TW202039005A - 新穎之抑制細胞生長的整合素配體綴合物 - Google Patents

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Abstract

本發明係有關一種新穎醫藥化合物，其包含αvβ3整合素拮抗劑、由可被彈性蛋白酶裂解之L-Val-L-Pro-L-Asp組成之鏈結單位、聚乙二醇(PEG)間隔基、及細胞毒性單元，並有關其製法、其於治療、預防或處理人類與其他哺乳動物之疾病與病症(包括如：癌症之過度增生性病變)上之用途。

Description

新穎之抑制細胞生長的整合素配體綴合物
本發明係有關一種新穎醫藥化合物，其包含αvβ3整合素拮抗劑、由可被彈性蛋白酶裂解之L-Val-L-Pro-L-Asp組成之鏈結單位、聚乙二醇(PEG)間隔基、及細胞毒性單元，並有關其製法、其於治療、預防或處理人類及其他哺乳動物之疾病及病症(包括如癌症之過度增生性病變)上之用途。
癌症的化學治療經常伴隨嚴重副作用，其歸因於化學治療劑對腫瘤組織以外之其他組織型態之增生細胞的毒性作用。許多年來，科學家們已致力於改良所使用活性化合物之選擇性問題。經常採行的方法為合成在標靶組織中具有或多或少的選擇性釋放之前藥，例如藉由改變pH(DE-A 42 29 903)，利用酵素(例如：葡糖醛酸苷酶；EP-A 511 917及595 133)或利用抗體-酵素綴合物(WO 88/07378；US 4 975 278；EP-A 595 133)。此等方法的問題之一特別在於該綴合物在其他組織與器官中缺乏安定性，以及特別是活性化合物在腫瘤組織中之細胞外釋放所造成的普遍活性化合物分佈。
20(S)-喜樹鹼為在1966年由Wall等人單離的五環植物鹼(J.Am.Chem.Soc.88,3888(1966))。其在許多活體外及活體內試驗具有高度抗腫瘤活性潛力。然而，不幸的是，因為毒性與溶解性問題，其無法在臨床研究階段展現穩健的潛力。
藉由打開E環內酯及形成鈉鹽，可以得到pH依賴性平衡之呈封環型的水溶性化合物。而其臨床試驗亦尚未成功。
Figure 108139645-A0202-12-0002-1
約20年後，已發現該生物活性係受到拓樸異構酶I的酵素抑制。因此再度展開積極研究，而發現喜樹鹼衍生物，其溶解性較高且較可以耐受，且具活體內活性。
為了改良水溶解性，具有可離子化基團之A-環-及B-環經修飾之喜樹鹼衍生物之鹽類與20-O-醯基衍生物之鹽類已有說明(US 4 943 579)。後來前藥概念亦轉移到經修飾之喜樹鹼衍生物(WO 96/02546)。然而所說明之20-O-醯基前藥，在活體內的半衰期非常短，且會極快裂解成母結構。
整合素為存在於細胞表面上之雜二聚體跨膜蛋白質，其在細胞對細胞外母質的附著性扮演重要角色。其等可透過出現在細胞外醣蛋白(如細胞外母質上之纖維網蛋白或玻連蛋白)上的RGD序列，來辨識此等細胞外蛋白質(RGD為胺基酸序列精胺酸-甘胺酸-天冬胺酸之單字母代碼)。
通常，整合素(舉例來說例如：玻連蛋白受體，其亦稱為αvβ3受體，或αvβ5受體或GpIIb/IIIa受體)在例如細胞轉移、血管新生及細胞-基質附著等生物過程中扮演重要角色，因此對以此等過程為關鍵步驟的疾病很重要。例如可為癌症、骨質疏鬆症、動脈硬化、術後再狹窄及眼炎。
αvβ3受體大量發生在如生長中之內皮細胞，使其等可能附著在細胞外基質。αvβ3受體因此在血管新生作用(亦即形成新血管)中扮演重要角色，其係癌病變中之腫瘤生長與形成轉移的關鍵前提。
阻斷上述受體可能顯示為治療此類型病變的起點。若藉由阻斷其對應的整合素受體(例如利用環狀肽或單株抗體)來壓制生長中之內皮細胞與細胞外基質之附著，就不會發生血管新生作用，而造成腫瘤生長的中止或消退(參見例如：Brooks等人之Cell 79,1157-1164(1994))。
WO 98/10795說明一種綴合物，其中由靶向腫瘤之分子與官能單位鏈結(舉例來說例如是細胞生長抑制劑或可檢測之標記(舉例來說例如是放射活性核種))。特言之，舉例來說例如具有上述RGD序列之肽的整合素拮 抗劑，係被描述作為靶向腫瘤或腫瘤基質之分子。阿黴素(doxorubicin)被描述為細胞生長抑制劑的實例，該細胞生長抑制劑係鏈結這種針對腫瘤之分子。
以WO 98/10795之化合物為例，進行該鏈結，使得該針對腫瘤的分子與官能單位在保留其個別性質下直接彼此鍵結(參見例如：p.56,1.17至p.58,1.10，及實例6)。其結果為此等化合物的確藉由該針對腫瘤之實體之結合能力而選擇性集中在緊鄰腫瘤細胞附近(以具有αvβ3整合素-拮抗作用之基團為例，係與特別在由新血管形成作用所形成之新生內皮細胞上所表現之αvβ3整合素受體結合)，但由於直接組合，以致於例如細胞生長抑制劑之官能單位無法釋入腫瘤組織之細胞內空間。
基本上，綴合物一方面藉由出現在綴合物中針對αvβ3或αvβ5整合素受體之部份的影響而選擇性集中在腫瘤組織，另一方面則包含可從綴合物釋放之細胞生長抑制劑，而應對腫瘤組織具有更高之毒性基團效應，因為其比WO 98/10795說明之綴合物更有可能對腫瘤細胞產生直接抑制細胞生長作用。特定言之，若細胞生長抑制劑在緊鄰腫瘤組織附近或甚至在腫瘤細胞中釋放時，此等毒性基團效應及腫瘤選擇性應該甚至更高。
WO 00/69472中揭示酵素活化之抗腫瘤前藥化合物，其等可被膠原蛋白酶(IV)及彈性蛋白酶特異性裂解。關於可被彈性蛋白酶裂解之鏈結單位態樣，此申請案因此說明合適之特異性四肽序列Ala-Ala-Pro-Val及Ala-Ala-Pro-Nva。此外，在此參考文獻中，未提及包含針對αvβ3整合素受體之基團及細胞生長抑制劑之綴合物。
Y.Liu等人(Mol.Pharmaceutics 2012,9,168)說明奧瑞他汀類(Auristatins)之綴合物，其係利用可被豆莢蛋白(legumain)裂解之鏈結子鏈結αvβ3整合素靶向基團。
EP 1 238 678中揭示與細胞毒性劑之綴合物，其靶向αvβ3整合素且具有可被彈性蛋白酶特異性裂解之肽鏈結子。關於可被彈性蛋白酶特異性裂解之鏈結單位之態樣，此申請案說明包含Pro-Val及Pro-Leu之合適肽序列。其舉例說明喜樹鹼及喹諾酮羧酸作為毒性基團部份。
此等綴合物之特別挑戰包括
●在適當媒劑中足以進行靜脈內投藥之充份溶解性，
●完整綴合物之腫瘤高穿透性，
●於血漿中之高安定性，以避免全身性脫離綴合，
●對腫瘤微環境中對標靶受體之充份結合性，
●可被腫瘤微環境中之酵素有效裂解，
●已裂解的毒性基團部份之高安定性及細胞通透性，以便在相對於再分佈下，可加強腫瘤細胞吸收。
因此，本發明目的之一在於發展綴合物，其包含針對αvβ3整合素受體之基團及較佳會在腫瘤微環境中從綴合物釋出之細胞生長抑制劑，其中綴合物中針對αvβ3整合素受體之基團保有其與αvβ3整合素受體結合之能力，因此讓此等化合物具有組織選擇性。此外，綴合物之可裂解性及藥物釋放應受到腫瘤環境中存在之酵素及其活化所介導，如嗜中性球彈性蛋白酶。最後，毒性基團之型態應配合細胞外裂解及釋放機制，其配合方式應使得其可以高度通透進入腫瘤細胞及組織，而非藥物轉運蛋白之受質。
本發明係有關一種醫藥化合物，其為包含αvβ3整合素拮抗劑、可被彈性蛋白酶選擇性裂解之鏈結單位、聚乙二醇(PEG)間隔基、與細胞毒性單元(毒性基團)之綴合物。綴合物具有腫瘤特異性作用，因為其利用可被彈性蛋白酶(亦即特別出現在腫瘤基質中之酵素)選擇性裂解之較佳鏈結單位來鏈結αvβ3整合素拮抗劑。該較佳鏈結單位提供該細胞生長抑制劑與αvβ3整合素拮抗劑之綴合物於生物介質(例如：培養基或血清)中之充份安定性，同時因其可被特異性酵素性或水解性裂解釋放細胞生長抑制劑，而在腫瘤組織中提供所需細胞內作用。
特定言之，本發明化合物顯示以下有利之特色：
●以脲鏈結置換硫脲鏈結後，改良綴合物之安定性
●使用7-乙基喜樹鹼作為特別合適毒性基團部份
○有利地影響例如：內酯環安定性(Drugs Fut 2002,27(9),869)
○高度細胞通透性及低流出量(相較於例如：SN38)
●經修飾之間隔基對溶解性、整合素結合親和性、彈性蛋白酶可裂解性具有有利影響
●相對於直接投藥，投與綴合物後，可使毒性基團累積在腫瘤
●對各種不同腫瘤模式有優異治療作用。
基於此目標，7-乙基喜樹鹼特別適用為上述綴合物之毒性基團部份。
圖1：實例1與EP1 238 678之實例1在使用腎癌細胞株786-O，使用或不使用彈性蛋白酶處理下之劑量效應曲線之比較
圖2：7-乙基喜樹鹼於37℃人類血漿中之安定性
圖3：喜樹鹼於37℃人類血漿中之安定性
本發明提供一種式(I)化合物
CT-LI-SP-IA (I)
其中CT 為單價基團，其來自細胞毒性基團、細胞生長抑制劑之基團、及細胞生長抑制劑衍生物之基團之群組中，其可分別額外帶有羥基、羧基或胺基，LI 為如下式的二價肽基團：-L-Val-L-Pro-L-Asp-，SP 為如下式之基團：-C=O-(CH2)x-O-(CH2-CH2-O)y-CH2-CH2-NH-C=O-，其中x=1至5及y=0至15，IA 為針對αvβ3整合素受體之單價基團，及其鹽類、溶劑合物、及該等鹽類之溶劑合物。
二價肽基團LI可以利用其N端或C端位置與CT或SP結合。較佳係LI利用其C端位置與CT結合，而利用其N端位置與SP結合。
本發明進一步提供一種通式(Ia)化合物
Figure 108139645-A0202-12-0006-2
 其中x為1至5及y=0至15，及其鹽類、溶劑合物、及鹽類之溶劑合物。
較佳係指式(I)或(Ia)中x為1至4之化合物，更佳為式(Ia)中x為1至2之化合物，最佳為式(Ia)中x為2之化合物。
較佳係指式(I)或(Ia)中y為0至10之化合物，更佳為式(Ia)中y為0至5之化合物，最佳為式(Ia)中y為2之化合物。
較佳係指式II化合物：
Figure 108139645-A0202-12-0007-3
 及其鹽類、溶劑合物、及該等鹽類之溶劑合物。
本發明內容中，鹽類較佳為本發明化合物之生理上可接受之鹽類。亦包括本身不適合醫藥用途，但可用於例如：單離、純化或儲存本發明化合物之鹽類。
本發明化合物之生理上可接受之鹽類尤其包括礦物酸、羧酸及磺酸之酸加成鹽類，例如：鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、萘二磺酸、甲酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、琥珀酸、富馬酸、馬來酸、乳酸、酒石酸、蘋果酸、檸檬酸、葡糖酸、苯甲酸、及撲酸(embonic acid)等之鹽類。
此外，本發明化合物之生理上可接受之鹽類亦包括衍生自習知鹼類之鹽類，較佳實例為鹼金屬鹽類(例如：鈉鹽及鉀鹽)、鹼土金屬鹽類(例如：鈣鹽及鎂鹽)、鋅鹽及衍生自氨或具有1至20個碳原子之有機胺(較佳實例為乙基胺、二乙基胺、三乙基胺、N,N-乙基二異丙基胺、單乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、二甲基胺基乙醇、二乙基胺基乙醇、參(羥甲基)胺基甲烷、膽鹼、苯扎氯銨(benzalkonium)、普魯卡因(procaine)、二苯甲基胺、二環己基胺、N-甲基嗎啉、N-甲基哌啶、精胺酸、離胺酸及1,2-乙二胺)之銨鹽。
鹽類較佳為式(II)化合物之二鈉鹽。
於本發明內容中，溶劑合物係指彼等由本發明化合物與溶劑分子配位形成之固態或液態複合物型式。水合物為與水配位之溶劑合物的特定型式。本發明內容中之溶劑合物較佳為水合物。
本發明亦包括本發明化合物之所有合適同位素變異體。咸了解，本發明化合物之同位素變體係指為本發明化合物中至少一個原子被另一個原子置換的化合物，該另一個原子的原子序與天然界中常見或主要出現的原子相同，但原子量不同。可納入本發明化合物中之同位素實例包括氫、碳、氮、氧、磷、硫、氟、氯、溴、與碘等的同位素，例如2H(氘)、3H(氚)、13C、14C、15N、17O、18O、32P、33P、33S、34S、35S、36S、18F、36Cl、82Br、123I、124I、129I與131I。本發明化合物之特定同位素變異體，尤指彼等其中已納入一個或多個放射性同位素者，可能比較有利於例如：用於探討體內作用機制或體內活性成份分佈；基於相當容易之製法及可檢測度，尤以標記3H、14C與/或18F同位素之化合物係適合本目的。此外，納入例如氘同位素，可能因化合物代謝安定性提高而得到特別治療效益，例如：延長其在體內之半衰期，或降低所需活性成份之劑量。因此，本發明化合物之此等修飾法亦可能構成本發明之較佳實施例。本發明化合物之同位素變異體可依熟悉此相關技藝之人士習知之方法製備，例如下文說明之方法及操作實例中所說明之方法，在其中採用經過相應同位素修飾之特定試劑及/或起始化合物製備。
本發明綴合物(例如實例1)之合成法係示於下列反應式中。
反應式1：αvß3整合素配體之合成法：
Figure 108139645-A0202-12-0009-4
亦可在不同步驟上，利用掌性管柱(chiral column)來分離對映異構物。
反應式2：使用7-乙基喜樹鹼合成αvß3整合素綴合物：
Figure 108139645-A0202-12-0010-41
治療方法：
本發明亦有關一種使用該等化合物及其組成物治療哺乳動物過度增生性病變之方法。此方法包括對有此需要之哺乳動物(包括人類)投與治療該病變有效量之化合物。過度增生性病變包括(但不限於)：實體腫瘤，如：乳房、呼吸道、腦、生殖器官、消化道、泌尿道、眼部、肝臟、皮膚、頭與頸、甲狀腺、副甲狀腺等癌症及其遠距轉移。彼等病變亦包括淋巴瘤、肉瘤、及白血病。
乳癌實例包括(但不限於)：侵襲性乳管惡性腫瘤、侵襲性乳葉惡性腫瘤、原位乳管惡性腫瘤、及原位乳葉惡性腫瘤。
呼吸道癌症實例包括(但不限於)：小細胞與非小細胞肺惡性腫瘤，及支氣管腺瘤與胸膜肺母細胞瘤。
腦癌實例包括(但不限於)：腦幹與下視丘神經膠質瘤、小腦與腦星細胞瘤、髓母細胞瘤、室管膜瘤，及神經外胚層與松果體腫瘤。
男性生殖器官腫瘤包括(但不限於)：攝護腺與睪丸癌。女性生殖器官腫瘤包括(但不限於)：子宮內膜、子宮頸、卵巢、陰道、與外陰部癌，及子宮之肉瘤。
消化道腫瘤包括(但不限於)：肛門、結腸、結腸直腸、食道、膽囊、胃、胰臟、直腸、小腸、與唾液腺的癌症。
泌尿道腫瘤包括(但不限於)：膀胱、陰莖、腎臟、腎盂、子宮、及尿道等癌症。
眼部癌症包括(但不限於)：眼內黑色素瘤及視網膜母細胞瘤。
肝臟癌症實例包括(但不限於)：肝細胞惡性腫瘤(出現或未出現纖維薄層變異之肝細胞惡性腫瘤)、膽管惡性腫瘤(肝內膽管惡性腫瘤)，及混合肝細胞膽管惡性腫瘤。
皮膚癌症包括(但不限於)：鱗狀細胞惡性腫瘤、卡波西氏肉瘤(Kaposi’s sarcoma)、惡性黑色素瘤、默克細胞(Merkel cell)皮膚癌、與非黑色素瘤皮膚癌。
頭與頸部癌症包括(但不限於)：喉/下咽/鼻咽/口咽的癌症，及唇與口腔的癌症。
淋巴瘤包括(但不限於)：AIDS相關淋巴瘤、非霍奇金氏(non-Hodgkin’s)淋巴瘤、皮膚T細胞淋巴瘤、霍奇金氏症(Hodgkin’s disease)、中樞神經系統淋巴瘤。
肉瘤包括(但不限於)：軟組織肉瘤、骨肉瘤、惡性纖維組織肉瘤、淋巴肉瘤、與橫紋肌肉瘤。
白血病包括(但不限於)：急性骨髓性白血病、急性淋巴母細胞性白血病、慢性淋巴細胞性白血病、慢性骨髓性白血病、與毛細胞白血病。
此等病變已在人類中詳細判別特徵，而且亦在其他哺乳動物中出現類似病因學，並可藉由投與本發明醫藥組成物來治療。
依據已知用於分析適用於治療過度增生性病變之化合物之標準實驗室技術，採用標準毒性試驗及採用用於判斷治療哺乳動物已判別之上述病症之標準藥理分析法，及藉由比較此等結果與用於治療此等病症之已 知醫藥之結果，即很容易決定本發明化合物治療各所需適應症之有效劑量。用於投藥治療其中一種病症之活性成份用量可以隨諸如：所使用特定化合物與劑量單位、投藥模式、治療時間期、所治療患者之年齡與性別、及所治療病症之性質與程度等考量，有很大變化。
活性成份之總投藥量一般範圍將為每天約0.001mg/kg至約200mg/kg體重內，而較佳係每天約0.01mg/kg至約20mg/kg體重。臨床上適用之投藥療程將在每天投藥1至3次至每4週投藥一次之範圍內。此外，可能有「停藥期」，其中患者在一段時間期內不接受投藥，有利於藥理效果與耐受性之間的平衡。單位劑量可能包含約0.5mg至約1500mg活性成份，且可以每天投藥一次或多次或少於一天一次。採用注射法(包括靜脈內、肌內、皮下、與非經腸式注射)及採用輸注技術投藥之平均每日劑量較佳係0.01至200mg/kg總體重。平均每日直腸劑量療程較佳係0.01至200mg/kg總體重。平均每日陰道劑量療程較佳係0.01至200mg/kg總體重。平均每日局部劑量療程較佳係每天投藥1至4次之0.1至200mg。穿皮式濃度較佳係要求維持每日劑量0.01至200mg/kg。平均每日吸入式劑量療程較佳係0.01至100mg/kg總體重。
每位患者之特定初始與後續劑量療程當然將會隨參與之診斷人員所判斷之病症性質與嚴重性、所採用特定化合物之活性、患者之年齡與一般條件、投藥時間、投藥途徑、藥物之排除速率、藥物組合、及類似因素等等變化。習此相關技藝之人士採用一般治療試驗即可決定所需之治療模式與本發明化合物或其醫藥上可接受之鹽或酯或組成物之劑量數量。
本發明進一步提供一種以本發明化合物於製備供治療上述病變之醫藥組成物上之用途。
投藥法
根據本發明化合物可能具有全身及/或局部活性。因此，其等可依合適方式投藥，如，例如：經口、非經腸式、經肺、鼻、舌下、舌部、頰、直腸、陰道、皮膚、穿皮式、結膜、耳朵等途徑，或呈植入物或人工支架。
針對此等投藥途徑，根據本發明化合物可以適當的投藥型式投與。
經口投藥時，根據本發明化合物可調配成相關技藝已知可快速及/或依修飾方式傳遞本發明化合物之劑型，如，例如：錠劑(無包衣或有包衣錠劑，例如：包覆腸溶性包衣或可延緩溶解或不溶解以控制釋放之包衣)、可於口腔中崩解之錠劑、膜衣錠/嚼錠(wafer)、膜衣錠/凍乾物、膠囊(例如：硬式或軟式明膠囊)、糖衣錠、粒劑、丸劑、粉劑、乳液、懸浮液、氣霧劑或溶液。根據本發明化合物可能呈結晶與/或非晶型與/或溶解型納入該等劑型中。
非經腸式投藥法可繞過吸收步驟進行(例如：經靜脈內、經動脈內、經心臟內、經脊柱內或經腰椎內)，或包括吸收作用進行(例如：經肌內、皮下、皮內、經皮膚、或經腹膜內)。適合非經腸式投藥之投藥劑型特別包括呈溶液、懸浮液、乳液、凍乾物或無菌粉末之注射與輸液製劑。
其他合適的投藥途徑實例為：吸入式藥物形式(特別指粉劑吸入式、霧化器)、鼻用滴劑、鼻用溶液、鼻用噴液；經舌部、舌下或頰內投藥之錠劑/膜衣錠/嚼錠/膠囊；栓劑；滴眼劑、眼藥膏、洗眼液、眼植入劑、耳滴劑、耳噴液、耳粉劑、耳洗液、耳棉條；陰道用膠囊、水性懸浮液(洗劑、搖溶混合物)、親脂性懸浮液、乳液、油膏、乳霜、穿皮式醫療系統(舉例而言例如貼布)、乳劑、糊劑、泡沫劑、灑粉、植入物或人工支架。
根據本發明之化合物可納入上述投藥型式中。其可依本身已知方式，與醫藥上合適之賦形劑混合來達成。醫藥上合適之賦形劑特別包括：
●填料與載劑(例如：纖維素、微晶纖維素(如，例如：Avicel®)、乳糖、甘露糖醇、澱粉、磷酸鈣(如，例如：Di-Cafos®))，
●油膏基質(例如：凡士林、石蠟、三酸甘油酯、蠟類、羊毛蠟、羊毛蠟醇類、羊毛脂、親水性油膏、聚乙二醇)，
●栓劑基質(例如：聚乙二醇、可可脂、硬脂)，
●溶劑(例如：水、乙醇、異丙醇、甘油、丙二醇、中鏈三酸甘油酯、脂肪油、液態聚乙二醇、石蠟)，
●界面活性劑、乳化劑、勻散劑或濕化劑(例如：十二烷基硫酸鈉、卵磷脂、磷脂類、脂肪醇(舉例而言例如Lanette®)、山梨糖醇酐脂肪酸酯類(舉例而言例如Span®)、聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯類(舉例而言例如Tween®)、聚氧乙烯脂肪酸甘油酯類(舉例而言例如Cremophor®)、聚氧乙烯脂肪酸酯類、聚氧乙烯脂肪醇醚類、甘油脂肪酸酯類、泊洛沙姆(poloxamer)(舉例而言例如Pluronic®))，
●緩衝劑、酸類與鹼類(例如：磷酸鹽、碳酸鹽、檸檬酸、乙酸、鹽酸、氫氧化鈉溶液、碳酸銨、三羥基胺基甲烷、三乙醇胺)，
●等滲劑(例如：葡萄糖、氯化鈉)，
●吸附劑(例如：高分散性矽石)，
●提高黏度劑、凝膠形成劑、增稠劑與/或結合劑(例如：聚乙烯吡咯啶酮、甲基纖維素、羥基丙基甲基纖維素、羥基丙基纖維素、羧甲基纖維素鈉、澱粉、卡波姆(carbomer)、聚丙烯酸(舉例而言例如Carbopol®)；藻酸鹽、明膠)，
●崩解劑(例如：改質澱粉、羧甲基纖維素鈉、澱粉乙醇酸鈉(舉例而言例如Explotab®)、交聯聚乙烯吡咯啶酮、交聯羧甲纖維素鈉(舉例而言例如AcDiSol®))，
●流動調節劑、潤滑劑、助滑劑與釋模劑(例如：硬脂酸鎂、硬脂酸、滑石、高分散性矽石(舉例而言例如Aerosil®))，
●包衣劑(例如：糖、蟲膠)及可以快速或以修飾方式溶解之膜衣或擴散膜之膜形成劑(例如：聚乙烯吡咯啶酮(舉例而言例如Kollidon®)、聚乙烯醇、羥基丙基甲基纖維素、羥基丙基纖維素、乙基纖維素、羥基丙基甲基纖維素酞酸酯、纖維素乙酸酯、纖維素乙酸酯酞酸酯、聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯(舉例而言例如：Eudragit®))，
●膠囊材料(例如：明膠、羥基丙基甲基纖維素)，
●合成性聚合物(例如：聚丙交酯、聚乙交酯、聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯(舉例而言例如Eudragit®)、聚乙烯吡咯啶酮(舉例而言例如Kollidon®)、 聚乙烯醇、聚乙酸乙烯酯、聚環氧乙烷、聚乙二醇及其共聚物與嵌段共聚物)，
●增塑劑(例如：聚乙二醇、丙二醇、甘油、三乙酸甘油酯、三乙醯基檸檬酸酯、酞酸二丁酯)，
●滲透加強劑，
●安定劑(例如：抗氧化劑，舉例而言例如抗壞血酸、棕櫚酸抗壞血基酯、抗壞血酸鈉、丁基羥基苯甲醚、丁基羥基甲苯、沒食子酸丙基酯)，
●防腐劑(例如：對羥基苯甲酸酯、山梨酸、硫柳汞、氯化烷基二甲基苄基銨(benzalkonium chloride)、醋酸氯己定(chlorhexidine acetate)、苯甲酸鈉)，
●著色劑(例如：無機色素，舉例而言例如氧化鐵、二氧化鈦)，
●風味劑、甜味劑、味道與/或氣味遮蔽劑。
本發明進一步有關一種醫藥組成物，其包含至少一種根據本發明化合物，通常共同使用一種或多種醫藥上合適之賦形劑，及其根據本發明之用途。
組合
根據另一態樣，本發明涵括醫藥組合，特別是藥物，其包含至少一種本發明通式(I)或(Ia)化合物與至少一種或多種其他活性成份，特定言之供治療及/或預防過度增生性病變。
本發明術語「組合」之用法係習此相關技藝者咸了解者，該組合可能為固定組合、非固定組合或部件套組。
本發明中「固定組合」之用法係習此相關技藝者咸了解，且其定義之組合為其中例如：第一活性成份，如：一或多種本發明通式(I)化合物、與其他活性成份共同形成一個單位劑量或形成單一實體。「固定組合」之實例之一為醫藥組成物，其中第一活性成份與其他活性成份係混合以供同時投藥，如：形成調配物。「固定組合」之另一實例為醫藥組合，其中由第一活性成份與其他活性成份在未混合下形成一個單位。
本發明中非固定組合或「部件套組」之用法係習此相關技藝者咸了解，且其定義之組合為其中第一活性成份與其他活性成份係呈超過一個單位。非固定組合或部件套組之實例之一為組合中第一活性成份與其他活性成份分開存在。非固定組合或部件套組之組份可能分開、依序、同時、併行、或依交錯時間投藥。
本發明化合物可以呈單獨藥劑投藥或與一或多種其他醫藥活性成份組合投藥，其中該組合不會產生不可接受之副作用。本發明亦涵括此等醫藥組合。例如：本發明化合物可與已知用於治療及/或預防過度增生性病變之活性成份組合。
供治療及/或預防過度增生性病變之活性成份實例包括：131I-chTNT、阿巴瑞克(abarelix)、阿貝西尼(abemaciclib)、阿比特龍(abiraterone)、阿卡拉布替尼(acalabrutinib)、阿克拉比黴素(aclarubicin)、阿達木單抗(adalimumab)、曲妥珠單抗-美坦新偶聯物(ado-trastuzumab emtansine)、阿法替尼(afatinib)、阿普西柏(aflibercept)、阿地白介素(aldesleukin)、艾樂替尼(alectinib)、阿侖單抗(alemtuzumab)、阿崙膦酸(alendronic acid)、阿利維A酸(alitretinoin)、六甲蜜胺(altretamine)、阿米福汀(amifostine)、胺鲁米特(aminoglutethimide)、胺基酮戊酸己酯(hexyl aminolevulinate)、胺柔比星(amrubicin)、安吖啶(amsacrine)、阿那曲唑(anastrozole)、安塞司亭(ancestim)、茴香腦二硫雜環戊二烯硫酮(anethole dithiolethione)、阿尼單抗拉夫坦辛(anetumab ravtansine)、血管收縮素II、抗凝血酶III、阿帕他胺(apalutamide)、阿瑞匹坦(aprepitant)、阿西莫單抗(arcitumomab)、阿加來必(arglabin)、三氧化二砷、天冬醯胺酶、阿特珠單抗(atezolizumab)、阿維魯單抗(avelumab)、艾希基因療法(axicabtagene ciloleucel)、阿西替尼(axitinib)、阿扎胞苷(azacitidine)、巴利昔單抗(basiliximab)、貝洛替康(belotecan)、苯達莫司汀(bendamustine)、貝索單抗(besilesomab)、貝利司他(belinostat)、貝伐單抗(bevacizumab)、貝沙羅汀(bexarotene)、比卡魯胺(bicalutamide)、比生群(bisantrene)、博來黴素(bleomycin)、博納吐單抗(blinatumomab)、硼替佐米(bortezomib)、博舒替尼(bosutinib)、布舍瑞林(buserelin)、本妥昔單抗(brentuximab vedotin)、布吉替 尼(brigatinib)、白消安(busulfan)、卡巴他賽(cabazitaxel)、卡博替尼(cabozantinib)、降血鈣素(calcitonine)、亞葉酸鈣、左旋亞葉酸鈣、卡培他濱(capecitabine)、卡羅單抗(capromab)、卡馬西平(carbamazepine)、卡鉑(carboplatin)、卡巴醌(carboquone)、卡非佐米(carfilzomib)、卡莫氟(carmofur)、卡莫司汀(carmustine)、卡妥索單抗(catumaxomab)、塞來昔布(celecoxib)、西莫白介素(celmoleukin)、色瑞替尼(ceritinib)、西妥昔單抗(cetuximab)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、氯地孕酮(chlormadinone)、氯甲炔(chlormethine)、西多福韋(cidofovir)、西那卡塞(cinacalcet)、順鉑(cisplatin)、克拉屈濱(cladribine)、氯膦酸(clodronic acid)、克羅拉濱(clofarabine)、考比替尼(cobimetinib)、考帕利希(copanlisib)(BAY 80-6946)、克立他酶(crisantaspase)、克唑替尼(crizotinib)、環磷醯胺、環丙孕酮(cyproterone)、阿糖胞苷(cytarabine)、達卡巴仁(dacarbazine)、放線菌素D(dactinomycin)、達雷木單抗(daratumumab)、耐血比(darbepoetinα)、達拉菲尼(dabrafenib)、達沙替尼(dasatinib)、道諾黴素(daunorubicin)、地西他濱(decitabine)、地加瑞克(degarelix)、地尼白介素(denileukin diftitox)、地舒單抗(denosumab)、地普奧肽(depreotide)、德舍瑞林(deslorelin)、環氧乳醇(dianhydrogalactitol)、右丙亞胺(dexrazoxane)、二溴螺氯銨(dibrospidium chloride)、環氧乳醇(dianhydrogalactitol)、雙氯芬酸(diclofenac)、達妥昔單抗(dinutuximab)、歐洲紫杉醇(docetaxel)、朵拉司瓊(dolasetron)、多西氟哌啶(doxifluridine)、阿黴素(doxorubicin)、阿黴素+雌激素、四氫大麻酚(dronabinol)、度伐魯單抗(durvalumab)、依庫珠單抗(eculizumab)、依決洛單抗(edrecolomab)、依利醋銨(elliptinium acetate)、埃羅妥珠單抗(elotuzumab)、艾曲泊帕(eltrombopag)、恩西地平(enasidenib)、血管內皮細胞抑制因子(endostatin)、伊諾他濱(enocitabine)、恩雜魯胺(enzalutamide)、泛艾黴素(epirubicin)、環硫雄醇(epitiostanol)、紅血球生成素(epoetin)α、紅血球生成素β、紅血球生成素ζ、舒鉑(eptaplatin)、艾日布林(eribulin)、厄洛替尼(erlotinib)、埃索美拉唑(esomeprazole)、雌二醇、雌莫司汀(estramustine)、炔雌二醇(ethinylestradiol)、依託泊苷(etoposide)、依維莫司(everolimus)、依西美坦(exemestane)、法倔唑(fadrozole)、吩坦尼(fentanyl)、非格司亭(filgrastim)、氟羥甲酮(fluoxymesterone)、氟尿苷 (floxuridine)、氟達拉濱(fludarabine)、氟尿嘧啶(fluorouracil)、氟他胺(flutamide)、亞葉酸(folinic acid)、福美司坦(formestane)、福沙匹坦(fosaprepitant)、福莫司汀(fotemustine)、氟維司群(fulvestrant)、釓布醇(gadobutrol)、釓特醇(gadoteridol)、釓特酸葡胺(gadoteric acid meglumine)、釓弗塞胺(gadoversetamide)、釓塞酸(gadoxetic acid)、硝酸鎵(gallium nitrate)、加尼瑞克(ganirelix)、吉非替尼(gefitinib)、吉西他濱(gemcitabine)、吉妥單抗(gemtuzumab)、穀卡匹酶(Glucarpidase)、氧化型谷胱甘肽(glutoxim)、GM-CSF、戈舍瑞林(goserelin)、格拉司瓊(granisetron)、粒細胞群落刺激因子、組織胺二鹽酸鹽、組氨瑞林(histrelin)、羥基脲(hydroxycarbamide)、I-125核種、蘭索拉唑(lansoprazole)、伊班膦酸(ibandronic acid)、替依莫單抗(ibritumomab tiuxetan)、依魯替尼(ibrutinib)、艾達黴素(idarubicin)、異環磷醯胺(ifosfamide)、伊馬替尼(imatinib)、咪喹莫特(imiquimod)、英丙舒凡(improsulfan)、吲地司瓊(indisetron)、英卡膦酸(incadronic acid)、巨大戟醇甲基丁烯酸酯(ingenol mebutate)、伊曲木單抗奧佐米星(inotuzumab ozogamicin)、干擾素α、干擾素β、干擾素γ、碘比特(iobitridol)、碘苯胍(iobenguane)(123I)、碘美普爾(iomeprol)、易普利單抗(ipilimumab)、伊立替康(irinotecan)、伊曲康唑(Itraconazole)、易莎平(ixabepilone)、伊沙佐米(ixazomib)、蘭瑞肽(lanreotide)、蘭索拉唑(lansoprazole)、拉帕替尼(lapatinib)、艾索膽鹼(Iasocholine)、來那度胺(lenalidomide)、樂伐替尼(lenvatinib)、來格司亭(lenograstim)、香菇多醣(lentinan)、來曲唑(letrozole)、亮丙瑞林(leuprorelin)、左旋咪唑(levamisole)、左炔諾孕酮(levonorgestrel)、左旋甲狀腺素鈉鹽(levothyroxine sodium)、麥角乙脲(lisuride)、洛鉑(lobaplatin)、洛莫司汀(lomustine)、氯尼達明(lonidamine)、鎦Lu 177 DOTA綴合物(lutetium Lu 177 dotatate)、馬索羅酚(masoprocol)、甲羥孕酮(medroxyprogesterone)、甲地孕酮(megestrol)、美拉胂醇(melarsoprol)、美法侖(melphalan)、美雄烷(mepitiostane)、巰嘌呤(mercaptopurine)、美司鈉(mesna)、美沙酮(methadone)、胺甲蝶呤(methotrexate)、甲氧沙林(methoxsalen)、胺基乙醯丙酸甲酯、甲基潑尼松龍(methylprednisolone)、甲基睪酮、甲酪胺酸(metirosine)、米哚妥林(midostaurin)、米伐木肽(mifamurtide)、米替福新(miltefosine)、米鉑(miriplatin)、 二溴甘露醇(mitobronitol)、丙脒腙(mitoguazone)、二溴衛矛醇(mitolactol)、絲裂黴素(mitomycin)、密妥坦(mitotane)、米托蒽醌(mitoxantrone)、莫戈美珠單抗(mogamulizumab)、莫拉司亭(molgramostim)、莫呱達醇(mopidamol)、嗎啡鹽酸鹽、嗎啡硫酸鹽、貝伐單抗(mvasi)、萘比靈斯(nabilone)、大麻素(nabiximols)、那法瑞林(nafarelin)、納洛酮(naloxone)+噴他佐辛(pentazocine)、那曲酮(naltrexone)、那托司亭(nartograstim)、耐昔妥珠單抗(necitumumab)、奈達鉑(nedaplatin)、奈拉濱(nelarabine)、來那替尼(neratinib)、奈立膦酸(neridronic acid)、奈妥比坦(netupitant)/帕洛諾司瓊(palonosetron)、納武利尤單抗(nivolumab)、噴曲肽(pentetreotide)、尼羅替尼(nilotinib)、尼魯米特(nilutamide)、尼莫拉唑(nimorazole)、尼妥珠單抗(nimotuzumab)、尼莫斯汀(nimustine)、尼達尼布(nintedanib)、尼拉帕尼(niraparib)、硝胺丙吖啶(nitracrine)、納武利尤單抗(nivolumab)、阿托珠單抗(obinutuzumab)、奧曲肽(octreotide)、奧法木單抗(ofatumumab)、奧拉帕尼(olaparib)、奧拉單抗(olaratumab)、高三尖杉酯鹼(omacetaxine mepesuccinate)、奧美拉唑(omeprazole)、昂丹司瓊(ondansetron)、奧普瑞白介素(oprelvekin)、奧古蛋白(orgotein)、奧瑞替莫(orilotimod)、奧希替尼(osimertinib)、奧沙利鉑(oxaliplatin)、羥考酮(oxycodone)、羥甲烯龍(oxymetholone)、奧佐米星(ozogamicine)、p53基因療法、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、帕博西尼(palbociclib)、帕利夫明(palifermin)、鈀-103核種、帕洛諾司瓊(palonosetron)、帕米膦酸(pamidronic acid)、帕尼單抗(panitumumab)、帕比諾他(panobinostat)、泮托拉唑(pantoprazole)、帕佐泮尼(pazopanib)、培門冬酶(pegaspargase)、PEG-紅血球生成素β(甲氧基PEG-紅血球生成素β)、派立珠單抗(pembrolizumab)、派非格司亭(pegfilgrastim)、聚乙二醇化干擾素α-2b(peginterferon alfa-2b)、派立珠單抗(pembrolizumab)、培美曲塞(pemetrexed)、噴他佐辛(pentazocine)、噴他斯汀(pentostatin)、培洛黴素(peplomycin)、全氟正丁烷(Perflubutane)、培磷醯胺(perfosfamide)、帕妥珠單抗(Pertuzumab)、畢西巴尼(picibanil)、匹魯卡品(pilocarpine)、吡柔比星(pirarubicin)、匹蒽醌(pixantrone)、普樂沙福(plerixafor)、普卡黴素(plicamycin)、聚胺葡糖(poliglusam)、聚磷酸雌二醇(polyestradiol phosphate)、聚乙烯吡咯啶酮+玻尿酸鈉(polyvinylpyrrolidone+ sodium hyaluronate)、多醣-K、泊利度胺(pomalidomide)、普納替尼(ponatinib)、卟吩姆鈉(porfimer sodium)、普拉曲沙(pralatrexate)、潑尼氮芥(prednimustine)、潑尼松(prednisone)、丙卡巴肼(procarbazine)、丙考達唑(procodazole)、普萘洛爾(propranolol)、喹高利特(quinagolide)、雷貝拉唑(rabeprazole)、拉克莫單抗(racotumomab)、氯化鐳-223、拉多替尼(radotinib)、雷諾昔酚(raloxifene)、雷替曲塞(raltitrexed)、拉莫司瓊(ramosetron)、雷莫蘆單抗(ramucirumab)、雷莫司汀(ranimustine)、拉布立酶(rasburicase)、雷佐生(razoxane)、瑞法美替尼(refametinib)、瑞戈非尼(regorafenib)、瑞博西利(ribociclib)、利塞膦酸(risedronic acid)、依替膦酸錸-186(rhenium-186 etidronate)、利妥昔單抗(rituximab)、羅拉匹坦(rolapitant)、羅米地辛(romidepsin)、羅米司亭(romiplostim)、羅莫肽(romurtide)、蘆卡帕尼(rucaparib)、來昔決南釤(153Sm)(samarium(153Sm)lexidronam)、沙格司亭(sargramostim)、沙利單抗(sarilumab)、沙妥莫單抗(satumomab)、胰泌素(secretin)、思圖昔單抗(siltuximab)、西普亮塞-T(sipuleucel-T)、西索菲蘭(sizofiran)、索布佐生(sobuzoxane)、甘胺雙唑鈉(sodium glycididazole)、索尼蒂吉伯(sonidegib)、索拉非尼(sorafenib)、司坦唑醇(stanozolol)、鏈脲菌素(streptozocin)、舒尼替尼(sunitinib)、他拉泊芬(talaporfin)、溶瘤病毒(talimogene laherparepvec)、他米巴羅汀(tamibarotene)、他莫昔芬(tamoxifen)、他噴他多(tapentadol)、他索那明(tasonermin)、替西白介素(teceleukin)、鎝(99mTc)諾非單抗美噴坦(technetium(99mTc)nofetumomab merpentan)、99mTc-HYNIC-[Tyr3]-奧曲肽(99mTc-HYNIC-[Tyr3]-octreotide)、喃氟啶(tegafur)、喃氟啶+吉美拉西+奧特拉西(tegafur+gimeracil+oteracil)、替莫泊芬(temoporfin)、替莫唑胺(temozolomide)、坦羅莫司(temsirolimus)、替尼泊苷(teniposide)、睪酮(testosterone)、替曲膦(tetrofosmin)、沙利竇邁(thalidomide)、噻替派(thiotepa)、胸腺法新(thymalfasin)、α促甲狀腺激素(thyrotropinα)、硫鳥嘌呤(tioguanine)、狄斯利昔(tisagenlecleucel)、托西利單抗(tocilizumab)、拓朴替康(topotecan)、托瑞米芬(toremifene)、托西莫單抗(tositumomab)、曲貝替定(trabectedin)、曲美替尼(trametinib)、曲馬多(tramadol)、曲妥珠單抗(trastuzumab)、恩他新曲妥珠單抗(trastuzumab emtansine)、曲奧舒凡(treosulfan)、維甲酸(tretinoin)、 曲氟尿苷+替吡嘧啶(trifluridine+tipiracil)、曲洛司坦(trilostane)、曲普瑞林(triptorelin)、曲美替尼(trametinib)、曲磷胺(trofosfamide)、血小板生成素、色胺酸、烏苯美司(ubenimex)、伐拉替尼(valatinib)(PTK/ZK)、伐柔比星(valrubicin)、凡德他尼(vandetanib)、伐普肽(vapreotide)、維羅非尼(vemurafenib)、長春鹼(vinblastine)、長春新鹼(vincristine)、長春地辛(vindesine)、長春氟寧(vinflunine)、長春瑞賓(vinorelbine)、維莫德吉(vismodegib)、伏立諾他(vorinostat)、伏羅唑(vorozole)、釔-90玻璃微球體、淨司他丁(zinostatin)、淨司他丁司他美(zinostatin stimalamer)、唑來膦酸(zoledronic acid)、左柔比星(zorubicin)。
縮寫：
下表列出本文所採用之縮寫。
Abu-γ-胺基丁酸
ACN-乙腈
Boc-第三丁基氧羰基
Bzl-苯甲基
DCM-二氯甲烷
DIEA-二異丙基乙基胺(亨尼氏鹼(Hünig’s base))
DMAP-二甲基胺基吡啶
DMF-二甲基甲醯胺
DMSO-二甲亞碸
EDCI-1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺
ee-對映異構性超量
FCS-胎牛血清
Fmoc-芴基-9-甲氧基羰基
HATU-2-(1H-7-氮雜苯並三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽
HPLC-高效液相層析法
MTBE-甲基第三丁基醚
NMP-N-甲基吡咯啶酮
RP-逆相
rt-室溫
RTV-相對腫瘤體積
TFA-三氟乙酸
THF-四氫呋喃
TLC-薄層層析法
本申請案說明之本發明各種不同態樣係利用下列實例舉例說明，該等實例無意以任何方式限制本發明。
本文說明之試驗性實驗實例係用於說明本發明，且本發明不受所出示實例之限制。
實驗章節
實驗部份中未說明合成方式之所有試劑，均自商品購得或係已知化合物，或可能由習此相關技藝之人士採用已知方法，由已知化合物製得。
根據本發明方法製造之化合物與中間物可能需要純化。有機化合物之純化法係習此相關技藝之人士所已知，且有許多種方法可以純化相同的化合物。有些例子中，不一定需要純化。有些例子中，化合物可經過結晶純化。有些例子中，可使用合適溶劑攪拌排除雜質。有些例子中，化合物可經過層析純化，特定言之使用例如：預填裝之矽膠匣(例如：Biotage SNAP匣KP-Sil®或KP-NH®)併用Biotage自動純化系統(SP4®或Isolera Four®)及溶離液(如：己烷/乙酸乙酯或DCM/甲醇之梯度)進行快速管柱層析法。有些例子中，化合物可經製備性HPLC純化，其係使用例如：加裝二極體陣列檢測器及/或連線電噴灑電離化質譜儀之Waters自動純化器，併用合適之預填裝逆相管柱與溶離液(如，水與乙腈之梯度，其中可包含添加劑，如，三氟乙酸、甲酸、或氨水)。
有些例子中，如上述純化法可以讓彼等具有充份鹼性或酸性官能基之本發明化合物呈鹽型提供，如，若本發明化合物具有充份鹼性時，可呈例如：三氟乙酸鹽或甲酸鹽，或若本發明化合物具有充份酸性時，可 呈例如：銨鹽。此鹽型態可以採用習此相關技藝之人士已知之各種不同方法，分別轉化成其游離鹼或游離酸型，或呈鹽類用於後續生物分析法中。咸了解，已單離且本文已說明之本發明化合物之特定形式(例如：鹽、游離鹼，等等)不一定為該化合物可用於生物分析法之唯一形式，以便定量特定生物活性。
UPLC-MS標準程序：
依下文說明進行分析級UPLC-MS。質量(m/z)係以正電模式電噴灑電離化表示，除非另有指示負電模式(ESI-)。大多數例子中，採用方法1。若未採用方法1將會另有指示。
HPLC-及LC-MS-方法：
方法0：
質量係採用高效液相層析-質譜儀(HPLC-MS)，使用電噴灑電離化(ESI)方法或採用FAB或MALDI質譜儀測定。
方法1(LC-MS)：
儀器：Waters ACQUITY SQD UPLC系統；管柱：Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8μ 50 x 1mm；溶離液A：1升水+0.25mL 99%甲酸，溶離液B：1升乙腈+0.25mL 99%甲酸；梯度：0.0分鐘90% A→1.2分鐘5% A→2.0分鐘5% A，烘箱：50℃；流速：0.40mL/分鐘；UV-檢測：208-400nm。
實例：
起始物與中間物：
中間物1
(3R)-3-(3-胺基苯基)-3-[(第三丁氧基羰基)胺基]丙酸
Figure 108139645-A0202-12-0023-5
取含151g 3-硝基苯甲醛、94g乙酸銨、127g丙二酸與1L 2-丙醇之混合物於回流下加熱5小時。溶液過濾，取沉澱使用0.7L熱2-丙醇洗滌。 粗產物真空乾燥，懸浮於1.5L水中，使用1N鹽酸處理，及過濾。濾液濃縮，產生146g。
NMR(400MHz,D4-甲醇)：δ=3.09(m,2 H),4.88(m,1 H),7.74(t,1 H),7.90(d,1 H),8.33(d,1 H),8.43(s,1 H)。
取20g(95mmol)此中間物與31.2g二碳酸二-第三丁基酯溶於150mL二
Figure 108139645-A0202-12-0024-42
烷/水混合物(1：1)中，添加33mL DIEA。攪拌混合物約90分鐘，直到觀察到完全溶解為止。溶劑蒸發後，殘留之殘質溶於1L DCM，使用500mL 5%檸檬酸萃取3次。有機相濃縮，產物使用DCM/乙醚/石油醚1：1：1混合物沉澱，及過濾。乾燥後，得到23.5g(80%)所需產物。
取5g(16.1mmol)此中間物及3.095g(23mmol)(2R)-2-胺基-2-苯基乙醇溶於乙腈，於0℃下靜置3天。濾出沉澱，溶於DCM，使用5%檸檬酸萃取2次。有機相經硫酸鈉脫水及蒸發。重覆此製程2次。得到1.52g(30%)所需產物，ee為95%及[α]D 25=+34.4°/甲醇。
取1500mg(0.243mmol)此中間物溶於100mL甲醇，及在常壓下，於鈀/碳上氫化30分鐘。分離出觸媒，溶液濃縮，使用乙醚分解，過濾，殘質真空乾燥。得到1334mg(98%)標題化合物。
[DC：(二氯甲烷/甲醇/氨水(17%ig)(15：4：0.5)；Rf=0.18]。
中間物2
(3R)-3-[(第三丁氧基羰基)胺基]-3-{3-[({3-[(丙基胺甲醯基)胺基]苯基}磺醯基)胺基]苯基}丙酸
Figure 108139645-A0202-12-0024-6
取8300mg(29.6mmol)中間物1與9843mg(44.4mmol)3-硝基苯磺醯氯溶於400ml DCM/DMF 1：1，添加7.2mL吡啶。混合物於室溫下攪拌過夜。然後使用200mL DCM稀釋混合物，使用50mL 5%檸檬酸萃取3次。 有機相濃縮。殘留之殘質乾燥後，得到13.8g(全收量)(3R)-3-[(第三丁氧基羰基)胺基]-3-(3-{[(3-硝基苯基)磺醯基]胺基}苯基)丙酸。
[DC：(二氯甲烷/甲醇/氨水(17%ig)(15：4：0.5)；Rf=0.2]。
取13800mg(29.65mmol)此中間物溶於1000mL甲醇，及在常壓下，於鈀/碳上氫化5h。濾出觸媒，溶液濃縮，使用乙醚洗滌殘質2次後，真空乾燥。得到12240mg(95%)(3R)-3-(3-{[(3-胺基苯基)磺醯基]胺基}苯基)-3-[(第三丁氧基羰基)胺基]丙酸。
取12200mg(28mmol)此中間物溶於600mL二
Figure 108139645-A0202-12-0025-43
烷，添加5722mg(67mmol)1-異氰醯基丙烷，混合物攪拌過夜。溶液真空濃縮，殘留之殘質經快速層析法，使用DCM/甲醇/NH4OH(17%)15/4/0.5溶離混合物純化。收集相關溶出份，及真空濃縮。殘質真空乾燥後，得到11220mg(67%)標題化合物。
LC-MS(方法1)：Rt=0.9分鐘；MS(ESIpos)：m/z=521(M+H)+。
中間物3
(3R)-3-{[(4-胺基苯基)胺甲醯基]胺基}-3-{3-[({3-[(丙基胺甲醯基)胺基]苯基}磺醯基)胺基]苯基}丙酸
Figure 108139645-A0202-12-0025-7
取400mg(0.768mmol)中間物2溶於10mL DCM，添加2mL三氟乙酸。於室溫下攪拌90分鐘後，反應混合物真空濃縮。殘質使用5%碳酸二鈉溶液處理，隨後溶於DCM/甲醇混合物中。使用乙醚沉澱後，過濾，及真空乾燥，得到260mg(81%)(3R)-3-胺基-3-{3-[({3-[(丙基胺甲醯基)胺基]苯基}磺醯基)胺基]苯基}丙酸。
LC-MS(方法0)：Rt=4.11分鐘；MS：m/z=421=(M+H)+
取250mg(0.595mmol)此中間物溶於15mL DMF，添加117mg(0.713mmol)1-異氰醯基-4-硝基苯，於室溫下攪拌溶液30分鐘。再添加30mg 1-異氰醯基-4-硝基苯，繼續攪拌30分鐘。溶液真空濃縮，殘留之殘質經快速層析法純化。取相關溶出份真空濃縮後，得到160mg(46%)(3R)-3-{[(4-硝基苯基)胺甲醯基]胺基}-3-{3-[({3-[(丙基胺甲醯基)胺基]苯基}磺醯基)胺基]苯基}丙酸。
LC-MS(方法0)：Rt=5.61分鐘；MS：m/z=585=(M+H)+
取142mg(0.243mmol)此中間物溶於20mL甲醇/DCM 10：1，及在常壓下，於鈀/碳上氫化30分鐘。濾出觸媒，溶液濃縮，使用乙醚分解，過濾，殘質真空乾燥。得到103mg(76%)標題化合物。
LC-MS(方法0)：Rt=4.31分鐘；MS：m/z=555=(M+H)+
1H-NMR(500MHz,D4-甲醇)：=0.93(t,3 H),1.5(m,2 H),2.74(d,2 H),3.1(dt,2 H),5.15(t,1 H),6.68(d,2 H),6.85(d,1 H),7.05(d,1 H),7.1(d,1 H),7.13(t,1 H),7.28-7.4(m,3H),7.6(s,1 H),7.66(d,1 H)。
中間物4
(4S)-4,11-二乙基-3,14-二側氧基-3,4,12,14-四氫-1H-哌喃并[3',4'：6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-4-基L-纈胺酸酯三氟乙酸鹽(1：1)
Figure 108139645-A0202-12-0026-46
取2.59g(10.6mmol)N-(第三丁氧基羰基)-纈胺酸-N-羧酸酐與0.5g的4-(N,N-二甲基胺基)-吡啶添加至含2g(5.3mmol)(4S)-4,11-二乙基-4-羥基-1H-哌喃并[3',4'：6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H,12H)-二酮(7-乙基喜樹鹼，依S.Sawada等人於Chem.Phar.Bull 1991-39(6)-1445中之說明合成)之150ml無水二氯甲烷之攪拌懸浮液中。混合物於室溫下攪拌20小時，隨後真 空濃縮。添加8ml ACN至殘質中，然後添加5mL乙醚。混合物過濾，取殘留之殘質真空乾燥。得到2964mg(92%)受保護之中間物。
LC-MS(方法1)：Rt=1.19分鐘；MS(ESIpos)：m/z=576(M+H)+。
取2964mg(5.15mmol)此受Boc保護之中間化合物於6ml二氯甲烷及60ml無水三氟乙酸中，於室溫下攪拌30分鐘，隨後音波處理1小時。真空濃縮後，產物從乙腈/水混合物中凍乾。得到3.622g(全收量)標題化合物。
LC-MS(方法1)：Rt=0.68分鐘；MS(ESIpos)：m/z=476(M+H)+。
中間物5
(2S)-1-[(19S)-19-(2-第三丁氧基-2-側氧基乙基)-2,2-二甲基-4,17,20-三側氧基-3,8,11,14-四氧雜-5,18-二氮雜二十碳烷-20-基]吡咯啶-2-羧酸
Figure 108139645-A0202-12-0027-9
此中間物5係依肽化學已知之傳統方法合成，其開始時係由1-(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)N-(第三丁氧基羰基)-L-天冬胺酸4-第三丁基酯與L-脯胺酸苯甲基酯鹽酸鹽(1：1)於DMF中，於DIEA之存在下偶合，隨後於鈀/碳上氫化，裂解苯甲基酯。接著，由(2S)-1-{(2S)-4-第三丁氧基-2-[(第三丁氧基羰基)胺基]-4-側氧基丁醯基}吡咯啶-2-羧酸溶液於15mL TFA與100mL DCM之混合物中攪拌，脫除第三丁氧羰基保護基，然後經過快速層析法，使用DCM/甲醇3：1為溶離液純化。取此中間物溶於DMF，於DIEA之存在下，與{2-[2-(2-{3-[(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)氧]-3-側氧基丙氧基}乙氧基)乙氧基]乙基}胺甲酸第三丁基酯(先前由2,2-二甲基-4-側氧基 -3,8,11,14-四氧雜-5-氮雜十七碳烷-17-酸於DMF中，使用1-羥基吡咯啶-2,5-二酮及EDCI轉化成活性酯製得)偶合。
LC-MS(方法1)：Rt=0.86分鐘；MS(ESIpos)：m/z=590(M+H)+。
中間物6
(3R)-3-{[(4-{[(4-硝基苯氧基)羰基]胺基}苯基)胺甲醯基]胺基}-3-{3-[({3-[(丙基胺甲醯基)胺基]苯基}磺醯基)胺基]苯基}丙酸
Figure 108139645-A0202-12-0028-10
取8.99g(43.3mmol)氯甲酸4-硝基苯基酯溶於1300mL THF，及添加12g(21.64mmol)(3R)-3-{[(4-胺基苯基)胺甲醯基]胺基}-3-{3-[({3-[(丙基胺甲醯基)胺基]苯基}磺醯基)胺基]苯基}丙酸。混合物加熱，於回流下攪拌45分鐘，隨後冷卻至室溫，及過濾。濾液減壓濃縮至體積100mL。此溶液倒至乙醚中，濾出沉澱物。真空乾燥過夜後，得到11.6g標題化合物。
LC-MS(方法1)：Rt=0.97分鐘；MS(ESIpos)：m/z=720(M+H)+。
中間物7：整合素配體之參考化合物(中間物3之S-差向異構體)：
(3S)-3-{[(4-胺基苯基)胺甲醯基]胺基}-3-{3-[({3-[(丙基胺甲醯基)胺基]苯基}磺醯基)胺基]苯基}丙酸
Figure 108139645-A0202-12-0028-12
此化合物係類似上述中間物3，利用在光學解析步驟期間出現在母液中之中間物1之差向異構體合成。
實例1：α v ß 3 整合素綴合物
1-{(2S)-2-(羧根基甲基)-17-[4-({[(1R)-2-羧根基-1-{3-[({3-[(丙基-胺甲醯基)胺基]苯基}磺醯基)胺基]苯基}乙基]胺甲醯基}胺基)苯胺基]-4,17-二側氧基-7,10,13-三氧雜-3,16-二氮雜十七碳烷-1-醯基}-L-脯胺醯基-L-纈胺酸(4S)-4,11-二乙基-3,14-二側氧基-3,4,12,14-四氫-1H-哌喃并[3',4'：6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-4-基酯二鈉
Figure 108139645-A0202-12-0029-13
取40mg(68μmol)中間物4與48mg(81μmol)中間物5溶於6.4mL DMF，添加33.5mg(88μmol)HATU與35μL DIEA。混合物於室溫下攪拌30分鐘。混合物蒸發，殘留之殘質經HPLC純化。得到28mg(39%)受保護之中間物。
LC-MS(方法1)：Rt=1.15分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1047(M+H)+。
取28mg此中間物溶於2ml二氯甲烷。添加2ml無水三氟乙酸，混合物於室溫下攪拌30分鐘，隨後音波處理1小時。真空濃縮後，產物從乙腈/水混合物中凍乾。得到30mg(全收量)脫除保護基之中間物，為橙色固體。
LC-MS(方法1)：Rt=0.72分鐘；MS(ESIpos)：m/z=891(M+H)+。
取1900mg(1.89mmol)此中間物溶於60mL DMF，添加1361mg(1.89mmol)中間物6，混合物於室溫下攪拌2小時。溶液真空濃縮，殘留之殘質使用水及5%檸檬酸處理，及過濾。殘留之殘質溶於DCM/甲醇，添加乙醚。濾出沉澱，經快速層析法，使用DCM/甲醇/NH4OH(17%)15/2/0.2->15/4/0.4之溶離混合物純化。收集相關溶出份，及真空濃縮。殘質真空乾燥後，得到942mg(34%)標題化合物。
LC-MS(方法1)：Rt=0.97分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1471(M+H)+。
取20mg(14μmol)此中間物溶於4mL二
Figure 108139645-A0202-12-0030-44
烷/水1：1中，添加30μL(30μmol)1N氫氧化鈉水溶液，混合物於室溫下經音波處理5分鐘及凍乾。得到21mg(全收量)標題化合物。
LC-MS(方法1)：Rt=0.97分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1471(M-2Na++2H++H)+。
實例2：實例1之參考化合物(S-差向異構物)：
1-{(2S)-2-(羧根基甲基)-17-[4-({[(1S)-2-羧根基-1-{3-[({3-[(丙基-胺甲醯基)胺基]苯基}磺醯基)胺基]苯基}乙基]胺甲醯基}胺基)苯胺基]-4,17-二側氧基-7,10,13-三氧雜-3,16-二氮雜十七碳烷-1-醯基}-L-脯胺醯基-L-纈胺酸(4S)-4,11-二乙基-3,14-二側氧基-3,4,12,14-四氫-1H-哌喃并[3',4'：6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-4-基酯二鈉
Figure 108139645-A0202-12-0031-15
此化合物係類似實例1，使用中間物7之αvß3配體之差向異構體合成。
較佳毒性基團7-乙基喜樹鹼及實例1綴合物之生物分析
測定細胞通透性之活體外試驗
Caco-2：
於通量分析法中，使用Caco-2細胞，利用活體外試驗探討物質之細胞通透性[M.D.Troutman與D.R.Thakker,Pharm.Res.20(8),1210-1224(2003)]。基於此目的，細胞於24-孔濾板上培養15至16天。測定通透性時，各試驗物質含在HEPES緩衝液中，施加至細胞上方(A)或下方(B)，並培養2小時。0小時後及2小時後，從正面及反面隔間取出樣本。利用HPLC(Agilent 1200,Böblingen,Germany)，使用逆相管柱分離樣本。HPLC系統係利用高流速離子電噴灑界面(Turbo Ion Spray Interface)偶聯Triple Quadropol質譜儀API 4000(AB SCIEX Deutschland GmbH,Darmstadt,Germany)。依據使用Schwab等人公開之公式計算之Papp值，分析通透性[D.Schwab等人，J.Med.Chem.46,1716-1725(2003)]。當Papp(B-A)對Papp(A-B)之比值(外流比值)>2或<0.5時，該物質歸類於主動轉運。
此分析中，實例1綴合物中使用之毒性基團(4S)-4,11-二乙基-4-羥基-1H-哌喃并[3',4'：6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H,12H)-二酮(7-乙基-喜樹鹼)顯示極佳通透性，Papp A->B=171nm/s，及低的外流比值1。此點比SN38之型態有利，因為伊立替康(irinotecan)釋放之毒性基團顯示顯著較低之通透性Papp A->B=8nm/s及外流比值36。SN38之新數據：通透性Papp A->B=20nm/s及外流比值9。
P-醣蛋白(p-GP)分析：
許多腫瘤細胞表現藥物之轉運子蛋白質，且此種狀況經常伴隨對細胞生長抑制劑發展出抗性。因此非此等轉運子蛋白質之受質物質，舉例而言例如P-醣蛋白(P-gp)或BCRP，即可能具有改善之活性型態。
P-gp(ABCB1)物質之受質性質係利用流量分析法，使用過度表現P-gp之LLC-PK1細胞(L-MDR1細胞)測定[A.H.Schinkel等人，J.Clin.Invest.96,1698-1705(1995)]。基於此目的，由LLC-PK1細胞或L-MDR1細胞於96-孔濾板上培養3至4天。測定通透性時，取各試驗物質，單獨或在抑制劑(舉例來說例如伊維菌素(ivermectin)或維拉帕米(verapamil))之存在下，含在HEPES緩衝液中，施加至細胞上方(A)或下方(B)，並培養2小時。0小時後及2小時後，從正面及反面隔間取出樣本。利用HPLC，使用逆相管柱分離樣本。HPLC系統係利用高流速離子電噴灑界面(Turbo Ion Spray Interface)偶聯Triple Quadropol mass spectrometer API 3000(Applied Biosystems Applera,Darmstadt,Germany)。依據使用Schwab等人公開之公式計算之Papp值，分析通透性[D.Schwab等人，J.Med.Chem.46,1716-1725(2003)]。當Papp(B-A)對Papp(A-B)之外流比值>2時，該物質歸類於P-gp受質。
此分析中，實例1綴合物使用之毒性基團(4S)-4,11-二乙基-4-羥基-1H-哌喃并[3',4'：6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H,12H)-二酮(7-乙基-喜樹鹼)顯示極佳通透性，Papp A->B=196nm/s，及低的外流比值0.6。此點比SN38之型態有利，因為伊立替康釋放之毒性基團顯示顯著較低之通透性Papp A->B=10nm/s及外流比值16。
活體外對抗NCI-H1975與其轉運子突變體之細胞毒性
當腫瘤細胞NCI-H1975經過藥物轉運子p-醣蛋白(P-gp)及乳癌抗性蛋白質(BCRP)轉染時，對7-乙基喜樹鹼之細胞毒性活性沒有負面影響，此點與SN38完全相反。
表1：活體外對抗NCI-H1975與其轉運子突變體之細胞毒性
Figure 108139645-A0202-12-0033-47
αvß3結合性試驗
取來自人類A375細胞之αvβ3，以類似Wong等人之Molecular Pharmacology 50,529-537(1996)說明之製程純化。每一例中，取10μLαvβ3(5ng)(含於TBS pH 7.6、2mM CaCl2、1mM MgCl2、1%正辛基哌喃葡糖苷(Sigma))；10μL試驗物質(含於TBS pH 7.6、0.1% DMSO與45μL TBS pH 7.6、2mM CaCl2、1mM MgCl2、1mM MnCl2)於室溫下培養1小時。每一例中，接著添加25μL WGA SPA小珠(Amersham，4mg/ml)及10μL鋸鱗蝰素(echistatin)(0.1μCi，Amersham，標記有氯胺-T)。於室溫下16小時後，取樣本於閃爍測定裝置(Wallac 1450)上測定。試驗結果示於下表2。
表2：對αvβ3受體之結合性之IC50值
Figure 108139645-A0202-12-0033-20
彈性蛋白酶可裂解性
於彈性蛋白酶存在及不存在下之活體外細胞毒性
依據標準程序，使用供應商建議之培養基進行細胞培養。細胞含在總體積100μL中，接種至白底96-孔板中(#3610)。於37℃及5% CO2下經過24h培養期後，添加90μL新鮮培養基更換培養基。添加試驗化合物至含有細胞之10μl培養基中，開始處理。選擇三重覆之10-5M至10-13M濃度，然後 於37℃及5%二氧化碳下培養。其中一組樣本僅接受試驗化合物處理，而第二組樣本除了亦滴加10nM彈性蛋白酶外，其他均進行相同處理。72h後，使用MTT分析法(ATCC)檢測增生性。培養期結束時，添加MTT試劑至所有樣本中4h，然後添加清潔劑溶解細胞過夜。於570nm下檢測所形成之染劑。以未接受試驗物質處理，但其他處理均相同之細胞之增生性定義為100%數值。可以從劑量效應曲線決定各IC50值，綜合示於表3(圖1及表4)。
表3 綜合說明實例1與2在含及不含彈性蛋白酶下之IC50值
Figure 108139645-A0202-12-0034-48
表4 實例1及EP 1 238 678之實例1在含有及不含彈性蛋白酶下之IC50值的同步比較(採用酵素活性較高之彈性蛋白酶)
Figure 108139645-A0202-12-0034-25
使用腎癌細胞株786-O時，嗜中性球彈性蛋白酶之存在會誘發化合物之細胞毒性的顯著改善。使用結腸癌細胞株HT29時，化合物亦顯示顯著依賴彈性蛋白酶。彈性蛋白酶誘發之裂解再度顯示會引發化合物之細胞毒性效應大幅升高。
實例1綴合物與EP 1 238 678實例1綴合物之溶解度比較：
方法：針對每一種測試之媒劑，稱取0.5至1.0mg試驗化合物加至2ml微量離心管(Eppendorf vial)中。添加2至3個玻璃珠(
Figure 108139645-A0202-12-0034-45
3mm)及1.0ml媒劑。小瓶於室溫(25℃)與1400rpm下振盪24小時。經過這段時間後，取上清液(約230μl)移至離心管中。於42 000rpm下30分鐘後，溶質移至另一個小瓶中，使用DMSO稀釋(1：5及1：50)。這兩個稀釋液採用HPLC分析(讀出值：面積)。
HPLC-方法：
溶離液A：1ml三氟乙酸/L水
溶離液B：1ml三氟乙酸/L乙腈
梯度：
Figure 108139645-A0202-12-0035-50
管柱：ZORBAX Extend-C18，3.0 x 50mm，3.5μm
烘箱溫度：30℃
檢測：214及254nm
注射體積：20μl
進行定量時，採用相同HPLC方法，由試驗化合物之DMSO溶液(100μl/ml、20μg/ml與2.5μg/ml)得到校正曲線。
表5：實例1與EP 1 238 678實例1之溶解度
Figure 108139645-A0202-12-0035-27
於pH 4檸檬酸緩衝液中比較實例1綴合物與EP 1 238 678實例1綴合物之安定性：
方法：取0.15mg試驗化合物溶於0.1ml二甲亞碸與0.4ml乙腈。為了完全溶解，含有樣本溶液之HPLC小瓶係經振盪及音波處理。然後添加1.0ml之各緩衝液(檸檬酸緩衝液pH 4；檸檬酸/氫氧化鈉/氯化鈉Fluka 33643)，樣本渦轉。樣本溶液在37℃下，經過HPLC分析，在24小時期間之指定時間點(0、1、2、4、24小時)測定試驗化合物含量及至多2種副產物之含量。在室溫下使用緩衝液漩渦震盪(vortexing)後立即取得之樣本為t(0)值。採用波峰面積(以百分比表示)進行定量。
LC & LC/MS純度分析：採用LC分析起始物純度；再利用LC/MS(Waters Quattro Micro)分析24小時樣本。
Figure 108139645-A0202-12-0036-29
表6：實例1及EP 1238 678之實例1於pH 4檸檬酸緩衝液中之安定性
Figure 108139645-A0202-12-0037-28
實例1綴合物之血漿安定性
於大鼠血漿中測定母化合物之釋放：
取1mg的實例1試驗化合物溶於1.5mL二甲亞碸與1ml水之混合物中。為了完全溶解，取HPLC小瓶振盪，及使用超音波處理。取500μl的此溶液加至0.5mL大鼠血漿中，在37℃溫度下漩渦震盪(vortexing)。在各時間點取等份(各10μL)，利用HPLC分析測定試驗化合物含量。所有出示之數據均以相對於t0時初始化合物之面積百分比表示。
實例1化合物在大鼠血漿中保持安定>24小時。
7-乙基喜樹鹼(實例1毒性基團)及喜樹鹼(EP 1 238 678之實例1毒性基團)於人類血漿中之安定性：
取1mg的試驗化合物溶於0.5ml乙腈/二甲亞碸(1：1)中。為了完全溶解，取HPLC小瓶振盪及音波處理。在漩渦震盪(vortexing)時，取20μl此溶液加至1ml、37℃的溫血漿中。經過0.17、0.5、1、1.5、2及4小時後，在室溫下添加100μl化合物血漿溶液至含300μl乙腈/緩衝液pH3(80：20)中，中止酵素反應。混合物於5000rpm下離心10分鐘。取上清液進行HPLC分析，測定試驗化合物及至多兩種副產物之含量。在室溫下將血漿漩渦震盪後立即取出之加工樣本得到t(0)值。採用波峰面積(以百分比表示)進行定量。
在該分析條件下，7-乙基喜樹鹼保持安定至少4小時，而同時間之喜樹鹼則降解至約50%之程度。
藥物動力學
取4mg實例1綴合物溶於生理食鹽水，經靜脈注射將其投與帶有786-O腫瘤之NMRI nu/nu雌性小鼠。在不同時間點收集腫瘤及血漿樣本，並測定完整綴合物及綴合物所裂解的毒性基團7-乙基-喜樹鹼之含量。
為了比較，取1mg/kg 7-乙基喜樹鹼溶於5%右旋糖水溶液/聚乙二醇-15羥基硬脂酸酯(solutol)/DMSO 85/10/5之混合物中，經靜脈注射將其投與帶有786-O腫瘤之NMRI nu/nu雌性小鼠。再次在不同時間點收集腫瘤及血漿樣本，並測定7-乙基-喜樹鹼之含量。
最後，為了比較，取4mg的實例23差向異構性參考綴合物(具有弱的αvß3結合親和性)溶於生理食鹽水，經靜脈注射將其投與帶有786-O腫瘤之NMRI nu/nu雌性小鼠。在不同時間點收集腫瘤及血漿樣本，並測定完整綴合物及綴合物所裂解毒性團7-乙基-喜樹鹼之含量。
表7中，綜合說明此等實驗分別檢測7-乙基喜樹鹼之腫瘤/血漿比值。相較於直接投與毒性基團及投與結合性弱的差向異構性對照綴合物，係證實該7-乙基喜樹鹼利用αvß3整合素綴合物加強傳遞至腫瘤。
表7：
Figure 108139645-A0202-12-0038-30
活體內異種移植試驗
在人類癌症之鼠類異種移植模式中檢測實例1之抗腫瘤活性。基於此目的，在免疫缺陷小鼠中，經皮下植入腫瘤細胞或腫瘤片段。當平均腫瘤大小達20至40mm2時，動物隨機分成處理組與對照組(n=8隻動物/組)，並開始使用僅媒劑或實例1處理(調配物：磷酸鹽緩衝生理食鹽水(「PBS」)；施加途徑：經靜脈內投至尾靜脈(「i.v.」))。連續三天，一天一次進行靜脈內處理，然後停藥四天不處理。至少每周測定腫瘤大小與體重。利用電子式卡尺量測腫瘤面積[長度(mm)x寬度(mm)]。依據德國與歐洲動物福利規範，當實驗組到達預定倫理終點時即結束。活體內抗腫瘤效力係以媒劑對照組留在試驗中最後一天時之處理組與對照組所測定平均腫瘤面積之T/C比值表示(處理組/對照組；處理組之平均腫瘤面積/對照組之平均腫瘤面積)。T/C低於0.5之化合物則定義為活性(亦即有效)。採用SigmaStat軟體進 行統計分析。進行單向變方分析，並採用配對比較法(鄧氏(Dunn’s)方法)比較其與對照組之差異。
結果：
在接受單方療法處理之不同人類腫瘤異種移植模式中，實例1顯示出強力的抗腫瘤效力。特言之，實例1在乳癌、結腸癌、肺癌與腎癌中係有效降低腫瘤面積。
表8：實例1在小鼠之不同人類癌症異種移植模式中之抗腫瘤活性。
Figure 108139645-A0202-12-0039-33

Claims (12)

  1. 一種式(I)化合物
    CT-LI-SP-IA (I)
    其中
    CT 為單價基團，其係來自：細胞毒性基團、細胞生長抑制劑之基團、與細胞生長抑制劑衍生物之基團之群組中，其可分別額外帶有羥基、羧基或胺基；
    LI 為如式：-L-Val-L-Pro-L-Asp-之二價肽基團；
    SP 為如下式基團：-C=O-(CH2)x-O-(CH2-CH2-O)y-CH2-CH2-(NH)z-C=O-，其中x=1至5，y=0至15及z=0至1；
    IA 為針對αvβ3整合素受體之單價基團；
    及其鹽類、溶劑合物、及該等鹽類之溶劑合物。
  2. 一種通式(Ia)化合物
    Figure 108139645-A0202-13-0001-35
    其中x為1至5及y=0至15，
    及其鹽類、溶劑合物、及該等鹽類之溶劑合物。
  3. 如請求項1至2中任一項之化合物，其中x=1至4，及y=0至10。
  4. 如請求項1至2中任一項之化合物，其中x=1至2，及y=0至5。
  5. 一種式(II)化合物
    Figure 108139645-A0202-13-0002-37
    及其鹽類、溶劑合物、及該等鹽類之溶劑合物。
  6. 如請求項5之化合物，其係呈其二鈉鹽形式。
  7. 如請求項1至6中任一項所定義之化合物，其係供治療及/或預防疾病。
  8. 如請求項1至6中任一項所定義之化合物，其係供治療及/或預防過度增生性病變。
  9. 一種以如請求項1至6中任一項所定義之化合物於製造用以治療及/或預防過度增生性病變之藥物之用途。
  10. 一種藥物，其包含如請求項1至6中任一項所定義之化合物，以及一或多種惰性、無毒性、醫藥上合適之賦形劑。
  11. 如請求項10之藥物，其係供治療及/或預防過度增生性病變。
  12. 一種治療及/或預防人類與動物之眼部病變及癌症或腫瘤之方法，其係投與有效量之至少一種如請求項1至6中任一項所定義之化合物，或如請求項10至11中任一項所定義之藥物。
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