TW202413635A - 複製缺陷型單純疱疹病毒第１型病毒疫苗 - Google Patents
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Abstract
本發明提供一種複製缺陷型HSV-1病毒疫苗，該複製缺陷型HSV-1病毒疫苗包含經修飾的HSV-1基因組和至少一種抗原。該修飾包括內部重複序列的缺失、ICP47中的失活突變和ICP4的另一拷貝中的失活突變。該至少一種抗原的第一抗原是由立即早期基因如ICP4的啟動子所驅動。在具體的實施例中，該HSV-1病毒疫苗表現來自SARS-Cov、SARS-Cov-2以及其變異株的抗原，並用於在施用該疫苗的受試者中誘導針對沙貝病毒的免疫反應。
Description
本公開涉及遞送來自非單純疱疹病毒第1型(non-HSV-1)微生物(例如，病毒、細菌或寄生蟲)的至少一種抗原的複製缺陷型HSV-1疫苗，並且特別地涉及表現來自SARS-Cov、SARS-Cov-2以及其變異株的刺突糖蛋白(spike glycoprotein)之結構域的複製缺陷型HSV-1病毒疫苗。本公開還涉及一種包含該病毒疫苗和醫藥上可接受的載體的疫苗組合物。本公開進一步涉及一種用於在受試者中誘導針對沙貝病毒(sarbecovirus)的免疫反應的方法。
2019冠狀病毒疾病(COVID-19)是由嚴重急性呼吸道症候群冠狀病毒2型(SARS-Cov-2)或其變異株引起，其在人類中的感染引起輕度或重度臨床表現，主要影響呼吸系統。SARS-Cov-2在其表面含有刺突(S)糖蛋白，該糖蛋白是目前疫苗研發的主要靶標，因為針對該蛋白質的抗體可中和感染。各公司和學術機構已經研發了基於S糖蛋白以及其抗原結構域和表位(epitopes)的疫苗，已經證明了這些疫苗在產生中和抗體方面是有效的。然而，新SARS-Cov-2變異株的出現可能會影響疫苗的有效性。鑑於病毒的持續進化，泛沙貝病毒(pan-sarbecovirus)疫苗將是理想的。
本公開的第一方面涉及複製缺陷型單純疱疹病毒第1型(HSV-1)病毒疫苗，該複製缺陷型HSV-1病毒疫苗包含經修飾的HSV-1基因組和至少一種抗原，其中修飾包括：內部反向重複區(internal inverted repeat region)的缺失，該缺失導致包括ICP0、ICP34.5、ICP4和潛伏相關轉錄本(latency-associated transcript，LAT)的雙拷貝基因中的每一者的一個拷貝的缺失；ICP47中的失活突變(inactivating mutation)；和末端重複序列中ICP4的另一拷貝中的失活突變，並且其中該至少一種抗原的第一抗原是由野生型HSV-1的立即早期基因(immediate early gene)的啟動子所驅動。
在一些具體實施例中，該野生型HSV-1的立即早期基因是ICP0、ICP27、ICP4、ICP22或ICP47。在一些具體實施例中，該野生型HSV-1的立即早期基因是ICP4。
在一些具體實施例中，該末端重複序列中ICP4的另一拷貝中的失活突變是ICP4的編碼序列中的缺失。在其中ICP4編碼序列中發生缺失的一些具體實施例中，該至少一種抗原的第一抗原與該末端重複序列中ICP4的啟動子可操作地連接。
在一些具體實施例中，該至少一種抗原的第一抗原與驅動啟動子一起被插入到對應於所缺失的內部反向重複區的位置。
在上述具體實施例中的任一者中，該複製缺陷型HSV-1病毒疫苗進一步包含融合到第一HSV-1糖蛋白中的第二抗原。
在上述具體實施例中的任一者中，該複製缺陷型HSV-1病
毒疫苗進一步包含融合到第二HSV-1糖蛋白中的第三抗原。
在一些具體實施例中，該第一HSV-1糖蛋白或第二HSV-1糖蛋白是糖蛋白gC或gE。
在一些具體實施例中，改變糖蛋白gC以使C3結合失活，並且其中改變糖蛋白gE以使FcR結合失活。在一些具體實施例中，糖蛋白gC在C3結合結構域中含有缺失，並且其中糖蛋白gE在FcR結合結構域中含有缺失。
在一些具體實施例中，該第一抗原在N末端與糖蛋白gB或gD訊號胜肽連接，並且在C末端與糖蛋白gB或gD的跨膜-病毒粒子內結構域(transmembrane-intravirion domain)連接。
在一些具體實施例中，該第一抗原、該第二抗原或該第三抗原來自病毒、細菌或寄生蟲。在一些具體實施例中，該第一抗原、該第二抗原和該第三抗原來自沙貝病毒。在一些具體實施例中，該第一抗原、該第二抗原和該第三抗原來自SARS-Cov、SARS-Cov-2以及其變異株。在一些具體實施例中，該第一抗原來自SARS-Cov-2的delta或omicron變異株，並且第二抗原和第三抗原來自SARS-Cov、SARS-Cov-2以及其變異株。在一些具體實施例中，該第一抗原來自SARS-Cov-2的delta變異株，該第二抗原來自SARS-Cov Tor2株，以及第三抗原來自SARS-Cov-2 Wuhan-Hu-1株。
在一些具體實施例中，該第一抗原是SARS-Cov-2的delta變異株之刺突糖蛋白的胞外結構域(ectodomain)或其免疫原性等價變體。在一些具體實施例中，該胞外結構域或其免疫原性等價變體在N末端
與糖蛋白gB訊號胜肽連接，並且在C末端與糖蛋白gB的跨膜-病毒粒子內結構域連接。在一些具體實施例中，該胞外結構域的免疫原性等價變體具有K986P/V987P突變及/或682-GSAS-685突變。
在一些具體實施例中，該第二抗原和第三抗原中的一者是SARS-Cov Tor2株的刺突糖蛋白的受體結合結構域，並且另一者是SARS-Cov-2 Wuhan-Hu-1株的刺突糖蛋白的N末端結構域，或它們各自的免疫原性等價變體。
在一些具體實施例中，該第二抗原是SARS-Cov Tor2株的刺突糖蛋白的受體結合結構域或其免疫原性等價變體，並且該第一HSV-1糖蛋白是糖蛋白gC。在一些具體實施例中，該受體結合結構域或其免疫原性等價變體被融合到糖蛋白gC中，以替代其C3結合結構域。
在一些具體實施例中，該第二抗原是SARS-Cov-2 Wuhan-Hu-1株的刺突糖蛋白的N末端結構域或其免疫原性等價變體，並且該第一HSV-1糖蛋白是糖蛋白gE。在一些具體實施例中，SARS-Cov-2 Wuhan-Hu-1株的刺突糖蛋白的N末端結構域或其免疫原性等價變體被融合到糖蛋白gE中，以替代其FcR結合結構域。
在一些具體實施例中，ICP47中的失活突變是ICP47的編碼序列中的缺失。
在一些具體實施例中，該反向內部重複區被啟動子(如CMV、EF1α、CAG或UbC啟動子)以及隨後的終止密碼子的三個重複序列替代。
在一些具體實施例中，該經修飾的基因組包含ICP0、LAT
和ICP34.5、UL1至UL56和US1至US11的一個拷貝。
本公開的另一個方面涉及疫苗組合物，該疫苗組合物包含本文公開的複製缺陷型HSV-1病毒疫苗和醫藥上可接受的載體。
本公開的另一方面涉及在受試者中誘導免疫反應的方法，該方法包含向受試者施用醫藥上有效量的本文公開的病毒疫苗。
圖1顯示HSV-1(F)、MVR-△IR4和MVR-△IR47基因組的示意圖。
圖2顯示MVR-△IR4和MVR-△IR47病毒僅能在ICP4補充細胞株E5中複製。
圖3顯示基於非複製HSV-1的沙貝病毒刺突蛋白疫苗病毒的構建模型。
圖4顯示MVR-△IR47、MVR-S-gB或MVR-S-gD基因組的示意圖。
圖5顯示gC-SRBD嵌合體的結構，其中gC蛋白中275-367的胺基酸被SARS冠狀病毒Tor2(SARS Tor2)刺突的RBD結構域所替代。
圖6顯示gE-SNTD嵌合體的結構，其中gE蛋白中237-382的胺基酸被SARS-Cov-2 WT Wuhan-Hu-1刺突的NTD結構域所替代。
圖7顯示gB-SECTO嵌合體的結構，其中SECTO與gB蛋白的跨膜結構域(transmembrane domain)和胞質尾區(cytoplasmic tail)(TM/CT)連接。
圖8顯示gD-SECTO嵌合體的結構，其中SECTO與gD蛋白的跨膜結構域和胞質尾區(TM/CT)連接。
圖9顯示MVR-S-gB和MVR-S-gD感染的E5細胞中gC、gC-SRBD、gE-SNTD、gB-SECTO或gD-SECTO蛋白的積累。模擬(mock)：E5細胞沉澱(陰性對照)。PL-S-gB：編碼gB-SECTO融合蛋白的質體轉染之293T細胞沉澱(陽性對照)。MVR-S-gB：MVR-S-gB病毒感染的E5細胞沉澱。F：F株感染的E5細胞沉澱。pL-S-gD：編碼gD-SECTO融合蛋白的質體轉染之293T細胞沉澱(陽性對照)。MVR-S-gD：MVR-S-gD病毒感染的E5細胞沉澱。
圖10顯示MVR-S-gB病毒感染的E5和Vero細胞中HSV-1代表性病毒蛋白的積累。模擬：E5細胞或Vero細胞沉澱(陰性對照)。pL-S-gB：編碼gB-SECTO融合蛋白的質體轉染之293T細胞沉澱(陽性對照)。MVR-S-gB：MVR-S-gB病毒感染的E5細胞或Vero細胞沉澱。F：F株感染的E5細胞或Vero細胞沉澱。
圖11顯示動物免疫的設計。
圖12顯示使用基於HIV的假型病毒(pseudotyped virus)的微量中和測定。ACE2-Fc代表陽性對照，其為包含ACE2功能結構域和人類Fc片段的融合蛋白。圖12A顯示來自用MVR-S-gB疫苗接種的組別中對Wuhan-Hu-1株的中和抗體之表現。圖12B顯示來自用MVR-S-gB疫苗接種的組別中對Delta株的中和抗體之表現。圖12C顯示來自用MVR-S-gB接種的組別中對Omicron BA1株的中和抗體之表現。
圖13顯示MVR-S-gB疫苗可誘導長達至少6個月的持久性
中和抗體。圖13A顯示接種MVR-S-gB的組別在3個月後的中和抗體之表現。圖13B顯示接種MVR-S-gB的組別在6個月後的中和抗體之表現。
定義
本文所用的術語「抗原」意指透過誘導免疫反應而觸發抗體產生的分子。典型的抗原是存在於病原體如細菌、真菌、病毒和其他外來顆粒表面上的蛋白或胞外結構域或其部分。當這些有害物質進入體內時，它會在體內誘導免疫反應以產生抗體。本公開的病毒疫苗中所含的「抗原」不意欲包括HSV-1抗原。也就是說，本公開的抗原是非HSV-1蛋白、胞外結構域或其各自的片段。
所謂「失活突變」意指導致標靶基因失活、無功能或不存在的標靶基因之基因組DNA序列中的任何突變，包括但不限於標靶基因的基因組DNA序列中，特別是感興趣基因的編碼序列中一個或多個核酸的插入、缺失或取代。在一些具體實施例中，失活突變降低或消除了mRNA轉錄，從而降低或消除了所編碼的mRNA轉錄物和蛋白質的表現程度。在一些具體實施例中，失活突變降低或抑制了mRNA轉譯，從而降低了所編碼蛋白質的表現程度。在一些具體實施例中，失活突變會編碼出經修飾蛋白質，其與蛋白質的未經修飾(即，野生型)形式相比具有降低或改變的功能。例如，ICP47中的失活突變可包括ICP47基因的編碼序列(CDS)的缺失，或ICP47基因的CDS中一個或多個核酸的取代，這會導致產生無功能的ICP47蛋白。例如，ICP4中的失活突變可包括ICP4基因的編碼序列(CDS)的缺失，或IC4基因的CDS中一個或多個核酸的取
代，這會導致產生無功能的ICP4蛋白。
術語「編碼序列中的缺失」意指編碼序列的片段的缺失或整個編碼序列的缺失。在一些具體實施例中，編碼序列中的缺失導致編碼序列的缺失。在一些具體實施例中，編碼序列中的缺失不導致對應基因的調控元件(如啟動子序列、增強子序列、核糖體結合位點或轉錄終止子)的缺失。
所謂「融合」意指組分(例如，NTD結構域、RBD結構域和訊號胜肽)透過肽鍵直接連接或經由一個或多個肽連接子連接。術語「融合到」意指較小組分(例如，NTD結構域)透過肽鍵在一個末端(N末端或C末端)或後者之間的任何位置與較大組分(例如，HSV-1糖蛋白如gC或gE的胞外結構域)連接。在一些具體實施例中，較大組分的中間片段被較小組分替代。
所謂糖蛋白(如gB或gD)的「訊號胜肽」意指相應HSV-1糖蛋白的訊號胜肽，其為天然存在的或與親本序列相比具有一個或多個保守突變。
所謂「跨膜-病毒粒子內結構域」意指跨膜和病毒粒子內結構域(病毒粒子內結構域在本文中也稱為胞質尾區)如天然存在那樣彼此直接連接，或透過合適的肽連接子彼此間接連接。
如本文所用，「HSV-1糖蛋白」意指HSV-1病毒包膜上的12-13病毒編碼的糖蛋白，其幫助病毒與標靶細胞相互作用。在HSV-1病毒包膜上存在的12種或更多種糖蛋白中，病毒進入標靶細胞需要五種糖蛋白的協同作用：gC、gD、gB和異二聚體gH和gL。gC和gB獨立地與
細胞表面硫酸乙醯肝素蛋白聚糖(heparan sulphate proteoglycan)相互作用並介導最初的病毒結合。在gB和gC兩者均不存在的情況下，與細胞表面結合的病毒嚴重降低。
糖蛋白gB是疱疹病毒中最保守的進入糖蛋白，在每個亞家族中具有約50%的胺基酸序列同一性。gB是I型跨膜蛋白，由訊號胜肽、大胞外結構域、單跨TM、膜近端區(MPR)和包含超過90個殘基的長CTD組成。gB是真正的疱疹病毒融合蛋白。最早表明其參與膜融合的證據來自於對合胞體HSV-1株攜帶gB基因突變的觀察。HSV-1的gB之第一個晶體結構提供了最直接的證據，即它確實是疱疹病毒的真正蛋白融合體。儘管缺乏序列保守性並且具有顯著不同的大小(約700 aa與約400 aa)，但顯示HSV-1 gB胞外結構域與其他不相關的水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus，VSV)的融合蛋白G具有保守的二級結構、三級結構和四級結構。迄今為止，已經測定了來自α疱疹病毒HSV-1和PrV、β疱疹病毒人類巨細胞病毒(HCMV)和γ疱疹病毒EBV的gB胞外結構域的結構，從而揭示了高度保守的折疊。全長gB胺基酸序列可從以下中獲得：UniProtKB/Swiss-Prot：P06437.2(KOS株)、UniProtKB/Swiss-Prot：P06436.1(F株)、UniProtKB/Swiss-Prot：P10211.1(17株)等。
gB的訊號胜肽的示例性序列是UniProtKB/Swiss-Prot：P06437.2的aa 1至aa 30、UniProtKB/Swiss-Prot：P06436.1的aa 1至aa 29或UniProtKB/Swiss-Prot：P10211.1的aa 1至aa 30。
gB的示例性跨膜-病毒粒子內結構域是UniProtKB/Swiss-Prot：P06437.2的aa 775至aa 904、UniProtKB/Swiss-Prot：P06436.1的aa
774至aa 903或UniProtKB/Swiss-Prot：P10211.1的aa 775至aa 904。
糖蛋白gD是主要的受體結合糖蛋白，並結合三種類型的細胞受體：(1)疱疹病毒進入介質(HVEM)；TNF受體家族的成員；(2)黏附蛋白(nectin)1和黏附蛋白2；免疫球蛋白超家族成員和(3)3-O硫酸化硫酸乙醯肝素(3-O sulphated heparan sulphate)。gD與這些受體中的一者的結合啟動了由gB、gD、gH和gL介導的構象變化，並觸發了病毒粒子包膜和質膜之間的融合。全長gD胺基酸序列可從以下中獲得：UniProtKB/Swiss-Prot：P57083.1(Patton株)、UniProtKB/Swiss-Prot：Q05059.1(F株)、UniProtKB/Swiss-Prot：A1Z0Q5.2(KOS株)、UniProtKB/Swiss-Prot：Q69091.1(17株)等。
gD的訊號胜肽的示例性序列是UniProtKB/Swiss-Prot：P57083.1的aa 1至aa 25、UniProtKB/Swiss-Prot：Q05059.1的aa 1至aa 25、UniProtKB/Swiss-Prot：A1Z0Q5.2的aa 1至aa 25或UniProtKB/Swiss-Prot：Q69091.1的aa 1至aa 25。
gD的示例性跨膜-病毒粒子內結構域是UniProtKB/Swiss-Prot：P57083.1的aa 340至aa 394、UniProtKB/Swiss-Prot：Q05059.1的aa 341至aa 394、UniProtKB/Swiss-Prot：A1Z0Q5.2的aa 341至aa 394或UniProtKB/Swiss-Prot：Q69091.1的aa 341至aa 394。
糖蛋白gE作為免疫球蛋白G(IgG)的Fc部分的受體(FcγR)發揮功能，並在病毒從細胞向細胞的傳播中發揮作用。gE與糖蛋白gI相互作用形成非共價的異二聚體複合物，其增加Fc結合親和力，使得gE-gI複合物結合IgG單體，而gE單獨結合IgG聚集體而不結合單
體。指定給IgG Fc結構域的功能包括經典補體途徑的啟動和與表現FcγR的免疫效應細胞的結合。解決HSV-1 FcγR的功能之體外研究已經證明，FcγR保護病毒免受抗體依賴性補體中和、抗體依賴性細胞毒性(ADCC)和Fc介導的粒細胞(granulocytes)附著於HSV-1感染細胞的影響。HSV-1 gE是病毒從一個上皮細胞有效傳播到另一個上皮細胞以及從上皮細胞有效傳播到神經元所必需的。HSV-1 gE還介導衣殼(capsid)、外皮(tegument)和病毒糖蛋白從神經元細胞體靶向軸突。部分重疊的gE結構域介導FcγR活性和傳播，從而對分離這些功能提出挑戰。不同HSV-1株的gE的完整胺基酸序列可從以下中獲得：GenBank ADD60055.1(F株)、UniProtKB/Swiss-Prot：P04488.1(17株)、GenBank：AFE62896.1(KOS株)等。
野生型gE的殘基235-380形成連續的IgG聚集體結合結構域，並且是FcR活性所必需的。所謂gE的「FcR結合結構域」在HSV-1 F株(GenBank ADD60055.1)的情況下意指胺基酸235至380之間的區域或該區域加上鄰接序列(如在其N末端或C末端的一個或多個，例如1-10個殘基)。所謂「FcR結合結構域中的缺失」意指FcR結合結構域的片段或全長缺失。例如，位於FcR結合結構域內的aa 280至aa 286或aa 299至aa 306的片段缺失。相應地，術語「失活FcR結合」意指喪失gE糖蛋白的FcR結合功能。這可透過在FcR結合結構域中的缺失，或在FcR結合結構域的編碼序列中一個或多個核苷酸的插入或取代來實現。
HSV-1糖蛋白C結合補體組分C3b，並抑制C5和備解素(properdin)(P)與C3b的相互作用，從而阻斷經典和另補體途徑的啟
動。HSV-1 gC阻止補體介導的無細胞病毒中和，抑制補體介導的感染細胞裂解，並有助於在體內產生毒力，因為在鼠側翼感染模型中，缺乏結合C3b或阻斷C5和P與C3b相互作用的病毒比野生型病毒更弱。不同HSV-1株的gC之完整胺基酸序列可從以下中獲得：GenBank ADD60042.1(F株)、GenBank：AKM76368.1(17+株)、GenBank：AAA45779.1(macroplaque株)、GenBank：CAB40083.1(HSZP株)、GenBank：AFH78104.1(McKrae株)等。
野生型gC具有四個C3結合區，即，結合區I(aa 124-137)、II(aa 276-292)、III(aa 339-366)和IV(aa 223-246)，每個結合區都是結合C3所必需的。所謂「C3結合結構域」意指四個結合區中的任一者或其組合。也就是說，C3結合結構域可以是結合區I、結合區II、結合區III、結合區IV、結合區II/III、結合區IV/II、結合區II/III/IV、結合區I/IV、結合區I/IV/II或結合區I/II/III/IV中的任一者。當指定兩個或更多個結合區時，意味著包括該兩個或更多個結合區之間的胺基酸。例如，結合區II/III意在包括結合區II、III和兩個區域之間的胺基酸293至338。因此，C3結合結構域或其語法變體(grammatical variant)中的缺失是指區域I至IV中的任一者或其組合的缺失。例如，C3結合結構域中的缺失可以是結合區I、II、III或IV的缺失。替代地，C3結合結構域中的缺失可以是結合區II/III、IV/II、I/IV、IV/II/III或I/IV/II/III的缺失。缺失發生在野生型gC的aa 124至aa 366的區域中。在較佳的實施例中，C3結合結構域中的缺失是結合區II/III(即，aa 276至aa 366)的缺失。相應地，術語「使C3結合失活」意指操作基因組以使結合區I至IV中的任一者或其組合失
活。操作可以是在結合區I至IV的編碼序列中一個或多個核苷酸的插入、缺失或取代。
術語「沙貝病毒」是含有SARS-Cov、SARS-Cov-2和各種變異株的病毒亞屬。參見Schoch CL等人，NCBI Taxonomy：a comprehensive update on curation,resources and tools，Database(Oxford)，2020年：baaa062。PubMed：32761142，PMC：PMC7408187(還參見https：//www.ncbi.nlm.nih.gov/Taxonomy/Browser/wwwtax.cgi？mode=Undef&id=2509511&lvl=3&lin=f，最後一次存取時間為2022年7月20日)。沙貝病毒SARS和SARS-Cov-2可導致嚴重的肺部疾病，並且各自以腹瀉和糞便排出為突出特徵。在每種情況下，合併症和年齡會增加患嚴重疾病的風險。SARS-Cov-2還感染上呼吸道，並且總體死亡率低於SARS-Cov(儘管如果疾病嚴重，則死亡率與SARS相似)。伴隨SARS-Cov-2感染可見長期COVID。疫苗接種的目標應包括預防嚴重疾病和長期COVID。越來越多的冠狀病毒被鑑定出來，這些病毒之間大量的遺傳多樣性增加了研發對這些病毒具有廣泛免疫力的疫苗的難度。氣候變化可能會改變另外的沙貝病毒的多樣性和向人傳播的可能性，其中大多數具有蝙蝠宿主。由於突變或由於人和受感染載體或宿主之間接觸的變化(其可受天氣和動物暴露機會的變化影響)，全新的冠狀病毒可在人類中出現。動物庫(animal reservoirs)給控制帶來了挑戰和機遇。
「泛沙貝病毒疫苗」是可在施用疫苗的受試者中誘導針對一種以上的沙貝病毒或其變異株的免疫反應的疫苗。本公開的目的是提供透過使用單一複製缺陷型HSV-1載體遞送來自一種以上的沙貝病毒的抗原
之泛沙貝病毒疫苗。考慮HSV-1載體還可用作遞送單一抗原或來自不同於沙貝病毒的病毒之抗原的疫苗平台。
嚴重急性呼吸道症候群(SARS)是二十一世紀首次發現的新傳染病。在WHO協調下，經過全球努力，於2003年4月鑑定了一種新冠狀病毒SARS-冠狀病毒(SARS-Cov，也稱為SARS-Cov-1或SARS冠狀病毒)，該病毒是導致疫情爆發的誘因。SARS-Cov是一種有包膜、單鏈和正鏈RNA病毒。其基因組RNA編碼非結構複製酶多蛋白和結構蛋白，包括刺突(S)、包膜(E)、膜(M)和核衣殼(N)蛋白。中和抗體及/或T細胞免疫反應可直接針對幾種SARS-Cov蛋白產生，但主要靶向S蛋白，這表明S蛋白誘導的特異性免疫反應在對抗SARS-Cov感染中起重要作用。SARS-Cov的刺突是由S蛋白的三聚體所組成。SARS-Cov S蛋白編碼表面糖蛋白前體，該表面糖蛋白前體的長度預計為1,255個胺基酸，並且預測蛋白的胺基末端和大部分位於細胞表面或病毒顆粒的外部。所預測的S蛋白是由位於N末端的訊號胜肽(胺基酸1-12)、胞外結構域(胺基酸13-1,195)、跨膜結構域(胺基酸1,196-1,215)和胞內結構域(胺基酸1,216-1,255)所組成。與其他冠狀病毒相似，SARS-Cov的S蛋白可被蛋白酶(如胰蛋白酶、因子Xa和組織蛋白酶L)切割成S1和S2亞基。血管張力素轉換酶2(ACE2)已經被鑑定為SARS-Cov的受體。位於S1亞基中且跨越胺基酸318-510的片段是最小受體結合結構域(RBD)。結晶學研究已經顯示RBD與其受體ACE2複合的結構。
SARS-Cov S蛋白在病毒感染和致病機制中具有關鍵作用。S1識別並結合宿主受體，隨後S2中的構象變化促進病毒包膜和宿主細胞
膜之間的融合。S1中的RBD負責病毒與宿主細胞受體的結合。ACE2的K341和RBD的R453對於複合物形成是重要的。RBD的N479和T487對於S蛋白與ACE2的高親和力結合是重要的。SARS-Cov的RBD結構域之示例性胺基酸序列可從以下中獲得：NCBI參考序列：YP_009825051.1，aa 306至aa 527。
2019冠狀病毒疾病(COVID-19)是由嚴重急性呼吸道症候群冠狀病毒2型(SARS-Cov-2)所引起，其在人類中的感染引起輕度或重度臨床表現，主要影響呼吸系統。SARS-Cov-2在其表面含有刺突((在本文中也稱為刺突糖蛋白、「S」、S糖蛋白或刺突)糖蛋白，該糖蛋白是目前疫苗研發的主要標靶，因為針對該蛋白質的抗體可中和感染。該蛋白質負責錨定至宿主受體，血管張力素轉換酶2(ACE2)。
S糖蛋白負責病毒進入到宿主細胞中，在其中它開始傳播，但它還可被免疫系統識別，觸發保護性反應，這是疫苗的主要目的。病毒S糖蛋白透過亞基1和2(S1和S2)經由非共價相互作用的締合而處於亞穩態融合前狀態。S的S1亞基由672個胺基酸(殘基14-685)組成，並包含四個結構域：N末端結構域(NTD)、受體結合結構域(RBD)和亞結構域1和2(SD1和SD2)。RBD之所以受到更多關注，是因為它透過其受體結合基序(RBM)與宿主細胞的血管張力素轉換酶2(ACE2)的相互作用，被認為是病毒與宿主細胞相互作用的仲介因素。RBM與ACE2受體的結合在病毒感染過程中是關鍵的，因為已經顯示這種相互作用會誘導S從亞穩態融合前狀態轉變為更穩定的融合後狀態，這是病毒和宿主細胞之間的膜融合所必需的。S2亞基由588個胺基酸(殘基686-
1273)組成，包含N末端融合胜肽(FP)和兩個七肽重複序列(heptad repeats)(HR1和HR2)，它們介導S2亞基與宿主膜的締合。S2亞基還具有跨膜結構域(TM)和用於將S糖蛋白附著於病毒膜上的病毒粒子內尾區。
SARS-Cov-2的S糖蛋白的示例性NTD胺基酸序列可從以下中獲得：UniProtKB/Swiss-Prot：P0DTC2.1，aa 13至aa 304。SARS-Cov-2的S糖蛋白的示例性RBD胺基酸序列可從以下中獲得：UniProtKB/Swiss-Prot：P0DTC2.1，aa 319至aa 541。
如本文所用，術語「複製缺陷型」、「複製缺陷」或「非複製」具有它們的普通含義，如，由於對其基因組的修飾而無繁殖能力的病毒。因此，一旦這種重組病毒感染細胞，其唯一可遵循的過程就是表現包含在其基因組中的任何病毒和異源蛋白質。在特定具體實施例中，本文提供的複製缺陷病毒可包含編碼非結構蛋白質的基因，並且對於RNA轉錄和基因表現是自給自足的。然而，這些載體缺乏編碼結構蛋白質的基因，因此需要輔助基因組以允許它們被包裝到感染性顆粒中。在本公開中，複製缺陷型病毒缺乏ICP4的兩個拷貝。這可透過例如缺失ICP4的拷貝中的一個拷貝所在的內部反向重複序列和末端重複序列中ICP4的另一拷貝的編碼序列來實現。
如本文所用，術語「免疫原性等價變體」意指與參考抗原相比具有一個或多個保守突變但保留參考抗原的免疫原性的變體。免疫原性等價變體保留了參考抗原的一個或多個或所有表位。在一些具體實施例中，免疫原性等價變體保留了參考抗原的所有表位。
所謂「保守突變」意指胺基酸殘基到同源殘基的一個或多個改變(如異白胺酸改變為白胺酸，天門冬胺酸改變為麩胺酸，或半胱胺酸改變為絲胺酸)，這預期不會顯著干擾蛋白質。此外，可進行核苷酸或胺基酸取代、缺失或插入，導致「非必需」胺基酸區的保守突變或改變。例如，源自指定蛋白質的多肽或胺基酸序列可與起始序列相同，除了一個或多個單獨的胺基酸取代、插入或缺失，例如一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十五個、二十個或更多個單獨的胺基酸取代、插入或缺失。在某些具體實施例中，源自指定蛋白質的多肽或胺基酸序列相對於起始序列具有一個至五個、一個至十個、一個至十五個或一個至二十個單獨的胺基酸取代、插入或缺失。
本文所用的「佐劑」是指在疫苗組合物中使用的成分，其幫助在接受疫苗的人中產生更強的免疫反應。佐劑幫助身體產生足夠強的免疫反應以保護人免受他或她正在接種疫苗的疾病的影響。佐劑疫苗可比無佐劑疫苗引起更多的局部反應(如注射部位的發紅、腫脹和疼痛)和更多的全身反應(諸如發熱、發冷和身體疼痛)。鋁鹽，如氫氧化鋁、磷酸鋁和硫酸鋁鉀已經安全地用於疫苗中超過70年。含鋁佐劑是自1930年以來一直用於疫苗的疫苗成分。加入少量鋁以幫助身體建立更強的針對疫苗中的細菌之免疫力。鋁是自然界中發現的最常見的金屬之一，並且存在於空氣、食物和水中。科學研究已經顯示，遵循推薦的疫苗方案的人之鋁暴露量低並且不容易被身體吸收。從2009年開始，在一種美國疫苗(Cervarix®)中使用單磷醯脂質(monophosphoryl lipid)A(MPL)；然而，由於市場需求低，該疫苗在美國不再可用。從細菌表面分離這種免疫
增強物質。MF59是Fluad(一種許可用於65歲或以上年齡的成年人的流感疫苗)中所含的佐劑。MF59是由角鯊烯組成的水包油乳劑，角鯊烯是在許多植物和動物細胞以及人中發現的天然存在的油。MF59自1997年起在歐洲和2016年起在美國用於流感疫苗，已為數百萬人接種，並且具有良好的安全記錄。AS01B是與Shingrix疫苗的抗原組分一起使用的佐劑懸浮液。Shingrix是推薦用於50歲或以上年齡的人的重組帶狀疱疹疫苗。AS01B由單磷醯脂質A(MPL)(從細菌表面分離的免疫增強物質)和QS-21(從智利皂樹(皂樹(Quillaja saponaria Molina))中提取的天然化合物)組成。在預先許可的臨床試驗中，AS01B與局部和全身反應相關，但總體安全性概況是可靠的。AS01B還是目前在臨床試驗中測試的疫苗的組分，包括瘧疾和HIV疫苗。迄今為止，這些試驗包括超過15,000人。CpG 1018是最近研發的用於Heplisav-B疫苗的佐劑。它是由胞嘧啶磷酸鳥嘌呤(CpG)基序所組成，其是模擬細菌和病毒遺傳物質的DNA的合成形式。當疫苗中包含CpG 1018時，它會增加體內的免疫反應。在預先許可的臨床試驗中，接種Heplisav-B之後的不良事件與在另一個美國許可的無佐劑乙型肝炎疫苗後觀察到的那些相當。
如本文所用，術語「抗原」是指能夠在受試者中誘導免疫反應的物質，通常是蛋白質。該術語還指在一旦施用給受試者(直接或透過施用給受試者編碼該蛋白質的核苷酸序列或載體)便能夠引起針對該蛋白質的體液及/或細胞類型之免疫反應的意義上具有免疫活性的蛋白質。
「受試者」或「個體」或「動物」或「患者」或「哺乳動物」是指需要診斷、預後或治療的任何受試者，特別是哺乳動物受試者。
哺乳動物受試者包括人、馴化動物、農場動物，以及動物園、運動或寵物動物，例如狗、貓、豚鼠、兔、大鼠、小鼠、馬、牛、奶牛等。
HSV-1病毒疫苗
HSV-1基因組由兩個共價連接的組分組成，命名為L和S。每個組分由側翼為反向重複序列的獨特序列(L組分為UL，S組分為US)組成。L組分的反向重複序列被命名為ab和b’a’。S組分的反向重複序列被命名為a’c’和ca。反向重複區包含轉錄單元的雙拷貝。本領域已知至少五個具有雙拷貝的開讀框(open reading frames)，其蛋白質分別被命名為ICP0、ICP4、ICP34.5、ORF P和ORF O。反向重複序列b’a’和a’c’(b’a’-a’c’)連接形成內部反向重複區或內部反向重複序列。相反，反向重複序列ab和ca在本文中稱為末端重複區或末端重複序列。
本公開的一方面涉及複製缺陷型單純疱疹病毒第1型(HSV-1)病毒疫苗，該複製缺陷型HSV-1病毒疫苗包含經修飾的HSV-1基因組和至少一種抗原，其中該修飾包括：內部反向重複區的缺失，該缺失導致包括ICP0、ICP34.5、ICP4和潛伏相關轉錄本(LAT)的雙拷貝基因中的每一者的一個拷貝的缺失；ICP47中的失活突變；和末端重複序列中ICP4的另一拷貝中的失活突變，並且其中該至少一種抗原的第一抗原是由野生型HSV-1的立即早期基因的啟動子所驅動。
在一些具體實施例中，內部反向重複區的缺失導致HSV-1 F株的基因組中核苷酸117005至132096的切除，其基因組可透過GenBank登錄號GU734771.1獲得。本領域技術人員應當理解，根據本公開待缺失的核苷酸的精確起始和終止位置取決於HSV-1病毒的毒株和基因
組異構體，並且可透過本領域已知技術容易地確定。應當理解本公開並不旨在限於HSV-1病毒的任何特定基因組異構體或毒株。本領域技術人員還將理解，只要基因組DNA被定序，其他株也是可能的。定序技術很容易在文獻和市場上獲得。例如，在另一個具體實施例中，可在HSV-1株17上進行缺失，其基因組可透過GenBank登錄號NC_001806.2獲得。在另一個具體實施例中，可在菌株KOS 1.1上進行缺失，其基因組可透過GenBank登錄號KT899744獲得。應當注意，大部分缺失序列不編碼蛋白質，而是位於缺失區之間間隔的重複非編碼序列，例如，ICP0的內含子、LAT結構域、“a”序列等。內部反向重複區的缺失導致ICP0、LAT、ICP4、ICP34.5、ORF P和ORF O中各一個拷貝的缺失。
在一些具體實施例中，ICP47中的失活突變(也稱為US12)是ICP 47的編碼序列的缺失。例如，在一個具體實施例中，ICP 47的編碼序列的缺失是HSV-1 F株(GenBank：GU734771.1)的基因組中核苷酸145152至145418的缺失。在一些具體實施例中，ICP47中的失活突變是基因ICP47的缺失。例如，在一個具體實施例中，ICP 47的編碼序列的缺失是HSV-1 F株(GenBank：GU734771.1)的基因組中核苷酸143988至146011的缺失。在一些具體實施例中，ICP47中的失活突變是HSV-1 F株(GenBank：GU734771.1)的基因組中與核苷酸序列145152至145418重疊但在核苷酸143988至146011內的核苷酸片段的缺失。例如，所缺失的序列可從HSV-1 F株(GenBank：GU734771.1)的143988之後的任何核苷酸開始並在145152至145418內結束，或者可從145152至145418內的任何核苷酸開始但在146011之前結束。本領域技術人員將理解，當使
用不同的株(例如，KOS、17等)或不同的異構體時，缺失的具體起始和終止位置可以變化，並且可根據GenBank資料庫中可獲得的序列資訊來確定。
在一些具體實施例中，ICP47中的失活突變是ICP47的編碼序列中的核苷酸的插入、缺失或取代導致誤義突變，從而產生無功能的ICP47蛋白。在一些具體實施例中，ICP47中的失活突變是ICP47的調控序列中的核苷酸的插入、缺失或置換使調控元件中的一者(例如，啟動子)失活，使得ICP47的轉錄或轉譯過程終止、弱化或不被啟動。
在本公開中，ICP47中的失活突變導致ICP47蛋白的程度降低或完全消除，這促進了抗原呈遞並有利於對本公開疫苗的免疫反應。ICP 47透過抑制與抗原呈遞相關的轉運蛋白來阻斷CD8+ T細胞對感染細胞的識別。HSV-1 ICP47-突變體在小鼠中比野生型HSV-1的神經毒性小。ICP47-突變體的神經毒力降低是由於保護性CD8+ T細胞反應。當與野生型病毒相比時，ICP47-突變體在免疫學上正常的小鼠中和用CD8+ T細胞重建之後的T細胞缺陷裸鼠中表現的神經毒力降低。然而，ICP47-突變體在CD8+ T細胞急性耗竭的小鼠中和在未重建或用CD4+ T細胞重建的裸鼠中顯示正常的神經毒力。相反，CD8+ T細胞耗竭不增加無關的減毒HSV-1 gE-突變體的神經毒力。ICP47是第一個透過抑制CD8+ T細胞保護來影響神經毒力的病毒蛋白。
在本公開中，末端重複序列中ICP4的另一拷貝中的失活突變導致ICP4蛋白的程度降低或完全消除。這可透過本領域習知的技術來實現。例如，在一些具體實施例中，失活突變是ICP4的編碼序列中的
核苷酸的插入、缺失或取代導致誤義突變，從而產生無功能的ICP4蛋白。在一些具體實施例中，ICP4中的失活突變是ICP4的調控序列中的核苷酸的插入、缺失或置換使調控元件中的一者(例如，啟動子)失活，使得ICP4的轉錄或轉譯過程終止、弱化或不被啟動。在一些具體實施例中，ICP4中的失活突變是ICP 4的編碼序列的缺失。
在本公開中，在HSV-1的基因組中產生ICP4的編碼序列中的缺失，使得ICP4的其他拷貝失活，並且病毒疫苗不表現任何ICP4蛋白。在一些具體實施例中，ICP4的編碼序列中的缺失是ICP4的全長編碼序列的缺失。例如，ICP4的編碼序列中的缺失是HSV-1 F株(GenBank：GU734771.1)的基因組中核苷酸146978至150886的缺失。在一些具體實施例中，ICP4的編碼序列中的缺失是核苷酸146978至150886之間的編碼序列的片段的缺失。在一些具體實施例中，ICP4的編碼序列中的缺失是與核苷酸146978和150886的片段重疊的核苷酸片段的缺失。例如，ICP4的編碼序列中的缺失是從146978之前開始但在146978至150886之間結束的核苷酸片段的缺失。例如，ICP4的編碼序列中的缺失是從146978至150886之間開始但在150886之後結束的核苷酸片段的缺失。在一些具體實施例中，當與核苷酸146978和150886的片段重疊的核苷酸片段產生缺失時，該缺失在146651至150948內產生，但使ICP4的啟動子保持完整，並且較佳還使ICP4的polyA序列和/或TATA框保持完整。ICP4的示例性啟動子序列可從以下中獲得：GenBank：EF667506.1。注意到，本段中所述的核苷酸的特定起始和終止位置僅參照F株原型。當使用不同株或異構體時，缺失的核苷酸的起始和結束位置將相應地改變，這在本領域普
通技術人員的能力範圍內。
在一些具體實施例中，該至少一種抗原的第一抗原是由ICP4的啟動子所驅動，並且末端重複序列中ICP4的另一拷貝中的失活突變是ICP4的編碼序列中的缺失，同時使ICP4的啟動子保持完整，使得該至少一種抗原的第一抗原與末端重複序列中ICP4的啟動子可操作地連接。
在一些具體實施例中，該至少一種抗原的第一抗原是由野生型HSV-1的立即早期基因(如ICP0、ICP27、ICP4、ICP22或ICP47)的啟動子所驅動，並且該至少一種抗原的第一抗原與驅動啟動子一起被插入到對應於所缺失的內部反向重複區的位置中。
在一些具體實施例中，本公開的HSV-1病毒疫苗包含ICP34.5的一個拷貝、ICP0的一個拷貝、LAT的一個拷貝和“a”序列的一個拷貝。在一些具體實施例中，本公開的HSV-1病毒疫苗包含UL1至UL56和US1至US11。在一些具體實施例中，本公開的HSV-1病毒疫苗包含工程化gC(UL44)和/或工程化gE(US8)。在一些具體實施例中，本公開的HSV-1病毒疫苗包含ICP34.5的僅一個拷貝、ICP0的僅一個拷貝、LAT的一個拷貝、“a”序列的僅一個拷貝、UL1至UL56和US1至US11。在一些具體實施例中，本公開的HSV-1病毒疫苗包含ICP34.5的僅一個拷貝、ICP0的僅一個拷貝、LAT的一個拷貝、“a”序列的僅一個拷貝、天然UL1至UL43、工程化UL44、天然UL45至UL56和天然US1至US11。在一些具體實施例中，本公開的HSV-1病毒疫苗包含ICP34.5的僅一個拷貝、ICP0的僅一個拷貝、LAT的一個拷貝、“a”序列的僅一個拷貝、天然UL1
至UL43、工程化UL44、天然UL45至UL56和天然US1至US7、工程化US8和天然US9至US11。
在一些具體實施例中，本公開的HSV-1病毒疫苗包含工程化UL44。在一些具體實施例中，本公開的HSV-1病毒疫苗包含工程化US8。在一些具體實施例中，本公開的HSV-1病毒疫苗包含工程化UL44和/或工程化US8。在一些具體實施例中，工程化UL44使C3結合失活。在一些具體實施例中，工程化UL44在C3結合結構域中具有缺失。在一些具體實施例中，工程化US8使FcR結合失活。在一些具體實施例中，工程化US8在FcR結合結構域中具有缺失。在一些具體實施例中，本公開的HSV-1病毒疫苗包含在C3結合結構域中具有缺失的工程化UL44。在一些具體實施例中，本公開的HSV-1病毒疫苗包含在FcR結合結構域中具有缺失的工程化US8。在一些具體實施例中，本公開的HSV-1病毒疫苗包含在C3結合結構域中具有缺失的工程化UL44和在FcR結合結構域中具有缺失的工程化US8。
本公開的HSV-1病毒疫苗包含至少一種抗原。在一些具體實施例中，本公開的HSV-1病毒疫苗包含一種抗原(即，第一抗原)，並且第一抗原是由立即早期基因的啟動子所驅動，如ICP4的啟動子。在一些具體實施例中，第一抗原來自病毒、細菌或寄生蟲。在一些具體實施例中，第一抗原來自非HSV-1病毒。在一些具體實施例中，第一抗原來自沙貝病毒。在一些具體實施例中，第一抗原來自SARS-Cov、SARS-Cov-2或其變異株。在一些具體實施例中，第一抗原來自SARS-Cov、SARS-Cov-2或其變異株。在一些具體實施例中，第一抗原來自SARS-Cov-2或其變異
株。在一些具體實施例中，第一抗原來自SARS-Cov-2的delta或omicron變異株。在一些具體實施例中，第一抗原來自SARS-Cov-2的omicron變異株。在一些具體實施例中，第一抗原來自SARS-Cov-2的delta變異株。在一些具體實施例中，第一抗原來自沙貝病毒的刺突糖蛋白。在一些具體實施例中，第一抗原來自SARS-Cov、SARS-Cov-2或其變異株的刺突糖蛋白。在一些具體實施例中，第一抗原來自SARS-Cov-2或其變異株的刺突糖蛋白。在一些具體實施例中，第一抗原來自沙貝病毒的刺突糖蛋白之胞外結構域。在一些具體實施例中，第一抗原來自SARS-Cov、SARS-Cov-2或其變異株的刺突糖蛋白之胞外結構域。在一些具體實施例中，第一抗原來自SARS-Cov-2或其變異株的刺突糖蛋白的胞外結構域。在一些具體實施例中，第一抗原來自沙貝病毒的刺突糖蛋白之NTD結構域。在一些具體實施例中，第一抗原來自SARS-Cov、SARS-Cov-2或其變異株的刺突糖蛋白之NTD結構域。在一些具體實施例中，第一抗原來自SARS-Cov-2或其變異株的刺突糖蛋白的NTD結構域。在一些具體實施例中，第一抗原來自沙貝病毒的刺突糖蛋白之RBD結構域。在一些具體實施例中，第一抗原來自SARS-Cov、SARS-Cov-2或其變異株的刺突糖蛋白之RBD結構域。在一些具體實施例中，第一抗原來自SARS-Cov-2或其變異株的刺突糖蛋白之RBD結構域。在一些具體實施例中，第一抗原來自SARS-Cov-2的delta或omicron變異株的刺突糖蛋白之胞外結構域。在一些具體實施例中，第一抗原是SARS-Cov-2的delta變異株的刺突糖蛋白之胞外結構域。
在一些具體實施例中，本公開的HSV-1病毒疫苗包含由ICP4的啟動子驅動之SARS-Cov-2的刺突糖蛋白之胞外結構域。SARS-
Cov-2的刺突糖蛋白之胞外結構域不含刺突糖蛋白的訊號序列、跨膜結構域或病毒粒子內結構域。例如，對於delta株，胞外結構域是UniProtKB/Swiss-Prot：P0DTC2.1的aa 14至aa 1213。在一些具體實施例中，刺突糖蛋白的胞外結構域在N末端(即，NTD結構域)與gB(UL27)或gD(US6)的訊號胜肽連接。在一些具體實施例中，刺突糖蛋白的胞外結構域在C末端(即，HR2結構域)與gB(UL27)或gD(US6)的跨膜-病毒粒子內結構域連接。在一些具體實施例中，刺突糖蛋白的胞外結構域在N末端(即，NTD結構域)與gB(UL27)或gD(US6)的訊號胜肽連接，並且在C末端(即，HR2結構域)與gB(UL27)或gD(US6)的跨膜-病毒粒子內結構域連接。在一些具體實施例中，刺突糖蛋白的胞外結構域在N末端(即，NTD結構域)與gB(UL27)的訊號胜肽連接，並且在C末端(即，HR2結構域)與gB(UL27)的跨膜-病毒粒子內結構域連接。在一些具體實施例中，刺突糖蛋白的胞外結構域在N末端(即，NTD結構域)與gD(US6)的訊號胜肽連接，並且在C末端(即，HR2結構域)與gD(US6)的跨膜-病毒粒子內結構域連接。
在一些具體實施例中，本公開的HSV-1病毒疫苗包含由ICP4的啟動子驅動之SARS-Cov-2的delta變異株的刺突糖蛋白之胞外結構域。在一些具體實施例中，本公開的HSV-1病毒疫苗包含SARS-Cov-2的delta變異株的刺突糖蛋白之具有K986P和V987P突變位點的胞外結構域。在一些具體實施例中，本公開的HSV-1病毒疫苗包含SARS-Cov-2的delta變異株的刺突糖蛋白之具有K986P和V987P突變位點以及弗林蛋白
酶切割位點(furin cleavage site)中的682-GSAS-685突變的胞外結構域。
在一些具體實施例中，本公開的HSV-1病毒疫苗包含由ICP4的啟動子驅動的SARS-Cov-2之delta變異株的刺突糖蛋白之胞外結構域，其中該胞外結構域，有或沒有上述突變，在N末端(即，NTD結構域)與gB(UL27)的訊號胜肽連接。在一些具體實施例中，本公開的HSV-1病毒疫苗包含由ICP4的啟動子驅動的SARS-Cov-2之delta變異株的刺突糖蛋白之胞外結構域，其中該胞外結構域，有或沒有上述突變，在C末端(即，HR2結構域)與gB(UL27)的跨膜-病毒粒子內結構域連接。在一些具體實施例中，本公開的HSV-1病毒疫苗包含由ICP4的啟動子驅動的SARS-Cov-2之delta變異株的刺突糖蛋白之胞外結構域，其中該胞外結構域，有或沒有上述突變，在N末端(即，NTD結構域)與gB(UL27)的訊號胜肽連接，並且在C末端(即，HR2結構域)與gB(UL27)的跨膜-病毒粒子內結構域連接。
在一些具體實施例中，本公開的HSV-1病毒疫苗的反向內部重複區被啟動子和隨後的終止密碼子的三個重複序列替代。在一些具體實施例中，本公開的HSV-1病毒疫苗的反向內部重複區被CMV啟動子和隨後的終止密碼子的三個重複序列替代。在一些具體實施例中，本公開的HSV-1病毒疫苗的反向內部重複區被立即早期基因(如ICP4)的啟動子和隨後的編碼第一抗原的核苷酸替代。
本公開的另一個方面涉及複製缺陷型單純疱疹病毒第1型(HSV-1)病毒疫苗，該複製缺陷型HSV-1病毒疫苗包含經修飾的HSV-1基因組和至少一種抗原，其中修飾包括：內部反向重複區的缺失，該缺失
導致包括ICP0、ICP34.5和ICP4和潛伏相關轉錄本(LAT)的雙拷貝基因中的每一者的一個拷貝的缺失；ICP47中的失活突變；和末端重複序列中ICP4的另一拷貝中的失活突變，並且其中該至少一種抗原的第一抗原是由野生型HSV-1的立即早期基因的啟動子所驅動，並且該至少一種抗原的第二抗原融合到第一HSV-1糖蛋白中。
術語「內部反向重複區的缺失」、「ICP47中的失活突變」、「ICP4的另一拷貝中的失活突變」、「立即早期基因的啟動子」和「第一抗原」具有與上述相同的定義和延伸。
第二抗原源自與第一抗原不同的來源，例如不同的變異株或不同的物種。在較佳的具體實施例中，第二抗原來自屬於第一抗原由其衍生的病毒、細菌或寄生蟲的同一科、屬、亞屬或種的病毒、細菌或寄生蟲。例如，在一些具體實施例中，第一抗原和第二抗原來自病毒的同一屬或亞屬。在一些具體實施例中，第一抗原和第二抗原來自沙貝病毒。在一些具體實施例中，第一抗原和第二抗原來自SARS-Cov、SARS-Cov-2或其變異株。在一些具體實施例中，第一抗原和第二抗原來自SARS-Cov、SARS-Cov-2或其變異株。在一些具體實施例中，第一抗原和第二抗原來自SARS-Cov-2或其變異株。在一些具體實施例中，第一抗原和第二抗原來自不同的SARS-Cov-2變異株。在一些具體實施例中，第一抗原和第二抗原來自SARS-Cov-2的delta或omicron變異株。
在一些具體實施例中，第一抗原來自SARS-Cov-2(例如，Wuhan-Hu-1株)或其變異株，並且第二抗原來自SARS-Cov或其變異株。在一些具體實施例中，第一抗原來自SARS-Cov-2，並且第二抗原來
自SARS-Cov或其變異株。在一些具體實施例中，第一抗原來自SARS-Cov-2的delta或omicron變異株，並且第二抗原來自SARS-Cov或其變異株。在一些具體實施例中，第一抗原來自SARS-Cov-2的delta變異株，並且第二抗原來自SARS-Cov或其變異株。在一些具體實施例中，第一抗原來自SARS-Cov-2的omicron變異株，並且第二抗原來自SARS-Cov或其變異株。在一些具體實施例中，第一抗原來自SARS-Cov-2或其變異株的刺突糖蛋白，並且第二抗原來自SARS-Cov或其變異株。在一些具體實施例中，第一抗原來自SARS-Cov-2的刺突糖蛋白，並且第二抗原來自SARS-Cov或其變異株。在一些具體實施例中，第一抗原來自SARS-Cov-2的變異株的刺突糖蛋白，並且第二抗原來自SARS-Cov或其變異株。在一些具體實施例中，第一抗原來自SARS-Cov-2的delta或omicron變異株的刺突糖蛋白，並且第二抗原來自SARS-Cov或其變異株。在一些具體實施例中，第一抗原是SARS-Cov-2或其變異株的刺突糖蛋白的胞外結構域，並且第二抗原來自SARS-Cov或其變異株。
在一些具體實施例中，第一抗原是SARS-Cov-2或其變異株的刺突糖蛋白的胞外結構域，並且第二抗原是SARS-Cov或其變異株的刺突糖蛋白的RBD結構域。在一些具體實施例中，第一抗原來自SARS-Cov-2的delta或omicron變異株的刺突糖蛋白的胞外結構域，並且第二抗原來自SARS-Cov-2的刺突糖蛋白。在一些具體實施例中，第一抗原是SARS-Cov-2的delta或omicron變異株的刺突糖蛋白的胞外結構域，並且第二抗原是SARS-Cov-2的刺突糖蛋白的NTD結構域。在一些具體實施例中，第一抗原是SARS-Cov-2的delta或omicron變異株的刺突糖蛋白的胞
外結構域，並且第二抗原來自SARS-Cov或其變異株的刺突糖蛋白。在一些具體實施例中，第一抗原來自SARS-Cov-2的delta或omicron變異株的刺突糖蛋白的胞外結構域，並且第二抗原是SARS-Cov的刺突糖蛋白的RBD結構域。在一些具體實施例中，第一抗原是SARS-Cov-2的delta或omicron變異株的刺突糖蛋白的胞外結構域，並且第二抗原是SARS-Cov-2的delta變異株的刺突糖蛋白的NTD或RBD結構域。在一些具體實施例中，第一抗原是SARS-Cov-2的omicron變異株的刺突糖蛋白的胞外結構域，並且第二抗原是SARS-Cov-2的delta變異株的刺突糖蛋白的NTD結構域。
在一些具體實施例中，第一HSV-1糖蛋白是gC或gE。在一些具體實施例中，第一HSV-1糖蛋白是gC或gE，並且第二抗原是SARS-Cov-2或其變異株的刺突糖蛋白的NTD結構域，或者是SARS-Cov或其變異株的刺突糖蛋白的RBD結構域。在一些具體實施例中，第一HSV-1糖蛋白是gE，並且第二抗原是SARS-Cov-2的刺突糖蛋白的NTD結構域。在一些具體實施例中，第一HSV-1糖蛋白是gC，並且第二抗原是SARS-Cov的刺突糖蛋白的RBD結構域。
在一些具體實施例中，改變HSV-1 gC以使C3結合失活。在一些具體實施例中，透過C3結合結構域中的缺失實現C3結合的失活。在一些具體實施例中，透過缺失結合區II/III，即aa 276至aa 366，實現C3結合的失活。在一些具體實施例中，SARS-Cov(例如，Tor 2株)的刺突糖蛋白的RBD結構域被插入，以替代結合區II/III。
在一些具體實施例中，改變HSV-1 gE以使FcR結合失
活。在一些具體實施例中，透過FcR結合結構域中的缺失實現FcR結合的失活。在一些具體實施例中，在HSV-1 F株的gE的情況下，透過缺失aa 235至380實現FcR結合的失活。在一些具體實施例中，SARS-Cov-2(例如，Wuhan-Hu-1株)的刺突糖蛋白的NTD結構域被插入，以替代FcR結合結構域。
本公開的另一個方面涉及複製缺陷型單純疱疹病毒第1型(HSV-1)病毒疫苗，該複製缺陷型HSV-1病毒疫苗包含經修飾的HSV-1基因組和至少一種抗原，其中修飾包括：內部反向重複區的缺失，該缺失導致包括ICP0、ICP34.5和ICP4和潛伏相關轉錄本(LAT)的雙拷貝基因中的每一者的一個拷貝的缺失；ICP47中的失活突變；和末端重複序列中ICP4的另一拷貝中的失活突變，並且其中該至少一種抗原的第一抗原是由野生型HSV-1的立即早期基因的啟動子所驅動，該至少一種抗原的第二抗原融合到第一HSV-1糖蛋白中，並且該至少一種抗原的第三抗原融合到第二HSV-1糖蛋白中。
術語「內部反向重複區的缺失」、「ICP47中的失活突變」、「ICP4的另一拷貝中的失活突變」、「立即早期基因的啟動子」、「第一抗原」和「第二抗原」具有與上述相同的定義和延伸。
第一抗原、第二抗原和第三抗原源自彼此不同的來源，例如，不同的變異株或不同的物種。在較佳的具體實施例中，第一抗原、第二抗原和第三抗原來自屬於同一科、屬、亞屬或種的病毒、細菌或寄生蟲。例如，在一些具體實施例中，第一抗原、第二抗原和第三抗原來自病毒的同一屬或亞屬。在一些具體實施例中，第一抗原、第二抗原和第三抗
原來自沙貝病毒。在一些具體實施例中，第一抗原、第二抗原和第三抗原來自SARS-Cov、SARS-Cov-2或其變異株。在一些具體實施例中，第一抗原、第二抗原和第三抗原來自SARS-Cov-2或其變異株。在一些具體實施例中，第一抗原、第二抗原和第三抗原來自不同的SARS-Cov-2變異株。在一些具體實施例中，第一抗原、第二抗原和第三抗原中的至少兩者來自SARS-Cov-2的delta或omicron變異株。在一些具體實施例中，第一抗原、第二抗原和第三抗原中的兩者來自SARS-Cov-2的delta或omicron變異株，而另一個來自SARS-Cov或其變異株。
在一些具體實施例中，第一抗原是SARS-Cov-2或其變異株的刺突糖蛋白的胞外結構域，第二抗原是與第一抗原由其衍生的SARS-Cov-2或其變異株不同的SARS-Cov-2或其變異株的刺突糖蛋白的NTD結構域，並且第三抗原是SARS-Cov或其變異株的刺突糖蛋白的RBD結構域。
在一些具體實施例中，第一抗原是SARS-Cov-2的delta變異株的刺突糖蛋白的胞外結構域，第二抗原是SARS-Cov-2的刺突糖蛋白的NTD結構域，並且第三抗原是SARS-Cov或其變異株的刺突糖蛋白的RBD結構域。在一些具體實施例中，第一抗原是SARS-Cov-2的delta變異株的刺突糖蛋白的胞外結構域，第二抗原是SARS-Cov或其變異株的刺突糖蛋白的RBD結構域，並且第三抗原是SARS-Cov-2的刺突糖蛋白的NTD結構域。
在一些具體實施例中，第一HSV-1糖蛋白和第二HSV-1糖蛋白是gC和gE。在一些具體實施例中，第一HSV-1糖蛋白是gC，並且
第二HSV-1糖蛋白是gE。在一些具體實施例中，第一HSV-1糖蛋白是gE，並且第二HSV-1糖蛋白是gC。
在一些具體實施例中，第一HSV-1糖蛋白是gE，第二抗原是SARS-Cov-2或其變異株的刺突糖蛋白的NTD結構域，第二HSV-1糖蛋白是gC，並且第三抗原是SARS-Cov或其變異株的刺突糖蛋白的RBD結構域。
在一些具體實施例中，改變HSV-1 gC以使C3結合失活。在一些具體實施例中，透過C3結合結構域中的缺失實現C3結合的失活。在一些具體實施例中，透過缺失結合區II/III，即aa 276至aa 366，實現C3結合的失活。在一些具體實施例中，SARS-Cov(例如，Tor 2株)的刺突糖蛋白的RBD結構域被插入，以替代結合區II/III。
在一些具體實施例中，改變HSV-1 gE以使FcR結合失活。在一些具體實施例中，透過FcR結合結構域中的缺失實現FcR結合的失活。在一些具體實施例中，在HSV-1 F株的gE的情況下，透過缺失aa 235至380實現FcR結合的失活。在一些具體實施例中，SARS-Cov-2(例如，Wuhan-Hu-1株)的刺突糖蛋白的NTD結構域被插入，以替代FcR結合結構域。
在一些具體實施例中，第一HSV-1糖蛋白是gE，第二抗原是被插入以替代FcR結合結構域的SARS-Cov-2(例如，Wuhan-Hu-1株)的刺突糖蛋白的NTD結構域，第二HSV-1糖蛋白是gC，並且第二抗原是被插入以替代C3結合結構域的結合區II/III的SARS-Cov(例如，Tor
2株)的刺突糖蛋白的RBD結構域。
疫苗組合物
本公開的另一方面涉及疫苗組合物，該疫苗組合物包含如本文所述的HSV-1病毒疫苗和醫藥上可接受的載體。潛在的載體包括但不限於生理平衡的培養基、磷酸鹽緩衝鹽水溶液、水、乳液(例如，油/水或水/油乳液)、各種類型的潤濕劑、冷凍保護添加劑或穩定劑，如蛋白質、胜肽或水解產物(例如，白蛋白、明膠)、糖(例如，蔗糖、乳糖、山梨糖醇)、胺基酸(例如，麩酸鈉)或其他保護劑。所得水溶液可以原樣包裝使用或凍乾。凍乾製劑在施用前與無菌溶液合併，用於單劑量或多劑量。配製的組合物，尤其是液體製劑，可包含抑菌劑以防止或最小化在儲存期間的降解，包括但不限於有效濃度(通常1% w/v)的苯甲醇、苯酚、間甲酚、氯丁醇、對羥苯甲酸甲酯及/或對羥苯甲酸丙酯。抑菌劑可能對一些患者有禁忌；因此，凍乾製劑可在含有或不含這種組分的溶液中重構。
本公開的疫苗組合物可包含接近生理條件所必需的醫藥上可接受的載體物質，如pH調節和緩衝劑、張力調節劑、潤濕劑等，例如乙酸鈉、乳酸鈉、氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、山梨糖醇單月桂酸酯(sorbitan monolaurate)和三乙醇胺油酸酯(triethanolamine oleate)。疫苗組合物可任選地包括佐劑以增強宿主的免疫反應。合適的佐劑是，例如，Toll樣受體(TLR)激動劑、鋁鹽、AlPO4、alhydrogel、脂質-A以及其衍生物或變體、油乳劑、皂苷、中性微脂體、含有疫苗和細胞因子的微脂體、非離子嵌段共聚物和趨化因子。包含聚氧乙烯(POE)和聚二甲基丙
烯(POP)的非離子嵌段聚合物，如POE-POP-POE嵌段共聚物、MPLTM(3-O-脫醯化單磷醯脂質A；Corixa，Hamilton，Ind.)和IL-12(Genetics Institute，Cambridge，Mass.)以及本領域熟知的許多其他合適的佐劑，可用作佐劑(Newman等人，1998年，Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier System，第15卷：第89-142頁)。這些佐劑的優點在於它們以非特異性方式幫助刺激免疫系統，從而增強對藥物產品的免疫反應。在一些具體實施例中，本公開的免疫原性組合物可包括一種以上的佐劑或與一種以上的佐劑一起施用。在一些具體實施例中，本公開的免疫原性組合物可包括兩種佐劑或與兩種佐劑一起施用。在一些具體實施例中，本公開的免疫原性組合物可包括多種佐劑或與多種佐劑一起施用。
對於疫苗組合物，合適的佐劑的實施例包括，例如氫氧化鋁、卵磷脂、弗氏佐劑、MPLTM和IL-12。在一些具體實施例中，本文公開的疫苗組合物(例如，SARS-Cov-2疫苗組合物)可被配製為控制釋放或緩釋製劑。這可在包含緩釋聚合物的組合物中實現，或者經由微封裝的遞送系統或生物粘合劑凝膠實現。各種疫苗組合物可根據本領域熟知的標準程序製備。
在一些具體實施例中，本公開的疫苗組合物可包含佐劑製劑，該佐劑製劑包含水包油乳液形式的可代謝油(例如，角鯊烯)和α生育酚，以及聚氧乙烯山梨糖醇單油酸酯(polyoxyethylene sorbitan monooleate)(吐溫-80(Tween-80))。在一些具體實施例中，佐劑製劑可包含約2%至約10%的角鯊烯、約2%至約10%的α生育酚(例如，D-α-生
育酚)和約0.3%至約3%的聚氧乙烯山梨糖醇單油酸酯。在一些具體實施例中，佐劑製劑可包含約5%的角鯊烯、約5%的生育酚和約0.4%的聚氧乙烯山梨糖醇單油酸酯。在一些具體實施例中，本公開的免疫原性組合物可包含3 de-O-醯化單磷醯脂質A(3D-MPL)和水包油乳液形式的佐劑，該佐劑包含可代謝油、α生育酚和聚氧乙烯山梨糖醇單油酸酯。在一些具體實施例中，本公開的疫苗組合物可包含QS21(皂樹提取物：級分21)、3D-MPL和水包油乳液，其中水包油乳液包含可代謝油、α生育酚和聚氧乙烯山梨糖醇單油酸酯。在一些具體實施例中，本公開的疫苗組合物可包含QS21、3D-MPL和水包油乳液，其中水包油乳液具有下列組成：可代謝油，如角鯊烯、α生育酚、吐溫-80。在一些具體實施例中，本公開的疫苗組合物可包含微脂體組合物形式的佐劑。
在一些具體實施例中，本公開的疫苗組合物可包含佐劑製劑，該佐劑製劑包含可代謝油(例如，角鯊烯)、聚氧乙烯山梨糖醇單油酸酯(吐溫-80)和司盤85(Span 85)。在一些具體實施例中，佐劑製劑可包含約5%(w/v)的角鯊烯、約0.5%(w/v)的聚氧乙烯山梨糖醇單油酸酯和約0.5%(w/v)的司盤85。
在一些具體實施例中，本公開的疫苗組合物可包含例如以奈米顆粒組合物的形式的佐劑製劑，該佐劑製劑包含皂樹皂苷(Quillaja saponins)、膽固醇和磷脂。在一些具體實施例中，本公開的疫苗組合物可包含皂樹的單獨純化級分的混合物，隨後將其與膽固醇和磷脂一起配製。在一些具體實施例中，本公開的疫苗組合物可包含選自MF59TM、Matrix-
ATM、Matrix-CTM、Matrix-MTM、AS01、AS02、AS03和AS04的佐劑。
一種或多種佐劑可組合使用，並且可包括但不限於鋁(鋁鹽)、水包油乳液、油包水乳液、微脂體和微粒，如聚(丙交酯-共-乙交酯)微粒。在一些具體實施例中，疫苗組合物進一步包含鋁鹽佐劑。在一些具體實施例中，鋁鹽佐劑包含由無定形羥基磷酸硫酸鋁、氫氧化鋁、磷酸鋁和硫酸鋁鉀所組成的群組中的一者或多者。在一些具體實施例中，鋁鹽佐劑包含氫氧化鋁和磷酸鋁中的一者或兩者。在一些具體實施例中，鋁鹽佐劑包含氫氧化鋁。在一些具體實施例中，疫苗組合物的單位劑量包含約0.25mg至約0.50mg Al3+、或約0.35mg Al3+。在一些具體實施例中，疫苗組合物進一步包含另外的佐劑。
方法和用途
在一些具體實施例中，本文提供了用於在受試者中產生免疫反應的方法，該方法包含向該受試者施用有效量的HSV-1病毒疫苗或本文所述的疫苗組合物。
在一些具體實施例中，本文提供了用於在受試者中產生針對冠狀病毒的表面抗原的免疫反應的方法，其中該表面抗原包含S蛋白或其抗原片段，並且該方法包含向該受試者施用有效量的HSV-1病毒疫苗或本文所述的疫苗組合物。
可選擇患有冠狀病毒感染或處於發生冠狀病毒感染的風險中的受試者進行治療，例如由於暴露於冠狀病毒或可能暴露於冠狀病毒。
在施用本公開的疫苗後，可監測受試者的與冠狀病毒相關的感染或症狀，或兩者。
打算用本公開的疫苗和方法治療的典型受試者包括人，以及非人類的靈長類動物和其他動物。為了鑑定用於根據本公開的方法進行預防或治療的受試者，採用公認的篩選方法來確定與靶向或疑似疾病或病狀相關的風險因素，或確定受試者現有疾病或病狀的狀態。這些篩選方法包括例如確定與靶向或懷疑疾病或病狀相關的環境、家族、職業和其他這類危險因素的常規工作，以及診斷方法，諸如檢測及/或表徵冠狀病毒感染的各種ELISA和其他免疫測定方法。這些和其他常規方法允許臨床醫生選擇需要使用本公開的方法和藥物組合物治療的患者。根據這些方法和原理，組合物可根據本文的教導或其他常規方法作為獨立的預防或治療方案或作為對其他治療的隨訪、輔助或協調治療方案施用。
所公開的疫苗的施用可用於預防或治療目的。當預防性地提供時，在任何症狀之前，例如在感染之前提供所公開的疫苗。預防性施用所公開的疫苗用於預防或改善任何隨後的感染。當治療性地提供時，在疾病或感染症狀發作時或之後，例如在冠狀病毒感染症狀發展之後，或在冠狀病毒感染診斷之後提供所公開的疫苗。因此，可在預期暴露於冠狀病毒之前提供疫苗，以便減輕預期的感染及/或相關疾病症狀的嚴重性、持續時間或程度，也可在暴露與或疑似暴露於病毒之後，或在感染實際開始之後提供。
本文所述的疫苗以有效誘導或增強受試者(較佳為人)對
如冠狀病毒的免疫反應的量來提供給受試者。疫苗的實際劑量將根據以下因素而變化，如疾病適應症和受試者的具體狀態(例如，受試者的年齡、體型、健康程度、症狀程度、易感性因素等)、施用的時間和途徑、同時施用的其他藥物或治療、以及用於在受試者中引發期望的活性或生物學反應的組合物的具體藥理學。可調整劑量方案以提供最佳預防或治療反應。
可存在幾次加強劑。初次免疫和加強劑可作為單劑量或多劑量施用，例如可在數天、數周或數月內向受試者施用兩個劑量、三個劑量、四個劑量、五個劑量、六個劑量或更多個劑量。也可給予多次加強劑，如一次至五次(例如，1、2、3、4或5次加強劑)或更多次。在一系列連續免疫中可使用不同的劑量。例如，初次免疫中的劑量相對大，然後用相對較小的劑量加強。
在一些具體實施例中，加強劑可在初次免疫後約兩周、約三周至八周或約四周或初免之後約幾個月施用。在一些具體實施例中，加強劑可在初次免疫之後約5個月、約6個月、約7個月、約8個月、約10個月、約12個月、約18個月、約24個月或初次免疫之後更多更少的時間施用。在適當的時間點還可使用週期性的另外的加強劑以增強受試者的「免疫記憶」。選擇的疫苗接種參數，例如製劑、劑量、方案等的適當性可透過從受試者取等份血清並在免疫程序過程期間測定抗體滴度來確定。另外，可監測受試者的臨床狀況以獲得期望的效果，例如預防感染或改善疾病狀態(例如，降低病毒載量)。如果這種監測表明疫苗接種是次優的，則可用另外劑量的疫苗對受試者進行加強，並且可以預期增強免疫反
應的方式修改疫苗接種參數。
疫苗組合物中利用的量基於受試者群體(例如，嬰兒或老年人)選擇。特定組合物的最佳量可透過標準研究來確定，包括觀察受試者的抗體滴度和其他反應。應當理解，疫苗組合物中所公開疫苗的治療有效量可包括透過施用單一劑量在引發免疫反應方面無效但在施用多劑量後例如在初次免疫-加強劑施用方案中有效的量。
在施用本公開的公開疫苗後，受試者的免疫系統通常會對疫苗反應，其會透過產生對如疫苗中包含的冠狀病毒S蛋白胜肽具有特異性的抗體。這種反應表明免疫有效劑量被遞送至受試者。在一些具體實施例中，受試者的抗體反應將在評價有效劑量/免疫方案的背景下確定。在大多數情況下，評估從受試者獲得的血清或血漿中的抗體滴度是足夠的。關於是否施用加強接種及/或改變施用給個體的治療劑的量的決定可至少部分地基於抗體滴度程度。抗體滴度程度可基於例如免疫結合測定，該免疫結合測定測量血清中與抗原結合的抗體的濃度。
在一些具體實施例中，不需要完全消除或減少或預防冠狀病毒感染，該方法才有效。例如，與在免疫原不存在下感染冠狀病毒相比，用一種或多種本公開的疫苗引發針對冠狀病毒的免疫反應可以期望的量來減少或抑制冠狀病毒感染，例如至少10%、至少20%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或甚至至少100%(消除或預防可檢測感染細胞)。在另外的實施例中，冠狀病毒複製可透過本公開的方法來減少或抑制。不需要完全消除冠狀病毒複製，
該方法才有效。例如，與在免疫反應不存在下冠狀病毒的複製相比，使用一種或多種所公開的免疫原引發的免疫反應可以期望的量來減少對應冠狀病毒的複製，例如至少10%、至少20%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或甚至至少100%(消除或預防可檢測冠狀病毒複製)。
在一些具體實施例中，向受試者施用治療有效量的一種或多種所公開的疫苗誘導了受試者的中和免疫反應。為了評估中和活性，在對受試者進行免疫後，可在適當的時間點從受試者收集血清，冷凍，並儲存用於中和測試。測定中和活性的方法是本領域普通技術人員已知的，並且在本文中進一步描述，並且包括但不限於，溶斑減少中和(plaque reduction neutralization，PRNT)測定、微量中和測定、基於流式細胞術的測定、單迴圈感染測定。在一些具體實施例中，可使用一組冠狀病毒假病毒來測定血清中和活性。
在一些具體實施例中，由本文公開的疫苗誘導的中和免疫反應產生了針對冠狀病毒如SARS-Cov-2的中和抗體。在一些具體實施例中，本文的中和抗體結合冠狀病毒如SARS-Cov-2的細胞受體或共受體或其組分。在一些具體實施例中，病毒受體或共受體是冠狀病毒受體或共受體，較佳為肺炎病毒受體或共受體，更佳為人類冠狀病毒受體，如SARS-Cov-2受體或共受體。在一些具體實施例中，本文的中和抗體於體外、原位及/或體內調節、降低、拮抗、減輕、阻斷、抑制、消除及/或干擾至少一種冠狀病毒如SARS-Cov-2活性或結合，或冠狀病毒如SARS-Cov-2受
體活性或結合，如SARS-Cov-2釋放、SARS-Cov-2受體訊號傳導、膜SARS-Cov-2切割、SARS-Cov-2活性、SARS-Cov-2產生及/或合成。在一些具體實施例中，本文所公開的疫苗誘導針對SARS-Cov-2的中和抗體，這些中和抗體調節、減少、拮抗、減輕、阻斷、抑制、消除及/或干擾SARS-Cov-2與SARS-Cov-2受體或共受體的結合，該受體或共受體如血管張力素轉換酶2(ACE2)、二肽基肽酶4(dipeptidyl peptidase 4，DPP4)、樹突細胞特異性細胞間黏附分子-3-抓取非整聯蛋白(dendritic cell-specific intercellular adhesion molecule-3-grabbing non integrin，DC-SIGN)及/或肝/淋巴結-SIGN(L-SIGN)。
在一些具體實施例中，由本文所公開的疫苗誘導的中和免疫反應產生了針對包括SARS-Cov、SARS-Cov-2以及其變異株的沙貝病毒的中和抗體。在這種意義上，本文提供的疫苗是泛沙貝病毒疫苗。
這種疫苗組合物可透過本領域普通技術人員已知的多種施用模式施用給受試者，例如，肌內、皮內、皮下、靜脈內、動脈內、關節內、腹膜內、鼻內、舌下、扁桃體、口咽或其他腸胃外和黏膜途徑。
序列
gD-SECTO胺基酸序列(SEQ ID NO：1)
註記：gD訊號胜肽以底線標示；SARS-Cov-2的delta變異株的胞外結構域以陰影化標示；gD跨膜-病毒粒子內結構域以框標示；*表示終止密碼子。
gB-SECTO胺基酸序列(SEQ ID NO：2)
註記：gB訊號胜肽以底線標示；SARS-Cov-2的delta變異株的胞外結構域以陰影化標示；gB跨膜-病毒粒子內結構域以框標示；*表示終止密碼子。
gC-SRBD胺基酸序列(SEQ ID NO：3)
註記：SARS-Cov Tor2 RBD結構域以陰影化標示；*表示終止密碼子。
gE-SNTD胺基酸序列(SEQ ID NO：4)
註記：SARS-Cov-2 Wuhan-Hu-1 NTD結構域以陰影化標示；*表示終止密碼子。
實施例
非複製HSV-1病毒載體MVR-△IR4和MVR-△IR47的構建。
圖1顯示HSV-1(F)、MVR-△IR4和MVR-△IR47基因組的示意圖。非複製HSV-1病毒載體MVR-△IR4包含末端重複(TR)區中ICP4基因的缺失以及經修飾的內部重複(IR)區，該經修飾的IR區含有被CMV啟動子和隨後的終止密碼子的三個重複序列替代的編碼ICP0、ICP4、ICP34.5、LAT、ORF P和ORF O的一個拷貝基因。非複製HSV-1病毒載體MVR-△IR47在MVR-△IR4載體的基礎上包含額外的ICP47基因的缺失。重組病毒是在細菌人工染色體(BAC)系統的說明下，透過幾
個步驟構建的。
病毒構建的細節描述如下。使用原型(P)佈置的HSV-1(F)。在野生型基因組的背景下，側翼為上游是核苷酸117005和下游是核苷酸132096的CMV盒分別透過兩組引子(GAAGATCTAATATTTTTATTGCAACTCCCTG(SEQ ID NO：5)、CTAGCTAGCTTATAAAAGGCGCGTCCCGTGG(SEQ ID NO：6))和(GCTCTAGATTGCGACGCCCCGGCTC(SEQ ID NO：7)、CCTTAATTAAGGTTACCACCCTGTAGCCCCGATGT(SEQ ID NO：8))從HSV-1病毒基因組中進行PCR擴增，並被插入到基因置換質體pKO5中，以產生pKO-CMV-STOP。然後透過電穿孔用BAC-HSV-1(F)將pKO-CMV-STOP轉染到大腸桿菌(Escherichia coli)以產生BAC-CMV-STOP。然後，在野生型基因組的情況下，含有核苷酸145867-146977的5’-側翼序列和核苷酸150887-151868的3’-側翼序列的pKO-△ICP4質體分別透過兩組引子(ATCCCGAGCCGGGGCGTCGCGATGCCGA(SEQ ID NO：9)、CGCCGATGCGGGGCGATCCTCCGGGGATACGGCTGC(SEQ ID NO：10))和(CGGGCCGGGACGGGGCGGGGCGCTTGCGAAAC(SEQ ID NO：11)、AACGCCCGCCGCGCGCGCGCACGCCGCCCGGACC(SEQ ID NO：12))從HSV-1病毒基因組中進行PCR擴增，透過電穿孔轉染到攜帶BAC-CMV-STOP的大腸桿菌中以產生BAC-△IR4。MVR-△IR4病毒透過轉染BAC-△IR4質體隨後在E5細胞(Vero衍生的，ICP4補充細胞株)中
擴增來獲得。
MVR-△IR47是在MVR-△IR4載體的基礎上額外缺失ICP47基因。在野生型基因組的情況下，含有核苷酸146977-145867的5’-側翼序列和核苷酸145088-143761的3’-側翼序列的pKO-△ICP47質體分別透過兩組引子(CGCCGATGCGGGGCGATCCTCCGGGGATACGG(SEQ ID NO：13)、TCCCGAGCCGGGGCGTCGCGATGCCGACGCCG(SEQ ID NO：14))和(ATGAGCCAGACCCAACCCCCGGCCCCAGTTGG(SEQ ID NO：15)、CAGAAAATGTAACCATACCCAAACCGACTCT(SEQ ID NO：16))從HSV-1病毒基因組中進行PCR擴增，透過電穿孔轉染到攜帶BAC-△IR4的大腸桿菌中以產生BAC-△IR47。MVR-△IR47病毒透過轉染BAC-△IR47質體隨後在E5細胞(Vero衍生的，ICP4補充細胞株)中擴增來獲得。
基於非複製HSV-1的沙貝病毒刺突蛋白疫苗病毒MVR-S-gB和MVR-S-gD的構建。
MVR-S-gB是基於MVR-△IR47的病毒，其由SARS-Cov-2 Delta株B.1.617.2刺突的胞外結構域和gB蛋白的跨膜結構域(TM)和胞質尾區(CT)組成。MVR-S-gD是基於MVR-△IR47的病毒，其由SARS-Cov-2 Delta株B.1.617.2刺突的胞外結構域和gD蛋白的跨膜結構域(TM)和胞質尾區(CT)組成。
在野生型基因組的情況下，其中SRBD盒的側翼為核苷酸
95401-97031的5’-側翼序列和核苷酸97311-98692的3’-側翼序列之pKO-gC-SRBD質體分別透過兩組引子(GGGCCACCGTCCCCCCCGACACCCCAACGA(SEQ ID NO：17)、GTGGGGCTGGAGGGTCAGAGACGGGGGGCGG(SEQ ID NO：18))和(CTGGTGCTGCCGCGGCCAACCATCACCATG(SEQ ID NO：19)、ACGCCTCCACCCGTGCTGCCGTCGCTAGAC(SEQ ID NO：20))從HSV-1病毒基因組中進行PCR擴增，透過電穿孔轉染到攜帶BAC-△IR47的大腸桿菌中以產生BAC-△IR47-SgC。
在野生型基因組的情況下，其中SNTD盒的側翼為核苷酸140341-141812的5’-側翼序列和核苷酸142251-143580的3’-側翼序列之pKO-gE-SNTD質體分別透過兩組引子(AAGCATCGACCACACCCTTCCCCACGGGA(SEQ ID NO：21)、AAACAGGATAGCTTCCGGAGTCTCCATACGCA(SEQ ID NO：22))和(TACCGGAACGCGGTGGTGGAACAGCCCCTC(SEQ ID NO：23)、AAAAATCAACCGGGAGACAACATTGCCAAT(SEQ ID NO：24))從HSV-1病毒基因組中進行PCR擴增，透過電穿孔轉染到攜帶BAC-△IR47-SgC的大腸桿菌中以產生BAC-△IR47-SgC-SgE。
在野生型基因組的情況下，其中SECTO盒的側翼為核苷酸145867-146977的5’-側翼序列和核苷酸150887-151868的3’-側翼序列之pKO-gB-SECTO或pKO-gD-SECTO質體分別透過兩組引子(ATCCCGAGCCGGGGCGTCGCGATGCCGA(SEQ ID NO：25)、
CGCCGATGCGGGGCGATCCTCCGGGGATACGGCTGC(SEQ ID NO：26))和(CGGGCCGGGACGGGGCGGGGCGCTTGCGAAAC(SEQ ID NO：27)、AACGCCCGCCGCGCGCGCGCACGCCGCCCGGACC(SEQ ID NO：28))從HSV-1病毒基因組中進行PCR擴增，透過電穿孔轉染到攜帶BAC-△IR47-SgC-SgE的大腸桿菌中以產生BAC-S-gB或BAC-S-gD。MVR-S-gB和MVR-S-gD病毒透過轉染BAC-S-gB或BAC-S-gD質體隨後在E5細胞(Vero衍生的，ICP4補充細胞株)中擴增來獲得。
材料和方法
顯微鏡分析
透過EVOS XL核心成像系統記錄感染細胞的形態學表型。為了分析感染細胞的表型，使Vero或E5細胞在150cm2燒瓶中生長，並用MVR-△IR4或MVR-△IR47病毒感染。在感染後48小時，透過EVOS XL核心顯微鏡觀察每個細胞的形態，並記錄原始數位圖像。
免疫墨點測定
75cm2燒瓶接種有6×106個E5或Vero細胞。在37℃下孵育過夜之後，細胞被模擬(mock)感染或以每細胞10PFU的HSV-1(F)、MVR-S-gB、MVR-S-gD感染。在感染後24小時收穫細胞，並用RIPA緩衝液(Beyotime)裂解。將細胞裂解物在100℃下加熱10分鐘，然後裝載到8% SDS-PAGE凝膠上。將蛋白質轉移到聚偏二氟乙烯(PVDF)膜(Minipore)上，並將膜用5%牛奶的PBST溶液在室溫
(RT)下阻斷1小時，並在4℃下與針對SARS-Cov-2刺突蛋白(目錄號42172，CST)、gE(目錄號ab6510，Abcam)、gC(目錄號ab6509，Abcam)、ICP4(目錄號ab6514，Abcam)、ICP27(目錄號ab53480，Abcam)、ICP8(目錄號ab20194，Abcam)、ICP0(目錄號ab6513，Abcam)、gD(目錄號sc-21719，Santa Cruz)或GAPDH(目錄號2118S，CST)的初級抗體反應過夜。然後在振盪器上用PBST將膜洗滌3次，並在RT下與HRP綴合的山羊抗小鼠IgG(目錄號31430，Invitrogen)或HRP綴合的山羊抗兔IgG(目錄號31460，Invitrogen)一起孵育1小時。然後在振盪器上用PBST將膜洗滌3次，並加入ECL西方墨點受質(目錄號WBKLS0500，Minipore)，將墨點透過ChemiDoc XRS+(Bio-rad)成像。
小鼠免疫研究。本研究使用雌性BalB/c小鼠。為了使用MVR-S-gB或陰性對照進行肌內疫苗接種，製備200μL總體積的d120病毒，其中含有或不含有鋁作為佐劑。以14天為間隔對所有小鼠進行三次免疫。在研究的第0、8、14、22、28、36、43和50天從眶竇收集血液。透過低速離心分離血清，並在-80℃下儲存直至使用。
假型病毒中和測定。PNA是使用慢病毒透過Genscript進行的，慢病毒編碼螢光酵素並分別展示Wuhan-Hu-1株、Delta株或Omicron BA1株的刺突蛋白。為了測量血清中的中和抗體活性，將小鼠血清以1：50稀釋在opti-MEM緩衝液中。此後，將25μL等份的稀釋血清、陽性對照ACE2蛋白或陰性對照測定緩衝液與25μL等份的含有500
TCID50的基於HIV之SARS-Cov-2假病毒在96孔盤中在RT下孵育1小時。在孵育結束時，將50μL混合物加入Opti-HEK293/ACE2標靶細胞，在37℃下孵育24小時。此後，透過螢光酵素測定來分析細胞。使用GraphPad Prism 6.0進行資料分析。陰性組的發光強度用作截止值以鑑定中和抗體的陽性。
非複製HSV-1病毒載體僅在病毒ICP4補充細胞中複製
將Vero或E5細胞以1.2×107個細胞/cm2的密度接種到150cm2燒瓶中。在孵育過夜之後，以每細胞1PFU的MVR-△IR4和MVR-△IR47感染細胞。在感染後48小時，透過EVOS XL核心顯微鏡觀察每個細胞的形態，並記錄原始數位圖像。
如圖2所示，複製缺陷MVR-AIR4和MVR-△IR47病毒僅能在E5細胞(Vero衍生的，ICP4補充細胞株)而不是在Vero細胞中複製並引起細胞病變效應(CPE)。
圖3顯示基於非複製HSV-1的沙貝病毒刺突蛋白疫苗病毒的構建模型。
綠色球形表示SARS-Cov-2 Delta株B.1.617.2刺突的胞外結構域(SECTO)。糖蛋白-SECTO是嵌合體，其中SECTO與gB或gD蛋白的跨膜結構域(TM)和胞質尾區(CT)連接。淺綠色梯形表示SARS-Cov-2野生型Wuhan-Hu-1刺突的NTD結構域(SNTD)。gE-SNTD是嵌合體，其中gE蛋白中237-382的胺基酸被SARS-Cov-2 WT Wuhan-Hu-1刺突的NTD
結構域替代。紅色矩形表示SARS冠狀病毒Tor2(SARS Tor2)刺突的RBD結構域(SRBD)。gC-SRBD是嵌合體，其中gC蛋白中275-367的胺基酸被SARS冠狀病毒Tor2(SARS Tor2)刺突的RBD結構域替代。紅十字表示病毒基因組複製缺陷修飾。
圖4顯示MVR-△IR47、MVR-S-gB或MVR-S-gD基因組的示意圖。
圖5顯示gC-SRBD嵌合體的結構，其中gC蛋白中275-367的胺基酸被SARS冠狀病毒Tor2(SARS Tor2)刺突的RBD結構域替代。
圖6顯示gE-SNTD嵌合體的結構，其中gE蛋白中237-382的胺基酸被SARS-Cov-2 WT Wuhan-Hu-1刺突的NTD結構域替代。
圖7顯示gB-SECTO嵌合體的結構，其中SECTO與gB蛋白的跨膜結構域和胞質尾區(TM/CT)連接。
圖8顯示gD-SECTO嵌合體的結構，其中SECTO與gD蛋白的跨膜結構域和胞質尾區(TM/CT)連接。
基於非複製HSV-1的刺突蛋白疫苗病毒在E5細胞中的蛋白表現
圖9顯示MVR-S-gB和MVR-S-gD感染的E5細胞中gC、gC-SRBD、gE-SNTD、gB-SECTO或gD-SECTO蛋白的積累。75cm2燒瓶接種有6×106個E5或Vero細胞。在37℃下孵育過夜之後，細胞被模擬感染或以每細胞10PFU的HSV-1(F)、MVR-S-gB、MVR-S-gD感染。在感染後
24小時收穫細胞。透過免疫墨點測定檢測gC、gC-SRBD、gE-SNTD、gB-SECTO或gD-SECTO蛋白表現。
如圖9所示，在感染的E5細胞中，MVR-S-gB病毒比MVR-S-gD病毒更有效地表現刺突融合蛋白。
MVR-S-gB病毒感染的E5和Vero細胞中HSV病毒蛋白的積累
圖10顯示MVR-S-gB病毒感染的E5和Vero細胞中HSV-1代表性病毒蛋白的積累。75cm2燒瓶接種有6×106個E5或Vero細胞。在37℃下孵育過夜之後，細胞被模擬感染以及以每細胞10PFU的HSV-1(F)、MVR-S-gB感染。在感染後24小時收穫細胞。透過免疫墨點測定檢測代表性病毒蛋白ICP4、ICP27、ICP0、ICP8、gD和MVR-S-gB病毒融合蛋白gB-SECTO的表現。
如圖10所示，MVR-S-gB在補充ICP4的E5細胞(Vero衍生的，ICP4補充細胞株)中有效表現所有檢測到的病毒蛋白，即ICP4(α)、ICP27(α)、ICP0(α)、ICP8(β)和gD(γ)(代表病毒立即早期(α)、早期(β)和晚期(γ)基因)，而在Vero細胞中僅表現立即早期(α)基因產物ICP27和ICP0。所有這些結果表明，IR區以及TR區ICP4基因的缺失導致ICP4基因的兩個拷貝被破壞的MVR-S-gB病毒使得載體複製缺陷，並且是有希望的沙貝病毒疫苗候選物。
動物疫苗接種
圖11顯示動物免疫的設計。使用六至八周齡雌性BalB/c小鼠。在鋁(aluminum，Alum)存在下用缺乏ICP4基因的陰性對照d120病毒對第1組(n=7)進行接種。在鋁存在或不存在下，用MVR-S-gB對第2至9組(n=7)進行接種。在D1、D15和D29，經由肌內(I.M.)途徑施用d120或MVR-S-gB。在D0、D8、D14、D22、D28、D36、D43和D50，收集血清樣本。表1顯示動物免疫的實驗設計。
表1、動物免疫的實驗設計
在鋁存在或不存在下，用MVR-S-gB(n=7)或陰性對照d120病毒對六至八周齡雌性BALB/c小鼠進行接種。在D1、D15和D29，經由肌內途徑進行三次免疫。在D36收集的血清樣本用於假型病毒中和測定。在中和測定中，使用基於HIV的Wuhan-Hu-1株或B.1.617.2 Delta株假病毒以技術雙重測試七份小鼠血清樣本中的三份。在中和測定中，使用Omicron BA1株假病毒以技術雙重測試來自各組的合併血清。
圖12顯示使用基於HIV的假型病毒的微量中和測定。如圖12所示，所有接種MVR-S-gB的組以劑量依賴性方式誘導針對Wuhan-Hu-1株(A)和Delta株(B)的中和抗體。此外，用4×106PFU或2×107PFU的MVR-S-gB免疫的組別所誘導針對Omicron BA1株(C)的中和抗體，並且還以劑量依賴性方式誘導，這表明透過MVR-S-gB誘導了針對泛沙貝病毒的交叉中和抗體。
MVR-S-gB疫苗可誘導長達至少6個月的持久性中和抗體。
在鋁存在或不存在下，用MVR-S-gB(n=7)或陰性對照d120病毒對六至八周齡雌性BALB/c小鼠進行接種。在D1、D15和D29，經由肌內途徑進行三次免疫。在第三次疫苗接種後3個月(圖13A)和6個月(圖13B)收集血清樣本，並用於假型病毒中和測定。在針對Delta株的假病毒中和測定中，以技術重複測試來自各組的合併小鼠
血清。
如圖13所示，接種MVR-S-gB的組別可誘導針對Delta株的持久性中和抗體長達至少6個月。
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Claims (30)
- 一種複製缺陷型單純疱疹病毒第1型(HSV-1)病毒疫苗，該複製缺陷型HSV-1病毒疫苗包含一經修飾的HSV-1基因組和至少一種抗原，其中該修飾包含：一內部反向重複區的缺失，該缺失導致包括ICP0、ICP34.5、ICP4和潛伏相關轉錄本(LAT)的雙拷貝基因中的每一者的一個拷貝的缺失，一ICP47中的失活突變，以及一末端重複序列中ICP4的另一拷貝中的失活突變，並且其中該至少一種抗原的一第一抗原是由野生型HSV-1的立即早期基因的啟動子所驅動。
- 如請求項1所述的複製缺陷型HSV-1病毒疫苗，其中該野生型HSV-1的立即早期基因是ICP0、ICP27、ICP4、ICP22或ICP47。
- 如請求項1所述的複製缺陷型HSV-1病毒疫苗，其中該野生型HSV-1的立即早期基因是ICP4。
- 如請求項3所述的複製缺陷型HSV-1病毒疫苗，其中該末端重複序列中ICP4的另一拷貝中的失活突變是ICP4的編碼序列中的缺失。
- 如請求項4所述的複製缺陷型HSV-1病毒疫苗，其中該至少一種抗原的該第一抗原與該末端重複序列中ICP4的啟動子可操作地連接。
- 如請求項1所述的複製缺陷型HSV-1病毒疫苗，其中該至少一種抗原的該第一抗原與驅動啟動子一起被插入到對應於所缺失的內部反向重複區的位置。
- 如請求項1至6中任一項所述的複製缺陷型HSV-1病毒疫苗，其中該至少一種抗原的一第二抗原被融合到第一HSV-1糖蛋白中。
- 如請求項7所述的複製缺陷型HSV-1病毒疫苗，其中該至少一種抗原的一第三抗原被融合到第二HSV-1糖蛋白中。
- 如請求項8所述的複製缺陷型HSV-1病毒疫苗，其中該第一HSV-1糖蛋白或第二HSV-1糖蛋白是糖蛋白gC或gE。
- 如請求項9所述的複製缺陷型HSV-1病毒疫苗，其中改變該糖蛋白gC以使C3結合失活，並且其中改變該糖蛋白gE以使FcR結合失活。
- 如請求項10所述的複製缺陷型HSV-1病毒疫苗，其中該糖蛋白gC在C3結合結構域中包含缺失，並且其中該糖蛋白gE在FcR結合結構域中包含缺失。
- 如請求項1至11中任一項所述的複製缺陷型HSV-1病毒疫苗，其中該第一抗原在N末端與糖蛋白gB或gD訊號胜肽連接，並且在C末端與糖蛋白gB或gD的跨膜-病毒粒子內結構域連接。
- 如請求項8所述的複製缺陷型HSV-1病毒疫苗，其中該第一抗原、該第二抗原或該第三抗原來自病毒、細菌或寄生蟲。
- 如請求項8所述的複製缺陷型HSV-1病毒疫苗，其中該第一抗原、該第二抗原或該第三抗原來自沙貝病毒。
- 如請求項14所述的複製缺陷型HSV-1病毒疫苗，其中該第一抗原、該第二抗原或該第三抗原來自SARS-Cov、SARS-Cov-2以及其變異株。
- 如請求項15所述的複製缺陷型HSV-1病毒疫苗，其中該第一抗原來自SARS-Cov-2的delta或omicron變體，該第二抗原和第三抗原來自SARS-Cov、SARS-Cov-2以及其變異株。
- 如請求項16所述的複製缺陷型HSV-1病毒疫苗，其中該第一抗原來自SARS-Cov-2的delta變體，該第二抗原來自SARS-Cov Tor2株，並且該第三抗原來自SARS-Cov-2 Wuhan-Hu-1株。
- 如請求項1至11中任一項所述的複製缺陷型HSV-1病毒疫苗，其中該第一抗原是SARS-Cov-2的delta變體的刺突糖蛋白的胞外結構域或其免疫原性等價變體。
- 如請求項18所述的複製缺陷型HSV-1病毒疫苗，其中該胞外結構域或其免疫原性等價變體在N末端與糖蛋白gB訊號胜肽連接，並且在C末端與糖蛋白gB的跨膜-病毒粒子內結構域連接。
- 如請求項19所述的複製缺陷型HSV-1病毒疫苗，其中該胞外結構域的免疫原性等價變體具有K986P/V987P突變及/或682-GSAS-685突變。
- 如請求項15或18所述的複製缺陷型HSV-1病毒疫苗，其中該第二抗原和該第三抗原中的一者是SARS-Cov Tor2株的刺突糖蛋白的受體結合結構域，並且另一者是SARS-Cov-2 Wuhan-Hu-1株的刺突糖蛋白的N末端結構域，或其各自的免疫原性等價變體。
- 如請求項21所述的複製缺陷型HSV-1病毒疫苗，其中該第二抗原是SARS-Cov Tor2株的刺突糖蛋白的受體結合結構域或其免疫原性等價變體，並且該第一HSV-1糖蛋白是糖蛋白gC。
- 如請求項22所述的複製缺陷型HSV-1病毒疫苗，其中該受體結合結構域或其免疫原性等價變體被融合到糖蛋白gC中，以替代其C3結合結構域。
- 如請求項21所述的複製缺陷型HSV-1病毒疫苗，其中該第二抗原是SARS-Cov-2 Wuhan-Hu-1株的刺突糖蛋白的N末端結構域或其免疫原性等價變體，並且該第一HSV-1糖蛋白是糖蛋白gE。
- 如請求項24所述的複製缺陷型HSV-1病毒疫苗，其中該SARS-Cov-2 Wuhan-Hu-1株的刺突糖蛋白的N末端結構域或其免疫原性等價變體被融合到糖蛋白gE中，以替代其FcR結合結構域。
- 如請求項1所述的複製缺陷型HSV-1病毒疫苗，其中該ICP47中的失活突變是ICP47的編碼序列中的缺失。
- 如請求項5所述的複製缺陷型HSV-1病毒疫苗，其中該反向內部重複區被CMV啟動子以及隨後的終止密碼子的三個重複序列所替代。
- 如請求項1所述的複製缺陷型HSV-1病毒疫苗，其中該經修飾的基因組包含ICP0、LAT和ICP34.5、UL1至UL56和US1至US11的一個拷貝。
- 一種疫苗組合物，其包含如請求項1至28中任一項所述的複製缺陷型HSV-1病毒疫苗和一醫藥上可接受的載體。
- 如請求項29所述的疫苗組合物，其中該醫藥上可接受的載體包含一佐劑。
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| WOPCT/CN2022/110565 | 2022-08-05 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| TW202413635A true TW202413635A (zh) | 2024-04-01 |
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