TW202132341A - 以hla-a2/wt1 x cd3雙特異性抗體及來那度胺(lenalidomide)治療癌症 - Google Patents
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Abstract
本發明係關於治療癌症,特定言之係關於使用HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體及來那度胺(lenalidomide)治療癌症。
Description
本發明係關於治療癌症,特定言之係關於使用HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體及來那度胺(lenalidomide)治療癌症。
T細胞活化之雙特異性抗體係新穎類別之癌症治療劑,其經設計以結合細胞毒性T細胞抵抗腫瘤細胞。此抗體對T細胞上之CD3及對表現於腫瘤細胞上之抗原之同時結合將迫使腫瘤細胞與T細胞之間暫時相互作用,引起該T細胞之活化及該腫瘤細胞之後續裂解。
WT1 (威爾姆斯瘤1 (Wilms tumor 1),威爾姆斯瘤蛋白)係涉及細胞增生、分化及凋亡及器官發育之致癌轉錄因子,其於正常成人組織中之表現係罕見的(Hinrichs及Restifo, Nat Biotechnol (2013) 31, 999-1008)。然而,據報導WT1在數種類型之血液學惡性腫瘤及廣泛範圍之實性瘤中過表現(Van Driessche等人,Oncologist (2012) 17, 250-259)。WT1係核蛋白,位於細胞內。細胞內蛋白可在蛋白酶體中降解,於細胞表面上由主要之組織相容性複合物(MHC) I作為T細胞抗原決定基處理並呈現,及由T細胞受體(TCR)識別。因此,WT1衍生之肽係在HLA-A2之背景下呈現於細胞表面上且可觸發T細胞識別。
靶向HLA-A2/WT1之T細胞活化之雙特異性抗體已描述於WO 2019/122052中。此等T細胞活化之雙特異性抗體可(例如)用於治療急性骨髓性白血病(AML)。
為最大化靶向HLA-A2/WT1之T細胞活化之抗體(例如)於AML中之治療益處,因此將需識別涉及此等T細胞活化之抗體及其他治療劑之組合治療。
發明人已發現相較於單獨靶向HLA-A2/WT1之T細胞活化之雙特異性抗體,靶向HLA-A2/WT1之T細胞活化之雙特異性抗體與來那度胺之組合導致在AML中之活性增強。
使用原發性AML細胞,發明人已意外發現由HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體誘導之腫瘤細胞裂解係藉由添加來那度胺增強。
因此,在第一態樣中,本發明提供HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體用於治療個體之癌症,其中該治療包括投與該HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體與來那度胺之組合。
在另一態樣中,本發明提供使用HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體製造用於治療個體之癌症之藥劑,其中該治療包括投與該HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體與來那度胺之組合。
在又另一態樣中,本發明提供用於治療個體之癌症之方法,其包括向該個體投與HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體及來那度胺。
在一項態樣中,本發明亦提供包含含有HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體之第一藥劑及含有來那度胺之第二藥劑,及視需要進一步包含含有用於投與該第一藥劑與該第二藥劑之組合以治療個體之癌症之說明書之包裝插頁之套組。
上文及本文描述之HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體、方法、用途或套組可併入(單獨或組合)下文中描述之特徵中之任何一者(除非內文另有明確規定)。
本文之HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體係特異性結合至CD3及HLA-A2/WT1 (尤其HLA-A2/WT1RMF
)之雙特異性抗體。尤其有用之HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體係描述(例如)於PCT公開案第WO 2019/122052號中(以全文引用之方式併入本文中)。
術語「雙特異性」意謂抗體可特異性結合至至少兩個不同之抗原性抗原決定位。通常,雙特異性抗體包含兩個抗原結合位點,其等中之各者係對不同之抗原性抗原決定位具特異性。在某些態樣中,該雙特異性抗體可同時結合兩個抗原性抗原決定位,尤其表現於兩個不同細胞上之兩個抗原性抗原決定位。
如本文使用,術語「抗原性抗原決定位」係與「抗原」及「抗原決定基」同義,及係指抗原結合部分結合形成抗原結合部分-抗原複合物之多肽大分子上之位點(例如連續之胺基酸段或由非連續胺基酸之不同區域組成之構象構型)。有用之抗原性抗原決定位可(例如)在腫瘤細胞之表面上、在病毒感染之細胞之表面上、在其他患病細胞之表面上、在免疫細胞之表面上,在無血清及/或細胞外基質(ECM)之情況下找到。
如本文使用,術語「抗原結合部分」係指特異性結合至抗原性抗原決定位之多肽分子。在一項態樣中,抗原結合部分可將其結合之實體(例如第二抗原結合部分)引導至靶位點,例如引導至攜載抗原性抗原決定位之特定類型之腫瘤細胞。在另一態樣中,抗原結合部分可通過其靶抗原(例如T細胞受體複合物抗原)活化傳訊。抗原結合部分包括如本文進一步定義之抗體及其片段。特定之抗原結合部分包括抗體之抗原結合域,其包含抗體重鏈可變區及抗體輕鏈可變區。在某些態樣中,該等抗原結合部分可包含如本文進一步定義及此項技術中已知的抗體恆定區。有用之重鏈恆定區包括五種同型中之任何一者:α、δ、ε、γ或μ。有用之輕鏈恆定區包括兩種同型中之任何一者:κ及λ。
「特異性結合」意謂該結合對抗原具有選擇性且可區別於非所需或非特異性相互作用。抗原結合部分結合至特異性抗原性抗原決定位之能力可通過酶聯免疫吸附測定(ELISA)或熟習此項技術者熟悉的其他技術,例如表面電漿子共振(SPR)技術(例如在BIAcore儀器上分析) (Liljeblad等人,Glyco J 17, 323-329 (2000))及傳統結合分析(Heeley, Endocr Res 28, 217-229 (2002))量測。在一項態樣中,如(例如)藉由SPR量測,抗原結合部分對無關蛋白質之結合程度係小於該抗原結合部分對抗原之結合之約10%。在某些態樣中,結合至該抗原之抗原結合部分或包含該抗原結合部分之抗體具有≤ 1 μM、≤ 100 nM、≤ 10 nM、≤ 1 nM、≤ 0.1 nM、≤ 0.01 nM或≤ 0.001 nM (例如10-8
M或更小,例如10-8
M至10-13
M,例如10-9
M至10-13
M)之離解常數(KD
)。
「親和力」係指分子(例如,受體)與其結合配偶體(例如,配體)之單一結合位點間之非共價相互作用之總和的強度。除非另有指示,否則如本文使用,「結合親和力」係指固有之結合親和力,其反映結合對之成員(例如,抗原結合部分及抗原或受體及其配體)間之1:1相互作用。分子X對其配偶體Y之親和力可一般由離解常數(KD
)表示,KD
係解離及結合速率常數(分別為koff
及kon
)之比率。因此,只要速率常數之比率保持相同,等效親和力即可包含不同之速率常數。親和力可藉由此項技術中已知的完全建立之方法量測,該等方法包括彼等本文描述者。用於量測親和力之特定方法係表面電漿子共振(SPR)。
除非另有指示,否則「CD3」係指來自任何脊椎動物來源,包括哺乳動物諸如靈長類動物(例如人類)、非人類靈長類動物(例如食蟹猴)及嚙齒動物(例如小鼠及大鼠)之任何天然CD3。該術語包含「全長」、未處理之CD3及由在細胞中處理產生之CD3之任何形式。該術語亦包含CD3之天然生成之變體,例如,剪接變體或對偶基因變體。在一項態樣中,CD3係人類CD3,尤其人類CD3之ε次單元(CD3ε)。人類CD3ε之胺基酸序列係顯示於UniProt (www.uniprot.org)登記號P07766 (version 144)或NCBI (www.ncbi.nlm.nih.gov/) RefSeq NP_000724.1中。亦參見SEQ ID NO: 27。食蟹猴[食蟹獼猴] CD3ε之胺基酸序列係顯示於NCBI基因庫編號BAB71849.1中。亦參見SEQ ID NO: 28。
除非另有指示,否則「WT1」 (亦稱為「威爾姆斯瘤1」或「威爾姆斯瘤蛋白」)係指來自任何脊椎動物來源,包括哺乳動物諸如靈長類動物(例如人類)、非人類靈長類動物(例如食蟹猴)及嚙齒類動物(例如小鼠及大鼠)之任何天然WT1。該術語包含「全長」、未處理之WT1及由在細胞中處理產生之WT1之任何形式。該術語亦包含WT1之天然生成之變體,例如,剪接變體或對偶基因變體。在一項態樣中,WT1係人類WT1,尤其SEQ ID NO: 23之蛋白質。人類WT1係描述於UniProt (www.uniprot.org)登記號P19544 (入門版215)中,及人類WT1之胺基酸序列亦顯示於SEQ ID NO: 23中。
「VLD」、「VLD肽」或「WT1VLD
」意謂WT1衍生之具有胺基酸序列VLDFAPPGA (SEQ ID NO: 24;SEQ ID NO: 23之WT1蛋白之位置37至45)之肽。
「RMF」、「RMF肽」或「WT1RMF
」意謂WT1衍生之具有胺基酸序列RMFRNAPYL (SEQ ID NO: 25;SEQ ID NO: 23之WT1蛋白之位置126至134)之肽。
「HLA-A2」、「HLA-A*02」、「HLA-A02」或「HLA-A*2」 (可互換使用)係指HLA-A血清型組中之人類白血球抗原血清型。HLA-A2蛋白(由個別HLA基因編碼)構成個別I類MHC (主要之組織相容性複合物)蛋白之α鏈,其進一步包含β2微球蛋白次單元。特異性HLA-A2蛋白係HLA-A201 (亦稱為HLA-A0201、HLA-A02.01或HLA-A*02:01)。在特定態樣中,本文描述之HLA-A2蛋白係HLA-A201。人類HLA-A2之例示性序列係在SEQ ID NO: 26中給定。
「HLA-A2/WT1」係指HLA-A2分子及WT1衍生之肽(本文中亦稱為「WT1肽」)之複合物,具體言之RMF或VLD肽(分別為「HLA-A2/WT1RMF
」及「HLA-A2/WT1VLD
」)。具體言之,本發明中使用之雙特異性抗體可結合至HLA-A2/WT1RMF
或HLA-A2/WT1VLD
複合物。
如本文使用,當各類型之部分存在多於一者時,關於Fab分子等之術語「第一」、「第二」或「第三」係為方便區別使用。除非明確如此規定,否則使用此等術語無意賦予雙特異性抗體特定順序或方向。
如本文使用之術語「化合價」表示抗體中存在規定數量之抗原結合位點。因此,術語「單價結合至抗原」表示抗體中存在對抗原具特異性之一個(及不多於一個)抗原結合位點。
本文之術語「抗體」係在廣義上使用且包含各種抗體結構,包括(但不限於)單株抗體、多株抗體、多特異性抗體(例如雙特異性抗體),及抗體片段,只要其等顯示所需抗原結合活性。
術語「全長抗體」、「完整抗體」及「全抗體」在本文中可互換使用以係指具有與天然抗體結構大體上相似之結構之抗體。
「抗體片段」係指除完整抗體外之包含完整抗體之一部分之分子,該部分結合該完整抗體結合之抗原。抗體片段之實例包括(但不限於) Fv、Fab、Fab'、Fab’-SH、F(ab')2
、雙功能抗體、線性抗體、單鏈抗體分子(例如scFv)及單域抗體。為回顧某些抗體片段,參見Hudson等人,Nat Med 9, 129-134 (2003)。為回顧scFv片段,參見例如Plückthun,於The Pharmacology of Monoclonal Antibodies,第113卷,Rosenburg及Moore編,Springer-Verlag, New York,第269至315頁(1994)中;亦參見WO 93/16185;及美國專利第5,571,894及5,587,458號。為討論包含挽救受體結合抗原決定基殘基且具有增加之活體內半衰期之Fab及F(ab')2
片段,參見美國專利第5,869,046號。雙功能抗體係具有兩個可為二價或雙特異性之抗原結合位點之抗體片段。參見,例如,EP 404,097;WO 1993/01161;Hudson等人,Nat Med 9, 129-134 (2003);及Hollinger等人,Proc Natl Acad Sci USA 90, 6444-6448 (1993)。三功能抗體及四功能抗體亦描述於Hudson等人,Nat Med 9, 129-134 (2003)中。單域抗體係包含抗體之重鏈可變域之所有或一部分或抗體之輕鏈可變域之所有或一部分之抗體片段。在某些態樣中,單域抗體係人類單域抗體(Domantis, Inc., Waltham, MA;參見例如美國專利第6,248,516 B1號)。如本文描述,抗體片段藉由各種技術,包括(但不限於)完整抗體之蛋白水解消化及藉由重組宿主細胞(例如大腸桿菌或噬菌體)產生來製備。
術語「可變區」或「可變域」係指涉及將抗體結合至抗原之抗體重鏈或輕鏈之域。天然抗體之重鏈及輕鏈之可變域(分別為VH及VL)一般具有相似結構,及各域包含四個保守框架區(FR)及三個高變區(HVR)。參見,例如,Kindt等人,Kuby Immunology,第6版,W.H. Freeman and Co.,第91頁(2007)。單一VH或VL域可足以賦予抗原結合特異性。如本文結合可變區序列使用,「Kabat編號」係指由Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版,Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)闡述之編號系統。
如本文使用,重鏈及輕鏈之所有恆定區及域之胺基酸位置係根據Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版,Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)中描述之Kabat編號系統編號,本文中稱為「根據Kabat編號」或「Kabat編號」。具體言之,該Kabat編號系統(參見Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版,Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)之第647至660頁)係用於κ及λ同型之輕鏈恆定域CL及Kabat EU索引編號系統(參見第661至723頁)係用於重鏈恆定域(CH1、鉸鏈、CH2及CH3),在此情況下,其在本文中藉由參考「根據Kabat EU索引編號」進一步闡明。
如本文使用,術語「高變區」或「HVR」係指抗體可變域之序列高變且決定抗原結合特異性之區中之各者,例如「互補決定區」 (「CDR」)。一般而言,抗體包含六個CDR;三個於VH中(HCDR1、HCDR2、HCDR3),及三個於VL中(LCDR1、LCDR2、LCDR3)。本文之例示性CDR包括:
(a)於胺基酸殘基26至32 (L1)、50至52 (L2)、91至96 (L3)、26至32 (H1)、53至55 (H2)及96至101 (H3)處出現之高變環(Chothia及Lesk,J. Mol. Biol.
196:901-917 (1987));
(b)於胺基酸殘基24至34 (L1)、50至56 (L2)、89至97 (L3)、31至35b (H1)、50至65 (H2)及95至102 (H3)處出現之CDR (Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest
,第5版,Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991));及
(c)於胺基酸殘基27c至36 (L1)、46至55 (L2)、89至96 (L3)、30至35b (H1)、47至58 (H2)及93至101 (H3)處出現之抗原接觸(MacCallum等人,J. Mol. Biol.
262: 732-745 (1996))。
除非另有指示,否則CDR係根據Kabat等人同上確定。熟習此項技術者應瞭解CDR命名亦可根據Chothia同上、McCallum同上或任何其他科學上可接受之命名系統確定。
「框架」或「FR」係指除高變區(HVR)殘基外之可變域殘基。可變域之FR一般由四個FR域構成:FR1、FR2、FR3及FR4。因此,該等HVR及FR序列一般以下列順序出現於VH (或VL)中:FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4。
抗體或免疫球蛋白之「類別」係指其重鏈具有之恆定域或恆定區之類型。存在五種主要類別之抗體:IgA、IgD、IgE、IgG及IgM,及此等中之數者可進一步分為子類(同型),例如,IgG1
、IgG2
、IgG3
、IgG4
、IgA1
及IgA2
。對應於不同類別之免疫球蛋白之重鏈恆定域分別稱為α、δ、ε、γ及μ。
「Fab分子」係指由免疫球蛋白之重鏈之VH及CH1域(「Fab重鏈」)及免疫球蛋白之輕鏈之VL及CL域(「Fab輕鏈」)構成之蛋白質。
「互換」 Fab分子(亦稱為「Crossfab」)意謂其中Fab重鏈及輕鏈之可變域或恆定域交換(即彼此置換)之Fab分子,即該互換Fab分子包含由輕鏈可變域VL及重鏈恆定域1 CH1 (VL-CH1,以N至C端方向)構成之肽鏈,及由重鏈可變域VH及輕鏈恆定域CL (VH-CL,以N至C端方向)構成之肽鏈。為清楚起見,在其中Fab輕鏈及Fab重鏈之可變域交換之互換Fab分子中,包含重鏈恆定域1 CH1之肽鏈在本文中稱為該(互換) Fab分子之「重鏈」。相反地,在其中Fab輕鏈及Fab重鏈之恆定域交換之互換Fab分子中,包含重鏈可變域VH之肽鏈在本文中稱為該(互換) Fab分子之「重鏈」。
與此相反,「習知」 Fab分子意謂以其天然形式之Fab分子,即包含由重鏈可變域及恆定域(VH-CH1,以N至C端方向)構成之重鏈,及由輕鏈可變域及恆定域(VL-CL,以N至C端方向)構成之輕鏈。
術語「免疫球蛋白分子」係指具有天然生成之抗體之結構之蛋白質。例如,IgG類別之免疫球蛋白係約150,000達爾頓之異四聚體醣蛋白,其等由雙硫鍵結合之兩個輕鏈及兩個重鏈構成。自N端至C端,各重鏈具有可變域(VH),亦稱為可變重鏈域或重鏈可變區,接著三個恆定域(CH1、CH2及CH3),亦稱為重鏈恆定區。同樣,自N端至C端,各輕鏈具有可變域(VL),亦稱為可變輕鏈域或輕鏈可變區,接著恆定輕鏈(CL)域,亦稱為輕鏈恆定區。免疫球蛋白之重鏈可分配至五種類型(稱為α (IgA)、δ (IgD)、ε (IgE)、γ (IgG)或μ (IgM))中之一者,其等中之一些可進一步分為子類型,例如γ1
(IgG1
)、γ2
(IgG2
)、γ3
(IgG3
)、γ4
(IgG4
)、α1
(IgA1
)及α2
(IgA2
)。免疫球蛋白之輕鏈可基於其恆定域之胺基酸序列分配至兩種類型(稱為kappa (κ)及lambda (λ))中之一者。免疫球蛋白基本上由經由免疫球蛋白鉸鏈區連接之兩個Fab分子及Fc域構成。
本文之術語「Fc域」或「Fc區」係用於定義含有恆定區之至少一部分之免疫球蛋白重鏈之C端區。該術語包括天然序列Fc區及變體Fc區。儘管IgG重鏈之Fc區之邊界可略有變化,但人類IgG重鏈Fc區通常定義為自Cys226或自Pro230延伸至重鏈之羧基端。然而,由宿主細胞產生之抗體可經歷自重鏈之C端轉譯後裂解一或多個(尤其一或兩個)胺基酸。因此,由宿主細胞藉由編碼全長重鏈之特異性核酸分子之表現產生之抗體可包括該全長重鏈,或其可包括該全長重鏈之裂解變體。此可為該重鏈之最後兩個C端胺基酸為甘胺酸(G446)及離胺酸(K447,根據Kabat EU索引編號)之情況。因此,Fc區之C端離胺酸(Lys447)或C端甘胺酸(Gly446)及離胺酸(K447)可存在或可不存在。除非本文另有規定,否者Fc區或恆定區中胺基酸殘基之編號係根據EU編號系統,亦稱為EU索引,如描述於Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版,Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991 (亦參見上文)中。如本文使用之Fc域之「次單元」係指形成二聚體Fc域之兩個多肽中之一者,即包含免疫球蛋白重鏈之C端恆定區之多肽,其可穩定自我結合。例如,IgG Fc域之次單元包含IgG CH2及IgG CH3恆定域。
「促進Fc域之第一及第二次單元結合之修飾」係肽主鏈之操作或減少或阻止包含Fc域次單元之多肽與相同多肽結合以形成同二聚體之該Fc域次單元之轉譯後修飾。特定言之,如本文使用之促進結合之修飾包括對需結合之兩個Fc域次單元(即該Fc域之第一及第二次單元)中之各者作出之不同修飾,其中該等修飾彼此互補以便於促進該等兩個Fc域次單元結合。例如,促進結合之修飾可改變該等Fc域次單元中之一者或兩者之結構或電荷以便於使得其等結合分別為空間或靜電有利的。因此,(異)二聚化在包含第一Fc域次單元之多肽與包含第二Fc域次單元之多肽之間發生,其在融合至該等次單元(例如抗原結合部分)中之各者之其他組分不同之意義上可為不同的。在一些態樣中,促進結合之修飾包含Fc域中之胺基酸突變,具體言之胺基酸取代。在一特定態樣中,促進結合之修飾包含於該Fc域之兩個次單元之各者中之不同胺基酸突變,具體言之胺基酸取代。
術語「效應功能」係指可歸因於抗體之Fc區之彼等生物活性,其等隨抗體同型變化。抗體效應功能之實例包括:C1q結合及補體依賴性細胞毒性(CDC)、Fc受體結合、抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)、抗體依賴性細胞吞噬作用(ADCP)、細胞介素分泌、免疫複合物介導之抗原呈遞細胞攝取抗原、細胞表面受體(例如B細胞受體)之下調,及B細胞活化。
關於參考多肽序列之「胺基酸序列同一性百分比(%)」定義為在比對序列並引入間隙(視需要)以達成最大序列同一性百分比且不應將任何保守取代視為序列同一性之一部分後,候選序列中之胺基酸殘基與參考多肽序列中之胺基酸殘基相同之百分比。出於確定胺基酸序列同一性百分比之目的之比對可以於該領域之技術內之各種方法,例如,使用公開可用之電腦軟體諸如BLAST、BLAST-2、Clustal W、Megalign (DNASTAR)軟體或FASTA程式包達成。彼等熟習此項技術者可確定適用於比對序列之參數,包括在比較中之序列之全長上達成最大比對所需之任何演算法。然而,出於本文之目的,%胺基酸序列同一性值係使用FASTA軟體包36.3.8c版或更高版本之ggsearch程式以BLOSUM50比較矩陣產生。該FASTA程式包係由W. R. Pearson及D. J. Lipman (1988),「Improved Tools for Biological Sequence Analysis」, PNAS 85:2444-2448;W. R. Pearson (1996) 「Effective protein sequence comparison」 Meth. Enzymol. 266:227- 258;及Pearson等人(1997) Genomics 46:24-36編寫,且可自http://fasta.bioch.virginia.edu/fasta_www2/fasta_down.shtml公開獲得。或者,可在http://fasta.bioch.virginia.edu/fasta_www2/index.cgi下存取之公共伺服器可用於比較序列,使用ggsearch (全域蛋白質:蛋白質(global protein:protein))程式及內定選項(BLOSUM50;open:-10;ext:-2;Ktup = 2)以確保進行全域(而非局部)比對。胺基酸同一性百分比係在輸出比對標頭中給定。
「活化Fc受體」係抗體之Fc域參與後引起刺激攜載受體之細胞進行效應功能之傳訊事件之Fc受體。人類活化Fc受體包括FcγRIIIa (CD16a)、FcγRI (CD64)、FcγRIIa (CD32)及FcαRI (CD89)。
「減少結合」(例如減少結合至Fc受體)係指如(例如)藉由SPR量測,針對個別相互作用之親和力減小。為清楚起見,該術語亦包括親和力減小至零(或減小至低於分析方法之偵測極限),即完全消除相互作用。相反地,「增加結合」係指針對個別相互作用之結合親和力增加。
「融合」意謂組分(例如Fab分子及Fc域次單元)係藉由肽鍵直接或經由一或多個肽連接子連接。
HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體包含特異性結合至CD3之第一抗原結合部分,及特異性結合至HLA-A2/WT1,尤其HLA-A2/WT1RMF
之第二抗原結合部分。
在一項態樣中,第一抗原結合部分包含含有SEQ ID NO: 1之重鏈CDR (HCDR) 1、SEQ ID NO: 2之HCDR2及SEQ ID NO: 3之HCDR3之重鏈可變區;及含有SEQ ID NO: 4之輕鏈CDR (LCDR) 1、SEQ ID NO: 5之LCDR2及SEQ ID NO: 6之LCDR3之輕鏈可變區。
在一項態樣中,第二抗原結合部分包含含有SEQ ID NO: 9之重鏈CDR (HCDR) 1、SEQ ID NO: 10之HCDR2及SEQ ID NO: 11之HCDR3之重鏈可變區;及含有SEQ ID NO: 12之輕鏈CDR (LCDR) 1、SEQ ID NO: 13之LCDR2及SEQ ID NO: 14之LCDR3之輕鏈可變區。
在一特定態樣中,HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體包含:
(i)第一抗原結合部分,其特異性結合至CD3及包含含有SEQ ID NO: 1之重鏈CDR (HCDR) 1、SEQ ID NO: 2之HCDR2及SEQ ID NO: 3之HCDR3之重鏈可變區;及含有SEQ ID NO: 4之輕鏈CDR (LCDR) 1、SEQ ID NO: 5之LCDR2及SEQ ID NO: 6之LCDR3之輕鏈可變區;及
(ii)第二抗原結合部分,其特異性結合至HLA-A2/WT1及包含含有SEQ ID NO: 9之重鏈CDR (HCDR) 1、SEQ ID NO: 10之HCDR2及SEQ ID NO: 11之HCDR3之重鏈可變區;及含有SEQ ID NO: 12之輕鏈CDR (LCDR) 1、SEQ ID NO: 13之LCDR2及SEQ ID NO: 14之LCDR3之輕鏈可變區。
在一項態樣中,第一抗原結合部分包含與SEQ ID NO: 7之胺基酸序列相同至少約95%、96%、97%、98%、99%或100%之重鏈可變區序列及與SEQ ID NO: 8之胺基酸序列相同至少約95%、96%、97%、98%、99%或100%之輕鏈可變區序列。
在一項態樣中,第一抗原結合部分包含SEQ ID NO: 7之重鏈可變區序列及SEQ ID NO: 8之輕鏈可變區序列。
在一項態樣中,第二抗原結合部分包含與SEQ ID NO: 15之胺基酸序列相同至少約95%、96%、97%、98%、99%或100%之重鏈可變區序列及與SEQ ID NO: 16之胺基酸序列相同至少約95%、96%、97%、98%、99%或100%之輕鏈可變區序列。
在一項態樣中,第二抗原結合部分包含SEQ ID NO: 15之重鏈可變區序列及SEQ ID NO: 16之輕鏈可變區序列。
在一些態樣中,第一及/或第二抗原結合部分係Fab分子。在一些態樣中,該第一抗原結合部分係其中Fab輕鏈及Fab重鏈之可變區或恆定區交換之互換Fab分子。在此等態樣中,該第二抗原結合部分較佳係習知Fab分子。
在其中雙特異性抗體之第一及第二抗原結合部分均為Fab分子之一些態樣中,及在該等抗原結合部分之一者(尤其該第一抗原結合部分)中,Fab輕鏈及Fab重鏈之可變域VL及VH係經彼此置換,
i)在該第一抗原結合部分之恆定域CL中,於位置124之胺基酸係經帶正電荷之胺基酸(根據Kabat編號)取代,及其中在該第一抗原結合部分之恆定域CH1中,於位置147之胺基酸或於位置213之胺基酸係經帶負電荷之胺基酸(根據Kabat EU索引編號)取代;或
ii)在該第二抗原結合部分之恆定域CL中,於位置124之胺基酸係經帶正電荷之胺基酸(根據Kabat編號)取代,及其中在該第二抗原結合部分之恆定域CH1中,於位置147之胺基酸或於位置213之胺基酸係經帶負電荷之胺基酸(根據Kabat EU索引編號)取代。
雙特異性抗體不包含在i)及ii)下提及之修飾。具有VH/VL交換之抗原結合部分之恆定域CL及CH1未經彼此置換(即保持未交換)。
在一更特定態樣中,
i)在第一抗原結合部分之恆定域CL中,於位置124之胺基酸係經離胺酸(K)、精胺酸(R)或組胺酸(H) (根據Kabat編號)獨立取代,及在該第一抗原結合部分之恆定域CH1中,於位置147之胺基酸或於位置213之胺基酸係經麩胺酸(E)或天冬胺酸(D) (根據Kabat EU索引編號)獨立取代;或
ii)在第二抗原結合部分之恆定域CL中,於位置124之胺基酸係經離胺酸(K)、精胺酸(R)或組胺酸(H) (根據Kabat編號)獨立取代,及在該第二抗原結合部分之恆定域CH1中,於位置147之胺基酸或於位置213之胺基酸係經麩胺酸(E)或天冬胺酸(D) (根據Kabat EU索引編號)獨立取代。
在一項此態樣中,在第二抗原結合部分之恆定域CL中,於位置124之胺基酸係經離胺酸(K)、精胺酸(R)或組胺酸(H) (根據Kabat編號)獨立取代,及在該第二抗原結合部分之恆定域CH1中,於位置147之胺基酸或於位置213之胺基酸係經麩胺酸(E)或天冬胺酸(D) (根據Kabat EU索引編號)獨立取代。
在另一態樣中,在第二抗原結合部分之恆定域CL中,於位置124之胺基酸係經離胺酸(K)、精胺酸(R)或組胺酸(H) (根據Kabat編號)獨立取代,及在該第二抗原結合部分之恆定域CH1中,於位置147之胺基酸係經麩胺酸(E)或天冬胺酸(D) (根據Kabat EU索引編號)獨立取代。
在較佳態樣中,在第二抗原結合部分之恆定域CL中,於位置124之胺基酸係經離胺酸(K)、精胺酸(R)或組胺酸(H) (根據Kabat編號)獨立取代及於位置123之胺基酸係經離胺酸(K)、精胺酸(R)或組胺酸(H) (根據Kabat編號)獨立取代,及在該第二抗原結合部分之恆定域CH1中,於位置147之胺基酸係經麩胺酸(E)或天冬胺酸(D) (根據Kabat EU索引編號)獨立取代及於位置213之胺基酸係經麩胺酸(E)或天冬胺酸(D) (根據Kabat EU索引編號)獨立取代。
在一項態樣中,在第二抗原結合部分之恆定域CL中,於位置124之胺基酸係經離胺酸(K) (根據Kabat編號)取代及於位置123之胺基酸係經離胺酸(K) (根據Kabat編號)取代,及在該第二抗原結合部分之恆定域CH1中,於位置147之胺基酸係經麩胺酸(E) (根據Kabat EU索引編號)取代及於位置213之胺基酸係經麩胺酸(E) (根據Kabat EU索引編號)取代。
在一項態樣中,在第二抗原結合部分之恆定域CL中,於位置124之胺基酸係經離胺酸(K) (根據Kabat編號)取代及於位置123之胺基酸係經精胺酸(R) (根據Kabat編號)取代,及在該第二抗原結合部分之恆定域CH1中,於位置147之胺基酸係經麩胺酸(E) (根據Kabat EU索引編號)取代及於位置213之胺基酸係經麩胺酸(E) (根據Kabat EU索引編號)取代。
在特定態樣中,若在第二抗原結合部分之恆定域CL及恆定域CH1中作出根據上文態樣之胺基酸取代,則該第二抗原結合部分之恆定域CL係κ同型。
在一些態樣中,第一及第二抗原結合部分係視需要經由肽連接子彼此融合。
在一些態樣中,第一及第二抗原結合部分各為Fab分子及(i)該第二抗原結合部分係於Fab重鏈之C端融合至該第一抗原結合部分之Fab重鏈之N端,或(ii)該第一抗原結合部分係於該Fab重鏈之C端融合至該第二抗原結合部分之Fab重鏈之N端。
在一些態樣中,HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體提供單價結合至CD3。
在特定態樣中,HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體包含特異性結合至CD3之單一抗原結合部分,及特異性結合至HLA-A2/WT1之兩個抗原結合部分。因此,在一些態樣中,該HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體包含第三抗原結合部分,尤其Fab分子,更特定言之習知Fab分子,其特異性結合至HLA-A2/WT1。該第三抗原結合部分可併入(單獨或組合)上文中描述與該第二抗原結合部分相關之所有特徵(例如恆定區中之CDR序列、可變區序列及/或胺基酸取代)。在一些態樣中,該第三抗原部分係與該第一抗原結合部分相同(例如亦為習知Fab分子且包含相同之胺基酸序列)。
在特定態樣中,HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體進一步包含由第一及第二次單元構成之Fc域。在一項態樣中,該Fc域係IgG Fc域。在一特定態樣中,該Fc域係IgG1
Fc域。在另一態樣中,該Fc域係IgG4
Fc域。在一更特定態樣中,該Fc域係IgG4
Fc域,其包含於位置S228 (Kabat EU索引編號)之胺基酸取代,尤其胺基酸取代S228P。此胺基酸取代減少IgG4
抗體之活體內Fab臂交換(參見Stubenrauch等人,Drug Metabolism and Disposition 38, 84-91 (2010))。在另一特定態樣中,該Fc域係人類Fc域。在一特別較佳之態樣中,該Fc域係人類IgG1
Fc域。人類IgG1
Fc區之例示性序列係以SEQ ID NO: 29給定。
在一些態樣中,其中第一、第二及(若存在)第三抗原結合部分各為Fab分子,(a) (i)該第二抗原結合部分係於Fab重鏈之C端融合至該第一抗原結合部分之Fab重鏈之N端及該第一抗原結合部分係於Fab重鏈之C端融合至Fc域之第一次單元之N端,或(ii)該第一抗原結合部分係於Fab重鏈之C端融合至該第二抗原結合部分之Fab重鏈之N端及該第二抗原結合部分係於Fab重鏈之C端融合至該Fc域之第一次單元之N端;及(b)該第三抗原結合部分(若存在)係於Fab重鏈之C端融合至該Fc域之第二次單元之N端。
在特定態樣中,Fc域包含促進該Fc域之第一及第二次單元之結合之修飾。人類IgG Fc域之兩個次單元間之最廣泛蛋白質-蛋白質相互作用之位點係於CH3域中。因此,在一項態樣中,該修飾係於該Fc域之CH3域中。
在一特定態樣中,促進Fc域之第一及第二次單元之結合之該修飾係所謂之「結進孔(knob-into-hole)」修飾,其包含在該Fc域之兩個次單元之一者中之「結」修飾及在該Fc域之兩個次單元之另一者中之「孔」修飾。結進孔技術係描述(例如)於US 5,731,168;US 7,695,936;Ridgway等人,Prot Eng 9, 617-621 (1996)及Carter, J Immunol Meth 248, 7-15 (2001)中。一般而言,該方法涉及引入隆凸(「結」)於第一多肽之界面及引入相應之空腔(「孔」)於第二多肽之界面中,使得該隆凸可放置於該空腔中以便於促進異二聚體形成及阻礙同二聚體形成。隆凸係藉由以較大側鏈(例如酪胺酸或色胺酸)置換來自該第一多肽之界面之小胺基酸側鏈構築。該等隆凸之相同或相似尺寸之補償性空腔係藉由以較小者(例如丙胺酸或蘇胺酸)置換大胺基酸側鏈於該第二多肽之界面中產生。
因此,在一些態樣中,Fc域之第一次單元之CH3域中之胺基酸殘基係經具有較大側鏈體積之胺基酸殘基置換,藉此於該第一次單元之CH3域內產生隆凸,該隆凸可定位於在第二次單元之CH3域內之空腔中,及該Fc域之第二次單元之CH3域中之胺基酸殘基係經具有較小側鏈體積之胺基酸殘基置換,藉此於該第二次單元之CH3域內產生空腔,於該第一次單元之CH3域內之隆凸可定位於該空腔內。較佳地,具有較大側鏈體積之該胺基酸殘基係選自由以下組成之群:精胺酸(R)、苯丙胺酸(F)、酪胺酸(Y)及色胺酸(W)。較佳地,具有較小側鏈體積之該胺基酸殘基係選自由以下組成之群:丙胺酸(A)、絲胺酸(S)、蘇胺酸(T)及纈胺酸(V)。該隆凸及空腔可藉由改變編碼多肽之核酸,(例如)藉由定點誘變或藉由肽合成製備。
在一特定此態樣中,在Fc域之第一次單元中,於位置366之蘇胺酸殘基係經色胺酸殘基(T366W)置換,及在該Fc域之第二次單元中,於位置407之酪胺酸殘基係經纈胺酸殘基(Y407V)置換及視需要於位置366之蘇胺酸殘基係經絲胺酸殘基(T366S)置換及於位置368之白胺酸殘基係經丙胺酸殘基(L368A) (根據Kabat EU索引編號)置換。在另一態樣中,在該Fc域之第一次單元中,另外於位置354之絲胺酸殘基係經半胱胺酸殘基(S354C)置換或於位置356之麩胺酸殘基係經半胱胺酸殘基(E356C)置換(尤其於位置354之絲胺酸殘基係經半胱胺酸殘基置換),及在該Fc域之第二次單元中,另外於位置349之酪胺酸殘基係經半胱胺酸殘基(Y349C) (根據Kabat EU索引編號)置換。在一較佳態樣中,該Fc域之第一次單元包含胺基酸取代S354C及T366W,及該Fc域之第二次單元包含胺基酸取代Y349C、T366S、L368A及Y407V (根據Kabat EU索引編號)。
在一些態樣中,Fc域包含減少結合至Fc受體及/或效應功能之一或多個胺基酸取代。
在一特定態樣中,Fc受體係Fcγ受體。在一項態樣中,該Fc受體係人類Fc受體。在一項態樣中,該Fc受體係活化Fc受體。在一特定態樣中,該Fc受體係活化人類Fcγ受體,更具體言之人類FcγRIIIa、FcγRI或FcγRIIa,最具體言之人類FcγRIIIa。在一項態樣中,效應功能係選自由以下組成之群之一或多者:補體依賴性細胞毒性(CDC)、抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)、抗體依賴性細胞吞噬作用(ADCP)及細胞介素分泌。在一特定態樣中,該效應功能係ADCC。
通常,相同之一或多個胺基酸取代係存在於Fc域之兩個次單元之各者中。在一項態樣中,該一或多個胺基酸取代減小該Fc域對Fc受體之結合親和力。在一項態樣中,該一或多個胺基酸取代將該Fc域對Fc受體之結合親和力減小至少2倍、至少5倍或至少10倍。
在一項態樣中,Fc域包含於選自由E233、L234、L235、N297、P331及P329 (根據Kabat EU索引編號)組成之群之位置之胺基酸取代。在一更特定態樣中,該Fc域包含於選自由L234、L235及P329 (根據Kabat EU索引編號)組成之群之位置之胺基酸取代。在一些態樣中,該Fc域包含胺基酸取代L234A及L235A (根據Kabat EU索引編號)。在一項此態樣中,該Fc域係IgG1
Fc域,尤其人類IgG1
Fc域。在一項態樣中,該Fc域包含於位置P329之胺基酸取代。在一更特定態樣中,該胺基酸取代係P329A或P329G,尤其P329G (根據Kabat EU索引編號)。在一項態樣中,該Fc域包含於位置P329之胺基酸取代及於選自E233、L234、L235、N297及P331 (根據Kabat EU索引編號)之位置之另一胺基酸取代。在一更特定態樣中,該另一胺基酸取代係E233P、L234A、L235A、L235E、N297A、N297D或P331S。在特定態樣中,該Fc域包含於位置P329、L234及L235 (根據Kabat EU索引編號)之胺基酸取代。在更特定態樣中,該Fc域包含胺基酸突變L234A、L235A及P329G (「P329G LALA」、「PGLALA」或「LALAPG」)。具體言之,在較佳態樣中,該Fc域之各次單元包含胺基酸取代L234A、L235A及P329G (Kabat EU索引編號),即在該Fc域之第一及第二次單元之各者中,於位置234之白胺酸殘基係經丙胺酸殘基(L234A)置換,於位置235之白胺酸殘基係經丙胺酸殘基(L235A)置換及於位置329之脯胺酸殘基係經甘胺酸殘基(P329G) (根據Kabat EU索引編號)置換。在一項此態樣中,該Fc域係IgG1
Fc域,尤其人類IgG1
Fc域。
在較佳態樣中,HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體包含:
(i) 特異性結合至CD3之第一抗原結合部分,其包含含有SEQ ID NO: 1之重鏈CDR (HCDR) 1、SEQ ID NO: 2之HCDR2及SEQ ID NO: 3之HCDR3之重鏈可變區;及含有SEQ ID NO: 4之輕鏈CDR (LCDR) 1、SEQ ID NO: 5之LCDR2及SEQ ID NO: 6之LCDR3之輕鏈可變區,其中該第一抗原結合部分係其中Fab輕鏈及Fab重鏈之可變區或恆定區(尤其可變區)交換之互換Fab分子;
(ii) 特異性結合至HLA-A2/WT1之第二及第三抗原結合部分,其包含含有SEQ ID NO: 9之重鏈CDR (HCDR) 1、SEQ ID NO: 10之HCDR2及SEQ ID NO: 11之HCDR3之重鏈可變區;及含有SEQ ID NO: 12之輕鏈CDR (LCDR) 1、SEQ ID NO: 13之LCDR2及SEQ ID NO: 14之LCDR3之輕鏈可變區,其中該第二及第三抗原結合部分各為Fab分子,尤其習知Fab分子;
(iii) 由第一及第二次單元構成之Fc域,
其中該第二抗原結合部分係於Fab重鏈之C端融合至該第一抗原結合部分之Fab重鏈之N端,及該第一抗原結合部分係於Fab重鏈之C端融合至該Fc域之第一次單元之N端,及其中該第三抗原結合部分係於Fab重鏈之C端融合至該Fc域之第二次單元之N端。
在一項態樣中,第一抗原結合部分包含與SEQ ID NO: 7之胺基酸序列相同至少約95%、96%、97%、98%、99%或100%之重鏈可變區序列及與SEQ ID NO: 8之胺基酸序列相同至少約95%、96%、97%、98%、99%或100%之輕鏈可變區序列。
在一項態樣中,第一抗原結合部分包含SEQ ID NO: 7之重鏈可變區序列及SEQ ID NO: 8之輕鏈可變區序列。
在一項態樣中,第二及第三抗原結合部分包含與SEQ ID NO: 15之胺基酸序列相同至少約95%、96%、97%、98%、99%或100%之重鏈可變區序列及與SEQ ID NO: 16之胺基酸序列相同至少約95%、96%、97%、98%、99%或100%之輕鏈可變區序列。
在一項態樣中,第二及第三抗原結合部分包含SEQ ID NO: 15之重鏈可變區及SEQ ID NO: 16之輕鏈可變區。
根據上文態樣之Fc域可併入(單獨或組合)上文中描述與Fc域相關之所有特徵。
在一項態樣中,抗原結合部分及Fc區係藉由肽連接子,尤其藉由如SEQ ID NO: 18及SEQ ID NO: 20中之肽連接子彼此融合。
在一項態樣中,在(ii)下在第二及第三Fab分子之恆定域CL中,於位置124之胺基酸係經離胺酸(K) (根據Kabat編號)取代及於位置123之胺基酸係經離胺酸(K)或精胺酸(R),尤其經精胺酸(R) (根據Kabat編號)取代,及在(ii)下在第二及第三Fab分子之恆定域CH1中,於位置147之胺基酸係經麩胺酸(E) (根據Kabat EU索引編號)取代及於位置213之胺基酸係經麩胺酸(E) (根據Kabat EU索引編號)取代。
在一項態樣中,HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體包含含有與SEQ ID NO: 17之序列相同至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%之序列之多肽(尤其兩個多肽)、含有與SEQ ID NO: 18之序列相同至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%之序列之多肽、含有與SEQ ID NO: 19之序列相同至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%之序列之多肽及含有與SEQ ID NO: 20之序列相同至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%之序列之多肽。
在一項態樣中,HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體包含含有SEQ ID NO: 17之序列之多肽(尤其兩個多肽)、含有SEQ ID NO: 18之序列之多肽、含有SEQ ID NO: 19之序列之多肽及含有SEQ ID NO: 20之序列之多肽。
本文之HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體係與來那度胺組合使用。
術語「來那度胺」係指具有化學名稱(RS)-3-(4-胺基-1-側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮及下列化學結構之化合物:
CAS登記編號191732-72-6。來那度胺之經驗式係C13
H13
N3
O3
及公克分子量係259.3。來那度胺係在商品名REVLIMID®下銷售之沙利度胺(thalidomide)類似物。其係具有抗血管生成性質之免疫調節劑。
如熟習從業者將已知的其他沙利度胺類似物(例如泊馬度胺(pomalidomide) (CAS登記編號19171-19-8)、阿伐多米(avadomide) (亦稱為CC-122;CAS登記編號1398053-45-6)或伊貝多米(iberdomide) (亦稱為CC-220;CAS登記編號1323403-33-3))亦經審慎考慮用於本發明中。
術語「癌症」係指哺乳動物中通常特徵為不受控制之細胞增生之生理狀況。癌症之實例包括(但不限於)癌、淋巴瘤、胚細胞瘤、肉瘤及白血病。癌症之更多非限制性實例包括血液癌症(諸如白血病)、膀胱癌、腦癌、頭頸癌、胰臟癌、膽道癌、甲狀腺癌、肺癌、乳癌、卵巢癌、子宮癌、宮頸癌、子宮內膜癌、食道癌、結腸癌、結腸直腸癌、直腸癌、胃癌、前列腺癌、皮膚癌、鱗狀細胞癌、肉瘤、骨癌及腎癌。其他細胞增生疾患包括(但不限於)位於以下中之贅瘤:腹部、骨、乳房、消化系統、肝、胰臟、腹膜、內分泌腺(腎上腺、甲狀旁腺、垂體、睾丸、卵巢、胸腺、甲狀腺)、眼、頭及頸、神經系統(中樞及外周)、淋巴系統、骨盆、皮膚、軟組織、脾、胸部及泌尿生殖系統。亦包括癌前狀態或病變及癌症轉移。
在本發明之HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體、方法、用途及套組之一些態樣中,癌症係血液癌症。血液癌症之非限制性實例包括白血病(例如急性淋巴球白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴球白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、毛細胞白血病(HCL))、淋巴瘤(例如非何傑金氏淋巴瘤(Non-Hodgkin lymphoma) (NHL)、何傑金氏淋巴瘤)、骨髓瘤(例如多發性骨髓瘤(MM))、骨髓發育不良症候群(MDS)及骨髓增生性疾病。
在某些態樣中,癌症係選自由以下組成之群:血液癌症(諸如白血病)、腎癌、膀胱癌、皮膚癌、肺癌、結腸直腸癌、乳癌、腦癌、頭頸癌及前列腺癌。
在特定態樣中,癌症係血液癌症,尤其白血病,最特別急性淋巴球白血病(ALL)或急性骨髓性白血病(AML)。
在較佳態樣中,癌症係急性骨髓性白血病(AML)。
在其他特定態樣中,癌症係骨髓發育不良症候群(MDS)。
在一些態樣中,癌症係WT1陽性癌症。「WT1陽性癌症」或「WT1表現癌症」意謂特徵為WT1於癌細胞中之表現或過表現之癌症。WT1之表現可(例如)藉由定量即時PCR (量測WT1 mRNA含量)、免疫組織化學(IHC)或西方墨點分析測定。在一項態樣中,該癌症表現WT1。在一項態樣中,如藉由免疫組織化學(IHC)使用對WT1具特異性之抗體測定,該癌症以至少20%,較佳至少50%或至少80%之腫瘤細胞表現WT1。
本文之「病患」、「個體(subject)」或「個體(individual)」係有治療資格之任何單一人類個體,其正經歷或已經歷癌症之一或多種徵象、症狀或其他適應症。在一些態樣中,該病患患有癌症或已診斷患有癌症。該病患可先前已用HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體或另一藥物治療,或未經如此治療。在特定態樣中,該病患先前尚未用HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體治療。該病患可已用除HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體外之包含一或多種藥物之療法治療,然後開始HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體療法。
如本文使用,「治療(treatment)」 (及其語法變化諸如「治療(treat)」或「治療(treating)」)係指在治療中之個體中嘗試改變疾病之自然病程之臨床干預,及可針對預防或在臨床病理學之過程期間進行。治療之所需效應包括(但不限於)預防疾病發生或復發;減輕症狀;減少疾病之任何直接或間接病理學後果;預防轉移;降低疾病進展之速率;改善或減輕疾病狀態及緩解或改善預後。
HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體及來那度胺係以有效量投與。
藥劑(例如,醫藥組合物)之「有效量」係指在達成所需治療或預防結果必需之劑量及期間下有效之量。
在一項態樣中,HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體之投與導致T細胞(尤其細胞毒性T細胞)之活化,尤其於癌症之位點之活化。該活化可包含T細胞增生、T細胞分化、T細胞分泌細胞介素、T細胞釋放細胞毒性效應分子、T細胞之細胞毒性活性及T細胞表現活化標誌物。在一項態樣中,HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體之投與導致T細胞(尤其細胞毒性T細胞)數量於癌症之位點之增加。
在上文及本文描述之HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體、方法、用途或套組之一些態樣中,相較於單獨使用或投與HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體之治療,使用或投與HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體及來那度胺之治療導致T細胞(尤其細胞毒性T細胞)加,尤其於癌症之位點之活化增加。在特定態樣中,該活化包含T細胞之細胞毒性活性(特別癌細胞之裂解)及/或T細胞分泌細胞介素(特別IL-2、TNF-α及/或干擾素-γ)。
在上文及本文描述之HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體、方法、用途或套組之一些態樣中,相較於單獨使用或投與HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體之治療,使用或投與HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體及來那度胺之治療導致幼稚T細胞向記憶T細胞,尤其於癌症之位點之分化增加。在一項態樣中,該分化係藉由(例如)使用流式細胞分析技術量測CD45RA表現偵測。
在上文及本文描述之HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體、方法、用途或套組之一些態樣中,使用或投與HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體及來那度胺之治療可在個體中導致反應。在一些態樣中,該反應可為完全反應。在一些態樣中,該反應可為停止治療後之持續反應。在一些態樣中,該反應可為停止治療後持續之完全反應。在其他態樣中,該反應可為部分反應。在一些態樣中,該反應可為停止治療後持續之部分反應。在一些態樣中,相較於單獨(即無來那度胺)使用或投與HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體之治療,使用或投與HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體及來那度胺之治療可改善該反應。
在一些態樣中,相較於經HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體單獨(即無來那度胺)治療之相應之病患群體,HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體及來那度胺之治療或投與可增加病患群體中之反應率。
本發明之組合療法包括投與HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體及來那度胺。
如本文使用,「組合(combination)」 (及其語法變化諸如「組合(combine)」或「組合(combining)」)包含根據本發明之HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體及來那度胺之組合,其中該HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體及來那度胺係於相同或不同容器中、於相同或不同醫藥調配物中、一起或分別投與、同時或循序投與(以任何順序),及藉由相同或不同途徑投與,但條件為該HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體及來那度胺可在體內同時發揮其等生物效應。例如根據本發明之「組合」 HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體及來那度胺可意謂首先以特定醫藥調配物投與該HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體,接著以另一醫藥調配物投與來那度胺,或反之亦然。
HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體及來那度胺可以此項技術中已知的任何合適之方式投與。在一項態樣中,該HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體及來那度胺係循序(在不同時間)投與。在另一態樣中,該HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體及來那度胺係同時(在相同時間)投與。不希望受理論束縛,在該HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體之前及/或與其同時投與來那度胺可為有利的。在一些態樣中,該HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體係在與來那度胺不同之組合物中。在一些態樣中,HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體係在與來那度胺相同之組合物中。
HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體及來那度胺可藉由任何合適之途徑投與,及可藉由相同之投與途徑或藉由不同之投與途徑投與。在一些態樣中,該HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體係靜脈內、肌內、皮下、局部、經口、經皮、腹膜內、眶內、藉由移植、藉由吸入、鞘內、心室內或鼻內投與。在一特定態樣中,HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體係靜脈內投與。在一些態樣中,來那度胺係靜脈內、肌內、皮下、局部、經口、經皮、腹膜內、眶內、藉由移植、藉由吸入、鞘內、心室內或鼻內投與。在一特定態樣中,來那度胺係經口投與。可投與有效量之HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體及來那度胺以預防或治療疾病。該HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體及/或來那度胺之適當之投與途徑及劑量可基於待治療之疾病之類型、HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體之類型、疾病之嚴重性及病程、個體之臨床狀況、個體之臨床病史及對治療之反應,及主治醫師之裁量權確定。給藥可藉由任何合適之途徑,例如藉由注射,諸如靜脈內或皮下注射,部分取決於該投與係短暫抑或長期的。本文審慎考慮各種給藥時間表,包括(但不限於)在各種時間點內之單次或多次投與、推注投與及脈衝輸注。該HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體及來那度胺適合向病患一次或在一系列治療內投與。
本發明之組合可單獨使用或與療法中之其他藥劑一起使用。例如,本發明之組合可與至少一種額外治療劑共投與。在某些態樣中,額外治療劑係抗癌劑,例如化學治療劑、腫瘤細胞增生之抑制劑或腫瘤細胞凋亡之活化劑。本發明之組合亦可與放射療法組合。
如本文提供之套組通常包含一或多個容器及在該容器上之標籤或包裝插頁或與該容器相關聯之標籤或包裝插頁。合適之容器包括(例如)瓶、小瓶、注射器、IV溶液袋等。該等容器可由各種材料諸如玻璃或塑膠製成。該容器容納組合物本身或組合物與有效治療、預防及/或診斷病症之另一組合物之組合且可具有無菌進入口(例如該容器可為靜脈內溶液袋或具有可由皮下注射針刺穿之塞子之小瓶)。該組合物中之至少一種活性劑係待用於本發明之組合中之HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體。另一活性劑係待用於本發明之組合中之來那度胺,其可在與該雙特異性抗體相同之組合物及容器中,或可提供於不同之組合物及容器中。該標籤或包裝插頁指示該(等)組合物用於治療選擇之病症(諸如癌症)。
在一項態樣中,本發明提供意欲治療癌症之套組,其在相同或分開之容器中包含(a) HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體,及(b)來那度胺,及視需要進一步包含(c)含有指導使用組合治療作為治療癌症之方法之印刷說明書之包裝插頁。此外,該套組可包含(a)其中含有組合物之第一容器,其中該組合物包含HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體;(b)其中含有組合物之第二容器,其中該組合物包含來那度胺;及視需要(c)其中含有組合物之第三容器,其中該組合物包含另一細胞毒性劑或另外治療劑。本發明之此等態樣中之套組可進一步包含指示該等組合物可用於治療癌症之包裝插頁。或者或另外,該套組可進一步包含含有醫藥上可接受之緩衝劑諸如注射用抑菌水(BWFI)、磷酸鹽緩衝鹽水、林格氏溶液(Ringer’s solution)及葡萄糖溶液之第三(或第四)容器。其可進一步包括商業及用戶立場所需之其他材料,包括其他緩衝劑、稀釋劑、過濾器、針及注射器。
胺基酸序列
序列 | SEQ ID NO | |
CD3 HCDR1 | GYTMN | 1 |
CD3 HCDR2 | LINPYKGVSTYNQKFKD | 2 |
CD3 HCDR3 | SGYYGDSDWYFDV | 3 |
CD3 LCDR1 | RASQDIRNYLN | 4 |
CD3 LCDR2 | YTSRLES | 5 |
CD3 LCDR3 | QQGNTLPWT | 6 |
CD3 VH | EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYSFTGYTMNWVRQAPGKGLEWVALINPYKGVSTYNQKFKDRFTISVDKSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTLVTVSS | 7 |
CD3 VL | DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIRNYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRLESGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQQGNTLPWTFGQGTKVEIK | 8 |
WT1 HCDR1 | SYAIS | 9 |
WT1 HCDR2 | GIIPIFGTANYAQKFQG | 10 |
WT1 HCDR3 | SIELWWGGFDY | 11 |
WT1 LCDR1 | RASQSISSWLA | 12 |
WT1 LCDR2 | DASSLES | 13 |
WT1 LCDR3 | QQYEDYTT | 14 |
WT1 VH | QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSIELWWGGFDYWGQGTTVTVSS | 15 |
WT1 VL | DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTIGSLQPDDFATYYCQQYEDYTTFGQGTKVEIK | 16 |
WT1 VL-CL(RK) | DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTIGSLQPDDFATYYCQQYEDYTTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDRKLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC | 17 |
WT1 VH-CH1(EE)-Fc(孔,PGLALA) | QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSIELWWGGFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVEDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDEKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP | 18 |
CD3 VH-CL | EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYSFTGYTMNWVRQAPGKGLEWVALINPYKGVSTYNQKFKDRFTISVDKSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTLVTVSSASVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC | 19 |
WT1 VH-CH1(EE)-CD3 VL-CH1-Fc(結,PGLALA) | QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSIELWWGGFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVEDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDEKVEPKSCDGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIRNYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRLESGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQQGNTLPWTFGQGTKVEIKSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP | 20 |
非靶向VH | EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKGSGFDYWGQGTLVTVSS | 21 |
非靶向VL | EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPLTFGQGTKVEIK | 22 |
人類WT1 | MGSDVRDLNALLPAVPSLGGGGGCALPVSGAAQWAPVLDFAPPGASAYGSLGGPAPPPAPPPPPPPPPHSFIKQEPSWGGAEPHEEQCLSAFTVHFSGQFTGTAGACRYGPFGPPPPSQASSGQARMFPNAPYLPSCLESQPAIRNQGYSTVTFDGTPSYGHTPSHHAAQFPNHSFKHEDPMGQQGSLGEQQYSVPPPVYGCHTPTDSCTGSQALLLRTPYSSDNLYQMTSQLECMTWNQMNLGATLKGVAAGSSSSVKWTEGQSNHSTGYESDNHTTPILCGAQYRIHTHGVFRGIQDVRRVPGVAPTLVRSASETSEKRPFMCAYPGCNKRYFKLSHLQMHSRKHTGEKPYQCDFKDCERRFSRSDQLKRHQRRHTGVKPFQCKTCQRKFSRSDHLKTHTRTHTGKTSEKPFSCRWPSCQKKFARSDELVRHHNMHQRNMTKLQLAL | 23 |
VLD肽 | VLDFAPPGA | 24 |
RMF肽 | RMFPNAPYL | 25 |
HLA-A2 | GSHSMRYFFTSVSRPGRGEPRFIAVGYVDDTQFVRFDSDAASQRMEPRAPWIEQEGPEYWDGETRKVKAHSQTHRVDLGTLRGYYNQSEAGSHTVQRMYGCDVGSDWRFLRGYHQYAYDGKDYIALKEDLRSWTAADMAAQTTKHKWEAAHVAEQLRAYLEGTCVEWLRRYLENGKETLQRTDAPKTHMTHHAVSDHEATLRCWALSFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRPAGDGTFQKWAAVVVPSGQEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWE | 26 |
人類CD3 | MQSGTHWRVLGLCLLSVGVWGQDGNEEMGGITQTPYKVSISGTTVILTCPQYPGSEILWQHNDKNIGGDEDDKNIGSDEDHLSLKEFSELEQSGYYVCYPRGSKPEDANFYLYLRARVCENCMEMDVMSVATIVIVDICITGGLLLLVYYWSKNRKAKAKPVTRGAGAGGRQRGQNKERPPPVPNPDYEPIRKGQRDLYSGLNQRRI | 27 |
食蟹猴CD3 | MQSGTRWRVLGLCLLSIGVWGQDGNEEMGSITQTPYQVSISGTTVILTCSQHLGSEAQWQHNGKNKEDSGDRLFLPEFSEMEQSGYYVCYPRGSNPEDASHHLYLKARVCENCMEMDVMAVATIVIVDICITLGLLLLVYYWSKNRKAKAKPVTRGAGAGGRQRGQNKERPPPVPNPDYEPIRKGQQDLYSGLNQRRI | 28 |
hIgG1 Fc區 | DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP | 29 |
實例
下列係本發明之方法及組合物之實例。應瞭解鑒於上文提供之一般描述,可實踐各種其他態樣。
實例1:WT1 TCB與來那度胺之組合
材料及方法
使用原發性AML細胞之離體細胞毒性分析係在用10%胎牛血清(FCS)、10%馬血清及1%青黴素/鏈黴素/麩醯胺酸補充之α-MEM培養基中進行。該培養基係用重組人類顆粒球群落刺激因子(rhG-CSF)、介白素(IL)-3及血小板生成素(TPO) (Peprotech, Hamburg, Germany)及57.4 mM β-巰基乙醇(Sigma-Aldrich, Munich, Germany)補充。將原發性AML細胞解凍並在6孔盤中於經輻射之鼠MS5基質細胞之飼養層上預培養。3至4天後,將原發性AML細胞轉移至96孔盤中之新鮮飼養層上。添加10 nM濃度之WT1 TCB (SEQ ID NO 9至16 (HLA-A2/WT1 CDR及V區)、1至8 (CD3 CDR及V區)及17至20 (完全重鏈及輕鏈),如圖1中之分子結構)。添加10 μM濃度之來那度胺。將來自健康供體之T細胞解凍並與原發性AML細胞以1:2之E:T比率共培養4天。使用相似結構之非靶向TCB (結合僅CD3,但不結合腫瘤抗原,具有SEQ ID NO 21至22作為非結合之V區)作為對照。
CD33 (REA775)、CD2 (REA972;均來自:Miltenyi, Heidelberg, Germany)、CD69 (FN50)、PD1 (29F.1A12)、TIM3 (F38-2E2)、CD45RA (HI100)、CCR7 (G43H7;全部來自:Biolegend, San Diego, USA)之表面表現係藉由流式細胞分析技術(CytoFLEX S, Beckman Coulter Life Sciences, Krefeld, Germany)評估。細胞培養上清液中之細胞介素濃度係使用人類Th1/Th2細胞介素套組(BD Biosciences, Heidelberg, Germany)定量。
結果
WT1 TCB與來那度胺之組合進一步增強WT1 TCB介導之T細胞毒性(在第3至4天之平均特異性裂解:32±10%相比於59±9%;p=0.0017;±SEM;n=13),而來那度胺與非靶向對照TCB之組合不導致顯著增加。參見圖2。
WT1 TCB與來那度胺之組合誘導促炎細胞介素之分泌及抗炎細胞介素IL-10之減少,而來那度胺與非靶向對照TCB之組合不導致顯著變化。參見圖3。
WT1-TCB與來那度胺之組合促進幼稚T細胞向中央記憶(TCM
)表現型之分化,其特徵在於CD45RA之下調,而來那度胺與非靶向對照TCB之組合不影響分化。參見圖4。
儘管已出於清楚瞭解之目的藉由說明及實例更詳細描述前述發明,但該等描述及實例不應視為限制本發明之範圍。本文引用之所有專利及科學文獻之揭示內容係以全文引用之方式明確併入本文中。
圖1:實例中使用之靶向HLA-A2/WT1之T細胞雙特異性(TCB)抗體分子(「WT1 TCB」)之示意圖。該分子包含針對CD3之單一抗原結合部分、針對HLA-A2/WT1之兩個抗原結合位點,及Fc域。
圖2:來那度胺增強WT1 TCB介導之細胞毒性。(A)代表性實例:在與健康供體T細胞共培養第4、7及13天後,原發性AML細胞之特異性裂解。各圖之左上區域:T細胞,各圖之右下區域:白血病細胞;及給定百分比。(B)總結:在共培養之第4天,原發性AML細胞之特異性裂解;四分位數範圍之中位數;威爾克森(Wilcoxon)配對符號秩檢定;n=13。
圖3:在原發性AML細胞及健康供體T細胞之共培養中使用WT1 TCB及來那度胺治療4天後,上清液中之細胞介素含量。(A、B、D、E、F)一經與WT1-TCB組合即增加促炎細胞介素之含量((A)介白素(IL)-2,(B) TNF-α,(D) IFN-γ,(E) IL-6,(F) IL-4),(C)降低抗炎IL-10之含量;*:p<0.05,**:p<0.005,n.s.:不顯著;威爾克森配對符號秩檢定;n=9。
圖4:使用WT1 TCB及來那度胺治療後,在與原發性AML細胞之共培養中之健康供體CD3+
T細胞之表現型。(A) CD45RA及CCR7表現分析之代表性實例;(B)治療7至10天後,T幼稚
及TCM
之百分比,四分位數範圍之中位數,威爾克森配對符號秩檢定,n=8。
Claims (10)
- 一種HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體之用途,其用於製造用於治療個體之癌症之藥劑,其中該治療包括投與該HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體與來那度胺(lenalidomide)之組合。
- 一種套組,其包含含有HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體之第一藥劑及含有來那度胺之第二藥劑,及視需要進一步包含含有用於投與該第一藥劑與該第二藥劑之組合以治療個體之癌症之說明書之包裝插頁。
- 如請求項1或2之用途或套組,其中該HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體包含: (i)第一抗原結合部分,其特異性結合至CD3及包含含有SEQ ID NO: 1之重鏈CDR (HCDR) 1、SEQ ID NO: 2之HCDR2及SEQ ID NO: 3之HCDR3之重鏈可變區;及含有SEQ ID NO: 4之輕鏈CDR (LCDR) 1、SEQ ID NO: 5之LCDR2及SEQ ID NO: 6之LCDR3之輕鏈可變區;及 (ii)第二抗原結合部分,其特異性結合至HLA-A2/WT1及包含含有SEQ ID NO: 9之重鏈CDR (HCDR) 1、SEQ ID NO: 10之HCDR2及SEQ ID NO: 11之HCDR3之重鏈可變區;及含有SEQ ID NO: 12之輕鏈CDR (LCDR) 1、SEQ ID NO: 13之LCDR2及SEQ ID NO: 14之LCDR3之輕鏈可變區。
- 如請求項3之用途或套組,其中該HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體包含特異性結合至HLA-A2/WT1之第三抗原結合部分及/或由第一及第二次單元構成之Fc域。
- 如請求項3之用途或套組,其中該HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體包含: (i)特異性結合至CD3之第一抗原結合部分,其包含含有SEQ ID NO: 1之重鏈CDR (HCDR) 1、SEQ ID NO: 2之HCDR2及SEQ ID NO: 3之HCDR3之重鏈可變區;及含有SEQ ID NO: 4之輕鏈CDR (LCDR) 1、SEQ ID NO: 5之LCDR2及SEQ ID NO: 6之LCDR3之輕鏈可變區,其中該第一抗原結合部分係其中Fab輕鏈及Fab重鏈之可變區或恆定區交換之互換Fab分子; (ii)特異性結合至HLA-A2/WT1之第二及第三抗原結合部分,其包含含有SEQ ID NO: 9之重鏈CDR (HCDR) 1、SEQ ID NO: 10之HCDR2及SEQ ID NO: 11之HCDR3之重鏈可變區;及含有SEQ ID NO: 12之輕鏈CDR (LCDR) 1、SEQ ID NO: 13之LCDR2及SEQ ID NO: 14之LCDR3之輕鏈可變區,其中該第二及第三抗原結合部分各為Fab分子,尤其習知Fab分子; (iii)由第一及第二次單元構成之Fc域, 其中該第二抗原結合部分係於該Fab重鏈之C端融合至該第一抗原結合部分之Fab重鏈之N端,及該第一抗原結合部分係於該Fab重鏈之C端融合至該Fc域之第一次單元之N端,且其中該第三抗原結合部分係於該Fab重鏈之C端融合至該Fc域之第二次單元之N端。
- 如請求項3之用途或套組,其中該HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體之該第一抗原結合部分包含與SEQ ID NO: 7之胺基酸序列相同至少約95%、96%、97%、98%、99%或100%之重鏈可變區序列及與SEQ ID NO: 8之胺基酸序列相同至少約95%、96%、97%、98%、99%或100%之輕鏈可變區序列,及/或該HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體之該第二及(若存在)第三抗原結合部分包含與SEQ ID NO: 15之胺基酸序列相同至少約95%、96%、97%、98%、99%或100%之重鏈可變區序列及與SEQ ID NO: 16之胺基酸序列相同至少約95%、96%、97%、98%、99%或100%之輕鏈可變區序列。
- 如請求項3之用途或套組,其中該HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體之該第一抗原結合部分係其中Fab輕鏈及Fab重鏈之可變區交換之互換Fab分子,且其中該HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體之該第二及(若存在)第三抗原結合部分係習知Fab分子,其中在恆定域CL中,於位置124之胺基酸係經離胺酸(K)、精胺酸(R)或組胺酸(H) (根據Kabat編號)獨立取代及於位置123之胺基酸係經離胺酸(K)、精胺酸(R)或組胺酸(H) (根據Kabat編號)獨立取代,及在恆定域CH1中,於位置147之胺基酸係經麩胺酸(E)或天冬胺酸(D) (根據Kabat EU索引編號)獨立取代及於位置213之胺基酸係經麩胺酸(E)或天冬胺酸(D)獨立取代(根據Kabat EU索引編號)。
- 如請求項4之用途或套組,其中該HLA-A2/WT1 x CD3雙特異性抗體之該Fc域包含促進該Fc域之該第一及該第二次單元之結合之修飾,及/或該Fc域包含減少結合至Fc受體及/或效應功能之一或多個胺基酸取代。
- 如請求項1或2之用途或套組,其中該癌症係WT1陽性癌症。
- 如請求項1或2之用途或套組,其中該癌症係急性骨髓性白血病(AML)。
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