TW202146438A

TW202146438A - 經工程化之t細胞受體及其使用方法

Info

Publication number: TW202146438A
Application number: TW110117938A
Authority: TW
Inventors: 嘉誠余; 潘科
Original assignee: 美國德州系統大學評議委員會
Priority date: 2020-05-18
Filing date: 2021-05-18
Publication date: 2021-12-16
Also published as: CN116322715A; AU2021276264A1; JP2023528255A; WO2021236548A1; CA3183663A1; EP4153618A1; US20230190812A1

Abstract

本發明提供經工程化之T細胞受體(TCR)、包含該等TCR之細胞，及製造並使用該等TCR之方法。本發明係關於特異性識別MAGE-A4抗原之癌症睾丸(CT)抗原之TCR。因此，本發明之態樣係關於經工程化之T細胞受體(TCR)、編碼該等TCR之核酸，及包含該等核酸及TCR之細胞。本發明亦提供包含本發明之細胞、核酸或經工程化之TCR之組合物；製造該等細胞之方法，及使用本發明之態樣用於醫療性處理之方法。

Description

經工程化之T細胞受體及其使用方法

本發明係關於癌症療法之領域。

過繼性T細胞療法係一種潛在強大之癌症治療，其基因修飾天然T細胞以使得其等腫瘤特異性並改善其等破壞腫瘤細胞之能力。該等經基因修飾之T細胞可表現嵌合抗原受體(CAR)或T細胞受體(TCR)，在多個臨床試驗中顯示令人印象深刻之結果。經TCR工程化之T (TCR-T)細胞已針對腫瘤顯示巨大前景。TCR之效價依賴於其等與肽主要組織相容性複合物(pMHC) (藉由肽結合至MHC形成之複合物)之相互作用。細胞內抗原切割成肽鏈並由MHC分子顯示以形成pMHC。待由I類MHC蛋白表現之細胞質蛋白(其等中之大部分為有缺陷之核醣體轉譯產物)藉由蛋白質水解裂解為肽鏈。然後，此等肽結合至I類MHC蛋白，其等表現於所有有核細胞之細胞表面上。一些細胞(稱為抗原呈遞細胞(APC))表現II類MHC蛋白。其等藉由內吞作用內化異物蛋白並將其等裂解為肽鏈以與來自T細胞之II類MHC蛋白T細胞受體結合，該等T細胞受體必須與患者之人類白血球抗原(HLA)對偶基因匹配，識別此等pMHC並引起癌細胞之殺死。(人類I類MHC蛋白表現自3個基因區：HLA-A、HLA-B及HLA-C，且人類II類MHC蛋白亦表現自3個基因區：HLA-DR、HLA-DP及HLA-DQ)。需工程化針對癌症特異性抗原且適用於治療癌症之TCR。

本發明提供經工程化之T細胞受體(TCR)、包含該等TCR之細胞，及製備並使用該等TCR之方法。本發明係關於特異性識別MAGE-A4 (MA4-230，GVYDGREHTV (SEQ ID NO:35))及(MA4-286，KVLEHVVRV (SEQ ID NO:36))之癌症睾丸(CT)抗原之TCR。因此，本發明之態樣係關於包含TCR α (TCR-a)可變區之多肽，該可變區包含含有與LVVEGNRDDKII (SEQ ID NO:9)具有至少80%序列一致性之胺基酸序列之CDR3。其他態樣係關於包含TCR β (TCR-b)可變區之多肽，該可變區包含含有與ASPPTPSSYNEQF (SEQ ID NO:16)具有至少80%序列一致性之胺基酸序列之CDR3。在其他多肽態樣中，本發明係關於包含TCR α (TCR-a)可變區之多肽，該可變區包含含有與AVGSMDSNYQLI (SEQ ID NO:25)具有至少80%序列一致性之胺基酸序列之CDR3。其他態樣係關於包含TCR β (TCR-b)可變區之多肽，該可變區包含含有與ASSQERTWPYNEQF (SEQ ID NO:30)具有至少80%序列一致性之胺基酸序列之CDR3。

本發明亦提供T細胞受體(TCR)及經工程化之TCR，諸如包含TCR-a多肽及TCR-b多肽之TCR，其中該TCR-a多肽包含含有與LVVEGNRDDKII (SEQ ID NO:9)具有至少80%序列一致性之胺基酸序列之CDR3及該TCR-b多肽包含含有與ASPPTPSSYNEQF (SEQ ID NO:16)具有至少80%序列一致性之胺基酸序列之CDR3。另一態樣係關於包含TCR-a多肽及TCR-b多肽之經工程化之TCR，其中該TCR-a多肽包含含有與AVGSMDSNYQLI (SEQ ID NO:25)具有至少80%序列一致性之胺基酸序列之CDR3及該TCR-b多肽包含含有與ASSQERTWPYNEQF (SEQ ID NO:30)具有至少80%序列一致性之胺基酸序列之CDR3。

又其他態樣係關於編碼多肽及經工程化之TCR之核酸、包含一或多種本發明之核酸之核酸載體，及包含本發明之多肽、經工程化之TCR及/或核酸之細胞。本文亦提供包含本發明之多肽、細胞、核酸或經工程化之TCR之組合物。其他態樣係關於一種製造經工程化之細胞之方法，其包括將本發明之核酸或載體轉移至細胞內。其他態樣係關於一種用於治療個體之癌症之方法，其包括對有需要個體投與多肽、組合物、細胞、核酸或經工程化之TCR。本發明亦係關於一種用於減小個體之腫瘤尺寸或體積之方法，其包括對有需要個體投與多肽、組合物、細胞、核酸或經工程化之TCR。本發明之方法亦係關於藉由對有需要個體投與多肽、組合物、細胞、核酸或經工程化之TCR而刺激個體中針對癌細胞之免疫反應。本發明之態樣提供藉由對有需要個體投與多肽、組合物、細胞、核酸或經工程化之TCR而治療或預防個體之癌症。方法中亦可使用本發明之多肽、組合物、細胞、核酸或經工程化之TCR以在患有癌症之個體中增加整體存活、降低復發率及/或增加無復發存活。

其他態樣係關於包含本發明之TCR及CD3結合區之融合蛋白。在一些態樣中，該CD3結合區包含CD3特異性抗原結合片段(Fab)、單鏈可變片段(scFv)、單域抗體或單鏈抗體。此項技術中已知例示性CD3特異性抗原結合片段(Fab)。例如，以引用之方式併入本文中之US20180222981揭示特異性結合至CD3之可變區，其可用於本發明之態樣中。抗CD3抗體及可變區揭示於US20180117152中，該案亦係以引用之方式併入本文中。

在一些態樣中，本發明之多肽或TCR-a多肽包含含有與LVVEGNRDDKII (SEQ ID NO:9)具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之胺基酸序列之CDR 3。在一些態樣中，該TCR-a多肽包含含有SEQ ID NO:9之胺基酸序列之CDR 3。在一些態樣中，本發明之多肽或TCR-b多肽包含含有與ASPPTPSSYNEQF (SEQ ID NO:16)具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之胺基酸序列之CDR3。在一些態樣中，本發明之多肽或該TCR-b多肽包含含有SEQ ID NO:16之胺基酸序列之CDR3。在一些態樣中，經工程化之TCR包含含有與LVVEGNRDDKII (SEQ ID NO:9)具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之胺基酸序列之CDR 3及包含含有與ASPPTPSSYNEQF (SEQ ID NO:16)具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之胺基酸序列之CDR3之TCR-b多肽。在一些態樣中，該經工程化之TCR包含含有SEQ ID NO:9之胺基酸之CDR 3及包含含有SEQ ID NO:16之胺基酸序列之CDR3之TCR-b多肽。在一些態樣中，本發明之多肽或該TCR-a多肽包含含有與AVGSMDSNYQLI (SEQ ID NO:25)具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之胺基酸序列之CDR 3。在一些態樣中，本發明之多肽或該TCR-a多肽包含含有SEQ ID NO:25之胺基酸序列之CDR 3。在一些態樣中，本發明之多肽或該TCR-b多肽包含含有與ASSQERTWPYNEQF (SEQ ID NO:30)具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之胺基酸序列之CDR3。在一些態樣中，本發明之多肽或該TCR-b多肽包含含有SEQ ID NO:30之胺基酸序列之CDR3。在一些態樣中，該經工程化之TCR包括包含含有與AVGSMDSNYQLI (SEQ ID NO:25)具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之胺基酸序列之CDR 3之TCR-a多肽及包含含有與ASSQERTWPYNEQF (SEQ ID NO:30)具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之胺基酸序列之CDR3之TCR-b多肽。在一些態樣中，該經工程化之TCR包括包含含有SEQ ID NO:25之胺基酸序列之CDR 3之TCR-a多肽及包含含有SEQ ID NO:30之胺基酸序列之CDR3之TCR-b多肽。

在一些態樣中，多肽包含含有來自TCR-a多肽或TCR-b多肽之CDR1、CDR2及CDR3之可變區。在一些態樣中，該TCR-a可變區包含與NIATNDY (SEQ ID NO:7)具有至少80%序列一致性之CDR1。在一些態樣中，該TCR-a可變區包含與NIATNDY (SEQ ID NO:7)具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之CDR1。在一些態樣中，該TCR-a可變區包含與GYKTK (SEQ ID NO:8)具有至少80%序列一致性之CDR2。在一些態樣中，該TCR-a可變區包含與GYKTK (SEQ ID NO:8)具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之CDR2。在一些態樣中，該TCR-a可變區包含含有SEQ ID NO:7之胺基酸序列之CDR1及/或含有SEQ ID NO:8之胺基酸序列之CDR2。在一些態樣中，該TCR-a可變區包含與SEQ ID NO:5具有至少70%序列一致性之胺基酸序列。在一些態樣中，該TCR-a可變區包含與SEQ ID NO:5具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之胺基酸序列。在一些態樣中，該TCR-a可變區包含SEQ ID NO:5之胺基酸序列。在一些態樣中，該TCR-b可變區包含與MNHEY (SEQ ID NO:14)具有至少80%序列一致性之CDR1。在一些態樣中，該TCR-b可變區包含與MNHEY (SEQ ID NO:14)具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之CDR1。在一些態樣中，該TCR-b可變區包含與SVGEGT (SEQ ID NO:15)具有至少80%序列一致性之CDR2。在一些態樣中，該TCR-b可變區包含與SVGEGT (SEQ ID NO:15)具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之CDR2。在一些態樣中，該TCR-b可變區包含含有SEQ ID NO:14之胺基酸序列之CDR1及/或含有SEQ ID NO:15之胺基酸序列之CDR2。在一些態樣中，該TCR-b可變區包含與SEQ ID NO:12具有至少70%序列一致性之胺基酸序列。在一些態樣中，該TCR-b可變區包含與SEQ ID NO:12具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之胺基酸序列。在一些態樣中，該TCR-b可變區包含SEQ ID NO:12之胺基酸序列。在一些態樣中，該TCR-a可變區包含與TTLSN (SEQ ID NO:23)具有至少80%序列一致性之CDR1。在一些態樣中，該TCR-a可變區包含與TTLSN (SEQ ID NO:23)具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之CDR1。在一些態樣中，該TCR-a可變區包含與LVKSGEV (SEQ ID NO:24)具有至少80%序列一致性之CDR2。在一些態樣中，該TCR-a可變區包含與LVKSGEV (SEQ ID NO:24)具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之CDR2。在一些態樣中，該TCR-a可變區包含含有SEQ ID NO:23之胺基酸序列之CDR1及/或含有SEQ ID NO:24之胺基酸序列之CDR2。在一些態樣中，該TCR-a可變區包含與SEQ ID NO:21具有至少70%序列一致性之胺基酸序列。在一些態樣中，該TCR-a可變區包含與SEQ ID NO:21具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之胺基酸序列。在一些態樣中，該TCR-a可變區包含SEQ ID NO:21之胺基酸序列。在一些態樣中，該TCR-b可變區包含與MNHEY (SEQ ID NO:14)具有至少80%序列一致性之CDR1。在一些態樣中，該TCR-b可變區包含與MNHEY (SEQ ID NO:14)具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之CDR1。在一些態樣中，該TCR-b可變區包含與SVGEGT (SEQ ID NO:15)具有至少80%序列一致性之CDR2。在一些態樣中，該TCR-b可變區包含與SVGEGT (SEQ ID NO:15)具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之CDR2。在一些態樣中，該TCR-b可變區包含含有SEQ ID NO:14之胺基酸序列之CDR1及/或含有SEQ ID NO:15之胺基酸序列之CDR2。在一些態樣中，該TCR-b可變區包含與SEQ ID NO:28具有至少70%序列一致性之胺基酸序列。在一些態樣中，該TCR-b可變區包含與SEQ ID NO:28具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之胺基酸序列。在一些態樣中，該TCR-a可變區包含SEQ ID NO:28之胺基酸序列。

在一些態樣中，多肽或TCR包含含有與SEQ ID NO:7具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之CDR1之可變區及/或包含具有至少、至多或恰好1、2、3、4、5、6或7 (或其中任何可推導範圍)個胺基酸與SEQ ID NO:5之可變區中之CDR1緊鄰(即側接)之CDR1。在一些態樣中，該多肽或TCR包含含有與SEQ ID NO:8具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之CDR2之可變區及/或包含具有至少、至多或恰好1、2、3、4、5、6或7 (或其中任何可推導範圍)個胺基酸與SEQ ID NO:5之可變區中之CDR2緊鄰(即側接)之CDR2。在一些態樣中，該多肽或TCR包含含有與SEQ ID NO:9具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之CDR3之可變區及/或包含具有至少、至多或恰好1、2、3、4、5、6或7 (或其中任何可推導範圍)個胺基酸與SEQ ID NO:5之可變區中之CDR3緊鄰(即側接)之CDR3。在一些態樣中，該多肽或TCR包含含有與SEQ ID NO:14具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之CDR1之可變區及/或包含具有至少、至多或恰好1、2、3、4、5、6或7 (或其中任何可推導範圍)個胺基酸與SEQ ID NO:12之可變區中之CDR1緊鄰(即側接)之CDR1。在一些態樣中，該多肽或TCR包含含有與SEQ ID NO:15具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之CDR2之可變區及/或包含具有至少、至多或恰好1、2、3、4、5、6或7 (或其中任何可推導範圍)個胺基酸與SEQ ID NO:12之可變區中之CDR2緊鄰(即側接)之CDR2。在一些態樣中，該多肽或TCR包含含有與SEQ ID NO:16具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之CDR3之可變區及/或包含具有至少、至多或恰好1、2、3、4、5、6或7 (或其中任何可推導範圍)個胺基酸與SEQ ID NO:12之可變區中之CDR3緊鄰(即側接)之CDR3。

在一些態樣中，該多肽或TCR包含含有與SEQ ID NO:23具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之CDR1之可變區及/或包含具有至少、至多或恰好1、2、3、4、5、6或7 (或其中任何可推導範圍)個胺基酸與SEQ ID NO:21之可變區中之CDR1緊鄰(即側接)之CDR1。在一些態樣中，該多肽或TCR包含含有與SEQ ID NO:24具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之CDR2之可變區及/或包含具有至少、至多或恰好1、2、3、4、5、6或7 (或其中任何可推導範圍)個胺基酸與SEQ ID NO:21之可變區中之CDR2緊鄰(即側接)之CDR2。在一些態樣中，該多肽或TCR包含含有與SEQ ID NO:25具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之CDR3之可變區及/或包含具有至少、至多或恰好1、2、3、4、5、6或7 (或其中任何可推導範圍)個胺基酸與SEQ ID NO:21之可變區中之CDR3緊鄰(即側接)之CDR3。在一些態樣中，該多肽或TCR包含含有與SEQ ID NO:14具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之CDR1之可變區及/或包含具有至少、至多或恰好1、2、3、4、5、6或7 (或其中任何可推導範圍)個胺基酸與SEQ ID NO:28之可變區中之CDR1緊鄰(即側接)之CDR1。在一些態樣中，該多肽或TCR包含含有與SEQ ID NO:15具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之CDR2之可變區及/或包含具有至少、至多或恰好1、2、3、4、5、6或7 (或其中任何可推導範圍)個胺基酸與SEQ ID NO:28之可變區中之CDR2緊鄰(即側接)之CDR2。在一些態樣中，該多肽或TCR包含含有與SEQ ID NO:30具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之CDR3之可變區及/或包含具有至少、至多或恰好1、2、3、4、5、6或7 (或其中任何可推導範圍)個胺基酸與SEQ ID NO:28之可變區中之CDR3緊鄰(即側接)之CDR3。

在一些態樣中，TCR包括包含含有CDR1、CDR2及CDR3之可變區之TCR-a多肽及包含含有CDR1、CDR2及CDR3之可變區之TCR-b多肽。在一些態樣中，該TCR-a多肽包含與SEQ ID NO:7具有至少80%序列一致性之CDR1及/或該TCR-b多肽包含與SEQ ID NO:14具有至少80%序列一致性之CDR1。在一些態樣中，該TCR-a多肽包含與SEQ ID NO:7具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之CDR1及/或該TCR-b多肽包含與SEQ ID NO:14具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之CDR1。在一些態樣中，該TCR-a多肽包含含有SEQ ID NO:7之胺基酸序列之CDR1及該TCR-b多肽包含含有SEQ ID NO:14之胺基酸序列之CDR1。在一些態樣中，該TCR-a多肽包含與SEQ ID NO:8具有至少80%序列一致性之CDR2及該TCR-b多肽包含與SEQ ID NO:15具有至少80%序列一致性之CDR2。在一些態樣中，該TCR-a多肽包含與SEQ ID NO:8具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之CDR2及該TCR-b多肽包含與SEQ ID NO:15具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之CDR2。在一些態樣中，該TCR-a多肽包含含有SEQ ID NO:8之胺基酸序列之CDR2及該TCR-b多肽包含含有SEQ ID NO:15之胺基酸序列之CDR2。在一些態樣中，該TCR-a多肽之CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 7、8及9之胺基酸序列，且其中該TCR-b多肽之CDR1、CDR3及CDR3分別包含SEQ ID NO:14、15及16之胺基酸序列。在一些態樣中，該TCR-a可變區包含與SEQ ID NO:5具有至少70%序列一致性之胺基酸序列及該TCR-b可變區包含與SEQ ID NO:12具有至少70%序列一致性之胺基酸序列。在一些態樣中，該TCR-a可變區包含與SEQ ID NO:5具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之胺基酸序列及該TCR-b可變區包含與SEQ ID NO:12具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之胺基酸序列。在一些態樣中，該TCR-a多肽包含與SEQ ID NO:3具有至少70%序列一致性之胺基酸序列及該TCR-b多肽包含與SEQ ID NO:10具有至少70%序列一致性之胺基酸序列。在一些態樣中，該TCR-a多肽包含與SEQ ID NO:3具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之胺基酸序列及該TCR-b多肽包含與SEQ ID NO:10具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之胺基酸序列。

在一些態樣中，TCR-a多肽包含與SEQ ID NO:23具有至少80%序列一致性之CDR1及/或該TCR-b多肽包含與SEQ ID NO:14具有至少80%序列一致性之CDR1。在一些態樣中，該TCR-a多肽包含與SEQ ID NO:23具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之CDR1及/或該TCR-b多肽包含與SEQ ID NO:14具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之CDR1。在一些態樣中，該TCR-a多肽包含含有SEQ ID NO:23之胺基酸序列之CDR1及該TCR-b多肽包含含有SEQ ID NO:14之胺基酸序列之CDR1。在一些態樣中，該TCR-a多肽包含與SEQ ID NO:24具有至少80%序列一致性之CDR2及該TCR-b多肽包含與SEQ ID NO:15具有至少80%序列一致性之CDR2。在一些態樣中，該TCR-a多肽包含與SEQ ID NO:24具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之CDR2及該TCR-b多肽包含與SEQ ID NO:15具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之CDR2。在一些態樣中，該TCR-a多肽包含含有SEQ ID NO:24之胺基酸序列之CDR2及該TCR-b多肽包含含有SEQ ID NO:15之胺基酸序列之CDR2。在一些態樣中，該TCR-a多肽之CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 23、24及25之胺基酸序列，且其中該TCR-b多肽之CDR1、CDR3及CDR3分別包含SEQ ID NO:14、15及30之胺基酸序列。在一些態樣中，該TCR-a可變區包含與SEQ ID NO:21具有至少70%序列一致性之胺基酸序列及該TCR-b可變區包含與SEQ ID NO:28具有至少70%序列一致性之胺基酸序列。在一些態樣中，該TCR-a可變區包含與SEQ ID NO:21具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之胺基酸序列及該TCR-b可變區包含與SEQ ID NO:28具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之胺基酸序列。在一些態樣中，該TCR-a多肽包含與SEQ ID NO:19具有至少70%序列一致性之胺基酸序列及該TCR-b多肽包含與SEQ ID NO:26具有至少70%序列一致性之胺基酸序列。在一些態樣中，該TCR-a多肽包含與SEQ ID NO:19具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之胺基酸序列及該TCR-b多肽包含與SEQ ID NO:26具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之胺基酸序列。

在一些態樣中，TCR包含修飾或係嵌合的。在一些態樣中，該TCR之可變區係融合至不同於特異性結合至本發明之肽之純系TCR之恆定區之TCR恆定區。

在一些態樣中，TCR-a多肽及TCR-b多肽係以可操作方式連接。術語「以可操作方式連接」可係指共價鍵，諸如肽鍵(例如兩個元件為多肽且在相同多肽上)，或非共價鍵，諸如凡得瓦力(例如彼此具有一定程度之特異性結合親和力之兩個多肽)。在一些態樣中，該TCR-a多肽及TCR-b多肽係經由肽鍵以可操作方式連接。在一些態樣中，該TCR-a多肽及TCR-b多肽係在相同多肽上且其中該TCR-b係在該TCR-a之胺基近端。在一些態樣中，該TCR-a多肽及TCR-b多肽係在相同多肽上且其中該TCR-a係在該TCR-b之胺基近端。當第一區域結合至第二區域之羧基末端時，該第一區域係在該第二區域之羧基近端。在該等第一與第二區域之間可存在其他介入胺基酸殘基。因此，除非明確規定為不具有介入胺基酸殘基，否則該等區域無需緊鄰。術語「胺基近端」類似地定義為當第一區域結合至第二區域之胺基末端時，該第一區域係在該第二區域之胺基近端。同樣地，除非另有規定，否則該等第一與第二區域之間可存在其他介入胺基酸殘基。在一些態樣中，該TCR可進一步定義為單鏈TCR。

CDR亦可包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或更多個連續之胺基酸殘基(或其中可推導之任何範圍)側接在特定CDR序列之一側或兩側；因此，於特定CDR序列之N端或C端可存在一或多個另外胺基酸，諸如彼等SEQ ID NO:7至9、14至16、23至25及30中顯示者。在一些態樣中，該CDR包含取代於胺基酸1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30。於SEQ ID NO:7至9、14至16、23至25及30之位置1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30之胺基酸可經以下取代：丙胺酸、精胺酸、天冬醯胺酸、天冬胺酸、半胱胺酸、麩醯胺酸、麩胺酸、甘胺酸、組胺酸、異白胺酸、白胺酸、離胺酸、甲硫胺酸、苯丙胺酸、脯胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、色胺酸、酪胺酸或纈胺酸。

在一些態樣中，TCR或融合蛋白係結合至偵測劑或治療劑。在一些態樣中，該藥劑包含螢光分子、輻射分子或毒素。在一些態樣中，該TCR或融合蛋白係結合至本文描述之藥劑。

在一些態樣中，本發明係關於一種核酸，其編碼包含含有與LVVEGNRDDKII (SEQ ID NO:9)具有至少80%序列一致性之胺基酸序列之CDR3之TCR-a多肽及包含含有與ASPPTPSSYNEQF (SEQ ID NO:16)具有至少80%序列一致性之胺基酸序列之CDR3之TCR-b多肽。在一些態樣中，該核酸編碼包含含有與LVVEGNRDDKII (SEQ ID NO:9)具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之胺基酸序列之CDR3之TCR-a多肽及包含含有與ASPPTPSSYNEQF (SEQ ID NO:16)具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之胺基酸序列之CDR3之TCR-b多肽。在一些態樣中，該核酸編碼包含CDR1、CDR2及CDR3之TCR-a多肽及/或包含CDR1、CDR2及CDR3之TCR-b多肽。在一些態樣中，該核酸編碼包含與SEQ ID NO:7具有至少80%序列一致性之CDR1之TCR-a及/或包含與SEQ ID NO:14具有至少80%序列一致性之CDR1之TCR-b。在一些態樣中，該核酸編碼包含與SEQ ID NO:7具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之CDR1之TCR-a及/或包含與SEQ ID NO:14具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之CDR1之TCR-b。在一些態樣中，該核酸編碼包含與SEQ ID NO:8具有至少80%序列一致性之CDR2之TCR-a及包含與SEQ ID NO:15具有至少80%序列一致性之CDR2之TCR-b。在一些態樣中，該核酸編碼包含與SEQ ID NO:8具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之CDR2之TCR-a及包含與SEQ ID NO:15具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之CDR2之TCR-b。在一些態樣中，該核酸編碼包含與SEQ ID NO:5具有至少70%序列一致性之胺基酸序列之TCR-a可變區及/或包含與SEQ ID NO:12具有至少70%序列一致性之胺基酸序列之TCR-b可變區。在一些態樣中，該核酸編碼包含與SEQ ID NO:5具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之胺基酸序列之TCR-a可變區及/或包含與SEQ ID NO:12具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之胺基酸序列之TCR-b可變區。在一些態樣中，該核酸編碼包含與SEQ ID NO:3具有至少70%序列一致性之胺基酸序列之TCR-a多肽鏈及/或包含與SEQ ID NO:10具有至少70%序列一致性之胺基酸序列之TCR-b鏈。在一些態樣中，該核酸編碼包含與SEQ ID NO:3具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之胺基酸序列之TCR-a多肽鏈及/或包含與SEQ ID NO:10具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之胺基酸序列之TCR-b鏈。在一些態樣中，該核酸包含SEQ ID NO:1及/或SEQ ID NO:2。在一些態樣中，該核酸包含與SEQ ID NO:1具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性及/或與SEQ ID NO:2具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之核酸序列。

在一些態樣中，本發明係關於一種核酸，其編碼包含含有與AVGSMDSNYQLI (SEQ ID NO:25)具有至少80%序列一致性之胺基酸序列之CDR3之TCR-a多肽及包含含有與ASSQERTWPYNEQF (SEQ ID NO:30)具有至少80%序列一致性之胺基酸序列之CDR3之TCR-b多肽。在一些態樣中，該核酸編碼包含含有與AVGSMDSNYQLI (SEQ ID NO:25)具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之胺基酸序列之CDR3之TCR-a多肽及包含含有與ASSQERTWPYNEQF (SEQ ID NO:30)具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之胺基酸序列之CDR3之TCR-b多肽。在一些態樣中，該核酸編碼包含CDR1、CDR2及CDR3之TCR-a多肽及/或包含CDR1、CDR2及CDR3之TCR-b多肽。在一些態樣中，該核酸編碼包含與SEQ ID NO:23具有至少80%序列一致性之CDR1之TCR-a及/或包含與SEQ ID NO:14具有至少80%序列一致性之CDR1之TCR-b。在一些態樣中，該核酸編碼包含與SEQ ID NO:23具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之CDR1之TCR-a及/或包含與SEQ ID NO:14具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之CDR1之TCR-b。在一些態樣中，該核酸編碼包含與SEQ ID NO:24具有至少80%序列一致性之CDR2之TCR-a及包含與SEQ ID NO:15具有至少80%序列一致性之CDR2之TCR-b。在一些態樣中，該核酸編碼包含與SEQ ID NO:24具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之CDR2之TCR-a及包含與SEQ ID NO:15具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之CDR2之TCR-b。在一些態樣中，該核酸編碼包含與SEQ ID NO:21具有至少70%序列一致性之胺基酸序列之TCR-a可變區及/或包含與SEQ ID NO:28具有至少70%序列一致性之胺基酸序列之TCR-b可變區。在一些態樣中，該核酸編碼包含與SEQ ID NO:21具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之胺基酸序列之TCR-a可變區及/或包含與SEQ ID NO:28具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之胺基酸序列之TCR-b可變區。在一些態樣中，該核酸編碼包含與SEQ ID NO:19具有至少70%序列一致性之胺基酸序列之TCR-a多肽鏈及/或包含與SEQ ID NO:26具有至少70%序列一致性之胺基酸序列之TCR-b鏈。在一些態樣中，該核酸編碼包含與SEQ ID NO:19具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之胺基酸序列之TCR-a多肽鏈及/或包含與SEQ ID NO:26具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之胺基酸序列之TCR-b鏈。在一些態樣中，該核酸包含SEQ ID NO:17及/或SEQ ID NO:18。在一些態樣中，該核酸包含與SEQ ID NO:17具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性及/或與SEQ ID NO:18具有至少75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% (或其中任何可推導範圍)序列一致性之核酸序列。在一些態樣中，該核酸包含TCR-a (TRA)及TCR-b (TRB)基因。在一些態樣中，該核酸係多順反子的。在一些態樣中，該核酸包含內部核醣體進入位點(IRES)或P2A連接子。在一些態樣中，該核酸包含編碼TCR-a及/或TCR-b基因之cDNA。在一些態樣中，該核酸進一步編碼包含CD3結合區之多肽。在一些態樣中，該CD3結合區包含CD3特異性抗原結合片段(Fab)、單鏈可變片段(scFv)、單域抗體或單鏈抗體。

在一些態樣中，載體包含TCR-a及TCR-b基因兩者。在一些態樣中，該載體包含引導核酸表現之啟動子。在一些態樣中，該啟動子包含鼠科幹細胞病毒(MSCV)啟動子。在一些態樣中，該細胞包含幹細胞、先驅細胞(progenitor cell)、免疫細胞或自然殺手(NK)細胞。在一些態樣中，該細胞包含造血幹細胞或先驅細胞、T細胞、自間葉系幹細胞(MSC)分化之細胞，或誘導性多潛能幹細胞(iPSC)。在一些態樣中，該細胞係自外周血單核細胞(PBMC)分離或衍生。在一些態樣中，該T細胞包含細胞毒性T淋巴球(CTL)、CD8⁺ T細胞、CD4⁺ T細胞、不變(invariant)NK T (iNKT)細胞、γ-δ T細胞、NKT細胞或調節T細胞。在一些態樣中，該細胞係分離自癌症患者。在一些態樣中，該細胞係自非癌患者分離。在一些態樣中，該細胞係自健康患者分離。在一些態樣中，該細胞係經冷凍或從未經冷凍。在一些態樣中，該細胞係於細胞培養物中。在一些態樣中，該細胞缺乏TCR基因之內源性表現。在一些態樣中，該細胞進一步包含嵌合抗原受體(CAR)。

在一些態樣中，已確定組合物無血清、無黴漿菌、無內毒素及/或無菌。在一些態樣中，該方法進一步包括在培養基中培養細胞，在容許細胞分裂之條件下培養該細胞，篩選該細胞，及/或冷凍該細胞。

在一些態樣中，已診斷個體患有癌症，諸如本文描述之癌症。在一些態樣中，該癌症包含實體瘤。在一些態樣中，該個體先前已針對癌症治療。在一些態樣中，已確定該個體對先前治療具有抗性。在一些態樣中，該方法進一步包括投與另外療法。在一些態樣中，該癌症包含肺癌。在一些態樣中，該個體係哺乳動物。在一些態樣中，該個體包含實驗室測試動物，諸如小鼠、大鼠、兔、狗、貓、馬或豬。在一些態樣中，該個體係人類。在一些態樣中，該癌症包含MAGE-A4+癌症。在一些態樣中，已確定該個體具有MAGE-A4+癌細胞或癌前細胞。在一些態樣中，已確定該個體係HLA-A*0201陽性。

在一些態樣中，將本發明之組合物調配成疫苗。在一些態樣中，本發明之組合物及方法提供預防性療法來預防癌症。在一些態樣中，本發明之組合物及方法提供治療性療法來治療現有癌症，諸如用於治療患有癌症之患者。在一些態樣中，該組合物進一步包含佐劑。佐劑為此項技術中已知且包括(例如) TLR促效劑及鋁鹽。

在一些態樣中，本發明之方法進一步包括針對一或多種細胞性質篩選細胞，諸如針對TCR表現、編碼TCR基因之核酸之併入，或針對免疫原性性質，諸如該TCR對癌症睾丸抗原(諸如MAGE-A4)之結合。

在一些態樣中，該方法包括投與細胞或包含細胞之組合物且其中該細胞包含自體細胞。在一些態樣中，該細胞包含非自體細胞。

在本申請案通篇中，術語「約」係根據其在細胞及分子生物學領域中之簡單及一般含義使用，以指示值包括用於測定該值之裝置或方法之誤差之標準偏差。

當結合術語「包含」使用時，使用措辭「一」或「一個」可意謂「一個」，但亦符合「一或多個」、「至少一個」及「一或多於一個」之含義。

如本文中使用，術語「或」及「及/或」用於描述彼此組合或彼此排除之多種組分。例如，「x、y及/或z」可係指單獨「x」、單獨「y」、單獨「z」、「x、y及z」、「(x及y)或z」、「x或(y及z)」或「x或y或z」。經特別考慮，可自一實施例明確排除x、y或z。

措辭「包含(comprising)」 (及包含之任何形式，諸如「包含(comprise及comprises)」)、「具有(having)」 (及具有之任何形式，諸如「具有(have及has)」)、「包括(including)」 (及包括之任何形式，諸如「包括(includes及include)」)、「特徵在於」 (及包括之任何形式，諸如「特徵為」)，或「含有(containing)」 (及含有之任何形式，諸如「含有(contains及contain)」)係包容性或開放性的且不排除另外未列舉之要素或方法步驟。

組合物及方法針對其等用途可「包含」本說明書通篇中揭示之成分或步驟中之任何一者、「基本上由本說明書通篇中揭示之成分或步驟中之任何一者組成」或「由本說明書通篇中揭示之成分或步驟中之任何一者組成」。片語「由……組成」排除未規定之任何要素、步驟或成分。片語「基本上由……組成」將本文描述之標的之範圍限制於本文規定之材料或步驟及彼等不實質上影響其基本及新穎特性者。經考慮，在術語「包含」之內文中描述之實施例亦可在術語「由……組成」或「基本上由……組成」之內文中實施。

在治療、診斷或生理學目的或效應之內文中之任何方法亦可以「用途」技術方案語言描述，諸如本文討論之任何化合物、組合物或藥劑於達成或實施本文描述之治療、診斷或生理學目的或效應「之用途」。

一或多種序列或組合物之用途可基於本文描述之方法中之任何一者來使用。在本申請案通篇中討論其他實施例。關於本發明之一項態樣討論之任何實施例亦適用於本發明之其他態樣且反之亦然。

經特別考慮，關於本發明之一項實施例討論之任何限制可適用於本發明之任何其他實施例。此外，本發明之任何組合物可用於本發明之任何方法中，且本發明之任何方法可用於產生或利用本發明之任何組合物。實例中闡述之一實施例之態樣亦係可在不同實例中之別處或在本申請案中之別處，諸如在發明內容、實施方式、申請專利範圍及圖式簡單說明中討論之實施例之內文中實施之實施例。

本發明之其他目標、特徵及優點將自以下實施方式變得顯而易見。然而，應瞭解，該實施方式及特定實例，儘管指示本發明之特定實施例，但僅藉助於闡述給定，因為熟習此項技術者自本實施方式將顯而易見於本發明之精神及範圍內之各種變化及修飾。

本申請案主張2020年5月18日申請之美國臨時申請案號63/026,445之優先權之權益，該案係以全文引用之方式併入本文中。 I. 經工程化之T細胞受體

T細胞受體包含由二硫鍵連接之兩種不同多肽鏈，稱為T細胞受體α (TCRα)及β (TCRβ)鏈。此等α:β異二聚體在結構上與免疫球蛋白分子之Fab片段非常相似，且其等為大多數T細胞識別抗原之原因。少數T細胞攜載可替代，但結構相似之受體，該受體由一對不同之多肽鏈(稱為γ及δ)組成。兩種類型之T細胞受體不同於充當B細胞受體之膜結合免疫球蛋白：T細胞受體具有僅一個抗原結合位點，而B細胞受體具有兩個，且從不分泌T細胞受體，而免疫球蛋白可呈抗體形式分泌。

T細胞受體之兩個鏈均具有與免疫球蛋白V域同源之胺基端可變(V)區、與免疫球蛋白C域同源之恆定(C)區，及含有形成鏈間二硫鍵之半胱胺酸殘基之短鉸鏈區。各鏈由疏水跨膜域跨越脂質雙層，並以短細胞質尾結束。

已確定T細胞受體之三維結構。該結構確實與抗體Fab片段之結構相似，如同對編碼其之基因之早期研究所懷疑。T細胞受體鏈之折疊方式與Fab片段之折疊方式大致相同，但最終結構似乎較短且較寬。然而，T細胞受體與Fab片段之間存在一些明顯差異。最顯著差異在於Cα域，其中折疊不同於任何其他免疫球蛋白樣域之折疊。與Cβ域並列之該域之一半形成類似於其他免疫球蛋白樣域中發現之β褶板，但該域之另一半由鬆散排列股及α螺旋之短區段形成。在免疫球蛋白樣域中通常連接兩個β股之分子內二硫鍵在Cα域中將β股連接至α螺旋之此區段。

該等域相互作用之方式亦存在差異。兩個T細胞受體鏈之V與C域之間的界面比抗體中更廣泛，此可使得該等域之間的鉸鏈連接較少可撓性。且Cα與Cβ域之間的相互作用在碳水化合物之輔助下係獨特的，該Cα域之糖基與該Cβ域形成許多氫鍵。最後，可變結合位點之比較顯示，儘管互補決定區(CDR)環與抗體分子之環相當緊密地對準，但相對於抗體分子之環有一些移位。此移位在Vα CDR2環中特別顯著，Vα CDR2環位向與抗體V域中之相等環大致呈直角，因為錨定該環之一端之β股自該域之一面位移至另一面。股移位亦引起七個結構已知的Vβ域之兩者中之Vβ CDR2環之位向改變。迄今，已將七個T細胞受體之晶體結構解析至此解析程度。

本發明之態樣係關於經工程化之T細胞受體。術語「經工程化」係指TCR可變區已移植至TCR恆定區以製造結合至本發明之肽及抗原之嵌合多肽之T細胞受體。在某些態樣中，該TCR包含介入序列，其用於選殖、增強表現、偵測或用於構築體之治療對照，但不存在於內源性TCR中，諸如多重選殖位點、連接子、鉸鏈序列、經修飾之鉸鏈序列、經修飾之跨膜序列、偵測多肽或分子，或可容許選擇或篩選包含該TCR之細胞之治療對照。

在一些態樣中，TCR包含非TCR序列。因此，某些態樣係關於具有非來自TCR基因之序列之TCR。在一些態樣中，該TCR係嵌合的，其含有通常在TCR基因中發現之序列，但含有來自至少兩個未必一起發現於自然界中之TCR基因之序列。

在一些態樣中，本發明之經工程化之TCR包含如下文顯示之變量：

描述	序列	SEQ ID NO:
MA4-230 H1 TCR序列；α鏈(TRAV04*01F)	ATGAGGCAAGTGGCGAGAGTGATCGTGTTCCTGACCCTGAGTACTTTGAGCCTTGCTAAGACCACCCAGCCCATCTCCATGGACTCATATGAAGGACAAGAAGTGAACATAACCTGTAGCCACAACAACATTGCTACAAATGATTATATCACGTGGTACCAACAGTTTCCCAGCCAAGGACCACGATTTATTATTCAAGGATACAAGACAAAAGTTACAAACGAAGTGGCCTCCCTGTTTATCCCTGCCGACAGAAAGTCCAGCACTCTGAGCCTGCCCCGGGTTTCCCTGAGCGACACTGCTGTGTACTACTGCCTCGTGGTCGAGGGGAACAGAGATGACAAGATCATCTTTGGAAAAGGGACACGACTTCATATTCTCCCCAATATCCAGAACCCTGACCCTGCCGTGTACCAGCTGAGAGACTCTAAATCCAGTGACAAGTCTGTCTGCCTATTCACCGATTTTGATTCTCAAACAAATGTGTCACAAAGTAAGGATTCTGATGTGTATATCACAGACAAAACTGTGCTAGACATGAGGTCTATGGACTTCAAGAGCAACAGTGCTGTGGCCTGGAGCAACAAATCTGACTTTGCATGTGCAAACGCCTTCAACAACAGCATTATTCCAGAAGACACCTTCTTCCCCAGCCCAGAAAGTTCCTGTGATGTCAAGCTGGTCGAGAAAAGCTTTGAAACAGATACGAACCTAAACTTTCAAAACCTGTCAGTGATTGGGTTCCGAATCCTCCTCCTGAAAGTGGCCGGGTTTAATCTGCTCATGACGCTGCGGCTGTGGTCCAGCTAA	1
MA4-230 H1 TCR序列；β鏈(TRBV06-201F或TRBV06-301F)	ATGAGCCTCGGGCTCCTGTGCTGTGGGGCCTTTTCTCTCCTGTGGGCAGGTCCAGTGAATGCTGGTGTCACTCAGACCCCAAAATTCCGGGTCCTGAAGACAGGACAGAGCATGACACTGCTGTGTGCCCAGGATATGAACCATGAATACATGTACTGGTATCGACAAGACCCAGGCATGGGGCTGAGGCTGATTCATTACTCAGTTGGTGAGGGTACAACTGCCAAAGGAGAGGTCCCTGATGGCTACAATGTCTCCAGATTAAAAAAACAGAATTTCCTGCTGGGGTTGGAGTCGGCTGCTCCCTCCCAAACATCTGTGTACTTCTGTGCCAGCCCCCCAACGCCCTCCTCCTACAATGAGCAGTTCTTCGGGCCAGGGACACGGCTCACCGTGCTAGAGGACCTGAAAAACGTGTTCCCACCCGAGGTCGCTGTGTTTGAGCCATCAGAAGCAGAGATCTCCCACACCCAAAAGGCCACACTGGTGTGCCTGGCCACAGGCTTCTTCCCTGACCACGTGGAGCTGAGCTGGTGGGTGAATGGGAAGGAGGTGCACAGTGGGGTCAGCACGGACCCGCAGCCCCTCAAGGAGCAGCCCGCCCTCAATGACTCCAGATACTGCCTGAGCAGCCGCCTGAGGGTCTCGGCCACCTTCTGGCAGAACCCCCGCAACCACTTCCGCTGTCAAGTCCAGTTCTACGGGCTCTCGGAGAATGACGAGTGGACCCAGGATAGGGCCAAACCCGTCACCCAGATCGTCAGCGCCGAGGCCTGGGGTAGAGCAGACTGTGGCTTTACCTCGGTGTCCTACCAGCAAGGGGTCCTGTCTGCCACCATCCTCTATGAGATCCTGCTAGGGAAGGCCACCCTGTATGCTGTGCTGGTCAGCGCCCTTGTGTTGATGGCCATGGTCAAGAGAAAGGATTTCTAA	2
MA4-230 H1 TCR序列；α鏈(TRAV04*01F)	MRQVARVIVFLTLSTLSLAKTTQPISMDSYEGQEVNITCSHNNIATNDYITWYQQFPSQGPRFIIQGYKTKVTNEVASLFIPADRKSSTLSLPRVSLSDTAVYYCLVVEGNRDDKIIFGKGTRLHILPNIQNPDPAVYQLRDSKSSDKSVCLFTDFDSQTNVSQSKDSDVYITDKTVLDMRSMDFKSNSAVAWSNKSDFACANAFNNSIIPEDTFFPSPESSCDVKLVEKSFETDTNLNFQNLSVIGFRILLLKVAGFNLLMTLRLWSS	3
訊息肽	MRQVARVIVFLTLSTLS	4
α - V區	LAKTTQPISMDSYEGQEVNITCSHNNIATNDYITWYQQFPSQGPRFIIQGYKTKVTNEVASLFIPADRKSSTLSLPRVSLSDTAVYYCLVVEGNRDDKIIFGKGTRLHILP	5
α - C區	NIQNPDPAVYQLRDSKSSDKSVCLFTDFDSQTNVSQSKDSDVYITDKTVLDMRSMDFKSNSAVAWSNKSDFACANAFNNSIIPEDTFFPSPESSCDVKLVEKSFETDTNLNFQNLSVIGFRILLLKVAGFNLLMTLRLWSS	6
CDR1 - α	NIATNDY	7
CDR2 - α	GYKTK	8
CDR3 - α	LVVEGNRDDKII	9
MA4-230 H1 TCR序列；β鏈(TRBV06-201F或TRBV06-301F)	MSLGLLCCGAFSLLWAGPVNAGVTQTPKFRVLKTGQSMTLLCAQDMNHEYMYWYRQDPGMGLRLIHYSVGEGTTAKGEVPDGYNVSRLKKQNFLLGLESAAPSQTSVYFCASPPTPSSYNEQFFGPGTRLTVLEDLKNVFPPEVAVFEPSEAEISHTQKATLVCLATGFFPDHVELSWWVNGKEVHSGVSTDPQPLKEQPALNDSRYCLSSRLRVSATFWQNPRNHFRCQVQFYGLSENDEWTQDRAKPVTQIVSAEAWGRADCGFTSVSYQQGVLSATILYEILLGKATLYAVLVSALVLMAMVKRKDF	10
訊息肽	MSLGLLCCGAFSLLWAGPV	11
β - V區	NAGVTQTPKFRVLKTGQSMTLLCAQDMNHEYMYWYRQDPGMGLRLIHYSVGEGTTAKGEVPDGYNVSRLKKQNFLLGLESAAPSQTSVYFCASPPTPSSYNEQFFGPGTRLTVL	12
β - C區	EDLKNVFPPEVAVFEPSEAEISHTQKATLVCLATGFFPDHVELSWWVNGKEVHSGVSTDPQPLKEQPALNDSRYCLSSRLRVSATFWQNPRNHFRCQVQFYGLSENDEWTQDRAKPVTQIVSAEAWGRADCGFTSVSYQQGVLSATILYEILLGKATLYAVLVSALVLMAMVKRKDF	13
CDR1 - β	MNHEY	14
CDR2 - β	SVGEGT	15
CDR3 - β	ASPPTPSSYNEQF	16
MA4-286 F1 TCR序列；α鏈(TRAV25*01F)	ATGAAGAGGGAGAGGGAGATGCTACTCATCACATCAATGTTGGTCTTATGGATGCAATTGTCACAGGTGAATGGACAACAGGTAATGCAAATTCCTCAGTACCAGCATGTACAAGAAGGAGAGGACTTCACCACGTACTGCAATTCCTCAACTACTTTAAGCAATATACAGTGGTATAAGCAAAGGCCTGGTGGACATCCCGTTTTTTTGATACAGTTAGTGAAGAGTGGAGAAGTGAAGAAGCAGAAAAGACTGACATTTCAGTTTGGAGAAGCAAAAAAGAACAGCTCCCTGCACATCACAGCCACCCAGACTACAGATGTAGGAACCTACTTCTGTGCAGTGGGAAGCATGGATAGCAACTATCAGTTAATCTGGGGCGCTGGGACCAAGCTAATTATAAAGCCAGATATCCAGAACCCTGACCCTGCCGTGTACCAGCTGAGAGACTCTAAATCCAGTGACAAGTCTGTCTGCCTATTCACCGATTTTGATTCTCAAACAAATGTGTCACAAAGTAAGGATTCTGATGTGTATATCACAGACAAAACTGTGCTAGACATGAGGTCTATGGACTTCAAGAGCAACAGTGCTGTGGCCTGGAGCAACAAATCTGACTTTGCATGTGCAAACGCCTTCAACAACAGCATTATTCCAGAAGACACCTTCTTCCCCAGCCCAGAAAGTTCCTGTGATGTCAAGCTGGTCGAGAAAAGCTTTGAAACAGATACGAACCTAAACTTTCAAAACCTGTCAGTGATTGGGTTCCGAATCCTCCTCCTGAAAGTGGCCGGGTTTAATCTGCTCATGACGCTGCGGCTGTGGTCCAGCTAA	17
MA4-286 F1 TCR序列；β鏈(TRBV06-201F或TRBV06-301F)	ATGAGCCTCGGGCTCCTGTGCTGTGGGGCCTTTTCTCTCCTGTGGGCAGGTCCAGTGAATGCTGGTGTCACTCAGACCCCAAAATTCCGGGTCCTGAAGACAGGACAGAGCATGACACTGCTGTGTGCCCAGGATATGAACCATGAATACATGTACTGGTATCGACAAGACCCAGGCATGGGGCTGAGGCTGATTCATTACTCAGTTGGTGAGGGTACAACTGCCAAAGGAGAGGTCCCTGATGGCTACAATGTCTCCAGATTAAAAAAACAGAATTTCCTGCTGGGGTTGGAGTCGGCTGCTCCCTCCCAAACATCTGTGTACTTCTGTGCCAGCAGCCAGGAACGGACCTGGCCCTACAATGAGCAGTTCTTCGGGCCAGGGACACGGCTCACCGTGCTAGAGGACCTGAAAAACGTGTTCCCACCCGAGGTCGCTGTGTTTGAGCCATCAGAAGCAGAGATCTCCCACACCCAAAAGGCCACACTGGTGTGCCTGGCCACAGGCTTCTTCCCTGACCACGTGGAGCTGAGCTGGTGGGTGAATGGGAAGGAGGTGCACAGTGGGGTCAGCACGGACCCGCAGCCCCTCAAGGAGCAGCCCGCCCTCAATGACTCCAGATACTGCCTGAGCAGCCGCCTGAGGGTCTCGGCCACCTTCTGGCAGAACCCCCGCAACCACTTCCGCTGTCAAGTCCAGTTCTACGGGCTCTCGGAGAATGACGAGTGGACCCAGGATAGGGCCAAACCCGTCACCCAGATCGTCAGCGCCGAGGCCTGGGGTAGAGCAGACTGTGGCTTTACCTCGGTGTCCTACCAGCAAGGGGTCCTGTCTGCCACCATCCTCTATGAGATCCTGCTAGGGAAGGCCACCCTGTATGCTGTGCTGGTCAGCGCCCTTGTGTTGATGGCCATGGTCAAGAGAAAGGATTTCTAA	18
MA4-286 F1 TCR序列；α鏈(TRAV25*01F)	MKREREMLLITSMLVLWMQLSQVNGQQVMQIPQYQHVQEGEDFTTYCNSSTTLSNIQWYKQRPGGHPVFLIQLVKSGEVKKQKRLTFQFGEAKKNSSLHITATQTTDVGTYFCAVGSMDSNYQLIWGAGTKLIIKPDIQNPDPAVYQLRDSKSSDKSVCLFTDFDSQTNVSQSKDSDVYITDKTVLDMRSMDFKSNSAVAWSNKSDFACANAFNNSIIPEDTFFPSPESSCDVKLVEKSFETDTNLNFQNLSVIGFRILLLKVAGFNLLMTLRLWSS	19
訊息肽	MKREREMLLITSMLVLWMQLSQVN	20
α - V區	GQQVMQIPQYQHVQEGEDFTTYCNSSTTLSNIQWYKQRPGGHPVFLIQLVKSGEVKKQKRLTFQFGEAKKNSSLHITATQTTDVGTYFCAVGSMDSNYQLIWGAGTKLIIKP	21
α - C區	DIQNPDPAVYQLRDSKSSDKSVCLFTDFDSQTNVSQSKDSDVYITDKTVLDMRSMDFKSNSAVAWSNKSDFACANAFNNSIIPEDTFFPSPESSCDVKLVEKSFETDTNLNFQNLSVIGFRILLLKVAGFNLLMTLRLWSS	22
CDR1 - α	TTLSN	23
CDR2 - α	LVKSGEV	24
CDR3 - α	AVGSMDSNYQLI	25
MA4-286 F1 TCR序列；β鏈(TRBV06-201F或TRBV06-301F)	MSLGLLCCGAFSLLWAGPVNAGVTQTPKFRVLKTGQSMTLLCAQDMNHEYMYWYRQDPGMGLRLIHYSVGEGTTAKGEVPDGYNVSRLKKQNFLLGLESAAPSQTSVYFCASSQERTWPYNEQFFGPGTRLTVLEDLKNVFPPEVAVFEPSEAEISHTQKATLVCLATGFFPDHVELSWWVNGKEVHSGVSTDPQPLKEQPALNDSRYCLSSRLRVSATFWQNPRNHFRCQVQFYGLSENDEWTQDRAKPVTQIVSAEAWGRADCGFTSVSYQQGVLSATILYEILLGKATLYAVLVSALVLMAMVKRKDF	26
訊息肽	MSLGLLCCGAFSLLWAGPV	27
β - V區	NAGVTQTPKFRVLKTGQSMTLLCAQDMNHEYMYWYRQDPGMGLRLIHYSVGEGTTAKGEVPDGYNVSRLKKQNFLLGLESAAPSQTSVYFCASSQERTWPYNEQFFGPGTRLTVL	28
β - C區	EDLKNVFPPEVAVFEPSEAEISHTQKATLVCLATGFFPDHVELSWWVNGKEVHSGVSTDPQPLKEQPALNDSRYCLSSRLRVSATFWQNPRNHFRCQVQFYGLSENDEWTQDRAKPVTQIVSAEAWGRADCGFTSVSYQQGVLSATILYEILLGKATLYAVLVSALVLMAMVKRKDF	29
CDR1 - β	MNHEY	14
CDR2 - β	SVGEGT	15
CDR3 - β	ASSQERTWPYNEQF	30

下表係關於TCR-a態樣之特徵：

結果匯總：	產生性TRA重排序列(無終止密碼子及框內接合)
V基因及對偶基因	*Homsap TRAV401 F**	分數= 1315	一致性= 100.00% (264/264 nt)
J基因及對偶基因	*Homsap TRAJ3001 F**	分數= 276	一致性= 98.25% (56/57 nt)
FR-IMGT長度、CDR-IMGT長度及AA接合	[25.17.34.11]	[7.5.12]	CLVVEGNRDDKIIF (SEQ ID NO:31)

結果匯總：	產生性TRA重排序列(無終止密碼子及框內接合)
V基因及對偶基因	*Homsap TRAV2501 F**	分數= 1330	一致性= 100.00% (267/267 nt)
J基因及對偶基因	*Homsap TRAJ3301 F**	分數= 285	一致性= 100.00% (57/57 nt)
FR-IMGT長度、CDR-IMGT 長度及AA接合	[26.17.34.11]	[5.7.12]	CAVGSMDSNYQLIW (SEQ ID NO:32)

下表係關於TCR-b態樣之特徵：

結果匯總：	產生性TRB重排序列(無終止密碼子及框內接合)
V基因及對偶基因	*Homsap TRBV6-201 F 或 Homsap TRBV6-301 F*	分數= 1360	一致性= 100.00% (273/273 nt)
J基因及對偶基因	*Homsap TRBJ2-101 F**	分數= 250	一致性= 100.00% (50/50 nt)
藉由IMGT/接合分析之D基因及對偶基因	無結果	-
FR-IMGT長度、CDR-IMGT長度及AA接合	[26.17.37.10]	[5.6.13]	CASPPTPSSYNEQFF (SEQ ID NO:33)

結果匯總：	產生性TRB重排序列(無終止密碼子及框內接合)
V基因及對偶基因	*Homsap TRBV6-201 F 或 Homsap TRBV6-301 F*	分數= 1360	一致性= 100.00% (273/273 nt)
J基因及對偶基因	*Homsap TRBJ2-101 F**	分數= 232	一致性= 96.00% (48/50 nt)
藉由IMGT/接合分析之D基因及對偶基因	*Homsap TRBD101 F**	D區在閱讀框1中
FR-IMGT長度、CDR-IMGT長度及AA接合	[26.17.37.10]	[5.6.14]	CASSQERTWPYNEQFF (SEQ ID NO:34)

II. 蛋白質組合物

如本文中使用，「蛋白質」、「肽」或「多肽」係指包含至少五個胺基酸殘基之分子。如本文使用，術語「野生型」係指生物體中天然存在之分子之內源性形式。在一些態樣中，採用蛋白質或多肽之野生型形式，然而，在本發明之許多態樣中，採用經修飾之蛋白質或多肽以產生免疫反應。上文描述之術語可互換使用。「經修飾之蛋白質」或「經修飾之多肽」或「變體」係指化學結構(特別其胺基酸序列)相對於野生型蛋白質或多肽改變之蛋白質或多肽。在一些態樣中，經修飾之/變體蛋白質或多肽具有至少一種經修飾之活性或功能(知曉蛋白質或多肽可具有多種活性或功能)。經特別考慮，經修飾之/變體蛋白質或多肽可關於一種活性或功能改變，在其他態樣中仍保留野生型活性或功能，諸如免疫原性。

在本文明確提及蛋白質之情況下，其通常係指天然(野生型)或重組(經修飾之)蛋白質，或視需要，其中已移除任何訊息序列之蛋白質。該蛋白質可自其天然之生物體分離，藉由重組DNA/外源性表現方法產生，或藉由固相肽合成(SPPS)或其他活體外方法產生。在特定態樣中，存在經分離之核酸區段及併入編碼多肽(例如，抗體或其片段)之核酸序列之重組載體。術語「重組」可結合多肽或特定多肽之名稱使用，且此一般係指自核酸分子產生之多肽，該核酸分子已經活體外操作或其係此分子之複製產物。

在某些態樣中，蛋白質或多肽(野生型或經修飾)之尺寸可包含(但不限於) 5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500、525、550、575、600、625、650、675、700、725、750、775、800、825、850、875、900、925、950、1000、1200、1400、1600、1800或2000個胺基酸殘基或核酸殘基或更大，且其中可推導之任何範圍，或本文描述或參考之相應胺基序列之衍生物。經考慮，多肽可藉由截斷突變，使得其等比其等相應之野生型形式更短，同樣，其等可藉由融合或結合具有特定功能(例如，用於靶向或定位、用於增強免疫原性、用於純化目的等)之異源性蛋白質或多肽序列而改變。

多肽、蛋白質或編碼本發明之此等多肽或蛋白質之多核苷酸可包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50 (或其中任何可推導範圍)或更多個變體胺基酸或核酸取代或與SEQ ID NO:1至36之至少或至多3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249、250、300、400、500、550、1000或更多個連續之胺基酸或核酸(或其中可推導之任何範圍)具有至少60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100% (或其中任何可推導範圍)相似性、一致性或同源性。在特定態樣中，該肽或多肽係或基於人類序列。在某些態樣中，該肽或多肽係非天然生成及/或於肽或多肽之組合中。

多肽、蛋白質或編碼本發明之此等多肽或蛋白質之多核苷酸可於SEQ ID NO:3至16或19至36中之任一者之胺基酸1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249、250、251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、264、265、266、267、268、269、270、271、272、273、274、275、276、277、278、279、280、281、282、283、284、285、286、287、288、289、290、291、292、293、294、295、296、297、298、299、300、301、302、303、304、305、306、307、308、309、310、311、312、313、314或315處包括取代。於SEQ ID NO:3至16或19至36之胺基酸1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249、250、251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、264、265、266、267、268、269、270、271、272、273、274、275、276、277、278、279、280、281、282、283、284、285、286、287、288、289、290、291、292、293、294、295、296、297、298、299、300、301、302、303、304、305、306、307、308、309、310、311、312、313、314或315處之取代可為以丙胺酸、精胺酸、天冬醯胺酸、天冬胺酸、半胱胺酸、麩醯胺酸、麩胺酸、甘胺酸、組胺酸、異白胺酸、白胺酸、離胺酸、甲硫胺酸、苯丙胺酸、脯胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、色胺酸、酪胺酸或纈胺酸之取代。

在一些態樣中，蛋白質、多肽或核酸可包含SEQ ID NO:1至36之胺基酸或核苷酸1至2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249、250、251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、264、265、266、267、268、269、270、271、272、273、274、275、276、277、278、279、280、281、282、283、284、285、286、287、288、289、290、291、292、293、294、295、296、297、298、299、300、301、302、303、304、305、306、307、308、309、310、311、312、313、314、315、316、317、318、319或320 (或其中任何可推導範圍)。

在一些態樣中，蛋白質、多肽或核酸可包含SEQ ID NO:1至36之1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249、250、251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、264、265、266、267、268、269、270、271、272、273、274、275、276、277、278、279、280、281、282、283、284、285、286、287、288、289、290、291、292、293、294、295、296、297、298、299、300、301、302、303、304、305、306、307、308、309、310、311、312、313、314、315、316、317、318、319或320 (或其中任何可推導範圍)個連續胺基酸或核酸。

在一些態樣中，多肽、蛋白質或核酸可包含SEQ ID NO:1至36之至少、至多或恰好1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249、250、251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、264、265、266、267、268、269、270、271、272、273、274、275、276、277、278、279、280、281、282、283、284、285、286、287、288、289、290、291、292、293、294、295、296、297、298、299、300、301、302、303、304、305、306、307、308、309、310、311、312、313、314、315、316、317、318、319或320 (或其中任何可推導範圍)個連續胺基酸，其等與SEQ ID NO:1至36中之任一者具有至少、至多或恰好60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100% (或其中任何可推導範圍)相似性、一致性或同源性。

在一些態樣中，核酸分子或多肽開始於SEQ ID NO:1至36中任一者之位置1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249、250、251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、264、265、266、267、268、269、270、271、272、273、274、275、276、277、278、279、280、281、282、283、284、285、286、287、288、289、290、291、292、293、294、295、296、297、298、299、300、301、302、303、304、305、306、307、308、309、310、311、312、313、314、315、316、317、318、319、320、321、322、323、324、325、326、327、328、329、330、331、332、333、334、335、336、337、338、339、340、341、342、343、344、345、346、347、348、349、350、351、352、353、354、355、356、357、358、359、360、361、362、363、364、365、366、367、368、369、370、371、372、373、374、375、376、377、378、379、380、381、382、383、384、385、386、387、388、389、390、391、392、393、394、395、396、397、398、399、400、401、402、403、404、405、406、407、408、409、410、411、412、413、414、415、416、417、418、419、420、421、422、423、424、425、426、427、428、429、430、431、432、433、434、435、436、437、438、439、440、441、442、443、444、445、446、447、448、449、450、451、452、453、454、455、456、457、458、459、460、461、462、463、464、465、466、467、468、469、470、471、472、473、474、475、476、477、478、479、480、481、482、483、484、485、486、487、488、489、490、491、492、493、494、495、496、497、498、499、500、501、502、503、504、505、506、507、508、509、510、511、512、513、514、515、516、517、518、519、520、521、522、523、524、525、526、527、528、529、530、531、532、533、534、535、536、537、538、539、540、541、542、543、544、545、546、547、548、549、550、551、552、553、554、555、556、557、558、559、560、561、562、563、564、565、566、567、568、569、570、571、572、573、574、575、576、577、578、579、580、581、582、583、584、585、586、587、588、589、590、591、592、593、594、595、596、597、598、599、600、601、602、603、604、605、606、607、608、609、610、611、612、613、614、615、616、617、618、619、620、621、622、623、624、625、626、627、628、629、630、631、632、633、634、635、636、637、638、639、640、641、642、643、644、645、646、647、648、649、650、651、652、653、654、655、656、657、658、659、660、661、662、663、664、665、666、667、668、669、670、671、672、673、674、675、676、677、678、679、680、681、682、683、684、685、686、687、688、689、690、691、692、693、694、695、696、697、698、699、700、701、702、703、704、705、706、707、708、709、710、711、712、713、714、715、716、717、718、719、720、721、722、723、724、725、726、727、728、729、730、731、732、733、734、735、736、737、738、739、740、741、742、743、744、745、746、747、748、749、750、751、752、753、754、755、756、757、758、759、760、761、762、763、764、765、766、767、768、769、770、771、772、773、774、775、776、777、778、779、780、781、782、783、784、785、786、787、788、789、790、791、792、793、794、795、796、797、798、799、800、801、802、803、804、805、806、807、808、809、810、811、812、813、814、815、816、817、818、819、820、821、822、823、824、825、826、827、828、829、830、831、832、833、834、835、836、837、838、839、840、841、842、843、844、845、846、847、848、849、850、851、852、853、854、855、856、857、858、859、860、861、862、863、864、865、866、867、868、869、870、871、872、873、874、875、876、877、878、879、880、881、882、883、884、885、886、887、888、889、890、891、892、893、894、895、896、897、898、899、900、901、902、903、904、905、906、907、908、909、910、911、912、913、914、915、916、917、918、919、920、921、922、923、924、925、926、927、928、929、930、931、932、933、934、935、936、937、938、939、940、941、942、943、944、945、946、947、948、949或950且包含SEQ ID NO:1至36中之任一者之至少、至多或恰好2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249、250、251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、264、265、266、267、268、269、270、271、272、273、274、275、276、277、278、279、280、281、282、283、284、285、286、287、288、289、290、291、292、293、294、295、296、297、298、299、300、301、302、303、304、305、306、307、308、309、310、311、312、313、314、315、316、317、318、319、320、321、322、323、324、325、326、327、328、329、330、331、332、333、334、335、336、337、338、339、340、341、342、343、344、345、346、347、348、349、350、351、352、353、354、355、356、357、358、359、360、361、362、363、364、365、366、367、368、369、370、371、372、373、374、375、376、377、378、379、380、381、382、383、384、385、386、387、388、389、390、391、392、393、394、395、396、397、398、399、400、401、402、403、404、405、406、407、408、409、410、411、412、413、414、415、416、417、418、419、420、421、422、423、424、425、426、427、428、429、430、431、432、433、434、435、436、437、438、439、440、441、442、443、444、445、446、447、448、449、450、451、452、453、454、455、456、457、458、459、460、461、462、463、464、465、466、467、468、469、470、471、472、473、474、475、476、477、478、479、480、481、482、483、484、485、486、487、488、489、490、491、492、493、494、495、496、497、498、499、500、501、502、503、504、505、506、507、508、509、510、511、512、513、514、515、516、517、518、519、520、521、522、523、524、525、526、527、528、529、530、531、532、533、534、535、536、537、538、539、540、541、542、543、544、545、546、547、548、549、550、551、552、553、554、555、556、557、558、559、560、561、562、563、564、565、566、567、568、569、570、571、572、573、574、575、576、577、578、579、580、581、582、583、584、585、586、587、588、589、590、591、592、593、594、595、596、597、598、599、600、601、602、603、604、605、606、607、608、609、610、611、612、613、614、615、616、617、618、619、620、621、622、623、624、625、626、627、628、629、630、631、632、633、634、635、636、637、638、639、640、641、642、643、644、645、646、647、648、649、650、651、652、653、654、655、656、657、658、659、660、661、662、663、664、665、666、667、668、669、670、671、672、673、674、675、676、677、678、679、680、681、682、683、684、685、686、687、688、689、690、691、692、693、694、695、696、697、698、699、700、701、702、703、704、705、706、707、708、709、710、711、712、713、714、715、716、717、718、719、720、721、722、723、724、725、726、727、728、729、730、731、732、733、734、735、736、737、738、739、740、741、742、743、744、745、746、747、748、749、750、751、752、753、754、755、756、757、758、759、760、761、762、763、764、765、766、767、768、769、770、771、772、773、774、775、776、777、778、779、780、781、782、783、784、785、786、787、788、789、790、791、792、793、794、795、796、797、798、799、800、801、802、803、804、805、806、807、808、809、810、811、812、813、814、815、816、817、818、819、820、821、822、823、824、825、826、827、828、829、830、831、832、833、834、835、836、837、838、839、840、841、842、843、844、845、846、847、848、849、850、851、852、853、854、855、856、857、858、859、860、861、862、863、864、865、866、867、868、869、870、871、872、873、874、875、876、877、878、879、880、881、882、883、884、885、886、887、888、889、890、891、892、893、894、895、896、897、898、899、900、901、902、903、904、905、906、907、908、909、910、911、912、913、914、915、916、917、918、919、920、921、922、923、924、925、926、927、928、929、930、931、932、933、934、935、936、937、938、939、940、941、942、943、944、945、946、947、948、949或950 (或其中任何可推導範圍)個連續胺基酸或核苷酸。

先前已揭示多種基因之核苷酸及蛋白質、多肽及肽序列，且可在公認之計算機化資料庫中找到。兩種常用資料庫為國家生物技術資訊中心之基因庫及GenPept資料庫(全球資訊網ncbi.nlm.nih.gov/)及通用蛋白質資源(UniProt；全球資訊網uniprot.org)。此等基因之編碼區可使用本文揭示或如一般技術者已知的技術擴增及/或表現。

經考慮，在本發明之組合物中，每ml存在介於約0.001 mg至約10 mg之間的總多肽、肽及/或蛋白質。蛋白質於組合物中之濃度可為約、至少約或至多約0.001、0.010、0.050、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0、9.5、10.0 mg/ml或更多(或其中可推導之任何範圍)。

下文討論改變蛋白質之胺基酸次單元以產生等效，或甚至經改善之第二代變體多肽或肽。例如，某些胺基酸可替代蛋白質或多肽序列中之其他胺基酸，有或無明顯損失與結構(諸如，例如，抗體之抗原結合區或受質分子上之結合位點)相互作用結合能力。因為蛋白質之相互作用能力及性質界定該蛋白質之功能活性，所以可在蛋白質序列中及在其相應DNA編碼序列中作出某些胺基酸取代，但仍產生具有相似或所需性質之蛋白質。因此，發明人考慮，可在編碼蛋白質之基因之DNA序列中作出各種變化，而不明顯損失其等生物效用或活性。

本文中使用術語「功能等效密碼子」係指編碼相同胺基酸之密碼子，諸如用於精胺酸之六個不同密碼子。亦考慮「中性取代」或「中性突變」，其等係指編碼生物等效胺基酸之一或多個密碼子之變化。

本發明之胺基酸序列變體可為取代、插入或刪除變體。如相較於野生型，本發明之多肽中之變化可影響蛋白質或多肽之1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50或更多個非連續或連續胺基酸(或其中可推導之任何範圍)。變體可包含與本文提供或參考之任何序列具有至少50%、60%、70%、80%或90% (包括其中所有值及範圍)一致性之胺基酸序列。變體可包括2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多個取代胺基酸。

亦應瞭解，胺基酸及核酸序列可包括另外殘基，諸如分別另外N或C端胺基酸，或5ʹ或3ʹ序列，且又仍與本文揭示之序列中之一者闡述基本上一致，只要該序列滿足上文闡述之標準，包括其中有關蛋白質表現之生物蛋白活性之維持。端序列之添加特別適用於核酸序列，其等可(例如)包括側接編碼區之5ʹ或3ʹ部分之各種非編碼序列。

刪除變體通常缺乏天然或野生型蛋白質之一或多個殘基。可刪除個別殘基或可刪除許多連續胺基酸。可將終止密碼子引入(藉由取代或插入)編碼核酸序列內以產生截斷之蛋白質。

插入突變體通常涉及於多肽中之非端點處添加胺基酸殘基。此可包括插入一或多個胺基酸殘基。亦可產生端添加，且端添加可包括融合蛋白，融合蛋白係一或多個本文描述或參考之肽或多肽之多聚體或多聯體。

取代變體通常於蛋白質或多肽內之一或多個位點處含有一個胺基酸與另一個胺基酸之交換，且可經設計以調節該多肽之一或多種性質，有或無損失其他功能或性質。取代可為保守的，即，一個胺基酸係經具有相似化學性質者置換。「保守胺基酸取代」可涉及一種胺基酸類別之一個成員與相同類別之另一成員之交換。保守取代為此項技術中已知且包括(例如)以下改變：丙胺酸變為絲胺酸；精胺酸變為離胺酸；天冬醯胺酸變為麩醯胺酸或組胺酸；天冬胺酸變為麩胺酸；半胱胺酸變為絲胺酸；麩醯胺酸變為天冬醯胺酸；麩胺酸變為天冬胺酸；甘胺酸變為脯胺酸；組胺酸變為天冬醯胺酸或麩醯胺酸；異白胺酸變為白胺酸或纈胺酸；白胺酸變為纈胺酸或異白胺酸；離胺酸變為精胺酸；甲硫胺酸變為白胺酸或異白胺酸；苯丙胺酸變為酪胺酸、白胺酸或甲硫胺酸；絲胺酸變為蘇胺酸；蘇胺酸變為絲胺酸；色胺酸變為酪胺酸；酪胺酸變為色胺酸或苯丙胺酸；及纈胺酸變為異白胺酸或白胺酸。保守胺基酸取代可包含非天然生成之胺基酸殘基，其等通常藉由化學肽合成而非藉由生物系統中之合成併入。此等包括擬肽物或胺基酸部分之其他反向或倒轉形式。

或者，取代可為「非保守」的，使得多肽之功能或活性受影響。非保守改變通常涉及胺基酸殘基用化學性質不同之胺基酸殘基替代，諸如用極性或帶電胺基酸替代非極性或不帶電胺基酸，且反之亦然。非保守取代可涉及胺基酸類別中之一者之成員與來自另一類別之成員之交換。

熟習此項技術者可使用眾所周知的技術確定如本文中闡述之多肽之合適變體。熟習此項技術者可藉由靶向據信對活性不重要之區域識別可改變但不破壞活性之分子之合適區域。熟習技工將亦可識別在相似蛋白質或多肽之間保守之胺基酸殘基及分子之部分。在其他態樣中，可對生物活性或結構重要之區域可經受保守胺基酸取代而不顯著改變生物活性或沒有不利地影響蛋白質或多肽結構。

在作出此等改變時，可考慮胺基酸之親水指數。蛋白質之親水概況係藉由給各胺基酸分配數值(「親水指數」)及然後沿肽鏈重複平均此等值來計算。各胺基酸已基於其親水性及電荷特性分配值。其等為：異白胺酸(+4.5)；纈胺酸(+4.2)；白胺酸(+3.8)；苯丙胺酸(+2.8)；半胱胺酸/半胱胺酸(+2.5)；甲硫胺酸(+1.9)；丙胺酸(+1.8)；甘胺酸(−0.4)；蘇胺酸(−0.7)；絲胺酸(−0.8)；色胺酸(−0.9)；酪胺酸(−1.3)；脯胺酸(1.6)；組胺酸(−3.2)；麩胺酸鹽(−3.5)；麩醯胺酸(−3.5)；天冬胺酸(−3.5)；天冬醯胺酸(−3.5)；離胺酸(−3.9)；及精胺酸(−4.5)。親水胺基酸指數在賦予蛋白質相互作用生物功能中之重要性係此項技術中普遍瞭解(Kyte等人，J. Mol. Biol. 157:105-131 (1982))。公認胺基酸之相對親水特性有助於所得蛋白質或多肽之二級結構，其進一步界定該蛋白質或多肽與其他分子(例如，酶、受質、受體、DNA、抗體、抗原等)之相互作用。亦已知，某些胺基酸可替代具有相似親水指數或分數，且仍保留相似生物活性之其他胺基酸。在基於親水指數作出改變時，在某些態樣中，包括親水指數於±2內之胺基酸之取代。在本發明之一些態樣中，包括彼等於±1內者，且在本發明之其他態樣中，包括彼等於±0.5內者。

此項技術中亦應瞭解，基於親水性可有效作出類似胺基酸之取代。以引用之方式併入本文中之美國專利4,554,101聲明，蛋白質之最大局部平均親水性(如由其相鄰胺基酸之親水性控制)與該蛋白質之生物性質相關。在某些態樣中，蛋白質之最大局部平均親水性(如由其相鄰胺基酸之親水性控制)與其免疫原性及抗原結合(即，諸如該蛋白質之生物性質)相關。已對此等胺基酸殘基分配下列親水性值：精胺酸(+3.0)；離胺酸(+3.0)；天冬胺酸(+3.0±1)；麩胺酸(+3.0±1)；絲胺酸(+0.3)；天冬醯胺酸(+0.2)；麩醯胺酸(+0.2)；甘胺酸(0)；蘇胺酸(−0.4)；脯胺酸(−0.5±1)；丙胺酸(−0.5)；組胺酸(−0.5)；半胱胺酸(−1.0)；甲硫胺酸(−1.3)；纈胺酸(−1.5)；白胺酸(−1.8)；異白胺酸(−1.8)；酪胺酸(−2.3)；苯丙胺酸(−2.5)；及色胺酸(−3.4)。在基於相似親水性值作出改變時，在某些態樣中，包括親水性值於±2內之胺基酸之取代，在其他態樣中，包括彼等於±1內者，且在又其他態樣中，包括彼等於±0.5內者。在一些情況下，吾人亦可基於親水性自一級胺基酸序列識別抗原決定基。此等區域亦稱為「抗原決定基核心區域」。應瞭解，胺基酸可替換成具有相似親水性值且仍產生生物等效及免疫等效蛋白質之另一者。

另外，熟習此項技術者可回顧識別相似多肽或蛋白質中對活性或結構重要之殘基之結構功能研究。鑑於此比較，吾人可預測對應於相似蛋白質中對活性或結構重要之胺基酸殘基之蛋白質中胺基酸殘基之重要性。熟習此項技術者可針對此等經預測重要之胺基酸殘基選擇化學相似之胺基酸取代。

熟習此項技術者亦可分析與相似蛋白質或多肽中之結構相關之三維結構及胺基酸序列。鑑於此等資訊，熟習此項技術者可預測抗體之胺基酸殘基關於其三維結構之排列。熟習此項技術者可選擇不對經預測在蛋白質表面上之胺基酸殘基作出改變，因為此等殘基可涉及與其他分子之重要相互作用。此外，熟習此項技術者可於各所需胺基酸殘基處產生含有單一胺基酸取代之測試變體。然後，可使用針對結合及/或活性之標準檢定篩選此等變體，因此產生自此等例行性實驗收集之資訊，該等資訊可容許熟習此項技術者確定其中應單獨或與其他突變組合避免其他取代之胺基酸位置。可在全球資訊網expasy.org/proteomics/protein structure上找到可用於確定二級結構之多種工具。

在本發明之一些態樣中，作出胺基酸取代使得：(1)降低對蛋白質水解之敏感性，(2)降低對氧化之敏感性，(3)改變用於形成蛋白質複合物之結合親和力，(4)改變配體或抗原結合親和力，及/或(5)對此等多肽賦予或修飾其他物理化學或功能性質。例如，可在天然生成之序列中作出單個或多個胺基酸取代(在某些態樣中，保守胺基酸取代)。可在位於形成分子間接觸之域外部之抗體部分中作出取代。在此等態樣中，可使用不實質性改變蛋白質或多肽之結構特性之保守胺基酸取代(例如，不破壞表徵天然抗體之二級結構之一或多個置換胺基酸)。 III. 核酸

在某些態樣中，核酸序列可存在於多種情況中，諸如：編碼抗體之一或兩個鏈之併入序列或重組多核苷酸之分離區段及重組載體，或其片段、衍生物、突變蛋白或變體、足以用作雜交探針之多核苷酸、用於識別、分析、突變或擴增編碼多肽之多核苷酸之PCR引子或定序引子、用於抑制多核苷酸之表現之反義核酸，及本文描述之前述之互補序列。亦提供編碼本文提供之某些抗體針對之抗原決定基之核酸。亦提供編碼包括此等肽之融合蛋白之核酸。該等核酸可為單股或雙股的且可包含RNA及/或DNA核苷酸及其人造變體(例如，肽核酸)。

術語「多核苷酸」係指重組或已自全基因體核酸分離之核酸分子。術語「多核苷酸」包括寡核苷酸(長度為100個殘基或更少之核酸)、重組載體，包括(例如)質體、黏接質體、噬菌體、病毒，及類似物。在某些態樣中，多核苷酸包括調節序列，其等大體上自其等天然生成之基因或蛋白質編碼序列分離。多核苷酸可為單股(編碼或反義)或雙股的，且可為RNA、DNA (基因體、cDNA或合成)，其類似物，或其組合。另外編碼或非編碼序列可(但無需)存在於多核苷酸內。

在此方面，術語「基因」、「多核苷酸」或「核酸」用於係指編碼蛋白質、多肽或肽之核酸(包括適當之轉錄、轉譯後修飾或定位所需之任何序列)。如熟習此項技術者應瞭解，此術語包含基因體序列、表現匣、cDNA序列及較小之經工程化之核酸區段，其等表現或可適用於表現蛋白質、多肽、域、肽、融合蛋白及突變體。編碼多肽之所有或部分之核酸可含有編碼此多肽之所有或一部分之連續核酸序列。亦考慮，特定多肽可由含有變化之核酸編碼，該等變化具有略微不同核酸序列，但儘管如此仍編碼相同或大體上相似之蛋白質。

在某些態樣中，存在與本文揭示之序列具有實質上一致性之多核苷酸變體；使用本文描述之方法(例如，使用標準參數之BLAST分析)，相較於本文提供之多核苷酸序列，彼等包含至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%或更高(包括其中之所有值及範圍)序列一致性者。在某些態樣中，經分離之多核苷酸將包含編碼與本文描述之胺基酸序列，在該序列之整個長度上具有至少90%，較佳95%及以上一致性之多肽之核苷酸序列；或與該經分離之多核苷酸互補之核苷酸序列。

核酸區段(無關編碼序列本身之長度)可與其他核酸序列(諸如啟動子、聚腺苷酸化訊息、另外限制酶位點、多重選殖位點、其他編碼區段，及類似物)組合，使得其等整體長度可顯著變化。該等核酸可為任何長度。其等可為(例如) 5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、75、100、125、175、200、250、300、350、400、450、500、750、1000、1500、3000、5000或更多個核苷酸長度，及/或可包含一或多個另外序列(例如，調節序列)，及/或係較大核酸(例如，載體)之一部分。因此，考慮可採用幾乎任何長度之核酸片段，其中總長度較佳易受預期重組核酸方案中之製備及用途限制。在一些情況下，核酸序列可編碼具有另外異源性編碼序列之多肽序列，例如以容許多肽之純化、運輸、分泌、轉譯後修飾，或容許治療益處(諸如靶向或效用)。如上文討論，可將標籤或其他異源性多肽添加至經修飾之多肽編碼序列，其中「異源性」係指與該經修飾之多肽不同之多肽。 A. 雜交

核酸在特定雜交條件下與其他核酸雜交。用於使核酸雜交之方法為此項技術中熟知。參見，例如，Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley and Sons, N.Y. (1989), 6.3.1-6.3.6。如本文中定義，中等嚴格之雜交條件使用含有5×氯化鈉/檸檬酸鈉(SSC)、0.5% SDS、1.0 mM EDTA (pH 8.0)之預洗液、約50%甲醯胺、6×SSC之雜交緩衝劑，及55℃之雜交溫度(或其他類似雜交溶液，諸如含有約50%甲醯胺者，及42℃之雜交溫度)，及60℃，於0.5×SSC、0.1% SDS中之清洗條件。嚴格之雜交條件於6×SSC中在45℃下雜交，接著於0.1×SSC、0.2% SDS中在68℃下清洗一或多次。此外，熟習此項技術者可操控雜交及/或清洗條件以增加或降低雜交之嚴格性，使得包含彼此具有至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性之核苷酸序列之核酸通常保持彼此雜交。

影響雜交條件之選擇之參數及用於設計合適條件之導則闡述於(例如) Sambrook、Fritsch及Maniatis (Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.，第9及11章(1989)；Current Protocols in Molecular Biology, Ausubel等人編，John Wiley and Sons, Inc.，第2.10及6.3-6.4章節(1995)，其等兩者均出於所有目的以全文引用之方式併入本文中)且可由彼等一般技術者基於(例如) DNA之長度及/或鹼基組成容易確定。 B. 突變

可藉由突變將變化引入核酸內，藉此導致其編碼之多肽(例如，抗體或抗體衍生物)之胺基酸序列之變化。突變可使用此項技術中已知的任何技術引入。在一項實施例中，使用(例如)定點誘變方案改變一或多個特定胺基酸殘基。在另一實施例中，使用(例如)隨機誘變方案改變一或多個隨機選擇之殘基。無論以何種方式製得，突變體多肽均可表現並針對所需性質篩選。

可將突變引入核酸內而不顯著改變其編碼之多肽之生物活性。例如，吾人可於非必需胺基酸殘基處作出導致胺基酸取代之核苷酸取代。或者，可將一或多個突變引入核酸內以選擇性改變其編碼之多肽之生物活性。參見，例如，Romain Studer等人，Biochem. J. 449:581-594 (2013)。例如，該突變可定量或定性改變生物活性。定量改變之實例包括增加、降低或消除活性。定性改變之實例包括改變抗體之抗原特異性。 C. 探針

在另一態樣中，核酸分子適合用作引子或雜交探針以偵測核酸序列。核酸分子可僅包含編碼全長多肽之核酸序列之一部分，例如，可用作探針或引子之片段或編碼給定多肽之活性部分之片段。

在另一實施例中，核酸分子可用作特異性抗體序列之探針或PCR引子。例如，核酸分子探針可用於診斷方法中或核酸分子PCR引子可用於擴增DNA區域，該區域可用於尤其分離用於產生抗體可變域之核酸序列。參見，例如，Gaily Kivi等人，BMC Biotechnol. 16:2 (2016)。在一較佳態樣中，該等核酸分子係寡核苷酸。在一更佳態樣中，該等寡核苷酸來自受關注之抗體之重鏈及輕鏈之高度可變區。在一甚至更佳態樣中，該等寡核苷酸編碼CDR或TCR中之一或多者之所有或部分。

基於核酸之所需序列之探針可用於偵測核酸或相似核酸，例如，編碼受關注之多肽之轉錄本。該探針可包含標記基團，例如，放射性同位素、螢光化合物、酶或酶輔助因子。此等探針可用於識別表現該多肽之細胞。 IV. 多肽表現

在一些態樣中，存在編碼本發明之多肽或肽之核酸分子(例如TCR基因)。此等可藉由此項技術中已知的方法產生，例如，自已經免疫並分離之小鼠B細胞分離、噬菌體顯示、在任何合適之重組表現系統中表現並容許組裝以形成抗體分子或藉由重組方法。 A. 表現

核酸分子可用於表現大量多肽。若核酸分子衍生自非人類、非轉基因動物，則該等核酸分子可用於TCR基因之人類化。 B. 載體

在一些態樣中，考慮包含編碼所需序列之多肽或其部分(例如含有一或多個或CDR或一或多個可變區域之片段)之核酸分子之表現載體。包含核酸分子之表現載體可編碼重鏈、輕鏈，或其抗原結合部分。在一些態樣中，包含核酸分子之表現載體可編碼融合蛋白、經修飾之抗體、抗體片段，及其探針。除控制轉錄及轉譯之控制序列外，載體及表現載體可含有亦發揮其他功能之核酸序列。

為表現本發明之多肽或肽，將編碼該等多肽或肽之DNA插入表現載體內，使得基因區域以可操作方式連接至轉錄及轉譯控制序列。在一些態樣中，載體編碼功能完整之人類CH或CL免疫球蛋白或TCR序列，其中適當之限制位點經工程化，使得可容易插入並表現任何VH或VL序列。在一些態樣中，載體編碼功能完整之人類TCR α或TCR β序列，其中適當之限制位點經工程化，使得可容易插入並表現任何可變序列或CDR1、CDR2及/或CDR3。通常，宿主細胞之任一者中所用之表現載體含有用於質體或病毒維持及用於選殖並表現外源性核苷酸序列之序列。統稱為「側接序列」之此等序列通常包括以下可操作連接之核苷酸序列中之一或多者：啟動子、一或多個強化子序列、複製起點、轉錄終止序列、含有供體及接受體剪接位點之完整內含子序列、編碼用於多肽分泌之前導序列之序列、核醣體結合位點、聚腺苷酸化序列、用於插入編碼欲表現之多肽之核酸之多重選殖區域(polylinker region)，及可選擇之標記物元件。此等序列及其使用方法為此項技術中熟知。 C. 表現系統

存在包含上文討論之表現載體之至少一部分及所有之許多表現系統。基於原核生物及/或真核生物之系統可用於與一態樣一起使用以產生核酸序列，或其同源多肽、蛋白質及肽。市售且廣泛可用之系統包括(但不限於)細菌、哺乳動物、酵母及昆蟲細胞系統。不同之宿主細胞具有用於蛋白質之轉譯後處理及修飾之特性及特定機制。可選擇適當之細胞系或宿主系統以確保所表現之外來蛋白之正確修飾及處理。熟習此項技術者可使用適當之表現系統表現載體以產生核酸序列或其同源多肽、蛋白質或肽。 V. 基因轉移之方法

如本文描述或如一般技術者將已知，適用於核酸遞送以實現組合物之表現之方法預期包括可將核酸(例如，DNA，包括病毒及非病毒載體)引入細胞、組織或生物體內之幾乎任何方法。此等方法包括(但不限於)直接遞送DNA諸如藉由注射(美國專利5,994,624、5,981,274、5,945,100、5,780,448、5,736,524、5,702,932、5,656,610、5,589,466及5,580,859，各以引用之方式併入本文中)，包括顯微注射(Harland及Weintraub, 1985；美國專利5,789,215，以引用之方式併入本文中)；藉由電穿孔(美國專利第5,384,253號，以引用之方式併入本文中)；藉由磷酸鈣沈澱(Graham及Van Der Eb, 1973；Chen及Okayama, 1987；Rippe等人，1990)；藉由使用DEAE葡聚醣，接著聚乙二醇(Gopal, 1985)；藉由直接聲波裝載(Fechheimer等人，1987)；藉由脂質體介導之轉染(Nicolau及Sene, 1982；Fraley等人，1979；Nicolau等人，1987；Wong等人，1980；Kaneda等人，1989；Kato等人，1991)；藉由微彈轟擊(microprojectile bombardment) (PCT申請案號WO 94/09699及95/06128；美國專利5,610,042；5,322,783、5,563,055、5,550,318、5,538,877及5,538,880，且各以引用之方式併入本文中)；藉由用碳化矽纖維攪動(Kaeppler等人，1990；美國專利5,302,523及5,464,765，各以引用之方式併入本文中)；藉由農桿菌(Agrobacterium)介導之轉形(美國專利5,591,616及5,563,055，各以引用之方式併入本文中)；或藉由原生質體之PEG介導之轉形(Omirulleh等人，1993；美國專利4,684,611及4,952,500，各以引用之方式併入本文中)；藉由乾燥/抑制介導之DNA攝取(Potrykus等人，1985)。其他方法包括病毒轉導，諸如藉由慢病毒或逆轉錄病毒轉導之基因轉移。 A. 宿主細胞

在另一態樣中，考慮使用已引入重組表現載體之宿主細胞。抗體可表現於多種細胞類型中。可根據此項技術中已知的多種方法將編碼抗體之表現構築體轉染至細胞內。可經由習知轉形或轉染技術將載體DNA引入原核或真核細胞內。一些載體可採用容許其在原核及真核細胞中複製及/或表現之控制序列。在某些態樣中，將抗體表現構築體置於連接至T細胞活化之啟動子之控制下，諸如受NFAT-1或NF-κΒ控制者，其等中之兩者均為一經T細胞活化即可活化之轉錄因子。抗體表現之控制容許T細胞(諸如靶向腫瘤之T細胞)在T細胞本身中及在周圍內源性免疫細胞中感知其等周圍環境並即時進行細胞介素傳訊之調節。熟習此項技術者應瞭解培養宿主細胞以維持其等並允許載體複製之條件。亦瞭解且已知容許大規模產生載體，及產生由載體編碼之核酸及其同源多肽、蛋白質或肽之技術及條件。

對於穩定轉染哺乳動物細胞，已知取決於使用之表現載體及轉染技術，僅一小部分細胞可將外源DNA整合至其等基因體內。為識別並選擇此等整合體，一般將可選擇標記物(例如，用於對抗生素之抗性)連同受關注之基因一起引入宿主細胞內。用引入之核酸穩定轉染之細胞可藉由藥物選擇(例如，已併入可選擇標記物基因之細胞將存活，而其他細胞死亡)，此項技術中已知的其他方法等等識別。 B. 分離

編碼抗體或其可變區之整個重鏈及輕鏈中之任一者或兩者之核酸分子可獲自產生抗體之任何來源。分離編碼抗體之mRNA之方法為此項技術中熟知。例如，參見Sambrook等人，同上。人類重鏈及輕鏈恆定區基因之序列亦為此項技術中已知。參見，例如，Kabat等人，1991，同上。然後編碼全長重鏈及/或輕鏈之核酸分子可在已併入其等之細胞中表現並分離抗體。 VI. 另外療法 A. 免疫療法

在一些態樣中，該等方法包括投與另外療法。在一些態樣中，該另外療法包含癌症免疫療法。癌症免疫療法(有時稱為免疫腫瘤學，縮寫為IO)使用免疫系統來治療癌症。免疫療法可分類為主動、被動或混合(主動及被動)。此等方法利用以下事實：癌細胞通常在其等表面上具有可由免疫系統偵測之分子，稱為腫瘤相關抗原(TAA)；通常其等係蛋白質或其他大分子(例如碳水化合物)。主動免疫療法藉由靶向TAA引導免疫系統攻擊腫瘤細胞。被動免疫療法增強現有抗腫瘤反應且包括使用單株抗體、淋巴球及細胞介素。此項技術中已知免疫療法，且下文描述一些。 1. 檢查點抑制劑及組合治療

本發明之態樣可包括投與下文進一步描述之免疫檢查點抑制劑。 a. PD-1、PDL1及PDL2抑制劑

PD-1可在T細胞遭遇感染或腫瘤之腫瘤微環境中發揮作用。經活化之T細胞上調PD-1並在外周組織中繼續表現其。細胞介素(諸如IFN-γ)誘導PDL1在上皮細胞及腫瘤細胞上之表現。PDL2表現在巨噬細胞及樹突細胞上。PD-1之主要作用係限制效應T細胞在外周中之活性並在免疫反應期間防止過度損傷組織。本發明之抑制劑可阻斷PD-1及/或PDL1活性之一或多種功能。

「PD-1」之替代名稱包括CD279及SLEB2。「PDL1」之替代名稱包括B7-H1、B7-4、CD274及B7-H。「PDL2」之替代名稱包括B7-DC、Btdc及CD273。在一些態樣中，PD-1、PDL1及PDL2係人類PD-1、PDL1及PDL2。

在一些態樣中，PD-1抑制劑係抑制PD-1結合至其配體結合配偶體之分子。在一特定態樣中，該等PD-1配體結合配偶體係PDL1及/或PDL2。在另一態樣中，PDL1抑制劑係抑制PDL1結合至其結合配偶體之分子。在一特定態樣中，PDL1結合配偶體係PD-1及/或B7-1。在另一態樣中，該PDL2抑制劑係抑制PDL2結合至其結合配偶體之分子。在一特定態樣中，PDL2結合配偶體係PD-1。該抑制劑可為抗體、其抗原結合片段、免疫黏附素、融合蛋白或寡肽。例示性抗體描述於美國專利第8,735,553、8,354,509及8,008,449中，全部以引用之方式併入本文中。用於本文提供之方法及組合物中之其他PD-1抑制劑為此項技術中已知，諸如描述於美國專利申請案號US2014/0294898、US2014/022021及US2011/0008369中，全部以引用之方式併入本文中。

在一些態樣中，PD-1抑制劑係抗PD-1抗體(例如，人類抗體、人類化抗體或嵌合抗體)。在一些態樣中，該抗PD-1抗體係選自由以下組成之群：納武單抗(nivolumab)、派姆單抗(pembrolizumab)及匹地珠單抗(pidilizumab)。在一些態樣中，該PD-1抑制劑係免疫黏附素(例如，包含PDL1或PDL2之細胞外或PD-1結合部分與恆定區(例如，免疫球蛋白序列之FC區)融合之免疫黏附素)。在一些態樣中，該PDL1抑制劑包含AMP-224。納武單抗(亦稱為MDX-1106-04、MDX-1106、ONO-4538、BMS-936558及OPDIVO®)係WO2006/121168中描述之抗PD-1抗體。派姆單抗(亦稱為MK-3475、Merck 3475、蘭博利珠單抗(lambrolizumab)、KEYTRUDA®及SCH-900475)係WO2009/114335中描述之抗PD-1抗體。匹地珠單抗(亦稱為CT-011、hBAT或hBAT-1)係WO2009/101611中描述之抗PD-1抗體。AMP-224(亦稱為B7-DCIg)係WO2010/027827及WO2011/066342中描述之PDL2-Fc融合可溶性受體。另外PD-1抑制劑包括MEDI0680 (亦稱為AMP-514)及REGN2810。

在一些態樣中，免疫檢查點抑制劑係PDL1抑制劑，諸如度伐魯單抗(Durvalumab) (亦稱為MEDI4736)、阿特珠單抗(atezolizumab) (亦稱為MPDL3280A)、阿維魯單抗(avelumab) (亦稱為MSB00010118C、MDX-1105、BMS-936559)，或其組合。在某些態樣中，該免疫檢查點抑制劑係PDL2抑制劑(諸如rHIgM12B7)。

在一些態樣中，抑制劑包含納武單抗、派姆單抗或匹地珠單抗之重鏈及輕鏈CDR或VR。因此，在一項態樣中，該抑制劑包含納武單抗、派姆單抗或匹地珠單抗之VH區之CDR1、CDR2及CDR3域，及納武單抗、派姆單抗或匹地珠單抗之VL區之CDR1、CDR2及CDR3域。在另一態樣中，該抗體與上文提及之抗體競爭結合及/或結合至PD-1、PDL1或PDL2上之相同抗原決定基。在另一態樣中，該抗體與上文提及之抗體具有至少約70、75、80、85、90、95、97或99% (或其中任何可推導範圍)可變區胺基酸序列一致性。 b. CTLA-4、B7-1及B7-2

可在本文提供之方法中靶向之另一免疫檢查點係細胞毒性T淋巴球相關蛋白4 (CTLA-4)，亦稱為CD152。人類CTLA-4之完整cDNA序列具有基因庫登錄編號L15006。CTLA-4發現於T細胞之表面上，且當結合至抗原呈遞細胞之表面上之B7-1 (CD80)或B7-2 (CD86)時，該CTLA-4充當「關閉」開關。CTLA4係免疫球蛋白超家族之成員，其表現於輔助T細胞之表面上並將抑制訊息傳輸至T細胞。CTLA4類似於T細胞共刺激蛋白CD28，且兩種分子均結合至抗原呈遞細胞上之B7-1及B7-2。CTLA-4將抑制訊息傳輸至T細胞，而CD28傳輸刺激訊息。細胞內CTLA-4亦發現於調節T細胞中且對其等功能而言可為重要的。經由T細胞受體及CD28之T細胞活化導致CTLA-4 (B7分子之抑制受體)之表現增加。本發明之抑制劑可阻斷CTLA-4、B7-1及/或B7-2活性之一或多種功能。在一些態樣中，該抑制劑阻斷CTLA-4及B7-1相互作用。在一些態樣中，該抑制劑阻斷CTLA-4及B7-2相互作用。

在一些態樣中，免疫檢查點抑制劑係抗CTLA-4抗體(例如，人類抗體、人類化抗體或嵌合抗體)、其抗原結合片段、免疫黏附素、融合蛋白或寡肽。

適用於本發明方法中之抗人類CTLA-4抗體(或由其衍生之VH及/或VL域)可使用此項技術中熟知的方法產生。或者，可使用公認之抗CTLA-4抗體。例如，揭示於以下中之抗CTLA-4抗體可用於本文揭示之方法中：US 8,119,129、WO 01/14424、WO 98/42752、WO 00/37504 (CP675,206，亦稱為曲美木單抗(tremelimumab)；原名替西木單抗(ticilimumab))、美國專利第6,207,156號；Hurwitz等人，1998。前述公開案中之各者之教示係以引用之方式併入本文中。亦可使用與此等公認之抗體中之任一者競爭結合至CTLA-4之抗體。例如，人類化CTLA-4抗體描述於國際專利申請案號WO2001/014424、WO2000/037504及美國專利第8,017,114號中；全部以引用之方式併入本文中。

在本發明之方法及組合物中適合作為檢查點抑制劑之另一抗CTLA-4抗體係伊匹單抗(ipilimumab) (亦稱為10D1、MDX-010、MDX-101及Yervoy®)或其抗原結合片段及變體(參見，例如，WO 01/14424)。

在一些態樣中，抑制劑包含曲美木單抗或伊匹單抗之重鏈及輕鏈CDR或VR。因此，在一項態樣中，該抑制劑包含曲美木單抗或伊匹單抗之VH區之CDR1、CDR2及CDR3域，及曲美木單抗或伊匹單抗之VL區之CDR1、CDR2及CDR3域。在另一態樣中，該抗體與上文提及之抗體競爭結合及/或結合至PD-1、B7-1或B7-2上之相同抗原決定基。在另一態樣中，該抗體與上文提及之抗體具有至少約70、75、80、85、90、95、97或99% (或其中任何可推導範圍)可變區胺基酸序列一致性。 2. 共刺激分子之抑制

在一些態樣中，免疫療法包含共刺激分子之抑制劑。在一些態樣中，該抑制劑包含B7-1 (CD80)、B7-2 (CD86)、CD28、ICOS、OX40 (TNFRSF4)、4-1BB (CD137；TNFRSF9)、CD40L (CD40LG)、GITR (TNFRSF18)之抑制劑，及其組合。抑制劑包括抑制抗體、多肽、化合物及核酸。 3. 樹突細胞療法

樹突細胞療法藉由引起樹突細胞對淋巴球呈遞腫瘤抗原而激發抗腫瘤反應，此活化淋巴球，誘發淋巴球殺死呈遞該抗原之其他細胞。樹突細胞係哺乳動物免疫系統中之抗原呈遞細胞(APC)。在癌症治療中，該等樹突細胞幫助癌症抗原靶向。基於樹突細胞之細胞癌症療法之一項實例係司普樂爾-T (sipuleucel-T)。

一種誘導樹突細胞以呈遞腫瘤抗原之方法係藉由用自體腫瘤裂解物或短肽(對應於癌細胞上之蛋白抗原之蛋白質之小部分)接種疫苗。通常，此等肽與佐劑(高度免疫原性物質)組合給定以增加免疫及抗腫瘤反應。其他佐劑包括吸引及/或活化樹突細胞之蛋白質或其他化學物質，諸如粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)。

樹突細胞亦可藉由使得腫瘤細胞表現GM-CSF而活體內活化。此可藉由基因工程化腫瘤細胞以產生GM-CSF或藉由用表現GM-CSF之溶瘤病毒感染腫瘤細胞達成。

另一策略係自患者之血液移除樹突細胞並在體外將其等活化。在腫瘤抗原之存在下活化該等樹突細胞，該等腫瘤抗原可為單一腫瘤特異性肽/蛋白質或腫瘤細胞裂解物(分解腫瘤細胞之溶液)。輸注此等細胞(具有可選佐劑)並激發免疫反應。

樹突細胞療法包括使用結合至樹突細胞之表面上之受體之抗體。可將抗原添加至該抗體，且該等抗原可誘導該等樹突細胞成熟且提供對腫瘤之免疫力。樹突細胞受體(諸如TLR3、TLR7、TLR8或CD40)已用作抗體標靶。 4. CAR-T細胞療法

嵌合抗原受體(CAR，亦稱為嵌合免疫受體、嵌合T細胞受體或人造T細胞受體)係經工程化之受體，該等受體組合新穎特異性與免疫細胞以靶向癌細胞。通常，此等受體將單株抗體之特異性移植至T細胞上。該等受體稱為嵌合受體，因為其等由來自不同來源之部分融合而成。CAR-T細胞療法係指針對癌症療法使用此等轉形細胞之治療。

CAR-T細胞設計之基本原理涉及組合抗原結合與T細胞活化功能之重組受體。CAR-T細胞之一般前提係人工產生靶向癌細胞上發現之標記物之T細胞。科學家們可自人體移除T細胞，基因改變該等T細胞，並將該等T細胞放回至患者內以容許該等T細胞攻擊癌細胞。倘若已將該T細胞工程化為CAR-T細胞，則其充當「活藥」。CAR-T細胞在細胞外配體識別域至細胞內傳訊分子之間建立連接，該連接進一步活化T細胞。該細胞外配體識別域通常係單鏈可變片段(scFv)。CAR-T細胞療法之安全性之一重要態樣係如何確保僅靶向癌性腫瘤細胞，而不靶向正常細胞。CAR-T細胞之特異性由靶向分子之選擇決定。

例示性CAR-T療法包括替沙塞爾(Tisagenlecleucel) (Kymriah)及阿基侖賽(Axicabtagene ciloleucel) (Yescarta)。在一些態樣中，該CAR-T療法靶向CD19。 5. 細胞介素療法

細胞介素係由腫瘤內存在之許多類型之細胞產生之蛋白質。細胞介素可調節免疫反應。腫瘤通常採用該等細胞介素以容許其生長並減少免疫反應。此等免疫調節效應容許其等用作激發免疫反應之藥物。兩種常用細胞介素為干擾素及介白素。

干擾素由免疫系統產生。其等通常參與抗病毒反應，但亦用於癌症。該等干擾素分為三組：I型(IFNα及IFNβ)、II型(IFNγ)及III型(IFNλ)。

介白素具有一系列免疫系統效應。IL-2係例示性介白素細胞介素療法。 6. 過繼性T細胞療法

過繼性T細胞療法係藉由輸注T細胞(過繼性細胞轉移)之被動免疫形式。該等T細胞存在於血液及組織中，且通常在其等發現外來病原體時活化。具體言之，當T細胞之表面受體遭遇在細胞表面抗原上顯示外來蛋白部分之細胞時，該等T細胞活化。此等可為受感染細胞或抗原呈遞細胞(APC)。可在正常組織及腫瘤組織中找到該等T細胞，其中該等T細胞稱為腫瘤浸潤淋巴球(TIL)。該等T細胞由APC(諸如呈遞腫瘤抗原之樹突細胞)呈遞而活化。儘管此等細胞可攻擊腫瘤，但該腫瘤內之環境為高度免疫抑制的，此防止免疫介導之腫瘤死亡。

已開發多種產生並獲得腫瘤靶向T細胞之方法。對腫瘤抗原具特異性之T細胞可自腫瘤樣本(TIL)移除或自血液過濾。隨後離體進行活化及培養，並重新輸注結果。活化可經由基因療法，或藉由使T細胞曝露於腫瘤抗原進行。 B. 化學療法

在一些態樣中，另外療法包含化學療法。化學治療劑之合適類別包括(a)烷化劑，諸如氮芥(例如，甲基二(氯乙基)胺、環磷醯胺、異環磷醯胺、美法侖(melphalan)、苯丁酸氮芥)、伸乙亞胺及甲基三聚氰胺(例如，六甲基三聚氰胺、噻替哌(thiotepa))、磺酸烷酯(例如，白消安(busulfan))、亞硝基脲(例如，卡莫司汀(carmustine)、洛莫司汀(lomustine)、氯唑菌素(chlorozoticin)、鏈脲佐菌素(streptozocin))及三嗪(例如，達卡巴嗪(dicarbazine))，(b) 抗代謝物，諸如葉酸類似物(例如，胺甲喋呤(methotrexate))、嘧啶類似物(例如，5-氟尿嘧啶、氟尿苷、阿糖胞苷、氮雜尿苷)及嘌呤類似物及相關材料(例如，6-巰基嘌呤、6-硫鳥嘌呤、噴司他丁(pentostatin))，(c)天然產品，諸如長春花生物鹼(例如，長春鹼(vinblastine)、長春新鹼(vincristine))、鬼臼毒素(例如，依託泊苷(etoposide)、替尼泊苷(teniposide))、抗生素(例如，放線菌素D(dactinomycin)、柔紅黴素(daunorubicin)、阿黴素(doxorubicin)、博來黴素(bleomycin)、普卡黴素(plicamycin)及米托蒽醌(mitoxanthrone))、酶(例如，L-天冬醯胺酸酶)及生物反應修飾劑(例如，干擾素-α)，及(d)其他藥劑，諸如鉑配位錯合物(例如，順鉑、卡鉑)、經取代之脲(例如，羥基脲)、甲基肼衍生物(例如，丙卡巴肼(procarbazine))，及腎上腺皮質抑制劑(例如，紫杉酚(taxol)及米托坦(mitotane))。在一些態樣中，順鉑係特別合適之化學治療劑。

順鉑已廣泛用於治療癌症，諸如，例如，轉移性睪丸癌或卵巢癌、晚期膀胱癌、頭頸癌、宮頸癌、肺癌或其他腫瘤。順鉑無法經口吸收且因此必須經由其他途徑(諸如，例如，靜脈內、皮下、瘤內或腹膜內注射)遞送。順鉑可單獨或與其他藥劑組合使用，在臨床應用中使用之有效劑量包括約15 mg/m2至約20 mg/m2，每三週歷時5天，在某些態樣中考慮總計三個療程。在一些態樣中，聯合包含以可操作方式連接至編碼治療多肽之多核苷酸之Egr-1啟動子之構築體一起遞送至細胞及/或對個體遞送之順鉑之量係小於當單獨使用順鉑時遞送之量。

其他合適之化學治療劑包括抗微管劑，例如，紫杉醇(Paclitaxel) (「紫杉酚」)及鹽酸阿黴素(「阿黴素」)。確定經由腺病毒載體遞送之Egr-1啟動子/TNFα構築體及阿黴素之組合有效克服對化學療法及/或TNF-α之抗性，此表明使用構築體及阿黴素之組合治療克服對阿黴素及TNF-α兩者之抗性。

阿黴素吸收較差且較佳靜脈內投與。在某些態樣中，適用於成人之靜脈內劑量包括約60 mg/m2至約75 mg/m2以約21天時間間隔，或連續2或3天每天約25 mg/m2至約30 mg/m2，以約3週至約4週之時間間隔重複，或約20 mg/m2每週一次。當由先前化學療法或腫瘤性骨髓侵襲引起先前骨髓抑制時，或當藥物與其他骨髓細胞生成抑制藥物組合時，在老年患者中應使用最低劑量。

氮芥係適用於本發明之方法中之其他合適之化學治療劑。氮芥可包括(但不限於)甲基二(氯乙基)胺(HN2)、環磷醯胺及/或異環磷醯胺、美法侖(L-溶肉瘤素)及苯丁酸氮芥。環磷醯胺(CYTOXAN®)可自Mead Johnson購買獲得及NEOSTAR®可自Adria購買獲得)，係另一合適之化學治療劑。適用於成人之經口劑量包括(例如)約1 mg/kg/天至約5 mg/kg/天，靜脈內劑量包括(例如)初始約40 mg/kg至約50 mg/kg，以分開劑量，歷時約2天至約5天之期間，或約10 mg/kg至約15 mg/kg約每7天至約10天或約3 mg/kg至約5 mg/kg每週兩次，或約1.5 mg/kg/天至約3 mg/kg/天。因為不利之胃腸道效應，所以靜脈內途徑較佳。該藥物有時亦肌內、藉由滲透或進入體腔內投與。

另外合適之化學治療劑包括嘧啶類似物，諸如阿糖胞苷(胞嘧啶阿拉伯糖苷)、5-氟尿嘧啶(氟脲嘧啶；5-FU)及氟尿苷(氟脫氧尿苷；FudR)。5-FU可以介於約7.5至約1000 mg/m2之間的任何劑量對個體投與。此外，5-FU給藥方案可歷時多種時間期，例如長達六週，或如由本發明所屬領域之一般技術者確定。

二磷酸吉西他濱(GEMZAR®，Eli Lilly & Co.，「吉西他濱(gemcitabine)」) (另一合適之化學治療劑)建議用於治療晚期及轉移性胰臟癌，且因此亦將適用於本發明中以治療此等癌症。

對患者遞送之化學治療劑之量可為可變的。在一項合適之態樣中，當化學療法與構築體一起投與時，該化學治療劑可以在宿主中有效引起癌症之停止或消退之量投與。在其他態樣中，該化學治療劑可以介於小於該化學治療劑之化學治療有效劑量2至10,000倍之間的任何量投與。例如，該化學治療劑可以比該化學治療劑之化學治療有效劑量小約20倍、約500倍或甚至約5000倍之量投與。可活體內測試本發明之化學治療劑與構築體組合之所需治療活性，並確定有效劑量。例如，在人類中測試之前，此等化合物可在合適之動物模型系統中加以測試，包括(但不限於)大鼠、小鼠、雞、奶牛、猴、兔等。如實例中描述，亦可使用活體外測試以確定合適之組合及劑量。 C. 放射療法

在一些態樣中，另外療法或先前療法包含輻射，諸如電離輻射。如本文中使用，「電離輻射」意謂包含具有足夠能量或可經由核相互作用產生電離(獲得或失去電子)來產生足夠能量之粒子或光子之輻射。一例示性且較佳之電離輻射係x輻射。用於將x輻射遞送至標靶組織或細胞之方式為此項技術中熟知。 D. 手術

在一些態樣中，另外療法包含手術。約60%癌症患者將經受某種類型之手術，其包括預防性、診斷性或分階段、治癒性及姑息性手術。治癒性手術包括其中物理移除、切除及/或破壞癌組織之所有或部分之切除術，且可聯合其他療法一起使用，諸如本發明態樣之治療、化學療法、放射療法、激素療法、基因療法、免疫療法及/或替代療法。腫瘤切除術係指物理移除腫瘤之至少部分。除腫瘤切除術外，手術治療包括雷射手術、冷凍手術、電刀手術及顯微控制手術(莫氏手術)。

一經切除癌細胞、組織或腫瘤之部分或所有，即可在體內形成空腔。治療可藉由輸注、直接注射或在區域局部應用另外抗癌症療法進行。此治療可例如每1、2、3、4、5、6或7天，或每1、2、3、4及5週或每1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個月(或其中可推導之任何範圍)重複。此等治療亦可具有變化之劑量。 VII. 偵測及治療劑

在本發明之一些態樣中，可偵測或治療性標記本發明之TCR或融合蛋白將係有用的。用於將多肽結合至此等藥劑之方法為此項技術中已知。僅出於闡述之目的，多肽可用可偵測部分諸如放射性原子、發色團、螢光團，或類似物標記。此等經標記之多肽可適用於診斷技術，活體內，或在經分離之測試樣本中或在本文描述之方法中。

如本文中使用，術語「標記」旨在直接或間接可偵測化合物或組合物，其直接或間接結合至待偵測之組合物(例如，多核苷酸或蛋白質，諸如抗體)，以便於產生「經標記之」組合物。術語亦包括結合至多核苷酸之序列，一經表現插入序列，其等即將提供訊息，諸如綠色螢光蛋白(GFP)及類似物。該標記可本身可偵測(例如放射性同位素標記或螢光標記)，或在酶促標記之情況下，可催化可偵測之受質化合物或組合物之化學變化。該等標記可適用於小規模偵測或更適用於高通量篩選。因此，合適之標記包括(但不限於)放射性同位素、螢光染料、化學發光化合物、燃料及蛋白質(包括酶)。該標記可被簡單偵測或其可被定量。簡單偵測之反應一般包含僅證實其存在之反應，而定量之反應一般包含具有可量化(例如，可用數字報告)值(諸如強度、極化及/或其他性質)之反應。在發光或螢光檢定中，該可偵測反應可使用與實際參與結合之檢定組分相關聯之發光團或螢光團直接產生，或使用與另一(例如，報導子或指示劑)組分相關聯之發光團或螢光團間接產生。

產生訊息之發光標記之實例包括(但不限於)生物發光及化學發光。可偵測發光反應一般包含發光訊息之變化或出現。適用於發光標記檢定組分之方法及發光團為此項技術中已知且描述(例如)於Haugland, Richard P. (1996) Handbook of Fluorescent Probes and Research Chemicals (第6補充版)中。發光探針之實例包括(但不限於)水母發光蛋白及螢光素酶。

合適之螢光標記之實例包括(但不限於)螢光素、羅丹明、四甲基羅丹明、曙紅、赤蘚紅、香豆素、甲基-香豆素、芘、孔雀石綠、芪、螢光黃、級聯藍及德克薩斯紅。其他合適之光學染料描述於Haugland, Richard P. (1996) Handbook of Fluorescent Probes and Research Chemicals (第6補充版)中。

在另一態樣中，將螢光標記功能化以促進對細胞或組織中或細胞或組織之表面上存在之細胞組分(諸如細胞表面標記物)之共價結合。合適之官能基包括(但不限於)異硫氰酸酯基團、胺基、鹵乙醯基、馬來醯亞胺、琥珀醯亞胺酯及磺醯鹵化物，其等均可用於將螢光標記結合至第二分子。該螢光標記之官能基之選擇將取決於與連接子、藥劑、標記物或第二標記劑結合之結合位點。

螢光標記之結合可為直接結合至細胞組分或化合物，或替代地，可經由連接子結合。適用於將該螢光標記間接連接至中間物之結合對包括(但不限於)抗原/多肽，例如，羅丹明/抗羅丹明、生物素/親和素及生物素/鏈黴親和素。

多肽對低分子量半抗原之偶合可增加抗體在檢定中之靈敏度。然後可藉助於第二反應特異性偵測該半抗原。例如，通常使用半抗原，諸如使親和素反應之生物素，或二硝基苯酚、吡哆醛，及可與特異性抗半抗原多肽反應之螢光素。參見，Harlow及Lane (1988)，同上。

結合劑可使用大量可用方法中之任何一者直接或間接連接至多肽。例如，藥劑可使用交聯劑諸如3-(2-吡啶基二硫基)丙酸N-琥珀醯酯(SPDP)經由二硫鍵形成，或經由抗體之FC區中之碳水化合物部分於還原抗體組分之鉸鏈區處結合(Yu等人，1994；Upeslacis等人，1995; Price, 1995)。

熟知用於將藥劑結合至多肽之技術(Amon等人，1985；Hellstrom等人，1987；Thorpe, 1985；Baldwin等人，1985；Thorpe等人，1982)。

本發明之多肽或其抗原結合區可連接至另一功能分子諸如配體、細胞毒性分子、化學治療劑，或描述為另外治療劑之其他藥劑。 VIII. 細胞之調配物及培養

在特定態樣中，本發明之細胞可經特定調配及/或其等可在特定培養基中培養。該等細胞可以適用於對受體遞送而無有害效應之方式調配。

在某些態樣中，培養基可使用用於培養動物細胞之培養基作為其等基礎培養基製備，諸如AIM V、X-VIVO-15、NeuroBasal、EGM2、TeSR、BME、BGJb、CMRL 1066、Glasgow MEM、經改良之MEM Zinc Option、IMDM、培養基199、Eagle MEM、αMEM、DMEM、Ham、RPMI-1640及希爾(Fischer)培養基中之任何一者，及其任何組合，但該培養基可不特別限於此，只要其可用於培養動物細胞。特定言之，該培養基可無外源物質或化學性界定。

培養基可為含血清或無血清培養基，或無外源物質培養基。自防止受異質動物源性組分污染之態樣，血清可來源於與幹細胞相同之動物。無血清培養基係指無未處理或未純化血清之培養基，且因此，可包括具有經純化之血液源性組分或動物組織源性組分(諸如生長因子)之培養基。

培養基可含有或可不含有任何血清替代品。該等血清替代品可包括適當地含有以下之材料：白蛋白(諸如富含脂質之白蛋白、牛白蛋白、白蛋白替代品(諸如重組白蛋白或人類化白蛋白)、植物澱粉、葡聚醣及蛋白質水解物)、轉鐵蛋白(或其他鐵轉運物)、脂肪酸、胰島素、膠原前體、痕量元素、2-巰基乙醇、3'-硫甘油或其等同物。例如，該等血清替代品可藉由國際公開案號98/30679中揭示之方法製備(以全文引用之方式併入本文中)。或者，為方便起見，可使用任何市售材料。該等市售材料包括knockout血清替代品(KSR)、化學性界定脂質濃縮物(Gibco)及Glutamax (Gibco)。

在某些態樣中，培養基可包含以下中之一、二、三、四、五、六、七、八、九、十、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多者：維生素，諸如生物素；DL α生育酚乙酸酯；DL α-生育酚；維生素A (乙酸酯)；蛋白質，諸如BSA (牛血清白蛋白)或人類白蛋白、不含脂肪酸之溶離份V；過氧化氫酶；人類重組胰島素；人類轉鐵蛋白；超氧化物歧化酶；其他組分，諸如皮質酮；D-半乳糖；乙醇胺HCl；麩胱甘肽(還原)；L-肉鹼HCl；亞麻油酸；亞麻酸；黃體固酮；腐胺2HCl；亞硒酸鈉；及/或T3 (三碘-I-甲狀腺胺酸)。在特定態樣中，可明確排除此等中之一或多者。

在一些態樣中，培養基進一步包含維生素。在一些態樣中，該培養基包含以下中之1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或13者(且其中可推導之任何範圍)：生物素、DL α生育酚乙酸酯、DL α-生育酚、維生素A、氯化膽鹼、泛酸鈣、泛酸、葉酸菸鹼醯胺、吡哆醇、核黃素、硫胺素、肌醇、維生素B12，或該培養基包括其組合或其鹽。在一些態樣中，該培養基包含以下或基本上由以下組成：生物素、DL α生育酚乙酸酯、DL α-生育酚、維生素A、氯化膽鹼、泛酸鈣、泛酸、葉酸菸鹼醯胺、吡哆醇、核黃素、硫胺素、肌醇及維生素B12。在一些態樣中，該維生素包括以下或基本上由以下組成：生物素、DL α生育酚乙酸酯、DL α-生育酚、維生素A或其組合或鹽。在一些態樣中，該培養基進一步包含蛋白質。在一些態樣中，該等蛋白質包含白蛋白或牛血清白蛋白、BSA之溶離份、過氧化氫酶、胰島素、轉鐵蛋白、超氧化物歧化酶，或其組合。在一些態樣中，該培養基進一步包含以下中之一或多者：皮質酮、D-半乳糖、乙醇胺、麩胱甘肽、L-肉鹼、亞麻油酸、亞麻酸、黃體固酮、腐胺、亞硒酸鈉或三碘-I-甲狀腺胺酸，或其組合。在一些態樣中，該培養基包含以下中之一或多者：B-27®補充劑、無外源物質B-27®補充劑、GS21TM補充劑，或其組合。在一些態樣中，該培養基包含或進一步包含胺基酸、單醣、無機離子。在一些態樣中，該等胺基酸包含精胺酸、胱胺酸、異白胺酸、白胺酸、離胺酸、甲硫胺酸、麩醯胺酸、苯丙胺酸、蘇胺酸、色胺酸、組胺酸、酪胺酸或纈胺酸，或其組合。在一些態樣中，該等無機離子包含鈉、鉀、鈣、鎂、氮或磷，或其組合或鹽。在一些態樣中，該培養基進一步包含以下中之一或多者：鉬、釩、鐵、鋅、硒、銅或錳，或其組合。在某些態樣中，該培養基包含下文討論之一或多種維生素及/或下文討論之一或多種蛋白質，及/或以下中之一或多者或基本上由其組成：皮質酮、D-半乳糖、乙醇胺、麩胱甘肽、L-肉鹼、亞麻油酸、亞麻酸、黃體固酮、腐胺、亞硒酸鈉或三碘-I-甲狀腺胺酸、B-27®補充劑、無外源物質B-27®補充劑、GS21TM補充劑、胺基酸(諸如精胺酸、胱胺酸、異白胺酸、白胺酸、離胺酸、甲硫胺酸、麩醯胺酸、苯丙胺酸、蘇胺酸、色胺酸、組胺酸、酪胺酸或纈胺酸)、單醣、無機離子(諸如鈉、鉀、鈣、鎂、氮及/或磷)或其鹽，及/或鉬、釩、鐵、鋅、硒、銅或錳。在特定態樣中，可明確排除此等中之一或多者。

培養基亦可含有一或多種外部添加之脂肪酸或脂質、胺基酸(諸如非必需胺基酸)、維生素、生長因子、細胞介素、抗氧化物質、2-巰基乙醇、丙酮酸、緩衝劑及/或無機鹽。在特定態樣中，可明確排除此等中之一或多者。

培養基組分中之一或多者可以至少、至多或約0.1、0.5、1、2、3、4、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、150、180、200、250 ng/L、ng/ml、µg/ml、mg/ml，或其中可推導之任何範圍之濃度添加。

在特定態樣中，本發明之細胞係經特定調配。其等可或可不調配成細胞懸浮液。在特定情況下，其等係以單劑量形式調配。其等可經調配用於全身或局部投與。在一些情況下，該等細胞可經調配以用於使用前儲存，且該細胞調配物可包含一或多種冷凍保存劑，諸如DMSO (例如，於5% DMSO中)。該細胞調配物可包含白蛋白，包括人類白蛋白，及包含2.5%人類白蛋白之特定調配物。該等細胞可經特定調配用於靜脈內投與；例如，其等可經調配用於在小於一小時內靜脈內投與。在特定態樣中，該等細胞係呈經調配之細胞懸浮液，該懸浮液係自解凍時間在室溫下穩定1、2、3或4小時或以上。

在特定態樣中，本發明之細胞包含外源性TCR，其可具有指定抗原特異性。在一些態樣中，該TCR可基於對預期受體之同種異體反應性之缺乏或降低而選擇(實例包括某些病毒特異性TCR、外源物質特異性TCR或癌症睪丸抗原特異性TCR)。在外源性TCR係非同種異體反應性之實例中，在T細胞分化期間，該外源性TCR經由稱為對偶基因排除之發展過程抑制內源性TCR基因座之重排及/或表現，導致僅表現非同種異體反應性外源性TCR且因此為非同種異體反應性之T細胞。在一些態樣中，外源性TCR之選擇可未必基於同種異體反應性之缺乏確定。在一些態樣中，該等內源性TCR基因已藉由基因體編輯修飾，使得其等不表現蛋白質。此項技術中已知且本文描述基因編輯之方法(諸如使用CRISPR/Cas9系統之方法)。

在一些態樣中，本發明之細胞進一步包含一或多種嵌合抗原受體(CAR)。例如，可針對CAR之腫瘤細胞抗原之實例包括至少5T4、8H9、αvβ6整合素、BCMA、B7-H3、B7-H6、CAIX、CA9、CD19、CD20、CD22、CD30、CD33、CD38、CD44、CD44v6、CD44v7/8、CD70、CD123、CD138、CD171、CEA、CSPG4、EGFR、EGFR家族(包括ErbB2 (HER2)、EGFRvIII)、EGP2、EGP40、ERBB3、ERBB4、ErbB3/4、EPCAM、EphA2、EpCAM、葉酸受體-a、FAP、FBP、胎兒AchR、FRα、GD2、G250/CAIX、GD3、磷脂醯肌醇蛋白聚醣-3 (GPC3)、Her2、IL-13Rα2、λ、路易士-Y、κ、KDR、MAGE、MCSP、間皮素、Muc1、Muc16、NCAM、NKG2D配體、NY-ESO-1、PRAME、PSC1、PSCA、PSMA、ROR1、SP17、生存素、TAG72、TEMs、癌胚抗原、HMW-MAA、AFP、CA-125、ETA、酪胺酸酶、MAGE、層黏連蛋白受體、HPV E6、E7、BING-4、鈣活化氯離子通道2、細胞週期素-B1、9D7、EphA3、端粒酶、SAP-1、BAGE家族、CAGE家族、GAGE家族、MAGE家族、SAGE家族、XAGE家族、NY-ESO-1/LAGE-1、PAME、SSX-2、Melan-A/MART-1、GP100/pmel17、TRP-1/-2、胰多肽、MC1R、前列腺特異性抗原、β-連環蛋白、BRCA1/2、CML66、纖連蛋白、MART-2、TGF-βRII或VEGF受體(例如，VEGFR2)。該CAR可為第一代、第二代、第三代或更多代CAR。該CAR可對任何兩個不同抗原具有雙特異性，或其可對超過兩個不同抗原具有特異性。 IX. 治療組合物之投與

本文提供之療法可包含治療劑之組合(諸如第一癌症療法及第二癌症療法)之投與。該等療法可以此項技術中已知的任何合適之方式投與。例如，該第一及第二癌症治療可循序(在不同時間下)或同時(在相同時間下)投與。在一些態樣中，該等第一及第二癌症治療係以不同組合物投與。在一些態樣中，該等第一及第二癌症治療係以相同組合物投與。

本發明之態樣係關於組合物及包含治療組合物之方法。不同療法可以一種組合物或以多於一種組合物，諸如2種組合物、3種組合物或4種組合物投與。可採用藥劑之各種組合。

本發明之治療組合物可藉由相同之投與途徑或藉由不同之投與途徑投與。在一些態樣中，癌症療法係靜脈內、肌內、皮下、局部、經口、透皮、腹膜內、眶內、藉由移植、藉由吸入、鞘內、心室內或鼻內投與。在一些態樣中，抗生素係靜脈內、肌內、皮下、局部、經口、透皮、腹膜內、眶內、藉由移植、藉由吸入、鞘內、心室內或鼻內投與。適當之劑量可基於待治療之疾病之類型、疾病之嚴重程度及病程、個體之臨床病症、個體之臨床病史及對治療之反應，及主治醫師之自由裁量權確定。

治療可包括各種「單位劑量」。單位劑量定義為含有預定量之治療組合物。待投與之量，及特定途徑及調配物係於熟習臨床領域者之判斷能力內。單位劑量無需作為單次注射投與但可包含在一段時間內連續輸注。在一些態樣中，單位劑量包含單一可投與劑量。

治療組合物之精確量亦取決於執業醫師之判斷且因人而異。影響劑量之因素包括患者之身體及臨床狀態、投與途徑、預期治療目標(症狀之減輕相對於治癒)及特定治療物質之效價、穩定性及毒性或個體可經受之其他療法。

適合治療之癌症包括(但不限於)所有類型、位置、尺寸及特性之腫瘤。在一些態樣中，該癌症包含實體瘤。在一些態樣中，方法係關於減小腫瘤體積或治療復發性及/或轉移性癌症。本發明之方法及組合物適用於治療例如胰臟癌、結腸癌、急性骨髓性白血病、腎上腺皮質癌、AIDS相關癌症、AIDS相關淋巴瘤、肛門癌、闌尾癌、星形細胞瘤、兒童小腦或大腦基底細胞癌、膽管癌、肝外膀胱癌、骨癌、骨肉瘤/惡性纖維組織細胞瘤、腦乾膠質瘤、腦腫瘤、小腦星形細胞瘤腦腫瘤、大腦星形細胞瘤/惡性膠質瘤腦腫瘤、室管膜瘤腦腫瘤、髓母細胞瘤腦腫瘤，幕上原始神經外胚層腫瘤腦腫瘤、視覺通路及下丘腦膠質瘤、乳癌、淋巴癌、支氣管腺瘤/類癌、氣管癌、肺癌、伯基特淋巴瘤(Burkitt lymphoma)、類癌瘤、兒童類癌瘤、原發不明之胃腸道癌、中樞神經系統淋巴瘤、原發性小腦星形細胞瘤、兒童大腦星形細胞瘤/惡性膠質瘤、兒童宮頸癌、兒童癌症、慢性淋巴球性白血病、慢性骨髓性白血病、慢性骨髓增生性疾病、皮膚T細胞淋巴瘤、促纖維增生性小圓細胞瘤、子宮內膜癌、室管膜瘤、食道癌、尤因氏(Ewing)兒童性腺外生殖細胞腫瘤、肝外膽管癌、眼癌、眼內黑色素瘤眼癌、視網膜母細胞瘤、膽囊癌、胃部(胃)癌、胃腸道類癌瘤、胃腸道間質瘤(GIST)、生殖細胞瘤：顱外、性腺外或卵巢、妊娠滋養細胞腫瘤、腦乾膠質瘤、膠質瘤、兒童大腦星形細胞瘤、兒童視覺通路及下丘腦膠質瘤、胃類癌、毛細胞白血病、頭頸癌、心臟癌、肝細胞(肝)癌、霍奇金氏(Hodgkin)淋巴瘤、下嚥癌、下丘腦及視覺通路膠質瘤、兒童眼內黑色素瘤、胰島細胞癌(內分泌胰腺)、卡波西肉瘤、腎臓癌(腎細胞癌)、喉癌、白血病、急性淋巴母細胞性(亦稱為急性淋巴球性白血病)白血病、急性髓樣(亦稱為急性骨髓性白血病)白血病、慢性淋巴球性(亦稱為慢性淋巴球性白血病)白血病、慢性骨髓性(亦稱為慢性髓樣白血病)白血病、毛細胞唇癌及口腔癌、脂肪肉瘤、肝癌(原發性)、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、淋巴瘤、AIDS相關淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、皮膚T細胞淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、非霍奇金氏(除霍奇金氏外之所有淋巴瘤之舊類別)淋巴瘤、原發性中樞神經系統淋巴瘤、華氏(Waldenstrom)巨球蛋白血症、骨/骨肉瘤之惡性纖維組織細胞瘤、兒童髓母細胞瘤、黑色素瘤、眼內(眼)黑色素瘤、梅克爾(merkel)細胞癌、成人惡性間皮瘤、兒童間皮瘤、轉移性鱗狀頸癌、口腔癌(mouth cancer)、多發性內分泌腫瘤症候群、多發性骨髓瘤/漿細胞腫瘤、蕈樣肉芽腫、骨髓增生異常症候群、骨髓增生異常/骨髓增生性疾病、慢性骨髓性白血病、成人急性骨髓性白血病、兒童急性骨髓性白血病、多發性骨髓瘤、慢性骨髓增生性疾病、鼻腔及鼻竇癌、鼻咽癌、神經母細胞瘤、口腔癌(oral cancer)、口咽癌、骨肉瘤/惡性、骨纖維組織細胞瘤、卵巢癌、卵巢上皮癌(表面上皮間質瘤)、卵巢生殖細胞瘤、卵巢低惡性潛能腫瘤、胰臟癌、胰島細胞鼻竇癌及鼻腔癌、甲狀旁腺癌、陰莖癌、咽癌、嗜鉻細胞瘤、松果體星形細胞瘤、松果體生殖細胞瘤、松果體母細胞瘤及幕上原始神經外胚層腫瘤、兒童垂體腺瘤、漿細胞瘤變/多發性骨髓瘤、胸膜肺母細胞瘤、原發性中樞神經系統淋巴瘤、前列腺癌、直腸癌、腎細胞癌(腎臓癌)、腎盂輸尿管移行細胞癌、視網膜母細胞瘤、橫紋肌肉瘤、兒童唾液腺癌肉瘤、腫瘤之尤因氏家族、卡波西肉瘤、軟組織肉瘤、子宮塞澤裡(sezary)症候群肉瘤、皮膚癌(非黑色素瘤)、皮膚癌(黑色素瘤)、皮膚腫瘤、梅克爾細胞小細胞肺癌、小腸癌、軟組織肉瘤、鱗狀細胞癌、原發性隱匿性鱗狀頸癌、轉移性胃癌、幕上原始神經外胚層腫瘤、兒童T細胞淋巴瘤、睾丸癌、喉癌、胸腺瘤、兒童胸腺瘤、胸腺癌、甲狀腺癌、尿道癌、子宮癌、子宮內膜肉瘤、陰道癌、視覺通路及下丘腦膠質瘤、兒童外陰癌及腎母細胞瘤(腎臓癌)。 X. 套組

本發明之某些態樣亦涉及含有本發明之組合物或實施本發明之方法之組合物之套組。在一些態樣中，套組可用於評估一或多種生物標記物或HLA類型。在某些態樣中，套組含有、含有至少或含有至多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、100、500、1,000或更多種探針、引子或引子組、合成分子或抑制劑，或其中可推導之任何值或範圍及組合。

套組可包含可個別地包裝或放置於容器(諸如管子、瓶子、小瓶、注射器或其他合適之容器工具)中之組分。

個別組分亦可以濃縮量提供於套組中；在一些態樣中，組分可以與該組分與其他組分於溶液中之相同濃度個別地提供。組分之濃度可以1x、2x、5x、10x或20x或更多提供。

在某些態樣中，陰性及/或陽性對照核酸、探針及抑制劑包括於一些套組態樣中。另外，套組可包括一種係用於一或多種生物標記物之甲基化之陰性或陽性對照之樣本。

經考慮，本文描述之任何方法或組合物可關於本文描述之任何其他方法或組合物實施且可組合不同之實施例。經考慮，最初申請之技術方案涵蓋多重依賴於任何申請之技術方案或申請之技術方案之組合之技術方案。 XI. 實例

下列實例係出於闡述本發明之各種實施例之目的給定且無意以任何方式限制本發明。熟習此項技術者將容易知曉，本發明可很好地適用於實施目標並獲得本文提及之目的及優點，及本文固有之彼等目標、目的及優點。本發明實例連同本文描述之方法一起目前表示較佳實施例，其等為例示性的，且無意限制本發明之範圍。熟習此項技術者將想到其中之變化及包含於如由申請專利範圍之範圍定義之本發明之精神內之其他用途。實例1：TCR評估。

GTEx資料集顯示，MAGE-A4僅表現於睾丸組織中，而不表現於任何其他正常組織中(圖1)。MAGE-A4高度表現於數種實體癌(諸如肺癌、食道癌、頭頸癌、卵巢癌及黑色素瘤)中(圖2)。樹突細胞與來自健康供體之外周血單核細胞(PBMC)之T細胞共培養。在使用經MA4-230肽脈衝之DC刺激兩次後，在一個48孔盤之3個孔中觀測到小CD8+/四聚體+群體。使用四聚體引導之分選技術分別分選3個陽性孔，並以快速擴增方案(REP)使該等3個陽性孔經歷1或2輪擴增。最終產物之CD8及四聚體染色顯示於圖3中。

發現MAGE-A4 CTL細胞系裂解各種表現MAGE-A4之細胞，包括經各種濃度之MA4-230肽脈衝之T2細胞並以20:1之效應物與標靶(E:T)比率裂解(圖4A)，以各種E:T比率裂解表現MAGE-A4之肺癌細胞系H2023 (MAGE-A4+、HLA-A2+) (使用肺細胞系H522 (MAGE-A4-、HLA-A2+)作為陰性對照) (圖4B)，以各種E:T比率裂解強製表現HLA-A2之腫瘤細胞系H1299-A2 (MAGE-A4+、HLA-A2+) (使用親代細胞系H1299 (MAGE-A4+、HLA-A2-)作為陰性對照) (圖4C)，及腫瘤細胞系H1395 (MAGE-A4+、HLA-A2+)及H1355 (MAGE-A4-、HLA-A2+) (圖4D)。

將來自MA4-230 CTL系之TCR定序並選殖。使用逆轉錄病毒載體將來自MA4-230 H1 CTL系之全長TCR引入同種異體PBMC內。感染後，將CD8+四聚體+群體分選並擴增。在分選並擴增後，獲得高純度之TCR-T (圖5)。發現MA4-230 H1 TCR-T細胞裂解表現MAGE-A4之細胞(圖6)。該MA4-230 H1 TCR-T與經MA4-230肽/M26肽脈衝之T2，及腫瘤細胞系A375 (MAGE-A4+、HLA-A2+)、H522 (MAGE-A4-、HLA-A2+)、H1395 (MAGE-A4+、HLA-A2+)及H2023 (MAGE-A4+、HLA-A2+)以E:T=10:1比率共培養。使用經PMA加離子黴素處理之TCR-T作為陽性對照。使用僅DMSO媒介物處理作為陰性對照。在共培養過夜後，用ICS檢定偵測TCR途徑下游活化之標記物IFN-γ及CD137 (圖7A)，及CD69，及TNF-α (圖7B)。在與經MA4-230肽脈衝之T2、A375、H1395、H2023共培養後，相較於陰性對照，TCR-T之CD137、CD69、IFN-γ及TNF-α之含量顯著增強。

產生MA4-286 CTL細胞。圖8顯示自與健康供體之PBMC之樹突細胞-T細胞(DC-T)共培養系統之MAGE-A4特異性T細胞產物之代表性產生。在使用經MA4-286肽脈衝之DC刺激2次後，在一個48孔盤之兩個孔中觀測到小CD8+/四聚體+群體。使用四聚體引導之分選技術分別分選兩個陽性孔，並以快速擴增方案(REP)使該等兩個陽性孔經歷1或2輪擴增。顯示最終產物之CD8及四聚體染色。MAGE-A4 CTL細胞系以20:1之效應物與標靶(E:T)比率裂解經各種濃度之MA4-286肽脈衝之T2細胞(圖9A)、以各種E:T比率裂解表現MAGE-A4之肺癌細胞系H2023 (使用MAGE-A4+、HLA-A2+) (肺細胞系H522 (MAGE-A4-、HLA-A2+)作為陰性對照) (圖9B)，以各種E:T比率裂解表現MAGE-A4及強製表現HLA-A2之腫瘤細胞系H1299-A2 (MAGE-A4+、HLA-A2+) (使用親代細胞系H1299 (MAGE-A4+、HLA-A2-)作為陰性對照) (圖9C)，及腫瘤細胞系H1395 (MAGE-A4+、HLA-A2+)及H1355 (MAGE-A4-、HLA-A2+) (圖9D)。將TCR定序並選殖。使用逆轉錄病毒載體將來自MA4-286 F1 CTL系之全長TCR引入同種異體PBMC內。感染後，將CD8+四聚體+群體分選並擴增。在分選並擴增後，獲得高純度之TCR-T (圖10)。發現MA4-286 F1 TCR-T細胞裂解各種表現MAGE-A4之細胞(圖11)。該MA4-286 F1 TCR-T與經MA4-286肽/M26肽脈衝之T2、腫瘤細胞系A375 (MAGE-A4+、HLA-A2+)、H522 (MAGE-A4-、HLA-A2+)、H1395 (MAGE-A4+、HLA-A2+)、H2023 (MAGE-A4+、HLA-A2+)以E:T=10:1比率共培養。經PMA加離子黴素處理之TCR-T用作陽性對照。僅DMSO媒介物處理用作陰性對照。在共培養過夜後，用ICS檢定偵測TCR途徑下游活化之標記物CD137及IFN-γ (圖12A)；及CD69及TNF-α (圖12B)。在與經MA4-286肽脈衝之T2、A375、H1395、H2023共培養後，相較於陰性對照，TCR-T之CD137、CD69、IFN-γ及TNF-α之含量顯著增強。 * * *

鑒於本發明，可作出並執行本文揭示並主張之所有方法而無需過度實驗。儘管已鑒於較佳實施例描述本發明之組合物及方法，但熟習此項技術者應知曉，可將變化應用於本文描述之方法及本文描述之方法之步驟或步驟順序而不背離本發明之概念、精神及範圍。更具體言之，應知曉，某些化學及物理相關之藥劑可替代本文描述之藥劑，同時將達成相同或相似之結果。認為熟習此項技術者知曉之所有此等相似替代及修飾係於如由隨附申請專利範圍定義之本發明之精神、範圍及概念內。

下列圖式形成本說明書之部分且包括於其中以進一步證實本發明之某些態樣。藉由參考此等圖式中之一或多者與本文呈現之特定實施例之詳細描述之組合，可更好地瞭解本發明。

圖1：正常組織中之MAGE-A4表現。GTEx資料集顯示，MAGE-A4僅表現於睾丸組織中，而不表現於任何其他正常組織中。

圖2：腫瘤組織中之MAGE-A4表現。TCGA資料集顯示，MAGE-A4高度表現於數種實體癌(諸如肺癌、食道癌、頭頸癌、卵巢癌及黑色素瘤)中。

圖3：MA4-230 GVYDGREHTV (SEQ ID NO:35) CTL產生。自與健康供體之PBMC之樹突細胞-T細胞(DC-T)共培養系統之MAGE-A4特異性T細胞產物之代表性產生。在使用經MA4-230肽脈衝之DC刺激2次後，在一個48孔盤之3個孔中觀測到小CD8+/四聚體+群體。使用四聚體引導之分選技術分別分選3個陽性孔，並以快速擴增方案(REP)經歷1或2輪擴增。顯示最終產物之CD8及四聚體染色。

圖4A至D：MAGE-A4特異性T細胞之功能結合性。A：3個MAGE-A4 CTL細胞系以20:1之效應物與標靶(E:T)比率裂解經各種濃度之MA4-230肽脈衝之T2細胞。B：3個MAGE-A4 CTL細胞系以各種E:T比率裂解表現MAGE-A4之肺癌細胞系H2023 (MAGE-A4+、HLA-A2+)。使用另一肺細胞系H522 (MAGE-A4-、HLA-A2+)作為陰性對照。C：3個MAGE-A4 CTL細胞系以各種E:T比率裂解表現MAGE-A4及強製表現HLA-A2之腫瘤細胞系H1299-A2 (MAGE-A4+、HLA-A2+)。使用親代細胞系H1299 (MAGE-A4+、HLA-A2-)作為陰性對照。D：3個MAGE-A4 CTL細胞系裂解腫瘤細胞系H1395 (MAGE-A4+、HLA-A2+)及H1355 (MAGE-A4-、HLA-A2+)。

圖5：MA4-230 H1 TCR-T產生。使用逆轉錄病毒載體將來自MA4-230 H1 CTL系之全長TCR引入同種異體PBMC內。感染後，將CD8+四聚體+群體分選並擴增。在分選並擴增後，獲得高純度之TCR-T。

圖6A至E：MA4-230 H1 TCR-T之功能結合性。A：MA4-230 H1 TCR-T以20:1之效應物與標靶(E:T)比率裂解經各種濃度之MA4-230肽脈衝之T2細胞。B：MA4-230 H1 TCR-T裂解表現MAGE-A4之肺癌細胞系H2023 (MAGE-A4+、HLA-A2+)；使用另一肺癌細胞系H522 (MAGE-A4-、HLA-A2+)作為陰性對照。C：MA4-230 H1 TCR-T以各種E:T比率裂解表現MAGE-A4及強製表現HLA-A2之腫瘤細胞系H1299-A2 (MAGE-A4+、HLA-A2+)。使用親代細胞系H1299 (MAGE-A4+、HLA-A2-)作為陰性對照。D、E：MA4-230 H1 TCR-T以各種E:T比率裂解腫瘤細胞系A375 (MAGE-A4+、HLA-A2+)及H1395 (MAGE-A4+、HLA-A2+)。

圖7A至B：使用細胞內細胞介素染色(ICS)檢定之MA4-230 H1 TCR-T功能偵測。該MA4-230 H1 TCR-T與經MA4-230肽/M26肽脈衝之T2，及腫瘤細胞系A375 (MAGE-A4+、HLA-A2+)、H522 (MAGE-A4-、HLA-A2+)、H1395 (MAGE-A4+、HLA-A2+)及H2023 (MAGE-A4+、HLA-A2+)以E:T=10:1比率共培養。使用經PMA加離子黴素處理之TCR-T作為陽性對照。僅DMSO媒介物處理作為陰性對照。在共培養過夜後，用ICS檢定偵測TCR途徑下游活化之標記物，A：IFN-γ及CD137，及B：CD69及TNF-α。在與經MA4-230肽脈衝之T2、A375、H1395、H2023共培養後，相較於陰性對照，TCR-T之CD137、CD69、IFN-γ及TNF-α之含量顯著增強。

圖8：MA4-286 KVLEHVVRV (SEQ ID NO:36) CTL產生。自與健康供體之PBMC之樹突細胞-T細胞(DC-T)共培養系統之MAGE-A4特異性T細胞產物之代表性產生。在使用經MA4-286肽脈衝之DC刺激2次後，在一個48孔盤之2個孔中觀測到小CD8+/四聚體+群體。使用四聚體引導之分選技術分別分選2個陽性孔，並以快速擴增方案(REP)經歷1或2輪擴增。顯示最終產物之CD8及四聚體染色。

圖9A至D：MAGE-A4特異性T細胞之MA4-286 CTL/功能結合性之功能檢定。A：3個MAGE-A4 CTL細胞系以20:1之效應物與標靶(E:T)比率裂解經各種濃度之MA4-286肽脈衝之T2細胞。B：3個MAGE-A4 CTL細胞系以各種E:T比率裂解表現MAGE-A4之肺癌細胞系H2023 (MAGE-A4+、HLA-A2+)。使用另一肺細胞系H522 (MAGE-A4-、HLA-A2+)作為陰性對照。C：3個MAGE-A4 CTL細胞系以各種E:T比率裂解表現MAGE-A4及強製表現HLA-A2之腫瘤細胞系H1299-A2 (MAGE-A4+、HLA-A2+)。使用親代細胞系H1299 (MAGE-A4+、HLA-A2-)作為陰性對照。D：3個MAGE-A4 CTL細胞系裂解腫瘤細胞系H1395 (MAGE-A4+、HLA-A2+)及H1355 (MAGE-A4-、HLA-A2+)。

圖10：MA4-286 F1 TCR-T產生。使用逆轉錄病毒載體將來自MA4-286 F1 CTL系之全長TCR引入同種異體PBMC內。感染後，將CD8+四聚體+群體分選並擴增。在分選並擴增後，獲得高純度之TCR-T。

圖11A至F： MA4-286 F1 TCR-T功能檢定/MA4-286 F1 TCR-T之功能結合性。A：MA4-286 F1 TCR-T以20:1之效應物與標靶(E:T)比率裂解經各種濃度之MA4-286肽脈衝之T2細胞。B：MA4-286 F1 TCR-T裂解表現MAGE-A4之肺癌細胞系H2023 (MAGE-A4+、HLA-A2+)；使用另一肺癌細胞系H522 (MAGE-A4-、HLA-A2+)作為陰性對照。C：MA4-286 F1 TCR-T以各種E:T比率裂解表現MAGE-A4及強製表現HLA-A2之腫瘤細胞系H1299-A2 (MAGE-A4+、HLA-A2+)。使用親代細胞系H1299 (MAGE-A4+、HLA-A2-)作為陰性對照。D、E、F：MA4-286 F1 TCR-T以各種E:T比率裂解更多腫瘤細胞系：A375 (MAGE-A4+、HLA-A2+)、H1395 (MAGE-A4+、HLA-A2+)及H1755 (MAGE-A4+、HLA-A2+)。

圖12A至B：使用細胞內細胞介素染色(ICS)檢定之MA4-286 F1 TCR-T之功能偵測。該MA4-286 F1 TCR-T與經MA4-286肽/M26肽脈衝之T2、腫瘤細胞系A375 (MAGE-A4+、HLA-A2+)、H522 (MAGE-A4-、HLA-A2+)、H1395 (MAGE-A4+、HLA-A2+)、H2023 (MAGE-A4+、HLA-A2+)以E:T=10:1比率共培養。經PMA加離子黴素處理之TCR-T作為陽性對照。僅DMSO媒介物處理作為陰性對照。在共培養過夜後，用ICS檢定偵測TCR途徑下游活化之標記物，A：CD137及IFN-γ；及B：CD69及TNF-α。在與經MA4-286肽脈衝之T2、A375、H1395、H2023共培養後，相較於陰性對照，TCR-T之CD137、CD69、IFN-γ及TNF-α之含量顯著增強。

Claims

一種多肽，其包含TCR α (TCR-a)可變區，該可變區包含含有與LVVEGNRDDKII (SEQ ID NO:9)具有至少80%序列一致性之胺基酸序列之CDR3。
如請求項1之多肽，其中該CDR3包含SEQ ID NO:9之胺基酸序列。
如請求項1或2之多肽，其中該TCR-a可變區包含CDR1、CDR2及CDR3。
如請求項3之多肽，其中該TCR-a可變區包含與NIATNDY (SEQ ID NO:7)具有至少80%序列一致性之CDR1。
如請求項3或4之多肽，其中該TCR-a可變區包含與GYKTK (SEQ ID NO:8)具有至少80%序列一致性之CDR2。
如請求項4或5之多肽，其中該TCR-a可變區包含含有SEQ ID NO:7之胺基酸序列之CDR1及/或含有SEQ ID NO:8之胺基酸序列之CDR2。
如請求項1至6中任一項之多肽，其中該TCR-a可變區包含與SEQ ID NO:5具有至少70%序列一致性之胺基酸序列。
如請求項7之多肽，其中該TCR-a可變區包含SEQ ID NO:5之胺基酸序列。
一種多肽，其包含TCR β (TCR-b)可變區，該可變區包含含有與ASPPTPSSYNEQF (SEQ ID NO:16)具有至少80%序列一致性之胺基酸序列之CDR3。
如請求項9之多肽，其中該CDR3包含SEQ ID NO:16之胺基酸序列。
如請求項9或10之多肽，其中該TCR-b可變區包含CDR1、CDR2及CDR3。
如請求項11之多肽，其中該TCR-b可變區包含與MNHEY (SEQ ID NO:14)具有至少80%序列一致性之CDR1。
如請求項11或12之多肽，其中該TCR-b可變區包含與SVGEGT (SEQ ID NO:15)具有至少80%序列一致性之CDR2。
如請求項12或13之多肽，其中該TCR-b可變區包含含有SEQ ID NO:14之胺基酸序列之CDR1及/或含有SEQ ID NO:15之胺基酸序列之CDR2。
如請求項9至14中任一項之多肽，其中該TCR-b可變區包含與SEQ ID NO:12具有至少70%序列一致性之胺基酸序列。
如請求項15之多肽，其中該TCR-b可變區包含SEQ ID NO:12之胺基酸序列。
一種多肽，其包含TCR-a可變區，該可變區包含含有與AVGS MDSNYQLI (SEQ ID NO:25)具有至少80%序列一致性之胺基酸序列之CDR3。
如請求項17之多肽，其中該CDR3包含SEQ ID NO:25之胺基酸序列。
如請求項17或18之多肽，其中該TCR-a可變區包含CDR1、CDR2及CDR3。
如請求項19之多肽，其中該TCR-a可變區包含與TTLSN (SEQ ID NO:23)具有至少80%序列一致性之CDR1。
如請求項19或20之多肽，其中該TCR-a可變區包含與LVKSGEV (SEQ ID NO:24)具有至少80%序列一致性之CDR2。
如請求項20或21之多肽，其中該TCR-a可變區包含含有SEQ ID NO:23之胺基酸序列之CDR1及/或含有SEQ ID NO:24之胺基酸序列之CDR2。
如請求項17至22中任一項之多肽，其中該TCR-a可變區包含與SEQ ID NO:21具有至少70%序列一致性之胺基酸序列。
如請求項23之多肽，其中該TCR-a可變區包含SEQ ID NO:21之胺基酸序列。
一種多肽，其包含TCR-b可變區，該可變區包含含有與ASSQE RTWPYNEQF (SEQ ID NO:30)具有至少80%序列一致性之胺基酸序列之CDR3。
如請求項25之多肽，其中該CDR3包含SEQ ID NO:30之胺基酸序列。
如請求項25或26之多肽，其中該TCR-b可變區包含CDR1、CDR2及CDR3。
如請求項27之多肽，其中該TCR-b可變區包含與MNHEY (SEQ ID NO:14)具有至少80%序列一致性之CDR1。
如請求項27或28之多肽，其中該TCR-b可變區包含與SVGEGT (SEQ ID NO:15)具有至少80%序列一致性之CDR2。
如請求項28或29之多肽，其中該TCR-b可變區包含含有SEQ ID NO:14之胺基酸序列之CDR1及/或含有SEQ ID NO:15之胺基酸序列之CDR2。
如請求項25至30中任一項之多肽，其中該TCR-b可變區包含與SEQ ID NO:28具有至少70%序列一致性之胺基酸序列。
如請求項31之多肽，其中該TCR-a可變區包含SEQ ID NO:28之胺基酸序列。
一種核酸，其編碼如請求項1至32中任一項之多肽。
一種經工程化之T細胞受體(TCR)，其包含TCR-a多肽及TCR-b多肽，其中該TCR-a多肽包含含有與LVVEGNRDDKII (SEQ ID NO:9)具有至少80%序列一致性之胺基酸序列之CDR3及該TCR-b多肽包含含有與ASPPTPSSYNEQF (SEQ ID NO:16)具有至少80%序列一致性之胺基酸序列之CDR3。
如請求項34之TCR，其中該TCR-a多肽包含含有SEQ ID NO:9之胺基酸序列之CDR3及該TCR-b多肽包含含有SEQ ID NO:16之胺基酸序列之CDR3。
如請求項34或35之TCR，其中該TCR包括包含含有CDR1、CDR2及CDR3之可變區之TCR-a多肽及包含含有CDR1、CDR2及CDR3之可變區之TCR-b多肽。
如請求項36之TCR，其中該TCR-a多肽包含與SEQ ID NO:7具有至少80%序列一致性之CDR1及/或該TCR-b多肽包含與SEQ ID NO:14具有至少80%序列一致性之CDR1。
如請求項37之TCR，其中該TCR-a多肽包含含有SEQ ID NO:7之胺基酸序列之CDR1及該TCR-b多肽包含含有SEQ ID NO:14之胺基酸序列之CDR1。
如請求項36至38中任一項之TCR，其中該TCR-a多肽包含與SEQ ID NO:8具有至少80%序列一致性之CDR2及該TCR-b多肽包含與SEQ ID NO:15具有至少80%序列一致性之CDR2。
如請求項39之TCR，其中該TCR-a多肽包含含有SEQ ID NO:8之胺基酸序列之CDR2及該TCR-b多肽包含含有SEQ ID NO:15之胺基酸序列之CDR2。
如請求項36至40中任一項之TCR，其中該TCR-a多肽之CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 7、8及9之胺基酸序列，且其中該TCR-b多肽之CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO:14、15及16之胺基酸序列。
如請求項36至41中任一項之TCR，其中該TCR-a可變區包含與SEQ ID NO:5具有至少70%序列一致性之胺基酸序列及該TCR-b可變區包含與SEQ ID NO:12具有至少70%序列一致性之胺基酸序列。
如請求項42之TCR，其中該TCR-a多肽包含與SEQ ID NO:3具有至少70%序列一致性之胺基酸序列及該TCR-b多肽包含與SEQ ID NO:10具有至少70%序列一致性之胺基酸序列。
一種經工程化之T細胞受體(TCR)，其包含TCR-a多肽及TCR-b多肽，其中該TCR-a多肽包含含有與AVGSMDSNYQLI (SEQ ID NO:25)具有至少80%序列一致性之胺基酸序列之CDR3及該TCR-b多肽包含含有與ASSQERTWPYNEQF (SEQ ID NO:30)具有至少80%序列一致性之胺基酸序列之CDR3。
如請求項44之TCR，其中該TCR-a多肽包含含有SEQ ID NO:25之胺基酸序列之CDR3及該TCR-b多肽包含含有SEQ ID NO:30之胺基酸序列之CDR3。
如請求項44或45之TCR，其中該TCR包括包含含有CDR1、CDR2及CDR3之可變區之TCR-a多肽及包含含有CDR1、CDR2及CDR3之可變區之TCR-b多肽。
如請求項46之TCR，其中該TCR-a多肽包含與SEQ ID NO:23具有至少80%序列一致性之CDR1及/或該TCR-b多肽包含與SEQ ID NO:14具有至少80%序列一致性之CDR1。
如請求項47之TCR，其中該TCR-a多肽包含含有SEQ ID NO:23之胺基酸序列之CDR1及該TCR-b多肽包含含有SEQ ID NO:14之胺基酸序列之CDR1。
如請求項46至48中任一項之TCR，其中該TCR-a多肽包含與SEQ ID NO:24具有至少80%序列一致性之CDR2及該TCR-b多肽包含與SEQ ID NO:15具有至少80%序列一致性之CDR2。
如請求項49之TCR，其中該TCR-a多肽包含含有SEQ ID NO:24之胺基酸序列之CDR2及該TCR-b多肽包含含有SEQ ID NO:15之胺基酸序列之CDR2。
如請求項46至50中任一項之TCR，其中該TCR-a多肽之CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 23、24及25之胺基酸序列，且其中該TCR-b多肽之CDR1、CDR3及CDR3分別包含SEQ ID NO:14、15及30之胺基酸序列。
如請求項46至51中任一項之TCR，其中該TCR-a可變區包含與SEQ ID NO:21具有至少70%序列一致性之胺基酸序列及該TCR-b可變區包含與SEQ ID NO:28具有至少70%序列一致性之胺基酸序列。
如請求項52之TCR，其中該TCR-a多肽包含與SEQ ID NO:19具有至少70%序列一致性之胺基酸序列及該TCR-b多肽包含與SEQ ID NO:26具有至少70%序列一致性之胺基酸序列。
如請求項34至53中任一項之TCR，其中該TCR包含修飾或係嵌合的。
如請求項34至54中任一項之TCR，其中該TCR-a多肽及TCR-b多肽係以可操作方式連接。
如請求項55之TCR，其中該TCR-a多肽及TCR-b多肽係經由肽鍵以可操作方式連接。
如請求項56之TCR，其中該TCR-a多肽及TCR-b多肽係在相同多肽上且其中該TCR-b係在該TCR-a之胺基近端。
如請求項56之TCR，其中該TCR-a多肽及TCR-b多肽係在相同多肽上且其中該TCR-a係在該TCR-b之胺基近端。
如請求項34至58中任一項之TCR，其中該TCR係單鏈TCR。
一種融合蛋白，其包含如請求項34至57中任一項之TCR及CD3結合區。
如請求項60之融合蛋白，其中該CD3結合區包含CD3特異性抗原結合片段(Fab)、單鏈可變片段(scFv)、單域抗體或單鏈抗體。
如請求項34至59中任一項之TCR或如請求項60或61之融合蛋白，其中該TCR或融合蛋白係結合至偵測劑或治療劑。
如請求項62之TCR或融合蛋白，其中該製劑包含螢光分子、輻射分子或毒素。
一種核酸，其編碼包含含有與LVVEGNRDDKII (SEQ ID NO:9)具有至少80%序列一致性之胺基酸序列之CDR3之TCR-a多肽及包含含有與ASPPTPSSYNEQF (SEQ ID NO:16)具有至少80%序列一致性之胺基酸序列之CDR3之TCR-b多肽。
如請求項64之核酸，其中該核酸編碼包含CDR1、CDR2及CDR3之TCR-a多肽及/或包含CDR1、CDR2及CDR3之TCR-b多肽。
如請求項65之核酸，其中該核酸編碼包含與SEQ ID NO:7具有至少80%序列一致性之CDR1之TCR-a及/或包含與SEQ ID NO:14具有至少80%序列一致性之CDR1之TCR-b。
如請求項65或66之核酸，其中該核酸編碼包含與SEQ ID NO:8具有至少80%序列一致性之CDR2之TCR-a及包含與SEQ ID NO:15具有至少80%序列一致性之CDR2之TCR-b。
如請求項64至67中任一項之核酸，其中該核酸編碼包含與SEQ ID NO:5具有至少70%序列一致性之胺基酸序列之TCR-a可變區及/或包含與SEQ ID NO:12具有至少70%序列一致性之胺基酸序列之TCR-b可變區。
如請求項68之核酸，其中該核酸編碼包含與SEQ ID NO:3具有至少70%序列一致性之胺基酸序列之TCR-a多肽鏈及/或包含與SEQ ID NO:10具有至少70%序列一致性之胺基酸序列之TCR-b鏈。
如請求項69之核酸，其中該核酸包含SEQ ID NO:1及/或SEQ ID NO:2。
一種核酸，其編碼包含含有與AVGSMDSNYQLI (SEQ ID NO:25)具有至少80%序列一致性之胺基酸序列之CDR3之TCR-a多肽及包含含有與ASSQERTWPYNEQF (SEQ ID NO:30)具有至少80%序列一致性之胺基酸序列之CDR3之TCR-b多肽。
如請求項71之核酸，其中該核酸編碼包含CDR1、CDR2及CDR3之TCR-a多肽及/或包含CDR1、CDR2及CDR3之TCR-b多肽。
如請求項72之核酸，其中該核酸編碼包含與SEQ ID NO:23具有至少80%序列一致性之CDR1之TCR-a及/或包含與SEQ ID NO:14具有至少80%序列一致性之CDR1之TCR-b。
如請求項72或73之核酸，其中該核酸編碼包含與SEQ ID NO:24具有至少80%序列一致性之CDR2之TCR-a及包含與SEQ ID NO:15具有至少80%序列一致性之CDR2之TCR-b。
如請求項71至74中任一項之核酸，其中該核酸編碼包含與SEQ ID NO:21具有至少70%序列一致性之胺基酸序列之TCR-a可變區及/或與SEQ ID NO:28具有至少70%序列一致性之胺基酸序列之TCR-b可變區。
如請求項75之核酸，其中該核酸編碼包含與SEQ ID NO:19具有至少70%序列一致性之胺基酸序列之TCR-a多肽鏈及/或包含與SEQ ID NO:26具有至少70%序列一致性之胺基酸序列之TCR-b鏈。
如請求項76之核酸，其中該核酸包含SEQ ID NO:17及/或SEQ ID NO:18。
如請求項64至77中任一項之核酸，其中該核酸包含TCR-a (TRA)及TCR-b (TRB)基因。
如請求項64至78中任一項之核酸，其中該核酸係多順反子的。
如請求項79之核酸，其中該核酸包含內部核醣體進入位點(IRES)或P2A連接子。
如請求項64至80中任一項之核酸，其中該核酸包含編碼該等TCR-a及/或TCR-b基因之cDNA。
如請求項64至81中任一項之核酸，其中該核酸進一步編碼包含CD3結合區之多肽。
如請求項82之核酸，其中該CD3結合區包含CD3特異性抗原結合片段(Fab)、單鏈可變片段(scFv)、單域抗體或單鏈抗體。
一種核酸載體，其包含如請求項33或64至83中任一項之核酸。
如請求項84之載體，其中該載體包含引導該核酸表現之啟動子。
如請求項85之載體，其中該啟動子包含鼠科幹細胞病毒(MSCV)啟動子。
如請求項84至86中任一項之載體，其中該載體包含該等TCR-a及TCR-b基因。
一種細胞，其包含如請求項1至32中任一項之多肽、如請求項34至59、62或63中任一項之TCR、如請求項60至63中任一項之融合蛋白、如請求項33或64至83中任一項之核酸、或如請求項84至87中任一項之載體。
如請求項88之細胞，其中該細胞包含幹細胞、先驅細胞(progenitor cell)、免疫細胞或自然殺手(NK)細胞。
如請求項89之細胞，其中該細胞包含造血幹細胞或先驅細胞、T細胞、自間葉系幹細胞(MSC)分化之細胞、或誘導性多潛能幹細胞(iPSC)。
如請求項89或90之細胞，其中該細胞係自外周血單核細胞(PBMC)分離或衍生。
如請求項90或91之細胞，其中該T細胞包含細胞毒性T淋巴球(CTL)、CD8⁺ T細胞、CD4⁺ T細胞、不變(invariant) NK T (iNKT)細胞、γ-δ T細胞、NKT細胞，或調節T細胞。
如請求項88至92中任一項之細胞，其中該細胞係分離自癌症患者。
一種組合物，其包含如請求項1至32中任一項之多肽、如請求項34至59、62或63中任一項之TCR、如請求項60至63中任一項之融合蛋白、如請求項33或64至83中任一項之核酸、如請求項84至87中任一項之載體、或如請求項88至93中任一項之細胞。
如請求項94之組合物，其中已確定該組合物無血清、無黴漿菌、無內毒素及/或無菌。
一種製造經工程化之細胞之方法，其包括將如請求項33或64至83中任一項之核酸或如請求項84至87中任一項之載體轉移至細胞內。
如請求項96之方法，其中該方法進一步包括在培養基中培養該細胞，在容許細胞分裂之條件下培養該細胞，篩選該細胞，及/或冷凍該細胞。
一種治療個體之癌症之方法，其包括對有需要個體投與如請求項94或95之組合物或如請求項88至93中任一項之細胞。
如請求項98之方法，其中該個體先前已針對癌症治療。
如請求項99之方法，其中已確定該個體對先前治療具有抗性。
如請求項98至100中任一項之方法，其中該方法進一步包括投與另外療法。
如請求項98至101中任一項之方法，其中該癌症包含第I、II、III或IV階段癌症。
如請求項98至102中任一項之方法，其中該癌症包含轉移性及/或復發性黑色素瘤。
如請求項98至103中任一項之方法，其中該癌症包含肺癌、食道癌、頭頸癌、卵巢癌或黑色素瘤。
如請求項98至104中任一項之方法，其中該癌症包含肺癌。
如請求項98至105中任一項之方法，其中該個體係及/或已確定係HLA-A2陽性。
如請求項106之方法，其中該個體係及/或已確定係HLA-A0201陽性。