TW382593B - Hypoglycemic agents from harungana or vismia spp. - Google Patents

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A7 B7 五、發明説明（1 1.發明範閎 讀 先 閱 讀 背 注 事 項 I裝 頁 本發明係關於以哈朗加那屬或維思米亞屬植物（藤普 科），包括，但不受限於馬達加斯加哈朗加那或大葉唯^米 亞（Vlsmia macrophylla)，之萃取物，以及蒽酮類化:物 哈朗加那素及維思米亞素於治療糖尿病上夕m… 、 们工 < 用途：降血糖 萃取物之分離方法及降血糖化合物之純化士，+ 、U…々决：及包含哈 朗加那素及維思米亞素之組合物及使用哈朗加那素及二思 米亞素之方法。 2 .發明背景 ； 2.1哈朗加那植物之醫藥用^ 訂 馬達加斯加哈朗加那（Harungana madagascai.iensis；) (L a m. e x _ P o i r )爲生長遍及西非、中非及東非洲多處之常 見小至中型喬木。孩樹葉，樹皮及樹根於多處非洲國家之 鄉村及都市地區做爲醫藥使用。 經濟部中央標準局員工消费合作社印製 於奈及利亞東南邊之伊博（Igbo )，艾非克（Efik )及豆克 元加（Doko-uyanga)文化以下列醫學方法使用此植物：葉 與水混合，做成糊狀且局部施用以治療錢癬，水痘，結膜 炎，皮疹及發燒：局部施用新鮮葉汁以治療膿腫：嫩葉於 水中煮沸且所生成之”茶”每曰口服投藥三次做爲止痛藥且 治療百曰咳。此外，於奈及利亞乾葉浸劑經口服投藥以治 療黃疸，胃病及麻瘋，且用爲催產藥及堕胎藥（1.1.馬度班 尼（M a d u b u n y i )等人，國際生藥學期刊（I n t · J. Pharmacog.)332 : 129- 1 34 (1995 ) : Ρ.Α·亞卡（Akah)，植 物治療研究（Phytotherapy Res · ) 8 : 1 06-1 08 ( 1 994 ))。再 -4 - 參纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 經濟部中央標準局員工消费合作社印製 Α7 Β7 五、發明説明(2 ) 者’樹皮？1_λ劑於奈及利亞用以治療氣喘，胃溃瘍，肝病， 及做爲瀉藥。 於東非洲’馬達加斯加哈朗加那樹皮之熱水萃取物經口 服投樂以治療癔疾及中斷月經（j柯瓦洛（Kokwaro )，東非 醫藥植物（Medicinal Plants of East Africa)，東非文獻 局，奈洛比，（1 9 7 6 ))。 於幾内亞，樹皮之熱水萃取物經口服投藥以加速產程及 胎盤排出’且治療經痛（B .瓦希李瓦（V a s i 1 e v a )，幾内亞藥 用植物（P丨antes Medicinales de Guinee，柯那克里，幾内 亞共和國（丨969 ))。赤道幾内亞之芳族（Fang) 口服樹皮萃 取物以治療肝病及發燒，且使用萃取物做爲灌腸劑以治療 發炎。. 於盧安達，乾莖樹皮煎劑經口服投藥以治療瘧疾（E .哈奇 查孟加（Hakizamungu)等，人種藥理學期刊（J. Ethnopharmaco 丨.362 : 143-丨 46 (1992 ))及腹瀉（R.邁可瑞 -.范尼岳（M a i k e 1. e - F a n i y 〇 )等人，人種藥理學期刊2 6 : 1 ΟΙ-ΐ 09 ( 1 989 )) 。 此外 ，施 用莖皮 及葉萃 取物可 治療泌 尿生殖 器感染，瘧疾及腹瀉。 於坦尚尼亞，施用乾樹根，莖皮及葉煎劑之口服萃取物 治療瘧疾（M.C.贾斯勒（Gessler)等，熱帶誌（Acta Tropica)5々：65-77 (1994))或一乾莖皮浸劑（M_C.賈斯勒 等，植物治療研究（Phytother. Res.) 9 : 504-508 ( 1995 ) 琢整株植物之熱水萃取物於象牙海岸用爲狀陽藥及調經 -5- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) ,Μ規格（2丨0X297公您) C請先閱讀背1δ·之注袁事項ί商本頁) 裝. 訂 A7 A7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 __：___— B7 五、發明説明（3 ) 藥（A.包華特（Bouquet)等，Trav Doc. Orstom. 32 : 1 (1974))。 於御子山’該果實之熱水萃取物經口服投藥做爲堕胎劑 (B ·瓦希拉瓦（Vasileva )，幾内亞藥用植物，柯那克里，幾 内亞共和國（1 969 ))。此外，施用植物汁液以治療疥瘡及其 Έ皮膚病，葉粉用以治療潰瘍，且葉萃取物經口服投藥以 >台療氣喘。 於坦干伊喀，葉汁液經口服投藥以治療停經（F海帝 (Haerdi)，坦干伊喀（東非）烏蘭加特區之本土藥用植物 (Native Medicinal Plants of Ulanga District of Tanganyika)，博士論文，Verlag Fur Recht und Gesellschaft AG ’ 巴塞爾，瑞士（ 1964))。 D.K.亞畢（Abb iw)，於迦纳有用之植物（Useful Plants in Ghana)中，中間科技出版及皇家植物園（Intermediate

Technology Publications & The Royal Botanic Gardens)·，克由（Kew)( 1990)，報告本植物之下列用法： 樹皮萃取用以治療河盲，畜疥及牙痛，做爲驅蟲藥及兒童 瀉藥：新鮮樹根及芽用以治療胃痛：樹皮煎劑用以治療氣 喘，肝炎，潰殤及痛經，且用以引發嘔吐：葉子用以治療 胸部病痛：根用以治療腹瀉及痢疾：施用膠液做爲灌腸劑 以治療腸炎且用以治療麻疲，錢癬，皮膚病及病變（寄生 性）：莓果及幼莖及芽用以治療胃腸痛或疾病：樹皮浸液及 根用以治療黃疸：壓碎之樹皮用以加速胎盤排出：樹皮用 以治療壞血病：莖用以治療胃痛，疾病及消化不良：汁液 _ -6- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4現格（210父297公_兹） ~~' ' (請先閲讀背氣之注意事項H^^r·^頁) 裝

-、1T _____ B7 _ . 五、發明説明（4 ) 用以止血；幼莖用以治療淋病：且植物乳汁用爲箭毒。 M.伊吾（Iwu)，於非洲藥用植物手册（Handbook of African Medicinal Plants)中，CRC 出版’弗羅里達州 (1 9 9 3 )，報告馬達加斯加哈朗加那之葉’根及至用以/台療 急性胃痛，牙痛，痛)疾及痔瘡。 H . D .紐溫華（N e u w i n g e ι_)，於非洲人種植物學：普物及 藥物（African Ethnobotany : Poisons and Drugs) ’ 隹普复 及豪（Chapm an & Hal 1)，倫敦（1 996 )，報告下列馬達加斯 加哈朗加那之醫藥用途： 賴比瑞亞之滿能（Manon )文化口服施用樹皮煎劑以 >台療 條蟲，將芽混合於棕櫚油中且口服施用所得混合物以治療 產科病人及產褥熱，且敷用苗汁使包皮環割止血： 貝南之唯美努（Wemenu )治療師使用根萃取物以治療尿道 感染： 來自坦尚尼亞東南烏蘭加（Ulanga)區域之居民口服施用 樹皮粉以治療瘧疾，且口服施用根皮粉以治療鈎蟲： 經濟部中央標準局貝工消费合作社印製 於喀麥隆，巴菲亞女人於生產後口服施用樹皮煎劑，巴 米立克人（Bami leke )於油及鹽中煮沸幼葉且於流產後口服 施用該混合物，且芳族文化施用壓碎之葉湯以治療被認爲 中盘者： 於加彭，該樹汁或雈皮煎劑敷用於包皮環割傷處，且用 爲收瘢藥： 於中非共和國西南羅貝（Lobaye)河之俾格米人（the Pygmies) 口服施用樹皮煎劑，且使用植物萃取物泡澡以治 -7- 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210x297公疫） , A7 B7 五、發明説明（5 ) 療腹瀉及痢疾： 請 先 閲 讀 背 面 之 意 事 項 於中非共和國之班基區，使用樹皮煎劑以治療月經障礙 及膿漏，樹皮粉敷於傷口，施用葉煎劑以治療胃痛，内層 樹皮黃色汁液局部敷用於女人腹部以治療不孕，根用爲植 物性中毒之解毒藥：. 於薩伊，寇特（Kote )人文化浸潰樹皮且以其泡澡以治療 疥瘡，'且施用樹皮及根煎劑以治療痔瘡出血及痢疾，且特 偷巴（Turumba )文化藉於葉浸.劑中泡澡將葉汁滴入眼中以 治療貧血。來自薩伊東北之伊土里森林中之羅瓦（Llowa) 河之木布提（Mbuti )俾格米文化利用樹皮治療腹部問題，皮 膚疹及濕疹： 於剛果之歐威薩（0 uessa )地區，口服施用樹皮浸潰液以 治療血尿及黃疸，口服施用根皮煎劑，用於坐浴，或施用 於陰道治療不孕.，痛經，及習慣性流產：口服施用樹皮煎 劑以治療咳漱及支氣管疾病，且用爲怯痰藥：且葉汁用以 治療心丨敗疾病· 經濟部中央標準局員工消f合作社印製 於蒲隆地，葉煎劑用爲泡澡或爲吸入藥以治療癲癇，葉 煎劑用以治療陰道脱出，口服施用葉煎劑以治療咳嗷及條 蟲，根煎劑用以治療條蟲：且 於馬達加斯加，採用葉茶治療腹瀉，脹氣，胃腸問題， 敗血性喉p龍痛，肺結核，及發燒：植物汁用以治療疥瘡， 且於大餐後口服施用植物部份以調節消化。 由哈朗加那植物不同部份之萃取物之研究顯示抗生素及 抗發炎活性，（0. F. C.沃德（N wodo )，國際天然藥物研究期 -8- 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） i i 經濟部中央標準局員工消费合作社印^ A7 B7 五、發明説明（6 ) 利（Int. J. Crude Drug Res. 27 : 1 37- 140)( 1989)):抗肝 *性及.柷极生物活性（I · I.馬杜邦尼（μ a d u b u n y )等，國際 生樂學期刊3 3 : 1 29-1 34 (1 995 ):及殺軟體動物活性與細 胞毒性（F. Cepleanu等人），國際生藥學期刊3 2 : 294_ 3〇7( I"4)及J.C.蕭普斯（Chapuis)等：，人種藥理學期刊 3 3 : 273-284(]988 ))。 馬達加斯加.哈朗加那t樹皮萃取物亦藉單一腹膜内注射 主狀通以篩檢藥物活性。樹皮萃取物於5小時内致死且最 小致死劑量爲500毫克/公斤，且不具任何篩檢之藥物副 作用，其包括：運動活性，肌肉鬆驰，止痛，豎毛，眼球 陷沒/眼球突出，垂臉，瞳孔大小，耳色，排尿，腹填， 或況淚（F.森白瑞（Sandburg)及A.克隆倫（Cronlund),第 三屆亞洲專題討論會報（proc. Third Asion Symposium), 藥用植物及調味料，可儉坡，斯里蘭卡，2月2 - 6曰 (1977))〇 2.2 .維思米亞植物之醫藥用途 維思米亞屬植物爲原始生長於中南美洲之熱帶及亞熱帶 區域t喬木或尚灌木，但部份樹種亦見於非洲及亞洲（F .狄 拉孟那（Delle Monache )等，藥用植物（Planta Medica 40 : 3 40-346 (1 980))。於已知約五十種維思米亞屬植物中，有 卜五種出現在委内瑞拉（F .狄扭孟那（D e 11 e Μ ο 〇 a c h e )， Gazzeta Chimica Italiana 109 : 30 1 (1979 ))。 亞馬返哥儉比亞普遍使用狹-茱維思米亞（V i s m i a a n g u s t a) 之膠乳治療傷口及感染之疼痛，且提古那斯（Tikunas )人用 -9- 本紙乐尺度適用中國國家標準（CN'S ) Λ4規格（210X297公釐） (請先"讀背菽之注意事項\^寫本頁) 裝·

、1T A7 B7 五、發明説明（7 ) 於治療皮膚眞菌及唇癌療；密拉提巴拉那（Miritiparn'a)及 波配牙加（Popeyak'a)河之育庫那（Yukunas)人及馬庫那 (Makunas )人使用密花維思米亞（Vismia confertiflora)所 製之茶，可能做爲利尿劑：來自白維思米亞（Vismia dealbata )之橙色••膠乳••則被蒲伊那富（puinaves )人用來治 療被認爲由眞菌引起之皮膚病：巴西，秘魯及哥倫比亞亞 馬遜將鐵·銹色維思米亞（Vi smia ferruginea )之樹脂敷於傷 處：亞非獅子之普均（Pujehun)特區使用來自維思米亞 (Vismia guineensis)之葉煎劑，與無毛甘參（Canthium glabri'florum) —起，作爲兒童之補血劑：小花維思米亞 (Vismia micrantha )用爲瀉藥，強壯劑，解熱藥及抗風濕 藥：且馬庫那人使用域毛維思米亞（Vismia tomentosa)治 療皮廣紅疮（.C . A ·馬克菲（M a c F o y )等，人種藥理學期.刊 8 215 - 23(1983) : R.E. Schulte.s·，植物博物館傳單 (Botanical Musium Leaflets )29( 1 ) : 49-5 7 ( 1983 ) ： R.E. 舒特（Schultes)等，”治癒之森林：西北亞馬遜之藥用及毒 性植物（The Healing Forest : Medicinal and Toxic Plants of Northwest Amazonia)”，第 2 册，210-12，T.R.杜德里 (Dudley)’ 版’迪奥斯柯菜德（D i o s c ο ι. i d e s )出版，波特 蘭’奧勒岡（1990) : T.J.諾眞（Nagem)等，Fitoterapia 64 (4) ： 382 - 83 (1993)) 〇 於象牙海岸’維思米亞用以治療發燒及皮膚病（A ·包奎特 (Bouquet)等，丁rav. Doc. Orstom 32 : 1(1974)) 0 由維思米亞屬植物莖皮萃取物之研究顯示殺軟體動物及 -10- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210x297公趁) (請先閱讀背面之注意事項 巧本頁 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 ΑΊ B7 五、發明説明（8 ) 殺眞菌之活性（F .赛普烈（Cepleanu )等，國際生藥學期刊 3 2 : 294 - 3 07 (I 994))及細胞毒性之活性（j . c .蕭普斯 (Chapuis)等’人種藥理學期刊 23 : 273-284 (1988))。 2.3. _啥朗加那素及維思米亞音夕公_ 哈朗加那素過去係由馬達加斯加哈貞月加那中分離，且藉 X -射線分析決定其結構（G . Η ·史塔特（s t 〇 u t)等，美國化學 學會期刊（J. Am. Chem. Soc. )84 : 2603 ( 1 962 ) ; E.李察 (Ritche )等，*四面信（Tetrahedron Lett.) 1 43 1 (1 964))。一 些哈朗加那素之光譜特性已發表（F .狄拉孟那（DelleMonache)等，四面體（Tetrahedi.on) 3 5 : 2 143 - 2 149 (1 9 7 9) : F .狄扭孟那（Μ ο n a c h e )等，天然產物期刊（j. n at. Pi.od.)43(4) : 487 - 494 (1980) : Μ·尼可拉地（Nicoletti) 等，四面體 3 8 : 3679 ( 1 982))。 (請先閱讀背面之注意事項寫本頁) Λ .裝. 、·§! 經濟部中央標準局員工消費合作社印？衣 OH OH 〇

哈朗加那素 維思米亞紊係由大葉維思米亞分離（F _狄拉孟那）等，藥 __ - 11 - 本紙張尺度通用中國國家榡率（CNS ) M規格（2丨GX297公兹） 五、發明説明（ 9-- Μ Β7 用植物4 0 : 340 ( 1 980))。有些維思米亞素之光譜特性已發 表（尼可拉地等，四面體3 8 : 3679( 1982 )，： F狄拉孟那 等’藥用植物4 0 : 3 4 0 ( 1 9 8 0 ))。

19 (請先閲讀背面之注意事項本頁 .裝 經濟部中央標準局負工消費合作社印製 維思米亞素 依本發明者等人所知，先前技藝均未曾説明哈朗加那 及維思米亞屬植物之降血糖活性，亦先前技藝亦均未説 蔥酮化合物如哈朗加那素或維思米亞素可用爲降、糖劑\ 本申請案中第2段引用或指定之任何參考資料均不λ 發明之先前技藝。 馬 3 .發明概要_ 本發明提供一種使用哈朗加那屬或維思米亞屬植物之 取物之方法，及使用蒽酮化合物啥朗加那素及▲田"一 素，…及其醫藥上可接受之鹽類做爲降血糖劑或做爲;:: 中葡糖濃度之藥劑，尤其用於糖尿病患者，+、、牛L 本發明一項具體實施例包括哈朗加那或維思米屬 屬 明 米亞 血 植物 -12- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210X297公釐）

經濟部中央標準局員工消費合作社印製 之十d 1定j M卒取物（或其中所人 iir各七.維田氺π本I 4 Υ所含 < 悤酮化合物哈朗加 那：予、或，准心、未亞素或其醫藥上、 λ 趣 勹拉又端士 Hfe & * 、又I 類）’治療哺乳 Λ§' I括人頒又胰島素依軺型换斥卜* 尿病之方法。1包括使用f ㈣或非姨島素依賴型糖 %勺括牛血糖劑處理急性壓力下之哺乳 類，包括人頌降低血中葡萄糖之方法。， 本發明另一項具體實施例包括传人、 ^ ^ . # p, v ^乙括使用哈朗加那素或維思米 亞素，.或其酋樂上可接受之鹽， 本發明亦包括使用哈朗加W 万法 ……臨’月加那素或維思米亞素，或其醫藥 上Γ按又之_ η，做爲降低糖尿出、^ ^ ^ ^ ^、 _、 , ^ η . 灼〜'异血中甫:）匈糎之藥劑之 万法。本设明亦包括用爲哺乳 肉孔颌降血糖劑之醫藥組合物， :&效量二哈朗如那素或維思米亞素，或其醫藥 w K鹽與％藥載體，及使用此等醫藥组合物之方 法0 ，二據，發明具體實施例，#包括下列步驟之方法製備具 y療政力之降血糖劑： (a )使用* -種極性或非極性溶劑，自哈朗加那或維思米 亞屬植物中洗出植物物質，得到含有一種或多種降血糖活 性化合物之溶液： 、⑻濃縮該溶液，得到含該—種或多種降血糖活性化合物 之;展縮混合物：且 (c )至少一次重複下列步骤： 使含該一種或多種降血糖活性化合物之濃縮混 合物分佈於第二種極性溶劑及第二種非極性溶 劑之雙相混合物中，得到具生物活性之非極性 ⑴ 裝！ (請先閱讀背面之注意事項^^寫本頁) 、-β 泉 -13 - 五、發明説明（11 A7 B7 經濟部中央標準局員工消费合作社印製 溶液，其中該第二種極性溶劑與一 .性溶劑不可互相混合；及 、〜吊—種非極 (i i);辰縮孩具生物活性之非極性、右、、，本發明另—項具體實施例，一：;：。 莉糖之方法包括投與治療有效量之哈朗^乳類血中葡 植物之萃取物至需要如此降 ^維思米亞屬、衣去包括下列步驟： 戎平 (过） 吊—種極性或非極性溶劑，自也 屬植物中咮山 0月加那或維思米亞 ^ ，先出植物物質，得到含有一種戋多# 化合物之溶液， 但名夕種降血糖活性 ()反钿咸芯液，得到含該一種或多種降血挾、壬w 之濃缩混合物：且 衩I牛血搪活性化合物 (c)至少一種重複下列步驟： (,)使含該一種或多種降血糖活性化合物之濃縮混 合物分佈於第二種極性溶劑及第二種非極性溶 之义相混合物中，得到具生物活性之非極性 心液，其中琢第二種極性溶劑與該第二種非極 性洛’則不可互相混合：及 (1丨）'辰縮孩具生物活性之非極性溶液，得到適用爲 • 降血糖劑之萃取物。 再者，本發明包括治療糖尿病之方法，其包括投與治療 有A £之哈朗加那或維思米亞屬植物萃取物至罹患糖尿病 之哺礼類’其中該萃取物之製法包括： (a )以第一種極性或非極性溶劑，自哈朗加那或維思米亞 14 表紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公资） 請 先 閏 讀 背 ϊέ- < 意· 京 $ 本 頁 裳 ΊΤ B7五、發明説明〇2 經濟部中央標準局員工消f合作社印製 屬植物中洗出植物物質，得到含 化合物之溶液： -戈夕種降血糖活性 ⑻濃縮該溶液，得到含該—種或 之濃縮混合物：且 务搪'舌性化合物 (c )至少一次重複下列步驟： i (i) 使含該一種或多種降而插_ 冬人 戈丨牛血糖'舌性化合物之濃縮 合物分佈於第二種極性溶劑及第二種非極性 =之雙相混合物中’得到具生物活性‘非極 落液，其中該第二種極性溶劑與該第二種非 性溶劑不可互相混合：及 (n )濃縮該具生物活性之非極性溶液。 更者，本發明包含用爲哺乳類之降血糖劑之醫藥组 物’其包含治療有效量之哈朗加那或維思米亞屬植物萃 物’其中該萃取物之製法包括： U)以第一種極性或非極性溶劑，自哈朗加那或維思米 蜃植物中洗出植物物質，得到含有一種或多種降血糖活 化合物之溶液： (b)濃縮該溶液，得到含該一種或多種降血糖活性化合物 之7辰縮混合物：且 (c )至少一種重複下列步騍： (1) 使含該一種或多種降血糖活性化合物之濃 合物分佈於第二種極性溶劑及第二種非極性 劑之雙相混合物中，得到具生物活性之非極 溶液，其中該第二種極性溶劑與該第二種非 混 溶 性 極 合 取 亞 性 縮混 溶 性 -1Fi - 本紙張尺度適用中困.國家標隼（CNS ) Λ4規格（210X297公釐） A7 A7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 B7 五、發明説明（13 ) 性溶劑不可互相混合；及 (i i);辰縮孩具生物活性.之非極性溶液。 參考下列圖表，詳述説明及實例（其爲本發明無設限之具 體If施例之例證）可更完全了解本發明。 4 .圖示説明 ' 圖1爲顯示哈朗加那素治療之糖尿病小白鼠血漿中葡萄糖 也/^ (龛兄/公合）之長條圖。哈朗加那素以$毫克/公斤 (每日四次’ 2劑量）及5 〇毫克/公斤（每曰四次，單劑量） 投藥。全邵數據點之N = 8。* P < 0. 〇 1 : * p < 〇 〇 1 (變方 分析（ANOVA) ’單一係數）。詳見第8.2段。 圖2爲顯示哈朗加那素治療之糖尿病小白鼠血漿中葡萄糖 濃度（毫克/公合）降低之連續時間圖形。動物接受丨〇〇毫克 /公斤（每曰四次，單劑量）之相關化合物（或載劑）。全部 數據點之N = 8。**p<0.00丨（變方分析（AN〇VA),單一係 數）。詳見第9.2段。 圖3爲顯示於口服葡萄糖耐受度測試中以哈朗加那素餐後 血漿中萄糖濃度降低之圖。動物口服相關化合物，每天 )，2 5及5 0耄克/公斤3天。於第3天投與葡萄糖大丸劑。 全邵數據點之 N = 8 。 * P < 〇. 〇 5 : * * < 〇 〇 1 *“P.<0.001(變方分析（ANOV^A)，單—係數）。詳見第ι〇 段。 圖4爲顯示於葡萄糖耐受度測試中於施用哈朗加那素之曲 線下面積降低之長條圖。動物經口投與每天5，2 5及5 〇毫 克/分斤，哈朗加那共3天。全部數據點之N = 8。 -16- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210歹了97公釐) '------ .装— (請先閱讀背面之注意事項I寫本頁)

,1T A7 B7 五、發明説明（ 14 經濟部中央標準局員工消费合作社印製 *P<〇.〇5 : **p<〇m · P<0.01 ，“.P<〇〇〇1(變方 (an〇va)，單—係數）。詳見第1〇 2段。 析 圖5爲顯:哈朗加那及維思米亞素對於脂肪細胞3 中2 -去氧荀萄糖基礎吸收之效果· — · — 、J _ 素：代表維思米亞素。詳見第^^段。'明加那 圖6馬顯示哈朗加那及維思米亞素 =素所剌激之…葡萄糖基礎吸收之 农u朗加那表·—△ —代表維思米亞素。詳見第】1 2段。 5 ·發明詳述 5.丨·魏 :々法使用〈恩酮化合物哈朗加那素及 維思米亞#^ 万法，自哈朗加那屬或 .—'.7匕J ’幸父好自馬達加斯加哈朗加那中分離出降 亚糖活性萃取物成分或實質上純化之形式。降:二二I:可由哈胡加那或維思米亞屬植物，較好由 U 明如那，根據下述方法製備降血糖物。 取哈朗加那屬σ1Μί田央 那之整株核私从二、=亞屬，較好由馬達加斯加哈朗如 JL r ^ J枓以第—種極性或非極性溶劑洗滌，得到 :^種或更多種降血糖活性化合物之溶液。較好由葉及 植物材料。合適的第一種極性溶劑包括，但不限 於，曱醇，乙醇， 醇，第二丁醇，四v:基乙醇，“丙醇，2-丙醇，異丁 溶劑，及其混八物 ，其它熟習此技藝者已知之極性 以調整其極性種：性溶劑可視需要加以稀釋： ί j中’第一種極性溶劑之水份含量範 本纸張纽翻㈣ '17 2 9 7公釐） —裝 (請先閱讀背面之注意事項 寫本頁) -δ • —1-'

經濟部中央標準局負工消费合作社印製 圍Γ自0 土約5 0 °/0，較好爲0至約2 0 %。 & C之第種非極性溶劑包括，但不限於· ’ 乙醋，乙酸異戍騎，笨，甲苯，二甲苯，2: 丁二，，乙酸 -2 -戊酮，氣化妗 尸、 丁鲖，4 -甲基 "、 上如—氣甲，氣仿，四氣化石山 虱乙烷’四氣乙烯及其它熟習此技藝者 一 劑，及其混合物。 〜非極性溶 用於自啥朗力口那屬或維思米亞屬植物 第-種極性或非極性溶劑爲極性溶 料之 醇^最佳者爲約8:2乙醇更佳者爲乙 咸需了解，以第一種極性溶劑或非極性 二 =料:視需要磨碎，例如於威立磨縮 減王^卩材料I大小，以增加植物材料可接觸溶劑之有效表 面積。 k物材料可直入含第—種極性或非極性溶劑之合適容器 中促進洗出’ JL使混合物攪拌約3〇分鐘至約2週，較好約3 小時至約72小時，且最好約1 2小時至約48小日争。第一種 極f生5 ?如性洛劑可於室溫，或於約室溫下加熱至所採用 特足溶劑系統之回流溫度。視情況，哈朗加那或維思米亞 屬植物材料可使用索格利特（s〇xhlet)萃取容器及第一種極 性或非極性溶劑藉熟習此技藝者已知之方法萃取。. 濃縮所得之含有一種或多種降血糖活性化合物之溶液， 視而要於興玄F得到含一種或多種降血糖活性化合物之濃 縮混合物。含一種或多種降血糖活性化合物之溶液可視情 況於濃縮前經由如，習用之濾紙，寅式鹽，或—小層矽 18 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（2丨0>α97公楚 (請先閱讀背氙之注意事項>^寫本頁)

P -裝· Ή A7 五、發明説明（ 16 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 膠谭濾。 ―:得含-種或多種降血糖活性化合物之濃縮混合物至少 下列步驟⑴，使含該—種或多種降血糖活性化合 4〜縮混合物分佈於第二種極性溶劑 劑之雙相混合物中，得到具生物活性之非極㈣ 2⑭生物活性之非極性溶液，得到包含哈朗加那素或 維思米亞素〈萃取物濃縮液’且可用爲降血糖劑。此等： 骤可依需要執行許多次，以便自濃縮混合物中萃取—種/ 多種降血糖活性化合物’如’哈朗加那素或維思米亞素 且進入第二種非極性溶劑，如此所得之萃取物濃縮液則 有一種或多種降血糖活性化合物。較佳具體實施例中， 種或少種降血糖活性化合物之一爲哈朗加那素或維甲、米 亞素。步驟（i)及（i i)之較佳重覆次數可自1至6次，最好爲 2次。合適之第二種極性溶劑包括，但不限於：水及下 溶劑之水溶液：甲醇，乙醇，1 -丙醇，2 -丙醇，里丁醇 第二丁醇，四氫呋喃，其它熟習此技藝者已知之容劑，及 其混合物。合適之第二種非極性溶劑包括，但不限於該等 上述之第一種非極性溶劑。重點在於第二種極性溶劑與非 極性溶劑不互相混合，且反之亦然。 雖然以上步驟（i)及（Π )可進行1次以上，但每次重 不焦使用相同之溶劑系統，即，第二種極性溶齊彳及第一 非極性溶劑之雙相混合物。換言之，每次重復步壤（i) (i i)時，可使用不同極性溶劑與不同非極性溶劑之組合 較佳具體實施例中，重複2次上述步骤（i)及（丨丨}, 或 含 該 米 列 複時 種 及 其中 (請先閱讀背V#之注意事項\^寫本頁}

A -裝 -訂 -19 本紙張尺度適用中囷國家標準（CNS ) Λ4規格（210X 297公釐 A7 五、發明説明（ 17 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 第1次之雙相混合物包括水做爲第-綠k . 甲—種極性溶劑及以二氣 甲垸做爲第二種非極性溶劑’且第？ 4 ^ 币2 /入重複時之雙相混合 物包括約9 : 1之乙醇/水做爲第二種 裡極性落劑及以石油醚 做爲第二種非極性溶劑。 咸了解，第一種及第二種極性溶劑’ $ 4，及第一種及第二種 非極性溶劑彼此獨立，因此第一種打 U币搜知性溶劑不需與第二種 極性溶劑相同，且第一種非極性溶南丨 、 H不需與第二種非極性 洛劑相同。 視情沉，步驟（i i)中所得之萃取物、、 物/辰縮液可再純化得到 w質上呈純化形式之一種或多種降血换工 牛此掩活性化合物。合適 之純化方法包括，不限於：自熟諳相關技藝者已知之溶 劑及溶劑混合物中再結晶，溶離層析法及其組合。溶離層 析法包括，但不限於：製備性薄層層析，習用之矽膠層 析，眞空急驟層析，高效液相層析，及其組合。需要時各 純化法可進行1次以上。 較佳具體實施例中，重複以上步驟⑴及（i i) 2次所得 之萃取物濃縮液先使用眞空急骤層析，然後使用習用之矽 膠層析純化，得到實質上呈純化形式之哈朗加那素及維思 米亞素。 本發明另一項具體實施例中，哈朗加那或維思米亞屬植 物’較好爲馬達加斯加哈朗加那之降血糖萃取物之製法爲 於水中加熱植株部份，較好於沸點或接近沸點溫度下，約 1分鐘至約4 8小時之間，較好約i分鐘至約2小時之間，且 最好約2分鐘至約1 5分鐘之間。植株部份相對於水之重量 -20- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項^^寫本頁) •裝·

、1T A7 五、發明説明（18 ) 百=比範圍可约！至約50重量％，較好約5至約4〇重量％， 且最好約1()至約25重量％。生成之水溶液煎劑包括一種或 多種降血糖活性化合物，如，哈朗如那素或維思米亞素， 且可用爲降血糖劑。此外，生成之煎劑可使之葱發，於直 空下或通風乾燥，且生成之殘餘物可用爲降血糖劑。再 者，生成之殘餘物可藉由上述技術純化，#到實質上呈純 化形式之哈朗加那素或維思米亞素。 或者，可使用已知方法（F.狄拉孟那等，四面體^ : 2 143 2 149(1979 ) : F狄拉孟那等，藥用植物: 3扣 (1980))得到實質上呈純化形式之哈朗加那素或維思米亞 素。 5 ·2 · 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 ./吏用^上弟5·1段描述之方法製備之哈朗加那或維思米亞 屬植物萃取物具降血糖活性。由於本發明之哈朗加那或維 =亞屬植物萃取物之強力活性，該萃取物可有利地用於 蝴、ί又人峨岛¥中糖尿病t治療。此外，在急性壓力下如 <问’外诰，敗血病，及燒傷及進行一般麻醉之動物 ^病=有利於使用該萃取物作爲降血糖劑，以降低血中葡 匈糖濃度。有時伴隨嚴重之頭部損傷，腦栓塞，腦炎及中 暑2糖過高亦可以此等哈朗加那屬植物萃取物治療。此 、 >加那矣植物之萃取物可於伴隨出現血糖過高之少 見t先天代謝肝糖貯存疾病用爲降血糖劑。 雖然本發明者等不願受限^任何特定之作用機制以解釋 ό朗加那或維思米亞屬植物之萃取物之降血糖活 本纸張尺度賴巾g 21 - )A4規格（210X 297公;^ ) A7 B7 五、發明説明（19 生，但預見其可有利地用、二. (早期稱爲幼年刑 、、冶療胰島素依賴型或I型糖尿病 或11型糖尿病（早期稱mm島素依賴型 尿病）。 千土，成”…、月起始或非酮病糖 ®投藥至哺乳類用於 ； 可單獨使用哈朗加那或維床使用， 任何生理上可接植^卒取物，或可與 其它生理上可如水，水溶液，—般食鹽水，或 可接雙之賦形劑組合。常，的 天。 /天，較好約5〇-25〇毫克/公斤/ 當製備哈朗加那戋维田 乳或人類之降血Cl:亞屬水溶液煎劑時，投藥至哺 次之間，二 〈水溶液煎劑次數爲每天]至約6 維思米亞素：：天約J次’ &水溶液煎劑中哈朗加那素或 之i限範圍Γ錢而""。每日合適劑量之決定係醫護人員 /朗加那或維思米亞屬植物萃取物可藉許多路徑投藥， 包括，但不限於.π aE 、、^ ^ 、服，〉王射包括，但不限於，靜脈内， 腹朕内皮下肌内，I。較佳之投藥路徑爲口服。此 ，15』加那或維思米亞屬植物萃取物可與另一降血糖劑 包括如：胰島素：雙胍如美特弗命（metf〇rmin)或布弗^ ( ⑷11) ’ 月尿如乙臨己SI胺（acetohexamide )，氣 丙醯胺（chl01.propanide)，甲苯磺氤雜脲（t〇lazamide)，甲 苯’、丁 I (t 〇丨b u t am i de ),甘布萊德（g 1 y b u丨.i d e ),甘必赛德 (glypizide)或甘克赛德（giycUzide):嘧唑破二酮如特奇塔 木紙杀尺度適用中國國尽標孪（CNS ) A4規格（2丨0X29*7公遵：） f請先閲讀背面-之注意事項15^马本頁) •裝.

-、1T 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 22 五、發明説明（ 20 A7 B7 松（trogiitazone) ; α _糖苷 ,,., ρ制劑如阿卡布斯（acarbose) 或米特加（miglatol):戍β ’ 3i6,243,等。 3-腎上腺受體催動劑如CL_ 本發明之哈朗加那或維田 ^ -V- -V- ^ „ 、未亞屬植物萃取物可呈上述分 離之形式或用相對離子如# ; 蚋，鉀，鋰，鈣，鎂， 轉變爲醫藥上可接受之鹽，伊 立 依有效量投藥。 此外，哈朗加那或維思米 - 亞屬植物之萃取物或其醫藥上 可接受之鹽類可用於研究目沾 ^ 的，例如，研究降血糖劑之機 制及活性。 5 . 3方法 由於其強力活性，哈朗t 朗加那素及維思米亞素可有利 於獸醫及人類醫學中糖尿病之治療。此外，在急性壓^ 如體溫過高，外傷，敗血病，及燒傷及進行—般麻醉之： 物或病患有利於使用哈朗加那素及維思米亞素作爲降血释 劑，以降低血中葡萄糖濃度。有時伴隨嚴重之頭部損傷； 腦栓塞，腦炎及中暑之血挣過古十了、，u — 劳 捃過呵吓可以此等哈朗加那 物卒取物治療。此外"合朗加那素及維思米亞素可於伴隨 出現血糖過高之少見之先天代謝肝料存疾病中用爲降: 糖劑。 哈朗加那素或維思米亞素，可使用以上第5.i段插述之任 何万法製備實質上純化形式。此外，若實質上純化之 之哈朗加那素或維思米·.亞素素變爲可藉合成方 二 得：本發明意欲包含使用此等降低血中葡萄糖或治療：： 病（本·方法及叙合物之方法。 ° 請 先 閲 讀 背 ιέ 經濟部中央標孪局員工消費合作社印製

五、發明説明（ 21 A7 B7 雖然本發明者等不願受限於任何特定之作用機 本發明之哈朗加那及維思米亞素之降血糖活性，但預見： :有利地用於治療姨島素依賴型或t型糖尿病（早期稱爲 土或自同病傾向型糖尿病）及非姨島素依賴型或η型糖尿 (㈣稱爲戌年型型，成熟期起始或非酮病糖尿病卜" 一田投藥土哺礼類用於獸醫使用或至人類用於臨床使用， 可單獨使用"合朗加那及維思米亞素可單獨，—起，切 與任何生理上可接受之載劑如水，水溶液，-般食鹽水， 或其冗生理上可接受之賦形劑组合。通常，劑量範圍爲 50-1000毫克/公斤/天，較好約50_250毫克/公斤> 天0 經濟.邵中央標準局員工消費合作社印製 *朗加那或維思米亞素可藉許多路徑投藥，包括，但不 限I · 口服，汪射包括，但不限於：靜脈内，腹膜内，皮 F，肌内，等。較佳之投藥路徑爲口服。此外，哈朗加那 ’f、及..隹心米亞素叮與另一降血糖劑包括如：胰島素：雙胍 如美特弗命（metformin)或布弗命（butformin):磺醯脲如 乙醞己醯胺，氣丙醯胺，甲苯磺氮雜脲，甲笨磺丁脲，甘 布菜德’甘必赛德或甘克赛德：4唑啶二酮如特奇塔松： α -糖甘酶抑制劑如阿卡布斯或米特加（mig丨at〇l ):或点、_ 腎上腺受體催動劑&CL_316 , 243，等。 ά胡加那I及维思米亞素可以其苯盼形式或使用相對離 ?如鈉，鉀，鋰，鈣，鎂，鋅或鐵形成醫藥上可接受之酚 鹽依有致量投藥。 此外’哈朗加那素及維思米亞素，或其醫藥上可接受之 -24 Α7 Β7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（22 ) 鹽類可用於研究目的，例如，研究降血糖劑之機制及活 性。 下列一系列實例本發明範疇，並未加以設限。 6 ·實例：由馬達加斯加哈朗加那製備水溶液煎劑 取1 5 0克由馬達加斯加哈朗加那之葉粉或樹皮粉於1升水 中煮沸1 0分鐘。經口投與4 0毫升所得之降血糖煎劑給病 患，一天三次。 7 .實例：哈朗加那素及維思米亞素之分離及特性描述 7 . 1材料及方法 * 於配備L-6200 A幫浦，AS-2000自動取樣機，L-4500A 二極管矩陣檢測器及Sedex 55光散射檢測器之日立D - 6500 型廣析負料 3占（Mitachi Model D-6500 Chromatography Data Station):以及 Primesphere C 1 8 HC，4 x 50 毫米（5 微米）HPLC管柱進行高效液相層析（HPLC )分析。於周溫 下進行所有層析測定。使用HPLC級溶劑而不再純化。 於菲立安調和加級400( Varian Unity Plus 400)或菲立安 調和400 ( Vari an U ni ty 400 )光譜儀上記綠核磁共振（n M R) 光譜。1 Η N M R光譜於4 0 0 Μ Η ζ進行；13 C N M R光譜於1 0 0 Μ Η ζ進行。化合物之N M R光譜於氘化丙酮中記綠。由一元 及二元N M R實驗，即，無畸變增加極化轉移（〇 e P T ) , Η -Η相關光έ晋（C 0 S Υ )，異核複量子相關（Η M Q C )，異核複鍵 相關（ HMBC )及長範園異核化學轉移相關（Hetc〇R)，提 供分子結構資料。M S光譜記綠於高解析電子衝擊掃描型， 7 0迠子伏特克拉托斯（Κ I· a t 〇 s) M S - 5 0。解析度設在 -25 - 本紙张尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210Χ 297公趁) (請先閲請背面之注意事本頁) Ρ •裝_ ，1Τ A 7 _____ B7__ 五、發明説明（23 ) 2000 ’掃描率爲1〇秒/衰變，溫度梯度由50。至3〇〇 °C， 依5 0 /分鐘之速率增加。I r光譜記錄於珀金埃爾默 (Perkin-Elmer) 1600系列FTIR。UV光譜記錄於珀金埃爾 默几（Lambda) 2 UV/VIS光譜儀或由HPLC系統上之日立 二極管矩陣UV測定器上直接採用。 ： 7 · 2 · 溶劑萃取分離哈朗加那素及維思米亞素 取馬達加斯加哈朗加那切碎及磨粉之整株植物材料（22.2 公斤）於220升8 : 2乙醇/水中，於室溫攪拌24小時。生成 之乙畔/水溶液經由2·5公斤寅式鹽過濾，濃縮使生成之混 合物分佈於二氣曱烷及水之間。二氣曱烷相使用旋轉蒸發 法減壓濃縮，使生成之殘餘物分佈於石油醚及乙醇/水 (9 : 1 ) ι間。石油醚相蒸發，產生5.3克降血糖活性萃取物 濃縮液。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 萃取物;展縮液再使用眞空急驟層析法依下列步躁純化： 取443克萃取物濃縮液吸附於1升矽膠（J . Τ ·貝克（Baker)， 公司，非力斯堡，紐澤西，40微米）且置於在己烷中平衡 之J . 5升矽膠床上，產生最終之床大小爲2 2 (直徑）X 2 7公 分。以己烷溶離第一部分（F丨）且以己烷/乙酸乙酯（6 : 〇 溶離第二邵分（F2)。蒸發F2中之溶劑，得到162克含蒽酮 化合物哈朗加那素及維思米亞素之深色樹脂。取5 〇克深色 樹脂於ιο(直徑）x 20公分含矽膠（J τ貝克（Bake〇，公 司，非力斯堡，紐澤西，4〇微米）之管柱上層析。合併3〇 X 200毫升溶離份，及後來之2 ό X 500毫升溶離份，以5 : 1己坑./乙酸乙酿溶離。集合HPLC法之含哈朗如那素及維 _-26- 本紙張尺度適3中國國家標) (2t〇x297公楚^ — - A7 五、發明説明（24 思米亞素溶離份且再產生15·5克含約3〇%哈朗加那素及唯 思米亞素混合物之溶離份。取這一部份中】丨5克溶離份使 用9 · 1甲醇/水爲溶離，於c _丨8 L c填充（貝克邦 (Bakerbond)，40"M)於9 : 甲醇/水中平衡之4 ^直徑） X25公分管柱中層析，得到2 15克(〇 〇5〇%)哈朗加：素： 1.05克（0· 024 % )維思米亞素。 E酮化合物哈朗加那素及維思米亞素之分離法示於下圖j 中〇 ,-----裝--- (請先閱讀背面之注意事項寫本頁) 圖I 馬達加斯加哈朗加那 葉及莖樹皮（2 2.2公斤） 1 .洗滌步驟：E to Η /水8 .過攄 .濃縮 4 .分佈：二氣曱烷/水1 1 .二氣甲烷相2 .濃縮 分佈：石油醚/ 1 〇 %乙醇水溶液 水相 訂 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 乙醇 水溶液 石油醚相 1 .興：ϊ：总戰層杆 2 _矽膠液相層折 3 . C - 1 8液相層折 哈朗加那素（2 · 1 5克） 及 維思米亞素（1.05克） 27- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4规格（2丨0X297公釐） A7 B7 五 、發明説明（25 7 · 3 ·全素及維思米亞素結摄卩⑤明 7 ·3 · 1哈朗加那素光譜特性 使用以上第7 · 2段描述之分離程序得到不定形燈色固體之 °朗加那素。由其結構與已發表之數値（Μ _尼可拉提（Μ · V Τ · | 1C〇 etti)等，四面體38 : 3679( 1982)1)比較而確認。其分

子式，P y〇H36〇4，由 HREIMS m/z 460.2616(JVT，計算値 (△ 〇·)3 ppm)及DEPT 13C NMR光譜測定。下表1列出哈 朗加邺素13C及| η化學轉移。 表1 :哈朗加那素之N M R資料 請 閲 讀 背 之 注 項 裝 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 原子數 1 丨3C Ή I1MBC相關性 1 192.2 ⑻ — C-3, C-4, C-14 2 105.0 ⑹ 5,86 (lll，s) 3 181.8 ⑻. ♦ 4 50.9 (S) — 5 141.1 ⑻ — ( 6 113.1 (d) 7.50 (lH，s) C-4, C-8, C-12, C-14 7 137.5 (s) — 8 126.0 (s) — 9 • 140.3 (s) — 10 ： 113.4 (d) 6.65 (lH，s) C-8, C-ll, C-12, C-25 11 156.6 (s) — - 12 112.3 (s) — 13 164.7 (s) 一 V 14 108.8 (s) — 15/15' 41.3 (0 3.02 (2H,dcI,7.6,14) 2.76 (2H，dd，7.2,14)) C-4, C-5, C-16/16'，C-17/17 C-3, C-4, C-16/16', C-17/17 16/16' 119.5 (d) 4.70 (2H,pt,1.2,7.2) C-18/18，， C-19/19' -28- 訂 木紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（2丨ΟΧ 297公釐） ΑΊ _____Β7 五、發明説明（26 ) 原子教 'C '!i 11MBC相關性 17/17， 134.6 (S) _ 18/18， 25.83 (q) 1.43 (6!I,d.0.8) C-16/16,, C-17/17,, C-19/19- 19/19' 18.1 (q) 1.48 (611,s) ^ CriC/l6,, C-18/18 20 28.0 (0 3.65 (2H,d 6Λ) CT7, C-9, C-21, C-22 21 124.5 (d) 5.03 (III,pt,1.2,6.4) 22 131.6 ⑻ — 23 25.75 (q) 1.(57 (3II,d,1.2) C-21, C-22, C-24 24 18.3 (q) 1.93 (311^,0.8) C-21, C-22, C-23 25 20.9 (q)' 2.41 (3II,s) C-8, C-9, C-10 0Η — 10.08 (lH,s) C-10, C-ll 、 -衣-- (請先閱讀背面之注意事項寫本頁} 7.3.2哈朗加那棄朵.#特性 使用以上第7 · 2段描述之分離程序得到不定形燈色固體之 維思米亞素。其結構與已發表之數値（Μ.尼可拉提（μ

Nicoletti)等，四面體 3 8 : 3679( 1982) ;.F.得利莫那克（F De 11 e Μ 〇n ach e )等，藥用植物 4 0 : 3 40 ( 1 980 ) > j 比較其光 譜特性而確認。其分子式，c25H28〇4，係由hREIMS m/z 392·199ΐ〇「，Λ0.86 ppm計算値）及 DEP丁丨 3C NMR 光譜 決定。下表2列出維思米亞素指定之及ιΗ化學轉移。 _________-29- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNs ) A4規格（210X 297公釐）

-、1T 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（27 ) 表2 :維思米亞素之Ν Μ ΐί資料 原子數 I?c lII I-IMI3C相關性 1 192.3 ⑻ —— 2.:. 104.9 ⑹ 5,84 (lHfs) C-3, C-4, C-14 3 181.8 ⑻ — 4 50.7 ⑻ —— 5 141.8 ⑻ — 6 116.0 ⑹ 7.42 (lH，s).· C-4, C-8, C-12, C-I4 7 139.6 ⑸ — 8 118.7 (d) 7.08 (lH，s) C-6, C-10, C-12, C-20 9 142.6 (s) — 10 112.1 (d) 6.62 (lH，d，’1.2) C-8, C-ll.C-12, C-20 ' 11 158.3 (s) — 12 111.8 (s) . —— 13 . 164.5 (s) — . 14 109.2 (s) 一 15/15， 41.1 (0 3.30 (2H，dd，7.6，14) 2.77 (2II，dd，.6.4，14) C-4, C-5，.6-16/16^ 017/17, C-3, C-4, 0-16/16-, 0-17/17- 16/16， 119.5 ;(d) 4.67 (2H，m) C-18/18，， C-19/19' 17/17' 134.7 ⑻ —— ' 18/18， 25.8 (q) 1.43 (6H,s) _ C-16/16,, C-nilT, C-19/19, 19/19, 18.1 (q) 1.49 (6H,s) C-16/16，，C-17/17', C-18/18, 20 22.0 (q).. 2.40 (3H，s) C-8, C-9, C-10 OH , — 10.02 (lH,s) - C-10 or 12, C-ll (請先閱讀背面之注意事項本頁) 裝. 、1Τ _—_-30- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210X 297公釐） 五、發明説明（ 28 A7 B7 經濟部中央標準局員工消费合作社印製 8 · 之降低 本實驗説明哈朗加那音私阶她 -、、ι肥脾糖尿病d b / d b小白鼠中隆 低血漿葡萄糖濃度之效果，此小白鼠係熟諳此技藝者等初 定爲非姨島素依㈣糖尿病（NIDDM)之代表性料且可： 於預測於哺乳類，包括人猶> II欠，> · ' .員I P牛血糖活性。使用哈朗加那 素所得結果與使用美特柴合^ α 1 、 开带°ρ (—種目前用於治療NIDDM之 藥物）所得結果比較。 8- 如以上第7.2段描述取得並純化哈朗加那素。美特弗命 (1，丨-二甲基雙胍）係購自西格瑪（Sigma)化學公司（聖路 易，密蘇里州，美國：目綠編號d_5035 )。 遺傳上改變之肥胖糖尿病小白鼠（命名C57BL/ks-db/ d b )(此後稱11 d b / d b "小白鼠）係購自傑克森實驗室（巴港， 緬因州，美國），且做爲實驗動物。本文所述之實驗使用年 齡8 - 9週之雄性動物。動物於標準實驗室條件下安置2 2 Ό 及5 0 %相對濕度F (4隻小鼠/蘢），且供應保麗那（pul.ina) 嚙齒類飼料及自由飲水。於治療前，由各動物之尾靜脈採 集血樣，且分析血漿葡萄糖。採用血聚葡萄糖濃度在3 5 0 及6 0 0毫克/公合間之小白.鼠進行此實驗。各治療組包括 隻小白鼠，其分配方式使研究開始時，各組中平均葡萄 濃度均相等。 db/db小白鼠經食道管經口投與載劑，5毫克/公斤哈 加那素（每曰四劑，2天），5 〇毫克/公斤（單一劑量）’ 美特弗命（250毫克（1 5 1 0莫耳）/公斤（每曰四劑，2天） 8糖 朗或 (請先閱讀背面之注意事項_寫本頁) mi -裝·

-、1T -31 - 本紙張尺度適用中.國國家標準（0~5)/\<1規格（21〇/297公焱） 五、發明説明（ 29 A7 B7 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 化合物於含有〇 · 2 5 % (w/ v)叛曱基纖維素，1 〇/〇 ( v / v).吐溫 (Tween. )60，及至多 10 °/〇(v/v)二甲亞^(DMS〇)於體積 1〇 毫升/公斤之液體載劑中傳送。施用化合物（3及27小時）3 小時後由尾靜脈採血檢體，且分析血漿葡萄糖濃度。亦於 24小時後測定個別體重及平均食物消g量（每籠）。使用葡 :糖氧化酶（西格瑪化學公司：西格瑪目綠號碼315)比色測 定血紫葡萄糖濃度。使用變方分析及費雪氏p〇st-h〇c試驗 (Fisher，s p〇st_h〇c test)評估组間差異顧著性（由藥物處 組與載劑處理組比較）。 =用哈朗加那素時，使db/db小白r之血漿葡萄;二？量降低(圖丨及表3卜以哈朗加那 佼相對於以载劑治療（對 度具統計顯著性。開始崎:广:：匈糖濃度之降低程克/公斤(每曰四次)之小白J = 4時後’施用5 合（P < 〇 〇 氷葡甸糖降低9 7毫克/ 。（卩^”且施用“毫克/公斤 / 約⑸毫克/公合（P<〇.〇5)。相小白鼠降低曰四次）之美特弗命之小白藏於:，接文25〇*克（每 合葡萄糖濃度…合朗加那素抗：：日’/僅降低5〇毫克/公 重沒有任何可測得之_( ^心果對食物攝取或體素或美特弗命，爲血衆葡萄糖降藥物，即哈朗加那 減少听致。此等資料顯示哈朗知-'、'，而非食物攝取 及NIDDM之售齒類模式 、〇那素在月夷島素抗性，肥胖 玫之口服抗高血糖劑。 理 糖 時 毫 公 請處 閲 讀 背 Φ- 之 注 意- 事 項 寫 本 頁 裝 訂 -32 A7 B7 30 五、發明説明（ 表3化合物對糖尿病db/db小白鼠血中葡萄糖之效果 處理 劑量(毫克 葡萄糖變化(毫克/公合） 葡萄糖變化(毫克/公合） /公斤） 3小時 p値 27小時 Ρ値 載劑 - -5.6 NA -5.8 ΝΑ 美特弗命 250(每曰四劑）-50.3 0.0556 -171.6 <0.0001 哈朗加那素 5(每曰四劑）-97 0.0008 -58 0.0078 哈朗加那素 5〇(單—劑量）-152.6 <0.0001 -36 0.704 N A =未取得 表4化合物對糖尿病d b / d b小白鼠體重及食物消 耗之影響 處理 劑量(毫克/公斤）體重變化(克）食物消耗(克/小白鼠) 24小時 0-24小時 載劑 - -0.1 5.8 美特弗命 250(每曰四劑）_〇.2 4.7 哈朗加那素 5(每曰四劑） 5.7 哈朗加那素 5〇(單一劑量） α1 5.5 9 ·實例：血漿茴笳揸隨時間之變化_ 經濟部中央標準局—工消費合作社印製 本實驗說明以哈朗加那素處兹之也槳葡萄糖濃度隨時間 降低情形。 9.1材料及立屋1 動物及贯驗條件與以上第8 . 1段之説明相同。d b / d b小 鼠，經食道管經口接受〗〇〇毫克/公斤（單一劑量）載劑或 朗加那素。於治療前（t = 〇)，及於處理後1.5，3 , 4 5 , 33- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210X297公趋） 五、發明説明（31 及2 4小時由尾靜脈取得血液 果表示於圖2。 A7 B7 ’且分析血漿葡萄糖濃度。結 經濟部中央標準局員工消费合作社印装 9·2ΐϋ 月良藥後1.5小時，哈如六抓直 ^ L 朗加那素即顯著降低血漿葡萄栌濃 度，且於3小時達其最女笱戈γ = 概吸擠、.…船二❹糖降低活性(圖2)。血漿葡萄 度樂俊3及6小時間反彈，但其後反彈程度實質上 減k，且施用哈朗加那素之小白藏之血漿葡萄糖濃度維 顯著低於僅載劑處理组，即，約降低i5QU/^、，' 達24小時。此等數據顯示1〇〇毫克/公斤單一劑量之队 加那侧齒類抗騰島素，肥胖及励DM模式中可㈣ 低血漿葡萄糖濃度長達24小時。 …f 1Q _ 萄糖處理之效果 本貧驗於db/db小白鼠中採用口服葡萄㈣" ”0GTT")説明哈朗加那素對葡萄糖處理之有利效果。 1 0.1材料及方法 … η以上弟8.1段相同。db/db小白^ 通官經口接受每曰—次接受載劑，共2天施用5，25或 5〇(党克/公斤)哈朗如那素，或美特弗命(25〇毫⑸。 吳耳)/公斤）。動物於接受第三劑該化合物前先斷：一 夜。於貫驗第三天，處评接。丨去 乂 恿理小時，經口給予葡萄糖自 童（2克/公斤）。於施用葡萄糖負荷量（t = 〇)之前，且於 萄糖負荷量^’3〇,6〇及15〇分鐘由尾靜脈取得血液 且分析血漿葡萄糖濃度。結果示於圖3及4。 1 0.2結果 長朗 降 整荷 .裝—— f請先閲讀背面之注意事¾¾寫本頁) 丁 -=•5 -34 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格 (21〇x297At) 五、發明説明（32 / 理(:朗加促那進素用d b / d b小白鼠之0 G T T枝^ 量 &進葡讀由血液中轉移至组織）（圖3·4)。所有劑 德+ : 5 〇毛克/公斤）之哈朗加那素於葡萄糖負荷量 下而卩時間點_著抑制餐後葡萄糖濃度（圖3)。藉由曲線 施用哈朗加丄 Λ ρ<。·01; **”<0.001) 、佳 丨素，口服葡匈糖耐受相對於對照組有顯著改 效果會隨劑量變化（圖4)。此等資料顯示哈朗加那辛 率姨島素，肥胖及―模式中促進葡萄糖利用 ^且改善葡萄糖處理效率。 1 1 ·互T 3 - L 1月對葡萄糖運送女钕耍 7例説明哈朗加那素及維思米亞素於3t3_li脂防細胞 〜匕接刹激葡萄糖運送之能力，該脂防細胞代表哺乳類中 葡萄糖利用及處理之重要作用模式之試管内系統所確認， 且叮於活體中預測化合物降血糖活性之技藝。 11.1材料及方法 經濟部中央標準局負工消費合作社印製 机科動物3 Τ 3 - L 1前脂肪細胞（美國菌種培養收集處 CL lh)維持於含1〇%(ν/ν)補充胎牛血清，抗生素及 —5 m Μ葡萄糖之道貝柯氏（Dulbecco's)改良老鷹培養基 (DMEM)中。細胞接種於24孔培養盤中（ 10,000個細胞/ 孔），生長至群集（典型爲5天），且依弗洛思特（Fr〇st)及蘭 (L a n e )之標準方法（S ·弗洛斯特等，生物化學期刊（j. b i 〇 1. Chem.) 260 : 2646-2652 (1985 ))於群集（〇 天）後2天誘導分 化。分化後，脂肪細胞維持於含丨〇 %胎牛血清之dmem 中且母2 - 3天更換新鮮培養基。本實驗使用之脂肪·細胞 -35- 私紙張尺度適用中囷國家標準（CNS ) Λ4規格（2丨0乂 297公梦_ ) A7 B7 五、發明説明（33 於分化後第7-10天使用。於實驗當天，以磷酸鹽緩衝之食 鹽水清洗脂肪細胞且轉移至不含血清之養基。< 以指定濃度之哈朗加那素及維思米亞素處理脂防細胞（3 重覆）18小時。於三甲亞碟（DMs〇)中新鮮配製哈朗加那素 及維思米亞素之濃度保存液且於培養基中稀釋。DMs〇t 最终濃度爲0.4%(V/V)其亦包含於基礎條件中。處理後γ 夜⑴小時m，吸乾培養基且以克氏—林格希普氏緩衝^ (hebs-Ringer Hepes Buffer)清洗該單細胞層。爲評估, 化合物對基礎葡萄糖運送之效果，於缺乏胰島素刺激下^ 疋2-去氧-D_葡萄糖吸收力（„種葡萄糖運送之指標）。測 定丨8小時暴露於化合物哈朗加那素及維思米亞素是否強化 胰島素之剌激效果，再以〇.5 nM胰島素（次高濃度） 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 處理脂防細胞3G分鐘。於此等分析條件下，Q 5 nM騰島素 剌激葡萄糖運送超過基礎値（典型5 〇毫微莫耳2 _去氧葡萄 糖/1〇分鐘/孔），約200 · 400%且1〇〇⑽月夷島素（最K 效濃度）剌激葡萄糖運送超過基礎値約1〇〇〇 _ 15〇〇%。藉 由添加最終濃^。。"心去氧—叫叫葡萄糖…㈣居^ 升）至各孔後，於22。(；培育1〇分鐘，開始進行葡萄糖 運运分析。精由吸乾培養基且以冰冷磷酸鹽緩衝食鹽水溶 液快速清洗該單細胞層2次而結束分析。單細胞^溶於 〇. 1 N NaQH中，移至閃燦瓿中，且藉由液體閃爍計數測定 放射性。全部數據以2〇〇毫莫耳濃度細胞鬆弛素^處理5分 鐘之平行樣本測得之非專一性六碳糖吸收校正。結果示於 圖5及圖ό。 、D * -36 木纸張尺度適用中'國國家標準（CNS ) Λ4規格（210父297公趋 A7 B7 7、發明説明（34 經濟部.中央標準局員工消費合作社印製 11.2結果 哈二加,素於"，M及3 " M時，於3 T3 _L】脂昉細胞中之 基=糖運送速率(即，不添加胰島素），相對於基礎濃 度增加约250%(圖5 )。維思米亞素於1 ^ Μ時於3 丁3 _L丨脂 肪細胞中之基礎葡萄糖運送速率（即，¥溱力口胰島素），相 對於基礎濃度增加約2 7 5 % (圖5 )。 ' 哈朗加那素（於1及3 V Μ )及維思米亞素（於〗及3 ^ M}於 脂肪細胞中亦使葡萄糖運送系統對隨後以次高濃度之胰島 素（0.5 nM :圖6)之剌激敏感化。〇 3，i及3 " “哈朗加那 素及維思米亞素之葡萄糖運送，相對於胰島素對照纽加強 約6 0至1 00 %。（圖6 )。如熟諳此藝者所肯定，此等數據顯 示哈朗加那素及維思米亞素於試管内直接剌激葡萄糖運 达’此致果與活體中發現促進葡萄糖處理及降低血中葡萄 糖之能力一致。 本發明不限於説明本發明一些觀點之實例中之特定具鹘 實施例1範疇且任何功能上相等之具體實施例均仍在本發 明之範®奇内。確赏，热請此技藝者咸了解本發明除了本文 已顯示及説明外，仍有其他各種更改且仍在申請專利範圍 内0 · 經引用之一些參考文獻及其全部揭示内容均已併爲本文 之參考文獻。 -37 - 本紙掁尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之泣意事項_寫本頁} β 、1Τ 泉

Claims (1)

1. 第86118602號專利申請案 A8 中文申請專利範園倐正太（88年11月） 吾f > uo -η- IX rjj _r . i _ 1 ：8 >8 六、申請專利範圍Γ 1. 一種用於降低哺乳類血中葡萄糖之醫藥組合物，包括哈 朗加那素（harunganin)或維思米亞素（vismin)，或其醫 藥上可接受之鹽。 2· —種用於治療糖尿病之醫藥組合物，包括哈朗加那素成 維思米亞素，或其醫藥上可接受之鹽。 3. 如申請專利範圍第1項之醫藥組合物，其中醫藥上可接 受之鹽選自鈉、钾、鐘、鈣、鎂、鋅及鐵。 4. 如申請專利範圍第2項之醫藥組合物，其中醫藥上可接 受之鹽選自鈉、鉀、鋰、鈣、鎂、鋅及鐵。 --------裝__ f請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 線 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 第86118602號專利申請案 A8 中文申請專利範園倐正太（88年11月） 吾f > uo -η- IX rjj _r . i _ 1 ：8 >8 六、申請專利範圍Γ 1. 一種用於降低哺乳類血中葡萄糖之醫藥組合物，包括哈 朗加那素（harunganin)或維思米亞素（vismin)，或其醫 藥上可接受之鹽。 2· —種用於治療糖尿病之醫藥組合物，包括哈朗加那素成 維思米亞素，或其醫藥上可接受之鹽。 3. 如申請專利範圍第1項之醫藥組合物，其中醫藥上可接 受之鹽選自鈉、钾、鐘、鈣、鎂、鋅及鐵。 4. 如申請專利範圍第2項之醫藥組合物，其中醫藥上可接 受之鹽選自鈉、鉀、鋰、鈣、鎂、鋅及鐵。 --------裝__ f請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 線 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐）