TW202104263A

TW202104263A - 雙特異性CD123xCD3雙抗體在血液系統惡性腫瘤治療中的給藥方案

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Publication number: TW202104263A
Application number: TW109112076A
Authority: TW
Inventors: 顏肯尼斯大衛森; 伊安蘭特; 克里斯南山帕斯庫瑪; 瑞夫佛曼安德森; 羅斯拉莫特莫斯; 強瑪克微吉頓
Original assignee: 美商宏觀基因股份有限公司
Priority date: 2019-04-10
Filing date: 2020-04-09
Publication date: 2021-02-01
Also published as: KR20210149807A; US20220213203A1; MX2021012263A; AU2020272734A1; WO2020210277A1; CA3136255A1; EP3953391A1; BR112021020265A2; IL287095A; CN113728009A; SG11202111192TA; JP2022526640A

Abstract

本發明涉及向具有如急性髓細胞白血病(AML)或脊髓發育不良綜合症(MDS)的血液系統惡性腫瘤的患者施用CD123 x CD3雙特異性雙抗體的給藥方案。本發明還涉及向具有如急性髓細胞白血病(AML)或脊髓發育不良綜合症(MDS)的血液系統惡性腫瘤的患者施用CD123 x CD3雙特異性雙抗體與能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的分子(“PD-1或PD-1配體結合分子”)的組合的給藥方案。本發明特別地關注施用能夠同時結合至CD123和CD3的序列優化的CD123 x CD3雙特異性雙抗體“DART-A ”的這種方案的用途。

Description

雙特異性CD123　x　CD3雙抗體在血液系統惡性腫瘤治療中的給藥方案

[相關申請的交叉引用]

本申請主張美國專利申請序號63/001,388 (在2020年3月29日提交；申請中)、62/831,969 (在2019年4月10日提交；申請中)、62/831,979 (在2019年4月10日提交；申請中)、62/929,381 (在2019年11月1日提交；申請中)和62/929,401 (在2019年11月1日提交；申請中)的優先權，其中每個申請均通過引用方式全部併入本文。

[序列表的引用]

按照37 C.F.R. 1.821以及下面條款，本申請包括一個或多個序列表，其以電腦可讀介質(檔案名：1301_0162P3_PCT_ST25.txt，創建於2020年3月28日，並且大小為35,519個位元組)公開，該檔通過引用方式全部併入本文。

本發明涉及向具有如急性髓細胞白血病(AML)或脊髓發育不良綜合症(MDS)的血液系統惡性腫瘤的患者施用CD123 x CD3雙特異性雙抗體的給藥方案。本發明還涉及向具有如急性髓細胞白血病(AML)或脊髓發育不良綜合症(MDS)的血液系統惡性腫瘤的患者施用CD123 x CD3雙特異性雙抗體與能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的分子(“PD-1或PD-1配體結合分子”)的組合的給藥方案。本發明特別地涉及用於能夠同時結合至CD123和CD3的序列優化的CD123 x CD3雙特異性雙抗體“DART-A ”的這種方案的用途。

[本發明的背景] I. AML和MDS

AML和MDS被認為在小部分的白血病幹細胞(LSC)中出現並通過其得以持續，該白血病幹細胞通常處於休眠狀態(即不是迅速分裂的細胞)，因此抵抗細胞死亡(凋亡)和常規化療劑。LSC的特徵在於高水準的CD123表達，其在正常人的骨髓中相應的正常造血幹細胞群體中不存在 (Jin, W. 等(2009) “Regulation Of Th17 Cell Differentiation And EAE Induction By MAP3K NIK ,”Blood 113:6603-6610；Jordan, C.T. 等(2000) “The Interleukin-3 Receptor Alpha Chain Is A Unique Marker For Human Acute Myelogenous Leukemia Stem Cells ,”Leukemia 14:1777-1784)。CD123在45%-95%的AML、85%的毛細胞白血病(HCL)和40%的急性B淋巴細胞白血病(B-ALL)中表達。CD123表達還與多種其他惡性腫瘤/前惡性腫瘤(pre-malignancies)相關：慢性髓細胞白血病(CML)祖細胞(包括急變期(blast crisis)CML)、霍奇金裡德斯特恩伯格(Hodgkin’s Reed Sternberg) (RS)細胞、轉化的非霍金淋巴瘤(NHL)、一些慢性淋巴細胞性白血病(CLL) (CD11c+)、急性T淋巴細胞白血病的亞群(T-ALL) (16%，最不成熟的，大部分是成人的)、漿細胞樣樹突狀細胞(pDC) (DC2)惡性腫瘤和CD34+/CD38-脊髓發育不良綜合症(MDS)骨髓細胞惡性腫瘤。

AML是克隆性疾病，其特徵在於在骨髓中轉化的髓樣祖細胞的增殖和積聚，其最終導致造血功能障礙。AML的發病率隨著年齡而增加，並且年長患者通常比年輕患者具有更差的治療效果(Robak, T.等(2009) “Current And Emerging Therapies For Acute Myeloid Leukemia ,” Clin.Ther.2:2349-2370)。不幸地，現在，大多數具有AML的成年人死於他們的疾病。

AML的治療最初集中在誘導緩解(誘導療法)。一旦達到緩解，治療轉為致力於鞏固這種緩解(緩解後或鞏固療法)，並且在一些情況下，轉為維持療法。針對AML的標準緩解誘導範例是用蒽環類抗生素/阿糖胞苷組合化學療法，然後鞏固化學療法(通常用更高劑量的藥物，所述藥物與在誘導時期期間使用的藥物相同)或人類造血幹細胞移植(HSCT)，這取決於患者耐受強化治療的能力和單獨用化學療法治癒的可能性(參見，例如，Roboz, G.J.(2012) “Current Treatment Of Acute Myeloid Leukemia ,” Curr.Opin.Oncol.24:711-719)。

誘導療法中頻繁使用的劑包括阿糖胞苷和蒽環類抗生素。阿糖胞苷，也稱為AraC，通過干擾DNA合成而殺死癌細胞(和其他快速分裂的正常細細胞)。與AraC治療相關的副作用包括對感染的抵抗力下降，白細胞生成減少的結果；由於血小板生成減少而出血；和由於紅細胞的潛在減少而貧血。其他副作用包括噁心和嘔吐。蒽環類抗生素(例如，柔紅黴素(daunorubicin)、多柔比星(daunorubicin)和伊達比星(daunorubicin))具有數種作用方式，包括抑制DNA和RNA合成、破壞DNA的更高級結構和生成損傷細胞的氧自由基。蒽環類抗生素最嚴重的不良反應是心臟毒性，其相當限制施用的終生劑量，並且在一定程度上限制它們的有用性。

因此，不幸地，儘管在新診斷的AML的治療中有重大進展，但20%至40%的患者未用標準誘導化學療法實現緩解，並且預計50%至70%的進入首次完全緩解期的患者會在3年內復發。在復發時或針對具有抗性疾病的患者的最佳策略仍不確定。已經確定幹細胞移植為具有首次或隨後緩解期的AML患者中最有效的抗白血病的治療形式(Roboz, G.J.(2012) “Current Treatment Of Acute Myeloid Leukemia ,” Curr.Opin.Oncol.24:711-719)。 II. CD123

CD123 (白介素3受體α，IL-3Ra)是40 kDa分子並且是白介素3受體複合物的部分(Stomski, F.C.等(1996)“Human Interleukin-3 (IL-3) Induces Disulfide-Linked IL-3 Receptor Alpha- And Beta-Chain Heterodimerization, Which Is Required For Receptor Activation But Not High-Affinity Binding ,” Mol.Cell.Biol.16(6):3035-3046)。白介素3 (IL-3)驅動多能幹細胞早期分化為紅系祖細胞、髓系祖細胞和淋巴祖細胞。CD123在CD34+定向祖細胞上表達(Taussig, D.C.等(2005)“Hematopoietic Stem Cells Express Multiple Myeloid Markers: Implications For The Origin And Targeted Therapy Of Acute Myeloid Leukemia ,” Blood 106:4086-4092)，但不通過CD34+/CD38-正常造血幹細胞被表達。CD123通過嗜鹼性粒細胞、肥大細胞、漿細胞樣樹突狀細胞表達，通過單核細胞、巨噬細胞和嗜酸性粒細胞表達一些，並且中性粒細胞和巨核細胞表達低或不表達。一些非造血組織(胎盤、睾丸的間質細胞、某些腦細胞成分和一些內皮細胞)表達CD123；然而，表達大部分是細胞質的。

據報導，CD123由白血病胚細胞和白血病幹細胞(LSC)表達(Jordan, C.T.等(2000)“The Interleukin-3 Receptor Alpha Chain Is A Unique Marker For Human Acute Myelogenous Leukemia Stem Cells ,” Leukemia 14:1777-1784; Jin, W.等(2009) “Regulation Of Th17 Cell Differentiation And EAE Induction By MAP3K NIK ,” Blood 113:6603-6610)。在人類正常前體群體中，CD123由造血祖細胞(HPC)的亞型表達，而不是由正常造血幹細胞(HSC)表達。CD123也由漿細胞樣樹突狀細胞(pDC)和嗜鹼性粒細胞表達，並且在較小程度上由單核細胞和嗜酸性粒細胞表達(Lopez, A.F.等(1989)“Reciprocal Inhibition Of Binding Between Interleukin 3 And Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor To Human Eosinophils ,” Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)86:7022-7026; Sun, Q.等(1996)“Monoclonal Antibody 7G3 Recognizes The N-Terminal Domain Of The Human Interleukin-3 (IL-3) Receptor Alpha Chain And Functions As A Specific IL-3 Receptor Antagonist ,” Blood 87:83-92; Muñoz, L.等(2001)“Interleukin-3 Receptor Alpha Chain (CD123) Is Widely Expressed In Hematologic Malignancies ,” Haematologica 86(12):1261-1269; Masten, B.J.等(2006) “Characterization Of Myeloid And Plasmacytoid Dendritic Cells In Human Lung ,”J. Immunol.177:7784-7793; Korpelainen, E.I.等(1995) “Interferon-Gamma Upregulates Interleukin-3 (IL-3) Receptor Expression In Human Endothelial Cells And Synergizes With IL-3 In Stimulating Major Histocompatibility Complex Class II Expression And Cytokine Production ,” Blood 86:176-182)。

已經報導CD123在包括急性髓細胞白血病(AML)和骨髓發育不良綜合症(MDS)的廣泛的血液系統惡性腫瘤中的惡性細胞上過度表達(Muñoz, L.等(2001) “Interleukin-3 Receptor Alpha Chain (CD123) Is Widely Expressed In Hematologic Malignancies, ” Haematologica 86(12):1261-1269)。CD123的過度表達與AML的預後較差有關(Tettamanti, M.S.等(2013) “Targeting Of Acute Myeloid Leukaemia By Cytokine-Induced Killer Cells Redirected With A Novel CD123-Specific Chimeric Antigen Receptor ,” Br. J. Haematol.161:389-401)。 III. CD3

CD3是由四條不同的鏈組成的T細胞共受體(Wucherpfennig, K.W.等(2010)“Structural Biology Of The T-Cell Receptor: Insights Into Receptor Assembly, Ligand Recognition, And Initiation Of Signaling ,”Cold Spring Harb.Perspect.Biol.2(4):a005140; 第1-14頁)。在哺乳動物中，該複合物包含CD3γ鏈、CD3δ鏈和兩條CD3ε鏈。這些鏈與稱為T細胞受體(TCR)的分子締合，以便在T淋巴細胞中產生活化信號。在沒有CD3的情況下，TCR無法適當組裝並降解(Thomas, S.等(2010) “Molecular Immunology Lessons From Therapeutic T-Cell Receptor Gene Transfer ,”Immunology 129(2):170–177)。發現CD3結合所有成熟T細胞的膜，並且幾乎不結合其他細胞類型的膜(參見，Janeway, C.A.等(2005) In: Immunobiology: The Immune System In Health And Disease,”第6版. Garland Science Publishing, NY, 第214-216頁; Sun, Z. J.等(2001) “Mechanisms Contributing To T Cell Receptor Signaling And Assembly Revealed By The Solution Structure Of An Ectodomain Fragment Of The CD3 ε : γ Heterodimer ,” Cell 105(7):913-923; Kuhns, M.S.等.(2006) “Deconstructing The Form And Function Of The TCR/CD3 Complex ,” Immunity.2006年2月;24(2):133-139)。 IV. 程式性死亡-1 (“PD-1”)膜蛋白

程式性死亡-1 (“PD-1,”也稱為“CD279”)是廣泛地負調節免疫應答的T-細胞調節劑的擴增的CD28/CTLA-4家族的近似31 kD的I型膜蛋白成員(Ishida, Y.等(1992) “Induced Expression Of PD-1, A Novel Member Of The Immunoglobulin Gene Superfamily, Upon Programmed Cell Death, ”EMBO J. 11:3887-3895；美國專利申請公開號2007/0202100、2008/0311117、2009/00110667；美國專利號6,808,710、7,101,550、7,488,802、7,635,757、7,722,868；PCT公開號WO 01/14557)。

PD-1在啟動的T細胞、B細胞和單核細胞上表達(Agata, Y.等(1996) “Expression Of The PD-1 Antigen On The Surface Of Stimulated Mouse T And B Lymphocytes, ” Int. Immunol.8(5):765-772; Yamazaki, T.等(2002) “Expression Of Programmed Death 1 Ligands By Murine T-Cells And APC, ”J. Immunol.169:5538-5545)並且在天然殺傷(NK)T-細胞中以低水準表達 (Nishimura, H.等(2000) “Facilitation Of Beta Selection And Modification Of Positive Selection In The Thymus Of PD-1-Deficient Mice, ”J. Exp.Med.191:891-898; Martin-Orozco, N.等(2007)“Inhibitory Costimulation And Anti-Tumor Immunity ,” Semin.Cancer Biol.17(4):288-298)。

PD-1通過結合B7-H1 和B7-DC (也稱為PD-L1和PD-L2)介導其抑制免疫系統(Flies, D.B.等(2007)“The New B7s: Playing a Pivotal Role in Tumor Immunity, ” J. Immunother.30(3):251-260；美國專利號6,803,192、7,794,710；美國專利申請公開號2005/0059051、2009/0055944、2009/0274666、2009/0313687；PCT公開號WO 01/39722、WO 02/086083)。

B7-H1和B7-DC在許多類型的人和鼠組織如心臟、胎盤、肌肉、胎肝、脾臟、淋巴結和胸腺以及鼠肝臟、肺、腎、胰腺的胰島細胞和小腸的表面上廣泛表達(Martin-Orozco, N.等(2007)“Inhibitory Costimulation And Anti-Tumor Immunity, ” Semin.Cancer Biol.17(4):288-298)。在人類中，已經在人內皮細胞 (Chen, Y.等(2005)“Expression of B7-H1 in Inflammatory Renal Tubular Epithelial Cells, ” Nephron.Exp.Nephrol.102:e81-e92; de Haij, S.等(2005)“Renal Tubular Epithelial Cells Modulate T-Cell Responses Via ICOS-L And B7-H1 ” Kidney Int. 68:2091-2102; Mazanet, M.M.等(2002) “B7-H1 Is Expressed By Human Endothelial Cells And Suppresses T-Cell Cytokine Synthesis, ” J. Immunol.169:3581-3588)、心肌 (Brown, J.A.等(2003) “Blockade Of Programmed Death-1 Ligands On Dendritic Cells Enhances T-Cell Activation And Cytokine Production, ” J. Immunol.170:1257-1266)和合胞體滋養層(syncyciotrophoblasts) (Petroff, M.G.等(2002) “B7 Family Molecules: Novel Immunomodulators At The Maternal-Fetal Interface ,” Placenta 23:S95-S101) 中發現B7-H1蛋白表達。分子也由一些組織的駐留型巨噬細胞、已經通過干擾素(IFN)-γ或腫瘤壞死因數(TNF)-α啟動的巨噬細胞表達(Latchman, Y.等(2001) “PD-L2 Is A Second Ligand For PD-1 And Inhibits T-Cell Activation ,” Nat. Immunol 2:261-268)以及在腫瘤中表達(Dong, H. (2003) “B7-H1 Pathway And Its Role In The Evasion Of Tumor Immunity ,” J. Mol.Med.81:281-287)。

已經發現B7-H1和PD-1之間的相互作用為T-細胞和B-細胞提供關鍵的負性共刺激信號(Martin-Orozco, N.等(2007)“Inhibitory Costimulation And Anti-Tumor Immunity ,” Semin.Cancer Biol.17(4):288-298)並且起細胞死亡誘導劑的作用(Ishida, Y.等(1992) “Induced Expression Of PD-1, A Novel Member Of The Immunoglobulin Gene Superfamily, Upon Programmed Cell Death, ”EMBO J. 11:3887-3895; Subudhi, S.K.等(2005)“The Balance Of Immune Responses: Costimulation Verse Coinhibition, ” J. Molec.Med.83:193-202)。更具體地，已發現低濃度的PD-1受體和PD-L1配體之間的相互作用導致抑制信號的傳遞，所述抑制信號強烈抑制抗原特異性CD8⁺ T-細胞的增殖；在較高濃度下，與PD-1的相互作用不抑制T-細胞增殖，但顯著減少多種細胞因數的產生(Sharpe, A.H.等(2002) “The B7-CD28 Superfamily, ” Nature Rev. Immunol.2:116-126)。已經發現，通過靜息和先前啟動的CD4和CD8 T-細胞以及甚至來自臍帶血的初始T-細胞的T-細胞增殖和細胞因數產生被可溶性B7-H1-Fc融合蛋白抑制(Freeman, G.J.等(2000) “Engagement Of The PD-1 Immunoinhibitory Receptor By A Novel B7 Family Member Leads To Negative Regulation Of Lymphocyte Activation, ”J. Exp.Med.192:1-9; Latchman, Y.等(2001) “PD-L2 Is A Second Ligand For PD-1 And Inhibits T-Cell Activation, ”Nature Immunol.2:261-268; Carter, L.等(2002) “PD-1:PD-L Inhibitory Pathway Affects Both CD4(+) and CD8(+) T-cells And Is Overcome By IL-2, ”Eur.J. Immunol.32(3):634-643; Sharpe, A.H.等(2002)“The B7-CD28 Superfamily, ”Nature Rev. Immunol.2:116-126)。

與PD-1結合並且阻礙其與其天然配體結合的能力的分子(例如，抗體等)，從而抑制PD-1抑制免疫系統的能力；這種分子因此促進主動的免疫應答。反過來，與PD-1的天然配體(尤其是B7-H1)結合並阻礙其與PD-1結合的能力的分子(例如，抗體等)，抑制PD-1抑制免疫系統的能力；這種分子因此也促進主動的免疫應答。

因此，B7-H1和PD-1在抑制T-細胞啟動和增殖中的作用已經表明，這些生物分子可以用作治療炎症和癌症的治療靶標。因此，已經提出使用PD-1或PD-L1結合分子，如抗PD-1和抗B7-H1抗體來治療感染和腫瘤並上調適應性免疫應答(參見例如，Nishijima, T.F.,等(2017) “Safety and Tolerability of PD-1/PD-L1 Inhibitors Compared with Chemotherapy in Patients with Advanced Cancer: A Meta-Analysis, ” The oncologist 22(4):470-479; Rao, M.,等(2017) “Anti-PD-1/PD-L1 therapy for infectious diseases: learning from the cancer paradigm, ”Intnl. J. of Infect.Dis. 56:221-228)。已經描述能夠特異性結合PD-1和B7-H1 的抗體(參見，例如，表 3-4 )。 V. 雙特異性雙抗體

提供非單特異性雙抗體相對於單特異性天然抗體帶來了顯著的優勢：共連接和共定位表達不同表位的細胞的能力。因此，雙特異性雙抗體具有包括治療和免疫診斷的廣泛的應用。雙特異性使雙抗體在各種應用中的設計和工程化允許極大的靈活性，從而提供增強的對多聚體抗原的親和力、不同抗原的交聯、以及依賴於靶抗原二者的存在對特定細胞類型的定向靶向。特別重要的是不同細胞的共連接，例如，如細胞毒性T細胞的效應細胞和腫瘤細胞的交聯(Staerz等(1985) “Hybrid Antibodies Can Target Sites For Attack By T Cells, ” Nature 314:628-631和Holliger等(1996) “Specific Killing Of Lymphoma Cells By Cytotoxic T-Cells Mediated By A Bispecific Diabody, ” Protein Eng. 9:299-305)。通過交聯腫瘤細胞和效應細胞，雙抗體不僅將效應細胞帶到腫瘤細胞附近，而且導致有效的腫瘤殺傷(參見例如，Cao等(2003) “Bispecific Antibody Conjugates In Therapeutics, ” Adv.Drug.Deliv.Rev. 55:171-197)。

這種非單特異性雙抗體的形成需要成功組裝兩個或更多個獨特的且不同的多肽 (即，這種形成需要通過不同多肽鏈種類的異源二聚化來形成雙抗體)。該事實與單特異性雙抗體相反，單特異性雙抗體是通過相同多肽鏈的同源二聚化形成。因為必須提供至少兩個不同的多肽(即，兩個多肽種類)以形成非單特異性雙抗體，並且因為這類多肽的同源二聚化導致分子失活(Takemura, S.等(2000) “Construction Of A Diabody (Small Recombinant Bispecific Antibody) Using A Refolding System, ” Protein Eng. 13(8):583-588)，這類多肽的生產必須以防止相同種類的多肽之間共價結合的這類方式完成(即，以防止同源二聚化) (Takemura, S.等(2000) “Construction Of A Diabody (Small Recombinant Bispecific Antibody) Using A Refolding System, ” Protein Eng. 13(8):583-588)。因此，現有技術已教導這類多肽的非共價締合(參見，例如，Olafsen等(2004) “Covalent Disulfide-Linked Anti-CEA Diabody Allows Site-Specific Conjugation And Radiolabeling For Tumor Targeting Applications, ” Prot.Engr.Des.Sel.17:21-27; Asano等(2004) “A Diabody For Cancer Immunotherapy And Its Functional Enhancement By Fusion Of Human Fc Domain, ” 摘要 3P-683, J. Biochem.76(8):992; Takemura, S.等(2000) “Construction Of A Diabody (Small Recombinant Bispecific Antibody) Using A Refolding System, ” Protein Eng. 13(8):583-588; Lu, D.等(2005) “A Fully Human Recombinant IgG-Like Bispecific Antibody To Both The Epidermal Growth Factor Receptor And The Insulin-Like Growth Factor Receptor For Enhanced Antitumor Activity, ” J. Biol.Chem.280(20):19665-19672)。

由非共價締合的多肽組成的雙特異性雙抗體是不穩定的並且容易解離成非功能性單體(參見，例如，Lu, D.等(2005)“A Fully Human Recombinant IgG-Like Bispecific Antibody To Both The Epidermal Growth Factor Receptor And The Insulin-Like Growth Factor Receptor For Enhanced Antitumor Activity, ” J. Biol.Chem.280(20):19665-19672)。已經描述了穩定的、共價結合的異源二聚化非單特異性雙抗體(參見，例如WO 2006/113665、WO/2008/157379、WO 2010/080538、WO 2012/018687、WO/2012/162068；Johnson, S.等(2010) “Effector Cell Recruitment With Novel Fv-Based Dual-Affinity Re-Targeting Protein Leads To Potent Tumor Cytolysis And In Vivo B-Cell Depletion, ”J. Molec.Biol.399(3):436-449; Veri, M.C.等(2010)“Therapeutic Control Of B Cell Activation Via Recruitment Of Fcgamma Receptor IIb (CD32B) Inhibitory Function With A Novel Bispecific Antibody Scaffold, ”Arthritis Rheum.62(7):1933-1943; Moore, P.A.等(2011) “Application Of Dual Affinity Retargeting Molecules To Achieve Optimal Redirected T-Cell Killing Of B-Cell Lymphoma, ”Blood 117(17):4542-4551)。這類雙抗體將一個或多個半胱氨酸殘基併入到每種採用的多肽種類中。例如，已經顯示，半胱氨酸殘基添加至這種構建體的C-端以允許多肽鏈之間的二硫鍵結合，從而穩定化所得的異源二聚體且不干擾二價分子的結合特徵。

已經描述了靶向CD123和CD3的雙特異性雙抗體能夠介導表達CD123的惡性細胞的T細胞重定向細胞殺傷(參見，例如，WO 2015/026892)。儘管這樣的成功，尚未滿足的需求仍需要開發施用CD123 x CD3雙特異性雙抗體來治療血液系統惡性腫瘤的給藥方案，特別是最小化不良副作用(包括例如細胞因數釋放綜合症(“CRS”))和刺激免疫系統的給藥方案。如以下所述，本發明直接解決了這種需求和其他需求。

本發明涉及向具有如急性髓細胞白血病(AML)或脊髓發育不良綜合症(MDS)的血液系統惡性腫瘤的患者施用CD123 x CD3雙特異性雙抗體的給藥方案。本發明還涉及向具有如急性髓細胞白血病(AML)或脊髓發育不良綜合症(MDS)的血液系統惡性腫瘤的患者施用CD123 x CD3雙特異性雙抗體與能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的分子(“PD-1或PD-1配體結合分子”)的組合的給藥方案。本發明特別地關注這種方案用於能夠同時結合至CD123和CD3的序列優化的CD123 x CD3雙特異性雙抗體“DART-A ”的用途。

詳細地，本發明提供治療血液系統惡性腫瘤的方法，其包括向需要其的受試者施用CD123 x CD3結合分子，其中： (I) CD123 x CD3結合分子是包含具有SEQ ID NO:21 的氨基酸序列的第一多肽鏈和具有SEQ ID No:23 的氨基酸序列的第二多肽鏈的雙抗體；以及 (II) 方法包括初始7天治療時期(I7DP)，其中： (A) 在I7DP的第1天，通過持續靜脈內輸注以約30 ng/kg/天的劑量向受試者施用CD123 x CD3結合分子； (B) 在I7DP的第2天，通過持續靜脈內輸注以約60 ng/kg/天的劑量向受試者施用CD123 x CD3結合分子； (C) 在I7DP的第3天，通過持續輸注以約100 ng/kg/天的劑量向受試者施用CD123 x CD3結合分子； (D) 在I7DP的第4天，通過持續靜脈內輸注以約200 ng/kg/天的劑量向受試者施用CD123 x CD3結合分子； (E) 在I7DP的第5天，通過持續靜脈內輸注以約300 ng/kg/天的劑量向受試者施用CD123 x CD3結合分子； (F) 在I7DP的第6天，通過持續靜脈內輸注以約300 ng/kg/天至約400 ng/kg/天的劑量向受試者施用CD123 x CD3結合分子；以及 (G) 在I7DP的第7天，通過持續靜脈內輸注以約300 ng/kg/天至約500 ng/kg/天的劑量向受試者施用CD123 x CD3結合分子。

本發明另外涉及用於受試者的血液系統惡性腫瘤的治療的用途的CD123 x CD3結合分子，其中： (I) CD123 x CD3結合分子是包含具有SEQ ID NO:21 的氨基酸序列的第一多肽鏈和具有SEQ ID No:23 的氨基酸序列的第二多肽鏈的雙抗體；以及 (II) 用途包括初始7天治療時期(I7DP)，其中： (A) 在I7DP的第1天，通過持續靜脈內輸注以約30 ng/kg/天的劑量向受試者施用CD123 x CD3結合分子； (B) 在I7DP的第2天，通過持續靜脈內輸注以約60 ng/kg/天的劑量向受試者施用CD123 x CD3結合分子； (C) 在I7DP的第3天，通過持續輸注以約100 ng/kg/天的劑量向受試者施用CD123 x CD3結合分子； (D) 在I7DP的第4天，通過持續靜脈內輸注以約200 ng/kg/天的劑量向受試者施用CD123 x CD3結合分子； (E) 在I7DP的第5天，通過持續靜脈內輸注以約300 ng/kg/天的劑量向受試者施用CD123 x CD3結合分子； (F) 在I7DP的第6天，通過持續靜脈內輸注以約300 ng/kg/天至約400 ng/kg/天的劑量向受試者施用CD123 x CD3結合分子；以及 (G) 在I7DP的第7天，通過持續靜脈內輸注以約300 ng/kg/天至約500 ng/kg/天的劑量向受試者施用CD123 x CD3結合分子。

本發明另外涉及所有這類以上所示的方法和用途的實施方式，其中該方法或用途包括一個或多個另外的7天治療時期(A7DP)，其中在一個或多個A7DP中的每個A7DP的第1-7天，通過持續靜脈內輸注以約300 ng/kg/天至約500 ng/kg/天的劑量向受試者施用CD123 x CD3結合分子。

本發明另外涉及所有這類以上所示的方法和用途的實施方式，其中在I7DP的第6天和第7天，以約300 ng/kg/天的劑量向受試者施用CD123 x CD3結合分子。

本發明另外涉及所有這類以上所示的方法和用途的實施方式，其中在一個或多個A7DP中的至少一個A7DP的第1-7天，以約300 ng/kg/天的劑量向受試者施用CD123 x CD3結合分子。

本發明另外涉及所有這類以上所示的方法和用途的實施方式，其中在I7DP的第6天和第7天，以約400 ng/kg/天的劑量向受試者施用CD123 x CD3結合分子。

本發明另外涉及所有這類以上所示的方法和用途的實施方式，其中在一個或多個A7DP中的至少一個A7DP的第1-7天，以約400 ng/kg/天的劑量向受試者施用CD123 x CD3結合分子。

本發明另外涉及所有這類以上所示的方法和用途的實施方式，其中在I7DP的第6天，以約400 ng/kg/天的劑量向受試者施用CD123 x CD3結合分子，並且在I7DP的第7天，以約500 ng/kg/天的劑量向受試者施用CD123 x CD3結合分子。

本發明另外涉及所有這類以上所示的方法和用途的實施方式，其中在一個或多個A7DP中的至少一個A7DP的第1-7天，以約500 ng/kg/天的劑量向受試者施用CD123 x CD3結合分子。

本發明另外涉及所有這類以上所示的方法和用途的實施方式，其包括三個A7DP。

本發明另外涉及所有這類以上所示的方法和用途的實施方式，其包括另外的四個、八個、十二個、十六個或二十個A7DP。

本發明另外涉及所有這類以上所示的方法和用途的實施方式，其中一個或多個A7DP中的至少一個A7DP隨後是一個或多個進一步的7天治療時期(F7DP)，其中在一個或多個F7DP中的每個F7DP的第1-4天，向受試者施用CD123 x CD3結合分子，並且在一個或多個F7DP中的每個F7DP的第5-7天，受試者不被提供CD123 x CD3結合分子。

本發明另外涉及所有這類以上所示的方法和用途的實施方式，其中在一個或多個F7DP中的至少一個F7DP的第1-4天，通過持續靜脈內輸注以約300 ng/kg/天至約500 ng/kg/天的劑量向受試者施用CD123 x CD3結合分子。

本發明另外涉及所有這類以上所示的方法和用途的實施方式，其中在一個或多個F7DP中的至少一個F7DP的第1-4天，以約300 ng/kg/天的劑量向受試者施用CD123 x CD3結合分子。

本發明另外涉及所有這類以上所示的方法和用途的實施方式，其中在一個或多個F7DP中的至少一個F7DP的第1-4天，以約400 ng/kg/天的劑量向受試者施用CD123 x CD3結合分子。

本發明另外涉及所有這類以上所示的方法和用途的實施方式，其中在一個或多個F7DP中的至少一個F7DP的第1-4天，以約500 ng/kg/天的劑量向受試者施用CD123 x CD3結合分子。

本發明另外涉及所有這類以上所示的方法和用途的實施方式，其包括四個F7DP。

本發明另外涉及所有這類以上所示的方法和用途的實施方式，其包括另外的四個、八個、十二個、十六個或二十個F7DP。

本發明另外涉及所有這類以上所示的方法和用途的實施方式，其進一步包括施用能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的分子，並且其中所述能夠結合PD-1的分子包括結合PD-1的抗體的表位元結合結構域，並且所述能夠結合PD-1的天然配體的分子包括結合PD-1的天然配體的抗體的表位元結合結構域。

本發明另外涉及所有這類以上所示的方法和用途的實施方式，其中每兩週一次(Q2W)、每三週一次(Q3W)或每四周一次(Q4W)施用能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的結合分子。

本發明另外涉及所有這類以上所示的方法和用途的實施方式，其中在第15天開始施用能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的結合分子。

本發明另外涉及所有這類以上所示的方法和用途的實施方式，其中在第15天開始Q2W施用能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的結合分子。

本發明另外涉及所有這類以上所示的方法和用途的實施方式，其中在一個或多個F7DP的第1天施用能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的結合分子。

本發明另外涉及所有這類以上所示的方法和用途的實施方式，其中能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的結合分子包括： (a) 派姆單抗(pembrolizumab)的VH結構域和VL結構域； (b) 尼魯單抗(Nivolumab)的VH結構域和VL結構域； (c) 西米單抗(cemiplimab)的VH結構域和VL結構域； (c) PD-1 mAb 1的VH結構域和VL結構域； (d) 阿特珠單抗(atezolizumab)的VH結構域和VL結構域； (e) 阿維魯單抗(avelumab)的VH結構域和VL結構域； (f) 度伐單抗(durvalumab)的VH結構域和VL結構域；或 (h) 在表 3 或表 4 中提供的抗體的VH結構域和VL結構域。

本發明另外涉及所有這類以上所示的方法和用途的實施方式，其中能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的結合分子包括PD-1 mAb 1的VH結構域和VL結構域。

本發明另外涉及所有這類以上所示的方法和用途的實施方式，其中能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的結合分子是PD-1 mAb 1 IgG4。

本發明另外涉及所有這類以上所示的方法和用途的實施方式，其中以約1 mg/kg至約3 mg/kg的劑量施用能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的結合分子。

本發明另外涉及所有這類以上所示的方法和用途的實施方式，進一步包括在施用最後劑量的所述CD123 x CD3結合分子之後，施用一種或多種劑量的所述能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的結合分子。

本發明另外涉及所有這類以上所示的方法和用途的實施方式，進一步包括在施用CD123 x CD3結合分子之前、期間和/或之後，通過靜脈內輸注施用皮質類固醇和/或抗IL-6或抗IL-6R抗體。特別地，其中皮質類固醇選自由地塞米松(dexamethasone)、甲基潑尼松龍(methylprednisolone)和氫化可的松(hydrocortisone)組成的組。

本發明另外涉及所有這類以上所示的方法和用途的實施方式，其中預防地施用地塞米松。特別地，其中在施用CD123 x CD3結合分子之前，以約10 mg至20 mg的劑量施用地塞米松。

本發明另外涉及所有這類以上所示的方法和用途的實施方式，進一步包括在施用CD123 x CD3結合分子期間和/或之後，以約4 mg的劑量施用地塞米松。

本發明另外涉及所有這類以上所示的方法和用途的實施方式，進一步包括在施用CD123 x CD3結合分子之後，施用抗IL-6或抗IL-6R抗體。特別地，其中抗IL-6或抗IL-6R抗體是托珠單抗(tocilizumab)或西妥昔單抗(siltuximab),並且更特別地，其中抗IL-6R抗體是以約4 mg/kg至約8 mg/kg的劑量施用的托珠單抗。

本發明另外涉及所有這類以上所示的方法和用途的實施方式，其中血液系統惡性腫瘤選自以下組成的組：急性髓細胞白血病(AML)、包括CML的原始細胞危象和與CML相關的阿貝爾森(Abelson)致癌基因(Bcr-ABL易位)的慢性髓細胞性白血病(CML)、脊髓發育不良綜合症(MDS)、急性B淋巴細胞白血病(B-ALL)、急性T淋巴細胞白血病(T-ALL)、包括CLL的裡克特綜合症(Richter's syndrome)或裡克特轉化(Richter's transformation)的慢性淋巴細胞性白血病(CLL)、多毛細胞白血病(HCL)、母細胞性漿細胞樣樹突狀細胞腫瘤(BPDCN)、包括套細胞淋巴瘤(MCL)和小淋巴細胞淋巴瘤(SLL)的非霍奇金淋巴瘤(NHL)、霍奇金淋巴瘤(Hodgkin's lymphoma)、系統性肥大細胞增生症和伯基特淋巴瘤(Burkitt's lymphoma)。

本發明另外涉及所有這類以上所示的方法和用途的實施方式，其中血液系統惡性腫瘤是急性髓細胞白血病。

本發明另外涉及所有這類以上所示的方法和用途的實施方式，其中血液系統腫瘤是脊髓發育不良綜合症。

本發明另外涉及所有這類以上所示的方法和用途的實施方式，其中血液系統腫瘤是急性T淋巴細胞白血病。

本發明另外涉及所有這類以上所示的方法和用途的實施方式，其中受試者是人。

本發明涉及向具有如急性髓細胞白血病(AML)或脊髓發育不良綜合症(MDS)的血液系統惡性腫瘤的患者施用CD123 x CD3雙特異性雙抗體的給藥方案。本發明還涉及向具有如急性髓細胞白血病(AML)或脊髓發育不良綜合症(MDS)的血液系統惡性腫瘤的患者施用CD123 x CD3雙特異性雙抗體與能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的分子(“PD-1或PD-1配體結合分子”)的組合的給藥方案。本發明特別地關注這種方案用於能夠同時結合至CD123和CD3的序列優化的CD123 x CD3雙特異性雙抗體“DART-A”的用途。 I. DART-A的多肽鏈

DART-A是能夠同時地和特異性結合CD123的表位和CD3的表位的序列優化的雙特異性雙抗體(“CD123 x CD3 ”雙特異性雙抗體) (美國專利公開號US 2016-0200827，在PCT公開WO 2015/026892中，在Al-Hussaini，M.等(2016) “Targeting CD123 In Acute Myeloid Leukemia U sing A T-Cell-Directed Dual-Affinity Retargeting Platform ”，Blood 127:122-131中；在Vey, N.等(2017) “A Phase 1, First-in-Human Study of MGD006/S80880 (CD123 x CD3) in AML/MDS, ”2017 ASCO年會，6月2-6日，2017，芝加哥, IL: 摘要TPS7070中，其每個檔通過引用其整體併入本文)。發現DART-A相對於類似組成的其他非序列優化的CD123 x CD3雙特異性雙抗體展現出增強的功能活性，因此被稱為“序列優化的”CD123 x CD3雙特異性雙抗體。

DART-A包括第一多肽鏈和第二多肽鏈。雙特異性雙抗體的第一多肽鏈在N-端至C-端方向上將包括N-端、能夠結合CD3的單克隆抗體的輕鏈可變結構域(VL結構域)(VL_CD3 )、間插連接體肽(連接體1)、能夠結合CD123的單克隆抗體的重鏈可變結構域(VH結構域) (VH_CD123 )以及C-端，並且具有圖 1 中提供的一般結構。對於這種VL_CD3 結構域優選的序列是SEQ ID NO:1 ： QAVVTQEPSL TVSPGGTVTL TCRSSTGAVT TSNYANWVQQ KPGQAPRGLI GGTNKRAPWT PARFSGSLLG GKAALTITGA QAEDEADYYC ALWYSNLWVF GGGTKLTVLG

VL_CD3 的抗原結合結構域包括： CDR1 (SEQ ID NO:2 ): RSSTGAVTTSNYAN； CDR2 (SEQ ID NO:3 ): GTNKRAP；以及 CDR3 (SEQ ID NO:4 ): ALWYSNLWV。

對於這種連接體1優選的序列是SEQ ID NO:5 ：GGGSGGGG。對於這種VH_CD123 結構域優選的序列是SEQ ID NO:6 ： EVQLVQSGAE LKKPGASVKV SCKASGYTFT DYYMKWVRQA PGQGLEWIGD IIPSNGATFY NQKFKGRVTI TVDKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCARSH LLRASWFAYW GQGTLVTVSS

VH_CD123 的抗原結合結構包括： CDR1 (SEQ ID NO:7 ): DYYMK； CDR2 (SEQ ID NO:8 ): DIIPSNGATFYNQKFKG；以及 CDR3 (SEQ ID NO:9 ): SHLLRASWFAY。

第二多肽鏈在N-端至C-端方向上將包括N-端、能夠結合CD123的單克隆抗體的VL結構域(VL_CD123 )、間插連接體肽(例如，連接體1)、能夠結合CD3的單克隆抗體的VH結構域(VH_CD3 )以及C-端。對於這種VL_CD123 結構域優選的序列是SEQ ID NO:10 ： DFVMTQSPDS LAVSLGERVT MSCKSSQSLL NSGNQKNYLT WYQQKPGQPP KLLIYWASTR ESGVPDRFSG SGSGTDFTLT ISSLQAEDVA VYYCQNDYSY PYTFGQGTKL EIK

VL_CD123 的抗原結合結構域包括： CDR1 (SEQ ID NO:11 ): KSSQSLLNSGNQKNYLT； CDR2 (SEQ ID NO:12 ): WASTRES；以及 CDR3 (SEQ ID NO:13 ): QNDYSYPYT。

對於這種VH_CD3 結構域優選的序列是SEQ ID NO:14 ： EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS TYAMNWVRQA PGKGLEWVGR IRSKYNNYAT YYADSVKDRF TISRDDSKNS LYLQMNSLKT EDTAVYYCVR HGNFGNSYVS WFAYWGQGTL VTVSS

VH_CD3 的抗原結合結構包括： CDR1 (SEQ ID NO:15 ): TYAMN； CDR2 (SEQ ID NO:16 ): RIRSKYNNYATYYADSVKD；以及 CDR3 (SEQ ID NO:17 ): HGNFGNSYVSWFAY。

工程化本發明的序列優化的CD123 x CD3雙特異性雙抗體，以便這種第一和第二多肽沿著它們的長度通過半胱氨酸殘基彼此共價結合。這種半胱氨酸殘基可以被引入到使多肽的VL和VH結構域隔開的間插連接體(例如，連接體1)中。可替選地並且更優選地，第二肽(連接體2)被引入到每條多肽鏈中，例如，在這種多肽鏈的N-端至VL結構域或C-端至VH結構域的位置。對於這種連接體2優選的序列是SEQ ID NO:18 ：GGCGGG。

異源二聚體的形成可通過進一步工程化這種多肽鏈以包含相反電荷的多肽螺旋驅動。因此，在優選的實施方式中，多肽鏈之一將被工程化以包含“E-螺旋”結構域(SEQ ID NO:19 : E VAAL E K E VAAL E K E VAAL E K E VAAL E K)，其殘基將在pH 7形成負電荷，而兩個多肽鏈中的另一條將被工程化以包含“K-螺旋”結構域(SEQ ID NO:20 : K VAAL K E K VAAL K E K VAAL K E K VAAL K E)，其殘基將在pH 7形成正電荷。這種帶電的結構域的存在促使第一多肽和第二多肽之間的締合，從而促進異源二聚化。

向第一或第二多肽鏈提供哪種螺旋是不重要的。然而，本發明的優選的序列優化的CD123 x CD3雙特異性雙抗體(“DART-A ”)具有第一多肽鏈，其具有序列(SEQ ID NO:21 )： QAVVTQEPSL TVSPGGTVTL TCRSSTGAVT TSNYANWVQQ KPGQAPRGLI GGTNKRAPWT PARFSGSLLG GKAALTITGA QAEDEADYYC ALWYSNLWVF GGGTKLTVLG GGGSGGGGEV QLVQSGAELK KPGASVKVSC KASGYTFTDY YMKWVRQAPG QGLEWIGDII PSNGATFYNQ KFKGRVTITV DKSTSTAYME LSSLRSEDTA VYYCARSHLL RASWFAYWGQ GTLVTVSSGG CGGGEVAALE KEVAALEKEV AALEKEVAAL EK

DART-A鏈1包含：SEQ ID NO:1 ─SEQ ID NO:5 ─SEQ ID NO:6 ─SEQ ID NO:18 ─SEQ ID NO:19 。編碼DART-A鏈1的多核苷酸是SEQ ID NO:22 ： caggctgtgg tgactcagga gccttcactg accgtgtccc caggcggaac tgtgaccctg acatgcagat ccagcacagg cgcagtgacc acatctaact acgccaattg ggtgcagcag aagccaggac aggcaccaag gggcctgatc gggggtacaa acaaaagggc tccctggacc cctgcacggt tttctggaag tctgctgggc ggaaaggccg ctctgactat taccggggca caggccgagg acgaagccga ttactattgt gctctgtggt atagcaatct gtgggtgttc gggggtggca caaaactgac tgtgctggga gggggtggat ccggcggcgg aggcgaggtg cagctggtgc agtccggggc tgagctgaag aaacccggag cttccgtgaa ggtgtcttgc aaagccagtg gctacacctt cacagactac tatatgaagt gggtcaggca ggctccagga cagggactgg aatggatcgg cgatatcatt ccttccaacg gggccacttt ctacaatcag aagtttaaag gcagggtgac tattaccgtg gacaaatcaa caagcactgc ttatatggag ctgagctccc tgcgctctga agatacagcc gtgtactatt gtgctcggtc acacctgctg agagccagct ggtttgctta ttggggacag ggcaccctgg tgacagtgtc ttccggagga tgtggcggtg gagaagtggc cgcactggag aaagaggttg ctgctttgga gaaggaggtc gctgcacttg aaaaggaggt cgcagccctg gagaaa

DART-A的第二多肽鏈具有序列(SEQ ID NO:23 )： DFVMTQSPDS LAVSLGERVT MSCKSSQSLL NSGNQKNYLT WYQQKPGQPP KLLIYWASTR ESGVPDRFSG SGSGTDFTLT ISSLQAEDVA VYYCQNDYSY PYTFGQGTKL EIKGGGSGGG GEVQLVESGG GLVQPGGSLR LSCAASGFTF STYAMNWVRQ APGKGLEWVG RIRSKYNNYA TYYADSVKDR FTISRDDSKN SLYLQMNSLK TEDTAVYYCV RHGNFGNSYV SWFAYWGQGT LVTVSSGGCG GGKVAALKEK VAALKEKVAA LKEKVAALKE

DART-A鏈2包含：SEQ ID NO:10 ─SEQ ID NO:5 ─SEQ ID NO:14 ─SEQ ID NO:18 ─SEQ ID NO:20 。編碼DART-A鏈2的多核苷酸是SEQ ID NO:24 ： gacttcgtga tgacacagtc tcctgatagt ctggccgtga gtctggggga gcgggtgact atgtcttgca agagctccca gtcactgctg aacagcggaa atcagaaaaa ctatctgacc tggtaccagc agaagccagg ccagccccct aaactgctga tctattgggc ttccaccagg gaatctggcg tgcccgacag attcagcggc agcggcagcg gcacagattt taccctgaca atttctagtc tgcaggccga ggacgtggct gtgtactatt gtcagaatga ttacagctat ccctacactt tcggccaggg gaccaagctg gaaattaaag gaggcggatc cggcggcgga ggcgaggtgc agctggtgga gtctggggga ggcttggtcc agcctggagg gtccctgaga ctctcctgtg cagcctctgg attcaccttc agcacatacg ctatgaattg ggtccgccag gctccaggga aggggctgga gtgggttgga aggatcaggt ccaagtacaa caattatgca acctactatg ccgactctgt gaaggataga ttcaccatct caagagatga ttcaaagaac tcactgtatc tgcaaatgaa cagcctgaaa accgaggaca cggccgtgta ttactgtgtg agacacggta acttcggcaa ttcttacgtg tcttggtttg cttattgggg acaggggaca ctggtgactg tgtcttccgg aggatgtggc ggtggaaaag tggccgcact gaaggagaaa gttgctgctt tgaaagagaa ggtcgccgca cttaaggaaa aggtcgcagc cctgaaagag II. DART-A的特性

如通過人和食蟹猴細胞所測試的，發現DART-A具有同時結合CD123和CD3的能力。發現提供DART-A會引起T細胞啟動、介導母細胞減少、驅動T細胞擴增、誘導T細胞啟動以及引起靶癌細胞的重定向殺傷(表 1 )。

表 1 DART-A 與人和食蟹猴 CD3 和 CD123 結合的平衡解離常數 (K_D )
抗原	k_a ( ± SD) (M^-1 s^-1 )	k_d ( ± SD) (s^-1 )	K_D ( ± SD) (nM)
人CD3ε/δ	5.7 (± 0.6) x 10⁵	5.0 (± 0.9) x 10^-3	9.0 ± 2.3
食蟹猴CD3ε/δ	5.5 (± 0.5) x 10⁵	5.0 (± 0.9) x 10^-3	9.2 ± 2.3
人CD123-His	1.6 (± 0.4) x 10⁶	1.9 (± 0.4) x 10^-4	0.13 ± 0.01
食蟹猴CD123-His	1.5 (± 0.3) x 10⁶	4.0 (± 0.7) x 10^-4	0.27 ± 0.02

更特別地，在具有高CD123表達(Kasumi-3 (EC50=0.01 ng/mL))和中CD123表達(Molm13 (EC50=0.18 ng/mL)和THP-1 (EC50=0.24 ng/mL))和中低或低CD123表達(TF-1 (EC50=0.46 ng/mL)和RS4-11 (EC50=0.5 ng/mL))的靶細胞系中，無論CD3表位結合特異性如何， DART-A被發現在亞-ng/mL範圍中以實現50%的最大活性(EC50)所需的濃度展現出強大的重定向殺傷能力。類似地，在具有來自不同供體的T細胞的多個靶細胞系中也觀察到了DART-A的重定向殺傷，並且在不表達CD123的細胞系中沒有觀察到重定向殺傷活性。結果匯總在表 2 中。

表 2
靶細胞系	CD123 表面表達 ( 抗體結合位點 )	序列優化的 CD123 x CD3 雙特異性雙抗體的 EC50 (ng/mL) E:T = 10:1	最大殺傷 %
Kasumi-3	118620	0.01	94
Molm13	27311	0.18	43
THP-1	58316	0.24	40
TF-1	14163	0.46	46
RS4-11	957	0.5	60
A498	陰性	無活性	無活性
HT29	陰性	無活性	無活性

此外，當將人T細胞和腫瘤細胞(Molm13或RS4-11)組合並且皮下注入到NOD/SCID γ (NSG)敲除的小鼠中，MOLM13腫瘤在0.16、0.5、0.2、0.1、0.02和0.004 mg/kg劑量水準被顯著地抑制。在MOLM13模型中，0.004 mg/kg和更高的劑量是有效的(active)。與RS4-11模型相比，MOLM13模型中與抑制腫瘤生長相關的較低DART-A劑量與體外資料一致，其表明MOLM13細胞比RS4-11細胞具有更高水準的CD123表達，其與MOLM13細胞中對在體外DART-A介導的細胞毒性增加的敏感性相關。

發現DART-A對來自AML患者的原發性AML標本(骨髓單核細胞(BMNC)和外周血單核細胞(PBMC))有活性。用DART-A孵育原發性AML骨髓樣本導致白血病細胞群體隨時間耗竭，伴隨著殘餘T細胞(CD4和CD8兩者)的相伴擴增以及T細胞啟動標誌物(CD25和Ki-67)的誘導。在CD8和CD4 T細胞兩者中均觀察到顆粒酶B和穿孔素水準的上調。與未處理對照或對照DART相比，用DART-A孵育原發性AML骨髓樣本導致白血病細胞群體隨時間的耗竭。當計數T細胞(CD8和CD4染色)和測定啟動(CD25染色)時，與未處理或對照DART樣本相比，DART-A樣品中的T細胞擴增並被啟動。還發現DART-A能夠介導人和食蟹猴PBMC兩者中pDCs細胞的耗竭，食蟹猴pDCs用僅僅10 ng/kg DART-A早在輸注後4天的時候耗竭。在DART-A處理的動物中，觀察到細胞因數干擾素-γ、TNFα、IL-6、IL-5、IL-4和IL-2的水準未升高。這些資料表明，DART-A介導的靶細胞殺傷是通過顆粒酶B和穿孔素途徑介導的。

對CD123陰性靶標(U937細胞)或對照DART沒有觀察到活性，表明觀察到的T細胞啟動嚴格取決於靶細胞接合(engagement)，並且DART-A對CD3的單價接合不足以觸發T細胞啟動。

總而言之，DART-A是基於抗體的分子，其接合TCR的CD3ε亞基以針對表達CD123(在數種血液系統惡性腫瘤中上調的抗原)的細胞重定向T淋巴細胞。DART-A以相似的親和力結合人和食蟹猴的抗原，並且重定向來自兩種物種的T細胞以殺傷CD123+細胞。用每週遞增劑量的DART-A一周輸注4或7天的猴子，無論給藥方案如何，在治療起始後72小時示出迴圈的CD123+細胞耗竭，其在整個治療的4周中持續。也發生迴圈T細胞的減少，但是在4天劑量方案在猴子中的隨後輸注之前恢復到基線，與DART-A介導的調動(mobilization)一致。DART-A施用增加了迴圈的PD1+，但不增加TIM-3+T細胞；此外，對來自處理的猴子的T細胞的離體分析展現出未改變的重定向靶細胞裂解，表明沒有衰竭。毒性僅限於DART-A第一輸注後細胞因數的最小暫態釋放，而不是在隨後的施用之後、甚至在遞增劑量時，並且在紅細胞團(mass)中最小可逆的減少伴隨著在CD123+骨髓祖細胞中的減少。 III. 能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的示例性分子 A. PD-1結合分子

對PD-1具有免疫特異性的抗體和其他能夠結合PD-1的分子是已知的，並且可被採用或適應於用作根據本發明的能夠結合PD-1的分子(例如，多特異性結合分子(例如，雙抗體、雙特異性抗體、三價結合分子等)、抗體的抗原結合片段(例如scFv、Fab、F(ab)2等)、scFv融合體等)(參見，例如在以下表 3 中給出的專利公開)。優選的能夠結合PD-1的分子將展現出結合人PD-1 (CD279)的連續或不連續(例如，構象的)部分(表位元)的能力，並且還將優選地展現出結合一種或多種非人物種，特別是靈長類物種(尤其是如食蟹猴的靈長類物種)的PD-1分子的能力。在某些實施方式中，能夠結合PD-1的分子將展現出拮抗PD-1/PD-L1相互作用的能力，例如通過阻斷PD-1和PD-1的天然配體之間的結合。另外的所需抗體可通過分離使用PD-1或其肽片段引發的分泌抗體的雜交瘤製備。代表性的人PD-1多肽(NCBI序列NP_005009.2；其包括20個氨基酸殘基信號序列，以底線顯示)和268個氨基酸殘基成熟蛋白)具有氨基酸序列(SEQ ID NO:25) : MQIPQAPWPV VWAVLQLGWR PGWFLDSPDR PWNPPTFSPA LLVVTEGDNA TFTCSFSNTS ESFVLNWYRM SPSNQTDKLA AFPEDRSQPG QDCRFRVTQL PNGRDFHMSV VRARRNDSGT YLCGAISLAP KAQIKESLRA ELRVTERRAE VPTAHPSPSP RPAGQFQTLV VGVVGGLLGS LVLLVWVLAV ICSRAARGTI GARRTGQPLK EDPSAVPVFS VDYGELDFQW REKTPEPPVP CVPEQTEYAT IVFPSGMGTS SPARRGSADG PRSAQPLRPE DGHCSWPL

抗PD-1抗體可使用具有以上提供的PD-1氨基酸序列的所有或部分的蛋白作為免疫原而獲得。可替選地，用於產生能夠結合PD-1的分子的抗-PD-1抗體可擁有以下描述的抗人PD-1或表 3 中列舉的抗PD-1抗體的VL和/或VH結構域；並且更優選地擁有這種抗PD-1抗體的VL結構域的CDR_L 中的1個、2個或全部3個和/或VH結構域的CDR_H 中的1個、2個或全部3個。

一個這種示例性人源化抗PD-1抗體在本文被命名為“PD-1 mAb 1 ”。以下顯示PD-1 mAb 1 的VH結構域的氨基酸序列(SEQ ID NO:26 ) (CDR_H 殘基以底線顯示)： QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYSFT SYWMN WVRQA PGQGLEWIG V IHPSDSETWL DQKFKD RVTI TVDKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAR EH YGTSPFAY WG QGTLVTVSS

以下顯示PD-1 mAb 1 的VL結構域的氨基酸序列(SEQ ID NO:27 ) (CDR_H 殘基以底線顯示)： EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSC RASESVD NYGMSFMN WF QQKPGQPPKL LIH AASNQGS GVPSRFSGSG SGTDFTLTIS SLEPEDFAVY FC QQSKEVPY T FGGGTKVEI K

用於產生能夠結合PD-1的分子的可替選的抗PD-1抗體和PD-1結合分子擁有抗人PD-1抗體尼魯單抗(CAS登記號:946414-94-4，也稱為5C4、BMS-936558、ONO-4538、MDX-1106並且通過Bristol-Myers Squibb以OPDIVO®銷售)；派姆單抗(以前稱為蘭博單抗(lambrolizumab))，CAS登記號：1374853-91-4，也稱為MK-3475、SCH-900475並且通過Merck以KEYTRUDA®銷售)；西米單抗(cemiplimab) (CAS登記號：1801342-60-8，也稱為REGN-2810、SAR-439684並且以LIBTAYO®銷售)，EH12.2H7 (Dana Farber)或表 3 中的任一抗PD-1抗體的VL和/或VH結構域；並且更優選地擁有這類抗PD-1抗體的VL結構域的CDR_L 中的1個、2個或全部3個和/或VH結構域的CDR_H 中的1個、2個或全部3個。尼魯單抗(WHO藥物資訊，2013，推薦的INN：列表69，27(1)：68-69)、派姆單抗(WHO藥物資訊，2014，推薦的INN：列表75，28(3)：407)和西米單抗(WHO藥物資訊，2018，建議的INN：列表119)的完整重鏈和輕鏈的氨基酸序列在本領域是已知的。最近已經鑒定了用於本發明的方法和組合物的擁有獨特的結合特徵的另外的抗PD-1抗體(參見，PCT公開號WO 2017/019846和表 3 )。

表 3 ：另外的結合 PD-1 的分子
命名	參考
PD1-17、PD1-28、PD1-33、PD1-35和PD1-F2	US 7,488,802
17D8、2D3、4H1、5C4、4A11、7D3和5F4	US 8,008,449
hPD-1.08A、hPD-1.09A、109A、K09A、409A、h409A11、h409A16、h409A17、密碼子優化的109A和密碼子優化的409A	US 8,354,509
1B8、20B3.1、7G3、3H4、2.3A9、1G7、1.8A10、28.11、6D10	US 8,168,757
1E3、1E8和1H3	US 2014/0044738
9A2、10B11、6E9、APE1922、APE1923、APE1924、APE1950、APE1963和APE2058	US 9,815,897
EH12.2H7	US 9,102727
GA1、GA2、GB1、GB6、GH1、A2、C7、H7、SH-A4、SH-A9、RG1H10、RG1H11、RG2H7、RG2H10、RG3E12、RG4A6、RG5D9、RG1H10-H2A-22-1S、RG1H10-H2A-27-2S、RG1H10-3C、RG1H10-16C、RG1H10-17C、RG1H10-19C、RG1H10-21C和RG1H10-23C2	US 2014/0356363
H1M7789N、H1M7799N、H1M7800N、H2M7780N、H2M7788N、H2M7790N、H2M7791N、H2M7794N、H2M7795N、H2M7796N、H2M7798N、H4H9019P、H4H7798N、H4xH9034P2、H4xH9035P2、H4xH9037P2、H4xH9045P2、H4xH9048P2、H4H9057P2、H4H9068P2、H4xH9119P2、H4xH9120P2、H4Xh9128p2、H4Xh9135p2、H4Xh9145p2、H4Xh8992p、H4Xh8999p和H4Xh9008p	US 2015/0203579
mAb1、mAb2、mAb3、mAb4、mAb7、mAb8、mAb9、mAb10、mAb11、mAb12、mAb13、mAb14、mAb15和mAb16	US 2016/0159905
246A10、244C8、413D2、393C5、388D4、413E1、244C8-1、244C8-2、244C8-3、388D4-1、388D4-2和388D4-3	US 2016/0319019
Mu317、mu326、317-4B6、326-4A3、317-4B2、317-4B5、317-1、326-3B1、326-3G1、326-1、317-3A1、317-3C1、317-3E1、317-3G1、317-3H1、317-3I1、317-4B1、317-4B3、317-4B4、317-4A2、326-3A1、326-3C1、326-3D1、326-3E1、326-3F1、326-3B N55D、326-4A1、326-4A2BGB-A317	US 8,735,553
22A5、6El、lODl、4C1、7D3、13Fl、14A6、15H5、5A8、7A4和其人源化的版本	US 2017/267762
1E9、hlE9-l、hlE9-2、hlE9-4、hlE9-5、4B10、h4B10-1、h4B10-2、h4B10-3、1B10、10B4、A09、C07、F09、G08、G10、H08、H09和1353-G10	US 2018/142022
M136-M13-MHC723、m136-M14-MHC724、m136-M19-MHC725、m245-M3-MHC728、m245-M5-MHC729、A1.0、A1.6、Ba2、Bb2/C1.1和D4	US 2017/0044259
PD-1 mAb 1、PD-1 mAb 2、PD-1 mAb 3、PD-1 mAb 4、PD-1 mAb 5、PD-1 mAb 6、PD-1 mAb 7、PD-1 mAb 8、PD-1 mAb 9、PD-1 mAb 10、PD-1 mAb 11、PD-1 mAb 12、PD-1 mAb 13、PD-1 mAb 14、PD-1 mAb 15和其人源化的版本：hPD-1 mAb 2、hPD-1 mAb 7、hPD-1 mAb 9、hPD-1 mAb 15;	US 2017/019846
PD1B11、PD1B70、PD1B71、PD1B114和其親和力成熟的變體：PD1B149、PD1B160、PD1B162、PD1B164、PD1B183、PD1B184、PD1B185、PD1B187、PD1B192、PD1B175、PD1B177、PD1B194、PD1B195、PD1B196、PD1B197、PD1B198、PD1B199、PD1B200、PD1B201	US 20017/079112
BAP049-hum01、BAP049-hum02、 BAP 049-hum03、BAP049-hum04、BAP049-hum05、BAP049-hum06、BAP049-hum07、BAP049-hum08、BAP049-hum09、BAP049-huml0、BAP049-humll、BAP049-huml2、BAP049-huml3、BAP049-huml4、BAP049-huml5、BAP049-huml6、BAP049-克隆-A、BAP049-克隆-B、BAP049-克隆-C、BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E、PDR-001	US 2018/0371093
AGEN-2034、AGEN-2034w、AGEN2033w、AGEN2046w、AGEN2047w、AGEN2001w、AGEN2002w、EPl l_pll_B03、EPl l_pll_B05、EPl l_pll_C02、EPl l_pll_C03	US 2017/081409
m136-M13– MHC723、m136-M19– MHC725、m245-M3– MHC728、m245-M5– MHC729、m136-M14– MHC724和人源化變體PD-1 A、PD-1 Ab、PD-1 Ae、PD-1 Af、PD-1 Ba、PD-1 Bb、PD-1 C、PD-1 Ca、PD-1 D、PD-1 1.0、PD-1 1.1、PD-1 1.2、PD-1 1.4、PD-1 1.5、PD-1 1.6、PD-1 1.7、PD-1 1.9、PD-1 1.10、PD-1 2、PD-1 4、CX188	US 2017/044259
244C8、388D4、 413E1、246A10、413D2和人源化變體D4-HC3+LC1、D4-HC1+LC3、D4-HC3+LC3、C8-HC1+LC1、C8-HC1+LC3、C8-HC2+LC1	US 10,239,942
PRS-332、選自SEQ ID NO:59-84和112-117的VH以及選自SEQ ID NO:85-111和118-123的VL	US 2019/010231
H005-1	US 2016/376367
BA08-1	US 2017/210806
R3A1、R3A2、R4B3、R3B7、R3D6、A2_#1、A2_#2	US 2018/244779
BY18.1	WO 2016/180034
抗體A、抗體B、抗體C、抗體D、抗體E、抗體F、抗體G、抗體H、抗體I、11430	US 2017/0044260
SHB-128、SHB-152、SHB-168、SHB-617和人源化變體SSI-361	US 2018/346569
E8-3、C2-3、E1-3、F3-3、H8-3、C10-2、G2-1、G3-2、H2-1、H4-2、C8-1、G10-2、135C12、136B4、139D6、136E10、122F10、139D6、137F2	US 9,982,052
AB12M3、AB12M4、AB12M5、AB12M6、AB12M7、AB12M8、AB12M9	US 2018/113258
1.7.3 hAb、1.49.9 hAb、1.103.11 hAb、 1.139.15 hAb、1.153.7 hAb	US 2017/024515、US 2017/025051
949和包括949 VK1 gL9 gH8b的人源化變體	US 9,102,728
948和人源化變體	US 8,993,731
STM-432	US 2019/077866

B. PD-1配體結合分子

對PD-1的天然配體(例如，B7-H1(PD-L1，CD274），B7-DC(PD-L2，CD273)) 具有免疫特異性的抗體和能夠結合PD-1的天然配體的分子是已知的並且可以被採用或適於用作根據本發明的能夠結合PD-1的天然配體的分子(例如，多特異性結合分子(例如，雙抗體、雙特異性抗體、三價結合分子等) )、抗體的抗原結合片段(例如，scFv、Fab、F(ab)2等、scFv-Fc融合體等) (參見例如下表4中列出的專利出版物)。能夠結合PD-1的天然配體的優選的分子將展示出結合人B7-H1和/或B7-DC的連續或不連續(例如，構象的)部分(表位元)的能力並且將優選地還展現出結合一個或多個非人物種，特別是靈長類物種(尤其是如食蟹猴的靈長類物種)的B7-H1和/或B7-DC分子的能力。在某些實施方式中，能夠結合PD-1的天然配體的分子將展現出拮抗PD-1/PD-L1相互作用的能力，例如通過阻斷PD-1和PD-1的天然配體之間的結合。另外的所需抗體可通過分離使用B7-H1、B7-DC或其肽片段引發的分泌抗體的雜交瘤製備。

代表性的人B7-H1 (PD-L1)多肽(NCBI序列NP_001254635.1；其包括預測的18氨基酸信號序列)具有氨基酸序列(SEQ ID NO:28 )： MRIFAVFIFM TYWHLLNAPY NKINQRILVV DPVTSEHELT CQAEGYPKAE VIWTSSDHQV LSGKTTTTNS KREEKLFNVT STLRINTTTN EIFYCTFRRL DPEENHTAEL VIPELPLAHP PNERTHLVIL GAILLCLGVA LTFIFRLRKG RMMDVKKCGI QDTNSKKQSD THLEET

代表性的人B7-DC (PD-L2)多肽(NCBI序列NP_079515.2；其包括預測的18氨基酸信號序列)具有氨基酸序列(SEQ ID NO:29 )： MIFLLLMLSL ELQLHQIAAL FTVTVPKELY IIEHGSNVTL ECNFDTGSHV NLGAITASLQ KVENDTSPHR ERATLLEEQL PLGKASFHIP QVQVRDEGQY QCIIIYGVAW DYKYLTLKVK ASYRKINTHI LKVPETDEVE LTCQATGYPL AEVSWPNVSV PANTSHSRTP EGLYQVTSVL RLKPPPGRNF SCVFWNTHVR ELTLASIDLQ SQMEPRTHPT WLLHIFIPFC IIAFIFIATV IALRKQLCQK LYSSKDTTKR PVTTTKREVN SAI

具體地，抗B7-H1抗體可使用具有以上提供的B7-H1氨基酸序列的部分或全部的蛋白作為免疫原而獲得。可替選地，用於產生能夠結合B7-H1的分子的抗B7-H1抗體可擁有以下描述的抗人B7-H1或表 4 中列舉的抗B7-H1抗體的VL和/或VH結構域；並且更優選地擁有這種抗B7-H1抗體的VL結構域的CDR_L 中的1個、2個或全部3個和/或VH結構域的CDR_H 中的1個、2個或全部3個。

用於產生能夠結合PD-1的天然配體的分子的示例性抗B7-H1抗體可擁有抗人B7-H1抗體阿特珠單抗(CAS登記號1380723-44-3，也稱為MPDL3280A並且作為TECENTRIQ®銷售)、度伐單抗(CAS登記號1428935-60-7，也稱為MEDI-4736並且作為IMFINZI®銷售)、阿維魯單抗、MDX1105 (CAS登記號1537032-82-8，也稱為BMS-936559，5H1並且作為BAVENCIO®銷售)或表 4 中列舉的任何抗B7-H1抗體和結合分子的VL和/或VH結構域；並且更優選地擁有這種抗B7-H1抗體的VL結構域的CDR_L 中的1個、2個或全部3個和/或VH結構域的CDR_H 中的1個、2個或全部3個。阿特珠單抗(WHO藥物資訊，2015，推薦的INN：列表74, 29(3):387)、度伐單抗(WHO藥物資訊，2015，推薦的INN：列表74, 29(3):393-394)和阿維魯單抗(WHO藥物資訊，2016，推薦的INN：列表74，30(1):100-101)的完整重鏈和輕鏈的氨基酸序列在本領域是已知的。

表 4 ：結合 PD-1 的天然配體的另外的分子
命名	參考
A09-188-1和親和力成熟的且優化的變體：A09-204-1、A09-211-1、A09-212-1、A09-213-1、A09-214-1、A09-215-1、A09-216-1、A09-219-1、A09-220-1、A09-221-1、A09-222-1、A09-223-1、A09-202-1、A09-248-2、A09-239-2、A09-240-2、A09-241-2、A09-242-2、A09-243-2、A09-244-2、A09-245-2、A09-246-2、A09-247-2	US 9,624298
YW243.55.S70、243.55.H1、243.55.H12、243.55.H37、243.55.H70、243.55.H89、243.55.S1、243.55.5、243.55.8、243.55.30、243.55.34、243.55.S37、243.55.49、243.55.51、243.55.62、243.55.84	US 8,217,149
2.9D10、2.7A4、2.14H9、3.15G8、2.20A8、3.18G1、2.7A4OPT或2.14H9OPT	US 8,779108B2
1B9.2E11.2、4H1.G10.15、1Α8、1Ε4、8G2、1D11、3Α2、3Β11、3F4、3Η6、4C1、4Ε1、5Α6、9C12、1Β4、1Β11、1F6、1Η8、1Η12、2D5、2Η11、3D12、4C8、4C9、5Ε10、5Η4、5Η5、8Α1、9G9、10Α7和10Η6	US 2015/0197571
1D05、84G09、411Β08、411C04、411D07、386Η03、386A03、385F01、413D08、413G05、413F09、414B06	US 9,617,338
3G10、12Α4、10Α5、5F8、10Η10、1Β12、7Η1、11Ε6、12Β7和13G4	US 9,273,135
A1、C2、C4、H12和H12-GL	US 2017/0319690
Ab-14、Ab-16、Ab-22、Ab-30、Ab-31、Ab-32、Ab-38、Ab-42、Ab-46、Ab-50、Ab-52、Ab-55、Ab-56和Ab-65	US 9,828434
R2κA3、R2κA4、R2κA6、R2κF4、R2κH5、R2κH6、R2κH3、sR3κA8、sR3κA9、sR3κB2、sR3κB5、tccR3ΚA8、tccR3ΚAl1、tccR3ΚB7、tccR3ΚD9、tccΚF10、tctR3ΚA4、tctR3ΚF8、R2λΑ7、R2λΒ12、R2λ12、sR3λD7、sR3 λE1 、 tccAF8、tccAD7、tctR3λH4、KD-033和其他	US 2016/340429
Η2Μ8306Ν、Η2Μ8307Ν、Η2Μ8309Ν、Η2Μ8310Ν、Η2Μ8312Ν、Η2Μ8314Ν、Η2Μ8316Ν、Η2Μ8317Ν、Η2Μ8321Ν、Η2Μ8323Ν、Η2Μ8718Ν、Η2Μ8718Ν2和Η2Μ8719Ν、Η1Η9323Ρ、Η1 Η9327Ρ、Η1 Η9329Ρ、Η1Η9336Ρ、Η1Η9344Ρ2、1Η9345Ρ2、Η1Η9351Ρ2、Η1Η9354Ρ2、Η1 Η9364Ρ2、Η1Η9373Ρ2、Η1Η9382Ρ2、Η1Η9387Ρ2和Η1Η9396Ρ2	US 9,938345
克隆8、克隆12、克隆16、克隆18、克隆60和其優化的變體包括：cl、dl、g7、h9、b10、E10、A05、C05、C10、D08、G09、G10、G12、Ell、D01、Η06、C5H9、C5B10、C5E10、G12H9、G12B10、G12E10	US 2016/0311903
ΒΑΡ058和其人源化變體包括：ΒΑΡ058-hum01、ΒΑΡ058-hum02、ΒΑΡ058-hum03、ΒΑΡ058-hum04、ΒΑΡ058-hum05、ΒΑΡ058-hum06、ΒΑΡ058-hum07、ΒΑΡ058-hum08、ΒΑΡ058-hum09、ΒΑΡ058-hum10、ΒΑΡ058-hum11、ΒΑΡ058-hum12、ΒΑΡ058-hum13、ΒΑΡ058-hum14、ΒΑΡ058-hum15、ΒΑΡ058-hum16和ΒΑΡ058-hum17；FAZ-053	US 9,988,452
Mu333、Mu277和其人源化變體包括：hu333-2B、hu333-3A2、hu333-3C2和hu333-3H2	US 2018/215825
332Μ1和其人源化變體包括：332Μ7、332Μ72和332M8	US 2018/346571
PDL1.1、PDL1.2	US 8,741295
13C5、5G9、5G11、8C6、7B4、4D1、4A8、8H4、8H3、15F1和其人源化變體包括：hu5G11、hu13C5	US 2017/0204184
PDL1-56 dAb、Hu56V1、Hu56V2、Hu56V3、Hu56V4、Hu56V5和KN035	US 2018/0291103
1.4.1、1.14.4、1.20.15和1.46.11	WO 2017/020858
92、24D5、29H1、9_2-1、9_2-2、9_2-3、9_2-4、9_2-5、9_2-6、9_2-7、9_2-8、9_2-9、9_2-10、24D5-H、HRP00049、HRP-00052	US 2018/0334504
5F10、9F6、5C10和其人源化變體包括：5C10H1L1、5C10H1L2、5C10H2L1和5C10H2L2	US 2018/0305464
4B6、26F5、21F11、23A11、23F11和22C9；BM-GT、BM-ME、4B6-H3L4、4B6-H4L3、23F11-H4L4、23F11-H4L6、23F11-H6L4、23F11-H6L6、23A11-H3L3、23A11-H3L5、23A11-H5L3和23A11-H5L5	WO 2017/161976
3C5-2G12和其人源化變體包括：h3C5H1-h3C5L1、h3C5H2-h3C5L2、h3C5H3-h3C5L2、h3C5H4-h3C5L2	WO 2017/196867
29E.2A3和24F.10C12	US 8,552,154

C. 示例性IgG4抗體

在某些實施方式中，用於本發明的方法和組合物的抗體(尤其是抗PD-1抗體和抗B7-H1抗體)包括IgG4恆定區。示例性IgG4抗體包括以上描述的任何抗PD-1抗體或抗B7-H1抗體的VL和VH結構域、IgG CL κ結構域和IgG4 CH1、CH2和CH3結構域。

示例性CL結構域是IgG CL κ結構域。示例性人CLκ結構域的氨基酸序列是(SEQ ID NO:30 )： RTVAAPSVFI FPPSDEQLKS GTASVVCLLN NFYPREAKVQ WKVDNALQSG NSQESVTEQD SKDSTYSLSS TLTLSKADYE KHKVYACEVT HQGLSSPVTK SFNRGEC

示例性CH1結構域是人IgG4 CH1結構域，任選地缺乏C-端賴氨酸殘基。示例性人IgG4 CH1結構域的氨基酸序列是(SEQ ID NO:31 )： ASTKGPSVFP LAPCSRSTSE STAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTKT YTCNVDHKPS NTKVDKRV

這類抗體將優選地包括IgG4 CH1結構域(SEQ ID NO:31 )和ESKYGPPCP P CP (SEQ ID NO:32 )，其是包括穩定的S228P取代(按照Kabat中規定的EU索引進行編號)以減少鏈交換的IgG4鉸鏈變體。

示例性人IgG4的CH2-CH3結構域的氨基酸序列是(SEQ ID NO:33 )： 231 240 250 260 270 280 APEFLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSQED PEVQFNWYVD 290 300 310 320 330 GVEVHNAKTK PREEQFNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKGLPS 340 350 360 370 380 SIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSQEEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE 390 400 410 420 430 WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSRL TVDKSRWQEG NVFSCSVMHE 440 447 ALHNHYTQKS LSLSLG X 按照Kabat中規定的EU索引進行編號，其中X 是賴氨酸(K)或不存在。

命名“PD-1 mAb 1 IgG4 ”的示例性抗PD-1單克隆抗體是人源化的抗人PD-1抗體。如上所述，PD-1 mAb 1 包括PD-1 mAb 1 的VH和VL結構域。

PD-1 mAb1 IgG4 的完整重鏈的氨基酸序列是SEQ ID NO:34 (CDR_H 殘基和S228P殘基以底線顯示)： QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYSFT SYWMN WVRQA PGQGLEWIG V IHPSDSETWL DQKFKD RVTI TVDKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAR EH YGTSPFAY WG QGTLVTVSSA STKGPSVFPL APCSRSTSES TAALGCLVKD YFPEPVTVSW NSGALTSGVH TFPAVLQSSG LYSLSSVVTV PSSSLGTKTY TCNVDHKPSN TKVDKRVESK YGPPCP P CPA PEFLGGPSVF LFPPKPKDTL MISRTPEVTC VVVDVSQEDP EVQFNWYVDG VEVHNAKTKP REEQFNSTYR VVSVLTVLHQ DWLNGKEYKC KVSNKGLPSS IEKTISKAKG QPREPQVYTL PPSQEEMTKN QVSLTCLVKG FYPSDIAVEW ESNGQPENNY KTTPPVLDSD GSFFLYSRLT VDKSRWQEGN VFSCSVMHEA LHNHYTQKSL SLSLG

在SEQ ID NO:34 中，殘基1-119對應於PD-1 mAb 1 的VH結構域(SEQ ID NO:26 )，氨基酸殘基120-217對應於人IgG4 CH1結構域(SEQ ID NO:31 )，氨基酸殘基218-229對應於包括S228P取代的人IgG4鉸鏈結構域(SEQ ID NO:32 )，氨基酸殘基230-245對應於人IgG4 CH2-CH3結構域(SEQ ID NO:33 ，其中X不存在)。

抗體PD-1 mAb 1 IgG4 的完整輕鏈的氨基酸序列擁有κ恆定區並且是(SEQ ID NO:35 ) (CDR_L 殘基以底線顯示): EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSC RASESVD NYGMSFMN WF QQKPGQPPKL LIH AASNQGS GVPSRFSGSG SGTDFTLTIS SLEPEDFAVY FC QQSKEVPY T FGGGTKVEI KRTVAAPSVF IFPPSDEQLK SGTASVVCLL NNFYPREAKV QWKVDNALQS GNSQESVTEQ DSKDSTYSLS STLTLSKADY EKHKVYACEV THQGLSSPVT KSFNRGEC

在SEQ ID NO:35 中，氨基酸殘基1-111對應於PD-1 mAb 1 的VL結構域(SEQ ID NO:27 )，並且氨基酸殘基112-218對應於輕鏈κ恆定區(SEQ ID NO:30) 。

其他具有IgG4恆定區的示例性抗PD-1抗體是尼魯單抗，其是人抗體；以及派姆單抗，其是人源化抗體。每種包括如以上所述的κ CL結構域、IgG4 CH1結構域、穩定的IgG4鉸鏈和IgG4 CH2-CH3結構域。 IV. 藥物組合物

本發明的組合物包括可用於製造組合物的原料藥(bulk drug)組合物(例如，不純的或非滅菌的組合物)和藥物組合物(即，適合施用至受試者或患者的純的和/或滅菌的組合物)，兩者中任一者可用於製備單位劑型。可用於本發明的方法中的組合物，尤其是藥物組合物包括包含DART-A的那些和包含能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的分子的那些。這類組合物或藥物組合物可包含預防或治療有效量的：DART-A和藥學上可接受的載體；PD-1結合分子和藥學上可接受的載體；或PD-1配體結合分子和藥學上可接受的載體。

本發明還涵蓋包含DART-A和對特定的癌症抗原特異的第二治療性抗體(例如，腫瘤特異性單克隆抗體)和藥學上可接受的載體的藥物組合物。

在具體的實施方式中，術語“藥學上可接受的”意味著獲得聯邦或州政府的監管機構的許可或列於美國藥典(U.S. Pharmacopeia)或其他通常獲得認可的藥典中，用於動物，更特別是用於人類。術語“載體”指與治療劑一起施用的稀釋劑、佐劑(例如，Freund佐劑(完全的和不完全的)、賦形劑或媒介(vehicle)。這種藥學上的載體可以為無菌液體如水或油，其包括石油、動物、植物或合成來源的那些油，如花生油、大豆油、礦物油、芝麻油等。當靜脈內施用藥物組合物靜脈內施用時，水是優選的載體。生理鹽水溶液和含水右旋糖以及甘油的溶液也可以用作液體載體，特別對於可注射溶液而言。合適的藥物賦形劑包括澱粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明膠、麥芽、大米、麵粉、白堊、矽膠、硬脂酸鈉、單硬脂酸甘油酯、滑石粉、氯化鈉、脫脂乳粉、甘油、丙烯、乙二醇、水、乙醇等。如果需要，組合物還可以包含少量的潤濕劑或乳化劑或pH緩衝劑。這些組合物可以採用溶液、懸液、乳液、片劑、丸劑、膠囊、粉末、緩釋製劑等形式。

通常，本發明的組合物的組分被單獨提供或以單位劑型的形式混合在一起，例如，作為在指示活性劑的量的密封容器如小瓶、安瓿或袋(sachette)中的乾燥凍乾粉或無水濃縮物。在通過輸注施用組合物的情況下，組合物可以用含有無菌的藥物級水或生理鹽水的輸注瓶或袋分配，以便可以在施用前混合或稀釋組分。在通過注射施用組合物的情況下，可以提供注射用無菌水或生理鹽水或其他稀釋劑的安剖，以便可以在施用前混合組分。

本發明也提供包括一個或多個容器的藥物包(pack)或試劑盒，所述容器包含單獨的DART-A或DART-A與這種藥學上可接受的載體。另外，用於疾病的治療的一種或多種其他預防性或治療性試劑也可以包括在藥物包或試劑盒中。本發明也提供包括一個或多個容器的藥物包或試劑盒，所述容器填充有本發明的藥物組合物的一種或多種組分。任選地與這類容器關聯的可以是以由管理藥物或生物製品的製造、使用或銷售的政府機構規定的形式的告示(notice)，所述告示反映了管理機構批准用於人類施用的製造、使用或銷售。

本發明提供包括DART-A並且可用在以上方法中的試劑盒。在這種試劑盒中，DART-A優選地被包裝在指示分子的量的密封容器如小瓶、安瓿或袋中，並且任選地包括使用說明書。在一個實施方式中，這種試劑盒的DART-A作為乾燥無菌凍乾粉或無水濃縮物提供在密封容器中，並可以例如用水、生理鹽水或其他稀釋劑重構(reconstitute)至適當的濃度以施用給受試者。凍幹的材料應在其原始容器中在2°C至8°C之間儲存，並且材料應在重構後的12小時內，優選地在6小時內、5小時內、3小時內或1小時內施用。在另一個實施方式中，這種試劑盒的DART-A作為水溶液提供在密封容器中，並且可以例如用水、生理鹽水或其他稀釋劑稀釋至合適的濃度以施用給受試者。試劑盒可進一步包括在一個或多個容器中的用於癌症治療的一種或多種其他的預防性和/或治療性試劑；和/或試劑盒可進一步包括結合一種或多種與癌症相關的癌症抗原的細胞毒性抗體。在某些實施方式中，其他預防性或治療性試劑是化學治療劑。在其他實施方式中，預防性或治療性試劑是生物或激素治療劑。在其他實施方式中，預防性或治療性試劑是PD-1結合分子。在其他實施方式中，預防性或治療性試劑是PD-1配體結合分子。 V. 本發明的組合物的用途

DART-A可用於治療與CD123的表達相關的或由CD123的表達表徵的任何疾病或病況。具體地，DART-A可用於治療血液系統惡性腫瘤。因此，在沒有限制的情況下，這種分子可用於診斷或治療血液系統惡性腫瘤：急性髓細胞白血病(AML)、包括CML的原始細胞危象和與CML相關的阿貝爾森致癌基因(Bcr-ABL易位)的慢性髓細胞性白血病(CML)、脊髓發育不良綜合症(MDS)、急性B淋巴細胞白血病(B-ALL)、急性T淋巴細胞白血病(T-ALL)、包括CLL的裡克特綜合症或裡克特轉化的慢性淋巴細胞性白血病(CLL)、多毛細胞白血病(HCL)、母細胞性漿細胞樣樹突狀細胞腫瘤(BPDCN)、包括套細胞淋巴瘤(MCL)和小淋巴細胞淋巴瘤(SLL)的非霍奇金淋巴瘤(NHL)、霍奇金淋巴瘤、系統性肥大細胞增生症和伯基特淋巴瘤。DART-A可另外用於製造用於以上所述的病況的治療的藥物中。

在具體的實施方式中，本發明提供治療AML、MDS、BPDCN、B-ALL和T-ALL的方法。在一個具體的實施方式中，本發明提供治療AML的方法。 VI. 施用方法

如以上提供的，本發明的CD123 x CD3雙特異性雙抗體(例如，DART-A)和包括其的本發明的藥物組合物可用於治療、預防和改善一種或多種與血液系統惡性腫瘤相關的症狀。在一些實施方式中，CD123 x CD3雙特異性雙抗體(或包括其的藥物組合物)可與一種或多種另外的治療劑(例如，本領域技術人員已知的用於治療或預防血液系統惡性腫瘤的治療劑，其包括但不限於當前的標準的和實驗性化學治療劑、激素劑、生物劑、免疫治療劑或可用於減輕包括但不限於本文所述的那些治療副作用的試劑) 組合使用。在具體的實施方式中，CD123 x CD3雙特異性雙抗體(或包括其的藥物組合物)可與能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的分子(或包括其的藥物組合物) 組合使用。

如本文使用的，術語“組合(combination)”指使用大於一種的治療劑。使用術語“組合”不限制向具有障礙的受試者施用治療劑的順序，也不意味著在恰好相同時間施用試劑，而是意味著按順序且以一定時間間隔向人患者或其他哺乳動物施用本發明的CD123 x CD3雙特異性雙抗體和其他試劑，以便本發明的CD123 x CD3雙特異性雙抗體和其他試劑提供所需的治療益處。例如，每種治療劑(例如，如能夠結合PD-1的分子的化學治療劑、激素劑或生物劑)可在相同時間或在不同時間點以任何順序依次施用；然而，如果沒有在相同時間施用，它們應該在時間上足夠近地施用以提供所期望的治療或預防效果。每種治療劑可以任何合適的形式和任何合適的途徑分開施用，例如，一種通過口服途徑和一種通過腸胃外途徑等。

具體地，本發明提供治療血液系統惡性腫瘤的方法，其包括向受試者施用有效量的本發明的CD123 x CD3雙特異性雙抗體(例如，DART-A)或包括本發明的CD123 x CD3雙特異性雙抗體(例如，DART-A)的藥物組合物。本發明進一步提供治療血液系統惡性腫瘤的方法，其包括向受試者施用有效量的本發明的CD123 x CD3雙特異性雙抗體(或包括其的藥物組合物)與能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的分子(或包括其的藥物組合物)的組合。在具體的方面，這種組合物基本上是純化的(即，基本上不含限制其作用或產生不良副作用的物質)。在具體的實施方式中，受試者是動物，優選地如非靈長類物種(例如，牛科動物、馬科動物、貓科動物、犬科動物、齧齒動物等)的哺乳動物或靈長類物種(例如，如食蟹猴的猴類、人等)。在具體的實施方式中，受試者是人。

施用本發明的分子的方法包括但不限於腸胃外施用(例如，皮內、肌內、腹膜內、靜脈內和皮下)。在具體的實施方式中，靜脈內施用本發明的序列優化的CD123 x CD3雙特異性雙抗體(例如，DART-A)。靜脈內輸注是優選的施用途徑。具體地，本發明的CD123 x CD3雙特異性雙抗體通過使用泵介導的連續靜脈內輸注(“泵輸注 ”)施用。這種連續輸注可具有每天約1小時至約24小時的持續時間，但是優選地將具有每天約24小時的持續時間。術語“約 ”旨在表示為所述持續時間的±10％的範圍，即使得約24小時的輸注的持續時間將在21.6小時和26.4小時之間。在某些實施方式中，具有每天約24小時的持續時間的持續輸注將持續約1天至約21天、或約1天至約14天、或約1天至約7天、或約1天至約4天、或約1天至約2天的時期。應當理解，連續施用可能需要暫停短時期 (例如改變供應、調整劑量、補充藥物供應、控制副作用等等)。具體地，本發明的CD123 x CD3雙特異性雙抗體的連續施用可被暫停以施用一種或多種另外的治療劑(例如，能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的分子)。這種暫停是例行的並且通常不認為終止持續輸注的時期。

在具體的實施方式中，靜脈內施用本發明的能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的分子(例如，PD-1 mAb 1 IgG4)。具體地，在約30分鐘至約240分鐘內間歇地施用且輸注能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的分子。應當理解，這種輸注可能需要暫停短時期(例如改變供應、調整劑量、補充藥物供應、控制副作用等)。這種暫停是例行的並且通常不認為終止持續輸注的時期。在某些實施方式中，本發明的CD123 x CD3雙特異性雙抗體的連續施用可被暫停以施用本發明的能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的分子。

可以通過標準臨床技術確定在治療、預防或改善與障礙相關的一種或多種症狀中有效的本發明的組合物的量。製劑中採用的精確劑量還將取決於施用途徑和病況的嚴重性，並且應根據醫師的判斷和每個患者的情況來確定。有效劑量可以從來源於體外或動物模型測試系統的劑量反應曲線中推斷。這種劑量可以根據接受受試者的體重(kg)確定或可以是施用的扁平劑量(flat dosage) (即，獨立於患者的體重的劑量，其包括待施用的分子的物理離散單元。在利用基於重量的劑量的情況下，將基於在基線處受試者的體重施用所計算的劑量。通常地，來自基線或建立的穩定期體重(plateau weight)的體重的顯著變化(≥10%)將提示重新計算劑量。

如上所述，DART-A優選地通過具有每天約24小時的持續時間的連續輸注施用。因此，劑量優選地基於每天待施用的DART-A的量，例如，每天每千克體重DART-A的納克數(ng/kg/天)確定。如上所述，本發明的能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的分子(例如，PD-1 mAb 1 IgG4)任選地在少於幾小時的時間段內間歇地施用。在某些實施方式中，每個劑量基於每千克體重能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的分子的量確定，例如，基於每千克體重PD-1 m Ab 1 IgG4的毫克數(mg/kg)確定。在其他實施方式中，施用扁平劑量，例如固定毫克數的PD-1 mAb 1 IgG，不考慮體重。關於劑量(dose)或劑量(dosage)，術語“約 ”旨在表示所述劑量的± 10%的範圍，以便例如約30 ng/kg/天的基於重量的劑量將為在27 ng/kg/天和33 ng/kg/天患者體重之間，並且約200 mg的扁平劑量將為在180 mg和220 mg之間。

在某些實施方式中，使用1周(7天)“時期 ”(“P ”)施用DART-A。如以下詳細討論的，施用包括初始7天治療時期(“I7DP ”)，其隨後為一個或多個另外的7天治療時期(每個為“A7DP ”；例如，A7DP 1 、A7DP 2 等)。治療週期的最終A7DP可隨後為一個或多個進一步的7天治療時期(每個為“F7DP ”；例如，F7DP 1 、F7DP 2 等)。

術語“LID-1 模式 ”指包括一步驟導入給藥(lead-in dosing)的給藥方案，其中在初始7天治療時期期間，DART-A以100 ng/kg/天施用4天，然後暫停3天。術語“LID-2 模式 ”指包括兩步驟導入給藥的給藥方案，其中在初始7天治療時期期間，DART-A以30 ng/kg/天施用3天，然後以100 ng/kg/天施用接下來4天。術語“LID-3 模式 ”指包括多步驟導入給藥的給藥方案，其中DART-A使用多個遞升(step-up)劑量增量(多於兩個的步驟)施用，每次持續約24小時直到達到目標劑量，此後，在最初7天治療時期(I7DP)的剩餘時間以目標劑量施用DART-A。

在一個實施方式中，在初始7天治療時期(I7DP)期間，使用包含多個遞升給藥增量的導入給藥策略施用DART-A直到達到目標劑量。在一個實施方式中，起始劑量為約30 ng/kg/天且目標劑量為在約300 ng/kg/天至約500 ng/kg/天之間。在一個實施方式中，目標劑量為約300 ng/kg/day且在I7DP期間，通過連續靜脈內輸注施用DART-A：在第1天以約30 ng/kg/天的劑量；在第2天以約60 ng/kg/天的劑量；在第3天以約100 ng/kg/天的劑量；在第4天以約200 ng/kg/天的劑量；並且在第5、6和7天以約300 ng/kg/天的劑量。在另一個實施方式中，目標劑量為約400 ng/kg/天且在I7DP期間，通過連續靜脈內輸注施用DART-A：在第1天以約30 ng/kg/天的劑量；在第2天以約60 ng/kg/天的劑量；在第3天以約100 ng/kg/天的劑量；在第4天以約200 ng/kg/天的劑量；在第5天以約300 ng/kg/天的劑量並且在第6和7天以約400 ng/kg/天的劑量。在進一步實施方式中，目標劑量為約500 ng/kg/天且在I7DP期間，通過連續靜脈內輸注施用DART-A：在第1天以約30 ng/kg/天的劑量；在第2天以約60 ng/kg/天的劑量；在第3天以約100 ng/kg/天的劑量；在第4天以約200 ng/kg/天的劑量；在第5天以約300 ng/kg/天的劑量；在第6天以約400 ng/kg/天的劑量；並且在第7天以約500 ng/kg/天的劑量。本發明特別地涵蓋治療血液系統惡性腫瘤的方法，其包括一個根據任一以上實施方式的I7DP。

在某些實施方式中，這種I7DP隨後為一個或多個另外的7天治療時期(每個為A7DP)，其中DART-A以目標劑量(即，約300 ng/kg/天至約500 ng/kg/天)通過連續靜脈內輸注施用7天。在一些實施方式中，施用一個至二十三個A7DP。優選地施用三個A7DP。在某些實施方式中，施用大於三個的A7DP，尤其是在施用三個A7DP後未觀察到所期望的應答的情況下。在特定的實施方式中，施用四個、八個、十二個或十六個更多的A7DP (即，總共七個、十一個、十五個、十九個或二十三個A7DP)。在一個實施方式中，目標劑量為約300 ng/kg/天並且施用至少三個A7DP。在另一個實施方式中，目標劑量為約400 ng/kg/天並且施用至少三個A7DP。在進一步實施方式中，目標劑量為約500 ng/kg/天並且施用至少三個A7DP。本發明特別地涵蓋治療血液系統惡性腫瘤的方法，其包括一個或多個根據任一以上實施方式的A7DP。

在某些實施方式中，一個或多個A7DP中的最後一個隨後為一個或多個進一步的7天治療時期(每個為F7DP)，其中根據4天施用(on)/3天停用(off)的方案(例如，DART-A在F7DP的第1天、第2天、第3天和第4天提供，但是在這種F7DP的第5天、第6天和第7天不提供)，通過持續靜脈內輸注以目標劑量施用DART-A。具體地，這種F7DP可包括通過持續靜脈內輸注以目標劑量在第1-4天施用DART-A，且在第5-7天不施用DART-A。在一些實施方式中，施用一個至二十四個F7DP。優選地，施用一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個或八個這種F7DP。在具體的實施方式中，施用一個至四個這種F7DP。在一個實施方式中，目標劑量為約300 ng/kg/天且施用至少四個F7DP。在另一個實施方式中，目標劑量為約400 ng/kg/天且施用至少四個F7DP。在進一步實施方式中，目標劑量為約500 ng/kg/天且施用至少四個F7DP。本發明特別地涵蓋治療血液系統惡性腫瘤的方法，其包括一個或多個根據任一以上實施方式的F7DP。

在某些實施方式中，DART-A與能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的分子(例如，PD-1 mAb 1 IgG4)結合施用，其中能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的分子每兩週一次(“Q2W ”)、每三週一次(“Q3W ”)或每四周一次(“Q4W ”)施用。在具體實施方式中，能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的分子以約1 mg/kg至約10 mg/kg的基於重量的劑量或約200 mg至約300 mg的固定劑量Q2W施用。在特定的實施方式中，能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的分子以約1 mg/kg至約3 mg/kg的基於重量的劑量Q2W施用。在其他具體的實施方式中，能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的分子以約200 mg至約375 mg的固定劑量Q3W施用。在特定的實施方式中，能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的分子以約375 mg的固定劑量Q3W施用。在其他具體的實施方式中，能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的分子以約400 mg至約500 mg的固定劑量Q4W施用。在特定的實施方式中，能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的分子以約500 mg的固定劑量Q4W施用。

在某些實施方式中，Q2W、Q3W或Q4W施用與以上所述的一個或多個7天治療時期同時進行，其中施用DART-A。因此，在某些實施方式中，能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的分子Q2W、Q3W或Q4W施用，其中在以上提供的一個或多個7天治療時期期間發生這種施用。在某些實施方式中，能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的分子在一個或多個A7DP期間和/或在一個或多個F7DP期間施用。在具體的實施方式中，能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的分子在一個或多個A7DP的第1天和/或在一個或多個F7DP的第1天施用。在特定的實施方式中，在能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的分子的施用期間暫停DART-A的施用。在某些實施方式中，當安排在同一天時，在DART-A之前施用能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的分子。在某些實施方式中，在兩個7天治療時期後、優選地在第15天施用第一劑量的能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的分子並且其後Q2W、Q3W或Q4W施用另外的劑量。在某些實施方式中，在施用最後劑量的DART-A之後，繼續Q2W、Q3W或Q4W施用能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的分子。

在某些實施方式中，治療被劃分為4周(28天)治療週期。在一個實施方式中，第一治療週期(“治療週期 1 ”)包括一個I7DP，然後三個A7DP以組成4周治療週期1。在某些實施方式中，能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的分子也在這類治療週期1期間施用。在一個實施方式中，能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的分子(例如，PD-1 mAb 1 IgG4)在這類治療週期1的第15天(即，第二A7DP的第1天)以約1 mg/kg至約3 mg/kg的劑量施用。

在某些實施方式中，任選地施用至少一個第二治療週期(每個“治療週期 2 ”)。在施用週期1後未觀察到所期望的應答時，尤其優選地施用至少一個治療週期2。在特定的實施方式中，每個治療週期2包括四個A7DP以組成4周(28天)治療週期2。任選地，治療週期2可重複以基於連續7天方案以目標劑量提供DART-A的另外施用。在某些實施方式中，在這類治療週期2期間，也施用能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的分子。在一個實施方式中，能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的分子(例如，PD-1 mAb 1 IgG4)在每個治療週期2的第1天和第15天(即，在第一A7DP的第1天和在第三A7DP的第1天)以約1 mg/kg至約3 mg/kg的基於重量的劑量施用。

在某些實施方式中，施用至少一個第三治療週期(每個“治療週期 3 ”)。在特定的實施方式中，治療週期3包括四個F7DP以組成4周(28天)治療週期3。在某些實施方式中，在治療週期1之後施用至少一個治療週期3。在其他實施方式中，在施用至少一個治療週期2之後施用至少一個治療週期3。任選地，治療週期3可重複以基於4天施用/3天停用(off)的方案以目標劑量提供DART-A的另外施用。在某些實施方式中，在這類治療週期3期間，也施用能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的分子。在一個實施方式中，能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的分子(例如，PD-1 mAb 1 IgG4)在每個治療週期3的第1天和第15天(即，在第一F7DP的第1天和在第三F7DP的第1天)以約1 mg/kg至約3 mg/kg的劑量施用。

在某些實施方式中，DART-A根據治療週期1施用，然後根據治療週期2進一步施用，其中治療週期2可重複，然後根據治療週期3進一步施用，其中治療週期3可重複。在其他實施方式中，不施用治療週期2。因此，在這類實施方式中，DART-A根據治療週期1施用，然後根據治療週期3進一步施用，其中治療週期3可重複。本發明特別地涵蓋治療血液系統惡性腫瘤的方法，其包括根據任一以上實施方式的治療週期1。本發明進一步涵蓋治療血液系統惡性腫瘤的方法，其包括根據任一以上實施方式的治療週期1，隨後至少一個根據任一以上實施方式的治療週期2。本發明進一步涵蓋治療血液系統惡性腫瘤的方法，其包括根據任一以上實施方式的治療週期1，隨後至少一個根據任一以上實施方式的治療週期2，隨後至少一個根據任一以上實施方式的治療週期3。在以下表 10B 中給出示例性LID-3模式，其包括治療週期1、治療週期2和治療週期3。本發明進一步涵蓋治療血液系統惡性腫瘤的方法，其包括根據任一以上實施方式的治療週期1，隨後至少一個根據任一以上實施方式的治療週期3。在以下表 10A 中給出示例性LID-3模式，其包括治療週期1和治療週期3。

在具體的實施方式中，能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的分子(例如，PD-1 mAb 1 IgG4)在這類治療週期1的第15天(即，第二A7DP的第1天)施用。如以上提供的，另外劑量的能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的分子Q2W、Q3W或Q4W施用。因此，這種另外的劑量在每個治療週期2、每個治療週期3期間施用，並且可以在施用DART-A的最後劑量之後連續施用。在某些實施方式中，根據治療週期1，DART-A與能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的分子(例如，PD-1 mAb 1 IgG4)結合施用，然後根據治療週期2進一步施用，其中治療週期2可重複，然後根據治療週期3進一步施用。以下表 11B 中給出DART-A與PD-1 mAb 1 IgG4結合施用的示例性給藥方案，其包括治療週期1、治療週期2和治療週期3。在其他實施方式中，不施用治療週期2。因此，在這類實施方式中，根據治療週期1，DART-A與能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的分子(例如，PD-1 mAb 1 IgG4)組合施用，然後根據治療週期3進一步施用。在下表 11A 中給出DART-A與PD-1 mAb 1 IgG4組合施用的示例性給藥方案，其包括治療週期1和治療週期3。在某些實施方式中，治療週期3隨後Q2W、Q3W或Q4W施用一個或多個另外劑量的能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的分子(例如， PD-1 mAb 1 IgG4)。在下表 11A-11B 中給出DART-A與PD-1 mAb 1 IgG4組合施用的示例性給藥方案，其包括在治療週期3後施用另外劑量的PD-1 mAb 1 IgG4 (Q2W)。

在一個實施方式中，能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的分子包括： (a) 派姆單抗的VH結構域和VL結構域； (b) 尼魯單抗的VH結構域和VL結構域； (c) 西米單抗的VH結構域和VL結構域； (c) PD-1 mAb 1的VH結構域和VL結構域； (d) 阿特珠單抗的VH結構域和VL結構域； (e) 阿維魯單抗的VH結構域和VL結構域； (f) 度伐單抗的VH結構域和VL結構域；或 (h)表 3 或表 4 中提供的抗體的VH結構域和VL結構域。

在具體的實施方式中，能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的分子為PD-1 mAb 1 IgG4。在另一個具體的實施方式中，根據任一以上實施方式施用PD-1 mAb 1 IgG4。

在任一以上任何實施方式中，當安排在同一天時，在施用DART-A之前，可通過靜脈內輸注施用能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的分子(例如，PD-1 mAb 1 IgG4)。在任一以上實施方式中，在施用能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的分子(例如，PD-1 mAb 1 IgG4) 的同時可暫停施用DART-A。可替選地，在施用DART-A的同時，通過靜脈內輸注施用能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的分子(例如，PD-1 mAb 1 IgG4)。這種施用可發生在不同位置(例如，DART-A通過IV進入患者的左臂並且能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的分子通過IV進入患者的右臂)，或在相同位置(例如，通過單一IV路線)。

在某些實施方式中，在DART-A施用之前、期間和/或之後，施用一種或多種另外的/可替選的試劑以控制可能發生的輸注相關的反應(“IRR ”)和/或細胞因數釋放綜合症(“CRS ”)。在特定的實施方式中，在施用一種或多種另外的/可替選的試劑以控制IRR和/或CRS的同時，暫停施用DART-A。在某些實施方式中，可以施用一種劑量或多種劑量的如地塞米松(或等效物)的類固醇以控制IRR和/或CRS。在某些實施方式中，可以施用一種劑量或多種劑量的IL-6抑制劑、IL-6R抑制劑、TNFα抑制劑和/或IL-1R抑制劑以控制IRR和/或CRS。

在具體的實施方式中，施用一種劑量或多種劑量的類固醇以控制IRR和/或CRS。類固醇的劑量將被選擇為足夠減弱或消除實際或潛在的IRR和/或CRS。在具體的實施方式中，在I7DP之前、期間和/或之後施用類固醇，在I7DP中根據任一以上實施方式施用DART-A。在另一個具體的實施方式中，在第一(或任何後續的) A7DP之前、期間和/或之後施用類固醇，在A7DP中根據任一以上實施方式施用DART-A。在另一個具體的實施方式中，在第一(或任何後續的) F7DP之前、期間和/或之後施用類固醇，在F7DP中根據任一以上實施方式施用DART-A。在任一以上實施方式中，在施用一種劑量或多種劑量的類固醇以控制IRR和/或CRS的同時，可以暫停施用DART-A。

在一個實施方式中，類固醇為長持續時間的類固醇(具有約48小時或更長的半衰期)，如地塞米松(或等效物)。在另一個實施方式中，類固醇為中等持續時間的類固醇(具有約12-36小時的半衰期)，如甲基潑尼松龍(或等效物)。在另一個實施方式中，類固醇為短持續時間的類固醇(具有約12小時或更少的半衰期)，如氫化可的松(或等效物)。在某些實施方式中，類固醇在DART-A給藥之前(例如，達到30分鐘之前)施用(例如，通過IV 10-20 mg地塞米松)，然後在施用DART-A期間和/或之後施用另外的劑量(例如，在已經開始DART-A給藥之後，通過IV 4 mg 12小時)。如地塞米松(或等效物)的類固醇可在改變DART-A給藥之前(例如，達到30分鐘之前)施用(例如，通過IV 10-20 mg)，隨後在施用改變的DART-A劑量後施用另外的劑量(例如，在開始DART-A給藥後12小時通過IV 4 mg)。

在具體的實施方式中，施用一種劑量或多種劑量的IL-6/IL-6R抑制劑以控制IRR和/或CRS。IL-6/IL-6R抑制劑的劑量將被選擇為足夠減弱或消除實際或潛在的IRR和/或CRS。在具體的實施方式中，在I7DP之前、期間和/或之後施用IL-6/IL-6R抑制劑，在I7DP中根據任一以上實施方式施用DART-A。在另一個具體的實施方式中，在第一(或任何後續的)A7DP之前、期間和/或之後施用IL-6/IL-6R抑制劑，在A7DP中根據任一以上實施方式施用DART-A。在另一個具體的實施方式中，在第一(或任何後續的)F7DP之前、期間和/或之後施用IL-6/IL-6R抑制劑，在F7DP中根據任一以上實施方式施用DART-A。在任一以上實施方式中，在施用一種劑量或多種劑量的IL-6/IL-6R抑制劑以控制IRR和/或CRS的同時，可以暫停施用DART-A。

在一個實施方式中，IL-6/IL-6R抑制劑為抗IL-6或抗IL-6R抗體，例如，托珠單抗 (ACTEMRA®；DrugBank登記號DB06273)、西妥昔單抗 (SYLVANT®；DrugBank登記號DB09036)或克拉紮珠單抗 (clazakizumab )( DrugBank登記號DB12849) (參見，Lee, D.W.等(2014)“Current Concepts In The Diagnosis And Management Of Cytokine Release Syndrome ,” Blood 124(2):188-195；Shimabukuro-Vornhagen, A.等(2018) “Cytokine Release Syndrome, ”J. ImmunoTher. Canc. 656, 第1-14頁)。

在一個實施方式中，IL-6/IL-6R抑制劑為托珠單抗，並且例如通過靜脈內輸注以約4 mg/kg至約12 mg/kg的劑量，並且特別地以約4 mg/kg至約8 mg/kg的劑量施用。在另一個實施方式中，IL-6/IL-6R抑制劑為西妥昔單抗並且例如通過靜脈內輸注以約1 mg/kg至約11 mg/kg的劑量，並且特別地以約11 mg/kg的劑量施用。

在具體的實施方式中，施用一種劑量或多種劑量的TNFα抑制劑以控制IRR和/或CRS。TNFα抑制劑的劑量將被選擇為足夠減弱或消除實際或潛在的IRR和/或CRS。在具體的實施方式中，在I7DP之前、期間和/或之後施用TNFα抑制劑，在I7DP中根據任一以上實施方式施用DART-A。在另一個具體的實施方式中，在第一(或任何後續的)A7DP之前、期間和/或之後施用TNFα抑制劑，在A7DP中根據任一以上實施方式施用DART-A。在另一個具體的實施方式中，在第一(或任何後續的)F7DP之前、期間和/或之後施用TNFα抑制劑，在F7DP中根據任一以上實施方式施用DART-A。在任一以上實施方式中，在施用一種劑量或多種劑量的TNFα抑制劑以控制IRR和/或CRS的同時，可以暫停施用DART-A。

在一個實施方式中，TNFα抑制劑為抗TNFα抗體，例如，阿達木單抗 (adalimumab) (HUMIRA®)或其生物仿製藥(例如，阿達木單抗 - 阿托 (atto) (AMJEVITA®) (Scheinfeld, N. (2003) “Adalimumab (HUMIRA):A Revie w, ” J. Drugs Dermatol. 2(4):375-377；DrugBank登記號DB00051)；賽妥珠單抗 pegol (certolizumab pegol) (CIMZIA®)或其生物仿製藥(Goel, N.等(2010) “Certolizumab pegol ” MAbs.2(2):137-147; DrugBank登記號DB08904)；戈利木單抗 (golimumab) (SIMPONI®)或其生物仿製藥(Mazumdar, S. 等(2009) “Golimumab ,” mAbs.1(5):422-431；DrugBank登記號DB06674)；英利昔單抗 (infliximab) (REMICADE®)或其生物仿製藥(例如，INFLECTRA®, SB2等(Smolen, J.S.(2011) “Infliximab:12 Years Of Experience ,” Arthritis Res.Ther.13(Suppl 1:S2)第1-18頁；Lamb, Y.N.(2017)“SB2:An Infliximab Biosimilar, ” BioDrugs. 31(5):461-464)；DrugBank登記號DB00065)，或為TNFα阻斷受體融合蛋白，例如，依那西普 (etanercept) (ENBREL®)或其生物仿製藥(例如，BENEPALI®,依那西普 -szzs (EREIZI®), GP2015等(Deeks, E.D.(2017) “GP2015:An Etanercept Biosimilar ,” Biodrugs 31:555-558; Cantini, F.等(2018) “Focus On Biosimilar Etanercept – Bioequivalence And Interchangeability ,” Biologics:Targets and Therapy 2018:12 87-95; DrugBank登記號DB00005)。

在一個實施方式中，使用的TNFα抑制劑為阿達木單抗或其生物仿製藥，並且例如通過皮下注射以約40 mg的劑量或以約80 mg的劑量施用。在一個實施方式中，TNFα抑制劑為賽妥珠單抗pegol或其生物仿製藥，並且例如通過皮下注射以約200 mg的劑量施用。在一個實施方式中，TNFα抑制劑為戈利木單抗或其生物仿製藥，並且例如通過皮下注射以約50 mg至約100 mg的劑量施用，或者例如通過靜脈內注射以約50 mg的劑量施用。在一個實施方式中，TNFα抑制劑為英利昔單抗或其生物仿製藥，並且例如通過靜脈內輸注以約100 mg的劑量或以約5 mg/kg體重的劑量施用。在一個實施方式中，TNFα抑制劑為依那西普或其生物仿製藥，並且例如通過皮下注射以約25 mg至約50 mg的劑量施用。

在具體的實施方式中，使用一種劑量或多種劑量的基於IL-1R的抑制劑(例如，阿那白滯素 (anakinra) (KINERET®; DrugBank登記號DB00026)以控制IRR和/或CRS。基於IL-1R的抑制劑的劑量將被選擇為足夠減弱或消除實際或潛在的IRR和/或CRS。在具體的實施方式中，在I7DP之前、期間和/或之後施用基於IL-1R的抑制劑，在I7DP中根據任一以上實施方式施用DART-A。在另一個具體的實施方式中，在第一(或任何後續的) A7DP之前、期間和/或之後施用基於IL-1R的抑制劑，在A7DP中根據任一以上實施方式施用DART-A。在另一個具體的實施方式中，在第一(或任何後續的) F7DP之前、期間和/或之後施用基於IL-1R的抑制劑，在F7DP中根據任一以上實施方式施用DART-A。在任一以上實施方式中，在施用一種劑量或多種劑量的IL-1R抑制劑以控制IRR和/或CRS的同時，可以暫停施用DART-A。

在一個實施方式中，IL-1R抑制劑為阿那白滯素，並且例如通過皮下注射以約100 mg至約150 mg的劑量施用。 VII. 本發明的實施方式

現在已經大體上描述了本發明，通過參考以下編號的實施方式(“E ”)將更容易理解本發明，除非另有說明，否則這些實施方式作為示例提供並且不意欲限制本發明：E1. 一種治療血液系統惡性腫瘤的方法，其包括向需要其的受試者施用CD123 x CD3結合分子，其中： (I) 所述CD123 x CD3結合分子是包含具有SEQ ID NO:21 的氨基酸序列的第一多肽鏈和具有SEQ ID NO:23 的氨基酸序列的第二多肽鏈的雙抗體；以及 (II) 所述方法包括初始7天治療時期(I7DP)，其中： (A) 在所述I7DP的第1天，通過持續靜脈內輸注以約30 ng/kg/天的劑量向所述受試者施用所述CD123 x CD3結合分子； (B) 在所述I7DP的第2天，通過持續靜脈內輸注以約60 ng/kg/天的劑量向所述受試者施用所述CD123 x CD3結合分子； (C) 在所述I7DP的第3天，通過持續輸注以約100 ng/kg/天的劑量向所述受試者施用所述CD123 x CD3結合分子； (D) 在所述I7DP的第4天，通過持續靜脈內輸注以約200 ng/kg/天的劑量向所述受試者施用所述CD123 x CD3結合分子； (E) 在所述I7DP的第5天，通過持續靜脈內輸注以約300 ng/kg/天的劑量向所述受試者施用所述CD123 x CD3結合分子； (F) 在所述I7DP的第6天，通過持續靜脈內輸注以約300 ng/kg/天至約400 ng/kg/天的劑量向所述受試者施用所述CD123 x CD3結合分子；以及 (G) 在所述I7DP的第7天，通過持續靜脈內輸注以約300 ng/kg/天至約500 ng/kg/天的劑量向所述受試者施用所述CD123 x CD3結合分子。E2. 一種用於受試者的血液系統惡性腫瘤的治療的用途的CD123 x CD3結合分子，其中： (I) 所述CD123 x CD3結合分子是包含具有SEQ ID NO:21 的氨基酸序列的第一多肽鏈和具有SEQ ID NO:23 的氨基酸序列的第二多肽鏈的雙抗體；以及 (II) 所述用途包括初始7天治療時期(I7DP)，其中： (A) 在所述I7DP的第1天，通過持續靜脈內輸注以約30 ng/kg/天的劑量向所述受試者施用所述CD123 x CD3結合分子； (B) 在所述I7DP的第2天，通過持續靜脈內輸注以約60 ng/kg/天的劑量向所述受試者施用所述CD123 x CD3結合分子； (C) 在所述I7DP的第3天，通過持續輸注以約100 ng/kg/天的劑量向所述受試者施用所述CD123 x CD3結合分子； (D) 在所述I7DP的第4天，通過持續靜脈內輸注以約200 ng/kg/天的劑量向所述受試者施用所述CD123 x CD3結合分子； (E) 在所述I7DP的第5天，通過持續靜脈內輸注以約300 ng/kg/天的劑量向所述受試者施用所述CD123 x CD3結合分子； (F) 在所述I7DP的第6天，通過持續靜脈內輸注以約300 ng/kg/天至約400 ng/kg/天的劑量向所述受試者施用所述CD123 x CD3結合分子；以及 (G) 在所述I7DP的第7天，通過持續靜脈內輸注以約300 ng/kg/天至約500 ng/kg/天的劑量向所述受試者施用所述CD123 x CD3結合分子。E3. 根據E1 所述的方法或根據E2 所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中在所述方法中或所述用途中包括一個或多個另外的7天治療時期(A7DP)，其中在所述一個或多個A7DP中的每個A7DP的第1-7天，通過持續靜脈內輸注以約300 ng/kg/天至約500 ng/kg/天的劑量向所述受試者施用所述CD123 x CD3結合分子。E4. 根據E1 或E3 中任一項所述的方法或根據E2 或E3 中任一項所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中在所述I7DP的第6天和第7天，以約300 ng/kg/天的劑量向所述受試者施用所述CD123 x CD3結合分子。E5. 根據E3 或E4 中任一項所述的方法或根據E3 或E4 中任一項所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中在所述一個或多個A7DP中的至少一個A7DP的第1-7天，以約300 ng/kg/天的劑量向所述受試者施用所述CD123 x CD3結合分子。E6. 根據E1 或E3 中任一項所述的方法或根據E2 或E3 中任一項所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中在所述I7DP的第6天和第7天，以約400 ng/kg/天的劑量向所述受試者施用所述CD123 x CD3結合分子。E7. 根據E3 或E6 中任一項所述的方法或根據E3 或E6 中任一項所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中在所述一個或多個A7DP中的至少一個A7DP的第1-7天，以約400 ng/kg/天的劑量向所述受試者施用所述CD123 x CD3結合分子。E8. 根據E1 或E3 中任一項所述的方法或根據E2 或E3 中任一項所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中在所述I7DP的第6天，以約400 ng/kg/天的劑量向所述受試者施用所述CD123 x CD3結合分子，並且在所述I7DP的第7天，以約500 ng/kg/天的劑量向所述受試者施用所述CD123 x CD3結合分子。E9. 根據E3 或E8 中任一項所述的方法或根據E3 或E8 中任一項所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中在所述一個或多個A7DP中的至少一個A7DP的第1-7天，以約500 ng/kg/天的劑量向所述受試者施用所述CD123 x CD3結合分子。E10. 根據E3 -E9 中任一項所述的方法或根據E3 -E9 中任一項所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其包括三個所述A7DP。E11. 根據E10 所述的方法或根據E10 所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其包括另外四個、八個、十二個、十六個或二十個所述A7DP。E12. 根據E3 -E11 中任一項所述的方法或根據E3 -E11 中任一項所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中所述一個或多個A7DP中的至少一個A7DP隨後是一個或多個進一步的7天治療時期(F7DP)，其中在所述一個或多個F7DP中的每個F7DP的第1-4天，向所述受試者施用所述CD123 x CD3結合分子，並且在所述一個或多個F7DP中的每個F7DP的第5-7天，所述受試者不被提供所述CD123 x CD3結合分子。E13. 根據E12 所述的方法或根據E12 所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中在所述一個或多個F7DP中的至少一個F7DP的第1-4天，通過持續靜脈內輸注以約300 ng/kg/天至約500 ng/kg/天的劑量向所述受試者施用所述CD123 x CD3結合分子。E14. 根據E13 所述的方法或根據E13 所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中在所述一個或多個F7DP中的至少一個F7DP的第1-4天，以約300 ng/kg/天的劑量向所述受試者施用所述CD123 x CD3結合分子。E15. 根據E13 所述的方法或根據E13 所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中在所述一個或多個F7DP中的至少一個F7DP的第1-4天，以約400 ng/kg/天的劑量向所述受試者施用所述CD123 x CD3結合分子。E16. 根據E13 所述的方法或根據E13 所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中在所述一個或多個F7DP中的至少一個F7DP的第1-4天，以約500 ng/kg/天的劑量向所述受試者施用所述CD123 x CD3結合分子。E17. 根據E12 -E16 中任一項所述的方法或根據E12 -E16 中任一項所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其包括四個所述F7DP。E18. 根據E17 所述的方法或根據E17 所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其包括另外四個、八個、十二個、十六個或二十個所述F7DP。E19. 根據E1 或E3 -E18 中任一項所述的方法或根據E2 -E18 中任一項所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中所述方法或用途進一步包括施用能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的分子，並且其中所述能夠結合PD-1的分子包括結合PD-1的抗體的表位元結合結構域，並且所述能夠結合PD-1的天然配體的分子包括結合PD-1的天然配體的抗體的表位元結合結構域。E20. 根據E19 所述的方法或根據E19 所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中每兩週一次(Q2W)、每三週一次(Q3W)或每四周一次(Q4W)施用所述能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的結合分子。E21. 根據E19 -E20 中任一項所述的方法或根據E19 -E20 中任一項所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中在第15天開始施用所述能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的結合分子。E22. 根據E21 所述的方法或根據E21 所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中在第15天開始Q2W施用所述能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的結合分子。E23. 根據E21 所述的方法或根據E21 所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中在第15天開始Q3W施用所述能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的結合分子。E24. 根據E21 所述的方法或根據E21 所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中在第15天開始Q4W施用所述能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的結合分子。E25. 根據E19 -E24 中任一項所述的方法或根據E19 -E24 中任一項所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中在一個或多個所述F7DP的第1天施用所述能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的結合分子。E26. 根據E19 -E25 中任一項所述的方法或根據E19 -E25 中任一項所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中所述能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的結合分子包括： (a) 派姆單抗的VH結構域和VL結構域； (b) 尼魯單抗的VH結構域和VL結構域； (c) 西米單抗的VH結構域和VL結構域； (c) PD-1 mAb 1的VH結構域和VL結構域； (d) 阿特珠單抗的VH結構域和VL結構域； (e) 阿維魯單抗的VH結構域和VL結構域； (f) 度伐單抗的VH結構域和VL結構域；或 (h) 在表 3 或表 4 中提供的抗體的VH結構域和VL結構域。E27. 根據E26 所述的方法或根據E26 所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中所述能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的分子： (a) 包括PD-1 mAb 1的VH結構域和VL結構域；或 (b) 是PD-1 mAb 1 IgG4。E28. 根據E19 -E27 中任一項所述的方法或根據E19 -E27 中任一項所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中所述能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的結合分子以約1 mg/kg至約3 mg/kg的劑量施用。E29. 根據E19 -E28 中任一項所述的方法或根據E19 -E28 中任一項所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，進一步包括在施用最後劑量的所述CD123 x CD3結合分子之後，施用一種或多種劑量的所述能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的結合分子。E30. 根據E1 、 E3 -E29 中任一項所述的方法或根據E2 -E29 中任一項所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中所述方法或所述用途進一步包括在所述施用所述CD123 x CD3結合分子之前、期間和/或之後通過靜脈內輸注施用皮質類固醇和/或抗IL-6或抗IL-6R抗體。E31. 根據E30 所述的方法或根據E28 所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中所述皮質類固醇選自由地塞米松、甲基潑尼松龍和氫化可的松組成的組。E32. 根據E30 所述的方法或根據E29 所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中所述皮質類固醇是地塞米松。E33. 根據E30 所述的方法或根據E29 所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中所述皮質類固醇是甲基潑尼松龍。E34. 根據E30 所述的方法或根據E29 所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中所述皮質類固醇是氫化可的松。E35. 根據E31 -E32 中任一項所述的方法或根據E31 -E32 中任一項所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中在施用所述CD123 x CD3結合分子之前，以約10 mg至約20 mg的劑量施用地塞米松。E36. 根據E31 -E32 或E35 中任一項所述的方法或根據E31 -E32 或E35 中任一項所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中所述方法和所述用途進一步包括在施用所述CD123 x CD3結合分子期間和/或之後，以約4 mg的劑量施用地塞米松。E37. 根據E1 或E3 -E36 中任一項所述的方法或根據E2 -E36 中任一項所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中所述方法和所述用途進一步包括在施用所述CD123 x CD3結合分子之後，施用抗IL-6或抗IL-6R抗體。E38. 根據E37 所述的方法或根據E37 所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中所述施用的抗IL-6或抗IL-6R抗體是托珠單抗或西妥昔單抗。E39. 根據E38 所述的方法或根據E38 所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中所述施用的抗IL-6R抗體是托珠單抗，並且其中以約4 mg/kg至約8 mg/kg的劑量施用所述托珠單抗。E40. 根據E1 或E3 -E39 中任一項所述的方法或根據E2 -E39 中任一項所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中所述血液系統惡性腫瘤選自以下組成的組中：急性髓細胞白血病(AML)、包括CML的原始細胞危象和與CML相關的阿貝爾森致癌基因(Bcr-ABL易位)的慢性髓細胞性白血病(CML)、脊髓發育不良綜合症(MDS)、急性B淋巴細胞白血病(B-ALL)、急性T淋巴細胞白血病(T-ALL)、包括CLL的裡克特綜合症或裡克特轉化的慢性淋巴細胞性白血病(CLL)、多毛細胞白血病(HCL)、母細胞性漿細胞樣樹突狀細胞腫瘤(BPDCN)、包括套細胞淋巴瘤(MCL)和小淋巴細胞淋巴瘤(SLL)的非霍奇金淋巴瘤(NHL)、霍奇金淋巴瘤、系統性肥大細胞增生症和伯基特淋巴瘤。E41. 根據E40 所述的方法或根據E40 所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中所述血液系統惡性腫瘤是急性髓細胞白血病。E42. 根據E40 所述的方法或根據E40 所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中所述血液系統惡性腫瘤是脊髓發育不良綜合症。E43. 根據E40 所述的方法或根據E40 所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中所述血液系統惡性腫瘤是母細胞性漿細胞樣樹突狀細胞腫瘤。E44. 根據E40 所述的方法或根據E40 所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中所述血液系統惡性腫瘤是急性T淋巴細胞白血病。E45. 根據E40 所述的方法或根據E40 所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中所述血液系統惡性腫瘤是急性B淋巴細胞白血病。E46. 根據E1 或E3 -E45 中任一項所述的方法或根據E2 -E45 中任一項所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中所述受試者是人。 [實施例]

現在已經總體上描述了本發明，通過參考下列實施例將更容易理解本發明，下列實施例通過舉例提供並且不意欲限制本發明，除非另有說明。實施例1原發性 AML 患者樣品中 CD123 x CD3 DART® 分子的活性

研究了DART-A用於殺傷原發性AML患者樣本的表達CD123的細胞的能力。AML患者原代PBMC(包含82%母細胞)用CD123 x CD3 DART®分子、FITC x CD3對照DART®分子或磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)處理144小時。在研究的開始PBMC中如根據母細胞和T細胞百分比確定的，E:T細胞比為近似1:300。白血病母細胞(CD45+/CD33+)的絕對數在圖 2A 中示出。T細胞(CD4+和CD8+)的絕對數在圖 2B 中示出。圖 2C 示出T細胞啟動(CD25表達)。在培養上清液中測量的細胞因數在圖 2D 中示出。實施例2用 DART-A 處理的樣品的特徵

來自AML患者的PBMC樣本從商業來源獲得並且用500 pg/ml、50 pg/ml或5 pg/ml的DART-A處理48小時。測量IFN-γ釋放，並且對於PD-1、PD-L1、CD3、CD4和CD8對細胞進行染色。如在圖 3A 中示出，用DART-A分子孵育的來自AML患者的PBMC樣本中，IFN-γ以劑量依賴性方式被誘導，在CD4⁺ 和CD8⁺ T細胞二者上觀察到PD-1上調(圖 3B )和在AML母細胞上觀察到PD-L1上調(圖 3C )。已經報導，IFN-γ誘導AML母細胞中的PD-L1表達(Kronig等(2014) “Interferon-Induced Programmed Cell Death-Ligand 1 (PD-L1/B7-H1) Expression Increases on Human Acute Myeloid Leukemia Blast Cells During Treatment ,” European Journal of Haematology, 92:195-203))。

在單獨的研究中，商業化的AML-PBMC樣本(在RPMI 1640/10% FBS中)用DART-A分子(以2000 pg/ml、666.67 pg/ml、222.22 pg/ml、74.07 pg/ml、24.69 pg/ml或8.23 pg/ml) +/-抗PD-1 mAb (PD-1 mAb 1 IgG4; 10 µg/ml)孵育48小時或72小時。4420 x CD3對照雙抗體(以2000 pg/ml、666.67 pg/ml或222.22 pg/ml)和抗RSV mAb用作同種型(陰性)對照。檢查CD4⁺ 和CD8⁺ 細胞中PD-1的細胞表面表達並且測定共表達PD-1和CD4⁺ 或CD8⁺ 的細胞的百分比。此外，使用BD™流式微球技術(CBA)試劑盒(BD Biosciences; San Jose, CA)檢測細胞因數並且通過檢測非T細胞的百分比評估細胞殺傷。對於一種這樣的AML-PMBC樣品的PD-1表達在CD4⁺ 細胞(圖 4A CD4⁺ 細胞中的總增長，圖 4B %CD4⁺ PD-1⁺ 細胞)和在CD8⁺ 細胞(圖 4C CD8⁺ 細胞中的總增長，圖 4D %CD8⁺ PD-1⁺ 細胞)中示出，並且說明在抗PD-1抗體檢查點抑制劑存在的情況下，減弱了用DART-A處理造成的CD4⁺ 和CD8⁺ 細胞上PD-1的增加表達。在圖 5A-5D 中給出的資料(在表 5 中總結的)示出許多細胞因數的釋放在體外通過DART-A分子和抗PD-1抗體檢測點抑制劑的組合增強，檢測點抑制劑包括GM-CSF (圖 5A )、INF-γ (圖 5B )、IL-2 (圖 5C )和TNF- α((圖 5D )。這些資料表明，用DART-A分子與能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的分子(這裡是抗PD-1抗體)組合處理AML細胞導致減弱的PD-1表達並且增強的T細胞活性。如在圖 6 中示出，在72小時，在低的DART-A濃度用組合處理的細胞觀察到細胞殺傷的增強。鑒於細胞因數釋放的增加，預期在以後的時間點細胞殺傷的增強將更大。

表 5
細胞因數	DART-A (pg/mL)	用抗 PD-1 抗體的增加 %
48 小時	72 小時
GM-CSF	2000	96.4	122.6
666.67	90.2	108.4
222.22	89.5	105.2
74.07	54.5	75.6
24.69	29.4	81.4
INF-γ	2000	49.5	54.3
666.67	47.1	57.1
222.22	62.0	75.9
74.07	49.2	73.6
24.69	50.9	98.5
IL-2	2000	74.8	92.0
666.67	69.6	76.5
222.22	58.8	63.8
74.07	57.2	60.0
24.69	48.7	64.6
TNF-α	2000	163.8	186.6
666.67	143.3	149.0
222.22	112.9	72.6

這些研究表明，DART-A處理與增強IFN-ɣ分泌、以及T細胞上的PD-1表達和由AML母細胞引起的PD-L1表達的上調相關，該上調可導致對DART-A介導的殺傷不太敏感。這些研究進一步表明，將DART-A療法與結合至PD-1或PD-1的天然配體的分子如抗PD1抗體的組合，增強DART-A分子在介導表達CD123的癌細胞的T細胞重定向殺傷中的效果。在不受任何特定理論束縛的情況下，這種增強可能是由於克服了PD-1檢查點的抑制活性而引起。這種組合在具有表達CD123的血液系統惡性腫瘤(例如，復發的或難治的AML、B-ALL、T-ALL或MDS)的患者中特別地有用。實施例3AML 和 MDS 中初始導入給藥 CD123 x CD3 DART 雙抗體

急性髓細胞白血病(AML)的特徵在於具有高水準CD123、白介素3受體(IL-3Rα)的α鏈的CD34+、CD38-細胞的擴增。CD123在＞90%的AML患者和至少50%的MDS患者中高表達。AML母細胞中CD123的表達與高風險疾病和疾病進展相關，從而使利用CD123靶向方法優先消融成為一種有前途的策略。由於AML母細胞和白血病幹細胞高表達CD123，其與高風險疾病和疾病進展相關，而正常造血幹細胞上CD123的表達最少，因此AML(和脊髓發育不良綜合症(MDS))是基於CD123的免疫療法的合理靶標。

本發明的DART-A分子對於體外靶向表達CD123的細胞系和原發性AML母細胞以被作為效應細胞的表達CD3的T淋巴細胞識別和消除示出強效的活性，並且能夠抑制小鼠中的白血病細胞系的生長且耗竭食蟹獼猴中的CD123陽性的漿細胞樣樹突狀細胞，因此為利用CD123靶向的方法優先消融AML提供了策略。單一患者劑量遞增

為了確定患者對DART-A的耐受性，進行了“單一患者劑量遞增研究 ”。使用3 ng/kg/天、隨後10 ng/kg/天、隨後30 ng/kg/天、隨後100 ng/kg/天的導入給藥策略，用持續IV輸注(CIV)對單一患者微型小組(mini-cohort)給藥，其中如果劑量限制毒性(DLT)小於33%，則每次出現這種劑量進展。如果不良作用(AE)≥等級2，則小組增加到4名患者。這個研究的結果表明，以所有測試劑量都耐受DART-A。初始導入劑量優化

隨後具有細胞因數釋放綜合症(CRS)可能性的細胞因數分泌是T細胞啟動固有的，並且在T細胞重定向療法中具有有限的毒性。在AML和MDS的治療中DART-A介導這種T細胞啟動的能力的第1期研究中，結合以托珠單抗的早期干預，對兩種導入劑量(“LID ”)策略減輕CRS的能力進行了比較(Maude, S.L.等(2014) “Managing Cytokine Release Syndrome Associated with Novel T Cell-Engaging Therapies .”Cancer Journal 20:119–122)。

簡言之，在第一LID策略(“LID-1模式”)中，在初始7天治療時期(“LID-1 ”)期間以100 ng/kg/天施用DART-A 4天，然後暫停3天，並且在第8天開始以小組目標劑量(例如，300 ng/kg/天或500 ng/kg/天)恢復治療。第二LID策略(“LID-2模式”)，包含在初始7天治療時期期間的兩步驟LID (“LID-2 ”)，其中以30 ng/kg/天施用DART-A 3天，隨後以100 ng/kg天施用接下來4天，隨後，三個另外的7天治療時期(每個為“A7DP ”)，其中在第2-4周期間使用持續給藥方案(即，該周的每一天以目標劑量施用DART-A)以小組目標劑量(例如，300-1000 ng/kg/天)施用DART-A，或施用三個進一步的7天治療時期(每個為“F7DP ”)，其中使用間歇給藥方案(即，以小組目標劑量施用DART-A 4天，隨後不施用DART-A暫停3天)以小組目標劑量(例如，300-1000 ng/kg/天)施用DART-A。具體地，在第1週期/第1周(“C1W1 ”)期間，LID-2 模式包含兩步驟LID(即，初始LID 30 ng/kg/天進行3天，隨後第二LID 100 ng/kg/天進行4天)，隨後三個7天治療時期，在此期間在第1週期/第2周–第1週期/第4周(C1W2 -C1W4 )期間，基於給藥方案(連續(A7DP)或間歇(F7DP))中的任一者以小組目標劑量(例如，300-1000 ng/kg/天)施用DART-A。

在第2週期(“C2 ”)，第5周-第8周(W5–W8)及以後，基於4天施用/3天停用的間歇給藥方案以目標劑量治療患者最大12個週期，其中2個週期在完全緩解(“CR ”)或不完全血細胞計數恢復(“CRi ”)之後。如果臨床上表明，則可使用節制激素的(steriod-sparing)抗細胞因數(托珠單抗)療法來控制細胞因數釋放綜合症(“CRS ”)的症狀。疾病狀況通過國際工作組(“IWG ”)標準評估。收集樣本進行藥代動力學(“PK ”)、抗藥物抗體(“PK ”)和細胞因數分析，其包括IL-2、IL-6、IL-8、IL-10、TNFα、IFN-γ和GM-CSF。還可以獲得治療後的骨髓活檢。

表 6 ： LID-2 模式–間歇給藥
時期	治療周	週期天	劑量
週期 1
LID-2	1	第1-3天	30 ng/kg/天
第4-7天	100 ng/kg/天
F7DP 1	2	第8-11天	300-1000 ng/kg/天
第12-14天	無藥物
F7DP 2	3	第15-18天	300-1000 ng/kg/天
第19-21天	無藥物
F7DP 3	4	第22-25天	300-1000 ng/kg/天
第26-28天	無藥物
週期 2 (週期2可重複–達到12次)
F7DP 1	5	第1-3天	300-1000 ng/kg/天
第4-7天	無藥物
F7DP 2	6	第8-11天	300-1000 ng/kg/天
第12-14天	無藥物
F7DP 3	7	第15-18天	300-1000 ng/kg/天
第19-21天	無藥物
F7DP 4	8	第22-25天	300-1000 ng/kg/天
第26-28天	無藥物

在表 6 中匯總了用間歇給藥方案 的LID-2 模式並且在表 7 中匯總了用持續給藥方案 的LID-2 模式。

表 7 ： LID-2 模式–持續給藥
時期	治療周	週期天	劑量
週期 1
LID-2	1	第1-3天	30 ng/kg/天
第4-7天	100 ng/kg/天
A7DP 1	2	第8-14天	300-1000 ng/kg/天
A7DP 2	3	第15-21天	300-1000 ng/kg/天
A7DP 3	4	第22-28天	300-1000 ng/kg/天
週期 2 (週期2可重複–達到12次)
F7DP 1	5	第1-3天	300-1000 ng/kg/天
第4-7天	無藥物
F7DP 2	6	第8-11天	300-1000 ng/kg/天
第12-14天	無藥物
F7DP 3	7	第15-18天	300-1000 ng/kg/天
第19-21天	無藥物
F7DP 4	8	第22-25天	300-1000 ng/kg/天
第26-28天	無藥物

在用間歇給藥方案的LID-2 模式和用持續給藥方案的LID-2 模式二者中，持續治療直至達到以下任一條件：(1)完全回應(complete response)、(2)達到完全回應後的1-2個週期、(3)最多12個週期、(4)劑量限制性毒性(“DLT ”)，或(5)治療失敗。CRS優選地根據Lee標準分級(Lee, D.W.等(2014) . “Current Concepts In The Diagnosis And Management Of Cytokine Release Syndrome ,” Blood. 124:188-195; Shimabukuro-Vornhagen, A.等， (2018) “Cytokine Release Syndrome ,” J. ImmunoTher. Canc. 656, 第1-14頁)。回應(完全緩解(CR)、不完全血球計數恢復(Cri)、部分緩解(PR)或外周血和骨髓(PB/BM) AML母細胞計數的改善)優選地通過國際工作組(International Working Group)IWG (AML)或IPSS (MDS)標準評估。

在導入劑量策略的評估中，測量細胞因數(IL-2、IL-6、IL-8、IL-10、TNFα、IFN-γ和GM-CSF)，並對CRS嚴重程度分級。評估了在第一劑量開始的10天內發生的首次報告的CRS事件期間的峰值細胞因數值。比較用LID和不用LID的患者之間的中位峰值細胞因數水準。評估了其他潛在的CRS決定因素。

患者的(76％)發生了輸注相關的反應(IRR)/CRS，大多數事件(82％)≤等級(Gr) 2，是可控制的且可逆的。在具有完整細胞因數資料的29名患者中，68%的患者在DART-A療法開始的2天內經歷了CRS，另外8%的患者在DART-A療法開始的10天內經歷了CRS(14% Gr 1、55% Gr 2和7% Gr 3)。在具有CRS的患者中的細胞因數水準總體高於不具有CRS的患者(中值IL-6，116.2 pg/mL對67.9 pg/mL；IL-8，191.1 pg/mL對144.6 pg/mL；IL-10，867.6 pg/mL對348.7 pg/mL)，並且通常隨著CRS等級的提高而更高。使用兩步驟LID (LID-2)降低了總體細胞因數水準，在第1周LID-2的規則使在週期1期間的嚴重程度降低了平均0.54等級(平均CRS等級，LID-2對LID-1分別為：第1周，1.16對2；第2周，1對1.33；第3周，0.67對0.83；第4周，0.13對0.67)。在第1周期間且達到最大劑量後，用LID-2觀察到的中位峰值細胞因數水準較低。初步資料顯示第1周期間的基線迴圈T細胞數量與最大CRS等級之間的關係，其中第1周的CRS更高等級(≥2)與迴圈T細胞的更高基線水準相關。評估的其他變數不隨CRS等級變化。CRS等級和頻率與回應無關。圖 7 顯現了研究參與者展現的CRS等級的概況，並示出在施用步進目標劑量(例如，500 ng/kg/天)之前，引入兩步驟LID-2 模式 (30 ng/kg/天持續3天，隨後100 ng/kg/天持續接下來的4天)，在第一個研究週期(28天)內降低CRS。

一旦已經確定最大耐受劑量(“MTDS ”)或最大施用劑量(“MAD ”)，劑量擴大發生在一個擴大小組中展現出復發的/難治的(“R/R ”) AML的患者中和在第二擴大小組中具有低甲基化失效MDS的患者中。登記的另外的患者用於評估功效。

具有R/R AML/MDS (89% AML和11% MDS)的四十五名(45)患者(平均年齡64(29-84)和44%女性)用DART-A處理。MTDS 在500 ng/kg/天達到。總體來說，DART-A證實，在20/45 (44%)患者中觀察到可控制的毒性(藥物相關的不良事件≥G3；輸注相關的反應/細胞因數釋放綜合症(“IRR/CRS ”)是最常見的毒性，並且在34/45 (76%)患者(在6/45中G3，13%)中觀察到)。最頻繁的CRS綜合症是發熱(15)、寒冷(10)、心跳過速(10)和低血壓(4)。十四名(14)以閾值500 ng/kg/天劑量小組(cohort)和超過(700 ng/kg/天劑量小組)閾值治療的患者完成至少一個治療週期和進行治療後的骨髓活檢。57% (8/14)患者中記錄抗白血病活性，6/14達到IWG標準(3 CR、1 Cri、1 MLF (無形態學白血病)、1 PR)的43%的目標響應率(ORR)，並且2名患者具有穩定的病情且BM母細胞從基線減少20%和25% (圖 8 )。母細胞減少經常在一個週期的治療內迅速發生，且除了DART-A中止以外繼續。

另外的患者使用LID-2 模式 (30 ng/kg/天進行3天，隨後100 ng/kg/天進行 4天)，隨後在第8-28天500 ng/kg/天的劑量(持續給藥方案(表 7 ))給藥。圖 9 示出DART-A抗白血病活性(以25名患者繪圖)和表 8 示出來自使用LID-2以持續給藥方案給藥的31名患者的患者CRS等級(表 7 )。

表 8 ：患者 CRS 等級
(n=31)	N (%)
1等級	8/31 (25.8%)
2等級	18/31 (58.1%)
3等級	4/31 (12.9%)

表 9 示出來自這些相同患者的事件的CRS等級。圖 10 繪製每個等級CRS持續時間(天)並且示出CRS事件的中值持續時間通常在1-2.5天之間(CRS 等級1事件：1天；CRS 等級2事件：2天；CRS 等級3事件：2.5天)。然而，大多數事件(62.0%，111/179)在第一周內(導入劑量)和在以500 ng/kg/天持續施用期間在週期1的第二周內遞升至500 ng/kg/天期間發生(圖 11 )。這種反應可導致治療延期或治療的中止並且可減少劑量強度。

表 9 ：事件的 CRS 等級
總共=189	%
等級1	56.1%
等級2	41.3%
等級3	2.6%

實施例4進一步導入劑量優化

實施了第三多步驟導入給藥策略(“LID-3 模式 ”)，用於施用DART-A以進一步減輕CRS，尤其是在治療的前兩周期間。

在多步驟LID-3 模式中，使用多步驟遞升劑量增加施用DART-A，每個持續約24小時，直到達到目標劑量(約300 ng/kg/天至約500 ng/kg/天)，此後，在第一周(即，初始7天治療時期(I7DP))的剩餘時間內以目標劑量施用DART-A，隨後三個另外的7天治療時期(每個為“A7DP”)，其中使用持續給藥方案以目標劑量(例如，約300 ng/kg/天、約400 ng/kg/天或約500 ng/kg/天)施用DART-A。例如，在目標劑量為約500 ng/kg/天的情況下，將使用多步驟給藥增加以如下劑量給藥DART-A：約30 ng/kg/天、約60 ng/kg/天、約100 ng/kg/天、約200 ng/kg/天、約300 ng/kg/天、約400 ng/kg/天，每個24小時。在I7DP的第7天，劑量將增加至約500 ng/kg/天，並且作為持續輸注施用3個一周的A7DP(即，第2-4周(第8-28天))。I7DP和前三個A7DP一起組成了28天第一個治療週期(治療週期1)。在施用治療週期1後，未達到CR(完全回應)、CRi(具有不完全血液學改善的完全回應)、CRh(具有部分血液學恢復的完全回應)或MLF(無形態學白血病狀態)的患者可使用持續給藥方案通過施用一個或多個28天的第二治療週期(“治療週期2”)以目標劑量施用另外的DART-A。四個A7DP，其中使用持續給藥方案以小組目標劑量(例如，約300-500 ng/kg/天)施用DART-A，組成治療週期2。治療週期2可重複達到5次。

此後，患者，尤其是施用單獨的治療週期1或治療週期1與治療週期2組合施用後達到CR、Cri、CRh或MLF的那些患者使用進一步的7天治療時期 (F7DP)治療，其中DART-A以目標劑量施用4天，然後暫停3天，其中不施用DART-A(即基於4天施用/3天停用的方案)。四個F7DP組成了28天的第三治療週期(治療週期3)。治療週期3可重複達到六次。

表 10A 提供了LID-3模式的給藥方案，其中I7DP具有約500 ng/kg/天、約400 ng/kg/天和約300 ng/kg/天的目標劑量，隨後是以目標劑量的三個A7DP(即，治療週期1)，然後是以目標劑量的四個F7DP(即，治療週期3)。表 10B 提供了LID-3 模式的給藥方案，其中治療週期1隨後是以目標劑量的四個另外的A7DP(即，治療週期2)並且治療週期2隨後是四個F7DP(即，治療週期3)。

表 10A ： DART-A LID-3 給藥方案 ǂ
DART-A目標劑量 ng/kg/天	500	400	300
時期	治療周	週期天	ng/kg/天	ng/kg/天	ng/kg/天
治療週期1
I7DP	1	第1天	30	30	30
第2天	60	60	60
第3天	100	100	100
第4天	200	200	200
第5天	300	300	300
第6天	400	400	300
第7天	500	400	300
A7DP 1	2	第8-14天	500	400	300
A7DP 2	3	第15-21天	500	400	300
A7DP 3	4	第22-28天	500	400	300
治療週期3 (示出一個治療週期3，但可包括達到6個，如果合適)
F7DP 1	5	第1-4天	500	400	300
第5-7天	無藥物	無藥物	無藥物
F7DP 2	6	第8-11天	500	400	300
第12-14天	無藥物	無藥物	無藥物
F7DP 3	7	第15-18天	500	400	300
第19-21天	無藥物	無藥物	無藥物
F7DP 4	8	第22-25天	500	400	300
第26-28天	無藥物	無藥物	無藥物

ǂ所有劑量 ±10%

表 10B ： DART-A LID-3 給藥方案 ǂ
DART-A目標劑量 ng/kg/day	500	400	300
時期	治療周	週期天	ng/kg/天	ng/kg/天	ng/kg/天
治療週期1
I7DP	1	第1天	30	30	30
第2天	60	60	60
第3天	100	100	100
第4天	200	200	200
第5天	300	300	300
第6天	400	400	300
第7天	500	400	300
A7DP 1	2	第8-14天	500	400	300
A7DP 2	3	第15-21天	500	400	300
A7DP 3	4	第22-28天	500	400	300
治療週期 2 (示出一個治療週期2，但可包括達到5個，如果合適)
A7DP 4	5	第1-7天	500	400	300
A7DP 5	6	第8-14天	500	400	300
A7DP 6	7	第15-21天	500	400	300
A7DP 7	8	第22-28天	500	400	300
治療週期3 (示出一個治療週期3，但可包括達到6個，如果合適)
F7DP 1	9	第1-4天	500	400	300
第5-7天	無藥物	無藥物	無藥物
F7DP 2	10	第8-11天	500	400	300
第12-14天	無藥物	無藥物	無藥物
F7DP 3	11	第15-18天	500	400	300
第19-21天	無藥物	無藥物	無藥物
F7DP 4	12	第22-25天	500	400	300
第26-28天	無藥物	無藥物	無藥物

ǂ所有劑量 ±10%

如地塞米松(或等效物)的類固醇可在DART-A給藥之前(例如，達到30分鐘之前)施用(例如，通過IV 10-20 mg)，在施用DART-A後，隨後另外的劑量(例如，在開始DART-A給藥後12小時通過IV 4 mg)。如地塞米松(或等效物)的類固醇也可在改變DART-A給藥之前(例如，達到30分鐘之前)施用(通過IV 10-20 mg)，在施用改變的DART-A劑量後，隨後另外的劑量(例如，在開始DART-A給藥後12小時通過IV 4 mg)。

如果臨床上表明，則使用節制激素的抗細胞因數，尤其是抗IL-6/抗IL-6R(托珠單抗或西妥昔單抗)療法來控制CRS症狀。疾病狀況通過IWG標準評估。具體地，可以施用托珠單抗(通過IV 4-8 mg/kg)。

可用於控制CRS症狀，尤其是對於抗IL-6/抗IL-6R治療(例如，托珠單抗)難治的CRS的其他試劑，包括進一步施用皮質類固醇(例如，地塞米松或等效物)，這種施用可以以更高劑量(例如，30 mg或更大的地塞米松的劑量)。可以採用抗-TNFα劑，如依那西普(或等效物)。具體地，可施用依那西普(例如，通過皮下注射(SC)50 mg)。

圖 12A 呈現了使用多步驟LID-3模式(I7DP，目標劑量500 ng/kg/天，隨後以目標劑量三周持續給藥 (A7DP1-A7DP3))在施用DART-A治療的治療週期1期間，由16名研究參與者展現出的中值IRR/CRS等級的概況。圖 12B 比較了來自使用多步驟LID-3模式施用DART-A的參與者的IRR/CRS等級資料，以及使用一步驟LID (LID-1模式)和兩步驟LID (LID-2模式)施用DART-A的受試者的IRR/CRS等級資料。如在圖 12A-12B 中所示，在達到最大劑量後，與用1步驟LID-1和2步驟LID-2觀察到的那些相比，在第1周、第2周和第3周期間，用多步驟LID-3觀察到的中值IRR/CRS等級較低。另外，如在圖 13A-13B 中所示，多步驟LID-3模式的使用改善了通過最小化由於IRR和/或CRS事件引起的劑量中斷而獲得的平均劑量強度。在週期1期間，在30名患者中，使用2步驟LID-2施用DART-A僅達到目標最大劑量強度(DI)的58.8%的平均值(圖 13A )。相反，在週期1期間，在30名患者中，使用多步驟LID-3模式施用DART-A達到目標最大劑量強度(DI)的80.6%的平均值(圖 13B )。因此，多步驟LID-3模式的使用顯著地增加了如通過增加的平均劑量強度所反映的接受目標最大值的患者的安全性特徵和數目。

總之，CRS是T細胞定向療法的限制因素。採用的兩步驟LID-2示出在減少IRR和/或CRS事件和迴圈細胞因數的有效性方面超過單步驟LID-1，並且多步驟LID-3在限制IRR和/或CRS事件和嚴重性方面提供了進一步改善。此外，當使用多步驟LID-3模式用DART-A治療時，更多的患者接受500 ng/kg/天的期望最高劑量強度。如以下更詳細地提供的，多步驟LID-3給藥策略可適於包括施用另外的治療劑。實施例5組合給藥方案

如以上提供的，DART-A療法可以與能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的分子(例如，抗PD-1抗體)組合施用，以增強DART-A分子在介導表達CD123的癌細胞的T細胞重定向殺傷中的作用。因此，根據以下描述的任何給藥模式，DART-A可以與能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的分子如PD-1 mAb 1 IgG4(或本文所述的其他抗體)組合施用，以治療血液系統惡性腫瘤(例如，復發的或難治的AML、B-ALL、T-ALL或MDS)。

儘管以下方案詳述了DART-A與示例性抗PD-1抗體“PD-1 mAb 1 IgG4”組合使用，但根據本文的教導應理解，可使用DART-A與其他能夠結合PD-1或PD-1天然配體的分子(例如，本文提供的任何抗PD-1抗體或抗B7-H1抗體)組合設計類似的組合方案。

在組合給藥治療方案中，如以上所述，使用多個遞升劑量增量施用DART-A，直到達到目標劑量(例如，約300 ng/kg/天至約500 ng/kg/天)，此後，第一周(即，初始7天治療時期(I7DP))的剩餘時間以目標劑量施用DART-A，隨後三個另外的7天治療時期(每個為“A7DP”)，其中使用持續給藥方案以目標劑量(例如，約300 ng/kg/天、約400 ng/kg/天或約500 ng/kg/天)施用DART-A(即，該周的每一天以目標劑量施用)。例如，在目標劑量約為500 ng/kg/天的情況下，將使用多步驟增量以如下劑量給藥DART-A：約30 ng/kg/天、約60 ng/kg/天、約100 ng/kg/天、約200 ng/kg/天、約300 ng/kg/天、約400 ng/kg/天，每個24小時。在I7DP的第7天，劑量將增加至約500 ng/kg/天，並且作為持續輸注施用3個一周的A7DP(即，第2-4周(第8-28天))。I7DP和前三個A7DP一起組成了28天的第一治療週期(治療週期1)。

在施用治療週期1後，未達到CR(完全回應)、CRi(具有不完全血液學改善的完全回應)、CRh(具有部分血液學恢復的完全回應)或MLF(無形態學白血病狀態)的患者可使用持續給藥方案通過施用一個或多個28天的第二治療週期(“治療週期2”)以目標劑量施用另外的DART-A。四個A7DP，其中使用持續給藥方案以小組目標劑量(例如，約300 ng/kg/天至約500 ng/kg/天) 施用DART-A，組成治療週期2。治療週期2可重複達到5次。

此後，患者，尤其是施用單獨的治療週期1或治療週期1與治療週期2組合施用後達到CR、Cri、CRh或MLF的那些使用進一步的7天治療時期 (F7DP)治療，其中DART-A以目標劑量施用4天，然後暫停3天，其中不施用DART-A(即基於4天施用/3天停用的方案)。四個F7DP組成了28天的第三治療週期(治療週期3)。

在治療週期1-3期間，在第15天(即第3周的第1天)開始，每兩週一次(“Q2W ”)以約3 mg/kg的劑量施用PD-1 mAb 1 IgG4。此後，另外的PD-1 mAb 1 IgG4可以基於Q2W方案以約3 mg/kg的劑量施用。如果確定在用300 ng/kg/天DART-A與3 mg/kg PD-1 mAb 1 IgG4組合治療的受試者中超過了最大耐受劑量(“MTD”)，則可利用劑量遞減(de-escalation)以評估與300 ng/kg/天DART-A組合的較低劑量的PD-1 mAb 1 IgG4(約1 mg/kg)。通常，當安排在同一天時，在施用DART-A之前，PD-1 mAb 1 IgG4通過靜脈內輸注施用。因此，在施用PD-1 mAb 1 IgG4的同時，可暫停DART-A的施用。可替選地，在施用DART-A的同時，通過靜脈內輸注施用PD-1 mAb 1 IgG4。這種施用可在不同的位置(例如，DART-A通過IV進入患者的左臂並且PD-1 mAb 1 IgG4通過IV進入患者的右臂)或在同一位置(例如，通過單一IV路線)發生。

表 11A 提供了組合給藥治療方案的給藥方案，其中具有約500 ng/kg/天、約400 ng/kg/天和約300 ng/kg/天的目標劑量的I7DP，隨後是以目標劑量的三個A7DP(即，治療週期1)，然後是以目標劑量的四個F7DP(即，治療週期3)。在治療週期1的第15天(即第二個A7DP的第1天)、在治療週期3的第1和15天(即，第一個F7DP的第1天和第三個F7DP的第1天)開始每兩週一次(“Q2W ”)以約3 mg/kg的劑量施用PD-1 mAb 1 IgG4。如所示，此後可基於Q2W方案以3 mg/kg的其他劑量施用PD-1 mAb 1 IgG4。如上所述，PD-1 mAb 1 IgG4可以以1 mg/kg的遞減劑量施用。

表11B 提供了組合給藥治療方案的給藥方案，其中治療週期1隨後以目標劑量的四個另外的A7DP(即，治療週期2)，和治療週期2隨後是四個F7DP(即，治療週期3)。在包含治療週期2的給藥方案中，在治療週期1的第15天(即第二個A7DP的第1天)、在每個治療週期2的第1和15天(即，每個治療週期2的第一個A7DP的第1天和第三個A7DP的第1天)和在治療週期3的第1和15天(即，第一個F7DP的第1天和第三個F7DP的第1天)開始每兩週一次(“Q2W ”)以約3 mg/kg的劑量施用PD-1 mAb 1 IgG4。如所示，此後可基於Q2W方案以3 mg/kg的其他劑量施用PD-1 mAb 1 IgG4。如上所述，PD-1 mAb 1 IgG4可以以1 mg/kg的遞減劑量施用。

表11A：組合給藥方案ǂ
PD-1 mAb 1 IgG1目標劑量	3 mg/kg	3 mg/kg	3 mg/kg
DART-A目標劑量	500	400	300
時期	治療周	週期天	ng/kg/天	ng/kg/天	ng/kg/天
治療週期1
I7DP	1	第1天	30	30	30
第2天	60	60	60
第3天	100	100	100
第4天	200	200	200
第5天	300	300	300
第6天	400	400	300
第7天	500	400	300
A7DP 1	2	第8-14天	500	400	300
A7DP 2	3	第15†-21天	500	400	300
A7DP 3	4	第22-28天	500	400	300
治療週期3
F7DP 1	5	第1**-4天	500	400	300
第5-7天	無藥物	無藥物	無藥物
F7DP 2	6	第8-11天	500	400	300
第12-14天	無藥物	無藥物	無藥物
F7DP 3	7	第15**-18天	500	400	300
第19-21天	無藥物	無藥物	無藥物
F7DP 4	8	第22-25天	500	400	300
第26-28天	無藥物	無藥物	無藥物
以3 mg/kg的另外的劑量的PD-1 mAb 1 IgG4，Q2W (如果合適可施用高達24劑量)

ǂ 所有劑量±10% † 在治療週期1的第15天施用PD-1 mAb 1 IgG4 ** 在治療週期3的第1和15天施用PD-1 mAb 1 IgG4

表 11B ：組合給藥方案 ǂ
PD-1 mAb 1 IgG1目標劑量	3 mg/kg	3 mg/kg	3 mg/kg
DART-A目標劑量	500	400	300
時期	治療周	週期天	ng/kg/天	ng/kg/天	ng/kg/天
治療週期1
I7DP	1	第1天	30	30	30
第2天	60	60	60
第3天	100	100	100
第4天	200	200	200
第5天	300	300	300
第6天	400	400	300
第7天	500	400	300
A7DP 1	2	第8-14	500	400	300
A7DP 2	3	第15†-21天	500	400	300
A7DP 3	4	第22-28天	500	400	300
治療週期 2 (示出一個治療週期2，但可包括達到5個，如果合適)
A7DP 4	5	第1‼-7天	500	400	300
A7DP 5	6	第8-14天	500	400	300
A7DP 6	7	第15‼-21天	500	400	300
A7DP 7	8	第22-28天	500	400	300
治療週期3
F7DP 1	9	第1**-4天	500	400	300
第5-7天	無藥物	無藥物	無藥物
F7DP 2	10	第8-11天	500	400	300
第12-14天	無藥物	無藥物	無藥物
F7DP 3	11	第15**-18天	500	400	300
第19-21天	無藥物	無藥物	無藥物
F7DP 4	12	第22-25天	500	400	300
第26-28天	無藥物	無藥物	無藥物
以3 mg/kg的另外的劑量的PD-1 mAb 1 IgG4，Q2W (如果合適可施用高達24劑量)

ǂ所有劑量 ±10% †在治療週期1的第15天施用PD-1 mAb 1 IgG4 ‼ 在每個治療週期2的第1和15天施用PD-1 mAb 1 IgG4 ** 在治療週期3的第1和15天施用PD-1 mAb 1 IgG4

在以上提供的給藥方案中，應理解，在開始給定的A7DP和/或F7DP中和/或在施用PD-1 mAb 1 IgG4的劑量中，約1天至約3天(即，±1-3天)的窗口(window)是可接受的，尤其是在第21天之後。

如地塞米松(或等效物)的類固醇可在DART-A給藥之前(例如，達到30分鐘之前)施用(例如，通過IV 10-20 mg)，在施用DART-A後，隨後另外的劑量(例如，在開始DART-A給藥後12小時通過IV 4 mg)。如地塞米松(或等效物)的類固醇可在改變DART-A給藥之前(例如，達到30分鐘之前)施用(例如，通過IV 10-20 mg)，在施用改變的DART-A劑量後，隨後另外的劑量(例如，在開始DART-A給藥後12小時通過IV 4 mg)。

可用於控制CRS症狀，尤其是抗IL-6/抗IL-6R治療(例如，托珠單抗)難治的CRS的其他試劑，包括進一步施用皮質類固醇(例如，地塞米松或等效物)，這種施用可以以更高劑量(例如，30 mg或更大的地塞米松的劑量)。可以採用抗-TNFα劑，如依那西普(或等效物)。具體地，可施用依那西普(例如，通過皮下注射(SC)50 mg)。

如以上提供的，特別地考慮了能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的其他分子(例如，派姆單抗、尼魯單抗、阿維魯單抗、度伐單抗等)可與DART-A組合施用。具體地，這種分子可以與DART-A組合施用，其中DART-A根據表 10A-10B 或表 11A-11B 施用，並且能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的分子根據護理標準或批准的給藥方案施用(例如，派姆單抗的批准的給藥方案為200 mg的靜脈內施用，Q3W)。

本說明書中提及的所有出版物和專利以相同的程度通過引用併入本文，如同每個單獨的出版物或專利申請被明確且單獨地指出以其全部內容通過引用併入一樣。儘管本發明已經結合其具體實施方式進行了描述，但是應當理解它能進一步改變，並且本申請意欲涵蓋本發明的任何變化、用途或調整，其總體上遵循本發明的原理並且包括落入本發明所屬領域內的已知或慣用實踐內的並且可適用於前文所提出的實質特徵的這種偏離。

無

圖 1 顯示如DART-A的兩鏈CD123 x CD3雙特異性雙抗體的第一和第二多肽鏈的整體結構。

圖 2A-2D 示出本發明的CD123 x CD3 DART®分子對AML患者的PMBC的活性。原代PBMC (包含82%母細胞)用DART-A、FITC x CD3對照DART®分子或磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)處理144小時。在研究的開始，如PBMC中母細胞和T細胞的百分比確定的，E:T細胞比為近似1:300。圖 2A ：白血病母細胞(CD45+/CD33+)的絕對數；圖 2B ：T細胞(CD4+和CD8+)的絕對數；圖 2C ：T-細胞啟動(CD25表達)；圖 2D ：在培養上清液中測量的細胞因數。

圖 3A-3C 示出來自AML患者的PBMC和母細胞的分析。圖 3A 示出在用5、50或500 pg/ml DART-A孵育48小時之後的IFN-γ釋放。圖 3B 示出在用5、50或500 pg/ml DART-A孵育48小時之後CD4⁺ 和CD8⁺ T細胞的細胞表面上的PD-1上調。圖 3C 示出在用DART-A孵育48小時之後AML母細胞的表面上的PD-L1上調。

圖 4A-4D 分別示出在用具有或不具有抗PD-1 mAb (PD-1 mAb 1 IgG4；10 μg/ml)的DART-A (8.23、24.69、74.07、222.22、666.67或2000 pg/ml)或同種型對照抗體孵育之後，從代表性AML-PMBC樣本獲得的CD4⁺ T細胞(圖 4A 和圖 4B )或CD8⁺ T細胞(圖 4C 和圖 4D )上的PD-1的細胞表面表達和陽性百分比。

圖 5A-5 D示出在用具有或不具有抗PD-1 mAb (PD-1 mAb 1 IgG4；10 μg/ml)的DART-A (8.23、24.69、74.07、222.22、666.67或2000 pg/ml)或同種型對照抗體孵育48小時或72小時之後，來自AML-PBMC的代表性樣本的GM-CSF (圖 5A )、IFN-γ(圖 5B )、IL-2 (圖 5C )和TNF-α(圖 5D )的體外釋放。

圖6示出在用具有或不具有抗PD-1 mAb (PD-1 mAb 1 IgG4；10μg/ml)的DART-A (8.23、24.69、74.07、222.22、666.67或2000 pg/ml)體外處理72小時之後，從AML-PBMC獲得的非T細胞殺傷的增強。

圖 7 示出使用一步驟(LID-1模式(Schema))或兩步驟(LID-2模式)導入給藥策略施用DART-A的參與者在第一個四周期間表現出的CRS等級的概況。

圖 8 示出以≥500 ng/kg/天治療的接受至少一個治療週期並且具有治療後骨髓活檢的14名患者的抗白血病活性(CR，完全回應(Complete Response)；CRm，分子CR；CRi，具有不完全血液學改善的完全回應；MLF，無形態學白血病狀態；PR，部分回應(Partial Response)；SD/OB，穩定疾病/其他抗白血病益處；PD，進行性疾病)。

圖 9 示出使用持續劑量方案以500 ng/kg/天的目標劑量LID-2治療的34名可評估響應的患者的抗白血病活性(表 7 ) (CR，完全回應；CRi，具有不完全血液學改善的完全回應；MLF=無形態學白血病狀態；PR，部分回應；SD，穩定疾病；PD，進行性疾病)。

圖 10 顯示按等級的CRS事件的中值(median)持續時間。CRS等級1事件：1天；CRS等級2事件：2天；CRS等級3事件：2.5天。

圖 11 示出使用兩步驟導入劑量(即，30 ng/kg/天進行3天，隨後100 ng/kg/天進行4天)的前兩周以及另外的7天治療時期(A7DP)的第一周，每位元患者的CRS事件數目減少，在此期間劑量維持在500 ng/kg/天的目標劑量。在治療的前八周內，繪製了隨時間每位元患者的CRS事件數目(左軸)和治療的患者數目(右軸)。

圖 12A-12B 示出使用不同的導入給藥策略由施用DART-A的參與者展現出的CRS等級的概況。圖 12A 繪製使用多步驟LID-3模式(I7DP，目標劑量500 ng/kg/天)隨後三周以目標劑量持續給藥(A7DP 1- A7DP 3)施用DART-A的8名研究參與者展現出的平均IRR/CRS等級。圖 12B 還繪製使用多步驟、一步驟(LID-1模式)和兩步驟(LID-2模式)導入給藥策略展現出的平均IRR/CRS等級。

圖 13A-13B 繪製使用不同導入劑量策略在週期1期間施用的DART-A的平均劑量強度(實線)。圖 13A 繪製使用兩步驟LID-2模式向30名患者施用的DART-A的平均劑量強度。圖 13B 繪製使用多步驟LID-3模式向30名患者施用的DART-A的平均劑量強度，並且示出達到平均80.6% 的500 ng/kg/天的所需峰值劑量強度。每個步驟的目標最大劑量強度由虛線表示。

Claims

一種治療血液系統惡性腫瘤的方法，其包括向需要其的受試者施用CD123 x CD3結合分子，其中： (I) 所述CD123 x CD3結合分子是包含具有SEQ ID NO:21 的氨基酸序列的第一多肽鏈和具有SEQ ID NO:23 的氨基酸序列的第二多肽鏈的雙抗體；以及 (II) 所述方法包括初始7天治療時期(I7DP)，其中： (A) 在所述I7DP的第1天，通過持續靜脈內輸注以約30 ng/kg/天的劑量向所述受試者施用所述CD123 x CD3結合分子； (B) 在所述I7DP的第2天，通過持續靜脈內輸注以約60 ng/kg/天的劑量向所述受試者施用所述CD123 x CD3結合分子； (C) 在所述I7DP的第3天，通過持續輸注以約100 ng/kg/天的劑量向所述受試者施用所述CD123 x CD3結合分子； (D) 在所述I7DP的第4天，通過持續靜脈內輸注以約200 ng/kg/天的劑量向所述受試者施用所述CD123 x CD3結合分子； (E) 在所述I7DP的第5天，通過持續靜脈內輸注以約300 ng/kg/天的劑量向所述受試者施用所述CD123 x CD3結合分子； (F) 在所述I7DP的第6天，通過持續靜脈內輸注以約300 ng/kg/天至約400 ng/kg/天的劑量向所述受試者施用所述CD123 x CD3結合分子；以及 (G) 在所述I7DP的第7天，通過持續靜脈內輸注以約300 ng/kg/天至約500 ng/kg/天的劑量向所述受試者施用所述CD123 x CD3結合分子。
一種用於受試者的血液系統惡性腫瘤的治療的用途的CD123 x CD3結合分子，其中： (I) 所述CD123 x CD3結合分子是包含具有SEQ ID NO:21 的氨基酸序列的第一多肽鏈和具有SEQ ID NO:23 的氨基酸序列的第二多肽鏈的雙抗體；以及 (II) 所述用途包括初始7天治療時期(I7DP)，其中： (A) 在所述I7DP的第1天，通過持續靜脈內輸注以約30 ng/kg/天的劑量向所述受試者施用所述CD123 x CD3結合分子； (B) 在所述I7DP的第2天，通過持續靜脈內輸注以約60 ng/kg/天的劑量向所述受試者施用所述CD123 x CD3結合分子； (C) 在所述I7DP的第3天，通過持續輸注以約100 ng/kg/天的劑量向所述受試者施用所述CD123 x CD3結合分子； (D) 在所述I7DP的第4天，通過持續靜脈內輸注以約200 ng/kg/天的劑量向所述受試者施用所述CD123 x CD3結合分子； (E) 在所述I7DP的第5天，通過持續靜脈內輸注以約300 ng/kg/天的劑量向所述受試者施用所述CD123 x CD3結合分子； (F) 在所述I7DP的第6天，通過持續靜脈內輸注以約300 ng/kg/天至約400 ng/kg/天的劑量向所述受試者施用所述CD123 x CD3結合分子；以及 (G) 在所述I7DP的第7天，通過持續靜脈內輸注以約300 ng/kg/天至約500 ng/kg/天的劑量向所述受試者施用所述CD123 x CD3結合分子。
如請求項1所述的方法或如請求項2所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中在所述方法中或所述用途中包括一個或多個另外的7天治療時期(A7DP)，其中在所述一個或多個A7DP中的每個A7DP的第1-7天，通過持續靜脈內輸注以約300 ng/kg/天至約500 ng/kg/天的劑量向所述受試者施用所述CD123 x CD3結合分子。
如請求項1或3中任一項所述的方法或如請求項2或3中任一項所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中在所述I7DP的第6天和第7天，以約300 ng/kg/天的劑量向所述受試者施用所述CD123 x CD3結合分子。
如請求項3或4中任一項所述的方法或如請求項3或4中任一項所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中在所述一個或多個A7DP中的至少一個A7DP的第1-7天，以約300 ng/kg/天的劑量向所述受試者施用所述CD123 x CD3結合分子。
如請求項1或3中任一項所述的方法或如請求項2或3中任一項所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中在所述I7DP的第6天和第7天，以約400 ng/kg/天的劑量向所述受試者施用所述CD123 x CD3結合分子。
如請求項3或6中任一項所述的方法或如請求項3或6中任一項所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中在所述一個或多個A7DP中的至少一個A7DP的第1-7天，以約400 ng/kg/天的劑量向所述受試者施用所述CD123 x CD3結合分子。
如請求項1或3中任一項所述的方法或如請求項2或3中任一項所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中在所述I7DP的第6天，以約400 ng/kg/天的劑量向所述受試者施用所述CD123 x CD3結合分子，並且在所述I7DP的第7天，以約500 ng/kg/天的劑量向所述受試者施用所述CD123 x CD3結合分子。
如請求項3或8中任一項所述的方法或如請求項3或8中任一項所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中在所述一個或多個A7DP中的至少一個A7DP的第1-7天，以約500 ng/kg/天的劑量向所述受試者施用所述CD123 x CD3結合分子。
如請求項3-9中任一項所述的方法或如請求項3-9中任一項所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其包括三個所述A7DP。
如請求項10所述的方法或如請求項10所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其包括另外四個、八個、十二個、十六個或二十個所述A7DP。
如請求項3-11中任一項所述的方法或如請求項3-11中任一項所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中所述一個或多個A7DP中的至少一個A7DP隨後是一個或多個進一步的7天治療時期(F7DP)，其中在所述一個或多個F7DP中的每個F7DP的第1-4天，向所述受試者施用所述CD123 x CD3結合分子，並且在所述一個或多個F7DP中的每個F7DP的第5-7天，所述受試者不被提供所述CD123 x CD3結合分子。
如請求項12所述的方法或如請求項12所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中在所述一個或多個F7DP中的至少一個F7DP的第1-4天，通過持續靜脈內輸注以約300 ng/kg/天至約500 ng/kg/天的劑量向所述受試者施用所述CD123 x CD3結合分子。
如請求項13所述的方法或如請求項13所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中在所述一個或多個F7DP中的至少一個F7DP的第1-4天，以約300 ng/kg/天的劑量向所述受試者施用所述CD123 x CD3結合分子。
如請求項13所述的方法或如請求項13所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中在所述一個或多個F7DP中的至少一個F7DP的第1-4天，以約400 ng/kg/天的劑量向所述受試者施用所述CD123 x CD3結合分子。
如請求項13所述的方法或如請求項13所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中在所述一個或多個F7DP中的至少一個F7DP的第1-4天，以約500 ng/kg/天的劑量向所述受試者施用所述CD123 x CD3結合分子。
如請求項12-16中任一項所述的方法或如請求項12-16中任一項所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其包括四個所述F7DP。
如請求項17所述的方法或如請求項17所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其包括另外四個、八個、十二個、十六個或二十個所述F7DP。
如請求項1或3-18中任一項所述的方法或如請求項2-18中任一項所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中所述方法或用途進一步包括施用能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的分子，並且其中所述能夠結合PD-1的分子包括結合PD-1的抗體的表位元結合結構域，並且所述能夠結合PD-1的天然配體的分子包括結合PD-1的天然配體的抗體的表位元結合結構域。
如請求項19所述的方法或如請求項19所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中每兩週一次(Q2W)、每三週一次(Q3W)或每四周一次(Q4W)施用所述能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的結合分子。
如請求項19-20中任一項所述的方法或如請求項19-20中任一項所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中在第15天開始施用所述能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的結合分子。
如請求項21所述的方法或如請求項21所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中在第15天開始Q2W施用所述能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的結合分子。
如請求項19-23中任一項所述的方法或如請求項19-23中任一項所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中在一個或多個所述F7DP的第1天施用所述能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的結合分子。
如請求項19-23中任一項所述的方法或如請求項19-23中任一項所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中所述能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的結合分子包括： (a) 派姆單抗的VH結構域和VL結構域； (b) 尼魯單抗的VH結構域和VL結構域； (c) 西米單抗的VH結構域和VL結構域； (c) PD-1 mAb 1的VH結構域和VL結構域； (d) 阿特珠單抗的VH結構域和VL結構域； (e) 阿維魯單抗的VH結構域和VL結構域； (f) 度伐單抗的VH結構域和VL結構域；或 (h) 在表 3 或表 4 中提供的抗體的VH結構域和VL結構域。
如請求項24所述的方法或如請求項24所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中所述能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的結合分子是PD-1 mAb 1 IgG4。
如請求項19-25中任一項所述的方法或如請求項19-25中任一項所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中所述能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的結合分子以約1 mg/kg至約3 mg/kg的劑量施用。
如請求項19-26中任一項所述的方法或如請求項19-26中任一項所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，進一步包括在施用最後劑量的所述CD123 x CD3結合分子之後，施用一種或多種劑量的所述能夠結合PD-1或PD-1的天然配體的結合分子。
3-27中任一項所述的方法或如請求項2-27中任一項所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中所述方法或所述用途進一步包括在所述施用所述CD123 x CD3結合分子之前、期間和/或之後通過靜脈內輸注施用皮質類固醇和/或抗IL-6或抗IL-6R抗體。
如請求項1或3-28中任一項所述的方法或如請求項2-28中任一項所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中所述血液系統惡性腫瘤選自以下組成的組中：急性髓細胞白血病(AML)、包括CML的原始細胞危象和與CML相關的阿貝爾森致癌基因(Bcr-ABL易位)的慢性髓細胞性白血病(CML)、脊髓發育不良綜合症(MDS)、急性B淋巴細胞白血病(B-ALL)、急性T淋巴細胞白血病(T-ALL)、包括CLL的裡克特綜合症或裡克特轉化的慢性淋巴細胞性白血病(CLL)、多毛細胞白血病(HCL)、母細胞性漿細胞樣樹突狀細胞腫瘤(BPDCN)、包括套細胞淋巴瘤(MCL)和小淋巴細胞淋巴瘤(SLL)的非霍奇金淋巴瘤(NHL)、霍奇金淋巴瘤、系統性肥大細胞增生症和伯基特淋巴瘤。
如請求項29所述的方法或如請求項29所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中所述血液系統惡性腫瘤是急性髓細胞白血病。
如請求項29所述的方法或如請求項29所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中所述血液系統惡性腫瘤是脊髓發育不良綜合症。
如請求項29所述的方法或如請求項29所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中所述血液系統惡性腫瘤是母細胞性漿細胞樣樹突狀細胞腫瘤。
如請求項29所述的方法或如請求項29所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中所述血液系統惡性腫瘤是急性T淋巴細胞白血病。
如請求項29所述的方法或如請求項29所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中所述血液系統惡性腫瘤是急性B淋巴細胞白血病。
如請求項1或3-34中任一項所述的方法或如請求項2-34中任一項所述的用於所述用途的CD123 x CD3結合分子，其中所述受試者是人。