改變係為顯而易見的且 需要考慮該疾病或病症之性質以及嚴重性。 本發明的第三種態樣係集中在腺苷三磷酸酶（ATPases 5 種酵素）的表現上，腺奋三碟酸酶係控制ATP至P2X7 受體的供給，例如，在一罹患惡性淋巴瘤之病患的b_細胞 中，於白血球上之P2X?受體之通道開口係透過藉由外-腺 苷三磷酸酶和外-ATP二磷酸水解酶（ect〇_ATpDases)而造成 ATP同效劑之快速水解而終止，此等酵素調節多種依賴於 10 ATP的生理過程，於淋巴細胞上之腺苷三磷酸酶和ATp二 磷酸水解酶活性的受質專一性可顯示在該細胞表面上—種 以上之類型於淋巴細胞上出現，包括CD39。一或多種該 等腺答二碟酸酶或ATP二填酸水解酶的增殖可限制ATp的 供’ ATP係為控制pax?孔洞形成以及後續之為調節b_ 15細胞之數量所需之計畫性細胞死亡所需要的。 相似地，一般相信，在][BS的情況中，腺苷三磷酸酶 的增殖可有助於該同效劑ATP至該MX?受體之適當結合 的缺乏。 據此’在該第三態樣中，本發明提供一種為了 一病患 20 之一疾病或病症的治療技術或預防之製劑，該製劑包括包 括一或多種用以調節腺苷三磷酸酶表現的物質，該腺答三 構酸酶係控制該病患的細胞或組織中之ATp至ρ2χ?受體 的供給。本發明亦提供一種治療或預防一病患之一疾病或 病症的方法，該方法包括投藥給該病患一製劑的步驟，該 19 1329648 玖、發明說明 步驟包括一或多種用以調節腺苷三磷酸酶表現的物質，該 腺薔二墙酸酶係控制該病患的細胞或組織中之ATP至 P2X7受體的供給。 此類腺答三鱗酸酶的例子係為CD39或CD73。 5 此一物質可採用一 ATI>相似物的形式，較佳地為非水 解性，且為P2X?專一性，或另一種可抑制腺苷三峨酸酶活 動之物質，該腺苷三磷酸酶可耗盡用於該ρ2χ7結合位置之 ΑΤΡ的可用性，該製劑可為一針對特定地非功能性Ρ2Χ7受 體之人類抗體的形式。 10 一種諸如一 ΑΤΡ相似物的物質可結合至Ρ2Χ7，且使 P2X?維持在開孔的構型’因而迫使該孔洞採取一種功能性 狀態，其中P2X?能夠讓大量和少量的陽離子通透，藉此， 此一合成同效劑的使用可以恢復受體的功能，同時，控制 Ρ2Χ7提供給細胞如作為鈣通道功能的生長優勢。 15 該疾病或病症係較佳地為惡性淋巴瘤或IBS，但本發 明亦可擴大至其他疾病或病症，包括其他上皮細胞癌或血 癌或病毒性以及其他病原性感染。 在該惡性淋巴瘤的情況中，該腺苷三磷酸酶控制該局 部之ATP至該P2X?受體的供給，以減少結合至該ρ2χ7受 20體之可獲得之ΑΤΡ的濃度，且因此使得腺苷三磷酸酶去活 化，以明顯地減少計晝性的B—細胞死亡，該等腺苷三磷酸 酶可特定地表現於該等Β-細胞表面上，且似乎為正向-調 控惡性淋巴瘤’較佳地’一特定之腺苷三磷酸酶抑制劑的 20 1329648 玖、發明說明 應用可使用來調節於該P2X7受體上之ATP的可用性，以 調節計畫性的B-細胞死亡。 就惡性淋巴瘤之治療技術而言，該物質係包括一能夠 阻斷腺苷三磷酸酶或ATP二磷酸水解酶之合成的同效劑， 5 其係為非水解性的P2X7同效劑的形式。 關於腸道激躁症，本發明之製劑的投藥係意欲恢復受 體的功能，該功能係由於位在該黏膜之罹病的區域下之肌 肉的過度活性而被耗盡，本發明之製劑可作用在該黏膜之 上，以直接地移除該等非功能性受體，並藉此恢復局部正 10常的胃腸的分泌機制，治療技術係意欲恢復該局部之ATP 至該非功能性受體的供給，以使得正常受體的功能被恢復 ，該等受體功能之控制的結果包括胃腸的分泌和蠕動之正 常控制的恢復，此一結果可藉由合成之ρ2χ7_特定同效劑 之腸内或系統化供給的投藥而達成，較佳地為藉由非水解 15性的腺苷二磷酸酶，藉由一針對非功能性Ρ2Χ7受體之抗體 的系統化投藥，較佳地為一小的人類之特定抗體以移除該 非功能性受體，僅留下功能性受體。 假若於該平滑肌之下的不正常的蠕動係會造成耗盡該 可結合至正常Ρ2Χ7受體之ΑΤΡ的局部可用性；治療技術 〇係涉及同效劑之自然供給的恢復，該治療技術係藉由限制 吸收，或是透過一暫時地限制腸蠕動使該平滑肌使用Ατρ 之治療技術的應用。 本發明亦提供-種用於一疾病或病症之治療技術的藥 學組成物，該組成物包括一藥學上有效劑量之一或多種物 21 玖、發明說明 質，其適用於調節可控制ATP至P2X7受體之供給的腺苷 三磷酸酶（酵素）的表現。 本發明之所有態樣可延伸至由其他醫學病症所造成之 相似的應用上，该等醫學病症係涉及了由於病毒感染而造 成之不正常的Ρ2χ7受體，其中該病毒係藉由正向調控非 功能性P2X?受體而被保護於該受感染細胞之中，或其中該 等受體係不同於該等正常細胞的狀況而受到正向調控。 該發明亦提供一種治療腸道激躁症的方法，其包含投 藥給一病患如上所界定之藥學組成物。 本發明亦提供在該腸道激躁症之治療技術上此一藥學 組成物的用途。 為了達到最適宜的效果，該一或多種上述之藥學上有 效劑量之藥劑用途的模式需要被調整。 以另一種表現方式，本發明提供一種治療腸道激躁症 的方法，該方法包括投以-用以恢復Ρ2χ7受體功能之組成 物，忒受體之功能係可經由位在該黏膜之罹病區域下之肌 肉的過度活性而被耗盡，該組成物可相同於如上所說明之 包括有於本發明之製劑中的物質。 於另種態樣中，本發明提供一種用於辨別不同之蛋 白質形態的方法，其係藉由使用一能夠引起一抗體產生之 抗原決定基或該抗體本身，經由結合至所有具有一可擇之 形態的蛋白質部份以影響特定之藥學結果（自動和被動免疫 法）’一個例子係為處於可導致VCJD病症之形態的普恩 (Pricm)蛋白質，該不正常的蛋白質形式可被—特定抗體或 1329648 玖、發明說明 弓丨起該抗體產生之抗原決定基所鎖定’較佳為人類和減小 尺寸，俾以達成最適宜的生理效果。 圖式簡單說明 第1圖顯示人類P2X?受體胺基酸序列（習知技藝），序列65 5至81與2〇〇至216被特別地標示出示並陳述如下。
C實施方式;J 較佳實施例之詳細說明 為了產生針對非功能性Ρ2χ7的專一性抗體，所使用的 抗原決定基為第1圖中的序列200至216，該序列在 10 位址包含一個Cys。 為了產生針對非-識別性Ρ2χ7的抗體，所使用的抗原 決定基為第1圖中的序列65至8卜並且於該序列上加入 一 Ν·端Cys，此一抗體不能偵測該受體是否為非功能性’ 但是被設計來偵測所有的受體，藉由分開使用兩種抗體並 15比較獲致的染色結果’來決定出功能性受體的比率。 於該等抗原決定基上的該等Cys殘基經由—種馬來酿 亞胺基己酿基.N-經基號賴亞胺（MCS)的交聯劑連結到白 喉毒素（DT)載體（於每一個DT載體上接有1〇個胜狀的抗 原決定基）來加以偶合，以維持構型穩定性並提供-個較大 2〇的抗原結構；該等連結的抗原決定基係被使用來作為注射 到數種動物物種中的（羊、兔子和小鼠）的抗原，俾以-般 的方式產生對於該等抗原決定基具有專―性的抗體。 產生抗體的方法步驟’習知技術已清楚地建立文 于-貝料其藉由將抗原/佐劑的混合物於特定時間注射至動 23 1329648 玖、發明說明 物中，產生該等抗體的特定實施例如下文來進行： f施例1 羊抗-P2X7抗體 500 yg的綴合物（約等於100 yg的P2X7抗原決定基） 5 被稀釋於磷酸鹽緩衝溶液（PBS)至0·8 mL ’並以1·2 mL的佛 氏完全佐劑（Freund’s Complete adjuvant)來加以乳化’將該 抗原/佐劑的乳化物在數個位置以皮下和肌肉内注射至羊體 内，八週之後，該等羊被再次於數個位置注射相同量的以 佛氏不完全佐劑（Freund’s Incomplete adjuvant)乳化的綴合 10 物，此一步驟於4週後重複進行，且該等動物自其頸靜脈採 血，所收集的血清用以測試抗體的專一性，該等羊接著被 例行地注射，並在八週期間採血，俾以提供一個包含該特 定抗體的血清庫。 其他的羊被注射以相同劑量的連結抗原，相似於上述 15 的過程，但是使用一種不同的佐劑。在該等動物中，將0.7 mL的稀釋抗原與0· 1 mL的一種Quill A/DEAE葡聚糖溶液 (每毫升PBS中含2_5 mg Quill A + 25 mg DEAE葡聚糖）和 1.2 mL的ISA 50V Montanide混合，該乳化物被皮下和肌 肉内注射於數個位置，使用此一佐劑所產生的抗體係與使 20 用佛氏佐劑所產生之抗體產生相同的專一性。 實施例2 兔子抗-P2X7抗體 使用相同於羊的兩種佐劑及相同的注射程序，於兔子 中來產生抗體，唯一的不同是，該注射係使用300 pg的綴 24 1329648 玖、發明說明 合物，所產生的抗體具有與羊中所產生之抗體相同的專一 性，並且可以容易地區辨該等抗體所對抗的抗原決定基。 實施例3 小鼠抗-P2X7抗體 5 於小鼠中，產生對抗非功能性P2X7抗原決定基的連結 的抗原決定基及亦對抗非功能性P 2 X 7抗原決定基的未連結 的抗原決定基的抗體（該抗體能夠區辨不能形成孔洞而因此 無法凋亡的受體）。 在該等實驗中，所使用的佐劑為QAIGEN Pty Ltd的產 10 品，ImmunEasyTM包含免疫-刺激產品CpG DNA (Coley Pharmaceutical Group Inc.的商標）。 5 pg的抗原決定基或是連結的抗原決定基以70 μί的 PBS和30 pL的ImmunEasyTM佐劑來力口以稀釋，小鼠在數 個位置被以皮下和肌肉内注射，於二週後重複此一步驟， 15 並且於再二週之後再重複進行一次，在第三次注射後的八 天，對小鼠進行採血，經由此方法於小鼠中所產生的抗體 復能夠區辨該等不同的P2X7抗原決定基，且對抗該P2X7 非功能性抗原決定基的抗體與羊和兔子中所產生之抗體獲 得相同的結果。 20 如上述實施例所例示說明，於不同的物種中，以各種 P2X7受體抗原決定基及使用不同的佐劑可產生相同的抗體 ，特別的是，對抗一種可識別出於非功能性狀態下受體之 P2X7受體的抗原決定基（其不能形成一個孔洞並在正常生 理狀況下執行其凋亡的功能）的抗體可被例行地產生。 25 1329648 玖、發明說明 實施例4 可偵測非功能性P2X7的抗體係經由令該抗體結合至 表現具有已知功能的P2X7(人類）的細胞來予以測試，如經 由P2X7具有吸收乙錠（ethidium)或铷的能力所來顯示，該 5 等P2X7蛋白質通道可在鹼基對15 13位址被突變，以使得 該等通道不會形成細胞凋亡的孔洞；在流式細胞儀（flow cytometry)和標準的免疫細胞化學技術中，表現於惡性B 淋巴細胞上之此等和相似之非功能性P2X7受體亦結合該 抗體，而表現正常功能性P2X7的細胞（能夠以大流量吸收 10 鈣、乙錠和铷）不能夠結合該抗體，因為所選擇來偵測該等 非功能性受體的抗原決定基並不會存在於功能性受體之中 ，於該等非功能性受體中，Pro210係採取一種順構型，並 且對於此構型具專一性，因為此構型在用來產生該抗體的 連結抗原決定基中可被穩定化。於該等受體中，顯示出反 15 構型的Pro210係具有功能性，此係為ATP (腺苷三磷酸）結 合至該P2X7受體的結果，當ATP被結合時，緊接於一 ATP結合位置的一個片段上的Pro210係採取一種反構型。 此可利用定點突變（site directed mutagenesis)來將 Pro210改變為一個Ala而被固定為反構型而獲得證明，此 20 —突變蛋白質被認為是完全功能性，且不能結合被產生來 偵測該非功能性受體的抗體。 f施例5 以該抗體檢測非功能性受體之專一性的另一項證明， 係例示於表現有P2X7之經標記的巨噬細胞實驗中。該等 26 1329648 玖、發明說明 巨噬細胞會結合針對該P2X7受體之一般性P2X7抗體，但 是不會結合針對非功能性P2X7的抗體，直到它們被暴露 於癌細胞中，諸如鼠融合瘤細胞，該等巨噬細胞和該等融 合瘤細胞之間的接觸係誘導該等巨噬細胞上非功能性P2X7 5的表現’其可藉由針對非功能P2X7的抗體及一般性P2X7 抗體來予以檢測。 從患有惡性淋巴瘤之病人身上取出的巨噬細胞和B-細 胞的淋巴細胞被用於測試，且所有細胞結合針對一般性 P2X·；的抗體及針對非功能性ρ2χ7受體的抗體，由此證實 10 ’ Ρ2χ·7在所有被偵測的癌細胞中為非功能性，且不能形成 為功能性P2X?所形成的細胞凋亡之孔洞並因此而誘導癌 細胞的細胞〉周亡。 所有此等癌細胞，諸如前列腺、乳房、腸、皮膚、胃 、子宮頸和其他部位的人類上皮細胞癌症’以及惡性淋巴 15 瘤、慢性淋巴性白血病（chronic lymphocytic leukaemia)和 腦瘤，以及其他哺乳動物被測試的相同腫瘤，包括狗的乳 房和前列腺和貓的皮膚以及所有鼠的融合瘤細胞和鼠的纖 維肉瘤細胞，所有皆會表現相同的非功能性Ρ2χ7，在所選 擇之抗原決定基上，人類、大鼠、貓、狗和鼠之間的序列 2〇相似性足以作為於上述所有情況中意欲進行者之正性鑑定 ’此顯示出’於該等哺乳動物中之癌症機制是相同的其 中所有表現非功能性Ρ2Χ7受體的癌細胞無法形成細胞凋 亡的孔洞，當該細胞凋亡的孔洞被活化時，於正常情況下 可殺死該細胞，在此情況下，該等癌細胞變成不死的 27 1329648 玖、發明說明 (immortal) ’且停止細胞凋亡。 貫施例6 進一步證明的是，該等癌細胞（諸如不正常的B_細胞 淋巴細胞）不能經由P2X?功能來誘導細胞凋亡，從含有非 5功能性P2X7受體之白血病病人的B細胞被培養在含有5 mM ATP的培養基中歷時2小時，結果是，所有的非功能 性受體被迫使經由過多的ATP來開啟並誘導細胞凋亡，而 殺死該等不正常的細胞。 實施例7 10 進一步證明的是，該抗體選擇性地結合癌細胞，從患 有基底細胞癌（BCC)之病人取得的皮膚被針對非功能性 P2X7受體的抗體所處理，被懸浮在一種惰性的乳液基底並 被施用於受損和周圍的皮膚（參考下文之實施例，每曰 施用該局部抗體的一週内，BCCs的所有跡象已經消失並 15且沒影響周圍的皮膚，因為正常的皮膚不會有該等受體。 診斷上的應用 在此係提供實施例來予以說明，其係使用於動物中之 特定的非功能性P2X7抗體’且說明該探針於多方面的應用 ’和本發明對於在人類和其他哺乳類動物中之大部分癌症 20 之診斷的方法。 來自於人類以及諸如貓和狗的哺乳類動物之前列腺組 織之中，當本發明之抗體係使用來診斷時，在沒有癌症或 癌症前之病害的情況下，不會偵測到任何標誌，但是，當 28 玖、發明說明 仍未有藉由H&E染由认/± '、巴的偵測而伴隨之形態改變的情況下， 本七月之9斷方法首次發現腫瘤生成改變的病徵。 在此階段，必須斟 、對於首先出現於該上皮細胞核中的受 體單元進行染色，哕笪 '^等又體早元在該疾病之較後期階段會 移至該細胞質，作用l _ 用如一區域效應遍及該前列腺，而使得 較少組織需要進行活組織檢查俾以較—腫瘤的存在在 該疾病之較後期階段，該染色成為較被限制於該頂上皮。 相m目為於該等其他组織内不再為一清澄的區域 效應’於人類和於其他諸如描和狗的哺乳類動物中，其他 10 上皮細胞之癌症，例如乳房'肺、結腸以及皮膚，可被偵 測出邊界。 該相同1¾段的發展係可見於該等其他組織中，例如乳 房和子宮頸，先發生細胞核染色再發生細胞質染色，而正 常組織不會被染色，由於在該乳房中之個別罹病的管系統 15中之局部區域效應的緣故，容易地偵測出於乳房組織中之 罹病的管和小葉，即使當正常的形態顯示沒有癌症，鄰近 之未罹病的管顯示未被染色，相似地，罹病的淋巴節，直 接地引流包括有一腫瘤的組織，透過該罹病的淋巴細胞之 區域效應而顯示該腫瘤的病徵’因此，在沒有任何轉移細 2〇 胞擴散到該淋巴節的情況下，信號結（sentinel n〇des)可被 偵測。 諸如基底細胞癌、鱗狀細胞癌和分化異常痣（dysplastic naevi)和惡性黑素瘤之皮膚癌症對於非功能性受體呈現陽性 染色，且在角質細胞和黑素細胞層通道組成（單體）具有清 29 1329648 玖、發明說明 楚的邊界，而在邊界之外的正常皮膚不論是在上皮或真皮 深層皆未被標記。 所有經測試之哺乳類動物的癌症細胞株，諸如人類前 列腺（PC3)和乳房（MCF7)以及嗡齒類動物的融合瘤，對於 5 在該細胞表面上之該非功能性受體係呈現陽性，以致細胞 凋亡被抑制於該等癌症細胞中，此診斷之大致的應用係藉 由於鼠類之融合瘤細胞中之相同的標誌，顯示出該受體普 遍存在於除了人類之外的其他動物類型中的性質，正常的 人類B-細胞淋巴細胞顯示功能性Ρ2χ7受體被表現在該細 10 胞表面上’當必要時可使得細胞凋亡，而來自於具有惡性 淋巴瘤之病患的人類B-細胞淋巴細胞顯示出非功能性 P2X7受體被表現在該細胞表面上，因而無法造成細胞凋亡 治療應用 以此類明顯表現於企圖進行細胞凋亡之癌症細胞之細 胞表面上普遍存在的P2X7非功能性順應者（c〇nf〇rmer)為目 標可被使用來治療於人類和其他哺乳類動物中之大部分的 癌症，實施例係說明如下： 實施例8 在含有與不含非功能性Ρ2χ7之親和純化抗體兩者中， 鼠類融合瘤細胞係生長於一巨噬細胞之基底上，在超過4 天後，當細胞與純化之正常IgG共培養下之細胞數量顯示 為成長1 X 10至7 X 1〇4，而與該非功能性ρ2χ7抗體共培 養下，可使該細胞數量保持在只有i 5χ 1〇4。 30 1329648 玖、發明說明 實施例9 此實施例顯示，產生來對抗P2X7受體之非功能性抗原 決定基的抗體可以於活體内Wv〇)抑制腫瘤形成。
如上文所揭示者，於羊中產生來對抗非功能性Ρ2χ7抗 5 原決定基的抗體係鑑定位在鼠融合瘤細胞表面的非功能性 P2X7之細胞凋亡受體，將此抗體加入至融合瘤細胞的培養 基中可延緩該等細胞的生長，當鼠融合瘤細胞被注射至已 製備的近親繁殖小鼠品系時，將形成腫瘤。 在此實驗中，三組的10隻Balb-c雌性小鼠之每一組 10 接受下面的處理： 第1組：第一天，10隻小鼠各自以靜脈注射（ΐρ)ι x 106個融合瘤細胞的0.5 mL細胞培養基， 於第二和三天’它們被靜脈注射以〇.5 mL 的細胞細胞培養基。
15 第2組： 第一天，10隻小鼠各自以靜脈注射（ιρ)ι x 106個融合瘤細胞和含有1 mg經純化之羊 IgG的0.5 mL細胞培養基，於第二和三天 ，它們被注射含有1 mg經純化的羊igG 的0.5 mL細胞培養基。 20 第3組： 第一天，1 〇隻小鼠各自以靜脈注射（ip) 1 x
106融合瘤細胞和含有1 mg之經純化的羊 抗-P2X7非功能性抗原決定基的igG的〇 5 mL之細胞培養基，於第二和三天，它們 再一次被注射含有經純化的羊抗_Ρ2χ7 IgG 31 1329648 玖、發明說明 之0.5 ml細胞培養基。 所有組中的小鼠在第11天被犧牲，並且檢查腫瘤的存 在，切除該等腫瘤並稱其重量。 結果如下所示: 組別 觀察紀錄 每隻小鼠之 平均腫瘤重 量(土 SD) (g) 1:對照組1 1 〇隻小鼠中有9隻具有腫瘤 3.98 ± 1.1 2:對照組2 10隻小鼠中有10隻具有腫瘤 2.93 ± 0.9 3:實驗組 1 〇隻小鼠中有9隻具有腫瘤 1.13 ± 0.4 經由一差異分析顯示’在該等組別之間的腫瘤重量具 有一顯著的差異（機率P< 〇.〇1)，被治療以抗_Ρ2χ7非功能 性抗體的實驗組與兩個對照組具有顯著地差異（Ρ < 〇.〇1)， 換έ之，對抗P2X?非功能性抗原決定基的抗體的治療明顯 10 地減少該等實驗組動物的腫瘤的重量。 實施例10 將特定親和純化的抗體（以顯著地改善其專一性）施加 至3種人類基底細胞癌（「BCC」），一者係以一液體形式 保持在適當處達7天，或懸浮於一種二曱聚矽氧烷乳液的 15 基底（dimethicone cream base)中，在處理之後，並未偵測到 受到BCC損害的跡象，而由於對照組的皮膚缺少該蛋白質 標的，則完全未受影響。 實施例11 32 1329648 玖、發明說明 在進一步的測試中，基底細胞癌（BCC)和鱗狀細胞癌 (SCC)(皆為原發性腫瘤和次發性Μ瘤）類型的皮膚損害，包 括復發性腫瘤及分化異常痣，係使用經純化的抗體來予以 處理’該經純化的抗體為經親和純化或未經親和純化的 5 ，並混合於二甲聚矽氧烷乳液的基底中或是一種滲透乳 液的基底中，因為沒有非功能性受體存在於正常皮膚中， 在任何的正常皮膚中不會偵測到副作用；所有類型的癌症 都對於抗體的存在有所反應，在每日二次的施用下會於三 十六小時至一週的期間内消失。在至多十二個月的期間内 10沒有發生復發，被治療腫瘤的大小從沒有突出邊緣的3mm 直徑到5cm直徑，且至多為4mm厚度，總共三十四個組 織學上已確認的腫瘤已經成功地在一週的治療期内被消除 〇 一般相信，對於病患的應用大致上會涉及一人類單株 15抗體的產生（諸如賀癌平（herceptin))，以使得體内癌症被治 療以如同局部應用所顯現之相同功效；由於該抗體之存在 ’所有表現於諸如淋巴細胞之細胞表面的正常功能性P2X7 *維持其不$影響，以避免副作用。所以，該抗體應只會 結合至表現於細胞之細胞表面上之企圖但是卻不能啟動細 D周亡的蛋白吳，因此所有標的細胞係為該等企圖藉由計 —F ’田胞死亡來设害自己的細胞，包括癌細胞，該等細胞 之P2X?又體，特別是癌細胞，會是處於一非功能性或 ATP-耗盡的狀態下。 自動免疫法 33 1329648 玖、發明說明 自動免疫法亦可被使用作為治療目的，在此情況下， 該人類或其他哺乳類動物需被免疫以對抗一特定抗原決定 基’或是對抗模仿位於該細胞表面上之非功能（ATP_耗盡） 形態之受體所採納之形態的抗原決定基。 5 包括出現於功能性受體之一抗原決定基形態之部分暴 露之形態上的可變性應被避免，作為一實施例之抗原決定 基Gly200-Cys216之順構型應在被適當的裝置使用之前予 以固定。另可為佐證的是，本發明之概念可於很多動物中 觀察到，包括被使用來產生該等抗體之小鼠、兔以及羊並 10 不會免疫減弱（immuno-compromised)，且沒有一種動物長 出任何的腫瘤。 一特定的實施例於此說明： 實施例12 實施步驟：本實驗係以一小鼠腫瘤模式為基礎來進行 15 ’ 40隻週齡為1〇週大的雌性近親繁殖的Balb C小鼠被 使用’且被分為各20隻的兩個組別，第1組為實驗組， 而第2組為對照組。 第1天：第1組中20隻實驗組的動物被注射〇丨mg 的經由MCS交聯劑而連結到白喉毒素的胜肽抗原決定基 20 (hP2X7序列200-216)，其包含大約〇.〇2 mg的胜肽抗原決 定基，該胜肽綴合物以一種QUILL· A/DEAE葡聚糖溶液 /Montanide ISA 50V的佐劑混合物來加以乳化，且以〇」 mL的體積注射於數個皮下和肌肉内位置。 第2組對照組中的20隻小鼠被注射〇.丨mL不含有胜 34 1329648 玖、發明說明 肽綴合物的佐劑混合物於數個皮下和肌肉内位置。 苐8天.20隻苐1組的小鼠被注射〇·mg之經由 MCS交聯劑連結到白喉毒素的胜肽抗原決定基（hp2X7序列 200-216)(包含大約0.002 mg的胜肽抗原決定基），將該胜 5 肽配製於一種磷酸鹽緩衝溶液中，並且依據實施步驟與商 業上可獲得的CpG DNA佐劑ImmunEasy (獲自於Qiagen) 混合，0· 1 mL體積的胜肽綴合物/佐劑溶液被注射於每一隻 小鼠的數個皮下和肌肉内位置。 20隻第2組的小鼠被注射可比較的鱗酸鹽緩衝溶液 10 /CpG DNA佐劑的混合物，且注射〇」mL體積至每一隻小 鼠的數個皮下和肌肉内位置。 第26天：20隻第1組的小鼠被注射〇 〇25 mg之經由 MCS交聯劑連結到白喉毒素的胜肽抗原決定基（hp2X7序列 200-216)(包含大約0.005 mg的胜肽抗原決定基），將該胜 15 肽配製於一種磷酸鹽緩衝溶液中，並且與Qiagen CpG DNA佐劑lmmunEasy混合，01 mL的混合物再次被注射 至每一隻小鼠的數個皮下和肌肉内位置，該對照組亦如先 前第8天的操作來予以注射。 第29天.所有小鼠在位於頸背之單一皮下位置注射含 20有腫瘤細胞的〇·1 mL組織培養基，所使用的腫瘤細胞為一 種小鼠纖維肉瘤細胞株，該細胞株為位於澳洲墨爾本的華 爾特和艾利沙堂醫學研究院（Walter and Eliza Hall Institute) 所產生’其被命名為細胞株WEHI 164。 s玄等細胞以二種濃度被注射至實驗組和對照組此二組 35 1329648 玖、發明說明 的小鼠中，每一組被再細分為二小組，實驗組和對照組各 自的10隻小鼠每隻鼠接受160,000個細胞，而各組的另外 10隻小鼠每隻鼠接受320,000個細胞。 自此一細胞株培養的細胞於先前已經測試在它們細胞 5 表面上非功能性P2X7抗原決定基的存在，此一測試係使用 一種產生於羊中並可專一地辨識該受體之非功能性形式的 抗體來進行。 第38天：所有的小鼠被犧牲且收集血液以作為非功能 性P2X7抗原決定基之抗體的分析，所有小鼠被稱重並且將 10 腫瘤切除並稱重。 結果 組別 對照組的 實驗組的 對照組的 實驗組的 160,000個細胞 160,000個細胞 320,000個細胞 320,000個細胞 N 10 10 10 10 平均腫瘤 599 270 1147 750 重量(mg) SD 307 108 633 363 SEM 97 34 200 115
該等結果的差異分析係顯示了對照組和治療組之間及 低和高劑量組之間具有統計上顯著的差異（p=0.0003);由 於注射較少的腫瘤，較不影響小鼠免疫系統對抗腫瘤的穩 15 定性，因此，較低劑量組顯示出較大的差異。 ATP類似物 36 1329648 玖、發明說明 使用一種合成的同效劑的功效係在於，有效地結合至 位在P2X7孔洞上的ATP結合位置，且迫使該孔洞進入功 能性狀態，藉此來恢復受體功能並控制P2X7提供給細胞的 生長優勢’此功效係顯示於下文的培養實驗中。自患有 5 CLL的一病人身上收集的腫瘤B-細胞，當與一自一正常病 人身上收集的相似數量的同樣細胞混合，被處理以2.5 mM ATP達4小時，沒有腫瘤細胞存活，只有正常的細胞存活 ° ATP或是更具選擇性的P2X?同效劑苯曱醯基ATp的使 用於/舌體内（/¾ vivo)並不適當，因此，一種選擇性的a丁p 10 類似物相較於ATP或是B ζΑΤΡ，可以更高的親和性選擇性 地結合至P2X?，而可被設計來恢復一範圍的不正常的腫瘤 細胞型式的細胞凋亡過程。 產業上的利用價值 於本發明之所有態樣中具有人類醫學和獸醫學以及保 15健領域上的應用，其具有能夠及早且準確的診斷疾病和有 效治療之潛力，相較於習知技藝目前所使用者，本發明於 很多情況中係極少為侵入性或創傷性診治。 【圖式簡單贺*明】 第1圖顯示人類Ρ2Χ7受體胺基酸序列（習知技藝），序列65 〇至81與200至216被特別地標示出示並陳述如下。 【圖式之主要元件代表符號表】 37