TW202342549A - 特異性結合flt3和cd3的抗原結合分子及其醫藥用途 - Google Patents
特異性結合flt3和cd3的抗原結合分子及其醫藥用途 Download PDFInfo
- Publication number
- TW202342549A TW202342549A TW112107348A TW112107348A TW202342549A TW 202342549 A TW202342549 A TW 202342549A TW 112107348 A TW112107348 A TW 112107348A TW 112107348 A TW112107348 A TW 112107348A TW 202342549 A TW202342549 A TW 202342549A
- Authority
- TW
- Taiwan
- Prior art keywords
- flt3
- seq
- amino acid
- acid sequence
- antigen
- Prior art date
Links
- 230000027455 binding Effects 0.000 title claims abstract description 285
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims abstract description 279
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims abstract description 279
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims abstract description 279
- 101100335081 Mus musculus Flt3 gene Proteins 0.000 title 1
- 101000932478 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein kinase FLT3 Proteins 0.000 claims abstract description 92
- 102100020718 Receptor-type tyrosine-protein kinase FLT3 Human genes 0.000 claims abstract description 85
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 35
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 34
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 29
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 479
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 138
- 102000017420 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Human genes 0.000 claims description 51
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 42
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 41
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 38
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 37
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 36
- 102100030127 Obscurin Human genes 0.000 claims description 36
- 101710194880 Obscurin Proteins 0.000 claims description 36
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 36
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 36
- 108010002947 Connectin Proteins 0.000 claims description 34
- 102100026260 Titin Human genes 0.000 claims description 34
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 33
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 22
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 21
- 206010012818 diffuse large B-cell lymphoma Diseases 0.000 claims description 16
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 15
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 claims description 15
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 13
- 208000031671 Large B-Cell Diffuse Lymphoma Diseases 0.000 claims description 12
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 11
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 11
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 claims description 11
- 208000003950 B-cell lymphoma Diseases 0.000 claims description 10
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 claims description 10
- 102000049850 human FLT3 Human genes 0.000 claims description 8
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 7
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 claims description 7
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 7
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 6
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 6
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 claims description 6
- 208000011691 Burkitt lymphomas Diseases 0.000 claims description 5
- 108010073807 IgG Receptors Proteins 0.000 claims description 5
- 102000009490 IgG Receptors Human genes 0.000 claims description 5
- 201000007924 marginal zone B-cell lymphoma Diseases 0.000 claims description 5
- 208000021937 marginal zone lymphoma Diseases 0.000 claims description 5
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 claims description 4
- 208000032791 BCR-ABL1 positive chronic myelogenous leukemia Diseases 0.000 claims description 4
- 208000010833 Chronic myeloid leukaemia Diseases 0.000 claims description 4
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 claims description 4
- 208000025205 Mantle-Cell Lymphoma Diseases 0.000 claims description 4
- 208000033761 Myelogenous Chronic BCR-ABL Positive Leukemia Diseases 0.000 claims description 4
- 208000007452 Plasmacytoma Diseases 0.000 claims description 4
- 208000033559 Waldenström macroglobulinemia Diseases 0.000 claims description 4
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 claims description 4
- 201000003444 follicular lymphoma Diseases 0.000 claims description 4
- 208000026876 intravascular large B-cell lymphoma Diseases 0.000 claims description 4
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 4
- 208000036170 B-Cell Marginal Zone Lymphoma Diseases 0.000 claims description 3
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 claims description 3
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 claims description 3
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 claims description 3
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 claims description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 3
- 208000017726 ALK-positive large B-cell lymphoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000024893 Acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 claims description 2
- 206010002412 Angiocentric lymphomas Diseases 0.000 claims description 2
- 208000010839 B-cell chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 claims description 2
- 208000028564 B-cell non-Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000032568 B-cell prolymphocytic leukaemia Diseases 0.000 claims description 2
- 206010003908 B-cell small lymphocytic lymphoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 206010014733 Endometrial cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010014759 Endometrial neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 208000021519 Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 claims description 2
- 241001502974 Human gammaherpesvirus 8 Species 0.000 claims description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 claims description 2
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 2
- 201000003791 MALT lymphoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010027406 Mesothelioma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000019569 Nodular lymphocyte predominant Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 claims description 2
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 206010036524 Precursor B-lymphoblastic lymphomas Diseases 0.000 claims description 2
- 206010065857 Primary Effusion Lymphoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 208000035269 cancer or benign tumor Diseases 0.000 claims description 2
- 208000013056 classic Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 claims description 2
- 239000000539 dimer Substances 0.000 claims description 2
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000009277 hairy cell leukemia Diseases 0.000 claims description 2
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 claims description 2
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 claims description 2
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 claims description 2
- 208000006116 lymphomatoid granulomatosis Diseases 0.000 claims description 2
- 201000007919 lymphoplasmacytic lymphoma Diseases 0.000 claims description 2
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 claims description 2
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 208000015325 multicentric Castleman disease Diseases 0.000 claims description 2
- 208000025113 myeloid leukemia Diseases 0.000 claims description 2
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000031223 plasma cell leukemia Diseases 0.000 claims description 2
- 208000007525 plasmablastic lymphoma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000006845 reticulosarcoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000029922 reticulum cell sarcoma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010062113 splenic marginal zone lymphoma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 claims description 2
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010007953 Central nervous system lymphoma Diseases 0.000 claims 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 claims 1
- 208000016800 primary central nervous system lymphoma Diseases 0.000 claims 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 58
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 41
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 24
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 23
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 21
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 18
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 17
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 16
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 16
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 15
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 15
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 14
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 14
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 13
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 13
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 13
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 13
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 13
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 13
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 12
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 11
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 11
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 11
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 10
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 10
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 10
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 10
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 10
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 9
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 8
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 8
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 8
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 8
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 8
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 8
- 230000006870 function Effects 0.000 description 8
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 8
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 8
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 8
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 101001105486 Homo sapiens Proteasome subunit alpha type-7 Proteins 0.000 description 7
- 102100021201 Proteasome subunit alpha type-7 Human genes 0.000 description 7
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 7
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 7
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 7
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 7
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 7
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 7
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 7
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 7
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 101710117290 Aldo-keto reductase family 1 member C4 Proteins 0.000 description 6
- 101100540120 Caenorhabditis elegans vab-3 gene Proteins 0.000 description 6
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 6
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 6
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 6
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 6
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 6
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 6
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 6
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 6
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 6
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 6
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 6
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 6
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 6
- 241000235648 Pichia Species 0.000 description 5
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 5
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 5
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 5
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 5
- 206010000871 Acute monocytic leukaemia Diseases 0.000 description 4
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 4
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 4
- 101000998947 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 1-46 Proteins 0.000 description 4
- 102100036888 Immunoglobulin heavy variable 1-46 Human genes 0.000 description 4
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 4
- 208000035489 Monocytic Acute Leukemia Diseases 0.000 description 4
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 4
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 4
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 4
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 4
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 4
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 4
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 102100026120 IgG receptor FcRn large subunit p51 Human genes 0.000 description 3
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 3
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 3
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 3
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 3
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 3
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 3
- 238000012867 alanine scanning Methods 0.000 description 3
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 3
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 3
- -1 aromatic amino acid Chemical class 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 230000004540 complement-dependent cytotoxicity Effects 0.000 description 3
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 3
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 3
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 3
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 3
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 3
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 3
- 229940081969 saccharomyces cerevisiae Drugs 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 3
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 3
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 3
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 3
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- UKAUYVFTDYCKQA-UHFFFAOYSA-N -2-Amino-4-hydroxybutanoic acid Natural products OC(=O)C(N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 4-isocyanato-4'-methyldiphenylmethane Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1CC1=CC=C(N=C=O)C=C1 UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 241000288950 Callithrix jacchus Species 0.000 description 2
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 description 2
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 2
- 241001674013 Chrysosporium lucknowense Species 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 2
- 241000223218 Fusarium Species 0.000 description 2
- 101001079285 Homo sapiens Immunoglobulin heavy joining 1 Proteins 0.000 description 2
- 101001090250 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 6-21 Proteins 0.000 description 2
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 2
- 101710177940 IgG receptor FcRn large subunit p51 Proteins 0.000 description 2
- 102100028078 Immunoglobulin heavy joining 1 Human genes 0.000 description 2
- 102100034806 Immunoglobulin kappa variable 6-21 Human genes 0.000 description 2
- 241000235058 Komagataella pastoris Species 0.000 description 2
- UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N L-homoserine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 2
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- 241000221961 Neurospora crassa Species 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 241000320412 Ogataea angusta Species 0.000 description 2
- 241001489174 Ogataea minuta Species 0.000 description 2
- 241000282577 Pan troglodytes Species 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 2
- 241000499912 Trichoderma reesei Species 0.000 description 2
- 230000009824 affinity maturation Effects 0.000 description 2
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 2
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000009830 antibody antigen interaction Effects 0.000 description 2
- 230000005888 antibody-dependent cellular phagocytosis Effects 0.000 description 2
- 102000025171 antigen binding proteins Human genes 0.000 description 2
- 108091000831 antigen binding proteins Proteins 0.000 description 2
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 229940095731 candida albicans Drugs 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 2
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- 206010052015 cytokine release syndrome Diseases 0.000 description 2
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 2
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 2
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 2
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 2
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004907 flux Effects 0.000 description 2
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 2
- 238000005734 heterodimerization reaction Methods 0.000 description 2
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 description 2
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 241001515942 marmosets Species 0.000 description 2
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 2
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 2
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 238000009774 resonance method Methods 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 2
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 2
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 2
- VGONTNSXDCQUGY-RRKCRQDMSA-N 2'-deoxyinosine Chemical group C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(N=CNC2=O)=C2N=C1 VGONTNSXDCQUGY-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- IVLXQGJVBGMLRR-UHFFFAOYSA-N 2-aminoacetic acid;hydron;chloride Chemical compound Cl.NCC(O)=O IVLXQGJVBGMLRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CJYMGANFUNYUNB-UHFFFAOYSA-N 2-methylthionine Chemical compound CC1=CC=CC=CC=CS1 CJYMGANFUNYUNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BRMWTNUJHUMWMS-UHFFFAOYSA-N 3-Methylhistidine Natural products CN1C=NC(CC(N)C(O)=O)=C1 BRMWTNUJHUMWMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 5,8-dihydroxy-2-methoxy-6-methyl-7-(2-oxopropyl)naphthalene-1,4-dione Chemical compound CC1=C(CC(C)=O)C(O)=C2C(=O)C(OC)=CC(=O)C2=C1O UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940117976 5-hydroxylysine Drugs 0.000 description 1
- GOZMBJCYMQQACI-UHFFFAOYSA-N 6,7-dimethyl-3-[[methyl-[2-[methyl-[[1-[3-(trifluoromethyl)phenyl]indol-3-yl]methyl]amino]ethyl]amino]methyl]chromen-4-one;dihydrochloride Chemical compound Cl.Cl.C=1OC2=CC(C)=C(C)C=C2C(=O)C=1CN(C)CCN(C)CC(C1=CC=CC=C11)=CN1C1=CC=CC(C(F)(F)F)=C1 GOZMBJCYMQQACI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000702423 Adeno-associated virus - 2 Species 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- 241000351920 Aspergillus nidulans Species 0.000 description 1
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 description 1
- 240000006439 Aspergillus oryzae Species 0.000 description 1
- 235000002247 Aspergillus oryzae Nutrition 0.000 description 1
- 241000151861 Barnettozyma salicaria Species 0.000 description 1
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 101100230428 Caenorhabditis elegans hil-5 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100476210 Caenorhabditis elegans rnt-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical group [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282552 Chlorocebus aethiops Species 0.000 description 1
- 241000938605 Crocodylia Species 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- 108010021468 Fc gamma receptor IIA Proteins 0.000 description 1
- 108010021472 Fc gamma receptor IIB Proteins 0.000 description 1
- 241001149959 Fusarium sp. Species 0.000 description 1
- 241000567178 Fusarium venenatum Species 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 102000001398 Granzyme Human genes 0.000 description 1
- 108060005986 Granzyme Proteins 0.000 description 1
- 101000690301 Homo sapiens Aldo-keto reductase family 1 member C4 Proteins 0.000 description 1
- 101000911952 Homo sapiens Cyclin-dependent kinase 7 Proteins 0.000 description 1
- 101001037147 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 1-69 Proteins 0.000 description 1
- 101001138121 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 1-33 Proteins 0.000 description 1
- 101001047625 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 2-40 Proteins 0.000 description 1
- 101000599940 Homo sapiens Interferon gamma Proteins 0.000 description 1
- 101001076408 Homo sapiens Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 101000878605 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Proteins 0.000 description 1
- 101001116548 Homo sapiens Protein CBFA2T1 Proteins 0.000 description 1
- 102100040232 Immunoglobulin heavy variable 1-69 Human genes 0.000 description 1
- 102100020901 Immunoglobulin kappa variable 1-33 Human genes 0.000 description 1
- 102100022948 Immunoglobulin kappa variable 2-40 Human genes 0.000 description 1
- 102100023915 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 description 1
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 1
- 241000235649 Kluyveromyces Species 0.000 description 1
- 241001138401 Kluyveromyces lactis Species 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 102100038007 Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Human genes 0.000 description 1
- 102100029204 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-a Human genes 0.000 description 1
- 102100029205 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-b Human genes 0.000 description 1
- 102100029193 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Human genes 0.000 description 1
- 101710099301 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 description 1
- 208000019693 Lung disease Diseases 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 101000753280 Mus musculus Angiopoietin-1 receptor Proteins 0.000 description 1
- 208000033776 Myeloid Acute Leukemia Diseases 0.000 description 1
- JDHILDINMRGULE-LURJTMIESA-N N(pros)-methyl-L-histidine Chemical compound CN1C=NC=C1C[C@H](N)C(O)=O JDHILDINMRGULE-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- 102100031914 Obscurin-like protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 101710130995 Obscurin-like protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 241001452677 Ogataea methanolica Species 0.000 description 1
- 241000489470 Ogataea trehalophila Species 0.000 description 1
- 241000826199 Ogataea wickerhamii Species 0.000 description 1
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N Ornithine Natural products OC(=O)C(C)CCCN UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 241000282579 Pan Species 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 108091093037 Peptide nucleic acid Proteins 0.000 description 1
- KHGNFPUMBJSZSM-UHFFFAOYSA-N Perforine Natural products COC1=C2CCC(O)C(CCC(C)(C)O)(OC)C2=NC2=C1C=CO2 KHGNFPUMBJSZSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000530350 Phaffomyces opuntiae Species 0.000 description 1
- 241000529953 Phaffomyces thermotolerans Species 0.000 description 1
- 241000195887 Physcomitrella patens Species 0.000 description 1
- 241000235062 Pichia membranifaciens Species 0.000 description 1
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 1
- 208000015634 Rectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 1
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 1
- 206010041067 Small cell lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 241000256251 Spodoptera frugiperda Species 0.000 description 1
- 230000037453 T cell priming Effects 0.000 description 1
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 1
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N Thiophosphoric acid Chemical class OP(O)(S)=O RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000370136 Wickerhamomyces pijperi Species 0.000 description 1
- 241000235015 Yarrowia lipolytica Species 0.000 description 1
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 239000003124 biologic agent Substances 0.000 description 1
- 238000012925 biological evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000005415 bioluminescence Methods 0.000 description 1
- 230000029918 bioluminescence Effects 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 238000013368 capillary electrophoresis sodium dodecyl sulfate analysis Methods 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 230000022534 cell killing Effects 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 210000003756 cervix mucus Anatomy 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 229940044683 chemotherapy drug Drugs 0.000 description 1
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000006552 constitutive activation Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 210000002726 cyst fluid Anatomy 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 1
- YSMODUONRAFBET-UHFFFAOYSA-N delta-DL-hydroxylysine Natural products NCC(O)CCC(N)C(O)=O YSMODUONRAFBET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004041 dendritic cell maturation Effects 0.000 description 1
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 1
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 238000000375 direct analysis in real time Methods 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 238000007876 drug discovery Methods 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 238000012063 dual-affinity re-targeting Methods 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- YSMODUONRAFBET-UHNVWZDZSA-N erythro-5-hydroxy-L-lysine Chemical compound NC[C@H](O)CC[C@H](N)C(O)=O YSMODUONRAFBET-UHNVWZDZSA-N 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 210000003414 extremity Anatomy 0.000 description 1
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 108700014844 flt3 ligand Proteins 0.000 description 1
- 238000002189 fluorescence spectrum Methods 0.000 description 1
- 108010003374 fms-Like Tyrosine Kinase 3 Proteins 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- UHBYWPGGCSDKFX-VKHMYHEASA-N gamma-carboxy-L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(C(O)=O)C(O)=O UHBYWPGGCSDKFX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000003966 growth inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000003862 health status Effects 0.000 description 1
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 1
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 1
- 102000052611 human IL6 Human genes 0.000 description 1
- 102000054751 human RUNX1T1 Human genes 0.000 description 1
- 150000002431 hydrogen Chemical group 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 210000005265 lung cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004880 lymph fluid Anatomy 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 210000003826 marginal zone b cell Anatomy 0.000 description 1
- 108010082117 matrigel Proteins 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 1
- YACKEPLHDIMKIO-UHFFFAOYSA-N methylphosphonic acid Chemical class CP(O)(O)=O YACKEPLHDIMKIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 108091005601 modified peptides Proteins 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 230000004001 molecular interaction Effects 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 108010068617 neonatal Fc receptor Proteins 0.000 description 1
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 1
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 230000007030 peptide scission Effects 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229930192851 perforin Natural products 0.000 description 1
- 210000003516 pericardium Anatomy 0.000 description 1
- 210000003200 peritoneal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 210000004303 peritoneum Anatomy 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- BZQFBWGGLXLEPQ-REOHCLBHSA-N phosphoserine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)COP(O)(O)=O BZQFBWGGLXLEPQ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 210000004224 pleura Anatomy 0.000 description 1
- 108010054442 polyalanine Proteins 0.000 description 1
- 238000010837 poor prognosis Methods 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 108091008598 receptor tyrosine kinases Proteins 0.000 description 1
- 102000027426 receptor tyrosine kinases Human genes 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 206010038038 rectal cancer Diseases 0.000 description 1
- 201000001275 rectum cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000009418 renovation Methods 0.000 description 1
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 210000004911 serous fluid Anatomy 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 208000000587 small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003802 sputum Anatomy 0.000 description 1
- 208000024794 sputum Diseases 0.000 description 1
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000001370 static light scattering Methods 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 210000001179 synovial fluid Anatomy 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 210000001138 tear Anatomy 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Natural products ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 description 1
- 230000001875 tumorinhibitory effect Effects 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 210000001364 upper extremity Anatomy 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
Abstract
本揭露關於特異性結合FLT3和CD3的抗原結合分子及其醫藥用途。該抗原結合分子可用於治療腫瘤相關疾病。
Description
本揭露屬於生物技術領域,更具體地,本揭露關於抗原結合分子及其應用。
這裡的陳述僅提供與本揭露有關的背景信息,而不必然地構成現有技術。
FMS樣酪胺酸激酶3(FLT3,也稱為CD135、FLK2、STK1)是一種受體酪胺酸激酶。與健康細胞相比,其在急性髓樣白血病(AML)患者大部分細胞(bulk cells)上過表達,並且在大多數患者白血病造血幹細胞上高表達。另外,FLT3是AML患者中最頻繁突變的基因,並且導致受體組成型活化的突變與不良預後相關。
CD3是一種表達於T細胞上的同種型或異型二聚體抗原。功能性CD3由四條不同鏈:ε、ζ、δ及γ中的兩者進行二聚體結合來形成。CD3二聚體排列包括γ/ε、δ/ε及ζ/ζ。CD3與T細胞受體複合物(TCR)結合且為T細胞活化所需。因此,已提議活化T細胞的抗CD3抗體用於達成治療目的。
然而,抗CD3抗體的給藥可能會觸發T細胞活化和相關的細胞因子釋放。過度的細胞因子釋放導致重度細胞因子釋放綜合症(CRS),其是抗CD3抗體在臨床用藥中的重要挑戰。
因此,提供具有高活性及低細胞因子釋放的FLT3/CD3雙特異性抗體是尚未滿足的需要。
本揭露提供了一種特異性結合FLT3和CD3的抗原結合分子和特異性結合FLT3的抗體。
在一個方面,本揭露提供了一種抗原結合分子,其包含至少一個特異性結合FLT3的抗原結合模塊和至少一個特異性結合CD3的抗原結合模塊,該特異性結合FLT3的抗原結合模塊包含重鏈可變區(FLT3-VH)和輕鏈可變區(FLT3-VL),該特異性結合CD3的抗原結合模塊包含重鏈可變區(CD3-VH)和輕鏈可變區(CD3-VL)。
在一些實施方式中,該抗原結合分子包含一個或兩個特異性結合FLT3的抗原結合模塊和一個特異性結合CD3的抗原結合模塊,該特異性結合FLT3的抗原結合模塊包含重鏈可變區(FLT3-VH)和輕鏈可變區(FLT3-VL),該特異性結合CD3的抗原結合模塊包含重鏈可變區(CD3-VH)和輕鏈可變區(CD3-VL)。
在一些實施方式中,該抗原結合分子包含一個特異性結合FLT3的抗原結合模塊和一個特異性結合CD3的抗原結合模塊,該特異性結合FLT3的抗原結合模塊包含重鏈可變區(FLT3-VH)和輕鏈可變區(FLT3-VL),該特
異性結合CD3的抗原結合模塊包含重鏈可變區(CD3-VH)和輕鏈可變區(CD3-VL)。
在一些實施方式中,如前所述的抗原結合分子,其中
(i)該FLT3-VH具有:包含SEQ ID NO:19的胺基酸序列的FLT3-HCDR1、包含SEQ ID NO:20的胺基酸序列的FLT3-HCDR2和包含SEQ ID NO:21的胺基酸序列的FLT3-HCDR3,和該FLT3-VL具有:包含SEQ ID NO:83或22的胺基酸序列的FLT3-LCDR1、包含SEQ ID NO:84或23的胺基酸序列的FLT3-LCDR2和包含SEQ ID NO:24的胺基酸序列的FLT3-LCDR3,或
(ii)該FLT3-VH具有:包含SEQ ID NO:13的胺基酸序列的FLT3-HCDR1、包含SEQ ID NO:14的胺基酸序列的FLT3-HCDR2和包含SEQ ID NO:15的胺基酸序列的FLT3-HCDR3,和該FLT3-VL具有:包含SEQ ID NO:16的胺基酸序列的FLT3-LCDR1、包含SEQ ID NO:17的胺基酸序列的FLT3-LCDR2和包含SEQ ID NO:18的胺基酸序列的FLT3-LCDR3,或。
(iii)該FLT3-VH具有:包含SEQ ID NO:7的胺基酸序列的FLT3-HCDR1、包含SEQ ID NO:8、76或77的胺基酸序列的FLT3-HCDR2和包含SEQ ID NO:9的胺基酸序列的FLT3-HCDR3,和該FLT3-VL具有:包含SEQ ID NO:10、78、79或80的胺基酸序列的FLT3-LCDR1、包含SEQ ID NO:11、81或82的胺基酸序列的FLT3-LCDR2和包含SEQ ID NO:12的胺基酸序列的FLT3-LCDR3。在一些實施方式中,如前所述的抗原結合分子,其中該FLT3-VH具有:包含SEQ ID NO:19的胺基酸序列的FLT3-HCDR1、包含SEQ ID NO:20的胺基酸序列的FLT3-HCDR2和包含SEQ ID NO:21的胺基酸序列的FLT3-HCDR3,和該FLT3-VL具有:包含SEQ ID NO:83的胺基酸序列的FLT3-LCDR1、包含
SEQ ID NO:84的胺基酸序列的FLT3-LCDR2和包含SEQ ID NO:24的胺基酸序列的FLT3-LCDR3。
在一些實施方式中,如前任一項所述的抗原結合分子,該FLT3-HCDR1、FLT3-HCDR2、FLT3-HCDR3、FLT3-LCDR1、FLT3-LCDR2和FLT3-LCDR3是根據Kabat編號規則定義的。
在具體的實施方式中,本文所述的特異性結合FLT3和CD3的抗原結合分子包含至少一個特異性結合FLT3的抗原結合模塊和至少一個特異性結合CD3的抗原結合模塊,該特異性結合FLT3的抗原結合模塊包含重鏈可變區FLT3-VH和輕鏈可變區FLT3-VL,該特異性結合CD3的抗原結合模塊包含重鏈可變區CD3-VH和輕鏈可變區CD3-VL;其中
(i)該FLT3-VH包含SEQ ID NO:19所示的FLT3-HCDR1、SEQ ID NO:20所示的FLT3-HCDR2和SEQ ID NO:21所示的FLT3-HCDR3,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:83或22所示的FLT3-LCDR1、SEQ ID NO:84或23所示的FLT3-LCDR2和SEQ ID NO:24所示的FLT3-LCDR3,或
(ii)該FLT3-VH包含SEQ ID NO:13所示的FLT3-HCDR1、SEQ ID NO:14所示的FLT3-HCDR2和SEQ ID NO:15所示的FLT3-HCDR3,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:16所示的FLT3-LCDR1、SEQ ID NO:17所示的FLT3-LCDR2和SEQ ID NO:18所示的FLT3-LCDR3,或
(iii)該FLT3-VH包含SEQ ID NO:7所示的FLT3-HCDR1、SEQ ID NO:8、76或77所示的FLT3-HCDR2和SEQ ID NO:9所示的FLT3-HCDR3,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:10、78、79或80所示的FLT3-LCDR1、SEQ ID NO:11、81或82所示的FLT3-LCDR2和SEQ ID NO:12所示的FLT3-LCDR3。
在一些實施方式中,如前任一項所述的抗原結合分子,其在25℃條件下以小於1×10-8M、5×10-9M的KD結合人FLT3,該KD是藉由表面等離子體共振法測量的。
在一些實施方式中,如前任一項所述的抗原結合分子,其中,
(i)該FLT3-VH包含SEQ ID NO:53、5、52或54的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:56、6或55的胺基酸序列,或
(ii)該FLT3-VH包含SEQ ID NO:45、3、46、47或48的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:50、4、49或51的胺基酸序列,或
(iii)該FLT3-VH包含SEQ ID NO:1、29、30、31、32、33、34或35的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:2、36、37、38、39、40、41、42、43或44的胺基酸序列。
在一些實施方式中,如前任一項所述的抗原結合分子,其中
(i)該FLT3-VH包含SEQ ID NO:53、52或54的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:56或55的胺基酸序列,或
(ii)該FLT3-VH包含SEQ ID NO:45、46、47或48的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:50、49或51的胺基酸序列,或
(iii)該FLT3-VH包含SEQ ID NO:29、30、31、32、33、34或35的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:36、37、38、39、40、41、42、43或44的胺基酸序列。
在一些實施方式中,如前任一項所述的抗原結合分子,其中
(i)該FLT3-VH包含SEQ ID NO:53的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:56的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:52的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:55的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:52的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:56的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:53的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:55的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:54的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:55的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:54的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:56的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:5的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:6的胺基酸序列;或
(ii)該FLT3-VH包含SEQ ID NO:45的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:50的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:45的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:49的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:46的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:49的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:47的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:49的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:48的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:49的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:46的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:50的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:47的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:50的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:48的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:50的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:45的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:51的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:46的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:51的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:47的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:51的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:48的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:51的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:3的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:4的胺基酸序列;或
(iii)該FLT3-VH包含SEQ ID NO:29的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:36的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:30的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:36的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:31的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:36的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:32的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:36的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:33的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:36的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:29的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:37的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:30的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:37的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:31的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:37的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:32的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:37的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:33的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:37的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:29的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:38的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:30的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:38的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:31的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:38的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:32的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:38的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:33的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:38的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:34的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:39的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:34的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:40的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:34的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:41的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:34的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:42的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:34的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:43的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:34的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:44的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:35的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:39的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:35的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:40的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:35的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:41的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:35的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:42的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:35的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:43的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:35的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:44的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:1的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:2的胺基酸序列。
在一些實施方式中,如前任一項所述的抗原結合分子,其中
(i)該FLT3-VH包含SEQ ID NO:53的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:56的胺基酸序列,或
(ii)該FLT3-VH包含SEQ ID NO:45的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:50的胺基酸序列。
在具體的實施方式中,本文所述的抗原結合分子包含至少一個特異性結合FLT3的抗原結合模塊和至少一個特異性結合CD3的抗原結合模塊,其中,
(i)該特異性結合FLT3的抗原結合模塊包含SEQ ID NO:53、5、52或54所示的FLT3-VH,和SEQ ID NO:56、6或55所示的FLT3-VL,或
(ii)該特異性結合FLT3的抗原結合模塊包含SEQ ID NO:45、3、46、47或48所示的FLT3-VH,和SEQ ID NO:50、4、49或51所示的FLT3-VL,或
(iii)該特異性結合FLT3的抗原結合模塊包含SEQ ID NO:1、29、30、31、32、33、34或35所示的FLT3-VH,和SEQ ID NO:2、36、37、38、39、40、41、42、43或44所示的FLT3-VL;
具體地,
(i)該特異性結合FLT3的抗原結合模塊包含SEQ ID NO:53、52或54所示的FLT3-VH,和SEQ ID NO:56或55所示的FLT3-VL,或
(ii)該特異性結合FLT3的抗原結合模塊包含SEQ ID NO:45、46、47或48所示的FLT3-VH,和SEQ ID NO:50、49或51所示的FLT3-VL,或
(iii)該特異性結合FLT3的抗原結合模塊包含SEQ ID NO:29、30、31、32、33、34或35所示的FLT3-VH,和SEQ ID NO:36、37、38、39、40、41、42、43或44所示的FLT3-VL;
更具體地,
(i)該特異性結合FLT3的抗原結合模塊包含SEQ ID NO:53所示的FLT3-VH,和SEQ ID NO:56所示的FLT3-VL,或
(ii)該特異性結合FLT3的抗原結合模塊包含SEQ ID NO:45所示的FLT3-VH,和SEQ ID NO:50所示的FLT3-VL。
在一些實施方式中,如前任一項所述的抗原結合分子,其中
該特異性結合CD3的抗原結合模塊包含重鏈可變區CD3-VH和輕鏈可變區CD3-VL,該CD3-VH具有:包含SEQ ID NO:57的胺基酸序列的CD3-HCDR1,包含SEQ ID NO:58的胺基酸序列的CD3-HCDR2,和包含SEQ ID NO:59的胺基酸序列的CD3-HCDR3;並且該CD3-VL具有:包含SEQ ID NO:60的胺基酸序列的CD3-LCDR1,包含SEQ ID NO:61的胺基酸序列的CD3-LCDR2,和包含SEQ ID NO:62的胺基酸序列的CD3-LCDR3。
在一些實施方式中,該CD3-VH包含SEQ ID NO:63的胺基酸序列,和該CD3-VL包含SEQ ID NO:64的胺基酸序列。
在具體的實施方式中,本文所述的抗原結合分子包含至少一個特異性結合FLT3的抗原結合模塊和至少一個特異性結合CD3的抗原結合模塊,其中,
該特異性結合CD3的抗原結合模塊包含重鏈可變區CD3-VH和輕鏈可變區CD3-VL,該CD3-VH包含SEQ ID NO:57所示的CD3-HCDR1,SEQ ID NO:58所示的CD3-HCDR2,和SEQ ID NO:59所示的CD3-HCDR3;並且該CD3-VL包含SEQ ID NO:60所示的CD3-LCDR1,SEQ ID NO:61所示的CD3-LCDR2,和SEQ ID NO:62所示的CD3-LCDR3;
具體地,
該特異性結合CD3的抗原結合模塊包含SEQ ID NO:63所示的CD3-VH,和SEQ ID NO:64所示的CD3-VL。
在一些實施方式中,如前任一項所述的抗原結合分子,其中該抗原結合分子包含Fc區(包括IgG Fc區或IgG1Fc區)。在一些實施方案中,該Fc區相比野生型Fc區,包含一個或多個胺基酸取代,該胺基酸取代能夠減少與Fc受體的結合,特別是與Fcγ受體的結合。在一些實施方案中,該Fc區是人IgG1 Fc區,並且在234和235位置的胺基酸殘基為A,編號依據為EU索引。
在一些實施方式中,如前任一項所述的抗原結合分子,其中該抗原結合分子包含Fc區,該Fc區包含能夠相互締合的第一亞基(Fc1)和第二亞基(Fc2),該Fc1和Fc2各自獨立地具有一個或多個減少Fc區同源二聚化的胺基酸取代。在一些實施方案中,該Fc1和Fc2各自獨立地具有一個或多個根據杵臼技術的胺基酸取代。在一些實施方案中,該Fc1具有根據杵臼技術的凸起結構,和該Fc2具有根據杵臼技術的孔結構。在一些實施方案中,該Fc1具有根據
杵臼技術的孔結構,和該Fc2具有根據杵臼技術的凸起結構。在一些實施方案中,該Fc1在366位置的胺基酸殘基為W;和該Fc2在366位置的胺基酸殘基為S、在368位置的胺基酸殘基為A、和在407位置的胺基酸殘基為V,編號依據為EU索引。在一些實施方案中,該Fc1在354位置的胺基酸殘基為C;和該Fc2在349位置的胺基酸殘基為C,編號依據為EU索引。在一些實施方案中,該Fc1具有SEQ ID NO:27的胺基酸序列,和該Fc2具有SEQ ID NO:28的胺基酸序列。
在一些實施方式中,如前任一項所述的抗原結合分子,其中該特異性結合FLT3的抗原結合模塊是Fab,和該特異性結合CD3的抗原結合模塊是經替換的Fab;或該特異性結合FLT3的抗原結合模塊是經替換的Fab,和該特異性結合CD3的抗原結合模塊是Fab;該經替換的Fab包含能夠形成二聚體的Titin鏈和Obscurin鏈。在一些實施方式中,該Titin鏈包含選自由SEQ ID NO:85至SEQ ID NO:103組成的組的胺基酸序列,該Obscurin鏈包含選自由SEQ ID NO:104至SEQ ID NO:144組成的組的胺基酸序列。在一些實施方式中,該Titin鏈包含SEQ ID NO:103的胺基酸序列,該Obscurin鏈包含SEQ ID NO:138的胺基酸序列。
在一些實施方式中,如前任一項所述的抗原結合分子,其中該抗原結合分子包含一個特異性結合FLT3的抗原結合模塊和一個特異性結合CD3的抗原結合模塊,該特異性結合FLT3的抗原結合模塊是Fab;該特異性結合CD3的抗原結合模塊是經替換的Fab。
在一些實施方式中,如前任一項所述的抗原結合分子,其包含一條具有式(a)所示結構的第一鏈、一條具有式(b)所示結構的第二鏈、一條具有式(c)所示結構的第三鏈和一條具有式(d)所示結構的第四鏈,
(a)[FLT3-VH]-[CH1]-[Fc1],
(b)[FLT3-VL]-[CL],
(c)[CD3-VH]-[連接子1]-[Titin鏈]-[Fc2],
(d)[CD3-VL]-[連接子2]-[Obscurin鏈],
式(a)、(b)、(c)和(d)所示的結構是從N端至C端排列的,該連接子1和該連接子2是相同或不同的肽連接子。在一些實施方式中,該連接子1和該連接子2具有相同的胺基酸殘基數量。在一些實施方式中,該連接子1和該連接子2是相同的肽連接子。在一些實施方案中,該連接子1和連接子2包含如SEQ ID NO:66所示的胺基酸序列。
在一些實施方式中,如前任一項所述的抗原結合分子,其具有:一條包含SEQ ID NO:72的胺基酸序列的第一鏈、一條包含SEQ ID NO:73的胺基酸序列的第二鏈、一條包含SEQ ID NO:74的胺基酸序列的第三鏈和一條包含SEQ ID NO:75的胺基酸序列的第四鏈。
在一些實施方式中,如前任一項所述的抗原結合分子,其中該抗原結合分子包含兩個特異性結合FLT3的抗原結合模塊和一個特異性結合CD3的抗原結合模塊,該特異性結合FLT3的抗原結合模塊是Fab;該特異性結合CD3的抗原結合模塊是經替換的Fab。
在一些實施方式中,如前任一項所述的抗原結合分子,其包含一條具有式(e)所示結構的第一鏈、兩條具有式(b)所示結構的第二鏈、一條具有式(f)所示結構的第三鏈和一條具有式(g)所示結構的第四鏈,
(e)[FLT3-VH]-[CH1]-[Fc2],
(b)[FLT3-VL]-[CL],
(f)[FLT3-VH]-[CH1]-[連接子3]-[CD3-VL]-[連接子4]-[Titin鏈]-[Fc1],
(g)[CD3-VH]-[連接子5]-[Obscurin鏈],
式(e)、(b)、(f)和(g)所示的結構是從N端至C端排列的,該連接子3、連接子4和該連接子5是相同或不同的肽連接子。在一些實施方式中,該連接子4和該連接子5具有相同的胺基酸殘基數量。在一些實施方案中,該連接子3包含如SEQ ID NO:146所示的胺基酸序列,該連接子4包含如SEQ ID NO:145所示的胺基酸序列,該連接子5包含如SEQ ID NO:66所示的胺基酸序列。
在一些實施方式中,如前任一項所述的抗原結合分子,其具有:一條包含SEQ ID NO:68的胺基酸序列的第一鏈、兩條包含SEQ ID NO:69的胺基酸序列的第二鏈、一條包含SEQ ID NO:70的胺基酸序列的第三鏈和一條包含SEQ ID NO:71的胺基酸序列的第四鏈。
在另一個方面,本揭露還提供一種分離的抗體,其能夠特異性結合FLT3,該抗體包含重鏈可變區FLT3-VH和輕鏈可變區FLT3-VL,其中
(i)該FLT3-VH具有:包含SEQ ID NO:19的胺基酸序列的FLT3-HCDR1、包含SEQ ID NO:20的胺基酸序列的FLT3-HCDR2和包含SEQ ID NO:21的胺基酸序列的FLT3-HCDR3,和該FLT3-VL具有:包含SEQ ID NO:83或22
的胺基酸序列的FLT3-LCDR1、包含SEQ ID NO:84或23的胺基酸序列的FLT3-LCDR2和包含SEQ ID NO:24的胺基酸序列的FLT3-LCDR3,或
(ii)該FLT3-VH具有:包含SEQ ID NO:13的胺基酸序列的FLT3-HCDR1、包含SEQ ID NO:14的胺基酸序列的FLT3-HCDR2和包含SEQ ID NO:15的胺基酸序列的FLT3-HCDR3,和該FLT3-VL具有:包含SEQ ID NO:16的胺基酸序列的FLT3-LCDR1、包含SEQ ID NO:17的胺基酸序列的FLT3-LCDR2和包含SEQ ID NO:18的胺基酸序列的FLT3-LCDR3,或
(iii)該FLT3-VH具有:包含SEQ ID NO:7的胺基酸序列的FLT3-HCDR1、包含SEQ ID NO:8、76或77的胺基酸序列的FLT3-HCDR2和包含SEQ ID NO:9的胺基酸序列的FLT3-HCDR3,和該FLT3-VL具有:包含SEQ ID NO:10、78、79或80的胺基酸序列的FLT3-LCDR1、包含SEQ ID NO:11、81或82的胺基酸序列的FLT3-LCDR2和包含SEQ ID NO:12的胺基酸序列的FLT3-LCDR3。
在一些實施方式中,本文提供的抗體包含重鏈可變區FLT3-VH和輕鏈可變區FLT3-VL,其中
(i)該FLT3-VH包含SEQ ID NO:19所示的FLT3-HCDR1、SEQ ID NO:20所示的FLT3-HCDR2和SEQ ID NO:21所示的FLT3-HCDR3,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:83或22所示的FLT3-LCDR1、SEQ ID NO:84或23所示的FLT3-LCDR2和SEQ ID NO:24所示的FLT3-LCDR3,或
(ii)該FLT3-VH包含SEQ ID NO:13所示的FLT3-HCDR1、SEQ ID NO:14所示的FLT3-HCDR2和SEQ ID NO:15所示的FLT3-HCDR3,和該FLT3-VL
包含SEQ ID NO:16所示的FLT3-LCDR1、SEQ ID NO:17所示的FLT3-LCDR2和SEQ ID NO:18所示的FLT3-LCDR3,或
(iii)該FLT3-VH包含SEQ ID NO:7所示的FLT3-HCDR1、SEQ ID NO:8、76或77所示的FLT3-HCDR2和SEQ ID NO:9所示的FLT3-HCDR3,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:10、78、79或80所示的FLT3-LCDR1、SEQ ID NO:11、81或82所示的FLT3-LCDR2和SEQ ID NO:12所示的FLT3-LCDR3。
在一些實施方式中,如前所述的抗體,其中該FLT3-VH具有:包含SEQ ID NO:19的胺基酸序列的FLT3-HCDR1、包含SEQ ID NO:20的胺基酸序列的FLT3-HCDR2和包含SEQ ID NO:21的胺基酸序列的FLT3-HCDR3,和該FLT3-VL具有:包含SEQ ID NO:83的胺基酸序列的FLT3-LCDR1、包含SEQ ID NO:84的胺基酸序列的FLT3-LCDR2和包含SEQ ID NO:24的胺基酸序列的FLT3-LCDR3。
在一些實施方式中,該FLT3-HCDR1、FLT3-HCDR2、FLT3-HCDR3、FLT3-LCDR1、FLT3-LCDR2和FLT3-LCDR3是根據Kabat編號規則定義的。
在一些實施方式中,如前任一項所述的抗體,其在25℃條件下以小於1×10-8M、5×10-9M的KD結合人FLT3,該KD是藉由表面等離子體共振法測量的。
在一些實施方式中,如前任一項所述的抗體,其中
(i)該FLT3-VH包含SEQ ID NO:53、5、52或54的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:56、6或55的胺基酸序列,或
(ii)該FLT3-VH包含SEQ ID NO:45、3、46、47或48的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:50、4、49或51的胺基酸序列,或
(iii)該FLT3-VH包含SEQ ID NO:1、29、30、31、32、33、34或35的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:2、36、37、38、39、40、41、42、43或44的胺基酸序列。
在一些實施方式中,如前任一項所述的抗體,其中
(i)該FLT3-VH包含SEQ ID NO:53、52或54的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:56或55的胺基酸序列,或
(ii)該FLT3-VH包含SEQ ID NO:45、46、47或48的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:50、49或51的胺基酸序列,或
(iii)該FLT3-VH包含SEQ ID NO:29、30、31、32、33、34或35的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:36、37、38、39、40、41、42、43或44的胺基酸序列。
在一些實施方式中,如前任一項所述的抗體,其中
(i)該FLT3-VH包含SEQ ID NO:53的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:56的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:52的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:55的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:52的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:56的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:53的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:55的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:54的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:55的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:54的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:56的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:5的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:6的胺基酸序列;或
(ii)該FLT3-VH包含SEQ ID NO:45的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:50的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:45的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:49的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:46的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:49的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:47的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:49的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:48的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:49的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:46的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:50的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:47的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:50的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:48的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:50的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:45的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:51的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:46的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:51的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:47的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:51的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:48的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:51的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:3的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:4的胺基酸序列;或
(iii)該FLT3-VH包含SEQ ID NO:29的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:36的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:30的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:36的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:31的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:36的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:32的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:36的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:33的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:36的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:29的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:37的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:30的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:37的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:31的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:37的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:32的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:37的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:33的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:37的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:29的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:38的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:30的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:38的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:31的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:38的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:32的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:38的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:33的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:38的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:34的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:39的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:34的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:40的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:34的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:41的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:34的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:42的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:34的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:43的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:34的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:44的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:35的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:39的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:35的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:40的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:35的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:41的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:35的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:42的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:35的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:43的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:35的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:44的胺基酸序列,或
該FLT3-VH包含SEQ ID NO:1的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:2的胺基酸序列。
在一些實施方式中,如前任一項所述的抗體,其中
(i)該FLT3-VH包含SEQ ID NO:53的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:56的胺基酸序列,或
(ii)該FLT3-VH包含SEQ ID NO:45的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:50的胺基酸序列。
在一些實施方式中,本文提供了分離的抗體,其中
(i)該抗體包含SEQ ID NO:53、5、52或54所示的FLT3-VH,和SEQ ID NO:56、6或55所示的FLT3-VL,或
(ii)該抗體包含SEQ ID NO:45、3、46、47或48所示的FLT3-VH,和SEQ ID NO:50、4、49或51所示的FLT3-VL,或
(iii)該抗體包含SEQ ID NO:1、29、30、31、32、33、34或35所示的FLT3-VH,和SEQ ID NO:2、36、37、38、39、40、41、42、43或44所示的FLT3-VL;
具體地,
(i)該抗體包含SEQ ID NO:53、52或54所示的FLT3-VH,和SEQ ID NO:56或55所示的FLT3-VL,或
(ii)該抗體包含SEQ ID NO:45、46、47或48所示的FLT3-VH,和SEQ ID NO:50、49或51所示的FLT3-VL,或
(iii)該抗體包含SEQ ID NO:29、30、31、32、33、34或35所示的FLT3-VH,和SEQ ID NO:36、37、38、39、40、41、42、43或44所示的FLT3-VL;
更具體地,
(i)該抗體包含SEQ ID NO:53所示的FLT3-VH,和SEQ ID NO:56所示的FLT3-VL,或
(ii)該抗體包含SEQ ID NO:45所示的FLT3-VH,和SEQ ID NO:50所示的FLT3-VL。
在一些實施方式中,如前任一項所述的抗體,其中該抗體是雙特異性抗體。在一些實施方式中,該雙特異性抗體特異性結合FLT3和CD3。
在另一個方面,本揭露提供了一種醫藥組成物,其含有:治療有效量的前述任一項所述的抗原結合分子或前述任一項所述的抗體,以及一種或更多種藥學上可接受的載體、稀釋劑、緩衝劑或賦形劑。在一些實施方案中,該醫藥組成物中還包含至少一種第二治療劑。
在另一個方面,本揭露還提供分離的核酸,其編碼前述任一項所述的抗原結合分子或前述任一項所述的抗體。
在另一個方面,本揭露還提供一種宿主細胞,其包含前述分離的的核酸。
在另一個方面,本揭露還提供一種治療或預防疾病的方法,該方法包括向有需要的受試者施用治療有效量的前述任一項所述的抗原結合分子或前述任一項所述的抗體或其組成物。
在另一個方面,本揭露還提供前述任一項所述的抗原結合分子或前述任一項所述的抗體或其組成物在製備治療或預防疾病的藥物中的用途。
在另一個方面,本揭露還提供用作藥物的前述任一項所述的抗原結合分子或前述任一項所述的抗體或其組成物。在一些實施方式中,該藥物用於治療或預防疾病。
在一些實施方式中,如前任一項所述的疾病是增殖性疾病、腫瘤或免疫疾病。
在一些實施方式中,如前任一項所述的疾病是腫瘤或癌症。
在一些實施方式中,如前任一項所述的疾病是多發性骨髓瘤、惡性漿細胞瘤、霍奇金氏淋巴瘤、結節性淋巴細胞為主型霍奇金氏淋巴瘤、卡勒氏病和骨髓瘤病、急性單核細胞白血病、漿細胞白血病、漿細胞瘤、B幼淋巴細胞白血病、毛細胞白血病、B細胞非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、急性髓樣白血病(AML)、慢性淋巴細胞性白血病(CLL)、急性淋巴細胞性白血病(ALL)、慢性髓樣白血病(CML)、濾泡性淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤、邊緣區淋巴瘤、套細胞淋巴瘤、大細胞淋巴瘤、前體B淋巴母細胞性淋巴瘤、髓樣白血病、華氏巨球蛋白血症、瀰漫性大B細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、邊緣區淋巴瘤、黏膜相關淋巴組織淋巴瘤、小細胞淋巴細胞淋巴瘤、套細胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、原發縱隔(胸腺)大B細胞淋巴瘤、淋巴漿細胞性淋巴瘤、華氏巨球蛋白血症、淋巴結邊緣區B細胞淋巴瘤、脾邊緣區淋巴瘤、血管內大B細胞淋巴瘤、原發性滲出性淋巴瘤、淋巴瘤樣肉芽腫病、富含T細胞/組織細胞大B細胞淋巴瘤、原發性中樞神經系統淋巴瘤、原發性皮膚瀰漫性大B細胞淋巴瘤(腿型)、老年人EBV陽性瀰漫性大B細胞淋巴瘤、與炎症相關的瀰散性大B細胞淋巴瘤、血管內大B細胞淋巴瘤、ALK陽性大B細胞淋巴瘤、漿母細胞淋巴瘤、源於HHV-8相關多中心卡斯特曼病的大B細胞淋巴瘤、特徵介於瀰散性大B細胞淋巴瘤和伯基特淋巴瘤之間的未分類的B細胞淋巴瘤、特徵介於瀰漫性大B細胞淋巴瘤和典型霍奇金淋巴瘤之間的未分類的B細胞淋巴瘤、以及其它造血細胞相關的癌症,以及乳腺癌、胃癌、肝癌、肺癌(如非小細胞肺癌、小細胞肺癌)、宮頸
癌、結直腸癌(如結腸癌、直腸癌)、子宮內膜癌、頭頸癌、間皮瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、皮膚癌、腎癌、膀胱癌以及其他相關癌症。
在一些實施方案中,前述的疾病為與FLT3相關的疾病;在一些實施方案中,前述的疾病為表達FLT3的疾病。
本揭露提供的抗原結合分子,具有治療活性、安全性、藥物代謝動力學特性和成藥性(如穩定性)好的特點。
圖1A為結構-1的結構示意圖;圖1B為結構-2的結構示意圖。
術語
本文所用的術語只是為了描述實施方案的目的,並非旨在進行限制。除非另外定義,本文所用的全部技術術語和科學術語具有與本揭露所屬技術領域具有通常知識者通常所理解的相同意義。
除非上下文另外清楚要求,否則在整個說明書和申請專利範圍中,應將詞語“包含”、“具有”、“包括”等理解為具有包含意義,而不是排他性或窮舉性意義;也即,“包括但不僅限於”的意義。除非另有說明,“包含”包括了“由......組成”。例如,對於包含SEQ ID NO:7的胺基酸序列的FLT3-HCDR1,其明確的涵蓋胺基酸序列如SEQ ID NO:7所示的FLT3-HCDR1。
本揭露所用胺基酸三字母代碼和單字母代碼如J.biol.chem,243,p3558(1968)中所述。
術語“和/或”,例如“X和/或Y”應當理解為意指“X和Y”或“X或Y”並且應當被用來提供對兩種含義或任一含義的明確支持。
術語“胺基酸”是指天然存在的和合成的胺基酸,以及以與天然存在的胺基酸類似的方式起作用的胺基酸類似物和胺基酸模擬物。天然存在的胺基酸是由遺傳密碼編碼的那些胺基酸,以及後來修飾的那些胺基酸,例如羥脯胺酸、γ-羧基谷胺酸和O-磷酸絲胺酸。胺基酸類似物是指與天然存在的胺基酸具有相同基本化學結構(即與氫、羧基、胺基和R基團結合的α碳)的化合物,例如高絲胺酸、正亮胺酸、甲硫胺酸亞碸、甲硫胺酸甲基鋶。此類類似物具有修飾的R基團(例如,正亮胺酸)或修飾的肽骨架,但保留與天然存在的胺基酸相同的基本化學結構。胺基酸模擬物是指具有與胺基酸的一般化學結構不同的結構,但是以與天然存在的胺基酸類似的方式起作用的化學化合物。
術語“胺基酸突變”包括胺基酸取代,缺失,插入和修飾。可以進行取代、缺失、插入和修飾的任意組合來實現最終構建體,只要最終構建體擁有期望的特性,例如降低或對Fc受體的結合。胺基酸序列缺失和插入包括在多肽鏈的胺基端和/或羧基端的缺失和插入。具體的胺基酸突變可以是胺基酸取代。在一個實施方式中,胺基酸突變是非保守性的胺基酸取代,即將一個胺基酸用具有不同結構和/或化學特性的另一種胺基酸替換。胺基酸取代包括由非天然存在的胺基酸或由20種天然胺基酸的衍生物(例如4-羥脯胺酸、3-甲基組胺酸、鳥胺酸、高絲胺酸、5-羥賴胺酸)替換。可以使用本領域中公知的遺傳或化學方法生成胺基酸突變。遺傳方法可以包括定點誘變、PCR,基因合成等。預計基因工
程以外的改變胺基酸側鏈基團的方法,如化學修飾也是可用的。本文中可使用各種名稱來指示同一胺基酸突變。本文中,可採用位置+胺基酸殘基的方式表示特定位點的胺基酸殘基,例如366W,則表示在366位點上的胺基酸殘基為W。T366W則表示第366位點上的胺基酸殘基由原來的T突變為了W。
術語“抗原結合分子”以最廣義使用,涵蓋各種特異性結合抗原的分子,包括但不限於抗體、其他具有抗原結合活性的多肽以及兩者融合而成的抗體融合蛋白,只要它們展現出期望的抗原結合活性。本文的抗原結合分子包含可變區(VH)和可變區(VL),其共同構成抗原結合域。示例性的,本文中的抗原結合分子是雙特異性抗原結合分子(例如:雙特異性抗體)。
術語“抗體”以最廣義使用,並且涵蓋各種抗體結構,包括但不限於單株抗體,多株抗體;單特異性抗體,多特異性抗體(例如雙特異性抗體),全長抗體和抗體片段(或抗原結合片段,或抗原結合部分),只要它們展現出期望的抗原結合活性。例如,天然IgG抗體是約150,000道爾頓的異四聚糖蛋白,由二硫鍵結合的兩條相同輕鏈和兩條相同重鏈構成。從N至C端,每條重鏈具有一個可變區(VH),又稱作可變重域、重鏈可變區,接著是三個恆定域(CH1、CH2和CH3)。類似地,從N至C端,每條輕鏈具有一個可變區(VL),又稱作可變輕域,或輕鏈可變域,接著是一個恆定輕域(輕鏈恆定區、CL)。
術語“雙特異性抗體”指能夠對兩個不同抗原或同一抗原的至少兩個不同抗原表位特異性結合的抗體(包括抗體或其抗原結合片段,如單鏈抗體)。現有技術已揭露了各種結構的雙特異性抗體,根據IgG分子的完整性可分為IgG樣雙特異性抗體和抗體片段型雙特異性抗體,根據抗原結合區域的數量可分為二價、三價、四價或更多價的雙特異性抗體,根據結構是否對稱可分為對稱結構
雙特異性抗體和不對稱結構雙特異性抗體。其中,基於抗體片段的雙特異性抗體,例如缺乏Fc片段的Fab片段,其藉由將2個或多個Fab片段結合在一個分子中形成雙特異性抗體,其具有較低的免疫原性,且分子量小,具有較高的腫瘤組織滲透性,該類型的典型的抗體結構如F(ab)2、scFv-Fab、(scFv)2-Fab;IgG樣雙特異性抗體(例如具有Fc片段),這類抗體相對分子量較大,Fc片段有助於抗體的純化,並提高其溶解性、穩定性,Fc部分還可能會與受體FcRn結合,增加抗體血清半衰期,典型的雙特異性抗體結構模型如KiH、CrossMAb、Triomab quadroma、Fc△Adp、ART-Ig、BiMAb、Biclonics、BEAT、DuoBody、Azymetric、XmAb、2:1 TCBs、1Fab-IgG TDB、FynomAb、two-in-one/DAF、scFv-Fab-IgG、DART-Fc、LP-DART、CODV-Fab-TL、HLE-BiTE、F(ab)2-CrossMAb、IgG-(scFv)2、Bs4Ab、DVD-Ig、Tetravalent-DART-Fc、(scFv)4-Fc、CODV-Ig、mAb2、F(ab)4-CrossMAb等(參見Aran F.Labrijn等,Nature Reviews Drug Discovery volume 18,pages585-608(2019);Chen S1等,J Immunol Res.2019 Feb 11;2019:4516041)。
術語“可變區”或“可變域”指抗原結合分子中結合抗原的域。本文中,特異性結合FLT3的抗原結合模塊中的重鏈可變區標示為FLT3-VH,輕鏈可變區標示為FLT3-VL;特異性結合CD3的抗原結合模塊中的重鏈可變區標示為CD3-VH,輕鏈可變區標示為CD3-VL。VH和VL各包含四個保守的框架區(FR)和三個互補決定區(CDR)。其中,術語“互補決定區”或“CDR”指可變結構域內主要促成與抗原結合的區域;“框架”或“FR”是指除CDR殘基之外的可變結構域殘基。VH包含3個CDR區:HCDR1、HCDR2和HCDR3;VL包含3個CDR區:LCDR1、LCDR2和LCDR3。本文中,FLT3-VH中的3個CDR區分別標示為FLT3-HCDR1、FLT3-HCDR2和FLT3-HCDR3;FLT3-VL中的3個CDR區分
別標示為FLT3-LCDR1、FLT3-LCDR2和FLT3-LCDR3;CD3-VH中的3個CDR區分別標示為CD3-HCDR1、CD3-HCDR2和CD3-HCDR3;CD3-VL中的3個CDR區分別標示為CD3-LCDR1、CD3-LCDR2和CD3-LCDR3。每個VH和VL從N端到C端依次為:FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。單個VH或VL可能足以賦予抗原結合特異性。
可以藉由各種公知方案來確定CDR的胺基酸序列邊界,例如:“Kabat”編號規則(參見Kabat等(1991),“Sequences of Proteins of Immunological Interest”,第5版,Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD)、“Chothia”編號規則、“ABM”編號規則、“Contact”編號規則(參見Martin,ACR.Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains[J].2001)和ImMunoGenTics(IMGT)編號規則(Lefranc,M.P.等,Dev.Comp.Immunol.,27,55-77(2003);Front Immunol.2018 Oct 16;9:2278)等;各種編號系統之間的對應關係是所屬技術領域具有通常知識者熟知的。本揭露的編號規則如表1所示。
除非另有說明,本揭露實施例中的可變區和CDR序列均適用“Kabat”編號規則。
術語“抗體片段”指不同於完整抗體的分子,其包含完整抗體的部分,該部分保留了完整抗體的抗原結合能力。抗體片段的實例包括但不限於Fv、Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2、單域抗體、單鏈Fab(scFab)、雙抗體、線性抗體、單鏈抗體分子(例如scFv);以及由抗體片段形成的多特異性抗體。
如本文所述,術語“Fab”或“Fab片段”可互換使用,其是指由VL、VH、CL和CH1結構域組成的單價抗體片段;在本文中,一種抗體,例如抗FLT3抗體的Fab單價抗體片段可以藉由其CH1的C-末端與Fc1亞基連接,所形成的Fab-Fc1可進一步藉由在Fc1亞基N-末端的二硫鍵與另一種抗體,例如抗CD3抗體的Fab-Fc2形成雙特異性抗體。
術語“Fc區”或“片段可結晶區”用於定義抗體重鏈的C末端區域,包括天然Fc區和改造的Fc區。在一些實施方式中,Fc區包含了相同或不同的兩個亞基。在一些實施方式中,人IgG重鏈的Fc區定義為從Cys226位置處的胺基酸殘基或從Pro230延伸至其羧基末端。用於本文所述抗體的合適天然序列Fc區包括人IgG1、IgG2(IgG2A、IgG2B)、IgG3和IgG4。除非另有說明,Fc區的編號規則為EU索引。
術語“Titin鏈”是指Titin蛋白中一段長度為78-118個胺基酸的包含Titin Ig-樣152結構域的肽段或其功能變體,該Titin鏈能夠與Obscurin Ig-樣1或Obscurin-樣Ig-樣1結構域結合形成二聚化複合物。術語“Obscurin鏈”是指Obscurin蛋白上一段長度為87-117個胺基酸的包含Obscurin Ig-樣1結構域的肽段或其功能變體,或Obscurin-樣1蛋白上一段長度為78-118個胺基酸的包含
Obscurin-樣Ig-樣1結構域的肽段或其功能變體,該Obscurin鏈能夠與Titin Ig-樣152結構域結合形成二聚化複合物。本揭露的Titin鏈與Obscurin鏈可用於替換Fab中的CH1和CL,形成經替換的Fab(Fab-S),該替換不影響抗原結合分子與抗原的結合。
術語“嵌合”抗體指抗體中的重和/或輕鏈的一部分自特定的來源或物種衍生,而重和/或輕鏈的剩餘部分自不同來源或物種衍生的抗體。
術語“人源化”抗體是保留非人抗體的反應性同時在人中具有較低免疫原性的抗體。例如,可以藉由保留非人CDR區並用其人對應物(即,恆定區以及可變區的框架區部分)替換抗體的其餘部分來實現。
術語“親和力”是指分子(例如,抗體)的單個結合部位與其結合配體(例如,抗原)之間非共價相互作用的總體的強度。除非另外指明,如本文所用,“結合親和力”是指內部結合親和力,其反映出結合對(例如,抗體與抗原)的成員之間1:1相互作用。分子X對其配體Y的親和力通常可以由平衡解離常數(KD)表示。親和力可以藉由本領域已知的常規方法(包括本文所述的那些)測量。術語“kassoc”或“ka”指特定抗體-抗原相互作用的締合速率,而如本文所使用的術語“kdis”或“kd”意在是指特定抗體-抗原相互作用的解離速率。如本文所使用的,術語“KD”指平衡解離常數,其獲得自kd與ka的比率(即kd/ka)並且表示為莫耳濃度(M)。可以使用本領域已知的方法測定抗體的KD值,例如表面等離子體共振法、ELISA或溶液平衡滴定法(SET)。
術語“單株抗體”指基本上均質的抗體的群,即在該群中包含的抗體分子的胺基酸序列是相同的,除了可能少量存在的天然突變以外。相比之下,多株抗體製劑通常包含在其可變結構域具有不同胺基酸序列的多種不同抗體,
其通常特異性針對不同表位。“單株”表示從基本上均質的抗體群體獲得的抗體的特徵,並且不應解釋為要求藉由任何特定方法來生產抗體。在一些實施方式中,本揭露提供的抗體是單株抗體。
術語“抗原”是指能夠由抗原結合蛋白(例如抗體)的選擇性結合劑所結合的分子或分子部分。抗原可具有一個或多個能夠與不同的抗原結合蛋白(例如抗體)相互作用的表位。
術語“表位”指能夠與抗體或其抗原結合片段特異性結合的抗原上的區域(area或region)。表位可以由連續胺基酸(線性表位)形成或包含非連續胺基酸(構象表位),例如因抗原的折疊(即藉由蛋白質性質的抗原的三級折疊)而使得非連續的胺基酸在空間上得以接近。構象表位和線性表位的差別在於:在變性溶劑的存在下,抗體對構象表位的結合喪失。表位包含處於獨特空間構象的至少3,至少4,至少5,至少6,至少7,或8-10個胺基酸。篩選結合特定表位的抗體(即那些結合相同表位的)可以使用本領域例行方法來進行,例如但不限於丙胺酸掃描,肽印跡(見Meth.Mol.Biol.248(2004)443-463),肽切割分析,表位切除,表位提取,抗原的化學修飾(見Prot.Sci.9(2000)487-496),和交叉阻斷(見“Antibodies”,Harlow and Lane(Cold Spring Harbor Press,Cold Spring Harb.,NY))。
術語“能夠特異性結合”、“特異性結合”或“結合”是指相比其他抗原或表位,抗體能夠以更高的親和力結合至某個抗原或表位。通常,抗體以約1×10-8M或更小(例如約5×10-9M或更小)的平衡解離常數(KD)結合抗原或表位。在一些實施方式中,抗體與抗原結合的KD為該抗體結合至非特異性抗原(例如BSA、酪蛋白)的KD的10%或更低(例如1%)。可使用已知的方法來
測量KD,例如藉由FACS或表面等離子體共振測定法所測量的。然而,特異性結合至抗原或抗原內的表位的抗體可能對其它相關的抗原具有交叉反應性,例如,對來自其它物種(同源)(諸如人或猴,例如食蟹獼猴(Macaca fascicularis)(cynomolgus,cyno)、黑猩猩(Pan troglodytes)(chimpanzee,chimp))或狨猴(Callithrix jacchus)(commonmarmoset,marmoset)的相應抗原具有交叉反應性。
術語“不結合”是指抗體不能夠以上述特異性結合的方式結合至某個抗原或該抗原內的表位。例如,當抗體以約1×10-6M或更大的平衡解離常數(KD)結合抗原或抗原內的表位。
術語“抗原結合模塊”指特異性結合目標抗原的多肽分子。具體的抗原結合模塊包括抗體的抗原結合域,例如包含重鏈可變區和輕鏈可變區。術語“特異性結合FLT3的抗原結合模塊”是指能夠以足夠的親和力結合FLT3的模塊,使得含有該模塊的分子可用作靶向FLT3的診斷劑和/或治療劑。例如,特異性結合FLT3的抗原結合模塊具有以下的平衡解離常數(KD):<約10nM,其是藉由表面等離子體共振測定法測量的。抗原結合模塊包括如本文定義的抗體片段,例如Fab,經替換的Fab或scFv。
術語“連接子”指連接兩個多肽片段的連接單元。在本文中,同一結構式中出現的連接子可以是相同或不同的。連接子可以是肽連接子,其包含一個或多個胺基酸,典型的約1-30個、2-24個或3-15個胺基酸。應用於本文的連接子可以是相同或不同的。當“-”出現在結構式中,其表示兩側的單元直接藉由共價鍵連接。
“Tm”是溶解變性溫度(內源螢光)。當蛋白質變性(加熱或變性劑作用)時,三級結構打開,芳香族胺基酸微環境發生變化,導致發射螢光光譜改變。本揭露中,Tm1是指螢光變化到最大值的一半時的溫度。
“Tonset”是變性起始溫度。意指蛋白質開始變性時的溫度,即螢光值開始變化時的溫度。
“Tagg”是聚集起始溫度。藉由靜態光散射,在266nm和473nm兩個波長下檢測聚集體,監測到樣品開始聚集時的溫度。Tagg 266指的是266nm下監測到聚集起始溫度。
術語“核酸”在本文中可與術語“多核苷酸”互換使用,並且是指呈單鏈或雙鏈形式的脫氧核糖核苷酸或核糖核苷酸及其聚合物。該術語涵蓋含有已知核苷酸類似物或修飾的骨架殘基或連接的核酸,該核酸是合成的、天然存在的和非天然存在的,具有與參考核酸相似的結合特性,並且以類似於參考核苷酸的方式代謝。此類類似物的實例包括但不限於硫代磷酸酯、胺基磷酸酯、甲基膦酸酯、手性-甲基膦酸酯、2-O-甲基核糖核苷酸、肽-核酸(PNA)。“分離的”核酸指已經與其天然環境的組分分開的核酸分子。分離的核酸包括在下述細胞中含有的核酸分子,該細胞通常含有該核酸分子,但該核酸分子存在於染色體外或存在於不同於其天然染色體位置的染色體位置處。編碼該抗原結合分子的分離的核酸指編碼抗體重鏈和輕鏈(或其片段)的一個或更多個核酸分子,包括在單一載體或分開的載體中的這樣的一個或更多個核酸分子,和存在於宿主細胞中一個或更多個位置的這樣的一個或更多個核酸分子。除非另有說明,否則特定的核酸序列還隱含地涵蓋其保守修飾的變體(例如,簡併密碼子取代)和互補序列以及明確指明的序列。具體地,如下詳述,簡併密碼子取代可以藉由產生如下序
列而獲得,在這些序列中,一個或多個所選的(或全部)密碼子的第三位被簡併鹼基和/或脫氧肌苷殘基取代。
術語“多肽”和“蛋白質”在本文中可互換使用,指胺基酸殘基的聚合物。該術語適用於胺基酸聚合物,其中一個或多個胺基酸殘基是天然存在的胺基酸相應的人工化學模擬物,以及適用於天然存在的胺基酸聚合物和非天然存在的胺基酸聚合物。除非另外說明,否則特定的多肽序列還隱含地涵蓋其保守修飾的變體。
術語序列“同一性”指,當對兩條序列進行最佳比對時,兩條序列的胺基酸/核酸在等價位置相同的程度(百分比)。在比對過程中,必要時可允許引入間隙以獲取最大序列同一性百分比,但任何保守性取代不視為構成序列同一性的一部分。為測定序列同一性百分比,比對可以藉由本領域技術已知的技術來實現,例如使用公開可得到的計算機軟體,諸如BLAST、BLAST-2、ALIGN、ALIGN-2或Megalign(DNASTAR)軟體。所屬技術領域具有通常知識者可確定適用於測量比對的參數,包括在所比較的序列全長上達成最大比對所需的任何算法。
術語“融合”或“連接”是指部件(例如抗原結合模塊和Fc結構域)直接地或經由連接子共價連接。
術語“載體”意指能夠轉運與其連接的另一多核苷酸的多核苷酸分子。一種類型的載體是“質粒”,其是指環狀雙鏈DNA環,其中可以連接附加的DNA區段。另一種類型的載體是病毒載體,例如腺相關病毒載體(AAV或AAV2),其中另外的DNA區段可以連接到病毒基因組中。某些載體能夠在引入它們的宿主細胞中自主複製(例如,具有細菌複製起點的細菌載體和附加型哺
乳動物載體)。其他載體(例如,非附加型哺乳動物載體)可以在引入宿主細胞中後整合到宿主細胞的基因組中,從而與宿主基因組一起複製。術語“表達載體”或“表達構建體”是指適用於對宿主細胞進行轉化且含有指導及/或控制(連同宿主細胞一起)與其可操作地連接的一個或多個異源編碼區的表達的核酸序列的載體。表達構建體可以包括但不限於影響或控制轉錄、翻譯且在存在內含子時影響與其可操作地連接的編碼區的RNA剪接的序列。
術語“宿主細胞”、“宿主細胞系”和“宿主細胞培養物”可互換使用,並且指已經導入外源核酸的細胞,包括此類細胞的後代。宿主細胞包括“轉化體”和“經轉化的細胞”,其包括原代的經轉化的細胞及自其衍生的後代,而不考慮傳代的次數。後代在核酸內容物上可以與親本細胞不完全相同,而是可以含有突變。本文中,該術語包括突變體後代,其與在原代轉化細胞中篩選或選擇的細胞具有相同的功能或生物學活性。宿主細胞包括原核和真核宿主細胞,其中真核宿主細胞包括但不限於哺乳動物細胞、昆蟲細胞系植物細胞和真菌細胞。哺乳動物宿主細胞包括人、小鼠、大鼠、犬、猴、豬、山羊、牛、馬和倉鼠細胞,包括但不限於中國倉鼠卵巢(CHO)細胞、NSO、SP2細胞、HeLa細胞、幼倉鼠腎(BHK)細胞、猴腎細胞(COS)、人肝細胞癌細胞(例如,Hep G2)、A549細胞、3T3細胞和HEK-293細胞。真菌細胞包括酵母和絲狀真菌細胞,包括例如巴氏畢赤酵母(Pichiapastoris)、芬蘭畢赤酵母(Pichia finlandica)、海藻畢赤酵母(Pichia trehalophila)、科克拉馬畢赤酵母(Pichia koclamae)、膜狀畢赤酵母(Pichia membranaefaciens)、小畢赤酵母(Pichia minuta)(Ogataea minuta、Pichia lindneri)、仙人掌畢赤酵母(Pichiaopuntiae)、耐熱畢赤酵母(Pichia thermotolerans)、柳畢赤酵母(Pichia salictaria)、松櫟畢赤酵母(Pichia guercuum)、
皮傑普畢赤酵母(Pichia pijperi)、具柄畢赤酵母(Pichia stiptis)、甲醇畢赤酵母(Pichia methanolica)、畢赤酵母屬、釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)、釀酒酵母屬、多形漢遜酵母(Hansenula polymorpha)、克魯維酵母屬、乳酸克魯維酵母(Kluyveromyces lactis)、白色念珠菌(Candida albicans)、構巢麯黴(Aspergillus nidulans)、黑麯黴(Aspergillus niger)、米麯黴(Aspergillus oryzae)、裡氏木黴(Trichoderma reesei)、勒克氏菌(Chrysosporium lucknowense)、鐮刀菌屬(Fusarium sp.)、禾穀鐮刀菌(Fusarium gramineum)、菜鐮刀菌(Fusarium venenatum)、小立碗蘚(Physcomitrella patens)和粗糙脈孢菌(Neurospora crassa)。畢赤酵母屬、任何釀酒酵母屬、多形漢遜酵母(Hansenula polymorpha)、任何克魯維酵母屬、白色念珠菌(Candida albicans)、任何麯黴屬、裡氏木黴(Trichoderma reesei)、勒克黴菌(Chrysosporium lucknowense)、任何鐮刀菌屬、解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)和粗糙脈孢菌(Neurospora crassa)。本專利的宿主細胞不包括在專利法中不授權的客體。
如在本揭露中所使用的,表述“細胞”、“細胞系”和“細胞培養物”可以互換使用,並且所有這樣的名稱均包括子代。因而,詞語“轉化體”和“轉化的細胞”包括原代受試者細胞和來源於其的培養物,而與傳代的次數無關。還應理解的是,由於有意或無意的突變,使得並非所有子代均具有完全相同的DNA內容物。包括與篩選出其的原始轉化細胞具有相同功能或生物活性的突變子代。
“視需要”或“視需要地”意味著隨後所描述地事件或環境可以但不必發生,該說明包括該事件或環境發生或不發生的場合。
術語“醫藥組成物”表示含有一種或多種本文所述的抗原結合分子或抗體與其他化學組分的混合物,該其他組分例如生理學/可藥用的載體和賦形劑。
術語“藥學上可接受的載體”指藥物製劑中與活性成分不同的,且對受試者無毒的成分。藥學上可接受載劑包括但不限於緩衝劑、賦形劑、穩定劑或防腐劑。
術語“受試者”或“個體”包括人類和非人類動物。非人動物包括所有脊椎動物(例如哺乳動物和非哺乳動物)例如非人靈長類(例如,食蟹猴)、綿羊、狗、牛、雞、兩棲動物和爬行動物。除非明確指出,否則該術語“患者”或“受試者”在本文中可互換地使用。如本文所使用的,術語“食蟹猴(cyno)”或“食蟹猴(cynomolgus)”是指食蟹猴(Macaca fascicularis)。在某些實施方案中,個體或受試者是人。
“施用”或“給予”,當其應用於動物、人、實驗受試者、細胞、組織、器官或生物流體時,是指外源性藥物、治療劑、診斷劑或組成物與動物、人、受試者、細胞、組織、器官或生物流體的接觸。
術語“樣本”是指從受試者分離的類似流體、細胞、或組織的採集物,以及存在於受試者體內的流體、細胞或組織。示例性樣本為生物流體,諸如血液、血清和漿膜液、血漿、淋巴液、尿液、唾液、囊液、淚液、排泄物、痰、分泌組織和器官的黏膜分泌物、陰道分泌物、腹水、胸膜、心包、腹膜、腹腔和其它體腔的流體、由支氣管灌洗液收集的流體、滑液、與受試者或生物來源接觸的液體溶液,例如細胞和器官培養基(包括細胞或器官條件培養基)、灌洗液等,組織活檢樣本、細針穿刺、手術切除的組織、器官培養物或細胞培養物。
“治療(treatment或treat)”和“處理”(及其語法變型)指試圖施加至所治療個體的臨床干預,並且可以為了預防目的、或者在臨床病理學的過程期間進行實施。治療的期望效果包括但不限於預防疾病的發生或復發,減輕症狀,減輕/減少疾病的任何直接或間接病理後果,預防轉移,降低疾病進展速率,改善或減輕疾病狀態,和消退或改善的預後。在一些實施方案中,使用本揭露的分子來延遲疾病的形成或減緩疾病的進展。
“有效量”一般是足以降低症狀的嚴重程度及/或頻率、消除這些症狀及/或潛在病因、預防症狀及/或其潛在病因出現及/或改良或改善由疾病狀態引起或與其相關的損傷(例如肺病)的量。在一些實施例中,有效量是治療有效量或預防有效量。“治療有效量”是足以治療疾病狀態或症狀、尤其與該疾病狀態相關的狀態或症狀,或者以其他方式預防、阻礙、延遲或逆轉該疾病狀態或以任何方式與該疾病相關的任何其他不理想症狀的進展的量。“預防有效量”是當給予受試者時將具有預定預防效應,例如預防或延遲該疾病狀態的發作(或復發),或者降低該疾病狀態或相關症狀的發作(或復發)可能性的量。完全治療或預防效果未必在給予一個劑量之後便發生,可能在給予一系列劑量之後發生。因而,治療或預防有效量可以一次或多次給予的方式給予。“治療有效量”和“預防有效量”可取決於多種因素變化:諸如個體的疾病狀態、年齡、性別和體重,以及治療劑或治療劑組合在個體中引發期望的應答的能力。有效治療劑或治療劑組合的示例性指標包括例如患者改善的健康狀況。
本揭露的抗原結合分子
本揭露提供了抗原結合分子,其具有諸多有利的特性,例如對FLT3和表達FLT3的細胞的高親和力、體外殺傷活性、治療活性、安全性、藥物代謝動力學特性和成藥性(如產率、純度和穩定性等)。
示例性的抗原結合分子
本揭露的抗原結合分子,包括特異性結合FLT3和CD3的雙特異性抗原結合分子(例如雙特異性抗體)和抗FLT3抗體。特別的,本揭露的抗原結合分子具有如下任一的性質:
a.針對FLT3的高親和力。該抗原結合分子在25℃條件下以小於1×10-7M,1×10-8M,5×10-9M的KD結合人FLT3,該KD是藉由表面等離子體共振法測量的。
b.針對表達FLT3的細胞表面的FLT3的高親和力。該抗體以小於10pM,1pM或0.5pM的EC50結合細胞表面FLT3,該EC50是藉由ELISA測量的。該細胞是Monomac-6。
c.對FLT3陽性的細胞具有體外特異性殺傷活性。
d.誘導低水平的細胞因子(IL6和IFNγ)釋放。
e.更強的體內治療活性。
本揭露提供了一種抗原結合分子,其包含至少一個特異性結合FLT3的抗原結合模塊和至少一個特異性結合CD3的抗原結合模塊,該特異性結合FLT3的抗原結合模塊包含FLT3-VH和FLT3-VL,該特異性結合CD3的抗原結合模塊包含CD3-VH和CD3-VL。本揭露還提供了一種分離的抗體,其能夠特異性結合FLT3,該抗體包含FLT3-VH和FLT3-VL。具體地,本文的實施例披露了抗體系列18、99和125。以下以含抗體125的抗原結合分子為例進行描述。
特異性結合FLT3和CD3的抗原結合分子或抗FLT3抗體的該FLT3-VH具有:胺基酸序列如SEQ ID NO:19所示的FLT3-HCDR1、胺基酸序列如SEQ ID NO:20所示的FLT3-HCDR2和胺基酸序列如SEQ ID NO:21所示的FLT3-HCDR3,和該FLT3-VL具有:胺基酸序列如SEQ ID NO:83或22所示的FLT3-LCDR1、胺基酸序列如SEQ ID NO:84或23所示的FLT3-LCDR2和胺基酸序列如SEQ ID NO:24所示的FLT3-LCDR3。在一些實施方式中,該FLT3-VH具有:胺基酸序列如SEQ ID NO:19所示的FLT3-HCDR1、胺基酸序列如SEQ ID NO:20所示的FLT3-HCDR2和胺基酸序列如SEQ ID NO:21所示的FLT3-HCDR3,和該FLT3-VL具有:胺基酸序列如SEQ ID NO:83所示的FLT3-LCDR1、胺基酸序列如SEQ ID NO:84所示的FLT3-LCDR2和胺基酸序列如SEQ ID NO:24所示的FLT3-LCDR3。
在一些實施方案中,如前所述的抗原結合分子或抗體,該FLT3-VH和/或該FLT3-VL是鼠源的或人源化的。在一些實施方案中,該FLT3-VH和/或該FLT3-VL是人源化的。在一些實施方案中,該人源化的FLT3-VH的FR1、FR2和FR3與SEQ ID NO:5的FR1、FR2和FR3具有至少60%、70%或80%的序列同一性,該人源化的FLT3-VH的FR4與SEQ ID NO:5的FR4具有至少80%或90%的序列同一性,該人源化的FLT3-VL的FR1、FR2和FR3與SEQ ID NO:6的FR1、FR2和FR3具有至少60%、70%或80%的序列同一性和/或該人源化的FLT3-VL的FR4與SEQ ID NO:6的FR4具有至少80%或90%的序列同一性。在一些實施方案中,該FLT3-VH具有來源於IGHV1-46*01的FR1、FR2、FR3和來源於IGHJ1*01的FR4,並且其是未被取代的或具有選自1E、37L、48I、67A、69W、71V和78A組成的組中的一個或多個胺基酸取代;和/或該FLT3-VL
具有來源於IGKV6-21*01的FR1、FR2、FR3和來源於IGKJ4*01的FR4,並且其是未被取代的或具有選自2N、47W、49Y和71Y組成的組中的一個或多個胺基酸取代。在一些實施方案中,上述可變區和CDR是根據Kabat編號規則定義的。
在一些實施方案中,如前任一項所述的抗原結合分子或抗體,其中該FLT3-VH的胺基酸序列與SEQ ID NO:53、5、52或54具有至少85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的序列同一性,和該FLT3-VL的胺基酸序列與SEQ ID NO:56、6或55具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的序列同一性。在一些實施方案中,該FLT3-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO:53、5、52或54所示,和該FLT3-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO:56、6或55所示。在一些實施方案中,該FLT3-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO:53、52或54所示,和該FLT3-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO:56或55所示。
在一些實施方案中,如前任一項所述的抗原結合分子或抗體,其中
該FLT3-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO:53所示,和該FLT3-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO:56所示,或
該FLT3-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO:52所示,和該FLT3-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO:55所示,或
該FLT3-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO:53所示,和該FLT3-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO:55所示,或
該FLT3-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO:54所示,和該FLT3-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO:55所示,或
該FLT3-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO:54所示,和該FLT3-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO:56所示,或
該FLT3-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO:52所示,和該FLT3-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO:56所示,或
該FLT3-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO:5所示,和該FLT3-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO:6所示。
在一些實施方案中,如前任一項所述的抗原結合分子或抗體,其中該FLT3-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO:53所示,和該FLT3-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO:56所示。
在一些實施方案中,如前所述的抗原結合分子,該CD3-VH具有:胺基酸序列如SEQ ID NO:57所示的CD3-HCDR1,胺基酸序列如SEQ ID NO:58所示的CD3-HCDR2,和胺基酸序列如SEQ ID NO:59所示的CD3-HCDR3;並且該CD3-VL具有:胺基酸序列如SEQ ID NO:60所示的CD3-LCDR1,胺基酸序列如SEQ ID NO:61所示的CD3-LCDR2,和胺基酸序列如SEQ ID NO:62所示的CD3-LCDR3。
在一些實施方案中,如前任一項所述的抗原結合分子,該CD3-VH和/或該CD3-VL是鼠源的或人源化的。在一些實施方案中,該CD3-VH和/或該CD3-VL是人源化的。在一些實施方案中,該CD3-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO:63所示,和該CD3-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO:64所示。在一些實施方案中,上述可變區和CDR是根據Kabat編號規則定義的。
根據本文實施例所披露的抗體系列18和99的技術方案,這些抗體與以上所描述的抗體125具有類似的技術方案範圍。
抗原結合分子的結構
本揭露的雙特異性抗原結合分子並不受限於特定的分子結構,只要其具有所期望的抗原結合功能。例如,本文的雙特異性抗原結合分子可以是雙價(1+1)的或三價(2+1)的。抗原結合分子中的抗原結合模塊可以是任意的具有抗原結合活性的抗體片段,其藉由肽連接子融合。本揭露的肽連接子可以是任意適宜的肽鏈,只要抗原結合分子能夠展現出期望的抗原結合活性。例如,肽連接子可以是1-50、或3-20個胺基酸殘基的柔性肽。在一些實施方式中,該肽連接子各自獨立地具有L1-(GGGGS)n-L2的結構,其中,L1是鍵、A、GS、GGS、GGGS、SGGGGS、GGGTKLTVLGGG,n是0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10,L2是鍵、G、GG、GGG或GGGG,並且該肽連接子不是鍵。在一些實施方案中,該肽連接子的長度為3-15個胺基酸殘基。在一些實施方案中,該肽連接子各自獨立地具有(GGGGS)n的結構,其中n是1、2或3。在一些實施方案中,該肽連接子是ASTKG(SEQ ID NO:66)、GGGGS(SEQ ID NO:145)、GGGGSGGGGS(SEQ ID NO:146)或GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:147)。
示例性的,本揭露的該抗原結合分子包含一條具有式(a)所示結構的第一鏈、一條具有式(b)所示結構的第二鏈、一條具有式(c-1)所示結構的第三鏈和一條具有式(d-1)所示結構的第四鏈,
(a)[FLT3-VH]-[CH1]-[Fc1],
(b)[FLT3-VL]-[CL],
(c-1)[CD3-VH]-[ASTKG]-[Titin鏈]-[Fc2],
(d-1)[CD3-VL]-[ASTKG]-[Obscurin鏈],
式(a)、(b)、(c-1)和(d-1)所示的結構是從N端至C端排列的。
示例性的雙價抗原結合分子具有:
該抗原結合分子具有:一條胺基酸序列如SEQ ID NO:72所示的第一鏈、一條胺基酸序列如SEQ ID NO:73所示的第二鏈、一條胺基酸序列如SEQ ID NO:74所示的第三鏈和一條胺基酸序列如SEQ ID NO:75所示的第四鏈。
抗原結合分子的變體
在某些實施方案中,涵蓋本文中提供的抗原結合分子的胺基酸序列變體。例如,可以期望改善抗體的結合親和力和/或其它生物學特性。可以藉由將合適的修飾引入編碼抗體的核苷酸序列中,或者藉由肽合成來製備抗體的胺基酸序列變體。此類修飾包括例如對抗原結合分子的胺基酸序列內的殘基的刪除、和/或插入、和/或取代。可以進行刪除、插入、和取代的任何組合以得到最終的構建體,只要最終的構建體擁有期望的特徵,例如抗原結合特性。
取代、插入、和刪除變體
在某些實施方案中,提供了具有一處或多處胺基酸取代的抗原結合分子變體。可以在CDR和FR進行取代。保守取代在表2中在“較佳的取代”的標題下顯示。更實質的變化在表2中在“示例性取代”的標題下提供,並且如下文參照胺基酸側鏈類別進一步描述的。可以將胺基酸取代引入感興趣的抗體中,並且對產物篩選期望的活性,例如保留/改善的抗原結合,降低的免疫原性,或改善的ADCC或CDC。
依照常見的側鏈特性,胺基酸可以如下分組:
(1)疏水性的:正亮胺酸,Met,Ala,Val,Leu,Ile;
(2)中性,親水性的:Cys,Ser,Thr,Asn,Gln;
(3)酸性的:Asp,Glu;
(4)鹼性的:His,Lys,Arg;
(5)影響鏈取向的殘基:Gly,Pro;
(6)芳香族的:Trp,Tyr,Phe。
非保守取代會是指用一個類別的成員替換另一個類別的成員。
一類取代變體涉及取代親本抗體(例如人源化或人抗體)的一個或多個CDR殘基。一般地,經選擇用於進一步研究的所得變體相對於親本抗體會具有某些生物學特性(例如升高的親和力,降低的免疫原性)的改變(例如改善),和/或會基本上保留親本抗體的某些生物學特性。一種示例性的取代變體是親和力成熟的抗體,可以例如使用基於噬菌體展示的親和力成熟技術(如本文所述的那些技術),便利地產生該抗體。簡言之,將一個或多個CDR殘基突變,並將變體抗體在噬菌體上展示,並對其篩選特定的生物學活性(例如結合親和力)。可以對CDR做出改變(例如取代),例如以改善抗體親和力。可以對CDR“熱點”,即在體細胞成熟過程期間以高頻率經歷突變的密碼子所編碼的殘基,和/或接觸抗原的殘基做出此類改變,同時對所得的變體VH或VL測試結合親和力。在親和力成熟的一些實施方案中,藉由多種方法(例如易錯PCR、鏈改組、或寡核苷酸指導的誘變)的任一種,將多樣性引入所選擇用於成熟的可變基因中。然後,創建次級文庫。然後,篩選文庫以鑑定具有期望的親和力的任何抗體變體。另一種引入多樣性的方法涉及CDR定向的方法,其中將幾個CDR殘基(例如一次4-6個殘
基)隨機化。可以例如使用丙胺酸掃描誘變或建模來特異性鑑定涉及抗原結合的CDR殘基。
在某些實施方案中,取代、插入或缺失可以在一個或多個CDR內發生,只要此類變化不實質性降低抗體結合抗原的能力。例如,可以對CDR做出保守變化(例如保守取代,如本文中提供的),其不實質性降低結合親和力。在上文提供的變體VH和VL序列的某些實施方案中,每個CDR是未改變的,或者含有不超過1、2或3處胺基酸取代。
一種可用於鑑定抗體中可以作為誘變靶位的殘基或區域的方法稱作“丙胺酸掃描誘變”。在這種方法中,鑑定一個殘基或殘基組(例如帶電荷的殘基,諸如Arg、Asp、His、Lys和Glu),並且替換為中性或帶負電荷的胺基酸(例如,Ala或聚丙胺酸),以確定該抗體與抗原的相互作用是否受影響。可以在對初始取代顯示功能敏感性的胺基酸位置引入進一步的取代。此外,可藉由研究抗原-抗體複合物的晶體結構來鑑定抗體與抗原間的接觸點。這些接觸殘基及鄰近殘基可以作為取代候選物被打靶或消除。可以篩選變體以確定它們是否含有期望的特性。
胺基酸序列插入包括:在胺基和/或羧基端融合1個殘基或長度為100或更多個殘基的多肽;和單個或多個胺基酸殘基的序列內插入。在末端插入的例子包括具有N端甲硫胺醯基殘基的抗體。抗體分子的其它插入變體包括,在抗體的N或C端融合有酶(或延長抗體的血清半衰期的多肽)的融合物。
Fab的改造
在一個方面,本揭露的抗原結合分子中,該特異性結合FLT3的抗原結合模塊和該特異性結合CD3的抗原結合模塊兩者之一是經替換的Fab,該經替換的
Fab包含重鏈可變區、輕鏈可變區、Titin鏈和Obscurin鏈。在經替換的Fab中,Fab原有的CH1和CL被Titin鏈和Obscurin鏈所替換。示例性的,Titin鏈和Obscurin鏈的序列如表3-1和表3-2所示。
Fc區的改造
在一個方面,本揭露的抗原結合分子的Fc區包含一個或多個胺基酸取代,該一個或多個胺基酸取代減少其與Fc受體的結合,例如其與Fcγ受體的結合,並且降低或消除效應子功能。天然IgG Fc區,具體地是IgG1 Fc區或IgG4 Fc區,可能導致本揭露的抗原結合分子靶向表達Fc受體的細胞,而不是表達抗原的細
胞。本揭露改造的Fc區表現出降低的對Fc受體的結合親和力和/或降低的效應子功能。在一些實施方案中,改造的Fc區與天然Fc區相比,對Fc受體的結合親和力下降50%、80%、90%或95%以上。在一些實施方案中,該Fc受體是Fcγ受體。在一些實施方案中,該Fc受體是人Fcγ受體,例如FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIB、FcγRIIIa。在一些實施方案中,改造的Fc區與天然Fc區相比,對補體,如C1q的結合親和力也降低。在一些實施方案中,改造的Fc區與天然Fc區相比,對新生兒Fc受體(FcRn)的結合親和力不降低。在一些實施例中,改造的Fc區具有降低的效應子功能,該降低的效應子功能可以包括但不限於以下中的一個或多個:降低的補體依賴性細胞毒性(CDC)、降低的抗體依賴性細胞介導的細胞毒性(ADCC)、降低的抗體依賴性細胞吞噬(ADCP)、減少的細胞因子分泌、減少的免疫複合物介導的抗原呈遞細胞的抗原攝取、減少的與NK細胞的結合、減少的與巨噬細胞的結合、減少的與單核細胞的結合、減少的與多形核細胞的結合、減少的直接信號傳導誘導性細胞凋亡、降低的樹突細胞成熟或減少的T細胞引發。對於IgG1 Fc區,在238、265、269、270、297、327和329等位置的胺基酸殘基取代可降低的效應子功能。在一些實施方案中,該Fc區是人IgG1 Fc區,並且在234和235位置的胺基酸殘基為A,編號依據為EU索引。對於IgG4 Fc區,在228等位置的胺基酸殘基取代可降低的效應子功能。
抗原結合分子還可包含二硫鍵改造,例如第一亞基的354C和第二亞基的349C。為增加抗原結合分子的血清半衰期,可以引入252Y、254T和256E的突變。
當抗原結合分子包含與Fc區的兩個亞基融合的不同結合模塊,可能導致不期望的同源二聚化。為了提高產率和純度,因此在本揭露的抗原結合
分子的Fc區中引入促進異源二聚化的修飾將是有利的。在一些實施方式中,本揭露的Fc區包含根據杵臼(knob-into-hole,KIH)技術的改造,該方法涉及在第一亞基的界面處引入凸起結構(knob)以及在第二亞基的界面處引入孔結構(hole)。使得該凸起結構可以定位在孔結構中,促進異源二聚體的形成並抑制同源二聚體的產生。凸起結構是藉由用較大側鏈(例如酪胺酸或色胺酸)取代來自第一亞基的界面的小胺基酸側鏈而構建的。而孔結構是藉由用較小的胺基酸側鏈(例如丙胺酸或蘇胺酸)取代大胺基酸側鏈而在第二亞基的界面中創建的。凸起結構和孔結構藉由改變編碼多肽的核酸來製備,可選的胺基酸取代如下表所示:
除了杵臼技術外,用於修飾重鏈的CH3結構域以實現異源二聚化的其他技術也是本領域中已知的,例如WO96/27011、WO98/050431、EP1870459、WO2007/110205、WO2007/147901、WO2009/089004、WO2010/129304、WO2011/90754、WO2011/143545、WO2012/058768、WO2013/157954和WO013/096291。
Fc區的C末端可以是以胺基酸殘基PGK結束的完整C末端;也可以是截短的C末端,例如在該截短的C末端中去除了一個或兩個C末端胺基酸殘基。在一個較佳的方面中,重鏈的C末端是以PG結束的縮短的C末端。因
此,在一些實施方式中,完整抗體的組成物可以包括去除了所有K447殘基和/或G446+K447殘基的抗體群體。在一些實施方式中,完整抗體的組成物可以包括沒有去除K447殘基和/或G446+K447殘基的抗體群體。在一些實施方式中,完整抗體的組成物具有帶有和不帶有K447殘基和/或G446+K447殘基的抗體混合物的抗體群體。
重組方法
抗原結合分子可以使用重組方法來產生。對於這些方法,提供編碼抗原結合分子的一個或更多個分離的核酸。
在天然抗體、天然抗體片段或具有同源二聚體重鏈的雙特異性抗體的情況下,需要兩個核酸,一個用於輕鏈或其片段,一個用於重鏈或其片段。此類核酸編碼包含抗體VL的胺基酸序列和/或包含抗體VH的胺基酸序列(例如抗體的輕鏈和/或重鏈)。這些核酸可以在相同的表達載體上或在不同的表達載體上。
在具有異二聚體重鏈的雙特異性抗體的情況下,需要例如四個核酸,一個用於第一輕鏈,一個用於包含第一異源單體Fc區多肽的第一重鏈,一個用於第二輕鏈,並且一個用於包含第二異源單體Fc區多肽的第二重鏈。這四個核酸可包含在一個或更多個核酸分子或表達載體中,通常這些核酸位於兩個或三個表達載體上,即一個載體可包含這些核酸中的多於一個。
在一個實施方案中,本揭露提供了編碼如前所述的抗體的分離的核酸。此類核酸可以獨立地編碼前述的任一多肽鏈。在另一方面中,本揭露提供了包含此類核酸的一種或多種載體(例如表達載體)。在另一方面中,本揭露提供了包含此類核酸的宿主細胞。在一個實施方案中,提供製備抗原結合分子的方法,
其中該方法包括,在適合抗體表達的條件下,培養包含編碼該抗體的核酸的宿主細胞,如上文所提供的,和視需要地從宿主細胞(或宿主細胞培養基)回收該抗體。
為了重組產生抗原結合分子,將編碼蛋白的核酸分離並插入一個或更多個載體中,用於在宿主細胞中進一步選殖和/或表達。此類核酸可以使用常規程序容易地分離和測序(例如藉由使用能夠與編碼抗體重鏈和輕鏈的基因特異性結合的寡核苷酸探針),或者藉由重組方法產生或藉由化學合成獲得。
用於選殖或表達編碼抗體的載體的適當宿主細胞包括本文描述的原核或真核細胞。例如,抗體可在細菌中產生,特別是當抗體不需要糖基化和Fc效應子功能時。在表達後,抗體可以在可溶級分中從細菌細胞糊狀物分離,並且可進一步純化。
除了原核生物以外,真核微生物諸如絲狀真菌或酵母也是用於編碼抗體的載體的合適的選殖或表達宿主,包括真菌和酵母菌株,其糖基化途徑已經“人源化”,導致產生具有部分或完全人糖基化模式的抗體。適於表達(糖基化)抗體的合適的宿主細胞也可源自多細胞生物體(無脊椎動物和脊椎動物);無脊椎動物細胞的例子包括植物和昆蟲細胞。已經鑑定了許多杆狀病毒株,其可與昆蟲細胞聯合使用,特別是用於草地貪夜蛾(Spodoptera frugiperda)細胞的轉染;還可利用植物細胞培養物作為宿主,例如US5959177、US 6040498、US6420548、US 7125978和US6417429;也可將脊椎動物細胞用作宿主,例如適應於在懸浮液中生長的哺乳動物細胞系。適宜的哺乳動物宿主細胞系的其它例子是經SV40轉化的猴腎CV1系(COS-7);人胚腎系(293或293T細胞);幼倉鼠腎細胞(BHK);小鼠塞托利(sertoli)細胞(TM4細胞);猴腎細胞(CV1);非洲綠猴腎細胞(VERO-76);人宮頸癌細胞(HELA);犬腎細胞(MDCK);水牛鼠(buffalo rat)肝細胞
(BRL3A);人肺細胞(W138);人肝細胞(Hep G2);小鼠乳房腫瘤(MMT 060562);TRI細胞;MRC 5細胞;和FS4細胞。其它適宜的哺乳動物宿主細胞系包括中國倉鼠卵巢(CHO)細胞,包括DHFR-CHO細胞;以及骨髓瘤細胞系,如Y0、NS0和Sp2/0。關於適合產生抗體的某些哺乳動物宿主細胞系的綜述參見例如Yazaki,P.和Wu,A.M.,Methods in Molecular Biology,Vol.248,Lo,B.K.C.(編),Humana Press,Totowa,NJ(2004),第255-268頁。
免疫綴合物
本揭露還提供免疫綴合物,其包含與一種或多種細胞毒性劑綴合的抗原結合分子,該一種或多種細胞毒性劑為諸如化學治療劑或藥物、生長抑制劑、毒素(例如細菌、真菌、植物或動物來源的蛋白質毒素、酶活性毒素,或它們的片段)、或放射性同位素。
診斷與治療組成物
在某些實施方案中,本揭露提供的抗原結合分子可用於檢測生物學樣品中FLT3和/或CD3的存在。在用於本文時,術語“檢測”涵蓋定量或定性檢測。在某些實施方案中,生物學樣品包含細胞或組織,諸如腫瘤組織。
在一個實施方案中,提供了在診斷或檢測方法中使用的抗原結合分子。在又一方面,提供了檢測生物學樣品中FLT3和/或CD3的存在的方法。在某些實施方案中,該方法包括在適宜條件下使生物學樣品與抗原結合分子接觸,並檢測是否在檢測試劑與抗原之間形成複合物。此類方法可以是體外或體內方法。在一個實施方案中,使用抗原結合分子來選擇適合治療的受試者,例如FLT3和/或CD3是用於選擇患者的生物標誌物。
可使用本揭露的抗原結合分子來診斷的例示性病症,例如腫瘤或癌症。
在某些實施方案中,提供了經標記的抗原結合分子。標記物包括但不限於直接檢測的標記物或模塊(諸如螢光、發色、電子緻密、化學發光、和放射性標記物),和間接檢測的模塊(例如,經由酶反應或分子相互作用間接檢測的模塊,諸如酶或配體)。
在另外的方面,提供包含該抗原結合分子的醫藥組成物,例如,用於以下任何治療方法。在一個方面,醫藥組成物包含本文提供的任何抗原結合分子和藥學上可接受的載體。在另一個方面,醫藥組成物包含本文提供的任何抗原結合分子和至少一種另外的治療劑。
本揭露所述的抗原結合分子的醫藥組成物藉由以下製備:將具有所需純度的此類抗原結合分子與一種或更多種視需要的藥學上可接受的載體混合,該醫藥組成物為凍乾組成物或水溶液的形式。用於體內施用的製劑一般是無菌的。無菌性可容易地實現,例如藉由穿過無菌濾膜過濾。
治療方法與施用途徑
本文提供的任何抗原結合分子可用於治療方法。
在又一個方面,本揭露提供抗原結合分子在藥物的製造或製備中的用途。在一個實施方案中,該藥物用於治療腫瘤或癌症。並且該藥物是以對上述疾病的有效量的形式存在的。在一些實施方式中,該有效量是單位日劑量或單位週劑量。在一個此類實施方案中,該用途進一步包括向受試者施用有效量的至少一種另外的治療劑(例如一種、兩種、三種、四種、五種或六種另外的治療劑)。根據任意以上實施方案的“受試者”可以是人。
在又一個的方面,提供包含該抗原結合分子的醫藥組成物,例如,其用於以上任何製藥用途或治療方法。在另一個實施方案中,醫藥組成物還包含至少一種另外的治療劑。
本揭露的抗原結合分子可單獨使用或與其他試劑聯合用於治療。例如,本揭露的抗原結合分子可與至少一種另外的治療劑共同施用。
本揭露的抗原結合分子(和任何另外的治療劑)可藉由任何合適的手段施用,包括腸胃外、肺內和鼻內,並且如果需要局部治療,則病灶內施用。腸胃外輸注包括肌肉內、靜脈內、動脈內、腹膜內或皮下施用。給藥可以藉由任何適當的途徑,例如,藉由注射,諸如靜脈內或皮下注射,這部分取決於施用是短期的還是長期的。本文考慮多種給藥時間方案,包括但不限於,單次或在多個時間點多次施用,推注施用和脈衝輸注。
本揭露的抗原結合分子將以符合良好醫療實踐的方式配製、給藥和施用。在此背景下考慮的因素包括所治療的具體病症、所治療的具體哺乳動物、個體患者的臨床狀況、病症的起因、試劑的遞送部位、施用方法、施用時間安排以及醫學從業者已知的其他因素。抗原結合分子無需但視需要地與目前用於預防或治療該病症的一種或更多種試劑一起配製。此類其它試劑的有效量取決於醫藥組成物中存在的抗原結合分子的量、病症或治療的類型以及上文討論的其它因素。這些通常以與本文所述相同的劑量和施用路徑使用,或以本文所述劑量的約1至99%使用,或以任何劑量使用,並藉由經驗/臨床確定為合適的任何途徑使用。
為了預防或治療疾病,本揭露的抗原結合分子(當單獨使用或與一種或更多種其他另外的治療劑組合使用時)的適當的劑量將取決於待治療的
疾病的類型,治療分子的類型,疾病的嚴重性和病程,是為預防還是治療目的施用,之前的治療,患者的臨床病史和對治療分子的響應,和主治醫師的判斷。治療分子恰當地以一次或經過一系列治療施用於患者。取決於疾病的類型和嚴重性,約1μg/kg至15mg/kg的抗原結合分子可以是用於施用至患者的初始候選劑量,不管例如是藉由一次或更多次分開的施用還是藉由連續輸注。一種典型的每日劑量可能在約1μg/kg至100mg/kg或更多的範圍內,這取決於上文提及的因素。相應的,以50kg體重為例,示例性的單位日劑量為50μg-5g。
製品
在本揭露的另一方面中,提供一種製品,該製品包含可用於治療、預防和/或診斷上述病症的材料。該製品包含容器和在容器上或與容器聯合的標簽或包裝插頁(package insert)。合適的容器包括,例如,瓶子、管形瓶、注射器、IV溶液袋等。容器可以自各種材料諸如玻璃或塑料形成。容器裝有單獨或與另一種組成物組合有效治療,預防和/或診斷疾患的組成物,並且可具有無菌的存取口(例如,容器可以是具有由皮下注射針可刺穿的塞子的靜脈內溶液袋或管形瓶)。組成物中的至少一種活性試劑是本揭露的抗原結合分子。標簽或包裝插頁指示使用該組成物是來治療選擇的病況。此外,製品可以包含:(a)其中裝有組成物的第一容器,其中該組成物包含本揭露的抗原結合分子;和(b)其中裝有組成物的第二容器,其中該組成物包含另外的細胞毒性劑或其他方面的治療劑。本揭露的該實施方案中的製品可進一步包含包裝插頁,該包裝插頁指示該組成物可以用於治療特定病況。備選地,或另外地,製品可進一步包含第二(或第三)容器,該第二(或第三)容器包含藥學上可接受的緩衝液。從商業和用戶立場,它可進一步包括所需的其他材料,包括其他緩衝劑、稀釋劑、濾器、針頭和注射器。
實施例與測試例
以下結合實施例和測試例進一步描述本揭露,但這些實施例和測試例並非限制著本揭露的範圍。本揭露實施例和測試例中未註明具體條件的實驗方法,通常按照常規條件,如冷泉港的抗體技術實驗手冊,分子選殖手冊;或按照原料或商品製造廠商所建議的條件。未註明具體來源的試劑,為市場購買的常規試劑。
實施例1. 含有Titin鏈/Obscurin鏈的抗原結合分子
本揭露的Titin鏈/Obscurin鏈可以來源於任意適宜的多肽,包括來源於WO2021139758A1(藉由援引完整收入本文)和CN202110527339.7及將其作為優先權文件的專利(藉由援引完整收入本文)中的多肽。構建雙特異性抗體,其中CL為WO2021139758A1中的kappa輕鏈恆定區,Titin鏈和Obscurin鏈的胺基酸序列見表3-1和表3-2,連接子序列包括GGGGS(SEQ ID NO:145)、ASTKG(SEQ ID NO:66)或RTVAS(SEQ ID NO:67),本實施例中的Fc1、Fc2、CH1的胺基酸序列如下所示。
>實施例1-CH1(SEQ ID NO:65)
>實施例1-Fc1(knob,SEQ ID NO:27)
>實施例1-Fc2(hole,SEQ ID NO:28)
1.1 DI雙特異性抗體
參照WO2021139758A1的實施例5,構建抗hNGF和hRANKL的DI雙特異性抗體:DI-2至DI-20,其包含如下所述的第一重鏈、第二重鏈、第一輕鏈和第二輕鏈:
第一重鏈:從N端到C端依次為:[VH1-I]-[連接子1]-[Obscurin鏈]-[Fc2],
第一輕鏈:從N端到C端依次為:[VL1-I]-[連接子2]-[Titin鏈],
第二重鏈:從N端到C端依次為:[VH2-D]-[CH1]-[Fc1],和
第二輕鏈:從N端到C端依次為:[VL2-D]-[CL];
其中,VH1-I和VL1-I分別為WO2021139758A1中I0的重鏈可變區和輕鏈可變區,VH2-D和VL2-D分別為WO2021139758A1中D0的重鏈可變區和輕鏈可變區。本實施例中DI雙特異性抗體中Obscurin鏈、Titin鏈、連接子1、連接子2結構見下表。
採用WO2021139758A1的測試例4中的方法檢測DI-2至DI-20雙特異性抗體與其抗原的結合活性。對抗體進行熱穩定性研究。研究方法:用PBS將抗體的濃度稀釋至5mg/mL,採用高通量微分掃描螢光儀(UNCHAINED,規格型號:Unit)測定其熱穩定性。實驗結果表明,改造後的雙特異性抗體對抗原的結合活性沒有顯著變化;並且,與DI-2相比,DI-4至DI-8、DI-10至DI-16、DI-20的Tm1(℃)、Tonset(℃)有明顯的提升,雙特異性抗體的熱穩定性更優。
採用10mM乙酸,pH5.5,9%蔗糖的緩衝液配製含DI雙特異性抗體的溶液,將溶液置於40℃恆溫箱中孵育四週,結束後將抗體濃度濃縮至孵育開始時的濃度,觀察溶液沉澱情況。實驗結果表明,DI-2雙特異性抗體組溶液出現沉澱,DI-3至DI-7相比DI-2具有更好的穩定性。
1.2 PL雙特異性抗體
構建抗hPDL1和hCTLA4的PL雙特異性抗體:PL-1至PL-19,其包含如下所述的第一重鏈、第二重鏈、第一輕鏈和第二輕鏈:
第一重鏈:從N端到C端依次為:[VH1-P]-[連接子1]-[Obscurin鏈]-[Fc1],
第一輕鏈:從N端到C端依次為:[VL1-P]-[連接子2]-[Titin鏈],
第二重鏈:從N端到C端依次為:[VH2-L]-[CH1]-[Fc2],和
第二輕鏈:從N端到C端依次為:[VL2-L]-[CL];
其中,VH1-P和VL1-P分別為WO2020177733A1中h1831K抗體的重鏈可變區和輕鏈可變區,VH2-L和VL2-L的胺基酸序列如下所示。
>VL2-L(SEQ ID NO:149)EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVGSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGAFSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPWTFGQGTKVEIK
本實施例中PL雙特異性抗體中Obscurin鏈、Titin鏈、連接子1、連接子2結構見下表。
參照WO2021139758A1中測試例4中的ELISA方法檢測PL雙特異性抗體的結合活性,其中hPDL1、hCTLA4抗原購自:Sino biology。對抗體進行熱穩定性研究。方法:用PBS將抗體的濃度稀釋至1.4-3mg/mL,採用高通量微分掃描螢光儀(UNCHAINED,規格型號:Unit)測定其熱穩定性。實驗結果表明,PL雙特異性抗體對抗原仍具有良好的結合活性;並且,與PL-1相比,PL-2至PL-19的Tm1(℃)、Tagg 266(℃)、Tonset(℃)有明顯的提升,雙特異性抗體的熱穩定性更優。
1.3 HJ雙特異性抗體
構建抗hIL5和hTSLP的HJ雙特異性抗體:HJ-3至HJ11,其包含如下所述的第一重鏈、第二重鏈、第一輕鏈和第二輕鏈:
第一重鏈:從N端到C端依次為:[VH1-H]-[連接子1]-[Titin鏈]-[Fc1],
第一輕鏈:從N端到C端依次為:[VL1-H]-[連接子2]-[Obscurin鏈],
第二重鏈:從N端到C端依次為:[VH2-J]-[CH1]-[Fc2],和
第二輕鏈:從N端到C端依次為:[VL2-J]-[CL];
其中,VH1-H和VL1-H分別為WO2021139758A1中H0的重鏈可變區和輕鏈可變區,VH2-J和VL2-J分別為WO2021139758A1中J1的重鏈可變區和輕鏈
可變區。本實施例中HJ雙特異性抗體中Obscurin鏈、Titin鏈、連接子1、連接子2結構見下表。
參照WO2021139758A1中測試例4中的方法檢測HJ雙特異性抗體的抗原結合活性。對抗體的熱穩定性進行研究,方法:用10mM乙酸pH5.5、9%蔗糖的緩衝液配製HJ雙特異性抗體稀釋溶液,然後藉由超濾濃縮的方法將雙特異性抗體濃縮,獲得不同濃度的HJ雙特異性抗體溶液(HJ雙特異性抗體的濃度見表13-2),然後將濃縮溶液置於40℃恆溫箱中孵育,第0天(也即40℃孵育開始前,D0),第7天(40℃孵育第7天,D7),第14天(40℃孵育第14天,D14),第21天(40℃孵育第21天,D21)和第28天(40℃孵育第28天,D28)檢測樣品的SEC純度,40℃孵育28天後,馬上取樣檢測樣品CE-SDS純
度。實驗結果表明,本揭露構建的HJ雙特異性抗體對抗原的結合活性沒有顯著變化;並且,與HJ-3相比,HJ-5至HJ-11雙特異性抗體的熱穩定性更優。
實施例2:小鼠抗人FLT3(ECD)單株抗體的製備
使用人FLT3-ECD(Sino Biological,10445-H08H)、FLT3-E6-mFc、FLT3-E6-Fc和CHOK1-hFLT3-E56、CHOK1-hFLT3-E6穩轉株細胞免疫SJL/Balb/C小鼠。免疫3次後取血測定血清中抗體的效價,選擇血清中抗體滴度高並且滴度趨於平臺的小鼠進行脾細胞融合,將融合好的融合瘤細胞鋪在96孔細胞培養板中,置於37℃,5%CO2培養箱中進行培養。取細胞培養上清液藉由激光掃描微孔板細胞分析儀mirrorball和流式細胞儀FACS進行檢測。將篩選出的陽性株進行擴增凍存保種和二到三次亞株直至獲得單細胞株。選擇出的融合瘤株用無血清細胞培養法進一步製備和純化抗體。得到的融合瘤抗體用FACS檢測抗體與人FLT3蛋白的結合和與FLT3配體的競爭情況,挑選出結合活性和競爭力強的融合瘤細胞株。收集對數生長期融合瘤細胞,用Trizol(Invitrogen,Cat# 15596-018)提取RNA,反轉錄為cDNA。用cDNA為模板進行PCR擴增後送測序公司測序,得到mAb18、mAb99和mAb125三個抗體。
>mAb99輕鏈可變區的胺基酸序列(SEQ ID NO:4)DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIHYTSRLYLGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEIE
>mAb125輕鏈可變區的胺基酸序列(SEQ ID NO:6)ENVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCRASSSVSSSYLHWYQQKSGASPKLWIYSTSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSVEAEDAATYYCQQYSGYPLTFGGGTKLEIK
將上述mAb18、mAb99和mAb125候選分子可變區序列分別藉由PCR擴增VH/VK序列,再與表達載體pHr(帶信號肽及hIgG1/hkappa恆定
區基因(CH1-Fc/CL)片段)進行同源重組,構建重組嵌合抗體全長表達質粒VH-CH1-Fc-pHr/VL-CL-pHr,進而獲得其嵌合抗體Ch18、Ch99和Ch125。
實施例3:抗人FLT3單株抗體的人源化設計
從人源germline數據庫中搜索鼠源抗體的VH/VL的同源序列,將鼠源抗體的CDR區移植到人源模板上,並對VL和VH的部分殘基進行突變,將鼠源抗體的恆定區替換為人恆定區,得到最終的人源化分子。
3-1.抗體mAb18的人源化
鼠源抗體mAb18的人源化抗體選擇IGHV1-69*02的FR1、FR2、FR3,和IGHJ6*01的FR4作為重鏈框架區模板;選擇IGKV2-40*01的FR1、FR2、FR3和IGKJ4*01的FR4作為輕鏈框架區模板。視需要地,對人源化抗體的重鏈可變
區上第1、24、27、28、30、38、40、54、55、69和/或93位的胺基酸殘基進行取代(根據Kabat編號系統編號,下同)的胺基酸殘基進行取代;和/或對人源化抗體的輕鏈可變區上第2、28、29、45、55和/或56位的胺基酸殘基進行取代。
>h18 VH4、VH6和VH7的CDR2(SEQ ID NO:76)AIHPGSGDTSYNQKFKG
>h18 VH5的CDR2(SEQ ID NO:77)AIHPGNVDTSYNQKFKG
>h18 VL3的CDR1(SEQ ID NO:78)
RSSQSLVHSNENTYLH
>h18 VL4、VL6和VL8的CDR1(SEQ ID NO:79)RSSQSLVHSSGNTYLH
>h18 VL5、VL7和VL9的CDR1(SEQ ID NO:80)RSSQSLVHSEGNTYLH
>h18 VL6和VL7的CDR2(SEQ ID NO:81)KVSNRDF
>h18 VL8和VL9的CDR2(SEQ ID NO:82)KVSNRFS
抗體可變區的序列如下:
>h18VL1(SEQ ID NO:36)DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFFGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGYYYCSQSTHVPYTFGGGTKVEIK
>h18VL2(SEQ ID NO:37)DVVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKILIYKVSNRFFGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHVPYTFGGGTKVEIK
>h18VL4(SEQ ID NO:39)DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLVHSSGNTYLHWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFFGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHVPYTFGGGTKVEIK
>h18VL5(SEQ ID NO:40)DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLVHSEGNTYLHWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFFGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHVPYTFGGGTKVEIK
3-2.抗體mAb99的人源化
鼠源抗體mAb99的人源化抗體選擇IGHV1-46*01的FR1、FR2、FR3,和
IGHJ6*01的FR4作為重鏈框架區模板;選擇IGKV1-33*01的FR1、FR2、FR3
和IGKJ4*01的FR4作為輕鏈框架區模板。視需要地,對人源化抗體的重鏈可變
區上第1、12、40、69、71、76和/或78位的胺基酸殘基進行取代;和/或對人源
化抗體的輕鏈可變區上第41、42、43、44、49和/或71位的胺基酸殘基進行取
代。
抗體可變區的序列如下:
>h99VL1(SEQ ID NO:49)DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIRNYLNWYQQKPGKAPKLLIHYTSRLYLGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQGNTLPYTFGGGTKVEIK
>h99VL2(SEQ ID NO:50)DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIRNYLNWYQQKPGKAVKLLIHYTSRLYLGVPSRFSGSGSGTDYTFTISSLQPEDIATYYCQQGNTLPYTFGGGTKVEIK
>h99VL3(SEQ ID NO:51)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIHYTSRLYLGVPSRFSGSGSGTDYTFTISSLQPEDIATYYCQQGNTLPYTFGGGTKVEIK
3-3.抗體mAb125的人源化
鼠源抗體mAb125的人源化抗體選擇IGHV1-46*01的FR1、FR2、FR3,和IGHJ1*01的FR4作為重鏈框架區模板;選擇IGKV6-21*01的FR1、FR2、FR3和IGKJ4*01的FR4作為輕鏈框架區模板。視需要地,對人源化抗體的重鏈可變區上第1、37、48、67、69、71和/或78位的胺基酸殘基進行取代;和/或對人源化抗體的輕鏈可變區上第2、29、47、49、56和/或71位的胺基酸殘基進行取代。
>h125 VL2的CDR1(SEQ ID NO:83)RASSSVTSSYLH
>h125 VL2的CDR2(SEQ ID NO:84)STSNLAT
抗體可變區的序列如下:
>h125VL1(SEQ ID NO:55)EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASSSVSSSYLHWYQQKPDQSPKLWIYSTSNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCQQYSGYPLTFGGGTKVEIK
>h125VL2(SEQ ID NO:56)ENVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASSSVTSSYLHWYQQKPDQSPKLWIYSTSNLATGVPSRFSGSGSGTDYTLTINSLEAEDAATYYCQQYSGYPLTFGGGTKVEIK
上述各組的重鏈可變區和輕鏈可變區與SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:26所示的恆定區組合獲得完整的人源化抗體。
實施例4:抗FLT3-CD3雙特異性抗體的製備
本揭露的CD3結合分子可以來源於任意適宜的抗體。具體的,本揭露的實施例採用的是S107E。
S107E可變區序列如下:
>S107E-VL(SEQ ID NO:64)QTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
>IgG1(CH1)(SEQ ID NO:65)ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC
>CL(SEQ ID NO:26)
>Titin(T.18,SEQ ID NO:103)
>Obscurin(O.27,SEQ ID NO:138)
>連接子a(SEQ ID NO:66)ASTKG
>連接子b(SEQ ID NO:146)GGGGSGGGGS
>連接子c(SEQ ID NO:145)GGGGS
本揭露採用兩種抗體結構。其中,
結構-1為非對稱結構分子,其示意圖如圖1A所示(Ob代表Obscurin)其包含
鏈1:VH(抗FLT3)-IgG1(CH1)-IgG1Fc(Knob);
鏈2:VL(抗FLT3)-CL;
鏈3:VH(S107E)-連接子a-Titin-IgG1Fc(Hole);和
鏈4:VL(S107E)-連接子a-Obscurin。
結構-2為非對稱結構分子,其示意圖如圖1B所示,其包含
鏈1:VH(抗FLT3)-IgG1(CH1)-IgG1Fc(Hole);
鏈2(兩條):VL(抗FLT3)-CL;
鏈3:VH(抗FLT3)-IgG1(CH1)-連接子b-VL(S107E)-連接子c-Titin-IgG1Fc(Knob);
鏈4:VH(S107E)-連接子a-Obscurin。
示例性的,雙特異性抗體BsAb-Hu99-5(即BsAb-99)包括五條鏈。
雙特異性抗體BsAb-Hu125-4(即BsAb-125)包含四條鏈。
本揭露所用的陽性對照分子為AMG427,其胺基酸序列如WO2017021362A1中的SEQ ID NO:863所示。
測試例
測試例1:抗原結合分子與細胞表面的FLT3的結合
採用2% FBS(ThermoFisher Scientific,10099-141)重新懸浮離心後的Monomac-6細胞,細胞懸液中的細胞含量為1-2×106個/mL。向96孔細胞板中加入50μL/孔的細胞懸液和梯度稀釋的抗體溶液50μL/孔,4℃孵育1小時。將96孔細胞板在室溫300g條件下離心5min,採用PBS洗板3次。向96孔細胞板中加入100μL/孔的anti mouse IgG(H+L)-A488(invitrogen,A11001,1:1000稀釋),4℃孵育1小時。將96孔細胞板在室溫300g條件下離心5min,採用PBS洗板3次。向96孔細胞板中加入100μL/孔的PBS,採用流式細胞儀進行檢測並採用Flowjo軟體分析數據。
以上比例值將m18的EC50設為1。
以上比例值將BsAb-m99的EC50設為1。
以上比例值將以BsAb-m125的EC50設為1。
實驗結果表明,人源化後的抗體保持了與表達FLT3抗原的天然細胞株Monomac-6的結合能力。
測試例2:Biacore抗體親和力實驗
用Biacore T200,Cytiva儀器測定AMG427和BsAb-125雙特異性抗體和人FLT3抗原、人和猴CD3親和力。
用Protein A生物傳感芯片(Cat.# 29127556,Cytiva)親和捕獲一定量的待測抗體,然後於芯片表面流經一系列濃度梯度下人源FLT3抗原(Sino
Biological,10445-H08H)、人源CD3抗原(Sino Biological,CT038-H2508H)和猴源FLT3抗原(ACRO,CDD-C52W4),利用Biacore儀器(Biacore T200,Cytiva)實時檢測反應信號從而獲得結合和解離曲線。在每個循環解離完成後,用10mM Glycine-HCl(pH1.5)將生物傳感芯片洗淨再生。實驗中用到的緩衝液為HBS-EP+10×緩衝溶液(pH 7.4(Cat.# BR-1006-69,Cytiva)用D.I.Water稀釋至1×(pH 7.4)。實驗得到的數據用BIAevaluation version,Cytiva軟體以(1:1)Langmuir模型進行擬合,得出親和力數值。
測試例3:體外PBMC-天然細胞株殺傷實驗
雙特異性抗體可藉由FLT3端抗體分子結合表達FLT3抗原的腫瘤細胞,另一方面可藉由CD3端抗體分子募集激活T細胞,T細胞分泌的穿孔素和顆粒酶等物質殺傷癌細胞。藉由檢測雙特異性抗體分子、T細胞、腫瘤細胞以及PBMC共同孵育後,腫瘤細胞螢光信號強度的變化評估雙特異性抗體分子的殺傷能力。本實驗中,藉由檢測靶標細胞的螢光信號強度的變化,評估了FLT3-CD3雙特異
性抗體介導的人PBMC對表達FLT3抗原的天然細胞株(Monomac-6、MoLM-13和MV-4-11,FLT3表達量由高至低),以及不表達FLT3抗原的天然細胞株K562細胞的殺傷作用。
將PCDH/lucG的質粒轉染至Monomac-6(南京科佰,CBP60521)、MoLM-13(DSMZ,ACC 554)、MV-4-11(ATCC,CRL-9591TM)、K562(ATCC,CCL-243)細胞中,構建穩定表達luciferase以及GFP的細胞株。用1640(Gibco,11875119)+10% FBS(ThermoFisher Scientific,10099-141)+1×胰島素(Gibco,41400-045)培養基培養Monomac-6/lucG細胞;用1640+10% FBS完全培養基培養MoLM-13/lucG、K562/lucG細胞;用IMDM(Gibco,12440061)+10% FBS完全培養基培養MV-4-11/lucG細胞。以上細胞均以1:10比例每週傳代2-3次。用1640+10% FBS完全培養基重新懸浮復蘇後的PBMC(妙順生物),置於T75培養瓶培養4小時(密度為2×106個/mL)。用1640+10% FBS重新懸浮離心後的PBMC,每孔加入50μL(密度為1.5×106個/mL)。收集上述靶細胞,每孔加入25μL(密度為3×105個/mL),確保E:T Ratio為10:1。用1640+10% FBS培養基稀釋抗體後每孔加入25μL(起始濃度為2nM,3倍稀釋,9個劑量點)。處理好的細胞放在37℃,5% CO2的培養箱培養48小時。將培養板在室溫1000rpm離心3分鐘,吸取50μL上清於新的3788板(Corning,3903)中用於檢測細胞因子,-20℃保存。加入20μL ONE-GloTM Luciferase(promega,E6120)至培養板,室溫孵育5分鐘後,用Vendor檢測Luminescence,計算抗體在不同濃度下的殺傷作用。使用Graphpad Prism8.0軟體分析數據,計算抗體介導殺傷EC50。將只有靶細胞、PBMC不加抗體的孔設為0%抑制,計算抗體的最大抑制率。
實驗結果表明BsAb-125在FLT3陽性的天然細胞株具有較好的一致殺傷活性,且BsAb-125在不表達FLT3抗原的細胞株沒有殺傷,安全性優於AMG427,具有顯著更寬的治療窗口。
測試例4:體外PBMC-HSPCs殺傷實驗
文獻報道正常造血幹細胞HSPCs表面有比較低FLT3表達,本實驗將BsAb-125或AMG427與HSPCs以及PBMC共同孵育後檢測細胞螢光信號強度的變化評估雙特異性抗體分子對HSPCs損傷。
用1640(Gibco,11875119)+10% FBS(ThermoFisher Scientific,10099-141)完全培養基重新懸浮復蘇的PBMC(妙順生物),置於T75培養瓶培養4小時(密度為2×106個/mL)。用1640+10% FBS重新懸浮離心後的PBMC,每孔加入50μL(密度為1.5×106個/mL)。用IMDM+15%FBS(B液,FBS滅活)重新懸浮HSPCs(Lonza,2M-101C),每孔加入25μL(密度為3×105個/mL),E:T Ratio為10:1。用B液稀釋抗體後每孔加入25μL(起始濃度都是2nM,5×稀釋,6個點)。處理好的細胞放在37℃,5% CO2的培養箱培養48小時。將培養板在室溫1000rpm離心3分鐘,去掉殘餘培養基,用FACS緩衝液(2%FBS+PBS)300μL重新懸浮細胞,室溫1200rpm離心3min,去掉上清;
按1:20的比例加入APC-Anti-CD38(sino,10818-MM27-A)和FITC-Anti-CD34(sino,68035-XM01-F)到FACS緩衝液中,100μL/孔重新懸浮細胞,4℃孵育30min,加入300μL FACS緩衝液室溫1200rpm離心3min,去掉上清後,加入200μL FACS緩衝液重新懸浮細胞,FACSVerse進行流式檢測。使用Flowjo分析數據,用Graphpad Prism8.0軟體計算抗體介導殺傷的EC50。將只有靶細胞、PBMC不加抗體的孔設為0%抑制,計算抗體的最大抑制率。
本實驗中,AMG427對造血幹細胞HSPCs的殺傷活性明顯,而BsAb-125對HSPCs沒有殺傷。因此,BsAb-125可保護病人機體正常造血幹細胞不被殺傷,安全性高。
測試例5:體外細胞因子釋放實驗
為檢測篩選到的抗體是否具有較好安全性,我們在體外檢測了該抗體分子的細胞因子釋放。具體方法是用1640+10% FBS培養基稀釋10倍細胞殺傷實驗(測試例3)中收集的上清備用。用1640+10% FBS培養基稀釋IL-6及IFNγ標準品至
需要的濃度。將要檢測的細胞因子的試劑盒(Human IL6 kit:CISBIO,62HIL06PEG;Human IFNγ kit:CISBIO,62HIFNGPEG)平衡試劑盒至常溫,使用detection緩衝液稀釋試劑盒中的兩個檢測抗體(20倍稀釋)。96孔板中加入16μL細胞上清(原液用於IL-6檢測,10倍稀釋用於IFNγ檢測)及IL-6或IFNγ標準品,加入4μL稀釋好的對應檢測抗體;震盪混勻,室溫1000rpm離心1分鐘,常溫孵育過夜。取出孵育過夜的樣品,室溫1000rpm離心1分鐘,使用PHERAstar多功能酶標儀讀取665nm和620nm的吸收值。用Graphpad Prism 8分析數據。
實驗結果表明不論是在高表達還是低表達FLT3抗原的天然細胞株,BsAb-125的IL-6和IFNγ細胞因子釋放均遠低於AMG427,具有較好的安全性。
體內活性生物學評價
測試例6:FLT3-CD3抗體對荷人急性單核細胞白血病細胞Monomac-6腫瘤的NOG小鼠腫瘤生長的影響
本實驗利用NOG小鼠皮下接種人急性單核細胞白血病Monomac-6細胞,並於接種前一天腹腔注射hPBMCs(妙順生物,ID#:P121081003C),檢測雙特
異性抗體BsAb-125對皮下移植瘤生長的影響。將5×106 hPBMCs藉由腹腔注射至雌性NOG雌性小鼠(4-8週齡),1天後將1×106個細胞/鼠/100μL(含50μL Matrigel)Monomac-6細胞接種至小鼠右肋部皮下。接種8天後將小鼠隨機分為3組:Vehicle(PBS),AMG427 0.2mpk組,BsAb-125 0.3 mpk組(與AMG427 0.2mpk等莫耳劑量)(n=8/組)。將分組當天定義為該實驗Day0,開始腹腔注射給予各抗體(Biw),ip給藥,共給藥4次,每週2次監測腫瘤體積、動物重量並記錄數據。所有數據使用Excel和GraphPad Prism 5軟體進行作圖及統計分析。
實驗結果顯示,兩受試抗體均能顯著抑制Monomac-6皮下移植瘤生長,且BsAb-125抑瘤效果明顯優於AMG427。
測試例7:FLT3-CD3抗體對荷人急性單核細胞白血病細胞MV-4-11-LucG原位移植瘤的NDG小鼠腫瘤生長的影響
本實驗利用NDG小鼠(百奧賽圖)建立MV-4-11-LucG原位移植瘤模型,並經腹腔注射hPBMCs,評價FLT3-CD3雙特異性抗體BsAb-125對腫瘤生長的影響,並與分子AMG427進行比較。
將MV-4-11-LucG細胞以1×107個細胞/鼠/200μL尾靜脈接種雌性NDG小鼠(6-8週齡),接種後10天左右向每隻小鼠腹腔注射生物發光受質(15mg/mL,10mL/kg),10分鐘後藉由小動物成像系統拍照成像,Total Flux達到4-5×107p/s時,將hPBMCs(賽笠商業,ID#:SC12220A)以3.5×106個細胞/鼠注射到小鼠腹腔。5天後再次拍攝螢光,按螢光信號將小鼠隨機分為5組:Vehicle(PBS),AMG427 0.2/0.7 mpk組,BsAb-125 0.3/1 mpk組(分別與AMG427 0.2mpk和0.7mpk等莫耳劑量)(n=8/組)。將分組當天定義為該實驗Day0,開始腹腔注射給予各抗體(Biw),ip給藥,共給藥4次,每週2次監測螢光強度、動物重量並記錄數據。所有數據使用Excel和GraphPad Prism 5軟體進行作圖及統計分析。生物發光信號值為Total Flux(單位,p/s),平均值以avg計算;SD值以STDEV計算;SEM值以STDEV/SQRT(每組動物數)計算。
實驗結果顯示,AMG427高、低劑量(0.7、0.2 mpk)組顯示出了較強的抑瘤效果,均與溶劑組存在顯著差異(p<0.01),受試抗體BsAb-125抑瘤效果最強,且抑瘤效果均強於等莫耳量的AMG427。本次實驗荷瘤小鼠體重基本保持平穩,各抗體未見明顯毒性,耐受良好。
測試例8:FLT3/CD3雙特異性抗體的體內安全性評價
將6隻食蟹猴(雌雄各半,給藥前一天稱重)分為2組,按該體重計算給藥量,選擇合適規格注射器,實際給藥量誤差不超過理論給藥量的5%。以給藥當天為D0計,以給藥前(0h)、給藥後0.083h、2h、4h、6h、24h、48h、96h、168h、240h、336h、504h、672h為各組PK採血點。食蟹猴於前或後肢靜脈(非給藥肢)取全血約1mL至1管惰性分離膠促凝管,室溫靜置約30min待血清析出,4℃,2600g離心10min,用離心後收集的血清檢測抗體濃度和細胞因子IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、TNF-α以及IFNγ釋放。
結果表明,本揭露BsAb-125分子的PK良好,且細胞因子釋放遠低於AMG427,因此BsAb-125安全性更高。
雖然為了清楚的理解,已經借助於圖式和實例詳細描述了上述發明,但是描述和實例不應當解釋為限制本揭露的範圍。本文中引用的所有專利和科學文獻的揭露內容藉由引用完整地清楚結合。
TW202342549A_112107348_SEQL.xml
Claims (15)
- 一種特異性結合FLT3和CD3的抗原結合分子,其包含至少一個特異性結合FLT3的抗原結合模塊和至少一個特異性結合CD3的抗原結合模塊,該特異性結合FLT3的抗原結合模塊包含重鏈可變區FLT3-VH和輕鏈可變區FLT3-VL,該特異性結合CD3的抗原結合模塊包含重鏈可變區CD3-VH和輕鏈可變區CD3-VL;其中(i)該FLT3-VH具有:包含SEQ ID NO:19的胺基酸序列的FLT3-HCDR1、包含SEQ ID NO:20的胺基酸序列的FLT3-HCDR2和包含SEQ ID NO:21的胺基酸序列的FLT3-HCDR3,和該FLT3-VL具有:包含SEQ ID NO:83或22的胺基酸序列的FLT3-LCDR1、包含SEQ ID NO:84或23的胺基酸序列的FLT3-LCDR2和包含SEQ ID NO:24的胺基酸序列的FLT3-LCDR3,或(ii)該FLT3-VH具有:包含SEQ ID NO:13的胺基酸序列的FLT3-HCDR1、包含SEQ ID NO:14的胺基酸序列的FLT3-HCDR2和包含SEQ ID NO:15的胺基酸序列的FLT3-HCDR3,和該FLT3-VL具有:包含SEQ ID NO:16的胺基酸序列的FLT3-LCDR1、包含SEQ ID NO:17的胺基酸序列的FLT3-LCDR2和包含SEQ ID NO:18的胺基酸序列的FLT3-LCDR3,或(iii)該FLT3-VH具有:包含SEQ ID NO:7的胺基酸序列的FLT3-HCDR1、包含SEQ ID NO:8、76或77的胺基酸序列的FLT3-HCDR2和包含SEQ ID NO:9的胺基酸序列的FLT3-HCDR3,和該FLT3-VL具有:包含SEQ ID NO:10、78、79或80的胺基酸序列的FLT3-LCDR1、包含SEQ ID NO:11、81或82的胺基酸序列的FLT3-LCDR2和包含SEQ ID NO:12的胺基酸序列的FLT3-LCDR3;較佳地,該抗原結合分子在25℃條件下以小於1×10-8M的KD結合人FLT3,該KD是藉由表面等離子體共振法測量的。
- 如請求項1所述的抗原結合分子,其中(i)該FLT3-VH包含SEQ ID NO:53、5、52或54的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:56、6或55的胺基酸序列,或(ii)該FLT3-VH包含SEQ ID NO:45、3、46、47或48的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:50、4、49或51的胺基酸序列,或(iii)該FLT3-VH包含SEQ ID NO:1、29、30、31、32、33、34或35的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:2、36、37、38、39、40、41、42、43或44的胺基酸序列;較佳地,(i)該FLT3-VH包含SEQ ID NO:53、52或54的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:56或55的胺基酸序列,或(ii)該FLT3-VH包含SEQ ID NO:45、46、47或48的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:50、49或51的胺基酸序列,或(iii)該FLT3-VH包含SEQ ID NO:29、30、31、32、33、34或35的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:36、37、38、39、40、41、42、43或44的胺基酸序列;更佳地,(i)該FLT3-VH包含SEQ ID NO:53的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:56的胺基酸序列,或(ii)該FLT3-VH包含SEQ ID NO:45的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:50的胺基酸序列。
- 如請求項1或2所述的抗原結合分子,其中該特異性結合CD3的抗原結合模塊包含重鏈可變區CD3-VH和輕鏈可變區CD3-VL,該CD3-VH具有:包含SEQ ID NO:57的胺基酸序列的CD3-HCDR1,包含SEQ ID NO:58的胺基酸序列的CD3-HCDR2,和包含SEQ ID NO:59的胺基酸序列的CD3-HCDR3;並且該CD3-VL具有:包含SEQ ID NO:60的胺基酸序列的CD3-LCDR1,包含SEQ ID NO:61的胺基酸序列的CD3-LCDR2,和包含SEQ ID NO:62的胺基酸序列的CD3-LCDR3;較佳地,該CD3-VH包含SEQ ID NO:63的胺基酸序列,和該CD3-VL包含SEQ ID NO:64的胺基酸序列。
- 如請求項1至3中任一項所述的抗原結合分子,其中該抗原結合分子進一步包含Fc區,該Fc區較佳為IgG Fc區,更佳為IgG1 Fc區;較佳地,該Fc區包含一個或多個能夠減少Fc區與Fcγ受體結合的胺基酸取代;更佳地,該Fc區是人IgG1 Fc區,並且在234和235位置的胺基酸殘基為A,編號依據為EU索引。
- 如請求項4所述的抗原結合分子,其中該Fc區包含能夠相互締合的第一亞基Fc1和第二亞基Fc2,該Fc1和Fc2各自獨立地具有一個或多個減少Fc區同源二聚化的胺基酸取代;較佳地,該Fc1具有根據杵臼技術的凸起結構,和該Fc2具有根據杵臼技術的孔結構,或者該Fc1具有根據杵臼技術的孔結構,和該Fc2具有根據杵臼技術的凸起結構;更佳地,該Fc1在366位置的胺基酸殘基為W;和該Fc2在366位置的胺基酸殘基為S、在368位置的胺基酸殘基為A、和在407位置的胺基酸殘基為V,編號依據為EU索引。
- 如請求項1至5中任一項所述的抗原結合分子,其中該特異性結合FLT3的抗原結合模塊是Fab,和該特異性結合CD3的抗原結合模塊是經替換的Fab;或該特異性結合FLT3的抗原結合模塊是經替換的Fab,和該特異性結合CD3的抗原結合模塊是Fab;該經替換的Fab包含能夠形成二聚體的Titin鏈和Obscurin鏈;較佳地,該Titin鏈包含選自由SEQ ID NO:85至SEQ ID NO:103組成的組的胺基酸序列,該Obscurin鏈包含選自由SEQ ID NO:104至SEQ ID NO:144組成的組的胺基酸序列;更佳地,該Titin鏈包含SEQ ID NO:103的胺基酸序列,該Obscurin鏈包含SEQ ID NO:138的胺基酸序列。
- 如請求項6所述的抗原結合分子,其包含一個特異性結合FLT3的抗原結合模塊和一個特異性結合CD3的抗原結合模塊,該特異性結合FLT3的抗原結合模塊是Fab,該特異性結合CD3的抗原結合模塊是經替換的Fab;較佳地,該抗原結合分子包含一條具有式(a)所示結構的第一鏈、一條具有式(b)所示結構的第二鏈、一條具有式(c)所示結構的第三鏈和一條具有式(d)所示結構的第四鏈,(a)[FLT3-VH]-[CH1]-[Fc1],(b)[FLT3-VL]-[CL],(c)[CD3-VH]-[連接子1]-[Titin鏈]-[Fc2],(d)[CD3-VL]-[連接子2]-[Obscurin鏈],式(a)、(b)、(c)和(d)所示的結構是從N端至C端排列的,該連接子1和該連接子2是相同或不同的肽連接子;更佳地,該抗原結合分子具有:一條包含SEQ ID NO:72的胺基酸序列的第一鏈、一條包含SEQ ID NO:73的胺基酸序列的第二鏈、一條包含SEQ ID NO:74的胺基酸序列的第三鏈和一條包含SEQ ID NO:75的胺基酸序列的第四鏈。
- 如請求項6所述的抗原結合分子,其包含兩個特異性結合FLT3的抗原結合模塊和一個特異性結合CD3的抗原結合模塊,該特異性結合FLT3的抗原結合模塊是Fab,該特異性結合CD3的抗原結合模塊是經替換的Fab;較佳地,該抗原結合分子包含一條具有式(e)所示結構的第一鏈、兩條具有式(b)所示結構的第二鏈、一條具有式(f)所示結構的第三鏈和一條具有式(g)所示結構的第四鏈,(e)[FLT3-VH]-[CH1]-[Fc2],(b)[FLT3-VL]-[CL],(f)[FLT3-VH]-[CH1]-[連接子3]-[CD3-VL]-[連接子4]-[Titin鏈]-[Fc1],(g)[CD3-VH]-[連接子5]-[Obscurin鏈],式(e)、(b)、(f)和(g)所示的結構是從N端至C端排列的,該連接子3、連接子4和該連接子5是相同或不同的肽連接子;更佳地,該抗原結合分子具有:一條包含SEQ ID NO:68的胺基酸序列的第一鏈、兩條包含SEQ ID NO:69的胺基酸序列的第二鏈、一條包含SEQ ID NO:70的胺基酸序列的第三鏈和一條包含SEQ ID NO:71的胺基酸序列的第四鏈。
- 一種分離的抗體,其能夠特異性結合FLT3,該抗體包含重鏈可變區FLT3-VH和輕鏈可變區FLT3-VL,其中(i)該FLT3-VH具有:包含SEQ ID NO:19的胺基酸序列的FLT3-HCDR1、包含SEQ ID NO:20的胺基酸序列的FLT3-HCDR2和包含SEQ ID NO:21的胺基酸序列的FLT3-HCDR3,和該FLT3-VL具有:包含SEQ ID NO:83或22的胺基酸序列的FLT3-LCDR1、包含SEQ ID NO:84或23的胺基酸序列的FLT3-LCDR2和包含SEQ ID NO:24的胺基酸序列的FLT3-LCDR3,或(ii)該FLT3-VH具有:包含SEQ ID NO:13的胺基酸序列的FLT3-HCDR1、包含SEQ ID NO:14的胺基酸序列的FLT3-HCDR2和包含SEQ ID NO:15的胺基酸序列的FLT3-HCDR3,和該FLT3-VL具有:包含SEQ ID NO:16的胺基酸序列的FLT3-LCDR1、包含SEQ ID NO:17的胺基酸序列的FLT3-LCDR2和包含SEQ ID NO:18的胺基酸序列的FLT3-LCDR3,或(iii)該FLT3-VH具有:包含SEQ ID NO:7的胺基酸序列的FLT3-HCDR1、包含SEQ ID NO:8、76或77的胺基酸序列的FLT3-HCDR2和包含SEQ ID NO: 9的胺基酸序列的FLT3-HCDR3,和該FLT3-VL具有:包含SEQ ID NO:10、78、79或80的胺基酸序列的FLT3-LCDR1、包含SEQ ID NO:11、81或82的胺基酸序列的FLT3-LCDR2和包含SEQ ID NO:12的胺基酸序列的FLT3-LCDR3;較佳地,該抗體在25℃條件下以小於1×10-8M的KD結合人FLT3,該KD是藉由表面等離子體共振法測量的。
- 如請求項9所述的分離的抗體,其中(i)該FLT3-VH包含SEQ ID NO:53、5、52或54的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:56、6或55的胺基酸序列,或(ii)該FLT3-VH包含SEQ ID NO:45、3、46、47或48的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:50、4、49或51的胺基酸序列,或(iii)該FLT3-VH包含SEQ ID NO:1、29、30、31、32、33、34或35的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:2、36、37、38、39、40、41、42、43或44的胺基酸序列;較佳地,(i)該FLT3-VH包含SEQ ID NO:53、52或54的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:56或55的胺基酸序列,或(ii)該FLT3-VH包含SEQ ID NO:45、46、47或48的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:50、49或51的胺基酸序列,或(iii)該FLT3-VH包含SEQ ID NO:29、30、31、32、33、34或35的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:36、37、38、39、40、41、42、43或44的胺基酸序列;更佳地,(i)該FLT3-VH包含SEQ ID NO:53的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:56的胺基酸序列,或(ii)該FLT3-VH包含SEQ ID NO:45的胺基酸序列,和該FLT3-VL包含SEQ ID NO:50的胺基酸序列。
- 如請求項9或10所述的分離的抗體,其中該抗體是雙特異性抗體;較佳地,該雙特異性抗體特異性結合FLT3和CD3。
- 一種醫藥組成物,其含有:治療有效量的如請求項1至8中任一項所述的抗原結合分子或如請求項9至11中任一項所述的分離的抗體,以及一種或更多種藥學上可接受的載體、稀釋劑、緩衝劑或賦形劑;較佳地,該醫藥組成物中還包含至少一種第二治療劑。
- 一種分離的核酸,其編碼如請求項1至8中任一項所述的抗原結合分子或如請求項9至11中任一項所述的分離的抗體。
- 一種宿主細胞,其包含如如請求項13所述的分離的核酸。
- 一種治療或預防疾病的方法,該方法包括向有需要的受試者施用治療有效量的如請求項1至8中任一項所述的抗原結合分子或如請求項9至11中任一項所述的分離的抗體或如請求項12所述的醫藥組成物的步驟;較佳地,該疾病是腫瘤或癌症;更佳地,該疾病選自多發性骨髓瘤、惡性漿細胞瘤、霍奇金氏淋巴瘤、結節性淋巴細胞為主型霍奇金氏淋巴瘤、卡勒氏病和骨髓瘤病、急性單核細胞白血病、漿細胞白血病、漿細胞瘤、B幼淋巴細胞白血病、毛細胞白血病、B細胞非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、急性髓樣白血病(AML)、慢性淋巴細胞性白血病(CLL)、急性淋巴細胞性白血病(ALL)、慢性髓樣白血病(CML)、濾泡性淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤、邊緣區淋巴瘤、套細胞淋巴瘤、大細胞淋巴瘤、前體B淋巴母細胞性淋巴瘤、髓樣白血病、華氏巨球蛋白血症、瀰漫性大B細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、邊緣區淋巴瘤、黏膜相關淋巴組織淋巴瘤、小細胞淋巴細胞淋巴瘤、套細胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、原發縱隔(胸腺)大B細胞淋巴瘤、淋巴漿細胞性淋巴瘤、華氏巨球蛋白血症、淋巴結邊緣區B細胞淋巴瘤、脾邊緣區淋巴瘤、血管內大B細胞淋巴瘤、原發性滲出性淋巴瘤、淋巴瘤樣肉芽腫病、富含T細胞/組織細胞大B細胞淋巴瘤、原發性中樞神經系統淋巴瘤、原發性皮膚瀰漫性大B細胞淋巴瘤(腿型)、老年人EBV陽性瀰漫性大B細胞淋巴瘤、與炎症相關的瀰散性大B細胞淋巴瘤、血管內大B細胞淋巴瘤、ALK陽性大B細胞淋巴瘤、漿母細胞淋巴瘤、源於HHV-8相關多中心卡斯特曼病的大B細胞淋巴瘤、特徵介於瀰散性大B細胞淋巴瘤和伯基特淋巴瘤之間的未分類的B細胞淋巴瘤、特徵介於瀰漫性大B細胞淋巴瘤和典型霍奇金淋巴瘤之間的未分類的B細胞淋巴瘤、乳腺癌、胃癌、肝癌、肺癌、宮頸癌、結直腸癌、子宮內膜癌、頭頸癌、間皮瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、皮膚癌、腎癌和膀胱癌。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN2022101937054 | 2022-03-01 | ||
CN202210193705 | 2022-03-01 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
TW202342549A true TW202342549A (zh) | 2023-11-01 |
Family
ID=87883046
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
TW112107348A TW202342549A (zh) | 2022-03-01 | 2023-03-01 | 特異性結合flt3和cd3的抗原結合分子及其醫藥用途 |
Country Status (2)
Country | Link |
---|---|
TW (1) | TW202342549A (zh) |
WO (1) | WO2023165514A1 (zh) |
Family Cites Families (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP3331913A1 (en) * | 2015-08-07 | 2018-06-13 | Novartis AG | Treatment of cancer using chimeric cd3 receptor proteins |
TWI757499B (zh) * | 2017-06-02 | 2022-03-11 | 美商輝瑞大藥廠 | 對flt3具特異性之抗體及其用途 |
CN110831970A (zh) * | 2017-06-02 | 2020-02-21 | 辉瑞公司 | 靶向flt3的嵌合抗原受体 |
RU2020120411A (ru) * | 2017-11-21 | 2021-12-23 | Новартис Аг | Триспецифические связывающие молекулы, направленные против опухолеассоциированных антигенов, и пути их применения |
EP3623383A1 (en) * | 2018-09-11 | 2020-03-18 | Deutsches Krebsforschungszentrum, Stiftung des öffentlichen Rechts | Improved bispecific flt3xcd3 antigen binding proteins |
JP2022500077A (ja) * | 2018-09-11 | 2022-01-04 | ドイチェス クレブスフォルシュングスツェントルム シュティフトゥング デス エッフェントリッヒェンレヒツ | 改善された抗flt3抗原結合タンパク質 |
US20230416385A1 (en) * | 2018-11-01 | 2023-12-28 | Shandong New Time Pharmaceutical Co., Ltd. | Bispecific antibody and use thereof |
-
2023
- 2023-03-01 WO PCT/CN2023/079002 patent/WO2023165514A1/zh unknown
- 2023-03-01 TW TW112107348A patent/TW202342549A/zh unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2023165514A1 (zh) | 2023-09-07 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
WO2023165514A1 (zh) | 特异性结合flt3和cd3的抗原结合分子及其医药用途 | |
WO2023174238A1 (zh) | 特异性结合gprc5d和cd3的抗原结合分子及其医药用途 | |
WO2022156739A1 (zh) | 特异性结合bcma和cd3的抗原结合分子及其医药用途 | |
WO2023284806A1 (zh) | 特异性结合cd38、bcma和cd3的抗原结合分子及其医药用途 | |
WO2024027815A1 (zh) | 特异性结合gucy2c和cd3的抗原结合分子及其医药用途 | |
WO2023147784A1 (zh) | 特异性结合psma和cd3的抗原结合分子及其医药用途 | |
WO2023051786A1 (zh) | 特异性结合cgrp和pacap的抗原结合分子及其医药用途 | |
WO2023246885A1 (zh) | 特异性结合dll3和cd3的抗原结合分子及其医药用途 | |
WO2023198015A1 (zh) | 特异性结合psma和cd28的抗原结合分子及其医药用途 | |
WO2023198042A1 (zh) | 特异性结合egfr和cd28的抗原结合分子及其医药用途 | |
WO2024051804A1 (zh) | 抗ilt4抗体及其医药用途 | |
WO2023284829A1 (zh) | 特异性结合hgfr和egfr的抗原结合分子及其医药用途 | |
WO2023083298A1 (zh) | 抗icosl抗体融合蛋白及用途 | |
WO2023051798A1 (zh) | 抗il23抗体融合蛋白及用途 | |
WO2023274342A1 (zh) | 特异性结合baff和il-12/23的抗原结合分子及用途 | |
WO2022237882A1 (zh) | 一种抗原结合分子 | |
TW202413437A (zh) | 特異性結合gucy2c和cd3的抗原結合分子及其醫藥用途 | |
EP4317175A1 (en) | Truncated taci polypeptide and fusion protein and use thereof | |
TW202413416A (zh) | 特異性結合egfr和cd28的抗原結合分子及其醫藥用途 | |
CN115386008A (zh) | 特异性结合cd20和cd3的抗原结合分子及其医药用途 | |
WO2023208182A1 (zh) | 抗ccr8抗体及其用途 | |
WO2023046071A1 (zh) | 抗klb抗体及用途 | |
CN115850499A (zh) | 特异性结合angptl3和pcsk9的抗原结合分子及其医药用途 | |
TW202413414A (zh) | 抗ilt4抗體及其醫藥用途 | |
CN116410319A (zh) | 抗par2抗体及其用途 |