TW202340211A - 嘧啶雜環化合物、其製法與醫藥上的用途 - Google Patents

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Abstract

本發明揭示嘧啶雜環化合物，其製法與醫藥上之用途，特定地，本發明揭示結構如式(A)所示之嘧啶雜環化合物或其醫藥學上可接受之鹽，各基團定義如說明書中所定義；包含上述化合物之醫藥組合物以及上述化合物在治療細胞增殖性疾病(例如癌症)等中之用途。

Description

嘧啶雜環化合物、其製法與醫藥上的用途
本發明係關於醫藥領域，特定言之，係關於嘧啶雜環化合物，其製法與醫藥上之用途。
細胞週期蛋白依賴性激酶(CDK)/週期蛋白複合物被鑑定為RNA聚合酶II轉錄機制之保守組分。目前存在20種哺乳動物CDK。在哺乳動物CDK中，CDK7具有堅實的激酶活性，且僅有CDK7具有調控細胞週期進程及轉錄之雙重功能。在胞質溶膠中，CDK7作為異源三聚體複合物存在且被認為發揮CDK1/2/4/6激活激酶(CAK)之作用，由此CDK7對CDK1/2/4/6中之保守殘基之磷酸化係完全催化性CDK活性及細胞週期進程所必需的。在細胞核中，CDK7形成RNA聚合酶II轉錄因子複合物之激酶核心，且負責磷酸化RNA聚合酶II之C-末端域(CTD)，此係基因轉錄起始之必要步驟。CDK7之兩個功能(亦即，CAK及CTD磷酸化)一起支援細胞增殖、細胞週期及轉錄之關鍵態樣。
CDK7作為總體轉錄之調控因子，可作為治療許多疾病及症候群之治療性靶點。CDK7可在轉錄調控區中及多個轉錄因子、輔因子、染色質調控因子以及非編碼RNA中之相互作用以調控轉錄。而此等轉錄因子、輔因子、染色質調控物或非編碼RNA之突變可導致癌症、自體免疫病、神經系統障礙、發育症候群、糖尿病、心血管疾病及肥胖症等疾病。其中一些轉錄因子可控制RNA聚合酶II介導之轉錄起始及延伸，且當其表現或功能改變時，可產生侵襲性腫瘤細胞(例如c-Myc引起的)或某些形式之自體免疫性(例如AIRE引起的)。因此，CDK7激酶可藉由調控總體轉錄過程來促進與腫瘤相關之某些轉錄因子之異常表現，以及藉由調控細胞週期關鍵激酶之磷酸化以促進腫瘤發展。更重要的是，與癌細胞中其他管家基因相比，CDK7更顯著地調控致癌轉錄因子之表現。CDK7之抑制可差異性影響某些癌基因及管家基因之轉錄，因此可確保治療窗口。藉由調控CDK7介導之磷酸化修飾來進行轉錄調控及細胞週期調控，可用於治療包括癌症在內之增殖異常疾病。作為轉錄之總體調控因子，CDK7亦可作為治療疾病如炎症、病毒複製例如HIV、EBV、癌症及心臟肥大之治療靶點。
CDK家族成員激酶域之高度序列及結構相似性阻礙了CDK7選擇性抑制劑之發現。因此，開發選擇性CDK7抑制劑，對於臨床應用有重要價值。
本發明第一態樣提供了式(A)所示之化合物或其醫藥學上可接受之鹽； 式(A) 其中， 為 或 ； 環A為無；或環A係選自下群：3至14員碳環、3至14員雜環、5至12員雜芳基、C 5-12芳基；環A為未經取代的或經1、2、3、4或5個選自S1群之基團所取代；上述3至14員雜環具有1、2、3或4個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子；上述5至12員雜芳基具有1、2、3或4個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子； L 3為無、C 1-6伸烷基、C 2-6伸烯基或環B (結構為 )；其中，上述C 1-6伸烷基上之1、2、3、4或5個氫原子可視情況各自獨立地經R 13取代；上述C 2-6伸烯基上之1、2、3、4或5個氫原子可視情況各自獨立地經R 13取代； 環B係選自下群：3至14員碳環、3至14員雜環、5至12員雜芳基、C 5-12芳基；環B為未經取代的或經1、2、3、4或5個選自S1群之基團所取代；上述3至14員雜環具有1、2、3或4個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子；上述5至12員雜芳基具有1、2、3或4個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子； L 1為無、C 1-6伸烷基、C 2-6伸烯基、-O-、-NR 10-、-C=N-、C 5-12芳基、5至12員雜芳基、-C(O)-、-C(O)-NR 10-或-NR 10-C(O)-；其中，上述C 1-6伸烷基上之1、2、3、4或5個氫原子可視情況各自獨立地經R 13取代；上述C 2-6伸烯基上之1、2、3、4或5個氫原子可視情況各自獨立地經R 13取代；上述5至12員雜芳基具有1、2、3或4個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子；上述C 5-12芳基、5至12員雜芳基各自獨立地為未經取代的或經1、2、3、4或5個選自S1群之基團所取代； L 2係選自下群： -(O) m2-(CR 13R 14) m1-(NR 12) m3-、 -(NR 11) m2-(CR 13R 14) m1-(NR 12) m3-、 -(O) m2-(CR 13R 14) m5-(3至7員碳環基) m4-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、 -(NR 11) m2-(CR 13R 14) m5-(3至7員碳環基) m4-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、 -(O) m2-(CR 13R 14) m5-(3至7員雜環基) m4-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、 -(NR 11) m2-(CR 13R 14) m5-(3至7員雜環基) m4-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、 -(O) m2-(CR 13R 14) m5-NR 10-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、 -(NR 11) m2-(CR 13R 14) m5-NR 10-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、 -(O) m2-(CR 13R 14) m5-NR 10C(O)-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、 -(NR 11) m2-(CR 13R 14) m5-NR 10C(O)-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、 -(O) m2-(CR 13R 14) m5-C(O)NR 10-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、 -(NR 11) m2-(CR 13R 14) m5-C(O)NR 10-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、 -(O) m2-(CR 13R 14) m5-O-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、 -(NR 11) m2-(CR 13R 14) m5-O-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、 -(O) m2-(CR 13R 14) m5-OC(O)-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、 -(NR 11) m2-(CR 13R 14) m5-OC(O)-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、 -(O) m2-(CR 13R 14) m5-C(O)O-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、 -(NR 11) m2-(CR 13R 14) m5-C(O)O-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、 -(O) m2-(CR 13R 14) m5-(CH=CH) m7-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、 -(NR 11) m2-(CR 13R 14) m5-(CH=CH) m7-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-； 各R 10各自獨立地為氫、C 1-6烷基、氘代C 1-6烷基、-3至7員碳環基、-C(O)-C 1-6烷基、-C(O)-C 1-4烷基-C 1-6烷氧基、-C(O)-3至7員碳環基、-C 1-4烷基-羥基、-C 1-4烷基-氰基、-C 1-4烷基-C 1-6烷氧基、-C 1-4烷基-NHC(O)-C 1-6烷基、-C 1-4烷基-NHC(O)-C 1-4烷基-C 1-6烷氧基、-C 1-4烷基-NHC(O)- 3至7員碳環基或-C 1-4烷基-NRR'； 各3至7員雜環基各自獨立地具有1、2或3個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子；上述3至7員碳環各自獨立地為未經取代的或經1、2、3、4或5個選自S1群之基團所取代； 各3至7員碳環基各自獨立地為未經取代的或經1、2、3、4或5個選自S1群之基團所取代； 各R 11各自獨立地為氫、C 1-6烷基或氘代C 1-6烷基； 各R 12各自獨立地為氫、C 1-6烷基或氘代C 1-6烷基； 各R 13各自獨立地為氫、氰基、羥基、鹵素、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、鹵代C 1-6烷基、鹵代C 1-6烷氧基、-3至7員碳環基、-C 0-6伸烷基-NRR'、-C 1-6伸烷基-羥基或-C 0-6伸烷基-氰基； 各R 14各自獨立地為氫、氰基、羥基、鹵素、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、鹵代C 1-6烷基、鹵代C 1-6烷氧基、-3至7員碳環基、-C 0-6伸烷基-NRR'、-C 1-6伸烷基-羥基或-C 0-6伸烷基-氰基； 各m1各自獨立地為1、2、3、4、5或6； 各m2各自獨立地為0或1； 各m3各自獨立地為0或1； 各m4各自獨立地為1或2； 各m5各自獨立地為0、1、2、3、4、5或6； 各m6各自獨立地為0、1、2、3、4、5或6； 各m7各自獨立地為1或2； R 1為氫、鹵素、氰基、C 1-6烷基或3至14員碳環基；上述C 1-6烷基、3至14員碳環基獨立地為未經取代的或經1、2、3、4或5個選自下群之基團所取代：側氧基、羥基、鹵素、C 1-6烷基、鹵代C 1-6烷基； R 2為氫、鹵素、氰基、C 1-6烷基或3至14員碳環基；上述C 1-6烷基、3至14員碳環基獨立地為未經取代的或經1、2、3、4或5個選自下群之基團所取代：側氧基、羥基、鹵素、C 1-6烷基、鹵代C 1-6烷基； X 2為N或C(R 3)； X 1為N或C(R 4)； Y為N或C(R 4)； Z為N或C(R 3)； 各R 3獨立地為氫、鹵素、氰基、C 1-6烷基或鹵代C 1-6烷基； 各R 4獨立地為氫、鹵素、羥基、氰基、-C 2-4伸烯基-苯基、-C 2-4伸炔基-苯基、-S(O)-OH、-S(O) 2-OH、-S-(C 1-6烷基)、C 1-6烷基、-O-C 1-6烷基、-C 1-6伸烷基-O-C 1-6烷基、-O-C 1-6伸烷基-O-C 1-6烷基、-C 0-6伸烷基-NRR'、-C 0-6伸烷基-C(O)OH、-C 0-6伸烷基-C(O)-C 1-6烷基、-C 0-6伸烷基-C(O)-NRR'、-C 0-6伸烷基-NR-C(O)-C 1-6烷基、-C 0-6伸烷基-S(O) 2-C 1-6烷基、-C 0-6伸烷基-S(O) 2-NRR'、-C 0-6伸烷基-NR-S(O) 2-C 1-6烷基、-C 0-6伸烷基-NR-S(O) 2-NRR'、-C 0-6伸烷基-P(O)O-(C 1-6烷基) 2、-C 0-6伸烷基-P(O)-(C 1-6烷基)(O-C 1-6烷基)、-C 0-6伸烷基-P(O)-(C 1-6烷基) 2、-C 0-6伸烷基-3至14員碳環基、-C 0-6伸烷基-3至14員雜環基、-C 0-6伸烷基-5至12員雜芳基、-C 0-6伸烷基-C 5-12芳基、-C 0-6伸烷基-C(O)-3至14員雜環基、-C 0-6伸烷基-C(O)-5至12員雜芳基、-O-C 0-6伸烷基-O-C 1-6烷基、-O-C 0-6伸烷基-3至14員碳環基、-O-C 0-6伸烷基-3至14員雜環基、-O-C 0-6伸烷基-5至12員雜芳基、-O-C 0-6伸烷基-C 5-12芳基、-S(O)-C 1-6烷基；其中，上述C 1-6烷基、C 0-6伸烷基、C 2-4伸烯基、3至14員碳環基、3至14員雜環基、5至12員雜芳基、C 5-12芳基獨立地為未經取代的或經1、2、3、4或5個選自S1群之基團所取代；上述3至14員雜環具有1、2、3或4個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子；上述5至12員雜芳基具有1、2、3或4個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子； 上述S1群之基團包括：側氧基、鹵素、羥基、氰基、C 1-6烷基、-O-C 1-6烷基、-C 1-6伸烷基-O-C 1-6烷基、-O-C 1-6伸烷基-O-C 1-6烷基、-C 0-6伸烷基-NRR'、-C 0-6伸烷基-C(O)OH、-C 0-6伸烷基-C(O)-C 1-6烷基、-C 0-6伸烷基-C(O)-NRR'、-C 0-6伸烷基-NR-C(O)-C 1-6烷基、-C 0-6伸烷基-S(O) 2-C 1-6烷基、-C 0-6伸烷基-S(O) 2-NRR'、-C 0-6伸烷基-NR-S(O) 2-C 1-6烷基、-C 0-6伸烷基-NR-S(O) 2-NRR'、-C 0-6伸烷基-P(O)O-(C 1-6烷基) 2、-C 0-6伸烷基-P(O)-(C 1-6烷基)(O-C 1-6烷基)、-C 0-6伸烷基-P(O)-(C 1-6烷基) 2、-C 0-6伸烷基-3至14員碳環基、-C 0-6伸烷基-3至14員雜環基、-C 0-6伸烷基-5至12員雜芳基、-C 0-6伸烷基-C 5-12芳基、-C 0-6伸烷基-C(O)-3至14員雜環基、-C 0-6伸烷基-C(O)-5至12員雜芳基、-O-C 0-6伸烷基-O-C 1-6烷基、-O-C 0-6伸烷基-3至14員碳環基、-O-C 0-6伸烷基-3至14員雜環基、-O-C 0-6伸烷基-5至12員雜芳基、-O-C 0-6伸烷基-C 5-12芳基、-S(O)-C 1-6烷基； R、R'各自獨立地為氫、C 1-6烷基或氘代C 1-6烷基；或者R、R'視情況與及其相連之氮原子共同構成3至14員雜環基或5至12員雜芳基；其中，上述雜環基、雜芳基各自獨立地除了已有之氮原子外亦包含0、1或2個選自N、O、S之雜原子； 上述各基團中，上述C 0-6伸烷基上任意同一個碳原子上之2個氫原子亦可視情況同時經3至7員碳環或3至7員雜環螺環取代； 上述各基團中，上述C 1-6伸烷基上任意同一個碳原子上之2個氫原子亦可視情況同時經3至7員碳環或3至7員雜環螺環取代。
在一些實施例中，R 1為氫、鹵素、氰基、C 1-4烷基或3至7員碳環基；上述C 1-4烷基、3至7員碳環基獨立地為未經取代的或經1、2、3、4或5個選自下群之基團所取代：側氧基、羥基、鹵素、C 1-3烷基、鹵代C 1-3烷基。
在一些實施例中，R 1為氫、鹵素、氰基、C 1-4烷基(例如甲基)、鹵代C 1-4烷基(例如三氟甲基)、3至7員碳環基或鹵代3至7員碳環基。
在一些實施例中，R 2為氫、鹵素、氰基、C 1-4烷基或3至7員碳環基；上述C 1-4烷基、3至7員碳環基獨立地為未經取代的或經1、2、3、4或5個選自下群之基團所取代：側氧基、羥基、鹵素、C 1-3烷基、鹵代C 1-3烷基。
在一些實施例中，R 2為氫、鹵素、氰基、C 1-4烷基(例如甲基)、鹵代C 1-4烷基(例如三氟甲基)、3至7員碳環基或鹵代3至7員碳環基。
在一些實施例中，X 1為N。
在一些實施例中，X 1為C(R 4)；其中，R 4為氫、鹵素、羥基、氰基、-C 2-4伸烯基-苯基、-C 2-4伸炔基-苯基、-S(O)-OH、-S(O) 2-OH、-S-(C 1-6烷基)或R 8；R 8為C 1-6烷基、-O-C 1-6烷基、-C 1-6伸烷基-O-C 1-6烷基、-O-C 1-6伸烷基-O-C 1-6烷基、-C 0-6伸烷基-NRR'、-C 0-6伸烷基-C(O)OH、-C 0-6伸烷基-C(O)-C 1-6烷基、-C 0-6伸烷基-C(O)-NRR'、-C 0-6伸烷基-NR-C(O)-C 1-6烷基、-C 0-6伸烷基-S(O) 2-C 1-6烷基、-C 0-6伸烷基-S(O) 2-NRR'、-C 0-6伸烷基-NR-S(O) 2-C 1-6烷基、-C 0-6伸烷基-NR-S(O) 2-NRR'、-C 0-6伸烷基-P(O)O-(C 1-6烷基) 2、-C 0-6伸烷基-P(O)-(C 1-6烷基)(O-C 1-6烷基)、-C 0-6伸烷基-P(O)-(C 1-6烷基) 2、-C 0-6伸烷基-3至14員碳環基、-C 0-6伸烷基-3至14員雜環基、-C 0-6伸烷基-5至12員雜芳基、-C 0-6伸烷基-C 5-12芳基、-C 0-6伸烷基-C(O)-3至14員雜環基、-C 0-6伸烷基-C(O)-5至12員雜芳基、-O-C 0-6伸烷基-O-C 1-6烷基、-O-C 0-6伸烷基-3至14員碳環基、-O-C 0-6伸烷基-3至14員雜環基、-O-C 0-6伸烷基-5至12員雜芳基、-O-C 0-6伸烷基-C 5-12芳基、-S(O)-C 1-6烷基；其中，上述C 1-6烷基、C 0-6伸烷基、C 2-4伸烯基、3至14員碳環基、3至14員雜環基、5至12員雜芳基、C 5-12芳基獨立地為未經取代的或經1、2、3、4或5個選自S1群之基團所取代；上述3至14員雜環具有1、2、3或4個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子；上述5至12員雜芳基具有1、2、3或4個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子；R、R'、S1群之基團定義同前。
在一些實施例中，X 1為C(R 4)；其中，R 4為-C 0-6伸烷基-NRR'、-C 0-6伸烷基-C(O)OH、-C 0-6伸烷基-C(O)-C 1-6烷基、-C 0-6伸烷基-C(O)-NRR'、-C 0-6伸烷基-NR-C(O)-C 1-6烷基、-C 0-6伸烷基-S(O) 2-C 1-6烷基、-C 0-6伸烷基-S(O) 2-NRR'、-C 0-6伸烷基-NR-S(O) 2-C 1-6烷基、-C 0-6伸烷基-NR-S(O) 2-NRR'、-C 0-6伸烷基-P(O)O-(C 1-6烷基) 2、-C 0-6伸烷基-P(O)-(C 1-6烷基)(O-C 1-6烷基)或-C 0-6伸烷基-P(O)-(C 1-6烷基) 2；其中，上述C 1-6烷基、C 0-6伸烷基獨立地為未經取代的或經1、2、3、4或5個選自S1群之基團所取代；R、R'、S1群之基團定義同前。
在一些實施例中，X 1為C(R 4)；其中，R 4為-C 0-6伸烷基-P(O)O-(C 1-6烷基) 2、-C 0-6伸烷基-P(O)-(C 1-6烷基)(O-C 1-6烷基)或-C 0-6伸烷基-P(O)-(C 1-6烷基) 2；其中，上述C 1-6烷基、C 0-6伸烷基獨立地為未經取代的或經1、2、3、4或5個選自S1群之基團所取代；S1群之基團定義同前。
在一些實施例中，X 1為C(R 4)；其中，R 4為-P(O)O-(C 1-6烷基) 2、-P(O)-(C 1-6烷基)(O-C 1-6烷基)或-P(O)-(C 1-6烷基) 2；其中，上述C 1-6烷基獨立地為未經取代的或經1、2、3、4或5個選自S1群之基團所取代；S1群之基團定義同前。
在一些實施例中，X 1為C(R 4)；其中，R 4為氫、鹵素或氰基。
在一些實施例中，X 1為C(R 4)；其中，R 4為-P(O)O-(CH 3) 2、-P(O)-(CH 3)(O-CH 3)或-P(O)-(CH 3) 2。
在一些實施例中，X 2為C(R 3)；R 3為氫。
在一些實施例中，Y為C(R 4)；R 4為氫。
在一些實施例中，Z為C(R 3)；R 3為氫。
如本文提及，C 0-6伸烷基上或C 0-6伸烷基上，同一個碳原子上之2個氫原子同時經3至7員碳環或3至7員雜環螺環取代，係指該碳原子上之2個氫原子經二價形式之取代基取代後，該二價形式之取代基與該碳原子共同形成3至7員碳環或3至7員雜環。例如，-CH 2-上碳原子上之2個氫原子經環丙基環螺環取代，係指-CH 2-上碳原子上之2個氫原子被二價形式之乙基(亦即，伸乙基)取代後，該伸乙基與該碳原子共同形成環丙基。以此類推。
在一些實施例中， 上述式(A)化合物為式(I-A)化合物； 式(I-A) 式中，X 1、Y、Z、X 2、R 1、R 2、L 1、L 2、環A、環B各自定義同前； 或 上述式(A)化合物為式(I-B)化合物； 式(I-B) 式中，X 1、Y、Z、X 2、R 1、R 2、L 1、L 2、環A、R 13、R 14各自定義同前；m0為1、2、3、4、5或6； 或 上述式(A)化合物為式(A1)化合物； 式(A1) 式中，X 1、Y、Z、X 2、R 1、R 2、L 1、L 2、環A、環B各自定義同前； 或 上述式(A)化合物為式(A2)化合物； 式(A2) 式中，X 1、Y、Z、X 2、R 1、R 2、L 1、L 2、環A、R 13、R 14各自定義同前；m0為1、2、3、4、5或6。
在一些實施例中，上述式(A)化合物為式(Ia)化合物、式(Ib)化合物、式(Ic)化合物、式(Id)化合物、式(Ie)化合物或式(If)化合物； 各式中，X 1、Y、Z、X 2、R 1、R 2、L 1、L 2、環A、環B各自定義同前。
在一些實施例中， 上述式(A)化合物為式(II-A)化合物； 式(II-A) 式中，R 1、R 2、L 1、L 2、環A、環B、X 1各自定義同前； 或 上述式(A)化合物為式(II-B)化合物； 式(II-B) 式中，X 1、R 1、R 2、L 1、L 2、環A、R 13、R 14各自定義同前；m0為1、2、3、4、5或6； 或 上述式(A)化合物為式(A3)化合物； 式(A3) 式中，X 1、R 1、R 2、L 1、L 2、環A、環B各自定義同前； 或 上述式(A)化合物為式(A4)化合物； 式(A4) 式中，X 1、R 1、R 2、L 1、L 2、環A、R 13、R 14各自定義同前；m0為1、2、3、4、5或6。
在一些實施例中，上述式(A)化合物為式(IIa)化合物、式(IIb)化合物、式(IIc)化合物、式(IId)化合物、式(IIe)化合物或式(IIf)化合物； 各式中，X 1、R 1、R 2、L 1、L 2、環A、環B各自定義同前。
在一些實施例中， 上述式(A)化合物為式(III-A)化合物； 式(III-A) 式中，L 1、L 2、環A、環B、X 1各自定義同前； 或 上述式(A)化合物為式(III-B)化合物； 式(III-B) 式中，X 1、L 1、L 2、環A、R 13、R 14各自定義同前；m0為1、2、3、4、5或6； 或 上述式(A)化合物為式(A5)化合物； 式(A5) 式中，X 1、L 1、L 2、環A、環B各自定義同前； 或 上述式(A)化合物為式(A6)化合物； 式(A6) 式中，X 1、L 1、L 2、環A、R 13、R 14各自定義同前；m0為1、2、3、4、5或6。
在一些實施例中，上述式(A)化合物為式(III-1)化合物或式(III-2)化合物； 各式中，L 1、L 2、環A、環B、X 1各自定義同前。
在一些實施例中，上述式(A)化合物為式(III-a)化合物、式(III-b)化合物、式(III-c)化合物或式(III-d)化合物； 各式中，L 1、L 2、環A、環B、X 1各自定義同前。
在一些實施例中，上述式(A)化合物為式(IV-a)化合物、式(IV-b)化合物或式(IV-c)化合物； ，各式中，L 1、L 2、環B、X 1各自定義同前。
在一些實施例中，環A為無；或環A係選自下群：3至6員碳環、3至6員雜環、5至6員雜芳基、苯基，上述環A為未經取代的或經1、2或3個選自OH、C 1-6烷基、鹵素取代，其餘變數如本發明所定義。
在一些實施例中，環A為無；或環A係選自下群：環丁環、環戊環、環己環、哌啶環、哌𠯤環、四氫吡咯環、吡唑環、咪唑環；環A為未經取代的或經1、2、3、4或5個選自S1群之基團所取代，其餘變數如本發明所定義。
在一些實施例中，環A為無；或環A係選自下群：環丁環、環戊環、環己環、哌啶環、哌𠯤環、四氫吡咯環、吡唑環、咪唑環；環A為未經取代的或經1、2、3、4或5個選自S1群之基團所取代；上述S組之基團包括：羥基、甲基、鹵素，其餘變數如本發明所定義。
在一些實施例中，環A為無；或環A係選自下群： ，其餘變數如本發明所定義。
在一些實施例中，環A為無；或環A係選自下群： ，其餘變數如本發明所定義。
在一些實施例中，環B係選自下群：3至6員碳環、3至6員雜環，上述環B為未經取代的或經1、2或3個選自OH、C 1-6烷基、鹵素取代，其餘變數如本發明所定義。
在一些實施例中，環B係選自下群：環丁環、環戊環、環己環、哌啶環、哌𠯤環、四氫吡咯環、吡唑環、咪唑環；環B為未經取代的或經1、2、3、4或5個選自S1群之基團所取代，其餘變數如本發明所定義。
在一些實施例中，環B係選自下群： ，其餘變數如本發明所定義。
在一些實施例中，環B係選自下群： ，其餘變數如本發明所定義。
在一些實施例中，L 2為-NR 11-(CR 13R 14) m1-NR 12-；R 11、R 12獨立地為氫或甲基；各R 13、R 14獨立地為氫、鹵素或甲基；m1為1、2、3、4、5或6，其餘變數如本發明所定義。
在一些實施例中，L 2為-O-(CR 13R 14) m1-NR 12-；R 12為氫或甲基；各R 13、R 14獨立地為氫、鹵素或甲基；m1為1、2、3、4、5或6，其餘變數如本發明所定義。
在一些實施例中，L 2為-NR 11-(CR 13R 14) m1-；R 11為氫或甲基；各R 13、R 14獨立地為氫、鹵素或甲基；m1為1、2、3、4、5或6，其餘變數如本發明所定義。
在一些實施例中，L 2為-(CR 13R 14) m1-NR 12-；R 12為氫或甲基；各R 13、R 14獨立地為氫、鹵素或甲基；m1為1、2、3、4、5或6，其餘變數如本發明所定義。
在一些實施例中，L 2為-(CR 13R 14) m1-；各R 13、R 14獨立地為氫、鹵素或甲基；m1為1、2、3、4、5或6，其餘變數如本發明所定義。
在一些實施例中，L 2為-NR 11-(CR 13R 14) m5-3至7員碳環-(CR 13R 14) m6-NR 12-；R 11、R 12獨立地為氫或甲基；各R 13、R 14各自獨立地為氫、鹵素或甲基；m5為0、1、2、3或4；m6為0、1、2、3或4；上述3至7員碳環為未經取代的或經1、2、3、4或5個選自S1群之基團所取代，其餘變數如本發明所定義。
在一些實施例中，L 2為-O-(CR 13R 14) m5-3至7員碳環-(CR 13R 14) m6-NR 12-；R 12為氫或甲基；各R 13、R 14各自獨立地為氫、鹵素或甲基；m5為0、1、2、3或4；m6為0、1、2、3或4；上述3至7員碳環為未經取代的或經1、2、3、4或5個選自S1群之基團所取代，其餘變數如本發明所定義。
在一些實施例中，L 2為-(CR 13R 14) m5-3至7員碳環-(CR 13R 14) m6-NR 12-；R 12為氫或甲基；各R 13、R 14各自獨立地為氫、鹵素或甲基；m5為0、1、2、3或4；m6為0、1、2、3或4；上述3至7員碳環為未經取代的或經1、2、3、4或5個選自S1群之基團所取代。在一些實施例中，上述3至7員碳環為環丁基、環戊基或環己基，其餘變數如本發明所定義。
在一些實施例中，L 2為-NR 11-(CR 13R 14) m5-3至7員雜環-(CR 13R 14) m6-NR 12；R 11、R 12獨立地為氫或甲基；各R 13、R 14各自獨立地為氫、鹵素或甲基；m5為0、1、2、3或4；m6為0、1、2、3或4；上述3至7員雜環為未經取代的或經1、2、3、4或5個選自S1群之基團所取代，其餘變數如本發明所定義。
在一些實施例中，L 2為-O-(CR 13R 14) m5-3至7員雜環-(CR 13R 14) m6-NR 12；R 12為氫或甲基；各R 13、R 14各自獨立地為氫、鹵素或甲基；m5為0、1、2、3或4；m6為0、1、2、3或4；上述3至7員雜環為未經取代的或經1、2、3、4或5個選自S1群之基團所取代，其餘變數如本發明所定義。
在一些實施例中，L 2為-(CR 13R 14) m5-3至7員雜環-(CR 13R 14) m6-NR 12-；R 12為氫或甲基；各R 13、R 14各自獨立地為氫、鹵素或甲基；m5為0、1、2、3或4；m6為0、1、2、3或4；上述3至7員雜環為未經取代的或經1、2、3、4或5個選自S1群之基團所取代，其餘變數如本發明所定義。
在一些實施例中，L 2為-NR 11-(CR 13R 14) m5-NR 10-(CR 13R 14) m6-NR 12-；R 11、R 12獨立地為氫或甲基；各R 13、R 14各自獨立地為氫、鹵素或甲基；R 10為氫或甲基；m5為0、1、2、3或4；m6為0、1、2、3或4，其餘變數如本發明所定義。
在一些實施例中，L 2為-O-(CR 13R 14) m5-NR 10-(CR 13R 14) m6-NR 12-；R 12為氫或甲基；各R 13、R 14各自獨立地為氫、鹵素或甲基；R 10為氫或甲基；m5為0、1、2、3或4；m6為0、1、2、3或4，其餘變數如本發明所定義。
在一些實施例中，L 2為-(CR 13R 14) m5-NR 10-(CR 13R 14) m6-NR 12-；R 12為氫或甲基；各R 13、R 14各自獨立地為氫、鹵素或甲基；R 10為氫或甲基；m5為0、1、2、3或4；m6為0、1、2、3或4，其餘變數如本發明所定義。
在一些實施例中，L 2為-NR 11-(CR 13R 14) m5-NR 10C(O)-(CR 13R 14) m6-NR 12-；R 11、R 12獨立地為氫或甲基；各R 13、R 14各自獨立地為氫、鹵素或甲基；R 10為氫或甲基；m5為0、1、2、3或4；m6為0、1、2、3或4，其餘變數如本發明所定義。
在一些實施例中，L 2為-O-(CR 13R 14) m5-NR 10C(O)-(CR 13R 14) m6-NR 12-；R 12為氫或甲基；各R 13、R 14各自獨立地為氫、鹵素或甲基；R 10為氫或甲基；m5為0、1、2、3或4；m6為0、1、2、3或4，其餘變數如本發明所定義。
在一些實施例中，L 2為-(CR 13R 14) m5-NR 10C(O)-(CR 13R 14) m6-NR 12-；R 12為氫或甲基；各R 13、R 14各自獨立地為氫、鹵素或甲基；R 10為氫或甲基；m5為0、1、2、3或4；m6為0、1、2、3或4，其餘變數如本發明所定義。
在一些實施例中，L 2為-NR 11-(CR 13R 14) m5-C(O)NR 10-(CR 13R 14) m6-NR 12-；R 11、R 12獨立地為氫或甲基；各R 13、R 14各自獨立地為氫、鹵素或甲基；R 10為氫或甲基；m5為0、1、2、3或4；m6為0、1、2、3或4，其餘變數如本發明所定義。
在一些實施例中，L 2為-O-(CR 13R 14) m5-C(O)NR 10-(CR 13R 14) m6-NR 12-；R 12為氫或甲基；各R 13、R 14各自獨立地為氫、鹵素或甲基；R 10為氫或甲基；m5為0、1、2、3或4；m6為0、1、2、3或4，其餘變數如本發明所定義。
在一些實施例中，L 2為-(CR 13R 14) m5-C(O)NR 10-(CR 13R 14) m6-NR 12-；R 12為氫或甲基；各R 13、R 14各自獨立地為氫、鹵素或甲基；R 10為氫或甲基；m5為0、1、2、3或4；m6為0、1、2、3或4，其餘變數如本發明所定義。
在一些實施例中，L 2為-NR 11-(CR 13R 14) m5-O-(CR 13R 14) m6-NR 12-；R 11、R 12獨立地為氫或甲基；各R 13、R 14各自獨立地為氫、鹵素或甲基；m5為0、1、2、3或4；m6為0、1、2、3或4，其餘變數如本發明所定義。
在一些實施例中，L 2為-O-(CR 13R 14) m5-O-(CR 13R 14) m6-NR 12-；R 12為氫或甲基；各R 13、R 14各自獨立地為氫、鹵素或甲基；m5為0、1、2、3或4；m6為0、1、2、3或4，其餘變數如本發明所定義。
在一些實施例中，L 2為-(CR 13R 14) m5-O-(CR 13R 14) m6-NR 12-；R 12為氫或甲基；各R 13、R 14各自獨立地為氫、鹵素或甲基；m5為0、1、2、3或4；m6為0、1、2、3或4，其餘變數如本發明所定義。
在一些實施例中，L 2為-NR 11-(CR 13R 14) m5-OC(O)-(CR 13R 14) m6-NR 12-；R 11、R 12獨立地為氫或甲基；各R 13、R 14各自獨立地為氫、鹵素或甲基；m5為0、1、2、3或4；m6為0、1、2、3或4，其餘變數如本發明所定義。
在一些實施例中，L 2為-O-(CR 13R 14) m5-OC(O)-(CR 13R 14) m6-NR 12-；R 12為氫或甲基；各R 13、R 14各自獨立地為氫、鹵素或甲基；m5為0、1、2、3或4；m6為0、1、2、3或4，其餘變數如本發明所定義。
在一些實施例中，L 2為-(CR 13R 14) m5-OC(O)-(CR 13R 14) m6-NR 12-；R 12為氫或甲基；各R 13、R 14各自獨立地為氫、鹵素或甲基；m5為0、1、2、3或4；m6為0、1、2、3或4，其餘變數如本發明所定義。
在一些實施例中，L 2為-NR 11-(CR 13R 14) m5-C(O)O-(CR 13R 14) m6-NR 12-；R 11、R 12獨立地為氫或甲基；各R 13、R 14各自獨立地為氫、鹵素或甲基；m5為0、1、2、3或4；m6為0、1、2、3或4，其餘變數如本發明所定義。
在一些實施例中，L 2為-O-(CR 13R 14) m5-C(O)O-(CR 13R 14) m6-NR 12-；R 12為氫或甲基；各R 13、R 14各自獨立地為氫、鹵素或甲基；m5為0、1、2、3或4；m6為0、1、2、3或4，其餘變數如本發明所定義。
在一些實施例中，L 2為-(CR 13R 14) m5-C(O)O-(CR 13R 14) m6-NR 12-；R 12為氫或甲基；各R 13、R 14各自獨立地為氫、鹵素或甲基；m5為0、1、2、3或4；m6為0、1、2、3或4，其餘變數如本發明所定義。
在一些實施例中，L 2為-NR 11-(CR 13R 14) m5-CH=CH-(CR 13R 14) m6-NR 12-；R 11、R 12獨立地為氫或甲基；各R 13、R 14各自獨立地為氫、鹵素或甲基；m5為0、1、2、3或4；m6為0、1、2、3或4，其餘變數如本發明所定義。
在一些實施例中，L 2為-O-(CR 13R 14) m5-CH=CH-(CR 13R 14) m6-NR 12-；R 12為氫或甲基；各R 13、R 14各自獨立地為氫、鹵素或甲基；m5為0、1、2、3或4；m6為0、1、2、3或4，其餘變數如本發明所定義。
在一些實施例中，L 2為-(CR 13R 14) m5-CH=CH-(CR 13R 14) m6-NR 12-；R 12為氫或甲基；各R 13、R 14各自獨立地為氫、鹵素或甲基；m5為0、1、2、3或4；m6為0、1、2、3或4，其餘變數如本發明所定義。
在一些實施例中，上述S1群之基團包括：側氧基、羥基、氰基、鹵素、甲基、乙基、丙基，其餘變數如本發明所定義。
在一些實施例中，上述3至7員碳環為環丙基、環丁基、環戊基或環己基，其餘變數如本發明所定義。
在一些實施例中，上述3至7員雜環為氮雜環丁基、氧雜環丁基、四氫吡咯基、四氫呋喃基、哌啶基或哌𠯤基，其餘變數如本發明所定義。
在一些實施例中，L 2係選自下群之一： ，其餘變數如本發明所定義。
在一些實施例中，L 2係選自下群： ，其餘變數如本發明所定義。
在一些實施例中，L 1為無、-O-、-N(CH 3)-、-CH=CH-、-C=N-、-CH 2-、-CH(CH 3)、-CH 2CH 2-、-CH(CH 3)CH 2-、-CH 2CH 2CH 2-、-CH 2CH 2CH(CH 3)-、-C(O)-、-NH-C(O)-、-N(CH 3)-C(O)-、-C(O)-N(CH 3)- -C(O)-NH-CH 2-或-C(O)-NH- ，其餘變數如本發明所定義。
在一些實施例中，L 1為-N(CD 3)-、-CH(CD 3)、-N(CD 3)-C(O)-或-C(O)-N(CD 3)，其餘變數如本發明所定義。
在一些實施例中，X 1為N或C(R 4)；其中，R 4為氫、鹵素、氰基、-S(O) 2CH 3或-P(O)(CH 3) 2，其餘變數如本發明所定義。
在一些實施例中，式(A)化合物選自下表(I)中化合物之一： 表(I)
本發明第二態樣提供了一種醫藥組合物，其包含第一態樣上述之化合物、其立體異構體、前驅藥或其醫藥學上可接受之鹽以及藥學可接受之載劑。
如本文所用，術語「本發明活性物質」或「本發明化合物」係指第一態樣所描述之化合物、其立體異構體、前驅藥或其醫藥學上可接受之鹽。
如本文所用，術語「藥學可接受之載劑」係指能夠遞送有效量之本發明活性物質、不干擾活性物質之生物活性且對宿主或者個體無毒副作用之任何製劑或載劑介質代表性之載劑，包括水、油、蔬菜及礦物質、膏基、洗劑基質、軟膏基質等。此等基質包括懸浮劑、增黏劑、透皮促進劑等。其製劑為熟習化妝品領域或局部藥物領域技術者所周知。
上述醫藥組合物可以以下任意方式投與：口服，噴霧吸入，直腸用藥，鼻腔用藥，頰部用藥，局部用藥，非腸道用藥，如皮下，靜脈，肌內，腹膜內，鞘內，心室內，胸骨內及顱內注射或輸入，或藉助一種外植儲器用藥。其中較佳口服、腹膜內或靜脈內給藥方式。當口服用藥時，本發明之化合物可製成任意口服可接受之製劑形式，包括但不限於錠劑、膠囊、水溶液或水懸浮液。錠劑使用之載劑通常包括乳糖及玉米澱粉，另外亦可加入潤滑劑如硬脂酸鎂。膠囊製劑使用之稀釋劑通常包括乳糖及乾燥玉米澱粉。水懸浮液製劑則通常係將活性成分與適宜的乳化劑及懸浮劑混合使用。若需要，以上口服製劑形式中亦可加入一些甜味劑、芳香劑或著色劑。當局部用藥時，尤其治療局部外敷容易達到之患面或器官，如眼睛、皮膚或下腸道神經性疾病時，可根據不同之患面或器官將本發明化合物製成不同的局部用藥製劑形式，當眼部局部投與時，本發明之化合物可調配成一種微粉化懸浮液或溶液之製劑形式，所使用載劑為等滲之一pH之無菌鹽水，其中可加入亦可不加防腐劑如氯化苄基烷醇鹽。對於眼用，亦可將化合物製成膏劑形式如凡士林膏。當皮膚局部投與時，本發明之化合物可製成適當的軟膏、洗劑或霜劑製劑形式，其中將活性成分懸浮或溶解於一或多種載劑中。軟膏製劑可使用之載劑包括但不限於：礦物油，液體凡士林，白凡士林，丙二醇，聚氧化乙烯，聚氧化丙烯，乳化蠟及水；洗劑或霜劑可使用之載劑包括但不限於：礦物油，脫水山梨醇單硬脂酸酯，吐溫60，十六烷酯蠟，十六碳烯芳醇，2-辛基十二烷醇，苄醇及水。本發明之化合物亦可以無菌注射製劑形式用藥，包括無菌注射水或油懸浮液或無菌注射溶液。可使用之載劑及溶劑包括水、林格氏溶液及等滲氯化鈉溶液。此外滅菌之非揮發油亦可用作溶劑或懸浮介質，如單甘油酯或二甘油酯。
在另一個態樣，本發明提供了第一態樣所描述之化合物、其立體異構體、前驅藥或其醫藥學上可接受之鹽在製備治療及/或預防CDK7相關疾病之藥物中之用途。
在另一個態樣，本發明提供了第一態樣所描述之化合物、其立體異構體、前驅藥或其醫藥學上可接受之鹽在製備治療及/或預防癌症之藥物中之用途。
在另一個態樣，本發明提供了一種治療癌症之方法，其包括向有此需要之個體投與治療有效量之第一態樣所描述之化合物、其立體異構體、前驅藥或其醫藥學上可接受之鹽，或上述之任意組合，或投與第二態樣所描述之醫藥組合物之步驟。
在另一個態樣，本發明提供了第一態樣所描述之化合物、其立體異構體、前驅藥或其醫藥學上可接受之鹽在製備CDK7抑制劑中之用途。
在一些實施例中，上述CDK7相關疾病為增殖性疾病(例如腫瘤或癌症)、傳染性疾病、免疫疾病、自體免疫疾病及炎性疾病。
在一些實施例中，上述腫瘤或癌症包括實體瘤、血液瘤。在一些實施例中，上述腫瘤或癌症包括黑色素瘤、骨癌(例如骨肉瘤、尤文氏肉瘤)、乳癌(例如激素受體陽性(HR+)乳癌(例如雌激素受體陽性(ER+)或孕酮受體陽性(PR+)乳癌)、激素受體陰性乳癌、三陰性乳癌(TNBC；ER-/PR-/HER2-))、大腸直腸癌、腦癌、肺癌(例如小細胞肺癌、非小細胞肺癌)、胰臟癌、卵巢癌、子宮內膜癌、子宮頸癌、食道癌、胃癌、膽管癌、前列腺癌、肝癌、腎細胞癌、慢性淋巴球白血病(CLL)、急性成淋巴球白血病(ALL)、T-細胞急性成淋巴球白血病(T-ALL)、慢性髓細胞白血病(CML)、急性骨髓性白血病(AML)、淋巴瘤、多發性骨髓瘤、膠質母細胞瘤、神經母細胞瘤。
在一些實施例中，上述傳染性疾病包括AIDS、霍亂、結膜炎、登革熱、腦炎、腸病毒感染(例如，脊髓灰質炎、非脊髓灰質炎)、大腸桿菌感染、口蹄疫、肝炎、帶狀疱疹、流感、麻疹等。
在一些實施例中，上述免疫疾病及/或自體免疫疾病包括哮喘、糖尿病、風濕性疾病、AIDS、移植器官及組織之排斥、鼻炎、慢性阻塞性肺病、骨質疏鬆症、潰瘍性結腸炎、紅斑狼瘡、過敏症、類風濕性關節炎、重症肌無力、克羅恩病、銀屑病等。
在一些實施例中，上述炎性疾病選自中樞神經系統(CNS)之炎性疾病、炎性風濕性疾病、血管之炎性疾病、中耳之炎性疾病、炎性腸病、皮膚之炎性疾病、葡萄膜炎炎性疾病及咽喉之炎性疾病。
如本文所用，術語「個體」係指動物，尤其哺乳動物，較佳係人。
如本文所用，術語「有效量」或「治療有效量」係指無毒的但能達到預期效果之藥物或藥劑之足夠用量。在本發明之實施例中，在根據本發明對患者進行治療時，給定藥物之量取決於諸多因素，如特定給藥方案、疾病或病症類型及其嚴重性、需要治療之受治療者或宿主之獨特性(例如體重)，但是，根據特定的周圍情況，包括例如已採用之特定藥物、給藥途徑、治療之病症、以及治療之受治療者或宿主，投與劑量可由此項技術中已知之方法習知決定。通常，就成人治療使用之劑量而言，投與劑量典型地在0.02-5000毫克/天，例如約1-1500毫克/天之範圍。該所需劑量可方便地被表現為一劑、或同時給藥之(或在短時間內)或在適當的間隔之分劑量，例如每天二、三、四劑或更多分劑。熟習此項技術者可理解的是，儘管給出了上述劑量範圍，但特定有效量可根據患者之情況且結合醫師診斷而適當調節。
如本文所用，術語「醫藥學上可接受之鹽」係指在製藥上可接受且具有母體化合物藥理學活性之本發明化合物之鹽。此類鹽包括：與無機酸或與有機酸形成之酸加成鹽，上述無機酸係諸如硝酸、磷酸、碳酸等；上述有機酸係諸如丙酸、己酸、環戊丙酸、乙醇酸、丙酮酸、葡糖酸、硬脂酸、黏康酸等；或在母體化合物上存在之酸性質子經金屬離子，例如鹼金屬離子或鹼土金屬離子取代時形成之鹽；或與有機鹼形成之配位化合物，上述有機鹼諸如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、N-甲基葡糖胺等。本發明之醫藥學上可接受之鹽可由含有酸根或鹼基之母體化合物藉由習知化學方法合成。一般情況下，此類鹽之製備方法係：在水或有機溶劑或其兩者之混合物中，經由游離酸或鹼形式之此等化合物與化學計量之適當的鹼或酸反應來製備。一般地，較佳係醚、乙酸乙酯、乙醇、異丙醇或乙腈等非水介質。除了鹽形式，本發明所提供之化合物亦存在前驅藥形式。本文所描述之化合物之前驅藥容易地在生理條件下發生化學變化從而轉化成本發明之化合物。此外，前驅體藥物可在體內環境中藉由化學或生化方法而轉換成本發明之化合物。
如本文所用，術語「立體異構體」包括構象異構體及構型異構體，其中構型異構體主要包括順反異構體及旋光異構體。本發明所描述之化合物可以立體異構體之形式存在，且因此涵蓋所有可能之立體異構體形式，包括但不限於順反異構體、互變異構體、鏡像異構體、非鏡像異構體、阻轉異構體等，本發明所描述之化合物亦可以前述立體異構體之任何組合或任何混合物，例如內消旋體、外消旋體、阻轉異構體之等量混合物等形式存在。例如單一鏡像異構體，單一非鏡像異構體或以上之混合物，或單一阻轉異構體或其混合物。當本發明所描述之化合物含有烯烴雙鍵時，除非特別說明，否則其包括順式異構體及反式異構體，以及其任何組合。本發明之阻轉異構體為基於分子內旋轉受限制而產生之軸向或平面對掌性立體異構體。式(A)化合物具有源於不對稱碳、軸向不對稱等之光學異構體，必要時單一異構體可藉由此項技術中已知之方法，例如結晶或對掌性層析等方法進行拆分獲得。
如本文所用，術語「烴基」指直鏈或分支鏈飽和脂族烴基基團。術語「C 1-6烴基」指具有1至6個碳原子之直鏈或分支鏈烴基。例如包括C 1-6烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基等。
如本文所用，術語「C 1-6烷基」指具有1至6個碳原子之直鏈或分支鏈烷基。較佳是C 1-4烷基，較佳更佳是C 1-3烷基。具體實例包括但不限於甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、三級丁基、第二丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基，及其各種分支鏈異構體等。
如本文所用，術語「烯基」指在鏈之任何位點上具有一或多個碳-碳雙鍵之如上定義之烷基，術語「C 2-6烯基」指具有2至6個碳原子及至少一個(例如1至2個)碳-碳雙鍵之烯基。較佳為C 2-4烯基(亦即具有2至4個碳原子及1至2個碳-碳雙鍵之烯基)。具體實例包括但不限於乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-、2-或3-丁烯基、戊烯基、己烯基、丁間二烯基等。
如本文所用，術語「炔基」指在鏈之任何位點上具有一或多個碳-碳三鍵之如上定義之烷基，術語「C 2-6炔基」指具有2至6個碳原子及至少一個(例如1至2個)碳-碳三鍵之炔基。較佳更佳為C 2-4炔基(亦即具有2至4個碳原子及1至2個碳-碳三鍵之炔基)。具體實例包括但不限於乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-、2-或3-丁炔基等。
如本文所用，術語「鹵素」指氟、氯、溴或碘。
如本文所用，術語「鹵代」指氟代、氯代、溴代或碘代。
如本文所用，術語「鹵代烴基」指一或多個(如1、2、3、4或5個)氫原子被鹵素取代之烴基，其中烴基之定義如上所述。術語「鹵代C 1-6烷基」指具有1至6個碳原子之鹵代烷基。較佳為鹵代C 1-4烷基，較佳更佳為鹵代C 1-3烷基。具體實例包括但不限於一氯甲基、二氯甲基、三氯甲基、一氯乙基、1,2-二氯乙基、三氯乙基、一溴乙基、一氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、一氟乙基、二氟乙基、三氟乙基等。
如本文所用，術語「氘代烴基」指一或多個(如1、2、3、4或5個)氫原子被氘原子取代之烴基，其中烴基之定義如上所述。術語「氘代C 1-6烷基」指具有1至6個碳原子之氘代烷基。較佳為氘代C 1-4烷基，較佳更佳為氘代C 1-3烷基。具體實例包括但不限於一氘代甲基、二氘代甲基、三氘代甲基等。
如本文所用，術語「碳環基」及「碳環」可互換使用，指飽和或部分不飽和單環或多環之環狀烴基。術語「3至14員碳環基」或「C 3-14碳環基」指具有3至14個碳原子之飽和或部分不飽和單環或多環之環狀烴基。例如包括單環碳環基(例如3至7員碳環基或「C 3-7碳環基」)或多環碳環基(例如螺碳環基、稠碳環基及橋碳環基等)。
術語「3至7員碳環基」或「C 3-7碳環基」可互換使用，均指具有3至7個環碳原子之飽和或部分不飽和單環環狀烴基。較佳3至6員單環碳環基，較佳4至6員單環碳環基，較佳更佳為3、4、5、6單環碳環基。單環碳環基之特定實例包括但不限於環丙基、環丁基、環戊基、環己基等。
術語「螺碳環基」及「螺碳環基環」指兩個或更多個單環之間共用一個碳原子(稱螺原子)形成之多環環狀烴基。根據環與環之間共用螺原子之數目將螺碳環基分為單螺碳環基、雙螺碳環基及多螺碳環基。術語「6至12員螺碳環基」指具有6至12個環碳原子之多環環狀烴基，其中共用螺原子之單環為3至7員單環碳環。較佳為7至12員螺碳環基，更佳為7至12員單螺碳環基。更佳為7員(4員單環碳環基環/4員單環碳環基環)、8員(4員單環碳環基環/5員單環碳環基環)、9員(4員單環碳環基環/6員單環碳環基環，5員單環碳環基環/5員單環碳環基環)、10員(5員單環碳環基環/6員單環碳環基環)或11員(6員單環碳環基環/6員單環碳環基環)單螺碳環基。螺碳環基之特定實例包括但不限於： 。此等螺碳環基可藉由任意一個環原子與分子其餘部分連接。
術語「稠碳環基」及「稠碳環基環」指兩個或更多個單環藉由共用毗鄰之一對碳原子形成之多環環狀烴基。根據形成環之數目可分為雙環、三環、四環或多環稠碳環基。術語「5至12員稠碳環基」指具有5至12個環碳原子之多環環狀烴基，其中共用毗鄰碳原子對之單環為3至7員單環碳環。較佳為7至12員稠碳環基。更佳為7至10員雙稠碳環基。最佳為8員(5員單環碳環基環與5員單環碳環基環稠合)、9員(5員單環碳環基環與6員單環碳環基環稠合)或10員(6員單環碳環基環與6員單環碳環基環稠合)雙稠碳環基。稠碳環基之特定實例包括但不限於： 。此等稠碳環基可藉由任意一個環原子與分子其餘部分連接。
術語「橋碳環基」及「橋碳環基環」指兩個或更多個單環之間藉由共用兩個不直接連接之碳原子形成之多環環狀烴基。根據形成環之數目可分為雙環、三環、四環或多環橋碳環基。術語「5至12員橋碳環基」指具有5至12個環碳原子之多環環狀烴基，其中任意兩個環共用兩個不直接連接之碳原子。較佳為7至12員橋碳環基。橋碳環基之特定實例包括但不限於： 。此等橋碳環基可藉由任意一個環原子與分子其餘部分連接。
上述碳環基環可稠合於芳基、雜芳基或雜環基環上，其中與母體結構連接在一起之環為碳環基環，非限制性實例包括茚滿基、四氫萘基、苯并環庚烷基等。在本發明中，上述各類碳環基可為視情況經取代的，當經取代時，取代基較佳為一或多個本申請案中所記載之取代基團。
如本文所用，術語「雜環基」及「雜環」可互換使用，指飽和或部分不飽和單環或多環之環狀烴基，例如包括單環雜環基、螺雜環基、稠雜環基及橋雜環基。本發明中所描述之雜環基之環碳原子可視情況經1、2或3個側氧基取代形成環酮、環內酯或環內醯胺結構。術語「3至14員雜環基」指具有3至14個環原子之飽和或部分不飽和單環或多環之環狀烴基，其中一或多個(較佳為1、2、3或4個)環原子係選自氮、氧或S(=O) m '(其中m'係整數0至2)之雜原子，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-之環部分，其餘環原子為碳。其中當環原子為氮原子時，其可為經取代或未經取代的(亦即，N或NR，R為氫或本文已定義之其他取代基)。本發明所描述之3至14員雜環基包括單環雜環基(例如3至7員雜環基)、螺雜環基、稠雜環基及橋雜環基。
術語「3至7員雜環基」及「3至7員雜環基環」指具有3至7個環原子，其中1、2或3個環原子係選自氮、氧或S(=O) m '(其中m'係整數0至2)之雜原子之飽和或部分不飽和單環環狀烴基。較佳為具有4至7個環原子，其中1或2個環原子為雜原子之4至7員單環雜環基。更佳為具有5或6個環原子，其中1或2個環原子為雜原子之5或6員單環雜環基。當雜原子為氮原子時，氮原子可為經取代或未經取代的(亦即，N或NR，R為氫或本文已定義之其他取代基)。當雜原子為硫原子時，硫原子可為視情況經氧化的(亦即，S(=O) m '，m'係整數0至2)。上述單環雜環基之環碳原子可視情況經1、2或3個側氧基取代形成環酮、環內酯或環內醯胺結構。單環之雜環基之特定實例包括但不限於氮丙環、環氧乙烷、氮雜環丁烷、氮雜環丁烷-2-酮、㗁唑烷、吡咯啶-2-酮、吡咯啶-2,5-二酮、1,3-二氧戊環、二氫呋喃-2(3H)-酮、二氫呋喃-2,5-二酮、哌啶-2-酮、哌啶-2,6-二酮、四氫-2H-哌喃-2-酮、咪唑烷、四氫呋喃、四氫噻吩、四氫吡咯、1,3-二氧戊環-2-酮、㗁唑烷-2-酮、咪唑烷-2-酮、哌啶、哌𠯤、哌𠯤-2-酮、𠰌啉、𠰌啉-3-酮、𠰌啉-2-酮、硫代𠰌啉-3-酮1,1-二氧化物、硫代𠰌啉、硫代𠰌啉-1,1-二氧化物、四氫哌喃、1,2-二氫氮雜環丁二烯、1,2-二氫氧雜環丁二烯、2,5-二氫-1H-吡咯、2,5-二氫呋喃、2,3-二氫呋喃、2,3-二氫-1H-吡咯、3,4-二氫-2H-哌喃、1,2,3,4-四氫吡啶、3,6-二氫-2H-哌喃、1,2,3,6-四氫吡啶、1,3-㗁 𠯤烷、六氫嘧啶、1,4-二㗁烷、四氫嘧啶-2(1H)-酮、1,4-二㗁烷-2-酮、5,6-二氫-2H-哌喃-2-酮、5,6-二氫嘧啶-4(3H)-酮、3,4-二氫吡啶-2(1H)-酮、5,6-二氫吡啶-2(1H)-酮、5,6-二氫嘧啶-4(1H)-酮、嘧啶-4(3H)-酮、嘧啶-4(1H)-酮、4,5-二氫-1H-咪唑、2,3-二氫-1H-咪唑、2,3-二氫㗁唑、1,3-二氧雜環戊烯、2,3-二氫噻吩、2,5-二氫噻吩、3,4-二氫-2H-1,4-㗁 𠯤、3,4-二氫-2H-1,4-噻𠯤1,1-二氧化物、1,2,3,4-四氫吡𠯤、1,3-二氫-2H-吡咯-2-酮、1,5-二氫-2H-吡咯-2-酮、1H-吡咯-2,5-二酮、呋喃-2(3H)-酮、呋喃-2(5H)-酮、1,3-二氧雜環戊烯-2-酮、㗁唑-2(3H)-酮、1,3-二氫-2H-咪唑-2-酮、呋喃-2,5-二酮、3,6-二氫吡啶-2(1H)-酮、吡啶-2,6-(1H，3H)-二酮、5,6-二氫-2H-哌喃-2-酮、3,6-二氫-2H-哌喃-2-酮、3,4-二氫-2H-1,3-㗁 𠯤、3,6-二氫-2H-1,3-㗁 𠯤、1,2,3,4-四氫嘧啶等。
上述單環雜環基環上相連之2個環原子，包括C-C、N-C均可視情況與本發明所定義之單環碳環基環、單環雜環基環、單芳基環、5或6員單環雜芳基環等碳環基、雜環基、芳基或雜芳基稠合形成稠合多環。與其他環形成稠合環之單環雜環基上相連之2個環原子較佳為C-C。
術語「螺雜環基」及「螺雜環基環」指兩個或更多個飽和或部分不飽和單環之間共用一個碳原子(稱螺原子)形成之多環雜環基，其中一或多個(如1、2或3個)環原子係選自氮、氧或S(=O) m '(其中m'係整數0至2)之雜原子，其餘環原子為碳。當雜原子為氮原子時，氮原子可為經取代或未經取代的(亦即，N或NR，R為氫或本文已定義之其他取代基)。每個單環中可含有一或多個雙鍵，但沒有一個環具有完全共軛之π電子系統。根據環與環之間共用螺原子之數目將螺雜環基分為單螺雜環基、雙螺雜環基或多螺雜環基。術語「7至14員螺雜環基」指具有7至14個環原子之螺雜環基，其中1或2個環原子為雜原子。較佳為7員(4員單環雜環基環/4員單環雜環基環或4員單環雜環基環/4員單環碳環基或4員單環碳環基環/4員單環雜環基環)、8員(4員單環雜環基環/5員單環雜環基環)、9員(4員單環雜環基環/6員單環雜環基環，5員單環雜環基環/5員單環雜環基環)、10員(5員單環雜環基環/6員單環雜環基環)或11員(6員單環雜環基環/6員單環雜環基環)單螺雜環基。螺雜環基之特定實例包括但不限於： 。
此等螺雜環基可藉由任意一個合適之環原子與分子其餘部分連接。
術語「稠雜環基」及「稠雜環基環」指兩個或更多個飽和或部分不飽和單環藉由共用毗鄰的一對環原子形成之多環雜環基，其中一或多個(如1、2或3個)環原子係選自氮、氧或S(=O) m '(其中m'係整數0至2)之雜原子，其餘環原子為碳。當雜原子為氮原子時，氮原子可為經取代或未經取代的(亦即，N或NR，R為氫或本文已定義之其他取代基)。每個單環中可含有一或多個雙鍵，但沒有一個環具有完全共軛之π電子系統。共用之毗鄰環原子對可為C-C或N-C。根據組成環之數目可分為雙環、三環、四環或多環稠雜環基。術語「5至14員稠雜環基」指具有5至14個環原子之稠雜環基。較佳為具有6至10個環原子，其中1或2個環原子為雜原子之6至10員稠雜環基。更佳為具有8至10個環原子，其中1或2個環原子為雜原子之8至10員稠雜環基。最佳為8員(5員單環雜環基環與5員單環雜環基環稠合)、9員(5員單環雜環基環與6員單環雜環基環稠合)或10員(6員單環雜環基環與6員單環雜環基環稠合)雙環稠雜環基。稠雜環基之特定實例包括但不限於： 。
此等稠雜環基可藉由任意一個合適之環原子與分子其餘部分連接。
術語「橋雜環基」及「橋雜環基環」指兩個或更多個飽和或部分不飽和單環藉由共用兩個不直接連接之環原子形成之多環雜環基，其中一或多個(如1、2或3個)環原子係選自氮、氧或S(=O) m '(其中m'係整數0至2)之雜原子，其餘環原子為碳。根據形成環之數目可分為雙環、三環、四環或多環橋碳環基。術語「5至14員橋雜環基」指具有5至14個環原子之飽和或部分不飽和多環雜環基團，其中任意兩個環共用兩個不直接連接之環原子，每個單環中可含有一或多個雙鍵，但沒有一個環具有完全共軛之π電子系統。較佳為5至10員橋雜環基。橋雜環基之特定實例包括但不限於： 。
此等橋雜環基可藉由任意一個合適之環原子與分子其餘部分連接。
在本發明中，上述各類雜環基可為視情況經取代的，當經取代時，取代基較佳為一或多個本申請案中所記載之取代基團。
如本文所用，術語「芳基」，「芳基環」及「芳環」可互換使用，指全碳單環、全碳非稠合多環(環與環藉由共價鍵連接，非稠合)或全碳稠合多環(亦即，共用毗鄰碳原子對之環)基團，基團中至少一個環係芳族的，亦即，具有共軛的π電子體系。術語「C 5-12芳基」係指具有5至12個環原子之芳基，較佳為C 6-10芳基。本發明中C 5-12芳基包括單環芳基(例如苯基)、非稠合多環芳基(例如聯苯基)及芳族稠合多環。
在一些實施例中，當C 5-12芳基為芳族稠合多環時，上述芳族稠合多環可為單芳基環與一或多個單芳基環稠合形成之多環基團，其非限制性實例包括萘基，蒽基等。
在一些實施例中，當C 5-12芳基為芳族稠合多環時，上述芳族稠合多環亦可為單芳基環(如苯基)與一或多個非芳族環稠合形成之多環基團，其中與母體結構連接之環為芳族環或非芳族環。上述非芳族環包括但不限於3至7員單環雜環基環(較佳為5或6員單環雜環基環，上述單環雜環基環之環碳原子可經1至2個側氧基取代，形成環內醯胺或環內酯結構)，3至7員單環碳環基環(較佳為5或6員單環碳環基環，上述單環碳環基環之環碳原子可經1或2個側氧基取代，形成環酮結構)。上述單芳基環與一或多個非芳族環稠合之多環基團可藉由氮原子或碳原子與其他基團或母體結構連接，與母體結構連接之環為單芳基環或非芳族環。
如本文所用，術語「雜芳基」，「雜芳基環」及「雜芳環」可互換使用，指環原子經至少一個獨立選自氮、氧或硫之雜原子取代之單環或稠合多環(亦即，共用毗鄰環原子對，共用的毗鄰環原子對可為C-C或N-C)基團，其中氮及硫原子可視情況經氧化，氮原子可視情況經四級銨化。上述雜芳基具有共用的6、10或14個π電子，基團中至少一個環係芳族的。術語「5至12員雜芳基」指具有5至12個環原子，其中1、2、3或4個環原子係選自氮、氧或S(=O) m '(其中m'係整數0至2)之雜原子之雜芳基。較佳為具有5至10個環原子，其中1、2、3或4個環原子為雜原子之5至10員雜芳基。本文之雜芳基可為單環雜芳基(例如5或6員單環雜芳基)、稠合雙環雜芳基(例如8至10員雙環雜芳基)或稠合三環雜芳基。
如本文所用，術語「5或6員單環雜芳基」或「5或6員雜芳基」指具有5或6個環原子，其中1、2或3個環原子係選自氮、氧或S(=O) m '(其中m'係整數0至2)之雜原子之單環雜芳基。單環雜芳基之特定實例包括但不限於噻吩、呋喃、噻唑、異噻唑、咪唑、㗁唑、吡咯、吡唑、三唑、1,2,3-三唑、1,2,4-三唑、1,2,5-三唑、1,3,4-三唑、四唑、異㗁唑、㗁二唑、1,2,3-㗁二唑、1,2,4-㗁二唑、1,2,5-㗁二唑、1,3,4-㗁二唑、噻二唑、吡啶、噠𠯤、嘧啶、吡𠯤等。
如本文所用，術語「8至10員雙環雜芳基」指具有8至10個環原子，其中1、2、3、4或5個環原子係選自氮、氧或S(=O) m '(其中m'係整數0至2)之雜原子之稠合雙環雜芳基。上述稠合雙環雜芳基既可為單芳基環(如苯基)與單環雜芳基環(較佳為5或6員單環雜芳基環)稠合形成之雙環基團，亦可為單環雜芳基環(較佳為5或6員單環雜芳基環)與單環雜芳基環(較佳為5或6員單環雜芳基環)稠合形成之雙環基團。
上述單環雜芳基環上任意相連之2個環原子，包括C-C、N-C、N-N均可與本發明所定義之單環碳環基環、單環雜環基環、單芳基環、5或6員單環雜芳基環等碳環基、雜環基、芳基或雜芳基稠合形成稠合多環。上述8至10員雙環雜芳基之非限制性實例包括：苯并[d]異㗁唑、1H-吲哚、異吲哚、1H-苯并[d]咪唑、苯并[d]異噻唑、1H-苯并[d][1,2,3]三唑、苯并[d]㗁唑、苯并[d]噻唑、吲唑、苯并呋喃、苯并[b]噻吩、喹啉、異喹啉、喹唑啉、喹㗁啉、㖕啉、吡啶并[3,2-d]嘧啶、吡啶并[2,3-d]嘧啶、吡啶并[3,4-d]嘧啶、吡啶并[4,3-d]嘧啶、1,8-㖠啶、1,7-㖠啶、1,6-㖠啶、1,5-㖠啶、吡唑并[1,5-a]嘧啶、咪唑并[1,2-b]噠𠯤等。
上述單環雜芳基，或苯環與單環雜芳基環稠合形成之雙環雜芳基，或單環雜芳基環與單環雜芳基環稠合形成之雙環雜芳基可藉由氮原子或碳原子與其他基團或母體結構連接。雙環雜芳基之特定實例包括但不限於： 。此等基團可藉由任意一個合適之環原子與分子其餘部分連接。與母體結構連接之環可為單環雜芳基環或苯環。
在一些實施例中，上述稠合雙環雜芳基或稠合三環雜芳基可為單環雜芳基環(較佳為5或6員單環雜芳基環)與一或多個非芳族環稠合形成之多環基團，其中與母體結構連接之環為單環雜芳基環或非芳族環。上述非芳族環包括但不限於3至6員單環雜環基環(較佳為5或6員單環雜環基環，上述單環雜環基環之環碳原子可經1至2個側氧基取代，形成環內醯胺或環內酯結構)，3至6員單環碳環基環(較佳為5或6員單環碳環基環，上述單環碳環基環之環碳原子可經1或2個側氧基取代，形成環酮結構)等。上述單環雜芳基環與一或多個非芳族環稠合形成之多環基團可藉由氮原子或碳原子與其他基團或母體結構連接，與母體結構連接之環為單環雜芳基環或非芳族環。例如，術語「8至10員雜芳基雜環基」或「8至10員雜芳基雜環基環」指5或6員單環雜芳基環與一個5或6員單環雜環基環稠合形成之8至10員稠合雙環雜芳基，亦即，由5或6員單環雜芳基上相鄰兩個取代基團與其所連接之環原子形成一個稠合之5或6員單環雜環基環，上述5或6員單環雜環基環如上文中所定義。又例如，如本文所用，術語「8至10員雜芳基碳環基」或「8至10員雜芳基碳環基環」指5或6員單環雜芳基環與一個5或6員單環碳環基環稠合形成之8至10員稠合雙環雜芳基，亦即，由5或6員單環雜芳基上相鄰兩個取代基團與其所連接之環原子形成一個稠合之5或6員單環碳環基環，上述5或6員單環碳環基環如上文中所定義。「8至10員雜芳基雜環基」或「8至10員雜芳基碳環基」非限制性實例包括： 。上述基團可藉由其任意合適之環原子與分子其他部分連接。
在本發明中，上述各類雜芳基可為經取代或非取代的，當經取代時，取代基較佳為一或多個本申請案中所記載之取代基團。
如本文所用，術語「羥基」指-OH。
如本文所用，術語「胺基」指-NH 2。
如本文所用，術語「氰基」指-CN。
如本文所用，術語「硝基」指-NO 2。
如本文所用，術語「苄基」指-CH 2-苯。
如本文所用，術語「側氧基」指=O。
如本文所用，術語「伸烷基」表示烷基之二價結合形式。例如，「C 0-6伸烷基」表示具有0至6個碳原子之伸烷基。例如，「C 1伸烷基」表示具有1個碳原子之伸烷基，例如-CH 2-。例如，「C 2伸烷基」表示具有2個碳原子之伸烷基，例如-CH 2CH 2-。以此類推。
如本文所用，術語「伸烯基」表示烯基之二價結合形式。例如，「C 2-6伸烯基」表示具有2至6個碳原子之伸烯基。例如，「C 2伸烯基」表示具有2個碳原子之伸烯基，例如-CH=CH-。以此類推。
如本文所用，術語「取代」係指特定原子上之任意一或多個氫原子經取代基取代，可包括重氫及氫之變體，只要特定原子之價態係正常的且取代後之化合物係穩定的。當取代基為側氧基(亦即，＝O)時，意謂兩個氫原子經取代。側氧基取代不會發生在芳族基上。術語「視情況經取代」或「視情況經取代的」係指可經取代，亦可未經取代，除非另有規定，取代基之種類及數目在化學上可實現之基礎上可為任意的。
當任何變數(例如R)在化合物之組成或結構中出現超過一次時，其在每一種情況下之定義均係獨立的。因此，例如，若一個基團經0-2個R取代，則上述基團可視情況至多經兩個R取代，且每種情況下之R均具有獨立的選項。此外，取代基及/或其變體之組合僅在此類組合會產生穩定的化合物之情況下才被允許。
如本文所用，術語「無」表示其連接之兩個基團直接相連，比如 ，當環A為無時，L 1及L 2直接相連，為「L 1-L 2」。
當所列舉之取代基中未指明其藉由哪一個原子連接至經取代之基團上時，此類取代基可藉由其任何原子相鍵合，例如，吡啶基作為取代基可藉由吡啶環上任意一個碳原子連接至經取代之基團上。
當所列舉之連接基團未指明其連接方向，其連接方向係任意的，例如 中，L係選自-C(O)-NH-，此時-C(O)-NH-既可按與自左至右之讀取順序相同的方向連接苯環及環戊烷構成 ，亦可按照與自左至右之讀取順序相反之方向連接苯環及環戊烷構成 。上述連接基團、取代基及/或其變體之組合僅在此類組合會產生穩定的化合物之情況下才被允許。
本發明式(A)所示之化合物可使用此項技術中已知的合成方法或使用此項技術中已知的方法與本發明記載之方法組合製備得到。本發明給出之溶劑、溫度及其他反應條件均為例示性的，可根據此項技術中熟知的方法而變化。本發明所記載之實施例化合物可根據其特定結構，使用適當的起始原料按照實施例中記載之方法合成，亦可使用與實施例中記載之類似方法合成得到。用於合成本發明實施例化合物之起始原料可藉由已知合成方法或文獻記載之類似方法製備得到或自商業來源獲得。化合物可根據需要，進一步藉由此項技術中熟知的方法，例如結晶、層析法等拆分得到其立體異構體，其拆分條件係熟習此項技術者藉由習知手段或有限試驗而容易獲得的。作為進一步說明，本發明式(A)化合物可利用以下方法合成，其中每個步驟中之溶劑、溫度及其他反應條件可與下述實施例中所記載的相同或類似，或使用此項技術中已知的反應條件。
本發明主張申請日為2021年12月22日之中國專利申請CN202111583828.0之優先權、申請日為2022年01月27日中國專利申請CN202210098381.6之優先權、申請日為2022年05月23日之中國專利申請CN202210562007.7之優先權、申請日為2022年12月07日之中國專利申請CN202211568373.X之優先權。本申請案引用上述中國專利申請之部分或者全部。
本發明之化合物可藉由熟習此項技術者所熟知的多種合成方法來製備，包括下面列舉之特定實施方式、其與其他化學合成方法之結合所形成之實施方式以及熟習此項技術者所熟知的等同替換方式。較佳實施方式包括但不限於本發明之實施例。
以下藉由實施例對本發明進行詳細描述，但並不意謂對本發明之任何不利限制。本文已詳細地描述了本發明，其中亦揭示了其特定實施例方式，對熟習此項技術者而言，在不脫離本發明精神及範圍之情況下針對本發明特定實施方式進行各種變化及改良將係顯而易見的。實施例中未註明特定條件者，按照習知條件或製造商建議之條件進行。所用試劑或儀器未註明生產廠商者，均為可藉由市購獲得之習知產品。
實施例 1 化合物 Z1 之合成 步驟一：三口燒瓶中加入[2-(2-羥基乙氧基)乙基]胺基甲酸苄酯(5.0 g, 20.92 mmol)及二氯甲烷(25 mL)，攪拌且加入三乙胺(6.34 g, 62.76mmol)及4-二甲胺基吡啶(510 mg, 4.18mmol)。混合物降溫至0℃且緩慢加入對甲苯磺醯氯(3.97 g, 20.92 mmol)。室溫攪拌反應2小時，LC-MS監測原料反應完全。將混合物倒入飽和碳酸氫鈉(100 mL)且用二氯甲烷萃取(50 mL×3)，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥且濃縮。粗物質用矽膠管柱純化(乙酸乙酯/石油醚：20%~50%)得油狀產品2-(2-(((苄氧基)羰基)胺基)乙氧基)乙基4-甲基苯磺酸酯(3.84 g, 收率: 46.7%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 7.79 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 7.42 - 7.28 (m, 7H), 5.10 (s, 3H), 4.35 - 4.07 (m, 2H), 3.68 - 3.58 (m, 2H), 3.47 (t, J= 5.0 Hz, 2H), 3.32 (dd, J= 10.4, 5.2 Hz, 2H), 2.41 (s, 3H)。
步驟二：2-(2-(((苄氧基)羰基)胺基)乙氧基)乙基4-甲基苯磺酸酯(1000 mg, 2.542 mmol)及(S)-吡咯啶-3-基胺基甲酸三級丁酯(394 mg, 2.12 mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(15.0 mL)溶液中於室溫下加入碘化鉀(0.056 mL, 0.508 mmol)及碳酸鉀(702.54 mg, 5.083 mmol)固體。反應混合物攪拌下於70℃反應16小時。反應完畢倒入冰水(100 mL)中，且用乙酸乙酯萃取數次(50 mL×3)。合併有機相，飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，濃縮。粗物質用矽膠管柱層析純化(乙酸乙酯/石油醚：10%~100%)得黃色油狀產品(S)-(2-(2-(3-((三級丁氧基羰基)胺基)吡咯啶-1-基)乙氧基)乙基)胺基甲酸苄酯(630 mg, 1.314 mmol, 收率: 51.70%)。LCMSm/z (ESI): [M+H] +=408.2。
步驟三：室溫下(S)-(2-(2-(3-((三級丁氧基羰基)胺基)吡咯啶-1-基)乙氧基)乙基)胺基甲酸苄酯(730 mg, 1.791 mmol)之二氯甲烷(6.0 mL)溶液中，加入三氟乙酸(4.0 mL, 53.85 mmol)。反應混合物室溫下攪拌3小時，反應完全。反應液濃縮且加入乙酸乙酯(50 mL×3)及飽和碳酸氫鈉(50 mL×3)萃取。合併有機相，飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，濃縮。粗物質用矽膠管柱層析純化(甲醇/二氯甲烷：0~10%)得黃色油狀產品化合物(S)-(2-(2-(3-胺基吡咯啶-1-基)乙氧基)乙基)胺基甲酸苄酯(520 mg, 1.66 mmol, 收率: 92.55%)。LCMSm/z (ESI): [M+H] +=308.2。
步驟四：室溫下，2,4二氯-5-(三氟甲基)嘧啶(7.44 g, 34.29 mmol)之1,2-二氯乙烷(30.0 mL)溶液中加入三氯化鋁(12.9 g, 85.62 mmol)。升溫至90℃反應30分鐘。6-甲酸甲酯吲哚(5.0 g, 28.54 mmol)之1,2-二氯乙烷(30.0 mL)溶液緩慢滴加至反應液中。反應混合物繼續於90℃反應18小時。冷卻且倒入冰水(200 mL)中，且用乙酸乙酯(100 mL×3)萃取。合併有機相，飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，濃縮。粗物質用矽膠管柱層析純化(甲醇/二氯甲烷：0~10%)得黃色固體3-(2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(2.5 g, 6.26 mmol, 收率: 21.92%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 12.50 (s, 1H), 9.08 (d, J= 3.4 Hz, 1H), 8.39 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 8.28 (d, J= 2.6 Hz, 1H), 8.20 (t, J= 6.4 Hz, 1H), 7.89 - 7.77 (m, 1H), 3.89 (s, 3H)。
步驟五：室溫氮氣保護下，化合物3-(2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(450 mg, 1.27 mmol)及化合物(S)-(2-(2-(3-胺基吡咯啶-1-基)乙氧基)乙基)胺基甲酸苄酯(583 mg, 1.9 mmol)之二氧六環(6 mL)溶液中加入N,N-二異丙基乙胺(1.56 ml, 9.4 mmol)。反應混合物升溫至120℃反應4小時。冷卻且倒入冰水(50 mL)中，且用乙酸乙酯萃取(50 mL×3)。合併有機相，飽和食鹽水洗(100 mL)，無水硫酸鈉乾燥，濃縮。粗物質用矽膠管柱純化(甲醇/二氯甲烷：0~10%)得黃色油狀產品甲基(R)-3-(2-((1-(2-(2-(((苄氧基)羰基)胺基)乙氧基)乙基)吡咯啶-3-基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(286 mg, 0.32 mmol, 收率: 25.25%)。LCMSm/z (ESI): [M+H] +=627.3。
步驟六：室溫下，化合物甲基(R)-3-(2-((1-(2-(2-(((苄氧基)羰基)胺基)乙氧基)乙基)吡咯啶-3-基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(660 mg, 1.05 mmol)之甲醇(50 mL)溶液中加入10%鈀碳(100 mg, 0.945mmol)。反應混合物在氫氣氛圍中攪拌反應4小時左右。過濾且濃縮，粗物質用矽膠管柱純化(甲醇/二氯甲烷：0~20%)得灰黑色油狀產品(R)-3-(2-((1-(2-(2-胺基乙氧基)乙基)吡咯啶-3-基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(460 mg, 0.65 mmol, 收率: 62.08%)。LCMSm/z (ESI): [M+H] +=493.0。
步驟七：室溫氮氣保護下，化合物(R)-3-(2-((1-(2-(2-胺基乙氧基)乙基)吡咯啶-3-基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(386 mg, 0.76 mmol)之甲醇/水(10/5 mL)溶液中加入氫氧化鋰(197.3mg, 4.7 mmol)。反應混合物升溫至70℃反應3小時。冷卻且濃縮。粗物質反相管柱純化(乙腈/水：0~70%)得白色固體產品(R)-3-(2-((1-(2-(2-胺基乙氧基)乙基)吡咯啶-3-基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸(106 mg, 0.19 mmol, 收率: 24.03%)。LCMSm/z (ESI): [M+H] +=479.2。
步驟八：室溫氮氣保護下，N,N,N',N'-四甲基-O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(126 mg, 0.33 mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(15 mL)溶液中加入N,N-二異丙基乙胺(0.11 ml, 0.66 mmol)。混合物攪拌下加入化合物(R)-3-(2-((1-(2-(2-胺基乙氧基)乙基)吡咯啶-3-基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸(106 mg, 0.22 mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(1 ml)溶液。反應物室溫下反應30分鐘。倒入冰水(50 mL)中，且用乙酸乙酯(50 mL×3)萃取。合併有機相，飽和食鹽水洗乾燥，濃縮。粗物質製備純化(層析管柱: Waters Xbridge C18 10μm OBD 19×250mm; 流動相:水/乙腈(0.1%碳酸氫銨); 流速: 20 mL/min; 偵測波長: 254nm/214nm; 管柱溫: 室溫)得產品(4 3S)-2 5-(三氟甲基)-1 1H-7-氧雜-3,10-二氮雜-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(3,1)-吡咯啶環十一烷-11-酮((4 3S)-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-7-oxa-3,10-diaza- 1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(3,1)-pyrrolidinacycloundecaphan-11-one)(Z1, 2.3 mg, 收率: 2.25%)。LCMS m/z (ESI): [M+H] +=461.2。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.91 (s, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.22 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.61 (s, 2H), 7.39 (s, 1H), 4.08 (s, 1H), 3.57 (s, 3H), 3.25 (s, 3H), 3.08 (s, 2H), 2.71 (d, J= 82.0 Hz, 3H), 2.00 (d, J= 90.2 Hz, 3H)。 19F NMR (400 MHz, DMSO) δ -56.63。
實施例 2 化合物 Z2 之合成 步驟一：室溫下，4-胺基-1-丁醇(3.0 g, 33.7 mmol)之乙醇(30 mL)溶液中加入二碳酸二三級丁酯(3.67 g, 16.856mmol)。反應混合物室溫攪拌反應4小時。反應液濃縮，粗物質用乙酸乙酯(100 mL×3)及碳酸氫鈉(150 mL)萃取，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥且濃縮。粗物質用矽膠管柱純化(乙酸乙酯/石油醚：0~100%)得無色油狀產品(4-羥基丁基)胺基甲酸三級丁酯(5.8 g, 30.69 mmol, 收率: 91%)。
步驟二：氮氣保護下，於-70℃之二甲基亞碸(3.7 ml)之二氯甲烷(50 ml)之反應溶液中滴加草醯氯(13 ml, 23 mmol, 2 M二氯甲烷)，滴完繼續攪拌5分鐘。在-70℃下滴加(4-羥基丁基)胺基甲酸三級丁酯(4.1 g, 21.6 mmol)之二氯甲烷(35.0 mL)溶液。反應混合物逐漸升溫至0℃且攪拌25分鐘。反應完畢倒入冰水中，且用乙酸乙酯(50 mL×3)萃取。合併有機相，飽和食鹽水洗(150 mL)，無水硫酸鈉乾燥，濃縮。粗物質矽膠管柱純化(乙酸乙酯/石油醚：0~50%)得黃色油狀產品(4-側氧基丁基)胺基甲酸三級丁酯(4.0 g, 24.59 mmol, 收率: 84.55%)。
步驟三：室溫氮氣保護下，化合物3-(2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(2.0g, 5.62 mmol)及化合物((1S,3S)-3-胺基環戊基)胺基甲酸三級丁酯(1.02 g, 5.06 mmol)之N-甲基吡咯啶酮(30 mL)溶液中加入N,N-二異丙基乙胺(2.78 ml, 16.78 mmol)。反應混合物升溫至140℃反應0.5小時。冷卻且倒入冰水中，且用乙酸乙酯萃取(50 mL×3)。合併有機相，飽和食鹽水洗(150 mL)，無水硫酸鈉乾燥，濃縮。粗物質用矽膠管柱純化(甲醇/二氯甲烷：0~10%)得到灰色固體3-(2-(((1S,3S)-3-((三級丁氧基羰基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(2.0 g, 3.84 mmol, 收率: 68.47%)。LCMS m/z (ESI): [M+H] +=519.2。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 12.11 (s, 1H), 8.64 - 8.51 (m, 1H), 8.48 - 8.31 (m, 1H), 8.15 (d, J= 5.8 Hz, 1H), 8.01 (d, J= 21.1 Hz, 2H), 7.88 - 7.69 (m, 1H), 7.06 - 6.83 (m, 1H), 4.44 (s, 1H), 4.07 - 3.81 (m, 4H), 2.16 - 1.77 (m, 4H), 1.51 (d, J= 33.4 Hz, 2H), 1.41 - 1.34 (m, 9H)。
步驟四：室溫下化合物3-(2-(((1S,3S)-3-((三級丁氧基羰基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(520 mg, 1.0 mmol)之二氯甲烷(10 mL)溶液中，加入三氟乙酸(1.0 mL, 13.56 mmol)。反應混合物室溫下攪拌1小時，反應完全。反應液濃縮且加入乙酸乙酯(50 mL×3)及飽和碳酸氫鈉(100 mL)萃取。合併有機相，飽和食鹽水(100 mL)洗，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到黃色油狀粗物質甲基3-(2-(((1S,3S)-3-胺基環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(520 mg, 1.66 mmol, 收率: 92.55%)，不經純化直接用於下一步反應。LCMS m/z (ESI): [M+H] +=419.1。
步驟五：室溫下化合物甲基3-(2-(((1S,3S)-3-胺基環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(480 mg, 1.0 mmol)之四氫呋喃(5 mL)溶液中，加入化合物(4-側氧基丁基)胺基甲酸三級丁酯(192.86 mg, 1.03 mmol)。混合物室溫下攪拌30分鐘後加入氰基硼氫化鈉(143.84 mg, 2.29 mmol)。反應混合物室溫下攪拌2小時，反應完全。反應液濃縮且加入乙酸乙酯(50 mL×3)及飽和碳酸氫鈉(100 mL)萃取。合併有機相，飽和食鹽水(100 mL)洗，無水硫酸鈉乾燥，濃縮。粗物質用管柱層析純化(甲醇/二氯甲烷：0~10%)後得到黃色固體化合物甲基3-(2-(((1S,3S)-3-((4-((三級丁氧羰基)胺基)丁基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(356 mg, 0.6 mmol, 收率: 52.66%)。LCMS m/z (ESI): [M+H] +=590.2。
步驟六：室溫下化合物甲基3-(2-(((1S,3S)-3-((4-((三級丁氧羰基)胺基)丁基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(356 mg, 0.76 mmol)之二氯甲烷(5 mL)溶液中，加入三氟乙酸(0.5 mL, 6.75 mmol)。反應混合物室溫下攪拌1小時，反應完全。反應液濃縮且加入乙酸乙酯(50 mL×3)及飽和碳酸氫鈉(100 mL)萃取。合併有機相，飽和食鹽水(100 mL)洗，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到黃色油狀粗物質化合物3-(2-(((1S,3S)-3-((4-胺基丁基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(387 mg, 0.47 mmol, 78.54%)，不經純化直接用於下一步反應。LCMS m/z (ESI): [M+H] +=490.2。
步驟七：室溫氮氣保護下，化合物3-(2-(((1S,3S)-3-((4-胺基丁基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(384 mg, 0.78 mmol)之四氫呋喃/水(10/5 mL)溶液中加入氫氧化鋰(98.54 mg, 2.35 mmol)。反應混合物攪拌反應0.5小時。冷卻且濃縮。粗物質用反相管柱純化(乙腈/水：0~70%)得白色固體產品3-(2-(((1S,3S)-3-((4-胺基丁基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸(208 mg, 0.44 mmol, 收率: 55.76%)。LCMS m/z (ESI): [M+H] +=476.2。
步驟八：室溫氮氣保護下，N,N,N',N'-四甲基-O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(239 mg, 0.63 mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(5 mL)溶液中加入N,N-二異丙基乙胺(0.139 ml, 0.84 mmol)。混合物攪拌下加入化合物3-(2-(((1S,3S)-3-((4-胺基丁基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸(106 mg, 0.22 mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(5 ml)溶液。反應物室溫下反應30分鐘。倒入冰水(50 mL)中，且用乙酸乙酯(50 mL×3)萃取。合併有機相，飽和食鹽水(100 mL)洗，無水硫酸鈉乾燥，濃縮。粗物質製備純化(層析管柱:Waters Xbridge C18 10μm OBD 19×250mm; 流動相:水/乙腈(0.1%碳酸氫銨); 流速: 20 mL/min; 偵測波長: 254nm/214nm; 管柱溫: 25℃)得產品(4 1S,4 3S)-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮雜-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-環戊烷環十一烷-11-酮((4 1S,4 3S)-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H- 3,5,10-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacycloundecaphan-11-one)(Z2, 1.02 mg, 收率：0.35%)。LCMS m/z (ESI): [M+H] +=458.2。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ 8.39 (s, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.34 - 7.24 (m, 1H), 7.23 - 7.07 (m, 1H), 2.95 (s, 2H), 2.27 (d, J= 23.4 Hz, 2H), 2.08 (d, J= 8.5 Hz, 2H), 1.41 (m, 4H), 1.19 (m, 6H)。 19F NMR (377 MHz, CD 3OD) δ -59.28 (s)。
實施例 3 化合物 Z3 之合成 步驟一：氮氣保護下，於-30℃向3-N-三級丁氧羰基-6-氧雜-3-氮雜二環[3.1.0]己烷(5 g, 26.99 mmol)及溴化亞銅(I)二甲硫醚錯合物(60.739 mL, 121.48 mmol)之四氫呋喃(150 mL)溶液中緩慢滴加烯丙基氯化鎂(60.739 mL, 121.48 mmol, 2 M/L)，該反應液在氮氣保護下於-10℃攪拌反應1小時。反應液用10%氯化銨水溶液(100 mL)及乙酸乙酯(100 mL)淬滅，接著於室溫下攪拌1小時。反應液用乙酸乙酯(50 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥、過濾、濃縮至乾。得到的粗物質經矽膠管柱(石油醚/乙酸乙酯=10/1~55/45)層析純化得到黃色油狀物(3R,4S)-3-羥基-4-烯丙基吡咯啶-1-羧酸三級丁酯(1.55 g, 收率: 25.26%)。LCMS m/z (ESI): [M+H-56] +=172。
步驟二：氮氣保護下，於0℃向(3R,4S)-3-羥基-4-烯丙基吡咯啶-1-羧酸三級丁酯(1.5 g, 6.60 mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(8 mL)溶液中加入氫化鈉(0.32 g, 7.92 mmol，60%純度)，該反應液在氮氣保護下於室溫攪拌反應0.5小時。溴化苄(0.947 mL, 7.92 mmol)加入其中，得到的反應液於室溫下攪拌隔夜。將反應液倒入水(50 mL)中，用乙酸乙酯(50 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮至乾燥。得到的粗物質經矽膠管柱(石油醚/乙酸乙酯=10/1 ~ 9/1)層析純化得到黃色油狀物(3R,4S)-3-苄氧基-4-烯丙基吡咯啶-1-羧酸三級丁酯(0.9 g, 收率:42.96%)。LCMS m/z (ESI): [M+H-56] +=262, [M+H-100] +=218。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 7.38 - 7.25 (m, 5H), 5.82 - 5.66 (m, 1H), 5.11 - 4.97 (m, 2H), 4.60 - 4.44 (m, 2H), 3.83 - 3.72 (m, 1H), 3.64 - 3.49 (m, 2H), 3.42 - 3.32 (m, 1H), 3.20 - 3.03 (m, 1H), 2.37 - 2.25 (m, 1H), 2.24 - 2.14 (m, 1H), 2.09 - 1.93 (m, 1H), 1.45 (s, 9H)。
步驟三：向(3R,4S)-3-苄氧基-4-烯丙基吡咯啶-1-羧酸三級丁酯(800 mg, 2.52 mmol)及高碘酸鈉(1.62 g, 7.56 mmol)之乙腈(15 mL)及水(6 mL)之混合溶液中加入鋨酸鉀(92.86 mg, 0.25 mmol)，該反應液室溫攪拌反應2小時。向反應液中加水(10 mL)且用乙酸乙酯(10 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮至乾燥。得到的粗物質經矽膠管柱(石油醚/乙酸乙酯=10/1 ~ 55/45)層析純化得到黃色油狀物(3R,4S)-3-苄氧基-4-(2-乙醛基)吡咯啶-1-羧酸三級丁酯(500 mg，收率: 62.11%). LCMS: MS m/z (ESI): [M+H-56] +=264, [M+H-100] +=220。
步驟四：向(3R,4S)-3-苄氧基-4-(2-乙醛基)吡咯啶-1-羧酸三級丁酯(480 mg, 1.50 mmol)及3-(2-(((1S, 3S)-3-胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(630 mg, 1.50 mmol)之1,2-二氯乙烷(15 mL)溶液中加入少量的醋酸(0.086 mL, 1.50 mmol)，該反應液室溫攪拌反應0.5小時。醋酸硼氫化鈉(951 mg, 4.51 mmol)加入其中，得到的反應液於室溫下攪拌隔夜。向反應液中加水(20 mL)中，且用乙酸乙酯(10 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮至乾。得到的粗物質經矽膠管柱(二氯甲烷/甲醇=100/1 ~ 95/5)層析純化得到黃色油狀物3-(2-(((1S,3S)-3-((2-((3S,4R)-4-(苄氧基)-1-(三級丁氧羰基)吡咯基-3-基)乙基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(460 mg, 收率: 42.37%). LCMS: MS m/z (ESI): [M+H] +=723。
步驟五：向3-(2-(((1S, 3S)-3-((2-((3S,4R)-4-(苄氧基)-1-(三級丁基氧羰基)吡咯基-3-基)乙基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(480 mg, 0.66 mmol)之四氫呋喃(2 mL)及甲醇(2 mL)之混合溶液中加入氫氧化鋰(139 mg, 3.32 mmol)之水(2 mL)溶液，該反應液室溫攪拌反應隔夜。反應液用0.5 M之鹽酸水溶液酸化至pH=3-4，且用乙酸乙酯(5 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮至乾。得到的粗物質經矽膠管柱(二氯甲烷/甲醇=100/1 ~ 85/15)層析純化得到黃色油狀物3-(2-(((1S, 3S)-3-((2-((3S,4R)-4-(苄氧基)-1-(三級丁氧羰基)吡咯基-3-基)乙基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(460 mg, 收率: 98.2%)。LCMS: MS m/z (ESI): [M+H] +=709。
步驟六：在0℃下向3-(2-(((1S, 3S)-3-((2-((3S,4R)- 4-(苄氧基)-1-(三級丁基氧羰基)吡咯基-3-基)乙基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(390 mg, 0.55 mmol)中加入鹽酸/二氧六環(10 mL, 4 N)溶液，該反應液室溫攪拌反應1小時。反應液濃縮至乾燥，得到黃色固體3-(2-(((1S,3S)-3-((2-((3S,4R)-4-(苄氧基)吡咯基-3-基)乙基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(320 mg, 收率: 95.55%)。LCMS: MS m/z (ESI): [M+H] +=609。
步驟七：向3-(2-(((1S, 3S)-3-((2-((3S,4R)-4-(苄氧基)吡咯基-3-基)乙基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(320 mg, 0.53 mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(180 mL)溶液中依次加入五氟苯酚(194 mg, 1.05 mmol)及N,N'-二環己基碳二亞胺(217 mg, 1.05 mmol)，該反應液室溫攪拌反應隔夜。反應液濃縮至乾，得到的粗物質經矽膠管柱(二氯甲烷/甲醇=100/1 ~ 90/10)層析純化得到棕色固體(4 1S,4 3S,8 3S,8 4R)-8 4-(苄氧基)-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5-二氮雜-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-8(3,1)-吡咯啶-4(1,3)-環戊烷環壬烷-9-酮(100 mg, 收率: 32.26%)。LCMS: MS m/z (ESI): [M+H] +=591。
步驟八：在0℃下向(4 1S,4 3S,8 3S,8 4R)-8 4-(苄氧基)-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5-二氮雜-1(3,6)- 吲哚-2(4,2)-嘧啶-8(3,1)-吡咯啶-4(1,3)-環戊烷環壬烷-9-酮(30 mg, 0.05 mmol)之二氯甲烷(2 mL)溶液中緩慢滴加三氯化硼(0.25 mL, 1 M)溶液，該反應液在氮氣保護下於0℃攪拌反應1.5小時。反應液用甲醇(0.1 mL)淬滅，且濃縮至乾燥，得到的粗物質經製備HPLC (層析管柱: Xbridge Prep C18 10μm OBO TM19×250nm; 流動相: 乙腈/水(0.05% 氨水)；流速: 20ml/min)純化得到(4 1S,4 3S,8 3S,8 4R)-8 4-(羥基)-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5-二氮雜-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-8(3,1)-吡咯啶-4(1,3)-環戊烷環壬烷-9-酮((4 1S,4 3S,8 3S,8 4R)-8 4-hydroxy-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5-diaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-8(3,1)-pyrrolidina-4(1,3)-cyclopentanacyclononaphan-9-one) (Z3, 2.6 mg, 收率: 8.0%)。LCMS: MS m/z (ESI): [M+H] +=501。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ 8.79 - 8.19 (m, 2H), 7.86 (d, J = 76.7 Hz, 1H), 7.51 - 7.45 (m, 1H), 7.25 - 7.15 (m, 1H), 4.64 - 4.48 (m, 1H), 4.29 - 4.18 (m, 1H), 4.15 - 3.87 (m, 2H), 3.58 - 3.37 (m, 1H), 3.26 - 3.18 (m, 1H), 2.86 - 2.67 (m, 1H), 2.59 - 2.47 (m, 1H), 2.29 - 2.19 (m, 2H), 2.13 - 1.96 (m, 2H), 1.88 - 1.74 (m, 1H), 1.70 - 1.58 (m, 2H), 1.56 - 1.44 (m, 1H), 1.36 - 1.09 (m, 2H)。
實施例 4 化合物 Z4 之合成 步驟一：向三級丁基((1S,3S)-3-胺基環戊基)胺基甲酸酯(1 g, 5.0 mmol)之四氫呋喃(25 mL)溶液中加入N,N-二異丙基乙胺(2.61 g, 20.0 mmol)及2,4-二氯-5-(三氟甲基)嘧啶(1.10 g, 5.0 mmol)，該反應液在25℃攪拌反應14小時。LCMS偵測反應完全後，將反應液直接濃縮得到粗物質。粗物質經矽膠管柱(石油醚/乙酸乙酯=30/1 ~ 15/1)層析純化得到N-[(1S,3S)-3-{[4-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]胺基}環戊基]胺基甲酸三級丁酯(0.76 g, 收率: 40%)。LCMS: MS m/z (ESI): [M+H] +=381.2, t R= 1.56 min。
步驟二：1H-吲哚-6-羧酸甲酯(3.00 g, 17.12 mmol)在N,N-二甲基甲醯胺(30 mL)中之溶液，0℃時，加入1-碘-吡咯啶-2,5-二酮(4.62 g, 20.55 mmol)。將反應在室溫下攪拌3小時。TLC(石油醚:乙酸乙酯=1:1)顯示反應完成。用乙酸乙酯(200mL×3)及水(60ml)萃取。接著加入飽和氯化鈉溶液洗滌，無水硫酸鈉乾燥、過濾、濃縮。矽膠管柱層析純化(石油醚/乙酸乙酯=1:1)得到化合物3-碘-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(3.5g, 收率:67.89%)。
步驟三：向3-碘-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(3.50 g, 11.62 mmol)之二氯甲烷(35 mL)溶液中加入三乙胺(3.23 mL, 23.25 mmol)、4-二甲胺基吡啶(0.36 g, 2.91 mmol)，0℃時，加入二碳酸二三級丁酯(2.99 mL, 13.95 mmol)。將反應在室溫下攪拌18小時。TLC(石油醚:乙酸乙酯=5:1)顯示反應完成。反應液用二氯甲烷(200mL×3)及水(60ml)萃取，加入飽和氯化鈉溶液洗滌，加入無水硫酸鈉乾燥、過濾、濃縮。矽膠管柱層析純化(石油醚/乙酸乙酯=3:1)得到化合物1-(三級丁基)6-甲基3-碘-1H-吲哚-1,6-二甲酸酯(3.8g, 收率: 81.48%)。
步驟四：向1-(三級丁基)6-甲基3-碘-1H-吲哚-1,6-二甲酸酯(3.60 g, 8.97 mmol )在二氧六環(36 mL)中之溶液中加入醋酸鉀(1.76 g, 17.95 mmol)、二氯化鈀(0.66 g, 0.91 mmol)及4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼烷(1.95 mL, 13.46 mmol)，在70℃下攪拌3小時。TLC(石油醚:乙酸乙酯=5:1)顯示反應完成。收集混合物，真空濃縮。粗物質用矽膠管柱層析純化(石油醚/乙酸乙酯=20:1)得到化合物1-(三級丁基)6-甲基3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼烷-2-基)-1H-吲哚-1,6-二甲酸酯(2.5g, 產率: 69.43%)。
步驟五：向1-(三級丁基)6-甲基3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼烷-2-基)-1H-吲哚-1,6-二甲酸酯(2.3 g, 5.73 mmol)在二氧六環及水溶液(23 mL)中之溶液中加入碳酸鉀(1.58 g, 11.46 mmol)、二氯化鈀(0.28 g, 0.38 mmol)及N-[(1S,3S)-3-{[4-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]胺基}環戊基]胺基甲酸三級丁酯(1.46 g, 3.82 mmol)，反應100℃下攪拌3小時。TLC(石油醚:乙酸乙酯=3:1)顯示反應完成。收集混合物，真空濃縮。粗物質用矽膠管柱層析純化(石油醚/乙酸乙酯溶離=3:1)得到化合物1-(三級丁基)6-甲基3-(2-(((1S,3S)-3-((三級丁氧羰基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-1,6-二甲酸酯(2.2 g, 收率: 90%)。
步驟六：向含有1-(三級丁基)6-甲基3-(2-(((1S,3S)-3-((三級丁氧羰基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-1,6-二甲酸酯(2.20 g, 3.55 mmol)之燒瓶中加入二氧六環(15 mL, 3.55 mmol)，接著加入氯化氫(15 mL, 3.55 mmol)。混合物在25℃下攪拌2小時。TLC(二氯甲烷:甲醇=10:1)顯示反應完成。濃縮，將所得固體用甲基三級丁基醚溶解，過濾，得淡黃色固體化合物3-(2-(((1S,3S)-3-胺基環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(2.6 g, 粗物質, 鹽酸鹽)。ES-API: [M+H] += 419.2。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 12.17 (s, 1H), 8.60 (d, J= 15.4 Hz, 1H), 8.38 (d, J= 30.4 Hz, 1H), 8.05 (s, 2H), 7.78 (d, J= 24.6 Hz, 1H), 4.53 (d, J= 6.1 Hz, 1H), 3.88 (s, 3H), 3.56 (s, 2H), 2.16 (s, 2H), 2.00 (d, J= 9.2 Hz, 3H), 1.63 (s, 2H), 1.23 (s, 2H)。
步驟七：向3-(2-(((1S,3S)-3-胺基環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(1.00 g, 2.38 mmol)之1,2-二氯乙烷(10 mL)溶液中加入硼氫化鈉(0.39 mL, 11.92 mmol)、三級丁基4-(2-氧乙基)哌啶-1-羧酸酯(0.54g, 2.38mmol)，將反應在室溫下攪拌隔夜。反應液用二氯甲烷(60mL×3)及碳酸氫鈉飽和溶液萃取，飽和氯化鈉溶液洗滌，無水硫酸鈉乾燥、過濾、濃縮。粗物質用薄層層析純化(二氯甲烷:甲醇=30:1)得到甲基3-(2-(((1S,3S)-3-((2-(1-(三級丁氧羰基)哌啶-4-基)乙基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(300mg, 收率: 19.46%)。ES-API: [M+H] += 630.31。
步驟八：向甲基3-(2-(((1S,3S)-3-((2-(1-(三級丁氧羰基)哌啶-4-基)乙基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(150 mg, 0.24 mmol) 在四氫呋喃/甲醇/水(1:1:1)中之溶液中加入氫氧化鋰(0.02 mL, 0.71 mmol)，將反應在室溫下攪拌隔夜。用稀鹽酸將反應物之pH值調至酸性。反應用乙酸乙酯(6mL×3)及水(2ml)稀釋，接著加入飽和氯化鈉溶液進行分離。收集有機層，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到化合物3-(2-(((1S,3S)-3-((2-(1-(三級丁氧基羰基)哌啶-4-基)乙基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4 -基)-1H-吲哚-6-羧酸(150mg，收率: 98.79%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 12.26 (d, J= 14.1 Hz, 1H), 9.16 (s, 3H), 8.85 (s, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 8.16 - 7.98 (m, 3H), 7.76 (d, J= 17.5 Hz, 1H), 4.52 (s, 1H), 3.21 (d, J= 12.1 Hz, 4H), 2.84 (d, J= 29.6 Hz, 5H), 2.19 (d, J= 6.3 Hz, 3H), 1.78 (s, 3H), 1.60 (s, 4H), 1.28 (d, J= 40.2 Hz, 9H)。
步驟九：向含有3-(2-(((1S,3S)-3-((2-(1-(三級丁氧基羰基)哌啶-4-基)乙基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸(330 mg, 0.52 mmol)之燒瓶中加入二氧六環(3 mL, 0.52 mmol)，接著加入氯化氫(3 mL)。混合物在25℃下攪拌2小時。TLC(二氯甲烷:甲醇=7:1)顯示反應完成。真空濃縮有機層。將所得固體用甲基三級丁基醚溶解，過濾，得淡黃色固體化合物3-(2-(((1S,3S)-3-((2-(哌啶-4-基)乙基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸(350 mg, 收率: 126.00%)。ES-API: [M+H] +=517.4。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 12.54 (s, 1H), 9.39 (d, J= 41.9 Hz, 3H), 9.13 (s, 1H), 8.59 (d, J= 12.7 Hz, 1H), 8.37 (dd, J= 40.4, 8.0 Hz, 1H), 8.07 (d, J= 60.1 Hz, 3H), 7.76 (dd, J= 33.4, 8.0 Hz, 1H), 4.51 (s, 1H), 3.18 (d, J= 11.9 Hz, 3H), 2.91 - 2.71 (m, 4H), 2.20 (dd, J= 13.6, 6.8 Hz, 3H), 1.79 (d, J= 8.9 Hz, 3H), 1.66 (d, J= 19.7 Hz, 4H), 1.37 (d, J= 9.5 Hz, 2H)。
步驟十：向3-(2-((1S,3S)-3-((2-(哌啶-4-基)乙基)胺基)環戊基胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸(90 mg, 0.17 mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(5 mL)溶液中依次加入2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(72 mg, 0.19 mmol)及N,N-二異丙基乙胺(88 mg, 0.68 mmol)，該反應液室溫攪拌16小時。LCMS偵測反應完全後，反應液濃縮至乾，得到的粗物質經反相製備(層析管柱: Ultimate XBC18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-06)；流速: 70 mL/min；流動相: 乙腈-水(0.1%三氟醋酸)；管柱溫: 25℃)得到(4 1S,4 3S)-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5-二氮雜-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-8(4,1)-哌啶-4(1,3)-環戊烷環壬烷-9-酮((4 1S,4 3S)-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5-diaza-1(3,6)-indola-2(4,2)- pyrimidina-8(4,1)-piperidina-4(1,3)-cyclopentanacyclononaphan-9-one) (Z4)之三氟乙酸鹽(1.7 mg, 收率:1.3%)。LCMS: MS m/z (ESI): [M+H] +=499.2, t R= 1.22 min。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD): δ 8.64 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.39 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 4.53 - 4.50 (m, 1H), 4.48 - 4.37 (m, 1H), 3.72 (s, 1H), 3.26 - 3.19 (m, 1H), 3.09 - 2.97 (m, 1H), 2.80 - 2.55 (m, 3H), 2.42 - 2,40 (m, 2H), 2.11 - 1.97 (m, 2H), 1.92 - 1.60 (m, 8H), 1.36 - 1.29 (m, 1H)。
實施例 5 化合物 Z5 之合成 步驟一：在室溫下，向3-(2-(((1S,3S)-3-胺基環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(270 mg, 0.55 mmol)之N,N-二甲基甲醯胺溶液(5 mL)中依次加入三級丁基(4-溴丁基)胺基甲酸酯(138 mg, 0.55 mmol)及N,N-二異丙基乙胺(284 mg, 2.20 mmol)，反應液在氮氣保護下於80℃攪拌反應16小時。LCMS偵測反應完全後，反應液加入10%氯化銨水溶液(100 mL)且用乙酸乙酯(100 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥、過濾、濃縮。得到的粗物質經矽膠管柱(石油醚/乙酸乙酯=2/1 ~ 1/1)層析純化得到白色固體甲基3-(2-(((1S,3S)-3-((4-((三級丁氧羰基)胺基)丁基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(170 mg, 收率: 46%)。LCMS: MS m/z (ESI): [M+H] +=667.3, t R= 1.28 min。
步驟二：向甲基3-(2-(((1S,3S)-3-((4-((三級丁氧羰基)胺基)丁基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(170 mg, 0.26 mmol)之四氫呋喃(2 mL)及甲醇(2 mL)之混合溶液中加入氫氧化鋰(66.0 mg, 1.56 mmol)之水(2 mL)溶液，該反應液在40℃攪拌反應隔夜。LCMS偵測反應完全後，反應液用1.0 M之鹽酸水溶液酸化至pH = 3-4，用二氯甲烷(10 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥、過濾、濃縮得到白色固體3-(2-(((1S,3S)-3-((4-((三級丁氧羰基)胺基)丁基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸(160 mg, 收率: 94%)，不經純化直接用於下一步反應。LCMS: MS m/z (ESI): [M+H] +=653.2, t R= 1.12 min。
步驟三：在25℃下向3-(2-(((1S,3S)-3-((4-((三級丁氧羰基)胺基)丁基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸(160 mg, 0.25 mmol)之甲醇(5 mL)溶液中加入鹽酸/甲醇(5 mL, 4 N)溶液，該反應液在25℃攪拌反應16小時。LCMS偵測反應完全後，反應液濃縮得到白色固體3-(2-(((1S,3S)-3-((4-胺基丁基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸(120 mg, 收率: 87%)。LCMS: MS m/z (ESI): 553.2 [M+H] +, t R= 1.00 min。
步驟四：向3-(2-(((1S,3S)-3-((4-胺基丁基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸(120 mg, 0.22 mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(5 mL)溶液中依次加入2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(91.2 mg, 0.24 mmol)及N,N-二異丙基乙胺(114 mg, 0.88 mmol)，該反應液在80℃攪拌16小時。LCMS偵測反應完全後，反應液濃縮，得到的粗物質經反相製備(層析管柱: Ultimate XBC18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-06)；流動相: 乙腈-水(0.1%三氟醋酸)；流速: 70 mL/min；管柱溫: 25℃)得到(4 1S,4 3S)-1 7-(二甲基磷醯基)-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮雜-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-環戊烷環十一烷-11-酮((4 1S,4 3S)-1 7-(dimethylphosphoryl) -2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,10-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacycloundecaphan-11-one) (Z5)之三氟乙酸鹽(17.2 mg, 收率: 17%)。LCMS: MS m/z (ESI): [M+H] +=535.2, t R= 1.55 min。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ): δ 12.00 (s, 1H), 8.61 (s, 1H), 8.53 - 8.31 (m, 3H), 8.18 (d, J= 4.0 Hz, 1H), 8.13 - 8.05 (m, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.29-7.26 (m, 1H), 4.34 - 4.20 (m, 1H), 2.85 - 2.75 (m, 1H), 2.73 - 2.57 (m, 4H), 2.20-2.12 (m, 2H), 1.95 - 1.85 (m, 6H), 1.81 - 1.52 (m, 6H), 1.50 - 1.40 (m, 1H)。
實施例 6 化合物 Z6 之合成 步驟一：在-78℃下向2-溴-3-硝基苯甲酸(10.0 g, 40.6 mmol)之四氫呋喃(150 mL)溶液中緩慢滴加乙烯基溴化鎂之四氫呋喃溶液(1 M, 163 mL, 163 mmol)，滴加完再在氮氣保護下於-78℃繼續攪拌反應3小時，接著自然升至室溫攪拌16小時。LCMS偵測反應完全後，向反應液中緩慢加入飽和氯化銨水溶液(300 mL)淬滅，且用1 M之鹽酸調節pH 4-5，接著用二氯甲烷(300 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥、過濾、濃縮。得到的粗物質經矽膠管柱(二氯甲烷/甲醇=30/1)層析純化得到黃色固體7-溴-1H-吲哚-6-羧酸(9.4 g, 收率: 96.5%)。LCMS: m/z (ESI): 239.8 [M+H] +, t R= 1.21 min。
步驟二：在25℃下向7-溴-1H-吲哚-6-羧酸(9.40 g, 39.2 mmol)之N,N二甲基甲醯胺(80 mL)溶液中加入碘甲烷(6.66 g, 46.9 mmol)及碳酸鉀(10.8 g, 78.3 mmol)。該反應液在氮氣保護下在25℃攪拌16小時。LCMS偵測反應完全後，反應液加水(200 mL)，接著用乙酸乙酯(200 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥、過濾、濃縮。得到的粗物質經矽膠管柱(石油醚/乙酸乙酯=10/1)層析純化得到黃色固體7-溴-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(3.90 g, 收率: 37%)。LCMS: m/z (ESI): 254.0 [M+H] +, t R= 1.46 min。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ): δ 11.63 (s, 1H), 7.62 (dd, J= 13.6, 5.6 Hz, 2H), 7.51 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 6.66 (d, J= 3.2 Hz, 1H), 3.87 (s, 3H)。
步驟三：在25℃下，向悶罐中依次加入三(二伸苄基丙酮)二鈀(242 mg, 0.393 mmol)、4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽(455 mg, 0.787 mmol)及1,4-二氧六環(20 mL)溶液，在氮氣保護下攪拌30分鐘，接著再依次加入7-溴-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(2.0 g, 7.87 mmol)、磷酸鉀(1.67 g, 7.87 mmol)及二甲基氧化膦(0.61 g, 7.87 mmol)。該反應液在110℃攪拌14小時。LCMS偵測反應完全後，反應液直接濃縮得到，得到的粗物質經矽膠管柱(石油醚/乙酸乙酯=1/1~純乙酸乙酯)層析純化得到黃色固體7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(1.00 g, 收率: 51%)。LCMS: m/z (ESI): [M+H] +=252.0, t R= 1.30 min。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ): δ 12.12 (s, 1H), 7.86 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.69 (dd, J= 8.4, 3.6 Hz, 1H), 7.65 (t, J= 2.8 Hz, 1H), 6.59 (s, 1H), 3.88 (s, 3H), 1.95 (s, 3H), 1.92 (s, 3H)。
步驟四：在氮氣氛圍中，在乾燥的50 mL三口瓶中，加入三氯化鋁(1.06 g, 7.96 mmol)，接著用注射器加入7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(1.00 g, 3.98 mmol)之1.2-二氯乙烷(10 mL)溶液，在80℃攪拌30分鐘，接著加入2,4-二氯-5-(三氟甲基)嘧啶(0.95 g, 4.38 mmol)之1.2-二氯乙烷(1 mL)溶液，該反應液在80℃下反應16小時。LCMS偵測反應完全後，反應液加水(20 mL)，接著用乙酸乙酯(20 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥、過濾、濃縮，得到的粗物質經管柱層析(石油醚/乙酸乙酯=3/5)純化得到白色固體3-(2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(800 mg, 收率: 47%)。LCMS: m/z (ESI): [M+H] +=432.0, t R= 1.58 min。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3): δ 13.15 (s, 1H), 8.83 (s, 1H), 8.77 (dd, J= 8.8, 1.6 Hz, 1H), 8.20 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.07 (dd, J= 8.8, 4.0 Hz, 1H), 3.96 (s, 3H), 2.10 (d, J= 14.4 Hz, 6H)。
步驟五：在10 mL微波管中，依次加入3-(2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(770 mg, 1.78 mmol)，N-甲基吡咯啶酮(4 mL)、N,N-二異丙基乙胺(0.59 mL, 3.57 mmol)及三級丁基((1S,3S)-3-胺基環戊基)胺基甲酸酯(392 mg, 1.96 mmol)，該反應液80℃攪拌溶解直至清澄，接著130℃微波反應2小時。LCMS偵測反應完全後，反應液加水(20 mL)，接著用乙酸乙酯(20 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥、過濾、濃縮，得到的粗物質經管柱層析(石油醚/乙酸乙酯=1:1)純化得到類白色固體甲基3-(2-(((1S,3S)-3-((三級丁氧羰基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(500 mg, 收率: 58%)。LCMS: m/z (ESI): [M+H] +=595.8, t R= 1.58 min。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ): δ 12.67 (s, 1H), 8.59 (s, 2H), 8.16 (s, 1H), 8.01 - 7.68 (m, 2H), 6.78 (s, 1H), 4.46 (dd, J= 13.8, 6.8 Hz, 1H), 3.94 (s, 3H), 2.23 - 2.10 (m, 2H), 2.00 (d, J= 14.2 Hz, 6H), 1.96 - 1.87 (m, 3H), 1.66 - 1.47 (m, 2H), 1.40 (s, 9H)。
步驟六：室溫下，將甲基3-(2-(((1S,3S)-3-((三級丁氧羰基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(400 mg, 0.67 mmol)溶於氯化氫/二氧六環(5 mL, 4 M)及甲醇(2 mL)之混合溶液，20℃反應16小時。LCMS偵測反應完全後，反應液加入飽和碳酸氫鈉溶液(40 mL)，接著用二氯甲烷(20 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥、過濾、濃縮，得到的粗物質經管柱層析(二氯甲烷/甲醇=30:1)純化得到白色固體3-(2-(((1S,3S)-3-胺基環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(160 mg, 收率: 48%)。LCMS: m/z (ESI): 496.2 [M+H] +, t R= 1.40 min。
步驟七：將3-(2-(((1S,3S)-3-胺基環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(500 mg, 1.0 mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(3 mL)中，三級丁基(5-溴戊基)胺基甲酸酯(269 mg, 1.0 mmol)及N,N-二異丙基乙胺(0.67 mL, 4.0 mmol)依次加入，反應在80℃攪拌16小時。LCMS偵測反應完全後，旋乾，管柱層析(二氯甲烷/甲醇=100/7)純化得到類白色固體甲基3-(2-(((1S,3S)-3-((5-((三級丁氧羰基)胺基)戊基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(420 mg, 收率: 61%)。LCMS: m/z (ESI): [M+H] +=681.2, t R= 1.54 min。
步驟八：將甲基3-(2-(((1S,3S)-3-((5-((三級丁氧羰基)胺基)戊基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(360 mg, 0.53 mmol)溶於水(1 mL)、甲醇(1 mL)及四氫呋喃(1 mL)之混合體系中，接著加入一水合氫氧化鋰(111 mg, 2.65 mmol)，40℃攪拌16小時。LCMS偵測反應完全後，加入水(20 mL)，用鹽酸(1 M)調至pH = 4-5，用二氯甲烷(20 mL×9)萃取，合併有機相用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥、過濾、濃縮得到粗物質3-(2-(((1S,3S)-3-((5-((三級丁氧羰基)胺基)戊基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸(320 mg, 收率: 91%)呈白色固體，不經純化直接用於下一步反應。LCMS: m/z (ESI): [M+H] +=667.2, t R= 1.50 min。
步驟九：將3-(2-(((1S,3S)-3-((5-((三級丁氧羰基)胺基)戊基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸(320 mg, 0.47 mmol)溶於氯化氫/甲醇(5 mL, 4 M)中，體系在25℃攪拌4小時。LCMS偵測反應完全後，溶劑旋乾得到白色固體3-(2-(((1S,3S)-3-((5-胺基戊基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸(260 mg, 收率: 98%)，不經純化直接用於下一步反應。LCMS: m/z (ESI): [M+H] +=567.3, t R= 0.92 min。
步驟十：向3-(2-(((1S，3S)-3-((5-胺基戊基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸(200 mg, 0.35 mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(20 mL)溶液中依次加入2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(134 mg, 0.35 mmol)及N,N-二異丙基乙胺(0.23 mL, 1.41 mmol)，該反應液在60℃攪拌16小時。LCMS偵測反應完全後，反應液濃縮，得到的粗物質經反相製備(層析管柱: Ultimate XB-C18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02)；流動相: 乙腈-水(0.1%三氟醋酸)；流速: 70 mL/min；管柱溫: 25℃)得到(4 1S,4 3S)-1 7-(二甲基磷醯基)-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,11-三氮雜-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-環戊烷環十二烷-12-酮((4 1S,4 3S)-1 7-(dimethylphosphoryl)-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,11-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacyclododecaphan-12-one) (Z6)之三氟乙酸鹽(34.3 mg, 收率: 15%)。LCMS: m/z (ESI): [M+H] +=549.2, t R= 0.70 min。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ): δ 11.84 - 11.94 (m, 1H), 8.70 - 8.30 (m, 3H), 8.30 - 8.07 (m, 3H), 7.87 - 8.10 (m, 1H), 7.62 - 7.22 (m, 1H), 4.39 - 4.18 (m, 1H), 3.50 - 3.05 (m, 1H), 3.01 - 2.80 (m, 3H), 2.70 - 2.52 (m, 1H), 2.45 - 2.33 (s, 1H), 2.22 - 2.01 (m, 2H), 2.00 - 1.37 (m, 15H)。
實施例 7 化合物 Z7 之合成 步驟一：在室溫下，向3-(2-(((1S,3S)-3-胺基環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(500 mg, 1.00 mmol)之N,N-二甲基甲醯胺溶液(5 mL)中依次加入(2-(2-溴乙氧基)乙基)胺基甲酸三級丁酯(270 mg, 1.00 mmol)及N,N-二異丙基乙胺(0.67 mL, 4.00 mmol)，該反應液在氮氣保護下於70℃攪拌反應16小時。LCMS偵測反應完全後，反應液加入10%氯化銨水溶液(100 mL)，用乙酸乙酯(100 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥、過濾、濃縮。得到的粗物質經矽膠管柱(二氯甲烷/甲醇=50/1 ~ 10/1)層析純化得到黃色固體甲基3-(2-(((1S,3S)-3-((2-(2-((三級丁氧羰基)胺基)乙氧基)乙基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(170 mg, 收率: 46%)。LCMS: MS m/z (ESI): [M+H] +=683.4, t R= 1.18 min。
步驟二：向甲基3-(2-(((1S,3S)-3-((2-(2-((三級丁氧羰基)胺基)乙氧基)乙基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(350 mg, 0.51 mmol)之四氫呋喃(2 mL)及甲醇(2 mL)之混合溶液中加入氫氧化鋰(86.0 mg, 2.05 mmol)之水(2 mL)溶液，該反應液在40℃攪拌下反應16小時。LCMS偵測反應完全後，反應液用1.0 M之鹽酸水溶液酸化至pH = 3-4，用二氯甲烷/甲醇(10:1, 60 mL×6)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥、過濾、濃縮得到黃色固體3-(2-(((1S,3S)-3-((2-(2-((三級丁氧基羰基)胺基)乙氧基)乙基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸(314 mg，收率: 92%)。粗產品無需純化直接用於下一步反應。LCMS: MS m/z (ESI): [M+H] +=669.2, t R= 1.10 min。
步驟三：在25℃下向3-(2-(((1S,3S)-3-((2-(2-((三級丁氧基羰基)胺基)乙氧基)乙基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸(300 mg, 0.45 mmol)之甲醇(5 mL)溶液中加入鹽酸/甲醇(5 mL, 4 M)溶液，該反應液在40℃下攪拌4小時。LCMS偵測反應完全後，反應液直接濃縮得到黃色固體3-(2-(((1S,3S)-3-((2-(2-胺基乙氧基)乙基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸(244 mg, 收率: 96%)。粗物質無需純化直接用於下一步反應。LCMS: MS m/z (ESI): [M+H] +=569.2, t R= 0.95 min。
步驟四：向3-(2-(((1S,3S)-3-((2-(2-胺基乙氧基)乙基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸(220 mg, 0.39 mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(8 mL)溶液中依次加入2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(149 mg, 0.39 mmol)及N,N-二異丙基乙胺(182 mg, 1.41 mmol)，該反應液在60℃攪拌16小時。LCMS偵測反應完全後，反應液濃縮，得到的粗物質經反相製備(層析管柱：Ultimate XB-C18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02)；層析條件：乙腈-水(0.1%三氟醋酸)；流速：70mL/min；管柱溫：25℃)得到(4 1S,4 3S)-1 7-(二甲基磷醯基)-2 5-(三氟甲基)-1 1H-8-氧雜-3,5,11-三氮雜-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-環戊烷環十二烷-12-酮((4 1S,4 3S)-1 7-(dimethylphosphoryl)-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-8-oxa-3,5,11-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacyclododecaphan-12-one) (Z7)之三氟乙酸鹽(33.5 mg, 收率: 16%)。LCMS: MS m/z (ESI): [M+H] +=551.2, t R= 0.69 min。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ): δ 12.06 - 12.05 (m, 1H), 8.69 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 8.64 - 8.48 (m, 2H), 8.13 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 8.07 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.86 - 7.75 (m, 1H), 7.42 (dd, J = 8.0, 3.2 Hz, 1H), 4.32 - 4.18 (m, 1H), 3.82 - 3.72 (m, 5H), 3.46 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 3.31 - 3.17 (m, 2H), 3.16 - 3.08 (m, 1H), 2.72 (dd, J = 14.4, 7.2 Hz, 1H), 2.30 - 2.20 (m, 1H), 2.19 - 2.11 (m, 1H), 2.02 - 1.86 (m, 6H), 1.82 - 1.62 (m, 3H)。
實施例 8 化合物 Z8 之合成 步驟一：在10 mL微波管中，依次加入3-(2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(810 mg, 1.88 mmol)、N-甲基吡咯啶酮(5 mL)、N,N-二異丙基乙胺(0.93 mL, 5.63 mmol)及三級丁基((1r,3r)-3-胺基環丁基)胺基甲酸酯(384 mg, 2.06 mmol)，反應液80℃攪拌溶解直至清澄，接著在130℃微波反應2小時。LCMS偵測反應完全後，反應液加水(20 mL)，接著用乙酸乙酯(20 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥、過濾、濃縮，得到的粗物質經管柱層析(石油醚/乙酸乙酯=1/1)純化得到類白色固體甲基3-(2-(((1r,3r)-3-((三級丁氧羰基)胺基)環丁基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(970 mg, 收率: 89%)。LCMS: MS m/z (ESI): [M+H] +=582.2, t R= 1.89 min。
步驟二：室溫下，將甲基3-(2-(((1r,3r)-3-((三級丁氧羰基)胺基)環丁基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(500 mg, 0.86 mmol)溶於氯化氫/二氧六環(5 mL, 4 M)及甲醇(2 mL)之混合溶液，25℃反應16小時。LCMS偵測反應完全後，反應液加入飽和碳酸氫鈉溶液(40 mL)，接著用乙酸乙酯(30 mL×10)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥、過濾、濃縮，得到的粗物質經矽膠管柱(二氯甲烷/甲醇=10/1)層析純化得到白色固體3-(2-(((1r,3r)-3-胺基環丁基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(220 mg, 收率: 53%)。LCMS: MS m/z (ESI): [M+H] +=482.2, t R= 1.35 min。
步驟三：在室溫下向3-(2-(((1r,3r)-3-胺基環丁基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(300 mg, 0.62 mmol)之N,N-二甲基甲醯胺溶液(5 mL)中依次加入三級丁基(4-溴丁基)胺基甲酸酯(157 mg, 0.62 mmol)及N,N-二異丙基乙胺(322 mg, 2.49 mmol)，該反應液在氮氣保護下於80℃攪拌反應16小時。LCMS偵測反應完全後，反應液加入飽和氯化銨溶液(100 mL)，且用乙酸乙酯(100 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥、過濾、濃縮至乾。得到的粗物質經矽膠管柱(二氯甲烷/甲醇=50/1到10/1)層析純化得到黃色固體物甲基3-(2-(((1r,3r)-3-((4-((三級丁氧羰基)胺基)丁基)胺基)環丁基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(225 mg, 收率: 55%)。LCMS: MS m/z (ESI): [M+H] +=653.3, t R= 1.19 min。
步驟四：向甲基3-(2-(((1r,3r)-3-((4-((三級丁氧羰基)胺基)丁基)胺基)環丁基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(225 mg, 0.35 mmol)之四氫呋喃(2 mL)及甲醇(2 mL)之混合溶液中加入一水合氫氧化鋰(72.0 mg, 1.72 mmol)之水(2 mL)溶液，該反應液在40℃攪拌反應16小時。LCMS偵測反應完全後，反應液用1.0 M之鹽酸水溶液酸化至pH = 3-4，且用二氯甲烷/甲醇(10:1, 60 mL×6)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥、過濾、濃縮得到黃色固體3-(2-(((1r,3r)-3-((4-((三級丁氧基羰基)胺基)丁基)胺基)環丁基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸(300 mg, 收率95%)。粗產品無需純化直接用於下一步反應。LCMS: MS m/z (ESI): [M+H] +=639.2, t R= 1.40 min。
步驟五：向3-(2-(((1r,3r)-3-((4-((三級丁氧基羰基)胺基)丁基)胺基)環丁基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸(300 mg, 0.33 mmol)之甲醇(5 mL)溶液中加入鹽酸/甲醇(5 mL, 4 M)溶液，該反應液在40℃攪拌反應16小時。LCMS偵測反應完全後，反應液濃縮至乾得到黃色固體3-(2-(((1r,3r)-3-((4-胺基丁基)胺基)環丁基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸(270 mg, 收率: 94%)。粗物質無需純化直接用於下一步反應。LCMS: MS m/z (ESI): [M+H] +=639.2, t R= 1.31 min。
步驟六：向3-(2-(((1r,3r)-3-((4-胺基丁基)胺基)環丁基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸(270 mg, 0.31 mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(5 mL)溶液中依次加入2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(118 mg, 0.31 mmol)及N,N-二異丙基乙胺(200 mg, 1.55 mmol)，該反應液在70℃攪拌16小時。LCMS偵測反應完全後，反應液濃縮至乾燥，得到的粗物質經反相製備(70 mL/min, 25℃, Ultimate XB-C18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02), 乙腈-水(0.1%三氟醋酸))得到(4 1r,4 3r)-1 7-(二甲基磷醯基)-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮雜-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-環丁烷環十一烷-11-酮((4 1r,4 3r)-1 7- (dimethylphosphoryl)-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,10-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclobutanacycloundecaphan-11-one) (Z8)之三氟乙酸鹽(3.9 mg, 收率: 2.4%)。LCMS: MS m/z (ESI): [M+H] +=551.3, t R= 1.05 min。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6): δ 11.94 (s, 1H), 8.79 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.29 (d, J= 4.4 Hz, 1H), 8.07 - 7.92 (m, 2H), 7.42 - 7.32 (m, 1H), 4.82 - 4.68 (m, 1H), 4.05 (s, 1H), 2.86 - 2.78 (m, 2H), 2.36 - 2.28 (m, 2H), 2.26 - 2.18 (m, 2H), 2.08 - 1.94 (m, 3H), 1.91 (s, 3H), 1.87 (s, 3H), 1.76 - 1.68 (m, 2H), 1.56 - 1.48 (m, 2H)。
實施例 9 化合物 Z9 之合成 步驟一：在10 mL微波管中，依次加入3-(2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(450 mg, 1.04 mmol)，N-甲基吡咯啶酮(5 mL)、N,N-二異丙基乙胺(0.52 mL, 3.13 mmol)及三級丁基((1S,3S)-3-胺基環己基)胺基甲酸酯(235 mg, 1.09 mmol)，該反應液80℃攪拌溶解直至清澄，接著在130℃微波反應2小時。LCMS偵測反應完全後，反應液加水(20 mL)，接著用乙酸乙酯(20 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥、過濾、濃縮，得到的粗物質經管柱層析(石油醚/乙酸乙酯=1/1)純化得到類白色固體甲基3-(2-(((1S,3S)-3-((三級丁氧羰基)胺基)環己基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(470 mg, 收率: 74%)。LCMS: m/z (ESI): [M+H] +=610.2, t R= 1.98 min。
步驟二：室溫下，將甲基3-(2-(((1S,3S)-3-((三級丁氧羰基)胺基)環己基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(470 mg, 0.77 mmol)溶於氯化氫/二氧六環(5 mL, 4 M)及甲醇(2 mL)之混合溶液，25℃反應16小時。LCMS偵測反應完全後，反應液加入飽和碳酸氫鈉溶液(40 mL)，接著用乙酸乙酯(30 mL×10)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥、過濾、濃縮，得到的粗物質經矽膠管柱(二氯甲烷/甲醇=10/1)層析純化得到白色固體3-(2-(((1S,3S)-3-胺基環己基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(310 mg, 收率: 79%)。LCMS: m/z (ESI): [M+H] +=510.5, t R= 1.42 min。
步驟三：將3-(2-(((1S,3S)-3-胺基環己基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(310 mg, 0.61 mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(3 mL)中，三級丁基(4-溴丁基)胺基甲酸酯(153 mg, 0.61 mmol)及N,N-二異丙基乙胺(0.67 mL, 4.0 mmol)依次加入，反應在80℃攪拌16小時。LCMS偵測反應完全後，旋乾，管柱層析(二氯甲烷/甲醇=100/7)純化得到類黃色固體甲基3-(2-(((1S,3S)-3-((4-((三級丁氧羰基)胺基)丁基)胺基)環己基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(200 mg, 收率: 48%)。LCMS: m/z (ESI): [M+H] +=681.2, t R= 1.60 min。
步驟四：將甲基3-(2-(((1S,3S)-3-((4-((三級丁氧羰基)胺基)丁基)胺基)環己基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(200 mg, 0.29 mmol)溶於水(1 mL)、甲醇(1 mL)及四氫呋喃(1 mL)之混合體系中，接著加入一水合氫氧化鋰(61.6 mg, 1.47 mmol)，反應在40℃攪拌16小時。LCMS偵測反應完全後，旋乾溶劑得到粗物質3-(2-(((1S,3S)-3-((4-((三級丁氧羰基)胺基)丁基)胺基)環己基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸(180 mg, 收率: 92%)，呈黃色固體，不經純化直接用於下一步反應。LCMS: m/z (ESI): [M+H] +=667.2, t R= 1.43 min。
步驟五：將3-(2-(((1S,3S)-3-((4-((三級丁氧羰基)胺基)丁基)胺基)環己基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸(180 mg, 0.27 mmol)溶於氯化氫/甲醇(5 mL, 4 M)中，體系在15℃攪拌4小時。LCMS偵測反應完全後，直接將溶劑旋乾得到黃色固體3-(2-(((1S,3S)-3-((4-胺基丁基)胺基)環己基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸(120 mg, 收率: 78%)，不經純化直接用於下一步反應。LCMS: m/z (ESI): [M+H] +=567.2, t R= 1.43 min。
步驟六：向3-(2-(((1S,3S)-3-((4-胺基丁基)胺基)環己基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸(120 mg, 0.21 mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(10 mL)溶液中依次加入2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(80.4 mg, 0.21 mmol)及N,N-二異丙基乙胺(0.14 mL, 0.84 mmol)，該反應液在60℃攪拌16小時。LCMS偵測反應完全後，反應液濃縮，得到的粗物質經反相製備(層析管柱：Ultimate SFC18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02)；流動相: 乙腈-水(0.1%三氟醋酸)；流速: 70 mL/min；管柱溫: 25℃)得到(4 1S,4 3S)-1 7-(二甲基磷醯基)-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮雜-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-環己烷環十一烷-11-酮((4 1S,4 3S)-1 7-1 7-(dimethylphosphoryl)-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,10-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclohexanacycloundecaphan-11-one) (Z9)之三氟乙酸鹽(8.2 mg, 收率: 5.8%)。LCMS: m/z (ESI): [M+H] +=549.2, t R= 0.72 min。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ): δ 11.87 (d, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.27 - 8.09 (m, 2H), 7.97 (m, 2H), 7.88 - 7.76 (m, 2H), 7.29 (m, 1H), 4.05 (m, 1H), 2.83 (m, 3H), 2.71 - 2.58 (m, 2H), 2.36 (m, 1H), 1.88 (m, 8H), 1.58 (m, 9H)。
實施例 10 化合物 Z10 之合成 步驟一：在室溫下向3-(2-(((1S,3S)-3-胺基環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(300 mg, 0.61 mmol)之N,N-二甲基甲醯胺溶液(3 mL)中依次加入3-(三級丁氧羰基胺基)丙基溴(144 mg, 0.61 mmol)及N,N-二異丙基乙胺(313 mg, 2.42 mmol)，該反應液在氮氣保護下於80℃攪拌反應16小時。LCMS偵測反應完全後，反應液加入10%氯化銨水溶液(50 mL)，用乙酸乙酯(50 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥、過濾、濃縮。得到的粗物質經矽膠管柱(二氯甲烷/甲醇=40/1 ~ 15/1)層析純化得到黃色固體3-(2-(((1S,3S)-3-(3-(三級丁氧羰基胺基丙基)胺基)環戊基胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(100 mg, 收率: 25%)。LCMS: MS m/z (ESI): [M+H] +=653.6, t R= 1.53 min。
步驟二：向3-(2-(((1S,3S)-3-(3-(三級丁氧羰基胺基丙基)胺基)環戊基胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(100 mg, 0.16 mmol)之四氫呋喃(1.5 mL)及甲醇(1.5 mL)之混合溶液中加入一水合氫氧化鋰(33 mg, 0.78 mmol)之水(1.5 mL)溶液，該反應液在40℃攪拌反應16小時。LCMS偵測反應完全後，反應液用1.0 M之鹽酸水溶液酸化至pH = 3-4，且用二氯甲烷(10 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥、過濾、濃縮得到白色固體3-(2-(((1S,3S)-3-((3-(三級丁氧羰基)胺基)丙基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸(90 mg, 收率92%)，不經純化直接用下一步反應。LCMS: MS m/z (ESI): [M+H] +=639.2, t R= 1.10 min。
步驟三：在25℃下向3-(2-(((1S,3S)-3-((3-(三級丁氧羰基)胺基)丙基)胺基)環戊基)胺基-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸(90 mg, 0.14 mmol)之甲醇(3 mL)溶液中加入鹽酸/甲醇(6 mL, 4 N)溶液，該反應液在40℃攪拌反應2小時。LCMS偵測反應完全後，反應液濃縮得到白色固體3-(2-(((1S,3S)-3-((3-氨丙基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸(70 mg, 收率: 93%)。LCMS: MS m/z (ESI): [M+H] +=539.6, t R= 1.33 min。
步驟四：向3-(2-(((1S,3S)-3-((3-氨丙基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸(65 mg, 0.12 mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(8 mL)溶液中依次加入2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(80 mg, 0.21 mmol)及N,N-二異丙基乙胺(300 mg, 2.32 mmol)，該反應液在80℃攪拌16小時。LCMS偵測反應完全後，反應液濃縮，得到的粗物質經反相製備(層析管柱：Ultimate XBC18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-06)；流動相：乙腈-水(0.1%三氟醋酸)；流速：70 mL/min；室溫：25℃)純化得到(4 1S,4 3S)-1 7-(二甲基磷醯基)-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,9-三氮雜-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-環戊烷環癸烷-10-酮((4 1S,4 3S)-1 7-(dimethylphosphoryl)-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,9-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacyclodecaphan-10-one) (Z10)之三氟乙酸鹽(1.6 mg, 收率: 3%)。LCMS: MS m/z (ESI): [M+H] +=521.2, t R= 1.26 min。
實施例 11 化合物 Z11 之合成 步驟一：在-78℃下，向2-氯-3-硝基苯甲酸(10.0 g, 49.6 mmol)之四氫呋喃(120 mL)溶液中緩慢滴加乙烯基溴化鎂之四氫呋喃溶液(198 mL, 198 mmol, 1 M)，滴加完再在氮氣保護下於-78℃繼續攪拌反應3小時。LCMS偵測反應完全後，向反應液中緩慢加入飽和氯化銨水溶液(300 mL)淬滅，且用1 M之鹽酸調節pH至4-5，接著用二氯甲烷(300 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥、過濾、濃縮得到粗物質棕黃色固體7-氯-1H-吲哚-6-羧酸(8.03 g, 收率: 83%)，不經純化直接用於下一步反應。LCMS: m/z (ESI): [M+H] +=196.0, t R= 1.53 min。
步驟二：在25℃下向7-氯-1H-吲哚-6-羧酸(8.00 g, 40.9 mmol)之N,N二甲基甲醯胺(85 mL)溶液中加入碘甲烷(6.97 g, 49.1 mmol)及碳酸鉀(11.3 g, 81.9 mmol)。該反應液在氮氣保護下在25℃攪拌16小時。TLC偵測反應完全後，反應液加水(200 mL)，接著用乙酸乙酯(150 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥、過濾、濃縮。得到的粗物質經矽膠管柱(石油醚/乙酸乙酯=10/1)層析純化得到黃色固體7-氯-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(5.8 g, 收率: 67%)。LCMS: m/z (ESI): [M+H] +=210.1, t R= 1.45 min。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3): δ 8.67 (s, 1H), 7.72 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.55 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.40 (m, 1H), 6.62 (dd, J= 3.2, 2.0 Hz, 1H), 3.95 (s, 3H)。
步驟三：在乾燥50 mL三口瓶中，加入三氯化鋁(1.27 g, 9.54 mmol)，在氮氣保護下加入7-氯-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(1.00 g, 4.77 mmol)之1,2-二氯乙烷(10 mL)溶液，此體系在80℃攪拌30分鐘，接著加入2,4-二氯-5-(三氟甲基)嘧啶(1.09 g, 5.01 mmol)之1,2-二氯乙烷(1 mL)溶液，該反應液在80℃下反應16小時。TLC偵測反應完全後，反應液加水(30 mL)，接著用乙酸乙酯(30 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥、過濾、濃縮，得到的粗物質經管柱層析(石油醚/乙酸乙酯=3/5)純化得到白色固體7-氯-3-(2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(0.38 g, 收率: 20%)。LCMS: m/z (ESI): [M+H] +=392.0, t R= 1.70 min。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ): δ 12.86 (s, 1H), 9.10 (s, 1H), 8.25 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 8.08 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 7.73 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 3.91 (s, 3H)。
步驟四：在10 mL微波管中，依次加入7-氯-3-(2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(420 mg, 1.08 mmol)，N-甲基吡咯啶酮(2 mL)、N,N-二異丙基乙胺(0.53 mL, 3.23 mmol)及三級丁基((1S,3S)-3-胺基環戊基)胺基甲酸酯(237 mg, 1.18 mmol)，該反應液80℃攪拌溶解直至清澄，接著在130℃微波反應2小時。LCMS偵測反應完全後，反應液加水(20 mL)，接著用乙酸乙酯(20 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥、過濾、濃縮，得到的粗物質經管柱層析(石油醚/乙酸乙酯=1/1)純化得到類白色固體甲基3-(2-(((1S,3S)-3-((三級丁氧羰基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-氯-1H-吲哚-6-羧酸酯(430 mg, 收率: 72%)。LCMS: m/z (ESI): [M+H] +=554.0, t R= 2.05 min。
步驟五：室溫下，將甲基3-(2-(((1S,3S)-3-((三級丁氧羰基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-氯-1H-吲哚-6-羧酸酯(430 mg, 0.72 mmol)溶於氯化氫/二氧六環(4 mL, 4 M)及甲醇(2 mL)之混合溶液，15℃反應16小時。LCMS偵測反應完全後，反應液加入飽和碳酸氫鈉溶液(40 mL)，接著用二氯甲烷(20 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥、過濾、濃縮，得到的粗物質經管柱層析(二氯甲烷/甲醇=30:1)純化得到白色固體3-(2-(((1S,3S)-3-胺基環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-氯-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(320 mg, 收率: 89%)。LCMS: m/z (ESI): [M+H] +=454.0, t R= 1.38 min。
步驟六：將3-(2-(((1S,3S)-3-胺基環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-氯-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(320 mg, 0.71 mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(2 mL)中，三級丁基(4-溴丁基)胺基甲酸酯(178 mg, 0.71 mmol)及N,N-二異丙基乙胺(0.58 mL, 3.53 mmol)依次加入，反應在80℃攪拌16小時。LCMS偵測反應完全後，旋乾，管柱層析(二氯甲烷/甲醇=100/7)純化得到黃色固體甲基3-(2-(((1S,3S)-3-((4-((三級丁氧羰基)胺基)丁基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-氯-1H-吲哚-6-羧酸酯(230 mg, 收率: 52%)。LCMS: m/z (ESI): [M+H] +=625.4, t R= 1.07 min。
步驟七：將甲基3-(2-((1S,3S)-3-((4-((三級丁氧羰基)胺基)丁基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-氯-1H-吲哚-6-羧酸酯(230 mg, 0.37 mmol)溶於水(1 mL)、甲醇(1 mL)及四氫呋喃(1 mL)之混合體系中，接著加入一水合氫氧化鋰(77.2 mg, 1.84 mmol)，反應在40℃攪拌16小時。LCMS偵測反應完全後，旋乾溶劑得到粗物質3-(2-(((1S,3S)-3-((4-((三級丁氧羰基)胺基)丁基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-氯-1H-吲哚-6-羧酸(鋰鹽, 340 mg, 收率: 91%)呈黃色固體，不經純化直接用於下一步反應。LCMS: m/z (ESI): [M+H] +=611.4, t R= 0.98 min。
步驟八：將3-(2-(((1S,3S)-3-((4-((三級丁氧羰基胺基)戊基胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸(鋰鹽, 340 mg)溶於氯化氫/甲醇(5 mL, 4 M)中，體系在25℃攪拌4小時。LCMS偵測反應完全後，旋乾溶劑得到棕色固體3-(2-(((1S,3S)-3-((4-胺基丁基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-氯-1H-吲哚-6-羧酸(含氯化鋰, 300 mg, 收率: 88%)，不經純化直接用於下一步反應。LCMS: m/z (ESI): [M+H] +=511.2, t R= 0.61 min。
步驟九：向3-(2-(((1S,3S)-3-((4-胺基丁基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-氯-1H-吲哚-6-羧酸(含氯化鋰, 290 mg, 0.28 mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(10 mL)溶液中依次加入2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(108 mg, 0.28 mmol)及N,N-二異丙基乙胺(0.24 mL, 1.42 mmol)，該反應液在60℃攪拌16小時。LCMS偵測反應完全後，反應液濃縮，得到的粗物質經反相製備純化(層析管柱：Ultimate XB-C18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02)；流動相：乙腈-水(0.1%三氟醋酸)；流速：70 mL/min；管柱溫：25℃)得到(4 1S,4 3S)-1 7-氯-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮雜-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-環戊基環十一烷-11-酮((4 1S,4 3S)-1 7-chloro-25-(trifluoromethyl)-11H-3,5,10-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacycloundecaphan-11-one) (Z11)之三氟乙酸鹽(30.8 mg, 收率: 22%)。LCMS: m/z (ESI): [M+H] +=493.2, t R= 1.27 min。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ): δ 12.33 (s, 1H), 8.64 (s, 1H), 8.43 (s, 1H), 8.34 - 8.04 (m, 3H), 7.99 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.26 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 3.60 (s, 2H), 2.88 (s, 1H), 2.55 (s, 1H), 2.47 - 2.38 (m, 1H), 2.30 - 1.95 (m, 3H), 1.83 - 1.41 (m, 6H), 1.30 - 1.25 (m, 2H)。
實施例 12 化合物 Z12 之合成 步驟一：在室溫下向3-(2-((1S,3S)-3-胺基環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(750 mg, 1.52 mmol)之甲醇溶液(10 mL)中依次加入三級丁基((4-氧環己基)甲基)胺基甲酸酯(414 mg, 1.82 mmol)及冰醋酸(0.1 mL)，該反應液在氮氣保護下於25℃攪拌反應16小時。接著加入氰基硼氫化鈉(287 mg, 4.56 mmol)，該反應液在25℃攪拌反應2小時。LCMS偵測反應完全後，向反應液加入飽和氯化銨溶液(20 mL)，用乙酸乙酯(30 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮至乾。得到的粗物質經反相製備純化得到(層析管柱：Ultimate XB-C18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02)；流動相：乙腈-水(0.1%三氟醋酸)；流速：70 mL/min；管柱溫：25℃)得到白色固體甲基3-(2-((1S,3S)-3-((三級丁氧羰基)胺基)甲基環己基胺基)環戊基胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸鹽(P1: 340 mg, 收率32%)。LCMS: MS m/z (ESI): 707.4 [M+H] +, t R= 7.43 min。甲基3-(2-((1S,3S)-3-((三級丁氧羰基)胺基)甲基環己基胺基)環戊基胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸鹽(P2: 340 mg, 收率: 32%)。LCMS: MS m/z (ESI): 707.4 [M+H] +, t R= 7.53 min。
步驟二：向甲基3-(2-(((1S,3S)-3-((4-(((三級丁氧羰基)胺基)甲基)環己基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸鹽(P2: 340 mg, 0.48 mmol)之四氫呋喃(3 mL)及甲醇(3 mL)之混合溶液中加入氫氧化鋰一水合物(101 mg, 2.40 mmol)之水(3 mL)溶液，該反應液在40℃攪拌反應隔夜。LCMS偵測反應完全後，反應液用1.0 M之鹽酸水溶液酸化至pH = 3-4，且用二氯甲烷(10 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥、過濾、濃縮白色固體3-(2-(((1S,3S)-3-((4-(((三級丁氧羰基)胺基)甲基)環己基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸(300 mg, 收率: 90%)，粗物質不經純化直接用於下一步反應。LCMS: MS m/z (ESI): [M+H] +=692.6, t R= 1.14 min。
步驟三：在25℃下向3-(2-(((1S,3S)-3-((4-(((三級丁氧羰基)胺基)甲基)環己基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸(300 mg, 0.43 mmol)之甲醇(3 mL)溶液中加入鹽酸/二氧六環(3 mL, 4 N)溶液，該反應液在25℃攪拌反應16小時。LCMS偵測反應完全後，反應液濃縮，經反相製備(層析管柱：Ultimate XB-C18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02)；流動相：乙腈-水(0.1%三氟醋酸)；流速：70 mL/min；管柱溫：25℃)得到白色固體3-(2-(((1S,3S)-3-((4-(氨甲基)環己基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸(140 mg, 收率: 55%)。LCMS: MS m/z (ESI): [M+H] +=592.8, t R= 0.94 min。
步驟四：向3-(2-(((1S,3S)-3-((4-(氨甲基)環己基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸(30 mg, 0.05 mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(5 mL)溶液中依次加入2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(19 mg, 0.05 mmol)及N,N-二異丙基乙胺(32 mg, 0.25 mmol)，該反應液在70℃攪拌14小時。LCMS偵測反應完全後，反應液濃縮，得到的粗物質經反相製備(層析管柱：Ultimate XBC18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-06)；流動相：乙腈-水(0.1%三氟醋酸)；流速：70 mL/min；管柱溫：25℃)得到(4 1S,4 3S)-1 7-(二甲基磷醯基)-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,8-三氮雜-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-6(1,4)-環己基-4(1,3)-環戊烷環壬烷-9-酮((4 1S,4 3S)-1 7-(dimethylphosphoryl)-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,8-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-6(1,4)-cyclohexana-4(1,3)-cyclopentanacyclononaphan-9-one) (Z12)之三氟乙酸鹽(2.0 mg, 收率: 9%)。LCMS: MS m/z (ESI): [M+H] +=575.3, t R= 1.55 min。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD): δ 11.44 (s, 1H), 8.63 (s, 1H), 7.94 (d, J= 6.8 Hz, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.21 (dd, J= 8.0, 3.2 Hz, 1H), 3.94 - 3.68 (m, 2H), 3.17 - 2.94 (m, 3H), 2.68-2.63 (m, 1H), 2.48-2.41 (m, 1H), 2.28 (d, J= 12.8 Hz, 1H), 2.16-2.11 (m, 1H), 2.02-1.97 (m, 8H), 1.94-1.85 (m, 1H), 1.78 - 1.53 (m, 6H), 1.37-1.29 (m, 1H), 1.00-0.85 (m, 1H)。
實施例 13 化合物 Z13 之合成 步驟一：氮氣保護下，於25℃向三級丁基((1S,3S)-3-羥基環丁基)(甲基)胺基甲酯(200 mg, 1.0 mmol)之二氯甲烷(4 mL)溶液中加入戴斯-馬丁試劑(843 mg, 2.0 mmol)，該反應液在氮氣保護下25℃攪拌反應3小時。LCMS偵測反應完全後，反應液用水(10 mL)及乙酸乙酯(20 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水(10 mL×2)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮至乾。得到的粗物質經矽膠管柱(石油醚/乙酸乙酯=10/1 ~ 5/1)層析純化得到白色固體物{[(3-側氧基環丁基)甲基]胺基}甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(170 mg, 收率: 86%)。LCMS: m/z (ESI): [M+H-56] +=144.2, t R= 1.58 min。
步驟二：氮氣保護下，於25℃向7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-胺基環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(423 mg,0.85 mmol)及{[(3-側氧基環丁基)甲基]胺基}甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(170 mg, 0.85 mmol)之甲醇(3 mL)溶液中加入醋酸(20 mg, 0.33 mmol)，氮氣保護下25℃攪拌反應16小時。再向反應液中加入氰基硼氫化鈉(268 mg, 4.26 mmol)，該反應在氮氣保護下25℃繼續反應6小時。LCMS偵測反應完畢。反應液用水(10 mL)及乙酸乙酯(30 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水(10 mL×2)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮至乾。得到的粗物質經矽膠管柱(二氯甲烷/甲醇=60/1 ~ 30/1)層析純化得到白色固體{[(3-{[(1S,3S)-3-[(4-{7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-6-(甲氧基羰基)-1H-吲哚-3-基}-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)胺基]環戊基]胺基}環丁基)甲基]胺基}甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(380 mg, 收率: 67%)。LCMS: m/z (ESI):[M+H] +=679.4, t R= 1.19 min。
步驟三：氮氣保護下，於25℃向{[(3-{[(1S,3S)-3-[(4-{7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-6-(甲氧基羰基)-1H-吲哚-3-基}-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)胺基]環戊基]胺基}環丁基)甲基]胺基}甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯之甲醇(4 mL)、四氫呋喃(4 mL)、水(4 mL)混合溶液中加入一水合氫氧化鋰(117 mg, 2.8mmol)，該反應液在氮氣保護下升溫至40℃攪拌反應16小時，LCMS偵測反應完畢。向反應液中緩慢加入2 M之鹽酸溶液調節pH至4-5，且用乙酸乙酯(50 mL×5)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水(10 mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮至乾得到的粗物質無色油狀物7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-{[3-(2,2-二甲基-4-側氧基-5-氮雜-3-氧雜己-6-基)環丁基]胺基}環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(400mg,純度:70%, 收率: 75%)，不經純化直接用於下一步反應。LCMS: m/z (ESI): [M+H] +=664.6, t R= 1.11 min。
步驟四：向7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-{[3-(2,2-二甲基-4-側氧基-5-氮雜-3-氧雜己-6-基)環丁基]胺基}環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(300 mg, 0.45 mmol)之甲醇(5 mL)溶液中加入4 M之甲醇氯化氫溶液(10 mL)，該反應液在氮氣保護下升溫至40℃攪拌反應2小時。LCMS偵測反應完全後，向反應液中緩慢加入飽和之碳酸氫鈉溶液(30 mL)中，且用乙酸乙酯(50 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮至乾。得到的粗物質經製備(層析管柱：Ultimate XB-C18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02)；流動相：乙腈-水(0.1%三氟醋酸)；流速：70 mL/min；管柱溫：25℃)純化得到白色固體7-[二甲基(側氧基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1 S,3 S)-3-{[3-(胺基甲基)環丁基]胺基}環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1 H-吲哚-6-甲酸(185 mg, 收率: 73%)。LCMS: MS m/z (ESI): [M+H] +=565.2, t R= 1.25 min。
步驟五：向7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-{[3-(胺基甲基)環丁基]胺基}環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(50 mg, 0.089 mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(5 mL)溶液中依次加入2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(34 mg, 0.089 mmol)及N,N-二異丙基乙胺(0.059 mL, 0.35 mmol)，該反應液在60℃攪拌2 h。LCMS偵測反應完全後，反應液濃縮，得到的粗物質經反相製備(層析管柱：Ultimate XB-C18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02)；流動相：乙腈-水(0.1%三氟醋酸)；流速：70 mL/min；管柱溫：25℃)純化得到(4 1S,4 3S)-1 7-(二甲基磷醯基)-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,8-三氮雜-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-環戊烷-6(1,3)-環丁烷環壬烷-9-酮((4 1S,4 3S)-1 7-(dimethylphosphoryl)-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,8-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentana-6(1,3)-cyclobutanacyclononaphan-9-one) (Z13)之三氟乙酸鹽(2.43 mg, 收率: 5%)。LCMS: MS m/z (ESI): [M+H] +=547.3, t R= 0.83 min。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD): δ 8.61 (s, 1H), 8.00 - 7.90 (m, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.16 (dd, J = 8.0, 2.8 Hz, 1H), 4.00 - 3.90 (m, 1H), 3.70 - 3.65 (m, 1H), 3.61 - 3.52 (m, 1H), 3.25 - 3.15 (m, 1H), 2.90 - 2.80 (m, 1H), 2.65 - 2.56 (m, 2H), 2.40 - 2.30 (m, 3H), 2.15 - 2.05 (m, 1H), 1.99 (s, 3H), 1.96 (s, 3H), 1.84 - 1.75 (m, 1H), 1.73 - 1.61 (m, 2H), 1.56 - 1.40 (m, 2H)。
實施例 14 化合物 Z14 之合成 步驟一：向{[(3S)-四氫-1H-吡咯-3-基]胺基}甲烷酸苄基酯(225 mg, 1.02 mmol)之N,N-二甲基甲烷醯胺(6 mL)溶液中依次加入[(5-溴戊基)胺基]甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(299 mg, 1.12 mmol)及N,N-二異丙基乙二胺(528 mg, 4.08 mmol)，該反應液在80℃氮氣氛圍下攪拌16小時。LCMS偵測反應完全後，反應液用水(15 mL)及乙酸乙酯(25 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水(15 mL×2)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮至乾。得到的粗物質經矽膠管柱(二氯甲烷/甲醇=30/1 ~ 10/1)層析純化得到黃色固體物{[(3S)-1-(2,2-二甲基-4-側氧基-5-氮雜-3-氧雜癸-10-基)四氫-1H-吡咯-3-基]胺基}甲烷酸苄基酯(373 mg, 收率: 90%)。LCMS: m/z (ESI): [M+H] +=406.2, t R= 0.80 min。
步驟二：向{[(3S)-1-(2,2-二甲基-4-側氧基-5-氮雜-3-氧雜癸-10-基)四氫-1H-吡咯-3-基]胺基}甲烷酸苄基酯(500 mg, 1.23 mmol)之甲醇(8 mL)溶液中加入鈀碳(50 mg, 10%含量, 60%含水)，反應液在25℃，氫氣氛圍下攪拌反應2小時。LCMS偵測反應完畢。反應液過濾，旋乾得到粗物質({5-[(3S)-3-胺基四氫-1H-吡咯-1-基]戊基}胺基)甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(370 mg,純度約85%, 收率: 94%)，粗物質無需進行純化直接用於下一步反應。LCMS: m/z (ESI): [M+H] +=272.2, t R= 0.46 min。
步驟三：向({5-[(3S)-3-胺基四氫-1H-吡咯-1-基]戊基}胺基)甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(334 mg, 1.23 mmol)之N,N-二甲基甲烷醯胺(8 mL)中依次加入3-[2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基]-7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(507 mg, 1.23 mmol)及N,N-二異丙基乙二胺(477 mg, 3.69 mmol)，該反應液在氮氣保護下升溫至80℃攪拌反應16小時，LCMS偵測反應完畢。反應液用水(20 mL)及二氯甲烷(30 mL×5)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水(20 mL×2)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮至乾。得到的粗物質經矽膠管柱(二氯甲烷/甲醇=30/1 ~ 10/1)層析純化得到黃色固體物7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(3S)-1-(2,2-二甲基-4-側氧基-5-氮雜-3-氧雜癸-10-基)四氫-1H-吡咯-3-基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(550 mg, 收率: 67%)。LCMS: m/z (ESI): [M+H] +=667.4, t R= 0.92 min。
步驟四：向7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(3S)-1-(2,2-二甲基-4-側氧基-5-氮雜-3-氧雜癸-10-基)四氫-1H-吡咯-3-基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(550 mg, 0.83 mmol)之甲醇(3 mL)、水(3 mL)、四氫呋喃(3 mL)混合溶液中加入一水合氫氧化鋰(173 mg, 4.13 mmol)，該反應液在氮氣保護下升溫至40℃攪拌反應2小時。LCMS偵測反應完全後，減壓濃縮除去溶劑得到的粗產品黃色固體7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(3S)-1-(2,2-二甲基-4-側氧基-5-氮雜-3-氧雜癸-10-基)四氫-1H-吡咯-3-基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(480 mg，純度約85%, 收率: 95%)。LCMS: MS m/z (ESI): [M+H] +=653.2, t R= 0.83 min。
步驟五：向7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(3S)-1-(2,2-二甲基-4-側氧基-5-氮雜-3-氧雜癸-10-基)四氫-1H-吡咯-3-基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(480 mg, 0.70 mmol)中加入4 M之1,4-二氧六環氯化氫溶液(8 mL)，該反應液在氮氣保護下升溫至40℃攪拌反應2小時。LCMS偵測反應完全後，向反應液中緩慢加入飽和碳酸氫鈉溶液(30 mL)中，且用乙酸乙酯(40 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮至乾。得到的粗物質經反向製備(層析管柱：Ultimate XB-C18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02)；流動相：乙腈-水(0.1%三氟醋酸)；流速：70 mL/min；管柱溫：25℃)純化得到黃色固體7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(3S)-1-(5-胺基戊基)四氫-1H-吡咯-3-基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(300 mg, 收率: 77%)。LCMS: MS m/z (ESI): 553.2 [M+H] +, t R= 0.61 min。
步驟六：向7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(3S)-1-(5-胺基戊基)四氫-1H-吡咯-3-基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(100 mg, 0.18 mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(5 mL)溶液中依次加入2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(69 mg, 0.18 mmol)及N,N-二異丙基乙胺(94 mg, 0.12 mmol)，該反應液在60℃攪拌16小時。LCMS偵測反應完全後，反應液濃縮，得到的粗物質經反相製備(層析管柱：Ultimate XB-C18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02)；流動相：乙腈-水(0.1%三氟醋酸)；流速：70 mL/min；管柱溫：25℃)純化得到(4 3S)-1 7-(二甲基磷醯基)-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,10-二氮雜-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(3,1)-吡咯啶環十一烷-11-酮((4 3S)-1 7-(dimethylphosphoryl)-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,10-diaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(3,1)-pyrrolidinacycloundecaphan-11-one) (Z14)之三氟乙酸鹽(13.8 mg, 收率: 14%)。LCMS: MS m/z (ESI): [M+H] +=535.2, t R= 0.63 min。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD): δ 8.63 (s, 1H), 8.43 (s, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.32 (dd, J = 8.0, 3.6 Hz, 1H), 4.50 - 4.37 (m, 1H), 3.97 - 3.85 (m, 1H), 3.63 - 3.50 (m, 1H), 3.26 - 3.20 (m, 1H), 3.17 - 3.08 (m, 2H), 3.02 - 2.84 (m, 2H), 2.59 - 2.46 (m, 1H), 2.23 - 2.12 (m, 1H), 2.01 (d, J = 3.6 Hz, 3H), 1.98 (d, J = 3.6 Hz, 3H), 1.82 - 1.65 (m, 2H), 1.52 - 1.37 (m, 4H)。
實施例 15 化合物 Z15 之合成 步驟一：在25℃下，向{[(3S)-六氫吡啶-3-基]胺基}甲烷酸苄基酯(242 mg, 1.03 mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(8 mL)溶液中加入[(5-溴戊基)胺基]甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(250 mg, 0.939 mmol)，N,N-二異丙基乙胺(363 mg, 2.82 mmol)。該反應液在氮氣保護下於80℃攪拌反應6小時。LCMS偵測反應完全後，反應液加水(50 mL)，接著用乙酸乙酯(50 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水(50 mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮，得到的粗物質經管柱層析(石油醚/乙酸乙酯=10/1 ~ 3/1)純化得到無色油狀物({5-[(3S)-3-{[(苄基氧基)羰基]胺基}六氫吡啶-1-基]戊基}胺基)甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(280 mg, 收率: 64%)。LCMS: m/z (ESI): [M+H] +=420.4, t R= 0.80 min。
步驟二：將({5-[(3S)-3-{[(苄基氧基)羰基]胺基}六氫吡啶-1-基]戊基}胺基)甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(250 mg, 0.596 mmol)溶於甲醇(10 mL)溶液中加入鈀碳(100 mg, 10%含量, 60%含水)。該反應液在氫氣保護下於25℃攪拌反應3小時。LCMS偵測反應完全後，反應液過濾濃縮得到的無色油狀物({5-[(3S)-3-胺基六氫吡啶-1-基]戊基}胺基)甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(180 mg, 粗物質)。LCMS: m/z (ESI): [M+H] +=286.0, t R= 0.80 min。
步驟三：在室溫下向({5-[(3 S)-3-胺基六氫吡啶-1-基]戊基}胺基)甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(180 mg, 0.63 mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(6 mL)溶液中依次加入3-[2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基]-7-[二甲基(側氧基)-λ 5-甲磷基]-1 H-吲哚-6-甲酸甲酯(272 mg, 0.63 mmol)、N,N-二異丙基乙胺(244 mg, 1.89 mmol)，該反應液在氮氣保護下於80℃攪拌反應16小時。LCMS偵測反應完全後，向反應液加入水溶液(50 mL)，且用二氯甲烷(50 mL×3)萃取，合併之有機層用無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮至乾。得到的粗物質經矽膠管柱(二氯甲烷/甲醇=50/1 ~ 10/1)層析純化得到無色油狀物7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(3S)-1-(2,2-二甲基-4-側氧基-5-氮雜-3-氧雜癸-10-基)六氫吡啶-3-基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(300 mg, 收率: 70%)。LCMS: MS m/z (ESI): [M+H] +=681.1, t R= 1.11 min。
步驟四：在室溫下向7-[二甲基(側氧基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(3 S)-1-(2,2-二甲基-4-側氧基-5-氮雜-3-氧雜癸-10-基)六氫吡啶-3-基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1 H-吲哚-6-甲酸甲酯(300 mg, 0.441 mmol)之甲醇(4 mL)、水(4 mL)、四氫呋喃(4 mL)中加入氫氧化鋰水合物(185 mg, 4.41 mmol)，該反應液在氮氣保護下於40℃攪拌反應16小時。LCMS偵測反應完全後，濃縮至乾得到白色固體物7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(3S)-1-(2,2-二甲基-4-側氧基-5-氮雜-3-氧雜癸-10-基)六氫吡啶-3-基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(260 mg, 粗物質)。LCMS: MS m/z (ESI): [M+H] +=667.2, t R= 0.79 min。
步驟五：在室溫下向7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(3S)-1-(2,2-二甲基-4-側氧基-5-氮雜-3-氧雜癸-10-基)六氫吡啶-3-基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(260 mg, 0.390 mmol)之二氧六環(4 mL)中加入鹽酸二氧六環(1.95 mL, 4 mol/L)。該反應液在氮氣保護下於40℃攪拌反應3小時。LCMS偵測反應完全後，濃縮除去鹽酸，得到的粗物質經反相製備純化(層析管柱：Ultimate XB-C18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02)；流動相：乙腈-水(0.1%三氟醋酸)；流速：70 mL/min；管柱溫：25℃)得到白色固體物7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(3S)-1-(5-胺基戊基)六氫吡啶-3-基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(200 mg, 收率: 95%)。LCMS: MS m/z (ESI): 567.2 [M+H] +, t R= 0.82 min。
步驟六：在室溫下向7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(3S)-1-(5-胺基戊基)六氫吡啶-3-基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(70 mg, 0.12 mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(5 mL)中依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(56.3 mg, 0.14 mmol)、N,N-二異丙基乙胺(77.4 mg, 0.6 mmol)，該反應液氮氣保護於65℃反應3小時。LCMS偵測反應完全後，濃縮得到的粗物質經反相(層析管柱：Ultimate XB-C18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02)；流動相：乙腈-水(10mmol NH 4HCO 3)；流速:70 mL/min；管柱溫：25℃)純化得到(4 3S)-1 7-(二甲基磷醯基)-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,10-二氮雜-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(3,1)-哌啶環十一烷-11-酮((4 3S)-1 7-(dimethylphosphoryl)-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,10-diaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(3,1)-piperidinacycloundecaphan-11-one) (Z15)(1.2 mg, 收率: 1.9%)。LCMS: MS m/z (ESI): 549.3 [M+H] +, t R= 0.81 min。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ): δ 8.61 (s, 1H), 7.91 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.22 - 7.19 (m, 1H), 2.96 - 2.78 (m, 4H), 2.46 - 2.40 (m, 2H), 2.08 - 2.03 (m, 1H), 1.96 (d, J = 14.4 Hz, 3H), 1.83 (d, J = 13.6 Hz, 3H), 1.71 (s, 1H), 1.73 - 1.56 (m, 5H), 1.38 - 1.14 (m, 6H)。
實施例 16 化合物 Z16 之合成 步驟一：將7-[二甲基(側氧基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1 S,3 S)-3-胺基環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1 H-吲哚-6-甲酸甲酯(300 mg, 0.61 mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(3 mL)中，[(4-溴丁基)胺基]甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(153 mg, 0.61 mmol)及N,N-二異丙基乙胺(0.30 mL,1.83 mmol)依次加入，在80℃攪拌反應16小時。LCMS偵測反應完全後，直接加入適量矽膠，旋乾混合之樣品，經管柱層析(二氯甲烷/甲醇=100/7)純化得到類白色固體7-[二甲基(側氧基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1 S,3 S)-3-[(2,2-二甲基-4-側氧基-5-氮雜-3-氧雜壬-9-基)胺基]環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1 H-吲哚-6-甲酸甲酯(200 mg, 收率: 50%)。LCMS: m/z (ESI): [M+H] +=667.2, t R= 0.91 min。
步驟二：將7-[二甲基(側氧基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1 S,3 S)-3-[(2,2-二甲基-4-側氧基-5-氮雜-3-氧雜壬-9-基)胺基]環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1 H-吲哚-6-甲酸甲酯(150 mg, 0.225 mmol)溶於甲醇(3 mL)，接著加入多聚甲醛(45.0 mg, 1.13 mmol)、鈀炭(10 mg, 10%含量, 60%水)及冰醋酸(0.1 mL)，在70℃攪拌反應5小時。LCMS偵測反應完全後，濾掉鈀炭，濾液直接加入矽膠混合之樣品，經管柱層析(二氯甲烷/甲醇=100/7)純化得到白色固體7-[二甲基(側氧基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1 S,3 S)-3-(2,2-二甲基-4-側氧基-5,10-二氮雜-3-氧雜十一烷-10-基)環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1 H-吲哚-6-甲酸甲酯(130 mg, 收率: 85%)。LCMS: m/z (ESI): [M+H] +=681.2, t R= 0.93 min。
步驟三：將7-[二甲基(側氧基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1 S,3 S)-3-(2,2-二甲基-4-側氧基-5,10-二氮雜-3-氧雜十一烷-10-基)環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1 H-吲哚-6-甲酸甲酯(130 mg, 0.191 mmol)溶於水(1 mL)、甲醇(1 mL)及四氫呋喃(1 mL)之混合體系中，接著加入一水合氫氧化鋰(40.1 mg, 0.955 mmol)，在40℃攪拌反應16小時。LCMS偵測反應完全後，此反應液不經任何處理，直接應用於下一步反應。LCMS: m/z (ESI): 667.4 [M+H] +=667.4, t R= 0.76 min。
步驟四：向上一步之反應液中加入鹽酸1,4-二氧六環溶液(5 mL, 4 M)，體系在10℃攪拌4小時。LCMS偵測反應完全後，直接將溶劑旋乾，得到的粗物質經反相製備(層析管柱: Ultimate XB-C18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02)；流動相：乙腈-水(0.1%碳酸氫銨)；流速：70 mL/min；管柱溫：25℃)得到白色固體7-[二甲基(側氧基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1 S,3 S)-3-[(4-胺基丁基)(甲基)胺基]環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1 H-吲哚-6-甲酸(20 mg, 收率: 13%)。LCMS: m/z (ESI): [M+H] +=567.2, t R= 0.59 min。
步驟五：向7-[二甲基(側氧基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1 S,3 S)-3-[(4-胺基丁基)(甲基)胺基]環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1 H-吲哚-6-甲酸(20 mg, 0.04 mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(3 mL)溶液中依次加入2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(14.8 mg, 0.04 mmol)及N,N-二異丙基乙胺(0.03 mL, 0.18 mmol)，該反應液在60℃攪拌16小時。LCMS偵測反應完全後，反應液濃縮，得到的粗物質經反相製備(層析管柱：Ultimate XB-C18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02)；流動相：乙腈-水(0.1%三氟醋酸)；流速：70 mL/min；管柱溫：25℃)得到(4 1S,4 3S)-1 7-(二甲基磷醯基)-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮雜-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-環戊烷環十一烷-11-酮((4 1S,4 3S)-1 7-(dimethylphosphoryl)-5-methyl-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,10-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacycloundecaphan-11-one) (Z16)之三氟乙酸鹽(5.88 mg, 收率: 30%)。LCMS: m/z (ESI): [M+H] +=549.2, t R= 0.67 min。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD): δ 8.57 (s, 1H), 8.53 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.31 (dd, J= 8.4, 3.2 Hz, 1H), 4.25-4.31 (m, 1H), 3.91-4.04 (m, 1H), 3.24 - 3.11 (m, 1H), 2.86-2.91 (m, 2H), 2.78 (s, 1H), 2.72 (s, 2H), 2.52-2.57 (m, 1H), 2.38 - 2.22 (m, 2H), 2.14 - 1.70 (m, 12H), 1.57-1.66 (m, 1H), 1.29-1.37 (m, 1H)。
實施例 17 化合物 Z19 之合成 步驟一：在一個250 mL三口瓶中，依次加入 N-[(苄基氧基)羰基]甘胺酸(20 g, 95.6 mmol)、四氫呋喃(130 mL)、氯化鎂(4.55 g, 47.8 mmol)、羰基二咪唑(15.5 g, 95.6 mmol)、[(3-甲氧基-1,3-二側氧基丙基)氧基]鉀(12.2 g, 71.7 mmol)，反應液用氮氣置換，70℃回流4小時，TLC偵測反應完全。反應液濃縮，加水(100 mL)稀釋，再用乙酸乙酯(50 mL×3)萃取，加入無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到粗物質，經矽膠管柱層析(二氯甲烷/甲醇=10/3)純化得到[(1-甲氧基-1,3-二側氧基丁-4-基)胺基]甲烷酸苄基酯(3.7 g, 收率15%)，呈類白色固體。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD): δ 7.42-7.26 (m, 5H), 5.12 (s, 2H), 4.21 (d, J= 5.2 Hz, 2H), 3.74 (s, 3H), 3.50 (s, 2H)。
步驟二：將[(1-甲氧基-1,3-二側氧基丁-4-基)胺基]甲烷酸苄基酯(1.50 g, 5.66 mmol)溶於二氯甲烷(30 mL)，接著於0℃滴加二乙胺基三氟化硫(1.00 g, 6.22 mmol)，在15℃攪拌16小時，接著於15℃補加二乙胺基三氟化硫(1.00 g, 6.22 mmol)，接著在15℃攪拌4小時。LCMS偵測反應完全後，加水(20 mL)淬滅反應，再用乙酸乙酯(20 mL×3)萃取，加入無水硫酸鈉乾燥，濃縮之粗物質經反相製備(層析管柱：Ultimate XB-C18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02), 流動相：乙腈-水(0.1%三氟醋酸)，流速：70 mL/min, 管柱溫：25℃)得到黃色油狀(3,3-二氟-1-甲氧基-1-側氧基丁-4-基)胺基]甲烷酸苄基酯(0.15 g, 收率9%)。LCMS: m/z (ESI): [M+H] += 288.0, t R= 0.97 min。
步驟三：將(3,3-二氟-1-甲氧基-1-側氧基丁-4-基)胺基]甲烷酸苄基酯(130 mg, 0.45 mmol)溶於四氫呋喃(3 mL)，接著於0℃滴加四氫鋁鋰之四氫呋喃溶液(1 mL, 1 M)，反應在10℃攪拌2小時。LCMS偵測反應完全後，加水(20 mL)淬滅反應，再用乙酸乙酯(20 mL×3)萃取，加入無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到粗物質黃色油狀物[(2,2-二氟-4-羥基丁基)胺基]甲烷酸苄基酯(100 mg, 收率85%)，不經純化直接用於下一步。LCMS: m/z (ESI): [M+H] += 260.0, t R= 0.88 min。
步驟四：將[(2,2-二氟-4-羥基丁基)胺基]甲烷酸苄基酯(120 mg, 0.46 mmol)溶於二氯甲烷(1 mL)中，再加入吡啶(1 mL)及對甲基磺醯氯(265 mg, 1.39 mmol)，體系在10℃攪拌3小時。LCMS偵測反應完全後，直接加入矽膠，油泵旋乾混合之樣品，經矽膠管柱層析(二氯甲烷100%)純化得到黃色油狀物4-甲基苯磺酸-6,6-二氟-3-側氧基-1-苯基-4-氮雜-2-氧雜辛-8-基酯(130 mg, 收率68%)。LCMS: m/z (ESI): [M+H] +=414.0, t R= 1.20 min。
步驟五：在一個10 mL單口瓶中，將7-[二甲基(側氧基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1 S,3 S)-3-胺基環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1 H-吲哚-6-甲酸甲酯(173 mg, 0.35 mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(3 mL)中，接著加入4-甲基苯磺酸-6,6-二氟-3-側氧基-1-苯基-4-氮雜-2-氧雜辛-8-基酯(120 mg, 0.29 mmol)及N,N-二異丙基乙胺(0.24 mL, 1.45 mmol)。體系在100℃攪拌20小時。LCMS偵測反應完全後，加矽膠油泵旋乾混合之樣品，經矽膠管柱層析(二氯甲烷:甲醇=10:1)純化得到黃色油狀物7-[二甲基(側氧基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1 S,3 S)-3-[(6,6-二氟-3-側氧基-1-苯基-4-氮雜-2-氧雜辛-8-基)胺基]環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1 H-吲哚-6-甲酸甲酯(81 mg, 收率38%)。LCMS: m/z (ESI): [M+H] +=737.2, t R= 0.96 min。
步驟六：將7-[二甲基(側氧基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1 S,3 S)-3-[(6,6-二氟-3-側氧基-1-苯基-4-氮雜-2-氧雜辛-8-基)胺基]環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1 H-吲哚-6-甲酸甲酯(90 mg, 0.12 mmol)溶於水(1 mL)、甲醇(1 mL)及四氫呋喃(1 mL)之混合體系中，接著加入一水合氫氧化鋰(5.13 mg, 0.12 mmol)，反應在40℃攪拌16小時。LCMS偵測反應完全後，過濾，濾液反相製備(層析管柱：Ultimate XB-C18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02), 流動相：乙腈-水(0.1%碳酸氫銨)，流速：70 mL/min, 管柱溫：25℃)得到白色固體7-[二甲基(側氧基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1 S,3 S)-3-[(6,6-二氟-3-側氧基-1-苯基-4-氮雜-2-氧雜辛-8-基)胺基]環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1 H-吲哚-6-甲酸(30 mg, 收率34%)。LCMS: m/z (ESI): [M+H] +=723.2, t R= 0.87 min。
步驟七：在一個10 mL單口瓶中，加入7-[二甲基(側氧基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1 S,3 S)-3-[(6,6-二氟-3-側氧基-1-苯基-4-氮雜-2-氧雜辛-8-基)胺基]環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1 H-吲哚-6-甲酸(18 mg, 0.03 mmol)及三氟乙酸(3 mL)。60℃攪拌1.5小時，LCMS偵測反應完全後，反應液旋乾得粗物質2,2-二氟-4-{[(1 S,3 S)-3-[(4-{5-[( Z)-[二甲基(側氧基)-λ 5-甲磷基]甲亞基]-4-[(1 Z)-乙亞基]-1 H-吡咯-3-基}-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)胺基]環戊基]胺基}丁-1-胺甲酸(14 mg, 96%)，灰色固體，無需純化直接用於下一步。LCMS: m/z (ESI): [M+H] +=589.2, t R= 0.62 min。
步驟八：向2,2-二氟-4-{[(1 S,3 S)-3-[(4-{5-[( Z)-[二甲基(側氧基)-λ 5-甲磷基]甲亞基]-4-[(1 Z)-乙亞基]-1 H-吡咯-3-基}-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)胺基]環戊基]胺基}丁-1-胺甲酸(14 mg, 0.02 mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(2 mL)溶液中依次加入2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(9.95 mg, 0.03 mmol)及N,N-二異丙基乙胺(0.02 mL, 0.12 mmol)。60℃攪拌16小時，LCMS偵測反應完全，反應液濃縮，粗物質經反相製備(層析管柱：Ultimate XB-C18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02), 流動相：乙腈-水(0.1%三氟醋酸)，流速：70 mL/min, 管柱溫：25℃)得(4 1S,4 3S)-1 7-(二甲基磷醯基)-8,8-二氟-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮雜-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-環戊烷環十一烷-11-酮(4 1S,4 3S)-1 7-(dimethylphosphoryl)-8,8-difluoro-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,10-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacycloundecaphan-11-one (Z19) (1.22 mg, 收率9%,三氟乙酸鹽)。LCMS: m/z (ESI): [M+H] += 571.2, t R= 0.67 min。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD): δ 8.57-8.58 (m, 2H), 8.01 (s, 1H), 7.32 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 4.16-4.18 (m, 1H), 3.86-3.87 (m, 1H), 3.47-3.49 (m, 1H), 2.89-2.93 (m, 2H), 2.70-2.73 (m, 1H), 2.48-2.27 (m, 4H), 1.98-2.02 (m, 6H), 1.81-1.86 (m, 2H), 1.28-1.29 (m, 2H)。
實施例 18 化合物 Z27 之合成 步驟一：在25℃下，向[(1-羥基丁-4-基)(甲基)胺基]甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(400 mg, 1.97 mmol)之四氫呋喃(8 mL)溶液中加入四溴化碳(981 mg, 3.74 mmol)、三苯基膦(1.24 g, 3.74 mmol)。該反應液在氮氣保護下於25℃攪拌反應16小時。LCMS偵測反應完全後，反應液加水(50 mL)，接著用乙酸乙酯(50 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水(50 mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮，得到的粗物質經矽膠管柱層析(石油醚/乙酸乙酯=10/1至3/1)純化得到無色油狀物[(1-溴丁-4-基)(甲基)胺基]甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(400 mg, 收率46%)。LCMS: m/z (ESI): [M+H-56] += 210.0, t R= 2.03 min。
步驟二：將[(1-溴丁-4-基)(甲基)胺基]甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(240 mg, 0.90 mmol)、3-(2-{[(1S,3S)-3-胺基環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-[甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(447 mg, 0.90 mmol)溶於乙腈(10 mL)，加入N,N-二異丙基乙胺(349 mg, 2.71 mmol)。氮氣保護下於80℃攪拌反應16小時。LCMS偵測反應完全後，反應液濃縮，得到的無色油狀物7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-[(2,2,5-三甲基-4-側氧基-5-氮雜-3-氧雜壬-9-基)胺基]環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(220 mg, 收率36%)。LCMS: m/z (ESI): [M+H] +=681.4, t R= 0.96 min。
步驟三：在室溫條件下向7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-[(2,2,5-三甲基-4-側氧基-5-氮雜-3-氧雜壬-9-基)胺基]環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(220 mg，0.32 mmol)之甲醇(8 mL)溶液中依次加入多聚甲醛(145 mg, 1.62 mmol)、醋酸(244 mg, 1.89 mmol)、鈀碳(20 mg, 10%含量, 60%含水)。氫氣下80℃攪拌反應16小時。LCMS偵測反應完全後，向反應液加入水溶液(50 mL)，且用二氯甲烷(50 mL×3)萃取。合併之有機層用無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮至乾燥。得到的粗物質經矽膠管柱層析(二氯甲烷/甲醇=50/1到10/1)純化得到無色油狀物7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-(2,2,5-三甲基-4-側氧基-5,10-二氮雜-3-氧雜十一烷-10-基)環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(200 mg, 收率71%)。LCMS: MS m/z (ESI): [M+H] += 695.7, t R= 1.19 min。
步驟四：在室溫條件下向7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-(2,2,5-三甲基-4-側氧基-5,10-二氮雜-3-氧雜十一烷-10-基)環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(200 mg, 0.29 mmol)之甲醇(3 mL)、水(3 mL)、四氫呋喃(3 mL)中加入氫氧化鋰水合物(121 mg, 2.88 mmol)。氮氣保護下於40℃攪拌反應16小時。LCMS偵測反應完全後，濃縮至乾燥得到粗物質白色固體物7-[二甲基(側氧基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-(2,2,5-三甲基-4-側氧基-5,10-二氮雜-3-氧雜十一烷-10-基)環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(180 mg, 收率83%)。LCMS: MS m/z (ESI): [M+H] += 681.4, t R= 0.93 min。
步驟五：在室溫條件下向7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-(2,2,5-三甲基-4-側氧基-5,10-二氮雜-3-氧雜十一烷-10-基)環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(180 mg, 0.26 mmol)之二氧六環(4 mL)中加入鹽酸二氧六環(1.32 mL, 5.29 mmol, 4 mol/L)。氮氣保護下25℃攪拌反應16小時。LCMS偵測反應完全後，濃縮，粗物質經反相製備(層析管柱：Ultimate XB-C18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02), 流動相：乙腈-水(0.1%三氟醋酸)，流速：70 mL/min, 管柱溫：25℃)純化得到白色固體物7-[二甲基(側氧基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-(2,7-二氮雜辛-2-基)環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(80 mg, 收率50%)。LCMS: MS m/z (ESI): [M+H] += 581.2, t R= 1.00 min。
步驟六：在室溫條件下向7-[二甲基(側氧基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-(2,7-二氮雜辛-2-基)環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(70 mg, 0.12 mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(5 mL)中依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(55 mg, 0.15 mmol)、N,N-二異丙基乙胺(78 mg, 0.61 mmol)。氮氣保護於60℃反應18小時。LCMS偵測反應完全後，濃縮，粗物質經反相(層析管柱：Ultimate XB-C18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02), 流動相：乙腈-水(0.1%三氟醋酸)，流速：70 mL/min, 管柱溫：25℃)製備純化得到(4 1S,4 3S)-1 7-(二甲基磷醯基)-5,10-二甲基-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮雜-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-環戊烷環十一烷-11-酮2,2,2-三氟乙酸(4 1S,4 3S)-1 7-(dimethylphosphoryl)-5,10-dimethyl-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,10-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacycloundecaphan-11-one (Z27)  (26 mg, 收率36%)。LCMS: MS m/z (ESI): [M+H] += 563.2, t R= 1.30 min。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6): δ 11.98 (s, 1H), 9.50 - 9.00 (m, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.25 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.23 (dd, J = 11.2, 1.2 Hz, 1H), 4.22 - 3.84 (m, 2H), 3.53 (s, 3H), 3.22 - 3.05 (m, 2H), 3.00 (s, 3H), 2.92 - 2.84 (m, 1H), 2.68 - 2.66 (m, 1H), 2.59 (d, J = 4.0 Hz, 2H), 2.45 - 2.37 (m, 1H), 2.17 - 2.08 (m, 2H), 1.91 - 1.49 (m, 11H)。
實施例 19 化合物 Z58 之合成 步驟一：在0℃，氮氣氛圍下，向2-側氧基四氫吡咯-1-甲酸-2-甲基丙-2-基酯(2.00 g, 10.8 mmol)之四氫呋喃(30 mL)溶液中緩慢滴加甲基溴化鎂(15.1 mL, 15.1 mmol)。反應在0℃下攪拌4小時。點板偵測反應完全後，加水(30 mL)淬滅反應，隨後用乙酸乙酯(100 mL×3)進行萃取，合併之有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮至乾燥。得到的粗物質經矽膠管柱層析(石油醚/乙酸乙酯=10/1至3/1)純化得到無色油狀物[(4-側氧基戊基)胺基]甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(1.20 g, 收率56%)。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD): δ 3.02 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.50 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.13 (s, 3H), 1.69 (p, J = 7.2 Hz, 1H), 1.43 (s, 9H)。
步驟二：將[(4-側氧基戊基)胺基]甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(122 mg, 0.61 mmol)溶於四氫呋喃(5 mL)，接著加入鈦酸異丙酯(574 mg, 2.0 mmol)、7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-胺基環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(250 mg, 0.51 mmol)，反應在70℃攪拌16小時後，冷卻至室溫，向其中加入氰基硼氫化鈉(159 mg, 2.53 mmol)，在25℃下攪拌6小時。LCMS偵測反應完全後，反應液過濾除去固體雜質，有機相濃縮得到粗產品，隨後粗產品經製備薄層層析(二氯甲烷/甲醇=10/1)純化得到7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-[(2,2-二甲基-4-側氧基-5-氮雜-3-氧雜癸-9-基)胺基]環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(270 mg, 收率79%)，為黃色油狀物。LCMS: m/z (ESI): [M+H] += 681.4, t R= 0.99 min。
步驟三：將7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-[(2,2-二甲基-4-側氧基-5-氮雜-3-氧雜癸-9-基)胺基]環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(220 mg, 0.32 mmol)溶於水(2 mL)、甲醇(2 mL)及四氫呋喃(2 mL)之混合體系中，加入氫氧化鋰(1個結晶水, 68 mg, 1.62 mmol)，反應在40℃攪拌14小時。LCMS偵測反應完全後，此反應液不經任何處理，直接應用於下一步反應。LCMS: m/z (ESI): [M+H] += 667.4, t R= 0.91 min。
步驟四：向步驟三之反應液中加入氯化氫/1,4-二氧六環溶液(5 mL, 4 M)，體系在40℃攪拌4小時。LCMS偵測反應完全後，直接將溶劑旋乾，得到粗物質，粗物質經反相製備(層析管柱：Ultimate XB-C18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02), 流動相：乙腈-水(0.1%三氟醋酸)，流速：70 mL/min, 管柱溫：25℃)得到7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-[(5-胺基戊-2-基)胺基]環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(150 mg, 收率94%)，呈白色固體。LCMS: m/z (ESI): [M+H] += 567.2, t R= 0.87 min。
步驟五：7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-[(5-胺基戊-2-基)胺基]環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(70 mg, 0.12 mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(3 mL)溶液中依次加入2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(47 mg, 0.12 mmol)及N,N-二異丙基乙胺(64 mg, 0.50 mmol)，該反應液在80℃攪拌18 h。LCMS偵測反應完全後，反應液濃縮，得到的粗物質經反相製備(層析管柱：Ultimate XB-C18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02), 流動相：乙腈-水(0.1%三氟醋酸)，流速：70 mL/min, 管柱溫：25℃)得到(4 1S,4 3S)-1 7-(二甲基磷醯基)-6-甲基-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮雜-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-環戊烷環十一烷-11-酮(4 1S,4 3S)-1 7-(dimethylphosphoryl)-6-methyl-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,10-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacycloundecaphan-11-one (Z58) (10.50 mg, 收率15%,三氟乙酸鹽)。LCMS: m/z (ESI): [M+H] += 549.2, t R= 0.69 min。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD): δ 8.58 (s, 1H), 8.51 - 8.36 (m, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.45 - 7.29 (m, 1H), 4.42 - 4.11 (m, 1H), 3.95 - 3.74 (m, 1H), 3.30 - 3.17 (m, 1H), 3.13 - 2.99 (m, 1H), 2.98 - 2.74 (m, 2H), 2.66 - 2.50 (m, 1H), 2.36 - 2.27 (m, 1H), 2.27 - 2.19 (m, 1H), 2.15 - 2.05 (m, 1H), 2.03 - 1.96 (m, 6H), 1.95 - 1.85 (m, 1H), 1.80 - 1.66 (m, 2H), 1.56 - 1.50 (m, 1H), 1.47 - 1.34 (m, 1H), 1.26 (t, J = 6.0 Hz, 3H)。
實施例 20 化合物 Z59 之合成 步驟一：在25℃下，向7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-胺基環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(200 mg, 0.71 mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(6 mL)溶液中加入[(6-溴己基)胺基]甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(353 mg, 0.71 mmol)、N,N-二異丙基乙胺(460 mg, 3.57 mmol)。氮氣保護下於80℃攪拌反應16小時。LCMS偵測反應完全後，反應液加水(50 mL)，乙酸乙酯(50 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水(50 mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮，得到的粗物質經矽膠管柱層析(石油醚/乙酸乙酯=10/1至3/1)純化得到無色油狀物7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-[(2,2-二甲基-4-側氧基-5-氮雜-3-氧雜十一烷-11-基)胺基]環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(180 mg, 收率33%)。LCMS: m/z (ESI): [M+H] += 694.7, t R= 1.33 min。
步驟二：在室溫條件下向7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-[(2,2-二甲基-4-側氧基-5-氮雜-3-氧雜十一烷-11-基)胺基]環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(180 mg, 0.26 mmol)之甲醇(3 mL)、水(3 mL)、四氫呋喃(3 mL)中加入氫氧化鋰水合物(109 mg, 2.59 mmol)。氮氣保護下於40℃攪拌反應16小時。LCMS偵測反應完全後，濃縮至乾燥得到粗物質白色固體物7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1 S,3 S)-3-[(2,2-二甲基-4-側氧基-5-氮雜-3-氧雜十一烷-11-基)胺基]環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1 H-吲哚-6-甲酸(180 mg, 粗物質)。LCMS: MS m/z (ESI): [M+H] += 681.3, t R= 0.87 min。
步驟三：在室溫條件下向7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1 S,3 S)-3-[(2,2-二甲基-4-側氧基-5-氮雜-3-氧雜十一烷-11-基)胺基]環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1 H-吲哚-6-甲酸(160 mg, 0.24 mmol)之甲醇(4 mL)中加入鹽酸甲醇(1.12 mL, 4 mol/L)。該反應液在氮氣保護下於40℃攪拌反應16小時。LCMS偵測反應完全後，濃縮除去鹽酸，得到的粗物質經反相(層析管柱：Ultimate XB-C18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02), 流動相：乙腈-水(0.1%三氟醋酸)，流速：70 mL/min, 管柱溫：25℃)製備純化得到白色固體物7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-[(6-胺基己基)胺基]環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(80 mg, 收率56%)。LCMS: MS m/z (ESI): [M+H] += 581.4, t R= 0.68 min。
步驟四：在室溫條件下向7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-[(6-胺基己基)胺基]環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(70 mg, 0.12 mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(5 mL)中依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(55.2 mg, 0.15 mmol)、N,N-二異丙基乙胺(78 mg, 0.61 mmol)。氮氣保護於60℃反應16小時。LCMS偵測反應完全後，濃縮得到的粗物質經反相(層析管柱：Ultimate XB-C18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02), 流動相：乙腈-水(0.1%三氟醋酸)，流速：70 mL/min, 管柱溫：25℃)純化得到(4 1S,4 3S)-1 7-(二甲基磷醯基)-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,12-三氮雜-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-環戊烷環十三烷-13-酮2,2,2-三氟乙酸(4 1S,4 3S)-1 7-(dimethylphosphoryl)-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,12-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacyclotridecaphan-13-one (Z59) (14 mg, 收率18%)。LCMS: MS m/z (ESI): [M+H] += 563.0, t R= 0.68 min。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ): δ 11.99 (s, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.60 - 8.57 (m, 1H), 8.51 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.46 (dd, J = 8.4, 3.2 Hz, 1H), 4.27 - 4.20 (m, 1H), 3.73 - 3.71 (m, 1H), 3.63 - 3.55 (m, 2H), 3.19 - 3.14 (m, 1H), 2.95 - 2.92 (m, 2H), 2.18 - 2.05 (m, 2H), 2.01- 1.89 (m, 7H), 1.82- 1.74 (m, 1H), 1.69 - 1.48 (m, 9H)。
實施例 21 化合物 Z60 之合成 步驟一：在室溫條件下，向(4 1S,4 3S)-1 7-(二甲基磷醯基)-2 5-(三氟甲基)-1 1H-8-氧雜-3,5,11-三氮雜-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-環戊烷環十二烷-12-酮2,2,2-三氟乙酸鹽(20 mg, 0.030 mmol)之四氫呋喃溶液(5 mL)中依次加入多聚甲醛(20 mg, 0.22 mmol)及鈦酸異丙酯(10.3 mg, 0.036 mmol)。氮氣保護下於60℃攪拌反應14小時。將反應液降溫至30℃ 後，加入氰基硼氫化鈉(20 mg, 0.318 mmol)，保溫反應4小時。LCMS偵測反應完全後，反應液濃縮，得到的粗物質經反相製備(層析管柱：Ultimate XB-C18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02), 流動相：乙腈-水(0.1%三氟醋酸)，流速：70 mL/min, 管柱溫：25℃)得到(4 1S,4 3S)-1 7-(二甲基磷醯基)-5-甲基-2 5-(三氟甲基)-1 1H-8-氧雜-3,5,11-三氮雜-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-環戊烷環十二烷-12-酮-2,2,2-三氟乙酸鹽(4 1S,4 3S)-1 7-(dimethylphosphoryl)-5-methyl-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-8-oxa-3,5,11-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacyclododecaphan-12-one (Z60) (7.8 mg, 收率38%)。LCMS: MS m/z (ESI): [M+H] += 565.2, t R= 0.73 min。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD): δ 8.58 (s, 1H), 8.50 - 8.28 (m, 1H), 7.94 - 7.89 (m, 1H), 7.69 - 7.50 (m, 1H), 4.28 - 4.15 (m, 1H), 3.99 - 3.68 (m, 6H), 3.52 - 3.42 (m, 1H), 3.24 - 3.14 (m, 1H), 2.97 - 2.85 (m, 3H), 2.78 - 2.59 (m, 1H), 2.37 - 2.15 (m, 3H), 2.14 - 1.92 (m, 7H), 1.87 - 1.70 (m, 2H)。
實施例 22 化合物 Z61 之合成 步驟一：在25℃下，向[(6-溴己基)胺基]甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(300 mg, 1.28 mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(8 mL)溶液中加入{[(3S)-六氫吡啶-3-基]胺基}甲烷酸苄基酯(395 mg, 1.41 mmol)、N,N-二異丙基乙胺(662 mg, 5.12 mmol)。該反應液在氮氣保護下於80℃攪拌反應6小時。LCMS偵測反應完全後，反應液加水(30 mL)，接著用乙酸乙酯(50 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水(50 mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮，得到的粗物質經矽膠管柱層析(二氯甲烷/甲醇=30/1到10/1)純化得到無色油狀物{[(3S)-1-(2,2-二甲基-4-側氧基-5-氮雜-3-氧雜十一烷-11-基)六氫吡啶-3-基]胺基}甲烷酸苄基酯(555 mg, 收率92%)。LCMS: m/z (ESI): [M+H] += 434.2, t R= 1.57 min。
步驟二：將{[(3S)-1-(2,2-二甲基-4-側氧基-5-氮雜-3-氧雜十一烷-11-基)六氫吡啶-3-基]胺基}甲烷酸苄基酯(555 mg, 1.17 mmol)溶於甲醇(10 mL)溶液中加入鈀碳(60 mg, 10%含量, 60%含水)。該反應液在氫氣保護下於25℃攪拌反應3小時。LCMS偵測反應完全後，反應液過濾濃縮，得到的無色油狀物({6-[(3S)-3-胺基六氫吡啶-1-基]己基}胺基)甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(350 mg, 粗物質)。LCMS: m/z (ESI): [M+H] += 300.0, t R= 0.98 min。
步驟三：在室溫條件下向{6-[(3S)-3-胺基六氫吡啶-1-基]己基}胺基(280 mg, 0.94 mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(8 mL)溶液中依次加入3-[2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基]-7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(404 mg, 0.94 mmol)、N,N-二異丙基乙胺(483 mg, 3.74 mmol)，該反應液在氮氣保護下於80℃攪拌反應16小時。LCMS偵測反應完全後，向反應液加入水溶液(40 mL)，且用二氯甲烷(50 mL×3)萃取，合併之有機層用無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮至乾燥。得到的粗物質經矽膠管柱層析(二氯甲烷/甲醇=30/1到10/1)純化得到黃色油狀物7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(3S)-1-(2,2-二甲基-4-側氧基-5-氮雜-3-氧雜十一烷-11-基)六氫吡啶-3-基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(473 mg，收率72%)。LCMS: MS m/z (ESI): [M+H] += 695.4, t R= 1.15 min。
步驟四：在室溫條件下向7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(3S)-1-(2,2-二甲基-4-側氧基-5-氮雜-3-氧雜十一烷-11-基)六氫吡啶-3-基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(243 mg, 0.35 mmol)之甲醇(3 mL)、水(3 mL)、四氫呋喃(3 mL)中加入氫氧化鋰水合物(74 mg, 1.75 mmol)，該反應液在氮氣保護下於40℃攪拌反應14小時。LCMS偵測反應完全後，濃縮至乾燥得到粗物質黃色固體7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(3S)-1-(2,2-二甲基-4-側氧基-5-氮雜-3-氧雜十一烷-11-基)六氫吡啶-3-基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(320 mg, 粗物質, 90%純度)。LCMS: MS m/z (ESI): [M+H] += 680.8, t R= 1.21 min。
步驟五：在室溫條件下向7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(3S)-1-(2,2-二甲基-4-側氧基-5-氮雜-3-氧雜十一烷-11-基)六氫吡啶-3-基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(420 mg, 粗物質, 90%純度)之甲醇(4 mL)溶液中加入氯化氫/甲醇溶液(6 mL, 4 mol/L)。該反應液在氮氣保護下於40℃攪拌反應4小時。LCMS偵測反應完全後，濃縮除去鹽酸，得到的粗物質經反相(層析管柱：Ultimate XB-C18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02), 流動相：乙腈-水(0.1%三氟醋酸)，流速：70 mL/min, 管柱溫：25℃)製備純化得到白色固體物7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(3S)-1-(6-胺基己基)六氫吡啶-3-基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(275 mg, 收率85%)。LCMS: MS m/z (ESI): [M+H] += 581.4, t R= 0.64 min。
步驟六：在室溫條件下向7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(3S)-1-(6-胺基己基)六氫吡啶-3-基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(100 mg, 0.17 mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(3 mL)中依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(65.4 mg, 0.17 mmol)、N,N-二異丙基乙胺(88.9 mg, 0.69 mmol)，該反應液氮氣保護於80℃反應16小時。LCMS偵測反應完全後，濃縮得到的粗物質經反相製備(層析管柱：Ultimate XB-C18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02), 流動相：乙腈-水(0.1%三氟醋酸), 流速：70 mL/min, 管柱溫：25℃)純化得到(4 3S)-1 7-(二甲基磷醯基)-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,11-二氮雜-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-哌啶環十二烷-12-酮(4 3S)-1 7-(dimethylphosphoryl)-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,11-diaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(3,1)-piperidinacyclododecaphan-12-one (Z61) (18.90 mg, 收率19%,三氟乙酸鹽)。LCMS: MS m/z (ESI): [M+H] += 563.2, t R= 0.67 min。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD): δ 8.64 (s, 1H), 8.22 (dd, J = 8.4, 1.2 Hz, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.65 (dd, J = 8.4, 3.6 Hz, 1H), 4.22 - 4.02 (m, 1H), 4.01 - 3.49 (m, 3H), 3.29 - 3.21 (m, 1H), 3.19 - 3.09 (m, 2H), 2.95 - 2.87 (m, 1H), 2.87 - 2.69 (m, 1H), 2.16 - 1.89 (m, 9H), 1.80 - 1.27 (m, 9H)。
實施例 23 化合物 Z56 之合成 步驟一：在25℃下，向{[2-(四氫-1H-吡咯-3-基)乙基]胺基}甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(200 mg, 0.93 mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(6 mL)溶液中加入[(2-溴乙基)胺基]甲烷酸苄基酯(241 mg, 0.93 mmol)、N,N-二異丙基乙胺(602 mg, 4.67 mmol)。該反應液在氮氣保護下於80℃攪拌反應5小時。LCMS偵測反應完全後，反應液加水(20 mL)，接著用乙酸乙酯(50 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水(20 mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮，得到的粗物質經矽膠管柱層析(石油醚/乙酸乙酯=10/1至3/1)純化得到無色油狀物({2-[1-(3-側氧基-1-苯基-4-氮雜-2-氧雜己-6-基)四氫-1H-吡咯-3-基]乙基}胺基)甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(218 mg, 收率54%)。LCMS: m/z (ESI): [M+H] += 392.4, t R= 1.40 min。
步驟二：在室溫條件下向({2-[1-(3-側氧基-1-苯基-4-氮雜-2-氧雜己-6-基)四氫-1H-吡咯-3-基]乙基}胺基)甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(200 mg, 0.51 mmol)之甲醇中加入Pd/C (20 mg, 10%含量, 60%含水)。該反應液在氫氣保護下於25℃攪拌反應5小時。LCMS偵測反應完全後，濃縮至乾燥得到粗物質白色固體物({2-[1-(2-胺基乙基)四氫-1H-吡咯-3-基]乙基}胺基)甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(100 mg, 收率53%)。LCMS: MS m/z (ESI): [M+H] += 258.2, t R= 0.47 min。
步驟三：在室溫條件下向({2-[1-(2-胺基乙基)四氫-1H-吡咯-3-基]乙基}胺基)甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(100 mg, 0.39 mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(6 mL)中加入3-[2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基]-7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(168 mg, 0.39 mmol)、N,N-二異丙基乙胺(150 mg, 1.17 mmol)。該反應液在氮氣保護下於80℃攪拌反應16小時。LCMS偵測反應完全後，反應液加水(20 mL)，接著用乙酸乙酯(30 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水(30 mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮，得到的粗物質經矽膠管柱層析(石油醚/乙酸乙酯=10/1至3/1)純化得到無色油狀物7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-3-[2-({2-[3-(2,2-二甲基-4-側氧基-5-氮雜-3-氧雜庚-7-基)四氫-1H-吡咯-1-基]乙基}胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基]-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(220 mg, 收率78%)。LCMS: MS m/z (ESI): [M+H] += 653.2, t R= 1.41 min。
步驟四：在室溫條件下向7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-3-[2-({2-[3-(2,2-二甲基-4-側氧基-5-氮雜-3-氧雜庚-7-基)四氫-1H-吡咯-1-基]乙基}胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基]-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(220 mg, 0.34 mmol)之甲醇(3 mL)、水(3 mL)、四氫呋喃(3 mL)中加入氫氧化鋰水合物(141 mg, 3.37 mmol)。氮氣保護下於40℃攪拌反應16小時。LCMS偵測反應完全後，濃縮至乾燥得到粗物質白色固體物7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-3-[2-({2-[3-(2,2-二甲基-4-側氧基-5-氮雜-3-氧雜庚-7-基)四氫-1H-吡咯-1-基]乙基}胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基]-1H-吲哚-6-甲酸(200 mg)。LCMS: MS m/z (ESI): [M+H] += 638.7, t R= 1.11 min。
步驟五：在室溫條件下，向7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-3-[2-({2-[3-(2,2-二甲基-4-側氧基-5-氮雜-3-氧雜庚-7-基)四氫-1H-吡咯-1-基]乙基}胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基]-1H-吲哚-6-甲酸(200 mg, 0.31 mmol)之1,4-二氧六環(4 mL)中加入鹽酸1,4-二氧六環(0.78 mL, 3.13 mmol, 4 mol/L)。氮氣保護下，40℃攪拌3小時。LCMS偵測反應完全後，濃縮，粗物質經反相製備(層析管柱：Ultimate XB-C18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02), 流動相：乙腈-水(0.1%三氟醋酸)，流速：70 mL/min, 管柱溫：25℃)純化得到白色固體物3-[2-({2-[3-(2-胺基乙基)四氫-1H-吡咯-1-基]乙基}胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基]-7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-1H-吲哚-6-甲酸(70 mg, 收率37%)。LCMS: MS m/z (ESI): [M+H] += 538.8, t R= 0.98 min。
步驟六：在室溫條件下向3-[2-({2-[3-(2-胺基乙基)四氫-1H-吡咯-1-基]乙基}胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基]-7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-1H-吲哚-6-甲酸(70 mg, 0.11 mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(5 mL)中依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(51 mg, 0.13 mmol)、N,N-二異丙基乙胺(43 mg, 0.33 mmol)。氮氣氛圍下於65℃反應3小時。LCMS偵測反應完全後，濃縮，粗物質經反相(層析管柱：Ultimate XB-C18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02), 流動相：乙腈-水(0.1%三氟醋酸)，流速：70 mL/min, 管柱溫：25℃)製備純化得到1 7-(二甲基磷醯基)-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,9-二氮雜-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-6(1,3)-吡咯啶環十烷-10-酮1 7-(dimethylphosphoryl)-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,9-diaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-6(1,3)-pyrrolidinacyclodecaphan-10-one (Z56) (6.0 mg, 收率10%,三氟乙酸鹽)。LCMS: MS m/z (ESI): [M+H] += 521.3, t R= 0.71 min。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD): δ 8.65 (s, 1H), 8.58 - 8.43 (m, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 4.09 - 3.82 (m, 3H), 3.63 - 3.36 (m, 4H), 3.18 - 2.98 (m, 2H), 2.78 - 2.57 (m, 1H), 2.49 - 2.35 (m, 1H), 2.23 - 1.99 (m, 7H), 1.70 - 1.14 (m, 3H)。
實施例 24 化合物 Z64 之合成 步驟一：在50 mL單口瓶中，向(1-羥基-6-氮雜-3-氧雜庚-6-基)甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(300 mg, 1.37 mmol)之二氯甲烷(10 mL)溶液中依次加入咪唑(140 mg, 2.05 mmol)、三苯基膦(431 mg, 1.64 mmol)及碘單質(521 mg, 2.05 mmol)。氮氣保護下5℃攪拌2小時。LCMS偵測反應完全，反應液加水(20 mL)稀釋，接著用二氯甲烷(10 mL×3)萃取，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到粗物質，經矽膠管柱層析(石油醚:乙酸乙酯=5:1)純化得淡黃色油狀物(1-碘-6-氮雜-3-氧雜庚-6-基)甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(314 mg, 收率70%)。LCMS: m/z (ESI): [M-100+H] += 230.0, t R= 1.20 min。
步驟二：在50 mL單口瓶中，向(1-碘-6-氮雜-3-氧雜庚-6-基)甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(350 mg, 1.06 mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(5 mL)溶液中加入7-[二甲基(側氧基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1 S,3 S)-3-胺基環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1 H-吲哚-6-甲酸甲酯(553 mg, 1.12 mmol)及N,N-二異丙基乙胺(0.88 mL, 5.32 mmol)。氮氣保護下100℃攪拌16小時。LCMS偵測反應完全後，反應液加水(30 mL)稀釋，乙酸乙酯(15 mL×3)萃取，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到粗物質，經矽膠管柱層析(二氯甲烷:甲醇=100:6)純化得到淡黃色固體7-[二甲基(側氧基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1 S,3 S)-3-[(2,2,5-三甲基-4-側氧基-5-氮雜-3,8-二氧雜癸-10-基)胺基]環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1 H-吲哚-6-甲酸甲酯(610 mg, 收率82%)。LCMS: m/z (ESI): [M+H] += 697.4, t R= 0.97 min。
步驟三：將7-[二甲基(側氧基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1 S,3 S)-3-[(2,2,5-三甲基-4-側氧基-5-氮雜-3,8-二氧雜癸-10-基)胺基]環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1 H-吲哚-6-甲酸甲酯(610 mg, 0.88 mmol)溶於水(3 mL)、甲醇(3 mL)及四氫呋喃(3 mL)之混合體系中。加入一水合氫氧化鋰(184 mg, 4.38 mmol)，40℃攪拌16小時。LCMS偵測反應完全後，得到含7-[二甲基(側氧基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1 S,3 S)-3-[(2,2,5-三甲基-4-側氧基-5-氮雜-3,8-二氧雜癸-10-基)胺基]環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1 H-吲哚-6-甲酸之反應液，此反應液不經處理直接用於下一步。LCMS: m/z (ESI): [M+H] += 683.3, t R= 0.86 min。
步驟四：在上步反應液中，加入鹽酸之甲醇溶液(5 mL, 4 M)，5℃攪拌5小時。LCMS偵測完全後，反應液濃縮，粗物質經反相製備(層析管柱：Ultimate XB-C18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02), 流動相：乙腈-水(0.1%三氟醋酸), 流速：70 mL/min, 管柱溫：25℃)得到白色固體7-[二甲基(側氧基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1 S,3 S)-3-(6-氮雜-3-氧雜庚-1-基胺基)環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1 H-吲哚-6-甲酸(260 mg, 2步收率51%)。LCMS: m/z (ESI): [M+H] += 582.6, t R= 0.92 min。
步驟五：向7-[二甲基(側氧基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1 S,3 S)-3-(6-氮雜-3-氧雜庚-1-基胺基)環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1 H-吲哚-6-甲酸(260 mg, 0.45 mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(10 mL)溶液中依次加入2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(187 mg, 0.49 mmol)及N,N-二異丙基乙胺(0.37 mL, 2.23 mmol)。60℃攪拌反應16小時。LCMS偵測反應完全後，反應液濃縮，粗物質經反相製備(層析管柱：Ultimate XB-C18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02), 流動相：乙腈-水(0.1%三氟醋酸), 流速：70 mL/min, 管柱溫：25℃)得到淡黃色固體(4 1S,4 3S)-1 7-(二甲基磷醯基)-11-甲基-2 5-(三氟甲基)-1 1H-8-氧雜-3,5,11-三氮雜-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-環戊烷環十二烷-12-酮((4 1S,4 3S)-1 7-(dimethylphosphoryl)-11-methyl-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-8-oxa-3,5,11-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacyclododecaphan-12-one) (Z64) (120 mg, 收率48%,三氟乙酸鹽)。LCMS: m/z (ESI): [M+H] += 564.8, t R= 0.97 min。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD): δ 8.57 (s, 1H), 8.43 (br, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.44 (dd, J= 8.4, 3.2 Hz, 1H), 4.36-4.39 (m, 1H), 3.88-3.91 (m, 1H), 3.78-3.83 (m, 2H), 3.53-3.72 (m, 3H), 3.67-3.42 (m, 1H), 3.23-3.61 (m, 1H), 3.13 (s, 3H), 2.65-2.71 (m, 1H), 2.32-2.39 (m, 1H), 2.21-2.23 (m, 1H), 2.14 - 1.62 (m, 10H)。
實施例 25 化合物 Z63 之合成 步驟一：在10 mL單口瓶中，向(4 1S,4 3S)-1 7-(二甲基磷醯基)-11-甲基-2 5-(三氟甲基)-1 1H-8-氧雜-3,5,11-三氮雜-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-環戊烷環十二烷-12-酮三氟乙酸鹽(35 mg, 0.06 mmol)之四氫呋喃(3 mL)溶液中依次加入多聚甲醛(9.30 mg, 0.31 mmol)及鈦酸四異丙酯(35.2 mg, 0.12 mmol)。該反應液在70℃攪拌16小時，將反應液降至35℃，再加入氰基硼氫化鈉(7.79 mg, 0.12 mmol)，繼續35℃攪拌3小時。LCMS偵測反應完全後，反應液濃縮，得到的粗物質經反相製備(層析管柱：Ultimate XB-C18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02), 流動相：乙腈-水(0.1%三氟醋酸)，流速：70 mL/min, 管柱溫：25℃)得到(4 1S,4 3S)-1 7-(二甲基磷醯基))-5,11-二甲基-2 5-(三氟甲基)-1 1H-8-氧雜-3,5,11-三氮雜-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-環戊烷環十二烷-12-酮((4 1S,4 3S)-1 7-(dimethylphosphoryl)-5,11-dimethyl-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-8-oxa-3,5,11-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacyclododecaphan-12-one) (Z63) (2 mg, 收率6%,三氟乙酸鹽)。LCMS: m/z (ESI): [M+H] += 579.2, t R= 0.77 min。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD): δ 8.24-8.58 (m, 2H), 7.88-8.01 (m, 1H), 7.41-7.43 (m, 1H), 4.11-4.18 (m, 1H), 3.94-3.97 (m, 1H), 3.79-3.85 (m, 3H), 3.66-3.70 (m, 2H), 3.36-3.41 (m, 1H), 3.13-3.18 (m, 4H), 2.86 (s, 2H), 2.55-2.73 (m, 2H), 2.25-2.32 (m, 3H), 1.82-1.97 (m, 9H)。
實施例 26 化合物 Z23 之合成 步驟一：25℃下，向7-溴-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(1.0 g, 3.9 mmol)之N,N二甲基甲醯胺(10 mL)溶液中，加入四(三苯基膦)鈀(0.45 g, 0.39 mmol)及氰化鋅(0.46 g, 3.9 mmol)。氮氣吹一分鐘放入微波150℃反應1小時。LCMS偵測反應完全後，向反應液中緩慢加入水(20 mL)，乙酸乙酯(30 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮，粗物質經過管柱機(石油醚/乙酸乙酯=5/1)層析純化得7-氰基-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(黃色固體, 800 mg, 收率81%)。LCMS: m/z (ESI): 201.2 [M+H] +, t R= 1.22 min。
步驟二：25℃下，向7-氰基-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(800 mg, 4.0 mmol)之N,N二甲基甲醯胺(10 mL)溶液中加入N-碘代丁二醯亞胺(1.35 g, 6.0 mmol)。置換氮氣，40℃攪拌3小時，LCMS偵測反應完全。向反應液加入水(30 mL)，乙酸乙酯(40 mL×2)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水(40 mL×4)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮。粗物質經矽膠管柱(石油醚/乙酸乙酯=1/1)層析純化得7-氰基-3-碘-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(灰白色固體, 740 mg, 收率51%)。LCMS: m/z (ESI): 327.0 [M+H] +, t R= 1.95 min。
步驟三：25℃下，向7-氰基-3-碘-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(740 mg, 2.27 mmol)及4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷(871 mg, 6.81 mmol)之四氫呋喃(15 mL)溶液中，依次加入三(二伸苄基丙酮)二鈀(312 mg, 0.34 mmol)、2-二環己基膦-2',4',6'-三異丙基聯苯(108 mg, 0.227 mmol)及三乙胺(689 mg, 6.81 mmol)。置換氮氣，90℃ 條件下反應14小時，LCMS偵測反應完全。向反應液中加入水(20 mL)，乙酸乙酯(30 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮，粗物質經矽膠管柱(石油醚/乙酸乙酯=5/1至1/1)層析純化，得到6-甲醯基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊-2-基)-1H-吲哚-7-甲腈甲烷(黃色固體, 600 mg, 收率81%)LCMS: m/z (ESI): 327.2 [M+H] +, t R= 1.26 min。
步驟四：25℃下，向6-甲醯基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊-2-基)-1H-吲哚-7-甲腈甲烷(600 mg, 1.84 mmol)及{[(1S,3S)-3-{[4-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]胺基}環戊基]胺基}甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(583 mg, 1.53mmol)之四氫呋喃溶液(10 mL)中依次加入氯[(正丁基二(1-金剛烷基)膦)-2-(2-胺基聯苯)]鈀(II) (102 mg, 0.153 mmol)及磷酸鉀(976 mg, 4.6 mmol)之水(2 mL)溶液。置換氮氣，60℃反應14小時，LCMS偵測反應完全。向反應液中加入水(20 mL)，乙酸乙酯(20 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮，粗物質經過管柱機(石油醚/乙酸乙酯=5/1)層析純化，得7-氰基-3-(2-{[(1S,3S)-3-({[(2-甲基丙-2-基)氧基]羰基}胺基)環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(黃色油狀, 580 mg, 收率69%)。LCMS: m/z (ESI): 544.8 [M+H] +, t R= 1.66 min。
步驟五：25℃下，向7-氰基-3-(2-{[(1S,3S)-3-({[(2-甲基丙-2-基)氧基]羰基}胺基)環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(500 mg, 0.92 mmol)之二氯甲烷(5 mL)溶液加入三氟醋酸(2.5 mL)。20℃反應3小時，LCMS偵測反應完全。反應液加入飽和碳酸氫鈉溶液(30 mL)，二氯甲烷及甲醇(5:1)之混合溶液(50 mL×6)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮得粗物質7-氰基-3-(2-{[(1S,3S)-3-胺基環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(黃色油狀, 500 mg,純度75%, 收率92%)。LCMS: MS m/z (ESI): 445.2 [M+H] +, t R= 0.79 min。
步驟六：室溫下，向7-氰基-3-(2-{[(1S,3S)-3-胺基環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(100 mg, 0.225 mmol)之N,N-二甲基甲醯胺溶液(2 mL)中，依次加入[(4-溴丁基)胺基]甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(56 mg, 0.225 mmol)及N,N-二異丙基乙胺(116 mg, 0.9mmol)。置換氮氣，80℃攪拌反應16小時，LCMS偵測反應完全。反應液加入飽和氯化銨溶液(10 mL)，且用乙酸乙酯(20 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮。得到的粗物質經矽膠管柱(二氯甲烷/甲醇=20/1到10/1)層析純化，得7-氰基-3-(2-{[(1S,3S)-3-[(2,2-二甲基-4-側氧基-5-氮雜-3-氧雜壬-9-基)胺基]環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(黃色油狀, 70 mg, 收率40%)。LCMS: MS m/z (ESI): 615.8 [M+H] +, t R= 1.28 min。
步驟七：向7-氰基-3-(2-{[(1S,3S)-3-[(2,2-二甲基-4-側氧基-5-氮雜-3-氧雜壬-9-基)胺基]環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(70 mg, 0.09mmol)之四氫呋喃(3 mL)及甲醇(3 mL)之混合溶液中加入一水合氫氧化鋰(19.0 mg, 0.45 mmol)之水(3 mL)溶液。40℃攪拌反應12 h，LCMS偵測反應完全。反應液直接濃縮，粗物質經反相製備(層析管柱：Ultimate XB-C18-08, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02), 流動相:乙腈-水(0.1%碳酸氫銨), 流速: 70 mL/min, 管柱溫: 25℃)得7-氰基-3-(2-{[(1S,3S)-3-[(2,2-二甲基-4-側氧基-5-氮雜-3-氧雜壬-9-基)胺基]環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(白色固體, 30 mg, 收率55%)。LCMS: MS m/z (ESI): 602.2 [M+H] +, t R= 0.86 min。
步驟八：向7-氰基-3-(2-{[(1S,3S)-3-[(2,2-二甲基-4-側氧基-5-氮雜-3-氧雜壬-9-基)胺基]環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(20 mg, 0.033 mmol)之二氯甲烷(0.9 mL)溶液中加入三氟醋酸(0.1 mL)。15℃攪拌反應45分鐘。LCMS偵測反應完全後，向反應液中加入N,N-二異丙基乙胺調節pH = 8。濃縮得7-氰基-3-(2-{[(1S,3S)-3-[(4-胺基丁基)胺基]環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(黃色油狀物, 12 mg, 收率72%)。粗產品直接用於下一步反應。LCMS: MS m/z (ESI): 502.0 [M+H] +, t R= 1.20 min。
步驟九：向7-氰基-3-(2-{[(1S,3S)-3-[(4-胺基丁基)胺基]環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(12 mg, 0.02 mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(2 mL)溶液中，依次加入2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(15 mg, 0.04 mmol)及N,N-二異丙基乙胺(21 mg, 0.16 mmol)。80℃攪拌14 h，LCMS偵測反應完全。濃縮，粗物質經反相製備(層析管柱: Ultimate XB-C18-08, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02), 流動相: 乙腈-水(0.1% 碳酸氫銨), 流速: 70 mL/min, 管柱溫: 25℃)得(4 1S,4 3S)- 11-氧雜-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,11-三氮雜-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-環戊烷環十一烷-1 7-甲腈(4 1S,4 3S)-11-oxo-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,10-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacycloundecaphane-1 7-carbonitrile (Z23, 0.8 mg, 收率7%)。LCMS: MS m/z (ESI): 484.2 [M+H] +, t R= 0.84 min。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD): δ 8.73 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.53 (s, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.46 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.18-4.13 (m, 1H), 3.28-3.23 (m, 1H), 3.11-3.00 (m, 1H), 2.91-2.80 (m, 1H), 2.52-2.48 (m, 1H), 2.34-2.08 (m, 4H), 1.84-1.73 (m, 1H), 1.72-1.61 (m, 1H), 1.56-1.39 (m, 5H)。
實施例 27 化合物 Z62 之合成 步驟一：在0℃，氮氣氛圍下，向三苯基膦(129mg, 0.49 mmol)之二氯甲烷(3 mL)溶液中依次加入[(4-羥基丁基)(甲基)胺基]甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(100 mg, 0.49 mmol)、碘單質(125 mg, 0.49mmol)、咪唑(50 mg, 0.74 mmol)。0℃下攪拌5分鐘後升溫至室溫，反應在室溫下攪拌4小時。LCMS反應完全後，加水(10 mL)稀釋，二氯甲烷(20 mL×3)萃取，合併有機相，飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥有機相，過濾濃縮。得到的粗物質經矽膠管柱(石油醚/乙酸乙酯=10/1至3/1)層析純化，得到無色油狀物[(4-碘丁基)(甲基)胺基]甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(120 mg, 收率78%)。LCMS: m/z (ESI): 258.0 [M+H-56] +, t R= 1.63 min。
步驟二：將7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-胺基環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(27 mg, 0.054 mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(2 mL)。依次加入[(4-碘丁基)(甲基)胺基]甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(20 mg, 0.065 mmol)、N,N-二異丙基乙胺(28 mg, 0.218 mmol)。80℃攪拌16小時，LCMS偵測反應完全。反應液過濾除去固體雜質，有機相濃縮得粗產品，經製備TLC (二氯甲烷/甲醇=10/1)純化得7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-[(2,2,5-三甲基-4-側氧基-5-氮雜-3-氧雜壬-9-基)胺基]環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(黃色固體, 28 mg, 收率75%)。LCMS: m/z (ESI): 681.3 [M+H] +, t R= 1.17 min。
步驟三：將7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-[(2,2,5-三甲基-4-側氧基-5-氮雜-3-氧雜壬-9-基)胺基]環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(110 mg, 0.162 mmol)溶於水(2 mL)、甲醇(2 mL)及四氫呋喃(2 mL)之混合體系中。加入氫氧化鋰(1個結晶水, 34 mg, 0.808 mmol)。40℃攪拌6小時。LCMS偵測反應完全後，旋乾除去溶劑得粗產品7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-[(2,2,5-三甲基-4-側氧基-5-氮雜-3-氧雜壬-9-基)胺基]環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(黃色固體, 110 mg, 收率94%)，直接用於下一步反應。LCMS: m/z (ESI): 667.4 [M+H] +, t R= 1.04 min。
步驟四：向7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-[(2,2,5-三甲基-4-側氧基-5-氮雜-3-氧雜壬-9-基)胺基]環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(110 mg, 0.164 mmol)中加入氯化氫/甲醇溶液(5 mL, 4 M)，體系在40℃攪拌4小時。LCMS偵測反應完全後，旋乾，粗物質經反相製備(層析管柱：Ultimate XB-C18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02), 流動相：乙腈-水(0.1%三氟醋酸), 流速：70 mL/min, 管柱溫：25℃)得7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-{[4-(甲基胺基)丁基]胺基}環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(白色固體, 80 mg, 收率94%)。LCMS: m/z (ESI): 567.3 [M+H] +, t R= 0.83 min。
步驟五：向7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-{[4-(甲基胺基)丁基]胺基}環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(60 mg, 0.106 mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(5 mL)溶液中依次加入2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(40 mg, 0.106 mmol)及N,N-二異丙基乙胺(68 mg, 0.530 mmol)。80℃攪拌4 h，LCMS偵測反應完全後。濃縮，粗物質經反相製備(層析管柱：Ultimate XB-C18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02), 流動相：乙腈-水(0.1%三氟醋酸), 流速：70 mL/min, 管柱溫：25℃)得(4 1S,4 3S)-1 7-(二甲基磷醯基)-10-甲基-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮雜-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-環戊烷環十一烷-11-酮(4 1S,4 3S)-1 7-(dimethylphosphoryl)-10-methyl-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,10-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacycloundecaphan-11-one (Z62, 16 mg, 收率28%,三氟乙酸鹽)。LCMS: m/z (ESI): 549.2 [M+H] +, t R= 0.84 min。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD): δ 8.72-8.36 (m, 2H), 8.05-7.89 (m, 1H), 7.36-7.19 (m, 1H), 3.86-3.73 (m, 1H), 3.23-3.13 (m, 1H), 3.11 (s, 3H), 3.08-2.98 (m, 1H), 2.83-2.63 (m, 3H), 2.41-2.06 (m, 4H), 2.00-1.55 (m, 12H)。
實施例 28 化合物 Z68-1 及 Z68-2 之合成 步驟一：在5℃下，向4-((苄氧基)羰基)胺基)-3-側氧基丁酸甲酯(5.0 g, 18.9 mmol)之四氫呋喃(100 mL)溶液中加入氫化鋁鋰之四氫呋喃溶液(28.3 mL, 1 M, 28.3 mmol)。該反應液在氮氣保護下於5℃攪拌反應2小時。LCMS偵測反應完全後，反應液加飽和氯化銨水溶液(100 mL)，乙酸乙酯(100 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水(100 mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮，粗物質經過管柱機(石油醚/乙酸乙酯=10/1到0/1)層析純化，得到無色油狀物苄基(2,4-二羥基丁基)胺基甲酸酯(1.2 g, 收率27%)。LCMS: m/z (ESI): 239.8 [M+H] +, t R= 0.99 min。
步驟二：在5℃下，向苄基(2,4-二羥基丁基)胺基甲酸酯(1.2 g, 5.02 mmol)之二氯甲烷(50 mL)溶液中加入咪唑(0.68 g, 10.04 mmol)、三級丁基二苯基氯矽烷(1.38 g, 5.02 mmol)。氮氣保護下於5℃攪拌反應3小時。LCMS偵測反應完全後，反應液加水(50 mL)，乙酸乙酯(50 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水(50 mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮，粗物質經過管柱機(石油醚/乙酸乙酯=10/1到1/1)層析純化，得到無色油狀物苄基(4-((三級丁基二苯基矽基)氧基)-2-羥基丁基)胺基甲酸酯(2.2 g, 收率92%)。LCMS: m/z (ESI): 400.2 [M+H] +, t R= 1.69 min。
步驟三：將苄基(4-((三級丁基二苯基矽基)氧基)-2-羥基丁基)胺基甲酸酯(2.2 g, 4.61 mmol)溶於二氯甲烷(30 mL)，接著於0℃ 緩慢加入二乙胺基三氟化硫(1.1 g, 6.92 mmol)，該反應在5℃攪拌3小時。TLC偵測反應完全後，加水(20 mL)淬滅，乙酸乙酯(30 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水(50 mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮，粗物質經過管柱機(石油醚/乙酸乙酯=15/1到1/1)層析純化，得到無色油狀物苄基(4-((三級丁基二苯基矽基)氧基)-2-氟丁基)胺基甲酸酯(0.7 g, 收率29%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ): δ 7.80 - 7.18 (m, 16H), 5.04 (s, 2H), 4.77 (d, J= 50.4 Hz, 1H), 3.74 (d, J= 5.6 H, 2H), 3.32 - 3.22 (m, 2H), 1.85 - 1.70 (m, 2H), 0.99 (s, 9H)。
步驟四：將苄基(4-((三級丁基二苯基矽基)氧基)-2-氟丁基)胺基甲酸酯(700 mg, 1.46 mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(5 mL)中，再加入氟化銫(888 mg, 5.84 mmol)。該反應在5℃攪拌18小時。LCMS偵測反應完全後，加水(20 mL)，乙酸乙酯(30 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水(50 mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮，粗物質經過管柱機(石油醚/乙酸乙酯=15/1到0/1)層析純化，得到無色油狀物苄基(2-氟-4-羥基丁基)胺基甲酸酯(300 mg, 收率85%)。LCMS: m/z (ESI): 242.0 [M+H] +, t R= 1.13 min。
步驟五：50 mL單口瓶中，將苄基(2-氟-4-羥基丁基)胺基甲酸酯(300 mg, 1.24 mmol)溶於二氯甲烷(10 mL)中，加入咪唑(126 mg, 1.86 mmol)、三苯基膦(390 mg, 1.50 mmol)及單質碘(381 mg, 1.50 mmol)。該反應在10℃攪拌1小時。TLC點板偵測反應完全後，直接加入矽膠，油泵旋乾混合之樣品，經過管柱機(石油醚/乙酸乙酯=20/1至3/1)層析純化，得到無色油狀物苄基(2-氟-4-碘丁基)胺基甲酸酯(330 mg, 收率76%)。
步驟六：將3-(2-((1S,3S)-3-胺基環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(220 mg, 0.44 mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(5 mL)中，加入苄基(2-氟-4-碘丁基)胺基甲酸酯(156 mg, 0.44 mmol)及N,N-二異丙基乙胺(286 mg, 2.20 mmol)。100℃攪拌18小時。LCMS偵測反應完全後，直接加入矽膠，油泵旋乾混合之樣品，經過管柱機(二氯甲烷/甲醇=40/1至5/1)層析純化，得到白色固體甲基3-(2-((1S,3S)-3-((苄氧基)羰基)胺基)-3-氟丁基胺基)環戊基胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(290 mg, 收率92%)。LCMS: m/z (ESI): 719.2 [M+H] +, t R= 1.12 min。
步驟七：將甲基3-(2-((1S,3S)-3-((苄氧基)羰基)胺基)-3-氟丁基胺基)環戊基胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(290 mg, 0.40 mmol)溶於甲醇(5 mL)、四氫呋喃(5 mL)及水(5 mL)之混合體系中，加入一水合氫氧化鋰(84 mg, 2.00 mmol)。該反應於40℃攪拌18小時，LCMS偵測反應完全後，反應液濃縮，得到粗物質白色固體3-(2-((1S,3S)-3-((苄氧基)羰基)胺基)-3-氟丁基胺基)環戊基胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸(300 mg)。LCMS: m/z (ESI): 705.2 [M+H] +, t R= 0.94 min。
步驟八：向3-(2-((1S,3S)-3-((苄氧基)羰基)胺基)-3-氟丁基胺基)環戊基胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸(300 mg, 0.43 mmol)之反應瓶中加入三氟乙酸(5 mL)，60℃攪拌3 h。LCMS偵測反應完全後，反應液濃縮，粗物質經反相製備(層析管柱：Ultimate XB-C18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02), 流動相：乙腈-水(0.1%三氟醋酸), 流速：70 mL/min, 管柱溫：25℃)，得到白色固體3-(2-((1S,3S)-3-((4-胺基-3-氟丁基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸(140 mg, 收率57%,三氟乙酸鹽)。LCMS: m/z (ESI): 571.2 [M+H] +, t R= 0.97 min。
步驟九：在室溫條件下向3-(2-((1S,3S)-3-((4-胺基-3-氟丁基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(二甲基磷醯基)-1H-吲哚-6-羧酸(70 mg, 0.12 mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(5 mL)中依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(55 mg, 0.15 mmol)、N,N-二異丙基乙胺(78 mg, 0.61 mmol)。氮氣保護於60℃反應18小時。LCMS偵測反應完全後，濃縮得到粗物質(4 1S,4 3S)-1 7-(二甲基磷醯基)-8-氟-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮雜-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-環戊烷環十一烷-11-酮。
步驟十：將上一步反應得到的粗物質經反相(層析管柱：Ultimate XB-C18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02), 流動相：乙腈-水(0.1%三氟醋酸), 流速：70 mL/min, 管柱溫：25℃)製備純化得到兩個異構體化合物。其中一個異構體化合物任意指定為(4 1S,4 3S,8R)-1 7-(二甲基磷醯基)-8-氟-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮雜-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-環戊烷環十一烷-11-酮(4 1S,4 3S,8R)-1 7-(dimethylphosphoryl)-8-fluoro-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,10-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacycloundecaphan-11-one (Z68-1, 4 mg, 收率6%,三氟乙酸鹽)，白色固體物。LCMS: MS m/z (ESI): 553.2 [M+H] +, t R= 1.07 min。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD): δ 8.57 (s, 1H), 8.45 - 8.42 (m, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.32 (dd, J= 8.0, 3.2 Hz, 1H), 4.80-4.61 (m, 1H), 4.22-4.08 (m, 1H), 3.88-3.78 (m, 1H), 3.28-3.17 (m, 2H), 2.96-2.86 (m, 1H), 2.85 - 2.64 (m, 2H), 2.40-2.26 (m, 2H), 2.11 - 1.94 (m, 8H), 1.92 - 1.69 (m, 3H)。另一個異構體化合物任意指定為(4 1S,4 3S,8S)-1 7-(二甲基磷醯基)-8-氟-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮雜-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-環戊烷環十一烷-11-酮(4 1S,4 3S,8S)-1 7-(dimethylphosphoryl)-8-fluoro-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,10-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacycloundecaphan-11-one (Z68-2, 3 mg, 收率5%,三氟乙酸鹽)。LCMS: MS m/z (ESI): 553.3 [M+H] +, t R= 1.08 min。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD): δ 8.57 (s, 1H), 8.50 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.28 (dd, J= 8.0, 3.2 Hz, 1H), 4.83-4.73 (m, 1H), 4.27 - 4.09 (m, 1H), 3.88-3.78 (m, 1H), 3.27 - 3.08 (m, 2H), 2.92-2.72 (m, 2H), 2.67 - 2.51 (m, 1H), 2.40 - 2.17 (m, 2H), 2.08 - 1.71 (m, 11H)。
實施例 29 化合物 Z66 之合成 步驟一：250 mL三口瓶中，依次加入 N-[(苄基氧基)羰基]- N-甲基甘胺酸(10.8 g, 48.4 mmol)、四氫呋喃(100 mL)及羰基二咪唑(7.8 g, 48.4 mmol)。反應液用氮氣置換，10℃攪拌12小時，加入氯化鎂(2.3 g, 24.2 mmol)及丙二酸單甲酯鉀鹽(7.6 g, 48.4 mmol)，升溫至60℃攪拌6小時，TLC偵測反應完全。反應液濃縮，加水(100 mL)稀釋，乙酸乙酯(50 mL×3)萃取，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到粗物質，經過管柱機(乙酸乙酯/石油醚=50/50)層析純化得(3,5-二側氧基-7-氮雜-2-氧雜辛-7-基)甲烷酸苄基酯(5.8 g, 收率43%)，呈淡黃色油狀液體。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD): δ 7.47 - 7.21 (m, 5H), 5.13 - 5.06 (m, 2H), 4.29 - 4.25 (m, 2H), 3.70 - 3.64 (m, 3H), 2.94 - 2.91 (m, 3H)。
步驟二：將(3,5-二側氧基-7-氮雜-2-氧雜辛-7-基)甲烷酸苄基酯(5.8 g, 20.8 mmol)溶於二氯甲烷(50 mL)，0℃滴加二乙胺基三氟化硫(5.0 g, 31.2 mmol)。25℃攪拌16小時。LCMS偵測反應完全後，加水(40 mL)淬滅，二氯甲烷(50 mL×3)萃取，無水硫酸鈉乾燥，濃縮之粗物質經反相製備(層析管柱：Ultimate XB-C18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02), 流速: 乙腈-水(0.1%三氟醋酸), 流速: 70 mL/min, 管柱溫: 25℃)，得到類白色固體(5,5-二氟-3-側氧基-7-氮雜-2-氧雜辛-7-基)甲烷酸苄基酯(1.4 g, 收率22%)。LCMS: m/z (ESI): 301.8 [M+H] +, t R= 1.48 min。
步驟三：將(5,5-二氟-3-側氧基-7-氮雜-2-氧雜辛-7-基)甲烷酸苄基酯(1.4 g, 4.7 mmol)溶於四氫呋喃(20 mL)，0℃滴加四氫鋁鋰之四氫呋喃溶液(4.7 mL, 1 M)，10℃攪拌2小時。LCMS偵測反應完全後，加水(20 mL)淬滅，乙酸乙酯(20 mL×3)萃取，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到粗物質，經過管柱機(乙酸乙酯/石油醚=80/20)層析純化，得[(2,2-二氟-4-羥基丁基)(甲基)胺基]甲烷酸苄基酯(1.0 g, 收率80%)，呈無色油狀液體。LCMS: m/z (ESI): 274.2 [M+H] +, t R= 1.14 min。
步驟四：向[(2,2-二氟-4-羥基丁基)(甲基)胺基]甲烷酸苄基酯(400 mg, 1.46 mmol)之吡啶(5 mL)溶液中，加入對甲基磺醯氯(558 mg, 2.93 mmol)，10℃攪拌3小時。LCMS偵測反應完全後，直接加入矽膠，油泵旋乾混合之樣品，經過管柱機(二氯甲烷100%)層析純化得到黃色油狀物4-甲基苯磺酸-6,6-二氟-4-甲基-3-側氧基-1-苯基-4-氮雜-2-氧雜辛-8-基酯(370 mg, 收率59 %)。LCMS: m/z (ESI): 428.2 [M+H] +, t R= 1.44 min。
步驟五：將7-[二甲基(側氧基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1 S,3 S)-3-胺基環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1 H-吲哚-6-甲酸甲酯(426 mg, 0.86 mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(7 mL)中，加入4-甲基苯磺酸-6,6-二氟-4-甲基-3-側氧基-1-苯基-4-氮雜-2-氧雜辛-8-基酯(350 mg, 0.82 mmol)及N,N-二異丙基乙胺(0.68 mL, 4.09 mmol)。100℃攪拌16小時。LCMS偵測反應完全後，加矽膠油泵旋乾混合之樣品，經過管柱機(二氯甲烷:甲醇=100:6)層析純化得到黃色固體7-[二甲基(側氧基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1 S,3 S)-3-[(6,6-二氟-4-甲基-3-側氧基-1-苯基-4-氮雜-2-氧雜辛-8-基)胺基]環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1 H-吲哚-6-甲酸甲酯(350 mg, 收率57%)。LCMS: m/z (ESI): 751.3 [M+H] +, t R= 1.15 min。
步驟六：將7-[二甲基(側氧基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1 S,3 S)-3-[(6,6-二氟-4-甲基-3-側氧基-1-苯基-4-氮雜-2-氧雜辛-8-基)胺基]環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1 H-吲哚-6-甲酸甲酯(330 mg, 0.46 mmol)溶於水(3 mL)、甲醇(3 mL)及四氫呋喃(3 mL)之混合體系中，加入一水合氫氧化鋰(96.6 mg, 2.30 mmol)，40℃攪拌16小時。LCMS偵測反應完全後，直接濃縮，得7-[二甲基(側氧基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1 S,3 S)-3-[(6,6-二氟-4-甲基-3-側氧基-1-苯基-4-氮雜-2-氧雜辛-8-基)胺基]環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1 H-吲哚-6-甲酸，無需任何處理直接用於下一步反應。LCMS: m/z (ESI): 737.4 [M+H] +, t R= 1.43 min。
步驟七：向7-[二甲基(側氧基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1 S,3 S)-3-[(6,6-二氟-4-甲基-3-側氧基-1-苯基-4-氮雜-2-氧雜辛-8-基)胺基]環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1 H-吲哚-6-甲酸(350 mg, 0.48 mmol)中加入三氟乙酸(5 mL)。60℃攪拌1.5小時，LCMS偵測完全後，濃縮，粗物質經反相製備(層析管柱：Ultimate XB-C18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02), 流動相：乙腈-水(0.1%三氟醋酸), 流速：70 mL/min, 管柱溫：25℃)得白色固體7-[二甲基(側氧基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1 S,3 S)-3-{[3,3-二氟-4-(甲基胺基)丁基]胺基}環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1 H-吲哚-6-甲酸(215 mg, 兩步收率81%)。LCMS: m/z (ESI): 603.2 [M+H] +, t R= 0.78 min。
步驟八：向7-[二甲基(側氧基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1 S,3 S)-3-{[3,3-二氟-4-(甲基胺基)丁基]胺基}環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1 H-吲哚-6-甲酸(215 mg, 0.36 mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(10 mL)溶液中依次加入2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(149 mg, 0.39 mmol)及N,N-二異丙基乙胺(0.30 mL, 1.78 mmol)。60℃攪拌16 h，LCMS偵測反應完全，濃縮，粗物質經反相製備(層析管柱：Ultimate XB-C18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02), 流動相：乙腈-水(0.1%三氟醋酸), 流速：70 mL/min, 管柱溫：25℃)得(4 1S,4 3S)-1 7-(二甲基磷醯基)-8,8-二氟-10-甲基-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮雜-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-環戊烷環十一烷-11-酮(4 1S,4 3S)-1 7-(dimethylphosphoryl)-8,8-difluoro-10-methyl-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,10-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacycloundecaphan-11-one (Z66, 22 mg, 收率11%,三氟乙酸鹽)。LCMS: m/z (ESI): 585.2 [M+H] +, t R= 0.87 min。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD): δ 8.45-8.65 (m, 2H), 7.93 (s, 1H), 7.26 (s, 1H), 4.00-4.38 (m, 1H), 3.96-3.47 (m, 3H), 3.25 (s, 3H), 3.01-2.52 (m, 3H), 2.52-2.09 (m, 4H), 2.08-1.51 (m, 9H)。
實施例 30 化合物 Z65 之合成 步驟一：在一個10 mL單口瓶中，向(4 1S,4 3S)-1 7-(二甲基磷醯基)-8,8-二氟-10-甲基-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮雜-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-環戊烷環十一烷-11-酮(14 mg, 0.02 mmol,三氟乙酸鹽)之四氫呋喃(3 mL)溶液中依次加入多聚甲醛(9 mg, 0.10 mmol)及鈦酸四異丙酯(28 mg, 0.10 mmol)。70℃攪拌14小時，將反應液降至25℃，加入氰基硼氫化鈉(4 mg, 0.06 mmol)，25℃攪拌2小時。LCMS偵測反應完全後，反應液濃縮，粗物質經反相製備(層析管柱：Ultimate XB-C18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02), 流動相：乙腈-水(0.1%三氟醋酸), 流速：70 mL/min, 管柱溫：25℃)得(4 1S,4 3S)-1 7-(二甲基磷醯基)-8,8-二氟-5,10-二甲基-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮雜-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-環戊烷環十一烷-11-酮(4 1S,4 3S)-1 7-(dimethylphosphoryl)-8,8-difluoro-5,10-dimethyl-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,10-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacycloundecaphan-11-one (Z65, 2 mg, 收率14%,三氟乙酸鹽)。LCMS: m/z (ESI): 599.2 [M+H] +, t R= 1.31 min。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD): δ 8.86 - 8.41 (m, 2H), 8.00 (s, 1H), 7.23 (dd, J= 8.0, 3.2 Hz, 1H), 4.28 - 4.06 (m, 1H), 3.92-3.76 (m, 1H), 3.68-3.47 (m, 2H), 3.25 (s, 3H), 2.90-2.77 (m, 1H), 2.46-2.38 (m, 1H), 2.33-2.16 (m, 5H), 2.13 - 1.94 (m, 6H), 1.90 - 1.86 (m, 3H), 1.78 - 1.55 (m, 3H)。
實施例 31 化合物 Z72 及 Z75 之合成 步驟一：在室溫條件下向7-溴-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(2.0 g, 7.9 mmol)之二甲基亞碸(15 mL)溶液中加入L-脯胺酸(0.18 g, 1.6 mmol)、碘化亞酮(0.95 g, 0.8 mmol)及甲基亞硫酸鈉(1.1 g, 9.5 mmol)。氮氣保護下於90℃攪拌反應16小時。LCMS偵測反應完全後，向反應液中緩慢加入飽和氯化銨水溶液(30 mL)淬滅，且用乙酸乙酯(30 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水洗滌3次，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮。得到的粗物質經矽膠管柱(石油醚/乙酸乙酯=30/1~2/1)層析純化，得到白色固體7-(甲磺醯基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(1.4 g, 收率70%)。LCMS: m/z (ESI): 254.0 [M+H] +, t R= 1.10 min。
步驟二：在室溫下向7-(甲磺醯基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(1.4 g, 5.5 mmol)之N,N二甲基甲醯胺(15 mL)溶液中加入N-碘代丁二醯亞胺(1.5 g, 6.6 mmol)。該反應液在氮氣保護下在室溫攪拌16小時。LCMS偵測反應完全後，反應液加水(30 mL)，接著用乙酸乙酯(30 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮。得到的粗物質經矽膠管柱(石油醚/乙酸乙酯=20/1~1:1)層析純化，得到3-碘-7-(甲磺醯基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(1.8 g, 收率86%)。LCMS: m/z (ESI): 380.0 [M+H] +, t R= 1.25 min。
步驟三：在室溫條件下，向封管中依次加入3-碘-7-(甲磺醯基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(1.8 g, 4.7 mmol)、三(二伸苄基丙酮)二鈀(0.44 g, 0.47 mmol)、2-二環己基膦-2,4,6-三異丙基聯苯(0.45 g, 0.94 mmol)、頻哪醇硼烷(0.91 g, 7.1 mmol)、三乙胺(1.4 g, 14.1 mmol)及四氫呋喃(15 mL)溶液。氮氣保護下於90℃攪拌16小時。LCMS偵測反應完全後，反應液直接旋蒸濃縮得到粗物質，粗物質經矽膠管柱(石油醚/乙酸乙酯=10/1~2/1)層析純化，得到白色固體甲基7-(甲磺醯基)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼戊烷-2-基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(1.1 g, 收率61%).LCMS: m/z (ESI): 380.2 [M+H] +, t R= 1.35 min。
步驟四：在室溫條件下，向乾燥之50 mL單口瓶中依次加入甲基7-(甲磺醯基)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼戊烷-2-基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(1.1 g, 2.9 mmol)、氯[(正丁基二(1-金剛烷基)膦)-2-(2-胺基聯苯)]鈀(II) (0.19 g, 0.29 mmol)、磷酸鉀(1.8 g, 8.7 mmol)、三級丁基((1S, 3S)-3-((4-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)胺基)環戊基)胺基甲酸酯(1.1 g, 2.9 mmol)、四氫呋喃(25 mL)及水(5 mL)之混合溶液。該反應在氮氣保護下於60℃攪拌16小時。LCMS偵測反應完全後，反應液直接旋蒸濃縮得到粗物質，粗物質經矽膠管柱(石油醚/乙酸乙酯=10/1~0/1)層析純化，得到白色固體甲基3-(2-((1S, 3S)-3-((三級丁氧羰基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(甲磺醯基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(0.57 g, 收率33%)。LCMS: m/z (ESI): 598.2 [M+H] +, t R= 1.38 min。
步驟五：室溫下，將甲基3-(2-((1S, 3S)-3-((三級丁氧羰基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(甲磺醯基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(570 mg, 0.95 mmol)溶於氯化氫/乙酸乙酯(5 mL, 4 M)及乙酸乙酯(3 mL)之混合溶液中，30℃下反應16小時。LCMS偵測反應完全後，反應液加入飽和碳酸氫鈉溶液(30 mL)，接著用二氯甲烷(20 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮，得到的粗物質經過管柱機(二氯甲烷/甲醇=20:1)層析純化，得到白色固體3-(2-((1S,3S)-3-胺基環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(甲磺醯基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(300 mg, 收率64%)。LCMS: m/z (ESI): 498.3 [M+H] +, t R= 1.12 min。
步驟六：室溫下，向3-(2-((1S,3S)-3-胺基環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(甲磺醯基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(300 mg, 0.60 mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(10 mL)溶液中依次加入三級丁基(2-(2-碘乙氧基)乙基)(甲基)胺基甲酸酯(197 mg, 0.60 mmol)及N,N-二異丙基乙胺(310 mg, 2.40 mmol)，80℃攪拌16小時。LCMS偵測反應完全後，反應液加入飽和碳酸氫鈉溶液(30 mL)，接著用乙酸乙酯(20 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮，得到的粗物質經過管柱機(二氯甲烷/甲醇=30:1)層析純化，得到白色固體甲基3-(2-((1S,3S)-3-((2-(2-((三級丁氧羰基)(甲基)胺基)乙氧基)乙基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(甲基磺醯基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(180 mg, 收率43%)。LCMS: m/z (ESI): 699.4 [M+H] +, t R= 1.29 min。
步驟七：將甲基3-(2-((1S,3S)-3-((2-(2-((三級丁氧羰基)(甲基)胺基)乙氧基)乙基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(甲基磺醯基)-1H-吲哚-6-羧酸酯(180 mg, 0.26 mmol)溶於水(3 mL)、甲醇(3 mL)及四氫呋喃(3 mL)之混合體系中，接著加入一水合氫氧化鋰(55 mg, 1.3 mmol)，40℃攪拌16小時。LCMS偵測反應完全後，將反應液用旋蒸直接旋乾，得到粗產品3-(2-((1S,3S)-3-((2-(2-((三級丁氧羰基)(甲基)胺基)乙氧基)乙基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(甲基磺醯基)-1H-吲哚-6-羧酸(176 mg, 收率100%)，無需任何純化直接用於下一步。LCMS: m/z (ESI): 685.3 [M+H] +, t R= 1.21 min。
步驟八：將3-(2-((1S,3S)-3-((2-(2-((三級丁氧羰基)(甲基)胺基)乙氧基)乙基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(甲基磺醯基)-1H-吲哚-6-羧酸(176 mg, 0.26 mmol)溶於甲醇(5 mL)中，接著加入鹽酸/甲醇(5 mL, 4 M)，40℃攪拌16小時。LCMS偵測反應完全後，反應液濃縮，得到的粗物質經反相製備(層析管柱：Ultimate XB-C18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02), 流動相：乙腈-水(0.1%三氟醋酸), 流速：70 mL/min, 管柱溫：25℃)，得到白色固體3-(2-((1S,3S)-3-((2-(甲胺基)乙氧基)乙基)胺基)環戊基胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(甲磺醯基)-1H-吲哚-6-羧酸(110 mg, 收率72%,三氟乙酸鹽)。LCMS: m/z (ESI): 585.2 [M+H] +, t R= 0.78 min。
步驟九：向3-(2-((1S,3S)-3-((2-(甲胺基)乙氧基)乙基)胺基)環戊基胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-(甲磺醯基)-1H-吲哚-6-羧酸(110 mg, 0.16 mmol,三氟乙酸鹽)之N,N-二甲基甲醯胺(10 mL)溶液中依次加入2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(61 mg, 0.16 mmol)及N,N-二異丙基乙胺(83 mg, 0.64 mmol)，60℃攪拌16 h。LCMS偵測反應完全後，反應液濃縮，得到的粗物質經反相製備(層析管柱：Ultimate XB-C18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02), 流動相：乙腈-水(0.1%三氟醋酸), 流速：70 mL/min, 管柱溫：25℃)，得到白色固體(4 1S,4 3S)-11-甲基-1 7-(甲基磺醯基)-2 5-(三氟甲基)-1 1H-8-氧雜-3,5,11-三氮雜-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-環戊烷環十二烷-12-酮(4 1S,4 3S)-11-methyl-1 7-(methylsulfonyl)-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-8-oxa-3,5,11-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacyclododecaphan-12-one (Z72, 55 mg, 收率51%,三氟乙酸鹽)。LCMS: m/z (ESI): 567.2 [M+H] +, t R= 1.12 min。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD): δ 8.59 (s, 1H), 8.34 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.39 (d, J= 8.0, 1H), 4.48 - 4.10 (m, 1H), 4.05 - 3.89 (m, 1H), 3.86-3.70 (m, 2H), 3.68-3.60 (m, 1H), 3.57 - 3.39 (m, 3H), 3.33 (s, 3H), 3.25-3.16 (m, 2H), 3.16 - 3.09 (m, 3H), 2.80 - 2.52 (m, 1H), 2.44 - 2.25 (m, 1H), 2.24 - 1.90 (m, 2H), 1.86 - 1.53 (m, 2H)。
步驟十：在一個10 mL單口瓶中，向(4 1S,4 3S)-11-甲基-1 7-(甲基磺醯基)-2 5-(三氟甲基)-1 1H-8-氧雜-3,5,11-三氮雜-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-環戊烷環十二烷-12-酮(30 mg, 0.044 mmol, 三氟乙酸鹽)之四氫呋喃(10 mL)溶液中依次加入多聚甲醛(20 mg, 0.221 mmol)及鈦酸四異丙酯(63 mg, 0.221 mmol)，該反應液在70℃攪拌14小時，將反應液降至30℃，加入氰基硼氫化鈉(41 mg, 0.660 mmol)，繼續在30℃下攪拌2小時。LCMS偵測反應完全後，反應液濃縮，得到的粗物質經反相製備(層析管柱：Ultimate XB-C18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02), 流動相：乙腈-水(0.1%三氟醋酸), 流速：70 mL/min, 管柱溫：25℃)，得到(4 1S,4 3S)-5,11-二甲基-1 7-(甲基磺醯基)-2 5-(三氟甲基)-1 1H-8-氧雜-3,5,11-三氮雜-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-環戊烷環十二烷-12-酮(4 1S,4 3S)-5,11-dimethyl-1 7-(methylsulfonyl)-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-8-oxa-3,5,11-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacyclododecaphan-12-one (Z75, 8 mg, 收率26%,三氟乙酸鹽)。LCMS: m/z (ESI): 581.2 [M+H] +, t R= 1.12 min。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD): δ 8.60 (s, 1H), 8.25 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.36 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 4.19 - 4.03 (m, 1H), 3.98-3.89 (m, 1H), 3.88 - 3.72 (m, 3H), 3.70-3.52 (m, 2H), 3.49-3.37 (m, 1H), 3.32 (s, 3H), 3.19-3.11 (m, 5H), 2.87 - 2.82 (m, 3H), 2.61 - 2.43 (m, 1H), 2.31 - 2.21 (m, 3H), 1.86-1.73 (m, 2H)。
實施例 32 化合物 Z76 、 Z77 、 Z78 、 Z79 之合成 步驟一：在15℃下，向 N-[(苄基氧基)羰基]甘胺酸(100.0 g, 478.49 mmol)之四氫呋喃(1000 mL)溶液中加入羰基二咪唑(85.3 g, 526.34 mmol)。該反應液在氮氣保護下於15℃攪拌反應18小時。接著向反應液中加入氯化鎂(22.8 g, 239.25 mmol)、丙二酸單甲酯鉀鹽(82.2 g, 526.34 mmol)。該反應液在氮氣保護下於45℃繼續攪拌反應6小時。LCMS偵測反應完全後，反應液加水(600 mL)，接著用乙酸乙酯(500 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水(500 mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮，得到的粗物質經過管柱機(石油醚/乙酸乙酯=15/1至3/1)層析純化，得到無色油狀物[(1-甲氧基-1,3-二側氧基丁-4-基)胺基]甲烷酸苄基酯(85.3 g, 收率67%)。LCMS: m/z (ESI): 220.0 [M-44+H] +, t R= 1.58 min。
步驟二：在15℃下，向[(1-甲氧基-1,3-二側氧基丁-4-基)胺基]甲烷酸苄基酯(85.3 g, 321.89 mmol)之四氫呋喃(900 mL)溶液中分批加入硼氫化鋰(14.0 g, 643.78 mmol)。該反應液在氮氣保護下於15℃攪拌反應18小時。TLC偵測反應完全後，反應液加入飽和氯化銨溶液(400 mL)，接著用乙酸乙酯(600 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水(600 mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮，得到的粗物質經過管柱機(石油醚/乙酸乙酯=5/1到1/2)層析純化，得到無色油狀物[(2,4-二羥基丁基)胺基]甲烷酸苄基酯(60.0 g, 收率78%)。
步驟三：在15℃下，向[(2,4-二羥基丁基)胺基]甲烷酸苄基酯(60.0 g, 251.05 mmol)之二氯甲烷(600 mL)溶液中加入咪唑(22.2 g, 326.37 mmol)，接著慢慢滴加三級丁基二苯基氯矽烷(69.0 g, 251.05 mmol)。該反應液在氮氣保護下於15℃攪拌反應2小時。LCMS偵測反應完全後，反應液加入飽和氯化銨溶液(400 mL)，接著用乙酸乙酯(600 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水(600 mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮，得到的粗物質經過管柱機(石油醚/乙酸乙酯=10/1到2/1)層析純化，得到無色油狀物[(7-羥基-2,2-二甲基-3,3-二苯基-4-氧雜-3-矽雜辛-8-基)胺基]甲烷酸苄基酯(88.0 g, 收率74%)。LCMS: m/z (ESI): 402.2 [M-77+H] +, t R= 1.74 min。
步驟四：將[(7-羥基-2,2-二甲基-3,3-二苯基-4-氧雜-3-矽雜辛-8-基)胺基]甲烷酸苄基酯(88.0 g, 184.49 mmol)溶於二氯甲烷(900 mL)中，接著室溫下緩慢滴加二乙胺基三氟化硫(38.7 g, 239.83 mmol)。該反應在15℃攪拌2小時。TLC偵測反應完全後，反應液加入飽和氯化銨溶液(400 mL)，接著用乙酸乙酯(600 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水(600 mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮，得到的粗物質經過管柱機(石油醚/乙酸乙酯=30/1至5/1)層析純化，得到無色油狀物[(7-氟-2,2-二甲基-3,3-二苯基-4-氧雜-3-矽雜辛-8-基)胺基]甲烷酸苄基酯(20.5 g, 收率23%)。LCMS: m/z (ESI): 502.2 [M+Na] +, t R= 1.74 min。
步驟五：將[(7-氟-2,2-二甲基-3,3-二苯基-4-氧雜-3-矽雜辛-8-基)胺基]甲烷酸苄基酯(20.5 g, 42.80 mmol)溶於四氫呋喃(150 mL)中，於室溫下分批加入鈉氫(5.1 g, 60%含量分散在礦物油中, 128.40 mmol)，接著再緩慢滴加碘甲烷(12.2 g, 85.60 mmol)。該反應在15℃攪拌12小時。LCMS偵測反應完全後，反應液加入飽和氯化銨溶液(200 mL)，接著用乙酸乙酯(200 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水(200 mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮，得到的粗物質經過管柱機(石油醚/乙酸乙酯=30/1至5/1)層析純化，得到無色油狀物(7-氟-2,2-二甲基-3,3-二苯基-9-氮雜-4-氧雜-3-矽雜癸-9-基)甲烷酸苄基酯(16.5 g, 收率78%)。LCMS: m/z (ESI): 516.2 [M+Na] +, t R= 1.85 min。
步驟六：將(7-氟-2,2-二甲基-3,3-二苯基-9-氮雜-4-氧雜-3-矽雜癸-9-基)甲烷酸苄基酯(10.0 g, 20.24 mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(60 mL)之溶液中，接著加入氟化銫(15.4 g, 101.20 mmol)，50℃攪拌8小時。LCMS偵測反應完全後，反應液加入飽和氯化銨溶液(100 mL)，接著用乙酸乙酯(100 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水(100 mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮，得到的粗物質經過管柱機(石油醚/乙酸乙酯=10/1到2/1)層析純化，得到無色油狀物[(2-氟-4-羥基丁基)(甲基)胺基]甲烷酸苄基酯(4.4 g, 收率85%)。LCMS: m/z (ESI): 256.2 [M+H] +, t R= 1.08 min。
步驟七：在室溫條件下，將[(2-氟-4-羥基丁基)(甲基)胺基]甲烷酸苄基酯(4.4 g, 17.25 mmol)溶於二氯甲烷(40 mL)之溶液中，接著依次加入咪唑(1.4 g, 20.70 mmol)、三苯基膦(5.4 g, 20.70 mmol)及單質碘(5.3 g, 20.70 mmol)。該反應在室溫下繼續攪拌2小時。LCMS偵測反應完全後，反應液加入飽和氯化銨溶液(50 mL)，接著用二氯甲烷(50 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水(50 mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮，得到的粗物質經過管柱機(石油醚/乙酸乙酯=30/1到10/1)層析純化，得到無色油狀物[(2-氟-4-碘丁基)(甲基)胺基]甲烷酸苄基酯(5.0 g, 收率79%)。LCMS: m/z (ESI): 366.0 [M+H] +, t R= 1.44 min。
步驟八：在一個250 mL單口瓶中，將7-[二甲基(側氧基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1 S,3 S)-3-胺基環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1 H-吲哚-6-甲酸甲酯(5.0 g, 10.10 mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(70 mL)中，接著加入[(2-氟-4-碘丁基)(甲基)胺基]甲烷酸苄基酯(3.7 g, 10.10 mmol)及N,N-二異丙基乙胺(5.2 g, 40.40 mmol)，100℃攪拌16小時。LCMS偵測反應完全後，直接加入矽膠，油泵旋乾混合之樣品，經過管柱機(二氯甲烷:甲醇=100:8)層析純化得到黃色固體7-[二甲基(側氧基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1 S,3 S)-3-[(6-氟-4-甲基-3-側氧基-1-苯基-4-氮雜-2-氧雜辛-8-基)胺基]環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1 H-吲哚-6-甲酸甲酯(7.0 g,收率95%)。LCMS: m/z (ESI): 733.2 [M+H] +, t R= 1.14 min。
步驟九：將7-[二甲基(側氧基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1 S,3 S)-3-[(6-氟-4-甲基-3-側氧基-1-苯基-4-氮雜-2-氧雜辛-8-基)胺基]環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1 H-吲哚-6-甲酸甲酯(7.0 g, 9.56 mmol)溶於水(20 mL)、甲醇(20 mL)及四氫呋喃(20 mL)之混合體系中，接著加入一水合氫氧化鋰(1.6 g, 38.24 mmol)，反應在40℃攪拌16小時。LCMS偵測反應完全後，油泵旋掉其中之溶劑，得到7-[二甲基(側氧基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1 S,3 S)-3-[(6-氟-4-甲基-3-側氧基-1-苯基-4-氮雜-2-氧雜辛-8-基)胺基]環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1 H-吲哚-6-甲酸(粗物質含鹽)，不經純化直接用於下一步反應。LCMS: m/z (ESI): 719.2 [M+H] +, t R= 1.09 min。
步驟十：將上步粗物質，加入三氟乙酸(30 mL)，60℃攪拌3小時，LCMS偵測完全後，反應液濃縮，得到的粗物質經反相製備(70 mL/min, 25℃, Ultimate XB-C18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02), 乙腈-水(0.1%三氟醋酸))得7-[二甲基(側氧基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1 S,3 S)-3-{[3-氟-4-(甲基胺基)丁基]胺基}環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1 H-吲哚-6-甲酸(4.0 g, 兩步收率72%, 白色固體)。LCMS: m/z (ESI): 585.2 [M+H] +, t R= 1.13 min。
步驟十一：向7-[二甲基(側氧基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1 S,3 S)-3-{[3-氟-4-(甲基胺基)丁基]胺基}環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1 H-吲哚-6-甲酸(4.0 g, 6.85 mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(60 mL)溶液中依次加入2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(2.6 g, 6.85 mmol)及N,N-二異丙基乙胺(3.6 g, 27.4 mmol)，該反應液在60℃攪拌16 h。LCMS偵測反應完全後，反應液濃縮，得到的粗物質經反相製備(層析管柱：Ultimate XB-C18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02), 流動相：乙腈-水(0.1%三氟醋酸), 流速：70 mL/min, 管柱溫：25℃)得到兩個異構體化合物。其中一個異構體化合物任意指定為(4 1S,4 3S,8R)-1 7-(二甲基磷醯基)-8-氟-10-甲基-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮雜-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-環戊烷環十一烷-11-酮(4 1S,4 3S,8R)-1 7-(dimethylphosphoryl)-8-fluoro-10-methyl-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,10-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacycloundecaphan-11-one (Z76, 0.7 g, 收率18%,三氟乙酸鹽)，類白色固體。LCMS: m/z (ESI): 567.2 [M+H] +, t R= 0.86 min。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD): δ 8.55 (s, 1H), 8.30-7.70 (m, 2H), 7.30 (m, 1H), 5.69-4.98 (m, 1H), 4.28-3.95 (m, 1H), 3.87-3.76 (m, 1H), 3.69-3.37 (m, 2H), 3.21 (s, 3H), 2.89-2.78 (m, 1H), 2.74-2.64 (m, 1H), 2.48-2.14 (m, 3H), 2.12-1.54 (m, 11H)。另一個異構體化合物任意指定為(4 1S,4 3S,8S)-1 7-(二甲基磷醯基)-8-氟-10-甲基-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮雜-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-環戊烷環十一烷-11-酮(4 1S,4 3S,8S)-1 7-(dimethylphosphoryl)-8-fluoro-10-methyl-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,10-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacycloundecaphan-11-one (Z77, 0.8 g, 收率21%,三氟乙酸鹽)，類白色固體。LCMS: m/z (ESI): 567.2 [M+H] +, t R= 0.87 min。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD): δ 8.58 (s, 1H), 8.40 (s, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.21 (dd, J= 8.0, 3.2 Hz, 1H), 5.26-4.96 (m, 1H), 4.32-3.97 (m, 1H), 3.86-3.72 (m, 1H), 3.54-3.31 (m, 2H), 3.22 (s, 3H), 2.91-2.79 (m, 1H), 2.73-2.37 (m, 2H), 2.36-2.16 (m, 2H), 2.12-1.65 (m, 11H)。
步驟十二：向(4 1S,4 3S,8R)-1 7-(二甲基磷醯基)-8-氟-10-甲基-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮雜-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-環戊烷環十一烷-11-酮(Z76, 220 mg, 0.39 mmol)之四氫呋喃(20 mL)溶液中依次加入多聚甲醛(176 mg, 1.95 mmol)及鈦酸四異丙酯(554 mg, 1.95 mmol)，該反應液在70℃攪拌16 h。接著將反應冷卻至10℃，向反應液中加入氰基硼氫化鈉(74 mg, 1.17 mmol)且繼續攪拌2小時。LCMS偵測反應完全後，反應液濃縮，得到的粗物質經反相製備(層析管柱：Ultimate XB-C18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02), 流動相：乙腈-水(0.1%三氟醋酸), 流速：70 mL/min, 管柱溫：25℃)，得到(4 1S,4 3S,8R)-1 7-(二甲基磷醯基)-8-氟-5,10-二甲基-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮雜-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-環戊烷環十一烷-11-酮(4 1S,4 3S,8R)-1 7-(dimethylphosphoryl)-8-fluoro-5,10-dimethyl-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,10-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacycloundecaphan-11-one (Z78, 45 mg, 收率20%,三氟乙酸鹽)，類白色固體。LCMS: m/z (ESI): 581.2 [M+H] +, t R= 0.92 min。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD): δ 8.57 (s, 1H), 8.24-7.73 (m, 2H), 7.27 (s, 1H), 5.46-4.85 (m, 1H), 4.49-3.80 (m, 2H), 3.80-3.46 (m, 1H), 3.27-3.09 (m, 4H), 2.83-2.66 (m, 4H), 2.58-2.47 (m, 1H), 2.45-2.21 (m, 3H), 2.13-1.65 (m, 11H)。
步驟十三：向(4 1S,4 3S,8S)-1 7-(二甲基磷醯基)-8-氟-10-甲基-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮雜-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-環戊烷環十一烷-11-酮(Z77, 200 mg, 0.35 mmol)之四氫呋喃(20 mL)溶液中依次加入多聚甲醛(158 mg, 1.75 mmol)及鈦酸四異丙酯(497 mg, 1.75 mmol)，該反應液在70℃攪拌16 h。接著將反應冷卻至10℃,向反應液中加入氰基硼氫化鈉(66 mg, 1.05 mmol)且繼續攪拌2小時。LCMS偵測反應完全後，反應液濃縮，得到的粗物質經反相製備(層析管柱：Ultimate XB-C18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02), 流動相：乙腈-水(0.1%三氟醋酸), 流速：70 mL/min, 管柱溫：25℃)，得到(4 1S,4 3S,8S)-1 7-(二甲基磷醯基)-8-氟-5,10-二甲基-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮雜-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-環戊烷環十一烷-11-酮(4 1S,4 3S,8S)-1 7-(dimethylphosphoryl)-8-fluoro-5,10-dimethyl-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,10-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacycloundecaphan-11-one (Z79, 30 mg, 收率15%,三氟乙酸鹽)。LCMS: m/z (ESI): 581.2 [M+H] +, t R= 0.92 min。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD): δ 8.57 (s, 2H), 8.22-7.91 (m, 1H), 7.56-7.05 (m, 1H), 5.27-4.99 (m, 1H), 4.37-4.19 (m, 1H), 4.07-3.82 (m, 1H), 3.74-3.44 (m, 1H), 3.41-3.35 (m, 1H), 3.24 (s, 3H), 2.88-2.64 (m, 3H), 2.57-2.44 (m, 1H), 2.40-2.23 (m, 3H), 2.16-1.64 (m, 12H)。
實施例 33 化合物 Z84 之合成 步驟一：在室溫下向7-溴-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(5.0 g, 19.8 mmol)之N,N二甲基甲醯胺(30 mL)溶液中加入N-碘代丁二醯亞胺(6.7 g, 29.7 mmol)。該反應在氮氣保護下於40℃下攪拌2小時。LCMS偵測反應完全後，反應液加入飽和氯化銨溶液(40 mL)，接著用乙酸乙酯(40 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮。得到的粗物質經矽膠管柱(石油醚/乙酸乙酯=20/1~1:1)層析純化，得到類白色固體7-溴-3-碘-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(6.5 g, 收率87%)。LCMS: m/z (ESI): 379.8 [M+H] +, t R= 1.32 min。
步驟二：在室溫條件下，向封管中依次加入7-溴-3-碘-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(6.5 g, 17.2 mmol)、三(二伸苄基丙酮)二鈀(1.6 g, 1.7 mmol)、2-二環己基膦-2,4,6-三異丙基聯苯(0.8 g, 1.7 mmol)、頻哪醇硼烷(6.5 g, 51.6 mmol)、三乙胺(5.2 g, 51.6 mmol)及四氫呋喃(60 mL)。氮氣保護下於90℃攪拌15小時。LCMS偵測反應完全後，反應液直接旋蒸濃縮得到粗物質，粗物質經矽膠管柱(石油醚/乙酸乙酯=10/1~2/1)層析純化，得到類白色固體7-溴-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼雜環戊烷-2-基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(2.4 g, 收率37%)。LCMS: m/z (ESI): 380.0 [M+H] +, t R= 1.48 min。
步驟三：在室溫條件下，向乾燥之100 mL單口瓶中依次加入7-溴-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼雜環戊烷-2-基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯(2.4 g, 6.3 mmol)、雙三苯基磷二氯化鈀(0.44 g, 0.63 mmol)、碳酸鉀(1.7 g, 12.6 mmol)、三級丁基((1S,3S)-3-((4-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)胺基)環戊基)胺基甲酸酯(2.4 g, 6.3 mmol)、二氧六環(30 mL)及水(6 mL)之混合溶液。該反應在氮氣保護下於90℃攪拌16小時。LCMS偵測反應完全後，反應液直接旋蒸濃縮得到粗物質，粗物質經矽膠管柱(石油醚/乙酸乙酯=10/1~0/1)層析純化，得到白色固體甲基7-溴-3-(2-(((1S,3S)-3-((三級丁氧羰基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸鹽(1.4 g, 收率37%)。LCMS: m/z (ESI): 598.2 [M+H] +, t R= 1.46 min。
步驟四：室溫下，將甲基7-溴-3-(2-(((1S,3S)-3-((三級丁氧羰基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸鹽(1.4 g, 2.3 mmol)溶於氯化氫/乙酸乙酯(15 mL, 4 M)及乙酸乙酯(10 mL)之混合溶液中，40℃下反應16小時。LCMS偵測反應完全後，反應液加入飽和碳酸氫鈉溶液(50 mL)，接著用二氯甲烷(40 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮，得到的粗物質經過管柱機(二氯甲烷/甲醇=20:1)層析純化，得到白色固體甲基3-(2-(((1S,3S)-3-胺基環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-溴-1H-吲哚-6-羧酸酯(0.8 g, 收率69%)。LCMS: m/z (ESI): 498.0 [M+H] +, t R= 1.08 min。
步驟五：室溫下，向甲基3-(2-(((1S,3S)-3-胺基環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-7-溴-1H-吲哚-6-羧酸酯(500 mg, 1.0 mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(10 mL)溶液中依次加入三級丁基(4-碘丁基)(甲基)胺基甲酸酯(344 mg, 1.1 mmol)及N,N-二異丙基乙胺(645 mg, 5.0 mmol)，70℃攪拌16小時。LCMS偵測反應完全後，反應液加入飽和碳酸氫鈉溶液(30 mL)，接著用乙酸乙酯(20 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮，得到的粗物質經過管柱機(二氯甲烷/甲醇=30:1)層析純化，得到白色固體甲基7-溴-3-(2-(((1S,3S)-3-((4-((三級丁氧羰基)(甲基)胺基)丁基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸鹽(60 mg, 收率9%)。LCMS: m/z (ESI): 683.2 [M+H] +, t R= 1.32 min。
步驟六：將甲基7-溴-3-(2-(((1S,3S)-3-((4-(三級丁氧羰基)(甲基)胺基)丁基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸鹽(60 mg, 0.09 mmol)溶於水(3 mL)、甲醇(3 mL)及四氫呋喃(3 mL)之混合體系中，接著加入一水合氫氧化鋰(19 mg, 0.45 mmol)，40℃攪拌6小時。LCMS偵測反應完全後，將反應液用旋蒸直接旋乾，得到粗產品7-溴-3-(2-(((1S,3S)-3-((4-((三級丁氧羰基)(甲基)胺基)丁基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸(60 mg, 收率大於100%)，粗物質無需任何純化直接用於下一步反應。LCMS: m/z (ESI): 669.2 [M+H] +, t R= 1.34 min。
步驟七：將7-溴-3-(2-(((1S,3S)-3-((4-((三級丁氧羰基)(甲基)胺基)丁基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸(60 mg, 0.09 mmol)溶於甲醇(5 mL)中，接著加入鹽酸/甲醇(5 mL, 4 M)，20℃攪拌16小時。LCMS偵測反應完全後，反應液濃縮，得到的粗物質經反相製備HPLC (層析管柱：Ultimate XB-C18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02)；流動相：乙腈-水(0.1%三氟醋酸)；流速:70 mL/min；管柱溫：25℃)純化得到白色固體7-溴-3-(2-(((1S，3S)-3-((4-(甲胺基)丁基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸(30 mg, 收率59%,三氟乙酸鹽)。LCMS: m/z (ESI): 569.3 [M+H] +, t R= 8.51 min。
步驟八：向7-溴-3-(2-(((1S,3S)-3-((4-(甲胺基)丁基)胺基)環戊基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-羧酸(30 mg, 0.053 mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(5 mL)溶液中依次加入2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(19 mg, 0.05 mmol)及N,N-二異丙基乙胺(32 mg, 0.25 mmol)。該反應於60℃攪拌18小時。LCMS偵測反應完全後，反應液濃縮，得到的粗物質經反相製備HPLC (層析管柱：Ultimate XB-C18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02)；流動相：乙腈-水(0.1%三氟醋酸)；流速：70 mL/min；管柱溫：25℃)純化得到白色固體(8 S,11 S)-20-溴-17-甲基-3-(三氟甲基)-5,7,12,17,22,28-六氮雜五環[17.4.3.1 2,6.1 8,11.0 21,24]二十八-1(23),2(3),4,6(28),19(20),21(24),25-七烯-18-酮(12 mg, 收率41%,三氟乙酸鹽)。LCMS: m/z (ESI): 551.2 [M+H] +, t R= 0.87 min。
步驟九：在一個50 mL單口瓶中，向(8 S,11 S)-20-溴-17-甲基-3-(三氟甲基)-5,7,12,17,22,28-六氮雜五環[17.4.3.1 2,6.1 8,11.0 21,24]二十八-1(23),2(3),4,6(28),19(20),21(24),25-七烯-18-酮(12 mg, 0.022 mmol,三氟乙酸鹽)之四氫呋喃(5 mL)溶液中依次加入多聚甲醛(10 mg, 0.11 mmol)及鈦酸四異丙酯(31 mg, 0.11 mmol)，該反應液在60℃攪拌14小時，將反應液降至30℃，加入氰基硼氫化鈉(7 mg, 0.11 mmol)，繼續在30℃下攪拌4小時。LCMS偵測反應完全後，反應液濃縮，得到的粗物質經反相製備HPLC (層析管柱：Ultimate XB-C18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02)；流動相：乙腈-水(0.1%三氟醋酸)；流速：70 mL/min；管柱溫：25℃)純化得到白色固體(8 S,11 S)-20-溴-12,17-二甲基-3-(三氟甲基)-5,7,12,17,22,28-六氮雜五環[17.4.3.1 2,6.1 8,11.0 21,24]二十八-1(23),2(3),4,6(28),19(20),21(24),25-七烯-18-酮(5 mg, 收率40%,三氟乙酸鹽)。LCMS: m/z (ESI): 567.2 [M+H] +, t R= 0.86 min。
步驟十：在室溫條件下，向微波管中依次加入(8 S,11 S)-20-溴-12,17-二甲基-3-(三氟甲基)-5,7,12,17,22,28-六氮雜五環[17.4.3.1 2,6.1 8,11.0 21,24]二十八-1(23),2(3),4,6(28),19(20),21(24),25-七烯-18-酮(5 mg, 0.009 mmol)、四三苯基磷鈀(2 mg, 0.002 mmol)、氰化鋅(3 mg, 0.027 mmol)及N,N-二甲基甲醯胺(1 mL)溶液。氮氣保護下於150℃微波反應1小時。LCMS偵測反應完全後，反應液濃縮，得到的粗物質經反相製備HPLC (層析管柱：Ultimate XB-C18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02)；流動相：乙腈-水；流速：70 mL/min；管柱溫：25℃)純化得到(4 1S,4 3S)-5,10-二甲基-11-氧雜-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮雜-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-環戊烷環十一烷-1 7-甲腈((4 1S,4 3S)-5,10-dimethyl-11-oxo-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,10-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacycloundecaphane-1 7-carbonitrile) (Z84, 1.6 mg, 收率35%)。LCMS: m/z (ESI): 512.2 [M+H] +, t R= 0.85 min。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD): δ 8.59 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 8.54 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.37 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 4.15-4.06 (m, 1H), 3.19-3.04 (m, 5H), 2.57-2.45 (m, 1H), 2.41-2.32 (m, 1H), 2.23-2.11 (m, 4H), 2.05-1.90 (m, 3H), 1.76-1.61 (m, 3H), 1.47-1.36 (m, 3H), 1.35-1.29 (m, 1H)。
實施例 34 化合物 Z85 ， Z86 之合成 步驟一：室溫下，向4-甲基苯磺酸-7,7-二氟-2,2,5-三甲基-4-側氧基-5-氮雜-3-氧雜壬-9-基酯(1.50 g, 3.81 mmol)之甲醇(10 mL)溶液中加入甲胺甲醇溶液(30%含量, 20 mL)及碘化鈉(60 mg, 0.38 mmol)，50℃下攪拌14小時。LCMS偵測反應完全後，反應液濃縮除去溶劑。得到的粗物質經矽膠管柱(二氯甲烷/甲醇=100/1到10/1)層析純化，得到無色油狀物(4,4-二氟-2,7-二氮雜辛-2-基)甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(1.0 g, 收率83%)。LCMS: m/z (ESI): 253.2 [M+H] +, t R= 1.09 min。
步驟二：將(4,4-二氟-2,7-二氮雜辛-2-基)甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(1.10 g, 3.49 mmol)溶於四氫呋喃(10 mL)，接著依次加入三氟乙酸乙酯(2.48 g, 17.4 mmol)及三乙胺(1.5 mL, 10.5 mmol)，50℃攪拌14小時，LCMS偵測反應完全後，向反應液中加入乙酸乙酯(30 ml)及水(20 mL)，將有機相分離，濃縮。得到的粗物質經矽膠管柱(石油醚/乙酸乙酯=100/1至5/1)層析純化，得到無色油狀物(4,4,9,9,9-五氟-7-甲基-8-側氧基-2,7-二氮雜壬-2-基)甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(660 mg, 收率54%)。LCMS: m/z (ESI): 249.1 [M+H-99] +, t R= 1.35 min。
步驟三：將(4,4,9,9,9-五氟-7-甲基-8-側氧基-2,7-二氮雜壬-2-基)甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(566 mg, 1.63 mmol)溶於二氯甲烷(5 mL)中，接著向反應液中加入三氟乙酸(1.0 mL)，25℃攪拌3小時，LCMS偵測反應完全後，向反應液中加入乙酸乙酯(10 mL)及飽和之碳酸氫鈉溶液(5 mL)，濃縮有機相得到粗物質為無色油狀物N-[3,3-二氟-4-(甲基胺基)丁基]-2,2,2-三氟-N-甲基乙醯胺(400 mg, 收率99%)，可直接用於下一步反應。LCMS: m/z (ESI): 249.2 [M+H] +, t R= 0.89 min。
步驟四：將N-[3,3-二氟-4-(甲基胺基)丁基]-2,2,2-三氟-N-甲基乙醯胺(399 mg, 1.61 mmol)溶於甲醇(5 mL)，接著依次加入{[(3S)-1-側氧基環戊-3-基]胺基}甲烷酸苄基酯(562 mg, 2.41 mmol)、4A分子篩(100 mg)、冰醋酸(2滴)，25℃攪拌2小時後，再向反應液中加入氰基硼氫化鈉(303 mg, 4.82 mmol)，繼續在25℃下攪拌14小時。LCMS偵測反應完全後，過濾除去固體雜質，得到的粗物質經反相製備HPLC (層析管柱：Ultimate XB-C18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02), 流動相：乙腈-水(0.1%三氟醋酸)；流速：70 mL/min；管柱溫：25℃)純化得到無色油狀物{[(3S)-1-(4,4,9,9,9-五氟-7-甲基-8-側氧基-2,7-二氮雜壬-2-基)環戊-3-基]胺基}甲烷酸苄基酯(380 mg, 收率50%)。LCMS: m/z (ESI): 466.4 [M+H] +, t R= 1.33 min。
步驟五：將{[(3S)-1-(4,4,9,9,9-五氟-7-甲基-8-側氧基-2,7-二氮雜壬-2-基)環戊-3-基]胺基}甲烷酸苄基酯(330 mg, 2.21 mmol)溶於甲醇(10 mL)中，向反應液中加入鈀碳(30 mg, 10%含量, 55%含水)、冰醋酸(30 mg, 0.50 mmol)，置換氫氣，25℃攪拌2小時，TLC偵測反應完全後，過濾，濃縮有機相得到粗物質為無色油狀N-(3,3-二氟-4-{[(3S)-3-胺基環戊基](甲基)胺基}丁基)-2,2,2-三氟-N-甲基乙醯胺(310 mg, 收率96%)，可直接用於下一步反應。LCMS: m/z (ESI): 332.2 [M+H] +, t R= 0.99 min。
步驟六：將N-(3,3-二氟-4-{[(3S)-3-胺基環戊基](甲基)胺基}丁基)-2,2,2-三氟-N-甲基乙醯胺(310 mg, 0.94 mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(4 ml)，向反應液中依次加入3-[2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基]-7-[二甲基(側氧基)-λ 5-甲磷基]-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(424 mg, 0.98 mmol)、N,N-二異丙基乙胺(0.77 mL, 4.68 mmol)，反應在氮氣氛圍下，130℃攪拌5小時，LCMS偵測反應完全後，向反應液加水(10 mL)，接著用乙酸乙酯(10 mL×2)萃取，合併之有機層，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮。得到的粗物質反相製備HPLC (層析管柱：Ultimate XB-C18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02), 流動相：乙腈-水(0.1%三氟醋酸)；流速：70 mL/min；管柱溫：25℃)純化得到白色固體7-[二甲基(側氧基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-(4,4,9,9,9-五氟-7-甲基-8-側氧基-2,7-二氮雜壬-2-基)環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(125 mg, 收率18%)。LCMS: m/z (ESI): 727.4 [M+H] +, t R= 1.38 min。
步驟七：將7-[二甲基(側氧基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-(4,4,9,9,9-五氟-7-甲基-8-側氧基-2,7-二氮雜壬-2-基)環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(125 mg, 0.17 mmol)溶於水(1 mL)、甲醇(3 mL)及四氫呋喃(3 mL)之混合溶劑中，加入氫氧化鋰(1個結晶水, 300 mg, 7.09 mmol)，40℃攪拌14小時。LCMS偵測反應完全後，將反應液濃縮，得到的粗物質反相製備HPLC (層析管柱：Ultimate XB-C18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02)；流動相：乙腈-水(0.1% 碳酸氫銨)；流速：70 mL/min；管柱溫：25℃)純化得到白色固體7-[二甲基(側氧基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-(4,4-二氟-2,7-二氮雜辛-2-基)環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(60 mg, 收率57%)。LCMS: m/z (ESI): 617.4 [M+H] +, t R= 1.13 min。
步驟八：向7-[二甲基(側氧基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1S,3S)-3-(4,4-二氟-2,7-二氮雜辛-2-基)環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1 H-吲哚-6-甲酸(30 mg, 0.05 mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(4 mL)溶液中依次加入N,N-二異丙基乙胺(37.7 mg, 0.29 mmol)及2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(74 mg, 0.20 mmol)，60℃攪拌14小時。LCMS偵測反應完全後，反應液濃縮，得到的粗物質經反相製備HPLC (層析管柱：Ultimate XB-C18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02)；流動相：乙腈-水(0.1% 碳酸氫銨)；流速：70 mL/min；管柱溫：25℃)純化得到(4 1S,4 3S)-1 7-(二甲基磷醯基)-7,7-二氟-5,10-二甲基-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮雜-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-環戊烷環十一烷-11-酮(4 1S,4 3S)-1 7-(dimethylphosphoryl)-7,7-difluoro-5,10-dimethyl-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,10-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacycloundecaphan-11-one (Z85, 1.51 mg, 收率5.2%)，白色固體。LCMS: m/z (ESI): 599.2 [M+H] +, t R= 0.91 min。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD): δ 8.65 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 8.51 (s, 1H), 8.02 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 7.32 (dd, J = 8.0, 3.6 Hz, 1H), 4.31 - 4.16 (m, 1H), 3.29 - 3.18 (m, 3H), 3.13 (s, 3H), 2.88 - 2.77 (m, 1H), 2.70 - 2.53 (m, 1H), 2.47 - 2.08 (m, 8H), 2.05 - 1.93 (m, 4H), 1.91 - 1.81 (m, 3H), 1.65 - 1.52 (m, 2H)。
(4 1S,4 3S)-1 7-(二甲基磷醯基)-7,7-二氟-5,10-二甲基-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮雜-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-環戊烷環十一烷-11-酮(4 1S,4 3S)-1 7-(dimethylphosphoryl)-7,7-difluoro-5,10-dimethyl-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,10-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacycloundecaphan-11-one (Z86, 1.27 mg, 收率4.4%)。LCMS: m/z (ESI): 599.3 [M+H] +, t R= 0.93 min。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD): δ 8.53 (s, 1H), 8.16 - 8.12 (m, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.24 (dd, J = 8.0, 3.2 Hz, 1H), 3.74 - 3.68 (m, 1H), 3.12 (s, 3H), 2.96 - 2.77 (m, 2H), 2.68 - 2.41 (m, 4H), 2.32 (s, 3H), 2.06 - 1.84 (m, 9H), 1.76 - 1.58 (m, 4H)。
實施例 35 化合物 Z87 、 Z88 之合成 步驟一：室溫下，向(2-氟-4-碘丁基)(甲基)胺基甲酸苄酯(2.07 g, 5.67 mmol)之甲醇(20 mL)溶液中加入甲胺甲醇溶液(30%含量, 5.87 g, 56.7 mmol)，50℃下攪拌16小時。LCMS偵測反應完全後，反應液濃縮除去溶劑。得到的粗物質經矽膠管柱(二氯甲烷/甲醇=100/1到20/1)層析純化，得到無色油狀物(4-氟-2,7-二氮雜辛基-2-基)甲酸苄酯(1.50 g, 收率98%)。LCMS: m/z (ESI): 269.2 [M+H] +, t R= 1.17 min。
步驟二：將(4-氟-2,7-二氮雜辛基-2-基)甲酸苄酯(1.50 g, 5.59 mmol)溶於二氯甲烷(20 mL)，接著依次加入4-二甲胺基吡啶(0.07 g, 0.56 mmol)、二碳酸二三級丁酯(1.46 g, 6.71 mmol)，25℃攪拌14小時，LCMS偵測反應完全後，反應液濃縮除去溶劑。得到的粗物質經矽膠管柱(二氯甲烷/甲醇=100/1到20/1)層析純化，得到無色油狀物(8-氟-2,2,5-三甲基-4-側氧基-5,10-二氮雜-3-氧雜十一烷-10-基)甲烷酸苄基酯(1.20 g, 收率58%)。LCMS: m/z (ESI): 269.2 [M+H-99] +, t R= 1.71 min。
步驟三：將(8-氟-2,2,5-三甲基-4-側氧基-5,10-二氮雜-3-氧雜十一烷-10-基)甲烷酸苄基酯(1.20 g, 3.26 mmol)溶於甲醇(20 mL)中，向反應液中加入鈀碳(120 mg, 10%含量, 55%含水)。置換氫氣，25℃攪拌14小時，LCMS偵測反應完全後，過濾，濃縮有機相得到粗物質為無色油狀物(5-氟-2,7-二氮雜辛-2-基)甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(0.70 g, 收率92%)，可直接用於下一步反應。LCMS: m/z (ESI): 235.2 [M+H] +, t R= 1.08 min。
步驟四：將(5-氟-2,7-二氮雜辛-2-基)甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(600 mg, 2.56 mmol)溶於甲醇(15 mL)，依次加入{[(3S)-1-側氧基環戊-3-基]胺基}甲烷酸苄基酯(597 mg, 2.56 mmol)、冰醋酸(30 mg, 0.50 mmol)，25℃攪拌2小時，向反應液中加入氰基硼氫化鈉(483 mg, 7.68 mmol)，繼續在25℃下攪拌16小時。LCMS偵測反應完全後，過濾，旋乾，得到的粗物質經反相製備HPLC (層析管柱：Ultimate XB-C18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02)；流動相：乙腈-水(0.1%三氟醋酸)；流速：70 mL/min；管柱溫：25℃)純化得到白色固體{7-[(3S)-3-{[(苄基氧基)羰基]胺基}環戊基]-5-氟-2,7-二氮雜辛-2-基}甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(P1, 240 mg, 收率20.7%)。LCMS: m/z (ESI): 452.3 [M+H] +, t R= 3.21 min。{7-[(3S)-3-{[(苄基氧基)羰基]胺基}環戊基]-5-氟-2,7-二氮雜辛-2-基}甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(P2, 360 mg, 收率31.1%)。LCMS: m/z (ESI): 452.3 [M+H] +, t R= 3.22 min。
步驟五：將3-胺基環戊-1-醇鹽酸鹽(10.0 g, 72.7 mmol)溶於二氯甲烷(100 mL)中，向反應液中加入苯甲氧羰醯琥珀醯亞胺(21.7 g, 87.2 mmol)、三乙胺(14.7 g, 145 mmol)。氮氣氛圍下，25℃攪拌14小時，LCMS偵測反應完全，向反應液加水(100 mL)，二氯甲烷(200 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮。得到的粗物質經矽膠管柱(二氯甲烷/甲醇=100/1到20/1)層析純化濃縮有機相得到無色油狀物[(3-羥基環戊基)胺基]甲烷酸苄基酯(9.0 g, 收率53%)。LCMS: m/z (ESI): 236.2 [M+H] +, t R= 1.26 min。
步驟六：-78℃下，向二氯甲烷(20 mL)中依次加入二甲基亞碸(1.69 g, 21.7 mmol)及草醯氯(1.38 g, 10.8 mmol)，該反應液在-78℃攪拌1 h。反應液中加入[(3-羥基環戊基)胺基]甲烷酸苄基酯(1.7 g, 7.23 mmol)，反應液繼續反應3 h，反應液中加入三乙胺(3.66 g, 36.1 mmol)。LCMS偵測反應完全，向反應液加水(30 mL)，二氯甲烷(50 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮。得到的粗物質經矽膠管柱(二氯甲烷/甲醇=100/1至30/1)層析純化濃縮有機相得到無色油狀物[(3-側氧基環戊基)胺基]甲烷酸苄基酯(1.0 g, 收率59%)。LCMS: m/z (ESI): 256.1 [M+Na] +, t R= 1.00 min。
步驟七：將{7-[(3S)-3-{[(苄基氧基)羰基]胺基}環戊基]-5-氟-2,7-二氮雜辛-2-基}甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(P1,1.00 g, 2.21 mmol)溶於甲醇(20 mL)中，向反應液中加入鈀碳(100 mg, 10%含量, 55%含水)、冰醋酸(30.0 mg, 0.50 mmol)，反應在氫氣氛圍下，25℃攪拌14小時。LCMS偵測反應完全後，過濾除去固體雜質，濃縮有機相得到粗物質為無色油狀物{7-[(3S)-3-胺基環戊基]-5-氟-2,7-二氮雜辛-2-基}甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(0.75 g, 90%純度, 收率96%)，可直接用於下一步反應。LCMS: m/z (ESI): 318.4 [M+H] +, t R= 0.99 min。
步驟八：將{7-[(3S)-3-胺基環戊基]-5-氟-2,7-二氮雜辛-2-基}甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(0.75 g, 90%純度, 2.13 mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(10 mL)中，向反應液中加入N,N-二異丙基乙胺(1.37 g 10.63 mmol)、3-[2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基]-7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(1.01 g, 2.34 mmol)。氮氣氛圍下，130℃攪拌5小時，TLC偵測反應完全後，向反應液加水(20 mL)，乙酸乙酯(30 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮。得到的粗物質經矽膠管柱(二氯甲烷/甲醇=100/1到20/1)層析純化濃縮有機相得到白色固體7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S)-3-(8-氟-2,2,5-三甲基-4-側氧基-5,10-二氮雜-3-氧雜十一烷-10-基)環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(1.01 g, 收率67%)。
步驟九：將7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S)-3-(8-氟-2,2,5-三甲基-4-側氧基-5,10-二氮雜-3-氧雜十一烷-10-基)環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(1.01 g, 1.42 mmol)溶於水(5 mL)、甲醇(5 mL)及四氫呋喃(5 mL)之混合體系中，接著加入氫氧化鋰(1個結晶水, 0.30 g, 7.09 mmol)，40℃攪拌5小時。LCMS偵測反應完全後，此反應液不經任何處理，直接應用於下一步反應。LCMS: m/z (ESI): 699.4 [M+H] +, t R= 0.93 min。
步驟十：向步驟七之反應液中加入氯化氫/甲醇溶液(10 mL, 4 M)，體系在40℃攪拌5小時。LCMS偵測反應完全後，直接將溶劑旋乾，所得粗物質經反相製備HPLC (層析管柱：Ultimate XB-C18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02)；流動相：乙腈-水(0.1% 碳酸氫銨)；流動相：70 mL/min；管柱溫：25℃)純化得到7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S)-3-(4-氟-2,7-二氮雜辛-2-基)環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(530 mg, 收率62%)呈白色固體。LCMS: m/z (ESI): 599.2 [M+H] +, t R= 0.73 min。
步驟十一：向7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S)-3-(4-氟-2,7-二氮雜辛-2-基)環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(100 mg, 0.17 mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(8 mL)溶液中依次加入N,N-二異丙基乙胺(108 mg, 0.84 mmol)及2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(254 mg, 0.67 mmol)，該反應液在60℃攪拌14 h。LCMS偵測反應完全後，反應液濃縮，得到的粗物質經反相製備(層析管柱：Ultimate XB-C18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02)；流動相：乙腈-水(0.1%三氟醋酸)；流動相：70 mL/min；管柱溫：25℃)，得到(4 1S)-1 7-(二甲基磷醯基)-7-氟-5,10-二甲基-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮雜-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-環戊烷環十一烷-11-酮((4 1S)-1 7-(dimethylphosphoryl)-7-fluoro-5,10-dimethyl-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,10-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacycloundecaphan-11-one)( Z87, 12.22 mg; 收率12.4%,三氟乙酸鹽)。LCMS: m/z (ESI): 581.3 [M+H] +, t R= 0.85 min。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD): δ 8.70 - 8.16 (m, 2H), 7.88 (s, 1H), 7.18 (dd, J = 7.6, 2.4 Hz, 1H), 4.34 - 4.08 (m, 1H), 3.96 - 3.80 (m, 1H), 3.35 - 3.25 (m, 1H), 3.14 - 3.05 (m, 2H), 3.04 (s, 3H), 2.96 - 2.81 (m, 1H), 2.71 (s, 3H), 2.48 - 2.36 (m, 1H), 2.30 - 2.12 (m, 3H), 2.06 - 1.46 (m, 11H)。
(4 1S)-1 7-(二甲基磷醯基)-7-氟-5,10-二甲基-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮雜-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-環戊烷環十一烷-11-酮((4 1S)-1 7-(dimethylphosphoryl)-7-fluoro-5,10-dimethyl-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,10-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacycloundecaphan-11-one)(Z88, 8.24 mg;三氟乙酸鹽,收率8.34%)。LCMS: m/z (ESI): 581.2 [M+H] +, t R= 0.88 min。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD): δ 8.63 - 8.39 (m, 2H), 7.92 (s, 1H), 7.21 (dd, J = 8.0, 3.2 Hz, 1H), 4.36 - 4.20 (m, 1H), 3.98 - 3.86 (m, 1H), 3.55 - 3.43 (m, 1H), 3.13 - 3.00 (m, 5H), 2.72 - 2.55 (m, 4H), 2.49 - 2.40 (m, 1H), 2.28 - 1.69 (m, 13H), 1.63 - 1.44 (m, 1H)。
實施例 36 化合物 Z89, Z90 之合成 步驟一：將{7-[(3S)-3-{[(苄基氧基)羰基]胺基}環戊基]-5-氟-2,7-二氮雜辛-2-基}甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(P2, 530 mg, 1.17 mmol)溶於甲醇(10 mL)中，接著向反應液中加入鈀碳(53 mg, 10%含量, 55%含水)、冰醋酸(30 mg, 0.50 mmol)。氫氣氛圍下，25℃攪拌14小時，LCMS偵測反應完全後，過濾除去固體雜質，濃縮有機相得到粗物質為無色油狀物{7-[(3S)-3-胺基環戊基]-5-氟-2,7-二氮雜辛-2-基}甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(380 mg, 90%純度, 收率92%)，可直接用於下一步反應。LCMS: m/z (ESI): 318.3 [M+H] +, t R= 1.01 min。
步驟二：將{7-[(3S)-3-胺基環戊基]-5-氟-2,7-二氮雜辛-2-基}甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(380 mg, 90%純度, 1.08 mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(8 mL)中，向反應液中加入N,N-二異丙基乙胺(696 mg 5.39 mmol)、3-[2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基]-7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(465 mg, 1.08 mmol)。氮氣氛圍下，130℃攪拌5小時，LCMS偵測反應完全後，向反應液加水(20 mL)，乙酸乙酯(30 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮。得到的粗物質經矽膠管柱(二氯甲烷/甲醇=100/1到20/1)層析純化得到白色固體7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S)-3-(8-氟-2,2,5-三甲基-4-側氧基-5,10-二氮雜-3-氧雜十一烷-10-基)環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(440 mg, 收率57%)。LCMS: m/z (ESI): 713.3 [M+H] +, t R= 1.34 min。
步驟三：將7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S)-3-(8-氟-2,2,5-三甲基-4-側氧基-5,10-二氮雜-3-氧雜十一烷-10-基)環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(330 mg, 0.46 mmol)溶於水(3 mL)、甲醇(3 mL)及四氫呋喃(3 mL)之混合體系中，加入氫氧化鋰(1個結晶水, 97 mg, 2.32 mmol)，反應在40℃攪拌5小時。LCMS偵測反應完全後，此反應液不經任何處理，直接應用於下一步反應。LCMS: m/z (ESI): 699.3 [M+H] +, t R= 1.22 min。
步驟四：向步驟三之反應液中加入氯化氫/甲醇溶液(8 mL, 4 M)，體系在40℃攪拌5小時。LCMS偵測反應完全後，直接將溶劑旋乾，得到的粗物質經反相製備HPLC (層析管柱：Ultimate XB-C18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02)；流動相：乙腈-水(0.1% 碳酸氫銨)；流速：70 mL/min；管柱溫：25℃)純化得到7-[二甲基(側氧基)-λ5-甲磷基]-3-(2-{[(1S)-3-(4-氟-2,7-二氮雜辛-2-基)環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(190 mg, 收率74%)，呈白色固體。LCMS: m/z (ESI): 599.4 [M+H] +, t R= 0.72 min。
步驟五：向7-[二甲基(側氧基)-λ 5-甲磷基]-3-(2-{[(1S)-3-(4-氟-2,7-二氮雜辛-2-基)環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吲哚-6-甲酸(100 mg, 0.17 mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(8 mL)溶液中依次加入N,N-二異丙基乙胺(172 mg, 1.33 mmol)及2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(254 mg, 0.67 mmol)，該反應液在60℃攪拌14小時。LCMS偵測反應完全後，反應液濃縮，得到的粗物質經反相製備HPLC (層析管柱：Ultimate XB-C18, 50×250 mm, 10 μm (PARP-02)；流動相：乙腈-水(0.1%三氟醋酸)；流速：70 mL/min；管柱溫：25℃)純化得到產物(P1與P2,三氟乙酸鹽)，分別將得到的產物用乙酸乙酯溶解，依次用飽和碳酸氫鈉溶液及飽和食鹽水洗滌，將有機相濃縮，凍乾得到(4 1S)-1 7-(二甲基磷醯基)-7-氟-5,10-二甲基-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮雜-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-環戊烷環十一烷-11-酮(4 1S)-1 7-(dimethylphosphoryl)-7-fluoro-5,10-dimethyl-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,10-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacycloundecaphan-11-one (Z89, 17.0 mg; 收率17.21%)。LCMS: m/z (ESI): 581.1 [M+H] +, t R= 0.73 min。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD): δ 8.55 (s, 1H), 8.10 - 7.90 (m, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.31 - 7.20 (m, 1H), 4.73 - 4.47 (m, 1H), 3.92 - 3.59 (m, 1H), 3.29 - 2.98 (m, 5H), 2.84 (m, 2H), 2.58 - 2.46 (m, 1H), 2.38 - 2.17 (m, 4H), 2.16 - 1.95 (m, 5H), 1.92 - 1.72 (m, 6H), 1.67 - 1.54 (m, 2H)。
(4 1S)-1 7-(二甲基磷醯基)-7-氟-5,10-二甲基-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮雜-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-環戊烷環十一烷-11-酮((4 1S)-1 7-(dimethylphosphoryl)-7-fluoro-5,10-dimethyl-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,10-triaza-1(3,6)-indola-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacycloundecaphan-11-one)( Z90, 15.0 mg; 收率15.18%)。LCMS: m/z (ESI): 581.3 [M+H] +, t R= 0.76 min。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3): δ 11.76 (s, 1H), 8.60 - 8.45 (m, 2H), 8.00 - 7.90 (m, 1H), 7.13 (s, 1H), 6.00 - 5.50 (br, 1H), 4.55 - 4.45 (s, 1H), 3.15 - 3.10 (m, 2H), 2.99 - 2.90 (m, 3H), 2.60 - 2.20 (m, 6H), 2.13 - 1.82 (m, 15H)。
實施例 37 化合物 Z91 之合成 步驟一：在25 mL微波管中，依次加入6-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(1.0 g, 6.55 mmol)、N-甲基吡咯啶酮(15 mL)、氰化鋅(0.77 g, 6.55 mmol)、四(三苯基膦)鈀(0.76 g, 0.66 mmol)及鋅粉(0.21 g, 3.28 mmol)，微波150℃反應6小時。LCMS偵測反應完全後，反應液加水(20 mL)，乙酸乙酯(30 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮，得到的粗物質經矽膠管柱(石油醚/乙酸乙酯=1.5/1)層析純化，得到類白色固體1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-6-甲腈(250 mg, 收率26 %)。LCMS: m/z (ESI): 144.2 [M+H] +, t R= 1.20 min。
步驟二：向1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-6-甲腈(1.20 g, 8.38 mmol)之N,N二甲基甲醯胺(25 mL)溶液中加入N-碘代丁二醯亞胺(2.26 g, 10.1 mmol)。氮氣保護下在45℃攪拌2小時。LCMS偵測反應完全後，反應液加水(50 mL)，乙酸乙酯(50 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮。得到的粗物質經矽膠管柱(石油醚/乙酸乙酯=4/1)層析純化，得到褐色固體3-碘-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-6-甲腈(1.87 g, 收率83%)。LCMS: m/z (ESI): 270.0 [M+H] +, t R= 1.49 min。
步驟三：室溫下向3-碘-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-6-甲腈(1.87 g, 6.95 mmol)之二氯甲烷(25 mL)溶液中加入三乙胺(1.76 g, 17.4 mmol)、4-二甲胺基吡啶(0.17 g, 1.39 mmol)及二碳酸二三級丁酯(2.28 g, 10.4 mmol)。室溫攪拌14小時。LCMS偵測反應完全後，反應液加水(50 mL)，接著用乙酸乙酯(50 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮。粗物質經矽膠管柱(石油醚/乙酸乙酯=10/1)層析純化，得到黃色固體6-氰基-3-碘吡咯并[2,3-b]吡啶-1-甲酸-2-甲基丙-2-基酯(1.90 g, 收率74 %)。LCMS: m/z (ESI): 314.0 [M+H-56] +, t R= 1.77 min。
步驟四：室溫下向封管中依次加入6-氰基-3-碘吡咯并[2,3-b]吡啶-1-甲酸-2-甲基丙-2-基酯(1.90 g, 5.15 mmol)、三(二伸苄基丙酮)二鈀(470 mg, 0.515 mmol)、四氫呋喃(20 mL)、2-二環己基磷-2',4',6'-三異丙基聯苯(242 mg, 0.515 mmol)、三乙胺(1.56 g, 15.4 mmol)及4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷(1.98 g, 15.4 mmol)。氮氣保護下90℃攪拌14小時。LCMS偵測反應完全後，反應液加水(20 mL)，乙酸乙酯(20 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮，粗物質經矽膠管柱(石油醚/乙酸乙酯=5/1)層析純化，得到白色固體6-氰基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊-2-基)吡咯并[2,3-b]吡啶-1-甲酸-2-甲基丙-2-基酯(1.30 g, 收率68%)。LCMS: m/z (ESI): 314.4 [M+H-56] +, t R= 1.61 min。
步驟五：室溫下向6-氰基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊-2-基)吡咯并[2,3-b]吡啶-1-甲酸-2-甲基丙-2-基酯(1.30 g, 3.52 mmol)之四氫呋喃(13 mL)溶液中，加入{[(1S,3S)-3-{[4-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]胺基}環戊基]胺基}甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(1.34 g, 3.52 mmol)、氯[(正丁基二(1-金剛烷基)膦)-2-(2-胺基聯苯)]鈀(II) (0.24 g, 0.352 mmol)及磷酸鉀(2.24 g, 10.6 mmol)之水溶液(3 mL)。該反應液在氮氣保護下60℃攪拌16小時。LCMS偵測反應完全後，反應液加水(20 mL)，接著用乙酸乙酯(20 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮，得到的粗物質經矽膠管柱(石油醚/乙酸乙酯=2:1)層析純化，得到類白色固體6-氰基-3-(2-{[(1S,3S)-3-({[(2-甲基丙-2-基)氧基]羰基}胺基)環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)吡咯并[2,3-b]吡啶-1-甲酸-2-甲基丙-2-基酯(1.20 g, 收率58%)。LCMS: m/z (ESI): 588.2 [M+H] +, t R= 1.88 min。
步驟六：室溫下向6-氰基-3-(2-{[(1S,3S)-3-({[(2-甲基丙-2-基)氧基]羰基}胺基)環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)吡咯并[2,3-b]吡啶-1-甲酸-2-甲基丙-2-基酯(700 mg, 1.20 mmol)之二氯甲烷(10 mL)溶液中加入三氟乙酸(2 mL)，反應液在25℃反應2小時。LCMS偵測反應完全後，用飽和碳酸氫鈉溶液(10 mL)調節pH至8左右，乙酸乙酯(50 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮，得到的粗物質經矽膠管柱層析(水/甲醇=5:1)純化，得到黃色固體6-氰基-3-(2-{[(1S,3S)-3-胺基環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)吡咯并[2,3-b]吡啶-1-甲酸-2-甲基丙-2-基酯(450 mg, 收率98%)。LCMS: m/z (ESI): 388.2 [M+H] +, t R= 1.18 min。
步驟七：室溫下向6-氰基-3-(2-{[(1S,3S)-3-胺基環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)吡咯并[2,3-b]吡啶-1-甲酸-2-甲基丙-2-基酯(300 mg, 0.774 mmol)之N-甲基吡咯啶酮(5 mL)中，依次加入(1-碘-6-氮雜-3-氧雜庚-6-基)甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(255 mg, 0.77 mmol)及N,N-二異丙基乙胺(0.384 mL, 2.32 mmol)，反應在80℃攪拌16小時。LCMS偵測反應完全後，反應液加水(30 mL)，乙酸乙酯(50 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮，得到的粗物質經矽膠管柱(二氯甲烷/甲醇=10:1)層析純化，得到黃色油狀物(1-{[(1S,3S)-3-{[4-(6-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]胺基}環戊基]胺基}-6-氮雜-3-氧雜庚-6-基)甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(75 mg, 收率17%)。LCMS: m/z (ESI): 589.4 [M+H] +, t R= 1.45 min。
步驟八：室溫下向(1-{[(1S,3S)-3-{[4-(6-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]胺基}環戊基]胺基}-6-氮雜-3-氧雜庚-6-基)甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(130 mg, 0.221 mmol)之甲醇(5 mL)溶液中，加入多聚甲醛(100 mg, 1.11 mmol)、醋酸(0.1 mL)、4A分子篩(130 mg)，氮氣保護下25℃攪拌2小時。再向反應液中加入氰基硼氫化鈉(41.7 mg, 0.663 mmol)繼續反應14小時。LCMS偵測反應完全後，直接過濾濃縮。得到的粗物質經矽膠管柱(二氯甲烷/甲醇=10:1)層析純化，得到黃色油狀物{8-[(1S,3S)-3-{[4-(6-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]胺基}環戊基]-2,8-二氮雜-5-氧雜壬-2-基}甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(100 mg, 收率75%)。LCMS: m/z (ESI): 603.4 [M+H] +, t R= 1.10 min。
步驟九：室溫下向{8-[(1S,3S)-3-{[4-(6-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]胺基}環戊基]-2,8-二氮雜-5-氧雜壬-2-基}甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(100 mg, 0.167 mmol)之醋酸(4 mL)溶液中加入濃鹽酸(2 mL)，反應液在120℃下攪拌16小時。LCMS偵測反應完全後，直接將溶劑旋乾，得到粗物質經反相製備HPLC (層析管柱：Ultimate XB-C18-08, 25×150 mm, 10 μm (PARP-02)；流動相：乙腈-水(0.1% NH 4HCO 3)；流速：25 mL/min；管柱溫：25℃)純化得到3-(2-{[(1S,3S)-3-(2,8-二氮雜-5-氧雜壬-2-基)環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-6-甲酸(30 mg, 收率35%)。LCMS: m/z (ESI): 522.2 [M+H] +, t R= 1.06 min。
步驟十：向3-(2-{[(1S,3S)-3-(2,8-二氮雜-5-氧雜壬-2-基)環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-6-甲酸(15 mg, 0.029 mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(3 mL)溶液中，依次加入N,N-二異丙基乙胺(0.048 mL, 0.29 mmol)及2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(54.7 mg, 0.144 mmol)，該反應液在60℃攪拌4 h。LCMS偵測反應完全後，反應液濃縮，得到的粗物質經反相製備HPLC (層析管柱：Ultimate XB-C18-08, 25×150 mm, 10 μm (PARP-02)；流動相：乙腈-水(0.1% NH 4HCO 3)；流速：25 mL/min；管柱溫：25℃)純化得到(4 1S,4 3S)-5,11-二甲基-2 5-(三氟甲基)-1 1H-8-氧雜-3,5,11-三氮雜-1(3,6)-吡咯并[2,3-b]吡啶-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-環戊烷環十二烷-12-酮(4 1S,4 3S)-5,11-dimethyl-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-8-oxa-3,5,11-triaza-1(3,6)-pyrrolo[2,3-b]pyridina-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacyclododecaphan-12-one (Z91, 2.5 mg, 收率17%)。LCMS: m/z (ESI): 504.2 [M+H] +, t R= 0.77 min。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD): δ 8.66 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.50 (s, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.41 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.31 - 4.13 (m, 1H), 3.71 - 3.36 (m, 5H), 3.22 (m, 2H), 3.15 (s, 3H), 2.72 - 2.56 (m, 1H), 2.46 - 2.26 (m, 2H), 2.16 (s, 3H), 2.14 - 2.08 (m, 1H), 2.00 (m, 1H), 1.70 - 1.53 (m, 3H)。
實施例 38 化合物 Z92 之合成 步驟一：室溫下，向3-(2-{[(1S,3S)-3-胺基環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-6-甲腈(220 mg, 0.57 mmol)之N -甲基吡咯啶酮(5 mL)中，依次加入[(4-碘丁基)(甲基)胺基]甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(178 mg, 0.57 mmol)及N,N-二異丙基乙胺(147 mg, 1.14 mmol)。130℃攪拌16小時，LCMS偵測反應完全後，反應液加水(30 mL)，乙酸乙酯(50 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮，得到的粗物質經矽膠管柱(二氯甲烷/甲醇=10:1)層析純化，得到黃色油狀物[(4-{[(1S,3S)-3-{[4-(6-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]胺基}環戊基]胺基}丁基)(甲基)胺基]甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(70.0 mg, 收率22%)。LCMS: m/z (ESI): 573.4 [M+H] +, t R= 1.45 min。
步驟二：室溫下，向[(4-{[(1S,3S)-3-{[4-(6-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]胺基}環戊基]胺基}丁基)(甲基)胺基]甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(120 mg, 0.21 mmol)之甲醇(6 mL)溶液中，加入多聚甲醛(94.0 mg, 1.05 mmol)、醋酸(30.0 mg)、4A分子篩(120 mg)，反應在氮氣保護下25℃攪拌2.0小時。再向反應液中加入氰基硼氫化鈉(40.0 mg, 0.63 mmol)繼續反應14小時。LCMS偵測反應完全後，直接過濾濃縮。得到的粗物質經矽膠管柱(二氯甲烷/甲醇=10:1)層析純化，得到黃色油狀物{7-[(1S,3S)-3-{[4-(6-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]胺基}環戊基]-2,7-二氮雜辛-2-基}甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(120 mg, 收率98%)。LCMS: m/z (ESI): 587.0 [M+H] +, t R= 1.13 min。
步驟三：在室溫下，向{7-[(1S,3S)-3-{[4-(6-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]胺基}環戊基]-2,7-二氮雜辛-2-基}甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(110 mg, 0.19 mmol)之醋酸(4 mL)溶液中加入濃鹽酸(2 mL)，120℃攪拌14小時。LCMS偵測反應完全後，直接將溶劑旋乾，得到粗物質經反相製備HPLC (層析管柱：Ultimate XB-C18-08, 25×150 mm, 10 μm (PARP-02)；流動相乙腈-水(0.1% NH 4HCO 3)；流速：25 mL/min；管柱溫：25℃)純化得到白色固體3-(2-{[(1S,3S)-3-{[4-(甲基胺基)丁基]胺基}環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-6-甲酸(54 mg, 收率57%)。LCMS: m/z (ESI): 506.2 [M+H] +, t R= 0.96 min。
步驟四：向3-(2-{[(1S,3S)-3-{[4-(甲基胺基)丁基]胺基}環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-6-甲酸(40.0 mg, 0.08 mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(5 mL)溶液中，依次加入N,N-二異丙基乙胺(51.0 mg, 0.40 mmol)及2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(36.0 mg, 0.10 mmol)，該反應液在60℃攪拌16小時。LCMS偵測反應完全後，反應液濃縮，得到的粗物質經反相製備HPLC (層析管柱：Ultimate XB-C18-08, 25×150 mm, 10 μm (PARP-02)；流動相乙腈-水(0.1% NH 4HCO 3)；流速：25 mL/min；管柱溫：25℃)純化得到(4 1S,4 3S)-5,10-二甲基-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮雜-1(3,6)-吡咯并[2,3-b]吡啶-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-環戊烷環十一烷-11-酮(4 1S,4 3S)-5,10-dimethyl-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,10-triaza-1(3,6)-pyrrolo[2,3-b]pyridina-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacycloundecaphan-11-one (Z92, 4.70 mg, 收率12%)。LCMS: m/z (ESI): 488.2 [M+H] +, t R= 0.77 min。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD): δ 8.77 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.44 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.26 - 4.07 (m, 1H), 3.33 - 3.27 (m, 1H), 3.17 (s, 3H), 3.14 - 2.98 (m, 2H), 2.55 - 2.27 (m, 2H), 2.25 - 2.10 (m, 4H), 2.09 - 1.84 (m, 3H), 1.80 - 1.63 (m, 3H), 1.54 - 1.43 (m, 1H), 1.42 - 1.27 (m, 2H)。
實施例 39 化合物 Z93 之合成 步驟一：室溫下，向6-氰基-3-(2-{[(1S,3S)-3-胺基環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)吡咯并[2,3-b]吡啶-1-甲酸-2-甲基丙-2-基酯(2.0 g, 5.16 mmol)之N -甲基吡咯啶酮(20 mL)溶液中，依次加入4-甲基苯磺酸-7,7-二氟-2,2,5-三甲基-4-側氧基-5-氮雜-3-氧雜壬-9-基酯(2.44 g, 6.20 mmol)、碘化鈉(0.15 g, 1.03 mmol)及N,N-二異丙基乙胺(2.56 mL, 15.49 mmol)，反應在80℃攪拌16小時。LCMS偵測反應完全後，反應液加水(50 mL)，乙酸乙酯(100 mL×3)萃取，合併之有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮，得到的粗物質經矽膠管柱(二氯甲烷/甲醇=10:1)層析純化，得到黃色油狀物[(2,2-二氟-4-{[(1S,3S)-3-{[4-(6-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]胺基}環戊基]胺基}丁基)(甲基)胺基]甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(480 mg, 收率15%)。LCMS: m/z (ESI): 609.5 [M+H] +, t R= 1.33 min。
步驟二：室溫下，向[(2,2-二氟-4-{[(1S,3S)-3-{[4-(6-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]胺基}環戊基]胺基}丁基)(甲基)胺基]甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(480 mg, 0.789 mmol)之甲醇(5 mL)溶液中，加入多聚甲醛(118 mg, 3.95 mmol)、醋酸(0.1 mL)、4A分子篩(480 mg)，反應在氮氣保護下25℃攪拌2.0小時。再向反應液中加入氰基硼氫化鈉(149 mg, 2.37 mmol)繼續反應14小時。LCMS偵測反應完全後，直接過濾濃縮。得到的粗物質經矽膠管柱(二氯甲烷/甲醇=10:1)層析純化，得到黃色油狀物{7-[(1S,3S)-3-{[4-(6-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]胺基}環戊基]-4,4-二氟-2,7-二氮雜辛-2-基}甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(330 mg, 收率67%)。LCMS: m/z (ESI): 623.3 [M+H] +, t R= 1.12 min。
步驟三：在室溫下，向{7-[(1S,3S)-3-{[4-(6-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]胺基}環戊基]-4,4-二氟-2,7-二氮雜辛-2-基}甲烷酸-2-甲基丙-2-基酯(330 mg, 0.53 mmol)之醋酸(2 mL)溶液中加入濃鹽酸(1 mL)，反應液在120℃下攪拌5小時。LCMS偵測反應完全後，直接將溶劑旋乾，得到粗物質經反相製備HPLC (層析管柱：Ultimate XB-C18-08, 25×150 mm, 10 μm (PARP-02)；流動相：乙腈-水(0.1% NH 4HCO 3)；流速：25 mL/min；管柱溫：25℃)純化得到白色固體3-(2-{[(1 S,3 S)-3-(5,5-二氟-2,7-二氮雜辛-2-基)環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1 H-吡咯并[2,3- b]吡啶-6-甲酸(220 mg, 收率76%)。LCMS: m/z (ESI): 542.2 [M+H] +, t R= 1.05 min。
步驟四：向3-(2-{[(1 S,3 S)-3-(5,5-二氟-2,7-二氮雜辛-2-基)環戊基]胺基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1 H-吡咯并[2,3- b]吡啶-6-甲酸(100 mg, 0.19 mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(2 mL)溶液中，依次加入N,N-二異丙基乙胺(0.15 mL, 0.92 mmol)及2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(280 mg, 0.74 mmol)，該反應液在60℃攪拌16小時。將反應液濃縮，得到的粗物質經反相製備HPLC (層析管柱：Ultimate XB-C18-08, 25×150 mm, 10 μm (PARP-02)；流動相：乙腈-水(0.1% NH 3·H 2O)；流速：25 mL/min；管柱溫：25℃)純化得到(4 1S,4 3S)-8,8-二氟-5,10-二甲基-2 5-(三氟甲基)-1 1H-3,5,10-三氮雜-1(3,6)-吡咯并[2,3-b]吡啶-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-環戊烷環十一烷-11-酮((4 1S,4 3S)-8,8-difluoro-5,10-dimethyl-2 5-(trifluoromethyl)-1 1H-3,5,10-triaza-1(3,6)-pyrrolo[2,3-b]pyridine-2(4,2)-pyrimidina-4(1,3)-cyclopentanacycloundecaphan-11-one) (Z93, 2.50 mg, 收率2.6%)。LCMS: m/z (ESI): 524.4 [M+H] +, t R= 1.10 min。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD): δ 9.06 - 8.61 (m, 1H), 8.56 - 8.23 (m, 1H), 8.20 - 7.91 (m, 1H), 7.71 - 7.32 (m, 1H), 4.77 - 4.18 (m, 2H), 4.13 - 3.38 (m, 2H), 3.29 - 3.17 (m, 3H), 3.15 - 2.38 (m, 3H), 2.34 - 2.15 (m, 3H), 2.13 - 1.82 (m, 5H), 1.79 - 1.48 (m, 2H)。
下表所示化合物可根據上述實施例之合成方法製備或根據現有文獻之方法進行合成得到。 表A
測試例 1 ： CDK 激酶活性之活體外抑制實驗CDK2/Cyclin E1購自佰翱得；批號：20150228-BP469/477/691；CDK7/Cyclin H/MAT1購自佰翺得；批號：20190326-BP487/492/479；CDK9/Cyclin T1購自佰翺得；批號：20200727-BP488/792/691；CDK12/Cyclin K購自佰翺得；批號: 20200526-BP1642/1648/691；MES購自BioRoYee (寶如億)；批號：67GR9637；BSA購自Aladdin；批號：H1601024；ATP購自VWR；批號：97061-226；EDTA 購自國藥集團；批號：20200521；星胞菌素購自Selleckchem；批號：S1421。
本實驗用於測定化合物對CDK2、CDK7、CDK9及CDK12激酶活性之抑制作用。本發明所進行之激酶反應在384孔板中進行測定，最終測定體積係16 µl，反應溫度為27℃。激酶之濃度由最佳化實驗決定。特定實驗過程如下： 1)激酶溶液組態： 激酶溶液(CDK2/Cyclin E1):激酶稀釋於測定緩衝液(20 mM MES pH 6.75，0.01% Tween 20，0.05 mg/mL BSA，2 mM MgCl 2)中得到相應2.4倍濃度之酶溶液。 激酶溶液(CDK7/Cyclin H/MAT1):激酶稀釋於測定緩衝液(20 mM MES pH 6.75，0.01% Tween 20，0.05 mg/mL BSA，6 mM MgCl 2)中得到相應2.4倍濃度之酶溶液。 激酶溶液(CDK9/Cyclin T1):激酶稀釋於測定緩衝液(20 mM MES pH 6.75，0.01% Tween 20，0.05 mg/mL BSA，10 mM MgCl 2)中得到相應2.4倍濃度之酶溶液。 激酶溶液(CDK12/Cyclin K):激酶稀釋於測定緩衝液(80 mM MES pH 6.5，0.01% Tween 20，0.05 mg/mL BSA，10 mM MgCl 2)中得到相應2.4倍濃度之酶溶液。 2) 化合物溶液組態：化合物以10 mM之濃度溶於二甲基亞碸(DMSO)中，使用時化合物用DMSO稀釋至25 nM到500 µM之10個濃度梯度，分別8.3倍稀釋於超純水中，得到6倍濃度之化合物溶液。 3) 多肽受質及ATP溶液組態：多肽受質及ATP稀釋於測定緩衝液中，得到2.4倍濃度之多肽受質及ATP混合溶液。 4)激酶反應過程： 將2 μl測試化合物溶液，5 μl多肽受質及ATP混合溶液與5 μl酶溶液混合27℃孵育(CDK2為60分鐘，CDK7為70分鐘，CDK9為70分鐘，CDK12為280分鐘)，接著藉由向每種樣品中加入4 μl濃度為150 mM之EDTA來終止反應。以含有20 µM星胞菌素之測定緩衝液代替化合物溶液作為100%抑制，以DMSO代替化合物溶液作為0%抑制。每個試驗至少2個平行對照。 CDK2測定中試劑之最終濃度：ATP為100 µM；多肽受質(5-FAM-YSPTSPSYSPTSPSYSPT SPSKKKK)為2 µM；CDK2/Cyclin E1為0.5 nM； CDK7測定中試劑之最終濃度：ATP為50 µM；多肽受質(5-FAM-YSPTSPSYSPTSPSYSPT SPSKKKK)為2 µM；CDK7/Cyclin H/MAT1為3 nM； CDK9測定中試劑之最終濃度：ATP為50 µM；多肽受質(FITC-Ahx-GSRTPMY-NH2)為2 µM；CDK9/Cyclin T1為8 nM； CDK12測定中試劑之最終濃度：ATP為30 µM；多肽受質(FITC-Ahx-GSRTPMY-NH2)為2 µM；CDK12/Cyclin K為50 nM。 5) 資料計算及分析：在Caliper EZ Reader II上藉由螢光受質及磷酸化產物進行電泳分離來對反應混合物進行分析。資料使用GraphPad Prism version 9.0進行計算，IC 50值藉由使用劑量反應曲線之非線性回歸模型調整得到。計算公式：Y=Bottom + (Top-Bottom)/(1+10^((LogIC50-X)×HillSlope))。其中，X為劑量或濃度之log值(log of dose or concentration)；Y為隨著X之增加而增加之抑制率(%inhibition, increasing as x increases)；Top為最大回應；Bottom基線回應；HillSlope為曲線斜率。由於CDK7/Cyclin H/MAT1激酶活性實驗之偵測下限限制，本發明化合物對之CDK7激酶活性抑制已達實驗偵測下限，IC 50不能準確反映化合物之激酶活性抑制能力，吾人採用表面電漿共振(SPR)方法來偵測化合物之結合親和力K D。化合物對CDK2, CDK9, CDK12激酶活性之抑制作用，以Km ATP條件下偵測擬合得到的IC 50用於計算K i(Cheng and Prusoff, Biochem. Pharmacol., 22(23)3099-3108, 1973)，換算公式如下: IC 50= K i(1+[受質/K m]) + [酶/2]。本發明例示性化合物之結果如表1所示。 表1
編號 CDK7/CyclinH/MAT1 IC 50assay (nM) CDK2 Ki CDK9 Ki CDK12 Ki
Z1 11.0 153.7 52.25 62.65
Z2 4.58 9.8 10.6 22.74
Z5 - 25.65 95.55 26.06
Z7 - 33.4 216.8 61.35
Z65 - 30.33 257.7 61.6
Z79 - 23.29 134.25 92.8
測試例 2 ： CDK7/Cyclin H 表面電漿共振 (SPR) 測定方法CDK7/Cyclin H購自佰翱得；批號：20200309-BP487/492；MES緩衝液購自BioRoYee；批號：67GR9637；CM5感測晶片購自Cytiva；批號：10305527；HEPES緩衝液購自Cytiva；批號：32349。
本實驗採用Biacore S200表面電漿共振設備(GE Healthcare)測試了CDK7/Cyclin H二聚體及化合物之動力學及親和力參數。
在pH 6.5之10 mM MES緩衝液條件下，濃度為50µg/mL之CDK7/Cyclin H二聚體在5 µL/min流速下被胺基偶聯至CM5感測晶片。在600秒內目的蛋白被固定至晶片通道上，一般情況下達到7000-10000回應值。在具有150 mM NaCl、0.05%界面活性劑P20及2%DMSO之pH7.4之10 mM HEPES緩衝液中將化合物2倍梯度稀釋5步達到0.6-10 nM濃度範圍。每個化合物濃度循環均以100 µL/min，180秒接觸時間及1800秒解離時間運行。對於每個化合物，0 nM化合物對照及參比通道之結合均被扣減以移除背景信號及正規化資料。使用Biacore S200評價軟體及動力學模型對化合物滴定整體擬合。最佳化擬合資料，測定CDK7/Cyclin H結合速率及解離速率參數，用以下等式來計算化合物親和力參數K D。K D(M) = k off(s -1) / K on(M -1s -1)；其中，K on(ka)係結合速率；K off(kd)係解離速率；s -1(每秒)及M -1s -1(每莫耳每秒)係k off及k on之單位。基於脫靶CDK之K i值相對於CDK7之直接化合物結合K D(藉由SPR量測)之比率，根據以下等式確定CDK7相對於CDK2、CDK9或CDK12之化合物選擇性。選擇性=K i, 脫靶/K D, CDK7。結果顯示：相對於CDK2/CDK9/CDK12，本發明化合物對CDK7具有優異的選擇性，本發明化合物對CDK7之特異性為對其他CDK之至少100倍或300倍；甚至可為500倍以上。部分例示性化合物結果如表2所示。 表2
編號 CDK7對CDK2, CDK9, CDK12之選擇性
Z2 CDK7/Cyclin H SPR K Dassay=0.14
CDK2 K i：9.8 (CDK2 K i/CDK7 K D)：70
CDK9 K i：10.6 (CDK9 K i/ CDK7 K D)：76
CDK12 K i：22.74 (CDK12 K i/CDK7 K D)：162
Z5 CDK7/Cyclin H SPR KD assay=0.16
CDK2 K i：25.65 (CDK2 K i/CDK7 K D)：160
CDK9 K i：95.55 (CDK9 K i/ CDK7 K D)：597
CDK12 K i：26.06 (CDK12 K i/CDK7 K D)：163
Z7 CDK7/Cyclin H SPR KD assay=0.059
CDK2 K i：33.4 (CDK2 K i/CDK7 K D)：566
CDK9 K i：216.8 (CDK9 K i/ CDK7 K D)：3675
CDK12 K i：61.35 (CDK12 K i/CDK7 K D)：61.35
Z65 CDK7/Cyclin H SPR KD assay=0.18
CDK2 K i：30.33 (CDK2 K i/CDK7 K D)：165
CDK9 K i：257.7 (CDK9 K i/ CDK7 K D)：1400
CDK12 K i：61.6 (CDK12 K i/CDK7 K D)：335
Z79 CDK7/Cyclin H SPR KD assay=0.12
CDK2 K i：23.29 (CDK2 K i/CDK7 K D)：192
CDK9 K i：134.25 (CDK9 K i/ CDK7 K D)：1103
CDK12 K i：92.8 (CDK12 K i/CDK7 K D)：763
測試例 3 ： HCC70 腫瘤細胞增殖抑制活性實驗HCC70購自ATCC；貨號：CRL-2315；RPMI1640購自Gibco；貨號：11875-093；胰酶(含EDTA)購自Gibco；貨號：25200-072；FBS購自Gibco；貨號：10099-141C；CellTiter-Glo購自Promega；貨號：G7573；DMSO購自VWR AMRESCO；貨號：0231-500ML；Staurosporine購自Selleck；貨號：S1421；細胞計數儀購自CHEMOMETEC；型號：NC-200；酶標儀購自PerkinElmer；型號：Envison。
HCC70為人乳腺導管癌細胞，培養於含10% FBS之RPMI-1640培養基中。取對數生長期之細胞，用胰酶-EDTA消化、收集及計數細胞，且接種2000個HCC70細胞/孔於384孔細胞板中，置於5% CO 2培養隔夜。使用DMSO調配1000X之化合物3.16倍梯度濃度儲液，使用培養基稀釋100倍至10X化合物儲液，於細胞接種後之第二天，向每個細胞培養孔中加入10X化合物儲液，終濃度為1X，DMSO含量為0.1%。使用DMSO處理細胞組作為實驗對照(control)，5μM Staurosporine處理細胞組為空白對照(blank)。加入化合物後繼續培養細胞3天後，向每孔加入25μl CellTiter-Glo工作液，混勻，室溫孵育5分鐘，讀取luminescence化學發光值，計算細胞增殖抑制率IR (%) = (RLU 對照- RLU 化合物) / (RLU 對照- RLU 空白)×100%，使用XLFit四參數法擬合化合物梯度稀釋濃度及對應的細胞增殖抑制率，計算出IC 50值。結果顯示，本發明化合物對HCC70人乳腺導管癌細胞增殖具有極強的抑制作用。部分化合物IC 50低於1000nM或500nM；甚至低於100 nM或50 nM。部分例示性化合物之結果如下表3所示。 表3
編號 HCC70 IC 50(nM) 編號 HCC70 IC 50(nM)
Z2 207.0 Z16 23.0
Z5 42.7 Z19 15.4
Z6 222.4 Z27 9.7
Z7 41.1 Z59 422
Z9 99.77 Z60 89
Z10 161.53 Z58 233
Z11 186 Z61 389.7
Z23 66.60 Z63 134.23
Z64 42.78 Z62 24.64
Z68-1 10.35 Z68-2 3.18
Z66 10.51 Z65 46.93
Z72 869.32 Z73 233.42
Z74 1250 Z78 43.97
Z79 66.5 Z76 21.91
Z77 9.87 Z84 263.1
Z85 517.14 Z86 ＞10000
Z89 ＞10000 Z90 ＞10000
Z87 242.9 Z88 241.1
Z91 438.5 Z92 106.76
Z93 5211.0      
測試例 4 ： OVCAR-3 腫瘤細胞增殖抑制活性實驗OVCAR-3購自ATCC；貨號：HTB-161；RPMI1640購自Gibco；貨號：11875-093；胰酶(含EDTA)購自Gibco；貨號：25200-072；FBS購自Gibco；貨號：10091-148；CellTiter-Glo購自Promega；貨號：G7573；Bovine insulin 購自absin；貨號：abs9169; DMSO購自VWR AMRESCO；貨號：0231-500ML；Staurosporine購自Selleck；貨號：S1421；細胞計數儀購自CHEMOMETEC；型號：NC-200；酶標儀購自PerkinElmer；型號：Envison。
OVCAR-3為人卵巢腺癌細胞，培養於含20% FBS及0.01mg/mL Bovine insulin之RPMI-1640培養基中。取對數生長期之細胞，用胰酶-EDTA消化、收集及計數細胞，且接種2000個OVCAR-3細胞/孔於384孔細胞板中，置於5% CO 2培養隔夜。使用DMSO調配1000X之化合物3.16倍梯度濃度儲液，使用培養基稀釋100倍至10X化合物儲液，於細胞接種後之第二天，向每個細胞培養孔中加入10X化合物儲液，終濃度為1X，DMSO含量為0.1%。使用DMSO處理細胞組作為實驗對照(control)，5μM Staurosporine處理細胞組為空白對照(blank)。加入化合物後繼續培養細胞3天後，向每孔加入25μl CellTiter-Glo工作液，混勻，室溫孵育5分鐘，讀取luminescence化學發光值，計算細胞增殖抑制率IR (%) = (RLU 對照- RLU 化合物) / (RLU 對照- RLU 空白)×100%，使用XLFit四參數法擬合化合物梯度稀釋濃度及對應的細胞增殖抑制率，計算出IC 50值。結果顯示，本發明化合物對OVCAR-3為人卵巢腺癌細胞增殖具有極強的抑制作用。部分化合物IC 50低於1000nM或500nM；甚至低於100 nM或50 nM。部分例示性化合物之結果如下表4所示。 表4
編號 OVCAR-3 IC 50(nM) 編號 OVCAR-3 IC 50(nM)
Z23 134.85 Z63 195.06
Z64 98.6 Z62 15.91
Z68-1 35.8 Z68-2 8.84
Z66 21.24 Z65 253.96
Z73 1054 Z74 3457
Z78 62.6 Z79 84.05
Z76 31.5 Z77 11.8
Z84 198.2 Z85 1802.3
Z86 ＞10000 Z89 ＞10000
Z90 ＞10000 Z91 810.54
Z92 342.9 Z93 ＞10000
測試例 5 ：本發明化合物之活體內藥代動力學實驗實驗方法及條件：雄性比格犬，8~11kg，採購於江蘇瑪斯生物技術有限公司。分別投與3隻犬靜脈注射投與待測化合物0.2 mg/kg或1.0 mg/kg (溶劑：2% DMSO + 10% Kolliphor HS 15 + 88% (6.818%羥丙基-β-環糊精水溶液)，0.2 mg/mL或1.0 mg/mL)及3隻犬口服灌胃給藥2 mg/kg(溶劑：5% DMSO + 95% (10%羥丙基-β-環糊精食鹽水溶液)，0.4 mg/mL)。給藥後，5min，15min，30min，1h，2 h，4h，8h，24h經頭靜脈採血，每個樣品採集約500 μL。採集後置於冰上，且於15分鐘內離心分離血漿待測。血漿中藥物濃度之偵測採用液相串聯質譜法(LC/MS/MS)，測得濃度運用Phoenix WinNonlin軟體計算藥代動力學參數。實驗結果如下表5及表6所示。 表5 本發明化合物口服給藥(2 mg/kg)之活體內藥代動力學
編號 T 1/2(h) C max(ng/mL) AUC 0~inf(ng×h/mL) F(%)
Z65 4.44 6623 45620 147
化合物101 6.61 123 1591 65.8
表6 本發明化合物靜脈注射給藥之活體內藥代動力學
編號 Dose (mg/kg) T 1/2(h) AUC 0~inf(ng×h/mL) V ss(L/kg) CL (mL/min/kg)
Z65 0.2 3.42 3097 0.24 1.23
化合物101 1.0 6.88 1228 7.57 14.5
可見，根據本發明化合物相對於先前技術(化合物101, WO2020093006， )其藥代動力學具有顯著更低之代謝清除率(CL)及更高之血漿暴露量(AUC 0~inf)。
儘管本發明之特定實施方式已得到詳細描述，根據已經揭示之所有教示，熟習此項技術者可對本發明技術方案之細節進行各種修改及替換，此等改變均在本發明之保護範圍之內。本發明之全部範圍由隨附申請專利範圍及其任何等效物給出。

Claims (12)

  1. 一種式(A)所示之化合物或其醫藥學上可接受之鹽； 式(A) 其中， 為 或 ； 環A為無；或環A係選自下群：3至14員碳環、3至14員雜環、5至12員雜芳基、C 5-12芳基；環A為未經取代的或經1、2、3、4或5個選自S1群之基團所取代；上述3至14員雜環具有1、2、3或4個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子；上述5至12員雜芳基具有1、2、3或4個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子； L 3為無、C 1-6伸烷基、C 2-6伸烯基或環B；其中，上述C 1-6伸烷基上之1、2、3、4或5個氫原子可視情況各自獨立地經R 13取代；上述C 2-6伸烯基上之1、2、3、4或5個氫原子可視情況各自獨立地經R 13取代； 環B係選自下群：3至14員碳環、3至14員雜環、5至12員雜芳基、C 5-12芳基；環B為未經取代的或經1、2、3、4或5個選自S1群之基團所取代；上述3至14員雜環具有1、2、3或4個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子；上述5至12員雜芳基具有1、2、3或4個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子； L 1為無、C 1-6伸烷基、C 2-6伸烯基、-O-、-NR 10-、-C=N-、C 5-12芳基、5至12員雜芳基、-C(O)-、-C(O)-NR 10-或-NR 10-C(O)-；其中，上述C 1-6伸烷基上之1、2、3、4或5個氫原子可視情況各自獨立地經R 13取代；上述C 2-6伸烯基上之1、2、3、4或5個氫原子可視情況各自獨立地經R 13取代；上述5至12員雜芳基具有1、2、3或4個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子；上述C 5-12芳基、5至12員雜芳基各自獨立地為未經取代的或經1、2、3、4或5個選自S1群之基團所取代； L 2係選自下群： -(O) m2-(CR 13R 14) m1-(NR 12) m3-、 -(NR 11) m2-(CR 13R 14) m1-(NR 12) m3-、 -(O) m2-(CR 13R 14) m5-(3至7員碳環基) m4-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、 -(NR 11) m2-(CR 13R 14) m5-(3至7員碳環基) m4-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、 -(O) m2-(CR 13R 14) m5-(3至7員雜環基) m4-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、 -(NR 11) m2-(CR 13R 14) m5-(3至7員雜環基) m4-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、 -(O) m2-(CR 13R 14) m5-NR 10-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、 -(NR 11) m2-(CR 13R 14) m5-NR 10-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、 -(O) m2-(CR 13R 14) m5-NR 10C(O)-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、 -(NR 11) m2-(CR 13R 14) m5-NR 10C(O)-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、 -(O) m2-(CR 13R 14) m5-C(O)NR 10-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、 -(NR 11) m2-(CR 13R 14) m5-C(O)NR 10-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、 -(O) m2-(CR 13R 14) m5-O-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、 -(NR 11) m2-(CR 13R 14) m5-O-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、 -(O) m2-(CR 13R 14) m5-OC(O)-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、 -(NR 11) m2-(CR 13R 14) m5-OC(O)-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、 -(O) m2-(CR 13R 14) m5-C(O)O-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、 -(NR 11) m2-(CR 13R 14) m5-C(O)O-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、 -(O) m2-(CR 13R 14) m5-(CH=CH) m7-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-、 -(NR 11) m2-(CR 13R 14) m5-(CH=CH) m7-(CR 13R 14) m6-(NR 12) m3-； 各R 10各自獨立地為氫、C 1-6烷基、氘代C 1-6烷基、-3至7員碳環基、-C(O)-C 1-6烷基、-C(O)-C 1-4烷基-C 1-6烷氧基、-C(O)- 3至7員碳環基、-C 1-4烷基-羥基、-C 1-4烷基-氰基、-C 1-4烷基-C 1-6烷氧基、-C 1-4烷基-NHC(O)-C 1-6烷基、-C 1-4烷基-NHC(O)-C 1-4烷基-C 1-6烷氧基、-C 1-4烷基-NHC(O)-3至7員碳環基或-C 1-4烷基-NRR'； 各3至7員雜環基各自獨立地具有1、2或3個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子；上述3至7員碳環各自獨立地為未經取代的或經1、2、3、4或5個選自S1群之基團所取代； 各3至7員碳環基各自獨立地為未經取代的或經1、2、3、4或5個選自S1群之基團所取代； 各R 11各自獨立地為氫、C 1-6烷基或氘代C 1-6烷基； 各R 12各自獨立地為氫、C 1-6烷基或氘代C 1-6烷基； 各R 13各自獨立地為氫、氰基、羥基、鹵素、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、鹵代C 1-6烷基、鹵代C 1-6烷氧基、-3至7員碳環基、-C 0-6伸烷基-NRR'、-C 1-6伸烷基-羥基或-C 0-6伸烷基-氰基； 各R 14各自獨立地為氫、氰基、羥基、鹵素、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、鹵代C 1-6烷基、鹵代C 1-6烷氧基、-3至7員碳環基、-C 0-6伸烷基-NRR'、-C 1-6伸烷基-羥基或-C 0-6伸烷基-氰基； 各m1各自獨立地為1、2、3、4、5或6； 各m2各自獨立地為0或1； 各m3各自獨立地為0或1； 各m4各自獨立地為1或2； 各m5各自獨立地為0、1、2、3、4、5或6； 各m6各自獨立地為0、1、2、3、4、5或6； 各m7各自獨立地為1或2； R 1為氫、鹵素、氰基、C 1-6烷基或3至14員碳環基；上述C 1-6烷基、3至14員碳環基獨立地為未經取代的或經1、2、3、4或5個選自下群之基團所取代：側氧基、羥基、鹵素、C 1-6烷基、鹵代C 1-6烷基； R 2為氫、鹵素、氰基、C 1-6烷基或3至14員碳環基；上述C 1-6烷基、3至14員碳環基獨立地為未經取代的或經1、2、3、4或5個選自下群之基團所取代：側氧基、羥基、鹵素、C 1-6烷基、鹵代C 1-6烷基； X 2為N或C(R 3)； X 1為N或C(R 4)； Y為N或C(R 4)； Z為N或C(R 3)； 各R 3獨立地為氫、鹵素、氰基、C 1-6烷基或鹵代C 1-6烷基； 各R 4獨立地為氫、鹵素、羥基、氰基、-C 2-4伸烯基-苯基、-C 2-4伸炔基-苯基、-S(O)-OH、-S(O) 2-OH、-S-(C 1-6烷基)、C 1-6烷基、-O-C 1-6烷基、-C 1-6伸烷基-O-C 1-6烷基、-O-C 1-6伸烷基-O-C 1-6烷基、-C 0-6伸烷基-NRR'、-C 0-6伸烷基-C(O)OH、-C 0-6伸烷基-C(O)-C 1-6烷基、-C 0-6伸烷基-C(O)-NRR'、-C 0-6伸烷基-NR-C(O)-C 1-6烷基、-C 0-6伸烷基-S(O) 2-C 1-6烷基、-C 0-6伸烷基-S(O) 2-NRR'、-C 0-6伸烷基-NR-S(O) 2-C 1-6烷基、-C 0-6伸烷基-NR-S(O) 2-NRR'、-C 0-6伸烷基-P(O)O-(C 1-6烷基) 2、-C 0-6伸烷基-P(O)-(C 1-6烷基)(O-C 1-6烷基)、-C 0-6伸烷基-P(O)-(C 1-6烷基) 2、-C 0-6伸烷基-3至14員碳環基、-C 0-6伸烷基-3至14員雜環基、-C 0-6伸烷基-5至12員雜芳基、-C 0-6伸烷基-C 5-12芳基、-C 0-6伸烷基-C(O)-3至14員雜環基、-C 0-6伸烷基-C(O)-5至12員雜芳基、-O-C 0-6伸烷基-O-C 1-6烷基、-O-C 0-6伸烷基-3至14員碳環基、-O-C 0-6伸烷基-3至14員雜環基、-O-C 0-6伸烷基-5至12員雜芳基、-O-C 0-6伸烷基-C 5-12芳基、-S(O)-C 1-6烷基；其中，上述C 1-6烷基、C 0-6伸烷基、C 2-4伸烯基、3至14員碳環基、3至14員雜環基、5至12員雜芳基、C 5-12芳基獨立地為未經取代的或經1、2、3、4或5個選自S1群之基團所取代；上述3至14員雜環具有1、2、3或4個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子；上述5至12員雜芳基具有1、2、3或4個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子； 上述S1群之基團包括：側氧基(=O)、鹵素、羥基、氰基、C 1-6烷基、-O-C 1-6烷基、-C 1-6伸烷基-O-C 1-6烷基、-O-C 1-6伸烷基-O-C 1-6烷基、-C 0-6伸烷基-NRR'、-C 0-6伸烷基-C(O)OH、-C 0-6伸烷基-C(O)-C 1-6烷基、-C 0-6伸烷基-C(O)-NRR'、-C 0-6伸烷基-NR-C(O)-C 1-6烷基、-C 0-6伸烷基-S(O) 2-C 1-6烷基、-C 0-6伸烷基-S(O) 2-NRR'、-C 0-6伸烷基-NR-S(O) 2-C 1-6烷基、-C 0-6伸烷基-NR-S(O) 2-NRR'、-C 0-6伸烷基-P(O)O-(C 1-6烷基) 2、-C 0-6伸烷基-P(O)-(C 1-6烷基)(O-C 1-6烷基)、-C 0-6伸烷基-P(O)-(C 1-6烷基) 2、-C 0-6伸烷基-3至14員碳環基、-C 0-6伸烷基-3至14員雜環基、-C 0-6伸烷基-5至12員雜芳基、-C 0-6伸烷基-C 5-12芳基、-C 0-6伸烷基-C(O)-3至14員雜環基、-C 0-6伸烷基-C(O)-5至12員雜芳基、-O-C 0-6伸烷基-O-C 1-6烷基、-O-C 0-6伸烷基-3至14員碳環基、-O-C 0-6伸烷基-3至14員雜環基、-O-C 0-6伸烷基-5至12員雜芳基、-O-C 0-6伸烷基-C 5-12芳基、-S(O)-C 1-6烷基； R、R'各自獨立地為氫、C 1-6烷基或氘代C 1-6烷基；或者R、R'視情況與其相連之氮原子共同構成3至14員雜環基或5至12員雜芳基；其中，上述雜環基、雜芳基各自獨立地除了已有的氮原子外亦包含0、1或2個選自N、O、S之雜原子； 上述各基團中，上述C 0-6伸烷基上任意同一個碳原子上之2個氫原子亦可視情況同時經3至7員碳環或3至7員雜環螺環取代； 上述各基團中，上述C 1-6伸烷基上任意同一個碳原子上之2個氫原子亦可視情況同時經3至7員碳環或3至7員雜環螺環取代。
  2. 如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽；其特徵在於， 上述式(A)化合物為式(I-A)化合物； 式(I-A) 式中，X 1、Y、Z、X 2、R 1、R 2、L 1、L 2、環A、環B各自如請求項1所定義； 或 上述式(A)化合物為式(I-B)化合物； 式(I-B) 式中，X 1、Y、Z、X 2、R 1、R 2、L 1、L 2、環A、R 13、R 14各自如請求項1所定義；m0為1、2、3、4、5或6； 或 上述式(A)化合物為式(A1)化合物； 式(A1) 式中，X 1、Y、Z、X 2、R 1、R 2、L 1、L 2、環A、環B各自如請求項1所定義； 或 上述式(A)化合物為式(A2)化合物； 式(A2) 式中，X 1、Y、Z、X 2、R 1、R 2、L 1、L 2、環A、R 13、R 14各自如請求項1所定義；m0為1、2、3、4、5或6。
  3. 如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽；其特徵在於， 上述式(A)化合物為式(II-A)化合物； 式(II-A) 式中，R 1、R 2、L 1、L 2、環A、環B、X 1各自如請求項1所定義； 或 上述式(A)化合物為式(II-B)化合物； 式(II-B) 式中，X 1、R 1、R 2、L 1、L 2、環A、R 13、R 14各自如請求項1所定義；m0為1、2、3、4、5或6； 或 上述式(A)化合物為式(A3)化合物； 式(A3) 式中，X 1、R 1、R 2、L 1、L 2、環A、環B各自如請求項1所定義； 或 上述式(A)化合物為式(A4)化合物； 式(A4) 式中，X 1、R 1、R 2、L 1、L 2、環A、R 13、R 14各自如請求項1所定義；m0為1、2、3、4、5或6。
  4. 如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽；其特徵在於， 上述式(A)化合物為式(III-A)化合物； 式(III-A) 式中，L 1、L 2、環A、環B、X 1各自如請求項1所定義； 或 上述式(A)化合物為式(III-B)化合物； 式(III-B) 式中，X 1、L 1、L 2、環A、R 13、R 14各自如請求項1所定義；m0為1、2、3、4、5或6； 或 上述式(A)化合物為式(A5)化合物； 式(A5) 式中，X 1、L 1、L 2、環A、環B各自如請求項1所定義； 或 上述式(A)化合物為式(A6)化合物； 式(A6) 式中，X 1、L 1、L 2、環A、R 13、R 14各自如請求項1所定義；m0為1、2、3、4、5或6； 或，上述式(A)化合物為式(IV-a)化合物， ， 式中，X 1、L 1、L 2、環B各自如請求項1所定義； 或，上述式(A)化合物為式(IV-b)化合物， ， 式中，X 1、L 1、L 2、環B各自如請求項1所定義； ， 式中，X 1、L 1、L 2、環B各自如請求項1所定義。
  5. 如請求項1至4之化合物或其醫藥學上可接受之鹽；其特徵在於，環A為無；或環A係選自下群：環丁環、環戊環、環己環、哌啶環、哌𠯤環、四氫吡咯環、吡唑環、咪唑環、吡啶環；環A為未經取代的或經1、2、3、4或5個選自S1群之基團所取代。
  6. 如請求項1至4之化合物或其醫藥學上可接受之鹽；其特徵在於，環B係選自下群：環丁環、環戊環、環己環、哌啶環、哌𠯤環、四氫吡咯環、吡唑環、咪唑環；環B為未經取代的或經1、2、3、4或5個選自S1群之基團所取代。
  7. 如請求項1至4之化合物或其醫藥學上可接受之鹽；其特徵在於，X 1為N或C(R 4)；其中，R 4為氫、鹵素、氰基、-S(O) 2CH 3或-P(O)(CH 3) 2。
  8. 如請求項1至4之化合物或其醫藥學上可接受之鹽；其特徵在於，上述化合物選自表(I)。
  9. 一種醫藥組合物，上述醫藥組合物包含如請求項1至8中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、以及醫藥學上可接受之載劑。
  10. 一種如請求項1至8中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽或如請求項9之醫藥組合物之用途，其係用於製備用以預防及/或治療CDK7相關疾病之藥物。
  11. 一種如請求項1至8中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽或如請求項9之醫藥組合物之用途，其係用於製備CDK7抑制劑。
  12. 如請求項11之用途，其特徵在於，上述CDK7相關疾病為增殖性疾病(例如腫瘤或癌症)、傳染性疾病、免疫疾病、自體免疫疾病及炎性疾病。
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