TW202128220A - 穩定液體組合物、其製備方法及含有其之調配物 - Google Patents

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Abstract

本說明書提供一種含有抗VEGF抗體之液體組合物，及一種製備該組合物之方法，其中藉由使用含有乙酸鹽之緩衝液及調節pH及/或重量莫耳滲透濃度，在打開及/或稀釋以用於滴注之後，該液體組合物之未使用部分具有改良之穩定性。

Description

穩定液體組合物、其製備方法及含有其之調配物
本發明係關於穩定液體組合物、其製備方法及含有該穩定液體組合物之調配物。
在1986年，小鼠抗CD3抗體經FDA批准作為第一個用於預防移植排斥反應之單株抗體治療(Yednock等人, Nature 356, 63-66 (1992))。此後，已開發及銷售多種治療性抗體，且治療性抗體之市場競爭亦隨著市場專營權到期的一些原始藥物之生物類似產品的出現而增加。因此，將使用調配物最佳化及開發來最大化各治療性抗體之穩定性視為發展其競爭力的方法之一。由於抗體之大分子量及複雜結構，重要的是考慮各抗體藥物之特徵來開發調配物及最小化由各藥物之儲存條件及外部環境條件所致之抗體去穩定。此將最大化藥物功效及最小化非所需的藥物相關不良作用或毒性。
抗體去穩定之類型包括化學類型，包括共價鍵之變化，及物理類型，包括三維空間結構之修飾。化學類型之去穩定包括例如抗體水解、氧化、去醯胺、二硫鍵修飾及外消旋作用，且物理類型之去穩定包括抗體聚集及抗體吸附，及導致抗體活性降低之去摺疊。
在使用前儲存或分佈期間或當打開容器以供使用或製備滴注溶液時，抗體可能會因物理因素而經改質，或者抗體之活性可能會因抗體之改質、氧化或聚集而降低，或者可能會出現抗體之結構修飾。因此，需要使抗體結構穩定以免受加工及處理抗體過程中產生的各種因素及環境影響。
出於以上原因，在當前市售產品Avastin®的情況下，當打開含有該抗體之容器(當藉由注射器自容器取出藥物時)以製備用於投藥之滴注溶液時，由於穩定性問題，應丟棄容器中剩餘的未使用部分。另外，眾所周知的是，藉由用0.9%注射用生理鹽水稀釋藥物而獲得之溶液可在2至30℃下儲存48小時。
若打開容器之後的未使用部分或稀釋溶液可以對於醫藥產品可接受之水準維持可接受穩定性及品質，則不僅可有效地利用打開/稀釋之醫藥產品，且亦可為負責使用前等待時間及儲存條件之健保工作者提供更靈活的工作環境。因此，藥物延長之「在用」穩定性將允許處理打開之容器及稀釋溶液的方法更精簡，提高行醫者之效率以及藥物之成本效益，例如藉由提供多劑量產品來達成。
然而，由於影響調配組合物之穩定性的因素取決於產品及情況而變化，因此難以開發能夠顯示長期在用穩定性之穩定調配物。特定言之，在液體調配物之情況下，藥物可容易地與構成組分反應且對氧氣高度敏感。另外，在醫藥領域中，尤其在蛋白質調配物領域中，難以預測特定藥物與構成組分之間的相互作用，且已需要開發能夠在各種環境中維持其穩定性的穩定調配物。
[技術問題]
因此，本發明提供含有抗VEGF抗體之調配物，該調配物具有增強之儲存穩定性及「在用」穩定性。特定言之，本發明提供含有抗VEGF抗體之調配物，該調配物可(i)確保使用該調配物製備之醫藥產品的長期儲存穩定性，及(ii)甚至在打開調配物之封裝以供使用之後及/或在稀釋以用於滴注之後維持其穩定性。 [技術解決方案]
在一個實施例中，本發明提供一種含有穩定液體組合物之調配物，該組合物含有抗VEGF抗體，具有重量莫耳滲透濃度及/或pH之特定範圍，該調配物能夠維持長期儲存穩定性及實際使用環境中之穩定性。
本發明之第一態樣提供含有穩定液體組合物之調配物，該穩定液體組合物含有抗VEGF抗體及乙酸鹽緩衝液，且具有5.2或更小的pH。
在一個實施例中，液體組合物可具有270 mOsm/kg或更小的重量莫耳滲透濃度。視情況，重量莫耳滲透濃度可為≤270 mOsm/kg或˂270 mOsm/kg。
調配物或液體組合物可不含磷酸、胺基酸或胺基酸之鹽。另外，可藉由以0.1至5.5:1之莫耳比混合乙酸鹽及乙酸來製備乙酸鹽緩衝液。
液體組合物可進一步含有糖或多元醇。特定言之，液體組合物可進一步含有海藻糖。
在另一實施例中，調配物可為適合於注射之非經腸調配物，且液體組合物可在小瓶或輸液袋中穩定。特定言之，在打開小瓶之後，調配物中所含之液體組合物可在10℃或更低的溫度下維持穩定性持續至少72小時。另外，在打開小瓶之後，液體組合物可在10℃或更低的溫度下維持穩定性持續至少7週。小瓶可為玻璃小瓶。
在另一實施例中，在稀釋液體組合物及將其置於輸液袋中之後，調配物可在10℃或更低溫度下維持穩定性持續至少45天。輸液袋可為聚烯烴袋。
在另一實施例中，調配物可具有 (i)1.0或更小的高分子量物質的百分比變化(Δ% HMW)及/或5.1或更小的酸性變異體的百分比變化(△%酸性)，如在將液體組合物儲存於30℃或更低溫度下至少5週之後所量測， (ii)1.8或更小的高分子量產物的百分比變化(Δ% HMW)及/或15.5或更小的酸性變異體的百分比變化(△%酸性)，如在將液體組合物儲存於30℃或更低溫度下至少6個月之後所量測；或(iii)1.6或更小的高分子量物質的百分比變化(Δ% HMW)，如在將液體組合物儲存於30℃或更高溫度下至少4週之後所量測。
本發明之第二態樣提供一種製備含有抗VEGF抗體及乙酸鹽緩衝液之穩定液體組合物的方法。
在一個實施例中，乙酸鹽緩衝液係藉由以0.1至5.5:1之莫耳比混合乙酸鹽及乙酸來製備。乙酸鹽與抗體之間的莫耳比可為50至360:1。
在另一實施例中，方法可進一步包含將液體組合物之pH調節至5.2或更小的步驟。方法可進一步包含將液體組合物之重量莫耳滲透濃度調節至270 mOsm/kg或更小的步驟。液體組合物可在小瓶或輸液袋中穩定。
本發明之第三態樣提供藉由本文所述之方法製備的液體組合物。 [有利效應]
不受理論束縛，已發現含有抗VEGF抗體之液體組合物的pH及/或重量莫耳滲透濃度可為影響本發明調配物之穩定性的因素。亦出人意料地發現重量莫耳滲透濃度之特定範圍及pH之特定範圍能夠以協同方式增強包含抗VEGF抗體之液體組合物的穩定性。因此，將pH及/或重量莫耳滲透濃度調節至特定值使得有可能提供如下調配物：不僅展示改良的針對抗體處理過程中存在之各種因素及環境(例如在室溫下持續超過5週)的儲存穩定性，且亦展現優良的「在用」穩定性，使得在打開及/或稀釋以製備用於滴注之後，任何未使用部分保持穩定及可用。
除非另外定義，否則本說明書中所用之所有技術及科學術語均具有本發明所涉及之領域的技術人員通常所理解相同的含義。另外，儘管較佳方法或樣品描述於本說明書中，但與其類似或等效之彼等亦包括於本發明之範疇中。一般而言，本說明書中所用之命名法及量測方法已在此項技術中熟知及常用。另外，儘管未規定，但將本發明中所述之數值視為包括「約」之含義。由術語「約」指示之數目可為在指示值之±10%範圍內的值。
本發明之一個態樣係關於含有穩定液體組合物之調配物，該穩定液體組合物含有VEGF結合抗體(抗VEGF抗體)及乙酸鹽緩衝液，且具有5.2或更小的pH。 乙酸鹽緩衝液
在本說明書中，術語「緩衝液」係指藉由混合弱酸及共軛鹼或混合弱鹼及共軛酸製備的溶液。在一個實施例中，「乙酸鹽緩衝液」可藉由混合有效量的乙酸鹽及乙酸製備，以便維持液體組合物之所需pH，以使VEGF結合抗體穩定、使pH之變化最小化及確保組合物之穩定性。
乙酸鹽可為乙酸鈉、乙酸鉀、乙酸鈣、乙酸鎂或其酸酐或水合物，但不限於此。
乙酸鹽可包括乙酸鈉、其酸酐或其水合物。在一特定實施例中，乙酸鈉水合物可為三水合乙酸鈉。
可將乙酸與乙酸鹽以特定比混合，以調節液體組合物之pH及確保調配物之穩定性。在一個實施例中，可藉由以0.1至5.5:1之莫耳比混合乙酸鹽及乙酸來製備乙酸鹽緩衝液。特定言之，莫耳比可為0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4(亦可包括在陳述值之間的範圍內的值)。在一個實施例中，莫耳比可為0.3至5.4:1。
可如下地確定莫耳比：藉由基於乙酸鹽之已知分子量(例如乙酸鈉之82.0 g/mol或三水合乙酸鈉之136.08 g/mol)來計算乙酸鹽之莫耳濃度，基於乙酸之已知分子量(60.05 g/mol)來計算乙酸之莫耳濃度，且接著計算乙酸鹽之莫耳濃度與乙酸之莫耳濃度之比。
在一個實施例中，緩衝液中之乙酸鹽緩衝液的莫耳濃度可為乙酸根離子之濃度。特定言之，乙酸鹽緩衝液之莫耳濃度可為10至100 mM，例如20、30、40、60、70、80或90 mM(亦可包括陳述值之間的範圍內的值)。在一個實施例中，其可為40至60 mM。
經製備以具有乙酸鹽與乙酸之間的上述莫耳比之乙酸鹽緩衝液可具有上述莫耳濃度，且此外，莫耳比有助於下文所述之液體組合物之pH。 pH及重量莫耳滲透濃度
在一個實施例中，液體組合物含有藉由以上述莫耳比混合乙酸鹽及乙酸獲得之乙酸鹽緩衝液，且液體組合物之pH可為5.2或更小。
在一個實施例中，液體組合物之pH可為5.2或更小，例如5.2、5.1、5.0、4.9、4.8、4.7、4.6、4.5、4.4、4.3、4.2、4.1或4.0(亦可包括陳述值之間的範圍內的值)。在一個實施例中，液體組合物之pH可為4.0至5.2，或4.5至5.2。
在一個實施例中，液體組合物之重量莫耳滲透濃度可為270 mOsm/kg或更小。特定言之，重量莫耳滲透濃度可為210、220、230、240、250、260或270 mOsm/kg(亦可包括陳述值之間的範圍內的值)。在一個實施例中，重量莫耳滲透濃度可為≤270 mOsm/kg或˂270 mOsm/kg，且在另一實施例中，重量莫耳滲透濃度可為230至270 mOsm/kg。
具有上述範圍內之pH及/或重量莫耳滲透濃度的液體組合物具有改良之儲存穩定性，且可甚至在打開容器之後或在稀釋調配物以用於分配之後在含有液體組合物之調配物中維持穩定性。
即使已首先確認藥物之安全性及有效性，但難以預測打開/分配之藥物在實際使用環境中之穩定性及有效性。此係由於在打開之後可影響使用環境及穩定性之因素取決於產品或情況而顯著變化。特定言之，液體調配物對氧氣高度敏感，且可注射調配物為具有最高風險之調配物中之一者。本發明之液體組合物不僅可藉由調節其pH及/或重量莫耳滲透濃度而在室溫及熱應力條件下展現長期儲存穩定性，且亦在實際使用環境中在不影響品質或功效的情況下維持穩定性。
如本文說明書中所用之術語「調節pH及/或重量莫耳滲透濃度」意謂不僅控制pH及/或重量莫耳滲透濃度，而且組合物/調配物起初具有所需pH/重量莫耳滲透濃度以展現所需藥理學活性、長期儲存穩定性及在用穩定性。 液體組合物
根據本發明之「液體組合物」意謂混合物或組合，其包含VEGF結合抗體，該抗體為能夠展現生物效應之活性成分，及一或多種適合於治療投與之非活性成分(添加劑)。
液體組合物可進一步含有一或多種醫藥學上可接受之組分，以使得VEGF結合抗體可穩定展現其活性。在一些實施例中，液體組合物係指適合於投與該抗體以展現所需藥理學活性而無醫學判斷範疇內之副作用的調配物。
在一個實施例中，調配物或液體組合物不含磷酸、胺基酸或其鹽。
在另一實施例中，液體組合物可進一步含有糖或多元醇。特定言之，該糖可選自單醣、雙醣、寡醣、多醣及其衍生物。糖衍生物可意謂糖醇或糖酸。特定言之，糖或糖衍生物可選自由以下組成之群的一或多者：葡萄糖、果糖、半乳糖、蔗糖、乳糖、麥芽糖、海藻糖、果寡醣、半乳寡醣、甘露聚糖寡醣、澱粉、肝糖、纖維素、幾丁質、果膠、甘油、赤藻糖醇、蘇糖醇、阿糖醇、木糖醇、核糖醇、甘露糖醇、山梨糖醇、半乳糖醇、岩藻糖醇、艾杜糖醇、肌醇、庚七醇、異麥芽酮糖醇、麥芽糖醇、乳糖醇、麥芽三糖醇、麥芽四糖醇、聚葡糖醇、醛糖酸、古洛糖酸、糖醛酸、醛糖酸、水蘇糖、山梨糖、木糖、核糖、肌肉肌糖、肌肉肌醇及聚乙二醇。另外，多元醇可意謂在分子末端處具有兩個或更多個羥基(-OH)之有機化合物。在一個實施例中，多元醇可為選自由以下組成之群的任一者：丙二醇、甘油、丁二醇、丙二醇、二丙二醇、戊二醇、己二醇、聚乙二醇及山梨糖醇，但其不限於此。
在另一實施例中，液體組合物可進一步含有界面活性劑。
界面活性劑為影響調配物之表面張力的組分。界面活性劑可減小調配物之表面張力、減少調配之抗體在儲存或處理期間的聚集、減少粒子形成及防止粒子吸附至容器上等。界面活性劑可例如為聚山梨醇酯、泊洛沙姆、十二烷基硫酸鈉(SDS)、月桂基硫酸鈉(SLS)或其類似物。聚山梨醇酯可為聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯21、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯61、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯81、聚山梨醇酯85或其兩者或更多者之混合物。在一個實施例中，界面活性劑為聚山梨醇酯20。
為了調節至本發明之所需pH及重量莫耳滲透濃度，可在本文所述之範圍內調節糖、多元醇及界面活性劑之濃度。為了維持液體組合物之化學/物理穩定性，可取決於賦形劑之類型而進一步調節此等組分之特定濃度。
在下文中，將藉助於實例來詳細描述糖及界面活性劑之濃度。
在一個實施例中，糖可為海藻糖，特定言之二水合海藻糖。海藻糖之濃度可為30至200 mM，例如40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180或190 mM(亦可包括陳述值之間的範圍內的值)。在一個實施例中，液體組合物可含有濃度為50至200 mM，或100至190 mM之二水合海藻糖。
在一個實施例中，界面活性劑可為聚山梨醇酯20，且聚山梨醇酯之濃度可為0.001至10 g/ml，例如0.01、0.05、0.1、0.15、0.2、0.25、0.3、0.35、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0 or 9.0 g/mL(亦可包括陳述值之間的範圍內的值)。在一個實施例中，液體組合物可含有濃度為0.1至5 mg/ml之界面活性劑。
另外，緩衝液或液體組合物可進一步含有增積劑、黏度調節劑、抗氧化劑及/或張力劑。
在一個實施例中，本發明之液體組合物包含抗VEGF抗體、乙酸鹽緩衝液及一或多種醫藥學上可接受之賦形劑，其中組合物之pH為5.2或更小且重量莫耳滲透濃度為270 mOsm/kg或更小。在特定實施例中，液體組合物之pH為4.5至5.2且重量莫耳滲透濃度為230至270 mOsm/kg。在一個實施例中，液體組合物不含磷酸、胺基酸或其鹽。在另一實施例中，液體組合物之乙酸鹽緩衝液係藉由以0.1至5.5:1之莫耳比混合乙酸鹽及乙酸來製備。在一特定實施例中，莫耳比為0.3至5.4:1。在一個實施例中，抗VEGF抗體為貝伐單抗(bevacizumab)、蘭尼單抗(ranibizumab)或其生物類似抗體，且乙酸鹽為乙酸鈉、其酸酐或其水合物，諸如三水合乙酸鈉。
在一個實施例中，液體組合物包含抗VEGF抗體、乙酸鹽緩衝液及選自由以下組成之群的一或多種醫藥學上可接受之賦形劑：多元醇、糖、界面活性劑、增積劑、黏度調節劑、抗氧化劑及張力劑。在各種實施例中，液體組合物包含10至100 mg/ml抗VEGF抗體、10至100 mM乙酸鹽緩衝液、30至200 mM糖及0.001至10 g/ml界面活性劑，其中糖及界面活性劑係選自上文所述之群。組合物可進一步包含多元醇。在特定實施例中，液體組合物包含抗VEGF抗體、乙酸鹽緩衝液、海藻糖及聚山梨醇酯20。在一個實施例中，液體組合物包含抗VEGF抗體、乙酸鹽緩衝液、100至190 mM二水合海藻糖及0.1至5 mg/ml聚山梨醇酯20。在一個實施例中，抗VEGF抗體為貝伐單抗、蘭尼單抗或其生物類似抗體，且乙酸鹽為乙酸鈉、其酸酐或其水合物，諸如三水合乙酸鈉。液體組合物可具有(i)1.0或更小的高分子量產物的百分比變化(Δ% HMW)及/或5.1或更小的酸性變異體的百分比變化(△%酸性)，如在將液體組合物儲存於30℃或更低溫度下至少5週之後所量測；(ii)1.8或更小的高分子量產物的百分比變化(Δ% HMW)及/或15.5或更小的酸性變異體的百分比變化(△%酸性)，如在將液體組合物儲存於30℃或更低溫度下至少6個月之後所量測；或(iii)1.6或更小的高分子量產物的百分比變化(Δ% HMW)，如在將液體組合物儲存於30℃或更高溫度下至少4週之後所量測。 穩定液體組合物
如本文所用之術語「穩定」意謂在投與調配物、額外製備方法或儲存之前及之後，調配物基本上保持其物理穩定性、化學穩定性及/或生物活性。
該術語意謂組合物中之抗體之生物活性為約60%至約150%、約70%至約140%、或約80%至約120%、或90%至110%，如在將調配物暴露於特定應力條件(例如在熱應力條件下儲存、長期儲存或在敞開的小瓶、稀釋的輸液袋之情況下儲存)之後所量測，可判定該抗體保持生物活性。
另外，該術語意謂甚至在將液體組合物儲存於某些條件下之後，該抗體之物理穩定性、化學穩定性或生物活性經改良或維持於可接受水準。對於對儲存條件敏感之蛋白質調配物，重要的是開發可在各種環境中保持穩定性之調配物。
可藉由通常已知之方法來評估物理穩定性、化學穩定性及/或生物活性。特定言之，可以多種不同方式評估穩定性，包括評估聚集體形成(例如使用尺寸排阻層析、藉由量測濁度及/或藉由目視檢查)；藉由使用陽離子交換層析、成像毛細管等電聚焦(icIEF)或毛細管區帶電泳來評估電荷異質性；胺基端或羧基端定序；質譜分析；比較還原抗體及完整抗體之SDS-PAGE分析；肽圖(例如胰蛋白酶或LYS-C)分析；或評估抗體之生物活性或抗原結合功能。
當在藉由目視檢查顏色及/或透明度、UV光散射或尺寸排阻高效液相層析(SE-HPLC)進行評估時，抗體不聚集、沈澱及/或變性時，調配物保持物理穩定性。
在一個實施例中，可藉由量測液體組合物之聚集百分比(%)及單體百分比(%)；蛋白質之%酸性、%主要及%鹼性圖譜；及總純度來確定液體組合物中之抗體的穩定性。可藉由量測是否在液體組合物中形成2H1L(兩條重鏈及一條輕鏈)、高分子量物質(HMWS)及/或低分子量物質(LMWS)來確定總純度。
另外，可藉由量測是否形成抗體之變異體來確定調配物中之抗體的穩定性。變異體可包括由於抗體之修飾而改變電荷的變異體，且可為例如電荷變異體。相比於未經修飾之抗體，電荷變異體可更具酸性且可具有更低的pI值。酸性變異體可在其相比於主要抗體類型獲取負電荷或失去其正電荷時產生。另外，相比於未經修飾之抗體，電荷變異體可更具鹼性且可具有更高的pI值。鹼性變異體可在其相比於主要抗體類型獲取正電荷或失去其負電荷時產生。此等電荷變異體可藉由抗體氧化、去醯胺、離胺酸殘基C端加工、N端焦麩胺酸鹽形成或非酶醣基化來產生。用於分析電荷變異體之方法包括層析方法及電泳方法，其中前者包括離子交換層析(IEX)，且後者一般包括毛細管區帶電泳(CZE)、成像毛細管等電聚焦(icIEF)及其類似者。
由於液體組合物中之聚集或降解之抗體或變異體為雜質，因此在量測純度時量測排除此等雜質之抗體的濃度。在此情況下，穩定性與形成之雜質的百分比成反比。舉例而言，「穩定液體組合物」可意謂組合物中排除經聚集或降解抗體之抗體的濃度為90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%或更大，如在特定條件下儲存之後所量測。
可藉由抗原結合分析或中和分析來量測調配物中之抗體的生物活性。特定言之，當組合物中之抗體的生物活性為60%至150%、70%至140%、或80%至120%、或90%至110%(如在將調配物暴露於特定應力條件之後所量測)時。可判定該抗體保持生物活性。
調配物或液體組合物在室溫或超出室溫之熱應力條件(例如30℃或更高)下具有改良之長期儲存穩定性。在本說明書中，儘管未專門提及，但溫度條件可為在陳述溫度之±2℃範圍內的溫度。
在本說明書中，術語「改良之」穩定性意謂在相同條件下儲存之後量測之穩定性的實驗結果與市售之Avastin之物理/化學穩定性相等或比其更優越，及/或在相同條件下儲存之後量測之穩定性的實驗結果優於pH及/或重量莫耳滲透濃度在本發明中所主張之範圍之外的液體組合物。特定言之，在一些實施例中，相比於Avastin®，本發明之穩定液體組合物具有相等或更小的高分子量物質百分比變化的百分比變化(Δ% HMW)及/或相等或更小的酸性變異體的百分比變化(Δ%酸性)。此指示相比於pH及/或重量莫耳滲透濃度在本發明中所主張之範圍之外的調配物，亦獲得類似結果。亦即，本發明之調配物可展現改良之穩定性。
在本說明書中，「% HMW」或「%酸性」可計算為HMW物質/酸性變異體之曲線下面積除以整個層析圖之曲線下面積(相對含量)。術語「Δ% HMW」或「Δ%酸性」意謂% HMW或%酸性在儲存之前與之後的差異(或變化)。
在一個實施例中，液體組合物在室溫下具有改良之穩定性。在一個實施例中，液體組合物可具有5.1或更小的酸性變異體的百分比變化(△%酸性)，如在30℃或更低的溫度下儲存至少5週之後所量測。舉例而言，溫度可為25℃，且在上述條件下量測之△%酸性可為5.0、4.9、4.8、4.7、4.6、4.5或4.4(亦可包括陳述值之間的範圍內的值)。
另外，液體組合物可具有15.5或更小的酸性變異體的百分比變化(△%酸性)，如在30℃或更低的溫度下儲存至少6個月之後所量測。舉例而言，溫度可為25℃，且在上述條件下量測之△%酸性可為15.4、15.3、15.2、15.1、15.0、14.0、13.0、12.0、11.0、10.0(亦可包括陳述值之間的範圍內的值)。△%酸性可為10.0至15.0。
在另一實施例中，液體組合物可具有1.0或更小的高分子量物質的百分比變化(Δ% HMW)，如在30℃或更低的溫度下儲存至少5週之後所量測。溫度可為25℃，且Δ% HMW可為0.9或更小。
在另一實施例中，液體組合物可具有1.8或更小的高分子量物質的百分比變化(Δ% HMW)，如在30℃或更低之溫度下儲存至少6個月之後所量測。溫度可為25℃，且Δ% HMW可為1.3或更小。
在另一實施例中，調配物或液體組合物具有改良的熱應力條件下之儲存穩定性。
在一個實施例中，液體組合物可具有1.6或更小的高分子量物質的百分比變化(Δ% HMW)，如在30℃或更高之溫度下儲存至少4週之後所量測。在一個實施例中，溫度為40℃，且Δ% HMW為1.5或更低或1.4或更低(亦可包括陳述值之間的範圍內的值)。
在另一實施例中，調配物或液體組合物在實際使用環境中之熱應力條件或暴露應力條件(打開或稀釋以用於分配)下維持穩定性。特定言之，調配物可為注射液，且液體組合物可在小瓶或輸液袋中穩定。
在本說明書中，術語「維持(maintain/maintenance)」穩定性意謂在一定條件下儲存調配物之前及之後，在物理/化學/生物活性(或穩定性)中量測之實驗值無顯著變化。在各種實施例中，「維持」係指當相比於儲存之前的相同活性成分之單體時，在將調配物儲存6個月之後維持大於90%生物活性。在一些其他實施例中，該術語意謂在將調配物儲存6個月之後，維持原始生物活性之大於95%、96%、97%、98%或99%。或者，其可意謂相比於初始實驗值，生物活性之變化率(例如藉由VEGF結合分析或VEGF中和分析來量測)低於0.5、0.4或0.3。另外，「維持」活性可意謂生物活性之變化率(例如VEGF結合分析或VEGF中和分析)值為低於1.0或更小。舉例而言，變化率可在VEGF結合分析中為低於1.0、0.8、0.6、0.4或0.3(%相對結合活性)，且變化率可在VEGF中和分析中為低於0.5、0.4、0.3或0.2(%相對效能)。
在一個實施例中，在打開小瓶之後，液體組合物可在10℃或更低之溫度下維持穩定性持續至少72小時。在一個實施例中，溫度為2℃至8℃之溫度。
在另一實施例中，在稀釋液體組合物且將其置於輸液袋中之後，調配物可在10℃或更低之溫度下維持穩定性持續至少7週(35天)。在一個實施例中，溫度為2℃至8℃之溫度。特定言之，調配物可在以下各者之後維持穩定性：i)在2至8℃下儲存35天，ii)在i)之條件下儲存之後，在30℃下儲存48小時，或iii)在2至8℃下儲存45天之後，在30℃下儲存72小時。
輸液袋可為聚烯烴袋。調配物穿過由各種材料製成之容器或裝置，隨後最後向患者投與。由於調配物之穩定性及功效可取決於容器材料及稀釋劑而變化，應在開發調配物期間考慮調配物在實際使用條件下(例如在打開/稀釋之後)的穩定性。在本文所述之實例中，未觀測到抗VEGF抗體(例如貝伐單抗或蘭尼單抗)與聚烯烴之間的不相容性。
在另一實施例中，液體組合物可甚至在以未打開狀態將含有液體組合物之小瓶儲存於2至8℃之溫度下持續至少36個月，且接著連續儲存於30℃之溫度及65±5%之相對濕度下持續7週之後維持穩定性。 抗體
本發明之液體組合物中之「抗VEGF抗體」係指可結合至VEGF，或降低VEGF之表現量，或中和、阻斷、抑制、消除、降低或干擾與VEGF結合至VEGF受體相關之生物活性的抗體。術語「VEGF結合抗體」可與術語「抗VEGF抗體」互換使用。VEGF結合抗體不僅包括結合至VEGF之完整抗體形式，且亦包括該抗體之抗原結合片段。
在一個實施例中，該抗體可為重組人類化抗VEGF單株抗體，其為VEGF結合抗體。在一個實施例中，該抗體為稱為「Avastin®」之「貝伐單抗」、稱為「Lucentis®」之「蘭尼單抗」或其生物類似抗體。
該抗體可為抗VEGF抗體，其包含與該抗體之已知序列具有至少85%，特定言之90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更大，或100%序列一致性之序列。
本發明之另一態樣提供一種製備穩定液體組合物之方法，該穩定液體組合物含有貝伐單抗及乙酸鹽緩衝液。
在一個實施例中，乙酸鹽緩衝液可藉由以0.1至5.5:1之莫耳比混合乙酸鹽及乙酸來製備，且乙酸鹽與抗體之間的莫耳比可為50至360:1。
在另一實施例中，方法可包含將液體組合物之pH調節至5.2或更小的步驟，或將液體組合物之重量莫耳滲透濃度調節至270 mOsm/kg或更小的步驟。液體組合物可在小瓶或輸液袋中穩定。
應理解，在未針對以上製備方法單獨提及之內容中，與針對液體組合物或調配物所描述之內容共同的內容係如關於液體調配物在上文所述。
在另一態樣中，本發明提供藉由根據本發明之其他態樣之方法製備的液體組合物。
在下文中，將參考實例及實驗實例來詳細描述本發明。然而，以下實例僅為了說明本發明，且本發明之範疇不限於以下實例。量測方法
以下實驗實例中所用之物理化學及生物學分析方法為如下。 生物學及物理化學分析
蛋白質濃度係藉由使用UV-VIS分光光度計量測280 nm之波長處之吸光度(蛋白質濃度量測)(A280 )來計算，且pH係根據歐洲藥典(Ph. Eur.)2.2.3來量測。另外，根據相同指南，使用VEGF中和分析及VEGF結合分析來進行生物分析。純度及雜質測試係使用SE-HPLC(%HWM量測)及icIEF(%酸性量測)來進行。分析方法之詳細描述為如下。 尺寸排阻高效液相層析(SE-HPLC)
進行SE-HPLC方法以藉由使用非稀釋樣品之純注射來定量液體組合物之總聚集體含量，及藉由稀釋注射來定量單體含量。在用稀釋緩衝液(50 mM乙酸鈉，pH 5.0)稀釋至2 mg/mL之後運行稀釋注射。將所有樣品在30℃下培育24小時且使用適當HPLC系統注射至TSKgel G3000SWXL(TOSOHAAS，P/N 08541，5 μm/.8 mm×300 mm)管柱上。自動進樣器保持於30℃下，而管柱保持於環境溫度下。流動速率為0.5 mL/min且每個樣品之總運行時間為30分鐘。在280 nm處進行偵測且使用具有整合能力之軟體獲取及處理資料。將各峰之結果計算為總蛋白質面積之%。 成像毛細管等電聚焦(icIEF)
將參考標準物及樣品用適當緩衝液稀釋且使用適當ICE3系統注射至毛細管上。在214 nm處進行偵測且使用具有整合能力之軟體獲取及處理資料。將各峰之結果計算為總蛋白質面積之%。 VEGF結合分析
將ELISA盤之表面用含有牛血清白蛋白之緩衝液封閉，且藉由非特異性結合將VEGF-A165 吸附至盤表面上。添加連續稀釋之樣品以結合至VEGF-A165 ，接著洗滌以移除非特異性結合。接著，添加HRP結合之抗人類IgG(Fc特異性)抗體且與樣品反應預定時間，且接著添加適當顯色受質。此後，接著使用分光光度計在450 nm之波長處讀取測試盤。獲得與樣品濃度成正比之光學密度，且藉由在平行線分析軟體中分析自資料繪製之4參數曲線來確定樣品之相對VEGF-A165 結合活性。 VEGF中和分析
VEGFR2依賴性報導基因系統用於確定樣品之VEGF-A165 中和效力。特定言之，含有編碼報導子之核酸的HEK293-NFAT-VEGFR2-Luc細胞株可操作地連接於螢光素酶報導基因之啟動子區中之經活化T細胞特異性元件。VEGF結合至VEGFR2誘導VEGFR2依賴性信號路徑之活化及螢光素酶報導基因之表現。因此，基於對應於細胞株中之螢光素酶量的發光水準之劑量依賴性變化來計算各樣品之VEGF-A165 中和效力。I. 儲存穩定性
Avastin®之組成及其濃度為已知的：pH 6.2，25 mg/ml貝伐單抗，51 mM磷酸鈉，60 mg/ml α,α-二水合海藻糖及0.4 mg/ml聚山梨醇酯20。製備實例 1 ：製備液體組合物
如下表1中所示，本發明之液體組合物樣品係製備為樣品1-1、1-2及1-3，其各含有25.0 mg/ml貝伐單抗、60 mg/ml二水合海藻糖及0.4 mg/ml聚山梨醇酯20。樣品1-4為基於Avastin®之比較實例。各組合物樣品之緩衝液資訊、pH及重量莫耳滲透濃度係展示於下表1中。 [表1]
樣品 緩衝液 pH    重量莫耳滲透濃度 (mOsm/kg)
1-1 51 mM乙酸鈉 4.5 248.3
1-2 51 mM乙酸鈉 4.9 264.0
1-3 51 mM乙酸鈉 5.4 277.3
1-4 51 mM磷酸鈉 6.1 282.7
本發明樣品之三水合乙酸鈉及乙酸之量、乙酸鹽與乙酸之莫耳比係展示於下表2中。 [表2]
樣品 pH 三水合乙酸鈉(g/L) 乙酸(g/L) 乙酸鹽與乙酸之莫耳比
1-1 4.5 2.43 1.98 0.54:1
1-2 5.0 4.40 1.14 1.70:1
1-3 5.5 5.89 0.47 5.53:1
實例 1 ：評估儲存穩定性 0
製備實例1之樣品係儲存於以下條件下，且接著量測各樣品之高分子量物質的百分比變化(Δ% HMW)及酸性變異體的百分比變化(Δ%酸性)。儲存條件：i)25±2℃，60±5% RH，5週，ii)40±2℃，75±5% RH，5週。
量測結果展示於下表3及4中。 [表3]
儲存條件 樣品 高分子量物質%
0週 5週 %變化 (∆% HMWS)
i 1-1 2.0 2.9 0.9
1-2 2.4 3.9 1.5
1-3 3.4 5.5 2.1
1-4 3.2 4.2 1.0
ii 1-1 2.0 5.4 3.4
1-2 2.4 7.1 4.7
1-3 3.4 9.3 5.9
1-4 3.2 9.5 6.3
[表4]
儲存條件 樣品編號 酸性變異體%
0週 5週 %變化 (∆ %酸性)
i 1-1 42.9 43.5 0.6
1-2 42.9 44.4 1.5
1-3 42.7 44.9 2.2
1-4 30.4 33.8 3.4
ii 1-1 42.9 64.2 21.3
1-2 42.9 60.8 17.9
1-3 42.7 61.7 19.0
1-4 30.4 62.4 32.0
自上表3及4中之結果可確認，本發明之組合物樣品具有與市售Avastin®相等或優於其的物理/化學穩定性。另外，樣品可甚至在熱應力條件下維持穩定性。 製備實例 2 ：製備液體組合物
如下表5中所示，製備液體組合物樣品，其各含有貝伐單抗、乙酸鹽緩衝液、60 mg/ml二水合海藻糖及0.4 mg/ml聚山梨醇酯20。各組合物樣品之pH及重量莫耳滲透濃度係展示於下表5中。 [表5]
樣品 pH 重量莫耳滲透濃度 貝伐單抗 乙酸鹽緩衝液
mOsm/kg mg/ml mM
2-1 4.52 252 45 51
2-2 4.53 251 55 51
2-3 4.97 267 50 51
2-4 4.95 264 50 51
2-5 5.42 277 45 51
2-6 5.45 282 55 51
實例 2 ：評估儲存穩定性
製備實例2之樣品係儲存於以下條件下，且接著量測各樣品之高分子量物質的百分比變化(Δ% HMW)及酸性變異體的百分比變化(Δ%酸性)。儲存條件：25±2℃及5週。量測結果展示於下表6中。 [表6]
樣品 % 高 分子量物質 % 酸性 變異體
0 週 5 週 △% HMW 0 週 5 週 △% 酸性
2-1 2.02 2.56 0.54 32.0 35.9 3.9
2-2 2.11 2.77 0.66 31.9 35.3 3.4
2-3 2.94 3.72 0.78 31.8 36.1 4.3
2-4 2.97 3.85 0.88 31.9 36.1 4.2
2-5 4.51 5.60 1.09 31.8 37.0 5.2
2-6 5.04 6.37 1.33 31.8 37.0 5.2
表6展示本發明之組合物樣品展現改良之穩定性。製備實例 3 ： 液體組合物
如下表7中所示，製備液體組合物樣品，其各含有貝伐單抗、乙酸鹽緩衝液、60 mg/ml二水合海藻糖及0.4 mg/ml聚山梨醇酯20，且其具有不同pH及重量莫耳滲透濃度。 [表7]
樣品 pH 重量莫耳滲透濃度 貝伐單抗 乙酸鹽
mOsm/kg mg/ml mM
3-1 5.0 268 25.0 51.0
3-2 4.5 243 22.5 45.9
3-3 4.5 243 27.5 45.9
3-4 4.5 260 22.5 56.1
3-5 5.0 249 25.0 42.4
3-6 5.7 280 25.0 51.0
3-7 5.4 281 27.5 56.1
實例 3 ： 評估在室溫下之儲存穩定性 (6 個月 )
製備實例3之樣品係儲存於以下條件下，且接著量測各樣品之高分子量物質的百分比變化(Δ% HMW)及酸性變異體的百分比變化(Δ%酸性)。儲存條件：25±2℃及6個月。量測結果展示於下表8中。 [表8]
樣品 % 高 分子量物質 % 酸性變異體
初始 6 個月 △% HMW 初始 6 個月 △% 酸性
3-1 2.5 3.8 1.3 35.9 50.9 15.0
3-2 1.9 2.6 0.7 37.2 49.4 12.2
3-3 2.0 2.7 0.8 35.8 49.4 13.6
3-4 2.0 2.7 0.7 36.0 49.6 13.6
3-5 2.4 3.6 1.2 35.8 50.2 14.4
3-6 5.4 7.5 2.2 36.2 51.8 15.6
3-7 3.6 5.4 1.9 35.5 51.4 15.9
表8展示本發明之組合物樣品展現改良之穩定性。製備實例 4 ： 製備液體組合物
如下表9中所示，製備液體組合物樣品，其各含有貝伐單抗、乙酸鹽緩衝液、二水合海藻糖及聚山梨醇酯20，且其具有不同pH及重量莫耳滲透濃度。 [表9]
樣品 pH 重量莫耳滲透濃度 貝伐單抗 乙酸鹽緩衝液 二水合海藻糖 PS20
mOsm/kg mg/ml mM mg/ml mg/ml
4-1 4.93 268 25.0 51.0 60 0.4
4-2 4.52 221 22.5 45.9 54 0.6
4-3 4.48 223 27.5 45.9 54 0.2
4-4 4.49 239 27.5 56.1 54 0.6
4-5 4.49 241 22.5 56.1 54 0.2
4-6 4.47 265 22.5 45.9 66 0.2
4-7 4.46 263 27.5 45.9 66 0.6
4-8 5.41 245 22.5 45.9 54 0.2
4-9 5.41 243 27.5 45.9 54 0.6
4-10 5.42 268 22.5 56.1 54 0.6
4-11 5.41 267 27.5 56.1 54 0.2
4-12 5.4 283 22.5 45.9 66 0.6
4-13 5.41 284 27.5 45.9 66 0.2
4-14 5.40 307 22.5 56.1 66 0.2
4-15 5.40 310 27.5 56.1 66 0.6
實例 4 ：評估在熱應力條件下之儲存穩定性
製備實例4之樣品係儲存於以下條件下，且接著量測各樣品之高分子量物質的百分比變化(Δ% HMW)及酸性變異體的百分比變化(Δ%酸性)。儲存條件：40℃及4週。量測結果展示於下表10中。 [表10]
樣品 % 高分子量物質
0 週 4 週 △% HMW
4-1 2.53 3.90 1.4
4-2 2.09 2.79 0.7
4-3 2.10 2.81 0.7
4-4 2.10 3.32 1.2
4-5 2.08 2.83 0.8
4-6 2.05 2.85 0.8
4-7 2.07 2.88 0.8
4-8 3.56 5.59 2.0
4-9 3.77 5.63 1.9
4-10 3.48 5.47 2.0
4-11 3.78 5.69 1.9
4-12 3.53 5.26 1.7
4-13 3.59 5.37 1.8
4-14 3.52 5.37 1.9
4-15 3.67 5.76 2.1
表10展示本發明之組合物樣品展現改良之穩定性。製備實例 5 ： 製備液體組合物
如下表11中所示，製備液體組合物樣品，其各含有貝伐單抗、緩衝液、二水合海藻糖及聚山梨醇酯20，且其具有不同pH及重量莫耳滲透濃度。樣品5-2係基於Avastin®之調配物。 [表11]
樣品 pH 重量莫耳滲透濃度 貝伐單抗 緩衝液 二水合海藻糖 PS20
mOsm/kg mg/ml mM mg/ml mg/ml
5-1 5.0 267 25 乙酸鈉51mM 60 0.4
5-2 6.2 279 25 磷酸鈉51mM 60 0.4
實例 5 ：評估在熱應力條件下之儲存穩定性及生物活性
製備實例5之樣品係在以下條件下儲存，且接著與市售之Avastin®相比。儲存條件：40℃及5週。量測各樣品之高分子量物質的百分比變化(Δ% HMW)、酸性變異體的百分比變化(Δ%酸性)及生物活性。量測結果展示於下表12中。 [表12]
樣品 % HMW % 酸性
0 週 5 週 △% HMW 0 週 5 週 △% 酸性
5-1 1.6 4.6 3.0 32.2 54.2 22.0
5-2 2.8 8.0 5.2 27.3 57.6 30.3
樣品 VEGF 結合，% 相對 結合活性 報導基因分析， % 相對效能
0 週 5 週 降低變化率 0 週 5 週 降低變化率
5-1 99 91 0.08 89 80 0.10
5-2 103 94 0.09 91 76 0.16
降低變化率係藉由相比於初始量測值之變化量除以初始量測值來計算。自上表12中之結果可確認，本發明之組合物樣品具有與市售Avastin®等同或比其更高的化學/物理/生物穩定性，且可甚至在熱應力條件下維持穩定性。II. 評估長期儲存穩定性及在打開 / 稀釋之後的穩定性 製備實例 6 ： 製備液體組合物
製備液體組合物，其含有25 mg/ml貝伐單抗、4.8 mg/ml三水合乙酸鈉、0.95 mg/ml乙酸、60 mg /ml二水合海藻糖及0.4 mg/ml聚山梨醇酯20。 實例 6 ：評估長期儲存穩定性
製備實例6中製備之液體組合物之pH為5.0且重量莫耳滲透濃度為267 mOsm/kg。將液體組合物在2至8℃之溫度下儲存至少36個月，且接著儲存於以下條件下。儲存條件：30±2℃之溫度，65±5%之相對濕度，及5週。量測液體組合物之高分子量物質的百分比變化(Δ% HMW)、酸性變異體的百分比變化(Δ%酸性)及生物活性。量測結果展示於下表13中。 [表13]
% HMW % 酸性
0 週 5 週 △% HMW 0 週 5 週 △% 酸性
3.3 3.6 0.3 41.0 48.0 4.0
VEGF 結合，% 相對 結合活性 VEGF 中和分析， % 相對效能
0 週 5 週 降低變化率 0 週 5 週 降低變化率
100 102 -0.02 98 95 0.03
實例 7. 評估打開 / 刺穿之小瓶的穩定性
製備小瓶，其各含有400 mg(16 mL)液體組合物，該液體組合物含有與製備實例6之組分相同的組分。液體組合物之pH為5.1且重量莫耳滲透濃度為263 mOsm/kg。
用具有21G針之注射器自小瓶中之每一者無菌獲取15 mL液體組合物。如上文所述地製備打開/刺穿之小瓶樣品且在避光條件下儲存於5±3℃之溫度下持續35天，且接著量測各樣品之高分子量物質的百分比變化(Δ% HMW)、酸性變異體的百分比變化(Δ%酸性)及生物活性。量測結果展示於下表14中。 [表14]
% HMW % 酸性
0 週 5 週 △% HMW 0 週 5 週 △% 酸性
3.3 3.4 0.1 38.3 39.0 0.7
VEGF 結合，% 相對 結合活性 VEGF 中和分析， % 相對效能
0 週 5 週 降低變化率 0 週 5 週 降低變化率
94 96 -0.02 93 92 0.01
如自上表14中之結果可見，在打開之後未觀測到物理化學/生物學穩定性之顯著變化。 實例 8. 評估稀釋以用於滴注之穩定性
製備小瓶，其各含有100 mg(4 mL)液體組合物，該液體組合物含有與製備實例6之組分相同的組分。液體組合物之pH為5.1且重量莫耳滲透濃度為263 mOsm/kg。
小瓶在未打開狀態下儲存於30±2℃之溫度及65±5%之相對濕度下持續24小時，且接著用0.9%生理鹽水(氯化鈉)稀釋各小瓶之內容物，因此製備低濃度(1.4 mg/mL)之稀釋樣品。各稀釋樣品係在以下條件下儲存於聚烯烴袋中。 ＜儲存條件＞ C1：儲存於5±3℃下持續35天 C2：儲存於5±3℃下持續35天，且接著儲存於30±2℃下持續48小時 C3：儲存於5±3℃下持續45天，且接著儲存於30±2℃下持續72小時
在儲存於各條件下之後，量測稀釋之前及之後的蛋白質濃度。量測結果展示於下表15中。 [表15]
儲存條件 蛋白質濃度 (A280 )(mg/ml )
初始濃度 稀釋之後的濃度 △%
C1 1.4 1.4 0
C2 1.4 0
C3 1.4 0
儘管已報導可在塑膠容器中顯著吸收更多低濃度下之免疫球蛋白，但確認在稀釋之後維持本發明調配物中之蛋白質濃度。
另外，在將稀釋樣品儲存於上述條件下之後，量測各稀釋樣品之高分子量物質的百分比變化(Δ% HMW)、酸性變異體的百分比變化(Δ%酸性)及生物活性。量測結果展示於下表16中。 [表16]
儲存條件 % HMW % 酸性
初始 終點 △% HMW 初始 終點 △% 酸性
C1 2.9 2.9 0 38.1 39.2 1.1
C2 3.1 0.2 39.3 1.2
C3 3.1 0.2 38.5 0.4
儲存條件 VEGF 結合，% 相對 結合活性 VEGF 中和分析， % 相對效能
初始 終點 降低變化率 初始 終點 降低變化率
C1 98 96 0.02 106 87 0.18
C2 96 0.02 91 0.14
C3 97 0.01 102 0.04
如上表16中所示，除了維持物理化學穩定性以外，本發明調配物亦就結合活性及效力而言維持生物活性。 [工業實用性]
根據本發明之含有抗VEGF抗體之液體組合物有效地預防或治療血管新生相關疾病，諸如大腸直腸癌、肺癌、乳癌、腎細胞癌、神經膠母細胞瘤、卵巢癌、輸卵管癌、腹膜癌、子宮頸癌及其類似疾病，且因此可用作醫藥行業及醫學領域中之醫藥產品。

Claims (19)

  1. 一種包含抗VEGF抗體及乙酸鹽緩衝液之液體組合物，其中該液體組合物之pH為5.2或更小。
  2. 如請求項1之液體組合物，其中該液體調配物之重量莫耳滲透濃度為270 mOsm/kg或更小。
  3. 如請求項1之液體組合物，其中該調配物或該液體組合物不含磷酸、胺基酸或胺基酸之鹽。
  4. 如請求項1之液體組合物，其中該乙酸鹽緩衝液係藉由以0.1至5.5:1之莫耳比混合乙酸鹽及乙酸來製備。
  5. 如請求項1之液體組合物，其中該液體組合物進一步包含糖或多元醇。
  6. 如請求項1之液體組合物，其中該液體組合物進一步包含海藻糖。
  7. 如請求項1之液體組合物，其中該調配物為可注射調配物，且該液體組合物在小瓶或輸液袋中穩定。
  8. 如請求項1之液體組合物，其中在打開小瓶之後，該液體組合物在10℃或更低之溫度下維持穩定性持續至少72小時。
  9. 如請求項1之液體組合物，其中在打開小瓶之後，該液體組合物在10℃或更低之溫度下維持穩定性持續至少7週。
  10. 如請求項7之液體組合物，其中該小瓶為玻璃小瓶。
  11. 如請求項1之液體組合物，其中在稀釋該液體組合物且將其置於輸液袋中之後，該液體組合物在10℃或更低之溫度下維持穩定性持續至少45天。
  12. 如請求項7之液體組合物，其中該輸液袋為聚烯烴袋。
  13. 如請求項1之液體組合物，其具有 i) 1.0或更小的高分子量產物的百分比變化(Δ% HMW)及/或5.1或更小的酸性變異體的百分比變化(△%酸性)，如在將該液體組合物儲存於30℃或更低溫度下至少5週之後所量測； ii) 1.8或更小的高分子量產物的百分比變化(Δ% HMW)及/或15.5或更小的酸性變異體的百分比變化(△%酸性)，如在將該液體組合物儲存於30℃或更低溫度下至少6個月之後所量測；或 iii) 1.6或更小的高分子量產物的百分比變化(Δ% HMW)，如在將該液體組合物儲存於30℃或更高溫度下至少4週之後所量測。
  14. 如請求項1之液體組合物，其中該抗VEGF抗體為貝伐單抗、蘭尼單抗或其生物類似抗體。
  15. 一種製備包含抗VEGF抗體及乙酸鹽緩衝液之液體組合物之方法，其包含： 藉由以0.1至5.5:1之莫耳比混合乙酸鹽及乙酸來製備該乙酸鹽緩衝液。
  16. 如請求項15之方法，其進一步包含i)將該液體組合物之pH調節至5.2或更小的步驟，或ii)將該液體組合物之重量莫耳滲透濃度調節至270 mOsm/kg或更小的步驟。
  17. 如請求項15之方法，其中該抗VEGF抗體為貝伐單抗、蘭尼單抗或其生物類似抗體。
  18. 如請求項15之方法，其中該液體組合物在小瓶或輸液袋中穩定。
  19. 一種液體組合物，其藉由如請求項15之方法製備。
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