TW202242144A

TW202242144A - Ｗｅｅ１抑制劑及用於治療癌症之方法

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Publication number: TW202242144A
Application number: TW110147825A
Authority: TW
Inventors: 飛利浦普特; 迪米崔歐斯沃利歐提斯; 安東尼威廉托契爾; 安東尼亞寧孫; 費南多杜奈特; 鍾彼特勞斯魯德夫德; 亞玫德亞迪沙曼塔; 凱文杜安班納; 琴華黃
Original assignee: 美商瑞卡瑞恩Ｉｐ控股有限責任公司
Priority date: 2020-12-22
Filing date: 2021-12-21
Publication date: 2022-11-01
Also published as: WO2022136916A1

Abstract

本文揭示一種判定對象對WEE1抑制劑之敏感性之方法，其包含：自該對象獲得或已經獲得生物樣本；及對該生物樣本執行或已經執行至少一種檢定，以判定該對象是否具有NBN、MRE11、RAD50、或MRE11-RAD50-NBN (MRN)蛋白錯合物之經改變DNA修復功能。亦揭示使用WEE1抑制劑治療癌症並基於NBN、MRE11、RAD50、或MRE11-RAD50-NBN (MRN)蛋白錯合物之序列變化及功能而修改有效濃度之方法。

Description

WEE1抑制劑及用於治療癌症之方法

本申請案大致上係關於作為WEE1抑制劑的化合物、及使用其治療特徵為過度細胞增生之病況（諸如癌症）的方法。其亦係關於識別患有癌症之對象中之突變及使用WEE1抑制劑對該等對象進行後續治療之方法。

DNA不斷受環境損害。光線、化學品、壓力、及細胞複製引起沿著DNA主鏈之單股或雙股斷裂。一般而言，生物體藉由重新連接或重新合成受損DNA之修復蛋白質來抵抗DNA損傷。此等蛋白質之正確運作係生命所必需的。將核苷酸錯誤置換至DNA中可引起突變（及其他基因改變，包括但不限於插入、缺失、及框移(frameshift)）、遺傳疾病、及蛋白質功能損失。DNA修復之完全損失可引起細胞死亡、腫瘤進展、及癌症。

細胞週期檢查點對於適當DNA修復係重要的，從而確保細胞不進行細胞複製，直到其基因體完整性恢復為止。WEE1係核激酶，其參與在進入有絲分裂之前用於DNA修復的G2-M細胞週期檢查點停滯。正常細胞在G1停滯期間修復受損的DNA。癌細胞常常具有缺陷的G1-S檢查點且依賴功能性G2-M檢查點進行DNA修復。WEE1在各種癌症類型中過表現。

各種實施例提供一種判定對象對於WEE1抑制劑之敏感性之方法，其包含：自該對象獲得或已經獲得生物樣本；及對該生物樣本執行或已經執行至少一種檢定，以判定該對象是否具有NBN、MRE11、RAD50、或MRE11-RAD50-NBN (MRN)蛋白錯合物之經改變DNA修復功能。

另一實施例提供一種治療癌症之方法，其包含：自該對象獲得或已經獲得生物樣本；對該生物樣本執行或已經執行至少一種檢定以判定該對象是否具有NBN、MRE11、RAD50、或MRE11-RAD50-NBN (MRN)蛋白錯合物之經改變DNA修復功能；及基於該檢定之結果，向該對象投予有效量之癌症治療。

另一實施例提供一種治療癌症之方法，其包含：識別具有(a)該癌症及(b) NBN、MRE11、RAD50、或MRE11-RAD50-NBN (MRN)蛋白錯合物之內源性或經改變DNA修復功能之對象；及向該對象投予有效量之WEE1抑制劑。

另一實施例提供一種治療對象之癌症之方法，其包含：判定該對象是否對於使用WEE1抑制劑之治療敏感，該判定包含：自該對象獲得或已經獲得生物樣本；及對該生物樣本執行或已經執行至少一種檢定以判定該對象是否具有NBN、MRE11、RAD50、或MRE11-RAD50-NBN (MRN)蛋白錯合物之經改變DNA修復功能；及基於該對象是否對於使用該WEE1抑制劑之治療敏感之該判定，來為該對象選擇治療計畫(treatment protocol)。

以下更詳細地描述這些及其他實施例。

相關申請案之交互參照

本申請案主張於2020年12月22日申請之美國臨時專利申請案序號第63/129,452號之優先權，該申請案特此以引用方式全文併入本文中。

WEE1為酪胺酸激酶，其為反應於細胞DNA損傷防止進入有絲分裂的ATR介導之G2細胞周期檢查點控制之關鍵組分。ATR磷酸化且活化CHK1，該CHK1繼而活化WEE1，導致細胞周期蛋白依賴性激酶1 (CDK1)在Tyr15處之選擇性磷酸化，從而穩定CDK1-細胞周期蛋白B複合物且停止細胞周期進展。此過程藉由允許在進入有絲分裂之前修復受損DNA之腫瘤細胞時間而賦予存活優勢。WEE1之抑制消除G2檢查點，促進具有DNA損傷之癌細胞進入過早的有絲分裂且經由有絲分裂驟變來經歷細胞死亡。因此，WEE1抑制具有使腫瘤對DNA損傷劑（諸如順鉑）敏感並誘導腫瘤細胞死亡之潜力。

由MRE11、RAD50、及NBN（亦稱為NBS1）組成之MRN蛋白錯合物結合至BRCA1、p53、及H2AX，且識別、傳訊、並經由同源重組(HR)修復等其他機制來輔助修復雙股DNA斷裂(DSB)。因此，MRN錯合物之任何組分之破壞皆會影響細胞恢復DNA損傷之能力。致病性NBN、MRE11、及RAD50突變已知與同源重組修復(HRR)路徑缺陷(HRD)相關。小鼠中NBN缺失具有胚胎致死性。NBN之突變已與發展各種癌症（包括乳癌、卵巢癌、大腸直腸癌、及胃癌）之風險增加相關。總體而言，致病性生殖系NBN突變與各種惡性疾病風險增加相關，但突變相對罕見（~0.2%至1%）。定義

除非另外定義，否則本文中所使用之所有技術及科學用語具有與所屬技術領域中具有通常知識者所共同理解的相同含義。除非另有說明，本文所引用之所有專利、申請案、公開申請案、及其他出版物之全文均以引用之方式併入本文中。若在本文中之用語具有複數個定義，除非另有說明，否則以此節之定義為主。

如本文中所使用，用語「約(about)」具有如由所屬技術領域中具有通常知識者所理解之其通常含義，且因此指示數值包括用於判定數值所採用之方法之誤差的固有變化、或多次判定之間存在的變化。

如本文中所使用，用語「修飾(modify)」或「改變(alter)」或其任何形式均意指修飾、改變、置換、缺失、取代、移除、變化、或轉換。

如本文所用，用語「功能(function)」及「功能性(functional)」具有如所屬技術領域中具有通常知識者所理解之其通常含義，且因此係指生物、酶促、或治療性功能。

如本文中所使用，用語「內源性(endogenous)」具有如所屬技術領域中具有通常知識者所理解之其通常含義，且因此係指基因、蛋白質、或細胞之天然或野生型性質。在一些實施例中，內源性基因係該基因之野生型序列。在一些實施例中，內源性蛋白質係該蛋白質之野生型序列。在一些實施例中，內源性蛋白質功能係該蛋白質之野生型功能及活性水準。在一些實施例中，內源性細胞係野生型細胞。

如本文所用，用語「活體內( in vivo)」具有所屬技術領域中具有通常知識者所理解之其通常含義，且因此係指在活生物體（通常是哺乳動物，包括人或小鼠）或構成此等活生物體而非組織提取物或死生物體的活細胞內履行方法。

如本文所用，用語「活體外( in vitro)」具有如所屬技術領域中具有通常知識者所理解之其通常含義，且因此係指在生物條件之外（例如，在培養皿或試管中）履行方法。

如本文所使用之用語「基因(gene)」具有如所屬技術領域中具有通常知識者所理解之其通常含義，且因此一般係指核酸之編碼蛋白質或功能性RNA之一部分；然而，該用語可以可選地涵蓋調控序列(regulatory sequence)。所屬技術領域中具有通常知識者應瞭解，用語「基因(gene)」可包括基因調控序列（例如啟動子、增強子等）及/或內含子序列。將進一步瞭解的是，基因之定義包括對於不編碼蛋白質而是編碼功能性RNA分子（諸如tRNA及miRNA）之核酸的指涉。在一些情況下，基因包括涉及轉錄或訊息產生或組成之調控序列。在其他實施例中，基因包括針對蛋白質、多肽、或肽進行編碼之經轉錄序列。與本文所述之用語一致，「經分離基因(isolated gene)」可包含經轉錄核酸、調控序列、編碼序列、或類似者，其基本上與其他此類序列分離，諸如其他天然存在之基因、調控序列、多肽或肽編碼序列等。有鑑於此，簡單起見，用語「基因(gene)」用於指包含經轉錄之核苷酸序列的核酸及其互補物。如所屬技術領域中具有通常知識者將理解，此功能用語「基因(gene)」包括基因體序列、RNA或cDNA序列，或較小之經工程改造核酸區段，包括基因之非轉錄部分之核酸區段，包括但不限於基因之非轉錄啟動子或增強子區域。較小之經工程改造基因核酸區段可表現或可經調適以使用核酸操縱技術、蛋白質、多肽、域、肽、融合蛋白、突變體及/或類似者來表現。

如本文所使用之用語「核酸(nucleic acid)」或「核酸分子(nucleic acid molecule)」具有如所屬技術領域中具有通常知識者所理解之其通常含義，且因此係指多核苷酸，諸如去氧核糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA)、寡核苷酸、天然出現在細胞中者、由聚合酶鏈反應(PCR)產生之片段、以及藉由接合、分離、核酸內切酶作用、及核酸外切酶作用中之任一者產生之片段。核酸分子可由天然存在之核苷酸（諸如DNA及RNA）之單體、或天然存在之核苷酸類似物（例如，天然存在之核苷酸之鏡像異構形式）、或兩者之組合構成。經修飾之核苷酸可具有糖部分(moiety)及/或嘧啶或嘌呤鹼基部分之改變。對於鹼基部份的修飾之實例包括烷基化嘌呤及嘧啶、醯化嘌呤或嘧啶，或其他熟知的雜環取代物。

如本文所用，用語「密碼子(codon)」具有如所屬技術領域中具有通常知識者所理解之其通常含義，且係指三個核苷酸之序列（RNA或DNA），其對應於特定胺基酸或終止信號。作為非限制性實例，此類密碼子可包括61個天然存在之密碼子、3個停止密碼子、起始密碼子及對應於非標準胺基酸之合成密碼子。

本文中所使用之用語「肽(peptide)」、「多肽(polypeptide)」、及「蛋白質(protein)」具有如所屬技術領域中具有通常知識者所理解之其通常含義，且因此係指包含由肽鍵所連接之胺基酸之巨分子。該用語係指短鏈（亦即肽、寡肽、及寡聚物）及較長鏈兩者。肽、多肽、及蛋白質之多種功能係本領域中已知的，且包括但不限於酶、結構、運輸、防禦、激素、或傳訊。如本文中對於多肽所使用之用語「下游(downstream)」具有根據本說明書中所理解之其明白及普通含義，且係指在先前序列之C末端之後的序列。如本文中對於多肽所使用之用語「上游(upstream)」具有根據說明書中所理解之其明白及普通含義，且係指在後續序列之N末端之前的序列。蛋白質可含有除20個基因編碼之胺基酸外的胺基酸。蛋白質包括藉由天然程序（例如處理及其他轉譯後修飾）及藉由化學修飾技術所修飾者。相同類型之修飾可按照相同或不同程度存在於給定蛋白質中之若干位點處，且蛋白質可含有許多修飾。可在肽主鏈、胺基酸側鏈、及胺基或羧基末端中進行修飾(modification)。修飾之實例包括：乙醯化；醯化作用；ADP-核糖基化；醯胺化；黃素、血紅素部份、核苷酸或核苷酸衍生物、脂質或脂質衍生物、碳水化合物、或磷脂醯肌醇(phosphotidylinositol)之共價附接；交聯；環化；二硫鍵形成；去甲基化，共價交聯之形成；醣化；羥化；碘化；甲基化；豆蔻醯化；氧化；蛋白水解處理；磷酸化；S-亞硝化；外消旋化；脂質附接；麩胺酸殘基之硫酸化、γ-羧化；或羥化。

用語「基因型(genotype)」具有如所屬技術領域中具有通常知識者所理解之其通常含義，且係指在個體或樣本中含有之基因的對偶基因之總和。在一些實施例中，細胞株、組織、腫瘤、或癌症之基因型不同於作為彼等細胞、組織、腫瘤、或癌症來源之原始生物體的基因型。

用語「突變(mutation)」具有如所屬技術領域中具有通常知識者所理解之其通常含義，且係指基因序列的改變。在一些實施例中，細胞具有多個突變。在一些實施例中，突變位於基因體之編碼區域中。突變大小可在單個核苷酸至包括多個基因之染色體之大區段的範圍內。在一些實施例中，至少一個突變係緘默的，對基因表現或功能沒有顯著影響。在一些實施例中，至少一個突變對基因表現或功能具有影響，諸如基因擴增或增強的複本數。在一些實施例中，至少一個突變係緘默的，對基因表現或功能無顯著影響。在一些實施例中，至少一個突變對蛋白質表現或功能具有小的影響。在一些實施例中，至少一個突變對蛋白質表現或功能具有中等影響。在一些實施例中，至少一個突變對蛋白質表現或功能具有大的影響。在一些實施例中，至少一個突變防止蛋白質表現或功能。突變之非限制性實例包括插入、缺失、截短、取代、重複、轉移、及反轉。在一些實施例中，突變係「體細胞」或在體細胞中發生且不可遺傳。在一些實施例中，生物體中之體細胞之子集具有其他體細胞不具有之至少一個突變。在一些實施例中，突變係「生殖系」或在生殖細胞中發生且可遺傳。

如本文所揭示，可透過多種定序、表現、或功能性檢定來監測突變。非限制性實例包括：DNA定序、RNA定序、DNA雜交、蛋白質定序、靶向基因體定序、全外顯子組定序、全基因體定序、桑格定序、PCR、qPCR、RT-PCR、RT-qPCR、次世代定序、蛋白質截短測試、DNA微陣列、異源二聚體分析、變性梯度凝膠電泳、核苷酸定序、單股構形多型性、限制性酶消化檢定、螢光原位雜交(FISH)、比較基因體雜交、限制性片段長度多型性、擴增阻礙突變系統PCR (amplification refractory mutation system PCR)、巢式PCR、多重接合依賴性探針擴增、單股構形多型性、及寡核苷酸接合檢定。

用語「癌症(cancer)」在本文中用於其通常生物意義，且由所屬技術領域中具有通常知識者所理解。因此，其可包括任何細胞類型之癌症，諸如但不限於：神經膠質母細胞瘤、星狀細胞瘤、腦膜瘤、神經膠質瘤、顱咽管瘤、髓母細胞瘤及其他腦癌、白血病、皮膚癌、腎上腺癌、肛門癌、膽管癌、膀胱癌、骨癌、乳癌、子宮頸癌、大腸直腸癌、子宮內膜癌、食道癌、眼癌、膽囊癌、胃腸癌、霍奇金淋巴瘤、血液腫瘤、卡波西氏肉瘤、腎癌、喉頭及下咽癌、肝癌、肺癌、淋巴瘤、間皮瘤、黑色素瘤、多發性骨髓瘤、神經母細胞瘤、鼻咽癌、卵巢癌、骨肉瘤、胰癌、腦垂體癌、視網膜胚細胞瘤、唾液腺癌、胃癌、小腸癌、睾丸癌、胸腺癌、甲狀腺癌、子宮癌、子宮肉瘤、子宮漿液性癌、陰道癌、外陰癌、華氏巨球蛋白血症、威爾姆氏腫瘤(Wilms tumor)、實體腫瘤、或液體腫瘤。

如本文所用，用語「腫瘤(tumor)」具有所屬技術領域中具有通常知識者所理解之其通常含義，並且係指細胞或組織之異常生長。在一些實施例中，腫瘤係良性的。在一些實施例中，腫瘤係惡性的。當腫瘤轉移或擴散至本體之其他區域時，腫瘤變係癌症。如本文所使用之用語「實體腫瘤(solid tumor)」具有如所屬技術領域中具有通常知識者所理解之其通常含義，且係指不含有液體區域或囊腫之異常組織腫塊。實體腫瘤之非限制性實例包括肉瘤、上皮細胞癌(carcinoma)、或淋巴瘤。許多癌症組織可形成實體腫瘤，諸如但不限於乳癌、腦癌、肺癌、肝癌、胃癌、脾癌、結腸癌、腎癌、胰癌、前列腺癌、子宮癌、皮膚癌、頭癌、頸癌、肉瘤、神經母細胞瘤、或卵巢癌。除非上下文明確指示所欲的是更特定的含義，否則用語「癌症(cancer)」及「腫瘤(tumor)」可互換使用。

如本文所使用之用語「細胞(cell)」具有如所屬技術領域中具有通常知識者所理解之其通常含義，且可指任何細胞類型。在一些實施例中，該等細胞係哺乳動物細胞。在一些實施例中，該等細胞係人類細胞。

如本文中所使用之用語「個體(individual)」、「對象(subject)」、或「患者(patient)」具有如所屬技術領域中具有通常知識者所理解其等的通常含義，且因此包括人類或非人類哺乳動物。用語「哺乳動物(mammal)」係用於其通常生物意義。因此，其具體包括（但不限於）靈長類（包括猿猴（黑猩猩、猿、猴）及人類）、牛、馬、綿羊、山羊、豬、兔、狗、貓、囓齒動物、大鼠、小鼠、天竺鼠、或豬。在一些實施例中，對象可以是人。在一些實施例中，對象可為兒童及/或嬰兒。在其他實施例中，對象可為成人。

如本文所使用之用語「癌症治療(cancer treatment)」具有如所屬技術領域中具有通常知識者所理解之其通常含義，且係指用於治療、抑制、或預防癌症之治療模態(therapeutic modality)（諸如手術及/或輻射）或抗癌劑，諸如小分子、化合物、蛋白、或其他藥劑。可與本文所述的替代物中之任一或多者一起使用之抗癌劑之常見類別的非限制性實例包括：烷化劑、抗EGFR抗體、抗Her-2抗體、抗代謝物質、長春花屬生物鹼、含鉑藥劑(platinum-based agent)、蒽環類藥物、拓撲異構酶抑制劑、紫杉烷類、抗生素、免疫調節劑、免疫細胞抗體、干擾素、白細胞介素、HSP90抑制劑、抗雄激素、抗雌激素、抗高鈣血症藥劑、細胞凋亡誘導劑、Aurora激酶抑制劑、Bruton酪胺酸激酶抑制劑(Bruton's tyrosine kinase inhibitor)、鈣調磷酸酶抑制劑、CaM激酶II抑制劑(CaM kinase II inhibitor)、CD45酪胺酸磷酸酶抑制劑、CDC25磷酸酶抑制劑、CHK激酶抑制劑、環氧合酶抑制劑、bRAF激酶抑制劑、cRAF激酶抑制劑、Ras抑制劑、細胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑、半胱胺酸蛋白酶抑制劑、DNA嵌入劑(DNA intercalator)、DNA股斷裂劑、E3連接酶抑制劑、EGF途徑抑制劑、法尼基轉移酶抑制劑(farnesyltransferase inhibitor)、Flk-1激酶抑制劑、醣原合成酶激酶-3(GSK3)抑制劑、組蛋白去乙醯酶(HDAC)抑制劑、I-κB-α激酶抑制劑、四氮雜苯咪唑(imidazotetrazinone)、胰島素酪胺酸激酶抑制劑、c-Jun-氨基-末端激酶(JNK)抑制劑、絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制劑、MDM2抑制劑、MEK抑制劑、ERK抑制劑、MMP抑制劑、mTor抑制劑、NGFR酪胺酸激酶抑制劑、p38 MAP激酶抑制劑、p56酪胺酸激酶抑制劑、PDGF途徑抑制劑、磷脂酸肌醇3-激酶抑制劑(phosphatidylinositol 3-kinase inhibitor)、磷酸酶抑制劑、蛋白磷酸酶抑制劑、PKC抑制劑、PKCδ激酶抑制劑(PKC delta kinase inhibitor)、多胺合成抑制劑(polyamine synthesis inhibitor)、PTP1B抑制劑、蛋白酪胺酸激酶抑制劑、SRC家族酪胺酸激酶抑制劑、Syk酪胺酸激酶抑制劑、Janus（JAK-2及/或JAK-3）酪氨酸激酶抑制劑、類視黃醇(retinoid)、RNA聚合酶II延長抑制劑、絲胺酸/蘇胺酸激酶抑制劑、固醇生物合成抑制劑(sterol biosynthesis inhibitor)、VEGF途徑抑制劑、化療藥劑、alitretinon、六甲蜜胺、胺基蝶呤(aminopterin)、胺基乙醯丙酸、安吖啶(amsacrine)、天門冬醯胺酶(asparaginase)、阿曲生坦(atrasentan)、貝沙羅汀(bexarotene)、卡波醌(carboquone)、秋水仙胺(demecolcine)、乙丙昔羅(efaproxiral)、依沙蘆星(elsamitrucin)、乙環氧啶(etoglucid)、羥基脲(hydroxycarbamide)、亞葉酸(leucovorin)、氯尼達明(lonidamine)、硫蒽酮(lucanthone)、馬索羅酚(masoprocol)、甲基氨基乙酰丙酸酯(methyl aminolevulinate)、米托胍腙(mitoguazone)、米托坦(mitotane)、奧利默森(oblimersen)、奧馬西他辛(omacetaxine)、培門冬酶(pegaspargase)、卟吩姆鈉(porfimer sodium)、潑尼莫司汀(prednimustine)、腺病毒載體定位碼基因(sitimagene ceradenovec)、他拉泊芬(talaporfin)、替莫泊芬(temoporfin)、曲貝替定(trabectedin)、或維替泊芬(verteporfin)。

用語「醫藥上可接受之鹽(pharmaceutically acceptable salt)」係指不會對其所投予至之生物體造成顯著刺激且不會使化合物之生物活性及性質無效化的化合物之鹽。在一些實施例中，鹽係化合物之酸加成鹽。醫藥鹽可藉由使化合物與無機酸反應而獲得，無機酸諸如氫鹵酸（例如，氫氯酸或氫溴酸）、硫酸、硝酸、及磷酸（諸如2,3-二羥丙基磷酸二氫鹽）。醫藥鹽亦可藉由使化合物與有機酸反應而獲得，有機酸諸如脂族或芳族羧酸或磺酸，例如甲酸、乙酸、琥珀酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、抗壞血酸、菸鹼酸、甲磺酸、乙磺酸、對甲苯磺酸、三氟乙酸、苯甲酸、水楊酸、2-側氧戊二酸或萘磺酸。醫藥鹽亦可藉由使化合物與鹼反應以形成鹽而獲得，鹽諸如銨鹽、鹼金屬鹽（諸如鈉鹽、鉀鹽、或鋰鹽）、鹼土金屬鹽（諸如鈣鹽或鎂鹽）、碳酸鹽、碳酸氫鹽、有機鹼（諸如二環己基胺、N-甲基-D-還原葡糖胺、參(羥甲基)甲基胺、C ₁-C ₇烷基胺、環己基胺、三乙醇胺、乙二胺）之鹽、及與胺基酸（諸如精胺酸及離胺酸）之鹽。對於WEE1抑製劑化合物，所屬技術領域中具有通常知識者理解，當鹽係藉由基於氮之基團（例如，NH ₂）的質子化形成時，基於氮之基團可與正電荷締合（例如，NH ₂可變成NH ₃ ⁺），且該正電荷可由帶負電荷之相對離子（諸如Cl ^-）平衡。

應理解，在本文所述之具有一或多個掌性中心之任何化合物中，若未明確指示絕對立體化學，則各中心可獨立地具有R-組態、或S-組態、或其混合物。因此，本文中所提供之化合物可係鏡像異構地純的、鏡像異構地富集的外消旋混合物、非鏡像異構地純的、非鏡像異構地富集的或立體異構的混合物。此外，應當理解，在具有一或多個雙鍵產生幾何異構物（可定義為E或Z）之任何本文中所述化合物中，各雙鍵可獨立地係E或Z或其混合。同樣地，應理解，在任何所述化合物中，亦意欲將所有互變異構形式包括在內。

應理解，在本文中揭示之化合物具有未填滿價數時，則價數應以氫或其同位素填滿，例如氫-1（氕）及氫-2（氘）。

應理解，本文所述之化合物可經同位素標示。以諸如氘之同位素取代可得到由較高代謝穩定性帶來的某些治療優點，例如體內半衰期增長或劑量需求降低。在化合物結構中表示之各化學元素可包括該元素之任何同位素。例如，在化合物結構中，氫原子可明確揭示或理解成存在於化合物中。在化合物之可能存在氫原子的任何位置處，氫原子可為氫之任何同位素，包括但不限於氫-1（氕）及氫-2（氘）。因此，在本文中參照之化合物涵蓋所有潛在同位素形式，除非上下文清楚另行表明。

應理解，本文所述之方法及組合包括結晶形式（亦稱為多形體，其包括化合物之相同元素組成之不同晶體堆積排列）、非晶相、鹽、溶劑合物、及水合物。在一些實施例中，本文描述之化合物以與醫藥上可接受之溶劑（諸如水、乙醇、或類似溶劑）之溶劑合形式存在。在其他實施例中，本文描述之化合物以非溶劑合形式存在。溶劑合物含有化學計量或非化學計量之量的溶劑，且可與醫藥上可接受之溶劑（諸如水、乙醇、或類似者）在結晶製程期間形成。當溶劑係水時即形成水合物，當溶劑係醇時即形成醇合物。此外，本文中所提供之化合物可以非溶劑合形式以及溶劑合形式存在。一般而言，針對本文中所提供之化合物及方法的目的，將溶劑合形式視為等同於非溶劑合形式。

當提供數值之範圍時，應理解範圍之上限及下限以及在上限及下限之間的各介入數值皆涵蓋於實施例之中。

本申請案及其變體特別是隨附之申請專利範圍中所使用之用語及短語，除非另有明確說明，否則應解讀為開放形式而非限制形式。作為前述之實例，用語「包括(including)」應解讀為意指「包括但不限於(including, without limitation/including but not limited to)」或類似者；如本文中所使用之用語「包含(comprising)」與「包括(including)」、「含有(containing)」、或「其特徵為(characterized by)」係同義詞，且係包含式或開放式且不排除額外、未列舉之元件或方法步驟；用語「具有(having)」應解讀為「具有至少(having at least)」；用語「包括(include)」應解讀為「包括但不限於」；用語「實例(example)」係用於提供討論項目之例示性例子而非其詳盡或限制性列表；且用語如「較佳地(preferably)」、「較佳的(preferred)」、「所欲(desired/desirable)」及類似意義文字的使用，不應理解為暗示某些特徵對於結構或功能而言係關鍵、必要、甚或重要的，反而只是意圖強調可在一具體實施例中利用或不利用之替代或額外特徵。此外，用語「包含(comprising)」應與片語「至少具有(having at least)」或「至少包括(including at least)」同義地解釋。當用於化合物、組成物、或裝置之上下文中時，用語「包含」意指化合物、組成物、或裝置至少包括所列舉特徵或組分，但亦可包括額外特徵或組分。

關於在本文中使用實質上任何複數及/或單數用語，所屬技術領域中具有通常知識者可視適合上下文及/或應用之情況，從複數轉換成單數及/或從單數轉換成複數。各種單數/複數排列組合可在本文中明確闡述以求清晰。不定冠詞「一（a或an）」並不排除複數。在互不相同的附屬項中列舉某些措施的單純事實，並不表示這些措施之組合無法有益地使用。申請專利範圍中之任何元件符號不應解讀為範圍限制。 WEE1抑制劑化合物

本文所揭示之各種實施例係關於使用WEE1抑制劑之用途或方法。用語「WEE1抑制劑(WEE1 inhibitor)」係指降低WEE1核激酶之功能的小分子、化合物、藥物、蛋白質、或混合物。在各種實施例中，WEE1抑制劑係WEE1抑制劑化合物，例如具有如本文所述之式。在一些實施例中，WEE1抑制劑抑制WEE1之表現。在一些實施例中，WEE1抑制劑抑制WEE1活性上游之至少一種蛋白質之功能。在一些實施例中，WEE1抑制劑抑制WEE1活性下游之至少一種蛋白質之功能。在一些實施例中，WEE1抑制劑直接地抑制WEE1。在一些實施例中，WEE1抑制劑變構地結合至WEE1。在一些實施例中，WEE1抑制劑結合至WEE1之活性位點。在一些實施例中，WEE1抑制劑係無競爭性抑制劑。在一些實施例中，WEE1抑制劑係非競爭性抑制劑。在一些實施例中，WEE1抑制劑係競爭性抑制劑。

廣泛各式WEE1抑制劑係所屬技術領域中具有通常知識者已知，且可用於本文所述之方法中。舉例而言，在各種實施例中，WEE1抑制劑係描述於下列公開案中之任一或多者中：WO2020210383、WO2020210375、WO2020210377、WO2020210380、WO2020210381、WO 2019173082、WO2019011228、WO2019138227、WO2018162932、WO2018011570、WO2018011569、WO2018090939、WO2015092431、WO2015019037、WO2014167347、WO2007126122、WO2011034743、US20070254892、US2008133866、US20160060258、US20190308984、US20200131192、WO2019085933、WO2020221358、EP3712150、WO2018133829、WO2019085933、WO2020083404、WO2019037678、WO2018171633、WO2019096322、WO2019165204、WO2012161812、WO2013012681、WO2013013031、WO2013059485、WO2013126656、US20120220572、US20130018045、KR2016035878、KR2020016567、WO2018056621、WO2017075629、WO2019169065、WO2019134539、WO2020028814、WO2020069105、WO2020192581、CN111718348、及WO9634867。前述公開案中之各者係以全文引用之方式明確地併入本文中，且具體而言是用於描述WEE1抑制劑及製造其之方法的目的。

在各種實施例中，WEE1抑制劑係描述於WO 2019173082中。舉例而言，在一些實施例中，WEE1抑制劑係由圖26中所述之通用結構所表示之化合物。在一實施例中，WEE1抑制劑係具有下式之化合物ZN-c3：

(ZN-c3)或其醫藥上可接受之鹽。

在一實施例中，WEE1抑制劑係描述於WO2019138227中。舉例而言，在一實施例中，WEE1抑制劑係由圖18中所述之通用結構所表示之化合物、或其醫藥上可接受之鹽。

在一實施例中，WEE1抑制劑係描述於WO2018162932中。舉例而言，在一實施例中，WEE1抑制劑係由圖17中所述之結構所表示之化合物：

或其醫藥上可接受之鹽或N-氧化物。

在一實施例中，WEE1抑制劑係描述於WO2018011570中。舉例而言，在一實施例中，WEE1抑制劑係由圖16中所述之通用結構所表示之化合物、或其醫藥上可接受之鹽。

在一實施例中，WEE1抑制劑係描述於WO2018011569中。舉例而言，在一實施例中，WEE1抑制劑係由圖15A中所述之通用結構所表示之化合物、或其醫藥上可接受之鹽。在另一實施例中，WEE1抑制劑係由圖15B中所述之通用結構所表示之化合物、或其醫藥上可接受之鹽。

在一實施例中，WEE1抑制劑係描述於WO2015092431中。舉例而言，在一實施例中，WEE1抑制劑係由圖14中所述之通用結構所表示之化合物、或其醫藥上可接受之鹽。

在一實施例中，WEE1抑制劑係描述於WO2014167347中。舉例而言，在一實施例中，WEE1抑制劑係由圖12中所述之通用結構所表示之化合物、或其醫藥上可接受之鹽。

在一實施例中，WEE1抑制劑係描述於WO2015019037中。舉例而言，在一實施例中，WEE1抑制劑係由圖13中所述之通用結構所表示之化合物、或其醫藥上可接受之鹽。

在一實施例中，WEE1抑制劑係描述於WO2020210375中。舉例而言，在一實施例中，WEE1抑制劑係由圖24中所述之通用結構所表示之化合物、或其醫藥上可接受之鹽。

在一實施例中，WEE1抑制劑係描述於WO2020210377中。舉例而言，在一實施例中，WEE1抑制劑係由圖25中所述之通用結構所表示之化合物、或其醫藥上可接受之鹽

在一實施例中，WEE1抑制劑係描述於WO2020210380中。舉例而言，在一實施例中，WEE1抑制劑係由圖21中所述之通用結構所表示之化合物、或其醫藥上可接受之鹽。

在一實施例中，WEE1抑制劑係描述於WO2020210381中。舉例而言，在一實施例中，WEE1抑制劑係由圖22中所述之通用結構所表示之化合物、或其醫藥上可接受之鹽。在各種實施例中，WEE1抑制劑係由選自

、

或

之式所表示之化合物、或前述中之任一者的其醫藥上可接受之鹽。

在一實施例中，WEE1抑制劑係描述於WO2020210383中。舉例而言，在一實施例中，WEE1抑制劑係由圖23中所述之通用結構所表示之化合物、或其醫藥上可接受之鹽。在各種實施例中，WEE1抑制劑係由選自

、

或

在一實施例中，WEE1抑制劑係描述於WO2019011228及/或US20200131192（WO2019011228之美國國家階段）中。舉例而言，在一實施例中，WEE1抑制劑係由圖20A及圖20B中所描述之通用結構中之一或兩者所表示之化合物、或其醫藥上可接受之鹽。舉例而言，在一實施例中，WEE1抑制劑係具有式

之化合物、或其醫藥上可接受之鹽。

在一實施例中，WEE1抑制劑係描述於WO2018090939及/或US20190308984（WO2018090939之美國國家階段）。舉例而言，在一實施例中，WEE1抑制劑係由圖19A及圖19B中所描述之通用結構中之一或兩者所表示之化合物、或其醫藥上可接受之鹽。在各種實施例中，WEE1抑制劑係由選自

、

或

在一實施例中，WEE1抑制劑係所屬技術領域中具有通常知識者已知為AZD1775之化合物，其式係：

(AZD1775)或其醫藥上可接受之鹽。

在一實施例中，WEE1抑制劑係所屬技術領域中具有通常知識者已知為SC0191之化合物，其式係：

(SC0191)或其醫藥上可接受之鹽。

在一實施例中，WEE1抑制劑係所屬技術領域中具有通常知識者已知為PD0166285之化合物，其式係：

(PD0166285)或其醫藥上可接受之鹽。

在一實施例中，WEE1抑制劑係所屬技術領域中具有通常知識者已知為NUV-569之化合物。在一實施例中，WEE1抑制劑係所屬技術領域中具有通常知識者已知為IMP7068之化合物。在一實施例中，WEE1抑制劑係所屬技術領域中具有通常知識者已知為Debio 0123之化合物。醫藥組成物

本文中所述之一些實施例係關於一種醫藥組成物，其可包括有效量之本文中所述之一或多種化合物（例如本文別處所述之WEE1抑制劑、或其醫藥上可接受之鹽）及其醫藥上可接受之載劑、稀釋劑、賦形劑、或其組合。

用語「醫藥組成物(pharmaceutical composition)」係指本文中所揭示之一或多種化合物及/或鹽與其他化學組分（諸如稀釋劑或載劑）之混合物。醫藥組成物促進化合物向生物體之投予。醫藥組成物亦可藉由使化合物與無機或有機酸（諸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、甲烷磺酸、乙烷磺酸、對甲苯磺酸、及水楊酸）反應來獲得。醫藥組成物通常將針對特定意圖投予途徑設計。

用語「生理上可接受(physiologically acceptable)」係指載劑、稀釋劑、或賦形劑，其不會消除化合物之生物活性及性質，亦不會對意欲遞送組成物之動物造成明顯損傷或損害。

如本文中所使用，「載劑(carrier)」係指促進化合物併入細胞或組織中之化合物。例如（但不限於），二甲基亞碸(DMSO)係經常利用的載劑，其促進許多有機化合物被攝入對象的細胞或組織中。

如本文中所使用，「稀釋劑(diluent)」係指醫藥組成物中缺乏明顯藥理學活性但可能為醫藥上必需或所欲之成分。例如，稀釋劑可用於增加質量過小而無法用於製造及/或投予之有效藥物的體積。其亦可為用於溶解將藉由注射、攝取或吸入投予之藥物的液體。所屬技術領域中常見形式的稀釋劑為緩衝水溶液，諸如但不限於模擬人類血液之pH及等滲性之磷酸鹽緩衝鹽水。

如本文中所使用，「賦形劑(excipient)」係指基本上惰性的物質，其經添加至醫藥組成物中以向該組成物提供（但不限於）體積、稠度、穩定性、結合能力、潤滑、崩解能力等。例如，諸如抗氧化劑及金屬螯合劑之穩定劑係賦形劑。在一實施例中，醫藥組成物包含抗氧化劑及/或金屬螯合劑。「稀釋劑(diluent)」係一種類型的賦形劑。

在本文中描述之醫藥組成物本身可向人類患者投予，或可以其中彼等與其他活性成分（如在組合療法中）、或載劑、稀釋劑、賦形劑或其組合混合之醫藥組成物向人類患者投予。適當配方取決於選擇的投予途徑。用於本文所述之化合物的配方及投予之技術係所屬技術領域中具有通常知識者已知的。

在本文中揭示之醫藥組成物可以本身已知之方式製造，例如藉由習知之混合、溶解、造粒、糖衣錠製造、研調、乳化、囊封、包封、或製錠製程。此外，所含有的活性成分之量可有效達成其意圖目的。在本文中揭示之醫藥組合中使用的許多化合物可提供為含有醫藥上相容的相對離子之鹽。

所屬技術領域存在多種投予WEE1抑制劑化合物、鹽、及/或組成物之技術，包括但不限於口服、直腸、肺、外用、氣溶膠、注射、輸注、及非經腸遞送，包括肌肉內、皮下、靜脉內、髓內注射、鞘內、直接心室內、腹膜內、鼻內、及眼內注射。在一些實施例中，WEE1抑制劑或其醫藥上可接受之鹽可經口服投予。

亦可以局部而非全身方式投予WEE1抑制劑化合物、鹽、及/或組成物，例如經由將通常呈貯劑或持續釋放配方之化合物直接注射或植入至感染區域中。另外，可以標靶藥物遞送系統（例如塗佈組織特異性抗體之脂質體）投予化合物。脂質體將靶向器官且由器官選擇性吸收。例如，可能需要鼻內或肺遞送以靶向呼吸疾病或病況。

所欲時，組成物可呈現於可含有一或多個（含有活性成分之）單位劑型之包裝或分配裝置中。包裝可例如包含金屬或塑膠箔，例如泡殼包裝。包裝或分配器裝置可隨附投予說明。包裝或分配器亦可隨附與該容器相關聯之通知來規範藥品的製造、使用、或銷售，通知之形式係由政府機構規定，該通知反映該機構核准該藥物形式用於人類或獸醫投予。舉例來說，該通知可為美國食品與藥品管理局批准用於處方藥的標籤或產品仿單。亦可製備可包括在相容醫藥載劑中配製的本文描述之化合物及/或鹽的組成物、置於適當容器中並標示用來治療所指示之病況。用途及方法

另一實施例提供一種治療對象之癌症之方法，其包含：判定該對象是否對於使用WEE1抑制劑之治療敏感，該判定包含：自該對象獲得或已經獲得生物樣本；及對該生物樣本執行或已經執行至少一種檢定以判定該對象是否具有NBN、MRE11、RAD50、或MRE11-RAD50-NBN (MRN)蛋白錯合物之經改變DNA修復功能；及基於該對象是否對於使用該WEE1抑制劑之治療敏感之該判定，來為該對象選擇治療計畫。

上述方法之各種實施例及實施方案細節在本文別處更詳細地描述。除非上下文另外明確指示，否則將理解所有此類實施例及實施方案皆適用於以上方法。

如本文中所使用，「DNA修復(DNA repair)」係指細胞藉由其識別並校正編碼其基因體之DNA分子損傷之一系列過程。在人類細胞中，正常代謝活性及環境因素兩者（諸如UV光及輻射）可導致DNA損傷，導致每天每個細胞至多100萬個個別分子病變。許多此等病變造成DNA分子之結構損傷，且可改變或消除細胞在轉錄受影響DNA所編碼之基因的能力。其他病變會誘發細胞基因體中潛在的有害突變，從而影響在其經歷有絲分裂後其子細胞之存活。因此，DNA修復過程是持續活躍的，因為其對DNA結構的損傷作出反應。DNA修復受到破壞會導致染色體不穩定性及非整倍性，此通常會導致異常的細胞分裂、突變累積、有絲分裂驟變（即細胞死亡）、或導致細胞凋亡之細胞週期檢查點失敗。

DNA修復途徑或細胞週期檢查點功能之損失可導致雙股斷裂(DSB)，其中雙螺旋體中之兩股皆被切斷，對細胞尤其有害，因為它們可導致細胞死亡或基因體重組。存在兩種修復DSB之主要機制：非同源末端連接(NHEJ)及重組修復（亦稱為模板輔助修復或同源重組修復）。

許多不同檢定可用於評定DNA斷裂及修復。檢定的非限制性實例包括：RAD51病灶檢定、γH2AX(gamma-H2AX)檢測或檢定、透過紙層析法(paper chromatography)之紫外線所誘導之CPD、放射性標記、修復複製、非排定DNA合成檢定(unscheduled DNA synthesis assay)、吖啶橙染色、碘化丙錠暈染檢定(halo assay with propidium iodide)、HPLC-MS、GC-MS、EM、重組DNA技術、桑格定序、彗星檢定、凝膠電泳、放射免疫檢定、ELISA、PCR、qPCR、LMPCR、ICPCR、TUNEL檢定、微陣列、免疫組織化學檢定、免疫學檢定、免疫沉澱、次世代定序、RADAR-seq、SMRT定序、FISH檢定、Comet-FISH檢定、DBD-FISH檢定、蛋白XRCC1、蛋白Ku、CometChip檢定、免疫印跡(immunoslot blot)、切除修復檢定、切口檢定、修復貼片檢定、螢光染料染色、親和性結合檢定、酶介導之螢光標記、宿主細胞再激活檢定、SPI-seq、XR-seq、tXR-seq、切除-seq、核糖-seq、水解末端定序、NMP-seq、Pu-seq、HydEn-seq、鹼性單細胞凝膠電泳、中性單細胞凝膠電泳、及FCM-Annexin V標記。

如本文所用，「細胞週期檢查點(cell cycle checkpoint)」是由細胞進行的一系列測試或評估，其暫停細胞週期並給予細胞時間在繼續分裂之前修復損傷。DNA損傷檢查點在G1/S與G2/M邊界處發生。亦存在內部S檢查點。檢查點活化係由兩個主激酶（ATM及ATR）控制。ATM對於DNA雙股斷裂及染色質結構的破壞作出反應，而ATR主要對停滯的複製分叉作出反應。此等激酶在信號轉導級聯反應(signal transduction cascade)中磷酸化下游靶標，最終導致細胞週期停滯。亦需要一類檢查點介質蛋白質，以用於將檢查點激活信號傳遞給下游蛋白，以促進或抑制細胞週期的進程。

「功能檢定(functional assay)」是檢測基因、蛋白質、或細胞對於刺激或損傷之反應的活性之方法。所執行之特異性功能檢定取決於併入細胞基因體中之特異性突變(specific mutation)。功能檢定包括但不限於激酶檢定、使用例如報告子構建體的轉錄檢定、增生檢定、細胞凋亡檢定、遷移/趨化性檢定、營養物敏感性檢定、藥劑（例如藥物、化療劑、誘變劑）或輻射敏感性檢定、核酸結合檢定、或蛋白質結合檢定，所有該等檢定皆在所屬技術領域中具有通常知識者的能力範圍內。

在一實施例中，對象具有經改變DNA修復功能的基因型。在一實施例中，經改變DNA修復功能之該基因型包含RAD50、NBN (NBS1)、MRE11、與該MRN蛋白錯合物相關之蛋白質、或其任何組合之功能突變。在一實施例中，該功能突變係缺失、插入、截短、點突變、框移、或其他基因改變。

在一實施例中，經改變DNA修復功能係DNA修復功能之損失。在一實施例中，Nirbin（NBN或NBS1）具有DNA修復功能之損失。在一實施例中，經改變DNA修復功能係DNA修復功能之降低。在一實施例中，NBN具有DNA修復功能之降低。在一實施例中，經改變DNA修復功能係DNA修復功能之增益。在一實施例中，NBN具有DNA修復功能之增益。

在一實施例中，經改變DNA修復功能係由於與該MRN蛋白錯合物相關之至少一個基因之表現改變。在一實施例中，與NBN相關聯之基因具有增強之表現。在一實施例中，與NBN相關聯之基因具有降低之表現。在一實施例中，經改變DNA修復功能的基因型係體細胞基因型。在一實施例中，經改變DNA修復功能的基因型係生殖系基因型。

在本文所述之治療癌症之方法之一實施例中，若該對象具有NBN、MRE 11、RAD50、或MRE11-RAD50-NBS1 (MRN)蛋白錯合物之經降低或內源性DNA修復功能，則投予該癌症治療包含向該對象投予有效量之WEE1抑制劑；或若該對象具有NBN、MRE11、RAD50、或MRE11-RAD50-NBS1 (MRN)蛋白錯合物之DNA修復功能之增益，則投予該癌症治療不包括向該對象投予WEE1抑制劑。

在本文所述之治療癌症之方法之一實施例中，該癌症包含腫瘤。在一實施例中，對象係哺乳動物。在一實施例中，對象係人類。在一實施例中，該對象具有經降低之DNA修復功能，且相較於治療中所給出之正常劑量，向該對象投予之該WEE1抑制劑之該有效量包含較低劑量。在一實施例中，該對象具有內源性DNA修復功能，且向該對象投予之WEE1抑制劑之該有效量係治療中所給出之正常劑量。

在本文所述之治療癌症之方法之一實施例中，經改變DNA修復功能係功能之損失。在一實施例中，經改變DNA修復功能係功能之增益。在一實施例中，經改變DNA修復功能係功能之降低。在一實施例中，對象具有內源性DNA修復功能。

在本文所述之治療癌症之方法之一實施例中，該方法進一步包含根據該治療計畫來治療該對象。在一實施例中，經改變DNA修復功能係功能之損失。在一實施例中，經改變DNA修復功能係功能之降低。在一實施例中，經改變DNA修復功能係功能之增益。在一實施例中，對象具有內源性DNA修復功能。在一實施例中，經改變DNA修復功能係與該MRN蛋白錯合物相關之至少一個基因之增強表現。在一實施例中，經改變DNA修復功能係與該MRN蛋白錯合物相關之至少一個基因之降低表現。

在本文所述之治療癌症之方法之一實施例中，若該對象具有與NBN、MRE11、RAD50、或MRE11-RAD50-NBN (MRN)蛋白錯合物相關之至少一個基因之內源性或降低之表現的基因型，則該治療計畫包含向該對象投予有效量之WEE1抑制劑；或若該對象具有與NBN、MRE11、RAD50、或MRE11-RAD50-NBN (MRN)蛋白錯合物相關之至少一個基因之增強之表現的基因型，則該治療計畫包含向該對象投予有效量之除WEE1抑制劑以外之癌症治療。

在本文所述之治療癌症之方法之一實施例中，若該對象具有與NBN、MRE11、RAD50、或MRE11-RAD50-NBN (MRN)蛋白錯合物相關之至少一個基因之內源性或降低之表現的基因型，則該治療計畫包含以第一有效劑量向該對象投予該WEE1抑制劑；或若該對象具有與NBN、MRE11、RAD50、或MRE11-RAD50-NBN (MRN)蛋白錯合物相關之至少一個基因之增強之表現的基因型，則該治療計畫包含以高於該第一有效劑量之第二有效劑量向該對象投予該WEE1抑制劑。

在本文所述之治療癌症之方法之實施例中，經改變DNA修復功能、經降低之DNA修復功能、DNA修復功能之損失、DNA修復功能之增益、增強之基因表現、或經降低之基因表現的基因型包含NBN突變。在一實施例中，經改變DNA修復功能、經降低之DNA修復功能、DNA修復功能之損失、DNA修復功能之增益、增強之基因表現、或降低之基因表現的基因型包含MRE11突變。在一實施例中，經改變DNA修復功能、經降低之DNA修復功能、DNA修復功能之損失、DNA修復功能之增益、降低之基因表現、或增強之基因表現的基因型包含RAD50突變。

在本文所述之治療癌症之方法之一實施例中，該方法進一步包含判定在第一有效劑量下之該治療計畫對於對象造成之毒性風險低於在第二有效劑量下之治療計畫。

在本文所述方法之各種實施例中之任一者中，WEE1抑制劑可選自上文標題為「WEE1抑制劑化合物」一節中所述之各種WEE1抑制劑化合物等。

本文所述之一些實施例係關於一種用於改善及/或治療本文所述癌症之方法，其可包括向患有本文所述癌症之對象投予有效量之本文所述之WEE1抑制劑化合物、或其醫藥上可接受之鹽、或包括有效量之本文所述之WEE1抑制劑化合物或其醫藥上可接受之鹽之醫藥組成物。本文所述之其他實施例係關於一種有效量之本文所述之WEE1抑制劑化合物、或其醫藥上可接受之鹽、或包括有效量之本文所述之WEE1抑制劑化合物或其醫藥上可接受之鹽之醫藥組成物在製造用於改善及/或治療本文所述癌症之藥劑中之用途。本文所述之又其他實施例係關於一種用於改善及/或治療本文所述癌症的有效量之本文所述之WEE1抑制劑化合物、或其醫藥上可接受之鹽、或包括有效量之本文所述之WEE1抑制劑化合物或其醫藥上可接受之鹽之醫藥組成物。

本文所述之一些實施例係關於一種用於抑制惡性生長或腫瘤之複製之方法，其可包括使該生長或該腫瘤與有效量之本文所述之WEE1抑制劑化合物、或其醫藥上可接受之鹽、或包括有效量之本文所述之WEE1抑制劑化合物或其醫藥上可接受之鹽之醫藥組成物接觸，其中該惡性生長或腫瘤係由本文所述癌症引起。本文所述之其他實施例係關於一種有效量之本文所述之WEE1抑制劑化合物、或其醫藥上可接受之鹽、或包括有效量之本文所述之WEE1抑制劑化合物或其醫藥上可接受之鹽之醫藥組成物在製造用於抑制惡性生長或腫瘤之複製之藥劑中之用途，其中該惡性生長或腫瘤係由本文所述癌症引起。本文所述之又其他實施例係關於一種用於抑制惡性生長或腫瘤之複製的有效量之本文所述之WEE1抑制劑化合物、或其醫藥上可接受之鹽、或包括有效量之本文所述之WEE1抑制劑化合物或其醫藥上可接受之鹽之醫藥組成物，其中該惡性生長或腫瘤係由本文所述癌症引起。

本文所述之一些實施例係關於一種用於改善或治療本文所述癌症之方法，其可包括向患有本文所述癌症的對象使惡性生長或腫瘤與有效量之本文所述之WEE1抑制劑化合物、或其醫藥上可接受之鹽、或包括有效量之本文所述之WEE1抑制劑化合物或其醫藥上可接受之鹽之醫藥組成物接觸。本文所述之其他實施例係關於一種有效量之本文所述之WEE1抑制劑化合物、或其醫藥上可接受之鹽、或包括有效量之本文所述之WEE1抑制劑化合物或其醫藥上可接受之鹽之醫藥組成物在製造用於改善或治療癌症之藥劑中之用途，其可包括接觸惡性生長或腫瘤，其中該惡性生長或腫瘤係由本文所述癌症引起。本文所述之又其他實施例係關於一種用於改善或治療癌症之有效量之本文所述之WEE1抑制劑化合物、或其醫藥上可接受之鹽、或包括有效量之本文所述之WEE1抑制劑化合物或其醫藥上可接受之鹽之醫藥組成物，其可包括接觸惡性生長或腫瘤，其中該惡性生長或腫瘤係由本文所述癌症引起。

本文所述之一些實施例係關於一種抑制WEE1之活性（例如，抑制NBN突變細胞中WEE1之活性、抑制NBN野生型細胞中WEE1之活性、抑制MRE11突變細胞中WEE1之活性、抑制MRE11野生型細胞中WEE1之活性、抑制RAD50突變細胞中WEE1之活性、抑制RAD50野生型細胞中WEE1之活性、及/或降低WEE1在細胞中之過表現）之方法，其可包括向患有本文所述癌症之癌細胞提供有效量之本文所述之化合物（例如，WEE1抑制劑或其醫藥上可接受之鹽）或包括有效量之本文所述之化合物（例如，WEE1抑制劑或其醫藥上可接受之鹽）之醫藥組成物。本文所述之其他實施例係關於一種有效量之本文所述之化合物（例如，WEE1抑制劑或其醫藥上可接受之鹽）或包括有效量之本文所述之化合物（例如，ZN-c3或其醫藥上可接受之鹽）之醫藥組成物在製造用於抑制WEE1之活性（例如，抑制NBN突變細胞中WEE1之活性，抑制NBN野生型細胞中WEE1之活性，抑制MRE11突變細胞中WEE1之活性，抑制MRE11野生型細胞中WEE1之活性，抑制RAD50突變細胞中WEE1之活性，抑制RAD50野生型細胞中WEE1之活性，及/或降低細胞中WEE1之過表現）之藥劑中之用途。本文所述之又其他實施例係關於一種有效量之本文所述之化合物（例如，WEE1抑制劑或其醫藥上可接受之鹽）或包含有效量之本文所述之化合物（例如，WEE1抑制劑或其醫藥上可接受之鹽）之醫藥組成物，其用於抑制WEE1之活性（例如，抑制WEE1之活性、抑制NBN突變細胞中WEE1之活性、抑制NBN野生型細胞中WEE1之活性、抑制MRE11突變細胞中WEE1之活性、抑制MRE11野生型細胞中WEE1之活性、抑制RAD50突變細胞中WEE1之的活性、抑制RAD50野生型細胞中WEE1之活性、及/或降低細胞中WEE1之過表現）。本文所述之一些實施例係關於一種抑制WEE1之活性（例如，抑制NBN突變細胞中WEE1之活性、抑制NBN野生型細胞中WEE1之活性、抑制MRE11突變細胞中WEE1之活性、抑制MRE11野生型細胞中WEE1之活性、抑制RAD50突變細胞中WEE1之活性、抑制RAD50野生型細胞中WEE1之活性、及/或降低WEE1在細胞中之過表現）之方法，其可包括向患有本文所述癌症之癌細胞提供有效量之本文所述之化合物（例如，WEE1抑制劑或其醫藥上可接受之鹽）或包括有效量之本文所述之化合物（例如，WEE1抑制劑或其醫藥上可接受之鹽）之醫藥組成物。本文所述之其他實施例係關於一種抑制WEE1之活性（例如，抑制NBN突變細胞中WEE1之活性、抑制NBN野生型細胞中WEE1之活性、抑制MRE11突變細胞中WEE1之活性、抑制MRE11野生型細胞中WEE1之活性、抑制RAD50突變細胞中WEE1之活性、抑制RAD50野生型細胞中WEE1之活性、及/或降低WEE1在細胞中之過表現）之方法，其可包括使來自本文所述癌症之癌細胞接觸有效量之本文所述之化合物（例如，WEE1抑制劑或其醫藥上可接受之鹽）或包括有效量之本文所述之化合物（例如，WEE1抑制劑或其醫藥上可接受之鹽）之醫藥組成物，並從而抑制WEE1之活性。

本文所述之一些實施例係關於一種用於改善或治療本文所述癌症之方法，其可包括使用有效量之本文所述之化合物（例如，ZN-c3或其醫藥上可接受之鹽）或包括有效量之本文所述之化合物（例如，ZN-c3或其醫藥上可接受之鹽）之醫藥組成物來抑制WEE1之活性（例如，抑制NBN突變細胞中WEE1之活性、抑制NBN野生型細胞中WEE1之活性、抑制MRE11突變細胞中WEE1之活性、抑制MRE11野生型細胞中WEE1之活性、抑制RAD50突變細胞中WEE1之活性、抑制RAD50野生型細胞中WEE1之活性、及/或降低WEE1在細胞中之過表現）。本文所述之其他實施例係關於一種有效量之本文所述之化合物（例如，ZN-c3或其醫藥上可接受之鹽）或包括有效量之本文所述之化合物（例如，ZN-c3或其醫藥上可接受之鹽）之醫藥組成物在藉由下列方式來製造用於改善或治療本文所述癌症之藥劑中之用途：抑制WEE1之活性（例如，抑制NBN突變細胞中WEE1之活性、抑制NBN野生型細胞中WEE1之活性、抑制MRE11突變細胞中WEE1之活性、抑制MRE11野生型細胞中WEE1之活性、抑制RAD50突變細胞中WEE1之活性、抑制RAD50野生型細胞中WEE1之活性、及/或降低細胞中WEE1之過表現）。本文所述之又其他實施例係關於一種有效量之本文所述之化合物（例如，ZN-c3或其醫藥上可接受之鹽）或包含有效量之本文所述之化合物（例如，ZN-c3或其醫藥上可接受之鹽）之醫藥組成物，其用於藉由下列方式來改善或治療本文所述癌症：抑制WEE1之活性（例如，抑制NBN突變細胞中WEE1之活性、抑制NBN野生型細胞中WEE1之活性、抑制MRE11突變細胞中WEE1之活性、抑制MRE11野生型細胞中WEE1之活性、抑制RAD50突變細胞中WEE1之的活性、抑制RAD50野生型細胞中WEE1之活性、及/或降低細胞中WEE1之過表現）。本文所述之一些實施例係關於一種用於改善或治療本文所述癌症之方法，其可包括使癌細胞接觸有效量之本文所述之化合物（例如，ZN-c3或其醫藥上可接受之鹽）或包括有效量之本文所述之化合物（例如，ZN-c3或其醫藥上可接受之鹽）之醫藥組成物，其中該化合物抑制WEE1之活性（例如，抑制NBN突變細胞中WEE1之活性、抑制NBN野生型細胞中WEE1之活性、抑制MRE11突變細胞中WEE1之活性、抑制MRE11野生型細胞中WEE1之活性、抑制RAD50突變細胞中WEE1之活性、抑制RAD50野生型細胞中WEE1之活性、及/或降低細胞中WEE1之過表現）。

本文揭示之一些實施例係關於一種用於抑制WEE1之活性的方法，其可包括向患有本文所述癌症的對象或來自本文所述癌症的癌細胞提供有效量之本文所述之化合物（例如，WEE1抑制劑或其醫藥上可接受之鹽）、或包括有效量之本文所述之化合物（例如，WEE1抑制劑或其醫藥上可接受之鹽）之醫藥組成物。本文揭示之其他實施例係關於一種有效量之本文所述之化合物（例如，WEE1抑制劑或其醫藥上可接受之鹽）或包括有效量之本文所述之化合物（例如，ZN-c3或其醫藥上可接受之鹽）之醫藥組成物在製造用於抑制WEE1之活性之藥劑中之用途。本文揭示之又其他實施例係關於一種用於抑制WEE1之活性的本文所述之化合物（例如，WEE1抑制劑或其醫藥上可接受之鹽）或包括有效量之本文所述之化合物（例如，ZN-c3或其醫藥上可接受之鹽）之醫藥組成物。

如本文中所使用，用語「治療(treat, treating, treatment, therapeutic)」及「療法(therapy)」不必然意指完全治癒或消除疾病或病況。可將疾病或病況之任何非所欲的徵象或症狀有任何程度的任何減輕視為治療及/或療法。另外，治療可包括可使對象對福祉或外觀的整體感覺惡化之行動。

如本文所使用之用語「投予(administration/administering)」具有如所屬技術領域中具有通常知識者所理解之其通常含義，且係指藉由任何有效途徑提供或給予對象一種藥劑，諸如本文所揭示之組成物。例示性投予途徑包括但不限於：口服、注射（諸如顱內、皮下、肌肉內、皮內、腹膜內、及靜脈內）、舌下、直腸、經皮、鼻內、陰道內、腹膜、或吸入途徑。

用語「治療有效量(therapeutically effective amount)」及「有效量(effective amount)」用於指示引發指示生物或藥物反應之活性化合物或醫藥製劑的量。例如，治療有效量之化合物、鹽、或組成物可為預防、減輕、或改善疾病或病況之症狀、或延長所治療對象之存活所需的量。此反應可以在組織、系統、動物、或人類中發生，且包括減輕所治療疾病或病況之徵象或症狀。鑒於在本文中提供之揭露，有效量之判定完全在所屬技術領域中具有通常知識者之能力範圍以內。作為劑量所需之本文揭示之化合物的治療有效量將取決於投予途徑、所治療的動物類型（包括人類）、及所考慮的特定動物之身體特徵。可調整劑量以達到所預的效果，但是取決於諸如體重、飲食、併用藥物、及所屬醫學領域中具有通常知識者將認識到的其他因素之因素。

例如，有效量之化合物或輻射為導致以下結果之量：(a)由癌症引起之一或多種症狀降低、減輕、或消失，(b)腫瘤大小減小，(c)腫瘤消除，及/或(d)腫瘤之長期疾病穩定（生長停滯）。在肺癌（諸如非小細胞肺癌）的治療中，治療有效量係減輕或消除咳嗽、呼吸急促、及/或疼痛的量。作為另一實例，WEE1抑制劑之有效量或治療有效量係導致WEE1活性及/或磷酸化（諸如CDC2之磷酸化，亦稱為CDK1）降低之量。WEE1活性之降低為所屬技術領域中具有通常知識者已知的，且可以藉由分析WEE1內在激酶活性及下游受質磷酸化來判定。

用於治療所需的WEE1抑制劑化合物或其醫藥上可接受之鹽的量將不僅隨著所選特定化合物或鹽而變化，且亦隨著投予途徑、所治療的疾病或病況之性質及/或症狀、及患者的年齡及病況而變化，而最終將由主治醫師或臨床醫師來決定。在投予醫藥上可接受之鹽的情況下，劑量可以游離鹼計算。所屬技術領域中具有通常知識者將理解，在某些情况下，可能需要以超過或甚至遠超過本文所述劑量範圍之量投予本文揭示之化合物，以有效及積極地治療特別是侵襲性疾病或病況。

然而，通常，合適之劑量將常常在約0.05 mg/kg至約10 mg/kg之範圍內。例如，合適之劑量可在約0.10 mg/kg至約7.5 mg/kg體重/天，諸如約0.15 mg/kg至約5.0 mg/kg/接受者體重/天、約0.2 mg/kg至約4.0 mg/kg/接受者體重/天、或介於其間之任何量的範圍內。化合物可以單位劑型投予；例如，每單位劑型含有1至500 mg、10至100 mg、5至50 mg、或介於其間之任何量的活性成分。

所欲劑量可便利地以單一劑量呈現，或呈以適當間隔投予之分開劑量，例如，以每天二、三、四、或更多個亞劑量。亞劑量本身可進一步劃分成例如多次不連續的寬鬆間隔開投予。

如所屬技術領域中具有通常知識者將顯而易知的，欲投予之有用體內劑量及特定投予模式將視年齡、體重、病痛嚴重性及所治療哺乳動物物種、所採用之特定化合物及所採用之這些化合物的特定用途而變化。有效劑量水準（即達到所欲效果所需之劑量水準）的判定可由所屬技術領域中具有通常知識者使用常規方法來達成，例如，人體臨床試驗、體內研究、及體外研究。例如，WEE1抑制劑化合物或其醫藥上可接受之鹽之有用劑量可藉由比較其體外活性及在動物模型中之體內活性來判定。這種比較可藉由與已建立之藥物（諸如順鉑(cisplatin)及/或吉西他濱）比較來進行

劑量及時間間隔可經個別地調節，以提供足以維持調節效應之活性部份之血漿水準或最小有效濃度(MEC)。各化合物之MEC將有所不同，但可自體內及/或體外數據估計。達成MEC所需之劑量將取決於個體特徵及投予途徑。然而，可使用HPLC檢定或生物檢定來判定血漿濃度。劑量時間間隔亦可使用MEC值來判定。組成物應使用維持血漿水準高於MEC達10至90%的時間、較佳地介於30至90%之間的時間且最佳的是介於50至90%之間的時間的方案投予。在局部投予或選擇性吸收之情況下，藥物之局部有效濃度可能與血漿濃度無關。

應注意，主治醫師會瞭解如何及何時因毒性或器官功能異常而終止、中斷或調整投予。相反地，主治醫師亦會知道若臨床反應不充足（排除毒性），則將治療調整至較高水平。管理所關注病症時投予劑量之量值將隨所治療疾病或病況之嚴重性及投予途徑而異。疾病或病況之嚴重程度可例如部分地依據標準預後評估方法來評估。另外，劑量及可能的給藥頻率亦將根據個別患者之年齡、體重及反應而異。與以上討論之計畫類似的計畫可用於獸醫學。

可使用已知方法來評估本文揭示之WEE1抑制劑化合物、鹽、及組成物之功效及毒性。例如，特定化合物或共用某些化學部份之化合物亞組之毒物學可藉由判定對細胞系（例如哺乳動物且較佳人類細胞系）之體外毒性來建立。此類研究之結果通常可預測在動物（例如哺乳動物）或更具體而言在人類中之毒性。替代地，可使用已知方法判定動物模型（諸如小鼠、大鼠、兔、狗、或猴）中特定化合物之毒性。特定化合物之療效可使用數種公認方法（例如體外方法、動物模型或人體臨床試驗）來建立。當選擇模型來判定療效時，熟習此項技術者可由目前最佳技術的引導以選擇適當模型、劑量、投予途徑及/或方案。實例實例1-臨床試驗展示出WEE1抑制劑治療具有NBN突變之對象的癌症之優良能力

藉由臨床試驗評估WEE1抑制劑對具有NBN突變之人類對象之有效性。檢查兩個人類對象：患者1，其具有IV期大腸直腸癌；及患者2，其具有IV期卵巢癌。對兩個對象之基因體之部分進行定序。發現患者1具有NBN之生殖系突變（c.123delC，截短的外顯子2；致病性突變）。預測患者1中之NBN c.123delC變異體，以導致NBN之DNA修復功能降低。發現患者2具有NBN之體細胞突變（截短之內含子8），其經預測為與NBN之經降低之DNA修復功能相關。

評估兩名患者隨時間推移對於WEE1抑制劑之反應。使用腫瘤標記來監測腫瘤進展；患者1使用CEA，而患者2使用CA-125。在治療前，患者1顯示出升高之CEA水平（＞ 300單位/mL），其顯著地高於參考範圍（圖 1 ）。然而，在使用ZN-c3（WEE1抑制劑）開始治療之兩週內，CEA含量減退至正常範圍，其表示實質的腫瘤消退。根據隨後的腫瘤影像分析，患者1預計在使用WEE1抑制劑治療後具有42%之腫瘤大小減小（部分反應）（圖 2 至圖 3 ），其在治療過程中進一步增加至51%之腫瘤大小減小（部分反應）。同樣，患者2的腫瘤進展在開始使用ZN-c3治療後約1個月顯著地減退，其係反映於CA-125水準的顯著降低（圖 4 ）。根據隨後的腫瘤影像分析，患者2在使用WEE1抑制劑治療後具有56%之腫瘤大小減小（部分反應）（圖 5 至圖 7 ），其在治療過程中進一步增加至71%之腫瘤大小減小（部分反應）。此等結果說明在臨床環境下，WEE1抑制在NBN功能降低之人類對象中之有效性增強。實例2-細胞培養分析指出，NBN功能與WEE1抑制劑抑制細胞增生之有效性呈負相關

使用經siRNA介導之NBN基因減弱來處理卵巢細胞培養細胞株UWB1.289，如西方墨點分析所證實（圖 8 ）。接著在72小時內使用增加濃度之ZN-c3處理該等細胞，並監測存活情況（圖 9 ）。相較於野生型而言，缺乏NBN功能之細胞對於WEE1抑制的敏感性高1.5倍（表 1 ）。此等結果與實例1之臨床試驗資料一致，表示經降低之NBN功能增強了WEE1抑制劑之有效性。

表 1

	siCTRL	siNBN
底部	0.3837	-1.317
頂部	106.1	92.4
Log(IC ₅₀)	-0.9213	-1.092
IC ₅₀	0.1199	0.08098

表 1總結了圖9所示實驗之統計分析。

在橫跨具有不同NBN表現水準之細胞株中評價WEE1抑制劑之有效性。HCC1428（乳癌）及HS-578T（乳癌）是NBN因拷貝數擴增而被擴增之細胞株。相比之下，在卵巢癌細胞株OVCAR3及UWB1.289中並未擴增NBN表現。使用ZN-c3處理來自所有四種細胞株之細胞（圖 10 ）。NBN表現水準與WEE1抑制效果呈負相關；與沒有擴增之NBN表現之細胞相比，具有擴增之NBN表現之細胞對於使用WEE1抑制劑之治療之敏感性較低，此係藉由較高的IC ₅₀值及/或較低的最大細胞密度抑制來證明（表 2 ）。此資料與實例1之臨床試驗資料及上述細胞培養資料一致。

表 2

	OVCAR3	UWB1.289	HS-578T	HCC1428
底部	4.195	2.548	15.01	27.25
Log（絕對IC ₅₀）	-6.806	-7.335	-6.647	-5.886
絕對IC ₅₀	1.562e-007	4.629e-008	2.252e-007	1.301e-006

表 2總結了圖10所示實驗之統計分析。

亦評價WEE1抑制與化合物Mirin組合使用之有效性。Mirin藉由阻斷MRE11相關之核酸酶活性，充當特異性MRE11–RAD50–NBN (MRN)蛋白複合物抑制劑。在使用或不使用30 µM Mirin的情況下，使用增加濃度之ZN-c3處理卵巢癌細胞株OVCAR3達96小時（圖 11 ）。表 3中顯示之資料指出，與單獨使用ZN-c3處理的細胞相比，使用30 µM Mirin共同處理之細胞對ZN-c3之敏感性高約3倍。OVCAR3细胞具有天然MRN錯合物功能，該功能會藉由透過Mirin治療之對於錯合物成員MRE11進行之後續標靶來抑制。由於Mirin治療增強了WEE1抑制劑之有效性，因此MRN錯合物功能（以及透過其之NBN功能）對於抑制劑抗藥性係重要的。此資料與實例1之臨床試驗資料及上述細胞培養資料一致。

表 3

	0 µM Mirin	30 µM Mirin
底部	4.152	5.942
頂部	100.5	96.10
Log(IC ₅₀)	-6.825	-7.285
IC ₅₀	1.496e-007	5.189e-008

表 3總結了圖11所示實驗之統計分析

使用經sgRNA介導之NBN基因減弱來處理卵巢細胞培養細胞株SKOV3，如西方墨點分析所證實（圖27）。然後在使用或不使用300 µM羥基脲(HU)（複製應力誘導化合物）之2D生長檢定中，於72小時內使用增加濃度之ZN-c3處理該等細胞，並監測存活情況（圖28）。相較於野生型而言，在羥基脲存在下缺乏NBN功能之細胞對於WEE1抑制的敏感性高1.8倍（表4）。此等結果與實例1之臨床試驗資料一致，表示經降低之NBN功能增強了WEE1抑制劑之有效性。

表 4

	SKOV3 sgNT	SKOV3 sgNT + 300 uM HU	SKOV3 sg1 NBN	SKOV3 sg1 NBN + 300 uM HU
IC ₅₀	0.1343	0.0783	0.1201	0.0435

表 4總結了圖28中所描繪實驗之統計分析。sgNT =非靶向；sg1 NBN = NBN剔除；HU =羥基脲。

使用經sgRNA介導之NBN基因減弱來處理卵巢細胞培養細胞株SKOV3，如西方墨點分析所證實（圖29）。接著將該等細胞在3D球狀體生長檢定中培養，並於11天內使用增加濃度之ZN-c3處理，並監測存活情況（圖30）。相較於野生型而言，缺乏NBN功能之細胞對於WEE1抑制的敏感性高1.9倍（表5）。此等結果與實例1之臨床試驗資料一致，表示經降低之NBN功能增強了WEE1抑制劑之有效性。

表 5

	SKOV3 sgNT	SKOV3 sg1 NBN
IC ₅₀	0.08188	0.04322

表 5總結了圖30中所描繪實驗之統計分析。sgNT =非靶向；sg1 NBN = NBN剔除。

分別使用經sgRNA及siRNA介導之NBN基因剔除及/或減弱來處理卵巢細胞培養細胞株SKOV3，如西方墨點法分析所證實（圖31）。然後將該等細胞在2D生長檢定中培養，並於72小時內使用增加濃度之ZN-c3處理，並監測存活情況（圖32）。與野生型相比，缺乏NBN功能（其由經sgRNA介導之剔除及經siRNA介導之減弱來介導）之細胞對於WEE1抑制之敏感性高2.0倍（表6）。此等結果與實例1之臨床試驗資料一致，表示經降低之NBN功能增強了WEE1抑制劑之有效性。

表 6

	SKOV3 sgNT + siCTRL	SKOV3 sg1 NBN + siCTRL	SKOV3 sgNT + siNBN	SKOV3 sg1 NBN + siNBN
IC ₅₀	0.4561	0.3126	0.3661	0.2257

表 6總結了圖32中所描繪實驗之統計分析。sgNT =非靶向；sg1 NBN = NBN剔除；siCTRL =非靶向(siRNA)；siNBN = NBN減弱。

在異種移植模型中測試ZN-c3之抗腫瘤作用，該等異種移植模型係自具有MRN基因遺傳變異體之細胞株建立，該等變異體已被描述為導致相應蛋白質之功能損失。測試四種不同的模型，其包括：大腸直腸癌LoVo細胞株（相關遺傳變異體：NBN L490fs）、卵巢癌TOV-21G細胞株（相關遺傳變異體：NBN R466Gfs*18）、急性淋巴母細胞白血病MOLT-4細胞株（相關遺傳變異體：RAD50 R656*、Q882*、R385C）、及乳癌MCF-7細胞株（相關遺傳變異體：NBN P325H、R43*、N321Y）。

使用BALB/c裸鼠的大腸直腸癌LoVo異種移植模型評估ZN-c3之抗腫瘤活性。在各小鼠右側腹皮下接種5 × 10 ⁶/100 µL的LoVo腫瘤細胞，以供腫瘤發展。當平均腫瘤大小達到207 mm ³時，將動物隨機分成4組（10隻動物/組），並根據下表7開始治療。

表 7

模型	組別	治療	動物數量 / 組	劑量 (mg/kg)	Vol (µL/g)	途徑	方案
LoVo	1	媒劑	10	-	10	p.o.	qd × 28
2	ZN-c3	10	40	10	p.o.	qd × 28
3	ZN-c3	10	60	10	p.o.	qd × 28
4	ZN-c3	10	80	10	p.o.	qd × 28

表 7總結了圖33所示實驗之治療組。

研究終點包括每日體重、臨床觀察結果、及腫瘤體積。圖33顯示，作為單一藥劑之ZN-c3在劑量水準增加（40 mg/kg/天、60 mg/kg/天、及80 mg/kg/天）的情況下對於腫瘤生長產生穩健的抑制作用，腫瘤生長抑制作用(TGI)分別為21.4%、32.1%、及70.3%。在任何劑量組中皆無不良臨床觀察結果，且治療對於平均體重無顯著影響。此等結果與實例1之臨床試驗資料一致，表示與基因突變相關之經降低之MRN功能與癌細胞對於WEE1抑制劑之穩健反應相關。

表 8

ZN-c3 劑量	TGI ^a(%)	P 值 ^b
40 mg/kg/天	21.4	0.098
60 mg/kg/天	32.1	0.016
80 mg/kg/天	70.3	＜0.001

表 8總結了圖33所示實驗之結果。 ^aTGI =腫瘤生長抑制作用，計算為TGI = (1 - (T _d– T ₀) / (C _d– C ₀)) × 100%，T _d及C _d係治療動物及對照動物之平均腫瘤體積，且T ₀及C ₀係治療動物及對照動物在實驗開始時之平均腫瘤體積； ^b以LSD測試進行之計算值與媒劑對照值之比較。

使用BALB/c裸鼠的卵巢癌TOV-21G異種移植模型評估ZN-c3之抗腫瘤活性。在各小鼠右側接種在0.2 mL的含50% BD　Matrigel之基礎培養基混合物中之TOV-21G腫瘤細胞（5×10 ⁶個細胞/小鼠），以供腫瘤發展。當腫瘤大小達到100-150 mm ³時，將動物隨機分為4組（8隻動物/組），並根據下表9開始治療。

表 9

模型	組別	治療	動物數量 / 組	劑量 (mg/kg)	Vol (µL/g)	途徑	方案
TOV-21G	1	媒劑	8	-	10	p.o.	qd × 19
2	ZN-c3	8	40	10	p.o.	qd × 19
3	ZN-c3	8	60	10	p.o.	qd × 19
4	ZN-c3	8	80	10	p.o.	qd × 19

表 9總結了圖34所示實驗之治療組。

研究終點包括每日體重、臨床觀察結果、及腫瘤體積。圖34顯示，作為單一藥劑之ZN-c3在劑量水準增加（40 mg/kg/天、60 mg/kg/天、及80 mg/kg/天）的情況下對於腫瘤生長產生穩健的抑制作用，TGI分別為65.6%、94.4%、及104.2%。相較於媒劑對照組而言，在任何劑量組中皆無不良臨床觀察結果，且對治療組的平均體重無顯著影響。此等結果與實例1之臨床試驗資料一致，表示與基因突變相關之經降低之MRN功能與癌細胞對於WEE1抑制劑之穩健反應相關。

表 10

ZN-c3 劑量	TGI ^a(%)	P 值 ^b
40 mg/kg/天	65.6	＜0.0001
60 mg/kg/天	94.4	＜0.0001
80 mg/kg/天	104.2	＜0.0001

表 10總結了圖34所示實驗之結果。 ^aTGI =腫瘤生長抑制作用，計算為TGI (%) = (1 - (TV _治療 _/Dn- TV _治療 _/D0)/ (TV _對照 _/Dn– TV _l _對照 _/D0)) × 100%； ^b.藉由雙因子變異數分析(Two-way ANOVA)及隨後的Bonferroni後測來計算，以比較按列計算之平均值與媒劑組平均值。

使用BALB/c裸鼠的急性淋巴母細胞白血病MOLT-4異種移植模型評估ZN-c3之抗腫瘤活性。在各小鼠右側腹接種95%活腫瘤細胞(5 × 10 ⁶)於100 µL之無血清之RPMI 1640含Matrigel混合物（1:1比率）中的單細胞懸浮液，以供腫瘤發展。當腫瘤大小達到約163 mm ³之平均腫瘤體積時，將動物隨機分為2組（8隻動物/組），並根據下表11開始治療。

表 11

模型	組別	治療	動物數量 / 組	劑量 (mg/kg)	Vol (µL/g)	途徑	方案
MOLT-4	1	媒劑	8	-	10	p.o.	qd × 28
2	ZN-c3	8	60	10	p.o.	qd × 28

表 11總結了圖35所示實驗之治療組。

研究終點包括每日體重、臨床觀察結果、及腫瘤體積。圖35顯示，在60 mg/kg/天劑量下，作為單一藥劑之ZN-c3對於腫瘤生長產生穩健的抑制作用，其中TGI為70.2%。不存在不良臨床觀察結果，且對於平均體重無顯著影響。此等結果與實例1之臨床試驗資料一致，表示與基因突變相關之經降低之MRN功能與癌細胞對於WEE1抑制劑之穩健反應相關。

表 12

ZN-c3 劑量	TGI ^a(%)	P 值 ^b
60 mg/kg/天	70.2	0.001

表 12總結了圖35所示實驗之結果。 ^aTGI =腫瘤生長抑制作用，計算為TGI = (1 - (T _d– T ₀) / (C _d– C ₀)) × 100%； ^b以曼-惠特尼U測試(Mann-Whitney U Test)進行之計算值與媒劑對照值之比較。

使用BALB/c裸鼠的乳癌MCF-7異種移植模型評估ZN-c3之抗腫瘤活性。在各小鼠右側腹皮下接種95%活腫瘤細胞(1.5 × 10 ⁷)於200 µL之無血清之DMEM Matrigel混合物（1:1比率）中的單細胞懸浮液，以供腫瘤發展。當腫瘤大小達到約202 mm ³之平均腫瘤體積時，將動物隨機分為2組（10隻動物/組），並根據下表13開始治療。此外，藉由皮下遞送安息香雌二醇酯注射劑（40 ug/20 uL，每週兩次）。

表 13

模型	組別	治療	動物數量 / 組	劑量 (mg/kg)	Vol (µL/g)	途徑	方案
MCF-7	1	媒劑	10	-	10	p.o.	qd × 28
2	ZN-c3	10	80/60	10	p.o.	80 mg/kg qd × 12 (PG-D0-D11) / 60 mg/kg qd × 7 (PG-D15-D21)/ 60 mg/kg qd × 2 (PG-D26-D27)

表 13總結了圖36所示實驗之治療組。

研究終點包括每日體重、臨床觀察結果、及腫瘤體積。圖36顯示作為單一藥劑之ZN-c3對於腫瘤生長產生穩健的抑制作用，其中TGI為116.0%。不存在不良臨床觀察結果，且對於平均體重無顯著影響。此等結果與實例1之臨床試驗資料一致，表示與基因突變相關之經降低之MRN功能與癌細胞對於WEE1抑制劑之穩健反應相關。

表 14

ZN-c3 劑量	TGIa (%)	P 值 b
80 mg/kg qd × 12 (PG-D0-D11)/ 60 mg/kg qd × 7 (PG-D15-D21)/ 60 mg/kg qd × 2 (PG-D26-D27)	116.0	＜0.001

表 14總結了圖36所示實驗之結果。 ^aTGI =腫瘤生長抑制作用，計算為TGI = (1 - (T _d– T ₀) / (C _d– C ₀)) × 100%； ^b以曼-惠特尼U測試(Mann-Whitney U Test)進行之計算值與媒劑對照值之比較。

此外，雖然前述已藉由說明和示例之方式稍微詳細地描述以達清晰及理解之目的，所屬技術領域中具有通常知識者將理解可進行各式各樣的改良而不背離本揭露之精神。因此，應清楚理解在本文中揭示之形式僅用以說明，且並非意欲限制本揭露之範疇，而是亦涵蓋伴隨本揭露之真實範疇及精神而來的所有修改及替代方案。

［圖1］描繪在投予WEE1抑制劑之前及之後的IV期大腸直腸癌人類對象（患者1）中作為腫瘤隨時間進展之標記的CEA濃度(ng/mL)的定量分析。［圖2］描繪患者1在肝臟中之癌性腫塊之放射攝影影像。基線板中之輪廓（左側）指示在投予WEE1抑制劑之前的腫塊大小，而追蹤板中之輪廓（右側）指示在投予後之腫塊大小。［圖3］描繪患者1在淋巴結中之癌性腫塊之放射攝影影像。基線板中之輪廓（左側）指示在投予WEE1抑制劑之前的腫塊大小，而追蹤板中之輪廓（右側）指示在投予後之腫塊大小。［圖4］描繪在投予WEE1抑制劑之前及之後的IV期卵巢癌人類對象（患者2）中作為腫瘤隨時間進展之標記的CA-125濃度（單位/mL）的定量分析。［圖5］描繪患者2之癌性胸膜腫塊之放射攝影影像。基線板中之輪廓（左側）指示在投予WEE1抑制劑之前的質量大小，而追蹤板中之輪廓（右側）指示在投予後不再檢測到癌性胸膜腫塊。［圖6］描繪患者2在肝門節點處之癌性腫塊之放射攝影影像。基線板中之輪廓（左側）指示在投予WEE1抑制劑之前的腫塊大小，而追蹤板中之輪廓（右側）指示在投予後之腫塊大小。［圖7］描繪患者2在腹膜病變中之癌性腫塊之放射攝影影像。基線板中之輪廓（左側）指示在投予WEE1抑制劑之前的腫塊大小，而追蹤板中之輪廓（右側）指示在投予後之腫塊大小。［圖8］描繪在使用及不使用經siRNA介導之NBN減弱(knockdown)治療的情況下之對於卵巢癌細胞株UWB1.289的西方墨點分析。［圖9］描繪隨著WEE1抑制劑濃度增加而在使用及不使用經siRNA介導之NBN減弱治療的情況下之UWB1.289細胞的存活百分比。使用細胞滴度光分析(cell titer glow analysis)計算存活百分比。［圖10］描繪隨著WEE1抑制劑濃度增加而在每一細胞株中的NBN之經改變DNA修復功能水準不同的情況下之HCC1428（乳癌細胞株）、HS-578T（乳癌細胞株）、OVCAR3（卵巢癌細胞株）、及UWB1.289（卵巢癌細胞株）的百分比細胞密度。使用細胞滴度光分析計算細胞密度。［圖11］描繪隨著WEE1抑制劑濃度增加而在同時使用0 µM或30 µM Mirin治療時的OVCAR3細胞之經調整細胞密度。使用細胞滴度光分析計算細胞密度。［圖12］描述代表WO2014167347之請求項1中揭示之WEE1抑制劑之通用化學結構。［圖13］描述代表WO2015019037之請求項1中揭示之WEE1抑制劑之通用化學結構。［圖14］描述代表WO2015092431之請求項1中揭示之WEE1抑制劑之通用化學結構。［圖15A］描述代表WO2018011569之請求項1中揭示之WEE1抑制劑之通用化學結構。［圖15B］描述代表WO2018011569之請求項2中揭示之WEE1抑制劑之通用化學結構。［圖16］描述代表WO2018011570之請求項1中揭示之WEE1抑制劑之通用化學結構。［圖17］描述代表WO2018162932之請求項1中揭示之WEE1抑制劑之化學結構。［圖18］描述代表WO2019138227之請求項1中揭示之WEE1抑制劑之通用化學結構。［圖19A］描述代表WO2018090939之請求項1中揭示之WEE1抑制劑之通用化學結構。［圖19B］描述代表US20190308984（WO2018090939的美國國家階段）之請求項1中揭示之WEE1抑制劑之通用化學結構。［圖20A］描述代表WO2019011228之請求項1中揭示之WEE1抑制劑之通用化學結構。［圖20B］描述代表US20200131192（WO2019011228的美國國家階段）之請求項1中揭示之WEE1抑制劑之通用化學結構。［圖21］描述代表WO2020210380之請求項1中揭示之WEE1抑制劑之通用化學結構。［圖22］描述代表WO2020210381之請求項1中揭示之WEE1抑制劑之通用化學結構。［圖23］描述代表WO2020210383之請求項1中揭示之WEE1抑制劑之通用化學結構。［圖24］描述代表WO2020210375之請求項1中揭示之WEE1抑制劑之通用化學結構。［圖25］描述代表WO2020210377之請求項1中揭示之WEE1抑制劑之通用化學結構。［圖26］描述代表WO2019173082之請求項1中揭示之WEE1抑制劑之通用化學結構。［圖27］描繪在使用及不使用經siRNA介導之NBN減弱治療的情況下之對於卵巢癌細胞株SKOV3的西方墨點分析。［圖28］描繪隨著WEE1抑制劑濃度增加而在NBN之經改變DNA修復功能水準不同的情況下之SKOV3（卵巢癌細胞株）的百分比細胞密度。使用細胞滴度光分析計算細胞密度。［圖29］描繪在使用及不使用經siRNA介導之NBN減弱治療的情況下之對於卵巢癌細胞株SKOV3的西方墨點分析。［圖30］描繪隨著WEE1抑制劑濃度增加而在NBN之經改變DNA修復功能水準不同的情況下之SKOV3（卵巢癌細胞株）的百分比細胞密度。使用細胞滴度光分析計算細胞密度。［圖31］描繪在分別使用經sgRNA及siRNA介導之剔除(knockout)及/或減弱之對於卵巢癌細胞株SKOV3的西方墨點分析。［圖32］描繪隨著WEE1抑制劑濃度增加而在NBN之經改變DNA修復功能水準不同的情況下之SKOV3（卵巢癌細胞株）的百分比細胞密度。使用細胞滴度光分析計算細胞密度。［圖33］描繪在使用變化之WEE1抑制劑濃度的治療後大腸直腸癌LoVo異種移模型植中BALB/c裸鼠之隨天數變化的腫瘤體積。［圖34］描繪在使用變化之WEE1抑制劑濃度的治療後卵巢癌TOV-21G異種移植模型中BALB/c裸鼠之隨天數變化的腫瘤體積。［圖35］描繪在使用WEE1抑制劑的治療後急性淋巴母細胞白血病MOLT-4異種移植模型中BALB/c裸鼠之隨天數變化的腫瘤體積。［圖36］描繪在使用WEE1抑制劑的治療後乳癌MCF-7異種移植模型中BALB/c裸鼠之隨天數變化的腫瘤體積。

Claims

一種判定對象對於WEE1抑制劑之敏感性之方法，其包含：自該對象獲得或已經獲得生物樣本；及對該生物樣本執行或已經執行至少一種檢定，以判定該對象是否具有NBN、MRE11、RAD50、或MRE11-RAD50-NBN (MRN)蛋白錯合物之經改變DNA修復功能。
如請求項1之方法，其中該對象具有經改變DNA修復功能的基因型。
如請求項1至2中任一項之方法，其中該經改變DNA修復功能之該基因型包含RAD50、NBN (NBS1)、MRE11、與該MRN蛋白錯合物相關之蛋白質、或其任何組合之功能突變。
如請求項3之方法，其中該功能突變係缺失、插入、截短、點突變、或其他基因改變。
如請求項1至4中任一項之方法，其中該經改變DNA修復功能係DNA修復功能之損失。
如請求項5之方法，其中Nibrin，亦即NBN或NBS1，具有DNA修復功能之損失。
如請求項1至4中任一項之方法，其中該經改變DNA修復功能係功能之降低。
如請求項7之方法，其中NBN具有DNA修復功能之降低。
如請求項1至4中任一項之方法，其中該經改變DNA修復功能係DNA修復功能之增益。
如請求項9之方法，其中NBN具有DNA修復功能之增益。
如請求項1至4中任一項之方法，其中該經改變DNA修復功能係由於與該MRN蛋白錯合物相關之至少一個基因之表現改變。
如請求項11之方法，其中與NBN相關之基因具有增強之表現。
如請求項11之方法，其中與NBN相關之基因具有降低之表現。
如請求項2至13中任一項之方法，其中該經改變DNA修復功能之該基因型係體細胞基因型。
如請求項2至13中任一項之方法，其中該經改變DNA修復功能之該基因型係生殖系基因型。
一種治療癌症之方法，其包含：自該對象獲得或已經獲得生物樣本；對該生物樣本執行或已經執行至少一種檢定以判定該對象是否具有NBN、MRE11、RAD50、或MRE11-RAD50-NBN (MRN)蛋白錯合物之經改變DNA修復功能；及基於該檢定之結果，向該對象投予有效量之癌症治療。
如請求項16之方法，其中：若該對象具有NBN、MRE11、RAD50、或MRE11-RAD50-NBS1 (MRN)蛋白錯合物之經降低或內源性DNA修復功能，則投予該癌症治療包含向該對象投予有效量之WEE1抑制劑；或若該對象具有NBN、MRE11、RAD50、或MRE11-RAD50-NBS1 (MRN)蛋白錯合物之DNA修復功能之增益，則投予該癌症治療不包括向該對象投予WEE1抑制劑。
如請求項16或17之方法，其中該癌症係腫瘤。
如請求項16至18中任一項之方法，其中該對象係哺乳動物。
如請求項19之方法，其中該對象係人類。
如請求項17至20中任一項之方法，其中該對象具有經降低之DNA修復功能，且相較於治療中所給出之正常劑量，向該對象投予之該WEE1抑制劑之該有效量包含較低劑量。
如請求項17至20中任一項之方法，其中該對象具有內源性DNA修復功能，且向該對象投予之WEE1抑制劑之該有效量係治療中所給出之正常劑量。
一種治療癌症之方法，其包含：識別具有(a)該癌症及(b) NBN、MRE11、RAD50、或MRE11-RAD50-NBN (MRN)蛋白錯合物之內源性或經改變DNA修復功能之對象；及向該對象投予有效量之WEE1抑制劑。
如請求項23之方法，其中該經改變DNA修復功能係功能之損失。
如請求項23之方法，其中該經改變DNA修復功能係功能之增益。
如請求項23之方法，其中該經改變DNA修復功能係功能之降低。
如請求項23之方法，其中該對象具有內源性DNA修復功能。
一種治療對象之癌症之方法，其包含：判定該對象是否對於使用WEE1抑制劑之治療敏感，該判定包含：自該對象獲得或已經獲得生物樣本；及對該生物樣本執行或已經執行至少一種檢定以判定該對象是否具有NBN、MRE11、RAD50、或MRE11-RAD50-NBN (MRN)蛋白錯合物之經改變DNA修復功能；及基於該對象是否對於使用該WEE1抑制劑之治療敏感之該判定，來為該對象選擇治療計畫。
如請求項28之方法，其進一步包含根據該治療計畫來治療該對象。
如請求項28至29中任一項之方法，其中該經改變DNA修復功能係功能之損失。
如請求項28至29中任一項之方法，其中該經改變DNA修復功能係功能之降低。
如請求項28至29中任一項之方法，其中該經改變DNA修復功能係功能之增益。
如請求項28至29中任一項之方法，其中該對象具有內源性DNA修復功能。
如請求項28至29中任一項之方法，其中該經改變DNA修復功能係與該MRN蛋白錯合物相關之至少一個基因之增強表現。
如請求項28至29中任一項之方法，其中該經改變DNA修復功能係與該MRN蛋白錯合物相關之至少一個基因之降低表現。
如請求項28至35中任一項之方法，其中：若該對象具有與NBN、MRE11、RAD50、或MRE11-RAD50-NBN (MRN)蛋白錯合物相關之至少一個基因之內源性或降低之表現的基因型，則該治療計畫包含向該對象投予有效量之WEE1抑制劑；或若該對象具有與NBN、MRE11、RAD50、或MRE11-RAD50-NBN (MRN)蛋白錯合物相關之至少一個基因之增強之表現的基因型，則該治療計畫包含向該對象投予有效量之除WEE1抑制劑以外之癌症治療。
如請求項28至35中任一項之方法，其中：若該對象具有與NBN、MRE11、RAD50、或MRE11-RAD50-NBN (MRN)蛋白錯合物相關之至少一個基因之內源性或降低之表現的基因型，則該治療計畫包含以第一有效劑量向該對象投予該WEE1抑制劑；或若該對象具有與NBN、MRE11、RAD50、或MRE11-RAD50-NBN (MRN)蛋白錯合物相關之至少一個基因之增強之表現的基因型，則該治療計畫包含以高於該第一有效劑量之第二有效劑量向該對象投予該WEE1抑制劑。
如請求項2至37中任一項之方法，其中經改變DNA修復功能、經降低之DNA修復功能、DNA修復功能之損失、DNA修復功能之增益、增強之基因表現、或降低之基因表現的該基因型包含NBN突變。
如請求項2至38中任一項之方法，其中該經改變DNA修復功能、經降低之DNA修復功能、DNA修復功能之損失、DNA修復功能之增益、增強之基因表現、或降低之基因表現的該基因型包含MRE11突變。
如請求項2至39中任一項之方法，其中該經改變DNA修復功能、經降低之DNA修復功能、DNA修復功能之損失、DNA修復功能之增益、降低之基因表現、或增強之基因表現的該基因型包含RAD50突變。
如請求項37至40中任一項之方法，其進一步包含判定在該第一有效劑量下之該治療計畫對於該對象造成之毒性風險低於在該第二有效劑量下之該治療計畫。
如請求項1至41中任一項之方法，其中該WEE1抑制劑係描述於下列公開案中之任一或多者中：WO2020210383、WO2020210375、WO2020210377、WO2020210380、WO2020210381、WO 2019173082、WO2019011228、WO2019138227、WO2018162932、WO2018011570、WO2018011569、WO2018090939、WO2015092431、WO2015019037、WO2014167347、WO2007126122、WO2011034743、US20070254892、US2008133866、US20160060258、US20190308984、US20200131192、WO2019085933、WO2020221358、EP3712150、WO2018133829、WO2019085933、WO2020083404、WO2019037678、WO2018171633、WO2019096322、WO2019165204、WO2012161812、WO2013012681、WO2013013031、WO2013059485、WO2013126656、US20120220572、US20130018045、KR2016035878、KR2020016567、WO2018056621、WO2017075629、WO2019169065、WO2019134539、WO2020028814、WO2020069105、WO2020192581、CN111718348、及WO9634867。
如請求項1至42中任一項之方法，其中該WEE1抑制劑係AZD1775、SC0191、PD0166285、NUV-569、IMP7068、Debio 0123、或其任何組合。
如請求項1至42中任一項之方法，其中該WEE1抑制劑係具有下式之化合物ZN-c3：
ZN-c3 或其醫藥上可接受之鹽。
如請求項1至43中任一項之方法，其中該WEE1抑制劑係具有下式之化合物：
或其醫藥上可接受之鹽或N-氧化物。
如請求項1至43中任一項之方法，其中該WEE1抑制劑係具有選自
、
、或
之式之化合物、或前述中之任一者的其醫藥上可接受之鹽。
如請求項1至43中任一項之方法，其中該WEE1抑制劑係具有選自
、
、或
之式之化合、或前述中之任一者的其醫藥上可接受之鹽。
如請求項1至43中任一項之方法，其中該WEE1抑制劑係具有式
之化合物、或其醫藥上可接受之鹽。
如請求項1至43中任一項之方法，其中該WEE1抑制劑係具有選自下列式之化合物：
、
、或
、或前述中之任一者的其醫藥上可接受之鹽。