TW202237633A - 嵌合受體及其使用方法 - Google Patents

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嘉亮 李
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Abstract

本文中提供針對嵌合受體及嵌合抑制受體之實體腫瘤抗原標靶及其使用方法，諸如用於治療癌症。

Description

嵌合受體及其使用方法
本申請案係關於針對嵌合受體及嵌合抑制受體之實體腫瘤抗原標靶，以及其使用方法，諸如用於治療癌症。
用於重定向免疫反應細胞(例如T細胞及天然殺手(NK)細胞)之特異性及功能的基於免疫療法(諸如嵌合抗原受體(CAR))之過繼性細胞療法已在患有惡性腫瘤之患者中顯示效力，其中許多先前研究聚焦於血液惡性腫瘤(Pule等人, Nat. Med. (14):1264-1270 (2008)；Maude等人, N Engl J Med. (371):1507-17 (2014)；Brentjens等人, Sci Transl Med. (5):177ra38 (2013))。舉例而言，CAR T細胞已顯示在化學療法已引起抗藥性及腫瘤進展的患有表現CD19之惡性腫瘤的患者中誘導完全緩解。
不同於T細胞，天然殺手(NK)細胞能夠在不引發之情況下消除異常細胞，諸如癌細胞。NK細胞活性由來自抑制及活化NK細胞受體之外部信號之平衡決定。諸如殺手免疫球蛋白受體(KIR)之抑制受體與主要組織相容性複合物(MHC) I類抗原相互作用，並保護正常細胞免受NK細胞活性影響(參見US20180057795A1)。
開發針對實體腫瘤之CAR療法的一個挑戰為缺乏適合之標靶。鑑定適當CAR標靶之能力對在不破壞表現相同靶抗原之正常細胞的情況下有效地靶向並治療腫瘤非常重要。因而，仍需要靶向腫瘤細胞而不靶向正常細胞或組織的基於CAR-NK細胞之腫瘤療法。
在一個態樣中，本文中提供一種經分離之細胞，其包含： (a)  抑制嵌合受體，其包含結合至抗原之細胞外抗原結合域，其中該抗原係選自由以下組成之群：VSIG2、CPM、ITM2C、SLC26A2、SLC4A4、GPA33、PLA2G2A、ABCA8、ATP1A2、CHP2及SLC26A3；及 (b)  嵌合受體，其包含一或多個細胞外抗原結合域，其中該一或多個細胞外抗原結合域結合一或多個額外抗原，該一或多個額外抗原係選自由以下組成之群：CEA、CEACAM1、CEACAM5及CEACAM6。
在一些態樣中，該抑制嵌合受體之抗原結合域包含一或多個單鏈可變片段(scFv)，視情況其中該一或多個scFv各自包含重鏈可變域(VH)及輕鏈可變域(VL)，視情況其中該VH及VL係由肽連接體隔開，視情況該肽連接體包含SEQ ID NO: 39或SEQ ID NO: 77之胺基酸序列，及/或視情況其中該一或多個scFv各自包含結構VH-L-VL或VL-L-VH，其中VH為重鏈可變域，L為肽連接體，且VL為輕鏈可變域。
在一些態樣中，該抑制嵌合受體包含跨膜結構域，且該跨膜結構域係選自由以下組成之群：CD8跨膜結構域、CD28跨膜結構域、CD25跨膜結構域、CD7跨膜結構域、CD3ζ鏈跨膜結構域、CD4跨膜結構域、4-1BB跨膜結構域、OX40跨膜結構域、ICOS跨膜結構域、CTLA-4跨膜結構域、LAX跨膜結構域、LAT跨膜結構域、PD-1跨膜結構域、LAG-3跨膜結構域、TIM3跨膜結構域、KIR3DS1跨膜結構域、KIR3DL1跨膜結構域、NKG2D跨膜結構域、NKG2A跨膜結構域、TIGIT跨膜結構域、2B4跨膜結構域及BTLA跨膜結構域。
在一些態樣中，該抑制嵌合受體包含間隔區，該間隔區係介於抗原結合域與跨膜結構域之間，視情況其中該間隔區具有選自由SEQ ID NO: 49-58組成之群的胺基酸序列；及/或
在一些態樣中，該抑制嵌合受體包含一或多個選自由以下組成之群的細胞內抑制域：PD-1、CTLA4、TIGIT、LAIR1、GRB-2、Dok-1、Dok-2、SLAP、LAG3、HAVR、BTLA、LIR1、NKG2A、KIR3DL1、GITR、PD-L1、CSK、SHP-1、PTEN、CD45、CD148、PTP-MEG1、PTP-PEST、c-CBL、CBL-b、PTPN22、LAR、PTPH1、SHIP-1、RasGAP、CD94及CD161。
在一些態樣中，該嵌合受體為CAR。在一些態樣中，該CAR包含一或多個細胞內信號傳導域，且該一或多個細胞內信號傳導域係選自由以下組成之群：CD3ζ鏈細胞內信號傳導域、CD3ε鏈細胞內信號傳導域、CD97細胞內信號傳導域、CD11a-CD18細胞內信號傳導域、CD2細胞內信號傳導域、ICOS細胞內信號傳導域、CD27細胞內信號傳導域、CD154細胞內信號傳導域、CD8細胞內信號傳導域、OX40細胞內信號傳導域、4-1BB細胞內信號傳導域、CD28細胞內信號傳導域、ZAP40細胞內信號傳導域、CD30細胞內信號傳導域、GITR細胞內信號傳導域、HVEM細胞內信號傳導域、DAP10細胞內信號傳導域、DAP12細胞內信號傳導域、MyD88細胞內信號傳導域、2B4細胞內信號傳導域、NKp46細胞內信號傳導域、NKp30細胞內信號傳導域、NKp44細胞內信號傳導域、NKG2D細胞內信號傳導域、CD226細胞內信號傳導域及CD160細胞內信號傳導域。在一些態樣中，該CAR包含跨膜結構域，且該跨膜結構域係選自由以下組成之群：CD8跨膜結構域、CD28跨膜結構域、CD25跨膜結構域、CD7跨膜結構域、CD3ζ鏈跨膜結構域、CD4跨膜結構域、4-1BB跨膜結構域、OX40跨膜結構域、ICOS跨膜結構域、CTLA-4跨膜結構域、LAX跨膜結構域、LAT跨膜結構域、PD-1跨膜結構域、LAG-3跨膜結構域、TIM3跨膜結構域、KIR3DS1跨膜結構域、KIR3DL1跨膜結構域、NKG2D跨膜結構域、NKG2A跨膜結構域、TIGIT跨膜結構域、2B4跨膜結構域及BTLA跨膜結構域。
在一些態樣中，該CAR包含間隔區，該間隔區介於抗原結合域與跨膜結構域之間，且該間隔區具有選自由SEQ ID NO: 49-58組成之群的胺基酸序列。
在一些態樣中，該抑制嵌合受體及/或該嵌合受體之抗原結合域包含一或多個單鏈可變片段(scFv)，視情況其中該一或多個scFv各自包含重鏈可變域(VH)及輕鏈可變域(VL)，視情況其中該VH及VL係由肽連接體隔開，視情況其中該肽連接體包含SEQ ID NO: 39或SEQ ID NO: 77之胺基酸序列。
在一些態樣中，該一或多個scFv各自包含結構VH-L-VL或VL-L-VH，其中VH為重鏈可變域，L為肽連接體，且VL為輕鏈可變域。
在一些態樣中，該一或多個額外抗原為CECAM1，視情況其中結合至CEACAM1之該抗原結合域包括包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的重鏈可變域(VH)及包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的輕鏈可變域(VL)。
在一些態樣中，該一或多個額外抗原為CECAM5，視情況其中結合至CEACAM5之該抗原結合域包括選自由以下組成之群的重鏈可變域(VH)及輕鏈可變域(VL)： (i) 包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的VH及包含SEQ. ID NO: 4之胺基酸序列的VL； (ii) 包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列的VH及包含SEQ. ID NO: 10之胺基酸序列的VL； (iii) 包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列的VH及包含SEQ. ID NO: 12之胺基酸序列的VL； (iv) 包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列的VH及包含SEQ. ID NO: 14之胺基酸序列的VL； (v) 包含SEQ ID NO: 78之胺基酸序列的VH及包含SEQ. ID NO: 79之胺基酸序列的VL；以及 (vi) 包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列的VH及包含SEQ. ID NO: 16之胺基酸序列的VL。
在一些態樣中，結合至CEACAM5之該抗原結合域包括選自由以下組成之群的重鏈(HC)及輕鏈(LC)： (i) 包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列的HC及包含SEQ. ID NO: 6之胺基酸序列的LC；以及 (ii) 包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列的HC及包含SEQ. ID NO: 8之胺基酸序列的LC；或 (c) 該一或多個額外抗原為CECAM6，視情況其中結合至CEACAM6之該抗原結合域包括包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列的重鏈可變域(VH)及包含SEQ ID NO 18之胺基酸序列的輕鏈可變域(VL)。
在一些態樣中，該細胞為免疫反應細胞。在一些態樣中，該抑制嵌合受體結合至該抗原能夠抑制該免疫反應細胞及/或其中該嵌合受體結合至該一或多個額外抗原能夠活化該免疫反應細胞。
在一些態樣中，該嵌合受體以低結合親和力結合至該一或多個額外抗原。
在一些態樣中，該嵌合受體以比該抑制嵌合受體結合至該抗原之結合親和力低之結合親和力結合至該一或多個額外抗原。
在一些態樣中，該抑制嵌合受體以低結合親合力結合至該抗原。
在一些態樣中，該嵌合受體係重組表現，視情況其中該嵌合受體係由載體或來自細胞基因體之所選基因座表現。
在一些態樣中，該細胞係選自由以下組成之群：T細胞、天然殺手(NK)細胞、細胞毒性T淋巴球(CTL)、調控T細胞、天然殺手T (NKT)細胞、骨髓細胞、巨噬細胞、人類胚胎幹細胞(ESC)、ESC衍生細胞、多潛能幹細胞及誘導型多潛能幹細胞(iPSC)以及iPSC衍生細胞。在一些態樣中，該細胞為自體的或該細胞為同種異體的。
在一些態樣中，本文中提供一種經分離之核酸，其編碼如本文中所提供之抑制嵌合受體。
在一些態樣中，本文中提供一種載體，其包含如本文中所提供之核酸。
在一些態樣中，本文中提供一種經基因修飾之細胞，其包含如本文中所提供之核酸或如本文中所提供之載體。
在一些態樣中，本文中提供一種醫藥組合物，其包含有效量之如本文中所提供之經分離之細胞、如本文中所提供之經分離之核酸或如本文中所提供之載體及醫藥學上可接受之載劑、醫藥學上可接受之賦形劑或其組合。
在一些態樣中，本文中提供一種治療有需要之個體的方法，該方法包括向該個體投與有效量之如本文中所提供之經分離之細胞、如本文中所提供之經分離之核酸、如本文中所提供之載體或如本文中所提供之醫藥組合物。
在一些態樣中，本文中提供一種在個體中刺激針對腫瘤細胞之細胞介導之免疫反應的方法，該方法包括向患有腫瘤之個體投與有效量之如本文中所提供之經分離之細胞、如本文中所提供之經分離之核酸、如本文中所提供之載體或如本文中所提供之醫藥組合物。
在一些態樣中，本文中提供一種在個體中提供抗腫瘤免疫力之方法，該方法包括向有需要之個體投與有效量之如本文中所提供之經分離之細胞、如本文中所提供之經分離之核酸、如本文中所提供之載體或如本文中所提供之醫藥組合物。
在一些態樣中，本文中提供一種在個體中減少腫瘤負荷之方法，該方法包括向該個體投與有效量之如本文中所提供之經分離之細胞、如本文中所提供之經分離之核酸、如本文中所提供之載體或如本文中所提供之醫藥組合物。在一些態樣中，該方法減少腫瘤細胞數目，該方法減小腫瘤大小，該方法減小腫瘤體積，及/或該方法消除該個體中之腫瘤。
在一些態樣中，本文中提供一種治療患有腫瘤之個體的方法，該方法包括投與有效量之如本文中所提供之經分離之細胞、如本文中所提供之經分離之核酸、如本文中所提供之載體或如本文中所提供之醫藥組合物。
在一些態樣中，本文中提供一種在個體中治療或預防癌症之方法，其中該癌症係選自由以下組成之群：結腸直腸癌、胰臟癌、肺腺癌及胃癌，該方法包括向該個體投與有效量之如本文中所提供之經分離之細胞、如本文中所提供之經分離之核酸、如本文中所提供之載體或如本文中所提供之醫藥組合物。
在一些態樣中，該方法增加該個體之無進展存活時間；及或該方法增加該個體之存活時間。
在一些態樣中，本文中提供一種用於治療及/或預防結腸直腸癌、胰臟癌、肺腺癌及/或胃癌之套組，其包含如本文中所提供之經分離之細胞、如本文中所提供之經分離之核酸、如本文中所提供之載體或如本文中所提供之醫藥組合物。在一些態樣中，該套組進一步包括關於使用該經分離之細胞或醫藥組合物在個體中治療及/或預防結腸直腸癌、胰臟癌、肺腺癌及/或胃癌之書面說明書，或該套組進一步包括關於使用該核酸或載體產生一或多種用於在個體中治療及/或預防結腸直腸癌、胰臟癌、肺腺癌及/或胃癌之抗原特異性細胞的說明書。
在一些態樣中，本文中提供一種抑制嵌合受體，其包含結合至抗原之細胞外抗原結合域，該抗原係選自由以下組成之群：VSIG2、CPM、ITM2C、SLC26A2、SLC4A4、GPA33、PLA2G2A、ABCA8、ATP1A2、CHP2及SLC26A3。
在一些實施例中，該抗原為VSIG2。在一些實施例中，該抗原為CPM。在一些實施例中，該抗原為ITM2C。在一些實施例中，該抗原為SLC26A2。在一些實施例中，該抗原為SLC4A4。在一些實施例中，該抗原為GPA33。在一些實施例中，該抗原為PLA2G2A。在一些實施例中，該抗原為ABCA8。在一些實施例中，該抗原為ATP1A2。在一些實施例中，該抗原為CHP2。在一些實施例中，該抗原為SLC26A3。
在一些實施例中，當表現於細胞上時，該抑制嵌合受體抑制該細胞之一或多種活性。
在一些實施例中，該抗原不表現於腫瘤細胞上，或該抗原以比非腫瘤細胞上之表現低的水準表現於腫瘤細胞上。
在一些實施例中，該抗原表現於非腫瘤細胞上，或該抗原以比相應腫瘤細胞上之表現高的水準表現於非腫瘤細胞上。
在一些實施例中，該抗原表現於來源於選自由以下組成之群的組織的非腫瘤細胞上：肺、胰臟、胃腸道、結腸、腦、神經元組織、內分泌、骨、骨髓、免疫系統、肌肉、肝臟、膽囊、胰臟、腎臟、膀胱、雄性生殖器官、雌性生殖器官、脂肪、軟組織及皮膚。
在一些實施例中，該抑制嵌合受體包含一或多個細胞內抑制域，該一或多個細胞內抑制域係選自由以下組成之群：PD-1、CTLA4、TIGIT、LAIR1、GRB-2、Dok-1、Dok-2、SLAP、LAG3、HAVR、BTLA、LIR1、NKG2A、KIR3DL1、GITR、PD-L1、CSK、SHP-1、PTEN、CD45、CD148、PTP-MEG1、PTP-PEST、c-CBL、CBL-b、PTPN22、LAR、PTPH1、SHIP-1、RasGAP、CD94及CD161。
在一些實施例中，該抗原結合域包含一或多個抗體、抗體之抗原結合片段、F(ab)片段、F(ab')片段、單鏈可變片段(scFv)或單結構域抗體(sdAb)。
在一些實施例中，該抗原結合域包含一或多個單鏈可變片段(scFv)。在一些實施例中，該一或多個scFv各自包含重鏈可變域(VH)及輕鏈可變域(VL)。在一些實施例中，該VH及VL係由肽連接體隔開。在一些實施例中，該肽連接體包含SEQ ID NO: 39或SEQ ID NO: 77之胺基酸序列。在一些實施例中，該一或多個scFv各自包含結構VH-L-VL或VL-L-VH，其中VH為重鏈可變域，L為肽連接體，且VL為輕鏈可變域。
在另一態樣中，本文中提供一種經分離之細胞，其包含如以上實施例中任一者之抑制嵌合受體。在一些實施例中，該抑制嵌合受體係重組表現。在一些實施例中，該抑制嵌合受體係由載體或來自細胞基因體之所選基因座表現。在一些實施例中，該細胞進一步包含包括一或多個細胞外抗原結合域之嵌合受體，其中該一或多個細胞外抗原結合域結合一或多個抗原，該一或多個抗原係選自由以下組成之群：CEA、CEACAM1、CEACAM5及CEACAM6。
在另一態樣中，本文中提供一種經分離之細胞，其包含： (a) 抑制嵌合受體，其包含結合至抗原之細胞外抗原結合域，其中該抗原係選自由以下組成之群：VSIG2、CPM、ITM2C、SLC26A2、SLC4A4、GPA33、PLA2G2A、ABCA8、ATP1A2、CHP2及SLC26A3；及 (b) 嵌合受體，其包含一或多個細胞外抗原結合域，其中該一或多個細胞外抗原結合域結合一或多個額外抗原，該一或多個額外抗原係選自由以下組成之群：CEA、CEACAM1、CEACAM5及CEACAM6。
在一些實施例中，該嵌合受體為嵌合T細胞受體或嵌合抗原受體(CAR)。在一些實施例中，該嵌合受體為CAR。在一些實施例中，該CAR包含一或多個細胞內信號傳導域，且該一或多個細胞內信號傳導域係選自由以下組成之群：CD3ζ鏈細胞內信號傳導域、CD3ε鏈細胞內信號傳導域、CD97細胞內信號傳導域、CD11a-CD18細胞內信號傳導域、CD2細胞內信號傳導域、ICOS細胞內信號傳導域、CD27細胞內信號傳導域、CD154細胞內信號傳導域、CD8細胞內信號傳導域、OX40細胞內信號傳導域、4-1BB細胞內信號傳導域、CD28細胞內信號傳導域、ZAP40細胞內信號傳導域、CD30細胞內信號傳導域、GITR細胞內信號傳導域、HVEM細胞內信號傳導域、DAP10細胞內信號傳導域、DAP12細胞內信號傳導域、MyD88細胞內信號傳導域、2B4細胞內信號傳導域、NKp46細胞內信號傳導域、NKp30細胞內信號傳導域、NKp44細胞內信號傳導域、NKG2D細胞內信號傳導域、CD226細胞內信號傳導域及CD160細胞內信號傳導域。
在一些實施例中，該CAR包含跨膜結構域，且該跨膜結構域係選自由以下組成之群：CD8跨膜結構域、CD28跨膜結構域、CD25跨膜結構域、CD7跨膜結構域、CD3 ζ鏈跨膜結構域、CD4跨膜結構域、4-1BB跨膜結構域、OX40跨膜結構域、ICOS跨膜結構域、CTLA-4跨膜結構域、LAX跨膜結構域、LAT跨膜結構域、PD-1跨膜結構域、LAG-3跨膜結構域、TIM3跨膜結構域、KIR3DS1跨膜結構域、KIR3DL1跨膜結構域、NKG2D跨膜結構域、NKG2A跨膜結構域、TIGIT跨膜結構域、2B4跨膜結構域及BTLA跨膜結構域。
在一些實施例中，該CAR包含間隔區，該間隔區介於抗原結合域與跨膜結構域之間，且該間隔區具有選自由SEQ ID NO: 49-58組成之群的胺基酸序列。
在一些實施例中，該抑制嵌合受體及/或該嵌合受體之抗原結合域包含一或多個抗體、抗體之抗原結合片段、F(ab)片段、F(ab')片段、單鏈可變片段(scFv)或單結構域抗體(sdAb)。
在一些實施例中，該抑制嵌合受體及/或該嵌合受體之抗原結合域包含一或多個單鏈可變片段(scFv)。在一些實施例中，該一或多個scFv各自包含重鏈可變域(VH)及輕鏈可變域(VL)。在一些實施例中，該VH及VL係由肽連接體隔開。在一些實施例中，該肽連接體包含SEQ ID NO: 39或SEQ ID NO: 77之胺基酸序列。在一些實施例中，該一或多個scFv各自包含結構VH-L-VL或VL-L-VH，其中VH為重鏈可變域，L為肽連接體，且VL為輕鏈可變域。
在一些實施例中，該細胞為免疫反應細胞。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合至該抗原能夠抑制該免疫反應細胞。在一些實施例中，該嵌合受體結合至該一或多個額外抗原能夠活化該免疫反應細胞。
在一些實施例中，該嵌合受體以低結合親和力結合至該一或多個額外抗原。
在一些實施例中，該嵌合受體以比該抑制嵌合受體結合至該抗原之結合親和力低之結合親和力結合至該一或多個額外抗原。在一些實施例中，該抑制嵌合受體以低結合親合力結合至該抗原。
在一些實施例中，該嵌合受體係重組表現。在一些實施例中，該嵌合受體係由載體或來自細胞基因體之所選基因座表現。
在一些實施例中，該細胞係選自由以下組成之群：T細胞、天然殺手(NK)細胞、細胞毒性T淋巴球(CTL)、調控T細胞、天然殺手T (NKT)細胞、骨髓細胞、巨噬細胞、人類胚胎幹細胞(ESC)、ESC衍生細胞、多潛能幹細胞及誘導型多潛能幹細胞(iPSC)以及iPSC衍生細胞。
在一些實施例中，該細胞為自體的。在一些實施例中，該細胞為同種異體的。
在另一態樣中，本文中提供一種經分離之核酸，其編碼如以上抑制嵌合受體中任一者之抑制嵌合受體。
在另一態樣中，本文中提供一種載體，其包含如以上態樣之核酸。
在另一態樣中，本文中提供一種經基因修飾之細胞，其包含如以上態樣之核酸或載體。
在另一態樣中，本文中提供一種治療有需要之個體的方法，該方法包括投與如以上實施例中任一者之經分離之細胞。
在另一態樣中，本文中提供一種在個體中刺激針對腫瘤細胞之細胞介導之免疫反應的方法，該方法包括向患有腫瘤之個體投與如以上實施例中任一者之經分離之細胞。
在另一態樣中，本文中提供一種在個體中提供抗腫瘤免疫力之方法，該方法包括向有需要之個體投與如以上實施例中任一者之經分離之細胞。
在另一態樣中，本文中提供一種在個體中減少腫瘤負荷之方法，該方法包括向該個體投與如以上實施例中任一者之經分離之細胞。在一些實施例中，該方法減少腫瘤細胞之數目。在一些實施例中，該方法減小腫瘤大小。在一些實施例中，該方法減小腫瘤體積。在一些實施例中，該方法消除個體之腫瘤。
在另一態樣中，本文中提供一種治療患有腫瘤之個體的方法，該方法包括投與如以上實施例中任一者之經分離之細胞。
在另一態樣中，本文中提供一種在個體中治療或預防結腸直腸癌之方法，該方法包括向該個體投與如以上實施例中任一者之經分離之細胞。
在另一態樣中，本文中提供一種在個體中治療或預防胰臟癌之方法，該方法包括向該個體投與如以上實施例中任一者之經分離之細胞。
在另一態樣中，本文中提供一種在個體中治療或預防肺腺癌之方法，該方法包括向該個體投與如以上實施例中任一者之經分離之細胞。
在另一態樣中，本文中提供一種在個體中治療或預防胃癌之方法，該方法包括向該個體投與如以上實施例中任一者之經分離之細胞。
在以上態樣之一些實施例中，該等經分離之細胞係以有效量投與。在以上態樣之一些實施例中，該方法增加個體之無進展存活時間。在以上態樣之一些實施例中，該方法增加個體之存活時間。
在另一態樣中，本文中提供一種醫藥組合物，其包含有效量之如以上實施例中任一者之經分離之細胞及醫藥學上可接受之載劑、醫藥學上可接受之賦形劑或其組合。在一些實施例中，該醫藥組合物係用於治療及/或預防結腸直腸癌、胰臟癌、肺腺癌及/或胃癌。
在另一態樣中，本文中提供一種用於治療及/或預防結腸直腸癌、胰臟癌、肺腺癌及/或胃癌之套組，其包含如以上實施例中任一者之經分離之細胞或如以上態樣之醫藥組合物。在一些實施例中，該套組進一步包括關於使用該經分離之細胞在個體中治療及/或預防結腸直腸癌、胰臟癌、肺腺癌及/或胃癌之書面說明書。
在另一態樣中，本文中提供一種用於治療及/或預防結腸直腸癌、胰臟癌、肺腺癌及/或胃癌之套組，其包含如以上態樣之經分離之核酸或載體。在一些實施例中，該套組進一步包括關於使用該核酸產生一或多種用於在個體中治療及/或預防結腸直腸癌、胰臟癌、肺腺癌及/或胃癌之抗原特異性細胞的書面說明書。
相關申請案之交叉引用
本申請案主張2021年8月10日申請之美國臨時申請案第63/231,626號及2020年11月24日申請之美國臨時申請案第63/117,861號的權益及優先權；各案係出於所有目的以引用之方式整體併入本文中。 序列表
本申請案含有已經由EFS-Web提交且以引用之方式整體併入本文中的序列表。該ASCII複本係於2022年1月13日創建且命名為STB-023WO_SL，並且大小為255,989位元組。
除非另外指示，否則本發明之實踐將採用熟習此項技術者能力範圍內之分子生物學、化學、生物化學、病毒學及免疫學習知方法。文獻中已充分闡明此種技術。參見例如Hepatitis C Viruses: Genomes and Molecular Biology (S.L. Tan編, Taylor & Francis, 2006)；Fundamental Virology, 第3版, 第I卷及第II卷(B.N. Fields及D.M. Knipe編)；Handbook of Experimental Immunology, 第I卷至第IV卷(D.M. Weir及C.C. Blackwell編, Blackwell Scientific Publications)；A.L. Lehninger, Biochemistry (Worth Publishers, Inc., 現行版)；Sambrook等人, Molecular Cloning: A Laboratory Manual (第3版, 2001)；Methods In Enzymology (S. Colowick及N. Kaplan編, Academic Press, Inc.)。 定義
除非另外定義，否則本文中所使用之所有技術術語、記法及其他科學術語皆意欲具有熟習此項技術者通常所理解之含義。在一些情況下，本文中出於清楚性及/或供及時參考之目的而定義具有通常理解之含義的術語，且本文中包括此種定義未必應理解為表示與此項技術中通常所理解存在差異。熟習此項技術者使用習知方法一般更充分地理解且通常採用本文中描述或參考之技術及程序，舉例而言，諸如Sambrook等人, Molecular Cloning: A Laboratory Manual第4版(2012) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY中所描述之廣泛使用之分子選殖方法。適當時，除非另外指出，否則涉及使用市售套組及試劑之程序一般根據製造商定義之方案及條件來進行。
如本文中所使用，除非上下文另外明確指示，否則單數形式「一」及「該」包括複數參考物。除非另外明確指示，否則術語「包括」、「諸如」及其類似術語意欲傳達包括但不限於。
如本文中所使用，除非另外明確指示，否則術語「包含」亦明確包括實施例「由所敍述之要素組成」及「基本上由所敍述之要素組成」。
術語「約」指示並涵蓋指示值及在該值上下之範圍。在某些實施例中，術語「約」指示指定值±10%、±5%或±1%。在某些實施例中，適用時，術語「約」指示指定值±該值之一個標準偏差。
如本文中所使用，術語「活化免疫反應細胞」係指在細胞中誘導信號轉導或蛋白質表現變化，從而引發免疫反應。舉例而言，當CD3鏈響應於配體結合及基於免疫受體酪胺酸之抑制基元(ITAM)而叢聚時，產生信號轉導級聯。在某些實施例中，當內源TCR或外源CAR結合抗原時，發生免疫突觸形成，其包括許多分子叢聚在結合受體附近(例如CD4或CD8、CD3γ/δ/ε/ζ等)。膜結合信號傳導分子之此叢聚允許CD3鏈內所含有之ITAM基元磷酸化。此磷酸化又引發T細胞活化途徑，最終活化轉錄因子，諸如NF-κΒ及AP-1。此等轉錄因子誘導T細胞之整體基因表現以增加IL-2產生，從而進行主調節T細胞蛋白之增殖及表現，以便引發T細胞介導之免疫反應。
如本文中所使用，術語「刺激」或「刺激免疫反應」係指藉由一或多個細胞類型或細胞群體產生引起免疫反應之信號。免疫刺激活性可包括促炎性活性。在各個實施例中，免疫反應發生在免疫細胞(例如T細胞或NK細胞)活化後或者經由受體(包括但不限於CD28、CD137 (4-1BB)、OX40、CD40及ICOS)及其相應配體(包括B7-1、B7-2、OX-40L及4-1BBL)伴隨介導。此種多肽可存在於腫瘤微環境中且可活化對腫瘤細胞之免疫反應。在各個實施例中，促進、刺激或以其他方式促效促炎性多肽及/或其配體可增強免疫反應細胞之免疫反應。不受特定理論束縛，接受多個刺激信號(例如，共刺激)對於在不存在共刺激信號之情況下建立穩固且長期之細胞介導之免疫反應(諸如T細胞介導之免疫反應，其中T細胞可能受抑制且對抗原無反應(亦稱為「T細胞無反應性」))為重要的。在不接受此等刺激信號之情況下，T細胞快速受到抑制且對抗原無反應。儘管多種共刺激信號之作用(尤其在與彼此組合時)可能不同且仍僅被部分理解，但其共刺激一般增加基因表現，以便產生例如在介導表現同源抗原之靶細胞之完全及/或持續根除時穩定響應於抗原之長壽命增殖性抗凋亡抗性細胞，諸如T細胞或NK細胞。
如本文中所使用，術語「嵌合抗原受體」或替代地「CAR」係指包含至少細胞外抗原結合域、跨膜結構域及包含功能信號傳導域之胞質信號傳導域(本文中亦稱為「細胞內信號傳導域」)的重組多肽構築體。
如本文中所使用，術語「活化CAR」或「aCAR」係指能夠在活化表現CAR之細胞中誘導信號轉導或蛋白質表現變化之CAR構築體/結構，其在結合至同源aCAR配體後引發、活化、刺激或增加免疫反應。
如本文中所使用，術語「抑制CAR」或「iCAR」係指能夠在表現抑制CAR之細胞中誘導信號轉導或蛋白質表現變化之CAR構築體/結構，其在結合至同源iCAR配體後預防、減弱、抑制、減少、降低、抑制或遏制免疫反應，諸如減少接受或已接受一或多個刺激信號(包括共刺激信號)之免疫反應細胞之活化。
如本文中所使用，術語「酶抑制域」係指抑制細胞內信號轉導級聯，例如天然T細胞活化級聯之蛋白質結構域。在一些實施例中，本發明之嵌合抑制受體之酶抑制結構域包含細胞外結構域、跨膜結構域及/或細胞內結構域之至少一部分。在一些實施例中，該酶抑制域包含酶之至少一部分。在一些實施例中，該酶係選自CSK、SHP-1、PTEN、CD45、CD148、PTP-MEG1、PTP-PEST、c-CBL、CBL-b、PTPN22、LAR、PTPH1、SHIP-1及RasGAP (參見例如Stanford等人, Regulation of TCR signaling by tyrosine phosphatases: from immune homeostasis to autoimmunity, Immunology, 2012年9月; 137(1): 1-19)。在一些實施例中，該酶部分包含酶結構域、酶片段或其突變體。在一些實施例中，該酶部分為酶催化域。在一些實施例中，選擇酶結構域、酶片段或其突變體以使效力最大化並且使基礎抑制最小化。
如本文中所使用，術語「細胞內信號傳導域」係指蛋白質之功能部分，其藉由在細胞內傳輸資訊來起作用，以藉由產生第二信使或藉由響應於此種信使來發揮效應子功能而經由所定義之信號傳導途徑調控細胞活性。
如本文中所使用，術語「細胞外抗原結合域」或「抗原結合域」(ABD)係指特異性識別或結合至指定抗原或抗原決定基之多肽序列或多肽複合物，諸如本文中所描述之嵌合蛋白質之提供例如VSIG2特異性結合之多肽序列或多肽複合物部分。據稱ABD (或抗體、抗原結合片段及/或包括其之嵌合蛋白質)「識別」該ABD特異性結合之抗原決定基(或更一般而言，抗原)，且據稱該抗原決定基為該ABD之「識別特異性」或「結合特異性」。據稱ABD以特定親和力結合至其特異性抗原或抗原決定基。如本文中所描述，「親和力」係指一個分子與另一分子之間的非共價分子間力相互作用強度。親和力，亦即，相互作用強度，可表示為解離平衡常數(K D)，其中K D值愈低係指分子間相互作用愈強。抗體構築體之K D值係藉由此項技術中眾所周知的方法來量測，包括但不限於生物層干涉術(例如Octet/FORTEBIO®)、表面電漿子共振(SPR)技術(例如Biacore®)及細胞結合分析(例如流式細胞術)。如藉由親和力評定之特異性結合可指結合分子具有ABD與其同源抗原或抗原決定基之間的親和力，其中K D值低於10 -6M、10 -7M、10 -8M、10 -9M或10 -10M。特異性結合亦可包括相關生物分子(例如多肽)之識別及結合，而不特異性識別並結合天然包括本發明多肽之樣品(例如生物樣品)中的其他分子。在某些實施例中，特異性結合係指ABD、抗體或抗原結合片段與抗原決定基或抗原或抗原決定子之間以結合可置換為一致或類似抗原決定基、抗原或抗原決定子之第二製劑或與其競爭之方式結合。
ABD可為抗體。如本文中所使用之術語「抗體」係指來源於與抗原特異性結合之免疫球蛋白分子的蛋白質或多肽序列。抗體可為多株或單株、多鏈或單鏈、或完整免疫球蛋白，且可來源於天然來源或重組來源。抗體可為免疫球蛋白分子之四聚體。
ABD可為抗體之抗原結合片段。如本文中所使用，術語「抗原結合片段」係指完整抗體或其重組變異體之至少一部分，其足以賦予抗原結合片段識別及特異性結合至諸如抗原或抗原決定基之標靶。抗原結合片段之實例包括但不限於Fab、Fab'、F(ab') 2、Fv、scFv、線性抗體、諸如sdAb (VL或VH)之單結構域抗體、駱駝V HH結構域及由抗原結合片段(諸如包含藉由鉸鏈區處之二硫橋連接之兩個Fab片段的二價片段，以及抗體之分離CDR或其他抗原決定基結合片段)形成之多特異性抗體。抗原結合片段亦可併入單結構域抗體、巨抗體、微抗體、奈米抗體、內抗體、雙價抗體、三價抗體、四價抗體、v-NAR及bis-scFv中(參見例如Hollinger及Hudson, Nature Biotechnology 23: 1126-1136, 2005)。抗原結合片段亦可基於諸如III型纖維連接蛋白(Fn3)之多肽移植至支架中(參見美國專利第6,703,199號，該專利描述纖維連接蛋白多肽微抗體)。
諸如本文中所描述之嵌合蛋白質之結合分子中之ABD數目定義該結合分子之「效價」。具有單一ABD之結合分子為「單價」。具有複數個ABD之結合分子稱為「多價」。具有兩個ABD之多價結合分子為「二價」。具有三個ABD之多價結合分子為「三價」。具有四個ABD之多價結合分子為「四價」。在各個多價實施例中，複數個ABD全部具有相同的識別特異性，且可稱為「單特異性多價」結合分子。在其他多價實施例中，該複數個ABD中至少兩個具有不同的識別特異性。此種結合分子為多價且「多特異性」的。在ABD總共具有兩個識別特異性之多價實施例中，該結合分子為「雙特異性的」。在ABD總共具有三個識別特異性之多價實施例中，該結合分子為「三特異性的」。在ABD對同一抗原上存在之不同抗原決定基總共具有複數個識別特異性之多價實施例中，該結合分子為「多互補位的(multiparatopic)」。ABD總共識別同一抗原上之兩個抗原決定基的多價實施例為「雙互補位的(biparatopic)」。
在各個多價實施例中，結合分子之多價改良了結合分子對特異性標靶之親合力。如本文中所描述，「親合力」係指兩個或更多個分子，例如特異性標靶之多價結合分子之間的相互作用總體強度，其中親合力為由多個ABD之親和力提供之相互作用累積強度。可藉由與如以上所描述之用於測定親和力之方法相同的方法來量測親合力。在某些實施例中，結合分子對特異性標靶之親合力使得相互作用為特異性結合相互作用，其中兩個分子之間的親合力具有低於10 -6M、10 -7M、10 -8M、10 -9M或10 -10M之K D值。在某些實施例中，結合分子對特異性標靶之親合力具有使得該相互作用為特異性結合相互作用之K D值，其中個別ABD之一或多種親合力不必具有適合特異性結合其自身之各別抗原或抗原決定基的K D值。在某些實施例中，親合力為由多個ABD對共用特定標靶或複合物上之單獨抗原(諸如在個別細胞上發現之單獨抗原)之親和力提供的相互作用累積強度。在某些實施例中，親合力為由多個ABD對共用個別抗原上之單獨抗原決定基之親和力提供的相互作用累積強度。
如本文中所使用，術語「單鏈可變片段」或「scFv」係指包含至少一個含輕鏈可變區之抗原結合片段及至少一個含重鏈可變區之抗原結合片段的融合蛋白，其中該輕鏈及重鏈可變區經由短可撓性多肽連接體連續連接，能夠表現為單鏈多肽，且其中該scFv保留其所來源之完整抗體之特異性。除非說明，否則如本文中所使用，scFv可按任一順序具有VL及VH可變區，例如，就多肽N端及C端而言，scFv可包含VL-連接體-VH或可包含VH-連接體-VL。
如本文中所使用，「可變區」係指由重組事件產生之可變序列，例如在T細胞中之B細胞或T細胞受體(TCR)基因中之免疫球蛋白基因中之V、J及/或D區段重組後。在免疫球蛋白基因中，可變區通常由其所來源之抗體鏈定義，例如，VH係指抗體重鏈之可變區，且VL係指抗體輕鏈之可變區。所選VH及所選VL可締合在一起以形成賦予抗原特異性及結合親和力之抗原結合域。
如本文中所使用，術語「互補決定區」或「CDR」係指抗體可變區VH及VL內賦予抗原特異性及結合親和力之序列。舉例而言，一般而言，各重鏈可變區(例如HCDR1、HCDR2及HCDR3)中存在三個CDR且各輕鏈可變區(LCDR1、LCDR2及LCDR3)中存在三個CDR。可使用許多眾所周知之方案中的任一種來確定指定CDR之確切胺基酸序列邊界，包括由Kabat等人(1991), 「Sequences of Proteins of Immunological Interest」, 第5版. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (「Kabat」編號方案)、Al-Lazikani等人, (1997) JMB 273,927-948 (「Chothia」編號方案)描述之彼等方案，或其組合。根據Kabat編號方案，在一些實施例中，重鏈可變域(VH)中之CDR胺基酸殘基編號31-35 (HCDR1)、50-65 (HCDR2)及95-102 (HCDR3)；且輕鏈可變域(VL)中之CDR胺基酸殘基編號24-34 (LCDR1)、50-56 (LCDR2)及89-97 (LCDR3)。根據Chothia編號方案，在一些實施例中，VH中之CDR胺基酸殘基編號26-32 (HCDR1)、52-56 (HCDR2)及95-102 (HCDR3)；且VL中之CDR胺基酸殘基編號26-32 (LCDR1)、50-52 (LCDR2)及91-96 (LCDR3)。在組合Kabat及Chothia編號方案中，在一些實施例中，CDR對應於作為Kabat CDR、Chothia CDR或二者之一部分的胺基酸殘基。舉例而言，在一些實施例中，CDR對應於VH (例如哺乳動物VH，例如人類VH)中之胺基酸殘基26-35 (HCDR1)、50-65 (HCDR2)及95-102 (HCDR3)；以及VL (例如哺乳動物VL，例如人類VL)中之胺基酸殘基24-34 (LCDR1)、50-56 (LCDR2)及89-97 (LCDR3)。在多種實施例，該等CDR為哺乳動物序列，包括但不限於小鼠、大鼠、倉鼠、兔、駱駝、驢、山羊及人類序列。在一較佳實施例中，該等CDR為人類序列。在各個實施例中，該等CDR為天然存在之序列。
如本文中所使用，術語「構架區」或「FR」係指抗體可變區VH及VL內充當散佈CDR之支架的一般保守序列，其通常呈FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4排列(自N端至C端)。在多種實施例中，該等FR為哺乳動物序列，包括但不限於小鼠、大鼠、倉鼠、兔、駱駝、驢、山羊及人類序列。在特定實施例中，該等FR為人類序列。在各個實施例中，該等FR為天然存在之序列。在各個實施例中，該等FR為合成序列，包括但不限於合理設計之序列。
如本文中所使用，術語「抗體重鏈」係指以天然存在之構型存在於抗體分子中的兩種類型多肽鏈中之較大者，且其通常決定抗體所屬之類別。
如本文中所使用，術語「抗體輕鏈」係指以其天然存在之構型存在於抗體分子中的兩種類型多肽鏈中之較小者。κ (Kappa)及λ (lambda)輕鏈係指兩種主要抗體輕鏈同型。
如本文中所使用，術語「重組抗體」係指使用重組DNA技術產生之抗體，舉例而言，諸如由噬菌體或酵母表現系統表現之抗體。該術語亦應解釋為意謂藉由合成編碼抗體之DNA分子且該DNA分子表現抗體蛋白質或規定抗體之胺基酸序列而產生之抗體，其中該DNA或胺基酸序列已使用此項技術中可利用且眾所周知的重組DNA或胺基酸序列技術獲得。
如本文中所使用，術語「抗原」或「Ag」係指激起免疫反應之分子。此免疫反應可涉及抗體產生或特定免疫勝任細胞活化或二者。熟習此項技術者應理解，任何巨分子，包括幾乎所有蛋白質或肽，皆可用作抗原。
如本文中所使用，術語「抗腫瘤作用」或「抗腫瘤活性」係指可藉由各種手段體現之生物學作用，包括但不限於例如腫瘤體積減小、腫瘤細胞數目減少、轉移數目減少、預期壽命增加、腫瘤細胞增殖減少、腫瘤細胞存活率降低或與癌症病狀相關之各種生理學症狀改善。「抗腫瘤作用」亦可首先由本發明之肽、多核苷酸、細胞及抗體用於預防腫瘤發生，諸如用於預防性療法或治療之能力來體現。
如本文中所使用，術語「自體」係指來源於相同個體之任何材料，其稍後將重新引入至該個體中。
如本文中所使用，術語「同種異體」係指來源於與引入該材料之個體相同物種的不同動物的任何材料。當一或多個基因座處之基因不一致時，稱兩個或更多個個體對彼此為同種異體的。在一些實施例中，來自相同物種之個體的同種異體材料的基因不同程度(例如，在特定基因處，諸如MHC等位基因)可能足以發生抗原相互作用。在一些實施例中，來自相同物種個體之同種異體材料可能基因相似(例如在諸如MHC等位基因之特定基因處)足以不發生抗原相互作用。
本發明之經分離之核酸分子包括編碼本發明之多肽的任何核酸分子或其片段。此種核酸分子不必與內源核酸序列100%同源或一致，但典型地將展現實質性一致性。與內源序列具有「實質性一致性」或「實質性同源性」之核酸典型地能夠與雙鏈核酸分子之至少一個鏈雜交。如本文中所使用，「雜交」係指在各種嚴格條件下配對以在互補多核苷酸序列(例如本文中所描述之基因)或其部分之間形成雙鏈分子。舉例而言，嚴格鹽濃度可低於約750 mM NaCl及75 mM檸檬酸三鈉、低於約500 mM NaCl及50 mM檸檬酸三鈉、或低於約250 mM NaCl及25 mM檸檬酸三鈉。低嚴格度雜交可在不存在有機溶劑(例如甲醯胺)之情況下獲得，而高嚴格度雜交可在存在至少約35%甲醯胺或至少約50%甲醯胺之情況下獲得。嚴格溫度條件一般將包括至少約30℃、至少約37℃或至少約42℃之溫度。改變其他參數，諸如雜交時間、清潔劑(例如十二烷基硫酸鈉(SDS))之濃度及包括或不包括載體DNA，對熟習此項技術者為眾所周知的。藉由根據需要組合此等各種條件可實現各種水準之嚴格度。
「實質上一致」或「實質上同源」意謂多肽或核酸分子展現與參考胺基酸序列(例如本文中所描述之胺基酸序列中之任一種)或核酸序列(例如本文中所描述之核酸序列中之任一種)至少約50%同源或一致。較佳地，此種序列在胺基酸層級或核酸上與用於比較之序列至少約60%、約80%、約85%、約90%、約95%、約99%或約100%同源或一致。序列一致性典型地使用序列分析軟體(例如威斯康辛大學生物技術中心(1710 University Avenue, Madison, Wis. 53705)之序列分析套裝軟體Genetics Computer Group、BLAST、BESTFIT、GAP或PILEUP/PRETTYBOX程式)進行量測。此種軟體藉由指定各種取代、缺失及/或其他修飾之同源性程度來匹配一致或類似之序列。保守取代典型地包括以下諸組內之取代：甘胺酸、丙胺酸；纈胺酸、異白胺酸、白胺酸；天冬胺酸、麩胺酸、天冬醯胺酸、麩醯胺酸；絲胺酸、蘇胺酸；離胺酸、精胺酸；及苯丙胺酸、酪胺酸。在確定一致性程度之例示性方法中，可使用BLAST程式，其中概率評分在e-3與e-100之間指示密切相關序列。
如本文中所使用，術語「編碼」係指用於在生物過程中充當合成其他聚合物及大分子之模板且具有確定性核苷酸序列(例如rRNA、tRNA及mRNA)或確定性胺基酸序列之多核苷酸，諸如基因、cDNA或mRNA中特定核苷酸序列之固有性質，以及由此產生之生物學性質。因而，若對應於該基因之mRNA之轉錄及轉譯在細胞或其他生物系統中產生蛋白質，則基因、cDNA或RNA編碼蛋白質。核苷酸序列與mRNA序列一致且通常提供於序列表中之編碼鏈及用作基因或cDNA之轉錄模板的非編碼鏈可稱為編碼蛋白質或者該基因或cDNA之其他產物。除非另外規定，否則「編碼胺基酸序列之核苷酸序列」包括彼此為簡併型式且編碼相同胺基酸序列之所有核苷酸序列。片語編碼蛋白質或RNA之核苷酸序列亦可包括內含子，其程度為編碼蛋白質之核苷酸序列可在某種型式中含有內含子。
如本文中所使用，術語「配體」係指結合至受體之分子。特定言之，配體結合另一細胞上之受體，從而允許細胞-細胞識別及/或相互作用。
術語「有效量」及「治療有效量」在本文可互換使用，並且係指如本文中所描述之對達成特定生物學結果有效之化合物、調配物、材料或組合物之量。在一些實施例中，「有效量」或「治療有效量」為足以停滯、改善或抑制相關疾病或病症(例如骨髓病症)繼續增殖、生長或轉移之量。
如本文中所使用，術語「免疫反應細胞」係指在免疫反應(例如免疫效應反應)中發揮功能之細胞或祖細胞或其子代。免疫效應細胞之實例包括但不限於α/β T細胞、γ/δ T細胞、B細胞、天然殺手(NK)細胞、天然殺手T (NKT)細胞、肥大細胞及骨髓衍生吞噬細胞。
如本文中所使用，術語「免疫效應反應」或「免疫效應功能」係指例如增強或促進靶細胞之免疫攻擊的免疫反應細胞的功能或反應。舉例而言，免疫效應功能或反應可指T細胞或NK細胞之促進殺死靶細胞或者抑制其生長或增殖之性質。在T細胞之情況下，一級刺激及共刺激為免疫效應功能或反應之實例。
如本文中所使用，術語「可撓性多肽連接體」或「連接體」係指由單獨或組合使用之諸如甘胺酸及/或絲胺酸殘基之胺基酸組成且用於將可變重鏈及可變輕鏈區域連接在一起之肽連接體。在一個實施例中，可撓性多肽連接體為Gly/Ser連接體且包含胺基酸序列(Gly-Gly-Gly-Gly-Ser) n(SEQ ID NO: 139)或(Gly-Gly-Gly-Ser) n(SEQ ID NO: 140)，其中n為等於或大於1之正整數。舉例而言，n=l、n=2、n=3、n=4、n=5、n=6、n=7、n=8、n=9或n=10。在一些實施例中，可撓性多肽連接體包括但不限於Gly 4Ser (SEQ ID NO: 37)或(Gly 4Ser) 3(SEQ ID NO: 39)。在其他實施例中，連接體包括多個(Gly 2Ser) (SEQ ID NO: 27)、(GlySer)或(Gly 3Ser) (SEQ ID NO: 32)重複單元。在一些實施例中，可撓性多肽連接體包括Whitlow連接體(例如GSTSGSGKPGSGEGSTKG [SEQ ID NO:42])。本發明之範疇內亦包括例如WO2012/138475中所描述之連接體。
如本文中所使用，術語「治療」係指由投與一或多種療法(例如一或多種治療劑，諸如本發明之CAR)而減輕或改善增殖性病症(例如，癌症)之進展、嚴重程度及/或持續時間，或者改善增殖性疾病之一或多種症狀(較佳地，一或多種可辨症狀)。在一些實施例中，減輕或改善係指改善患者未必可辨別之增殖性病症之至少一個可量測物理參數，諸如腫瘤生長。在其他實施例中，術語「治療」係指物理地(藉由例如穩定可辨症狀)、生理地(藉由例如穩定物理參數)或二者抑制增殖性病症之進展。在一些實施例中，減輕或改善包括減少或穩定腫瘤大小或癌細胞計數。
如本文中所使用，術語「個體」意欲包括可引發免疫反應之活生物體(例如哺乳動物、人類)。 其他詮釋規約
本文中所敍述之範圍應理解為對該範圍內之所有值(包括所敍述之終點在內)的簡化。舉例而言，範圍1至50應理解為包括來自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49及50之任何數值、數值組合或子範圍。
除非另外指示，否則提及具有一或多個立體中心之化合物意謂其各立體異構體及立體異構體之所有組合。 實體腫瘤抗原
本發明之某些態樣係關於嵌合受體及經基因修飾以表現一或多個結合至相關抗原之嵌合受體的細胞，諸如免疫反應細胞，以及使用此種受體及細胞治療及/或預防實體惡性腫瘤(諸如肺癌、胰臟癌、胃腸癌、結腸癌、腦癌、神經元組織癌、內分泌腫瘤、骨癌、骨髓癌、免疫系統癌、肌肉癌、肝癌、膽囊癌、腎癌、膀胱癌、雄性生殖器官癌、雌性生殖器官癌、脂肪癌、軟組織癌及皮膚癌)及需要抗原特異性免疫反應之其他病變的方法。惡性細胞已發展出一系列機制來保護其自身免於免疫識別及消除。本發明在腫瘤微環境內提供免疫原性以用於治療此種惡性細胞。
本發明之某些態樣係關於可用於治療實體腫瘤惡性腫瘤之特異性結合骨髓細胞上表現之一或多種抗原的嵌合受體，以及經基因修飾以表現此種嵌合受體之免疫反應細胞。實體癌為由破壞關鍵過程(諸如細胞增殖及分化)之基因及表觀基因改變引起之選殖性疾病。實體腫瘤惡性腫瘤可為慢性或急性的。
在某些實施例中，本發明係關於實體腫瘤抗原及適合用於嵌合受體(例如嵌合TCR或CAR)中以便在治療實體腫瘤時增高效力及/或降低脫腫瘤毒性之實體腫瘤抗原組合。在某些實施例中，該實體腫瘤抗原為CEA家族成員。在某些實施例中，該實體腫瘤抗原為選自由以下組成之群的CEA家族成員：CEA、CEACAM1、CEACAM5及CEACAM6。如本文中所使用，「CEA」係指高度相關蛋白質(CD66蛋白質)家族，包括但不限於CEACAM1 (CD66a)、CEACAM5 (CD66e)及CEACAM6 (CD66c)。在某些實施例中，結合CEA之抗體或抗原結合片段結合超過一種CD66蛋白。
表 1提供適合用於本文中所提供之方法及組合物中所描述之嵌合受體中的CEA家族抗原。
表 1
實體腫瘤抗原
抗原 UniProt 登錄號 名稱 簡短描述
CEA - 癌胚抗原相關細胞黏附分子 在細胞黏附中發揮功能之高度相關細胞表面糖蛋白
CEACAM1 P13688 癌胚抗原相關細胞黏附分子1 在免疫反應、胰島素作用及功能中作為共抑制受體、在血管生成期間作為活化劑起作用之細胞表面糖蛋白
CEACAM5 P06731 癌胚抗原相關細胞黏附分子5 在細胞黏附、細胞內信號傳導及腫瘤進展中起作用之細胞表面糖蛋白
CEACAM6 P40199 癌胚抗原相關細胞黏附分子6 在細胞黏附及腫瘤進展中起作用之細胞表面糖蛋白
在一些實施例中，實體腫瘤抗原為CEACAM1抗原。CEACAM1在此項技術中亦稱為BGP、BGP1、BGPI或CD66a。在一些實施例中，實體腫瘤抗原為CEACAM5抗原。CEACAM5在此項技術中中先前稱為CEA。目前，CEACAM5亦稱為胎糞抗原100、癌胚抗原或CD66e。在一些實施例中，實體腫瘤抗原為CEACAM6抗原。CEACAM6在此項技術中亦稱為CEAL、NCA、正常交叉反應抗原、非特異性交叉反應抗原或CD66c。 嵌合受體
本發明之某些態樣係關於嵌合受體及結合至相關抗原之編碼此種嵌合受體之核酸。 抗體及抗原結合片段
在一些實施例中，嵌合受體包含能夠結合實體腫瘤抗原，例如CEA家族抗原(諸如 表 1中所列出)之抗原結合域中之一或多個。嵌合受體之抗原結合域可包含 表 2中所提供之代表性抗CEA抗體之抗體序列或其抗原結合片段。
表2
例示性實體腫瘤抗原結合劑
實體腫瘤抗原 抗體純系 純系序列
CEACAM1 MRG1 VH: QVQLQQSGAELVRPGTSVKVSCKASGYAFTNNLIEWVKQRPGQGLEWIGVINPGSGDTNYNEKFKGKATLTADKSSNTAYMQLSSLTSDDSAVYFCARGDYYGGFAVDYWGQGTSVTVSS (SEQ ID NO: 1)    VL: DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRTSQDIGNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGKSLPRTFGGGTKLEI (SEQ ID NO: 2)
CEACAM5 拉貝珠單抗(Labetuzumab) (亦即，hMN14) VH: EVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCSASGFDFTTYWMSWVRQAPGKGLEWIGEIHPDSSTINYAPSLKDRFTISRDNAKNTLFLQMDSLRPEDTGVYFCASLYFGFPWFAYWGQGTPVTVSS (SEQ ID NO: 3)    VL: DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVGTSVAWYQQKPGKAPKLLIYWTSTRHTGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQYSLYRSFGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 4)
CEACAM5 賽必妥單抗(Cibisatamab) HC: QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTEFGMNWVRQAPGQGLEWMGWINTKTGEATYVEEFKGRVTFTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARWDFAYYVEAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLS (SEQ ID NO: 5)    LC: DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASAAVGTYVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRKRGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCHQYYTYPLFTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYAEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 6)
CEACAM5 特賽妥單抗(Tusamitamab) HC: EVQLQESGPGLVKPGGSLSLSCAASGFVFSSYDMSWVRQTPERGLEWVAYISSGGGITYAPSTVKGRFTVSRDNAKNTLYLQMNSLTSEDTAVYYCAAHYFGSSGPFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP (SEQ ID NO: 7)    LC: DIQMTQSPASLSASVGDRVTITCRASENIFSYLAWYQQKPGKSPKLLVYNTRTLAEGVPSRFSGSGSGTDFSLTISSLQPEDFATYYCQHHYGTPFTFGSGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 8)
CEACAM5 BW431/26 VH: QLQESGPGLVRPSQTLSLTCTVSGFTISSGYSWHWVRQPPGRGLEWIGYIQYSGITNYNPSLKSRVTMLVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCAREDYDYHWYFDVWGQGSLVTVSS (SEQ ID NO: 9)    VL: GVHSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSTSSSVSYMHWYQQKPGKAPKLLIYSTSNLASGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCHQWSSYPTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO: 10)
CEACAM5 A5B7 VH: MDFQVQIFSFLLISASVIMSRGQTVLSQSPAILSASPGEKVTMTCRASSSVTYIHWYQQKPGSSPKSWIYATSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISRVEAEDAATYYCQHWSSKPPTFGGGTKLEIKR (SEQ ID NO: 11)    VL: MDFQVQIFSFLLISASVIMSRGQTVLSQSPAILSASPGEKVTMTCRASSSVTYIHWYQQKPGSSPARFSGSGTSYSLTISRVEAEDAATYYCQHWSSKPPTFGGGTKLEIKR (SEQ ID NO: 12)
CEACAM5 MFE23 VH: ETVIKYLLPTAAAGLLLLAAQPAMAQVKLQQSGAELVRSGTSVKLSCTASGFNIKDSYMHWLRQGPEQGLEWIGWIDPENGDTEYAPKFQGKATFTTDTSSNTAYLQLSSLTSEDTAVYYCNEGTPTGPYYFDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 13)    VL: ENVLTQSPAIMSASPGEKVTITCSASSSVSYMHWFQQKPGTSPKLWIYSTSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISRMEAEDAATYYCQQRSSYPLTFGAGTKLELKRAA (SEQ ID NO: 14)
CEACAM5 hMFE23 VH: QVKLEQSGAEVVKPGASVKLSCKASGFNIKDSYMHWLRQGPGQRLEWIGWIDPENGDTEYAPKFQGKATFTTDTSANTAYLGLSSLRPEDTAVYYCNEGTPTGPYYFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 78)    VL: ENVLTQSPSSMSVSVGDRVTIACSASSSVPYMHWLQQKPGKSPKLLIYLTSNLASGVPSRFSGSGSGTDYSLTISSVQPEDAATYYCQQRSSYPLTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 79)
糖基化CEACAM5 FM4 (亦稱為「MG7」) VH: EVKLVESGGGLVQPGGSLRLSCSISGFTFTDYYMNWVRQSPGKALEWLGFIRNKVNGDTTEYSASVKGRFTISRDISQSILYLQMNTLRTEDSATYYCARDKGIAYYFDYWGQGTTLTVSS (SEQ ID NO: 15)    VL: QIVLSQSPAILFASPGEKVTMTCRASSSVSYIHWYQQKPGSSPKPWIHGTSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISRMEAEDAATYYCQQWSSNLSTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 16)
CEACAM6 替奴瑞利單抗(Tinurilimab) HC: QVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLSTYGIGVGWIRQPPGKALEWLAHIWWNDNKYYSTSLKTRLTISKDTSKNQVVLTMTNMDPVDTATYYCARISLPYFDYWGQGTTLTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 17)    LC: DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITCKASQNVGTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASNRYTGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQYSSYPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 18)
本發明之某些態樣係關於包含細胞外抗原結合域之嵌合受體(例如，CAR或嵌合TCR)，該等嵌合受體結合至本發明之一或多個抗原。在一些實施例中，該抗原結合域來源於抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，抗原結合域包含 表 2之抗體或其抗原結合片段之CDR序列。以上詳細論述了CDR序列及用於定義其之已知系統，例如Kabat。
本發明之適合抗體包括足夠強地且特異性地結合至實體腫瘤抗原，例如CEA、CEACAM1、CEACAM5或CEACAM6之任何抗體，無論天然或合成、全長或其片段、單株或多株。在一些實施例中，該抗體可具有至多約至多10 -6M、至多約10 -7M、至多約10 -8M、至多約10 -9M、至多約10 -10M、至多約10 -11M或至多約10 -12M之K D。
在一些實施例中，可使用之抗體及其衍生物包括但不限於多株抗體、單株抗體、嵌合抗體、人類抗體、人類化抗體、靈長類化(CDR移植)抗體、鑲嵌抗體、單鏈抗體、噬菌體產生之抗體(例如來自噬菌體展示文庫)及抗體之功能結合片段。舉例而言，能夠結合至實體腫瘤抗原或其部分之抗體片段包括但不限於Fv、Fab、Fab'及F(ab') 2片段。該等片段可藉由酶促切割或藉由重組技術產生。舉例而言但不具限制性，木瓜蛋白酶或胃蛋白酶切割分別可產生Fab或F(ab') 2片段。具有必要受質特異性之其他蛋白酶亦可用於產生Fab或F(ab') 2片段。亦可使用已在天然終止位點上游引入一或多個終止密碼子之抗體基因來產生呈各種截短形式之抗體。舉例而言，可設計編碼F(ab') 2重鏈部分之嵌合基因以包括編碼重鏈之CH結構域及鉸鏈區之DNA序列。
產生靶向特定抗原之抗體的方法在此項技術中總體上為已知的。合成及工程化抗體描述於例如US4816567、EP0125023Bl、US4816397、EP0120694Bl、WO 86/01533、EP0194276Bl、US5225539、EP0239400Bl、EP0451216Bl、EP0519596Al及US4946778中。
在一些實施例中，市售抗體可用於結合至實體腫瘤抗原。熟習此項技術者使用習知定序技術容易獲取市售抗體之CDR。此外，熟習此項技術者能夠基於此種市售抗體之CDR來構築編碼scFv及嵌合受體(例如CAR及TCR)之核酸。
在一些實施例中，嵌合受體包含特異性結合CEA之抗原結合域。
在一些實施例中，嵌合受體包含特異性結合CEACAM1之抗原結合域。在一些實施例中，CEACAM1特異性抗原結合域來源於抗CEACAM1抗體，諸如MRG1抗體或其抗原結合片段。在某些實施例中，CEACAM1特異性抗原結合域包括包含與SEQ ID NO:1至少90% (例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%)一致之胺基酸序列的重鏈可變域(VH)及包含與SEQ ID NO:2至少90% (例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%)一致之胺基酸序列的輕鏈可變域(VL)。在某些實施例中，第二抗原結合位點包含分別屬於SEQ ID NO: 1及2之VH及VL序列之根據Kabat、Chothia、MacCallum或此項技術中已知的任何其他CDR確定方法確定之重鏈CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈CDR1、CDR2及CDR3。抗原結合域可為包含輕鏈可變域(VL)及重鏈可變域(VH)之scFv。在一些實施例中，該嵌合受體可具有多特異性抗原結合域。舉例而言，該嵌合受體可對CEACAM1及一或多個額外抗原特異。在一些實施例中，該嵌合受體可對CEACAM1及CEACAM5特異。在一些實施例中，該嵌合受體可對CEACAM1及CEACAM6特異。在一些實施例中，該嵌合受體可對CEACAM5及CEACAM6特異。
在一些實施例中，嵌合受體包含特異性結合CEACAM5之抗原結合域。在一些實施例中，CEACAM5特異性抗原結合域來源於抗CEACAM5抗體，諸如拉貝珠單抗(亦即，hMN14)或其抗原結合片段。在某些實施例中，CEACAM5特異性抗原結合域包括包含與SEQ ID NO:3至少90% (例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%)一致之胺基酸序列的重鏈可變域(VH)及包含與SEQ ID NO:4至少90% (例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%)一致之胺基酸序列的輕鏈可變域(VL)。在某些實施例中，第二抗原結合位點包含分別屬於SEQ ID NO: 3及4之VH及VL序列之根據Kabat、Chothia、MacCallum或此項技術中已知的任何其他CDR確定方法確定之重鏈CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈CDR1、CDR2及CDR3。抗原結合域可為包含輕鏈可變域(VL)及重鏈可變域(VH)之scFv。在一些實施例中，該嵌合受體可具有多特異性抗原結合域。舉例而言，該嵌合受體可對CEACAM5及一或多個額外抗原特異。
在一些實施例中，CEACAM5特異性抗原結合域來源於抗CEACAM5抗體，諸如賽必妥單抗或其抗原結合片段。在某些實施例中，CEACAM5特異性抗原結合域包括包含與SEQ ID NO: 5至少90% (例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%)一致之胺基酸序列的重鏈(HC)及包含與SEQ ID NO: 6至少90% (例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%)一致之胺基酸序列的輕鏈(LC)。在某些實施例中，第二抗原結合位點包含分別屬於SEQ ID NO: 5及6之HC及LC序列的重鏈可變域(VH)及輕鏈可變域(VL)。在某些實施例中，第二抗原結合位點包含分別屬於SEQ ID NO: 5及6之HC及LC序列之根據Kabat、Chothia、MacCallum或此項技術中已知的任何其他CDR確定方法確定之重鏈CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈CDR1、CDR2及CDR3。抗原結合域可為包含輕鏈可變域及重鏈可變域之scFv。在一些實施例中，該嵌合受體可具有多特異性抗原結合域。舉例而言，該嵌合受體可對CEACAM5及一或多個額外抗原特異。
在一些實施例中，CEACAM5特異性抗原結合域來源於抗CEACAM5抗體，諸如特賽妥單抗或其抗原結合片段。在某些實施例中，CEACAM5特異性抗原結合域包括包含與SEQ ID NO: 7至少90% (例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%)一致之胺基酸序列的重鏈(HC)及包含與SEQ ID NO: 8至少90% (例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%)一致之胺基酸序列的輕鏈(LC)。在某些實施例中，第二抗原結合位點包含分別屬於SEQ ID NO: 7及8之HC及LC序列之重鏈可變域(VH)及輕鏈可變域(VL)。在某些實施例中，第二抗原結合位點包含分別屬於SEQ ID NO: 7及8之HC及LC序列之根據Kabat、Chothia、MacCallum或此項技術中已知的任何其他CDR確定方法確定之重鏈CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈CDR1、CDR2及CDR3。抗原結合域可為包含輕鏈可變域及重鏈可變域之scFv。在一些實施例中，該嵌合受體可具有多特異性抗原結合域。舉例而言，該嵌合受體可對CEACAM5及一或多個額外抗原特異。
在一些實施例中，CEACAM5特異性抗原結合域來源於抗CEACAM5抗體，諸如BW431/26或其抗原結合片段。在某些實施例中，CEACAM5特異性抗原結合域包括包含與SEQ ID NO: 9至少90% (例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%)一致之胺基酸序列的重鏈可變域(VH)及包含與SEQ ID NO: 10至少90% (例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%)一致之胺基酸序列的輕鏈可變域(VL)。在某些實施例中，第二抗原結合位點包含分別屬於SEQ ID NO: 9及10之VH及VL序列之根據Kabat、Chothia、MacCallum或此項技術中已知的任何其他CDR確定方法確定之重鏈CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈CDR1、CDR2及CDR3。抗原結合域可為包含輕鏈可變域(VL)及重鏈可變域(VH)之scFv。在一些實施例中，該嵌合受體可具有多特異性抗原結合域。舉例而言，該嵌合受體可對CEACAM5及一或多個額外抗原特異。
在一些實施例中，CEACAM5特異性抗原結合域來源於抗CEACAM5抗體，諸如A5B7或其抗原結合片段。在某些實施例中，CEACAM5特異性抗原結合域包括包含與SEQ ID NO: 11至少90% (例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%)一致之胺基酸序列的重鏈可變域(VH)及包含與SEQ ID NO: 12至少90% (例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%)一致之胺基酸序列的輕鏈可變域(VL)。在某些實施例中，第二抗原結合位點包含分別屬於SEQ ID NO: 11及12之VH及VL序列之根據Kabat、Chothia、MacCallum或此項技術中已知的任何其他CDR確定方法確定之重鏈CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈CDR1、CDR2及CDR3。抗原結合域可為包含輕鏈可變域(VL)及重鏈可變域(VH)之scFv。在一些實施例中，該嵌合受體可具有多特異性抗原結合域。舉例而言，該嵌合受體可對CEACAM5及一或多個額外抗原特異。
在一些實施例中，CEACAM5特異性抗原結合域來源於抗CEACAM5抗體，諸如MFE23或其抗原結合片段。在某些實施例中，CEACAM5特異性抗原結合域包括包含與SEQ ID NO: 13至少90% (例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%)一致之胺基酸序列的重鏈可變域(VH)及包含與SEQ ID NO: 14至少90% (例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%)一致之胺基酸序列的輕鏈可變域(VL)。在某些實施例中，第二抗原結合位點包含分別屬於SEQ ID NO: 13及14之VH及VL序列之根據Kabat、Chothia、MacCallum或此項技術中已知的任何其他CDR確定方法確定之重鏈CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈CDR1、CDR2及CDR3。抗原結合域可為包含輕鏈可變域(VL)及重鏈可變域(VH)之scFv。在一些實施例中，該嵌合受體可具有多特異性抗原結合域。舉例而言，該嵌合受體可對CEACAM5及一或多個額外抗原特異。
在一些實施例中，CEACAM5特異性抗原結合域來源於抗CEACAM5抗體，諸如hMFE23或其抗原結合片段。在某些實施例中，CEACAM5特異性抗原結合域包括包含與SEQ ID NO: 78至少90% (例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%)一致之胺基酸序列的重鏈可變域(VH)及包含與SEQ ID NO: 79至少90% (例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%)一致之胺基酸序列的輕鏈可變域(VL)。在某些實施例中，第二抗原結合位點包含分別屬於SEQ ID NO: 78及79之VH及VL序列之根據Kabat、Chothia、MacCallum或此項技術中已知的任何其他CDR確定方法確定之重鏈CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈CDR1、CDR2及CDR3。抗原結合域可為包含輕鏈可變域(VL)及重鏈可變域(VH)之scFv。在一些實施例中，該嵌合受體可具有多特異性抗原結合域。舉例而言，該嵌合受體可對CEACAM5及一或多個額外抗原特異。
在一些實施例中，CEACAM5特異性抗原結合域來源於能夠特異性結合糖基化CEACAM5之抗CEACAM5抗體。在一些實施例中，糖基化CEACAM5特異性抗原結合域來源於抗糖基化CEACAM5抗體，諸如FM4 (本文中亦稱為「MG7」)或其抗原結合片段。在某些實施例中，CEACAM5特異性抗原結合域包括包含與SEQ ID NO: 15至少90% (例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%)一致之胺基酸序列的重鏈可變域(VH)及包含與SEQ ID NO: 16至少90% (例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%)一致之胺基酸序列的輕鏈可變域(VL)。在某些實施例中，第二抗原結合位點包含分別屬於SEQ ID NO: 15及16之VH及VL序列之根據Kabat、Chothia、MacCallum或此項技術中已知的任何其他CDR確定方法確定之重鏈CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈CDR1、CDR2及CDR3。抗原結合域可為包含輕鏈可變域(VL)及重鏈可變域(VH)之scFv。在一些實施例中，該嵌合受體可具有多特異性抗原結合域。舉例而言，該嵌合受體可對CEACAM5及一或多個額外抗原特異。
在一些實施例中，嵌合受體包含特異性結合CEACAM6之抗原結合域。在一些實施例中，該CEACAM6特異性抗原結合域來源於抗CEACAM6抗體，諸如替奴瑞利單抗或其抗原結合片段。在某些實施例中，該CEACAM6特異性抗原結合域包括包含與SEQ ID NO: 17至少90% (例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%)一致之胺基酸序列的重鏈(HC)及包含與SEQ ID NO: 18至少90% (例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%)一致之胺基酸序列的輕鏈(LC)。在某些實施例中，第二抗原結合位點包含分別屬於SEQ ID NO: 17及18之HC及LC序列之重鏈可變域(VH)及輕鏈可變域(VL)。在某些實施例中，第二抗原結合位點包含分別屬於SEQ ID NO: 17及18之HC及LC序列之根據Kabat、Chothia、MacCallum或此項技術中已知的任何其他CDR確定方法確定之重鏈CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈CDR1、CDR2及CDR3。該抗原結合域可為包含輕鏈可變域及重鏈可變域之scFv。在一些實施例中，該嵌合受體可具有多特異性抗原結合域。舉例而言，該嵌合受體可對CEACAM6及一或多種其他抗原具特異性。 T 細胞受體 (TCR)
本發明之某些態樣係關於特異性結合至實體腫瘤細胞上所表現之抗原的嵌合受體。在一些實施例中，該嵌合受體為嵌合T細胞受體(TCR)。本發明之TCR為二硫橋連接之異二聚蛋白，其含有表現為與不變CD3鏈分子之複合物之一部分的兩個可變鏈。TCR發現於T細胞表面上，且負責識別呈與主要組織相容性複合物(MHC)分子結合之肽形式的抗原。在某些實施例中，本發明之TCR包含由TRA編碼之α鏈及由TRB編碼之β鏈。在某些實施例中，TCR包含γ鏈及δ鏈(分別由TRG及TRD編碼)。
TCR之各鏈由兩個細胞外結構域構成：可變(V)區及恆定(C)區。恆定區在細胞膜近端，繼而為跨膜區及短胞質尾區。可變區結合至肽/MHC複合物。各可變區具有三個互補決定區(CDR)。
在某些實施例中，TCR可與三個二聚信號傳導模組CD3δ/ε、CD3γ/ε及CD247ζ/ζ或CD247ζ/η形成受體複合物。當TCR複合物與其抗原及MHC接合(肽/MHC)時，表現TCR複合物之T細胞被活化。
在一些實施例中，本發明之TCR為重組TCR。在某些實施例中，該TCR為非天然存在之TCR。在某些實施例中，該TCR與天然存在之TCR相差至少一個胺基酸殘基。在一些實施例中，該TCR與天然存在之TCR相差至少2個胺基酸殘基、至少3個胺基酸殘基、至少4個胺基酸殘基、至少5個胺基酸殘基、至少6個胺基酸殘基、至少7個胺基酸殘基、至少8個胺基酸殘基、至少9個胺基酸殘基、至少10個胺基酸殘基、至少11個胺基酸殘基、至少12個胺基酸殘基、至少13個胺基酸殘基、至少14個胺基酸殘基、至少15個胺基酸殘基、至少20個胺基酸殘基、至少25個胺基酸殘基、至少30個胺基酸殘基、至少40個胺基酸殘基、至少50個胺基酸殘基、至少60個胺基酸殘基、至少70個胺基酸殘基、至少80個胺基酸殘基、至少90個胺基酸殘基、至少100個胺基酸殘基或更多個胺基酸殘基。在某些實施例中，該TCR相對於天然存在之TCR經至少一個胺基酸殘基修飾。在一些實施例中，該TCR相對於天然存在之TCR經至少2個胺基酸殘基、至少3個胺基酸殘基、至少4個胺基酸殘基、至少5個胺基酸殘基、至少6個胺基酸殘基、至少7個胺基酸殘基、至少8個胺基酸殘基、至少9個胺基酸殘基、至少10個胺基酸殘基、至少11個胺基酸殘基、至少12個胺基酸殘基、至少13個胺基酸殘基、至少14個胺基酸殘基、至少15個胺基酸殘基、至少20個胺基酸殘基、至少25個胺基酸殘基、至少30個胺基酸殘基、至少40個胺基酸殘基、至少50個胺基酸殘基、至少60個胺基酸殘基、至少70個胺基酸殘基、至少80個胺基酸殘基、至少90個胺基酸殘基、至少100個胺基酸殘基或更多個胺基酸殘基修飾。 嵌合 TCR
在一些實施例中，本發明之TCR包含一或多個抗原結合域，該一或多個抗原結合域可移植至TCR鏈，例如TCR α鏈或TCR β鏈之一或多個恆定結構域，以產生特異性結合至本發明之靶抗原(例如實體腫瘤抗原)的嵌合TCR。不希望受理論束縛，據信在抗原結合後，嵌合TCR可經由TCR複合物進行信號傳導。舉例而言，抗體或抗體片段(例如scFv)可移植至TCR鏈(諸如TCR α鏈及/或TCR β鏈)之恆定結構域，例如細胞外恆定結構域、跨膜結構域及細胞質域之至少一部分。作為另一實例，抗體或抗體片段之CDR可移植至TCR α鏈及/或β鏈中，以產生特異性結合至本發明之抗原(例如實體腫瘤抗原)的嵌合TCR。此種嵌合TCR可藉由此項技術中已知的方法來產生(例如Willemsen RA等人, Gene Therapy 2000; 7:1369-1377；Zhang T等人, Cancer Gene Ther 2004 11: 487-496；及Aggen等人, Gene Ther. 2012年4月; 19(4): 365-74)。 嵌合抗原受體 (CAR)
本發明之某些態樣係關於特異性結合至實體腫瘤(例如肺、胰臟、胃腸道、結腸、腦、神經元組織、內分泌、骨、骨髓、免疫系統、肌肉、肝臟、膽囊、腎臟、膀胱、雄性生殖器官、雌性生殖器官、脂肪、軟組織或皮膚腫瘤)上所表現之抗原的嵌合受體。在一些實施例中，該嵌合受體為嵌合抗原受體(CAR)。在一些實施例中，CAR (或經遺傳工程化以包含一或多個CAR之免疫反應細胞，參見以下)特異性結合CEA家族成員腫瘤抗原，諸如 表 1之CEA抗原中之任一者。在一些實施例中，CAR (或經遺傳工程化以包含一或多個CAR之免疫反應細胞)可包含 表 2中所提供之代表性抗CEA抗體之抗體序列或其抗原結合片段。在一些實施例中，CAR (或經遺傳工程化以包含一或多個CAR之免疫反應細胞)可包含來源於能夠結合至實體腫瘤抗原之抗體的scFv，諸如 表 3中所提供之代表性抗CEA scFv。
在一些實施例中，CAR為將相關特異性移植至或賦予免疫效應細胞上之工程化受體。在某些實施例中，CAR可用於將抗體之特異性移植至諸如T細胞之免疫反應細胞上。在一些實施例中，本發明之CAR包含與跨膜結構域融合、與一或多個細胞內信號傳導域融合之細胞外抗原結合域(例如scFv)。
在一些實施例中，該嵌合抗原受體結合至其同源配體足以誘導免疫反應細胞活化。在一些實施例中，該嵌合抗原受體結合至其同源配體足以誘導免疫反應細胞刺激。在一些實施例中，免疫反應細胞活化殺死靶細胞。在一些實施例中，免疫反應細胞活化引起免疫反應細胞之細胞介素或趨化因子表現及/或分泌。在一些實施例中，免疫反應細胞刺激引起免疫反應細胞之細胞介素或趨化因子表現及/或分泌。在一些實施例中，免疫反應細胞刺激誘導免疫反應細胞分化。在一些實施例中，免疫反應細胞刺激誘導免疫反應細胞增殖。
本發明之CAR可為第一代、第二代或第三代CAR。「第一代」CAR包含單一細胞內信號傳導域，一般來源於T細胞受體鏈。「第一代」CAR一般具有來自CD3-ζ (CD3ζ)鏈之細胞內信號傳導域，其為來自內源TCR之信號之主要傳送者。「第一代」CAR可提供從頭抗原識別，並藉由單一融合分子中之CD3ζ鏈信號傳導域活化CD4 +及CD8 +T細胞，與HLA介導之抗原呈現無關。「第二代」CAR將來自多種共刺激分子之一(例如CD28、4-1BB、ICOS、OX40)的第二細胞內信號傳導域添加至CAR之胞質尾區，以便向T細胞提供額外的信號。「第二代」CAR提供共刺激(例如CD28或4-1BB)及活化(CD3ζ)。臨床前研究已指示「第二代」CAR可改良免疫反應細胞(諸如T細胞)之抗腫瘤活性。「第三代」CAR具有多個細胞內共刺激信號傳導域(例如CD28及4-1BB)及細胞內活化信號傳導域(CD3ζ)。
在一些實施例中，本發明之CAR之細胞外抗原結合域結合至諸如實體腫瘤細胞之細胞上所表現之一或多個抗原，解離常數(K D)為約2×10 -7M或更小、約1×10 -7M或更小、約9×10 -8M或更小、約1×10 -8M或更小、約9×10 -9M或更小、約5×10 -9M或更小、約4×10 -9M或更小、約3×10 -9M或更小、約2×10 -9M或更小、或者約1×10 -9M或更小。在一些實施例中，該K D在約2×10 -7M至約1×10 -9M之範圍內。
本發明之CAR之細胞外抗原結合域之結合可藉由例如酶聯免疫吸附分析(ELISA)、放射免疫分析(RIA)、FACS分析、生物分析(例如生長抑制)或西方墨點分析(Western Blot assay)來測定。此等分析中之每一種一般藉由採用對相關複合物具有特異性之標記試劑(例如抗體或scFv)來偵測特別相關之蛋白質-抗體複合物的存在。舉例而言，scFv可經放射性標記且用於RIA分析中。可藉由諸如使用γ計數器或閃爍計數器之手段或藉由自動放射攝影術來偵測放射性同位素。在某些實施例中，CAR之細胞外抗原結合域經螢光標記物標記。螢光標記物之非限制性實例包括綠色螢光蛋白(GFP)、藍色螢光蛋白(例如EBFP、EBFP2、Azurite及mKalamal)、青色螢光蛋白(例如ECFP、Cerulean及CyPet)及黃色螢光蛋白(例如YFP、Citrine、Venus及YPet)。
在一些實施例中，本發明之CAR包含結合至實體腫瘤(例如肺、胰臟、胃腸道、結腸、腦、神經元組織、內分泌、骨、骨髓、免疫系統、肌肉、肝臟、膽囊、腎臟、膀胱、雄性生殖器官、雌性生殖器官、脂肪、軟組織或皮膚腫瘤)細胞上所表現之一或多個抗原的細胞外抗原結合域、跨膜結構域及一或多個細胞內信號傳導域。在一些實施例中，該細胞外抗原結合域包含scFv。在一些實施例中，該細胞外抗原結合域包含可能交聯之Fab片段。在某些實施例中，該細胞外結合域為F(ab) 2片段。 細胞外抗原結合域
在一些實施例中，本發明之CAR之細胞外抗原結合域特異性結合至諸如肺、胰臟、胃腸道、結腸、腦、神經元組織、內分泌、骨、骨髓、免疫系統、肌肉、肝臟、膽囊、腎臟、膀胱、雄性生殖器官、雌性生殖器官、脂肪、軟組織或皮膚腫瘤細胞之實體腫瘤細胞上所表現的一或多個抗原。在某些實施例中，該細胞外抗原結合域結合至實體腫瘤細胞上所表現之一或多個抗原(實體腫瘤抗原)。在一些實施例中，該一或多個實體腫瘤抗原為人類多肽。
本發明之抗原結合域可包括任何結合至抗原之結構域，包括但不限於單株抗體、多株抗體、重組抗體、雙特異性抗體、結合抗體、人類抗體、人類化抗體及其功能片段，包括但不限於單結構域抗體(sdAb)，諸如駱駝來源之奈米抗體之重鏈可變域(VH)、輕鏈可變域(VL)及可變域(V HH)，以及此項技術中已知的發揮抗原結合域功能之替代支架，諸如重組纖維連接蛋白結構域、T細胞受體(TCR)、具有增高親和力之重組TCR或其片段，例如單鏈TCR，及其類似物。在一些情況下，抗原結合域來源於最終將使用CAR之相同物種為有益的。舉例而言，為了在人類中使用，CAR之抗原結合域包含抗體或抗體片段之抗原結合域之人類或人類化殘基可能為有益的。
在一些實施例中，該細胞外抗原結合域包含抗體。在某些實施例中，該抗體為人類抗體。在某些實施例中，該抗體為人類化抗體。在某些實施例中，該抗體為嵌合抗體。在一些實施例中，該細胞外抗原結合域包含抗體之抗原結合片段。
在一些實施例中，該細胞外抗原結合域包含F(ab)片段。在某些實施例中，該細胞外抗原結合域包含F(ab')片段。
在一些實施例中，該細胞外抗原結合域包含scFv。
來源於能夠結合至實體腫瘤抗原之抗體的各種scFv提供於 表 3中。在一些實施例中，該細胞外抗原結合域包含如 表 3中所提供之scFv。
表3
scFv 胺基酸序列 SEQ ID NO
hMN14 scFv (VL-VH)    DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVGTSVAWYQQKPGKAPKLLIYWTSTRHTGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQYSLYRSFGQGTKVEIKGGSGSGGSGSGGSGSEVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCSASGFDFTTYWMSWVRQAPGKGLEWIGEIHPDSSTINYAPSLKDRFTISRDNAKNTLFLQMDSLRPEDTGVYFCASLYFGFPWFAYWGQGTPVTVSS 19
hMFE23 scFv (VH-VL)    QVKLEQSGAEVVKPGASVKLSCKASGFNIKDSYMHWLRQGPGQRLEWIGWIDPENGDTEYAPKFQGKATFTTDTSANTAYLGLSSLRPEDTAVYYCNEGTPTGPYYFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSENVLTQSPSSMSVSVGDRVTIACSASSSVPYMHWLQQKPGKSPKLLIYLTSNLASGVPSRFSGSGSGTDYSLTISSVQPEDAATYYCQQRSSYPLTFGGGTKLEIK 20
MG7 (「FM4」) scFv (VL-VH)    EVKLVESGGGLVQPGGSLRLSCSISGFTFTDYYMNWVRQSPGKALEWLGFIRNKVNGDTTEYSASVKGRFTISRDISQSILYLQMNTLRTEDSATYYCARDKGIAYYFDYWGQGTTLTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQIVLSQSPAILFASPGEKVTMTCRASSSVSYIHWYQQKPGSSPKPWIHGTSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISRMEAEDAATYYCQQWSSNLSTFGGGTKLEIK 21
MRG1 scFv (VH-VL)    QVQLQQSGAELVRPGTSVKVSCKASGYAFTNNLIEWVKQRPGQGLEWIGVINPGSGDTNYNEKFKGKATLTADKSSNTAYMQLSSLTSDDSAVYFCARGDYYGGFAVDYWGQGTSVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRTSQDIGNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGKSLPRTFGGGTKLEI 22
特賽妥單抗scFv (VH-VL) DIQMTQSPASLSASVGDRVTITCRASENIFSYLAWYQQKPGKSPKLLVYNTRTLAEGVPSRFSGSGSGTDFSLTISSLQPEDFATYYCQHHYGTPFTFGSGTKLEIKRGGGGSGGGGSGGGGSEVQLQESGPGLVKPGGSLSLSCAASGFVFSSYDMSWVRQTPERGLEWVAYISSGGGITYAPSTVKGRFTVSRDNAKNTLYLQMNSLTSEDTAVYYCAAHYFGSSGPFAYWGQGTLVTVSSA 23
特賽妥單抗scFv (VL-VH) EVQLQESGPGLVKPGGSLSLSCAASGFVFSSYDMSWVRQTPERGLEWVAYISSGGGITYAPSTVKGRFTVSRDNAKNTLYLQMNSLTSEDTAVYYCAAHYFGSSGPFAYWGQGTLVTVSSAGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPASLSASVGDRVTITCRASENIFSYLAWYQQKPGKSPKLLVYNTRTLAEGVPSRFSGSGSGTDFSLTISSLQPEDFATYYCQHHYGTPFTFGSGTKLEIKR 24
A5B7 scFv (VH-VL) EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCATSGFTFTDYYMNWVRQAPGKGLEWLGFIGNKANGYTTEYSASVKGRFTISRDKSKSTLYLQMNTLQAEDSAIYYCTRDRGLRFYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVLYLQMNTLQAEDSAIYYCTRDRGLRFYFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVLTQSPSSLSVSVGDRVTITCRASSSVTYIHWYQQKPGLAPKSLIYATSNLASGVPSRFSGSGSGTDYTFTISSLQPEDIATYYCQHWSSKPPTFGQGTKVEVKRTV 25
A5B7 scFv (VL-VH) QTVLTQSPSSLSVSVGDRVTITCRASSSVTYIHWYQQKPGLAPKSLIYATSNLASGVPSRFSGSGSGTDYTFTISSLQPEDIATYYCQHWSSKPPTFGQGTKVEVKRTVGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCATSGFTFTDYYMNWVRQAPGKGLEWLGFIGNKANGYTTEYSASVKGRFTISRDKSKSTLYLQMNTLQAEDSAIYYCTRDRGLRFYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVLYLQMNTLQAEDSAIYYCTRDRGLRFYFDYWGQGTLVTVSS 26
在一些實施例中，該細胞外抗原結合域包含兩個單鏈可變片段(scFv)。在一些實施例中，該兩個scFv各自結合至相同抗原上之相異抗原決定基。在一些實施例中，該細胞外抗原結合域包含第一scFv及第二scFv。在一些實施例中，該第一scFv及該第二scFv結合相同抗原上之相異抗原決定基。在某些實施例中，該scFv為人類scFv。在某些實施例中，該scFv為人類化scFv。在某些實施例中，該scFv為嵌合scFv。在某些實施例中，該scFv包含重鏈可變域(VH)及輕鏈可變域(VL)。在某些實施例中，該VH及該VL係由肽連接體隔開。在一些實施例中，該肽連接體包含如 表 4中所示之胺基酸序列。
表 4
適用之肽連接體
連接體 胺基酸序列 SEQ ID NO:
(G 2S) 1scFv連接體 GGS 27
(G 2S) 2scFv連接體 GGSGGS 28
(G 2S) 3scFv連接體 GGSGGSGGS 29
(G 2S) 4scFv連接體 GGSGGSGGSGGS 30
(G 2S) 5scFv連接體 GGSGGSGGSGGSGGS 31
(G 3S) 1scFv連接體 GGGS 32
(G 3S) 2scFv連接體 GGGSGGGS 33
(G 3S) 3scFv連接體 GGGSGGGSGGGS 34
(G 3S) 4scFv連接體 GGGSGGGSGGGSGGGS 35
(G 3S) 5scFv連接體 GGGSGGGSGGGSGGGSGGGS 36
(G 4S) 1連接體 GGGGS 37
(G 4S) 2連接體 GGGGSGGGGS 38
(G 4S) 3連接體 GGGGSGGGGSGGGGS 39
(G 4S) 4連接體 GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS 40
(G 4S) 5連接體 GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS 41
Whitlow連接體 GSTSGSGKPGSGEGSTKG 42
scFv連接體2 EAAAKEAAAKEAAAKEAAAK 43
(GGSGS) 3scFv連接體 GGSGSGGSGSGGSGS 77
在某些實施例中，該肽連接體係由包含GGCGGAGGCGGATCAGGTGGCGGAGGAAGTGGCGGCGGAGGATCT (SEQ ID NO: 44)之序列的核酸編碼。
在某些實施例中，該scFv包含結構VH-L-VL或VL-L-VH，其中VH為該重鏈可變域，L為該肽連接體，且VL為該輕鏈可變域。
在一些實施例中，該一或多個scFv各自包含結構VH-L-VL或VL-L-VH，其中VH為該重鏈可變域，L為該肽連接體，且VL為該輕鏈可變域。當有兩個或更多個scFv連接在一起時，各scFv可利用肽連接體連接至下一個scFv。在一些實施例中，該一或多個scFv各自由肽連接體隔開。在一些實施例中，隔開各scFv之肽連接體包含如 表 4中所示之胺基酸序列。
在一些實施例中，該肽連接體包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列。在一些實施例中，該肽連接體包含SEQ ID NO: 28之胺基酸序列。在一些實施例中，該肽連接體包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列。在一些實施例中，該肽連接體包含SEQ ID NO: 30之胺基酸序列。在一些實施例中，該肽連接體包含SEQ ID NO: 31之胺基酸序列。在一些實施例中，該肽連接體包含SEQ ID NO: 32之胺基酸序列。在一些實施例中，該肽連接體包含SEQ ID NO: 33之胺基酸序列。在一些實施例中，該肽連接體包含SEQ ID NO: 34之胺基酸序列。在一些實施例中，該肽連接體包含SEQ ID NO: 35之胺基酸序列。在一些實施例中，該肽連接體包含SEQ ID NO: 36之胺基酸序列。在一些實施例中，該肽連接體包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列。在一些實施例中，該肽連接體包含SEQ ID NO: 38之胺基酸序列。在一些實施例中，該肽連接體包含SEQ ID NO: 39之胺基酸序列。在一些實施例中，該肽連接體包含SEQ ID NO: 40之胺基酸序列。在一些實施例中，該肽連接體包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列。在一些實施例中，該肽連接體包含SEQ ID NO: 42之胺基酸序列。在一些實施例中，該肽連接體包含SEQ ID NO:43之胺基酸序列。
在一些實施例中，該細胞包含第一嵌合受體及第二嵌合受體。該第一嵌合受體之抗原結合域及該第二嵌合受體之抗原結合域可為本文中所描述或此項技術中已知的適當抗原結合域。舉例而言，該第一或第二抗原結合域可為一或多個抗體、抗體之抗原結合片段、F(ab)片段、F(ab')片段、單鏈可變片段(scFv)或單結構域抗體(sdAb)。在一些實施例中，該第一嵌合受體及/或該第二嵌合受體之抗原結合域包含兩個單鏈可變片段(scFv)。在一些實施例中，該兩個scFv各自結合至相同抗原上之相異抗原決定基。
在一些實施例中，該細胞外抗原結合域包含單結構域抗體(sdAb)。在某些實施例中，該sdAb為人類化sdAb。在某些實施例中，該sdAb為嵌合sdAb。
在一些實施例中，本發明之CAR可包含兩個或更多個抗原結合域、三個或更多個抗原結合域、四個或更多個抗原結合域、五個或更多個抗原結合域、六個或更多個抗原結合域、七個或更多個抗原結合域、八個或更多個抗原結合域、九個或更多個抗原結合域、或者十個或更多個抗原結合域。在一些實施例中，該兩個或更多個抗原結合域各自結合相同抗原。在一些實施例中，該兩個或更多個抗原結合域各自結合相同抗原之不同抗原決定基。在一些實施例中，該兩個或更多個抗原結合域各自結合不同的抗原。在一些實施例中，該兩個或更多個抗原結合域提供具有諸如OR邏輯閘控之邏輯閘控的CAR。
在一些實施例中，該CAR包含兩個抗原結合域。在一些實施例中，該兩個抗原結合域經由可撓性連接體彼此連接。在一些實施例中，該兩個抗原結合域各自可獨立地選自抗體、抗體之抗原結合片段、scFv、sdAb、重組纖維連接蛋白結構域、T細胞受體(TCR)、具有增高親和力之重組TCR及單鏈TCR。在一些實施例中，該包含兩個抗原結合域之CAR為雙特異性CAR或串聯CAR (tanCAR)。
在某些實施例中，該雙特異性CAR或tanCAR含有包含雙特異性抗體或抗體片段(例如scFv)之抗原結合域。在一些實施例中，在雙特異性抗體分子之各抗體或抗體片段(例如scFv)內，VH可在VL上游或下游。在一些實施例中，該上游抗體或抗體片段(例如scFv)係安排為其VH (VH 1)在其VL (VL 1)上游，且該下游抗體或抗體片段(例如scFv)係安排為其VL (VL 2)在其VH (VH 2)上游，使得該總體雙特異性抗體分子具有安排VH 1-VL 1-VL 2-VH 2。在其他實施例中，該上游抗體或抗體片段(例如scFv)係安排為其VL (VL 1)在其VH (VH 1)上游，且該下游抗體或抗體片段(例如scFv)係安排為其VH (VH 2)在其VL (VL 2)上游，使得該總體雙特異性抗體分子具有安排VL 1-VH 1-VH 2-VL 2。在一些實施例中，連接體佈置在兩個抗體或抗體片段(例如scFv)之間，例如若構築體安排為VH 1-VL 1-VL 2-VH 2時則在VL 1與VL 2之間，或若構築體安排為VL 1-VH 1-VH 2-VL 2則在VH 1與VH 2之間。該連接體可為如本文中所描述之連接體，例如(Gly 4-Ser)n連接體(SEQ ID NO: 138)，其中n為1、2、3、4、5或6。一般而言，在兩個scFv之間的連接體之長度應足以避免該兩個scFv之結構域之間的錯配。在一些實施例中，連接體佈置在第一scFv之VL與VH之間。在一些實施例中，連接體佈置在第二scFv之VL與VH之間。在具有多個連接體之構築體中，該等連接體中之任何兩個或更多個可相同或不同。因此，在一些實施例中，雙特異性CAR或tanCAR包含VL、VH，且可進一步包含呈如本文中所描述之安排的一或多個連接體。
在一些實施例中，該二價受體包含CEA CAR及CEACAM1 CAR。在一些實施例中，該二價受體包含CEA CAR及CEACAM5 CAR。在一些實施例中，該二價受體包含CEA CAR及CEACAM6 CAR。在一些實施例中，該二價受體包含CEACAM1 CAR及CEACAM5 CAR。在一些實施例中，該二價受體包含CEACAM1 CAR及CEACAM6 CAR。在一些實施例中，該二價受體包含CEACAM5 CAR及CEACAM6 CAR。
在一些實施例中，該二價受體包含CEA CAR及VSIG2 CAR。在一些實施例中，該二價受體包含CEA CAR及CPM CAR。在一些實施例中，該二價受體包含CEA CAR及ITM2C CAR。在一些實施例中，該二價受體包含CEA CAR及SLC26A2 CAR。在一些實施例中，該二價受體包含CEA CAR及SLC4A4 CAR。在一些實施例中，該二價受體包含CEA CAR及GPA33 CAR。在一些實施例中，該二價受體包含CEA CAR及PLA2G2A CAR。在一些實施例中，該二價受體包含CEA CAR及ABCA8 CAR。在一些實施例中，該二價受體包含CEA CAR及ATP1A2 CAR。在一些實施例中，該二價受體包含CEA CAR及CHP2 CAR。在一些實施例中，該二價受體包含CEA CAR及SLC26A3 CAR。
在一些實施例中，該二價受體包含CEACAM1 CAR及VSIG2 CAR。在一些實施例中，該二價受體包含CEACAM1 CAR及CPM CAR。在一些實施例中，該二價受體包含CEACAM1 CAR及ITM2C CAR。在一些實施例中，該二價受體包含CEACAM1 CAR及SLC26A2 CAR。在一些實施例中，該二價受體包含CEACAM1 CAR及SLC4A4 CAR。在一些實施例中，該二價受體包含CEACAM1 CAR及GPA33 CAR。在一些實施例中，該二價受體包含CEACAM1 CAR及PLA2G2A CAR。在一些實施例中，該二價受體包含CEACAM1 CAR及ABCA8 CAR。在一些實施例中，該二價受體包含CEACAM1 CAR及ATP1A2 CAR。在一些實施例中，該二價受體包含CEACAM1 CAR及CHP2 CAR。在一些實施例中，該二價受體包含CEACAM1 CAR及SLC26A3 CAR。
在一些實施例中，該二價受體包含CEACAM5 CAR及VSIG2 CAR。在一些實施例中，該二價受體包含CEACAM5 CAR及CPM CAR。在一些實施例中，該二價受體包含CEACAM5 CAR及ITM2C CAR。在一些實施例中，該二價嵌合抗原受體包含CEACAM5 CAR及SLC26A2 CAR。在一些實施例中，該二價受體包含CEACAM5 CAR及SLC4A4 CAR。在一些實施例中，該二價受體包含CEACAM5 CAR及GPA33 CAR。在一些實施例中，該二價受體包含CEACAM5 CAR及PLA2G2A CAR。在一些實施例中，該二價受體包含CEACAM5 CAR及ABCA8 CAR。在一些實施例中，該二價受體包含CEACAM5 CAR及ATP1A2 CAR。在一些實施例中，該二價受體包含CEACAM5 CAR及CHP2 CAR。在一些實施例中，該二價受體包含CEACAM5 CAR及SLC26A3 CAR。
在一些實施例中，該二價受體包含CEACAM6 CAR及VSIG2 CAR。在一些實施例中，該二價受體包含CEACAM6 CAR及CPM CAR。在一些實施例中，該二價受體包含CEACAM6 CAR及ITM2C CAR。在一些實施例中，該二價受體包含CEACAM6 CAR及SLC26A2 CAR。在一些實施例中，該二價受體包含CEACAM6 CAR及SLC4A4 CAR。在一些實施例中，該二價受體包含CEACAM6 CAR及GPA33 CAR。在一些實施例中，該二價受體包含CEACAM6 CAR及PLA2G2A CAR。在一些實施例中，該二價受體包含CEACAM6 CAR及ABCA8 CAR。在一些實施例中，該二價受體包含CEACAM6 CAR及ATP1A2 CAR。在一些實施例中，該二價受體包含CEACAM6 CAR及CHP2 CAR。在一些實施例中，該二價受體包含CEACAM6 CAR及CHP2 CAR。在一些實施例中，該二價受體包含CEACAM6 CAR及SLC26A3 CAR。
在一些實施例中，該二價嵌合受體包含具有靶向表1中所提供之任何抗原之抗原結合域的CAR。在一些實施例中，該二價嵌合受體包含具有來源於如 表 2中所提供之抗體之抗原結合域的CAR。在一些實施例中，該二價嵌合受體包含具有包括如 表 2中所提供之scFv之抗原結合域的CAR。在一些實施例中，該二價嵌合受體包含具有靶向 表 5中所提供之任何抗原配對之兩個或更多個抗原結合域的CAR。在一些實施例中，該二價嵌合抗原受體包含具有兩個或更多個如本文中所描述之抗原結合域之任何組合的CAR。
在一些實施例中，嵌合受體包含雙順反子嵌合抗原受體系統，例如包含活化CAR及抑制性CAR之嵌合抗原受體系統。在一些實施例中，該雙順反子嵌合抗原受體系統包含具有靶向 表 1中所提供之任何抗原之抗原結合域的CAR及例如具有靶向 表 8中所提供之任何抗原之抗原結合域的抑制CAR。在一些實施例中，該雙順反子嵌合抗原受體系統包含具有來源於 表 2中所提供之抗體之抗原結合域的CAR及例如具有靶向 表 7中所提供之任何抗原之抗原結合域的抑制CAR。在一些實施例中，該雙順反子嵌合抗原受體系統包含具有兩個或更多個靶向表5中所提供之任何抗原配對之抗原結合域的CAR，其中至少一個抗原結合域為活化CAR，且至少一個抗原結合域為抑制CAR。在一些實施例中，該雙順反子嵌合抗原受體系統包含具有兩個或更多個如本文中所描述之抗原結合域的CAR，其中至少一個抗原結合域為活化CAR，且至少一個抗原結合域為抑制CAR。 跨膜結構域
在一些實施例中，本發明之CAR之跨膜結構域包含跨越細胞膜之至少一部分的疏水性α螺旋。已證明不同的跨膜結構域可產生不同的受體穩定性。在抗原識別之後，受體發生叢聚且信號傳輸至細胞。在一些實施例中，本發明之CAR之跨膜結構域可包含CD8多肽、CD28多肽、CD25多肽、CD7多肽、CD3-ζ多肽、CD4多肽、4-1BB多肽、OX40多肽、ICOS多肽、CTLA-4多肽、LAX多肽、LAT多肽、PD-1多肽、LAG-3多肽、TIM3多肽、KIR3DS1多肽、KIR3DL1多肽、NKG2D多肽、NKG2A多肽、TIGIT多肽、2B4多肽、BTLA多肽、LIR-1 (LILRB1)多肽之跨膜結構域，或可為合成肽，或其任何組合。
在一些實施例中，該跨膜結構域來源於CD8多肽。可使用任何適合之CD8多肽。例示性CD8多肽包括但不限於NCBI參考號NP_001139345及AAA92533.1。在一些實施例中，該跨膜結構域來源於CD28多肽。可使用任何適合之CD28多肽。例示性CD28多肽包括但不限於NCBI參考號NP_006130.1及NP_031668.3。在一些實施例中，該跨膜結構域來源於CD3-ζ多肽。可使用任何適合之CD3-ζ多肽。例示性CD3-ζ多肽包括但不限於NCBI參考號NP_932170.1及NP_001106862.1。在一些實施例中，該跨膜結構域來源於CD4多肽。可使用任何適合之CD4多肽。例示性CD4多肽包括但不限於NCBI參考號NP_000607.1及NP_038516.1。在一些實施例中，該跨膜結構域來源於4-1BB多肽。可使用任何適合之4-1BB多肽。例示性4-1BB多肽包括但不限於NCBI參考號NP_001552.2及NP_001070977.1。在一些實施例中，該跨膜結構域來源於OX40多肽。可使用任何適合之OX40多肽。例示性OX40多肽包括但不限於NCBI參考號NP_003318.1及NP_035789.1。在一些實施例中，該跨膜結構域來源於ICOS多肽。可使用任何適合之ICOS多肽。例示性ICOS多肽包括但不限於NCBI參考號NP_036224及NP_059508。在一些實施例中，該跨膜結構域來源於CTLA-4多肽。可使用任何適合之CTLA-4多肽。例示性CTLA-4多肽包括但不限於NCBI參考號NP_005205.2及NP_033973.2。在一些實施例中，該跨膜結構域來源於PD-1多肽。可使用任何適合之PD-1多肽。例示性PD-1多肽包括但不限於NCBI參考號NP_005009及NP_032824。在一些實施例中，該跨膜結構域來源於LAG-3多肽。可使用任何適合之LAG-3多肽。例示性LAG-3多肽包括但不限於NCBI參考號NP_002277.4及NP_032505.1。在一些實施例中，該跨膜結構域來源於2B4多肽。可使用任何適合之2B4多肽。例示性2B4多肽包括但不限於NCBI參考號NP_057466.1及NP_061199.2。在一些實施例中，該跨膜結構域來源於BTLA多肽。可使用任何適合之BTLA多肽。例示性BTLA多肽包括但不限於NCBI參考號NP_861445.4及NP_001032808.2。可使用任何適合之LIR-1 (LILRB1)多肽。例示性LIR-1 (LILRB1)多肽包括但不限於NCBI參考號NP_001075106.2及NP_001075107.2。
在一些實施例中，該跨膜結構域含有包含與NCBI參考號NP_001139345、AAA92533.1、NP_006130.1、NP_031668.3、NP_932170.1、NP_001106862.1、NP_000607.1、NP_038516.1、NP_001552.2、NP_001070977.1、NP_003318.1、NP_035789.1、NP_036224、NP_059508、NP_005205.2、NP_033973.2、NP_005009、NP_032824、NP_002277.4、NP_032505.1、NP_057466.1、NP_061199.2、NP_861445.4或NP_001032808.2之序列或其片段至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%同源之胺基酸序列的多肽。在一些實施例中，可使用諸如BLAST或FASTA之標準軟體來確定同源性。在一些實施例中，該多肽可包含一個保守胺基酸取代、至多兩個保守胺基酸取代或至多三個保守胺基酸取代。在一些實施例中，該多肽可具有作為NCBI參考號NP_001139345、AAA92533.1、NP_006130.1、NP_031668.3、NP_932170.1、NP_001106862.1、NP_000607.1、NP_038516.1、NP_001552.2、NP_001070977.1、NP_003318.1、NP_035789.1、NP_036224、NP_059508、NP_005205.2、NP_033973.2、NP_005009、NP_032824、NP_002277.4、NP_032505.1、NP_057466.1、NP_061199.2、NP_861445.4或NP_001032808.2中至少20、至少30、至少40、至少50、至少60、至少70、至少80、至少90、至少100、至少110、至少120、至少130、至少140、至少150、至少160、至少170、至少180、至少190、至少200、至少210、至少220、至少230或至少240個胺基酸長度之連續部分的胺基酸序列。
跨膜結構域可來源之適合多肽之其他實例包括但不限於T細胞受體CD27、CD3ε、CD45、CD5、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137、CD154、KIRDS2、CD2、CD27、LFA-1 (CD11a、CD18)、GITR、CD40、BAFFR、HVEM (LIGHTR)、SLAMF7、NKp80 (KLRF1)、NKp44、NKp30、NKp46、CD160、CD19、IL2Rβ、IL2Rγ、IL7Rα、ITGA1、VLA1、CD49a、ITGA4、IA4、CD49D、ITGA6、VLA-6、CD49f、ITGAD、CD11d、ITGAE、CD103、ITGAL、CD11a、LFA-1、ITGAM、CD11b、ITGAX、CD11c、ITGB1、CD29、ITGB2、CD18、LFA-1、ITGB7、TNFR2、DNAM1 (CD226)、SLAMF4 (CD244、2B4)、CD84、CD96 (Tactile)、CEACAM1、CRTAM、Ly9 (CD229)、CD160 (BY55)、PSGL1、CD100 (SEMA4D)、SLAMF6 (NTB-A、Ly108)、SLAM (SLAMF1、CD150、IPO-3)、BLAME (SLAMF8)、SELPLG (CD162)、LTBR、PAG/Cbp、NKG2D及NG2C之α、β或ζ鏈之跨膜區。在一些實施例中，跨膜結構域可包含 表 5中所列出之胺基酸序列中之任一個，或者與 表 5中所列出之胺基酸序列中之任一個至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之胺基酸序列。
表 5
胺基酸序列 SEQ ID NO: 描述
IYIWAPLAGTCGVLLLSLVIT 45 CD8跨膜結構域
FWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV 46 CD28跨膜結構域
VAAILGLGLVLGLLGPLAILL 47 OX40跨膜結構域
FLVIIVILSALFLGTLACFCV 48 2B4跨膜結構域
間隔區
在一些實施例中，本發明之CAR亦可包含連接該細胞外抗原結合域與該跨膜結構域之間隔區。該間隔區之可撓性可足以允許該抗原結合域定向在不同的方向上以促進抗原識別。在一些實施例中，該間隔區可為來自人類蛋白質之鉸鏈。舉例而言，間隔子(本文中亦稱為「鉸鏈」)可能為人類Ig (免疫球蛋白)鉸鏈，包括但不限於IgG4鉸鏈、IgG2鉸鏈、CD8a鉸鏈或IgD鉸鏈。在一些實施例中，該間隔區可包含IgG4鉸鏈、IgG2鉸鏈、IgD鉸鏈、CD28鉸鏈、KIR2DS2鉸鏈、LNGFR鉸鏈或PDGFR-β細胞外連接體。在一些實施例中，該間隔區局部化在該抗原結合域與該跨膜結構域之間。在一些實施例中，間隔區可包含 表 6中所列出之胺基酸序列中之任一個，或者與 表 6中所列出之胺基酸序列中之任一個至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之胺基酸序列。在一些實施例中，編碼本發明之間隔區中之任一者的核酸可包含 表 7中所列出之核酸序列中之任一個，或者與 表 7中所列出之核酸序列中之任一個至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之核酸序列。
表 6
胺基酸序列 SEQ ID NO: 描述
AAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKP 49 CD28鉸鏈
TTTPAPRPPTPAPTIALQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACD 50 CD8鉸鏈
ESKYGPPCPSCP 51 IgG4最小鉸鏈
ESKYGPPAPSAP 52 IgG4最小鉸鏈，無二硫橋
ESKYGPPCPPCP 53 IgG4 S228P最小鉸鏈，增強之二硫橋形成
EPKSCDKTHTCP 54 IgG1最小鉸鏈
AAAFVPVFLPAKPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRN 55 延伸之CD8a鉸鏈
ACPTGLYTHSGECCKACNLGEGVAQPCGANQTVCEPCLDSVTFSDVVSATEPCKPCTECVGLQSMSAPCVEADDAVCRCAYGYYQDETTGRCEACRVCEAGSGLVFSCQDKQNTVCEECPDGTYSDEADAEC 56 LNGFR鉸鏈
ACPTGLYTHSGECCKACNLGEGVAQPCGANQTVC 57 截短之LNGFR鉸鏈 (TNFR-Cys1)
AVGQDTQEVIVVPHSLPFKV 58 PDGFR-β細胞外連接體
表 7
核酸序列 SEQ ID NO: 描述
GCAGCAGCTATCGAGGTGATGTATCCTCCGCCCTACCTGGATAATGAAAAGAGTAATGGGACTATCATTCATGTAAAAGGGAAGCATCTTTGTCCTTCTCCCCTTTTCCCCGGTCCGTCTAAACCT 59 CD28鉸鏈
ACCACAACACCAGCTCCTAGACCTCCAACTCCTGCTCCTACAATCGCCCTGCAGCCACTGTCTCTGAGGCCTGAAGCTTGTAGACCTGCTGCTGGCGGAGCCGTGCATACCAGAGGACTGGATTTCGCCTGCGAC    60 CD8鉸鏈
GAAAGCAAGTACGGTCCACCTTGCCCTAGCTGTCCG 61 IgG4最小鉸鏈
GAATCCAAGTACGGCCCCCCAGCGCCTAGTGCCCCA 62 IgG4最小鉸鏈，無二硫橋
GAATCTAAATATGGCCCGCCATGCCCGCCTTGCCCA 63 IgG4 S228P最小鉸鏈，增強之二硫橋形成
GAACCGAAGTCTTGTGATAAAACTCATACGTGCCCG 64 IgG1最小鉸鏈
GCTGCTGCTTTCGTACCCGTGTTCCTCCCTGCTAAGCCTACGACTACCCCCGCACCGAGACCACCCACGCCAGCACCCACGATTGCTAGCCAGCCCCTTAGTTTGCGACCAGAAGCTTGTCGGCCTGCTGCTGGTGGCGCGGTACATACCCGCGGCCTTGATTTTGCTTGCGATATATATATCTGGGCGCCTCTGGCCGGAACATGCGGGGTCCTCCTCCTTTCTCTGGTTATTACTCTCTACTGTAATCACAGGAAT 65 延伸之CD8a鉸鏈
GCCTGCCCGACCGGGCTCTACACTCATAGCGGGGAATGTTGTAAGGCATGTAACTTGGGTGAGGGCGTCGCACAGCCCTGCGGAGCTAACCAAACAGTGTGCGAACCCTGCCTCGATAGTGTGACGTTCTCTGATGTTGTATCAGCTACAGAGCCTTGCAAACCATGTACTGAGTGCGTTGGACTTCAGTCAATGAGCGCTCCATGTGTGGAGGCAGATGATGCGGTCTGTCGATGTGCTTACGGATACTACCAAGACGAGACAACAGGGCGGTGCGAGGCCTGTAGAGTTTGTGAGGCGGGCTCCGGGCTGGTGTTTTCATGTCAAGACAAGCAAAATACGGTCTGTGAAGAGTGCCCTGATGGCACCTACTCAGACGAAGCAGATGCAGAATGC 66 LNGFR鉸鏈
GCCTGCCCTACAGGACTCTACACGCATAGCGGTGAGTGTTGTAAAGCATGCAACCTCGGGGAAGGTGTAGCCCAGCCATGCGGGGCTAACCAAACCGTTTGC 67 截短之LNGFR鉸鏈 (TNFR-Cys1)
GCTGTGGGCCAGGACACGCAGGAGGTCATCGTGGTGCCACACTCCTTGCCCTTTAAGGTG 68 PDGFR-β細胞外連接體
在一些實施例中，該間隔區包含SEQ ID NO: 49中所示之序列。在一些實施例中，該間隔區包含SEQ ID NO: 50中所示之序列。在一些實施例中，該間隔區包含SEQ ID NO: 51中所示之序列。在一些實施例中，該間隔區包含SEQ ID NO: 52中所示之序列。在一些實施例中，該間隔區包含SEQ ID NO: 53中所示之序列。在一些實施例中，該間隔區包含SEQ ID NO: 54中所示之序列。在一些實施例中，該間隔區包含SEQ ID NO: 55中所示之序列。在一些實施例中，該間隔區包含SEQ ID NO: 56中所示之序列。在一些實施例中，該間隔區包含SEQ ID NO: 57中所示之序列。在一些實施例中，該間隔區包含SEQ ID NO: 58中所示之序列。
在一些實施例中，本發明之CAR可進一步包括短寡肽或多肽連接體，其長度在2個胺基酸殘基與10個胺基酸殘基之間，且可在該CAR之跨膜結構域與胞質區之間形成鍵聯。適合連接體之非限制性實例為甘胺酸-絲胺酸二連體。在一些實施例中，該連接體包含GGCKJSGGCKJS (SEQ ID NO: 69)之胺基酸序列。 細胞內信號傳導域
在一些實施例中，本發明之CAR包含一或多個胞質域或區。該CAR之胞質域或區可包括細胞內信號傳導域。細胞內信號傳導域典型地負責活化經工程化以表現本發明之CAR的免疫細胞(例如T細胞或NK細胞)的一或多種效應功能。舉例而言，T細胞之效應功能可為細胞溶解活性或輔助活性，諸如細胞介素分泌。因此，在一些實施例中，術語「細胞內信號傳導域」係指轉導效應功能信號並指導細胞執行特化功能之蛋白質部分。儘管可採用整個細胞內信號傳導域，但在許多情況下不必使用整個鏈。在使用細胞內信號傳導域之截短部分的實施例中，可使用此種截短部分替代相應完整鏈，只要該截短部分轉導效應功能信號即可。
可用於本發明之CAR中之適合細胞內信號傳導域之實例包括但不限於T細胞受體(TCR)及協同作用以在抗原受體接合後引發信號轉導之輔助受體的胞質序列，以及此等序列之任何衍生物或變異體及具有該相同功能能力之任何重組序列。
不希望受理論束縛，據信由TCR產生之信號單獨不足以完全活化T細胞，且因而完全活化亦需要二級及/或共刺激信號。因此，T細胞活化可由兩個相異類別的胞質信號傳導序列，亦即，經由TCR引發抗原依賴性一級活化之彼等胞質信號傳導序列(一級細胞內信號傳導域)以及以非抗原依賴性方式起作用以提供二級或共刺激信號之彼等胞質信號傳導序列(二級胞質域，例如共刺激域)來介導。
在一些實施例中，一級信號傳導域以刺激方式抑或以抑制方式調控TCR複合物之一級活化。以刺激方式起作用之一級細胞內信號傳導域可含有稱為基於免疫受體酪胺酸之活化基元(ITAM)的信號傳導基元。可用於本發明之CAR中的適合含ITAM之一級細胞內信號傳導域之實例包括但不限於CD3-ζ、FcRγ、FcRβ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD5、CD22、CD79a、CD79b、CD278 (亦稱為「ICOS」)、FcεRI、DAP10、DAP12及CD66d之彼等。
在一些實施例中，本發明之CAR包含細胞內信號傳導域，例如CD3-ζ多肽之一級信號傳導域。本發明之CD3-ζ多肽可具有與NCBI參考號NP_932170或NP_001106864.2之序列或其片段至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%同源的胺基酸序列。在一些實施例中，該CD3-ζ多肽可包含一個保守胺基酸取代、至多兩個保守胺基酸取代或至多三個保守胺基酸取代。在一些實施例中，該多肽可具有作為NCBI參考號NP_932170或NP_001106864.2中至少20、至少30、至少40、至少50、至少60、至少70、至少80、至少90、至少100、至少110、至少120、至少130、至少140、至少150、或至少160、至少170、或至少180個胺基酸長度之連續部分的胺基酸序列。
在其他實施例中，一級信號傳導域包含經修飾之ITAM結構域，例如與天然ITAM結構域相比具有改變(例如增高或降低)之活性的突變ITAM結構域。在一個實施例中，一級信號傳導域包含含有經修飾之ITAM之一級細胞內信號傳導域，例如含有最佳化及/或截短ITAM之一級細胞內信號傳導域。在一個實施例中，一級信號傳導域包含一、二、三、四或更多個ITAM基元。
在一些實施例中，本發明之CAR之細胞內信號傳導域本身可包含CD3-ζ信號傳導域或其可與可用於本發明之CAR之情況下的任何其他所要細胞內信號傳導域組合。舉例而言，CAR之細胞內信號傳導域可包含CD3-ζ鏈部分及共刺激信號傳導域。該共刺激信號傳導域可能係指包含共刺激分子之細胞內結構域的CAR部分。本發明之共刺激分子為可能為淋巴球對抗原作出有效反應所需之除抗原受體或其配體以外之細胞表面分子。適合共刺激分子之實例包括但不限於CD97、CD2、ICOS、CD27、CD154、CD8、OX40、4-1BB、CD28、ZAP40、CD30、GITR、HVEM、DAP10、DAP12、MyD88、2B4、CD40、PD-1、淋巴球功能相關抗原1 (LFA-1)、CD7、LIGHT、NKG2C、B7-H3及特異性結合CD83之配體、I類MHC分子、TNF受體蛋白、免疫球蛋白樣蛋白、細胞介素受體、整合素、信號傳導淋巴球活化分子(SLAM蛋白)、活化NK細胞受體、BTLA、Toll配體受體、CDS、ICAM-1、(CD11a/CD18)、BAFFR、KIRD3S1、KIRDS2、SLAMF7、NKp80 (KLRF1)、NKp44、NKp30、NKp46、CD19、CD4、IL2Rβ、IL2Rγ、IL7Rα、ITGA4、VLAl、CD49a、ITGA4、IA4、CD49D、ITGA6、VLA-6、CD49f、ITGAD、CD11d、ITGAE、CD103、ITGAL、CD11a、ITGAM、CD11b、ITGAX、CD11c、ITGB1、CD29、ITGB2、CD18、ITGB7、NKG2D、TNFR2、TRANCE/RANKL、DNAM1 (CD226)、SLAMF4 (CD244、2B4)、CD84、CD96 (Tactile)、CEACAM1、CRTAM、Ly9 (CD229)、CD160 (BY55)、PSGL1、CD100 (SEMA4D)、CD69、SLAMF6 (NTB-A、Ly108)、SLAM (SLAMF1、CD150、IPO-3)、BLAME (SLAMF8)、SELPLG (CD162)、LTBR、LAT、GADS、SLP-76、PAG/Cbp、CD19a及其類似物。
細胞內信號傳導域(ICD)之非限制性實例提供於 表 8中。
表 8
胺基酸序列 SEQ ID NO: 描述
KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL 70 4-1BB ICD
RSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS 71 CD28 ICD
ALYLLRRDQRLPPDAHKPPGGGSFRTPIQEEQADAHSTLAKI 72 OX40 ICD
WRRKRKEKQSETSPKEFLTIYEDVKDLKTRRNHEQEQTFPGGGSTIYSMIQSQSSAPTSQEPAYTLYSLIQPSRKSGSRKRNHSPSFNSTIYEVIGKSQPKAQNPARLSRKELENFDVYS 73 2B4 ICD
RVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR 74 CD3z ICD
在一些實施例中，本發明之CAR之胞質部分內之細胞內信號傳導序列可按無規或規定順序彼此連接。在一些實施例中，例如長度在2個胺基酸與10個胺基酸之間(例如2個胺基酸、3個胺基酸、4個胺基酸、5個胺基酸、6個胺基酸、7個胺基酸、8個胺基酸、9個胺基酸或10個胺基酸)的短寡肽或多肽連接體可在細胞內信號傳導序列之間形成鍵聯。在一個實施例中，可使用甘胺酸-絲胺酸二連體作為適合之連接體。在一個實施例中，可使用單一胺基酸(例如丙胺酸或甘胺酸)作為適合之連接體。
在一些實施例中，該細胞內信號傳導域包含兩個或更多個共刺激信號傳導域，例如兩個共刺激信號傳導域、三個共刺激信號傳導域、四個共刺激信號傳導域、五個共刺激信號傳導域、六個共刺激信號傳導域、七個共刺激信號傳導域、八個共刺激信號傳導域、九個共刺激信號傳導域、10個共刺激信號傳導域或更多共刺激信號傳導域。在一個實施例中，該細胞內信號傳導域包含兩個共刺激信號傳導域。在一些實施例中，該兩個或更多個共刺激信號傳導域係由本發明之連接體隔開。在一個實施例中，該連接體為甘胺酸殘基。在另一實施例中，該連接體為丙胺酸殘基。
在一些實施例中，本發明之CAR進一步包括抗原決定基標籤。抗原決定基標籤為多肽內所包括之呈可例如藉由單株抗體加以偵測之標記物形式之多肽序列。抗原決定基標籤之實例包括FLAG標籤、strep標籤、HA標籤、V5標籤及myc標籤。例示性抗原決定基標籤為具有胺基酸序列EQKLISEEDL (SEQ ID NO: 75)之myc標籤。
在一些實施例中，本發明之細胞表現包括結合本發明之靶抗原之抗原結合域、本發明之跨膜結構域、一級信號傳導域及一或多個共刺激信號傳導域的CAR。 天然殺手 CAR (NK CAR)
在一些實施例中，本發明之CAR包含天然殺手(NK)細胞之一或多種組分，從而形成NK-CAR。NK組分可為來自任何適合天然殺手細胞受體之跨膜結構域、鉸鏈域或胞質域，包括但不限於殺手細胞免疫球蛋白樣受體(KIR)，諸如KIR2DL1、KIR2DL2/L3、KIR2DL4、KIR2DL5A、KIR2DL5B、KIR2DS1、KIR2DS2、KIR2DS3、KIR2DS4、DIR2DS5、KIR3DL1、KIR3DS1、KIR3DL2、KIR3DL3、KIR2DP1及KIRS DPI；天然細胞毒性受體(NCR)，諸如NKp30、NKp44、NKp46；免疫細胞受體之信號傳導淋巴球活化分子(SLAM)家族，諸如CD48、CD229、2B4、CD84、NTB-A、CRACC、BLAME及CD2F-10；Fc受體(FcR)，諸如CD16及CD64；以及Ly49受體，諸如LY49A及LY49C。在一些實施例中，NK-CAR可與接合分子或細胞內信號傳導域(諸如DAP12)相互作用。CAR之如以上所描述之結構組件亦適用於NK CAR之結構。
包含NK受體組分之CAR之例示性構型及序列描述於2014年9月18日公開之國際專利公開案WO2014/145252中。
CAR NK細胞療法相對於CAR T療法之一個優勢為顯著降低誘導移植物抗宿主病(GvHD)之風險。因此，由於對CAR NK細胞未觀測到或預期發生嚴重毒性，因此無需住院即可投與治療，從而顯著降低與由於治療後住院所致之基於CAR-T細胞之療法相關的巨大間接費用(Oberschmidt等人(2017), Front Immunol, 8:654)。 嵌合抑制受體
本發明之某些態樣係關於嵌合抑制受體。嵌合抑制受體可用作例如用於控制細胞活性(諸如免疫細胞活性)之NOT邏輯閘。在一些實施例中，本發明之嵌合抑制受體特異性結合至正常細胞上而非腫瘤細胞上所表現之一或多個抗原。
在一些實施例中，該嵌合抑制受體包含抗原結合域、本發明之跨膜結構域(例如，與本發明之嵌合受體聯合使用之任何適合之跨膜結構域)及細胞內結構域。在一些實施例中，該嵌合抑制受體可抑制細胞(諸如免疫反應細胞)之一或多種活性。
在一些實施例中，該嵌合抑制受體可包含酶抑制域。當該嵌合抑制受體位於細胞膜中之受體(諸如免疫受體)近端時，同源抗原結合至該抗原結合域將活化該酶抑制域以抑制該受體之活化。如本文中所使用，術語「酶抑制域」係指抑制細胞內信號轉導級聯，例如天然T細胞活化級聯之蛋白質結構域。因而，所揭示之嵌合抑制受體可經工程化以含有適當抗原結合域，從而將減少例如存在同源抗原時之免疫反應。本發明之嵌合抑制受體之用途包括但不限於減少免疫反應、控制T細胞活化及控制CAR-NK或CAR-T反應。
在一些實施例中，本發明之嵌合抑制受體之酶抑制結構域包含細胞外結構域、跨膜結構域及/或細胞內結構域之至少一部分。在一些實施例中，該酶抑制域包含酶之至少一部分。在一些實施例中，該酶係選自CSK、SHP-1、PTEN、CD45、CD148、PTP-MEG1、PTP-PEST、c-CBL、CBL-b、PTPN22、LAR、PTPH1、SHIP-1及RasGAP (參見例如Stanford等人, Regulation of TCR signaling by tyrosine phosphatases: from immune homeostasis to autoimmunity, Immunology, 2012年9月; 137(1): 1-19)。在一些實施例中，該酶部分包含酶結構域、酶片段或其突變體。在一些實施例中，該酶部分為酶催化域。在一些實施例中，選擇酶結構域、酶片段或其突變體以使效力最大化並且使基礎抑制最小化。
在一些實施例中，該酶抑制域包含一或多個調控基礎抑制之修飾。修飾之實例包括但不限於截短突變、胺基酸取代、引入供轉譯後修飾(其實例對熟習此項技術者為已知的)之位置及添加新官能基。在一些實施例中，選擇酶結構域、酶片段或其突變體以使效力最大化並且使基礎抑制最小化。在一些實施例中，該一或多個修飾減少基礎抑制。在其他實施例中，該一或多個修飾增加基礎抑制。
在一些實施例中，該酶抑制域在將本發明之嵌合抑制受體募集至免疫受體近端後抑制例如免疫受體活化。在一些實施例中，該免疫受體為天然存在之免疫受體。在一些實施例中，該免疫受體為天然存在之抗原受體。在一些實施例中，該免疫受體係選自T細胞受體、模式識別受體(PRR)、NOD樣受體(NLR)、Toll樣受體(TLR)、殺手活化受體(KAR)、殺手抑制受體(KIR)、補體受體、Fc受體、B細胞受體及細胞介素受體。在一些實施例中，該免疫受體為T細胞受體。在一些實施例中，該免疫受體為嵌合免疫受體。在一些實施例中，該嵌合免疫受體為嵌合TCR或CAR。
在一些實施例中，本發明之嵌合抑制受體亦可包含一或多個細胞內抑制輔助信號傳導域。在一些實施例中，該細胞內抑制輔助信號傳導域包含抑制域。在一些實施例中，該一或多個細胞內抑制輔助信號傳導域包含一或多種含ITIM之蛋白質或其片段。ITIM為在許多抑制免疫受體之胞質尾區中發現之保守胺基酸序列。在一些實施例中，該一或多種含ITIM之蛋白質或其片段係選自PD-1、CTLA4、TIGIT及LAIR1。在一些實施例中，該一或多個細胞內抑制輔助信號傳導域包含一或多種非ITIM支架蛋白質或其片段。在一些實施例中，該一或多種非ITIM支架蛋白質或其片段係選自GRB-2、Dok-1、Dok-2、SLAP、LAG3、HAVR、BTLA、GITR及PD-L1。適合細胞內抑制輔助信號傳導域之其他實例包括但不限於PD-L1、ΤIΜ3、LIR1、NKG2A、VISTA、CD160、2B4、CD80、CD86、B7-H3 (CD276)、B7-H4 (VTCN1)、HVEM (TNFRSF14或CD270)、KIR、KIR3DL1、A2aR、MHC I類、MHC II類、GAL9、腺苷酸及TGFβ。
在一些實施例中，該抑制嵌合受體結合表現於非腫瘤細胞上之抗原。用於嵌合抑制受體中之例示性抗原描述於 表 9中。
表9
抗原 UniProt 登錄號 名稱 簡短描述
VSIG2 Q96IQ7 含V-set及免疫球蛋白域蛋白2 含有免疫球蛋白域，在胃腸道腺細胞中高度表現
CPM P14384 羧肽酶M 自肽及蛋白質移除C端鹼性殘基(Arg或Lys)；據信在控制細胞表面肽激素及生長因子活性方面起作用
ITM2C Q9NQX7 內在膜蛋白2C 澱粉樣-β肽產生之負調控劑
SLC26A2 P50443 硫酸鹽轉運蛋白 可在軟骨內骨形成方面起作用之硫酸鹽轉運蛋白
SLC4A4 Q9Y6R1 產電碳酸氫鈉共轉運蛋白1 可調控細胞底側膜處之碳酸氫鹽流入/流出及調控細胞內pH之產電鈉/碳酸氫鹽共轉運蛋白
GPA33 Q99795 細胞表面A33抗原 可在細胞-細胞識別及信號傳導方面起作用
PLA2G2A P14555 膜相關磷脂酶A2 主要靶向細胞外磷脂之分泌鈣依賴性磷脂酶A2
ABCA8 O94911 ATP結合盒子族A成員8 ATP依賴性親脂性藥物轉運蛋白
ATP1A2 P50993 鈉/鉀轉運ATP酶次單元α2 活性酶之催化組分，其催化ATP水解外加鈉及鉀離子跨細胞膜交換
CHP2 O43745 鈣調磷酸酶B同源蛋白2 藉由控制質膜型Na+/H+交換活性來調控細胞pH之輔因子。
SLC26A3 P40879 氯陰離子交換劑 氯粒子/碳酸氫鹽交換劑
在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合VSIG2抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合CPM抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合ITM2C抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合SLC26A2抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合SLC4A4抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合GPA33抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合PLA2G2A抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合ABCA8抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合ATP1A2抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合CHP2抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合SLC26A3抗原。
在一些實施例中，該嵌合抑制受體為包含兩個或更多個抗原結合域，使得該嵌合抑制受體可結合兩個或更多個抗原之多特異性受體。替代地，可編輯細胞以表現兩個或更多個結合至不同抗原的嵌合抑制受體。嵌合抑制受體之例示性抗原配對見於 表 10中。在一些實施例中，該雙順反子嵌合受體系統包含具有兩個或更多個靶向 表 10中所提供之任何抗原配對的抗原結合域的CAR，其中該抗原配對包含CEA家族成員及抑制抗原。 免疫反應細胞
本發明之某些態樣係關於經遺傳工程化以包含一或多種本發明之嵌合受體或者一或多種編碼此嵌合受體之核酸的細胞，諸如免疫反應細胞，以及使用此種細胞治療實體腫瘤之方法。
在一些實施例中，免疫反應細胞經遺傳工程化以包含一或多個特異性結合CEA家族成員腫瘤抗原，諸如 表 1之CEA抗原中之任一者的CAR (或編碼其之核酸)。在一些實施例中，免疫反應細胞經遺傳工程化以包含一或多個包含 表 2中所提供之代表性抗CEA抗體之抗體序列或其抗原結合片段的CAR (或編碼其之核酸)。在一些實施例中，免疫反應細胞經遺傳工程化以包含一或多個包含來源於能夠結合至實體腫瘤抗原之抗體之scFv，諸如 表 3中所提供之代表性抗CEA scFv的CAR (或編碼其之核酸)。在一些實施例中，特異性結合CEA家族成員腫瘤抗原之CAR可被視為如本文中所描述之活化CAR (「aCAR」)。
在一些實施例中，該細胞為哺乳動物細胞。在一些實施例中，該哺乳動物細胞為初代細胞。在一些實施例中，該哺乳動物細胞為細胞株。在一些實施例中，該哺乳動物細胞為骨髓細胞、血細胞、皮膚細胞、骨細胞、肌細胞、肺細胞、胃腸道細胞、腦細胞、神經元細胞、脂肪細胞、肝臟細胞或心臟細胞。在一些實施例中，該細胞為幹細胞。例示性幹細胞包括但不限於胚胎幹細胞(ESC)、誘導多潛能幹細胞(iPSC)、成熟幹細胞及組織特異性幹細胞，諸如造血幹細胞(血液幹細胞)、間質幹細胞(MSC)、神經幹細胞、上皮幹細胞或皮膚乾細胞。在一些實施例中，該細胞為由本發明之幹細胞衍生或分化之細胞。在一些實施例中，該細胞為免疫細胞。本發明之免疫細胞可由本發明之幹細胞(例如由ESC或iPSC)分離或分化。例示性免疫細胞包括但不限於T細胞(例如輔助T細胞、細胞毒性T細胞、記憶T細胞、調控T細胞、自體殺手T細胞、αβT細胞及γδT細胞)、B細胞、天然殺手(NK)細胞、樹突細胞、骨髓細胞、巨噬細胞及單核細胞。在一些實施例中，該細胞為神經元細胞。本發明之神經元細胞可由本發明之幹細胞(例如由ESC或iPSC)分離或分化。例示性神經元細胞包括但不限於神經祖細胞、神經元(例如感覺神經元、運動神經元、膽鹼激導性神經元、GABA激導性神經元、麩胺酸激導性神經元、多巴胺激導性神經元或血清素激導性神經元)、星形細胞、寡樹突神經膠細胞及小膠質細胞。
在一些實施例中，該細胞為免疫反應細胞。本發明之免疫反應細胞可由本發明之幹細胞(例如由ESC或iPSC)分離或分化。本發明之例示性免疫反應細胞包括但不限於淋巴譜系細胞。淋巴譜系(包含B細胞、T細胞及天然殺手(NK)細胞)提供抗體產生、細胞免疫系統調控、血液中外來物質偵測、宿主外來細胞偵測及其類似功能。淋巴譜系之免疫反應細胞之實例包括但不限於T細胞、天然殺手(NK)細胞、胚胎幹細胞、多潛能幹細胞及誘導多潛能幹細胞(例如淋巴樣細胞所來源或分化之彼等幹細胞)。T細胞可為在胸腺中成熟且主要負責細胞介導之免疫性的淋巴球。T細胞涉及適應性免疫系統。在一些實施例中，本發明之T細胞可為任何類型之T細胞，包括但不限於T輔助細胞、細胞毒性T細胞、記憶T細胞(包括中樞記憶T細胞、幹細胞樣記憶T細胞(或幹樣記憶T細胞)及兩種效應記憶T細胞：例如T EM細胞及T EMRA細胞、調控T細胞(亦稱為抑制T細胞)、天然殺手T細胞、黏膜相關不變T細胞及γδT細胞。細胞毒性T細胞(CTL或殺手T細胞)為能夠誘導受感染體細胞或腫瘤細胞死亡之T淋巴球子集。患者自身之T細胞可經由引入一或多個嵌合受體，諸如嵌合TCR或CAR進行基因修飾以靶向特定抗原。
天然殺手(NK)細胞可為作為細胞介導免疫性之一部分且在固有免疫反應期間起作用的淋巴球。NK細胞不需要先前活化以對靶細胞執行其細胞毒性作用。
在一些實施例中，本發明之免疫反應細胞為T細胞。本發明之T細胞可為自體的、同種異體的或者活體外來源於工程化祖細胞或幹細胞。
在一些實施例中，本發明之免疫反應細胞為缺乏TCR-αβ之通用T細胞。在此項技術中，開發通用T細胞之方法描述於例如Valton等人, Molecular Therapy (2015); 23 9, 1507-1518，及Torikai等人, Blood 2012 119:5697-5705中。
在一些實施例中，本發明之免疫反應細胞為包含一或多個本發明之嵌合受體的分離免疫反應細胞。在一些實施例中，該免疫反應細胞包含一或多個、兩個或更多個、三個或更多個、四個或更多個、五個或更多個、六個或更多個、七個或更多個、八個或更多個、九個或更多個、或者十個或更多個本發明之嵌合受體。
在一些實施例中，免疫反應細胞為T細胞。在一些實施例中，免疫反應細胞為天然殺手(NK)細胞。 表現多個嵌合受體之細胞
在一些實施例中，本發明之細胞(例如免疫反應細胞)包含兩個或更多個本發明之嵌合受體。在一些實施例中，該細胞包含兩個或更多個嵌合受體，其中該兩個或更多個嵌合受體之一為嵌合抑制受體。在一些實施例中，該細胞包含三個或更多個嵌合受體，其中該三個或更多個嵌合受體之一為嵌合抑制受體。在一些實施例中，該細胞包含四個或更多個嵌合受體，其中該四個或更多個嵌合受體之一為嵌合抑制受體。在一些實施例中，該細胞包含五個或更多個嵌合受體，其中該五個或更多個嵌合受體之一為嵌合抑制受體。
在一些實施例中，該兩個或更多個嵌合受體各自包含不同的抗原結合域，例如，其結合至相同的抗原或不同的抗原。在一些實施例中，該兩個或更多個嵌合受體所結合之各抗原表現於相同細胞類型(例如相同實體腫瘤細胞類型)上。在一個實施例中，該細胞包含靶向第一抗原且包括具有共刺激信號傳導域而非一級信號傳導域之細胞內信號傳導域的第一嵌合受體，以及靶向第二不同抗原且包括具有一級信號傳導域而非共刺激信號傳導域之細胞內信號傳導域的第二嵌合受體。不希望受理論束縛，據信共刺激信號傳導域(例如4-1BB、CD28或OX-40)置放在第一嵌合受體上及一級信號傳導域(例如CD3-ζ鏈)置放在第二嵌合受體上可將嵌合受體活性限制於表現該兩個標靶之細胞。因此，在一些實施例中，本發明之細胞(例如免疫反應細胞)包括：(a) 第一嵌合受體，其包含結合第一抗原之抗原結合域、跨膜結構域及共刺激信號傳導域；以及(b) 第二嵌合受體，其包含結合第二抗原之抗原結合域、跨膜結構域及一級信號傳導域。在一些實施例中，本發明之細胞(例如免疫反應細胞)包括：(a) 第一嵌合受體，其包含結合第一抗原之抗原結合域、跨膜結構域及一級信號傳導域；以及(b) 第二嵌合受體，其包含結合第二抗原之抗原結合域、跨膜結構域及共刺激信號傳導域。在一些實施例中，本發明之細胞(例如免疫反應細胞)包括：(a) 第一嵌合受體，其包含結合第一抗原之抗原結合域、跨膜結構域、一級信號傳導域及共刺激域；以及(b) 第二嵌合受體，其包含結合第二抗原之抗原結合域、跨膜結構域、一級信號傳導域及共刺激域。在第一嵌合受體及第二嵌合受體二者各自包含共刺激信號傳導域之實施例中，第一嵌合受體之共刺激信號傳導域及第二嵌合受體之共刺激信號傳導域可來源於相同的蛋白質，諸如來自4-1BB、CD28或OX40。替代地，第一嵌合受體之共刺激信號傳導域可來源於與第二嵌合受體之共刺激信號傳導域不同的蛋白質。
在本發明之細胞(例如免疫反應細胞)表現兩個或更多個相異嵌合受體之實施例中，可設計該等不同的嵌合受體中之每一者的抗原結合域，使得該等抗原結合域不與彼此相互作用。舉例而言，表現第一嵌合受體及第二嵌合受體之本發明細胞(例如免疫反應細胞)可含有包含不與第二嵌合受體之抗原結合域形成締合的抗原結合域的第一嵌合受體。舉例而言，第一嵌合受體之抗原結合域可包含抗體片段，諸如scFv，而第二嵌合受體之抗原結合域可包含V HH。
不希望受理論束縛，據信在具有複數個各自包含抗原結合域之嵌合膜包埋受體的細胞中，各受體之抗原結合域之間的相互作用可能不合需要，此係因為此種相互作用可能抑制該等抗原結合域中之一或多個結合其同源抗原的能力。因此，在本發明之細胞(例如免疫反應細胞)表現兩個或更多個嵌合受體之實施例中，該等嵌合受體包含使此種抑制性相互作用最小化的抗原結合域。在一個實施例中，一個嵌合受體之抗原結合域包含scFv，而第二嵌合受體之抗原結合域包含單一VH結構域，例如駱駝、鯊魚或七鰓鰻單一VH結構域，或者來源於人類或小鼠序列之單一VH結構域。
在一些實施例中，當存在於細胞表面上時，第一嵌合受體之抗原結合域與其同源抗原之結合實質上不會因存在第二嵌合受體而降低。在一些實施例中，第一嵌合受體之抗原結合域與其同源抗原在存在第二嵌合受體時之結合為第一嵌合受體之抗原結合域與其同源抗原在不存在第二嵌合受體時之結合的85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%。在一些實施例中，當存在於細胞表面上時，第一嵌合受體及第二嵌合受體之抗原結合域彼此締合程度低於二者皆為scFv抗原結合域時。在一些實施例中，第一嵌合受體及第二嵌合受體之抗原結合域彼此締合程度比二者皆為scFv抗原結合域時低85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%。
在本發明之細胞(例如免疫反應細胞)包含兩個或更多個結合至不同抗原之本發明相異嵌合受體的實施例中，該兩個或更多個嵌合受體向細胞提供邏輯閘控，諸如OR邏輯閘控、AND邏輯閘控、NOT邏輯閘控或此種邏輯閘控之任何組合。因此，在某些實施例中，本發明之細胞(例如免疫反應細胞)包含兩個或更多個嵌合受體，且第一嵌合受體與第一抗原結合能夠活化該細胞。在一些實施例中，本發明之細胞(例如免疫反應細胞)包含兩個或更多個嵌合受體，且第二嵌合受體與第二抗原結合能夠刺激該細胞。在一些實施例中，本發明之細胞(例如免疫反應細胞)包含兩個或更多個嵌合受體，且第一嵌合受體與第一抗原結合及第二嵌合受體與第二抗原結合為活化該細胞所需的。在一些實施例中，本發明之細胞(例如免疫反應細胞)包含兩個或更多個嵌合受體，且第一嵌合受體與第一抗原結合及第二嵌合受體與第二抗原結合為刺激該細胞所需的。在一些實施例中，本發明之細胞(例如免疫反應細胞)包含兩個或更多個嵌合受體，且該細胞展現對針對該第一抗原及該第二抗原皆呈陽性之細胞的細胞溶解活性與對僅針對該第一抗原或僅針對該第二抗原呈陽性之細胞的細胞溶解活性相比程度更大。在一些實施例中，本發明之細胞(例如免疫反應細胞)包含兩個或更多個嵌合受體，且第一嵌合受體與第一抗原結合或第二嵌合受體與第二抗原結合能夠活化該免疫反應細胞。
在一些實施例中，本發明之細胞(例如免疫反應細胞)包含裂解嵌合受體系統，諸如裂解CAR系統。例示性裂解嵌合受體系統描述於WO2014/055442及WO2014/055657中。在一些實施例中，裂解嵌合受體系統包含表現具有第一抗原結合域及共刺激域(例如4-1BB)之第一嵌合受體及具有第二抗原結合域及細胞內信號傳導域(例如CD3-ζ)之第二嵌合受體的細胞。在此種實施例中，當該細胞遇到該第一抗原時，活化該共刺激域，且該細胞增殖。另外，當該細胞遇到該第二抗原時，活化該細胞內信號傳導域且誘導細胞殺死活性。因此，在一些實施例中，本發明之細胞(例如免疫反應細胞)僅在存在該兩個抗原時完全活化。
在一些實施例中，本發明之細胞(例如免疫反應細胞)展現對針對該第一抗原及該第二抗原二者皆呈陽性之細胞的細胞溶解活性與對單獨針對該第一抗原呈陽性之細胞的細胞溶解活性相比程度更大。在某些實施例中，該第一嵌合受體以低結合親和力或低結合親合力結合至第一抗原。在某些實施例中，該第一嵌合受體結合至該第一抗原之低可及性抗原決定基處。在某些實施例中，第一嵌合受體結合至第一抗原之結合親和力低於第二嵌合受體結合至第二抗原之結合親和力。在一些實施例中，第一嵌合受體結合至第一抗原之結合親和力與第二嵌合受體結合至第二抗原之結合親和力相比低至少5倍。在一些實施例中，第一嵌合受體結合至第一抗原之結合親和力與第二嵌合受體結合至第二抗原之結合親和力相比低至少10倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍、100倍、200倍、5000倍、1000倍、5000倍、或10000倍。
在一些實施例中，配對選擇應有利於腫瘤中之兩個靶抗原之冗餘表現，以便將抗原逃避風險降至最小。因此，在一些實施例中，本發明之細胞(例如免疫反應細胞)包含(i)結合至第一抗原之第一嵌合受體及(ii)結合至第二抗原之第二嵌合受體，其中該兩個嵌合受體結合至其靶抗原之組合產生治療作用。在諸多實施例中，僅結合至一個靶抗原不達成治療作用。
在一些實施例中，本發明之細胞(例如免疫反應細胞)包含一或多個結合CEA家族抗原之嵌合受體，且視情況該細胞亦包含抑制嵌合受體。在一些實施例中，該嵌合受體結合CEACAM1抗原。在一些實施例中，該嵌合受體結合CEACAM5抗原。在一些實施例中，該嵌合受體結合CEACAM6抗原。在一些實施例中，該嵌合受體結合至如 表 1中所描述之CEA家族抗原。在一些實施例中，結合至CEA家族抗原之嵌合受體包含來源於選自以下之抗體的抗原結合域：MRG1、拉貝珠單抗(亦即，hMN14)、賽必妥單抗、特賽妥單抗、BW431/26、A5B7、MFE23、hMFE23、FM4 (亦稱為「MG7」)、替奴瑞利單抗。在一些實施例中，結合至CEA家族抗原之嵌合受體之抗原結合域包括包含如 表 3中所提供之胺基酸序列之scFv。在一些實施例中，結合至CEA家族抗原之嵌合受體包含如 表 28中所示之胺基酸序列及/或係由如 表 28中所提供之多核苷酸序列編碼。在一些實施例中，該抑制嵌合受體結合VSIG2抗原。在一些實施例中，該抑制嵌合受體結合CPM抗原。在一些實施例中，該抑制嵌合受體結合ITM2C抗原。在一些實施例中，該抑制嵌合受體結合SLC26A2抗原。在一些實施例中，該抑制嵌合受體結合SLC4A4抗原。在一些實施例中，該抑制嵌合受體結合GPA33抗原。在一些實施例中，該抑制嵌合受體結合PLA2G2A抗原。在一些實施例中，該抑制嵌合受體結合ABCA8抗原。在一些實施例中，該抑制嵌合受體結合ATP1A2抗原。在一些實施例中，該抑制嵌合受體結合CHP2抗原。在一些實施例中，該抑制嵌合受體結合SLC26A3抗原。在一些實施例中，該嵌合受體為包含兩個或更多個抗原結合域，使得該嵌合受體可結合兩個或更多個抗原之多特異性受體。
在一些實施例中，免疫反應細胞可包含一或多個靶向腫瘤之嵌合受體及一或多個靶向不表現於腫瘤上之抗原的抑制嵌合受體。靶向腫瘤之嵌合受體及抑制嵌合受體組合在相同免疫反應細胞中可用於降低中靶脫腫瘤毒性。舉例而言，若健康細胞表現靶向腫瘤之嵌合受體識別之抗原及抑制嵌合受體識別之抗原二者，則表現該腫瘤抗原之免疫反應細胞可結合至健康細胞。在此種情況下，抑制嵌合抗原亦將結合處於健康細胞上之其同源配體，且抑制嵌合受體之抑制功能將減少、降低、預防或抑制免疫反應細胞經由靶向腫瘤之嵌合受體而活化。
在一些實施例中，該抑制嵌合受體結合VSIG2抗原。在一些實施例中，該抑制嵌合受體結合CPM抗原。在一些實施例中，該抑制嵌合受體結合ITM2C抗原。在一些實施例中，該抑制嵌合受體結合SLC26A2抗原。在一些實施例中，該抑制嵌合受體結合SLC4A4抗原。在一些實施例中，該抑制嵌合受體結合GPA33抗原。在一些實施例中，該抑制嵌合受體結合PLA2G2A抗原。在一些實施例中，該抑制嵌合受體結合ABCA8抗原。在一些實施例中，該抑制嵌合受體結合ATP1A2抗原。在一些實施例中，該抑制嵌合受體結合CHP2抗原。在一些實施例中，該抑制嵌合受體結合SLC26A3抗原。
替代地，細胞可表現兩個或更多個結合至不同抗原的嵌合受體。例示性抗原配對示於 表 10中。
表 10
抗原 1 抗原 2 抗原 1 抗原 2
CEACAM1 CEACAM5    CEACAM6 SLC4A4
CEACAM1 CEACAM6    CEACAM6 GPA33
CEACAM1 VSIG2    CEACAM6 PLA2G2A
CEACAM1 CPM    CEACAM6 ABCA8
CEACAM1 ITM2C    CEACAM6 ATP1A2
CEACAM1 SLC26A2    CEACAM5 SLC26A2
CEACAM1 SLC4A4    CEACAM5 SLC4A4
CEACAM1 GPA33    CEACAM5 GPA33
CEACAM1 PLA2G2A    CEACAM5 PLA2G2A
CEACAM1 CHP2    CEACAM5 ABCA8
CEACAM1 SLC26A3    CEACAM5 ATP1A2
CEACAM1 ABCA8    CEACAM5 CHP2
CEACAM1 ATP1A2    CEACAM5 SLC26A3
CEACAM5 CEACAM6    CEACAM6 VSIG2
CEACAM5 VSIG2    CEACAM6 CPM
CEACAM5 CPM    CEACAM6 ITM2C
CEACAM5 ITM2C    CEACAM6 SLC26A2
         CEACAM6 CHP2
         CEACAM6 SLC26A3
在一些實施例中，該免疫反應細胞包含雙順反子嵌合抗原受體系統構築體。在一些實施例中，該雙順反子嵌合抗原受體系統構築體包含CEA CAR及CEACAM1 CAR。在一些實施例中，該雙順反子嵌合抗原受體系統構築體包含CEA CAR及CEACAM5 CAR。在一些實施例中，該雙順反子嵌合抗原受體系統構築體包含CEA CAR及CEACAM6 CAR。在一些實施例中，該雙順反子嵌合抗原受體系統構築體包含CEACAM1 CAR及CEACAM5 CAR。在一些實施例中，該雙順反子嵌合抗原受體系統構築體包含CEACAM1 CAR及CEACAM6 CAR。在一些實施例中，該雙順反子嵌合抗原受體系統構築體包含CEACAM5 CAR及CEACAM6 CAR。
在一些實施例中，該雙順反子嵌合抗原受體系統構築體包含CEA CAR及VSIG2 CAR。在一些實施例中，該雙順反子嵌合抗原受體系統構築體包含CEA CAR及CPM CAR。在一些實施例中，該雙順反子嵌合抗原受體系統構築體包含CEA CAR及ITM2C CAR。在一些實施例中，該雙順反子嵌合抗原受體系統構築體包含CEA CAR及SLC26A2 CAR。在一些實施例中，該雙順反子嵌合抗原受體系統構築體包含CEA CAR及SLC4A4 CAR。在一些實施例中，該雙順反子嵌合抗原受體系統構築體包含CEA CAR及GPA33 CAR。在一些實施例中，該雙順反子嵌合抗原受體系統構築體包含CEA CAR及PLA2G2A CAR。在一些實施例中，該雙順反子嵌合抗原受體系統構築體包含CEA CAR及ABCA8 CAR。在一些實施例中，該雙順反子嵌合抗原受體系統構築體包含CEA CAR及ATP1A2 CAR。在一些實施例中，該雙順反子嵌合抗原受體系統構築體包含CEA CAR及CHP2 CAR。在一些實施例中，該雙順反子嵌合抗原受體系統構築體包含CEA CAR及SLC26A3 CAR。
在一些實施例中，該雙順反子嵌合抗原受體系統構築體包含CEACAM1 CAR及VSIG2 CAR。在一些實施例中，該雙順反子嵌合抗原受體系統構築體包含CEACAM1 CAR及CPM CAR。在一些實施例中，該雙順反子嵌合抗原受體系統構築體包含CEACAM1 CAR及ITM2C CAR。在一些實施例中，該雙順反子嵌合抗原受體系統構築體包含CEACAM1 CAR及SLC26A2 CAR。在一些實施例中，該雙順反子嵌合抗原受體系統構築體包含CEACAM1 CAR及SLC4A4 CAR。在一些實施例中，該雙順反子嵌合抗原受體系統構築體包含CEACAM1 CAR及GPA33 CAR。在一些實施例中，該雙順反子嵌合抗原受體系統構築體包含CEACAM1 CAR及PLA2G2A CAR。在一些實施例中，該雙順反子嵌合抗原受體系統構築體包含CEACAM1 CAR及ABCA8 CAR。在一些實施例中，該雙順反子嵌合抗原受體系統構築體包含CEACAM1 CAR及ATP1A2 CAR。在一些實施例中，該雙順反子嵌合抗原受體系統構築體包含CEACAM1 CAR及CHP2 CAR。在一些實施例中，該雙順反子嵌合抗原受體系統構築體包含CEACAM1 CAR及SLC26A3 CAR。
在一些實施例中，該雙順反子嵌合抗原受體系統構築體包含CEACAM5 CAR及VSIG2 CAR。在一些實施例中，該雙順反子嵌合抗原受體系統構築體包含CEACAM5 CAR及CPM CAR。在一些實施例中，該雙順反子嵌合抗原受體系統構築體包含CEACAM5 CAR及ITM2C CAR。在一些實施例中，該雙順反子嵌合抗原受體系統構築體包含CEACAM5 CAR及SLC26A2 CAR。在一些實施例中，該雙順反子嵌合抗原受體系統構築體包含CEACAM5 CAR及SLC4A4 CAR。在一些實施例中，該雙順反子嵌合抗原受體系統構築體包含CEACAM5 CAR及GPA33 CAR。在一些實施例中，該雙順反子嵌合抗原受體系統構築體包含CEACAM5 CAR及PLA2G2A CAR。在一些實施例中，該雙順反子嵌合抗原受體系統構築體包含CEACAM5 CAR及ABCA8 CAR。在一些實施例中，該雙順反子嵌合抗原受體系統構築體包含CEACAM5 CAR及ATP1A2 CAR。在一些實施例中，該雙順反子嵌合抗原受體系統構築體包含CEACAM5 CAR及CHP2 CAR。在一些實施例中，該雙順反子嵌合抗原受體系統構築體包含CEACAM5 CAR及SLC26A3 CAR。
在一些實施例中，該雙順反子嵌合抗原受體系統構築體包含CEACAM6 CAR及VSIG2 CAR。在一些實施例中，該雙順反子嵌合抗原受體系統構築體包含CEACAM6 CAR及CPM CAR。在一些實施例中，該雙順反子嵌合抗原受體系統構築體包含CEACAM6 CAR及ITM2C CAR。在一些實施例中，該雙順反子嵌合抗原受體系統構築體包含CEACAM6 CAR及SLC26A2 CAR。在一些實施例中，該雙順反子嵌合抗原受體系統構築體包含CEACAM6 CAR及SLC4A4 CAR。在一些實施例中，該雙順反子嵌合抗原受體系統構築體包含CEACAM6 CAR及GPA33 CAR。在一些實施例中，該雙順反子嵌合抗原受體系統構築體包含CEACAM6 CAR及PLA2G2A CAR。在一些實施例中，該雙順反子嵌合抗原受體系統構築體包含CEACAM6 CAR及ABCA8 CAR。在一些實施例中，該雙順反子嵌合抗原受體系統構築體包含CEACAM6 CAR及ATP1A2 CAR。在一些實施例中，該雙順反子嵌合抗原受體系統構築體包含CEACAM6 CAR及CHP2 CAR。在一些實施例中，該雙順反子嵌合抗原受體系統構築體包含CEACAM6 CAR及CHP2 CAR。在一些實施例中，該雙順反子嵌合抗原受體系統構築體包含CEACAM6 CAR及SLC26A3 CAR。
在一些實施例中，該雙順反子嵌合抗原受體系統構築體包含 表 10中所提供之任一對抗原。 表現嵌合抑制受體之細胞
在一些實施例中，本發明之細胞(例如免疫反應細胞)包含一或多個本發明之嵌合抑制受體。在一些實施例中，該一或多個嵌合抑制受體各自包含抗原結合域，該抗原結合域結合正常細胞上而非諸如實體腫瘤細胞之腫瘤細胞上表現的抗原。在一些實施例中，該一或多個嵌合抑制受體結合表現於非腫瘤細胞上之抗原，該表現於非腫瘤細胞上之抗原來源於選自由以下組成之群的組織：腦、神經元組織、內分泌、骨、骨髓、免疫系統、內皮組織、肌肉、肺、肝臟、膽囊、胰臟、胃腸道、腎臟、膀胱、雄性生殖器官、雌性生殖器官、脂肪、軟組織及皮膚。
在一些實施例中，可使用嵌合抑制受體與本發明細胞(例如免疫反應細胞)上表現之一或多個嵌合受體(例如嵌合TCR或CAR)作為NOT邏輯閘，以控制、調節或以其他方式抑制該一或多個嵌合受體之一或多種活性。在一些實施例中，本發明之嵌合受體可抑制本發明細胞(例如免疫反應細胞)之一或多種活性。在一些實施例中，將嵌合抑制受體與一或多個本發明之嵌合受體組合以組合OR邏輯閘與NOT邏輯閘及/或AND邏輯閘與NOT邏輯閘。
在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合選自以下之一或多個抗原：VSIG2、CPM、ITM2C、SLC26A2、SLC4A4、GPA33、PLA2G2A、ABCA8、ATP1A2、CHP2及SLC26A3。
在一些實施例中，該嵌合受體結合CEA抗原且該嵌合抑制受體結合VSIG2、CPM、ITM2C、SLC26A2、SLC4A4、GPA33、PLA2G2A、ABCA8、ATP1A2、CHP2或SLC26A3抗原。
在一些實施例中，該嵌合受體結合CEACAM1抗原且該嵌合抑制受體結合VSIG2、CPM、ITM2C、SLC26A2、SLC4A4、GPA33、PLA2G2A、ABCA8、ATP1A2、CHP2或SLC26A3抗原。
在一些實施例中，該嵌合受體結合CEACAM5抗原且該嵌合抑制受體結合VSIG2、CPM、ITM2C、SLC26A2、SLC4A4、GPA33、PLA2G2A、ABCA8、ATP1A2、CHP2或SLC26A3抗原。
在一些實施例中，該嵌合受體結合CEACAM6抗原且該嵌合抑制受體結合VSIG2、CPM、ITM2C、SLC26A2、SLC4A4、GPA33、PLA2G2A、ABCA8、ATP1A2、CHP2或SLC26A3抗原。
在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合VSIG2抗原且該嵌合受體結合CEA抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合VSIG2抗原且該嵌合受體結合CEACAM1抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合VSIG2抗原且該嵌合受體結合CEACAM5抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合VSIG2抗原且該嵌合受體結合CEACAM6抗原。
在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合CPM抗原且該嵌合受體結合CEA抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合CPM抗原且該嵌合受體結合CEACAM1抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合CPM抗原且該嵌合受體結合CEACAM5抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合CPM抗原且該嵌合受體結合CEACAM6抗原。
在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合ITM2C抗原且該嵌合受體結合CEA抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合ITM2C抗原且該嵌合受體結合CEACAM1抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合ITM2C抗原且該嵌合受體結合CEACAM5抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合ITM2C抗原且該嵌合受體結合CEACAM6抗原。
在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合SLC26A2抗原且該嵌合受體結合CEA抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合SLC26A2抗原且該嵌合受體結合CEACAM1抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合SLC26A2抗原且該嵌合受體結合CEACAM5抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合SLC26A2抗原且該嵌合受體結合CEACAM6抗原。
在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合SLC4A4抗原且該嵌合受體結合CEA抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合SLC4A4抗原且該嵌合受體結合CEACAM1抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合SLC4A4抗原且該嵌合受體結合CEACAM5抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合SLC4A4抗原且該嵌合受體結合CEACAM6抗原。
在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合GPA33抗原且該嵌合受體結合CEA抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合GPA33抗原且該嵌合受體結合CEACAM1抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合GPA33抗原且該嵌合受體結合CEACAM5抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合GPA33抗原且該嵌合受體結合CEACAM6抗原。
在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合PLA2G2A抗原且該嵌合受體結合CEA抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合PLA2G2A抗原且該嵌合受體結合CEACAM1抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合PLA2G2A抗原且該嵌合受體結合CEACAM5抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合PLA2G2A抗原且該嵌合受體結合CEACAM6抗原。
在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合ABCA8抗原且該嵌合受體結合CEA抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合ABCA8抗原且該嵌合受體結合CEACAM1抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合ABCA8抗原且該嵌合受體結合CEACAM5抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合ABCA8抗原且該嵌合受體結合CEACAM6抗原。
在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合ATP1A2抗原且該嵌合受體結合CEA抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合ATP1A2抗原且該嵌合受體結合CEACAM1抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合ATP1A2抗原且該嵌合受體結合CEACAM5抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合ATP1A2抗原且該嵌合受體結合CEACAM6抗原。
在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合CHP2抗原且該嵌合受體結合CEA抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合CHP2抗原且該嵌合受體結合CEACAM1抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合CHP2抗原且該嵌合受體結合CEACAM5抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合CHP2抗原且該嵌合受體結合CEACAM6抗原。
在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合SLC26A3抗原且該嵌合受體結合CEA抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合SLC26A3抗原且該嵌合受體結合CEACAM1抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合SLC26A3抗原且該嵌合受體結合CEACAM5抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合SLC26A3抗原且該嵌合受體結合CEACAM6抗原。
在一些實施例中，該抑制嵌合受體包含來源於抗VSIG2抗體之抗原結合域。該VSIG2抗體可為此項技術中已知的任何適合之VSIG2抗體。
在一些實施例中，該抑制嵌合受體包含來源於抗CPM抗體之抗原結合域。該CPM抗體可為此項技術中已知的任何適合之CPM抗體。
在一些實施例中，該抑制嵌合受體包含來源於抗ITM2C抗體之抗原結合域。該ITM2C抗體可為此項技術中已知的任何適合之ITM2C抗體。
在一些實施例中，該抑制嵌合受體包含來源於抗SLC26A2抗體之抗原結合域。該SLC26A2抗體可為此項技術中已知的任何適合之SLC26A2抗體。
在一些實施例中，該抑制嵌合受體包含來源於抗SLC4A4抗體之抗原結合域。該SLC4A4抗體可為此項技術中已知的任何適合之SLC4A4抗體。
在一些實施例中，該抑制嵌合受體包含來源於抗GPA33抗體之抗原結合域。該GPA33抗體可為此項技術中已知的任何適合之GPA33抗體。
在一些實施例中，該抑制嵌合受體包含來源於抗PLA2G2A抗體之抗原結合域。該PLA2G2A抗體可為此項技術中已知的任何適合之PLA2G2A抗體。
在一些實施例中，該抑制嵌合受體包含來源於抗ABCA8抗體之抗原結合域。該ABCA8抗體可為此項技術中已知的任何適合之ABCA8抗體。
在一些實施例中，該抑制嵌合受體包含來源於抗ATP1A2抗體之抗原結合域。該ATP1A2抗體可為此項技術中已知的任何適合之ATP1A2抗體。
在一些實施例中，該抑制嵌合受體包含來源於抗CHP2抗體之抗原結合域。該CHP2抗體可為此項技術中已知的任何適合之CHP2抗體。
在一些實施例中，該抑制嵌合受體包含來源於抗SLC26A3抗體之抗原結合域。該SLC26A3抗體可為此項技術中已知的任何適合之SLC26A3抗體。 共刺激配體
在一些實施例中，本發明之細胞(例如免疫反應細胞，例如NK細胞)可進一步包括一或多個重組或外源共刺激配體。舉例而言，該細胞可用一或多個共刺激配體進一步轉導，使得該細胞共表現或經誘導以共表現一或多個本發明之嵌合受體及一或多個共刺激配體。不希望受理論束縛，據信一或多個嵌合受體與一或多個共刺激配體之間的相互作用可提供對於細胞完全活化重要的非抗原特異性信號。適合共刺激配體之實例包括但不限於腫瘤壞死因子(TNF)超家族成員及免疫球蛋白(Ig)超家族配體。TNF為參與全身性炎症之細胞介素且刺激急性期反應。其主要作用為調控免疫細胞。TNF超家族之成員共有許多共同特徵。大多數TNF超家族成員合成為含有短胞質段及相對較長胞外區之II型跨膜蛋白(細胞外C端)。適合TNF超家族成員之實例包括但不限於神經生長因子(NGF)、CD40L (CD40L)/CD154、CD137L/4-1BBL、TNF-a、CD134L/OX40L/CD252、CD27L/CD70、Fas配體(FasL)、CD30L/CD153、腫瘤壞死因子β (TNFP)/淋巴毒素α (LTa)、淋巴毒素β (LTP)、CD257/B細胞活化因子(BAFF)/Blys/THANK/Tall-1、糖皮質激素誘導型TNF受體配體(GITRL)及TNF相關凋亡誘導配體(TRAIL)、LIGHT (TNFSF 14)。免疫球蛋白(Ig)超家族為參與細胞之識別、結合或黏附過程的一大組細胞表面可溶性蛋白質。此等蛋白質與免疫球蛋白共有諸多結構特徵且具有免疫球蛋白結構域(摺疊)。適合免疫球蛋白超家族配體之實例包括但不限於CD28配體CD80及CD86、PD-1配體PD-L1/(B7-H1)。在某些實施例中，該一或多個共刺激配體係選自4-1BBL、CD80、CD86、CD70、OX40L、CD48、TNFRSF14、PD-L1及其組合。 效應分子
在一些實施例中，本發明之細胞(例如免疫反應細胞，例如NK細胞)包含一或多個嵌合受體且可進一步包括一或多個免疫調節效應分子。本發明涵蓋之效應分子之非限制性實例包括細胞介素、抗體、趨化因子、核苷酸、肽、酶及溶瘤病毒。舉例而言，細胞可經工程改造以便以受調控方式表現並分泌以下免疫調節效應分子中之至少一種、兩種、三種或更多種：IL-12、IL-16、IFN-β、IFN-γ、IL-2、IL-15、IL-7、IL-36γ、IL-18、IL-1β、IL-21、OX40配體、CD40L、抗PD-1抗體、抗PD-L1抗體、抗CTLA-4抗體、抗TGFβ抗體、抗TNFR2、MIP1α (CCL3)、MIP1β (CCL5)、CCL21、CpG寡去氧核苷酸及抗腫瘤肽(例如，具有抗腫瘤活性之抗微生物肽，參見例如Gaspar, D.等人, Front Microbiol. 2013; 4: 294；Chu, H.等人, PLoS One. 2015; 10(5): e0126390，及網站:aps.unmc.edu/AP/main.php)。
在一些實施例中，該效應分子為免疫調節效應分子，其：刺激T細胞信號傳導、活性及/或募集，刺激抗原呈遞及/或加工，刺激天然殺手細胞介導之細胞毒性信號傳導、活性及/或募集，刺激樹突細胞分化及/或成熟，刺激免疫細胞募集，刺激巨噬細胞信號傳導，刺激基質降解，刺激免疫刺激代謝物產生，或刺激I型干擾素信號傳導；以及至少一種蛋白質，包括效應分子，該效應分子：抑制負共刺激信號傳導、抑制抗腫瘤免疫細胞之促凋亡信號傳導、抑制T調控(Treg)細胞信號傳導、活性及/或募集、抑制腫瘤檢查點分子、活化干擾素基因刺激因子(STING)信號傳導，抑制骨髓來源抑制細胞信號傳導、活性及/或募集，降解免疫抑制因子/代謝物，抑制血管內皮生長因子信號傳導，或直接殺死腫瘤細胞。
在一些實施例中，該一或多個效應分子包括選自IL-15、IL-12 (例如IL12p70融合蛋白)、IL-18及IL-21之細胞介素。 趨化因子受體
在一些實施例中，本發明之細胞(例如免疫反應細胞，例如NK細胞)包含一或多個嵌合受體且可進一步包括一或多個趨化因子受體。舉例而言，趨化因子受體CCR2b或CXCR2在諸如T細胞之細胞中之轉殖基因表現增強與分泌CCL2或分泌CXCL1之實體腫瘤的通訊(Craddock等人, J Immunother. 2010年10月; 33(8):780-8，及Kershaw等人, Hum Gene Ther. 2002年11月1日; 13(16): 1971 -80)。不希望受理論束縛，據信本發明之表現嵌合受體之細胞上所表現之趨化因子受體可識別由腫瘤分泌之趨化因子並改良該細胞對腫瘤之靶向，由此可促進該細胞向腫瘤浸潤並增強該細胞之抗腫瘤效力。本發明之趨化因子受體可包括天然存在之趨化因子受體、重組趨化因子受體或其趨化因子結合片段。可表現於本發明之細胞上的適合趨化因子受體之實例包括但不限於CXC趨化因子受體，諸如CXCR1、CXCR2、CXCR3、CXCR4、CXCR5、CXCR6或CXCR7；CC趨化因子受體，諸如CCR1、CCR2、CCR3、CCR4、CCR5、CCR6、CCR7、CCR8、CCR9、CCR10或CCR11；CX3C趨化因子受體，諸如CX3CR1；XC趨化因子受體，諸如XCR1；及其趨化因子結合片段。在一些實施例中，基於由腫瘤分泌之趨化因子來選擇欲表現於該細胞上之趨化因子受體。 嵌合受體調控
本發明之一些實施例係關於調控本發明之表現嵌合受體之細胞的一或多種嵌合受體活性。有若干種可調控嵌合受體活性之方法。在一些實施例中，可能需要可調控嵌合受體，其中可控制一或多種嵌合受體活性，以最佳化嵌合受體療法之安全性及/或效力。舉例而言，使用與二聚結構域融合之半胱天冬酶誘導細胞凋亡(參見例如Di等人, N Engl. J. Med. 2011年11月3日; 365(18): 1673-1683)可用作嵌合受體療法之安全開關。在一些實施例中，本發明之表現嵌合受體之細胞亦可表現在投與諸如利米西德(rimiducid) (IUPAC名稱：(2S)-1-[(2S)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)丁醯基]哌啶-2-甲酸[(1R)-3-(3,4-二甲氧基苯基)-1-[3-[2-[2-[[2-[3-[(1R)-3-(3,4-二甲氧基苯基)-1-[(2S)-1-[(2S)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)丁醯基]哌啶-2-羰基]氧基丙基]苯氧基]乙醯基]胺基]乙基胺基]-2-側氧基乙氧基]苯基]丙基]酯)之二聚藥物後誘導半胱天冬酶-9活化並導致細胞凋亡的誘導型半胱天冬酶-9 (iCaspase-9)。在一些實施例中，iCaspase-9含有包含化學二聚誘導子(CID)之結合域，其在CID存在下介導二聚，由此導致表現嵌合受體之細胞之誘導性選擇性耗竭。
替代地，在一些實施例中，本發明之嵌合受體可藉由利用鈍化或以其他方式抑制嵌合受體活性之小分子或抗體來調控。舉例而言，抗體可藉由誘導抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)來耗竭表現嵌合受體之細胞。在一些實施例中，本發明之表現嵌合受體之細胞可進一步表現由能夠藉由ADCC或補體誘導之細胞死亡來誘導細胞死亡之分子識別的抗原。舉例而言，本發明之表現嵌合受體之細胞可進一步表現能夠藉由抗體或抗體片段靶向之受體。可藉由抗體或抗體片段靶向之適合受體之實例包括但不限於EpCAM、VEGFR、整合素(例如ανβ3、α4、αΙ¾β3、α4β7、α5β1、ανβ3、αν)、TNF受體超家族成員(例如TRAIL-R1及TRAIL-R2)、PDGF受體、干擾素受體、葉酸受體、GPNMB、ICAM-1、HLA-DR、CEA、CA-125、MUC1、TAG-72、IL-6受體、5T4、GD2、GD3、CD2、CD3、CD4、CD5、CD11、CD11a/LFA-1、CD15、CD18/ITGB2、CD19、CD20、CD22、CD23/IgE受體、CD25、CD28、CD30、CD33、CD38、CD40、CD41 、CD44、CD51、CD52、CD62L、CD74、CD80、CD125、CD147/basigin、CD152/CTLA-4、CD154/CD40L、CD195/CCR5、CD319/SLAMF7及EGFR，以及其截短型式。
在一些實施例中，本發明之表現嵌合受體之細胞亦可表現缺乏信號傳導能力但保留被能夠誘導ADCC之分子識別之抗原決定基的截短表皮生長因子受體(EGFR) (例如WO2011/056894)。
在一些實施例中，本發明之表現嵌合受體之細胞進一步包括高度表現緊密標記物/自殺基因，其將來自CD32及CD20抗原二者之靶抗原決定基組合在表現嵌合受體之細胞中，由此結合抗CD20抗體(例如利妥昔單抗(rituximab))，從而導致ADCC選擇性耗竭該表現嵌合受體之細胞。耗竭本發明之表現嵌合受體之細胞的其他方法可包括但不限於投與單株抗CD52抗體，該單株抗CD52抗體選擇性地結合並靶向表現嵌合受體之細胞以藉由誘導ADCC進行破壞。在一些實施例中，可使用諸如抗特應性抗體之嵌合受體配體選擇性地靶向該表現嵌合受體之細胞。在一些實施例中，該抗特應性抗體可引起效應細胞活性，諸如ADCC或ADC活性。在一些實施例中，該嵌合受體配體可進一步偶聯至諸如毒素之誘導細胞殺死之劑。在一些實施例中，本發明之表現嵌合受體之細胞可進一步表現由本發明之細胞耗竭劑識別之靶蛋白。在一些實施例中，該靶蛋白為CD20且該細胞耗竭劑為抗CD20抗體。在此種實施例中，一旦需要減少或消除表現嵌合受體之細胞，便投與細胞耗竭劑。在一些實施例中，細胞耗竭劑為抗CD52抗體。
在一些實施例中，經調控之嵌合受體包含一組多肽，其中本發明之嵌合受體之組分分配在獨立的多肽或成員上。舉例而言，該組多肽可包括二聚開關，該二聚開關在存在二聚分子時可使多肽彼此偶聯以形成功能嵌合受體。 編碼嵌合受體之核酸構築體
本發明之某些態樣係關於編碼本發明之一或多個嵌合受體的核酸(例如經分離之核酸)。在一些實施例中，該核酸為RNA構築體，諸如信使RNA (mRNA)轉錄物或經修飾之RNA。在一些實施例中，該核酸為DNA構築體。
在一些實施例中，本發明之核酸編碼嵌合受體，該嵌合受體包含一或多個抗原結合域(其中各結構域結合至靶抗原(例如實體腫瘤抗原))、跨膜結構域及一或多個細胞內信號傳導域。在一些實施例中，該核酸編碼嵌合受體，該嵌合受體包含抗原結合域、跨膜結構域、一級信號傳導域(例如CD3-ζ結構域)及一或多個共刺激信號傳導域。在一些實施例中，該核酸進一步包含編碼間隔區之核苷酸序列。在一些實施例中，該抗原結合域藉由該間隔區連接至該跨膜結構域。在一些實施例中，該間隔區包含選自 表 9中所列出之核酸序列中之任一個的核酸序列。在一些實施例中，該核酸進一步包含編碼前導序列之核苷酸序列。
本發明之核酸可使用此項技術中已知的任何適合重組方法獲得，包括但不限於藉由自表現相關基因之細胞篩檢文庫、藉由自已知包括該基因之載體獲得相關基因、或藉由使用標準技術直接自含有該基因之細胞及組織分離相關基因。替代地，該相關基因可合成產生。
在一些實施例中，本發明之核酸包含在載體內。在一些實施例中，本發明之核酸經由轉位子、CRISPR/Cas9系統、TALEN或鋅指核酸酶表現於細胞中。
在一些實施例中，編碼本發明之嵌合受體之核酸之表現可藉由將該核酸可操作地連接至啟動子並且將構築體併入表現載體中來達成。適合之載體可在真核細胞中複製並整合。典型選殖載體含有可用於調控所要核酸之表現的轉錄及轉譯終止子、起始序列及啟動子。
在一些實施例中，本發明之表現構築體亦可使用標準基因遞送方案(例如US5399346、US5580859及US5589466)用於核酸免疫及基因療法。在一些實施例中，本發明之載體為基因療法載體。
本發明之核酸可選殖至許多類型之載體中。舉例而言，該核酸可選殖至載體中，包括但不限於質體、噬菌體質體、噬菌體衍生物、動物病毒或黏質體。在一些實施例中，該載體可為表現載體、複製載體、探針產生載體或定序載體。
在一些實施例中，該質體載體包含轉位子/轉位酶系統，以便將本發明之核酸併入宿主細胞基因體中。使用轉位子及轉位酶質體系統在免疫細胞中表現蛋白質之方法一般描述於Chicaybam L, Hum Gene Ther. 2019年4月;30(4):511-522. doi: 10.1089/hum.2018.218；及Ptáčková P, Cytotherapy. 2018年4月;20(4):507-520. doi: 10.1016/j.jcyt.2017.10.001中，各文獻係以引用之方式整體併入本文中。在一些實施例中，該轉位子系統為睡美人轉位子/轉位酶或piggyBac轉位子/轉位酶。
在一些實施例中，本發明之表現載體可呈病毒載體形式提供至細胞。適合之病毒載體系統在此項技術中為眾所周知的。舉例而言，病毒載體可來源於反轉錄病毒(例如γ反轉錄病毒及慢病毒)、腺病毒、腺相關病毒及疱疹病毒。在一些實施例中，本發明之載體為反轉錄病毒載體。反轉錄病毒載體類型包括慢病毒載體及γ反轉錄病毒載體。在一些實施例中，本發明之載體為慢病毒載體。慢病毒載體來源於慢病毒，諸如人類免疫缺陷病毒(HIV)，且可適用於長期基因轉移，因為此種載體一般允許轉殖基因長期穩定整合及其在子細胞中繁殖。就轉導某些細胞類型而言，慢病毒載體可能優於其他反轉錄病毒載體(例如鼠類白血病病毒)，因為慢病毒載體通常可轉導非增殖細胞。在一些實施例中，本發明之載體為γ反轉錄病毒載體。γ反轉錄病毒載體來源於γ反轉錄病毒屬病毒，其包括鼠類白血病病毒(MLV)及貓白血病病毒。
使用反轉錄病毒載體(例如慢病毒及γ反轉錄病毒載體)產生之病毒顆粒通常經假型化以包括反轉錄病毒外源套膜蛋白。用於假型化之常用套膜蛋白為水疱性口炎病毒(VSV) G糖蛋白。在一些實施例中，反轉錄病毒載體(例如慢病毒載體或γ反轉錄病毒載體)係使用狒狒內源反轉錄病毒(BaEV)套膜蛋白進行假型化。BaEV套膜蛋白可為野生型BaEV套膜，或可為變異BaEV套膜，諸如胞質尾區替換為MLV-A病毒胞質尾區之嵌合BaEV或在C端截短以移除R肽之型式(例如Anais Girard-Gagnepain等人, Blood 2014; 124 (8): 1221–1231. doi: https://doi.org/10.1182/blood-2014-02-558163)。
在一些實施例中，本發明之載體為腺病毒載體(A5/35)。在一些實施例中，本發明之載體含有在至少一種生物體中具功能性之複製起點、啟動子序列、適宜限制內核酸酶位點及一或多個可選標記物(例如，WO01/96584；WO01/29058；及US6326193)。已開發許多基於病毒之系統以用於基因轉移至哺乳動物細胞中。可使用此項技術中已知的技術將所選基因插入載體中並包封在反轉錄病毒顆粒中。隨後可分離重組病毒並在活體內或離體遞送至哺乳動物細胞。許多反轉錄病毒系統為此項技術中已知的。
在一些實施例中，本發明之載體包括額外的啟動子元件，諸如調控轉錄起始頻率之增強子。增強子典型地位於起始位點上游30-110 bp之區域中，但許多啟動子已顯示亦含有處於起始位點下游之功能元件。啟動子元件之間的間隔可為可撓性的，因此啟動子功能在元件相對於彼此逆轉或移動時得以保留。舉例而言，在胸苷激酶(tk)啟動子中，啟動子元件之間的間隔可增至50 bp，隨後活性開始下降。視啟動子而定，個別元件可協同或獨立地發揮功能以活化轉錄。例示性啟動子可包括但不限於SFFV基因啟動子、EFS基因啟動子、CMV IE基因啟動子、EFla啟動子、泛素C啟動子及磷酸甘油激酶(PGK)啟動子。
在一些實施例中，能夠在哺乳動物細胞(諸如本發明之免疫反應細胞)中表現本發明之核酸的啟動子為EF1a啟動子。天然EF1a啟動子驅動負責將胺醯基tRNA酶促遞送至核糖體之延長因子-1複合物之α次單元之表現。EF1a啟動子已廣泛用於哺乳動物表現質體中，且已顯示在驅動選殖至慢病毒載體中之核酸的嵌合受體表現方面為有效的。
在一些實施例中，能夠在哺乳動物細胞(諸如本發明之免疫反應細胞)中表現本發明之核酸的啟動子為組成性啟動子。舉例而言，適合之組成性啟動子為即時早期巨細胞病毒(CMV)啟動子。CMV啟動子為能夠驅動可操作地連接至該啟動子之任何多核苷酸序列之高水準表現的強組成性啟動子。其他適合之組成性啟動子包括但不限於泛素C (UbiC)啟動子、猿猴病毒40 (SV40)早期啟動子、小鼠乳房腫瘤病毒(MMTV)啟動子、人類免疫缺乏病毒(HIV)長末端重複(LTR)啟動子、MoMuLV啟動子、禽白血病病毒啟動子、埃-巴二氏病毒即時早期啟動子、勞氏肉瘤病毒啟動子、肌動蛋白啟動子、肌球蛋白啟動子、延長因子la啟動子、血紅蛋白啟動子及肌酸激酶啟動子。
在一些實施例中，能夠在哺乳動物細胞(諸如本發明之免疫反應細胞)中表現本發明之核酸的啟動子為誘導性啟動子。使用誘導性啟動子可在該啟動子可操作地連接至核酸時提供能夠誘導或抑制本發明核酸之表現的分子開關。誘導性啟動子之實例包括但不限於金屬硫蛋白啟動子、糖皮質激素啟動子、孕酮啟動子及四環素調控啟動子。
在一些實施例中，本發明之載體可進一步包含促進分泌之信號序列、聚腺苷酸化信號及轉錄終止子、允許附加型複製之元件及/或允許選擇之元件。例示性信號序列提供於 表 11中。
表 11
胺基酸序列 SEQ ID NO: 描述  
MALPVTALLLPLALLLHAARP 76 CD8信號序列  
在一些實施例中，本發明之載體可進一步包含可選標記物基因及/或報導基因以促進自經該載體轉導之細胞群體鑑定及選擇表現嵌合受體之細胞。在一些實施例中，可選標記物可由自載體分離並用於共轉染程序之核酸編碼。可選標記物或報導基因可側接適當調控序列以允許在宿主細胞中表現。可選標記物之實例包括但不限於抗生素抗性基因，諸如neo及其類似基因。
在一些實施例中，報導基因可用於鑑定經轉導之細胞及評估調控序列之功能性。如本文中所揭示，報導基因為不存在或不表現於受體生物體或組織中且編碼表現會引起容易偵測之性質(例如酶活性)之多肽的基因。可在核酸已引入受體細胞中之後在適合之時間分析報導基因之表現。報導基因之實例包括但不限於編碼螢光素酶之基因、編碼β-半乳糖苷酶之基因、編碼氯黴素乙醯基轉移酶之基因、編碼分泌鹼性磷酸酶之基因及編碼綠色螢光蛋白之基因。適合之表現系統在此項技術中為眾所周知的且可使用已知技術製備或獲自市面。在一些實施例中，具有顯示最高水準之報導基因表現之最小5'側接區的構築體鑑定為啟動子。此種啟動子區可連接至報導基因，並用於評估劑調節啟動子驅動之轉錄的能力。
在一些實施例中，包含編碼本發明之嵌合受體之核酸序列的載體進一步包含編碼增加該嵌合受體之活性的多肽的第二核酸。
在表現嵌合受體之細胞包含兩個或更多個嵌合受體之實施例中，單一核酸可在單一調節控制元件(例如啟動子)下或在該核酸中所包含之各編碼嵌合受體之核苷酸序列的單獨調節控制元件下編碼兩個或更多個嵌合受體。在表現嵌合受體之細胞包含兩個或更多個嵌合受體的一些實施例中，各嵌合受體可由單獨的核酸編碼。在一些實施例中，各單獨核酸包含其自身之控制元件(例如啟動子)。在一些實施例中，單一核酸編碼兩個或更多個嵌合受體，且編碼嵌合受體之核苷酸序列在相同閱讀框中且表現為單一多肽鏈。在此種實施例中，該兩個或更多個嵌合受體可由一或多個諸如自動切割位點之肽切割位點或細胞內蛋白酶受質隔開。適合之肽切割位點可包括但不限於T2A肽切割位點、P2A肽切割位點、E2A肽切割位點及F2A肽切割位點。在一些實施例中，該兩個或更多個嵌合受體包含T2A肽切割位點。在一些實施例中，該兩個或更多個嵌合受體包含E2A肽切割位點。在一些實施例中，該兩個或更多個嵌合受體包含T2A及E2A肽切割位點。
將基因引入至細胞中並表現之方法在此項技術中為眾所周知的。舉例而言，在一些實施例中，可藉由物理、化學或生物學手段將表現載體轉移至宿主細胞中。用於將核酸引入至宿主細胞中之物理手段之實例包括但不限於磷酸鈣沈澱、脂轉染、粒子轟擊、顯微注射及電穿孔。用於將核酸引入至宿主細胞中之化學方法之實例包括但不限於膠體分散系統、巨分子複合物、奈米膠囊、微球體、珠粒及基於脂質之系統，包括水包油乳液、膠束、混合膠束及脂質體。用於將核酸引入至宿主細胞之生物學手段之實例包括但不限於使用DNA及RNA載體。
在一些實施例中，脂質體可用作非病毒遞送系統以在活體外、離體或活體內將本發明之核酸或載體引入至宿主細胞中。在一些實施例中，該核酸可與脂質締合，例如藉由包封在脂質體內部之水溶液中、散佈在脂質體之脂質雙層內、經由與脂質體及核酸二者締合之連接分子連接至脂質體、包裹在脂質體中、與脂質體複合、分散在含有脂質之溶液中、與脂質混合、與脂質組合、呈懸浮液形式包含在脂質中、包含膠束或與膠束複合、或以其他方式與脂質締合。如本文中所揭示，脂質締合之核酸或載體組合物不限於溶液中之任何特定結構。在一些實施例中，此種組合物可存在於雙層結構中、呈膠束形式或具有「塌陷」結構。此種組合物亦可簡單地散佈在溶液中，從而形成尺寸或形狀不均勻之聚集體。如本文中所揭示，脂質為可能天然存在或合成之脂肪物質。在一些實施例中，脂質可包括天然存在於細胞質中之脂肪滴或含有長鏈脂族烴及其衍生物，諸如脂肪酸、醇、胺、胺基醇及醛之化合物類別。適合之脂質可獲自商業來源，且包括但不限於二肉豆蔻基磷脂醯膽鹼(「DMPC」)、磷酸二鯨蠟酯(「DCP」)、膽固醇及二肉豆蔻基磷脂醯甘油(「DMPG」)。脂質於三氯甲烷或三氯甲烷/甲醇中之儲備溶液可儲存在約-20℃下。使用三氯甲烷作為溶劑，因為其比甲醇更容易蒸發。如本文中所使用，「脂質體」可涵蓋藉由產生包封脂質雙層或聚集體而形成的各種單層及多層脂質媒劑。在一些實施例中，脂質體可表徵為具有存在磷脂雙層膜及內部水性介質之囊泡結構。在一些實施例中，多層脂質體可具有藉由水性介質隔開之多個脂質層。在磷脂懸浮於過量水溶液中時自發形成多層脂質體。在一些實施例中，脂質組分可在形成封閉結構之前進行自我重排且可將水及溶解之溶質截留在脂質雙層之間。在一些實施例中，該脂質可呈現微胞結構或僅作為脂質分子之不均勻聚集體存在。
在一些實施例中，將本發明之核酸或載體引入至哺乳動物宿主細胞，諸如本發明之免疫反應細胞中。在一些實施例中，可藉由此項技術中已知的任何適合之分析來證實本發明之核酸或載體存在於宿主細胞中，包括但不限於南方墨點分析、北方墨點分析、RT-PCR、PCR、ELISA分析及西方墨點分析。
在一些實施例中，將本發明之核酸或載體穩定轉導至本發明之免疫反應細胞中。在一些實施例中，展現核酸或載體之穩定表現的細胞在轉導之後表現所編碼之嵌合受體至少1週、至少2週、至少3週、至少4週、至少5週、至少6週、至少7週、至少8週、至少3個月、至少6個月、至少9個月或至少12個月。
在本發明之嵌合受體瞬時表現於細胞中之實施例中，將本發明之編碼嵌合受體之核酸或載體轉染至本發明之免疫反應細胞中。在一些實施例中，該免疫反應細胞在轉染之後表現嵌合受體約4天、約5天、約6天、約7天、約8天、約9天、約10天、約11天、約12天、約13天、約14天或約15天。
在一些實施例中，該核酸構築體編碼包含嵌合受體及嵌合抑制受體之雙順反子嵌合抗原受體。在一些實施例中，該核酸構築體包含包含兩個或更多個嵌合受體及嵌合抑制受體之多順反子嵌合抗原受體。在一些實施例中，使用多個核酸構築體，其中一個構築體編碼嵌合受體且一個構築體編碼嵌合抑制受體。
在一些實施例中，該嵌合受體結合CEACAM6抗原且該嵌合抑制受體結合VSIG2、CPM、ITM2C、SLC26A2、SLC4A4、GPA33、PLA2G2A、ABCA8、ATP1A2、CHP2或SLC26A3抗原。
在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合VSIG2抗原且該嵌合受體結合CEA抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合VSIG2抗原且該嵌合受體結合CEACAM1抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合VSIG2抗原且該嵌合受體結合CEACAM5抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合VSIG2抗原且該嵌合受體結合CEACAM6抗原。
在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合CPM抗原且該嵌合受體結合CEA抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合CPM抗原且該嵌合受體結合CEACAM1抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合CPM抗原且該嵌合受體結合CEACAM5抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合CPM抗原且該嵌合受體結合CEACAM6抗原。
在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合ITM2C抗原且該嵌合受體結合CEA抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合ITM2C抗原且該嵌合受體結合CEACAM1抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合ITM2C抗原且該嵌合受體結合CEACAM5抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合ITM2C抗原且該嵌合受體結合CEACAM6抗原。
在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合SLC26A2抗原且該嵌合受體結合CEA抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合SLC26A2抗原且該嵌合受體結合CEACAM1抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合SLC26A2抗原且該嵌合受體結合CEACAM5抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合SLC26A2抗原且該嵌合受體結合CEACAM6抗原。
在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合SLC4A4抗原且該嵌合受體結合CEA抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合SLC4A4抗原且該嵌合受體結合CEACAM1抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合SLC4A4抗原且該嵌合受體結合CEACAM5抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合SLC4A4抗原且該嵌合受體結合CEACAM6抗原。
在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合GPA33抗原且該嵌合受體結合CEA抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合GPA33抗原且該嵌合受體結合CEACAM1抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合GPA33抗原且該嵌合受體結合CEACAM5抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合GPA33抗原且該嵌合受體結合CEACAM6抗原。
在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合PLA2G2A抗原且該嵌合受體結合CEA抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合PLA2G2A抗原且該嵌合受體結合CEACAM1抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合PLA2G2A抗原且該嵌合受體結合CEACAM5抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合PLA2G2A抗原且該嵌合受體結合CEACAM6抗原。
在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合ABCA8抗原且該嵌合受體結合CEA抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合ABCA8抗原且該嵌合受體結合CEACAM1抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合ABCA8抗原且該嵌合受體結合CEACAM5抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合ABCA8抗原且該嵌合受體結合CEACAM6抗原。
在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合ATP1A2抗原且該嵌合受體結合CEA抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合ATP1A2抗原且該嵌合受體結合CEACAM1抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合ATP1A2抗原且該嵌合受體結合CEACAM5抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合ATP1A2抗原且該嵌合受體結合CEACAM6抗原。
在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合CHP2抗原且該嵌合受體結合CEA抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合CHP2抗原且該嵌合受體結合CEACAM1抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合CHP2抗原且該嵌合受體結合CEACAM5抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合CHP2抗原且該嵌合受體結合CEACAM6抗原。
在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合SLC26A3抗原且該嵌合受體結合CEA抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合SLC26A3抗原且該嵌合受體結合CEACAM1抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合SLC26A3抗原且該嵌合受體結合CEACAM5抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合SLC26A3抗原且該嵌合受體結合CEACAM6抗原。
在一些實施例中，所編碼之雙順反子嵌合抗原受體系統包含具有靶向 表 1中所提供之任何抗原之抗原結合域的CAR。在一些實施例中，所編碼之雙順反子嵌合抗原受體系統包含具有來源於如 表 2中所提供之抗體之抗原結合域的CAR。在一些實施例中，所編碼之雙順反子嵌合抗原受體系統包含具有包括如 表 3中所提供之scFv之抗原結合域的CAR。在一些實施例中，所編碼之雙順反子嵌合抗原受體系統包含具有兩個或更多個靶向 表 10中所提供之任何抗原配對之抗原結合域的CAR。
在一些實施例中，該核酸構築體編碼包含嵌合受體及嵌合抑制受體之二價嵌合抗原受體。在一些實施例中，該嵌合受體結合CEACAM6抗原且該嵌合抑制受體結合VSIG2、CPM、ITM2C、SLC26A2、SLC4A4、GPA33、PLA2G2A、ABCA8、ATP1A2、CHP2或SLC26A3抗原。
在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合VSIG2抗原且該嵌合受體結合CEA抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合VSIG2抗原且該嵌合受體結合CEACAM1抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合VSIG2抗原且該嵌合受體結合CEACAM5抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合VSIG2抗原且該嵌合受體結合CEACAM6抗原。
在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合CPM抗原且該嵌合受體結合CEA抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合CPM抗原且該嵌合受體結合CEACAM1抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合CPM抗原且該嵌合受體結合CEACAM5抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合CPM抗原且該嵌合受體結合CEACAM6抗原。
在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合ITM2C抗原且該嵌合受體結合CEA抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合ITM2C抗原且該嵌合受體結合CEACAM1抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合ITM2C抗原且該嵌合受體結合CEACAM5抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合ITM2C抗原且該嵌合受體結合CEACAM6抗原。
在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合SLC26A2抗原且該嵌合受體結合CEA抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合SLC26A2抗原且該嵌合受體結合CEACAM1抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合SLC26A2抗原且該嵌合受體結合CEACAM5抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合SLC26A2抗原且該嵌合受體結合CEACAM6抗原。
在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合SLC4A4抗原且該嵌合受體結合CEA抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合SLC4A4抗原且該嵌合受體結合CEACAM1抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合SLC4A4抗原且該嵌合受體結合CEACAM5抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合SLC4A4抗原且該嵌合受體結合CEACAM6抗原。
在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合GPA33抗原且該嵌合受體結合CEA抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合GPA33抗原且該嵌合受體結合CEACAM1抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合GPA33抗原且該嵌合受體結合CEACAM5抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合GPA33抗原且該嵌合受體結合CEACAM6抗原。
在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合PLA2G2A抗原且該嵌合受體結合CEA抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合PLA2G2A抗原且該嵌合受體結合CEACAM1抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合PLA2G2A抗原且該嵌合受體結合CEACAM5抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合PLA2G2A抗原且該嵌合受體結合CEACAM6抗原。
在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合ABCA8抗原且該嵌合受體結合CEA抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合ABCA8抗原且該嵌合受體結合CEACAM1抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合ABCA8抗原且該嵌合受體結合CEACAM5抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合ABCA8抗原且該嵌合受體結合CEACAM6抗原。
在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合ATP1A2抗原且該嵌合受體結合CEA抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合ATP1A2抗原且該嵌合受體結合CEACAM1抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合ATP1A2抗原且該嵌合受體結合CEACAM5抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合ATP1A2抗原且該嵌合受體結合CEACAM6抗原。
在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合CHP2抗原且該嵌合受體結合CEA抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合CHP2抗原且該嵌合受體結合CEACAM1抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合CHP2抗原且該嵌合受體結合CEACAM5抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合CHP2抗原且該嵌合受體結合CEACAM6抗原。
在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合SLC26A3抗原且該嵌合受體結合CEA抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合SLC26A3抗原且該嵌合受體結合CEACAM1抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合SLC26A3抗原且該嵌合受體結合CEACAM5抗原。在一些實施例中，該嵌合抑制受體結合SLC26A3抗原且該嵌合受體結合CEACAM6抗原。
在一些實施例中，所編碼之二價嵌合抗原受體包含具有靶向 表 1中所提供之任何抗原之抗原結合域的CAR。在一些實施例中，所編碼之二價嵌合抗原受體包含具有靶向來源於如 表 2中所提供之抗體之抗原結合域的CAR。在一些實施例中，所編碼之二價嵌合抗原受體包含具有包括如 表 3中所提供之scFv之抗原結合域的CAR。在一些實施例中，所編碼之二價嵌合抗原受體包含具有靶向 表 10中所提供之任何抗原配對之兩個或更多個抗原結合域的CAR。 醫藥組合物及投與
本發明之某些態樣係關於包含本發明之一或多個嵌合受體或表現該一或多個嵌合受體之本發明之免疫反應細胞的組合物(例如，醫藥組合物)。在一些實施例中，包含嵌合受體或表現此種嵌合受體之經基因修飾之免疫反應細胞的組合物可全身或直接提供至個體以用於治療增殖性病症，諸如實體腫瘤。
包含本發明之經基因修飾之細胞的組合物可於任何生理學上可接受之媒劑中投與，例如經血管內，但其亦可引入至骨或經基因修飾之細胞可尋到適合之再生及分化部位的其他適宜部位(例如胸腺)。包含本發明之經基因修飾之細胞的組合物可包含經純化之細胞群體。用於確定細胞群體中經基因修飾之細胞之百分比的方法在此項技術中為眾所周知的，且包括但不限於螢光活化細胞淘選(FACS)。在一些實施例中，細胞群體中經基因修飾之細胞之純度可為細胞群體中約50%、約55%、約60%或約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%、約97%、約98%、約99%或更多的細胞。熟習此項技術者可容易地調節劑量(例如，純度降低可能需要增加劑量)。
在某些實施例中，該等組合物為醫藥組合物，其包含經基因修飾之細胞，諸如免疫反應細胞或其祖細胞，以及醫藥學上可接受之載劑。投與可為自體的或異源的。 治療方法
本發明之某些態樣係關於使用本發明之嵌合受體及表現此種嵌合受體之經基因修飾之細胞(例如免疫反應細胞，例如NK細胞)來治療有需要之個體的方法。在一些實施例中，本發明之方法可用於治療個體之癌症，其中該癌症表現CEA (為CEA+)。在一些實施例中，本發明之方法可用於在個體中治療癌症，其中該癌症表現CEACAM1 (為CEACAM1+)。在一些實施例中，本發明之方法可用於在個體中治療癌症，其中該癌症表現CEACAM5 (為CEACAM5+)。在一些實施例中，本發明之方法可用於在個體中治療癌症，其中該癌症表現CEACAM6 (為CEACAM6+)。在一些實施例中，本發明之方法可用於在個體中治療癌症，諸如實體腫瘤。
在一些實施例中，該實體腫瘤為肺癌、胰臟癌、胃腸道癌及結腸癌。在一些實施例中，該實體腫瘤為肺腺癌。在一些實施例中，該實體腫瘤為胰臟癌。在一些實施例中，該實體腫瘤為胃腸癌(包括但不限於食道癌、胃癌、小腸癌、結腸癌或直腸癌)。在一些實施例中，該實體腫瘤為結腸癌。在一些實施例中，該實體腫瘤為結腸直腸癌。
在一些實施例中，本發明之方法可包括以對達成所要效果(包括但不限於減輕現有病狀、預防病狀、治療現有病狀、控制現有病狀、或者預防疾病復發)有效之量投與本發明之經基因修飾之細胞。在一些實施例中，有效量可在本發明之經基因修飾之細胞(例如免疫反應細胞，例如NK細胞)之一次或一系列投與中提供。在一些實施例中，有效量可呈藥團形式或藉由連續灌注提供。
如本文中所揭示，「有效量」或「治療有效量」為足以在治療後實現有益或所要臨床結果之量。有效量可以一或多個劑量投與個體。就治療而言，有效量為足以緩解、改善、穩定、逆轉或減緩疾病進展或以其他方式減輕疾病之病理學後果的量。有效量一般由醫師逐例確定且在熟習此項技術者之能力範圍內。在確定達成有效量之適當劑量時典型地考慮若干因素。此等因素包括個體之年齡、性別及體重、所治療之病狀、病狀之嚴重程度以及所投與之免疫反應細胞之形式及有效濃度。
在一些實施例中，該方法減少腫瘤細胞之數目。在一些實施例中，該方法減小腫瘤大小。在一些實施例中，該方法減小腫瘤體積。在一些實施例中，該方法增加個體之無進展存活時間。在一些實施例中，該方法增加個體之存活時間。 治療性治療
在一些實施例中，本發明之方法增加有需要之個體之免疫反應。在一些實施例中，本發明之方法包括用於治療及/或預防個體之實體腫瘤的方法。在一些實施例中，該個體為人類。在一些實施例中，適用於療法之人類個體可包括可藉由臨床標準區分的兩個治療組。具有「晚期疾病」或「高腫瘤負荷」之個體為攜帶臨床可量測之腫瘤的個體。臨床可量測之腫瘤為可基於腫瘤塊偵測之腫瘤(例如，基於腫瘤細胞之百分比、藉由觸診、CAT掃描、音波圖、乳房攝影或X射線；自身陽性生物化學或組織病理學標記物不足以鑑定此群體)。在一些實施例中，本發明之醫藥組合物投與此等個體以引發抗腫瘤反應，目標為減輕其病狀。在一些實施例中，腫瘤塊減小由於投與醫藥組合物而發生，但任何臨床改良皆將構成益處。在一些實施例中，臨床改良包括降低腫瘤風險或進展速率或減輕其病理學後果。在一些實施例中，第二組適合人類個體為「佐劑組」個體。此等個體為具有實體腫瘤病史但已對另一治療模式有反應之個體。先前療法可包括但不限於手術切除、放射療法及/或傳統化學療法。因此，此等個體不存在臨床可量測之腫瘤。然而，其疑似在原始腫瘤部位附近或因轉移而存在疾病進展風險。在一些實施例中，此組可進一步細分為高風險個體及低風險個體。可基於初始治療前後觀測之特徵進行細分。此等特徵在臨床領域中為已知的，且針對各不同的實體腫瘤適當地定義。高風險子群之典型特徵為腫瘤侵襲鄰近組織或顯示累及淋巴結之子群。
在如本文中所描述之增加免疫反應之任何及所有態樣中，特徵或功能態樣之任何增高或降低或改變係相較於未與如本文中所描述之免疫反應細胞接觸之細胞。
增加免疫反應可為增強免疫反應或誘導免疫反應。舉例而言，增加免疫反應涵蓋開始或起始免疫反應，或者增加或放大進行中或現有免疫反應。在一些實施例中，該治療誘導免疫反應。在一些實施例中，該誘導之免疫反應為適應性免疫反應。在一些實施例中，該誘導之免疫反應為固有免疫反應。在一些實施例中，該治療增強免疫反應。在一些實施例中，該增強之免疫反應為適應性免疫反應。在一些實施例中，該增強之免疫反應為固有免疫反應。在一些實施例中，該治療增加免疫反應。在一些實施例中，該增加之免疫反應為適應性免疫反應。在一些實施例中，該增加之免疫反應為固有免疫反應。
在一些實施例中，另一組個體為具有實體腫瘤病症遺傳傾向性但尚無實體腫瘤臨床徵象證據之彼等個體。舉例而言，據測試對與雌性生殖器官癌(例如乳癌、卵巢癌)相關之基因突變呈陽性但仍處於生育年齡之婦女可受益於在治療時預防性接受一或多種本發明之細胞(例如免疫反應細胞，例如NK細胞)來預防該雌性生殖器官癌發生，直至其適合進行預防性手術。在一些實施例中，個體可患有晚期形式之疾病，在該情況下，治療目標可包括減輕或逆轉疾病進展及/或改善副作用。在一些實施例中，個體可具有病狀史，已進行過治療，在該情況下，治療目標典型地可包括降低或延遲復發風險。
在一些實施例中，抑制CEA CAR (例如CEACAM1 CAR、CEACAM5 CAR或CEACAM6 CAR)之活性。在一些實施例中，抑制表現CEA CAR (例如CEACAM1 CAR、CEACAM5 CAR或CEACAM6 CAR)之免疫細胞的活性。在某些實施例中，使用抑制嵌合受體抑制CEA CAR之活性。在某些實施例中，使用抑制嵌合受體抑制表現CEA CAR之免疫細胞的活性。在一些實施例中，該抑制嵌合受體結合VSIG2抗原。在一些實施例中，該抑制嵌合受體結合CPM抗原。在一些實施例中，該抑制嵌合受體結合ITM2C抗原。在一些實施例中，該抑制嵌合受體結合SLC26A2抗原。在一些實施例中，該抑制嵌合受體結合SLC4A4抗原。在一些實施例中，該抑制嵌合受體結合GPA33抗原。在一些實施例中，該抑制嵌合受體結合PLA2G2A抗原。在一些實施例中，該抑制嵌合受體結合ABCA8抗原。在一些實施例中，該抑制嵌合受體結合ATP1A2抗原。在一些實施例中，該抑制嵌合受體結合CHP2抗原。在一些實施例中，該抑制嵌合受體結合SLC26A3抗原。在一些實施例中，該嵌合受體為包含兩個或更多個抗原結合域，使得該嵌合受體可結合兩個或更多個抗原之多特異性受體。 組合療法
在一些實施例中，表現本發明之一或多種嵌合受體的本發明之經基因修飾之細胞(例如免疫反應細胞，例如NK細胞)可與其他已知劑及療法組合使用。在一些實施例中，本發明之組合療法包含可與一或多種其他治療劑組合投與之本發明之經基因修飾之細胞。在一些實施例中，經基因修飾之細胞及一或多種其他治療劑可同時、於相同或單獨組合物中或相繼投與。對於相繼投與，首先可投與經基因修飾之細胞，其次可投與一或多種其他劑，或可逆轉投與順序。在一些實施例中，經基因修飾之細胞經進一步修飾以表現一或多種其他治療劑。 套組
本發明之某些態樣係關於用於治療及/或預防實體腫瘤之套組。在某些實施例中，該套組包括治療或預防組合物，其包含有效量之一或多種本發明之嵌合受體、本發明之經分離之核酸、本發明之載體及/或本發明之細胞(例如免疫反應細胞)。在一些實施例中，該套組包含無菌容器。在一些實施例中，此種容器可為盒、安瓿、瓶、小瓶、管、袋、囊袋、泡罩包裝或此項技術中已知的其他適合之容器形式。容器可由塑膠、玻璃、層壓紙、金屬箔或其他適合容納藥物之材料製成。
在一些實施例中，提供治療或預防組合物連同用於向患有實體腫瘤或有罹患實體腫瘤風險之個體投與治療或預防組合物，例如以用於治療及/或預防結腸直腸癌、胰臟癌、肺腺癌及/或胃癌的說明書。在一些實施例中，說明書可包括關於使用該組合物治療及/或預防病症之資訊。在一些實施例中，說明書包括但不限於治療或預防組合物之描述、劑量時間表、用於治療或預防該病症或其症狀之投藥時間表、預防措施、警告、適應症、反適應症、過度劑量資訊、不良反應、動物藥理學、臨床研究及/或參考文獻。在一些實施例中，說明書可直接印刷在容器(當存在時)上，或者作為施加至容器之標籤，或者作為在容器中或與容器一起提供之單獨印頁、小冊子、卡片或資料夾。 實施例1.    一種抑制嵌合受體，其包含結合至抗原之細胞外抗原結合域，該抗原係選自由以下組成之群：VSIG2、CPM、ITM2C、SLC26A2、SLC4A4、GPA33、PLA2G2A、ABCA8、ATP1A2、CHP2及SLC26A3。 2.    如實施例1之抑制嵌合受體，其中該抗原為VSIG2。 3.    如實施例1之抑制嵌合受體，其中該抗原為CPM。 4.    如實施例1之抑制嵌合受體，其中該抗原為ITM2C。 5.    如實施例1之抑制嵌合受體，其中該抗原為SLC26A2。 6.    如實施例1之抑制嵌合受體，其中該抗原為SLC4A4。 7.    如實施例1之抑制嵌合受體，其中該抗原為GPA33。 8.    如實施例1之抑制嵌合受體，其中該抗原為PLA2G2A。 9.    如實施例1之抑制嵌合受體，其中該抗原為ABCA8。 10.  如實施例1之抑制嵌合受體，其中該抗原為ATP1A2。 11.  如實施例1之抑制嵌合受體，其中該抗原為CHP2。 12.  如實施例1之抑制嵌合受體，其中該抗原為SLC26A3。 13.  如實施例1至12中任一者之抑制嵌合受體，其中當表現於細胞上時，該抑制嵌合受體抑制該細胞之一或多種活性。 14.  如實施例1至13中任一者之抑制嵌合受體，其中該抗原不表現於腫瘤細胞上，或該抗原係以比非腫瘤細胞上之表現低的水準表現於腫瘤細胞上。 15.  如實施例1至14中任一者之抑制嵌合受體，其中該抗原係表現於非腫瘤細胞上，或該抗原係以比相應腫瘤細胞上之表現高的水準表現於非腫瘤細胞上。 16.  如實施例15之抑制嵌合受體，其中該抗原係表現於非腫瘤細胞上，該非腫瘤細胞係來源於選自由以下組成之群的組織：肺、胰臟、胃腸道、結腸、腦、神經元組織、內分泌、骨、骨髓、免疫系統、肌肉、肝臟、膽囊、腎臟、膀胱、雄性生殖器官、雌性生殖器官、脂肪、軟組織及皮膚。 17.  如實施例1至16中任一者之抑制嵌合受體，其中該抑制嵌合受體包含一或多個細胞內抑制域，該一或多個細胞內抑制域係選自由以下組成之群：PD-1、CTLA4、TIGIT、LAIR1、GRB-2、Dok-1、Dok-2、SLAP、LAG3、HAVR、BTLA、LIR1、NKG2A、KIR3DL1、GITR、PD-L1、CSK、SHP-1、PTEN、CD45、CD148、PTP-MEG1、PTP-PEST、c-CBL、CBL-b、PTPN22、LAR、PTPH1、SHIP-1、RasGAP、CD94及CD161。 18.  如實施例1至17中任一者之抑制嵌合受體，其中該抗原結合域包含一或多個抗體、抗體之抗原結合片段、F(ab)片段、F(ab')片段、單鏈可變片段(scFv)或單結構域抗體(sdAb)。 19.  如實施例1至18中任一者之抑制嵌合受體，其中該抗原結合域包含一或多個單鏈可變片段(scFv)。 20.  如實施例19之抑制嵌合受體，其中該一或多個scFv各自包含重鏈可變域(VH)及輕鏈可變域(VL)。 21.  如實施例20之抑制嵌合受體，其中該VH及該VL係由肽連接體隔開。 22.  如實施例21之抑制嵌合受體，其中該肽連接體包含SEQ ID NO: 39或SEQ ID NO: 77之胺基酸序列。 23.  如實施例20至22中任一者之抑制嵌合受體，其中該一或多個scFv各自包含結構VH-L-VL或VL-L-VH，其中VH為該重鏈可變域，L為該肽連接體，且VL為該輕鏈可變域。 24.  一種經分離之細胞，其包含如實施例1至23中任一者之抑制嵌合受體。 25.  如實施例24之經分離之細胞，其中該抑制嵌合受體係重組表現。 26.  如實施例24或實施例25之經分離之細胞，其中該抑制嵌合受體係由載體或來自該細胞之基因體之所選基因座表現。 27.  如實施例24至26中任一者之經分離之細胞，其中該細胞進一步包含包括一或多個細胞外抗原結合域之嵌合受體，其中該一或多個細胞外抗原結合域結合一或多個抗原，該一或多個抗原係選自由以下組成之群：CEA、CEACAM1、CEACAM5及CEACAM6。 28.  一種經分離之細胞，其包含： (a) 抑制嵌合受體，其包含結合至抗原之細胞外抗原結合域，其中該抗原係選自由以下組成之群：VSIG2、CPM、ITM2C、SLC26A2、SLC4A4、GPA33、PLA2G2A、ABCA8、ATP1A2、CHP2及SLC26A3；及 (b) 嵌合受體，其包含一或多個細胞外抗原結合域，其中該一或多個細胞外抗原結合域結合一或多個額外抗原，該一或多個額外抗原係選自由以下組成之群：CEA、CEACAM1、CEACAM5及CEACAM6。 29.  如實施例27或實施例28之經分離之細胞，其中該嵌合受體為嵌合T細胞受體或嵌合抗原受體(CAR)。 30.  如實施例29之經分離之細胞，其中該嵌合受體為CAR。 31.  如實施例30之經分離之細胞，其中該CAR包含一或多個細胞內信號傳導域，且該一或多個細胞內信號傳導域係選自由以下組成之群：CD3ζ鏈細胞內信號傳導域、CD3ε鏈細胞內信號傳導域、CD97細胞內信號傳導域、CD11a-CD18細胞內信號傳導域、CD2細胞內信號傳導域、ICOS細胞內信號傳導域、CD27細胞內信號傳導域、CD154細胞內信號傳導域、CD8細胞內信號傳導域、OX40細胞內信號傳導域、4-1BB細胞內信號傳導域、CD28細胞內信號傳導域、ZAP40細胞內信號傳導域、CD30細胞內信號傳導域、GITR細胞內信號傳導域、HVEM細胞內信號傳導域、DAP10細胞內信號傳導域、DAP12細胞內信號傳導域、MyD88細胞內信號傳導域、2B4細胞內信號傳導域、NKp46細胞內信號傳導域、NKp30細胞內信號傳導域、NKp44細胞內信號傳導域、NKG2D細胞內信號傳導域、CD226細胞內信號傳導域及CD160細胞內信號傳導域。 32.  如實施例30或實施例31之經分離之細胞，其中該CAR包含跨膜結構域，且該跨膜結構域係選自由以下組成之群：CD8跨膜結構域、CD28跨膜結構域、CD25跨膜結構域、CD7跨膜結構域、CD3ζ鏈跨膜結構域、CD4跨膜結構域、4-1BB跨膜結構域、OX40跨膜結構域、ICOS跨膜結構域、CTLA-4跨膜結構域、LAX跨膜結構域、LAT跨膜結構域、PD-1跨膜結構域、LAG-3跨膜結構域、TIM3跨膜結構域、KIR3DS1跨膜結構域、KIR3DL1跨膜結構域、NKG2D跨膜結構域、NKG2A跨膜結構域、TIGIT跨膜結構域、2B4跨膜結構域及BTLA跨膜結構域。 33.  如實施例30至32中任一者之經分離之細胞，其中該CAR包含間隔區，該間隔區介於該抗原結合域與該跨膜結構域之間，且該間隔區具有選自由SEQ ID NO: 49-58組成之群的胺基酸序列。 34.  如實施例27至33中任一者之經分離之細胞，其中該抑制嵌合受體及/或該嵌合受體之該抗原結合域包含一或多個抗體、抗體之抗原結合片段、F(ab)片段、F(ab')片段、單鏈可變片段(scFv)或單結構域抗體(sdAb)。 35.  如實施例27至33中任一者之經分離之細胞，其中該抑制嵌合受體及/或該嵌合受體之該抗原結合域包含一或多個單鏈可變片段(scFv)。 36.  如實施例35之經分離之細胞，其中該一或多個scFv各自包含重鏈可變域(VH)及輕鏈可變域(VL)。 37.  如實施例36之經分離之細胞，其中該VH及該VL係由肽連接體隔開。 38.  如實施例37之經分離之細胞，其中該肽連接體包含SEQ ID NO: 39或SEQ ID NO: 77之胺基酸序列。 39.  如實施例36至38中任一者之經分離之細胞，其中該一或多個scFv各自包含結構VH-L-VL或VL-L-VH，其中VH為該重鏈可變域，L為該肽連接體，且VL為該輕鏈可變域。 40.  如實施例28至39中任一者之經分離之細胞，其中該一或多個額外抗原為CECAM1。 41.  如實施例40之經分離之細胞，其中結合至CEACAM1之該抗原結合域包括包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的重鏈可變域(VH)及包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的輕鏈可變域(VL)。 42.  如實施例28至39中任一者之經分離之細胞，其中該一或多個額外抗原為CECAM5。 43.  如實施例42之經分離之細胞，其中結合至CEACAM5之該抗原結合域包含選自由以下組成之群的重鏈可變域(VH)及輕鏈可變域(VL)： (a) 包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的VH及包含SEQ. ID NO: 4之胺基酸序列的VL； (b) 包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列的VH及包含SEQ. ID NO: 10之胺基酸序列的VL； (c) 包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列的VH及包含SEQ. ID NO: 12之胺基酸序列的VL； (d) 包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列的VH及包含SEQ. ID NO: 14之胺基酸序列的VL； (e) 包含SEQ ID NO: 78之胺基酸序列的VH及包含SEQ. ID NO: 79之胺基酸序列的VL；以及 (f) 包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列的VH及包含SEQ. ID NO: 16之胺基酸序列的VL。 44.  如實施例42之經分離之細胞，其中結合至CEACAM5之該抗原結合域包含選自由以下組成之群的重鏈(HC)及輕鏈(LC)： (a) 包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列的HC及包含SEQ. ID NO: 6之胺基酸序列的LC；以及 (b) 包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列的HC及包含SEQ. ID NO: 8之胺基酸序列的LC。 45.  如實施例28至39中任一者之經分離之細胞，其中該一或多個額外抗原為CECAM6。 46.  如實施例45之經分離之細胞，其中結合至CEACAM6之該抗原結合域包括包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列的重鏈可變域(VH)及包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列的輕鏈可變域(VL)。 47.  如實施例28至39中任一者之經分離之細胞，其中該細胞為免疫反應細胞。 48.  如實施例28至47中任一者之經分離之細胞，其中該抑制嵌合受體結合至該抗原能夠抑制該免疫反應細胞。 49.  如實施例28至48中任一者之經分離之細胞，其中該嵌合受體結合至該一或多個額外抗原能夠活化該免疫反應細胞。 50.  如實施例28至49中任一者之經分離之細胞，其中該嵌合受體以低結合親和力結合至該一或多個額外抗原。 51.  如實施例28至50中任一者之經分離之細胞，其中該嵌合受體以比該抑制嵌合受體結合至該抗原之結合親和力低的結合親和力結合至該一或多個額外抗原。 52.  如實施例28至51中任一者之經分離之細胞，其中該抑制嵌合受體以低結合親合力結合至該抗原。 53.  如實施例27至52中任一者之經分離之細胞，其中該嵌合受體係重組表現。 54.  如實施例27至53中任一者之經分離之細胞，其中該嵌合受體係由載體或來自該細胞之基因體之所選基因座表現。 55.  如實施例24至54中任一者之經分離之細胞，其中該細胞係選自由以下組成之群：T細胞、天然殺手(NK)細胞、細胞毒性T淋巴球(CTL)、調控T細胞、天然殺手T (NKT)細胞、骨髓細胞、巨噬細胞、人類胚胎幹細胞(ESC)、ESC衍生細胞、多潛能幹細胞及誘導型多潛能幹細胞(iPSC)以及iPSC衍生細胞。 56.  如實施例24至55中任一者之經分離之細胞，其中該細胞為自體的。 57.  如實施例24至55中任一者之經分離之細胞，其中該細胞為同種異體的。 58.  一種經分離之核酸，其編碼如實施例1至23中任一者之抑制嵌合受體。 59.  一種載體，其包含如實施例58之核酸。 60.  一種經基因修飾之細胞，其包含如實施例58之核酸或如實施例59之載體。 61.  一種治療有需要之個體的方法，該方法包括投與如實施例24至57中任一者之經分離之細胞。 62.  一種在個體中刺激針對腫瘤細胞之細胞介導之免疫反應的方法，該方法包括向患有腫瘤之個體投與如實施例24至57中任一者之經分離之細胞。 63.  一種在個體中提供抗腫瘤免疫力之方法，該方法包括向有需要之個體投與如實施例24至57中任一者之經分離之細胞。 64.  一種在個體中減少腫瘤負荷之方法，該方法包括向該個體投與如實施例24至57中任一者之經分離之細胞。 65.  如實施例64之方法，其中該方法減少腫瘤細胞之數目。 66.  如實施例64之方法，其中該方法減小腫瘤大小。 67.  如實施例64之方法，其中該方法減小腫瘤體積。 68.  如實施例64之方法，其中該方法消除該個體之該腫瘤。 69.  一種治療患有腫瘤之個體的方法，該方法包括投與如實施例24至57中任一者之經分離之細胞。 70.  一種在個體中治療或預防結腸直腸癌之方法，該方法包括向該個體投與如實施例24至57中任一者之經分離之細胞。 71.  一種在個體中治療或預防胰臟癌之方法，該方法包括向該個體投與如實施例24至57中任一者之經分離之細胞。 72.  一種在個體中治療或預防肺腺癌之方法，該方法包括向該個體投與如實施例24至57中任一者之經分離之細胞。 73.  一種在個體中治療或預防胃癌之方法，該方法包括向該個體投與如實施例24至57中任一者之經分離之細胞。 74.  如實施例61至73中任一者之方法，其中該等經分離之細胞係以有效量投與。 75.  如實施例69至74中任一者之方法，其中該方法增加該個體之無進展存活時間。 76.  如實施例69至75中任一者之方法，其中該方法增加該個體之存活時間。 77.  一種醫藥組合物，其包含有效量之如實施例24至57中任一者之經分離之細胞及醫藥學上可接受之載劑、醫藥學上可接受之賦形劑或其組合。 78.  如實施例77之醫藥組合物，其中該醫藥組合物係用於治療及/或預防結腸直腸癌、胰臟癌、肺腺癌及/或胃癌。 79.  一種用於治療及/或預防結腸直腸癌、胰臟癌、肺腺癌及/或胃癌之套組，其包含如實施例24至57中任一者之經分離之細胞或如實施例77之醫藥組合物。 80.  如實施例79之套組，其中該套組進一步包括關於使用該經分離之細胞在個體中治療及/或預防結腸直腸癌、胰臟癌、肺腺癌及/或胃癌之書面說明書。 81.  一種用於治療及/或預防結腸直腸癌、胰臟癌、肺腺癌及/或胃癌之套組，其包含如實施例58之經分離之核酸或如實施例59之載體。 82.  如實施例81之套組，其中該套組進一步包括關於使用該核酸產生一或多種用於在個體中治療及/或預防結腸直腸癌、胰臟癌、肺腺癌及/或胃癌之抗原特異性細胞的書面說明書。 實例
以下為本發明之方法及組合物之實例。應理解，鑒於本文中所提供之一般性描述，可實踐各種其他實施例。
以下為用於進行本發明所主張之標的物之特定實施例的實例。該等實例僅出於說明目的而提供且不意欲以任何方式限制本發明之範疇。已努力確保所使用之數字(例如，量、溫度等)的準確性，但固然應允許一定程度之實驗誤差及偏差。 實例 1 ： 針對實體腫瘤抗原之生物資訊篩檢
CEA因其作為腫瘤抗原之既定作用外加由於中靶脫組織毒性而導致其治療效力受限而被選擇用於進一步研究。分析來自所選實體腫瘤及正常組織樣品之微陣列資料、RNA-seq資料及蛋白質組學資料以及來自脫靶組織之資料的CEACAM1、CEACAM5及CEACAM6表現水準。 圖 1中描繪CEA家族成員之比較分析。對來自癌症基因體圖譜(TCGA)之資料的分析顯示，CEACAM5及CEACAM6表現在結腸直腸癌(CRC)及正常組織二者中較高( 圖 2)。該分析允許在不同群組間進行比較。log2標度之y軸允許確定不同的腫瘤與正常組織之間在表現方面之相對差異。此等發現係藉由使用Lee等人 (2020) Nat Genetics, 52(1):56-73中所公開之結腸癌及健康結腸之單一細胞RNAseq之所提供RNA資料集對患者進行生物資訊分析來證實，其中CEACAM5表現示於 圖 3A中且CEACAM6表現示於 圖 3B中，揭示癌細胞與正常細胞之間的表現相當。藉由組織微陣列之免疫組織化學染色來評定正常及癌症組織中之蛋白質分析，並且在蛋白質層級上證實CEA家族蛋白之表現( 圖 4)。儘管據發現表現在正常組織中亦較高，但實體組織類型中CEACAM家族成員之高水準突出顯示CEACAM1、CEACAM5及CEACAM6為實體腫瘤療法之適合標靶。為了進行進一步系統驗證，自ATCC購得一組人類結腸癌細胞株，並使用流式細胞術測定不同CEACAM同種型(CEA家族成員：CEACAM1、CEACAM5及CEACAM6)之表現( 圖 5)。 實例 2 ：對抑制抗原標靶 (「 NOT」 標靶 ) 之生物資訊篩檢
隨後對 實例 1中所鑑定之CEACAM1、CEACAM5及CEACAM6抗原進行配對以進行NOT閘選。使用scRNA定序資料，使用以下標準確定NOT標靶：NOT標靶在實體腫瘤組織中具有較低表現，而在所要組織中具有較高表現。藉由對scRNAseq資料進行差異基因表現(DEG)分析來鑑定潛在NOT抗原。藉由對數變化倍數(LFC)＞1健康:腫瘤組織對標靶進行初步過濾。隨後過濾標靶，並且僅考慮推定之膜或細胞表面蛋白。隨後基於文獻檢索等對此等進行手動優先排序及調查。類似地，藉由檢查相對於實體腫瘤抗原CEACAM1、CEACAM5或CEACAM6之表現來證實適合之NOT標靶。當實體腫瘤抗原表現較高時，所選NOT標靶在腫瘤細胞中具有低表現，而在健康上皮細胞中具有高表現。
藉由此策略確定之「NOT」閘選標靶包括VSIG2、CPM、ITM2C、SLC26A2、SLC4A4、GPA33、PLA2G2A、ABCA8及ATP1A2。「NOT」標靶亦描述於 表 9中。
對於ABCA8 ( 圖 6A)及ATP1A2 ( 圖 6B)，顯示來自TCGA資料集之RNA分析。ABCA8之單一細胞RNA定序(scRNAseq)結果示於 圖 7A及 圖 7B中。
使用Li等人 (2017) Nat. Genetics, 11(23):6861-6873 (GSE81861)、Lee等人 (2020) Nat. Genetics, 52(1):56-73 (GSE132465)及GSE144735中所提供之以下RNA資料集分析腫瘤細胞及各種正常細胞之VSIG2表現，其中如以上實例1中所描述進行分析。如 圖 8中所示，腫瘤細胞中未偵測到VSIG2表現。相比之下，正常組織在所檢查之四個正常細胞子集中顯示可偵測之VSIG2表現，證明VSIG2滿足作為NOT標靶之標準。在獨立scRNAseq資料集中，進一步分析VSIG2表現在組織上皮區室中之特異性表現。使用主要成分分析(PCA)，藉由疊加來鑑定scRNAseq VSIG2表現之特定細胞亞群。如 圖 9A至 圖 9B中所示，VSIG2表現在正常上皮區室亞群中較高( 圖 9A輪廓區域，左圖)，而在腫瘤細胞上皮區室亞群( 圖 9A輪廓區域，右圖)中較低，且在整個腫瘤組織中較低，再次證明VSIG2滿足作為NOT標靶之標準。
亦在正常及腫瘤組織中檢查VSIG2及CEACAM5之比較基因表現研究。如 圖 10A至 圖 10E中所示，該分析證明諸多組織類型中之表現逆相關。當與CEACAM6相比時，對VSIG2觀測到類似表現模式。亦針對VSIG2對諸多細胞類型及組織進行scRNAseq分析，分析與以上所描述之結果一致( 圖 11)。與 圖 10A至 圖 10E中之比較表現分析一致，VSIG2與健康肺組織中之CEACAM5及CEACAM6表現相關，如 圖 12A中所示。
使用具有多個胃腸腫瘤及健康組織樣品之組織微陣列測定推定VSIG2蛋白表現( 圖 13A)。藉由免疫組織化學(IHC)，使用兩種不同的市售抗體(單株抗體OTI2D8及多株抗體ab252969)測定VSIG2蛋白表現。健康腸黏膜之代表性影像顯示上皮細胞中之陽性VSIG2免疫反應性( 圖 13B至 圖 13C)。使用多路IHC觀測到aCAR標靶CEACAM5及iCAR標靶VSIG2在胃腸健康上皮細胞中之共定位( 圖 14A至 圖 14B)。重要的是，在3級IIB期結腸癌樣品中未觀測到aCAR標靶CEACAM5及iCAR標靶VSIG2之共定位，其中觀測到大多數VSIG2信號較低或有核，且因而iCAR NOT閘技術不會對癌症組織賦予保護，而是將特異性保護健康組織( 圖 15)。藉由分析來自兩個資料集之scRNAseq資料確定aCAR標靶(CEACAM5)及iCAR標靶(VSIG2)在結腸樣品中之基質區室及免疫細胞中共表現( 圖 16A至 圖 16C)。
類似地分析另一潛在NOT標靶CPM之基因表現。在結腸癌及正常組織( 圖 17A)以及正常肺組織( 圖 17B)中進行表現分析。CPM及CEACAM5及CEACAM6在正常及腫瘤組織中之比較基因表現研究顯示表現逆相關，如 圖 17C中所示。
亦對NOT候選抗原進行推定基因表現分析，以確定正常及腫瘤組織中之表現：GPA33 ( 圖 18A- 圖 18B)、PLA2G2A ( 圖 19A 至圖 19B)、ITM2C ( 圖 20A 至圖 20B)、CHP2 ( 圖 21A 至圖 21B)、SLC26A2 ( 圖 22A 至圖 22B)、SLC4A4 ( 圖 23A 至圖 23B)及SLC26A3 ( 圖 24A 至圖 24B)。 實例 3 ：表現 CEA aCAR 之 T 細胞展現增加之細胞介素 / 趨化因子誘導及靶細胞殺死
評定經編碼CEA活化CAR (「aCAR」)之構築體慢病毒轉導之T細胞的CAR表現、細胞介素表現及靶細胞殺死。對來自兩個不同供體且經包括CD28共刺激域、CD3ζ細胞內結構域及各種抗CEA scFv (來源於hMN14、hMFE23、MG7及MRG1)之CEA CAR構築體轉導之初生供體T細胞進行測試。各CAR構築體在N端至C端方向上編碼CD8信號序列(SEQ ID NO: 76)、scFv結構域(亦即，「結合劑」)、Myc抗原決定基標籤(SEQ ID NO: 75)、CD8鉸鏈(SEQ ID NO: 50)、來源於CD28 (SEQ ID NO: 46)或OX40 (SEQ ID NO: 47)之跨膜結構域、來源於CD28 (SEQ ID NO: 71)或OX40 (SEQ ID NO: 72)之共刺激域，以及CD3ζ活化域(SEQ ID NO: 73)。各構築體中所使用之各結合劑、跨膜結構域及共刺激域之描述提供於 表 12中。用0.6或0.3皮克(如藉由p24分析法所量測)慢病毒/T細胞之MOI對T細胞進行轉導。初生T細胞獲自兩個不同的供體(稱為「供體1」及「供體2」)，並用於評定構築體轉導效率。經由流式細胞術，藉由針對抗原決定基標籤(Myc)之存在進行染色來評定CAR表現。在轉導後4天及7天時對細胞進行染色以確定構築體表現之穩定性。使用未轉導對照物(無病毒)繪出用於確定Myc表現%之閘，使得＜1% Myc+細胞處於陽性閘中。確定中值螢光強度(MFI)以定量及評定CAR表現水準。第4天各CAR在供體1及供體2 T細胞中之表現水準示於 表 13中。第8天各CAR在供體1及供體2 T細胞中之表現水準示於 表 14中。
表 12
構築體 ID 結合劑 (scFv) 、 取向及 SEQ ID NO TM 及共刺激域  
SB02463 hMN14 VL-VH (SEQ ID NO: 19) CD28  
SB02465 hMFE23 VH-VL (SEQ ID NO: 20)  
SB02467 MG7 VL-VH (SEQ ID NO: 21)  
SB02470 MRG1 VH-VL (SEQ ID NO: 22)  
SB02779 hMN14 L/H (SEQ ID NO: 19) OX40  
SB02782 hMFE23 VH-VL (SEQ ID NO: 20)  
SB02785 MG7 L/H (SEQ ID NO: 21)  
SB02788 MRG1 H/L (SEQ ID NO: 22)  
表 13
      第 4 天   
構築體 ID MOI (pg) Myc+ % Myc+ 細胞之 MFI   
SB02463 0.6 67.1 39083 供體 1
SB02465 0.6 93.2 56281
SB02467 0.6 71.1 14712
SB02470 0.6 77.8 28766
SB02476 0.6 71.2 5370
無病毒 0 0.47 2680
SB02463 0.3 60.1 36351
SB02465 0.3 91 47832
SB02467 0.3 67.8 12812
SB02470 0.3 73.2 26101
SB02476 0.3 64 4950
SB02463 0.6 58.9 40008 供體 2
SB02465 0.6 89.9 48857
SB02467 0.6 62 13511
SB02470 0.6 77.9 26231
SB02476 0.6 70.1 5392
無病毒 0 0.89 2329
SB02463 0.3 53.4 37398
SB02465 0.3 89.9 49248
SB02467 0.3 72.1 17351
SB02470 0.3 74.2 25653
SB02476 0.3 63.1 4910
表 14
      第 8 天   
構築體 ID MOI Myc+ % Myc+ 細胞之 MFI   
SB02463 0.6 65 40931 供體 1
SB02465 0.6 93.3 37665
SB02467 0.6 81.8 23874
SB02470 0.6 74.5 31633
SB02476 0.6 87.2 6797
無病毒 0 0.21 2557
SB02463 0.3 58.3 40180
SB02465 0.3 91.1 33318
SB02467 0.3 78.9 22621
SB02470 0.3 71 29855
SB02476 0.3 83.1 6449
SB02463 0.6 61.9 71269 供體 2
SB02465 0.6 94.1 68204
SB02467 0.6 72.1 41184
SB02470 0.6 81.7 65274
SB02476 0.6 93.7 12608
無病毒 0 0.34 2389
SB02463 0.3 54.7 57595
SB02465 0.3 93.6 56880
SB02467 0.3 80.4 38961
SB02470 0.3 79.1 60171
SB02476 0.3 92.3 11386
評定經CEA aCAR轉導之T細胞之殺死活性。將經CEA aCAR轉導之T細胞與結腸癌細胞株之靶細胞(LS174t)一起以2:1 E:T比培育隔夜(16至18小時)。Ls174t靶細胞株包括「親代」LS174t細胞(左圖)以及已經轉導以表現螢光報導基因mKate之「mKate」細胞株(右圖)。使用兩個T細胞供體評定潛在CAR活性，即供體1及供體2。收集細胞培養物上清液並測試殺死。為了評定由於殺死活性導致之細胞死亡，量測細胞培養物上清液中之LDH水準。增加之LDH釋放指示靶細胞殺死。遵循製造商之說明書(CyQUANT LDH細胞毒性分析，Thermo Fisher)測定LDH活性。測定化學溶解靶細胞之最大殺死活性，而測定單獨靶細胞之自發LDH釋放。計算與經構築體轉導之供體1 T細胞一起共培養之親代靶細胞( 圖 25A)、與經構築體轉導之供體1 T細胞一起共培養之mKate靶細胞( 圖 25B)、與經構築體轉導之供體2 T細胞一起共培養之親代靶細胞( 圖 26A)，以及與經構築體轉導之供體2 T細胞一起共培養之mKate靶細胞( 圖 26B)的LDH釋放百分比(作為最大LDH釋放之百分比)。相對於未轉導對照物(無病毒)，所有CEA aCAR皆展現顯著殺死活性，指示CAR介導之同源靶細胞殺死。殺死活性在兩個測試靶細胞株中相當。
評定經CEA aCAR轉導之T細胞之細胞介素活性。連同如藉由LDH釋放所量測且示於 圖 25A、 圖 25B、 圖 26A及 圖 26B中之殺死分析一起，亦評定相同細胞培養物上清液之T細胞細胞介素活性。使用Luminex評定自利用供體2進行之殺死分析收集之細胞培養物上清液。由於LDH分析中親代靶細胞對比表現mkate之靶細胞株之差異極小，故評定同一組中之兩個靶細胞株作為技術重複實驗。使用多路免疫分析(ProcartaPlex，Thermo Fisher)量測IL-2 ( 圖 27A)、IFNγ ( 圖 27B)、TNFα ( 圖 27C)、半胱天冬酶3 ( 圖 27D)、穿孔蛋白( 圖 27E)及顆粒酶B ( 圖 27F)之水準，以進一步評估T細胞活性。如 圖 27A 至圖 27F中所示，表現CEA aCAR之T細胞展現比未轉導對照T細胞(無病毒)顯著更高之細胞介素及趨化因子活性，指示識別同源靶細胞後CAR介導之T細胞活化。 實例 4 ：慢病毒轉導之 CEA aCAR NK 細胞展現增加之靶細胞殺死
在此實例中，用編碼各種CEA aCAR構築體及表現包括Axl結合域之CAR之脫靶對照構築體的慢病毒載體轉導初生供體來源之NK細胞，並評定 CAR之表現及CAR介導之殺死。各CEA aCAR構築體在N端至C端方向上編碼CD8信號序列(SEQ ID NO: 76)、scFv結構域(亦即，「結合劑」)、Myc抗原決定基標籤(SEQ ID NO: 75)、CD8鉸鏈(SEQ ID NO: 50)、來源於CD28 (SEQ ID NO: 46)或OX40 (SEQ ID NO: 46)之跨膜結構域、來源於CD28 (SEQ ID NO: 70)或OX40 (SEQ ID NO: 72)之共刺激域，以及CD3ζ活化域(SEQ ID NO: 74)。轉導後5天評定經轉導NK細胞之CEA aCAR表現。用各種scFv測試具有各種抗原結合域(CD28或OX40共刺激域)及CD3ζ細胞內結構域之構築體。各構築體之抗原結合域及共刺激域提供於 表 15中。亦測試作為陰性對照物之脫靶「對照」CAR (SB02716)。以30 IU/NK細胞之MOI轉導NK細胞。經由流式細胞術，藉由針對抗原決定基標籤(Myc)之存在進行染色來評定CAR表現。在轉導後5天時對細胞進行染色以確定構築體表現之穩定性。使用未轉導對照物(無病毒)繪出用於確定Myc表現%之閘，使得＜1% Myc+細胞處於陽性閘中。確定中值螢光強度(MFI)以定量及評定CAR表現水準。各CAR在第4天之表現水準示於 表 15中。
表 15
構築體 ID 結合劑 (scFv) 、 取向及 SEQ ID NO TM 及共刺激域 Myc + % Myc+ 細胞之 MFI
SB02463 hMN14 VL-VH (SEQ ID NO: 19) CD28 21.2 2187
SB02465 hMFE23 VH-VL (SEQ ID NO: 20) 22.7 2414
SB02467 MG7 VL-VH (SEQ ID NO: 21) 4.56 1405
SB02470 MRG1 VH-VL (SEQ ID NO: 22) 20.9 1847
SB02779 hMN14 VL-VH (SEQ ID NO: 19) OX40 18 1513
SB02782 hMFE23 VH-VL (SEQ ID NO: 20) 11.2 1388
SB02785 MG7 VL-VH (SEQ ID NO: 21) 1.5 1272
SB02788 MRG1 VH-VL (SEQ ID NO: 22) 14.2 1523
SB02716 aAxl (對照物) 4-1BB/CD28 42.9 4311
無病毒 N/A    0.88 1604
經CEA aCAR慢病毒轉導之NK細胞在基於流體之分析中的殺死活性。轉導後五天，將經CEA aCAR轉導之NK細胞與結腸直腸癌靶細胞株(LS174t)一起以1:1 E:T比培育隔夜(16-18小時)。將細胞在超低結合U形底板中共培養以促進細胞-細胞相互作用及緩解板黏附。收集細胞並染色以用於流式細胞術，從而確定細胞表型及死亡。使用表現mKate之Ls174t靶細胞來區分靶細胞與CD56+ NK細胞。使用Zombie UV (Biolegend)染料來區分活細胞與死細胞。計算死細胞百分比並示於 圖 28中。如 圖 28中所示，與未轉導(無病毒) NK對照物相比，測試CEA aCAR構築體中有六種展現顯著更高之殺死活性。使用普通單因子ANOVA與鄧奈特多重比較修正來確定顯著差異，**** p ＜ 0.0001。此等結果顯示顯著CAR介導之殺死活性。 實例 5 ：表現各種 CEA aCAR 構築體之經慢病毒及 γ 反轉錄病毒轉導之 NK 細胞之表現及殺死活性
評定經慢病毒及γ反轉錄病毒轉導之NK細胞之CEA aCAR表現。用呈VH-VL取向或VL-VH取向之兩個CEACAM5特異性scFv (A5B7及Tus)測試具有各種鉸鏈、跨膜結構域及細胞內結構域之慢病毒構築體。各CAR構築體在N端至C端方向上編碼CD8信號序列(SEQ ID NO: 76)、scFv結構域(亦即，「結合劑」)、Myc抗原決定基標籤(SEQ ID NO: 75)、CD8鉸鏈(SEQ ID NO: 50)或CD28鉸鏈(SEQ ID NO: 49)、來源於CD28 (SEQ ID NO: 46)或CD8 (SEQ ID NO: 45)之跨膜結構域、來源於CD28 (SEQ ID NO: 71)或4-1BB (SEQ ID NO: 70)之共刺激域，以及CD3ζ活化域(SEQ ID NO: 74)。同時，用各種scFv (三個CEACAM5特異性scFv，即hMN14、hMFE23及特賽妥單抗，以及一個CEACAM1特異性scFv，即MRG1)、跨膜結構域及共刺激域測試γ-反轉錄病毒構築體。各γ反轉錄病毒構築體亦包括CD8信號序列(SEQ ID NO: 76)、myc抗原決定基標籤(SEQ ID NO: 75)及共刺激域C端之CD3ζ活化域(SEQ ID NO: 74)。亦測試作為陰性對照物之脫靶「對照」CAR (SB02716)。經由流式細胞術，藉由針對抗原決定基標籤(Myc)之存在進行染色來評定CAR表現。在轉導後4天及7天時對細胞進行染色以確定構築體表現之穩定性。使用未轉導對照物(無病毒)繪出用於確定Myc表現%之閘，使得＜1% Myc+細胞處於陽性閘中。確定中值螢光強度(MFI)以定量及評定CAR表現水準。經慢病毒轉導之NK細胞在第4天之CAR表現水準示於 表 16中。經γ反轉錄病毒轉導之NK細胞在第4天之CAR表現水準示於 表 17中。經慢病毒轉導之NK細胞在第7天之CAR表現水準示於 表 18中。經γ反轉錄病毒轉導之NK細胞在第7天之CAR表現水準示於 表 19中。
表 16
   慢病毒構築體組分 第 4 天
SB ID scFv 名稱 VH-VL 或 VL-VH 及 SEQ ID NO 鉸鏈 TM 共刺激域 Myc+ % Myc+ 細胞之 MFI
SB03089 Tus VH-VL (SEQ ID NO: 23) CD8 CD28 CD28 67.5 2228
SB03090 VL-VH (SEQ ID NO: 24) 51.2 1684
SB03091 A5B7 VH-VL (SEQ ID NO: 25) 1.2 1064
SB03092 VL-VH (SEQ ID NO: 26) 0.36 1184
SB03093 Tus VH-VL (SEQ ID NO: 23) CD28 34.6 1436
SB03094 VL-VH (SEQ ID NO: 24) 12.6 1149
SB03095 A5B7 VH-VL (SEQ ID NO: 25) 1.8 1593
SB03096 VL-VH (SEQ ID NO: 26) 0.49 1140
SB03097 Tus VH-VL (SEQ ID NO: 23) CD8 CD8 4-1BB 77.5 3408
SB03098 VL-VH (SEQ ID NO: 24) 63.2 2146
SB03099 A5B7 VH-VL (SEQ ID NO: 25) 0.35 1100
SB03100 VL-VH (SEQ ID NO: 26) 0.21 1191
SB02716 脫靶(Axl)對照CAR 18.7 1448
無病毒 N/A 0.44 998
表 17
   γ 反轉錄病毒構築體組分 第 4 天
SB ID scFv 名稱 VH-VL 或 VL-VH 鉸鏈 TM 共刺激域 Myc+ % Myc+ 細胞之 MFI
SB03173 hMN14 VL-VH (SEQ ID NO: 19) CD8 CD28 CD28 15.8 25183
SB03174 VL-VH (SEQ ID NO: 19) CD8 OX40 OX40 21.5 7581
SB03175 VL-VH (SEQ ID NO: 19) CD8 CD8 4-1BB 21.1 11548
SB03176 hMFE23 VH-VL (SEQ ID NO: 20) CD8 CD28 CD28 34.1 10590
SB03178 MRG1 VH-VL (SEQ ID NO: 22) CD8 OX40 OX40 44.9 5859
SB03180 Tus VH-VL (SEQ ID NO: 23) CD8 CD28 CD28 34.1 27758
SB02716 脫靶對照CAR 1448 1448
無病毒 N/A 0.44 998
表 18
   慢病毒構築體組分 第 7 天
SB ID scFv 名稱 VH-VL 或 VL-VH 鉸鏈 TM 共刺激域 Myc+ % Myc+ 細胞之 MFI
SB03089 Tus VH-VL (SEQ ID NO: 23) CD8 CD28 CD28 34.8 1584
SB03090 VL-VH (SEQ ID NO: 24) 15.3 3037
SB03091 A5B7 VH-VL (SEQ ID NO: 25) 1.05 1140
SB03092 VL-VH (SEQ ID NO: 26) 0.21 1146
SB03093 Tus VH-VL (SEQ ID NO: 23) CD28 12.2 1247
SB03094 VL-VH (SEQ ID NO: 24) 3.68 1833
SB03095 A5B7 VH-VL (SEQ ID NO: 25) 0.67 1243
SB03096 VL-VH (SEQ ID NO: 26) 0.22 1319
SB03097 Tus VH-VL (SEQ ID NO: 23) CD8 CD8 4-1BB 54.7 1996
SB03098 VL-VH (SEQ ID NO: 24) 27.4 2023
SB03099 A5B7 VH-VL (SEQ ID NO: 25) 0.17 1421
SB03100 VL-VH (SEQ ID NO: 26) 0.21 1085
SB02716 脫靶對照CAR 8.34 3257
無病毒 N/A 0.37 1531
表 19
   γ 反轉錄病毒構築體組分 第 7 天
SB ID scFv VH-VL 或 VL-VH 鉸鏈 TM 共刺激域 Myc+ % Myc+ 細胞之 MFI
SB03173 hMN14 VL-VH (SEQ ID NO: 19) CD8 CD28 CD28 11 10031
SB03174 VL-VH (SEQ ID NO: 19) CD8 OX40 OX40 17.1 5719
SB03175 VL-VH (SEQ ID NO: 19) CD8 CD8 4-1BB 13 6619
SB03176 hMFE23 VH-VL (SEQ ID NO: 20) CD8 CD28 CD28 20.5 5931
SB03178 MRG1 VH-VL (SEQ ID NO: 22) CD8 OX40 OX40 26.7 3176
SB03180 Tus VH-VL (SEQ ID NO: 23) CD8 CD28 CD28 25.9 14583
SB02716 脫靶對照CAR 8.34 3257
無病毒 N/A 0.37 1531
在基於流體之分析中評定經表16至表19中所示之構築體之子集轉導之NK細胞之殺死活性。將經aCAR轉導之NK細胞與結腸直腸癌靶細胞株LS174t一起以1:1之效應細胞(亦即，NK細胞，「E」)對靶細胞(在此情況下，LS174t細胞，「T」)「E:T」比培育隔夜(16-18小時)。將細胞在超低結合U形底板中共培養以促進細胞-細胞相互作用及緩解板黏附。收集細胞並染色以用於流式細胞術，從而確定細胞表型及死亡。使用Ls174t靶細胞之mKate表現來區分靶細胞與CD56+ NK細胞。使用Zombie UV (Biolegend)染料來區分活細胞與死細胞。計算死細胞百分比並示於 圖 29中。如 圖 29中所示，相對於未轉導(無病毒) NK對照物，許多CEA aCAR構築體(SB03089、SB03097、SB03098、SB03174、SB03176及SB03180)在1:1 E:T比下展現更高殺死活性。使用普通單因子ANOVA與鄧奈特多重比較修正來確定顯著差異，* p ＜ 0.05，** p ＜ 0.005，**** p ＜ 0.0001。總之，此等結果顯示使用慢病毒載體及γ反轉錄病毒載體二者產生之表現CEA aCAR之NK細胞的顯著殺死活性。 實例 6 ：表現各種 CEA aCAR 構築體之經慢病毒轉導之 NK 細胞在各種效應細胞對靶細胞比率下之殺死活性
在轉導後5天評定經各種CEA aCAR構築體慢病毒轉導之NK細胞之CEA aCAR表現。用CEACAM5特異性scFv (A5B7、特賽妥單抗或「Tus」及hMN14)測試具有CD28或4-1BB共刺激域及CD3ζ細胞內結構域之慢病毒構築體。對於A5B7及特賽妥單抗來源之scFv，測試兩個取向之VH-VL及VL-VH。亦測試作為陰性對照物之脫靶「對照」CAR (SB02716)。各構築體之描述提供於 表 20中。經由流式細胞術，藉由針對抗原決定基標籤(Myc)之存在進行染色來評定CAR表現。在轉導後5天時對細胞進行染色以確定構築體表現之穩定性。添加針對SB03089至SB03100之慢病毒以便以2 pg p24/NK細胞之MOI轉導細胞。滴定針對SB02463及SB02779之病毒，使得兩種構築體之CAR表現匹配。使用未轉導對照物(無病毒)繪出用於確定Myc表現%之閘，使得＜1% Myc+細胞處於陽性閘中。確定中值螢光強度(MFI)以定量及評定CAR表現水準。如藉由Myc標籤測定之各構築體之表現示於 表 20中。
表 20
   構築體組分 第 5 天
構築體名稱 scFv V H-V L 或V L-VH 及 SEQ ID NO 鉸鏈 TM 共刺激域 Myc+ % Myc+ 細胞之 MFI
SB03089 Tus VH-VL (SEQ ID NO: 23) CD8 CD28 CD28 19.6 1157
SB03090 VL-VH (SEQ ID NO: 24) 15.2 3911
SB03091 A5B7 VH-VL (SEQ ID NO: 25) 2.43 895
SB03092 VL-VH (SEQ ID NO: 26) 1.41 755
SB03093 Tus VH-VL (SEQ ID NO: 23) CD28 8.37 1021
SB03094 VL-VH (SEQ ID NO: 24) 4.84 1232
SB03095 A5B7 VH-VL (SEQ ID NO: 25) 2.17 925
SB03096 VL-VH (SEQ ID NO: 26) 1.52 805
SB03097 Tus VH-VL (SEQ ID NO: 23) CD8 CD8 4-1BB 33.1 1427
SB03098 VL-VH (SEQ ID NO: 24) 22.9 1853
SB03099 A5B7 VH-VL (SEQ ID NO: 25) 0.74 757
SB03100 VL-VH (SEQ ID NO: 26) 0.73 764
SB02463 hMN14 VL-VH (SEQ ID NO: 19) CD8 CD28 CD28 16.3 1013
SB02779 VL-VH (SEQ ID NO: 19) CD8 OX40 OX40 16.9 1173
SB02716 脫靶對照CAR 13.8 3226
無病毒 N/A 0.88 760
在基於流體之分析中以不同E:T比評定經如 表 20中所示之構築體之子集轉導之NK細胞之殺死活性。將經表16中所示之CEA aCAR構築體中之兩種(SB02463及SB02779)轉導之NK細胞與結腸直腸癌靶細胞株LS174t一起以1:1、1:2及1:4之E:T比培育隔夜(16-18小時)。將細胞在超低結合U形底板中共培養以促進細胞-細胞相互作用及緩解板黏附。亦用未轉導NK細胞(無病毒)及經作為陰性對照物之脫靶CAR (SB02716，其靶向Axl)轉導之NK細胞進行共培養。收集細胞並染色以用於流式細胞術，從而確定細胞表型及死亡。使用表現mKate之Ls174t靶細胞來區分靶細胞與CD56+ NK細胞。使用Zombie UV (Biolegend)染料來區分活細胞與死細胞。計算死細胞百分比並示於 圖 30中。如 圖 30中所示，與未轉導(無病毒) NK對照物相比，CEA aCAR構築體在較低E:T比下展現更高殺死活性，指示CAR介導之同源靶細胞殺死。使用普通二因子ANOVA與鄧奈特多重比較修正來確定顯著差異，* p ＜ 0.05，** p ＜ 0.005。 實例 7 ：具有各種結合域及信號傳導域之 CEA aCAR 在對 NK 細胞進行 γ 反轉錄病毒轉導後之表現
評定γ反轉錄病毒轉導之NK細胞上之CEA aCAR表現。用四種不同的scFv (Tus、hMN14、hMFE23及MG7)、四種不同的跨膜結構域：CD8 (SEQ ID NO: 45)、CD28 (SEQ ID NO: 46)、OX40 (SEQ ID NO: 47)及2B4 (SEQ ID NO: 48)以及四種不同的共刺激域：CD28 (SEQ ID NO: 71)、OX40 (SEQ ID NO: 72)、2B4 (SEQ ID NO: 73)及4-1BB (SEQ ID NO: 70)測試多個γ反轉錄病毒構築體。各構築體亦包括myc抗原決定基標籤、CD8鉸鏈域(SEQ ID NO: 50)及CD3ζ活化域(SEQ ID NO: 74)。各構築體之描述提供於 表 21中。經由流式細胞術，藉由針對抗原決定基標籤(Myc)之存在進行染色來評定CAR表現。在轉導後3天及7天時對細胞進行染色以確定構築體表現之穩定性。使用未轉導對照物(無病毒)繪出用於確定myc表現%之閘，使得＜1% Myc+細胞處於陽性閘中。確定中值螢光強度(MFI)以定量及評定CAR表現水準。γ反轉錄病毒轉導之NK細胞在第3天及第7天之CAR表現水準示於 表 22中。
表 21
   構築體組分
構築體名稱 scFv VH-VL 或 VL-VH 及 SEQ ID NO Tag 鉸鏈 TM 共刺激域
SB03180 Tus VH-VL (SEQ ID NO: 23) Myc CD8 CD28 CD28
SB03290 Tus VH-VL (SEQ ID NO: 23) Myc CD8 OX40 OX40
SB03615 Tus VH-VL (SEQ ID NO: 23) Myc CD8 CD28 4-1BB
SB03173 hMN14 VL-VH (SEQ ID NO: 19) Myc CD8 CD28 CD28
SB03174 hMN14 VL-VH (SEQ ID NO: 19) Myc CD8 OX40 OX40
SB03604 hMN14 VL-VH (SEQ ID NO: 19) Myc CD8 2B4 2B4
SB03175 hMN14 VL-VH (SEQ ID NO: 19) Myc CD8 CD8 4-1BB
SB03176 hMFE23 VH-VL (SEQ ID NO: 20) Myc CD8 CD28 CD28
SB03605 hMFE23 VH-VL (SEQ ID NO: 20) Myc CD8 OX40 OX40
SB03606 hMFE23 VH-VL (SEQ ID NO: 20) Myc CD8 2B4 2B4
SB03607 hMFE23 VH-VL (SEQ ID NO: 20) Myc CD8 CD8 4-1BB
SB03603 MG7 VL-VH (SEQ ID NO: 21) Myc CD8 CD28 CD28
SB03608 MG7 VL-VH (SEQ ID NO: 21) Myc CD8 CD8 OX40
SB03609 MG7 VL-VH (SEQ ID NO: 21) Myc CD8 2B4 2B4
SB03610 MG7 VL-VH (SEQ ID NO: 21) Myc CD8 CD8 4-1BB
無病毒 N/A
表 22
   第 3 天 第 7 天
SB 編號 Myc+ % Myc+ 細胞之 MFI Myc+ % Myc+ 細胞之 MFI
SB03180 46 17919 51.7 7794
SB03290 4.35 7694 3.02 4103
SB03615 45.8 16861 45 7823
SB03173 75.4 19798 70.3 9827
SB03174 46.6 6148 42.2 4635
SB03604 54.3 8585 46.6 4554
SB03175 28.7 9069 29.8 6119
SB03176 47 11582 45.3 5339
SB03605 47.4 4050 42 2729
SB03606 37.5 4495 27.7 2754
SB03607 21.4 6882 22.7 4385
SB03603 43.7 4836 32.1 3754
SB03608 19 2053 12.7 1904
SB03609 18.1 3130 12.3 2505
SB03610 16.3 3041 10.1 2297
無病毒 0.82 1475 0.27 1337
與靶細胞一起培養之經轉導CEA aCAR NK細胞之表面標記物活化。將經CEA aCAR轉導之NK細胞與結腸直腸癌靶細胞株(LS174t)一起以1:1 E:T比培育隔夜(16-18小時)。將細胞在超低結合U形底板中共培養以促進細胞-細胞相互作用及緩解板黏附。收集細胞並染色以用於流式細胞術，從而確定細胞表型及死亡。使用表現mKate之Ls174t靶細胞來區分靶細胞與CD56+ NK細胞。將NK活化標記物NKp46、CD16及CD107A染色以評定在靶細胞存在下之CAR NK活性。針對每一者計算MFI並示於 圖 31A(NKp46)、 圖 31B(CD16)及 圖 31C(CD107a)中。使用普通單因子ANOVA與鄧奈特多重比較修正來確定顯著差異，* p ＜ 0.05，** p ＜ 0.005，*** p ＜ 0.0005，**** p ＜ 0.0001。如 圖 31A、 圖 31B及 圖 31C中所示，所測試之CEA aCAR NK細胞群體中若干者之表面標記物活性增加，指示識別同源靶細胞後NK細胞活化。 實例 8 ：如藉由即時基於螢光之分析所評定之經轉導 CEA aCAR NK 細胞之殺死活性
用螢光報導基因mKate穩定轉導表現CEA之結腸直腸癌細胞(Ls174t細胞株)群體，以追蹤培養過程中之靶細胞生長及豐度。經轉導之Ls174t細胞在此稱為「靶細胞株」。隨後將經CEA aCAR (構築體SB03180)轉導之NK細胞及未轉導對照物(「無病毒」或「NV」) NK細胞與LS174t一起以2:1 E:T比培育。針對各條件將細胞接種於六個技術重複實驗中：單獨靶細胞株、具有靶細胞株之未轉導(「NV」) NK細胞及具有靶細胞株之CEA aCAR NK細胞(用構築體SB03180轉導，參見 表 21)。在培養過程中，每三小時經由即時螢光分析對來自靶細胞之報告信號進行成像以量測mkate。由總紅色積分強度/孔確定各條件之靶細胞株豐度。計算死細胞百分比並示於 圖 32中。將所有資料相對於來自單獨靶細胞株之值進行正規化，並繪製+/-SEM。如圖32中所示，CEA CAR NK細胞在活體外以比未轉導對照物(NV NK)更快之速率抑制靶細胞株生長，指示CAR介導之同源靶細胞殺死。 實例 9 ：經轉導之 CEA aCAR NK 細胞在活體內之殺死活性
在活體內評定經CEA aCAR轉導之NK細胞之殺死活性。為了在活體內追蹤腫瘤進展，對表現CEA之結腸直腸癌Ls174t靶細胞進行轉導以表現螢火蟲螢光素酶(fLuc)。在NK細胞處理前五天(第-5天，在右圖中以黑色箭頭指示)對小鼠經腹膜內接種1e6個L1S174t靶細胞/小鼠。各研究組用30e6個NK細胞(經CEA aCAR構築體SB03180轉導之NK細胞或未轉導NK細胞)與經由腹膜內(IP)遞送投與NK細胞或媒劑對照物(PBS)進行處理。各研究組以八隻小鼠/組開始，且在中間時間點(第6天，以紫色箭頭指示)處死三隻小鼠以用於中間分析(起初n=8，突檢後n=5)。癌細胞接種之後，每週兩次使用全身生物發光成像(BLI)評定fLuc信號。如 圖 33A中所示，將BLI之變化相對於在處理時(第0天)之初始基線值進行正規化。處理後16天獲取之代表性影像示於 圖 33B中。如圖33A及圖33B中所示，在處理後16天之後，已經CEA aCAR NK細胞處理之小鼠展現比經未轉導CAR處理之小鼠顯著更低之腫瘤負荷，指示CAR介導之活體內腫瘤細胞殺死，無病毒(NV)對照NK細胞(* p ＜ 0.05，二因子ANOVA與Sidak多重比較檢驗)。 實例 10 ：狒狒套膜假型化 γ 反轉錄病毒轉導後腫瘤細胞之 CAR 表現及 CAR-NK 殺死
初生NK細胞係獲自第一供體(「NK供體1」)及第二供體(「NK供體2」)。使用自身不活化γ反轉錄病毒載體產生編碼各種CEA aCAR之γ反轉錄病毒，並使用狒狒內源病毒(BaEV)套膜進行假型化。用γ反轉錄病毒轉導來自兩個供體之NK細胞，並評定經轉導之NK細胞上之CEA aCAR表現。針對兩種CEACAM5特異性scFv (hMN-14及特賽妥單抗，「Tus」)，使用編碼具有CD28及CD3ζ細胞內結構域或OX40及CD3ζ細胞內結構域之CAR的第一γ反轉錄病毒構築體主鏈及第二γ反轉錄病毒構築體主鏈(「反轉錄病毒1」及「反轉錄病毒2」)測試反轉錄病毒構築體。經由流式細胞術，藉由針對抗原決定基標籤(Myc)之存在進行染色來評定CAR表現。在轉導後11天時對細胞進行染色以確定構築體表現之穩定性。使用未轉導對照物(無病毒)繪出用於確定Myc表現%之閘，使得＜1% Myc+細胞處於陽性閘中。確定中值螢光強度(MFI)以定量及評定CAR表現水準。經BaEV假型化γ反轉錄病毒轉導之NK 供體1細胞之CAR表現示於 表 23中。經相同BaEV假型化γ反轉錄病毒轉導之NK 供體2細胞之CAR表現示於 表 24中。兩個供體之間的表現(轉導)百分比平均值示於 表 25中。
表 23
NK 供體 1 細胞
構築體名稱 反轉錄病毒構築體主鏈 scFv 名稱 密碼子最佳化 共刺激域 信號序列 轉導 (Myc+) % MFI
SB03173 1 hMN14 人類密碼子最佳化 CD28 CD8 18 534
SB03174 1 hMN14 人類密碼子最佳化 OX40 CD8 5.02 179
SB04285 1 hMN14 新密碼子最佳化(編碼與SB03173相同之CAR胺基酸序列) CD28 CD8 44.2 1454
SB04293 1 hMN14 新密碼子最佳化 (編碼與SB03174相同之CAR胺基酸序列) OX40 CD8 47.2 1695
SB03180 1 Tus 人類密碼子最佳化 CD28 CD8 19.4 562
SB03290 1 Tus 人類密碼子最佳化 OX40 CD8 9.08 248
SB04288 1 Tus 新密碼子最佳化 (編碼與SB03180相同之CAR胺基酸序列) CD28 CD8 45.7 1338
SB04296 1 Tus 新密碼子最佳化 (編碼與SB03190相同之CAR胺基酸序列) OX40 CD8 39.8 1077
SB04442 2 hMN14 人類最佳化(編碼與SB03173相同之CAR胺基酸序列) CD28 CD8 93.1 16783
SB04443 2 hMN14 人類最佳化(編碼與SB03174相同之CAR胺基酸序列) OX40 CD8 94.1 18022
SB04444 2 Tus 人類密碼子最佳化 (編碼與SB03180相同之CAR胺基酸序列) CD28 CD8 94.4 19568
SB04445 2 Tus 人類密碼子最佳化 (編碼與SB03190相同之CAR胺基酸序列) OX40 CD8 91.9 11533
表 24
NK 供體 2 細胞
構築體名稱 反轉錄病毒構築體主鏈 scFv 名稱 密碼子最佳化 共刺激域 信號序列 轉導 (Myc+) % MFI
SB03173 1 hMN14 人類密碼子最佳化 CD28 CD8 11.9 329
SB03174 1 hMN14 人類密碼子最佳化 OX40 CD8 4.31 151
SB04285 1 hMN14 新密碼子最佳化 CD28 CD8 28.4 768
SB04293 1 hMN14 新密碼子最佳化 OX40 CD8 42.5 1422
SB03180 1 Tus 人類密碼子最佳化 CD28 CD8 19.5 561
SB03290 1 Tus 人類密碼子最佳化 OX40 CD8 8.93 233
SB04288 1 Tus 新密碼子最佳化 CD28 CD8 30.7 753
SB04296 1 Tus 新密碼子最佳化 OX40 CD8 38.3 1021
SB04442 2 hMN14 人類密碼子最佳化 CD28 CD8 88.6 11862
SB04443 2 hMN14 人類密碼子最佳化 OX40 CD8 85.1 6268
SB04444 2 Tus 人類密碼子最佳化 CD28 CD8    N/A
SB04445 2 Tus 人類密碼子最佳化 OX40 CD8 86.4 7295
表 25
供體之間的平均值
構築體名稱 轉導 (Myc+) % SD MFI
SB03173 14.95 4.31 431.5
SB03174 4.665 0.50 165
SB04285 36.3 11.17 1111
SB04293 44.85 3.32 1558.5
SB03180 19.45 0.07 561.5
SB03290 9.005 0.106 240.5
SB04288 38.2 10.606 1045.5
SB04296 39.05 1.06 1049
SB04442 90.85 3.18 14322.5
SB04443 89.6 6.36 12145
SB04444 94.4 N/A 19568
SB04445 89.15 3.889 9414
用螢光報導基因mKate穩定轉導表現CEA之結腸直腸癌細胞(Ls174t細胞株)群體，以追蹤培養過程中之靶細胞生長及豐度。經轉導之Ls174t細胞在此稱為「靶細胞株」。隨後將經CEA aCAR (構築體SB03180)轉導之NK細胞及未轉導對照物(「無病毒」或「NV」) NK細胞與LS174t一起以2:1 E:T比培育。針對各條件將細胞接種於六個技術重複實驗中：單獨靶細胞株、具有靶細胞株之未轉導(「NV」) NK細胞及具有靶細胞株之CEA aCAR NK細胞(用構築體SB03180轉導)。在培養過程中，每三小時經由即時螢光分析對來自靶細胞之報告信號進行成像以量測mkate。由總紅色積分強度/孔確定各條件之靶細胞株豐度。針對第一殺死分析中所包括之構築體計算死亡靶細胞百分比(SB03173、SB04293、SB04444及SB04445； 圖 34)。對SB04443、SB04444及SB04445進行單獨的第二殺死分析，並且將此第二分析中之死亡靶細胞百分比示於 圖 35中。如 圖 34中所示，經CEA aCAR構築體SB03173、SB04293、SB04443、SB04445轉導之NK細胞顯示比未轉導NK細胞更高之殺死，且如 圖 35中所示，在針對構築體SB04443及SB04445 (該二者皆包括OX40細胞內結構域)之第二分析中證實殺死。將所有資料相對於來自單獨靶細胞株之值進行正規化，並繪製+/-SEM。 圖 35中所示之殺死活性證實與由未工程改造之NK細胞所致之殺死相比，對經CEA aCAR構築體SB04443、SB04445轉導之NK細胞的殺死更高，且亦示於 圖 34中。 實例 11 ：經狒狒套膜假型化 γ 反轉錄病毒轉導之 CAR-NK 細胞之活體內抗腫瘤活性
產生CEA aCAR NK細胞以評定活體內抗腫瘤活性。初生NK細胞用各種CEA aCAR構築體(構築體SB03173、SB03174、SB03180、SB03290及SB03176)轉導或為未轉導(「無病毒」或「NV」) NK細胞。經由流式細胞術，藉由針對抗原決定基標籤(Myc)之存在進行染色來評定CAR表現。在轉導後11天時對細胞進行染色以確定構築體表現之穩定性。使用未轉導對照物(無病毒)繪出用於確定Myc表現%之閘，使得＜1% Myc+細胞處於陽性閘中。確定中值螢光強度(MFI)以定量及評定CAR表現水準。轉導後第8天及第16天對每一者之表現百分比示於 表 26中。
表26
構築體 時間點( 轉導後天數) CAR+ NK 細胞(Myc 標籤) % MFI AF647 (Myc 標籤) 時間點 CAR+ NK 細胞(Myc 標籤) % MFI AF647 (Myc 標籤)
SB03173 第8天 32.6 10262 第16天 27.9 10316
SB03174 第8天 25.6 5648 第16天 28.1 7014
SB03180 第8天 32 13055 第16天 32.7 15832
SB03290 第8天 18.7 6276 第16天 22 7787
SB03176 第8天 29.2 8113 第16天 39.5 9819
未轉導 第8天 0.58 1073 第16天 0.44 1030
如 表 26中所示，CAR表現隨時間穩定，其中在轉導後16天有至少20%且高達約40%之表現。
為了在活體內追蹤腫瘤進展，對表現CEA之結腸直腸癌Ls174t靶細胞進行轉導以表現螢火蟲螢光素酶(fLuc)。在NK細胞處理前五天，對小鼠經腹膜內接種1e6個L1S174t靶細胞/小鼠。各研究組經由腹膜內(IP)遞送用30e6個NK細胞之群體或媒劑對照物(PBS)進行處理。各研究組以九隻小鼠/組開始。在癌細胞接種之後，在NK細胞處理後2天使用全身生物發光成像(BLI)評定fLuc信號，且各研究組之九隻小鼠之影像示於 圖 36中。在NK細胞處理後13天亦使用總BLI評定fLuc信號，且與經未轉導NK細胞處理之小鼠相比，用經構築體SB03173轉導之NK細胞處理之小鼠實現顯著較低之腫瘤負荷。SB03173 NK細胞研究組、未轉導NK細胞研究組及PBS處理(未處理)研究組之九隻小鼠之代表性影像示於 圖 37中。對於此三個研究組，與NK細胞處理第0天相比，藉由計算各小鼠在NK細胞處理第2天或NK細胞處理第13天之BLI變化倍數來評定腫瘤進展。在第2天及第13天將SB03173 NK細胞研究組、未轉導NK細胞研究組及PBS (未處理)研究組中各小鼠之疾病結果分類為漸進性疾病(BLI變化倍數小於1)、疾病穩定(BLI變化倍數大於1或小於10)或部分/完全緩解(BLI變化倍數大於10) ( 表 27)。
表 27
   第 2 天 第 13 天
處理組 PD SD PR/CR PD SD PR/CR
未處理(PBS) 7 2 0 9 0 0
無病毒NK 3 5 1 5 3 1
SB03173 NK 2 1 5 4 2 3
如 表 27中所示，在第2天及第13天，用經CEA aCAR (構築體SB03173)轉導之NK細胞處理使部分/完全緩解發生率高於用未轉導NK細胞處理及不處理。此等結果指示CEA aCAR在活體內之抗腫瘤活性。DNA及胺基酸(「AA」)序列皆提供於 表 28中。
表28
SB02463 DNA序列 ATGGCTCTGCCTGTGACAGCTCTGCTGCTGCCTCTGGCTCTGCTTCTGCATGCCGCCAGACCTGACATCCAGCTGACACAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCTCTGTGGGCGACAGAGTGACCATCACATGCAAGGCCTCTCAGGACGTGGGCACAAGCGTGGCATGGTATCAGCAGAAGCCTGGCAAGGCCCCTAAGCTGCTGATCTACTGGACCAGCACCAGACACACAGGCGTGCCCAGCAGATTTTCTGGCAGCGGCTCTGGCACCGACTTCACCTTCACCATAAGCAGCCTGCAGCCTGAGGATATCGCCACCTACTACTGCCAGCAGTACAGCCTGTACAGAAGCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAAATCAAAGGCGGATCTGGAAGCGGCGGTTCTGGATCTGGTGGAAGCGGATCTGAGGTGCAGCTGGTGGAATCTGGTGGCGGAGTTGTGCAGCCTGGCAGATCTCTGAGACTGAGCTGTAGCGCCAGCGGCTTCGATTTCACCACCTACTGGATGAGCTGGGTCCGACAGGCCCCTGGCAAAGGACTGGAATGGATCGGCGAGATTCACCCCGACAGCAGCACCATCAATTACGCCCCTAGCCTGAAGGACCGGTTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAATACCCTGTTCCTGCAGATGGACAGCCTCCGGCCTGAAGATACCGGCGTGTACTTTTGCGCCAGCCTGTATTTCGGCTTCCCTTGGTTTGCCTACTGGGGCCAGGGAACACCTGTGACCGTTAGCTCTGAGCAGAAGCTGATCTCCGAAGAGGACCTGACCACAACACCAGCTCCTAGACCACCTACACCAGCACCTACAATCGCCCTGCAGCCACTGTCTCTGAGGCCAGAGGCTTGTAGACCTGCTGCTGGCGGAGCCGTGCATACAAGAGGACTGGATTTCGCCTGCGACTTCTGGGTGCTCGTGGTTGTTGGAGGCGTGCTGGCCTGTTACTCTCTGCTGGTCACCGTGGCCTTCATCATCTTTTGGGTCCGAAGCAAGCGGAGCCGGCTGCTGCACAGCGACTACATGAACATGACCCCTAGACGGCCCGGACCTACCAGAAAGCACTACCAGCCTTACGCTCCTCCTAGAGACTTCGCCGCCTACCGGTCCAGAGTGAAGTTCTCCAGATCTGCCGACGCTCCCGCCTATAAGCAGGGCCAGAACCAGCTGTACAACGAGCTGAACCTGGGGAGAAGAGAAGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGCAGAGATCCTGAGATGGGCGGCAAGCCCAGACGGAAGAATCCTCAAGAGGGCCTGTATAATGAGCTGCAGAAAGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGAATGAAGGGCGAGCGCAGAAGAGGCAAGGGACACGATGGACTGTACCAGGGCCTGAGCACCGCCACCAAGGATACCTATGATGCCCTGCACATGCAGGCCCTGCCTCCAAGA (SEQ ID NO: 80)
SB02463胺基酸序列 MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCSASGFDFTTYWMSWVRQAPGKGLEWIGEIHPDSSTINYAPSLKDRFTISRDNAKNTLFLQMDSLRPEDTGVYFCASLYFGFPWFAYWGQGTPVTVSSEQKLISEEDLTTTPAPRPPTPAPTIALQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR (SEQ ID NO: 81)
SB02465及SB03176 DNA序列 ATGGCTCTGCCTGTGACAGCTCTGCTGCTGCCTCTGGCTCTGCTTCTGCATGCCGCTAGACCCCAAGTGAAGCTGGAACAGTCTGGCGCCGAGGTTGTGAAACCTGGCGCCTCTGTGAAGCTGAGCTGTAAAGCCAGCGGCTTCAACATCAAGGACAGCTACATGCACTGGCTGCGGCAAGGCCCTGGACAGAGACTGGAATGGATCGGCTGGATCGACCCCGAGAATGGCGATACAGAGTACGCCCCTAAGTTCCAGGGCAAAGCCACCTTCACCACCGACACCTCTGCCAACACAGCCTACCTGGGACTGTCTAGCCTGAGGCCTGAAGATACCGCCGTGTACTACTGCAACGAGGGCACACCTACAGGCCCCTACTACTTCGATTATTGGGGCCAGGGCACCCTGGTCACCGTTTCTAGCGGAGGCGGAGGATCTGGTGGCGGAGGAAGTGGCGGAGGCGGTTCTGAAAATGTGCTGACACAGAGCCCCAGCAGCATGTCCGTGTCTGTGGGCGACAGAGTGACAATCGCCTGTAGCGCCTCTAGCAGCGTGCCCTATATGCATTGGCTGCAGCAGAAGCCCGGCAAGAGCCCTAAGCTGCTGATCTACCTGACCAGCAATCTGGCCAGCGGCGTGCCAAGCAGATTTTCTGGAAGCGGCAGCGGCACCGACTACAGCCTGACAATCAGTAGCGTGCAGCCTGAGGATGCCGCCACCTACTACTGTCAGCAGAGAAGCAGCTACCCTCTGACCTTTGGAGGCGGCACCAAGCTGGAAATCAAAGAGCAGAAGCTGATCTCCGAAGAGGACCTGACCACAACACCAGCTCCTAGACCACCTACACCAGCACCTACAATCGCCCTGCAGCCACTGTCTCTGAGGCCAGAAGCTTGTAGACCTGCTGCTGGCGGAGCCGTGCATACAAGAGGACTGGATTTCGCCTGCGACTTCTGGGTGCTCGTGGTTGTTGGCGGAGTGCTGGCCTGTTACTCTCTGCTGGTCACAGTGGCCTTCATCATCTTTTGGGTCCGAAGCAAGCGGAGCCGGCTGCTGCACAGCGACTACATGAACATGACCCCTAGACGGCCCGGACCTACCAGAAAGCACTACCAGCCTTACGCTCCTCCTAGAGACTTCGCCGCCTACCGGTCCAGAGTGAAGTTCAGCAGATCCGCCGATGCTCCCGCCTATAAGCAGGGCCAGAACCAGCTGTACAACGAGCTGAACCTGGGGAGAAGAGAAGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGCAGAGATCCTGAGATGGGCGGCAAGCCCAGACGGAAGAATCCTCAAGAGGGCCTGTATAATGAGCTGCAGAAAGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGAATGAAGGGCGAGCGCAGAAGAGGCAAGGGACACGATGGACTGTATCAGGGCCTGAGCACCGCCACCAAGGATACCTATGATGCCCTGCACATGCAGGCCCTGCCTCCAAGA (SEQ ID NO: 82)
SB02465及SB03176 胺基酸序列 MALPVTALLLPLALLLHAARPENVLTQSPSSMSVSVGDRVTIACSASSSVPYMHWLQQKPGKSPKLLIYLTSNLASGVPSRFSGSGSGTDYSLTISSVQPEDAATYYCQQRSSYPLTFGGGTKLEIKEQKLISEEDLTTTPAPRPPTPAPTIALQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR (SEQ ID NO: 83)
SB02467 DNA序列 ATGGCTCTGCCTGTGACAGCTCTGCTGCTGCCTCTGGCTCTGCTTCTGCATGCTGCCAGACCTCAGATCGTGCTGTCTCAGTCTCCCGCCATCCTGTTTGCTAGCCCTGGCGAGAAAGTGACCATGACCTGTAGAGCCAGCAGCTCCGTGTCCTACATCCACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCAGCAGCCCTAAGCCTTGGATCCACGGCACAAGCAATCTGGCCAGCGGAGTGCCTGCCAGATTTTCTGGAAGCGGCAGCGGCACCAGCTACAGCCTGACCATCTCTAGAATGGAAGCCGAGGACGCCGCCACCTACTACTGTCAGCAGTGGTCCAGCAACCTGAGCACCTTTGGCGGCGGAACAAAGCTGGAAATCAAAGGCGGCGGAGGATCTGGCGGAGGCGGTAGCGGAGGTGGTGGATCTGAAGTGAAGCTGGTGGAATCAGGCGGAGGCCTGGTTCAACCTGGCGGATCTCTGAGACTGAGCTGCAGCATCTCCGGCTTCACCTTCACCGACTACTACATGAACTGGGTCCGACAGAGCCCTGGCAAGGCTCTGGAATGGCTGGGCTTCATCAGAAACAAAGTGAACGGCGACACCACCGAGTACAGCGCCTCTGTGAAGGGCAGATTCACCATCAGCCGGGACATCAGCCAGAGCATCCTGTACCTGCAGATGAACACCCTGCGGACCGAGGATAGCGCCACATATTACTGCGCCAGAGACAAGGGAATCGCCTACTACTTCGACTACTGGGGCCAGGGCACCACACTGACAGTGTCTAGCGAGCAGAAGCTGATCTCCGAAGAGGACCTGACCACAACACCAGCTCCTAGACCACCTACACCAGCACCTACAATCGCCCTGCAGCCACTGTCTCTGAGGCCAGAAGCTTGTAGACCTGCTGCTGGCGGAGCCGTGCATACAAGAGGACTGGATTTCGCCTGCGACTTCTGGGTGCTCGTGGTTGTTGGCGGAGTGCTGGCCTGTTACTCTCTGCTGGTCACCGTGGCCTTCATCATCTTTTGGGTCCGAAGCAAGCGGAGCCGGCTGCTGCACAGCGATTACATGAACATGACCCCTCGGAGGCCCGGACCTACCAGAAAGCACTACCAGCCTTACGCTCCTCCTAGAGACTTCGCCGCCTACCGGTCCAGAGTGAAGTTCAGCAGATCCGCTGATGCCCCTGCCTACAAGCAGGGCCAGAACCAGCTGTACAACGAGCTGAACCTGGGGAGAAGAGAAGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGCAGAGATCCTGAGATGGGCGGCAAGCCCAGACGGAAGAATCCTCAAGAGGGCCTGTATAACGAACTGCAGAAAGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGAATGAAGGGCGAGCGCAGAAGAGGCAAGGGACACGATGGACTGTACCAGGGCCTGAGCACAGCCACCAAGGATACCTATGACGCCCTGCACATGCAGGCCCTGCCTCCAAGA (SEQ ID NO: 84)
SB02467胺基酸序列 MALPVTALLLPLALLLHAARPEVKLVESGGGLVQPGGSLRLSCSISGFTFTDYYMNWVRQSPGKALEWLGFIRNKVNGDTTEYSASVKGRFTISRDISQSILYLQMNTLRTEDSATYYCARDKGIAYYFDYWGQGTTLTVSSEQKLISEEDLTTTPAPRPPTPAPTIALQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR (SEQ ID NO: 85)
SB02470胺基酸序列 MALPVTALLLPLALLLHAARPDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRTSQDIGNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGKSLPRTFGGGTKLEIKEQKLISEEDLTTTPAPRPPTPAPTIALQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR (SEQ ID NO: 86)
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SB02476胺基酸序列 MALPVTALLLPLALLLHAARPDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRTSQDIGNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGKSLPRTFGGGTKLEIKEQKLISEEDLESKYGPPCPSCPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR (SEQ ID NO: 88)
SB02779及SB03174 DNA序列 ATGGCTCTGCCTGTGACAGCTCTGCTGCTGCCTCTGGCTCTGCTTCTGCATGCCGCCAGACCTGACATCCAGCTGACACAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCTCTGTGGGCGACAGAGTGACCATCACATGCAAGGCCTCTCAGGACGTGGGCACAAGCGTGGCATGGTATCAGCAGAAGCCTGGCAAGGCCCCTAAGCTGCTGATCTACTGGACCAGCACCAGACACACAGGCGTGCCCAGCAGATTTTCTGGCAGCGGCTCTGGCACCGACTTCACCTTCACCATAAGCAGCCTGCAGCCTGAGGATATCGCCACCTACTACTGCCAGCAGTACAGCCTGTACAGAAGCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAAATCAAAGGCGGATCTGGAAGCGGCGGTTCTGGATCTGGTGGAAGCGGATCTGAGGTGCAGCTGGTGGAATCTGGTGGCGGAGTTGTGCAGCCTGGCAGATCTCTGAGACTGAGCTGTAGCGCCAGCGGCTTCGATTTCACCACCTACTGGATGAGCTGGGTCCGACAGGCCCCTGGCAAAGGACTGGAATGGATCGGCGAGATTCACCCCGACAGCAGCACCATCAATTACGCCCCTAGCCTGAAGGACCGGTTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAATACCCTGTTCCTGCAGATGGACAGCCTCCGGCCTGAAGATACCGGCGTGTACTTTTGCGCCAGCCTGTATTTCGGCTTCCCTTGGTTTGCCTACTGGGGCCAGGGAACACCTGTGACCGTTAGCTCTGAGCAGAAGCTGATCTCCGAAGAGGACCTGACCACAACACCAGCTCCTAGACCACCTACACCAGCACCTACAATCGCCCTGCAGCCACTGTCTCTGAGGCCAGAGGCTTGTAGACCTGCTGCTGGCGGAGCCGTGCATACAAGAGGACTGGATTTCGCCTGCGACGTGGCCGCCATTCTCGGACTGGGACTTGTTCTGGGACTGCTGGGACCTCTGGCCATTCTGCTGGCTCTGTACCTGCTGAGAAGGGACCAGAGACTGCCTCCTGACGCTCACAAACCTCCAGGCGGAGGCAGCTTCAGAACCCCTATCCAAGAGGAACAGGCTGACGCCCACAGCACCCTGGCCAAGATCAGAGTGAAGTTCAGCAGATCCGCCGACGCTCCCGCCTATAAGCAGGGACAGAATCAGCTGTACAACGAGCTGAACCTGGGGCGCAGAGAAGAGTACGACGTGCTGGACAAGAGAAGAGGCAGGGATCCTGAAATGGGCGGCAAGCCCAGACGGAAGAATCCTCAAGAGGGCCTGTATAATGAGCTGCAGAAAGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGAATGAAGGGCGAACGCAGAAGAGGAAAGGGCCACGACGGACTGTATCAGGGCCTGAGCACAGCCACCAAGGACACCTATGATGCCCTGCACATGCAGGCCCTGCCTCCAAGA (SEQ ID NO: 136)
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SB02782胺基酸序列 MALPVTALLLPLALLLHAARPQVKLEQSGAEVVKPGASVKLSCKASGFNIKDSYMHWLRQGPGQRLEWIGWIDPENGDTEYAPKFQGKATFTTDTSANTAYLGLSSLRPEDTAVYYCNEGTPTGPYYFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSENVLTQSPSSMSVSVGDRVTIACSASSSVPYMHWLQQKPGKSPKLLIYLTSNLASGVPSRFSGSGSGTDYSLTISSVQPEDAATYYCQQRSSYPLTFGGGTKLEIKEQKLISEEDLTTTPAPRPPTPAPTIALQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDVAAILGLGLVLGLLGPLAILLALYLLRRDQRLPPDAHKPPGGGSFRTPIQEEQADAHSTLAKIRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR (SEQ ID NO: 91)
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SB03096胺基酸序列 MALPVTALLLPLALLLHAARPQTVLTQSPSSLSVSVGDRVTITCRASSSVTYIHWYQQKPGLAPKSLIYATSNLASGVPSRFSGSGSGTDYTFTISSLQPEDIATYYCQHWSSKPPTFGQGTKVEVKRTVGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCATSGFTFTDYYMNWVRQAPGKGLEWLGFIGNKANGYTTEYSASVKGRFTISRDKSKSTLYLQMNTLQAEDSAIYYCTRDRGLRFYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVLYLQMNTLQAEDSAIYYCTRDRGLRFYFDYWGQGTLVTVSSEQKLISEEDLNGAAAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR (SEQ ID NO: 99)
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SB03098 DNA序列 ATGGCTCTGCCTGTGACAGCTCTGCTGCTGCCTCTGGCTCTGCTTCTGCATGCTGCCAGACCTGACATCCAGATGACACAGAGCCCTGCCAGCCTGTCTGCCTCTGTGGGAGACAGAGTGACCATCACCTGTCGGGCCAGCGAGAACATCTTCAGCTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCAAGTCTCCTAAGCTGCTGGTGTACAACACCCGGACACTGGCTGAAGGCGTGCCCAGCAGATTTTCTGGCAGCGGCAGCGGAACCGACTTCAGCCTGACAATCAGCAGCCTGCAGCCTGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCACCACTACGGCACCCCTTTCACCTTTGGCTCTGGCACCAAGCTGGAAATCAAGAGAGGCGGCGGAGGATCTGGCGGAGGTGGAAGTGGCGGAGGCGGATCTGAAGTTCAGCTGCAAGAGTCTGGCCCTGGCCTCGTGAAACCTGGCGGATCTCTGTCTCTGAGCTGTGCCGCCAGCGGCTTCGTGTTCAGCAGCTACGATATGAGCTGGGTCCGACAGACCCCTGAGCGAGGACTTGAGTGGGTCGCCTACATCTCTTCTGGCGGCGGAATCACATACGCCCCTAGCACAGTGAAGGGCAGATTCACCGTGTCCAGAGACAACGCCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGACCAGCGAGGACACCGCCGTGTACTATTGTGCCGCTCACTACTTTGGCAGCAGCGGCCCTTTTGCCTATTGGGGCCAGGGAACACTCGTGACCGTGTCTAGCGCCGAGCAGAAGCTGATCTCCGAAGAGGACCTGAATGGCGCCGCTACCACAACACCAGCTCCTAGACCTCCAACTCCTGCTCCTACAATCGCCCTGCAGCCACTGTCTCTGAGGCCTGAAGCTTGTAGACCTGCTGCTGGCGGAGCCGTGCATACCAGAGGACTGGATTTCGCCTGCGACATCTACATCTGGGCCCCTCTGGCTGGAACATGCGGAGTGTTGCTGCTGAGCCTGGTCATCACCAAGCGGGGCAGAAAGAAGCTGCTGTACATCTTCAAGCAGCCCTTCATGCGGCCCGTGCAGACCACACAAGAGGAAGATGGCTGCTCCTGCAGATTCCCCGAGGAAGAAGAAGGCGGCTGCGAGCTGAGAGTGAAGTTCAGCAGATCCGCCGACGCTCCTGCCTATCAGCAGGGACAGAACCAGCTGTACAACGAGCTGAACCTGGGGAGAAGAGAAGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGCAGAGATCCTGAAATGGGCGGCAAGCCCAGACGGAAGAATCCTCAAGAGGGCCTGTATAATGAGCTGCAGAAAGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGAATGAAGGGCGAGCGCAGAAGAGGCAAGGGACACGATGGACTGTACCAGGGCCTGAGCACCGCCACCAAGGATACCTATGATGCCCTGCACATGCAGGCCCTGCCTCCAAGA (SEQ ID NO: 102)
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SB03099 DNA序列 ATGGCTCTGCCTGTGACAGCTCTGCTGCTGCCTCTGGCTCTGCTTCTGCATGCTGCCAGACCTGAAGTGCAGCTGCTGGAATCTGGCGGAGGACTGGTTCAACCTGGCGGCTCTCTGAGACTGAGCTGTGCCACAAGCGGCTTCACCTTCACCGACTACTACATGAACTGGGTCCGACAGGCCCCTGGCAAAGGACTGGAATGGCTGGGCTTCATCGGCAACAAGGCCAACGGCTACACCACCGAGTACAGCGCCTCTGTGAAGGGCAGATTCACCATCAGCCGGGACAAGAGCAAGAGCACCCTGTACCTGCAGATGAACACCCTGCAGGCCGAGGACTCCGCCATCTACTACTGCACCAGAGACAGAGGCCTGCGGTTCTACTTCGACTATTGGGGCCAGGGCACCCTGGTCACAGTGTCTAGCGCCTCTACAAAGGGCCCCAGCGTTTTCCCACTGGCTCCCTGTAGCAGAAGCACCAGCGAATCTACAGCCGCTCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTTCCTGAGCCTGTGACCGTGCTGTATCTCCAGATGAATACTCTCCAGGCTGAAGATAGCGCCATATATTACTGTACGCGCGACCGGGGCCTGAGATTCTACTTTGATTACTGGGGACAAGGGACCCTCGTGACCGTTTCTTCTGGCGGCGGAGGAAGCGGAGGCGGAGGATCCGGTGGTGGTGGATCTCAGACAGTGCTGACACAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGTGTCCGTGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTAGAGCCAGCAGCTCCGTGACCTACATCCACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGACTGGCCCCTAAGAGCCTGATCTACGCCACAAGCAATCTGGCCAGCGGCGTGCCAAGCAGATTTTCTGGAAGCGGCAGCGGCACCGACTATACCTTTACAATCAGCAGCCTGCAGCCTGAGGATATCGCCACCTACTATTGCCAGCACTGGTCCAGCAAGCCTCCAACCTTTGGACAGGGCACCAAGGTGGAAGTGAAGCGGACCGTGGAGCAGAAGCTGATCTCCGAAGAGGACCTGAATGGCGCCGCTACCACAACACCAGCTCCTAGACCTCCAACTCCTGCTCCTACAATCGCCCTGCAGCCACTGTCTCTGAGGCCTGAAGCTTGTAGACCTGCTGCTGGCGGAGCCGTGCATACCAGAGGACTGGATTTCGCCTGCGACATCTACATCTGGGCCCCTCTGGCTGGAACATGCGGAGTGTTGCTGCTGAGCCTGGTCATCACCAAGCGGGGCAGAAAGAAGCTGCTGTACATCTTCAAGCAGCCCTTCATGCGGCCCGTGCAGACCACACAAGAGGAAGATGGCTGCTCCTGCAGATTCCCCGAGGAAGAAGAAGGCGGCTGCGAGCTGAGAGTGAAGTTCAGCAGATCCGCCGACGCTCCTGCCTATCAGCAGGGACAGAACCAGCTGTACAACGAGCTGAACCTGGGGAGAAGAGAAGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGCAGAGATCCTGAAATGGGCGGCAAGCCCAGACGGAAGAATCCTCAAGAGGGCCTGTATAATGAGCTGCAGAAAGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGAATGAAGGGCGAGCGCAGAAGAGGCAAGGGACACGATGGACTGTACCAGGGCCTGAGCACCGCCACCAAGGATACCTATGATGCCCTGCACATGCAGGCCCTGCCTCCAAGA (SEQ ID NO: 104)
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SB03100 DNA序列 ATGGCTCTGCCTGTGACAGCTCTGCTGCTGCCTCTGGCTCTGCTTCTGCATGCTGCCAGACCTCAGACCGTGCTGACACAGAGCCCAAGCAGCCTGTCTGTGTCCGTGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTAGAGCCAGCAGCTCCGTGACCTACATCCACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGACTGGCCCCTAAGAGCCTGATCTACGCCACAAGCAATCTGGCCAGCGGCGTGCCAAGCAGATTTTCTGGAAGCGGCAGCGGCACCGACTACACCTTCACCATATCTAGCCTGCAGCCTGAGGATATCGCCACCTACTACTGCCAGCACTGGTCCAGCAAGCCTCCAACATTTGGCCAGGGCACCAAGGTGGAAGTGAAGAGAACAGTTGGCGGCGGAGGATCTGGCGGAGGCGGTAGCGGAGGTGGTGGATCTGAAGTTCAGCTGCTGGAATCAGGCGGCGGACTGGTTCAACCTGGCGGATCTCTGAGACTGAGCTGTGCCACCAGCGGCTTCACCTTTACCGACTACTACATGAACTGGGTCCGACAGGCCCCTGGCAAAGGACTGGAATGGCTGGGCTTCATCGGCAACAAGGCCAACGGCTACACCACCGAGTACAGCGCCTCTGTGAAGGGCAGATTCACCATCAGCCGGGACAAGAGCAAGAGCACCCTGTACCTGCAGATGAACACCCTGCAGGCCGAGGACTCCGCCATCTACTATTGCACCAGAGACAGAGGCCTGCGGTTCTACTTCGACTATTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACAGTGTCTAGCGCCTCTACAAAGGGCCCCAGCGTTTTCCCACTGGCTCCCTGTAGCAGAAGCACCAGCGAATCTACAGCCGCTCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTTCCTGAGCCAGTGACAGTGCTGTATCTCCAGATGAATACTCTCCAAGCTGAGGACAGCGCCATCTATTACTGTACGCGCGATCGGGGCCTGAGATTCTACTTTGATTACTGGGGACAAGGCACCCTCGTGACCGTGTCCTCTGAGCAGAAGCTGATCTCCGAAGAGGACCTGAATGGCGCCGCTACCACAACACCAGCTCCTAGACCTCCAACTCCTGCTCCTACAATCGCCCTGCAGCCACTGTCTCTGAGGCCTGAAGCTTGTAGACCTGCTGCTGGCGGAGCCGTGCATACCAGAGGACTGGATTTCGCCTGCGACATCTACATCTGGGCCCCTCTGGCTGGAACATGCGGAGTGTTGCTGCTGAGCCTGGTCATCACCAAGCGGGGCAGAAAGAAGCTGCTGTACATCTTCAAGCAGCCCTTCATGCGGCCCGTGCAGACCACACAAGAGGAAGATGGCTGCTCCTGCAGATTCCCCGAGGAAGAAGAAGGCGGCTGCGAGCTGAGAGTGAAGTTCAGCAGATCCGCCGACGCTCCTGCCTATCAGCAGGGACAGAACCAGCTGTACAACGAGCTGAACCTGGGGAGAAGAGAAGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGCAGAGATCCTGAAATGGGCGGCAAGCCCAGACGGAAGAATCCTCAAGAGGGCCTGTATAATGAGCTGCAGAAAGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGAATGAAGGGCGAGCGCAGAAGAGGCAAGGGACACGATGGACTGTACCAGGGCCTGAGCACCGCCACCAAGGATACCTATGATGCCCTGCACATGCAGGCCCTGCCTCCAAGA (SEQ ID NO: 106)
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SB03175 DNA序列 ATGGCTCTGCCTGTGACAGCTCTGCTGCTGCCTCTGGCTCTGCTTCTGCATGCCGCCAGACCTGACATCCAGCTGACACAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCTCTGTGGGCGACAGAGTGACCATCACATGCAAGGCCTCTCAGGACGTGGGCACAAGCGTGGCATGGTATCAGCAGAAGCCTGGCAAGGCCCCTAAGCTGCTGATCTACTGGACCAGCACCAGACACACAGGCGTGCCCAGCAGATTTTCTGGCAGCGGCTCTGGCACCGACTTCACCTTCACCATAAGCAGCCTGCAGCCTGAGGATATCGCCACCTACTACTGCCAGCAGTACAGCCTGTACAGAAGCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAAATCAAAGGCGGATCTGGAAGCGGCGGTTCTGGATCTGGTGGAAGCGGATCTGAGGTGCAGCTGGTGGAATCTGGTGGCGGAGTTGTGCAGCCTGGCAGATCTCTGAGACTGAGCTGTAGCGCCAGCGGCTTCGATTTCACCACCTACTGGATGAGCTGGGTCCGACAGGCCCCTGGCAAAGGACTGGAATGGATCGGCGAGATTCACCCCGACAGCAGCACCATCAATTACGCCCCTAGCCTGAAGGACCGGTTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAATACCCTGTTCCTGCAGATGGACAGCCTCCGGCCTGAAGATACCGGCGTGTACTTTTGCGCCAGCCTGTATTTCGGCTTCCCTTGGTTTGCCTACTGGGGCCAGGGAACACCTGTGACCGTTAGCTCTGAGCAGAAGCTGATCTCCGAAGAGGACCTGACCACAACACCAGCTCCTAGACCTCCAACTCCTGCTCCTACAATCGCCCTGCAGCCACTGTCTCTGAGGCCTGAAGCTTGTAGACCTGCTGCTGGCGGAGCCGTGCATACCAGAGGACTGGATTTCGCCTGCGACATCTACATCTGGGCCCCTCTGGCTGGAACATGCGGAGTGTTGCTGCTGAGCCTGGTCATCACCAAGCGGGGCAGAAAGAAGCTGCTGTACATCTTCAAGCAGCCCTTCATGCGGCCCGTGCAGACCACACAAGAGGAAGATGGCTGCTCCTGCAGATTCCCCGAGGAAGAAGAAGGCGGCTGCGAGCTGAGAGTGAAGTTCAGCAGATCCGCCGACGCTCCTGCCTATCAGCAGGGACAGAACCAGCTGTACAACGAGCTGAACCTGGGGAGAAGAGAAGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGCAGAGATCCTGAAATGGGCGGCAAGCCCAGACGGAAGAATCCTCAAGAGGGCCTGTATAATGAGCTGCAGAAAGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGAATGAAGGGCGAGCGCAGAAGAGGCAAGGGACACGATGGACTGTACCAGGGCCTGAGCACCGCCACCAAGGATACCTATGATGCCCTGCACATGCAGGCCCTGCCTCCAAGA (SEQ ID NO: 109)
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SB04293 DNA序列 ATGGCCCTGCCTGTGACAGCTCTGCTGCTGCCTCTGGCCCTGCTGCTGCATGCTGCTAGACCTGACATCCAGCTGACACAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCTCTGTGGGCGACAGAGTGACCATCACATGCAAGGCCTCTCAGGACGTGGGCACAAGCGTGGCATGGTATCAGCAGAAGCCTGGCAAGGCCCCTAAGCTGCTGATCTACTGGACCAGCACCAGACACACAGGCGTGCCCAGCAGATTTTCTGGCAGCGGCTCTGGCACCGACTTCACCTTCACCATAAGCAGCCTGCAGCCTGAGGATATCGCCACCTACTACTGCCAGCAGTACAGCCTGTACAGAAGCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAAATCAAAGGCGGATCTGGAAGCGGCGGTTCTGGATCTGGTGGAAGCGGATCTGAGGTGCAGCTGGTGGAATCTGGTGGCGGAGTTGTGCAGCCTGGCAGATCTCTGAGACTGAGCTGTAGCGCCAGCGGCTTCGATTTCACCACCTACTGGATGAGCTGGGTCCGACAGGCCCCTGGCAAAGGACTGGAATGGATCGGCGAGATTCACCCCGACAGCAGCACCATCAATTACGCCCCTAGCCTGAAGGACCGGTTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAATACCCTGTTCCTGCAGATGGACAGCCTCCGGCCTGAAGATACCGGCGTGTACTTTTGCGCCAGCCTGTATTTCGGCTTCCCTTGGTTTGCCTACTGGGGCCAGGGAACACCTGTGACCGTTAGCTCTGAACAAAAACTCATCTCAGAAGAAGATCTGAATGGGGCCGCAACCACGACGCCAGCGCCGCGACCACCAACACCGGCGCCCACCATCGCGTTGCAGCCCCTGTCCCTGCGCCCAGAGGCGTGCCGGCCAGCGGCGGGGGGCGCAGTGCACACGAGGGGGCTGGACTTCGCCTGTGATGTGGCCGCCATTCTTGGACTGGGACTTGTTCTGGGACTGCTGGGACCTCTGGCCATTCTGCTGGCTCTGTACCTGCTGAGAAGGGACCAGAGACTGCCTCCTGACGCTCACAAACCTCCAGGCGGAGGCAGCTTCAGAACCCCTATCCAAGAGGAACAGGCTGACGCCCACAGCACCCTGGCCAAGATCAGAGTGAAGTTCAGCAGGAGCGCAGACGCCCCCGCGTACAAGCAGGGCCAGAACCAGCTCTATAACGAGCTCAATCTAGGACGAAGAGAGGAGTACGATGTTTTGGACAAGAGACGTGGCCGGGACCCTGAGATGGGGGGAAAGCCGAGAAGGAAGAACCCTCAGGAAGGCCTGTACAATGAACTGCAGAAAGATAAGATGGCGGAGGCCTACAGTGAGATTGGGATGAAAGGCGAGCGCCGGAGGGGCAAGGGGCACGATGGCCTTTACCAGGGTCTCAGTACAGCCACCAAGGACACCTACGACGCCCTTCACATGCAGGCCCTGCCCCCTCGC (SEQ ID NO: 127)
SB04293 胺基酸序列 MALPVTALLLPLALLLHAARPDIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVGTSVAWYQQKPGKAPKLLIYWTSTRHTGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQYSLYRSFGQGTKVEIKGGSGSGGSGSGGSGSEVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCSASGFDFTTYWMSWVRQAPGKGLEWIGEIHPDSSTINYAPSLKDRFTISRDNAKNTLFLQMDSLRPEDTGVYFCASLYFGFPWFAYWGQGTPVTVSSEQKLISEEDLNGAATTTPAPRPPTPAPTIALQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDVAAILGLGLVLGLLGPLAILLALYLLRRDQRLPPDAHKPPGGGSFRTPIQEEQADAHSTLAKIRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR (SEQ ID NO: 128)
SB04288 DNA序列 ATGGCCCTGCCTGTGACAGCTCTGCTGCTGCCTCTGGCCCTGCTGCTGCATGCTGCTAGACCTGAGGTCCAGCTGCAAGAGTCTGGCCCTGGACTTGTGAAGCCTGGCGGAAGCCTGTCTCTGTCTTGTGCCGCCAGCGGCTTCGTGTTCAGCAGCTACGATATGAGCTGGGTCCGACAGACCCCTGAGCGAGGACTTGAGTGGGTCGCCTACATCTCTTCTGGCGGCGGAATCACATACGCCCCTAGCACAGTGAAGGGCAGATTCACCGTGTCCAGAGACAACGCCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGACCAGCGAGGACACCGCCGTGTACTATTGTGCCGCTCACTACTTTGGCAGCAGCGGCCCTTTTGCCTATTGGGGCCAGGGAACACTCGTGACCGTTTCTAGTGCTGGCGGAGGCGGATCAGGTGGCGGAGGAAGTGGCGGCGGAGGATCTGATATCCAGATGACACAGAGCCCCGCCAGCCTGTCTGCCTCTGTGGGAGATAGAGTGACCATCACCTGTCGGGCCAGCGAGAACATCTTCAGCTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCAAGTCTCCTAAGCTGCTGGTGTACAACACCCGGACACTGGCTGAAGGCGTGCCCAGCAGATTTTCTGGCAGCGGCTCTGGCACCGACTTCAGCCTGACAATCAGCAGCCTGCAGCCTGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCACCACTACGGCACCCCTTTCACCTTTGGAAGCGGCACCAAGCTGGAAATCAAGAGAGAACAAAAACTCATCTCAGAAGAAGATCTGAATGGGGCCGCAACCACGACGCCAGCGCCGCGACCACCAACACCGGCGCCCACCATCGCGTTGCAGCCCCTGTCCCTGCGCCCAGAGGCGTGCCGGCCAGCGGCGGGGGGCGCAGTGCACACGAGGGGGCTGGACTTCGCCTGTGATTTTTGGGTGCTGGTGGTGGTTGGTGGAGTCCTGGCTTGCTATAGCTTGCTAGTAACAGTGGCCTTTATTATTTTCTGGGTGAGGAGTAAGAGGAGCAGGCTCCTGCACAGTGACTACATGAACATGACTCCCCGCCGCCCCGGGCCCACCCGCAAGCATTACCAGCCCTATGCCCCACCACGCGACTTCGCAGCCTATCGCTCCAGAGTGAAGTTCAGCAGGAGCGCAGACGCCCCCGCGTACAAGCAGGGCCAGAACCAGCTCTATAACGAGCTCAATCTAGGACGAAGAGAGGAGTACGATGTTTTGGACAAGAGACGTGGCCGGGACCCTGAGATGGGGGGAAAGCCGAGAAGGAAGAACCCTCAGGAAGGCCTGTACAATGAACTGCAGAAAGATAAGATGGCGGAGGCCTACAGTGAGATTGGGATGAAAGGCGAGCGCCGGAGGGGCAAGGGGCACGATGGCCTTTACCAGGGTCTCAGTACAGCCACCAAGGACACCTACGACGCCCTTCACATGCAGGCCCTGCCCCCTCGC (SEQ ID NO: 129)
SB04296 DNA序列 ATGGCCCTGCCTGTGACAGCTCTGCTGCTGCCTCTGGCCCTGCTGCTGCATGCTGCTAGACCTGAGGTCCAGCTGCAAGAGTCTGGCCCTGGACTTGTGAAGCCTGGCGGAAGCCTGTCTCTGTCTTGTGCCGCCAGCGGCTTCGTGTTCAGCAGCTACGATATGAGCTGGGTCCGACAGACCCCTGAGCGAGGACTTGAGTGGGTCGCCTACATCTCTTCTGGCGGCGGAATCACATACGCCCCTAGCACAGTGAAGGGCAGATTCACCGTGTCCAGAGACAACGCCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGACCAGCGAGGACACCGCCGTGTACTATTGTGCCGCTCACTACTTTGGCAGCAGCGGCCCTTTTGCCTATTGGGGCCAGGGAACACTCGTGACCGTTTCTAGTGCTGGCGGAGGCGGATCAGGTGGCGGAGGAAGTGGCGGCGGAGGATCTGATATCCAGATGACACAGAGCCCCGCCAGCCTGTCTGCCTCTGTGGGAGATAGAGTGACCATCACCTGTCGGGCCAGCGAGAACATCTTCAGCTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCAAGTCTCCTAAGCTGCTGGTGTACAACACCCGGACACTGGCTGAAGGCGTGCCCAGCAGATTTTCTGGCAGCGGCTCTGGCACCGACTTCAGCCTGACAATCAGCAGCCTGCAGCCTGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCACCACTACGGCACCCCTTTCACCTTTGGAAGCGGCACCAAGCTGGAAATCAAGAGAGAACAAAAACTCATCTCAGAAGAAGATCTGAATGGGGCCGCAACCACGACGCCAGCGCCGCGACCACCAACACCGGCGCCCACCATCGCGTTGCAGCCCCTGTCCCTGCGCCCAGAGGCGTGCCGGCCAGCGGCGGGGGGCGCAGTGCACACGAGGGGGCTGGACTTCGCCTGTGATGTGGCCGCCATTCTCGGACTGGGACTTGTTCTGGGACTGCTGGGACCTCTGGCCATTCTGCTGGCTCTGTACCTGCTGAGAAGGGACCAGAGACTGCCTCCTGACGCTCACAAACCTCCAGGCGGAGGCAGCTTCAGAACCCCTATCCAAGAGGAACAGGCTGACGCCCACAGCACCCTGGCCAAGATCAGAGTGAAGTTCAGCAGGAGCGCAGACGCCCCCGCGTACAAGCAGGGCCAGAACCAGCTCTATAACGAGCTCAATCTAGGACGAAGAGAGGAGTACGATGTTTTGGACAAGAGACGTGGCCGGGACCCTGAGATGGGGGGAAAGCCGAGAAGGAAGAACCCTCAGGAAGGCCTGTACAATGAACTGCAGAAAGATAAGATGGCGGAGGCCTACAGTGAGATTGGGATGAAAGGCGAGCGCCGGAGGGGCAAGGGGCACGATGGCCTTTACCAGGGTCTCAGTACAGCCACCAAGGACACCTACGACGCCCTTCACATGCAGGCCCTGCCCCCTCGC (SEQ ID NO: 130)
SB04442 DNA序列 ATGGCTCTGCCTGTGACAGCTCTGCTGCTGCCTCTGGCTCTGCTTCTGCATGCCGCCAGACCTGACATCCAGCTGACACAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCTCTGTGGGCGACAGAGTGACCATCACATGCAAGGCCTCTCAGGACGTGGGCACAAGCGTGGCATGGTATCAGCAGAAGCCTGGCAAGGCCCCTAAGCTGCTGATCTACTGGACCAGCACCAGACACACAGGCGTGCCCAGCAGATTTTCTGGCAGCGGCTCTGGCACCGACTTCACCTTCACCATAAGCAGCCTGCAGCCTGAGGATATCGCCACCTACTACTGCCAGCAGTACAGCCTGTACAGAAGCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAAATCAAAGGCGGATCTGGAAGCGGCGGTTCTGGATCTGGTGGAAGCGGATCTGAGGTGCAGCTGGTGGAATCTGGTGGCGGAGTTGTGCAGCCTGGCAGATCTCTGAGACTGAGCTGTAGCGCCAGCGGCTTCGATTTCACCACCTACTGGATGAGCTGGGTCCGACAGGCCCCTGGCAAAGGACTGGAATGGATCGGCGAGATTCACCCCGACAGCAGCACCATCAATTACGCCCCTAGCCTGAAGGACCGGTTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAATACCCTGTTCCTGCAGATGGACAGCCTCCGGCCTGAAGATACCGGCGTGTACTTTTGCGCCAGCCTGTATTTCGGCTTCCCTTGGTTTGCCTACTGGGGCCAGGGAACACCTGTGACCGTTAGCTCTGAGCAGAAGCTGATCTCCGAAGAGGACCTGACCACAACACCAGCTCCTAGACCACCTACACCAGCACCTACAATCGCCCTGCAGCCACTGTCTCTGAGGCCTGAAGCTTGTAGACCTGCTGCTGGCGGAGCCGTGCATACAAGAGGACTGGATTTCGCCTGCGACTTCTGGGTGCTCGTTGTTGTTGGCGGCGTGCTGGCCTGTTATTCCCTGCTGGTTACCGTGGCCTTCATCATCTTTTGGGTCCGAAGCAAGCGGAGCAGACTGCTGCACTCCGACTACATGAACATGACCCCTAGACGGCCCGGACCAACCAGAAAGCACTACCAGCCTTACGCTCCTCCTAGAGACTTCGCCGCCTACCGGTCCAGAGTGAAGTTCTCCAGATCCGCCGATGCTCCCGCCTATAAGCAGGGACAGAACCAGCTGTACAACGAGCTGAACCTGGGGAGAAGAGAAGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGCAGAGATCCTGAGATGGGCGGCAAGCCCAGACGGAAGAATCCTCAAGAGGGCCTGTATAATGAGCTGCAAAAGGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGAATGAAGGGCGAGCGCAGAAGAGGCAAGGGACACGATGGACTGTACCAGGGCCTGAGCACCGCCACCAAGGATACCTATGATGCCCTGCACATGCAGGCCCTGCCTCCAAGA (SEQ ID NO: 131)
SB04443 DNA序列 ATGGCTCTGCCTGTGACAGCTCTGCTGCTGCCTCTGGCTCTGCTTCTGCATGCCGCCAGACCTGACATCCAGCTGACACAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCTCTGTGGGCGACAGAGTGACCATCACATGCAAGGCCTCTCAGGACGTGGGCACAAGCGTGGCATGGTATCAGCAGAAGCCTGGCAAGGCCCCTAAGCTGCTGATCTACTGGACCAGCACCAGACACACAGGCGTGCCCAGCAGATTTTCTGGCAGCGGCTCTGGCACCGACTTCACCTTCACCATAAGCAGCCTGCAGCCTGAGGATATCGCCACCTACTACTGCCAGCAGTACAGCCTGTACAGAAGCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAAATCAAAGGCGGATCTGGAAGCGGCGGTTCTGGATCTGGTGGAAGCGGATCTGAGGTGCAGCTGGTGGAATCTGGTGGCGGAGTTGTGCAGCCTGGCAGATCTCTGAGACTGAGCTGTAGCGCCAGCGGCTTCGATTTCACCACCTACTGGATGAGCTGGGTCCGACAGGCCCCTGGCAAAGGACTGGAATGGATCGGCGAGATTCACCCCGACAGCAGCACCATCAATTACGCCCCTAGCCTGAAGGACCGGTTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAATACCCTGTTCCTGCAGATGGACAGCCTCCGGCCTGAAGATACCGGCGTGTACTTTTGCGCCAGCCTGTATTTCGGCTTCCCTTGGTTTGCCTACTGGGGCCAGGGAACACCTGTGACCGTTAGCTCTGAGCAGAAGCTGATCTCCGAAGAGGACCTGACCACAACACCAGCTCCTAGACCACCTACACCAGCACCTACAATCGCCCTGCAGCCACTGTCTCTGAGGCCAGAGGCTTGTAGACCTGCTGCTGGCGGAGCCGTGCATACAAGAGGACTGGATTTCGCCTGCGACGTGGCCGCCATTCTCGGACTGGGACTTGTTCTGGGACTGCTGGGACCTCTGGCCATTCTGCTGGCTCTGTACCTGCTGAGAAGGGACCAGAGACTGCCTCCTGACGCTCACAAACCTCCAGGCGGAGGCAGCTTCAGAACCCCTATCCAAGAGGAACAGGCTGACGCCCACAGCACCCTGGCCAAGATCAGAGTGAAGTTCAGCAGATCCGCCGACGCTCCCGCCTATAAGCAGGGACAGAATCAGCTGTACAACGAGCTGAACCTGGGGCGCAGAGAAGAGTACGACGTGCTGGACAAGAGAAGAGGCAGGGATCCTGAAATGGGCGGCAAGCCCAGACGGAAGAATCCTCAAGAGGGCCTGTATAATGAGCTGCAGAAAGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGAATGAAGGGCGAACGCAGAAGAGGAAAGGGCCACGACGGACTGTATCAGGGCCTGAGCACAGCCACCAAGGACACCTATGATGCCCTGCACATGCAGGCCCTGCCTCCAAGA (SEQ ID NO: 132)
SB04444 DNA序列 ATGGCTCTGCCTGTGACAGCTCTGCTGCTGCCTCTGGCTCTGCTTCTGCATGCCGCTAGACCTGAGGTCCAGCTGCAAGAGTCTGGCCCTGGACTTGTGAAGCCTGGCGGAAGCCTGTCTCTGTCTTGTGCCGCCAGCGGCTTCGTGTTCAGCAGCTACGATATGAGCTGGGTCCGACAGACCCCTGAGCGAGGACTTGAGTGGGTCGCCTACATCTCTTCTGGCGGCGGAATCACATACGCCCCTAGCACAGTGAAGGGCAGATTCACCGTGTCCAGAGACAACGCCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGACCAGCGAGGACACCGCCGTGTACTATTGTGCCGCTCACTACTTTGGCAGCAGCGGCCCTTTTGCCTATTGGGGCCAGGGAACACTCGTGACCGTTTCTAGTGCTGGCGGAGGCGGATCAGGTGGCGGAGGAAGTGGCGGCGGAGGATCTGATATCCAGATGACACAGAGCCCCGCCAGCCTGTCTGCCTCTGTGGGAGATAGAGTGACCATCACCTGTCGGGCCAGCGAGAACATCTTCAGCTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCAAGTCTCCTAAGCTGCTGGTGTACAACACCCGGACACTGGCTGAAGGCGTGCCCAGCAGATTTTCTGGCAGCGGCTCTGGCACCGACTTCAGCCTGACAATCAGCAGCCTGCAGCCTGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCACCACTACGGCACCCCTTTCACCTTTGGAAGCGGCACCAAGCTGGAAATCAAGAGAGAGCAGAAGCTGATCTCCGAAGAGGACCTGACCACAACTCCTGCTCCTAGACCTCCTACACCAGCTCCTACAATCGCCCTGCAGCCACTGTCTCTGAGGCCAGAAGCTTGTAGACCTGCTGCAGGCGGAGCCGTGCATACAAGAGGACTGGATTTCGCCTGCGACTTCTGGGTGCTCGTGGTTGTTGGCGGAGTGCTGGCCTGTTACTCTCTGCTGGTCACCGTGGCCTTCATCATCTTTTGGGTCCGAAGCAAGCGGAGCCGGCTGCTGCACAGCGACTACATGAACATGACCCCTAGACGGCCCGGACCTACCAGAAAGCACTACCAGCCTTACGCTCCTCCTAGAGATTTCGCCGCCTACCGGTCCAGAGTGAAGTTCAGCAGATCCGCCGATGCTCCCGCCTATAAGCAGGGACAGAACCAGCTGTACAACGAGCTGAACCTGGGGAGAAGAGAAGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGCAGAGATCCTGAGATGGGCGGCAAGCCCAGACGGAAGAATCCTCAAGAGGGCCTGTATAATGAGCTGCAGAAAGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGAATGAAGGGCGAGCGCAGAAGAGGCAAGGGACACGATGGACTGTACCAGGGCCTGAGCACCGCCACCAAGGATACCTATGATGCCCTGCACATGCAGGCCCTGCCTCCAAGA (SEQ ID NO: 133)
SB04445 DNA序列 ATGGCTCTGCCTGTGACAGCTCTGCTGCTGCCTCTGGCTCTGCTTCTGCATGCCGCTAGACCTGAGGTCCAGCTGCAAGAGTCTGGCCCTGGACTTGTGAAGCCTGGCGGAAGCCTGTCTCTGTCTTGTGCCGCCAGCGGCTTCGTGTTCAGCAGCTACGATATGAGCTGGGTCCGACAGACCCCTGAGCGAGGACTTGAGTGGGTCGCCTACATCTCTTCTGGCGGCGGAATCACATACGCCCCTAGCACAGTGAAGGGCAGATTCACCGTGTCCAGAGACAACGCCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGACCAGCGAGGACACCGCCGTGTACTATTGTGCCGCTCACTACTTTGGCAGCAGCGGCCCTTTTGCCTATTGGGGCCAGGGAACACTCGTGACCGTTTCTAGTGCTGGCGGAGGCGGATCAGGTGGCGGAGGAAGTGGCGGCGGAGGATCTGATATCCAGATGACACAGAGCCCCGCCAGCCTGTCTGCCTCTGTGGGAGATAGAGTGACCATCACCTGTCGGGCCAGCGAGAACATCTTCAGCTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCAAGTCTCCTAAGCTGCTGGTGTACAACACCCGGACACTGGCTGAAGGCGTGCCCAGCAGATTTTCTGGCAGCGGCTCTGGCACCGACTTCAGCCTGACAATCAGCAGCCTGCAGCCTGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCACCACTACGGCACCCCTTTCACCTTTGGAAGCGGCACCAAGCTGGAAATCAAGAGAGAGCAGAAGCTGATCTCCGAAGAGGACCTGACCACAACACCAGCTCCTAGACCACCTACACCAGCACCTACAATCGCCCTGCAGCCACTGTCTCTGAGGCCAGAGGCTTGTAGACCTGCTGCTGGCGGAGCCGTGCATACAAGAGGACTGGATTTCGCCTGCGACGTGGCCGCCATTCTCGGACTGGGACTTGTTCTGGGACTGCTGGGACCTCTGGCCATTCTGCTGGCTCTGTACCTGCTGAGAAGGGACCAGAGACTGCCTCCTGACGCTCACAAACCTCCAGGCGGAGGCAGCTTCAGAACCCCTATCCAAGAGGAACAGGCTGACGCCCACAGCACCCTGGCCAAGATCAGAGTGAAGTTCAGCAGATCCGCCGACGCTCCCGCCTATAAGCAGGGACAGAATCAGCTGTACAACGAGCTGAACCTGGGGCGCAGAGAAGAGTACGACGTGCTGGACAAGAGAAGAGGCAGGGATCCTGAAATGGGCGGCAAGCCCAGACGGAAGAATCCTCAAGAGGGCCTGTATAATGAGCTGCAGAAAGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGAATGAAGGGCGAACGCAGAAGAGGAAAGGGCCACGACGGACTGTATCAGGGCCTGAGCACAGCCACCAAGGACACCTATGATGCCCTGCACATGCAGGCCCTGCCTCCAAGA (SEQ ID NO: 134)
實例 12 ：用於表現 CEA CAR 之慢病毒及 γ 反轉錄病毒平台
在此實例中，評定用於表現各種抗CEA活化CAR之慢病毒及γ反轉錄病毒平台。
使用含有不同CAR構築體之慢病毒或反轉錄病毒載體轉導NK細胞。各種構築體示於 表 29中。
表29
NK 供體2 細胞
反轉錄病毒構築體名稱 慢病毒構築體名稱 scFv 名稱 scFv取向 鉸鏈 TM 共刺激域 刺激域
SB03173 SB02463 hMN14 H/L CD8 CD28 CD28 CD3z
SB03174 SB02779 hMN14 H/L CD8 OX40 OX40 CD3z
SB03175 SB02781 hMN14 H/L CD8 CD8 4-1BB CD3z
SB03176 SB02465 MFE-23 H/L CD8 CD28 CD28 CD3z
SB03177 SB02470 MRG1 H/L CD8 CD28 CD28 CD3z
SB03178 SB02788 MRG1 H/L CD8 OX40 OX40 CD3z
SB03179 SB02790 MRG1 H/L CD8 CD8 4-1BB CD3z
SB03180 SB03089 Tus H/L CD8 CD28 CD28 CD3z
使用流式細胞術及細胞外膜中之MYC標籤蛋白量測CAR表現。在不同的時間點量測CAR表現(在第4天評定自慢病毒及γ反轉錄病毒構築體二者之表現，在轉導後第7天及第11天再次評定自γ反轉錄病毒構築體之表現)。
藉由量測轉導% (與未轉導陰性對照物相比之陽性細胞%)或藉由量測MFI (群體螢光強度之幾何平均值)來定量CAR表現。表現示於 圖 38A(轉導後第4天)、 圖 38B(轉導後第11天)及 圖 38C(自γ反轉錄病毒構築體表現之時程)中。如 圖 38A中可見，反轉錄病毒構築體引起高得多的轉導效率以及更明顯之陽性群體。如 圖 38B及 圖 38C中可見，反轉錄病毒構築體引起至少11天之持久表現。 實例 13 ：自各種 γ 反轉錄病毒系統之抗 CEA CAR 表現
在此實例中，評定用於表現抗CEA活化CAR之各種γ反轉錄病毒平台。所評定之各種系統示於 表 30中。
表 30
各種 γ 反轉錄病毒系統
轉導組 反轉錄病毒構築體主鏈 套膜 scFv 名稱 密碼子最佳化 共刺激域
A 1 BaEv hMN14 人類密碼子最佳化 CD28
1 BaEv hMN14 人類密碼子最佳化 OX40
1 BaEv Tus 人類密碼子最佳化 CD28
1 BaEv Tus 人類密碼子最佳化 OX40
B 1 BaEv hMN14 新密碼子最佳化 CD28
1 BaEv hMN14 新密碼子最佳化 OX40
1 BaEv Tus 新密碼子最佳化 CD28
1 BaEv Tus 新密碼子最佳化 OX40
C 2 BaEv hMN14 人類密碼子最佳化 CD28
2 BaEv hMN14 人類密碼子最佳化 OX40
2 BaEv Tus 人類密碼子最佳化 CD28
2 BaEv Tus 人類密碼子最佳化 OX40
用經EaEV或BaEv假型化之γ反轉錄病毒轉導初生NK細胞，使用3e9個載體基因體單位/1e6個NK細胞進行轉導。使用流式細胞術及細胞外膜中之MYC標籤蛋白量測CAR表現。在轉導後第11天量測CAR表現。
藉由量測轉導% (與未轉導陰性對照物相比之陽性細胞%)來定量CAR表現。表現示於 圖 39A(轉導組A)、 圖 39B(轉導組B)、 圖 39C(轉導組C)中。如 圖 39A 至圖 39D中可見，使用兩種反轉錄病毒主鏈及兩種假型化套膜皆達成高表現(參見轉導組B及D)。特定言之，使用經BaEV假型化之第二主鏈導致超過90%之細胞對CEA CAR呈陽性。 實例 14 ：使用各種 CAR 結構之抗 CEA CAR 表現及細胞毒性
在此實例中，使用來源於兩個不同供體(「供體7」及「供體13」)之初生NK細胞來評定具有基於hMN-14之scFv及各種共刺激域之抗CEA活化CAR。各CAR包括Myc標籤以用於量測表現。構築體描述提供於 表 31中。
表 31
構築體名稱 CAR 結構
SB05382 hMN14 scFv-ICD: CD28 /CD3ζ
SB05384 hMN14 scFV-ICD: OX40 /CD3ζ
SB04446 hMN14 scFv-ICD: 41bb /CD3ζ
基於Myc陽性細胞百分比量測轉導百分比且示於 圖 40A中，並基於平均螢光強度(MFI)量測CAR表現且示於 圖 40B中。
接下來評定CAR-NK細胞之殺死活性。將CAR-NK細胞與經轉導以穩定表現螢光蛋白mKate且表現抗原之結腸直腸癌細胞(Ls174t)一起共培養。
將25,000個靶細胞接種於96孔板中。以不同的效應細胞對靶細胞比(自2:1至1:4)添加經工程改造之或對照NK細胞。每2小時使用Incucyte量測靶細胞面積(紅色區域)
以1:1效應細胞對靶細胞比進行之殺死分析示於 圖 41A及 圖 41B中。如 圖 41A及 圖 41B中可見，供體7細胞具有高基線殺死(與存在CAR無關)，但供體13細胞具有較低基線殺死，其中存在CEA CAR導致殺死量高於不表現CAR之NK細胞。
以1:2效應細胞對靶細胞比進行之殺死分析示於 圖 42A及 圖 42B中。然而，如同1:1效應細胞對靶細胞比，在1:2比率下，供體7細胞具有更高基線殺死(與存在CAR無關)，但在此較低效應細胞比率下，觀測到基於存在CEA CAR之殺死增加。供體13細胞在存在CEA CAR時具有較低基線殺死，而且基於存在CEA CAR之殺死量亦增加。 實例 15 ：活體外及活體內 CEA CAR NK 細胞功能
在此實例中，使用來源於兩個不同供體之初生NK細胞來評定具有基於hMN-14之scFv及各種共刺激域之抗CEA活化CAR。
藉由用含有各種CEA-CAR構築體之反轉錄病毒構築體轉導經擴增/活化之NK細胞來產生CEA-CAR NK細胞。
經由流式細胞術偵測MYC標籤來評定CAR表現且示於 圖 43中。
將CAR-NK細胞與表現CEA之CRC靶細胞(Ls174t)以1:1比率共培養隔夜(18小時)。將NK細胞固定並且用抗體染色以偵測細胞內細胞介素IFNg及顆粒酶B (「GZMB」)，其為NK細胞活化標記物，如 圖 44中所示。如 圖 44中可見，不同的構築體對NK細胞產生不同程度的活性。
使用相同的CEA-CAR NK細胞處理存在既有Ls174t腹膜腫瘤之NSG雌性小鼠(6-8週齡)。使用無病毒(NV) NK細胞及PBS作為對照物。藉由BLI量測腫瘤負荷並相對於治療前值正規化以計算變化倍數。處理後腫瘤負荷BLI之代表性影像示於 圖 45中。第10天之反應率示於 圖 46中之圓形圖中。PD意謂據量測變化倍數大於5 BLI之漸進性疾病。SD意謂據量測變化倍數為0.1至5 BLI之穩定疾病，且PR/CR意謂據量測變化倍數小於0.1 BL1 (包括負值)之部分或完全反應。 實例 16 ：對安全性抗原陽性細胞之基於 NOT 閘之保護
在此實例中，使用表現安全性抗原(模型安全性抗原HER2或安全性抗原VSIG2)之細胞來評定NOT閘與CEA活化CAR組合使用
首先，產生表現安全性抗原(HER2或VSIG2)之細胞株。使用表現Her2或VSIG2蛋白及抗性可選標記物(殺稻瘟菌素)之慢病毒來轉導CRC細胞(Ls174t、DLD1及HT29)或SEM細胞。選擇用於抗生素抗性之細胞，並經由流式細胞術評定所要蛋白質之表現。CRC細胞株Ls174t及HT29天然表現CEACAM5，但DLD1則不然。因而，亦用編碼CEACAM5-EGFP之膜結合形式之慢病毒轉導DLD1 CRC細胞。淘選EGFP陽性細胞，並經由流式細胞術測定CEACAM5及VSIG2之共表現。
接下來，產生表現CEA活化CAR及抗VSIG2抑制CAR或抗HER2抑制CAR之NK細胞。產生具有LIR1抑制結構域之抗HER2抑制性CAR，以及具有各種抑制結構域(按與膜之鄰近性順序列出：兩個LIR1結構域、一個KIR3DL1結構域、一個KIR3DL1繼之以一個KIR3DL1結構域、一個LIR1結構域繼之以KIR3DL1結構域、一個KIR3DL1結構域繼之以一個LIR1結構域、一個KIR2DL1結構域、一個LAIR1結構域、一個SIGLEC2結構域及一個SIRPa結構域)之各種抗VSIG2抑制性CAR。構築體描述提供於 表 32中。
表 32
構築體名稱 CAR 描述
「LIR1-LIR1」 aVSIG2 (L-w-H) LIR1-LIR1 2A PuroR
「KIR3DL1」 aVSIG2 (L-w-H) KIR3DL1 2A PuroR
「KIR3DL1-KIR3DL1」 aVSIG2 (L-w-H) KIR3DL1-KIR3DL1 2A PuroR
「LIR1-KIR3DL1」 aVSIG2 (L-w-H) LIR1-KIR3DL1 2A PuroR
「KIR3DL1-LIR1」 aVSIG2 (L-w-H) KIR3DL1-LIR1 2A PuroR
「KIR2DL1」 aVSIG2 (L-w-H) KIR2DL1 2A PuroR
「LAIR1」 aVSIG2 (L-w-H) LAIR1 2A PuroR
「SIGLEC-2」 aVSIG2 (L-w-H) SIGLEC-2 2A PuroR
「SIRPa」 aVSIG2 (L-w-H) SIRPa 2A PuroR
抗VSIG抑制CAR中所使用之抗VSIG2 scFV序列提供於 表 33中。
表33
抗VSIG2 scFv 序列 SEQ ID NO
DIQMTQSPASLSASVGETVTMTCRASENIYSYLAWYQQKQGKSPQL LVFNAETLPEGVPSRFSGTGSGTHFSLRINSLQPEDFGSYYCQHHYV IPWTFGGGTKLEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVQMVESGGDLVKP GGSLKLSCAASGFTFSNSGMSWVRQTPDKRLEWVASISDGGLYTH YPDSVKGRFTISRDNGKSTLYLQMSSLRSEDTAIYYCARQGVRPFFD YWGQGTTLTVSS (SEQ ID NO: 135) R1-LIR1 2A PuroR
作為對照，亦產生表現脫靶抑制CAR (抗EMCN)之NK細胞。首先擴增初生供體來源之NK細胞，隨後用編碼CAR之反轉錄病毒進行轉導。經由流式細胞術，使用MYC標籤測定aCAR之表現。經由流式細胞術，使用V5標籤測定iCAR之表現。模型安全性抗原系統及脫靶對照系統之表現示於 圖 47A至 圖 47B中。VSIG2安全性抗原系統之表現示於 圖 48中。
將表現CEA-aCAR及各種iCAR之NK細胞與表現僅CEACAM5或CEACAM5/安全性抗原(Her2或VSIG2)之靶細胞一起共培養。使用適當控制物，諸如單獨aCAR、單獨iCAR及非靶向性iCAR。
對於模型抗原系統(使用HER2)，經由Incucyte量測靶細胞生長並示於 圖 49中，且使用CAR下游信號傳導磷酸化流體(pZAP70及pErk1/2)量測NK細胞活化信號傳導並示於 圖 50A及 圖 50B中。如 圖 50A及 圖 50B中所示，HER2抑制CAR之表現以安全性抗原依賴性方式減少活化CAR介導之信號傳導。
對於VSIG2安全性抗原系統，在與NOT閘選CAR NK細胞一起隔夜共培養之後，使用流式細胞術量測靶細胞減少百分比，如 圖 51中所示。含有各種抑制結構域之各種VSIG2抑制性CAR顯示表現安全性抗原之靶細胞(VSIG2，藍色條形)中CAR介導之細胞殺死顯著減少，而僅表現CEACAM5之靶細胞(紅色條形)中則不然。此結果指示VSIG2抑制性CAR之表現以安全性抗原依賴性方式減少活化CAR介導之信號傳導。 以引用之方式併入
本申請案中所引用之所有出版物、專利、專利申請案及其他文獻皆出於所有目的以引用之方式整體併入在此，達到如同個別地指示各個別出版物、專利、專利申請案或其他文獻係出於所有目的以引用之方式併入的程度。 等效方案
儘管已說明並描述各個特定實施例，但以上說明書不具限制性。應理解，可在不背離本發明之精神及範疇的情況下進行各種變化。在審閱本說明書後，許多變化對熟習此項技術者將變得顯而易見。
本專利或申請案檔案含有至少一個以彩色製作之附圖。需要時且在支付必需費用後，事務所將提供含彩色圖式之此專利或專利申請公開案副本。
結合以下發明描述及附圖將更充分理解本發明之此等及其他特徵、態樣及優勢。
圖 1描繪CEA家族成員、其結構及功能之示意性圖示。 圖 2描繪結腸直腸癌(CRC)及正常組織中CEACAM5及CEACAM6之基因表現。 圖 3A描繪結腸直腸癌(CRC)及正常組織中CEACAM5之基因表現。 圖 3B描繪結腸直腸癌(CRC)及正常組織中CEACAM6之基因表現。 圖 4描繪組織微陣列中之患者樣品(包括癌症及正常組織樣品)中CEACAM1、CEACAM5及CEACAM6之蛋白質表現。 圖 5描繪對一組獲自ATCC之人類結腸癌細胞株中CEACAM1、CEACAM5及CEACAM6表現之基於流式細胞術之分析。 圖 6A描繪使用ABCA8之批量RNAseq基因表現資料對NOT標靶進行之分析。 圖 6B描繪使用ATP1A2之批量RNAseq基因表現資料對NOT標靶進行之分析。 圖 7A描繪降維及聚簇之後對單一細胞RNAseq資料集GSE144735之分析，其中不同的細胞類型經註釋及著色。 圖 7B描繪正常組織(圖7A)中ABCA8之表現，其中突出顯示在基質細胞中之表現。 圖 8描繪結腸直腸癌(CRC)及正常組織中VSIG2之基因表現。 圖 9A描繪對VSIG2之基因表現分析，顯示在單一細胞RNAseq資料集GSE144735中正常及腫瘤組織中之上皮細胞中表現。 圖 9B描繪對VSIG2之基因表現分析，顯示在單一細胞RNAseq資料集GSE132465中之正常及腫瘤組織中之總體基因表現。 圖 10A描繪VSIG2及CEACAM5之比較基因表現分析。 圖 10B描繪對VSIG2及CEACAM5之比較基因表現分析，呈現為各群體之相對分數。 圖 10C描繪對正常胃腸組織(迴腸、結腸及直腸)中VSIG2及CEACAM5之比較基因表現分析。 圖 10D描繪對正常肺上皮組織中VSIG2及CEACAM5之比較基因表現分析。 圖 10E描繪對正常腎臟及肝臟組織中VSIG2及CEACAM5之比較基因表現分析。 圖 11描繪對諸多結腸正常及癌症亞型中潛在NOT標靶VSIG2表現之表現分析(資料集：GSE81861、GSE144735、GSE132465)。 圖 12A描繪健康肺上皮細胞(EGAS00001004344)中之VSIG2表現。 圖 12B比較健康肺上皮細胞中VSIG2及CEACAM5及CEACAM6之表現。 圖 13A描繪針對VSIG2染色之胃腸腫瘤及健康胃腸組織之組織微陣列(TMA)。 圖 13B為針對VSIG2染色之TMA之代表性健康組織樣品。 圖 13C為針對VSIG2染色之TMA之代表性健康組織樣品。 圖 14A描繪對針對VSIG2 (粉色)及CEACAM5 (白色)染色之健康組織之多路IHC分析。細胞核係用DAPI染色(藍色)。 圖 14B描繪對針對VSIG2 (粉色)及CEACAM5 (白色)染色之健康組織之多路IHC分析。細胞核係用DAPI染色(藍色)。 圖 15描繪對3級IIB期結腸癌中VSIG2 (粉色)及CEACAM5 (白色)之定位分析。細胞核係用DAPI染色(藍色)。 圖 16A描繪對來自兩個群組之結腸癌樣品中之基質細胞及免疫細胞中之VSIG2及CEACAM5的基因表現分析。 圖 16B描繪對來自兩個群組之結腸癌樣品中之基質細胞及免疫細胞中之VSIG2及CEACAM5的基因表現分析。 圖 16C描繪對來自兩個群組之結腸癌樣品中之基質細胞及免疫細胞中之VSIG2及CEACAM5的基因表現分析。 圖 17A描繪對結腸癌及正常組織中之CPM的基因表現分析(資料集：GSE81861、GSE144735、GSE132465)。 圖 17B描繪肺正常組織中CPM及CEACAM5及CEACAM6之比較表現(資料集EGAS00001004344)。 圖 17C描繪健康肺細胞中CPM及CEACAM5及CEACAM6之比較表現(資料集EGAS00001004344)。 圖 18描繪對潛在NOT標靶GPA33之表現分析。 圖 18A描繪諸多正常及CRC細胞亞型之GPA33表現(資料集：GSE81861、GSE144735、GSE132465)。 圖 18B描繪肺正常組織中之GPA33基因表現分析(資料集EGAS00001004344)。 圖 19描繪對潛在NOT標靶PLA2G2A之表現分析。 圖 19A描繪諸多正常及CRC細胞亞型之PLA2G2A表現(資料集：GSE81861、GSE144735、GSE132465)。 圖 19B描繪肺正常組織中之PLA2G2A基因表現分析(資料集EGAS00001004344)。 圖 20描繪對潛在NOT標靶ITM2C之表現分析。 圖 20A描繪諸多正常及CRC細胞亞型之ITM2C表現(資料集：GSE81861、GSE144735、GSE132465)。 圖 20B描繪肺正常組織中之ITM2C基因表現分析。 圖 21描繪對潛在NOT標靶CHP2之表現分析。 圖 21A描繪諸多正常及CRC細胞亞型之CHP2表現(資料集：GSE81861、GSE144735、GSE132465)。 圖 21B描繪肺正常組織中之CHP2基因表現分析。 圖 22描繪對潛在NOT標靶SLC26A2之表現分析。 圖 22A描繪諸多正常及CRC細胞亞型之SLC26A2表現(資料集：GSE81861、GSE144735、GSE132465)。 圖 22B描繪肺正常組織中之SLC26A2基因表現分析。 圖 23描繪對潛在NOT標靶SLC4A4之表現分析。 圖 23A描繪諸多正常及CRC細胞亞型之SLC4A4表現(資料集：GSE81861、GSE144735、GSE132465)。 圖 23B描繪肺正常組織中之SLC4A4基因表現分析。 圖 24描繪對潛在NOT標靶SLC26A3之表現分析。 圖 24A描繪諸多正常及CRC細胞亞型之SLC26A3表現(資料集：GSE81861、GSE144735、GSE132465)。 圖 24B描繪肺正常組織中之SLC26A3基因表現分析。 圖 25A 至圖 25B描繪親代未轉導LS174t細胞之LDH活性( 圖 25A)及表現mKATE之靶細胞之LDH活性( 圖 25B)，各自在與來自第一供體(「T細胞供體1」)之CEA aCAR轉導T細胞一起共培養後。 圖 26A 至圖 26B描繪親代未轉導LS174t細胞之LDH活性( 圖 26A)及表現mKATE之靶細胞之LDH活性( 圖 26B)，各自在與來自第二供體(「T細胞供體2」)之CEA aCAR轉導T細胞一起共培養後。 圖 27A 至圖 27F描繪CEA aCAR轉導T細胞在與靶細胞一起共培養後之細胞介素活性(IL-2， 圖 27A；IFN-γ， 圖 27B；TNF-α， 圖 27C；半胱天冬酶3， 圖 27D；穿孔蛋白， 圖 27E；及顆粒酶B， 圖 27F)。 圖 28描繪如藉由基於流體之分析所測定之經第一組CEA aCAR轉導之CEA aCAR轉導NK細胞之殺死活性。 圖 29描繪如藉由基於流體之分析所測定之經第二組CEA aCAR轉導之CEA aCAR轉導NK細胞之殺死活性。 圖 30描繪如藉由基於流體之分析所測定之經兩種不同CEA aCAR轉導之NK細胞在不同效應細胞對靶細胞(E:T)比率下之殺死活性。 圖 31A 至圖 31C描繪與靶細胞一起培養之CEA aCAR轉導NK細胞之表面標記物活化(NKp46， 圖 31A；CD16， 圖 31B；及CD107a， 圖 31C)。 圖 32描繪藉由即時基於螢光之分析所得之轉導CEA aCAR NK細胞之殺死活性。 圖 33A 至圖 33B描繪用表現CEA aCAR之NK細胞對小鼠進行處理後的腫瘤生物發光變化倍數( 圖 33A)及來自處理後第16天之代表性腫瘤影像( 圖 33B)。 圖 34描繪如藉由即時基於螢光之分析所量測之經不同CEA aCAR構築體轉導之NK細胞之殺死活性。 圖 35描繪如藉由即時基於螢光之分析所量測之經不同CEA aCAR構築體轉導之NK細胞之殺死活性。 圖 36描繪針對經腹膜內接種結腸直腸癌細胞株之靶細胞且用經不同CEA aCAR構築體轉導之NK細胞處理之小鼠在NK細胞處理後第2天獲取之代表性影像。 圖 37描繪針對經腹膜內接種結腸直腸癌細胞株之靶細胞且用經CEA aCAR構築體轉導之NK細胞處理之小鼠在NK細胞處理後第13天獲取之代表性影像。 圖 38A 至圖 38D提供不同CEA-CAR慢病毒及反轉錄病毒構築體在經轉導NK細胞上之表現水準(轉導之後3天)。圖38A、圖38B及圖38C提供描繪表現水準之流式細胞術直方圖(圖38A，針對慢病毒構築體，在轉導後3天；圖38B，針對反轉錄病毒構築體，在轉導後3天；及圖38C，針對反轉錄病毒構築體，在轉導後11天)。虛線表示負臨限值(基於未轉導「無病毒」NK細胞之表現)。 圖 38D顯示自反轉錄病毒構築體表現之時程，其中左圖提供表現百分比之時程，且右圖提供平均螢光強度(MFI)之時程。 圖 39A 至圖 39C顯示來自以狒狒內源病毒套膜(BaEv)假型化之不同反轉錄病毒轉導系統之CEA CAR表現。 圖 39A顯示第一反轉錄病毒主鏈(「主鏈1」)之表現。 圖 39B顯示第一反轉錄病毒載體主鏈(「主鏈1」)且具有替代核苷酸序列(「新密碼子最佳化」)之表現。 圖 39C顯示第二反轉錄病毒主鏈(「主鏈2」)之表現。 圖 40A 至圖 40B提供具有不同CAR結構之CEA CAR之轉導效率( 圖 40A)及CAR表現( 圖 40B)。 圖 41A 至圖 41B顯示CEA CAR NK細胞(來源於兩個不同的供體，供體7， 圖 41A及供體13， 圖 41B)在1:1效應細胞對靶細胞比率下之殺死。 圖 42A 至圖 42B顯示CEA CAR NK細胞(來源於兩個不同的供體，供體7， 圖 42A及供體13， 圖 42B)在1:2效應細胞對靶細胞比率下之殺死。 圖 43顯示NK細胞對不同CAR結構之CEA CAR表現。 圖 44顯示如藉由顆粒酶B及干擾素γ所量測之CEA CAR NK細胞與靶細胞(結腸直腸癌細胞株Ls174t)一起共培養時之NK細胞活化。 圖 45A 至圖 45B顯示如在NK細胞處理後5天所計算之腫瘤負荷變化倍數( 圖 45A)及代表性影像( 圖 45B)，如藉由生物發光成像對經CEA CAR NK細胞處理之攜帶腫瘤之小鼠所量測。 圖 46顯示研究中小鼠之腫瘤反應率。 圖 47A 至圖 47B顯示表現CEA aCAR及脫靶iCAR之NK細胞( 圖 47A)以及表現CEA aCAR及對模型安全性抗原HER2特異之抑制CAR之NK細胞( 圖 47B)的NK細胞CAR表現水準。 圖 48顯示抑制CAR (對安全性抗原VSIG2特異)及活化抗CEA CAR之NK細胞表現水準。 圖 49顯示與表現脫靶iCAR及CEA aCAR或HER2 iCAR及CEA aCAR之NK細胞一起共培養之HER2+ Ls174t細胞之殺死。 圖 50A 至圖 50B顯示表現aCAR/iCAR組合之NK細胞在與表現安全性抗原之靶細胞一起共培養後的NK細胞活化標記物磷酸化水準。 圖 51顯示如與表現aCAR/iCAR組合或單獨aCAR之NK細胞一起隔夜共培養之後經由流式細胞術量測之靶細胞減少百分比。 
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          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 
                      20                  25                  30          
          Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Thr Lys Thr Gly Glu Ala Thr Tyr Val Glu Glu Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Val Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Trp Asp Phe Ala Tyr Tyr Val Glu Ala Met Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          <![CDATA[<210> 6]]>
          <![CDATA[<211> 214]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 6]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Ala Ala Val Gly Thr Tyr 
                      20                  25                  30          
          Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Lys Arg Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Tyr Tyr Thr Tyr Pro Leu 
                          85                  90                  95      
          Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala 
                      100                 105                 110         
          Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser 
                  115                 120                 125             
          Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu 
              130                 135                 140                 
          Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu 
                          165                 170                 175     
          Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val 
                      180                 185                 190         
          Tyr Ala Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 
                  195                 200                 205             
          Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              210                 
          <![CDATA[<210> 7]]>
          <![CDATA[<211> 448]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 7]]>
          Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Ser Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Val Phe Ser Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Arg Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Gly Gly Ile Thr Tyr Ala Pro Ser Thr Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Ala His Tyr Phe Gly Ser Ser Gly Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 
                  115                 120                 125             
          Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 
                          165                 170                 175     
          Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 
                      180                 185                 190         
          Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 
                  195                 200                 205             
          Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 
              210                 215                 220                 
          Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 
                          245                 250                 255     
          Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 
                      260                 265                 270         
          Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 
                  275                 280                 285             
          Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 
              290                 295                 300                 
          Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 
          305                 310                 315                 320 
          Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 
                          325                 330                 335     
          Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 
                      340                 345                 350         
          Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 
                  355                 360                 365             
          Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 
              370                 375                 380                 
          Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 
          385                 390                 395                 400 
          Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 
                          405                 410                 415     
          Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 
                      420                 425                 430         
          Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 
                  435                 440                 445             
          <![CDATA[<210> 8]]>
          <![CDATA[<211> 214]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 8]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Phe Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Val 
                  35                  40                  45              
          Tyr Asn Thr Arg Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Pro Phe 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 
                      100                 105                 110         
          Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 
                  115                 120                 125             
          Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 
              130                 135                 140                 
          Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 
                          165                 170                 175     
          Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 
                      180                 185                 190         
          Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 
                  195                 200                 205             
          Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              210                 
          <![CDATA[<210> 9]]>
          <![CDATA[<211> 118]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 9]]>
          Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Arg Pro Ser Gln Thr Leu 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Thr Ile Ser Ser Gly Tyr Ser 
                      20                  25                  30          
          Trp His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Ile Gly 
                  35                  40                  45              
          Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ile Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 
              50                  55                  60                  
          Arg Val Thr Met Leu Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Arg 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 
                          85                  90                  95      
          Glu Asp Tyr Asp Tyr His Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Ser 
                      100                 105                 110         
          Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  115             
          <![CDATA[<210> 10]]>
          <![CDATA[<211> 110]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 10]]>
          Gly Val His Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Thr Ser Ser Ser 
                      20                  25                  30          
          Val Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys 
                  35                  40                  45              
          Leu Leu Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg 
              50                  55                  60                  
          Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Trp Ser Ser 
                          85                  90                  95      
          Tyr Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 
                      100                 105                 110 
          <![CDATA[<210> 11]]>
          <![CDATA[<211> 129]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 11]]>
          Met Asp Phe Gln Val Gln Ile Phe Ser Phe Leu Leu Ile Ser Ala Ser 
          1               5                   10                  15      
          Val Ile Met Ser Arg Gly Gln Thr Val Leu Ser Gln Ser Pro Ala Ile 
                      20                  25                  30          
          Leu Ser Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser 
                  35                  40                  45              
          Ser Ser Val Thr Tyr Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser 
              50                  55                  60                  
          Pro Lys Ser Trp Ile Tyr Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile 
                          85                  90                  95      
          Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Trp 
                      100                 105                 110         
          Ser Ser Lys Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                  115                 120                 125             
          Arg 
          <![CDATA[<210> 12]]>
          <![CDATA[<211> 112]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 12]]>
          Met Asp Phe Gln Val Gln Ile Phe Ser Phe Leu Leu Ile Ser Ala Ser 
          1               5                   10                  15      
          Val Ile Met Ser Arg Gly Gln Thr Val Leu Ser Gln Ser Pro Ala Ile 
                      20                  25                  30          
          Leu Ser Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser 
                  35                  40                  45              
          Ser Ser Val Thr Tyr Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser 
              50                  55                  60                  
          Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Val Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Trp Ser 
                          85                  90                  95      
          Ser Lys Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 
                      100                 105                 110         
          <![CDATA[<210> 13]]>
          <![CDATA[<211> 145]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 13]]>
          Glu Thr Val Ile Lys Tyr Leu Leu Pro Thr Ala Ala Ala Gly Leu Leu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Leu Ala Ala Gln Pro Ala Met Ala Gln Val Lys Leu Gln Gln Ser 
                      20                  25                  30          
          Gly Ala Glu Leu Val Arg Ser Gly Thr Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr 
                  35                  40                  45              
          Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Ser Tyr Met His Trp Leu Arg Gln 
              50                  55                  60                  
          Gly Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Trp Ile Asp Pro Glu Asn 
          65                  70                  75                  80  
          Gly Asp Thr Glu Tyr Ala Pro Lys Phe Gln Gly Lys Ala Thr Phe Thr 
                          85                  90                  95      
          Thr Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Leu Ser Ser Leu Thr 
                      100                 105                 110         
          Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn Glu Gly Thr Pro Thr Gly 
                  115                 120                 125             
          Pro Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser 
              130                 135                 140                 
          Ser 
          145 
          <![CDATA[<210> 14]]>
          <![CDATA[<211> 109]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 14]]>
          Glu Asn Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met 
                      20                  25                  30          
          His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Thr Ser Pro Lys Leu Trp Ile Tyr 
                  35                  40                  45              
          Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser 
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Met Glu Ala Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu Thr 
                          85                  90                  95      
          Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Ala Ala 
                      100                 105                 
          <![CDATA[<210> 15]]>
          <![CDATA[<211> 121]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 15]]>
          Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ile Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu 
                  35                  40                  45              
          Gly Phe Ile Arg Asn Lys Val Asn Gly Asp Thr Thr Glu Tyr Ser Ala 
              50                  55                  60                  
          Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ile Ser Gln Ser Ile 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Tyr Leu Gln Met Asn Thr Leu Arg Thr Glu Asp Ser Ala Thr Tyr 
                          85                  90                  95      
          Tyr Cys Ala Arg Asp Lys Gly Ile Ala Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 
                  115                 120     
          <![CDATA[<210> 16]]>
          <![CDATA[<211> 106]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 16]]>
          Gln Ile Val Leu Ser Gln Ser Pro Ala Ile Leu Phe Ala Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Ile 
                      20                  25                  30          
          His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile His 
                  35                  40                  45              
          Gly Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser 
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Met Glu Ala Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Leu Ser Thr 
                          85                  90                  95      
          Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105     
          <![CDATA[<210> 17]]>
          <![CDATA[<211> 443]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 17]]>
          Gln Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln 
          1               5                   10                  15      
          Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Tyr 
                      20                  25                  30          
          Gly Ile Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 
                  35                  40                  45              
          Trp Leu Ala His Ile Trp Trp Asn Asp Asn Lys Tyr Tyr Ser Thr Ser 
              50                  55                  60                  
          Leu Lys Thr Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 
          65                  70                  75                  80  
          Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 
                          85                  90                  95      
          Cys Ala Arg Ile Ser Leu Pro Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 
                      100                 105                 110         
          Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 
                  115                 120                 125             
          Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly 
              130                 135                 140                 
          Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 
                          165                 170                 175     
          Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 
                      180                 185                 190         
          Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser 
                  195                 200                 205             
          Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys 
              210                 215                 220                 
          Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe 
          225                 230                 235                 240 
          Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val 
                          245                 250                 255     
          Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe 
                      260                 265                 270         
          Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro 
                  275                 280                 285             
          Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr 
              290                 295                 300                 
          Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val 
          305                 310                 315                 320 
          Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr 
                          325                 330                 335     
          Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg 
                      340                 345                 350         
          Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly 
                  355                 360                 365             
          Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro 
              370                 375                 380                 
          Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser 
          385                 390                 395                 400 
          Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln 
                          405                 410                 415     
          Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His 
                      420                 425                 430         
          Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
                  435                 440             
          <![CDATA[<210> 18]]>
          <![CDATA[<211> 214]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 18]]>
          Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Ala 
                      20                  25                  30          
          Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Ser Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Leu 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 
                      100                 105                 110         
          Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 
                  115                 120                 125             
          Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 
              130                 135                 140                 
          Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 
                          165                 170                 175     
          Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 
                      180                 185                 190         
          Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 
                  195                 200                 205             
          Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              210                 
          <![CDATA[<210> 19]]>
          <![CDATA[<211> 240]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 19]]>
          Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ser 
                      20                  25                  30          
          Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Trp Thr Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Leu Tyr Arg Ser 
                          85                  90                  95      
          Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gly Ser Gly Ser Gly 
                      100                 105                 110         
          Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser 
                  115                 120                 125             
          Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser 
              130                 135                 140                 
          Ala Ser Gly Phe Asp Phe Thr Thr Tyr Trp Met Ser Trp Val Arg Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Glu Ile His Pro Asp Ser 
                          165                 170                 175     
          Ser Thr Ile Asn Tyr Ala Pro Ser Leu Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser 
                      180                 185                 190         
          Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Phe Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg 
                  195                 200                 205             
          Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Phe Cys Ala Ser Leu Tyr Phe Gly Phe 
              210                 215                 220                 
          Pro Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 
          225                 230                 235                 240 
          <![CDATA[<210> 20]]>
          <![CDATA[<211> 241]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 20]]>
          Gln Val Lys Leu Glu Gln Ser Gly Ala Glu Val Val Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Ser 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met His Trp Leu Arg Gln Gly Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Glu Tyr Ala Pro Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Lys Ala Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Ala Asn Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gly Leu Ser Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Asn Glu Gly Thr Pro Thr Gly Pro Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 
                  115                 120                 125             
          Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Asn Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser 
              130                 135                 140                 
          Ser Met Ser Val Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Ala Cys Ser Ala 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Ser Ser Val Pro Tyr Met His Trp Leu Gln Gln Lys Pro Gly Lys 
                          165                 170                 175     
          Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr 
                  195                 200                 205             
          Ile Ser Ser Val Gln Pro Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln 
              210                 215                 220                 
          Arg Ser Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile 
          225                 230                 235                 240 
          Lys 
          <![CDATA[<210> 21]]>
          <![CDATA[<211> 242]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 21]]>
          Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ile Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu 
                  35                  40                  45              
          Gly Phe Ile Arg Asn Lys Val Asn Gly Asp Thr Thr Glu Tyr Ser Ala 
              50                  55                  60                  
          Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ile Ser Gln Ser Ile 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Tyr Leu Gln Met Asn Thr Leu Arg Thr Glu Asp Ser Ala Thr Tyr 
                          85                  90                  95      
          Tyr Cys Ala Arg Asp Lys Gly Ile Ala Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 
                  115                 120                 125             
          Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ile Val Leu Ser Gln Ser Pro 
              130                 135                 140                 
          Ala Ile Leu Phe Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg 
          145                 150                 155                 160 
          Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly 
                          165                 170                 175     
          Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile His Gly Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly 
                      180                 185                 190         
          Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu 
                  195                 200                 205             
          Thr Ile Ser Arg Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln 
              210                 215                 220                 
          Gln Trp Ser Ser Asn Leu Ser Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu 
          225                 230                 235                 240 
          Ile Lys 
          <![CDATA[<210> 22]]>
          <![CDATA[<211> 241]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 22]]>
          Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Asn Asn 
                      20                  25                  30          
          Leu Ile Glu Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Val Ile Asn Pro Gly Ser Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Asp Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Gly Asp Tyr Tyr Gly Gly Phe Ala Val Asp Tyr Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 
                  115                 120                 125             
          Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser 
              130                 135                 140                 
          Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Thr 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Gln Asp Ile Gly Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp 
                          165                 170                 175     
          Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly 
                      180                 185                 190         
          Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu 
                  195                 200                 205             
          Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln 
              210                 215                 220                 
          Gln Gly Lys Ser Leu Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu 
          225                 230                 235                 240 
          Ile 
          <![CDATA[<210> 23]]>
          <![CDATA[<211> 244]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 23]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Phe Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Val 
                  35                  40                  45              
          Tyr Asn Thr Arg Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Pro Phe 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Gly Gly Gly Gly 
                      100                 105                 110         
          Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Gln 
                  115                 120                 125             
          Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser Leu Ser Leu Ser 
              130                 135                 140                 
          Cys Ala Ala Ser Gly Phe Val Phe Ser Ser Tyr Asp Met Ser Trp Val 
          145                 150                 155                 160 
          Arg Gln Thr Pro Glu Arg Gly Leu Glu Trp Val Ala Tyr Ile Ser Ser 
                          165                 170                 175     
          Gly Gly Gly Ile Thr Tyr Ala Pro Ser Thr Val Lys Gly Arg Phe Thr 
                      180                 185                 190         
          Val Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser 
                  195                 200                 205             
          Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala His Tyr Phe 
              210                 215                 220                 
          Gly Ser Ser Gly Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 
          225                 230                 235                 240 
          Val Ser Ser Ala 
          <![CDATA[<210> 24]]>
          <![CDATA[<211> 244]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 24]]>
          Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Ser Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Val Phe Ser Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Arg Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Gly Gly Ile Thr Tyr Ala Pro Ser Thr Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Ala His Tyr Phe Gly Ser Ser Gly Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 
                  115                 120                 125             
          Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro 
              130                 135                 140                 
          Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg 
          145                 150                 155                 160 
          Ala Ser Glu Asn Ile Phe Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro 
                          165                 170                 175     
          Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Val Tyr Asn Thr Arg Thr Leu Ala Glu 
                      180                 185                 190         
          Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser 
                  195                 200                 205             
          Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys 
              210                 215                 220                 
          Gln His His Tyr Gly Thr Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu 
          225                 230                 235                 240 
          Glu Ile Lys Arg 
          <![CDATA[<210> 25]]>
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          <![CDATA[<400> 25]]>
          Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Thr Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 
                  35                  40                  45              
          Gly Phe Ile Gly Asn Lys Ala Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Ala 
              50                  55                  60                  
          Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Lys Ser Lys Ser Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Tyr Leu Gln Met Asn Thr Leu Gln Ala Glu Asp Ser Ala Ile Tyr 
                          85                  90                  95      
          Tyr Cys Thr Arg Asp Arg Gly Leu Arg Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Leu Tyr Leu Gln Met Asn Thr Leu Gln Ala Glu Asp Ser Ala Ile Tyr 
                          165                 170                 175     
          Tyr Cys Thr Arg Asp Arg Gly Leu Arg Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 
                      180                 185                 190         
          Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 
                  195                 200                 205             
          Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Thr Val Leu Thr Gln Ser Pro 
              210                 215                 220                 
          Ser Ser Leu Ser Val Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg 
          225                 230                 235                 240 
          Ala Ser Ser Ser Val Thr Tyr Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly 
                          245                 250                 255     
          Leu Ala Pro Lys Ser Leu Ile Tyr Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly 
                      260                 265                 270         
          Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe 
                  275                 280                 285             
          Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln 
              290                 295                 300                 
          His Trp Ser Ser Lys Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu 
          305                 310                 315                 320 
          Val Lys Arg Thr Val 
                          325 
          <![CDATA[<210> 26]]>
          <![CDATA[<211> 325]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 26]]>
          Gln Thr Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Val Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Thr Tyr Ile 
                      20                  25                  30          
          His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Leu Ala Pro Lys Ser Leu Ile Tyr 
                  35                  40                  45              
          Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Trp Ser Ser Lys Pro Pro Thr 
                          85                  90                  95      
          Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Val Lys Arg Thr Val Gly Gly Gly 
                      100                 105                 110         
          Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu 
                  115                 120                 125             
          Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu 
              130                 135                 140                 
          Ser Cys Ala Thr Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr Tyr Met Asn Trp 
          145                 150                 155                 160 
          Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly Phe Ile Gly 
                          165                 170                 175     
          Asn Lys Ala Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Ala Ser Val Lys Gly 
                      180                 185                 190         
          Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Lys Ser Lys Ser Thr Leu Tyr Leu Gln 
                  195                 200                 205             
          Met Asn Thr Leu Gln Ala Glu Asp Ser Ala Ile Tyr Tyr Cys Thr Arg 
              210                 215                 220                 
          Asp Arg Gly Leu Arg Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 
          225                 230                 235                 240 
          Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 
                          245                 250                 255     
          Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys 
                      260                 265                 270         
          Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Leu Tyr Leu Gln 
                  275                 280                 285             
          Met Asn Thr Leu Gln Ala Glu Asp Ser Ala Ile Tyr Tyr Cys Thr Arg 
              290                 295                 300                 
          Asp Arg Gly Leu Arg Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Val Thr Val Ser Ser 
                          325 
          <![CDATA[<210> 27]]>
          <![CDATA[<211> 3]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 27]]>
          Gly Gly Ser 
          1           
          <![CDATA[<210> 28]]>
          <![CDATA[<211> 6]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 28]]>
          Gly Gly Ser Gly Gly Ser 
          1               5       
          <![CDATA[<210> 29]]>
          <![CDATA[<211> 9]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 29]]>
          Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser 
          1               5                   
          <![CDATA[<210> 30]]>
          <![CDATA[<211> 12]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 30]]>
          Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser 
          1               5                   10          
          <![CDATA[<210> 31]]>
          <![CDATA[<211> 15]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 31]]>
          Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser 
          1               5                   10                  15  
          <![CDATA[<210> 32]]>
          <![CDATA[<211> 4]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 32]]>
          Gly Gly Gly Ser 
          1               
          <![CDATA[<210> 33]]>
          <![CDATA[<211> 8]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400> 33]]>
          Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser 
          1               5               
          <![CDATA[<210> 34]]>
          <![CDATA[<211> 12]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400> 34]]>
          Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser 
          1               5                   10          
          <![CDATA[<210> 35]]>
          <![CDATA[<211> 16]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 35]]>
          Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
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          <![CDATA[<211> 20]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
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          <![CDATA[<400> 36]]>
          Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          Gly Gly Gly Ser 
                      20  
          <![CDATA[<210> 37]]>
          <![CDATA[<211> 5]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400> 37]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser 
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          <![CDATA[<400> 38]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210> 39]]>
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          <![CDATA[<400> 39]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 
          1               5                   10                  15  
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          <![CDATA[<211> 20]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400> 40]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gly Gly Gly Ser 
                      20  
          <![CDATA[<210> 41]]>
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          <![CDATA[<400> 41]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 
                      20                  25  
          <![CDATA[<210> 42]]>
          <![CDATA[<211> 18]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 42]]>
          Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr 
          1               5                   10                  15      
          Lys Gly 
          <![CDATA[<210> 43]]>
          <![CDATA[<211> 20]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 43]]>
          Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu 
          1               5                   10                  15      
          Ala Ala Ala Lys 
                      20  
          <![CDATA[<210> 44]]>
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          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 44]]>
          ggcggaggcg gatcaggtgg cggaggaagt ggcggcggag gatct                       45
          <![CDATA[<210> 45]]>
          <![CDATA[<211> 21]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 45]]>
          Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Val Ile Thr 
                      20      
          <![CDATA[<210> 46]]>
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          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 46]]>
          Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val 
                      20                  25          
          <![CDATA[<210> 47]]>
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          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 47]]>
          Val Ala Ala Ile Leu Gly Leu Gly Leu Val Leu Gly Leu Leu Gly Pro 
          1               5                   10                  15      
          Leu Ala Ile Leu Leu 
                      20      
          <![CDATA[<210> 48]]>
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          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 48]]>
          Phe Leu Val Ile Ile Val Ile Leu Ser Ala Leu Phe Leu Gly Thr Leu 
          1               5                   10                  15      
          Ala Cys Phe Cys Val 
                      20      
          <![CDATA[<210> 49]]>
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          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 49]]>
          Ala Ala Ala Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu 
          1               5                   10                  15      
          Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro 
                      20                  25                  30          
          Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro 
                  35                  40          
          <![CDATA[<210> 50]]>
          <![CDATA[<211> 45]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 50]]>
          Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala 
          1               5                   10                  15      
          Leu Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly 
                      20                  25                  30          
          Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp 
                  35                  40                  45  
          <![CDATA[<210> 51]]>
          <![CDATA[<211> 12]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 51]]>
          Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro 
          1               5                   10          
          <![CDATA[<210> 52]]>
          <![CDATA[<211> 12]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 52]]>
          Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Ala Pro Ser Ala Pro 
          1               5                   10          
          <![CDATA[<210> 53]]>
          <![CDATA[<211> 12]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 53]]>
          Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro 
          1               5                   10          
          <![CDATA[<210> 54]]>
          <![CDATA[<211> 12]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400> 54]]>
          Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro 
          1               5                   10          
          <![CDATA[<210> 55]]>
          <![CDATA[<211> 86]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 55]]>
          Ala Ala Ala Phe Val Pro Val Phe Leu Pro Ala Lys Pro Thr Thr Thr 
          1               5                   10                  15      
          Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro 
                      20                  25                  30          
          Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val 
                  35                  40                  45              
          His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro 
              50                  55                  60                  
          Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Tyr Cys Asn His Arg Asn 
                          85      
          <![CDATA[<210> 56]]>
          <![CDATA[<211> 132]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 56]]>
          Ala Cys Pro Thr Gly Leu Tyr Thr His Ser Gly Glu Cys Cys Lys Ala 
          1               5                   10                  15      
          Cys Asn Leu Gly Glu Gly Val Ala Gln Pro Cys Gly Ala Asn Gln Thr 
                      20                  25                  30          
          Val Cys Glu Pro Cys Leu Asp Ser Val Thr Phe Ser Asp Val Val Ser 
                  35                  40                  45              
          Ala Thr Glu Pro Cys Lys Pro Cys Thr Glu Cys Val Gly Leu Gln Ser 
              50                  55                  60                  
          Met Ser Ala Pro Cys Val Glu Ala Asp Asp Ala Val Cys Arg Cys Ala 
          65                  70                  75                  80  
          Tyr Gly Tyr Tyr Gln Asp Glu Thr Thr Gly Arg Cys Glu Ala Cys Arg 
                          85                  90                  95      
          Val Cys Glu Ala Gly Ser Gly Leu Val Phe Ser Cys Gln Asp Lys Gln 
                      100                 105                 110         
          Asn Thr Val Cys Glu Glu Cys Pro Asp Gly Thr Tyr Ser Asp Glu Ala 
                  115                 120                 125             
          Asp Ala Glu Cys 
              130         
          <![CDATA[<210> 57]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400> 57]]>
          Ala Cys Pro Thr Gly Leu Tyr Thr His Ser Gly Glu Cys Cys Lys Ala 
          1               5                   10                  15      
          Cys Asn Leu Gly Glu Gly Val Ala Gln Pro Cys Gly Ala Asn Gln Thr 
                      20                  25                  30          
          Val Cys 
          <![CDATA[<210> 58]]>
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          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 58]]>
          Ala Val Gly Gln Asp Thr Gln Glu Val Ile Val Val Pro His Ser Leu 
          1               5                   10                  15      
          Pro Phe Lys Val 
                      20  
          <![CDATA[<210> 59]]>
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          <![CDATA[<212> DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 59]]>
          gcagcagcta tcgaggtgat gtatcctccg ccctacctgg ataatgaaaa gagtaatggg       60
          actatcattc atgtaaaagg gaagcatctt tgtccttctc cccttttccc cggtccgtct      120
          aaacct                                                                 126
          <![CDATA[<210> 60]]>
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          <![CDATA[<212> DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400> 60]]>
          accacaacac cagctcctag acctccaact cctgctccta caatcgccct gcagccactg       60
          tctctgaggc ctgaagcttg tagacctgct gctggcggag ccgtgcatac cagaggactg      120
          gatttcgcct gcgac                                                       135
          <![CDATA[<210> 61]]>
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          <![CDATA[<400> 61]]>
          gaaagcaagt acggtccacc ttgccctagc tgtccg                                 36
          <![CDATA[<210> 62]]>
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          <![CDATA[<400> 62]]>
          gaatccaagt acggcccccc agcgcctagt gcccca                                 36
          <![CDATA[<210> 63]]>
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          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 63]]>
          gaatctaaat atggcccgcc atgcccgcct tgccca                                 36
          <![CDATA[<210> 64]]>
          <![CDATA[<211> 36]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 64]]>
          gaaccgaagt cttgtgataa aactcatacg tgcccg                                 36
          <![CDATA[<210> 65]]>
          <![CDATA[<211> 258]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 65]]>
          gctgctgctt tcgtacccgt gttcctccct gctaagccta cgactacccc cgcaccgaga       60
          ccacccacgc cagcacccac gattgctagc cagcccctta gtttgcgacc agaagcttgt      120
          cggcctgctg ctggtggcgc ggtacatacc cgcggccttg attttgcttg cgatatatat      180
          atctgggcgc ctctggccgg aacatgcggg gtcctcctcc tttctctggt tattactctc      240
          tactgtaatc acaggaat                                                    258
          <![CDATA[<210> 66]]>
          <![CDATA[<211> 396]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 66]]>
          gcctgcccga ccgggctcta cactcatagc ggggaatgtt gtaaggcatg taacttgggt       60
          gagggcgtcg cacagccctg cggagctaac caaacagtgt gcgaaccctg cctcgatagt      120
          gtgacgttct ctgatgttgt atcagctaca gagccttgca aaccatgtac tgagtgcgtt      180
          ggacttcagt caatgagcgc tccatgtgtg gaggcagatg atgcggtctg tcgatgtgct      240
          tacggatact accaagacga gacaacaggg cggtgcgagg cctgtagagt ttgtgaggcg      300
          ggctccgggc tggtgttttc atgtcaagac aagcaaaata cggtctgtga agagtgccct      360
          gatggcacct actcagacga agcagatgca gaatgc                                396
          <![CDATA[<210> 67]]>
          <![CDATA[<211> 102]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 67]]>
          gcctgcccta caggactcta cacgcatagc ggtgagtgtt gtaaagcatg caacctcggg       60
          gaaggtgtag cccagccatg cggggctaac caaaccgttt gc                         102
          <![CDATA[<210> 68]]>
          <![CDATA[<211> 60]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 68]]>
          gctgtgggcc aggacacgca ggaggtcatc gtggtgccac actccttgcc ctttaaggtg       60
          <![CDATA[<210> 69]]>
          <![CDATA[<211> 12]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> MOD_RES]]>
          <![CDATA[<222> (5)..(5)]]>
          <![CDATA[<223> Any amino acid]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> MOD_RES]]>
          <![CDATA[<222> (11)..(11)]]>
          <![CDATA[<223> Any amino acid]]>
          <![CDATA[<400> 69]]>
          Gly Gly Cys Lys Xaa Ser Gly Gly Cys Lys Xaa Ser 
          1               5                   10          
          <![CDATA[<210> 70]]>
          <![CDATA[<211> 42]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 70]]>
          Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met 
          1               5                   10                  15      
          Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe 
                      20                  25                  30          
          Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu 
                  35                  40          
          <![CDATA[<210> 71]]>
          <![CDATA[<211> 41]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 71]]>
          Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr 
          1               5                   10                  15      
          Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro 
                      20                  25                  30          
          Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser 
                  35                  40      
          <![CDATA[<210> 72]]>
          <![CDATA[<211> 42]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 72]]>
          Ala Leu Tyr Leu Leu Arg Arg Asp Gln Arg Leu Pro Pro Asp Ala His 
          1               5                   10                  15      
          Lys Pro Pro Gly Gly Gly Ser Phe Arg Thr Pro Ile Gln Glu Glu Gln 
                      20                  25                  30          
          Ala Asp Ala His Ser Thr Leu Ala Lys Ile 
                  35                  40          
          <![CDATA[<210> 73]]>
          <![CDATA[<211> 120]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 73]]>
          Trp Arg Arg Lys Arg Lys Glu Lys Gln Ser Glu Thr Ser Pro Lys Glu 
          1               5                   10                  15      
          Phe Leu Thr Ile Tyr Glu Asp Val Lys Asp Leu Lys Thr Arg Arg Asn 
                      20                  25                  30          
          His Glu Gln Glu Gln Thr Phe Pro Gly Gly Gly Ser Thr Ile Tyr Ser 
                  35                  40                  45              
          Met Ile Gln Ser Gln Ser Ser Ala Pro Thr Ser Gln Glu Pro Ala Tyr 
              50                  55                  60                  
          Thr Leu Tyr Ser Leu Ile Gln Pro Ser Arg Lys Ser Gly Ser Arg Lys 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Asn His Ser Pro Ser Phe Asn Ser Thr Ile Tyr Glu Val Ile Gly 
                          85                  90                  95      
          Lys Ser Gln Pro Lys Ala Gln Asn Pro Ala Arg Leu Ser Arg Lys Glu 
                      100                 105                 110         
          Leu Glu Asn Phe Asp Val Tyr Ser 
                  115                 120 
          <![CDATA[<210> 74]]>
          <![CDATA[<211> 112]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 74]]>
          Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr 
                      20                  25                  30          
          Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys 
                  35                  40                  45              
          Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys 
              50                  55                  60                  
          Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala 
                          85                  90                  95      
          Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 
                      100                 105                 110         
          <![CDATA[<210> 75]]>
          <![CDATA[<211> 10]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 75]]>
          Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210> 76]]>
          <![CDATA[<211> 21]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 76]]>
          Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 
          1               5                   10                  15      
          His Ala Ala Arg Pro 
                      20      
          <![CDATA[<210> 77]]>
          <![CDATA[<211> 15]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 77]]>
          Gly Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser 
          1               5                   10                  15  
          <![CDATA[<210> 78]]>
          <![CDATA[<211> 120]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 78]]>
          Gln Val Lys Leu Glu Gln Ser Gly Ala Glu Val Val Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Ser 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met His Trp Leu Arg Gln Gly Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Glu Tyr Ala Pro Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Lys Ala Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Ala Asn Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gly Leu Ser Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Asn Glu Gly Thr Pro Thr Gly Pro Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120 
          <![CDATA[<210> 79]]>
          <![CDATA[<211> 106]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 79]]>
          Glu Asn Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Ser Val Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Ala Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Pro Tyr Met 
                      20                  25                  30          
          His Trp Leu Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 
                  35                  40                  45              
          Leu Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Pro Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu Thr 
                          85                  90                  95      
          Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105     
          <![CDATA[<210> 80]]>
          <![CDATA[<211> 1488]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 80]]>
          atggctctgc ctgtgacagc tctgctgctg cctctggctc tgcttctgca tgccgccaga       60
          cctgacatcc agctgacaca gagccctagc agcctgtctg cctctgtggg cgacagagtg      120
          accatcacat gcaaggcctc tcaggacgtg ggcacaagcg tggcatggta tcagcagaag      180
          cctggcaagg cccctaagct gctgatctac tggaccagca ccagacacac aggcgtgccc      240
          agcagatttt ctggcagcgg ctctggcacc gacttcacct tcaccataag cagcctgcag      300
          cctgaggata tcgccaccta ctactgccag cagtacagcc tgtacagaag cttcggccag      360
          ggcaccaagg tggaaatcaa aggcggatct ggaagcggcg gttctggatc tggtggaagc      420
          ggatctgagg tgcagctggt ggaatctggt ggcggagttg tgcagcctgg cagatctctg      480
          agactgagct gtagcgccag cggcttcgat ttcaccacct actggatgag ctgggtccga      540
          caggcccctg gcaaaggact ggaatggatc ggcgagattc accccgacag cagcaccatc      600
          aattacgccc ctagcctgaa ggaccggttc accatctcca gagacaacgc caagaatacc      660
          ctgttcctgc agatggacag cctccggcct gaagataccg gcgtgtactt ttgcgccagc      720
          ctgtatttcg gcttcccttg gtttgcctac tggggccagg gaacacctgt gaccgttagc      780
          tctgagcaga agctgatctc cgaagaggac ctgaccacaa caccagctcc tagaccacct      840
          acaccagcac ctacaatcgc cctgcagcca ctgtctctga ggccagaggc ttgtagacct      900
          gctgctggcg gagccgtgca tacaagagga ctggatttcg cctgcgactt ctgggtgctc      960
          gtggttgttg gaggcgtgct ggcctgttac tctctgctgg tcaccgtggc cttcatcatc     1020
          ttttgggtcc gaagcaagcg gagccggctg ctgcacagcg actacatgaa catgacccct     1080
          agacggcccg gacctaccag aaagcactac cagccttacg ctcctcctag agacttcgcc     1140
          gcctaccggt ccagagtgaa gttctccaga tctgccgacg ctcccgccta taagcagggc     1200
          cagaaccagc tgtacaacga gctgaacctg gggagaagag aagagtacga cgtgctggac     1260
          aagcggagag gcagagatcc tgagatgggc ggcaagccca gacggaagaa tcctcaagag     1320
          ggcctgtata atgagctgca gaaagacaag atggccgagg cctacagcga gatcggaatg     1380
          aagggcgagc gcagaagagg caagggacac gatggactgt accagggcct gagcaccgcc     1440
          accaaggata cctatgatgc cctgcacatg caggccctgc ctccaaga                  1488
          <![CDATA[<210> 81]]>
          <![CDATA[<211> 375]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 81]]>
          Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 
          1               5                   10                  15      
          His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val 
                      20                  25                  30          
          Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe 
                  35                  40                  45              
          Asp Phe Thr Thr Tyr Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys 
              50                  55                  60                  
          Gly Leu Glu Trp Ile Gly Glu Ile His Pro Asp Ser Ser Thr Ile Asn 
          65                  70                  75                  80  
          Tyr Ala Pro Ser Leu Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala 
                          85                  90                  95      
          Lys Asn Thr Leu Phe Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr 
                      100                 105                 110         
          Gly Val Tyr Phe Cys Ala Ser Leu Tyr Phe Gly Phe Pro Trp Phe Ala 
                  115                 120                 125             
          Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Pro Val Thr Val Ser Ser Glu Gln Lys Leu 
              130                 135                 140                 
          Ile Ser Glu Glu Asp Leu Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr 
          145                 150                 155                 160 
          Pro Ala Pro Thr Ile Ala Leu Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala 
                          165                 170                 175     
          Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe 
                      180                 185                 190         
          Ala Cys Asp Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys 
                  195                 200                 205             
          Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser 
              210                 215                 220                 
          Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg 
          225                 230                 235                 240 
          Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg 
                          245                 250                 255     
          Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp 
                      260                 265                 270         
          Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn 
                  275                 280                 285             
          Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg 
              290                 295                 300                 
          Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu 
                          325                 330                 335     
          Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu 
                      340                 345                 350         
          Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His 
                  355                 360                 365             
          Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 
              370                 375 
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 82]]>
          atggctctgc ctgtgacagc tctgctgctg cctctggctc tgcttctgca tgccgctaga       60
          ccccaagtga agctggaaca gtctggcgcc gaggttgtga aacctggcgc ctctgtgaag      120
          ctgagctgta aagccagcgg cttcaacatc aaggacagct acatgcactg gctgcggcaa      180
          ggccctggac agagactgga atggatcggc tggatcgacc ccgagaatgg cgatacagag      240
          tacgccccta agttccaggg caaagccacc ttcaccaccg acacctctgc caacacagcc      300
          tacctgggac tgtctagcct gaggcctgaa gataccgccg tgtactactg caacgagggc      360
          acacctacag gcccctacta cttcgattat tggggccagg gcaccctggt caccgtttct      420
          agcggaggcg gaggatctgg tggcggagga agtggcggag gcggttctga aaatgtgctg      480
          acacagagcc ccagcagcat gtccgtgtct gtgggcgaca gagtgacaat cgcctgtagc      540
          gcctctagca gcgtgcccta tatgcattgg ctgcagcaga agcccggcaa gagccctaag      600
          ctgctgatct acctgaccag caatctggcc agcggcgtgc caagcagatt ttctggaagc      660
          ggcagcggca ccgactacag cctgacaatc agtagcgtgc agcctgagga tgccgccacc      720
          tactactgtc agcagagaag cagctaccct ctgacctttg gaggcggcac caagctggaa      780
          atcaaagagc agaagctgat ctccgaagag gacctgacca caacaccagc tcctagacca      840
          cctacaccag cacctacaat cgccctgcag ccactgtctc tgaggccaga agcttgtaga      900
          cctgctgctg gcggagccgt gcatacaaga ggactggatt tcgcctgcga cttctgggtg      960
          ctcgtggttg ttggcggagt gctggcctgt tactctctgc tggtcacagt ggccttcatc     1020
          atcttttggg tccgaagcaa gcggagccgg ctgctgcaca gcgactacat gaacatgacc     1080
          cctagacggc ccggacctac cagaaagcac taccagcctt acgctcctcc tagagacttc     1140
          gccgcctacc ggtccagagt gaagttcagc agatccgccg atgctcccgc ctataagcag     1200
          ggccagaacc agctgtacaa cgagctgaac ctggggagaa gagaagagta cgacgtgctg     1260
          gacaagcgga gaggcagaga tcctgagatg ggcggcaagc ccagacggaa gaatcctcaa     1320
          gagggcctgt ataatgagct gcagaaagac aagatggccg aggcctacag cgagatcgga     1380
          atgaagggcg agcgcagaag aggcaaggga cacgatggac tgtatcaggg cctgagcacc     1440
          gccaccaagg atacctatga tgccctgcac atgcaggccc tgcctccaag a              1491
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 83]]>
          Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 
          1               5                   10                  15      
          His Ala Ala Arg Pro Glu Asn Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met 
                      20                  25                  30          
          Ser Val Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Ala Cys Ser Ala Ser Ser 
                  35                  40                  45              
          Ser Val Pro Tyr Met His Trp Leu Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro 
              50                  55                  60                  
          Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser 
                          85                  90                  95      
          Ser Val Gln Pro Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser 
                      100                 105                 110         
          Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Glu 
                  115                 120                 125             
          Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg 
              130                 135                 140                 
          Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Leu Gln Pro Leu Ser Leu Arg 
          145                 150                 155                 160 
          Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly 
                          165                 170                 175     
          Leu Asp Phe Ala Cys Asp Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val 
                      180                 185                 190         
          Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp 
                  195                 200                 205             
          Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met 
              210                 215                 220                 
          Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala 
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          Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg 
                          245                 250                 255     
          Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn 
                      260                 265                 270         
          Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg 
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          Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro 
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          Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala 
          305                 310                 315                 320 
          Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His 
                          325                 330                 335     
          Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp 
                      340                 345                 350         
          Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 
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          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 84]]>
          atggctctgc ctgtgacagc tctgctgctg cctctggctc tgcttctgca tgctgccaga       60
          cctcagatcg tgctgtctca gtctcccgcc atcctgtttg ctagccctgg cgagaaagtg      120
          accatgacct gtagagccag cagctccgtg tcctacatcc actggtatca gcagaagccc      180
          ggcagcagcc ctaagccttg gatccacggc acaagcaatc tggccagcgg agtgcctgcc      240
          agattttctg gaagcggcag cggcaccagc tacagcctga ccatctctag aatggaagcc      300
          gaggacgccg ccacctacta ctgtcagcag tggtccagca acctgagcac ctttggcggc      360
          ggaacaaagc tggaaatcaa aggcggcgga ggatctggcg gaggcggtag cggaggtggt      420
          ggatctgaag tgaagctggt ggaatcaggc ggaggcctgg ttcaacctgg cggatctctg      480
          agactgagct gcagcatctc cggcttcacc ttcaccgact actacatgaa ctgggtccga      540
          cagagccctg gcaaggctct ggaatggctg ggcttcatca gaaacaaagt gaacggcgac      600
          accaccgagt acagcgcctc tgtgaagggc agattcacca tcagccggga catcagccag      660
          agcatcctgt acctgcagat gaacaccctg cggaccgagg atagcgccac atattactgc      720
          gccagagaca agggaatcgc ctactacttc gactactggg gccagggcac cacactgaca      780
          gtgtctagcg agcagaagct gatctccgaa gaggacctga ccacaacacc agctcctaga      840
          ccacctacac cagcacctac aatcgccctg cagccactgt ctctgaggcc agaagcttgt      900
          agacctgctg ctggcggagc cgtgcataca agaggactgg atttcgcctg cgacttctgg      960
          gtgctcgtgg ttgttggcgg agtgctggcc tgttactctc tgctggtcac cgtggccttc     1020
          atcatctttt gggtccgaag caagcggagc cggctgctgc acagcgatta catgaacatg     1080
          acccctcgga ggcccggacc taccagaaag cactaccagc cttacgctcc tcctagagac     1140
          ttcgccgcct accggtccag agtgaagttc agcagatccg ctgatgcccc tgcctacaag     1200
          cagggccaga accagctgta caacgagctg aacctgggga gaagagaaga gtacgacgtg     1260
          ctggacaagc ggagaggcag agatcctgag atgggcggca agcccagacg gaagaatcct     1320
          caagagggcc tgtataacga actgcagaaa gacaagatgg ccgaggccta cagcgagatc     1380
          ggaatgaagg gcgagcgcag aagaggcaag ggacacgatg gactgtacca gggcctgagc     1440
          acagccacca aggataccta tgacgccctg cacatgcagg ccctgcctcc aaga           1494
          <![CDATA[<210> 85]]>
          <![CDATA[<211> 377]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 85]]>
          Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 
          1               5                   10                  15      
          His Ala Ala Arg Pro Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu 
                      20                  25                  30          
          Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ile Ser Gly Phe 
                  35                  40                  45              
          Thr Phe Thr Asp Tyr Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys 
              50                  55                  60                  
          Ala Leu Glu Trp Leu Gly Phe Ile Arg Asn Lys Val Asn Gly Asp Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Thr Glu Tyr Ser Ala Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp 
                          85                  90                  95      
          Ile Ser Gln Ser Ile Leu Tyr Leu Gln Met Asn Thr Leu Arg Thr Glu 
                      100                 105                 110         
          Asp Ser Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Lys Gly Ile Ala Tyr Tyr 
                  115                 120                 125             
          Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Glu Gln 
              130                 135                 140                 
          Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro 
          145                 150                 155                 160 
          Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Leu Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro 
                          165                 170                 175     
          Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu 
                      180                 185                 190         
          Asp Phe Ala Cys Asp Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu 
                  195                 200                 205             
          Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val 
              210                 215                 220                 
          Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr 
          225                 230                 235                 240 
          Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro 
                          245                 250                 255     
          Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser 
                      260                 265                 270         
          Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu 
                  275                 280                 285             
          Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg 
              290                 295                 300                 
          Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln 
          305                 310                 315                 320 
          Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr 
                          325                 330                 335     
          Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp 
                      340                 345                 350         
          Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala 
                  355                 360                 365             
          Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 
              370                 375         
          <![CDATA[<210> 86]]>
          <![CDATA[<211> 363]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 86]]>
          Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 
          1               5                   10                  15      
          His Ala Ala Arg Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu 
                      20                  25                  30          
          Ser Ala Ser Leu Gly Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Thr Ser Gln 
                  35                  40                  45              
          Asp Ile Gly Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr 
              50                  55                  60                  
          Val Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile 
                          85                  90                  95      
          Ser Asn Leu Glu Gln Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly 
                      100                 105                 110         
          Lys Ser Leu Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                  115                 120                 125             
          Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Thr Thr Thr Pro Ala Pro 
              130                 135                 140                 
          Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Leu Gln Pro Leu Ser Leu 
          145                 150                 155                 160 
          Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg 
                          165                 170                 175     
          Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly 
                      180                 185                 190         
          Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe 
                  195                 200                 205             
          Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn 
              210                 215                 220                 
          Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr 
          225                 230                 235                 240 
          Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser 
                          245                 250                 255     
          Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr 
                      260                 265                 270         
          Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys 
                  275                 280                 285             
          Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn 
              290                 295                 300                 
          Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu 
          305                 310                 315                 320 
          Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly 
                          325                 330                 335     
          His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr 
                      340                 345                 350         
          Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 
                  355                 360             
          <![CDATA[<210> 87]]>
          <![CDATA[<211> 1395]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 87]]>
          atggctctgc ctgtgacagc tctgctgctg cctctggctc tgcttctgca tgctgctaga       60
          cctcaggtcc agctgcagca gtctggcgcc gaacttgtta gacctggcac cagcgtgaag      120
          gtgtcctgta aagccagcgg ctacgccttc accaacaacc tgatcgagtg ggtcaagcag      180
          aggcctggac agggactcga gtggatcggc gtgatcaatc ctggcagcgg cgacaccaac      240
          tacaacgaga agttcaaggg caaagccaca ctgaccgccg acaagagcag caacacagcc      300
          tacatgcagc tgagcagcct gacctccgat gacagcgccg tgtacttttg cgccagaggc      360
          gattactacg gcggcttcgc cgtggattat tggggccagg gaacaagcgt gaccgtgtct      420
          agcggaggcg gaggatctgg tggcggagga agtggcggag gcggttctga tatccagatg      480
          acccagacca ccagcagcct gtctgcctct ctgggcgata gagtgaccat cagctgcaga      540
          accagccagg acatcggcaa ctacctgaac tggtatcagc agaaacccga cggcaccgtg      600
          aagctgctga tctactacac cagcagactg cacagcggcg tgcccagcag attttctgga      660
          agcggcagcg gcaccgacta ctccctgaca atcagcaacc tggaacaaga ggatatcgct      720
          acctacttct gccagcaagg caagagcctg cctagaacct ttggaggcgg caccaagctg      780
          gaaatcaaag agcagaagct gatctccgaa gaggacctgg agtctaagta cggccctcct      840
          tgtcctagct gccccttttg ggtgctcgtg gttgttggcg gagtgctggc ctgttactct      900
          ctgctggtca ccgtggcctt catcatcttt tgggtccgaa gcaagcggag ccggctgctg      960
          cactccgact acatgaacat gacccctaga cggcccggac ctaccagaaa gcactaccag     1020
          ccttacgctc ctcctagaga cttcgccgcc taccggtcca gagtgaagtt cagcagatcc     1080
          gccgatgctc ccgcctataa gcagggccag aatcagctgt acaacgagct gaacctgggg     1140
          cgcagagaag agtacgacgt gctggacaag agaagaggca gggaccctga gatgggcggc     1200
          aagcccagaa gaaagaaccc tcaagagggc ctgtataacg aactgcagaa agacaagatg     1260
          gccgaggcct acagcgagat cggaatgaag ggcgaacgca gaagaggaaa gggccacgac     1320
          ggactgtatc agggcctgag cacagccacc aaggacacct atgatgccct gcacatgcag     1380
          gccctgcctc caaga                                                      1395
          <![CDATA[<210> 88]]>
          <![CDATA[<211> 330]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 88]]>
          Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 
          1               5                   10                  15      
          His Ala Ala Arg Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu 
                      20                  25                  30          
          Ser Ala Ser Leu Gly Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Thr Ser Gln 
                  35                  40                  45              
          Asp Ile Gly Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr 
              50                  55                  60                  
          Val Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile 
                          85                  90                  95      
          Ser Asn Leu Glu Gln Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly 
                      100                 105                 110         
          Lys Ser Leu Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                  115                 120                 125             
          Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Glu Ser Lys Tyr Gly Pro 
              130                 135                 140                 
          Pro Cys Pro Ser Cys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val 
          145                 150                 155                 160 
          Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp 
                          165                 170                 175     
          Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met 
                      180                 185                 190         
          Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala 
                  195                 200                 205             
          Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg 
              210                 215                 220                 
          Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn 
          225                 230                 235                 240 
          Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg 
                          245                 250                 255     
          Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro 
                      260                 265                 270         
          Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala 
                  275                 280                 285             
          Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His 
              290                 295                 300                 
          Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp 
          305                 310                 315                 320 
          Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 
                          325                 330 
          <![CDATA[<210> 89]]>
          <![CDATA[<211> 491]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 89]]>
          Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 
          1               5                   10                  15      
          His Ala Ala Arg Pro Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu 
                      20                  25                  30          
          Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln 
                  35                  40                  45              
          Asp Val Gly Thr Ser Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala 
              50                  55                  60                  
          Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Thr Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile 
                          85                  90                  95      
          Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr 
                      100                 105                 110         
          Ser Leu Tyr Arg Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly 
                  115                 120                 125             
          Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Glu Val 
              130                 135                 140                 
          Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu 
          145                 150                 155                 160 
          Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Asp Phe Thr Thr Tyr Trp Met 
                          165                 170                 175     
          Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Glu 
                      180                 185                 190         
          Ile His Pro Asp Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Ala Pro Ser Leu Lys Asp 
                  195                 200                 205             
          Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Phe Leu Gln 
              210                 215                 220                 
          Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Phe Cys Ala Ser 
          225                 230                 235                 240 
          Leu Tyr Phe Gly Phe Pro Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Pro 
                          245                 250                 255     
          Val Thr Val Ser Ser Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Thr 
                      260                 265                 270         
          Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Leu 
                  275                 280                 285             
          Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly 
              290                 295                 300                 
          Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Val Ala Ala Ile 
          305                 310                 315                 320 
          Leu Gly Leu Gly Leu Val Leu Gly Leu Leu Gly Pro Leu Ala Ile Leu 
                          325                 330                 335     
          Leu Ala Leu Tyr Leu Leu Arg Arg Asp Gln Arg Leu Pro Pro Asp Ala 
                      340                 345                 350         
          His Lys Pro Pro Gly Gly Gly Ser Phe Arg Thr Pro Ile Gln Glu Glu 
                  355                 360                 365             
          Gln Ala Asp Ala His Ser Thr Leu Ala Lys Ile Arg Val Lys Phe Ser 
              370                 375                 380                 
          Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr 
          385                 390                 395                 400 
          Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys 
                          405                 410                 415     
          Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn 
                      420                 425                 430         
          Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu 
                  435                 440                 445             
          Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly 
              450                 455                 460                 
          His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr 
          465                 470                 475                 480 
          Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 
                          485                 490     
          <![CDATA[<210> 90]]>
          <![CDATA[<211> 1476]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 90]]>
          atggctctgc ctgtgacagc tctgctgctg cctctggctc tgcttctgca tgccgctaga       60
          ccccaagtga agctggaaca gtctggcgcc gaggttgtga aacctggcgc ctctgtgaag      120
          ctgagctgta aagccagcgg cttcaacatc aaggacagct acatgcactg gctgcggcaa      180
          ggccctggac agagactgga atggatcggc tggatcgacc ccgagaatgg cgatacagag      240
          tacgccccta agttccaggg caaagccacc ttcaccaccg acacctctgc caacacagcc      300
          tacctgggac tgtctagcct gaggcctgaa gataccgccg tgtactactg caacgagggc      360
          acacctacag gcccctacta cttcgattat tggggccagg gcaccctggt caccgtttct      420
          agcggaggcg gaggatctgg tggcggagga agtggcggag gcggttctga aaatgtgctg      480
          acacagagcc ccagcagcat gtccgtgtct gtgggcgaca gagtgacaat cgcctgtagc      540
          gcctctagca gcgtgcccta tatgcattgg ctgcagcaga agcccggcaa gagccctaag      600
          ctgctgatct acctgaccag caatctggcc agcggcgtgc caagcagatt ttctggaagc      660
          ggcagcggca ccgactacag cctgacaatc agtagcgtgc agcctgagga tgccgccacc      720
          tactactgtc agcagagaag cagctaccct ctgacctttg gaggcggcac caagctggaa      780
          atcaaagagc agaagctgat ctccgaagag gacctgacca caacaccagc tcctagacca      840
          cctacaccag cacctacaat cgccctgcag ccactgtctc tgaggccaga agcttgtaga      900
          cctgctgctg gcggagccgt gcatacaaga ggactggatt tcgcctgcga cgtggccgcc      960
          attctcggac tgggacttgt tctgggactg ctgggacctc tggccattct gctggctctg     1020
          tacctgctga gaagggacca gagactgcct cctgacgctc acaaacctcc aggcggaggc     1080
          agcttcagaa cccctatcca agaggaacag gctgacgccc acagcaccct ggccaagatc     1140
          agagtgaagt tcagcagatc cgccgacgct cccgcctata agcagggaca gaatcagctg     1200
          tacaacgagc tgaacctggg gcgcagagaa gagtacgacg tgctggacaa gagaagaggc     1260
          agggatcctg aaatgggcgg caagcccaga cggaagaatc ctcaagaggg cctgtataat     1320
          gagctgcaga aagacaagat ggccgaggcc tacagcgaga tcggaatgaa gggcgaacgc     1380
          agaagaggaa agggccacga cggactgtat cagggcctga gcacagccac caaggacacc     1440
          tatgatgccc tgcacatgca ggccctgcct ccaaga                               1476
          <![CDATA[<210> 91]]>
          <![CDATA[<211> 492]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 91]]>
          Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 
          1               5                   10                  15      
          His Ala Ala Arg Pro Gln Val Lys Leu Glu Gln Ser Gly Ala Glu Val 
                      20                  25                  30          
          Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe 
                  35                  40                  45              
          Asn Ile Lys Asp Ser Tyr Met His Trp Leu Arg Gln Gly Pro Gly Gln 
              50                  55                  60                  
          Arg Leu Glu Trp Ile Gly Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Tyr Ala Pro Lys Phe Gln Gly Lys Ala Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser 
                          85                  90                  95      
          Ala Asn Thr Ala Tyr Leu Gly Leu Ser Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr 
                      100                 105                 110         
          Ala Val Tyr Tyr Cys Asn Glu Gly Thr Pro Thr Gly Pro Tyr Tyr Phe 
                  115                 120                 125             
          Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly 
              130                 135                 140                 
          Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Asn Val Leu 
          145                 150                 155                 160 
          Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Ser Val Ser Val Gly Asp Arg Val Thr 
                          165                 170                 175     
          Ile Ala Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Pro Tyr Met His Trp Leu Gln 
                      180                 185                 190         
          Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Thr Ser Asn 
                  195                 200                 205             
          Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr 
              210                 215                 220                 
          Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Pro Glu Asp Ala Ala Thr 
          225                 230                 235                 240 
          Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly 
                          245                 250                 255     
          Thr Lys Leu Glu Ile Lys Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu 
                      260                 265                 270         
          Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala 
                  275                 280                 285             
          Leu Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly 
              290                 295                 300                 
          Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Val Ala Ala 
          305                 310                 315                 320 
          Ile Leu Gly Leu Gly Leu Val Leu Gly Leu Leu Gly Pro Leu Ala Ile 
                          325                 330                 335     
          Leu Leu Ala Leu Tyr Leu Leu Arg Arg Asp Gln Arg Leu Pro Pro Asp 
                      340                 345                 350         
          Ala His Lys Pro Pro Gly Gly Gly Ser Phe Arg Thr Pro Ile Gln Glu 
                  355                 360                 365             
          Glu Gln Ala Asp Ala His Ser Thr Leu Ala Lys Ile Arg Val Lys Phe 
              370                 375                 380                 
          Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu 
          385                 390                 395                 400 
          Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp 
                          405                 410                 415     
          Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys 
                      420                 425                 430         
          Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala 
                  435                 440                 445             
          Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys 
              450                 455                 460                 
          Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr 
          465                 470                 475                 480 
          Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 
                          485                 490         
          <![CDATA[<210> 92]]>
          <![CDATA[<211> 1479]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 92]]>
          atggctctgc ctgtgacagc tctgctgctg cctctggctc tgcttctgca tgctgccaga       60
          cctcagatcg tgctgtctca gtctcccgcc atcctgtttg ctagccctgg cgagaaagtg      120
          accatgacct gtagagccag cagctccgtg tcctacatcc actggtatca gcagaagccc      180
          ggcagcagcc ctaagccttg gatccacggc acaagcaatc tggccagcgg agtgcctgcc      240
          agattttctg gaagcggcag cggcaccagc tacagcctga ccatctctag aatggaagcc      300
          gaggacgccg ccacctacta ctgtcagcag tggtccagca acctgagcac ctttggcggc      360
          ggaacaaagc tggaaatcaa aggcggcgga ggatctggcg gaggcggtag cggaggtggt      420
          ggatctgaag tgaagctggt ggaatcaggc ggaggcctgg ttcaacctgg cggatctctg      480
          agactgagct gcagcatctc cggcttcacc ttcaccgact actacatgaa ctgggtccga      540
          cagagccctg gcaaggctct ggaatggctg ggcttcatca gaaacaaagt gaacggcgac      600
          accaccgagt acagcgcctc tgtgaagggc agattcacca tcagccggga catcagccag      660
          agcatcctgt acctgcagat gaacaccctg cggaccgagg atagcgccac atattactgc      720
          gccagagaca agggaatcgc ctactacttc gactactggg gccagggcac cacactgaca      780
          gtgtctagcg agcagaagct gatctccgaa gaggacctga ccacaacacc agctcctaga      840
          ccacctacac cagcacctac aatcgccctg cagccactgt ctctgaggcc agaagcttgt      900
          agacctgctg ctggcggagc cgtgcataca agaggactgg atttcgcctg cgacgtggcc      960
          gccattctcg gactgggact tgttctggga ctgctgggac ctctggccat tctgctggct     1020
          ctgtacctgc tgagaaggga ccagagactg cctcctgacg ctcacaaacc tccaggcgga     1080
          ggcagcttca gaacccctat ccaagaggaa caggctgacg cccacagcac cctggccaag     1140
          atcagagtga agttcagcag atccgccgac gctcccgcct ataagcaggg acagaatcag     1200
          ctgtacaacg agctgaacct ggggcgcaga gaagagtacg acgtgctgga caagagaaga     1260
          ggcagggatc ctgaaatggg cggcaagccc agacggaaga atcctcaaga gggcctgtat     1320
          aatgagctgc agaaagacaa gatggccgag gcctacagcg agatcggaat gaagggcgaa     1380
          cgcagaagag gaaagggcca cgacggactg tatcagggcc tgagcacagc caccaaggac     1440
          acctatgatg ccctgcacat gcaggccctg cctccaaga                            1479
          <![CDATA[<210> 93]]>
          <![CDATA[<211> 493]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 93]]>
          Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 
          1               5                   10                  15      
          His Ala Ala Arg Pro Gln Ile Val Leu Ser Gln Ser Pro Ala Ile Leu 
                      20                  25                  30          
          Phe Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser 
                  35                  40                  45              
          Ser Val Ser Tyr Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro 
              50                  55                  60                  
          Lys Pro Trp Ile His Gly Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser 
                          85                  90                  95      
          Arg Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser 
                      100                 105                 110         
          Ser Asn Leu Ser Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly 
                  115                 120                 125             
          Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val 
              130                 135                 140                 
          Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu 
          145                 150                 155                 160 
          Arg Leu Ser Cys Ser Ile Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr Tyr Met 
                          165                 170                 175     
          Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu Gly Phe 
                      180                 185                 190         
          Ile Arg Asn Lys Val Asn Gly Asp Thr Thr Glu Tyr Ser Ala Ser Val 
                  195                 200                 205             
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ile Ser Gln Ser Ile Leu Tyr 
              210                 215                 220                 
          Leu Gln Met Asn Thr Leu Arg Thr Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Tyr Cys 
          225                 230                 235                 240 
          Ala Arg Asp Lys Gly Ile Ala Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 
                          245                 250                 255     
          Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp 
                      260                 265                 270         
          Leu Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile 
                  275                 280                 285             
          Ala Leu Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala 
              290                 295                 300                 
          Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Val Ala 
          305                 310                 315                 320 
          Ala Ile Leu Gly Leu Gly Leu Val Leu Gly Leu Leu Gly Pro Leu Ala 
                          325                 330                 335     
          Ile Leu Leu Ala Leu Tyr Leu Leu Arg Arg Asp Gln Arg Leu Pro Pro 
                      340                 345                 350         
          Asp Ala His Lys Pro Pro Gly Gly Gly Ser Phe Arg Thr Pro Ile Gln 
                  355                 360                 365             
          Glu Glu Gln Ala Asp Ala His Ser Thr Leu Ala Lys Ile Arg Val Lys 
              370                 375                 380                 
          Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln 
          385                 390                 395                 400 
          Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg 
                      420                 425                 430         
          Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met 
                  435                 440                 445             
          Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly 
              450                 455                 460                 
          Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp 
          465                 470                 475                 480 
          Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 
                          485                 490             
          <![CDATA[<210> 94]]>
          <![CDATA[<211> 1479]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 94]]>
          atggctctgc ctgtgacagc tctgctgctg cctctggctc tgcttctgca tgctgctaga       60
          cctcaggtcc agctgcagca gtctggcgcc gaacttgtta gacctggcac cagcgtgaag      120
          gtgtcctgta aagccagcgg ctacgccttc accaacaacc tgatcgagtg ggtcaagcag      180
          aggcctggac agggactcga gtggatcggc gtgatcaatc ctggcagcgg cgacaccaac      240
          tacaacgaga agttcaaggg caaagccaca ctgaccgccg acaagagcag caacacagcc      300
          tacatgcagc tgagcagcct gacctccgat gacagcgccg tgtacttttg cgccagaggc      360
          gattactacg gcggcttcgc cgtggattat tggggccagg gaacaagcgt gaccgtgtct      420
          agcggaggcg gaggatctgg tggcggagga agtggcggag gcggttctga tatccagatg      480
          acccagacca ccagcagcct gtctgcctct ctgggcgata gagtgaccat cagctgcaga      540
          accagccagg acatcggcaa ctacctgaac tggtatcagc agaaacccga cggcaccgtg      600
          aagctgctga tctactacac cagcagactg cacagcggcg tgcccagcag attttctgga      660
          agcggcagcg gcaccgacta ctccctgaca atcagcaacc tggaacaaga ggatatcgct      720
          acctacttct gccagcaagg caagagcctg cctagaacct ttggaggcgg caccaagctg      780
          gaaatcaaag agcagaagct gatctccgaa gaggacctga ccacaacacc agctcctaga      840
          cctccaactc ctgctcctac aatcgccctg cagccactgt ctctgaggcc tgaagcttgt      900
          agacctgctg ctggcggagc cgtgcatacc agaggactgg atttcgcctg cgacgtggcc      960
          gccattctcg gactgggact tgttctggga ctgctgggac ctctggccat tctgctggct     1020
          ctgtacctgc tgagaaggga ccagagactg cctcctgacg ctcacaaacc tccaggcgga     1080
          ggcagcttca gaacccctat ccaagaggaa caggctgacg cccacagcac cctggccaag     1140
          atcagagtga agttcagcag atccgccgac gctcccgcct ataagcaggg acagaatcag     1200
          ctgtacaacg agctgaacct ggggcgcaga gaagagtacg acgtgctgga caagagaaga     1260
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          cgcagaagag gaaagggcca cgacggactg tatcagggcc tgagcacagc caccaaggac     1440
          acctatgatg ccctgcacat gcaggccctg cctccaaga                            1479
          <![CDATA[<210> 95]]>
          <![CDATA[<211> 493]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 95]]>
          Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 
          1               5                   10                  15      
          His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu 
                      20                  25                  30          
          Val Arg Pro Gly Thr Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 
                  35                  40                  45              
          Ala Phe Thr Asn Asn Leu Ile Glu Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln 
              50                  55                  60                  
          Gly Leu Glu Trp Ile Gly Val Ile Asn Pro Gly Ser Gly Asp Thr Asn 
          65                  70                  75                  80  
          Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser 
                          85                  90                  95      
          Ser Asn Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Asp Asp Ser 
                      100                 105                 110         
          Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Asp Tyr Tyr Gly Gly Phe Ala Val 
                  115                 120                 125             
          Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly 
              130                 135                 140                 
          Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met 
          145                 150                 155                 160 
          Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly Asp Arg Val Thr 
                          165                 170                 175     
          Ile Ser Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Gly Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr 
                      180                 185                 190         
          Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Thr Ser 
                  195                 200                 205             
          Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly 
              210                 215                 220                 
          Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln Glu Asp Ile Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Lys Ser Leu Pro Arg Thr Phe Gly Gly 
                          245                 250                 255     
          Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp 
                      260                 265                 270         
          Leu Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile 
                  275                 280                 285             
          Ala Leu Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala 
              290                 295                 300                 
          Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Val Ala 
          305                 310                 315                 320 
          Ala Ile Leu Gly Leu Gly Leu Val Leu Gly Leu Leu Gly Pro Leu Ala 
                          325                 330                 335     
          Ile Leu Leu Ala Leu Tyr Leu Leu Arg Arg Asp Gln Arg Leu Pro Pro 
                      340                 345                 350         
          Asp Ala His Lys Pro Pro Gly Gly Gly Ser Phe Arg Thr Pro Ile Gln 
                  355                 360                 365             
          Glu Glu Gln Ala Asp Ala His Ser Thr Leu Ala Lys Ile Arg Val Lys 
              370                 375                 380                 
          Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln 
          385                 390                 395                 400 
          Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg 
                      420                 425                 430         
          Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met 
                  435                 440                 445             
          Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly 
              450                 455                 460                 
          Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp 
          465                 470                 475                 480 
          Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 
                          485                 490             
          <![CDATA[<210> 96]]>
          <![CDATA[<211> 1473]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 96]]>
          atggctctgc ctgtgacagc tctgctgctg cctctggctc tgcttctgca tgccgccaga       60
          cctgacatcc agctgacaca gagccctagc agcctgtctg cctctgtggg cgacagagtg      120
          accatcacat gcaaggcctc tcaggacgtg ggcacaagcg tggcatggta tcagcagaag      180
          cctggcaagg cccctaagct gctgatctac tggaccagca ccagacacac aggcgtgccc      240
          agcagatttt ctggcagcgg ctctggcacc gacttcacct tcaccataag cagcctgcag      300
          cctgaggata tcgccaccta ctactgccag cagtacagcc tgtacagaag cttcggccag      360
          ggcaccaagg tggaaatcaa aggcggatct ggaagcggcg gttctggatc tggtggaagc      420
          ggatctgagg tgcagctggt ggaatctggt ggcggagttg tgcagcctgg cagatctctg      480
          agactgagct gtagcgccag cggcttcgat ttcaccacct actggatgag ctgggtccga      540
          caggcccctg gcaaaggact ggaatggatc ggcgagattc accccgacag cagcaccatc      600
          aattacgccc ctagcctgaa ggaccggttc accatctcca gagacaacgc caagaatacc      660
          ctgttcctgc agatggacag cctccggcct gaagataccg gcgtgtactt ttgcgccagc      720
          ctgtatttcg gcttcccttg gtttgcctac tggggccagg gaacacctgt gaccgttagc      780
          tctgagcaga agctgatctc cgaagaggac ctgaccacaa caccagctcc tagaccacct      840
          acaccagcac ctacaatcgc cctgcagcca ctgtctctga ggccagaggc ttgtagacct      900
          gctgctggcg gagccgtgca tacaagagga ctggatttcg cctgcgacgt ggccgccatt      960
          ctcggactgg gacttgttct gggactgctg ggacctctgg ccattctgct ggctctgtac     1020
          ctgctgagaa gggaccagag actgcctcct gacgctcaca aacctccagg cggaggcagc     1080
          ttcagaaccc ctatccaaga ggaacaggct gacgcccaca gcaccctggc caagatcaga     1140
          gtgaagttca gcagatccgc cgacgctccc gcctataagc agggacagaa tcagctgtac     1200
          aacgagctga acctggggcg cagagaagag tacgacgtgc tggacaagag aagaggcagg     1260
          gatcctgaaa tgggcggcaa gcccagacgg aagaatcctc aagagggcct gtataatgag     1320
          ctgcagaaag acaagatggc cgaggcctac agcgagatcg gaatgaaggg cgaacgcaga     1380
          agaggaaagg gccacgacgg actgtatcag ggcctgagca cagccaccaa ggacacctat     1440
          gatgccctgc acatgcaggc cctgcctcca aga                                  1473
          <![CDATA[<210> 97]]>
          <![CDATA[<211> 491]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 97]]>
          Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 
          1               5                   10                  15      
          His Ala Ala Arg Pro Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu 
                      20                  25                  30          
          Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln 
                  35                  40                  45              
          Asp Val Gly Thr Ser Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala 
              50                  55                  60                  
          Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Thr Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile 
                          85                  90                  95      
          Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr 
                      100                 105                 110         
          Ser Leu Tyr Arg Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly 
                  115                 120                 125             
          Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Glu Val 
              130                 135                 140                 
          Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu 
          145                 150                 155                 160 
          Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Asp Phe Thr Thr Tyr Trp Met 
                          165                 170                 175     
          Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Glu 
                      180                 185                 190         
          Ile His Pro Asp Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Ala Pro Ser Leu Lys Asp 
                  195                 200                 205             
          Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Phe Leu Gln 
              210                 215                 220                 
          Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Phe Cys Ala Ser 
          225                 230                 235                 240 
          Leu Tyr Phe Gly Phe Pro Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Pro 
                          245                 250                 255     
          Val Thr Val Ser Ser Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Thr 
                      260                 265                 270         
          Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Leu 
                  275                 280                 285             
          Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly 
              290                 295                 300                 
          Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Val Ala Ala Ile 
          305                 310                 315                 320 
          Leu Gly Leu Gly Leu Val Leu Gly Leu Leu Gly Pro Leu Ala Ile Leu 
                          325                 330                 335     
          Leu Ala Leu Tyr Leu Leu Arg Arg Asp Gln Arg Leu Pro Pro Asp Ala 
                      340                 345                 350         
          His Lys Pro Pro Gly Gly Gly Ser Phe Arg Thr Pro Ile Gln Glu Glu 
                  355                 360                 365             
          Gln Ala Asp Ala His Ser Thr Leu Ala Lys Ile Arg Val Lys Phe Ser 
              370                 375                 380                 
          Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr 
          385                 390                 395                 400 
          Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys 
                          405                 410                 415     
          Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn 
                      420                 425                 430         
          Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu 
                  435                 440                 445             
          Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly 
              450                 455                 460                 
          His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr 
          465                 470                 475                 480 
          Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 
                          485                 490     
          <![CDATA[<210> 98]]>
          <![CDATA[<211> 1746]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 98]]>
          atggctctgc ctgtgacagc tctgctgctg cctctggctc tgcttctgca tgctgccaga       60
          cctcagaccg tgctgacaca gagcccaagc agcctgtctg tgtccgtggg cgacagagtg      120
          accatcacct gtagagccag cagctccgtg acctacatcc actggtatca gcagaagccc      180
          ggactggccc ctaagagcct gatctacgcc acaagcaatc tggccagcgg cgtgccaagc      240
          agattttctg gaagcggcag cggcaccgac tacaccttca ccatatctag cctgcagcct      300
          gaggatatcg ccacctacta ctgccagcac tggtccagca agcctccaac atttggccag      360
          ggcaccaagg tggaagtgaa gagaacagtt ggcggcggag gatctggcgg aggcggtagc      420
          ggaggtggtg gatctgaagt tcagctgctg gaatcaggcg gcggactggt tcaacctggc      480
          ggatctctga gactgagctg tgccaccagc ggcttcacct ttaccgacta ctacatgaac      540
          tgggtccgac aggcccctgg caaaggactg gaatggctgg gcttcatcgg caacaaggcc      600
          aacggctaca ccaccgagta cagcgcctct gtgaagggca gattcaccat cagccgggac      660
          aagagcaaga gcaccctgta cctgcagatg aacaccctgc aggccgagga ctccgccatc      720
          tactattgca ccagagacag aggcctgcgg ttctacttcg actattgggg ccagggaacc      780
          ctggtcacag tgtctagcgc ctctacaaag ggccccagcg ttttcccact ggctccctgt      840
          agcagaagca ccagcgaatc tacagccgct ctgggctgcc tggtcaagga ctactttcct      900
          gagccagtga cagtgctgta tctccagatg aatactctcc aagctgagga cagcgccatc      960
          tattactgta cgcgcgatcg gggcctgaga ttctactttg attactgggg acaaggcacc     1020
          ctcgtgaccg tgtcctctga gcagaagctg atctccgaag aggacctgaa tggcgccgct     1080
          gccgctgcta tcgaagtgat gtaccctcct ccttacctgg acaacgagaa gtccaacggc     1140
          accatcatcc acgtgaaggg caagcacctg tgtccttctc cactgttccc cggacctagc     1200
          aagcctttct gggtgctcgt tgttgttggc ggcgtgctgg cctgttattc cctgctggtt     1260
          accgtggcct tcatcatctt ttgggtccga agcaagcgga gcagactgct gcactccgac     1320
          tacatgaaca tgacccctag acggcccgga ccaaccagaa agcactacca gccttacgct     1380
          cctcctagag acttcgccgc ctaccggtcc agagtgaagt tctccagatc cgccgatgct     1440
          cccgcctata agcagggaca gaaccagctg tacaacgagc tgaacctggg gagaagagaa     1500
          gagtacgacg tgctggacaa gcggagaggc agagatcctg agatgggcgg caagcccaga     1560
          cggaagaatc ctcaagaggg cctgtataat gagctgcaaa aggacaagat ggccgaggcc     1620
          tacagcgaga tcggaatgaa gggcgagcgc agaagaggca agggacacga tggactgtac     1680
          cagggcctga gcaccgccac caaggatacc tatgatgccc tgcacatgca ggccctgcct     1740
          ccaaga                                                                1746
          <![CDATA[<210> 99]]>
          <![CDATA[<211> 582]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 99]]>
          Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 
          1               5                   10                  15      
          His Ala Ala Arg Pro Gln Thr Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu 
                      20                  25                  30          
          Ser Val Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser 
                  35                  40                  45              
          Ser Val Thr Tyr Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Leu Ala Pro 
              50                  55                  60                  
          Lys Ser Leu Ile Tyr Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser 
                          85                  90                  95      
          Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Trp Ser 
                      100                 105                 110         
          Ser Lys Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Val Lys Arg 
                  115                 120                 125             
          Thr Val Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 
              130                 135                 140                 
          Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Thr Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp 
                          165                 170                 175     
          Tyr Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 
                      180                 185                 190         
          Leu Gly Phe Ile Gly Asn Lys Ala Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser 
                  195                 200                 205             
          Ala Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Lys Ser Lys Ser 
              210                 215                 220                 
          Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Thr Leu Gln Ala Glu Asp Ser Ala Ile 
          225                 230                 235                 240 
          Tyr Tyr Cys Thr Arg Asp Arg Gly Leu Arg Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp 
                          245                 250                 255     
          Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 
                      260                 265                 270         
          Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr 
                  275                 280                 285             
          Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 
              290                 295                 300                 
          Val Leu Tyr Leu Gln Met Asn Thr Leu Gln Ala Glu Asp Ser Ala Ile 
          305                 310                 315                 320 
          Tyr Tyr Cys Thr Arg Asp Arg Gly Leu Arg Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp 
                          325                 330                 335     
          Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Glu Gln Lys Leu Ile Ser 
                      340                 345                 350         
          Glu Glu Asp Leu Asn Gly Ala Ala Ala Ala Ala Ile Glu Val Met Tyr 
                  355                 360                 365             
          Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His 
              370                 375                 380                 
          Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser 
          385                 390                 395                 400 
          Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr 
                          405                 410                 415     
          Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys 
                      420                 425                 430         
          Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp 
              450                 455                 460                 
          Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala 
          465                 470                 475                 480 
          Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu 
                          485                 490                 495     
          Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp 
                      500                 505                 510         
          Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu 
                  515                 520                 525             
          Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile 
              530                 535                 540                 
          Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr 
          545                 550                 555                 560 
          Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met 
                          565                 570                 575     
          Gln Ala Leu Pro Pro Arg 
                      580         
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          atggctctgc ctgtgacagc tctgctgctg cctctggctc tgcttctgca tgctgccaga       60
          cctgaggtcc agctgcaaga gtctggccct ggacttgtga agcctggcgg aagcctgtct      120
          ctgtcttgtg ccgccagcgg cttcgtgttc agcagctacg atatgagctg ggtccgacag      180
          acccctgagc gaggacttga gtgggtcgcc tacatctctt ctggcggcgg aatcacatac      240
          gcccctagca cagtgaaggg cagattcacc gtgtccagag acaacgccaa gaacaccctg      300
          tacctgcaga tgaacagcct gaccagcgag gacaccgccg tgtactattg tgccgctcac      360
          tactttggca gcagcggccc ttttgcctat tggggccagg gaacactcgt gaccgtttct      420
          agtgctggcg gaggcggatc aggtggcgga ggaagtggcg gcggaggatc tgatatccag      480
          atgacacaga gccccgccag cctgtctgcc tctgtgggag atagagtgac catcacctgt      540
          cgggccagcg agaacatctt cagctacctg gcctggtatc agcagaagcc cggcaagtct      600
          cctaagctgc tggtgtacaa cacccggaca ctggctgaag gcgtgcccag cagattttct      660
          ggcagcggct ctggcaccga cttcagcctg acaatcagca gcctgcagcc tgaggacttc      720
          gccacctact actgccagca ccactacggc acccctttca cctttggaag cggcaccaag      780
          ctggaaatca agagagagca gaagctgatc tccgaagagg acctgaatgg cgccgctacc      840
          acaacaccag ctcctagacc tccaactcct gctcctacaa tcgccctgca gccactgtct      900
          ctgaggcctg aagcttgtag acctgctgct ggcggagccg tgcataccag aggactggat      960
          ttcgcctgcg acatctacat ctgggcccct ctggctggaa catgcggagt gttgctgctg     1020
          agcctggtca tcaccaagcg gggcagaaag aagctgctgt acatcttcaa gcagcccttc     1080
          atgcggcccg tgcagaccac acaagaggaa gatggctgct cctgcagatt ccccgaggaa     1140
          gaagaaggcg gctgcgagct gagagtgaag ttcagcagat ccgccgacgc tcctgcctat     1200
          cagcagggac agaaccagct gtacaacgag ctgaacctgg ggagaagaga agagtacgac     1260
          gtgctggaca agcggagagg cagagatcct gaaatgggcg gcaagcccag acggaagaat     1320
          cctcaagagg gcctgtataa tgagctgcag aaagacaaga tggccgaggc ctacagcgag     1380
          atcggaatga agggcgagcg cagaagaggc aagggacacg atggactgta ccagggcctg     1440
          agcaccgcca ccaaggatac ctatgatgcc ctgcacatgc aggccctgcc tccaaga        1497
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          <![CDATA[<400> 101]]>
          Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 
          1               5                   10                  15      
          His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu 
                      20                  25                  30          
          Val Lys Pro Gly Gly Ser Leu Ser Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe 
                  35                  40                  45              
          Val Phe Ser Ser Tyr Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Arg 
              50                  55                  60                  
          Gly Leu Glu Trp Val Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Gly Gly Ile Thr Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Ala Pro Ser Thr Val Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ala 
                          85                  90                  95      
          Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr 
                      100                 105                 110         
          Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala His Tyr Phe Gly Ser Ser Gly Pro Phe 
                  115                 120                 125             
          Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Gly Gly 
              130                 135                 140                 
          Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val 
                          165                 170                 175     
          Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Phe Ser Tyr Leu Ala Trp 
                      180                 185                 190         
          Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Val Tyr Asn Thr 
                  195                 200                 205             
          Arg Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser 
              210                 215                 220                 
          Gly Thr Asp Phe Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe 
          225                 230                 235                 240 
          Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Pro Phe Thr Phe Gly 
                          245                 250                 255     
          Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Leu Asn Gly Ala Ala Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro 
                  275                 280                 285             
          Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Leu Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu 
              290                 295                 300                 
          Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp 
          305                 310                 315                 320 
          Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly 
                          325                 330                 335     
          Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu 
                      340                 345                 350         
          Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln 
                  355                 360                 365             
          Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly 
              370                 375                 380                 
          Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr 
          385                 390                 395                 400 
          Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg 
                          405                 410                 415     
          Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met 
                      420                 425                 430         
          Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu 
                  435                 440                 445             
          Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys 
              450                 455                 460                 
          Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu 
          465                 470                 475                 480 
          Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu 
                          485                 490                 495     
          Pro Pro Arg 
          <![CDATA[<210> 102]]>
          <![CDATA[<211> 1497]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 102]]>
          atggctctgc ctgtgacagc tctgctgctg cctctggctc tgcttctgca tgctgccaga       60
          cctgacatcc agatgacaca gagccctgcc agcctgtctg cctctgtggg agacagagtg      120
          accatcacct gtcgggccag cgagaacatc ttcagctacc tggcctggta tcagcagaag      180
          cccggcaagt ctcctaagct gctggtgtac aacacccgga cactggctga aggcgtgccc      240
          agcagatttt ctggcagcgg cagcggaacc gacttcagcc tgacaatcag cagcctgcag      300
          cctgaggact tcgccaccta ctactgccag caccactacg gcaccccttt cacctttggc      360
          tctggcacca agctggaaat caagagaggc ggcggaggat ctggcggagg tggaagtggc      420
          ggaggcggat ctgaagttca gctgcaagag tctggccctg gcctcgtgaa acctggcgga      480
          tctctgtctc tgagctgtgc cgccagcggc ttcgtgttca gcagctacga tatgagctgg      540
          gtccgacaga cccctgagcg aggacttgag tgggtcgcct acatctcttc tggcggcgga      600
          atcacatacg cccctagcac agtgaagggc agattcaccg tgtccagaga caacgccaag      660
          aacaccctgt acctgcagat gaacagcctg accagcgagg acaccgccgt gtactattgt      720
          gccgctcact actttggcag cagcggccct tttgcctatt ggggccaggg aacactcgtg      780
          accgtgtcta gcgccgagca gaagctgatc tccgaagagg acctgaatgg cgccgctacc      840
          acaacaccag ctcctagacc tccaactcct gctcctacaa tcgccctgca gccactgtct      900
          ctgaggcctg aagcttgtag acctgctgct ggcggagccg tgcataccag aggactggat      960
          ttcgcctgcg acatctacat ctgggcccct ctggctggaa catgcggagt gttgctgctg     1020
          agcctggtca tcaccaagcg gggcagaaag aagctgctgt acatcttcaa gcagcccttc     1080
          atgcggcccg tgcagaccac acaagaggaa gatggctgct cctgcagatt ccccgaggaa     1140
          gaagaaggcg gctgcgagct gagagtgaag ttcagcagat ccgccgacgc tcctgcctat     1200
          cagcagggac agaaccagct gtacaacgag ctgaacctgg ggagaagaga agagtacgac     1260
          gtgctggaca agcggagagg cagagatcct gaaatgggcg gcaagcccag acggaagaat     1320
          cctcaagagg gcctgtataa tgagctgcag aaagacaaga tggccgaggc ctacagcgag     1380
          atcggaatga agggcgagcg cagaagaggc aagggacacg atggactgta ccagggcctg     1440
          agcaccgcca ccaaggatac ctatgatgcc ctgcacatgc aggccctgcc tccaaga        1497
          <![CDATA[<210> 103]]>
          <![CDATA[<211> 499]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 103]]>
          Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 
          1               5                   10                  15      
          His Ala Ala Arg Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu 
                      20                  25                  30          
          Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu 
                  35                  40                  45              
          Asn Ile Phe Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser 
              50                  55                  60                  
          Pro Lys Leu Leu Val Tyr Asn Thr Arg Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Thr Ile 
                          85                  90                  95      
          Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His His 
                      100                 105                 110         
          Tyr Gly Thr Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                  115                 120                 125             
          Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 
              130                 135                 140                 
          Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Leu Ser Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Val Phe Ser Ser Tyr 
                          165                 170                 175     
          Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Arg Gly Leu Glu Trp Val 
                      180                 185                 190         
          Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Gly Gly Ile Thr Tyr Ala Pro Ser Thr Val 
                  195                 200                 205             
          Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 
              210                 215                 220                 
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
          225                 230                 235                 240 
          Ala Ala His Tyr Phe Gly Ser Ser Gly Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln 
                          245                 250                 255     
          Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Leu Asn Gly Ala Ala Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro 
                  275                 280                 285             
          Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Leu Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu 
              290                 295                 300                 
          Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp 
          305                 310                 315                 320 
          Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly 
                          325                 330                 335     
          Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu 
                      340                 345                 350         
          Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln 
                  355                 360                 365             
          Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly 
              370                 375                 380                 
          Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr 
          385                 390                 395                 400 
          Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg 
                          405                 410                 415     
          Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met 
                      420                 425                 430         
          Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu 
                  435                 440                 445             
          Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys 
              450                 455                 460                 
          Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu 
          465                 470                 475                 480 
          Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu 
                          485                 490                 495     
          Pro Pro Arg 
          <![CDATA[<210> 104]]>
          <![CDATA[<211> 1740]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 104]]>
          atggctctgc ctgtgacagc tctgctgctg cctctggctc tgcttctgca tgctgccaga       60
          cctgaagtgc agctgctgga atctggcgga ggactggttc aacctggcgg ctctctgaga      120
          ctgagctgtg ccacaagcgg cttcaccttc accgactact acatgaactg ggtccgacag      180
          gcccctggca aaggactgga atggctgggc ttcatcggca acaaggccaa cggctacacc      240
          accgagtaca gcgcctctgt gaagggcaga ttcaccatca gccgggacaa gagcaagagc      300
          accctgtacc tgcagatgaa caccctgcag gccgaggact ccgccatcta ctactgcacc      360
          agagacagag gcctgcggtt ctacttcgac tattggggcc agggcaccct ggtcacagtg      420
          tctagcgcct ctacaaaggg ccccagcgtt ttcccactgg ctccctgtag cagaagcacc      480
          agcgaatcta cagccgctct gggctgcctg gtcaaggact actttcctga gcctgtgacc      540
          gtgctgtatc tccagatgaa tactctccag gctgaagata gcgccatata ttactgtacg      600
          cgcgaccggg gcctgagatt ctactttgat tactggggac aagggaccct cgtgaccgtt      660
          tcttctggcg gcggaggaag cggaggcgga ggatccggtg gtggtggatc tcagacagtg      720
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          agagccagca gctccgtgac ctacatccac tggtatcagc agaagcccgg actggcccct      840
          aagagcctga tctacgccac aagcaatctg gccagcggcg tgccaagcag attttctgga      900
          agcggcagcg gcaccgacta tacctttaca atcagcagcc tgcagcctga ggatatcgcc      960
          acctactatt gccagcactg gtccagcaag cctccaacct ttggacaggg caccaaggtg     1020
          gaagtgaagc ggaccgtgga gcagaagctg atctccgaag aggacctgaa tggcgccgct     1080
          accacaacac cagctcctag acctccaact cctgctccta caatcgccct gcagccactg     1140
          tctctgaggc ctgaagcttg tagacctgct gctggcggag ccgtgcatac cagaggactg     1200
          gatttcgcct gcgacatcta catctgggcc cctctggctg gaacatgcgg agtgttgctg     1260
          ctgagcctgg tcatcaccaa gcggggcaga aagaagctgc tgtacatctt caagcagccc     1320
          ttcatgcggc ccgtgcagac cacacaagag gaagatggct gctcctgcag attccccgag     1380
          gaagaagaag gcggctgcga gctgagagtg aagttcagca gatccgccga cgctcctgcc     1440
          tatcagcagg gacagaacca gctgtacaac gagctgaacc tggggagaag agaagagtac     1500
          gacgtgctgg acaagcggag aggcagagat cctgaaatgg gcggcaagcc cagacggaag     1560
          aatcctcaag agggcctgta taatgagctg cagaaagaca agatggccga ggcctacagc     1620
          gagatcggaa tgaagggcga gcgcagaaga ggcaagggac acgatggact gtaccagggc     1680
          ctgagcaccg ccaccaagga tacctatgat gccctgcaca tgcaggccct gcctccaaga     1740
          <![CDATA[<210> 105]]>
          <![CDATA[<211> 580]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 105]]>
          Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 
          1               5                   10                  15      
          His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu 
                      20                  25                  30          
          Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Thr Ser Gly Phe 
                  35                  40                  45              
          Thr Phe Thr Asp Tyr Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys 
              50                  55                  60                  
          Gly Leu Glu Trp Leu Gly Phe Ile Gly Asn Lys Ala Asn Gly Tyr Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Thr Glu Tyr Ser Ala Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp 
                          85                  90                  95      
          Lys Ser Lys Ser Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Thr Leu Gln Ala Glu 
                      100                 105                 110         
          Asp Ser Ala Ile Tyr Tyr Cys Thr Arg Asp Arg Gly Leu Arg Phe Tyr 
                  115                 120                 125             
          Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser 
              130                 135                 140                 
          Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro 
                          165                 170                 175     
          Glu Pro Val Thr Val Leu Tyr Leu Gln Met Asn Thr Leu Gln Ala Glu 
                      180                 185                 190         
          Asp Ser Ala Ile Tyr Tyr Cys Thr Arg Asp Arg Gly Leu Arg Phe Tyr 
                  195                 200                 205             
          Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly 
              210                 215                 220                 
          Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Thr Val 
          225                 230                 235                 240 
          Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Val Ser Val Gly Asp Arg Val 
                          245                 250                 255     
          Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Thr Tyr Ile His Trp Tyr 
                      260                 265                 270         
          Gln Gln Lys Pro Gly Leu Ala Pro Lys Ser Leu Ile Tyr Ala Thr Ser 
                  275                 280                 285             
          Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly 
              290                 295                 300                 
          Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala 
          305                 310                 315                 320 
          Thr Tyr Tyr Cys Gln His Trp Ser Ser Lys Pro Pro Thr Phe Gly Gln 
                          325                 330                 335     
          Gly Thr Lys Val Glu Val Lys Arg Thr Val Glu Gln Lys Leu Ile Ser 
                      340                 345                 350         
          Glu Glu Asp Leu Asn Gly Ala Ala Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro 
                  355                 360                 365             
          Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Leu Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro 
              370                 375                 380                 
          Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys 
                          405                 410                 415     
          Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Lys Arg Gly Arg Lys Lys 
                      420                 425                 430         
          Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr 
                  435                 440                 445             
          Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly 
              450                 455                 460                 
          Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala 
          465                 470                 475                 480 
          Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg 
                          485                 490                 495     
          Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu 
                      500                 505                 510         
          Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn 
                  515                 520                 525             
          Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met 
              530                 535                 540                 
          Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly 
          545                 550                 555                 560 
          Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala 
                          565                 570                 575     
          Leu Pro Pro Arg 
                      580 
          <![CDATA[<210> 106]]>
          <![CDATA[<211> 1740]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 106]]>
          atggctctgc ctgtgacagc tctgctgctg cctctggctc tgcttctgca tgctgccaga       60
          cctcagaccg tgctgacaca gagcccaagc agcctgtctg tgtccgtggg cgacagagtg      120
          accatcacct gtagagccag cagctccgtg acctacatcc actggtatca gcagaagccc      180
          ggactggccc ctaagagcct gatctacgcc acaagcaatc tggccagcgg cgtgccaagc      240
          agattttctg gaagcggcag cggcaccgac tacaccttca ccatatctag cctgcagcct      300
          gaggatatcg ccacctacta ctgccagcac tggtccagca agcctccaac atttggccag      360
          ggcaccaagg tggaagtgaa gagaacagtt ggcggcggag gatctggcgg aggcggtagc      420
          ggaggtggtg gatctgaagt tcagctgctg gaatcaggcg gcggactggt tcaacctggc      480
          ggatctctga gactgagctg tgccaccagc ggcttcacct ttaccgacta ctacatgaac      540
          tgggtccgac aggcccctgg caaaggactg gaatggctgg gcttcatcgg caacaaggcc      600
          aacggctaca ccaccgagta cagcgcctct gtgaagggca gattcaccat cagccgggac      660
          aagagcaaga gcaccctgta cctgcagatg aacaccctgc aggccgagga ctccgccatc      720
          tactattgca ccagagacag aggcctgcgg ttctacttcg actattgggg ccagggaacc      780
          ctggtcacag tgtctagcgc ctctacaaag ggccccagcg ttttcccact ggctccctgt      840
          agcagaagca ccagcgaatc tacagccgct ctgggctgcc tggtcaagga ctactttcct      900
          gagccagtga cagtgctgta tctccagatg aatactctcc aagctgagga cagcgccatc      960
          tattactgta cgcgcgatcg gggcctgaga ttctactttg attactgggg acaaggcacc     1020
          ctcgtgaccg tgtcctctga gcagaagctg atctccgaag aggacctgaa tggcgccgct     1080
          accacaacac cagctcctag acctccaact cctgctccta caatcgccct gcagccactg     1140
          tctctgaggc ctgaagcttg tagacctgct gctggcggag ccgtgcatac cagaggactg     1200
          gatttcgcct gcgacatcta catctgggcc cctctggctg gaacatgcgg agtgttgctg     1260
          ctgagcctgg tcatcaccaa gcggggcaga aagaagctgc tgtacatctt caagcagccc     1320
          ttcatgcggc ccgtgcagac cacacaagag gaagatggct gctcctgcag attccccgag     1380
          gaagaagaag gcggctgcga gctgagagtg aagttcagca gatccgccga cgctcctgcc     1440
          tatcagcagg gacagaacca gctgtacaac gagctgaacc tggggagaag agaagagtac     1500
          gacgtgctgg acaagcggag aggcagagat cctgaaatgg gcggcaagcc cagacggaag     1560
          aatcctcaag agggcctgta taatgagctg cagaaagaca agatggccga ggcctacagc     1620
          gagatcggaa tgaagggcga gcgcagaaga ggcaagggac acgatggact gtaccagggc     1680
          ctgagcaccg ccaccaagga tacctatgat gccctgcaca tgcaggccct gcctccaaga     1740
          <![CDATA[<210> 107]]>
          <![CDATA[<211> 580]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 107]]>
          Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 
          1               5                   10                  15      
          His Ala Ala Arg Pro Gln Thr Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu 
                      20                  25                  30          
          Ser Val Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser 
                  35                  40                  45              
          Ser Val Thr Tyr Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Leu Ala Pro 
              50                  55                  60                  
          Lys Ser Leu Ile Tyr Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser 
                          85                  90                  95      
          Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Trp Ser 
                      100                 105                 110         
          Ser Lys Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Val Lys Arg 
                  115                 120                 125             
          Thr Val Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 
              130                 135                 140                 
          Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Thr Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp 
                          165                 170                 175     
          Tyr Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 
                      180                 185                 190         
          Leu Gly Phe Ile Gly Asn Lys Ala Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser 
                  195                 200                 205             
          Ala Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Lys Ser Lys Ser 
              210                 215                 220                 
          Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Thr Leu Gln Ala Glu Asp Ser Ala Ile 
          225                 230                 235                 240 
          Tyr Tyr Cys Thr Arg Asp Arg Gly Leu Arg Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp 
                          245                 250                 255     
          Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 
                      260                 265                 270         
          Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr 
                  275                 280                 285             
          Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 
              290                 295                 300                 
          Val Leu Tyr Leu Gln Met Asn Thr Leu Gln Ala Glu Asp Ser Ala Ile 
          305                 310                 315                 320 
          Tyr Tyr Cys Thr Arg Asp Arg Gly Leu Arg Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp 
                          325                 330                 335     
          Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Glu Gln Lys Leu Ile Ser 
                      340                 345                 350         
          Glu Glu Asp Leu Asn Gly Ala Ala Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro 
                  355                 360                 365             
          Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Leu Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro 
              370                 375                 380                 
          Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys 
                          405                 410                 415     
          Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Lys Arg Gly Arg Lys Lys 
                      420                 425                 430         
          Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr 
                  435                 440                 445             
          Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly 
              450                 455                 460                 
          Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala 
          465                 470                 475                 480 
          Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg 
                          485                 490                 495     
          Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu 
                      500                 505                 510         
          Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn 
                  515                 520                 525             
          Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met 
              530                 535                 540                 
          Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly 
          545                 550                 555                 560 
          Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala 
                          565                 570                 575     
          Leu Pro Pro Arg 
                      580 
          <![CDATA[<210> 108]]>
          <![CDATA[<211> 500]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 108]]>
          Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 
          1               5                   10                  15      
          His Ala Ala Arg Pro Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu 
                      20                  25                  30          
          Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln 
                  35                  40                  45              
          Asp Val Gly Thr Ser Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala 
              50                  55                  60                  
          Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Thr Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile 
                          85                  90                  95      
          Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr 
                      100                 105                 110         
          Ser Leu Tyr Arg Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly 
                  115                 120                 125             
          Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Glu Val 
              130                 135                 140                 
          Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu 
          145                 150                 155                 160 
          Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Asp Phe Thr Thr Tyr Trp Met 
                          165                 170                 175     
          Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Glu 
                      180                 185                 190         
          Ile His Pro Asp Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Ala Pro Ser Leu Lys Asp 
                  195                 200                 205             
          Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Phe Leu Gln 
              210                 215                 220                 
          Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Phe Cys Ala Ser 
          225                 230                 235                 240 
          Leu Tyr Phe Gly Phe Pro Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Pro 
                          245                 250                 255     
          Val Thr Val Ser Ser Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Asn 
                      260                 265                 270         
          Gly Ala Ala Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro 
                  275                 280                 285             
          Thr Ile Ala Leu Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro 
              290                 295                 300                 
          Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp 
          305                 310                 315                 320 
          Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu 
                          325                 330                 335     
          Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser 
                      340                 345                 350         
          Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly 
                  355                 360                 365             
          Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala 
              370                 375                 380                 
          Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala 
          385                 390                 395                 400 
          Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg 
                          405                 410                 415     
          Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu 
                      420                 425                 430         
          Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn 
                  435                 440                 445             
          Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met 
              450                 455                 460                 
          Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly 
          465                 470                 475                 480 
          Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala 
                          485                 490                 495     
          Leu Pro Pro Arg 
                      500 
          <![CDATA[<210> 109]]>
          <![CDATA[<211> 1473]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 109]]>
          atggctctgc ctgtgacagc tctgctgctg cctctggctc tgcttctgca tgccgccaga       60
          cctgacatcc agctgacaca gagccctagc agcctgtctg cctctgtggg cgacagagtg      120
          accatcacat gcaaggcctc tcaggacgtg ggcacaagcg tggcatggta tcagcagaag      180
          cctggcaagg cccctaagct gctgatctac tggaccagca ccagacacac aggcgtgccc      240
          agcagatttt ctggcagcgg ctctggcacc gacttcacct tcaccataag cagcctgcag      300
          cctgaggata tcgccaccta ctactgccag cagtacagcc tgtacagaag cttcggccag      360
          ggcaccaagg tggaaatcaa aggcggatct ggaagcggcg gttctggatc tggtggaagc      420
          ggatctgagg tgcagctggt ggaatctggt ggcggagttg tgcagcctgg cagatctctg      480
          agactgagct gtagcgccag cggcttcgat ttcaccacct actggatgag ctgggtccga      540
          caggcccctg gcaaaggact ggaatggatc ggcgagattc accccgacag cagcaccatc      600
          aattacgccc ctagcctgaa ggaccggttc accatctcca gagacaacgc caagaatacc      660
          ctgttcctgc agatggacag cctccggcct gaagataccg gcgtgtactt ttgcgccagc      720
          ctgtatttcg gcttcccttg gtttgcctac tggggccagg gaacacctgt gaccgttagc      780
          tctgagcaga agctgatctc cgaagaggac ctgaccacaa caccagctcc tagacctcca      840
          actcctgctc ctacaatcgc cctgcagcca ctgtctctga ggcctgaagc ttgtagacct      900
          gctgctggcg gagccgtgca taccagagga ctggatttcg cctgcgacat ctacatctgg      960
          gcccctctgg ctggaacatg cggagtgttg ctgctgagcc tggtcatcac caagcggggc     1020
          agaaagaagc tgctgtacat cttcaagcag cccttcatgc ggcccgtgca gaccacacaa     1080
          gaggaagatg gctgctcctg cagattcccc gaggaagaag aaggcggctg cgagctgaga     1140
          gtgaagttca gcagatccgc cgacgctcct gcctatcagc agggacagaa ccagctgtac     1200
          aacgagctga acctggggag aagagaagag tacgacgtgc tggacaagcg gagaggcaga     1260
          gatcctgaaa tgggcggcaa gcccagacgg aagaatcctc aagagggcct gtataatgag     1320
          ctgcagaaag acaagatggc cgaggcctac agcgagatcg gaatgaaggg cgagcgcaga     1380
          agaggcaagg gacacgatgg actgtaccag ggcctgagca ccgccaccaa ggatacctat     1440
          gatgccctgc acatgcaggc cctgcctcca aga                                  1473
          <![CDATA[<210> 110]]>
          <![CDATA[<211> 495]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 110]]>
          Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 
          1               5                   10                  15      
          His Ala Ala Arg Pro Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu 
                      20                  25                  30          
          Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln 
                  35                  40                  45              
          Asp Val Gly Thr Ser Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala 
              50                  55                  60                  
          Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Thr Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile 
                          85                  90                  95      
          Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr 
                      100                 105                 110         
          Ser Leu Tyr Arg Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly 
                  115                 120                 125             
          Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Glu Val 
              130                 135                 140                 
          Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu 
          145                 150                 155                 160 
          Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Asp Phe Thr Thr Tyr Trp Met 
                          165                 170                 175     
          Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Glu 
                      180                 185                 190         
          Ile His Pro Asp Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Ala Pro Ser Leu Lys Asp 
                  195                 200                 205             
          Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Phe Leu Gln 
              210                 215                 220                 
          Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Phe Cys Ala Ser 
          225                 230                 235                 240 
          Leu Tyr Phe Gly Phe Pro Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Pro 
                          245                 250                 255     
          Val Thr Val Ser Ser Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Asn 
                      260                 265                 270         
          Gly Ala Ala Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro 
                  275                 280                 285             
          Thr Ile Ala Leu Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro 
              290                 295                 300                 
          Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp 
          305                 310                 315                 320 
          Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu 
                          325                 330                 335     
          Ser Leu Val Ile Thr Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe 
                      340                 345                 350         
          Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly 
                  355                 360                 365             
          Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg 
              370                 375                 380                 
          Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln 
          385                 390                 395                 400 
          Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp 
                          405                 410                 415     
          Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro 
                      420                 425                 430         
          Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp 
                  435                 440                 445             
          Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg 
              450                 455                 460                 
          Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr 
          465                 470                 475                 480 
          Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 
                          485                 490                 495 
          <![CDATA[<210> 111]]>
          <![CDATA[<211> 1500]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 111]]>
          atggctctgc ctgtgacagc tctgctgctg cctctggctc tgcttctgca tgccgctaga       60
          cctgaggtcc agctgcaaga gtctggccct ggacttgtga agcctggcgg aagcctgtct      120
          ctgtcttgtg ccgccagcgg cttcgtgttc agcagctacg atatgagctg ggtccgacag      180
          acccctgagc gaggacttga gtgggtcgcc tacatctctt ctggcggcgg aatcacatac      240
          gcccctagca cagtgaaggg cagattcacc gtgtccagag acaacgccaa gaacaccctg      300
          tacctgcaga tgaacagcct gaccagcgag gacaccgccg tgtactattg tgccgctcac      360
          tactttggca gcagcggccc ttttgcctat tggggccagg gaacactcgt gaccgtttct      420
          agtgctggcg gaggcggatc aggtggcgga ggaagtggcg gcggaggatc tgatatccag      480
          atgacacaga gccccgccag cctgtctgcc tctgtgggag atagagtgac catcacctgt      540
          cgggccagcg agaacatctt cagctacctg gcctggtatc agcagaagcc cggcaagtct      600
          cctaagctgc tggtgtacaa cacccggaca ctggctgaag gcgtgcccag cagattttct      660
          ggcagcggct ctggcaccga cttcagcctg acaatcagca gcctgcagcc tgaggacttc      720
          gccacctact actgccagca ccactacggc acccctttca cctttggaag cggcaccaag      780
          ctggaaatca agagagagca gaagctgatc tccgaagagg acctgaccac aactcctgct      840
          cctagacctc ctacaccagc tcctacaatc gccctgcagc cactgtctct gaggccagaa      900
          gcttgtagac ctgctgcagg cggagccgtg catacaagag gactggattt cgcctgcgac      960
          ttctgggtgc tcgtggttgt tggcggagtg ctggcctgtt actctctgct ggtcaccgtg     1020
          gccttcatca tcttttgggt ccgaagcaag cggagccggc tgctgcacag cgactacatg     1080
          aacatgaccc ctagacggcc cggacctacc agaaagcact accagcctta cgctcctcct     1140
          agagatttcg ccgcctaccg gtccagagtg aagttcagca gatccgccga tgctcccgcc     1200
          tataagcagg gacagaacca gctgtacaac gagctgaacc tggggagaag agaagagtac     1260
          gacgtgctgg acaagcggag aggcagagat cctgagatgg gcggcaagcc cagacggaag     1320
          aatcctcaag agggcctgta taatgagctg cagaaagaca agatggccga ggcctacagc     1380
          gagatcggaa tgaagggcga gcgcagaaga ggcaagggac acgatggact gtaccagggc     1440
          ctgagcaccg ccaccaagga tacctatgat gccctgcaca tgcaggccct gcctccaaga     1500
          <![CDATA[<210> 112]]>
          <![CDATA[<211> 504]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 112]]>
          Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 
          1               5                   10                  15      
          His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu 
                      20                  25                  30          
          Val Lys Pro Gly Gly Ser Leu Ser Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe 
                  35                  40                  45              
          Val Phe Ser Ser Tyr Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Arg 
              50                  55                  60                  
          Gly Leu Glu Trp Val Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Gly Gly Ile Thr Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Ala Pro Ser Thr Val Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ala 
                          85                  90                  95      
          Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr 
                      100                 105                 110         
          Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala His Tyr Phe Gly Ser Ser Gly Pro Phe 
                  115                 120                 125             
          Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Gly Gly 
              130                 135                 140                 
          Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val 
                          165                 170                 175     
          Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Phe Ser Tyr Leu Ala Trp 
                      180                 185                 190         
          Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Val Tyr Asn Thr 
                  195                 200                 205             
          Arg Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser 
              210                 215                 220                 
          Gly Thr Asp Phe Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe 
          225                 230                 235                 240 
          Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Pro Phe Thr Phe Gly 
                          245                 250                 255     
          Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Leu Asn Gly Ala Ala Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro 
                  275                 280                 285             
          Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Leu Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu 
              290                 295                 300                 
          Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp 
          305                 310                 315                 320 
          Phe Ala Cys Asp Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala 
                          325                 330                 335     
          Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg 
                      340                 345                 350         
          Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro 
                  355                 360                 365             
          Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro 
              370                 375                 380                 
          Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu 
                          405                 410                 415     
          Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly 
                      420                 425                 430         
          Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu 
                  435                 440                 445             
          Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser 
              450                 455                 460                 
          Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly 
          465                 470                 475                 480 
          Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu 
                          485                 490                 495     
          His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 
                      500                 
          <![CDATA[<210> 113]]>
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          <![CDATA[<212> DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400> 113]]>
          atggctctgc ctgtgacagc tctgctgctg cctctggctc tgcttctgca tgccgctaga       60
          cctgaggtcc agctgcaaga gtctggccct ggacttgtga agcctggcgg aagcctgtct      120
          ctgtcttgtg ccgccagcgg cttcgtgttc agcagctacg atatgagctg ggtccgacag      180
          acccctgagc gaggacttga gtgggtcgcc tacatctctt ctggcggcgg aatcacatac      240
          gcccctagca cagtgaaggg cagattcacc gtgtccagag acaacgccaa gaacaccctg      300
          tacctgcaga tgaacagcct gaccagcgag gacaccgccg tgtactattg tgccgctcac      360
          tactttggca gcagcggccc ttttgcctat tggggccagg gaacactcgt gaccgtttct      420
          agtgctggcg gaggcggatc aggtggcgga ggaagtggcg gcggaggatc tgatatccag      480
          atgacacaga gccccgccag cctgtctgcc tctgtgggag atagagtgac catcacctgt      540
          cgggccagcg agaacatctt cagctacctg gcctggtatc agcagaagcc cggcaagtct      600
          cctaagctgc tggtgtacaa cacccggaca ctggctgaag gcgtgcccag cagattttct      660
          ggcagcggct ctggcaccga cttcagcctg acaatcagca gcctgcagcc tgaggacttc      720
          gccacctact actgccagca ccactacggc acccctttca cctttggaag cggcaccaag      780
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          gcttgtagac ctgctgctgg cggagccgtg catacaagag gactggattt cgcctgcgac      960
          gtggccgcca ttctcggact gggacttgtt ctgggactgc tgggacctct ggccattctg     1020
          ctggctctgt acctgctgag aagggaccag agactgcctc ctgacgctca caaacctcca     1080
          ggcggaggca gcttcagaac ccctatccaa gaggaacagg ctgacgccca cagcaccctg     1140
          gccaagatca gagtgaagtt cagcagatcc gccgacgctc ccgcctataa gcagggacag     1200
          aatcagctgt acaacgagct gaacctgggg cgcagagaag agtacgacgt gctggacaag     1260
          agaagaggca gggatcctga aatgggcggc aagcccagac ggaagaatcc tcaagagggc     1320
          ctgtataatg agctgcagaa agacaagatg gccgaggcct acagcgagat cggaatgaag     1380
          ggcgaacgca gaagaggaaa gggccacgac ggactgtatc agggcctgag cacagccacc     1440
          aaggacacct atgatgccct gcacatgcag gccctgcctc caaga                     1485
          <![CDATA[<210> 114]]>
          <![CDATA[<211> 499]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 114]]>
          Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 
          1               5                   10                  15      
          His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu 
                      20                  25                  30          
          Val Lys Pro Gly Gly Ser Leu Ser Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe 
                  35                  40                  45              
          Val Phe Ser Ser Tyr Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Arg 
              50                  55                  60                  
          Gly Leu Glu Trp Val Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Gly Gly Ile Thr Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Ala Pro Ser Thr Val Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ala 
                          85                  90                  95      
          Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr 
                      100                 105                 110         
          Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala His Tyr Phe Gly Ser Ser Gly Pro Phe 
                  115                 120                 125             
          Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Gly Gly 
              130                 135                 140                 
          Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val 
                          165                 170                 175     
          Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Phe Ser Tyr Leu Ala Trp 
                      180                 185                 190         
          Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Val Tyr Asn Thr 
                  195                 200                 205             
          Arg Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser 
              210                 215                 220                 
          Gly Thr Asp Phe Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe 
          225                 230                 235                 240 
          Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Pro Phe Thr Phe Gly 
                          245                 250                 255     
          Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Leu Asn Gly Ala Ala Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro 
                  275                 280                 285             
          Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Leu Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu 
              290                 295                 300                 
          Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp 
          305                 310                 315                 320 
          Phe Ala Cys Asp Val Ala Ala Ile Leu Gly Leu Gly Leu Val Leu Gly 
                          325                 330                 335     
          Leu Leu Gly Pro Leu Ala Ile Leu Leu Ala Leu Tyr Leu Leu Arg Arg 
                      340                 345                 350         
          Asp Gln Arg Leu Pro Pro Asp Ala His Lys Pro Pro Gly Gly Gly Ser 
                  355                 360                 365             
          Phe Arg Thr Pro Ile Gln Glu Glu Gln Ala Asp Ala His Ser Thr Leu 
              370                 375                 380                 
          Ala Lys Ile Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr 
          385                 390                 395                 400 
          Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg 
                          405                 410                 415     
          Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met 
                      420                 425                 430         
          Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu 
                  435                 440                 445             
          Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys 
              450                 455                 460                 
          Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu 
          465                 470                 475                 480 
          Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu 
                          485                 490                 495     
          Pro Pro Arg 
          <![CDATA[<210> 115]]>
          <![CDATA[<211> 1707]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 115]]>
          atggctctgc ctgtgacagc tctgctgctg cctctggctc tgcttctgca tgccgccaga       60
          cctgacatcc agctgacaca gagccctagc agcctgtctg cctctgtggg cgacagagtg      120
          accatcacat gcaaggcctc tcaggacgtg ggcacaagcg tggcatggta tcagcagaag      180
          cctggcaagg cccctaagct gctgatctac tggaccagca ccagacacac aggcgtgccc      240
          agcagatttt ctggcagcgg ctctggcacc gacttcacct tcaccataag cagcctgcag      300
          cctgaggata tcgccaccta ctactgccag cagtacagcc tgtacagaag cttcggccag      360
          ggcaccaagg tggaaatcaa aggcggatct ggaagcggcg gttctggatc tggtggaagc      420
          ggatctgagg tgcagctggt ggaatctggt ggcggagttg tgcagcctgg cagatctctg      480
          agactgagct gtagcgccag cggcttcgat ttcaccacct actggatgag ctgggtccga      540
          caggcccctg gcaaaggact ggaatggatc ggcgagattc accccgacag cagcaccatc      600
          aattacgccc ctagcctgaa ggaccggttc accatctcca gagacaacgc caagaatacc      660
          ctgttcctgc agatggacag cctccggcct gaagataccg gcgtgtactt ttgcgccagc      720
          ctgtatttcg gcttcccttg gtttgcctac tggggccagg gaacacctgt gaccgttagc      780
          tctgagcaga agctgatctc cgaagaggac ctgaccacaa caccagctcc tagacctcca      840
          actcctgctc ctacaatcgc cctgcagcca ctgtctctga ggcctgaagc ttgtagacct      900
          gctgctggcg gagccgtgca taccagagga ctggatttcg cctgcgactt cctggtcatc      960
          atcgtgatcc tgagcgccct gttcctgggc acactggcct gtttctgcgt gtggcgcaga     1020
          aagcgcaaag agaagcagag cgagacaagc cccaaagagt tcctgaccat ctacgaggac     1080
          gtgaaggacc tgaaaacccg gcggaaccac gagcaagagc agacctttcc tggcggcgga     1140
          tccaccatct acagcatgat ccagagccag agcagcgccc ctacaagcca agagcctgcc     1200
          tacacactgt acagcctgat tcagcccagc agaaagagcg gctcccggaa gagaaatcac     1260
          agccccagct tcaacagcac gatctacgaa gtgatcggca agagccagcc aaaggctcag     1320
          aaccctgcca gactgagcag aaaagagctg gaaaacttcg acgtgtacag ccgcgtgaag     1380
          ttcagcagat ccgccgatgc tcctgcctat cagcagggcc agaaccagct gtacaacgag     1440
          ctgaacctgg ggagaagaga agagtacgac gtgctggaca agcggagagg cagagatcct     1500
          gaaatgggcg gcaagcccag acggaagaat cctcaagagg gcctgtataa tgagctgcag     1560
          aaagacaaga tggccgaggc ctacagcgag atcggaatga agggcgagcg cagaagaggc     1620
          aagggacacg atggactgta ccagggcctg agcaccgcca ccaaggatac ctatgatgcc     1680
          ctgcacatgc aggccctgcc tccaaga                                         1707
          <![CDATA[<210> 116]]>
          <![CDATA[<211> 573]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 116]]>
          Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 
          1               5                   10                  15      
          His Ala Ala Arg Pro Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu 
                      20                  25                  30          
          Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln 
                  35                  40                  45              
          Asp Val Gly Thr Ser Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala 
              50                  55                  60                  
          Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Thr Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile 
                          85                  90                  95      
          Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr 
                      100                 105                 110         
          Ser Leu Tyr Arg Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly 
                  115                 120                 125             
          Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Glu Val 
              130                 135                 140                 
          Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu 
          145                 150                 155                 160 
          Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Asp Phe Thr Thr Tyr Trp Met 
                          165                 170                 175     
          Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Glu 
                      180                 185                 190         
          Ile His Pro Asp Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Ala Pro Ser Leu Lys Asp 
                  195                 200                 205             
          Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Phe Leu Gln 
              210                 215                 220                 
          Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Phe Cys Ala Ser 
          225                 230                 235                 240 
          Leu Tyr Phe Gly Phe Pro Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Pro 
                          245                 250                 255     
          Val Thr Val Ser Ser Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Asn 
                      260                 265                 270         
          Gly Ala Ala Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro 
                  275                 280                 285             
          Thr Ile Ala Leu Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro 
              290                 295                 300                 
          Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp 
          305                 310                 315                 320 
          Phe Leu Val Ile Ile Val Ile Leu Ser Ala Leu Phe Leu Gly Thr Leu 
                          325                 330                 335     
          Ala Cys Phe Cys Val Trp Arg Arg Lys Arg Lys Glu Lys Gln Ser Glu 
                      340                 345                 350         
          Thr Ser Pro Lys Glu Phe Leu Thr Ile Tyr Glu Asp Val Lys Asp Leu 
                  355                 360                 365             
          Lys Thr Arg Arg Asn His Glu Gln Glu Gln Thr Phe Pro Gly Gly Gly 
              370                 375                 380                 
          Ser Thr Ile Tyr Ser Met Ile Gln Ser Gln Ser Ser Ala Pro Thr Ser 
          385                 390                 395                 400 
          Gln Glu Pro Ala Tyr Thr Leu Tyr Ser Leu Ile Gln Pro Ser Arg Lys 
                          405                 410                 415     
          Ser Gly Ser Arg Lys Arg Asn His Ser Pro Ser Phe Asn Ser Thr Ile 
                      420                 425                 430         
          Tyr Glu Val Ile Gly Lys Ser Gln Pro Lys Ala Gln Asn Pro Ala Arg 
                  435                 440                 445             
          Leu Ser Arg Lys Glu Leu Glu Asn Phe Asp Val Tyr Ser Arg Val Lys 
              450                 455                 460                 
          Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln 
          465                 470                 475                 480 
          Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu 
                          485                 490                 495     
          Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg 
                      500                 505                 510         
          Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met 
                  515                 520                 525             
          Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly 
              530                 535                 540                 
          Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp 
          545                 550                 555                 560 
          Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 
                          565                 570             
          <![CDATA[<210> 117]]>
          <![CDATA[<211> 1710]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 117]]>
          atggctctgc ctgtgacagc tctgctgctg cctctggctc tgcttctgca tgccgctaga       60
          ccccaagtga agctggaaca gtctggcgcc gaggttgtga aacctggcgc ctctgtgaag      120
          ctgagctgta aagccagcgg cttcaacatc aaggacagct acatgcactg gctgcggcaa      180
          ggccctggac agagactgga atggatcggc tggatcgacc ccgagaatgg cgatacagag      240
          tacgccccta agttccaggg caaagccacc ttcaccaccg acacctctgc caacacagcc      300
          tacctgggac tgtctagcct gaggcctgaa gataccgccg tgtactactg caacgagggc      360
          acacctacag gcccctacta cttcgattat tggggccagg gcaccctggt caccgtttct      420
          agcggaggcg gaggatctgg tggcggagga agtggcggag gcggttctga aaatgtgctg      480
          acacagagcc ccagcagcat gtccgtgtct gtgggcgaca gagtgacaat cgcctgtagc      540
          gcctctagca gcgtgcccta tatgcattgg ctgcagcaga agcccggcaa gagccctaag      600
          ctgctgatct acctgaccag caatctggcc agcggcgtgc caagcagatt ttctggaagc      660
          ggcagcggca ccgactacag cctgacaatc agtagcgtgc agcctgagga tgccgccacc      720
          tactactgtc agcagagaag cagctaccct ctgacctttg gaggcggcac caagctggaa      780
          atcaaagagc agaagctgat ctccgaagag gacctgacca caacaccagc tcctagacct      840
          ccaactcctg ctcctacaat cgccctgcag ccactgtctc tgaggcctga agcttgtaga      900
          cctgctgctg gcggagccgt gcataccaga ggactggatt tcgcctgcga cttcctggtc      960
          atcatcgtga tcctgagcgc cctgttcctg ggcacactgg cctgtttctg cgtgtggcgc     1020
          agaaagcgca aagagaagca gagcgagaca agccccaaag agttcctgac catctacgag     1080
          gacgtgaagg acctgaaaac ccggcggaac cacgagcaag agcagacctt tcctggcggc     1140
          ggatccacca tctacagcat gatccagagc cagagcagcg cccctacaag ccaagagcct     1200
          gcctacacac tgtacagcct gattcagccc agcagaaaga gcggctcccg gaagagaaat     1260
          cacagcccca gcttcaacag cacgatctac gaagtgatcg gcaagagcca gccaaaggct     1320
          cagaaccctg ccagactgag cagaaaagag ctggaaaact tcgacgtgta cagccgcgtg     1380
          aagttcagca gatccgccga tgctcctgcc tatcagcagg gccagaacca gctgtacaac     1440
          gagctgaacc tggggagaag agaagagtac gacgtgctgg acaagcggag aggcagagat     1500
          cctgaaatgg gcggcaagcc cagacggaag aatcctcaag agggcctgta taatgagctg     1560
          cagaaagaca agatggccga ggcctacagc gagatcggaa tgaagggcga gcgcagaaga     1620
          ggcaagggac acgatggact gtaccagggc ctgagcaccg ccaccaagga tacctatgat     1680
          gccctgcaca tgcaggccct gcctccaaga                                      1710
          <![CDATA[<210> 118]]>
          <![CDATA[<211> 598]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 118]]>
          Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 
          1               5                   10                  15      
          His Ala Ala Arg Pro Glu Thr Val Ile Lys Tyr Leu Leu Pro Thr Ala 
                      20                  25                  30          
          Ala Ala Gly Leu Leu Leu Leu Ala Ala Gln Pro Ala Met Ala Gln Val 
                  35                  40                  45              
          Lys Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Ser Gly Thr Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Ser Tyr Met 
          65                  70                  75                  80  
          His Trp Leu Arg Gln Gly Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Trp 
                          85                  90                  95      
          Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Glu Tyr Ala Pro Lys Phe Gln Gly 
                      100                 105                 110         
          Lys Ala Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr Leu Gln 
                  115                 120                 125             
          Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn Glu 
              130                 135                 140                 
          Gly Thr Pro Thr Gly Pro Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 
          145                 150                 155                 160 
          Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 
                          165                 170                 175     
          Gly Gly Gly Gly Ser Glu Asn Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met 
                      180                 185                 190         
          Ser Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser 
                  195                 200                 205             
          Ser Val Ser Tyr Met His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Thr Ser Pro 
              210                 215                 220                 
          Lys Leu Trp Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser 
                          245                 250                 255     
          Arg Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser 
                      260                 265                 270         
          Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg 
                  275                 280                 285             
          Ala Ala Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Thr Thr Thr Pro 
              290                 295                 300                 
          Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Leu Gln Pro Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His 
                          325                 330                 335     
          Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Phe Leu Val Ile Ile Val Ile 
                      340                 345                 350         
          Leu Ser Ala Leu Phe Leu Gly Thr Leu Ala Cys Phe Cys Val Trp Arg 
                  355                 360                 365             
          Arg Lys Arg Lys Glu Lys Gln Ser Glu Thr Ser Pro Lys Glu Phe Leu 
              370                 375                 380                 
          Thr Ile Tyr Glu Asp Val Lys Asp Leu Lys Thr Arg Arg Asn His Glu 
          385                 390                 395                 400 
          Gln Glu Gln Thr Phe Pro Gly Gly Gly Ser Thr Ile Tyr Ser Met Ile 
                          405                 410                 415     
          Gln Ser Gln Ser Ser Ala Pro Thr Ser Gln Glu Pro Ala Tyr Thr Leu 
                      420                 425                 430         
          Tyr Ser Leu Ile Gln Pro Ser Arg Lys Ser Gly Ser Arg Lys Arg Asn 
                  435                 440                 445             
          His Ser Pro Ser Phe Asn Ser Thr Ile Tyr Glu Val Ile Gly Lys Ser 
              450                 455                 460                 
          Gln Pro Lys Ala Gln Asn Pro Ala Arg Leu Ser Arg Lys Glu Leu Glu 
          465                 470                 475                 480 
          Asn Phe Asp Val Tyr Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala 
                          485                 490                 495     
          Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu 
                      500                 505                 510         
          Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp 
                  515                 520                 525             
          Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu 
              530                 535                 540                 
          Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile 
          545                 550                 555                 560 
          Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr 
                          565                 570                 575     
          Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met 
                      580                 585                 590         
          Gln Ala Leu Pro Pro Arg 
                  595             
          <![CDATA[<210> 119]]>
          <![CDATA[<211> 1476]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 119]]>
          atggctctgc ctgtgacagc tctgctgctg cctctggctc tgcttctgca tgccgctaga       60
          ccccaagtga agctggaaca gtctggcgcc gaggttgtga aacctggcgc ctctgtgaag      120
          ctgagctgta aagccagcgg cttcaacatc aaggacagct acatgcactg gctgcggcaa      180
          ggccctggac agagactgga atggatcggc tggatcgacc ccgagaatgg cgatacagag      240
          tacgccccta agttccaggg caaagccacc ttcaccaccg acacctctgc caacacagcc      300
          tacctgggac tgtctagcct gaggcctgaa gataccgccg tgtactactg caacgagggc      360
          acacctacag gcccctacta cttcgattat tggggccagg gcaccctggt caccgtttct      420
          agcggaggcg gaggatctgg tggcggagga agtggcggag gcggttctga aaatgtgctg      480
          acacagagcc ccagcagcat gtccgtgtct gtgggcgaca gagtgacaat cgcctgtagc      540
          gcctctagca gcgtgcccta tatgcattgg ctgcagcaga agcccggcaa gagccctaag      600
          ctgctgatct acctgaccag caatctggcc agcggcgtgc caagcagatt ttctggaagc      660
          ggcagcggca ccgactacag cctgacaatc agtagcgtgc agcctgagga tgccgccacc      720
          tactactgtc agcagagaag cagctaccct ctgacctttg gaggcggcac caagctggaa      780
          atcaaagagc agaagctgat ctccgaagag gacctgacca caacaccagc tcctagacct      840
          ccaactcctg ctcctacaat cgccctgcag ccactgtctc tgaggcctga agcttgtaga      900
          cctgctgctg gcggagccgt gcataccaga ggactggatt tcgcctgcga catctacatc      960
          tgggcccctc tggctggaac atgcggagtg ttgctgctga gcctggtcat caccaagcgg     1020
          ggcagaaaga agctgctgta catcttcaag cagcccttca tgcggcccgt gcagaccaca     1080
          caagaggaag atggctgctc ctgcagattc cccgaggaag aagaaggcgg ctgcgagctg     1140
          agagtgaagt tcagcagatc cgccgacgct cctgcctatc agcagggaca gaaccagctg     1200
          tacaacgagc tgaacctggg gagaagagaa gagtacgacg tgctggacaa gcggagaggc     1260
          agagatcctg aaatgggcgg caagcccaga cggaagaatc ctcaagaggg cctgtataat     1320
          gagctgcaga aagacaagat ggccgaggcc tacagcgaga tcggaatgaa gggcgagcgc     1380
          agaagaggca agggacacga tggactgtac cagggcctga gcaccgccac caaggatacc     1440
          tatgatgccc tgcacatgca ggccctgcct ccaaga                               1476
          <![CDATA[<210> 120]]>
          <![CDATA[<211> 520]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 120]]>
          Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 
          1               5                   10                  15      
          His Ala Ala Arg Pro Glu Thr Val Ile Lys Tyr Leu Leu Pro Thr Ala 
                      20                  25                  30          
          Ala Ala Gly Leu Leu Leu Leu Ala Ala Gln Pro Ala Met Ala Gln Val 
                  35                  40                  45              
          Lys Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Ser Gly Thr Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Ser Tyr Met 
          65                  70                  75                  80  
          His Trp Leu Arg Gln Gly Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Trp 
                          85                  90                  95      
          Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Glu Tyr Ala Pro Lys Phe Gln Gly 
                      100                 105                 110         
          Lys Ala Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr Leu Gln 
                  115                 120                 125             
          Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn Glu 
              130                 135                 140                 
          Gly Thr Pro Thr Gly Pro Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 
          145                 150                 155                 160 
          Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 
                          165                 170                 175     
          Gly Gly Gly Gly Ser Glu Asn Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met 
                      180                 185                 190         
          Ser Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser 
                  195                 200                 205             
          Ser Val Ser Tyr Met His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Thr Ser Pro 
              210                 215                 220                 
          Lys Leu Trp Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser 
                          245                 250                 255     
          Arg Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser 
                      260                 265                 270         
          Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg 
                  275                 280                 285             
          Ala Ala Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Thr Thr Thr Pro 
              290                 295                 300                 
          Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Leu Gln Pro Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His 
                          325                 330                 335     
          Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu 
                      340                 345                 350         
          Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Lys Arg 
                  355                 360                 365             
          Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro 
              370                 375                 380                 
          Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu 
          385                 390                 395                 400 
          Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala 
                          405                 410                 415     
          Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu 
                      420                 425                 430         
          Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly 
                  435                 440                 445             
          Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu 
              450                 455                 460                 
          Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser 
          465                 470                 475                 480 
          Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly 
                          485                 490                 495     
          Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu 
                      500                 505                 510         
          His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 
                  515                 520 
          <![CDATA[<210> 121]]>
          <![CDATA[<211> 1713]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 121]]>
          atggctctgc ctgtgacagc tctgctgctg cctctggctc tgcttctgca tgctgccaga       60
          cctcagatcg tgctgtctca gtctcccgcc atcctgtttg ctagccctgg cgagaaagtg      120
          accatgacct gtagagccag cagctccgtg tcctacatcc actggtatca gcagaagccc      180
          ggcagcagcc ctaagccttg gatccacggc acaagcaatc tggccagcgg agtgcctgcc      240
          agattttctg gaagcggcag cggcaccagc tacagcctga ccatctctag aatggaagcc      300
          gaggacgccg ccacctacta ctgtcagcag tggtccagca acctgagcac ctttggcggc      360
          ggaacaaagc tggaaatcaa aggcggcgga ggatctggcg gaggcggtag cggaggtggt      420
          ggatctgaag tgaagctggt ggaatcaggc ggaggcctgg ttcaacctgg cggatctctg      480
          agactgagct gcagcatctc cggcttcacc ttcaccgact actacatgaa ctgggtccga      540
          cagagccctg gcaaggctct ggaatggctg ggcttcatca gaaacaaagt gaacggcgac      600
          accaccgagt acagcgcctc tgtgaagggc agattcacca tcagccggga catcagccag      660
          agcatcctgt acctgcagat gaacaccctg cggaccgagg atagcgccac atattactgc      720
          gccagagaca agggaatcgc ctactacttc gactactggg gccagggcac cacactgaca      780
          gtgtctagcg agcagaagct gatctccgaa gaggacctga ccacaacacc agctcctaga      840
          ccacctacac cagcacctac aatcgccctg cagccactgt ctctgaggcc agaagcttgt      900
          agacctgctg ctggcggagc cgtgcataca agaggactgg atttcgcctg cgacttcctg      960
          gtcatcatcg tgatcctgag cgccctgttc ctgggcacac tggcctgttt ctgcgtgtgg     1020
          cgcagaaagc gcaaagagaa gcagagcgag acaagcccca aagagttcct gaccatctac     1080
          gaggacgtga aggacctgaa aacccggcgg aaccacgagc aagagcagac ctttcctggc     1140
          ggcggatcca ccatctacag catgatccag agccagagca gcgcccctac aagccaagag     1200
          cctgcctaca cactgtacag cctgattcag cccagcagaa agagcggctc ccggaagaga     1260
          aatcacagcc ccagcttcaa cagcacgatc tacgaagtga tcggcaagag ccagccaaag     1320
          gctcagaacc ctgccagact gagcagaaaa gagctggaaa acttcgacgt gtacagccgc     1380
          gtgaagttca gcagatccgc cgatgctcct gcctatcagc agggccagaa ccagctgtac     1440
          aacgagctga acctggggag aagagaagag tacgacgtgc tggacaagcg gagaggcaga     1500
          gatcctgaaa tgggcggcaa gcccagacgg aagaatcctc aagagggcct gtataatgag     1560
          ctgcagaaag acaagatggc cgaggcctac agcgagatcg gaatgaaggg cgagcgcaga     1620
          agaggcaagg gacacgatgg actgtaccag ggcctgagca ccgccaccaa ggatacctat     1680
          gatgccctgc acatgcaggc cctgcctcca aga                                  1713
          <![CDATA[<210> 122]]>
          <![CDATA[<211> 571]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 122]]>
          Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 
          1               5                   10                  15      
          His Ala Ala Arg Pro Gln Ile Val Leu Ser Gln Ser Pro Ala Ile Leu 
                      20                  25                  30          
          Phe Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser 
                  35                  40                  45              
          Ser Val Ser Tyr Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro 
              50                  55                  60                  
          Lys Pro Trp Ile His Gly Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser 
                          85                  90                  95      
          Arg Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser 
                      100                 105                 110         
          Ser Asn Leu Ser Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly 
                  115                 120                 125             
          Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val 
              130                 135                 140                 
          Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu 
          145                 150                 155                 160 
          Arg Leu Ser Cys Ser Ile Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr Tyr Met 
                          165                 170                 175     
          Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu Gly Phe 
                      180                 185                 190         
          Ile Arg Asn Lys Val Asn Gly Asp Thr Thr Glu Tyr Ser Ala Ser Val 
                  195                 200                 205             
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ile Ser Gln Ser Ile Leu Tyr 
              210                 215                 220                 
          Leu Gln Met Asn Thr Leu Arg Thr Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Tyr Cys 
          225                 230                 235                 240 
          Ala Arg Asp Lys Gly Ile Ala Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 
                          245                 250                 255     
          Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp 
                      260                 265                 270         
          Leu Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile 
                  275                 280                 285             
          Ala Leu Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala 
              290                 295                 300                 
          Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Phe Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Val Ile Ile Val Ile Leu Ser Ala Leu Phe Leu Gly Thr Leu Ala Cys 
                          325                 330                 335     
          Phe Cys Val Trp Arg Arg Lys Arg Lys Glu Lys Gln Ser Glu Thr Ser 
                      340                 345                 350         
          Pro Lys Glu Phe Leu Thr Ile Tyr Glu Asp Val Lys Asp Leu Lys Thr 
                  355                 360                 365             
          Arg Arg Asn His Glu Gln Glu Gln Thr Phe Pro Gly Gly Gly Ser Thr 
              370                 375                 380                 
          Ile Tyr Ser Met Ile Gln Ser Gln Ser Ser Ala Pro Thr Ser Gln Glu 
          385                 390                 395                 400 
          Pro Ala Tyr Thr Leu Tyr Ser Leu Ile Gln Pro Ser Arg Lys Ser Gly 
                          405                 410                 415     
          Ser Arg Lys Arg Asn His Ser Pro Ser Phe Asn Ser Thr Ile Tyr Glu 
                      420                 425                 430         
          Val Ile Gly Lys Ser Gln Pro Lys Ala Gln Asn Pro Ala Arg Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Arg Lys Glu Leu Glu Asn Phe Asp Val Tyr Ser Arg Val Lys Phe Ser 
              450                 455                 460                 
          Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr 
          465                 470                 475                 480 
          Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys 
                          485                 490                 495     
          Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn 
                      500                 505                 510         
          Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu 
                  515                 520                 525             
          Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly 
              530                 535                 540                 
          His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr 
          545                 550                 555                 560 
          Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 
                          565                 570     
          <![CDATA[<210> 123]]>
          <![CDATA[<211> 1479]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 123]]>
          atggctctgc ctgtgacagc tctgctgctg cctctggctc tgcttctgca tgctgccaga       60
          cctcagatcg tgctgtctca gtctcccgcc atcctgtttg ctagccctgg cgagaaagtg      120
          accatgacct gtagagccag cagctccgtg tcctacatcc actggtatca gcagaagccc      180
          ggcagcagcc ctaagccttg gatccacggc acaagcaatc tggccagcgg agtgcctgcc      240
          agattttctg gaagcggcag cggcaccagc tacagcctga ccatctctag aatggaagcc      300
          gaggacgccg ccacctacta ctgtcagcag tggtccagca acctgagcac ctttggcggc      360
          ggaacaaagc tggaaatcaa aggcggcgga ggatctggcg gaggcggtag cggaggtggt      420
          ggatctgaag tgaagctggt ggaatcaggc ggaggcctgg ttcaacctgg cggatctctg      480
          agactgagct gcagcatctc cggcttcacc ttcaccgact actacatgaa ctgggtccga      540
          cagagccctg gcaaggctct ggaatggctg ggcttcatca gaaacaaagt gaacggcgac      600
          accaccgagt acagcgcctc tgtgaagggc agattcacca tcagccggga catcagccag      660
          agcatcctgt acctgcagat gaacaccctg cggaccgagg atagcgccac atattactgc      720
          gccagagaca agggaatcgc ctactacttc gactactggg gccagggcac cacactgaca      780
          gtgtctagcg agcagaagct gatctccgaa gaggacctga ccacaacacc agctcctaga      840
          cctccaactc ctgctcctac aatcgccctg cagccactgt ctctgaggcc tgaagcttgt      900
          agacctgctg ctggcggagc cgtgcatacc agaggactgg atttcgcctg cgacatctac      960
          atctgggccc ctctggctgg aacatgcgga gtgttgctgc tgagcctggt catcaccaag     1020
          cggggcagaa agaagctgct gtacatcttc aagcagccct tcatgcggcc cgtgcagacc     1080
          acacaagagg aagatggctg ctcctgcaga ttccccgagg aagaagaagg cggctgcgag     1140
          ctgagagtga agttcagcag atccgccgac gctcctgcct atcagcaggg acagaaccag     1200
          ctgtacaacg agctgaacct ggggagaaga gaagagtacg acgtgctgga caagcggaga     1260
          ggcagagatc ctgaaatggg cggcaagccc agacggaaga atcctcaaga gggcctgtat     1320
          aatgagctgc agaaagacaa gatggccgag gcctacagcg agatcggaat gaagggcgag     1380
          cgcagaagag gcaagggaca cgatggactg taccagggcc tgagcaccgc caccaaggat     1440
          acctatgatg ccctgcacat gcaggccctg cctccaaga                            1479
          <![CDATA[<210> 124]]>
          <![CDATA[<211> 493]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 124]]>
          Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 
          1               5                   10                  15      
          His Ala Ala Arg Pro Gln Ile Val Leu Ser Gln Ser Pro Ala Ile Leu 
                      20                  25                  30          
          Phe Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser 
                  35                  40                  45              
          Ser Val Ser Tyr Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro 
              50                  55                  60                  
          Lys Pro Trp Ile His Gly Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser 
                          85                  90                  95      
          Arg Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser 
                      100                 105                 110         
          Ser Asn Leu Ser Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly 
                  115                 120                 125             
          Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val 
              130                 135                 140                 
          Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu 
          145                 150                 155                 160 
          Arg Leu Ser Cys Ser Ile Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr Tyr Met 
                          165                 170                 175     
          Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu Gly Phe 
                      180                 185                 190         
          Ile Arg Asn Lys Val Asn Gly Asp Thr Thr Glu Tyr Ser Ala Ser Val 
                  195                 200                 205             
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ile Ser Gln Ser Ile Leu Tyr 
              210                 215                 220                 
          Leu Gln Met Asn Thr Leu Arg Thr Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Tyr Cys 
          225                 230                 235                 240 
          Ala Arg Asp Lys Gly Ile Ala Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 
                          245                 250                 255     
          Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp 
                      260                 265                 270         
          Leu Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile 
                  275                 280                 285             
          Ala Leu Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala 
              290                 295                 300                 
          Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr 
          305                 310                 315                 320 
          Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu 
                          325                 330                 335     
          Val Ile Thr Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln 
                      340                 345                 350         
          Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser 
                  355                 360                 365             
          Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys 
              370                 375                 380                 
          Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln 
          385                 390                 395                 400 
          Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg 
                      420                 425                 430         
          Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met 
                  435                 440                 445             
          Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly 
              450                 455                 460                 
          Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp 
          465                 470                 475                 480 
          Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 
                          485                 490             
          <![CDATA[<210> 125]]>
          <![CDATA[<211> 1500]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 125]]>
          atggccctgc ctgtgacagc tctgctgctg cctctggccc tgctgctgca tgctgctaga       60
          cctgacatcc agctgacaca gagccctagc agcctgtctg cctctgtggg cgacagagtg      120
          accatcacat gcaaggcctc tcaggacgtg ggcacaagcg tggcatggta tcagcagaag      180
          cctggcaagg cccctaagct gctgatctac tggaccagca ccagacacac aggcgtgccc      240
          agcagatttt ctggcagcgg ctctggcacc gacttcacct tcaccataag cagcctgcag      300
          cctgaggata tcgccaccta ctactgccag cagtacagcc tgtacagaag cttcggccag      360
          ggcaccaagg tggaaatcaa aggcggatct ggaagcggcg gttctggatc tggtggaagc      420
          ggatctgagg tgcagctggt ggaatctggt ggcggagttg tgcagcctgg cagatctctg      480
          agactgagct gtagcgccag cggcttcgat ttcaccacct actggatgag ctgggtccga      540
          caggcccctg gcaaaggact ggaatggatc ggcgagattc accccgacag cagcaccatc      600
          aattacgccc ctagcctgaa ggaccggttc accatctcca gagacaacgc caagaatacc      660
          ctgttcctgc agatggacag cctccggcct gaagataccg gcgtgtactt ttgcgccagc      720
          ctgtatttcg gcttcccttg gtttgcctac tggggccagg gaacacctgt gaccgttagc      780
          tctgaacaaa aactcatctc agaagaagat ctgaatgggg ccgcaaccac gacgccagcg      840
          ccgcgaccac caacaccggc gcccaccatc gcgttgcagc ccctgtccct gcgcccagag      900
          gcgtgccggc cagcggcggg gggcgcagtg cacacgaggg ggctggactt cgcctgtgat      960
          ttttgggtgc tggtggtggt tggtggagtc ctggcttgct atagcttgct agtaacagtg     1020
          gcctttatta ttttctgggt gaggagtaag aggagcaggc tcctgcacag tgactacatg     1080
          aacatgactc cccgccgccc cgggcccacc cgcaagcatt accagcccta tgccccacca     1140
          cgcgacttcg cagcctatcg ctccagagtg aagttcagca ggagcgcaga cgcccccgcg     1200
          tacaagcagg gccagaacca gctctataac gagctcaatc taggacgaag agaggagtac     1260
          gatgttttgg acaagagacg tggccgggac cctgagatgg ggggaaagcc gagaaggaag     1320
          aaccctcagg aaggcctgta caatgaactg cagaaagata agatggcgga ggcctacagt     1380
          gagattggga tgaaaggcga gcgccggagg ggcaaggggc acgatggcct ttaccagggt     1440
          ctcagtacag ccaccaagga cacctacgac gcccttcaca tgcaggccct gccccctcgc     1500
          <![CDATA[<210> 126]]>
          <![CDATA[<211> 500]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 126]]>
          Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 
          1               5                   10                  15      
          His Ala Ala Arg Pro Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu 
                      20                  25                  30          
          Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln 
                  35                  40                  45              
          Asp Val Gly Thr Ser Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala 
              50                  55                  60                  
          Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Thr Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile 
                          85                  90                  95      
          Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr 
                      100                 105                 110         
          Ser Leu Tyr Arg Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly 
                  115                 120                 125             
          Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Glu Val 
              130                 135                 140                 
          Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu 
          145                 150                 155                 160 
          Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Asp Phe Thr Thr Tyr Trp Met 
                          165                 170                 175     
          Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Glu 
                      180                 185                 190         
          Ile His Pro Asp Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Ala Pro Ser Leu Lys Asp 
                  195                 200                 205             
          Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Phe Leu Gln 
              210                 215                 220                 
          Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Phe Cys Ala Ser 
          225                 230                 235                 240 
          Leu Tyr Phe Gly Phe Pro Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Pro 
                          245                 250                 255     
          Val Thr Val Ser Ser Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Asn 
                      260                 265                 270         
          Gly Ala Ala Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro 
                  275                 280                 285             
          Thr Ile Ala Leu Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro 
              290                 295                 300                 
          Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp 
          305                 310                 315                 320 
          Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu 
                          325                 330                 335     
          Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser 
                      340                 345                 350         
          Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly 
                  355                 360                 365             
          Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala 
              370                 375                 380                 
          Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala 
          385                 390                 395                 400 
          Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg 
                          405                 410                 415     
          Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu 
                      420                 425                 430         
          Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn 
                  435                 440                 445             
          Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met 
              450                 455                 460                 
          Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly 
          465                 470                 475                 480 
          Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala 
                          485                 490                 495     
          Leu Pro Pro Arg 
                      500 
          <![CDATA[<210> 127]]>
          <![CDATA[<211> 1485]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 127]]>
          atggccctgc ctgtgacagc tctgctgctg cctctggccc tgctgctgca tgctgctaga       60
          cctgacatcc agctgacaca gagccctagc agcctgtctg cctctgtggg cgacagagtg      120
          accatcacat gcaaggcctc tcaggacgtg ggcacaagcg tggcatggta tcagcagaag      180
          cctggcaagg cccctaagct gctgatctac tggaccagca ccagacacac aggcgtgccc      240
          agcagatttt ctggcagcgg ctctggcacc gacttcacct tcaccataag cagcctgcag      300
          cctgaggata tcgccaccta ctactgccag cagtacagcc tgtacagaag cttcggccag      360
          ggcaccaagg tggaaatcaa aggcggatct ggaagcggcg gttctggatc tggtggaagc      420
          ggatctgagg tgcagctggt ggaatctggt ggcggagttg tgcagcctgg cagatctctg      480
          agactgagct gtagcgccag cggcttcgat ttcaccacct actggatgag ctgggtccga      540
          caggcccctg gcaaaggact ggaatggatc ggcgagattc accccgacag cagcaccatc      600
          aattacgccc ctagcctgaa ggaccggttc accatctcca gagacaacgc caagaatacc      660
          ctgttcctgc agatggacag cctccggcct gaagataccg gcgtgtactt ttgcgccagc      720
          ctgtatttcg gcttcccttg gtttgcctac tggggccagg gaacacctgt gaccgttagc      780
          tctgaacaaa aactcatctc agaagaagat ctgaatgggg ccgcaaccac gacgccagcg      840
          ccgcgaccac caacaccggc gcccaccatc gcgttgcagc ccctgtccct gcgcccagag      900
          gcgtgccggc cagcggcggg gggcgcagtg cacacgaggg ggctggactt cgcctgtgat      960
          gtggccgcca ttcttggact gggacttgtt ctgggactgc tgggacctct ggccattctg     1020
          ctggctctgt acctgctgag aagggaccag agactgcctc ctgacgctca caaacctcca     1080
          ggcggaggca gcttcagaac ccctatccaa gaggaacagg ctgacgccca cagcaccctg     1140
          gccaagatca gagtgaagtt cagcaggagc gcagacgccc ccgcgtacaa gcagggccag     1200
          aaccagctct ataacgagct caatctagga cgaagagagg agtacgatgt tttggacaag     1260
          agacgtggcc gggaccctga gatgggggga aagccgagaa ggaagaaccc tcaggaaggc     1320
          ctgtacaatg aactgcagaa agataagatg gcggaggcct acagtgagat tgggatgaaa     1380
          ggcgagcgcc ggaggggcaa ggggcacgat ggcctttacc agggtctcag tacagccacc     1440
          aaggacacct acgacgccct tcacatgcag gccctgcccc ctcgc                     1485
          <![CDATA[<210> 128]]>
          <![CDATA[<211> 495]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 128]]>
          Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 
          1               5                   10                  15      
          His Ala Ala Arg Pro Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu 
                      20                  25                  30          
          Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln 
                  35                  40                  45              
          Asp Val Gly Thr Ser Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala 
              50                  55                  60                  
          Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Thr Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile 
                          85                  90                  95      
          Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr 
                      100                 105                 110         
          Ser Leu Tyr Arg Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly 
                  115                 120                 125             
          Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Glu Val 
              130                 135                 140                 
          Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu 
          145                 150                 155                 160 
          Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Asp Phe Thr Thr Tyr Trp Met 
                          165                 170                 175     
          Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Glu 
                      180                 185                 190         
          Ile His Pro Asp Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Ala Pro Ser Leu Lys Asp 
                  195                 200                 205             
          Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Phe Leu Gln 
              210                 215                 220                 
          Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Phe Cys Ala Ser 
          225                 230                 235                 240 
          Leu Tyr Phe Gly Phe Pro Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Pro 
                          245                 250                 255     
          Val Thr Val Ser Ser Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Asn 
                      260                 265                 270         
          Gly Ala Ala Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro 
                  275                 280                 285             
          Thr Ile Ala Leu Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro 
              290                 295                 300                 
          Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp 
          305                 310                 315                 320 
          Val Ala Ala Ile Leu Gly Leu Gly Leu Val Leu Gly Leu Leu Gly Pro 
                          325                 330                 335     
          Leu Ala Ile Leu Leu Ala Leu Tyr Leu Leu Arg Arg Asp Gln Arg Leu 
                      340                 345                 350         
          Pro Pro Asp Ala His Lys Pro Pro Gly Gly Gly Ser Phe Arg Thr Pro 
                  355                 360                 365             
          Ile Gln Glu Glu Gln Ala Asp Ala His Ser Thr Leu Ala Lys Ile Arg 
              370                 375                 380                 
          Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln 
          385                 390                 395                 400 
          Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp 
                          405                 410                 415     
          Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro 
                      420                 425                 430         
          Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp 
                  435                 440                 445             
          Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg 
              450                 455                 460                 
          Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr 
          465                 470                 475                 480 
          Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 
                          485                 490                 495 
          <![CDATA[<210> 129]]>
          <![CDATA[<211> 1512]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 129]]>
          atggccctgc ctgtgacagc tctgctgctg cctctggccc tgctgctgca tgctgctaga       60
          cctgaggtcc agctgcaaga gtctggccct ggacttgtga agcctggcgg aagcctgtct      120
          ctgtcttgtg ccgccagcgg cttcgtgttc agcagctacg atatgagctg ggtccgacag      180
          acccctgagc gaggacttga gtgggtcgcc tacatctctt ctggcggcgg aatcacatac      240
          gcccctagca cagtgaaggg cagattcacc gtgtccagag acaacgccaa gaacaccctg      300
          tacctgcaga tgaacagcct gaccagcgag gacaccgccg tgtactattg tgccgctcac      360
          tactttggca gcagcggccc ttttgcctat tggggccagg gaacactcgt gaccgtttct      420
          agtgctggcg gaggcggatc aggtggcgga ggaagtggcg gcggaggatc tgatatccag      480
          atgacacaga gccccgccag cctgtctgcc tctgtgggag atagagtgac catcacctgt      540
          cgggccagcg agaacatctt cagctacctg gcctggtatc agcagaagcc cggcaagtct      600
          cctaagctgc tggtgtacaa cacccggaca ctggctgaag gcgtgcccag cagattttct      660
          ggcagcggct ctggcaccga cttcagcctg acaatcagca gcctgcagcc tgaggacttc      720
          gccacctact actgccagca ccactacggc acccctttca cctttggaag cggcaccaag      780
          ctggaaatca agagagaaca aaaactcatc tcagaagaag atctgaatgg ggccgcaacc      840
          acgacgccag cgccgcgacc accaacaccg gcgcccacca tcgcgttgca gcccctgtcc      900
          ctgcgcccag aggcgtgccg gccagcggcg gggggcgcag tgcacacgag ggggctggac      960
          ttcgcctgtg atttttgggt gctggtggtg gttggtggag tcctggcttg ctatagcttg     1020
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          agtgactaca tgaacatgac tccccgccgc cccgggccca cccgcaagca ttaccagccc     1140
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          agagaggagt acgatgtttt ggacaagaga cgtggccggg accctgagat ggggggaaag     1320
          ccgagaagga agaaccctca ggaaggcctg tacaatgaac tgcagaaaga taagatggcg     1380
          gaggcctaca gtgagattgg gatgaaaggc gagcgccgga ggggcaaggg gcacgatggc     1440
          ctttaccagg gtctcagtac agccaccaag gacacctacg acgcccttca catgcaggcc     1500
          ctgccccctc gc                                                         1512
          <![CDATA[<210> 130]]>
          <![CDATA[<211> 1497]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 130]]>
          atggccctgc ctgtgacagc tctgctgctg cctctggccc tgctgctgca tgctgctaga       60
          cctgaggtcc agctgcaaga gtctggccct ggacttgtga agcctggcgg aagcctgtct      120
          ctgtcttgtg ccgccagcgg cttcgtgttc agcagctacg atatgagctg ggtccgacag      180
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          attgggatga aaggcgagcg ccggaggggc aaggggcacg atggccttta ccagggtctc     1440
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          <![CDATA[<210> 131]]>
          <![CDATA[<211> 1488]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 131]]>
          atggctctgc ctgtgacagc tctgctgctg cctctggctc tgcttctgca tgccgccaga       60
          cctgacatcc agctgacaca gagccctagc agcctgtctg cctctgtggg cgacagagtg      120
          accatcacat gcaaggcctc tcaggacgtg ggcacaagcg tggcatggta tcagcagaag      180
          cctggcaagg cccctaagct gctgatctac tggaccagca ccagacacac aggcgtgccc      240
          agcagatttt ctggcagcgg ctctggcacc gacttcacct tcaccataag cagcctgcag      300
          cctgaggata tcgccaccta ctactgccag cagtacagcc tgtacagaag cttcggccag      360
          ggcaccaagg tggaaatcaa aggcggatct ggaagcggcg gttctggatc tggtggaagc      420
          ggatctgagg tgcagctggt ggaatctggt ggcggagttg tgcagcctgg cagatctctg      480
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          ctgttcctgc agatggacag cctccggcct gaagataccg gcgtgtactt ttgcgccagc      720
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          tctgagcaga agctgatctc cgaagaggac ctgaccacaa caccagctcc tagaccacct      840
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          ggcctgtata atgagctgca aaaggacaag atggccgagg cctacagcga gatcggaatg     1380
          aagggcgagc gcagaagagg caagggacac gatggactgt accagggcct gagcaccgcc     1440
          accaaggata cctatgatgc cctgcacatg caggccctgc ctccaaga                  1488
          <![CDATA[<210> 132]]>
          <![CDATA[<211> 1473]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 132]]>
          atggctctgc ctgtgacagc tctgctgctg cctctggctc tgcttctgca tgccgccaga       60
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          agcagatttt ctggcagcgg ctctggcacc gacttcacct tcaccataag cagcctgcag      300
          cctgaggata tcgccaccta ctactgccag cagtacagcc tgtacagaag cttcggccag      360
          ggcaccaagg tggaaatcaa aggcggatct ggaagcggcg gttctggatc tggtggaagc      420
          ggatctgagg tgcagctggt ggaatctggt ggcggagttg tgcagcctgg cagatctctg      480
          agactgagct gtagcgccag cggcttcgat ttcaccacct actggatgag ctgggtccga      540
          caggcccctg gcaaaggact ggaatggatc ggcgagattc accccgacag cagcaccatc      600
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          ctgttcctgc agatggacag cctccggcct gaagataccg gcgtgtactt ttgcgccagc      720
          ctgtatttcg gcttcccttg gtttgcctac tggggccagg gaacacctgt gaccgttagc      780
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          agaggaaagg gccacgacgg actgtatcag ggcctgagca cagccaccaa ggacacctat     1440
          gatgccctgc acatgcaggc cctgcctcca aga                                  1473
          <![CDATA[<210> 133]]>
          <![CDATA[<211> 1500]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 133]]>
          atggctctgc ctgtgacagc tctgctgctg cctctggctc tgcttctgca tgccgctaga       60
          cctgaggtcc agctgcaaga gtctggccct ggacttgtga agcctggcgg aagcctgtct      120
          ctgtcttgtg ccgccagcgg cttcgtgttc agcagctacg atatgagctg ggtccgacag      180
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          tactttggca gcagcggccc ttttgcctat tggggccagg gaacactcgt gaccgtttct      420
          agtgctggcg gaggcggatc aggtggcgga ggaagtggcg gcggaggatc tgatatccag      480
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          ctggaaatca agagagagca gaagctgatc tccgaagagg acctgaccac aactcctgct      840
          cctagacctc ctacaccagc tcctacaatc gccctgcagc cactgtctct gaggccagaa      900
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          ttctgggtgc tcgtggttgt tggcggagtg ctggcctgtt actctctgct ggtcaccgtg     1020
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          aacatgaccc ctagacggcc cggacctacc agaaagcact accagcctta cgctcctcct     1140
          agagatttcg ccgcctaccg gtccagagtg aagttcagca gatccgccga tgctcccgcc     1200
          tataagcagg gacagaacca gctgtacaac gagctgaacc tggggagaag agaagagtac     1260
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          aatcctcaag agggcctgta taatgagctg cagaaagaca agatggccga ggcctacagc     1380
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          <![CDATA[<210> 134]]>
          <![CDATA[<211> 1485]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 134]]>
          atggctctgc ctgtgacagc tctgctgctg cctctggctc tgcttctgca tgccgctaga       60
          cctgaggtcc agctgcaaga gtctggccct ggacttgtga agcctggcgg aagcctgtct      120
          ctgtcttgtg ccgccagcgg cttcgtgttc agcagctacg atatgagctg ggtccgacag      180
          acccctgagc gaggacttga gtgggtcgcc tacatctctt ctggcggcgg aatcacatac      240
          gcccctagca cagtgaaggg cagattcacc gtgtccagag acaacgccaa gaacaccctg      300
          tacctgcaga tgaacagcct gaccagcgag gacaccgccg tgtactattg tgccgctcac      360
          tactttggca gcagcggccc ttttgcctat tggggccagg gaacactcgt gaccgtttct      420
          agtgctggcg gaggcggatc aggtggcgga ggaagtggcg gcggaggatc tgatatccag      480
          atgacacaga gccccgccag cctgtctgcc tctgtgggag atagagtgac catcacctgt      540
          cgggccagcg agaacatctt cagctacctg gcctggtatc agcagaagcc cggcaagtct      600
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          ggcagcggct ctggcaccga cttcagcctg acaatcagca gcctgcagcc tgaggacttc      720
          gccacctact actgccagca ccactacggc acccctttca cctttggaag cggcaccaag      780
          ctggaaatca agagagagca gaagctgatc tccgaagagg acctgaccac aacaccagct      840
          cctagaccac ctacaccagc acctacaatc gccctgcagc cactgtctct gaggccagag      900
          gcttgtagac ctgctgctgg cggagccgtg catacaagag gactggattt cgcctgcgac      960
          gtggccgcca ttctcggact gggacttgtt ctgggactgc tgggacctct ggccattctg     1020
          ctggctctgt acctgctgag aagggaccag agactgcctc ctgacgctca caaacctcca     1080
          ggcggaggca gcttcagaac ccctatccaa gaggaacagg ctgacgccca cagcaccctg     1140
          gccaagatca gagtgaagtt cagcagatcc gccgacgctc ccgcctataa gcagggacag     1200
          aatcagctgt acaacgagct gaacctgggg cgcagagaag agtacgacgt gctggacaag     1260
          agaagaggca gggatcctga aatgggcggc aagcccagac ggaagaatcc tcaagagggc     1320
          ctgtataatg agctgcagaa agacaagatg gccgaggcct acagcgagat cggaatgaag     1380
          ggcgaacgca gaagaggaaa gggccacgac ggactgtatc agggcctgag cacagccacc     1440
          aaggacacct atgatgccct gcacatgcag gccctgcctc caaga                     1485
          <![CDATA[<210> 135]]>
          <![CDATA[<211> 243]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 135]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Thr Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val 
                  35                  40                  45              
          Phe Asn Ala Glu Thr Leu Pro Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Thr Gly Ser Gly Thr His Phe Ser Leu Arg Ile Asn Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Val Ile Pro Trp 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Ser Thr Ser Gly 
                      100                 105                 110         
          Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Val Gln 
                  115                 120                 125             
          Met Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser Leu Lys 
              130                 135                 140                 
          Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ser Gly Met Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Trp Val Arg Gln Thr Pro Asp Lys Arg Leu Glu Trp Val Ala Ser Ile 
                          165                 170                 175     
          Ser Asp Gly Gly Leu Tyr Thr His Tyr Pro Asp Ser Val Lys Gly Arg 
                      180                 185                 190         
          Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Gly Lys Ser Thr Leu Tyr Leu Gln Met 
                  195                 200                 205             
          Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Arg Gln 
              210                 215                 220                 
          Gly Val Arg Pro Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 
          225                 230                 235                 240 
          Val Ser Ser 
          <![CDATA[<210> 136]]>
          <![CDATA[<211> 1473]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 136]]>
          atggctctgc ctgtgacagc tctgctgctg cctctggctc tgcttctgca tgccgccaga       60
          cctgacatcc agctgacaca gagccctagc agcctgtctg cctctgtggg cgacagagtg      120
          accatcacat gcaaggcctc tcaggacgtg ggcacaagcg tggcatggta tcagcagaag      180
          cctggcaagg cccctaagct gctgatctac tggaccagca ccagacacac aggcgtgccc      240
          agcagatttt ctggcagcgg ctctggcacc gacttcacct tcaccataag cagcctgcag      300
          cctgaggata tcgccaccta ctactgccag cagtacagcc tgtacagaag cttcggccag      360
          ggcaccaagg tggaaatcaa aggcggatct ggaagcggcg gttctggatc tggtggaagc      420
          ggatctgagg tgcagctggt ggaatctggt ggcggagttg tgcagcctgg cagatctctg      480
          agactgagct gtagcgccag cggcttcgat ttcaccacct actggatgag ctgggtccga      540
          caggcccctg gcaaaggact ggaatggatc ggcgagattc accccgacag cagcaccatc      600
          aattacgccc ctagcctgaa ggaccggttc accatctcca gagacaacgc caagaatacc      660
          ctgttcctgc agatggacag cctccggcct gaagataccg gcgtgtactt ttgcgccagc      720
          ctgtatttcg gcttcccttg gtttgcctac tggggccagg gaacacctgt gaccgttagc      780
          tctgagcaga agctgatctc cgaagaggac ctgaccacaa caccagctcc tagaccacct      840
          acaccagcac ctacaatcgc cctgcagcca ctgtctctga ggccagaggc ttgtagacct      900
          gctgctggcg gagccgtgca tacaagagga ctggatttcg cctgcgacgt ggccgccatt      960
          ctcggactgg gacttgttct gggactgctg ggacctctgg ccattctgct ggctctgtac     1020
          ctgctgagaa gggaccagag actgcctcct gacgctcaca aacctccagg cggaggcagc     1080
          ttcagaaccc ctatccaaga ggaacaggct gacgcccaca gcaccctggc caagatcaga     1140
          gtgaagttca gcagatccgc cgacgctccc gcctataagc agggacagaa tcagctgtac     1200
          aacgagctga acctggggcg cagagaagag tacgacgtgc tggacaagag aagaggcagg     1260
          gatcctgaaa tgggcggcaa gcccagacgg aagaatcctc aagagggcct gtataatgag     1320
          ctgcagaaag acaagatggc cgaggcctac agcgagatcg gaatgaaggg cgaacgcaga     1380
          agaggaaagg gccacgacgg actgtatcag ggcctgagca cagccaccaa ggacacctat     1440
          gatgccctgc acatgcaggc cctgcctcca aga                                  1473
          <![CDATA[<210> 137]]>
          <![CDATA[<211> 1488]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 137]]>
          atggctctgc ctgtgacagc tctgctgctg cctctggctc tgcttctgca tgccgccaga       60
          cctgacatcc agctgacaca gagccctagc agcctgtctg cctctgtggg cgacagagtg      120
          accatcacat gcaaggcctc tcaggacgtg ggcacaagcg tggcatggta tcagcagaag      180
          cctggcaagg cccctaagct gctgatctac tggaccagca ccagacacac aggcgtgccc      240
          agcagatttt ctggcagcgg ctctggcacc gacttcacct tcaccataag cagcctgcag      300
          cctgaggata tcgccaccta ctactgccag cagtacagcc tgtacagaag cttcggccag      360
          ggcaccaagg tggaaatcaa aggcggatct ggaagcggcg gttctggatc tggtggaagc      420
          ggatctgagg tgcagctggt ggaatctggt ggcggagttg tgcagcctgg cagatctctg      480
          agactgagct gtagcgccag cggcttcgat ttcaccacct actggatgag ctgggtccga      540
          caggcccctg gcaaaggact ggaatggatc ggcgagattc accccgacag cagcaccatc      600
          aattacgccc ctagcctgaa ggaccggttc accatctcca gagacaacgc caagaatacc      660
          ctgttcctgc agatggacag cctccggcct gaagataccg gcgtgtactt ttgcgccagc      720
          ctgtatttcg gcttcccttg gtttgcctac tggggccagg gaacacctgt gaccgttagc      780
          tctgagcaga agctgatctc cgaagaggac ctgaccacaa caccagctcc tagaccacct      840
          acaccagcac ctacaatcgc cctgcagcca ctgtctctga ggcctgaagc ttgtagacct      900
          gctgctggcg gagccgtgca tacaagagga ctggatttcg cctgcgactt ctgggtgctc      960
          gttgttgttg gcggcgtgct ggcctgttat tccctgctgg ttaccgtggc cttcatcatc     1020
          ttttgggtcc gaagcaagcg gagcagactg ctgcactccg actacatgaa catgacccct     1080
          agacggcccg gaccaaccag aaagcactac cagccttacg ctcctcctag agacttcgcc     1140
          gcctaccggt ccagagtgaa gttctccaga tccgccgatg ctcccgccta taagcaggga     1200
          cagaaccagc tgtacaacga gctgaacctg gggagaagag aagagtacga cgtgctggac     1260
          aagcggagag gcagagatcc tgagatgggc ggcaagccca gacggaagaa tcctcaagag     1320
          ggcctgtata atgagctgca aaaggacaag atggccgagg cctacagcga gatcggaatg     1380
          aagggcgagc gcagaagagg caagggacac gatggactgt accagggcct gagcaccgcc     1440
          accaaggata cctatgatgc cctgcacatg caggccctgc ctccaaga                  1488
          <![CDATA[<210> 138]]>
          <![CDATA[<211> 30]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<221> SITE ]]>
          <![CDATA[<222> (1)..(30)]]>
          <![CDATA[<223> 此序列可涵蓋1至6個"Gly Gly Gly Gly Ser"重複單元]]>
          <![CDATA[<400> 138]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 
                      20                  25                  30  
          <![CDATA[<210> 139]]>
          <![CDATA[<211> 5]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 參見所提交說明書中有關取代和優選實施例之詳細描述]]>
          <![CDATA[<400> 139]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser 
          1               5   
          <![CDATA[<210> 140]]>
          <![CDATA[<211> 4]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列的描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 參見所提交說明書中有關取代和優選實施例之詳細描述]]>
          <![CDATA[<400> 140]]>
          Gly Gly Gly Ser 
          1
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Claims (20)

  1. 一種經分離之細胞，其包含：  (a) 抑制嵌合受體，其包含結合至抗原之細胞外抗原結合域，其中該抗原係選自由以下組成之群：VSIG2、CPM、ITM2C、SLC26A2、SLC4A4、GPA33、PLA2G2A、ABCA8、ATP1A2、CHP2及SLC26A3；及 (b) 嵌合受體，其包含一或多個細胞外抗原結合域，其中該一或多個細胞外抗原結合域結合一或多個額外抗原，該一或多個額外抗原係選自由以下組成之群：CEA、CEACAM1、CEACAM5及CEACAM6。
  2. 如請求項1之經分離之細胞，其中：  (a) 該抑制嵌合受體之該抗原結合域包含一或多個單鏈可變片段(scFv)，視情況其中該一或多個scFv各自包含重鏈可變域(VH)及輕鏈可變域(VL)，視情況其中該VH及該VL係由肽連接體隔開，視情況該肽連接體包含SEQ ID NO: 39或SEQ ID NO: 77之胺基酸序列，及/或視情況其中該一或多個scFv各自包含結構VH-L-VL或VL-L-VH，其中VH為該重鏈可變域，L為該肽連接體，且VL為該輕鏈可變域； (b) 該抑制嵌合受體包含跨膜結構域，且該跨膜結構域係選自由以下組成之群：CD8跨膜結構域、CD28跨膜結構域、CD25跨膜結構域、CD7跨膜結構域、CD3ζ鏈跨膜結構域、CD4跨膜結構域、4-1BB跨膜結構域、OX40跨膜結構域、ICOS跨膜結構域、CTLA-4跨膜結構域、LAX跨膜結構域、LAT跨膜結構域、PD-1跨膜結構域、LAG-3跨膜結構域、TIM3跨膜結構域、KIR3DS1跨膜結構域、KIR3DL1跨膜結構域、NKG2D跨膜結構域、NKG2A跨膜結構域、TIGIT跨膜結構域、2B4跨膜結構域及BTLA跨膜結構域； (c) 該抑制嵌合受體包含間隔區，該間隔區介於該抗原結合域與該跨膜結構域之間，視情況其中該間隔區具有選自由SEQ ID NO: 49-58組成之群的胺基酸序列；及/或 (d) 該抑制嵌合受體包含一或多個細胞內抑制域，該一或多個細胞內抑制域係選自由以下組成之群：PD-1、CTLA4、TIGIT、LAIR1、GRB-2、Dok-1、Dok-2、SLAP、LAG3、HAVR、BTLA、LIR1、NKG2A、KIR3DL1、GITR、PD-L1、CSK、SHP-1、PTEN、CD45、CD148、PTP-MEG1、PTP-PEST、c-CBL、CBL-b、PTPN22、LAR、PTPH1、SHIP-1、RasGAP、CD94及CD161。
  3. 如請求項1或2之經分離之細胞，其中該嵌合受體為CAR，  視情況其中該CAR包含一或多個細胞內信號傳導域，且該一或多個細胞內信號傳導域係選自由以下組成之群：CD3ζ鏈細胞內信號傳導域、CD3ε鏈細胞內信號傳導域、CD97細胞內信號傳導域、CD11a-CD18細胞內信號傳導域、CD2細胞內信號傳導域、ICOS細胞內信號傳導域、CD27細胞內信號傳導域、CD154細胞內信號傳導域、CD8細胞內信號傳導域、OX40細胞內信號傳導域、4-1BB細胞內信號傳導域、CD28細胞內信號傳導域、ZAP40細胞內信號傳導域、CD30細胞內信號傳導域、GITR細胞內信號傳導域、HVEM細胞內信號傳導域、DAP10細胞內信號傳導域、DAP12細胞內信號傳導域、MyD88細胞內信號傳導域、2B4細胞內信號傳導域、NKp46細胞內信號傳導域、NKp30細胞內信號傳導域、NKp44細胞內信號傳導域、NKG2D細胞內信號傳導域、CD226細胞內信號傳導域及CD160細胞內信號傳導域， 視情況其中該CAR包含跨膜結構域，且該跨膜結構域係選自由以下組成之群：CD8跨膜結構域、CD28跨膜結構域、CD25跨膜結構域、CD7跨膜結構域、CD3ζ鏈跨膜結構域、CD4跨膜結構域、4-1BB跨膜結構域、OX40跨膜結構域、ICOS跨膜結構域、CTLA-4跨膜結構域、LAX跨膜結構域、LAT跨膜結構域、PD-1跨膜結構域、LAG-3跨膜結構域、TIM3跨膜結構域、KIR3DS1跨膜結構域、KIR3DL1跨膜結構域、NKG2D跨膜結構域、NKG2A跨膜結構域、TIGIT跨膜結構域、2B4跨膜結構域及BTLA跨膜結構域， 視情況其中該CAR包含間隔區，該間隔區介於該抗原結合域與該跨膜結構域之間，且該間隔區具有選自由SEQ ID NO: 49-58組成之群的胺基酸序列，且 視情況其中該抑制嵌合受體及/或該嵌合受體之該抗原結合域包含一或多個單鏈可變片段(scFv)，視情況其中該一或多個scFv各自包含重鏈可變域(VH)及輕鏈可變域(VL)，視情況其中該VH及該VL係由肽連接體隔開，視情況其中該肽連接體包含SEQ ID NO: 39或SEQ ID NO: 77之胺基酸序列， 視情況其中該一或多個scFv各自包含結構VH-L-VL或VL-L-VH，其中VH為該重鏈可變域，L為該肽連接體，且VL為該輕鏈可變域。
  4. 如請求項1至3中任一項之經分離之細胞，其中：  (a) 該一或多個額外抗原為CECAM1，視情況其中結合至CEACAM1之該抗原結合域包括包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的重鏈可變域(VH)及包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的輕鏈可變域(VL)； (b) 該一或多個額外抗原為CECAM5，視情況其中結合至CEACAM5之該抗原結合域包括選自由以下組成之群的重鏈可變域(VH)及輕鏈可變域(VL)： (i) 包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的VH及包含SEQ. ID NO: 4之胺基酸序列的VL； (ii) 包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列的VH及包含SEQ. ID NO: 10之胺基酸序列的VL； (iii) 包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列的VH及包含SEQ. ID NO: 12之胺基酸序列的VL； (iv) 包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列的VH及包含SEQ. ID NO: 14之胺基酸序列的VL； (v) 包含SEQ ID NO: 78之胺基酸序列的VH及包含SEQ. ID NO: 79之胺基酸序列的VL；以及 (vi) 包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列的VH及包含SEQ. ID NO: 16之胺基酸序列的VL；或 結合至CEACAM5之該抗原結合域包括選自由以下組成之群的重鏈(HC)及輕鏈(LC)： (i) 包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列的HC及包含SEQ. ID NO: 6之胺基酸序列的LC；以及 (ii) 包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列的HC及包含SEQ. ID NO: 8之胺基酸序列的LC；或 (c) 該一或多個額外抗原為CECAM6，視情況其中結合至CEACAM6之該抗原結合域包括包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列的重鏈可變域(VH)及包含SEQ ID NO 18之胺基酸序列的輕鏈可變域(VL)。
  5. 如請求項1至4中任一項之經分離之細胞，其中該細胞為免疫反應細胞，  視情況其中該抑制嵌合受體結合至該抗原能夠抑制該免疫反應細胞，及/或其中該嵌合受體結合至該一或多個額外抗原能夠活化該免疫反應細胞。
  6. 如請求項1至5中任一項之經分離之細胞，其中：  (a) 該嵌合受體以低結合親和力結合至該一或多個額外抗原； (b) 該嵌合受體以比該抑制嵌合受體結合至該抗原之結合親和力低之結合親和力結合至該一或多個額外抗原；及/或 (c) 該抑制嵌合受體以低結合親合力結合至該抗原。
  7. 如請求項1至6中任一項之經分離之細胞，其中該嵌合受體係重組表現，視情況其中該嵌合受體係由載體或來自該細胞之基因體之所選基因座表現。
  8. 如請求項1至7中任一項之經分離之細胞，其中該細胞係選自由以下組成之群：T細胞、天然殺手(NK)細胞、細胞毒性T淋巴球(CTL)、調控T細胞、天然殺手T (NKT)細胞、骨髓細胞、巨噬細胞、人類胚胎幹細胞(ESC)、ESC衍生細胞、多潛能幹細胞及誘導型多潛能幹細胞(iPSC)以及iPSC衍生細胞，  視情況其中該細胞為自體的或該細胞為同種異體的。
  9. 一種經分離之核酸，其編碼如請求項1至8中任一項之抑制嵌合受體。
  10. 一種載體，其包含如請求項9之核酸。
  11. 一種經基因修飾之細胞，其包含如請求項9之核酸或如請求項10之載體。
  12. 一種醫藥組合物，其包含有效量之如請求項1至8及11中任一項之經分離之細胞、如請求項9之經分離之核酸或如請求項10之載體及醫藥學上可接受之載劑、醫藥學上可接受之賦形劑或其組合。
  13. 一種治療有需要之個體的方法，該方法包括向該個體投與有效量之如請求項1至8及11中任一項之經分離之細胞、如請求項9之經分離之核酸、如請求項10之載體或如請求項12之醫藥組合物。
  14. 一種在個體中刺激針對腫瘤細胞之細胞介導之免疫反應的方法，該方法包括向患有腫瘤之個體投與有效量之如請求項1至8及11中任一項之經分離之細胞、如請求項9之經分離之核酸、如請求項10之載體或如請求項12之醫藥組合物。
  15. 一種在個體中提供抗腫瘤免疫力之方法，該方法包括向有需要之個體投與有效量之如請求項1至8及11中任一項之經分離之細胞、如請求項9之經分離之核酸、如請求項10之載體或如請求項12之醫藥組合物。
  16. 一種在個體中減少腫瘤負荷之方法，該方法包括向該個體投與有效量之如請求項1至8及11中任一項之經分離之細胞、如請求項9之經分離之核酸、如請求項10之載體或如請求項12之醫藥組合物，視情況其中： (a) 該方法減少腫瘤細胞數目， (b) 該方法減小腫瘤大小， (c) 該方法減小腫瘤體積，及/或 (d) 該方法消除該個體之腫瘤。
  17. 一種治療患有腫瘤之個體的方法，該方法包括投與有效量之如請求項1至8及11中任一項之經分離之細胞、如請求項9之經分離之核酸、如請求項10之載體或如請求項12之醫藥組合物。
  18. 一種在個體中治療或預防癌症之方法，其中該癌症係選自由以下組成之群：結腸直腸癌、胰臟癌、肺腺癌及胃癌，該方法包括向該個體投與有效量之如請求項1至8及11中任一項之經分離之細胞、如請求項9之經分離之核酸、如請求項10之載體或如請求項12之醫藥組合物。
  19. 如請求項17或18之方法，其中：  (a) 該方法增加該個體之無進展存活時間；及或 (b) 該方法增加該個體之存活時間。
  20. 一種用於治療及/或預防結腸直腸癌、胰臟癌、肺腺癌及/或胃癌之套組，其包含如請求項1至8及11中任一項之經分離之細胞、如請求項9之經分離之核酸、如請求項10之載體或如請求項12之醫藥組合物，  視情況其中該套組進一步包括關於使用該經分離之細胞或該醫藥組合物在個體中治療及/或預防結腸直腸癌、胰臟癌、肺腺癌及/或胃癌之書面說明書，或該套組進一步包括關於使用該核酸或該載體產生一或多種用於在個體中治療及/或預防結腸直腸癌、胰臟癌、肺腺癌及/或胃癌之抗原特異性細胞的說明書。
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