TW202334401A - 組織保存溶液、組織保存系統及保存組織之方法 - Google Patents
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Abstract
本公開提供了一種保存組織移植物的方法，包括將所述組織移植物浸沒於包含一種或多種抗微生物及／或穩定試劑之溶液中以及當所述溶液處於未凍結狀態時，將所述組織移植物儲存於所述溶液中至少 24 小時之時間段。一種組織保存系統包括包含一種或多種抗微生物及／或穩定試劑之溶液以及所述溶液中之組織移植物。
Description
本公開一般而言與組織修復及醫學之領域有關。更具體而言，本公開是關於用於組織如神經移植物保存之解決方案、組織保存系統及保存組織如神經移植物之方法。
無論其原因為何，神經損傷都可能導致對象嚴重、在某些情況為重度之殘疾與不適。神經病變損傷尤其可造成慢性疼痛、喪失感覺、喪失部分或全部肌肉控制或其他不良影響。神經損傷的一種潛在治療方法是經由自體組織置換進行外科手術，其中將來自未損傷區域之神經組織移植至神經損傷區域。雖然自體神經移植被認為是修復神經缺損尤其是修復周圍神經損傷的黃金標準，但自體神經移植存在明顯的缺點，如供體部位創傷、移植過程複雜性增加、形成疤痕、以及供體部位的感覺喪失等。
雖然與中樞神經系統的神經相比，周邊神經系統的神經元可具有增強之再生能力，但是許多神經損傷在沒有手術介入的情況下無法充分癒合。例如，當損傷導致缺乏足夠的神經組織以允許周邊神經之無張力癒合時，可能會建議進行手術介入以增加成功之神經再生與感覺恢復或肌肉控制的可能性。雖然手術介入在某些情況下相當成功，但周邊神經再生過程複雜且受多種因素如神經再生所涉及之微環境影響。至少部分地由於這種複雜性，在許多情況下手術介入並不完全成功。
同種異體移植物提供了自體移植物之替代方案，且可植入神經組織不足以允許無需介入而進行癒合的部位。同種異體移植物以及神經異種移植物可被處理以提供用於神經再生之合適基質。然而，同種異體移植物或異種移植物存在挑戰。例如，通常希望在需要植入物之前製備及儲存同種異體移植物或異種移植物組織以用作植入物。然而，當儲存相對較長的時間段時，組織會發生降解。雖然冷凍保存可以減緩這種降解，但冷凍保存會造成另外不同之其他問題。例如，在降低的溫度下保存組織需要仔細的溫度監控，並且會造成有關運輸及儲存冷凍保存組織所需之專用製冷設備的成本增加。其他保存過程如組織冷凍乾燥涉及組織的再水化，且當再水化無法充分復原組織結構時會導致組織降解。
根據本公開，溶液可用於組織如神經移植物之保存及／或再水化。該溶液可使組織能夠儲存於室溫。該溶液可用於經冷凍乾燥之組織的再水化，並可防止對組織的一種或多種結構造成損害。
一方面，保存組織移植物的方法可包括將組織移植物浸沒於包包含一種或多種抗微生物及／或穩定試劑之溶液中，並將組織移植物儲存於溶液中至少 24 小時之時間段，所述溶液處於未凍結狀態。
另一方面，保存組織移植物的方法可包括將組織移植物浸沒於包含葡萄糖酸洛赫西定及丙二醇之溶液中，並將組織移植物儲存於溶液中至少 24 小時之時間段，所述溶液處於未凍結狀態。
在另一方面，將組織移植物進行再水化的方法可包括將組織移植物以脫水狀態儲存至少24小時，以及將組織移植物浸沒於包含一種或多種抗微生物及／或穩定試劑之溶液中。
另一方面，組織保存系統可包括包含一種或多種抗微生物及／或穩定試劑的溶液及所述溶液中之組織移植物。
在又一方面，組織保存系統可包括包含葡萄糖酸洛赫西定及丙二醇之溶液及所述溶液中的組織移植物。
本公開的其他目的、特徵及優點將由以下詳細描述而變得明顯。然而，應當理解，詳細描述及示例雖然指示了本公開的示例性實施方式，但僅以說明的方式提出，因為對於所屬技術領域中具有通常知識者而言，在本發明的精神及範圍內的各種變化與修改會根據該詳細描述而變得顯而易見。需注意，僅因特定化合物歸屬於一個通式並非意指其不能夠也屬於另一個通式。
單數形式「一」、「一個」、「所述」包括複數之指代，除非上下文另有說明。術語「大約」及「約」是指與參考數字或數值幾乎相同。如本文所用，術語「大約」及「約」通常應理解為涵蓋指定量或數值的±10%，除非在說明書中另外指出。在申請專利範圍及說明書中使用的術語「或」是用於表示「及／或」，除非明確指出僅指替代方案或替代方案相互排斥，儘管本公開支持僅指替代方案與「及／或」。如本文所用，「另一」可表示至少第二個或更多個。
前文的一般描述與下文的詳細描述均僅為示例性及解釋性的，而非對所要求保護的特徵之限制。如本文所用，術語「包括 」、「包含」、「含有」、「具有」或其其他變體旨在涵蓋非排他性之包含，從而包括元件列表之過程、方法、物品或設備不僅包括該等元件，還可能包括其他未明確列出的元素或此類所固有之元件。此外，此處使用的術語「示例性」是指「示例」，而非「理想」。此外，用於描述數值範圍的術語「之間」旨在包括本文所述的最小值及最大值。
所使用的術語及表達是用作描述而非限制，並且在使用此類術語及表達時，並非意在排除所示出及描述的特徵或其部分之任何等同物， 但應理解，在要求保護的公開範圍內可以進行各種修改。
本公開的實施方式是有關於組織如神經移植物、以及用於儲存組織的系統或過程，包括用於將組織儲存於室溫的過程。神經移植物可被儲存於室溫或冷藏環境中。神經移植物可被置於溶液中並以水化狀態儲存。另外或替代地，神經移植物可被冷凍、冷凍乾燥、以冷凍乾燥狀態儲存、以及利用溶液進行再水化。神經移植物，無論是在水化狀態下或是被再水化後儲存，均可被放置於對象上或植入對象內，可用於實驗室實驗及／或可用於示範。在一些方面，該溶液可包含一種或多種抗微生物試劑。該一種或多種抗微生物試劑可抑制一種或多種細菌、真菌、藻類、棘狀變形蟲或其他雜質的生長。該一種或多種抗微生物試劑可包括葡萄糖酸洛赫西定。該溶液可包括一種或多種穩定試劑。該一種或多種穩定試劑可包括丙二醇。該溶液可包括乳酸鹽Ringer氏溶液（lactated Ringer’s solution，LRS）、磷酸鹽緩衝鹽水（phosphate buffer saline，PBS）、生理食鹽水及／或去離子水。該溶液可任選地由一種或多種可溶性鹽形成。在一些方面，該溶液的內容物可為可生物降解的。
在一些方面，組織例如神經移植組織、人或異種之心包膜、腸黏膜下層、真皮、膀胱膜、神經外膜、血管或出生組織（birth tissues），可在被導入保存及／或再水化溶液之前被加工。適用於本公開的實施方式之經加工的組織可為天然的或合成的。例如，組織可為從動物例如哺乳動物包括人類或非人類哺乳動物、或非哺乳動物包括魚、兩棲動物或昆蟲獲取之軟生物組織。移植物相對於移植物被植入其中的對象而言可為同種異體的或異種的。組織可為神經組織，包括例如周邊神經組織或中樞神經系統組織。適用於本公開的其他類型之組織包括但不限於上皮組織、結締組織、肌肉組織、血管（例如微血管組織）、真皮組織、骨骼組織、平滑肌組織、心臟組織（例如心包膜）、泌尿組織（例如膀胱膜）、腸黏膜下層、出生組織、韌帶組織或脂肪組織。如上所述，生物軟組織可為哺乳動物組織，包括人體組織及其他靈長類動物的組織、囓齒動物組織、馬組織、犬組織、兔組織、豬組織或綿羊組織。此外，組織可為選自魚、兩棲動物或昆蟲組織之非哺乳動物組織。組織可為合成組織，例如但不限於實驗室培養的組織或3D列印的組織。根據一些示例，該組織為從動物如人類或非人類哺乳動物獲取之神經組織。組織可如2021年8月25日提交之標題為「Nerve Grafts and Methods of Preparation Thereof」的美國專利申請號17／411718 所公開般獲取及／或處理，其全部內容藉由引用而併入。該組織可為植入物及／或生物材料，如2021年12月22日提交之標題為「Nerve Grafts Containing Regenerative Compounds, Methods of Making the Same, and Methods of Treatment Using the Same」的美國臨時專利申請號 63／292681、2021年12月22日提交之標題為「Nerve Grafts Containing Regenerative Compounds, Methods of Making the Same, and Methods of Treatment Using the Same」的美國臨時專利申請號 63／265858、2021年12月22日提交之標題為「Drug Delivery System and Methods of Using the Same」的美國臨時專利申請號63／265860、及／或2021年12月22日提交之標題為「Drug Delivery System and Methods of Using the Same」的美國臨時專利申請號 63／265861，其全部內容藉由引用而併入。在至少一些實施方式中，示例性組織可為經處理之人類神經同種異體移植（allograph），例如來自Axogen, Inc.（Alachua, FL, US）之Avance® Nerve Graft。
儘管為方便起見，本公開的實施方式是關於神經移植物而描述，但是可以想到如上所述之其他類型的組織可用於本文描述之方法及植入物中。此外，本公開的實施方式集中於將包括抗微生物試劑如葡萄糖酸洛赫西定及穩定試劑如丙二醇之溶液結合組織而使用，但可包括不同的抗微生物試劑、不同的穩定試劑、另外的抗微生物試劑、另外的穩定試劑、或者可省略抗微生物試劑或穩定試劑。
圖1示出用於保存組織如用作神經移植物的神經組織之示例性過程100的圖表。在一個或多個方面，神經移植物110可包括一種或多種神經再生或免疫抑制試劑。一種或多種神經再生或免疫抑制試劑可包括親免素配體。一種或多種神經再生或免疫抑制試劑可包括FK506（他克莫司（tacrolimus））、雷帕黴素 （西羅莫司（sirolimus））或環孢素A。一種或多種神經再生或免疫抑制試劑中，代替雷帕黴素或除雷帕黴素之外，可包括一種或多種所謂的「-olimus」藥物。例如，一種或多種神經再生或免疫抑制試劑可包括特癌適（temsirolimus）、依維莫司（everolimus）、利達弗莫司（ridaforolimus） （德佛利姆，deforolimus）、拜爾利莫司（biolimus ）、諾波利莫司（novolimus）、咗他莫司（zotarolimus）、苗莫司（myolimus）及／或amphilimus。神經移植物可適於植入人類或非人類動物。圖2示出用於製造經保存之組織如神經移植物110的示例性過程200之流程圖。尤其，過程200可使神經移植物110或其他組織能夠儲存於室溫，如以下關於過程100所述（圖 1）。
過程 200 可包括獲取組織如適合與神經移植物一起使用或用作神經移植物之天然或合成組織、準備用於儲存之組織、以及將組織浸沒於包含一種或多種抗微生物及／或穩定試劑的溶液中。該溶液可使神經移植物能夠儲存於例如未凍結狀態下、室溫下或冷藏溫度下。如本文所用，術語「室溫」是指約攝氏18度至約攝氏27度之溫度，而「冷藏溫度」是指約攝氏0度至約攝氏18度之溫度。如本文所用，「冷凍」是指其中浸沒有組織之溶液處於固態的狀態，「未凍結」是指其中浸沒有組織之溶液處於液態的狀態。如本文所用，「溶液」包括混合物的冷凍（固體）狀態或液體狀態。
如所理解，雖然過程200是結合過程100及圖1而敘述，但與過程100相比，過程200可包括更少的步驟、附加的步驟及／或不同的步驟。此外，與圖2所示的每個方框（例如步驟202、204、206）相比，過程200可包括更少的步驟、附加的步驟及／或不同的步驟，或者具體的步驟順序可以不同。
在步驟202（圖2）中，可獲取神經移植物110（圖1）。如上所述，合適的神經移植物可從動物如哺乳動物，例如人類或非人類哺乳動物獲取。該神經移植物可為已經過預處理且可適合立即使用於對象（例如植入）或適合儲存以供之後使用於對象。在一個示例中，步驟202可包括獲取神經移植物110，該神經移植物110已經以抑制對象中免疫性反應以及促進神經細胞在植入後從對象組織增殖至神經移植物110之方式處理。
在至少一些方面，步驟204可包括處理神經移植物110。該神經組織或用於神經移植物110的其他組織之適當處理可包括去除至少一些細胞性物質或其他生物物質。合適的處理技術（例如機械處理、化學處理或兩者的組合）可允許細胞外基質（「ECM」）的一部分或全部保持完整，從而經處理的神經移植物110形成用於浸潤神經細胞之框架。
示例性的經處理之神經移植物 110 能夠已被製備用作同種異體移植物。該製備工作可包括從供體（例如從屍體）採集組織、處理組織例如將組織進行去細胞化（decellularize）等。例如，神經移植物110可為Axogen之Avance® Nerve Graft。經去細胞化之組織可包括對應於神經外膜112、神經束膜114及神經內膜116之去細胞化物質，從而神經移植物110包含對應於天然神經結構的一個或多個結構。經去細胞化之組織尤其可適用於植入人體以修復神經例如周邊神經之損傷。在一個或多個方面，使用包含一種或多種抗微生物試劑及／或一種或多種穩定試劑之溶液可實現神經移植物110的儲存而不會造成結構如神經外膜112、神經束膜114及／或神經內膜116之顯著降解。
為了便於經處理之神經移植物110的使用，去細胞化可包括去除至少一些可導致或增加對象的免疫反應或其他不良反應之細胞與非細胞成分。去細胞化可藉由合適的化學及酶處理之任何組合來進行。2017年2月21日被授予專利權之標題為「Method for Decellularization of Tissue Grafts」的美國專利號9572911描述包括去細胞化之適用於處理組織以產生神經移植物110的示例性方法，其全部公開內容作為參考併入本文。然而，應當理解，能夠使用用於製備組織樣品之各種其他方法。如所理解，可藉由獲取經預處理的組織及／或經預處理的移植物來執行步驟202及204。
步驟206可包括藉由將溶液122添加至神經移植物110或藉由將神經移植物110添加至溶液122來將溶液122導入神經移植物110。無論是將溶液122添加至神經移植物110或是將神經移植物110添加至溶液122 ，神經移植物110均可浸沒於溶液122中。如本文所用，術語「浸沒」是指完全地或部分地被流體包圍。溶液122可包括一種或多種成分，其被配置為藉由抑制神經移植物110之降解以便於神經移植物110的儲存。溶液122可藉由減少微生物的增殖來抑制神經移植物110之降解。例如，溶液122可包括一種或多種抗微生物試劑及／或一種或多種穩定試劑。溶液122可包括一種或多種成分，如包括一種或多種乳酸鹽Ringer氏溶液（lactated Ringer’s solution，LRS）、磷酸鹽緩衝鹽水（phosphate buffer saline，PBS）、生理食鹽水及／或另一種成分如去離子水。LRS、PBS、生理食鹽水及／或去離子水可按重量計而形成溶液122的大部分。溶液122還可包括例如鎂、鈉、鈣及／或鉀的可溶性鹽之一種或多種。尤其，溶液122可由硫酸鎂、氯化鎂六水合物（magnesium chloride hexahydrate）、氯化鈉、碳酸氫鈉、氯化鈣、磷酸氫二銨（ammonium phosphate dibasic）、Trisma氯化氫（Trisma hydrochloride）、磷酸二氫鉀及／或氯化鉀之一種或多種形成。當將一種或多種鹽類導入溶液122時，鹽類可具有合適的陽離子及陰離子成分，從而所添加的鹽類能夠穩定pH、穩定蛋白質功能及／或維持存在於神經移植物110中的蛋白質之生物活性。
當溶液122包括硫酸鎂時，硫酸鎂能夠以約0.01 g／L至約1 g／L的量添加至溶液122。當溶液122包括氯化鎂六水合物時，氯化鎂六水合物能夠以約0.01 g／L至約1 g／L的量添加至溶液122。當溶液122包括氯化鈉時，氯化鈉能夠以約5 g／L至約50 g／L的量添加至溶液122。當溶液122包括碳酸氫鈉時，碳酸氫鈉能夠以約0.5 g／L至約5 g／L的量添加至溶液122。當溶液122包括氯化鈣時，氯化鈣能夠以約0.2 g／L至約0.8 g／L的量添加至溶液122中。當溶液122包括磷酸氫二銨時，磷酸氫二銨能夠以約0.5 g／L至約5 g／L的量添加至溶液122。當溶液122包括Trisma氯化氫時，Trisma氯化氫能夠以以約0.1 g／L至約1 g／L的量添加至溶液122。當溶液122包括磷酸二氫鉀時，磷酸二氫鉀能夠以約0.01 g／L至約0.1 g／L的量添加至溶液122。當溶液122包括氯化鉀時，氯化鉀能夠以約0.01 g／L至約0.5 g／L的量添加至溶液122。
溶液122可包括一種或多種有助於保護神經移植物110的結構及／或防止蛋白質降解之添加劑。例如，溶液122可包括甘油及／或二甲基亞碸（dimethyl sulfoxide，DMSO）。然而，在至少一些實施方式中，溶液122可不含或基本上不含DMSO。
溶液 122 可為無色液體且於存在神經移植物110的情況下可以保持無色。在一些方面，溶液122可具有淺黃色。溶液122的pH可為約4.0至約8.0之間或約5.0至約7.0之間。溶液122可為無味的。
一種或多種抗微生物試劑可包括葡萄糖酸洛赫西定。溶液122可包含約0.0005重量％至約2重量％的葡萄糖酸洛赫西定。溶液122可在神經移植物110浸入溶液122之前被稀釋，或者當神經移植物110存在於溶液122中時被稀釋。於稀釋之前，葡萄糖酸洛赫西定能夠以約0.1重量％至約10重量％的量、約0.2重量％至約5重量％的量、或約0.5重量％至約2重量％的量存在。於稀釋之後，葡萄糖酸洛赫西定能夠以約0.0005重量％至約0.01重量％、或約0.001重量％至約0.005重量％的量存在於溶液122中。一種或多種抗微生物試劑可包括一種或多種醇或對氯間二甲苯酚（parachlorometaxylenol）來代替葡萄糖酸洛赫西定或除葡萄糖酸洛赫西定外可包括一種或多種醇或對氯間二甲苯酚。
一種或多種穩定試劑可包括丙二醇（propylene glycol）。溶液122可包含約0.001重量％至約50重量％的量之丙二醇。如上所述，溶液122可在神經移植物110浸入溶液122之前或在神經移植物110存在於溶液122之後被稀釋。於稀釋之前，丙二醇能夠以約1重量％至約30重量％的量、或約5重量％至約15重量％的量存在。於稀釋之後，丙二醇能夠以約0.001重量％至約0.5重量％的量、或約0.01重量％至約0.05重量％的量存在。一種或多種穩定試劑可包含丙二醇（propanediol）、甘油或丁二醇之一種或多種來代替丙二醇（propylene glycol），或除丙二醇（propylene glycol）之外還可包含丙二醇（propanediol）、甘油或丁二醇之一種或多種。
當溶液122包括葡萄糖酸洛赫西定及丙二醇時，溶液122按重量計可包括比丙二醇更少的葡萄糖酸洛赫西定。尤其，葡萄糖酸洛赫西定與丙二醇的比例按重量計可為約1：100至約1：2，例如1：50至約1：4重量、或1：25至約1：10 。在一些方面，葡萄糖酸洛赫西定的量可與丙二醇的量大致相同（即，按重量計為約1：1）。在一些方面，葡萄糖酸洛赫西定與丙二醇的比例按重量計可為約1：100、約1：50、約1：25、約1：15、約1：10、約 1：4，或約1：2。如果需要，葡萄糖酸洛赫西定的量可以大於丙二醇的量。例如，葡萄糖酸洛赫西定與丙二醇的比例按重量計可為約2：1、約10：1、約50：1、約100：1或約500：1。
神經移植物 110 可藉由將溶液122及神經移植物110置於合適的容器內而浸沒於溶液122中。該容器可包括例如小瓶、托盤的孔、神經移植物110於使用前可儲存在其中的包裝或任何其他合適的容器。在至少一些實施方式中，步驟206可包括將神經移植物110連同溶液122一起放置在用於神經移植物110之濕式保存（wet-preservation）的合適包裝中。溶液122的量可至少部分地基於容器的尺寸及／或神經移植物110的尺寸。例如，溶液122的量可為約500 μL至約50 mL、約500 μL、約1 mL、約5 mL、約10 mL、約15 mL、約20 mL、約30 mL 或約50 mL。包裝可為半透明的或可為不透明的，以防止大部分或所有的光滲入。
在步驟 206 之後，可將神經移植物110準備進行滅菌及消毒。如上所述，神經移植物110可與溶液122一起放置在容器內，且神經移植物110可在該容器例如小瓶、托盤或包裝中被滅菌，其中該神經移植物首先被浸沒於溶液122中。或者，神經移植物110可在滅菌期間放置於不同的容器，例如專門的滅菌容器內。
可在神經移植物110存在於溶液122的情況下進行滅菌。可在溶液122及神經移植物110處於室溫或低於室溫之溫度下進行滅菌。在一些方面，神經移植物110及溶液122可在滅菌過程中暫時冷凍。可在滅菌之前進行冷凍以抑制微生物作用，從而在滅菌之後，微生物作用進一步被抗微生物試劑或經滅菌之溶液122中的試劑抑制，或者被抗微生物試劑或經滅菌之溶液122中的試劑完全抑止。在將溶液122導入移植物110或將移植物110導入溶液122之後，可藉由將神經移植物110及溶液122的溫度降低至低於攝氏0度來冷凍神經移植物110及溶液122。尤其，神經移植物110及溶液122可保持在等於或高於約攝氏-20度、等於或低於約攝氏-20度、等於或低於約攝氏-40度、等於或低於約攝氏-80度、或等於或低於約攝氏-196度之溫度。
當為了滅菌而冷凍溶液122及神經移植物110時，可控制冷凍溶液122及神經移植物110之條件。例如，受控制之冷凍速率可設置為低於每分鐘約攝氏5度、低於每分鐘約攝氏2度，例如每分鐘約攝氏1度或根據所欲之其他速率，以防止溫度快速降低及防止或抑制冰晶的形成。
可藉由一種或多種合適的方法進行滅菌。在一個示例中，神經移植物110可如圖1所示，以足以對神經移植物110進行滅菌之量接受伽馬輻射132。在一些示例中，神經移植物110可接受約0.5 kGy至約100 kGy、約1 kGy至約50 kGy、或約5 kGy至約 30 kGy之伽馬輻射。伽馬輻射的劑量可為至少約10 kGy、至少約15 kGy、至少約20 kGy、至少約25 kGy或至少約30 kGy。由於在滅菌期間神經移植物110可能存在溶液122，因此溶液122也可藉由伽馬輻射132進行滅菌。
滅菌後，溶液122及神經移植物110可一起儲存一時間段，之後可將神經移植物110與溶液122分離，以供對象使用。在一些示例中，神經移植物110可在溶液122中儲存至少1日、至少1週、至少2週、至少1個月、至少6週、至少2個月、至少3個月、至少6個月，或至少1年之時間段。尤其，神經移植物110可在溶液122中儲存約24小時、約2天、約4天、約1週、約2週、約4週、約6週、約8週、約3個月、約6個月、約1年、約2年、約3年、約5年或更久。於該時間段內，溶液122及神經移植物110可儲存於室溫或低於室溫之溫度。溶液122可儲存於約攝氏0度至約攝氏30度、約攝氏12度至約攝氏28度或約攝氏18度至約攝氏27度之溫度。在一些方面，溶液122可儲存於冷藏溫度、約攝氏4度至約攝氏20度的溫度、或約攝氏8度至約攝氏10度的溫度。當溶液122及神經移植物110儲存於低於室溫之溫度時，該溫度可低於約攝氏18度或低於約攝氏12度。在至少一些配置中，溶液122及其中儲存有溶液122的容器或包裝能夠以目視確認溶液122為澄清，即沒有或通常沒有污染。
圖3示出根據本公開的一個或多個方面之用於保存及／或再水化組織的示例性過程300。過程300可包括獲取神經移植物110，如前文關於過程200的步驟202及過程100的相應方面所述。然後可將神經移植物110浸沒於冷凍乾燥溶液142中。冷凍乾燥溶液142可適用於神經移植物110之冷凍乾燥，並且可具有一種或多種成分，其減少或防止在冷凍乾燥過程中對神經移植物110之損傷。
一旦神經移植物110存在冷凍乾燥溶液142，且若有需要，在培養期之後，溶液142及神經移植物110可被暴露於冷凍溫度，製造冷凍之神經移植物120。神經移植物110及溶液142的溫度能夠以所欲之冷卻速率降低至一定溫度（例如，約攝氏0度至約攝氏-80度之溫度）直到神經移植物110凍結以形成冷凍之神經移植物120。在冷凍之後，溶液142可被昇華，導致脫水或冷凍乾燥之神經移植物130。可將神經移植物130儲存所欲之時間段（例如24小時、2天、4天、1週、2週、4週、6週、8週、3個月、6個月、1年、2年、3年、5年或更久）。
在儲存冷凍乾燥之神經移植物130之後，神經移植物130可藉由浸沒於溶液122中被再水化。溶液122，如關於過程300所描述，可包含與前文關於過程100及過程200所述相同的成分。尤其，溶液122可包括一種或多種抗微生物試劑如葡萄糖酸洛赫西定、以及一種或多種穩定試劑如丙二醇。如上所述，溶液122可包括LRS、PBS、生理食鹽水及／或去離子水。
在一些方面，可使用不同於溶液122之再水化溶液對神經移植物130進行再水化。該再水化溶液可包括去離子水、鹽水、LRS或PBS之一種或多種。神經移植物130可浸入該再水化溶液中一合適的時間段。一旦神經移植物130被充分再水化，便可去除再水化溶液並替換為溶液122以保存經再水化之神經移植物140及保存神經移植物140。此種經再水化之神經移植物140可適用於示範目的、科學實驗或植入人類或非人類對象。
前文關於過程100及過程200描述之神經移植物110及前文關於過程300描述之神經移植物140可用於治療人類或非人類動物對象的方法。這些方法可包含將神經移植物110或140植入損傷部位。使用神經移植物 110 或 140 的方法，無論是儲存於室溫還是以冷凍乾燥形式儲存，皆可包括準備受損的神經以用於植入神經移植物110或140。準備可包括使損傷神經暴露、製備神經床（nerve bed）、以及清創與清潔損傷神經，以形成近側神經端及遠側神經端。具有所欲之直徑及／或長度的神經移植物110或140可選自具有不同直徑及／或長度的多個神經移植物110或140。神經移植物110或140之合適長度可基於近側及遠側神經端之間的距離來決定，且可大約等於該距離。類似地，神經移植物110或140的直徑可基於近側及遠側神經端的直徑來選擇。然後可將選定的神經移植物110或140從儲存系統或容器（例如包裝）中取出。該儲存系統或容器可對應於上述用於儲存神經移植物110的儲存系統且可包括溶液122。若有需要，神經移植物110或140可於從儲存系統或容器取出後在無菌鹽水或水中潤洗以用於植入。若為已被冷凍乾燥之神經移植物140，作為再水化的一部分或接在再水化之後，神經移植物140可被再水化並浸沒於溶液122中。如果神經移植物110或140較近側及遠側神經端之間的距離更長，則可將神經移植物140修剪至大約等於該距離之長度。
神經移植物110或140的植入可藉由將神經移植物110或140縫至近側神經端及遠側神經端以橋接該等神經端之間的間隙來進行，從而產生植入的神經移植物 140。具有植入的神經移植物110或 140 之手術部位可被縫合。所植入之神經移植物110或140可促進對象組織的恢復。尤其，神經移植物110或140於植入後可提供結構支承，從而使損傷神經組織能夠進行軸突再生及癒合。
示例
可藉由以下非限制性之實施方式進一步理解本公開。示例旨在說明上述公開的實施方式，而不應被解釋為限縮其範圍。所屬技術領域中具有通常知識者將容易地理解，這些示例提出了可實踐本公開之實施方式的許多其他方式。應當理解，在本公開的範圍內可進行各種變化及修改。
示例 1
藉由對神經組織進行去細胞化並將神經組織分為兩種儲存條件來製備神經移植物。製備去細胞化之神經移植物以儲存於室溫。還製備了神經移植物以供儲存，同時保持冷凍狀態，以便與儲存於室溫之神經移植物進行比較。儲存後，觀察到這些神經移植物表現出微結構，並觀察到其表現出與目前市售之神經移植物相似的縫合拉出強度（suture pull out strength）。因此，微結構及縫合拉出強度與支持人類或非人類對象中周邊神經再生的適用性一致。
神經移植物進一步分為兩組。第一組神經移植物包括4個神經移植物，2個直徑大於3 mm的神經移植物、2個直徑小於3 mm的神經移植物，被浸沒於保存溶液中並儲存於室溫。第二組神經移植物包括4個神經移植物，2個直徑大於3 mm的神經移植物、2個直徑小於3 mm的神經移植物，被置於少量LRS中並以冷凍狀態儲存。
為了在室溫下儲存，將第一組的神經移植物浸沒於經稀釋的保存溶液中。該經稀釋的保存溶液是將包含葡萄糖酸洛赫西定及丙二醇的濃縮溶液5.2 mL與作為稀釋劑的LRS 1000 mL混合而成。經稀釋的溶液包含0.005重量％的葡萄糖酸洛赫西定及0.05重量％的丙二醇。第一組的每個神經移植物與經稀釋的溶液一起被冷凍於攝氏-80度。然後經由伽馬輻射對冷凍的神經移植物及溶液進行滅菌。解凍經伽馬輻射照射之神經移植物並使其升溫至室溫。這些神經移植物在室溫下避光培養2週。屬於第二組的神經移植物在伽馬輻射照射後保持冷凍狀態。冷凍的神經移植物在冷凍狀態下同樣儲存2週的時間同時進行避光。2週的培養完成後，將冷凍的神經移植物解凍，使其升溫至室溫，並如下所述進行評估。
每個神經移植物的評估包括將每個單獨的神經移植物與多個驗收準則進行比較以確定神經移植物在保存及儲存之後是否適合用作植入物。尤其，目視檢查兩組之每個神經移植物，包括神經移植物本身及儲存溶液。處理每個樣品以確定剛性。經由抗層連結蛋白免疫組織化學評估每個神經移植物以觀察並評估神經內膜管結構（結果示於圖4A至4D及5B），並測試以確定縫合拉出強度（結果示於圖5A）。來自第二組之冷凍的神經移植物在進行該等評估之前被未凍結。
在對用於室溫儲存之神經移植物的溶液進行目視檢查期間，觀察到每個溶液均為澄清且無可見之污染。室溫保存的神經移植物在視覺上並不比冷凍之神經移植物差。在物理處理過程中，室溫儲存的神經移植物與以冷凍狀態進行儲存之神經移植物相比稍硬，但保留了適當的可撓性。
組織學評估的結果總結於圖4A至4D。圖4A至4D之各者示出神經移植物的層連結蛋白染色之切片，其中藉由神經組織之束內部的深褐色染色沉積（圖4A至4D中的較暗區域）鑑定包含層連結蛋白之神經內膜管基底膜。圖4A示出儲存於室溫之神經移植物，該神經移植物的直徑大於3 mm。圖4A中，每個基本上圓形的部分示出了束內保存之神經內膜管結構。圖4B示出以冷凍狀態進行儲存之直徑大於3 mm的神經移植物。圖4C及4D分別示出儲存於室溫之神經移植物及以冷凍狀態進行儲存的神經移植物。圖4C及4D所示之神經移植物各自的直徑小於3 mm。如圖 4A及4C 所示，在束中觀察到一些組織分離。一些儲存於室溫之神經移植物樣品在神經內膜管的大小及形狀上表現出微小的變化。然而，室溫儲存的神經移植物在束中包含基本上完整的神經內膜管。觀察到神經內膜管經歷了相對有限的結構變化且具有與充分之保存一致的形態。室溫儲存的神經移植物中神經內膜管之保存與在冷凍時進行保存的神經移植物相當。
圖5A及5B示出如上所述進行儲存之神經組織的示例性定量分析。圖5A以條狀圖顯示縫合拉出測試之結果，其中每個直條代表分離縫合所需之最大力的測量值範圍，由每個直條之底部表示最小的最大拉出力，由每個直條之頂部表示最大的最大拉出力。圖5A 中的誤差條示出標準差，「X」示出平均值，而每個直條內的水平線示出這些測試的中位數值。
縫合拉出評估，其結果示於圖 5A，是採用9-0縫合線進行，適用於植入此類型之神經移植物，其從每個神經移植物之邊緣插入穿過神經外膜約 5 mm，並形成一個環以用於將縫合線附接於力學測試裝置。施加每秒 1 mm之恆定拉力，直到縫合或組織失效。所施加的最大力表示所保存之組織的相對強度超過可用於植入之縫合線的強度。如圖5A可見，與表現出約 0.95 N 的最大拉出力之於冷凍時進行保存的神經移植物相比，室溫儲存的神經移植物具有合適的最大拉出力，超出縫合材料強度的力，大於約 0.5 N（牛頓）且小於約 1.2 N。雖然室溫儲存的組織在所測量之值中具有稍高的可變性，但所測量的值適用於可植入之組織。雖然不希望受理論的束縛，但該可變性可能是由於直徑小於3 mm的樣品之相對較高的剛性及／或縫合可變性。在所有測量的樣品中，縫合失效是在組織失效之前被觀察到，其表示可接受的組織保存。
圖5B示出對每組的神經移植物進行之神經內膜管評估的結果。圖 5B反映的神經內膜管評估 （endoneurial tube assessment，ETA）包括每 100000 µm
2束狀區域之神經內膜管周長的定量測量。層連結蛋白染色的表面辨識神經內膜管基底膜，較高的分數被分配給包含較大周長之神經內膜管的神經移植物，這些神經移植物適合被定義的尺寸及圓度之範圍。圖5B中之直條包括具有代表以冷凍狀態儲存的神經移植物之平均ETA分數的高度之第一直條以及具有代表儲存於室溫儲存的神經移植物之平均ETA分數的高度之第二直條。與室溫儲存的神經移植樣本相比，以冷凍狀態進行儲存的神經移植物的之ETA 分數略高。如圖 5B 所示，以冷凍狀態進行儲存的神經移植物之平均ETA分數約為12000，而儲存於室溫的神經移植物之ETA分數約為8200。儲存於室溫的神經移植物之ETA分數雖較於冷凍時儲存的神經組織低，但仍處於可接受的範圍內。在某些方面，這些ETA分數與神經移植物一致，在儲存於室溫後，能夠滿足植入人類或非人類對象之驗收準則，因此表示儲存於室溫的神經移植物之適當保存。
示例 2
藉由對神經組織進行去細胞化來製備神經移植物。如下所述，將每個去細胞化神經分為四組。製備去細胞神經移植物以儲存於室溫。還製備了去細胞神經移植物以在冷凍狀態下儲存，這些神經移植物適於植入人類或非人類對象。示例2的第一組神經移植物包括12個神經移植物，6個直徑大於3 mm的神經移植物及6個直徑小於3 mm的神經移植物。第一組的所有神經移植物浸沒於保存溶液中並儲存於室溫下4週。第二組神經移植物包括12個神經移植物，6個直徑大於3 mm的神經移植物及6個直徑小於3 mm的神經移植物，其被置於LRS中並以冷凍狀態儲存4週。第三組包括12個神經移植物，6個直徑大於3 mm的神經移植物及6個直徑小於3 mm的神經移植物，其被浸沒於保存溶液中並儲存於室溫下12週。第四組神經移植物包括12個神經移植物，6個直徑大於3 mm的神經移植物及6個直徑小於3 mm的神經移植物，其被置於LRS中並以冷凍狀態儲存12週。
儲存於室溫的第一組及第三組神經移植物在儲存前被導入經稀釋的保存溶液。該經稀釋的溶液是藉由將3.13 mL之包含葡萄糖酸洛赫西定及丙二醇的濃縮溶液與1000 mL之LRS 混合而成。經稀釋的溶液包含0.003重量％之葡萄糖酸洛赫西定及0.03重量％之丙二醇。第一組的每個神經移植物，包括經稀釋的溶液，接著被冷凍並經由伽馬輻射進行滅菌，如前文關於示例1所述。然後解凍經伽馬輻射照射的神經移植物並使其升溫至室溫。第一組及第三組之室溫儲存的神經移植物在室溫下分別培養4週或12週，同時進行避光。屬於第二組及第四組的神經移植物分別於冷凍時儲存並進行避光4週或12週。
評估每個神經移植物並與前文關於示例1描述的驗收準則進行比較。在目視檢查室溫儲存之神經移植物的溶液期間，觀察到每個溶液均為澄清且沒有可見的污染。室溫保存的神經移植物在視覺上並不比冷凍之神經移植物差，且雖然在處理過程中觀察到與以冷凍狀態進行儲存之神經移植物相比稍硬，但表現出合適的可撓性。
四個組之各者的組織學評估的示例性結果示於圖6A至6D。圖6A至6D各自示出神經移植物之層連結蛋白染色的部分，與圖4A至4D相比具有放大的視圖（圖6A至6D的放大倍數增加以便於觀察神經移植物結構）。圖6A示出第一組的神經移植物，儲存於室溫下4週。圖6B示出以冷凍狀態進行儲存4週之第二組神經移植物。圖6C及6D分別示出儲存於室溫的神經移植物（第三組）及以冷凍狀態儲存的神經移植物（第四組）。神經移植物如圖6C及6D所示各自儲存12週。如圖6A及 6C 所示，室溫保存的神經移植物包含完整的神經內膜管，其結構與以冷凍狀態進行保存的神經移植物相當。與於冷凍時進行儲存之圖6B及6D的神經移植物相比，每個單獨的神經內膜管皆經歷了相對最小的結構變化及充分的保存。
圖7A及7B示出對如上所述儲存的神經組織之示例性定量分析。圖7A以條狀圖顯示縫合拉出測試之結果，其中每個直條的高度表示平均拉出力，以牛頓為單位，其針對每一組進行測量。圖7A中的誤差條示出這些測量的標準差。圖7A中，「冷凍T1」指的是冷凍並儲存4週之神經移植物組，「室溫T1」指的是保存於室溫4週之神經移植物組，「冷凍T2」指的是冷凍並儲存12週之神經移植物組，「室溫T2」是指保存於室溫12週之神經移植物組。
如圖7A可見，室溫儲存的神經移植物與於冷凍時儲存的相應神經移植物組的表現相似。儲存4週的冷凍及室溫儲存的神經移植物表現出介於約0.7 N與約0.8 N之間的平均縫合拉出力。以冷凍狀態儲存 12 週的神經移植物表現出介於約0.8 N與約0.9 N之間的平均縫合拉出力，而儲存於室溫的神經移植物表現出介於約0.9 N與約1.0 N之間的平均縫合拉出力。所有測試，包括儲存於室溫的每個神經移植物之測試，均得到縫合失效發生在神經移植失效之前的結果，表示保存符合要求。此外，對於儲存4週的神經移植物組及儲存12週的神經移植物組，這些測量值的可變性是可接受的。
圖7B示出神經內膜管評估（ETA）的結果，其對每個神經移植物進行以評估神經內膜管周長，如上所述，分數越高表示神經內膜管周長越大。圖7B中的直條包括第一直條（「冷凍T1」），其高度代表以冷凍狀態儲存4週的神經移植物之平均ETA分數。該ETA分數為約10000。圖7B中的第二直條（「室溫T1」）的高度代表儲存於室溫下4週的神經移植物之平均ETA分數，為約9000。圖7B還包括第三直條（「冷凍T2」），其高度代表以冷凍狀態儲存12週的神經移植物之平均 ETA 分數，為約 13000，而第四直條（「室溫T1）的高度代表儲存於室溫下12週的神經移植物之平均ETA分數，為約7500。儲存於室溫的神經移植物表現出與以冷凍狀態儲存相同時間段的神經移植物樣品相當之ETA分數。室溫儲存的神經移植物之ETA分數對於儲存4週的神經移植物組及儲存12週的神經移植物組而言均保持在合適的範圍內。尤其，室溫保存的神經移植物之ETA分數，無論是儲存4週還是12週，均保持在可接受的範圍內。在某些方面，這些ETA分數與神經移植物一致，在儲存於室溫後，神經移植物能夠滿足植入人類或非人類對象的驗收準則，因此表示室溫儲存的神經移植物之適當保存。
示例 3A
藉由對神經組織進行去細胞化並將神經組織分為儲存條件不同的兩組來製備神經移植物。製備第一組的去細胞神經移植物以儲存於攝氏4度之冷藏溫度。製備第二組的神經移植物以進行儲存，同時保持冷凍狀態，以與儲存於冷藏溫度的神經移植物進行比較。第一組神經移植物包括10個神經移植物，5個直徑大於3 mm的神經移植物及5個直徑小於3 mm的神經移植物，分別被浸沒於保存溶液中並儲存於攝氏4度之冷藏溫度。第二組神經移植物包括10個神經移植物，5個直徑大於3 mm的神經移植物及5個直徑小於3 mm的神經移植物，每一個都被置於少量LRS中，以冷凍狀態儲存於攝氏-80度。
去細胞神經移植物藉由被放置於經稀釋的保存溶液中而製備以儲存於攝氏4度。該經稀釋的溶液是藉由將包含葡萄糖酸洛赫西定及丙二醇的濃縮溶液5.2 mL與作為稀釋劑的磷酸鹽緩衝鹽水（PBS）1000 mL混合而成。PBS的 pH值為7.4。經稀釋的溶液包含0.005重量％之葡萄糖酸洛赫西定及0.05重量％之丙二醇。該溶液還包含0.6重量％之溶解的氯化鎂六水合物。
接著將每個神經移植物冷凍並經由伽馬輻射進行滅菌。然後將第一組經伽馬輻射照射的神經移植物於冷藏環境中解凍，並使其升溫至攝氏4度之冷藏溫度。冷藏溫度的神經移植物於攝氏4度進行避光培養12週。
每個神經移植物被評估並與前文關於示例1描述的驗收準則進行比較。在目視檢查冷藏溫度儲存之神經移植物的溶液期間，觀察到每個溶液均為澄清且沒有可見的 污染。冷藏溫度儲存的神經移植物在視覺上並不比冷凍之神經移植物差，且在一些儲存容器中僅包含少量沉積物。此外，與冷凍之神經移植物或示例1及示例2的樣品相比，冷藏溫度儲存的神經移植物表現出相似的力學完整性（mechanical integrity）。
在12週的培養期之後，還對神經移植物進行組織研究以評估神經內膜管結構。冷藏及冷凍之樣品的組織學評估的示例性結果分別示於圖8A及8B。圖8A示出儲存以冷藏狀態儲存的神經移植物之層連結蛋白染色切片。圖8B示出以冷凍狀態儲存的神經移植物之層連結蛋白染色切片。圖8A及8B各自示出單一束內之被保存的神經內膜管結構。如圖8A及8B所示，與示例1及2相比，層連結蛋白染色有所減少，導致冷藏與冷凍樣品之視覺外觀略微變淺。冷藏與冷凍樣品均具有可接受的外觀及束內基本上完整的神經內膜管。
示例3的神經組織的定量分析如以下表1所示。表1顯示每組四個示例性樣品的ETA分數。第一組的結果顯示在標有「冷藏」之列中，而第二組的結果顯示在標有「冷凍」之列中。表1顯示以冷藏狀態儲存的直徑大於3 mm之樣品的一個ETA分數，以及以冷凍狀態儲存的直徑大於3 mm之樣品的一個ETA分數。對於以冷藏狀態儲存之直徑小於3 mm的示例性樣品，包括三個額外的ETA分數，且對於以冷凍狀態儲存之直徑小於3 mm的樣品，包括三個ETA分數。
如表1所示，所有冷藏樣品的ETA分數均為可接受的，無論樣品的直徑大於3 mm還是小於3 mm。第一組的分數與以冷凍（攝氏-80度）狀態進行儲存之樣品的分數相當。冷藏樣品的平均ETA分數略小於冷凍樣品的平均ETA分數。
表 1
| 冷凍 | 冷藏 | |
| 樣品 1 （尺寸＞3mm） | 6351.3 | 8299.2 |
| 樣品2 （尺寸＜3mm） | 3988.1 | 4500.7 |
| 樣品3 （尺寸＜3mm） | 7561.2 | 8802.1 |
| 樣品4 （尺寸＜3mm） | 11385.7 | 7020.2 |
| 平均 | 7321.6 | 7155.6 |
示例3A之冷藏溫度儲存的神經移植物之特性至少部分地由上述評估表示，與神經移植物一致，儲存於室溫後，於儲存12週後與支持人類或非人類對象中周邊神經再生的適用性一致，因此表示冷藏溫度儲存的神經移植物之適當保存。
示例 3B
如前文關於示例3A所述製備及儲存神經移植物。第一組神經移植物包括八個以此方式製備之神經移植物，第一組包括四個直徑大於3 mm的神經移植物及四個直徑小於3 mm的神經移植物，每個神經移植物被浸沒於保存溶液（如前文關於示例3A所述）並儲存於攝氏4度之冷藏溫度。第二組神經移植物包括8個神經移植物，4個直徑大於3 mm的神經移植物及4個直徑小於3 mm的神經移植物，分別被置於少量LRS中且以冷凍狀態儲存於攝氏-80度。所有神經移植物均經過滅菌，並於攝氏4度之冷藏溫度或於攝氏-80度培養2週。
培養後，進行組織研究以評估神經內膜管結構。冷藏及冷凍樣品的組織學評估之示例性結果示於圖9A至9F。圖9A示出以冷藏狀態進行儲存的神經移植物之層連結蛋白染色切片，神經移植物的直徑大於3 mm。圖9B示出以冷凍狀態進行儲存的神經移植物之層連結蛋白染色切片，神經移植物的直徑大於3 mm。圖9C為儲存於冷藏溫度的神經移植物之放大圖像，且圖9D為於冷凍時儲存的神經移植物之放大圖像。
如圖9A至9D所示，儲存於冷藏溫度的神經移植物樣品（圖9A及9C）顯示基本上完整的神經內膜管結構。與以冷凍狀態進行儲存的樣品相比，儲存於冷藏溫度的神經移植物樣品表現出略微鬆散的周邊神經ECM、略微增加的束狀分離以及神經內膜管中的一些非專一性染色。儘管如此，觀察到冷藏之樣品的神經內膜管經歷了相對有限的結構變化且具有與充分保存一致之形態（例如微結構）。綜合而言，冷藏溫度儲存的神經移植物中神經內膜管之保存在視覺上與於冷凍時儲存的神經移植物相當。
也對直徑大於3 mm之冷藏及冷凍樣品進行了神經內膜管評估 （ETA）。以冷藏狀態儲存的樣品之平均ETA分數為 9359.60（標準差為 2306.95），而平均ETA分數為14493.04（標準差為 1670.25）。冷藏之樣本的ETA分數與神經組織一致，在儲存後能夠滿足植入人類或非人類對象之驗收準則。
圖9E及9F示出儲存於冷藏溫度（圖9E）及攝氏-80度（圖9F）的神經移植物之層連結蛋白染色切片。圖9E及9F所示之神經移植物各自的直徑小於3mm。藉由比較圖9E及9F，可看出冷藏溫度儲存的神經移植物經歷了束狀組織自周圍組織之輕微分離。此外，如圖9E所示，發生了一些神經內管損傷，並觀察到一些收縮。這些形態上的改變僅限於直徑小於3 mm的樣品，且在性質上相對較小。觀察到儲存於攝氏4度的神經移植物表現出與保存後支持人類或非人類對象之周邊神經再生的適用性一致之微結構，因此表示冷藏溫度儲存的神經移植物之適當保存。
應當理解，雖然本公開是參考較佳之實施方式、示例性實施方式及可選的特徵而得，但是所屬技術領域中具有通常知識者可採用本文公開的概念之修改及變化，並且這樣的修改及變化被認為落在由所附申請專利範圍所限定之本公開的範圍內。此處提供的具體實施方式及示例為本公開之有用實施方式的示例且為非限制性的，並且僅為說明性的。對於所屬技術領域中具有通常知識者而言顯而易見的是，可使用本說明書中闡述之裝置、裝置組件、方法及步驟之大量的變化物來執行本公開。正如所屬技術領域中具有通常知識者所將理解，可用於本方法之手段及裝置可包括大量各種可選的組合物及處理元件與步驟。
100:過程
110:神經移植物
112:神經外膜
114:神經束膜
116:神經內膜
120:神經移植物
122:溶液
130:神經移植物
132:伽馬輻射
140:神經移植物
142:冷凍乾燥溶液
200:過程
202:步驟
204:步驟
206:步驟
300:過程
以下圖式形成本說明書的一部分並且被包括以進一步展示本公開的某些方面。藉由參考這些圖式中的一個或多個並結合本文呈現之示例性實施方式的詳細描述，能夠更佳地理解本公開。
根據本公開之多個方面，圖1示出用於儲存組織或植入物如神經移植物的示例性過程之示意圖。
根據本公開之多個方面，圖2示出用於儲存組織或植入物的示例性過程之流程圖。
根據本公開之多個方面，圖3示出用於儲存組織或植入物的另一示例性過程之示意圖。
根據本公開之多個方面，圖4A示出儲存於溶液中之神經組織的組織切片。
根據本公開之多個方面，圖4B示出於冷凍時儲存之神經組織的組織切片。
根據本公開之多個方面，圖4C示出儲存於溶液中之神經組織的組織切片。
根據本公開之多個方面，圖4D示出於冷凍時儲存之神經組織的組織切片。
根據本公開之多個方面，圖5A示出說明在不同狀態下儲存之神經組織的縫合保留特性之圖表。
根據本公開之多個方面，圖5B示出說明在不同狀態下儲存後之神經組織中所存在之神經內膜管的評估之圖表。
根據本公開之多個方面，圖6A示出儲存於溶液中之神經組織的組織切片。
根據本公開之多個方面，圖6B示出於冷凍時儲存之神經組織的組織切片。
根據本公開之多個方面，圖6C示出儲存於溶液中之神經組織的組織切片。
根據本公開之多個方面，圖6D示出於冷凍時儲存之神經組織的組織切片。
根據本公開之多個方面，圖7A示出說明在不同狀態下儲存之神經組織的縫合保留特性之圖表。
根據本公開之多個方面，圖7B示出說明在不同狀態下儲存後之神經組織中所存在之神經內膜管的評估之圖表。
根據本公開之多個方面，圖8A示出被儲存於溶液中之神經組織的組織切片。
根據本公開之多個方面，圖8B示出於冷凍時被儲存之神經組織的組織切片。
根據本公開之多個方面，圖9A示出被儲存於溶液中之神經組織的組織切片。
根據本公開之多個方面，圖9B示出於冷凍時被儲存之神經組織的組織切片。
根據本公開之多個方面，圖9C示出被儲存於溶液中之神經組織的組織切片。
根據本公開之多個方面，圖9D示出於冷凍時被儲存之神經組織的組織切片。
根據本公開之多個方面，圖9E示出被儲存於溶液中之神經組織的組織切片。
根據本公開之多個方面，圖9F示出於冷凍時被儲存之神經組織的組織切片。
100:過程
110:神經移植物
112:神經外膜
114:神經束膜
116:神經內膜
122:溶液
132:伽馬輻射
Claims (79)
- 一種保存組織移植物的方法，所述方法之特徵在於，包括： 將所述組織移植物浸沒於包含一種或多種抗微生物及／或穩定試劑之溶液中； 及 當所述溶液處於未凍結狀態時，將所述組織移植物儲存於所述溶液中至少 24 小時之時間段。
- 如請求項1記載的方法，其中所述組織移植物為神經移植物。
- 如請求項1或2記載的方法，其中所述溶液包含一種或多種抗微生物試劑，所述一種或多種抗微生物試劑包括葡萄糖酸洛赫西定。
- 如請求項3記載的方法，其中所述葡萄糖酸洛赫西定以約0.0005重量％至約2重量％之量存在於所述溶液中。
- 如請求項1至4中任一項記載的方法，其中所述溶液包含一種或多種穩定試劑，所述一種或多種穩定試劑包括丙二醇。
- 如請求項5記載的方法，其中所述丙二醇以約0.001重量％至約50重量％之量存在於所述溶液中。
- 如請求項1至6中任一項記載的方法，其中所述溶液進一步包括乳酸鹽Ringer氏溶液（LRS）、磷酸鹽緩衝鹽水（PBS）、生理食鹽水或去離子水之一種或多種。
- 如請求項1至7中任一項記載的方法，其中所述溶液不含二甲基亞碸。
- 如請求項1至7中任一項記載的方法，其中所述溶液基本上不含二甲基亞碸。
- 如請求項1至7中任一項記載的方法，其中所述溶液進一步包括甘油或二甲基亞碸之一種或多種。
- 如請求項1至10中任一項記載的方法，其中所述組織移植物被儲存於約攝氏0度至約攝氏30度之溫度。
- 如請求項1至11中任一項記載的方法，其中所述組織移植物被儲存於室溫。
- 如請求項1至12中任一項記載的方法，進一步包括在儲存所述組織移植物之前對所述組織移植物進行滅菌。
- 如請求項13記載的方法，其中對所述組織移植物進行滅菌包括將所述組織移植物暴露於伽馬輻射。
- 如請求項13或14記載的方法，進一步包括在對所述組織移植物進行滅菌之前凍結所述組織移植物及所述溶液。
- 如請求項15記載的方法，進一步包括在滅菌後及儲存所述組織移植物之前將所述溶液解凍至所述未凍結狀態。
- 如請求項1至16中任一項記載的方法，其中所述溶液由鎂、鈣、鈉或鉀的可溶性鹽之一種或多種形成。
- 如請求項17記載的方法，其中所述溶液由氯化鎂形成。
- 如請求項1或2記載的方法，其中所述一種或多種抗微生物及／或穩定試劑包括葡萄糖酸洛赫西定及丙二醇，所述葡萄糖酸洛赫西定與所述丙二醇之比例按重量計為約1：50至約1：2。
- 一種使用請求項1至19中任一項的被保存之所述組織移植物的方法，其特徵在於，進一步包括將所述組織移植物植入人類或非人類對象。
- 如請求項1至20中任一項記載的方法，其中所述組織移植物包含非細胞性神經組織。
- 一種保存組織移植物的方法，所述方法之特徵在於，包括： 將所述組織移植物浸沒於包含葡萄糖酸洛赫西定及丙二醇之溶液中；及 將所述組織移植物儲存於所述溶液中至少24小時之時間段，所述溶液處於未凍結狀態。
- 如請求項22記載的方法，其中所述組織移植物為神經移植物。
- 如請求項22或23記載的方法，其中所述葡萄糖酸洛赫西定以約0.0005重量％至約2重量％之量存在於所述溶液中。
- 如請求項22至24中任一項記載的方法，其中所述丙二醇以約0.001重量％至約50重量％之量存在於所述溶液中。
- 如請求項22至25中任一項記載的方法，其中所述溶液進一步包括乳酸鹽Ringer氏溶液（LRS）、磷酸鹽緩衝鹽水（PBS）、生理食鹽水或去離子水之一種或多種。
- 如請求項22至26中任一項記載的方法，其中所述溶液不含二甲基亞碸。
- 如請求項22至26中任一項記載的方法，其中所述溶液基本上不含二甲基亞碸。
- 如請求項22至26中任一項記載的方法，其中所述溶液進一步包括甘油或二甲基亞碸之一種或多種。
- 如請求項22至29中任一項記載的方法，其中所述組織移植物被儲存於約攝氏0度至約攝氏30度之溫度。
- 如請求項22至30中任一項記載的方法，其中所述組織移植物被儲存於室溫。
- 如請求項22至31中任一項記載的方法，進一步包括在儲存所述組織移植物之前對所述組織移植物進行滅菌。
- 如請求項32記載的方法，其中對所述組織移植物進行滅菌包括將所述組織移植物暴露於伽馬輻射。
- 如請求項32或33記載的方法，進一步包括在對所述組織移植物進行滅菌之前凍結所述組織移植物及所述溶液。
- 如請求項34記載的方法，進一步包括在滅菌後及儲存所述組織移植物之前將所述溶液解凍至所述未凍結狀態。
- 如請求項22至35中任一項記載的方法，其中所述溶液由鎂、鈣、鈉或鉀的可溶性鹽之一種或多種形成。
- 如請求項36記載的方法，其中所述溶液由氯化鎂形成。
- 如請求項22至37中任一項記載的方法，其中所述葡萄糖酸洛赫西定與所述丙二醇之比例按重量計為約1：50至約1：2。
- 一種使用請求項22至38中任一項的被保存之組織移植物的方法，進一步包括將所述組織移植物植入人類或非人類對象。
- 如請求項22至39中任一項記載的方法，其中所述組織移植物包含非細胞性神經組織。
- 一種將組織移植物進行再水化的方法，所述方法之特徵在於包括： 將所述組織移植物以脫水狀態儲存至少24小時；及 將所述組織移植物浸沒於包含一種或多種抗微生物及／或穩定試劑之溶液中。
- 如請求項41記載的方法，其中所述組織移植物為神經移植物。
- 如請求項41或42記載的方法，其中所述溶液將被脫水之所述組織移植物進行再水化。
- 如請求項41或42記載的方法，進一步包括在將所述組織移植物置於所述溶液中之前將所述組織移植物進行再水化。
- 如請求項41至44中任一項記載的方法，其中所述溶液包含一種或多種抗微生物試劑，所述一種或多種抗微生物試劑包括葡萄糖酸洛赫西定。
- 如請求項45記載的方法，其中所述葡萄糖酸洛赫西定以約0.0005重量％至約2重量％之量存在於所述溶液中。
- 如請求項41至46中任一項記載的方法，其中所述溶液包含一種或多種穩定試劑，所述一種或多種穩定試劑包括丙二醇。
- 如請求項47記載的方法，其中所述丙二醇以約0.001重量％至約50重量％之量存在於所述溶液中。
- 如請求項41至48中任一項記載的方法，其中所述溶液進一步包括乳酸鹽Ringer氏溶液（LRS）、磷酸鹽緩衝鹽水（PBS）、生理食鹽水或去離子水之一種或多種。
- 如請求項41至49中任一項記載的方法，其中所述溶液不含二甲基亞碸。
- 如請求項41至49中任一項記載的方法，其中所述溶液基本上不含二甲基亞碸。
- 如請求項41至49中任一項記載的方法，其中所述溶液進一步包括甘油或二甲基亞碸之一種或多種。
- 如請求項41至52中任一項記載的方法，進一步包括對所述組織移植物進行滅菌。
- 如請求項53記載的方法，其中對所述組織移植物進行滅菌包括將所述組織移植物暴露於伽馬輻射。
- 如請求項41至54中任一項記載的方法，其中所述溶液由鎂、鈣、鈉或鉀的可溶性鹽之一種或多種形成。
- 如請求項55記載的方法，其中所述溶液由氯化鎂形成。
- 如請求項41記載的方法，其中所述一種或多種抗微生物及／或穩定試劑包括葡萄糖酸洛赫西定及丙二醇，所述葡萄糖酸洛赫西定與所述丙二醇之比例按重量計為約1：50至約1：2。
- 一種使用請求項41至57中任一項的被脫水之所述組織移植物的方法，其特徵在於，進一步包括將所述組織移植物植入人類或非人類對象。
- 如請求項41至58中任一項記載的方法，其中所述組織移植物包含非細胞性組織。
- 一種組織保存系統，其特徵在於，包括： 溶液，其包含一種或多種抗微生物及／或穩定試劑；及 所述溶液中之組織移植物。
- 如請求項60記載的組織保存系統，其中所述溶液包含一種或多種抗微生物試劑，所述一種或多種抗微生物試劑包括葡萄糖酸洛赫西定。
- 如請求項61記載的組織保存系統，其中所述葡萄糖酸洛赫西定以約0.0005重量％至約2重量％之量存在於所述溶液中。
- 如請求項60記載的組織保存系統，其中所述溶液包含一種或多種穩定試劑，所述一種或多種穩定試劑包括丙二醇。
- 如請求項63記載的組織保存系統，其中所述丙二醇以約0.001重量％至約50重量％之量存在於所述溶液中。
- 如請求項60至64中任一項記載的組織保存系統，其中所述溶液進一步包括乳酸鹽Ringer氏溶液（LRS）、磷酸鹽緩衝鹽水（PBS）、生理食鹽水或去離子水之一種或多種。
- 如請求項60至65中任一項記載的組織保存系統，其中所述溶液不含二甲基亞碸。
- 如請求項60至65中任一項記載的組織保存系統，其中所述溶液進一步包括甘油或二甲基亞碸之一種或多種。
- 如請求項60至67中任一項記載的組織保存系統，其中所述系統被配置為將所述組織移植物儲存於約攝氏0度至約攝氏30度之溫度。
- 如請求項60至67中任一項記載的組織保存系統，其中所述系統被配置為將所述組織移植物儲存於室溫。
- 如請求項60至69中任一項記載的組織保存系統，其中所述組織移植物包含非細胞性神經組織。
- 一種組織保存系統，其特徵在於，包括： 溶液，其包含葡萄糖酸洛赫西定及丙二醇；及 所述溶液中之組織移植物。
- 如請求項71記載的組織保存系統，其中所述葡萄糖酸洛赫西定以約0.0005重量％至約2重量％之量存在於所述溶液中。
- 如請求項71或72記載的組織保存系統，其中所述丙二醇以約0.001重量％至約50重量％之量存在於所述溶液中。
- 如請求項71至73中任一項記載的組織保存系統，其中所述溶液進一步包括乳酸鹽Ringer氏溶液（LRS）、磷酸鹽緩衝鹽水（PBS）、生理食鹽水或去離子水之一種或多種。
- 如請求項71至74中任一項記載的組織保存系統，其中所述溶液不含二甲基亞碸。
- 如請求項71至74中任一項記載的組織保存系統，其中所述溶液進一步包括甘油或二甲基亞碸之一種或多種。
- 如請求項71至76中任一項記載的組織保存系統，其中所述系統被配置為將所述組織移植物儲存於約攝氏0度至約攝氏30度之溫度。
- 如請求項71至76中任一項記載的組織保存系統，其中所述系統被配置為將所述組織移植物儲存於室溫。
- 如請求項71至78中任一項記載的組織保存系統，其中所述組織移植物包含非細胞性神經組織。
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|---|---|---|---|
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