TW202317155A - 一種含有聚乙二醇化艾塞那肽變異體的藥物組成物及其用途 - Google Patents

一種含有聚乙二醇化艾塞那肽變異體的藥物組成物及其用途 Download PDF

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Abstract

本發明屬於蛋白質藥物技術領域，具體涉及一種含有聚乙二醇化艾塞那肽變異體的藥物組成物及其用途。具體而言，本發明提供的藥物組成物包括聚乙二醇化艾塞那肽變異體和pH調節劑。本發明透過對各種組分及濃度篩選，開發出穩定性優良的藥物組成物，該藥物組成物可作為預防和/或治療糖尿病的藥物，適於長期保存。

Description

一種含有聚乙二醇化艾塞那肽變異體的藥物組成物及其用途
本發明屬於蛋白質藥物技術領域，具體涉及一種含有聚乙二醇化艾塞那肽變異體的藥物組成物及其用途。
隨著經濟社會的發展、人口平均壽命的延長和生活方式的變化，糖尿病已經成為世界各國主要的衛生保健問題。無論在發達國家或是發展中國家，糖尿病的發病率都在急劇上升。糖尿病是由於胰腺分泌功能缺陷或胰島素作用缺陷引起的，以血糖升高為特徵的代謝性疾病。糖尿病患者若血糖長期控制不佳，可導致器官組織損傷，成為“萬病之源”，伴發各種器官，尤其是眼、心、血管、腎、神經損害或器官功能不全或衰竭，嚴重可致患者殘疾或者死亡。根據發病機制不同，糖尿病主要分為I型糖尿病、II型糖尿病、妊娠期糖尿病和其他類型糖尿病。II型糖尿病患者是糖尿病的主體，占比約為90%。II型糖尿病的特點是胰島素分泌或作用失調及β-細胞功能障礙，致使脂肪、碳水化合物以及蛋白質代謝失調，造成慢性血糖過高，最終導致各種血管及臟器併發症出現。
類升糖素胜肽-1 (Glucagon-like peptide-1, GLP-1)於1985年被首次發現，其是人體進食後由升糖素原基因表現，主要在腸道黏膜L-細胞分泌的一種產物，它能刺激胰島β-細胞分泌胰島素，對穩定血糖位準有重要作用(Knudsen. J. Med. Chem. 2004, 47, 17, 4128–4134)。但GLP-1在體內很容易被雙基胜肽酶IV (DPPIV)降解，半衰期不足2分鐘，幾乎不能成為有效的抗糖尿病藥物。
艾塞那肽(Exenatide，或稱Exendin-4)是在爬行動物毒蜥的唾液分泌物中發現的多肽，與GLP-1(7-36)具有高度同源性(53%)(Eng et al. J. Biol. Chem. 265(33), 20259-62；Eng et al. J. Biol. Chem. 267(11), 7402-5)。研究表明，Exendin-4同樣可以與GLP-1受體結合，並在藥理上表現出與GLP-1相類似的促效作用，例如：增加胰島素的合成及葡萄糖依賴性促胰島素分泌；刺激β細胞增生和再生，抑制β細胞凋亡，從而增加β細胞的數量；抑制升糖素的分泌；抑制肝糖生成，但不會引起嚴重低血糖；抑制餐後胃腸道動力及分泌功能；降低食欲，減少食物的攝入；對神經細胞具有保護作用(Bonner-Weir et al. Nat Biotechnol. 23(7), 857-61；Raufman et al. J. Biol. Chem. 266(5), 2897-2902；Kolligs et al. Diabetes.44(1), 16-19；Turton et al. Nature. 379(6560), 69-72)。Exendin-4促進胰島素分泌和抑制餐後升糖素分泌的作用具有血糖依賴性，優於目前所用的磺脲類降糖藥，不易發生低血糖反應，能夠極大減少血糖監測次數，並能減輕體重。由美國安米林(Amylin)和禮來(Eli Lilly)公司共同開發的一天注射兩次的Exendin-4 (通用名Exenatide，商品名：Byetta)於2005年和2006年分別在美國和歐洲上市，使得該類藥物開始在糖尿病及肥胖治療領域得到廣泛的應用。與天然GLP-1相比，Exenatide透過第2位胺基酸替換，有效地抑制了DPPIV的酶解，在體內的半衰期可達60-90分鐘。
聚合物修飾技術是上世紀70年代發展起來的一種強有力的修飾技術，其中尤以聚乙二醇化技術為代表。該技術是將聚乙二醇(PEG)與蛋白質藥物化學結合，對蛋白質的表面進行修飾。透過PEG的修飾，一方面增加了蛋白質的分子量，降低了其在腎臟的排泄速率；另一方面，偶聯的PEG鏈在被修飾的蛋白質分子表面產生空間位阻效應，減低血液中蛋白水解酶對該蛋白的水解作用，從而有效地延長了其在循環系統內的滯留時間，導致藥物血漿週期延長和系統性藥物暴露增加並提高療效。
WO 2010/121559 A1揭示了一類聚乙二醇化的艾塞那肽變異體化合物，相比於艾塞那肽，經聚乙二醇特異性修飾得到的綴合物在作用持續時間、生物可利用性及治療效果等方面均具有明顯優勢。臨床研究表明，聚乙二醇化艾塞那肽變異體對於II型糖尿病患者具有優異的療效和安全性。
目前，以GLP-1受體促效劑為代表的多肽類藥物多以注射液的形式保存及使用。多肽活性成分容易受到外界環境的影響，從而發生水解、脫氨、氧化和消旋等化學變化，所產生的雜質會嚴重影響藥物的有效性和安全性。為解決該技術難題，在已獲批上市的GLP-1類藥物中，通常會在處方中額外加入緩衝系統，降低外界環境對溶液pH的影響，以此來維持活性成分的穩定性，例如，Liraglutide (商品名Victoza)、Semaglutide (商品名Ozempic)中使用了磷酸鹽緩衝系統(參見Victoza、Ozempic藥品說明書)，Exenatide (商品名Byetta)中使用了醋酸鹽緩衝系統(參見Byetta藥品說明書)。然而，目前尚未揭示適於長期保存的聚乙二醇化艾塞那肽變異體的注射液配方。
發明要解決的問題
鑒於目前尚未揭示適於長期保存的聚乙二醇化艾塞那肽變異體的注射液配方，本發明提供一種穩定的含有聚乙二醇化艾塞那肽變異體的藥物組成物，同時，本發明還提出了該藥物組成物的用途。 用於解決問題的方案
[1].一種含有聚乙二醇化艾塞那肽變異體的藥物組成物，其包括以下組分：聚乙二醇化艾塞那肽變異體和pH調節劑，
Figure 02_image001
， 所述聚乙二醇化艾塞那肽變異體中聚乙二醇修飾部分的分子量為5~100 kDa。
[2].根據[1]所述的藥物組成物，所述聚乙二醇修飾部分的分子量為10~50 kDa。
[3].根據[1]或[2]所述的藥物組成物，所述聚乙二醇修飾部分的分子量為15~40 kDa。
[4].根據[1]至[3]中任一項所述的藥物組成物，所述聚乙二醇修飾部分的分子量為20~29 kDa。
[5].根據[1]至[4]中任一項所述的藥物組成物，所述藥物組成物包括溶劑。
[6].根據[5]所述的藥物組成物，所述藥物組成物的pH值為2.0~6.0。
[7].根據[5]或[6]所述的藥物組成物，所述藥物組成物的pH值為2.5~5.5。
[8].根據[5]至[7]中任一項所述的藥物組成物，所述藥物組成物的pH值為3.0~5.0。
[9].根據[5]至[8]中任一項所述的藥物組成物，所述藥物組成物的pH值為3.5~4.5。
[10].根據[1]至[9]中任一項所述的藥物組成物，所述pH調節劑為酸。
[11].根據[10]所述的藥物組成物，所述酸選自檸檬酸、醋酸、三氟乙酸、磷酸、鹽酸、酒石酸、蘋果酸和丙酸中的一種或多種。
[12].根據[10]或[11]所述的藥物組成物，所述酸選自檸檬酸、醋酸、三氟乙酸和磷酸中的一種或多種。
[13].根據[10]至[12]中任一項所述的藥物組成物，所述酸為檸檬酸。
[14].根據[1]至[9]中任一項所述的藥物組成物，所述pH調節劑為緩衝系統。
[15].根據[14]所述的藥物組成物，所述緩衝系統包括甘胺酸/鹽酸、檸檬酸/檸檬酸鈉、檸檬酸/磷酸氫二鈉、醋酸/醋酸鈉、乳酸/氫氧化鈉、乳酸/碳酸鈉、丙酸/丙酸鈉、琥珀酸/琥珀酸鈉和蘋果酸/氫氧化鈉中的任一種。
[16].根據[14]或[15]所述的藥物組成物，所述緩衝系統選自甘胺酸/鹽酸、醋酸/醋酸鈉、乳酸/氫氧化鈉、乳酸/碳酸鈉、丙酸/丙酸鈉、琥珀酸/琥珀酸鈉和蘋果酸/氫氧化鈉中的任一種。
[17].根據[14]或[16]中任一項所述的藥物組成物，所述緩衝系統為乳酸/氫氧化鈉或乳酸/碳酸鈉。
[18].根據[5]至[17]中任一項所述的藥物組成物，以胜肽含量計，所述聚乙二醇化艾塞那肽變異體的濃度為0.1~5.0 mg/ml。
[19].根據[5]至[18]中任一項所述的藥物組成物，以胜肽含量計，所述聚乙二醇化艾塞那肽變異體的濃度為0.25~1.5 mg/ml。
[20].根據[5]至[19]中任一項所述的藥物組成物，以胜肽含量計，所述聚乙二醇化艾塞那肽變異體的濃度為0.3~0.8 mg/ml。
[21].根據[5]至[20]中任一項所述的藥物組成物，以胜肽含量計，所述聚乙二醇化艾塞那肽變異體的濃度為0.4~0.6 mg/ml。
[22].根據[5]至[21]中任一項所述的藥物組成物，以胜肽含量計，所述聚乙二醇化艾塞那肽變異體的濃度為0.5 mg/ml。
[23].根據[1]至[22]中任一項所述的藥物組成物，所述藥物組成物包括滲透壓調節劑。
[24].根據[23]所述的藥物組成物，所述滲透壓調節劑選自甘露醇、山梨醇、木糖醇、甘油和氯化鈉中的一種或多種。
[25].根據[23]至[24]所述的藥物組成物，所述滲透壓調節劑為甘露醇。
[26].根據[23]至[25]中任一項所述的藥物組成物，所述滲透壓調節劑的濃度為5~100 mg/ml。
[27].根據[23]至[26]中任一項所述的藥物組成物，所述滲透壓調節劑的濃度為10~80 mg/ml。
[28].根據[23]至[27]中任一項所述的藥物組成物，所述滲透壓調節的濃度為30~60 mg/ml。
[29].根據[23]至[28]中任一項所述的藥物組成物，所述滲透壓調節的濃度為40~50 mg/ml。
[30].根據[1]至[29]中任一項所述的藥物組成物，所述藥物組成物中還包括抑菌劑。
[31].根據[30]所述的藥物組成物，所述抑菌劑選自間甲酚、苯酚、氯甲酚、氯丁醇、苯甲醇和尼泊金酯中的一種或多種。
[32].根據[30]或[31]所述的藥物組成物，所述抑菌劑選自間甲酚、苯酚、氯甲酚、氯丁醇和尼泊金酯中的一種或多種。
[33].根據[30]至[32]中任一項所述的藥物組成物，所述抑菌劑為間甲酚。
[34].根據[30]至[33]中任一項所述的藥物組成物，所述抑菌劑的濃度為0.1~5 mg/ml。
[35].根據[30]至[34]中任一項所述的藥物組成物，所述抑菌劑的濃度為1.0~4.0 mg/ml。
[36].根據[30]至[35]中任一項所述的藥物組成物，所述抑菌劑的濃度為1.5~3.0 mg/ml。
[37].根據[30]至[36]中任一項所述的藥物組成物，所述抑菌劑的濃度為2.0~2.5 mg/ml。
[38].根據[1]至[37]中任一項所述的藥物組成物，所述藥物組成物為注射液。
[39].根據[1]至[38]中任一項所述的藥物組成物在製備用於預防和/或治療糖尿病的藥物中的用途。 發明的效果
為解決含有聚乙二醇化艾塞那肽變異體的注射液在長期存儲過程中穩定性的問題，本發明透過對各種組分及濃度篩選，開發出穩定性優良的藥物組成物，該藥物組成物適於長期保存。
進一步地，在合適的pH條件下，未添加緩衝系統的藥物組成物能夠取得相當甚至是更優的穩定性，這是出乎意料的。
具體實施方式
以下將詳細說明本發明的各種示例性實施例、特徵和方面。在這裡專用的詞“示例性”意為“用作例子、實施例或說明性”。這裡作為“示例性”所說明的任何實施例不必解釋為優於或好於其它實施例。
另外，為了更好地說明本發明，在下文的具體實施方式中給出了眾多的具體細節。本領域技術人員應當理解，沒有某些具體細節，本發明同樣可以實施。在另外一些實例中，對於本領域技術人員熟知的方法、手段、器材和步驟未作詳細描述，以便於凸顯本發明的主旨。
如無特殊聲明，本說明書中所使用的單位均為國際標準單位，並且本發明中出現的數值，數值範圍，均應當理解為包含了工業生產中所不可避免的系統性誤差。
本說明書中，使用“數值A~數值B”表示的數值範圍是指包含端點數值A、B的範圍。
本說明書中，使用“可以”表示的含義包括了進行某種處理以及不進行某種處理兩方面的含義。
本說明書中，所提及的“一些具體/優選的實施方案”、“另一些具體/優選的實施方案”、“實施方案”等是指所描述的與該實施方案有關的特定要素(例如，特徵、結構、性質和/或特性)包括在此處所述的至少一種實施方案中，並且可存在於其它實施方案中或者可不存在於其它實施方案中。另外，應理解，所述要素可以任何合適的方式組合在各種實施方案中。 ＜第一方面＞
本發明的第一方面，本發明提供了一種含有聚乙二醇化艾塞那肽變異體的藥物組成物，其包括以下組分：聚乙二醇化艾塞那肽變異體和pH調節劑。
本發明透過對上述各種組分及濃度篩選，開發出穩定性優良的藥物組成物，該藥物組成物適於長期保存。具體而言： 聚乙二醇化艾塞那肽變異體
本發明提供的藥物組成物，其活性成分為聚乙二醇化艾塞那肽變異體。聚乙二醇化艾塞那肽變異體是指透過聚乙二醇化(PEGylation)技術特異性修飾艾塞那肽變異體後得到的綴合物。
其中，術語“艾塞那肽變異體”是指Cys 39-Exendin-4 (或Cys 39-exenatide)，其為艾塞那肽胺基酸序列中的第39位的絲胺酸(Ser)置換為半胱胺酸(Cys)後得到的變異體。具體地，Cys 39-Exendin-4 (或Cys 39-exenatide)的結構為：H-His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Cys-NH 2，如SEQ ID NO.1所示。
術語“聚乙二醇化艾塞那肽變異體”為Cys 39-exenatide與mPEG-ppMAL(α-甲氧基-聚乙二醇-ω-[3-(3-馬來醯亞胺基-1-氧代丙基)胺基]丙基醚)的綴合物，其結構為：
Figure 02_image001
， 其中，n獨立地選自任意的自然數，使聚乙二醇修飾部分的分子量落入目標範圍內。
術語“聚乙二醇修飾部分的分子量”為mPEG-ppMAL的分子量。由於聚合物是由一定分佈範圍內的不同聚合度的分子構成，一般用平均分子量表示聚合物的分子量。具體來說，可以為數量平均分子量，也可以為重量平均分子量。儘管在聚合物的聚合度差異較大時，數量平均分子量和重量平均分子量可能有一些偏差，但是對於分佈範圍較窄的聚合物來說，二者趨於相等。對於本發明的聚乙二醇化艾塞那肽變異體，在提及其分子量時，既可以是重量平均分子量，也可以是數量平均分子量，優選數量平均分子量。
本發明中，對聚乙二醇化艾塞那肽變異體中聚乙二醇修飾部分的分子量可不作特別限定，可由所屬技術人員根據實際需要而確定。在本發明一些具體的實施方案中，聚乙二醇修飾部分的分子量為5~100 kDa，優選為10~50 kDa，更優選為15~40 kDa，示例性地，其分子量可以為15 kDa、16 kDa、17 kDa、18 kDa、19 kDa、20 kDa、21 kDa、22 kDa、23 kDa、24 kDa、25 kDa、26 kDa、27 kDa、28 kDa、29 kDa、30 kDa、31 kDa、32 kDa、33 kDa、34 kDa、35 kDa、36 kDa、37 kDa、38 kDa、39 kDa、40 kDa等。
在本發明一些更優選的實施方案中，聚乙二醇修飾部分的分子量為20~29 kDa。
相比於艾塞那肽，經上述修飾後，本發明的活性成分在作用持續時間、生物可利用性及治療效果等方面均具有明顯優勢，對於糖尿病患者具有優異的療效和安全性。
本發明的藥物組成物可以包含上述活性成分和pH調節劑，也可以為進一步包含其他藥學上可接受的載劑、佐劑或介質等的某種製劑形式，以便於臨床應用或保存等。本發明對藥物組成物的具體應用形式不作限定，可由所屬領域技術人員根據實際需要而確定。例如，上述活性成分和pH調節劑和適量溶劑製成液體製劑，該溶劑可以為水、乙醇或其與水形成的混合溶劑、丙二醇或其與水形成的混合溶劑、甘油與水形成的混合溶劑、聚乙二醇與水形成的混合溶劑、花生油、麻油和豆油等，所述液體製劑更具體地可以為口服液、注射液等。在本發明一些具體的實施方案中，本發明的藥物組成物為注射液，注射液的溶劑可選自水(例如注射用水)、乙醇與水形成的混合溶劑、丙二醇與水形成的混合溶劑、聚乙二醇與水形成的混合溶劑等中的任一種，優選為注射用水。
本發明對藥物組成物中活性成分的含量不作特別限定，可由所屬領域技術人員根據實際需要而確定。為確保優異的療效和用藥的便利性，在本發明一些具體的實施方案中，本發明的藥物組成物中，以胜肽含量計，聚乙二醇化艾塞那肽變異體的濃度為0.1~5.0 mg/ml。
本發明的發明人發現，聚乙二醇化艾塞那肽變異體的濃度還影響著藥物組成物的穩定性，上述胜肽濃度越高，其穩定性將越好。但當藥物組成物為注射液時，當上述胜肽濃度升高時，其溶液黏度也越大，將不利於注射。因此，在本發明的一些優選的實施方案中，聚乙二醇化艾塞那肽變異體的濃度不高於1.5 mg/ml，具體可以為0.2 mg/ml、0.25 mg/ml、0.3 mg/ml、0.35 mg/ml、0.4 mg/ml、0.45 mg/ml、0.5 mg/ml、0.55 mg/ml、0.6 mg/ml、0.65 mg/ml、0.7mg/ml、0.75 mg/ml、0.8 mg/ml、0.85 mg/ml、0.9 mg/ml、0.95 mg/ml、1.0 mg/ml、1.1 mg/ml、1.2 mg/ml、1.3 mg/ml、1.4 mg/ml、1.5 mg/ml等。
當上述濃度低於0.25 mg/ml時，藥物組成物的穩定性略下降，因此，在本發明一些更優選的實施方案中，聚乙二醇化艾塞那肽變異體的濃度為0.25~1.5 mg/ml，更優選為0.3~0.8 mg/ml，甚至更優選為0.4~0.6 mg/ml。
考慮到當上述濃度為0.5 mg/ml時，藥物組成物的穩定性已能滿足需求，因此，在本發明一些更優選的實施方案中，聚乙二醇化艾塞那肽變異體的濃度為0.5 mg/ml。 pH值
pH值對聚乙二醇化艾塞那肽變異體的穩定性具有較大影響。本發明提供的藥物組成物，在偏酸性條件下較為穩定。
在本發明一些具體的實施方案中，藥物組成物的pH值為2.0~6.0。在此pH值範圍內，本發明的藥物組成物可保持較好的穩定性。當pH值在6.0以上時，聚乙二醇化艾塞那肽變異體降解較快。
在本發明一些優選的實施方案中，藥物組成物的pH值為2.5~5.5，進一步優選為3.0~5.0。該pH條件下，藥物組成物在低溫(例如4℃)存放時間9個月，其液相純度仍能保持在90%以上。示例性地，pH值可以為3.0、3.1、3.2、3.3、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0等。
在本發明一些更優選的實施方案中，藥物組成物的pH值為3.5~4.5。若能維持該pH條件，具體所使用的pH調節劑可不作限定，如pH調節劑可為酸，或者可為緩衝系統等，該pH條件可減少或避免其它組分(例如緩衝系統)對穩定性所帶來的負面影響。
在本發明一些更優選的實施方案中，藥物組成物的pH值為3.5~4.5時，該pH條件下低溫(例如4℃)存放時間9個月，其液相純度仍能保持在94%以上。 pH調節劑
本發明對pH調節劑的具體種類不作特別限定，可由所屬領域技術人員根據實際需要而確定。在本發明一些具體的實施方案中，pH調節劑可以為酸，也可以為緩衝系統。 (酸)
對於pH調節劑為酸的情況，本發明對酸的具體種類不作特別限定，可由所屬領域技術人員根據實際需要而確定，例如可以為檸檬酸、醋酸、馬來酸、乳酸等。在本發明一些優選的實施方案中，酸選自檸檬酸、醋酸、三氟乙酸、磷酸、鹽酸、酒石酸、蘋果酸和丙酸中的一種或多種。
在本發明一些更優選的實施方案中，酸選自檸檬酸、醋酸、三氟乙酸和磷酸中的一種或多種。
在本發明一些更優選的實施方案中，pH調節劑為檸檬酸。此實施方案不使用緩衝系統，僅使用檸檬酸將pH值調至上述目標值(例如3.5~4.5)，可保持藥物組成物在高溫(例如40℃)下長期穩定，其綜合穩定性甚至高於下文中使用緩衝系統(例如乳酸緩衝系統)的情況。 (緩衝系統)
緩衝系統由共軛酸鹼對或兩性物質組成，能在一定程度上抵消、減輕外加酸或鹼對溶液酸鹼度的影響，從而保持溶液的pH值相對穩定。
對於pH調節劑為緩衝系統的情況，本發明對緩衝系統的具體種類不作特別限定，可由所屬領域技術人員根據實際需要而確定，例如可以為乳酸/碳酸鈉、乳酸/氫氧化鈉、磷酸二氫鉀/氫氧化鈉等。
在本發明的一些優選的實施方案中，藥物組成物中所使用的緩衝系統包括甘胺酸/鹽酸、檸檬酸/檸檬酸鈉、檸檬酸/磷酸氫二鈉、醋酸/醋酸鈉、乳酸/氫氧化鈉、乳酸/碳酸鈉、丙酸/丙酸鈉、琥珀酸/琥珀酸鈉和蘋果酸/氫氧化鈉中的任一種。
在本發明一些更優選的實施方案中，藥物組成物中所使用緩衝系統選自甘胺酸/鹽酸、醋酸/醋酸鈉、乳酸/氫氧化鈉、乳酸/碳酸鈉、丙酸/丙酸鈉、琥珀酸/琥珀酸鈉和蘋果酸/氫氧化鈉中的任一種。在合適的pH範圍內(例如pH值為3.5~4.5)，可不同程度地減緩聚乙二醇化艾塞那肽變異體的降解。
在本發明一些更優選的實施方案中，藥物組成物中所使用的緩衝系統為乳酸緩衝系統，具體可以為乳酸/氫氧化鈉或乳酸/碳酸鈉。在合適的pH範圍內(例如pH值為3.5~4.5)，使用該類緩衝系統可使藥物組成物保持較好的穩定性。
對於上述緩衝系統的用量，本發明不作特別限定，可由所屬領域技術人員根據實際需要而確定。本發明緩衝系統的用量以“緩衝鹽的濃度”計量，術語“緩衝鹽的濃度”指的是緩衝系統中陰離子濃度。在本發明一些的實施方案中，緩衝鹽的濃度為10-50 mmol/L，優選為20-40 mmol/L，更優選為25-35 mmol/L，甚至更優選為30 mmol/L。本發明透過改變緩衝系統中共軛酸鹼或兩性物質的比例來調節不同的pH值。
本發明的藥物組成物還可任選地包括其它組分，例如滲透壓調節劑、抑菌劑等，具體而言： 滲透壓調節劑
本發明對是否使用滲透壓調節劑不作特別限定，在本發明一些優選的實施方案中，上述藥物組成物包括滲透壓調節劑。滲透調節劑用於調節藥物組成物的滲透壓。本發明對滲透壓調節劑的具體種類不作特別限定，可為本領域現有技術中常用的物質，如海藻糖、甘露醇、半乳糖、麥芽糖和葡萄糖等。
在本發明一些具體的實施方案中，滲透壓調節劑選自甘露醇、山梨醇、木糖醇、甘油和氯化鈉中的一種或多種，該類滲透壓調節劑不僅能夠調節滲透壓，還對藥物組成物的穩定起到輔助作用。
在本發明一些優選的實施方案中，滲透壓調節劑為甘露醇。相比於上述氯化鈉等，甘露醇可增強藥物組成物的穩定性。
對於滲透壓調節劑的用量，本發明不作特別限定，可由所屬領域技術人員根據實際需要而確定。在本發明一些具體的實施方案中，滲透壓調節劑的濃度為5~100 mg/ml，優選為10~80 mg/ml，更優選為30~60 mg/ml，示例性地，其濃度具體可以為30 mg/ml、31 mg/ml、32 mg/ml、33 mg/ml、34 mg/ml、35 mg/ml、36 mg/ml、37 mg/ml、38 mg/ml、39 mg/ml、40 mg/ml、41 mg/ml、42 mg/ml、43 mg/ml、44 mg/ml、45 mg/ml、46 mg/ml、47 mg/ml、48 mg/ml、49 mg/ml、50 mg/ml、51 mg/ml、52 mg/ml、53 mg/ml、54 mg/ml、55 mg/ml、56 mg/ml、57 mg/ml、58 mg/ml、59 mg/ml、60 mg/ml等。
在本發明一些優選的實施方案中，滲透壓調節劑的濃度為40~50 mg/ml。 抑菌劑
本發明對是否使用抑菌劑不作特別限定，可由所屬領域技術人員根據實際需要而確定。在本發明一些具體的實施方案中，藥物組成物使用抑菌劑。
本發明對抑菌劑的具體種類不作特別限定，可由所述領域技術人員根據實際需要而確定，例如，間甲酚、苯酚、山梨酸等。在本發明一些優選的實施方案中，抑菌劑選自間甲酚、苯酚、氯甲酚、氯丁醇、苯甲醇和尼泊金酯中的一種或多種。
在本發明一些更優選的實施方案中，抑菌劑選自間甲酚、苯酚、氯甲酚、氯丁醇和尼泊金酯中的一種或多種。採用此類抑菌劑，藥物組成物較為穩定。
在本發明一些更優選的實施方案中，抑菌劑為間甲酚，藥物組成物的穩定性更好。
對於上述抑菌劑的用量，本發明不作特別限定，可由所屬領域技術人員根據實際需要而確定。在本發明一些具體的實施方案中，抑菌劑的濃度為0.1~5 mg/ml，優選為1.0~4.0 mg/ml，更優選為1.5~3.0 mg/ml，示例性地，其濃度具體可以為1.5 mg/ml、1.6 mg/ml、1.7 mg/ml、1.8 mg/ml、1.9 mg/ml、2.0 mg/ml、2.1 mg/ml、2.2 mg/ml、2.3 mg/ml、2.4 mg/ml、2.5 mg/ml、2.6 mg/ml、2.7 mg/ml、2.8 mg/ml、2.9 mg/ml、3.0 mg/ml等。
在本發明一些優選的實施方案中，抑菌劑的濃度為2.0~2.5 mg/ml。 ＜第二方面＞
本發明的第二方面，本發明還提出了上述藥物組成物的用途。 醫藥用途
基於活性成分聚乙二醇化艾塞那肽變異體可控制血糖位準的功效，上述任一種藥物組成物也可平穩有效地控制血糖位準，因此，本發明提供了上述藥物組成物，其用於預防和/或治療糖尿病。
本發明還提供了上述藥物組成物在製備用於預防和/或治療糖尿病的藥物中的用途。 治療方法
本發明還提供一種用於預防和/或治療糖尿病的方法，其包括下列步驟：將預防和/或治療有效量的上述藥物組成物施用於對其有需求的患者。
施用於患者的藥物組成物的量將取決於施用的藥物、施用的目的(如預防或治療)、患者的狀態、施用方式等而變化。在治療性應用中，可以按足以治癒或至少部分地抑制疾病的症狀及其併發症的量將藥物組成物施用於已經患有該疾病的患者。治療有效量將取決於正在治療的疾病病狀並且透過主治臨床醫師的判斷取決於以下因素，如疾病的嚴重性，患者的年齡、體重和一般狀況等。
下面將結合實施例對本發明的實施方案進行詳細描述，但是本領域技術人員將會理解，下列實施例僅用於說明本發明，而不應視為限定本發明的範圍。實施例中未註明具體條件者，按照常規條件或製造商建議的條件進行。所用試劑或儀器未註明生產廠商者，均為可以透過市售獲得的常規產品。 實施例一：聚乙二醇化艾塞那肽變異體的製備(一)艾塞那肽變異體的製備
使用Fmoc-Rink Amide MBHA樹脂類型的固相載體，選擇Fmoc胺基保護策略合成含巰基的艾塞那肽變異體。
第一步：將保護基保護的39位Cys以及縮合劑HBTU/DIPEA溶於N,N-二甲基甲醯胺(DMF)溶劑中，反應1~5小時，用茚三酮方法監測縮合反應是否完全；
第二步：以10-30%哌啶DMF溶液為脫保護劑，加至第一步的反應系統中，反應10~30分鐘，用茚三酮方法監測胺基保護基是否完全脫除；
第三步：按照SEQ ID NO.1的多肽序列，依次使用相應的胺基酸，重複“第一步”和“第二步”，直到序列中的N端胺基酸偶聯完畢；
第四步：加入裂解試劑三氟醋酸(TFA)，反應1~5小時，將多肽從固相載體上裂解下來，同時脫除各種保護基；
第五步：對裂解下來的多肽溶液用乙醚進行沉澱；過濾收集沉澱，然後用C18類型的層析管柱，選擇0.1%TFA/乙腈-水系統為流動相進行洗提，收集組分溶液，冷凍乾燥得到艾塞那肽變異體；
第六步：用高效液相層析方法鑒定產物純度，LC-MS質譜測定艾塞那肽變異體分子量為4201.6，理論值為4202.7±2.0。 (二)聚乙二醇化艾塞那肽變異體的製備
第一步：配製pH=6.5的磷酸鹽緩衝溶液，充氮氣30～50 min，把艾塞那肽變異體與mPEG-ppMAL (mPEG-ppMAL分子量約為23 kDa，艾塞那肽變異體與mPEG-ppMAL的材料添加莫耳比為1:2)倒入裝有磷酸鹽緩衝液的反應瓶中，反應溫度控制在22±2℃，攪拌反應60 min，並取樣檢測。反應結束後，反應液用pH=4.0的NaAc-HAc溶液稀釋，再滴加適量冰醋酸將混合液的pH值調為4.0，得聚乙二醇化艾塞那肽變異體粗產物溶液；
第二步：上樣於SP離子交換層析管柱(GE公司，XK16/20管柱，macroCap SP填充劑)，上樣後用50 mM醋酸鈉緩衝液平衡2個管柱體積，然後在20個管柱體積內線性增加到含1M NaCl的50 mM醋酸鈉緩衝液進行洗提，收集洗提液凍乾，得到聚乙二醇化艾塞那肽變異體，Maldi-TOF-MS質譜檢測產品的數量平均分子量為27162.3。 實施例二： pH 的篩選
取配製總量60%-70%的注射用水(≤25℃)加入配液桶中，將秤量好的間甲酚加入配液桶中，取適量注射用水分多次沖洗容器並全部加入到配液桶中，攪拌至澄清無油狀顆粒。緩慢攪拌下，將秤量好的聚乙二醇化艾塞那肽變異體原料藥持續緩慢投入到配液桶中，取適量注射用水沖洗容器並全部加入到配液桶中，控制藥液量達到配製總量的80%-90%，持續攪拌至原料完全溶解。用檸檬酸/檸檬酸鈉溶液分別調節溶液pH至目標值，並定容。其中，各配方的組成如下表所示： 表1 pH篩選過程中的各配方組成
pH值 胜肽含量 間甲酚 pH調節劑 緩衝鹽濃度
3.5 0.5mg/ml 2.2mg/ml 檸檬酸/檸檬酸鈉 30 mmol/L
4.0
4.5
5.0
5.5
6.0
6.5
將配製的製劑放置在4℃條件下研究其穩定性，按規定時間取樣、檢測樣品的純度(%)，結果如下表所示： 表2 不同pH條件對穩定性的影響
存放時間 pH值
3.5 4.0 4.5 5.0 5.5 6.0 6.5
0d 98.8 98.8 98.8 98.8 98.8 98.8 98.8
15d 98.3 98.4 98.2 98.3 98.8 98.7 97.9
31d 97.2 97.7 97.4 97.3 98.0 97.5 95.7
2M 97.7 98.0 97.7 97.6 98.4 96.7 94.4
3M 97.4 97.6 97.3 96.7 97.3 95.5 92.3
6M 97.0 97.1 96.0 95.2 95.4 92.5 84.1
9M 96.2 96.5 94.0 93.0 93.7 89.4 78.9
綜合表1和表2中不同pH條件下樣品的檢測結果可知，聚乙二醇化艾塞那肽變異體在偏酸性條件下較為穩定。其中，pH值為3.5~4.5時最穩定，pH值在6.0以上時樣品降解非常快。然後，在不同緩衝系統下對pH的篩選進行驗證性實驗，各配方的組成如下表所示： 表3 pH篩選驗證性實驗中的各配方組成
pH值 胜肽含量 間甲酚 pH調節劑 緩衝鹽濃度
3.5 0.5 mg/ml 2.2 mg/ml 檸檬酸/檸檬酸鈉 30 mmol/L
4.0
4.5
5.0
4.0 醋酸/醋酸鈉
4.5
5.0
3.5 乳酸/氫氧化鈉
4.0
4.5
5.0
配製方法如前所述，將配製好的製劑分成3份分別放置在40℃、25℃和4℃條件下研究其穩定性，按規定時間取樣、檢測樣品的純度(%)，結果見表4和表5。 表4 不同溫度對穩定性的影響
存放條件 存放時間 檸檬酸 / 檸檬酸鈉 (pH) 醋酸 / 醋酸鈉 (pH)
5.0 4.5 4.0 3.5 5.0 4.5 4.0
40 ℃ 0D 99.2 99.2 99.2 99.2 99.2 99.2 99.2
6D 96.5 97.2 97.9 97.5 96.5 97.5 98.0
12D 93.5 95.6 96.8 97.5 93.7 95.4 96.4
23D 88.4 92.3 94.9 95.5 90.0 92.6 93.8
34D 81.6 86.7 89.7 90.2 85.3 87.2 87.8
44D 64.9 71.1 74.3 75.3 78.8 79.7 80.5
25 ℃ 0D 99.2 99.2 99.2 99.2 99.2 99.2 99.2
12D 97.0 97.2 97.9 98.1 96.9 97.6 98.1
35D 94.2 94.9 96.3 96.9 93.9 95.1 96.5
58D 91.7 92.0 94.3 96.0 92.5 92.4 94.8
78D 88.8 90.4 93.0 94.8 90.0 90.8 93.4
111D 84.4 84.3 88.0 88.6 86.3 85.4 88.8
135D 80.3 81.3 85.6 86.7 84.3 82.7 87.0
4 ℃ 0D 99.2 99.2 99.2 99.2 99.2 99.2 99.2
1M 98.4 98.2 98.9 99.0 98.5 98.7 99.1
2M 98.3 98.1 98.4 98.8 98.5 98.8 99.0
3M 97.9 97.9 98.5 98.5 98.2 98.6 98.8
6M 96.9 96.9 97.7 98.2 98.5 98.2 98.5
表5不同溫度對穩定性的影響
存放條件 存放時間 乳酸 / 氫氧化鈉 (pH)
5.0 4.5 4.0 3.5
40 ℃ 0D 99.1 99.1 99.1 99.1
6D 97.4 97.8 97.8 98.0
12D 94.5 95.9 96.1 97.0
19D 92.6 94.2 93.8 94.0
25D 86.5 88.1 89.3 90.2
39D 82.9 85.6 86.2 87.6
54D 76.5 78.2 80.8 83.4
25 ℃ 0D 99.1 99.1 99.1 99.1
19D 96.5 97.6 97.4 97.3
39D 93.9 94.5 95.1 95.2
56D 91.3 92.7 93.5 93.8
82D 88.5 90.8 90.9 89.9
104D 85.4 87.7 88.8 89.3
132D 82.8 85.4 86.8 87.4
158D 79.7 83.7 84.4 85.5
4 ℃ 0D 99.1 99.1 99.1 99.1
1M 98.7 98.9 99.1 99.0
2M 98.1 98.6 98.8 99.0
3M 98.1 98.5 98.6 98.9
6M 96.7 97.6 97.4 97.7
綜合表4和表5的檢測結果可知，不同緩衝系統下樣品的穩定性表現出相對一致的變化趨勢，均在pH=3.5~4.5時較為穩定；同時可發現，相同pH條件下，不同緩衝系統下樣品的穩定性存在著一定的差異，本發明進一步對pH調節劑進行篩選。 實施例三： pH 調節劑的篩選
取配製總量60%-70%的注射用水(≤25℃)加入配液桶中，將秤量好的間甲酚加入配液桶中，取適量注射用水分多次沖洗容器並全部加入到配液桶中，攪拌至澄清無油狀顆粒。將已秤量好的甘露醇加入配液桶中，取適量注射用水沖洗容器並全部加入到配液桶中，攪拌至甘露醇完全溶解(若未使用甘露醇，則該步驟省略)。緩慢攪拌下，將秤量好的聚乙二醇化艾塞那肽變異體原料藥持續緩慢投入到配液桶中，取適量注射用水沖洗容器並全部加入到配液桶中，控制藥液量達到配製總量的80%-90%，持續攪拌至原料完全溶解。用pH調節劑調節溶液pH至目標值，並定容。 (1)pH=4.5
採用同一批原料，按上述方法進行兩次配製，各配方的組成如下表所示： 表6 pH調節劑篩選過程中的各配方組成
批次 pH調節劑 胜肽含量 甘露醇 間甲酚 緩衝鹽濃度 pH值
第一次配製 醋酸/醋酸鈉 0.5 mg/ml 41 mg/ml 2.2 mg/ml 30 mmol/L 4.50
琥珀酸/琥珀酸鈉
丙酸/丙酸鈉
檸檬酸/檸檬酸鈉
乳酸/碳酸鈉
蘋果酸/氫氧化鈉
第二次配製 醋酸/醋酸鈉 0.5 mg/ml 無 2.2 mg/ml 30 mmol/L 4.50
乳酸/碳酸鈉
乳酸/氫氧化鈉
將上述配製好的製劑分成3份分別放置在40℃、25℃和4℃條件下研究其穩定性，按規定時間取樣、檢測樣品的純度(%)，結果見表7。 表7 不同pH調節劑對穩定性的影響
存放條件 存放 時間 第一次配製 第二次配製
醋酸/醋酸鈉 琥珀酸/琥珀酸鈉 丙酸/丙酸鈉 檸檬酸/檸檬酸鈉 乳酸/碳酸鈉 蘋果酸/氫氧化鈉 存放時間 醋酸/醋酸鈉 乳酸/碳酸鈉 乳酸/氫氧化鈉
40℃ 0D 98.9 98.9 98.9 98.9 98.9 98.9 0D 99.3 99.3 99.3
6D 96.6 97.0 96.9 97.1 98.2 97.9 7D 96.8 97.5 97.5
12D 94.4 95.3 95.6 94.8 96.6 96.0 19D 91.7 94.2 94.4
20D 91.8 93.1 93.3 92.3 94.9 93.9 34D 84.8 90.3 89.9
38D 86.4 88.5 88.9 85.7 90.8 88.6 50D 76.5 82.2 81.3
52D 83.0 86.0 84.6 69.3 87.6 85.0 64D 72.7 78.5 77.2
67D 79.2 82.5 81.0 63.5 84.9 81.7 85D 65.5 71.3 69.3
25℃ 0D 98.9 98.9 98.9 98.9 98.9 98.9 0D 99.3 99.3 99.3
14D 97.3 97.4 97.8 97.3 98.0 98.0 25D 96.5 97.6 97.6
38D 94.1 95.1 95.8 94.2 96.3 95.9 57D 92.8 94.1 94.3
52D 93.1 94.4 94.8 92.6 95.4 94.9 89D 88.3 94.3 92.3
67D 92.3 93.0 94.3 90.8 94.8 93.7 116D 85.2 89.8 90.1
87D 90.0 90.2 92.0 86.7 92.0 90.7 138D 83.2 88.7 88.6
108D 87.9 88.0 90.7 84.0 90.7 88.6 183D 75.9 82.2 82.6
137D 85.2 85.1 88.6 70.9 88.5 86.1        
4℃ 0D 98.9 98.9 98.9 98.9 98.9 98.9 0D 99.3 99.3 99.3
12D 98.4 98.5 98.5 98.3 99.0 98.0 1M 99.0 99.0 98.9
38D 99.2 99.5 98.3 98.2 98.8 98.6 2M 98.5 99.0 98.9
2M 98.2 98.3 98.3 97.9 98.6 98.6 3M 98.5 98.7 98.54
3M 98.1 98.3 98.2 97.8 98.7 98.5 6M 98.1 98.4 98.2
6M 98.3 98.0 98.0 97.2 98.7 98.3        
9M 97.9 97.7 98.1 96.5 98.2 97.8        
根據表7結果可知，在檸檬酸鹽緩衝條件下，活性成分降解速度較快；在乳酸鹽緩衝條件下，活性成分的穩定性相對較好；其餘幾種緩衝系統對活性成分穩定性的影響程度較為一致。
相較於第一次，第二次配製省去滲透壓調節劑。根據表7結果可知，相同緩衝系統下，當省去滲透壓調節劑時，活性成分的降解速度有所加快。這說明，滲透壓調節劑除了有調節滲透壓作用外，同時還對製劑穩定起到輔助作用。 (2)pH=4.0
選取三批原料分別按照上述方法進行配製，各配方的組成如下表所示： 表8 pH調節劑篩選過程中的各配方組成
批次 pH調節劑 胜肽含量 間甲酚 緩衝鹽濃度 pH值
1 醋酸/醋酸鈉 0.5 mg/ml 2.2 mg/ml 30 mmol/L 4.0
琥珀酸/琥珀酸鈉
檸檬酸/檸檬酸鈉
乳酸/氫氧化鈉
乳酸/碳酸鈉
2 檸檬酸 0.5 mg/ml 2.2 mg/ml / 4.0
檸檬酸/檸檬酸鈉 30 mmol/L
醋酸/醋酸鈉
乳酸/氫氧化鈉
琥珀酸/琥珀酸鈉
3 檸檬酸 0.5 mg/ml 2.2 mg/ml / 4.0
醋酸/醋酸鈉 30 mmol/L
乳酸/氫氧化鈉
將上述配製好的製劑放置在40℃條件下研究其穩定性，按規定時間取樣、檢測樣品的純度(%)，結果見表9所示： 表9 不同pH調節劑對穩定性的影響
批次 存放 時間 pH 調節劑
醋酸/ 醋酸鈉 琥珀酸/ 琥珀酸鈉 檸檬酸/ 檸檬酸鈉 乳酸/ 碳酸鈉 乳酸/ 氫氧化鈉 檸檬酸
1 0D 98.9 98.9 98.9   98.9 98.9 /
7D 97.9 97.9 98.1 98.0 98.3 /
22D 94.0 93.7 95.5 95.4 94.9 /
36D 88.1 88.1 90.9 91.5 90.4 /
47D 84.5 84.5 87.0 87.6 86.6 /
61D 78.5 78.6 68.5 82.9 82.4 /
2 0D 98.2 98.2 98.2 / 98.2 98.2
7D 96.8 96.8 97. 4 / 96.9 96.1
14D 94.0 95.1 96.3 / 95.7 95.2
21D 90.1 91.3 94.0 / 91.2 91.6
28D 91.5 92.9 94.8 / 93.2 94.1
35D 87.0 88.4 81.6 / 88.7 89.2
47D 82.7 84.9 77.9 / 84.1 85.2
58D 74.5 81.4 72.7 / 82.3 81.5
3 0D 97.9 / / / 97.9 97.9
7D 96.4 / / / 96.4 96.5
14D 95.1 / / / 94.9 95.2
21D 93.7 / / / 93.9 94.0
28D 92.5 / / / 93.0 93.0
35D 91.6 / / / 90.9 91.8
48D 89.8 / / / 89.5 89.4
63D 82.5 / / / 81.7 85.6
78D 79.8 / / / 79.0 81.5
由表9的結果可以看出，pH=4.0條件下，各pH調節劑對穩定性的影響表現出與pH=4.5時相同的趨勢。其中，在檸檬酸鹽緩衝條件下，活性成分降解較快；而在乳酸鹽緩衝條件下，仍保持了較高的穩定性。出乎意料的是，在不加入緩衝系統、僅使用檸檬酸調節pH至目標值時，所得製劑經高溫長期放置後純度仍然較高，其綜合穩定性甚至高於乳酸緩衝系統。這說明，在合適的pH條件下，即使未添加緩衝系統，所得製劑也能取得與添加乳酸緩衝系統相當甚至更高的穩定性。 實施例四：胜肽濃度的篩選
取配製總量60%-70%的注射用水(≤25℃)加入配液桶中，將秤量好的間甲酚加入配液桶中，取適量注射用水分多次沖洗容器並全部加入到配液桶中，攪拌至澄清無油狀顆粒。將已秤量好的甘露醇加入配液桶中，取適量注射用水沖洗容器並全部加入到配液桶中，攪拌至甘露醇完全溶解。緩慢攪拌下，將秤量好的聚乙二醇化艾塞那肽變異體原料藥持續緩慢投入到配液桶中，取適量注射用水沖洗容器並全部加入到配液桶中，控制藥液量達到配製總量的80%-90%，持續攪拌至原料完全溶解。用pH調節劑-檸檬酸溶液調節溶液pH至目標值，並定容。各配方的組成如下表所示： 表10 胜肽濃度篩選過程中的各配方組成
pH調節劑 胜肽濃度 pH值 甘露醇 間甲酚
檸檬酸 0.25 mg/mL 3.8 41 mg/mL 2.2 mg/mL
0.5 mg/mL
1.5 mg/mL
將上述配製好的製劑放置在40℃條件下研究其穩定性，按規定時間取樣、檢測樣品的純度(%)，結果見表11所示： 表11 不同胜肽濃度對穩定性的影響
40℃
胜 肽濃度 0 天 7 天 14 天 21 天 30 天 44 天 59 天
0.25 mg/ml 97.8 95.6 93.4 90.0 88.8 83.4 79.6
0.5 mg/ml 97.8 96.2 94.0 90.6 88.8 85.7 81.3
1.5 mg/ml 97.8 96.6 94.6 92.1 90.3 86.3 83.1
由表11數據可知，製劑中胜肽濃度越高，穩定性則越強。但考慮到胜肽濃度高於1.5 mg/mL時溶液黏度變大，不利於注射，而胜肽濃度為0.5 mg/mL時的穩定性已經能滿足需求，因此本發明的胜肽濃度可優選為0.5 mg/mL。 實施例五：滲透壓調節劑的篩選
取配製總量60%-70%的注射用水(≤25℃)加入配液桶中，將秤量好的間甲酚加入配液桶中，取適量注射用水分多次沖洗容器並全部加入到配液桶中，攪拌至澄清無油狀顆粒。將已秤量好滲透壓調節劑加入配液桶中，取適量注射用水沖洗容器並全部加入到配液桶中，攪拌至完全溶解。緩慢攪拌下，將秤量好的聚乙二醇化艾塞那肽變異體原料藥持續緩慢投入到配液桶中，取適量注射用水沖洗容器並全部加入到配液桶中，控制藥液量達到配製總量的80%-90%，持續攪拌至原料完全溶解。用pH調節劑-檸檬酸溶液調節溶液pH至目標值，並定容。各配方的組成如下表所示： 表12 滲透壓調節劑的篩選過程中的各配方組成
pH調節劑 滲透壓調節劑 pH值 胜肽濃度 間甲酚
檸檬酸 41 mg/ml 甘露醇 4.5 0.5 mg/ml 2.2 mg/ml
0.9% 氯化鈉
將上述配製好的製劑放置在40℃條件下研究其穩定性，按規定時間取樣、檢測樣品的純度(%)，結果見表13所示： 表13 不同滲透壓調節劑對穩定性的影響
40℃
滲透壓調節劑 0天 7天 14天 28天 35天 42天 49天
甘露醇 97.2 95.1 93.9 91.2 89.1 84.6 83.3
氯化鈉 97.2 92.1 88.2 81.8 77.9 74.7 72.2
由表13的數據可知，添加甘露醇的製劑穩定性優於添加氯化鈉。
然後，進一步研究將部分甘露醇替換為甘胺酸後對製劑穩定性的影響。各配方的組成如下表所示： 表14 甘胺酸和甘露醇對比研究過程的各配方組成
編號 pH調節劑 緩衝鹽濃度 甘胺酸 (mg/ml) 甘露醇 (mg/ml) pH值 胜肽 濃度 間甲酚
1 醋酸/醋酸鈉 30 mmol/L 17.72 / 4.5 0.5 mg/ml 2.2 mg/ml
2 15.50 5.38
3 13.29 10.75
4 8.86 21.5
5 / 43
6 / 41
7 / /
將上述配製好的製劑放置在25℃、40℃條件下研究其穩定性，按規定時間取樣、檢測樣品的純度(%)，結果見表15所示： 表15 甘胺酸和甘露醇對穩定性的影響
儲存條件 1 2 3 4 5 6 7
0d 99.34 99.37 99.36 99.30 99.31 99.29 99.30
25℃ 4d 98.55 98.69 98.99 99.14 99.18 99.20 98.99
10d 97.24 98.07 98.50 98.85 99.03 99.03 98.68
15d 95.06 97.23 97.91 98.50 98.79 98.80 98.36
21d 92.11 94.16 96.53 98.18 98.66 98.66 98.01
40℃ 4d 93.75 96.20 97.16 98.40 98.87 98.83 98.31
10d 76.57 83.68 91.45 93.24 97.08 96.99 96.00
15d 62.91 71.57 82.46 88.45 95.96 96.78 95.29
21d 48.29 57.25 67.96 81.28 95.47 95.53 92.52
由表15的數據可知，只添加甘露醇的配方(編號5和6)穩定性最佳；只添加甘胺酸的配方(編號1)穩定性最差，在25℃和40℃條件下都降解最快。這說明，甘胺酸對樣品有破壞作用，甘露醇對樣品有一定的保護作用，可增強其穩定性，因此本發明可使用甘露醇作為滲透壓調節劑。 實施例六：抑菌劑的篩選
取配製總量60%-70%的注射用水(≤25℃)加入配液桶中，將秤量好的抑菌劑加入配液桶中，取適量注射用水分多次沖洗容器並全部加入到配液桶中，攪拌至澄清無油狀顆粒。將已秤量好甘露醇加入配液桶中，取適量注射用水沖洗容器並全部加入到配液桶中，攪拌至完全溶解。緩慢攪拌下，將秤量好的聚乙二醇化艾塞那肽變異體原料藥持續緩慢投入到配液桶中，取適量注射用水沖洗容器並全部加入到配液桶中，控制藥液量達到配製總量的80%-90%，持續攪拌至原料完全溶解。用pH調節劑調節溶液pH至目標值，並定容。各配方的組成如下表所示： 表16 抑菌劑篩選過程中的各配方組成
pH調節劑 甘露醇 pH值 胜肽濃度 抑菌劑
醋酸/醋酸鈉 43 mg/ml 4.5 0.5 mg/ml 2.2 mg/ml 間甲酚
2.2 mg/ml 苯甲醇
將上述配製好的製劑放置在25℃、40℃條件下研究其穩定性，按規定時間取樣、檢測樣品的純度(%)，結果見表17所示： 表17 不同抑菌劑對穩定性的影響
儲存條件 間甲酚 苯甲醇
0d 99.35 97.21
25℃ 7d 99.24 79.44
10d 99.13 75.40
15d 99.01 72.76
21d 98.65 71.54
40℃ 7d 97.11 74.18
10d 96.17 73.59
15d 94.96 70.81
21d 91.69 65.47
由表17的數據可知，添加苯甲醇的樣品純度迅速下降，而加入間甲酚的樣品則較為穩定。 實施例七：含有聚乙二醇化艾塞那肽變異體組成物的穩定性研究
取配製總量 60%-70%的注射用水(≤25℃)加入配液桶中，將秤量好的間甲酚加入配液桶中，取適量注射用水分多次沖洗容器並全部加入到配液桶中，攪拌至澄清無油狀顆粒。將已秤量好甘露醇加入配液桶中，取適量注射用水沖洗容器並全部加入到配液桶中，攪拌至完全溶解。緩慢攪拌下，將秤量好的聚乙二醇化艾塞那肽變異體原料藥持續緩慢投入到配液桶中，取適量注射用水沖洗容器並全部加入到配液桶中，控制藥液量達到配製總量的80%-90%，持續攪拌至原料完全溶解。用檸檬酸調節溶液pH至目標範圍，並定容。
選取兩批原料，按照表18的配方進行配製： 表18 配方組成
pH值 胜肽含量 甘露醇 pH調節劑 間甲酚
3.5-4.5 0.5 mg/ml 47 mg/ml 檸檬酸 2.2 mg/ml
將上述配製好的製劑分別放置於2-8℃和25℃條件下研究其穩定性，按規定時間取樣、檢測樣品的純度(%)，結果見表19。 表19 穩定性研究結果
批次編號 0M實測pH 儲存條件 純度
0M 6M
1 4.15 2-8℃ 99.02 98.20
25℃ 90.40
2 4.01 2-8℃ 98.90 97.80
25℃ 90.70
根據表19的結果可知，本發明所提供的含有聚乙二醇化艾塞那肽變異體的配方在低溫(2-8℃)和常溫(25℃)下經長期放置後，其純度均在90%以上，尤其是低溫(2-8℃)下，活性成分降解極少。這說明，本發明提供的配方適於長期保存。
以上已經描述了本揭示的各實施例，上述說明是示例性的，並非窮盡性的，並且也不限於所揭露的各實施例。在不偏離所說明的各實施例的範圍和精神的情況下，對於本技術領域的普通技術人員來說許多修改和變更都是顯而易見的。本文中所用術語的選擇，旨在最好地解釋各實施例的原理、實際應用或對市場中的技術的改進，或者使本技術領域的其它普通技術人員能理解本文揭露的各實施例。
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Claims (10)

  1. 一種含有聚乙二醇化艾塞那肽變異體的藥物組成物，其包括以下組分：聚乙二醇化艾塞那肽變異體和pH調節劑， 其中，所述聚乙二醇化艾塞那肽變異體的結構為：
    Figure 03_image001
    ， 所述聚乙二醇化艾塞那肽變異體中聚乙二醇修飾部分的分子量為5~100 kDa，優選為10~50 kDa，更優選為15~40 kDa，甚至更優選為20~29 kDa。
  2. 根據請求項1所述的藥物組成物，其中，所述藥物組成物包括溶劑。
  3. 根據請求項2所述的藥物組成物，其中，所述藥物組成物的pH值為2.0~6.0，優選為2.5~5.5，更優選為3.0~5.0，甚至更優選為3.5~4.5。
  4. 根據請求項1-3任一所述的藥物組成物，其中，所述pH調節劑為酸； 所述酸優選自檸檬酸、醋酸、三氟乙酸、磷酸、鹽酸、酒石酸、蘋果酸和丙酸中的一種或多種，更優選自檸檬酸、醋酸、三氟乙酸和磷酸中的一種或多種，甚至更優選為檸檬酸。
  5. 根據請求項1-3任一所述的藥物組成物，其中，所述pH調節劑為緩衝系統； 所述緩衝系統優選包括甘胺酸/鹽酸、檸檬酸/檸檬酸鈉、檸檬酸/磷酸氫二鈉、醋酸/醋酸鈉、乳酸/氫氧化鈉、乳酸/碳酸鈉、丙酸/丙酸鈉、琥珀酸/琥珀酸鈉和蘋果酸/氫氧化鈉中的任一種，更優選自甘胺酸/鹽酸、醋酸/醋酸鈉、乳酸/氫氧化鈉、乳酸/碳酸鈉、丙酸/丙酸鈉、琥珀酸/琥珀酸鈉和蘋果酸/氫氧化鈉中的任一種，甚至更優選為乳酸/氫氧化鈉或乳酸/碳酸鈉。
  6. 根據請求項2-5任一所述的藥物組成物，其中，以胜肽含量計，所述聚乙二醇化艾塞那肽變異體的濃度為0.1~5.0 mg/ml，優選為0.25~1.5 mg/ml，更優選為0.3~0.8 mg/ml，甚至更優選為0.4~0.6 mg/ml，甚至再優選為0.5 mg/ml。
  7. 根據請求項1-6任一所述的藥物組成物，其中，所述藥物組成物包括滲透壓調節劑，所述滲透壓調節劑優選自甘露醇、山梨醇、木糖醇、甘油和氯化鈉中的一種或多種，更優選為甘露醇； 優選地，所述滲透壓調節劑的濃度為5~100 mg/ml，優選為10~80 mg/ml，更優選為30~60 mg/ml，甚至更優選為40~50 mg/ml。
  8. 根據請求項1-7任一所述的藥物組成物，其中，所述藥物組成物還包括抑菌劑，所述抑菌劑優選自間甲酚、苯酚、氯甲酚、氯丁醇、苯甲醇和尼泊金酯中的一種或多種，更優選自間甲酚、苯酚、氯甲酚、氯丁醇和尼泊金酯中的一種或多種，甚至更優選為間甲酚； 優選地，所述抑菌劑的濃度為0.1~5 mg/ml，優選為1.0~4.0 mg/ml，更優選為1.5~3.0 mg/ml，甚至更優選為2.0~2.5 mg/ml。
  9. 根據請求項1-8任一所述的藥物組成物，其中，所述藥物組成物為注射液。
  10. 一種請求項1-9任一所述的藥物組成物在製備用於預防和/或治療糖尿病的藥物中的用途。
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