TW297837B - - Google Patents

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A7 B7 五、發明説明\ ) 發明領域 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本發明是有關t黏性棉#之處理，以減少棉繊維上之 黏度，且特別是有關酵素組成物及利用此酵素組成物處理 ^黏性棉#纖維以減少其黏度之方法。 發明背景 .黏性棉'一詞用以指其上有黏性糖沈積之棉纖維， 其係由某種（同翅亞目昆虫）昆虫所分泌（主要是甘薯粉 風 B e m i s i s tabac i (棉粉風）及棉贬虫 Anh i s gossvDDi (棉蚜）），其在打開之圓形莢上的棉鈴上生長。在棉軋 製中黏性棉會造成嚴重問題。這是全世界棉裁培者面對的 問題。 在^黏性棉'之棉纖維上的黏性物質稱爲 '甜液'。 甜液是單一，雙一，三糖以及少量蛋白質及有機酸之複雜 混合物（1 ，2 )。由粉虱產生之甜液典型組成爲 29 . 5%寡糖（包括松三糖），10 . 1%蔗糖， 經濟部中央揉準局員工消费合作社印製 5 . 3%葡萄糖，1 1 . 7%果糖及43 . 1%海藻糖（ 3 )。 在棉上之甜液使其難以軋棉機及紡織廠處理。再者， 存在有此種甜液可加強沾污在纖維上之真菌之微生物醱酵 ，而大大地破壞棉之纖維品質。在軋棉機中，黏性棉會干 擾雜質之移除且軋棉機之翼片需更常清洗，減緩軋棉之操 作•如此顯著減少產力。於紡織廠中，甜液干擾主要的處 理步驟，包括梳棉、併條、粗紡及細紡操作。由於適應高 本紙張尺度適用中國國家揉準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -4 -

經濟部中央標準局貝工消费合作社印裝 A7 B7 五、發明説明（） 速技術，在許多國家中黏性棉是棉產製的主要威脅，且於 織品工業中扮演重要的品質考量。 在減少經感染棉之黏度上，似乎少有研究報告。據報 告將黏性棉加熱至1 3 0 — 1 4 0°C短時間可焦化甜液中 之糖以避免紡紗中之沾黏（4) »應用碳氫化合物及界面 活性劑添加物室棉中據報告也可消除紗線製造中之沾黏問 題（5)。另一個已有的報告的方式是以稀的氫氧化銨或 硝酸銨溶液噴灑在經沾污之棉包上，以加強甜液中糖之微 生物瓦解（2)。其他尙有使用殺虫劑來控制棉之黏度（ 6 ，7 )。使用稱之爲Tempanil之物質，據報告含有葡 萄糖氧化酶，應用至沾污之棉上頃發現可顯著減少可溶性 糖（8 )。並未提及經處理的棉，其黏度有何改變。 Tempanil由二部份組成：一爲葡萄糖氧化酶及觸酶之粉 末製劑；且另一爲非離子及陰離子濕潤劑之液體混合物。 由文獻中可看出，在使用酵素水解甜液之領域中所進 行的極少，除了使用葡萄糖氧化酶。然而，葡萄糖氧化酶 僅可將葡萄糖轉化成葡萄糖酸，在對已知構成黏性棉之糖 並無活性。 存在於甜液中之複雜的低分子量二及三糖，即海藻糖 及松三糖，主要構成經沾污棉之黏性。這些糖含單純的糖 、葡萄糖及果糖，其由《及/3糖苷鍵結連接，示於下： 1 )海蓮糖 —吡喃葡糖基-（ 本紙張尺度適用中國國家揉準（CNS ) A4規格（210X297公釐） )一 D —呋喃果糖 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

-5 - A7 B7 五、發明説明（3 ) Μ )

(2 )松三糖 (〇— α — D -吡喃葡糖基一 0 — ( 1 — 2 ) — 0— D —呋喃果糖基_ ( 3 — 1 ) — a — D —吡喃葡糖葑）

----------裝-^-----訂·------線一^" (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央揉準局貝工消费合作社印裂 不幸的是，存在於甜液中之海藻糖及松三糖均耐受傅 統碳水化合物水解酶之水解。因此，使用此種傳統的碳水 化合物水解酶不會令人滿意地處理黏性棉，即自其嫌維中 移去甜液。 因此，可看出仍極需提供一種組成物，且特別是一種 酵素組成物，可水解或是減少棉纖維上之甜液。進一步可 本紙張尺度適用中國國家梂準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） 83. 3.10,000 經濟部中央揉準局貝工消费合作社印製 A7 _B7_ 五3綱綠U ) 看出仍需有利用此酵素組成物之方法，以處理黏性棉以達 成在其上黏度之減少。 發明要點 本發明主要目的是鑑知及提供一種組成物，且特別是 一種酵素組成物，其可水解及/或減少棉嫌維上之甜液， 以減少此繊維上之黏性。 本發明再一目的是提出處理黏性棉織維之方法，以達 成其上黏性之減低作用。 依據本發明敎示，此中揭示一種可水解及/或減少棉 纖維上存在之甜液之酵素組成物，由是減低其上之黏性° 此酵素組成包括至少一種衍自眞菌來源之水解酶。 較好，酵素組成之水解酶衍自曲霉屬之眞菌。更好， 此種水解酶衍自黑曲霉菌株（Aspergillus niger)。最 好，水解酶衍_自黑曲霉（臭的）之眞菌株，其以編號 1 4 9 1 6貯量於美國標準菌種收集所（ATCC)。 欲包括於本發明酵素組成物中之衍自眞菌來源之較佳 的水解酶包括轉葡糖酶（α — 1，4及or — 1，.6 )及果 膠酶。 進一步依據本發明之敎示，此中揭示處理（酵素性處 理）黏性棉嫌維之方法，以達成其上黏性之減低。此方法 包括將該棉縝維與酵素組成物接觸，其中包括至少一種由 眞菌來源衍生之水解酶。 較好，方法中應用具水解酵索之酵素組成物，其衍自 本紙張尺度適用中Η國家揉準（CNS > Α4规格（210Χ297公釐） 83. 3.10,000 -----------裝-1-----*·1τ------線-'η\ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央揉準局貝工消費合作社印裝 A7 B7__ 五、發明説明（5 ) 曲霉屬眞菌。較好，此水解酶衍生自黑曲霉。更好，水解 酶衍自黑曲霉（臭的），其已在1 4 9 1 0下貯於 A T C C 中。 本發明酵素組成物中欲包括之衍自眞菌之較佳水解酶 包括有轉葡糖苷酶（α — 1，4及1，6)及果膠酶 Ο 又依據本發明進一步之敎示，此中指示至少一種衍自 眞菌來源的水解酶，其製成可至少部份水解棉嫌維上甜液 之酵素組成物之用法，由是減低棉織維上之黏性。 較好，用於上述水解酵索中之酵素組成，係衍自曲霉 靥。較好，此水解酶衍自黑曲霉。更好，此水解酶衍自黑 曲霉（臭的）眞菌，其已以1 4 9 1 6號貯置於ATCC 中。 欲包括於本發明酵素組成中，衍自眞菌源之較佳的水 解酶包括轉葡糖苷酶（α-l，4及π — 1，6)及果膠 酶0 本發明這些及進一步的目的及儍點由以下說明配合所 揭示之附圖可更容易明瞭。 附圖說明 圖1 Α及1 Β爲在0及1 7小時時分解水解甜液之 HP LC屉析譜，其依如實例1所述，將由黏性（沾污的 )棉嫌維中萃取之甜液行酵素水解試驗而得。 IB2A，2B，2C及2D爲如實例2所述，分別在 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4规格（210X297公釐） 83. 3.10,000 --.-------裝 4-----訂--^----線一 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央揉準局貝工消費合作社印裝 A7 __ _B7_ _ 五、發明説明（6 ) 〇、1小時、4小時及2 0小時時由轉葡糖苷酶水解蔴糖 之HPLC謄析譜。 圖3A，3B，3C及3D爲如實例2所述，分別在 〇、1小時、4小時及2 0小時時由轉葡糖苷酶水解松三 糖之HPLC餍析譜。 圖4 A及4 B爲如寅例2所述，在〇及4小時時分別 由轉葡糖旮酶水解海藻糖之Η P L C屉析譜。 圖5 Α及5 Β爲織維經衍自黑曲霉之果膠酶製劑處理 > 後，所萃取出之糖之HPLC層析譜。％未處理的'係指 於表2中之檢査用樣品。tBoora + Duct〃係指在二說明 中相同的複版。 圖6是一圖表以說明本發明酵素組成物之效力，其中 X軸是熱偵測器刻度，Y軸是在籽棉中之水百分率，實心 (或黑色）點及線將其連接代表使用含1 % ( v/v )轉 葡糖苷酶L 一 1 0 0 0製劑之酵素組成物所得之結果，空 心（或白色）點及線將其連接代表使用含2 % ( v/v ) 轉葡糖苷酶L— 1 0 0 0製劑之酵素組成物所得的結果， 且三角形及線連接代表使用標準品所得之結果。

圓7是一圚表說明本發明酵素組成物之效力，其中X 軸是小卡紙的刻度，Y軸是籽棉中水百分率，實心（或黑 色）點及線迪接表示利用含有1 % ( v/v )之轉葡糖苷 酶L—1 〇 〇 0製劑之酵素組成物所得的結果，空心（白 色）點及線連接代表以含有2 % ( v/v )轉葡糖苷酶L

I - 1 0 0 0製劑之酵素組成物所得的結果，且三角形及線 本紙張尺度適用中國國家揉準（CNS ) A4规格（210X297公釐） 83.1 10,000 ---r-------裝·{-----訂-------線一 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局属工消費合作社印裂 A7 B7 五、發明説明（7 ) 連接表示以標準品所得之結果。 圖8是一圖表說明本發明酵素組成物之效力，其中X 軸是熱偵測器刻度，且Y軸爲小卡紙之刻度。 r 圖9是橫線圖進一步說明本發明含有轉葡糖苷酶L 一 1 0 0 0製劑之酵素組成物之效力，其己噴灑在各種潘潮 水平，並培育2週，其中X軸是熱偵測器刻度，且進一步 其中的最左手測之横線代表一個乾燥的檢査組（即，檢査 樣品既無濕氣也無酵素），其中緊鄰其右之横線代表有1 % H) / v ) H2〇但無酵素之濕的檢査組，其中緊鄰其 右的代表有 1 0% (v/v) H2〇 及 0 . 2 6% (v/ v )轉葡糖苷酶L— 1 0 0 0製劑之濕的檢査組，其中緊 鄰其右的代表具1 2% (v/v) H2〇及0 . 2 5% ( v/v )轉葡糖苷酶L— 1 0 0 0製劑之濕的檢査組，其 中緊鄰其右的代表具有1 0% (v/v) H2〇及0 . 5 % ( v/v )轉葡糖苷酶L — 1 0 0 0製劑之濕的檢査組 ，且其中緊鄰其右的（最右手側之橫線）代表具有12 % (v/v ) H2〇 及 0 . 5% (v/v )轉葡糖苷酶 L — 1 0 0 0製劑之濕的檢査組。 發明之詳細說明 本發明新穎的酵素製劑（組成物）包括可經由水解甜 液中之糖減低棉織維黏性之酵素，較好是海藻糖及於三糖 。再者，如此中所揭示的這些糖類之酵素水解方法，造成 的沾污之棉黏性之減低。其對全世界棉栽培者提供對主要 本紙張尺度逍用中國國家梯準（CNS ) A4规格（210X297公嫠） 83. 3.10,000 —；—：-----裝 A-----訂—^----線一0 (請先閲婧背面之注意事項再填寫本頁) -10 - 經濟部中央揉準局負工消費合作社印«. A7 B7_ 五、發明説明（8 ) 問題一個簡易、經濟及安全的解決之道。 吾等已鑑知可行此種水解作用之酵索爲道些水解酵素 ，其衍自眞菌來源且更特別的是曲霉扃之眞菌。最好道些 水解酵素衍自黑曲霉，如黑曲霉（臭的）在ATCC中以 1 4 9 1 6號貯置。 本發明的水解酵素，當納入本發明組成物中爲可水解 糖之酵素（糖指海藻糖及松三糖），包括衍自眞菌來源之 轉葡糖苷酶，果膠酶、α -半乳糖苷酶及葡糖澱粉酶，但 亦不限於此。 此種轉葡糖苷酶之實例有轉葡糖苷酶，4，衍 自黑曲霉ATCC 1 4 9 1 6，轉葡糖苷酶α_1，6 ，衍自黑曲霉ATCC 1 4 9 1 6，及以1以1^8丨11(：〇-sidase L - 1 0 0 0商品名上市之轉葡糖苷酶組成物（ SOLVAY ENZYMES, INC., Elkhart, Ind.) 〇 此種果膠酶之實例爲商品名PEAREX 5X及CLAREX-ML上市之果膠酶組成物（SOLVAY ENZYMES, INC.,

Elkhart, Ind. , U.S . A · ) 〇 « _半乳糖苷酶之實例是衍自黑曲霉之α -半乳糖苷 酶（以 BEANO 商品名上市，AK PARMA INC. , USA〉〇 葡糖澱粉酶的一個實例是衍自黑曲酶ATC C 14916之葡糖澱粉酶。 依據本發明原則，使用水解酵素以製成水解棉級維上 甜液之酵素組成物，由是棉嫌維之黏性可減少。基於此， 酵素（或酵素製劑）與可接受之載劑混合或調和，其可令 本纸張尺度逍用中國國家梂準（CNS ) A4规格（210X297公釐） 83. 3.10,000 -----.-----裝4-----,·ΤΓ!----線 1C' (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -11 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（9 ) 生成之酵素組成物應用在棉纖維上，如此其上之甜液被水 解並自此中移除。 可被利用於本發明酵素組成物中之載劑寅例包括水。 其他型式之載劑包括沾濕劑，如TR1T0N-X-100(UNI0N CARBIDE )。欲利用之精確載劑可依使用中酵素組成物應 用之環境而變化（如欲求之接觸時間，接觸中環境條件， 等）〇 欲被利用於本發明酵素組成物製備中之酵素或酵素組 成物對載劑之精確澳度及比率是決定技藝中技術之內的。 較好，酵素（或酵素製劑）利用方法混合於載劑中， 如搅動，此爲技藝中爲了溶解已知的及/或可充份及實質 如均勻抻合組份至實質上均質之組成物中。 在進一步依據本發明原則中，本發明之酵素組成物可 用於處理其上有甜液之棉織維。此處理方法包括將棉織維 與本發明之酵素組成物接觸一段足以至少令甜液部份水解 之時間。此處理方法進一步包括接下來自酵素組成物中移 去棉織維，由是經水解之甜液可保留於酵索組成物中。以 此方式，可提供棉織維上甜液之減低作用。 如上示所述，本發明之酵素組成物及其用法，可用手 處理仍在田困之棉纖維或已收穫者。 於前一例中，酵素組成物可以經衍施用或其他任何適 合的裝《，如噴霧器，其可將液體酵素組成物分佈（較好 是實質上均匀之分佈）在棉嫌維上。於此一例中，希望棉 纖維可再自酵素組成物中移出，可利用造成酵素組成物自 本纸張尺度適用中國國家揉準（CNS )_A4規格（210X297公釐) 83.3.10,000 I-.--.-----裝-f-----訂-------線一^7' (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) * 12 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印装 A7 B7 五、發明説明（l〇 ) 棉纖維滴下之重力，以蒸發作用以及以自然沈澱作用◊若 必要時，棉織維接下來之沾濕或浸泡（在其收穫之前及/ 或之後）也可採用，以進一步自所處理之棉娥維上移除本 發明之酵素組成物。 於後一例中，酵素組成物之施用可將收穫之棉織維浸 於適當的容器中，其中含有本發明之酵素組成物。另外， 酵素組成物可經由使用適當的（及一般的）裝世，如氣壓 式噴耪鎗，而施用在棉纖維上。同時，將酵索組成物僅採 傾倒方式於棉織維上也足夠。再次地，希望棉嫌維可再移 出酵素組成物中，利用造成酵素組成物自棉織維中滴下之 重力，蒸發，自然沈澱及/或接下來沾濕或浸泡棉纖維以 進一步移去經處理之棉纖維中所含的本發明之酵素組成物 0 酵素組成物與其上有甜液之棉織維接觸停留之時間， 依據（尤其是依據）量以及欲求之水解作用完全程度而變 化，但此可由精藝者十分容易地決定。此中希望此種接觸 可少至1 0分鐘或長至欲求時間，接觸時間多至數天或數 週也是可能。然而，此中希望以1 8小時之最少接觸時間 爲較佳。 即已大體上描述本發明之組成物及方法，進行以下實 例之參考說明，實例僅供說明不欲予以限制。 窗例1 1 5克沾污有甜液之棉樣品，以5 0 eC的6 0 0毫升 本紙張尺度適用中國國家揉準（CNS > A4規格（210X297公釐） 83. 3.10,000 -----.-----裝从-----訂--^-----線一^1 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -13 - 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（11 ) 水萃取◊萃取再重覆三次。各次萃取包括沾濕棉並混合 1 5分鐘，以手壓擠出棉內之水。萃取物混合並於旋轉膜 蒸發器中以眞空方式濃縮成約1〇毫升。此萃取物再用來 篩選可水解甜液之酵素。 爲測試水解酶活性，將PH4 .5之0 .5毫升萃取 物在5 0°C下與0 . 0 2毫升轉菊糖苷酶L — 1 0 0 〇製 備共培育1 8小時，後者由黑曲霉選出之菌株產生，其則 以ATCC No . 1 4 9 1 6貯於美國標準菌種收集所 ，Rockville, Maryland, U.S.A (此株有時分類爲臭曲霉 —員），且其培養於適合的營養肉汁中。反應中止是移去 〇 . 2毫升反應樣品並置沸水浴中歷1 0分鐘。冷卻後加 入0 . 3毫升的0 . 0 IN H2S〇4。此混合物再於 Eppenaorf桌上型離心機中離心，且上清液經由0 . 4 5 微米濾膜過濾證明之。再進行HPLC分離，0 . 0 2毫 升樣品在 6 0°C 之 Bio-Rad HPX-87H 管柱（Bio-Rad USA )上進行，利用移動相0 . 0 1 N H2S〇4，流速 0 · 7毫升/分。以Erma RI偵測器ER— 7 5 1 2機型 (Erma CA, Inc. Tokyo,日本）來偵測糖。甜液萃取物 分配至峰中，其中葡萄糖及果糖在最後二峰中。管柱中分 離條件，即低p Η値及高溫可使蔗糖水解。在HP L C中 應用的條件下，對於酵索存在下蔗糖的命運並未十分被了 解。由文獻中知道，甜液中寡糖之組成主要是葡萄糖及果 糖之聚合物。因此，可水解寡糖的任何酵素，均可達成葡 萄糖及/或果糖之增加，在寡糖部份中則相對的減少。 本纸張尺度適用中國國家揉準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 83. 3.10,000 I 裝A钉 ^ 線 ^ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -14 - 經濟部中央標準局爲工消费合作社印製 A7 __B7_ 五、發明説明（12 ) 分離自黑曲霉變種相同選擇株之轉葡糖苷酶，如上述 般測試，即加2 0單位的轉葡糖苷酶至甜液萃取物中（ 0 .5毫升體稹）。1單位轉葡糖苷酶定義爲，在分析條 件下（此中以麥芽糖及受質）每分鐘產生1微莫耳6 — α -葡萄基麥芽糖所需之酵素置。此分析中HP L C層析譜 之影本示於圖1，其中甜液在0時及1 7小時後水解。圖 1清楚地顯示，一旦甜液之寡糖水解，單糖（葡萄糖及果 糖）會增加。 賨例2 蔗糖、松三糖及海蕩糖之轉葡糖锊醅7k解作用 甜液據報告含有蔗糖、松三糖及海藻糖（7)。由 於以Bio-Rad HPX-87H管柱之HP LC條件可水解蔗糖， 發現另一HP LC管柱，其操作條件無法水解蔗糖。頃發 現，Bio-Rad Bio Sil 5S管柱可使寡糖及單糖有極佳的分 離，但不會水解蔗糖，其中所使用之移動相由6 8% (v /v )乙睛及3 2% ( v/v )水組成。管柱在2 5°C下 操作，使用移動相及9 8毫升/分之流速。2 0微升的4 %DS (乾物質）樣品足可有良好的分離。 於酵素水解中，各糖（AC S級或所指示之來源）在 〇 . 〇 2M醋酸塩緩衝溶液，pH5 · 0製成4%溶液。 水解在5 0°C下進行，利用1 0毫升受質及5 0單位的轉 葡糖苷酶。反應之中止是將水解物置沸水浴中10分鐘。 在注入HPLC之前，水解物經由0.45微米濾膜過濾 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 83.3.10,000 裝从-----訂--.----線一0 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -15 - 經濟部中央揉準局貝工消費合作社印裝 A 7 Λ B7 _2^78^?------ 五、發明説明（13 ) 。圖2 _ 4示出簾糖、海藻糖（SIGMA CHEMICALS)及松 三糖（得自 W B MILLER之禮物，Clemson University) 分別爲轉葡糖替酶水解之層析圖。結果清楚地說明，鹿糖 、松三糖及海藻糖及轉葡糖@酶製劑水解成葡萄糖及果糖 Ο 道些觀察是獨特的，因爲通常轉葡糖苷酶水解麥芽糖 ，並將一個葡萄糖基殘基轉移至另—麥芽糖上形成1 — 6 連接，產生6 — β 一葡萄基麥芽糖。使蔗糖、海藻糖及松 三糖三種糖水解變得如此不尋常的原因是其均由葡萄糖及 果糖組成，即蔗糖（1^ 2)〕，海藻 糖〔agluc( 1 — 2 )〕々fruc( 3->1 ) orgluc〕，及 松三糖〔agluc( 1 — 1 ) f rue〕。 官例3 以商品化之果膠涵製劑水解甜液 得自實例1所述經沾污（'黏性的之棉之甜液萃 取物，用來測試含有各種眞菌酵素活性之各種商品化酵素 製劑。如上實例1所述之相同步驟，用來測試這些酵索在 甜液上之水解活性。 爲檢査由於甜液水解所造成的單糖（葡萄糖及果糖） 之發展，以RT7 . 2 2處峰之減少作爲甜液水解之指示 (見圖1 )。 發展品質等級以定訂出甜液及本發明各種酵素組成物 酵素水解之效力。等級定爲由0至3，0 (_)表示約0 本紙張尺度適用中國國家揉準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） 83.3.10,000 裝M------1T--；----線丨η' (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -16 - A7 B7 五、發明説明（14 ) —1 0%水解，1 ( + )表示約1 〇 — 4 0%水解，2 ( + +)表示約4 0 — 7 0%水解，且3 (+ + +)表示約 7 0 — 1 0 0%水解。這些分析的結果綜合於表1。 (锖先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) .裝Jk-----訂—------線 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 83. 3.10,000 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -17 - A7 B7 五、發明説明（// ) 表 1 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 以不同的酵索及酵索製劑處理甜液 酵索 供應商 微生物來源 水解指數 果膠酶 (CLAREX-ML) SOLVAY ENZYMES USA - 黑曲霉 十十 果膠酶 (PEAREX 5X) SOLVAY ENZYMES USA 黑曲霉 ++十 果膝酶 (Suraizynie-AP-I I) SHIN NIHON CHEMICAL 日本 黑曲霉 ++十 轉葡糖彌 L-100 SOLVAY ENZYMES USA 里曲道 ATCC 14916 +-H- mmmm (Amano) AMANO INTERNATIONAL 日本 里曲想 -HH- 麟糖 (DIAZYME) SOLVAY ENZYMES USA 黑曲霉 ATCC 14916 + α-半髓彌 (BEANO) AK PARMA INC. USA 黑曲霉 + 轉葡糖挪 α-1,4 SOLVAY ENZYMES USA 黑曲霉 ATCC 14916 + 83. 3.10,000 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -I? 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（16 ) 實例4 果瞜酯酶棄組成物之野地應用 呈液體型式之Sumizyme-AP-II，在使用前稀釋成其原 先濃度之 2% ( v/v )，以含TRITON X-100(UNI0N CA-RBIDE)0 . 2 5% ( v/v )之自來水稀釋，其中pH値 以充份的醋酸降至4 . 5。此混合物應用至爲棉粉虱甜液 沾污之棉上，係在其收獲時以噴嘴噴涵，如此回收之籽棉 可爲此溶液沾濕。已知棉採拾機之速度，可調整噴瀾線上 之壓力，使每英畝的棉有約3 0加侖（US )的此混合物 。進行這些試驗的野地產率爲每英畝有約3 0 0 0磅籽棉 Ο 採拾機在這些實驗中採用國際收稹機（Inter national Harvester) 4 2 2 機型 ，其包括一 個小的 （ 1 4 US加侖）的塑膠桶、壓力調控器、球型的流動閥，及在 靠近傳動輪處架上濾器以保持住酵素溶液。由此桶中，混 合物可在各種壓力下（約4 0 p s i )泵送至噴嘴，以產 生欲求之應用速率。噴灑之噴嘴置在桁上，其再架於（金 屬支持結構）採拾機頭部前方，如此在進入採拾機（衍處 理〉之前，棉可以細小霧水噴灑。用來試驗果膠製劑的另 一應用方法，是經由齊平面架上之噴嘴噴灑在已收獲之棉 上，此直接可通至管子，其可將已收獲之籽棉由採拾頭部 傳送至位於採拾機上方傳動輪後方之貯存倉（稱爲籃）之 中 Ο 噴灑後，樣品立即自採拾機籃中移出，並置入不透氣 本纸張尺度適用中國國家揉準（CNS ) A4规格（210X297公釐） 83.3.10,000 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝-f-----訂--：-----線一0 -19 - 經濟部中央揉準局属工消费合作社印製 A7 B7 五、發明説明（17 ) 容器中以決定所施用之水汽（且由是可決定所加入之有效 酵素，因假設酵素在潮濕狀況下才有效。這些樣品再稱重 ，於氣動力之1 0 5°C烘箱中乾燥一夜，並再次稱重以決 定其水汽含量。未處理的樣品另外取樣，並決定噴灑添加 之效力。 爲決定在甜液中糖上之作用及所收獲棉之黏性本質， 自採拾機之籃中再採取額外的樣品，置於緊密並包覆之塑 膠桶中（21?10(^袋），將之置環境溫度下（約8 5 — 1 Ο 5T)培育2天，之後籽棉自塑膠袋中移出並於熱的 ，無水空間中乾燥（無空調的溫室，具溫度範圍爲約 1 1 5 — 1 6 0°F，且濕度十分低），直到爲恆重爲止。 樣品再以實驗室規模的小的棉軋棉機軋壓，並取1 〇克線 頭（即棉織維）以HPLC分析糖。其餘的線頭送至實驗 室（Dr. Henry H. PERKINS, Jr. in Clemson， S. C.) 以分析還原糖及黏度，利用Minicard試驗分析。後一試 驗如在美國所應用的，具有〇至3之等級，〇代表無黏性 之棉，且3表示最黏的棉。應用果膠酶酵素組成物可使黏 性等級由在桁應用時之2 . 7 5±0 · 2 9 (平均値土 3£]^[)減至0.5土0_2 9等級°當噴灑至输送管， 黏度降至0 . 2 5 土 0 . 〇 〇之Minicard等級，且當噴 灌二處時，黏度等級爲0 . 〇 〇 土 〇 . 〇 0。這些結果綜 合於表2中。 於表2及圓說明之實驗中以未經噴灑的棉爲對照組’ 其反映在複品之相對水含量上（表2) ° 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 83. 3.10,000 I„--.-----裝-f-----訂--：-----線 ~^ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -20 - A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（18 ) 表 2 處理 M i n i c a r d 等 級 糖百分率 水汽百分率 檢査 2.75 土 0 . 29 0.76 土 0 . 06 0.15士 〇 . 07 得自桁 0.50土 0 . 29 1·1 士 0 . 11 5.60土 〇.08 得自輸送管 0.25 土 0 · 00 0 · 87 土 0.02 12 · 65土 0·03 桁+輸送管 0.00 土 0 . 00 0.57 土 0 . 01 12 . 43 ± 0 · 33 數據爲4次重覆樣品之平均値士 S . E。挑出處理之 經標記檢査，並不加酵素，其他處理則在收獏時以溶液噴 灑，此溶液含有2%(v/v)酵索製劑，0 . 25%( v/v)界面活性劑，於醋酸之弱溶液中（pH約4 . 5 )0 賨例5 轉葡糖苷酶酵素組成物之野地應用 轉葡糖苷酶L - 1 0 0 0，得自SOLVAY ENZYMES, INC,(Elkhart, IN)，呈液體狀而於使用前才用水稀釋至 〇 . 2 5至1% (v/v )各濃度，此稀釋之水含有 〇 . 2 5 % ( v / v ) Triton X-100(UNI0N CARBIDE) » 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 83.3.10,000 - , -----------裝-f-----钉--：----線1「' (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -21 - 經濟部中央標準局貝工消费合作社印製 A7 ___B7_ 五、發明説明（19 ) 其P Η値並以充份的醋酸降至4 . 5。此混合物應用於爲 棉粉虱甜液的沾污之棉上，係在其收獲時以噴嘴噴灑，如 此回收之籽棉可爲此溶液沾濕。已知棉採拾機之速度，可 調整噴灑線上之壓力，使每英畝的棉有約3 0加侖（US )的此混合物。進行這些試驗的野地產率爲毎英畝有約 1，600至3，400磅籽棉。 在此實驗中採用機型爲4 2 2及7 8 2之國際收稹機 。ΙΗ 4 2 2機型有一個小的（1 4US加侖）的塑膠 桶、壓力調控器、球型流動閥，及在靠近傳動輪處架上之 濾器以保持住酵素溶液。由此桶中，混合物可在各種壓力 下（約4 0 p s i )泵送至噴嘴，以產生欲求之應用速率 。111 782機型使用採拾機之水供應槽（約50 US加侖）爲噴灑之水源。在二種採拾機中，噴灑之噴嘴 置在桁上，其再架於（金靥支持結構）採拾機頭部前方， 如此棉在進入採拾機之前（桁處理）可以細小霧水噴灑。 用來試驗轉葡糖苷酶L— 1 0 0 0製劑的另一應用方法， 是經由齊平面架上之噴嘴噴灑在已收稹之棉上，此直接可 通至输送管，其可將已收稷之籽棉由採拾機頭部傳送至位 於拾機上方傳動輪後方之貯存倉（稱爲籃）之中。 噴灑後，重覆樣品立即自採拾機籃中移出，並置入不 透氣溶器中（雙重的唇封四分之一加侖之漆罐）以決定所 施用之水汽（且由是可決定所加入之有效酵素，因假設酵 素在潮濕狀況下才有效）。這些樣品再稱重，於氣動力之 10 5°C烘箱中乾燥一夜（至少8小時），移出，再冷卻 本紙張尺度適用中國國家揉準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 83. 3.10,000 —I.--^-----裝-{-----訂-------線丨( (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -22 - 經濟部中央梯準局負工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（20 ) 於大的充滿乾燥劑之金屬盒中，且再稱重以決定其水汽含 量。此水百分率估計以A S TM試驗方法進行，利用濕重 爲分母。未處理的樣品另外取樣，且以等置水加上醋酸及 三通X — 1 0 0噴灑者也取樣，並決定噴灑添加之效力。 爲決定轉葡糖苷酶對甜液中糖之作用，及所收穫棉之 黏性本質，自採拾機之籃中再採拾額外的樣品，置於緊密 包覆之金靥桶中，其可在環境溫度下（約8 5 — 1 0 5 °F )培育各種時間，由2 4小時至5週，之後杆棉自金屬桶 中移出並於熱的，無水空間中乾燥（無空調之溫室，且溫 度範圍爲約11 5 — 1 0 6°F，且濕度十分低），直到恆 重爲止。樣品再以實驗室規模的小的軋棉機軋壓，並取1 〇克線頭（即棉纖維）以HPLC分析糖。其餘的線頭送 至實驗室（Dr. Henry H. PERKINS, Jr., USDA-ARS, C1-erason, S. C.)以分析還原糖及黏度，利用Minicard試 驗及Therraodetector試驗。注意到Minicard試驗，如美 國中應用的有0至3之等級，其中〇代表無黏性棉，且3 爲最黏著，且Thermodetector試驗有約1 0倍更髙之等 級（即，3 . 0 之 Minicard 等級極接近 3 OThermodete- ctor等級）。雖然這些試驗得相當的結果，然而後者多少 快些可以極黏樣品供應，且如此以致在1 9 9 3之手冊中 大部份用來評估黏度。 額外的籽棉批次可在野地經轉菊糖苷酶L- 1 〇 〇 〇 溶液，或等量的含醋酸及三通X — 1 〇 〇之水，以和酵素 溶液相同速率下喷後處理成棉％單位'。這些單位貯於環 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 83. 3.10,000 ----：-----裝 4------ΪΤ-------線 1(；' (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -23 - 經濟部中央標準局員工消费合作社印製 A 7 B7 五、發明説明（21 ) 境溫度下（約7 0_ 1 0 5°F)約1週，再行商品化軋壓 &移去籽。樣品在這些商品化單位製備中，軋製前及移去 #後在軋棉機中之線頭側取樣。道些樣品之黏度，在軋製 中爲2 1 . 67±1 . 20 (平均土 SEM)，是自單位 Φ移出之單以水處理之樣品，一其並在實驗室規模之軋棉 機中軋製；0 . 0 0 土 0 . 0 0爲經轉葡糖苷酶L — 1 〇 0 0處理之籽棉：4 · 1 0 土 0 . 7 9爲以水處理自 軋棉機線頭側取出之籽棉（於籽移去後立即取出）；及 〇 . 2 5±0 . 1 6爲轉葡糖苷酶L—1 0 0 0處理且取 自線頭側之籽棉。 很明顯的，只要不破壞本發明精神可進行許多樊化。 因此，精藝者應明白，在所附申請專利範圍之內，本發明 可在此中所將示之外實行。 參考文獻 1 -BATES, R. B., D. N. BYRNE, V. V. ΚΑΝΕ, ¥. Β. MILLER and S. R. TAYLOR, Carbohydrate Res. ( 2 0 1 ) ,3 42 - 345 ( 1 990 ). 2- HEUER B . , Z. 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Cotton Fibers Trop. 40(2) 105-11(1985). 7- BRUNO, G. P., Industrial Cotonier 2L5_ 227-230 ( 1 982 ). 8- HENDRIX, D. L., Y. WIS., Proceedings of the Beltwide Cotton Production Conference, 2. 671-673 (1 992 ). I~.--^-----裝-f-----、-1T--Γ----線—「 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 83. 3. 10,000 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 25

Claims (1)

1. 297837 A8 B8 C8 D8 修正丨 六、申請專利範圍 附件二A 第83103758號專利申.請案 中文申請專利範圍修正本 民國8 5年3月呈 1·一種可減少經沾污之黏性棉之黏度的酵素組成物 ，其中含有至少一種來自曲霉屬之眞菌的酵素，其可水解 經沾污的黏性棉中至少一種甜液糖，且提供其黏性之減低 作用。 t 2 .如申請專利範圍第1項之酵素組成物，其中的眞 菌來源是黑曲霉之眞菌。 3 .如申請專利範圍第1項之酵素組成物，其中的酵 素包括轉葡糖苷酶。 4 .根據如申請專利範圍第1項之酵素組成物，其中 的酵素包括果膠酶。 5 .—種能水解經沾污之黏性棉上至少一種甜液糖之 酵素，其可用於製成酵素組成物以減少經沾污之黏性棉之 經濟部中央梯準局員工消費合作社印製 (婧先閲讀背面之注$項再填寫本頁) ‘黏性，其中該酵素係來自曲霉屬之眞菌。 6 .如申請專利範圍第5項之酵素，其中眞菌來源是 黑曲霉之眞菌。 7 .如申請專利範圍第5項之酵素，其爲轉葡糖苷酶 Ο 8 ·如申請專利範圍第5項之酵素，其爲果膨酶。 _9 · 一種處理其上有甜液之棉纖維之方法，此方法包 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）

   Α8 Β8 C8 D8 π、申請專利範圍 括將骸棉纖維與酵素組成物接觸，後者包括有至少一種可 水解經沾污之黏性棉上至少一種甜液糖之酵素，由是甜液 可至少被部份水解，且減少在沾污棉上之甜液。 1〇 .如申請專利範圍第9項之方法，其中酵素包括 衍生物自眞菌來源之酵素。 11.如申請專利範圍第10項之方法，其中眞菌來 源是曲霉靥之眞菌。 1 2 .如申請專利範圍第1 1項之方法，’其中眞菌來 源是黑曲霉屬之眞菌。 13 .如申請專利範圍第9項之方法，其中酵素包括 轉葡糖苷酶。 14 .如申請專利範圍第9項之方法，其中酵素包括 果膠酶。 (請先閏讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐）_ 2 -