TW202405159A - 用於治療性產品製造的靈活的設施配置 - Google Patents

Abstract

本文揭露了用於製造至少一種治療性產品的靈活的設施，其中該靈活的設施包括可以視需要藉由分隔件隔離的可重新配置的單次使用區域和不銹鋼區域。

Description

用於治療性產品製造的靈活的設施配置

本揭露關於靈活的製造設施，該靈活的製造設施使得能夠生產治療性產品，比如藥物物質、細胞治療物等，該等治療性產品的製造可能在順序的或同時的工作期（campaign）中需要不同的設備（比如，單次使用系統和不銹鋼設備）。在一些實施方式中，靈活的製造設施將可重新配置的單次使用區域與常規的不銹鋼區域組合，其中，可重新配置的單次使用區域和不銹鋼區域視需要藉由分隔件隔離。

生物製品在全世界範圍內被用於各種治療領域中，範圍從腫瘤學到心臟病學以及其他。然而，由於其複雜的生產方法、以及典型的生物製造設施的單一模態和/或單一產品專注所致，與製造生物製品相關聯的成本高昂。生物製品的製造典型地利用多步驟製程，該等多步驟製程包括細胞培養放大、大規模生產細胞培養、以及細胞收穫後期望的生物製品的純化；該等步驟常常是給定模態或產品所特有的。近年來，由於眾多新型模態（比如，單株抗體、BiTE®分子、融合蛋白、CAR-T細胞治療、RNA治療等）的可用性所致，製造複雜性已增加。雖然生產的所有方面的改進降低了許多生物製品的商業規模的製造費用，但與建設和維護生物製造設施相關聯的預付成本（包括與變更或擴展在給定設施中製造的模態和/或產品類型的工作期改變相關聯的預付成本）仍然可能是令人望而卻步的。因此，本領域中需要新型的、可重新配置的生物製造設施配置，使得能夠在單一設施中貫穿其壽命以降低的成本和較短的時間製造多種產品和/或模態，以有利於長期的供應計畫。

生物製品通常在被稱為「補料分批」的工業標準平臺中生產。補料分批製程採用部分開放系統，其中在細胞培養期間，一或多種營養物團劑被補料到生物反應器。補料分批生產製程常常在大型不銹鋼生物反應器中執行，並且與生物製藥製造相關聯的大部分費用可以歸因於建設和維護基礎設施所需的資本投資，該基礎設施係支持特定生物製品的生產和純化所需的。展示性地，建設補料分批設施常常需要大約15億美元的資本投資和大約6年的許可證發放。另外，用於製造生物產品（比如，單株抗體和微生物產品）的常規結構不允許高效使用設施空間，例如由於需要大型不銹鋼罐和大量的不銹鋼硬管來支持補料分批製程。此外，常規的生物製造設施的佈局（常常包括大量的硬管和相當大的設備）可能限制其隨時重新配置或擴展以製造新的產品線的能力。被用來製造生物製品的多樣化平臺使這一局限性變得更複雜，該等多樣化平臺常常具有產品特定性並且缺乏可互換性。

理想的生物製造設施將是建造成本低廉並且能夠快速擴展和重新配置，以快速和成本有效地整合新產品和製程。此外，此類製造設施能夠維持和改進藥物製造的現行良好製造實踐（cGMP）所要求的高品質水平（例如，符合21 C.F.R. 第11部分）將是有利的。

單次使用生產技術在生物製造設施中越來越受歡迎，相對於需要在每個生產批次之間進行清潔和消毒的可重複使用的系統，該等單次使用生產技術簡化了設備和設施設計。單次使用部件不需要在每批次生產之後進行清潔，並且是用於製造生物製品的具成本效益的手段。然而，某些生物製品的製造要求超過了單次使用技術所能達到的當前容積或其他容量。因此，對於具有高數量要求的某些生物製品來說，不能避免可重複使用的大容積不銹鋼容器。此類容器必須藉由不銹鋼管連接至其他單元操作、培養基和緩衝液供給、水供給、以及就地清潔和就地蒸汽系統。如上所述，該等不銹鋼容器以及支持它們的所有公用設施的製造和安裝係昂貴的，並且需要相當長的用於設計和製造的前置時間。

因此，需要一種靈活的製造設施，其允許用戶在產品線之間高效地部署共同的資源，並且可以容易地修改以適應新的製造製程或新的製造線並且減少設施停機時間。

本揭露提供了一種用於生產生物製品的靈活的製造設施，其中，該靈活的製造設施可以根據一或多種生物製品（比如，不同模態的一或多種生物製品）的具體需求進行定制。這種新穎的設施佈置利用了可以視需要藉由分隔件隔離的可重新配置的單次使用區域和不銹鋼區域。

本文揭露了一種用於製造至少一種治療性產品的靈活的設施，該靈活的設施包括： 可重新配置的單次使用區域，包括至少一個單次使用生物反應器，其中，該至少一或多個單次使用生物反應器中的一或多個具有至少1000 L（例如，至少2000 L、大於2000 L）的容積；以及 不銹鋼區域，包括至少一個不銹鋼生物反應器，其中，不銹鋼區域中的每個不銹鋼生物反應器具有大於5000 L的容積， 其中，該至少一個不銹鋼生物反應器中的一或多個流體地連接至該至少一個單次使用生物反應器中的一或多個。

在一些實施方式中，該至少一個單次使用生物反應器中的一或多個具有1000 L的容積。在一些實施方式中，多個該至少一個單次使用生物反應器具有1000 L的容積。

在一些實施方式中，該至少一個單次使用生物反應器中的一或多個具有至少2000 L的容積。在一些實施方式中，該至少一個單次使用生物反應器中的一或多個具有2000 L的容積。在一些實施方式中，多個該至少一個單次使用生物反應器具有2000 L的容積。

在一些實施方式中，該至少一個單次使用生物反應器中的一或多個具有至少3000 L的容積。在一些實施方式中，該至少一個單次使用生物反應器中的一或多個具有3000 L的容積。在一些實施方式中，多個該至少一個單次使用生物反應器具有3000 L的容積。

在一些實施方式中，該至少一個單次使用生物反應器中的一或多個具有至少5000 L的容積。在一些實施方式中，該至少一個單次使用生物反應器中的一或多個具有5000 L的容積。在一些實施方式中，多個該至少一個單次使用生物反應器具有5000 L的容積。

在一些實施方式中，該至少一個單次使用生物反應器中的一或多個具有1000 L、2000 L、3000 L或5000 L的容積。在一些實施方式中，多個該至少一個單次使用生物反應器具有獨立地選自1000 L、2000 L、3000 L和5000 L的容積。

在一些實施方式中，該至少一個單次使用生物反應器中的一或多個具有200 L的容積。在一些實施方式中，該至少一個單次使用生物反應器中的一或多個具有500 L的容積。

可以在靈活的設施中採用的設備的非限制性示例包括生物反應器、盤式堆疊式離心機、單次使用離心機、切向流過濾（TFF）橇、深度過濾橇、線上稀釋橇、帶有相關聯的控制設備的層析柱、培養基罐、收穫罐、純化容器、深層過濾器支架、水軟化和/或脫氯系統、清潔蒸汽發生器、注射用水（WFI）儲罐、WFI斷流罐、WFI蒸餾器、冷卻塔、配電盤、應急發電機、冷卻器、泵、高壓釜、空氣處理單元、製程廢物中和（比如，玻璃纖維增強塑膠（FRP））設備、生物廢物收集和/或滅活系統、就地清潔系統、就地蒸汽系統、零件清洗機和/或其他設備。

作為非限制性示例而非限制性地，美國公開號2013/0280797、2012/0077429、2011/0280797和2009/0305626以及美國專利案號8,298,054；7,629,167；以及5,656,491（其在此藉由引用併入）描述了具有可以適合在本文所描述的靈活的設施中使用的特徵的示例設施區域、設備和/或系統。

在一些實施方式中，作為一個整體來看的不銹鋼區域具有比作為一個整體來看的可重新配置的單次使用區域更低的空氣分類。在一些實施方式中，作為一個整體來看的不銹鋼區域具有比作為一個整體來看的可重新配置的單次使用區域更低的建築物塗漆。在一些實施方式中，作為一個整體來看的不銹鋼區域具有比作為一個整體來看的可重新配置的單次使用區域更低的空氣分類和更低的建築物塗漆。

在一些實施方式中，不銹鋼區域係未分類的製造空間。在一些實施方式中，可重新配置的單次使用區域的至少一部分（例如，種子培養區域；純化區域）係已分類的製造空間。可重新配置的單次使用區域的至少一部分內部的完整性和環境控制有利於了對未分類的製造空間的使用。

在一些實施方式中，該至少一個不銹鋼生物反應器中的一或多個被支撐在地表面上。

在一些實施方式中，該至少一個不銹鋼生物反應器中的一或多個可以從結構本身懸掛。

在一些實施方式中，不銹鋼區域包括多個不銹鋼生物反應器，每個不銹鋼生物反應器具有至少10,000 L的容積。

在一些實施方式中，不銹鋼區域中的每個不銹鋼生物反應器具有介於5000 L與20,000 L之間的容積。在一些實施方式中，不銹鋼區域中的每個不銹鋼生物反應器具有介於5000 L與15,000 L之間的容積。在一些實施方式中，不銹鋼區域中的每個不銹鋼生物反應器具有介於5000 L與10,000 L之間的容積。

在一些實施方式中，不銹鋼區域沒有將它與可重新配置的單次使用區域分離的物理屏障。

在一些實施方式中，可重新配置的單次使用區域和不銹鋼區域藉由分隔件隔離。在一些實施方式中，分隔件係牆壁。在一些實施方式中，分隔件係塑膠片材。

在一些實施方式中，不銹鋼區域係完全封閉的。在一些實施方式中，不銹鋼區域被一或多個牆壁和天花板完全封閉。

在一些實施方式中，不銹鋼區域具有與可重新配置的單次使用區域分離的空氣處理。

在一些實施方式中，該至少一個不銹鋼生物反應器的一部分穿透牆壁並通過管材流體地連接至該至少一個單次使用生物反應器中的一或多個。在一些實施方式中，該部分足以有利於儀器和/或製程單元之間的連接。在一些實施方式中，該部分最低限度地足以有利於儀器和/或製程單元之間的連接。

在一些實施方式中，該至少一個不銹鋼生物反應器的外部容器表面積的至少1%（例如，至少2%、至少3%、至少4%、至少5%；1%、2%、3%、4%、5%）穿透牆壁並通過管材流體地連接至該至少一個單次使用生物反應器中的一或多個。在一些實施方式中，該至少一個不銹鋼生物反應器的外部容器表面積的3%至7%（例如，3.5%至6.5%、4%至6%、4.5%至5.5%；3%、4%、5%、6%、7%）穿透牆壁並通過管材流體地連接至該至少一個單次使用生物反應器中的一或多個。

在一些實施方式中，穿透牆壁的部分包括選自以下各者的一或多個部件：用以允許進入生物反應器儀器的探針帶、用於灌注的連接件、以及用於補料溶液（例如，營養物補料；含抗泡劑的溶液）的連接件。

在一些實施方式中，流體連接件被配置為使得能夠繞過不銹鋼區域。在一些實施方式中，流體連接件係可移除的。在一些實施方式中，流體連接件能夠在靈活的設施內的不同生物反應器之間移動。

在一些實施方式中，不銹鋼區域進一步包括收穫區域。在一些實施方式中，不銹鋼區域中的收穫區域包括一或多個離心機。在一些實施方式中，不銹鋼區域中的收穫區域包括一或多個不銹鋼離心機。在一些實施方式中，不銹鋼區域中的設備與管材和/或一或多個閥連接，以允許實現完成正在運行的具體製程所需的流體連接。在一些實施方式中，一或多個閥被用來繞過對於正在運行的製程而言不需要的某個設備。在一些實施方式中，一或多個閥被用來關閉流體流動以允許更換設備。例如，在一些實施方式中，存在從種子培養部連接至每個不銹鋼生物反應器中的入口導管。在一些實施方式中，存在從每個不銹鋼生物反應器到離心機的出口導管以進行收穫。

在一些實施方式中，可重新配置的單次使用區域可以包括獨立地選自以下各者的一或多個附加空間：細胞培養單元、病毒前單元、病毒後單元、公用設施場地、倉庫、培養基緩衝液設施、辦公室、人員單元和生產單元。生產單元可能對製造治療性產品有用。

在一些實施方式中，可重新配置的單次使用區域可以包括試劑準備區域、種子培養區域和純化區域。

在一些實施方式中，可重新配置的單次使用區域進一步包括用於執行下游純化的設備。在一些實施方式中，用於執行下游純化的設備係單次使用或不銹鋼的。在一些實施方式中，用於執行下游純化的設備係單次使用的。在一些實施方式中，用於執行下游純化的設備係不銹鋼的。在一些實施方式中，用於執行下游純化的其中一些設備係不銹鋼的，並且用於執行下游純化的其中一些設備係單次使用的。

在一些實施方式中，不銹鋼區域進一步包括用於執行下游純化的設備。在一些實施方式中，用於執行下游純化的設備係單次使用或不銹鋼的。在一些實施方式中，用於執行下游純化的設備係單次使用的。在一些實施方式中，用於執行下游純化的設備係不銹鋼的。

在一些實施方式中，可重新配置的單次使用區域進一步包括一或多個離心機。在一些實施方式中，該一或多個離心機係單次使用和/或不銹鋼設備。在一些實施方式中，該一或多個離心機係單次使用設備。在一些實施方式中，該一或多個離心機係不銹鋼設備。

在一些實施方式中，不銹鋼區域進一步包括一或多個離心機。在一些實施方式中，該一或多個離心機係單次使用和/或不銹鋼設備。在一些實施方式中，該一或多個離心機係單次使用設備。在一些實施方式中，該一或多個離心機係不銹鋼設備。

在一些實施方式中，可重新配置的單次使用區域包括試劑準備區域。在一些實施方式中，可重新配置的單次使用區域包括圍繞試劑準備區域的牆壁。在一些實施方式中，試劑準備區域具有單獨的空氣處理。在一些實施方式中，可重新配置的單次使用區域包括種子培養區域。在一些實施方式中，可重新配置的單次使用區域包括圍繞種子培養區域的牆壁。在一些實施方式中，種子培養區域具有單獨的空氣處理。在一些實施方式中，可重新配置的單次使用區域包括純化區域。在一些實施方式中，可重新配置的單次使用區域包括圍繞純化區域的牆壁。在一些實施方式中，純化區域具有單獨的空氣處理。

在一些實施方式中，可重新配置的單次使用區域包括試劑準備區域、種子培養區域和純化區域。在一些實施方式中，可重新配置的單次使用區域包括試劑準備區域、種子培養區域和純化區域、連同一或多個分隔件，該一或多個分隔件將試劑準備區域、種子培養區域和純化區域中的一或多個至少部分地隔離。在一些實施方式中，可重新配置的單次使用區域包括試劑準備區域、種子培養區域和純化區域，其中，試劑準備區域、種子培養區域和純化區域不全部都由同一空氣處理系統提供服務。

在一些實施方式中，不銹鋼區域與種子培養區域相鄰、或與純化區域相鄰、或與種子培養區域和純化區域兩者相鄰。

在一些實施方式中，可重新配置的單次使用區域包括一或多個種子培養部。在一些實施方式中，可重新配置的單次使用區域包括一或多個波浪式生物反應器，例如具有至少50 L（例如，50 L）的容積的一或多個波浪式生物反應器。在一些實施方式中，可重新配置的單次使用區域包括一或多個種子生物反應器，比如，具有至少500 L（例如，500 L）的容積或至少2,000 L（例如，2,000 L）的容積的一或多個種子生物反應器。

在一些實施方式中，可重新配置的單次使用區域進一步包括一或多個純化橇。在一些實施方式中，該一或多個純化橇中的每一個包括獨立地選自以下各者的一或多個部件：層析橇、層析柱、病毒滅活系統、病毒過濾系統、超濾滲濾系統和批量過濾系統。在一些實施方式中，可重新配置的單次使用區域進一步包括層析橇。在一些實施方式中，可重新配置的單次使用區域進一步包括病毒滅活系統。在一些實施方式中，可重新配置的單次使用區域進一步包括病毒過濾系統。在一些實施方式中，可重新配置的單次使用區域進一步包括超濾/滲濾系統。在一些實施方式中，可重新配置的單次使用區域進一步包括批量過濾系統。在一些實施方式中，可重新配置的單次使用區域進一步包括病毒滅活系統和病毒過濾系統。

在一些實施方式中，靈活的設施中的一或多個純化橇具有單獨的空氣處理。

在一些實施方式中，靈活的設施包括能夠被重新配置為連接靈活的設施中的不同設備（例如，生物反應器、純化橇等）的多個連接件。

在一些實施方式中，公用設施在可重新配置的單次使用區域中係在頭頂上方、從一或多個牆壁、或從一或多個地板安裝的公用設施分佈、或上述公用設施分佈選項的組合提供的。在一些實施方式中，在可重新配置的單次使用區域中，公用設施係在頭頂上方提供的。在一些實施方式中，公用設施在可重新配置的單次使用區域中係容易獲得的。

在一些實施方式中，多個設備在可重新配置的單次使用區域中能夠圍繞可重新配置的單次使用區域移動。

在一些實施方式中，靈活的設施進一步包括品質保證（QA）區段、行政管理/辦公室區段、工廠公用設施（例如，空氣處理、電氣和管道）、品質控制區域、實驗室區域和接收區域。

在一些實施方式中，靈活的設施進一步包括獨立地選自以下各者的一或多個附加空間：公用設施空間、培養基緩衝液設施、人員更衣室和生產單元。在一些實施方式中，靈活的設施進一步包括公用設施空間。在一些實施方式中，靈活的設施進一步包括培養基緩衝液設施。在一些實施方式中，靈活的設施進一步包括人員更衣室。在一些實施方式中，靈活的設施進一步包括生產單元。在一些實施方式中，靈活的設施進一步包括公用設施空間、培養基緩衝液設施、人員更衣室和生產單元。在一些實施方式中，該至少一個附加空間（例如，公用設施空間、培養基緩衝液設施、人員更衣室和/或生產單元）位於可重新配置的單次使用區域內。

在一些實施方式中，靈活的設施包括以下各者中的至少一者：發酵單元、病毒前單元、病毒後單元、公用設施空間、倉庫、培養基緩衝液設施、辦公室、人員單元和生產單元。

在一些實施方式中，任何典型的製造和清潔室設備都可以包括在靈活的設施中。

在一些實施方式中，靈活的設施被配置用於生產獨立地選自以下各者的一或多種治療性產品：單株抗體、BiTE®分子、基於RNA的藥物物質、細胞治療產品和發酵產品。在一些實施方式中，靈活的設施被配置用於生產單株抗體。在一些實施方式中，靈活的設施被配置用於生產BiTE®分子。在一些實施方式中，靈活的設施被配置用於生產基於RNA的藥物物質。在一些實施方式中，靈活的設施被配置用於生產細胞治療產品。在一些實施方式中，靈活的設施被配置用於生產發酵產品。

在一些實施方式中，不銹鋼區域中的（多個）不銹鋼生物反應器致力於單一治療性產品。在一些實施方式中，整個靈活的設施致力於生產單一治療性產品。在一些實施方式中，不銹鋼區域中的（多個）不銹鋼生物反應器僅包含一種生產治療性產品的細胞系。

在一些實施方式中，靈活的設施致力於同時生產一種以上（例如，兩種、三種、四種、五種、六種、七種、八種、九種、十種、十一種、十二種等）治療性產品（例如，在例如種子培養部、生產生物反應器和純化橇中同時有多種產品）。在一些實施方式中，靈活的設施致力於同時生產兩種治療性產品。在一些實施方式中，靈活的設施致力於同時生產三種治療性產品。在一些實施方式中，靈活的設施致力於同時生產四種治療性產品。在一些實施方式中，靈活的設施致力於同時生產五種治療性產品。在一些實施方式中，靈活的設施致力於同時生產六種治療性產品。在一些實施方式中，靈活的設施致力於同時生產七種治療性產品。在一些實施方式中，靈活的設施致力於同時生產八種治療性產品。在一些實施方式中，靈活的設施致力於同時生產九種治療性產品。在一些實施方式中，靈活的設施致力於同時生產十種治療性產品。在一些實施方式中，靈活的設施致力於同時生產十一種治療性產品。在一些實施方式中，靈活的設施致力於同時生產十二種治療性產品。

在一些實施方式中，在工作期改變期間，在靈活的設施中生產一種以上（例如，兩種、三種、四種、五種、六種、七種、八種、九種、十種、十一種、十二種等）治療性產品。例如，在一些實施方式中，在細胞收穫之後和在純化期間，可在種子培養部中起始第二種治療性產品的生產。在一些實施方式中，不銹鋼區域中的（多個）不銹鋼生物反應器包含一種以上生產治療性產品的細胞系。

在一些實施方式中，靈活的設施致力於在其壽命期間生產一種以上（例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50種等）治療性產品。在一些實施方式中，靈活的設施致力於在其壽命期間生產上至10種治療性產品。在一些實施方式中，靈活的設施致力於在其壽命期間生產上至15種治療性產品。在一些實施方式中，靈活的設施致力於在其壽命期間生產上至20種治療性產品。在一些實施方式中，靈活的設施致力於在其壽命期間生產上至25種治療性產品。在一些實施方式中，靈活的設施致力於在其壽命期間生產上至30種治療性產品。在一些實施方式中，靈活的設施致力於在其壽命期間生產上至35種治療性產品。在一些實施方式中，靈活的設施致力於在其壽命期間生產上至40種治療性產品。在一些實施方式中，靈活的設施致力於在其壽命期間生產上至45種治療性產品。在一些實施方式中，靈活的設施致力於在其壽命期間生產上至50種治療性產品。

在一些實施方式中，靈活的設施被配置為支援cGMP（現行良好製造實踐）製程。在一些實施方式中，靈活的設施被配置為支援GMP製程。在一些實施方式中，靈活的設施被配置為支援非GMP製程。在一些實施方式中，靈活的設施支援GMP臨床產品的生產。在一些實施方式中，靈活的設施支援GMP商業產品的生產。在一些實施方式中，靈活的設施支援非GMP產品的生產。在一些實施方式中，靈活的設施支援GMP臨床產品和GMP商業產品的生產。在一些實施方式中，靈活的設施支援GMP臨床產品和非GMP產品的生產。在一些實施方式中，靈活的設施支援GMP商業產品和非GMP產品的生產。在一些實施方式中，靈活的設施支援GMP臨床產品、GMP商業產品和非GMP產品的生產。

相關申請的交叉引用

要求2022年6月28日提交的美國臨時專利申請號63/356,361的優先權，該申請的全部內容藉由引用併入本文。

本揭露關於一種新的製造設施配置，它整合了來自基於單次使用設備的下一代生物製造平臺的行業領先技術，以便在基於可重複使用的不銹鋼設備的常規補料分批設施內實現強化的製程。新的設施配置可以有利於同時或按順序生產多種生物製品，該等生物製品係使用多樣化製造平臺來製造的。相對於常規的生物製造設施佈局，這種設施配置還提供了增強的柔性。例如，設施可以被配置或重新配置為支援以下製造技術中的任一種：(a) 補料分批細胞培養加工（例如，上至10,000 L的規模，處於大於10,000 L的規模）（例如，利用單次使用和/或不銹鋼設備）；(b) 上至2,000 L的規模的單次使用細胞培養加工（例如，只利用單次使用技術）；以及 (c) 上至500 L的規模的連續上游製造。

除了提供平臺柔性之外，當與具有類似生產能力的常規補料分批設施相比時，本文所描述的生物製造設施還被期望展現以下優點中的一或多個：(a) 由於較低的空間要求、較低容量的設備、較少的不銹鋼硬管和較少的自動化不銹鋼閥所致，降低了財務風險（例如，資本支出小於50%）；(b) 由於改進了空間利用率所致，建造速度更快且更早發放許可證；以及 (c) 當採用可持續建築材料時，減少了碳排放和水消耗（例如，減少上至50%），並且減少了對需要定期清潔和消毒程式的不銹鋼設備的依賴。

現在參考 圖 1 至圖 2C，描繪了用於製造至少一種治療性產品的靈活的製造設施10。靈活的設施10包括可重新配置的單次使用區域12，該單次使用區域包括至少一個單次使用生物反應器14。在該實施方式中，並且如下文更多解釋的，該至少一個單次使用生物反應器14中的一或多個具有至少1000 L的容積。在另一個示例中，該至少一個單次使用生物反應器14中的該一或多個具有至少2000 L的容積並且仍然落入本揭露之範圍內。

靈活的設施10還包括不銹鋼區域16，該不銹鋼區域包括至少一個不銹鋼生物反應器18。不銹鋼區域16中的每個不銹鋼生物反應器18具有大於5000 L的容積。另外，並且也如下文更多解釋的，該至少一個不銹鋼生物反應器18中的一或多個可以流體地連接至該至少一個單次使用生物反應器14中的一或多個。在另一個示例中，並且如 圖 1中所描繪的，不銹鋼區域16包括多個不銹鋼生物反應器20，每個不銹鋼生物反應器具有至少10,000 L的容積。

在一個示例中，該至少一個不銹鋼生物反應器18係大型不銹鋼生物反應器並且包括至少一個閥組件。該至少一個不銹鋼生物反應器18可以包括具有大規模容量的就地蒸汽生物反應器，例如在一個示例中並且如所述之，被配置為容納上至10,000 L或更大的流體容積。就地蒸汽式大型生物反應器的該至少一個閥組件使得就地蒸汽式大型生物反應器能夠在細胞培養（例如，灌注細胞培養）開始之前進行完全消毒。具體地，該至少一個閥組件可以包括多個閥，並且蒸汽（比如，清潔蒸汽CS）流入一個閥中，向上進入其他閥中並到達端口。附加地，在流入第一閥中之後，蒸汽還向下流入又一閥中並流過蒸汽疏水閥，以對生物反應器進行消毒並產生經蒸汽消毒的無菌環境。另外，如由熟悉該項技術者所理解的，在清潔期間，製程廢物PW從一些閥中流出而注入下水道中。在使用之後，就地蒸汽生物反應器被就地清潔，並且在任何進一步使用之前再次發生就地蒸汽消毒製程。該至少一個閥組件還包括用於聯接至無菌連接器閥組件（比如，經高壓滅菌的無菌連接器閥組件）或其他裝置的端口。無菌連接閥組件實現了單次使用灌注裝置或可重複使用灌注裝置到該至少一個不銹鋼生物反應器18（比如，就地蒸汽式大型生物反應器）的已消毒的連線性。另外，該至少一個閥組件實現了單次使用生物反應器14到該至少一個不銹鋼生物反應器18的已消毒的連線性。

在另一個示例中，該至少一個不銹鋼生物反應器18可以包括側部和聯接至該至少一個不銹鋼生物反應器18的這個側部的第一閥組件（比如，經高壓滅菌的閥組件）。經高壓滅菌的閥組件可以包括多個閥，並且蒸汽（比如，清潔蒸汽CS）流入第一閥中，向上到達其他閥和端口。附加地，例如，在流入第一閥中之後，蒸汽向下流過又一閥並流過蒸汽疏水閥，以對該至少一個不銹鋼生物反應器18進行消毒並在進一步使用之前產生就地蒸汽消毒製程。在該示例中，可能僅存在聯接至閥組件（比如，經高壓滅菌的閥組件）的至少一個無菌連接器。例如，該經高壓滅菌的閥組件經由經高壓滅菌的閥組件的該至少一個無菌連接器實現了到工廠組裝和輻照的灌注裝置或經高壓釜消毒的灌注裝置的連接，該灌注裝置可以是單次使用灌注裝置或可重複使用灌注裝置。另外，多個灌注裝置能夠無菌地聯接至該至少一個不銹鋼生物反應器18，而不進行附加的蒸汽消毒。進一步地，經高壓滅菌的閥組件還實現了該至少一個單次使用生物反應器14到該至少一個不銹鋼生物反應器18的連線性。在又一示例中，該至少一個不銹鋼生物反應器18可以實現對經高壓滅菌的灌注裝置的連接和對閥組件的就地清潔，但不使用無菌連接器。相反，軟管組件可以用作替代性連接器，以將該至少一個不銹鋼生物反應器18聯接至經高壓滅菌的灌注裝置和/或該至少一個單次使用生物反應器14。

如 圖 1和 圖 2A中進一步所描繪的，在另一個示例中，可重新配置的單次使用區域12和不銹鋼區域16藉由分隔件22隔離。在一個示例中，分隔件係牆壁。在另一個示例中，不銹鋼區域16係完全封閉的並且具有單獨的空氣處理，如下文更多解釋的。另外，該至少一個不銹鋼生物反應器18的一部分24穿透分隔牆壁22並通過管材26流體地連接至該至少一個單次使用生物反應器14中的一或多個。流體連接件被配置為使得能夠繞過不銹鋼區域16，也如下文更多解釋的。

在另一個示例中，該至少一個不銹鋼生物反應器18包括適配器組件（比如，單次使用適配器組件和/或三通組件），該適配器組件被配置為無菌連接器和/或聯接至無菌連接器。適配器組件（比如，三通組件）包括直接聯接至無菌連接器的連接器，該無菌連接器最終聯接至一對管（比如，管材26）。例如，三通組件的無菌連接器或連接器中的每一個被配置為聯接至可重複使用或單次使用灌注裝置或 圖 1和 圖 2A的可重新配置的單次使用區域12的該至少一個單次使用生物反應器14。例如，這使得多個灌注裝置或多個單次使用生物反應器14能夠操作性地聯接至該至少一個不銹鋼生物反應器18。

在另一個示例中，該至少一個不銹鋼生物反應器18的穿透分隔牆壁22的部分24包括一或多個部件，包括但不限於探針帶27a、用於灌注的灌注連接件27b、以及補料溶液罐連接件27c，如 圖 2B中所描繪的。

如 圖 1和 圖 2A中所描繪的，並且在一個示例中，不銹鋼區域16包括一或多個離心機30。另外，可重新配置的單次使用區域12也包括一或多個離心機32。在另一個示例中，可重新配置的單次使用區域12包括一或多個種子培養部34。在又一示例中，可重新配置的單次使用區域12包括一或多個純化橇36。在一個示例中，並且如 圖 2C中所描述的，該一或多個純化橇36中的每一個包括獨立地選自以下各者和/或包括以下各者的一或多個部件：層析橇37a、層析柱37b、病毒滅活系統37c、病毒過濾系統37d、超濾滲濾系統37e、批量過濾系統37f、共軛罐系統37g、氧化罐系統37h和還原罐系統37i。

在一些實施方式中，本揭露之靈活的設施10展現或被配置用於以下性質中的一或多種： 1) 廣泛部署可重新配置的空間以適應細胞培養加工（例如，在10,000 L規模下的高滴度（比如，1至15 g/L滴度或更大）以及在2,000 L規模下的甚至更高滴度（比如，上至30 g/L或更大）。補料分批培養和灌注培養可以容納在一個設施中，包括作為單一治療性產品製造製程的一部分。 2) 包括不銹鋼生物反應器18（比如，10,000 L的規模的不銹鋼生產生物反應器），其使用高結合能力的市售層析樹脂來使純化能力最大化。 3) 包括不銹鋼生物反應器18（比如，10,000 L的規模的不銹鋼生產生物反應器），其與從2,000 L (N-1)生物反應器到生產生物反應器（N生物反應器）的典型最大分流比相匹配。展示性地，對於(N-1)階段，5 : 1的分流比實現了10,000 L的生產生物反應器加工以及2,000 L的種子反應器。 4) 不銹鋼生物反應器18與單次使用生物反應器14之間的無菌連接有利於了強化的補料分批操作。 5) 大部分不銹鋼生物反應器18位於具有較低空氣分級和較低建築物塗漆的不銹鋼區域16中，從而降低了建築成本和運營成本（例如，空氣純化成本）。 6) 下游純化區域係可重新配置的，以適應各種上游技術的廣泛範圍的輸出，例如藉由利用各種可容易移動的生產橇。可重新配置的下游純化區域被配置為允許以分批模式或連接模式進行操作，其中分批模式涉及將各種純化步驟分離的池式容器，而連接模式去除了池式容器並採用純化步驟之間的直接連接。 7) 可重新配置的下游純化區域定位成與在可重新配置的單次使用區域12內的可重新配置的種子培養區域相鄰。

在一些實施方式中，可重新配置的單次使用區域12和不銹鋼區域16中的每一個可以包括與可重新配置的單次使用區域12和不銹鋼區域16的其他部分部分地或完全地隔離（比如，藉由分隔件22，比如牆壁或塑膠片材）的子區域。附加地，在一些實施方式中，可重新配置的單次使用區域12可以包括一或多件非單次使用設備（比如，不銹鋼離心機），只要該件設備不是生物反應器。類似地，在一些實施方式中，不銹鋼區域16可以包括一或多件非由不銹鋼製成的設備，只要該件設備不是生物反應器。

本文所揭露的靈活的設施10對在給定時間製造至少一種治療性產品（例如，一種；一種以上（例如，兩種、三種、四種等））有用。展示性地，靈活的設施10適於藉由在可能的情況下部署共同的資源來同時或者按順序製造各種不同的治療性產品，同時有利於製程特定的設備的可互換性。 非限制性示例特徵

在不限制的情況下，本揭露之一些示例實施方式/特徵包括： 1.  一種用於製造至少一種治療性產品的靈活的設施，該靈活的設施包括： 可重新配置的單次使用區域，包括至少一個單次使用生物反應器，其中，該至少一個單次使用生物反應器中的一或多個具有至少1000 L（例如，1000 L、2000 L、3000 L、5000 L、至少2000 L、至少3000 L、至少5000）的容積；以及 不銹鋼區域，包括至少一個不銹鋼生物反應器，其中，不銹鋼區域中的每個不銹鋼生物反應器具有大於5000 L的容積， 其中，該至少一個不銹鋼生物反應器中的一或多個流體地連接至該至少一個單次使用生物反應器中的一或多個。 2.  如特徵1所述之靈活的設施，其中，該至少一個單次使用生物反應器中的一或多個（例如，一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個或十個）具有1000 L、2000 L、3000 L或5000 L的容積。 3.  如特徵1或2所述之靈活的設施，其中，該至少一個單次使用生物反應器具有1000 L、2000 L、3000 L或5000 L的容積。 4.  如特徵1至3中任一項所述之靈活的設施，其中，在可重新配置的單次使用區域中沒有單次使用生物反應器具有大於2000 L的容積。 5.  如特徵1至4中任一項所述之靈活的設施，其中，該至少一個單次使用生物反應器中的一或多個（例如，一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個或十個）具有小於2000 L（例如，1000 L、500 L、50 L）的容積。 6.  如特徵1至5中任一項所述之靈活的設施，其中，該可重新配置的單次使用區域包括一或多個波浪式生物反應器（例如，具有至少50 L（例如，50 L）的容積的一或多個波浪式生物反應器）和/或一或多個種子生物反應器（例如，具有至少500 L（例如，500 L）的容積或至少2,000 L（例如，2,000 L）的容積的一或多個種子生物反應器）。 7.  如特徵1至6中任一項所述之靈活的設施，其中，該不銹鋼區域包括多個不銹鋼生物反應器，每個不銹鋼生物反應器具有至少10,000 L的容積。 8.  如特徵1至7中任一項所述之靈活的設施，其中，不銹鋼區域中的每個不銹鋼生物反應器具有介於5000 L與20,000 L之間的容積。 9.  如特徵1至8中任一項所述之靈活的設施，其中，不銹鋼區域中的每個不銹鋼生物反應器具有介於5000 L與15,000 L之間的容積。 10.      如特徵1至9中任一項所述之靈活的設施，其中，不銹鋼區域中的每個不銹鋼生物反應器具有介於5000 L與10,000 L之間的容積。 11.      如特徵1至10中任一項所述之靈活的設施，其中，不銹鋼區域包括五個10,000 L的生物反應器。 12.      如特徵1至11中任一項所述之靈活的設施，其中，該至少一個不銹鋼生物反應器中的一或多個被支撐在地表面上。 13.      如特徵1至12中任一項所述之靈活的設施，其中，該至少一個不銹鋼生物反應器中的一或多個從結構本身懸掛。 14.      如特徵1至13中任一項所述之靈活的設施，其中，該可重新配置的單次使用區域包括試劑準備區域、種子培養區域和純化區域。 15.      如特徵1至14中任一項所述之靈活的設施，其中，該可重新配置的單次使用區域包括試劑準備區域、種子培養區域和純化區域、連同一或多個分隔件，該一或多個分隔件將試劑準備區域、種子培養區域和純化區域中的一或多個至少部分地隔離。 16.      如特徵14或15所述之靈活的設施，其中，該種子培養區域包括獨立地選自以下各者的一或多件設備：用於儲存細胞培養基的罐；用於儲存酸、堿和緩衝溶液的罐；接種準備設備；生物反應器（例如，適合於培養細胞），例如搖臂式生物反應器、500 L生物反應器和2000 L單次使用生物反應器；適合於容納細胞的罐；以及適合於容納由細胞產生的產品的罐。 17.      如特徵14至16中任一項所述之靈活的設施，其中，該種子培養區域中的設備呈單次使用格式。 18.      如特徵1至17中任一項所述之靈活的設施，其中，該不銹鋼區域與該種子培養區域相鄰。 19.      如特徵1至17中任一項所述之靈活的設施，其中，該不銹鋼區域與該純化區域相鄰。 20.      如特徵1至17中任一項所述之靈活的設施，其中，該不銹鋼區域與該種子培養區域和該純化區域兩者相鄰。 21.      如特徵1至20中任一項所述之靈活的設施，其中，該不銹鋼區域進一步包括收穫區域。 22.      如特徵1至21中任一項所述之靈活的設施，其中，該不銹鋼區域係未分類的製造空間。 23.      如特徵1至22中任一項所述之靈活的設施，其中，該可重新配置的單次使用區域的至少一部分（例如，種子培養區域；純化區域）係已分類的製造空間。 24.      如特徵1至23中任一項所述之靈活的設施，其中，該可重新配置的單次使用區域和不銹鋼區域藉由分隔件隔離。 25.      如特徵24所述之靈活的設施，其中，該分隔件係塑膠片材。 26.      如特徵25所述之靈活的設施，其中，該分隔件係牆壁。 27.      如特徵26所述之靈活的設施，其中，該不銹鋼區域係完全封閉的並且具有單獨的空氣處理。 28.      如特徵26或27所述之靈活的設施，其中，該至少一個不銹鋼生物反應器的一部分穿透牆壁並通過管材流體地連接至該至少一個單次使用生物反應器中的一或多個。 29.      如特徵26至28中任一項所述之靈活的設施，其中，該至少一個不銹鋼生物反應器的外部容器表面積的至少5%穿透牆壁並通過管材流體地連接至該至少一個單次使用生物反應器中的至少一個。 30.      如特徵28或29所述之靈活的設施，其中，穿透牆壁的該部分包括獨立地選自以下各者的一或多個部件：用以允許進入生物反應器儀器的探針帶、用於灌注的連接件、以及用於補料溶液的連接件。 31.      如特徵1至30中任一項所述之靈活的設施，其中，該流體連接件包括無菌連接模組。 32.      如特徵1至31中任一項所述之靈活的設施，其中，無菌連接模組將該可重新配置的單次使用區域中的該一或多個種子培養生物反應器連接至該不銹鋼區域中的一或多個不銹鋼生物反應器。 33.      如特徵1至32中任一項所述之靈活的設施，其中，該流體連接件被配置為使得能夠繞過該不銹鋼區域。 34.      如特徵1至33中任一項所述之靈活的設施，其中，該流體連接件被配置為使得能夠通過使用一或多個閥繞過該不銹鋼區域。 35.      如特徵1至34中任一項所述之靈活的設施，其中，該流體連接件係可移除的。 36.      如特徵1至35中任一項所述之靈活的設施，其中，該流體連接件能夠在靈活的設施內的不同生物反應器之間移動。 37.      如特徵1至36中任一項所述之靈活的設施，其中，該靈活的設施包括能夠被重新配置為連接靈活的設施中的不同設備（例如，生物反應器、純化橇等）的多個連接件。 38.      如特徵1至37中任一項所述之靈活的設施，其中，該可重新配置的單次使用區域和/或不銹鋼區域進一步包括一或多個離心機。 39.      如特徵1至38中任一項所述之靈活的設施，其中，該可重新配置的單次使用區域包括一或多個種子培養部。 40.      如特徵1至39中任一項所述之靈活的設施，其中，該可重新配置的單次使用區域和/或該不銹鋼區域包括一或多個純化橇（例如，僅包含單次使用設備的一或多個純化橇；僅包含不銹鋼設備的一或多個純化橇；包含單次使用設備和不銹鋼設備的一或多個純化橇）。 41.      如特徵40所述之靈活的設施，其中，該一或多個純化橇中的每一個包括獨立地選自以下各者的一或多個部件：層析橇、層析柱、病毒滅活系統、病毒過濾系統、超濾滲濾系統和批量過濾系統。 42.      如特徵1至41中任一項所述之靈活的設施，進一步包括獨立地選自以下各者的一或多個附加空間：公用設施空間、培養基緩衝液設施、人員更衣室和生產單元。 43.      如特徵1至42中任一項所述之靈活的設施，其中，該靈活的設施被配置用於生產獨立地選自以下各者的一或多種藥物物質：單株抗體、BiTE®分子、基於RNA的藥物物質和發酵產品。 44.      如特徵1至43中任一項所述之靈活的設施，其中，該靈活的設施被配置為實施獨立地選自以下各者的一或多個製程：哺乳動物細胞培養物補料分批製程、哺乳動物細胞培養物灌注製程、連續哺乳動物細胞培養製程、微生物發酵補料分批製程和前述各者中的任一者的組合。 45.      如特徵1至44中任一項所述之靈活的設施，其中，該靈活的設施可以分一系列階段構造。 46.      如特徵1至45中任一項所述之靈活的設施，其中，該靈活的設施能夠被擴展以添加附加的產品線。 47.      如特徵1至46中任一項所述之靈活的設施，其中，該不銹鋼區域中的這個或該等不銹鋼生物反應器僅包含一種生產治療性產品的細胞系。 48.      如特徵1至46中任一項所述之靈活的設施，其中，該不銹鋼區域中的該或該等不銹鋼生物反應器包含一種以上生產治療性產品的細胞系。 49.      如特徵1至48中任一項所述之靈活的設施，其中，該可重新配置的單次使用區域中的單次使用生物反應器僅包含一種生產治療性產品的細胞系。 50.      如特徵1至48中任一項所述之靈活的設施，其中，該可重新配置的單次使用區域中的單次使用生物反應器包含一種以上生產治療性產品的細胞系。 51.      如特徵47至50中任一項所述之靈活的設施，其中，每種生產治療性產品的細胞系獨立地選自原核細胞系和真核細胞系。 52.      如特徵47至50中任一項所述之靈活的設施，其中，每種生產治療性產品的細胞系獨立地選自原核細胞系。 53.      如特徵47至50中任一項所述之靈活的設施，其中，每種生產治療性產品的細胞系獨立地選自哺乳動物細胞系。 54.      如特徵47至50中任一項所述之靈活的設施，其中，每種生產治療性產品的的細胞系獨立地選自能夠生產病毒治療劑（例如，抗癌溶瘤病毒、用於基因療法的病毒載體和/或病毒免疫療法）的細胞系。 55.      如特徵47至50中任一項所述之靈活的設施，其中，每種生產治療性產品的細胞系獨立地選自CHO細胞系。 定義：

如本文所用，除非另有明確指示，否則術語「一」和「一個（種）」意指一或多個。附加地，「一或多個」和「至少一個」在本文中可互換地使用。此外，除非上下文另有要求，否則單數術語包括複數，並且複數術語包括單數。

如本文所用，術語「生物反應器」意指對細胞培養物（例如，哺乳動物細胞培養物或細菌細胞培養物）的生長有用的任何容器。「生物反應器」在本文涵蓋術語「發酵罐」（即，對細菌細胞培養物的生長有用的容器，該容器相對於用於哺乳動物細胞培養物的生長的容器而典型地包含更嚴格的攪拌器和增加的氣體流量）。生物反應器的非限制性示例包括攪動罐、氣升件（airlift）、纖維、微纖維、中空纖維、陶瓷基質、流化床、固定床和/或噴動床生物反應器。在一些實施方式中，示例生物反應器可以執行以下步驟中的一或多個（例如，一個、兩個、三個、全部）：對營養物和/或碳源進行補料、合適氣體（比如，氧氣）的注射、發酵或細胞培養基的入口和出口流動、氣相和液相的分離、溫度的維持、氧氣和CO ₂水平的維持、pH水平的維持、攪拌（例如，攪動）和/或清潔/消毒。除非上下文另有指示，否則生物反應器可以適合於分批、半補料分批、補料分批、灌注和/或連續發酵製程。可以使用任何合適的生物反應器直徑。除非上下文另有指示，否則在一些實施方式中，生物反應器可以具有介於100 mL與50,000 L之間的容積。除非另有指示，否則生物反應器可以是任何尺寸，只要它對細胞培養有用；典型地，生物反應器的大小適合在其內部生長的細胞培養物的容積。在非限制性實施方式中，除非上下文另有指示，否則生物反應器可以是至少1升（L），或者可以是2、5、10、50、100、200、250、500、1,000、1,500、2,000、2,500、5,000、8,000、10,000、12,000升或更大，或者為兩者之間的任何容積。可以在培養期期間控制生物反應器的內部條件，包括但不限於pH值和溫度。熟悉該項技術者將意識到用於本文所揭露的靈活的設施中的合適的生物反應器，並且將能夠基於相關考慮因素來選擇該等合適的生物反應器。

如本文所用，術語「細胞培養」或「培養」係指細胞在多細胞生物體或組織外部的生長和繁殖。哺乳動物細胞和細菌細胞的合適培養條件係本領域中已知的。（見例如Animal cell culture: A Practical Approach, D. Rickwood, ed., Oxford University Press, New York (1992)）。哺乳動物細胞可以懸浮培養或附著在固體底物上培養。在一些實施方式中，流化床生物反應器、中空纖維生物反應器、滾瓶、搖瓶和/或攪動罐生物反應器（有或沒有微載體）可以用於細胞培養。在一些實施方式中，500 L至2000 L的生物反應器被用於細胞培養（例如，作為種子培養的一部分）。在一些實施方式中，1000 L至2000 L的生物反應器被用於細胞培養（例如，作為種子培養的一部分）。

如本文所用，術語「細胞培養基」（也稱為「培養基（media/culture medium）」、「細胞培養基」、「組織培養基」等）係指用於生長細胞（例如，細菌細胞或哺乳動物細胞）的任何營養液。細胞培養基通常提供以下組分中的一或多種：能源（例如，呈碳水化合物形式，比如葡萄糖）；一或多種必需胺基酸（例如，所有必需胺基酸；二十種基礎胺基酸，再加上半胱胺酸）；典型地以低濃度需要的維生素和/或其他有機化合物；脂質或游離脂肪酸；以及典型地以極低的濃度（比如，在微莫耳範圍內的濃度）需要的痕量元素，比如無機化合物或天然存在的元素。如本文所用，細胞培養基涵蓋典型地在任何細胞培養過程中被採用和/或已知與任何細胞培養過程一起使用的營養液，細胞培養過程包括但不限於細胞的分批、擴展分批、補料分批和/或灌注或連續培養。

如本文所用，「補料分批培養」係指一種懸浮培養形式，具體地一種培養細胞之方法，其中在培養過程開始之後的一或多個時間向培養物提供附加的組分。所提供的組分典型地包括對細胞而言在培養過程期間已耗盡的營養補充劑。附加地或替代性地，附加組分可以包括補充組分（比如，細胞週期抑制化合物）。在一些實施方式中，補料分批細胞培養基配方可能比基礎細胞培養基配方更豐富或濃度更高。補料分批培養可以在某個時間點停止，並且可以收穫和視需要純化培養基中的細胞和/或組分。

如本文所用，「灌注」細胞培養基係指典型地用於藉由灌注或連續培養方法來維持的細胞培養中並且在該製程期間足夠完整以支持細胞培養的細胞培養基。在一些實施方式中，灌注細胞培養基配方可能比基礎細胞培養基配方更豐富或濃度更高，以適應被用來去除用過的培養基之方法。在一些實施方式中，灌注細胞培養基可以在生長和生產兩個階段期間使用。

如本文所用，「生產」細胞培養基係指典型地在指數生長結束和蛋白質生產接管時的過渡（即，「過渡」和/或「產品」階段）期間用於細胞培養中並且足夠完整以在該階段期間維持所期望的細胞密度、活力和/或產品滴度的細胞培養基。

如本文所用，「治療性產品」係用於受試者（例如，人類）中的與預防、診斷、醫治或減輕疾病、病痛、缺陷或傷害有關的生物產品。治療性產品的非限制性示例包括單株抗體、BiTE®分子、基於RNA的藥物物質、細胞治療物和發酵產品。 種子培養區域

靈活的設施10中的種子培養區域（比如，單次使用區域12的其中設置有該一或多個種子培養部34的區域）可以容納適合於細胞培養的設備。用於細胞培養的設備包括但不限於：用於儲存細胞培養基的罐；用於酸、堿和緩衝溶液的罐；接種準備設備；生物反應器（例如，適合於培養細胞），包括搖臂式生物反應器、500 L生物反應器和2000 L單次使用生物反應器（比如，單次使用生物反應器14）；適合於容納細胞或由細胞產生的產品的罐；離心機，比如離心機32；泵；以及對產品收穫有用的其他設備。在一些實施方式中，種子培養區域中的設備呈單次使用格式。

在一些實施方式中，種子培養區域論證了本揭露之製造設施的柔性。例如，在也採用不銹鋼生物反應器18的一些配置中，種子培養部可以包含上至且包括N-1生物反應器的生物反應器單元。在一些實施方式中，N-1生物反應器的產品被轉移到不銹鋼N生物反應器。在這種配置中，用於產品收穫的設備被繞過而有利於不銹鋼區域中的設備。

在不銹鋼區段被繞過的一些配置中，最大生物反應器單元被認為係N生物反應器（比如，500 L或2000 L的N生物反應器），並且利用種子培養區域中的設備來進行產品收穫。

在一些實施方式中，種子培養區域包含適合於培養細胞的一或多個培養瓶（flask）、培養袋和生物反應器單元。在一些實施方式中，種子培養區域中的細胞培養單元在種子培養部內逐漸變大，以適應更大的細胞培養。在一些實施方式中，種子培養部可以包括一個波浪式生物反應器和兩個種子生物反應器。在一些實施方式中，種子培養部可以包括一個50 L的波浪式生物反應器、一個500 L的單次使用生物反應器、以及一個2000 L的單次使用生物反應器，其中，2000 L的單次使用生物反應器（比如，單次使用生物反應器14）視需要被配置成用於灌注培養（比如，ATF灌注培養）。在一些實施方式中，還可以存在逐漸變大的生物反應器的並行組，其中，每個並行組可以包含表現相同產品的細胞，或者可以包含表現不同產品的細胞。

在一些實施方式中，種子培養區域可以包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個生物反應器，或者在製造多種產品的情況下包含其倍數個生物反應器。在一些實施方式中，種子培養區域中的每個生物反應器適合於獨立地選自以下各者的一或多種製程方法：分批、半補料分批、補料分批、灌注和/或連續過程。在一些實施方式中，生物反應器係攪動罐反應器。在一些實施方式中，生物反應器係氣升式反應器。在一些實施方式中，生物反應器可以具有介於約100毫升與約5,000升之間的容積。非限制性示例生物反應器容積包括100毫升、250毫升、500毫升、750毫升、1升、2升、3升、4升、5升、6升、7升、8升、9升、10升、15升、20升、25升、30升、40升、50升、60升、70升、80升，90升、100升、150升、200升、250升、300升、350升、400升、450升、500升、550升、600升、650升、700升、750升、800升、850升、900升、950升、1000升、1500升、2000升、2500升、3000升、3500升、4000升、4500升和5000升。通常，種子培養區域中的生物反應器單元小於不銹鋼區域中的生物反應器單元。在某些配置中，每個種子培養生物反應器比不銹鋼生產生物反應器小至少2倍、至少3倍、至少4倍、或至少5倍。在一些實施方式中，種子培養區段可以容納四個2,000升的容器用以進行單次使用技術操作。

在一些實施方式中，種子培養區域符合良好製造製程和生物安全標準。在一些實施方式中，種子培養區域符合生物安全水平1（BSL1）、生物安全水平2（BSL2）、生物安全水平3（BSL3）或生物安全水平4（BSL4）標準。

在一些實施方式中，種子培養區域可以包括子區室，其中每個子區室可以被用來執行支持細胞培養生產製程的不同功能或方面。舉例來說，在一些實施方式中，種子培養區域可以包括容納一或多個生物反應器的子區室以及容納用於產品收穫的設備的子區室。 單次使用生產區域

在一些實施方式（其中，不銹鋼區域16被繞過）中，可重新配置的單次使用區域12包括一或多個生產生物反應器。靈活的設施10係容易可擴展和可縮放的，並且在可重新配置的單次使用區域12內的不同生產生物反應器可以被用來在同一靈活的設施10中生產完全不同的治療性產品。

例如，在一些實施方式中，在被配置為第一生物反應器模組的模組化單元中，用戶可以製造一種類型的治療性產品，比如源自哺乳動物細胞系的單株抗體產品。在第二模組化單元中，用戶可以製造完全不同的治療性產品，比如微生物產品。在一些實施方式中，本揭露之靈活的設施10能夠在單次使用生產區域12和不銹鋼區域16中的一者或兩者中使用生產生物反應器來同時支援多條產品線。此外，在一些實施方式中，本揭露之靈活的設施（比如，靈活的設施10）能夠擴展以添加附加的產品線。 不銹鋼區域

在一些實施方式中，不銹鋼區段16容納適合於細胞培養的設備。適合於細胞培養的設備包括但不限於生物反應器（例如，適合於培養細胞）、罐（例如，適合於容納細胞、培養基或由細胞產生的產品）、離心機、泵和對產品收穫有用的其他設備、以及清潔系統（CIP）。CIP單元典型地是模組化橇，並且具有幾個罐以容納清潔溶液（比如，苛性鹼溶液和/或漂白劑）、泵和感測器以將清潔溶液送至待清潔的適當罐。

在一些實施方式中，不銹鋼區段16包含適合於培養細胞的一或多個不銹鋼生物反應器單元，比如（多個）不銹鋼生物反應器18。生物反應器單元可以執行以下各項中的一項或多項（比如，一項、兩項、三項、四項、全部）：對營養物和/或碳源進行補料；合適氣體（例如，氧氣）的注射；細胞培養基的流動；氣相和液相的分離；生長溫度的維持；pH水平的維持；攪拌（例如，攪動）；和/或清潔/消毒。在一些實施方式中，不銹鋼區段可以包含1、2、3、4、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90、或100個或更多個生物反應器。在一些實施方式中，不銹鋼區域16中的每個生物反應器適合於獨立地選自以下各者的一或多種製程方法：分批、半補料分批、補料分批、灌注和/或連續過程。在一些實施方式中，至少一個不銹鋼生物反應器18係攪動罐反應器。在一些實施方式中，至少一個不銹鋼生物反應器18係氣升式反應器。在一些實施方式中，至少一個不銹鋼生物反應器18可以具有介於1000升與50,000升之間的容積。非限制性示例包括如下的容積：1000升、1500升、2000升、2500升、3000升、3500升、4000升、4500升、5000升、6000升、7000升、8000升、9000升、10,000升、15,000升、20,000升或50,000升。

在一些實施方式中，（多個）不銹鋼生物反應器中有大約95%駐留在靈活的設施10內的非分類空間中，其中（多個）不銹鋼生物反應器18的一小部分（大約5%）暴露於靈活的設施10的已分類的可重新配置的單次使用區域12。在一些實施方式中，（多個）不銹鋼生物反應器18的（多個）暴露部分可以包括用以允許進入罐儀器的罐探針帶27a、用於灌注的連接件27b、以及用於補料和向罐添加溶液的任何其他連接件27c，包括用於pH控制、營養物補料（培養基）或其他添加（即，抗泡劑添加）的連接件。

在一些實施方式中，（多個）不銹鋼生物反應器18的（多個）暴露部分24直接暴露到已分類空間中，比如利用探針帶27a、或藉由與已分類空間中的一條或多條線進行的一或多個連接，該一條或多條線可以在其他罐位置（比如，具有培養基添加）中通過管進入罐。

在一些實施方式中，不銹鋼區域16被設計成容納若干個生物反應器18。在一些實施方式中，不銹鋼區域16可以容納用於哺乳動物細胞系的五個10,000升容器。

在一些實施方式中，不銹鋼區域16包括五個或更多的10,000升容器和收穫設備。在一些實施方式中，不銹鋼區域16包括五個10,000升容器和收穫設備。在一些實施方式中，不銹鋼區域中的生物反應器被配置用於製造源自哺乳動物細胞系的單株抗體產品。

在一些實施方式中，不銹鋼區域16中的一或多個不銹鋼生物反應器18可以是基於地面的反應器。在一些實施方式中，一或多個不銹鋼生物反應器18可以從結構本身懸掛。

在一些實施方式中，不銹鋼區域16符合良好製造製程和生物安全標準。在一些實施方式中，不銹鋼區域16符合生物安全水平1（BSL1）、生物安全水平2（BSL2）、生物安全水平3（BSL3）或生物安全水平4（BSL4）標準。

在一些實施方式中，不銹鋼區域16可以包括子區室，其中每個子區室可以被用來執行支持細胞培養生產製程的不同功能或方面。舉例來說，在一些實施方式中，不銹鋼區域16可以包括容納一或多個生物反應器的子區室、容納用於產品收穫的設備的子區室、用於接種的子區室、以及用於清潔和淨化設備以及處理此類設備的操作員的子區室。

在一些實施方式中，不銹鋼區域16內的不同生產生物反應器可以被用來在同一靈活的設施（比如，靈活的設施10）中生產完全不同的治療性產品。例如，在一些實施方式中，在被配置為第一生物反應器模組的模組化單元中，用戶可以製造一種類型的治療性產品，比如源自哺乳動物細胞系的單株抗體產品。在第二模組化單元中，用戶可以製造完全不同的治療性產品，比如微生物產品。 下游加工區域

標準下游加工（DSP）單元通常是層析、混合和過濾設備構成的組件。在本揭露之非限制性實施方式中，下游加工區域中的過濾設備可以包括超濾、微濾、病毒過濾和消毒設備，包括例如病毒前分離子單元和病毒後分離子單元。可能貫穿典型的哺乳動物細胞衍生的蛋白質純化製程發生病毒減少；例如，在一些實施方式中，可能藉由（多個）病毒減少層析步驟、在混合的容器的情況下的病毒滅活和/或病毒過濾發生病毒減少–所有該等都在一個哺乳動物製程內。病毒後分離子單元容納適合於以下各者中的任一者的設備和公用設施：超濾（切向過濾）；正常過濾；層析；配製；滴定；混合；濃縮；緩衝液交換；以及原料藥物物質容器填充和冷凍。

非限制性示例純化區域可以包括：帶有攪動器的罐，來自分離模組的粗提產品的入口導管連接至該罐；設置有容積泵的出口導管，該出口導管連接至由電腦化單元運行的第一層析柱中的入口導管，該導管也連接至電腦化單元；該層析柱的出口導管，該出口導管連接至設置有攪動器的罐中的入口導管，該罐的設置有容積泵的出口導管連接至由電腦化單元運行的第二層析柱中的入口導管，該導管也連接至電腦化單元；該層析柱的出口導管，其連接至設置有攪動器的罐中的入口導管，其出口導管進而以不連續的方式連接至設置有出口的真空冷凍乾燥器的入口。 分類水平

基於分級標準，靈活的設施10內的不同區域（比如，可重新配置的單次使用區域12和不銹鋼區域16、以及它們的部分）可以具有不同的分類水平。例如，在一些實施方式中，基於由靈活的設施10在其中受監管的管轄區域中的監管機構設定的分級標準，不同的區域可以具有不同的分類水平。在一些實施方式中，基於由靈活的設施10所處的管轄區域中的監管機構設定的分級標準，不同的區域可以具有不同的分類水平。在一些實施方式中，基於由在靈活的設施10中生產的治療性產品在其中被銷售的管轄區域中的監管機構設定的分級標準，不同的區域可以具有不同的分類水平。

在一些實施方式中，基於由美國食品和藥品管理局設定的分級標準或由EudraLex（歐盟醫藥產品管理規則第4卷歐盟良好製造實踐指南人用和獸用醫藥產品（由附錄1歐盟無菌醫藥產品製造增補）設定的分級標準，不同的區域可以具有不同的分類水平。 控制系統

在一些實施方式中，可以使用本領域中已知的分析技術中的任一種來監測和評估來自細胞培養的樣品。在一些實施方式中，可以在培養的持續時間內監測各種參數，包括但不限於重組蛋白和培養基的品質和特性。可以獲取樣品並以期望的頻率對其進行間歇性監測，包括連續監測、即時監測或近即時監測。

在一些實施方式中，種子培養設備、不銹鋼生物反應器和純化設備可以各自包括用於監測反應參數和/或產品品質參數的感測器。被監測的參數可以包括但不限於電導率、溫度、pH、氧氣和CO ₂。感測器可以是本領域中已知的用於監測該等參數的任何類型的侵入式感測器，其中感測器與製程流體接觸。另外，在一些實施方式中，感測器可以是非侵入式光化學感測器，比如在例如美國專利案號6,673,532和7,041,493、以及美國專利申請公開號20110065084中描述的那些。另外，本領域中已知的光譜儀可以用於種子培養設備、生產生物反應器和/或純化設備中，以監測產品流和/或每個設備的輸入。由此類光譜儀測量的參數可以包括但不限於吸光度、多角度光散射、螢光性、拉曼散射、圓二色性和紅外光譜特性。

在一些實施方式中，每個區域內的設備和製程係經由電腦系統和對應軟體進行電腦控制和監測的，這也允許使系統自動化。位於每個區域中的設備可以包括資料收集感測器和控制項，該等資料收集感測器和控制項可以經由硬線連接或者無線連接與中央控制器進行通訊。

在一些實施方式中，每個區域可以附加地包括電子控制板，該電子控制板也可以被用來監測、收集和控制設備和其中發生的製程。中央控制器還可以包括用以存儲資料的資料存儲裝置、以及用於中央控制器和系統操作的應用程式和/或操作軟體。軟體可以包括可在工作站上顯示的圖形化用戶介面（GUI）。GUI可以顯示若干個不同的螢幕以用於設置、監測及控制設備和整體製造製程。

因此，在一些實施方式中，此類軟體可以被用來控制區域內的程式，並且視需要可以經由中央電腦和/或電子控制板進行定制。程式係在用於在區域內實施特定製程的策略（即，藉由單次執行分批製程而生產的或已生產的材料）。在一些實施方式中，製程可以是用於轉換、運輸或儲存材料或能量的一連串化學、物理或生物活動。

在一些實施方式中，無菌連接模組將可重新配置的單次使用區域中的一或多個種子培養生物反應器連接至不銹鋼區域中的一或多個不銹鋼生物反應器。

在一些實施方式中，無菌連接模組將收穫單元連接至一或多個下游純化單元。 細胞系

在一些實施方式中，本揭露之靈活的設施10中的每個生物反應器適合於培養原核細胞或真核細胞。在一些實施方式中，靈活的設施10中的至少一個生物反應器適合於培養原核細胞。在一些實施方式中，靈活的設施10中的至少一個生物反應器適合於培養真核（比如，哺乳動物）細胞。在一些實施方式中，靈活的設施10中的至少一個生物反應器適合於培養能夠產生病毒治療劑（例如，抗癌溶瘤病毒、用於基因療法的病毒載體和/或病毒免疫療法）的細胞。在一些實施方式中，靈活的設施10中的至少一個生物反應器適合於培養能夠產生病毒治療劑（例如，抗癌溶瘤病毒、用於基因療法的病毒載體和/或病毒免疫療法）的原核細胞。在一些實施方式中，靈活的設施10中的至少一個生物反應器適合於培養能夠產生病毒治療劑（例如，抗癌溶瘤病毒、用於基因療法的病毒載體和/或病毒免疫療法）的真核（比如，哺乳動物）細胞。

用於在本揭露之靈活的設施10的生物反應器中培養的合適細胞的示例包括但不限於細菌細胞（例如， 大腸桿菌、 巴斯德畢赤酵母）、酵母細胞（例如， 釀酒酵母、 裡氏木黴）、植物細胞、昆蟲細胞（例如，Sf9）、中國倉鼠卵巢細胞（CHO、以及任何遺傳修飾的或衍生的CHO細胞系）、小鼠細胞（例如，小鼠胚胎纖維母細胞、源自小鼠癌症模型的細胞）、人細胞（例如，來自任何組織或器官的細胞、來自癌症或其他患病細胞系的細胞、幹細胞）、融合瘤細胞或其他遺傳修飾的或雜交細胞。用於包含在本揭露之靈活的設施中的生物反應器中的合適宿主細胞包括可購自例如培養物保藏中心（比如，DSMZ（德國布倫瑞克的德國微生物菌種保藏中心）或美國典型培養物保藏中心（ATCC））的那些宿主細胞。

在一些實施方式中，細胞係細菌或原核細胞。在一些實施方式中，原核細胞選自革蘭氏陽性細胞，比如： 芽孢桿菌（比如， 枯草芽孢桿菌（比如， 枯草芽孢桿菌3ΝΑ和 枯草芽孢桿菌168）、 解澱粉芽胞桿菌、 地衣芽孢桿菌、 納豆芽孢桿菌或 巨大芽孢桿菌）、 鏈黴菌、 鏈球菌、 葡萄球菌或 乳桿菌細胞。在一些實施方式中，原核細胞選自革蘭氏陰性細胞，比如 沙門氏菌屬種或 大腸桿菌（比如，TGI、TG2、W3110、DH1、DHB4、DH5a、HMS 174、HMS174（DE3）、ΝΜ533、C600、ΗΒ101、JM109、MC4100、XLl-Blue和Origami細胞）、以及源自 大腸桿菌B-菌株的細胞（比如，BL-21或BL21（DE3））。原核生物細胞或細菌細胞可以從商業供應商處獲得。 芽孢桿菌細胞例如可獲自芽孢桿菌遺傳保藏中心，生物科學556，484西第12大道，哥倫布市，俄亥俄州43210-1214。

在一些實施方式中，細胞係真核細胞，比如哺乳動物細胞。哺乳動物細胞可為例如人或齧齒類或牛細胞系或細胞株。此類細胞、細胞系或細胞株的示例包括但不限於例如小鼠骨髓瘤（NSO）細胞系、中國倉鼠卵巢（CHO）細胞系、FIT 1080、Η9、HepG2、MCF7、MDBK Jurkat、NIH3T3、PC12、BF1K（幼倉鼠腎臟細胞）、VERO、SP2/0、ΥΒ2/0、Υ0、C127、L細胞、COS（例如，COS1和COS7）、QC1-3、HEK-293、VERO、PER.C6、HeLa、EB1、EB2、EB3、溶瘤或融合瘤細胞系。在一些實施方式中，哺乳動物細胞係CHO細胞系。在一些實施方式中，哺乳動物細胞係CHO細胞。在一些實施方式中，哺乳動物細胞選自以下各者：CHO-K1細胞、CHO-K1 SV細胞、DG44 CHO細胞、DUXB11 CHO細胞、CHOS細胞、CHO GS敲除細胞、CHO FUT8 GS敲除細胞、CHOZN細胞和CHO衍生細胞。CHO GS敲除細胞（比如，GSKO細胞）係例如CHO-K1 SV GS敲除細胞。附加地，CHO FUT8敲除細胞係例如Potelligent® CHOK1 SV（龍沙有限公司）。在一些實施方式中，真核細胞也可為禽細胞、細胞系或細胞株，比如EBx®細胞、EB14、EB24、EB26、EB66或EBv13。

在一些實施方式中，任何哺乳動物細胞系都可以用於包括在本揭露之靈活的設施10中的生物反應器中。作為非限制性示例，適合於在培養物中生長的廣泛各種哺乳動物細胞系可從美國典型培養物保藏中心（維吉尼亞州馬納薩斯）和商業供應商處獲得。工業上常用的細胞系的非限制性示例包括由SV40轉化的猴腎CVl系（COS-7，ATCC CRL 1651）；人胚腎系（293細胞或亞選殖用於在懸浮培養中生長的293細胞（Graham等人, 1977年，J. Gen Virol.《普通病毒學雜誌》36:59）；幼倉鼠腎臟細胞（BHK，ATCC CCL 10）；小鼠塞托利細胞（TM4, Mather,1980年，Biol. Reprod.《生殖生物學》23:243-251）；猴腎臟細胞（CVl ATCC CCL 70）；非洲綠猴腎臟細胞（VERO-76, ATCC CRL-1587）；人子宮頸癌細胞（HELA，ATCC CCL 2）；犬腎臟細胞（MDCK，ATCC CCL 34）；布法羅大鼠肝細胞（BRL 3A，ATCC CRL 1442）；人肺細胞（W138，ATCC CCL 75）；人肝癌細胞（Hep G2，HB 8065）；小鼠乳腺腫瘤（MMT 060562，ATCC CCL51）；TRI細胞（Mather等人, 1982年，Annals N.Y Acad. Sci.《紐約科學院年報》383:44-68）；MRC 5細胞或FS4細胞；哺乳動物骨髓瘤細胞、以及若干種其他細胞系和中國倉鼠卵巢（CHO）細胞。

CHO細胞（包括CHOK1細胞（ATCC CCL61））被廣泛用來生產複雜的重組蛋白。在一些實施方式中，二氫葉酸還原酶（DHFR）不足的突變細胞系（Urlaub等人，1980年，《 美國國家科學院院刊》77: 4216-4220）、DXB11和DG-44係期望的CHO宿主細胞系，因為高效的DHFR可選擇且可擴增的基因表現系統允許在該等細胞系中的高水平重組蛋白表現（Kaufman R. J.，1990年， Meth Enzymol185:537-566）。還包括利用基於麩醯胺酸合成酶（GS）的甲硫胺酸亞碸亞胺（MSX）選擇的麩醯胺酸合成酶（GS）-敲除CHOK1SV細胞系。其他適合用於本揭露之靈活的設施的生物反應器中的CHO宿主細胞包括但不限於以下（括號中為ECACC登錄號）：CHO（85050302）；CHO（無蛋白）（00102307）；CHO-K1（85051005）；CHO-K1/SF（93061607）；CHO/dhFr-（94060607）；CHO/dhFr-AC-free（05011002）；以及RR-CHOKI（92052129）。

用於商業應用的蛋白質的大規模生產可在懸浮培養中實施。因此，被用來生成本文描述的重組哺乳動物細胞的哺乳動物宿主細胞可以但不必適於在懸浮培養中生長。已知適於在懸浮培養中生長的各種宿主細胞，包括來自CFIO-S、DG44和DXB11細胞系的小鼠骨髓瘤NS0細胞和CLIO細胞。其他合適的細胞系包括但不限於小鼠骨髓瘤SP2/0細胞、幼倉鼠腎臟BF1K-21細胞、人PER.C6 ^®細胞、人胚腎F1EK-293細胞、以及源自本文所揭露的細胞系中的任一者或從本文所揭露的細胞系中的任一者工程化的細胞系。

在一些實施方式中，真核細胞選自以下各者：低等真核細胞，比如酵母細胞（例如，畢赤酵母屬（例如，巴斯德畢赤酵母、甲醇畢赤酵母、克魯弗畢赤酵母和安格斯畢赤酵母）、孔瑪氏酵母屬（例如，巴斯德孔瑪氏酵母、假巴斯德孔瑪氏酵母或菲氏孔瑪氏酵母）、酵母屬（例如，釀酒酵母、克魯維酵母、葡萄汁酵母）的細胞、克魯維酵母屬（例如，乳酸克魯維酵母、馬克斯克魯維酵母）的細胞、假絲酵母屬（例如，產朊假絲酵母、可可假絲酵母、博伊丁假絲酵母）的細胞、地絲菌屬（例如，發酵地絲菌）的細胞、多形漢遜酵母、解脂耶氏酵母或粟酒裂殖酵母。在一些實施方式中，真核細胞選自巴斯德畢赤酵母株。巴斯德畢赤酵母株的非限制性示例包括Χ33、GS115、ΚΜ71、ΚΜ71Η和CBS7435。

在一些實施方式中，真核細胞選自真菌細胞（例如，以下各者的細胞：麴菌（比如，黑麴菌、煙麴菌、歐氏麴菌、尼杜拉麴菌）、頂孢黴（比如，嗜熱支頂孢）、毛殼菌（比如，嗜熱毛殼菌）、金孢子菌（比如，嗜熱金孢子菌）、蟲草菌（比如，蛹蟲草）、棒囊殼菌、櫛黴菌、鐮刀菌（比如，尖鐮孢菌）、小叢殼菌（比如，禾生小叢殼菌）、肉座菌（比如，紅褐肉座菌）、稻瘟菌（比如，歐氏稻瘟菌）、毀絲黴（比如，嗜熱毀絲黴）、叢赤殼菌（比如，紅球叢赤殼菌）、脈孢菌（比如，粗糙脈孢菌）、青黴菌、孢子絲菌（比如，嗜熱孢子絲菌）、梭孢殼菌（比如，泰瑞斯梭孢殼菌、異梭孢殼菌）、木黴菌（比如，裡氏木黴）或輪黴菌（比如，大麗花輪黴菌））。

在一些實施方式中，真核細胞選自昆蟲細胞（比如，Sf9、Mimic™ Sf9、Sf21、High Five™（ΒΤ1-ΤΝ- 5Β1-4）或BT1-Ea88細胞）、藻類細胞（比如，雙眉藻屬、矽藻屬、杜氏藻屬、綠藻屬、衣藻屬、藍綠藻屬（藍綠藻細菌）、微擬球藻屬、螺旋藻屬或棕鞭藻屬）和植物細胞（比如，來自單子葉植物（比如，玉米、水稻、小麥或狗尾草）的細胞或來自雙子葉植物（比如，木薯、馬鈴薯、大豆、番茄、菸草、紫苜蓿、小立碗蘚或擬南芥）的細胞）。

在一些實施方式中，細胞表現或產生產品，比如重組治療性產品。如下文更詳細描述的，由細胞產生的治療性產品的示例包括但不限於抗體分子（例如，單株抗體、雙特異性抗體）、抗體模擬物（特異性地結合至抗原但在結構上與抗體無關的多肽分子，比如DARPins、親和體、adnectins或IgNAR）、融合蛋白（例如，Fc融合蛋白、嵌合細胞介素）、其他重組蛋白（例如，糖基化蛋白、酶、激素）、病毒療法（例如，抗癌溶瘤病毒、用於基因療法和病毒免疫療法的病毒載體）、細胞治療物（例如，多能幹細胞、間葉幹細胞和成體幹細胞）、疫苗或脂質包裹的顆粒（例如，胞泌體、病毒樣顆粒）、RNA（例如，siRNA）或DNA（例如，質體DNA）、抗生素或胺基酸。在一些實施方式中，根據本揭露之靈活的設施可以用於生產生物仿製藥。在一些實施方式中，根據本揭露之靈活的設施可以用於生產治療性產品，該等治療性產品具有一定範圍的複雜性，並且可以包括翻譯後修飾（比如，糖基化）。

在一些實施方式中，根據本揭露之靈活的設施允許生產以下各者：真核細胞，例如哺乳動物細胞或低等真核細胞（比如，酵母細胞或絲狀真菌細胞）；或原核細胞，比如革蘭氏陽性或革蘭氏陰性細胞；和/或真核或原核細胞的產品，例如蛋白質、肽、抗生素、胺基酸、核酸（比如，DNA或RNA），其由真核細胞以大規模方式合成。 培養方法

可以在用於藉由哺乳動物細胞培養物生產重組蛋白的商業製程中使用的各種方法包括但不限於：分批培養；補料分批培養；以及灌注培養。

分批培養係一種不連續的方法，其中細胞在固定容積的培養基中生長很短的一段時間，接著完全收穫。使用分批方法生長的培養物經歷細胞密度的增加直至達到最大細胞密度，接著隨著培養基組分的消耗和代謝副產物（比如，乳酸鹽和胺）水平的積聚，活細胞密度下降。收穫典型地發生在達到最大細胞密度時（例如，5 x 10 ⁶個細胞/mL或更高，取決於培養基配方、細胞系等）。分批製程係最簡單的培養方法；然而，可行的細胞密度受到營養物可用性的限制，並且一旦細胞處於最大密度，培養物就會下降且產量減少。在分批培養中沒有延長生產階段的能力，因為廢品的積集和營養物的耗盡迅速導致培養物下降，典型地在3至7天左右。

補料分批培養藉由提供團式或連續培養基補料以補充已經消耗的那些培養基組分而改進了分批製程。由於補料分批培養貫穿運行接收附加的營養物，因此當與分批方法相比時，它們具有實現更高的細胞密度（＞ 10至30 x 10 ⁶個細胞/mL，取決於培養基配方、細胞系等）和增加產品滴度的潛力。與分批製程不同，可以藉由操縱補料策略和培養基配方來產生和維持雙相培養物，以區分實現所期望的細胞密度的細胞增殖期（生長階段）與懸浮或緩慢細胞生長階段（生產階段）。因而，與分批培養相比，補料分批培養具有獲得更高產品滴度的潛力。典型地，在生長階段期間使用分批方法，並且在生產階段期間使用補料分批方法，但補料分批的補料策略可以貫穿整個製程使用。然而，與分批製程不同，生物反應器容積係限制補料量的限制因素。而且，與分批方法一樣，代謝副產物的積聚將導致培養物下降，這限制了生產階段的持續時間，常常在10至21天左右。補料分批培養係不連續的，並且收穫典型地發生在代謝副產物水平或培養物活力達到預定水平時。當與分批培養（其中不發生補料）相比時，補料分批培養可以產生更大量的重組蛋白。（見例如美國專利案號5,672,502。）

灌注方法藉由在培養期間添加新鮮培養基並同時去除用過的培養基來提供對分批和補料分批方法的潛在改進。灌注培養係如下的一種培養：其中細胞培養物接收新鮮的灌注補料培養基而同時去除用過的培養基。典型的灌注培養以持續一天或兩天的分批培養啟動開始，接著連續、分步和/或間歇地將新鮮的補料培養基添加到培養物，且同時去除用過的培養基，其中貫穿培養物的生長和生產階段保留了細胞和附加的高分子量化合物，比如蛋白質（基於過濾器的截留分子量）。可以使用各種方法（比如，沈澱、離心或過濾）來去除用過的培養基，同時維持細胞密度。過濾方法的非限制性示例係交替切向流過濾。交替切向流係藉由將培養基泵送通過中空纖維過濾器模組來維持的。見例如美國專利案號6,544,424；Furey，2002年，Gen. Eng. News. 22 (7):62-63。

灌注可為連續的、分步的、間歇的、或任何該等中的任何一種或全部的組合。灌注率可以每天低於一工作容積至許多個工作容積。細胞被保留在培養物中，並且被去除的用過的培養基基本上不含細胞或具有顯著少於培養物的細胞。細胞培養物表現的重組蛋白也可以保留在培養物中。

典型的大規模商業細胞培養策略力圖達到高細胞密度，60 – 90(+) x 10 ⁶個細胞/mL，其中反應器容積的幾乎三分之一到超過一半係生物質。藉由灌注培養，已實現了 ＞ 1 x 10 ⁸個細胞/mL的極端細胞密度；預測了甚至更高的密度。灌注製程的潛在優點係生產培養物可以比分批或分批培養方法維持更長的時段。然而，增加培養基的準備、使用、儲存和處置對於支援長期的灌注培養係必要的，特別是對於具有高細胞密度的培養物而言，該培養物還需要甚至更多的營養物。這一切與分批和補料分批方法相比增加了生產成本。另外，較高的細胞密度可能在生產期間引起問題，比如維持溶解氧水平和充氣增加的問題，包括供應更多的氧氣和去除更多的二氧化碳，這可能導致更大程度的起泡和需要更改消泡策略；以及在收穫和下游加工期間引起問題，其中去除過量細胞材料所需的努力可導致產物損失，從而否定了由於細胞質量增加所致而增加滴度的益處。

適合在本揭露之靈活的設施10中使用的替代性大規模細胞培養策略將生長階段期間的補料分批補料與生產階段期間的連續灌注進行組合。在一些實施方式中，在生長階段期間使用具有團劑補料的補料分批培養來維持細胞培養。然後，可以在生產階段期間使用灌注補料。在一些實施方式中，當細胞已達到生產階段時，灌注開始。 治療性產品

各種治療性產品均可以在根據本揭露之靈活的設施中生產。感興趣的多肽和蛋白質（它們代表治療性產品的子集）可能具有科學或商業利益，包括例如基於蛋白質的治療。感興趣的蛋白質包括但不限於分泌性蛋白質、非分泌性蛋白質、細胞內蛋白質或膜結合蛋白質。感興趣的多肽和蛋白質可以使用細胞培養方法藉由重組動物細胞系生產，並且可以被稱為「重組蛋白」。所表現的（多種）蛋白可以在細胞內產生或被分泌到培養基中，從培養基中可以回收和/或收集該等蛋白。術語「分離的蛋白質」或「分離的重組蛋白」係指感興趣的多肽或蛋白質，其從將干擾其治療性、診斷性、預防性、研究或其他用途的蛋白質或多肽或其他污染物中純出來。感興趣的蛋白質包括但不限於藉由結合靶發揮治療性作用的蛋白質，靶比如為下文列出的那些靶當中的靶，包括從其衍生的靶、與其相關的靶以及其修飾。

感興趣的蛋白質可以包括但不限於「抗原結合蛋白」。「抗原結合蛋白」係指包括抗原結合區域或抗原結合部分的蛋白質或多肽，該抗原結合區域或抗原結合部分對其所結合的另一個分子（抗原）具有親和力。抗原結合蛋白包括但不限於抗體、肽體、抗體片段、抗體衍生物、抗體類似物、融合蛋白（包括例如單鏈可變片段（scFv）、雙鏈（二價）scFv和IgGscFv（見例如Orcutt等人，2010年，Protein Eng Des Sel 23:221-228））、雜合IgG（見例如Liu等人，2015年，《生物化學期刊》290:7535-7562）、突變蛋白質和XmAb ^®（加利福尼亞州蒙諾維亞Xencor有限公司）。還包括以下各者雙特異性T細胞銜接器（BiTE ^®）、具有延長（比如，半衰期延長）的雙特異性T細胞銜接器（比如，HLE BiTE、HeteroIg BITE等）、嵌合抗原受體（CAR、CART）和T細胞受體（TCR）。

在一些實施方式中，感興趣的蛋白質可以包括群落刺激因子，比如顆粒球群落刺激因子（G-CSF）。此類G-CSF劑包括但不限於Neupogen ^®（非格司亭）和Neulasta ^®（培非格司亭）。還包括紅血球生成刺激劑（ESA），比如Epogen ^®（依伯汀α）、Aranesp ^®（達貝泊汀α）、Dynepo ^®（依伯汀δ）、Mircera ^®（甲氧基聚乙二醇-依伯汀β）、Hematide ^®、MRK-2578、INS-22、Retacrit ^®（依伯汀ζ）、Neorecormon ^®（依伯汀β）、Silapo ^®（依伯汀ζ）、Binocrit ^®（依伯汀α）、依伯汀α Hexal、Abseamed ^®（依伯汀α）、Ratioepo ^®（依伯汀θ）、Eporatio ^®（依伯汀θ）、Biopoin ^®（依伯汀θ）、依伯汀α、依伯汀β、依伯汀ζ、依伯汀θ和依伯汀δ、依伯汀ω、依伯汀ι、組織性血漿蛋白激活劑和GLP-1受體促效劑、以及前述各者中的任一者的變體或其類似物和生物仿製藥。

在一些實施方式中，感興趣的蛋白質單獨地或以任何組合結合至以下各者中的一者或多者：CD蛋白質，包括但不限於CD3、CD4、CD5、CD7、CD8、CD19、CD20、CD22、CD25、CD30、CD33、CD34、CD38、CD40、CD70、CD123、CD133、CD138、CD171和CD174；HER受體家族蛋白質，包括例如HER2、HER3、HER4和EGF受體、EGFRvIII、細胞黏附分子（例如，LFA-1、Mol、p150、95、VLA-4、ICAM-1、VCAM和αv/β3整合素）；生長因子，包括但不限於例如血管內皮生長因子（「VEGF」）；VEGFR2、生長激素、甲狀腺刺激素、卵泡刺激素、黃體生成激素、生長激素釋放因子、甲狀旁腺激素、米勒管抑制物質、人類巨噬細胞炎性蛋白（MIP-1-α）、促紅血球生成素（EPO）、神經生長因子（比如，NGF-β）、血小板衍生生長因子（PDGF）、纖維母細胞生長因子（包括例如aFGF和bFGF）、表皮生長因子（EGF）、Cripto、轉化生長因子（TGF）（尤其包括TGF-α和TGF-β（包括TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3、TGF-β4或TGF-β5））、胰島素樣生長因子-I和胰島素樣生長因子-II（IGF-I和IGF-II）、des(1-3)-IGF-I（腦IGF-I）和骨誘導因子、胰島素和胰島素相關蛋白（包括但不限於胰島素、胰島素A鏈、胰島素B鏈、前胰島素和類胰島素生長因子結合蛋白）；（凝血蛋白和凝血相關蛋白，尤其比如，VIII因子、組織因子、血管性血友病因子、蛋白C、α-1-抗胰蛋白酶、血纖維蛋白溶酶原激活劑（比如，尿激酶和組織性血漿蛋白激活劑（「t-PA」））、邦巴辛（bombazine）、凝血酶、血小板生成素和血小板生成素受體、群落刺激因子（CSF）（尤其包括以下各者：M-CSF、GM-CSF和G-CSF）、其他血液和血清蛋白（包括但不限於白蛋白、IgE和血型抗原）、受體和受體相關蛋白（包括例如flk2/flt3受體、肥胖（OB）受體、生長激素受體和T細胞受體）；神經滋養因子，包括但不限於骨源性神經滋養因子（BDNF）和神經滋養蛋白-3、神經滋養蛋白-4、神經滋養蛋白-5或神經滋養蛋白-6（NT-3、NT-4、NT-5或NT-6）；鬆弛素A鏈、鬆弛素B鏈和鬆弛素原樣蛋白、干擾素（包括例如，干擾素α、干擾素β和干擾素γ）、白血球介素（IL）（例如，IL-1至IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-23、IL-12/IL-23、IL-2Ra、IL1-R1、IL-6受體、IL-4受體和/或IL-13受體、IL-13RA2或IL-17受體、IL-1RAP）；病毒抗原，包括但不限於AIDS包膜病毒抗原、脂蛋白、降鈣素、升糖素、心房利尿鈉因子、肺表面活性劑、腫瘤壞死因子-α和腫瘤壞死因子-β、腦啡肽酶、BCMA、IgKappa、ROR-1、ERBB2、間皮素、RANTES（受激活調節的正常T細胞表現與分泌因子）、小鼠促性腺激素相關肽、DNA酶、FR-α、抑制素和活化素、整合素、蛋白A或D、類風濕因子、免疫毒素、骨成形性蛋白（BMP）、超氧化物歧化酶、表面膜蛋白、衰變加速因子（DAF）、AIDS包膜、運輸蛋白、歸巢受體、MIC（MIC-a、MIC-B）、ULBP 1-6、EPCAM、位址素、調節蛋白、免疫黏附素、抗原結合蛋白、生長激素、CTGF、CTLA4、伊紅趨素（eotaxin）-1、MUC1、CEA、c-MET、密連蛋白（Claudin）-18、GPC-3、EPHA2、FPA、LMP1、MG7、NY-ESO-1、PSCA、神經節苷脂GD2、神經節苷脂GM2、BAFF、OPGL（RANKL）、肌抑素、Dickkopf-1（DKK-1）、Ang2、NGF、IGF-1受體、肝細胞生長因子（HGF）、TRAIL-R2、c-Kit、B7RP-1、PSMA、NKG2D-1、計畫性細胞死亡蛋白1和配體、PD1和PDL1、甘露糖受體/hCGβ、C型肝炎、間皮素dsFv[PE38]軛合物、退伍軍人症嗜肺桿菌（lly）、IFN γ、γ干擾素誘導蛋白10（IP10）、IFNAR、TALL-1、胸腺基質淋巴細胞生成素（TSLP）、前蛋白轉化酶枯草桿菌蛋白酶/Kexin 9型（PCSK9）、幹細胞因子、Flt-3、降鈣素基因相關肽（CGRP）、OX40L、α4β7、血小板特異性（血小板糖蛋白IIb/IIIb（PAC-1）、轉化生長因子β（TFGβ）、透明帶精子結合蛋白3（ZP-3）、TWEAK、血小板衍生生長因子受體α（PDGFRα）、硬化蛋白（sclerostin）以及前述各者中的任一者的生物活性片段或變體。

在一些實施方式中，感興趣的蛋白質包括阿昔單抗、阿達木單抗、阿德木單抗、阿柏西普、阿侖單抗、阿利庫單抗、阿那白滯素、阿塞西普、巴厘昔單抗、貝利木單抗、貝伐單抗、生物素單抗（biosozumab）、博納吐單抗、本妥昔單抗、布羅達單抗、莫坎妥珠單抗、康納單抗、西妥昔單抗、塞妥珠單抗、可那木單抗、達利珠單抗、地舒單抗、依庫麗單抗、依決洛單抗、依法利珠單抗、依帕珠單抗、依那西普、依伏庫單抗、加利昔單抗、蓋尼塔單抗、吉妥珠單抗、戈利木單抗、替伊莫單抗、英夫利昔單抗、易普利姆瑪、樂地單抗、魯昔單抗、左旋單抗（lxdkizumab）、馬帕木單抗、二磷酸莫替沙尼、莫羅單抗-CD3、那他珠單抗、奈西立肽、尼妥珠單抗、納武單抗、奧瑞組單抗、奧法木單抗、奧馬珠單抗、奧普瑞白介素、帕利珠單抗、帕尼單抗、派姆單抗、帕妥珠單抗、培克珠單抗、蘭尼單抗、利妥木單抗、利妥昔單抗、羅米司亭、洛莫索珠單抗、沙格司亭、托珠單抗、托西莫單抗、曲妥單抗、優特克單抗、維多珠單抗、維西珠單抗、伏洛昔單抗、紮木單抗和紮魯木單抗、以及前述各者中的任一者的生物仿製藥。

在一些實施方式中，感興趣的蛋白質還可以包括基因工程化受體，比如嵌合抗原受體（CAR或CAR-T）和T細胞受體（TCR）、以及包括與該靶向抗原相互作用的抗原結合分子的其他蛋白質。藉由摻入與該靶向抗原相互作用的抗原結合分子，CAR可以被工程化以結合至抗原（比如，細胞表面抗原）。CAR典型地將抗原結合結構域（比如，scFv）與一或多個共刺激（「傳訊」）結構域和一或多個激活結構域串聯在一起。

在本申請中所引用的所有文件或文件的部分，包括但不限於專利、專利申請、文章、書籍和專著，都藉由引用特此明確地併入。除非上下文另有明確指示，否則本揭露之實施方式中所描述的內容可以與本揭露之一或多個其他實施方式組合。

所揭露的主題不旨在受本文所描述的實施方式的範圍限制，該等實施方式相反旨在作為本揭露之各個方面的非限制性展示。功能上等同的方法和部件在本揭露之範圍內。事實上，除了本文所示出和描述的那些之外，所揭露的主題的各種修改對於熟悉該項技術者來說將從前述描述和附圖中顯而易見。此類修改旨在落入所揭露的主題之範圍內。

所揭露的主題的各種實施方式和/或示例的描述係出於展示的目的而呈現的，但不旨在係窮盡性的或以任何方式進行限制。在不脫離所描述的實施方式的範圍和精神的情況下，許多修改和變化對於熟悉該項技術者將是顯而易見的。選擇本文中使用的術語以最佳地解釋實施方式的原理、實際應用或對市場中存在的技術的技術改進，和/或使得熟悉該項技術者能夠理解所揭露的主題。

10:靈活的製造設施 12:單次使用生產區域 14:單次使用生物反應器 16:不銹鋼區域 18:不銹鋼生物反應器 20:不銹鋼生物反應器 22:分隔牆壁 24:暴露部分 26:管材 27a:探針帶 27b:用於灌注的灌注連接件 27c:補料溶液罐連接件 32:離心機 30:離心機 34:種子培養部 36:純化橇 37a:層析橇 37b:層析柱 37c:病毒滅活系統 37d:病毒過濾系統 37e:超濾滲濾系統 37f:批量過濾系統 37g:共軛罐系統 37h:氧化罐系統 37i:還原罐系統

[ 圖 1]描繪了根據本揭露之靈活的製造設施的非限制性示例。 圖 1係靈活的設施的示例實施方式之頂部平面圖。在一些實施方式中， 圖 1的靈活的設施可以分一系列階段構造，比如第一階段、第二階段和後續階段。

[ 圖 2A]係描繪 圖 1的靈活的製造設施的各個部件之示意圖。

[ 圖 2B]係描繪 圖 1和 圖 2A的至少一個不銹鋼生物反應器的該部分的部件之示意圖。

[ 圖 2C]係描繪 圖 1和 圖 2A的一或多個純化橇中的至少一個純化橇之示意圖。

無

10:靈活的製造設施

12:單次使用生產區域

14:單次使用生物反應器

16:不銹鋼區域

18:不銹鋼生物反應器

24:暴露部分

26:管材

32:離心機

30:離心機

36:純化橇

Claims (16)

1. 一種用於製造至少一種治療性產品的靈活的設施，該靈活的設施包括： 可重新配置的單次使用區域，包括至少一個單次使用生物反應器，其中，該至少一個單次使用生物反應器中的一或多個具有至少1000 L的容積；以及 不銹鋼區域，包括至少一個不銹鋼生物反應器，其中，該不銹鋼區域中的每個不銹鋼生物反應器具有大於5000 L的容積， 其中，該至少一個不銹鋼生物反應器中的一或多個流體地連接至該至少一個單次使用生物反應器中的一或多個。
2. 如請求項1所述之靈活的設施，其中，該至少一個單次使用生物反應器中的一或多個具有至少2000 L的容積。
3. 如請求項1或者請求項2所述之靈活的設施，其中，該不銹鋼區域包括多個不銹鋼生物反應器，每個不銹鋼生物反應器具有至少10,000 L的容積。
4. 如請求項1至3中任一項所述之靈活的設施，其中，該可重新配置的單次使用區域和該不銹鋼區域藉由分隔件隔離。
5. 如請求項4所述之靈活的設施，其中，該分隔件係牆壁。
6. 如請求項5所述之靈活的設施，其中，該不銹鋼區域係完全封閉的並且具有單獨的空氣處理。
7. 如請求項5所述之靈活的設施，其中，該至少一個不銹鋼生物反應器的一部分穿透該牆壁並通過管材流體地連接至該至少一個單次使用生物反應器中的一或多個。
8. 如請求項7所述之靈活的設施，其中，穿透該牆壁的部分包括獨立地選自以下各者的一或多個部件：探針帶、用於灌注的連接件、以及補料溶液罐連接件。
9. 如請求項1至8中任一項所述之靈活的設施，其中，該流體連接件被配置為使得能夠繞過該不銹鋼區域。
10. 如請求項1至9中任一項所述之靈活的設施，其中，該可重新配置的單次使用區域和/或該不銹鋼區域進一步包括一或多個離心機。
11. 如請求項1至10中任一項所述之靈活的設施，其中，該可重新配置的單次使用區域包括一或多個種子培養部。
12. 如請求項1至11中任一項所述之靈活的設施，其中，該可重新配置的單次使用區域進一步包括一或多個純化橇。
13. 如請求項12所述之靈活的設施，其中，該一或多個純化橇中的每一個包括獨立地選自以下各者的一或多個部件：層析橇、層析柱、病毒滅活系統、病毒過濾系統、超濾滲濾系統和批量過濾系統。
14. 如請求項1至13中任一項所述之靈活的設施，進一步包括獨立地選自以下各者的一或多個附加空間：公用設施空間、培養基緩衝液設施、人員更衣室和生產單元。
15. 如請求項1至14中任一項所述之靈活的設施，其中，該靈活的設施被配置用於生產獨立地選自以下各者的一或多種治療性產品：單株抗體、BiTE®分子、基於RNA的藥物物質、細胞治療物和發酵產品。
16. 如請求項1至15中任一項所述之靈活的設施，其中，該靈活的設施被配置為實施獨立地選自以下各者的一或多個製程：哺乳動物細胞培養物補料分批製程、哺乳動物細胞培養物灌注製程、連續哺乳動物細胞培養製程、微生物發酵補料分批製程和前述各者中的任一者的組合。