TW202227631A - 冷凍保存經工程化之調節t細胞(tregs)之方法 - Google Patents
冷凍保存經工程化之調節t細胞(tregs)之方法 Download PDFInfo
- Publication number
- TW202227631A TW202227631A TW110141609A TW110141609A TW202227631A TW 202227631 A TW202227631 A TW 202227631A TW 110141609 A TW110141609 A TW 110141609A TW 110141609 A TW110141609 A TW 110141609A TW 202227631 A TW202227631 A TW 202227631A
- Authority
- TW
- Taiwan
- Prior art keywords
- treg
- population
- tregs
- cells
- foxp3
- Prior art date
Links
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 387
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 153
- 101000861452 Homo sapiens Forkhead box protein P3 Proteins 0.000 claims abstract description 211
- 102100027581 Forkhead box protein P3 Human genes 0.000 claims abstract description 209
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims abstract description 150
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims abstract description 150
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims abstract description 149
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 claims abstract description 114
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 113
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims abstract description 108
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 108
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 106
- 101001018097 Homo sapiens L-selectin Proteins 0.000 claims abstract description 84
- 102100033467 L-selectin Human genes 0.000 claims abstract description 84
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 39
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 317
- 108010019670 Chimeric Antigen Receptors Proteins 0.000 claims description 64
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 47
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 claims description 42
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 claims description 42
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 42
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 42
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 41
- 101001057504 Homo sapiens Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Proteins 0.000 claims description 36
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 claims description 36
- 102100027268 Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Human genes 0.000 claims description 36
- 238000010257 thawing Methods 0.000 claims description 36
- 238000010361 transduction Methods 0.000 claims description 34
- 230000026683 transduction Effects 0.000 claims description 34
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims description 32
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims description 32
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 27
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims description 18
- 239000012595 freezing medium Substances 0.000 claims description 15
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 claims description 15
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 12
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 12
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 12
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 11
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 9
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 9
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 9
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 claims description 9
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 claims description 8
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 8
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 8
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 claims description 8
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 8
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims description 7
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 claims description 7
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 7
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 claims description 7
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 7
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 claims description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 206010052779 Transplant rejections Diseases 0.000 claims description 6
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 claims description 6
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims description 5
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 claims description 5
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 claims description 4
- 208000009329 Graft vs Host Disease Diseases 0.000 claims description 3
- 208000024908 graft versus host disease Diseases 0.000 claims description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 abstract description 10
- 238000004321 preservation Methods 0.000 abstract description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 63
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 63
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 63
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 57
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 51
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 51
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 47
- 210000004970 cd4 cell Anatomy 0.000 description 42
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 36
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 36
- 230000006870 function Effects 0.000 description 34
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 29
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 27
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 26
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 26
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 25
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 22
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 206010010144 Completed suicide Diseases 0.000 description 20
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 20
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 19
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 18
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 18
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 description 17
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 16
- 206010002026 amyotrophic lateral sclerosis Diseases 0.000 description 15
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 15
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 15
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 14
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 14
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 14
- NCQMBSJGJMYKCK-ZLUOBGJFSA-N Ala-Ser-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O NCQMBSJGJMYKCK-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 13
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 13
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 13
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 13
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 12
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 12
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 12
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 12
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 12
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 12
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 12
- 230000008569 process Effects 0.000 description 12
- IRMLZWSRWSGTOP-CIUDSAMLSA-N Leu-Ser-Ala Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O IRMLZWSRWSGTOP-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 11
- 108010013835 arginine glutamate Proteins 0.000 description 11
- 108010085325 histidylproline Proteins 0.000 description 11
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 11
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 11
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 10
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 10
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 10
- ZIFYDQAFEMIZII-GUBZILKMSA-N Ser-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O ZIFYDQAFEMIZII-GUBZILKMSA-N 0.000 description 10
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 10
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 10
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 10
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 9
- XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N N-alpha-L-glutamyl-L-phenylalanine Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N glycyl-DL-alpha-alanine Natural products OC(=O)C(C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000011194 good manufacturing practice Methods 0.000 description 9
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 9
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 9
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 9
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 9
- 210000001266 CD8-positive T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 8
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N N-glycyl-L-proline Natural products NCC(=O)N1CCCC1C(O)=O KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 102100024952 Protein CBFA2T1 Human genes 0.000 description 8
- 239000002458 cell surface marker Substances 0.000 description 8
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 8
- 108010064235 lysylglycine Proteins 0.000 description 8
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 8
- 108010029020 prolylglycine Proteins 0.000 description 8
- GMUOCGCDOYYWPD-FXQIFTODSA-N Asn-Pro-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O GMUOCGCDOYYWPD-FXQIFTODSA-N 0.000 description 7
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 7
- KWLWZYMNUZJKMZ-IHRRRGAJSA-N Leu-Pro-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O KWLWZYMNUZJKMZ-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 7
- HFNPOYOKIPGAEI-SRVKXCTJSA-N Pro-Leu-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 HFNPOYOKIPGAEI-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 7
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 7
- MJFSRZZJQWZHFQ-SRVKXCTJSA-N Val-Met-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)O)N MJFSRZZJQWZHFQ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 7
- 108010070944 alanylhistidine Proteins 0.000 description 7
- 108010060035 arginylproline Proteins 0.000 description 7
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 description 7
- 230000000779 depleting effect Effects 0.000 description 7
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 7
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 7
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 7
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 7
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 7
- 108010026333 seryl-proline Proteins 0.000 description 7
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 7
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 7
- YBZMTKUDWXZLIX-UWVGGRQHSA-N Arg-Leu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O YBZMTKUDWXZLIX-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 6
- ULBHWNVWSCJLCO-NHCYSSNCSA-N Arg-Val-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ULBHWNVWSCJLCO-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 6
- UWFOMGUWGPRVBW-GUBZILKMSA-N Asn-Pro-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H](CC(=O)N)N UWFOMGUWGPRVBW-GUBZILKMSA-N 0.000 description 6
- WSXDIZFNQYTUJB-SRVKXCTJSA-N Asp-His-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O WSXDIZFNQYTUJB-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 6
- YIDFBWRHIYOYAA-LKXGYXEUSA-N Asp-Ser-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O YIDFBWRHIYOYAA-LKXGYXEUSA-N 0.000 description 6
- BVFQOPGFOQVZTE-ACZMJKKPSA-N Cys-Gln-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O BVFQOPGFOQVZTE-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 6
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- UVAOVENCIONMJP-GUBZILKMSA-N Gln-Cys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O UVAOVENCIONMJP-GUBZILKMSA-N 0.000 description 6
- LGIKBBLQVSWUGK-DCAQKATOSA-N Gln-Leu-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O LGIKBBLQVSWUGK-DCAQKATOSA-N 0.000 description 6
- QZQYITIKPAUDGN-GVXVVHGQSA-N Gln-Val-His Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N QZQYITIKPAUDGN-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 6
- PAQUJCSYVIBPLC-AVGNSLFASA-N Glu-Asp-Phe Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 PAQUJCSYVIBPLC-AVGNSLFASA-N 0.000 description 6
- GMAGZGCAYLQBKF-NHCYSSNCSA-N Glu-Met-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O GMAGZGCAYLQBKF-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 6
- QJVZSVUYZFYLFQ-CIUDSAMLSA-N Glu-Pro-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O QJVZSVUYZFYLFQ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 6
- JXYMPBCYRKWJEE-BQBZGAKWSA-N Gly-Arg-Ala Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O JXYMPBCYRKWJEE-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 6
- UUYBFNKHOCJCHT-VHSXEESVSA-N Gly-Leu-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)CN UUYBFNKHOCJCHT-VHSXEESVSA-N 0.000 description 6
- UROVZOUMHNXPLZ-AVGNSLFASA-N His-Leu-Gln Chemical compound NC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 UROVZOUMHNXPLZ-AVGNSLFASA-N 0.000 description 6
- 108700039609 IRW peptide Proteins 0.000 description 6
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 6
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 6
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 6
- WGNOPSQMIQERPK-UHFFFAOYSA-N Leu-Asn-Pro Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(CC(=O)N)C(=O)N1CCCC1C(=O)O WGNOPSQMIQERPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- VPKIQULSKFVCSM-SRVKXCTJSA-N Leu-Gln-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O VPKIQULSKFVCSM-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 6
- IFMPDNRWZZEZSL-SRVKXCTJSA-N Leu-Leu-Cys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O IFMPDNRWZZEZSL-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 6
- REPBGZHJKYWFMJ-KKUMJFAQSA-N Leu-Lys-His Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N REPBGZHJKYWFMJ-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 6
- PWPBLZXWFXJFHE-RHYQMDGZSA-N Leu-Pro-Thr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O PWPBLZXWFXJFHE-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 6
- PPGBXYKMUMHFBF-KATARQTJSA-N Leu-Ser-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O PPGBXYKMUMHFBF-KATARQTJSA-N 0.000 description 6
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- CFRRIZLGFGJEDB-SRVKXCTJSA-N Met-His-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O CFRRIZLGFGJEDB-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 6
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 description 6
- 101100342977 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) leu-1 gene Proteins 0.000 description 6
- XQHGISDMVBTGAL-ULQDDVLXSA-N Pro-His-Phe Chemical compound C([C@@H](C(=O)[O-])NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H]1[NH2+]CCC1)C1=CC=CC=C1 XQHGISDMVBTGAL-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 6
- MCWHYUWXVNRXFV-RWMBFGLXSA-N Pro-Leu-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@@H]2CCCN2 MCWHYUWXVNRXFV-RWMBFGLXSA-N 0.000 description 6
- FDMKYQQYJKYCLV-GUBZILKMSA-N Pro-Pro-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H]1NCCC1 FDMKYQQYJKYCLV-GUBZILKMSA-N 0.000 description 6
- KHRLUIPIMIQFGT-AVGNSLFASA-N Pro-Val-Leu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O KHRLUIPIMIQFGT-AVGNSLFASA-N 0.000 description 6
- BRKHVZNDAOMAHX-BIIVOSGPSA-N Ser-Ala-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N BRKHVZNDAOMAHX-BIIVOSGPSA-N 0.000 description 6
- ADJDNJCSPNFFPI-FXQIFTODSA-N Ser-Pro-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)CO ADJDNJCSPNFFPI-FXQIFTODSA-N 0.000 description 6
- BMKNXTJLHFIAAH-CIUDSAMLSA-N Ser-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O BMKNXTJLHFIAAH-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 6
- OLKICIBQRVSQMA-SRVKXCTJSA-N Ser-Ser-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O OLKICIBQRVSQMA-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 6
- JMBRNXUOLJFURW-BEAPCOKYSA-N Thr-Phe-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N2CCC[C@@H]2C(=O)O)N)O JMBRNXUOLJFURW-BEAPCOKYSA-N 0.000 description 6
- ISERLACIZUGCDX-ZKWXMUAHSA-N Val-Asp-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N ISERLACIZUGCDX-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 6
- GQMNEJMFMCJJTD-NHCYSSNCSA-N Val-Pro-Gln Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O GQMNEJMFMCJJTD-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 6
- 108010024078 alanyl-glycyl-serine Proteins 0.000 description 6
- 108010044940 alanylglutamine Proteins 0.000 description 6
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 6
- 108010043240 arginyl-leucyl-glycine Proteins 0.000 description 6
- 108010029539 arginyl-prolyl-proline Proteins 0.000 description 6
- 108010077245 asparaginyl-proline Proteins 0.000 description 6
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 6
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 6
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 6
- 108010049041 glutamylalanine Proteins 0.000 description 6
- JYPCXBJRLBHWME-UHFFFAOYSA-N glycyl-L-prolyl-L-arginine Natural products NCC(=O)N1CCCC1C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(O)=O JYPCXBJRLBHWME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108010025801 glycyl-prolyl-arginine Proteins 0.000 description 6
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 6
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 6
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 6
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 6
- 108010034529 leucyl-lysine Proteins 0.000 description 6
- 108010003700 lysyl aspartic acid Proteins 0.000 description 6
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 6
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 6
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 6
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 6
- 108010070643 prolylglutamic acid Proteins 0.000 description 6
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 6
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 6
- 108010020532 tyrosyl-proline Proteins 0.000 description 6
- UCIYCBSJBQGDGM-LPEHRKFASA-N Ala-Arg-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N UCIYCBSJBQGDGM-LPEHRKFASA-N 0.000 description 5
- JAMAWBXXKFGFGX-KZVJFYERSA-N Ala-Arg-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O JAMAWBXXKFGFGX-KZVJFYERSA-N 0.000 description 5
- NBTGEURICRTMGL-WHFBIAKZSA-N Ala-Gly-Ser Chemical compound C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O NBTGEURICRTMGL-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 5
- TZDNWXDLYFIFPT-BJDJZHNGSA-N Ala-Ile-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O TZDNWXDLYFIFPT-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 5
- JAQNUEWEJWBVAY-WBAXXEDZSA-N Ala-Phe-Phe Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@@H](N)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 JAQNUEWEJWBVAY-WBAXXEDZSA-N 0.000 description 5
- FQNILRVJOJBFFC-FXQIFTODSA-N Ala-Pro-Asp Chemical compound C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N FQNILRVJOJBFFC-FXQIFTODSA-N 0.000 description 5
- IORKCNUBHNIMKY-CIUDSAMLSA-N Ala-Pro-Glu Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O IORKCNUBHNIMKY-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 5
- BTRULDJUUVGRNE-DCAQKATOSA-N Ala-Pro-Lys Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O BTRULDJUUVGRNE-DCAQKATOSA-N 0.000 description 5
- SSQHYGLFYWZWDV-UVBJJODRSA-N Ala-Val-Trp Chemical compound CC(C)[C@H](NC(=O)[C@H](C)N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(O)=O SSQHYGLFYWZWDV-UVBJJODRSA-N 0.000 description 5
- NUBPTCMEOCKWDO-DCAQKATOSA-N Arg-Asn-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N NUBPTCMEOCKWDO-DCAQKATOSA-N 0.000 description 5
- ZATRYQNPUHGXCU-DTWKUNHWSA-N Arg-Gly-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)CNC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N)C(=O)O ZATRYQNPUHGXCU-DTWKUNHWSA-N 0.000 description 5
- DJIMLSXHXKWADV-CIUDSAMLSA-N Asn-Leu-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DJIMLSXHXKWADV-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 5
- MDDXKBHIMYYJLW-FXQIFTODSA-N Asn-Met-Asp Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N MDDXKBHIMYYJLW-FXQIFTODSA-N 0.000 description 5
- CBWCQCANJSGUOH-ZKWXMUAHSA-N Asn-Val-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O CBWCQCANJSGUOH-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 5
- KHBLRHKVXICFMY-GUBZILKMSA-N Asp-Glu-Lys Chemical compound N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O KHBLRHKVXICFMY-GUBZILKMSA-N 0.000 description 5
- LBOVBQONZJRWPV-YUMQZZPRSA-N Asp-Lys-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(O)=O LBOVBQONZJRWPV-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 5
- YYLBXQJGWOQZOU-IHRRRGAJSA-N Cys-Phe-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=CC=C1)NC(=O)[C@H](CS)N YYLBXQJGWOQZOU-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 5
- BTSPOOHJBYJRKO-CIUDSAMLSA-N Gln-Asp-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O BTSPOOHJBYJRKO-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 5
- KVXVVDFOZNYYKZ-DCAQKATOSA-N Gln-Gln-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O KVXVVDFOZNYYKZ-DCAQKATOSA-N 0.000 description 5
- KUTPGXNAAOQSPD-LPEHRKFASA-N Glu-Glu-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)C(=O)O KUTPGXNAAOQSPD-LPEHRKFASA-N 0.000 description 5
- KRRFFAHEAOCBCQ-SIUGBPQLSA-N Glu-Ile-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O KRRFFAHEAOCBCQ-SIUGBPQLSA-N 0.000 description 5
- IRXNJYPKBVERCW-DCAQKATOSA-N Glu-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O IRXNJYPKBVERCW-DCAQKATOSA-N 0.000 description 5
- FKJQNJCQTKUBCD-XPUUQOCRSA-N Gly-Ala-His Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)O FKJQNJCQTKUBCD-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 5
- XXGQRGQPGFYECI-WDSKDSINSA-N Gly-Cys-Glu Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O XXGQRGQPGFYECI-WDSKDSINSA-N 0.000 description 5
- UQJNXZSSGQIPIQ-FBCQKBJTSA-N Gly-Gly-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)CN UQJNXZSSGQIPIQ-FBCQKBJTSA-N 0.000 description 5
- WDEHMRNSGHVNOH-VHSXEESVSA-N Gly-Lys-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)CN)C(=O)O WDEHMRNSGHVNOH-VHSXEESVSA-N 0.000 description 5
- HAOUOFNNJJLVNS-BQBZGAKWSA-N Gly-Pro-Ser Chemical compound NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O HAOUOFNNJJLVNS-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 5
- DKJWUIYLMLUBDX-XPUUQOCRSA-N Gly-Val-Cys Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O DKJWUIYLMLUBDX-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 5
- KECFCPNPPYCGBL-PMVMPFDFSA-N His-Trp-Phe Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CNC3=CC=CC=C32)NC(=O)[C@H](CC4=CN=CN4)N KECFCPNPPYCGBL-PMVMPFDFSA-N 0.000 description 5
- ZXJFURYTPZMUNY-VKOGCVSHSA-N Ile-Arg-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)CC)C(O)=O)=CNC2=C1 ZXJFURYTPZMUNY-VKOGCVSHSA-N 0.000 description 5
- YJRSIJZUIUANHO-NAKRPEOUSA-N Ile-Val-Ala Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)O)N YJRSIJZUIUANHO-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 5
- 108010092694 L-Selectin Proteins 0.000 description 5
- 102000016551 L-selectin Human genes 0.000 description 5
- CZCSUZMIRKFFFA-CIUDSAMLSA-N Leu-Ala-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O CZCSUZMIRKFFFA-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 5
- WNGVUZWBXZKQES-YUMQZZPRSA-N Leu-Ala-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(O)=O WNGVUZWBXZKQES-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 5
- KSZCCRIGNVSHFH-UWVGGRQHSA-N Leu-Arg-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O KSZCCRIGNVSHFH-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 5
- OXRLYTYUXAQTHP-YUMQZZPRSA-N Leu-Gly-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O OXRLYTYUXAQTHP-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 5
- KVOFSTUWVSQMDK-KKUMJFAQSA-N Leu-His-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)CC1=CN=CN1 KVOFSTUWVSQMDK-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 5
- WTZUSCUIVPVCRH-SRVKXCTJSA-N Lys-Gln-Arg Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N WTZUSCUIVPVCRH-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 5
- IMAKMJCBYCSMHM-AVGNSLFASA-N Lys-Glu-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN IMAKMJCBYCSMHM-AVGNSLFASA-N 0.000 description 5
- AWMMBHDKERMOID-YTQUADARSA-N Lys-Trp-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC2=CNC3=CC=CC=C32)NC(=O)[C@H](CCCCN)N)C(=O)O AWMMBHDKERMOID-YTQUADARSA-N 0.000 description 5
- TXTZMVNJIRZABH-ULQDDVLXSA-N Lys-Val-Phe Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 TXTZMVNJIRZABH-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 5
- MPCKIRSXNKACRF-GUBZILKMSA-N Met-Pro-Asn Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O MPCKIRSXNKACRF-GUBZILKMSA-N 0.000 description 5
- WUGMRIBZSVSJNP-UHFFFAOYSA-N N-L-alanyl-L-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(N)C)C(O)=O)=CNC2=C1 WUGMRIBZSVSJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108010079364 N-glycylalanine Proteins 0.000 description 5
- LLGTYVHITPVGKR-RYUDHWBXSA-N Phe-Gln-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O LLGTYVHITPVGKR-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 5
- RVRRHFPCEOVRKQ-KKUMJFAQSA-N Phe-His-Asn Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N RVRRHFPCEOVRKQ-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 5
- METZZBCMDXHFMK-BZSNNMDCSA-N Phe-Leu-His Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CC=CC=C2)N METZZBCMDXHFMK-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 5
- QARPMYDMYVLFMW-KKUMJFAQSA-N Phe-Pro-Glu Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 QARPMYDMYVLFMW-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 5
- UNBFGVQVQGXXCK-KKUMJFAQSA-N Phe-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O UNBFGVQVQGXXCK-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 5
- VGTJSEYTVMAASM-RPTUDFQQSA-N Phe-Thr-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O VGTJSEYTVMAASM-RPTUDFQQSA-N 0.000 description 5
- HFZNNDWPHBRNPV-KZVJFYERSA-N Pro-Ala-Thr Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O HFZNNDWPHBRNPV-KZVJFYERSA-N 0.000 description 5
- IHCXPSYCHXFXKT-DCAQKATOSA-N Pro-Arg-Glu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O IHCXPSYCHXFXKT-DCAQKATOSA-N 0.000 description 5
- QSKCKTUQPICLSO-AVGNSLFASA-N Pro-Arg-Lys Chemical compound C1C[C@H](NC1)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O QSKCKTUQPICLSO-AVGNSLFASA-N 0.000 description 5
- ICTZKEXYDDZZFP-SRVKXCTJSA-N Pro-Arg-Pro Chemical compound N([C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(O)=O)C(=O)[C@@H]1CCCN1 ICTZKEXYDDZZFP-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 5
- CLNJSLSHKJECME-BQBZGAKWSA-N Pro-Gly-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)CNC(=O)[C@@H]1CCCN1 CLNJSLSHKJECME-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 5
- FEPSEIDIPBMIOS-QXEWZRGKSA-N Pro-Gly-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H]1CCCN1 FEPSEIDIPBMIOS-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 5
- BGWKULMLUIUPKY-BQBZGAKWSA-N Pro-Ser-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 BGWKULMLUIUPKY-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 5
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 5
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 5
- BGOWRLSWJCVYAQ-CIUDSAMLSA-N Ser-Asp-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O BGOWRLSWJCVYAQ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 5
- SNNSYBWPPVAXQW-ZLUOBGJFSA-N Ser-Cys-Cys Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N)O SNNSYBWPPVAXQW-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 5
- FUMGHWDRRFCKEP-CIUDSAMLSA-N Ser-Leu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O FUMGHWDRRFCKEP-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 5
- AZWNCEBQZXELEZ-FXQIFTODSA-N Ser-Pro-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O AZWNCEBQZXELEZ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 5
- JKGGPMOUIAAJAA-YEPSODPASA-N Thr-Gly-Val Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O JKGGPMOUIAAJAA-YEPSODPASA-N 0.000 description 5
- IMDMLDSVUSMAEJ-HJGDQZAQSA-N Thr-Leu-Asn Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O IMDMLDSVUSMAEJ-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 5
- MROIJTGJGIDEEJ-RCWTZXSCSA-N Thr-Pro-Pro Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(O)=O)CCC1 MROIJTGJGIDEEJ-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 5
- NDZYTIMDOZMECO-SHGPDSBTSA-N Thr-Thr-Ala Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O NDZYTIMDOZMECO-SHGPDSBTSA-N 0.000 description 5
- FYBFTPLPAXZBOY-KKHAAJSZSA-N Thr-Val-Asp Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O FYBFTPLPAXZBOY-KKHAAJSZSA-N 0.000 description 5
- HOJPPPKZWFRTHJ-PJODQICGSA-N Trp-Arg-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)N HOJPPPKZWFRTHJ-PJODQICGSA-N 0.000 description 5
- YPBYQWFZAAQMGW-XIRDDKMYSA-N Trp-Lys-Asn Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N YPBYQWFZAAQMGW-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 5
- UJGDFQRPYGJBEH-AAEUAGOBSA-N Trp-Ser-Gly Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)O)N UJGDFQRPYGJBEH-AAEUAGOBSA-N 0.000 description 5
- PSALWJCUIAQKFW-ACRUOGEOSA-N Tyr-Phe-Lys Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)N PSALWJCUIAQKFW-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 5
- LYERIXUFCYVFFX-GVXVVHGQSA-N Val-Leu-Glu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N LYERIXUFCYVFFX-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 5
- XBJKAZATRJBDCU-GUBZILKMSA-N Val-Pro-Ala Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O XBJKAZATRJBDCU-GUBZILKMSA-N 0.000 description 5
- AJNUKMZFHXUBMK-GUBZILKMSA-N Val-Ser-Arg Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)N AJNUKMZFHXUBMK-GUBZILKMSA-N 0.000 description 5
- 108010050025 alpha-glutamyltryptophan Proteins 0.000 description 5
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 5
- 108010091092 arginyl-glycyl-proline Proteins 0.000 description 5
- 108010038633 aspartylglutamate Proteins 0.000 description 5
- 108010068265 aspartyltyrosine Proteins 0.000 description 5
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 5
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 5
- 108010040030 histidinoalanine Proteins 0.000 description 5
- 108010038320 lysylphenylalanine Proteins 0.000 description 5
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 5
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 description 5
- 210000002501 natural regulatory T cell Anatomy 0.000 description 5
- -1 pdcd1) Proteins 0.000 description 5
- 210000002706 plastid Anatomy 0.000 description 5
- 108010087846 prolyl-prolyl-glycine Proteins 0.000 description 5
- 108010031719 prolyl-serine Proteins 0.000 description 5
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 5
- 229960004641 rituximab Drugs 0.000 description 5
- 210000005212 secondary lymphoid organ Anatomy 0.000 description 5
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 5
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 5
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 5
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 5
- IOFVWPYSRSCWHI-JXUBOQSCSA-N Ala-Thr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](C)N IOFVWPYSRSCWHI-JXUBOQSCSA-N 0.000 description 4
- JVMKBJNSRZWDBO-FXQIFTODSA-N Arg-Cys-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O JVMKBJNSRZWDBO-FXQIFTODSA-N 0.000 description 4
- DTBPLQNKYCYUOM-JYJNAYRXSA-N Arg-Met-Phe Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 DTBPLQNKYCYUOM-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 4
- YCYXHLZRUSJITQ-SRVKXCTJSA-N Arg-Pro-Pro Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(O)=O)CCC1 YCYXHLZRUSJITQ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 4
- IDUUACUJKUXKKD-VEVYYDQMSA-N Asn-Pro-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O IDUUACUJKUXKKD-VEVYYDQMSA-N 0.000 description 4
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 4
- 102100035360 Cerebellar degeneration-related antigen 1 Human genes 0.000 description 4
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 4
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 4
- UWZLBXOBVKRUFE-HGNGGELXSA-N Gln-Ala-His Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N UWZLBXOBVKRUFE-HGNGGELXSA-N 0.000 description 4
- OCJRHJZKGGSPRW-IUCAKERBSA-N Glu-Lys-Gly Chemical compound NCCCC[C@@H](C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O OCJRHJZKGGSPRW-IUCAKERBSA-N 0.000 description 4
- XCLCVBYNGXEVDU-WHFBIAKZSA-N Gly-Asn-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XCLCVBYNGXEVDU-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 4
- BMWFDYIYBAFROD-WPRPVWTQSA-N Gly-Pro-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)CN BMWFDYIYBAFROD-WPRPVWTQSA-N 0.000 description 4
- MKIAPEZXQDILRR-YUMQZZPRSA-N Gly-Ser-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CN MKIAPEZXQDILRR-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 4
- VGYOLSOFODKLSP-IHPCNDPISA-N His-Leu-Trp Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(O)=O)C1=CN=CN1 VGYOLSOFODKLSP-IHPCNDPISA-N 0.000 description 4
- LVQDUPQUJZWKSU-PYJNHQTQSA-N Ile-Arg-His Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N LVQDUPQUJZWKSU-PYJNHQTQSA-N 0.000 description 4
- PELCGFMHLZXWBQ-BJDJZHNGSA-N Ile-Ser-Leu Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)O)N PELCGFMHLZXWBQ-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 4
- 241000880493 Leptailurus serval Species 0.000 description 4
- ZDBMWELMUCLUPL-QEJZJMRPSA-N Leu-Phe-Ala Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 ZDBMWELMUCLUPL-QEJZJMRPSA-N 0.000 description 4
- DAYQSYGBCUKVKT-VOAKCMCISA-N Leu-Thr-Lys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O DAYQSYGBCUKVKT-VOAKCMCISA-N 0.000 description 4
- URGPVYGVWLIRGT-DCAQKATOSA-N Lys-Met-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O URGPVYGVWLIRGT-DCAQKATOSA-N 0.000 description 4
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 4
- 208000025966 Neurological disease Diseases 0.000 description 4
- YYRCPTVAPLQRNC-ULQDDVLXSA-N Phe-Arg-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 YYRCPTVAPLQRNC-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 4
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 4
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 4
- WGHVMKFREWGCGR-SRVKXCTJSA-N Val-Arg-Arg Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)N WGHVMKFREWGCGR-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 4
- 238000011467 adoptive cell therapy Methods 0.000 description 4
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 4
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 4
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 4
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 4
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 4
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 4
- 229940124589 immunosuppressive drug Drugs 0.000 description 4
- 210000002602 induced regulatory T cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 230000004068 intracellular signaling Effects 0.000 description 4
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 4
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N monopropylene glycol Natural products CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010051242 phenylalanylserine Proteins 0.000 description 4
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 108010014614 prolyl-glycyl-proline Proteins 0.000 description 4
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 4
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 4
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 4
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 108010038745 tryptophylglycine Proteins 0.000 description 4
- BRPMXFSTKXXNHF-IUCAKERBSA-N (2s)-1-[2-[[(2s)-pyrrolidine-2-carbonyl]amino]acetyl]pyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)CNC(=O)[C@H]1NCCC1 BRPMXFSTKXXNHF-IUCAKERBSA-N 0.000 description 3
- 208000030939 Chronic inflammatory demyelinating polyneuropathy Diseases 0.000 description 3
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 description 3
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 description 3
- 101000599037 Homo sapiens Zinc finger protein Helios Proteins 0.000 description 3
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 3
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 3
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 3
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 3
- 102000013691 Interleukin-17 Human genes 0.000 description 3
- 108050003558 Interleukin-17 Proteins 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- 208000036110 Neuroinflammatory disease Diseases 0.000 description 3
- 108090000772 Neuropilin-1 Proteins 0.000 description 3
- 102100028762 Neuropilin-1 Human genes 0.000 description 3
- 238000000636 Northern blotting Methods 0.000 description 3
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 3
- 102100037796 Zinc finger protein Helios Human genes 0.000 description 3
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 3
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 3
- 108010062796 arginyllysine Proteins 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 3
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 3
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 201000005795 chronic inflammatory demyelinating polyneuritis Diseases 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 3
- 108091006047 fluorescent proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000034287 fluorescent proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010089804 glycyl-threonine Proteins 0.000 description 3
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 3
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 3
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 3
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 3
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 3
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 3
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 3
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 3
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 3
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 3
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 3
- 238000003196 serial analysis of gene expression Methods 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 238000003151 transfection method Methods 0.000 description 3
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 3
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 3
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 2
- MZRBYBIQTIKERR-GUBZILKMSA-N Arg-Glu-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O MZRBYBIQTIKERR-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- BSYKSCBTTQKOJG-GUBZILKMSA-N Arg-Pro-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O BSYKSCBTTQKOJG-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- ATABBWFGOHKROJ-GUBZILKMSA-N Arg-Pro-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O ATABBWFGOHKROJ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- VRTWYUYCJGNFES-CIUDSAMLSA-N Arg-Ser-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O VRTWYUYCJGNFES-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- 102100022005 B-lymphocyte antigen CD20 Human genes 0.000 description 2
- 101710149863 C-C chemokine receptor type 4 Proteins 0.000 description 2
- 102100025074 C-C chemokine receptor-like 2 Human genes 0.000 description 2
- 102100028990 C-X-C chemokine receptor type 3 Human genes 0.000 description 2
- 102100032976 CCR4-NOT transcription complex subunit 6 Human genes 0.000 description 2
- 102100027207 CD27 antigen Human genes 0.000 description 2
- 102100032937 CD40 ligand Human genes 0.000 description 2
- 229940045513 CTLA4 antagonist Drugs 0.000 description 2
- 102000020313 Cell-Penetrating Peptides Human genes 0.000 description 2
- 108010051109 Cell-Penetrating Peptides Proteins 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 102100039498 Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Human genes 0.000 description 2
- 206010012289 Dementia Diseases 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 206010013975 Dyspnoeas Diseases 0.000 description 2
- IRDASPPCLZIERZ-XHNCKOQMSA-N Glu-Ala-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N IRDASPPCLZIERZ-XHNCKOQMSA-N 0.000 description 2
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 2
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 2
- 102000025850 HLA-A2 Antigen Human genes 0.000 description 2
- 108010074032 HLA-A2 Antigen Proteins 0.000 description 2
- 102000006354 HLA-DR Antigens Human genes 0.000 description 2
- 108010058597 HLA-DR Antigens Proteins 0.000 description 2
- 101000897405 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD20 Proteins 0.000 description 2
- 101000716068 Homo sapiens C-C chemokine receptor type 6 Proteins 0.000 description 2
- 101000916050 Homo sapiens C-X-C chemokine receptor type 3 Proteins 0.000 description 2
- 101000914511 Homo sapiens CD27 antigen Proteins 0.000 description 2
- 101000889276 Homo sapiens Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Proteins 0.000 description 2
- 101001059662 Homo sapiens Mucosal addressin cell adhesion molecule 1 Proteins 0.000 description 2
- 101000914484 Homo sapiens T-lymphocyte activation antigen CD80 Proteins 0.000 description 2
- 229920001612 Hydroxyethyl starch Polymers 0.000 description 2
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 2
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 2
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 2
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 2
- 108020004684 Internal Ribosome Entry Sites Proteins 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 description 2
- HOMFINRJHIIZNJ-HOCLYGCPSA-N Leu-Trp-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)NCC(O)=O HOMFINRJHIIZNJ-HOCLYGCPSA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 102100028793 Mucosal addressin cell adhesion molecule 1 Human genes 0.000 description 2
- 208000001089 Multiple system atrophy Diseases 0.000 description 2
- YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101150051337 NRP1 gene Proteins 0.000 description 2
- 206010029240 Neuritis Diseases 0.000 description 2
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 description 2
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 102100040678 Programmed cell death protein 1 Human genes 0.000 description 2
- 101710089372 Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 description 2
- QKQDTEYDEIJPNK-GUBZILKMSA-N Ser-Glu-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO QKQDTEYDEIJPNK-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- MUJQWSAWLLRJCE-KATARQTJSA-N Ser-Leu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O MUJQWSAWLLRJCE-KATARQTJSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000713880 Spleen focus-forming virus Species 0.000 description 2
- 102100027222 T-lymphocyte activation antigen CD80 Human genes 0.000 description 2
- 208000030886 Traumatic Brain injury Diseases 0.000 description 2
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 2
- 108060008683 Tumor Necrosis Factor Receptor Proteins 0.000 description 2
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 2
- 108091005956 Type II transmembrane proteins Proteins 0.000 description 2
- AZSHAZJLOZQYAY-FXQIFTODSA-N Val-Ala-Ser Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O AZSHAZJLOZQYAY-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 108010005233 alanylglutamic acid Proteins 0.000 description 2
- SHGAZHPCJJPHSC-YCNIQYBTSA-N all-trans-retinoic acid Chemical compound OC(=O)\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C SHGAZHPCJJPHSC-YCNIQYBTSA-N 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 108010068380 arginylarginine Proteins 0.000 description 2
- 208000029560 autism spectrum disease Diseases 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 102000023732 binding proteins Human genes 0.000 description 2
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 2
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 2
- 230000004186 co-expression Effects 0.000 description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- 208000016097 disease of metabolism Diseases 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 2
- 230000003028 elevating effect Effects 0.000 description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 2
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 2
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 2
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 2
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 229940050526 hydroxyethylstarch Drugs 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 2
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 2
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 description 2
- 108010044374 isoleucyl-tyrosine Proteins 0.000 description 2
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 2
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 2
- 230000001617 migratory effect Effects 0.000 description 2
- 208000005264 motor neuron disease Diseases 0.000 description 2
- 230000000926 neurological effect Effects 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 2
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 2
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 2
- 230000001124 posttranscriptional effect Effects 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 235000013772 propylene glycol Nutrition 0.000 description 2
- ZAHRKKWIAAJSAO-UHFFFAOYSA-N rapamycin Natural products COCC(O)C(=C/C(C)C(=O)CC(OC(=O)C1CCCCN1C(=O)C(=O)C2(O)OC(CC(OC)C(=CC=CC=CC(C)CC(C)C(=O)C)C)CCC2C)C(C)CC3CCC(O)C(C3)OC)C ZAHRKKWIAAJSAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930002330 retinoic acid Natural products 0.000 description 2
- QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N sirolimus Chemical compound C1C[C@@H](O)[C@H](OC)C[C@@H]1C[C@@H](C)[C@H]1OC(=O)[C@@H]2CCCCN2C(=O)C(=O)[C@](O)(O2)[C@H](C)CC[C@H]2C[C@H](OC)/C(C)=C/C=C/C=C/[C@@H](C)C[C@@H](C)C(=O)[C@H](OC)[C@H](O)/C(C)=C/[C@@H](C)C(=O)C1 QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N 0.000 description 2
- 229960002930 sirolimus Drugs 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 2
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 2
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 2
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 2
- 230000009529 traumatic brain injury Effects 0.000 description 2
- 102000003298 tumor necrosis factor receptor Human genes 0.000 description 2
- 230000007306 turnover Effects 0.000 description 2
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 2
- 238000004017 vitrification Methods 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- DNIAPMSPPWPWGF-GSVOUGTGSA-N (R)-(-)-Propylene glycol Chemical compound C[C@@H](O)CO DNIAPMSPPWPWGF-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 1
- VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 1-monostearoylglycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PXFBZOLANLWPMH-UHFFFAOYSA-N 16-Epiaffinine Natural products C1C(C2=CC=CC=C2N2)=C2C(=O)CC2C(=CC)CN(C)C1C2CO PXFBZOLANLWPMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020005065 3' Flanking Region Proteins 0.000 description 1
- 108020005029 5' Flanking Region Proteins 0.000 description 1
- 102100022464 5'-nucleotidase Human genes 0.000 description 1
- 108091007505 ADAM17 Proteins 0.000 description 1
- 206010000097 Abdominal tenderness Diseases 0.000 description 1
- RLMISHABBKUNFO-WHFBIAKZSA-N Ala-Ala-Gly Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(O)=O RLMISHABBKUNFO-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- KMGOBAQSCKTBGD-DLOVCJGASA-N Ala-His-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)N)CC1=CN=CN1 KMGOBAQSCKTBGD-DLOVCJGASA-N 0.000 description 1
- NYDBKUNVSALYPX-NAKRPEOUSA-N Ala-Ile-Arg Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N NYDBKUNVSALYPX-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 1
- GSHKMNKPMLXSQW-KBIXCLLPSA-N Ala-Ile-Gln Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C)N GSHKMNKPMLXSQW-KBIXCLLPSA-N 0.000 description 1
- MEFILNJXAVSUTO-JXUBOQSCSA-N Ala-Leu-Thr Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O MEFILNJXAVSUTO-JXUBOQSCSA-N 0.000 description 1
- PVQLRJRPUTXFFX-CIUDSAMLSA-N Ala-Met-Gln Chemical compound CSCC[C@H](NC(=O)[C@H](C)N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O PVQLRJRPUTXFFX-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- RUXQNKVQSKOOBS-JURCDPSOSA-N Ala-Phe-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O RUXQNKVQSKOOBS-JURCDPSOSA-N 0.000 description 1
- MAZZQZWCCYJQGZ-GUBZILKMSA-N Ala-Pro-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O MAZZQZWCCYJQGZ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- XWFWAXPOLRTDFZ-FXQIFTODSA-N Ala-Pro-Ser Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XWFWAXPOLRTDFZ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- TVUFMYKTYXTRPY-HERUPUMHSA-N Ala-Trp-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O TVUFMYKTYXTRPY-HERUPUMHSA-N 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 206010027654 Allergic conditions Diseases 0.000 description 1
- 229920000856 Amylose Polymers 0.000 description 1
- SGYSTDWPNPKJPP-GUBZILKMSA-N Arg-Ala-Arg Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O SGYSTDWPNPKJPP-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- JGDGLDNAQJJGJI-AVGNSLFASA-N Arg-Arg-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N JGDGLDNAQJJGJI-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- MAISCYVJLBBRNU-DCAQKATOSA-N Arg-Asn-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N MAISCYVJLBBRNU-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- PQWTZSNVWSOFFK-FXQIFTODSA-N Arg-Asp-Asn Chemical compound C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N)CN=C(N)N PQWTZSNVWSOFFK-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- WVNFNPGXYADPPO-BQBZGAKWSA-N Arg-Gly-Ser Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O WVNFNPGXYADPPO-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- QEHMMRSQJMOYNO-DCAQKATOSA-N Arg-His-Asn Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N QEHMMRSQJMOYNO-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- NVCIXQYNWYTLDO-IHRRRGAJSA-N Arg-His-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N NVCIXQYNWYTLDO-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- BSGSDLYGGHGMND-IHRRRGAJSA-N Arg-Phe-Cys Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N BSGSDLYGGHGMND-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- BECXEHHOZNFFFX-IHRRRGAJSA-N Arg-Ser-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O BECXEHHOZNFFFX-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- RYQSYXFGFOTJDJ-RHYQMDGZSA-N Arg-Thr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O RYQSYXFGFOTJDJ-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- CMLGVVWQQHUXOZ-GHCJXIJMSA-N Asn-Ala-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O CMLGVVWQQHUXOZ-GHCJXIJMSA-N 0.000 description 1
- XSGBIBGAMKTHMY-WHFBIAKZSA-N Asn-Asp-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O XSGBIBGAMKTHMY-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ZDOQDYFZNGASEY-BIIVOSGPSA-N Asn-Asp-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N)C(=O)O ZDOQDYFZNGASEY-BIIVOSGPSA-N 0.000 description 1
- MSBDSTRUMZFSEU-PEFMBERDSA-N Asn-Glu-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O MSBDSTRUMZFSEU-PEFMBERDSA-N 0.000 description 1
- OPEPUCYIGFEGSW-WDSKDSINSA-N Asn-Gly-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O OPEPUCYIGFEGSW-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- OOWSBIOUKIUWLO-RCOVLWMOSA-N Asn-Gly-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O OOWSBIOUKIUWLO-RCOVLWMOSA-N 0.000 description 1
- HDHZCEDPLTVHFZ-GUBZILKMSA-N Asn-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O HDHZCEDPLTVHFZ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- RCFGLXMZDYNRSC-CIUDSAMLSA-N Asn-Lys-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O RCFGLXMZDYNRSC-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- ICDDSTLEMLGSTB-GUBZILKMSA-N Asn-Met-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O ICDDSTLEMLGSTB-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- HNXWVVHIGTZTBO-LKXGYXEUSA-N Asn-Ser-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O HNXWVVHIGTZTBO-LKXGYXEUSA-N 0.000 description 1
- TZQWZQSMHDVLQL-QEJZJMRPSA-N Asn-Trp-Gln Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N TZQWZQSMHDVLQL-QEJZJMRPSA-N 0.000 description 1
- DAYDURRBMDCCFL-AAEUAGOBSA-N Asn-Trp-Gly Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)NCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N DAYDURRBMDCCFL-AAEUAGOBSA-N 0.000 description 1
- XEGZSHSPQNDNRH-JRQIVUDYSA-N Asn-Tyr-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O XEGZSHSPQNDNRH-JRQIVUDYSA-N 0.000 description 1
- GBAWQWASNGUNQF-ZLUOBGJFSA-N Asp-Ala-Cys Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N GBAWQWASNGUNQF-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- HPNDBHLITCHRSO-WHFBIAKZSA-N Asp-Ala-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(O)=O HPNDBHLITCHRSO-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- NJIKKGUVGUBICV-ZLUOBGJFSA-N Asp-Ala-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O NJIKKGUVGUBICV-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- DZQKLNLLWFQONU-LKXGYXEUSA-N Asp-Cys-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N)O DZQKLNLLWFQONU-LKXGYXEUSA-N 0.000 description 1
- PDECQIHABNQRHN-GUBZILKMSA-N Asp-Glu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O PDECQIHABNQRHN-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- VIRHEUMYXXLCBF-WDSKDSINSA-N Asp-Gly-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O VIRHEUMYXXLCBF-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- AYFVRYXNDHBECD-YUMQZZPRSA-N Asp-Leu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O AYFVRYXNDHBECD-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- WNGZKSVJFDZICU-XIRDDKMYSA-N Asp-Leu-Trp Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N WNGZKSVJFDZICU-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 1
- LTCKTLYKRMCFOC-KKUMJFAQSA-N Asp-Phe-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O LTCKTLYKRMCFOC-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- QSFHZPQUAAQHAQ-CIUDSAMLSA-N Asp-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O QSFHZPQUAAQHAQ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- JSHWXQIZOCVWIA-ZKWXMUAHSA-N Asp-Ser-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O JSHWXQIZOCVWIA-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- NJLLRXWFPQQPHV-SRVKXCTJSA-N Asp-Tyr-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O NJLLRXWFPQQPHV-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- AWPWHMVCSISSQK-QWRGUYRKSA-N Asp-Tyr-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)NCC(O)=O AWPWHMVCSISSQK-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- SQIARYGNVQWOSB-BZSNNMDCSA-N Asp-Tyr-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O SQIARYGNVQWOSB-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- XWKPSMRPIKKDDU-RCOVLWMOSA-N Asp-Val-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(O)=O XWKPSMRPIKKDDU-RCOVLWMOSA-N 0.000 description 1
- 102100038080 B-cell receptor CD22 Human genes 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 102100035875 C-C chemokine receptor type 5 Human genes 0.000 description 1
- 101710149870 C-C chemokine receptor type 5 Proteins 0.000 description 1
- 102100036301 C-C chemokine receptor type 7 Human genes 0.000 description 1
- 102100036842 C-C motif chemokine 19 Human genes 0.000 description 1
- 102100025248 C-X-C motif chemokine 10 Human genes 0.000 description 1
- 102100025279 C-X-C motif chemokine 11 Human genes 0.000 description 1
- 102100036170 C-X-C motif chemokine 9 Human genes 0.000 description 1
- 108010029697 CD40 Ligand Proteins 0.000 description 1
- 102100036008 CD48 antigen Human genes 0.000 description 1
- 102100037904 CD9 antigen Human genes 0.000 description 1
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- 108091007741 Chimeric antigen receptor T cells Proteins 0.000 description 1
- 206010008796 Chromaturia Diseases 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 208000011990 Corticobasal Degeneration Diseases 0.000 description 1
- 208000020406 Creutzfeldt Jacob disease Diseases 0.000 description 1
- 208000003407 Creutzfeldt-Jakob Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000010859 Creutzfeldt-Jakob disease Diseases 0.000 description 1
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 1
- 102000005636 Cyclic AMP Response Element-Binding Protein Human genes 0.000 description 1
- 108010045171 Cyclic AMP Response Element-Binding Protein Proteins 0.000 description 1
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JIVJXVJMOBVCJF-ZLUOBGJFSA-N Cys-Asn-Cys Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N)C(=O)N JIVJXVJMOBVCJF-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- HHABWQIFXZPZCK-ACZMJKKPSA-N Cys-Gln-Ser Chemical compound C(CC(=O)N)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N HHABWQIFXZPZCK-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- SKSJPIBFNFPTJB-NKWVEPMBSA-N Cys-Gly-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)CNC(=O)[C@H](CS)N)C(=O)O SKSJPIBFNFPTJB-NKWVEPMBSA-N 0.000 description 1
- PDRMRVHPAQKTLT-NAKRPEOUSA-N Cys-Ile-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O PDRMRVHPAQKTLT-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 1
- CWHKESLHINPNBX-XIRDDKMYSA-N Cys-Lys-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CS)CCCCN)C(O)=O)=CNC2=C1 CWHKESLHINPNBX-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 1
- LKHMGNHQULEPFY-ACZMJKKPSA-N Cys-Ser-Glu Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O LKHMGNHQULEPFY-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- JTEGHEWKBCTIAL-IXOXFDKPSA-N Cys-Thr-Phe Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N)O JTEGHEWKBCTIAL-IXOXFDKPSA-N 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 102100033587 DNA topoisomerase 2-alpha Human genes 0.000 description 1
- 230000004568 DNA-binding Effects 0.000 description 1
- 208000019505 Deglutition disease Diseases 0.000 description 1
- 206010067889 Dementia with Lewy bodies Diseases 0.000 description 1
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 1
- 206010012438 Dermatitis atopic Diseases 0.000 description 1
- 102100031111 Disintegrin and metalloproteinase domain-containing protein 17 Human genes 0.000 description 1
- 206010013952 Dysphonia Diseases 0.000 description 1
- 208000000059 Dyspnea Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- HKVAMNSJSFKALM-GKUWKFKPSA-N Everolimus Chemical compound C1C[C@@H](OCCO)[C@H](OC)C[C@@H]1C[C@@H](C)[C@H]1OC(=O)[C@@H]2CCCCN2C(=O)C(=O)[C@](O)(O2)[C@H](C)CC[C@H]2C[C@H](OC)/C(C)=C/C=C/C=C/[C@@H](C)C[C@@H](C)C(=O)[C@H](OC)[C@H](O)/C(C)=C/[C@@H](C)C(=O)C1 HKVAMNSJSFKALM-GKUWKFKPSA-N 0.000 description 1
- 102100030421 Fatty acid-binding protein 5 Human genes 0.000 description 1
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 1
- 208000004262 Food Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 201000011240 Frontotemporal dementia Diseases 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 1
- IPHGBVYWRKCGKG-FXQIFTODSA-N Gln-Cys-Glu Chemical compound NC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O IPHGBVYWRKCGKG-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- LOJYQMFIIJVETK-WDSKDSINSA-N Gln-Gln Chemical compound NC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O LOJYQMFIIJVETK-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- NSORZJXKUQFEKL-JGVFFNPUSA-N Gln-Gly-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N)C(=O)O NSORZJXKUQFEKL-JGVFFNPUSA-N 0.000 description 1
- FKXCBKCOSVIGCT-AVGNSLFASA-N Gln-Lys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O FKXCBKCOSVIGCT-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- FGWRYRAVBVOHIB-XIRDDKMYSA-N Gln-Pro-Trp Chemical compound C1C[C@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCC(=O)N)N)C(=O)N[C@@H](CC2=CNC3=CC=CC=C32)C(=O)O FGWRYRAVBVOHIB-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 1
- LPIKVBWNNVFHCQ-GUBZILKMSA-N Gln-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O LPIKVBWNNVFHCQ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- JILRMFFFCHUUTJ-ACZMJKKPSA-N Gln-Ser-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O JILRMFFFCHUUTJ-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- BBFCMGBMYIAGRS-AUTRQRHGSA-N Gln-Val-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O BBFCMGBMYIAGRS-AUTRQRHGSA-N 0.000 description 1
- FKGNJUCQKXQNRA-NRPADANISA-N Glu-Cys-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O FKGNJUCQKXQNRA-NRPADANISA-N 0.000 description 1
- CGOHAEBMDSEKFB-FXQIFTODSA-N Glu-Glu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O CGOHAEBMDSEKFB-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- QQLBPVKLJBAXBS-FXQIFTODSA-N Glu-Glu-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O QQLBPVKLJBAXBS-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- PHONAZGUEGIOEM-GLLZPBPUSA-N Glu-Glu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O PHONAZGUEGIOEM-GLLZPBPUSA-N 0.000 description 1
- VGUYMZGLJUJRBV-YVNDNENWSA-N Glu-Ile-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O VGUYMZGLJUJRBV-YVNDNENWSA-N 0.000 description 1
- ZCOJVESMNGBGLF-GRLWGSQLSA-N Glu-Ile-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O ZCOJVESMNGBGLF-GRLWGSQLSA-N 0.000 description 1
- FBEJIDRSQCGFJI-GUBZILKMSA-N Glu-Leu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FBEJIDRSQCGFJI-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- FMBWLLMUPXTXFC-SDDRHHMPSA-N Glu-Lys-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)C(=O)O FMBWLLMUPXTXFC-SDDRHHMPSA-N 0.000 description 1
- SUIAHERNFYRBDZ-GVXVVHGQSA-N Glu-Lys-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O SUIAHERNFYRBDZ-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 1
- KJBGAZSLZAQDPV-KKUMJFAQSA-N Glu-Phe-Arg Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N KJBGAZSLZAQDPV-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- SYWCGQOIIARSIX-SRVKXCTJSA-N Glu-Pro-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O SYWCGQOIIARSIX-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- JRDYDYXZKFNNRQ-XPUUQOCRSA-N Gly-Ala-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CN JRDYDYXZKFNNRQ-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 1
- JVACNFOPSUPDTK-QWRGUYRKSA-N Gly-Asn-Phe Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 JVACNFOPSUPDTK-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- TZOVVRJYUDETQG-RCOVLWMOSA-N Gly-Asp-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CN TZOVVRJYUDETQG-RCOVLWMOSA-N 0.000 description 1
- CCQOOWAONKGYKQ-BYPYZUCNSA-N Gly-Gly-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)CNC(=O)CN CCQOOWAONKGYKQ-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ADZGCWWDPFDHCY-ZETCQYMHSA-N Gly-His-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CC1=CN=CN1 ADZGCWWDPFDHCY-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- SXJHOPPTOJACOA-QXEWZRGKSA-N Gly-Ile-Arg Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N SXJHOPPTOJACOA-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 1
- DGKBSGNCMCLDSL-BYULHYEWSA-N Gly-Ile-Asn Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)CN DGKBSGNCMCLDSL-BYULHYEWSA-N 0.000 description 1
- VEPBEGNDJYANCF-QWRGUYRKSA-N Gly-Lys-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CCCCN VEPBEGNDJYANCF-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- PCPOYRCAHPJXII-UWVGGRQHSA-N Gly-Lys-Met Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O PCPOYRCAHPJXII-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- JYPCXBJRLBHWME-IUCAKERBSA-N Gly-Pro-Arg Chemical compound NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O JYPCXBJRLBHWME-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- LBDXVCBAJJNJNN-WHFBIAKZSA-N Gly-Ser-Cys Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O LBDXVCBAJJNJNN-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- DBUNZBWUWCIELX-JHEQGTHGSA-N Gly-Thr-Glu Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O DBUNZBWUWCIELX-JHEQGTHGSA-N 0.000 description 1
- BNMRSWQOHIQTFL-JSGCOSHPSA-N Gly-Val-Phe Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 BNMRSWQOHIQTFL-JSGCOSHPSA-N 0.000 description 1
- DCXXMTOCNZCJGO-UHFFFAOYSA-N Glycerol trioctadecanoate Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC DCXXMTOCNZCJGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100028541 Guanylate-binding protein 2 Human genes 0.000 description 1
- 102100030595 HLA class II histocompatibility antigen gamma chain Human genes 0.000 description 1
- 102100026122 High affinity immunoglobulin gamma Fc receptor I Human genes 0.000 description 1
- AWHJQEYGWRKPHE-LSJOCFKGSA-N His-Ala-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O AWHJQEYGWRKPHE-LSJOCFKGSA-N 0.000 description 1
- DZMVESFTHXSSPZ-XVYDVKMFSA-N His-Ala-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O DZMVESFTHXSSPZ-XVYDVKMFSA-N 0.000 description 1
- VIVSWEBJUHXCDS-DCAQKATOSA-N His-Asn-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O VIVSWEBJUHXCDS-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- VBOFRJNDIOPNDO-YUMQZZPRSA-N His-Gly-Asn Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N VBOFRJNDIOPNDO-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- JIUYRPFQJJRSJB-QWRGUYRKSA-N His-His-Gly Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)NCC(O)=O)C1=CN=CN1 JIUYRPFQJJRSJB-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- UXSATKFPUVZVDK-KKUMJFAQSA-N His-Lys-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)N UXSATKFPUVZVDK-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- ZVKDCQVQTGYBQT-LSJOCFKGSA-N His-Pro-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O ZVKDCQVQTGYBQT-LSJOCFKGSA-N 0.000 description 1
- VCBWXASUBZIFLQ-IHRRRGAJSA-N His-Pro-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O VCBWXASUBZIFLQ-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- JATYGDHMDRAISQ-KKUMJFAQSA-N His-Tyr-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O JATYGDHMDRAISQ-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- 101000678236 Homo sapiens 5'-nucleotidase Proteins 0.000 description 1
- 101000884305 Homo sapiens B-cell receptor CD22 Proteins 0.000 description 1
- 101000716065 Homo sapiens C-C chemokine receptor type 7 Proteins 0.000 description 1
- 101000713106 Homo sapiens C-C motif chemokine 19 Proteins 0.000 description 1
- 101000858088 Homo sapiens C-X-C motif chemokine 10 Proteins 0.000 description 1
- 101000858060 Homo sapiens C-X-C motif chemokine 11 Proteins 0.000 description 1
- 101000947172 Homo sapiens C-X-C motif chemokine 9 Proteins 0.000 description 1
- 101100005713 Homo sapiens CD4 gene Proteins 0.000 description 1
- 101000716130 Homo sapiens CD48 antigen Proteins 0.000 description 1
- 101000738354 Homo sapiens CD9 antigen Proteins 0.000 description 1
- 101000866286 Homo sapiens Excitatory amino acid transporter 1 Proteins 0.000 description 1
- 101001062855 Homo sapiens Fatty acid-binding protein 5 Proteins 0.000 description 1
- 101001027128 Homo sapiens Fibronectin Proteins 0.000 description 1
- 101001058858 Homo sapiens Guanylate-binding protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 101001082627 Homo sapiens HLA class II histocompatibility antigen gamma chain Proteins 0.000 description 1
- 101000913074 Homo sapiens High affinity immunoglobulin gamma Fc receptor I Proteins 0.000 description 1
- 101001081176 Homo sapiens Hyaluronan mediated motility receptor Proteins 0.000 description 1
- 101000917858 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 description 1
- 101000917839 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Proteins 0.000 description 1
- 101000990912 Homo sapiens Matrilysin Proteins 0.000 description 1
- 101000990902 Homo sapiens Matrix metalloproteinase-9 Proteins 0.000 description 1
- 101000934338 Homo sapiens Myeloid cell surface antigen CD33 Proteins 0.000 description 1
- 101001097889 Homo sapiens Platelet-activating factor acetylhydrolase Proteins 0.000 description 1
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 description 1
- 101000845188 Homo sapiens Tetratricopeptide repeat protein 4 Proteins 0.000 description 1
- 101000904724 Homo sapiens Transmembrane glycoprotein NMB Proteins 0.000 description 1
- 101000679903 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 25 Proteins 0.000 description 1
- 101000662056 Homo sapiens Ubiquitin D Proteins 0.000 description 1
- 208000023105 Huntington disease Diseases 0.000 description 1
- 102100027735 Hyaluronan mediated motility receptor Human genes 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- OONBGFHNQVSUBF-KBIXCLLPSA-N Ile-Gln-Cys Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O OONBGFHNQVSUBF-KBIXCLLPSA-N 0.000 description 1
- RVNOXPZHMUWCLW-GMOBBJLQSA-N Ile-Met-Asn Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N RVNOXPZHMUWCLW-GMOBBJLQSA-N 0.000 description 1
- LRAUKBMYHHNADU-DKIMLUQUSA-N Ile-Phe-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)CC)CC1=CC=CC=C1 LRAUKBMYHHNADU-DKIMLUQUSA-N 0.000 description 1
- YBHKCXNNNVDYEB-SPOWBLRKSA-N Ile-Trp-Ser Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N YBHKCXNNNVDYEB-SPOWBLRKSA-N 0.000 description 1
- OAQJOXZPGHTJNA-NGTWOADLSA-N Ile-Trp-Thr Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)O)N OAQJOXZPGHTJNA-NGTWOADLSA-N 0.000 description 1
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 1
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 1
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 description 1
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 1
- 102000003816 Interleukin-13 Human genes 0.000 description 1
- 108090000176 Interleukin-13 Proteins 0.000 description 1
- 108090000171 Interleukin-18 Proteins 0.000 description 1
- 102000003810 Interleukin-18 Human genes 0.000 description 1
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 description 1
- 102000000743 Interleukin-5 Human genes 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 1
- 108010002335 Interleukin-9 Proteins 0.000 description 1
- 102000000585 Interleukin-9 Human genes 0.000 description 1
- 206010023126 Jaundice Diseases 0.000 description 1
- HGCNKOLVKRAVHD-UHFFFAOYSA-N L-Met-L-Phe Natural products CSCCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 HGCNKOLVKRAVHD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N L-Phenylalanyl-L-lysin Natural products NCCCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SITWEMZOJNKJCH-UHFFFAOYSA-N L-alanine-L-arginine Natural products CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCNC(N)=N SITWEMZOJNKJCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- KFKWRHQBZQICHA-STQMWFEESA-N L-leucyl-L-phenylalanine Natural products CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 KFKWRHQBZQICHA-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- BQSLGJHIAGOZCD-CIUDSAMLSA-N Leu-Ala-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BQSLGJHIAGOZCD-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- ILJREDZFPHTUIE-GUBZILKMSA-N Leu-Asp-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O ILJREDZFPHTUIE-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- KTFHTMHHKXUYPW-ZPFDUUQYSA-N Leu-Asp-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O KTFHTMHHKXUYPW-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 1
- QLQHWWCSCLZUMA-KKUMJFAQSA-N Leu-Asp-Tyr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 QLQHWWCSCLZUMA-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- GZAUZBUKDXYPEH-CIUDSAMLSA-N Leu-Cys-Cys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N GZAUZBUKDXYPEH-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- PIHFVNPEAHFNLN-KKUMJFAQSA-N Leu-Cys-Tyr Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)O)N PIHFVNPEAHFNLN-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- DZQMXBALGUHGJT-GUBZILKMSA-N Leu-Glu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O DZQMXBALGUHGJT-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- FEHQLKKBVJHSEC-SZMVWBNQSA-N Leu-Glu-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 FEHQLKKBVJHSEC-SZMVWBNQSA-N 0.000 description 1
- HYMLKESRWLZDBR-WEDXCCLWSA-N Leu-Gly-Thr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O HYMLKESRWLZDBR-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 1
- AVEGDIAXTDVBJS-XUXIUFHCSA-N Leu-Ile-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O AVEGDIAXTDVBJS-XUXIUFHCSA-N 0.000 description 1
- QJXHMYMRGDOHRU-NHCYSSNCSA-N Leu-Ile-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(O)=O QJXHMYMRGDOHRU-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- JNDYEOUZBLOVOF-AVGNSLFASA-N Leu-Leu-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O JNDYEOUZBLOVOF-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- KPYAOIVPJKPIOU-KKUMJFAQSA-N Leu-Lys-Lys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O KPYAOIVPJKPIOU-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- LINKCQUOMUDLKN-KATARQTJSA-N Leu-Thr-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N)O LINKCQUOMUDLKN-KATARQTJSA-N 0.000 description 1
- 201000002832 Lewy body dementia Diseases 0.000 description 1
- 102100029185 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Human genes 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- 208000005777 Lupus Nephritis Diseases 0.000 description 1
- FZIJIFCXUCZHOL-CIUDSAMLSA-N Lys-Ala-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN FZIJIFCXUCZHOL-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- RVOMPSJXSRPFJT-DCAQKATOSA-N Lys-Ala-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O RVOMPSJXSRPFJT-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- UWKNTTJNVSYXPC-CIUDSAMLSA-N Lys-Ala-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN UWKNTTJNVSYXPC-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- AIPHUKOBUXJNKM-KKUMJFAQSA-N Lys-Cys-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O AIPHUKOBUXJNKM-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- LLSUNJYOSCOOEB-GUBZILKMSA-N Lys-Glu-Asp Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O LLSUNJYOSCOOEB-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- GCMWRRQAKQXDED-IUCAKERBSA-N Lys-Glu-Gly Chemical compound [NH3+]CCCC[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CCC([O-])=O)C(=O)NCC([O-])=O GCMWRRQAKQXDED-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- IVFUVMSKSFSFBT-NHCYSSNCSA-N Lys-Ile-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN IVFUVMSKSFSFBT-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- ZJWIXBZTAAJERF-IHRRRGAJSA-N Lys-Lys-Arg Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N ZJWIXBZTAAJERF-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- RIJCHEVHFWMDKD-SRVKXCTJSA-N Lys-Lys-Asn Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O RIJCHEVHFWMDKD-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- WBSCNDJQPKSPII-KKUMJFAQSA-N Lys-Lys-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O WBSCNDJQPKSPII-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- BPDXWKVZNCKUGG-BZSNNMDCSA-N Lys-Phe-His Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N BPDXWKVZNCKUGG-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- SQXZLVXQXWILKW-KKUMJFAQSA-N Lys-Ser-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O SQXZLVXQXWILKW-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- RPWTZTBIFGENIA-VOAKCMCISA-N Lys-Thr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O RPWTZTBIFGENIA-VOAKCMCISA-N 0.000 description 1
- BVRNWWHJYNPJDG-XIRDDKMYSA-N Lys-Trp-Asn Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N BVRNWWHJYNPJDG-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100030417 Matrilysin Human genes 0.000 description 1
- 102100030412 Matrix metalloproteinase-9 Human genes 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- QEVRUYFHWJJUHZ-DCAQKATOSA-N Met-Ala-Leu Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(C)C QEVRUYFHWJJUHZ-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- ZAJNRWKGHWGPDQ-SDDRHHMPSA-N Met-Arg-Pro Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N ZAJNRWKGHWGPDQ-SDDRHHMPSA-N 0.000 description 1
- YLLWCSDBVGZLOW-CIUDSAMLSA-N Met-Gln-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O YLLWCSDBVGZLOW-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- ORRNBLTZBBESPN-HJWJTTGWSA-N Met-Ile-Phe Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 ORRNBLTZBBESPN-HJWJTTGWSA-N 0.000 description 1
- FWAHLGXNBLWIKB-NAKRPEOUSA-N Met-Ile-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H](N)CCSC FWAHLGXNBLWIKB-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 1
- MIAZEQZXAFTCCG-UBHSHLNASA-N Met-Phe-Ala Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 MIAZEQZXAFTCCG-UBHSHLNASA-N 0.000 description 1
- 102100025748 Mothers against decapentaplegic homolog 3 Human genes 0.000 description 1
- 101710143111 Mothers against decapentaplegic homolog 3 Proteins 0.000 description 1
- 208000026072 Motor neurone disease Diseases 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 208000007101 Muscle Cramp Diseases 0.000 description 1
- 206010028289 Muscle atrophy Diseases 0.000 description 1
- 206010028347 Muscle twitching Diseases 0.000 description 1
- 102100025243 Myeloid cell surface antigen CD33 Human genes 0.000 description 1
- AJHCSUXXECOXOY-UHFFFAOYSA-N N-glycyl-L-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)CN)C(O)=O)=CNC2=C1 AJHCSUXXECOXOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BQVUABVGYYSDCJ-UHFFFAOYSA-N Nalpha-L-Leucyl-L-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(N)CC(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 BQVUABVGYYSDCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000021320 Nasu-Hakola disease Diseases 0.000 description 1
- 206010028813 Nausea Diseases 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102000007339 Nerve Growth Factor Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010032605 Nerve Growth Factor Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000007399 Nuclear hormone receptor Human genes 0.000 description 1
- 101710160107 Outer membrane protein A Proteins 0.000 description 1
- SEPNOAFMZLLCEW-UBHSHLNASA-N Phe-Ala-Val Chemical compound N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)O SEPNOAFMZLLCEW-UBHSHLNASA-N 0.000 description 1
- AYPMIIKUMNADSU-IHRRRGAJSA-N Phe-Arg-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O AYPMIIKUMNADSU-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- KYYMILWEGJYPQZ-IHRRRGAJSA-N Phe-Glu-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 KYYMILWEGJYPQZ-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- WPTYDQPGBMDUBI-QWRGUYRKSA-N Phe-Gly-Asn Chemical compound N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O WPTYDQPGBMDUBI-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- FXPZZKBHNOMLGA-HJWJTTGWSA-N Phe-Ile-Arg Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=CC=C1)N FXPZZKBHNOMLGA-HJWJTTGWSA-N 0.000 description 1
- IIEOLPMQYRBZCN-SRVKXCTJSA-N Phe-Ser-Cys Chemical compound N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O IIEOLPMQYRBZCN-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- GLJZDMZJHFXJQG-BZSNNMDCSA-N Phe-Ser-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O GLJZDMZJHFXJQG-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- LTAWNJXSRUCFAN-UNQGMJICSA-N Phe-Thr-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O LTAWNJXSRUCFAN-UNQGMJICSA-N 0.000 description 1
- BQMFWUKNOCJDNV-HJWJTTGWSA-N Phe-Val-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O BQMFWUKNOCJDNV-HJWJTTGWSA-N 0.000 description 1
- 102100024616 Platelet endothelial cell adhesion molecule Human genes 0.000 description 1
- 102100037518 Platelet-activating factor acetylhydrolase Human genes 0.000 description 1
- WWAQEUOYCYMGHB-FXQIFTODSA-N Pro-Asn-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 WWAQEUOYCYMGHB-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- SNIPWBQKOPCJRG-CIUDSAMLSA-N Pro-Gln-Cys Chemical compound C1C[C@H](NC1)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O SNIPWBQKOPCJRG-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- NMELOOXSGDRBRU-YUMQZZPRSA-N Pro-Glu-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 NMELOOXSGDRBRU-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- VOZIBWWZSBIXQN-SRVKXCTJSA-N Pro-Glu-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1)C(O)=O VOZIBWWZSBIXQN-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- WFHYFCWBLSKEMS-KKUMJFAQSA-N Pro-Glu-Phe Chemical compound N([C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C(=O)[C@@H]1CCCN1 WFHYFCWBLSKEMS-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- LGSANCBHSMDFDY-GARJFASQSA-N Pro-Glu-Pro Chemical compound C1C[C@H](NC1)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N2CCC[C@@H]2C(=O)O LGSANCBHSMDFDY-GARJFASQSA-N 0.000 description 1
- TYMBHHITTMGGPI-NAKRPEOUSA-N Pro-Ile-Cys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 TYMBHHITTMGGPI-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 1
- XYSXOCIWCPFOCG-IHRRRGAJSA-N Pro-Leu-Leu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O XYSXOCIWCPFOCG-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- DRKAXLDECUGLFE-ULQDDVLXSA-N Pro-Leu-Phe Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(=O)[C@@H]1CCCN1)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(O)=O DRKAXLDECUGLFE-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- GFHXZNVJIKMAGO-IHRRRGAJSA-N Pro-Phe-Ser Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O GFHXZNVJIKMAGO-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- NAIPAPCKKRCMBL-JYJNAYRXSA-N Pro-Pro-Phe Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H]1NCCC1)C1=CC=CC=C1 NAIPAPCKKRCMBL-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- RCYUBVHMVUHEBM-RCWTZXSCSA-N Pro-Pro-Thr Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O RCYUBVHMVUHEBM-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 1
- FYXCBXDAMPEHIQ-FHWLQOOXSA-N Pro-Trp-Lys Chemical compound C1C[C@H](NC1)C(=O)N[C@@H](CC2=CNC3=CC=CC=C32)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O FYXCBXDAMPEHIQ-FHWLQOOXSA-N 0.000 description 1
- XDKKMRPRRCOELJ-GUBZILKMSA-N Pro-Val-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 XDKKMRPRRCOELJ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- WQUURFHRUAZQHU-VGWMRTNUSA-N Pro-Val-Val-Pro Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@@H]2CCCN2 WQUURFHRUAZQHU-VGWMRTNUSA-N 0.000 description 1
- 102000000850 Proto-Oncogene Proteins c-rel Human genes 0.000 description 1
- 108010001859 Proto-Oncogene Proteins c-rel Proteins 0.000 description 1
- 208000003251 Pruritus Diseases 0.000 description 1
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 1
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 102000012977 SLC1A3 Human genes 0.000 description 1
- 102000003800 Selectins Human genes 0.000 description 1
- 108090000184 Selectins Proteins 0.000 description 1
- 108091081021 Sense strand Proteins 0.000 description 1
- JJKSSJVYOVRJMZ-FXQIFTODSA-N Ser-Arg-Cys Chemical compound C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N)CN=C(N)N JJKSSJVYOVRJMZ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- DKKGAAJTDKHWOD-BIIVOSGPSA-N Ser-Asn-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CO)N)C(=O)O DKKGAAJTDKHWOD-BIIVOSGPSA-N 0.000 description 1
- BYIROAKULFFTEK-CIUDSAMLSA-N Ser-Asp-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO BYIROAKULFFTEK-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- MOVJSUIKUNCVMG-ZLUOBGJFSA-N Ser-Cys-Ser Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N)O MOVJSUIKUNCVMG-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- RNMRYWZYFHHOEV-CIUDSAMLSA-N Ser-Gln-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O RNMRYWZYFHHOEV-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- MAWSJXHRLWVJEZ-ACZMJKKPSA-N Ser-Gln-Cys Chemical compound C(CC(=O)N)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N MAWSJXHRLWVJEZ-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- XWCYBVBLJRWOFR-WDSKDSINSA-N Ser-Gln-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O XWCYBVBLJRWOFR-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- YRBGKVIWMNEVCZ-WDSKDSINSA-N Ser-Glu-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O YRBGKVIWMNEVCZ-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- GZFAWAQTEYDKII-YUMQZZPRSA-N Ser-Gly-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CO GZFAWAQTEYDKII-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- KDGARKCAKHBEDB-NKWVEPMBSA-N Ser-Gly-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)CNC(=O)[C@H](CO)N)C(=O)O KDGARKCAKHBEDB-NKWVEPMBSA-N 0.000 description 1
- QGAHMVHBORDHDC-YUMQZZPRSA-N Ser-His-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(O)=O)CC1=CN=CN1 QGAHMVHBORDHDC-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- MLSQXWSRHURDMF-GARJFASQSA-N Ser-His-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)NC(=O)[C@H](CO)N)C(=O)O MLSQXWSRHURDMF-GARJFASQSA-N 0.000 description 1
- WEQAYODCJHZSJZ-KKUMJFAQSA-N Ser-His-Tyr Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CO)N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CN=CN1 WEQAYODCJHZSJZ-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- IUXGJEIKJBYKOO-SRVKXCTJSA-N Ser-Leu-His Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N IUXGJEIKJBYKOO-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- UBRMZSHOOIVJPW-SRVKXCTJSA-N Ser-Leu-Lys Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O UBRMZSHOOIVJPW-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- VZQRNAYURWAEFE-KKUMJFAQSA-N Ser-Leu-Phe Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 VZQRNAYURWAEFE-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- NNFMANHDYSVNIO-DCAQKATOSA-N Ser-Lys-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O NNFMANHDYSVNIO-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- JUTGONBTALQWMK-NAKRPEOUSA-N Ser-Met-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CO)N JUTGONBTALQWMK-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 1
- MQUZANJDFOQOBX-SRVKXCTJSA-N Ser-Phe-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O MQUZANJDFOQOBX-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- PPCZVWHJWJFTFN-ZLUOBGJFSA-N Ser-Ser-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O PPCZVWHJWJFTFN-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- SRSPTFBENMJHMR-WHFBIAKZSA-N Ser-Ser-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O SRSPTFBENMJHMR-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- VGQVAVQWKJLIRM-FXQIFTODSA-N Ser-Ser-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O VGQVAVQWKJLIRM-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- DYEGLQRVMBWQLD-IXOXFDKPSA-N Ser-Thr-Phe Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N)O DYEGLQRVMBWQLD-IXOXFDKPSA-N 0.000 description 1
- PMTWIUBUQRGCSB-FXQIFTODSA-N Ser-Val-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O PMTWIUBUQRGCSB-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 208000009106 Shy-Drager Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 1
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 1
- 102100020886 Sodium/iodide cotransporter Human genes 0.000 description 1
- 208000005392 Spasm Diseases 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 102000000551 Syk Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108010016672 Syk Kinase Proteins 0.000 description 1
- 101710124574 Synaptotagmin-1 Proteins 0.000 description 1
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 102100031279 Tetratricopeptide repeat protein 4 Human genes 0.000 description 1
- KEGBFULVYKYJRD-LFSVMHDDSA-N Thr-Ala-Phe Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 KEGBFULVYKYJRD-LFSVMHDDSA-N 0.000 description 1
- DWYAUVCQDTZIJI-VZFHVOOUSA-N Thr-Ala-Ser Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O DWYAUVCQDTZIJI-VZFHVOOUSA-N 0.000 description 1
- CAJFZCICSVBOJK-SHGPDSBTSA-N Thr-Ala-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O CAJFZCICSVBOJK-SHGPDSBTSA-N 0.000 description 1
- XVNZSJIKGJLQLH-RCWTZXSCSA-N Thr-Arg-Met Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)O)N)O XVNZSJIKGJLQLH-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 1
- SKHPKKYKDYULDH-HJGDQZAQSA-N Thr-Asn-Leu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O SKHPKKYKDYULDH-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- JTEICXDKGWKRRV-HJGDQZAQSA-N Thr-Asn-Lys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N)O JTEICXDKGWKRRV-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- NLJKZUGAIIRWJN-LKXGYXEUSA-N Thr-Asp-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N)O NLJKZUGAIIRWJN-LKXGYXEUSA-N 0.000 description 1
- UTCFSBBXPWKLTG-XKBZYTNZSA-N Thr-Cys-Gln Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)N)O UTCFSBBXPWKLTG-XKBZYTNZSA-N 0.000 description 1
- QILPDQCTQZDHFM-HJGDQZAQSA-N Thr-Gln-Arg Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O QILPDQCTQZDHFM-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- IMULJHHGAUZZFE-MBLNEYKQSA-N Thr-Gly-Ile Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O IMULJHHGAUZZFE-MBLNEYKQSA-N 0.000 description 1
- DDDLIMCZFKOERC-SVSWQMSJSA-N Thr-Ile-Cys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)N DDDLIMCZFKOERC-SVSWQMSJSA-N 0.000 description 1
- KRDSCBLRHORMRK-JXUBOQSCSA-N Thr-Lys-Ala Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O KRDSCBLRHORMRK-JXUBOQSCSA-N 0.000 description 1
- MXDOAJQRJBMGMO-FJXKBIBVSA-N Thr-Pro-Gly Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O MXDOAJQRJBMGMO-FJXKBIBVSA-N 0.000 description 1
- FWTFAZKJORVTIR-VZFHVOOUSA-N Thr-Ser-Ala Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O FWTFAZKJORVTIR-VZFHVOOUSA-N 0.000 description 1
- MYNYCUXMIIWUNW-IEGACIPQSA-N Thr-Trp-Lys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N)O MYNYCUXMIIWUNW-IEGACIPQSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 230000010632 Transcription Factor Activity Effects 0.000 description 1
- 102100035100 Transcription factor p65 Human genes 0.000 description 1
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 1
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 1
- 102100023935 Transmembrane glycoprotein NMB Human genes 0.000 description 1
- 206010044565 Tremor Diseases 0.000 description 1
- MJBBMTOGSOSAKJ-HJXMPXNTSA-N Trp-Ala-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O MJBBMTOGSOSAKJ-HJXMPXNTSA-N 0.000 description 1
- NXQAOORHSYJRGH-AAEUAGOBSA-N Trp-Gly-Ser Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O)=CNC2=C1 NXQAOORHSYJRGH-AAEUAGOBSA-N 0.000 description 1
- CXPJPTFWKXNDKV-NUTKFTJISA-N Trp-Leu-Ala Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)=CNC2=C1 CXPJPTFWKXNDKV-NUTKFTJISA-N 0.000 description 1
- ARKBYVBCEOWRNR-UBHSHLNASA-N Trp-Ser-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O ARKBYVBCEOWRNR-UBHSHLNASA-N 0.000 description 1
- JKLJVFCPCWMNMZ-UMPQAUOISA-N Trp-Thr-Met Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O)[C@@H](C)O)=CNC2=C1 JKLJVFCPCWMNMZ-UMPQAUOISA-N 0.000 description 1
- WTRQBSSQBKRNKV-MNSWYVGCSA-N Trp-Thr-Tyr Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)[C@H](O)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 WTRQBSSQBKRNKV-MNSWYVGCSA-N 0.000 description 1
- STKZKWFOKOCSLW-UMPQAUOISA-N Trp-Thr-Val Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O)[C@@H](C)O)=CNC2=C1 STKZKWFOKOCSLW-UMPQAUOISA-N 0.000 description 1
- DVLHKUWLNKDINO-PMVMPFDFSA-N Trp-Tyr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O DVLHKUWLNKDINO-PMVMPFDFSA-N 0.000 description 1
- XQMGDVVKFRLQKH-BBRMVZONSA-N Trp-Val-Gly Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(O)=O)=CNC2=C1 XQMGDVVKFRLQKH-BBRMVZONSA-N 0.000 description 1
- BABINGWMZBWXIX-BPUTZDHNSA-N Trp-Val-Ser Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)N BABINGWMZBWXIX-BPUTZDHNSA-N 0.000 description 1
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 1
- 102100022203 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 25 Human genes 0.000 description 1
- 102100022153 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Human genes 0.000 description 1
- 101710165473 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Proteins 0.000 description 1
- 108010046308 Type II DNA Topoisomerases Proteins 0.000 description 1
- 108091005966 Type III transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- NOXKHHXSHQFSGJ-FQPOAREZSA-N Tyr-Ala-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 NOXKHHXSHQFSGJ-FQPOAREZSA-N 0.000 description 1
- DANHCMVVXDXOHN-SRVKXCTJSA-N Tyr-Asp-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 DANHCMVVXDXOHN-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- SFSZDJHNAICYSD-PMVMPFDFSA-N Tyr-His-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC3=CN=CN3)NC(=O)[C@H](CC4=CC=C(C=C4)O)N SFSZDJHNAICYSD-PMVMPFDFSA-N 0.000 description 1
- WSFXJLFSJSXGMQ-MGHWNKPDSA-N Tyr-Ile-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)N WSFXJLFSJSXGMQ-MGHWNKPDSA-N 0.000 description 1
- KSCVLGXNQXKUAR-JYJNAYRXSA-N Tyr-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O KSCVLGXNQXKUAR-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- UUBKSZNKJUJQEJ-JRQIVUDYSA-N Tyr-Thr-Asp Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)N)O UUBKSZNKJUJQEJ-JRQIVUDYSA-N 0.000 description 1
- KUXCBJFJURINGF-PXDAIIFMSA-N Tyr-Trp-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)NC(=O)[C@H](CC3=CC=C(C=C3)O)N KUXCBJFJURINGF-PXDAIIFMSA-N 0.000 description 1
- MWUYSCVVPVITMW-IGNZVWTISA-N Tyr-Tyr-Ala Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)C1=CC=C(O)C=C1 MWUYSCVVPVITMW-IGNZVWTISA-N 0.000 description 1
- WYOBRXPIZVKNMF-IRXDYDNUSA-N Tyr-Tyr-Gly Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)NCC(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 WYOBRXPIZVKNMF-IRXDYDNUSA-N 0.000 description 1
- 102100037932 Ubiquitin D Human genes 0.000 description 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 1
- ZLFHAAGHGQBQQN-GUBZILKMSA-N Val-Ala-Pro Natural products CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O ZLFHAAGHGQBQQN-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- VCAWFLIWYNMHQP-UKJIMTQDSA-N Val-Glu-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N VCAWFLIWYNMHQP-UKJIMTQDSA-N 0.000 description 1
- 201000004810 Vascular dementia Diseases 0.000 description 1
- 108010003533 Viral Envelope Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 1
- 241001492404 Woodchuck hepatitis virus Species 0.000 description 1
- 102000007624 ZAP-70 Protein-Tyrosine Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108010046882 ZAP-70 Protein-Tyrosine Kinase Proteins 0.000 description 1
- HMNZFMSWFCAGGW-XPWSMXQVSA-N [3-[hydroxy(2-hydroxyethoxy)phosphoryl]oxy-2-[(e)-octadec-9-enoyl]oxypropyl] (e)-octadec-9-enoate Chemical compound CCCCCCCC\C=C\CCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCCO)OC(=O)CCCCCCC\C=C\CCCCCCCC HMNZFMSWFCAGGW-XPWSMXQVSA-N 0.000 description 1
- 208000020560 abdominal swelling Diseases 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 208000002552 acute disseminated encephalomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- 230000000961 alloantigen Effects 0.000 description 1
- KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N alpha-L-glutamyl-L-glutamic acid Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002203 alpha-beta t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 230000004596 appetite loss Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010069926 arginyl-glycyl-serine Proteins 0.000 description 1
- 210000004507 artificial chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 108010092854 aspartyllysine Proteins 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 201000008937 atopic dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 1
- 208000029028 brain injury Diseases 0.000 description 1
- 230000000981 bystander Effects 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 125000000837 carbohydrate group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 1
- 238000013354 cell banking Methods 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000011712 cell development Effects 0.000 description 1
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 1
- 230000008614 cellular interaction Effects 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 1
- 208000011235 central nervous system lupus Diseases 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000012411 cloning technique Methods 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 230000002338 cryopreservative effect Effects 0.000 description 1
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 1
- 108010004073 cysteinylcysteine Proteins 0.000 description 1
- 108010016616 cysteinylglycine Proteins 0.000 description 1
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 108091007930 cytoplasmic receptors Proteins 0.000 description 1
- 210000005220 cytoplasmic tail Anatomy 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 1
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003292 diminished effect Effects 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 230000005059 dormancy Effects 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 1
- 238000012407 engineering method Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 206010015037 epilepsy Diseases 0.000 description 1
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N ether Substances CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005167 everolimus Drugs 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000003722 extracellular fluid Anatomy 0.000 description 1
- 206010016256 fatigue Diseases 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000012997 ficoll-paque Substances 0.000 description 1
- 229960000390 fludarabine Drugs 0.000 description 1
- GIUYCYHIANZCFB-FJFJXFQQSA-N fludarabine phosphate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC(F)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@@H]1O GIUYCYHIANZCFB-FJFJXFQQSA-N 0.000 description 1
- 235000020932 food allergy Nutrition 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 210000004475 gamma-delta t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 1
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 1
- 238000010362 genome editing Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000003862 glucocorticoid Substances 0.000 description 1
- 108010055341 glutamyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 1
- XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N glycyl-L-tyrosine hemihydrate Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010033719 glycyl-histidyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 1
- 108010015792 glycyllysine Proteins 0.000 description 1
- 108010077515 glycylproline Proteins 0.000 description 1
- 108010087823 glycyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 238000011134 hematopoietic stem cell transplantation Methods 0.000 description 1
- 108010025306 histidylleucine Proteins 0.000 description 1
- 102000053917 human FOXP3 Human genes 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 229920003063 hydroxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229940031574 hydroxymethyl cellulose Drugs 0.000 description 1
- 230000006910 ice nucleation Effects 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 239000012642 immune effector Substances 0.000 description 1
- 102000027596 immune receptors Human genes 0.000 description 1
- 108091008915 immune receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000006058 immune tolerance Effects 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 238000002650 immunosuppressive therapy Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000004968 inflammatory condition Effects 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000266 injurious effect Effects 0.000 description 1
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 1
- 230000031261 interleukin-10 production Effects 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 238000010212 intracellular staining Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 239000000644 isotonic solution Substances 0.000 description 1
- 230000007803 itching Effects 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 201000010901 lateral sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 108010044056 leucyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000001638 lipofection Methods 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 235000021266 loss of appetite Nutrition 0.000 description 1
- 208000019017 loss of appetite Diseases 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 206010025135 lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 210000003563 lymphoid tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 108010044348 lysyl-glutamyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010054155 lysyllysine Proteins 0.000 description 1
- 229940124302 mTOR inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 239000003628 mammalian target of rapamycin inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 210000004779 membrane envelope Anatomy 0.000 description 1
- 210000003071 memory t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 108010068488 methionylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 1
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000011325 microbead Substances 0.000 description 1
- 201000000585 muscular atrophy Diseases 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 230000008693 nausea Effects 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 230000000626 neurodegenerative effect Effects 0.000 description 1
- 230000003959 neuroinflammation Effects 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 230000008816 organ damage Effects 0.000 description 1
- 239000002357 osmotic agent Substances 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 239000002304 perfume Substances 0.000 description 1
- 210000001428 peripheral nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 235000019271 petrolatum Nutrition 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- 239000008024 pharmaceutical diluent Substances 0.000 description 1
- 238000011422 pharmacological therapy Methods 0.000 description 1
- 108010084572 phenylalanyl-valine Proteins 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 208000031334 polycystic lipomembranous osteodysplasia with sclerosing leukoencephaly Diseases 0.000 description 1
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000001566 pro-viral effect Effects 0.000 description 1
- 230000002250 progressing effect Effects 0.000 description 1
- 201000002212 progressive supranuclear palsy Diseases 0.000 description 1
- 208000026526 progressive weakness Diseases 0.000 description 1
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 108010090894 prolylleucine Proteins 0.000 description 1
- 108010053725 prolylvaline Proteins 0.000 description 1
- AAEVYOVXGOFMJO-UHFFFAOYSA-N prometryn Chemical compound CSC1=NC(NC(C)C)=NC(NC(C)C)=N1 AAEVYOVXGOFMJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 108010054624 red fluorescent protein Proteins 0.000 description 1
- 230000022532 regulation of transcription, DNA-dependent Effects 0.000 description 1
- 230000009711 regulatory function Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 108010056030 retronectin Proteins 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 1
- 108010048818 seryl-histidine Proteins 0.000 description 1
- 108010071207 serylmethionine Proteins 0.000 description 1
- 208000015891 sexual disease Diseases 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- RMAQACBXLXPBSY-UHFFFAOYSA-N silicic acid Chemical compound O[Si](O)(O)O RMAQACBXLXPBSY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 108010013351 sodium-iodide symporter Proteins 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 208000020431 spinal cord injury Diseases 0.000 description 1
- 102000009076 src-Family Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108010087686 src-Family Kinases Proteins 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 230000008093 supporting effect Effects 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 230000009747 swallowing Effects 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 1
- 108010061238 threonyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 229940107955 thymoglobulin Drugs 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 230000005026 transcription initiation Effects 0.000 description 1
- 239000012096 transfection reagent Substances 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 108010003137 tyrosyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- IBIDRSSEHFLGSD-UHFFFAOYSA-N valinyl-arginine Natural products CC(C)C(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCN=C(N)N IBIDRSSEHFLGSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010073969 valyllysine Proteins 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 210000000264 venule Anatomy 0.000 description 1
- 231100000747 viability assay Toxicity 0.000 description 1
- 238000003026 viability measurement method Methods 0.000 description 1
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 1
- 238000011179 visual inspection Methods 0.000 description 1
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 1
- 239000001993 wax Substances 0.000 description 1
- 108010027345 wheylin-1 peptide Proteins 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/14—Blood; Artificial blood
- A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
- A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/462—Cellular immunotherapy characterized by the effect or the function of the cells
- A61K39/4621—Cellular immunotherapy characterized by the effect or the function of the cells immunosuppressive or immunotolerising
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/46433—Antigens related to auto-immune diseases; Preparations to induce self-tolerance
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/46434—Antigens related to induction of tolerance to non-self
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/4644—Cancer antigens
- A61K39/464402—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- A61K39/464429—Molecules with a "CD" designation not provided for elsewhere
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4702—Regulators; Modulating activity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
- C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/7056—Lectin superfamily, e.g. CD23, CD72
- C07K14/70564—Selectins, e.g. CD62
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70589—CD45
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0636—T lymphocytes
- C12N5/0637—Immunosuppressive T lymphocytes, e.g. regulatory T cells or Treg
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/60—Transcription factors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2510/00—Genetically modified cells
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Virology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Neurology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
Abstract
本發明係關於一種在已冷凍保存之調節T細胞(Treg)群中保持CD62L表現的方法,其包含在冷凍保存之前將編碼FOXP3多肽之聚核苷酸引入Treg群中。本發明亦關於一種在冷凍保存後之Treg群中保持CD62L的方法,其包含將編碼FOXP3多肽之聚核苷酸引入Treg群中及冷凍保存該Treg群。此外,本發明係關於編碼FOXP3之外源聚核苷酸用於在冷凍保存後之Treg群中保持CD62L表現的用途,以及經冷凍保存之工程化Treg、包含該經冷凍保存之工程化Treg的醫藥組合物及其治療用途。
Description
本發明係關於冷凍保存調節T細胞(Tregs)之方法。特定言之,本發明係關於一種在冷凍保存之前增加Tregs中FOXP3表現以在冷凍保存後保持Tregs之抑制功能的方法。本發明亦關於經冷凍保存之工程化Treg、包含該經冷凍保存之工程化Treg的醫藥組合物及其治療用途。
近年來,在過繼細胞療法(ACT)之臨床背景下使用調節T細胞(Tregs)治療一系列不同病狀已愈來愈受關注。已提出使用Tregs、基於其免疫抑制功能來控制不當免疫反應。舉例而言,Tregs已用於治療自體免疫或過敏性疾病,用於移植時的免疫調節,及改善及/或預防發炎病症中發生的免疫調節之器官損傷。此外,Tregs已得到基因工程改造以表現具有新特異性之T細胞受體(TCR)或嵌合抗原受體(CAR),從而提供達成靶向免疫抑制之優點。各種I期試驗已顯示Treg療法安全且有效,且當前正在進行若干II期試驗。
用於治療用途之Tregs的主要來源來自患者自身的血液(直接自血管中抽出或作為白血球清除術之產物)或來自臍帶血。來自此等來源之Tregs數目較低且需要實質的量來有效抑制免疫系統。因此,需要活體外擴增以獲得足夠數目之Tregs用於注射入患者體內。遵循良好生產規範(GMP)指南之典型分離及擴增方案花費約九天至二十一天。若此等細胞可以有足夠量處理及冷凍,在需要時即用於患者中,避免長時間處理對Treg品質產生不利影響,則為高度有利的。就療法規劃、輸注時序而言,此方法具有更大的靈活性,允許隨後輸注Treg及收集細胞後進行藥理學療法。因此,冷凍保存Tregs之能力至關重要。
冷凍及解凍對Treg細胞群之影響尚未明確界定。若干研究小組已報導冷凍保存可對Tregs具有不利影響且可降低Treg活力,導致細胞介素分泌異常且改變恰當Treg抑制功能及遷移所必需之表面標記物的表現。
特定而言,Florek等人(Florek等人, PLoS One, 2015, DOI: 10.137/journal.pone.0145763)已顯示Tregs之冷凍-解凍會導致CD62L (L-選擇素)表現減少及抵禦移植物抗宿主疾病(GvHD)之能力減弱。解凍之Tregs顯示結合至CD62L結合搭配物MADCAM1之能力降低以及返回次級淋巴器官之能力減弱。其他研究已顯示T細胞上之CD62L (L-選擇素)及CCR5表現在冷凍保存之後消失(De Boer等人, Bone Marrow Transplant, 1998, 22:1103-10及Hattori等人, Exp Hematol, 2001, 29:114-22)。Tregs缺乏CD62L表現引起遷移能力、定位減小及因此引起Treg控制之免疫反應的區室化減少(Sakaguchi等人, Cell, 2008, 133:775-87)。解凍之後的CD62L表現減少可藉由隔夜培養來逆轉(De Boer等人, 1998及Hattori等人, 2001)。然而,以此方式使細胞休眠對於臨床應用可能不實用,其中解凍通常在床邊進行且因此無法進一步培養。
Golab等人(Golab等人, Oncotarget, 2018, 第9卷(第11期), 第9728-9740頁)評估兩種用於Treg療法之細胞儲備策略;冷凍保存CD4+細胞以便隨後進行Treg分離/擴增,及將離體擴增的Tregs (CD4
+CD25
高CD127
低 /-細胞)冷凍保存。發現離體擴增之Tregs比CD4+細胞對冷凍保存製程更敏感,在解凍之後細胞活力低得多且Treg標記物表現降低(亦即,細胞具有表型CD4
+CD25
高CD127
-及CD4
+FoxP3
+的頻率降低)。解凍之後出現的Treg活力不良及表型減弱係藉由在隨後離體擴增13天期間再刺激Tregs來克服。類似地,Peters等人(Peters等人, PLoS One, 2008, 3:e3161)顯示,解凍之後的Treg抑制能力可藉由刺激及擴增10天來恢復。
然而,如上文所論述,在臨床背景中,此等另外的培養及擴增步驟不實用並且耗時且額外增加風險,導致使用冷凍保存之Tregs相對於新分離細胞之益處消失。因此,仍需要改良的冷凍保存方法,其中可將冷凍保存之Tregs在解凍之後立即投與患者,而無需實驗室中目前需要之冗長的解凍後救援步驟。
就此而言,本發明人已驚人地發現,冷凍保存之後,外源FOXP3表現對Treg表型提供保護作用。本發明人已測定經FOXP3轉導之Tregs在冷凍及解凍之後維持CD62L (或L-選擇素)表現。CD62L表現對於Treg之遷移及歸巢功能為至關重要的且因此對於其免疫抑制功能為重要的。因此,在冷凍保存之前用FOXP3轉導Tregs (例如作為細胞必要處理之部分)使得Tregs在解凍後維持其免疫調節及抑制功能,從而允許該等細胞即刻用於患者中。因此本發明人已提供以避免進一步培養細胞的方式解決與Tregs冷凍保存相關之問題的方案,以及用於產生可有效用於臨床中之Treg療法的路徑。
因此,本發明提供在冷凍保存之後維持其免疫抑制特性且因此具有增強之臨床功效及安全性的工程化Tregs。經冷凍保存之Tregs可用於多種治療用途,包括在個體中誘發對移植物之耐受性或或用於治療及/或預防移植排斥反應、移植物抗宿主疾病、發炎、自體免疫疾病、過敏性疾病、神經發炎性疾病(諸如肌肉萎縮性側索硬化(ALS))、代謝疾病(諸如I型糖尿病)或用於抑制免疫反應。
在第一態樣中,本發明提供一種在已冷凍保存之調節T細胞(Treg)群或Treg中保持CD62L表現的方法,其包含在冷凍保存之前將編碼FOXP3多肽之聚核苷酸引入該Treg群或Treg中。
Treg群或Treg在冷凍保存之後的CD62L表現高於對應非工程化Treg群或Treg (亦即,尚未經編碼FOXP3之聚核苷酸轉導之Treg群體或Treg)在冷凍保存之後的CD62L表現。
該方法可另外包含冷凍保存該Treg群或Treg之步驟。因此,本發明可進一步提供一種在冷凍保存之調節T細胞(Treg)群或Treg中保持CD62L表現的方法,其包含以下步驟:(a)將編碼FOXP3多肽之聚核苷酸引入Treg群或Treg中及(b)冷凍保存該Treg群或Treg。
替代地,本發明可提供一種用於冷凍保存Treg (或Tregs群)之方法,其包含(a)將編碼FOXP3之聚核苷酸引入Treg或Treg群中及(b)冷凍保存該Treg或Treg群,其中該經冷凍保存之Treg或Treg群的表現量高於對應非工程化Treg或Treg群的CD62L表現量。
在另一態樣中,本發明提供一種產生經冷凍保存之Treg或Tregs群的方法,該經冷凍保存之Treg或Tregs群的CD62L水準與對應未冷凍保存之Treg或Tregs群類似,該方法包含(a)將編碼FOXP3之聚核苷酸引入Treg或Tregs群中及(b)冷凍保存該Treg或Tregs群。
熟習此項技術者應瞭解,本文中所描述之方法步驟通常以其作用次序提供,例如步驟(a)應在步驟(b)之前執行。
本發明之方法可進一步包括以下其他步驟中之任何一或多者:自樣本分離Treg或Treg群,隨後將編碼FOXP3之聚核苷酸引入該Treg或Treg群中,解凍該Treg或Treg群及/或向個體投與解凍之Treg或Treg群。該等方法可進一步包括在冷凍保存之前擴增Treg群或Treg之步驟。替代地來看,本發明之Treg或Treg群直至已擴增才可冷凍保存。本發明之經冷凍保存之Treg或Treg群可作為現成治療產品立即使用,而無需進一步擴增、修飾或替代的其他培養步驟。
就此而言,本發明另外提供一種用於在已自冷凍保存狀態解凍之Treg或Treg群中保持CD62L表現之方法,其包含在冷凍保存及解凍之前將編碼FOXP3多肽之聚核苷酸引入Treg或Treg群中。
替代地來看,本發明提供一種在自冷凍保存狀態解凍之Treg或Treg群中保持CD62L表現之方法,其包含(a)將編碼FOXP3之聚核苷酸引入Treg或Treg群中,(b)冷凍保存該Treg或Treg群及(c)解凍該Treg或Treg群。在解凍之後/期間可立即使用Treg或Treg群而無其他擴增。該方法可進一步包含以下步驟:(i)在步驟(a)之前,自疑似含有Tregs之樣本富集Tregs,以產生Treg富集樣本;及(ii)在步驟(a)之後但在步驟(b)之前自Treg富集樣本擴增Treg或Treg群以產生經擴增之工程化Treg或Treg群。步驟(i)可進一步包含耗乏CD8+細胞。
在另一態樣中,本發明提供一種用於產生解凍之Treg或Tregs群的方法,該解凍之Treg或Tregs群的CD62L水準類似於對應的未冷凍保存之Treg或Tregs群,該方法包含(a)將編碼FOXP3之聚核苷酸引入Treg或Tregs群中,(b)冷凍保存該Treg或Tregs群及(c)解凍該Treg或Treg群。在解凍之後/期間可立即使用Treg或Treg群而無其他擴增。該方法可進一步包含以下步驟:(i)在步驟(a)之前,自疑似含有Tregs之起始細胞樣本富集Tregs,以產生Treg富集樣本;及(ii)在步驟(a)之後但在步驟(b)之前自Treg富集樣本擴增Treg或Treg群以產生經擴增之工程化Treg或Treg群。步驟(i)可進一步包含耗乏CD8+細胞。
樣本(亦稱為含有Treg細胞之樣本或簡稱含有細胞之樣本)可包含以下或由以下組成:全血、臍帶血、白血球錐、血錐、外周血液單核細胞(PBMC)或白血球採集物。通常,樣本可包含以下或由以下組成:白血球錐或一或多種白血球採集物。通常,樣本來自人類供者。供者可為健康的或可患有疾病,例如神經退化性疾病(諸如ALS)或自體免疫疾病(諸如I型糖尿病)或可為移植患者。
該Treg群(或Treg)之冷凍保存可包含以下步驟:(bi)將該Treg群懸浮於冷凍保存培養基中;(bii)冷凍來自(bi)之Treg群;及(biii)在低於-130℃之溫度下儲存來自(bii)之該Treg群。適合之冷凍保存培養基可為此項技術中已知之任何冷凍保存培養基,如下文所詳細論述。較佳地,冷凍保存培養基將含有一或多種冷凍保護劑且下文將論述適合冷凍保護劑。較佳地,冷凍保存培養基及冷凍保護劑將遵守良好生產規範(GMP)標準。
本發明之方法可進一步包含以下步驟中之任何一或多者:在冷凍保存(步驟(b))之前預冷卻該Treg群(或Treg)及/或待用於冷凍保存之任何步驟中的任何一或多種(且較佳所有)試劑或裝置;以每分鐘約-1℃之可控冷凍速率冷凍該Treg群(或Treg)(根據步驟(b));及/或在步驟(biii)之前將Treg群(或Treg)在-80℃下儲存至多24小時。「試劑」可包括例如冷凍保存培養基,且「裝置」可包括例如維持可控冷凍速率之任何冷凍裝置。適合之試劑及裝置可為此項技術中已知的用於冷凍保存之任何試劑或裝置。較佳地,此類試劑及裝置將符合GMP標準。
步驟(biii)可包含將該Treg群儲存於液氮中。液氮之溫度可為約-196℃。
解凍該Treg群(或Treg)之步驟可包含將Treg組合物自低於-130℃之溫度升溫至在約0℃至10℃之間的溫度,視情況其中升溫Treg群包含將Treg組合物置放於保持在約37℃之水浴中。
冷凍保存及/或解凍步驟可根據GMP標準在封閉系統或A級環境中進行。
Treg群可藉由選擇CD4
+CD25
+CD127
-及/或CD4
+CD25
+CD127
低細胞或藉由選擇CD4
+CD25
高CD127
-及/或CD4
+CD25
+CD127
低細胞而自樣本分離。Treg群可藉由選擇CD45RA
+細胞,較佳CD4
+CD25
+CD127
低CD45RA
+細胞來分離。因此,本發明之經冷凍保存之Treg群可包含至少70%、至少80%、至少90%、或至少95%CD4
+CD25
+CD127
-、CD4
+CD25
+CD127
低及/或CD4
+CD25
+CD127
低CD45RA
+Treg細胞。
此外,經冷凍保存之Treg群可包含少於20% CD8+細胞、少於10% CD8+細胞、較佳少於5% CD8+細胞且更加少於2% CD8+細胞。就此而言,本發明之方法可包含在轉導步驟之前耗乏CD8+細胞之步驟(亦即,在以上方法之步驟(a)之前,其包含將編碼FOXP3之聚核苷酸引入Treg或Treg群中)。
在第二態樣中,本發明提供編碼FOXP3之外源聚核苷酸的用途,其用於在已冷凍保存或用於冷凍保存之Treg群或Treg中保持CD62L表現。特定言之,如上文所論述,將外源聚核苷酸引入Treg群或Treg中,且其表現對Treg群或Treg內之CD62L表現量提供保護作用。
本發明之第三態樣提供包含編碼FOXP3多肽之外源聚核苷酸的經冷凍保存之工程化Treg群或Treg,其中工程化Treg群或Treg在冷凍保存之後比對應非工程化Treg群或Treg在冷凍保存之後具有更高CD62L表現量。
本發明進一步提供藉由本發明之方法可獲得或獲得之Treg群或Treg (例如冷凍保存或解凍之細胞)。替代地來看,本發明提供包含編碼FOXP3多肽之外源聚核苷酸的解凍Treg或Treg群,其中工程化Treg或Treg群在解凍之後比對應非工程化Treg或Treg群在解凍之後具有更高CD62L表現量。
FOXP3多肽可包含與SEQ ID NO. 1至少80%一致之胺基酸序列或其功能片段。編碼FOXP3之聚核苷酸可存在於表現載體內。
方法可進一步包含將編碼外源T細胞受體(TCR)之聚核苷酸或編碼嵌合抗原受體(CAR)之聚核苷酸引入Treg群或Treg中,或經冷凍保存之工程化Treg群或Treg可包含編碼外源T細胞受體(TCR)之聚核苷酸或編碼嵌合抗原受體(CAR)之聚核苷酸。編碼FOXP3多肽之聚核苷酸及編碼外源TCR或CAR之聚核苷酸可藉由單一表現載體提供。
TCR或CAR可針對任何所需靶分子,尤其針對靶細胞上表現之靶分子。適合TCR及CAR在下文論述。在一實施例中,CAR係針對HLA抗原,例如HLA-A2。
載體可包含編碼FOXP3多肽之第一聚核苷酸及編碼外源TCR或CAR之第二聚核苷酸,其中第一聚核苷酸及第二聚核苷酸可操作地連接於同一啟動子,且其中第一聚核苷酸在第二聚核苷酸上游。編碼FOXP3之聚核苷酸與編碼外源TCR或CAR之聚核苷酸之間可存在內部自裂解序列。適合啟動子及自裂解序列在下文論述。
本發明之方法可進一步包含將編碼包含自殺部分之安全開關的聚核苷酸引入Treg群或Treg中或本發明之經冷凍保存之工程化Treg群或Treg可包含含有自殺部分之安全開關。因此,在一個實施例中,編碼FOXP3及視情況CAR/TCR之聚核苷酸/核酸分子亦可對包含自殺部分之安全開關進行編碼。特定言之,核酸分子及構築體可設計成編碼對單一核酸分子或構築體內之各別組分(例如,三種組分(例如FOXP3、外源TCR或CAR及安全開關)),使得各組分可在細胞中作為個別組分產生,亦即呈離散實體(亦即彼此不連接且在實體上不同)形式。因此,由核酸分子編碼之表現組分可以各別且相異或離散之功能多肽形式分開地定位於細胞中或細胞上。此藉由在核酸分子中編碼裂解序列來達成,尤其在編碼各別組分之核苷酸序列之間編碼自裂解序列來達成。
本文揭示之聚核苷酸(例如編碼FOXP3及/或外源TCR或CAR及/或安全開關)可藉由病毒轉導,較佳藉由反轉錄病毒或慢病毒轉導引入Treg群或Treg中。
在第四態樣中,本發明提供一種醫藥組合物,其包含如本文所描述之經冷凍保存之工程化Treg群或Treg,或解凍之Treg或Treg群。
在第五態樣中,本發明提供如本文所描述之經冷凍保存之工程化Treg群或Treg、如本文所描述之解凍Treg或Treg群或醫藥組合物,其用於預防及/或治療疾病。
在第六態樣中,本發明提供如本文所描述之冷凍保存之工程化Treg群或Treg、解凍之Treg或Treg群或醫藥組合物用於製備供預防及/或治療疾病之藥物的用途。
在第七態樣中,本發明提供一種預防及/或治療疾病之方法,其包含向個體投與如本文所描述之經冷凍保存之工程化Treg群或Treg、如本文所描述之解凍Treg或Treg群或醫藥組合物。
疾病可為自體免疫疾病、過敏性疾病、移植排斥反應、移植物抗宿主疾病、發炎、神經發炎性疾病(諸如肌肉萎縮性側索硬化(ALS))或代謝疾病(諸如糖尿病(例如I型糖尿病))。本發明亦關於如本文所描述之冷凍保存之工程化Treg群或Treg或如本文所描述使用之醫藥組合物,或如本文所描述之冷凍保存之工程化Treg群或Treg或醫藥組合物用於抑制免疫反應的用途。
在一實施例中,提供一種使冷凍保存後之Treg或Treg群返回次級淋巴器官之能力相比於冷凍保存後之對應非工程化Treg或Treg群改良的方法,其包含在冷凍保存之前將編碼FOXP3多肽之聚核苷酸引入Treg或Treg群中之步驟。
在另一實施例中,提供一種刪除如本文所定義之冷凍保存之Treg或Tregs群的方法,該Treg或Tregs群包含編碼FOXP3之核酸分子/聚核苷酸、表現構築體或載體及安全開關,該方法包含將冷凍保存之Treg或Treg群暴露於識別安全開關內之自殺部分之各別細胞缺失劑(諸如抗體)的步驟。藉由結合於自殺部分,細胞刪除劑可靶向待刪除之細胞。該方法可為活體外方法。
本發明亦可提供一種用於在冷凍保存之後增加Treg或Treg群之穩定性及/或抑制功能的方法,其包含在冷凍保存之前將如本文所提供之核酸分子/聚核苷酸、表現構築體或載體引入細胞中之步驟。
本發明之方法提供離體擴增之冷凍保存之治療性Treg或Treg群,其在解凍後且不進一步擴增的情況下保持經擴增的工程化Treg或Treg群在冷凍保存之前的較高活力、純度及效能。因此,本發明之細胞可用作現成治療劑。
本發明尋求之保護如申請專利範圍中所定義。
本發明人已驚人地發現用外源FOXP3轉導調節細胞使其CD62L之表現保持在一定水準,該水準允許在冷凍保存之後維持調節功能。因此,本發明提供在已冷凍保存之調節T細胞(Treg)群(或Treg)中保持CD62L表現之方法,其包含在冷凍保存之前將編碼FOXP3多肽之聚核苷酸引入至Treg群中。替代地來看,本發明提供一種產生經冷凍保存之Treg或Tregs群的方法,該冷凍保存之Treg或Tregs群的CD62L水準與對應的未冷凍保存之Treg或Tregs群類似,該方法包含(a)將編碼FOXP3之聚核苷酸引入Treg或Tregs群中及(b)冷凍保存該Treg或Tregs群。本發明亦提供包含編碼FOXP3多肽之外源聚核苷酸的經冷凍保存之工程化Treg群(或Treg),其中工程化Treg群在冷凍保存之後比對應的非工程化Treg群在冷凍保存之後具有更高CD62L表現(或可替代地,CD62L表現量類似於對應的未冷凍保存之Treg或Treg群)。
調節 T 細胞「調節T細胞(Treg)或T調節細胞」為具有免疫抑制功能之免疫細胞,其控制細胞病變免疫反應且為維持免疫耐受性所必需的。如本文所用,術語Treg係指具有免疫抑制功能之T細胞。
如本文所使用之T細胞為淋巴細胞,其包括任何類型之T細胞,諸如α β T細胞(例如CD8或CD4+)、γ δ T細胞、記憶T細胞或Treg細胞。
免疫抑制功能及術語「免疫反應」可適當地指Treg響應於刺激(諸如病原體、同種抗原或自體抗原)而減小或抑制藉由免疫系統促進之多種生理及細胞效應中之一或多者的能力。此類效應之實例包括增加習知T細胞(Tconv)增殖及促炎性細胞介素分泌。任何此類效應均可用作免疫反應強度之指標。Tconv在Tregs存在下之相對較弱免疫反應表明Treg抑制免疫反應之能力。舉例而言,細胞介素分泌之相對減少將表明免疫反應較弱,且因此表明Tregs抑制免疫反應之能力。Tregs亦可藉由調節共刺激分子在抗原呈遞細胞(APC)(諸如B細胞、樹突狀細胞及巨噬細胞)上之表現來抑制免疫反應。CD80及CD86之表現量可用於評估活化Tregs在共培養後的活體外抑制效能。
分析在此項技術中已知用於量測免疫反應強度之指標,且從而量測Tregs之抑制能力。特定言之,抗原特異性Tconv細胞可與Tregs共培養,且將相應抗原之肽添加至共培養物中以刺激Tconv細胞之反應。Tconv細胞之增殖程度及/或其響應於肽添加而分泌之細胞介素IL-2的數量可用作共培養Tregs之抑制能力的指標。
與如本文所揭示之Tregs (或Treg群)共培養之抗原特異性Tconv細胞的增殖可比在Tregs不存在下培養之相同Tconv細胞少5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、90%、95%或99%。舉例而言,與本發明之冷凍保存之Tregs共培養之抗原特異性Tconv細胞的增殖可比在冷凍保存之非工程化Tregs存在下培養之相同Tconv細胞少5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%或99%。
與本文中之Tregs共培養之抗原特異性Tconv細胞所表現的效應細胞介素可比在Tregs不存在下(例如在冷凍保存之非工程化Tregs存在下)培養之對應Tconv細胞少至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%或至少60%。效應細胞介素可係選自IL-2、IL-17、TNFα、GM-CSF、IFN-γ、IL-4、IL-5、IL-9、IL-10及IL-13。適當效應細胞介素可選自IL-2、IL-17、TNFα、GM-CSF及IFN-γ。
已鑑別可表現不同特定標記物或特定標記物表現量不同的數種不同Tregs亞群。Tregs總體上為表現標記物CD4、CD25及FOXP3之T細胞(CD4
+CD25
+FOXP3
+)。Tregs亦可表現CTLA-4 (細胞毒性T淋巴球相關蛋白4)或GITR (糖皮質激素誘導之TNF受體)。
Treg細胞存在於周邊血液、淋巴結及組織中且供本文使用之Tregs包括胸腺衍生之自然Treg (nTreg)細胞、周邊產生之Tregs及誘導之Treg (iTreg)細胞。
可利用缺乏表面蛋白CD127或與低量表現之表面蛋白CD127組合的細胞表面標記物CD4及CD25來鑑別Treg (CD4
+CD25
+/ 高CD127
-或CD4
+CD25
+CD127
低)。使用此類標記物鑑別Tregs為此項技術中已知的且描述於例如Liu等人(JEM; 2006; 203; 7(10); 1701-1711)。
Treg可為CD4
+CD25
+FOXP3
+T細胞、CD4
+CD25
+CD127
−T細胞或CD4
+CD25
+FOXP3
+CD127
− / 低T細胞。
適當地,Treg可為自然Treg (nTreg)。如本文所用,術語「自然Treg」意謂胸腺衍生之Treg。自然Tregs為CD4
+CD25
+FOXP3
+Helios
+神經纖毛蛋白1
+ 。與iTregs相比,nTregs對PD-1 (計劃性細胞死亡-1,pdcd1)、神經纖毛蛋白1 (Nrp1)、Helios (Ikzf2)及CD73的表現更高。nTregs可個別地基於Helios蛋白或神經纖毛蛋白1 (Nrp1)的表現而區別於iTregs。
Treg可具有去甲基化Treg特異性去甲基化區域(TSDR)。TSDR為調節Foxp3表現之重要甲基化敏感元件(Polansky, J.K.等人, 2008. European journal of immunology, 38(6), 第1654-1663頁)。
其他適合之Tregs包括(但不限於) Tr1細胞(其不表現Foxp3,且具有高IL-10產生);CD8
+FOXP3
+T細胞;及γδ FOXP3
+T細胞。
已知存在不同Tregs亞群,包括初始Treg (CD45RA
+FoxP3
低)、效應/記憶Tregs (CD45RA
-FoxP3
高)及產生細胞介素之Tregs (CD45RA
-FoxP3
低)。「記憶Tregs」為表現CD45RO且被認為呈CD45RO
+之Tregs。此等細胞與初始Tregs相比,CD45RO之水準增加(例如CD45RO增加至少10、20、30、40、50、60、70、80或90%),且與初始Tregs相比,其較佳不表現或具有低水準之CD45RA (mRNA及/或蛋白質)(例如,與初始Tregs相比,CD45RA減少至少80、90或95%)。「產生細胞介素之Tregs」為相比於初始Tregs,不表現或具有極低水準之CD45RA (mRNA及/或蛋白質)(例如,與初始Tregs相比,CD45RA減少至少80、90或95%)且相比於記憶Tregs,具有低水準之FOXP3 (例如與記憶Tregs相比,小於50、60、70、80或90%之FOXP3)的Tregs。產生細胞介素之Tregs可產生干擾素γ,且活體外抑制能力可低於初始Tregs (例如比初始Tregs之抑制能力低50、60、70、80或90%)。
本文提及表現量可指mRNA或蛋白質表現。
特定言之,對於細胞表面標記物,諸如CD45RA、CD25、CD4、CD45RO、CD62L等,表現可指細胞表面表現,亦即在細胞表面上表現之標記蛋白的量或相對量。表現量可藉由此項技術之任何已知方法測定。舉例而言,mRNA表現量可藉由北方墨點法/陣列分析測定,且蛋白質表現可藉由西方墨點法,或較佳藉由FACS、使用針對細胞表面表現之抗體染色測定。
特定言之,Treg可為初始Treg。在本文中可互換地使用之「初始調節T細胞、初始T調節細胞或初始Treg」係指表現CD45RA (特定言之,在細胞表面上表現CD45RA)之Treg細胞。初始Tregs由此描述為CD45RA
+ 。初始Tregs總體上代表尚未藉由肽/MHC、經由其內源性TCR活化之Tregs,然而效應/記憶Tregs係指已經由其內源性TCR刺激活化之Tregs。通常,初始Treg可比非初始Treg細胞(例如記憶Treg細胞)表現至少10、20、30、40、50、60、70、80或90%以上的CD45RA。替代地來看,初始Treg細胞表現CD45RA的量可為非初始Treg細胞(例如記憶Treg細胞)的至少2、3、4、5、10、50或100倍。CD45RA之表現量可容易藉由此項技術之方法測定,例如藉由使用市售抗體之流動式細胞測量術測定。通常,非初始Treg細胞不表現CD45RA或CD45RA表現量低。
特定言之,初始Tregs可不表現CD45RO,且可視為CD45RO
- 。因此,初始Tregs表現的CD45RO比記憶Treg低至少10、20、30、40、50、60、70、80或90%,或可替代地看,表現的CD45RO比記憶Treg細胞低至少2、3、4、5、10、50或100倍。
儘管初始Tregs如上文所論述表現CD25,但CD25表現量可比記憶Tregs中之表現量低,此視初始Tregs之來源而定。舉例而言,對於自周邊血液分離之初始Tregs,CD25之表現量可比記憶Tregs低至少10、20、30、40、50、60、70、80或90%。此類初始Tregs可視為中等量至低量表現CD25。然而,熟習此項技術者應瞭解自臍帶血分離之初始Tregs可不顯示此差異。
通常,如本文所定義之初始Treg可為CD4
+、CD25
+、FOXP3
+、CD127
低、CD45RA
+。
如本文所使用之CD127低表現係指CD127之表現量低於來自同一個體或供者之CD4
+非調節或Tcon細胞。特定言之,與來自同一個體或供者之CD4
+非調節或Tcon細胞相比,初始Tregs可表現小於90、80、70、60、50、40、30、20或10%之CD127。CD127之水準可藉由此項技術中標準之方法評估,包括對抗CD127抗體染色之細胞進行流動式細胞測量術。
通常,初始Tregs不表現CCR4、HLA-DR、CXCR3及/或CCR6或其表現量低。特定言之,初始Tregs表現CCR4、HLA-DR、CXCR3及CCR6的量可低於記憶Tregs,例如表現量低至少10、20、30、40、50、60、70、80或90%。
初始Tregs可進一步表現其他標記物,包括CCR7
+及CD31
+。經分離之初始Tregs可藉由此項技術中已知之方法鑑別,包括測定經分離細胞之細胞表面上是否存在一組如上文所論述之標記物中之任何一或多者。舉例而言,CD45RA、CD4、CD25及CD127低可用於判定細胞是否為初始Treg。測定經分離細胞是否為初始Tregs或具有所需表型之方法可如下文關於可進行之其他步驟所論述進行,且判定細胞標記物之存在及/或表現量之方法為此項技術中熟知的且包括例如使用市售抗體之流動式細胞測量術。
適合地,Treg或Treg群自樣本分離,其中樣本包含以下或由以下組成:全血、臍帶血、白血球錐、血錐、外周血液單核細胞(PBMC)或獲自個體之一或多種白血球採集物。Treg可自獲自個體之PBMC分離。Treg可自獲自個體之白血球錐分離。Treg可自獲自個體之一或多種白血球採集物分離。適合地,獲得樣本之個體為哺乳動物,較佳為人類。通常,樣本可藉由抽取血液或藉由血球分離術獲得。
適合地,Treg與待投與工程化Treg的個體匹配(例如HLA匹配)或為自體的。適合地,待治療之個體(亦即,工程化細胞待投與的個體)為哺乳動物,較佳為人類。可使用同種異體Tregs,其中例如細胞已經受基因編輯技術以預防排斥反應或GvHD。因此,Treg細胞可自患者自身周邊血液(第1方)離體產生,或在供體周邊血液(第2方)之造血幹細胞移植的背景下產生,或自非相關供者(第3方)之周邊血液產生。
適合地,Treg為細胞群之一部分。適合地,Tregs群包含至少60%Tregs,諸如至少65、70、75、80、85、90、95、97、98或99% Tregs。在一個實施例中,Tregs群可僅包含Tregs。此類群可稱為「Treg群」或「富集Treg群」。術語「Treg群」及「Tregs群」在本文中可互換地使用。自樣本獲得或分離Tregs群之方法在下文論述。熟習此項技術者應瞭解,Tregs群可包含不具有調節表型之其他細胞類型。此外,在本發明之方法期間,Treg群中之Tregs百分比可由於引入編碼FOXP3之聚核苷酸而增加。Treg群可包含不同Tregs亞群,或可包含單一Treg亞群,例如初始Tregs。
在一些實施例中,為提供高純度之Treg群,本發明方法之分離/富集步驟涉及耗乏CD8+細胞。表現CD8之細胞的耗乏係指減少此類細胞在群中之百分比或數目,但可能不會使得表現CD8之全部細胞完全移除。在一些實施例中,Treg群中至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或100%之CD8細胞可耗盡。CD8耗乏可使用CD8珠粒、根據標準方案實現。
在一些態樣中,可由誘導性祖細胞(例如iPSC)或胚胎祖細胞離體分化為Treg (例如直接分化為Treg或間接分化為Tcon細胞及轉化為Treg,如下文所論述)而衍生Treg。如本文所描述之核酸分子或載體在分化為Treg之前或之後引入誘導性祖細胞或胚胎祖細胞中。適用於分化之方法為此項技術中已知且包括Haque等人, J Vis Exp., 2016, 117, 54720 (以引用之方式併入本文中)中揭示之方法。
如本文所使用,術語「習知T細胞」或Tcon或Tconv (在本文中可互換使用)意謂表現αβ T細胞受體(TCR)以及共受體之T淋巴球,該共受體可為分化叢集4 (CD4)或分化叢集8 (CD8)且不具有免疫抑制功能。習知T細胞存在於中周邊血液、淋巴結及組織中。適合地,工程化Treg可由Tcon藉由引入包括FOXP3編碼序列之核酸產生。替代地,工程化Treg可由Tcon藉由在IL-2及TGF-β存在下活體外培養CD4+CD25-FOXP3-細胞而產生。
本發明提供包含如所定義或本文所述之Treg的Treg或Treg群。如本文所使用之「Treg」亦可稱為「細胞」或「Treg細胞」且如本文所使用之「Treg群」亦可稱為「細胞群」或「Treg細胞群」。應瞭解,Treg群可包括包含如本文所定義之核酸分子/聚核苷酸分子、多肽分子、表現構築體或載體的本發明Treg細胞;與不包含如本文所描述之核酸分子/聚核苷酸分子、多肽分子、表現構築體或載體的Treg細胞,例如未轉導或未轉染之細胞。儘管在一較佳實施例中,群中之所有Treg細胞可包含如本文所描述之核酸分子/聚核苷酸分子、多肽分子、表現構築體或載體,但所提供之細胞群中包含本發明之核酸分子/聚核苷酸分子、多肽分子、表現構築體或載體的細胞為至少10、20、30、40、50、60、70、80、90、95或99%。
自然殺傷(NK)細胞為已報導具有調節作用之免疫細胞。特定言之,NK細胞為CD56bright,其可呈現調節特徵。就此而言,本發明提供NK細胞或NK細胞群在本發明之任何方法中之用途(亦即,用NK細胞或NK群取代Treg細胞或Treg群)。亦提供包含編碼FOXP3多肽之外源聚核苷酸的NK細胞或群,其中與對應的非工程化NK細胞或群在冷凍保存之後相比,NK細胞或群在冷凍保存之後具有更高的CD62L表現。
叉頭框 P3 蛋白 ( FOXP3 )在本發明中,藉由將編碼FOXP3多肽之聚核苷酸(在本文中有時稱為第一聚核苷酸)引入細胞中而使Treg中的FOXP3表現增加。
「FOXP3」為叉頭框P3蛋白之簡稱。FOXP3為轉錄因子FOX蛋白家族之成員且在調節T細胞之發育及功能中充當調節路徑之主調節劑。如本文所使用之「FOXP3」涵蓋FOXP3之變異體、同功異型物及功能片段。
細胞(或細胞群)中之FOXP3 mRNA及/或蛋白質水準相比於尚未經修飾之對應細胞(或細胞群)可增加。舉例而言,根據本發明修飾之細胞(或此類細胞之群)中之FOXP3 mRNA及/或蛋白質水準可增加至比尚未根據本發明修飾之對應細胞(或此類細胞之群)中之水準大至少1.5倍、至少2倍、至少5倍、至少10倍、至少50倍、至少100倍、至少150倍。細胞為Treg或細胞群為Tregs群。
適合地,根據本發明修飾之細胞(或此類細胞之群)中的FOXP3 mRNA及/或蛋白質水準可增加至比尚未根據本發明修飾之對應細胞(或此類細胞之群)中的水準大至少1.5倍、2倍或5倍。細胞為Treg或細胞群為Tregs群。
用於量測特定mRNA及蛋白質水準的技術為此項技術中所熟知。細胞群(諸如Tregs)中之mRNA水準可藉由諸如以下技術來量測:Affymetrix ebioscience prime flow RNA分析、北方墨點法、基因表現系列分析(SAGE)或定量聚合酶鏈反應(qPCR)。細胞群中之蛋白質水準可藉由諸如以下技術來量測:流動式細胞測量術、高效液相層析法(HPLC)、液相層析-質譜分析(LC/MS)、西方墨點法或酶聯免疫吸附分析法(ELISA)。
「FOXP3多肽」為具有FOXP3活性之多肽,亦即,能夠結合FOXP3標靶DNA且充當調節Tregs發育及功能之轉錄因子的多肽。特定言之,FOXP3多肽可具有與野生型FOXP3 (SEQ ID NO. 1)相同或類似之活性,例如可具有野生型FOXP3多肽活性之至少40、50、60、70、80、90、95、100、110、120、130、140或150%。用於量測轉錄因子活性之技術為此項技術中所熟知。舉例而言,可藉由ChIP來量測轉錄因子DNA結合活性。轉錄因子之轉錄調節活性可藉由量化其所調節之基因的表現量來量測。基因表現可使用諸如北方墨點法、SAGE、qPCR、HPLC、LC/MS、西方墨點法或ELISA等技術、藉由量測自基因產生之mRNA及/或蛋白質之水準來定量。由FOXP3調節之基因包括細胞介素,諸如IL-2、IL-4及IFN-γ (Siegler等人 Annu. Rev. Immunol. 2006, 24: 209-26,該文獻以引用之方式併入本文中)。如下文所詳細論述,FOXP3或FOXP3多肽包括其功能片段、變異體及同功異型物,例如SEQ ID NO. 1之功能片段、變異體及同功異型物。
「FOXP3之功能片段」可指FOXP3多肽或編碼FOXP3多肽之聚核苷酸的一部分或區域,其具有與全長FOXP3多肽或聚核苷酸相同或相似活性。功能片段可具有全長FOXP3多肽或聚核苷酸活性之至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%或100%。熟習此項技術者將能夠基於FOXP3之已知結構性及功能特徵來產生功能片段。此等功能片段描述於例如Song, X.等人, 2012. Cell reports, 1(6), 第665-675頁; Lopes, J.E.等人, 2006. The Journal of Immunology, 177(5), 第3133-3142頁; 及Lozano, T.等人, 2013. Frontiers in oncology, 3, 第294頁中。此外,N及C末端截斷的FOXP3片段描述於WO2019/241549 (以引用之方式併入本文中)內,例如如下文所論述具有序列SEQ ID NO. 5之N及C末端截斷片段。
「FOXP3變異體」可包括與FOXP3多肽或編碼FOXP3多肽之聚核苷酸可至少50%、至少55%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%或至少90%一致、較佳至少95%或至少97%或至少99%一致的胺基酸序列或核苷酸序列。FOXP3變異體可具有與野生型FOXP3多肽或聚核苷酸相同或相似活性,例如可具有野生型FOXP3多肽或聚核苷酸活性之至少40、50、60、70、80、90、95、100、110、120、130、140或150%。熟習此項技術者將能夠基於FOXP3之已知結構及功能特徵及/或使用保守取代而產生FOXP3變異體。FOXP3變異體在Treg細胞內的周轉時間(或降解速率)可與野生型FOXP3相似或相同,例如為野生型FOXP3在Treg中之周轉時間(或降解速率)的至少40、50、60、70、80、90、95、99或100%。一些FOXP3變異體與野生型FOXP3相比可具有減少之周轉時間(或降解速率),例如,在SEQ ID NO. 1之胺基酸418及/或422處具有胺基酸取代之FOXP3變異體,例如S418E及/或S422A,如WO2019/241549 (以引用之方式併入本文中)中所描述且闡明於SEQ ID NO. 2至4中,其分別代表aa418、aa422及aa418及aa422突變體。
適合地,由如本文所描述之核酸分子、構築體或載體編碼之FOXP3多肽可包含人類FOXP3之多肽序列,諸如UniProtKB寄存編號Q9BZS1 (SEQ ID NO: 1)或其功能片段或變異體。
在本發明之一些實施例中,FOXP3多肽包含與SEQ ID NO. 1至少70%一致之胺基酸序列或其功能片段。適合地,FOXP3多肽包含與SEQ ID NO. 1具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%一致之胺基酸序列或其功能片段。在一些實施例中,FOXP3多肽包含或其組成為SEQ ID NO. 1或其功能片段。
在一些實施例中,如上文所論述,FOXP3多肽可包含SEQ ID NO. 1之殘基418及/或422處之突變,如SEQ ID NO. 2、SEQ ID NO. 3或SEQ ID NO. 4如所闡明。
在本發明之一些實施例中,FOXP3多肽可在N及/或C末端截斷,引起功能片段產生。特定言之,FOXP3之N及C末端截斷的功能片段可包含以下或由以下組成:SEQ ID NO. 5之胺基酸序列或與其具有至少80%、85%、90%、95%或99%一致性之其功能變異體。
適合地,FOXP3多肽可為SEQ ID NO. 1之變異體,例如天然變異體。適合地,FOXP3多肽為SEQ ID NO. 1之同功異型物。舉例而言,FOXP3多肽可包含相對於SEQ ID NO. 1之胺基酸位置72-106之缺失。替代地,FOXP3多肽可包含相對於SEQ ID NO. 1之胺基酸位置246-272之缺失。
適合地,FOXP3多肽包含SEQ ID NO. 6或其功能片段。SEQ ID NO. 6代表說明性FOXP3多肽。
適合地,FOXP3多肽包含或其組成為與SEQ ID NO. 6至少70%一致之胺基酸序列或其功能片段。適合地,FOXP3多肽包含與SEQ ID NO. 6至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%一致之胺基酸序列或其功能片段。在一些實施例中,FOXP3多肽包含或其組成為SEQ ID NO. 6或其功能片段。
適合地,FOXP3多肽可為SEQ ID NO. 6之變異體,例如天然變異體。適合地,FOXP3多肽為SEQ ID NO. 6之同功異型物或其功能片段。舉例而言,FOXP3多肽可包含相對於SEQ ID NO. 6之胺基酸位置72-106之缺失。替代地,FOXP3多肽可包含相對於SEQ ID NO. 6之胺基酸位置246-272之缺失。
適合地,編碼FOXP3多肽之聚核苷酸包含闡述於SEQ ID NO. 7中之聚核苷酸序列或由其組成,SEQ ID NO. 7代表說明性FOXP3核苷酸序列。
在本發明之一些實施例中,編碼FOXP3多肽或變異體之聚核苷酸包含與編碼功能性FOXP3多肽的SEQ ID NO. 7至少70%一致之聚核苷酸序列或其片段。適合地,編碼FOXP3多肽或變異體之聚核苷酸包含與SEQ ID NO. 7至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%一致之聚核苷酸序列或其功能片段。在本發明之一些實施例中,編碼FOXP3多肽或變異體之聚核苷酸包含編碼功能性FOXP3多肽的SEQ ID NO. 7或其片段或由其組成。
適合地,編碼FOXP3多肽之聚核苷酸包含闡述於SEQ ID No. 8中之聚核苷酸序列由其組成,SEQ ID NO. 8代表另一說明性FOXP3核苷酸。
在本發明之一些實施例中,編碼FOXP3多肽或變異體之聚核苷酸包含與編碼功能性FOXP3多肽的SEQ ID NO. 8至少70%一致之聚核苷酸序列或其片段。適合地,編碼FOXP3多肽或變異體之聚核苷酸包含與編碼功能性FOXP3多肽的SEQ ID NO. 8至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%一致之聚核苷酸序列或其片段。在本發明之一些實施例中,編碼FOXP3多肽或變異體之聚核苷酸包含編碼功能性FOXP3多肽的SEQ ID NO. 8或其片段或由其組成。
適合地,編碼FOXP3多肽或其功能片段或變異體之聚核苷酸可經密碼子優化。適合地,編碼FOXP3多肽或其功能片段或變異體之聚核苷酸可經密碼子優化以在人類細胞中表現。
如本文所使用之術語「變異體」包括來自序列或發生於序列中之一(或多個)胺基酸殘基之任何取代、改變、修飾、置換、缺失及/或添加,其限制條件為所得蛋白質或多肽保持所需功能。替代地來看,本文所提及之變異體或衍生物為功能變異體或衍生物。
通常,胺基酸取代可例如由1、2或3至10或20個取代達成,其限制條件為經修飾序列保持所需活性或能力。胺基酸取代可包括使用非天然存在之類似物。
蛋白質或肽亦可具有胺基酸殘基之缺失、插入或取代,其產生靜默變化且產生功能上等效之蛋白質。只要保持內源性功能,即可基於殘基之極性、電荷、溶解性、疏水性、親水性及/或兩性性質的相似性而達成有意的胺基酸取代。舉例而言,帶負電荷之胺基酸包括天冬胺酸及麩胺酸;帶正電荷之胺基酸包括離胺酸及精胺酸;且具有親水性值類似之不帶電極性頭基之胺基酸包括天冬醯胺、麩醯胺酸、絲胺酸、蘇胺酸及酪胺酸。
保守取代可例如根據下表1來進行。
表1
脂族 | 非極性 | G A P |
I LV | ||
極性-不帶電荷 | C S T M | |
N Q | ||
極性-帶電荷 | D E | |
K R | ||
芳族 | H F W Y |
一致性比較可藉由目測或更通常藉助於容易獲得的序列比較程式來進行。此等市售電腦程式可計算兩個或更多個序列之間的一致性百分比。
序列一致性百分比可針對連續序列計算,亦即,一個序列與另一序列比對且一個序列中之各胺基酸直接與另一序列中之對應胺基酸比較,一次一個殘基。此被稱為「無空位」比對。通常,此類無空位比對僅針對相對較短數目個殘基進行。
儘管此為極簡單且一致之方法,但未能考慮到的是,例如在原本一致之序列對中,核苷酸序列中之一個插入或缺失可導致後續密碼子無法對準,由此在進行全局比對時可能引起同源性百分比大幅降低。因此,大部分序列比較方法經設計以產生最佳比對,該等最佳比對考慮可能的插入及缺失而不會對整體同源分數產生不當的罰分。此係藉由在序列比對時插入「空位」以嘗試最大化局部同源性來達成。
然而,此等較複雜方法將「空位罰分」賦予在比對時出現之各空位,因此對於相同數目之一致胺基酸而言,空位儘可能少之序列比對(反映出兩個比較序列之間的相關性較高)所達成的分數將高於空位多之序列比對。通常使用「仿射空位成本」,其中空位存在的成本相對較高,而空位後續各殘基的懲分較小。此為最常用之空位評分系統。當然,空位罰分高將使得空位較少之比對最佳。大多數比對程式允許修改空位罰分。然而,在使用此類軟體進行序列比較時,較佳使用預設值。舉例而言,當使用GCG Wisconsin Bestfit套裝軟體時,胺基酸序列之預設空位罰分對於空位為-12且對於各延長為-4。
因此,考慮到空位罰分,計算最大同源性百分比/序列一致性首先需要產生最佳比對。適用於進行此類比對之電腦程式為GCG Wisconsin Bestfit套裝軟體(University of Wisconsin, U.S.A.; Devereux等人 (1984) Nucleic Acids Res. 12: 387)。可進行序列比較之其他軟體實例包括(但不限於) BLAST套裝軟體(參見Ausubel等人 (1999) ibid - Ch. 18)、FASTA (Atschul等人 (1990) J. Mol. Biol. 403-410)及GENEWORKS比較工具套件。BLAST及FASTA均可用於離線及線上搜尋(參見Ausubel等人(1999) ibid, 第7-58頁至第7-60頁)。然而,對於一些應用,較佳使用GCG Bestfit程式。另一種稱為BLAST 2序列之工具亦可用於比較蛋白質及核苷酸序列(參見FEMS Microbiol. Lett. (1999) 174: 247-50; FEMS Microbiol. Lett. (1999) 177: 187-8)。
儘管可在一致性方面量測最終同源性百分比,但比對過程本身通常不基於全部成對或全部不成對的比較。取而代之,通常使用按比例調整之相似性得分矩陣,該矩陣基於化學相似性或進化距離為各成對比較賦分。通常使用之此類矩陣之實例係BLOSUM62矩陣-BLAST程式套件之預設矩陣。若供應,則GCG Wisconsin程式通常使用公共預設值或自定義符號比較表(其他細節參見使用者手冊)。對於一些應用,較佳使用GCG套裝軟體之公共預設值,或在其他軟體之情況下使用預設矩陣,諸如BLOSUM62。適合地,一致性百分比係在整個參考及/或查詢序列中測定。
一旦軟體產生最佳比對,即可計算同源性百分比、較佳計算序列一致性百分比。軟體通常將此作為序列比較之部分且產生數值結果。
變異體及片段可使用標準重組DNA技術(諸如定點突變誘發)製備。當要進行插入時,可製備編碼插入之合成性DNA以及與插入位點任一側之天然存在之序列對應的5'及3'側接區域。側接區域將含有與天然存在之序列中之位點對應的便利限制位點,以使得該序列可用適當酶切割且將合成性DNA接合至切點。隨後根據本發明表現DNA以製得所編碼之蛋白質。此等方法僅說明此項技術中已知用於操縱DNA序列之眾多標準技術,且亦可使用其他已知技術。
熟習此項技術者應瞭解,Treg內之FOXP3表現可藉由將聚核苷酸引入細胞中而間接增加,該聚核苷酸編碼增加FOXP3轉錄及/或轉譯或增加FOXP3半衰期(例如增加至少10、20、30、40、50、60、70、80或90%)或功能(例如根據經轉導之Treg之抑制能力測定,如先前所論述量測)之蛋白質。舉例而言,可將聚核苷酸引入Treg中,藉由與內源性FOXP3啟動子或發現於編碼區上游的非編碼序列(CNS,例如CNS1、2或3)相互作用而增加內源FOXP3轉錄。特定言之,FOXP3表現可藉由在Treg內引入編碼c-Rel、p65、Smad3或CREB中之任何一或多者的聚核苷酸而增加。
在此態樣中,本發明亦提供在已冷凍保存之調節T細胞(Treg)群中保持CD62L表現的方法,其包含引入編碼蛋白質的聚核苷酸,該蛋白質增加FOXP3轉錄及/或轉譯或增加FOXP3半衰期或功能。
替代地來看,本發明亦提供在冷凍保存之調節T細胞(Treg)群或Treg中保持CD62L表現的方法,其包含以下步驟:(a)將編碼增加FOXP3轉錄及/或轉譯或增加FOXP3半衰期或功能之蛋白質的聚核苷酸引入Treg群或Treg中及(b)冷凍保存該Treg群或Treg。
替代地,本發明可提供一種用於冷凍保存Treg (或Treg群)之方法,其包含(a)將編碼增加FOXP3轉錄及/或轉譯或增加FOXP3半衰期或功能之蛋白質的聚核苷酸引入Treg或Treg群中及(b)冷凍保存該Treg或Treg群,其中該經冷凍保存之Treg或Treg群相比於對應的非工程化Treg或Treg群具有更高CD62L表現量。
在另一態樣中,本發明提供一種產生經冷凍保存之Treg或Tregs群的方法,該冷凍保存之Treg或Tregs群的CD62L水準與未冷凍保存之Treg或Tregs群類似,該方法包含(a)將編碼增加FOXP3轉錄及/或轉譯或增加FOXP3半衰期或功能之蛋白質的聚核苷酸引入Treg或Tregs群中及(b)冷凍保存該Treg或Tregs群。
熟習此項技術者亦將瞭解,直接地將編碼CD62L之聚核苷酸引入如本文所論述之細胞(例如Treg)中,可在冷凍保存之後保持功能(例如抑制功能)或穩定性。在此態樣中,本發明進一步提供在冷凍保存期間/之後保持Treg或Treg群(或其他細胞,例如NK細胞)之功能或穩定性的方法,其包含在冷凍保存之前將編碼CD62L之聚核苷酸引入細胞或細胞群中之步驟。本發明進一步提供經冷凍保存之細胞(尤其Treg),其包含編碼外源CD62L之聚核苷酸,其中該細胞具有與對應的非冷凍保存之細胞類似的功能或穩定性。聚核苷酸可對包含SEQ ID NO. 9之胺基酸序列的CD62L或其功能性片段或功能性變異體(亦即,保持SEQ ID NO. 9之CD62L之至少50%、60%、70%、80%、90%或95%功能的片段或變異體)進行編碼。變異體可與SEQ ID No. 9具有至少60%、70%、80%、90%或95%一致性。
表型標記物表現CD62L亦稱為L-選擇素,為存在於某些T淋巴球(例如Tregs)及某些其他免疫細胞(諸如嗜中性白血球)之細胞外表面上的歸巢受體或細胞表面黏著分子。其屬於蛋白質之選擇素家族,其識別唾液酸化碳水化合物基團。其藉由ADAM17裂解。
CD62L在淋巴球-內皮細胞相互作用中發揮重要作用且CD62L表現與Treg擴增後更強抑制作用之群有關。CD62L充當Treg經由高內皮微靜脈進入次級淋巴組織之「歸巢受體」。內皮細胞上所存在之配位體將結合於表現CD62L之Treg,減緩Treg經由血液之遷移,且促進在彼時進入次級淋巴器官中。
如本文所使用之術語「歸巢(homing/home)」意謂行進至含有標靶(例如結合靶)之位點或位置。在表現CD62L之Treg細胞的上下文中,此可意謂行進至表現CD62L結合搭配物MADCAM1之位置。
CD62L係細胞表面標記物且除其他標記物之外,CD62L之存在表明擴增的細胞已保持Treg表型。保持Treg表型之細胞亦可能保持其常見抑制功能。
CD62L通常具有以下胺基酸序列: MIFPWKCQSTQRDLWNIFKLWGWTMLCCDFLAHHGTDCWT YHYSEKPMNW QRARRFCRDNYTDLVAIQNKAEIEYLEKTLPFSRSYYWIGIRKIGGIWTW VGTNKSLTEE AENWGDGEPNNKKNKEDCVEIYIKRNKDAGKWNDDACHKLKAALCYTASCQPWSCSGHGECVEIINNYTCNCDVGYYGPQCQFVIQCEPLEAPELGTMDCTHPLGNFSFSSQCAFSCSEG TNLTGIEETTCGPFGNWSSPEPTCQVIQCE PLSAPDLGIM NCSHPLASFS FTSACTFICS EGTELIGKKKTICESSGIWS NPSPICQKLD KSFSMIKEGD YNPLFIPVAV MVTAFSGLAF IIWLARRLKK GKKSKRSMND PY (SEQ ID NO. 9) |
如本文所描述之經冷凍保存之工程化Treg (或Treg群)相較於無外源FOXP3之經冷凍保存之Treg可具有保持之細胞表面標記物表現,尤其是保持之CD62L細胞表面表現。如本文所使用之「保持(Preserved/preserving/preservation)」意謂細胞表面標記物表現(例如CD62L)之量保持與對應的新製(亦即,非冷凍保存或非冷凍) Treg上之細胞表面標記物表現量相似或類似,亦即,細胞表面標記物表現可與新製Treg上之細胞表面標記物表現量相同(亦即,無顯著差異),或比新製Treg上之表現僅少1%,最多少30%。較佳地,其將少不超過5%、10%、15%、20%或25%。應瞭解,通常,用於比較細胞表面標記物(通常CD62L)表現量的冷凍保存之Treg及新製Treg細胞將為相同細胞類型,或衍生自相同細胞類型。舉例而言,應將冷凍之初始CD45RA+ Treg中的CD62L水準應與新製或非冷凍之初始CD56RA+ Treg中的CD62L水準進行比較。通常,對應之非冷凍保存之細胞(Treg)將以與本發明細胞或用於本發明之細胞相同之方式進行加工或處理,且將相同聚核苷酸序列引入對應的非冷凍保存之細胞中。然而,將不進行冷凍保存步驟(及任何解凍步驟)。因此,對應的非冷凍保存細胞通常地對應之非冷凍保存的工程化細胞。
替代性地看,如本文所使用之「保持(Preserved/preserving/preservation)」意謂如本文所描述之冷凍保存之工程化Treg上的細胞表面標記物之量高於(尤其顯著高於)對應之冷凍保存的未轉導Treg上之細胞表面標記物之量。較佳地,細胞表面標記物表現量將比冷凍保存的未轉導Treg上之細胞表面標記物表現高至少10%%、高至少15%、高至少20%、高至少25%、高至少30%、高至少35%、高至少40%、高至少45%、高至少50%、高至少55%、高至少60%、高至少65%、高至少70%或高至少80%。如本文所使用之術語「保持(preserved/preserving)」可與術語「維持(maintained/maintaining)」互換。
如本文所使用之術語「更高CD62L表現」意謂如本文所描述之冷凍保存之工程化Treg相較於無外源FOXP3之經冷凍保存的Treg具有增加(或升高)的CD62L表現量。因此,本文中提及對應之非工程化細胞或Treg通常係指一種細胞或Treg,其已或將經受與本發明或用於本發明之細胞或Treg相同之冷凍保存步驟(及任何解凍步驟),但編碼FOXP3之外源聚核苷酸尚未引入細胞中。
包含如本文所定義之聚核苷酸、多肽、表現構築體或載體(且因此具有如本文所定義之保持及/或更高CD62L表現量)之冷凍保存Treg或Treg群與如本文所定義之冷凍保存的非工程化Treg或Treg群相比可具有增加之抑制活性(例如抑制活性增加至少5、10、20、30、40、50、60、70、80或90%)。
CD62L表現可藉由此項技術之任何熟知方法測定,包括藉由流動式細胞測量術測定。用於CD62L偵測及表現量測定之抗體可市購,例如Thermofisher CD62L (L-選擇素)單株抗體(MEL-14或DREG-56)。
如本文所描述,在冷凍保存之前,將編碼FOXP3多肽之聚核苷酸引入Treg中。術語「在冷凍保存之前」」意謂在Treg冷凍保存之前(亦即在Treg冷凍之前)。因此,如本文所描述之Treg在引入編碼FOXP3多肽之聚核苷酸之前不經受冷凍保存步驟。通常,聚核苷酸將在分離之後及擴增之前引入Treg中,兩者皆可在冷凍保存之前進行。
冷凍保存如本文所使用之術語「冷凍保存(cryopreservation/cryopreserving)」意謂在細胞保持活力之條件下(例如在冷凍期間及在解凍之任何後續步驟之後)冷凍Tregs或Treg群。細胞活力可藉由此項技術之任何熟知方法量測,例如使用活/死細胞染料之流動式細胞測量術(例如LIVE/DEAD™可固定近IR死細胞染料(Thermofisher))。通常,至少50%、60%、70%、80%、90%或95%之細胞在冷凍保存期間及之後保持活力。因此,活力係指活細胞。熟習此項技術者應瞭解,由於應用一或多種可有效阻止細胞死亡及可維持細胞結構之條件(例如,使用特定溫度、冷凍/解凍速率及/或冷凍保存劑),因此冷凍保存可允許細胞保持活力。此類條件為此項技術中已知的且在下文論述。
「冷凍保存之Treg」或「冷凍保存之Treg群」係指在如上所定義之細胞保持活力的條件下已經歷冷凍保存之Treg或Treg群,以及冷凍保存(例如呈冷凍保存或冷凍狀態)之Treg或Treg群。如先前所論述,「冷凍保存之Treg」包含外源FOXP3。此亦可稱為「冷凍保存之治療Treg或Treg群」或「冷凍保存之工程化Treg或Treg群」。
「已冷凍保存之Treg或Treg群」係指Treg或Treg群如上所述已經歷冷凍保存且可冷凍保存(例如在冷凍保存狀態下)或可不再冷凍保存,亦即,包括呈解凍狀態之Treg或Treg群(亦即,先前冷凍保存)。
如本文所使用之「在冷凍保存之後」意謂已進行冷凍保存製程。在冷凍保存之後之Tregs或Treg群可處於冷凍保存狀態(例如儲存狀態)或可解凍或正經歷解凍。
「非冷凍保存之Treg」或「非冷凍保存之Treg群」係指尚未冷凍保存,亦即從未冷凍保存或冷凍之Treg或Treg群。此類細胞可替代地稱為新製的。
「冷凍(freezing/frozen)」或「冷凍狀態」在此項技術中具有其通常意義且為液體變成固體之製程,或為製程之結果。冷凍Treg或Treg群意謂將該Treg或群之溫度降低至其粒子不再具有足以克服其間吸引力之能量的溫度。
通常,冷凍保存之工程化Treg或Treg群將在-196℃下儲存。然而,冷凍保存之工程化Treg或Treg群可在低於冷凍之任何溫度(亦即,任何低於0℃之溫度)下儲存,其中細胞(或一部分細胞)如上文所論述保持活力,例如-50℃至-196℃、-80℃至-196℃之任何溫度、或低於-55℃、低於-60℃、低於-65℃、低於-70℃、低於-75℃、低於-80℃、低於-85℃、低於-90℃、低於-95℃、低於-100℃、低於-105℃、低於-110℃、低於-115℃、低於-120℃、低於-125℃、低於-130℃、低於-135℃、低於-140℃、低於-145℃、低於-150℃、低於-155℃、低於-160℃、低於-165℃、低於-170℃之任何溫度。冷凍保存之Treg或Treg群可在低於冷凍至-196℃之任何溫度下儲存,諸如低於-175℃、低於-180℃、低於-185℃或低於-190℃。較佳地,冷凍保存之Treg或Treg群可在-80℃、低於-130℃之溫度下或在約-196℃之液氮氣相中儲存。更佳地,冷凍保存之Treg或Treg群可儲存於液氮中。
在本發明之冷凍保存步驟中,可在冷凍保存製程開始時將待使用之Treg或Treg群、任何一或多種(例如所有)試劑(例如冷凍保存培養基)及裝置(例如受控速率裝置及冷凍機,其中有多者在此項技術中已知,例如CryoMed、ThermoFisher)預冷卻(或預冷)。如本文所使用之「預冷卻(pre-chilled/pre-chilling)」意謂將溫度降低至在約4℃至8℃之間。此確保對細胞之溫度衝擊降至最低。預冷卻步驟可為例如大致5分鐘、10分鐘、15分鐘、20分鐘或30分鐘長。
在冷凍保存期間,Treg群通常藉由與如本文所描述之包含一或多種冷凍保護劑的冷凍保存培養基(亦稱為冷凍保存溶液)接觸來保護。此通常在將Treg或Treg群之溫度降低至冷凍保存溫度(亦即,降低至將儲存Treg或Treg群之溫度)之前進行。可將Treg群離心以形成細胞集結粒,且在降低溫度之前再懸浮於冷凍保存培養基中。
冷凍保存培養基通常包含完全生長培養基,其尤其可最佳化成向解凍時的活細胞提供如上文所論述之冷凍保護劑。許多不同類型之冷凍保存培養基為市售的,例如ImmunoCult- XF T細胞培養基(StemCell)。較佳地,冷凍保存培養基可為符合GMP標準之任何培養基。冷凍保護劑為用於保護生物組織以免因冰晶體形成而被冷凍損傷的物質。冷凍保護劑屬於兩種一般類別;可以穿過細胞膜之滲透型冷凍保護劑,及非滲透型冷凍保護劑,其中任一者可根據本發明方法之冷凍保存步驟使用。滲透冷凍保護劑之實例包括(但不限於)二甲亞碸(DMSO)、甘油、蔗糖及1,2-丙二醇。非滲透型冷凍保護劑之實例包括(但不限於)羥乙基澱粉、白蛋白及聚乙烯吡咯啶酮。所使用之大多數滲透型冷凍保護劑為DMSO,其往往與非滲透劑組合使用,諸如自體血漿、血清白蛋白及/或羥乙基澱粉。此項技術中已知之任何冷凍保護劑可用於本發明方法中。較佳地,用於本發明方法之冷凍保護劑可為符合良好生產規範(GMP)標準之任何冷凍保護劑。
熟習此項技術者應瞭解,可再懸浮於冷凍保存培養基(亦即含有一或多種冷凍保護劑之培養基)中之Treg的數目可視待提供至個體之劑量而定,其將在Treg產物與待治療之疾病或病況之間變化。Treg群可以任何所需細胞密度冷凍保存。
冷凍Treg或Treg群之最佳速率可根據若干因素確定,該等因素包括Treg細胞膜對水之滲透性、細胞表面與體積之比率及及所用冷凍保護劑之類型及濃度。Treg或Treg群可在約4℃與-80℃之間連續地冷卻,且特定言之,可使用受控冷凍速率(例如,每分鐘約-1℃)。替代地,受控冷凍速率可為例如約每分鐘-2℃,每分鐘-3℃,每分鐘-4℃或每分鐘-5℃。為實現受控速率冷凍,可使用此項技術中已知之任何適合的受控速率冷凍裝置。熟習此項技術者應理解,冰核形成(亦即,藉由在細胞外液中形成冰晶來誘導群冷凍)可藉由任何適合手段在約-5℃下起始。一旦溫度達到約-80℃,則Treg或群可直接轉移至液氮(-196℃)中儲存。
Treg或Treg群可在-80℃下儲存任何所需時間長度,例如約4小時至48小時、較佳4小時至16小時之任何時間或長達24小時,且隨後可轉移至溫度低於-130℃之液氮儲存。替代地,一旦Treg或Treg群達到-80℃,則其可即刻轉移至溫度低於-130℃之液氮儲存。可在液氮中儲存任何所需時間量。儲存可持續任何天數或週數。通常,儲存可為長期的,亦即,任何月數、一年或任何年數,例如2年、5年、10年、20年、50年或100年。
替代地,Treg或Treg群可藉由玻化方式冷凍保存。玻化為極其快速之冷凍保存方法,藉此可將Treg或Treg群在短時間內(通常在1秒下)自約37℃轉變至-196℃,引起極其快速之冷卻速率。
Treg或Treg群體在冷凍保存之後可解凍。「解凍(thawing/thawed)」或「解凍狀態」在此項技術中具有其通常意義且為固體變成液體之製程,或為製程之結果。解凍Treg或Treg群意謂將該Treg或群之溫度提高至其粒子具有足以克服其間吸引力之能量的溫度。因此,為了解凍Treg或Treg群,通常施加熱量。通常,解凍之細胞將能夠擴增及/或充當Tregs (例如將能夠引發其免疫抑制功能)。解凍之Treg或Treg群因此係指已經受冷凍保存與解凍製程之Treg或群。熟習此項技術者應瞭解解凍之Treg群或解凍製程可能不會引起群完全解凍且該群內之一部分細胞可保持冷凍。舉例而言,解凍之Treg群可包含至少10%、20%、30%、40%或50%冷凍或冷凍保存之細胞。替代性地看,解凍之Treg群可包含不超過50%、40%、30%、20%或10%冷凍或冷凍保存之細胞。
最佳解凍速率視所用冷凍保存條件而變化。一般而言,快速加熱可施加於冷凍保存之Treg細胞,此可藉由將組合物置放於約37℃溫度的水浴中或藉由攪動(例如藉由振盪)組合物實現。Treg或Treg群可升溫至冷卻溫度(約0℃至10℃),直至小冰晶保持或可升溫至約37℃之人體溫度,例如直接投與患者。
在一個實施例中,冷凍保存之Treg或Treg群可升溫至其自固體變成液體之溫度且直接投與患者。
本發明之Treg或Treg群可非經腸投與,例如靜脈內投與或藉由輸注技術投與。如本文所使用之非經腸投與意謂除腸內及表面投與以外之投與模式,通常為注射,且包括靜脈內、肌肉內、動脈內、鞘內、囊內、眶內、心內、關節內、經氣管、皮內、腹膜內、皮下、表皮下、囊下、蛛膜下、脊椎內及胸骨內注射及輸注。
T 細胞受體 ( TCR ) 及嵌合抗原受體 ( CAR )適合地,本發明之Treg或Treg群亦可包含外源TCR或CAR。
TCR為細胞表面分子,其結合與抗原呈現細胞上之主要組織相容複合體(MHC)分子結合之抗原片段,作為引導免疫反應之一部分。適合地,TCR可為重組蛋白,換言之,TCR可為並非由本發明之Treg天然表現之外源蛋白。
如本文所使用之術語「TCR」及「CAR」(嵌合抗原受體)係指可賦予Treg細胞(例如Tregs)抗原特異性之工程化受體。
CAR亦稱為人工T細胞受體、嵌合T細胞受體或嵌合免疫受體。CAR通常包含含有抗原特異性靶向區之胞外域(在本文中稱為抗原結合域)、跨膜域及胞內域(其視情況包含一或多個共刺激域),及胞內信號傳導域。抗原結合域通常藉由鉸鏈域接合至跨膜域。CAR之設計及其可含有之各種域為此項技術中所熟知。
CAR之抗原結合域可衍生自或獲自結合(亦即對其具有親和力)所需靶抗原或更一般而言所需靶分子之任何蛋白質或多肽。此可為例如配位體或受體,或靶分子之生理學結合蛋白,或其一部分,或合成或衍生蛋白。靶分子通常可表現於、但不必定表現於細胞(例如靶細胞)或靶細胞附近之細胞(針對旁觀者效應)之表面上。視抗原結合域之性質及特異性而定,CAR可識別可溶性分子,例如其中抗原結合域係基於或衍生自細胞受體。
抗原結合域最常衍生自抗體可變鏈(例如其通常採用scFv之形式),但亦可由T細胞受體可變域或如上文所提及之其他分子(諸如配位體或其他結合分子之受體)產生。
CAR通常以多肽形式表現,該多肽亦包含信號序列(亦稱為前導序列),尤其是將CAR靶向細胞質膜之信號序列。其位置一般緊鄰或接近抗原結合域,一般位於抗原結合域上游。CAR之細胞外域或胞外域從而可包含信號序列及抗原結合域。
抗原結合域為CAR提供結合預定相關抗原之能力。抗原結合域較佳靶向臨床上關注之抗原或疾病位點之抗原。
如上文所指出,抗原結合域可為具有特異性識別且結合至生物分子(例如細胞表面受體或其組分)之能力的任何蛋白質或肽。抗原結合域包括所關注生物分子之任何天然存在、合成、半合成或以重組方式產生之結合搭配物。說明性抗原特異性靶向域包括抗體或抗體片段或衍生物、受體之細胞外域、細胞表面分子/受體之配位體或其受體結合域及腫瘤結合蛋白。儘管如下文所論述,抗原特異性靶向域較佳可為抗體或衍生自抗體,但涵蓋其他抗原特異性靶向域,例如由抗原肽/MHC或HLA組合形成之抗原特異性靶向域,其能夠結合至移植、發炎或疾病位點處具有活性之Tcon細胞的TCR。
抗原結合域可為抗體或衍生自抗體。抗體衍生之結合域可為抗體片段或抗體之一或多個片段的基因工程化產物,該片段與抗原結合有關。實例包括可變區(Fv)、互補決定區(CDR)、Fab或F(ab')
2或可以單鏈形式(例如ScFv)且以任一取向(例如V
L-V
H或V
H-V
L)接合在一起之輕鏈及重鏈可變區。V
L及/或V
H序列可經修飾。詳言之,構架區可經修飾(例如取代以例如使抗原結合域人類化)。其他實例包括重鏈可變區(VH)、輕鏈可變區(VL)、駱駝抗體(VHH)及單域抗體(sAb)。
通常,結合域為單鏈抗體(scFv)。scFv可為鼠類、人類或人類化scFv。
關於抗體或其抗原結合片段之「互補決定區」或「CDR」係指抗體重鏈或輕鏈可變區中的高度可變環。CDR可與抗原構形相互作用且很大程度上決定與抗原之結合(儘管已知一些構架區涉及結合)。重鏈可變區及輕鏈可變區各含有3個CDR。「重鏈可變區」或「VH」係指抗體重鏈片段,其含有三個散置於稱為構架區之側接伸長段之間的CDR,該等側接伸長段比CDR更高度保守且形成支撐CDR之支架。「輕鏈可變區」或「VL」係指抗體輕鏈片段,其含有三個散置於構架區之間的CDR。
「Fv」係指抗體中承載完整抗原結合位點之最小片段。Fv片段由結合至單一重鏈可變區的單一輕鏈可變區組成。「單鏈Fv抗體」或「scFv」係指由輕鏈可變區及重鏈可變區在任一定向上直接或經由肽連接子序列彼此連接而組成的工程化抗體。
可使用此項技術中熟知之方法製備特異性結合預定抗原之抗體。此類方法包括噬菌體呈現、產生人類或人類化抗體之方法或使用經工程化以產生人類抗體之轉殖基因動物或植物的方法。可獲得部分或完全合成抗體之噬菌體呈現文庫且可自其中篩選出可與靶分子結合之抗體或其片段。亦可獲得人類抗體之噬菌體呈現文庫。編碼抗體之胺基酸序列或聚核苷酸序列一經鑑別,則可加以分離及/或測定。
CAR可針對任何所需靶抗原或分子。此可根據預期療法及需要治療之病況來選擇。其可例如為與特定病況相關之抗原或分子,或與為了治療病況而欲靶向之細胞相關的抗原或分子。通常,抗原或分子為細胞表面抗原或分子。
術語「針對」與「特異性針對」或「抗」同義。換言之,CAR識別靶分子。因此,其意謂CAR能夠特異性結合至指定或給定的抗原或標靶。特定言之,CAR之抗原結合域能夠特異性地結合至靶分子或抗原(更特定言之,當CAR表現於細胞表面上,尤其免疫效應細胞表面上時)。特異性結合可有別於與非靶分子或抗原之非特異性結合。因此,表現CAR之細胞經導引或經再導引以特異性結合於表現靶分子或抗原之靶細胞,特定言之,在細胞表面上表現靶抗原或分子之靶細胞。
可被CAR靶向之抗原包括(但不限於)與移植器官、自體免疫疾病、過敏性疾病、代謝疾病(例如糖尿病)及發炎性疾病(例如神經退化性疾病)相關之細胞上表現之抗原。
與器官移植體相關之抗原及/或與移植器官相關之細胞包括(但不限於)存在於移植器官中、而非患者中之HLA抗原,或表現在移植排斥反應期間上調之抗原,諸如CCL19、MMP9、SLC1A3、MMP7、HMMR、TOP2A、GPNMB PLA2G7、CXCL9、FABP5、GBP2、CD74、CXCL10、UBD、CD27、CD48、CXCL11。
在一實施例中,CAR係針對HLA抗原,尤其HLA-A2抗原。
針對此類抗原之抗體為此項技術中已知,且適宜地,scFv可基於已知或可用抗體獲得或產生。就此而言,有助於製備此類抗體結合域的VH及VL及CDR序列可公開獲得,例如WO 2020/044055中,其揭示內容以引用之方式併入本文中。可使用WO 2020/044055中所揭示之抗原結合域或CDR、VH及/或VL序列中之任一者。
在一實施例中,抗原結合域包含如SEQ ID NO. 10、11及12中分別所示之VH CDR1、2及3序列及如SEQ ID NO. 13、14及15中分別所示之VL CDR1、 2及3序列。
當CDR確實含有胺基酸序列修飾時,此可為如上述SEQ ID NO.中所示之CDR序列之胺基酸殘基缺失、添加或取代。更特定言之,修飾可為胺基酸取代,例如保守胺基酸取代,例如如上文所闡述。較長CDR可容許更多胺基酸殘基修飾。在CDR長度為5或7個胺基酸殘基之情況下,修飾可為1或2個,例如1個殘基。一般而言,對任何特定CDR序列可存在0、1、2或3個修飾。此外,在一實施例中,CDR 1及2可經修飾,且CDR3可未經修飾。在另一個實施例中,所有3個CDR可經修飾。在另一實施例中,CDR未經修飾。
抗原結合域可呈scFV之形式,其包含如上文以任一次序所示之VH及VL域序列,例如VH-VL。VH及VL序列可藉由連接子序列連接。
適合連接子可容易選擇且可具有適合長度中之任一者,諸如1個胺基酸(例如Gly)至30個胺基酸,例如2、3、4、5、6、7、8、9或10個胺基酸中之任一者至12、15、18、20、21、25、30個胺基酸中之任一者,例如5至30、5至25、6至25、10至15、12至25、15至25個等。
CAR較佳亦包含鉸鏈域以固持遠離細胞表面的細胞外域(尤其是抗原結合域),且包含跨膜域。鉸鏈域及跨膜域可包含來自具有鉸鏈域及/或跨膜域之任何蛋白質的鉸鏈及跨膜序列,包括I型、II型或III型跨膜蛋白中之任一者。
CAR之跨膜域亦可包含人造疏水性序列。CAR之跨膜域可經選擇以免二聚化。其他跨膜域對於熟習此項技術者而言將為顯而易見的。CAR構築體中所用之跨膜(TM)區實例為:1) CD28 TM區((Pule等人, Mol Ther, 2005年11月;12(5):933-41; Brentjens等人, CCR, 2007年9月15日; 13(18 Pt 1):5426-35; Casucci等人, Blood, 2013年11月14日;122(20):3461-72.);2) OX40 TM區(Pule等人, Mol Ther, 2005年11月;12(5):933-41); 3) 41BB TM區(Brentjens等人, CCR, 2007年9月15日;13(18 Pt 1):5426-35);4) CD3 ζ TM區(Pule等人, Mol Ther, 2005年11月;12(5):933-41; Savoldo B, Blood, 2009年6月18日;113(25):6392-402.); 5) CD8a TM區(Maher等人, Nat Biotechnol, 2002年1月;20(1):70-5.; Imai C, Leukemia, 2004年4月;18(4):676-84; Brentjens等人, CCR, 2007年9月15日;13(18 Pt 1):5426-35; Milone等人, Mol Ther, 2009年8月;17(8):1453-64.)。可使用之其他跨膜域包括來自CD4、CD45、CD9、CD16、CD22、CD33、CD64、CD80、CD86或CD154之跨膜域。
鉸鏈域可適宜地自與跨膜域相同之蛋白質獲得,但此並非必需的。
替代地,CAR可包含衍生自CD8α跨膜域之域。
如本文所描述之CAR之胞內域包含轉導效應功能信號及引導表現CAR之細胞在抗原結合時執行其特定功能所必要的模體。特定言之,胞內域可包含一或多個(例如兩個或三個)基於免疫受體酪胺酸之活化模體(ITAM),通常其包含YXXL/I之胺基酸序列,其中X可為任何胺基酸。胞內信號傳導域之實例包括(但不限於) T細胞受體之ζ鏈胞內域或其任何同源物(例如η鏈、FcεR1γ及β鏈、MB1 (Igα)鏈、B29 (Igβ)鏈等)、CD3多肽域(∆、δ及ε)、syk酪胺酸激酶家族(Syk、ZAP 70等)、src酪胺酸激酶家族(Lck、Fyn、Lyn等)及其他涉及T細胞轉導之分子,諸如CD2、CD5及CD28。胞內信號傳導域可包含人類CD3 ζ鏈胞內域、FcyRIII、FcsRI、Fc受體之細胞質尾、攜帶細胞質受體之基於免疫受體酪胺酸之活化模體(ITAM)或其組合。
可使用之其他信號傳導域包括CD28或CD27之信號傳導域或其變異體。其他胞內信號傳導域對於熟習此項技術者將為顯而易見的且可與本發明之替代性實施例結合使用。
CAR可包含複合胞內域,其包含T細胞共刺激分子之胞內部分與例如CD3ζ之胞內部分的融合。此類複合胞內域可稱為第二代CAR,其可在抗原識別之後同時傳輸活化及共刺激信號。最常用之共刺激域為CD28之共刺激域。此供應觸發T細胞增殖的最強共刺激信號 - 即免疫信號2。CAR胞內域亦可包含一或多個TNF受體家族信號傳導域,諸如OX40、4-1BB、ICOS或TNFRSF25之信號傳導域。
安全開關安全開關多肽提供於細胞中,與自殺部分一起在細胞中或細胞上表現。此可用作安全機制,若需要,或實際上更一般而言,根據期望或需要,例如一旦細胞已履行或完成其治療作用,則此安全機制允許刪除已投與個體之冷凍保存細胞。如上文所論述,本發明之Treg或本發明中所使用之Treg可另外包含安全開關多肽。
自殺部分具有引起細胞死亡或更通常排除或刪除細胞之誘導性能力。自殺部分之實例為由自殺基因編碼的自殺蛋白,該自殺蛋白可在如本文所述之Treg中或Treg上表現。本文中之自殺部分為自殺多肽,其為在允許條件(亦即誘導或開啟之條件)下能夠促使細胞被刪除之多肽。
自殺部分可為多肽或胺基酸序列,其可藉由投與個體之活化劑活化以執行刪除細胞活性,或其在可投與個體之受質存在下具有活性以執行刪除細胞活性。在一特定實施例中,自殺部分可代表投與個體之各別細胞刪除劑之標靶。藉由結合於自殺部分,細胞刪除劑可靶向待刪除之細胞。特定言之,自殺部分可被抗體識別,且當在細胞表面上表現時,抗體與安全開關多肽之結合促使細胞被排除或刪除。
自殺部分可為HSV-TK或iCasp9。然而,自殺部分較佳為抗原決定基,或包含被細胞刪除抗體或能夠引發細胞刪除之其他結合分子識別的抗原決定基。在此類實施例中,安全開關多肽表現於細胞表面上。
特定言之,自殺部分可為被抗體利妥昔單抗(Rituximab)識別之CD20抗原決定基。因此,在安全開關多肽中,自殺部分可包含基於被抗體利妥昔單抗識別之CD20抗原決定基的最小抗原決定基。
可使用抗體利妥昔單抗或具有利妥昔單抗結合特異性之抗體選擇性地殺死表現包含此序列之安全開關多肽的經冷凍保存之細胞。安全開關多肽在細胞表面上表現,且當表現之多肽暴露於利妥昔單抗或與利妥昔單抗或具有相同結合特異性之抗體接觸時,細胞隨之死亡。
舉例而言,WO2013/153391之自殺構築體(以引用之方式併入本文中)可用於如本文所述之Treg或Treg群中。
聚核苷酸如本文所定義且在本文中可互換使用之核酸分子及聚核苷酸/核酸序列可包含DNA或RNA。其可為單股或雙股的。熟習此項技術者應瞭解,許多不同核酸分子/聚核苷酸可由於遺傳密碼簡倂而編碼相同多肽。
核酸分子/聚核苷酸可藉由此項技術中可獲得之任何方法修飾。可進行此類修飾以便提高如本文所定義之核酸分子/聚核苷酸之活體內活性或壽命。
核酸分子/聚核苷酸/核苷酸序列(諸如DNA核酸分子/聚核苷酸/序列)可以重組方式、以合成方式或藉由熟習此項技術者可獲得的任何方式產生。其亦可藉由標準技術選殖。
較長核酸分子/聚核苷酸/核苷酸序列一般將使用重組方式產生,例如使用聚合酶鏈反應(PCR)選殖技術產生。此將包括:製造與需要選殖之靶序列側接的引子對(例如約15至30個核苷酸),使引子與自動物或人類細胞獲得之mRNA或cDNA接觸,在引起所需區域擴增之條件下進行聚合酶鏈反應,分離擴增之片段(例如用瓊脂糖凝膠純化反應混合物)以及回收擴增之DNA。引子可經設計以含有適合的限制酶識別位點,使得擴增之DNA可選殖至適合載體中。
本文所述之核酸分子/聚核苷酸可以進一步包含編碼可選標記物之核酸序列。適合地,可選標記物為此項技術中所熟知且包括(但不限於)螢光蛋白,諸如GFP。適合地,可選標記物可為螢光蛋白,例如GFP、YFP、RFP、tdTomato、dsRed或其變異體。在一些實施例中,螢光蛋白為GFP或GFP變異體。編碼可選標記物之核酸序列可與本文中之核酸分子組合成核酸構築體形式提供。此類核酸構築體可提供於載體中。
適合地,可選標記物/報導域可為基於螢光素酶之報導體、PET報導體(例如鈉碘同向轉運蛋白(NIS))或膜蛋白(例如CD34、低親和力神經生長因子受體(LNGFR))。
當包含於單一構築體內時,編碼FOXP3及一或多種其他多肽(例如CAR、安全開關及/或可選標記物)之核酸序列彼此可相隔一或多個共表現位點,從而使得各多肽能夠以不連續的實體形式表現。適合共表現位點為此項技術中已知且包括例如內部核糖體進入位點(IRES)及自裂解位點,諸如本發明核酸分子中所包括之彼等位點,且如下文所定義。在一實施例中,此可為2A裂解位點,如下文所論述。
適合自裂解域包括P2A、T2A、E2A及F2A序列。
使用可選標記物係有利的,因為其允許使用常見方法(例如流動式細胞測量術)自起始細胞群中選擇且分離其中已成功引入核酸分子、構築體或載體的細胞(例如Tregs) (使得所編碼之FOXP3多肽及可能之CAR及安全開關多肽受到表現)。
如本文中所描述之聚核苷酸(例如編碼FOXP3之聚核苷酸)的表現通常將受啟動子控制。「啟動子」為引起基因轉錄開始之DNA區域。啟動子位於基因轉錄起點附近,位於DNA上游(朝向有義股之5'區域)。可使用熟習此項技術者可容易選擇的任何適合啟動子。啟動子可來自任何來源,且可為病毒啟動子或真核啟動子,包括哺乳動物或人類啟動子(亦即,生理學啟動子)。在一實施例中,啟動子為病毒啟動子。特定啟動子包括LTR啟動子、EFS (或其功能性截斷)、SFFV、PGK及CMV。在一實施例中,啟動子為SFFV或病毒LTR啟動子。「可操作地連接於同一啟動子」意謂聚核苷酸序列之轉錄可自同一啟動子起始(例如第一、第二及第三聚核苷酸序列之轉錄自同一啟動子起始)且核苷酸序列經定位及定向以自啟動子起始轉錄。可操作地連接於啟動子之聚核苷酸處於啟動子之轉錄調節下。
載體在本發明之一些實施例中,聚核苷酸處於表現載體內。如本文所使用之術語「表現載體」意謂能夠表現FOXP3多肽(或使得CD62L水準保持之另一多肽)之構築體。
載體為允許或促進實體自一個環境轉移至另一環境之工具。如本文所用,且舉例而言,用於重組核酸技術中之一些載體允許實體(諸如核酸區段(例如異源DNA區段,諸如異源cDNA區段))轉移至靶細胞中。
載體可為非病毒或病毒。重組核酸技術中所用之載體之實例包括(但不限於)質體、mRNA分子(例如活體外轉錄之mRNA)、染色體、人工染色體及病毒。載體亦可為例如裸核酸(例如DNA)。載體本身的最簡單形式可為所關注之核苷酸。
本文所用之載體可為例如質體、mRNA或病毒載體且可包括用於表現核酸分子/聚核苷酸的啟動子(如下文所描述)且視情況包括啟動子之調節子。如本文所使用之術語「核酸分子」包括聚核苷酸。
在一實施例中,載體為病毒載體,例如反轉錄病毒,例如慢病毒載體或γ反轉錄病毒載體。
載體可進一步包含其他啟動子,例如在一個實施例中,啟動子可為LTR,例如反轉錄病毒LTR或慢病毒LTR。長末端重複序列(LTR)為重複數百或數千次的相同DNA序列,其存在於反轉錄轉座子或藉由反轉錄病毒RNA反轉錄所形成之原病毒DNA的任一末端。其被病毒使用以將其遺傳物質插入宿主基因體中。基因表現之信號發現於LTR:強化子、啟動子(可具有轉錄強化子或調節元件二者)、轉錄起始(諸如封端)、轉錄終止子及聚腺苷酸化信號。適合地,載體可包括5'LTR及3'LTR。
載體可包含一或多個可以在轉錄前或轉錄後起作用之其他調節序列。「調節序列」為促進多肽表現(例如用來增加轉錄物之表現或強化mRNA穩定性)之任何序列。適合之調節序列包括例如強化子元件、轉錄後調節元件及聚腺苷酸化位點。適合地,其他調節序列可存在於LTR中。適合地,載體可包含土拔鼠肝炎病毒轉錄後調節元件(WPRE),例如可操作地連接於啟動子。
包含如本文所描述之核酸分子/聚核苷酸之載體可使用此項技術中已知之多種技術(諸如轉型及轉導)引入細胞中。此項技術中已知若干技術,例如用重組病毒載體(諸如反轉錄病毒、慢病毒、腺病毒、腺相關病毒、桿狀病毒及單純疱疹病毒載體)感染;直接注射核酸及基因槍轉型。
非病毒遞送系統包括(但不限於) DNA轉染方法。此處,轉染包括使用非病毒載體將基因遞送至靶細胞之過程。非病毒遞送系統可包括脂質體或兩性細胞穿透肽,較佳與核酸分子或構築體複合。
典型轉染方法包括電致孔、DNA基因槍、脂質介導之轉染、緻密DNA介導之轉染、脂質體、免疫脂質體、脂質轉染劑、陽離子試劑介導之轉染、陽離子面式兩親分子(CFA) (Nat. Biotechnol. (1996) 14: 556)及其組合。
工程化Treg細胞可藉由許多方法(包括用病毒載體轉導及用DNA或RNA轉染)中之一者引入如本文所定義之核酸分子、構築體或載體來產生。
如本文所定義之Treg細胞可藉由以下方式製得:向細胞中引入(例如藉由轉導或轉染)如本文所定義之核酸分子/聚核苷酸、構築體或載體。
上文進一步論述適合細胞,但細胞可來自自個體分離之樣本。個體可為供者個體,或用於治療之個體(亦即,細胞可為用於引入另一接受者的自體細胞或供者細胞,例如同種異體細胞)。
細胞可藉由包含以下步驟之方法產生:
(i)自個體分離含有Treg細胞之樣本或提供含有Treg細胞之樣本;及
(ii)將如本文所定義之核酸分子、構築體或載體引入(例如藉由轉導或轉染)含有Treg細胞之樣本中,以得到工程化Treg細胞群。
標靶Treg細胞富集之樣本可在該方法之步驟(ii)之前及/或之後自含有細胞之樣本分離、富集及/或產生。舉例而言,可在步驟(ii)之前及/或之後進行Tregs (或其他靶細胞)之分離、富集及/或產生以分離、富集或產生Treg富集樣本。自含有細胞之樣本中分離及/或富集可在步驟(ii)之後進行以富集包含如本文所描述之編碼FOXP3之核酸分子/聚核苷酸、構築體及/或載體的Tregs (或其他靶細胞)。
Treg富集之樣本可藉由熟習此項技術者已知之任何方法(例如FACS及/或磁珠分選)分離或富集。Treg富集之樣本可藉由熟習此項技術者已知之任何方法自含有細胞之樣本產生,例如藉由引入編碼FOXP3之DNA或RNA及/或自誘導性祖細胞或胚胎祖細胞之離體分化產生。分離及/或富集其他靶細胞之方法為此項技術中已知。
適合地,工程化靶細胞可藉由包含以下步驟之方法產生:
(i)自個體分離富集靶細胞之樣本或提供富集靶細胞之樣本;及
(ii)將如本文所定義之核酸、構築體或載體引入(例如藉由轉導或轉染)富集靶細胞之樣本中,以得到工程化靶細胞群。
靶細胞可為Treg細胞,或其前驅體或祖細胞。Treg細胞之分離可包含以下步驟:
(i) 分離CD4+ T細胞;及
(ii) 自CD4+ T細胞分離Treg。
分離可包含使用免疫磁性珠粒或螢光活化細胞分選(FACS)選擇該等T細胞或Treg細胞。
「工程化細胞」、「工程化Treg」或「工程化Treg群」」意謂已經修飾以包含或表現非天然存在於細胞內之聚核苷酸的細胞或細胞群。熟習此項技術者應瞭解,雖然Treg表現FOXP3,但如本文所述之工程化細胞將包含編碼FOXP3之非天然存在之聚核苷酸序列(例如包含非天然存在之啟動子、調節序列、CAR、TCR等)。細胞工程化方法為此項技術中已知的且包括(但不限於)細胞之基因修飾,例如藉由轉導,諸如反轉錄病毒或慢病毒轉導;轉染(諸如暫時轉染-基於DNA或RNA),包括脂質轉染、聚乙二醇、磷酸鈣及電致孔,如上文所論述。可使用任何適合方法將核酸序列引入細胞中。諸如兩性細胞穿透肽之非病毒技術可用於引入核酸。
非工程化Treg或細胞為不含有編碼FOXP3之外源聚核苷酸/核酸分子的Treg或細胞。因此,非工程化Treg或細胞可包含其他外源聚核苷酸(亦即除FOXP3以外)。在一個實施例中,非工程化Treg或細胞不含有任何外源聚核苷酸/核酸分子。
適合地,工程化細胞為已例如藉由轉導或藉由轉染加以修飾之細胞。適合地,工程化細胞為已修飾之細胞或基因體已例如藉由轉導或藉由轉染加以修飾之細胞。適合地,工程化細胞為已修飾之細胞或基因體已藉由反轉錄病毒轉導加以修飾之細胞。適合地,工程化細胞為已修飾之細胞或基因體已藉由慢病毒轉導加以修飾之細胞。
如本文所用,術語「引入」係指將外來核酸(例如DNA或RNA)插入細胞中之方法。如本文所用,術語引入包括轉導與轉染方法。轉染係藉由非病毒方法將核酸引入細胞中之製程。轉導係經由病毒載體將外來DNA或RNA引入細胞中之製程。工程化細胞可藉由許多方法(包括用病毒載體轉導及用DNA或RNA轉染)中之一者引入如本文所描述之核酸來產生。
細胞可在引入如本文所描述之核酸/聚核苷酸之前或之後活化及/或擴增,例如藉由用抗CD3單株抗體或抗CD3與抗CD28單株抗體處理。細胞亦可在抗CD3及抗CD28單株抗體與IL-2的組合存在下擴增。適合地,IL-2可經IL-15取代。可用於細胞(例如Treg)擴增方案中之其他組分包括(但不限於)雷帕黴素、全反式視黃酸(ATRA)及TGFβ。如本文所用,「活化」意謂細胞已經刺激,使得細胞增殖。如本文所用,「擴增」意謂細胞或細胞群已經誘導增殖。細胞群之擴增可例如藉由對群中存在之細胞數目計數來量測。細胞表型可藉由此項技術中已知之方法(諸如流動式細胞測量術)測定。
組合物醫藥組合物為包含治療有效量之醫藥活性劑(亦即Treg或Treg群)或由其組成之組合物。其較佳包括醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑(包括其組合)。用於治療用途之可接受載劑或稀釋劑為醫藥技術中所熟知,且描述於例如Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co. (A. R. Gennaro編, 1985)中。醫藥學載劑、賦形劑或稀釋劑之選擇可結合預定投藥途徑及標準醫藥實務來選擇。醫藥組合物可包含或另外包含載劑、賦形劑或稀釋劑、任何適合黏合劑、潤滑劑、懸浮劑、包衣劑或溶解劑。應瞭解,本發明之醫藥組合物可為冷凍保存之醫藥組合物。
「醫藥學上可接受」包括無菌且無熱原質之調配物。在與細胞或載體相容且對其接受者無害之意義上,載劑、稀釋劑及/或賦形劑必須為「可接受的」。通常,載劑、稀釋劑及賦形劑將為無菌及無熱原質的鹽水或輸注介質,然而可使用其他可接受載劑、稀釋劑及賦形劑。
醫藥學上可接受之載劑實例包括例如水、鹽溶液、酒精、矽酮、蠟、石油膏、植物油、聚乙二醇、丙二醇、脂質體、糖、明膠、乳糖、直鏈澱粉、硬脂酸鎂、滑石、界面活性劑、矽酸、黏性石蠟、香料油、脂肪酸單甘油酸酯及二酸甘油酯、石油醚脂肪酸酯、羥基甲基纖維素、聚乙烯吡咯啶酮及其類似物。
本文所述之Treg、Treg群或醫藥組合物可以適於治療及/或預防所需疾病或病況之方式投與,且本文中論述適合之投藥途徑。投藥之數量及頻率將根據諸如個體之狀況及個體之疾病或病況的類型及嚴重程度確定,但適當劑量可藉由臨床試驗確定。可相應地調配醫藥組合物。
如本文所描述之Treg、Treg群或醫藥組合物可非經腸(例如靜脈內)投與,或其可藉由輸液技術投與。Treg、Treg群或醫藥組合物可以可含有其他物質之無菌水溶液形式投與,例如足以使溶液與血液等張之鹽或葡萄糖。水溶液可經適當緩衝(較佳至3至9之pH)。可相應地調配醫藥組合物。在無菌條件下製備適合的非經腸調配物容易藉由熟習此項技術者熟知的標準醫藥技術實現。
醫藥組合物可包含輸注介質中之細胞,例如無菌等張溶液。醫藥組合物可封裝於由玻璃或塑膠製成之安瓿、拋棄式注射器或多劑量小瓶中。
Treg、Treg群或醫藥組合物可以單次劑量或多次劑量投與。特定言之,Treg、Treg群或醫藥組合物可以單次、一次性劑量投與。可相應地調配醫藥組合物。
醫藥組合物可進一步包含一或多種活性劑。醫藥組合物可進一步包含一或多種其他治療劑,諸如淋巴耗盡劑(例如即複寧(thymoglobulin)、坎帕斯-1H (campath-1H)、抗CD2抗體、抗CD3抗體、抗CD20抗體、環磷醯胺、氟達拉濱(fludarabine))、mTOR抑制劑(例如西羅莫司(sirolimus)、依維莫司(everolimus))、抑制共刺激路徑之藥物(例如抗CD40/CD40L、CTAL4Ig),及/或抑制特定細胞介素之藥物(IL-6、IL-17、TNFα、IL18)。
視待治療之疾病/病況及個體以及投藥途徑而定,Treg、Treg群或醫藥組合物可以不同劑量(例如以細胞數/公斤或細胞數/個體量度)投與。在任何情況下,醫師將確定將最適合於任何個別個體之實際劑量且其將隨特定個體之年齡、體重及反應而變化。然而,通常,對於本文之細胞,每個個體可投與5x10
7至3x10
9個細胞或1x10
8至2x10
9個細胞之劑量。
本文中之Treg、Treg群及醫藥組合物可用於治療或預防疾病或病況。細胞及含有其之組合物用於過繼細胞療法(ACT)。各種病況可藉由投與Treg細胞(例如表現TCR或CAR之Treg細胞)來治療。如上文所指出,此等病況可為對免疫抑制、尤其對Treg細胞之免疫抑制效應有反應的病況。本文中所描述之細胞、細胞群及醫藥組合物可因此用於在個體中誘導或實現免疫抑制。可藉由TCR或CAR之表現來靶向活體內投與或修飾之Treg細胞。適用於此類治療之病況包括感染性、神經退化性、發炎性或代謝疾病,或更廣泛地為與任何非所需或非吾人所樂見或有害之免疫反應相關的病況。
特定言之,Treg細胞及Treg群及組合物為達成以下而提供方式:誘導對移植體之耐受性;治療及/或預防細胞及/或體液移植排斥反應;治療及/或預防移植物抗宿主病(GvHD)、自體免疫或過敏性疾病;神經退化性疾病(諸如澱粉狀蛋白側索硬化(ALS));代謝疾病(諸如I型糖尿病);或促進組織修復及/或組織再生;或改善發炎/抑制免疫反應。細胞、細胞群及組合物可用於包含向個體投與如本文所描述之細胞、細胞群或組合物之步驟的方法中。
如本文所用,「誘導對移植體之耐受性」係指誘導對接受者中之移植器官的耐受性。換言之,誘導對移植體之耐受性意謂降低接受者對供者移植器官之免疫反應的水準。誘導對移植器官之耐受性可減少移植接受者需要之免疫抑制藥物之量,或可使得免疫抑制藥物能夠停藥。就此而言,本發明進一步提供用於誘導個體對移植器官產生耐受性的方法,其包含向個體投與如本文所論述之Treg、群或組合物。
舉例而言,可向患有疾病之個體投與Tregs,以便減輕、減少或改善至少一種疾病症狀,諸如黃疸、尿赤、瘙癢、腹部腫脹或壓痛、疲乏、噁心或嘔吐及/或食慾不振。至少一種症狀可減輕、減少或改善至少10%、至少20%、至少30%、至少40%或至少50%,或至少一種症狀可完全緩解。
可向患有疾病之個體投與Tregs以便減緩、降低或阻斷疾病惡化。相比於未投與工程化細胞之個體,疾病惡化可減緩、減少或阻斷至少10%、至少20%、至少30%、至少40%或至少50%,或疾病惡化可完全停止。
在一個實施例中,個體為正經歷免疫抑制療法之移植接受者。
適合地,個體為哺乳動物。適合地,個體為人類。
移植體可選自肝、腎臟、心、肺、胰臟、腸、胃、骨髓、血管化複合組織移植物及皮膚移植體。
本發明之Treg、Treg群或醫藥組合物可在解凍之後/期間立即投與患者而不進一步擴增。Treg、Treg群或醫藥組合物可在解凍之約5、10、15或30分鐘,或約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12小時內投與患者。
用於治療疾病或病況之方法係指本文中之細胞之治療用途。在此態樣中,細胞可投與患有現有疾病或病況之個體,以減輕、減少或改善與該疾病或病況相關之至少一種症狀及/或減緩、減少或阻斷疾病惡化。
適合地,治療及/或預防細胞及/或體液移植排斥反應可指投與有效量之細胞(例如Tregs),使得移植體接受者需要之免疫抑制藥物之量減少,或可使得免疫抑制藥物能夠停藥。
預防疾病或病況係指本文中細胞之預防性用途。在此態樣中,可將細胞投與尚未感染或出現疾病或病況及/或未顯示疾病或病況之任何症狀的個體,以預防疾病或病況或減小或預防與疾病或病況相關之至少一種症狀的發展。個體可具有易染疾病或病況之體質,或被認為處於發展疾病或病況之風險中。
自體免疫或過敏性疾病可選自發炎性皮膚疾病,包括牛皮癬及皮膚炎(例如異位性皮膚炎);與發炎性腸道疾病(諸如克羅恩氏病(Crohn's disease)及潰瘍性結腸炎)相關之反應;皮膚炎;過敏病況(諸如食物過敏、濕疹及哮喘);類風濕性關節炎;全身性紅斑狼瘡(SLE)(包括狼瘡性腎炎、皮膚狼瘡);糖尿病(例如1型糖尿病或胰島素依賴型糖尿病);多發性硬化症;神經退化性疾病,例如肌肉萎縮性側索硬化(ALS);慢性發炎性脫髓鞘多發性神經病變(CIPD)及幼年型發作型糖尿病。
在一些實施例中,待治療之疾病或病症為神經/神經退化性疾病或病症/病況。在一些實施例中,神經/神經退化性疾病或病症與發炎相關。因此,在一些實施例中,本發明可用於治療或預防(例如降低其風險)神經發炎或相關疾病或病症。神經發炎可為慢性或急性,較佳為慢性的。神經發炎可為中樞或周邊神經系統(較佳為中樞神經系統)之神經發炎。
在一些實施例中,神經疾病、病症或損傷係選自肌肉萎縮性側索硬化(ALS)、癡呆、額顳葉型癡呆、阿茲海默氏疾病(Alzheimer's disease)、血管性癡呆、混合型癡呆、克雅氏病(Creutzfeldt-Jakob disease)、慢性發炎性脫髓鞘多發性神經病變(CIDP)、亨汀頓舞蹈症(Huntington's disease)、Tau蛋白病變疾病、那須-哈科拉疾病(Nasu-Hakola disease)、中樞神經系統狼瘡、帕金森氏病(Parkinson's disease)、路易體性癡呆(dementia with Lewy bodies)、多發性系統萎縮症(夏伊-德爾格症候群(Shy-Drager syndrome))、進行性核上麻痹、皮層基底節變性、急性播散性腦脊髓炎、癲癇、脊髓損傷、創傷性腦損傷(例如缺血及創傷性腦損傷)、抑鬱、自閉症譜系障礙及多發性硬化症。在一些實施例中,神經疾病、病症或損傷為肌肉萎縮性側索硬化(ALS)、阿茲海默症(Alzheimer disease)、帕金森病(Parkinson disease)、多發性硬化症、缺血及創傷性腦損傷、抑鬱及自閉症譜系障礙。
肌肉萎縮性側索硬化(ALS)(亦稱為運動神經元疾病或葛雷克氏症(Lou Gehrig's disease))係指具有不同病因的致衰弱疾病,其特徵為快速進展無力、肌肉萎縮及顫搐、肌肉痙攣、難以說話(發音困難)、難以吞咽(吞咽困難)及難以呼吸(呼吸困難)。
因此,本發明提供如本文所定義之用於療法中之Treg、Treg群或醫藥組合物(例如可藉由本發明之方法獲得的冷凍保存、解凍Treg或Treg群)。
適合地,Treg可為自體的。適合地,Treg可為同種異體的。
適合地,Treg (例如工程化Treg)可與一或多種其他治療劑(諸如淋巴細胞耗盡劑(例如如上文所論述))組合投與。
Treg可與一或多種其他治療劑同時投與或依次投與(亦即,在一或多種其他治療劑之前或之後)。
Tregs可在引入如本文所描述之核酸分子之前或之後活化及/或擴增,例如藉由用抗CD3單株抗體或抗CD3與抗CD28單株抗體處理。擴增方案論述如上。較佳地,活化及/或擴增製程在冷凍保存之前進行。較佳地,解凍後不需要進一步活化及/或擴增。
可在方法之各步驟之後,尤其在擴增之後洗滌Treg。
Treg細胞群可藉由熟習此項技術者已知之任何方法(例如藉由FACS或磁珠分選)進一步富集。
產生及冷凍保存方法之步驟可在封閉及無菌細胞培養系統中進行。
如先前所論述,本發明進一步提供相比於冷凍保存之後對應的非工程化Treg或Treg群,使冷凍保存之後的Treg或Treg群對次級淋巴器官之歸巢能力提高的方法,其包含在冷凍保存之前將編碼FOXP3多肽之聚核苷酸引入Treg或Treg群中之步驟。
Treg或Treg群之「歸巢能力提高」係指相比於不包含編碼FOXP3之外源聚核苷酸之Treg或Treg群,在活體內投藥後歸巢或定位於次級淋巴器官之能力增加(例如增加至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%)。歸巢能力可藉由任何已知成像技術量測。
此外,本發明提供一種用於在冷凍保存之後增加Treg或Treg群之穩定性及/或抑制功能之方法,其包含在冷凍保存之前將如本文所提供之核酸分子/聚核苷酸、表現構築體或載體引入細胞中之步驟。增加穩定性係指穩定性增加至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90% (例如相比於對應的經冷凍保存之非工程化Treg)。穩定性可藉由使用此項技術中已知之方法量測存在之Treg數目相對於時間的關係來測定。增加Treg之抑制功能係指抑制功能增加至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90% (例如相比於對應的經冷凍保存之非工程化Treg)。抑制功能可藉由任何熟知分析測定,包括本文所述之分析。替代性地看,本發明提供一種在冷凍保存之後保持Treg或Treg群穩定性及/或抑制功能之方法,其包含以下步驟:在冷凍保存之前將如本文所提供之核酸分子/聚核苷酸、表現構築體或載體引入細胞中,其中穩定性及/或抑制功能與對應的非冷凍保存之工程化Treg類似。類似的功能/穩定性意謂功能或穩定性可類似或相同於對應的非冷凍保存之工程化Treg,例如具有至少70%、80%或90%穩定性或功能。
本發明不受本文中所揭示之例示性方法及材料限制,且可在本發明之實施例的實施或測試中使用與本文中所描述之方法及材料類似或等效的任何方法及材料。數值範圍包括界定該範圍之數值。除非另外指明,否則任何核酸序列均以5'至3'方向自左向右書寫;胺基酸序列分別以胺基至羧基方向自左向右書寫。正確核酸及胺基酸序列直接來自本發明人。
當提供值之範圍時,應理解除非上下文另外明確指出,否則亦具體揭示該範圍上限與下限之間之各中間值直至下限單位之十分之一。任何所述值之間的各較小範圍或所述範圍內之中間值及該所述範圍內之任何其他所述值或中間值均涵蓋於本發明內。此等較小範圍之上限及下限可獨立地包括在範圍內或排除在外,且其中更小範圍包括任一限值、兩個限值均不包括於更小範圍內或兩個限值均包括於更小範圍內的各範圍亦涵蓋於本發明內,以所述範圍內特定排除之任何限值為准。當所述範圍包括一個或兩個限值時,排除彼等所含限值中之一者或兩者的範圍亦包括於本發明中。
必須指出,除非上下文另外明確規定,否則如本文及隨附申請專利範圍中所用之單數形式「一(a/an)」及「該」包括複數個提及物。
如本文所使用之術語「包含(comprising/comprises/comprised of)」與「包括(including/includes)」或「含有(containing/contains)」同義且不排除其他未列舉之成員、要素或方法步驟。術語「包含(comprising/comprises/comprised of)」亦包括術語「由......組成」。
本文中論述之公開案僅提供本申請案之申請日之前的揭示內容且以引用之方式併入本文中。本文中之任何內容不應解釋為承認此類公開案構成了隨附申請專利範圍之先前技術。
在不脫離本發明之範疇及精神的情況下,本發明所揭示方法、細胞、組合物及用途之各種修改及變化對於熟習此項技術者而言將為顯而易見的。儘管已結合特定較佳實施例揭示本發明,但應理解所主張之本發明不應過度限於此類特定實施例。實際上,所揭示之本發明實施方式的各種修改對於熟習此項技術者而言為顯而易見的,此等修改意欲屬於以下申請專利範圍之範疇內。
現將藉助於實例進一步描述本發明,該等實例意欲用於幫助一般熟習此項技術者實施本發明且不意欲以任何方式限制本發明之範疇。
實例 材料及方法 選殖 : 構築體1 (C1)係內部設計,且整個序列經密碼子優化以用於人類細胞中之表現且製造。將構築體選殖至pMP71骨架中且用質體將D5a高效細菌轉型且用選擇劑胺苄青黴素培養。使用Miniprep套組(Qiagen)提取DNA。藉由PCR選殖將插入序列轉移至慢病毒骨架中。構築體1 (C1)代表如本文所主張之本發明之構築體。
收集 PBMC : 白血球錐藉由NHS血液及移植體供應且自BioIVT獲得白血球採集物。使用密度離心方案自錐體分離出PBMC。簡言之,血液用1xPBS以1:1稀釋且在Ficoll-Paque (GE Healthcare)上分層。將樣本離心且移除白血球層且在PBS中洗滌。
Treg 分離方案 : 使用RosetteSep™人類CD4+ T細胞富集混合物、經由負向選擇對血錐及白血球採集物進行CD4富集。隨後,使用密度離心分離CD4+細胞。隨後,使用CD25微珠II (Miltenyi)、經由正向選擇來分離CD4+ CD25+ T細胞。在FACS分選之前,用流動式細胞測量術抗體CD4 FITC (OKT4, Biolegend)、CD25 PE-Cy7 (BC96, Biolegend)、CD127 BV421 (A019D5, Biolegend)、CD45RA BV510 (HI100, Biolegend)及LIVE/DEAD™可固定近IR-死細胞染料(Thermofisher)對CD4+CD25+溶離份進行染色。分選及使用CD4+CD25+CD127低CD45RA+ (CD45RA+ Tregs)。
Treg 培養基及擴增 : 人類調節T細胞用人類T-活化劑CD3/CD28 Dynabeads™ (Gibco)活化且在補充有IL-2及5%人類血清(Sigma-Aldrich)之XVIVO (Lonza)中培養。每2至3天向細胞中再饋入Treg培養基。用Dynabeads™進行第二輪刺激以促進Treg細胞進一步擴增。
轉染及病毒粒子產生 : 慢病毒 :接種HEK293T細胞且在DMEM (達爾伯克改良伊格爾培養基(Dulbecco's Modified Eagle's Medium))+10%胎牛血清(FBS)中培養24小時。使轉染試劑達到室溫且與所關注之DNA構築體/質體、封裝質體(pD8.91)及病毒包膜(pVSV-G)混合。將PEI添加至經稀釋之DNA中且混合且添加至HEK293Ts中。轉染後48小時收集上清液,過濾且濃縮病毒。
T 細胞之轉導 Treg細胞用抗CD3及抗CD28 Dynabeads (Gibco)活化且再懸浮於T細胞培養基中。藉由用重組人纖維連接蛋白(Retronectin) (Takahara-bio - Otsu, Japan)塗佈來製備非組織培養處理之24孔盤且將細胞懸浮液與慢病毒上清液一起添加。培育細胞且隔日進行培養基更換。細胞在轉導後12天用於實驗。
流動式細胞測量術染色以測定轉導及 FOXP3 表現 自培養物中移出Treg細胞,隨後洗滌且首先在PBS中用LIVE/DEAD™可固定近IR-死細胞染料(Thermofisher)染色,且接著在FACS染色緩衝液中用抗CD4 AF700 (RPA-T4, BD)、抗CD34 FITC (QBEND/10, Thermofisher)及抗CD3 PE-Cy7染色。對於FOXP3之細胞內染色,將細胞固定且滲透且用抗Foxp3 PE (150D/E4, Thermofisher)抗體染色。在Attune NxT流式細胞儀上分析細胞。
流動式細胞測量術對經轉導細胞進行表型分型 自培養物中移出Treg細胞且使用十聚體及LIVE/DEAD™可固定近IR-死細胞染料染色,如上文所描述。使用抗CD62L BV650 (Biolegend)進行細胞之表面染色。細胞用抗Foxp3 PE (150D/E4, Thermofisher)滲透及染色。
人類 Treg 細胞之冷凍保存及解凍 在活體外擴增14天後,以磁性方式自Treg細胞移除Dynabeads且細胞以1×10
6/mL之密度在具有1%人類血清之細胞培養基中靜置。第二天,將一半細胞冷凍保存,且另一半新鮮用於表型分析。藉由使靜置之Treg細胞再懸浮於冷凍保存培養基中以獲得0.5至10×10
6個細胞/毫升細胞懸浮液進行冷凍保存。隨後使用無菌Pasteur移液管將細胞轉移至冷凍小瓶中且使冷凍小瓶在預冷卻之冷凍容器內、在-80℃下冷凍4至6小時。最後將冷凍小瓶轉移至液氮罐中。藉由將冷凍小瓶浸沒至37℃水浴中2至3分鐘來進行Treg細胞之解凍。隨後將解凍之細胞懸浮液平緩地倒入含有具有20%胎牛血清(FBS)之細胞培養基的錐形管中,且細胞在300xg下離心10分鐘。離心之後,對細胞計數且用於表型分析。
測試不同冷凍保存溶液及細胞密度之方法 使用標準方案設計及製造內部構築體:構築體1 (C1)。此構築體代表如本文所主張之本發明構築體。
初始Tregs係自白血球採集物分離且根據標準方案分選。經分離之細胞用CD3/CD28珠粒活化且在補充有IL-2及人類血清之XVIVO (Lonza)中培養。每2至3天向細胞中再饋入培養基。在培養期間用CD3/CD28珠粒進行第二輪刺激以促進Treg細胞進一步擴增。
Treg細胞在培養期間不轉導或以使用慢病毒載體(慢病毒載體根據標準方案產生)之C1轉導。將載體及IL-2直接添加至培養之Treg細胞中。
在擴增之後,取出一部分細胞用於計數及流動式細胞測量術分析(『冷凍前』)。將剩餘細胞等分成5個不同細胞體積。使細胞快速離心且使細胞集結粒再懸浮於1 ml冷凍保存溶液1、2或3中,每種冷凍保存溶液得到5種不同細胞密度(在1×至100×初始細胞密度範圍內)。接著將細胞等分至冷凍小瓶中且於-80℃下置放24小時且接著轉移至液氮中。藉由將冷凍小瓶置放在37℃水浴中直至剩下小冰晶來進行Treg之解凍。
隨後藉由流動式細胞測量術分析細胞以評估轉導、FOXP3表現及表型。此係使用內部『健康』流動式細胞測量組合及內部『成熟』流動式細胞測量組合完成。簡言之,健康組合量測活/死細胞、CD4/CD25、FOXP3、RQR8 (使用抗CD34抗體 – 指示轉導)及細胞凋亡標記物。成熟組合量測活/死細胞、CD4、CD45RA (初始/SCM)、CD45RA-CCR7+ (中樞記憶)、CD45RA-CCR7- (效應子記憶)及CD62L。結果展示於圖4至圖6中。
資料分析 使用流動式細胞測量術分析軟體FlowJo (Flowjo, LLC)分析流動式細胞測量資料。如何分析資料的所有簡要說明為統計分析,其使用Graphpad Prism v.8 (Graphpad, Software)進行。
實例 1 - 活力評估如上文所描述,收集新製及冷凍的非轉導Tregs,亦即不含有外源FOXP3之非遺傳修飾之Tregs (非GMO)及用表現FOXP3之構築體(C1 (構築體1))轉導之新製及冷凍之Tregs且用可固定之活力染料染色以用於流動式細胞測量術分析。評估來自八個各別供者之細胞。構築體1 (C1)為包含FOXP3、安全開關及CD34可選標記物之構築體。使用抗CD34抗體(諸如QBEND)偵測CD34可選標記物能夠鑑別轉導細胞。C1代表如本文所主張之本發明構築體。
圖1顯示冷凍之經轉導Tregs的活力百分比類似於冷凍之未轉導Tregs的活力百分比,為約75%。
實例 2 - 轉導及 FOXP3 表現如上文所描述評估經表現FOXP3之構築體(C1)轉導之新製及冷凍Tregs的轉導效率。使用抗CD34抗體選擇經轉導之細胞。評估來自6個各別供者之細胞。
圖2顯示經C1轉導之新製與冷凍之Tregs均表現FOXP3。
實例 3 - 表型評估 ( 細胞表面 CD62L 表現 )如上文所描述,收集新製及冷凍之非轉導Tregs (非GMO),亦即,不含有外源FOXP3之Tregs及經表現FOXP3之實驗構築體(C1 (構築體1))轉導的新製及冷凍Tregs且用與螢光團結合的抗CD62L抗體染色以用於流動式細胞測量術分析。評估來自八個各別供者之細胞。
圖2顯示當尚未冷凍此等細胞時,經FOXP3轉導之Tregs中及非轉導之Tregs中的CD62L表現量接近100%。在冷凍保存之後,經轉導與未轉導之細胞中的CD62L表現量均降低。然而,相比於未轉導之Tregs,經FOXP3轉導之Tregs在冷凍及解凍之後維持顯著較高的CD62L表現量。
實例 4 - 不同冷凍保存溶液中之活力評估Treg經表現FOXP3之構築體(C1 (構築體1))轉導或未經轉導,亦即,不含有外源FOXP3之未遺傳修飾之Tregs (非GMO)。一些此等Tregs新鮮地用於活力分析(圖4中之『冷凍前』欄)且其他Tregs在三種不同冷凍保存溶液中冷凍:溶液1、溶液2及溶液3,每種溶液五種不同細胞密度。如上文所描述,收集新製及冷凍Tregs且用活力染料染色以用於流動式細胞測量術分析。使用抗CD34抗體選擇經C1轉導之細胞。評估來自5個各別供者之細胞。
圖4顯示冷凍之經轉導及未轉導Tregs的活力百分比與新製之經轉導及未轉導Tregs的活力百分比類似,幾乎100%,且在三種不同冷凍保存溶液1、2及3中且在所有五種細胞密度中,經轉導與未轉導之細胞的活力百分比變化極小。
實例 5 - 不同冷凍保存溶液中之轉導及 FOXP3 表現如上文所描述,評估經表現FOXP3之構築體(C1)轉導或未轉導之新製Tregs (亦即,不含有外源FOXP3之未遺傳修飾之Tregs (非GMO))(參見圖5中之『冷凍前』欄)及經C1轉導或未轉導且已在冷凍保存溶液1、2或3冷凍之冷凍Tregs (每種溶液五種不同細胞密度)的轉導效率。使用抗CD34抗體選擇經C1轉導之細胞。評估來自5個各別供者之細胞。
圖5顯示經C1轉導之新製與冷凍Tregs均高量表現FOXP3且FOXP3表現百分比在所有三種冷凍保存溶液中、在所有五種細胞密度下一致。
實例 6 - 不同冷凍保存溶液中之表型評估 ( CD62L 之細胞表面表現 )Treg經表現FOXP3之構築體(C1 (構築體1))轉導或未經轉導,亦即,不含有外源FOXP3之未遺傳修飾之Tregs (非GMO)。一些此等Tregs新鮮地用於表型分析(圖6中之『冷凍前』欄)且其他Tregs在三種不同冷凍保存溶液中冷凍:溶液1、溶液2或溶液3,每種溶液五種不同細胞密度。如上文所描述,收集新製及冷凍Tregs且用與螢光團結合之抗CD62L抗體染色以用於流動式細胞測量術分析。評估來自5個各別供者之細胞。
圖6顯示在所有三個冷凍保存溶液1、2及3中且在五種細胞密度下,經FOXP3 (C1)轉導之Tregs中的CD62L表現量接近90%,而未轉導之Tregs中的CD62L表現在所有條件下皆低得多。
圖 1 - 活力圖1顯示新製Tregs (亦即,未冷凍之Tregs)及已用表現FOXP3之構築體(C1)轉導之冷凍Tregs的活力與尚未轉導(亦即,未經遺傳修飾(非GMO))之新製Treg及冷凍Tregs之活力的比較。在經轉導與未經轉導之Tregs中,約75%細胞在冷凍後仍有活力。
圖 2 - 轉導圖2顯示經C1轉導之新製與冷凍Tregs均表現FOXP3。
圖 3 - 細胞表面 CD62L 表現圖3顯示新製Tregs (亦即,未冷凍之Tregs)及已用表現FOXP3之構築體(C1)轉導之冷凍Tregs之細胞表面CD62L表現及尚未轉導(非GMO)之新製Treg及冷凍Tregs之細胞表面CD62L表現。相比於冷凍的非轉導Tregs,冷凍之經轉導Treg中的CD62L表現百分比顯著增加。
圖 4 - 不同冷凍保存溶液中之活力圖4顯示新製Tregs (亦即,未冷凍之Tregs)(『冷凍前』欄)及冷凍Tregs之活力,其二者均用表現FOXP3之構築體(C1)轉導或未轉導(非GMO)(未轉導之Tregs不表現外源FOXP3)。冷凍之Tregs在三種不同冷凍保存溶液中冷凍:溶液1、溶液2及溶液3,每種溶液有五個不同細胞密度。在所有條件下活力接近100%。
圖 5 - 不同冷凍保存溶液中之轉導圖5顯示已用表現FOXP3之構築體(C1)轉導或未轉導(非GMO)(『冷凍前』欄)之新製Tregs中的轉導,以及已用C1轉導或未轉導(非GMO)且接著在冷凍保存溶液1、2或3中、在每個溶液五種不同細胞密度下冷凍之Tregs中的轉導。在新製與冷凍條件下,經C1轉導之Tregs高量表現FOXP3。在所有三種不同冷凍保存溶液1、2及3及所有五種不同細胞密度中,冷凍的Tregs維持此高表現量。
圖 6 - 不同冷凍保存溶液中之細胞表面 CD62L 表現圖6顯示已用表現FOXP3 (C1)之構築體轉導或未轉導(非GMO)(『冷凍前』欄)之新製Tregs的細胞表面CD62L表現,以及已用C1轉導或未轉導(非GMO)且接著在冷凍保存溶液1、2或3中、在每個溶液五種不同細胞密度下冷凍之Treg的細胞表面CD62L表現。相比於未轉導之Tregs,經C1轉導之Tregs中的CD62L表現百分比增加,且在所有三種冷凍保存溶液及所有五種不同細胞密度中係類似的。
<![CDATA[<110> 英商圭爾醫療有限公司(QUELL THERAPEUTICS LIMITED)]]> <![CDATA[<120> 冷凍保存經工程化之調節T細胞(TREGS)之方法]]> <![CDATA[<130> 27.130.151796/02]]> <![CDATA[<150> GB 2017678.0]]> <![CDATA[<151> 2020-11-09]]> <![CDATA[<150> GB 2107418.2]]> <![CDATA[<151> 2021-05-25]]> <![CDATA[<160> 15 ]]> <![CDATA[<170> PatentIn version 3.5]]> <![CDATA[<210> 1]]> <![CDATA[<211> 431]]> <![CDATA[<212> PRT]]> <![CDATA[<213> 智人]]> <![CDATA[<400> 1]]> Met Pro Asn Pro Arg Pro Gly Lys Pro Ser Ala Pro Ser Leu Ala Leu 1 5 10 15 Gly Pro Ser Pro Gly Ala Ser Pro Ser Trp Arg Ala Ala Pro Lys Ala 20 25 30 Ser Asp Leu Leu Gly Ala Arg Gly Pro Gly Gly Thr Phe Gln Gly Arg 35 40 45 Asp Leu Arg Gly Gly Ala His Ala Ser Ser Ser Ser Leu Asn Pro Met 50 55 60 Pro Pro Ser Gln Leu Gln Leu Pro Thr Leu Pro Leu Val Met Val Ala 65 70 75 80 Pro Ser Gly Ala Arg Leu Gly Pro Leu Pro His Leu Gln Ala Leu Leu 85 90 95 Gln Asp Arg Pro His Phe Met His Gln Leu Ser Thr Val Asp Ala His 100 105 110 Ala Arg Thr Pro Val Leu Gln Val His Pro Leu Glu Ser Pro Ala Met 115 120 125 Ile Ser Leu Thr Pro Pro Thr Thr Ala Thr Gly Val Phe Ser Leu Lys 130 135 140 Ala Arg Pro Gly Leu Pro Pro Gly Ile Asn Val Ala Ser Leu Glu Trp 145 150 155 160 Val Ser Arg Glu Pro Ala Leu Leu Cys Thr Phe Pro Asn Pro Ser Ala 165 170 175 Pro Arg Lys Asp Ser Thr Leu Ser Ala Val Pro Gln Ser Ser Tyr Pro 180 185 190 Leu Leu Ala Asn Gly Val Cys Lys Trp Pro Gly Cys Glu Lys Val Phe 195 200 205 Glu Glu Pro Glu Asp Phe Leu Lys His Cys Gln Ala Asp His Leu Leu 210 215 220 Asp Glu Lys Gly Arg Ala Gln Cys Leu Leu Gln Arg Glu Met Val Gln 225 230 235 240 Ser Leu Glu Gln Gln Leu Val Leu Glu Lys Glu Lys Leu Ser Ala Met 245 250 255 Gln Ala His Leu Ala Gly Lys Met Ala Leu Thr Lys Ala Ser Ser Val 260 265 270 Ala Ser Ser Asp Lys Gly Ser Cys Cys Ile Val Ala Ala Gly Ser Gln 275 280 285 Gly Pro Val Val Pro Ala Trp Ser Gly Pro Arg Glu Ala Pro Asp Ser 290 295 300 Leu Phe Ala Val Arg Arg His Leu Trp Gly Ser His Gly Asn Ser Thr 305 310 315 320 Phe Pro Glu Phe Leu His Asn Met Asp Tyr Phe Lys Phe His Asn Met 325 330 335 Arg Pro Pro Phe Thr Tyr Ala Thr Leu Ile Arg Trp Ala Ile Leu Glu 340 345 350 Ala Pro Glu Lys Gln Arg Thr Leu Asn Glu Ile Tyr His Trp Phe Thr 355 360 365 Arg Met Phe Ala Phe Phe Arg Asn His Pro Ala Thr Trp Lys Asn Ala 370 375 380 Ile Arg His Asn Leu Ser Leu His Lys Cys Phe Val Arg Val Glu Ser 385 390 395 400 Glu Lys Gly Ala Val Trp Thr Val Asp Glu Leu Glu Phe Arg Lys Lys 405 410 415 Arg Ser Gln Arg Pro Ser Arg Cys Ser Asn Pro Thr Pro Gly Pro 420 425 430 <![CDATA[<210> 2]]> <![CDATA[<211> 431]]> <![CDATA[<212> PRT]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> FOXP3,aa418突變體]]> <![CDATA[<400> 2]]> Met Pro Asn Pro Arg Pro Gly Lys Pro Ser Ala Pro Ser Leu Ala Leu 1 5 10 15 Gly Pro Ser Pro Gly Ala Ser Pro Ser Trp Arg Ala Ala Pro Lys Ala 20 25 30 Ser Asp Leu Leu Gly Ala Arg Gly Pro Gly Gly Thr Phe Gln Gly Arg 35 40 45 Asp Leu Arg Gly Gly Ala His Ala Ser Ser Ser Ser Leu Asn Pro Met 50 55 60 Pro Pro Ser Gln Leu Gln Leu Pro Thr Leu Pro Leu Val Met Val Ala 65 70 75 80 Pro Ser Gly Ala Arg Leu Gly Pro Leu Pro His Leu Gln Ala Leu Leu 85 90 95 Gln Asp Arg Pro His Phe Met His Gln Leu Ser Thr Val Asp Ala His 100 105 110 Ala Arg Thr Pro Val Leu Gln Val His Pro Leu Glu Ser Pro Ala Met 115 120 125 Ile Ser Leu Thr Pro Pro Thr Thr Ala Thr Gly Val Phe Ser Leu Lys 130 135 140 Ala Arg Pro Gly Leu Pro Pro Gly Ile Asn Val Ala Ser Leu Glu Trp 145 150 155 160 Val Ser Arg Glu Pro Ala Leu Leu Cys Thr Phe Pro Asn Pro Ser Ala 165 170 175 Pro Arg Lys Asp Ser Thr Leu Ser Ala Val Pro Gln Ser Ser Tyr Pro 180 185 190 Leu Leu Ala Asn Gly Val Cys Lys Trp Pro Gly Cys Glu Lys Val Phe 195 200 205 Glu Glu Pro Glu Asp Phe Leu Lys His Cys Gln Ala Asp His Leu Leu 210 215 220 Asp Glu Lys Gly Arg Ala Gln Cys Leu Leu Gln Arg Glu Met Val Gln 225 230 235 240 Ser Leu Glu Gln Gln Leu Val Leu Glu Lys Glu Lys Leu Ser Ala Met 245 250 255 Gln Ala His Leu Ala Gly Lys Met Ala Leu Thr Lys Ala Ser Ser Val 260 265 270 Ala Ser Ser Asp Lys Gly Ser Cys Cys Ile Val Ala Ala Gly Ser Gln 275 280 285 Gly Pro Val Val Pro Ala Trp Ser Gly Pro Arg Glu Ala Pro Asp Ser 290 295 300 Leu Phe Ala Val Arg Arg His Leu Trp Gly Ser His Gly Asn Ser Thr 305 310 315 320 Phe Pro Glu Phe Leu His Asn Met Asp Tyr Phe Lys Phe His Asn Met 325 330 335 Arg Pro Pro Phe Thr Tyr Ala Thr Leu Ile Arg Trp Ala Ile Leu Glu 340 345 350 Ala Pro Glu Lys Gln Arg Thr Leu Asn Glu Ile Tyr His Trp Phe Thr 355 360 365 Arg Met Phe Ala Phe Phe Arg Asn His Pro Ala Thr Trp Lys Asn Ala 370 375 380 Ile Arg His Asn Leu Ser Leu His Lys Cys Phe Val Arg Val Glu Ser 385 390 395 400 Glu Lys Gly Ala Val Trp Thr Val Asp Glu Leu Glu Phe Arg Lys Lys 405 410 415 Arg Glu Gln Arg Pro Ser Arg Cys Ser Asn Pro Thr Pro Gly Pro 420 425 430 <![CDATA[<210> 3]]> <![CDATA[<211> 431]]> <![CDATA[<212> PRT]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> FOXP3,aa422突變體]]> <![CDATA[<400> 3]]> Met Pro Asn Pro Arg Pro Gly Lys Pro Ser Ala Pro Ser Leu Ala Leu 1 5 10 15 Gly Pro Ser Pro Gly Ala Ser Pro Ser Trp Arg Ala Ala Pro Lys Ala 20 25 30 Ser Asp Leu Leu Gly Ala Arg Gly Pro Gly Gly Thr Phe Gln Gly Arg 35 40 45 Asp Leu Arg Gly Gly Ala His Ala Ser Ser Ser Ser Leu Asn Pro Met 50 55 60 Pro Pro Ser Gln Leu Gln Leu Pro Thr Leu Pro Leu Val Met Val Ala 65 70 75 80 Pro Ser Gly Ala Arg Leu Gly Pro Leu Pro His Leu Gln Ala Leu Leu 85 90 95 Gln Asp Arg Pro His Phe Met His Gln Leu Ser Thr Val Asp Ala His 100 105 110 Ala Arg Thr Pro Val Leu Gln Val His Pro Leu Glu Ser Pro Ala Met 115 120 125 Ile Ser Leu Thr Pro Pro Thr Thr Ala Thr Gly Val Phe Ser Leu Lys 130 135 140 Ala Arg Pro Gly Leu Pro Pro Gly Ile Asn Val Ala Ser Leu Glu Trp 145 150 155 160 Val Ser Arg Glu Pro Ala Leu Leu Cys Thr Phe Pro Asn Pro Ser Ala 165 170 175 Pro Arg Lys Asp Ser Thr Leu Ser Ala Val Pro Gln Ser Ser Tyr Pro 180 185 190 Leu Leu Ala Asn Gly Val Cys Lys Trp Pro Gly Cys Glu Lys Val Phe 195 200 205 Glu Glu Pro Glu Asp Phe Leu Lys His Cys Gln Ala Asp His Leu Leu 210 215 220 Asp Glu Lys Gly Arg Ala Gln Cys Leu Leu Gln Arg Glu Met Val Gln 225 230 235 240 Ser Leu Glu Gln Gln Leu Val Leu Glu Lys Glu Lys Leu Ser Ala Met 245 250 255 Gln Ala His Leu Ala Gly Lys Met Ala Leu Thr Lys Ala Ser Ser Val 260 265 270 Ala Ser Ser Asp Lys Gly Ser Cys Cys Ile Val Ala Ala Gly Ser Gln 275 280 285 Gly Pro Val Val Pro Ala Trp Ser Gly Pro Arg Glu Ala Pro Asp Ser 290 295 300 Leu Phe Ala Val Arg Arg His Leu Trp Gly Ser His Gly Asn Ser Thr 305 310 315 320 Phe Pro Glu Phe Leu His Asn Met Asp Tyr Phe Lys Phe His Asn Met 325 330 335 Arg Pro Pro Phe Thr Tyr Ala Thr Leu Ile Arg Trp Ala Ile Leu Glu 340 345 350 Ala Pro Glu Lys Gln Arg Thr Leu Asn Glu Ile Tyr His Trp Phe Thr 355 360 365 Arg Met Phe Ala Phe Phe Arg Asn His Pro Ala Thr Trp Lys Asn Ala 370 375 380 Ile Arg His Asn Leu Ser Leu His Lys Cys Phe Val Arg Val Glu Ser 385 390 395 400 Glu Lys Gly Ala Val Trp Thr Val Asp Glu Leu Glu Phe Arg Lys Lys 405 410 415 Arg Ser Gln Arg Pro Ala Arg Cys Ser Asn Pro Thr Pro Gly Pro 420 425 430 <![CDATA[<210> 4]]> <![CDATA[<211> 431]]> <![CDATA[<212> PRT]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> FOXP3,aa 418及422突變體]]> <![CDATA[<400> 4]]> Met Pro Asn Pro Arg Pro Gly Lys Pro Ser Ala Pro Ser Leu Ala Leu 1 5 10 15 Gly Pro Ser Pro Gly Ala Ser Pro Ser Trp Arg Ala Ala Pro Lys Ala 20 25 30 Ser Asp Leu Leu Gly Ala Arg Gly Pro Gly Gly Thr Phe Gln Gly Arg 35 40 45 Asp Leu Arg Gly Gly Ala His Ala Ser Ser Ser Ser Leu Asn Pro Met 50 55 60 Pro Pro Ser Gln Leu Gln Leu Pro Thr Leu Pro Leu Val Met Val Ala 65 70 75 80 Pro Ser Gly Ala Arg Leu Gly Pro Leu Pro His Leu Gln Ala Leu Leu 85 90 95 Gln Asp Arg Pro His Phe Met His Gln Leu Ser Thr Val Asp Ala His 100 105 110 Ala Arg Thr Pro Val Leu Gln Val His Pro Leu Glu Ser Pro Ala Met 115 120 125 Ile Ser Leu Thr Pro Pro Thr Thr Ala Thr Gly Val Phe Ser Leu Lys 130 135 140 Ala Arg Pro Gly Leu Pro Pro Gly Ile Asn Val Ala Ser Leu Glu Trp 145 150 155 160 Val Ser Arg Glu Pro Ala Leu Leu Cys Thr Phe Pro Asn Pro Ser Ala 165 170 175 Pro Arg Lys Asp Ser Thr Leu Ser Ala Val Pro Gln Ser Ser Tyr Pro 180 185 190 Leu Leu Ala Asn Gly Val Cys Lys Trp Pro Gly Cys Glu Lys Val Phe 195 200 205 Glu Glu Pro Glu Asp Phe Leu Lys His Cys Gln Ala Asp His Leu Leu 210 215 220 Asp Glu Lys Gly Arg Ala Gln Cys Leu Leu Gln Arg Glu Met Val Gln 225 230 235 240 Ser Leu Glu Gln Gln Leu Val Leu Glu Lys Glu Lys Leu Ser Ala Met 245 250 255 Gln Ala His Leu Ala Gly Lys Met Ala Leu Thr Lys Ala Ser Ser Val 260 265 270 Ala Ser Ser Asp Lys Gly Ser Cys Cys Ile Val Ala Ala Gly Ser Gln 275 280 285 Gly Pro Val Val Pro Ala Trp Ser Gly Pro Arg Glu Ala Pro Asp Ser 290 295 300 Leu Phe Ala Val Arg Arg His Leu Trp Gly Ser His Gly Asn Ser Thr 305 310 315 320 Phe Pro Glu Phe Leu His Asn Met Asp Tyr Phe Lys Phe His Asn Met 325 330 335 Arg Pro Pro Phe Thr Tyr Ala Thr Leu Ile Arg Trp Ala Ile Leu Glu 340 345 350 Ala Pro Glu Lys Gln Arg Thr Leu Asn Glu Ile Tyr His Trp Phe Thr 355 360 365 Arg Met Phe Ala Phe Phe Arg Asn His Pro Ala Thr Trp Lys Asn Ala 370 375 380 Ile Arg His Asn Leu Ser Leu His Lys Cys Phe Val Arg Val Glu Ser 385 390 395 400 Glu Lys Gly Ala Val Trp Thr Val Asp Glu Leu Glu Phe Arg Lys Lys 405 410 415 Arg Glu Gln Arg Pro Ala Arg Cys Ser Asn Pro Thr Pro Gly Pro 420 425 430 <![CDATA[<210> 5]]> <![CDATA[<211> 362]]> <![CDATA[<212> PRT]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> FOXP3,截斷變異體]]> <![CDATA[<400> 5]]> Gly Gly Ala His Ala Ser Ser Ser Ser Leu Asn Pro Met Pro Pro Ser 1 5 10 15 Gln Leu Gln Leu Pro Thr Leu Pro Leu Val Met Val Ala Pro Ser Gly 20 25 30 Ala Arg Leu Gly Pro Leu Pro His Leu Gln Ala Leu Leu Gln Asp Arg 35 40 45 Pro His Phe Met His Gln Leu Ser Thr Val Asp Ala His Ala Arg Thr 50 55 60 Pro Val Leu Gln Val His Pro Leu Glu Ser Pro Ala Met Ile Ser Leu 65 70 75 80 Thr Pro Pro Thr Thr Ala Thr Gly Val Phe Ser Leu Lys Ala Arg Pro 85 90 95 Gly Leu Pro Pro Gly Ile Asn Val Ala Ser Leu Glu Trp Val Ser Arg 100 105 110 Glu Pro Ala Leu Leu Cys Thr Phe Pro Asn Pro Ser Ala Pro Arg Lys 115 120 125 Asp Ser Thr Leu Ser Ala Val Pro Gln Ser Ser Tyr Pro Leu Leu Ala 130 135 140 Asn Gly Val Cys Lys Trp Pro Gly Cys Glu Lys Val Phe Glu Glu Pro 145 150 155 160 Glu Asp Phe Leu Lys His Cys Gln Ala Asp His Leu Leu Asp Glu Lys 165 170 175 Gly Arg Ala Gln Cys Leu Leu Gln Arg Glu Met Val Gln Ser Leu Glu 180 185 190 Gln Gln Leu Val Leu Glu Lys Glu Lys Leu Ser Ala Met Gln Ala His 195 200 205 Leu Ala Gly Lys Met Ala Leu Thr Lys Ala Ser Ser Val Ala Ser Ser 210 215 220 Asp Lys Gly Ser Cys Cys Ile Val Ala Ala Gly Ser Gln Gly Pro Val 225 230 235 240 Val Pro Ala Trp Ser Gly Pro Arg Glu Ala Pro Asp Ser Leu Phe Ala 245 250 255 Val Arg Arg His Leu Trp Gly Ser His Gly Asn Ser Thr Phe Pro Glu 260 265 270 Phe Leu His Asn Met Asp Tyr Phe Lys Phe His Asn Met Arg Pro Pro 275 280 285 Phe Thr Tyr Ala Thr Leu Ile Arg Trp Ala Ile Leu Glu Ala Pro Glu 290 295 300 Lys Gln Arg Thr Leu Asn Glu Ile Tyr His Trp Phe Thr Arg Met Phe 305 310 315 320 Ala Phe Phe Arg Asn His Pro Ala Thr Trp Lys Asn Ala Ile Arg His 325 330 335 Asn Leu Ser Leu His Lys Cys Phe Val Arg Val Glu Ser Glu Lys Gly 340 345 350 Ala Val Trp Thr Val Asp Glu Leu Glu Phe 355 360 <![CDATA[<210> 6]]> <![CDATA[<211> 441]]> <![CDATA[<212> PRT]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> FOXP3,說明性變異體]]> <![CDATA[<400> 6]]> Met Pro Asn Pro Arg Pro Gly Lys Pro Ser Ala Pro Ser Leu Ala Leu 1 5 10 15 Gly Pro Ser Pro Gly Ala Ser Pro Ser Trp Arg Ala Ala Pro Lys Ala 20 25 30 Ser Asp Leu Leu Gly Ala Arg Gly Pro Gly Gly Thr Phe Gln Gly Arg 35 40 45 Asp Leu Arg Gly Gly Ala His Ala Ser Ser Ser Ser Leu Asn Pro Met 50 55 60 Pro Pro Ser Gln Leu Gln Leu Pro Thr Leu Pro Leu Val Met Val Ala 65 70 75 80 Pro Ser Gly Ala Arg Leu Gly Pro Leu Pro His Leu Gln Ala Leu Leu 85 90 95 Gln Asp Arg Pro His Phe Met His Gln Leu Ser Thr Val Asp Ala His 100 105 110 Ala Arg Thr Pro Val Leu Gln Val His Pro Leu Glu Ser Pro Ala Met 115 120 125 Ile Ser Leu Thr Pro Pro Thr Thr Ala Thr Gly Val Phe Ser Leu Lys 130 135 140 Ala Arg Pro Gly Leu Pro Pro Gly Ile Asn Val Ala Ser Leu Glu Trp 145 150 155 160 Val Ser Arg Glu Pro Ala Leu Leu Cys Thr Phe Pro Asn Pro Ser Ala 165 170 175 Pro Arg Lys Asp Ser Thr Leu Ser Ala Val Pro Gln Ser Ser Tyr Pro 180 185 190 Leu Leu Ala Asn Gly Val Cys Lys Trp Pro Gly Cys Glu Lys Val Phe 195 200 205 Glu Glu Pro Glu Asp Phe Leu Lys His Cys Gln Ala Asp His Leu Leu 210 215 220 Asp Glu Lys Gly Arg Ala Gln Cys Leu Leu Gln Arg Glu Met Val Gln 225 230 235 240 Ser Leu Glu Gln Val Glu Glu Leu Ser Ala Met Gln Ala His Leu Ala 245 250 255 Gly Lys Met Ala Leu Thr Lys Ala Ser Ser Val Ala Ser Ser Asp Lys 260 265 270 Gly Ser Cys Cys Ile Val Ala Ala Gly Ser Gln Gly Pro Val Val Pro 275 280 285 Ala Trp Ser Gly Pro Arg Glu Ala Pro Asp Ser Leu Phe Ala Val Arg 290 295 300 Arg His Leu Trp Gly Ser His Gly Asn Ser Thr Phe Pro Glu Phe Leu 305 310 315 320 His Asn Met Asp Tyr Phe Lys Phe His Asn Met Arg Pro Pro Phe Thr 325 330 335 Tyr Ala Thr Leu Ile Arg Trp Ala Ile Leu Glu Ala Pro Glu Lys Gln 340 345 350 Arg Thr Leu Asn Glu Ile Tyr His Trp Phe Thr Arg Met Phe Ala Phe 355 360 365 Phe Arg Asn His Pro Ala Thr Trp Lys Asn Ala Ile Arg His Asn Leu 370 375 380 Ser Leu His Lys Cys Phe Val Arg Val Glu Ser Glu Lys Gly Ala Val 385 390 395 400 Trp Thr Val Asp Glu Leu Glu Phe Arg Lys Lys Arg Ser Gln Arg Pro 405 410 415 Ser Arg Cys Ser Asn Pro Thr Pro Gly Pro Glu Gly Arg Gly Ser Leu 420 425 430 Leu Thr Cys Gly Asp Val Glu Glu Asn 435 440 <![CDATA[<210> 7]]> <![CDATA[<211> 1296]]> <![CDATA[<212> DNA]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> FOXP3,說明性FOXP3聚核苷酸]]> <![CDATA[<400> 7]]> atgcccaacc ccaggcctgg caagccctcg gccccttcct tggcccttgg cccatcccca 60 ggagcctcgc ccagctggag ggctgcaccc aaagcctcag acctgctggg ggcccggggc 120 ccagggggaa ccttccaggg ccgagatctt cgaggcgggg cccatgcctc ctcttcttcc 180 ttgaacccca tgccaccatc gcagctgcag ctgcccacac tgcccctagt catggtggca 240 ccctccgggg cacggctggg ccccttgccc cacttacagg cactcctcca ggacaggcca 300 catttcatgc accagctctc aacggtggat gcccacgccc ggacccctgt gctgcaggtg 360 caccccctgg agagcccagc catgatcagc ctcacaccac ccaccaccgc cactggggtc 420 ttctccctca aggcccggcc tggcctccca cctgggatca acgtggccag cctggaatgg 480 gtgtccaggg agccggcact gctctgcacc ttcccaaatc ccagtgcacc caggaaggac 540 agcacccttt cggctgtgcc ccagagctcc tacccactgc tggcaaatgg tgtctgcaag 600 tggcccggat gtgagaaggt cttcgaagag ccagaggact tcctcaagca ctgccaggcg 660 gaccatcttc tggatgagaa gggcagggca caatgtctcc tccagagaga gatggtacag 720 tctctggagc agcagctggt gctggagaag gagaagctga gtgccatgca ggcccacctg 780 gctgggaaaa tggcactgac caaggcttca tctgtggcat catccgacaa gggctcctgc 840 tgcatcgtag ctgctggcag ccaaggccct gtcgtcccag cctggtctgg cccccgggag 900 gcccctgaca gcctgtttgc tgtccggagg cacctgtggg gtagccatgg aaacagcaca 960 ttcccagagt tcctccacaa catggactac ttcaagttcc acaacatgcg accccctttc 1020 acctacgcca cgctcatccg ctgggccatc ctggaggctc cagagaagca gcggacactc 1080 aatgagatct accactggtt cacacgcatg tttgccttct tcagaaacca tcctgccacc 1140 tggaagaacg ccatccgcca caacctgagt ctgcacaagt gctttgtgcg ggtggagagc 1200 gagaaggggg ctgtgtggac cgtggatgag ctggagttcc gcaagaaacg gagccagagg 1260 cccagcaggt gttccaaccc tacacctggc ccctga 1296 <![CDATA[<210> 8]]> <![CDATA[<211> 1352]]> <![CDATA[<212> DNA]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> FOXP3,說明性FOXP3聚核苷酸]]> <![CDATA[<400> 8]]> gaattcgtcg acatgcccaa ccccagaccc ggcaagcctt ctgccccttc tctggccctg 60 ggaccatctc ctggcgcctc cccatcttgg agagccgccc ctaaagccag cgatctgctg 120 ggagctagag gccctggcgg cacattccag ggcagagatc tgagaggcgg agcccacgcc 180 tctagcagca gcctgaatcc catgccccct agccagctgc agctgcctac actgcctctc 240 gtgatggtgg cccctagcgg agctagactg ggccctctgc ctcatctgca ggctctgctg 300 caggaccggc cccactttat gcaccagctg agcaccgtgg acgcccacgc cagaacacct 360 gtgctgcagg tgcaccccct ggaaagccct gccatgatca gcctgacccc tccaaccaca 420 gccaccggcg tgttcagcct gaaggccaga cctggactgc cccctggcat caatgtggcc 480 agcctggaat gggtgtcccg cgaacctgcc ctgctgtgca ccttccccaa tcctagcgcc 540 cccagaaagg acagcacact gtctgccgtg ccccagagca gctatcccct gctggctaac 600 ggcgtgtgca agtggcctgg ctgcgagaag gtgttcgagg aacccgagga cttcctgaag 660 cactgccagg ccgaccatct gctggacgag aaaggcagag cccagtgcct gctgcagcgc 720 gagatggtgc agtccctgga acagcagctg gtgctggaaa aagaaaagct gagcgccatg 780 caggcccacc tggccggaaa gatggccctg acaaaagcca gcagcgtggc cagctccgac 840 aagggcagct gttgtatcgt ggccgctggc agccagggac ctgtggtgcc tgcttggagc 900 ggacctagag aggcccccga tagcctgttt gccgtgcgga gacacctgtg gggcagccac 960 ggcaactcta ccttccccga gttcctgcac aacatggact acttcaagtt ccacaacatg 1020 aggcccccct tcacctacgc caccctgatc agatgggcca ttctggaagc ccccgagaag 1080 cagcggaccc tgaacgagat ctaccactgg tttacccgga tgttcgcctt cttccggaac 1140 caccccgcca cctggaagaa cgccatccgg cacaatctga gcctgcacaa gtgcttcgtg 1200 cgggtggaaa gcgagaaggg cgccgtgtgg acagtggacg agctggaatt tcggaagaag 1260 cggtcccaga ggcccagccg gtgtagcaat cctacacctg gccctgaggg cagaggaagt 1320 ctgctaacat gcggtgacgt cgaggagaat cc 1352 <![CDATA[<210> 9]]> <![CDATA[<211> 372]]> <![CDATA[<212> PRT]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> CD62L]]> <![CDATA[<400> 9]]> Met Ile Phe Pro Trp Lys Cys Gln Ser Thr Gln Arg Asp Leu Trp Asn 1 5 10 15 Ile Phe Lys Leu Trp Gly Trp Thr Met Leu Cys Cys Asp Phe Leu Ala 20 25 30 His His Gly Thr Asp Cys Trp Thr Tyr His Tyr Ser Glu Lys Pro Met 35 40 45 Asn Trp Gln Arg Ala Arg Arg Phe Cys Arg Asp Asn Tyr Thr Asp Leu 50 55 60 Val Ala Ile Gln Asn Lys Ala Glu Ile Glu Tyr Leu Glu Lys Thr Leu 65 70 75 80 Pro Phe Ser Arg Ser Tyr Tyr Trp Ile Gly Ile Arg Lys Ile Gly Gly 85 90 95 Ile Trp Thr Trp Val Gly Thr Asn Lys Ser Leu Thr Glu Glu Ala Glu 100 105 110 Asn Trp Gly Asp Gly Glu Pro Asn Asn Lys Lys Asn Lys Glu Asp Cys 115 120 125 Val Glu Ile Tyr Ile Lys Arg Asn Lys Asp Ala Gly Lys Trp Asn Asp 130 135 140 Asp Ala Cys His Lys Leu Lys Ala Ala Leu Cys Tyr Thr Ala Ser Cys 145 150 155 160 Gln Pro Trp Ser Cys Ser Gly His Gly Glu Cys Val Glu Ile Ile Asn 165 170 175 Asn Tyr Thr Cys Asn Cys Asp Val Gly Tyr Tyr Gly Pro Gln Cys Gln 180 185 190 Phe Val Ile Gln Cys Glu Pro Leu Glu Ala Pro Glu Leu Gly Thr Met 195 200 205 Asp Cys Thr His Pro Leu Gly Asn Phe Ser Phe Ser Ser Gln Cys Ala 210 215 220 Phe Ser Cys Ser Glu Gly Thr Asn Leu Thr Gly Ile Glu Glu Thr Thr 225 230 235 240 Cys Gly Pro Phe Gly Asn Trp Ser Ser Pro Glu Pro Thr Cys Gln Val 245 250 255 Ile Gln Cys Glu Pro Leu Ser Ala Pro Asp Leu Gly Ile Met Asn Cys 260 265 270 Ser His Pro Leu Ala Ser Phe Ser Phe Thr Ser Ala Cys Thr Phe Ile 275 280 285 Cys Ser Glu Gly Thr Glu Leu Ile Gly Lys Lys Lys Thr Ile Cys Glu 290 295 300 Ser Ser Gly Ile Trp Ser Asn Pro Ser Pro Ile Cys Gln Lys Leu Asp 305 310 315 320 Lys Ser Phe Ser Met Ile Lys Glu Gly Asp Tyr Asn Pro Leu Phe Ile 325 330 335 Pro Val Ala Val Met Val Thr Ala Phe Ser Gly Leu Ala Phe Ile Ile 340 345 350 Trp Leu Ala Arg Arg Leu Lys Lys Gly Lys Lys Ser Lys Arg Ser Met 355 360 365 Asn Asp Pro Tyr 370 <![CDATA[<210> 10]]> <![CDATA[<211> 5]]> <![CDATA[<212> PRT]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> 3PB2 VH CDR1]]> <![CDATA[<400> 10]]> Asp Tyr Gly Met His 1 5 <![CDATA[<210> 11]]> <![CDATA[<211> 17]]> <![CDATA[<212> PRT]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> 3PB2 VH CDR2]]> <![CDATA[<400> 11]]> Phe Ile Arg Asn Asp Gly Ser Asp Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <![CDATA[<210> 12]]> <![CDATA[<211> 14]]> <![CDATA[<212> PRT]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> 3PB2 VH CDR3]]> <![CDATA[<400> 12]]> Asn Gly Glu Ser Gly Pro Leu Asp Tyr Trp Tyr Leu Asp Leu 1 5 10 <![CDATA[<210> 13]]> <![CDATA[<211> 11]]> <![CDATA[<212> PRT]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> 3PB2 VL CDR1]]> <![CDATA[<400> 13]]> Gln Ser Ser Leu Asp Ile Ser His Tyr Leu Asn 1 5 10 <![CDATA[<210> 14]]> <![CDATA[<211> 7]]> <![CDATA[<212> PRT]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> 3PB2 VL CDR2]]> <![CDATA[<400> 14]]> Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr 1 5 <![CDATA[<210> 15]]> <![CDATA[<211> 9]]> <![CDATA[<212> PRT]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> 3PB2 VL CDR3]]> <![CDATA[<400> 15]]> Gln Gln Tyr Asp Asn Leu Pro Leu Thr 1 5
Claims (36)
- 一種在已冷凍保存之調節T細胞(Treg)群中保持CD62L表現的方法,其包含在冷凍保存之前將編碼FOXP3多肽之聚核苷酸引入該Treg群中。
- 如請求項1之方法,其中該Treg群在冷凍保存之後的CD62L表現高於對應的非工程化Treg群在冷凍保存之後的CD62L表現。
- 如前述請求項中任一項之方法,其中該FOXP3多肽包含與SEQ ID NO. 1至少80%一致之胺基酸序列或其功能片段。
- 如請求項1至3中任一項之方法,其中該編碼FOXP3之聚核苷酸處於表現載體內。
- 如前述請求項中任一項之方法,其進一步包含將編碼外源T細胞受體(TCR)之聚核苷酸或編碼嵌合抗原受體(CAR)之聚核苷酸引入該Treg群中。
- 如請求項5之方法,其中該編碼FOXP3多肽之聚核苷酸及該編碼外源TCR或CAR之聚核苷酸藉由單一表現載體提供。
- 如請求項6之方法,其中該載體包含編碼該FOXP3多肽之第一聚核苷酸及編碼該外源TCR或CAR之第二聚核苷酸,其中該第一聚核苷酸及該第二聚核苷酸可操作地連接於同一啟動子,且其中該第一聚核苷酸位於該第二聚核苷酸上游。
- 如請求項5至7中任一項之方法,其中在該編碼FOXP3之聚核苷酸與該編碼外源TCR或CAR之聚核苷酸之間存在內部自裂解序列。
- 如前述請求項中任一項之方法,其中編碼FOXP3及/或外源TCR或CAR之該聚核苷酸藉由病毒轉導,較佳藉由反轉錄病毒或慢病毒轉導引入該Treg群中。
- 一種在冷凍保存之後保持Treg群中之CD62L表現的方法,其包含以下步驟:(a)將編碼FOXP3多肽之聚核苷酸引入Treg群中,及(b)冷凍保存該Treg群。
- 如請求項10之方法,其進一步包含以下步驟: 自樣本中分離出Treg群,隨後將該編碼FOXP3多肽之聚核苷酸引入該Treg群中;及/或 在冷凍保存之後,將該Treg群解凍。
- 如請求項11之方法,其中該樣本由全血、臍帶血、白血球錐、血錐、外周血液單核細胞(PBMC)或一或多種白血球採集物組成。
- 如請求項10至12中任一項之方法,其中步驟(b)包含以下步驟: (bi)將該Treg群懸浮於冷凍保存培養基中; (bii)冷凍(bi)之該Treg群;及 (biii)在低於-130℃之溫度下儲存(bii)之該Treg群。
- 如請求項10至13中任一項之方法,其中該方法進一步包含以下步驟: 在步驟(b)之前,將該Treg群及/或待用於冷凍保存步驟中之任何一或多種試劑及裝置預冷卻; 以每分鐘約-1℃之可控冷凍速率冷凍保存根據步驟(b)之該Treg群;及/或 在步驟(biii)之前將該Treg群在-80℃下儲存至多24小時。
- 如請求項11至14中任一項之方法,其中解凍該Treg群包含將該Treg群自低於-130℃之溫度升溫至約0℃至10℃之間的溫度,視情況其中升溫該Treg群包含將該Treg群置放於維持約37℃之水浴中。
- 如請求項11至15中任一項之方法,其中該Treg群係藉由選擇以下而分離: (i) CD4 +CD25 +CD127 -及/或CD4 +CD25 +CD127 低細胞;或 (ii) CD4 +CD25 高CD127 -及/或CD4 +CD25 +CD127 低細胞。
- 如請求項11至16中任一項之方法,其中該Treg群係藉由選擇CD45RA +細胞,較佳選擇CD4 +CD25 +CD127 低CD45RA +細胞來分離。
- 一種編碼FOXP3之外源聚核苷酸的用途,其用於在冷凍保存之後的Treg群中保持CD62L表現。
- 一種經冷凍保存之工程化Treg群,其包含編碼FOXP3多肽之外源聚核苷酸,其中該工程化Treg群在冷凍保存之後的CD62L表現高於對應的非工程化Treg群在冷凍保存之後的CD62L表現。
- 如請求項19之經冷凍保存之工程化Treg群,其中該FOXP3多肽包含與SEQ ID NO. 1至少80%一致之胺基酸序列或其功能片段。
- 如請求項19或20之經冷凍保存之工程化Treg群,其中該編碼FOXP3之外源聚核苷酸處於表現載體內。
- 如請求項19至21中任一項之經冷凍保存之工程化Treg群,其進一步包含編碼外源T細胞受體(TCR)之聚核苷酸或編碼嵌合抗原受體(CAR)之聚核苷酸。
- 如請求項22之經冷凍保存之工程化Treg群,其中該編碼FOXP3多肽之聚核苷酸及該編碼外源TCR或CAR之聚核苷酸藉由單一表現載體提供。
- 如請求項23之經冷凍保存之工程化Treg群,其中該載體包含編碼該FOXP3多肽之第一聚核苷酸及編碼該外源TCR或CAR之第二聚核苷酸,其中該第一聚核苷酸及該第二聚核苷酸可操作地連接於同一啟動子,且其中該第一聚核苷酸位於該第二聚核苷酸上游。
- 如請求項22至24中任一項之經冷凍保存之工程化Treg群,其中在該編碼FOXP3之聚核苷酸與該編碼外源TCR或CAR之聚核苷酸之間存在內部自裂解序列。
- 一種Treg群,其可根據如請求項1至17中任一項之方法獲得。
- 一種醫藥組合物,其包含如請求項19至26中任一項之Treg群。
- 如請求項19至26中任一項之Treg群,或如請求項27之醫藥組合物,其用於預防及/或治療疾病。
- 一種如請求項19至26中任一項之Treg群或如請求項27之醫藥組合物的用途,其用於製造供預防及/或治療疾病用之藥物。
- 一種預防及/或治療疾病之方法,其包含向個體投與如請求項19至26中任一項之Treg群或如請求項27之醫藥組合物。
- 如請求項28之Treg群或醫藥組合物,如請求項29之Treg群之用途或如請求項30之方法,其中該疾病為自體免疫或過敏性疾病。
- 如請求項28之Treg群或醫藥組合物,如請求項29之Treg群之用途或如請求項30之方法,其中該疾病為移植排斥反應或移植物抗宿主疾病。
- 如請求項28之Treg群或醫藥組合物,或如請求項29之Treg群之用途,其用於抑制免疫反應。
- 如請求項28之Treg群或醫藥組合物,如請求項29之Treg群之用途,或如請求項30之方法,其中該疾病為神經退化性疾病,視情況其中該疾病為肌肉萎縮性側索硬化(ALS)。
- 如請求項28之Treg群或醫藥組合物,如請求項29之Treg群之用途或如請求項30之方法,其中該疾病為糖尿病,視情況其中該疾病為I型糖尿病。
- 一種產生經冷凍保存之Treg或Tregs群的方法,該經冷凍保存之Treg或Tregs群的CD62L水準與對應的未冷凍保存之Treg或Tregs群類似,該方法包含(a)將編碼FOXP3之聚核苷酸引入Treg或Tregs群中及(b)冷凍保存該Treg或Tregs群。
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GBGB2017678.0A GB202017678D0 (en) | 2020-11-09 | 2020-11-09 | Method for cryopreserving engineered tregs |
GB2017678.0 | 2020-11-09 | ||
GB2107418.2 | 2021-05-25 | ||
GBGB2107418.2A GB202107418D0 (en) | 2021-05-25 | 2021-05-25 | Method for cryopreserving engineered tregs |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
TW202227631A true TW202227631A (zh) | 2022-07-16 |
Family
ID=78599025
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
TW110141609A TW202227631A (zh) | 2020-11-09 | 2021-11-09 | 冷凍保存經工程化之調節t細胞(tregs)之方法 |
Country Status (10)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20240009237A1 (zh) |
EP (1) | EP4240376A1 (zh) |
JP (1) | JP2023548234A (zh) |
KR (1) | KR20230106655A (zh) |
AU (1) | AU2021373326A1 (zh) |
CA (1) | CA3197701A1 (zh) |
GB (1) | GB2615722A (zh) |
IL (1) | IL302591A (zh) |
TW (1) | TW202227631A (zh) |
WO (1) | WO2022096744A1 (zh) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2023214182A1 (en) * | 2022-05-05 | 2023-11-09 | Quell Therapeutics Limited | Method for maintaining suppressive activity of regulatory t cells |
WO2024008274A1 (en) * | 2022-07-04 | 2024-01-11 | Universiteit Antwerpen | T regulatory cell modification |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB201206559D0 (en) | 2012-04-13 | 2012-05-30 | Ucl Business Plc | Polypeptide |
CA3098128A1 (en) * | 2018-04-18 | 2019-10-24 | Ucl Business Ltd | Engineered regulatory t cell |
WO2019241549A1 (en) | 2018-06-15 | 2019-12-19 | A2 Biotherapeutics, Inc. | Foxp3-expressing car-t regulatory cells |
GB201814203D0 (en) | 2018-08-31 | 2018-10-17 | King S College London | Engineered regulatory t cell |
-
2021
- 2021-11-09 TW TW110141609A patent/TW202227631A/zh unknown
- 2021-11-09 IL IL302591A patent/IL302591A/en unknown
- 2021-11-09 KR KR1020237019204A patent/KR20230106655A/ko unknown
- 2021-11-09 AU AU2021373326A patent/AU2021373326A1/en active Pending
- 2021-11-09 EP EP21806262.8A patent/EP4240376A1/en active Pending
- 2021-11-09 GB GB2307850.4A patent/GB2615722A/en active Pending
- 2021-11-09 US US18/035,891 patent/US20240009237A1/en active Pending
- 2021-11-09 CA CA3197701A patent/CA3197701A1/en active Pending
- 2021-11-09 JP JP2023527414A patent/JP2023548234A/ja active Pending
- 2021-11-09 WO PCT/EP2021/081101 patent/WO2022096744A1/en active Application Filing
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
KR20230106655A (ko) | 2023-07-13 |
WO2022096744A1 (en) | 2022-05-12 |
CA3197701A1 (en) | 2022-05-12 |
GB202307850D0 (en) | 2023-07-12 |
US20240009237A1 (en) | 2024-01-11 |
AU2021373326A1 (en) | 2023-06-22 |
GB2615722A (en) | 2023-08-16 |
IL302591A (en) | 2023-07-01 |
EP4240376A1 (en) | 2023-09-13 |
JP2023548234A (ja) | 2023-11-15 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US20210338726A1 (en) | Engineered regulatory t cell | |
US20190030073A1 (en) | Cancer immunotherapy with highly enriched cd8+ chimeric antigen receptor t cells | |
US20240158506A1 (en) | Methods to protect transplanted tissue from rejection | |
US20230138428A1 (en) | Chimeric receptors for use in engineered cells | |
JP2021522790A (ja) | ホスホリパーゼa2受容体キメラ自己受容体t細胞の組成物および方法 | |
TW202227631A (zh) | 冷凍保存經工程化之調節t細胞(tregs)之方法 | |
TW202227469A (zh) | 用於在細胞中表現多肽之核酸構築體 | |
EP3834849A1 (en) | Method for treating tumor using immune effector cell | |
KR20220007675A (ko) | 아세틸콜린 수용체 키메라 자가항체 수용체 세포의 조성물 및 방법 | |
CN116615532A (zh) | 用于冷冻保存工程化Treg的方法 | |
US20240052015A1 (en) | Inducible signalling protein | |
US20240117309A1 (en) | Methods for expanding t cell populations | |
AU2022422880A1 (en) | Constitutive cytokine receptors | |
WO2023099886A1 (en) | Signalling protein | |
WO2024110751A1 (en) | Constitutively active chimeric antigen receptor for treg cell survival and/or persistence |