TWI245772B - Substance P analogs for the treatment of cancer - Google Patents

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五、發明説明（ 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本發明之範疇 本發明係包括新穎的合成胜肷類似物，其可拮抗物質 P、物質P類似胜肷及相關的胜肽，且其可用於治療癌症。 本發明特別係有關於新穎物質P拮抗劑類似物的設計與合 成，該拮抗劑類似物係以一位置特定方式併入一 αα ·二 烷基化胺基酸。本發明包括生產該等胜肽之方法、含有此 等胜肽之組成物以及此等胜肽之藥學用途，特別是用於治 療及預防癌症。 本發明之背景 物質Ρ係為心動促速素族群中之主要成員之一。心動 促速素係為哺乳類的調控胜肽且存在於中樞及週邊神經系 統以及腸的内分泌細胞中。物質Ρ係為第一個被發現的腸 神經胜肽。其為一具有下列序列之U個殘基的神經胜肽：Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe-Gly-Leu-Met-NH2 (序列辨識編號1) 物質P可調控腸胃蠕動、增加腸内的血液流動、刺激 胰液、唾腺、小腸的分泌、以及抑制酸的分泌。於中樞神 經系統中，心動促速素在感覺神經路徑與運動的控制上扮 演重要的角色（Dockray，G.J·，1994, 401腸胜肽（Gut peptides) ·•生物化學與生理學（Biochemistry and Physiology), Raven Press Ltd, New York) 〇 在癌症中，特別是小細胞肺癌中，物質P的角色係已 被確認。小細胞肺癌（SCLC)的細胞生長係由涉及神經胜 本紙張尺度適财關家鮮（〇刚44規格（21(^297公釐) ' ' (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) •衣· II· 『· 1245772 五、發明説明（ 2 版之多重自體分泌及局部分泌生長環所支持。於用於小細 胞肺癌之新穎抗增生劑的研究中，第一個欲被研究的物質 P拮抗劑為[D-Arg1，D-Pro2, D-Trp7,9, Leu11]物質 P (拮抗劑 A)。物質p在結構上係與邦布辛（b〇nibesin)/GRp無關，且 不具有邦布辛/GRP之拮抗活性；拮抗劑A被發現在胰液製 備上可阻斷邦布辛的分泌、減少邦布辛/GRp結合至其受 體上以及抑制Swiss 3T3細胞的有絲分裂（jensen et al.， 1984, Nature，309; 61-63; Zachary與 Rozengurt，1986， Biochem. Biophys· Res. Commun·，137;135-141)。然而， 其並不影響由多肽生長因子（諸如血小板衍生生長因子及 上皮細胞生長因子）所誘發之有絲分裂。其他用於測試邦 布辛/GRP拮抗性質之物質p的同類物質中，鑑定出二種具 有抑制活性的化合物：拮抗劑D，[D_Argl，D_phe5, D_Tl>p7,9, Le#]物質 P與拮抗劑 G，[Arg6，D-Trp7,9, Mephe8]物質 p(6_ 11)。在防止小鼠3T3細胞内邦布辛/GRP與後葉加壓素在 細胞上的作用以及抑制在不含血清之培養液中SCLC細胞 的生長方面，其顯示拮抗劑D比拮抗劑a具有五倍多的潛 力。總言之’於Swiss 3T3細胞内，二種拮抗劑皆顯示其 等不僅具有抑制邦布辛/GRP的功效，同時亦具有抑制其 他神經胜肽（包括後葉加壓素、金管舒緩激肽、内皮素與 物質P)的功效。其係反應於下列之資料中，該資料顯示在 阻斷Swiss 3T3細胞中之邦布辛/GRP所調控的有絲分裂 中，拮抗劑G之潛力比拮抗劑D少1 〇倍，且其在活體内之 抑制SCLC的增生作用上，幾乎具有與拮抗劑D相同的潛 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -I — I I I 1 . I.---Γ--•衣II (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -訂 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1245772 Α7 Β7 五、發明説明（) 3 力。於液悲培養及半固態培養液中，拮抗劑D可抑制H-510 與H-69 SCLC細胞的增生（IC50二5 // M)。由多種神經性胜 肷（包括後葉加壓素與血管舒緩激肽）所刺激的菌落生成亦 可由拮抗劑 D 所抑制（Seckl，M.J. et al.，1997, Can Res， 57(1):51-4)。此外，拮抗劑G顯示活體内之SCLC異種移植 的抑制（Wolf P .J 與 R0zengurt，E·，1990, Can. Res.， 50(13):3968-73 ; Everard，M.J·等人，1993, Eur J Cancer， 29A(10):1450-3; Br J Cancer，1992, 65(3):388-92))。Reeve， J.G.與 Bleehen，N.M. (Biochem· Biophys· Res· Commun.,1994, 199(3):1313-19)發現，以拮抗劑 D 治療肺 腫瘤細胞可造成一濃度依賴之細胞存活率的喪失，其係伴 隨由細胞學標準及DNA片斷化（fragmentation)所界定之細 胞計劃性凋亡的發生。 短鏈 SP拮抗劑 viz.pHOPA-D-Trp-Phe-D-Trp-Leu-Leu-NH2 (類似物 R) (序列辨識編號2)及 其類似 物係由 Hungarian族群所研究，且被發現可抑制裸鼠之活體外及 活體内異種移植二者之H69 SCLC細胞的增生（Int. J·

Cancer，1995,60(1):82-7)。於又一延伸研究中，c-端的胜 肽鍵係被亞甲基-胺基（擬胜肽）鍵所取代。物質P類似物： D-MePhe-D-Trp-Phe-D-TrpLeu(psi)-(CH2NH)-Leu-NH2)(^ 列辨識編號3):類似物 6與 D-MePhe-D-Trp-Phe-D-Trp-Leu_MPA (序列辨識編號4):類似物7，可比類似物R更有 效地抑制 SCLC的增生（6: IC50 = 2// M; 7: IC50 = 5// Μ 且 R: IC50 = 10//Μ)。再者，類似物6可抑制增生狀態（而非 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） I ▲ 7---- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1245772 Α7 五、發明説明（ 靜止狀態）下，肺癌細胞之SK-MES 1上皮細胞種類的啤吸 活性’其假設此等化合物之抗增生作用係非起因於簡單的 細胞毒性且此等短鏈SP類似物可作為治療SCLC之治療劑 的預示候選物（Nyeki，0.等人，1998, J. Pept. Sci，4(8): 486-95)。拮抗劑D及其在癌症上的角色係已描述於美國專 利第 5,434，132號與W0 88/07551 中。 本發明係描述物質P的胜肷類似物、其製備及物質p 之胜肷類似物的使用，特別是使用限位胺基酸之物質p的 拮抗劑D及其等單獨或結合之使用或作為癌症化療之佐劑 而用於癌症的治療。 構形限位生物活性胜肽衍生物的設計係為一種已被廣 泛用於以胜肽為主之治療試劑發展的方法。具有強列構形 表現之非標準胺基酸可用以引導多肽鏈折疊的發生，其係 以胜肽設計之新生（de novo)方法藉由強制局部立體化學限 位。α，α -二烧基化胺基酸之構形特性係已被研究。此等 胺基酸的併合係限制了分子内φ、ψ角度的旋轉，藉此以 穩定一所欲之胜肽構形。α，α -二烷基化胺基酸、α -胺 基異丁0文（八丨1))或（2，(2-^一曱基甘胺酸之原型數（prototypic member)係已顯示可誘發3 -圈或螺旋構形（當其等併入一胜 肽序列時）（Prasad與 Balaram，1984, CRC Crit. Rev. Biochem.16，307-347; Karle與 Balaram，1990 Biochemistry， 29, 6747-6756)。已顯示α，a _二烷基化胺基酸之較高同系 物（諸如二乙基甘胺酸（Deg)、二-n-丙基甘胺酸（Dpg)及二_ η-丁基甘胺酸（Dbg))與α，α -二烷基化胺基酸之環狀侧鏈 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） ----·---Η--.衣|丨 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁} -訂· 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1245772 A7 B7 五、發明説明（） 5 類似物（諸如1-胺基環戊烷羧酸（Ac5c)、1·胺基環己烷羧酸 (Ac6c)、1-胺基環庚烷羧酸（人〇7〇)與1-胺基環辛烷羧酸 (八〇8〇))的構形特性可誘導折疊之構形01^&(1，|5.6^1.， 1995 Bioploymers，35，11-20; Karle，LL·，等人，1995，[ Amen Chem· Soc·，1 17, 9632-9637)。α，α -二烷基化胺基 酸係已用於南潛力之向化胜肽類似物的設計（prasad，S .等 人·，1996 Int· J. Peptide Protein Res· 48, 312-318.)。然而， 申清人並未知道到任何用於合成本發明所包括之新穎胜肽 類似物（特別是含有αα -二烷基化胺基酸之物質p胜肽類 似物的合成）的前案。再者，此種用於設計具有抗腫瘤活 性之胜肷的限位胺基酸的使用於任一習知之技藝中亦為未 知。本發明利用此種α，α -二烷基化胺基酸的構形特性以 設計具有特定抗癌活性之物質ρ的生化活性胜肽衍生物。 更者，於習知技術中已顯示生物活性胜肽的親脂化特性係 和:升了穩定性、生物有效性及滲透生物膜的可能性 (Dasgupta，Ρ 等人；1999, pharmaceutical Res % 1〇47_ 1053; Gozes，I.等人，1996, Proc. Natl. Acad. Sci. USA，93, 427-432) 〇 本發明亦包括合成的胜肽衍生物，其具有2-18個碳原 子之Ν-端烷醯基基團，其具有改良的抗癌活性。 縮寫輿符號 於以下之式（I)及說明書全文與申請專利範圍中，胺 基I係以其等標準縮寫來命名。胺基酸係指L-構形，除非 ^張尺度適用中國國i^YCNS) Α4規格（2l〇x;^) --___ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

1245772 Α7 Β7 五、發明説明（） 6 在其符號前以D或DL指明，且其以連字號分隔。 以下的縮寫亦可使用於本發明中： (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

Aib = α -胺基丁酸 Deg = α，α·二-乙基甘胺酸 Dpg = α，α -二-η-丁基甘胺酸 Ac5c = 1-胺基環戊烧叛酸 Ac6c = 1-胺基環己烷羧酸 BOP :苯并三唑-1-基-氧代-三-(二甲胺基）-磷鏘-六氟 磷酸鹽

PyBOP:苯并三峻-1-基-氧代三-四氫ϋ比嘻·填鏘-六氟 磷酸鹽 HBTU: 0-苯并三唑-N，N，N，，Nf-四甲基-正離子 (uronium)-六氟麟酸鹽 TBTU: 2-(1Η-苯并三唑-1-基）-1，1，3,3-四甲基正離子 四氟硼酸鹽 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 HOBt: 1_羥基苯并三唑 DCC:二環己基碳化二亞胺 DICPDL·二異丙基碳化二亞胺 DIEA:二異丙基乙胺基 DMF:二曱基甲醯胺 DCM:二氣曱烷 NMP: N-曱基-2_四氫σ比洛酮 TFA:三氟乙酸 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） !245772 A7 B7 五、 發明説明（ fcg概述 本發明係包含下列一般式之多肽： X.D-Arg-Pro.Lys.Pro^D^Phe.Gln.D.Trp.Phe.D-TLCU-R-NH2 其中， X為乙醯基或3到18個碳原子之直鏈、支鏈或環狀的 烧醯基基團，或可被切除；R 為 Aib、Deg、Dpg、Ac5(^Ac6c :或者尺為一可水 解之缓基保護性基團U學上可接受之胜版鹽類。 rp· 圖式之簡要說明 第1圖係顯示活體内之物質P類似物在異種移植上的 抗腫瘤活性。 ----·---^--•衣 II (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 發明之詳細説明 本發明所具體實施之物質p的新穎胜肷類似物係含有 名為α，α-二烷基化胺基酸之胺基酸，已知其可誘發胜肽 月杀中之回度專一性限位（constraints)。該使用於本發明 中之α，α -二烷基化胺基酸係由其相對之酮類所合成。於 本發明之一具體實施例中，酮類係首先被轉換成其相對之 乙内酿腺’其被水解以產生前述之胺基酸。於本發明之一較佳/、體實^例中’硫酸、氫氯酸或強驗（諸如Na〇H)已 被使用作為水解劑。 本發明包含下列一般式之多肽： ^紙張尺度適用中國^ϋΤ^ΤΓ4規格（210X297公釐)---- -10- 1245772 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 五、發明説明（ X-D-Arg-Pro-Lys-Pro-D-Phe-Gln-D-Trp-Phe-D-Trp-

Leu-R-NH2 其中， X為乙醯基或3到18個碳原子之直鏈、支鏈或環狀之 烷醯基基團；或可被刪除； R為 Aib、Deg、Dpg、Ac5c 或 Ac6c ;或者 R為一可水 解之羧基保護性基團，·或一藥學上可接受之胜肽鹽類。 一可水解之羧基保護性基團，其於水解時被轉換成魏 基，諸如-CONH2、-COOMe等等。 烧醯基基團之較佳的烷基部分係為自2到12個碳原 子。較佳之烧醯基基團係為乙醯基、丁醯基、辛醯基、十 二醯基、十四醯基、十六醯基、[己醯基、異己醯基、環 己醯基、戊幾基、庚醯基、癸醯基、--酿基及3,7· 二甲基辛醯基。 包含於該名詞”藥學上可接受之鹽類，，的鹽類係指本發 明之化合物的非毒性鹽類。代表性的鹽類及酯類包括： 乙酸酯、抗壞血酸鹽、苯磺酸鹽、苯曱酸鹽、重碳酸鹽、 重硫酸鹽、酒石酸氫鹽、硼酸鹽、樟腦磺酸鹽、碳酸鹽、 知板酸鹽、—鼠氣化物、甲石黃酸鹽、乙石黃酸鹽、p-甲苯石黃 酸鹽、環己基胺基磺酸鹽、奎尼酸鹽、 乙二胺四乙酸鹽、 乙二續酸鹽、依特酸鹽（estolate)、依斯酸鹽（esylate)、反 丁烯二酸、葡糖酸鹽、谷胺酸鹽、甘油磷酸鹽、氫溴化物、 氫氣化物、羥基萘酸鹽、乳酸鹽、乳糠酸鹽、月桂酸鹽、 蘋果酸鹽、馬來酸鹽、扁桃酸鹽、曱磺醯鹽、馬克特 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210'〆297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本買)

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五、發明説明（） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) (mucate)、奈確酸鹽（napsylate)、硝酸鹽、n_甲基葡糖胺、 油酸鹽、草酸鹽、普莫特（palm〇ates)、雙羥萘酸鹽（雙羥 萘酸鹽（embonate))、棕櫚酸鹽、泛酸鹽、高氯酸鹽、填 酸鹽/二磷酸鹽、聚半乳糖醛酸鹽、水楊酸鹽、硬脂酸鹽、 琥珀酸鹽、硫酸鹽、胺基磺酸鹽、鹼式乙酸鹽、琥珀酸鹽、 單寧酸鹽、酒石酸鹽、曱苯磺酸鹽、三氟乙酸鹽及戊酸鹽。 其他的鹽類包括Ca、Li、Mg、Na及K鹽；胺基酸鹽， 諸如離胺酸或精胺酸；胍、二乙醇胺或膽鹼；銨、未取代 之銨鹽或鋁鹽。 鹽類係使用傳統的方法製備之。 本發明亦包含前述之胜肽的片段，其具有下式： D-Phe-Gln-D-Trp-Phe-D-Trp-Leu-R-NH2 其中， R為 Aib、Deg、Dpg、Ac5c 或 Ac6c ;或 R為可水解之羧基保護性基團；或一藥學上可接受之 胜肽鹽類。 羧基保護性基團及鹽類係如前所界定者。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本發明之較佳的新穎物質p類似物係如下所示·· D-Arg.Pro-Lys-Pro-D-Phe.Gln.D-Trp.Phe.D-Trp-Leu.

Ac5c-NH2 (序列辨識編號5) 乙醯基-D-Arg-Pro-Lys-Pr〇-D-Phe-Gln-EKTrp-Phe_D_ Trp-Leu-Ac5c-NH2 (序列辨識編號6) 丁醯基-D-Arg-Pro-Lys-Pro-D-Phe-Gln-D-Trp_phe-D-Trp-Leu-Ac5c-NH2 (序列辨識編號 7) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） •12- 1245772 Α7 Β7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明説明（） 10 辛醯基- D-Arg-Pro-Lys-Pro-D-Phe-Gln-D-Trp-Phe-D-Trp-Leu-AcSc-NI^ (序列辨 識編號 8) 十二醯基_0-入％-?1*〇-1^3-?1*〇-0-?1^-0111-0-丁印-?1^-D-Trp-Leu-Ac5c-NH2 (序列辨識編號 9) D-Arg-Pro-Lys-Pro-D-Phe-Gln-D-Trp-Phe-D-Trp-Leu-Ac6c-NH2 (序列辨識編號10) 丁醯基-0-入巧_?1*〇-1^8_?1：〇-0-?116-0111-0-1^卩-?116-0-Trp-Leu-Ac6c-NH2 (序列辨識編號 11) 辛醯基- D-Arg-Pro-Lys-Pro-D-Phe-Gln-D-Trp-Phe-D-Trp-Leu-AcGc-NH〗 （序列辨 識編號 12) D-Arg-Pro-Lys-Pro-D-Phe-Gln-D-Trp-Phe-D-Trp-Leu-Aib-NH2 (序列辨識編號13) D-Arg-Pro-Lys-Pro-D-Phe-Gln-D-Trp-Phe-D-Trp-Leu-Deg-NH2 (序列辨識編號14) D-Arg-Pro-Lys-Pro-D-Phe-Gln-D-Trp-Phe-D-Trp-Leu-Dpg-NH2 (序列辨識編號1 5) D-Phe-Gln-D-Trp-Phe-D-Trp-Leu-Aib-NH2 (序列辨識 編號16) D-Phe-Gln-D-Trp-Phe-D-Trp_Leu-Ac5c-NH2 (序列辨 識編號17) D-Phe-Gln-D-Trp-Phe_D-Trp-Leu-Ac6c-NH2 (序列辨 識編號18) D-Phe-Gln-D-Trp-Phe-D-Trp-Leu-Deg-NH2 (序列辨識 編號19) 本紙張尺度適用中ΐ國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -13- 1245772 五、發明説明（） 11 D-Phe-Gln^D.Trp.Phe-D.Trp-Leu-Dpg.NH2 ?lJ m .. 編號20) 〜辨5线 III:——;--«衣一丨 f請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁} 適於本發明之藥學組成物包括含有有效量之^八 以達到其所欲目的的組成物。 刀 該名詞”有效量”係指一藥物或藥學物質之量，其量將 可引發組織、系統、動物或人類所欲之生物或醫藥反應。 除了活性成分之外，此藥學組成物可含有合適的藥學:可 接又之可獲得的賦形劑、稀釋劑、溶劑、調味劑、染劑等。 此等製備物可以任何形式配方之，其包括但不限於片巧、 糖錠劑、膠囊、粉末、糖漿、懸浮液、於聚、依時間_ 之配方、持續釋放之配方、丸狀、顆粒狀、乳液、斑片狀、 注射液、溶液、脂質體及毫微顆粒。 適用之投藥路徑係為習知所知者，其包括口服、直腸、 經皮膚的、經陰道的、經黏膜的或經腸供藥方式；不經腸 的輸送，其包含肌肉的、皮下的、髓内注射與鞘内的、直 接心室内的、靜脈内的、腹膜内的、鼻内的或眼内注射。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 真正的配方、供藥路徑及劑量係可由個別之醫師視病 患之情況來決定。 本發明之胜肽的毒性及治療功效可由標準之細胞培養 或實驗動物的藥學程序來決定。 胜狀的合成 本發明之新穎胜肽係可藉使用固相技術、液相方法及 固相技術之結合或藉片斷縮合方法來產生。該等胜肷之化 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） •14- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1245772 A7 _______ B7 五、發明説明（） — 12 學合成方法係為習知所知者（Stewart& Y〇ung，1969，固相 胜版合成（Solid Phase Peptide Synthesis), W.H. Freeman Co.) 〇 於本發明之一較佳具體實施例中，胜肽係於半自動胜 肽合成機（08 31〇，1^〇(161 5 3 6)上，使用17111〇(:方法之最佳側 鏈保護法程序來合成。胜肽係由c_端往N_端組合而成。 羧基端醯胺化之胜肽係使用Rink Amide樹脂來合成。第一 個Fmoc保護的胺基酸的承載係藉與固體撐體形成醯胺鍵 而達成’其係由二異丙基碳化二亞胺（DIPCdi)與HOBt所 調節。自動合成之取代程度較佳係介於每公克樹脂之〇2 與0.8 mmol胺基酸之間。 N-端胺基係由9-芴基-甲氧羰基（Fm〇c)所保護。三苯 曱游基（trt)或t- 丁氧羰基（Boc)係為組胺酸殘基之咪唑基團 的較佳保濩性基團。絲胺酸、酥胺酸及酪胺酸的羥基較佳 係由t· 丁基（tBu) 2,2,5,7,8-五甲基-苯并二氫σ比喃_6-石黃醯基 (Pmc)所保護，或者2,2,4，ν五甲基_二氫苯并呋喃_5_磺醯 基（Pbf)係為精胺酸之胍基的較佳保護性基團。三苯甲游 基係為天冬醯胺酸與麵醯胺酸的較佳保護性基團，且第三 丁基（tBu)係為天冬胺酸與麩胺酸的較佳保護性基團。色 月女酸殘基係可為未保護形式或使用B〇c保護方法。離胺酸 之側鏈胺基較佳係使用B〇c基團保護之。 於本發明之一較佳具體實施例中，每樹脂氮當量係使 用2-8個當量iFmoc保護性胺基酸。在固相胜肽合成方法 中，使用於將胺基酸耦合至樹脂的活化劑係為習知所知 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

-15- 1245772 A7 B7 五、發明説明（） 13 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 者。活化劑包括〇<：001?001、0^八、60?、？760?、118丁1；、 TBTU與HOBt 〇於搞合反應中，較佳係使用DCC或 DIPCDI/HOBt 或 HBTU/HOBt及 DIEA作為活化劑。 保護性胺基酸可在原位活化或以熟於此技者所知之預 活化脂類（諸如，NHS脂類、Opfp脂類等）的形成加入， Atherton，E. etal，1988，I. Chem. Soc·，Perkin Trans· I， 2887。Bodansky，M· in ”胜肽、分析、合成及生物（The Peptides，Analysis，Synthesis and Biology)’’（E. Gross，I， Meienhofer，eds) Vol. 1，Academic Press，New York，1979, 106 〇 耦合反應係於DMF、DCM或NMP或此等溶劑之混合 物中進行，且以凱瑟試驗（Kaiser test)(Kaiser et al.，Anal. Biochem·，34, 595-598 (197))來監測。於一正凱瑟試驗的 例子中，適當的胺基酸係使用新鮮製備的活化劑再耦合 之0 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 在胜肽組合完成後，移除胺端的Fmoc基團，而後， 以甲醇清洗胜肽-樹脂並乾燥之。而後，將胜肽去保護， 並在室溫下，藉由以三氟乙酸、結晶酚、乙烷二硫酚、苯 硫基甲烷及去離子水處理1.5到5個小時，以自樹脂撐體上 切除。以冷乾乙醚沈澱以獲得粗萃胜肽、過濾、溶解並冷 凍乾燥之。 所得之粗萃胜肽係以製備式高效能液態色層分析法 (HPLC)來純化，其係使用一製備式HPLC系統（Shimadzu Corporation，Japan)上之LiChroCART(§)C18 (250. Times. 10) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -16- 1245772 A7 B7 14 發明説明（ 之逆相管柱（Merck，Darrnstadt，Germany)，且使用配製於 〇·1 % TFA中之乙腈及水的梯度系統。該沖提區份係以分 析性之 HPLC 系統（Shimadzu Corporation，Japan)再分析 之，其係使用 C18 LiChrospher㊣，WP-300 (300 X 4)之逆 相管柱。蒸發乙賸，冷凍乾燥該等區份以獲得純的胜肽。 各胜肽的同一性係以電子喷霧質譜議來確認。 本發明較佳之半自動逐步固相的胜肽合成方法係使用 於本文後述之實施例中。 本發明將參照下列之實施例而作更詳細之說明，且可 為熟於此藝者所了解，該等實施例係僅用於例示說明而非 用於限制本發明。本發明之其他的改良亦可在不偏離本發 明之精神與範圍下進行。 與合成物質P類似物有關的步驟係使用下列之方法： I--:---:--II (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 、11 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 第1表 步驟 1 試劑 混合時間 (分鐘） 循 1 二氣曱烷 1 - 2 ~~ΞΥϊ甲醯胺 1 3 配製於二甲基甲醯 胺中之20%的哌啶 1 4 配製於二甲基甲醯 胺中之20%的哌啶 29 5 a 一甲基甲醯胺 1 卜— 6 異丙醇 1 7 一氣曱烧 1 8 π 胺基酸 可變 - y 1 Λ 1 1 u 停止或回到下一個 循環 尺 I張 -紙 本 -17- 1245772 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（） 15 實施例1

於Rink醯胺榭脂L 典型的Fm〇C-Ac5C-Rink醯胺樹脂的製備係使用lo克 之4-(2’，4’-二曱氧苯基邛m〇c_胺甲基）苯氧基_曱基-衍生之 水苯乙烯1%二乙烯基苯（Rink醯胺）樹脂（〇 7 mM/g) (1〇〇_ 、、罔目）末進行’其係得自 Advanced Chemtech，Louisville， KY’U.S.A·。樹脂的膨脹典型係在二氯甲烷中進行，量測 其體積為10-40ml/g樹脂。使樹脂於二氯甲烷（2 X 25以， 持績ίο分鐘）膨脹。樹脂以二甲基曱醯胺（DMF)再清洗一 次，持續1分鐘。方法中所有的溶劑係於每一循環中加入2〇 ml。以接下來之方法步驟3_7來移除樹脂上2Fm〇c_保護性 基團。Fmoc基團的去保護係以凱瑟試驗中之藍色珠粒的 存在來確認。就於樹脂之游離胺基（NH2)上承载第一胺基 酸而言，於胜肽合成機之胺基酸槽中，第一胺基酸之^量 係為3到6倍多，且具有一相似倍數的H〇m。其等係在加 入胜肽合成機之反應槽内的樹脂之前，溶解於二甲基曱醯 胺中（A.C.S.等級）（j.T Baker，New Jersey，u § a )且以 DIPCDI活化。H0Bt 4系全部加入於輕合反應中，特別是 於麩醯胺酸與組胺酸的例子中。耦合反應係進行U個小 時的時間。樹脂上胺基酸的承載係以凯瑟試驗中之無色珠 粒來確認。纟載效率係以胺基酸之添加後樹脂重量的增加 而知。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

-18- 1245772 A7 B7 五、發明説明（） 16 實施例2 D-Phe-Gln-D-Trp-Phe-D-Trp-Leu-Ac5c-NH2 (序列辨識編號17)的合成 胜肽序列辨識編號1 7的合成係使用前述之實施例1之 lg規模之承載有Fmoc-Ac5c-OH的樹脂來開始。而後進行 合成循環之步驟1 -1 〇的逐步去保護作用及耦合步驟。於各 柄合反應中，使用4倍多之胺基酸、DICPDI與HOBt。於 合成完成並移除N-端Fmoc保護性基團（合成循環之步驟^ 6)時’以甲醇清洗胜肽_樹脂二次、乾燥並稱重得丨料％。 而後’在室溫下，於包含有三氟乙酸及清除劑、結晶酚、 苯硫基甲烷、乙烷二硫酚及水之切除混合物中進行切除， 該切除係歷時1-4個小時，並持續攪拌之。以冷乾乙醚沈 殿胜肷’以獲得粗萃胜肽。以梯度系統之C丨8製備式逆相 HPLC管柱（250 X 10)純化粗萃胜肽，該梯度系統包含前述 技藝所述之配製於O.i % TFA中之乙腈及水。收集突出顯 著的峰並冷凍乾燥之，再以分析式HPLC及質譜儀分析之。 觀察所得之分子量與計算而得之分子量間有一良好之一致 性（計算之質量〜1036，觀察之質量=1037.2 )。而後將純 化之胜肽使用於生物分析。 實施例3 D-Arg-Pro-Lys-Pro-D-Phe-Gln-D-Trp-Phe-D-Trp-Leu-

Ac5c-NH2 (序列辨識編號5)的合成 此合成係使用適當之胺基酸且以前述實施例之方式來 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐〉 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 19- 1245772 五 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 發明説明（） 17 進行。其而後以實施例2之方法進行切除及純化。純化之 胜肽係以其質量分析作進一步特性分析。前述胜肽計算之 質量為〜1515,且所觀察之質量為1514 29。 實施例4 丁醢基-D-Arg-Pro-Lys-Pro-D-Phe-Gln-D-Trp-Phe-D-Trp-

Leu-Ac5c-NH2 (序列辨識編號7)的合成 將丁醯基接合於N-端位置的反應係於固相上進行。 前述之胜肽序列係如實施例2所述合成於樹脂上。在 D-Arg胺基酸去保護後，進一步依標準步驟使用DIPCDI與 HOBT，使其與配製於DMF中之丁酸耦合。而後，依實施 例2所述之標準步驟進行切除及純化工作。最後所得之純 化的胜肽係以質譜儀分析之。計算質量及觀察質量係有一 良好的一致性（計算質量約為〜1585，觀察質量=1586)。 實施例5 辛醯基-D-Arg，Pro-Lys-Pro-D-Phe-Gln-D-Trp_Phe_D-Trp-Leu-Ac5c-NH2 (序列辨識編號8)的合成 將辛醯基接合於N-端位置的反應係於固相上進行。 除了以辛酸取代丁酸外，前述之胜肽序列係以實施例 4所述之相同方式合成於樹脂上。最後所得之純化的胜肽 係以質譜儀分析之。計算質量及觀察質量係有一良好的一 致性（計算質量約為〜1641，觀察質量= 1642.2)。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） ----^---J--II (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 -20- 1245772 at — B7 五、發明説明（） 18 實施例ό (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 乙醯基-D-Arg-Pro-Lys-Pro-D-Phe-Gln-D-Trp-Phe-D- Trp-

Leu-Ac5c-NH2 (序列辨識編號6)的合成 將乙醯基接合於N-端位置的反應係以實施例4所述之 相同方式，於固相上使用乙酸酐來進行。最後所得之純化 的胜肽係以質譜儀分析之。計算質量及觀察質量係有一良 好的一致性（計算質量約為〜1557，觀察質量=1558.5)。 實施例7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 新穎合成之胜肷類似物的活體外細胞毒性 所合成之胜肽的細胞毒性係於6種人類腫瘤細胞株上 進行測試，該等細胞株為MCF7 (乳癌）、U3 73 (神經膠母 細胞瘤）、PTC (結腸癌）、L132 (肺癌）、Su.86.86 (胰臟癌） 及KB ( 口腔癌）。腫瘤細胞係於指數生長期收集之且再懸 浮於培養液中（1·5χ106細胞/ml之含有l〇%FBS的RPM1 1640)。將1 50 // L之培養液加入96井組織培養盤（Nunc， Denmark)中，而後加入30//L的細胞懸浮液。將盤置於培 養箱中（37°C、5% C02)過夜。將20/z L的胜肷（1〇〇 pM到10 # Μ濃度）加至96井盤之標示井中。各濃度進行三重試 驗。將20 // L之培養液單獨加至對照井中，同時不含細胞 之井係作為空白組。確定各井中之總體積為2〇〇 # l，且 將盤置於培養箱（37°C、5% C〇2)中。培養72小時後，進 行MTT分析，並計算與對照組細胞比較之細胞毒性百分 比。第2及3表係顯示不同胜肽在各腫瘤細胞株内的細胞毒 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） -21- 1245772 A7 B7 五、發明説明（） 19 性。 序列辨識編號7之細胞毒性 第2表 細胞株 不同濃度下之細胞毒性百分比 10/z Μ 1 β Μ ΙΟΟηΜ 10 ηΜ 1 ηΜ ΙΟΟρΜ MCF-7 19.7±5 11.7±5.1 15_4±0·7 2·7±1.5 20.55土 3.1 19.3±1·8 U373 21.1±1.7 8.3±0.5 8_8±0.2 6.6±0.7 13·4±4_6 10·9±1·0 PTC 27.3±5.4 11.7±3.0 5.3±0·2 5·8±0.2 Nil Nil L132 15±2.3 9±2.3 9±2·3 19±3.3 25土8 14±3.4 Su8686 38±4.3 36±3.3 15±3·8 10±2.8 25±5.3 6±1·8 KB 15±2.3 4±2.6 10±4.9 10±3·4 6±0·9 Nil 序列辨識編號5之細胞毒性 第3表 細胞株 不同濃度下之細胞毒性百分比 10/z Μ 1 u Μ ΙΟΟηΜ 10 ηΜ 1 ηΜ ΙΟΟρΜ MCF-7 18·4±6·4 12.4±2.6 8.6±1.6 7_5±1.5 2_4±1·2 Nil U373 37.2±5·3 17.06±1.9 4.5±0.5 5.0±0.7 3·1±0·5 3.7±0·5 PTC 35.5 ±4.8 25·5±4·8 6·7±1.3 3.1±1.9 3·1±0.5 Nil L132 23±2.3 20±2·3 21±1·2 19±3·3 15±5_8 18±3.4 Su8686 25 ±4.3 22±3.3 9±3.8 12±2_8 3±0.3 Nil (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 衣· -ίτ填寫太 訂

I 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 實施例8 物質P類似物之脂·綴合物的活體外細胞毒性 物質P類似物序列辨識編號6、列辨識編號7與序列辨 識編號8之脂_綴合物的細胞毒性效果係以MTT分析法來研 究，其係基於1^1^[3-[4,5-二甲基噻唑_2-基]-2,5-二苯四 嗤鐵漠化物]，一種四嗤I翁鹽，被一代謝活化細胞所吸收， 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -22- 1245772 發明説明（） 20 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 其被活化粒腺體代謝成一藍色的甲臢產物，該產物可以分 光光度方式而讀出。簡言之，腫瘤細胞_KB (口腔鱗狀瘤）、 U87MG (神經膠母細胞瘤）、HBL100 (乳癌）、HeP2 (Larngeal)、ECV304(内皮細胞）、PA-1(卵巢）及 L132(肺癌） 係在37°C下，於96-井培養盤中，與胜肽類似物一起培養48 個小時，而後加入l〇0/z g MTT，並再培養1個小時。形成 於細胞内部的甲臢結晶係以一含10〇/。十二烷基磺酸鈉與 0.01 N HC1之洗劑溶解，並以多重掃瞄elisa讀取機讀取 光學密度。光學密度係正比於增生與代謝活化細胞的數 目。胜肽類似物之毒性百分比係顯示於下表中。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 序列辨識編號7 細胞株 不同濃度下之細胞毒性百分出 1 β Μ ΙΟΟηΜ 10 ηΜ 1 ηΜ KB 9.0±5.3 18.0±5.2 21.9 + 4.1 20.9 + 3.6 U87MG 14·8±1·4 21·8±1·2 27.8 + 2.2 22.9 + 2.3 HBL100 22·8±1·4 23_9±1_7 22.9 + 3.8 13.9 + 3.5 HeP2 12·9±1·4 24.7±2.5 19.8+4.8 16.4 + 3.2 L132 12.9±2·4 18.5±3.6 24.7 + 3.5 14.9 + 4.9 PA-1 23.7±3.3 32.9±2.6 26.7 + 2.4 12.7 + 3.5 ECV304 6.0±2.4 20·9±2_3 16.5+3.3 ] 13.9 + 4.5 序列辨識編號6 細胞株 — 不同濃度下之細胞毒性百分比 1 ^ Μ ΙΟΟηΜ 10 ηΜ 1 ηΜ ΚΒ 2.0±1.3 18.0土2.6 29.0 + 1.3 28.0 + 2.3 U87MG 31.8±3.2 34.7±1·9 32.9 + 2.4 26.9 + 3.5 HBL100 28·9±1·448 31·8±1.5 28.4 + 1.8 28.5+4.5 HeP2 13.8±2.4 24.9±1.5 14.8+4.4 10.0 + 3.2 L132 19.7±2_5 19.5±4.6 24.7 + 3.2 14.9 + 2.9 ΡΑ-1 13.9±3.3 25.4±2.6 22.0 + 3.4 8.0 + 2.4 ECV304 12_9±2.2 15·9±2·3 13.8 + 3.3 9.0 + 3.7 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -23- 1245772 A7 _____B7 五、發明説明（） 21 序列辨識編號8 細胞株 不同濃度下之細胞毒性百分比 1 // Μ ΙΟΟηΜ 10 ηΜ 1 ηΜ KB 19_0±4·3 23.0±3.2 29.0 28.0 U87MG 21.8±3.4 28.9±1_4 33·9±2·2 23·9±3.3 HBL100 25_8±1·4 30·6±1·5 28.6±3.8 9.0±4.5 HeP2 1 12·9±3.4 24·9±2·5 15.5±4.4 12.5±3.2 L132 18.6±2.4 16.9±3.6 27.5±3.5 11.9±4.9 PA-1 34.4±3.4 39.0±2.6 26.9±3·4 22.1±3.4 ECV304 17.9±2·4 24.6±2.3 31·9±3·3 16.9±3.5 ----^---^--•衣 II (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 實施例9 訂 物質P類似物在PCT腫瘤異種移植方法中的 j舌體内抗腫瘤活性 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 物質P類似物的抗腫瘤活性係以裸鼠内之人類結腸腺 癌（PTC)異種移植物來研究。PTC腫瘤異種移植物係生長 於Balb/c無胸腺裸鼠中，其係藉由於皮下接種ptc細胞之 單一細胞懸浮液（15 X 1〇6細胞/100 而達成。帶有腫 瘤之動物係£为成四組’每組三隻，其含一組未處理之對 照動物。當以游標卡尺所測得之平均腫瘤體積為4〇〇-800mm3時，以物質P受體拮抗劑之處理來啟動反應。製備 浪度為42.5 // g/ml之序列辨識編號5、序列辨識編號7與序 列辨識編號8之胜肽，且以靜脈注射方式供給至所選擇之 V腫瘤動物之組別’其劑量為4·25 // g/1 〇〇 # L，每天二次， 以使各動物之供藥總劑量為8.5//g。此供藥治療係持續ι〇 天0

-24- 1245772

發明説明（ 22 百 結果 gA 口物之抗腫瘤活性係藉每四天測量15個腫瘤體積而 :控之，其使用下列方程式：W*W*L*Q 4 (W=較小的直 ▲狄較大的直)。腫瘤生長抑制百分比係使用下式 :十异之:經治療之腫瘤體積/對照組之腫瘤體積)Χ1〇0。 第4表係顯示各動物之腫瘤體積，該體積係測量至接種後 第21天°第1圖軸示治療及未治療之動物中直至第21天 之腫瘤動力學。：種胜肽皆顯示在ptc異種移植物上之一 顯著的抗腫瘤活性。在第19天時，序列辨識編號5、序列 辨4、’扁號7與序列辨識編號8與對照組比較之腫瘤生長的 刀比抑制性係各別為68·34%、78 54%與7516%。 ----丨·---^--II (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ’訂- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

25- 1245772 A7 B7 五、發明説明（y 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 序列辨識編號7 S.D. ο 33.5 94.2 601.3 879.9 280.1 1577.8 平均 ο 30.7 169.5 767.4 1412.6 1931.3 1709.3 HH H-H h-H ο ο 卜 281.6 864 1800 ο h—1 I-H ο 66.6 260.1 1440 2427.6 2253 1 3110 1 HH ο 25.6 176.4 580.8 946.4 I1741 1 1 2018 1 序列辨識編號8 S.D. ο 266.6 520.8 979.7 1663.1 1119.0 1622.4 平均 ο 274.6 570.6 1225.8 2351.2 2334.9 1841.6 HH 1—I KH ο ο ο 156.8 580.8 1710 1 3177 1 HH h-H ο 291.6 691.2 1440 2592 1474.8 HH ο [532.4 1020.6 2080.8 3880.8 3520.0 2312.0 序列辨識編號5 S.D. ο 190.3 |333.6 |898·9 1 661.5 1198.7 1739.4 平均 ο 505.1 1103.1 2989.7 3716.6 2848.9 1330.0 HH HH h-H ο |687·71 1411.2 3840.0 4480.0 3499.2 2560.0 H-H HH ο 1 520 1 1149.2 3080.3 1 3360 1 1465.6 1 100 1 HH ο |307·8 1 748.81 1 2049 1 3 310 3582 1 1 未處 理 ο 500 1500 I 4000 6500 9000 1 vK ο 〇〇 (Ν r-H 〇\ (Ν (Ν ： ：--•衣II (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 、言

wovd *%#s^w<i 1« m. tmmammmi-> emmmmmMMmm 1·1_ϋ «Ha·— I 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 1245772 A7 ...................... B7 - 五、發明説明（） ^ ^ ^ 24 所有公開的參考資料（包括列示於公開資料中的胺基 酸序列）係併於此以供參考。所有揭干化合物的與前述公 開資料中所提及者（包括所揭示且於前所述及之公開資料5 所引證之文獻的化合物）係併於此以供參考。 n··— n I—I- - 11 - I ---= I I --- I- - 1 - -- n (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） -27- 1245772 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

五、發明説明（） 25序列表 <110〉BURMAN C，ANAND PRASAD，SUDHANAND MUKHERJEE，RAMA JAGGI，MANU SINGH T，ANU < 120〉用於治療癌症之物質P類似物 <130> U012846-8 <140〉 <141〉 <160> 20 <170〉Patent In Ver. 2.0 <210〉 1 <211> 11 <212> PRT <213> Equus caballus <400> 1 Arg Pro Lys Pro Gin Gin Phe Phe Gly Leu Met 1 5 10 <210> 2 <211〉 5 <212〉PRT (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X297公釐） -28- 1245772 A7 B7 五、發明説明（） 26 <213>人工序列 <220> (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) <223〉人工序列之說明：此胜肽係以合成方式產生 <220> <221> MOD—RES <222> (1) <223〉/產物=pHOPA-D-色胺酸/標示=pHOPA-D-Trp <220> <221> MOD—RES <222> (4) <223〉/產物D-色胺酸/標示=D-Trp <400> 2

Xaa Phe Xaa Leu Leu 1 5 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 <210> 3 <211> 6 <212> PRT <213〉人工序列 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -29- 1245772 A7 B7 五、發明説明（ 27 <220> <223〉人工序列之說明：此胜肽係以合成方式產生 <220> <221> MOD—RES <222> (1) <223>/產物D-甲基-苯丙胺酸/樣示=D-MePhe <220> <221> MOD—RES <222〉（2) <223〉/產物色胺酸/標示 D-Trp <220> <221> MOD—RES <222> (4) <223〉/產物=D-色胺酸/標示=D-Trp (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 <220> <221> MOD一RES <222> (5) ..(6) <223> /產物=π其他"/註記 鍵結” ’接續有（CH2NH)的替代性 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -30- 1245772 A7 B7 五、發明説明（ 28 <400> 3 Xaa Xaa Phe Xaa Leu Leu 1 5 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 <210> 4 <211> 5 <212> PRT <213〉人工序列 <220> <223〉人工序列之說明：此胜肽係以合成方式產生 <220> <221〉MOD—RES <222〉 （1) <223〉/產物=D-甲基苯丙胺酸/標示D-MePhe <220> <221〉MOD一RES <222〉（2) <223〉/產物=D-色胺酸/標示D-Trp

<220> <221> MOD RES 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -31 - 1245772 A7 B7 五、發明説明（） 29 <222〉（4) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) <223〉/產物=D-色胺酸/標示=D-Trp <400> 4

Xaa Xaa Phe Xaa Leu 1 5 <210〉 5 <211〉 11 <212> PRT <213〉人工序列 <220> <223>人工序列之說明：此胜肽係以合成方式產生 <220> 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 <221〉MOD—RES <222〉 （1) <223〉/產物=D-精胺酸/標示=D-Arg <220> <221〉MOD—RES <222〉（5) <223>/產物=D·苯丙胺酸/標示=D-Phe 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -32- 1245772 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明説明（） 30 <220> <221> MOD—RES <222〉（7) < 2 2 3〉/產物=D ·色胺酸/標不=D - Trp <220> <221> MOD—RES <222〉（9) <223>/產物=D-色胺酸/標示=D-Trp <220> <221> MOD—RES <222〉 （11) <223>/產物=1·胺環戊烧魏酸/標示=Ac5c <400> 5 Xaa Pro Lys Pro Xaa Gin Xaa Phe Xaa Leu Xaa 1 5 10 <210> 6 <211〉 11 <212> PRT <213>人工序列 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -33- 1245772 A7 B7 五、發明説明（ 31 <220> <223〉人工序列之說明：此胜肽係以合成方式產生 <220> <221〉MOD—RES <222〉（1) <223〉/產物=乙醯基-D-精胺酸/標示 乙酿基-D-Arg <220> <221〉MOD—RES <222〉（5) <223〉/產物=D-苯丙胺酸/標示=D-Phe <220> <221> MOD—RES <222> (7) <223〉/產物=D-色胺酸/標示=D-Trp (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 <220> <221> MOD—RES <222〉（9) <223>/產物=D-色胺酸/標示=D-Trp 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -34- 1245772 A7 B7 五、發明説明（） 32 <220> (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) <221> MOD_RES <222> (11) <223>/產物=1-胺環戊烧叛酸/標示=Ac5c <400> 6

Xaa Pro Lys Pro Xaa Gin Xaa Phe Xaa Leu Xaa 1 5 10 <210> 7 <211〉 11 <212> PRT <213〉人工序列 <220> 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 <223>人工序列之說明：此胜肽係以合成方式產生 <220> <221> MOD—RES <222> (1) <223>/產物=丁醯基-D-精胺酸/標示=丁醯基-D-Afg <220>

<221〉MOD RES 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2H)X297公釐） -35- 1245772 A7 B7 五、發明説明（） 33 <222〉（5) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) <223〉/產物D-苯丙胺酸/標示=D-Phe <220> <221〉MOD—RES <222> (7) < 2 2 3〉/產物=D -色胺酸/標不=D - T r p <220> <221〉MOD—RES <222> (9) <223〉/產物=D-色胺酸/標示=D-Trp <220> <221> MOD—RES <222〉（11) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 <223〉/產物=1-胺環戊烧緩酸/標示=Ac5c <400> 7

Xaa Pro Lys Pro Xaa Gin Xaa Phe Xaa Leu Xaa 1 5 10 <210> 8 <211> 11 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -36- 1245772 A7 B7 五、發明説明（ 34 <212> PRT <213〉人工序列 <220> <223>人工序列之說明：此胜肽係以合成方式產生 <220> <221> MOD—RES <222〉 （1) <223>/產物=辛醯基-D_精胺酸/標示 辛醯基-D_Arg (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 <220> <221〉MOD—RES <222〉（5) <223〉/產物D-苯丙胺酸/標不—D-Phe <220> <221> MOD—RES <222> (7) <223>/產物=D-色胺酸/標示=D-Trp <220> <221> MOD—RES <222〉（9) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -37- 五 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1245772 - 發明説明（） 35 <223〉/產物色胺酸/標示二D-Trp <220>

<221〉MOD—RES <222> (11) <223〉/產物=1-胺環戊烷羧酸/標示=Ac5c <400> 8

Xaa Pro Lys Pro Xaa Gin Xaa Phe Xaa Leu Xaa 1 5 10 <210> 9 <211〉 11 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223〉人工序列之說明··此胜肽係以合成方式產生 <220> <221〉MOD一RES <222〉 （1) <223〉/產物=十二醯基-D-精胺酸/標示=十二醯基D-Arg 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） _ I---:---”---ΦII (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 1245772 - 五、發明説明（） 36 <220> <221〉MOD—RES <222> (5) <223〉/產物=D-苯丙胺酸/標示=D-Phe <220> <221〉MOD—RES <222> (7) <223>/產物=D-色胺酸/標示=D-Trp <220> <221> MOD一RES <222> (9) <223>/產物=D-色胺酸/標示=D-Trp <220> <221> MOD—RES <222> (11) <223>/產物=1-胺環戊烷羧酸/標示=Ac5c <400> 9

Xaa Pro Lys Pro Xaa Gin Xaa Phe Xaa Leu Xaa 1 5 10 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） I---:---,---ΦII (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 、11 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 ._ 1245772 A7 B7 五、發明説明（ 37 <210> 10 <211> 11 <212> PRT <213〉人工序列 <220> <223>人工序列之說明：此胜肽係以合成方式產生 <220> <221> MOD—RES <222> (1) <223>/產物=D-精胺酸/標示 D-Arg <220> <221> MOD一RES <222> (5) <223〉/產物=D-苯丙胺酸/標示=D-Phe I---,1---，---φII (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 <220> <221〉MOD—RES <222> (7) <223〉/產物=D-色胺酸/標示=D-Trp 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS )八4規格（210X297公釐） -40. 1245772 A7 B7 五、發明説明（） 38 <220> <221〉MOD—RES <222〉（9) <223〉/產物=D-色胺酸/標示=D-Trp <220> <221〉MOD—RES <222> (11) <223>/產物=1-胺環己烧魏酸/標示=Ac6c <400〉 10

Xaa Pro Lys Pro Xaa Gin Xaa Phe Xaa Leu Xaa 1 5 10 <210> 11 <211〉 11 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223〉人工序列之說明：此胜肷係以合成方式產生 <220>

<221〉MOD RES 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X 297公釐） 11^---.---ΦI — (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -41- 1245772 A7 B7 五、發明説明（） 39 <222〉 （1) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) <223〉/產物=丁醯基-D-精胺酸/標示=丁醯基-D-Arg <220> <221> MOD—RES <222> (5) <223〉/產物=D_苯丙胺酸/標示=D-Phe <220> <221> MOD—RES <222〉（7) <223〉/產物=D-色胺酸/標示=D-Trp <220> <221> MOD一RES <222> (9) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 <223>/產物=D-色胺酸/標示=D-Trp <220> <221> MOD一RES <222> (11) <223〉1_胺環己院叛酸/標示=Ac6c 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -42- 1245772 A7 B7 五、發明説明（） 40 <400〉 11 Xaa Pro Lys Pro Xaa Gin Xaa Phe Xaa Leu Xaa 1 5 10 <210〉 12 <211> 11 <212> PRT <213〉人工序列 <220> <223>人工序列之說明：此胜肽係以合成方式產生 <220> <221> MOD—RES <222> (1) <223〉/產物=辛醯基-D-精胺酸/標示 辛醯基-D-Arg (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 <220> <221〉MOD—RES <222〉（5) <223>/產物D-苯丙胺酸/標示=D-Phe

<220> <221〉MOD RES 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -43- 1245772 A7 B7 五、發明説明（） 41 <222〉（7) <223>/產物D-色胺酸/標示=D-Trp <220> <221> MOD—RES <222> (9) <223>/產物=D-色胺酸/標示= D-Trp <220> <221> MOD—RES <222> (11) <223>/產物=1-胺環己烧魏酸/標示=Ac6c <400> 12

Xaa Pro Lys Pro Xaa Gin Xaa Phe Xaa Leu Xaa 1 5 10 <210> 13 <211> 11 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：此胜肽係以合成方式產生 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） I--^---·---ΦII (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -44- 1245772 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明説明（） 42 <220> <221> MOD_RES <222> (1) <223〉/產物=D-精胺酸/標示二D-Arg <220> <221> MOD—RES <222〉（5) <223>/產物D-苯丙胺酸/標示=D-Phe <220〉 <221> MOD_RES <222> (7) <223〉/產物=D-色胺酸/標示=D-Trp <220> <221> MOD一RES <222〉（9) <223>/產物=D-色胺酸/標示=D-Trp <220> <221〉MOD—RES <222〉 （11) <223〉/產物胺基異丁酸/標示=Aib I---^ .---Φ丨丨 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X 297公釐） -45- 1245772 A7 B7 五、發明説明（ 43 <400> 13 Xaa Pro Lys Pro Xaa Gin Xaa Phe Xaa Leu Xaa 1 5 10 <210〉 14 <211> 11 <212> PRT <213〉人工序列 <220> <223〉人工序列之說明：此胜肽係以合成方式產生 <220> <221> MOD—RES <222〉（1) <223〉/產物=D-精胺酸/標不=D-Arg ----^---’---Φ丨丨 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 <220> <221> MOD—RES <222> (5) <223〉/產物=D-苯丙胺酸/標示

<220> <221> MOD RES 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X 297公釐） D-Phe -46- 1245772 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明説明（） 44 <222〉（7) <223〉/產物=D -色胺酸/標不=D - Trp <220> <221〉MOD—RES <222> (9) <2 2 3〉/產物二D -色胺酸/標不=D - Trp <220> <221〉MOD—RES <222〉 （11) <223〉/產物=α，α-二-乙基甘胺酸/標示^Deg <400> 14 Xaa Pro Lys Pro Xaa Gin Xaa Phe Xaa Leu Xaa 1 5 10 <210〉 15 <211> 11 <212> PRT <213〉人工序列 <220> <223>人工序列之說明：此胜肽係以合成方式產生 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -47- 1245772 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明説明（） 45 <220> <221> MOD_RES <222> (1) <223〉/產物=D-精胺酸/標不=D-Arg <220> <221〉MOD—RES <222〉（5) <223〉/產物=D-苯丙胺酸/標示=D-Phe <220> <221> MOD—RES <222> (7) <22 3〉/產物=D-色胺酸/標不=D-Trp <220> <221> MOD一RES <222〉（9) <223> /產物=D-色胺酸/標示=D-Trp <220> <221〉MOD —RES <222〉 （11) <223〉/產物二-丙基甘胺酸/標不=Dpg (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） -48- 1245772 A7 B7 五、發明説明（） 46 <400〉 15

Xaa Pro Lys Pro Xaa Gin Xaa Phe Xaa Leu Xaa 1 5 10 <210> 16 <211> 7 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223〉人工序列之說明：此胜肽係以合成方式產生 <220> <221〉MOD—RES <222> (1) <223〉/產物=D-苯丙胺酸/標示=D-Phe <220> <221> MOD一RES <222〉（3) <223〉/產物=D-色胺酸/標示=D-Trp <220>

<221> MOD RES 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） ----J---II 疃 II (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -49- 1245772 A7 B7 五、發明説明（） 47 <222〉（5) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) <2 2 3〉/產物=D -色胺酸/標不=D - Trp <220> <221> MOD—RES <222> (7) < 2 2 3 > /產物=a -胺基異丁酸/標不=A i b <400> 16

Xaa Gin Xaa Phe Xaa Leu Xaa 1 5 <210〉 17 <211〉 7 <212> PRT <213〉人工序列 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 <220> <223>人工序列之說明：此胜肽係以合成方式產生 <220> <221〉MOD—RES <222〉 （1) <223〉/產物=D-苯丙胺酸/標示=D-Phe 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -50- 1245772 A7 B7 五、發明説明（） 48 <220> (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) <221> MOD_RES <222> (3) <22 3〉/產物=D-色胺酸/標不=D_Trp <220> <221〉MOD—RES <222〉（5) <223〉/產物=D-色胺酸/標示=D-Trp <220> <221〉MOD—RES <222> (7) <223> /產物=1-胺環戍烧竣酸/標不^AcSc <400> 17 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

Xaa Gin Xaa Phe Xaa Leu Xaa 1 5 <210> 18 <211〉 7 <212〉PRT <213〉人工序列 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -51- 1245772 A7 B7 五、發明説明（ 49 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 <220> <223〉人工序列之說明：此胜肽係以合成方式產生 <220> <221> MOD—RES <222> (1) <223〉/產物=D-苯丙胺酸/標示=D-Phe <220> <221> MOD—RES <222〉（3) <223>/產物=D-色胺酸/標示=D-Trp <220> <221> MOD_RES <222〉（5) <223〉/產物=D-色胺酸/標示=D-Trp <220> <221> MOD—RES <222> (7) <223〉/產物=1-胺環己烧叛酸/標示=Ac6c <400〉 18 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210'〆297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -52- 1245772 A7 B7 五、發明説明（ 50

Xaa Gin Xaa Phe Xaa Leu Xaa <210〉 19 <211〉 7 <212> PRT <213〉人工序列 <220> <223〉人工序列之說明：此胜肽係以合成方式產生 <220> <221〉MOD—RES <222〉 （1) <223>/產物D·苯丙胺酸/標示=D-Phe (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 <220> <221> MOD—RES <222〉（3) <223>/產物D-色胺酸/標示 <220> <221〉MOD—RES <222〉（5) D-Trp 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -53- A7 B7 1245772 五、發明説明（） 51 <223〉/產物二D-色胺酸/標示=D-Trp <220> <221〉MOD—RES <222〉（7) <223〉/產物α，α_二乙基甘胺酸/標示=Deg <400〉 19

Xaa Gin Xaa Phe Xaa Leu Xaa 1 5 <210〉20 <211> 7 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：此胜肽係以合成方式產生 <220> <221> MOD一RES <222> (1) <223>/產物苯丙胺酸/標示=D-Phe 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 衣. 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -54- 1245772 A7 B7 五、發明説明（） 52 <220> <221〉MOD—RES <222〉（3) <223> /產物=D-色胺酸/標示=D-Trp <220> <221> MOD_RES <222> (5) <223〉/產物=D-色胺酸/標示=D-Trp <220> <221〉MOD—RES <222〉（7) <223〉/產物α，α -二-丙基甘胺酸/標示=Dpg <400> 20

Xaa Gin Xaa Phe Xaa Leu Xaa ----------衣-- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） -55-

Claims (1)

1. [爾 B8 7. ife;::之)正.本 !S 7Τ 經 部 智 1 片 > “L 乂 ·’） Μ χ 消 合 作 ϋ 卬 製 申請專利範園 第90118680號專利申請案申請專利範圍修正本2〇〇s年7月1. 一種胜肽，其具有下列之一般式， X-D-Arg-Pro^Lys-Pro-D-Phe.Gln-D-Trp.Phe-D.Trp- Leu-R-NH2其中， X為乙醯基或3到18個碳原子之直鏈、支鏈或環 狀之院醯基基團；或可被刪除； R為 Aib、Deg、Dpg、. Ac5c或 Ac6c ;或者 R為一 可水解之羧基保護性基團； 或一藥學上可接受之胜肽鹽類。 一種胜肽，其具有下列之一般式， D-Phe-Gln-D-Trp-Phe-D-Trp-Leu-R-NH2其中， R 為 Aib、Deg、Dpg、Ac5c 或 Ac6c ;或一可水解 之羧基保護性基團；或 一藥學上可接受之胜跃鹽類。 如申請專利範圍第1項之胜肽，其中X係被刪除且R 為Ac5c，該胜肽具有下式： D-Arg-Pro-Lys-Pro-D-Phe-Gln-D-Trp-Phe-D-Trp-Leu-Ac5c_NH2 (序列辨識編號5) 或其藥學上可接受之鹽類。 如申請專利範圍第1項之胜肽，其中X係為乙醯基且 R為Ac5c，該胜版具有下式： 乙醯基-D-Arg-Pro-Lys-Pro-D-Phe-Gln-D-Trp-Phe-D· 項 I 2. 3. 4· Trp-Leu-Ac5c-NH2 (序列辨識編號6); 夂尺度適州中®國家標绛（CNS > A4規格（2丨0X297公釐} 訂 -56- 1245772 Λ 8 CS D8 六、申請專利範園 經^部智&財^兑：只工消骨合作社印製 或其藥學上可接受之鹽類。 5· 如申請專利範圍第1項之胜肽，其中X係為丁醯基且 R為Ac5c，該胜肷具有下式： 丁醢基-D-Arg-Pro-Lys-Pro-D-Phe-Gln-D-Trp-Phe-D-Trp-Leu-AcSc-NH〗 （序列辨識編號 7) ; 或其藥學上可接受之鹽類。 6· 如申請專利範圍第1項之胜肽，其中X係為辛醯基且 R為Ac5c，該胜肷具有下式： 辛酿基-D-Arg-Pro-Lys-Pro-D-Phe-Gln-D-Trp-Phe-D-Trp-Leu-Ac5c-NH2 (序列辨識編號 8); 或其藥學上可接受之鹽類。 7· 如申請專利範圍第1項之胜肽，其中X係為十二醯基 且R為Ac5c，該胜肽具有下式： 十二酿基-D-Arg-Pro-Lys-Pro-D-Phe-Gln-D-Trp-Phe- D-Trp-Leu-Ac5c-NH2 (序列辨識編號9); 或其藥學上可接受之鹽類。 8· 如申請專利範圍第1項之胜肽，其中R為Ac6c，該胜 肽具有下式： D-Arg-Pro-Lys-Pro-D-Phe-Gln-D-Trp-Phe-D-Trp-Leu- Ac6c-NH2 (序列辨識編號10); 或其藥學上可接受之鹽類。 9· 如申請專利範圍第1項之胜肽，其中X係為丁醯基且 R為Ac6c，該胜肽具有下式： 丁醯基-D-Arg-Pro-Lys-Pro-D-Phe-Gln-D-Trp-Phe-D- 夂紙浪尺度適用中國國家樣準（CNS > A4現格（2丨0Χ 297&«ΰ "^------ ί請先閲讀背面之注意事項再填9頁) 裝sftf 訂 線 -57- 1245772 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 Trp-Leu-Ac6c-NH2 (序列辨識編號 11); 或其藥學上可接受之鹽類。 10·如申請專利範圍第1項之胜肽，其中X係為辛醯基且 R為Ac6c，該胜狀具有下式： 辛酿基-D-Arg-Pro-Lys-Pro-D-Phe-Gln-D-Trp-Phe-D-Trp-Leu-AcGc-NH] (序列辨 識編號 12) ; 或其藥學上可接受之鹽類。 11·如申請專利範圍第1項之胜肽，其中R為Aib，該胜肽 具有下式： D-Arg-Pro-Lys-Pro-D-Phe-Gln-D-Trp-Phe-D-Trp-Leu- Aib-NH2 (序列辨識編號π); 或其藥學上可接受之鹽類。 12·如申請專利範圍第1項之胜肽，其中尺為!)^，該胜 肽具有下式： D-Arg-Pro-Lys-Pro-D-Phe-Gln-D-Trp.phe-D-Trp-Leu-Deg-NH2 (序列辨識編號14); 或其藥學上可接受之鹽類。 經*部智.^^4::?^:工消赍合作社印以 13·如申請專利範圍第1項之胜肽，其中汉為〇1^，該胜 肽具有下式： D.Arg.Pro^Lys.Pro>D.Phe-Gln-D^Trp.phe.D.Xrp.Leu. Dpg-NH2 (序列辨識編號1 5); 或其藥學上可接受之鹽類。 14·如申請專利範圍第2項之胜肽，其中反為人比，該胜肽 具有下式： 尤成※尺度適用中國國家樣準（CNS > Λ4規格（2丨0X 297公漦) --；- -58- 1245772 Λ S Β8 C8 DS 申請專利範園 D Phe GlHTrp-Phe-D-Trp-Leu-Aib-NH2 (序列辨識 編號16) ; _ 或其藥學上可接受之鹽類。 15·如申請專利範圍第2項之胜肽，其中R為Ac5c，該胜 肽具有下式： D Phe Gln-D-Trp_Phe-D-Trp-Leu-Ac5c-NH2 (序列辨 識編號17); 或其藥學上可接受之鹽類〇 16.如申請專利範圍第2項之胜肽，其中R為Ac6c，該胜 肽具有下式： D-Phe-Gln’D-Trp-Phe-D-Trp-Leu-Ac6c-NH2 (序列辨 識編號18); 或其藥學上可接受之鹽類。 17·如申請專利範圍第2項之胜肽，其中尺為！)“，該胜 肽具有下式： D-Phe-Gln-D-Trp-Phe-D-Trp-Leu-Deg-NH2 (序列辨識 編號19); 或其藥學上可接受之鹽類。 18·如申請專利範圍第2項之胜肽，其中尺為0叩，該胜 肽具有下式： D-Phe-Gln-D-Trp-Phe-D-Trp-Leu-Dpg-NH2 (序列辨識 編號20); 或其藥學上可接受之鹽類。 19· 一種組成物，其包含一有效量之申請專利範圍第1項 也把乐尺度適用中國國家橾準（cNS ) Α4規格（2丨0Χ 29*7公釐} 裝-- (請先閲請背面之注意事項再填ί!頁) 訂 線 -59- A'S BS C8 D8

   1245772 之胜肷與一藥學上可接受之載趙。 20. 一種組成物，其包含一有效量之申請專利範圍第2項 之胜肷與一藥學上可接受之載艚。 21· 一種有效量之申請專利範圍第1項之胜肽於製造一藥物的用途，該藥物係 供用於治療哺乳動物之癌症。 22· 一種有效量之申請專利範圍第2項之胜肽於製造一藥物的用途，該藥物係 供用於治療哺乳動物之癌症。 23· 一種用於製備式（I)之胜肽類似物的固相合成方法， X-D-Arg-Pro.Lys-Pro.D.Phe.Gln-D^Trp-Phe-D. Trp-Leu-R-NH2 其中， X為乙酿基或2到18個礙原子之直鍵、支鏈或環 狀之烷醯基基團；或可被刪除； R為 Aib、Deg、Dpg、Ac5c 或 Ac6c ; 該方法包含，於依序循環中，依序將經保護之 α-二烷基化胺基酸承載至固相樹脂的胺端上、耦合 該等胺基酸以組成一胜肽_樹脂組合物、移除該保護 性基團並自樹脂上切除該胜肽，以獲得一胜肽。 24.如申請專利範圍第23項之方法，其中該α，α-二烷基 化胺基酸係以9-芴基·曱氧羰基（Fmoc)保護其等之胺 基。 25·如申請專利範圍秦23項之方法，其中該耦合反應係 於一活化劑存在下進行，該活化劑係選自於由DCC、 DIPCDI、DIEA、BOP、PyBOP、HBTU、TBTU與 HOBt *七炊压&度適用中國國家標來（〇奶>八4規格（2丨0><297公嫠） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 -60- 1245772 Λ 8 88 C8 D8 申請專利範圍 26. 27. 28. 所構成之族群中。 如申請專利範圍第23項之方法，其中㈣合反應係 於一溶劑存在下進行，該溶劑係選自於*DMF、DCM 與NMP或其等之混合物所構成之族群中。 如申請專利範圍第23項之方法，其中該㈣係在室 溫下，以二氟乙酸、結晶酚、乙烷二硫酚、苯硫基甲烷及水處理1到4個小時.·，以自胜肽_樹脂組合物上 切除。 如申請專利範圍第23項之方法，其中該江，江_二烷基 化胺基酸係藉由將一醐類轉換成乙内醯脲，且水解 該乙内醯脲而製得。 請 先 閱讀 背 ιέ 之 注 意事 項 再 填 頁 訂

   線 Κ張尺度適用中國國家標牵（CNS > Α4現格（2丨0X297公釐） -61-