以RGMa片段為主的診斷分析
本發明係關於一種用於偵測且確定樣品中RGMa片段之分析，以及該分析用於確定、優化、預測及監測罹患神經變性疾病之個體之治療的用途。
多發性硬化(MS)為一種中樞神經系統之慢性炎性疾病。伴有釓投與之當前可用之MRI技術可發現在疾病過程期間發生的多種病變且用作生物標記物。然而，對腦脊液(CSF)及蛋白的研究可進一步理解疾病進程、慢性炎症及對治療(諸如鞘內延遲釋放類固醇投與)之反應之間的相互作用。
軸突再生之過程改善多發性硬化之臨牀結果。已知在髓磷脂及神經膠質結構中存在多種再生抑制劑，亦即髓磷脂相關糖蛋白；NogoA、OMgp(少突膠質髓磷脂糖蛋白)。另一種抑制劑為反義導向分子A (RGMa)，其亦阻礙神經元再生及功能恢復。RGMa為一種糖基磷脂醯肌醇(GPI)錨定糖蛋白，其為神經突生長之有效抑制劑且作為在CNS創傷或炎症後抑制神經元再生及功能恢復之重要因子出現。RGMa以膜結合及可溶形式存在，其皆為神經突生長抑制劑。RGMa定位於罹患創傷性腦損傷或缺血性中風之人類之CNS髓磷脂、新鮮病灶以及成熟疤痕組織中。
存在於腦及脊髓中之RGMa及其片段可促進神經變性且抑制神經再生。RGMa影響神經纖維之再生以及神經元之變性。使用基於ELISA之分析偵測RGMa物種，以識別再生活性之抑制。然而，此等分析缺少區分具有不同尺寸之RGMa片段之能力且通常不展示偵測不同RGMa片段所需之高敏感性水準。此外，基於ELISA之分析因為體液中之蛋白量較低而不能偵測到RGMa。需要一種具有較高敏感性且可偵測及區分RGMa片段以及使RGMa片段與罹患MS或任何其他神經變性疾病之患者之增強的功能恢復及再生相關聯之診斷分析。
本發明係關於一種偵測及量化樣品中至少一種RGMa片段之方法。該方法包含(a)自個體得到包含至少一種RGMa片段之樣品；(b)將該樣品與捕捉結合性蛋白質接觸，其中該捕捉結合性蛋白質結合至少一種RGMa片段以形成捕捉結合性蛋白質-RGMa片段複合物；(c)將該樣品與偵測結合性蛋白質接觸，其中該偵測結合性蛋白質與捕捉結合性蛋白質相互作用以形成偵測結合性蛋白質-捕捉結合性蛋白質RGMa片段複合物，以及(d)偵測且量化樣品中至少一種RGMa片段。該至少一種RGMa片段可為具有約1 kDa至約65 kDa之尺寸之RGMa片段。該RGMa片段可具有10 kDa、18 kDa、20 kDa、30 kDa、40 kDa、50 kDa或65 kDa之尺寸。RGMa片段可選自由18 kDa RGMa片段、30 kDa RGMa片段及40 kDa RGMa片段組成之群。在步驟(b)前，可利用凝膠電泳分離至少一種RGMa片段。可偵測至少兩種RGMa片段。該至少兩種RGMa片段之尺寸可為30 kDa及40 kDa。可檢測至少三種RGMa片段。該至少三種RGMa片段之尺寸可為18 kDa、30 kDa及40 kDa。該至少一種RGMa片段可為可溶性RGMa片段。該RGMa片段之尺寸可利用SDS-PAGE測定。SDS PAGE可為4-15%。捕捉結合性蛋白質可為RGMa-選擇性抗體。該抗體可為生物素化RGMa-選擇性抗體。偵測結合性蛋白質可為四價抗生物素蛋白且可偵測標記可為生物素化辣根過氧化酶。可利用過氧化酶染色套組偵測至少一種RGMa片段。該RGMa片段可為人類RGMa片段。方法樣品可包含腦脊液、血液、血清或血漿。
本發明係關於一種偵測及量化樣品中至少一種RGMa片段之方法。該方法包含(a)自個體得到包含至少一種RGMa片段之樣品；(b)將該樣品與捕捉結合性蛋白質接觸，其中該捕捉結合性蛋白質結合至少一種RGMa片段以形成捕捉結合性蛋白質-RGMa片段複合物；(c)將該樣品與偵測結合性蛋白質接觸，其中該偵測結合性蛋白質與捕捉結合性蛋白質相互作用以形成偵測結合性蛋白質-捕捉結合性蛋白質RGMa片段複合物，以及(d)偵測及量化樣品中之至少一種RGMa片段。該至少一種RGMa片段可為具有約1 kDa至約65 kDa之尺寸之RGMa片段。該RGMa片段可具有10 kDa、18 kDa、20 kDa、30 kDa、40 kDa、50 kDa或65 kDa之尺寸。RGMa片段可選自由18 kDa RGMa片段、30 kDa RGMa片段及40 kDa RGMa片段組成之群。在步驟(b)前，可利用凝膠電泳分離至少一種RGMa片段。該方法進一步包含在步驟(b)前將至少一種RGMa片段固定於膜上以產生西方墨點(western blotting)膜；在步驟(b)中，將該西方墨點膜與捕捉結合性蛋白質接觸，其中該捕捉結合性蛋白質與固定於西方墨點膜之至少一種RGMa片段結合，形成捕捉結合性蛋白質-RGMa片段複合物；以及在步驟(c)中，將該西方墨點膜與偵測結合性蛋白質接觸，其中該偵測結合性蛋白質與捕捉結合性蛋白質相互作用以形成偵測結合性蛋白質-捕捉結合性蛋白質RGMa片段複合物。可偵測至少兩種RGMa片段。該至少兩種RGMa片段之尺寸可為30 kDa及40 kDa。可偵測至少三種RGMa片段。該至少三種RGMa片段之尺寸可為18 kDa、30 kDa及40 kDa。至少一種RGMa片段可為可溶性RGMa片段。可利用SDS-PAGE測定RGMa片段之尺寸。SDS PAGE可為4-15%。膜可為硝化纖維素膜。捕捉結合性蛋白質可為RGMa-選擇性抗體。該抗體可為生物素化RGMa-選擇性抗體。偵測結合性蛋白質可為四價抗生物素蛋白且可偵測標記可為生物素化辣根過氧化酶。可利用過氧化酶染色套組偵測至少一種RGMa片段。該RGMa片段可為人類RGMa片段。方法樣品可包含腦脊液、血液、血清或血漿。
本發明係關於一種偵測及量化樣品中至少一種RGMa片段之方法。該方法包含(a)自個體得到包含至少一種RGMa片段之樣品；(b)將該樣品與捕捉結合性蛋白質接觸，其中該捕捉結合性蛋白質結合至少一種RGMa片段以形成捕捉結合性蛋白質-RGMa片段複合物；(c)將該樣品與偵測結合性蛋白質接觸，其中該偵測結合性蛋白質與捕捉結合性蛋白質相互作用以形成偵測結合性蛋白質-捕捉結合性蛋白質RGMa片段複合物，以及(d)偵測及量化樣品中之至少一種RGMa片段。該至少一種RGMa片段可為具有約1 kDa至約65 kDa之尺寸之RGMa片段。該RGMa片段可具有10 kDa、18 kDa、20 kDa、30 kDa、40 kDa、50 kDa或65 kDa之尺寸。RGMa片段可選自由18 kDa RGMa片段、30 kDa RGMa片段及40 kDa RGMa片段組成之群。在步驟(b)前，可利用凝膠電泳分離至少一種RGMa片段。該方法進一步包含在步驟(b)前將至少一種RGMa片段固定於膜上以產生西方墨點膜；在步驟(b)中，將該西方墨點膜與捕捉結合性蛋白質接觸，其中該捕捉結合性蛋白質與固定於西方墨點膜之至少一種RGMa片段結合，形成捕捉結合性蛋白質-RGMa片段複合物；以及在步驟(c)中，將該西方墨點膜與偵測結合性蛋白質接觸，其中該偵測結合性蛋白質與捕捉結合性蛋白質相互作用以形成偵測結合性蛋白質-捕捉結合性蛋白質RGMa片段複合物。可偵測至少兩種RGMa片段。該至少兩種RGMa片段之尺寸可為30 kDa及40 kDa。可偵測至少三種RGMa片段。該至少三種RGMa片段之尺寸可為18 kDa、30 kDa及40 kDa。至少一種RGMa片段可為可溶性RGMa片段。該方法進一步包含在步驟(b)中，在凝膠上同時分離RGMa蛋白質標準物與樣品中之蛋白質；以及(g)將至少一種RGMa片段與分離的RGMa蛋白質標準物比較以量化片段。RGMa蛋白質標準物可為重組RGMa片段梯度。梯度可包含10、25、50、100及200 pg/mL之RGMa蛋白質標準物。該RGMa片段之尺寸可利用SDS-PAGE測定。SDS PAGE可為4-15%。膜可為硝化纖維素膜。捕捉結合性蛋白質可為RGMa-選擇性抗體。該抗體可為生物素化RGMa-選擇性抗體。偵測結合性蛋白質可為四價抗生物素蛋白且可偵測標記可為生物素化辣根過氧化酶。可利用過氧化酶染色套組偵測至少一種RGMa片段。該RGMa片段可為人類RGMa片段。方法樣品可包含腦脊液、血液、血清或血漿。
本發明係關於一種確定有需要個體之神經變性疾病之治療有效性的方法。該方法包含(a)利用技術方案1至21中任一項之方法確定該個體之樣品中至少一種RGMa片段之含量，以及(b)將個體之樣品中至少一種RGMa片段之含量與至少一種RGMa片段之對照含量比較，其中若與對照含量相比，至少一種片段之含量增加，則該治療被確定為對於治療神經變性疾病係無效的，以及其中若與對照含量相比，至少一種片段之含量相同或降低，則該治療被確定為對於治療神經變性疾病係有效的。至少一種RGMa片段之對照含量可為患有神經變性疾病但沒有對神經變性疾病進行治療之個體之至少一種RGMa片段的含量。治療可包含神經修復藥物、神經保護藥物或神經再生藥物。治療可包含曲安奈德(triamcinolone acetonide/TCA)、Tecfidera/BG-12(反丁烯二酸二甲酯)、Gilenya(芬戈莫德(fingolimod))、拉喹莫德(Laquinimod)、β-干擾素、克帕松(Copaxone)、達利珠單抗(Daclizumab)、阿侖單抗(Alemtuzumab)、利妥昔單抗(Rituximab)中之至少一種或其組合。治療可包含曲安奈德(TCA)。可偵測至少兩種RGMa片段。該至少兩種RGMa片段之尺寸可為30 kDa及40 kDa。可偵測至少三種RGMa片段。該至少三種RGMa片段之尺寸可為18 kDa、30 kDa及40 kDa。神經變性疾病或病症可為多發性硬化、帕金森氏病(Parkinson's disease)、阿滋海默氏病(Alzheimer's disease)、泰-薩克斯氏病(Tay-Sachs disease)、尼曼-匹克氏病(Niemann-Pick disease)、高歇氏病(Gaucher's disease)、赫爾勒氏症候群(Hurler's syndrome)、亨廷頓氏病(Huntington's disease)、肌萎縮性側索硬化、特發性發炎脫髓鞘疾病、維生素B12缺乏症、腦橋中央髓鞘溶解症、脊髓癆、橫貫性脊髓炎、德維克氏病(Devic's disease)、進行性多竈性白質腦病、視神經炎、脊髓損傷、創傷性腦損傷、中風、青光眼、糖尿病性視網膜病、年齡相關之黃斑變性或腦白質營養不良。神經變性疾病或病症可為多發性硬化。RGMa片段可為人類RGMa片段。方法樣品可包含腦脊液、血液、血清或血漿。
本發明係關於一種確定用於有需要個體之神經變性疾病之治療的有效性之方法。該方法包含(a)利用技術方案1至21中任一項之方法確定該個體之樣品中至少一種RGMa片段之含量，以及(b)將個體之樣品中至少一種RGMa片段之含量與至少一種RGMa片段之對照含量比較，其中若與對照含量相比，至少一種片段之含量增加，則該治療被確定為對於治療神經變性疾病係無效的，以及其中若與對照含量相比，至少一種片段之含量相同或降低，則該治療被確定為對於治療神經變性疾病係有效的。該方法進一步包含繼續投與被確定為對於治療有需要個體的神經變性疾病係有效的治療。至少一種RGMa片段之對照含量可為患有神經變性疾病但沒有對神經變性疾病進行治療之個體之至少一種RGMa片段的含量。治療可包含神經修復藥物、神經保護藥物或神經再生藥物。治療可包含曲安奈德(TCA)、Tecfidera/BG-12(反丁烯二酸二甲酯)、Gilenya(芬戈莫德)、拉喹莫德、β-干擾素、克帕松、達利珠單抗、阿侖單抗、利妥昔單抗中之至少一種或其組合。治療可包含曲安奈德(TCA)。可偵測至少兩種RGMa片段。該至少兩種RGMa片段之尺寸可為30 kDa及40 kDa。可偵測至少三種RGMa片段。該至少三種RGMa片段之尺寸可為18 kDa、30 kDa及40 kDa。神經變性疾病或病症可為多發性硬化、帕金森氏病、阿滋海默氏病、泰-薩克斯氏病、尼曼-匹克氏病、高歇氏病、赫爾勒氏症候群、亨廷頓氏病、肌萎縮性側索硬化、特發性發炎脫髓鞘疾病、維生素B12缺乏、腦橋中央髓鞘溶解症、脊髓癆、橫貫性脊髓炎、德維克氏病、進行性多竈性白質腦病、視神經炎、脊髓損傷、創傷性腦損傷、中風、青光眼、糖尿病性視網膜病、年齡相關之黃斑變性或腦白質營養不良。神經變性疾病或病症可為多發性硬化。RGMa片段可為人類RGMa片段。方法樣品可包含腦脊液、血液、血清或血漿。
本發明係關於一種預測罹患神經變性疾病之個體對治療之反應的方法。該方法包含(a)利用技術方案1至21中任一項之方法確定該個體之樣品中至少一種RGMa片段之含量，(b)將個體之樣品中至少一種RGMa片段之含量與至少一種RGMa片段之對照含量比較，以及(c)若與對照含量相比，樣品中至少一種RGMa片段之含量降低，則可提供預測個體對治療之反應。治療可包含神經修復藥物、神經保護藥物或神經再生藥物。治療可包含曲安奈德(TCA)、Tecfidera/BG-12(反丁烯二酸二甲酯)、Gilenya(芬戈莫德)、拉喹莫德、β-干擾素、克帕松、達利珠單抗、阿侖單抗、利妥昔單抗中之至少一種或其組合。治療可包含曲安奈德(TCA)。可偵測至少兩種RGMa片段。該至少兩種RGMa片段之尺寸可為30 kDa及40 kDa。可偵測至少三種RGMa片段。該至少三種RGMa片段之尺寸可為18 kDa、30 kDa及40 kDa。神經變性疾病或病症可為多發性硬化、帕金森氏病、阿滋海默氏病、泰-薩克斯氏病、尼曼-匹克氏病、高歇氏病、赫爾勒氏症候群、亨廷頓氏病、肌萎縮性側索硬化、特發性發炎脫髓鞘疾病、維生素B12缺乏、腦橋中央髓鞘溶解症、脊髓癆、橫貫性脊髓炎、德維克氏病、進行性多竈性白質腦病、視神經炎、脊髓損傷、創傷性腦損傷、中風、青光眼、糖尿病性視網膜病、年齡相關之黃斑變性或腦白質營養不良。神經變性疾病或病症可為多發性硬化。RGMa片段可為人類RGMa片段。方法樣品可包含腦脊液、血液、血清或血漿。
本發明係關於一種預測罹患神經變性疾病之個體對治療之反應的方法。該方法包含(a)利用技術方案1至21中任一項之方法確定該個體之樣品中至少一種RGMa片段之含量，(b)將個體之樣品中至少一種RGMa片段之含量與至少一種RGMa片段之對照含量比較，以及(c)若與對照含量相比，樣品中至少一種RGMa片段之含量降低，則可提供預測個體對治療之反應。該方法進一步包含向預測對治療有反應的個體投與治療。治療可包含神經修復藥物、神經保護藥物或神經再生藥物。治療可包含曲安奈德(TCA)、Tecfidera/BG-12(反丁烯二酸二甲酯)、Gilenya(芬戈莫德)、拉喹莫德、β-干擾素、克帕松、達利珠單抗、阿侖單抗、利妥昔單抗中之至少一種或其組合。治療可包含曲安奈德(TCA)。可偵測至少兩種RGMa片段。該至少兩種RGMa片段之尺寸可為30 kDa及40 kDa。可偵測至少三種RGMa片段。該至少三種RGMa片段之尺寸可為18 kDa、30 kDa及40 kDa。神經變性疾病或病症可為多發性硬化、帕金森氏病、阿滋海默氏病、泰-薩克斯氏病、尼曼-匹克氏病、高歇氏病、赫爾勒氏症候群、亨廷頓氏病、肌萎縮性側索硬化、特發性發炎脫髓鞘疾病、維生素B12缺乏、腦橋中央髓鞘溶解症、脊髓癆、橫貫性脊髓炎、德維克氏病、進行性多竈性白質腦病、視神經炎、脊髓損傷、創傷性腦損傷、中風、青光眼、糖尿病性視網膜病、年齡相關之黃斑變性或腦白質營養不良。神經變性疾病或病症可為多發性硬化。RGMa片段可為人類RGMa片段。方法樣品可包含腦脊液、血液、血清或血漿。
本發明係關於一種治療罹患神經變性疾病之個體之方法。該方法包含(a)利用技術方案1至21中任一項之方法確定該個體之樣品中至少一種RGMa片段之含量，(b)將個體之樣品中至少一種RGMa片段之含量與至少一種RGMa片段之對照含量比較，以及(c)若與對照含量相比，片段之含量增加，則向該個體投與治療方案。治療可包含神經修復藥物、神經保護藥物或神經再生藥物。治療可包含曲安奈德(TCA)、Tecfidera/BG-12(反丁烯二酸二甲酯)、Gilenya(芬戈莫德)、拉喹莫德、β-干擾素、克帕松、達利珠單抗、阿侖單抗、利妥昔單抗中之至少一種或其組合。治療可包含曲安奈德(TCA)。可偵測至少兩種RGMa片段。該至少兩種RGMa片段之尺寸可為30 kDa及40 kDa。可偵測至少三種RGMa片段。該至少三種RGMa片段之尺寸可為18 kDa、30 kDa及40 kDa。神經變性疾病或病症可為多發性硬化、帕金森氏病、阿滋海默氏病、泰-薩克斯氏病、尼曼-匹克氏病、高歇氏病、赫爾勒氏症候群、亨廷頓氏病、肌萎縮性側索硬化、特發性發炎脫髓鞘疾病、維生素B12缺乏、腦橋中央髓鞘溶解症、脊髓癆、橫貫性脊髓炎、德維克氏病、進行性多竈性白質腦病、視神經炎、脊髓損傷、創傷性腦損傷、中風、青光眼、糖尿病性視網膜病、年齡相關之黃斑變性或腦白質營養不良。神經變性疾病或病症可為多發性硬化。RGMa片段可為人類RGMa片段。方法樣品可包含腦脊液、血液、血清或血漿。
本發明係關於一種優化用於罹患神經變性疾病之個體之治療方案之方法。該方法包含(a)利用技術方案1至20中任一項之方法確定該個體之第一樣品中至少一種RGMa片段之第一含量，其中該第一樣品係在該個體開始了治療方案之時段之前或期間之時間點自個體獲得；(b)在比步驟(a)晚之時間點，於自該個體得到之第二樣品中確定至少一種RGMa片段之第二含量，其中與至少一種RGMa片段之第一含量相比，至少一種RGMa片段之第二含量降低可表示治療方案對於神經變性疾病具有療效；(c)利用技術方案1之方法確定該個體之第一樣品中至少一種RGMa片段之含量，(d)將個體之樣品中至少一種RGMa片段之含量與該至少一種RGMa片段之對照含量比較；以及(e)若與對照含量相比，樣品中至少一種RGMa片段之含量降低，則可提供預測該個體對治療之反應。該治療方案可為神經修復治療方案。神經修復治療方案之成功率可增加。該治療方案可為神經保護治療方案。神經保護治療方案之成功率可增加。可偵測至少兩種RGMa片段。該至少兩種RGMa片段之尺寸可為30 kDa及40 kDa。可偵測至少三種RGMa片段。該至少三種RGMa片段之尺寸可為18 kDa、30 kDa及40 kDa。神經變性疾病或病症可為多發性硬化、帕金森氏病、阿滋海默氏病、泰-薩克斯氏病、尼曼-匹克氏病、高歇氏病、赫爾勒氏症候群、亨廷頓氏病、肌萎縮性側索硬化、特發性發炎脫髓鞘疾病、維生素B12缺乏、腦橋中央髓鞘溶解症、脊髓癆、橫貫性脊髓炎、德維克氏病、進行性多竈性白質腦病、視神經炎、脊髓損傷、創傷性腦損傷、中風、青光眼、糖尿病性視網膜病、年齡相關之黃斑變性或腦白質營養不良。神經變性疾病或病症可為多發性硬化。RGMa片段可為人類RGMa片段。方法樣品可包含腦脊液、血液、血清或血漿。
本發明係關於一種監測罹患神經變性疾病之個體之促進再生藥物治療之方法。該方法包含(a)利用技術方案1至21中任一項之方法確定該個體之第一樣品中至少一種RGMa片段之第一含量，其中該第一樣品係在該個體開始藥物治療時之前或期間之一個時間點自個體獲得；(b)在比步驟(a)晚之時間點，於自該個體得到之第二樣品中確定至少一種RGMa片段之第二含量，其中與至少一種RGMa片段之第一含量相比，至少一種RGMa片段之第二含量降低可表示藥物治療方案對於神經變性疾病具有療效；以及與至少一種RGMa片段之第一含量相比，至少一種RGMa片段之第二含量增加可表示藥物治療方案對於神經變性疾病不具有療效；以及(c)若藥物治療方案對於神經變性疾病不具有療效，則向該個體投與不同之藥物治療。可偵測至少兩種RGMa片段。該至少兩種RGMa片段之尺寸可為30 kDa及40 kDa。可偵測至少三種RGMa片段。該至少三種RGMa片段之尺寸可為18 kDa、30 kDa及40 kDa。神經變性疾病或病症可為多發性硬化、帕金森氏病、阿滋海默氏病、泰-薩克斯氏病、尼曼-匹克氏病、高歇氏病、赫爾勒氏症候群、亨廷頓氏病、肌萎縮性側索硬化、特發性發炎脫髓鞘疾病、維生素B12缺乏、腦橋中央髓鞘溶解症、脊髓癆、橫貫性脊髓炎、德維克氏病、進行性多竈性白質腦病、視神經炎、脊髓損傷、創傷性腦損傷、中風、青光眼、糖尿病性視網膜病、年齡相關之黃斑變性或腦白質營養不良。神經變性疾病或病症可為多發性硬化。RGMa片段可為人類RGMa片段。方法樣品可包含腦脊液、血液、血清或血漿。
本發明係關於一種篩選對於神經變性疾病具有療效之化合物之方法。該方法包含(a)利用技術方案1至21中任一項之方法確定包含細胞之樣品中至少一種RGMa片段之第一含量；(b)將該樣品與化合物接觸，(c)在比步驟(b)晚之時間點，於自該個體得到之第二樣品中確定至少一種RGMa片段之第二含量，其中與至少一種RGMa片段之第一含量相比，至少一種RGMa片段之第二含量降低可表示化合物對於神經變性疾病具有療效，以及其中與至少一種RGMa片段之第一含量相比，至少一種RGMa片段之第二含量增加可表示化合物對於神經變性疾病不具有療效；以及(d)選擇被證實具有療效之化合物。可偵測至少兩種RGMa片段。該至少兩種RGMa片段之尺寸可為30 kDa及40 kDa。可偵測至少三種RGMa片段。該至少三種RGMa片段之尺寸可為18 kDa、30 kDa及40 kDa。神經變性疾病或病症可為多發性硬化、帕金森氏病、阿滋海默氏病、泰-薩克斯氏病、尼曼-匹克氏病、高歇氏病、赫爾勒氏症候群、亨廷頓氏病、肌萎縮性側索硬化、特發性發炎脫髓鞘疾病、維生素B12缺乏、腦橋中央髓鞘溶解症、脊髓癆、橫貫性脊髓炎、德維克氏病、進行性多竈性白質腦病、視神經炎、脊髓損傷、創傷性腦損傷、中風、青光眼、糖尿病性視網膜病、年齡相關之黃斑變性或腦白質營養不良。神經變性疾病或病症可為多發性硬化。RGMa片段可為人類RGMa片段。方法樣品可包含腦脊液、血液、血清或血漿。
本發明係關於一種用於分析RGMa片段之含量，以及確定、優化、預測及監測用於有需要個體之神經變性疾病之治療方案之分析。以RGMa片段為主之診斷分析可用於偵測具有特定尺寸之具體RGMa片段。內源性及重組RGMa片段之免疫偵測可用於確定、優化、預測及監測罹患神經變性疾病或表現出其症狀之個體之治療。以RGMa片段為主之診斷分析利用最少量定量量測人體液中所存在之可溶性再生-抑制性RGMa片段之濃度，該等人體液例如CSF、血液、血清及血漿。此診斷分析提供更高靈敏度(偵測人物質中皮克) (pg)量之RGMa)且與RGMa蛋白質標準物組合，RGMa蛋白質標準物為一種識別罹患神經變性疾病例如多發性硬化之患者之體液中RGMa濃度之定量工具。此外，此分析區別RGMa之不同片段，且允許監測在疾病進展期間此等片段之圖譜移位。因此，因為此方法提供一種用於神經修復藥物試驗中之患者分層之方法；一種追蹤對促進再生藥物做出陽性反應之患者之方法；一種識別該等試驗中之未反應者之方法；一種優化神經修復治療策略之方法；以及一種提高神經修復藥物方法之成功率之方法，所以其優於只研究整個RGM蛋白質之當前技術。
此章節及文中整個揭示內容中所用之章節標題僅僅係為了概括且無意限制。1. 定義
除非另外定義，文中所用之所有技術及科學術語具有與熟習此項技術者通常理解相同之意思。在矛盾之情況下，以本發明為主，包括定義。以下描述較佳之方法及材料，然而與文中所述之彼等類似或等效之方法及材料可用於實施或測試本發明。文中所有公佈、專利申請、專利及其他引用之全文係以引用之方式併入。文中所公開之材料、方法及實例僅說明而無意限制。
如文中所用，單數形式「一」及「該」包括複數個指示物，除非上下文另外指出。為了引述文中數值範圍，明確地涵蓋具有相同精確度之其間每個中間值。例如，對於範圍6-9，除了6及9，涵蓋數值7及8，以及對於範圍6.0-7.0，明確地涵蓋數值6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9及7.0。
「或」之使用意指「及/或」，除非另外指出。並且，術語「包括」及「具有」，以及彼等術語之其他形式之使用且無限制性。
如說明書及申請專利範圍中所用，以下術語具有以下意思：
如文中所用，術語「對照個體」意指健康個體，即沒有神經變性疾病例如多發性硬化(MS)之臨牀表現或症狀之個體。在臨牀上評估對照個體之在其他情況下偵測不到之MS表現或症狀，該評估可包括常規身體檢查及/或實驗室試驗。如文中所用，術語「對照組」係指對照個體或健康個體之組，即沒有神經變性疾病例如MS之臨牀表現或症狀之個體之組。
如文中所用，「樣品」、「生物樣品」、「測試樣品」、「試樣」、「來自個體之樣品」及「患者樣品」可交換使用且可為血液、組織、尿、血清、血漿、羊水、腦脊液、胎盤細胞或組織、內皮細胞、白細胞或單核細胞。樣品可自患者獲得直接使用或可預處理，例如藉由過濾、蒸餾、提取、濃縮、離心、干擾組分之失活、添加試劑等，以利用文中所述或該領域已知之一些方式修飾樣品之特徵。
如文中可交換使用之術語「個體」、「患者」或「方法中之個體」意指任何脊椎動物，包括但不限於，哺乳動物(例如，牛、豬、駱駝、美洲駝、馬、山羊、兔子、羊、倉鼠、豚鼠、貓、狗、大鼠及小鼠)、非人靈長類動物(例如，猴，例如食蟹猴或恆河猴、黑猩猩等)及人。在一些實施例中，該個體可為人或非人。在一些實施例中，該個體可為處於或疑處於發展或已經患有神經變性疾病例如MS之風險之人個體。
如文中所用，術語「治療」係指一種治療，其中目的在於減緩(減輕)非所需生理病況、病症或疾病，或得到有利或所需的臨牀結果。對於本發明而言，有利或所需臨牀結果包括，但不限於，緩解症狀；減小病況、病症或疾病程度；穩定(即，不惡化)病況、病症或疾病狀態；拖延病況、病症或疾病之發作或減緩其進展；改善病況、病症或疾病狀態；以及緩解(無論局部還是整體)，無論可偵測到還是不可偵測到，或增強或改善病況、病症或疾病。治療亦包括與不接受治療時所預期到之存活相比，延長存活。
除非文中另外定義，結合本發明所使用之科學及技術術語應具有熟習此項技術者常見之意思。例如，結合文中所述之細胞及組織培養物、分子生物學、免疫學、微生物學、遺傳學以及蛋白及核酸化學及雜交所用之任何名稱以及其等技術為該領域熟知且常用之彼等。術語之意思及範圍應係清晰的；但在任何潛在不明確之情況下，文中提供之定義優先於任何詞典或外來定義。且，除非上下文另外要求，單數術語應包括複數且複數術語應包括單數。2. 以 RGMa 片段為主之診斷分析
本發明係關於用於定量及偵測樣品中RGMa片段之診斷分析。該RGMa可為任何RGMa片段。該診斷分析可定量及偵測至少一種RGMa片段。將RGMa合成為含有47 aa信號序列、121 aa N端前片段、256成熟區及26 aa C端前片段之450胺基酸(aa)前原蛋白。N端前片段含有RGD三肽及該分子之唯一兩個潛在的N-連接糖基化位點。成熟片段顯示一個具有與馮威里氏(von Willebrand)因子域之結構同源性之縮短域。在天冬胺酸-脯胺酸鍵發生蛋白水解加工，產生所預期之32 kDa成熟區。GPI-錨定之RGMa蛋白係經弗林蛋白酶及前蛋白轉化酶SKI-1加工成許多膜結合及可溶性片段，且此加工為其適宜活體內功能所需。
RGMa之受體係報導為再生蛋白(neogenin)。RGM-A亦已顯示為骨成形蛋白輔受體(coreceptor)，能夠結合BMP-2、BMP-4、BMP-5及BMP-6。RGMa之幾種不同片段係藉由結合至其等神經元受體再生蛋白而發揮其等神經突生長抑制功能。再生蛋白為免疫球蛋白超家族中之一成員且係由四個N端免疫球蛋白樣結構域(Ig)、六個纖連蛋白III型(FNIII)結構域、跨膜結構域及C端內部域組成。兩個不同RGMa片段N端(30 kDa)及C端片段(40 kDa)結合至再生蛋白之相同FNIII結構域(結構域3-4)，盡管它們缺少序列同源性。RGMa片段已顯示在活體外抑制神經突生長。在脊髓損傷模型中RGMa活性經多株RGMa抗體中和導致長距離軸突再生且增進功能恢復。在腦中風模型中，RGMa之下調導致神經保護及經由再生蛋白作用加強功能恢復，再生蛋白在軸突引導及細胞分化中之基本作用係熟知的。在人類CSF中兩種再生抑制性RGMa片段(30及40 kDa)之存在表示此等蛋白在進行性MS患者中導致再生失敗及神經變性。在MS患者中，RGMa係由腦及脊髓中之不成熟及成熟樹突細胞表現。RGMa在免疫系統中，例如亦在小神經膠質細胞上，或在T細胞反應之調節中亦可能發揮作用，因為其在CD68-陽性巨噬細胞及CD4-陽性T淋巴細胞上表現。在腦中，活化之小神經膠質細胞在其表面表現RGMa，且小神經膠質RGMa表現降低導致在活體外及在活體內均增強軸突生長。此外，RGMa基因在經實驗自體免疫性腦脊髓炎引起之MS患者及某些大鼠品系中被確定為與疾病相關之基因。
診斷分析包括自個體得到包含至少一種RGMa片段之樣品；將該樣品與捕捉結合性蛋白質接觸，其中該捕捉結合性蛋白質結合該至少一種RGMa片段以形成捕捉結合性蛋白質-RGMa片段複合物；將該樣品與偵測結合性蛋白質接觸，其中該偵測結合性蛋白質與該捕捉結合性蛋白質相互作用以形成偵測結合性蛋白質-捕捉結合性蛋白質RGMa片段複合物，以及偵測且定量樣品中之該至少一種RGMa片段。該至少一種RGMa片段可具有約1 kDa至約65 kDa之尺寸。該至少一種RGMa片段可具有約10 kDa、約18 kDa、約20 kDa、約30 kDa、約40 kDa、約50 kDa或約65 kDa之尺寸。該至少一種RGMa片段可選自由18 kDa RGMa片段、30 kDa RGMa片段及40 kDa RGMa片段組成之群。可將至少一種RGMa片段從樣品之其他組分中分離出，例如具有不同尺寸之其他RGMa片段。在一些實施例中，分析涉及利用分離技術，例如凝膠電泳、柱層析及質譜，藉由尺寸分離片段。a. RGMa 片段
RGMa係藉由診斷分析偵測。RGMa可為RGMa片段。分析可偵測至少一種RGMa片段。
RGMa係藉由兩個蛋白酶，前蛋白轉化酶SKI-1及弗林蛋白酶，在N-端胺基酸168及在N-端結構域內裂解以產生功能活性蛋白及活性18、30及40 kDa片段(圖1)。30 kDa片段係藉由二硫鍵(S-S)連接膜結合C-端40 kDa片段。在C-端(箭頭，脫落)GPI-錨定結構域內裂解導致三個片段之釋放，產生可溶形式之RGMa。當C-端經脫落酶及裂解GPI-錨之酶裂解時，產生此等片段之可溶形式。如同膜-錨定形式，三個所有可溶性片段(18 kDa = 截短N-端結構域，30 kDa = N-端結構域，40 kDa = C-端結構域)作為軸突生長及再生抑制劑係有活性的。
以RGMa片段為主之診斷分析可偵測具有約1 kDa至約65 kDa之尺寸之至少一種RGMa片段。RGMa片段可為約1 kDa、約2 kDa、約3 kDa、約4 kDa、約5 kDa、約6 kDa、約7 kDa、約8 kDa、約9 kDa、約10 kDa、約11 kDa、約12 kDa、約13 kDa、約14 kDa、約15 kDa、約16 kDa、約17 kDa、約18 kDa、約19 kDa、約20 kDa、約21 kDa、約22 kDa、約23 kDa、約24 kDa、約25 kDa、約26 kDa、約27 kDa、約28 kDa、約29 kDa、約30 kDa、約31 kDa、約32 kDa、約33 kDa、約34 kDa、約35 kDa、約36 kDa、約37 kDa、約38 kDa、約39 kDa、約40 kDa、約41 kDa、約42 kDa、約43 kDa、約44 kDa、約45 kDa、約4 kDa、約47 kDa、約48 kDa、約49 kDa、約50 kDa、約51 kDa、約52 kDa、約53 kDa、約54 kDa、約55 kDa、約56 kDa、約57 kDa、約58 kDa、約59 kDa、約60 kDa、約61 kDa、約62 kDa、約63 kDa、約64 kDa、約65 kDa或其組合。
以RGMa片段為主之診斷分析可偵測至少一種RGMa片段、至少兩種RGMa片段、至少三種RGMa片段、至少四種RGMa片段、至少五種RGMa片段、至少六種RGMa片段或至少七種RGMa片段。以RGMa片段為主之診斷分析可偵測10 kDa RGMa片段、18 kDa RGMa片段、20 kDa RGMa片段、30 kDa RGMa片段、40 kDa RGMa片段、50 kDa RGMa片段、65 kDa RGMa片段或其組合。例如，以RGMa片段為主之診斷分析可偵測10 kDa RGMa片段；18 kDa RGMa片段；20 kDa RGMa片段、30 kDa RGMa片段；40 kDa RGMa片段；50 kDa RGMa片段；65 kDa RGMa片段；10 kDa RMGa片段及18 kDa RGMa片段；10 kDa RMGa片段及20 kDa RGMa片段；10 kDa RMGa片段及30 kDa RGMa片段；10 kDa RMGa片段及40 kDa RGMa片段；10 kDa RMGa片段及50 kDa RGMa片段；10 kDa RMGa片段及60 kDa RGMa片段；18 kDa RMGa片段及20 kDa RGMa片段；18 kDa RMGa片段及30 kDa RGMa片段；18 kDa RMGa片段及40 kDa RGMa片段；18 kDa RMGa片段及50 kDa RGMa片段；18 kDa RMGa片段及60 kDa RGMa片段；20 kDa RMGa片段及30 kDa RGMa片段；20 kDa RMGa片段及40 kDa RGMa片段；20 kDa RMGa片段及50 kDa RGMa片段；20 kDa RMGa片段及60 kDa RGMa片段；30 kDa RMGa片段及40 kDa RGMa片段；30 kDa RMGa片段及50 kDa RGMa片段；30 kDa RMGa片段及60 kDa RGMa片段；40 kDa RMGa片段及50 kDa RGMa片段；40 kDa RMGa片段及60 kDa RGMa片段；50 kDa RMGa片段及60 kDa RGMa片段；10 kDa RGMa片段及18 kDa RGMa片段、20 kDa RGMa片段、30 kDa RGMa片段、40 kDa RGMa片段、50 kDa RGMa片段或65 kDa RGMa片段中至少兩種、至少三種、至少四種、至少五種或至少六種；18 kDa RGMa片段及10 kDa RGMa片段、20 kDa RGMa片段、30 kDa RGMa片段、40 kDa RGMa片段、50 kDa RGMa片段或65 kDa RGMa片段中至少兩種、至少三種、至少四種、至少五種或至少六種；20 kDa RGMa片段及10 kDa RGMa片段、18 kDa RGMa片段、30 kDa RGMa片段、40 kDa RGMa片段、50 kDa RGMa片段或65 kDa RGMa片段中至少兩種、至少三種、至少四種、至少五種或至少六種；30 kDa RGMa片段及10 kDa RGMa片段、18 kDa RGMa片段、20 kDa RGMa片段、40 kDa RGMa片段、50 kDa RGMa片段或65 kDa RGMa片段中至少兩種、至少三種、至少四種、至少五種或至少六種；40 kDa RGMa片段及10 kDa RGMa片段、18 kDa RGMa片段、20 kDa RGMa片段、30 kDa RGMa片段、50 kDa RGMa片段或65 kDa RGMa片段中至少兩種、至少三種、至少四種、至少五種或至少六種；50 kDa RGMa片段及10 kDa RGMa片段、18 kDa RGMa片段、20 kDa RGMa片段、30 kDa RGMa片段、40 kDa RGMa片段或65 kDa RGMa片段中至少兩種、至少三種、至少四種、至少五種或至少六種；65 kDa RGMa片段及10 kDa RGMa片段、18 kDa RGMa片段、20 kDa RGMa片段、30 kDa RGMa片段、40 kDa RGMa片段或50 kDa RGMa片段中至少兩種、至少三種、至少四種、至少五種或至少六種。以RGMa片段為主之診斷分析可偵測18 kDa RGMa片段、30 kDa RGMa片段及40 kDa RGMa片段，只要此等片段保留捕捉結合性蛋白質例如以下所述之抗-RGMa-抗體之結合表位位點。b. 片段偵測
可藉由多種方式分離片段及確定片段尺寸來偵測且定量個體樣品中之RGMa片段。可利用捕捉結合性蛋白質偵測特異性結合RGMa片段之片段，該捕捉結合性蛋白質例如RGMa片段結合蛋白，例如抗-RGMa抗體。捕捉結合性蛋白質可具有可偵測之標記或由具有可偵測標記之偵測結合性蛋白質識別。可偵測標記允許RGMa片段之識別。
在一些實施例中，利用SDS-PAGE/西方墨點分析識別、定尺寸及定量RGMa片段。在一些實施例中，利用柱層析技術識別、定尺寸及定量RGMa片段。在一些實施例中，利用質譜識別、定尺寸及定量RGMa片段。
捕捉結合性蛋白質可為抗-RGMa抗體，諸如生物素化RGMa-選擇性抗體(BAF2459 R&D Systems)或美國專利公佈號2004/0102376、2010/0028340、2011/0135664、2013/0330347及2014/0023659中所述之RGMa抗體。結合RGMa片段之抗體可在利用ABC過氧化酶染色套組(Pierce; 32020)或高靈敏ECL溶液(Thermo Scientific, SuperSignal West Femto Chemiluminescence Substrate, 34094)培養後可看到且利用VersaDoc Imager(BioRad)掃描。Quantity One Version 4.6.9 (BioRad)可用於定量體液中重組RGMa(R&D Systems, 2459-RM-050)及單RGMa片段之條帶強度。(1) SDS-PAGE/ 西方墨點
以RGMa片段為主之診斷分析可進一步包括將至少一種RGMa片段固定於膜以產生西方墨點膜，將該西方墨點膜與捕捉結合性蛋白質接觸，其中該捕捉結合性蛋白質與固定於西方墨點膜之至少一種RGMa片段結合，形成捕捉結合性蛋白質-RGMa片段複合物；以及將西方墨點膜與偵測結合性蛋白質接觸，其中該偵測結合性蛋白質與捕捉結合性蛋白質相互作用以形成偵測結合性蛋白質-捕捉結合性蛋白質RGMa片段複合物。
可使用RGMa蛋白質標準物標記物且與樣品同時在SDS-PAGE上分離。使至少一種RGMa片段條帶強度與RGMa蛋白質標準物標記物比較以確定RGMa片段之尺寸及/或量化至少一種RGMa片段之量。RGMa蛋白質標準物可為重組RGMa片段梯度。在一些實施例中，重組RGMa片段梯度包括10、25、50、100及200 pg/mL。SDS-PAGE可具有5%至25%丙烯醯胺。在一些實施例中，SDS-PAGE可為4-15%丙烯醯胺梯度凝膠。膜可為硝化纖維素或PVDF膜。3. 使用以 RGMa 片段為主之診斷分析之方法 - 診斷、預測或評估治療性 / 預防性治療之效力之方法
文中亦提供了一種使用以RGMa片段為主之診斷分析之方法。該方法包含自有需要個體得到樣品。該方法使用以RGMa片段為主之診斷分析以偵測自個體得到之樣品中上述RGMa片段中至少一種之存在及/或含量。該個體罹患神經變性疾病或處於罹患神經變性疾病風險。
該方法使用以RGMa片段為主之診斷分析以確定用於神經變性疾病之治療或治療方案之有效性。在其他實施例中，該方法使用以RGMa片段為主之診斷分析以預測罹患神經變性疾病之個體對治療或治療方案之反應。在一些實施例中，該方法使用以RGMa片段為主之診斷分析以確定是否將治療或治療方案投與於個體。在又其他實施例中，該方法使用以RGMa片段為主之診斷分析以優化用於罹患神經變性疾病之個體之治療或治療方案。在一些實施例中，該方法可使用以RGMa片段為主之診斷分析以監測罹患神經變性疾病之個體之治療或治療方法。在其他實施例中，該方法使用以RGMa片段為主之診斷分析以篩選對於神經變性疾病在治療上有效之化合物。a. 神經變性疾病
RGMa可用作神經變性與一方面慢性疾病進展及另一方面再生之間相互作用之調節劑。神經變性疾病可為一種其中RGMa之存在與疾病相關(即，其中RGMa活性係不利的)之疾病。例如，在缺血損傷人腦組織中，在罹患創傷性腦損傷之患者之病變中，在AD患者之斑區中，在帕金森氏病患者之黑質中以及在MS患者中發現了RGMa。神經變性疾病或病症可為多發性硬化、帕金森氏病、阿滋海默氏病、泰-薩克斯氏病、尼曼-匹克氏病、高歇氏病、赫爾勒氏症候群、亨廷頓氏病、肌萎縮性側索硬化、特發性發炎脫髓鞘疾病、維生素B12缺乏、腦橋中央髓鞘溶解症、脊髓癆、橫貫性脊髓炎、德維克氏病、進行性多竈性白質腦病、視神經炎、CNS之創傷性損傷，諸如脊髓損傷、創傷性腦損傷，以及中風，諸如缺血性腦中風、青光眼、糖尿病性視網膜病、年齡相關之黃斑變性及腦白質營養不良。(1) 多發性硬化
多發性硬化(MS)為一種中樞神經系統之失能性疾病，其干擾腦內，以及腦與身體之間的信息流。MS涉及一種免疫-介導之過程，其中身體免疫系統之異常反應針對於中樞神經系統(CNS)，中樞神經系統由腦、脊髓、視網膜及視神經組成。此病症特徵在於關於其進展及其炎性病變之主導腦及脊髓定位之多種亞型。該等亞型包括復發-緩解型MS(RRMS)、次級進行性MS(SPMS)、原發性進行性MS(PPMS)及進行性復發MS(PRMS)。
RRMS特徵在於惡化之神經功能之明確攻擊，通常稱為復發、發作或惡化，然後為局部或完全恢復期(緩解)，在其期間，症狀局部或完全改善，且沒有明顯疾病進展。SPMS特徵為MS之第二階段且在起初具有RRMS疾病進程之個人中發生。因為疾病從RRMS 中所見之炎症過程逐漸地變化到由神經損傷或損失表徵之更穩定進行性階段，所以患有SPMS之個人可或不可繼續經歷由炎症引起之復發。PPMS特徵在於神經功能之穩定惡化，沒有任何明顯復發或緩解期。患有PPMS之個人具有隨時間變化之進展率，雖然偶爾穩定或暫時改善然而持續進展。PRMS類似於PPMS，其中患有PRMS之個人從剛開始就經歷穩定惡化之神經功能，以及偶爾復發，如患有RRMS之患者所經歷的那些。
術語「臨牀上分離之症候群」(CIS)用於描述持續至少24小時且由中樞神經系統中一或多個部位之炎症及脫髓鞘引起之神經症狀之首次發作。CIS可為單竈，其中經歷由單損害引起之單神經徵兆或症狀，或為多竈，其中經歷由多處之損害引起之一種以上之徵兆或症狀。經歷CIS之患者可或不可繼續發展成MS。長期以來，大多數患者在具有神經變性性質之進展性、鬱積型、慢性炎性過程中終結。
可利用擴展殘疾狀況得分(EDSS)及/或對最大步行距離及/或步行速度之評估來評估或診斷罹患或疑罹患MS之個體。在一些實施例中，具有降低之EDSS得分，增加之步行距離，及/或減慢之步行速度之個體可指出治療或治療方案對於個體係有效的。
例如，與個體治療前之EDSS得分相比，個體之EDSS得分降低至少約0.1、至少約0.2、至少約0.3、至少約0.4、至少約0.5、至少約0.6、至少約0.7、至少約0.8、至少約0.9、至少約1.0、至少約2.0、至少約3.0、至少約4.0、至少約5.0或至少約6.0，這表示治療或治療方案對於治療神經變性疾病係有效的。
例如，步行距離之約70 m至約150 m、約70 m至約145 m、約70 m至約140 m、約70 m至約135 m、約70 m至約130 m、約70 m至約125 m、約70 m至約120 m、約70 m至約115 m、約70 m至約110 m、約70 m至約105 m、約70 m至約100 m、約70 m至約95 m、約70 m至約90 m、約70 m至約85 m、約70 m至約80 m、約70 m至約75 m、約75 m至約150 m、約75 m至約145 m、約75 m至約140 m、約75 m至約135 m、約75 m至約130 m、約75 m至約125 m、約75 m至約120 m、約75 m至約115 m、約75 m至約110 m、約75 m至約105 m、約75 m至約100 m、約75 m至約95 m、約75 m至約90 m、約75 m至約85 m、約75 m至約80 m、約80 m至約150 m、約80 m至約145 m、約80 m至約140 m、約80 m至約135 m、約80 m至約130 m、約80 m至約125 m、約80 m至約120 m、約80 m至約115 m、約80 m至約110 m、約80 m至約105 m、約80 m至約100 m、約80 m至約95 m、約80 m至約90 m、約80 m至約85 m、約85 m至約150 m、約85 m至約145 m、約85 m至約140 m、約85 m至約135 m、約85 m至約130 m、約85 m至約125 m、約85 m至約120 m、約85 m至約115 m、約85 m至約110 m、約85 m至約105 m、約85 m至約100 m、約85 m至約95 m、約85 m至約90 m、約90 m至約150 m、約90 m至約145 m、約90 m至約140 m、約90 m至約135 m、約90 m至約130 m、約90 m至約125 m、約90 m至約120 m、約90 m至約115 m、約90 m至約110 m、約90 m至約105 m、約90 m至約100 m、約90 m至約95 m、約95 m至約150 m、約95 m至約145 m、約95 m至約140 m、約95 m至約135 m、約95 m至約130 m、約95 m至約125 m、約95 m至約120 m、約95 m至約115 m、約95 m至約110 m、約95 m至約105 m、約95 m至約100 m、約100 m至約150 m、約100 m至約145 m、約100 m至約140 m、約100 m至約135 m、約100 m至約130 m、約100 m至約125 m、約100 m至約120 m、約100 m至約115 m、約100 m至約110 m、約100 m至約105 m、約105 m至約150 m、約105 m至約145 m、約105 m至約140 m、約105 m至約135 m、約105 m至約130 m、約105 m至約125 m、約105 m至約120 m、約105 m至約115 m、約105 m至約110 m、約110 m至約150 m、約110 m至約145 m、約110 m至約140 m、約110 m至約135 m、約110 m至約130 m、約110 m至約125 m、約110 m至約120 m、約110 m至約115 m、約115 m至約150 m、約115 m至約145 m、約115 m至約140 m、約115 m至約135 m、約115 m至約130 m、約115 m至約125 m、約115 m至約120 m、約120 m至約150 m、約120 m至約145 m、約120 m至約140 m、約120 m至約135 m、約120 m至約130 m、約120 m至約125 m、約250 m至約750 m、約250 m至約700 m、約250 m至約650 m、約250 m至約600 m、約250 m至約550 m、約250 m至約500 m、約250 m至約450 m、約250 m至約400 m、約250 m至約350 m、約250 m至約300 m、約300 m至約750 m、約300 m至約700 m、約300 m至約650 m、約300 m至約600 m、約300 m至約550 m、約300 m至約500 m、約300 m至約450 m、約300 m至約400 m、約300 m至約350 m、約350 m至約750 m、約350 m至約700 m、約350 m至約650 m、約350 m至約600 m、約350 m至約550 m、約350 m至約500 m、約350 m至約450 m、約350 m至約400 m、約400 m至約750 m、約400 m至約700 m、約400 m至約650 m、約400 m至約600 m、約400 m至約 550 m、約400 m至約500 m、約400 m至約450 m、約450 m至約750 m、約450 m至約700 m、約450 m至約650 m、約450 m至約600 m、約450 m至約550 m、約450 m至約500 m、約500 m至約750 m、約500 m至約700 m、約500 m至約650 m、約500 m至約600 m、約500 m至約550 m、約550 m至約750 m、約550 m至約700 m、約550 m至約650 m、約550 m至約600 m、約600 m至約750 m、約600 m至約700 m、約600 m至約650 m、約650 m至約750 m或約650 m至約700 m之增加之個體表示治療或治療方案對於治療該個體之神經變性疾病係有效的。步行距離增加至少約1 m、至少約2 m、至少約3 m、至少約4 m、至少約5 m、至少約10 m、至少約15 m、至少約20 m、至少約25 m、至少約30 m、至少約35 m、至少約40 m、至少約45 m、至少約50 m、至少約55 m、至少約60 m、至少約65 m、至少約70 m、至少約75 m、至少約80 m、至少約85 m、至少約90 m、至少約95 m、至少約100 m、至少約105 m、至少約110 m、至少約115 m、至少約120 m、至少約125 m、至少約130 m、至少約135 m、至少約140 m、至少約145 m、至少約150 m、至少約155 m、至少約160 m、至少約165 m、至少約170 m、至少約175 m、至少約180 m、至少約185 m、至少約190 m、至少約195 m或至少約200 m之個體表示治療或治療方案對於治療該個體之神經變性疾病係有效的。
例如，步行速度(s/8 m)之至少約30 s/8 m至至少約10 s/8 m、至少約25 s/8 m至至少約10 s/8 m、至少約20 s/8 m至至少約10 s/8 m、至少約15 s/8 m至至少約10 s/8 m、至少約30 s/8 m至至少約15 s/8 m、至少約25 s/8 m至至少約15 s/8 m、至少約20 s/8 m至至少約15 s/8 m、至少約30 s/8 m至至少約20s/8 m、至少約25 s/8 m至至少約20 s/8 m或至少約30 s/8 m至至少約25 s/8 m之增加之個體表示治療或治療方案對於治療該個體之神經變性疾病係有效的。具有小於約30.0 s/8m、小於約25.0 s/8m、小於約20.0 s/8m、小於約15.0 s/8m、小於約14.5 s/8m、小於約14.0 s/8m、小於約13.5 s/8m、小於約13.0 s/8m、小於約12.9 s/8m、小於約12.8 s/8m、小於約12.7 s/8m、小於約12.6 s/8m、小於約12.5 s/8m、小於約12.4 s/8m、小於約12.3 s/8m、小於約12.2 s/8m、小於約12.1 s/8m、小於約12.0 s/8m、小於約11.9 s/8m、小於約11.8 s/8m、小於約11.7 s/8m、小於約11.6 s/8m、小於約11.5 s/8m、小於約11.4 s/8m、小於約11.3 s/8m、小於約11.2 s/8m、小於約11.1 s/8m、小於約11.0 s/8m、小於約10.5 s/8m、小於約10.0 s/8m、小於約9.5 s/8m、小於約9.0 s/8m、小於約8.5 s/8m或小於約8.0 s/8m之步行速度之個體表示治療或治療方案對於治療該個體之神經變性疾病係有效的。
例如，個體步行8 m之時間減少至少約0.5秒、至少約1秒、至少約2秒、至少約3秒、至少約4秒、至少約5秒、至少約6秒、至少約7秒、至少約8秒、至少約9秒、至少約10秒、至少約11秒、至少約12秒、至少約13秒、至少約14秒、至少約15秒、至少約16秒、至少約17秒、至少約18秒、至少約19秒、至少約20秒、至少約21秒、至少約22秒、至少約23秒、至少約24秒或至少約25秒表示治療或治療方案對於治療該個體之神經變性疾病係有效的。b. 對照 / 參考含量
宜包括對照樣品。對照樣品可與如上所述之來自個體之樣品同時分析。來自個體樣品之結果可與來自對照樣品之結果比較。提供標準曲線，利用該等標準曲線，可比較生物樣品之分析結果。該等標準曲線呈示作為分析單位函數之標記物之含量，若使用化學發光標記，則分析單位即為化學發光信號強度。使用來自多個供體之樣品，提供正常健康組織或未進行處理之MS組織中RGMa片段之對照含量之標準曲線。
因此，鑑於以上描述，提供一種測定試驗樣品中RGMa片段之存在、量或濃度之方法。該方法包含(1)藉由西方墨點分析法分析試驗樣品之RGMa片段，例如使用結合RGMa片段上之表位之至少一種捕捉抗體以及結合捕捉抗體或RGMa片段上之表位(該表位不同於捕捉抗體之表位)，以及視情況地包括可偵測標記之至少一種偵測抗體。該方法進一步包含(2)將可直接或間接指示試驗樣品中RGMa片段之存在、量或濃度之由可偵測標記所產生之信號與作為校準物中RGMa片段之存在、量或濃度之直接或間接指示之所產生之信號比較。校準物視情況地，且較佳地，為一系列校準物之一部分，其中每個校準物與其他校準物系列之RGMa片段之濃度不同。(1) 參考含量
文中所述之方法使用個體之RGMa片段之參考含量以(1)識別且確定治療或治療方案用於罹患神經變性疾病之個體之有效性；(2)預測罹患神經變性疾病之個體對治療或治療方案之反應；(3)向罹患神經變性疾病之個體提供治療或治療方案；(4)優化罹患神經變性疾病之個體之治療或治療方案；(5)監測罹患神經變性疾病之個體之促進再生藥物治療或治療方案；以及(6)篩選對神經變性疾病具有療效之化合物。
一般來講，可採用預定或參考含量作為基準，對照該基準以評估藉由分析試驗樣品之RGMa片段(諸如18 kDa RGMa片段、30 kDa RGMa片段及/或40 kDa RGMa片段)得到之結果。一般來講，在進行該比較時，該預定含量係藉由進行足夠次數之特定分析且在適當條件下得到，以建立分析物存在、量或濃度與MS之特定階段或終點之相連性或關聯性。通常，藉由參考個體(或個體羣體)之分析得到該預定含量。參考個體可為對照個體，例如不患有神經疾病之正常或健康個體或患有神經疾病之個體，諸如MS個體。該MS個體為患有MS之特定階段或前期(即，RRMS、SPMS、PPMS、PRMS或CIS)但可能接受或未接受MS治療之個體。參考羣體或參考族群可為對照族群或MS族群。MS族群可包括患有MS之特定階段或前期(即，RRMS、SPMS、PPMS、PRMS或CIS)之個體及/或患有MS但未接受MS治療之個體。參考含量可為個體接受投與治療或治療方案之前之個體中之RGMa片段含量。
特定言之，關於用於治療反應之預確定含量，如上所述，RGMa片段之量或濃度可「不變」、「有利」(或「有利變化」)或「不利」(或「不利變化」)。「升高」或「增加」係指試驗樣品中之量或濃度高於或大於常見或正常含量或範圍(例如，預確定含量)，例如對照組或MS組中所見之常見或正常含量，或高於或大於另一參考含量或範圍(例如，更早樣品或基線樣品)。「升高」或「增加」也指試驗樣品中之量或濃度高於或大於開始治療前個體中所見之含量或範圍。術語「降低」或「減小」係指試驗樣品中之量或濃度低於或小於常見或正常含量或範圍(例如，預確定含量)，例如對照組或MS組中所見之常見或正常含量，或低於或小於另一參考含量或範圍(例如，更早樣品或基線樣品)。術語「降低」或「減小」也指試驗樣品中之量或濃度低於或小於開始治療前個體中所見之含量或範圍。術語「變化」 係指樣品中之量或濃度超出常見或正常含量或範圍(例如，預確定含量)，例如對照組或MS組中所見之常見或正常含量，或超出另一參考含量或範圍(例如，更早樣品或基線樣品)變化。
如上所述之用於RGMa片段之常見或正常含量或範圍或另一參考含量或範圍(例如，更早樣品或基線樣品)根據標準操作定義。所謂之變化含量或變化可視為在與常見或正常含量或範圍，或參考含量或範圍相比之任何淨變化不能藉由試驗誤差或樣品偏差解釋時發生。在一些實施例中，在特定樣品中量測之含量將與來自所謂之正常個體(即對照個體)之類似樣品中確定之含量或含量範圍比較。在此上下文中，例如，「正常」(有時稱為「對照」或「健康」)個體為不具有可偵測之MS之個人，以及「正常」患者或羣體為不表現出可偵測之MS之患者或羣體。「明顯正常之個體」為RGMa片段未被評估或正被評估之個體(例如18 kDa RGMa片段、30 kDa RGMa片段及/或40 kDa RGMa片段)。當偵測物在正常情況下偵測不到(例如，正常含量為零，或在正常羣體之約25至約75百分位數範圍內)，但在試驗樣品中偵測到時，以及當偵測物以比正常含量更高之含量存在於試驗樣品中時，則該偵測物之含量被視為「提高」。在一些實施例中，將在特定樣品中確定之含量與來自MS個體之類似樣品或來自開始治療前之個體之早期樣品或基線樣品中確定之含量或含量範圍比較。
在一些實施例中，若參考含量為進行或未進行MS治療之MS個體之RGMa片段含量，則高於RGMa片段(例如18 kDa RGMa片段、30 kDa RGMa片段及/或40 kDa RGMa片段)之參考含量之含量確定個體對治療或治療方案沒有反應或確定治療對於治療MS係無效的；低於或等於RGMa片段(例如18 kDa RGMa片段、30 kDa RGMa片段及/或40 kDa RGMa片段)之參考含量之含量確定個體對治療或治療方案有反應或確定治療對於治療MS係有效的。
在一些實施例中，與對照、基線或更早含量或範圍相比之樣品中相對RGMa片段含量之變化確定個體對治療或治療方案有反應或確定治療對於治療MS係有效的。在一些實施例中，與對照、更早或基線樣品中之RGMa片段含量相比，取自個體之樣品中少於約100%、少於約95%、少於約85%、少於約80%、少於約75%、少於約70%、少於約65%、少於約55%、少於約50%、少於約45%、少於約40%、少於約35%、少於約30%、少於約25%、少於約20%、少於約15%、少於約10%或少於約5%之相對RGMa片段含量確定或預測個體對治療或治療方案有反應或確定治療對於治療MS係有效的。c . 樣品
利用以RGMa片段為主之診斷分析之方法可包括自個體得到一或多種樣品。一或多種樣品可為腦脊液(CSF)樣品。在其他實施例中，一或多種樣品可取自任意來源，例如，組織、血液、血漿, 唾液、痰、黏液、汗液、尿液、尿道拭子、宮頸拭子、泌尿生殖或肛門拭子、結膜拭子、眼晶狀體液或腦脊液。一或多種樣品可(i)直接獲自個體或(ii)在預處理後使用以修改一或多種樣品之特徵。因此，一或多種樣品可藉由例如由血液製備血漿或血清、裂解細胞、由固體材料製備液體、稀釋黏液、過濾液體、添加試劑、純化核酸、純化蛋白等進行預處理。
樣品可在向個體投與治療或治療方案前及後之多個時間點獲取。例如，樣品可在向個體投與治療或治療方案前之1天、前之0天、後之1天、後之2天、後之3天、後之4天、後之5天、後之6天、後之7天、後之8天、後之9天或後之10天獲取。d. 與其他生物標記之組合
文中所述方法也可包括使用以RGMa片段為主之診斷分析與另一生物標記之組合以(1)識別且確定治療或治療方案對罹患神經變性疾病之個體之有效性；(2)預測罹患神經變性疾病之個體對治療或治療方案之反應；(3)向罹患神經變性疾病之個體提供治療或治療方案；(4)優化罹患神經變性疾病之個體之治療或治療方案；(5)監測罹患神經變性疾病之個體之促進再生藥物治療或治療方案；以及(6)篩選對神經變性疾病具有療效之化合物。在一些實施例中，生物標記可為MS之生物標記，諸如NOGO A、Nogo受體(NgR)、NOGO受體、髓鞘少突膠質細胞糖蛋白(OMgp)、髓鞘鹼性蛋白(MBP)、神經絲(Nf)、生長相關蛋白43(GAP-43)之配體；骨橋蛋白；白細胞介素-17、白細胞介素-6、干擾素-γ及TNF-α。在一些實施例中，MS生物標記含量之變化(即增加或減少)與RGMa片段含量之變化之組合表示治療或治療方案是否有效。e. 治療方案
利用以RGMa片段為主之診斷分析之方法可用於神經變性疾病之治療或治療方案。治療或治療方案可包括神經修復藥物，包括神經再生藥物、神經保護藥物或其組合。神經修復涵蓋功能失調性神經網路藉由突觸強度之變化、突觸活性之改變、沉默突觸之活化、抑制性突觸之沉默進行修正。神經修復包括神經再生過程。神經再生為受損之神經網路藉由受損纖維之再生、受損纖維束或健康之相鄰之未受損束之側支萌發、再生後新突觸之形成以及新髓鞘片之隨後形成進行修復。神經保護為神經元結構及/或功能之相對保存以藉由停止或至少減緩神經元丟失來阻止或減緩疾病進展及繼發性損傷。
治療或治療方案可包括皮質類固醇，諸如曲安奈德(TCA)、Tecfidera/BG-12(反丁烯二酸二甲酯)、Gilenya(芬戈莫德)、拉喹莫德、達利珠單抗、阿侖單抗、利妥昔單抗、潑尼松龍(prednisolone)；甲潑尼龍(methylprednisolone)；咪唑硫嘌呤(azathioprine)；環磷醯胺(cyclophosphamide)；環孢黴素(cyclosporine)；甲氨蝶呤(methotrexate)；4-胺基吡啶(4-aminopyridine)；替紮尼定(tizanidine)；干擾素-β1a (AVONEX; Biogen)；干擾素-βlb (BETASERON; Chiron/Berlex)；干擾素α-n3) (Interferon Sciences/Fujimoto)、干擾素-α (Alfa Wassermann/J&J)、干擾素β1A-IF (Serono/Inhale Therapeutics)、聚乙二醇干擾素α 2b (Enzon/Schering-Plough)、共聚物1 (Cop-1; COPAXONE; Teva Pharmaceutical Industries, Inc.)；高壓氧；靜脈內免疫球蛋白；克拉屈濱(cladribine)；其他人細胞因子或生長因子以及其受體之抗體或拮抗劑，例如，TNF、LT、IL-l、IL-2、IL-6、IL-7、IL-8、IL-23、IL-15、IL-16、IL-18、EMAP-11、GM-CSF、FGF及PDGF，細胞表面分子之抗體例如CD2、CD3、CD4、CDS、CD19、CD20、CD25、CD28、CD30、CD40、CD45、CD69、CD80、CD86、CD90或其配體、那他珠單抗(natalizumab)、藥劑，例如氨甲喋呤(methotrexate)、環孢菌素(cyclosporine)、FK506、雷帕黴素(rapamycin)、黴酚酸莫非替克(mycophenolate mofetil)、特立氟胺(teriflunomide)、來氟米特(leflunomide)、醋酸格拉替美(glatiramer acetate)、Gilenya (芬戈莫德)、米托蒽醌(mitoxantrone)、聚乙二醇干擾素β-1a、反丁烯二酸二甲酯、NSAID，例如，布洛芬(ibuprofen)，皮質類固醇諸如潑尼松龍(prednisolone)、磷酸二酯酶抑制劑、腺苷激動劑、抗血栓形成劑、補體抑制劑、腎上腺素能藥劑、干擾促炎性細胞因子之信號傳遞之藥劑諸如TNFα或IL-l (例如IRAK, NIK, IKK, p38或MAP激酶抑制劑)、IL-lβ轉化酶抑制劑、TACE抑制劑、T -細胞信號傳遞抑制劑諸如激酶抑制劑、金屬蛋白酶抑制劑、柳氮磺吡啶、硫唑嘌呤、6-巰基嘌呤、血管緊張素轉化酶抑制劑、可溶性細胞因子受體及其衍生物(例如，可溶性p55或p75 TNF受體、siL-lRI、siL-lRII、siL-6R)、抗炎性細胞因子(例如IL-4、IL-10、IL-13及TGFβ)或其任何組合。治療或治療方案可包括促再生RGMa抗體。促再生RGMa抗體如美國專利公佈第2004/0102376、2010/0028340、2011/0135664、2013/0330347及2014/0023659號中所述。
治療可進一步包括：治療劑、成像劑、細胞毒性劑、血管生成抑制劑；激酶抑制劑；共刺激分子阻斷劑；黏附分子阻斷劑；抗細胞因子抗體或其功能性片段；氨甲喋呤；環孢菌素；雷帕黴素；FK506；可偵測標記或報告子；TNF拮抗劑；抗風溼藥物；肌肉鬆弛劑、麻醉劑、非類固醇抗炎藥(NSAID)、止痛劑、麻醉劑、鎮靜劑、局部麻醉劑、神經肌肉阻斷劑、抗菌劑、抗牛皮蘚劑、皮質類固醇、促蛋白合成類固醇、促紅細胞生成素、免疫劑、免疫球蛋白、免疫抑制劑、生長激素、激素替代藥物、放射性藥物、抗抑鬱藥、抗精神病藥物、刺激劑、哮喘藥物、β-激動劑、吸入性類固醇、腎上腺素或類似物、細胞因子、細胞因子拮抗劑、神經保護劑，諸如抗氧化劑、自由基清除劑、抗驚厥藥物例如苯妥英(Phenytoin)、貧血藥物紅細胞生成素或其組合。(1) TCA
神經變性疾病之治療或治療方案可為曲安奈德治療。稱為曲安奈德(TCA = VOLON A)之皮質類固醇之鞘內投與可用於MS患者。多種TCA研究揭示出具有降低之EDSS(擴展殘疾狀況得分)，增加之步行距離及減慢之步行速度之治療患者之顯著改善。然而，不完全清楚MS患者之此改進之功能恢復之基本分子機理。
先前之公開觀測試驗描述在原發性及繼發性進行性MS患者中鞘內重複投與持續釋放類固醇曲安奈德(TCA)之益處，尤其在他們罹患脊柱症狀時。在臨牀上，對TCA治療有三種反應：(I)在一系列之四次至六次TCA投與期間，患者可能報導立刻改進或(II)在幾次TCA注射後疾病症狀之改善延遲或(III)無益處。不清楚對TCA治療之這三種行為反應模式之具體生化及藥理原因。在上肢及下肢功能明顯立刻增強之患者中顯示自由基之CSF合成降低。一般來講，自由基具有介導組織破壞及調節多種CSF蛋白產生之能力。鞘內重複投與持續釋放類固醇曲安奈德可能有利於進行性多發性硬化患者。f. 確定用於神經變性疾病之治療之有效性之方法
使用以RGMa片段為主之診斷分析之方法可用於確定用於有需要個體之神經變性疾病之治療或治療方案之有效性之方法。確定方法可包括確定獲自個體之樣品中之至少一種RGMa片段之含量。確定可包括使用以RGMa片段為主之診斷分析以偵測或量測樣品中至少一種RGMa片段之存在及/或含量。
確定之方法亦可包括將至少一種RGMa片段之含量與該至少一種RGMa片段之對照含量比較。若至少一種RGMa片段之含量相較於該至少一種RGMa片段之對照含量增加，則可確定該治療或治療方案對於治療神經變性疾病係無效的。當確定治療或治療方案對於治療神經變性疾病係無效的，則該方法亦可包括向個體投與與無效治療或治療方案不同之治療或治療方案。
若至少一種RGMa片段之含量相較於該至少一種RGMa片段之對照含量降低，則確定治療或治療方案對於治療神經變性疾病係有效的。當確定治療或治療方案對於治療神經變性疾病係有效的，則該方法亦可包括繼續向個體投與該有效治療或治療方案。g. 預測罹患神經變性疾病之個體對治療之反應之方法
利用以RGMa片段為主之診斷分析之方法可用於預測罹患神經變性疾病之個體對治療之反應之方法。該方法可包括確定獲自個體之樣品中至少一種RGMa片段之含量。確定可包括利用以RGMa片段為主之診斷分析以偵測或量測樣品中至少一種RGMa片段之存在及/或含量。
預測方法亦可包括將至少一種RGMa片段之含量與該至少一種RGMa片段之對照含量比較。預測方法可進一步包括若至少一種RGMa片段之含量相對於該RGMa片段之對照含量降低，可提供預測個體對治療或治療方案之反應。當提供反應之預測時，預測方法亦可包括向個體投與治療或治療方案。h. 治療罹患神經變性疾病之個體之方法
利用以RGMa片段為主之診斷分析之方法可用於治療罹患神經變性疾病之個體之方法。該方法可包括確定獲自個體之樣品中至少一種RGMa片段之含量。確定可包括利用以RGMa片段為主之診斷分析以偵測或量測樣品中至少一種RGMa片段之存在及/或含量。
該方法亦可包括將至少一種RGMa片段之含量與該至少一種RGMa片段之對照含量比較。該方法可進一步包括若至少一種RGMa片段之含量相對於該RGMa片段之對照含量增加，則向個體投與治療或治療方案。i. 優化用於罹患神經變性疾病之個體之治療方案之方法
利用以RGMa片段為主之診斷分析之方法可用於優化用於罹患神經變性疾病之個體之治療或治療方案之方法。該方法可包括確定獲自個體之第一樣品中至少一種RGMa片段之第一含量。第一樣品係在該個體開始了治療或治療方案之時段之前或期間之時間點獲得。該方法亦可包括確定獲自個體之第二樣品中至少一種RGMa片段之第二含量。第二樣品可在比第一時間點晚之時間點自個體得到。第二樣品可在距離獲取第一樣品至少約1小時、至少約2小時、至少約3小時、至少約4小時、至少約5小時、至少約6小時、至少約7小時、至少約8小時、至少約9小時、至少約10小時、至少約12小時、至少約24小時、至少約2天、至少約3天、至少約4天、至少約5天、至少約4天、至少約5天、至少約2週、至少約1個月或至少約一年獲取。確定第一含量及第二含量可包括利用以RGMa片段為主之診斷分析以偵測或量測各自樣品中至少一種RGMa片段之存在及/或含量。
當至少一種RGMa片段之第二含量小於該至少一種RGMa片段之第一含量時，則治療或治療方案對於神經變性疾病係有效的且不改變治療方案。當至少一種RGMa片段之第二含量大於或等於該至少一種RGMa片段之第一含量時，則治療或治療方案對於神經變性疾病係無效的且改變治療方案。j. 監測罹患神經變性疾病之個體之促進再生藥物治療之方法
利用以RGMa片段為主之診斷分析之方法可用於監測罹患神經變性疾病之個體之促進再生藥物治療之方法。該方法可包括確定獲自個體之第一樣品中至少一種RGMa片段之第一含量。第一樣品係在該個體開始了治療或治療方案之時段之前或期間之時間點獲得。該方法亦可包括確定獲自個體之第二樣品中至少一種RGMa片段之第二含量。第二樣品可在比第一時間點晚之時間點自個體得到。第二樣品可在距離獲取第樣品至少約1小時、至少約2小時、至少約3小時、至少約4小時、至少約5小時、至少約6小時、至少約7小時、至少約8小時、至少約9小時、至少約10小時、至少約12小時、至少約24小時、至少約2天、至少約3天、至少約4天、至少約5天、至少約4天、至少約5天、至少約2週、至少約1個月或至少約一年獲取。確定第一含量及第二含量可包括利用以RGMa片段為主之診斷分析以偵測或量測各自樣品中至少一種RGMa片段之存在及/或含量。
至少一種RGMa片段之第二含量相對於該至少一種RGMa片段之第一含量降低，可表示治療或治療方案對神經變性疾病具有療效。當治療或治療方案在治療上被確定對於神經變性疾病係有效時，監測方法可包括繼續向個體投與治療上有效之治療或治療方案。
至少一種RGMa片段之第二含量相對於該至少一種RGMa片段之第一含量增加，可表示治療或治療方案對神經變性疾病不具有療效。當治療或治療方案在治療上被確定對於神經變性疾病係無效時，監測方法可包括向個體投與與該治療上無效之治療或治療方案不同之治療或治療方案。k. 篩選對於神經變性疾病具療效之化合物之方法
使用以RGMA片段為主之診斷分析之方法可用於篩選對於神經變性疾病具有療效之化合物之方法。例如，以RGMa片段為主之診斷分析可用於評估神經再生之臨牀藥物候選、提高神經可塑性之臨牀藥物候選或促進髓鞘再生之臨牀藥物候選。該方法可包括確定包含細胞之樣品中至少一種RGMa片段之第一含量。該方法亦可包括將樣品與化合物接觸。該方法可進一步包括確定樣品中至少一種RGMa片段之第二含量。第二含量可在將樣品與化合物接觸後至少約1小時、至少約2小時、至少約3小時、至少約4小時、至少約5小時、至少約6小時、至少約7小時、至少約8小時、至少約9小時、至少約10小時、至少約12小時、至少約24小時、至少約2天、至少約3天、至少約4天、至少約5天、至少約4天、至少約5天、至少約2週、至少約1個月或至少約一年量測。確定第一含量及第二含量可包括利用以RGMa片段為主之診斷分析以偵測或量測各自樣品中至少一種RGMa片段之存在及/或含量。
至少一種RGMa片段之第二含量相對於該至少一種RGMa片段之第一含量降低，可表示化合物對神經變性疾病具有療效。至少一種RGMa片段之第二含量相對於該至少一種RGMa片段之第一含量增加，可表示化合物對神經變性疾病不具有療效。4. 用於進行方法之套組
文中提供一種套組，其可用於進行如上所述之方法。套組可提供(1)能夠特異性結合RGMa片段中任一種(例如18 kDa RGMa片段、30 kDa RGMa片段及/或40 kDa RGMa片段中每一種)之試劑，以量化自個體分離之生物樣品中RGMa片段(例如18 kDa RGMa片段、30 kDa RGMa片段及/或40 kDa RGMa片段中每一種)之含量，以及(2)指示RGMa片段(例如18 kDa RGMa片段、30 kDa RGMa片段及/或40 kDa RGMa片段中每一種)之參考含量之參考標準物，其中至少一種試劑包含能夠特異性結合適宜標記物之至少一種抗體。套組可包含能夠特異性結合至少一種RGMa片段之試劑，量化生物樣品中之各生物標記物之濃度之試劑以及指示生物樣品中RGMa片段之參考含量之參考標準物(即，18 kDa RGMa片段、30 kDa RGMa片段及/或40 kDa RGMa)。套組可進一步包含能夠特異性結合MS之至少另一生物標記物之至少一種試劑(即抗體)，該生物標記物例如NOGO A、NOGO受體、OMgp、MBP、Nf、GAP-43、骨橋蛋白；介白素-17、介白素-6、介白素-γ及TNF-α；以及指示MS之至少另一生物標記物(若存在)之參考含量之參考標準物。
套組亦可包含抗體及用於投與該等抗體之構件。套組可進一步包含關於使用該套組及執行分析、監測或治療之說明書。
套組亦可包含一或多個容器，例如小瓶或瓶子，各容器裝有單獨試劑。套組可進一步包含書面說明書，其可描述如何進行或解釋本文中所述之分析、監測、治療或方法。
例如，套組可包含藉由西方墨點分析用於分析試驗樣品之18 kDa RGMa片段、30 kDa RGMa片段及/或40 kDa RGMa片段之說明書。說明書可呈紙張形式或電腦可讀取形式，例如磁碟、CD、DVD等。抗體可為18 kDa RGMa片段、30 kDa RGMa片段及/或40 kDa RGMa片段捕捉抗體及/或18 kDa RGMa片段、30 kDa RGMa片段及/或40 kDa RGMa片段偵測抗體(意指利用可偵測標記標記之抗體)。例如，套組可含有特異性結合至少一種RGMa片段之至少一種捕捉抗體。套組亦可含有用於捕捉抗體之綴合抗體(例如，利用可偵測標記標記之抗體) (即，特異性結合18 kDa RGMa片段、30 kDa RGMa片段及/或40 kDa RGMa片段之捕捉抗體之綴合抗體)。替代地或額外地，套組可包括校準物或對照，例如，經純化，以及視情況地經凍乾，(例如，18 kDa RGMa片段、30 kDa RGMa片段及/或40 kDa RGMa片段)，及/或至少一個容器(例如，試管、微量滴定板或條，其已經塗覆了抗-18 kDa RGMa片段、30 kDa RGMa片段及/或40 kDa RGMa片段單株抗體)以進行分析，及/或緩衝液，諸如分析緩衝液或沖洗緩衝液，其中任一種可以濃縮溶液提供，用於可偵測標記(例如，酶標記)之基質溶液，或終止溶液。較佳地，套組包含進行分析所必要之所有組分，即試劑、標準物、緩衝液、稀釋液等。說明書亦可包括用於產生標準曲線之說明書或用於量化18 kDa RGMa片段、30 kDa RGMa片段及/或40 kDa RGMa片段之參考標準物。
如上所述，在套組中提供之任意抗體，例如18 kDa RGMa片段、30 kDa RGMa片段及/或40 kDa RGMa片段之特異性重組抗體，可併入可偵測標記，例如螢光團、放射性部分、酶、生物素/抗生物素蛋白標記、發色團、化學發光標記等，或套組可包括用於標記抗體之試劑或用於偵測抗體(例如，偵測抗體)及/或用於標記分析物之試劑或用於偵測分析物之試劑。抗體、校準物及/或對照可在單獨容器中提供或預分配到適宜分析模式中，例如微量滴定板中。
視情況地，套組包括品質控制組分(例如，靈敏度板、校準物及陽性對照)。品量控制試劑之製備係相關領域中熟知者且描述於在用於多種免疫診斷產物之內插頁中。視情況採用靈敏度板元件來確定分析性能特徵，且進一步視情況地適用為西方墨點套組試劑完整性及分析標準化之有效指示劑。
套組亦可視情況地包括進行診斷分析或利於品質控制評估時所需之其他試劑，例如緩衝液、鹽、酶、酶輔助因子、受質、偵測試劑等。其他組分亦可包括在套組中，例如用於分離及/或處理試驗樣品之緩衝液及溶液(例如，前處理試劑)。套組可另包括一或多種其他對照物。可將套組中之一或多種組分凍乾，在此情況中，套組可進一步包括適於復水凍乾組分之試劑。
套組之多種組分可視情況在必要時提供在適宜容器中，例如微量滴定板。套組可進一步包括用於保留或儲存樣品之容器(例如，用於血樣之容器或卡管)。適宜時，套組視情況亦可包括反應容器、混合容器、以及利於試驗樣品之試劑製備之其他組分。套組亦可包括有助於獲得試驗樣品之一或多種器具，諸如注射器、移液管、鑷子、量勺等。
若可偵測標記為至少一種吖啶鎓化合物時，套組可包括至少一種吖啶鎓-9-羧醯胺、至少一種吖啶鎓-9-羧酸芳基酯、或其任何組合。若可偵測標記為至少一種吖啶鎓化合物時，套組亦可包含過氧化氫來源，諸如緩衝液、溶液及/或至少一種鹼性溶液。
如需要，套組可包括固相，例如磁性顆粒、珠、試管、微量滴定板、比色杯、薄膜、支架分子、膜、濾紙、石英晶體、盤或片。套組亦可包括可偵測標記，其可為抗體或可接合抗體，例如用作偵測抗體之抗體。可偵測標記可例如為直接標記，其可為酶、寡核苷酸、奈米顆粒、化學發光團、螢光團、螢光猝滅劑、化學發光猝滅劑或生物素。套組可視情況包括偵測標記所需之任意其他試劑。
如需要，套組可進一步包括一或多種單獨或與說明進一步組合之組分，以分析試驗樣品之另一分析物，該分析物可為生物標記，例如MS生物標記，例如NOGO A、NOGO受體、OMgp、MBP、Nf、GAP-43、骨橋蛋白；介白素-17、介白素-6、介白素-γ及TNF-α。分析物之實例包括但不限於18 kDa RGMa片段、30 kDa RGMa片段及/或40 kDa RGMa片段以及文中所述之其他分析物及生物標記，或技術中所知。在一些實施例中，用於分析試驗樣品之18 kDa RGMa片段、30 kDa RGMa片段及/或40 kDa RGMa片段之一或多種組分能夠確定18 kDa RGMa片段、30 kDa RGMa片段及/或40 kDa RGMa片段之存在、量或濃度。亦可利用TOF-MS及內標分析樣品(例如血清樣品)之18 kDa RGMa片段、30 kDa RGMa片段及/或40 kDa RGMa片段。
對於熟習此項技術者顯而易見的係，對本發明方法之其他適宜修改及改進易應用且理解，且可利用適宜等效項，在不脫離本發明範圍及文中所揭示之態樣及實施例下進行。現在詳細描述本發明，藉由參考以下實例將更清晰地理解，以下實例只用於闡述本發明之一些態樣及實施例，不應視為限制本發明範圍。文中指出之所有期刊參考、美國專利及公佈之揭示內容之全文係以引用之方式併入文中。
本發明具有多個態樣，此等態樣係藉由以下非限制實例說明。實例 實例 1 材料及方法 個體 .
研究25名MS患者(年齡：50 ± 1.64 [平均值± SEM，歲]。平均MS持續時間為14.02 ± 1.71 [年]。個體包括14名女性及11名男性。個體包括13名繼發性進行性[8名女性，5名男性]及12名原發性進行性[6名女性，6名男性])。排除標準為急性惡化或其症狀進展近期明顯加快。設計 .
TCA投與後，強制臥牀休息至少六個小時以支持及便於TCA在CSF及脊髓中之擴散。利用無創傷Sprotte針進行腰椎穿刺。調節藥物治療之原有免疫系統保持穩定。減少痙攣治療沒有變化。在基線處以及在投與溶於10 ml鹽水中之40 mg曲安奈德(TCA)後之每一天進行擴展殘疾狀況得分(EDSS)評級、最大步行距離、以及步行速度分析，直到投與第四個TCA。CSF 取樣及 CSF 分析
. 在鞘內投與TCA前，取CSF。將等份之約1 ml CSF收集在無菌Eppendorf管中，立即冷凍且在-20℃下儲存。在第一次投與TCA(I時刻)前之基線處及在注射TCA(II、III、IV及V時刻)後之每一天確定RGMa。藉由利用NanoDrop分析儀(Thermo Scientific)量測確定蛋白濃度。西方墨點分析 .
藉由西方墨點及免疫偵測分析CSF RGMa含量(Schaffar等, J Neurochem 107:418-431 (2008))。簡言之，將10 μl各CSF樣品與10 μl SDS-負載染料(Life Technologies)混合且在95℃下培養10分鐘。使10 μl此等樣品在SDS-PA-凝膠(Life Technologies)上分離且轉移到硝化纖維素膜上。利用抗-RGMa抗體(R&D Systems, BAF2459)及第二試劑超靈敏ABC過氧化酶染色套組(Pierce, 32050)免疫染色後，利用發光試劑(Thermo Scientific, SuperSignal West Femto Chemiluminescence Substrate, 34094)培養膜。條 帶強度分析 .
利用Quantity One Version 4.6.9 (BioRad)量測條帶強度。簡言之，選擇Band Analysis Quick Guide中之「Frame lanes…」且選定泳道數。利用「Add/Adjust Anchors」-工具細微調整泳道以及利用「Detect Bands…」-工具人工偵測所關注之條帶。利用「All Lane Report」，偵測軌跡強度x mm且用於分析。對於每個患者，將時刻I以100%計且時刻II、III、IV為時刻I之相關百分比。將此等百分比之平均值繪成圖且利用Bonferroni多重比較檢驗在GraphPad Prism 5中藉由ANOVA進行統計分析。
用於實驗室結果之統計評估之步驟。藉由西方墨點分析所有25個患者之CSF之RGMa表達，與臨牀得分無關。將等量CSF用於西方墨點分析以比較相同體積中RGMa含量。藉由密度計量測值分析此組中所有25個患者之CSF中之30 kDa及40 kDa。將臨牀數據分成觀測期間之立即反應者及沒有立即之未反應者。統計 .
將利用重複量測設計之ANCOVA用於此試驗性試驗之此探索性分析。共變量為作為共變量之MS持續時間、MS類型、性別及年齡。利用對照基線之Tukey多重比較檢驗進行事後分析。利用GraphPad Prism 5軟件進行統計分析。實例 2 MS 患者之腦脊液中 RGMa
為了確定RGMa片段是否存在於罹患MS之患者之腦脊液中，進行人CSF樣品之電泳、西方墨點以及利用RGMa-特異性抗體之免疫偵測，如實例2中所述。圖1顯示了以上所述之所有RGMa片段存在於人CSF中(modified from 由Key及Lah, Cell Adhesion & Migration 6:2, 85-90 (2012)修改)。利用RGMa-特異性抗體之免疫偵測可偵測到具有約40、30及18 kDa之尺寸之三種片段。TCA=曲安奈德，分別第一、第二、第三、第四及第五次TCA治療前用於進行性MS患者I- II、III、IV、V之鞘內治療之皮質類固醇。實例 3 多發性硬化患者之曲安奈德之效果
當前多種藥物減緩MS疾病進展但沒有提高MS患者之功能恢復。進行實驗以說明每隔一天之四次曲安西龍(triamcinolone)投與之與腦脊液中RGMa含量相關之效力。在25名進展性多發性硬化患者中，在基線處及投與曲安西龍後之每一天進行臨牀評估。在將TCA施與患者前，取1-2 ml等份CSF。在每次投與曲安西龍前，藉由西方墨點分析及量化確定RGMa濃度。取決於疾病活性，患者通常接受4-6次TCA投與。反應者之臨牀數據 .
治療後，17名患者(10名男性，7名女性；年齡：52.18 ± 2.04，MS持續時間：15.74 ± 1.92)得到改善。此等患者之EDSS得分(F = 8.55；p ＜ 0.009 [圖3A])下降，最大步行距離增加(F = 3.64；p = 0.01 [圖3B])，以及步行速度加快(F = 3.42；p ＜ 0.01 [圖3C])。三名患者坐輪椅且他們數據不包括在步行能力之分析中。沒有立即反應之患者之臨牀數據 .
在觀測期間，8名患者(1名男性，7名女性；年齡：45.38 ± 2.04；MS持續時間：10.38 ± 3.24)沒有立即反應。EDSS得分(F = 1；ns [圖4A])；最大步行距離(F = 1.52；ns [圖4B])及步行速度(F = 0.021；ns [圖4C])沒有明顯變化。6名患者報導在TCA投與後，三週內出現延遲的改善。
一般來講，所有參與者都沒出現嚴重之副作用。在整個分析中沒有發現共變量之影響。實驗室結果 .
反應者. 在此組中RGMa含量下降。30 kDa形式(F = 3.82; p ＜ 0.05 [圖5B])下降不如40 kDa形式(F = 9.12; p ＜ 0.0001 [圖5A])明顯。蛋白CSF濃度沒有顯著變化(F = 2.77; ns [圖5C])。圖6顯示三個代表性西方墨點。未立即反應之患者 .
在CSF中RGMa之形式(30 kDa: F = 2.98; ns [圖7B]; 40 kDa: F = 0.84; ns [圖7A])及蛋白含量(F = 2.86; ns [圖7C])皆未發生明顯變化。圖8顯示此組中三個代表性西方墨點(Western bltos)。
在17名患者中，多發性硬化之臨牀得分改善，且最大步行距離及步行速度改善。此等反應者中之RGMa含量降低。其餘患者未展示即時臨牀效益且RGMa濃度未降低。RGMa降低可反映在進行性多發性硬化患者中藉由曲安西龍進行之再生及功能恢復。蛋白濃度在反應者與未反應者之間無差異。在CSF之兩個組之間不存在細胞計數之相關變化。
反複投與TCA引起所有研究之RGMa片段之濃度降低。出人意料的是，在展示功能改善之患者中觀測到TCA-引起之CSF中可溶性RGMa片段之濃度降低，表示RGMa片段可用於評估MA患者之結果。此藉由第二觀測進一步加強，其中亦使用TCA治療之另一組MS患者未展示RGMa片段CSF濃度之降低且因此未展示功能恢復。
應瞭解，以上詳細說明及隨附實例僅為說明性且不視為對本發明範圍之限制，本發明範圍僅由隨附申請專利範圍及其等效物界定。
對所揭示之實施例之多種改變及變化對於熟習此項技術者為顯而易見的。可在不脫離其主旨及範疇下進行此類改變及變化，包括(但不限於)與本發明之化學結構、取代基、衍生物、中間物、合成酶、組合物、調配物或使用方法相關之改變及變化。
為了完整性原因，在以下帶編號之條款中闡述本發明之各種態樣：
條款1. 一種偵測及量化樣品中之至少一種RGMa片段之方法，該方法包含：(a)自個體得到包含至少一種RGMa片段之樣品；(b)將該樣品與捕捉結合性蛋白質接觸，其中該捕捉結合性蛋白質結合該至少一種RGMa片段以形成捕捉結合性蛋白質-RGMa片段複合物；(c)將該樣品與偵測結合性蛋白質接觸，其中該偵測結合性蛋白質與捕捉結合性蛋白質相互作用以形成偵測結合性蛋白質-捕捉結合性蛋白質RGMa片段複合物，以及(d)偵測且量化樣品中至少一種RGMa片段。
條款2. 如條款1之方法，其中該至少一種RGMa片段為具有約1 kDa至約65 kDa的尺寸的RGMa片段。
條款3. 如條款1或2之方法，其中該RGMa片段具有10 kDa、18 kDa、20 kDa、30 kDa、40 kDa、50 kDa或65 kDa之尺寸。
條款4. 如條款1至3中任一項之方法，其中該RGMa片段係選自由18 kDa RGMa片段、30 kDa RGMa片段及40 kDa RGMa片段組成之群。
條款5. 如條款1至4中任一項之方法，其中該至少一種RGMa片段在步驟(b)前利用凝膠電泳分離。
條款6. 如條款5之方法，進一步包含在步驟(b)前將該至少一種RGMa片段固定於膜上以產生西方墨點膜；在步驟(b)中，將該西方墨點膜與捕捉結合性蛋白質接觸，其中該捕捉結合性蛋白質與固定於該西方墨點膜上之該至少一種RGMa片段結合，形成捕捉結合性蛋白質-RGMa片段複合物；以及在步驟(c)中，將該西方墨點膜與偵測結合性蛋白質接觸，其中該偵測結合性蛋白質與該捕捉結合性蛋白質相互作用以形成偵測結合性蛋白質-捕捉結合性蛋白質RGMa片段複合物。
條款7. 如條款1至6中任一項之方法，其中偵測至少兩種RGMa片段。
條款8. 如條款7之方法，其中該至少兩種RGMa片段之尺寸為30 kDa及40 kDa。
條款9. 如條款1至6中任一項之方法，其中偵測至少三種RGMa片段。
條款10. 如條款9之方法，其中該至少三種RGMa片段之尺寸為18 kDa、30 kDa及40 kDa。
條款11. 如條款1至10中任一項之方法，其中該至少一種RGMa片段為可溶性RGMa片段。
條款12. 如條款5至11中任一項之方法，進一步包含在步驟(b)中，在凝膠上同時分離RGMa蛋白質標準物與樣品中之蛋白質；以及(g)將至少一種RGMa片段與分離的RGMa蛋白質標準物比較以量化片段。
條款13. 如條款12之方法，其中該RGMa蛋白質標準物為重組RGMa片段梯度。
條款14. 如條款13之方法，其中該梯度包含RGMa蛋白質標準物10、25、50、100及200 pg/mL。
條款15. 如條款1至14中任一項之方法，其中該RGMa片段之尺寸係由SDS-PAGE測定。
條款16. 如條款15之方法，其中該SDS-PAGE為4-15%。
條款17. 如條款6至16中任一項之方法，其中該膜為硝化纖維素膜。
條款18. 如條款1至17中任一項之方法，其中該捕捉結合性蛋白質為RGMa-選擇性抗體。
條款19. 如條款18之方法，其中該抗體為生物素化RGMa-選擇性抗體。
條款20. 如條款19之方法，其中該偵測結合性蛋白質為四價抗生物素蛋白以及該可偵測標記為生物素化辣根過氧化酶。
條款21. 如條款20之方法，其中該至少一種RGMa片段係利用過氧化酶染色套組偵測。
條款22. 一種確定有需要個體之神經變性疾病之治療有效性之方法，該方法包含：(a)利用條款1至21中任一項之方法確定該個體之樣品中至少一種RGMa片段之含量；以及(b)將個體之樣品中至少一種RGMa片段之含量與該至少一種RGMa片段之對照含量比較，其中若與對照含量相比，該至少一種片段之含量增加，則該治療被確定為對於治療神經變性疾病係無效的，以及其中若與對照含量相比，該至少一種片段之含量相同或降低，則該治療被確定為對於治療神經變性疾病係有效的。
條款23. 如條款22之方法，進一步包含繼續投與被確定為對於治療有需要個體的神經變性疾病係有效的治療。
條款24. 如條款22或23之方法，其中該至少一種RGMa片段之對照含量為患有神經變性疾病但沒有對神經變性疾病進行治療之個體之該至少一種RGMa片段的含量。
條款25. 一種預測罹患神經變性疾病之個體對治療之反應的方法，該方法包含：(a)利用條款1至21中任一項之方法確定該個體之樣品中至少一種RGMa片段之含量；(b)將該個體之樣品中該至少一種RGMa片段之含量與該至少一種RGMa片段之對照含量比較；以及(c)若與對照含量相比，樣品中該至少一種RGMa片段之含量降低，則可提供預測該個體對治療之反應。
條款26. 如條款25之方法，進一步包含向預測對治療有反應的個體投與治療。
條款27. 一種治療罹患神經變性疾病之個體之方法，該方法包含：(a)利用條款1至21中任一項之方法確定該個體之樣品中至少一種RGMa片段之含量；(b)將該個體之樣品中該至少一種RGMa片段之含量與該至少一種RGMa片段之對照含量比較；以及(c)若與對照含量相比，片段之含量增加，向該個體投與治療方案。
條款28. 如條款22至27中任一項之方法，其中該治療包含神經修復藥物、神經保護藥物或神經再生藥物。
條款29. 如條款22至28中任一項之方法，其中該治療包含曲安奈德(TCA)、Tecfidera/BG-12 (反丁烯二酸二甲酯)、Gilenya (芬戈莫德)、拉喹莫德、β-干擾素、克帕松、達利珠單抗、阿侖單抗、利妥昔單抗中之至少一種或其組合。
條款30. 如條款26至29中任一項之方法，其中該治療包含曲安奈德(TCA)。
條款31. 一種優化用於罹患神經變性疾病之個體之治療方案之方法，該方法包含：(a)利用條款1至20中任一項之方法確定該個體之第一樣品中至少一種RGMa片段之第一含量，其中該第一樣品係在該個體開始了治療方案之時段之前或期間之時間點從該個體獲得；(b)在比步驟(a)晚之時間點，於自該個體得到之第二樣品中確定該至少一種RGMa片段之第二含量，其中與該至少一種RGMa片段之第一含量相比，該至少一種RGMa片段之第二含量降低可表示治療方案對於神經變性疾病具有療效；(c)利用條款1之方法確定該個體之第一樣品中該至少一種RGMa片段之含量，(d)將個體之樣品中該至少一種RGMa片段之含量與該至少一種RGMa片段之對照含量比較；以及(e)若與對照含量相比，樣品中該至少一種RGMa片段之含量降低，則可提供預測該個體對治療之反應。
條款32. 如條款31之方法，其中該治療方案為神經修復治療方案。
條款33. 如條款32之方法，其中該神經修復治療方案之成功率增加。
條款34. 如條款31之方法，其中該治療方案為神經保護治療方案。
條款35. 如條款34之方法，其中該神經保護治療方案之成功率增加。
條款36. 一種監測罹患神經變性疾病之個體之促進再生藥物治療之方法，該方法包含：(a)利用條款1至21中任一項之方法確定該個體之第一樣品中至少一種RGMa片段之第一含量，其中該第一樣品係在該個體開始藥物治療時之前或期間之一個時間點從該個體獲得；(b)在比步驟(a)晚之時間點，於自該個體得到之第二樣品中確定至少一種RGMa片段之第二含量，其中與該至少一種RGMa片段之第一含量相比，該至少一種RGMa片段之第二含量降低可表示藥物治療方案對於神經變性疾病具有療效，以及與該至少一種RGMa片段之第一含量相比，該至少一種RGMa片段之該第二含量增加可表示藥物治療方案對於神經變性疾病不具有療效；以及(c)若藥物治療方案對於神經變性疾病不具有療效，則向該個體投與不同藥物治療。
條款37. 一種篩選對於神經變性疾病具有療效之化合物之方法，該方法包含：(a)利用條款1至21中任一項之方法確定包含細胞之樣品中至少一種RGMa片段之第一含量；(b)將該樣品與化合物接觸，(c)在比步驟(b)晚之時間點，於自該個體得到之第二樣品中確定該至少一種RGMa片段之第二含量，其中與該至少一種RGMa片段之第一含量相比，該至少一種RGMa片段之該第二含量降低可表示化合物對於神經變性疾病具有療效，以及其中與該至少一種RGMa片段之第一含量相比，該至少一種RGMa片段之該第二含量增加可表示化合物對於神經變性疾病不具有療效；以及(d)選擇被證實具有療效之化合物。
條款38. 如條款22至37中任一項之方法，其中偵測至少兩種RGMa片段。
條款39. 如條款38之方法，其中該至少兩種RGMa片段之尺寸為30 kDa及40 kDa。
條款40. 如條款22至37中任一項之方法，其中偵測至少三種RGMa片段。
條款41. 如條款40之方法，其中該至少三種RGMa片段之尺寸為18 kDa、30 kDa及40 kDa。
條款42. 如條款22至41中任一項之方法，其中該神經變性疾病或病症為多發性硬化、帕金森氏病、阿滋海默氏病、泰-薩克斯氏病、尼曼-匹克氏病、高歇氏病、赫爾勒氏症候群、亨廷頓氏病、肌萎縮性側索硬化、特發性發炎脫髓鞘疾病、維生素B12缺乏、腦橋中央髓鞘溶解症、脊髓癆、橫貫性脊髓炎、德維克氏病、進行性多竈性白質腦病、視神經炎、脊髓損傷、創傷性腦損傷、中風、青光眼、糖尿病性視網膜病、年齡相關之黃斑變性或腦白質營養不良。
條款43. 如條款22至42中任一項之方法，其中該神經變性疾病或病症為多發性硬化。
條款44. 如條款1至43中任一項之方法，其中該RGMa片段為人類RGMa片段。
條款45. 如條款1至44中任一項之方法，其中該樣品包含腦脊液、血液、血清或血漿。
圖1顯示RGMa藉由前蛋白轉化酶SKI-1及弗林蛋白酶(Furin)產生18、30及40 kDa片段(a、b、c、實線箭頭)之裂解。
圖2顯示進行性MS患者之CSF中存在之RGMa片段。
圖3 A、B、C利用改善之EDSS(圖3A)、步行距離(圖3B)及步行速度(圖3C)顯示在TCA治療期間具有即時反應之17名患者之臨牀數據。所有數據以平均值± SEM(平均值之標準誤差)給出；* = p ＜ 0.05；** = p ＜ 0.01；*** = p ＜ 0.001；* = 事後分析之p-值之顯著性程度；I=第一次TCA投與前之基線，II，第二次TCA投與前，III=第三次TCA投與前，IV=第四次TCA投與前，V=第五次TCA投與前；VI=第六次TCA投與前。
圖4A、B、C利用未改善之EDSS(圖4A)、步行距離(圖4B)及步行速度(圖4C)顯示對於重複投與TCA沒有即時反應之8名患者之臨牀數據。所有數據以平均值± SEM(平均值之標準誤差)給出；I=第一次TCA投與前之基線，II=第二次TCA投與前，III=第三次TCA投與前，IV=第四次TCA投與前，V=第五次TCA投與前。
圖5A、B、C顯示對TCA治療之即時反應者之腦脊液中RGMa濃度((40 kDa(圖5A)；30 kDa(圖5B))及蛋白濃度(圖5C)之變化。所有數據以平均值± SEM給出；* = p ＜ 0.05；** = p ＜ 0.01；*** = p ＜ 0.001；* = 事後分析之p-值之顯著性程度； I=第一次TCA投與前之基線；II，第二次TCA投與前；III，第三次TCA投與前；IV，第四次TCA投與前。
圖6利用從對TCA投與具有即時反應之17名患者中得到之RGMa CSF含量之光密度分析之柱狀圖顯示三個代表性西方墨點。
圖7A、B、C顯示對TCA治療沒有即時反應之MS患者之腦脊液中RGMa濃度(40 kDa(圖7A)；30 kDa(圖7B))及蛋白濃度(圖7C)。所有數據以平均值± SEM給出；* = p ＜ 0.05；** = p ＜ 0.01；*** = p ＜ 0.001；* = 事後分析之p-值之顯著性程度；I=第一次TCA投與前之基線；II=第二次TCA投與前；III=第三次TCA投與前；IV=第四次TCA投與前。
圖8利用從不對TCA投與具有即時反應之8名患者中得到之RGMa CSF含量之光密度分析之柱狀圖顯示三個代表性西方墨點。
