TW202345906A - 以抗組織因子抗體藥物結合物治療實體腫瘤之方法 - Google Patents

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Abstract

本發明提供以抗組織因子抗體藥物結合物治療實體腫瘤之方法。

Description

以抗組織因子抗體藥物結合物治療實體腫瘤之方法
血液凝固涉及一組複雜的引起血液凝結之過程。組織因子(TF)在此等凝血過程中發揮重要作用。TF為絲胺酸蛋白酶因子VIIa (FVIIa)之細胞表面受體。TF/FVIIa複合物催化非活性蛋白酶因子X (FX)轉化為活性蛋白酶因子Xa (FXa)。FXa及其輔因子FVa形成凝血酶原酶複合物，其自凝血酶原產生凝血酶。凝血酶將可溶血纖維蛋白原轉化為不可溶纖維蛋白股且催化許多其他凝血相關過程。
TF在多種類型之實體腫瘤上過表現。在癌症中，TF/FVIIa信號傳導會支持血管生成、腫瘤進展及轉移。
本發明提供經由向個體投與約0.16 mg/kg至約3.0 mg/kg範圍內的劑量之抗體藥物結合物來治療患有實體腫瘤之個體的方法，該抗體藥物結合物包含： a.          抗原結合蛋白(Ab)，其與人類組織因子(TF) (SEQ ID NO: 41)之細胞外域結合，其中Ab包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3，其中 VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3係來自經指定為25A3之抗體， 及 b.          一或多個由式I表示之連接子-毒素部分： 式 I其中： ##表示該連接子-毒素部分與該TF抗體之連接點，且該連接子-毒素部分經由共價鍵與該TF抗體連接。
本文中提供經由向個體投與約0.16 mg/kg至約3.0 mg/kg範圍內的劑量之抗體藥物結合物來治療患有實體腫瘤之個體的方法，該抗體藥物結合物包含式I之連接子-毒素部分： 式 I其中##表示該連接子-毒素部分與該TF抗體之連接點，且該連接子-毒素部分經由共價鍵與該TF抗體連接。
本文中提供經由向個體投與約0.16 mg/kg至約3.0 mg/kg範圍內的劑量之式II之抗體藥物結合物來治療患有實體腫瘤之個體的方法： 式 II其中： Ab為組織因子(TF)抗體，其中Ab包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3，其中 VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3係來自經指定為25A3之抗體， n為大於或等於1之整數，及 丁二醯亞胺基團經由共價鍵與該Ab連接。
在一些實施例中，n係選自由1、2、3、4及5組成之群。
在一些實施例中，n係選自由2、3及4組成之群。
在一些實施例中，Ab包含： SEQ ID NO: 37之VH及SEQ ID NO: 38之VL序列。
在一些實施例中，Ab包含： 重鏈序列，其為QVQLVQSGAE VKKPGASVKVSCKASGYT FDVYGISWVRQAPGQGLEWMGWIAPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPFGYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO:39)；及輕鏈序列，其為DIQMTQS PSTLSASVGDRV TITCQASQSINNWLAWYQQKPGKAPKLLIYKAYNLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQLFQSLPPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:40)。
本文中提供經由向個體投與約0.16 mg/kg至約3.0 mg/kg範圍內的劑量之式II之抗體藥物結合物來治療患有實體腫瘤之個體的方法： 式 II其中： Ab為組織因子(TF)抗體，其中Ab包含來自經指定為25A3之抗體之VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3，及 n為大於或等於1之整數。
在一些實施例中，n係選自由1、2、3、4及5組成之群。
在一些實施例中，n係選自由2、3及4組成之群。
在一些實施例中，Ab包含SEQ ID NO: 37之VH序列及SEQ ID NO: 38之VL序列。
在一些實施例中，Ab包含完全重鏈序列，其為QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDVYGISWVRQAPGQGLEWMGWIAPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPFGYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKS CDKTHT CPP CPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO:39)；及輕鏈序列，其為DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSINNWLAWYQQKP GKAPKLLIYKAYNLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQLFQSLPPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGE C(SEQ ID NO:40)。
本文中提供經由向個體投與約0.16 mg/kg至約3.0 mg/kg範圍內的劑量之式II之抗體藥物結合物來治療患有實體腫瘤之個體的方法： 式 II其中： Ab為組織因子(TF)抗體，其中該Ab包含重鏈序列，其為QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDVYGISWVRQAPGQGLEWMGWIAPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPFGYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKS CDKTHT CPP CPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO:39)；及輕鏈序列，其為DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSINNWLAWYQQKP GKAPKLLIYKAYNLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQLFQSLPPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:40)，及 n為大於或等於1之整數。
在一些實施例中，n係選自由1、2、3、4及5組成之群。
在一些實施例中，n係選自由2、3、及4組成之群。
本文中提供經由向個體投與約0.16 mg/kg至約3.0 mg/kg範圍內的劑量之抗體藥物結合物來治療患有實體腫瘤之個體的方法，該抗體藥物結合物包含抗體(Ab)及一或多個式I之連接子-毒素： 式 I其中： Ab為組織因子(TF)抗體，其中Ab包含來自經指定為25A3之抗體之VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3； 該一或多個連接子-毒素經由共價鍵與Ab連接；及 ##表示連接子-毒素與Ab之連接點。
本文中提供經由向個體投與約0.16 mg/kg至約3.0 mg/kg範圍內的劑量之抗體藥物結合物組合物來治療患有實體腫瘤之個體的方法，該抗體藥物結合物組合物包含本文所揭示之抗體藥物結合物，其中組合物包含多種藥物-抗體比(DAR)種類，其中組合物之平均DAR為2至4。在一些實施例中，組合物之平均DAR為約3.8。
本文中提供經由向個體投與約0.16 mg/kg至約3.0 mg/kg範圍內的劑量之抗體藥物結合物來治療患有實體腫瘤之個體的方法，該抗體藥物結合物包含抗體(Ab)及一或多個式I之連接子-毒素： 式 I其中： Ab為組織因子(TF)抗體，其中該Ab包含重鏈序列，其為QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDVYGISWVRQAPGQGLEWMGWIAPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPFGYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKS CDKTHT CPP CPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO:39)；及輕鏈序列，其為DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSINNWLAWYQQKP GKAPKLLIYKAYNLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQLFQSLPPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:40)，及 該一或多個連接子-毒素經由共價鍵與Ab連接；及 ##表示連接子-毒素與Ab之連接點。
本文中提供經由向個體投與約0.16 mg/kg至約3.0 mg/kg範圍內的劑量之抗體藥物結合物組合物來治療患有實體腫瘤之個體的方法，該抗體藥物結合物組合物包含本文所揭示之抗體藥物結合物，其中組合物包含多種藥物-抗體比(DAR)種類，其中組合物之平均DAR為2至4。在一些實施例中，組合物之平均DAR為約3.8。
在一些實施例中，抗體為IgG1κ。
本文中提供經由向個體投與醫藥組合物來治療患有實體腫瘤之個體的方法，該醫藥組合物含有約0.16 mg/kg至約3.0 mg/kg範圍內的劑量之如本文所揭示之抗體藥物結合物及醫藥學上可接受之載劑。在一些實施例中，本文所提供之方法包含向個體投與約1.0 mg/kg至約3.0 mg/kg範圍內的劑量之本文所揭示之抗體藥物結合物。在一些實施例中，本文所提供之方法包含向個體投與約0.16 mg/kg、0.5 mg/kg、1.0 mg/kg、1.5 mg/kg、2.0 mg/kg、2.25 mg/kg、2.5 mg/kg、2.75 mg/kg或約3.0 mg/kg的劑量之本文所揭示之抗體藥物結合物。在一些實施例中，方法包含每3週向個體靜脈內(IV)投與本文所揭示之抗體藥物結合物。
本文中亦提供組合治療方法，其進一步包含向個體投與與PD-1結合之抗體，其中與PD-1結合之抗體包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3，其中VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3係來自納武單抗(Nivolumab)。在一些實施例中，與PD-1結合之抗體包含VH及VL，其中VH及VL係來自納武單抗。在一些實施例中，與PD-1結合之抗體係納武單抗且包含有包含SEQ ID NO: 43之胺基酸序列之重鏈及包含SEQ ID NO: 44之胺基酸序列之輕鏈。在一些實施例中，每3週以約360 mg之劑量靜脈內(IV)投與納武單抗。
在其他實施例中，本發明提供組合治療方法，其進一步包含向個體投與與血管內皮生長因子(VEGF)結合之抗體，其中與VEGF結合之抗體包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3，其中VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3係來自貝伐單抗(Bevacizumab)。在一些實施例中，與VEGF結合之抗體包含VH及VL，其中VH及VL係來自貝伐單抗。在一些實施例中，與VEGF結合之抗體係貝伐單抗且包含有包含SEQ ID NO: 45之胺基酸序列之重鏈及包含SEQ ID NO: 46之胺基酸序列之輕鏈。在一些實施例中，每3週以約15 mg/kg之劑量靜脈內(IV)投與貝伐單抗。
在一些實施例中，實體腫瘤為癌症。在一些實施例中，癌症係選自由以下組成之群：非小細胞肺癌(NSCLC)、尿道上皮癌、子宮內膜癌(EC)、卵巢癌(例如上皮卵巢癌(EOC))、子宮頸癌(例如具有鱗狀細胞或腺癌組織學)、頭頸癌(例如頭頸部鱗狀細胞癌(SCCHN))、胰臟癌、食道鱗狀細胞癌(SCC)、前列腺癌(例如轉移性去勢抵抗性前列腺癌(mCRPC))、乳癌(例如三陰性乳癌(TNBC)及激素受體陽性乳癌(HR+BC))，以及與腫瘤類型無關(TA)之組織因子陽性(TF+)癌症。
在一些實施例中，個體為人類個體。
相關申請案之交互參照
本申請案主張2022年10月10日遞交之美國臨時專利申請案第63/414,869號、2022年5月12日遞交之美國臨時專利申請案第63/341,305號以及2022年3月9日遞交之美國臨時專利申請案第63/318,384號之權利,其揭示內容各自以全文引用之方式併入本文中。 序列表
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除非另外定義，否則本文所使用之技術術語、符號及其他科學術語意欲具有熟習此項技術者通常理解的含義。在一些情況下，為了清楚起見及/或為了便於參考，本文所定義之術語具有通常所理解之含義，且本文所包括之此類定義未必解釋為表示與此項技術中通常所理解不同。
除非上下文另有明確指示，否則如本文所使用之單數形式「一(a)」、「一(an)」及「該」包括複數個參考物。除非另外特定指示，否則術語「包括」、「諸如」及其類似術語意欲表示包括但不限於。
如本文所用，除非另外特定指示，否則術語「包含」亦特定地包括「由所述要素組成」及「基本上由所述要素組成」的實施例。
術語「約」或「大致」指示及涵蓋指定值及高於及低於該值之範圍。在某些實施例中，術語「約」或「大致」表示指定值±10%、±5%或±1%。在某些實施例中，當適用時，術語「約」或「大致」表示一或多個指定值±該一或多個值的一倍標準差。
術語「組織因子」、「TF」、「血小板組織因子」、「因子III」、「凝血酶」及「CD142」可互換地用於指TF (例如人類TF)。TF為絲胺酸蛋白酶因子VIIa之細胞表面受體。其通常由血管周圍之某些細胞及在一些疾病環境中組成性表現。
術語「抗體藥物結合物」或「ADC」係指包含視情況經由一或多個連接子與一或多種細胞毒性劑結合之抗體之結合物。術語「抗TF抗體藥物結合物」或「抗TF ADC」係指包含視情況經由一或多個連接子與一或多種細胞毒性劑結合之抗TF抗體之結合物。
如本文所使用，術語「TF抗體」、「抗TF抗體」係同義的。
如本文所使用之術語「細胞毒性劑」係指抑制或預防細胞功能及/或引起細胞死亡或破壞之物質。細胞毒性劑可為抗血管生成劑、促凋亡劑、抗有絲分裂劑、抗激酶劑、烷化劑、激素、激素促效劑、激素拮抗劑、趨化介素、藥物、前驅藥、毒素、酶、抗代謝物、抗生素、生物鹼或放射性同位素。例示性細胞毒性劑包括刺孢黴素(calicheamycin)、喜樹鹼(camptothecin)、卡鉑(carboplatin)、伊立替康(irinotecan)、SN-38、卡鉑、喜樹鹼、環磷醯胺、阿糖胞苷(cytarabine)、達卡巴嗪(dacarbazine)、多西他賽(docetaxel)、放線菌素(dactinomycin)、道諾黴素(daunorubicin)、多柔比星(doxorubicin)、多柔比星、依託泊苷(etoposide)、艾達黴素(idarubicin)、拓朴替康(topotecan)、長春花生物鹼(vinca alkaloid)、類美登素(maytansinoid)、類美登素類似物、吡咯并苯并二氮呯、類紫杉醇(taxoid)、倍癌黴素(duocarmycin)、海兔毒素(dolastatin)、奧瑞他汀(auristatin)及其衍生物。
「連接子」係指將一種組合物與另一種組合物(例如抗體與藥劑)連接之分子。本文中所描述之連接子可將抗體結合於細胞毒性劑。例示性連接子包括不穩定連接子、酸不穩定連接子、光不穩定連接子、帶電連接子、含二硫化物之連接子、肽酶敏感性連接子、β-葡萄糖苷酸連接子、二甲基連接子、硫基-醚連接子及親水性連接子。連接子可為可裂解的或不可裂解的。
術語「免疫球蛋白」係指一類結構上相關之蛋白質，其通常包含兩對多肽鏈：一對輕(L)鏈及一對重(H)鏈。在「完整免疫球蛋白」中，此等鏈中之所有四條鏈係藉由二硫鍵互連。已充分表徵免疫球蛋白之結構。參見例如Paul, Fundamental Immunology, 第7版, 第5章(2013) Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, PA。簡言之，各重鏈通常包含重鏈可變區(V H)及重鏈恆定區(C H)。重鏈恆定區通常包含三個域，縮寫為C H1、C H2及C H3。各輕鏈通常包含輕鏈可變區(V L)及輕鏈恆定區。輕鏈恆定區通常包含一個域，縮寫為C L。
術語「抗體」在本文中係以其最廣泛含義使用且包括某些類型之包含特異性結合於抗原或抗原決定基之一或多個抗原結合域之免疫球蛋白分子。抗體尤其包括完整抗體(例如完整免疫球蛋白)、抗體片段及多特異性抗體。
術語「抗原結合域」意謂抗體之能夠特異性結合於抗原或抗原決定基之部分。
術語「全長抗體」、「完整抗體」及「完全抗體」在本文中可互換地使用以指代具有與天然存在之抗體結構實質上類似的結構且具有包含Fc區之重鏈之抗體。舉例而言，當用於指代IgG分子時，「全長抗體」為包含兩條重鏈及兩條輕鏈之抗體。
術語「Fc區」意謂免疫球蛋白重鏈之C端區，在天然存在之抗體中，其與Fc受體及補體系統之某些蛋白質相互作用。各種免疫球蛋白之Fc區之結構及其中所含的醣基化位點為此項技術中已知的。
V H及V L區可進一步再分成高變區(region of hypervariability) (「高變區(hypervariable region；HVR)」；亦稱為「互補決定區」(CDR))，其間穿插有保守性較高之區域。保守性較高之區域被稱為構架區(FR)。各V H及V L通常包含三個CDR及四個FR，其按以下順序(自N端至C端)排列：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。CDR與抗原結合有關，且影響抗體之抗原特異性及結合親和力。參見Kabat等人, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第 5 版. (1991) Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD。
「互補決定區(CDR)」係指免疫球蛋白(Ig或抗體) VH β片狀構架之非構架區內之三個高變區(H1、H2或H3)中之一個，或抗體VL β片狀構架之非構架區內之三個高變區(L1、L2或L3)中之一個。CDR為構架區序列內穿插之可變區序列。CDR係此項技術中良好識別的且已由例如Kabat定義為抗體可變(V)域內具有最大高變性之區。參見Kabat等人, J Biol Chem, 1977, 252:6609-6616及Kabat, Adv Protein Chem, 1978, 32:1-75。CDR亦由Chothia在結構上定義為並非保守性β片狀構架之一部分且因此能夠適應不同構形之殘基。參見Chothia及Lesk, J Mol Biol,1987, 196:901-917。Kabat命名法及Chothia命名法皆為此項技術中熟知的。AbM、Contact及IMGT亦定義CDR。已藉由比較多個結構來確定典型抗體可變域內之CDR位置。參見Morea等人, Methods, 2000, 20:267-279及Al-Lazikani等人, J Mol Biol, 1997, 273:927-48。因為高變區內之殘基數目在不同抗體中各不相同，所以與典型位置相關之額外殘基習知地以緊接在典型可變域編號方案中之殘基編號之後的a、b、c等來編號。此類術語為熟習此項技術者所熟知的。
本文中使用且包括多種高變區描述。Kabat CDR係基於序列可變性且係最常用的。參見Kabat等人(1992) Sequences of Proteins of Immunological Interest, DIANE Publishing: 2719。Chothia實際上係指結構環之位置(Chothia及Lesk, 見上文)。AbM高變區表示Kabat CDR與Chothia結構環之間的折衷，且由Oxford Molecular之AbM抗體建模軟體使用。Contact高變區係基於對可用複雜晶體結構之分析。
最近，已開發且廣泛採用通用編號系統ImMunoGeneTics (IMGT) Information SystemTM。參見Lefranc等人, Dev Comp Immunol, 2003, 27:55-77。IMGT係整合式資訊系統，專用於人類及其他脊椎動物之免疫球蛋白(IG)、T細胞受體(TR)及主要組織相容複合體(MHC)。所提及之IMGT CDR係關於胺基酸序列及輕鏈或重鏈內之位置兩者。由於免疫球蛋白可變域之結構內之CDR的「位置」在物種之間為保守的且存在於稱為環的結構中，因此使用根據結構特徵來比對可變域序列的編號系統可容易地鑑別CDR及構架殘基。Kabat、Chothia及IMGT編號之間的對應關係亦為此項技術中所熟知的(Lefranc等人, 見上文)。本文中所展示之例示性系統將Kabat及Chothia CDR定義組合。
例示性 (Kabat + Chothia) Kabat Chothia AbM Contact IMGT
VH CDR1 26-35 31-35 26-32 26-35 30-35 27-38
VH CDR2 50-65 50-65 52a-55 50-58 47-58 56-65
VH CDR3 95-102 95-102 96-101 95-102 93-101 105-117
VL CDR1 24-34 24-34 26-32 24-34 30-36 27-38
VL CDR2 50-56 50-56 50-52 50-56 46-55 56-65
VL CDR3 89-97 89-97 91-96 89-97 89-96 105-117
來自任何脊椎動物物種之輕鏈可基於其恆定域之序列而歸為被稱為κ (kappa)及λ (lambda)之兩種類型中之一種。
來自任何脊椎動物物種之重鏈可歸為五種不同類別(或同型)中之一種：IgA、IgD、IgE、IgG及IgM。此等類別亦分別稱為α、δ、ε、γ及µ。IgG及IgA類別基於序列及功能之差異而進一步分成子類別。人類表現以下子類別：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2。
術語「恆定區」或「恆定域」係指輕鏈及重鏈之羧基末端部分，其不直接參與抗體與抗原之結合，但呈現各種效應功能，諸如與Fc受體之相互作用。該等術語係指免疫球蛋白分子中之相對於免疫球蛋白之含有抗原結合位點之另一部分(可變域)具有保守性更高的胺基酸序列之部分。恆定域含有重鏈之C H1、C H2及C H3域以及輕鏈之C L域。
當指代抗體重鏈恆定區中之殘基時，通常使用「EU編號方案」(例如Kabat等人, 見上文中所報導)。除非另外陳述，否則EU編號方案係用於指本文中所描述之抗體重鏈恆定區中之殘基。
術語「單株抗體」係指來自實質上同質性抗體之群體的抗體。實質上同質性抗體之群體包含實質上類似且與相同抗原決定基結合之抗體，在單株抗體產生期間可能通常產生之變體除外。此類變體一般僅少量存在。通常藉由包括自複數種抗體選擇單一抗體之方法獲得單株抗體。舉例而言，選擇方法可為自複數種純系，諸如融合瘤純系、噬菌體純系、酵母純系、細菌純系或其他重組DNA純系之集合選擇獨特純系。可進一步改變所選抗體以例如提高對目標之親和力(「親和力成熟」)、使抗體人源化、提高其在細胞培養物中之產量，及/或降低其在個體中之免疫原性。
「人類抗體」為具有對應於由人類或人類細胞產生或衍生自非人類來源之抗體之胺基酸序列的胺基酸序列之抗體，該非人類來源利用人類抗體譜系或人類抗體編碼序列(例如自人類來源獲得或重新設計)。人類抗體尤其排除人源化抗體。
「親和力」係指分子(例如抗體)之單一結合位點與其結合搭配物(例如抗原或抗原決定基)之間的非共價相互作用之總和的強度。除非另外指示，否則如本文所使用，「親和力」係指固有結合親和力，其反映結合對之成員(例如抗體與抗原或抗原決定基)之間的1:1相互作用。分子X對其搭配物Y之親和力可由解離平衡常數(K D)表示。下文更詳細地描述對解離平衡常數有貢獻之動力學組分。可經由此項技術中已知的常用方法，諸如表面電漿子共振(SPR)技術(例如BIACORE ®)或生物層干涉術(例如FORTEBIO ®)來量測親和力。
關於抗體與標靶分子之結合，針對特定抗原(例如多肽標靶)或特定抗原上之抗原決定基之術語「結合」、「特異性結合」、「特異性結合於」、「具有特異性」、「選擇性地結合」及「具有選擇性」意謂與非特異性或非選擇性相互作用(例如與非標靶分子)顯著不同之結合。可例如藉由量測與標靶分子之結合且將其與對非標靶分子之結合進行比較來量測特異性結合。亦可藉由與模擬在標靶分子上識別之抗原決定基之對照分子之競爭來測定特異性結合。在此情況下，若抗體與標靶分子之結合被對照分子競爭性地抑制，則指示特異性結合。
如本文所使用，術語「k d」 (sec -1)係指特定抗體-抗原相互作用之解離速率常數。此值亦稱為k off值。
如本文所使用，術語「k a」 (M -1×sec -1)係指特定抗體-抗原相互作用之結合速率常數。此值亦稱為k on值。
如本文所使用，術語「K D」 (M)係指特定抗體-抗原相互作用之解離平衡常數。K D= k d/k a。在一些實施例中，根據此類抗體與其抗原之間的相互作用之K D來描述抗體之親和力。為清楚起見，如此項技術中已知，更小的K D值指示更高的親和力相互作用，而更大的K D值指示更低的親和力相互作用。
如本文所使用，術語「K A」 (M -1)係指特定抗體-抗原相互作用之結合平衡常數。K A= k a/k d。
「Fc效應功能」係指由抗體之Fc區介導之生物活性，該等活性可視抗體同型而變化。抗體效應功能之實例包括用於激活補體依賴性細胞毒性(CDC)之C1q結合、用於激活抗體依賴性細胞毒性(ADCC)及抗體依賴性細胞噬菌作用(ADCP)之Fc受體結合。
術語「胺基酸」係指二十種天然存在之常見胺基酸。天然存在之胺基酸包括丙胺酸(Ala；A)、精胺酸(Arg；R)、天冬醯胺(Asn；N)、天冬胺酸(Asp；D)、半胱胺酸(Cys；C)、麩胺酸(Glu；E)、麩醯胺酸(Gln；Q)、甘胺酸(Gly；G)；組胺酸(His；H)、異白胺酸(Ile；I)、白胺酸(Leu；L)、離胺酸(Lys；K)、甲硫胺酸(Met；M)、苯丙胺酸(Phe；F)、脯胺酸(Pro；P)、絲胺酸(Ser；S)、蘇胺酸(Thr；T)、色胺酸(Trp；W)、酪胺酸(Tyr；Y)及纈胺酸(Val；V)。
術語「治療(treating)」(及其變化形式，諸如「治療(treat)」或「治療(treatment)」)係指試圖改變有需要之個體中之疾病或病狀之天然病程的臨床干預。可出於預防目的及在臨床病理學過程期間進行治療。治療之理想作用包括預防疾病之發生或復發、減輕症狀、減弱疾病之任何直接或間接病理學結果、預防轉移、降低疾病進展速率、改善或緩和疾病狀態，以及緩解或改良預後。
如本文所使用，術語「治療有效量」或「有效量」係指當向個體投與時可有效治療疾病或病症的本文所提供之抗體或醫藥組合物之量。
如本文所使用，術語「個體」意謂哺乳動物個體。例示性個體包括人類、猴、犬、貓、小鼠、大鼠、牛、馬、駱駝、山羊、兔、豬及綿羊。在某些實施例中，個體為人類。在一些實施例中，個體患有可用本文所提供之抗體治療之疾病或病狀。在一些態樣中，疾病或病狀為癌症。 2.    25A3-LT-A研發
抗體藥物結合物(ADC)為靶向癌症療法，其由經由連接子組分與細胞毒性劑(有效負載)結合之單株抗體(mAb)組成。ADC之抗體組分係針對腫瘤相關抗原，實現腫瘤特異性及對腫瘤部位之靶向藥物遞送。預計此方法會引起非標靶組織對細胞毒性劑之暴露減少及抗腫瘤效力增強。由於ADC介導之藥物遞送之毒性降低，與傳統化學療法相比，可擴大治療窗。
組織因子(TF；亦稱為凝血因子III [F3]、凝血酶、CD142或血小板組織因子)為45-kDa、單鏈、I型跨膜醣蛋白，其在正常生理條件下在內皮下組織中表現。TF在調節外部凝血級聯中起重要作用。其充當凝血因子VII (FVIIa)之活化形式的獨特細胞結合受體且在血管損傷後起始血液凝固。除調節止血平衡以外，依賴於TF之信號傳導路徑有助於血管生成、發炎、動脈粥樣硬化、腫瘤轉移及免疫逃避。人類TF之全長胺基酸序列如下(例示性信號序列=斜體文字；例示性細胞外域=加底線文字)： 。 人類TF之細胞外域之胺基酸序列如下： 。
已發現TF在許多實體腫瘤中異常過表現，包括子宮頸癌、頭頸部鱗狀細胞癌(SCCHN)、卵巢癌、肺癌、乳癌、前列腺癌及胰臟癌。TF表現與實體腫瘤中之疾病進展及預後不佳，諸如疾病結果不佳、整體存活期縮短及轉移增加密切相關。
TF可經由多種機制促進細胞增殖及腫瘤存活。已發現由TF-FVIIa複合物進行的PAR-2之活化會經由VEGF及介白素-8之表現來誘導細胞增殖、遷移及血管生成。此外，已發現TF與β3及β1整聯蛋白之直接結合會在活體外及活體內誘導血管生成及細胞增殖。鑒於其在癌症生物學中之作用及在許多腫瘤中之異常表現，認為直接或間接抑制TF活性係用於治療癌症的潛在治療策略。除其在癌細胞之細胞表面上之表現以外，TF經歷有效的內化及胞溶體靶向，使其成為有吸引力的用於ADC介導之細胞毒性劑內化至腫瘤細胞中之腫瘤結合抗原。
經由TF特異性ADC靶向腫瘤細胞可引起癌細胞對細胞毒性劑之吸收增強，從而產生直接細胞毒性活性。藉由使效應細胞經由其Fc受體與抗體之Fc區結合，經人類IgG mAb工程改造之TF靶向ADC亦能夠將免疫效應細胞募集至癌細胞，從而產生免疫效應細胞介導之抗體依賴性細胞毒性(ADCC)。此外，在與癌細胞表面上之TF蛋白結合後，ADC之細胞毒性劑之釋放可經由旁觀者效應引起相鄰腫瘤細胞死亡。已在早期臨床試驗中產生以單甲基奧瑞他汀E (MMAE)作為細胞毒性有效負載之TF靶向ADC的初步安全性及療效資料。儘管臨床療效結果在經大量預治療之患者中具有前景且不同腫瘤類型之客觀反應率為約15%，但相對地通常發生出血且包括嚴重的出血併發症，表明此TF靶向ADC可能會干擾凝血級聯且因此可能具有窄治療窗。雖然TF引導之ADC在晚期子宮頸癌中顯示療效，但是亦與出血不良反應相關，表明需要經改良之TF引導之ADC。
25A3-LT-A為一種ADC，其經設計以改良ADC靶向TF之治療潛力。其由抗TF之人類mAb (25A3)構成，該人類mAb使用可裂解連接子經由半胱胺酸殘基與新型毒素(N-醯基磺醯胺奧瑞他汀，化合物 9)結合。毒素(化合物 9)及其連接子標示為LT-A。在目標介導之內化後，藉由酶促裂解釋放毒素(化合物 9)。毒素(化合物 9)為新型奧瑞他汀，其經由阻斷微管蛋白之聚合來抑制細胞分裂。在臨床前研究中，藉由Fxa轉化及凝血酶產生分析法量測，25A3-LT-A中之抗TF抗體並不影響凝血級聯，同時仍以高親和力結合人類及石蟹獼猴(cynomolgus) TF。在人類胰臟腺癌(HPAF-II)腫瘤模型中，25A3-LT-A比用與MMAE結合之相同抗體產生的ADC更有效。在患者衍生之異種移植(PDX)模型中，25A3-LT-A顯示出極佳療效及顯著的腫瘤生長抑制作用，且在一些情況下，顯示完全消退。 3.    用於投藥之抗TF抗體藥物結合物
本文中提供經由向個體投與約0.16 mg/kg至約3.0 mg/kg範圍內之劑量的抗體藥物結合物來治療患有實體腫瘤之個體的方法，該抗體藥物結合物包含特異性結合於TF之抗體。在一些實施例中，細胞毒性劑與抗TF抗體直接連接。在一些實施例中，細胞毒性劑與抗TF抗體間接連接。
在一些實施例中，ADC進一步包含連接子。在一些實施例中，連接子將抗TF抗體連接至細胞毒性劑。
在ADC中與抗體結合之細胞毒性劑的數目定義為藥物-抗體比或DAR。如此項技術中已知，大多數結合方法產生包括各種DAR種類之ADC組合物，且所報導之DAR為個別DAR種類之平均值。因此，當本文中所描述之ADC定義為具有特定DAR時，應理解，所提供之數目表示ADC組合物中個別DAR種類之平均值。在一些實施例中，本文所提供之ADC具有約3.8之藥物-抗體比(DAR)。
在一些實施例中，本文中提供式II之抗體藥物結合物： 式 II其中： Ab為組織因子(TF)抗體，且n為大於或等於1之整數。在一些實施例中，在式II之ADC中，n為1至10之整數。在一些式II之ADC之一些實施例中，n係選自由1、2、3、4、及5組成之群。在一些實施例中，在式II之ADC中，n為選自由2、3及4組成之群之整數。在一些實施例中，在式II之ADC中，丁二醯亞胺基團經由共價鍵與Ab連接。
在一些實施例中，如本文中所使用之有效負載改良微管抑制劑有效負載之特徵(例如經由較低的脫靶去結合)。
在式II之ADC之一些實施例中，Ab包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3，其中VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3係來自經指定為25A3之抗體，n為大於或等於1之整數。
在式II之ADC之一些實施例中，Ab包含來自如表1中所示的經指定為25A3之抗體之VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3。
在式II之ADC之一些實施例中，Ab包含來自如表1中所示的經指定為25A3之抗體之VH及VL。
在式II之ADC之一些實施例中，Ab包含來自如表2中所示的經指定為25A3之抗體之重鏈(HC)及輕鏈(LC)。
表1 ： 抗體25A3-CDR 序列
例示性 * Kabat Chothia AbM Contact IMGT
VH CDR 序列 VH CDR1 GYTFDVYGIS (SEQ ID NO:1) VYGIS (SEQ ID NO:7) GYTFDVY (SEQ ID NO:13) GYTFDVYGIS (SEQ ID NO:19) DVYGIS (SEQ ID NO:25) GYTFDVYG (SEQ ID NO:31)
VH CDR2 WIAPYSGNTNYAQKLQG (SEQ ID NO:2) WIAPYSGNTNYAQKLQG (SEQ ID NO:8) PYSG (SEQ ID NO:14) WIAPYSGNTN (SEQ ID NO:20) WMGWIAPYSGNTN (SEQ ID NO:26) IAPYSGNT (SEQ ID NO:32)
VH CDR3 DAGTYSPFGYGMDV (SEQ ID NO:3) DAGTYSPFGYGMDV (SEQ ID NO:9) AGTYSPFGYGMD (SEQ ID NO:15) DAGTYSPFGYGMDV (SEQ ID NO:21) ARDAGTYSPFGYGMD (SEQ ID NO:27) ARDAGTYSPFGTGMDV (SEQ ID NO:33)
VL CDR 序列 VL CDR1 QASQSINNWLA (SEQ ID NO:4) QASQSINNWLA (SEQ ID NO:10) SQSINNW (SEQ ID NO:16) QASQSINNWLA (SEQ ID NO:22) NNWLAWY (SEQ ID NO:28) QSINNW (SEQ ID NO:34)
VL CDR2 KAYNLES (SEQ ID NO:5) KAYNLES (SEQ ID NO:11) KAY (SEQ ID NO:17) KAYNLES (SEQ ID NO:23) LLIYKAYNLE (SEQ ID NO:29) KAY (SEQ ID NO:35)
VL CDR3 QLFQSLPPFT (SEQ ID NO:6) QLFQSLPPFT (SEQ ID NO:12) FQSLPPF (SEQ ID NO:18) QLFQSLPPFT (SEQ ID NO:24) QLFQSLPPF (SEQ ID NO:30) QLFQSLPPFT (SEQ ID NO:36)
VH序列 *：QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKAS GYTFDVYGISWVRQAPGQGLEWMG WIAPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCAR DAGTYSPFGYGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:37)
VL序列 *： DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITC QASQSINNWLAWYQQKPGKAPKLLIY KAYNLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYC QLFQSLPPFTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:38)
*例示性CDR序列涵蓋經由Kabat+Chothia測定之胺基酸
表 2 ： 25A3 抗體重鏈及輕鏈序列(可變區以粗體顯示；與藥物結合相關之半胱胺酸以加底線顯示)
純系 重鏈 輕鏈
25A3 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDVYGISWVRQAPGQGLEWMGWIAPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPFGYGMDVWGQGTTVTVSSastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepks cdktht cpp cpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspg (SEQ ID NO:39) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSINNWLAWYQQKPGKAPKLLIYKAYNLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQLFQSLPPFTFGGGTKVEIKrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrge c(SEQ ID NO:40)
在一個實施例中，本文所描述之ADC包含抗體，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 38之胺基酸序列之VL。在一個實施例中，本文所描述之ADC包含抗體，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 39之胺基酸序列之重鏈及包含SEQ ID NO: 40之胺基酸序列之輕鏈。
在一個實施例中，本文描述抗體藥物結合物，其包含抗體(Ab)及一或多個式I之連接子-毒素： 式 I其中： Ab為組織因子(TF)抗體，其中Ab包含來自經指定為25A3之抗體之VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3；該一或多個連接子-毒素經由共價鍵與Ab連接；且##表示連接子-毒素與Ab之連接點。如本文所使用，式I之連接子-毒素亦稱為「 LT-A」，其中##表示與組織因子(TF)抗體，即Ab之連接點。如本文所使用，式II之抗體藥物結合物亦稱為「 25A3-LT-A」，其中Ab包含來自經指定為25A3之抗體之VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3。
在一些實施例中，本文中提供包含ADC之組合物，該ADC包含抗體(Ab)及一或多個式I之連接子-毒素。在一個實施例中，組合物包含多種藥物-抗體比(DAR)種類。在一些實施例中，組合物之平均DAR為2至4。在一些實施例中，組合物之平均DAR為約3.8。
在一個實施例中，本文中提供抗體藥物結合物，其包含抗體(Ab)及一或多個式I之連接子-毒素： 式 I其中： Ab為組織因子(TF)抗體，其中該Ab包含重鏈序列，其為QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDVYGISWVRQAPGQGLEWMGWIAPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPFGYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKS CDKTHT CPP CPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO:39)；及輕鏈序列，其為DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSINNWLAWYQ QKPGKAPKLLIYKAYNLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQLFQSLPPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:40)，該一或多個連接子-毒素經由共價鍵與Ab連接；且##表示連接子-毒素與Ab之連接點。
在另一實施例中，本文描述包含本發明之ADC之抗體藥物結合物組合物，其中該組合物包含多種藥物-抗體比(DAR)種類，其中組合物之平均DAR為2至4。在一些實施例中，組合物之平均DAR為約3.8。
在一些實施例中，本文所提供之方法係用於治療選自由以下組成之群之實體腫瘤：非小細胞肺癌(NSCLC)、尿道上皮癌、子宮內膜癌(EC)、卵巢癌(例如上皮卵巢癌(EOC))、子宮頸癌(例如具有鱗狀細胞或腺癌組織學)、頭頸癌(例如頭頸部鱗狀細胞癌(SCCHN))、胰臟癌、食道鱗狀細胞癌(SCC)、前列腺癌(例如轉移性去勢抵抗性前列腺癌(mCRPC))、乳癌(例如三陰性乳癌(TNBC)及激素受體陽性乳癌(HR+BC))，以及與腫瘤類型無關(TA)之組織因子陽性(TF+)癌症。
在其他實施例中，本文提供本文所提供之ADC (例如25A3-LT-A)，其係用於治療選自由以下組成之群之實體腫瘤：非小細胞肺癌(NSCLC)、尿道上皮癌、子宮內膜癌(EC)、卵巢癌(例如上皮卵巢癌(EOC))、子宮頸癌(例如具有鱗狀細胞或腺癌組織學)、頭頸癌(例如頭頸部鱗狀細胞癌(SCCHN))、胰臟癌、食道鱗狀細胞癌(SCC)、前列腺癌(例如轉移性去勢抵抗性前列腺癌(mCRPC))、乳癌(例如三陰性乳癌(TNBC)及激素受體陽性乳癌(HR+BC))，以及與腫瘤類型無關(TA)之組織因子陽性(TF+)癌症。
在其他實施例中，本文提供本文所提供之ADC (例如25A3-LT-A)的用途，其係用於製造用以治療選自由以下組成之群之實體腫瘤之藥劑：非小細胞肺癌(NSCLC)、尿道上皮癌、子宮內膜癌(EC)、卵巢癌(例如上皮卵巢癌(EOC))、子宮頸癌(例如具有鱗狀細胞或腺癌組織學)、頭頸癌(例如頭頸部鱗狀細胞癌(SCCHN))、胰臟癌、食道鱗狀細胞癌(SCC)、前列腺癌(例如轉移性去勢抵抗性前列腺癌(mCRPC))、乳癌(例如三陰性乳癌(TNBC)及激素受體陽性乳癌(HR+BC))，以及與腫瘤類型無關(TA)之組織因子陽性(TF+)癌症。
在一些實施例中，實體腫瘤為非小細胞肺癌(NSCLC)。在一些實施例中，實體腫瘤為尿道上皮癌。在一些實施例中，實體腫瘤為子宮內膜癌(EC)。在一些實施例中，實體腫瘤為卵巢癌(例如上皮卵巢癌(EOC))。在一些實施例中，實體腫瘤為子宮頸癌(例如具有鱗狀細胞或腺癌組織學)。在一些實施例中，實體腫瘤為頭頸癌(例如頭頸部鱗狀細胞癌(SCCHN))。在一些實施例中，實體腫瘤為胰臟癌。在一些實施例中，實體腫瘤為食道鱗狀細胞癌(SCC)。在一些實施例中，實體腫瘤為前列腺癌(例如轉移性去勢抵抗性前列腺癌(mCRPC))。在一些實施例中，實體腫瘤為乳癌，例如三陰性乳癌(TNBC)或激素受體陽性乳癌(HR+BC)。在一些實施例中，實體腫瘤為與腫瘤類型無關(TA)之組織因子陽性(TF+)癌症。
在一些實施例中，本文所提供之ADC (例如25A3-LT-A)係作為單一藥劑療法向個體投與。在一些實施例中，劑量之範圍係約1.0 mg/kg至約3.0 mg/kg。在一些實施例中，劑量為約0.16 mg/kg、約0.5 mg/kg、約1.0 mg/kg、約1.5 mg/kg、約2.0 mg/kg、約2.25 mg/kg、約2.5 mg/kg、約2.75 mg/kg或約3.0 mg/kg。在一些實施例中，每3週向個體靜脈內(IV)投與本文所提供之ADC (例如25A3-LT-A)。 4.    與納武單抗之組合療法
在另一態樣中，本文提供使用本文所提供之ADC及與免疫檢查點計劃性死亡受體-1 (PD-1)結合之抗體的組合療法(參見例如UniProtKB/Swiss-Prot: Q15116或NCBI Gene ID: 5133)。PD-1為在經活化之T細胞中表現之免疫抑制性受體；其涉及T細胞功能，包括效應CD8+ T細胞之功能之調節。此外，此蛋白亦可促進CD4+ T細胞分化為T調節細胞。其在許多類型之腫瘤(包括黑色素瘤)中表現，且證明在抗腫瘤免疫性中起作用。
在一些實施例中，與PD-1結合之抗體包含如包含SEQ ID NO: 43之胺基酸序列之重鏈中所示之VH-CDR1、VH-CDR2及VH-CDR3，以及如包含SEQ ID NO: 44之胺基酸序列之輕鏈中所示之VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3。在一些實施例中，與PD-1結合之抗體包含如包含SEQ ID NO: 43之胺基酸序列之重鏈中所示之包含胺基酸序列之VH域，以及包含如包含SEQ ID NO: 44之胺基酸序列之重鏈中所示之包含胺基酸序列之VL域。在一些實施例中，與PD-1結合之抗體包含有包含SEQ ID NO: 43之胺基酸序列之重鏈及包含SEQ ID NO: 44之胺基酸序列之輕鏈。在特定實施例中，與PD-1結合之抗體係納武單抗(OPDIVO ®)，其為靶向PD-1之完全人類IgG4抗體。納武單抗之重鏈序列為QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKG LEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK (SEQ ID NO:43)；且納武單抗之輕鏈序列為EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQSSNWPRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:44)。
在一些實施例中，本文所提供之組合療法係用於治療選自由以下組成之群之實體腫瘤：非小細胞肺癌(NSCLC)、尿道上皮癌、子宮內膜癌(EC)、卵巢癌(例如上皮卵巢癌(EOC))、子宮頸癌(例如具有鱗狀細胞或腺癌組織學)、頭頸癌(例如頭頸部鱗狀細胞癌(SCCHN))、胰臟癌、食道鱗狀細胞癌(SCC)、前列腺癌(例如轉移性去勢抵抗性前列腺癌(mCRPC))、乳癌(例如三陰性乳癌(TNBC)及激素受體陽性乳癌(HR+BC))，以及與腫瘤類型無關(TA)之組織因子陽性(TF+)癌症。在一些實施例中，本文所提供之組合療法係用於治療選自由NSCLC、SCCHN及食道SCC組成之群之實體腫瘤。
在其他實施例中，本文提供本文所提供之ADC (例如25A3-LT-A)，其係與納武單抗組合使用以治療選自由以下組成之群之實體腫瘤：非小細胞肺癌(NSCLC)、尿道上皮癌、子宮內膜癌(EC)、卵巢癌(例如上皮卵巢癌(EOC))、子宮頸癌(例如具有鱗狀細胞或腺癌組織學)、頭頸癌(例如頭頸部鱗狀細胞癌(SCCHN))、胰臟癌、食道鱗狀細胞癌(SCC)、前列腺癌(例如轉移性去勢抵抗性前列腺癌(mCRPC))、乳癌(例如三陰性乳癌(TNBC)及激素受體陽性乳癌(HR+BC))，以及與腫瘤類型無關(TA)之組織因子陽性(TF+)癌症。在一些實施例中，本文提供本文所提供之ADC (例如25A3-LT-A)，其係與納武單抗組合使用以治療選自由NSCLC、SCCHN及食道SCC組成之群之實體腫瘤。
在其他實施例中，本文提供本文所提供之ADC (例如25A3-LT-A)之用途，其係用於製造用以與納武單抗組合治療實體腫瘤之藥劑，其中實體腫瘤係選自由以下組成之群：非小細胞肺癌(NSCLC)、尿道上皮癌、子宮內膜癌(EC)、卵巢癌(例如上皮卵巢癌(EOC))、子宮頸癌(例如具有鱗狀細胞或腺癌組織學)、頭頸癌(例如頭頸部鱗狀細胞癌(SCCHN))、胰臟癌、食道鱗狀細胞癌(SCC)、前列腺癌(例如轉移性去勢抵抗性前列腺癌(mCRPC))、乳癌(例如三陰性乳癌(TNBC)及激素受體陽性乳癌(HR+BC))，以及與腫瘤類型無關(TA)之組織因子陽性(TF+)癌症。在一些實施例中，本文提供本文所提供之ADC (例如25A3-LT-A)之用途，其係用於製造用以與納武單抗組合治療實體腫瘤之藥劑，其中實體腫瘤係選自由NSCLC、SCCHN及食道SCC組成之群。
在一些實施例中，實體腫瘤為非小細胞肺癌(NSCLC)。在一些實施例中，實體腫瘤為尿道上皮癌。在一些實施例中，實體腫瘤為子宮內膜癌(EC)。在一些實施例中，實體腫瘤為卵巢癌(例如上皮卵巢癌(EOC))。在一些實施例中，實體腫瘤為子宮頸癌(例如具有鱗狀細胞或腺癌組織學)。在一些實施例中，實體腫瘤為頭頸癌(例如頭頸部鱗狀細胞癌(SCCHN))。在一些實施例中，實體腫瘤為胰臟癌。在一些實施例中，實體腫瘤為食道鱗狀細胞癌(SCC)。在一些實施例中，實體腫瘤為前列腺癌(例如轉移性去勢抵抗性前列腺癌(mCRPC))。在一些實施例中，實體腫瘤為乳癌，例如三陰性乳癌(TNBC)或激素受體陽性乳癌(HR+BC)。在一些實施例中，實體腫瘤為與腫瘤類型無關(TA)之組織因子陽性(TF+)癌症。
在一些實施例中，本文所提供之組合療法包含以約0.16 mg/kg至約3.0 mg/kg範圍內的劑量向個體投與本文所提供之ADC (例如25A3-LT-A)。在一些實施例中，組合療法進一步包含以360 mg之劑量向個體投與納武單抗。在一些實施例中，每3週向個體靜脈內(IV)投與本文所提供之ADC (例如25A3-LT-A)及納武單抗。
在一些實施例中，本文所提供之組合療法包含以約1.0 mg/kg至約3.0 mg/kg範圍內的劑量向個體投與本文所提供之ADC (例如25A3-LT-A)。在一些實施例中，組合療法進一步包含以360 mg之劑量向個體投與納武單抗。在一些實施例中，每3週向個體靜脈內(IV)投與本文所提供之ADC (例如25A3-LT-A)及納武單抗。在一些實施例中，本文所提供之組合療法包含以約0.16 mg/kg、約0.5 mg/kg、約1.0 mg/kg、約1.5 mg/kg、約2.0 mg/kg、約2.25 mg/kg、約2.5 mg/kg、約2.75 mg/kg或約3.0 mg/kg之劑量向個體投與本文所提供之ADC (例如25A3-LT-A)。在一些實施例中，組合療法進一步包含以360 mg之劑量向個體投與納武單抗。在一些實施例中，每3週向個體靜脈內(IV)投與本文所提供之ADC (例如25A3-LT-A)及納武單抗。
在一些實施例中，在同一天向個體投與納武單抗及本文所提供之ADC (例如25A3-LT-A)。在其他實施例中，在向個體提供本文所提供之ADC (例如25A3-LT-A)及納武單抗的當天，在本文所提供之ADC之前投與納武單抗。或者或另外，納武單抗及本文所提供之ADC (例如25A3-LT-A)係彼此至少間隔30分鐘投與。
在一些實施例中，每3週向個體靜脈內(IV)投與本文所提供之ADC (例如25A3-LT-A)及納武單抗。在一些實施例中，至少間隔21天向個體靜脈內(IV)投與組合療法。在一些實施例中，組合療法持續不超過2年。 5.    與貝伐單抗之組合療法
在另一態樣中，本文提供使用本文所提供之ADC及與血管內皮生長因子(VEGF)結合之抗體的組合療法(參見例如UniProtKB/Swiss-Prot: P15692或NCBI gene ID: 7422)。VEGF為PDGF/VEGF成長因子家族之成員。其為以二硫鍵連接之均二聚體形式存在之肝素結合蛋白。此成長因子誘導血管內皮細胞之增殖及遷移，且對生理性及病理性血管生成皆為至關重要的。小鼠中之此基因之破壞引起異常胚胎血管形成。此基因在許多已知的腫瘤中上調且其表現與腫瘤階段及進展相關。在一些實施例中，與VEGF結合之抗體包含如包含SEQ ID NO: 45之胺基酸序列之重鏈中所示之VH-CDR1、VH-CDR2及VH-CDR3，以及如包含SEQ ID NO: 46之胺基酸序列之輕鏈中所示之VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3。在一些實施例中，與VEGF結合之抗體包含如包含SEQ ID NO: 45之胺基酸序列之重鏈中所示之包含胺基酸序列之VH域，以及如包含SEQ ID NO: 46之胺基酸序列之重鏈中所示之包含胺基酸序列之VL域。在一些實施例中，與VEGF結合之抗體包含有包含SEQ ID NO: 45之胺基酸序列之重鏈及包含SEQ ID NO: 46之胺基酸序列之輕鏈。在特定實施例中，與VEGF結合之抗體係貝伐單抗(AVASTIN ®)，其為靶向VEGF之人源化免疫球蛋白G1 (IgG1)抗體。貝伐單抗之重鏈序列為EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTNYGMNWVRQAPGKGLEWVGWINTYTGEPTYAADFKRRFTFSLDTSKSTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAKYPHYYGSSHWYFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO:45)；且貝伐單抗之輕鏈序列為DIQMTQSPSSLSA SVGDRVTITCSASQDISNYLN WYQQKPGKAPKVLIYFTSSLHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYSTVPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:46)。
在一些實施例中，本文所提供之組合療法係用於治療選自由以下組成之群之實體腫瘤：非小細胞肺癌(NSCLC)、尿道上皮癌、子宮內膜癌(EC)、卵巢癌(例如上皮卵巢癌(EOC))、子宮頸癌(例如具有鱗狀細胞或腺癌組織學)、頭頸癌(例如頭頸部鱗狀細胞癌(SCCHN))、胰臟癌、食道鱗狀細胞癌(SCC)、前列腺癌(例如轉移性去勢抵抗性前列腺癌(mCRPC))、乳癌(例如三陰性乳癌(TNBC)及激素受體陽性乳癌(HR+BC))，以及與腫瘤類型無關(TA)之組織因子陽性(TF+)癌症。在一些實施例中，本文所提供之組合療法係用於治療EOC。
在其他實施例中，本文提供本文所提供之ADC (例如25A3-LT-A)，其係與貝伐單抗組合使用以治療選自由以下組成之群之實體腫瘤：非小細胞肺癌(NSCLC)、尿道上皮癌、子宮內膜癌(EC)、卵巢癌(例如上皮卵巢癌(EOC))、子宮頸癌(例如具有鱗狀細胞或腺癌組織學)、頭頸癌(例如頭頸部鱗狀細胞癌(SCCHN))、胰臟癌、食道鱗狀細胞癌(SCC)、前列腺癌(例如轉移性去勢抵抗性前列腺癌(mCRPC))、乳癌(例如三陰性乳癌(TNBC)及激素受體陽性乳癌(HR+BC))，以及與腫瘤類型無關(TA)之組織因子陽性(TF+)癌症。在一些實施例中，本文提供所提供之ADC (例如25A3-LT-A)，其係與貝伐單抗組合使用以治療EOC。
在其他實施例中，本文提供本文所提供之ADC (例如25A3-LT-A)之用途，其係用於製造用以與貝伐單抗組合治療實體腫瘤之藥劑，其中實體腫瘤係選自由以下組成之群：非小細胞肺癌(NSCLC)、尿道上皮癌、子宮內膜癌(EC)、卵巢癌(例如上皮卵巢癌(EOC))、子宮頸癌(例如具有鱗狀細胞或腺癌組織學)、頭頸癌(例如頭頸部鱗狀細胞癌(SCCHN))、胰臟癌、食道鱗狀細胞癌(SCC)、前列腺癌(例如轉移性去勢抵抗性前列腺癌(mCRPC))以及乳癌(例如三陰性乳癌(TNBC)及激素受體陽性乳癌(HR+BC))。在一些實施例中，本文提供本文所提供之ADC (例如25A3-LT-A)之用途，其係用於製造用以與貝伐單抗組合治療EOC之藥劑。
在一些實施例中，實體腫瘤為非小細胞肺癌(NSCLC)。在一些實施例中，實體腫瘤為尿道上皮癌。在一些實施例中，實體腫瘤為子宮內膜癌(EC)。在一些實施例中，實體腫瘤為卵巢癌(例如上皮卵巢癌(EOC))。在一些實施例中，實體腫瘤為子宮頸癌(例如具有鱗狀細胞或腺癌組織學)。在一些實施例中，實體腫瘤為頭頸癌(例如頭頸部鱗狀細胞癌(SCCHN))。在一些實施例中，實體腫瘤為胰臟癌。在一些實施例中，實體腫瘤為食道鱗狀細胞癌(SCC)。在一些實施例中，實體腫瘤為前列腺癌(例如轉移性去勢抵抗性前列腺癌(mCRPC))。在一些實施例中，實體腫瘤為乳癌，例如三陰性乳癌(TNBC)或激素受體陽性乳癌(HR+BC)。在一些實施例中，實體腫瘤為與腫瘤類型無關(TA)之組織因子陽性(TF+)癌症。
在一些實施例中，本文所提供之組合療法包含以約0.16 mg/kg至約3.0 mg/kg範圍內的劑量向個體投與本文所提供之ADC (例如25A3-LT-A)。在一些實施例中，組合療法進一步包含以15 mg/kg之劑量向個體投與貝伐單抗。在一些實施例中，每3週向個體靜脈內(IV)投與本文所提供之ADC (例如25A3-LT-A)及貝伐單抗。
在一些實施例中，本文所提供之組合療法包含以約1.0 mg/kg至約3.0 mg/kg範圍內的劑量向個體投與本文所提供之ADC (例如25A3-LT-A)。在一些實施例中，組合療法進一步包含以15 mg/kg之劑量向個體投與貝伐單抗。在一些實施例中，每3週向個體靜脈內(IV)投與本文所提供之ADC (例如25A3-LT-A)及貝伐單抗。
在一些實施例中，本文所提供之組合療法包含以約0.16 mg/kg、約0.5 mg/kg、約1.0 mg/kg、約1.5 mg/kg、約2.0 mg/kg、約2.25 mg/kg、約2.5 mg/kg、約2.75 mg/kg或約3.0 mg/kg之劑量向個體投與本文所提供之ADC (例如25A3-LT-A)。在一些實施例中，組合療法進一步包含以15 mg/kg之劑量向個體投與貝伐單抗。在一些實施例中，每3週向個體靜脈內(IV)投與本文所提供之ADC (例如25A3-LT-A)及貝伐單抗。
在一些實施例中，在同一天向個體投與貝伐單抗及本文所提供之ADC (例如25A3-LT-A)。在其他實施例中，在向個體提供本文所提供之ADC (例如25A3-LT-A)及貝伐單抗的當天，在本文所提供之ADC之前投與貝伐單抗。或者或另外，貝伐單抗及本文所提供之ADC (例如25A3-LT-A)係彼此至少間隔30分鐘投與。
在一些實施例中，每3週向個體靜脈內(IV)投與本文所提供之ADC (例如25A3-LT-A)及貝伐單抗。在一些實施例中，至少間隔21天向個體靜脈內(IV)投與組合療法。在一些實施例中，組合療法持續不超過2年。 6.    用於製造抗體藥物結合物之方法
可採用熟習此項技術者已知的有機化學反應、條件及試劑，使用此項技術中所揭示之任何適合之方法製備ADC。
在某些實施例中，本文描述一種用於製備抗體藥物結合物之方法，該方法包含：(A)使與人類組織因子(TF) (SEQ ID NO: 41)之細胞外域結合之抗原結合蛋白(Ab)上的親核或親電子基團與包含兩個或更多個連接子組分之雙功能連接子的第一連接子組分反應，隨後依序添加其餘連接子組分以形成Ab-連接子中間物，且使Ab-連接子中間物與化合物 9上之-NH 2基團反應： 化合物 9， 從而得到抗體藥物結合物；或(B)使化合物 9上之-NH 2基團與包含兩個或更多個連接子組分之雙功能連接子的第一連接子組分反應，隨後依序添加其餘連接子組分以形成連接子-毒素中間物，且使連接子-毒素中間物與結合於人類組織因子(TF) (SEQ ID NO: 41)之細胞外域之抗原結合蛋白(Ab)上的親核或親電子基團反應以得到抗體藥物結合物。在一些實施例中，在(A)或(B)中，(a) Ab包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3，其中VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3係來自經指定為25A3之抗體；及 (b)抗體藥物結合物包含一或多個由式I表示之部分： 式 I其中##表示該連接子-毒素部分與該TF抗體之連接點，且該連接子-毒素部分經由共價鍵與該TF抗體連接。
在某些實施例中，Ab上之親核或親電子基團為硫醇或胺。在用於製備ADC之方法之某些實施例中，該方法進一步包含用還原劑處理Ab以還原Ab中之一或多個二硫鍵，以得到親核硫醇基團。在某些實施例中，ADC可經由包含以下之方法製備：(A) (i)使抗體上之親核或親電子基團與雙功能連接子反應以形成抗體-連接子中間物，或(ii)使抗體上之親核或親電子基團與包含兩個或更多個連接子組分之雙功能連接子的第一連接子組分反應，隨後依序添加其餘連接子組分以形成抗體-連接子中間物，及(B)使抗體-連接子中間物與化合物 9上之-NH 2基團反應以得到ADC。
在其中細胞毒性劑為化合物 9之某些實施例中，ADC可經由包含以下之方法製備：(A) (i)使化合物 9上之NH 2基團與雙功能連接子反應以形成連接子-毒素中間物，或(ii)使化合物 9上之NH 2基團與包含兩個或更多個連接子組分之雙功能連接子的第一連接子組分反應，隨後依序添加其餘連接子組分以形成連接子-毒素中間物，及(B)使連接子-毒素中間物與抗體上之親核或親電子基團反應以得到抗體藥物結合物。
在一些實施例中，抗體上之親電子或親核基團為硫醇(例如來自抗體上之半胱胺酸殘基)，或胺(例如來自抗體上之離胺酸殘基)。化合物 9及包含化合物 9之連接子-毒素可經由標準合成有機化學計劃由市售起始物質製備。
套組
本文中亦提供一種套組，其包含如本文所揭示之TF ADC或包含其之醫藥組合物。在一些實施例中，套組進一步包含化學療法及/或抗癌抗體(例如抗VEGF mAb、抗體藥物結合物或PD-1/PD-L1 mAb)。
本文提供一種套組，其包含如本文所揭示之TF ADC或包含其之醫藥組合物及使用說明書。在一些實施例中，套組進一步包含化學療法及/或抗癌抗體(例如抗VEGF mAb、抗體藥物結合物或PD-1/PD-L1 mAb)。
本文中亦提供一種套組，其包含封裝於適合之封裝材料中的本文所提供之TF ADC或包含其之醫藥組合物。在一些實施例中，套組進一步包含化學療法及/或抗癌抗體(例如抗VEGF mAb、抗體藥物結合物或PD-1/PD-L1 mAb)。套組視情況包括標籤或藥品說明書，其包括組分之描述或關於其中的組分之活體外、活體內或離體使用之說明。
術語「封裝材料」係指容納套組之組分之實體結構。封裝材料可保持組分無菌，且可由常用於此類目的之材料(例如紙、波紋狀纖維、玻璃、塑膠、箔、安瓿、小瓶、管等)製成。
本文所提供之套組可包括標籤或插頁。標籤或插頁包括「印刷品」，例如紙或卡紙板，其係單獨的或貼附至組分、套組或封裝材料(例如盒子)，或附著至例如含有套組組分之安瓿、管或小瓶。標籤或插頁可額外包括電腦可讀媒體，諸如磁碟(例如硬碟、卡、記憶體磁碟)；光碟，諸如CD-ROM/RAM或DVD-ROM/RAM、DVD、MP3、磁帶；或電儲存媒體，諸如RAM及ROM，或此等物質之混合物，諸如磁/光學儲存媒體、FLASH介質或記憶體型卡。標籤或插頁可包括識別製造商資訊、批號、製造商位置及日期之資訊。
本文所提供之套組可額外包括其他組分。套組之各組分可密封於個別容器內，且所有各種容器可位於單一封裝內。套組亦可經設計以用於冷藏。 實例
以下為本發明之方法及組合物之實例。應理解，考慮到本文提供之一般說明，可實施各種其他實施例。
以下為用於實踐本發明之特定實施例之實例。實例係僅出於說明之目的而提供，且不意欲以任何方式限制本發明之範疇。已努力確保關於所用數字(例如量、溫度等)之準確性，但當然應該允許存在一些實驗誤差及偏差。 實例 1 ：連接子 - 毒素 A 之合成
以下實例描述包含奧瑞他汀衍生物之例示性連接子-毒素(連接子-毒素A，亦稱為 LT-A)化合物 9的製備：
可採用類似計劃來製備包含其他如本文所描述之通式 I之奧瑞他汀衍生物的連接子-毒素(亦參見國際專利申請公開案第WO 2016/041082號，其以全文引用之方式併入本文中)。 1.1 (2R,3R)-3- 甲氧基 -2- 甲基 -3-((S)- 吡咯啶 -2- 基 ) 丙酸乙酯 ( 化合物 1)
在0℃下向(2R,3R)-3-((S)-1-(三級丁氧基羰基)吡咯啶-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酸(Boc-Dap-OH，4.31 g，15.0 mmol)於純乙醇(27.0 mL)中之攪拌溶液中逐滴添加亞硫醯氯(3.0 mL)。使所得溶液升溫至室溫且經由HPLC-MS監測進展。在18小時後，未偵測到剩餘起始物質且將溶液在減壓下濃縮至乾燥。將所得油狀物懸浮於甲苯(10 mL)中且在減壓下濃縮兩次，然後懸浮於乙醚(5 mL)中且在減壓下濃縮兩次，得到呈白色固態發泡體狀之標題化合物(3.78 g，定量產率%)。MS m/z觀測值= 216.5 (M+1)。 1.2 (3R,4S,5S)-4-((S)-2-((( 苯甲氧基 ) 羰基 ) 胺基 )-N,3- 二甲基丁醯胺基 )-3- 甲氧基 -5- 甲基庚酸 ( 化合物 3)
如國際專利申請公開案第WO 2016/041082號中所描述來製備化合物 2。
向化合物 2(6.965 g，14.14 mmol)於二氯甲烷(20 mL)中之攪拌溶液中添加三氟乙酸(5.0 mL)。藉由HPLC-MS監測反應是否完成且在40小時之後，無起始物質剩餘。在減壓下濃縮反應物，與甲苯(2×10 mL)及二氯甲烷(2×10 mL)一起共蒸發，得到泡沫狀白色固體(6.2 g，定量產率，含有殘餘TFA)。將此物質溶解於200 mL熱的1:3 EtOAc:己烷中且使其冷卻至室溫。在冷卻期間，形成沈澱物以及一些小晶體。添加5 mL EtOAc且再次加熱懸浮液以完全溶解沈澱物。在冷卻至室溫後形成更多晶體且將燒瓶置放在-30℃下隔夜。第二天早晨，傾析母液且用2×50 mL己烷沖洗晶體且在高真空中乾燥。回收5.67 g呈結晶產物形式之標題化合物。MS m/z觀測值=405.7 (M+1)。 1.3 (2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((( 苯甲氧基 ) 羰基 ) 胺基 )-N,3- 二甲基丁醯胺基 )-3- 甲氧基 -5- 甲基庚醯基 ) 吡咯啶 -2- 基 )-3- 甲氧基 -2- 甲基丙酸乙酯 ( 化合物 4)
在室溫下，向化合物 3(6.711 g，15.37 mmol，1.025當量)於二氯甲烷(5.0 mL)及 N,N-二甲基甲醯胺(5.0 mL)之混合物中的攪拌溶液中添加HATU (5.732 g，15.07 mmol，1.005當量)及 N,N-二異丙基乙胺(7.84 mL，3當量)。在室溫下攪拌30分鐘之後，逐滴添加化合物 1(3.776 g，15.00 mmol，1.0當量)於二氯甲烷(1.0 mL)及 N,N-二甲基甲醯胺(1.0 mL)之混合物中的溶液且用額外3 mL 1:1之二氯甲烷: N,N-二甲基甲醯胺在殘餘化合物 1中沖洗。藉由HPLC-MS監測反應且在15分鐘之後未觀測到剩餘化合物 1。在減壓下濃縮反應物，用乙酸乙酯(約125 mL)稀釋且用1 M HCl (2×50 mL)、1×dH 2O (1×50 mL)、飽和NaHCO 3(3×50 mL)、鹽水(25 mL)萃取有機相。用25 mL EtOAc洗滌酸性及鹼性水層。隨後合併所有有機物且經MgSO 4乾燥，過濾且濃縮，得到紅色油狀物。將殘餘物溶解於最少量的二氯甲烷(約10 mL)中，裝載至Biotage ®SNAP Ultra 360 g矽膠管柱(Isolera™ Flash System；Biotage AB, Sweden)上以進行純化(超過10倍管柱體積之含20-100% EtOAc之己烷)。合併含有純產物之溶離份以回收7.9 g泡沫狀白色固體。不純的溶離份用Biotage ®SNAP Ultra 100 g矽膠管柱進行第二次純化且與純產物合併，以回收呈白色泡沫固體狀之標題化合物(8.390 g，88.3%)。MS m/z觀測值= 634.7 (M+1)。 1.4 (2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((( 苯甲氧基 ) 羰基 ) 胺基 )-N,3- 二甲基丁醯胺基 )-3- 甲氧基 -5- 甲基庚醯基 ) 吡咯啶 -2- 基 )-3- 甲氧基 -2- 甲基丙酸 ( 化合物 5)
向化合物 4(8.390 g，13.24 mmol)於1,4-二㗁烷(158 mL)中之攪拌溶液中添加dH 2O (39.7 ml)及單水合氫氧化鋰(1 M於H 2O中，39.7 mL，3當量)。將反應物在4℃下攪拌且經由HPLC-MS監測起始物質之消耗，此耗時3天直至僅剩餘微量的化合物 4。在反應過程期間，除所需物質以外，亦形成了少量百分比之新產物，對應於甲醇之損失(β-消除，＜2%)。反應物藉由添加1 M HCl水溶液(50 mL)來酸化且在減壓下濃縮以移除二㗁烷。剩餘反應混合物用乙酸乙酯(4×50 mL)萃取且將有機相合併，用鹽水(15 mL + 2 mL 2 M HCl)洗滌，經MgSO 4乾燥，過濾且在減壓下濃縮，得到淺色油狀物。將該油狀物再溶解於乙醚(約50 mL)中且在減壓下濃縮(3次)以促進移除殘餘二㗁烷，得到呈黏稠油狀之標題產物(7.81 g 97%產率，含有一些殘餘二㗁烷及化合物 4)。MS m/z觀測值= 606.7 (M+1)。 1.5 ((S)-1-(((3R,4S,5S)-3- 甲氧基 -1-((S)-2-((1R,2R)-1- 甲氧基 -2- 甲基 -3- 側氧基 -3-((4-(2,2,2- 三氟乙醯胺基 ) 苯基 ) 磺醯胺基 ) 丙基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-5- 甲基 -1- 側氧基庚 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-3- 甲基 -1- 側氧基丁 -2- 基 ) 胺基甲酸苯甲酯 ( 化合物 7)
如國際專利申請公開案第WO 2016/041082號中所描述來製備化合物 6。
向化合物 5(7.12 g，11.754 mmol)於二氯甲烷(20 mL)中之攪拌溶液中添加2,2,2-三氟-N-(4-胺磺醯基苯基)乙醯胺(化合物 6，4.095 g，1.3當量，溶解於3 mL DMF中)、 N,N-二甲基吡啶(1.867 g，1.3當量)及 N,N-二甲基甲醯胺(1.5 mL)，產生淺黃色懸浮液。再添加5 mL DMF未能使溶液變澄清。一次性添加 N-(3-二甲基胺基丙基)- N'-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(EDCI) (2.817 g，1.25當量)且經由HPLC-MS監測反應。在48小時後，反應不再進行且再添加400 mg EDCI。在18小時後，未觀測到剩餘起始物質且在減壓下濃縮反應物，得到黃色油狀物。將該油狀物溶解於乙酸乙酯(約150 mL)及1 M HCl(20 mL)中，且用冷的2 M HCl (2×10 mL)、飽和NaHCO 3(1×10 mL)、鹽水(20 mL+5 mL 2 M HCl)洗滌有機相。酸性及鹼性水性溶離份用EtOAc (1×20 mL)萃取，合併所有有機溶離份，經MgSO 4乾燥且在減壓下濃縮，得到油性粗固體(13 g)。將殘餘物溶解於二氯甲烷(約10 mL)中，裝載至Biotage ®SNAP Ultra 360 g矽膠管柱上且在超過12倍管柱體積之含10-100% EtOAc (2% AcOH)之己烷梯度(在50% EtOAc時存在3倍管柱體積之平線區)下純化。合併含有純產物之溶離份，在減壓下濃縮，溶解且自甲苯(2×10 mL)及乙醚(2×10 mL)濃縮，得到所需產物，7.1 g白色發泡體狀固體。在Isolera™儀器上使用Biotage ®SNAP Ultra 100 g矽膠管柱在較淺的梯度條件下對不純的溶離份進行重複純化。合併所有純溶離份以回收呈白色固態發泡體狀之純產物(標題化合物) (8.60 g，86%)。MS m/z觀測值= 856.7 (M+1)。 1.6 (S)-2- 胺基 -N-((3R,4S,5S)-3- 甲氧基 -1-((S)-2-((1R,2R)-1- 甲氧基 -2- 甲基 -3- 側氧基 -3-((4-(2,2,2- 三氟乙醯胺基 ) 苯基 ) 磺醯胺基 ) 丙基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-5- 甲基 -1- 側氧基庚 -4- 基 )-N,3- 二甲基丁醯胺 ( 化合物 7a)
在含有磁性攪拌器且裝配有3通氣體管線配接器之圓底燒瓶中，將化合物 7(3.71 g，4.33 mmol)溶解於含10% N,N-二甲基甲醯胺之乙酸乙酯(30 mL)中。將容器在減壓下抽空兩次且填充氮氣。一次性添加10%碳載鈀(0.461g，0.1當量)，將3通配接器裝配至燒瓶，將氫氣球裝配至配接器且將容器在減壓下抽空兩次且填充氫氣。將反應物攪拌2天，在該時段內，偶爾再填充氫氣球。約48小時之後，HPLC-MS分析指示無起始物質剩餘。反應物用甲醇(20 mL)稀釋且經由矽藻土塞過濾。用甲醇(2×50 mL)洗滌矽藻土。合併所有濾液且在減壓下濃縮，且將所得油狀物溶解且自二氯甲烷濃縮。在減壓下乾燥之後，以無色粉末形式分離標題化合物(3.10 g，99%)。MS m/z觀測值= 722.6 (M+1)。 1.7 (S)-2-((S)-2-( 二甲基胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-N-((3R,4S,5S)-3- 甲氧基 -1-((S)-2-((1R,2R)-1- 甲氧基 -2- 甲基 -3- 側氧基 -3-((4-(2,2,2- 三氟乙醯胺基 ) 苯基 ) 磺醯胺基 ) 丙基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-5- 甲基 -1 側氧基庚 -4- 基 )-N,3- 二甲基丁醯胺 ( 化合物 8)
向 N,N-( L)-二甲基纈胺酸(1.696 g，9.35 mmol)於 N,N-二甲基甲醯胺(10 mL)中之攪拌溶液中添加HATU (3.216 g，8.46 mmol)及雙異丙基乙基胺(3.10 mL，17.8 mmol)。5分鐘後得到澄清的黃色溶液。再繼續攪拌10分鐘，然後一次性添加化合物 7a(3.213 g，4.45 mmol)。再攪拌1小時之後，HPLC-MS指示剩餘微量的化合物 7a且反應持續16小時。然後在減壓下濃縮反應物，用乙酸乙酯(120 mL)及40 mL 1:1之NaHCO 3(飽和):5% LiCl稀釋且轉移至分液漏斗中。移除水層且用LiCl (1×20 mL)、NaHCO 3(飽和，2×20 mL)洗滌有機相。合併水層且用EtOAc (3×50 mL)萃取。合併有機層且用鹽水(1×20 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮，得到負載有DMF之油狀物，將其經由旋轉式蒸發器濃縮以移除殘餘DMF，得到7 g粗稻草色油狀物。將該油狀物溶解於最少量的10%甲醇/二氯甲烷(約11 mL)中，且裝載至Biotage ®SNAP Ultra 360 g矽膠管柱上以進行純化(超過15倍管柱體積之含2-20% MeOH之CH 2Cl 2，產物溶離約10-13%)。將含有所需產物之溶離份合併且在減壓下濃縮，得到呈無色發泡體狀之標題化合物。將不純的溶離份合併、蒸發且在Isolera™儀器上與Biotage ®SNAP Ultra 100 g矽膠管柱進行重複純化且與來自第一管柱之純產物合併，得到無色固態發泡體(3.78 g)。MS m/z觀測值= 850.6 (M+1)。 1.8 (S)-N-((3R,4S,5R)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-((4- 胺基苯基 ) 磺醯胺基 )-1- 甲氧基 -2- 甲基 -3- 側氧基丙基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3- 甲氧基 -5- 甲基 -1- 側氧基庚 -4- 基 )-2-((S)-2-( 二甲基胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-N,3- 二甲基丁醯胺 ( 化合物 9)
向化合物 8(0.980 g，1.154 mmol)於1,4-二㗁烷(15 mL)中之攪拌溶液中添加水(3.5 mL)及1 M單水合氫氧化鋰(3當量，3.46 mL)。在4℃下攪拌所得淺色懸浮液且經由HPLC-MS監測起始物質之消耗。在轉化完成(約5天)時，用3.46 mL 1 M HCl中和反應物且在減壓下濃縮以移除二㗁烷。所得水相用60 mL EtOAc及5 mL鹽水稀釋，接著用乙酸乙酯(2×30 mL)萃取。合併有機溶離份，經Na 2SO 4乾燥，過濾且蒸發，得到呈棕褐色固體狀之標題化合物(0.930 g)。R f= 0.5 (8% MeOH in CH 2Cl 2)。MS m/z觀測值= 753.7 (M+1)。 1.9 3-(2-(2-(2-(2,5- 二側氧基 -2,5- 二氫 -1H- 吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 丙酸 2,3,5,6- 四氟苯酯 ( 化合物 15)
在乾燥的50 mL錐形燒瓶中，將3-(2-(2-(2-胺基乙氧基)乙氧基)乙氧基)丙酸(化合物 14，1.000 g，4.52 mmol)及順丁烯二酸酐(0.443 g，4.52 mmol)溶解於無水 N,N-二甲基甲醯胺(5 mL)中。將反應物在室溫下在N 2下攪拌6小時，然後冷卻至0℃且逐滴添加同-三甲基吡啶(1.263 mL，2.1當量)。在單獨的乾燥的50 mL錐形燒瓶中，將四氟苯酚(3.002 g，4當量)溶解於無水 N,N-二甲基甲醯胺(10 mL)中。將燒瓶在冰浴中冷卻至0℃且逐滴添加三氟乙酸酐(2.548 mL，4當量)。在攪拌15分鐘之後，逐滴添加同-三甲基吡啶(2.407 mL，4當量)。將燒瓶再攪拌15分鐘，且接著經由注射器將內含物逐滴添加至第一燒瓶中。使反應物升溫至室溫且在N 2下繼續攪拌。經由HPLC-MS監測反應中之起始物質之消耗。在6天後，反應完成且化合物 14完全耗盡，僅留下化合物 15及少量(約5%)雙-TFP順丁烯二醯胺中間物。將反應物轉移至分液漏斗中，用乙醚(75 ml)稀釋且用5% LiCl (1×20 mL)、1 M HCl (2×20 mL)、飽和NaHCO 3(5×20 mL)及鹽水(1×20 mL)洗滌。有機層經Na 2SO 4乾燥，過濾且蒸發，得到具有殘餘DMF之棕色粗油狀物。將粗油狀物溶解於8 mL 1:1之DMF:H 2O+0.1% TFA中，裝載至60 g Biotage ®SNAP Ultra C18管柱(Biotage AB, Uppsala, Sweden)上且在超過8倍管柱體積之ACN/H 2O+0.1% TFA之線性30-100%梯度下純化。合併純溶離份且用鹽水(20 mL)稀釋，接著用3×50 mL Et 2O萃取。經合併之有機物經MgSO 4乾燥，過濾且蒸發以回收呈淺黃色油狀之標題化合物(1.34 g，66%產率)。 1.10 ((S)-1-(((S)-1-((4-(N-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2- ( 二甲基胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-N,3- 二甲基丁醯胺基 )-3- 甲氧基 -5- 甲基庚醯基 ) 吡咯啶 -2- 基 )-3- 甲氧基 -2- 甲基丙醯基 ) 胺磺醯基 ) 苯基 ) 胺基 )-1- 側氧基 -5- 脲基戊 -2- 基 ) 胺基 )-3- 甲基 -1- 側氧基丁 -2- 基 ) 胺基甲酸三級丁酯 ( 化合物 12)
如國際專利申請公開案第WO 2016/041082號中所描述來製備化合物 11。
向空的25 mL梨形燒瓶中添加化合物 11(1.342 g，3.58 mmol，3.0當量)、1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(0.664 g，3.46 mmol，2.9當量)及7-羥基-氮雜苯并三唑(HOAT) (0.472 g，3.46 mmol，2.9當量)。在室溫下，在攪拌下將此等固體經30分鐘溶解於 N,N-二甲基甲醯胺(0.5 mL)及二氯甲烷(4.5 mL)之混合物中。單獨地，將化合物 9(0.900 g，1.20 mmol)溶解於 N,N-二甲基甲醯胺(0.2 mL)及二氯甲烷(1.8 mL)之混合物中且添加至梨形燒瓶中，用二氯甲烷(1.0 mL)沖洗。將攪拌速率提高至1000 rpm，產生渦流。在添加化合物 9之後的2分鐘內，經由窄粉末漏斗向渦流中心直接一次性添加氯化銅(II) (0.514 g，3.83 mmol，3.2當量)。最初淺黃色溶液變為深棕色懸浮液，其經10分鐘變為深綠色懸浮液。經由HPLC-MS監測反應是否完成且在30分鐘及1小時(約完成95%)採集的樣品之間未觀測到反應進展之變化。在室溫下攪拌反應物隔夜，隨後向經攪拌之懸浮液中添加2-(2-胺基乙胺基)乙醇(0.483 mL，4.781 mmol，4當量)、EtOAc (10 mL)及dH 2O (5 mL)，其顏色變成深藍色。隨著懸浮固體逐漸溶解於兩相混合物中而劇烈攪拌懸浮液4小時。將此混合物轉移至分液漏斗中且用EtOAc (100 mL)及鹽水(10 mL)稀釋，且使用10% IpOH/EtOAc (4×50 mL)萃取水層。將有機層合併且用鹽水(10 mL)洗滌，經Na 2SO 4乾燥且蒸發，得到微藍色粗固體。將此粗固體溶解於甲醇(0.5 mL)及二氯甲烷(6 mL)之混合物中且用Biotage ®SNAP Ultra 100 g純化(超過10倍管柱體積之含2-20% MeOH之CH 2Cl 2，隨後在20% MeOH處之8倍管柱體積平線區)。在含約20% MeOH之CH 2Cl 2之情況下，在經過1-2倍管柱體積後，產物以寬峰形式溶離。合併含有所需物質之溶離份且在減壓下濃縮，得到呈白色固體狀之標題化合物(1.105 g，83%)。MS m/z觀測值= 555.9 ((M+2)/2), 1109.8 (M+1)。 1.11 (S)-2-((S)-2- 胺基 -3- 甲基丁醯胺基 )- N-(4-(N-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5R)-4-((S)-2-((S)-2-( 二甲基胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-N,3- 二甲基丁醯胺基 )-3- 甲氧基 -5- 甲基庚醯基 ) 吡咯啶 -2- 基 )-3- 甲氧基 -2- 甲基丙醯基 ) 胺磺醯基 ) 苯基 )-5- 脲基戊醯胺 ( 化合物 13)
向化合物 12(0.926 g，0.834 mmol)之溶液中添加二氯甲烷(10 mL)及三氟乙酸(2.0 mL)之混合物。經由HPLC-MS監測反應中之起始物質之消耗(約45分鐘)。反應物與乙腈(2×10 mL)及二氯甲烷(2×10 mL)一起在減壓下共蒸發以移除過量的三氟乙酸。將所得殘餘物溶解於最少量的二氯甲烷及甲醇(3:1，v/v，約2 mL)中，且經由滴管逐滴添加至乙醚(200 mL)及己烷(100 mL)之攪拌溶液中，產生淺白色固體之懸浮液。過濾固體且在真空中乾燥，得到呈三氟乙酸鹽形式的白色粉末狀之標題化合物(1.04 g，定量產率，含有一些殘餘溶劑)。MS m/z觀測值= 505.8 ((M+2)/2)。 1.12 (S)-N-(4-(N-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5R)-4-((S)-2-((S)-2-( 二甲基胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-N,3- 二甲基丁醯胺基 )-3- 甲氧基 -5- 甲基庚醯基 ) 吡咯啶 -2- 基 )-3- 甲氧基 -2- 甲基丙醯基 ) 胺磺醯基 ) 苯基 )-2-((S)-1-(2,5- 二側氧基 -2,5- 二氫 -1H- 吡咯 -1- 基 )-14- 異丙基 -12- 側氧基 -3,6,9- 三氧雜 -13- 氮雜十五醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺 ( 連接子 - 毒素 A)
向化合物 13(0.722 g，0.584 mmol)於 N,N-二甲基甲醯胺(4 mL)中之攪拌溶液中添加化合物 15(0.314 g，1.2當量)及二異丙基乙胺(0.305 mL，3.0當量)。在2小時之HPLC-MS分析指示不存在剩餘起始物質。反應物用TFA (300 μL)酸化且接著用diH 2O+0.1% TFA (9 mL)稀釋。將所得溶液裝載至120 g Biotage ®SNAP Ultra C18管柱(Biotage, Uppsala, Sweden)上且在ACN/H 2O+0.1% TFA梯度下純化：超過10倍管柱體積之20-60% ACN、超過5倍管柱體積之60-100% ACN。產物溶離約40% ACN。合併且凍乾經由LCMS所鑑別之純溶離份。自凍乾器回收白色粉末狀固體。以更高濃度(於2:1之H 2O/ACN中約50 mg/mL)重複凍乾至小瓶中，產生呈更緻密、絮凝更少的凍乾固體狀之標題化合物(754.2 mg，91%)。MS m/z觀測值= 647.4 ((M+2)/2), 1292.8 (M+1) 。 實例 2 ： ADC 合成
如下文所描述製備如實例1中製備之抗TF抗體及連接子-毒素A之抗體藥物結合物(ADC) (亦參見國際專利申請公開案第WO 2021/003399號，其以全文引用之方式併入本文中)。
簡言之，經由添加參(2-羧基乙基)膦(2.0至2.5或3.2莫耳當量)及最終濃度為0.8 mM之最終濃度之二伸乙基三胺-五乙酸來還原含5至10 mg/mL之25A3抗體(關於純系25A3之CDR及V區序列，參見表1及表2)之磷酸鹽緩衝生理鹽水(PBS)，pH 7.4。在37℃下2小時後，將部分還原之抗體在冰上冷卻10分鐘，然後在冰上與8莫耳當量之連接子-毒素A結合1小時。反應物用過量的N-乙醯基-L-半胱胺酸淬滅。將經淬滅之反應物在冰上靜置30分鐘，隨後純化。根據製造商之計劃，ADC分別經由兩輪40kDa MWCO Zeba™離心脫鹽管柱(10 mL管柱，產品號8772，批號RL240689)進行純化。在純化前，兩組管柱用無菌PBS進行底塗。ADC首先經由一組經PBS底塗之管柱純化，接著收集樣品且經由另一組進行第二次純化。在第二次純化後，將ADC重新合併在一起且無菌過濾且在-80℃下冷凍。
如WO 2016/041082中所描述，可經由UV/vis光譜法、疏水相互作用層析(HIC)及/或反相液相層析分離(RP-UPLC/質譜法)以及飛行時間偵測及質量表徵來量測藥物-抗體比(DAR)。亦如WO 2016/041082中所描述，亦可經由此項技術中已知之各種技術，包括MS (具有或不具有伴隨的層析分離步驟)、疏水相互作用層析、反相HPLC或等電聚焦凝膠電泳(IEF)來分析藥物相關形式之分佈(例如DAR0、DARl、DAR2等種類之分數)。
對於此實例，所得ADC之藥物-抗體比(DAR)為約3。經由疏水相互作用層析測定DAR：平均DAR=(0×(DAR0面積%)+2×(DAR2面積%)+4×(DAR4面積%)+6×(DAR6面積%)+8×(DAR8面積%)/100。使用尺寸排阻層析以確保ADC製劑之單體性為至少95%。
將例如此實例中所製備之包含25A3及LT-A之ADC ( 25A3-LT-A)用於以下實例3至7之研究。 實例 3 ： ADC 調配物
製備25A3-LT-A (如實例1中所描述合成)之溶液調配物且用於毒理學研究及1期臨床試驗。調配物之組成展示於表3中。 表 3 ： 25A3-LT-A 調配物之組成
組分 1 功能
25A3-LT-A劑量 活性醫藥成分
L-組胺酸 緩衝液
HCl 1N 1 pH控制
蔗糖 滲壓劑
聚山梨醇酯80 界面活性劑
注射用水 稀釋劑
使用 1HCl 1N以將組胺酸緩衝液滴定至目標pH值，因此用量可能因批次而不同。 實例 4 ：石蟹獼猴中之 GLP 毒理學研究
在雄性及雌性石蟹獼猴中之此GLP研究中，每3週一次經由IV輸注來投與3、6、12或15毫克/公斤/劑量之25A3-LT-A (如實例2中所描述合成且如實例3中所描述調配)持續總共4個劑量。在第65天對各劑量之每種性別的4隻動物進行最終屍檢，且在各劑量之每種性別的兩隻動物中之6週恢復期後檢查結果之潛在可逆性(第106天)。
此研究中不存在非預期死亡。25A3-LT-A對體重、尿液分析參數及器官重量亦不存在相關影響。此外，經委員會認證的獸醫心臟病專家確定，對ECG不存在定性影響。基於在一隻雄性石蟹獼猴中在15毫克/公斤/劑量之情況下必須中斷給藥之不良結果，25A3-LT-A之耐受性係至多12毫克/公斤/劑量。在此雄性石蟹獼猴中，25A3-LT-A之投藥引起眼部之與測試項目相關之不良臨床觀測結果(分泌物、眼睛部分或完全閉合、結膜發紅、眼瞼及眶周區域嚴重腫脹)，此導致在第22天投藥後二次觀測到不良狀況(呈駝背姿勢、活動性降低及疑似脫水)。在下一次給藥時(第43天)，觀測結果仍存在；因此，在第43天未向動物給藥。
在治療期間，在剩餘動物中主要在12及15毫克/公斤/劑量之情況下發現臨床觀測結果，其中一些此等觀測結果在6毫克/公斤/劑量之情況下出現。此等觀測結果包括在≥6毫克/公斤/劑量時的眼瞼輕微至嚴重軟腫脹及在≥12毫克/公斤/劑量時的眶周區域之輕微至嚴重軟腫脹。在≥12毫克/公斤/劑量之情況下的其他觀測結果包括異常(紅色)眼球顏色以及眼睛之異常顏色(黃色或透明)及/或分泌物(液態或黏液狀)。在恢復期結束時，除眶周腫脹以外，大部分此等眼部臨床觀測結果在≥12毫克/公斤/劑量之情況下持續存在。
在≥12毫克/公斤/劑量之情況下發現可能係對眼部作用之反應的臨床觀測結果且包括呈駝背姿勢、疑似脫水、毛皮豎立及活動性降低。在恢復期結束時，未再觀測到脫水、毛皮豎立及活動性降低，其中駝背姿勢僅在雄性中持續存在。因此，基於此等整體觀測結果，支持恢復之跡象。應注意到，與探索性毒理學研究相比，不存在皮膚觀測結果。
關於食物消耗作用，自第14天至第34天，在15毫克/公斤/劑量之情況下在所有雄性動物中短暫觀測到食慾下降。
在整個給藥期中，25A3-LT-A對臨床病理學參數存在非劑量相關影響。在≥6毫克/公斤/劑量時，在≥12毫克/公斤/劑量時之變化幅度較大，嗜中性球、淋巴球及單核球之計數增加，此在總WBC計數增加中反映。此等結果與25A3-LT-A相關之血纖維蛋白原及總蛋白濃度增加(由於球蛋白增加)以及白蛋白及白蛋白/球蛋白比降低相關聯。此等變化不具有明顯的微觀相關性，但可能反映在眼睛及肺部中發現之炎症結果。血小板計數之零星個別增加同樣可能與炎症過程相關。在≥12毫克/公斤/劑量之情況下發現AST增加以及對ALT或ALP無影響且不存在任何微觀相關性。對aPTT或對PT沒有影響。
在恢復期後，在先前投與≥6毫克/公斤/劑量之雄性動物中及在先前投與15毫克/公斤/劑量之雌性動物中不再觀測到血液學結果；然而，WBC、嗜中性球及淋巴球計數之增加僅存在於提供≤12毫克/公斤/劑量之雌性動物中。總體而言，有證據表明對其餘臨床病理學參數之影響之恢復。
在眼瞼、眼睛、肺部及輸注部位發現25A3-LT-A相關之組織病理學結果。
在眼瞼中，接受15毫克/公斤/劑量之雄性動物及≥6毫克/公斤/劑量之雌性動物之結膜上皮出現輕微至輕度糜爛/潰瘍，接受≥12毫克/公斤/劑量之雌性動物伴有結膜上皮之輕微至中度增生，及/或接受15毫克/公斤/劑量之1隻雄性動物及接受12毫克/公斤/劑量之1隻雌性動物中出現最小黏膜下層混合細胞發炎。在恢復期結束時，在接受≥12毫克/公斤/劑量之雄性動物及≥6毫克/公斤/劑量之雌性動物中，在眼瞼中發現輕微糜爛/潰瘍、結膜增生、混合細胞發炎及/或輕微至輕度黏膜下層纖維化。
在眼睛中，接受15毫克/公斤/劑量之一隻雄性動物之角膜出現明顯糜爛/潰瘍(伴有混合細胞發炎、新血管生成且與肉眼可見不透明、異常外觀及腫大相關)，在接受15毫克/公斤/劑量之一隻雄性動物及接受≥12毫克/公斤/劑量之雌性動物中，結膜出現輕微至輕度糜爛/潰瘍。在接受12毫克/公斤/劑量之雄性動物及接受≥12毫克/公斤/劑量之雌性動物中，結膜上皮出現輕微至輕度增生，在接受≥3毫克/公斤/劑量之雄性及雌性動物中，角膜出現輕微至輕度上皮萎縮，且在接受≥12毫克/公斤/劑量之雌性動物中，角膜上皮出現色素沉著。認為角膜結果可能繼發於在眼瞼中發現的結果。在恢復時，在12毫克/公斤/劑量下，在四隻雄性動物中之一隻(輕度，伴有角膜上皮色素沉著)及四隻雌性動物中之一隻(中度，伴有結膜上皮背側糜爛/潰瘍及/或增生)中出現角膜糜爛/潰瘍，且在12毫克/公斤/劑量下，在一隻雌性動物的右眼中發現極輕微的角膜上皮萎縮。與給藥期結束時之結果相比，結果之發生率及/或嚴重程度有所降低。認為此與進行中之恢復過程一致。
與此等組織病理學結果相關的係在給藥階段在≥6毫克/公斤/劑量之情況下的眼科檢查期間發現的變化。在各給藥週期及恢復期結束時進行至少一次眼科檢查。在6毫克/公斤/劑量下，25A3-LT-A相關之眼科學結果(在第36天首次發現)存在於眼瞼、結膜及角膜中，但在≥12毫克/公斤/劑量下更明顯。角膜變化(包括渾濁、血管生成、失去光澤及基質液泡)極可能繼發於引起結膜、眼瞼及淚液產生(數量及質量)異常之附件變化。諸如結膜充血、附件分泌物、角膜渾濁及血管生成之一些變化屬於在淚液產生不足時發現的類型。接受6毫克/公斤/劑量之動物之眼部變化少於更高劑量組。
在恢復期間，大多數眼睛中仍存在眼部變化。25A3-LT-A相關結果通常係類似的或略有改良，但接受12毫克/公斤/劑量之一隻動物除外，其右眼之角膜血管生成之嚴重程度增加。在≥12毫克/公斤/劑量下，動物之眼瞼外觀存在不規則或異常(「波浪狀邊緣」或「摺疊狀」或「缺口狀」)。此等眼瞼結果可能繼發於慢性眼瞼炎症及/或刺激。
在肺部中，在≥6毫克/公斤/劑量下，雄性(極輕微至輕度)及雌性(極輕微至顯著)動物中存在間質性炎症，且在接受≥6毫克/公斤/劑量之雄性動物及接受≥12毫克/公斤/劑量之雌性動物中，肺泡巨噬細胞增加(極輕微至中度)。在炎症之感染區域中，肺泡膈膜由不同程度之單核細胞浸潤，其中嗜中性球及巨噬細胞之數量較少，且出現肺泡II型肺細胞增生及纖維化。在接受≥12毫克/公斤/劑量之雌性動物中亦發現肺泡鱗狀化生，且在各相應組之受到最嚴重感染的動物中觀測到。
在恢復期結束時，在≥12毫克/公斤/劑量下觀測到肺部之輕微至輕度間質性炎症及/或肺泡巨噬細胞之極少量增加。嚴重程度及/或發生率與最終屍檢時之嚴重程度及/或發生率相比有所降低，或與對照組相比具有類似的發生率。此外，不存在鱗狀化生之跡象，表明幾乎完全自肺部結果恢復。
在輸注部位，在接受≥6毫克/公斤/劑量之雄性動物及接受≥3毫克/公斤/劑量之雌性動物中，表皮層出現可逆、極輕微的糜爛/潰瘍。認為此結果與實驗程序(IV輸注)之程度加重相關。由於不存在任何相關之臨床觀測結果及/或嚴重程度較低，認為此等結果係無害的。
未觀測到PK之性別差異，亦不存在25A3-LT-A累積之證據。值得注意的是，在所有劑量組中，血清中之對25A3-LT-A之毒素之暴露通常係不可偵測或極低的。在此研究中偵測到針對25A3-LT-A之高ADA發生率；儘管如此，在整個研究期間，總抗體及完整ADC血清水平在所有劑量水平下均得到維持。對於3 mg/kg、6 mg/kg、12 mg/kg及15 mg/kg劑量組，在第64天最後一次給藥後的完整ADC AUC 0-21之累積比率分別為0.6、0.7、1.1及1.2。
考慮到在≥6毫克/公斤/劑量下之無治療期結束時眼部結果之總體持續性，確定最高非嚴重毒性劑量(HNSTD)為3毫克/公斤/劑量。此劑量在給藥階段期間在眼睛中引起極輕微的組織病理學結果，且在恢復期結束時不存在與25A3-LT-A相關之組織病理學或眼科結果。
在石蟹獼猴中之此GLP研究中，在生命期內觀測期間及在連續眼科評估期間，在眼睛及眼瞼中發現具有潛在臨床意義之結果(例如腫脹、分泌物、乾眼症、結膜充血、角膜渾濁及/或角膜血管生成)，其亦與眼睛及眼瞼中之組織病理學結果(例如結膜上皮之潰瘍/糜爛、增生及/或混合細胞發炎，以及繼發性色素沉著及/或萎縮)相關。其他組織病理學結果亦存在於肺部中(例如間質性炎症)。
在石蟹獼猴中之探索性毒理學研究中，與GLP毒理學研究(此實例3)相比，發現皮膚中之結果(乾燥或紅色皮膚)。
1期臨床研究之建議起始劑量為0.16 mg/kg IV q3w。與石蟹獼猴中之HNSTD相比較，預計此起始劑量之安全性臨界範圍基於HED為6，基於預測之人類最大血清濃度(C max)為19且基於預測之人類曲線下面積(AUC)為37。基於PK建模，在0.16 mg/kg之建議起始劑量下，25A3-LT-A暴露預測在C max時達到約50%之目標佔有率，且在給藥後2天達到＜10%之目標佔有率。基於小鼠腫瘤建模，所評估之25A3-LT-A有效暴露水平在3.6 µg/mL至10 µg/mL之範圍內。人類PK模擬表明，預期2.4 mg/kg q3w之人類劑量可達到用於腫瘤生長抑制之平均濃度(約7 µg/mL)。 實例 5 ： 大鼠中之單劑量毒性
單劑量GLP大鼠研究(人類非相關物種)評估了在以1、3及6 mg/kg之劑量以單劑量形式向大鼠投與時，25A3-LT-A之毒素之急性毒性及毒物動力學。向另一對照組投與媒劑。在投與劑量後3天將來自所有組之動物處死以分析25A3-LT-A之毒素之毒性。在14天之恢復期後，將來自對照組及6 mg/kg組之其他動物處死以評估恢復之可能性。
不存在死亡且不存在對尿液分析參數、眼科檢查或屍檢時之剖檢之毒素相關影響。
臨床觀測結果限於接受6 mg/kg之劑量的25A3-LT-A之毒素的五隻雌性大鼠中之兩隻且包括面部毛髮變紅、前腳結痂、前腳及後腳皮膚變紅、尾部變紅及/或右眼周圍有黑色/紅色物質。此等結果在14天恢復期結束時係可逆的。
臨床病理學變化包括在3及6 mg/kg下兩種性別中之網狀紅血球之顯著減少以及在6 mg/kg下嗜中性球及嗜酸性球之輕度至中度減少，此與微觀下發現的造血細胞結構減少相關。在6 mg/kg下發現淋巴球之輕度至中度減少，此與在微觀下在多個淋巴組織中觀測到的淋巴耗竭相關。在3及6 mg/kg下觀測到輕度炎症反應之證據，如由在3及6 mg/kg下之血纖維蛋白原之增加、在6 mg/kg下之球蛋白之增加及在6 mg/kg下兩種性別中之凝血酶原時間中之極輕微延長所指示。
組織病理學結果通常與根據25A3-LT-A之游離毒素之作用所預期之結果一致。此等作用之特徵在於骨髓、脾臟、胸腺、淋巴結及眶外淚腺中之可逆的微觀結果。
在骨髓中，在6 mg/kg下，在兩種性別中觀測到影響所有造血細胞株之造血細胞結構減少，且與兩種性別中之網狀紅血球、嗜中性球、淋巴球及嗜酸性球之減少相關。僅在6 mg/kg下，在雄性動物之脾臟中觀測到髓外造血減少。在胸腺中，在≥3 mg/kg下之兩種性別中且在6 mg/kg下之兩種性別之下頜淋巴結中且在6 mg/kg下之雄性及≥3 mg/kg下之雌性之腸系膜淋巴結中，觀測到以所有淋巴隔室中之淋巴球數量之相對減少為特徵之全身性淋巴耗竭。在≥3 mg/kg下之雄性之眶外淚腺中及在≥1 mg/kg下之雌性中，結果包括輕度至中度萎縮及輕微至輕度單細胞壞死。認為所有此等結果係可逆的，因為在恢復屍檢時在任何組織中均不存在微觀結果。 實例 6 ：基因毒性
25A3-LT-A之毒素在細菌回復突變分析法中呈陰性。與25A3-LT-A之毒素(一種經由阻斷微管蛋白聚合來抑制細胞分裂之抗有絲分裂劑)的作用機制一致，該毒素在活體外及活體內微核分析法中均呈陽性。 實例 7 ： 作為單一藥劑療法或在組合療法中之抗 TF ADC 在 患有不宜接受手術的局部晚期或轉移性實體腫瘤之個體中的安全性及藥代動力學之劑量遞增及擴展研究
此首次用於人類(FIH)之1期臨床研究評估了25A3-LT-A (與或不與納武單抗或貝伐單抗組合)在患有晚期實體腫瘤之個體中的安全性、耐受性、藥代動力學(PK)及初步抗腫瘤活性，對於該等個體而言，不存在可延長生命之療法或現有療法不耐受或不再有效。
已基於動物中之非臨床PK及毒性資料來計算用於此FIH 1期研究之25A3-LT-A的初始劑量及方案。根據國際協調會議(International Conference on Harmonization；ICH)S9指南，為了估測起始劑量，將應用於來自石蟹獼猴中之10週GLP重複劑量毒理學研究之3毫克/公斤/劑量之HNSTD的人類等效劑量(HED)之安全係數係6。此FIH 1期臨床研究之起始劑量為每3週(q3w)靜脈內(IV)投與0.16 mg/kg。劑量遞增階段評估至多3 mg/kg之劑量水平。由群組審查委員會(Cohort Review Committee)確定，在劑量水平≤1 mg/kg時，未達到最大耐受劑量(MTD)，且安全性及PK概況支持在＞1.0 mg/kg之劑量水平下評估25A3-LT-A。
在初始劑量遞增階段，使用間隔3+3 (i3+3)設計(Liu等人, 2020)測定以單一藥劑及與納武單抗或貝伐單抗之組合形式提供的25A3-LT-A之MTD。在劑量遞增階段中，在向4個劑量水平群組中之14名個體投與25A3-LT-A後：群組A1：n=3，0.16 mg/kg IV q3w；群組A2：n=3，0.5 mg/kg IV q3w；群組A3：n=6，1.0 mg/kg IV q3w；及群組A4：n=2，1.5 mg/kg IV q3w，未觀測到劑量限制性毒性(DLT)。所觀測之累積安全性資料表明，大多數(71%)所報告之不良事件(AE)的嚴重程度為低級(1-2級)。在超過1名個體中報告之AE僅為1級噁心，其在3名個體(群組A2中之1名個體及群組A3中之2名個體)中報告，以及1級腹痛，其在2名個體(群組A1及A3中各1名個體)中報告。未觀測到DLT。三名個體經歷3級AE。群組A1中有1名個體報告3級高血壓，該個體具有高血壓病史且認為與研究治療無關。在劑量限制性毒性(DLT)評估期後，群組A3 (1.0 mg/kg)中各有1名個體報告3級COVID-19肺炎及3級腹瀉且認為與研究治療無關。此等AE引起住院治療，且因此視為嚴重AE (SAE)。四名個體(29%)經歷了被視為與研究治療有關之AE：1級風寒(群組A2)、1級噁心(群組A3)、1級疲勞(群組A4)及1級乾眼症、1級結膜炎，以及2級偽膜(在群組A3中之同一個體中報告)。此外，兩名個體經歷了導致研究治療中斷之AE。群組A3中之一名個體因3級腹瀉(與研究治療無關)而中斷研究治療，且群組A3中之另一名個體因1級結膜炎及2級偽膜(均與研究治療有關)而中斷研究治療。一名個體(在群組A3中)具有致命結果，經研究者評估為由疾病進展引起，該結果發生在研究治療之最後一次給藥後＞60天。此外，6名個體積極接受使用25A3-LT-A之治療。
此臨床前資料顯示無出血異常且在劑量遞增階段無出血事件。整體上，此表明25A3-LT-A不會加重貝伐單抗之出血風險且為貝伐單抗之安全組合搭配物。此外，其表明貝伐單抗可與另一種微管抑制劑(諸如本文所揭示之25A3-LT-A)良好地組合。
在確定群組擴展階段之建議劑量(RD)後，在多個腫瘤特異性擴展群組中進一步評估25A3-LT-A之安全性及初步療效，該等腫瘤特異性擴展群組包括患有以下疾病之個體：非小細胞肺癌[NSCLC]、子宮內膜癌(EC)、EOC、子宮頸癌、頭頸部鱗狀細胞癌[SCCHN]、胰臟癌、食道鱗狀細胞癌(SCC)、轉移性去勢抵抗性前列腺癌(mCRPC)、三陰性乳癌(TNBC)及激素受體陽性乳癌(HR+BC)，以及與腫瘤類型無關(TA)之TF-陽性(TF+)群組。使用西蒙2階段設計( Simon's 2 Stage design)(Simon 1989)，但有以下例外：在所選擇之腫瘤類型中在無臨時無效性測試的情況下評估兩種劑量水平，以更全面地理解暴露-安全性及暴露-反應關係，且在TA TF+群組中在無臨時無效性測試的情況下評估RD。在多個腫瘤特異性群組及TA TF+群組中以單一療法形式且在NSCLC、SCCHN及食道SCC中以與納武單抗之組合療法形式以及在EOC中以與貝伐單抗之組合療法形式評估25A3-LT-A。監測個體中之潛在的與ADC相關之毒性，包括(但不限於)眼部、肺部、皮膚及神經事件，以及潛在的出血事件。 劑量遞增階段
在劑量遞增階段中，主要目標係確定MTD及/或RD，以用於進一步評估在患有晚期惡性腫瘤之個體中，當單獨及以組合療法形式投與時25A3-LT-A之靜脈內(IV)投藥。
劑量遞增階段之其他目標包括：確定25A3-LT-A在單獨及以組合療法形式投與時之初步安全性及耐受性概況；評估在單獨及以組合療法形式IV投與後，25A3-LT-A (與有效負載結合之抗體)、總抗體(未結合及結合之抗體)以及游離有效負載之PK；評估25A3-LT-A之免疫原性；以及評估單獨的及呈組合療法形式之25A3-LT-A的抗腫瘤活性，根據研究者所評估之RECIST 1.1藉由客觀反應率(ORR)、反應持續時間(DOR)及無進展生存期(PFS)來量測。
劑量遞增階段之探究性目標為評估PK與探究性生物標記物、初步療效及安全性結果之間的關係。 群組擴展階段
在群組擴展階段中，主要目標為經由根據由研究者評估之RECIST 1.1確定ORR來評估25A3-LT-A在單獨及以組合療法形式投與時之初步療效。
群組擴展階段之其他目標包括：評估25A3-LT-A在單獨及以組合療法形式投與時之安全性及耐受性；進一步評估在單獨及以組合療法形式IV投與後，25A3-LT-A (與有效負載結合之抗體)、總抗體(未結合及結合之抗體)以及游離有效負載之PK；評估25A3-LT-A之免疫原性；評估單獨的及呈組合療法形式之25A3-LT-A的抗腫瘤活性，根據研究者所評估之RECIST 1.1藉由DOR及PFS來量測；評估所選擇之群組中25A3-LT-A之抗腫瘤活性，根據盲態獨立放射學委員會(BIRC)所評估之RECIST 1.1藉由ORR、DOR及PFS量測；評估整體存活期；評估所選擇之腫瘤適應症之腫瘤標記物的相對於基線的變化。
群組擴展階段之探究性目標為評估25A3-LT-A對腫瘤及血液生物標記物之影響、評估納武單抗或貝伐單抗與25A3-LT-A之組合之暴露、評估納武單抗或貝伐單抗與25A3-LT-A之組合之免疫原性以及評估TF表現與療效結果之間的相關性。 研究設計 - 綜述
此為1期、開放標籤、多中心、劑量遞增及擴展研究，其評估每3週一次以單一療法及與納武單抗或貝伐單抗之組合形式向患有晚期實體腫瘤之個體IV投與之25A3-LT-A之安全性、耐受性、PK、藥力學及臨床抗腫瘤活性。
此研究由用於評估呈單一療法及與納武單抗或貝伐單抗之組合形式之25A3-LT-A的劑量遞增階段及群組擴展階段組成。首先，在劑量遞增階段評估25A3-LT-A單一療法之安全性及PK。在此階段中，使用i3+3設計(Liu等人, 2020)，在劑量遞增群組中用25A3-LT-A治療患有晚期實體腫瘤之個體。經由監測安全性及PK資料來調節25A3-LT-A之劑量遞增步驟。在組合療法群組擴展階段中評估納武單抗或貝伐單抗之25A3-LT-A組合療法之安全性及PK。群組審查委員會由兩個劑量遞增階段(單一療法及組合療法)確定25A3-LT-A之MTD及RD，以用於相應的後續群組擴展階段。在劑量遞增階段中鑑別25A3-LT-A之RD後，在群組擴展階段中進一步評估呈單一療法及與納武單抗或貝伐單抗之組合形式的25A3-LT-A之安全性及療效。在劑量遞增階段完成後開始進入群組擴展階段。由發起人決定各擴增群組之開放。在所選地點及/或國家開放TA TF+群組。研究設計之綜述在 圖 1A- 圖 1D所示之示意圖中提供且所計劃之研究入選條件之概述在下文表4A及表4B中顯示。
劑量遞增階段中之個體在篩檢期提供可用的存檔腫瘤組織(若無法獲得存檔組織，則在根據研究者判斷可安全地進行生檢時提供新鮮的腫瘤生檢物質)。群組擴展階段中之個體需要在篩檢期提供組織樣品(存檔或新鮮的生檢腫瘤組織)。兩個階段中之個體亦可視情況在治療期間提供來自新鮮生檢之腫瘤組織。 表 4A.  25A3-LT-A 單一藥劑評估之入選估計
單一藥劑劑量遞增階段
群組 a 腫瘤類型 25A3-LT-A劑量 i3+3設計n=
群組A1 實體腫瘤 0.16 mg/kg IV q3w b 3
群組A2 實體腫瘤 0.5 mg/kg IV q3w 3
群組A3 實體腫瘤 1.0 mg/kg IV q3w 3
群組A4 實體腫瘤 1.5 mg/kg IV q3w 3至12
群組A5 實體腫瘤 2.0 mg/kg IV q3w 3至12
群組A6 實體腫瘤 2.25 mg/kg IV q3w 3至12
群組A7 實體腫瘤 2.5 mg/kg IV q3w 3至12
群組A8 實體腫瘤 2.75 mg/kg IV q3w 3至12
群組A9 實體腫瘤 3.0 mg/kg IV q3w 3至12
總計 約 41 C
單一藥劑群組擴展階段：單組型群組
群組 腫瘤類型 25A3-LT-A劑量 西蒙2-階段n=
群組C EC RD (TBD) d 28 (18 + 10)
群組F SCCHN RD (TBD) d 28 (18 + 10)
群組G 胰臟癌 RD (TBD) d 28 (18 + 10)
群組H 食道SCC RD (TBD) d 28 (18 + 10)
群組I mCRPC RD (TBD) d 28 (18 + 10)
群組J TNBC RD (TBD) d 28 (18 + 10)
群組K HR+ BC RD (TBD) d 28 (18 + 10)
群組L e TA TF+ RD (TBD) d 40(1-階段)
單一藥劑群組擴展階段：隨機群組
群組 腫瘤類型 25A3-LT-A劑量 根據治療組之樣品大小n=
群組B NSCLC 組B1：RD (TBD) 組B2：RD-低(TBD) 約20 約20
群組D EOC 組D1：RD (TBD) 組D2：RD-低(TBD) 約20 約20
群組E 子宮頸癌 組E1：RD (TBD) 組E2：RD-低(TBD) 約20 約20
總共 約 397
EC，子宮內膜癌；EOC，上皮卵巢癌；HR+ BC，HR-陽性乳癌；IV，靜脈內；mCRPC，轉移性去勢抵抗性前列腺癌；NSCLC，非小細胞肺癌；q3w，每三週；RD，建議劑量；SCC，鱗狀細胞癌；SCCHN，頭頸部鱗狀細胞癌；TA，與腫瘤類型無關；TF+，組織因子-陽性；TBD，待確定；TNBC，三陰性乳癌。 a在劑量遞增階段中以單一25A3-LT-A劑量水平治療之所有個體被定義為群組(例如群組A1包括以25A3-LT-A起始劑量治療之所有個體)。 b25A3-LT-A之起始劑量水平。 c約41名個體參與九次標靶劑量水平遞增。若研究額外的中間劑量，則總樣品尺寸可擴展至各額外中間劑量至多6名個體(可以研究最多2個中間劑量)。若群組審查委員會確定應獲得任何正在評估之劑量水平之額外安全性資料，則亦可在此劑量水平下增加額外個體(至多6名額外個體，在該劑量水平下總共12名)。 d在25A3-LT-A之RD下。 e在所選地點及/或國家開放TA TF+群組。 表 4B. 組合療法評估之入選估計
組合療法劑量遞增階段
群組 a 腫瘤類型 研究治療 i3+3設計n=
25A3-LT-A 組合藥物
群組AN1 實體腫瘤 TBD mg/kg IV q3w b 納武單抗，360 mg IV q3w 3至12
群組AN2、……、約AN n 實體腫瘤 TBD mg/kg IV q3w 納武單抗，360 mg IV q3w 各3至12
              
群組AB1 實體腫瘤 TBD mg/kg IV q3w b 貝伐單抗，15 mg/kg IV q3w 3至12
群組AB2、……、約Ab n 實體腫瘤 TBD mg/kg IV q3w 貝伐單抗，15 mg/kg IV q3w 各3至12
總計 48 ( 各約 24) c
組合療法群組擴展階段
群組 腫瘤類型 研究治療 西蒙2-階段n=
25A3-LT-A 組合藥物
群組BN NSCLC TBD mg/kg IV q3w d 納武單抗，360 mg IV q3w 30 (15 + 15)
群組FN SCCHN TBD mg/kg IV q3w d 納武單抗，360 mg IV q3w 28 (18 + 10)
群組HN 食道SCC TBD mg/kg IV q3w d 納武單抗，360 mg IV q3w 28 (18 + 10)
              
群組DB EOC TBD mg/kg IV q3w d 貝伐單抗，15 mg/kg IV q3w 30 (15 + 15)
總計 約 116
EOC，上皮卵巢癌；IV，靜脈內；NSCLC，非小細胞肺癌；q3w，每三週；RD，建議劑量；SCC，鱗狀細胞癌；SCCHN，頭頸部鱗狀細胞癌；TBD，待確定。 a在劑量遞增階段中以單一25A3-LT-A劑量水平治療之所有個體被定義為群組(例如群組AN1包括以25A3-LT-A+納武單抗起始劑量治療之所有個體)。 b25A3-LT-A組合療法之起始劑量水平係由群組審查委員會基於25A3-LT-A單一藥劑劑量遞增階段之經驗認為安全的劑量。 c約24名個體參與各組合方案之三次標靶劑量水平遞增。若研究額外中間劑量，則總樣品尺寸可擴展至各額外中間劑量至多6名個體(可研究最多2個中間劑量)。若群組審查委員會確定應獲得任何正在評估之劑量水平之額外安全性資料，則亦可在此劑量水平下增加額外個體(至多6名額外個體，在該劑量水平下總共12名)。 d在25A3-LT-A之RD下。
所有個體以單一30分鐘IV輸注，q3w形式接受25A3-LT-A。個體持續接受治療直至符合中斷準則。在最後一次隨訪後，每12週對個體進行一次訪問以獲得關於後續抗癌療法及存活期之資訊。對於25A3-LT-A單一藥劑療法評估，在單一藥劑劑量遞增階段期間，使用i3+3設計以經估測之9種劑量水平用25A3-LT-A治療患有晚期實體腫瘤之個體。在劑量遞增階段結束時確定MTD。
在鑑別RD後，在單一藥劑群組擴展階段中，在多個腫瘤特異性擴展群組及TA TF+群組中評估作為單一藥劑療法之25A3-LT-A之安全性及療效( 圖 1B)。西蒙2-階段設計用於以下群組：EC、SCCHN、胰臟癌、食道SCC、mCRPC、TNBC及HR+ BC。TA TF+群組在無臨時無效性測試之情況下評估除腫瘤特異性擴展群組中所包括之腫瘤以外的腫瘤。在此群組中，用RD治療經由免疫組織化學(IHC)發現具有可偵測之TF表現量之個體。
在選定的單一藥劑腫瘤群組(NSCLC、EOC及子宮頸癌)中研究兩種劑量水平(RD及低於RD之劑量[RD-低])。RD-低劑量經群組審查委員會核准。將召募RD或RD-低群組之分配隨機化且在此等群組中省略無效性分析。若個體有資格參與超過一個研究群組，則將個體隨機分配。試驗委託者可隨時審慎判斷決定開放或關閉群組之招募。
對於25A3-LT-A組合療法評估，進行額外的獨立劑量遞增評估以確定25A3-LT-A之不同組合方案之MTD。在組合療法劑量遞增階段期間，在患有晚期實體腫瘤之個體中評估與納武單抗或貝伐單抗組合之25A3-LT-A。對於此評估，使用i3+3設計，且起始25A3-LT-A劑量水平係由群組審查委員會基於單一藥劑劑量遞增階段中之經驗認為安全的劑量水平。在鑑別組合方案之25A3-LT-A之RD後，在組合療法群組擴展階段中，使用最佳西蒙2-階段設計，在三個腫瘤特異性擴展群組(NSCLC、SCCHN及食道SCC)中進一步評估25A3-LT-A加納武單抗的安全性及療效，且在一個腫瘤特異性擴展群組中進一步評估25A3-LT-A加貝伐單抗(EOC)的安全性及療效。
對於其中向患有晚期實體腫瘤之個體以單一藥劑及與納武單抗或貝伐單抗之組合形式投與25A3-LT-A之劑量遞增階段，使用i3+3研究設計以鑑別25A3-LT-A之MTD。劑量遞增係由向患有晚期實體腫瘤之個體投與之遞增25A3-LT-A的劑量水平組成。劑量水平決策由群組審查委員會經審查所有可用的安全性資料後做出。組合療法之劑量遞增係在群組審查委員會認為安全及適合之時間及25A3-LT-A劑量下單獨開始，且可能在確定單一藥劑25A3-LT-A之MTD之前進行。在各劑量水平下密切監測安全性及藥代動力學資料。研究之起始25A3-LT-A單一藥劑劑量水平為每3週以輸注形式(IV q3w)提供之0.16 mg/kg。兩種劑量水平之間之劑量遞增取決於來自當前及先前劑量水平群組之新出現的藥代動力學及安全性資料。基於相對於石蟹獼猴HNSTD及此研究中所實施的穩定安全性評估而預測的C max及AUC之人類安全性臨界範圍，劑量遞增階段評估9種劑量水平(0.16、0.5、1.0、1.5、2.0、2.25、2.5、2.75及3.0 mg/kg)。基於來自≤1 mg/kg之劑量水平的安全性及PK概況來選擇高於1 mg/kg之劑量水平。此等劑量水平以比經改進之菲波那扯序列(Fibonacci series)更保守的方式定義，以便將個體暴露於毒性可能過高之劑量的風險降至最低。第一次給藥後之3週時段(21天)包含DLT評估期。組合療法中之25A3-LT-A之劑量遞增係與單一藥劑25A3-LT-A劑量遞增同時進行，且以由群組審查委員會認為安全的起始劑量水平開始。由單一藥劑劑量遞增階段中之相同計劃劑量水平知曉在組合治療劑量遞增階段中評估的25A3-LT-A之劑量水平。可在先前開放的劑量水平之間插入中間劑量水平群組，並根據群組審查委員會之要求基於新出現的安全性及PK資料進行評估。
i3+3 劑量遞增研究設計 使用i3+3設計(Liu等人, 2020)以鑑別呈單一藥劑及組合療法形式之25A3-LT-A之MTD。劑量遞增/遞減決策係基於DLT-評估期間發生之事件且使用下文所描述之i3+3演算法指導。若個體經歷了DLT或完成了DLT-評估期而未經歷DLT，則認為可對其進行評估以用於制定劑量遞增決策之目的；認為可對出於除安全性以外之原因而未完成DLT-評估期之個體進行評估。
在此研究中，呈單一藥劑及組合療法形式之25A3-LT-A之MTD的目標毒性機率設定為25%之目標毒性率(p T=0.25)且等效區間(EI)=[0.20,0.30]。EI為定義及定位MTD提供更大靈活性。認為毒性機率在0.20與0.30之間的劑量可被接受作為MTD。所選擇的p T及EI的值比在早期標準劑量遞增研究設計(例如3+3研究設計)中認為對於MTD而言可接受之毒性率要適當地更保守。
i3+3 設計演算法 . 治療及觀測具有3名個體之入選群組，且關於劑量水平遞增、遞減及後續群組之擴展的決策係基於針對EI進行之所觀測到的以既定劑量水平治療之所有可評估的個體之DLT率的比較(考慮在每次做出決策時可用資訊的量，但實際演算法更複雜)。當在指示為入選演算法中之下一步驟的劑量水平下觀測到12名可評估之個體或在方案之階段中治療及觀測最後五種計劃劑量水平(A5-A9)之標準劑量遞增群組中之30名可評估之個體時(以先實現者為準)，單一藥劑劑量遞增階段之累積結束。類似地，當在指示為入選演算法中之下一步驟的劑量水平下觀測到12名可評估之個體或在各組合方案之階段中治療及觀測三種標靶劑量水平遞增之標準劑量遞增群組(不包括回填群組)中之約24名可評估之個體時(以先實現者為準)，組合劑量遞增階段中之各方案之累積結束。
在操作上，此等決策被編入如 圖 2及表5中所顯示之規則表中。以此方式，在既定劑量水平下之入選及所觀測之個體的數量方面，i3+3設計比習知的3+3設計更靈活，且更容易定製目標毒性水平(經由EI之說明)。
表5：i3+3設計之劑量遞增入選說明
決策規則 標準作用 a 例外
「 E」」意謂「 遞增」 在下一更高劑量水平下入選3名個體。 1.         若下一更高劑量水平係先前宣稱之「 DU」，則遵循「 S」之說明。或者，群組審查委員會可以選擇開放一個高於先前登記之水平(若存在)的中間劑量水平。 2.         若已在下一更高水平下入選12名可評估之個體(且不保證中間劑量水平)或在單一藥劑評估中之最後五種計劃劑量水平(A5-A9)之標準劑量遞增群組中入選總共30名可評估之個體或在整個階段中在組合評估中之標準劑量遞增群組中入選24名可評估之個體，則停止入選個體。 劑量遞增完成。
「 S」」意謂「 保持」 在當前劑量水平下再入選3名個體。 若已在當前劑量水平下招收12名可評估之個體或在單一藥劑評估中之最後五種計劃劑量水平(A5-A9)之標準劑量遞增群組中入選總共30名可評估之個體或在整個階段中在組合評估中之標準劑量遞增群組中入選24名可評估之個體，則停止入選個體。 劑量遞增完成。
「 D」」意謂「 遞減」 在下一更低劑量水平下入選3名個體。 1.         若群組審查委員會判定下一更低劑量水平太低，則可能會開放一個低於先前入選之水平(若存在)的中間劑量水平。 2.         若已在下一更低水平下招收12名可評估之個體(且不保證中間劑量水平)或在單一藥劑評估中之最後五種計劃劑量水平(A5-A9)之標準劑量遞增群組中入選總共30名可評估之個體或在整個階段中在組合評估中之標準劑量遞增群組中入選24名可評估之個體，則停止入選個體。 劑量遞增完成。
「 DU」意謂「 遞減 / 不可接受」 在下一較低劑量水平下招收3名個體且自進一步評估移除當前劑量水平及任何更高劑量水平。 1.         若群組審查委員會判定下一更低劑量水平太低，則可能會開放一個低於先前入選之水平(若存在)的中間劑量水平。 2.         若已在下一更低水平下入選12名可評估之個體(且不保證中間劑量水平)或在單一藥劑評估中之最後五種計劃劑量水平(A5-A9)之標準劑量遞增群組中入選總共30名可評估之個體或在整個階段中在組合評估中之標準劑量遞增群組中入選24名可評估之個體，則停止入選個體。 劑量遞增完成。
a在安全性及PK資料審查後，即使決策規則將允許繼續在一劑量水平入選3名個體之群組，但群組審查委員會可停止或限制在該劑量水平下之入選。
決策規則充當群組審查委員會確定用於連續群組之入選之劑量水平的指南。根據i3+3設計之劑量遞增決策(亦即，「E」決策)必須基於來自在一劑量水平下至少3名可評估之個體之資料，但群組審查委員會可選擇停止或限制在一劑量水平下之入選，且若新出現的資料指示該劑量水平下存在安全性風險，則將劑量水平遞減(即使少於3名可評估之個體)。此外，若知曉使用可用的劑量水平不會產生可耐受的劑量水平，則可提前停止對治療方案之評估。
若群組審查委員會確定應獲得任何正在評估之劑量水平的額外安全性資料，則可在該劑量水平下增加額外個體(至多總共12名)。
若在單一藥劑評估中存在超過九次標靶劑量遞增水平遞增、在組合療法評估中存在超過三次標靶劑量水平遞增，則群組審查委員會可根據i3+3設計來調整入選個體之總數或在個別劑量水平下入選比預期更多的個體。
回填群組 . 在劑量遞增階段結束時做出最終決策之前，群組審查委員會可決定使用回填方法收集更多的在較低劑量下之資料。此方法允許同時在較低劑量群組中回填及在較高劑量群組中進行劑量遞增。i3+3演算法及決策機率毒性機率區間(PoD-TPI)設計(Zhou等人, Statistics in Biosciences. 2020年7月;12(2):124-45. 2020)之混合版本用於允許回填群組。該方法之益處係其允許在較低劑量下收集額外資訊，同時亦提供用於在劑量遞增期間處理此資訊之機制。將在回填群組中觀測到的DLT事件併入劑量水平決策中。在回填群組中，若在該較低劑量水平群組中發生足夠數量的DLT事件，則遞減或DU之決策(亦即，遞減且在研究中不再使用該劑量水平)可能會推翻較高劑量水平之結果。該方法之概述如下文所表徵。
「標準劑量遞增群組」表示用於劑量遞增之個體之群組，且「回填群組」表示用於進一步表徵較低劑量之安全性的群組。在一劑量具有總共12名或更多個體時，則認為該劑量係「完整」的。
假設群組由三名個體組成且劑量 當前用於治療標準劑量遞增群組中之個體。在劑量 下之群組入選完成後，只要劑量 未完整且劑量 已用於治療超過三名個體(例如劑量 已經歷保持決策)，則允許個體在比劑量 低一個水平的劑量 下回填。
在完全評估在劑量水平 下治療之個體的結果後，接著(a)若無未決結果，則應用i3+3決策以計算所有低於劑量 之劑量的決策；或(b)若回填群組在低於當前劑量 之任何劑量下有未決結果，則使用PoD-TPI (Zhou等人, 2020)設計以計算在此等劑量下之決策機率(PoD) γ',)。
基於回填演算法之任何決策由群組審查委員會基於新出現的安全性及PK資料進行評估。
中間劑量水平群組 . 可在先前開放的劑量水平之間插入中間劑量水平群組且應群組審查委員會之要求基於新出現的安全性及PK資料進行評估。
MTD 測定 . 一旦所有入選個體在DLT-評估期間完成其DLT之評估(或已被認為不可評估)且符合停止進一步入選標準劑量遞增群組之準則，則使用等滲回歸統計分析基於自所有劑量水平觀測到的DLT資料來選擇MTD (Liu等人, Journal of Biopharmaceutical Statistics. 30(2):294-304 (2020))。
特定言之，選擇毒性率最接近25%之目標毒性率(p T=0.25)且不超過EI上限(亦即，0.30)的最高測試劑量作為MTD。群組審查委員會認可呈單一藥劑及與納武單抗或貝伐單抗之組合形式的25A3-LT-A之MTD。
RD 測定 . 與MTD測定無關且在審查所有可用的安全性、PK初步臨床活性資料後，群組審查委員會選擇25A3-LT-A之一個建議劑量(RD)水平，在該水平下治療相應的擴展群組個體。對於各治療方案，根據群組審查委員會之判斷，25A3-LT-A RD為MTD或更低的劑量水平。
劑量遞增之幅度 . 僅在當前劑量水平下評估在i3+3設計下入選的至少三名個體且如上文所論述未滿足中斷招收之原因時，才會進行劑量遞增至下一更高劑量水平。劑量水平決策由群組審查委員會在審查所有可用的安全性資料後做出。在各劑量水平下密切監測安全性及藥代動力學資料。兩種劑量水平之間之劑量遞增取決於來自當前及先前劑量水平群組之新出現的藥代動力學及安全性資料。
方案再評估 . 若群組審查委員會無法選擇可接受的RD以進一步評估群組-擴展階段中之方案(例如出於安全性提前終止，已審查的毒性資料不足)，則可在新的劑量遞增階段中評估替代性治療方案。在此等情況下，來自第一劑量遞增評估之資料用於獲取劑量水平及/或治療方案選擇，但入選及遞增/遞減決策遵循i3+3設計而與先前評估無關。
個體內劑量遞增 . 經發起人核准，在確立MTD前，若個體已接受指定劑量下之6個25A3-LT-A研究治療之劑量，且根據研究者與醫學監測者討論之評估結果未經歷不可接受的副作用(例如眼部毒性)或＞2級之治療引發毒性，則群組審查委員會可允許個體之個體內劑量遞增至安全的25A3-LT-A單一藥劑或組合療法劑量水平(亦即，已在至少3名個體中完成且不未報告DLT之DLT評估)。
被允許增加劑量之個體不涉及在該更高劑量下之DLT評估。
治療延伸期 . 在完成21天DLT-評估期後，個體有機會在長達24個月之治療延伸期內繼續接受研究治療，包括組合療法藥劑(若適用)，限制條件為其未患有放射性進行性疾病(PD)或不可接受的毒性。由研究者測定及由發起人同意，若個體正獲取明顯的臨床益處，則個體可繼續接受25A3-LT-A超過24個月。
劑量限制毒性 . 劑量限制毒性(DLT)由群組審查委員會在審查所有可用的資料後確定。
對於經歷DLT之個體，延緩使用25A3-LT-A直至毒性消退。經發起人同意，允許在21天內恢復之個體以比產生DLT之劑量低一個劑量水平之最大劑量繼續使用25A3-LT-A。若可耐受減少之劑量而不存在DLT或其他不可接受的毒性，則個體有資格以減少之劑量進入治療延伸期。
劑量遞增階段研究訪問 . 劑量遞增階段中之個體在如下研究期間訪問診所以進行研究評估：治療前時期(篩檢)、DLT-評估期(第1-21天)、治療延伸期(第22+天)及治療後時期。
在治療前時期(篩檢)期間，個體簽署同意書且接受篩檢及基線評估以符合研究的條件。在DLT-評估期(第1-21天)期間，DLT由群組審查委員會在審查所有可用的資料後確定且如上文所定義。在治療延伸期(第22+天)期間，個體接受使用呈單一藥劑或組合療法形式之25A3-LT-A之治療，且在研究安全性訪問(SSV)時監測安全性(包括實驗室評估)及毒性跡象。經發起人同意，個體可繼續接受研究治療長達24個月直至出現如研究者所評估之放射性PD或滿足任何其他治療中斷準則。由研究者確定及由發起人同意，若個體正獲取明顯的臨床益處，則個體可繼續接受25A3-LT-A超過24個月。關於治療後隨訪(FU)，在決定中斷研究治療之日後的30 (+14)天及60 (+14)天進行兩次治療後安全性隨訪。被投與納武單抗之個體在決定中斷研究治療之日後的100 (+14)天進行第三次治療後安全性隨訪。若導致研究治療中斷之相關AE或相關SAE在最後一次隨訪時仍存在，則應進行隨訪直至認為已消退或不可逆。對於延長之隨訪(最後一次FU後每12週[±14天]一次)，在最後一次治療後隨訪後，繼續追蹤各個體之存活期及是否接受非計劃抗癌療法(NPACT)。研究者(或指定人員)在治療後隨訪後每12週與個體聯繫一次直至個體期滿、撤回對此類聯繫之同意書，或發起人決定停止收集此等研究資料。根據計劃定義之方案進行放射性腫瘤成像直至根據RECIST 1.1出現疾病進展、開始後續抗癌療法或死亡。
群組擴展階段 . 在劑量遞增階段中測定呈單一藥劑或組合療法形式之25A3-LT-A的RD後，開始相應的群組擴展階段。群組擴展階段進一步研究呈單一藥劑及組合療法形式的25A3 LT-A在多個腫瘤特異性擴展群組及TA TF+群組中之安全性、耐受性及初步療效。患有晚期NSCLC、EC、EOC、子宮頸癌、SCCHN、胰臟癌、食道SCC、mCRPC、TNBC或HR+ BC或TA TF+之個體入選單一藥劑群組-擴展階段且在25A3-LT-A單一療法之RD下接受治療。患有NSCLC、SCCHN或食道SCC之個體入選組合療法群組擴展階段且在25A3-LT-A加納武單抗組合療法之RD下接受治療。患有EOC之個體可入選組合療法群組擴展階段且在25A3-LT-A加貝伐單抗之RD下接受治療。根據西蒙2-階段設計納入以下群組：EC、SCCHN、胰臟癌、食道SCC、mCRPC、TNBC及HR+ BC。在此設計中，最低數量之個體必須在第一階段經歷放射性反應才能開放第二階段以進行納入。TA TF+群組在無臨時無效性測試之情況下評估除腫瘤特異性擴展群組中所包括之腫瘤以外的腫瘤。在所選之單一藥劑腫瘤群組(NSCLC、EOC及子宮頸癌)中在無臨時無效性分析之情況下研究兩種劑量水平(RD及低於RD之劑量[RD-低])。在發起人之資格審查過程後，個體入選適合之開放群組。
此外，在所選之單一藥劑腫瘤群組(NSCLC、EOC及子宮頸癌)中研究兩種劑量水平(RD及低於RD之劑量[RD-低])。額外的RD-低劑量由群組審查委員會核准。將RD或RD-低群組之入選隨機化且在此等群組中省略無效性分析。
若個體有資格參與超過一個研究群組，則將個體隨機化分配。可在任何時間根據發起人之判斷而關閉群組之入選。
群組擴展階段研究訪問 . 擴展群組中之各個體之治療過程由以下時期組成：治療前時期(篩檢)、治療期(第1+天)及治療後時期。
在治療前時期(篩檢)期間，個體簽署同意書且接受篩檢及基線評估以符合研究的條件。
在治療期(第1+天)期間，個體接受使用呈單一藥劑或組合療法形式之25A3-LT-A之治療，且在研究安全性訪問(SSV)時監測安全性(包括實驗室評估)及毒性跡象。經發起人同意，個體可繼續接受研究治療長達24個月直至出現研究者所評估之放射性PD或滿足任何其他治療中斷準則。由研究者確定及由發起人同意，若個體正獲取明顯的臨床益處，則個體可繼續接受25A3-LT-A超過24個月。
在治療後隨訪(FU)期間，在決定中斷研究治療之日後的30 (+14)天及60 (+14)天進行兩次治療後安全性隨訪。被投與納武單抗之個體在決定中斷研究治療之日後的100 (+14)天進行第三次治療後安全性隨訪。若導致研究治療中斷之相關AE或相關SAE在最後一次隨訪時仍存在，則應進行隨訪直至認為已消退或不可逆。
對於延長之隨訪(最後一次FU後每12週[±14天]一次)，在最後一次治療後隨訪後，繼續追蹤各個體之存活期及是否接受NPACT。研究者(或指定人員)在治療後隨訪後每12週與個體聯繫一次直至個體期滿、撤回對此類聯繫之同意書，或發起人決定停止收集此等研究資料。根據計劃定義之方案進行放射性腫瘤成像直至根據RECIST 1.1出現疾病進展、開始後續抗癌治療或死亡。
治療中斷準則 . 個體接受研究治療直至治療中斷。個體可在任何時候中斷研究治療及評估或撤回其參與研究之同意書而無任何偏見。對於中斷研究治療之個體，除非亦撤回非干預性研究評估之同意書，否則盡一切努力進行計劃規定之隨訪程序，包括治療結束評估、存活期隨訪及後續抗癌治療之記錄。
腫瘤生檢 . 劑量遞增及群組擴展階段中之個體提供可用的存檔腫瘤組織。若無法獲得存檔腫瘤組織，且若根據研究者的醫學判斷可安全地進行，則可在個體同意的情況下在第一次給藥前採集新鮮的腫瘤生檢。群組擴展階段中之個體需要在篩檢期間提供組織樣品(存檔或新鮮的生檢腫瘤組織)。用於研究目的之生檢位置應獲得足夠的組織學物質，同時對個體之程序風險最低。
新鮮的腫瘤生檢應遵循標準臨床實踐且必須謹慎地評估程序風險。此等程序風險包括(但不限於)可能指示較高出血風險之因素(亦即，低血小板計數、抗凝療法)。為了根據RECIST 1.1測定反應，不需要對此等個體中之目標病灶進行生檢。在篩檢期間，應在25A3-LT-A治療之第一次給藥前至少7天進行新鮮的腫瘤生檢。對於劑量遞增及群組擴展階段，可視情況在第15天進行治療中生檢。對於治療中生檢，任何與程序相關之AE必須在下一次25A3-LT-A投藥前已消退。在腫瘤生檢後密切追蹤個體以觀察傷口是否充分癒合。
研究委員會 . 發起人聘請群組審查委員會、研究監察委員會(SOC)、公司安全性監管及盲態獨立放射學委員會(BIRC)來審查此研究之安全性、PK及療效資料。
試驗之結束 . 試驗之結束定義為兩個日期中之較晚的一個：剩餘的最後一名個體之最後一次研究訪問或程序之日期，或獲得最後一名個體之隨訪所需的最後一個資料點之日期。
個體數量 . 表4A及表4B中顯示了此1期研究中所納入的個體之估計數量，該研究在患有晚期實體腫瘤之個體中評估呈單一藥劑療法及組合療法形式的25A3-LT-A。
在劑量遞增階段在美國約10個地點及在群組擴展階段在全球約80個地點招募個體以進行研究。
目標群體 . 此研究中之個體必須已接受標準的生命延長治療，或沒有資格接受此類治療。
為了有資格參與研究，個體滿足所有納入準則且不滿足任何排除準則。發起人不認可此等資格準則之例外情況。
注意：為了測定先前治療線之數量，新輔助、輔助、腹膜內及維持療法不計入先前治療之最大允許數量，且再次暴露於相同藥劑不視為額外療法線。 納入準則
納入準則包括細胞學或組織學及放射學所證實的不宜進行手術、局部晚期、轉移性或復發性實體腫瘤之存在。對於劑量遞增階段群組A、AB及AN (實體腫瘤)，納入準則為個體已接受標準生命延長治療(除非此等治療不存在)，或現有療法不耐受或不再有效。對於群組擴展階段(群組B-K、BN、DB、FN及HN)，納入準則為個體已接受標準生命延長治療(除非此等治療不存在)，或現有療法不耐受或不再有效。
關於群組B (非小細胞肺癌)，包括患有IV期NSCLC (非鱗狀細胞或鱗狀細胞組織學)之個體，其在其最後一次全身性抗癌療法期間或之後已記錄有放射性疾病進展。不具有可操作之基因改變的個體必須已接受同時或依序投與之用於轉移性疾病之含鉑化學療法及ICI療法。不符合接受ICI療法資格之個體若已接受含鉑雙藥化學療法，則符合資格。具有可操作之基因改變的個體(例如EGFR敏感突變、ALK重排、ROS1重排、BRAF V600E突變、MET外顯子14跳躍突變、RET重排)必須已接受至少一種針對該特異性基因改變之分子靶向療法，除非此類治療不可用或個體不符合接受此類療法之條件。個體必須未接受超過3線之針對局部晚期或轉移性疾病之先前全身性抗癌療法(例如化學療法、免疫療法、以單一藥劑或組合形式提供的分子靶向療法)。
關於群組C (子宮內膜癌)，包括患有組織學證實、晚期、復發性或轉移性子宮內膜癌之個體，其在其最後一次全身性抗癌療法期間或之後已記錄有放射性疾病進展。個體必須已在輔助、局部晚期或轉移性疾病情況下接受含鉑化學療法。個體必須未接受超過3線之針對局部晚期或轉移性疾病之先前全身性抗癌療法(例如化學療法、包括ICI之免疫療法、以單一藥劑或組合形式提供的分子靶向療法)。
關於群組D及DB (上皮卵巢癌)，包括患有高嚴重等級之EOC之個體，包括原發性腹膜癌(PPC)及輸卵管癌(FTC)，該等個體在接受含鉑化學治療後患有抗鉑性疾病。抗鉑性疾病定義為在接受最後一次基於鉑之化學療法之給藥後＜6個月內出現疾病進展。由於AE而中斷含鉑化學療法之個體不能被定義為抗鉑性，且因此不符合研究條件。注意：卵巢交界性上皮腫瘤(低惡性可能)、黏液性及子宮內膜樣腫瘤不符合條件。若當地視為護理標準且符合條件，則個體必須先前已接受貝伐單抗治療。不包括鉑難治性疾病(在第一線治療時或在完成後4週內出現進展)。個體必須未接受超過3線之針對局部晚期或轉移性疾病之先前全身性抗癌療法(例如化學療法、免疫療法、以單一藥劑或組合形式提供的分子靶向療法)。注意：激素療法不計入先前療法之最大允許數量。
關於群組E (子宮頸癌)，包括患有持久、復發性或轉移性子宮頸癌(鱗狀細胞或腺癌組織學)之個體，其在其最後一次全身性抗癌療法期間或之後已記錄有放射性疾病進展。個體必須已接受針對復發性或轉移性疾病之含鉑化學療法。個體未接受超過2線之針對局部晚期或轉移性疾病之先前全身性抗癌療法(例如化學療法、免疫療法、以單一藥劑或組合形式提供的分子靶向療法)。化學放射療法不計入先前治療之最大允許數量。
關於群組F及FN (SCCHN)，包括患有頭頸癌(鱗狀細胞組織學)之個體，其在其最後一次全身性抗癌療法期間或之後已記錄有放射性疾病進展。允許的原發腫瘤位置為口腔、口咽、下咽、聲門喉。不包括患有鼻咽部位之原發腫瘤的個體。個體必須已接受針對不宜進行手術的局部晚期、復發性或轉移性疾病之先前含鉑化學療法(包括化學放射)。若當地視為護理標準且符合條件，則個體必須亦已接受ICI療法及/或EGFR抑制劑療法。包括未接受超過3線之針對局部晚期或轉移性疾病之先前全身性抗癌療法(例如化學療法、免疫療法、以單一藥劑或組合形式提供的分子靶向療法)之個體。
關於群組G (胰臟癌)，包括患有胰臟癌(腺癌組織學)之個體，其在其最後一次全身性抗癌療法期間或之後已記錄有放射性疾病進展。個體必須已接受使用吉西他濱與白蛋白結合型紫杉醇(白蛋白結合型-紫杉醇)或FOLFIRINOX之組合的先前治療，或已記錄有不符合標準療法之條件。包括先前已接受至少1且不超過2線之針對不宜進行手術的局部晚期、復發性或轉移性疾病之全身性抗癌療法的個體。
關於群組H及HN (食道SCC)，包括患有食道癌(鱗狀細胞組織學)之個體，其在其最後一次全身性抗癌療法期間或之後已記錄有放射性疾病進展。不包括患有食道腺癌及胃食道接合部(GEJ)腺癌之個體。若當地視為護理標準且符合條件，則個體必須已接受用於不宜進行手術的局部晚期、復發性或轉移性疾病之同時或依序投與的使用化學療法之先前治療，諸如氟尿嘧啶/卡培他濱(capecitabine)/紫杉烷(taxane)與鉑及ICI療法之組合。包括未接受超過2線之針對不宜進行手術的局部晚期、復發性或轉移性疾病之先前全身性抗癌療法(例如化學療法、免疫療法、以單一藥劑或組合形式提供的分子靶向療法)之個體。
關於群組I (mCRPC)，包括患有轉移性去勢抵抗性前列腺癌之個體。若腺癌為主要組織學，則允許神經內分泌分化及其他組織特徵。個體必須具有由以下任一項證明之前列腺癌進展：(i) PSA進展：前列腺特異性抗原(PSA)進展，由在3或4次連續評估中發現之PSA值上升至少2定義，其中各評估之間的間隔為至少7天。若僅由PSA進展符合條件，則篩檢PSA值必須係至少2 ng/mL (2 µg/L)，且最早的合格值必須係基於在簽署知情同意書(ICF)之前不超過一年抽取的血液樣品，且未改變治療前列腺癌之全身性方案；允許PSA降低至多一次，只要其並非最新值即可。若研究實驗室為抽取個體之先前PSA血液樣品之當地實驗室，則當地實驗室篩檢PSA必須為最高的。(ii)軟組織疾病中之放射性進展。若僅患有骨骼疾病之個體可經由鍀骨掃描之新的病灶或CT掃描之新的/進行性溶骨病灶的成像進行評估，則該等個體符合條件。個體必須已接受至少一種針對局部晚期或轉移性去勢敏感性前列腺癌(mCSPC)或mCRPC之先前新型激素療法(NHT；例如恩雜魯胺(enzalutamide)、阿帕魯胺(apalutamide)、達魯胺(darolutamide)、阿比特龍(abiraterone)或等效物)。個體可能已接受一種針對mCRPC或mCSPC之基於紫杉烷之先前化學療法(例如多西他賽、卡巴他賽(cabazitaxel))。個體應未接受超過3種針對mCSPC及/或mCRPC之先前全身性治療。
關於群組J (TNBC)，包括患有三陰性(雌激素受體陰性[ER-]/黃體酮受體陰性[PR-]及人類表皮生長因子受體2陰性或低[HER-2-])乳癌之個體，其在其最後一次針對不宜進行手術的局部晚期或轉移性疾病之全身性抗癌療法期間或之後記錄有放射性疾病進展。關於三陰性乳癌、雌激素受體及黃體酮受體陰性定義為經由IHC分析發現＜1%之細胞表現激素受體。HER-2陰性由當地實驗室評估定義為以下中之任一者：原位雜交(ISH)非擴增(HER-2與CEP17之比率＜2.0或單一探針平均HER-2基因複本數＜4個信號/細胞)，或IHC 0或IHC 1+. HER-2低，定義為1+或2+之IHC評分且ISH測試為陰性。若可獲得超過一種測試結果且其並非均符合納入準則定義，則應與發起人討論以確定個體是否符合條件。個體必須已接受至少一線之先前全身性化學療法(基於蒽環黴素、烷基化劑或紫杉烷之化學療法)，但不超過三線之針對局部晚期或轉移性疾病之先前全身性抗癌療法(例如細胞毒素治療、靶向療法，包括ADC、免疫療法)。
關於群組K (HR+BC)，包括患有乳癌之個體，該乳癌為激素受體陽性(ER+及/或PR+)及HER-2陰性或低，該等個體在其最後一次針對不宜進行手術的局部晚期或轉移性疾病之全身性抗癌療法期間或之後記錄有放射性疾病進展。關於激素受體陽性及HER-2陰性乳癌(HR+ BC)，雌激素受體及黃體酮受體陽性定義為經由IHC分析發現≥1%之細胞表現激素受體。HER-2陰性由當地實驗室評估定義為以下中之任一者：原位雜交(ISH)非擴增(HER-2與CEP17之比率＜2.0或單一探針平均HER-2基因複本數＜4個信號/細胞)，或IHC 0或IHC 1+. HER-2低，定義為1+或2+之IHC評分且ISH測試為陰性。若可獲得超過一種測試結果且其並非均符合納入準則定義，則應與發起人討論以確定個體是否符合條件。個體必須已處於由於手術/自然停經或由促性腺激素釋放激素(GnRH)促效劑(例如戈舍瑞林(goserelin))造成之卵巢抑制而引起的停經後狀態。個體必須已依序或同時接受針對不宜進行手術的局部晚期或轉移性乳癌之至少一種先前內分泌抗癌療法及一種先前CDK4/6抑制劑療法。個體必須已接受至少一線之先前全身性化學療法(基於蒽環黴素、烷基化劑或紫杉烷之化學療法)，但不超過三線之針對局部晚期或轉移性疾病之先前全身性抗癌療法(例如細胞毒素療法、靶向療法，包括ADC、免疫療法)。先前內分泌抗癌療法之線數不受限制。實例包括氟維司群(fulvestrant)(選擇性雌激素受體降解劑[SERD]、他莫昔芬(tamoxifen)(選擇性雌激素受體調節劑[SERM])、依西美坦(exemestane)(類固醇芳香酶抑制劑[SAI])及來曲唑(letrozole)(非類固醇芳香酶抑制劑[NSAI])。
關於群組L (與腫瘤類型無關之TF陽性癌症)，包括患有除群組B-K中指定的實體腫瘤以外之實體腫瘤且其他經核准之療法不可用或不適用的個體。基於地點可行性評估，在所選之地點及國家招募此群組。使用過去兩年內獲得的可用存檔組織學物質，IHC應指示個體之腫瘤為TF陽性。不應進行用於資格評估之新鮮生檢。腫瘤TF陽性之評估應在當地使用由發起人指定的根據製造商計劃使用之市售單株抗體或遵循單獨手冊中提供的指南進行。亦必須獲得足夠數量之相同存檔物質以提交給發起人。其他資格準則適用於其他群組，但研究者必須首先經由醫學監測者或其指定人員與發起人協商以討論適合入選之條件。
與腫瘤類型無關之組織因子陽性癌症之擴展群組的基本原則 . 可提出用於選擇接受治療之患者之替代途徑，且可藉由生物學特徵來定義療法反應。若存在該特徵之可量測參數，則可採用該參數來最佳化接受該治療之患者之選擇，此為精準醫學之實例。對於25A3-LT-A，抗體目標TF之表現為似乎合理的生物標記物。針對群組擴展所選之腫瘤類型中的TF表現之分析提供收集表現-反應關係之證據的機會，尋找療效之生物標記物富集。互補地，為了評估TF表現是否可預測療效，對於群組L，患有除群組B-K中指定的腫瘤類型以外之任何腫瘤類型的個體，若其腫瘤為TF+，則其被認為符合資格。
可在群組L中研究各種臨床情況，包括：TF+及可預見地對25A3-LT-A有效負載敏感但由於其他原因而未入選獨立群組之腫瘤，諸如較低的未滿足需求(例如尿道上皮)或罕見性(例如骨肉瘤)；通常為TF+之腫瘤，其中對有效負載之敏感性可能會限制療效(例如大腸直腸癌)；或罕見地為TF+之腫瘤，但若觀點認為TF陽性係25A3-LT-A療效之驅動因素，則具有TF+腫瘤表現之患者可能會自25A3-LT-A中得到臨床益處。
群組L為探索性的，進行信號發現練習以測定是否需要進行更大型的研究，且評估可能需要多少水平之TF表現才能入選後續研究。出於此原因，由當地測定之TF表現滿足TF陽性之準則，且發起人隨後對相同物質之TF表現進行分析，允許進一步檢查表現-反應關係以及兩種不同評估之間的變化程度。此告知關於需要伴隨診斷分析法之相關問題。除組織學上之TF表現準則以外，此群組之入選準則與研究中之其他擴展群組一致。在所選地點及/或國家開放TA TF+群組。
根據如研究者所測定之RECIST 1.1，群組擴展階段中之個體患有可量測之疾病。以下個體無需在篩檢時患有可量測之疾病：劑量遞增階段中之個體、患有前列腺癌(群組I)但無軟組織疾病之個體，或患有原發性腦腫瘤之個體，諸如神經膠質母細胞瘤(無需對此等個體進行RECIST評估)。群組擴展階段中之個體必須在簽署同意書之前不超過2年已採集可用的存檔腫瘤組織。若存檔腫瘤組織不可用，則自劑量遞增階段中入選的個體採集新鮮的腫瘤生檢，且必須在第一次給藥前至少7天(且最多60天)自群組擴展階段中之個體採集。實驗室手冊中提供腫瘤組織樣品之特定要求。除非AE在臨床上不顯著(例如禿髮)或穩定(例如1級周邊神經病變)，否則群組擴展階段中之個體必須自AE恢復至基線或≤1級嚴重程度(不良事件常用術語準則第5版[CTCAE v5])。群組擴展階段中之個體在簽署同意書之日必須年滿18歲或更大。群組擴展階段中之個體必須具有0-1之東部腫瘤協作組(Eastern Cooperative Oncology Group；ECOG)體能狀態。基於在研究治療之第一次給藥前10天內滿足以下所有實驗室準則，群組擴展階段中之個體必須具有足夠的器官及骨髓功能：絕對嗜中性球計數(ANC)≥1500/mm 3(≥1.5 GI/L)，在篩選實驗室樣品採集前2週內無顆粒球群落刺激因子(G-CSF)支持；血小板≥100,000/mm 3(≥100 GI/L)，在篩檢實驗室樣品採集前2週內未輸血；血紅蛋白≥9 g/dL (≥90 g/L)，在篩檢實驗室採集樣品前2週內未輸血；凝血酶原時間(PT)或經活化之部分凝血酶時間(aPTT)≤1.2×正常上限(ULN)或國際標準化比率(INR)≤1.3，未接受抗凝療法(若使用穩定的口服基於香豆素之抗凝血劑，則INR≤3)；丙胺酸胺基轉移酶(ALT)及天冬胺酸胺基轉移酶(AST)≤3×ULN；總膽紅素≤1.5×ULN (對於已知患有吉爾伯氏病(Gilbert's disease)之個體，總膽紅素≤3×ULN)；及血清肌酐≤1.5×ULN或使用科克羅夫特-高爾特方程(Cockcroft-Gault equation)所計算之肌酐清除率≥45 mL/min (≥0.75 mL/sec)。群組擴展階段中之個體必須能夠理解且遵守計劃要求且必須已簽署知情同意書。
性活躍可育個體及其伴侶必須同意在研究過程中及治療之最後一次給藥後之以下持續時間內(以較晚者為準)採用高效避孕方法：對於有生育潛力之女性(WOCBP)，25A3-LT-A之最後一次給藥之後7個月，且對於男性，25A3-LT-A之最後一次給藥之後4個月；對於WOCBP，納武單抗之最後一次給藥之後5個月；或對於WOCBP，貝伐單抗之最後一次給藥之後6個月。具有生育潛力之女性伴侶之男性個體必須同意使用保險套直至治療之最後一次給藥後或25A3-LTA之最後一次給藥之後4個月。
具有生育潛力之女性個體必須在篩檢時未懷孕。除非滿足以下準則中之一者，否則女性個體被認為具有生育潛力：永久性絕育(子宮切除術、雙側輸卵管切除術或雙側卵巢切除術)，或有記錄的停經後狀態(定義為在不存在其他生物或生理原因的情況下45歲以上女性閉經12個月)。此外，55歲以下女性必須具有＞40 mIU/mL之血清促卵泡激素(FSH)水平才能證實停經)。記錄可包括研究地點工作人員進行之醫療記錄審查、醫學檢查或病史訪談。 排除準則
接受任何組織因子靶向抗體藥結合物或基於奧瑞他汀衍生物之抗體藥物結合物。
在研究治療之第一次給藥前21天內(對於亞硝基脲或絲裂黴素，在42天內)接受任何化學療法或抗癌抗體(例如抗VEGF mAb、抗體藥物結合物或PD-1/PD-L1 mAb)。
在研究治療之第一次給藥前2週內接受任何類型的小分子激酶抑制劑(包括研究性激酶抑制劑)。
在研究治療之第一次給藥前，在2週內或藥劑之5個半衰期(以較短者為準)內接受任何抗癌激素療法。注意：允許同時使用促黃體激素釋放激素(LHRH)促效劑(例如亮丙立德(leuprolide)、戈舍瑞林)或拮抗劑(例如瑞盧戈利(relugolix))。
在研究治療之第一次給藥前2週內接受放射療法。因先前放射療法而具有臨床上相關持續併發症(例如輻射引起之食道炎或肺炎)之個體不符合資格。
已知的腦轉移或顱腦硬膜外疾病，除非經放射療法及/或手術(包括放射外科手術)充分治療且在研究治療之第一次給藥前穩定至少4週。注意：符合資格的個體必須在研究治療之第一次給藥時無神經學症狀且未接受皮質類固醇治療。
個體患有不受控制、顯著的間發或近期疾病，包括(但不限於)以下病症：
急性眼部感染、結膜或角膜之急性或慢性潰瘍性/瘢痕性病症，包括(但不限於)由自體免疫疾病引起之眼部病症(例如黏膜類天疱瘡、休格倫氏症候群(Sjogren's syndrome))、顯著的結膜/角膜疤痕(例如放射角膜病變)、嚴重乾眼病(席爾莫測試(Schirmer's test)讀取值≤5 mm)、角膜移植病史、單眼。
周邊神經病變(感覺及/或運動) CTCAE≥2級。
在第一次給藥前2個月內出現出血病症或有臨床意義之出血事件史(例如需要進行侵入性手術或輸血)。
紐約心臟協會(New York Heart Association) 3類或4類充血性心臟衰竭、不穩定型心絞痛、嚴重心律不整(例如心室撲動、心室性震顫、扭轉型心動過速)。
在第一次給藥前6個月內中風(包括短暫性缺血性發作[TIA])、心肌梗塞或其他局部缺血。
在第一次給藥前3個月內發生血管栓塞事件(例如DVT或PE)。個體必須已接受抗凝療法且在第一次給藥時無症狀。
一或多個直徑＞1 cm之空泡肺部病灶。
具有公認的血管受累出血風險之腫瘤(例如侵入主要肺部血管或頸動脈之病灶)。
與藥物相關之間質性肺病(ILD)/肺炎之病史。
侵襲GI道之腫瘤(除原發性大腸直腸癌或食道癌以外)、活動性消化性潰瘍病或炎症性腸病、憩室炎、膽囊炎、症狀性膽管炎或闌尾炎、急性胰臟炎或胰臟/膽管或GI道之急性阻塞。
中度至重度肝臟損傷(蔡爾德-皮尤分級(Child-Pugh) B或C)。
需要全身性抗微生物療法，包括HIV抗反轉錄病毒治療之活動性感染(細菌、病毒或真菌)。允許防治性使用抗生素。
COVID-19病史，除非個體已在臨床上自感染中康復：若COVID-19 PCR呈陰性，則至少在第一次給藥前10天或更早。
需要進行血液透析或腹膜透析。腎病症候群，蛋白尿且在24小時內之尿液中含有＞2 g蛋白。
實體器官、自體或同種異體幹細胞移植之病史。
與先前免疫療法相關之危及生命之毒性病史(例如抗CTLA 4或抗PD-1/PD-L1治療或特異性靶向T細胞共刺激或免疫檢查點路徑之任何其他抗體或藥物)，除不太可能復發且經由標準護理治療進行管理之疾病(例如甲狀腺功能低下)以外。
腸阻塞、出血或瘺管病史。
醫學上不受控制的高血壓(血壓，收縮壓≥160 mmHg及/或舒張壓≥100 mmHg)，或需要超過三種抗高血壓藥物或與高血壓相關之併發症(例如心臟衰竭)。
在研究治療之第一次給藥前4週內進行大型手術(例如GI手術、腦轉移瘤移除或生檢)。在第一次給藥前7天內進行小型手術(例如簡單切除、拔牙、生檢、孔置放)。手術造成的創傷必須完全癒合，且任何與手術相關之AE必須在第一次給藥前已消退。具有由先前手術引起之臨床上相關持續併發症之個體不符合資格。
在研究治療之第一次給藥前4週內，根據心電圖(ECG)，經由弗氏公式(Fridericia formula)計算的經校正之QT間期(QTcF)＞480毫秒。
注意：若單次ECG顯示絕對值＞480 ms之QTcF，則必須在初始ECG後30分鐘內以大致3分鐘之間隔進行兩次額外的ECG，且QTcF之三個連續結果之平均值必須≤480 ms才能使個體符合資格。
可能會干擾遵守計劃要求或提供知情同意書之能力之精神疾病史。
懷孕或哺乳期女性。
先前確定的對研究治療調配物之組分的過敏或超敏反應或對單株抗體之嚴重輸注相關反應(IPR)之病史。
在研究治療之第一次給藥前2年內診斷出另一惡性腫瘤，除淺表非黑色素瘤皮膚癌或視為已治癒且未接受全身性療法之局部低級腫瘤以外。 所估計之研究持續時間
據估計，患有晚期實體腫瘤之個體可能會接受平均約4至6個月之研究治療。研究經設計以使個體接受長達24個月之研究治療。對個體進行隨訪直至其死亡、撤回同意書或發起人決定不再收集此等資料。 研究產品及產品投與
每三週(q3w)經約30分鐘IV投與25A3-LT-A注射藥品。對於接受組合療法之個體，亦經由IV輸注q3w投與納武單抗。25A3-LT-A之劑量係基於實際體重(mg/kg)。對於體重＞100 kg之個體，基於100 kg體重計算最大總劑量。在可用時應用標準機構劑量捨入規則。在不可用時，捨入應基於最接近的毫克數。
在劑量遞增階段，群組A1之起始劑量為0.16毫克/公斤體重。在劑量遞增階段，接受使用納武單抗或貝伐單抗之組合療法之個體的25A3-LT-A之起始劑量水平係已由群組審查委員會認為對單一藥劑25A3-LT-A療法安全的25A3-LT-A之劑量水平。在組合療法群組擴展階段，個體之25A3-LT-A之起始劑量係在劑量遞增階段確定的組合療法之RD。在劑量遞增及擴展階段，每3週經約30分鐘經由IV輸注投與25A3-LT-A。分配至25A3-LT-A+納武單抗組合方案之個體在研究地點亦接受納武單抗(360 mg q3w)之IV輸注，持續時間大致60分鐘且隨後持續30分鐘，除非先前輸注經歷了IRR，否則保持60分鐘輸注。對於分配至25A3-LT-A+貝伐單抗組合方案之個體，貝伐單抗以15 mg/kg之劑量係以IV輸注形式q3w投與。第一次輸注在90分鐘內投與。若第一次輸注可耐受，則第二次輸注在60分鐘內投與。若在60分鐘內完成之第二次輸注可耐受，則後續輸注在30分鐘內投與。擇期手術前28天不應投與貝伐單抗。在同時投與25A3-LT-A及組合療法當天，首先投與納武單抗或貝伐單抗隨後再投與25A3-LT-A。在更換包括過濾器之輸注套件且觀測個體以確保沒有發生IRR後，開始第二次輸注。各輸注之間的時間至少為30分鐘(自納武單抗或貝伐單抗輸注結束至25A3-LT-A輸注開始)，在此期間在診所監測個體。研究治療之間的間隔必須至少為21天。組合療法給藥在第一次給藥的當天開始(SSV1/第1天)。在未針對潛在IRR預先用藥之情況下進行納武單抗及25A3-LT-A之初始輸注。在初始輸注後，允許針對輸注反應進行預先用藥。不允許速注或IV推注納武單抗或貝伐單抗。
允許劑量延遲及劑量減少來管理治療引發之AE。
25A3-LT-A注射藥品係以10 mL一次性小瓶形式提供，濃度為10 mg/mL。有關輸注製劑之詳情，請參閱研究藥劑手冊。
研究藥劑手冊中亦提供了研究藥品裝運、標籤、儲存及製備之詳情。 實例 8 ： 抗組織因子抗體藥物結合物 25A3-LT-A 在患有晚期實體腫瘤之患者中之 1 期研究 ： 劑量遞增階段之初步結果
如以上實例7中所說明，25A3-LT-A在多種腫瘤類型中顯示抗腫瘤活性且不干擾酶促、細胞及動物臨床前模型中之凝血。本文進一步提供了25A3-LT-A在晚期實體腫瘤中之1期研究之單一藥劑劑量遞增階段之初步結果。
此為1期、開放標籤、多中心、首次用於人類之試驗，其由劑量遞增及群組擴展組成，例如本文所揭示及/或實例7中所推導。
簡言之，劑量遞增階段之主要目標為獲得25A3-LT-A之最大耐受劑量(MTD)及/或建議劑量(RD)。所選的次要終點目標包括評估安全性；耐受性；及藥代動力學(PK)，諸如25A3-LT-A之與有效負載結合之抗體、總抗體(結合及未結合的)以及游離有效負載。
Q3W IV投與25A3-LT-A。25A3-LT-A劑量可延遲或減少至下一較低劑量水平以管理AE。潤滑滴眼劑為唯一推薦給已患有乾眼症之患者的首劑預防性措施；不推薦預防性皮質類固醇滴眼劑。根據包括具有潛在臨床意義之治療中引發的AE之準則評估劑量限制性毒性(DLT)。DLT評估期為首次輸注25A3-LT-A後第1-21天之間。在DLT評估期之第1、2、4、8、15、21天，此後在各21天治療週期之第1天及第10天，以及在研究治療中斷後30天及60天評估安全性。
截至2022年7月21日，19名患者接受了5個劑量水平下之25A3-LT-A：0.16 mg/kg (n=3)、0.5 mg/kg (n=3)、1.0 mg/kg (n=6)、1.5 mg/kg (n=3)以及2.0 mg/kg (n=4)；一些群組招募了超過3名患者以收集額外的安全性資料。以高達2.0 mg/kg之劑量水平之25A3-LT-A治療的患者中未報導DLT。25A3-LT-A之建議劑量及/或最大耐受劑量尚未確定且劑量遞增正在進行中。所報告之治療中斷之主要原因包括放射性進展(n=9 [47%])、治療引發之AE (n=2 [11%])、不具有臨床益處(n=2 [11%])及除AE以外之患者要求(n=3 [16%])。 表 6.基線時之患者人口統計資料及臨床特徵
25A3-LT-A (n=19)
年齡、中位數 ( 範圍 ) ，歲 63.0 (30-79)
女性 ， n (%) 10 (53)
ECOG 體能狀態， n (%)   
0 7 (37)
1 12 (63)
腫瘤類型， n (%)   
胰臟癌 4 (21)
大腸直腸癌 3 (16)
子宮頸癌 2 (11)
前列腺癌 2 (11)
其他 * 8 (42)
參與研究時使用之抗凝血劑， n (%) # 8 (42)
直接因子Xa抑制劑 5(26)
肝素 2(11)
非肝素血小板凝集抑制劑 2(11)
酶 1(5)
維生素K拮抗劑 1(5)
先前非放射抗癌療法線，中位數 ( 範圍 ) 3 (1-5+)
1-2，n (%) 4 (21)
≥3，n (%) 15 (79)
先前乾眼病 ， n (%) 4(21)
先前周邊神經病變， n (%) 9(47)
先前高血壓， n (%) 10 (53)
*其他腫瘤類型包括以下中之各一種：上皮闌尾癌、黑色素瘤、非小細胞肺癌、卵巢癌、腹膜癌、肉瘤、胸腺癌以及子宮癌。 #患者可能已接受超過一種抗凝血劑。 表 7.分配、25A3-LT-A暴露及安全性概述
25A3-LT-A (n=19)
資料截止時接受研究治療之患者，n (%) 3 (16)
暴露之持續時間，中位數(範圍)，月 0.8 (0-9.8)
每患者之輸注次數，中位數(範圍) 2.0 (1-14)
治療引發之AE，n (%) 19 (100)
引起劑量減少 0
引起劑量保持 3 (16)
引起中斷 2 (11)
與治療相關之AE，n (%) 12 (63)
引起中斷 1 (5)
劑量限制性毒性，n (%) 0
表 8. ≥10%患者中由25A3-LT-A引起的治療引發之不良事件
   總計 (n=19) 0.16 mg/kg (n=3) 0.5 mg/kg (n=3) 1 mg/kg (n=6) 1.5 mg/kg (n=3) 2.0 mg/kg (n=4)
任一級別 3級 任一級別 3級 任一級別 3級 任一級別 3級 任一級別 3級 任一級別 3級
任何TEAE，n (%) 19 (100) 8 (42) 3 (100) 1 (33) 3 (100) 1 (33) 6 (100) 2 (33) 3 (100) 3 (100) 4 (100) 1 (25)
噁心 8 (42) 0 0 0 1 (33) 0 2 (33) 0 2 (67) 0 3 (75) 0
高血壓 7 (37) 5 (26) 1 (33) 1 (33) 1 (33) 1 (33) 1 (17) 0 3 (100) 3 (100) 1 (25) 0
疲乏 6 (32) 0 0 0 0 0 1 (17) 0 3 (100) 0 2 (50) 0
結膜炎 5 (26) 0 0 0 1 (33) 0 1 (17) 0 1 (33) 0 2 (50) 0
背痛 3 (16) 0 0 0 0 0 1 (17) 0 2 (67) 0 0 0
發冷 3 (16) 0 0 0 1 (33) 0 0 0 0 0 2 (50) 0
乾眼症 3 (16) 0 1 (33) 0 0 0 1 (17) 0 0 0 1 (25) 0
呼吸困難 3 (16) 1 (5) 0 0 0 0 1 (17) 0 0 0 2 (50) 1 (25)
頭痛 3 (16) 0 0 0 1 (33) 0 0 0 1 (33) 0 1 (25) 0
腹痛 2 (11) 0 1 (33) 0 0 0 1 (17) 0 0 0 0 0
便秘 2 (11) 0 0 0 0 0 2 (33) 0 0 0 0 0
食慾降低 2 (11) 0 0 0 0 0 2 (33) 0 0 0 0 0
熱潮紅 2 (11) 0 0 0 1 (33) 0 0 0 0 0 1 (25) 0
低鉀血症 2 (11) 0 0 0 1 (33) 0 1 (17) 0 0 0 0 0
低鎂血症 2 (11) 0 0 0 1 (33) 0 0 0 1 (33) 0 0 0
失眠 2 (11) 0 0 0 0 0 2 (33) 0 0 0 0 0
肌痛 2 (11) 0 1 (33) 0 0 0 0 0 0 0 1 (25) 0
周邊水腫 2 (11) 0 1 (33) 0 0 0 0 0 1 (33) 0 0 0
肺炎 2 (11) 0 0 0 1 (33) 0 0 0 0 0 1 (25) 0
過敏性鼻炎 2 (11) 0 0 0 0 0 1 (17) 0 0 0 1 (25) 0
溫度不耐受性 2 (11) 0 0 0 0 0 1 (17) 0 0 0 1 (25) 0
嘔吐 2 (11) 0 0 0 0 0 1 (17) 0 1 (33) 0 0 0
安全性：所有患者均具有治療引發之AE，其中8名(42%)經歷了3級事件(7名無關，1名相關)；沒有4級或5級治療引發之AE。十二名(63%)患者經歷了與治療相關之AE，除一個3級事件(高血壓、25A3-LT-A 1.5 mg/kg)以外，其皆為≤2級，且在下一次25A3-LT-A給藥前得到改善或已消退。3名(16%)患者經歷嚴重AE且均認為與25A3-LT-A無關：2名患者出現3級事件(COVID-19肺炎及腹瀉，25A3-LT-A 1.0 mg/kg)且1名患者出現2級菌血症(25A3-LT-A 2.0 mg/kg)。
臨床上關注之不良事件：患有非感染性結膜炎(5 [26%])及乾眼症(3 [16%])之8名(42%)患者經歷了認為與25A3-LT-A治療相關之眼部治療引發之AE。眼部事件的發生率在2 mg/kg劑量水平(75%；3/4患者)下高於其他劑量水平(33%；5/15患者)。未觀測到角膜毒性。所有眼部事件在支持性護理下均係可逆的，該護理包括潤滑、血管收縮、皮質類固醇及/或抗生素滴眼劑或冷卻眼墊。在0.16 mg/kg劑量下有一例周邊神經病變(1級)。儘管有9名(47%)患者使用了抗凝血劑，但未發生出血事件。
抗腫瘤活性：在腫瘤TF表現水平未知的經大量預治療之患者群體中評估低、潛在藥理學失活的劑量水平之此劑量遞增階段中，沒有患者具有客觀反應，9名患者病情穩定。療效評估並非劑量遞增階段中之主要目標，而係在群組擴展階段中在特定腫瘤適應症中進一步評估。25A3-LT-A C max及AUC 0-t的增加超過0.16 mg/kg至2.0 mg/kg之劑量增量或與其成比例。
藥代動力學：25A3-LT-A總抗體及完整ADC PK相似，表明25A3-LT-A在輸注後穩定。在所有劑量水平下，包括2.0 mg/kg，游離有效負載水平保持較低(＜1 ng/mL)。亦參見 表 9及 圖 3A- 圖 3B。
表 9.25A3-LT-A之平均PK參數
      完整ADC 總抗體 游離有效負載
25A3-LT-A劑量 N AUC 0-t(微克·天/毫升) C max(μg/mL) AUC 0-t(微克·天/毫升) C max(μg/mL) AUC 0-t(奈克·天/毫升) C max(ng/mL)
0.16 mg/kg 3 6.14 3.91 7.16 4.10 0.424 0.0724
0.5 mg/kg 3 28.4 13.4 32.9 13.8 1.24 0.157
1.0 mg/kg 6 63.5 23.4 70.4 23.5 3.93 0.407
1.5 mg/kg 3 83.5 29.7 95.4 30.0 2.10 0.323
2.0 mg/kg 4 121 46.6 125 47.1 4.21 0.809
總之，在患有晚期實體腫瘤之患者中之此1期試驗之劑量遞增階段中，截至資料截止(2022年7月21日)，未觀測到DLT，且25A3-LT-A之最大耐受劑量及/或建議劑量尚未確定。Q3W 25A3-LT-A輸注在五個遞增劑量水平下具有良好耐受性且毒性可控。治療引發之AE通常為1/2級，沒有4/5級事件；有一種與治療相關之AE導致25A3-LT-A中斷，且僅有一種≥3級之與治療相關之AE。即使接近一半之患者正接受治療性抗凝血劑，但在接受25A3-LT-A之治療過程中沒有發生出血事件。此表明TF-FVIIa凝血路徑未受影響，與如本文所揭示之25A3-LT-A的臨床前研究一致。42%之患者出現與25A3-LT-A相關之眼部毒性且主要由輕度結膜炎及乾眼症組成；所有事件在標準療法下均係可逆的。未發現角膜AE。潤滑滴眼劑為唯一推薦之預防性措施。PK分析證實25A3-LT-A穩定，其中游離有效負載水平極低，且暴露量的增加超過劑量增加或與其成比例。當前正在進行劑量遞增。
縮寫：AE，不良事件；AUC，曲線下面積；C max，最大血清濃度；COVID-19，2019冠狀病毒疾病；DLT，劑量限制性毒性；ECOG，東部腫瘤協作組；IV，靜脈內；LLOQ，定量之下限；PK，藥代動力學；Q3W，每三週；TEAE，治療引發之AE。
出於所有目的，在本說明書正文內引用之所有參考文獻、頒佈之專利及專利申請案均以全文引用之方式併入本文中。
參考以下描述及附圖可更好地理解本發明之此等及其他特徵、態樣及優點，其中：
圖 1A- 圖 1D說明如實例7及實例8中所描述之研究設計。
圖 2說明根據如實例7中所描述之研究的i3+3設計之劑量遞增/遞減決策。
圖 3A- 圖 3B提供如實例8中所描述之0.16至2.0 mg/kg之完整ADC ( 圖 3A)、總抗體(Ab、 圖 3A)及游離有效負載( 圖 3B)之25A3-LT-A平均PK。
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Claims (24)

  1. 一種治療患有實體腫瘤之個體之方法，該方法包含向該個體投與約0.16 mg/kg至約3.0 mg/kg範圍內的劑量之組合物，該組合物包含抗體藥物結合物之群體，該等抗體藥物結合物包含： a. 與人類組織因子(TF) (SEQ ID NO: 41)細胞外域結合之抗原結合蛋白(Ab)，其中該Ab包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3，其中該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3係來自經指定為25A3之抗體， 及 b. 一或多個由式I表示之連接子-毒素部分： 式 I其中：##表示該連接子-毒素部分與該TF抗體之連接點，且該連接子-毒素部分係經由共價鍵與該TF抗體連接。
  2. 一種治療患有實體腫瘤之個體之方法，其包含向該個體投與約0.16 mg/kg至約3.0 mg/kg範圍內的劑量之組合物，該組合物包含式II之抗體藥物結合物之群體： 式 II其中： Ab為組織因子(TF)抗體，其中該Ab包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3，其中該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3係來自經指定為25A3之抗體， n為大於或等於1之整數，及 丁二醯亞胺基團係經由共價鍵與該Ab連接。
  3. 如請求項2之方法，其中n係選自由1、2、3及4組成之群。
  4. 如請求項2或3之方法，其中n係選自由3及4組成之群。
  5. 如請求項2之方法，其中該群體為抗體藥物結合物之混合群體，其中對於該群體中之各抗體藥物結合物，n在1至4之間變化。
  6. 如前述請求項中任一項之方法，其中該Ab包含： SEQ ID NO: 37之VH及SEQ ID NO: 38之VL序列。
  7. 如前述請求項中任一項之方法，其中該Ab包含： 重鏈序列，其為QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDVYG ISWVRQAPGQGLEWMGWIAPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPFGYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO:39)；及輕鏈序列，其為DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSI NNWLAWYQQKPGKAPKLLIYKAYNLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQLFQSLPPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:40)。
  8. 一種治療患有實體腫瘤之個體之方法，其包含向該個體投與約0.16 mg/kg至約3.0 mg/kg範圍內的劑量之式II之抗體藥物結合物： 式 II其中： Ab為組織因子(TF)抗體，其中該Ab包含重鏈序列，其為QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDVYGISWVRQAPGQGLEWMGWIAPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAGTYSPFGYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKS CDKTHT CPP CPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO:39)；及輕鏈序列，其為DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSINNWLAWYQQKPGKAPKLLIYKAYNLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQLFQSLPPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:40)，及 n為大於或等於1之整數。
  9. 如請求項7之方法，其中n係選自由1、2、3、4及5組成之群。
  10. 如請求項7之方法，其中n係選自由2、3及4組成之群。
  11. 如請求項1或2之方法，其中該抗體為IgG1。
  12. 如請求項1至11中任一項之方法，其中該方法包含向該個體投與約1.0 mg/kg至約3.0 mg/kg範圍內的劑量之該組合物，該組合物包含該抗體藥物結合物之群體。
  13. 如請求項1至11中任一項之方法，其中該方法包含向該個體投與約0.16 mg/kg、0.5 mg/kg、1.0 mg/kg、1.5 mg/kg、2.0 mg/kg、2.25 mg/kg、2.5 mg/kg、2.75 mg/kg或約3.0 mg/kg之劑量的該組合物，該組合物包含該抗體藥物結合物之群體。
  14. 如請求項1至13中任一項之方法，其中該方法包含每3週向該個體靜脈內(IV)投與該劑量之該組合物，該組合物包含該抗體藥物結合物之群體。
  15. 如請求項1至14中任一項之方法，其中該方法進一步包含向該個體投與與PD-1結合之抗體，其中該與PD-1結合之抗體包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3，其中該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3係來自納武單抗(Nivolumab)。
  16. 如請求項15之方法，其中該與PD-1結合之抗體包含VH及VL，其中該VH及VL係來自納武單抗。
  17. 如請求項15之方法，其中該與PD-1結合之抗體係納武單抗且包含有包含SEQ ID NO: 43之胺基酸序列之重鏈及包含SEQ ID NO: 44之胺基酸序列之輕鏈。
  18. 如請求項15至17中任一項之方法，其中該方法包含每3週靜脈內(IV)投與約360 mg之劑量的納武單抗。
  19. 如請求項1至14中任一項之方法，其中該方法進一步包含向該個體投與與VEGF結合之抗體，其中該與VEGF結合之抗體包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3，其中該VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3係來自貝伐單抗(Bevacizumab)。
  20. 如請求項19之方法，其中該與VEGF結合之抗體包含VH及VL，其中該VH及VL係來自貝伐單抗。
  21. 如請求項19之方法，其中該與VEGF結合之抗體係貝伐單抗且包含有包含SEQ ID NO: 45之胺基酸序列之重鏈及包含SEQ ID NO: 46之胺基酸序列之輕鏈。
  22. 如請求項19至21中任一項之方法，其中該方法包含每3週靜脈內(IV)投與約15 mg/kg之劑量的貝伐單抗。
  23. 如請求項1至22中任一項之方法，其中該實體腫瘤係選自由以下組成之群：非小細胞肺癌(NSCLC)、尿道上皮癌、子宮內膜癌(EC)、卵巢癌、子宮頸癌、頭頸部鱗狀細胞癌(SCCHN)、胰臟癌、食道鱗狀細胞癌(SCC)、轉移性去勢抵抗性前列腺癌(mCRPC)、三陰性乳癌(TNBC)、激素受體陽性乳癌(HR+BC)及與腫瘤類型無關(TA)之組織因子陽性(TF+)癌症，其中視情況地，該卵巢癌為上皮卵巢癌(EOC)。
  24. 如請求項1至23中任一項之方法，其中該個體為人類個體。
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