TW438811B - Compounds with growth hormone releasing properties - Google Patents
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經濟部中央標準局負工消費合作社印裝 4388 1 1 at _^_ B7 五、發明説明(1 ) [發明領域1 本發明係有關新穎肽衍生物•含彼等之组合物,及其對 於治療生長激素缺乏所致豁學疾病之用途。 [發明背景1 生長激素為刺激所有能夠生長的姐織生長之激素。此外 ,也已知者,生長激素對於代謝程序具有許多效應,例如 ,蛋白質合成和自由脂肪酸代謝之剌激及促成從睡類能量 代謝變成賄肪酸代謝之轉換等。生長激素缺乏可能導致許 多嚴重的豁學疾病,如侏儒症。 生長激素係從腦下垂體釋放出來的。該釋放是在許多激 素和神經遞質的直接或間接地緊密控制之下者。生長激素 釋放可為生長激素釋放激素(GHRH)所剌激而為生長激素釋 放抑制因子所抑制。於這兩種情況中,激素都是從下丘腦 釋放出來但其作用則主要是經由腦下垂體内的特定受體所 媒介成的。此外,也有提及可剌激腦下垂體釋放生長激素 的其他fb合物。例如,精胺酸,L-3,4 -二羥基苯丙胺酸 <L-D〇pa),胰高血糖激素,後葉加壓素,PACAP(腦下垂體 腺苷醚瑁化SS活化肽 > ,輦毒鹼受體激動劑和合成六肽* GHRP (生畏激素釋放肽)等可經由對腦下垂體的直接效麽 或經由影響下丘腦的GHRH及/或生長激素釋放抑制因子的 釋放等的釋放出内源生長激素。 於賻要增高生長激#水平的疾病或激狀中,生長激素的 蛋白質本宵使得非绳腸給藥Μ外的方式成為不可行。此外 ,其他育接作用性天然促分泌素’如GHRΗ和p ACΑρ等皆為 本紙張尺度適用中囡囡家標準(CNS ) Λ·!規格(2KJX297公釐) ,(請先閱讀背面之注;項再填寫本頁) 訂 4 3¾8*ί00!274號專利申請赛 Α7 中文說明書修正頁(90年3月)β7 五、發明説明(之)
90. 3. 0G 修正補充 較長的多肽類,因此之故,彼等之經口給藥皆為不可行者 〇 先前技藝中已有提及較短肽對於增加哺乳動物體内生長 激素水平之用途,例如· ΕΡ 18 072 ,ΕΡ 83 864 ,W0 89/071 10 * VO 89/01711 « VO 89/10933 * W0 88/9780 » W0 83/02272 · V0 91/18016 · V0 92/01711 和 W0 93/04081等。 生長激素釋放肽或肽衍生物的姐成對於其生長激素釋放 效力及其生物可用率等具有重要性。綜上所述,本發明的 目的即為提出具有生長瀲素釋放性質|且其具有相對於巳 知的這類肽較為改良的性霣之肽類。 [發明概述] 綜上所述,本發明偽有«通式I化合物 A-B-C-D (-Ε)ρ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標率局貝工消費合作社印褽 其中ρ為0或1 ; a 為氫或 其中 q為〇或1至5的整數; r為0或1 : s為0或1至5的整數; R1為氫,畔唑基,胍基,六氫吡畊基,嗎啉基,六氮 吡啶基或NUs)-li3·其中R2和R3分別為氫或視情況含 有一或多個羥基*吡啶基或呋喃基等取代基之低碳數 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS > A4規格U10X297公釐) 43881 1 A7 B7 五、發明説明(3 ) 烷基;且 於r為1時,為-NH-,-CH: -CH=CH- R16 I -Ο Ι R17
經濟部中夬標隼局員工消費合作社印製 其中R1S和R17分別為氫或低碳数烷基; B 為(G)t-(H)U,其中 t為0或1 ; u為0或1 ; G和Η為選自下列兔.合中的胺基酸殘基:天然L -胺基 酸或其對應的D -異構物,或非天然胺基酸,例如 1.4- 二胺基丁酸,胺基異丁酸,1,3-二胺基丙酸, 4-胺基笨丙胺酸,3-吡啶基丙胺酸,1,2,3,4-四氫異 Β奎啉-3-羧酸,1,2,3,4-四氫新哈爾滿-3-菝酸(1,2, 3.4- tetrahyaronorharinan-3-carboxy 1 ic acid), N-甲基鄰胺基笨甲酸,鄰胺基苯甲酸,N-苯甲基甘胺 酸,3-胺甲基苯甲酸,3-胺基-3-甲基-丁酸,肌胺 酸,六氫吡啶酸或異六六氫吡啶酸; 巨其中*當t和u兩者皆為1時,G與Η之間的醯胺 鍵可視需要為f 〜 1 . 所取代,其中Y為)=〇或CHZ,且Ria為氫,〆 I 低碳數烷基或低碳数芳烷基; 6- (請洗閱讀背面之注意事項再填寫本頁)
本纸張尺度適用中國國家標準(CNS ) Λ4规格(210X297公釐) 4388 1 1 A7 B7 五'發明説明(4) C 為式- NH-CH((CH2)w-R4)-C〇 -之 D -胺基酸,式中 w為0 ,1 ,或2 ;且
I R 4為選自下列之中的基 其中每一個都可視情況含有鹵素,低碳數烷基|低碳 數烷氧基,低碳數烷胺基I胺基或羥基等取代基; D於p為1時,為式-NH-CH(iCH2)k-Rs)-CO-之D-肢基酸 * 或,當 P 為0 時 * D 為-〇-〇((〇2)1-1^)-(:[12-1^或 -NH-CH((CH2U-R5 ,其中 k為0 ,1或2 ; 1為0 ,1或2 ; b為0 ,1或2 ; R 6為選自下列之基 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 其中每一基皆可視情況含有鹵素,烷基,烷氧基,胺 基或羥基等取代基;旦
Re為六氬吡阱基,嗎啉基,六氫吡啶基’-〇Η或 -N (R 7丨-R 3 ,其中I? 7和K s分別為氫或低碳数烷基; R ,於 P 為丨時,為-HH-CH(R10>-(CH2)v-)ie ,其中 v為0或1至8的秸數; -7 -本紙張尺度適用中國國家標隼(CNS ) Λ4^_格(210Χ 297公釐) 4388 1 1 五、發明説明(5 ) A7 B7 P為氫,眯唑基*瞋基*六氫吡畊基,嗎啉基,六氫 吡啶基, i
19 R 其中ri為Ο ,1或2 ,且R1Q為氫或低碳數烷基,
312 或
(CHZ) —N: a12 (請先,閣讀背面之注意事項再填寫本頁) 或 N (R 11)-R 12,其中 R 11 基,或為1咖、 和R12分別為氫或低碳數烷
或 ,1Τ 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 其中每一個皆可視情況含有鹵素,烷基,烷氧基,胺 基,烷胺基*羥基*或胺基與吡喃己糖或吡喃己糖基 -耻喃己糖的Amadori重排產物, a R 1。,於 p 為 1 時,係選自-Η,- C 0 0 Η ,」C Η 2 - R 1 3, -C0-R13或-C丨U0H之中的基,其中 R13為六氫吡畊基,嗎啉基,六氫吡啶基,-OH ’或 —Λ — 本紙張尺度逍用中國國家標準(CNS ) Λ4規格(2Ι0Χ 297公釐) 4388 1 1 經濟部中央樣準局員工消費合作社印製 A7 B7_五、發明説明(6 ) -NU14)-!?15 ,其中R14和R1S分刖為氫或低碳數烷 * ; / B與C之間的醯胺鍵,或當t和u皆為〇時,A與C之間 的釀胺鐽可視需要為r I -Y-N-所取代,其中Y為〉C = 〇或j^H2,且Ria為氫· 低碳數烷基或低碳數芳烷基, 或,當P為1時’ D與E之間的醢胺鍵可視需要為 R18 -Y-lV所取代,其中Y和R18皆為上文所定義者; 或其醫藥可接受鹽。、 據信式I肽衍生物係因為肽序列中含有相鄰胺基酸, R18! 里視箱要配合用上述,如,胺基亞甲基(-CH2HH_) 取代一涸臨胺鐽卜C0-NH-)及/或在肽的Η-端或C -端之改 質等而使其具有改良的對酵素的蛋白分解降解作用之抗性 。本發明肽衍生物對於蛋白分解降解作用的改良抗性加上 其尺寸的減小預料可使其具有相對於先前文獻中所提肽較 為改良的生物利用率。 於本文中,”低碳數烷基”一詞意欲表具有1-δ Μ碳原子 的烷基,特別者為甲基,乙基’丙基*異丙基’丁基,戊 基或己基。"鹵素” 一詞意欲包拮c 1,p ,B r和I 。於"低 碳數烷氧基”,”低碳數芳烷基’’和”低碳數烷胺基”等詞中 ,低碳數烷棊部份腊具有上示之意義。 -9- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -li - -I - ·= — - - - - n _ 沒------- 本紙張尺度適用中國ϋ家標华(CNS ) Λ4規格(210X 29?公釐) 19( 經濟部中央標準局員工消費合作杜印装 4 3§參41〇3274號專利申謓案 . A7 中文說明害修正頁(90年3月)B7 五、發明说明(.3. Μ修正 浲月a .C太彻充 詳细說明] 於式I化合物的較佳實施例中,p為1 。於式ϊ化合物 的另一較佳貢施例中.a為氫,或為|^-((^2)«-(乂)^ (CH2)*-CO-,式中R1為3-咪唑基,q為2 * Γ為0且s 為〇 ;或其中R1為KH2 *q為1 *r為1 ;X為含雙取代 基的苯,較佳者係在1和3兩位置上有取代基者,且3為 〇 ;或其中R1為HH2 ,q為1 ,r為1 ,X為含雙取代基 的噻吩•較佳者是在3和2兩位置有取代基者;且S為0 。當t為1時,式I化合物中的G較佳者為Ala ,Gly , Aib •肌胺酸,六氳吡啶酸或異六氫吡啶酸等。當u為1 時 * Η 較佳者為 His ,Phe · Tic · Phe(4-NH2) · 3-Pyal,Gly ,A1 a ,Sar · Pro ,Tyr · Arg ,Orn > 3-胺甲基笨甲酸或D-Phe 。式I化合物中的C較佳者為 D-2-萘基丙胺酸(D-2Hal) · D-卜萘基丙胺酸(D-lHal) · D-Phe或D-Trp 。式I化合物中的D較佳者為D-Phe * D-lNa 1 · D-2Na 1 * D-Trp ’ 3-Pya 1,D-Phe (4F) · D-Tyr 或 Phe-NH2 0 式I化合物中的E較佳者為Lys-NH2* NH-(2-U -六氮吡 畊基)乙基),NH-(2-(卜嗎啉基)丙基>,HH-(2-胺基乙基 )* HH-(4-胺甲基笨甲基)· KH-(笨甲基),Lys-OH,HH-(1-羥基-6-胺基-2S-己基· ΝΗ-(2-(1-甲基-2-吡咯啶基) 乙基) 或 -10 - 本紙張尺度通用中國國家標率(CNS)A4洗格(210X297公釐) {請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) *ττ 泉 4388 1 1 A7 B7五、發明説明(δ )
經濟部中失標準局員工消費合作社印製 式I化合物中的R4較佳者為2-萘基。〖5較佳者為苯基。v 較佳者為2-6 ·且,嗎啉基乙基,嗎啉基丙基或 (1-甲基吡咯啶基)乙基。R1<J較佳者為- CODH ,-CHfOH ,-Η,-CONH2或-CON (CH3)2 ° 本發明特殊化合物的&子有: H-Ala-Hisur (CHaNH)D-2Nal~DwPhe-Lys-NH2 H-A]a-AIa-D-2Hal*'D-Phe~Lys~HH2 H-H is-D_2Na 1 - D- Phe"Lys*NH2 (3-(4-咪唑基)丙醢基卜 D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 H - [)-Lys - D-2Ma 1 - D,Phe-Lys~NH2 H-5Apent-His-D-2Nal -D-Phe-Lys‘HH2 H-D-AIa-D-2Hal-D'Phe-Lys-HH2 H-5Apent_R_2Na 1 ™D_Phe-Lys-HHa (n-丙基)-His~l)-2Na 卜 D-Phe-Lys-NHa H-Ala-3Pyal-D-2Kali-D*Phe**Lys-NHs H-Ala-Phe(4-NH2)~D-2Nal-D-Phe-Lys-ΗΗξ ^ H"D-Ala-llis-D-2Nal~D~Phe'Lys-NH2 (2-(4-咪唑基丨乙醯基卜D-2Na】-D-Phe-Lys-NH2 -1卜 (請洗閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -文. 訂 -東 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS ) A4現格(210X29?公釐) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 4 3 8 8 11 A7 B7五、發明説明(9 ) (3-(4_Π米啤基)丙鋪藤基)-D-2Nal-D-Phe-Lys-HH2 (3-胺甲基苯甲醯基)-D-2Na卜D-Phe-Lys-NfU (3-胺基苯乙醯基卜D~2Na卜D-Phe-Lys-HH2 (4-胺基笨乙醯基)-D~2fial-D-Phe-Lys-NHz (3-胺基巴豆醯基)-D-2Nal-D-Phe-LysH (4-六氫吡啶基-羧基)-D-2Ha卜D-Phe-Us-HH2 H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH2 (H-/Ua-His-D-2Nal-D-Phe-NH)己烧 6-(H-Ala-His-D-2Hal-D-Phe-NH}己瞭 5-(H-Ala-His-D-2Mai-D-Phe_MH)戊胺 Η-Ala-His-D-2Hal+Phew (CtUNH)Lys-NH2 H_Ala~H is~D_2Nal-D~Phe~Lys-OH (2S)-(H-Aia-His-D-2Na卜D-Phe-HH)-6-胺基己酸 (2-(H-Ma-His-D_2Nal-D~Phe~Nf〇 乙基)笨 2_fH-Ala-His-D-2Hal_D-Phe-NH)乙胺 4 -((H-AU-HisHNa 卜 D-Phe-NH)甲基)苯甲胺 H-/Ua-His-D-2NalUhe-Lys(麥芽糖基)-NH2 H-Ala-His-D-"2Nal-D-Phe-Phe"NH2 H-Ala_His_D^2Nal-D-Phe~D*Phe~NH2 H-A!3-H is-D-Phe-D-Phe-Lys^NHa H_A I a^H is-*D-Trp_D^Phe_Lys~NHs H-His-D^Nal-D-Trp-Lys-NH^ ^ H-Ala-His-D-lNal-D'Phe-Lys'NIia H-Ala,Phe‘i)-2Na 1-D-Phe-Lys-NH-2 -1 2 - .(請先鬩讀背面之注意事項再填寫本頁)
*tT 本紙張尺度適用中因國家標準(CNS ) Λ4規格(210X297公釐) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 4388 1 1 A7 ' B7五、發明説明(10 ) H-Ala-His-DJKal-D-Phe-Lys(麥芽糖基}-NH2 (2R}-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH)-3-笨基两胺 H-Ala-N-Me-f2-胺基苯甲醯基)-D-2Na卜D-Phe-Lys-NH2 (3-(甲胺甲基)笨甲醯基)_D-2Ma卜D-Phe-Lys-NH2 (4-(胺甲基)苯甲釀基)-D_2Ha 卜 D-Phe-Lys-NHa H~H i s-Ala-D-2Na 1 - D- Phe_Lys-NH2 4-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH) 丁胺 3-(H-Ala-His-D-2Nal_D-Phe-NH)丙瞭 (3 -(二甲胺基甲基)苯甲醯基)-D-2Na卜D-Phe-Lys-HH2 (3 -胺基-3-甲基 丁醯基 >-D-2Na 卜 D-Phe-Lys-NH2 (3-胺甲基苯甲滕基)_D_hPhe-D-Phe-Lys-NHz (3-胺甲基苯甲藤基)w (CHzNH)D-2Na卜D-Phe-Lys-KH2 (3-胺甲基笨甲藤基)-D-2Nai-D-hPhe-Lys-HH2 (3-(肢基-3-甲基 丁醢基)-His-D-2Na 卜 D-Phe-Us-NH2 (3-胺甲基苯甲醯基)-D-2Na 卜 H-Bzl-Gly-Lys-HH2 (2S)-(3-胺甲基笨申醯基)w (CHaNf〇-D-2Ha 卜D-Phe-HH) -6-胺等己酵 (2$)-((3-胺甲基苯甲醯基)-〇-2^(3卜[)-卩卜6-^{〇-6-胺基己 醇 (3-胺甲基笨甲醯基)_[)-2料3 1-0-1^3]-1^5^2 (2$)-(11-/^1)咄;5似((:11:^}1卜[)-2}^!-〇-卩卜6^[〇-6-瞭基己 _ ' (3 -胺甲基苯甲臨基)-D-2Na卜D-3Pya卜Lys-NH2 Π-胺甲基苯甲醯基)UHal-D-Phe(4F)-Lys-NH2 (請先'"讀背面之注意事項再填寫本頁)
、1T -13- 本紙張尺度適用中國因家標準(CNS ) Λ4規格(210X 297公釐) 經濟部中央標準局負工消費合作社印製 4388 1 1 A7 。 B7 五、發明説明(11 ) (3_胺甲基絮甲醯基)-D-2Nal-D-Phe(4-0Me)-Lys-NH2 (2-胺甲基苯乙藤基)-D-2Na卜D-Phe-Lys~HH2 (2-胺甲基笨甲醯基)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 2-(H-Aib-His-D-2Na 卜 D-Phe-NH)-(4-iitt 啶基)乙烷 H-Ai b-Phe_D-2Na 1 - D- Phe-Lys-NHa 2-(H-Aib-His-D-2Nal-D_Phe-NH)-(1-甲基- 2- ¾:路陡基) 乙烷 2 - (H-Aib-His-D_2Nal-D_Phe-NH)-(4~Ht 暗基)乙综
H-Aib-Hisw (CH2NH)-D-2Ha卜D-Phe-Lys-OH f3-胺甲基苯甲藤基)_D-2Hal-N-He-D-Phe,Lys~flH2 H-Aib-His_D-2Nal-D~Phe-Gly-NH2 H-Aib-Hi s-D-2NaI-D-Phe^AIa-NHz H-Aib-His_D-2NaI-D-Phe_0rn-NH2 (5-胺甲基噻吩基-2-羰基)_D-2Na卜D-Phe-Lys-NH2 H_Aib - His-D-2Nal**D - Phe-D-Lys-NHa H^Aib-His-D-2Nar^D**Phe-Dab"NH2 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phei〇r fCH2NH)-Lys_HH2 H-Aib'wHis-N-Me-D-2Nal~D_Phe~Lys"NH2 H-Aib-His-D-2Hal"D_Phe-N^He"Lys"HH2 (3-胺甲基_ 吩基-2-羰基)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D"Phe-Lys-NH2 H-Aib-His_〇-2Na! - D- Phe-Lys-N(Me>2 (3R)-六氫吼啶棟基 _D-2Na 卜 D-Phe-Lys-Mf^ (3S)-六氫吼喃糖基 _D-2Na 卜D-Phe-Lys-Nh -14- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS ) Λ4規格(210X297公釐) (請先閔讀背面之注意事項再填寫本頁}
'1T 經濟部中央標準局貞工消費合作社印製 4 3 8 8 11 A7 B7 五、發明説明(l2 ) (3-胺甲基苯甲 _基)_D-lNa 卜 D-Phe-Lys-NH2 H-Aib-H is-D-2Ha1-D-Trp-Lys-HHa (咲喃基)-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Lys_NH2 (2-啦瞭甲基)-Aib-His_D_2Nal_D-Phe-Lys-NH2 H-Aib-(3-胺甲基笨甲醯基)-D-2Ha卜D-Phe-Lys-HH2 H-Aib-3Pyal-D-2Nal-D*Phe-Lys-NH2 (3S卜六氫吡啶羰基-D-2Ha卜D-Phe-Us-NH2 (31〇-六氫吡啶羰基-〇-2^31-1)-卩^-1^3-}^2 (2-iH-/Ub-His-D-2NaI-MH)乙基)笨 N,N-di(2R-羥丙基)-(3-肢甲基笨甲醯基)-D-2Ha卜D-Phe-Lys-NHa (2R-羥丙基)-Aib-His-D-2Ha卜D-Phe-Lys-NH2 (3-胺甲基笨甲醯基)-D-2Na 卜 D-Phew (CH2NH)Lys-NH2 (3-胺甲基苯甲醢基卜N-Ms-D-2Na卜D-Phe-Lys-NH2 (3-胺甲基苯甲醯基)-D-2Nal-D-Phe-N-Me-Lys-NH2 H-D-Thr-His-D-2Ral-D-Phe-Lys-NH2 H-Aib-His-D-2Na卜N-(笨乙基)-Gly-Lys-HH2 (3-胺甲基苯甲醯基)_D-2Hal-N-(苯乙基)-Gly-Lys-NH2 H-Hyp-H i s-D-2Na1-D-Phe-Lys-NHz H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-(苯乙基 ^-Gly-Lys-NHz H-Aib-His-N-He-D~2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH2 H-Aib-fiis-D-2Nal-D-Phew(CH2H(Me))Lys-NH2 _ 基丙综 2-ilf-Aib-ifis-D-2Hal-H-Me-D-Phe-NI〇-(l -甲基-2-吼略 -15- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS ) Λ4規格(210X297公釐) (請先, 閲讀背面之注意事項再填寫本頁)
.1T -1 A7 4388 1 1 ~ B7 五、發明説明(l3 ) 啶基)乙烷 (請先. 閣讀背面之注意事項再填寫本頁) (3R) -六氫啦嗤親基-N-Me-D-2Na】-H-Me-D-Phe-Lys-NH2 3-((胺甲基笨甲醯基卜D-2Na卜N-Me-D-Phe-NH)嗎啉基丙 综 2-(H-Aib-His-N-Me-D-2Na卜H-Me-D-Phe-NH)-(1-甲基-2-吡喀啶基)乙烷 2-(3R)_六氬批喷截基-N-Me-D-2Ha卜N-Me-D-Phe-HH)-(1 -甲基-2-吡咯啶基)乙烷 2- (3-瞭甲基聚甲醢基)-N-Me-D-2Na卜N-Me-D-Phe-NH)-(1 -甲基-2-吡咯啶基)乙烷 3- (H-Aib-HisUe-D-2Na 卜 H-Me-D-Phe-NHHI_ 基丙烷 3 - ( (3R)-六 S 阳;瞭辕基- N- Me_D-2Nal-H-Me_D-Phe-NH)嗎 啉基丙烷 3-U3-胺甲基苯甲醯基)-N_Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)嗎 啉基丙烷 H-Aib-His-D-2Nar-N-He-D-Phe_Hyp_HH3 2-((3-胺甲基苯甲醚基)-D-2Ha卜N-Me-D-Phe-NH)-(1-甲 基-2-¾喀啶基)乙烷 經濟部中央標準局貞工消費合作社印裳 2-((3R)_ 六氫吡啶羰基- D-2Na 卜 N-Me-D-Phe-NH)-(1-甲基 -2-吡咯啶基)乙烷 鋪寫:D-2Na 1 = D-2-萘基丙胺酸 5Apent=5 -胺基戊酸 3Pya丨=3_吡啶基丙胺酸 A i b = Η -胺棊異丁酸 -16- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS ) Λ4規格(210X 297公釐) 4388 1 1 A7 _""_B7 五、發明説明(l4 )
Thial =噻吩基丙胺酸 hPhe =高苯丙胺酸 N-Bz卜G ly = N-苯甲基甘胺酸 4-P = 4-氟基 4-OMe = 4-甲氧基 〇「n =鳥胺酸
Dab = 2,4-二胺基丁酸
Hyp =羥基脯胺酸
Tic = 1,2,3,4-四氫異喹啉-3-羧酸 式I化合物可用傳統溶液相或固相肽合成方法予K製備 。例如,固相合成可大致依Stewart and Young, S-〇.l.i d Phase Peptide Synthesis. 2nd. Ed. , Rockford, II丨inois, USA, 1976所述者進行。溶液肽合成可實質地 嵌,例如,Bodansky et al., Peptide Synthesis, 2nd. Ed·, New York, New York, USA, 〗976 所述者進行 0 經濟部中央標準局—工消費合作社中策 (請Λ閲讀背面之注意事項再填寫本頁) (t 作為醢胺鐽取代的胺基亞甲基可M根據Y. Sasaki and D. Η. Coy , Peptides SJl), 1987, pp. 119-121 所述方法 導入。具有一個一或二-吡哺己糖衍化胺基的肽衍生物可 以用大致為 R. Albert et al·, Life Sciences 5J_, 1993t pp. 51 7 -525所述方法進行Amadori重排而製備成 。逋用的——或二-吡喃己糖例子有葡萄糖,半乳糖,麥 芽糖,乳糖或缴維二糖等。在合成中用為起始物的衍生物 可以從市而上取得Η可Μ在需要時,具有適當保護基’或 -17- 本紙張尺度適用中困國家標準(CNS ) Λ4現格(210Χ297公釐) 經濟部中央標準局員工消費合作社印袈 '4388 1 1 A7 -----__B7_ 五、發明説明(]_5 ) 用Μ製備通式ί中的,.A ”部份體之起始物可用熟知方法製 備成巨視需要以已知方法保護住。 式ΐ化合物的豁藥可接受酸加成鹽包括肽與無機或有槠 酸’如_驗,溴釅,硫酸,乙酸,磷酸,乳酸•順丁烯二 酸’笨二甲酸,槔樣酸,戊二酸,葡糖酸,甲烷磺酸,拥 酸’ 丁二酸,酒石酸’甲苯磺酸,三氟乙酸,胺基硫酸和 反丁烯二酸等反應而製成者。 於另一部份中,本發明係有闊含有通式I化合物或其强 藥可接受鹽作為活性成份,與醫藥可接受的載體或稀釋劑 等所構成的酱藥组合物。 含有本發明化合物的豁藥姐合物可Κ用傳統技術,如 JLLn.gLLflii„f..S-_P harmaceutifial Snifinpes. 1 9 8 5 中所述者 ,予Μ製備成。該姐合物可為傳統形式,如,膠囊劑,錠 劑,氣溶睽,溶液,懸浮液或侷部應用等。 所用的睜藥用載體或稀釋劑可為傳统的固體或液體載體 。固體載體的例孑有乳糖,白土,蔗糖,環糊精,滑石, 明膠,橡脂•果膠,阿膠,硬脂酸鎂,硬脂酸或纖維素的 低碳黻烷基醚等。液體載體的例子有糖漿,花生油*橄欖 油,瞵脂質·脂肪酸*脂肪酸胺,聚氧乙烯和水等° 同樣地,該載體或稀釋劑可包含技藝中已知的任何棰捋 續釋放性物質,例如*甘油一硬脂酸醋或甘油二硬脂酸酯 ,單獨者或與撖混合者。 若使用固膊載體於口服給槩時,該製劑可經製淀,以粉 末或丸粒形式放在硬質明膠膠囊内或可為淀劑或糖淀形式 -18- 本纸悵尺度適用中國國家標隼(CNS ) Λ4规格(210X 297公釐) (請i閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 43B81 1 A7 _:_B7五、發明説明(Μ ) 。固賻載腊的用量可有廣幅變異,不過通常為約25毫克至 約1克° 可以用搏统製錠技術製備成的典型錠劑可含有: 核心: 活性化合物(為自由化合物或其鹽) 100奄克 膠體二氧化矽(Ae「〇sil> 1.5¾克 嫌維素,微晶型(Avicel) 70毫克 改質嫌維素膠(Ac-Di-Sol) 7.5毫克 硬脂酸鎂 塗被·· HPMC約 9毫克 *Mywacett 9-40 T 約 0.9毫克 {請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標隼局員工消費合作社印製 "醸化甘油一酸酯,用於薄瞑塗_中作為助塑劑。 若使用液體載體時,該製劑可為糖漿,乳液,軟質明膠 膠囊或無菌注射阪,如水性或非水性液體懸浮液或溶液。 對於昇舞給藥,可將式I化合物溶解或懸浮於液體載體 *特別是水性載體中製成供噴霧應用的製劑。該載體可含 有添加劑,例如增溶劑,如丙二醇;界面活性劑,如膊酸 埔或聚氣乙烯高碳數酵醚;吸收增進劑,如卵瞵脂(磷醯 滕齡)或環糊精;或防腐劑,如parabenes等。 通常,本發明化合物係以單位劑量形式配製i其中每單 位劑费包含0.0001 - 100毫克的活性成份,與醫槩可接受載 體 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS ) μ規格(2丨0X297公釐) 訂 - 經濟部中央樣準局員工消費合作社印製 4388 1 1 A7 _____" B7 五、發明説明(17 ) 本發明化合物的劑量於作為蕖物給患者·如人類,服用 時1適當者為每劑1 -500毫克/天,如約100毫克/劑。 經證明者,通式I化合物具有可在活體内(in vivo)釋 放内源生長激素之能力。因此.該化合物可用來治療需要 增高血漿生長激素水平的徵狀.例如生長激素缺乏的人或 老年患者或家畜。 依此,於一特別部份中,本發明係有鬮用Μ剌激腦下垂 體釋放生長激素的醫藥姐合物,其含有作為活性成份的通 式Τ化合物或其發槩可接受鹽,及醫藥可接受戧體或稀釋 劑。 於另一部份中,本發明像有關剌激腦下垂體釋放生長湩 素之方法 > 其包括給需要者服用有效量的通式I化合物或 其除藥可接受鹽。 於另一部份中,本發明係有闞通式I化合物或其戡藥可 接受鹽對於製備用以剌激腦下垂體釋放生長激素的睡藥之 用途。 _ 對於諳於此技替所熟知者為生長激素對於人類的現行和 潛在用途為多變且多樣者。預期通式I化合物可就刺激腦 下垂體釋敗生長激素的目的而眼用且因而即可具有如生長 激素本身一樣的類似效應或用途。生長激素的用途可描述 如下:刺激年長者的生長激素釋放;防止糖皮質激素的分 解代謝副作用;治療骨質疏鬆症;刺激免疫系统;加速傷 口癒合;加速骨析復原;治療生長滯緩症;治療因生長滞 鍰所致腎衰竭或功能缺乏;治療生理矮小症,包括生長激 -20 - 本紙张尺度適用中國囤家標準(CNS ) Λ4規格(210Χ297公釐) (請先,閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 經濟部中央棵隼局男工消费合作社印聚 4 3 8 8 1 1 A7 __ B7 五、發明説明(i8 ) 累缺乏性兒童和與慢性病相關聯的矮小症;治療肥胖症及 與粑胖症相關聯的生長滯緩;治療與Prade「-Wi】H氏徴侯 群和Turne「氏徵侯群相騮聯的生長滯緩;加速灼傷患者的 復原和減少其住院治療;治療子宮内生長滯媛*费骼發贲 異常,腎上腺皮質機能過旺症和Cushing氏徴侯群等;誘 専博動式生長激素釋放;受壓抑患者的生長激素替補;治 療骨發育異常,Noonan氐徵侯群,早發痴呆症,抑鬱,阿 茲海默爾氏症•延遲性傷口癒合和精神受損等;治療肺功 能異常及換氣简嵌賴性等;於重大手術後增強蛋白質分解 代謝反應;減低因慢性疾病,如癌症或AIDS所致惡質症和 蛋白質損失;治療血胰島素遇多症,包括胰島母细胞增殖 症等;排卵誘導的佐藥治療;剌激胸腺發育及防止與年龄 相關的阏腺功能衰滅;治療免疫壓抑患者;肌肉強度’運 動性,皮膚厚度維持,新陳代謝等穩性,虚弱年長者窗等 穩性,骨質母細胞的刺激,骨改造和軟骨生長等的改良; 陪伴動物免疫糸統的剌激;陪伴動物老化疾病的治療;家 畜生長增進劑及剌激綿羊的羊毛生長等等。 對於上述徵吠,其劑量可依所用的式I化合物,給藥方 式和所欲治療等而赛異。不過*通常給病人和動物眼用 0 . 000 1至〗00毫克/公斤體重/天之間的劑量水平从得到 有效的内源生長激素釋放。通常,供經口或經舆給藥的进 當劑最形式包含約0,0001奄克至約100毫克,較佳者’約 0.001弯克至約50笔克的式I化合物的混合醫槩可接受載 髀或:晞釋劑。 -21 - 本紙張尺度適用中國國家榡準(CNS > A4規格·( 2丨〇 X 297公釐) (請先i閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 4388 1 1 at ___B7_ 五、發明説明(19 ) 式I化合物可用路藥可接受酸加成鹽形式,或,適當者 ,鹼金屬或鹼土金屬_,或低碳数烷基銨鹽等形式服用。 這些髏形式據信具有與自由鹼形式約略相同鈒次的活性。 視情況,本發明翳藥姐合物可包含式I化合物,姐合一 或多種具有不同活性的化合物,如,抗生素或其他藥學活 性物質。其可為另一種促分泌素,例如GHRP (1或6)或 GHRH或其類似物,生長激素或其類似钧,或促生畏因子· 如 TGF-1 或 IGF-2 等。 給槩途徑可為能有效地將活性化合物輸送到適當或所欲 作用部位的任何途徑,洌如|經口·經典或非經腸|其中 ,以經口途徑為較佳者。 除了式I化合物的路藥用途之外,其可為有用的活體外 工具以研究生長激素釋放的調節。 式I化合物也可為有用的活體内工具Μ評估腦下垂體的 生長激素釋放能力。例如,可對從服用這些化合之前和之 後的人所採取的ΛΤ清樣品分析生長激素。每一血清樣品中 所含生長激素的比較卽可直接剷定病人腦下垂腊釋放生長 激素的能力。 式Τ化合物可以給具商業重要性的動物服用以增加其生 畏速率和程度,及增加牛奶生產等。 藥學方..法 式Τ化合物可在活體外評估其對於在老鼠原促生長细胞 内釋欣生長激素的效窣和效力。 老鼠厣促生長细胞基本上可依先前技藝所述予Κ製備 -22- :尺/i適用中國國家標準(CNS ) Μ規格(2丨0〆297公釐) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ,1Τ 經濟部中央搮準局員工消资合作社印裝 Γ 43881 1 Α7 - Β7 ---i- 五、發明説明(2〇 ) (Chen et al·, Endocrinology 1991, 129, 3337-3342和 Chen et. al·,Endocrinology 1989,124,2791-2798)0 簡略而言,以去頭殺死老鼠。迅速取出其腦下垂體。用 0.2%膠原酶和0.2%玻尿酸酯在Hanks平衡强溶液中的溶 液消化該腦下垂體。將該细胞再懸浮於Dulbecco's改質 Eagle's培養基内(含有〇.37%HaHC〇3 ,10%禺血清, 2. 5 %眙牛血清,1%非必需胺基酸,1%穀胺醯胺和1%青 嫌素/鏈徽素)並調整到1 · 5 X 10s细睢/毫升。取一毫升 該懸浮液置於24 -洞盤中的各洞中並靜置2-3天後’才進 行釋放實驗。 於啻驗的第一天,用含有25 mM HEPES,pH 7.4的上述 培養基洗該钿胞兩次。經由添加含2 5 mM HEPES和試驗化 合物的培養基而起始生長激素釋放。於371進行掊甭15分 鐘。於培育後,K標準ΙίΙΑ測量釋放到培養基内的生長激 素。 式I化合物亦可·依先前技藝所述評估其對於戊巴比妥麻 醉雔老鼠體内生長激素釋放之活體内(in vivo)效應 (Bercu et al., Endocrinology 1991, 129, 2592-2598 > 。簡略而言1將雄的Sprague-Dawley成鼠用50毫克/公 斤丨P.戊巴比妥予以麻醉。於該老鼠已完全麻醉後,在老 鼠腊内榷入氣管插管並在頸動脈和頸内靜脈植人導管。於 15分練冏復期後,於〇時採取血樣。經由靜脈内給入腦下 垂體促分泌素並將動脈血樣置於冰上1 5分鏞,然後Μ 1 2 , 0 0 0 X κ離心2分繪。傾出血清並用搮準R I Α測定生長 -2 3 - 本紙悵尺度適用中国國家橾準(CNS ) Λ4規格(210X 297公釐) (請氏閱讀背面之注意事項再填寫本頁)
r 4388 1 1 A7 - B7 五、發明説明(21 ) 激素含最。 本發明要以下而的實施例進一步闡述;彼等實施例絕不 / 是要用來限制本發明的範圍的。 於本發明說明部份和實施例中所用的縮寫具有下列構造 非天然胺基酸殘基的縮寫: (請先加讀背面之注意事項再填寫本頁)
Phe(40Me)
CH,
3Pyal N
、1T
PheC^NH^
NH,
Phe(4-F)
F hPhe
經濟部中央標準局肩工消費合作社印11
HO
Hyp
M-(苯乙基卜
-24-
Tic
本紙張尺度適用中闯國家標準(CNS ) Λ4规格(210X 297公釐) 4388 1 1 A7 B7 五、發明説明(22
Aib 2Nal
INal
H3C
ο 5Apent 〇
Thial
〇
Om NH
(請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -*^. 訂
Dab
NH, NH
〇 肽鐽取代之縮寫 經濟部中央標準局員工消费合作社印製 -N-Me- Λ
T(CHZNH) NH T(CH2N(Me)) ch2 ch3 保課基所用縮寫
N 1 CH 3 25- 本紙張尺度適用中國國家標孪(CNS ) A4規格(210X 297公釐} 4388 1 A7 B7 五、發明説明(23
Boo
Trt-
Fmoc-
〇 人 CI-Z-
又
Bom
(請<'M讀背面之注意事項再填寫本頁) UA. 下面@施例所製備的化合物皆以三氟乙酸(TFA)鹽形式 分離出。 鬣直11_ H-Ala-His-D-2Nal-D-Trp-L.ys-NH2 根據Fuioc方法在’Applied Biosystems 431A狀合成器上 • W0.g2毫莫耳規棋用製造商供應的FastMoc UV方案合成 榑題呔,其中係採用在NMP (N-甲基吡咯烷嗣)中的HBTU f六氟硪酸2-(111-¾并三唑-1-基)-1,1.3,3-四甲脲||>媒 介偶合反應並UV監澜Fi〇c保課基的脫除。該合成所用起始 樹陏為559毫克,具有0.39毫莫耳/克置換度的4-((2·, 4’-二甲氧基苯基- Fmoc-胺基)甲基)-笨氧基樹脂 (Novabiochem, Bad Soden, G e r ib a n y , cat.lt: 01-64-00〗3)。所用姅保_住的胺基酸衍生物為Fm〇c-LyS(Boc)- -26- 本紙張尺度通用中國國家梯準(CNS ) Α4規格(210X297公釐) 1?τ 經濟部中央栳準局員工消費合作社印策 A7 4388 1 1 - B7 五、發明説明(24 ) Ο Η * Fmoc-D-Trp-〇H ' Fraoc~2Nal-〇H 0 用4 34毫克該肽樹脂與含有4毫升TFA (三氟乙酸), 3 00毫克酚,1〇〇微升乙烷二疏酵,200微升笨碲基甲烷 和200撒升H20等的混合钧在室溫下攢拌180分鐘以切出 該肽。過濾該切斷混合物並將濾液用氮氣流湄縮成1毫升 。用45牽升乙醚將粗製肽從該油狀物沈澱出來並用50毫升 乙醚洗三次。 將該粗製肽於充填著C-18氧化矽的20毫米X 250毫米 罾柱上以本製備型HPLC予以纯化其中用Μ 4K H2S〇4調整到 pH 2.5 的 15%CH3CN/ 0.05M (NH4)2S04 預平衡該管柱。將 該粗製肽溶解在2毫升的7 0%(:113^0.1%了?4/}120中並 用稀釋到100毫升。將該溶液等分成兩部份·分別注 射到管柱中,進行兩次洗提。該管柱偽在40它*於47分鐘 期間用 15%-25%CH3CN / 0.05Μ (NH4)2S〇4,pH 2.5 ,以 10毫升/水洗提。收集含該肽的液份,用3體積的H2〇稀 釋,並加到用0.1%TFA預平衡過的Sep-Pak® C18短简 (Waters pa「t_tt: 51910)上。甩 70%CH3CN 0.1%TF/\ 將該 肽從SeP-Pa k® 短苘中洗提出來,用水稀釋洗提液後,冷 凍乾燥分離出。得到產量為19.0毫克。 所得最後產物Μ分析型RP-HPLC (滯留時間)和電漿去吸 著質譜分析法(分子量)鑑定。質譜分析结果在該方法的實 驗誤差内符合谭期的構造(質譜分析法± 0.9 asu)。 RP-HPLC分析係用在214 rim的UV偵檢及Vydac 218TP54 4.f5毫米x2「)0毫米5ϋ〇18氧化矽管柱(The -27- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS ) Λ4規格(210X297公釐) (請先裀讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 經濟部中央標準局員工消f合作社印製 43^8 1 1 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7五、發明説明(25 ) Separations Group, Hesperia, USA) ’ 在 4213 Ml 毫升 /分洗提而進行的。使用兩種不同的洗提條件: /Π:用 5%CH3CN/ 含 0.1M (NfUUStU 的媛衝疲(用 4M ^25〇4調整到出2.5)平衡該管柱並在50分鐘期間, 用5%至60%CH3CH /相同緩衝液洗提。 B1:用5%CH3CN / 0.1%TFA / H20平衡該管柱並用5 % CH3CN / O.l^TPA / H3〇g60%CH3CN / 0 . 1% TFA / H2 的梯度於50分鐘期間進行洗提。 使用洗提條件A 1和B 1得到的滯留時間分別為1 7 . 8 8分和 2 0 1 5 分。 置直SU. H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-0H 用類似實施例1所述程序合成標題呔,其中係使用具有 取代容最為0.49毫莫耳/克450毫克Fmoc-Lys(Boc)-Wang 樹脂(Hovabiochem, Bad Soden, .Germany· cat. # 04- 1 2-2014)作备起始樹胞。依簧施例1所述將560奄克 肽樹脂切斷並將1 /2所得粗製產物純化後,得到25.9毫克 的產量。 依實施例1所述鑑定最後產物。使甩洗提條件A1和所 得滯留時間分別為1 8 . 3 0分和20 . 1 5分。 W...施.13. 5- (H-Ala-His-i)-2Na 卜 D-Phe-NH)胺基戊烷 · 使用類似實拖例1所述程序合成呔樹脂Η - A I a - ^以1>1:卜1)-2^31-0-?^-$33^〇樹脂,不同處在於其中係 本紙張尺度適州中國國家標芈(CNS ) Λ4規格(210Χ297公釐) (請Λ聞讀背面之注意事項再填寫本頁)
,1T -气 43881 1 A7 - B7 五、發明説明(26) 用具有0.96毫莫耳/克的取代容量之262毫克Sasrin樹脂 (2-甲氧基-4-焼氧基苯甲酵樹脂)(Bachem. Budendorf, Switzerland· cat. If D- 1 29 5 )且將第一個胺基酸殘基偶 合到樹脂所用的方案為用預形成的對稱酐以4 -二甲胺基吡 啶催化偶合後,用苯甲酐將樹脂上殘留的-0H基予以封蓋 〇 用 56毫克的 H-Ala-His(Trt)-D-2Na卜D-Phe-Sasrin樹脂 與0,5毫升的1.5 -二胺基戊烷在室溫下攪拌20小時K切出 部份保讅住的肽 5-(H-/Ua-His(T「t)-D-2NahD-Phe-HH)胺 基戊烷。濾掉地餘樹脂並用1毫升DMF萃取。將合併液與 萃取液緩慢地加到攪拌中的2.5毫升CH3CN / 10毫升1M鹽酸 绲合物中巨於用25% CH3CN稀釋到50毫升後,將該混合物 置於410 100小時(M切斷沮胺酸上的三苯甲基保護)。然 後用H2〇將該裾合物稀釋到200毫升。 用1/2該濾液直接注射到管柱而K類似實施例1所述程 序進行半製備型HPLC純化該粗製肽。產量為4.5毫克。 依茛胞例1所述鑑定最後產物。使用洗提條件A1和B1所 得滯留時間分別為18 . 43分和20.75分。 實崴胤丄 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先,閱讀背面之注意事項再填寫本頁) (2S)-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-HH>-6-胺基己醇 使用類似實拖例3所述程序,用SasM η樹脂(取代容量 :0.96¾ «耳 / 克)合成肽樹脂^13-11〗5(1>1:)-0-2Hftl-l)-Phe-Lys(Boc>-Sasrin樹脂。 用 200 笔克的 I卜/Ua-His<Trt)-D-2Na 卜 D-Phe- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS ) Λ4坭格(210x297公釐) Α7 43881 τ ___~ Β7 五、發明説明(27 )
Lys<Boc)-Sasrin樹脂與含有1.2毫升THF (四氫呋喃)* 0.2毫升乙酵,23毫克LiBr和10毫克NaBH4的混合物一起 在室溫下攪拌20小時以切出部份保護住的肽(2S)-(H-Ala-His(T「t>-D-2Na 卜 D-Phe-HH)-6-胺基己醇。然後加入 200微升H20 ,200微升乙酸和4毫升乙醇。濾掉樹脂粒 並用50毫升Η 2〇稀釋該滤液後予Μ冷凍乾燥。依實腌例1 所述對所得粉末進行TF Α切斷和純化。該純化必須重複進 行以得到足夠純的產物。得到5 . 8毫克的產量。 依實施例1所述鑑定最後產物。使用洗提條件A1和B1得 到滯留時間分別為1 7 . 8 2分和2 0 . 0 2分。 鬣麗i H-Ala-Hisur (CHaNH)D~2Kal-D-Phe-Lys-NHz 以類似實施例1所述程序,用具有取代容量0.34毫萁耳 /克的556毫克4-((2’,4匕二甲氧基笨基)-(Fmoc-胺基} 甲基卜苯氧基樹脂(Novabiocheia AG Switzerland, cat. 林:01-64-0013)起始合成肽樹脂卜[)-2^1-&11^-1^3-(B 〇c )樹脂。使用下列經保護的胺基酸衍生物:Ρπ〇οι· y s (& 〇 c ) - 0 Η , F m 〇 c U h e - 0 Η 和 F m 〇 c - 2 N a 1 - 0 Η 0 裉據 Sasaki, Y WC〇y.D.H.,PEPTIDES8il)119-121, 1987 導人-CtUNH -肽鐽同位質。 用8 2 0牽克對應的N,0-二甲基巽羥肟酸酯根據 Fehrent,z, J.A. and Castro, B.. SYNTHESIS 676-678, 198 3所述製備成「|11〇(;-«丨5(1>1:)-醛。將粗製醛溶解在8毫 升f) M F中並分成兩部份。將其中第一部份於室溫下加到 -30 — 本紙張反度適用中闺國家標孪(CNS ) A4说格(2IOX297公釐) JIP-------ί,------訂------t ,(請A閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央榇準局員工消費合作社印製 經濟部中央橾隼局員工消費合作社印裝 4 3 8 8 1 1 A7 - B7 五、發明説明(28) fiio 毫克 H-D-2Nal-D-Phe-Lys-樹脂 / 10毫升 1% 乙酸 / OMF攪拌漿液。然後加人57毫克HaCNBH3 (85%纯度)/ 1 毫升DMF溶液並繼鑛播拌分鐘。之後,過濾分離出該肽 樹脂並用1%乙酸/ DMF洗之。再將該肽樹脂懸浮於1〇毫升 1%乙酸/ DMF中並加入第二部份的Fmoc-His(Trt)-醛。接 著,於室溫下再加人57牽克NaCNBH3 (85%純度)/ 1毫升 DMF溶液並將所得混合物播拌18小時。 於該遇原烷基化步驟之後,過漶分離肽樹脂並用1 %乙 酸/ DMF洗,並用肽合成混合器根據上述程序,用經保護 的胺基酸衍生物Fmoc-Ala-OH完成鏈增長。 用550毫克的肽樹脂切出該肽並用類似實施例1所述程 序K本製備型Η P L C纯化該粗製肽。得到11 . 3牽克之產虽。 依實施例1所述鑑定最後產物。用洗提條件和Β1测得 滯留時間分別為1 3.35分和1 7 . 38分。 鬣施_倒1 (正丙基)-His_D-2Ha 丨-D-Phe-Lys-HH2與(正丙基)2_ His-D-2-Nal-D~Phe-Lys_NH2 Μ類似實施例]所述程序,用具有取代容量0.34毫莫耳 /克的4-<(2'4’-二甲氧基苯基)-(FBOC-胺基)甲基)-苯 氧基樹脂(Hovabiocheiu AG Switzerland, cat. 01_ 64-00U丨起始而合成肽樹脂H-His(T>t卜D-2Nal-D-Phe-Us(Boc)-樹脂。所用的經保護胺基酸衍生物為!^〇(;-!, vs(Boc)-〇H · Fmoc-D-Phe-〇H > Fmoc-2Hal-0H|0 Fmoc-H i r ( T r t ) - 0 H ° ™ 3 1 - 本紙張尺度適用中國國客標隼(CNS ) Λ4坭格(2丨0X297公沒) 1 ~J Ί n 1 ^ 11 (請也閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 4 388 1 1 A7 _________;_B7 _ 五、發明説明(29 ) 於 150 牽克 H-His(Trt)-D-2Na卜D-Phe-Lys-樹脂 / 3.3 暈并乙酸/ DMF攪拌漿液中,於室溫下,加入13微升的 正丙醛。然後加人16.8毫克NaCNBHa (85%純度)/ 0.5毫 升D M F溶液並繼續擾拌6小時。於該透原烷基化步驟後, 分離該肽樹脂並在過濾漏斗上用DMF和CtUC U洗,再真空 乾燥。 . 將所得兩種呔樹脂混合並從所得300毫克肽樹脂切出未 烷基化的一正丙基-和二正丙基肽混合物。用類似實施例 1所述程序以半製備型Η P L C分離和純化該肽。得到6 · 5 4毫 克的正丙基-11丨5-0-2丨丨31^卜6-1^3-?^2和5.59毫克的( ΙΕ 丙基)a-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NHa。 依窖施例1所述鑑定最後產物。對於(正丙基 2Na卜D-Phe-Lys-NH2,使用洗提條件A1和B〗分別得到滯留 時間1 6 . 45分和19.92分。 實_施.倒__7_ H''Ala-Tio~D-2Hal-D-Phe-Lys-NH2 用具有取代容量為0.72毫莫耳/莫的620毫克4-甲基 BHA 樹脂(Bissendorf Biochemicais, Hannover, Germany, cat. tt: RMIS50)起始,根據 方法在 經濟部中夾橾筚扃員工消f合作社印製
AppI. ied Biosystems 430A狀合成器上’用製U商提供的 0.5毫莫耳規模單一偶合方案,以預形成好的對稱軒在 0 M F内進行單一偶合而合成該肽。對於L端A I a ·則採用2 X 60分鏑偶合時間的雙霞偶合。合成所用的經保護胺基酸衍 牛.物為 B〇c-|,ys(2 -氛- Z)-〇H,Boc-!)-Phe-01l’ Boc-D- -32 - 本紙張尺度適用中國國家櫺準(CNS ) Λ4規格(210X297公釐) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 4388 1 1 A7 __'_B7___ 五、發明説明(K)) 2Ka I -OH * Boc-Tic-OH和 Boc-Ala-〇H° 用4S6毫克該肽樹脂與4. 5毫升HF / 500微升間甲酚混 合物在Of下搜拌75分鐘Μ切出該肽。在用氮氣流蒸掉 該HP。用50毫升乙醚將該肽與廢餘樹脂從殘留油狀物中沈 澱出來並用50毫升乙醚洗2次。於乾燦後,用1〇毫升含有 4滴乙酸的}^〇從沈殺物萃取該肽。將萃取液用稀釋到 1 00毫升hO 。 用類似實陁例1所述程序K兩次半製備型HPLC從2x18 毫升稀釋萃取液纯化該粗製肽。產量為17.3毫克。 依實腌例1所述鑑定最後產物。 闬洗提條件A1和B1進行RP-HPLC分析得到滯留時間分別 為27 . 37分和29.50分。 實1.例 (2in-(H-Ua-His-D-2Hal-NH)-3-笨基丙胺 用5 8 0毫升4 - ( ( 2 ' , 4 '-二甲氧基苯基> -(F κι 〇 c -胺基)甲 基)苯氣基樹脂(NSvabiochem AG Switzerland, cat 0 1-64-0013)(取代容量0.43毫莫耳/克)M20%六氫吡啶 / HMP處理20分鏡Μ脫除Fhioc基。用DMF和CH2CU洗該樹 脂並闬宵沲例5所述遇原烷基化程序’ K F»〇c-D-Phe-醛 予K惊基化。 之後,過濾分離該肱樹脂並在過滅漏斗上用1 %乙酸/ |)ΜΓ洗,再依苜拖例1所述用肽合成器完成鐽增長1所用 锊保詢胺基酸衍生物為F m 〇 c - Ϊ) - 2 H a卜0 Η,F m 〇 c - H i s ( T r t) -OH 和 Fmoc-Ala-OH0 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS ) Λ·4規格(210X297公釐) ^1. ---^----IT -(請洗閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 4388Ί 1 A7 B7 五、發明説明(3工 用3 01毫克該肽樹脂切出該肽並用類似實胞例1所述程 序以半製備型HPLC純化該粗製肽,得到23. 92毫克之產量 Ο 嵌宵施例1所述鑑定最後產物。用洗提條件A 1和B 1得到 滯留時間分別為1 9 . 3 3分和2 I 7 7分。 請 冼 閱 讀 背 δ 之 注 意 項 再 填 寫 本 頁 訂
X 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 -34- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS ) Λ4規格(210Χ 297公釐) 4388 1 1 A7
7 B 經濟部中央標準局員工消費合作社印褽 五、發明説明(32 ) 笛施例9-54
Ex. 呔 / 用類似 所示實 拖例所 述程序 製備 條件A1 (首施例 1)所得 RP-HPLC 滞留時 間 條件B1 (實拖例 1)所得 RP-HPLC 滯留時 間 9 H-Ala-His-D-Phe-D-Phe-Lys-NH2 1 12.53 15.43 10 H-A]a-Phe-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH: 1 28.13 29.62 11 H-His-D-2NaI-D-Phe-Lys-NH2 1 18.02 20.15 12 H-Ala-His-D-2Nal-D-PJie-Phe-NH2 1 28.48 29.48 13 H-Ala-His-D-2NaI-D-Phe-D-Phe-NH, 1 26.65 27.75 14 H-Ala-His-D-2Nal-Phe-Lys-NH, 1 21.85 23.12 15 (3- (4-畔唯基)丙藤基)-D~*2Na 1 -D-Phe-Lys-m 1 20.7 - 16 (丙醯基)-H i s-D-2Ha 卜 D-Phe-Lys-NH2 1 22.2 23.77 17 H-A]a-His-D-2Nal-D-Phe-NH2 1 21.7 23.08 18 (H-Aia-His-D-2Na!-D'Phe-NH)己综 .3 34.11 35.78 19 H-Ala-His-D-Trp-D-Phe-Lys-NH2 1 14.52 16.7 20 H-Ala.Ala-D-2Nal,D-Phe*Lys-NH: 1 21.97 23.23 21 ((丙臨基)-His-D-2Na 卜 D-Phe-NH)己烷 3 37.17 39.47 22 6-(Η-Αΐ2-Ηί5-ϋ-2ΝΓ3ΐ-0-ΡΗΰ-NH)己胺 3 19.3 21.57 23 H-D^Nal-D-Phe-Lys-NH, 1 15.83 18.25 24 (5-胺基戊稀基卜 His-D-2Na|-D-Phe-Lys-NH2 1 17.S 19.98 25 H-D-Lys-D-2Nral-D-Phe-Lys-NH, 1 17.07 19.62 (請洗閒讀背面之注意事項再填寫本頁) 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS ) Λ4規格(210X 297公釐) 4388 1 五、發明説明(33 ) A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 26 H-Ala-His-D-2NaI-D-Tic-Lys-NH, 1 19.12 20.78 27 H-D-Lys-Phe^2Nal-D-His-D-Ala-NH2 1 18.15 20.48 28 ί5-胺基戊醯基)-D_2Na 卜 D-Phe-Lys-NH2 / 1 20.67 22.45 29 H-D-AJa-D-2NaI-D-Phe-Lys-NH2 1 19.57 21.53 30 (丙醯基)-D-2Na 卜 D-Phe-Lys-NHz 1 26.7 27.92 31 H-D-A]a-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH, 1 17.83 20.3 32 H-Ala-3-Pyal-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH, 1 18.15 20.18 33 (n-Butyl)-AJa-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 6 19.55 - 34 (n-Octy^-Ala-His-D'lNal-D-Phe-Lys-NH; 6 27.88 24.52 35 H-AIa-His-D-2Nal-D-Phei|r(CH,NH)Lys- NH, 5 17.97 20.S3 36 (3-胺甲基苯甲醯棊)-D-2Ha卜D-Phe-Us_NH2 1 22.42 24.13 37 (3-胺甲基苯乙醢基)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 23.62 23.97 38 (U-咪唑基)乙醯基卜D-2HaH)-Phe-Lys-HH2 1 20.42 22.22 39 (3- (4-眯唑基)丙烯醯基)-D-2Na卜D-Phe-Lys- nh3 - 1 21.25 23.32 40 (4-胺基茏乙醯基)-D-2Na 卜 D-Phe-Lys-NH2 '1. 22.45 - 41 (反式-4-胺甲基瑁己醯基)-D-2Na卜D-Phe-Lys- hh2 1 22.07 23.67 42 2-(H-AIa-His-D-2Nal-D-Phe-NHJ- 乙胺 3 18.6 20.25 43 (Z-fH-AJa-His-D-ZNaND-Phe-NH)乙苺ΐ笨 3 30.13 32.18 44 4-((H-AJa-His-D-2Nral-D-Phe- NH)甲基)苯甲胺 3 19.63 21.55 45 (2R)-(H-AIa-His-D-2NaI-NH)-3- 苯丙胺 4 21.55 23.57 46 2-(H-Ala-HkD-2N3l-NH)乙胺 •Ί J 25.52 - -36- 本紙張尺度適用中闺围家慄準i C\\S ) Λ4规格(210Χ 297公釐) 請 桌 閲 讀 背 © 冬 事 項 填 寫 本 頁 438811 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作杜印製 五、發明説明(34 ) 47 H-D-Phe-Ala-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH: 1 27.82 29.43 43 H-Ala-D'PheO-2Nal-D-Phe-Lys-NHz 1 25.62 27.22 49 H-Ala-(2-胺基苯甲醯基)-D-2Na 卜 D-Phe-L'ys-NH2 7 26.42 24.93 50 H-Aib*His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NHj 1 17.42 20.13 51 H-AIa-His-D-lNal-D-Phe-Lys-NH, 1 17.55 19.8 52 H-Tyr-Ala-His-D^Nal-D-Phe-Lys-NHj 1 19.9 21.22 53 (六氣啦唯-4-羰基)-D-2Nal**D-Phe,Ljs-NH2 1 20.4 22.32 54 H-AJa-Phe(4-NH,)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH, 1 19.20 - 實—ams ((丙醯基)-D-2Na卜D-Phe-NH)己烷 用類似實施例3所述程序,K具有取代容量為0.96毫莫 耳/克的Sasrin樹脂合成肽樹脂(丙釀基)-D-2Ha卜D-Phe-Sas「in樹脂。 用105毫克的所"得肽樹脂進行胺分解。 用105毫克的丙醯基- D-2Na卜D-Phe-S.asrin樹脂與1·毫 升正己胺在室溫下搜拌20小時Μ切出肽((丙醞基) 2Ha卜D-Phe-NH)己烷。濾出駿餘樹脂並用1毫升DHF萃取 。將合併濾液和萃取液於播拌下緩慢地加到8毫升1 Μ鹽酸 中。將所得沈澱物經由添加的70毫升CH3CN使其再溶解, 然後,添加20毫升丨U0使其再沈澱。濾出沈澱物,用H20 洗並乾燥。產最為〗2毫克。 (农宵胞例1所述鑑定最後產物,不過只用類似於β 1之條 本紙張尺度適用中阁國家標準(CNS ) AJ規格(2丨Ο X 297公釐) 1Ί—------------1Τ {請洗閲讀背面之注意事項再填寫本頁) ^ 3 88 1 1 A7 B7 五、發明説明(35 ) 件•於 50 分鋳内用 0.1%TFA / H20 至 90%CH3CH / 0.1 % 丁1^/1120梯度進行一次1^1(:分析,其滯留時間為35.73分 〇 鬣嵐1处 (3-甲胺甲基苯甲醯基)-D-2Ha卜D-Phe-LyS-HH2 以類似實施例7所述程序用具有取代容量0.72毫奠耳/ 克的樹脂合成肽樹脂(3-胺甲基笨甲醯基)-〇-21^1-D - P h e - U s ( C 1 - Z ) - Μ Β Η A 樹脂。 根據 Kaljuste, Κ. and Unden, Α·, Int. J. Peptide Protein Res. 42, 1 18 -1 24, 1993所述將所得肽甲基化。 用300毫克樹脂與含有8毫升DCM,150毫升DIEA (二乙基 -異丙胺)和39毫克4,4’_二甲氧基二苯甲基氯(000-(:1) 等的混合物一起攪拌2小時,過濾分離並用DCM和DMF洗。 然後將該經D0D保護的肽樹腊與18毫升的3.7%甲醛/ DMF 溶液攪拌,接著加人0.18毫升乙酸和180毫克的NaCNBfU •並繼續播拌18小_時。過»分離樹腊並用DMF和DCM洗。 之後,用2x 3毫升DCM / TFA 1 :1分別處理5分+ 30分以脫 除D0D·保護後,用DCM洗該肽樹脂並真空乾烽。 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 ^--Ί J-------衣------訂 (請洗閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 用3 70毫克樹脂以類似寅腌例7所述程序切取所得H-甲 基化肽,並依實豳例1所述將與純化和鑑定。產量為 1 7 . 3毫克。 用條件A1和B1進行RP-HPLC分析所得滯留時間分別為 2 2 . 8 3 分和 2 4 . 6 0 ♦分。 本紙張尺度適用中國囤家標隼(CNS ) Λ4規格(210X 297公釐) 經濟部中央標準局負工消費合作社印製 4 3 8 8 1 1 A? ___B7 五、發明説明(36 ) 實m? 二甲胺甲基苯甲醮基>-D-2Ha卜D-Phe-Lys-NfU Μ類似實豳例7所述程序用具有取代容量0.72毫莫耳/ 克的ΜΒΗΑ樹脂合成肽樹脂(3 -胺甲基笨甲醯基卜D-2Hal-I)-Phe-i>ys(Cl_Z)-HBHA 0 然後用650毫克所得肽樹脂與20牽升1%乙酸/DMF和 45微升3.7%甲醛/ DMF等一起攪拌。接著,加入55毫克 NaCNBH3 (85%纯度)並繼纘播拌18小時。過濾分離出樹脂 並用DMF,DCM / MeOH 6:4和DCM依次洗滌。 用631毫克所得樹脂Μ類似實施例7所述程序切取所得 -二-甲基化肽混合钧並依實施例1所述將其純化和鑑 定。產最為8 . 58毫克。 用條件A 1和B 1進行R P - Η P L C分析得到滯留時間分別為 3 1 . 5 8 分和 3 3 . 0 0 分。 踅施.®L5A. (3-胺基-3-甲基 T酵基)-D-2Na 卜D-Phe-Lys-HH2 Μ類似實沲例1所述程序用2克的4-((2’,4 ^二甲氧基 苯基)·- (Frooc-胺基)甲基)-苯氧基樹脂(Rink樹腊) (Novabiochem, Bad Soden. Germany, cat. 01-64-〇〇 u)(取代容最為〇>39毫莫耳/克)合成肽樹脂H-D-2Nal"[)~Phe-Lys(Boc)-Rink樹脂。 將毫克所得肽樹脂(0.15毫莫耳 > 懸浮於4毫升DCM/ MeOH 1:1中。加人42微升三乙胺(0.3毫莫耳 > 並於冷卻到 m後,於掙伴下加人:Π毫克(0.丨58毫莫耳)的2,2-二甲基 本紙張尺度通用中囡國家梯羋() Λ4说格(21〇><29·;公釐) H. ; I Τ- I—---1 - -- 士·^— I- - ! - 1 - I * ^"δ (请洗閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局負工消費合作社印取 4388 1 1 A7 ___~_B7_ 五、發明説明(π) - 4-氧基吖丁啶-1-磺醯氛。在0 t!繼績攪拌20分,接著在 室湎下攢拌90分。於用DCM / HeOH 6:4洗該樹脂並真空乾 燥之後,從樹脂切取粗製肽並用類似實施例1所述程序純 化。產景為4 1 . 8 ]毫克。 用條件A 1和B 1進行R P - Η P LC分析測得滞留時間分別為 21.35 分和 22,95 分。 置 1@L5J_ (2S>-i(3-胺甲基苯甲醯基)ur (CH2NH)D-2Na 卜 D-Phe-NH卜6-胺基己酵 以類似實施例3所述程序用980毫克具有取代容量 0.87毫莫耳/克的SasrMn樹脂合成肽樹脂[]-0-2«31-0-Phe-Lys(Boc)-Sas「in 樹脂。 用1.4克該樹脂M Boc-3-胺甲基笨甲醛予Μ還原烷基化 ,並用1.0克所得樹脂切取該肽;將一半該粗製產物Μ類 似實施例5所述程序予以純化。產量為18.46毫克。 用條件Α1和Bliff行RP-HPLC分析測得滯留時間分別為 1 4. 78 分和 17. 40 分。 實_.1倒—麗 (2-胺甲基苯甲醯基)-D-2Na卜D-Phe-Lys-NHa Μ額似實施例1所述程序,用2克的4-((2’,4' -二甲氧 基苯基)-(Fraoc-胺基)甲基)-笨氧基樹脂(RUk樹脂) (Novabiochem, Bad Soden, (Jerraany. cat. tt: 01~64~ 001 3)(取代容虽〇. 39毫莫耳/克)合成肽樹脂})-0-21^1-D-Phe-l., ysU]r)c>-Rink 樹_ 〇 -4 〇 - 本紙張尺度適用中國阐家標準(CNS ) Λ4規格(210X 297公釐) i^i ^^^^1 (請洗閡讀背面之注意事項再填寫本頁) *-° 4 388 1 1 A7 B7 五、發明説明(38 ) 取;Ϊ00毫克所得肽樹脂(0.096毫莫耳 > 與54毫克笨二甲 醣基-2-胺甲基-笨甲酸(0.19 2毫莫耳),182毫克HBTU (0.480毫莫耳)和164微升DIEA (0.96毫莫耳)等在10毫 升i) M F中攪拌1 8小時。 於用[)MF ,DCM/ MeOH 6:4和DCM等依次洗過該樹脂及 真空乾燥之後,用290毫克該呔樹腊與含有3毫升TFA , 225毫克酸,75微升乙烷二硫酵,150微升苯硫基甲烷和 150微升等的混合物在室溫下搰拌180分Μ切出(苯 二甲醯基-.2-胺甲基笨甲醯基)-D-2Nal-D-Phe-Lys-HH2 。 過濾該切斷混合籾,用1毫升TFA洗刺餘樹脂並用氮氣流 將浦液湄縮到約1毫升。用50毫升乙醚從油吠物中沈漉出 粗製呔並用50毫升乙醚洗三次。然後將沈灝的溶解在50奄 升“^中並冷凍乾燥。所得粉末物與0.5毫升肼水合物/ 5毫升乙醇在701擯拌6小時後*用50毫升H2〇稀釋並冷 凍乾燥。 經由添加2毫井'乙酸* 2毫升乙酵和100毫升H2〇 Μ溶 解該冷凍乾燥產物,再以類似實施例1所述程序予以純化 。產量為9 . 43毫克。 經濟部中央標準局員工消費合作社印聚 用條件/Π和ΙΠ進行RP-HPLC分析測得滯留時間分別為 2 3 . 2 2 分和 2 5 . 0 5 分。 鬣施.盤立1_
H-Aib-Hisw (CH2NH)D-2Nal-D-Phe-Lys-0H 以類似實胞例5所述程序合成該肽*其中係用具有取代 宵最0.87毫莫耳/克的1050牽克Sasrin樹脂(2 -甲氧基- -41 - 本紙倀尺度適用中國國家樣準(CNS ) Λ4規格(210x 29·/公釐) A7 4388 1 1 ______B7 五、發明説明(39 ) 4 -按氧基苯甲酵樹脂)(Bachem, Bubendorf,
SwUzeHand, cat. It D-1295)且將第一個胺基酸賤基偁 合到該樹脂所用的方案為Μ預形成的對稱酐用4 -二甲胺基 吡啶催化偶合後·用苯甲酸酐將樹脂上的殘留-0Η基封蓋 。於依宮施例].所述切斷752毫克的呔樹脂並將7/10所得 粗萆物純化後,得到3 6 . 7 6毫克之產量。 依實施例1所述鑑定最後產物。使甩條件A1和Β1所得滯 留時間分別為1 3 · 90分和1 7 . 42分。 鬣施 H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 K類似實腌例56所逑程序用具有取代容量0.72毫莫耳/ 克的MBHA樹脂合成狀樹脂H-N-Me_D-2Na卜D,Phe-
Lys((M-Z)-HBHA樹脂。 然後用458毫克該樹脂經由與B〇c-His(Bora)-0H與Boc-Aib-0H偶合而合成H-Aib-His(BOB)-N-Me-D-2Ha卜f)-I>he-L y s ( C 1 - Z ) - MB Η A,接著甩46 9毫克所得樹脂切取N -甲基化 肽並依實施例7所述纯化1 /2所得粗製肽且進行鑑定。產 最為23. 5毫克。 用條件A 1和β 1進行R P - Η P L C分析得到滞留時間分別為 17.62 分和 19.95 分。 1 施 163. (D夫喃甲基)-Aib-His-D-2Na卜D-Phe-Lys-HH2 ‘ 以類似實拖例1所述程序,用其取代容量為0.43毫莫耳 /克的4-((2’,4’-二甲氧基苯基)-(|?|1|0(^_胺基>甲基)-苯 -42- 本紙張尺度適圯中因國家標準(〇呢)六4规格(210><297公釐) ---Ί—-------装------訂-------A (請攻閱讀背面之注意事項再填寫表頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 經濟部中夬標準局貝工消費合作社印裝 4388 1 1 A7 ____^_B7____ 五、發明説明(4〇 ) 氧基樹腊(Rink 樹脂)(Novabiocheni, Bad Soden,
Germany, eat, #: 01H0013)合成狀樹脂 H-Aib “ His(T>U-D-2Na 卜 D-Phe-Lys(Boc)-Rint 樹脂。 然後用300毫克所得肽樹脂輿5毫升1%乙酸/ DMFfD 410微升呋哺-2-醛一起攪拌。於15分後及180分後分別 加人231毫克的NaCNBH3 (85%)。繼績攪拌18小時*^過滅 分離樹脂並用DMF,DCM / MeOH 6:4和DCM分別洗之° 用319毫克所得樹胞敗實施例1所述切取H -烷基化肽並 予Μ純化和鑑定。其產量為44.8毫克。 用晓件Α1和Β1進行8P-HPLC分析分別得到滯留時間 19.45 分和 22.23 分。 實—施農趾 N,H-二- (2R-羥丙基)-3-胺甲基苯甲醢基)-D-2Ha卜D-Phe^Lys-HHa Μ類似實施例7所述程序用其取代容量為0.7 2毫莫耳/ 克的4-甲基二苯甲*基胺(ΜΒΗΑ)樹脂(B issendorf Biochemicals, Hannover * Germany . cat . tt: RMIS50)合 成肽樹脂(3-胺甲基苯甲醸基)-D-2Ha]-D-Phe-Lys(n-Z} -MBHA樹脂。
然後取5 00毫克所得肽樹脂與12.5毫升1%乙酸/ DMF和 410微升2(R)-(四氫吡_~2(R,S) -基氧基)丙醛一起摄拌 。於5分鏡後加人2 1 3毫克的N a C N B Η 3 ( 85% ) &繼續攪拌 18小時。過濾分雛該樹脂並用DMF,DCM / MeOH β:4和DCM 依次洗之。 -4 3- 本紙張尺度適用中國國家標羋(CNS ) Λ4規格(210X29?公釐) (诗洗閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -装. 訂 438811
7 7 A B 五、發明説明(4i )
用490毫克所得樹脂依S施例7所述切取N,H-二烷基化 狀,並予Μ純化和鑑定。其產量為20.72毫克。 / 用條件Α1和Β1進行RP-HPLC分析所得滞留時間分別為 23 . 40分和 25 · 33分。 t 施 IM^LUL 經濟部中央標準局貝工消費合作社印袋
Ex. 肽 1 用類似 所示實 施例编 號所述 程序製 備. 條件A1 施例 1)所得 RP-HPLC 滞留時 間 條件B1 (實腌例 υ所得 RP-HPLC 滯留時 間 65 H-/Ua-N-Me-i2-胺基苯甲臨基)-D-2Na 卜 D-Phe-Lys~NH2 7 24.47 26.27 66 U-胺甲基苯甲醯基> -D-2Na卜D-Phe-Lys-NH2 1 22.22 23.5 67 H-His-Ala-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH, 1 19.90 21.45 68 (2S)-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-l,6-di- 胺基己烷 :S. 17.05 19.07 69 4-(H’AJa-His-D-2NaI-D-Phe· NH) 丁胺 3 18.65 20.08 70 3-(H-AJa-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-丙胺 3 18.42 19.80 71 (3-胺甲基笨甲醯基)-D-hPhe-D-Phe-Lys-NH2 7 20.33 21.95+ 72 (3-胺甲基苯甲醢基)少(〇^刖)0-2Kal-D-Phe-Lys-HHz 5 14.17 17.23 73 (3-胺甲基苯甲醯基)-D-2Na卜D-hPhe-Lys-HH^ 7 25.30 26.58 -44- (請也鬩讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙浪尺度適州中國國家標準(CNS ) Λ4規格(210X 297公釐} 43881t
7 7 A B 五、發明説明(42) 經濟部中央標準局員工消费合作社印製 74 <3-胺基-3-甲基丁醯基)-His-D-2Na卜 D-Phe-L.ys-NHs 58 18.12 20.20 75 ί3-胺甲基苯甲醯基卜D-2Na卜N-Bz卜 G1v-Lys-NH2 7 25.33 26.70 76 (25)-((3-胺甲基苯一豳基)-〇-2如卜0-Phe-HH)-6-胺基己酵 4 22.95 24.32 77 (3-胺甲基苯甲酵(基)-0-2Na卜Thia卜 Lys-NH2 7 22.13 23.23 78 (2S)-(H-Aib-HisiKCH2NH)D_2Nal-D-Phe-按基己醇 59 12.83 17.27 79 (3-胺甲基笨甲鲼基)-D-2Na卜D-3Pya卜 Lys,2 1 15.10 16.87 80 (3-胺甲基苯甲醯基)-D-2Na卜D-Phe (4-F),Lys,2 7 23.40 24.63 81 (3-胺甲基苯甲醯基)-D-2Ha卜D-Phe(4_ 0Me)-L^s~NH2 7 22.50 23.90 82 2-(H-Aib-His-D-2NeU-D-Phe-NH)乙烷 3 18.30 20.47 S3 H-Aib-Phe-D-2Nal-D'Phe-Lys-NHz 1 29.25 30.55 84 2-(H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-NH-(l-甲基-2-吡咯啶基)乙烷 3 18.70 20.80 85 2-(H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-(2- 吡啶基)乙烷 3 19.20 20.83 86 · (3,胺甲基苯甲醯基)UNa卜N-Me-D-Phe-Lys-NH^ Γ 26.78 27.88 87 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-GIy-NH2 1 20.48 22.23 88 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-A]a-NH, 1 21.65 23.38 39 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Om-NH, 1 18.43 20.05 90 <5-胺甲基嗥吩基-2-羰基>-D-2Ha卜Ch Phe-L.ys-NH^ 1 22.32 23.65 91 H-Aib-His-D-2NabD-Phe-D-Lys-NH: 1 18.50 20.00 92 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Dab-NH, 1 17.75 19.48 93 Η-Αί!>Ηί5-04Να!-πΡί^ψ((:Η,ΝΗ)1^- NH, 5 18.57 20.62 -4S - 1· ^^1 I I i ttt I =1 ^—>n 一flJ (請洗閒讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙悵尺度適州中阁S家橾準(CNS ) Λ4规格(210X2W公釐) 4388 1 1 A7
7 B 五、發明説明(43 ) 經濟部中央標準局貝工消费合作社印製 94 H-Aib-His-D^2Nal-D-Phe-N-Me-Lys-NH, 62 18.03 20.60 95 <3-胺甲基噻吩基-2-羰基)-D-2Ha卜D-Phe 吐 ysH ; 1 23.23 24.78 96 H-Aib-His-D-2Nal-N^Me-D-Phe-Lys-NH2 1 21.78 23.53 97 H-Aib-His-D^Nal-D-Phe-Lys-NiMe), 3 18.70 21.07 98 <3-胺申基苯甲醯基)-D-lNai-D-Phe-Lys'NH^ 1 22.67 24.23 99 H-Aib-His-D-2Nal-D-Trp-Lys-NR 1 18.17 20.40 100 (2-吡啶基甲基)-Aib-HisH)-2NaI-D-Phe-Lys-MH2 63 19.07 21.73 101 H-Aib-(3-胺甲基苯甲醯基)-D-2Na^D-Phe-Lys-NH^ 7 23.95 25.38 102 H-Aib-3PyaI*D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 J8.53 20.38 103 (3i〇-六氮吡啶羰基)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NHa 1 21.52 22.97 104 (2-(H-Aib-His-D-2Na!-NH)乙基)苯 J 25.55 27.85 105 (2R-羰基丙基)-Aib-His-D-2Ha 卜 D-Phe-Lys-NHZ 64 18.15 20.2S 106 (3-胺甲基苯甲醯基卜卜2如〗-0-PhewfMHJLys* 5, 22.00 23.95 107 (3-胺甲基苯甲醯基)-N-Me-D-2Ha卜D-Phe-LysH 62 23.27 24.72 108 (3-胺甲基苯甲醯基)-D-2NJ -D叩he-Η-He-Lys-KH2 67 22.60 23.98 109 H-D-Thr-His-D-2NaI-D-Phe-Lys-NH, 7 17.75 19.83 · 110 H-Hyp-His-D-2NaI-D-Phe-Lys-NH, 7 ' 17.58 19.37 木發明代表性肽的構造如下所示。 (讀洗閱讀背^之注意事項再填寫本頁) 本紙张尺度適用中固围家標卒(CNS ) Λ4規格(2丨0X21』7公釐) 4388 1 T Α7 - Β7五、發明説明(44 ) Κ,Ν -二- (2R-羥基丙基)-(3-胺甲基笨甲醯基)-D-2Nal-D-Phft-l.ys-NHs
3-(4-咪唑基)丙醚基)-D-2Na卜D-Phe-Lys-NH2 广NH
H-Ala-3Pyal-D-2Nal~D-Phe-Lys-NHa ---^------ ^------、玎 (請先閲讀背面之注意事項界填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印策
-47- 本紙张尺度通用中國國家標準(CNS ) A4規格(210X 297公釐) 4388 1 1 A7 A7 B7 五、發明説明(45) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 張 紙 本
3 (請洗閲讀背面之注意事項再填寫本頁) ^1388 1 t A7 - B7 五、發明説明(46 ) H-A!a-N-Me-(2-胺基苯甲醯基)_D-2Ha卜D-Phe-Lys-NH2
酵
S-fH-.Mb-HisUHal-D-Phe-NH) (1-甲基-2-阳;略症基)乙 烷 ^^^1- it ^ii^n «n »^^^1 ^^^^1 nil* ^ s • ."-5 (請洗閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製
49 本紙張尺度適用t國國家標準(CNS ) Λ4規格(210X297公釐) 4388 1 1 A7 B7五、發明说明(47 ) (5 -胺甲基噻吩基-2-羰基)-D-2Mal-D-Phe-L;is-HH2
(3-胺甲基-噻吩基-2-羰基)-D-2Ha〗-S)-Phe-Lys-NHz
(3-胺甲基苯甲醯基)-D-2Na卜N-(苯乙基.)-G]y-Lys-NHz 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製
-50- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)
本紙張尺度適用中國國家標準(CNS ) Λ4規格(210X297公釐) 4388 1 1 A7 __^ _B7 五、發明説明(邳) 鬣盘®LUi 建立一種用老鼠腦下垂體细胞進行的活體外分析以研究 不同GH促分泌素的效應。從雄鼠的腦下垂體前葉分離出混 含腦下垂體細胞培養物並培養3天。於洗滌後,剌激該细 胞15分鐘並測量培養液上澄液中的GH分泌量。 老鼠腦下垂艄细胞的分離程序為0. Sartor et aK, E.n.d.o.c.Ji.i._DjQ_l_Q.SJL LU5_,1985, pp, 952-957的修改程序。用 250克雄Sprague-Daw ley鼠在去頭後取出腦下垂體。取出 神經中葉後,將刺餘物置於補充0.25%葡萄糖,2x非必需 胺基酸和1%BSA (分離緩衝液)等約Grey’s培養基之中。 將該腺體切成小塊後,轉置於裝著3牽升分離緩衝液+ 經濟部中央標準局員工消費合作社印聚 11.5毫克胰蛋白ϋ和1000微克DNase等的燒瓶内並在37t ,95% 〇2和每分鐘70轉等條件下掊育35分鐘。經由沈降在 分難緩衝液中並用吸管抽吸成單一细胞之方式洗該碎片三 次。於分散之後,用尼龍濾器(160微米)過濾出细胞Μ脫 除未消化的姐鐮^用補充胰蛋白_抑制劑(0.75毫克/毫 升)的分離緩銜液洗該细胞三次後,再懸浮於培驀基中( 補充25 «Μ HEPES,4 ιιΜ穀胺醣胺,0.75%碳酸氫納-2.5%PCS,3%馬血清,10%老鼠血清,1 nm T3和40微克 /井地寒米松(dexamethasone)等的DMEM)到2χ105细胞 /棄升之密度。將细胞接種到微滴板中,200微升/洞並 在371和8% C〇2下培養3天。 於培養期後,用剌激緩衝液(HBSS,加1%BSA,0.25% 葡萄糖和2 5 m Μ丨丨E P ES )洗該细胞兩次並預掊苺1小時。然 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS ) Λ4規格(210X29?公釐) 經濟部中央標準局員工消費合作杜印裝 4 3 88 1 1 A7 B7 五、發明説明(奶) 後,除去缓衝液,加入含有本發明化合物的新刺激緵衝液 ,再將諸板置於37¾和5% C02下培啻15分鐘。收集鑀衝液 並依閃爍近似分析(SPA)法分析老鼠生長激素(rGH)含量 (SPA,基本上為如 US 4.568,649, Hart and Greenwalt, UJLa丄丄-L6_,1979, ρρ· 265-269’ 或 Ddenfriend e t. a 1 . , P r o cH a±.l...___ft.g.a d_.__S_cL_£_2_,19 8 5, p p . 8 (372-8676等之中所述者)° rGH分析係在OptiPlates (96 -洞板)中進行的*該板適 合於在Packards TopCount (jS-閃燦計數器)内直接計數 分析方案: 40撤升緩衝液 10微升樣品(接種刺激緩衝液)
50微升 lz5I-rGH 50微升兔子抗-rGfl 50微升SPA試劑(抗-兔子抗體) 將各板密封,置於板搖盪器上30分鐘,接著培甭〗〇小時 ,於1 0 -1 5 TC沈著後,進行計數。 於SPA中,结合到抗-GH兔子抗髑(原抗體)與结合到螢 光微球膊的二級抗體(SPA Type II RIA,得自Amershan) 。進行反應。結合到原抗體上的任何放射標示r G Η即固定 化到螢光微球照上而產生光。在/3 -閃爍計數器中的測量 可以計算出放射標示「G Η的量。结合到螢光微球粒的放射 -52- 本紙張尺度通用中國國家橾準(CNS ) Α4規格(210X297公釐) — 1—-------装------訂------.艮 (請先閱讀背面之注意事項异填寫本頁) < _ _ 4388 1 1 A7 一 B7 五、發明説明(5〇 ) 標示「GH量會隨樣品中的rGH含量增加而遞滅。 Ex, No. fb合物 ECJ0 (nM) E輯 (% of GHRP-6) 3 H-AIa-Hjs-D-2Na!-DPhe^NH-(CH,)5NH2 20 100 10 H-Ala-Phe-D^Nal-D-Phe-Lys-NH, 2 90 51 H-Ala-His-D-lNal-D-Phe-Lys-NH, 10 85 76 (25)-((3-胺甲基苯甲皤基)-[)2心卜0-Phe-NH)-6-胺基己醇 26 65 83 H-Aib-Phe-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH, 8 75 88 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-AJa-NH, Π SO 104 〇(H-Aib-His-D-2NaI-NH)乙基)宏 58 85 I,— -^------▲-- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)
*1T 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 -53- 本紙張尺度適用中國國家標準ί CNS ) Λ4規格(210Χ297公釐) 4388 1 1 年月 84. ]9 22 第84100274號專利申請案 .中文補充説明書(84年12月) 申請案4 1 1 3中實例卜1 1 0之M S數據 下表爲吾等之專利申請案4 1 1 3中實例1至1 1 0所述化合物之電 漿解吸質譜數據。數據之取得係使用B i ο 1 ο η 2 0儀器,採用下 文中詳細説明之條件3 實例 肽 理論値 M+H+ 實測値 M+H+ 1 H-Ala-His-D-2Nal-D-Tip-Lys-NH2 737.9 737.3 2 H-Ala-Hi&-I>-2Nal-D-Phe-Lys-OH 699.8 699.3 3 5^(H-AIa-His-E>2Nal-l>Phe~NH)胺基戊烷 655.8 655.4 4 (2S><H-Ala-His-I>2NaW>Phe*NH>6·胺基己醇 685.9 685.1 5 H-Ala-His ψ (CH2NH)D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 684.9 684.5 6 (n-Propyl)-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 669.9 669.0 6 (n-Propyl)2-His-D-2NaI-D-Phe-LyS'NH2 711.9 711.0 7 H-Ala-Tic-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 720.9 720.6 8 (;2RKH-Ala-His-I>2Nal-NH>3-苯基丙胺 556.7 556. 9 H-Ala-His-D-Phe-D-Phe-Lys-NH2 648.8 648.5 10 H-Ala^Phe-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 708.9 708.9 11 H-His-D-2Nal-I>Phe-Lys-NH2 627,8 627.5 12 H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Phe-NH2 717.9 717.4 13 H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-l>Phe-NH2 . 717.9 717.6 14 H-Ala-His-D-2Nal-Phe-Lys-NH2 698.8 698.4 15 3-(4~ 咪峻基)丙酿基-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 611.8 612.6 16 (丙酿基)·Ηί3·Ό·2Ν3ΐ-Μκ-Ι^-ΝΗ2 683.8 683.9 17 H-Ala-His-D-2NaI-D-Phe-NH2 570.6 570.6 19 H-Ala-His-D-Tr^D-Phe-Lys-NH2 687.8 687.7 20 H-Ala-Ala-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 632.8 632.1 21 ((丙暗基>>His-I>2Nal-D-Phe^NH)己烷 639.8 639.0 22 6^H-Ala-His-I>2Nal-D-Phe-NH)己烷 669.9 669.3 23 H-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 490.6 490.1 U:\TYPE\MFY\38330.DOC t 1 - 43881 1 24 (5-胺戊醯基)"His-Msial-Mie-Lys-Ni^ 726.9 726.5 25 H-D-Lys-D-2NaI-D-Phe-Lys-NH2 618.8 618.5 26 H-Ala-His-D-2Nal-D-Tic-Lys-NH2 710.9 710.8 27 H-D-Lys-Phe-2Nal-D-His-D-Ala-NH2 698.9 698.6 28 (5-胺戊醯基;K>2Nal-I>Phe-Lys-NH2 589.8 588.6 29 H-D-Ala-D-2N^-D-Phc_Lys-NH2 561.7 561.0 30 (丙醯基)~D-2Nai-l>Phe-Lys-NH2 546.7 546.2 31 H-D-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 698.0 698.4 32 H-Ala-3Pyal-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 710.0 709.1 33 (n-Butyl>Ala-His-D-2Nal-I>Phe-Lys-NH2 755.0 754.6 34 (n-Octyl>Ak-His-D-2Nal-I>Phe-Lys-NH2 811.1 810.7 35 H-Ala-His-D^Nal-D-Phe^C^NHiLys-^ 684.9 684.9 36 (3-胺甲芊醯基)~D-2Nal-I>Phe-Lys-NH2 623.9 623.0 37 (3-胺苯乙酿基>D~2NaR>Phe-Lys-NH2 623.9 623.2 38 ¢(4咪唑基)乙醯基)-I>2Nal-D"Phe~Lys-NH2 598.7 598.4 39 (3_(4~ 咪唑基)丙烯醯基>I>2Nal-D-Phe-Lys-NH2 610.8 610.3 40 1(4·胺苯乙醯基>I>2Nal-D~Phe-Lys-NH2 623.9 623.5 41 (反式冬胺甲環己醯基>I>2Nal-I>Plie-Lys-NH2 629.8 629.5 42 2~(H-Ala-His-D-2Nal-D-Plie-NH)乙胺 613.8 613.0 43 (2~(H-Ak-His-D-2Nal-D-Phe-NH)乙基)苯 674.8 674.0 44 4H:(H-AIa-His-D-2Nal-I>Phe-NH)甲基)芊胺 689.9 689.3 45 (2R><H-Ala-His-D-2Nal-NH>3-苯基丙胺 557.7 557.0 46 2<H-Ala-His-]>2Nal-NH)乙胺 527.7 527.0 47 H-D-Phe-Ala-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 708.9 708.5 48 H-Ala-D-Phe-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 708.9 708.5 49 H-Ala~(2-胺苄醯基)~D-2Nal-D-Pheiys-NH2 680.8 680.4 50 H-Aib-His-D-2NaI-D-Phe-Lys-NH2 ' 712.9 712.5 51 H-Ala-His-D-lNal-D-Phe-Lys-NH2 698.9 698.2 52 H-Tyr-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 862.0 861.1 53 六氫吡啶斗羰基>I>2Nal-D-Phe-Lys-NH2 602.8 600.2 54 H-Ala-Phei^NH^D^Nal-D-Phe-Lys-^ 723.9 722.6 56 (3-甲胺曱芊醯基>D-2Nal-I>Phe"Lys-NH2 637.8 637.8 57 (3-二甲胺甲苄醯基;K^Nal-D-Pheiys-N^ 650.9 650.5 58 (3-胺基-3-曱 丁醯基>D~2Nai-Mie-Lys-NH2 589.8 589.1 59 (2sX(3-胺甲苄醯基(CH2NH>I>2Nal-D-Phe-NH)~6·胺基 己醇 · 596.8 596.0 U:\TYPE\MFY\38330.DOC i -2 - 4388 1 1 60 (2-胺 f 苄醯基>!>2Nal-D-Phe~Lys-NH2 622.5 623.4 61 H-Aib-His ψ (CH2NH>D-2Nal-D-Phe-Lys-OH 699.9 699.3 62 H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 726.9 726.8 63 (Furfmyl>Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 793.0 793.2 64 (N,N~dK2R-#至丙基)*3-胺甲芊醯基>D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 739.9 739.7 65 H-Ala-N-Me<2-胺苄醯基>D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 694.9 694.1 66 (4_胺甲芊醯基)_D_2Nal-D~Phe-Lys-NH2 623.8 622.9 67 H-His-Ala-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 698.9 697.7 68 (2SKH-Ala-His-I>2Nal-I>Phe-NH>l,5·二胺基己烷 682.9 684.5 69 4~(H-Ala-His-I>2Nal-D-Phe-NH) 丁胺 641.8 640.7 70 3^(H-Ala-His-D^Nal-Mie-NH)丙胺) 627.8 626.8 71 (3-胺甲芊醯基>D-hPhe-D-Lys-NH2 586.7 587.2 72 (3-胺甲苄 MMCH2NH)D-2Nal-I>Phfi-Lys-NH2 609.8 609.2 73 (3-胺甲苄醯基;H>2NaI-D~hPhe-Ly^NH2 636.8 637.2 74 (3-胺基-3-甲丁 醯基)·Ηί5-Ι>2Ν3ΐ-ί>ΡΙ^-Ιγ8-ΝΗ2 726.9 726.0 75 (3-胺甲芊醯基>D-2Nal-N-Bzl-Gly~Lys-NH2 622.9 623.3 76 (2SK(3-胺甲苄醯基>D~2Nal-I>Ph^NH>5-胺基己醇 610.8 608.2 77 (3-胺曱芊醯基>D>2Nal-I>Thial-Lys-NH2 628.5 629.1 78 (2SHH-Ai1>Hi^ (CH2_D~2NaR>Phe-NH>6·胺基己醇 685.9 685.4 79 (3-胺甲芊醯基)~D-2NaI-D-3Pyal-Lys-NH2 624.9 624.1 80 (3-胺甲苄醯基>·0-2Ν3ΐ·ϋ-Ρίιε(^Ρ>]:γ3-ΝΗ2 640.8 641.1 81 (3-胺甲芊醯基>!>2Nal-]>Phe(4OMe)-Lys-NH2 653,5 653.5 82 2*(H-Alb"His-I>2Nal-I>Phe~NH><本吡啶基)乙烷 689.9 689.1 83 H-Aib-Phe-D-2NaI-D-Phe-Lys-NH2 722.9 722.5 84 2*<H-AithHis-I>2Nal-D-Phe~NHXl-甲基-2-吡咯啶基)乙烷 695.9 695.1 85 2n(H-Ail>His-D-2Nal-]>Phe-NHH4·吡啶基)乙烷 689.9 689.8 86 (3-胺甲苄醯基>I>2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH2 - 636.8 637.1 87 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Gly-NH2 641.8 641.6 88 H-Ait>-His-D-2Nal-D-Phe-Ala-NH2 655.8 655.7 89 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Om-NH2 698.9 699.1 90 ¢5-胺曱嘍吩基-2-羰基:hI>2Nal-D-Phe-Lys-NH2 629.8 630.0 91 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-D-Lys-NH2 712.9 713.1 92 H-Aib-His-D-2Nal-DPhe-Dab-NH2 684.8 685.1 93 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe φ (CH2NH)Lys-NH2 698.9 699.1 94 H-Aib-His-D-2NaI-D-Phe-N-Me-Lys-NH2 726.9 726.9 95 (3-胺甲噻吩基-2-羰基 >I>2Nal-D-PheJLys-Nt^ 629.8 629.8 U:\TYPE\MFTO8330.DOC 1 -3 43881 1 96 H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-l>Phe-Lys-NH2 726.9 727.0 97 H-Aib-His-D-ZNal-D-Phe-Lys-NCMe^ 740.9 740.9 98 (3-胺甲苄醯基)-D- lNal-I>Phe-Lys-NH2 _ 623.8 624.0 99 H-Aib-His-D-2Nal-D-Tip-Lys-NH2 751.9 752.2 100 (2-吡啶甲基)·ΑΛ·ίΪ5-0-2Ν3ΐ-0·Ρ1κ-1^-ΝΗ2 804.0 804.0 10L 胺甲芊醯基>D-2Nal-l>Phe-Lys-NH2 708.9 709.2 102 H-Aib-3Pyal-r>2Nal-I>Phe-Lys-NH2 724.0 724.2 103 (3R> 六氫吡啶羰基-]>2NaW>Phe~Lys-NH2 601.8 601.4 104 H-A^His-D-2Nal-NIH 苯乙基) 541.7 541.6 105 (2R-# 丙基)·Αίΐ>Ηί3-]>2Ν3ΐ-0-Ρ1ιε-1^-ΝΗ2 771.0 770.9 106 (3-胺甲芊醯基>I>2Nal-i>Phe 於(CH2NH)Lys-NH2 609.8 609.6 107 (3-胺甲芊醯基>N-Me-I>2Nal-I>Phe-Lys-NH2 637.9 637.5 108 (3-胺甲苄醯基H>2Nal-D-Phe~N-Me-Lys-NH2 637.9 637.8 109 H-D-Ihr-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 728.9 728.7 110 H-Hyp-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 740.9 740.5 電漿解吸質譜 樣本製備 樣本溶於〇 . 1 %三氟乙酸(T F A ) / E t 0 h ( 1 : 1 )中,濃度1微克/ 微升。取5至.10微升樣本溶液置於硝基纖維素(NC)目標(瑞典歐 普赛拉市(Uppsala)Bio-ion AB公司)上,使之吸附在目標表 面上2分鐘。隨後以2 X 2 5微升0 . 1 % T F A潤洗目標,並旋轉乾 燥。最後將NC -目標置於目標轉盤上,‘置入質譜儀中。 M S分析法 質譜分析法係採用Β 1 〇 - i ο η 2 0瞬時質譜儀(瑞典歐普赛拉市 Bio-ion,Niordic ΑΒ公司)(3)。加速電壓爲15kV,分子態 離子係由2 5 2 - c f融合片段經加速,向終止偵測器撞擊N C -表面 而形成α 所得瞬間光譜使用Η +與Ν 0 +離子分別在m / 2 1與3 0校正成眞 正質譜s質譜通常在1 5 - 2 0分鐘累積1 . 0 X 1 0 6次分裂。 U:\TYPE\MFTO8330.DOC 1 -4 ' 4388 1 1 所得質量結果均相當於同位素之平均分子質量β 質量之準確度通常優於0.1 %+1質量單位。 (3)卡門斯基(Kamensky),1與 A G 克拉格(Craig): Anal,Insirum. 1 6 ( 1),F _ 9 1 ( l 9 8 7)。 L概要 老鼠GH_分析法已發展成測定血清與培養基樣本中老鼠GHt 巧谷量篩選分析法。該分析法爲閃爍近似分析法 (Scintillation Proximity Assay)(SPA)。SPA 技術{584} 通用於放射性配位體結合分析法,可免除分離步驟與閃躁液體 之添加。在SPA中,由一級抗體-配位體複合物與spa -試劑反 應’該試劑中含有與螢光微小球結合之第二個捕捉抗體。因此 任何會與一級抗體結合之放射性標識之配位體均固定在螢光微 小球上。由於微弱之点-發射體(例如:1 2 51)必須接閃爍分子, 以產生光’因此不需要分離步驟即可定量配位體濃度。該分析 法係於微滴定板中進行,於々-閃爍計數器中測定。 分析法中之一級抗體爲兔子抗-老鼠G Η。放射性標識之追踪劑 爲老鼠G Η。分析法之偵測極限(限定爲.〇 + 2 S D )爲4毫微克/毫 升β分析法之有效性由組内及組間分析變異,血清樣本中之回 收率及稀釋過程之間之線性決定。在低濃度(1 7毫微克/毫升) 、中濃度(2 0 0毫微克/毫升)及高濃度( 1 3 0 0毫微克/毫升)對 照組樣本之總分析變異(包括組内與組間分析變異之组合)分別 爲18.1、12.6及5.0%。血清中老鼠(由11至850毫微克/毫升 )之回收率爲1 0 9至1 3 0 %之間。在培養基及在血清中之稀釋度 均相當呈線性= 2.老鼠GH分析法之材料與試劑
U:\TYPE\MFrO8330.DOC L 43881 1 2.1 抗老鼠G Η抗體 ‘以含1 Ο Ο微克純化之老鼠G Η之佛洛依德氏(f r e u d s )完全輔劑 爲兔子進行初次免疫,然後每個月以含等量抗原之佛洛依德氏 不完全輔劍免疫接種。接種10天後,放血。收集高效償之血液 ,存放在4°C下。所使用之抗體稀釋1:400至1:700。 2.2 追踪劑 基本上根據 SOP-S 436-072-JBKr(氣胺(ehl〇ramin)-T)爲 老鼠GH進行放射性標識。由RP-HPLC判別ΐ25ι老鼠Gh之純度 (r G Η 0 1 法)。 2.3 校正劑‘ 校正劑係來自老鼠腦下腺純化之G Η,溶於ρ β S、1 % B S A、 0.02%Tween 20,ρΗ7·6 中 s 所使用校正劑爲 〇·8.2-24.7-74, 1-222-666-2000毫微克/毫升。校正劑保存在-80 °C。解 凍至多5次,保持安定2年以上。 2.4 對照組 含生物性老鼠G Η之稀釋緩衝液·高、中、低濃度及血清對照 組,約3 0 0毫微克/毫升。 . 2.5 稀釋缓衝液 PBS,1 % B S Α ^ 0.0 2 % t w e e η 20,·ρΗ7.6 2.6 S Ρ Α試劑 SPA-PVT抗體結合性小珠抗兔子試劑。八1^131^11111?>^- 0 0 16 = 2.7 微滴定板 該分析法係於〇ptiplatesTM(Packard公司)上進行。 2 - 8办-計數器 -
U:\TYPE\MFY\38330.doc I 438811
Topcount™ 0 万-計數器爲Packard 3.分析法 吸取4 0械升稀釋缓衝液加至微滴定板之小孔中。取μ微升校 正劑或樣本加至小孔中。校正劑係進行雙測定,樣本則進行單 測定。吸取50微升下列溶液加至小孔中:•老鼠 GH(100,000cpm),兔子抗老鼠gh與SPA試劑。以平板蓋 (T 〇P seal Pa ekafd n〇 60 05 1 6 1 )蓋上微滴定板’置於平板振 上’以中等速度振盪3〇分鐘。自平板振盪器上 取下滴定板,於1(rC下培養10小時。滴定板於packard T〇pc〇unter上計數》uRia Smart程式將樣本代入曲線並計算。 4.分析法之有效性 4.1 偵測極限 根據R i a S m a r t程式計算偵測極限。 4.2 校正曲線之準確度 校正曲線,組間分折Cn=7〉 濃度,毫微克/毫升 B/B〇 SD% cv% 0 100 8.2 95.2 1.76 1 68 24.7 86.9 1.88 2 16 74.1 70.1 3.34 4 76 222 47.1 2.22 471 666 22.6 1.00 3 63 2000 14.3 Γ 1.50 — I J 10.50 4.3 分析變異 U:\TYPE\MFY\38330.DOC 1 4388 1 1 對照组,每天10個樣本,共3天 濃度 毫微克 /毫升 組間分析 组内分析 ~ 總分析法 SD毫微克 /毫升 CV% SD毫微克 /毫升 CV% SD毫微克 /毫升 CV% 17.1 2.9 17.0 2.6 15.6 3.1 18.1 197 12.2 6.2 18.8 9.5 24.8 12.6 1300 53.6 4.1 57.1 4.4 64.9 5.0 4.4 血清中之回收率 添加之老鼠GH 回收率% η 850 120 2 200 109 2 72 130 3 11 129 3 4.5 於培養基樣本中稀釋度之線性 樣 本 稀釋度 濃度毫微克/毫升(X稀釋度) 1 518 培養基1 1+1 493 1+3 532 1 - 243 培養基2 1+1 224 1+4 244 4.6 於血清樣本中稀釋度之線性 樣 本 稀釋度 濃度毫微克/毫升(X稀釋度) 1 238 血清1 1+1 212 1+3 216 UATYPE\MFr38330.DOC 1 -8 43 88 1 1
自丹麥利斯根維德市(Li ^ le Skensved)莫加德公司 (Mollegaard)購得雄性步炎 , H劳-道利大白鼠(Sprague-
Dawley)(250 ±25克)〇 去白八名 ;老叭分组置於籠内(4隻/籠),置入 光循環爲1 2小時之屋内。舍,、w电〜< 至概避化爲19至24X,濕度爲30至 6 0%。 細胞製備 斷頭殺死老鼠,取出腦下杳碑 . 卜垂體除去神經中葉,其餘组織立 即置入冰冷之單離緩衝液中(蓋氏培養基(㈣、medium),( 奇布可公司(CHbcopq-oww),其中補充〇 Μ% D-葡萄糖 ,非必需胺基酸(奇布可公司牛血清白蛋 白(BSA)(希格馬公司(Sigma)A_45〇3))。將组織切成小塊, 移至已補充3 8耄克/毫升胰蛋白酶(惠靈頓公司 (w〇rthingt〇n)#3 707 TRL-3)與 33〇微克 / 毫升 DNase(希 格馬公司D-4527)之單離緩衝液中。混合物於7〇轉/分鐘,37 °C及9 5 / 5 % 0 2 / C Ο 2大氣下培養3 5分鐘。以上述緩衝液洗 U:\TYP拉MFYO8330.DOC i 4388 1 1 滌组織3次。使用標準巴斯德吸管,將组織吸成單一細胞。細胞 分散後’經尼龍濾紙(1 6 0微米)過濾,去除未分解之組織。以補 充胰蛋白酶抑制劑(〇 . 7 5毫克/毫升,惠靈頓# 2 8 2 9 )之單離 緩衝液洗滌3次,最後再懸浮於培養基D Μ Ε Μ中(奇布可公司 041-01965),其中補充 25mM HEPES(希格馬公司 Η-3375)- 4111以麩醯胺(奇布可公司〇43-0503(^)、0.075 %碳酸氫鈉(希 格馬公司S - 8 8 7 5 )、0 . 1 %非必需胺基酸、2 5 %胎牛血清(F C S ,奇布可公司0H-06290)、3%馬血清(奇布可公司034-06050)、10%新鮮老氣血清、lnMT3(希格馬公司τ_2752)及 40微克/升地美它松(dexainethason)(希格馬公司D-4902)pH 7.3,密度爲2X105個細胞/毫升。將細胞接種至微 滴定板中(丹麥努克公司(Nunc),200微升/孔,於37 °C及 8%C〇2下培養3天。 化合物試驗 細胞經過培養期後,以刺激緩衝液(漢克氏(Hanks)平衡塩 溶液(奇布可公司04卜〇4〇2〇),其中補充1%BSA(希格馬公司 八-4503)、0.25%〇-葡萄糖(希格馬公司(}-5250)及251111^ HEPES (希格馬公司H_ 3 3 7 5 )pH 7 3)洗滌2次,於37«c下預先 培養1小時。緩衝液與90微升刺激緩衝液交換(37t:)。添加1〇 微升試驗化合物溶液,平板於3 7 T及5 % C 0 2下培養1 5分鐘。 傾析培養基,於rGH SPA試驗系統中分析GH含量。 所有化合物之試驗劑量範圍爲1〇pMii〇〇 uM。使用希爾
U:\TYPE\MFY\3833G.DOC I 4388 1 1 (Hm)方程式(圖P,Biosoft)建立劑量_效應關係。效力(GH 最高釋出量,Emax)以佔GHRp_6tEma>x<%表示。決定謗發 GH釋出之最大刺激作用之一半時之濃度作爲效能(ec;5〇) 所揭示化合物之酵素安定性: 材料 自希格馬公司(美國蒙大拿州)購得標準肽(血管收縮素丨_ j 4 ,ACTH4-10及胰增血糖素)。 酵素(胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶,彈性蛋白酶、胺基肽酶M 與幾基肽酶Y及B)均購自德國曼漢姆市(Mannheim)百靈藥廠 (Boehringer Mannheim GmbH)。 酵素溶液 胰臟酵素混合物:胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶及彈性蛋白酶含 於100 mM碳酸氫銨中,pH 8_0(所有濃度均爲0.025微克/微 升)° 羧基肽酶混合物:羧基肽酶γ與B含於50mM乙酸銨中, pH4.5(所有濃度均爲〇.025微克/毫升 胺基肽酶Μ溶液•胺基肽酶μ (Ό.025微克/微升)含於 100mM碳酸氫铵中,ρΗ8.0。 安定性分析法 使化合物以1微克/微升之濃度溶於水中。添加2 5微升此溶 液至1 7 5微升各酵素溶液中(產生酵素:受質比例(w / V/ )爲約1 :5 )。容液置於3 7 °c下一夜。採用流動注射電子噴洒質譜 U:\TYPE\MFr\3S330,D〇C 1 -11 - (4388 1 1 (ESMS),以特定之分子態離子之離子監視器,相對於零樣本分 析ίο微升各種不同降解溶液。若相對於零樣本之訊號減少2〇1 以上時,剩餘落液則以Η P L C及質譜儀分析,以準確鑑別降解程 度與位置。 安定性試驗中包括數種標準肽(ACTH 4_1(),血管收繪素 1 - 4及胰增血糖素),以證明各種溶液降解肽之能力。 質譜分析法 採用二種不同質譜儀進行質譜分析Αρι Ιπ三重 四極LC-MS·儀器(加拿大盎大略省東希市赛克斯儀器(Sciex iustruments,Thornhill, Ontario)加裝電子喷洒離子源及 Bio-ion 20瞬時電漿解吸儀器(瑞典歐普拉市Bi〇_i〇n Nordic A B公司)。 化合物之定量(降解前與降解後)係於API πΐ儀器上,使用 指定分子態離子之單一離予監視器,流動注射分析物進行。由 ABI 140 B HPLC單位(加州佛斯特市柏金-艾瑪應用生物系統 刀 部(P e r k i η - E1 m e r A p p 1 i e d B i 〇 s y s t e m s D i v i s i 〇 n s, Foster City,CA))控制液體流速(MeOH : H2〇 1 : 1)爲 100 微升/分鐘。儀器之變數設定在標準操作條件下,並使用最強 之分子態離子(大多數指雙價分子態離子)進行s ϊ Μ監視。 降解產物之鑑定尚包括使用電漿解吸質譜(PDMS),其中樣 本係塗饰在塗覆硝基纖維素之目標,並使用標準儀器設定。所 測量質量之準確性通常優於〇 1 % 3 ^TYPE\MFY\38330.D〇C \ —12 - 4388 1 1
HPL C 降解產物之分離與單離係使用Η Y - T-A C H C - 1 8逆相4.6 x 105毫米HPLC管柱(加州帕洛亞圖市惠普公司(HewloU-Packard Company, Palo Alto, CA)),以標準乙月青:TFA 梯度分離。所使用之Η P L C系統爲Η P 1 0 9 0 M (加州帕洛亞圖 市惠普公司)。 肤衍生物 MW/SM 離子(amu) 羧基肽酶混合物 胰臟酵素混合物 標準物 ACTH 4-10 1124.5/562.8 + 騰增血糖素 3483/871.8 _ 胰島素(Β23-29) 259.1/430.5 企管收縮素1-14 1760.1/881.0 - • GHRP-2 817.4/409.6 - GHRP-6 872.6/437.4 . - 專利案實例No. 實例50 711.2/357.4 + 實例86 636.4/319.2 + 實例35 683.4/342.8 + 實例69 640.4/321.2 + + 實例87 640.2/321.6 + 實例96 725.3/363.6 - + 實例103 600.2/301.1 + 實例91 711.9/357.0 + 實例92 683.2/342.8 + 實例101 707.9/355.0 + 實例102 723.0/362.5 + + :安定(在降解溶液中2 4小時後,S I Μ訊號減少2 0 %以下) -:不安定(在降解溶液中2 4小時後,S I Μ訊號減少2 0 %以 上) U:\TYPEVMFY\38330.DOC I - 13 -
C:\TVPE\EN\ENG\0314G.D0C
3-胺甲芊醯基-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH2 κ t > cr r ffi >—*« m 1 a 1 K) 1 ϋ 1 ! m 1 2: X N> H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Ala-NH2 K I > μ-*·* cr j !=r a> j σ 1 to 之: Pi )—* 1 ϋ 1 hd 0 1 r c〇 1 ffi N) (2S)-((3 胺甲芊醯基;hD2Nal-D-Phe-NH)-6-胺基己醇 ffi 1 > P- 1 >—· CO 1 0 r t— 2: j D 1 >-d t3- a> t w t •z: ffi N> ffi 1 > P 1 !=r CD 1 d 1 to 之: ΐύ 1 α 1 irr CP 亡 CD 1 2: ffi SJ ffi 1 > c〇 1 一 · w 1 σ 1 1 ϋ π Ο 1 2: r ο ffi \Jl X to 本發明式I之化合物v ! 〇 La )—k t—* t—i 00 to 〇\ bO K) 〇 w ο ο 口 § 0〇 Ο OO 〇 OO o -4 G\ Lh 00 Lh o o - 100 m B P X 9 o 〇 ffi * 〇\ 饿、\.3〜〇〇卜^3隸如洤奇1#泖 l-s-外盏^-棼浼l#(、v-hlcv—η
Claims (1)
- ^10¾¾ Γ100274號專利申請某 中文申請專利範圍修正本(90年3月) A8 Ββ C8 D8 Ρ、-..申.請專刹範園^ 9ft 3. 06 ^補充T7 ~~一種逋式I化合物 A-B-C-D (-E)P I 其中P為1 : A為氫 B 為(G)t-(H)U ,其中 t為0或1 ; u為1 ί G和Η各獮立為選自包括下列胺基酸之群之胺基酸 殘基:L-丙胺酸、L-姐胺酸、L-苯丙胺酸、D-丙胺 酸、D-姐胺酸、D-苯丙胺酸、2-胺基異丁酸及3-胺 甲基苯甲酸; C 為式-NH-CH((CH2)w-R4)-C0-之 D-胺基酸 * 式中 w為1 :且 R4為 ^€0 n 裝 訂 外 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 D 於p 為 1 時,為式-KH-CH((CH2K-Rs)-C〇-之 D-胺基 酸,其中 k為1 ; R5為 本纸張尺度適用中國國家捸準(CNS )八4说格(210X297公釐) 4388 1 1 AS B8 C8 D8六、申請專利範圍 經濟部令央橾準局員工消費合作社印製 E * 於p 為 1 時 * 為-NH-CMlTW-KHsOv-R0 ,其中 v為1或4 ; Re為氫, 或NU11)-!?12*其中1Ϊ11和R12分別為氫,或為 且 R10 係選自-H,-C0-HH2 或-CH20H 或其B槩可接受鹽》 2. 根據申請專利範圍第1項之化合物•其中t係0且Η係 3-胺甲基苯甲酸。 3. 根據申謅專利範圍第1項之化合物,其中,當t為1時 * G 為 Ala或 Aib。 4. 根據申請専利範圍第1項之化合物•其中Η為His、 f>he或3-胺甲基苯甲酸。 5. 根據申請專利範圍第1項之化合物,其中R4為2-萘基。 6. 根據申請専利範圍第1項之化合物,其中Reg -NH2。 7. 根據申請專利範騮第1項之化合物•其係埋自下列所成 姐合之中者 5_(H_Ala-His-D_2Nal-D_Phe-NH)戊胺 H-Ala~His-D-lNal_D-Phe_Lys-NH2 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國囷家揉準(CNS ) A4現格(210X297公釐) 4388 1 Α8 Β8 C8 D8 經濟部中央標準局貞工消費合作社印製 六、申請專利範圍 H-Ala-Phe_D-2Nal-D-Phe-Lys-NHz (25)-((3-胺甲基笨甲釀基)-0-2»(3 1-卜?》^-»11〇-6-胺基己 酵 H-Aib-Phe-D-2Hal-D-Phe-Lys-NH2 (3-胺甲基苯甲睡基 iUNal-H-Me-D-Phe-Lys-HIU H-Aib-His-D-2HaI-D-Phe-AU-NfU H-Aib-His-D_2Nal-D_Phe-Lys-NH2 0 8. 一種用K剌激腦下垂Si釋放生長激素的醫藥姐合物•其 包含作為活性成份的根據申請專利範圍:第1項之通式I 化合物或其S藥可接受鹽,及轚藥可接受載體或稀釋劑 0 9. 根據申請專利範圍第8項之B蕖姐合物·其係單位劑量 形式,包含10至200 *克的通式I化合物或其》槩可接 受鹽。 10. 根據申謓專利範圍第8項之Β蕖姐合物·其中根據申請 専利範圍第1項之通式I化合物或其醫藥可接受鹽之有 效劑量係在0.0001至100亳克/公斤《重/天·較佳者 0.001至50毫克/公斤體重/天的範圍之内。 11. 根據申請專利範围第1項之通式I化合物或其》藥可接 受鹽*其用於製備剌激腦下垂體釋放生長激素的Β蔡品 (請先聞讀背面之注^^項再填寫本頁) 裝. 訂 Λ 本紙浪尺度逋用中画國家梯準(CNS ) Α4規格(2Ι0Χ297公釐) 4 3¾8*ί00!274號專利申請赛 Α7 中文說明書修正頁(90年3月)β7 五、發明説明(之) 90. 3. 0G 修正補充 較長的多肽類,因此之故,彼等之經口給藥皆為不可行者 〇 先前技藝中已有提及較短肽對於增加哺乳動物體内生長 激素水平之用途,例如· ΕΡ 18 072 ,ΕΡ 83 864 ,W0 89/071 10 * VO 89/01711 « VO 89/10933 * W0 88/9780 » W0 83/02272 · V0 91/18016 · V0 92/01711 和 W0 93/04081等。 生長激素釋放肽或肽衍生物的姐成對於其生長激素釋放 效力及其生物可用率等具有重要性。綜上所述,本發明的 目的即為提出具有生長瀲素釋放性質|且其具有相對於巳 知的這類肽較為改良的性霣之肽類。 [發明概述] 綜上所述,本發明偽有«通式I化合物 A-B-C-D (-Ε)ρ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標率局貝工消費合作社印褽 其中ρ為0或1 ; a 為氫或 其中 q為〇或1至5的整數; r為0或1 : s為0或1至5的整數; R1為氫,畔唑基,胍基,六氫吡畊基,嗎啉基,六氮 吡啶基或NUs)-li3·其中R2和R3分別為氫或視情況含 有一或多個羥基*吡啶基或呋喃基等取代基之低碳數 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS > A4規格U10X297公釐) 19( 經濟部中央標準局員工消費合作杜印装 4 3§參41〇3274號專利申謓案 . A7 中文說明害修正頁(90年3月)B7 五、發明说明(.3. Μ修正 浲月a .C太彻充 詳细說明] 於式I化合物的較佳實施例中,p為1 。於式ϊ化合物 的另一較佳貢施例中.a為氫,或為|^-((^2)«-(乂)^ (CH2)*-CO-,式中R1為3-咪唑基,q為2 * Γ為0且s 為〇 ;或其中R1為KH2 *q為1 *r為1 ;X為含雙取代 基的苯,較佳者係在1和3兩位置上有取代基者,且3為 〇 ;或其中R1為HH2 ,q為1 ,r為1 ,X為含雙取代基 的噻吩•較佳者是在3和2兩位置有取代基者;且S為0 。當t為1時,式I化合物中的G較佳者為Ala ,Gly , Aib •肌胺酸,六氳吡啶酸或異六氫吡啶酸等。當u為1 時 * Η 較佳者為 His ,Phe · Tic · Phe(4-NH2) · 3-Pyal,Gly ,A1 a ,Sar · Pro ,Tyr · Arg ,Orn > 3-胺甲基笨甲酸或D-Phe 。式I化合物中的C較佳者為 D-2-萘基丙胺酸(D-2Hal) · D-卜萘基丙胺酸(D-lHal) · D-Phe或D-Trp 。式I化合物中的D較佳者為D-Phe * D-lNa 1 · D-2Na 1 * D-Trp ’ 3-Pya 1,D-Phe (4F) · D-Tyr 或 Phe-NH2 0 式I化合物中的E較佳者為Lys-NH2* NH-(2-U -六氮吡 畊基)乙基),NH-(2-(卜嗎啉基)丙基>,HH-(2-胺基乙基 )* HH-(4-胺甲基笨甲基)· KH-(笨甲基),Lys-OH,HH-(1-羥基-6-胺基-2S-己基· ΝΗ-(2-(1-甲基-2-吡咯啶基) 乙基) 或 -10 - 本紙張尺度通用中國國家標率(CNS)A4洗格(210X297公釐) {請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) *ττ 泉 4388 1 1 年月 84. ]9 22 第84100274號專利申請案 .中文補充説明書(84年12月) 申請案4 1 1 3中實例卜1 1 0之M S數據 下表爲吾等之專利申請案4 1 1 3中實例1至1 1 0所述化合物之電 漿解吸質譜數據。數據之取得係使用B i ο 1 ο η 2 0儀器,採用下 文中詳細説明之條件3 實例 肽 理論値 M+H+ 實測値 M+H+ 1 H-Ala-His-D-2Nal-D-Tip-Lys-NH2 737.9 737.3 2 H-Ala-Hi&-I>-2Nal-D-Phe-Lys-OH 699.8 699.3 3 5^(H-AIa-His-E>2Nal-l>Phe~NH)胺基戊烷 655.8 655.4 4 (2S><H-Ala-His-I>2NaW>Phe*NH>6·胺基己醇 685.9 685.1 5 H-Ala-His ψ (CH2NH)D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 684.9 684.5 6 (n-Propyl)-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 669.9 669.0 6 (n-Propyl)2-His-D-2NaI-D-Phe-LyS'NH2 711.9 711.0 7 H-Ala-Tic-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 720.9 720.6 8 (;2RKH-Ala-His-I>2Nal-NH>3-苯基丙胺 556.7 556. 9 H-Ala-His-D-Phe-D-Phe-Lys-NH2 648.8 648.5 10 H-Ala^Phe-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 708.9 708.9 11 H-His-D-2Nal-I>Phe-Lys-NH2 627,8 627.5 12 H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Phe-NH2 717.9 717.4 13 H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-l>Phe-NH2 . 717.9 717.6 14 H-Ala-His-D-2Nal-Phe-Lys-NH2 698.8 698.4 15 3-(4~ 咪峻基)丙酿基-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 611.8 612.6 16 (丙酿基)·Ηί3·Ό·2Ν3ΐ-Μκ-Ι^-ΝΗ2 683.8 683.9 17 H-Ala-His-D-2NaI-D-Phe-NH2 570.6 570.6 19 H-Ala-His-D-Tr^D-Phe-Lys-NH2 687.8 687.7 20 H-Ala-Ala-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 632.8 632.1 21 ((丙暗基>>His-I>2Nal-D-Phe^NH)己烷 639.8 639.0 22 6^H-Ala-His-I>2Nal-D-Phe-NH)己烷 669.9 669.3 23 H-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 490.6 490.1 U:\TYPE\MFY\38330.DOC t 1 - C:\TVPE\EN\ENG\0314G.D0C3-胺甲芊醯基-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH2 κ t > cr r ffi >—*« m 1 a 1 K) 1 ϋ 1 ! m 1 2: X N> H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Ala-NH2 K I > μ-*·* cr j !=r a> j σ 1 to 之: Pi )—* 1 ϋ 1 hd 0 1 r c〇 1 ffi N) (2S)-((3 胺甲芊醯基;hD2Nal-D-Phe-NH)-6-胺基己醇 ffi 1 > P- 1 >—· CO 1 0 r t— 2: j D 1 >-d t3- a> t w t •z: ffi N> ffi 1 > P 1 !=r CD 1 d 1 to 之: ΐύ 1 α 1 irr CP 亡 CD 1 2: ffi SJ ffi 1 > c〇 1 一 · w 1 σ 1 1 ϋ π Ο 1 2: r ο ffi \Jl X to 本發明式I之化合物v ! 〇 La )—k t—* t—i 00 to 〇\ bO K) 〇 w ο ο 口 § 0〇 Ο OO 〇 OO o -4 G\ Lh 00 Lh o o - 100 m B P X 9 o 〇 ffi * 〇\ 饿、\.3〜〇〇卜^3隸如洤奇1#泖 l-s-外盏^-棼浼l#(、v-hlcv—η ^10¾¾ Γ100274號專利申請某 中文申請專利範圍修正本(90年3月) A8 Ββ C8 D8 Ρ、-..申.請專刹範園^ 9ft 3. 06 ^補充T7 ~~一種逋式I化合物 A-B-C-D (-E)P I 其中P為1 : A為氫 B 為(G)t-(H)U ,其中 t為0或1 ; u為1 ί G和Η各獮立為選自包括下列胺基酸之群之胺基酸 殘基:L-丙胺酸、L-姐胺酸、L-苯丙胺酸、D-丙胺 酸、D-姐胺酸、D-苯丙胺酸、2-胺基異丁酸及3-胺 甲基苯甲酸; C 為式-NH-CH((CH2)w-R4)-C0-之 D-胺基酸 * 式中 w為1 :且 R4為 ^€0 n 裝 訂 外 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 D 於p 為 1 時,為式-KH-CH((CH2K-Rs)-C〇-之 D-胺基 酸,其中 k為1 ; R5為 本纸張尺度適用中國國家捸準(CNS )八4说格(210X297公釐)
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