TW458972B

TW458972B - New cryptophycins from synthesis

Info

Publication number: TW458972B
Application number: TW85102778A
Authority: TW
Inventors: Richard E Moore; Marcus A Tius; Russell A Barrow; Jian Liang; Thomas H Corbett
Original assignee: Univ Hawaii; Univ Wayne State
Priority date: 1995-03-07
Filing date: 1996-03-07
Publication date: 2001-10-11
Also published as: AR003111A1; RU2195458C2; IN185695B; IL117302A; CO4700444A1; ZA961745B; TR199600191A2; PE43497A1; BR9600952A; IL117302A0

Description

經濟部中央標準局員工消費合作社印製岛 u dd 7 2 A7 B7五、發明説明（1 ) 本案爲1994年12月21曰申請之共同申請案，國際申請案系列No. PCT\US94\14740之部份連續案，後者係1994年5月 27曰申請之共同申請案系列No. 08/249,955之部份連續案，後者更爲〗993年12月21日申請之共同申請案系列No. 〇8/172,632之連續案，現已放棄。此等專利申請案均已併爲本文之參考文獻。本發明之進行係部份接受美國政府根據Nos. CA12623與 CA53001認可，提供國家癌症研究所，健康與人類服務部 (The National Cancer Institute, Department of Health and Human Services)之支持而完成。因此美國政府對本發明亦可擁有部份權利。發明背景贅生性疾病爲人類之主要死亡原因之一，其特徵在於細胞生長未受到正常控制而增生。癌症化療法之臨床經驗證實，需要更新更有效之藥物來治療此等疾病。此等臨床經驗亦證實，干擾細胞架構中微管系統之藥物可有效抑制贅生細胞增生° 眞核生物細胞之微管系統爲細胞架構之主要成份，且處於組合與分解之動態；亦即微管蛋白之雜二聚物進行聚合並形成微管。微管在調節細胞之建構、代謝及分裂上扮演關鍵之角色。微管之動態對其正常功能很重要。就細胞分裂而言，微管蛋白聚合形成微管，進而形成有絲分裂紡錘體。當有絲分裂纺錘體之功用完成時，微管則再分解。因此，可干擾微管之聚合與分解作用之製劑即可抑制有絲分裂 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -4- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 458972 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（2 ) ，並成爲臨床上最有用之癌症化療劑。這種抗有絲分裂劑或毒藥可根據其作用之分子機轉，分成二大類。第—類包括秋水仙素（colchicine)與克希美 (colicemid)之製劑，利用微管蛋白之螯合作用來抑制微管形成。第二類包括長春花驗（vinb〗astine)與長春新驗 (vincristine)，可謗發微管蛋白形成半結晶之凝聚物。長春花鹼與長春新鹼爲習知之抗癌藥：其干擾有絲分裂紡錘體微管之作用優先抑制過度增生之細胞D第三類包括紫杉醇 (taxol)之製劑，其促進微管蛋白聚合，因此可安定微管。然而’僅有抗有絲分裂之毒性作用並無法保證可有效對抗腫瘤細胞’更遑論對抗具有抗藥表型之腫瘤細胞。長春花（V丨nca)植物鹼如：長春花鹼與長春新鹼可有效對抗贅生細胞與腫瘤，但對某些抗藥性腫瘤與細胞卻缺少活性。贅生細胞展現抗藥性（DR)或多重抗藥性（MDR)之一項基礎爲過度表現P-醋蛋白。不適合作爲運送p__蛋白之受質之化合物應適用於壓制這種MDR表型。因此，就許多腫瘤細胞具有DR或MDR表型之現象及臨床上已證實抗微管劑對抗贅生細胞之作用模式而言，極需要發展對無抗藥性之贅生細胞具有細胞毒性且對具有抗藥性表型之贅生細胞具有細胞毒性之抗微管劑3 有關克力托懷辛之製法’尚無完全合成克力托懷辛之方法。克力托懷辛目前之製法爲自藍綠藻中分離或由此等天然生產之化合物進行半合成產生變異物。由於缺乏完全合成方法’因此很難生產立體專一性克力托懷辛，後者可達 -5- 本紙張尺度適用中國國家標準（CMS ) A4規格（210X297公釐） 1 裝訂^ (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 458972 A7 —____________B7五、發明説明（3 ) 最南活性並提尚化合物之安定性。例如已有研究顯示，具有元整大環結構之克力托懷辛具較高活性。因此，需要— 種可生產具有大環結構且比天然克力托懷辛更安定之克力托懷辛之完全合成法。本發明即解決此等問題。背景技藝過去曾鑑足幾種特定克力托懷辛，二氧雜二氮雜環十六烯四酮類，係自諾斯特菌（N〇st〇c)屬之藍綠藻（藍青菌）中單離或由單離物進行半合成而得，其對絲狀眞菌，明確言之，曲黴（Aspergillus)、青黴（Penicillium)與莖點黴（Ph〇ma) 具有抗眞菌劑之活性；然而，其作用機轉卻仍未知^美國專利案 Nos. 4,946,835、4,845,085、4,845,086及 4,868,208 曾揭示5種克力托懷辛化合物，本文中稱爲克力托懷辛1' 3、5 、13與15，此等化合物係自mb 5357之諾斯特菌中單離，或由此等單離之化合物合成。此等已頒佈之專利案已併爲本文之參考文獻。發明概要本發明提供如下結構式之新穎克力托懷辛化合物 I--------t------ΐτ------4 (請先閲讀^c面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） Α7 Β7 五、發明説明（4 ) 其中

Ar爲笨基或任何簡單之未取代或經取代之芳香基或雜芳香基； \爲鹵素、SH、胺基、單烷胺基、二烷胺基、三烷銨基、烷硫基 '二烷锍基、硫酸根或磷酸根； 112爲OH或SH;或 1^與R2可共同形成環氧環、氮丙啶環 '表硫醚環、硫酸醋環或單烷基磷酸酯環；或心與心可在c18與c19之間共同形成第二個鍵結；尺3爲低破數烷基； R4爲 H; R5爲 H; 尺4與115可在c13與c14之間共同形成第二個鍵結；爲苄基、羥芊基、烷氧芊基 '鹵羥芊基、二鹵經苄基、鹵拔氧节基、或二函燒氧爷基； 117爲Η或低碳_數貌基； h爲Η或低碳數燒*基； R9爲Η或低碳數烷基； R10爲Η或低碳數烷基；經濟部中央標準局員工消費合作社印製 —--------裝-- (請先閱讀背面之注4^·項再填寫本頁) X爲Ο、ΝΗ或烷胺基；且 Υ爲Ο、ΝΗ或燒胺基。本發明當提供製造克力托懷辛之完全合成法。本發明亦提供克力托懷辛之醫藥用途。本發明另一個目的爲使用克力托懷辛來抑制哺乳動物細胞之增生。此外，本發明並提本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2!〇Χ297公釐} 458972 經濟部中央標率局員工消費合作社印策 A7 ______B7五、發明説明（5 ) 供使用克力托懷辛來治療贅瘤形成之方法。圖示之簡要説明圖1出示本發明幾種特定化合物之一般結構，及特定具體實施例中A與D羥酸單位及B與C二個胺基酸單位之编號系統。圖2出示克力托懷辛化合物及長春花鹼對喬卡特（Jurkat) 細胞增生及細胞循環演進之影響圖解。喬卡特細胞係與指定濃度心克力托懷辛化合物（A)或長春花鹼（B)培養24小時。每個樣本均依實驗部份所述測定活細胞數（_)及有絲分裂指數（□)。數値代表三次類似實驗中一次之三重覆樣本之平均値土標準偏差（sd)。圖3出示長春花鹼、克力托懷辛及紫杉醇對細胞生長影響之可逆性。SK0V3細胞於時間=〇時，接受〇 1 nM長春花絵（ □ )、0.1 nM克力托懷辛（)或1 nM紫相醇（区])處理。各該化合物在此等濃度下抑制50%細胞生長。24小時後，洗條細胞，於無藥物之培養基中培養所指定之時間。依實驗部份説明之硫達胺（sulforhodamine B (SRB))染色法測定細胞密度，並以三次實驗中一次之三重覆樣本於56〇 nm下之平均値士 sd吸光度表示。圖4提供長春花驗與克力托懷辛對細胞增生之組合效果之異輕射圖（isobologram)。以長春花磁·（0-600 pM)及/或克力托懷辛（1-100ρΜ)處理SKOV3細胞48小時。然後依實驗部份所述之SRB染色法測定細胞數，並出示長春花鹼與克力托懷辛化合物之组合之IC50(_ )及加成性直線（·---)。數値代 ------------ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 —Q — 本紙張尺度適用中®®家標率（CNS)A4规格（210X297公釐） y '一 l : y '一 l : 經濟部中央標準局員工消費合作社印掣 Μ ______B7__ 五、發明説明（6 ) 表二次各含三重覆樣本之實驗平均値。圖5示出經由完全合成法製得之本發明特定克力托懷辛化合物之一般結構及有些特定具體實施例之幾酸單位A與d及二個胺基酸單位B與C之編號系統。圖6出示合成克力托懷辛之第一個流程圖。圖7示出製造經基單位a之流程圖。圖8出示製造含有羥酸單位A與胺基酸b之克力托懷辛之副單位之流程圖。圖9出示製造含有胺基酸單位C與羥酸〇之克力托懷辛副單位之流程圖。圖1 0出示根據本發明合成特定克力托懷辛之流程圖。本發明之詳細説明本發明提供如下結構式之新穎克力托懷辛化合物：

或低碳數烷基； R2爲Η ' 0H、酮基之〇、Νη2、SH'低碳數烷氧基或低碳數烷基；或 R’ R2可共同形成—個環氧環、氮丙(^環、硫酸環或Ci〇與 -9- 本紙蒗纽適财關家縣（CNS )八4祕（210X297公釐） ----------^-- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T A7 經濟部乍央標率局員工消費合作社印製 ___B7 五、發明説明（7 ) C„之間之第二個鍵結；或 R 1與R4可共同形成一個四氫0夫喃環； r34h或低碳數垸基；尺4爲0H、低碳數烷醯氧基或低碳數π -羥基烷醯氧基； 115爲Η或ΟΗ基團； Rg爲Η;或尺5或R6可在c5與c6之間共同形成第二鍵結； β·7爲节基、起爷基、甲氧辛基、鹵經ΐ基、二由經爷基、鹵曱氧芊基或二鹵甲氧芊基； 118爲011、低碳數/3-胺基酸，其中（^與卢-胺基酸之Ν鍵結，或爲酯化之低碳數/?-胺基酸，其中（^與酯化之低碳數/?-胺基酸鍵結； R4與R8可共同形成二縮齡' 自太基（didepsipeptide)，其包括低 .碳數/5 -胺基酸與低碳數《 -¾基燒酸鍵結；且 R5與Rs可共同形成二縮酚肽基，其包括低破數/?-胺基酸與低碳數α -羥基烷酸鍵結；但其限制條件如下：僅當R2爲0Η、酮基之0、NH2、SH時，尺丨爲Η、低碳數烷基，或低碳數燒氧基；僅當R〖爲0Η、酮基之Ο、NH2 ' SH時，尺2爲Η、低碳數烷基，或低碳數烷氧基；當R][爲0Η，尺2爲OH，R3爲甲基，R5與^在心與c6之間共同形成弟一個键結’尺4與尺6共同形成如下結構式X之二縮酚酞基： ^、1T-^ {請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁}

本紙張尺度適用中國國家標率（CNS ) A4規格（2ίΟΧ297公釐）經濟部中央標準局員工消費合作社印製 4b 89 7 2 A7 _____B7 五、發明説明（8 ) 其中X之0〗相當於尺4, X2N8相當於Rs，&爲甲基，且 R ίο爲異丁基時，R?不爲3-氣-4-甲氧苄基；當\與1共同形成環氧環，心爲甲基，1與心在(：5與(^之間共同形成第二個鍵結，尺4與心共同形成如結構式χ之二縮酚酞，Rg爲甲基，且r1〇爲異丁基時，心不爲3_氣_4· 甲氧苄基；當\與尺2在C10與Cu之間共同形成第二個鍵結，h爲甲基，與在A與C0之間共同形成第二個鍵結，且^與^共同形成如結構式X之二縮盼g太，R?1爲甲基，且R 1〇爲異丁基時’ R7不爲3 -氣-4_甲氧苄基；當心與I共同形成環氧環，&爲甲基，心與心在匕與q之間共同形成第二個鍵結，&與2_羥_4_甲基戍酸（leudc acid)之羧基末端鍵結，且&與3·胺基_2_甲基丙酸或八胺基-2-甲基丙酸甲酯之氮末端键結時，R?不爲3_氣_4_子氧羊基。本發明尚提供克力托懷辛化合物，其中與C2 ' c8、c9、 c10及c"連接之至少一個基團具有R立體化學性。 —項具體實施例中，與c：2、c：8、c：9、ci〇及Cu連接之至少一個基團呈S立體化學性。本發明尚提供根據上述結構式之克力托懷辛化合物，其中 R4或與Rs共同形成之二縮酚酞之結構即爲如下結構式χ :

-11 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CMS ) Α4規格（210x297公釐} I 装trβ- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) A7 B7 ib 89 7 2 五、發明説明（9 其中X之0〖相當於心或R5, X之Ns相當於r8,心爲11或低碳數烷基，且R10爲Η或低碳數烷基。本文中所使用之"低碳數/?_胺基酸，，係指含有3至8個碳之任何/?-胺基酸，且包括直鏈與非直鏈之烴鏈；例如：3_胺基-2-曱基丙酸。本文中所使用之"酯化之低碳數胺基酸，係指含有3至5個碳之ρ _胺基酸，其中羧酸根之氫係經甲基取代；例如：3 -胺基-2 -甲基丙酸甲酯。本文中所使用之" 低後數燒酿乳基1係指1至7個碳之燒酷氧基且包括直鏈與非直鏈之烴鏈。本文中所使用之”低碳數羥基烷醯氧基,，係指2至7個碳之Λ -羥基烷醯氧基，且包括直鏈與非直之之烴鏈，例如：2 -羥基-4 -甲基戊酸。本文中所使用"低碳數烷氧基"係指〖至5個碳之任何烷基與氧原子鍵結形成之基團。本文中所使用"低碳數烷基"係扣1至5個碳之烷基，且包括直鏈與非直鏈之烴鏈，包括例如:甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、三級丁基、二級丁基、曱基化丁基、戊基、三級戊基、二級丁基及甲基化戊基。本X中所使用"埽丙基系經取代之缔”係指含有燒基取代基之任何缔類。本文中所使用環氧環”係指一種由二個碳與一個氧原子組成主幹之三員環。本文中所使用"氮丙啶環，，係指由二個，與-個氮原子組成主幹之三員環。本文中所使用,,硫继環 ”係指由二個碳與一個硫原子組成主幹之三員環。本文中所使用”表硫醚環”係指由二個碳與一個硫原子組成主幹之三員環。本文中所使用"硫酸酿環"係指由碳_碳_氧-硫-氧主幹及另二個氧原子附接在疏原子上組成之五員帛。本文中 -12- 私纸張尺度顧t if目家標準i ) A4規格（21〇^^ {請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) i裝.

、1T 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 45 89 ?2 A7 B7 五、發明説明（10 ) 所使用"單垸基硫酸醋環”係指由破冬氧令氧主 —個氧原子组成之5員環，其中一個氧、數垸基與彻子連^ ^原子帶有-個低竣本文令所使用’，簡單之未經取代之芳香基"係指在單環也，系（例如：吱喃基、㈣基、喧吩基、㈣基）或雙環丑輕系（例如♦朵基«基）中含有4η+2 π電子之一般芳香環。本文中所使用"簡單之經取代之芳香基"係指經單一基團取代之苯基（例如：低碳數烷基或_素）。本文中所使用"雜芳香基"係指含有一個或多個非磷取代基如：氧、氮或硫之芳香環。本又中所使用"卣素"係指元素週期表上習稱爲鹵素之成員。鹵化方法包括（但不限於）：與氫鹵化物加成，於高溫下進仃取代，光自化作用等等，且此等方法係相關技藝專家們習知者υ。本發明之新穎克力托懷辛化合物實例爲當心與R2共同形成環氧基’ R3爲甲基’尺5與尺6在（^與C6之間共同形成第二個鍵結，而成爲雙鍵，r7爲仁甲氧芊基，且心與心共同形成如結構式X之二縮酚肽，其中尺9爲甲基且R10爲異丁基。此克力托懷辛化合物（克力托懷辛2)之結構式如下：

經濟部中央標準局員工消費合作社印製本發明之新穎克力托懷辛化合物之另一個實例爲當1^與 -13- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 五、發明説明（11 ) 尺2在c10與C u碳之間形成第二個鍵結，而成爲雙鍵，爲甲基，Rs與R_6在C：5與C：6之間形成第二個键結，而成爲雙鍵’ 〜爲4-甲氧节基’且尺4與〜共同形成如結構式χ之二縮酚肽，其中爲甲基且H1〇爲異丁基。此克力托懷辛化合物（克力托懷辛4 )之結構式如下：

本發明之新穎克力托懷辛化合物之另一個實例爲當&與尺4共同形成一個四氫呋喃環，心爲〇H基團，h爲曱基，& 與在C：5與C：6之間形成第二個鍵結，而成爲雙鍵，心爲3 _ 氣-4-甲氧下基，且&爲（2_甲酯丙基）胺基。此克力托懷辛化合物（克力托懷辛6)之結構式如下：

本發明之新穎克力托懷辛化合物之另一個實例爲當心與尺4共同形成四氫呋喃環，心與心爲〇H基團，心爲曱基，心與\在C：5與q之間共同形成第二個鍵結，而成爲雙鍵，且 ___ -14- 本紙張尺度適用中國國家榡芈（CNS ) A4^格（2獻297公着〉 — -I!-----裝—----- 訂 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 458972 經濟部中央標率局負工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（12 ) R?爲3 -氯-4 -甲氧芊基。此克力托懷辛化合物（克力托懷辛 7 )之結構式如下：

克力托懷辛7 本發明之新穎克力托懷辛化合物之另一個實例爲當尺1爲氣基，尺2爲0H基團，尺3爲甲基，尺5與心在(25與c6之間共同形成第二個鍵結，而成爲雙鍵，尺7爲3_氣_4甲氧苄基，且尺4與Rs共同形成如結構式X之二縮酚肽，其中反9爲曱基且 R10爲異丁基。此克力托懷辛化合物（克力托懷辛8)之結構式如下：

克力托懷辛8 本發明之新穎克力托懷辛化合物之另一個實例爲當心爲甲载基，爲0H基團，爲甲基，尺5與在與c6之間共同形成第二個鍵結，而成爲雙鍵，尺7爲3，氣_ 4 _甲氧节基，且尺4與Rs共同形成如結構式X之二縮酚肽，其中R9爲甲基且R爲異丁基。此克力托懷辛化合物（克力托懷辛9)之結構式如下： -15- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2IOX29?公釐）裝訂各 {請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 458972 A7 B7 五、發明説明（13 )

克力托懷辛9 本發明之新賴克力托懷辛化合物之另—個實例爲合汉甲氧基，h與〜爲OH基團，&爲甲基，心與心在^與^之間共同形成第二個鍵結，而成爲雙鍵，心爲弘氣-#-甲氧笮基，且Rs爲（2-羧丙基）胺基。此克力托懷辛化合物（克力托懷辛1 0)之結構式如下：

克力托懷辛1 0 本發明之新穎克力托懷辛化合物之另一個實例爲當心與尺4共同形成四氫呋喃環’尺2爲0H基團，r3爲甲基，115與R6 在cs與Ce之間共同形成第二個鍵結，而成爲雙鍵，：^7爲3 _ 氣-4 -甲氧苄基，且尺4爲（2 -羥丙基）胺基^此克力托懷辛化合物（克力托懷辛1 2 )之結構式如下： 1T^ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製

-16- 本紙張尺度適用中國國家標率（CNS ) A4規格（210X297公釐）經濟部中央標準局員工消費合作社印製 4 5 8 9 7 2 A7 ____B7 五、發明説明（14 ) 本發明之新穎克力托懷辛化合物之另一個實例爲當1^與 ϊϊ·2爲在C 1〇與C η之間共同形成第二個鍵結，而成爲雙鍵，r3 爲甲基’ R4爲OH基團’尺5與尺6在<：5與C6之間共同形成第二個鍵結’而成爲雙鍵，117爲3-氣-4-甲氧芊基，且118爲（2 -幾丙基）胺基。此克力托懷辛化合物（克力托懷辛1 4 )之結構式如下：

本發明之新穎克力托懷辛化合物之另一個實例爲當尺丨與尺2共同形成一個環氧基，R3爲曱基，尺5與116在(：5與C6之間共同形成第二個鍵結，而成爲雙鍵，尺7爲3 -氣-4 -甲氧苄基，且尺4與R8共同形成如結構式X之二縮酚肽，其中％爲甲基且Rio爲異丁基。此克力托懷辛化合物（克力托懷辛1 6 )之結構式如下：

克力托懷辛16 本發明之新穎克力托懷辛化合物之另一個實例爲當{^與 R2在C10與c η之間共同形成第二個鍵結，而成爲雙鍵，尺3爲 -17- 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） ---------裝------訂------^ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 458972 A7 B7 五、發明説明（15 ) 甲基，&與R0在A與C6之間共同形成第二個鍵結，而成爲雙鍵，爲3-氯-4-甲氧苄基’且心與心共同形成如結構式 X之二縮酚肽，其中心爲甲基且R10爲異丁基。此克力托懷辛化合物（克力托懷辛1 7)之結構式如下：

本發明之新穎克力托懷辛化合物之另一個實例爲當R 1與 R2在C 10與Cu之間共同形成第二個鍵結，而成爲雙鍵，尺3爲甲基’ R5與R6在C：5與C0之間共同形成第二個键結，而成爲雙鍵’ R?爲3 -氣-4-曱氧苄基，且RA Rg共同形成如結構式 X之二縮酚肽，其中&爲甲基且R1〇爲二級丁基。此克力托懷辛化合物（克力托懷辛1 8 )之結構式如下： I---------0-- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 、1: 經濟部中央標準扃員工消費合作社印製

本發明之新賴克力托懷辛化合物之另一個實例爲當R 1與 R2在C10與Cu之間共同形成第二個鍵結，而成爲雙鍵，心爲甲基’ Rs與R&在C：5與C6之間共同形成第二個鍵結，而成爲雙鍵，R7爲3-氣-4-甲氧笮基，且心與心共同形成如結構式 -18- 本紙承尺度適用中國國家標準（CNS) M規格公楚） 4 5 89 7 2 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（16 ) X之二縮酚肽，其中仗9爲甲基且Rio爲異丙基。此克力托懷辛化合物（克力托懷辛19)之結構式如下：

克力托懷辛19 本發明之新穎克力托懷辛化合物之另一個實例爲當R i與 R2共同形成一個環氧基，R3爲甲基’ R5與尺6在匚5與c6之間共同形成第二個键結’而成爲雙鍵，117爲3 -氣-4-甲氧苄基，且尺4與R8共同形成如結構式X之二縮盼肽，其中r9爲甲基JL尺10爲異丁基。此克力托懷辛化合物（克力托懷辛21)之結構式如下：

克力托懷辛2 1 本發明之新穎克力托懷辛化合物之另一個實例爲當^^與 R2共同形成一個環氧基’尺3爲甲基，尺5與反6在匸5與C6之間共同形成第二個鍵結，而成爲雙鍵，尺7爲3，5 -二氣-4 -曱氧芊基’且^與R8共同形成如結構式X之二縮酴肽，其中r9 爲曱基且R1〇爲異丁基。此克力托懷辛化合物（克力托懷辛 2 3 )之結構式如下： 19 - 本紙張尺度it财國國家標芈（CNS ) Α4規格（21GX297公釐） 1 n n n n n ] n Ϊ I ! I I I I 訂-^ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 458972 五、發明説明（17 ) A7 B7 ___________~~----

本發明之新穎克力托懷辛化合物之另一個實例爲當1^輿R 共同形成一個環氧基’ 爲甲基，尺5與汉6在與C：6之間共同2 形成第二個键結，而成爲雙鍵，爲4 -甲氧芊基，且|^與 Rs共同形成如結構式X之二縮酚肽’其中R9爲氫且R1〇爲異丁基。此克力托懷辛化合物（克力托懷辛24)之結構式如下.

本發明之新穎克力托懷辛化合物之另一個實例爲當R 1與R2 在C10與Cu之間共同形成第二個鍵結，而成爲雙鍵，R3爲甲基，R4爲羥基，R6爲氫，117爲3 -氣-4-甲氧苄基，且115與R8 共同形成如結構式X之二縮酚肽，其中尺9爲甲基且R1〇爲異丁基。此克力托懷辛化合物（克力托懷辛26)之結構式如下： I - n I 訂— — I 為 (請先鬩讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製

-20- 本紙張尺度賴t S ϋ家樣準（(：叫八4規格（21(^297公楚） 458972 經濟部中央標準局員工消费合作社印裂 A7 B7 五、發明説明（18 ) 本發明之新穎克力托懷辛化合物之另一個實例爲當R 1與 K_；2在C10與cu之間共同形成第二個鍵結，而成爲雙鍵，尺3爲氫，R5與R0在C5與ce之間共同形成第二個鍵結，而成爲雙鍵，爲3-氣-4-甲氧苄基，且r^r8共同形成如結構式χ 之二縮酚肽，其中％爲甲基且R〗〇爲異丁基。此克力托懷辛化合物（克力托懷辛2 8 )之結構式如下：

克力托懷辛2 8 本發明之新穎克力托懷辛化合物之另一個實例爲當R】與 R2在C1〇與Cu之間共同形成第二個鍵結，而成爲雙鍵，^爲甲基，Rs與R0在C：5與&之間共同形成第二個鍵結，而成爲雙鍵’ R?爲3 -氣-4-甲氧字基’且尺4與r8共同形成如結構式 X之一縮驗肤’其中尺9爲氫且Ri〇爲異丁基°此克力托懷辛化合物（克力托懷辛29)之結構式如下：

克力托懷辛2 9 本發明之新穎克力托懷辛化合物之另一個實例爲當^與 R2在C10與C之間共同形成第二個鍵結，而成爲雙鍵，爲 -21 - 本^張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210X297公釐)~~ ： ~~ --- ----------裝------訂------^ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 45 89 7 2 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（19) 甲基，R5爲羥基，R6爲氣，尺7爲3_氣_4_甲氧芊基，且心與共同形成如結構式X之二縮酚肽，其中心爲甲基且r二爲異丁基。此克力托懷辛化合物（克力托懷辛3 〇)之結構^如下:；

克力托懷辛3 0 本發明之新穎克力托懷辛化合物之另一個實例爲當&與 R2共同形成一個環氧基，R_3爲甲基，尺5與尺6在(^與之間共同形成第二個鍵結，而成爲雙鍵，尺7爲3,5_二氣·4_甲氧爷基’且R4與Rs共同形成如結構式X之二縮驗肽，其中％爲曱基且R 1〇爲異丁基。此克力托懷辛化合物（克力托懷辛 3 1 )之結構式如下：

克力托懷辛3 1 本發明之新穎克力托懷辛化合物之另—個實例爲當|^與尺2共同形成一個環氧基，R3爲甲基，r5爲氫，r6爲氫，r7 爲3 -氣-4 -甲氧苄基，且尺4與尺8共同形成如結構式X之二縮紛肽’其中119爲甲基且R1〇爲異丁基。此克力托懷辛化合物 -22- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐〉裝訂 .5^ (請先鬩讀背面之注意事項再填寫本頁) 458972 A7 ___ B7 五、發明説明（2〇 ) (克力托懷辛3 5 )之結構式如下：

本發明之新穎克力托懷辛化合物之另一個實例爲當^與 R2共同形成一個環氧基，I爲氫，Rs與尺0在(：5與c6之間共同形成第二個键結’而成爲雙鍵，尺7爲3 -氯_ 4 _甲氧窄基，且R4與R8共同形成如結構式X之二縮紛肤，其中尺9爲甲基且R10爲異丁基。此克力托懷辛化合物（克力托懷辛4〇)之結構式如下： H «-- H - I - = II [ I— m ϋ n _ n 丁 --5 (請先閱讀背面之注項再填寫本頁)

經濟部中央標攀局員工消費合作社印製本發明之新穎克力托懷辛化合物之另一個實例爲當R1與 R2在c ίο與c 11之間共同形成第二個鍵結，而成爲雙鍵，皮3爲甲基’ 與R0在A與C0之間共同形成第二個鍵結，而成爲雙键，R?爲3,5-二氯-4-甲氧苄基’且尺4與反8共同形成如結構式X之二縮酚肽，其中R?爲甲基且R1〇爲異丁基。此克力托懷辛化合物（克力托懷辛4 5 )之結構式如下： -23- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS) A4規格（2丨0X297公釐） 458972 A7 B7 五、發明説明（21 )

克力托懷辛4 5 本發明之新穎克力托懷辛化合物之另一個實例爲當R〗與 R2共同形成一個環氧基，尺3爲甲基，尺5與尺6在(：5與(：6之間共同形成第二個鍵結，而成爲雙鍵，心爲3 -氣-4 -甲氧笮I ，且114與R8共同形成如結構式X之二縮酚肽，其中厌9爲f 基且R10爲丙基。此克力托懷辛化合物（克力托懷辛4 9 )之結構式如下：

經濟部中央標準局員工消費合作社印製克力托懷辛4 9 本發明之新穎克力托懷辛化合物之另一個實例爲當化與 R2在C10與Cu之間共同形成第二個鍵結，而成爲雙鍵，r3爲甲基，R5與116在(：5與C6之間共同形成第二個鍵結，而成爲雙鍵，117爲3 -氣-4.甲氧苄基，且R4，r8共同形成如結構式 X之二縮酚肽，其中尺9爲甲基且R1〇爲丙基。此克力托懷辛化合物（克力托懷辛5 0)之結構式如下： -24- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2丨〇 X 297公釐） 45 89 72 Μ Β7 五、發明説明（22 )

克力托懷辛5 0 本發明之新穎克力托懷辛化合物之另一個實例爲當與 r2共同形成一個環氧基，r3爲甲基，汉5與及6在<：5與c6之間共同形成第二個鍵結，而成爲雙键，117爲3 -氣-4 -曱氧苄基 ’且尺4與R8共同形成如結構式X之二縮酚肽，其中爲甲基且R】0爲二級丁基。此克力托懷辛化合物（克力托懷辛5 4) 之結構式如下：

經濟部中央榡準局員工消費合作衽印製克力托懷辛5 4 上述化合物中’克力托懷辛2、4、16-19、21、23、24、 26、28-31、40、43 ' 45、49、50與54爲經過培養之諾斯特菌種藍綠藻（藍青菌）所生產之代謝物，然後自此培養物中單離此等化合物。克力托懷辛6與7爲使用含甲醇之溶劑進行單離而產生之產品。克力托懷辛8、9、1〇_12、14與35爲此等天然代謝物之衍生物，其已經過本申請案實驗部份中所述心方法進行化學修飾，或利用相關技藝專家們可利用之替代方法來製造例舉之化合物，及非例舉化合物。本發明提供經由培養諾斯特菌種來生產上述克力托懷辛 -25- 一I- -__ 國國家標準（CNS ) A4規格（210x1^^ I---------^------、tl------^ (请先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ^ 5 8.9 7 2

Α7 Β7 五、發明説明（23 ) 化合物之方法。美國專利案No. 4,946,835所提供之諾斯特菌藍綠藻（藍青菌）之外形特徵爲絲狀，及由有生長力之細胞组成。在較長之絲狀體中，通常在間生位置發現異形細胞。未發現靜止孢子。其繁殖法除了毛狀體藻絲分裂 (trichome breakage)外’尚可利用鏈鎖體繁殖，諾斯特菌種之鑑定標準可參見 J. Gen. Micro.，η 1:1-61(1979)。本發明尚提供可培養之諾斯特菌及新穎之克力托懷辛代謝物’及先如曾揭示可自此培養物中單離之克力托懷辛代謝物。本發明之一項較佳具體實施例中，稱爲GSV 224之諾斯特菌即爲培養之菌種，自此菌種中單離如下結構式代表之化合物其中心爲Η、OH、鹵素、酮基之〇、NH2、SH、低碳數烷氧基或低碳數烷基； R^H ' 0H、酮基之0、NH2、SH、低碳數烷氧基或低碳數烷基；或 1^與112可共同形成一個環氧環 '氮丙啶環、硫醚環或C10與 C J丨之間之第二個鍵結；或心與114可共同形成一個四氫呋喃環； 1爲Η或低碳數烷基； -26- 本纸乐尺度適用中國國家標準（CNS) Α4規格（210Χ297公釐） — II I I - . I 訂 II —备 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印裂經濟部中央標準局貝工消費合作杜印製 —0 8 9 7 2 a? __B7_ 五、發明説明（24 ) R4爲0H、低碳數烷醯氧基或低碳數羥基烷醯氡基； R5爲Η或ΟΗ基團；尺6爲H;或 115或116可在<35與<：6之間共同形成第二個鍵結； Κ·7爲辛基、經字基、曱氧节基 '鹵幾节基、二鹵經节基、鹵甲氧苄基或二由甲氧芊基； 118爲011、低碳數/3-胺基酸，其中（^與々-胺基酸之Ν鍵結，或爲酯化之低碳數/9-胺基酸，其中C!與酯化之低碳數;5-胺基酸鍵結； &4與R8可共同形成二縮酚酞基，其包括低碳數丨-胺基酸與低碳數^ -羥基烷酸鍵結；且 R5與R8可共同形成二縮酚酞基，其包括低碳數胺基酸與低碳數β - #基燒酸鍵結；但其限制條件如下：僅當尺2爲011、酮基之0、NH2、SH時，R#H、低碳數烷基，或低碳數燒氧基。本發明較佳具體實施例中，依上述方法爲單離之克力托懷辛代謝物進行化學修飾後，能提供亦具有此結構式之獨特化合物。爲克力托懷辛化合物進行化學修飾來生產本發明範圍内其他化合物之方法係相關技藝專家們可取得者。此外，其他方法更詳細説明於本申請案之實驗部份中。除了本發明之新穎克力托懷辛化合物外，本發明並提供新穎製法，及如上述結構式化合物（包括下列先前揭示之克力托懷辛種類，克力托懷辛1、3、5、13與15)之用法。 I--------裝丨-- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁} 『訂1 -27- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4规格（2ίΟΧ297公釐） -^^ 89 72 A7 B7 五、發明説明（25 )

私各訂 Μ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製

-28- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） 458972 A7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 B7 五、發明説明（26 ) 本發明因此係有關任何品種之諾斯特菌，最好係有關可生產克力托懷辛化合物之諾斯特菌GVS 224品種。爲了此目的，諾斯特菌GSV 224品種已於1993年10月7曰根據布達佩斯公約（Budapest Treaty)，寄存在美國菌種培養物收集處之專利培養物寄存處（Patent Culture Depository of the American Type Culture Collection)(l2301 Parklawn Drive, Rockville, Maryland 20852 U.S.A), ATCC 登錄號 55483。諾斯特菌之其他品種，特定言之MB 5357品種先前已由默克公司（Merck and Co.)以ATCC登錄號53789寄存，此等菌種均用於本發明。就如同其他生物體，諾斯特菌之特性可以變異。例如：以各種已知之物理與化學誘變劑，如紫外線，X -射線，N -射線，及N-甲基-N、硝基-N-亞硝基胍處理特定菌種，可得到其重组體，變異株或突變株。該特定菌種之所有仍保留生產克力托懷辛化合物之特性之天然及誘變之變異株、突變株及重组體均涵括在本發明申請專利範圍内。本發明之克力托懷辛化合物之製法可由諾斯特菌之一種品種在合適培養基中，於好氧條件下進行深部培養，直到產生相當多抗生素活性。亦可採用其他培養技術來生產此等化合物，如：於固化培養基之表面上生長。特定菌種賴以生長之培養基可包含相關技藝專家們已知之任一種氮源與碳源及無機鹽。當選擇所使用之碳源與氮源時，應考慮生產之經濟效益、最適當收量及單離產物之難易度°可加入培養基中之無機鹽營養素爲可產生鐵、鉀 '鈉、鎂、鈣、私本訂岛 (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) -29- 本紙張尺度適用中國國家標準（CMS ) A4規格（210X 297公釐）經濟部申央標隼局員工消費合作社印製 8972 A7 ______B7 五、發明説明（27 ) 銨、氯、碳酸根、填酸根、硫酸根、硝酸根等離子之習知可溶性鹽類。 ' 培養基中亦可包括有機體生長及發展所必須之必需微量元素。此等微量元素經常以雜質形式存在於培養基之其他組成份中，其含量足以滿足生物體之生長需求。若出現起泡問通時’可能需在大型培養基中添加少量（即〇. 2毫升/升）消泡劑，如：聚丙二醇（M.W.約2000)。大量生產克力托懷辛化合物時，可使用大槽進行深部好氧性培養。利用振盧燒瓶培養時，可得到少量。由於代謝物生產時之時間落後經常與大槽之生物體接種有關，因此最好使用營養性生長之接種菌。製備營養性生長之接種菌時，係自生物體上取得營養性生長之毛狀體藻絲或含異形細胞型式之片段接種至少量體積之培養基中，以得到新鮮且活性生長之生物體培養物。然後將營養性生長之接種菌移至更大槽中。營養性生長之接種菌所採用之培養基可與較大型培養或醱酵時所使用之培養基相同。生物體可在約20°C至30°C之溫度及入射光照明強度約1 〇〇至200微莫耳質子·米秒-ι(光合作用性之活性照射）下生長〇如同此類好氧性深部培養常用之方法，可增加二氧化碳氣體至無菌空氣中，再打入培養基中，提供給培養物。爲了有效生產克力托懷辛化合物，二氧化碳之比例應約1 %( 在24C及一大氣壓下）。先前技藝，明確言之美國專利案No.4,946,835已提供培養 -30- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210 X 297公釐） IF ( ' 裝 I II 訂 I 备· (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標率局員工消費合作社印製 458972 A7 ---------B7 五、發明説明（1^7~~ - 語斯特菌之方法，該案之内容已併爲本文之參考文獻。 /吾養期間，可測試營養液之樣本對抗已知對此等抗生素敏感义生物随之程度，來追踪克力托懷辛化合物生長。一種適狀分析用生物體爲白假絲酵母（Candida albicans)。在冰砟好氧性培養條件下培養後，可利用相關技藝專家們已知之方法，自培養物或培養基中回收本發明之克力托踉辛化〇物《回收時，通常先過濾培養基，以分離藻菌細胞，然後使分離之細胞冷來乾燥。冷康乾燥之漠菌可使用合適溶劑如:乙醇、甲醇、異丙醇或二氣甲烷萃取。此萃物及培養基於逆相管柱上進行快速層析法，即可分離出克力托麽辛克力托懷辛可利用逆相高效液相層析法（HPLC)純化。克力托懷辛由其結構式可知，具有可接受化學修飾之基團。本發明之化合物種類涵括具有抗贅生活性之克力托懷辛β例如：本發明所例舉之衍生物包括圖]中在A單位之c_ 7與C_8上具有環氧基氧或羥基或於B單位具有2 -羥-4-甲基戊酸根之化合物。此等來自可展現抗贅生活性之新穎及先前揭示之化合物均包括在本發明申請專利範圍内。此外克力把激辛化合物之結構式與抗贅生活性之間之關係已説明於下文之實驗部份中。雖然已知某些特定克力托懷辛化合物爲本發明之藥菌生產之代謝物，但亦可採用相關技藝專利們習知之公開技術，自代謝物中衍生其他克力托懷辛化合物，例如：克力托懷辛8-15 '例如：揭示於美國專利案4 868 2〇8 ' 4,845,〇86及 -31 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）裝-- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂經濟部中央橾隼局員工消費合作社印製 45 89 7 2 A7 _B7 五、發明説明（29 )

4,845,085之合成法，該等專利案之内容已併爲本文之參考文獻，或可採用相關技藝之專家們已知之其他方法衍生。此外’本發明並在實驗部份中提供生產衍生物之方法a 克力托懷辛爲來自諾斯特菌屬（Nostocaceae)之藍綠藻（藍青菌）之強效抗腫瘤及抗具菌之縮齡 g太（depsipeptides) °第一種克力托懷辛（克力托懷辛1)係自陸生諾斯特菌ATCC 53789中單離，且已發現對眞菌，尤指隱球酵母 (Cryptococcus) ’ 極具活性（R.E.史瓦兹（Schwartz)等人，J· Ind. Microbiol. 1990, 5, 1 13-24)。亦可自陸生諾斯特菌 GSV 224單離出克力托懷辛1，及24種其他克力托懷辛類似物，爲藻物之次要成份，且發現在小白鼠體内極具對抗皮下移植固體腫瘤之活性（G.奇姆吐魯（Trimurtulu)等人，J. Am. Chem. Soc. 1994, 116, 4729-4737; R_ 巴洛（Barrow)等人，J. Am. Chem，Soc. 1995, 117, 5月8日頒佈）。先前技藝曾説明一種來自諾斯特菌GSV 224之類似物，.克力托懷辛3與5，爲克力托懷辛1之半合成類似物（D.F.赛辛（Sesin)，美國專利案4,845,085，1989年7月4日頒布；〇.尸.赛辛等人，美國專利案4,868,208，1989年9月19日頒佈）。克力托懷辛在柯貝特 (Corbett)分析法中展現顯著之腫瘤選擇性細胞毒性，且對感藥性及抗藥性腫瘤細胞均具相同細胞毒性。克力托懷辛 1似乎與長春花鹼具有相同作用模式，但後者更對微管組合具有不可逆之抑制性（C.D.史密斯（Smith)等人，Cancer Res. 1994, 54, 3779-84)。來自諾斯特菌GSV 224之一種克力托懷辛（克力托懷辛24)已自海生之海綿中單離出，稱爲亞 _ -32- 本紙張尺度適用中國國家榇準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ----------餐-- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

-、1T 458972 A7 ______B7 五、發明説明（3〇 ) 仏那抑制素（arenastatin)A (M. Kobayashi等人，Tetrahedron

Lett. 1994，35，7969-72; M. Kobayashi等人，Tennen Yuki Kagobutsu Toronkai Koen Yoshishu 1994, 36st, 104-110)。美國專利申請案系列Nos. 08/172,632(1993年1 2月21曰申請）及〇8/249,955(1994年5月27日申請）及國際申請案系列No. PCT/US 94/1 4740( 1 994年12月21曰申請）已揭示另外22種克力托懷辛化合物，本文稱爲克力托懷辛2、4、6、7、16-19 、21 、 23、 24、 26' 28-31 、 40、 43、 45、 49、 50與54，此等化合物可爲自諾斯特菌中單離之代謝物或由此等代謝物半合成。此等專利申請案中亦揭示特定克力托懷辛化合物作爲抗微管劑之特性，對許多種植入小白鼠之腫瘤，包括 DR及MDR腫瘤，均具有臨床型活性。本發明提供如下結構式之新穎克力托懷辛化合物：經濟部中央標準局員工消費合作社印製 I n J 扣水訂 (請先閲讀背面之注意寧項再填将太頁)

Ar爲苯基或任何簡單之未取代或經取代之芳香基或雜芳香基；

Ri爲南素' SH、胺基、單烷胺基、二坑胺基、三烷銨基、 -33- 本紙張尺度適用令國國家標準（CNS )从規格（21〇χ297公釐） 8972 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（31) 坑硫基、一燒锍基、硫酸根或鱗酸根； 112爲0H或SH;或心與R2可共同形成環氧環、氮丙啶環、表硫醚環、硫酸酯環或單烷基磷酸酯環；或心與R2可在（:^與C 之間共同形成第二個鍵結；尺3爲低碳數烷基； R4爲 H; 爲 Η; R4與R5可在C 1：3與C Μ之間共同形成第二個鍵結； R·6爲苄基、羥苄基、烷氧苄基 '鹵羥苄基、二鹵羥苄基、鹵燒氧芊基、或二南燒氧苄基；尺7爲11或低碳數烷基；

Rs爲Η或低碳數烷基； 119爲Η或低碳數娱^基； R10爲Η或低碳數烷基； X爲Ο、ΝΗ或院胺基；且 Υ爲Ο、ΝΗ或烷胺基。此克力托懷辛之較佳具體實施例中 ’克力托懷辛之Rs爲乙基、丙基 '異丙基、丁基、異丁基、戊基或異戊基。此克力托懷辛之另一項較佳具體實施例中，R?爲乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、戊基或異戊基°此克力托懷辛之另一項較佳具體實施例中，尺7爲H ，爲甲基’ A爲甲基；X與Y不同時爲〇。本發明提供此克力托懷辛之另—項較佳具體實施例中， &爲乙基、丙基、異丙基、丁基 '異丁基、戊基或異戍基本紙張尺度適用_國國家標準（CNS ) A4規格（私衣訂 ..- : Μ (請先閱讀背面之注意事項再4¾•本頁) -34- ^ ο β 9 7 2 Α7 ________Β7________ 五、發明説明（32 ) 。此克力托懷辛另一項較佳具體實施例中，r9爲甲基、乙基、丙基、丁基、異丁基、戊基或異戊基。此克力托懷辛之另一項較佳具體實施例中，R 爲甲基、乙基、丙基、丁基、異丁基、戊基或異戊基。本發明另提供克力托懷辛化合物，其中與c3、C6、Ci〇、 c l6、<^7與C1S附接之至少一個基團呈R立體化學性。本發明另一項具體實施例中，與C3、C6、Ci〇、C丨6、（^與匸以附接之至少一個基團呈S ±體化學性。本發明之新穎克力托懷辛化合物之另一個實例爲當\與尺2在<^8與C!9之間共同形成第二個鍵結，、心與Rg爲甲基 ’心與RS在C13與C14之間共同形成第二個键結，而成爲雙鍵 ’ &爲3 -氣-4 -甲氧苄基，％爲異丁基，Ri〇爲氫，且X與γ 爲氧。此克力托懷辛化合物（克力托懷辛5丨）之結構式如下：

經濟部中央標準局員工消費合作杜印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 克力托懷辛5 1 本發明之新穎克力托懷辛化合物之另一個實例爲當心與尺2共同形成一個R，R -環氧環，R3、1^與r8爲曱基，心與& 在匚^與CM之間共同形成第二個鍵結，而成爲雙鍵，心爲3 _ _ _ - 35 本紙乐尺度適用中國國家標準（CNS ) A4^~f2l〇x2打公廣） ◦ 8972 A7 _________B7 _ 五、發明説明（33 ) 氣-4-甲氧苄基，R9爲異丁基，Ri〇爲氫，且又與¥爲氧。此克力托懷辛化合物（克力托懷辛5 2 )之結構式如下：

(請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁 .裝. 克力托懷辛5 2 本發明之新穎克力托懷辛化合物之另一個實例爲當Ri與 R2共同形成一個s，s-環氧環，R3'尺7與]^爲甲基，r4與1R< 在匚^與<^4之間共同形成第二個鍵結，而成爲雙鍵，R6爲3-氣4 -甲氧卞基’ Rg馬異丁基’ 爲氫’且X與γ爲氧。此克力托懷辛化合物（克力托懷辛5 3 )之結構式如下，

克力托懷辛5 3 本發明之新穎克力托懷辛化合物之另一個實例爲當R爲 -36 - 本紙張尺度適用中國國家標率（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） -55 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 J 72 A7 _ B7 _ 五、發明説明（34 ) 氣，尺2爲羥基，R3、尺7與118爲甲基，R4與R5在C13與c14之間共同形成第二個鍵結，而成爲雙鍵，R6爲3 -氣-4 -曱氧苄基，R9爲異丁基，尺10爲氫，且X與Y爲氧。此克力托懷辛化合物（克力托懷辛5 5 )之結構式如下：

克力托懷辛5 5 本發明之新穎克力托懷辛化合物之另一個實例爲當|^與 h共同形成一個環氧環，R·3、R7與R8爲甲基，R4與R5爲氫，R0爲3 -氯-4-甲氧节基，R9爲異丁基，r1〇爲氛，且X與γ 爲氧。此克力托懷辛化合物（克力托懷辛57)之結構式如下：裝-------訂 (請先閲讀背而之注意事項再填寫本頁〕經濟部中央標準局員工消費合作社印製

克力托懷辛5 7 -37- 本紙張尺度it财賴家標率(CNS ) A4規格（210X297公釐)" ~~~~~~. 458972 A7 B7 _ 五、發明説明（35 ) 本發明之新穎克力托懷辛化合物之另一個實例爲當1爲氣，R2爲羥基，R3、117與心爲甲基，尺4與R5爲氫，尺6爲3 -氣-4 甲氧芊基’ R?爲異丁基，Ri〇爲氫，且X與γ爲氧。此克力托懷辛化合物（克力托懷辛5 8 )之結構式如下：

克力托懷辛5 8 本發明之新穎克力托懷辛化合物之另一個實例爲當心與 R2共同形成一個R，R -環氧環，r3、尺7與rs爲甲基，尺4與r5 在c 13與C14之間共同形成第二個鍵結，而成爲雙鍵，心爲3 -氣-4 -甲氧苄基，R9爲異丁基，Ri〇爲氫，且X與Y爲氧。己知此結構式爲克力托懷辛化合物6 1。本發明提供利用完全合成法，生產上述克力托懷辛化合物，及所有先前已知之克力托懷辛之方法。本發明並提供可使用本發明所提供方法而合成之新穎克力托懷辛代謝物，及先前曾揭示之克力托懷辛代謝物3 本發明提供一種生產克力托懷辛之方法，其包括選擇— 種烯丙基系經取代之E烯；使烯丙基系經取代之E烯經由立體專一性咸特（Wittig)重組作用進行重組；將此化合物轉化成 -38 - 本紙張尺度適用中國國家榡準（CNS ) A4規格（210 X m公釐） 1^1 II...... ^1^1. m^i · Ji 11! ^1· ^^^1 I —V 、-B (請先閱讀背面之注意事項再填寶本頁) 經濟部中央標準局肩工消費合作社印製 458972 A7 B7 五、發明説明（36 ) 第一個β -羥酸；使第一個酸與第二個& -胺基酸偶合，形成第一個副單位；使第三個々-胺基酸與第四個α -羥酸或“-胺基酸偶合’形成第二個副單位；使第一個副單位與第二個副單位偶合，形成克力托懷辛Q 本發明當提供該方法之較佳具體實施例，其中所製成之克力托懷辛之結構式如下：

{請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝·

、1T 經濟部中央標準局—工消費合作社印製其中

Ri爲鹵素、SH、胺基、單烷胺基 '二烷胺基、三烷銨基、烷硫基、二烷锍基、硫酸根或磷酸根； R2爲0H或SH;或心與R2可共同形成環氧環 '氮丙咬環、表硫酿環、硫酸酯環或單烷基磷酸酯環；或 R1與R·2可在C以與C 之間共同形成第二個鍵結；尺3爲低碳數烷基； -39- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） 4^8972 A7 B7 五、發明説明（37 ) R4爲 H; R 5爲 Η; R4與R5可在c13與c14之間共同形成第二個鍵結；尺6爲+基、巍节基、燒氧节基 '鹵趣字基、二卤巍节基、鹵烷氧苄基、或二幽烷氧苄基； R>7爲Η或低竣數坑基；

Rg爲Η或低碳數燒基；心爲Η或低碳數烷基； R10爲Η或低碳數烷基； X爲Ο、ΝΗ或烷胺基；且 Υ爲◦、ΝΗ或烷胺基。在本發明一項較佳具體實施例中，該方法產生一種克力托懷辛，其中Ar爲苯基；R3甲基；尺6爲曱氧苄基；尺7爲H;尺8爲甲基；R9爲異丁基；R1〇爲Η; X爲〇;且γ 爲Ο 〇本發明除了提供如上述結構式之克力托懷辛外，尚提供生產先前揭示之克力托懷辛及先前技藝之克力托懷辛之方法。克力托懷辛1、8與35係由完全合成法生產。下文中出示由完全合成法生產之先前揭示及先前技藝之代表性克力托懷辛： ! ί 扯衣 ~Ί . —i I ]场， (請先閲讀背面之注意事項再填离本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐）經濟部中央標準局員工消費合作杜印製 458972 A7 _______ B7_ 五、發明説明（38 ) 其中 R1馬自素；化2爲Ο Η;或 r^r2共同形成環氧環； R3爲Η ;且R#爲Η ;或尺3與R4可共同形成第二個鍵結。本發明亦提供適用於抑制過度增生之哺乳動物細胞之増生作用疋醫藥組合物，其含有有效量之如下結構式克力托懷辛：

Ri爲画素、SH、胺基、單燒胺基、二娱1胺基、三燒銨基、烷硫基、二烷疏基、硫酸根或磷酸根； ίϊ·2爲〇H或SH;或 R!與可共同形成環乳環、氮丙淀環、表疏酸環、硫酸酉旨環或單烷基磷酸酯環；或 1與112可在c18與c19之間共同形成第二個鍵結； -41 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） I---------裝------訂------糸 (請先閏讀背面之注意事項再填寫本頁) ^ υ 89 7 2 Α7 Β7 五、發明説明（39 ) 民3爲低碳數烷基； R4爲 Η; R5爲 Η; 尺4與尺5可在c13與c14之間共同形成第二個鍵結； R6爲苄基、羥苄基、烷氧T基、鹵羥r基、二鹵羥r基、自娱*氧卞基、或二卣恍氧节基；尺7爲Η或低碳數烷基；尺8爲11或低碳數烷基；尺9爲Η或低碳數烷基； R1Q爲Η或低碳數烷基； X爲Ο、ΝΗ或烷胺基；且 Υ爲Ο、ΝΗ或烷胺基；及醫藥上可接受之載體。在本發明一項較佳具體實施例中，醫藥組合物中尚包含至少另一種抗贅生劑。本發明亦提供一種抑制哺乳動物細胞增生之方法，其包括由哺乳動物細胞與足以抑制細胞增生之量之克力托懷辛化合物接觸；該克力托懷辛之結構式如下： (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁裝- 經濟部中央標準局員工消費合作社印製

-42- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210 X 297公釐） ^ 89 72 A7 B7 五、發明説明（40 ) 其中 ΑΓ爲苯基或任何簡單之未取代或經取代之芳香基或雜芳香基；烷銨基、

Ri爲鹵素、SH、胺基、單烷胺基、二烷胺基、烷硫基、二烷锍基、硫酸根或磷酸根； R2爲OH或SH;或硫酸酯 R#R2可共同形成環氧環、氮丙喊環、表硫酸環環或單烷基磷酸酯環；或 \與尺2可在(:^與^9之間共同形成第二個鍵結； R3爲低碳數烷基； R4爲 H; R5爲 H; R4與尺5可在Ci3與之間共同形成第二個鍵結； R6爲芊基、羥芊基、烷氧苄基'•羥苄基、二齒羥苄基、鹵娱*氧苄基、或二画貌氧节基； R7爲Η或低碳數燒基； R8爲Η或低碳數烷基； %爲Η或低碳數烷基； R10爲Η或低碳數烷基；經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 X爲0、ΝΗ或烷胺基；且 Υ爲Ο、ΝΗ或燒胺基。在本發明—項較佳具體實施例中，本方法尚包括由細胞與至少另—種抗贅生劑接觸。在明-項較佳具體實施例中，所接觸之哺乳動物細胞爲過度增生之細胞。本發明另-項較佳具體實施例令，該過度ς -43- 私紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210 η 89 7 2 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 Α7 Β7 五、發明説明（41 ) 生之細胞爲人類。本發明亦提供一種對具有多重抗藥性表型之過度増生之哺乳動物細胞抑制其增生之方法，其包括由該細胞與克力托懷辛化合物接觸，其用量可有效干擾微管聚合作用與解除聚合作用之動態’以遏止細胞有絲分裂，藉以抑制細胞增生’該克力托懷辛化合物之結構式如下：

Ar爲苯基或任何簡單之未取代或經取代之芳香基或雜芳香基； 1^爲鹵素、SH、胺基、單烷胺基、二烷胺基、三烷銨基、烷硫基、二烷锍基、硫酸根或磷酸根；化2爲0H或SH;或 1^與r2可共同形成環氧環、氮丙啶環、表硫醚環、硫酸酯環或單燒基嶙酸酷環；或心與心可在C18與c19之間共同形成第二個鍵結； R3爲低碳數燒基； R4爲 Η; -44- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210'〆297公釐） I— '1TIn I I 叙 (請先閔讀背面之注意事項再填寫本¥o ο 39 72 A7 B7 經濟部中央標隼局員工消費合作社印裂五、發明説明（42) R5爲 Η; R4與R5可在C13與c〗4之間共同形成第二個鍵結； r6爲苄基、羥芊基、烷氧苄基、鹵羥苄基、二鹵羥苄基、鹵烷氧r基、或二南院氧苄基； R7爲Η或低碳數烷基； R8爲Η或低破數燒基； R9爲Η或低碳數烷基； R 1〇爲Η或低碳數晚基； X爲Ο、ΝΗ或烷胺基；且 Υ爲Ο、ΝΗ或烷胺基。在本發明一項較佳具體實施例中，該方法尚包括由細胞與至少另一種抗贅生劑接觸。本發明另一項較佳具體實施例中，該哺乳動物細胞爲人類。本發明亦提供一種減輕因哺乳動物細胞過度增生所引起之病症之方法，其包括爲該個體投與有效量之本文所揭示之醫藥藥組合物，以抑制細胞增生。本發明較佳具體實施例中，該哺乳動物細胞爲人類。本發明較佳具體實施例中，該方法尚包括爲該個體施用至少另一種療法，以減輕病症。本發明較佳具體實施例中，該病症之特徵爲形成贅瘤。本發明另一項較佳具體實施例中，該贅瘤係選自：乳房、小房肺邵（small-cell lung)、非小房肺部、結腸直腸、白血病、黑瘤、胰腺癌瘤、中樞神經系統（CNS)、卵巢、前列腺、軟组織或骨頭之肉瘤、頭與頸部、胃部（gastric)(包括胰與食道）' 腹部（stomach)、骨髓瘤、膀胱、腎、神經與内分泌系統（包括甲狀腺）及非霍奇金氏症（non-Hodgkin's disease) -45- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） I 裝訂叙 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 4 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 5 89 72 A7 ______B7五、發明説明（43 ) 及霍奇金氏症等之贅瘤。克力托懷辛化合物之製法已综合説明於流程圖1。起始物爲呈S-組態之3E-烯（a)，其C-2上經XH基團取代，其中X爲氧或NH。L-丙胺酸與L-乳酸可作爲起始物a之廉價來源。該合成法之關鍵步驟在於a之炔丙基醚（b)進行立體選擇性 [2,3]威特重組作用（d. J-S.蔡（Tsai)等人，J, Org. Chem. 1984, 49，1842-3; K.米卡梅（Mikami)等人，Tetrahedron 1984，25, 2303-2308; N.赛亞（Sayo)等人，Chem. Lett. 1984, 259-262)，形成（3R，4R)-3-(XH-經取代）-4-燒基庚-5(E)-烯-1-块（c)，其中X爲氧或受保護之氮（例如：三級丁基二甲矽烷胺基）。化合物c可再使用相關技藝上已知之方法，轉化成克力托懷辛之d-羥基或胺基酸單位（A前體），（5S，6R)-5-(XP-經取代）-6-烷基-8-芳基-辛-2E,7E-二烯酸甲酯（d)，其中P爲合適之保護基團。由d-羥基或胺基酸單位a、胺基酸單位B、b-胺基酸單位C 、及a-羥基或胺基酸單位d組合之克力托懷辛之合成法之一爲由代表克力托懷辛分子部份之二個前體，例如：含有d-羥基或胺基酸單位A與a-胺基酸單位B之A-B前體（e)與含有b-胺基酸單位C與a-羥基或胺基酸單位D之C-D前體（f)組合而成。本文所述之方法中，依二個步驟组合A-B與C-D前體形成克力托懷辛：（1)連接A-B與C-D前體中之A與D單位之末端，形成無環C-D-A-B中間物且（2)連接B與C單位之末端，形成環狀產物。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝· 訂 -46- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS ) A4規格（210X297公釐）經濟部中央榡率局員工消費合作社印製 Λ5 8972 Α7 _____ Β7____ 五、發明説明（44 ) 合成實驗郅份中所述之克力托懷辛51時，在α·Β部中A單位之d-經基與C-D片段中D單位之羧酸根之間形成酯鏈結，而形成無環C-D-A-B中間物’然後在A-B部份中B單位之叛酸根與C-D部份中C單位之b-胺基之間形成醯胺鏈結。化合物K爲A-B部份前體，化合物？爲c_D部份前體，且化合物r 爲克力托懷辛之無環C-D-A-B前體。化合物K與P在B單位之羧酸根及C單位之b-胺基上均含有保護基團，以限制a與d 單位在步驟1中偶合形成酯。步驟2中，自C-D-A-B中間物上脱除此等保護基團’而在B與c單位之間形成酿胺。克力托懷辛5〗之單位A前體：（5S，6R)-5-三級丁基二甲矽烷氧基-6·甲基-8-苯基-辛_2E,7E-二烯酸甲酯（G)之合成法综合說明於流程圖1。起始物：(S)_反_3_戊晞_2_醇（A)係由消旋性化合物進行酵素解析作用製得。A與炔丙基氣及鹼在移相條件下之反應形成炔丙基醚B，收率86%。於-90°C下，以丁基趣處理B’產生醇C，收率7〗％。在威特重组作用中，僅形成所需之3R，4R反式化合物c唯一產物。C之經基受保護形成三級丁基二甲矽烷基醚（或三級丁基二甲矽烷基醚）後’由參鍵進行氫溴化作用c,布朗（Br〇wn)，"利用硼烷進行之有機合成法 _’（〇rganic Synthesis Via Boranes)，威利出版社（Wiley)，l975) ’由c產生醛D，收率73%。D隨後利用何ab -艾蒙思（Horner-Emmons)反應，轉化成反式a,b-未飽和醋E，收率90%。D中C6-C7雙鍵進行選擇性臭氧分解作用’產生搭F，收率83%。最後由f與芊基三苯基燐化氣於丁基錄之存在下進行威特反應，產生G，收率80%。由A形 __ -47- 國國家標準（〇^)八4規格（210乂297公嫠） (諳先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 丨裝· 訂經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 ______B7 五、發明説明（45 ) 成G之總收率爲26%。前體G中A單位與D-3-(3-氣-4-甲氧苯基）丙胺酸單位B形成 A-B前體（K)之偶合作用综合説明於流程圖2中。〇中甲酯基團經氫氧化鋰於丙酮中水解後，產生羧酸Η，收率95%。由含Η之Ν，Ν-二甲基甲醯胺（DMF)溶液經過稍過量之五氟苯基二苯基次膦酸酯（FDPP)、等莫耳量之〗之三氟乙酸鹽、及3當量二異丙基乙胺（DIEA)於25°C下依序處理（s.陳（Chen)等人， Tetrahedron Lett. 1"1，32, 6川·4)，可使H與三氣乙酯工偶合，產生J，收率65%。J之氟脱矽烷基作用產生尺，收率95〇/〇。依5個步驟’由D-酷胺酸製備受保護之胺基酸I。首先，於冰醋酸中，以硫醯氣氣化D-酪胺酸（R.賽尼克（Zeynek)，

Hoppe-Seyler’s Z‘f. Physiol. Chemie 1926, 144, 247-254)。隨後於二乙胺之存在下，以二碳酸二_三級丁酯處理含胺基酸之50%二氧陸圜水溶液。所得產物於碳酸許之存在下，在回流之丙酮中’經硫酸二甲酯二甲基化，收率84〇/〇。甲酯再於二氧陸圜水溶液中，經氫氧化鈉皀化，產生N_(三級丁氧碳基）-3-(3-氣-4-甲氧苯基）-D-丙胺酸，收率。受 B0C保護之胺基酸於二氣甲烷中，與三氯乙醇，吡啶及 DCC反應’產生二氣乙酯I，收率65%。以三氟乙酸處理此物質，產生全收量之I之三氟乙酸鹽。 C-D前體：（2S)-2-[3_-(三級丁氧羰基）胺基_2，，2，_二甲基丙醯氧基]-4-甲基戊酸（P)之合成法综合説明於流程圖3 ^ p部份之C單位之起始點爲胺基酸L。L之胺基部份於三乙胺之存在下經二碳酸二-三級丁酯處理（收率93%)，然後以四氧化 -48- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210X297公釐} C請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝、-'° 經濟部中央橾準局員工消費合作社印製 4 5 8 9 7 2 A7 _______________B7 五、發明説明（46) 対乳化一級醇（P.H.J.卡爾森（Carlsen)等人，J.Org. Chem. 1981，46, 3936-8)，產生幾酸 Μ(收率 66%)。L-2-羥-4-甲基戊酸在移相條件下，與晞丙基溴之二氣甲烷溶液及含四-正丁基按化亂之碳酸虱納水溶液之混合物反應，轉化成稀丙醋 N ’ 收率 93%(S.弗立奇-巴尼奇克（Frjedrich-Bochnitschek) 等人，J. Org. Chem. 19δ9, 54, 751-6)。Μ與 N之偶合反應係使用4-二甲胺基吡啶（DMAP)與二環己基碳化二亞胺（DCC) 於二氯甲烷中進行，產生0，收率75%。0則於含嗎啉及觸媒量之肆（三苯基膦）把之THF中裂解烯丙酯，產生ρ，收率 95%(P.D.傑佛瑞（Jeffery)等人，J. 〇rg. chem. 1982, 47, 587- 90)。 A-B前體（K)與C-D前體（P)之偶合反應示於流程圖4 =以 DCC/DMAP於二氣甲烷中處理κ與P，產生完全保護之C-D-A-B中間物（Q)，收率84%。Q之三氣乙酯基使用活化之鋅粉，於乙酸中完成還原性裂解 '然後利用三氟乙酸脱除B〇C-保護基團’產生R之三氟乙酸鹽，來自Q之總收率爲91〇/0。 R與FDPP之大内醯胺化作用，產生克力托懷辛51，收率 61%(J.小杜達希（Dudash，Jr)等人，Synth. Commun. 1993,23, 349-56)。來自S-反式-3-戊晞-2-醇（A)之總收率爲7%。克力托懷辛51可作爲克力托懷辛52(R,R-環氧化物）及克力托懷辛53(S，S-環氧化物）之前體。克力托懷辛52爲克力托懷辛55(1 8R，1 9S-氣乙醇）及克力托懷辛57(1 3,14-二氫類似物）之前體。克力托懷辛57爲克力托懷辛58之前體。本發明之新穎克力托懷辛化合物比克力托懷辛丨與2丨更能 _ -49- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（2!0X297公釐） I. 訂 It Μ (請先閱讀背面之注意事項再填夕？本頁) 經濟部中央標率局員工消費合作社印製 ^5 8972 A7 ___________B7_ 五、發明説明（47 ) 安定抵抗水解及溶劑分解作用。克力托懷辛1中，連接C單位與D單位之酯鍵對溫和之鹼水解相當敏感，在ρΗ η下，裂解成羥酸之半衰期爲0.83小時。克力托懷辛21中C-D酯鍵 (其C單位之C-2上缺少甲基）打開之速率更快，其半衰期爲〇. 25小時’ C-D酯鍵亦對溶劑分解作用敏感。當在單離過程中使用甲醇時，克力托懷辛1與21大量進行曱醇分解作用^ 克力托懷辛21比克力托懷辛1更容易進行甲醇分解作用。克力托懷辛1具有抗腫瘤活性，而克力托懷辛21則無活性，可能歸因於克力托懷辛21之C-D酯鍵在活體内比克力托懷辛1 之C-D酯鍵更快水解。C-D酯鍵之水解亦可部分解釋克力托懷辛1經由腹膜内及皮下途徑投藥時，其活體内活性降低之現象。在C單位之C-2上具有二個甲基之克力托懷辛（如克力托懷辛52)之C-D酯鍵則在pH 1 1下安定。本發明之新穎克力托懷辛化合物及先前揭示之克力托懷辛化合物在醫療上可用爲抗贅生劑，因此可用於治療贅生性疾病。本文中所使用"贅生"—詞係指不正常生長之贅瘤，這種生長發生在細胞不受到一般生長限制而增生時。本文中所使用"抗贅生劑”爲任何可抑制、消除、延滯或逆轉細胞之贅生表型之化合物、組合物、混合物、共混合物或捧合物。癌症治療上通常使用化療法、手術、放射療法、生物反應改質劑療法，及免疫療法。每—種療法均具有相關技藝專家已知之特定症狀，且可採用其中—種或所有方法來完全消滅贅生之細胞。本發明即提供利用一種或多種克力托 50- 本紙張尺度適用中國國家榡準（CNS ) A4规格（210X297公釐） ----------^---------1^------"' (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁} 經濟部中央榡準局員工消費合作社印黎 458972 A7 B7五、發明説明（48 ) 懷辛之化療法。此外，本發明亦提供組合化療法，即利用克力托懷辛與其他抗贅生劑组合之化療法，通常组合療法比使用單一抗贅生劑更有效。因此，本發明另一方面爲提供含有醫療有效量之至少一種本發明新穎克力托懷辛化合物（包括其無毒性加成鹽）之组合物，可提供上述醫療效益。此等组合物亦可與生理上可耐受之液體、凝膠或固體載體、稀釋劑 '輔劑及賦形劑共同使用。此等載體、稀釋劑、輔劑及賦形劑亦可參見"美國藥典，第XXII卷及國家藥方第 XVII卷(United States Pharmacopeia Vol. XXII and National Formulary Vol XVII)，馬里蘭州洛克菲加市美國藥典協會（U. S. Pharmacopeia Convention, Inc., Rockville, MD)(1989) 5 其内容已併爲本文之參考文獻。其他治療模式可見於美國醫院藥方服務處之"AHFS藥物資訊11，1993出版，pp. 522-660 (AHFS Drug Information, 1993, ed. by the American Hospital Formulary Service, pp. 522-660)，其内容已併爲本文之參考文獻。本發明尚提供用於治療贅生性疾病之醫藥組合物，其含有至少一種克力托懷辛化合物及至少另一種抗贊生劑。可與克力托懷辛組合使用之抗贅生化合物包括彼等述於"默克指引"(The Merck Index)，第 11 版，默克藥廠（1 989)，pp. Ther 16-17，其内容已併爲本文之參考文獻。本發明另一項具體實施例中，抗贅生劑可爲抗代謝物，可包括（但不限於） :美特奇賽（methotrexate)、5 -氟尿喃、6-氫硫基嗓呤、胞喊咬阿拉伯糖甘、遲基脲、及2-氣去氧腺嘗。本發明另一項 ( :裝 .I — H 、νδ [ ^ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -51 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（2!〇><297公釐）經濟部中央標準局員工消費合作社印聚 458972 A7 B7五、發明説明（49 ) 具體實施例中，所涵括之抗贅生劑爲烷化劑，包括（但不限於）:環鱗酿胺、美法蘭（melphalan)、布蘇吩（busulfan)、巴拉布拉丁（paraplat丨η)、克布希（chlorambucil)及氮介子。本發明另一項具體實施例中，抗贅生劑爲植物鹼，包括（但不限於）:長春新驗（vincristine)，長春花驗（vinblastine)、紫杉醇（taxo丨）及艾特普赛（etoposide)。本發明另一項具體實施例中，所涵括之抗贅生劑爲抗生素，包括（但不限於）:道索樂必辛（doxorubicin)(艾奇黴素（adriamycin))、道諾樂必辛 (daunorubicin)、米特黴（mitomycin)c及布里黴素（bleomycin) 。本發明另一項具體實施例中，所涵括之抗贅生劑爲激素，包括（但不限於）:卡拉斯綱（calusterone)、代莫斯塔弗隆 (diomostavolone)、普派内特（propionate)、艾比特史坦諾 (epitiostanol)、米比特史坦（mepitiostane)、睪丸内酯 (testolactone)、塔莫希吩（tamoxifen)、聚雌二醇磷酸鹽 (polyestTadiol phosphate) ' 曱地孕 _ 乙酸鹽（megesterol acetate)、弗塔醯胺（flutamide)、尼魯塔醯胺（nilutamide)及奇洛丹（trilotane)。本發明另一項具體實施例中，所涵括之抗贅生劑包括酵素，包括（但不限於）：L-天冬醯胺酶或胺基 11丫咬衍生物，包括（但不限於）：安薩卡靈（amsacrine)。其他抗贅生劑包括彼等述於史基爾，羅蘭T之”抗贅生性藥物及生物反應改質劑：臨床用藥劑之分類、用途與毒性"，复症化療手册（第3版），立德布朗出版公司，1 9 9 1年（Skeel， Roland T., "Antineoplastic Drugs and Biologic Response Modifier:Classification, Use and Toxicity of Clinically Useful - I Γ _~~ 訂iv (請先閲請背面之注意事項再填寫本頁) -52- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（2l〇XM7公釐） A7 458972 五、發明説明（50 )

Agents, "Handbook of Cancer Chemotherapy(3rd ed.), Little Brown & Co. (1991))，其内容已併爲本文之參考文獻。此等化合物與組合物可作爲獸醫用途投與哺乳動物，如：家畜動物，及作爲臨床用途投與人類，其用法即類似其他醫療劑。通常’療效所需之劑量將根據用途型態及投藥模式’及個別宿主之特定需求而定。通常，劑量範圍在約 0‘001至1000毫克/公斤宿主體重，更常在至毫克/ 公斤。或者，取此範圍内之劑量，在長時間内，通常超過 2 4小時’持續灌流，直到達所需療效爲止。的確，藥物劑量’及投藥途徑必須根據相對效果、相對毒性、腫瘤之生長特性及克力托懷辛對細胞循環之效果、藥物動力學、患者之年齡、性別、體能狀況’及先前之治療來選擇。克力托懷辛化合物，不論是否併用其他抗贅生劑，均可以天然或鹽型配成醫療組合物。醫藥上可接受之無毒性鹽包括鹼加成鹽（與游離羧基或其他陰離子性基團形成之鹽），此等鹽可衍生自無機鹼如，例如：鈉、鉀、銨、鈣或鐵之氫氧化物，及有機鹼如：異丙胺、三甲胺、2_乙基胺基乙醇、组胺酸、普卡因，等等。亦可由游離陽離子性基團形成酸加鹽，且通常與無機酸如，例如：鹽酸或酸如:乙酸、草酸、酒石酸、烏桃酸等形成。本發日:尚= 供之其他賦形劑爲相關技藝習知者，例如.彼等可見於,ι美國藥典第ΧΧΠ卷與國家藥方第XVI$，"美國藥典協會’馬里蘭州洛克菲力市（1989年），該内容已併爲本文之參考文 _ -53- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS } Λ4規格（2Ϊ0Χ297公着) ~ 1 —i . I ,1τI n ft Μ {請先閎讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標隼局員工消費合作社印裝 458972 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 五、發明説明（51) — 包埋物在特定醫療組合物中之特定載體之適合性依較適宜义投藥途徑而定。例如:抗贅生組合物可調配成供口服用。此等组合物王要製成液體容液或懸浮液，或呈固體形式。口服調配物經常包含此等常用之添加物如：結合劑、填料載拉防腐劑、安4劑、乳化劑、緩衝劑及賦形劑，如，例如：藥用級之甘露糖醇、乳糖'澱粉、硬脂酸錢、糖精納纖維素、碳酸鎂’等等。此等组合物可呈溶液、懸浮液 '藥片 '丸劑、膠囊、緩釋調配物、或散劑，典型地包含1 %至9 5 %活性成份，以2 y。至7 〇 %較佳β 本發明I組合物亦可製成注射劑，可呈液體溶液、懸浮液、或乳液；適合在注射之前可在液體中製成溶液或懸浮液之固體形式。此等注射劑可經皮下、靜脈内、腹膜内、肌内椎官内或胸膜内投藥。活性成份通常與生理上可耐受且可與活性成份相容之稀釋劑或賦形劑混合。合適稀釋劑及賦形劑爲例如：水、食鹽水、右旋糖、甘油，等等，及其組合。此外’若需要時’組合物可含少量輔助物質，如：濕化劑或乳化劑、安定劑或ρ Η緩衝劑。本發明尚提供使用上述一般結構式所涵括之克力托懷辛化合物抑制哺乳動物細胞增生之方法，其係由此等細胞與足以抑制哺乳動物細胞增生之用量之克力托懷辛化合物接觸。較佳具體實施例爲抑制哺乳動物細胞過度增生。爲了本發明之目的’ ”過度增生之哺乳動物細胞”爲生長未受到特別限制’例如：漸進式細胞死亡（細胞自殺），之哺乳動物細胞。另一項較佳具體實施例爲當哺乳動物細胞爲人類時 ___ -54- 本紙張尺度適用中國國家標準（CN’S )八如見格（210Χ297公釐）裝一訂線 (諳先聞讀背面之注意事項再填{"本頁) 4 5 8 9 7 2' A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印聚五 '發明説明（52 ) °本發明尚提供由哺乳動物細胞與至少一種克力托懷辛化合物及至少另一種抗贅生劑接觸。所涵括之抗贅生劑種類與上文揭示者相同。本發明尚提供使用上述一般結構式所涵括之克力托懷辛化合物抑制具抗藥性表型（包括多重抗藥性表型）之過度增生性細胞發生增生現象之方法，其係由該細胞與足以抑制過度增生之哺乳動物細胞出現增生現象之用量之克力托懷辛化σ物接觸。較佳具體實施例爲當哺乳動物細胞爲人類時。本發明尚提供由哺乳動物細胞與克力托懷辛化合物及至少另一種抗贅生劑接觸。所涵括之抗贅生劑種類與上述者相同。本發明尚提供一種減輕因哺乳動物細胞過度增生而引起之病症，例如：贅瘤形成，其係爲該個體投與有效量之上述醫樂組合物，以抑制過度增生之細胞發生增生作_。本文中所使用之"病症”—詞係指任何哺乳動物細胞未受到正常細：生長之限制而增生後，户斤引起之病症 =於贊：，_不限於)下列贊瘤:乳房 '小房肺部 (CNS广：：、結^直腸、白血病、黑瘤、中枢神經系統胃邱列腺、教組織或㈣之肉瘤'頭與頸部、包括姨與食道)、腹部、骨趙瘤、膀 ==括甲狀腺與淋巴瘤)、非霍奇金氏症= 至氏症°本發明另一項具體實施例中，贅生細胞爲人= 本發明尚提供利用克力托懷辛併用類替生劑來減輕此等病症之方法。此等療法及其對各種= --- -55- 本紙張尺度· ^^i^iiTcNS ) A4ft^7li07297^i~；---- -.--- I i In n I_ m _ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) '11 练 ~ I n ----- n In . 4 5 89 7 2 A7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 B7 五、發明説明（S3 ) 瘤形成之適用性可見於”腫瘤學之癌症原理與操作"，第4 版’ V 狄菲塔編輯’ S赫曼與s洛森柏格著，利本克公司 (1993 年)(Cancer Principles and Practice of Oncology, 4th ed,, Editors DeVita, V., Heilman, S., and Rosenberg., S., Lippincott Co. (I993)，其内容已併爲本文之參考文獻。本揭不文中’克力托懷辛化合物可有效干擾培養細胞中之微管結構。此外，與長春花植物鹼相反，克力托懷辛化合物似乎不是泵出藥物之p_醣蛋白幫浦之良好受質。克力托懷辛1爲諾斯特菌藍綠藻（藍青菌）GSV 224菌種中之主要細胞毒素’且對植入小白鼠之腫瘤展現優越活性。此環狀二縮鼢肽過去曾自諾斯特菌ATCC No. 53787之菌種中單離出’爲一種抗眞菌劑，且過去曾測定其粗略結構。這種具有潛在重要性之藥物之相對及絕對立體化學性現已利用化學及光譜之组合技術來確定。亦已自GSV 224中單離出另外24種克力托懷辛化合物，克力托懷辛2_7、16_19、21、 23、24、26、28-31、40、43、45、49、50與 54，並已測得其冗全結構及細胞毒性。並説明數種衍生物及降解產物之化學性及藥理性。下列實例係説明某些較佳具體實施例及本發明之較佳方面，但不構成本發明之限制範圍。部份下列實驗説明中’所有重量均以克（g)、毫克（mg)、微克（ "g)、€;微克（ng)、微微克（pg)或莫耳（m〇i)表示，所有濃度均以體積（％)、莫耳濃度（M)、毫莫耳濃度（mM)、微莫耳濃 -56- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐〉 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -5 經濟部中央標準局員工消費合作社印11 458972 A7 _B7 五、發明説明（54 ) 度（"M)、毫微莫耳濃度（nM)或微微莫耳濃度（pM)、當量濃度（N)表示，且所有體積均以升（L)、毫升（mL)或微升（^ 表示，長度則以毫米（mm)表示，除非另有説明。下列實例説明克力托懷辛化合物之單離法與合成法，及其根據本發明作爲醫療劑之用途。自1000種以上藍綠藻（藍青菌）之萃物中篩選抗腫瘤活性時’發現話斯特菌GSV 224之親脂性萃物具強烈細胞毒性3 ，其對抗K B (—種人類鼻咽癌瘤細胞系）之最小抑制濃度 (MIC)爲0.24毫微克/毫升，且對L〇V〇(係—種結腸直腸腺癌瘤細胞系）之MIC爲6毫微克/毫升。更重要者，此萃物於柯貝特分析法45中展現顯著之腫瘤選擇性細胞毒性。藥菌萃物在生物追踪下進行之逆相層析法產生以克力托懷辛1爲主之落離份，係一種早期由默克公司之研究者ο自諾斯特菌 ATCC 53789中單離之強力殺眞菌劑，且發現其對隱球菌極具活性。克力托懷辛1爲諾斯特菌GSV 224之藻菌粗萃物之主要細胞毒性活性來源，該純化合物對KB&L〇V〇2IC5〇値分別爲 3及5微微克/毫升。在柯貝特分析法中，發現克利托懷辛工具有強烈I腫瘤選擇性，且對感藥性及抗藥性腫瘤細胞具有相同之細胞毒性。免疫螢光分析法顯示，克力托懷辛1 係類似長春花鹼，會與目標細胞交互作用，但不同於後者工處在於作用時間較長，且不會形成半結晶體。在活體内預備實驗中，克力托懷辛1對植入小白鼠之腫瘤具有極有效之活性。柳長尺度適用中狀衣------ΐτ------^ (請先閲"'背面之注意事項再填寫本頁) ____ -57- A7 B7 絰濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明（55) 諾斯特菌GSV 224亦含有少量數種其他克力托懷辛化合物。可分離出足量之其中21種，供進行結構式測定及於活體外進行杬腫瘤分析，其係以i: 5二氣甲烷/乙腈萃取藻菌，並由萃液進行逆相HPLC。以65:35乙腈/水溶離逆相急驟管柱時’會溶離出克力托懷辛2、3、4、16、17、18、19、21 、23、24、26、28、29、30 ' 31、40、43、45、49、50與 54，伴隨克力托懷辛！—起出現在溶離份中。當以甲醇萃取藻菌，並使用甲醇/水進行逆枏層析法時，發現克力托懷辛 2、3、4、5、6與7爲僅有之化合物。以曱醇/水可審離出克力托懷辛2、3、4、5與ό，以1:3甲醇/水溶離時，則在先流出之較低細胞毒性之溶離份中出現克力托懷辛7。無環克力托懷辛5、6與7則似乎是克力托懷辛1在單離過程中分離產生之產物。克力托懷辛3及5似乎與默克藥廠之研究者μ，由克力托懷辛1製成之具殺眞菌性之半合成化合物完全相同。以鋅_銅偶合物或以四破化二鱗8處理克力托懷辛1，可製成克力托懷辛3。由克力托懷辛1之甲醇分解作用，即可製成克力托懷辛59。實例1 結構式測定新穎化合物，亦即克力托懷辛2、4、6' 7、8、9、10、 12、14、16、17、18、19、21、23、24、26、28 ' 29、30 、3 1、40、43、45、49、50與54，及先前揭示之化合物之結構式係使用相關技藝上習知之方法測定。質譜數據與分子組成ρ勿合。由來自COSY、HMQC、HMBC及HOESY等光 -58- 本紙張尺度適用中國國冬標準（CNS ) A4^格（210X297公廣) C請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁 _ 、-β

K 458972 經濟部中央標率局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（56 ) 譜之質子與碳NMR數據即可組合出此等縮齡·肽型化合物之粗略結構。由氣相層析質譜分析法確認各化合物中是否含有各種輕基及胺基酸單位。由克力托懷辛化合物之適當衍生物併用化學分解法及特殊分析技術，即可決定總結構式，包括絕對立體化學性。 —實例2 結構式-活性關係（SAR) 爲了探討克力托懷辛1要達最適當活性時之結構特色，分析上述所有化合物對KB(人類鼻咽癌瘤）、l〇 Vo(人類結腸癌瘤）及SK0V3(人類卵巢癌瘤）細胞系之細胞毒性。IC50値示於表1與2。比較細胞毒性時顯示，最適當之細胞毒性需要：完整之大環内酯環，在克力托懷辛1之7,8 -環氧基-5-經基-6-甲基-8-苯基-2-辛烯酸單位（見圖1之A單位）上具有環氧基與甲基及雙键，在3_(3·氣·4·曱氧苯基）丙胺酸單位 (Β單位）上具有氣及〇-甲基，在3-胺基-2-甲基丙酸單位（C單位）上具有異丁基。克力托懷辛8之細胞毒性效力最可能來自氣乙醇官能基，其作用如同受遮蔽之環氧化物。亦採用柯貝特分析法2，一種根據常用之抗眞菌與抗細菌試驗法改良之圓盤擴散分析法，來分析最具活性之化合物對抗四種不同細胞，即鼠白血病（L1210或Ρ388)、鼠固體腫瘤（結腸腺癌瘤38、胰管腺癌瘤03、乳房腺癌瘤（Ml6/Μ17) 、人類固體腫瘤（結腸〇乂-1、11(：丁8、11116;肺11125;乳房 MX-1、MCF-7)及低惡性纖維母細胞（LML)之選擇性細胞毒性°其結果示於表1，顯示克力托懷辛1至5及8對固體腫瘤或白血病均無選擇性，對腫瘤細胞系，包括抗藥性細胞如 ____ -59- 本紙張尺度適用㈣國家轉（CNS ) A4胁（21〇Χ297公餐） (讀先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝、1Γ 線 458972 經濟部中央標準局負工消費合作社印製 A7 五、發明説明（57 ) :M17，則具相同活性’所有化合物對任何固體腫瘤細胞系之抑制區（其係3250區單位，即37. 5 mm)均未大於白血病細胞系之抑制區。但克力托懷辛1至5及8對所有腫瘤細胞系所展現之抑制區（34 0 0區單位）則顯著大於纖維母細胞LML抑制區°在診斷上’發現LML對臨床上適用之細胞毒性劑之表現比腫瘤細胞更類似正常細胞（參見表1中，5_氟尿嘧啶、艾托普赛（etoposide)及紫杉醇（taxol)之柯貝特分析數據）。由於細胞毒性差異>250區單位’因此克力托懷辛具有腫瘤選擇性。此等化合物因此成爲活體内試驗之候選化合物。克力托懷辛1可活性對抗植入小白鼠體内之許多種鼠及人類腫瘤，包括抗藥性者（表3)。其對5種早期鼠腫瘤，即結腸腺癌瘤#38與#51、紫杉醇-敏感性及紫杉醇_抗藥性乳房癌瘤#16/C/RP '及胰管腺癌瘤#〇3，及對2種在SCID小白鼠體内試驗之早期人類腫瘤，即MX]胸部及H125腺鱗狀肺部腫瘤，均具有優越活性，其腫瘤負荷値（處理组動物之平均腫瘤負荷/未處理動物之平均腫瘤負荷）小於1〇0/。。依NC〗標準，T/C値小於42%者即視之爲活性；丁…値小於 10%者，即視之具有優越活性，且具有可能之臨床活性9。有二項試驗顯示，（腫瘤細胞）總消滅對數（gr〇ss kiU)値爲2.0。總消滅對數値之定義爲T_C/3 2 ，其中τ爲處理組之腫瘤達到750毫克所需天數之中間値，（：爲對照組之腫瘤達到750毫克時所需天數之中間値’且^爲腫瘤體積加倍時所需時間。在藥物治療5至20天期間，總消滅對數値爲>28 、2.0-2.8、〇.5·〇·8、及 <〇5時，分別劃爲++++、 __ -60- 本紙張ϋ適用中國國家標隼（CNS ) A4規格U10X2W公箸） f 裝 _ 訂"' (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 458972 A7

五、發明説明（58 ) +++、++、+及-(無活性）。大多數植入固體腫瘤之小白鼠需要活性等級在+++至++++(表示臨床活性）方可使植入小白鼠體内之大多數固體腫瘤中100-3 00毫克大小之腫瘤部份或完全消退。克力托懷辛8亦可活性對抗許多種植入小白鼠之腫瘤（表4) 。其對目前所測試之所有腫瘤均展現優越活性，其腫瘤負荷T/C値<10%，但更重要的是，其總消減對數値活性等級在+ + +至+ + + +，且有些更痊癒了。克力托懷辛35在一項目前還在進行之試驗中亦出現良好之活體内活性° 在克力托懷辛1與8之試驗中所觀察到之致死毒性則歸因於白血球減少症，此係所有臨床用抗腫瘤藥常見者。裝------訂------良 (请先闉讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央橾準局員工消費合作社印装 -61 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2丨0X297公釐） 458972 A7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明（59 ) 表1.克力。托懷辛與半合成性類似物之細胞毒性。表中並比較5-氟尿嘧啶、艾特普赛（Vp_16)及紫杉酵之柯貝特/瓦烈特（Valeriote)分折數爐____ 細胞生型態:（區單位之差異) 柯貝特瓦特烈 KBIC50 LoVo IC50 4匕合物樹克/盤分析法a 微克/盤分析法b 鲁徽克/毫升毫微克/毫升 1 12.5 t/r(>4〇o)c N 0.005 0.003 2 25 E/T(>400)c N 0.007 0.0002 3 25 E/T(>400)c N 0.3 0.5 4 20 Ε/Τ(>400)<= N 1.3 0.5 5 2.9 E/T(>400)c N 0.02 0.02 6 250 I > 100 > 100 7 I > 750 > 480 8 30 E/T(>500)c 3〇 N 0.0002 0.01 9 15 未測定 10 > 100 > 100 12 > 100 > 100 14 1.8 3 5-FU 2.5 M/T(>400)d 2.5 LL(>400) VP-16 5 L(350)，T(530)d 5 LL(260) 紫杉醇 0.2 M/H/T(>400)d aL=白血病選擇性（例如 &121〇_2(：38與 ZLi2i〇_ZHg25〇 zu) M=鼠固體腫瘤選擇性（例如Zc38_Zli2成25〇 zu) H=人類固體腫瘤選擇性（例如Zh8_Zu2i@25〇 zU) E=對白血病及固體腫瘤細胞系均具相同細胞毒性（抑制區>25〇 zu) τ=腫瘤選擇性（例如ZL1210-ZLML，ZC38-ZLML,與ΖΗ8-Ζ·>250 zu) 1= 供活性（抑制區<250) bN=對腫瘤（白血病）及正常細胞（CFU_GM)系無選擇性 LL=淋巴白血病選擇性（ZLi2i〇_ZcFu_cMy5〇 zu) ML=急性骨髓白血病（AML)選擇性（ZAML_zCFu cMg5〇 zu) c選擇性對抗感藥性及抗藥性細胞系（Zc3s_Zlml，z贈_ζ·及Ζη8· zlml) 0

d僅選擇性對抗感藥性細胞系D -62- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS )T4規格（210X 297公釐） I US n In n n - - ------丁 US."tv (請先閱讀背面之注意事項再填巧本頁) 五、發明説明（60) A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製表2 .克力托懷辛之活體外細胞毒性數據克力托懷辛 kbic50 毫微克/毫升 l〇voic50 毫微克/毫升 SKOV3IC50 毫微克/毫升 1 0.0025 0.001 0.026 2 0.023 0.021 0.18 3 1.8 0.6 2.8 4 6 2.5 21 5 12 2 7.4 8 0.01 0.0022 0.15 12 18 3 15 12 16 0.08 0.02 0.64 17 4.7 5.9 11 18 15 4.5 23 19 9.8 5.9 41 2 1 0.01 0.0003 0.029 23 0.89 0.4 1.7 24 0.12 0.095 0.3 26 19 9.8 95 2 8 1.5 0.75 6.1 29 1 0.49 3.4 3 0 11 8 21 3 1 0.53 0.062 1.9 3 5 0.055 0.01 0.092 40 9.0 1.0 1.7 43 0.72 0.8 1.1 45 2.3 2.4 1.6 49 1.4 1.9 1.1 5 0 0.17 0.17 0.2 54 0.80 2.2 2.2 -63- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210X297公釐） - - - ---- - —I - 士^- -I— -I.…I - ——^1 - - - ! _ I (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 9 8 5 4 2

A

7 B 五、發明説明（61 ) 表3 .力托懷辛-A之活體内活性實驗# SC腫瘤靜脈内注射# mg/kg 總劑量 Nadir 體重下降％ T/C 消滅對數値疮癌數 1560 結腸38 8 10.3 增加 6% 1.5 0/5 1694 胰03 8 16.0 增加 0% 2.0 0/5 1636 結腸51 7 28.1 -11% 7% 1.3 0/5 1720 乳房16/C 5 13.2 -1% 5% 1.4 0/5 1733 乳房16/紫杉醇 5 16.5 0% 2% 1.8 0/4 1833 M17/0(Adr.Sens.) 5 5.4 -10% 23% <1 0/5 1749 胰02 5 11.0 -5% 20% 1.1 0/5 1596 人類Sm細胞系 DMS273 SCID 6 7.3 0% 27% <1 0/5 1806 MX-1人類胸部 8 12 -3% 3% 2.0 0/5 1823 H125人類腺鱗狀肺 8 14.4 -15% 1/5死亡 9% 1.1 0/5 1841 LNCaP人類前列腺 6 6.5 -6% 26% <1 0/5 (請先間讀背面之.注意事項再填寫本頁裝訂線經濟部中央標準局員工消費合作社印装 -64- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 458972 A7 B7 五、發明説明（62 ) 表4 .克力托懷辛類似物之活體内活性實驗# 藥劑 SC 腫瘤靜脈内注射# mg/kg 總劑量 Nadir 體重下F#% T/C 消;麟數値減數 1813 克力托懷辛-2 P03 10 37 -2% 44% <1 0/5 1843 克力托懷辛-3 P03 4 28/5 -9% 54% <1 0/5 1769 克力托懷辛-8 C38 15 45 -2% >100% 無 0/5 1825 克力托懷辛-8 P03 Π 106 -6% 4% 4.6 0/5 1885 克力托懷辛-8 乳房 16/C 7 21.3 -4.5% 6% 2.5 1/5 1887B 克力托懷辛-8 C38 6 30 -2% 0% 2.8 0/5 1900 克力托懷辛-8 結腸 51 9 67.5 -1% 7% 1.8 0/5 1843 克力托懷夺15 P03 5 18 -7% 83% 血 0/5 1878 ^7托懷夺16 P03 9 82 -1% 89% 0/5 1813 克力托懷夺21 P03 9 27 -11% (1/5死亡） 61% 無 0/5 1843 砂托懷夺35 P03 7 23 -2% 11% 1.3 0/5 (請先閲讀背面之注意事項再楨窍.尽頁裝_ 訂線經濟部中央榡準局員工消費合作社印製 -65- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） A7 今5 R972 ----^___ 五、發明説明（63 ) tin 培養條件諾斯特菌G S V 2 2 4係得自密西根州立大學μ S U - D Ο E植物研％室C.P,沃克（Walk)敎授。諾斯特菌atCC 53789 係購自美國菌種培養收集處。使用1升燒瓶之藻菌培養物接種至含有無機培養基（稱爲改良之BG-II3)(其pH已經利用 NaOH調至7.0)之高壓殺菌過之20升有外軍玻璃瓶中。以冷白螢光管依光強度爲200微莫耳質子。米-2秒-1連續照射培養物（光合作用活性照射）’並於24 + 1 °C，依5升/分鐘之速率通入含0.5% C02之空氣混合物。典型地，在2 1天後，過濾收集培養物。冷凍乾燥後之諾斯特菌GSV 224與ATCC 53789 之平均收量分別爲0.61及0.3克/升培養物。

實例4 單離法方法A 以2升1:5 CH2C1/CH3CN萃取冷凍乾燥之諾斯特菌GSV 224(50克）48小時，萃液眞空濃縮，產生深綠色固體。殘質 (1克；KB MIC 0,24毫微克/毫升）加至塗佈〇DS之矽石管柱中 (55克，7 X 5公分），並進行急驟層析法，以1:3 CH3CN/H2〇 (0.8升）、1」CH3CN/H2O(0.8升）、65:35 CH3CN/H2O(10升）、MeOH(0.8升）及 CH2C12(0.5升）溶離 ° 取得以 65:35 CH3CN/H20溶出之溶離份（420毫克；KB MIC 14微微克/毫升）進行逆相HPLC(Econosil C18，10微米，25公分X21.5公分，於250 nm下進行UV檢測，65:35 CH3CN/H20，流速6毫升 /分鐘），得到克力托懷辛l(tR 49.3分鐘，220毫克）及幾種雜質溶離份。自Econosil C18管柱中，在tR28.8分鐘時溶出之 -66- ^紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4^格（210x297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁裝· '?τ 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 A7 B7 458972 五、發明説明（64 ) (請先閲讀背'"之注意事項再填寫本頁) 溶離份再經正相HPLC純化（Econosil矽石5公尺卡管，250 X 4.6毫米，6:4乙酸乙酯/己烷，3毫升/分鐘），產生克力托懷辛16(3.0毫克）。自Econosil C18管柱中，在tR 32.5分鐘時溶出之溶離份，於Econosil矽石管柱上進行HPLC，使用3毫升 /分鐘之55:45乙酸乙酯/己烷，產生克力托懷辛24(0.8毫克）。自Econosil C18管柱中，在tR 3 5.5分鐘時溶出之溶離份於 Econosil矽石管柱上進行HPLC 2次，第一次使用3毫升/分鐘之1:1乙酸乙酯/己烷，第二次使用2.5毫升/分鐘之4:6乙酸乙酯/二氣甲烷，產生克力托懷辛23(1.2毫克）與克力托懷辛 43(0.1毫克）。自Econosil C18管柱中，在tR 39.5分鐘時溶出之溶離份於EconosU矽石管柱上進行HPLC，以3毫升/分鐘之1:〗乙酸乙醋/己就溶離，產生克力托懷辛2(6毫克）與克力托懷辛21(14毫克），並於tR 32.5分鐘溶離出克力托懷辛之複合混合物。這份自400克乾藻菌中累積得到之溶離份依半製備性管柱（Partisil C18，250x 9.4 毫米，10米），以 35:65水/ 乙腈溶離，及經逆相分析管柱（Econosil，1 50 X 4.6毫米，5 米）’以5:4:1水/乙腈/曱醇，於1.3毫升/分鐘下溶離，產生經濟部中央標準局員工消費合作社印製克力托懷辛50(tR34.8，0‘4毫克）及克力托懷辛40(tR38.8分鐘’ 0.3毫克）。自Econosil C1 8管柱中，於tR 44.5分鐘時溶出之溶離份於Econosil石夕石管柱上進行HPLC，以3毫升/分鐘之1:1乙酸乙酯/己烷溶離，產生克力托懷辛〗7(0 3毫克）。自Econosil C18管柱上，在tR 54.5時在克力托懷辛！旁邊呈肩形出現之溶離份經過正相HPLC純化，以1:1乙酸乙酿/己燒溶離，產生克力托懷辛45(tR6‘7分鐘，〇· 1毫克），克力 ______ -67- 本紙張尺度適用6國家標準（CNS ) Α4· ( 2]()><297公漦 1 ~~ ~~---- 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 458972 A7 ___ _B7_五、發明説明（65 ) 托懷辛26(tR8.9分鐘’ 0.5毫克），及克力托懷辛54(tR19.8 分鐘’<0.1毫克）。自Econosil C18管柱上呈寬峰（tR58至70 分鐘）溶出之溶離份於Econosil^石管柱上進行HPLC，以 2.5毫升/分鐘之43:57乙酸乙酯/己烷溶離，產生克力托懷辛 4(tR19.6分鐘，1.5毫克）、克力托懷辛31(tR9.4分鐘，0.8 毫克）、克力托懷辛19(tR25.8分鐘，0.3毫克）、克力托懷辛49(tR28分鐘，0.1毫克）、克力托懷辛2 8(tR29分鐘，0.5 毫克）及不純之克力托懷辛29(tR52.5分鐘，2.0毫克）與克力托懷辛30(tR49分鐘，3.0毫克）。克力托懷辛29與30則經過逆相 HPLC 純化（Econosil C18，10米，250x 10毫米，3:1 甲醇/水）。自Econosil C18管柱上，在tR78.9分鐘時溶出之溶離份於Econosil矽石管柱上進行HPLC，產生克力托懷辛 3(^尺16.4分鐘，3.0毫克）。自£(：〇11〇8丨10：18管柱上，在|：1182.8 分鐘時溶出之溶離份於Econo si丨秒石管柱上進行HPLC，以3 毫升/分鐘之45:55乙酸乙酯/己烷溶離，產生克力托懷辛 18(tR 19.2，0.8毫克）。方法B 取冷凍乾燥之諾斯特菌GSV 224(12.23克），分別以700毫升及400毫升MeOH萃取12及5小時。合併萃液，眞空濃縮，產生1.84克深綠色固體，使之分佈在水與CH2C12之間。取親脂性部份（0.65克；KB MIC 0.24毫微克/毫升）加至塗佈ODS 之矽石管柱上（55克，7X 5公分），以1:3 Me0H/H20 (0.8升）、 1:1 MeOH/H2O(0.8 升）、 3:1 MeOH/H2O(0.8 升）、 MeOH(0.8升）及CH2C12(0.5升）進行急驟層析°以3:1

(請先閏讀背面之注意事項再填寫本I 裝- 訂 -68- 本紙浪尺变適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 4 5 8972 經濟部中央標準局員工消费合作社印策 A7 B7_ 五、發明説明（66 )

Me0H/H20溶出之溶離份（22毫克；KB MIC 14微微克/毫升）爲所有細胞毒性活性之主要來源，因此再使用1:5 爲溶離液，進行逆相HPLC(Econosil C18，10" u，250公分X 1 0毫米，於250 nm進行UV檢測，流速3毫升/分鐘），產生克力托懷辛7(^7.6分鐘，0.2毫克）、5(1：1115.4分鐘’2.3毫克）、2(tR16_0 分鐘，1.0 毫克）' l(tR19.0 分鐘，12.0 毫克）、 4(tR26.5分鐘，1.2毫克）及3(tR30.2分鐘，1.4毫克）°自其中一份培養物中，以1:3 MeOH/H20自急驟管柱中溶出之溶離份（8.1毫克）展現較溫和之細胞毒性（KB MIC 2微克/毫升）。於HPLC上，使用2:3 Me0H/H20爲溶離液純化，產生克力托懷辛G(7，tR6.0分鐘，2.4毫克）。實例5 克力托懷辛1 - 7之光譜數據

光譜數據中，以粗斜體字表示之字母係指圖1中之A至D 單位。克力托懷辛1 [a]D+33.S° (MeOH, c 1.83); UV Amax( ε )208(42,400), 218 (33,700), 228(23,800), 280(2,210)； CD[ Θ ]202+15,9〇〇, [ Θ ]2〇6 +64,900, [ θ ]214+26,900, [ θ ]224+46,300[ β ]237+l〇,500 〇 IR (CHC13) t^max 3425, 2963, 1751, 1719, 1677, 1502, 1259 cm-' 0 EIMS m/z(相對強度）654/656(20.9)，412/414(33/12)，280/ 282(3 1/12)，227(80), 195/197(92/44)，91(100);高解析EIMS m/z 654.2665(C35H43CIN208之計算値，誤差 4 · 3 mmu)。Ή NMR (CDC13):胺基或羥酸單位a (碳位置，多重性；J Hz) -69- 本紙張尺度適用中國國家標率（CNS ) A4規格（210X297公釐） ---------裝------訂------紙 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 4 S 8 9 7 2 A7 -B7_ 五、發明説明（67) 7,8·環氧-5-羥基-6-甲基-8-苯基-2-辛烯酸（A)5.74(2dt; 15.5 與〇.9)，6.68(3, ddd; 15.5, 9.6與 5.2)，2.45(4, ddd; 14.2, Π.1 與 9.6)，2.55(4, brdd; 14.2與 5.2)，5.16(5, ddd; 11.1，4.9與 1,9)， 180(6, m), 1.14(6-Me，d; 7.1)，2.92(7, dd; 7.5與 2.0)，3.69(8， d; 2.0)，7.25(10/14, tn), 7.34-7.39(11/12/13, m); 2-羥-4-甲基戊酸（D) 4.83(2, dd; 6.8與3.3)，1.70(3, m)，1.36(3, m)， ^70(4, m)，0.86(5, d; 6.6)，0.85(5’，d; 6.6); 3-胺基-2-甲基丙酸（C) 2.71(2, m)，1.22(2-Me, d; 7.1), 3.30(3, ddd; 13.4, 5.8 與3‘8)，3.48(3，（1£1(1;13.4,6.3與5.8),6.93(3->[11,1^;5.8);3-氣-4-曱氧苯基丙胺酸（B)4.80(2, ddd; 8.7, 7.3與5.4)，5.61(2-NH，d; 8.7)，3.03(3, dd; 14.4與7.3)，3.13(3, dd; 14.4與5.4)， 7.21(5, d; 2.1), 3.87(7-OCH3, s), 6.83(8, d; 8.5), 7.07(9, dd; 8.5 與 2‘1)。13C NMR(CDC13):單位(碳位置）Α165·3(1), 125.3(2), 141.0(3), 36.7(4), 76.2(5), 40.6(6), 13.5(6-Me), 63.0(7), 59.0(8), 136.7(9), 125.6(10/14), 128.7(11/13), 128.5(12); D 170.7(1), 71.3(2), 39.4(3), 24.5(4), 22.9(5), 21.3(5'); C 175.6(1), 38.2(2), 14.1(2-Me), 41.1(3); B 170.9(1), 53.6(2), 35.0(3), 129.7(4), 131.0(5), 122.4(6), 154.0(7), 56.1(7-OCH3), 112.2(8), 128.4(9)-克力托懷辛2 [a ]D+20.4。（MeOH，c 0.54); UV 入腿（ε )206(43,800), 218 (37,500), 232(22,900), 278(2,410); CD[ θ ]2〇3+54,100, [ Θ ]212 + 16,500, [θ]225+53,600, [θ]236-14,000。IR (CHCl3)i/max 3423, 3029, 2961，1742, 1724, 1678, 1512, 1258 cm1。EIMS m/z(相 -70- 本紙張尺度適用中國國家標隼（CNS) A4規格（210X297公楚） I 裝訂 i 氣 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) A7 4 5 8 9 7 2 _B7____ 五、發明説明（68 ) 對強度，指定）620(11，M+)，431(3), 378(8)，377(6), 31 1(11)， 246(10), 244(8), 227(14), 195(17), 161(84, CH3〇-C6H4-CH=CH=CO+), 121(79, CH30-C6H4-CH2+), 91(100);高解析 EIMSm/z 620.3094(C35H44N2O8之計算値，誤差0.3mmu); 161.0605(Ci0H9O2之計算値，誤差-0.2 mmu); 121.0658(C8H9O 之計算値，誤差-0.4 mmu)。Ή NMR(CDC13):胺基或羥酸單位 d (碳位置，多重性；J Hz) 7,8-環氧-5-羥基-6-曱基-8-苯基-2-辛烯酸（A)5.71(2, dd; 15.4 與 1.3)，6.70 (3, ddd; 15.4, 10.2 與5.0)，2.45(4, m), 2.55(4, m)，5.18(5, ddd; 11.3, 4‘8與2.0)， 1.79(6, m), 1.14(6-Me，d; 7.0)，2.92(7, dd; 7.7與2.0)，3.68(8, d; 2.0)，7.24(10/14, m), 7.34-7.39(11/ 12/13, m); 2-羥-4-甲基戊酸(D)4.82(2, dd; 10.1 與3.7)，1.70(3, m)，1.33(3, m)，1.70(4, m), 0.86(5, d; 6.4)，0.84(5’，d; 6.4); 3-胺基-2-曱基丙酸(C) 2.68(2, m), 1.23(2-Me, d; 7.3), 3.39(3-H2, m), 7.02 (3-NH,brt; 6.0); O-甲基酪胺酸（B)4.79(2, ddd; 8.1，7.0 與 5.7)，5.55(2-NH, d; 8.1)，3.07(3, dd; 14_5與7.0)，3.13(3, dd; 14.5與5.7)， 7.10(5/9, d; 8.6)，6.81(6/8, d; 8.6)，3.78(7-OCH3, s)。13C NMR(CDC13):單位 i (碳位置)A 165.1(1), 125.1(2)，141.1(3)， 36.7(4), 76.0(5), 40.7(6), 13.6(6-Me), 63.0(7), 59.0(8), 136.7(9), 125.6(10/14), 128.7(1 1/13), 128.5(12); D 170.6(1), 71.3(2), 39.4(3), 24.5(4), 21.3(5), 22.9(5'); C 176.0(1), 38.1(2)，14.2(2-Me), 40.7(3); B 171.1(1)，53.9(2),35.3(3), 131.0(4)，130.2(5/9)，114.1(6/8)，158.6(7)，55.2(7-OCH3)。克力托懷辛3 ___ -71 - 本紙張尺度適用中國國家梯準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） ------------装------訂------.^ (請先閲讀背面之;i意事項再填寫本ΪΓΟ 經濟部中央標準局員工消費合作社印裂經濟部中央標率局員工消費合作社印製 458972 A7 B7 五、發明説明（69) [e]D+20.3。（MeOH，c 1.13); UV ；lmax( ε )206(51,700)，218 (31,200), 230(22,900), 246(18,800), 280(3,230); CD[^]2〇5 + 50,000, [ ^ ]212 -390, [ θ ]218-47,200, [ θ ]233- 1〇〇, [ θ ]251 + 33,400, [ θ ]271+4,310 〇 IR (CHC13) 3417, 2926, 1742, 1721，1676, 1499, 1336 cm.1。EIMS m/z(相對強度） 638/640(2/0.7, M+), 412/414(63/19), 280/282(15/5), 227(100), 195(63)，91(98);高解析 EIMS m/z 638.2764 (C35H43CIN207之計算値，誤差-0.5 11111111)，412.1516((：201127(：11^〇6之計算値，誤差 1.1 mmu)，227.1293(C15H17NO之計算値，誤差 1 ·0 mmu); Ή NMR(CDC13):胺基或羥酸單位d (碳位置，多重性； 11^)5-羥基-6-甲基-8-苯基-2,7-辛二缔酸（八)5.77(2，£1;15.5)， 6.68(3, ddd; 15.5, 9_5與5.3)，2.37(4, m)，2.54(4, m)，5.01(5， ddd; 11.4, 6與 1.5)，2.56(6, m)，1.14(6-Me，d; 7.0)，6.01(7, dd; 15.8與8.8), 6.41(8, d; 15.8), 7.28-7.34(10/1 1/13/14, m), 7.23(12, m); 2-羥-4-甲基戊酸(D) 4.84(2, dd; 10.1 與3.6)， 16.2(3, m), 1.36(3, m), 1.62(4, m), 0.77(5, d; 6.5), 0.73(5', d; 6.3); 3-胺基-2-甲基丙酸(C) 2.71(2, m), 1.22(2-Me, d; 7.3)， 3.28(3, dt; 13.5與7.0)，3.50(3, ddd; 13.5, 4.9與4)，6.93(3-NH， brt; 6.3); 3-氣-4-甲氧苯基丙胺酸(B)4.82(2, m)，5.64(2-NH，d; 8.8)，3.05(3, dd; 14.5與7.0)，3.13(3, dd; 14.5與5.5)，7.22(5, d; 2.2)，3.87(7-〇<：113,3)，.6.84(8，（1;8_5)，7.08(9，£1山8,5與2.2) 。I3C NMR(CDC13):單位 (碳位置）A 165.4(1)，125.2(2)，141.4 (3), 36.5(4), 77.1(5), 42.3(6), 17.3(6-Me), 130.1(7), 130.0(8), 136.7(9), 126.1(10/14), 128.6(11/13), 128.4(12); D 170.1(1), -72- 本紙崁尺度適用中國國家標率（CNS ) A4規格（21 OX297公釐） ----------.裝------訂------.iv (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) A7 B7 458972 五、發明説明（70 ) 71.6(2), 39.5(3), 24.5(4), 21.2(5), 22.7(5'); C 175.6(1), 38.3 (2), 14.0(2-Me),41.2(3); B 170.9 (1), 53.5(2), 35.1(3), 129.8 (4), 131.0(5)，122,4(6)，154.0(7)，56.l(7-OCH3)，112.2(8)，127.6(9)。克力托懷辛4

[a]D+36.7° (MeOH，c 1‘93); UV Amax( ε )206(41,800)，228 (25,000), 240(21,200), 248(22,500), 280(3,000), 290(1,230); CD[ (9 ]205 +63,900, [^]211 +3,040, [ ^ ]218 -71,900, [έΜ229 -11，700, [β ]234 -130, ]252+47,5 0 0, [θ ]270 + 5,4 0 0。IR (CHC13) vmax 3410, 2926, 2917, 1741, 1718, 1678, 1511, 1251 cm1。ETMS m/z(相對強度）604(2, Μ+), 378(74)，246(11)， 227(46)，161(100)，91(96);高解析 EIMS m/z 604.3127 (C35H44N207之計算値，誤差2.2 mmu), 378.1910(C20H28NO6 之計算値，誤差0.7 mmu), 227.1293(Ci5H17NO之計算値，誤差 1.7 mmu), 161.0605(C10H9O2之計算値，誤差-0.2 mmu); Ή NMR(CDC13):胺基或羥酸單位(碳位置，多重性；J Hz) 5-羥基-6-甲基-8-苯基-2,7-辛二烯酸（八)5.74(2，（1(1;15.3與1.2)， 6.71(3, ddd; 15‘3, 10.3 與5.0)，2.37(4, m)，2.53(4, m)，5.03(5, ddd; 11.2, 6.4與2.0), 2.55(6, m)，1.13(6-Me，d; 6.8)，6.01(7， dd; 15.8與8.8)，6.40(8, d; 15.8)，7.28-7.37(10/1 1/13/ 14, m)， 7.22(12, m); 2·羥-4-曱基戊酸(D) 4.84(2, dd; 10.1 與3.6)， 1.65(3, m), 1.34(3, m), 1.65(4, m), 0.75(5, d; 6.5), 0.72(5', d; 6.3); 3-胺基-2-甲基丙酸(C)2.69(2, m), 1.22(2-Me，d; 7.5)， 3.39(3-H2, m)，7.03(3-NH, brt; 6.0); O-甲基酪胺酸(B)4.79(2， 111)，5.61(2-1'411，£1;7.8)，3.08(3,(!(1;14.5與7.0)，3.13(3，（1(!; -73- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS〉A4規格（210X297公釐） ---------淋衣------ΐτ------^ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製經濟部中央榡準局員工消費合作社印製 4 5 R Q τ 2 A7 B7__ 五、發明説明（71 ) 14.5與5.3)，7.11(5/9, d; 8.8)，6,81(6/8, d; 8,8)，3.78(7-OCH3, s)。13C NMR(CDC13):單位 (碳位置）A 165.3(1), 125,1(2)， 141.5(3), 36.5(4), 77.1(5), 42.3(6), 17.3(6-Me), 130.1(7), 131.8(8), 136.7(9), 126.2(10/14), 218.7(1 1/13), 127.6(12); D 170.8(1), 71.6(2), 39.5(3), 24.5(4), 21.2(5), 22.7(5'); C 175.9 (1), 38.2(2), 14.2(2-Me), 40.9(3); B 171.2 (1), 53.8(2), 35.3 (3), 131.0(4), 130.2(5/9), 1 14.1(6/8), 158.6(7), 55.2(7-OCH3) 克力托懷辛5 [a ]D+36·0〇 (MeOH, c 0.55); UV 凡哪（ε )206(45,600), 218 (37,700), 280(3,790), 286(3,480), 325(2,080); CD[ ^ ]203 +7,71〇 ]206 +29,0 0 0, [θ]210 +21,400, [θ}222 +59,800, [ ^ ]234 + 12,800, [ Θ ]241+13,700。TR (CHC13) vmax 3426, 2958, 1728， 1672, 1502, 1259 cm1。EIMS m/z(相對強度）686/688 (0.1510.05), 655/657(1/0.3), 654/656(1.5/0.5), 311/313(75/27), 195(66)，155(54), 121(51), 91(100);高解析 EIMS m/z 686.2983 (C36H47ClN2〇9之計算値，誤差 1 . 3 mmu); Ή NMR(CDC13): 胺基或羥酸單位碳位置，多重性；JHz)7,8-環氧-5-羥基-6-甲基-8-笨基-2,7-辛二烯酸（A)5.87(2, d; 15.3)，6.72(3, dt; 15.3與6.8)，2.60(4, m)，2.52(4, ddd; 15.2, 7.8與6.8)，5.11(5， ddd; 12.3, 7.8與7.1)，1.87(6, m), 1.12(6-Me, d; 7.1)，2.91(7， dd; 7.3 與2.1)，3.70(8, d; 2.1)，7.24(10/14, brd;7.4)，7.29-7.36 (1 1/12/13, m);2-羥-4-甲基戊酸(D)4.09(2, m)，2.86(2-OH，brd, 6.1), 1.83(3, m), 1.42(3, m), 1.86(4, m), 0.90(5, d; 6.6), 0.87 ___-74- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） n m I— n I. ‘士良 ____ If 丁 Hr n II n !-- n 、-& 给 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 45 89 7 2 A7 B7 五、發明説明（72) (5『，d; 6.8); 3-胺基-2-甲基丙酸(C)3.64(I-OCH3, s)，2.60(2, m)， 1.07(2-Me, d; 7.3)，3.27(3, ddd; 13.5, 8.0與5.5)，3.39(3, m), 6.32(3-NH，t; 5.4); 3-氣-4-甲氧苯基丙胺酸(B)4.59(2, dt; 6與 7.5) ，6.30(2-：^11，（1;7.5)，2.95(3，€1(1;13.6與7.5)，3.0(3，（1(1; 13.6與6.0)，7.2(5,<1;2.1)，3.86(7-〇(：113,3)，6.84(8，（1;8.5), 7‘05(9, dd，8.5; 2.1)。13C NMR(CDC13):單位 d (碳位置）A 164， 8(1), 126.5(2), 139.2 (3), 34.4(4), 75.5(5), 39.2(6), 12.9(6-Me), 63.3(7), 58.7(8), 136.8(9), 125.7(10/14), 128.6(11/13), 128.4 (12); B 175.1(1), 69.2(2), 43.2(3), 24.3(4), 21.2(5), 23.2(5'); C 175.4(1), 51.9(l-OMe), 39.1(2), 14.7(2-Me), 41.6(3); D 170.6 (1), 54.6(2), 37.4(3), 129.5(4), 131.0(5), 122.4(6), 154.1(7), 56.1(7-OMe)，112.2(8), 128.4(9)。克力托懷辛6 [a ]D+1 7.1 ° (MeOH, c 1.1); UV Amax( ε )206(40,000), 218 (30,100), 228(21,400), 282(2,430); CD[ Θ ]203 + 37,7 0 0, [ Θ ]210 -5,430 [i9 ]2i3 -1,260，[Θ ]22i +24,100，]比 +8,480，[Θ]24〇 + 13,400, [ Θ ]254 + 7 9 0 ° IR (CHC13) vmax 3425, 3006, 2956, 1726, 1672, 1641，1502, 1462, 1259 cnr1。FABMS(硫代甘油） m/z(相對強度）573/575(1 3/6)[M-H20]+，217(26)，91(100)。Ή NMR(CDC13):胺基或羥酸單位碳位置，多重性；JHz) 5,7,8-三羥基-6-曱基-8-苯基-2-辛烯酸（八)5.92(2，士；15.0與 1.5) ，6.94(3, dt; 15與7.5)，2.51(4, m)，2.64(4, m)，3.97(5, ddd; 9.3,6.5#4.5)，2.03(6，m),1.10(6-Me，d;6.5)，3.70(7，dd;9.0 與7.5)，4.64(8, d; 7.5)，7.33-7.39(10/11/13/14, m)，7.28(12, tt; -75- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之；;i意事項再填寫本頁 -裝. 訂經濟部中央標準局員工消費合作社印製經濟部中央標準局貝工消費合作社印繁 458972 A7 B7 五、發明説明（73 ) 6.5與2.0); 3-氣-4-甲氧苯基丙胺酸(B)4,60(2, td; 8.0與6.0)， 6.09(2-NH，brd;8.0)，2.96(3，dd;13.8*8.0)，3.02(3，dd;13.8 與6.0)，7.22(5, d; 2.0)，3.86(7-OCH3, s)，6.84(8, d; 8.5)， 7.07(9，£1£1;8.5與2.0)3-胺基-2-曱基丙酸（(：）3.63(1-〇(：113,3)， 2.58(2,1!1)，1.07(2-!^，（1;7.0)，3.24(3，（1(1(1;13.8,8與6.5)， 3.41(3，（1(1(1;13.8,6.5與4.8)，6.21(3-1^11，1»1^;6.5)。|3(：1^]\411 (CDC13):單位 d (碳位置）A 165.2(1)，125.6(2)，141.3(3)，36.9 (4)，82.5(5)，46.3(6)，14.3(6-Me)，85.1(7), 84.8(8)，140.9(9)， 125.8(10/14), 128.6(11/13), 127.8(12); B 170.6(1), 54.5(2), 37.3(3), 129.6(4), 13 1.0(5), 122.5(6), 154,1(7), 56.1 (7-OCH3), 112.2(8), 128.5(9) C 52.0(1-OHC3), 175.4(1), 39.2(2), 14.7 (2-Me), 41,6(3)= 克力托懷辛7 [從]D-51.9〇 (MeOH, c 0.89); UV ；Lmax( ε )206(23,400), 220 (14,900), 282(1,670); CD[ ^ ]202 +3 5,400, [ 6»]206 -1,7 3 0, [Θ]2Η -19,200, [ Θ ]220 -15,800, [ Θ ]232 +29,000, [ Θ ]263 +2,040 〇 IR (CHC13) t/max 3426, 2946, 1732, 1675, 1501, 1258 cm-1 〇 EIMS m/z(相對強度）455/457(1/0.3, [M-2H20]' 105(100)，77(98); FABMS m/z(魔術子彈基質）496/498[M-H20+Na]+，（硫代甘油基質）474/476[Μ·Η2〇1+Η]+。Ή NMR(CD3OHD):胺基或羥酸單位 ά'(碳位置，多重性；JHz)5,7,8-三羥基-6-甲基-8-苯基-2-辛烯酸（八)6.06(2,€1€1€1;15.5，1.3與1.0),6.80(3，价；15.5與7.5)， 2.49(4, m)，2.59(4, m)，3.92(5, ddd; 9.5, 6.3與4.7), 1.95(6， 111)，1.08(6-1^，£1;6.7),3.59(7,〇1(1;9,0與7.8)，4.56(8，（1;7.8)， -76- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2〗0X297公嫠） -批冬訂紙 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) A7 B7 45 B97 2 五、發明説明（74 ) 7.37(10/14, brd; 7‘3)，7.31(11/13, brt; 7.3), 7.24(12, tt; 7.3與 1.5); 3-氣-4-甲氧苯基丙胺酸(B)4.52(2, dd; 6,9與5.0)，2.93(3， dd; 13.8與6_9)，3.15(3, dd; 13.8與5.0)，7.20(5, d; 2.2), 3.78 (7-OCH3, s), 6.88(8, d; 8.4), 7,08(9, dd; 8.4與2.2)。，3C NMR (CD3〇D):單位 β (碳位置）A 167.4(1), 127.6(2)，140.9(3)，37.9 (4), 84.0(5), 47.6(6), 14.4(6-Me), 86.0(7), 85.8(8), 142.9(9), 127.1(10/14), 129.3(11/13), 128.5(12); B 177.6(1), 57.3(2), 38.2(3), 132.8(4), 1 32.1(5), 122.9(6), 155.0(7), 56.5(7-OCH3), 113.2(8), 130.1(9)。克力托懷辛16 [^]d+41.3° (MeOH, c 5.2); UV ε )242(4963), 280 (2430)，286(2212);IR(無溶劑）vmax 3402, 3270, 2960, 1748， 1724, 1676, 1514, 1466, 1343, 1239, 1177 cm1。E1MS m/z(相對強度）640/642(66/27)，398/400(47/16)，265(55)，227(93)， 181(100);高解析ETMS m/z 640.25676 (C34H41C1N208之計算値，誤差-1.6 mmu); Ή NMR(CDC13):胺基或羥酸單位d (碳位置，多重性；J Hz) 7,8-環氧-5-羥基-6-甲基-8-苯基-2-辛烯酸（A)5.74(2, d; 16)，6.67(3, ddd; 15.3, 9.7與5.5)，2.45(4, dt; 14.3與10.4)，2.55(4，1^(1(!;14‘3與5.3)，5.15(5,€1(1(1;11.2,4.8 與1.8),1.8(6，111),1.14(6-皿6，山7.0)，2.92(7，（1<!;7.5與2.0)， 3.69(8, d; 2.0), 7.24-7.26(10/14, m), 7.33-7.39(11/12/13, m); 3-氣-4-羥苯基丙胺酸(B)4.8(2, m)，5.64(2-NH, d; 8.8), 3.03(3, dd; 14.5與7.0)，3.11(3, dd; 14.4與5.6), 7.17(5, d; 2.2)，5.61 (7-〇H, s)，6.91(8, d; 8.3)，7.0(9, dd; 8.3與2.2); 3-胺基-2-甲基 -77- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210Χ 297公釐） · i衣 _ 訂 _ 線 f請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁} 經濟部中央標準局員工消費合作社印敦 45 89 7 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印聚五、發明説明（75 ) 丙酸((：）2.71(2，111)，1.22(2-]^1(1;7.3)，3.28(3,心；13.6與6.8)， 3.49(3, ddd; 13_6, 5與4.1)，6.92(3-NH，br t; 6.1); 2-羥-4-甲基戊酸(D)4.83(2, dd; 10.1 與3.3)，1.36(3, ητ), 1.67-1.75(3, m)， 1.67-1.75(4, m)，0‘85(5, d; 7.5)，.86(5，，d; 6.8)。13C NMR (CDC13)單位 Θ (碳位置）A 165.3(1)，125.3(2)，141.0 (3)，36.7 (4), 76.2(5), 40.6(6), 13.5(6-Me), 63.0(7), 59.0(8), 136.8(9), 125.6(10/14), 128.7(1 1/13), 128.6(12); B 170,9(1), 53.6(2), 35.1(3), 129.9(4), 129.6(5), 120.0(6), 1 50.4(7), 1 16.4(8), 129.2(9); C 175.6(1), 38.3(2), 14.1(2-Me), 41.1(3); D 170.8 (1)，71.3(2), 39.4(3)，24.6(4)，21.3(5), 22.9(5_)。克力托懷辛1 7 [從]D+27‘8〇 (CHC13c.0.37); UV Amax( ε )248(14740)，268 (8100)，278(3400)，284(2840); IR (無溶劑）r雌 3412, 2958， 1750, 1723, 1668, 1504, 1463, 1290, 1177, 751 cm1; EIMS m/z(相對強度）624/626(10/3), 398/400(95/35)，284(100), 149(95);高解析 EIMS m/z 624.26161 (C34H41ClN207i計算値，誤差-1 · 4 mmu)。Ή NMR(CDC13):胺基或羥酸單位Θ (碳位置，多重性；JHz)5·羥基-6-甲基-8-苯基-2,7-辛二烯酸（A) 5.77(2, d;〗5·4), 6,67(3, ddd; 15.4, 9.5與5.3)，2.37(4, m), 4.99(5, ddd; 11.2, 6.3 與 1.6)，2.54(6, m)，1.14(6-Me, d; 6.7)， 6.01(7, dd; 15.7與8.7)，6.41(8, d; 15.9)，7.28-7.34(10/1 1/1 3/ 14, m)，7.23(12, m); 3-氣-4-羥苯基丙胺酸(B)4.82(2, m), 5.63(2-NH，d; 8.7)，3.12(3, dd; 14.7與5.6)，3.03(3'，dd; 14.7 與7.1)，7.18(5, d; 2.0)，5.47(7-OH，br s), 6.91(8, d; 8.3), -78- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210'χ：297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝 π 線— A7 ^ 8972 B7__ 五、發明説明（76 ) 7.02(9, dd; 8.3 與 2.0); 3-胺基-2-甲基丙酸（C)2.71(2, m)，1.21 (2-Me, d' 6.9), 3.25(3, m), 3.52(3', m), 6.89(3-NH, br t; 6.1) ;2-羥-4-甲基戊酸(d)4.84(2, dd; 9.6與3.1)，1.62(3, m)，1.36(3·， m), 1.62(4, m), 0.77(5, d' 6.5), 0.73(5', d; 6.5);nC NMR(CDC13) :單位 <ί (碳位置）A 165.4(1)，125.1(2)，141.3(3)，36.5(4)，77.1 (5), 42.3(6), 17.3(6-Me), 130.0(7), 129.9(8), 136.7(9), 126.2 (10/14), 128.6(11/13), 127.6(12); B 170.9(1), 53.5(2), 35.1(3), 129.6(4), 131.9(5), 126.2(6), 150.3(7), 116.3(8), 127.6(9); C 175.9(1), 38.4(2), 13.9(2-Me)} 41.3(3); D 170.9(1), 71.6(2), 39.5(3), 24.5(4), 21.2(5), 22.7(5')= 克力托懷辛1 8 [^]d+54.9° (MeOH, c 0.93); UV Amax( ε )250(20518), 284 (3857); TR (無溶劑）Vmax 3411，3271, 2966, 1746, 1728, 1668， 1505, 1463, 1258, 1178 cm1。EIMS m/z(相對強度）638/640 (4.5/1.1), 412/414(59/19)，280(17)，227(100);高解析 EIMS m/z 63 8.272934 (C35H43ClN207i計算値，誤差2‘9 mmu)。 Ή NMR(CDC13):胺基或羥酸單位(碳位置，多重性；J Hz) 5-羥基-6-甲基-8-苯基-2,7-辛二烯酸（A) 5.76(2, d; 15.5), 6.65(3, ddd; 15.4, 9.2與6.2)，2.38-2.47(4, tn), 5.08(5, ddd; 10.6, 4.9與2.2)，2.58(6, m)，1.15(6-Me，d; 6.8)，6.07(7, dd; 15.9與8.5)，6.43(8, d; 15.9)，7.21-7.35(10/11/12/13/14, m); 3-氣-4-甲氧苯基丙胺酸(B) 4.83(2, m)，3.05(3, dd; 14.5與7.1), 5.65(2-：1^，£1;8.7)，3.14(3，（1(1;14.4與5.5)，7.21(5，（1;2‘4)， 3.86(7-〇(：113,8)，6.83(8，<1;8.3)，7.08(9,(1比8.3與2.2);3-胺 -79- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） - ί- -I- I- i·· 11^1 ^^^1 - I LI - - - - —1—[ _ ....... ' 一-ΰ4I _ - I - - -- n! (請先閲讀背面之注意事項再填苟本頁) 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 A7 4 b 8 9 7 2 __ B7 _ 五、發明説明（77 ) 基-2-甲基丙酸（C) 2.73(2, m), 1.23(2-Me，d; 7.2)，3.23(3, dt; 13.5與6.8)，3.56(3，<1(1(1;13.5,5.7與4.0)，6.85(3->^,(1(1;7.1 與6.2); 2-羥-4-甲基戍酸(D) 4.8(2, d; 4·6), 1.86-1.89(3, m)，〇.94(3-Me, d; 7.0), 1.20-1.26(4, m), 1.39-1.44(4, m), 0.77(5, d; 7.4)。NMR(CDC13)單位 d (碳位置）A 165.5(1)，125.2(2)， 141.5(3), 36.4(4), 77.7(5), 41.9(6), 17.1(6-Me), 129.8(7), 131.9(8), 136.8(9), 128.6(10/14), 126.2(1 1/13), 127.6(12); B 170.0(1), 53.5(2), 35.1(3), 129.9(4), 131.1(5), 122.4(6), 153.9(7), 56.1(7-OCH3), 112.2(8), 128.5(9); C 175.3(1), 38.6(2), 14.0(2-Me), 41.4(3); D 169.5(1), 76.6(2), 36.2(3), 15.5(3-Me), 24.2(4)，14.0(5)。克力托懷辛19 [a ]D+62.6。（MeOH，c 0.67); UV(MeOH) λ_( ε )204(44900), 230 (17000)，248(15600)，280(2500); IR (無溶劑）v職 3413， 3272, 2966, 1745, 1726, 1672, 1504, 1258, 1199, 1178, 1066, 692 cm.1。EIMS m/z(相對強度）624/626(3.0/1.4)，398/400 (58/21),280/282(15/5), 227(100)，195/197(57/22);高解析 EIMS m/z 624.2585 (C34H41C1N207之計算値，誤差 is mmu) 。屮NMR(CDC13):胺基或羥酸單位(碳位置，多重性；j 112)5-羥基-6-甲基-8-苯基-2,7-辛二烯酸（六)5.76(2，比15.2), 6.64(3, ddd; 15‘4, 9.1 與6.2)，2.38(4, m)，2.47(4, m), 5.04(5’ ddd; 7.1，5.1 與 1.8)，2.57(6, m), 1.15(6-Me, d; 6.9)，6.05(7, dd; 15.8與8.5), 6.43(8, d; 15.8)，7.29-7.35(10/11/13/ 14, m)， 7.23(12, m); 3-氣-4-甲氧苯基丙胺酸（B) 4.84(2, m)，5,67(2-NH， -80- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210><297公釐} ---------參------訂------'線 {諸先K讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製

經濟、邵中央標準局員工消費合作社印I “。6 9 7 2 A7 B7___ 五、發明説明（78 ) d; 8.9)，3.04(3, dd; 14.3與7.1)，3.14(3, dd; 14.3與5.3), 7.22(5, £1;2.0)，3.86(7-〇<：113,3)，6.83(8，18.2)，7.08(9，（1(!;8.2與 2.0); 3-胺基-2-甲基丙酸(C) 2.75(2, m)，1.23(2-Me，d; 7.1)， 3.19(3, m), 3.59(3, m)，6.80(3-NH，brt; 6.7); 2-羥基異戊酸 (D)4.73(2, d; 4.2), 2.09(3, m), 0.84(4, d; 6.9), 0.95(4', d； 6.9) 。13C NMR (CDC13):單位 (碳位置）A 165.5(1), 125.3(2), 141.3(3), 36.3 (4), 77.7(5), 42.0(6), 17.1(6-Me), 129.9(7), 131.9(8), 136.8 (9), 126.1(10/14), 128.6(1 1/13), 127.6(12)； B 171.0(1), 53.4 (2), 35.1(3), 130.0(4), 131.1(5), 122.4(6), 153.9(7), 56.1(7-OMe), 112.2(8), 128.5(9); C 175.1(1), 38.7(2), 13.9(2-Me), 41.5(3), D 169.6(1), 76.9(2), 29.8(3), 19.0(4), 16.7(3-Me) ° 克力托懷辛2 1 [^]d+40.2° (CHC13 c 0.72); UV Amax( ε )240(6700), 280 (2400)，288(2100); IR (無溶劑）Vmax 3403, 3279, 2957, 1731， 1673, 1503, 1464, 1409, 1372, 1258, 1174, 1065, 1023, 889 cm. 1。E1MS m/z(相對強度）640/642(10/4)，612(5)，478(1 5)， 398(40)，266(33)，227(76)，195(95)，155(100)，127(90);高解析 ETMS m/z 640.2550 (C34H41ClN208i計算値，誤差0.2 mmu) ;Ή NMR(CDC13):胺基或羥酸單位d (碳位置，多重性； J Hz) 7,8-環氧-5-羥基-6-甲基-8-苯基辛酸（A) 5.73(2, d; 15.4)，6.68(3, ddd; 15.0, 9.9與4.9), 2.45(4, m), 2.56(4, m), 5.19(5, ddd; 11.2, 5.1 與 1.5), 1.80(6, m), 1.14(6-Me, d; 7.1)， 2.92(7, dd; 7.5與2.0)，3.68(8, d; 1.8)，7.25(10/14, m), 7.33- -81 - 本紙張尺度通用中國國家榡準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） I. . *裝訂 . 線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 458972 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五 '發明説明（79 ) 7.38(11/ 12/13, m); 3-氣-4-甲氧苯基丙胺酸(B) 4.74(2, ddd; 8.2,6.8與6.2)，5.68(2-1^11，（1;8.6),2.98(3，（1山14.3與7.7)， 3.14(3，以；14.3與5.6)，7.21(5，（1;2.0)，3.86(7-〇]^，8),6.83 (8，（1;8.4)，7.07(9，（1(!;8.4與2.0);3-胺基丙酸（〇2_56(2,111)， 3.51(3, m)，3.45(3, m)，6.90(3-NH，br t; 5.8); 2-羥-4-甲基戊酸 (D) 4.89 (2, dd; 10.0與3‘3)，1.67(3, m)，1.31(3, m)，1.67(4， m)，0.84 (5, d; 6.4), 0.83(5'，d; 6.4);13C NMR(CDC13):單位 β ( 碳位置）A 165.5(1)，125.3(2)，141.0(3), 36.7(4)，75.9(5), 40.6(6), 13.5(6-Me)? 63.0(7), 59.0(8), 136.7(9), 125.6(10/14), 128.7 (1 1/13), 128.5(12); B 170.7(1), 53.9(2), 35.0(3), 1 29.8 (4), 130.9(5), 122.4(6), 1 53.9(7), 56.1(7-OMe), 112.2(8), 128.3(9); C 172.6(1), 32.4(2), 34.4(3), D 170.5(1), 71.2(2), 39.5(3), 24.4(4), 22.8(5)，21.2(51)。克力托懷辛2 3 [α]Ό+47° (MeOH, c 1.55); UV ε )240(4571), 282 (2174)，290(2177); IR (無溶劑）vmax 3284, 2960, 1747, 1724， 1653, 1540, 1490, 13 39, 1272, 1174 cm.1。EIMS m/z(相對強度）674/675/678(47/35/8)，432/434/436(1 1/5/2)，299/301/ 303(39/30/7)，227(64), 215/217/219(31/20/8)，141(100);高解析ElMSm/z 674.21643 (<：34Η4αΝ2082計算値，誤差-0.3 mmu); Ή NMR(CDC13):胺基或羥酸單位d (碳位置，多重性； J Hz) 7,8-環氧-5-羥基-6-曱基-8-苯基-2-辛烯酸（A) 5.77(2, d; 15.4), 6.65(3, ddd; 15.4, 9.3與6.0)，2.47 (4, dt; 14.2與 10.2)， 2.55(4, br dd; 14.2與5.6)，5.13(5, ddd; 11.0, 4.6與 1.6)，1.8] -82- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS } Λ4規格（21〇Χ297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -β 468972 A7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 B7 五、發明説明（80 ) (6，111)，1.15(6-1^，{1;6‘9)，2,93(7,4(1;7.6與2.0),3.7(8，（1;2.0)， 7,22.7.26(10/14, m)，7.32-7.39(11/12/13, m); 3,5-二氣-4-經苯基丙胺酸(B) 4.81(2, m), 5.69(2-NH, d; 8.6)，3.11(3, dd; 14.5 與5.6)，3.50(3，（1山14.3與7.0)，7.13(5/9,5)，5.78(7-〇11，3);3· 胺基-2-甲基丙酸(C) 2.73(2, m)，1.22(2-Me，d; 7.1)，3.19(3, dt; 13.4與6.9)，3.58(3，（1(1(1;13.6,5.8與4.1)，6.82(3->^，131^; 5.9); 2-經-4-甲基戊酸(D) 4.84(2, dd; 9.9與3.2)，1.38(3, m)， 1.68-1.75(3, m), 1.68-1.75(4, m), 0.86(4-Me, d; 6.7), 0,87(5, d; 6_7)。13C NMR (CDC13):單位 d (碳位置）A 165.4(1)，125.4 (2)，140.9(3)，36‘7 (4)，76.3(5)，40.6(6)，13.5(6-Me)，63.0(7)， 58.9(8), 136.7(9), 125.6(10/14), 128.7(1 1/13), 128.6(12); B 170.7(1), 53.3(2), 35.0(3), 130.3(4), 129.0(5/9), 121.0(6/8), 146.7(7); C 175,3 (1)，38.4(2)，13.9(2-Me), 41.5(3); D 170.8 (1)，71.3(2)，39.4 (3)，24.6(4)，21.3(4-Me), 22.9(5)。克力托懷辛2 4 [λ ]D+48.8〇 (CHC13，c 0.63); UV Amax( ε )228(19006), 242 (8249)，274(2351); IR (無溶劑）3400, 3284, 2959, 1732， 1678, 1652, 1514, 1248, 1 178 cm1。EIMS m/z(相對強度，指定）606(2, M+)，364(7)，161(55, 121(100, CH30-C6H4-CH2+)，91(68);高解析 EIMS m/z 606.2954 (C34H42N208t 計算値，誤差-1 .3 mmu); Ή NMR(CDC13):胺基或羥酸單位β (碳位置，多重性；J Hz) 7,8-環氧-5-羥基-6-曱基-8-苯基-2-辛烯酸（A) 5.70(2, dd; 15.2與 1.3)，6.70(3, ddd; 15.2, 10.3與4.7), 2.43(4, dt; 14.3與 10.9)，2.56(4, m), 5.20(5， -83 - 本紙張尺,复適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（21CIX 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) t

T A7 45 897 2 _B7_ 五、發明説明（81 ) ddd; 11.3, 5.1 與2.0)，1.79(6, m), 1.14(6-Me，d; 7.0), 2.92(7, dd; 7.5與2.0)，3.68(8, d; 2·0)，7.23-7.38(10/11/12/13/14, m); 〇-甲基酪胺酸(6)4.73(2,!!1)，5.58(2->^，（1;8.3),3.03(3，（1(1;14.5與 7.5) , 3.14(3, dd; 14.5與5.7)，7.11(5/9, d; 8.6), 6.81(6/8 d;

8.6) , 3.78(7-OMe, s); 3-胺基丙酸(C) 2.55(2-H2, m), 3.42(3， m)，3.53(3, m)，6.97(3-NH，br t; 5.7); 2-羥-4-甲基戊酸（D) 4.89(2, dd; 9‘9與3.5)，1.29(3, m)，1.62-1.70(3/4, m)，0.83(5, d; 5.9)，0.84(5_, d; 6.1); 13C NMR (CDC13):單位 Θ (碳位置）A 1 65.4(1), 125.3(2), 141.0(3), 36.7 (4), 75.9(5), 40.6(6), 13.4(6-Me), 63.0(7), 59.0(8), 136.7(9), 125.6(10/14), 128.7(11/13)，128.5(12); B 170.7或 170.6(1)，54.1(2), 35.2(3)， 128.5(4), 130.2(5/9), 1 14.1(6/8), 158.6(7), 55.2(7-OMe); C 172.8 (1)，32.5(2)，34.2(3); D 170.6或 170.7(1)，71.2(2)，39.5 (3)，24.4(4), 21.3(5) 22.8(5')。克力托懷辛26 [^]d+28.2〇 (CHC3, c 1.31); UV ε )254(1461 5), 284 (2949); TR (無溶劑）i;max 3299, 2960, 1732, 1644, 1504, 1258， 1209 cm.1。EIMS m/z(相對強度）656/658(0.5/0.1，M+)，638/ 640(1.7/1.0), 525/527(3.7/1.8), 412/414(10/4), 280/282 (12/11)，227(20)，195(48)，131(68);高解析EIMS m/z 65 6.283 6 (C35H45C1N208之計算値，誤差2.8 mmu), 638.2712 (C35H43ClN2〇7之計算値，誤差4.7 mmu); Ή NMR(CDC13):胺基或羥酸單位碳位置，多重性；J Hz) 3,5-二羥基-6-甲基-8-苯基-7-辛晞酸（A) 2.46(2, dd; 14.8與7.8), 2.58(2, dd; 14.8與 -84- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2丨〇X 297公釐） -----------.裝------訂------表 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印聚經濟部中央標準局員工消费合作社印裝 4 5 B 9 T 2 A7 B7__ 五、發明説明（82 ) 3.0) , 5.46(3, m), 1.86-1.90(4-H2, m), 3.61(5, m), 2.37(6, m), 1,14(6-1\^，£1;6.8)，6.06(7,(1£1;16與8.7)，6.47(8,£1;16)， 7.37(10/14, br d; 7.9), 7.32(11/13, br t; 7.6), 7.22-7.28(12, m); 3-氣-4-甲氧苯基丙胺酸(B) 4.73(2, br dt; 6.4與8.1)，6.14 (2-NH, d; 8.6)，2.84(3, dd; 14.4與8)，3.18(3, dd; 14.4與6.3)， 7.21(5, d; 2.2), 3.85(7-OMe, s), 6.82(8, d; 8.6), 7.08(9, dd; 8.6與2.2); 3-胺基-2-甲基丙酸(C) 2.87(2, m), 1.19(2-Me, d; 7.0) ，3.01(3, ddd; 13.4, 10.6與4.9), 3,73(3, ddd; 13.4, 8.2與 4.7)，6.72(3-1^11，心（!山7.3與5.2);2-羥-4-甲基戊酸(0)4.95(2, dd; 9.7與4.2)，1.62-1.72(3, m), 1.79-1.84(3, m), 1.62-1.72(4， m)，0.90(4-Me，d; 6.4)，0,95(5, d; 6.4)。13C NMR (CDC13):單位 ci (碳位置）A 170.0(1), 41.5(2)，71.4(3), 37_3 (4)，71.9或71.8 (5), 43.6(6), 16.6(6-Me), 130.8(7), 132.5(8), 136.8(9), 126.2 (10/14), 128.6(1 1/13), 127.6(12); B 170.9(1), 53.2(2), 34.7(3), 130.3(4), 131.1(5), 122.2(6), 153.8(7), 56.1(7-〇Me) , 112.2(8), 128.5(9); C 174.3(1), 40.1(2), 14.4(2-Me), 42.5 (3); D 170.7(1), 71.8或71.9(2)，38.9(3), 24.6(4)，21.6(4-Me), 22.9(5)。克力托懷辛2 8

[a ]D+65,6° (MeOH，c 0.93); UV(MeOH) Amax( ε )204(48000), 23 0(19300), 248(1 8700)，280(3400); IR (無溶劑）vmax 3413， 3270, 2958, 1745, 1726, 1665, 1504, 1258, 1 197, 1 175, 1066, 694 cnr1。E1MS m/z(相對強度）624/626(3.0/1/3), 412/414 (70/24), 280/282(13/6), 213(100), 195/1 97(85/40);EIMS m/z 624.2626 ((：34Η4ιαΝ2072計算値，誤差-2.4 mmu); Ή NMR -85- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210 X 297公釐） ---------裝------訂-------線 (請先閱讀背面之泣意事項存填寫本莧) A7 4 5 B97 2 _B7 五、發明説明（83 ) (CDC13):胺基或羥酸單位β (碳位置，多重性；j Hz) 5-種基_ 8-苯基-2,7-辛二烯酸（A) 5.78(2, d; 15.6)，6.71(3, ddd; 15.6， 9.9#5.4), 2.40 (4, m), 2.53(4, m), 5.17(5, m), 2.53(6-H2, br t; 6.7) , 6.07(7, dt; 15.8與7.4)，6.44(8, d; 15.8)，7.27-7,38(10/11/13/ 14, m)，7.22(12, m); 3-氣-4-甲氧苯基丙胺酸(B) 4.82(2, m)， 5.72(2-1^，（1;8.5)，3.04(3,(1(1;14.5與7.2)，3.14(3，（1£1;14.5 與5‘4)，7.22(5, d; 2_0)，3.87(7-OMe，s), 6.84(8, d; 8_5)，7.08 (9,〇^;8.5與2.0);；3-胺基-2-甲基丙酸((：）2.72(2，:《1)，1.21(2-Me，d; 7.2)，3.29(3, dt; 13.5與7.0)，3.49(3, ddd; 13.5, 4.9與 3.8) ，6.97(3-NH, br t; 5.9); 2-羥-4-甲基戊酸(D) 4.82(2, m)， 1.40(3, tn), 1.62(3, m), 1.62(4, m), 0.76(4-Me, d; 6.3), 0.74(5, d; 6.3); 13C NMR (CDC13)單位 β (碳位置）A 16 5.4(1), 125.2(2)， 141.2(3), 38.5 (4), 73.5(5), 38.6(6), 124.1(7), 133.8(8), 136.7(9), 126.1(10/14), 128.6(1 1/13), 127.6(12); B 170.9(1), 53.6(2), 35.1(3), 129.8(4), 131.0(5), 122.4(6), 154.0(7), 56.1 (7-OMe), 112.3(8), 128.4(9); C 175.6(1), 38.3(2), 14.0(2-Me), 41.2(3), D 170.9(1), 71.6(2), 39.6(3), 24.5(4), 21.5(4-Me), 22.6(5) ° 克力托懷辛2 9 [a]D+22.2〇 (CHC13, c 1.13); UV Amax( ε )250(17000), 284 (3 3 00); IR (無溶劑）ι/隊 341 5, 3 272, 2960, 1744, 1734, 1674， 1504, 1259, 1197, 1174 1067, 694 cm·1。EIMS m/z(相對強度） 624/66(2.6/1.1), 398/400(44/15), 227(100), 195/197(50/16), 155/157(59/20), 131(63)，91(95);高解析 EIMS m/z 624.2607 -86- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ----------裝------訂-------级 (諳先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 Α7 Β7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明（84 ) (C34H41C1N207之計算値，誤差·0·5 mmu); ΉΝΜΚ(εΌα3)胺基或羥酸單位β (碳位置，多重性；J Hz) 5-羥基-6-甲基-8-苯基-2,7-辛二烯酸（A) 5.75(2, dd; 15.3 與 1.1), 6.69(3, ddd; 15.3, 10.1 與5_3)，2.36(4, m)，2.54(4, m)，5.03(5, ddd; 11.0， 6.4與1.8)，2.56(6，111)，1.14(6-\^，巾6.8)，6.01(7，£1<1;15.8與 8.8), 6.41(8, d; 15.8), 7.28-7.33(10/11/13/14, m), 7.22(12, m); 3-氣-4-甲氧苯基丙胺酸（B) 4.76(2, m), 5·67(2-ΝΗ, d; 8.6)， 3‘0(3，（1(1;14.4與10.2)，3.14(3，（1<1;14.4與5.9)，7.22(5，（!；2.2)， 3.87(7-〇^^，3)，6.83(8，山8.4),7.08(9,£1(1;8.4與2.2);3-胺基丙酸（C) 2.55(2-H2, m), 3.44(3, m), 3.55(3, m)，6.89(3-NH, br 1;5.7);2-羥-4-甲基戊酸(〇)4.90(2，（!(1;9‘9與3.5)，1.34(3，（1£1巾 15.4，10.3與3.5)，1.63(3，111)，1.63(4，111)，0.76(4-1^，0;6.4)， 0.72(5, d; 6.4)。13C NMR (CDC13)單位在（碳位置）A 165.6(1)， 125.2(2), 141.5(3), 36.4 (4), 77.1(5), 42.3(6), 17.3(6-Me), 130.1(7), 131.8(8), 136.7(9), 126.2(10/14), 128.6(1 1/13), 127.6(12); B 170.9(1), 53.8(2), 34.9(3), 129.9(4), 131.0(5), 122.4(6), 153.9(7), 56.1(7-〇Me), 112.2(8), 128.4(9); C 172.6(1), 32.4(2), 34.5(3); D 170.4(1), 71.5(2), 39.7(3), 24.4(4)，21.2(4-Me), 22.6(5)。克力托懷辛3 0 [^]d-12.3° (CHC13, c 1.53); UV Amax( ε )254(17200), 284 (3600); IR (無溶劑）3414, 3306, 2961，1738, 1660, 1504， 125 8, 1205, 1183,1066, 695 cm-1。EIMS m/z(相對強度） 656/658(1.0/0.3), 638/640(3.0/1.0), 525/527(3.8/1.3), 412/ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

^^^^1 n^i ^^^^1 ^^^^1 ^^^^1 I - 1 .....^^^^1 ^^^^1 —kft— 一aJ β -87- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 458972 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 _ B7__五、發明说明（85 ) 414(10.5/3.6), 280/282(10.3/3.8), 227(29), 195/197(48/17), 1 55/157(74/21)，131(100);高解析 EIMS m/z 656.2852 (C35H45C1N20S之計算値，誤差 1‘3 mmu); Ή NMR(CDC13):胺基或羥酸單位β (碳位置，多重性；J Hz) 3,5-二羥基-6-甲基-8-苯基-7-辛烯酸(A) 2.25(2, dd; 16.0與9.6), 2.64(2, brd; 16.0)， 3.89(3, m)，2.51(3-OH，d; 6.4)，1.77(4, ddd; 14.3, 9.8與2.1)， 1.88(4，（^£1;14.3，11.3與3.8)，4‘88(5，（1(1(1;11.3,6.2與2.1)， 2.53(6, m)，1.10(6-Me，d; 6.8)，5.99(7, dd; 15.9與9.0)，6.40 (8, d; 15.9)，7.28-7.33(10/11/13/14, m)，7.23(12, m); 3-氣-4· 甲氧苯基丙胺酸(B) 4.60(2, m)，6‘61(2-NH, d; 8.1)，3.09(3, dd; 14.2與5.6)，3.15(3，（1(1;14.2與7.3)，7.22(5,4;2.1)，3.86(7-OMe, s), 6.83(8, d; 8.3)，7.07(9, dd; 8.3與2.1); 3-胺基-2-甲基丙酸(C) 2.67(2, m)，1.21(2-Me，d; 7.3)，3.26(3, ddd; 13.6, 7·3 與6.4),3.63(3，€1(1山13‘6,6.2與3.9)，6.75(3-；^11，151^;6.3);2-羥-4-甲基戊酸(D) 4.83(2, dd; 9.6, 4.1)，1.42(3, m)，1.64(3, m)， 1.64(4, m), 0.79(4-Me, d; 6.4), 0.76(5, d; 6.4);13C NMR (CDC13)單位 π (碳位置）A 171.6(1)，42.4(2)，66.0(3)，41.3(4)， 76.0(5), 42.0(6), 17.3(6-Me), 130.0(7), 131.9(8), 136.7(9), 126.1(10/14), 128.6(11/13), 127.6(12); B 170.8(1), 54.3(2), 35.1(3), 130.1(4), 131.1(5), 122.2(6), 153.8(7), 56.1(7-OMe), 112.1(8), 128.7(9); C 175.6(1), 39.7(2), 13.8(2-Me), 41.5 (3), D 171.9(1)，72.1(2), 38.1(3)，24.6(4)，21.4(4-Me)，22.7(5)。克力托懷辛3 1 [^]D+50.6o (MeOH, c 1.13); UV Amax( ε )242(3 800), 284 1 . -I —-i 111— I v^ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本f ) 訂 -88- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（21〇x 297公釐） 4 5 8 9 7 2 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7_五 '發明説明（86 ) (700); IR (無溶劑）t/max 3412, 3272, 2961，1745, 1725, 1678， 1537, 1481，1270, 1196, 1176, 1000, 698 cm1; EIMS m/z(相對強度)688/690/691 (1.2Λ.0/0.4), 446/448/450(7.9/6.7/3.1)， 314/316/318(17/11/3)，91 (100);高解析 EIMS m/z 688.2336 (C35H42C12N208之計算値，誤差-1 .8 mmu); Ή NMR(CDCi3) 胺基或羥酸單位J (碳位置，多重性；J Hz) 7,8-環氧-5-羥基-6-甲基-8-苯基-2-辛烯酸（A) 5.78(2, d; 15.5)，6.66(3, ddd; 15.5, 9.4與6.0), 2.47 (4, ddd; 14.1，10.8與9.4)，2.56(4, m), 5.14(5, ddd; 10.8, 4.7與 1.7)，1.82(6, m), 1.15(6-Me, d; 7.1), 2.93(7, dd; 7.5與 1.9)，3.70(8, d; 1.9)，7.24-7.26(10/14, m), 7.34-7.39(11/12/13, m); 3,5-二氯-4-甲氧苯基丙胺酸(B) 4.83(2, 1«)，5.68(2->411,山9.0)，3.0(3，£111;14.4與7.3)，3.14(3，（1(1; 14.4與5.6)，7.16(5/9,8)，3.87(7-01^^，3);3-胺基-2-甲基丙酸 (C) 2.74(2, m), 1.22(2-Me, d; 7.1), 3.20(3, m), 3.58(3, ddd; 13.5,5.6與4.1)，6.82(3-1'^，111^;5.6);2-羥-4-甲基戍酸(〇) 4.83(2, m), 1.38(3, m), 1.72(3, m), 1.72(4, m), 0.87(4-Me, d; 6.8)，0.86(5, d; 6.8); NMR (CDC13):單位 Θ (碳位置)A 165.4(1), 125.4(2), 141.0(3), 36.7 (4), 76.3(5), 40.6(6), 13.5(6-Me), 63.0(7), 58.9(8), 136.7(9), 125.6(10/14), 128.7 (11/13), 128.6(12); B 1 70.8(1), 53.3(2), 35.2(3), 129.3(4), 129.6(5/9), 134.5(6/8), 151.2(7), 60.6(7-OMe); C 175.3(1), 38.3(2), 13.9(2-CH3), 41.5(3), D 170.6(1), 71.3 (2), 39.4 (3), 24.6(4)，22.9(4-Me), 21‘3(5)。克力托懷辛40 I^訂 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -89- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2]0X297公釐） 458972 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明（87 ) [a]O+4\.6〇 (CHC13, c 0.31); UV Amax( ε )242(4974),266 (391 1), 274 (3666), 286(2359)，328(511); IR (無溶劑）Vmax 3415, 2959, 1748, 1723, 1667, 1505, 1463, 1289, 1176 cm1 〇 EIMS m/z(相對強度）640/642(5/2), 280/282(7/3)，213(13)， 195/197 51/17), 1 55(29), 141(32), 121(28), 91(100), 69(47); 高解析耵1^8〇1/2 640.2570 ((：341141(：11^208之計算値，誤差-1 ·8 mmu) ; Ή NMR(CDC13):胺基或羥酸單位_ θ，（碳位置，多重性；J Hz) 7,8-環氧-5-羥基-8-苯基-2-辛烯酸（A) 5.77(2, d; 15.1)，6.72(3，£1£1(1;15.1，9.7與4.9)，2.42(4，111)，2.58(4，111)， 5.33(5, m)，1.89(6, ddd; 12.9, 8.1 與5.0)，2.13(6, ddd; 12.9， 9.3與5.0),2.98(7，（1(^6.7,4‘5與1.9)，3.64(8，11.9)，7.31-7.39(10/11/13/14, m)，7.22(12. m); 3-氣-4-甲氧苯基丙胺酸(B) 4.83(2, m)，5.64 (2-NH，d; 8.6), 3.03(3, dd; 14.3與7.5), 3.14 (3，（1山14.3與5.4),7.21(5，（1;2.0)，3.87(7-〇]^^，3)，6.84(8，（1; 8.3)，7.08(9, dd; 8.3與2.0); 3-胺基-2-甲基丙酸(C) 2.72(2, m)， 1.23(2-1\^，（1;7.3),3.31(3，£^;13.8與6.9)，3.50((1(1(1;13.6， 5.7與3.9), 6.96 (3-NH，br t; 6.0); 2-羥-4-甲基戊酸(D) 4.85(2， dd; 6.7, 3.4), 1.42(3, m), 1.72(3, m), 1.72(4, m), 0.86(4-Me, d, 3,7)，0.87 (5, d; 3.7)。13C NMR (CDC13):單位 ί (碳位置）A 165.3(1)，125.2(2)，140.9(3)，39.0(4)，72.0(5), 37.3(6)，59.0 (7), 58.7 (8), 140.9(9), 125.6(10/14), 128.7(1 1/13), 128.5(12); B 170.9 (1), 53.6(2), 35.1(3), 129.8(4), 1 3 1.0(5), 122.5(6), 157.0(7), 56,l(7-OMe), 112.3(8), 128.4(9); C 175.6(1), 38.3 (2), 14.1(2-Me), 41.1 (3); D 170.9(1), 71.4(2), 39.4(3), 24.5 -90* 本紙浪尺度適用中國國家榡準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1 - 、VLe d6 897 2 A7 B7 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製五、發明説明（88 ) (4)，21.5(4-Me)，22.8(5)。克力托懷辛4 3 [a]D+20〇 (CHC13, c 0‘2); UV Amax( ε )250(20512), 282 (4083)，294(1734); IR (無溶劑）v眶 3400, 3272, 2927, 1727， 1660, 1516, 1455, 1242, 1175 cm1, EIMS m/z(相對強度） 533(24), 484(3), 445(14), 398(9), 364(29), 227(59), 149(67), 91(100);高解析EIMS m/z 590.3044 (C34H41N207之計算値，誤差-5.2 mmu); Ή NMR(CDC13):胺基或羥酸單位(碳位置，多重性；J Hz) 5-羥基-6-甲基-8-苯基-2,7-辛二烯酸（A) 5.75(2, d; 15.3)，6.69(3, ddd; 15.3, 9.9與5.3)，2.37 (4, dt; 14.2與 10.4)，2.52(4, m), 5.01(5, ddd，11.2, 6.4與 1.8)，2.55(6, m)，1.13(6-Me, d; 6.9)，6.01(7, dd; 15.8與8.9)，6.41(8, d; 15.8)， 7.21-7.34(10/11/12/13/14, m); 4-曱氧苯基丙胺酸(B) 4.80(2, m)， 5.64(2->^，山8.4),3.06(3，£1山14‘5與7.2)，3‘13(3，£1(1;14.4 與5.3)，7.06(5/9, d; 8.4)，6.74(6/8, d; 8.4); 3-胺基-2-甲基丙酸 (C) 2.69(2, m), 1.22(2-Me, d; 7.3), 3.33(3, m), 3.44(4, dt; 14.0與4.7)，7.0(3-NH, m); 2-羥-4-甲基戊酸(D) 4.84(2, dd; 10.0與3.6)，1.60-1.67(3，m), 1.35(3，m)，1.60-1.67(4, m), 0.76(5, d; 6.4), 0.73(5’，d; 6.7); 13C NMR (CDC13)單位 (碳位置）八125.2(2)，141.5(3)，36.5(4)，77.5(5),42.3(6)，17.3(6_

Me), 130.1(7), 131.8(8), 136.8(9), 126.2(10/14), 128.6 (11/13), 127.6(12); B 53.8(2), 35.3(3), 129.8(4), 130.5(5/9), 115.6(6/8), 154.6(7); C 38.3(2), 14.1(2-Me), 41.0(3)； D 71.6 (2)，39.6(3)，24,5(4)，21.2(5)，22.9(5〇。由於樣本量少，因 -91 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2丨0 X 297公釐） —^n tf—K fl^i t—· V V -¾ T 口 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 458972 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（89 ) 此無法看到羰基之碳訊號。克力fe懷辛4 5 [«]d+72.0〇 (MeOH, c 0.122); UV Amax( ε )250(25500), 284(5300); IR (無溶劑）Vmax 3407, 3239, 2958, 1743, 1727， 1667, 1538, 1469, 1242, 1 196, 1177, 694, cm1; EIMS m/z(相對強度）658/660/662(2.1/1.4/0.3)，483(7.6) 432/434/436(9.5/6.4/1.8)， 300/302/304(8.0/5.5/1.2)，227(100) 91(87);高解析 EIMS m/z 658.2207 (C34H40Cl2N2O7之計算値，誤差0,6 mmu); ΉΝΜΙΙ (CDC13):胺基或羥酸單位β (碳位置，多重性；J Hz) 5-羥基-6-甲基-8-苯基-2,7-辛二烯酸（A) 5.80(2, d; 14.7)，6.66(3, ddd; 14.7, 8.5與5.5)，2.38(4, m)，2.53(4, m), 4.97(5, br dd; 10.4與 6.2) ，2.57(6, m)，1.14(6-Me，d; 6.7)，6.01(7, dd; 15.9與8.7)， 6.42(8, d; 15.9), 7.28-7.34(10/11/13/14, m), 7.22(12; m); 3,5-二氣-4·羥苯基丙胺酸(B) 4.82(2, m)，5.73(2-NH, br d; 8.7)， 3.02(3, dd; 14.3與6.2), 3.10(3, dd; 14.3與5.2)，7.14(5/9, s)， 5.79(7-OH，s); 3-胺基-2-甲基丙酸（C) 2.73(2, m)，1.21(2-Me， d; 7.0)，3.17(3, m)，3.60(3, m)，6.81(3-NH，br t; 6,7); 2-羥-4-甲基戊酸(D) 4.84(2, dd; 10.0與3.2)，1.38(3, ddd; 14.9, 10.2與 3.2) , 1.65(3, m), 1.65(4, m), 0.78(4-Me, d; 6.5), 0.73(5, d; 6.5); i3C NMR (CDC13)單位 d (碳位置）A 165.5(1), 12 5.4(2)， 141.2(3), 36.4 (4), 77.6(5), 42.3(6), 17.3(6-Me), 130.0(7), 131.9(8), 1 36.7 (9), 126.2(10/14), 128.6(1 1/13), 127.6(12); B 171.0(1), 53.2 (2), 35.0(3), 130.4(4), 129.1(5/9), 121.0(6/8), 146.7(7); C 175.2 (1), 38.5(2), 13.9(2-Me), 41.6(3); D 170.7 -92- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 丁 α 6 8 9 7 2 Α7 經濟部中央標準局員工消費合作社印11 Β7五、發明説明（90 ) (1)，71.5(2)，39.5 (3)，24.6(4)，22.7(4-Me)，21.2(5)。克力托懷辛4 9 [«r]D+68.1° (MeOH, c 0.075); UV Amax( ε )246(25500), 284 (5200); IR (無溶劑）vmax 3401，3282, 2962, 1744, 1728, 1668， 1540, 1505, 1464, 1258, 1198, 1177, 1066, 694 cm1; EIMS m/z( 相對強度）624/626(0.8/0.3), 398/400(43/14)，227(78), 195/197(58/26) 91(100);高解析 EIMS m/z 624.2650 (C34H41C1N207之計算値，誤差-4.8 mmu); ONMI^CDCh): 胺基或羥酸單位cJ (碳位置，多重性；J Hz) 5-羥基-6-甲基-8-苯基-2,7-辛二烯酸（A) 5.77(2, d; 14.1), 6.67(3, m)，2.38(4, m), 2.50(4, m), 5.01(5, m), 2.56(6, m), 1.13(6-Me, 6; 6.5), 6.03(7, dd; 15.8與8.6)，6.42(8, d; 15.8)，7.29-7.35(10/11/13/14, m)，7.23(12; m); 3-氣-4-曱氧苯基丙胺酸(B) 4.82(2, m), 5.64 (2-NH, m), 3.06(3, m), 3.13(3; m), 7.22(5, m), 3.76(7-OMe, s), 6.83(8, m)，7_08(9, m); 3-胺基-2-甲基丙酸（C) 2.72(2, m), 1.22(2-Me, d; 6.7), 3.26(3, m), 3.53(3, m), 6.90(3-NH, m); 2-羥基戊酸(D) 4.81(2, dd; 8.8與3.9), 1.63(3, m)，1.68(3, m), 1.33(4-H2, m)，0.74(5, t; 7.3)。克力托懷辛5 0 [λ ]D+32.0° (CHC13 c. 0.44); UV Amax( ε )242(4933), 262 (3996), 274(3719)，286(2430)，332(359); IR (無溶劑）vmax 3412, 3274, 2958, 1752, 1724, 1676, 1648, 1503, 1465, 1258, 1 1 1 7, 1066, 753; ETMS m/z(相對強度）640/642(4/2)，398/400 (1 1/4), 280/282(10/3), 227(17), 195/197(57/18), 157(20), (讀先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) -93- 本紙張尺度適用中國國家標率（CNS ) A4現格（210X297公釐）經濟部中央標準局員工消費合作社印製 4 b B 9 T 2 a7 B7五、發明説明（91 ) 141(31)，91(100);高解析 EIMS m/z 640.2531 (C34H41C1N2〇8 之計算値，誤差2.1 mmu); Ή NMR(CDC13):胺基或經酸單位_ (碳位置，多重性；J Hz) 7,8-環氧-5-羥基-6-甲基-8-苯基辛酸（八）5.73(2，（1;15_7)，6_67(3，（1(1山15.7,9.7與5.4)，2.45 (4, m)，2.55(4, m), 5Λ3(5, ddd; 11.2, 5.0與 1.7)，1.78(6, m)， 1.15(6-Me，d, 6.9)，2.91(7, dd; 7_5與 1_9)，3.68(8, d; 1.7)， 7.25(10/14, m)，7.33-7.38(1 1/12/13, m); 3-氣-4-甲氧苯基丙胺酸（B) 4.80(2, ddd; 8.3, 7.1 與5,4)，5·61(2-ΝΗ，d; 8.3), 3.03 (3, dd; 14.4與7.3)，3.13(3, dd; 14.4與5.6), 7.21(5, d; 1.9)，3.87 (7-〇1^，3)，6.83(8，（1;8.4)，7.07(9,£1(1;8.4與2.2);3-胺基-2-甲基丙酸(C) 2.71(2, m), 1.22(2-Me, d; 7.3)，3.29(3, dt; 13.6 與6.9)，3.49(3，<1如；13.6,6.7與5.0)，6.92(3-1\^，心1;6.7);2-羥基戊酸(D) 4.75(2, dd; 9.2與3.7)，1.55(3, m)，1.65(3, m)， 1.33(4-H2, m), 0.84(5, t; 7.3); 13CNMR(CDC13)單位 cM直(碳位置)A 165.3(1)，125.3(2)，141.0(3)，36.9(4)，76.3(5)，40.8(6)， 13.6(6-Me)，63.2(7)，59.1(8)，136.8(9)，125.5 (10/14)，128.7 (11/13), 128.5(12); B 170.9(1), 53.6(2), 35.1 (3), 129.8(4), 131.0(5), 122.5(6), 154.0(7), 56.1(7-OMe), 112.3(8), 128.5 (9); C 175.6 (1), 38.4(2), 14.1(2-Me), 41.2 (3); D 170.4(1), 72.4(2)，32.7 (3)，18.4(4)，13.5(5)。克力托懷辛5 4 EIMS m/z(相對強度）654/656(17/10)，493(5)，411/413 (12/4), 280(16), 227(25), 195/197(45/25), 141(30), 91(100)；高解析£1河8 111/2 654,2686 ((：35只43(：1]^208之計算値，誤差2.2 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 έ/··' -94 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐）經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（92 ) mmu); Ή NMR(CDC13):胺基或羥酸單位(碳位置，多重性； J Hz) 5-羥基-6-甲基-7 -氧-8-苯基-2-辛烯酸（A) 5,73(2, d; 15.4), 6.66(3, ddd; 15.4, 9.7, 5.7), 2.46(4, m), 2.53(4, m), 5.16(5, ddd; 11.〇, 4.2, 1.7), 1.79(6, m), 1.14(6-Me, d; 6.8), 2.89(7, dd; 7.4, 1.8), 3.69(8, d; 1.9), 7.25(10/14, m), 7.30-7.38(11/12/13, m); (B) 4.81(2, m), 5.63(2-NH, d； 8.6), 3.03(3, dd; 14.5, 7.3), 3.13(3, dd; 14.5, 5.5), 7.21(5, d; 2.2), 3.87(7-OMe, s), 6.83(8, d; 8.4), 7.07(9, dd; 8.4, 2.2); (C) 2.73(2, m), 1.22(2-Me, d; 7.3), 3.26(3, ddd; 13.4, 6.8, 6.8), 3.51(3, ddd; 13.4, 6.8, 5.3), 6.88(3-NH, br t; 6.8); (D) 4.73 (2, d; 4.2), 1.78-1.82(3, m), 0.92(3-Me, d; 6.8), 1.36-1.41(4, m), 1.18-1.20(4, m), 0.80(5, t; 7.5); 13C (CDC13):單位 (碳位置）A 165.3 (1), 125.4(2), 141.0(3), 36.6(4), 76.3(5), 40.6(6), 13.2(6-Me), 63.1(7), 58.7(8), 136.7(9), 125.4(10/14), 128.6 (11/13), 128.5 (12); B 170.9(1), 53.5(2), 35.0(3), 129.8(4), 131.0(5), 125.3(6), 153.9(7), 56.1(7-OMe), 112.2(8), 128.4(9); C 175.4(1), 38.5(2), 14.0(2-Me), 41.3(3); D 169.4(1), 76.5(2), 36.1(3), 15.6(3-Me), 24.0(4), 11.2(5) ° 實例6 克力托懷辛衍生物之合成法克力托懷辛8 添加9微升IN HC1至含3.8毫克克力托懷辛1之1.5毫升2:1 1,2-二甲氧乙烷/水之溶液中。使溶液於室溫下攪拌4小時，以碳酸鉀中和，及蒸發。殘質分佈在水與CH2C12之間。 CH2C12可溶物經逆相HPLC純化，得到3.3毫克純克力托懷辛 -95- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先間讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 β 9 / 2 A7 B7 五、發明説明（93 ) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 EIMS m/z(相對強度）690/692/694(0.8/0.5/0.2)。高解析 EIMS m/z 690.2533 (C35H44Cl2N208i計算値，誤差-5.8 mmu) 。Ή NMR(CDCL3):胺基或羥酸單位β (碳位置，多重性；J Hz) 8-氣·5,7-二羥基-6 -甲基-8-苯基-2-辛烯酸（Α) 5.79(2, d; 15.4)，6.69(3, ddd; 15.4, 9.6與5.6), 2.68(4, ddt; 14.0, 5.5與 1.8)，2.38(4, m)，5.11(5, ddd; 10.8, 8.6與 1.8)，2.51(6, m)， 1.05(6-Me, d; 7.0),4.01(7, dd; 9.6與 1‘9)，4.65(8, d; 9.6)， 7.36-7.41(10/11/12/13/14, m); 2-羥-4-甲基戊酸(D) 4.92(2, dd; 10.1 與3.5)，1.76(3/4, m)，1.45(3, m), 0.94(5, d; 6.6)，0.94(5'， d; 6.4); 3-胺基-2-甲基丙酸（C) 2.73(2, m), 1.22(2-Me，d; 7.2)， 3.25(3, ddd; 13_6, 6_8與6.1)，3.54(3, ddd; 13.5, 6.1 與3.4)， 6.91(3-NH，brt; 6. 1); 3-氣-4-甲氧苯基丙胺酸(B) 4.82(2, ddd; 8.2,7.2與5.6),5.64(2-1^11，（1;8.8)，3.03(3，（1(1;15.4與7.2)， 3.16(3，dd;15.^5.6)，7.23(5，d;2.2)，3.88(7-OCH3，s)，6.85 (8, d; 8_5)，7.09(9, dd; 8.5與2.2)。克力托懷辛9 添加10微升HC1之甲醇溶液（由25毫升MeOH處理1.25克亞硫醯氣製得）至含10毫克克力托懷辛1之1毫升無水曱醇溶液中。攪拌4小時後，眞空蒸發溶劑，樣本留在眞空下12小時。經逆相HPLC，產生8毫克純克力托懷辛9。 Ή NMR(CDC13):胺基或羥酸單位（？（碳位置，多重性；j Hz) 5,7-二羥基-8-甲氧基-6-甲基-8-苯基-2-辛烯酸（A) 5.76(2, d; 15.5)，6.67(3, ddd 15.4, 9.5與5.6)，2.34(4, ddd; 14.1，11.1 -96- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210Χ297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁} l· -φ. 經濟部中央標準局員工消費合作社印製。的72 Λ7 B7 五、發明説明（94 ) 與9.5)，2,62(4, dddd; 14.1，5.6, 1.8與 1.5)，5.09(5, ddd; 11.1， 7.8與1.8),2.24(6，（1(1(1;7.8,7.0與2,2)，1.03(6-]\^，（1;7.0)， 3.71(7, dd; 8.3與2.2)，4.03(8，山8.3)，3‘20(8-〇(：113,5),7,31-7.40(10/11/12/13/14, m); 2-羥-4-甲基戊酸(D) 4.86(2, dd; 9.8 與3.5)，1.71(3/4, m)，1.41(3, m)，0.89(5/5，，d; 6.4); 3-胺基-2-甲基丙基（<：)2.71(2，（1(^;6.8,3.9與7.2),1.21(2-^^，（1;7.2)， 3.23(3, ddd; 13.5, 6.8與6.0), 3.52(3, ddd; 13.5, 6.0與3.9), 6.90(3-NH, brt; 6.0); 3-氣-4·甲氧苯基丙胺酸（B) 4.82 (2, ddd; 8.8,7.4與5.7)，5.66(2-1^11，山8.8)，3.02(3，<1(1;14.4,7.4), 3.15(3，<1(1;14.4與5.5)，7.23(5，（1;2.2)，3.87(7-0(：113,8)，6.84 (8, d; 8.5)，7.08(9, dd; 8.5與2.2)。克力托懷辛1 0 添加8微升2N NaOH至含7毫克克力托懷辛9之1毫升丙酮與0.3毫升水攪拌溶液中。攪拌4小時後，以IN HCI中和溶液至pH 7。減壓排除溶劑。殘質經逆相HPLC，使用7:3 MeOH/H20溶離，產生純克力托懷辛10(5毫克）。 Ή NMR(CD3OD):胺基或羥酸單位ci (碳位置，多重性；j Hz) 5,7-二經基-8-甲氧基-6-甲基-8-苯基-2-辛烯酸（A) 5.99(2， dt; 15,4與 1.3)，6,82(3, dt，； 15.4與7.3)，2.30(4, m)，2,50(4, m)， 3.66(5,1巾7.8與3.5)，2.05(6，£1?611161;1.8與7.0)，0.96(6-：\16, d; 7.0)，4,04(7, dd; 8.8與2.0)，4.01(8, d; 8.8)，3.12(8-〇CH3， s)，7.26-7.36(10/11/12/13/14, m); 3-胺基-2-甲基丙基 2.50(2,〇1),1.02(2-^^,(1;7.3)，3.16(3,(1€1;13.4與6.9)，3.82(3, 如；13.4與6‘6);3-氣-4-甲氧苯基丙胺酸（3)4.57(2，£1(1;8.5與 -97- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4現格（210Χ 2们公釐） —.--------私-- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T OB97 2 經濟部中央標準局員工消費合作社印策 A7 B7 五、發明説明（95 ) 6.5) ，2.82(3, dd; 13.9與8‘6)，3.03(3, dd; 13‘9與6.5)，7.25(5, d; 2.2)，3.82(7-0(：133,3)，6.96(8，£1;8.6)，7,13(9,(|(1;8.6與2.2) 0 13C NMR(CD3〇D): δ 179.5, 173.4, 168.2, 1 55.4, 143.7, 141.7, 131.9, 131.7, 129.8, 129.3(2C), 129.2(2C), 128.8, 126.2, 123.2, 113.4, 85.9, 74.5, 74.1, 56.8, 56.6, 56.3, 43.3, 41.2, 40.2, 38.8, 38.0, 15.5, 9.9 ° 克力托懷辛12 添加15微升2N NaOH至含5毫克克力托懷辛1、5或8之1毫升4:1丙酮/水溶液中。於室溫下攪拌5小時後，以in HC1中和反應混合物至pH 7，並蒸發。使CH2C12可溶物通過小型矽石卡管，以 CH2C12、1:1 EtOAc/CH2Cl2&EtOAc溶離。以 EtOAc溶出之溶離份含有純克力托懷辛〗2。 ΉΝΜΙΙ(€0300):胺基或羥酸單位（？（碳位置，多重性；j Hz) 5,7,8-三羥基-6-甲基-8-苯基-2-辛烯酸（A) 6.07(A) (2, ddd; 15.5, 1.3與 1‘2)，6.40(3, dt; 15.5與7.3)，2.49(4, m), 2.60(4, m), 3.92(5，（1(1(1;9.3,6.7與4.5)，1.94(6，111)，1.07(6-皿6，（1;6.6), 3.61(7, dd; 8.9與7.6)，4.56(8, d; 7.6)，7.36(10/14, dd; 7.4與 1.5) ，7.32(11/13, brt; 7.5)，7.25(12, m); 3-胺基-2-甲基丙酸（〇 2.54(2，<1€^;7.0,6.6與7.0)，1,02(2-1\^，4 7.0)，3.14 3，（1€1; 13.5與7,0), 3.42(3, dd; 13.4與6.6); 3-氯-4-甲氧苯基丙胺酸 (B) 4.57 (2, dd; 8.4與6.7)，2,83(3, dd; 13.8與8.4)，3.02 (3, dd; 13.8與6.6)，7.25(5，£1;2-1)，3.82(7-0(：113,8)，6.95(8，（1;8.5)， 7.12(9, dd; 8.5與2.1)。由克力托懷辛i 2與重氮甲烷之甲基化作用產生克力托懷辛6。 -98- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2丨0>< 297公釐） --------->衣— (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 4 5 8 9 B7 4 5 8 9 B7 經濟部中央標率局員工消費合作社印製五、發明説明（96 ) 克力托懷辛1 4 添加5微升2N NaOH至含3毫克克力托懷辛6之1毫升3:1丙酮/H20溶液中。攪拌5小時後，反應混合物以iN HC1中和至 pH 7後，蒸發至乾。殘質進行逆相HPLC產生2.4毫克克力托懷辛〗4。 Ή NMR(CD3OD):胺基或羥酸單位β (碳位置，多重性；j Hz) 5-羥基-6-甲基-8-幕基-2,7_辛二烯酸（A) 5.98(2, d; 15,3)， 6.78(3, dt; 15.3與7.5)，2.35(4, m)，3.64(5, td; 7.2與4.8)，2.47 (6，111)，1.14(6-1^，（!；6.9)，6.22(7,4本15.9與8.1)，6,39(8,山 15.9)’ 7,24-7.36(10/11/12/13/14, m); 3-胺基-2-甲基丙酸（C) 2.35(2, m), 1.02(2-Me, d; 6.9)，3.18(3, dd; 13.2與6.6), 3.36(3, dd;丨3.2與4·5); 3_氣_4·甲氧苯基丙胺酸（B) 4 5S(2, dd; 8.7,與 6.3)，2.80(3, dd; 13‘8與9.0)，3.05(3, dd; 13.8與6.3), 7.25(5, d; 2.1)，3‘82(7-OCH3, s)，6.95(8, d; 8.4)，7.13(9, dd; 8.4與2.1) o 克力托懷辛3 5 添加觸媒量Pt〇2至含0‘5毫升CH2Cl2i燒瓶中。抽除燒瓶内之空氣，引進H2，混合物於室溫下攪拌2〇分鐘。添加含 10毫克克力托懷辛1之最少量CH2C12溶液，混合物於室溫下攪拌45分鐘。經寅式鹽/棉花過濾排除觸媒，蒸發溶劑。殘質於C18管柱上進行逆相HPLC，產生6.5毫克克力托懷辛35。

EIMS m/z(相對強度）656/658(25/10), 412/414(25/12)，280/ 282(20/10)，195/197(78/25)，141(58)，91(1〇0);高解析EIMS m/z 656.2864(C35H45ClN2〇A計算値’誤差〇.〇 mmu); Ή NMR -99- 本紙張尺度適用中國國家標隼（CNS ) Α4規格（210X297公釐） ----------"-- (請先閱讀背而之注意事項再填窩本頁)

'1T 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 d5 B97 2 A7 _B7 五、發明説明（97) (CDC13)胺基或羥酸單位—3_値(碳位置，多重性；J Hz) 2,3-二羥基-7,8-環氧-5-羥基-6-甲基-8-苯基辛酸（A)2.32(2, ddd; 14.5, 9.2, 5.8)，2.10(2, ddd; 14.5, 9.2, 6·2), 1.5-18(3/4 重疊 m), 5.07(5, ddd; 12.5, 5.6, 2.0), 1.80(6, m), 1.12(6-Me} d; 7.0), 2.90(7, dd; 7.4, 1.8), 3.67(8, d; 1.8), 7.24(10/14, m), 7.32-7.38(1 1/:12/13, m); 3-氣-4-甲氧苯基丙胺酸(b) 4.71(2, ddd; 8.7, 6.4, 6.3), 5.62(2-NH, d, 8.7), 3.08(2H-3, br d; 6.4), 7,19(5, d; 2.0), 3.87(7-OMe, s), 6.83(8, d; 8.5), 7,07(9, dd; 8.4，2_0); 3-胺基-2-甲基丙酸（C) 2.72(2, m), l,18(2-Me, d; 6.9), 3.12(3, ddd; 11.4, 10.6, 5.6), 3.70(3, ddd), 6.76(3-NH, br t, 6.0); 2-羥-4-甲基戊酸(D) 4.83(2, dd; 9.9, 3.8)，1.39(3， m), 1.70(3, m), 1.72(4, m), 0.87(4-Me, d; 5.3), 0.86(5, d; 5.3); 13C NMR(CDC13)單位 β 値(碳位置）A 172.4(1)，36.2(2)， 32.0(3), 21.1(4), 76.6(5), 40.2(6), 13.6(6-Me), 63.3(7), 59.2 (8), 136.8(9), 125.6(10/14), 128.7(1 1/13), 128.6(12); B 170.7(1), 53.7(2), 35.5(3), 130.0(4), 131.1(5), 122.2(6), 153.8(7), 56.1(7-OMe), 112.1(8), 128.5(9); C 175.2(1), 38.2 (2), 13.6(2-Me), 42.1(3); D 171.9(1), 71.7(2), 39.6(3), 24.5 (4)，22.9(4-Me), 21.4(5)。實例1 0 AAfeJijfr對微管之解除聚合活性之分析材料自希格馬化學公司（Sigma Chemical Company)得到長春花驗、細胞鬆他素（Cyt〇chalasin)B、異硫氰酸四甲基若丹明 tn ^^^^1 ^^^^1 nn ^^^^1 nk I 1 為、-fl (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -100- 本紙張尺度適用中國國家襟準（CMS ) A4規格（210X 297公釐）經濟部中央榡準局舅工消費合作衽印製 45 89 ( 2 at B7 五、發明説明（98 ) (TRITC)-鬼筆鹼（phalloidin)、硫若丹明（sulforhodamine)B (SRB)及對抗卢-微管蛋白與拜門汀（vimentin)之抗體。含有艾利氏鹽（Earle's salts)之伊格基礎培養基（Basa〗 Medium Eagle, BME)係來自奇布可藥廠（Gibco)及胎牛血清（FBS)係購自海克隆實驗室（Hyclone Laboratories) 0 細胞系喬卡特（Jurkat)T白血病細胞系及A-10老鼠頸部平滑肌細胞得自美國菌種培養物收集處，且培養在含10% FBS及50 微克/毫升健大黴素硫酸鹽之BME中。人類卵巢癌瘤細胞 (SKOV3)及其經選拔對長春花鹼具有抗性之副細胞系 (SKVLB1)爲安大略癌症研死所（Ontario Cancer Institute)之維克·林恩博士（Dr. Victor Ling)之慷慨捐贈。這二株細胞系均保存在含10% FBS及50微克/毫升健大黴素硫酸鹽之 BME中。移植24小時後，添加長春花鹼至SKVLB1細胞，終濃度爲1微克/毫升，以維持P-醣蛋白-過度表現細胞之選拔壓力。細胞增生與循理中止分析法依史克漢（Skehna)等人11所述，進行細胞增生分析法。分析喬卡特細胞時’依史克漢所述，以指定藥物處理培養物 ’於血球計數器中計算總細胞數。以含0.4% Giemsa之PBS 染色’測定有絲分裂細胞之百分比，然後以PBS迅速洗滌3 次°每次處理至少記錄到1 〇〇〇個細胞有出現有絲分裂，並以出現有絲分裂之細胞數與所計算總細胞數之比例計算爲有絲分裂指數。 —___________~1〇1 - 本紙張尺度適用中國國家樣隼（CNS〉A4規格（210X 297公蝥） (請先閱讀背面之注意事項再禎寫本頁) 訂 45897^ A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明（99 ) i疫螢光分柄i 取A-10細胞，在含BME/10%FBS之蓋破片上生長至幾近融合爲止。添加PBS至所指定之終濃度，細胞再培養24小時。爲微管及中間絲狀體染色時，以冷甲醇固定細胞，與含丨〇%胎牛血清之PBS培養，以阻斷非專—性結合位置。細胞於37C下’與依照製造商之建議而稀釋之單株抗-乃_微苢蛋白或與單株抗_拜門汀培養6 〇分鐘。然後與已與螢光素共軛之兔子抗小白鼠IgG培養45分鐘，目視觀察結合之初級抗體。將蓋玻片蓋在顯微鏡載玻片上，檢視螢光型態並使用裝設檢測螢光素之表螢光光學儀器之蔡司（Zeiss)光學顯微鏡照相。爲微絲狀體染色時，以3 %多聚甲路固定細胞，以0.2% Triton X-ioo滲透，以氫硼化鈉毫克/毫升）進行化學還原。添加含100 nM TRITC-鬼筆鹼之PBS，使混合物於 37C下培養45分鐘。以PBS迅速洗滌細胞3次，然後再蓋上蓋玻片，立即依上述照相。克力托懷辛及至花鹼對喬卡特細胞增生及細胞循環之影 1 ‘ 克力托懷辛化合物及長春花鹼對細胞循環及出現有絲分裂之細胞百分比之影響之劑量_效應曲線分別示於圖2 A與 2B。未處理之細胞中，3%以下出現有絲分裂圖形。克力把懷辛化合物與長春花鹼均可依賴劑量提高出現有絲分裂之細胞百分比。有絲分裂指數提高則與細胞增生下降有密切相關性；亦即克力托懷辛化合物與長春花鹼二者引致5〇%細胞累積有絲分裂時之濃度實質上與抑制5〇%細胞增生時之 -102- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS) A4規格（210X 297公麥） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

經濟部中央標準局員工消費合作社印製 4 5 89 7 2 A7 ___ B7 五、發明説明（100) 濃度相同。克力粍懷辛與長春花鹼對此等效應之IC50分別爲 0.2與 8 nM。典素B、長驗與克力托懷辛對細胞架構之影響取頬邵平滑肌（A-10)細胞在玻璃蓋玻上片生長，以pBS、 2" Μ細胞鬆弛素b、100nM長春花鹼或1〇nM克力托懷辛化合物處理《 24小時後，直接以免疫螢光檢視微管與拜門汀中間絲狀體，並使用TRITC_鬼筆鹼染色微絲狀體。檢視各藥物對外形I影響。未處理之細胞展現密集之微管網狀結構，由核周園之微管组成中心。拜門汀中間絲狀體亦均勻分佈在細胞質中，而一束束之微絲狀體則沿著細胞主軸集中。細胞鬆弛素B引起微絲狀體完全解除聚合，同時使半結晶殘質聚集。此化合物不會影響微管或中間絲狀體之分佈。長春花鹼及克力托懷辛化合物會顯著消耗微管。這二種化合物均不會影響微絲狀體之構成；但當以長春花鹼或克力托懷辛化合物處理時，拜門汀中間絲狀體會瓦解，在細胞核周圍形成同心圓環。克力托懷辛及長秦i蜂對經過紫杉醇安定化之微營之影響取A-10細胞，以〇或10"2^紫杉醇處理3小時後，添加、ΙΟΟιιΜ長春花鹼或10nM克力托懷辛化合物。24小時後，依上述，以免疫螢光法檢視微管之構成。將之與對照組細胞比較，經過紫杉醇處理之細胞中之微管出現密集成束，尤其在細胞極區。如同上述，長春花鹼使未經過前處理之細胞中之微管完全解除聚合。然而，以紫杉醇前處理可防止微管因長春花鹼引起之解除聚合作用。同樣地，紫杉醇 -103- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2IOX297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填巧本頁訂 A7 u 6 8 9^2, 五、發明説明（101) 之前處理可完全安定微管，以對抗克力托懷辛誘發之解除聚合作用。 i秦花啥與懷辛對微管合作用之可逆性_ 取A-10細胞，以〗00nM長春花鹼或]〇nM克托懷辛處理24 小時，使微管完全解除聚合。隨後洗滌細胞，於無藥物培養基中培養1小時或24小時。當排除長春花鹼後，微管迅速再聚合，在1小時後即出現顯著量之微管，24小時後完全恢復外形。反足，接受克力托懷辛化合物處理丨小時或2 4小時之細胞，當排除化合物後，仍未再出現微管。立力托懷土二花鹼及紫杉醇對細胞増生之抑制作用之可逆性以預先測定之長春花鹼、克力托懷辛化合物或紫杉醇之 IC5〇劑量（即表5中综合説明之實驗所測得之數値）處理 SK0V3細胞24小時。此期間，細胞密度由〇 4提高至〇 5土〇.〇5吸光度單位（圖3)，表示所有三種處理之細胞數均增加 25%。排除藥物，造成經過長春花鹼處理之細胞迅速生長，因此其數目在24小時内提高約3倍。反之，接受克力托懷辛化合物或紫杉醇處理之細胞仍舊受到抑制，排除藥物24 小時後，細胞數僅增加〇.2至0 4倍。接受克力托懷辛或紫杉醇處理之細胞之增生能力隨後即恢復，因爲細胞數在其後2 4小時即加倍。支春花托懷辛之组合對細胞增生之嵚響以克力托懷辛與長春花鹼之组合處理Sk〇V3細胞48小時。然後測定存活細胞百分比，並計算各組合之冗如。此等 _____ - 104- 本紙張尺度適用中國國&準（CNi7A4規格（2)0><297公 (請先Μ讀背面之注意事項再填寫本頁)

，1T 經濟部中央標隼局負工消費合作杜印裝經濟部中央標準局員工消費合作社印製 45 8912 A7 __ B7 五、發明説明（102) 組合處理及單一藥物處理之效應以異輻射圖示於圖4中。克力托懷辛化合物與長春花鹼之组合之1(：50非常接近加成性直線，表示這二種藥物對細胞增生僅誇發加成性抑制作用 0 克力托懷辛、長春花鹼及紫杉醇對SKOV3及SKVLB 1細胞之毒性由於SKVLB 1細胞會過度表現P-醣蛋白12，因此會抗拒天然產物之抗癌藥。紫杉醇、長春花鹼及克力托懷辛化合物抑制SKO V3及SKVLB1細胞之能力综合示於表5。紫杉醇對 SKOV3及SK VLB 1細胞二種細胞系之增生随劑量變化之抑制作用IC5〇分別爲1及8000nM。長春花鹼亦抑制這二種細胞系之生長，對SKOV3及SKVLB1之IC5〇分別爲0.35與4200nM 。克力托懷辛對SKOV3及SKVLB1之IC5{)分別爲7及600PM ° SKVBL1細胞對各化合物所得到之抗性因子係由SKVLB 1之 ic50計算。SKOV3細胞之IC5〇亦示於表5。表5 .抗有絲分裂劑對SKO V3及SKVLB 1細胞之包座以下文所示各種不同濃度化合物處理細胞48小時。依方法部份中所述，測定細胞數，並計算各化合物IC5〇 °數値代表三次實驗之平均値土 SEM。__________ 細胞系化合物___SKOV3 SKVLB i性因子 IV50(nM) 長春化鹼 0.35±0.25 4200± 1700 I2,000 紫杉醇 1 士 0.4 8000 ±2000 8?〇〇〇克力托懷辛 0.007士0.002 0_60±0.19 86__ -105- 本纸張尺度適用中國國家榡準（CNS ) A4規格（210X297公釐} (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 丁 -5 經濟部中央橾準局負工消費合作社印製 -ο 8 9 7 2 五、發明説明（103) 因此證實本發明可提供新賴之克力托懷辛化合物，及先前曾曷示之克力托睃辛化合物，其係細胞增生之強力抑制劑 ’其作用在干擾微管網路結構並抑制有絲分裂。克力托懷辛化合物干擾微管構成’因此干擾正常細胞功能，包括有絲分裂。傳統之抗微管劑，如：秋水仙素及長春花植物鹼，均在有絲分裂時遏止細胞分裂。因此似乎適合比較此等製劑之一與克力托懷辛化合物對細胞增生之效果差異。因此選擇長春花植物鹼：長春花鹼，作爲傳統抗微管劑之代表。因此比較克力托懷辛化合物及長春花鹼對喬卡特τ _細胞白血病細胞系之增生及細胞循環之演進之影響。這二種化合物對細胞增生及出現有絲分裂之細胞之累積具有平行之依賴劑量變化之抑制作用。由於經常以干擾有絲分裂之紡錘體中微管之作用來調節抗有絲分裂劑之效果，因此利用螢光顯微鏡法來鑑別克力 $懷辛化合物對細胞架構結構之效果。接受克力托懷辛化合物或長春花鹼處理之細胞在進行免疫螢光染色後，即顯著證明這二種化合物均可導致微管完全消失。對Sk〇V3細胞進行之類似研究證實，克力托懷辛化合物之抗微管效果不僅針對平滑肌細胞系°沒有藥物可以如同細胞鬆他素Β —般輕易地誘發對微絲狀體束之量或分佈之影響，表示微吕之消失可能不是非專—性機轉，例如：蛋白酶之活化或喪失能量補充等所致。長春花鹼及克力托懷辛化合物二者亦促進拜門汀中間絲狀體顯著瓦解，因此在細胞核周圍形成 —. -106- 本紙張尺度賴中關家辟（CNS ) A4規格（2⑴X別公楚》 #衣訂 C請先聞讀背面之：成意事項再填寫本頁} 經濟部中央標準局負工消費合作社印製 45 89 72 A7 ________B7 五、發明説明（104) 明亮染色之環。自培養基排除長春花鹼，導致微管迅速再聚合。反之，接受克力托懷辛化合物處理之細胞在培養物中排除化合物至少2 4小時後，仍保持消耗微管狀態。本發明證明克力粍懷辛化合物可抑制p _醣蛋白調節之多重藥物抗性。利用醣蛋白運送會限制天然產物抗癌藥對後來取得或重新取得抗藥性η—,5之腫瘤細胞生長之抑制能力。長春花植物鹼，雖然極適用於初期之化療，但仍爲利用 Ρ-酿蛋白運送之極佳受質，因此在對抗ρ_醣蛋白所調節 MDR腫瘤上之適用性非常有限。因此，鑑定可克服多重抗藥性之藥劑，可發展成有用且新穎之抗癌劑。本發明克力托懷辛化合物即爲此藥劑，因爲其爲ρ _醣蛋白調節之運送過程之不良受質。此現象反映在克力托懷辛化合物相較於長春花絵、紫杉醇及其他天然產物藥物具有較低之細胞抗性因子。克力托懷辛之完全合成法採用相關技藝上習知之方法，確認新穎之合成化合物，即克力托懷辛51、52、53 ' 55、56、57、58與61之結構式。質譜數據與分子组成吻合。質子與碳NMR數據與克力托懷辛1及相關之天然與半合成類似物相似。下列實例證實克力托懷辛化合物之完全合成法，及其根據本發明作爲醫療劑之用途。 Α.例1 1 克力托懷辛5 1之合成法 S -反式-3-戊烯-2-醇（Α) -107- 本紙張尺度適用中國國家榇2^ ( CNS ) Α4規格（210Χ 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 、1Τ " 458972 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 ------ B7五、發明説明（1〇5) 取3 ’肖旋性反式-2-戊烯_2-醇（933毫克，u毫莫耳）、月桂酸三氟乙酷（4.14克，15毫莫耳）及緒騰脂酶(ppL，2〇克）之25毫升揲水乙醚混合物攪拌80小時。濾出ppL，以醚洗滌3次。崧發醚萃液，粘稠之油經短程眞空蒸餾。s•反式_3_戊烯 S? (A)則自液態氮冷卻之收集瓶中冷凝得到（383毫克）^旧 NMR(CDCl3)d 5.57(4-H; dq, -15.3/6.0), 5.47(3-H, ddd, -15.3/6 4/1.2)，4.19(2-H; 1:4:6:4:1 五裂峰’ 6.4)，2.24(OH; bs), 1.63 (5-H3, d, 6.0)，1.19(1-H3; d, 6.4)。％ NMR(CDC13) d 135.5 (3)， 125.5(4)，68.7(2)，23.3(5)，17.5(1)。 S -反_式，2-(2-丙炔氧基）_3_戊烯於〇°C下，滴加炔丙基氣（767毫克’ 1〇 3毫莫耳，745微升）至含S-對映異構物a(628毫克，7.3毫莫耳）、硫酸氫四丁基銨（138毫克，0.41毫莫耳）及40% NaOH之水溶液（5毫升) 之激烈攪拌混合物中。持續激烈攪拌一夜，之後於〇«C下，以HC1中和混合物’以戊烷萃取炔丙基醚。萃液蒸發，炔丙基醚經短矽膠管柱純化（2%乙醚/戊烷），產生778毫克炔丙基醚B ’ [a]D-118.9。（c 2.0, CHC13); Ή NMR(CDCl3)d 5.70 (4-H; dq, 18.5/6.5), 5.31(3-H; ddd, 18.5/7.2/1.4), 4.15(1'-H; dd, -15.6/2.1), 4,01(1'^; dd, -15.6/2.1), 4.01(2-H; m), 2.38 (3’-H; t, 2.1)，1_73(5-H; dd, 6.5/1.4), 1.25(1H; d, 6.3)。 (3尺，4尺)-4-甲基庚-5(£)-稀~-1-炔-3-醇（(^) 取一份丁基鋰己烷溶液（2.5M，5.1毫升，12.8毫莫耳），眞空蒸發，殘質冷卻至-90°C。緩緩添加含炔丙基醚B(454 毫克’ 3.66毫莫耳）之1〇毫升THF溶液。使溫度回升至室溫 (請先閲讀背νδ之注意事項再填寫本頁} -108- 本紙張尺度適用中國國家標準i CNS ) A4規格（210X297公釐） A7 B7 45 89 72 五、發明説明（ioe) 一夜後，以NH4C1溶液中止反應混合物之反應。以醚萃取3 次，萃液脱水後蒸發，殘質經矽膠管柱純化（5% Et0AC/己烷），產生 322毫克醇 c(收率 71%) ’ [a]D+32.9° (C 3.0, CHC13) ;IR(NaCl) η廳 3306, 2968, 1455, 1 379, 1029, 975 cm1。 Ή NMR (CDCI3) d 5.61(6-H; dq, 15.3/6.3), 5.38(5-H; dd, 15.3/ 7.7), 4.13(3-H; bs), 2.45(1-H; d, 1.5), 2.38(4-H; m), 2.20 (OH; bd, 3.3), 1.68(7-H; d, 6.2), 1.09(4-CH3; d, 6.8) 。13C NMR (CDCI3) d 131.5(5), 127.9(6), 83.5(2), 73.6(1), 66.2(3)，43.4(4), 18.1(7), 15.7(4-Me)。 (3S,4R)-3 -三級丁基二苯矽烷氧基-4-甲基庚- :5£ -烯醛（D) 添加三級丁基二曱矽烷基氣（452毫克’ 3毫莫耳）至含(:醇 (248毫克，2毫莫耳）與咪唑（340毫克’ 5毫莫耳）之3毫升無水DMF攪拌溶液中。混合物攪拌一夜後，添加1〇毫升10〇/〇 NaOH，以破壞過量之三級丁基二甲矽烷基氣。以醚萃取產物，萃液依序以水、〇. 5 N HC丨及水洗滌，脱水及蒸發。殘質經矽膠使用己烷層析純化，產生457毫克（3R，4R)-3-三級丁基二甲矽烷氧基-4-甲基庚-5(E)-烯-1-炔（收率96%)，Ή NMR(CDC13) d 5.50(6-H; dq, 15.3/6.1), 5.38(5-H; dd, 15.3/ 7.5), 4.16(3-H; dd, 5.7/1.7), 2.37(1-H; d, 1.7), 2.35(4-H; m), 1.68(7-H; d, 6.1), 1.07(4-Me; d, 6.8), 0.90(CMe3; s), 0.12 (SiMe; s), 0.09(SiMe; s) ° 依相同製程，形成相應之TBDPS衍生物，（3R，4R)-3-三級丁基二苯矽烷氧基-4-甲基庚-5(E)-烯-1-炔，收率92%，[a]D +32.9° (c 3.0, CHC13) 0 Ή NMR(CDC13) d 7.72/7.38(2Ph-H5), -109- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4現格（2】0 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填κ?本頁) i^· 經濟部中央標準局舅工消費合作社印製 A7 458972 ____B7 _ 五、發明説明（107) 5.32(6-H; m), 5.25(5-H; dd, 16.2/7.3), 4.29(3-H; dd, 5.2/2.0), 2.38(4-H; m), 2.33(1-H; d, 2.0), 1.64(7-H; d, 5.3), 1.11(4-Me; d，6.9), 1.06(CMe3)。l3C NMR(CDC13) d 1 36.1/135.9/ 133.6/129.7/129.6/127.5/127.3(Ph), 132.4(5), 1 26.1(6), 83.3(2)，73.5(1), 68.0(3), 43.6(4)，26.9(CMe3), 19.4(CMe3), 18.0(7)，14‘7(4-Me)。添加2-甲基丁烯（1.15毫升，2M THF溶液，2.3毫莫耳）至 -25°C下，1，1毫升BH3之THF溶液（1M，1.1毫莫耳）中，混合物於冰浴中攪拌2小時。溫度冷卻至_5〇。(：，一次添加全量含丁88衍生物（238毫克，1毫莫耳）之1毫升丁册溶液。移開冷卻槽，使反應混合物回升至室溫，並保持1小時《於〇°C 下添加 2.2 Μ ΚΗ2Ρ04/Κ2ΗΡ04溶液（4.8毫升）與 30% H2O2(0.8 毫升）。1小時後，蒸發THF，以醚萃取殘質。醚萃液脱水後蒸發，殘質經矽膠層析（1% EtOAc/己烷），產生194毫克醛D(收率76%)。Ή NMR(CDC13) d 9.78(1-H; t，2.3)，5.46(6-H; dq, 15.3/6.1), 5.34(5-H; dd, 15.3/7.5), 4.13(3-H; m), 2.47 (2-H; m), 2.31(4-H; m), 1.66(7-H; br d, 6.1), 0.99(4-Me; d, 6.8), 0.87(CMe3; s), 0.07(SiMe; s), 0.04(SiMe; s) ° 形成醛之三級丁基二甲矽烷基醚（TBDMS)衍生物，收率 83% » Ή NMR(CDC13) d 9.52(1-H; t, 2.4), 7.69/7.40(2Ph-H5), 5.28(6-H; m), 5.22(5-H; dd, 16.2/6.2), 4.19(3-H; m), 2.42(2-H; m), 2.29(4-H; m), 1.60(7-H; d, 5.4), 1.07(CMe3), 1.02(4-Me; d，6.9)。 13C NMR(CDCl3)d 202.0(1),136.1/133.6/133.3/ 130.2/129.7/127.7/127.6(Ph), 132.3(5), 126.2(6), 72.8(3), -110- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 11 n I i t I ^ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 5 89 7 2 A7 B7 五、發明説明（108) 47.6(2), 42.2(4), 27. l(CMe3), 19.6(CMe3), 18.3(7), 14.9(4-Me) ο (5S，6R)-L三級丁基二夕燒氧基-6-甲基-7-氧酮a-2E，7E-二烯酸鹽（E) 添加四甲基胍（435微升，3.5毫莫耳）至已冷卻至-78°C , 含D醛（0.74克，2.9毫莫耳）與膦羧基乙酸三甲酯（632毫克， 3.5毫莫耳）之5毫升THF攪拌溶液中。30分鐘後，移開冷卻槽’混合物再攪拌4小時。以in HC1中和混合物，以醚萃取產物。脱水之醚萃液蒸發，殘質經矽膠管柱層析（5% EtOAc/己烷），產生0·814克E(收率90%)，1HNMR(CDCl3)d 6.93(3-H; dts 15.6/7.8), 5.62(2-H; dd, 15.6/1.2), 5.37(8-H, m), 5.37(7-H, m), 3.71(OCH3, s), 3.61(5-H, m), 2.29(4-H2, m), 2.22(6-H, m), 1.66(9-H3; br d, 6.1), 0.99(6-Me; d, 6.8), 0.88 (CMe3; s), 0.03(SiMe; s), 0.01(SiMe; s)。經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 形成醛之三級丁基二甲矽烷基醚（TBDMS)衍生物，收率 90%， Ή NMR(CDC13) d 7.68/7.38(2Ph-H5), 6.75(3-H; dt, 15.6/7.4), 5.62(2-H; d, 15.6), 5.34(8-H, m), 5.29(7-H, m), 3.70(5-H, m), 3.68(OCH3, s), 2.28(4-H2, m), 2.20(6-H, m), 1‘62(9-H3; d, 5.3)，1.08(CMe3), 0.99(6-Me; d, 6.9)。13C NMR (CDC13) d 166.7(1), 146.4(3), 136.0/134.2/133.8/129.62/ 129.56/127.5/127.4(Ph), 132.5(7), 125.8(8), 122.6(2), 76.2(5), 51.3(OCH3) , 41.7(6), 36.8(4), 27.0(CMe3), 19.4(CMe3), 18.1 (9)，14.7(6-Me)。 (5S,6R)-5-三級丁基二甲矽烷氧基-6-甲基-7-氧庚-2(E)-烯酸 -111 - 本紙張尺度適用中國國家標隼（CNS ) A4規格（210X297公釐） 2 A7 B7 五、發明説明（109) 甲酯（F) 使臭氧通過-78°C之含甲醋E(328毫克，1·0毫莫耳）與97微升吡啶之1 5毫升CH2C12溶液，以TLC分析法追踪臭氧分解作用過程。待甲酯消耗完後，添加约500毫克鋅粉及1毫升冰醋酸。溫度緩緩上升至25X：。過濾混合物，濾液依序以飽和<：11804及NaHC03溶液洗滌。溶劑蒸發後，得到粗醛 F(249毫克，S3%)，未純化即用於下一個步驟。Ή NMR (CDC13), d 9.96(7-H; t, 2.3), 6.96(3-H; dt, 15.7/7.6), 5.90(2-H; dd, 15.7/0.7), 4.05(5-H; m), 3.74(OMe; s), 2.51(6-H; m), 2.45(4-H2; m), 1.09(6-Me; d, 6.9), 0.88(CMe3; s), 0.04(SiMe; s), 0.03(SiMe; s)。 (5S,6R)-5-三級丁基二甲矽烷氣基-6-甲基-8-苯基-辛-2EJE-二烯酸甲酯（G ) 經濟部中央榡準局負工消費合作社印製 ^^1- —^ϋ« t^ilf ffl mt PE^i E^p - 1 · ^—Ttv (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) η 添加0.80毫升含芊基三苯基燐化氯（268毫克，0.69毫莫耳，6.9毫升THF溶液）及正丁基鋰（280微升，2.5 Μ己烷溶液）之冷（-78°C)混合物至-78°C下，含醛F(25.0毫克，〇.〇8毫莫耳）之1 · 5毫升THF攪拌溶液中。15分鐘後，移開冰浴，續授拌2小時。以飽和氣化銨溶液中止反應，蒸發THF。濃縮物以己烷萃取2次，合併之萃液以鹽水洗滌、脱水，及蒸發。殘留之油爲E與Z異構物之5:1混合物，溶於1.5毫升含硫酿 (0.02M)與1，1’-偶氮雙（環己腈）(VAZO, 0.006M)之苯中，混合物回流5小時。冷卻至RT後，添加己燒（1 5毫升），有機溶液依序以10% NaOH及鹽水洗蘇，脱水（MgS04)，及蒸發。殘質經矽膠層析（2% EtOAc/己烷），產生24毫克（8〇%)G , -112- 本紙張尺度適用中國國家橾準（CNS ) A4規格（2i〇x297公釐） Α7 Β7 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝五、發明説明（110) [a]D+68.20 (c 1.5, CHC13); EIMS m/z 374(<1%; Μ+)，359(1; M+-CH3), 317(10; M+-Bu), 275(10), 243, (73), 143(20), 115 (10), 97(64), 89(31), 73(100); HREIMS m/z 374.2232 (C22H3403Si, D+4.5 mmu), 359.203 1 (C21H3103Si, D + l.l mmu), 31 7.1579(C18H2503Si, D-0.6 mmu); UV(MeOH)lraax (e) 206 (33500), 252(20100) nm; IR nmax 2952, 2855, 1725, 1657, 1435, 1257, 1168, 1097, 970, 836, 775 cm1; Ή NMR d 7.2-7.4(Ph-H5; m), 6.96(3-H; ddd, 15.6/7.8/7.5), 6.37(8-H, d, 15.9), 6.16(7-H; dd, 15.9/8.1), 5,84(2-H; d, 15.6), 3.75(5-H; ddd, 10.2/6.0/4.2), 3.72(OMe; s), 2.44(6-H; m), 2.36(4-H2; m), 1.lO(6-Me; d, 6.9), 0.91 (Si-CMe3; s), 0.06(Si-Me; s), 0.05(Si-Me; s); 13C NMR d 166.8(1), 146.4(3), 137.6(Ph 1'), 131.9(8), 130.4(7), 128.5(Ph 375'), 127.0(Ph 4'), 126.0(Ph 276'), 122.9(2), 75.0(5), 51.4(OMe), 42.8(6), 37.6(4), 25.9 (Si-CMe3), 18.1(Si-CMe3), 16.2(6-Me), -4.4(Si-Me), -4.5(Si-Me)。C22H 340 3Si計算値：C,70.52; H,9.17。實測値：C，70.72; H，9.42。 f5S.6R)-5-三級丁基二甲矽烷氧基-6-甲基-8-苯基辛-2E，7E-二烯酸（Η) 添加5毫升INLiOH水溶液至含G酯（159毫克，0.43毫莫耳) 之7毫升丙酮溶液中。混合物於25°C下攪拌3小時，以20毫升£t20稀釋，以1NHC1酸化至《ρΗ4。分離有機層，以各20 毫升鹽水及水洗滌，脱水（MgS04)及蒸發。殘留之油經矽膠使用40%EtOAc之含〇.5%AcOH之己烷溶液層析，產生純酸 -113- 本紙張尺度速用中國國家標準（CNS ) M規格（210x297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) .

、1T 4 4 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 A7 B7 五、發明説明（111) Η之淺黃色可流動油（145毫克，收率95%):[a]D+87.0° (c 1.4, CHC13)； EIMS m/z; 343(1; M+-OH), 303(5), 275(9), 257(4), 229(62), 213(16), 171(22), 143(37), 131(16), 115(23), 97 (100), 91(44); HREIMS m/z 343.2107(C21H31O2Si, D-1.3 mmu), 229.1220(C15H17O2, D+0.9 mmu); VU lmax(e)206(24500) ,252(15600) nm; IR 3300-2800(br), 2956, 2856, 1697, 1651, 1419, 1256, 1097, 836, 693 cm1; Ή NMR d 10.4 (C02H; bs, Wi/2«100), 7.2-7.4(Ph-H5; m), 7.09(3-H; ddd, 15.6/7.6/7.6), 6.39(8-H; d, 15.9), 6.16(7-H; dd, 15.9/8.1), 5.85(2-H; d, 15.6), 3.78(5-H; ddd, 6.0/6.0/4.2), 2.46(6-H; m), 2.40(4-H2; m), l.12(6-Me; d, 6.9), 0.92(Si-CMe3; s), 0.07 (SiMe2; s); I3C NMR d 1 71.6(1), 149.1(3), 137.5(Ph Γ), 131.8(8), 130.5(7), 128.5(Ph 375'), 127.1(Ph 4'), 126.1(Ph 276'), 122.7(2), 74.9(5), 42.9(6), 37.6(4), 25.8(Si-CMe3), 1 8. l(Si-CMe3), 16.1(6-Me), -4.4(Si-Me), -4.5(Si-Me)。 3-(3-氯-4-甲氧笨基）-D-丙胺酸之2,2,2·三氣乙酯（I) 取一份D-氯酪胺酸BOC衍生物樣本（160毫克，0.35毫莫耳) 溶於3毫升無溶劑之三氟乙酸中，於室溫下靜置1小時。減壓排除過量試劑，留下所需胺I之三氟乙酸鹽（165毫克，收率 100%)，[a]D +1.7。（c 5.2, CHC13); IRnmax 3400-2500(br)，1760, 1680, 1500, 1200, 1 130, 1070, 805, 710 cm·1; Ή NMR d 8.07 (NH2; br m, W1/2j»45), 7.27(5-H; s), 7.12(9-H; d, 8.1), 6.88 (8-H; d, 8.1), 4.86/4.67(CH2CCl3; AB q, -12.0), 4.41(2-H; bs, W1/2«20), 3.86(〇Me; s), 3.33(3-H; dd, -14.4/3.6), 3.22(3-Η'; -114- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（2]0X297公釐） (請先閱讀Jba面之注意事項再填寫本頁) i裝. 訂 4 5 8 9 7 2 A7 B7 經濟部中央樣準局員工消費合作社印製五、發明説明（112) dd, -14.4/6.6); 13CNMR d 167.6(1), 155.0(7), 130.9(5), 128.8 (9), 125.4(4), 123.1(6), 112.7(8), 93.4(CC13), 75.3(CH2CC13), 56.l(〇Me), 54.2(2)，34.9(3)。化合物J 依序添加五氟二苯基次膦酸酯（FDPP，32毫克，0.08毫莫耳）、三氟乙酸鹽1(3 5毫克，0.07毫莫耳）及二異丙基乙胺 (DIEA，27毫克，® 36毫升，0.21毫莫耳，《3當量）至氬氣下，含Η(25毫克，0.07毫莫耳）之3毫升無水DMF攪拌溶液中。續於25°C下攪拌1小時後，以20毫升Et20萃取反應混合物。醚萃液以10毫升IN HC1、10毫升飽和NaHC03、20毫升鹽水及20毫升水依序洗滌，脱水（MgS04)，及蒸發。殘留之淺黃色油經矽膠層析（15% EtOAc之己烷溶液），產生J之無色油（32毫克，收率 65%):[a]D+11.8。（cl.2，CHCl3):EIMS m/z; 644/646/648/650(7/8/6/3; M+-lBu), 570/572/574(46/100 /21), 536/538(1 8/15), 394/396(67/29), 275(20), 155/157 (29/9); HREIMS m/z 644.098l(C29H34C14N05Si, D-2.1 mmu); uv ^ax (e)204(54900), 230(23200), 248(19200), 284(3500) nm; IR nmax 3290, 2980, 2850, 1760, 1680, 1640, 1505, 1380, 1270, 1169, 990, 720 cm1;屮 NMR 單位 A d 7.2-7.4(Ph-H5; m), 6.87(3-H; ddd, 15.0/7.8/7.5), 6.37(8-H; d, 16.2), 6.18(7-H; dd, 16.2/8.1), 5.82(2-H; d, 15.0), 3.75(5-H; ddd, 9.9/6.0/4.8), 2.46(6-H; m), 2.36(4-H2; m), l.ll(6-Me; d, 6.9), 0.91 (SiCMe3; s), 0.07(SiMe; s)，0.06(SiMe; s);單位 B d 7.1 9(5-H; d，2」）, 7.04(9-H; dd, 8.4/2.1), 6.85(8-H; d, B.4), 5.85(NH; d, 7.8), -115- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2l〇X 297公釐) .(請先閲讀背面之；d意事項再填寫本頁) -5 r 45 89 7 2 at B7 ___ 五、發明説明（113) 5.08(2-H; ddd, 7.8/6.0/5.7), 4.81/4.74(CH2CC13; AB q, -11.7), 3.87(OMe, s), 3.22(3-H; dd, -14.1/5.7), 3.12(3-H'; dd?-14.1/6.0) ° 13C NMR 單位 A d 165.1(1)，143.0(3)，137.6(9), 132.0(B), 130.4(7), 128.5(1 1/13), 127.0(12), 126.0(10/14), 124.7(2), 75.0(5), 42.6(6), 37.6(4), 25.9(Si-CMe3), 18.1(Si-2Me3)，16.5(6-Me), -4.3(Si-Me), -4.6(Si-Me);單位 B d 170.1 (1)，154.3(7)，131.1(5)，128.5(4/9)，122.6(6)，112.2(8)，94.2 (CC13)，74.8(QH2CC13)，56.l(OMe)，53.0(2), 36.5(3)。 (1，尺，58,6尺)-义1|-(羰基-2",2"，2"-三氣乙氧基）-2'-(3-氣-4-甲

氧苯基）乙基-5-三級丁基二甲矽烷氧基-6-甲基-8-苯基-辛- I 2E，7E-二晞醯胺（K) [

添加400毫升49% HF水溶液至含J(50毫克，0.07毫莫耳）之 I 訂 4毫升MeCN溶液中，混合物於25°C下攪拌1小時。以30毫升 |

Et20萃取，醚萃液依序以各30毫升飽和NaHC03、鹽水及水洗滌，脱水（MgS04)及蒸發，產生醇K之無色泡沫物（40毫克 | ，收率 95%): [a]D-6.1。（c 1_3, CHC13); EIMS m/z(相對強度 )587/589/591/593(M+, <1%), 552/554/556(1/2/0.5), 456/ 鉍

458/460/462(1/2/1/0.2), 342/344/346(7/8/4), 212/214 (15/5), 195/197(6/2), 155/157(99/34), 131(100), 91(77); HREIMS I 經濟部中央樣準局員工消費合作社印製 ---------^-- (請先閲讀背命之注意事項再填肖本頁) m/z 587.0721 (C27H 2935C14N05, D+7.9 mmu); UV lmax 204 | (56500), 230(22100), 248(18100), 284(3600) nm; IR nmax | 3400, 3300, 2980, 1780, 1680, 1640, 1505, 1270, 1180, 1090, |

1000, 770 cm-1。NMR 單位 A d 7.2-7.4(Ph-H5; m)，6.92(3-H; ddd, 15.3/7.8/7.5), 6.46(8-H; d, 15.9), 6.14(7-H; dd, 15.9/8.4), I -116- 本紙張尺度適用十國國家橾準（CNS Μ4規格（210Χ2Ε»7公嫠） A7 458972 五、發明説明（114) 5.90(2-H; d, 15.3), 3.65(5-H; ddd 7.8/5.6/4.0), 2.39(6-H/4-H2； brn), l‘78(OH; bs，W1/2«40 Hz)，1.14(6-Me; d, 6_9);單位 B d 7.18(5-H; d, 1.8), 7.03(9-H; dd, 8.4/1.8), 6.84 (8-H; d, 8.4), 5.97(NH; d, 7.8), 5.06(2-H; ddd, 7.8/6.0/5.7), 4.79/4.72 (CH2CC13; AB q, -12.0), 3.86(OMe; s), 3.20(3-H, dd, -14.1/5.7), 3.10(3-H_; dd，-14.1/6.0)。13C NMR單位 A d 165.3(1)，142,6 (3)，137.0(9)，131.7(8)，131.0(7)，128.5 (11/13)，127.3(12)， 126.1(10/14)，125.0(2)，73.8(5)，43.2(6)，37.2(4)，16.8(6-Me); 單位 B d 170.2(1)，154.2(7)，131.0(5)，128.4(9)，128.3(4), 122.5(6), 112.2(8), 94.2(CC13), 74.7 (CH2CC13), 56.1(OMe), 53.0(2)，36.5(3)。 3-(三級丁氧羰基）胺基-2,2-二甲基丙酸fM) 添加二碳酸二-三級丁酯（6.7克，31毫莫耳）至含3-胺基_ 2,2-二甲基丙-1-醇（L)(3.0克，29毫莫耳）之51毫升〗0〇/〇三乙胺之MeOH溶液中，混合物於25°C下攪拌1小時。排除溶劑後，殘質溶於CH2C12(30毫升）中’溶液以1 μ KHS04(pH 2) 洗務2次，以飽和NaCl溶液洗條1次，脱水（MgS04) °眞空排除溶劑，產生5.8克（收率93%)3-(三級丁氧羰基）胺基-2,2_ 二甲基丙 1 -醇之白色固體，未再純化即直接用於下一個步驟（經NMR分析之純度>95%) ’熔點70.5-71 5°C . IR η ? max 3350, 1685, 1456 cm1; Ή NMR d 4.87(NH; br s), 3.72(OH; br s), 3.19(1-H2; d, 5.1), 2.95(3-H2; d, 6.0), 1.44(CMe3; s), 0.85 (2-Me2; s); 13C NMR(CDC13) d 157.6(B〇C CO), 79.7 (CMe3), 68.1 ⑴，47.1(3)，36.7(2)，28.3(CMe)，22.4(2-Me2)。 -117- 紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2l〇X 297公釐） ' ~-- ----------参---------„訂 1-----M i請先聞讀背面之注意事項再填寫本ΐ!ο 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 458972 A7 ____ B7 五、發明説明（115) 添加三氯化釕水合物（122毫克）至含3-(三級丁氧羰基）胺基-2,2-二甲基丙-1-醇（5.3克，25.9毫莫耳）與過碘酸鈉（16.6 克，77.7毫莫耳）之四氫化碳（52毫升）、乙腈（52毫升）及水 (78毫升）溶液中’混合物於25°C下攪拌1小時。混合物經寅式鹽過濾’添加飽和碳酸钾之水溶液（5 〇毫升）。分離水層，以醚（20毫升）洗滌，於〇°C下，以HC1酸化至pH 2，以 CH2C12萃取（30毫升X 3)。合併之萃液以飽和:NaCl溶液洗滌及脱水（MgS04)。眞空排除溶劑，產生之殘質經ci 8矽石進行急騍逆相層析（ODS 120A，50至90% MeOH)，然後自醚中結晶’產生3.7克（收率66%)M之白色固體，'溶點106-1 〇8 °C ; EIMS m/z(相對強度）217(0.1), 161(11), 98(25)，88(71)， 57(100); HREIMS m/z 217.1292(C10H19NO4, D+2.2 mmu); IR nmax 3450·2500, 17〗0, 1694, 1510 cm1;主要異構物之Ή NMR d 5.03(NH; br s); 3.26(3-H2; m), 1.45(CMe3; s), 1.24(2-Me2; s); 13C NMR(CDC13) d 183.2(1), 156.3(BOC CO), 79.6 (CMe3), 49.5/47.9(2/3)，28.4(CMe3)，22.9(2-Me2)。 (2S)-2-經基-4-甲基戊酸缔丙醋（N) 於0°C下，添加30毫升含6.44克四丁基按比氯（20毫莫耳）與1.74毫升烯丙基溴（20毫莫耳）之<3112(：12溶液至含2.66克L-2-經-4-甲基戊酸（20毫莫耳）與1.74克碳酸氫鋼（20毫莫耳）之 30毫升水溶液中。激烈攪拌混合物24小時後，蒸發ch2C12 。添加約5 0毫升水’以Et20萃取水層4次。醚溶液經無水硫酸納脱水，然後蒸發。殘質通過短Si管柱，產生3.21克少希丙酯 N(收率 93%)之無色油，[a]D-8.4。（c 1.1，CHC13); IRn -118- 本纸張尺度適用中國國家標率（CNS ) ΛΑ規格（2lOX 297公釐） ^^^1- If— 151 ·1 -I —j n^— 1>ϋ1 .^/ nn· —^v— Jm «1^1— « J. 1^^1- n^i ^^^^1 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) A7 B7 45 897 2 五、發明説明（116) 3464, 2957, 1732, 1203, 1140, 1087 cnr!; Ή NMR d 5.92(稀丙基2-H; m)，5.34(烯丙基3-Hz; dd，17.4/1.1)，5 28(烯丙基3_he; dd，10.5/1,1)，4.67(晞丙基 1-H2; d，5.7)，4_23(2-H; br s), 2.64 (OH; br s), 1.89(4-H; m), 1.57(3-H2; m), 0.96(5-H3; d, 6.5), 0.95(4-Me;d，6.7);i3CNMR(n75.3(l)，13l.4(_$SC-2), 118.6(3), 68.9(2), 65.7(烯丙基C-1)0, 43.2(3)，241(4)，23,0(5)， 21.3(4-Me)。 (2S)-2-[3，-(三級丁氧羰基）胺基-2，，2，-二甲某丙醯氣基卜4-甲基戊酸烯丙酯（Ο) 添加0.84克DCC(4.1毫莫耳）之CH2C2溶液至（TC下，含0.8 克Μ(3·7毫莫耳）、〇_76克N(4.4毫莫耳）及92毫克DMAP之1〇毫升無水CH2C12溶液中。混合物於25°c下攪拌3小時後，過濾。濾液以飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌，脱水（Na2S04)，及眞空蒸發。急驟層析（矽膠，5% EtOAc/己烷）產生1.0克（收率 92%)純 Ο之無色油，Rf 0.68(17:83 EtOAc/己烷），[a]D-29.4。 (c 18.1，CHCI3);EIMSm/z(相對強度）371(2, M+), 242(13)， 184(12), 126(20), 84(100); HRETMS m/z 371.23 17(C19H33N06, D-0‘9 mmu); IR(無溶劑）n_ 3385, 2963, 1731，1720, 1513 cm1; Ή NMR(300 MHz，CDC13)單位C d 5.39(NH;模糊之br s)， 3.33(3-H; dd, -13.5/7.4), 3.27(3-H'; dd, -13.5/5.9), 2.78(2-H, m), 1.44(CMe3; s)，1.23(2-Me; s), 1.22(20Me; s);單位D d 5.91 ( 烯丙基 2-H, ddt, 16.6/10.3/6.0 Hz), 5.34(烯丙基 3-Hz; bd，16.6)， 5.27(烯丙基3-HE; bd，10.3L 5.08(2-H; dd, 9.6/3.6), 4.65(烯丙基 1-H2; m)，1.6-1.9(3-H2/4-H; m)，0.94(5-H3; d，6.3)，0.94(4- -119- 本紙浪尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2l〇x297公釐） n- ί. - J In . ....... n —^n I - m 19^1 HI— ^^^1 (請先閱讀背而之注意事項存填寫本筲) 經濟部中央標隼局員工消費合作社印製 458972 A7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 _ B7五、發明説明（117) Me;d，7.3)。 13CNMR 單位 Cdl76.5(l)，156.3(B〇CQO), 79.0(CMe3), 48.6(3), 44.0(2), 28.4(CMe3), 22.2/23.0(2-Me2); 單位 D d 170.6(1)，131.4(烯丙基 C-2), 119.1(烯丙基 C-3), 70.9(2)，66.0(烯丙基 C-l), 39.5(3)，24.8(4)，23.0(5)，21.5(4-Me) 0 (2S)-2-『3'-(三級丁氧羰基）胺基-2_,2，-二甲基丙醯氧基1-4-甲基戊酸（P) 以10分鐘時間，緩緩添加470毫升（5.4毫莫耳）之無水嗎啉至10毫升含180毫克（0.49毫莫耳）〇與60毫克（0.05毫莫耳）肆（三苯基膦）鈀之無水THF溶液中（於氬氣下）^攪拌50分鐘後，添加40毫升醚，以1NHC1(40毫升）洗滌溶液後，以飽和碳酸氫鈉萃取（2 X 30毫升）水性萃液以〇·5 N HC1酸化，以醚萃取（40毫升）。醚萃液以水洗滌（2 X 30毫升），脱水 (MgS04)，及眞空濃縮，產生P之無色可流動性油（1 52毫克，95%);[a]D-22.2。〇2.2,0^<：13);丑1]^111/2(相對強度）331 (1, M+), 275(1), 258(4), 231(9), 202(36), 174(13), 144(31), 126(16), 114(14), 98(54), 88(50), 84 9100); HREIMS rn/z 33 1.2004 (C16H29N06, D-10 mmu)。Ή NMR(CDC13)單位 C d 5.41(NH; dd, 5.7/5.4), 3.30(3-H2; ra), 2.68(2-H; tn), 1.43(CMe3; br s), 1‘22(2-Me; s)，，1.21(2-Me; s);單位D d 6.47(l-OH; br s, Wl/2« 35), 5.09(2-H; dd, 9.3/2.7), 1.7-1.9(3-H2/4-H; m), 0.97(5-H3; d, 6.0)，0..94(4-Me; d，6.0)。13C NMR(CDC13)單位 C d 176.5(1), 156.5(BOC CO), 79.3(CMe3), 48.6(3), 44.0(2), 28.3(CMe3), 23.0(2-Me), 22.2(2-Me);單位 D d 175.4(1)，70.6 裝 (請先閱讀背而之注意事項再填寫本頁〕 -5 Μ -120- 未紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（2丨0 X 297公釐） 458972 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明（ne) ⑺，39.5(3)，24.8(4)，23.0(5)，21.4(4-Me)。

化合物Q

添加含DCC(44毫克，0.21毫莫耳）之無水CH2C12(1毫升）溶液至於0°C及氬大氣下攪拌之含K醇（80毫克，0.14毫莫耳）、：P酸（68毫克，0.21毫莫耳）及DMAP(4毫克）之無水 CH2C12(4毫升）溶液中。混合物於〇°C下攪拌30分鐘，此期間出現白色沈澱，然後使之回升至室溫，再攪拌4小時。濾出沈澱，濾液以Et2O(40毫升）稀釋，依序以稀HC1(1M，40毫升）、飽和NaHCO3(40毫升）及鹽水（40毫升）洗滌。醚層脱水 (MgS04)，及眞空蒸發，產生蠟狀固體。經層析（矽石， EtOAc:己烷，1:3)，產生純Q之無色粘稠油（103毫克，84%)， [a]D-3.1。（c 2.9, CHC13); EIMS m/z 800/802/804/806(<1, M+-C5H802), 415/417/419/421(5/3/3/2), 342/344/346(7/9/4), 286/288/290(2/6/2), 207(34), 178(22), 155/157(66/24), 131 (36), 91(70), 70(100); HREIMS m/z 800.21 79(C38H48N20835C14, D -1.4 mimi); UV(MeOH) 1 赚（e) 204(51200)，230(18500), 248(17200), 282(2200) nm; IR(NaCl) nmax 3376, 2965, 1755, 1728,1712,1678,1504,1258,1150,1067,732 cm1 ° Ή NMR (CDC13) d 單位 A: 7.28-7.33(10-H/14_H/ll-H/13-H; m)，7.22 (12-H; m), 6.78(3-H; ddd, 15.8/6.4/6.3), 6.40(8-H; d, 15.8), 6.01(7-H; dd, 15.8/8.7), 5.88(2-H; dd, 15.8), 5.06(5-H; bm, W1/2«20 Hz), 2.62(6-H; m), 2.53(4-H2; bm, W1/2«15 Hz), 1.12(6-CH3; d，6.8);單位 B 7.18(5-H; d，2-0), 7·05(9-Η; dd， 8.5/2.0), 6.83(8-H; d, 8.5), 6.49(NH; d, 7.9), 5.06(2-H; bm, -121 - 本紙張尺度適用中國國家榇準（CNS ) A4规格(210 X 297公釐） ^Bn V cl^t UK— Ir^n n .·. —m nn 1·11 i - -. 、vd (請先閲讀背面之：λ£意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 Α7 Β7 五、發明説明（119) W1/2«20 Hz), 4.79/4.70(CH2CCl3; AB q, -11.7), 3.85(〇CH3;

s)，3.20(3-Hb; dd，-14.1/5.8)，3.07(3-Ha; dd，-14.1/6.7);單位C 5.38(NH; bt, 6.5), 3.27(3-H2; d, 6.5), 1.20*(2-CH3； s), 115* (2-CH3'; s);單位 D 4_92(2-H; dd，10.0/3.8)，1.72(4-H; bm, W1/2«20 Hz), 1.67(3-Hb; άύά, -14.1/10.0/5.0/), 1.56(3-Ha, ddd, -14.1/9.1/3.8), 1.43(C02CMe3; s), 0.86+(4-CH3；d, 6.4), 0.82+(5-H3; d, 6.4) ° 13C NMR(CDC13) d 單位 A 165.4(1), 139.3 (3), 136.9(9), 131.7(8)130.1(7), 128.6(1 1/13), 127.5(12), 126.2(10/14), 125.4(2), 76.5(5), 41.1(6), 33.4(4), 16.7(6-Me)；單位 B 170.0(1)，154.1(7)，131.2(5), 128.8(4), 128.5(9)， 122.3(6), 1 12.1(8), 94.3(CH2CC13), 74.6(CH2CC13), 56.1(7-OMe), 53,2(2)，36.6(3);單位 C 176.9(1)，156.4(Q02CMe3), 79.1(C02CMe3), 48.7(3), 44.0(2), 22.8*(2-Me), 22.3*(2-Me'); 單位 D 170.7(1)，71.4(2)，39.5(3), 28.4(C02CMe3), 24.8(4), 23.0+(4-Me)，21.4+(5)。（上標符號相同之共振性表示可相互交換。

胺基酸R 添加活化鋅粉（400毫克，過量）及AcOH(4毫升）至胺基酸 Q(i〇〇毫克，0.11毫莫耳）中。此多相混合物進行音波處理 45分鐘，於室溫下攪拌9〇分鐘後，倒至寅式鹽墊上。以 CH2C12洗下寅式鹽墊上之有機物。眞空排除溶劑，留下叛酸之無色不定形固體。粗酸在未純化下即溶於三氟乙酸（TF a，5毫升）中，於室溫下攪拌〗小時。之後眞空排除過量之TFA ’所得之不定形 ______ -122- 本纸張尺度適用悄國·家標準（CNS ) A4“97公楚] (請先閱讀背而之注意事項存填寫本貰) % 45 8 y 72 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作杜印製五、發明説明（120) 固體經層析純化（Sep-Pak™，矽石，依序使用CH2C12及 1 0%/MeOH/CH2Cl2)，產生所需化合物之三氟乙酸銨鹽。鹽之水溶液經過重覆冷凍乾燥後，產生游離胺基酸R之無色不定形固體（68毫克，二個步驟共91%);IR(NaCl)nmax 3300, 3200, 2965, 1693, 1606, 1504, 1441, 1259, 1201, 1146, 1066, 727 cn^。Ή NMR(CD3OD) d 單位 A; 7.33(10-H/14-H; d, 7.4), 7.28(11-H/13-H; t, 7.4), 7.1 8-7.23(1 2-H; m), 6.69(3-H; ddd, 15.6/7.7/7.0), 6.43(8-H; d, 15.8), 6.04(7-H; dd} 15.8/8.9), 6.00(2-H； d, 15.6), 5.01(5-H; ddd, 9.1/6.9/3.1), 2.64(4-Hb; bm, W1/2«30 Hz), 2.60(6-H; bm, W1/2«20 Hz), 2.49(4-Ha; ddd，15.8/9.1/7.7)，1.13(6-Me;d，6.7);單位 B 7.18-7.23(5-H; m), 7.11(9-H; dd, 8.3/1.6), 6.92(8-H; d, 8.3), 4.59(2-H; bm, W1/2«20 Hz), 3.81(OCH3; s), 3.14(3-Hb; dd, -13.7/4.3), 2.96 (3-Ha; m, W1/2«20 Hz);單位 C 2.96(3-H2; bm, W1/2«20 Hz), 1.3r(2-CH3; s)，1.25*(2-CH3·; s);單位 D 4.90(2-H; dd, 9.6/4.0)， 1.66(4-H; bm, W1/2«25 Hz), 1.59(3-Hb; ddd, -14.4/9.6/4.8), 1.53(3-Ha; ddd, -14.4/9.1/4.0), 0.81+(4-Me; d, 6.5), 0.74+(5-H3; d，6.5)。13C NMR(CD3OD)d 單位 A 167.7(1)，140.7(3)， 1 38.4(9), 133.0(8), 131.7(7), 129.6(1 1/13), 128.5(12), 127.3 (10/14)，127.1(2)，78.4(5)，43.1(6)，35.7(4)，17.4(6-Me);單位 B 179.8(1)，155.2(7)，132.3(4)，132.1(5)，130.1(9)，123.0 ⑷， 113.4(8)，56.6(7-OMe)，56.6(2), 37.8(3)，單位 C 176.8(1), 48.3(3)，42.2(2)，23.3*(2-Me)，23.3*(2-M〇;單位 D 172.0(1)， 73.4(2)，40.7(3)，26,0(4)，23.l+(4-Me), 21.8+(5)。（上標符號相 -123- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（2丨〇 X 297公釐） (請先閲讀背而之注意事項再填寫本頁) -9 4 5 8 9 7 2 五、發明説明（121) 同之共振性表示可以交換）。克力托懷辛5 1 於室溫及氬氣下，依序添加二異丙基乙胺（DIEA，44毫克 ’ 60毫升’ 0.34¾莫耳’ ^3當量）及含五氟二苯基次膦酸醋 (FDPP，55毫克，0.14毫莫耳，免1 3當量）之DMF(2毫升）溶液至含胺基酸T(75毫克，on毫莫耳）之無水DMF(2〇毫升) 攪拌溶液中。混合物攪拌12小時，添加Et2〇(4〇毫升），醚層依序以HC1(1M，40毫升）、鹽水（4〇毫升）&H2〇(4〇毫升）洗滌’脱水（MgS 〇4) ’及減壓蒸發。殘留之蟻狀固體再經逆相層析法純化（ODS，10米，30% H20/MeCN，3毫升/分鐘) ，產生克力托懷辛51之無色不定形固體（45毫克，61%)， [a]D +26.4° (c 2.5, CHC13); EIMS m/z 652/654(M+,3/l), 632/ 634(3/2), 426/428(51/15), 227(64), 195/197(64/22), 155/ 157(71/15), 131(59), 91(100); HREIMS m/z 652.2936 (C36H45N2〇 735Cl, D -2.1 mmu); UV(MeOH)lmax (e) 204(52000), 228(20400), 250(13400), 284(2800) nm; IR(NaCl) nmax 3376, 3270,2960, 1747, 1721, 1659, 1536, 1514, 1259, 1150, 1066, 1013, 980, 694 cm1。Ή NMR (CDC13) d 單位 A: 7.32 (10-H/ 14-H; dd, 8.0/1.5), 7.29(11-H/13-H;t, 8.0), 7.24(12-H; bm, W1/2« 15 Hz), 6.77(3-H; ddd, 15.1/10.8/4.3), 6.40(8-H; d, 15.8), 6.01(7-H; dd, 15.8/8.8), 5.76(2-H; dd, 15.2/1.1), 5.04 (5-H; ddd, 11.1/6.4/1.9), 2.54(4^^6^; bm, W1/2«15 Hz), 2.37(4-Ha; ddd，-14.3/11.1/10.8), 1.13(6-Me; d, 6.8);單位B 7.20(5.H; d, 2.0), 7.05(9-H; dd, 8.4/2.0), 6.84(8-H; d, 8.4), 5.61 (NH; d, -124- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4规格（2丨〇乂297公釐〉 {請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁訂經濟部中央標率局員工消費合作社印製 458972 A7 B7 五、發明説明（122) 7 8), 4.74(2-H; ddd, 7.8/7.6/5.4), 3.87(OMe; s), 3.11 (3-Hb; dd, -14.2/5.4)，3.06(3-Ha; dd，-14.2/7.6);單位 C 7.24 (NH; bm, W1/2«15 Hz),3.40(3-Hb; dd, -13.5/8.5), 3.12(3-Ha; dd, -13.5/ 3.6)，1.22*(2_Me; s)，1.15*(2-Mei; s);單位 D 4.85(2-H; dd， 10.2/3.6), 1.66(3-H; ddd, 14.0/1 0.2/4.6), 1.61(4-H, bm, W1/2« 20.0 Hz), 1.33(3-Ha; ddd, -14.0/9.0/3.6), 0.74+(4-Me; d, 6.6), 〇-72+(5-H3; d, 6‘6)。13C NMR(CDC13) d 單位 A 165,1(1), 142.2 (3), 136.7(9), 131.7(8)1 30.1(7), 128.6 (11/13), 127.5(12), 126.1(10/14), 124.6(2), 77.0(5), 42.2(6), 36.5(4), 17.3(6-Me); 單位 B 170.3(1)，154.1(7)，130.9(5)，129.5(4)，128.3(9)，122.5 (6)，112.3(8)，56.l(7-OMe)，54.2 (2)，35.3(3);單位 C 178.0(1)， 46.5(3)，42.7(2)，22.8*(2-Me)，22.6*(2-Me');單位 D 170.6(1), 71.5(2)，39.5(3)，24.5(4)，22.7+(4-Me), 21.2+(5)(上標符號相同之共振性表示可以交換）。實例1 2 克力托懷辛5 2與克力托懷辛5 3之合成法添加含間氯過苯甲酸（mCPB A，50毫克，0.23毫莫耳，〜2 當量（以80%活性氧爲準計算）)之二氣甲烷毫升）溶液至與氬氣下’含克力托懷辛51 (75毫克，0.12毫莫耳）之無水二鼠甲燒（7·5笔升）授拌法液中。30分鐘後，使反應混合物回升至室溫’再搜:拌12小時。減壓排除溶劑，產生克力托懷辛52與53之1.8:1混合物（NMR分析法），爲不定形固體。此特定取向異構性環氧化物溶於最少量乙腈中，進行逆相層析法（YMC-ODS，10米 ’ 250毫米 X 22 5毫米，3〇% H20/MeCN，6毫升/分鐘），分離克力托懷辛52(37毫克， -125- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公楚） (請先閲讀背面之注意事項再填.寫本頁裝_

*1T 經濟部中央標準局員工消費合作社印製經濟部中央標準局員工消費合作社印黎 ab 8972 A7 _____B7 __ 五、發明説明（123) 48%)與克力托懷辛53(19毫克，25%)。克力托懷辛52之光譜數據 [a]D +19.9° (c 0.5, CHC13); E1MS m/z 668/670(4/2, M+)， 445(35), 244(12), 227(22), 195/197(66/27), 184(45), 155/ 157(38/10), 91(100); HREIMS m/z 668.2873 (C36H45N20835C1, D -0.9 mmu); 445.2497(C25H35N06, D -3.3 mmu); UV(MeOH) lmax (e) 204(35100), 218(20900) nm; IR(NaCl) 3415, 3270, 2960, 1748, 1721, 1650, 1536, 1504, 1260, 1192, 1150, 1066, 1013, 800, 698 cm1。Ή NMR(CDC13) d 單位八 7.33-7.38 (1 1-H/12-H/13-H; bm, W1/2«25 Hz),, 7.24(10-H/14-H; m, W1/2«15 Hz), 6.76{3-H; ddd, 15.1/10.8/4.3), 5.71(2-H; dd, 15.1/1.7), 5.20(5-H; ddd, 11.0/5.0/1.8), 3.68(8-H; d, 1.9), 2.92(7-H; dd, 7.5/1.9), 2.57(4-Hb; ddd, -14.6/1.8/1.7), 2.57 (4-Ha; ddd,-14.6/11.0/10.8), 1.78(6-H; bm, W1/2« 15Hz), 1.14(6-Me; d, 6.9);單位3 7.18(5-印<1，2.2),7.04(9-11;€^，8.4/2.2)，6.83(8-H; d, 8.4), 5.56(NH; d, 7.9), 4.73(2-H; ddd, 7.9/7.4/5.3), 3.87(OMe; s)，3.09(3-Hb; dd，-14.6/5.3)，3.05 (3-Ha; dd，-14.6/7.4);單位 C 7.20(NH; dd，8.6/3,2), 3.41(3-Hb; dd, -13.4/ 8.6), 3.10(3-Ha; dd, -13.4/3.2), 1.22*(2-Me; s), 1.15*(2-Me', s); 單位 D 4.82(2-H; dd，10.2/3.5), 1.73(3-Hb; bm, W1/2«20 Hz), 1.66(4-H; bm, W1/2«20 Hz), 1.31(3-Ha; ddd, -13.8/9.1/3.5), 0.84+(4-Me; d, 6.6)，0.82+(5-H3; d, 6.6); 13C NMR(CDC13) d 單位 A 164.9(1)，141.8(3)，136.7(9)，128.7(11/13), 128.3(12)， 125.6(10/14), 124.7(2), 75.9(5), 63.0(7), 59.0(8), 40.7(6), -126- 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公餐） ϋ ϊ —ί Α衣 ί "^訂 1 I 1 r_ I—'if (請先閲讀背而之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印聚 5 89 72 A7 _____B7五、發明説明（124) 36.9(4)，13.5(6-Me)，單位 B 170.3 (1), 154.1(7)，130.9(5)， 129.5(4), 128.5(9), 122.6(6), 112.4 (8), 56.1(7-〇Me), 54.3(2), 35.3(3)，單位 C 178.0(1)，46.5(3)，22.8(2-Me), 42.8(2-Me，），單位 D 170.5(1)，71.2(2)，39.3(3)，24,6(4)，22.7+(4-Me)， 21.2+(5)。（上標符號相同之共振性可以交換）。克力托懷辛53之光譜數據 [a]D +20.8° (c 1‘7, CHC13); EIMS m/z 668/670(5/4, M+)， 445(32), 244(15), 227(24), 195/197(64/21), 184(60), 155/ 157(33/9), 91(100); HREIMS m/z 668.2853 (C36H45N20835C1, D 1.1 mmu); UV(MeOH) (e) 204(38700), 218(22900) nm; IR(NaCl) nmax 3415, 3280, 2917, 2849, 1748, 1722, 1660, 1504, 1465, 1260, 1190, 1150, 1066, 755 cm1。Ή NMR(CDC13) d 單位A 7.29-7.36 (11-ΗΛ2-Η/13-Η)，7.23(10-H/14-H; dd，8.3/1.7)， 6.77(3-H; ddd, 15.1/10.9/4.3), 5.81(2-H; dd, 15.1/1.3), 5.17(5- H, ; ddd, 11.2/4.9/1.8), 3.58(8-H; d, 1.7), 2.90(7-H; dd, 7.8/1.7), 2.67(4-Hb; ddd, 14.7/11.2/10.9), 2.56(4-Ha; dddd, 14.7/4.3/1.8/ I. 3)，1.67-1.78(6-H; bm，W1/2j»45)，1.03(6-CH3; d, 7.1);單位 B 7.21(5-H; d, 2.1), 7.07(9-Η; dd, 8.5/2.1), 6.84(8-H; d, 8.4), 5.90(2-NH; d, 7.9), 4.75(2-H; ddd, 7.9/7.9/4.9), 3.85(7-OCH3; s), 3.14(3-Hb; dd, 14.5/4.9), 3.03(3-Ha; dd, 14.5/7.9);單位 C 7.29-7.36(3-NH; bm, W1/2« 25), 3.43(3-Hb; dd, 13.7/8.8), 3.10(3-Ha; dd, 13.7/3.4)，1.23*(2-CH3; s), l.iyp-CH/; s);單位〇4.92(2-11;€1(1,10.3/3.2)，1.73(3-'«15;13111，1\^1/2；%；45)，1.67-1.78(4-H; bm, W1/2«45), 1.48(3-Ha; ddd, 13.9/8.8/3.2), 0.89+ -127- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本页) '裝訂本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4规格（2〗0X297公釐） 458972 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（125) (4-CH3; d，6.6)，0.86+(5-H3; d，6.6) ° 13C NMR(CDC13) d 單位 A 165.1(1), 142.0(3), 137.0(9), 128.5(1 1/13), 128.5(12), 125.3(10/14), 124.6(2), 76.7(5), 63.2(7), 56.2(8), 40.8(6), 36.7(4)，13.4(6-Me);單位 B: 170.4*(1), 154.0(7)，130.8(5)， 129.7(4), 128.2(9), 122.5(6), 1 12.3(8), 56.1(7-OMe), 54.4(2), 35.3(3);單位 C 177.9(1), 46.4(3), 42.7(2), 23.0°(2-Me)，22.7U (2-Me');單位〇170.5*(1)，71.3(2)，39.2(3),24,7(4)，22.8+(4_ Me)，21.3+(5) ° (上標符號相同之共振性表示可以交換）。實例1 3 克力托懷辛5 5之合成法添加2微升12NHC1至含克力托懷辛52(6毫克，0.009毫莫耳）之0.6毫升2:1 1,2-二甲氧乙烷/水之溶液中。溶液於室溫下攪拌20小時，以碳酸鉀中和，經5m濾紙過濾，及蒸發。取乙腈可溶物於C18上進行逆相HPLC(25〇x 10毫米管柱），使用4:1 MeOH/H20純化，產生3.0毫克克力托懷辛55(48%) ° Ή NMR(CDCl3)d 單位 A 7.35-7.42(10-H/ll-H/12-H/13-H/ 14-H; m), 6.78(3-H; ddd, 15.1/10.6/4.5), 5.78(2-H; dd, 15.1/ 1.7), 5.16(5-H; ddd, 11.1/8.3/2.1), 4.65(8-H; d, 9.7), 4.01(7-H; bd, 9.7), 2.69(4-Hb; dddd, -14.5/4.5/2.1/1.7), 2.50(6-H; bm, W1/2«15), 2.38(4-Ha; ddd, -14.5/11.1/10.6), 1.53(7-OH, s), 1.04(6-Me，d, 7.1);單位 B 7.21(5-H; d, 2.2)，7.07(9-H; dd, 8.5/2.2), 6.85(8-H; d, 8.5), 5.57(2-NH; d, 7.8), 4.74(2-H; ddd, 7.8/7.6/5.2), 3.88(7-OCH3; s), 3.13(3-Hb; dd, 14.5/5.2), 3.05(3-Ha; dd, 14.5/7.6);單位 C 7.21(3-NH; m)，3.38(3-Hb; dd， 13.5/8.3), 3.17(3-Ha; dd, 13.5/4.1), 1.23*(2-CH3; s), 1.17*(2- -128- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ........ 1!-1 —TUF r EE .^11 I -- I- I— - '"^- - --- ......... ϋ T- - - - I --aJ..... I- -i I...... I - n {請先聞讀背面之注意事項再填·"本页) 458972 經濟部中央樣準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（126) CH3(； s),單位 D 4.93(2-H; dd，10.1/3.5)，1.78(3-Hb; ddd, 13.5/ 10.1/5.0), 1.72(4-H; bm, W1/2«20), 1.43(3-Ha; ddd, 13.5/8.8/ 3.5)，0.92 + (4-CH3; d, 6.6)，0.92 + (5-H3, d，6.4)。 I3C NMR (CDC13) d 單位八165.1((：-1)，142.4((：-3)，138.4((：-9)，129.0((：-11/13), 128.3(C-12), 128.0(C-10/14), 124.6 (C-2), 76.1(C-5), 74.1(C-7), 62.0(C-8)，38.4(C-6), 36,5(C-4), 8.6(6-Me);單位 B 170.3(C-1), 154.1(C-7), 130.9(C-5), 129.6 (C-4), 129.2(C-9), 122.6(0-6), 112.3(C-8), 56.1(7-OMe), 54.3(C-2), 35.3(C-3); 單位 C 177.8(C-1)，46.5(C-3)，42.8(C-2), 22.9(2-Me), 23.0(C-2-Me’）；單位 D 170.3(C-1), 71.3(C-2), 39.7(C-3), 24.8(04)， 22.7+(4-Me), 21.6+(C-5)。（上標符號相同之共振性表示可以交換）°亦得到相應之二醇，克力托懷辛56(2.8毫克，收率 44%) ° 實例14 克力托懷辛57之合成法添加觸媒量Pt〇2至含0.5毫升(：112(：12之燒瓶中。抽除燒瓶中之空氣，引進H2,混合物於室溫下攪拌20分鐘β添加於最少量CH2C12中含1〇毫克克力托懷辛52之溶液，混合物於室溫下攪拌45分鐘。經寅式鹽/棉花過濾排除觸媒，蒸發溶劑°殘質於C1 8管柱上進行逆相HPLC，產生克力托懷辛57 。Ή NMR(CDC13) d 單位 A 2.32(2, ddd; -14.5, 9.2, 5.8)，2_10 (2, ddd; -14.5, 9_2, 6.2)，1.5-1.8(3/4 重疊 m), 5.07(5, ddd; 12.5, 5.6, 2.0), 1.80(6, m), 1.12(6-Me, d; 7.0), 2.90(7, dd; 7.4, 1.8), 3.67(8, d，1.8)，7.24(10/14, m), 7.32-7.38(11/12/13, m);單位 B 4.71(2, ddd; 8.7, 6.4, 6.3), 5.62(2-NH, d; 8.7), 3.08 (2H-3, br d; -129- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α·4規格（210Χ297公釐）〔請先閲讀背面之：^-意事項再填荇本頁) .裝 '1r 經濟部中央標準局員工消費合作杜印製 ο 8972 Α7 ________Β7_ 五、發明説明（127) 6-4), 7.19(5, d; 2.0), 3.87(7-OMe, s), 6.83(8, d; 8.5), 7.07(9, dd; 8.4, 2‘0);單位 c 7 20(NH; dd 8 6/3 2) 3 41(3_叫此 13.4/8.6), 3.1〇(3-Ha; dd, -13.4/3.2), 1.22*(2-Me; s), 1.15^(2-

Me，； s);單位 D 4‘83(2, dd; 9.9, 3.8)，1.39(3, m)，L70 (3, m), 1.72(4, m)，0.87(4-Me，d; 5.3)，0.86(5, d; 5.3)。克力托懷辛5 8之合成法添加2微升12NHC1至含克力托懷辛57(6毫克，0.009毫莫耳）之0.6¾升2:1 ]，2-二甲氧乙燒/水之溶液中。溶液於室溫下攪拌4小時，以碳酸鉀中和，及蒸發。殘質分佈在水與 CH2C12之間。CH2C12可溶物於C1 8上進行逆相HPLC使用4:1 MeOH/H2純化，產生純克力托懷辛58。Ή NMR(CDC13) d單位 A 2.32(2, ddd; -14.5, 9.2, 5.8)，2.10 (2, ddd; -14.5, 9.2, 6.2), 1.5-1.8(3/4 重疊 m), 5.07(5, ddd; 12.5, 5.6, 2.0), 1.80(6, m)， 1.12(6-Me, d; 7.0), 2.90(7, dd; 7.4, 1.8), 3.67(8, d, 1.8), 7.24 (10/14, m), 7.32-7.38(11/12^3，m);單位 B 4.82(2-H，ddd; 8.8/ 7.2/5.6), 5.64(2-NH, d; 8.8), 3.03(3-H, dd;- 15.4/7.2), 3.16(3-H; dd; -15.4/5.6), 7.23(5-H, d; 2.2), 3.88(7-OCH3, s), 6.85 (8-H; d, 8.5), 7·09(9·Η; dd, S.5/2.2);單位 C 7.20(NH; dd, 8.6/ 3.2), 3.41(3-Hb; dd, -13.4/8.6), 3.10(3-Ha; dd, -13.4/3.2), 1.22*(2-Me; s), 1.15*(2-Me，； s);單位 D 4‘92(2-H; dd; 10.1/3.5), 1.76(3-H/4-H; m), 1.45 (3-H; m), 0.94(5-H3; d, 6.6), 0.94(4-Me, d; 6.4) ° 實例1 6 克力托懷辛6 1之合成法依序添加三苯基膦化硫（4毫克，0.014毫莫耳）及〇_65微升 -130- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2!0X297公釐） I ί! I n I ΐ衣 I ΓΓΙ >訂 f (請先閡請背面之注意事項再填寫太頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印裳 ,, A7 _ 五、發明説明（128) 三氟乙酸之無水苯溶液（100微升）至含克力托懷辛53(5毫克，0,007毫莫耳）之0.5毫升無水苯溶液中。溶液於室溫下攪掉6小時，以碳酸氫鈉中和，過濾及蒸發。殘質分佈在水與 CH2C12之間。<^2<：12可溶物於C18上進行逆相HPLC，使用 4:1 MeCN/H20純化，產生純克力托懷辛61(1.9毫克，37%) 。Ή NMR(300 MHz, CDC13) d 單位 Α 7.24-7·35(10/11Λ2/13/ 14-H; m), 6.73(3-H; ddd; 15.0/10.2/4.8), 5.67(2-H; d, 15.0), 5.23(5-H; bm, Wl/2«15 Hz), 3.68(8-H; d, 5.1), 3.01(7-H; dd, 8.3/5.1), 2.52(4-Hb; bm, W1/2« 15 Hz), 2.41(4-Ha; ddd, -14.6/ 1 1.1/10.8)，1.6-1.8(6-H; m), 1.15(6-Me; d，6.9)單位 B 7.18 (5-H; d, 2.1), 7.04(9-H; dd, 8.4/2.1), 6.84(8-H; d, 8.4), 5.45 (NH; d, 7.8), 4.75(2-H; ddd, 7.8/7.2/6.9), 3.88(OMe; s), 3.08(3-bm’ W1/2«15 Hz);單位 C 7.17(NH; m)，3,40(3-Hb; dd, -13.6/ 8.4), 3.13(3-Ha; dd, -13.6/3.6), 1.23*(2-Me; s), 1.16*(2-Me’；S); H, m), 1.43 (3-Ha; bm, Ψυ2κ 15 Hz), 0.92+(4-Me; d, 6.6), 0.88+(5，H3; d，6.6) 〇本説明書中所摘綠之所有文獻及專利申請案（但並非單獨及特別納入參考者）’若已明確分別指明已納爲參考文獻時，則均爲本文之參考文獻。雖然上述本發明爲了闡明之目的，已利用説明及實例詳説明’但相關技藝專家們由本發明即咸了解，可在不偏離申請專利之範圍或精神内進行某些改變或修正。 tMU.鼓_構式-活性關係（SAR) -131 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21〇X 297公釐} I n .~~, 1 r I I IM (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) Α7 Β7 五、發明説明（129) 克力托懷辛5 1及克力托懷辛3對人類腫瘤細胞系如：KB與 LoVo均展現差不多之細胞毒性（1(：50爲2至4毫微克/毫升）。此外，克力托懷辛5 2 (IC50爲25至50微微克/毫升）與克力托懷辛丨（1(：50爲5至20毫微克/毫升）亦展現差不多之細胞毒性 ((1<：50爲1 5至4 5微微克/毫升）。在小白鼠實驗中，克力托懷辛5 2之急性與慢性毒性大於克力托懷辛1 ;然而，抗腫瘤活性仍在致死劑量以下。克力托懷辛52與克力托懷辛1具有相差不多之活體内活性。克力托懷辛52可活性對抗胰管腺癌瘤#0.3，於8.1毫克/公斤時，其腫瘤負荷T/C(處理組動物之平均腫瘤負荷/未處理組動物之平均腫瘤負荷）爲16%，且（腫瘤細胞）總消減對數値<2。克力托懷辛52可活性對抗早期結腸腺癌瘤#33，於 8.1毫克/公斤時，其腫瘤負荷T/C爲4%，且（腫瘤細胞）總消滅對數値<2。經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 根據NCI標準，T/C値在42%以下即視之具有優越活性 ;T/C値在10%以下時，則認爲其活性優越且具有可能之臨床活性，總消滅對數値之定義爲T-C/3.2 Td其中T爲處理組之腫瘤達到750毫克時所需天數之中間値，c爲對照組之腫瘤達到750毫克時所需天數之中間値，且Td爲腫瘤體積加倍時所需時間（T.H.柯貝特（Corbett)等人之"細胞毒性抗癌藥· 藥物發明與發展之模式與觀念"（Cytotoxic Antieaneei· DmgS: Models and Concepts for Drug Discovery and Development), pp 3 5-87; Kluwer:Norwell，1992)。在藥物治療 5至 20天期間，總消滅對數値 >2.8、2.0-2.8、1.3-1.9、0,7-1.2 及 <〇·7 時，分別 -132- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）經濟部中央標準局員工消費合作社印11 458972 A7 B7 _ 五、發明説明（13〇) 劃分爲++++、+++、++、+及-(無活性）〇 +++至++++之活性等級則表示有臨床活性，爲使小白鼠體内大部份植入之固體腫瘤中1 〇〇至300毫克大小之腫瘤部份或完全消退時所需之活性。克力托懷辛1之T/C値爲0至27%，消滅對數値範圍在 <〗至2。克力托懷辛8之T/C値範圍在0至1 8%，消滅對數値範園在1.8至>4.6(癌癒）。參考文獻 1. Eglof, G., Oranic Chemistry: An Advanced Treatise, Gilmar et al. (ed.), pp. 31-46, John Wiley & Sons (1943)。 2. Kemp, et al., Organic Chemistry, Worth Publishers, Inc. (1980)。 3. Patterson, G.M.L. et al. J. Phycol. 27:530-6(1991)。 4. Corbett, T.H. et al. Cytotoxic Anticancer Drugs: Models and Concepts for Drug Discovery and Development, pp 35-87; Kluwer Academic Pubishers: Norwell, 1992。 5. Valeriote, F.A. et al., Discovery and Development of Anticancer Agents; Kluwer Academic Publishers: Norwell, 1993;付印中。 6. Schwartz, R.E. et al. J. Ind. Microbiol. 5:113-24(1990)。 7. Hirsch，C.F. et al·美國專利案 4,946,835, 1990年 8 月 7 日申請〇 8. Sesin，D_F.美國專利案4,845,085, 1989年7月4日申請。 9.865111，〇.?.;1^5^1，_1.14.美國專利案4,868,208，1989年9月 19曰申請。 -133 - 本紙張尺度適用中國國家橾準（CMS ) Α4规格（210X 297公釐） ---------裝------訂------Μ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 4 5 89 A7 B7 五、發明説明（131) lO.Sesin D.F‘美國專利案4,845,086, 1989年7月4日申請。 1 l.Skehan, P. et al.,J. Natl. Cancer Inst. 82: 1107-1112 (1990) o 12. Bradley, G. et al. Cancer Res. 49:2790-2796(1989)。 1 3.Endicott, J-A. et al. Ann. Rev. Biochem. 58: 137-171 (1989) » 14. Beck, W.T. Biochem. Pharm. 36: 2879-2887(1987)。 15. Moscow, J.A. et al., J. Natl. Cancer Inst. 80: 14-20(1988) o 1 6. Trimurtulu, G. et al., "Total structures of cryptophycins, potent antitumor depsipeptides from the blue-green alga Nostoc sp. strain GSV 224", J. Am. Chem. Soc. 116: 4729-4737(1994)= 17. Smith, C D. et al.,"Cryptophycin: a new microtubule depolymerizing agent active against drug resistant cells", Cancer Research 54: 3779-3784(1984) 0 (請先閱讀背面之注意?項再填寫本頁裝. Μ 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 -134- 本紙張尺度適用中國國家榡準（CNS ) Α4规格（210X 297公釐）

Claims

· ^^ ^ SO 7 :：1 Ag 第8|5102778號專利申·^案羿半美申請專利範圍修正本(9〇年5月）〇8 經濟部中央標车局員工消費合作社印I 六、申請專利範圍 1. 一種如下結構式代表之克力托懷辛 (CRYPTOPHYCIN)化合物：

其中 Ar為苯基； Ri為南素； R2為0H ;或 Ri與R2共同形成環氧環或在C18與C19間之第二個鍵結；R_3為 C 1 - C 4 .燒基； R4及R5各為Η，或R4與R5在C13與C14之間共同形成第二個鍵結； ^•6為爷基、經爷基、C1-C4燒氧爷基、鹵超爷基、二鹵羥苄基、鹵CVC4烷氧芊基、或二鹵 G-C4坡氧爷基；尺7為只或c「c5烷基； Rg為Η或Ci-C;燒基；本紙伕尺度逍用中國國家#準（CNS Μ4规格（210Χ297公釐） (請先Η讀背面之注意事項再填寫本瓦) -IT d5 B97P 0〇 C8 D8 七、申請專利範圍 R9為 Η; R丨〇為C丨-C 4坑> 基；且 X及Υ為氧。 2 .根據申請專利範圍第1項之化合物，其中尺8為乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、戊基或異戊基。 3 ,根據申請專利範圍第1項之化合物，其中R7為乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、戊基或異戊基。 4.根據申請專利範圍第1項之化合物，其中R3為乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、戊基或異戊基。 5 .根據申請專利範圍第1項之化合物，其中R9為甲基、乙基、丙基、丁基、異丁基、戊基或異戊基。 6 .根據申請專利範圍第1項之化合物，其中R1〇為甲基、乙基、丙基、丁基、異丁基、戊基或異戊基》經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 7. 根據申請專利範圍第1項之化合物，其中連接 C3、C6、C10、C16、C17及C18之至少一個基團呈R立體化學性。 8. 根據申請專利範圍第1項之化合物，其中連接 C3、C6、C10、C16 ' (：17及C18之至少一個基團呈S立體化學性》 -2- 本紙張尺度適用中81國家揉準（CNS ) A4規格（2丨OX297公釐） t5 8972 as B8 C8 D8 六、申請專利範圍 _ 9.根據中請專利範圍第1項之化合物，其中心與R2 在c18與cl9之間共同形成第二個鍵結，r3、r7與 r8為甲基，r4與在C13與c14之間共同形成第二個鍵結，而成為雙鍵，R6為3-氯-4-甲氧芊基，R9 為異丁基1 Rio為氫，且X與Y為氧。 10. 根據申請專利範圍第1項之化合物，其中Ri與共同形成一個R,R-環氧環，R3、R7與尺8為甲基，尺4與尺5在C 13與C 14之間共同形成弟二個鍵結而成為雙鍵，R6為3-氣-4-甲氧芊基，R9為異丁基，R10 為氫，且X與Y為氧。 11. 根據申請專利範圍第1項之化合物，其中1^與R2 共同形成一個S,S-環氧環，R3、R7與118為甲基，尺4與尺5在C13與C14之間共同形成第二個鍵結而成為雙鍵，尺6為3-氣-4-甲氧芊基，R9為異丁基，R丨0 為氫，且X與Y為氧。經濟部中央揉隼局負工消費合作社印製 ί - ί f - -- I 1 - ^^1 ί ' I— _ - 1—# J、vs (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 12. 根據申請專利範圍第1項之化合物，其中1^為氣，R2為羥基，R3、R7與R8為甲基，R4與I在C|3 與c14之間共同形成第二個鍵結而成為雙鍵，r6 為3-氯-4-甲氧芊基，R9為異丁基，R10為氫，且X 與Y為氧。 13. 根據中請專利範圍第1項之化合物，其中心與R2 共同形成一個環氧環，R3、R7與R8為甲基，R4與 R5為氣’ 為3-氯-4-甲乳+基’ R9為異丁基，R]〇為氫，且X與Y為氧。 -3- 本紙張尺度適用中國國家梂準（CNS )A4洗格（210X297公釐） 5 8972 as B8 C8 D8、申請專利範圍經濟部中央揉準局員工消費合作社印策 14. 根據申請專利範圍第1項之化合物，其中心為氣，R2為羥基，R3、尺7與Rs為甲基，尺4與尺5為氫，R6為3-氯-4-甲氧苄基，R9為異丁基，R丨〇為氫，且X與Y為氧。 15. 根據申請專利範圍第1項之化合物，其中汉丨與R2 共同形成一個R，R-表硫醚環，R3、尺7與Rs為甲基，R4與R5在C13與C14之間共同形成第二個鍵結而成為雙鍵，R6為3-氣-4-甲氧芊基，R9為異丁基，R1()為氫且X與Y為氧。 16. —種製備克力托懷辛（cryptophydn)之方法，該方法包括：轉化具有下列結構之晞丙基取代之E缔： -¾ . 其中： X為Ο，且 R 3為C , - C 3烷基，形成具有下列結構之炔丙基取代之E晞：

經由立體專一性威特重組作用（Witting rearrangement)進行重組該炔丙基取代之£晞 4- 本紙張尺度適用中國國家#準丨CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂竦！ ^ B 8972 51 C8 D8 六、申請專利範圍得到具有下列結構之化合物： r3

轉化該化合物形成具有下列結構之第一 5 -胺基酸或6 -羥基酸：

其中： A r為苯基； Ri為鹵素；尺2為0H ;或 1^及尺2可共同形成環氧環或雙鍵； R4及R5各為Η，或114及R5可共同形成雙鍵；偶合該5-胺基酸或該<5-羥基酸成為第一 α-胺基酸形成具有下列結構之副單位： --:n . n ----- - — - - —1,J^I— -- I- . i I I n ^-, "e (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部十央梂率局負工消費合作社印製

-5- 本紙張尺度適用中國國家揉準（CNS ) A4規格（210X297公着） 4 5 89 7 2 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍其中： R~6為字基、輕节基、C1-C4虎氧基辛基、鹵基羥苄基、k二鹵基羥芊基、鹵基κ4烷氧 I» 基节基’或二卣基C!-C4燒氧基+基；偶合一 /3-胺基酸成為（2-胺基酸形成具有下列結構之副單位：

其中： R 7及R 8各獨正為Η或C】-C4燒基， R9為 Η ; R i 〇為C 1 - C 6燒•基，及偶合該第一副單位成為第二副單位形成克力托懷辛。 17.根據申請專利範圍第I 6項之方法，其中所產生之克力托懷辛之結構式如下： (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消费合作社印製

本紙浪尺度適用中國國家揉丰（CNS ) A4規冰（2丨OXW7公釐） 45 8972 ABCD 六、申請專利範圍經濟部t央橾率局負工消費合作社印裝其中 Ar為苯基； Ri為鹵素’；為0H ;或 1與Κ·2共同形成環氧環或在C18與c19間之第二個鍵結； R_3為C I - C 4院基； R4及R5各為Η ’或R4與R5在Ci3與C!4之間共同形成第二個鍵結； R6為苄基、羥芊基、CVC4烷氧芊基、鹵羥苄基、二鹵羥芊基、鹵CrG烷氧芊基、或二鹵 Ci-Ci(淀氧爷基； R7為Η或C 1 - C 5烷基； 118為11或Ci-Cs烷基； R9為 Η; X及Υ為氧。 18.根據申請專利範圍第1 7項之方法，其中Ar為苯基；R3為甲基；R6為甲氧芊基；R7為H;R8為甲基；R9為異丁基；R10為H;X為0;且Y為0。 19·根據申請專利範圍第1 6項之方法，其中所產生之克力托懷辛尚具有如下結構式之特徵： (请先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家梯準（CNS) A4規格（210X297公釐）經濟部中央標準局貞工消費合作社印製 45 89 7 2 H C8 D8 六、申請專利範圍

其中 Ri為齒素；Κ·2為OH;或心與！^可共同形成一個環氧環； R>3為Η ;且R4為Η ;或 r3與r4可共同形成第二個鍵結。 20. —種適用於抑制過度增生之哺乳動物細胞發生增生作用之醫藥組合物，其包含有效量之如下結構式化合物： Ar苯為 Γ A

Be0 本紙浪尺度逍用中國圃家梂率（CNS) A4規格（210X297公釐） ^------1T-------? (請先H讀背面之注意事項再填寫本頁) 9 8 5 d 2 ABCD 六、申請專利範圍 R i為1¾素， R_2為0H ;或 1^與r2共同形成環氧環或在cls與c19間之第二個键結； R3為C 1 - C 4健基； R4及R5各為Η，或R4與115在C13與CI4之間共同形成第二個鍵結； Κ·6為+基、輕基、Cj-C#燒氧爷基、_輕节基、二鹵羥芊基、鹵Ci-C4烷氧芊基、或二鹵 C「C4^氧卞基； 117為11或Ci-Cs烷基； Rs為Η或C〗-C 5烷基； Rg為 Η; Ri〇為C〗-C4燒基；且 X及Y為氧。 21. 根據申請專利範圍第2 0項之醫藥組合物，其中尚包含另——種抗贅生劑。 22. 根據申請專利範圍第2 0項之醫藥組合物，其中哺乳動物細胞為過度增生。經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 (請先《讀背面之注意事項再填寫本頁) 23. 根據申請專利範圍第2 2項之醫藥組合物，其中過度增生之細胞為人類。 24. —種用於抑制具有多重抗藥性表型之過度增生之哺乳動物細胞增生之醫藥组合物，包括有效量之克力托懷辛以干擾微管聚合與解除聚合之 -9 - 本紙張尺度適用中國圃家梂準（CNS ) A4说格（210X297公釐） 45 897 2 AS BS C8 D8 々、申請專利範圍動態之量，以遏止細胞有絲分裂，藉以抑制細胞增生，克力托懷辛化合物之結構式如下：

R? Re 其中 Ar為苯基；尺1為_素；為0Η ;或 1^與R2共同形成環氧環或在c18與c19間之第二個鍵結； Κ·3為C 1 - C 4燒基； R4及R5各為Η，或114與115在C13與C]4之間共同形成第二個鍵結；經濟部中央標準局負工消費合作社印製 -li - ί - n - ί I, - I--- ------"1T (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) r6為芊基、羥芊基、Cf-c4烷氧苄基、鹵羥芊基、二鹵羥芊基、鹵Ci-G烷氧芊基、或二鹵 C1-C4燒氧字基； R7為Η或C t - C 5烷基； Rg為Η或C 1 - C 5燒基； Rg為 Η ; -10- 本紙伕尺度適用中國國家揉準（CNS) A4规格（2IOX297公釐） AB!CD 458972 六、申請專利範圍 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) R 10為C I - C 4燒基；且 X及Y為氧。 25. 根據申請專利範圍第2 4項之醫藥组合物，另包括至少另一種抗贅生劑。 26. 根據申請專利範圍第2 4項之醫藥組合物，其中哺乳動物細胞為人類。 27. —種用於減輕因哺乳動物細胞過度增生所引起病症之醫藥組合物，其包括有效量之根據申請專利範圍第1項之化合物及醫藥上可接受載劑。 28. 根據申請專利範圍第27項之醫藥組合物*其中哺乳動物細胞為人類。 29. 根據申請專利範圍第2 7項之醫藥组合物，其尚包括為該個體施與至少另一種療法，以減輕病症。 30. 根據申請專利範圍第2 7項之醫藥組合物，其中該病症之特徵為形成贅瘤。經濟部中央梯隼局貝工消費合作社印製 31. 根據申請專利範圍第3 0項之醫藥组合物，其中該贅瘤係選自：乳房、小房肺部、非小房肺部、結腸直腸、白血病、黑瘤、胰腺癌瘤、中樞神經系統（C N S )、卵巢、前列腺、軟组織或骨頭之肉瘤、頭與頸部、胃部（gastric)(包括姨與食道）、腹部（stomach)、骨髓瘤、膀胱、腎、神經與内分泌系統（包括甲狀腺）及非霍奇金氏症與霍奇金氏症等之贅瘤。 -11 - 本紙张尺度適用中國國家揉丰（CNS ) A4规格（210/297公簸）