TW202031681A - 經工程處理之Fc - Google Patents

Abstract

本發明揭示包含Fc區之抗原結合分子，該Fc區包含具有以下之多肽：(i)在對應於位置242之位置的C及在對應於位置334之位置的C；以及(ii)以下中之一或多者：在對應於位置236之位置的A、在對應於位置239之位置的D、在對應於位置332之位置的E、在對應於位置330之位置的L、在對應於位置345之位置的K及在對應於位置430之位置的G。亦揭示此等Fc區之成分多肽、編碼此等抗原結合分子及多肽的核酸、包含此等抗原結合分子、多肽及核酸之組合物以及使用該等組合物之方法。

Description

經工程處理之Fc

發明領域 本申請案主張2018年10月25日申請之GB 1817354.2的優先權，該申請案之內容及要素以引用的方式併入本文中用於所有目的。

本發明係關於分子生物學之領域，更特定而言，係關於抗體技術。

發明背景 存在二個主要(非相互排斥)策略以藉由更改Fc:Fc受體及Fc:補體組分1q (C1q)相互作用來調節(增強或減弱)抗體Fc效應功能(ADCC、ADCP、CDC)。

最常見方法涉及將胺基酸取代提供至Fc區之多肽鏈以產生對稱(均二聚) IgG分子。

可替代地，抗體可經糖基工程處理；最常見策略包括藉由操縱宿主細胞中之聚糖生物合成路徑來修飾N連接寡糖且在活體外重構聚糖。修飾包括去岩藻糖基化、經增加之末端半乳糖基化及經增加之末端唾液酸化。

然而，存在與影響效應功能之已知修飾相關的缺點。海藻糖基(Afucosyl)抗體之產生在技術上具有挑戰性，通常需要突變細胞類型(例如，Lec13 CHO細胞、FUT8基因剔除CHO細胞等)之表現或所治療細胞之表現減少涉及聚糖合成/處理的因子之表現(例如，用FUT8 siRNA或基夫鹼(kifunensine)抑制劑處理之細胞)，或需要在其表現之後處理抗體製劑以移除具有岩藻糖基殘基的聚糖。此等抗體製劑通常經岩藻糖基化抗體污染，使得Fcγ受體結合活性相對於岩藻糖基化抗體製劑的改良限於約3倍(參見例如Chung等人, MAbs (2012) 4(3): 326-340)。

經由將胺基酸取代引入於Fc區中來改良效應功能之當代方法通常與ADCC活性相對於具有未經取代之Fc區之抗體的約2至5倍改良相關。

仍需要具有改良結構及功能特性之Fc區。

發明概要 在第一態樣中，本發明提供一種任擇地經分離之抗原結合分子，其包含Fc區，該Fc區包含具有以下之多肽：(i)在對應於位置242之位置的C及在對應於位置334之位置的C；以及(ii)以下中之一或多者：在對應於位置236之位置的A、在對應於位置239之位置的D、在對應於位置332之位置的E、在對應於位置330之位置的L、在對應於位置345之位置的K及在對應於位置430之位置的G。

除非另外說明，否則Fc區之多肽中之位置根據EU編號系統，如Kabat等人, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第5版 Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991中所描述進行編號。

在一些實施例中，Fc區包含具有以下之多肽：(i)在對應於位置242之位置的C及在對應於位置334之位置的C以及(ii)在對應於位置236之位置的A、在對應於位置239之位置的D、在對應於位置332之位置的E及在對應於位置330之位置的L；或在對應於位置236之位置的A、在對應於位置239之位置的D及在對應於位置332之位置的E；或在對應於位置236之位置的A及在對應於位置239之位置的D；或在對應於位置345之位置的K及在對應於位置430之位置的G。

在一些實施例中，Fc區包含具有以下之多肽：(i)在對應於位置242之位置的C及在對應於位置334之位置的C；以及(ii)在對應於位置236之位置的A、在對應於位置239之位置的D、在對應於位置332之位置的E及在對應於位置330之位置的L。

在一些實施例中，Fc區包含具有以下之多肽：(i)在對應於位置242之位置的C及在對應於位置334之位置的C；以及(ii)在對應於位置236之位置的A、在對應於位置239之位置的D及在對應於位置332之位置的E。

在一些實施例中，Fc區包含具有以下之多肽：(i)在對應於位置242之位置的C及在對應於位置334之位置的C；以及(ii)在對應於位置236之位置的A及在對應於位置239之位置的D。

在一些實施例中，Fc區包含具有以下之多肽：(i)在對應於位置242之位置的C及在對應於位置334之位置的C；以及(ii)在對應於位置345之位置的K及在對應於位置430之位置的G。

在一些實施例中，Fc區包含包括與SEQ ID NO:39、38、37、41、22、21、20或24具有至少60%序列一致性之胺基酸序列的多肽。

亦提供一種任擇地經分離之多肽，其包含與SEQ ID NO:31或6具有至少60%序列一致性之胺基酸序列，其中多肽包含以下在相對於SEQ ID NO:31或6編號之指定位置的胺基酸殘基：(i)在位置15之C及在位置107之C；以及(ii)以下中的一或多者：在位置9之A、在位置12之D、位置103之L、在位置105之E、在位置118之K及在位置203之G。

在一些實施例中，多肽包含以下在相對於SEQ ID NO:31或6編號之指定位置的胺基酸殘基：(i)在位置15處之C及在位置107處之C以及(ii)在位置9之A、在位置12之D、在位置103之L及在位置105之E；或在位置9之A、在位置12之D及在位置105之E；或在位置9之A及在位置12之D；或在位置118之K及在位置203之G。

在一些實施例中，多肽包含以下在相對於SEQ ID NO:31或6編號之指定位置的胺基酸殘基：(i)在位置15之C及在位置107之C；以及(ii)在位置9之A、在位置12之D、在位置103之L及在位置105之E。

在一些實施例中，多肽包含以下在相對於SEQ ID NO:31或6編號之指定位置的胺基酸殘基：(i)在位置15之C及在位置107之C；以及(ii)在9之A、在位置12之D及在位置105之E。

在一些實施例中，多肽包含以下在相對於SEQ ID NO:31或6編號之指定位置的胺基酸殘基：(i)在位置15之C及在位置107之C；以及(ii)在位置9之A及在位置12之D。

在一些實施例中，多肽包含以下在相對於SEQ ID NO:31或6編號之指定位置的胺基酸殘基：(i)在位置15之C及在位置107之C；以及(ii)在位置118之K及在位置203之G。

亦提供一種任擇地經分離之多肽，其包含SEQ ID NO:39、38、37、41、22、21、20或24之胺基酸序列。

亦提供一種任擇地經分離之Fc區，其包含如本文中所描述之多肽。

亦提供一種任擇地經分離之抗原結合分子，其包含如本文中所描述之多肽或Fc區。

亦提供一種任擇地經分離之核酸或多種核酸，其編碼如本文中所描述之抗原結合分子、多肽或Fc區。

亦提供一種表現載體或多種表現載體，其包含如本文中所描述之一種核酸或多種核酸。

亦提供一種細胞，其包含如本文中所描述之抗原結合分子、多肽、Fc區、一種核酸或多種核酸或一種表現載體或多種表現載體。

亦提供一種方法，其包含在適合於由(多種)核酸或(多種)表現載體表現抗原結合分子、多肽或Fc區的條件下，培養包含如本文中所描述之一種核酸或多種核酸或一種表現載體或多種表現載體的細胞。

亦提供一種組合物，其包含如本文中所描述之抗原結合分子、多肽、Fc區、一種核酸或多種核酸、一種表現載體或多種表現載體或細胞。

亦提供如本文中所描述之抗原結合分子、多肽、Fc區、一種核酸或多種核酸、一種表現載體或多種表現載體、細胞或組合物，其用於醫藥治療或防治的方法中。

亦提供如本文中所描述之抗原結合分子、多肽、Fc區、一種核酸或多種核酸、一種表現載體或多種表現載體、細胞或組合物，其用於治療或預防癌症、感染性疾病或自體免疫疾病的方法中。

亦提供一種如本文中所描述之抗原結合分子、多肽、Fc區、一種核酸或多種核酸、一種表現載體或多種表現載體、細胞或組合物的用途，其用於製造用於治療或預防癌症、感染性疾病或自體免疫疾病之方法中的藥劑。

亦提供一種治療或預防癌症、感染性疾病或自體免疫疾病之方法，其包含向個體投與治療或預防有效量的如本文中所描述之抗原結合分子、多肽、Fc區、一種核酸或多種核酸、一種表現載體或多種表現載體、細胞或組合物。

亦提供一種殺死表現目標抗原之細胞的方法，任擇地一種活體外方法，其包含使表現目標抗原之細胞與如本文中所描述的抗原結合分子、多肽、Fc區、一種核酸或多種核酸、一種表現載體或多種表現載體、細胞或組合物接觸。

本發明係基於出人意料之發現：Fc區取代之特定組合適用於提供具有有利特性之組合的抗原結合分子。

特定而言，本發明者已鑑別用於提供分子內二硫橋鍵之Fc區取代可與用於增強效應活性之Fc區取代組合以得到對活化性Fcγ受體及FcRn受體具有出乎意料地高親和力、相對於抑制性Fcγ受體對活化性Fcγ受體具有較高選擇性以及較高穩定性的Fc區。 抗原結合分子

本發明提供抗原結合分子。抗原結合分子可以經分離或實質上純化形式提供。

「抗原結合分子」係指能夠結合至目標抗原之分子，且涵蓋單株抗體、多株抗體、單特異性及多特異性抗體(例如，雙特異性抗體)及抗體片段(例如Fv、scFv、Fab、scFab、F(ab')₂ 、Fab₂ 、雙功能抗體、三功能抗體、scFv-Fc、微型抗體、單區域抗體(例如VhH)等)，只要其顯示結合至(多種)相關目標分子。

本發明之抗原結合分子包含能夠結合至目標抗原之部分及Fc區。

在一些實施例中，能夠結合至目標抗原之部分包含能夠特異性結合至目標抗原之抗體的抗體重鏈可變區(VH)及抗體輕鏈可變區(VL)。

在一些實施例中，能夠結合至目標抗原之部分包含能夠結合至目標抗原之適體(例如核酸適體)或由其組成(綜述於例如Zhou及Rossi Nat Rev Drug Discov. 2017 16(3):181-202中)。在一些實施例中，能夠結合至目標抗原之部分包含抗原結合肽/多肽或由其組成，例如肽適體、硫氧還蛋白、單功能抗體、抗運載蛋白、Kunitz區域、高親和性多聚體、打結素、菲諾體(fynomer)、阿特里體(atrimer)、DARPin、親和抗體、奈米抗體(亦即單區域抗體(sdAb))、阿菲林(affilin)、犰狳重複蛋白(armadillo repeat protein；ArmRP)、OBody或纖維結合蛋白，綜述於例如Reverdatto等人, Curr Top Med Chem. 2015; 15(12): 1082-1101中，該文獻以全文引用的方式併入本文中(亦參見例如Boersma等人, J Biol Chem (2011) 286:41273-85及Emanuel等人, Mabs (2011) 3:38-48)。

本發明之抗原結合分子通常包含抗原結合部分，其包含能夠特異性結合至目標抗原之抗體的VH及VL。由VH及VL形成之抗原結合部分在本文中亦可稱為Fv區。

抗原結合分子可為或可包含抗原結合多肽或抗原結合多肽複合物。抗原結合分子可包含多於一個一起形成抗原結合區域之多肽。多肽可共價或非共價締合。抗原結合分子可指多於一個多肽(例如2、3、4、6或8個多肽)之非共價或共價複合物，例如包含二個重鏈多肽及二個輕鏈多肽之IgG樣抗原結合分子。

本發明之抗原結合分子可使用能夠結合至目標抗原之單株抗體(mAb)的序列來設計及製備。抗體之抗原結合部分為能夠結合至其中既定抗體對其具有特異性之目標的抗體之任何片段。抗體之抗原結合部分包括可變片段(Fv)及Fab片段。

抗體通常包含六個互補決定區CDR；三個在重鏈可變(VH)區中：HC-CDR1、HC-CDR2及HC-CDR3，且三個在輕鏈可變(VL)區中：LC-CDR1、LC-CDR2及LC-CDR3。六個CDR一起定義抗體之互補位，其為結合至目標抗原的抗體之部分。

VH區及VL區在各CDR之任一側包含構架區(FR)，其向CDR提供骨架。自N端至C端，VH區包含以下結構：N端-[HC-FR1]-[HC-CDR1]-[HC-FR2]-[HC-CDR2]-[HC-FR3]-[HC-CDR3]-[HC-FR4]-C端；且VL區包含以下結構：N端-[LC-FR1]-[LC-CDR1]-[LC-FR2]-[LC-CDR2]-[LC-FR3]-[LC-CDR3]-[LC-FR4]-C端。

存在若干用於定義抗體CDR及FR之不同慣例，諸如Kabat等人, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第5版 Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)；Chothia等人, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)中所描述之彼等；及如Retter等人, Nucl. Acids Res. (2005) 33 (增刊1): D671-D674中所描述之VBASE2。本文中所描述之抗體純系之VH區及VL區的CDR及FR根據國際免疫遺傳學(ImMunoGeneTics；IMGT)資訊系統來定義(LeFranc等人, Nucleic Acids Res. (2015) 43 (Database issue):D413-22)，其使用如Lefranc等人, Dev. Comp. Immunol. (2003) 27:55-77中所描述之IMGT V-DOMAIN編號法則。

在一些實施例中，抗原結合分子包含能夠結合至目標抗原之抗原結合分子的CDR。在一些實施例中，抗原結合分子包含能夠結合至目標抗原之抗原結合分子的FR。在一些實施例中，抗原結合分子包含能夠結合至目標抗原之抗原結合分子的CDR及FR。即，在一些實施例中，抗原結合分子包含能夠結合至目標抗原之抗原結合分子的VH區及VL區。在一些實施例中，根據本發明之抗原結合分子包含結合至目標抗原之Fv區。在一些實施例中，Fv區包含包括VH及VL之多肽(例如，VH-VL融合多肽)。在一些實施例中，VH區及VL區提供為藉由連接子序列(例如，如本文中所描述)接合之單個多肽；亦即為單鏈Fv (scFv)。

在一些實施例中，抗原結合分子包含能夠結合至目標抗原之Fab片段。Fab片段包含VH區及VL區，且進一步包含免疫球蛋白重鏈恆定區1 (CH1)及免疫球蛋白輕鏈恆定區(CL)。在一些實施例中，抗原結合分子包含包括VH、CH1、VL及CL (例如Cκ或Cλ)之Fab區。在一些實施例中，Fab區包含包括VH及CH1之多肽(例如VH-CH1融合多肽)以及包含VL及CL之多肽(例如VL-CL融合多肽)。在一些實施例中，Fab區包含包括VH及CL之多肽(例如VH-CL融合多肽)以及包含VL及CH之多肽(例如VL-CH1融合多肽)；即，在一些實施例中，Fab區為CrossFab區。在一些實施例中，Fab或CrossFab之VH、CH1、VL及CL區提供為由連接子序列接合之單一多肽，亦即為單鏈Fab (scFab)或單鏈CrossFab (scCrossFab)。

不同種類之免疫球蛋白及其結構描述於例如Schroeder及Cavacini J Allergy Clin Immunol. (2010) 125(202): S41-S52中，其以全文引用之方式併入本文中。G型免疫球蛋白(亦即IgG)為包含二個重鏈及二個輕鏈之約150 kDa糖蛋白。自N端至C端，重鏈包含VH，後接包含三個恆定域(CH1、CH2及CH3)之重鏈恆定區，且類似地，輕鏈包含VL，後接CL。視重鏈而定，免疫球蛋白可分類為IgG (例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)、IgA(例如IgA1、IgA2)、IgD、IgE或IgM。輕鏈可為卡帕(κ)或拉姆達(λ)。

免疫球蛋白重鏈恆定區序列可為或可來源於IgG (例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)、IgA (例如IgA1、IgA2)、IgD、IgE或IgM之重鏈恆定序列。

在一些實施例中，重鏈恆定區序列可為或可來源於IgG之重鏈恆定序列。在一些實施例中，重鏈恆定區序列可為或可來源於人類IgG之重鏈恆定序列。

在一些實施例中，重鏈恆定區序列可為或可來源於人類IgG1同種異型(例如G1m1、G1m2、G1m3或G1m17)之重鏈恆定序列。

在一些實施例中，免疫球蛋白重鏈恆定序列為人類免疫球蛋白G 1恆定，G1m1同種異型(IGHG1；UniProt：P01857-1，v1；SEQ ID NO:1)。SEQ ID NO:1之位置1至98形成CH1區(SEQ ID NO:2)。SEQ ID NO:1之位置99至110形成CH1與CH2區之間的鉸鏈區(SEQ ID NO:3)。SEQ ID NO:1之位置111至223形成CH2區(SEQ ID NO:4)。SEQ ID NO:1之位置224至330形成CH3區(SEQ ID NO:5)。

在一些實施例中，免疫球蛋白重鏈恆定序列為人類免疫球蛋白G 1恆定，G1m3同種異型(SEQ ID NO:28)。SEQ ID NO:28之位置1至98形成CH1區(SEQ ID NO:29)。SEQ ID NO:28之位置99至110形成CH1與CH2區之間的鉸鏈區(SEQ ID NO:3)。SEQ ID NO:28之位置111至223形成CH2區(SEQ ID NO:4)。SEQ ID NO:28之位置224至330形成CH3區(SEQ ID NO:30)。

在一些實施例中，抗原結合分子包含一或多個CH1區。在一些實施例中，CH1區包含或由以下組成：SEQ ID NO:2之序列；或與SEQ ID NO:2之胺基酸序列具有至少60%，較佳地70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%胺基酸序列一致性中之一者的序列。在一些實施例中，CH1區包含或由以下組成：SEQ ID NO:29之序列；或與SEQ ID NO:29之胺基酸序列具有至少60%，較佳地70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%胺基酸序列一致性中之一者的序列。

在一些實施例中，抗原結合分子包含一或多個CH1-CH2鉸鏈區。在一些實施例中，CH1-CH2鉸鏈區包含或由以下組成：SEQ ID NO:3之序列；或與SEQ ID NO:3之胺基酸序列具有至少60%，較佳地70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%胺基酸序列一致性中之一者的序列。

在一些實施例中，本發明之抗原結合分子包含免疫球蛋白輕鏈恆定序列之一或多個區域。在一些實施例中，免疫球蛋白輕鏈恆定序列為人類免疫球蛋白κ恆定(IGKC；Cκ；UniProt：P01834-1，v2；SEQ ID NO:7)。在一些實施例中，免疫球蛋白輕鏈恆定序列為人類免疫球蛋白λ恆定(IGLC；Cλ)，例如IGLC1、IGLC2、IGLC3、IGLC6或IGLC7。在一些實施例中，抗原結合分子包含一或多個CL區。在一些實施例中，CL區包含或由以下組成：SEQ ID NO:7之序列；或與SEQ ID NO:7之胺基酸序列具有至少60%，較佳地70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%胺基酸序列一致性中之一者的序列。

本發明之抗原結合分子可一任何適合的格式提供，只要其包含至少一個抗原結合部分及至少一個Fc區。

在一些實施例中，抗原結合分子包含抗原結合部分，其包含或由以下中之一者組成：對目標抗原具有特異性之Fv、scFv、Fab、scFab、CrossFab、scCrossFab、VhH、雙功能抗體或三功能抗體。

在一些實施例中，抗原結合分子包含多於一個(例如2、3、4、5、6、7、8個等)抗原結合部分。在其中抗原結合分子包含多於一個抗原結合部分之實施例中，抗原結合部分可相同或不相同。在一些實施例中，抗原結合部分可各自獨立地為根據如本文中所描述之抗原結合部分的任何實施例的抗原結合部分。

在一些實施例中，抗原結合分子為單特異性的(亦即，包含一種類型之抗原結合部分)。借助於說明，本揭露內容之實驗實例中所表徵之抗原結合分子針對HER3為單特異性的。

在一些實施例中，抗原結合分子為多特異性的(例如雙特異性、三特異性等)；即，在一些實施例中，抗原結合分子包含多於一個(例如2、3個等)不同類型之抗原結合部分。多特異性抗原結合分子可與不相同抗原決定基結合。多特異性抗原結合分子可與不相同目標抗原結合。

根據本發明之抗原結合分子至少顯示與目標抗原之單價結合。結合原子價係指在抗原結合分子中針對既定目標之結合位點之數目。在一些實施例中，抗原結合分子針對既定目標為多價的(例如二價、三價等)。借助於說明，本揭露內容之實驗實例中所表徵之抗原結合分子包含二個針對HER3之相同結合位點，且因此為單特異性的二價抗原結合分子。

除能夠結合至目標抗原之部分以外，本發明之抗原結合分子包含Fc區。

抗原結合部分(且因此抗原結合分子)針對其為特異性的目標抗原可為任何目標抗原。在一些實施例中，目標抗原為其表現/活性或其上調表現/活性與疾病或病症(例如癌症、感染性疾病或自體免疫疾病)正相關之抗原。在一些實施例中，目標抗原係在表現目標抗原之細胞的細胞表面處表現。

在一些實施例中，目標抗原藉由需要破壞或移除之感染物、細胞或組織細胞來表現。在一些實施例中，目標抗原藉由需要直接免疫反應(例如體液或細胞介導之免疫反應)之病原體、細胞或組織細胞來表現。在一些實施例中，目標抗原與癌症、感染性疾病或自體免疫疾病相關。

在一些實施例中，目標抗原藉由癌細胞、感染物、經感染物感染之細胞或自身免疫效應細胞(亦即，自身免疫病理之效應子)來表現。

在一些實施例中，目標抗原為癌細胞抗原(亦即，藉由癌細胞表現或過度表現之抗原)。癌細胞抗原之表現可能與癌症相關。癌細胞抗原可由癌細胞異常表現(例如，癌細胞抗原可表現有異常定位)，或可藉由癌細胞表現有異常結構。癌細胞抗原可能能夠引發免疫反應。在一些實施例中，抗原係在癌細胞之細胞表面表現(亦即，癌細胞抗原為癌細胞表面抗原)。在一些實施例中，由本文中所描述之抗原結合分子結合之抗原部分顯示於癌細胞之外表面(亦即，細胞外)上。癌細胞抗原可為癌症相關抗原。在一些實施例中，癌細胞抗原為其表現與癌症之出現、進展或症狀嚴重程度相關的抗原。癌症相關抗原可能與癌症之病因或病理相關，或可能由於癌症而異常表現。在一些實施例中，癌細胞抗原為其表現例如與類似非癌細胞(例如來源於相同組織/細胞類型之非癌細胞)之表現位準相比，由癌細胞上調(例如在RNA及/或蛋白質位準方面)的抗原。在一些實施例中，癌症相關抗原可能優先由癌細胞表現，且不由類似非癌細胞(例如，來源於相同組織/細胞類型之非癌細胞)表現。在一些實施例中，癌症相關抗原可為突變致癌基因或突變腫瘤抑制基因之產物。在一些實施例中，癌症相關抗原可為過度表現細胞蛋白質、由致癌病毒產生之癌症抗原、癌胚抗原或細胞表面糖脂或糖蛋白的產物。

在一些實施例中，目標抗原為感染物之抗原。抗原可為由感染物表現之抗原。抗原可為存在於經感染物感染之細胞之細胞表面的抗原。抗原可為存在於使感染物內化(例如吞噬)之細胞之細胞表面的抗原。抗原可為其表現與感染物之感染相關的抗原，例如由經感染物感染之細胞異常表現的抗原。在一些實施例中，目標抗原為其表現例如與類似非感染細胞(例如來源於相同組織/細胞類型之非感染細胞)之表現位準相比，由經感染物感染的細胞上調(例如在RNA和/或蛋白質位準方面)之抗原。在一些實施例中，目標抗原可優先由經感染物感染之細胞表現，且不由類似非感染細胞(例如來源於相同組織/細胞類型之非感染細胞)表現。

在一些實施例中，目標抗原係自身免疫效應細胞(亦即，由自身免疫效應細胞表現或過度表現之抗原)。抗原之表現可能與自身免疫病理相關。在一些實施例中，抗原係在自身免疫效應細胞之細胞表面表現。在一些實施例中，由本文中所描述之抗原結合分子結合之抗原部分顯示於自身免疫效應細胞之外表面(亦即，細胞外)上。在一些實施例中，抗原為其表現與自體免疫疾病/病況之發展、進展或症狀嚴重程度相關的抗原。抗原可能與自體免疫疾病/病況之病因或病理相關。在一些實施例中，抗原之表現例如與並非自身免疫效應細胞的來源於相同組織/細胞類型之細胞相比，由自身免疫效應細胞上調(例如在RNA和/或蛋白質位準方面)。在一些實施例中，抗原可優先由自身免疫效應細胞表現，且不由並非自身免疫效應細胞之類似細胞表現。

在一些實施例中，目標抗原為HER3。在一些實施例中，目標抗原為VISTA。在一些實施例中，目標抗原為CD47。在一些實施例中，目標抗原為CD33。在一些實施例中，目標抗原為BCMA。在一些實施例中，目標抗原為TACI。 Fc區

本發明提供包含Fc區之抗原結合分子。亦提供Fc區。Fc區可以經分離或實質上經純化形式提供。

Fc區提供與Fc受體及免疫系統之其他分子之相互作用以產生功能效應。IgG Fc介導之效應功能綜述於例如Jefferis等人, Immunol Rev 1998 163:59-76 (以全文引用之方式併入本文中)中，且經由Fc-介導的免疫細胞(例如巨噬細胞、樹突狀細胞、嗜中性球、嗜鹼性球、嗜酸性球、血小板、肥大細胞、NK細胞及T細胞)之募集及活化，經由Fc區與由免疫細胞表現之Fc受體之間的相互作用，經由Fc區與補體蛋白C1q之結合來募集補體路徑組分，以及隨之而來的補體級聯之活化來實現。

在IgG IgA及IgD同型中，Fc區由來自一個多肽之CH2及CH3區以及來自另一多肽之CH2及CH3區組成。來自二個多肽之CH2及CH3區一起形成Fc區。在IgM及IgE同型中，Fc區含有三個恆定域(CH2、CH3及CH4)，且來自二個多肽之CH2與CH4一起形成Fc區。

在根據本揭露內容之各個態樣的較佳實施例中，Fc區包含二個多肽，各多肽包含CH2區及CH3區。

Fc介導之功能包括：Fc受體結合、抗體依賴性細胞毒性(antibody-dependent cellular cytotoxicity；ADCC)、抗體依賴性細胞介導之吞噬作用(antibody-dependent cell-mediated phagocytosis；ADCP)、補體依賴性細胞毒性(complement-dependent cytotoxicity；CDC)、膜攻擊複合物(membrane attack complex；MAC)之形成、細胞脫粒、細胞介素及/或趨化因子產生以及抗原加工及呈遞。

影響Fc介導之功能之抗體Fc區的修飾為此項技術中已知的，諸如描述於例如Wang等人, Protein Cell (2018) 9(1):63-73中之彼等，該文獻以全文引用之方式併入本文中。已知影響抗體效應功能之例示性Fc區修飾概括於Wang等人, Protein Cell (2018) 9(1):63-73之表1中。

取代F243L/R292P/Y300L/V305I/P396L之組合描述於Stavenhagen等人 Cancer Res. (2007)中以增大與FcγRIIIa結合，且藉此增強ADCC。取代S239D/I332E或S239D/I332E/A330L之組合描述於Lazar等人, Proc Natl Acad Sci USA. (2006)103:4005-4010中以增大與FcγRIIIa結合，且藉此增大ADCC。取代S239D/I332E/A330L之組合亦經描述以減少與FcγRIIb結合，且藉此增加ADCC。取代S298A/E333A/K334A之組合描述於Shields等人, J Biol Chem. (2001) 276:6591-6604中以增大與FcγRIIIa結合，且藉此增加ADCC。一個重鏈中之取代L234Y/L235Q/G236W/S239M/H268D/D270E/S298A的組合及其他重鏈中之取代D270E/K326D/A330M/K334E的組合描述於Mimoto等人, MAbs. (2013): 5:229-236中以增大與FcγRIIIa結合，且藉此增加ADCC。取代G236A/S239D/I332E之組合描述於Richards等人, Mol Cancer Ther. (2008) 7:2517-2527中以增大與FcγRIIa結合且增大與FcγRIIIa結合，且藉此增加ADCP。

取代K326W/E333S之組合描述於Idusogie等人 J Immunol. (2001) 166(4):2571-5中以增大與C1q結合，且藉此增加CDC。取代S267E/H268F/S324T之組合描述於Moore等人 MAbs. (2010) 2(2):181-9中以增大與C1q結合，且藉此增加CDC。描述於Natsume等人, Cancer Res. (2008) 68(10):3863-72中之取代組合經報導以增加與C1q結合，且藉此增加CDC。取代E345R/E430G/S440Y之組合描述於Diebolder等人 Science (2014) 343(6176):1260-3中以增加六聚作用(hexamerisation)，且藉此增加CDC。

取代E345K/E430G之組合描述於de Jong等人 PLoS Biol. (2016) 14(1):e1002344中以增加六聚體形成及補體活化，且藉此增加CDC。

取代M252Y/S254T/T256E之組合描述於Dall'Acqua等人 J Immunol. (2002) 169:5171-5180中以在pH 6.0下增大與FcRn結合，且藉此增加抗原結合分子半衰期。取代M428L/N434S之組合描述於Zalevsky等人 Nat Biotechnol. (2010) 28:157-159中以在pH 6.0下增大與FcRn結合，且藉此增加抗原結合分子半衰期。

取代L242C、K334C之組合描述於Gong等人 J Biol Chem. (2009) 284(21):14203-10及McConnell等人 Protein Eng Des Sel. (2013) 26(2):151-64中以增加抗體恆定域之熱穩定性。

當重鏈恆定區/Fc區/CH2-CH3區/CH2區/CH3區在本文中描述為包含「對應於」(多種)參考位置/(多種)取代之(多種)位置/(多種)取代時，考慮同源重鏈恆定區/Fc區/CH2-CH3區/CH2區/CH3區中之(多種)等效位置/(多種)取代。

當Fc區描述為包含(多種)特定位置/(多種)取代時，(多種)位置/(多種)取代可存在於一個或兩個一起形成Fc區之多肽鏈中。

除非另外規定，否則本文中之位置係指根據EU編號系統編號之人類免疫球蛋白恆定區胺基酸序列之位置，如Kabat等人, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第5版 Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991中所描述。

人類IgG1(G1m1)重鏈恆定區的同源重鏈恆定區為包含與人類IgG1(G1m1)之重鏈恆定區(亦即，展示於SEQ ID NO:1中之胺基酸序列)具有至少60%，較佳70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%胺基酸序列一致性中之一者的胺基酸序列之重鏈恆定區。人類IgG1(G1m1) Fc區之同源Fc區為由多肽組成之Fc區，該等多肽包含與人類IgG1(G1m1)之CH2-CH3區(亦即，展示於SEQ ID NO:6中之胺基酸序列)具有至少60%，較佳70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%胺基酸序列一致性中之一者的胺基酸序列。人類IgG1(G1m1) CH2區之同源CH2區為包含與人類IgG1(G1m1)之CH2區(亦即，展示於SEQ ID NO:4中之胺基酸序列)具有至少60%，較佳70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%胺基酸序列一致性中之一者的胺基酸序列之CH2區。人類IgG1(G1m1) CH3區之同源CH3區為包含與人類IgG1(G1m1)之CH3區(亦即，展示於SEQ ID NO:5中之胺基酸序列)具有至少60%，較佳70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%胺基酸序列一致性中之一者的胺基酸序列之CH3區。

人類IgG1(G1m3)重鏈恆定區的同源重鏈恆定區為包含與人類IgG1(G1m3)之重鏈恆定區(亦即，展示於SEQ ID NO:28中之胺基酸序列)具有至少60%，較佳70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%胺基酸序列一致性中之一者的胺基酸序列之重鏈恆定區。人類IgG1(G1m3) Fc區的同源Fc區為由多肽組成之Fc區，該等多肽包含與人類IgG1(G1m3)之CH2-CH3區(亦即，展示於SEQ ID NO:31中之胺基酸序列)具有至少60%，較佳70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%胺基酸序列一致性中之一者的胺基酸序列。人類IgG1(G1m3) CH2區之同源CH2區為包含與人類IgG1(G1m3)之CH2區(亦即，展示於SEQ ID NO:4中之胺基酸序列)具有至少60%，較佳70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%胺基酸序列一致性中之一者的胺基酸序列之CH2區。人類IgG1(G1m3) CH3區之同源CH3區為包含與人類IgG1(G1m3)之CH3區(亦即，展示於SEQ ID NO:30中之胺基酸序列)具有至少60%，較佳70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%胺基酸序列一致性中之一者的胺基酸序列之CH3區。

與人類IgG1中所鑑別之彼等相對應的位置可藉由可例如使用諸如ClustalOmega (Söding, J. 2005, Bioinformatics 21, 951-960)之序列比對軟體執行的序列比對來鑑別。

借助於說明，人類IgG1中之取代L242C及K334C對應於根據SEQ ID NO:25編號的小鼠Ig γ-2A鏈C區(A對偶基因)的位置125處之I>C取代及位置217處之R>C取代。

在一些實施例中，Fc區包含增加Fc介導之功能的修飾。在一些實施例中，Fc區包含增加ADCC之修飾。在一些實施例中，Fc區包含增加ADCP之修飾。在一些實施例中，Fc區包含增加或減少CDC之修飾。與包含相對應的未經修飾之Fc區之抗原結合分子相比，包含包括增加Fc介導之功能(例如ADCC、ADCP、CDC)之修飾的Fc區之抗原結合分子誘導相關效應功能位準增加。與包含相對應的未經修飾之Fc區之抗原結合分子相比，包含包括減少Fc介導之功能(例如CDC)之修飾的Fc區之抗原結合分子誘導相關效應功能位準降低。

在一些實施例中，Fc區包含增加與Fc受體結合的修飾。在一些實施例中，Fc區包含增加與Fcγ受體結合的修飾。在一些實施例中，Fc區包含增加與FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIb、FcγRIIc、FcγRIIIa及FcγRIIIb中之一或多者結合的修飾。在一些實施例中，Fc區包含增加與FcγRIIIa結合之修飾。在一些實施例中，Fc區包含增加與FcγRIIa結合之修飾。在一些實施例中，Fc區包含增加與FcγRIIb結合之修飾。在一些實施例中，Fc區包含減少與FcγRIIb結合之修飾。在一些實施例中，Fc區包含增加與FcRn結合之修飾。在一些實施例中，Fc區包含增加與補體蛋白結合之修飾。在一些實施例中，Fc區包含增加或減少與C1q結合之修飾。在一些實施例中，Fc區包含促進抗原結合分子之六聚作用的修飾。在一些實施例中，Fc區包含增加抗原結合分子半衰期之修飾。在一些實施例中，Fc區包含增加共接合之修飾。

在一些實施例中，Fc區包含(例如包含多於一個包含重鏈恆定區或CH2-CH3區之多肽，該等多肽包含)以下中之一或多者(例如1、2、3、4、5、6、7或8)：在對應於位置242之位置的C；在對應於位置334之位置的C；在對應於位置236之位置的A；在對應於位置239之位置的D；在對應於位置332之位置的E；在對應於位置330之位置的L；在對應於位置345之位置的K；以及在對應於位置430之位置的G。

在一些實施例中，Fc區包含(例如包含多於一個包含重鏈恆定區或CH2-CH3區之多肽，該等多肽包含)以下取代(或相對應的取代)中之一或多者(例如1、2、3、4、5、6、7或8)：L242C、K334C、G236A、S239D、I332E、A330L、E345K以及E430G。

在一些實施例中，Fc區包含(例如包含多於一個包含重鏈恆定區、CH2-CH3區或CH2區之多肽，該等多肽包含)在對應於位置242之位置的C。在一些實施例中，Fc區包含(例如包含多於一個包含重鏈恆定區、CH2-CH3區或CH2區之多肽，該等多肽包含)在對應於位置334之位置的C。在一些實施例中，Fc區包含(例如包含多於一個包含重鏈恆定區、CH2-CH3區或CH2區之多肽，該等多肽包含)在對應於位置242之位置的C及在對應於位置334之位置的C。

在一些實施例中，Fc區包含(例如包含多於一個包含重鏈恆定區、CH2-CH3區或CH2區之多肽，該等多肽包含)在對應於位置236之位置的A。在一些實施例中，Fc區包含(例如包含多於一個包含重鏈恆定區、CH2-CH3區或CH2區之多肽，該等多肽包含)在對應於位置239之位置的D。在一些實施例中，Fc區包含(例如包含多於一個包含重鏈恆定區、CH2-CH3區或CH2區之多肽，該等多肽包含)在對應於位置236之位置的A及在對應於位置239之位置的D。

在一些實施例中，Fc區包含(例如包含多於一個包含重鏈恆定區、CH2-CH3區或CH2區之多肽，該等多肽包含)在對應於位置332之位置的E。在一些實施例中，Fc區包含(例如包含多於一個包含重鏈恆定區、CH2-CH3區或CH2區之多肽，該等多肽包含)在對應於位置236之位置的A、在對應於位置239之位置的D及在對應於位置332之位置的E。

在一些實施例中，Fc區包含(例如包含多於一個包含重鏈恆定區、CH2-CH3區或CH2區之多肽，該等多肽包含)在對應於位置330之位置的L。在一些實施例中，Fc區包含(例如包含多於一個包含重鏈恆定區、CH2-CH3區或CH2區之多肽，該等多肽包含)在對應於位置236之位置的A、在對應於位置239之位置的D、在對應於位置332之位置的E及在對應於位置330之位置的L。

在一些實施例中，Fc區包含(例如包含多於一個包含重鏈恆定區、CH2-CH3區或CH3區之多肽，該等多肽包含)在對應於位置345之位置的K。在一些實施例中，Fc區包含(例如包含多於一個包含重鏈恆定區、CH2-CH3區或CH3區之多肽，該等多肽包含)在對應於位置430之位置的G。在一些實施例中，Fc區包含(例如包含多於一個包含重鏈恆定區、CH2-CH3區或CH3區之多肽，該等多肽包含)在對應於位置345之位置的K及在對應於位置430之位置的G。

在一些實施例中，Fc區包含(例如包含多於一個包含重鏈恆定區、CH2-CH3區或CH2區之多肽，該等多肽包含)在對應於位置242之位置的C、在對應於位置334之位置的C、在對應於位置236之位置的A及在對應於位置239之位置的D。

在一些實施例中，Fc區包含(例如包含多於一個包含重鏈恆定區、CH2-CH3區或CH2區之多肽，該等多肽包含)在對應於位置242之位置的C、在對應於位置334之位置的C、在對應於位置236之位置的A、在對應於位置239之位置的D及在對應於位置332之位置的E。

在一些實施例中，Fc區包含(例如包含多於一個包含重鏈恆定區、CH2-CH3區或CH2區之多肽，該等多肽包含)在對應於位置242之位置的C、在對應於位置334之位置的C、在對應於位置236之位置的A、在對應於位置239之位置的D、在對應於位置332之位置的E及在對應於位置330之位置的L。

在一些實施例中，Fc區包含(例如包含多於一個包含重鏈恆定區或CH2-CH3區之多肽，該等多肽包含)在對應於位置242之位置的C、在對應於位置334之位置的C、在對應於位置345之位置的K及在對應於位置430之位置的G。

在一些實施例中，Fc區包含(例如包含多於一個包含重鏈恆定區、CH2-CH3區或CH2區之多肽，該等多肽包含)取代L242C (或等效取代)。在一些實施例中，Fc區包含(例如包含多於一個包含重鏈恆定區、CH2-CH3區或CH2區之多肽，該等多肽包含)取代K334C (或等效取代)。在一些實施例中，Fc區包含(例如包含多於一個包含重鏈恆定區、CH2-CH3區或CH2區之多肽，該等多肽包含)取代L242C (或等效取代)及取代K334C (或等效取代)。

在一些實施例中，Fc區包含(例如包含多於一個包含重鏈恆定區、CH2-CH3區或CH2區之多肽，該等多肽包含)取代G236A (或等效取代)。在一些實施例中，Fc區包含(例如包含多於一個包含重鏈恆定區、CH2-CH3區或CH2區之多肽，該等多肽包含)取代S239D (或等效取代)。在一些實施例中，Fc區包含(例如包含多於一個包含重鏈恆定區、CH2-CH3區或CH2區之多肽，該等多肽包含)取代G236A (或等效取代)及取代S239D (或等效取代)。

在一些實施例中，Fc區包含(例如包含多於一個包含重鏈恆定區、CH2-CH3區或CH2區之多肽，該等多肽包含)取代I332E (或等效取代)。在一些實施例中，Fc區包含(例如包含多於一個包含重鏈恆定區、CH2-CH3區或CH2區之多肽，該等多肽包含)取代G236A (或等效取代)、取代S239D (或等效取代)及取代I332E (或等效取代)。

在一些實施例中，Fc區包含(例如包含多於一個包含重鏈恆定區、CH2-CH3區或CH2區之多肽，該等多肽包含)取代A330L (或等效取代)。在一些實施例中，Fc區包含(例如包含多於一個包含重鏈恆定區、CH2-CH3區或CH2區之多肽，該等多肽包含)取代G236A (或等效取代)、取代S239D (或等效取代)、取代I332E (或等效取代)及取代A330L (或等效取代)。

在一些實施例中，Fc區包含(例如包含多於一個包含重鏈恆定區、CH2-CH3區或CH3區之多肽，該等多肽包含)取代E345K (或等效取代)。在一些實施例中，Fc區包含(例如包含多於一個包含重鏈恆定區、CH2-CH3區或CH3區之多肽，該等多肽包含)取代E430G (或等效取代)。在一些實施例中，Fc區包含(例如包含多於一個包含重鏈恆定區、CH2-CH3區或CH3區之多肽，該等多肽包含)取代E345K (或等效取代)及取代E430G (或等效取代)。

在一些實施例中，Fc區包含(例如包含多於一個包含重鏈恆定區、CH2-CH3區或CH2區之多肽，該等多肽包含)取代L242C (或等效取代)、取代K334C (或等效取代)、取代G236A (或等效取代)及取代S239D (或等效取代)。

在一些實施例中，Fc區包含(例如包含多於一個包含重鏈恆定區、CH2-CH3區或CH2區之多肽，該等多肽包含)取代L242C (或等效取代)、取代K334C (或等效取代)、取代G236A (或等效取代)、取代S239D (或等效取代)及取代I332E (或等效取代)。

在一些實施例中，Fc區包含(例如包含多於一個包含重鏈恆定區、CH2-CH3區或CH2區之多肽，該等多肽包含)取代L242C (或等效取代)、取代K334C (或等效取代)、取代G236A (或等效取代)、取代S239D (或等效取代)、取代I332E (或等效取代)及取代A330L (或等效取代)。

在一些實施例中，Fc區包含(例如包含多於一個包含重鏈恆定區或CH2-CH3區之多肽，該等多肽包含)取代L242C (或等效取代)、取代K334C (或等效取代)、取代E345K (或等效取代)及取代E430G (或等效取代)。

在一些實施例中，Fc區包含一或多個包含與SEQ ID NO:8、9、10、11、12、13、14或15具有至少60%，較佳70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性中之一者的胺基酸序列之多肽。

在一些實施例中，Fc區包含一或多個包含與SEQ ID NO:16、17、18、19、20、21、22、23、24、33、34、35、36、37、38、39、40或41具有至少60%，較佳70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性中之一者的胺基酸序列之多肽。

在一些實施例中，Fc區包含(例如包含多於一個包含重鏈恆定區或CH2-CH3區之多肽，該等多肽包含)以下中之一或多者(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12)：在對應於位置243之位置的L、在對應於位置292之位置的P、在對應於位置300之位置的L、在對應於位置305之位置的I及在對應於位置396之位置的L；在對應於位置239之位置的D及在對應於位置332之位置的E；在對應於位置239之位置的D、在對應於位置332之位置的E及在對應於位置330之位置的L；在對應於位置298之位置的A、在對應於位置333之位置的A及在對應於位置334之位置的A；在對應於位置234之位置的Y、在對應於位置235之位置的Q、在對應於位置236之位置的W、在對應於位置239之位置的M、在對應於位置268之位置的D、在對應於位置270之位置的E及在對應於位置298之位置的A；在對應於位置270之位置的E、在對應於位置326之位置的D、在對應於位置330之位置的M及在對應於位置334之位置的E；在對應於位置236之位置的A、在對應於位置239之位置的D及在對應於位置332之位置的E；在對應於位置326之位置的W及在對應於位置333之位置的S；在對應於位置267之位置的E、在對應於位置268之位置的F及在對應於位置324之位置的T；在對應於位置345之位置的R、在對應於位置430之位置的G及在對應於位置440之位置的Y；在對應於位置252之位置的Y、在對應於位置254之位置的T及在對應於位置256之位置的E；以及在對應於位置428之位置的L及在對應於位置434之位置的S。

在一些實施例中，Fc區包含(例如包含多於一個包含重鏈恆定區或CH2-CH3區之多肽，該等多肽包含)以下取代(或相對應的取代)之組合中之一或多者(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12)：F243L/R292P/Y300L/V305I/P396L；S239D/I332E；S239D/I332E/A330L；S298A/E333A/K334A；L234Y/L235Q/G236W/S239M/H268D/D270E/S298A；D270E/K326D/A330M/K334E；G236A/S239D/I332E；K326W/E333S；S267E/H268F/S324T；E345R/E430G/S440Y；M252Y/S254T/T256E；以及M428L/N434S。

在一些實施例中，Fc區或(多種)多肽包含對連接至Fc區之寡糖(相對於連接至野生型IgG1之Fc區的寡糖)的修飾。Fc區之糖基工程處理描述於例如Kellner等人, Transfus Med Hemother (2017) 44:327-336中，其以全文引用之方式併入本文中。連接至N297人類IgG1 Fc之寡糖的存在對於與Fcγ受體及C1q結合為重要的，且N-聚糖中減少之岩藻糖或唾液酸含量已展示改善ADCC活性。

各種不同方法已用於製備具有經糖基工程處理之Fc區的抗體，包括來自缺乏一或多種涉及聚糖處理/修飾之酶活性之細胞的產物。舉例而言，N-聚糖中具有經減少岩藻糖之Fc可藉由經修飾以減少岩藻糖基轉移酶之蛋白質表現的細胞之表現(例如藉由基因剔除或反義干擾)來製備。可替代地，抗體可藉由用於移除岩藻糖殘基之因子來處理。修飾抗體Fc聚糖之其他方法包括具有N-乙醯胺基葡萄糖轉移酶之上調表現的細胞之表現，以產生具有等分GlcNAc之N-聚醣，從而改良Fc受體結合。

在一些實施例中，Fc區或(多種)多肽包含缺乏岩藻糖之N-聚糖。在一些實施例中，Fc區或(多種)多肽包含缺乏唾液酸之N-聚糖。在一些實施例中，Fc區或(多種)多肽缺乏包含岩藻糖之N-聚糖。在一些實施例中，Fc區或(多種)多肽缺乏包含唾液酸之N-聚糖。在一些實施例中，Fc區或(多種)多肽包含缺乏岩藻糖之N-聚糖。在一些實施例中，Fc區或(多種)多肽包含包括等分GlcNAc之N-聚糖。

在一些實施例中，Fc區包含CH2及CH3區中之一或多者中促進Fc區之成分多肽締合的修飾。抗原結合分子之成分多肽之重組共表現及後續締合產生若干可能組合。為改良重組產物中抗原結合分子中之多肽之所需組合的良率，在Fc區中引入促進重鏈多肽之所需組合之締合的(多種)修飾為有利的。修飾可促進例如不同多肽鏈之CH2及/或CH3區之間的疏水性及/或靜電相互作用。適合的修飾描述於例如Ha等人, Front. Immnol (2016) 7:394中，其以全文引用之方式併入本文中。

在一些實施例中，本發明之抗原抗原結合分子在Fc區之CH3區中包含根據以下格式中之一者的包含成對取代之Fc區，如Ha等人, Front. Immnol (2016) 7:394之表1中所展示：KiH、KiH_s-s 、HA-TF、ZW1、7.8.60、DD-KK、EW-RVT、EW-RVT_s-s 、SEED或A107。在一些實施例中，本發明之抗原抗原結合分子在Fc區之CH3區中包含根據以下格式中之一者的包含成對取代之Fc區，如Brinkmann及Kontermann, MABS (2017) 9(2):182-212 (以全文引用之方式併入本文中)之表1中所展示。

在一些實施例中，Fc區包含「杵臼(knob-into-hole)」或「KiH」修飾，例如，如例如US 7,695,936及Carter, J Immunol Meth 248, 7-15 (2001)中所描述。在此等實施例中，Fc區之CH3區中之一者包含「杵」修飾，而另一CH3區包含「臼」修飾。「杵」及「臼」修飾定位於各別CH3區內以使得「杵」可定位於「臼」中以便促進多肽之雜二聚作用(且抑制同二聚作用(homodimerisation))及/或穩定雜二聚體。杵藉由用具有較大側鏈之彼等(例如酪胺酸或色胺酸)取代具有較小鏈之胺基酸來構建。臼藉由用具有較小側鏈之彼等(例如丙胺酸或蘇胺酸)取代具有較大側鏈之胺基酸來產生。

在一些實施例中，本發明之抗原結合分子的Fc區之CH3區中之一者包含取代(本文中Fc、CH2及CH3區中之位置/取代之編號係根據EU編號系統，如Kabat等人, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第5版 Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991中所描述) T366W，而Fc區之另一CH3區包含取代Y407V。在一些實施例中，抗原結合分子之Fc區的CH3區中之一者包含取代T366W，而Fc區之另一CH3區包含取代T366S及L368A。在一些實施例中，抗原結合分子之Fc區的CH3區中之一者包含取代T366W，而Fc區之另一CH3區包含取代Y407V、T366S及L368A。

在一些實施例中，Fc區包含如例如WO 2014/131694 A1中所描述之「DD-KK」修飾。在一些實施例中，CH3區中之一者包含取代K392D及K409D，而Fc區之另一CH3區包含取代E356K及D399K。修飾促進CH3區之間的靜電相互作用。

在一些實施例中，本發明之抗原結合分子包含如Labrijn等人, Proc Natl Acad Sci U S A. (2013) 110(13):5145-50中所描述經修飾的Fc區，稱作『Duobody』格式。在一些實施例中，CH3區中之一者包含取代K409R，而Fc區之另一CH3區包含取代K405L。

在一些實施例中，本發明之抗原結合分子包含Fc區，該區包含如Strop等人, J Mol Biol. (2012) 420(3):204-19中所描述之「EEE-RRR」修飾。在一些實施例中，CH3區中之一者包含取代D221E、P228E及L368E，而Fc區之另一CH3區包含取代D221R、P228R及K409R。

在一些實施例中，抗原結合分子包含Fc區，該區包含描述於Choi等人, Mol Cancer Ther (2013) 12(12):2748-59中之「EW-RVT」修飾。在一些實施例中，CH3區中之一者包含取代K360E及K409W，而Fc區之另一CH3區包含取代Q347R、D399V及F405T。

在一些實施例中，CH3區中之一者包含取代S354C，而Fc區之另一CH3區包含取代Y349C。此等半胱胺酸殘基之引入導致在Fc區之二個CH3區之間形成二硫橋鍵，從而進一步穩定雜二聚體(Carter (2001), J Immunol Methods 248, 7-15)。

在一些實施例中，Fc區包含「KiHS-S」修飾。在一些實施例中，CH3區中之一者包含取代T366W及S354C，而Fc區之另一CH3區包含取代T366S、L368A、Y407V及Y349C。

在一些實施例中，本發明之抗原結合分子包含Fc區，該區包含如Davis等人, Protein Eng Des Sel (2010) 23(4):195-202中所描述之「SEED」修飾，其中人類IgG1 CH3及IgA CH3之β股區段經交換。

在一些實施例中，CH3區中之一者包含取代S364H及F405A，而Fc區之另一CH3區包含取代Y349T及T394F (參見例如Moore等人, MAbs (2011) 3(6):546-57)。

在一些實施例中，CH3區中之一者包含取代T350V、L351Y、F405A及Y407V，而Fc區之另一CH3區包含取代T350V、T366L、K392L及T394W (參見例如Von Kreudenstein等人, MAbs (2013) 5(5):646-54)。

在一些實施例中，CH3區中之一者包含取代K360D、D399M及Y407A，而Fc區之另一CH3區包含取代E345R、Q347R、T366V及K409V (參見例如Leaver-Fay等人, Structure (2016) 24(4):641-51)。

在一些實施例中，CH3區中之一者包含取代K370E及K409W，而Fc區之另一CH3區包含取代E357N、D399V及F405T (參見例如Choi等人, PLoS One (2015) 10(12):e0145349)。 Fc受體

Fc受體為與免疫球蛋白之Fc區結合之多肽。Fc受體結構及功能綜述於例如Masuda等人, Inflamm Allergy Drug Targets (2009) 8(1): 80-86, 及Bruhns, Blood (2012) 119:5640-5649中，該等文獻均以全文引用之方式併入本文中。

Fc受體在包括巨噬細胞、嗜中性球、樹突狀細胞、嗜酸性球、嗜鹼性球、肥大細胞及NK細胞之造血細胞的表面表現。其包括IgG結合之Fcγ受體、IgE之高親和力受體(FcεRI)、IgA受體及IgA及IgM之聚合Ig受體。新生兒Fc受體(FcRn)為IgG之其他Fc受體，且涉及IgG跨越上皮障壁之傳送(胞吞轉送)，從而保護IgG免於降解及抗原呈遞。

人類具有六種不同類別之Fcγ受體(小鼠直系同源物展示於括號中)：FcγRI (mFcγRI)、FcγRIIa (mFcγRIII)、FcγRIIb (mFcγRIIb)、FcγRIIc FcγRIIIa (mFcγRIV)及FcγRIIIb。

Fcγ受體可為活化性或抑制性的。活化性Fcγ受體FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIc及FcγRIIIa包含其胞內域中之免疫受體基於酪胺酸之活化基序(immunoreceptor tyrosine-based activation motif；ITAM)，且利用Fc之接合引起表現受體之細胞活化。

抑制性Fcγ受體FcγRIIb包含其胞內域中之免疫受體基於酪胺酸之抑制基序(ITIM)，且在由Fc接合後負調節細胞活化及去顆粒、細胞增殖、胞吞作用以及吞噬作用。

在本說明書中，「Fcγ受體」可來自任何物種，且包括來自任何物種之同功異型物、片段、變異體(包括突變體)或同系物。類似地，「FcγRI」、「FcγRIIa」、「FcγRIIb」、「FcγRIIc」、「FcγRIIIa」及「FcγRIIIb」分別係指來自任何物種之FcγRI/FcγRIIa/FcγRIIb/FcγRIIc/FcγRIIIa/FcγRIIIb，且包括來自任何物種之同功異型物、片段、變異體(包括突變體)或同系物。變異型Fcγ受體包括例如人類FcγRIIIa之158V及158F多形體以及人類FcγRIIa之167H及167R多形體。

在一些實施例中，Fcγ受體(例如FcγRI/FcγRIIa/FcγRIIb/FcγRIIc/FcγRIIIa/FcγRIIIb)來自哺乳動物(例如靈長類動物(恆河猴、獼猴、非人類靈長類動物或人類)及/或嚙齒動物(例如大鼠或小鼠)。同功異型物、片段、變異體或同系物可任擇地表徵為與來自既定物種(例如人類)之Fcγ受體(例如FcγRI/FcγRIIa/FcγRIIb/FcγRIIc/FcγRIIIa/FcγRIIIb)的未成熟或成熟同功異型物之胺基酸序列具有至少70%，較佳80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%胺基酸序列一致性中之一者。

同功異型物、片段、變異體或同系物可任擇地為功能性同功異型物、片段、變異體或同系物，例如具有參考Fcγ受體之功能特性/活性，如藉由分析藉由功能特性/活性之適合的分析所測定。舉例而言，FcγRI之同功異型物、片段、變異體或同系物可例如顯示與人類IgG1 Fc相關。

在本說明書中，「FcRn受體」可來自任何物種，且包括來自任何物種之同功異型物、片段、變異體(包括突變體)或同系物。

在一些實施例中，FcRn受體來自哺乳動物(例如靈長類動物(恆河猴、獼猴、非人類靈長類動物或人類)及/或嚙齒動物(例如大鼠或小鼠)。同功異型物、片段、變異體或同系物可任擇地表徵為與來自既定物種(例如人類)之FcRn受體的未成熟或成熟同功異型物之胺基酸序列具有至少70%，較佳80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%胺基酸序列一致性中之一者。

同功異型物、片段、變異體或同系物可任擇地為功能性同功異型物、片段、變異體或同系物，例如具有參考FcRn之功能特性/活性，如藉由分析藉由功能特性/活性之適合的分析所測定。舉例而言，FcRn之同功異型物、片段、變異體或同系物可例如顯示與人類IgG1 Fc相關。

本發明之抗原結合分子或Fc區可為或可包含多肽之複合物。本發明亦提供本文中所描述之抗原結合分子及Fc區之多肽成分。多肽可以經分離或實質上經純化形式提供。 連接子及其他序列

在一些實施例中，本發明之抗原結合分子及多肽在胺基酸序列之間包含一或多個連接子序列。連接子序列可設置於本文中所描述之抗原結合分子/Fc區/多肽之VH、VL、CH1-CH2鉸鏈區、CH2區及CH3區中之一或多者之一個或兩個端部處。

連接子序列為技術人員所已知，且描述於例如Chen等人, Adv Drug Deliv Rev (2013) 65(10): 1357-1369中，其以全文引用之方式併入本文中。在一些實施例中，連接子序列可為可撓性連接子序列。可撓性連接子序列允許由連接子序列連接之胺基酸序列的相對移動。可撓性連接子為技術人員所已知，且若干連接子於Chen等人, Adv Drug Deliv Rev (2013) 65(10): 1357-1369中鑑別。可撓性連接子序列通常包含較高比例之甘胺酸及/或絲胺酸殘基。

在一些實施例中，連接子序列包含至少一個甘胺酸殘基及/或至少一個絲胺酸殘基。在一些實施例中，連接子序列由甘胺酸及絲胺酸殘基組成。在一些實施例中，連接子序列具有1至2、1至3、1至4、1至5、1至10、1到15、1至20、1至25或1至30個胺基酸之長度。在一些實施例中，連接子序列包含胺基序列或由其組成，該胺基序列包含展示於SEQ ID NO:26或27中之胺基酸序列的一或多個(例如1、2、3、4個)串聯複本。

本發明之抗原結合分子及多肽可額外包含其他胺基酸或胺基酸序列。舉例而言，抗原結合分子及多肽可包含有助於抗原結合分子/多肽之表現、摺疊、運輸、處理、純化或偵測之一或多個胺基酸序列。舉例而言，抗原結合分子/多肽可任擇地在抗原結合分子/多肽之N端或C端處包含編碼His (例如6XHis)、Myc、GST、MBP、FLAG、HA、E或生物素標籤之序列。在一些實施例中，抗原結合分子/多肽包含可偵測部分，例如螢光、發光、免疫可偵測、放射、化學、核酸或酶標記。

本發明之抗原結合分子、Fc區及多肽可另外包含信號肽(亦稱為前導序列或信號序列)。信號肽通常由5至30個疏水性胺基酸之序列組成，其形成單一α螺旋。分泌蛋白及在細胞表面表現之蛋白質通常包含信號肽。

信號肽可存在於抗原結合分子/Fc區/多肽之N端處，且可存在於新合成之抗原結合分子/Fc區/多肽中。信號肽提供抗原結合分子/Fc區/多肽之高效運輸及分泌。信號肽通常藉由裂解移除，且因此不包含於自表現抗原結合分子/Fc區/多肽之細胞分泌的成熟抗原結合分子/Fc區/多肽中。

信號肽對於多種蛋白質為已知且記錄於諸如GenBank、UniProt、Swiss-Prot、TrEMBL、蛋白質資訊資源(Protein Information Resource)、蛋白質資料庫(Protein Data Bank)、Ensembl及InterPro之資料庫中，及/或可例如使用胺基酸序列分析工具，諸如SignalP (Petersen等人, 2011 Nature Methods 8: 785-786)或Signal-BLAST (Frank及Sippl, 2008 Bioinformatics 24: 2172-2176)來鑑別/預測。 標記及共軛物

在一些實施例中，本發明之抗原結合分子另外包含可偵測部分。

在一些實施例中，抗原結合分子包含可偵測部分，例如螢光標記、磷光標記、發光標記、免疫可偵測標記(例如抗原決定基標籤)、放射性標記、化學、核酸或酶標記。抗原結合分子可以可偵測部分共價或非共價標記。

螢光標記包括例如螢光素、若丹明、別藻藍蛋白、曙紅及NDB、諸如銪(Eu)、鋱(Tb)及釤(Sm)之稀土的綠色螢光蛋白(GFP)螯合物、四甲基若丹明、德克薩斯紅(Texas Red)、4-甲基傘酮、7-胺基-4-甲基香豆素、Cy3及Cy5。放射性標記包括放射性同位素，諸如碘¹²³ 、碘¹²⁵ 、碘¹²⁶ 、碘¹³¹ 、碘¹³³ 、溴⁷⁷ 、鍀^99m 、銦¹¹¹ 、銦^113m 、鎵⁶⁷ 、鎵⁶⁸ 、釕⁹⁵ 、釕⁹⁷ 、釕¹⁰³ 、釕¹⁰⁵ 、汞²⁰⁷ 、汞²⁰³ 、錸^99m 、錸¹⁰¹ 、錸¹⁰⁵ 、鈧⁴⁷ 、碲^121m 、碲^122m 、碲^125m 、銩¹⁶⁵ 、銩¹⁶⁷ 、銩¹⁶⁸ 、銅⁶⁷ 、氟¹⁸ 、釔⁹⁰ 、鈀¹⁰⁰ 、鉍²¹⁷ 及銻²¹¹ 。發光標記包括如放射性發光、化學發光(例如吖錠酯、魯米諾(luminol)、異魯米諾)及生物發光標記。免疫可偵測標記包括半抗原、肽/多肽、抗體、受體及配位體，諸如生物素、抗生物素蛋白、抗生蛋白鏈菌素或地高辛(digoxigenin)。核酸標記包括適體。酶標記包括例如過氧化酶、鹼性磷酸酶、葡萄糖氧化酶、β-半乳糖苷酶及螢光素酶。

在一些實施例中，本發明之抗原結合分子與化學部分共軛。化學部分可為提供治療效果之部分。抗體-藥物共軛物綜述於例如Parslow等人, Biomedicines. 2016年9月; 4(3):14中。在一些實施例中，化學部分可為藥物部分(例如細胞毒性劑)。在一些實施例中，藥物部分可為化學治療劑。在一些實施例中，藥物部分選自卡奇黴素(calicheamicin)、DM1、DM4、單甲基奧瑞他汀E (MMAE)、單甲基奧瑞他汀F (MMAF)、SN-38、小紅莓、多卡黴素(duocarmycin)、D6.5及PBD。 功能特性

本文中所描述之抗原結合分子、Fc區及多肽可藉由參考某些功能特性來表徵。

在一些實施例中，包含如本文中所描述之Fc區的抗原結合分子可具有以下特性中之一或多者： 與活化性Fcγ受體(例如hFcγRIIa (例如hFcγRIIa167H、hFcγRIIa167R)、hFcγRIIIa (例如hFcγRIIIa158V、hFcγRIIIa158F)、mFcγRIV、mFcγRIII)結合； 與FcRn (例如hFcRn、mFcRn)結合； 與具有由具有SEQ ID NO:6或31之胺基酸序列的CH2-CH3組成之Fc區的等效抗原結合分子相比，與活化性Fcγ受體(例如hFcγRIIa (例如hFcγRIIa167H、hFcγRIIa167R)、hFcγRIIIa (例如hFcγRIIIa158V、hFcγRIIIa158F)、mFcγRIV、mFcγRIII)之結合增加； 與具有由具有SEQ ID NO:6或31之胺基酸序列的CH2-CH3組成之Fc區的等效抗原結合分子相比，與FcRn (例如hFcRn、mFcRn)之結合增加； 與具有由具有SEQ ID NO:6或31之胺基酸序列的CH2-CH3組成之Fc區的等效抗原結合分子相比，與抑制性Fcγ受體(例如hFcγRIIb、mFcγRIIb)之結合減少； 與具有由具有SEQ ID NO:6或31之胺基酸序列的CH2-CH3組成之Fc區的等效抗原結合分子相比，相對於抑制性Fcγ受體針對活化性Fcγ受體的結合及/或選擇率增加(例如，相對於hFcγRIIb針對hFcγRIIa之選擇率增加)； 與具有由具有SEQ ID NO:6或31之胺基酸序列的CH2-CH3組成之Fc區的等效抗原結合分子相比，與補體蛋白(例如C1q)之結合增加或減少； 與具有由具有SEQ ID NO:6或31之胺基酸序列的CH2-CH3組成之Fc區的等效抗原結合分子相比，六聚作用增加； 與具有由具有SEQ ID NO:6或31之胺基酸序列的CH2-CH3組成之Fc區的等效抗原結合分子相比， ADCC活性增加； 與具有由具有SEQ ID NO:6或31之胺基酸序列的CH2-CH3組成之Fc區的等效抗原結合分子相比，ADCP活性增加； 與具有由具有SEQ ID NO:6或31之胺基酸序列的CH2-CH3組成之Fc區的等效抗原結合分子相比，CDC活性增加； 與具有由具有SEQ ID NO:6或31之胺基酸序列的CH2-CH3組成之Fc區的等效抗原結合分子相比，熱穩定性類似或增加；或 與具有由具有SEQ ID NO:6或31之胺基酸序列的CH2-CH3組成之Fc區的等效抗原結合分子相比，活體內腫瘤生長之抑制增加；

與Fc受體之結合可藉由技術人員所熟知之方法，包括例如ELISA、表面電漿子共振(Surface Plasmon Resonance；SPR；參見例如Hearty等人, Methods Mol Biol (2012) 907:411-442)、生物膜層干涉量測術(Bio-Layer Interferometry) (參見例如Lad等人, (2015) J Biomol Screen 20(4):498-507)來分析。結合之親和力可經測定，且可例如表示為K_D 值。

結合至既定Fc受體相較於另一者之選擇率可例如藉由測定與各受體結合之親和力來確定。結合之選擇率可表示為結合至不同Fc受體的K_D 值之分數。

ADCC活性可例如根據Yamashita等人, Scientific Reports (2016) 6:19772 (以全文引用之方式併入本文中)中所描述之方法，或藉由如例如Jedema等人, Blood (2004) 103: 2677-82 (以全文引用之方式併入本文中)中所描述的⁵¹ Cr釋放分析來分析。ADCC活性亦可使用皮爾斯LDH細胞毒性分析套組(Pierce LDH Cytotoxicity Assay Kit)，根據製造商之說明來分析(如本文中之實例5中所描述)。

可例如根據Kamen等人, J Immunol (2017) 198 (1增刊) 157.17 (以全文引用之方式併入本文中)中所描述之方法分析ADCP。

誘導CDC之能力可例如使用C1q結合分析，例如如Schlothauer等人, Protein Engineering, Design and Selection (2016), 29(10):457-466 (以全文引用之方式併入本文中)中所描述來分析。

抗原結合分子之熱穩定性可藉由技術人員所熟知之方法，包括描述於例如以全文引用之方式併入本文中的He等人, J Pharm Sci. (2010)中之差示掃描螢光法及差示掃描量熱法(DSC)來分析。熱穩定性可依據解構溫度(melting temperature)(T_m )、展開溫度或分解溫度(例如以℃或F°表示)來反映。

可在適當體內模型，例如細胞株衍生之異種移植模型，諸如A549細胞衍生之模型中分析腫瘤生長抑制。

在一些實施例中，包含如本文中所描述之Fc區的抗原結合分子與活化性Fcγ受體(例如，hFcγRIIa (例如hFcγRIIa167H、hFcγRIIa167R)、hFcγRIIIa (例如hFcγRIIIa158V、hFcγRIIIa158F)、mFcγRIV、mFcγRIII)結合，其中結合之親和力大於1倍，例如大於2、3、4、5、6、7、8、9、10、15倍或大於20倍藉由具有由具有SEQ ID NO:6或31之胺基酸序列之CH2-CH3組成的Fc區之等效抗原結合分子結合至活化性Fcγ受體的親和力。在一些實施例中，包含本文中所描述之Fc區的抗原結合分子結合至活化性Fcγ受體之K_D 小於1倍，例如小於0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3、0.2、0.1、0.09、0.08、0.07、0.06倍或小於0.05倍具有由具有SEQ ID NO:6或31之胺基酸序列的CH2-CH3組成之Fc區的等效抗原結合分子針對活化性Fcγ受體之K_D 。

在一些實施例中，包含如本文中所描述之Fc區的抗原結合分子與活化性Fcγ受體(例如，hFcγRIIa (例如hFcγRIIa167H、hFcγRIIa167R)、hFcγRIIIa (例如hFcγRIIIa158V、hFcγRIIIa158F)、mFcγRIV、mFcγRIII)結合，其中K_D 為1000 nM或更小，較佳為以下中之一者：≤500 nM、≤100 nM、≤75 nM、≤50 nM、≤40 nM、≤30 nM、≤20 nM、≤15 nM、≤12.5 nM、≤10 nM、≤9 nM、≤8 nM、≤7 nM、≤6 nM、≤5 nM、≤4 nM、≤3 nM、≤2 nM或≤1 nM。

在一些實施例中，包含如本文中所描述之Fc區的抗原結合分子與FcRn (例如hFcRn、mFcRn)結合，其中結合之親和力大於1倍，例如大於2、3、4、5、6、7、8、9、10、15倍或大於20倍藉由具有由具有SEQ ID NO:6或31的胺基酸序列之CH2-CH3組成的Fc區之等效抗原結合分子結合至FcRn的親和力。在一些實施例中，包含本文中所描述之Fc區的抗原結合分子結合至FcRn之K_D 小於1倍，例如小於0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3、0.2、0.1、0.09、0.08、0.07、0.06倍或小於0.05倍具有由具有SEQ ID NO:6或31之胺基酸序列的CH2-CH3組成之Fc區的等效抗原結合分子針對FcRn之K_D 。

在一些實施例中，包含如本文中所描述之Fc區的抗原結合分子與FcRn (例如，hFcRn、mFcRn)結合，其中K_D 為1000 nM或更小，較佳為以下中之一者：≤500 nM、≤100 nM、≤75 nM、≤50 nM、≤40 nM、≤30 nM、≤20 nM、≤15 nM、≤12.5 nM、≤10 nM、≤9 nM、≤8 nM、≤7 nM、≤6 nM、≤5 nM、≤4 nM、≤3 nM、≤2 nM或≤1 nM。

在一些實施例中，包含如本文中所描述之Fc區的抗原結合分子與抑制性Fcγ受體(例如hFcγRIIb、mFcγRIIb)結合，其中結合之親和力小於1倍，例如小於0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3、0.2倍或小於0.1倍藉由具有由具有SEQ ID NO:6或31之胺基酸序列的CH2-CH3組成之Fc區的等效抗原結合分子結合至抑制性Fcγ受體之親和力。在一些實施例中，包含本文中所描述之Fc區的抗原結合分子結合至抑制性Fcγ受體之K_D 大於1倍，例如大於2、3、4、5、6、7、8、9倍或大於10倍具有由具有SEQ ID NO:6或31之胺基酸序列的CH2-CH3組成之Fc區的等效抗原結合分子針對抑制性Fcγ受體之K_D 。

在一些實施例中，包含如本文中所描述之Fc區的抗原結合分子與抑制性Fcγ受體(例如hFcγRIIb、mFcγRIIb)結合，其中K_D 為1 nM或更大，較佳為以下中之一者：≥5 nM、≥10 nM、≥50 nM、≥100 nM、≥500 nM、≥1000 nM、≥2000 nM、≥3000 nM、≥4000 nM或≥5000 nM。

在一些實施例中，對於包含如本文中所描述之Fc區的抗原結合分子，結合活化性Fcγ受體(例如hFcγRIIa)相對於抑制性Fcγ受體(例如hFcγRIIb)之選擇率大於1倍，例如大於2、3、4、5、6、7、8、9、10、15倍或大於20倍藉由具有由具有SEQ ID NO:6或31之胺基酸序列的CH2-CH3組成之Fc區的等效抗原結合分子所顯示之結合選擇率。

在一些實施例中，包含如本文中所描述之Fc區的抗原結合分子顯示ADCC，其大於1倍，例如大於2、3、4、5、6、7、8、9、10、15倍或大於20倍藉由具有由具有SEQ ID NO:6或31之胺基酸序列的CH2-CH3組成之Fc區的等效抗原結合分子所顯示之ADCC。

在一些實施例中，在ADCC活性分析中針對包含如本文中所描述之Fc區的抗原結合分子所測定之EC50 (ng/ml)小於1倍，例如小於0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3、0.2倍或小於0.1倍針對具有由具有SEQ ID NO:6或31之胺基酸序列的CH2-CH3組成之Fc區的等效抗原結合分子所測定之EC50 (ng/ml)。

在一些實施例中，在ADCC活性分析中針對包含如本文中所描述之Fc區的抗原結合分子所測定之EC50 (ng/ml)為500 ng/ml或更小，較佳為以下中之一者：≤400 ng/ml、≤300 ng/ml、≤200 ng/ml、≤100 ng/ml、≤90 ng/ml、≤80 ng/ml、≤70 ng/ml、≤60 ng/ml、≤50 ng/ml、≤40 ng/ml、≤30 ng/ml、≤20 ng/ml或≤10 ng/ml。

在一些實施例中，包含如本文中所描述之Fc區的抗原結合分子可具有解構溫度、展開溫度或分解溫度，其≥0.75倍且≤1.25倍，例如≥0.8倍且≤1.2倍、≥0.85倍且≤1.15倍、≥0.9倍且≤1.1倍、≥0.91倍且≤1.09倍、≥0.92倍且≤1.08倍、≥0.93倍且≤1.07倍、≥0.94倍且≤1.06倍、≥0.95倍且≤1.05倍、≥0.96倍且≤1.04倍、≥0.97倍且≤1.03倍、≥0.98倍且≤1.02倍或≥0.99倍且≤1.01倍具有由具有SEQ ID NO:6或31之胺基酸序列的CH2-CH3組成之Fc區的等效抗原結合分子之解構溫度、展開溫度或分解溫度。

在一些實施例中，包含如本文中所描述之Fc區的抗原結合分子可抑制活體內腫瘤生長達至多於1倍，例如≥1.01倍、≥1.02倍、≥1.03倍、≥1.04倍、≥1.05倍、≥1.1倍、≥1.2倍、≥1.3倍、≥1.4倍、≥1.5倍、≥1.6倍、≥1.7倍、≥1.8倍、≥1.9倍、≥2倍、≥3倍、≥4倍、≥5倍、≥6倍、≥7倍、≥8倍、≥9倍或≥10倍針對具有由具有SEQ ID NO:6或31之胺基酸序列的CH2-CH3組成之Fc區的等效抗原結合分子觀測到之腫瘤生長抑制位準。 核酸及載體

本發明提供編碼根據本發明之抗原結合分子、Fc區或多肽的一種核酸或多種核酸。

在一些實施例中，核酸例如自其他核酸純化或分離或為天然存在之生物材料。在一些實施例中，(多種)核酸包含DNA及/或RNA或由其組成。

本發明亦提供包含根據本發明之核酸或多種核酸的一種載體或多種載體。

核苷酸序列可含於載體，例如表現載體中。如本文中所使用之「載體」為用作將外源核酸轉移至細胞中之運載工具的核酸分子。載體可為用於在細胞中表現核酸之載體。此等載體可包括可操作地連接至編碼待表現序列之核苷酸序列的啟動子序列。載體亦可包括終止密碼子及表現強化子。此項技術中已知之任何適合的載體、啟動子、強化子及終止密碼子可用於由根據本發明之載體表現肽或多肽。

術語「可操作地連接」可包括所選核酸序列及調節核酸序列(例如啟動子及/或強化子)以核酸序列表現受調節序列影響或控制(藉此形成表現卡匣)之此種方式共價連接之情況。因此，若調節序列能夠實現核酸序列轉錄，則調節序列可操作地連接至所選核酸序列。(多種)所得轉錄物可隨後轉譯成所需(多種)肽/(多種)多肽。

適合載體包括質體、二元載體、DNA載體、mRNA載體、病毒載體(例如γ反轉錄病毒載體(例如鼠類白血病病毒(murine Leukemia virus；MLV)衍生載體)、慢病毒載體、腺病毒載體、腺相關病毒載體、痘瘡病毒載體及疱疹病毒載體)、基於轉座子之載體及人工染色體(例如酵母人工染色體)。

在一些實施例中，載體可為真核載體，例如包含蛋白質在真核生物細胞中自載體表現所必需之元件的載體。在一些實施例中，載體可為哺乳動物載體，例如包含驅動蛋白質表現之巨細胞病毒(cytomegalovirus；CMV)或SV40啟動子。

根據本發明之抗原結合分子或Fc區之成分多肽可由多種核酸之不同核酸或由多種載體之不同載體編碼。 包含/表現抗原結合分子及多肽之細胞

本發明亦提供一種包含或表現根據本發明之抗原結合分子、Fc區或多肽之細胞。亦提供一種包含或表現根據本發明之一種核酸、多種核酸、一種載體或多種載體的細胞。

細胞可為真核細胞，例如哺乳動物細胞。哺乳動物可為靈長類動物(恆河猴、獼猴、非人類靈長類動物或人類)或非人類哺乳動物(例如兔、天竺鼠、大鼠、小鼠或其他嚙齒動物(包括嚙齒目中之任何動物)、貓、狗、豬、綿羊、山羊、牛(包括奶牛(cow)，例如產奶牛(dairy cow)，或牛目中之任何動物)、馬(包括馬目中之任何動物)、驢及非人類靈長類動物)。

本發明亦提供一種用於產生包含根據本發明之(多種)核酸或(多種)載體之細胞的方法，其包含將根據本發明之一種核酸、多種核酸、一種載體或多種載體引入至細胞中。在一些實施例中，將根據本發明之(多種)經分離核酸或(多種)載體引入至細胞中包含轉化、轉染、電穿孔或轉導(例如反轉錄病毒轉導)。

本發明亦提供一種用於產生表現/包含根據本發明之抗原結合分子、Fc區或多肽之細胞的方法，其包含將根據本發明之一種核酸、多種核酸、一種載體或多種載體引入細胞中。在一些實施例中，方法另外包含在適合於由細胞表現(多種)核酸或(多種)載體之條件下培養細胞。在一些實施例中，方法係在活體外執行。

本發明亦提供藉由根據本發明之方法獲得或可獲得的細胞。 產生抗原結合分子、Fc區及多肽

根據本發明之抗原結合分子、Fc區及多肽可根據技術人員已知的產生多肽之方法來製備。

多肽可藉由化學合成，例如液相或固相合成來製備。舉例而言，肽/多肽可藉由使用例如Chandrudu等人, Molecules (2013), 18: 4373-4388中所描述之方法合成，該文獻以全文引用的方式併入本文中。

可替代地，抗原結合分子、Fc區及多肽可藉由重組表現而產生。適合於重組產生多肽之分子生物學技術為此項技術中所熟知，諸如Green及Sambrook, Molecular Cloning: A Laboratory Manual (第4版), Cold Spring Harbor Press, 2012及Nat Methods. (2008); 5(2): 135-146中所闡述之彼等，該等文獻均以全文引用之方式併入本文中。重組產生抗原結合分子之方法亦描述於Frenzel等人, Front Immunol. (2013); 4: 217以及Kunert及Reinhart, Appl Microbiol Biotechnol. (2016) 100: 3451-3461中，該等文獻均以全文引用之方式併入本文中。

在一些情況下，本發明之抗原結合分子及Fc區由多於一個多肽鏈組成。在此情況下，產生可包含轉錄及轉譯多於一個多肽及後續締合多肽鏈以形成抗原結合分子/Fc區。

針對根據本發明之重組產生，可使用適合於表現多肽之任何細胞。細胞可為原核生物或真核生物。在一些實施例中，細胞為原核細胞，諸如古菌或細菌之細胞。在一些實施例中，細菌可為革蘭氏陰性細菌，諸如腸桿菌科(Enterobacteriaceae)之細菌，例如大腸桿菌(Escherichia coli)。在一些實施例中，細胞為真核細胞，諸如酵母細胞、植物細胞、昆蟲細胞或哺乳動物細胞，例如CHO、HEK (例如HEK293)、HeLa或COS細胞。

在一些情況下，細胞不為原核細胞，因為一些原核細胞不允許與真核細胞相同之摺疊或轉譯後修飾。另外，在真核生物中極高表現位準為可能的，且蛋白質可更易於使用適當標籤自真核生物純化。亦可使用增強蛋白質分泌至培養基中之特異性質體。

在一些實施例中，多肽可藉由無細胞蛋白質合成(CFPS)，例如根據使用Zemella等人 Chembiochem (2015) 16(17): 2420-2431中所描述之系統來製備，該文獻以全文引用的方式併入本文中。

產生可涉及培養或醱酵經修飾以表現感興趣的(多種)多肽之真核生物細胞。培養或醱酵可在設置有營養素、空氣/氧氣及/或生長因子之適當供應源的生物反應器中執行。分泌蛋白可藉由以下方式收集：根據細胞分配培養基/醱酵培養液，萃取蛋白質內含物，及分離個別蛋白質以分離(多種)分泌多肽。培養、醱酵及分離技術為熟習此項技術者所熟知，且描述於例如Green及Sambrook, Molecular Cloning: A Laboratory Manual (第4版；以引用的方式併入上文中)中。

生物反應器包括可培養細胞之一或多個容器。生物反應器中之培養可連續地進行，其中連續反應物流進入反應器中，且連續培養細胞流自反應器出來。或者，培養可分批進行。生物反應器監測且控制環境條件，諸如pH、氧氣、進入容器及自容器出來之流動速率及容器內之攪拌，使得向待培養細胞提供最佳條件。

可分離以下表現抗原結合分子/Fc區/(多種)多肽、感興趣的(多種)多肽之培養細胞。可使用此項技術中已知的自細胞分離蛋白質之任何適合方法。為分離多肽，可能有必要自營養培養基分離細胞。若(多種)多肽自細胞分泌，則細胞可藉由自含有感興趣的(多種)分泌多肽之培養基離心而分離。若感興趣的(多種)多肽在細胞內收集，則蛋白質分離可包含離心以自細胞培養基分離細胞，用溶解緩衝液處理細胞集結粒，且例如藉由超音波處理、快速凍融或滲透性溶解進行細胞破壞。

隨後可能需要自可含有其他蛋白質及非蛋白質組分之上清液或培養基分離感興趣的(多種)多肽。自上清液或培養基分離蛋白質組分之常見方法為利用沈澱。不同溶解度之蛋白質在不同濃度之沈澱劑(諸如硫酸銨)下沈澱。舉例而言，在低濃度之沈澱劑下，萃取水溶性蛋白質。因此，藉由添加不同增加濃度之沈澱劑，可區別不同溶解度之蛋白質。透析可隨後用於自分離之蛋白質移除硫酸銨。

區別不同蛋白質之其他方法為此項技術中已知的，例如離子交換層析法及尺寸層析法。此等方法可用作沈澱之替代，或可在沈澱之後執行。

在感興趣的(多種)多肽已自培養物分離後，可能需要或必需濃縮(多種)多肽。多種濃縮蛋白質之方法為此項技術中已知的，諸如超濾或凍乾。 組合物

本發明亦提供包含本文中所描述之抗原結合分子、Fc區、多肽、核酸、表現載體及細胞的組合物。

本文中所描述之抗原結合分子、Fc區、多肽、核酸、表現載體及細胞可調配為用於臨床用途之醫藥組合物或藥劑且可包含醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑、賦形劑或佐劑。組合物可調配為用於局部、非經腸、全身、腔內、靜脈內、動脈內、肌內、鞘內、眼內、結膜內、瘤內、皮下、皮內、鞘內、經口或經皮投藥途徑，其可包括注射或輸注。

適合調配物可在無菌或等張培養基中包含抗原結合分子。藥劑及醫藥組合物可在流體中，包括膠凝形式中調配。流體調配物可調配用於藉由注射或輸注(例如經由導管)投與至人類或動物身體之所選區域。

在一些實施例中，組合物經調配用於注射或輸注至例如血管或腫瘤中。

根據本發明，本文中所描述之方法亦提供用於製造醫藥學上有用之組合物，此等製造方法可包含選自以下的一或多個步驟：產生本文中所描述之抗原結合分子、Fc區、多肽、核酸(或其多者)、表現載體(或其多者)或細胞；分離本文中所描述之抗原結合分子、Fc區、多肽、核酸(或其多者)、表現載體(或其多者)或細胞；及/或將本文中所描述之抗原結合分子、Fc區、多肽、核酸(或其多者)、表現載體(或其多者)或細胞與醫藥學上可接受之載劑、佐劑、賦形劑或稀釋劑混合。

舉例而言，本文中所描述之本發明的另一態樣係關於一種調配或產生用於治療疾病/病況(例如癌症)之藥劑或醫藥組合物的方法，該方法包含藉由將本文中所描述之抗原結合分子、Fc區、多肽、核酸(或其多者)、表現載體(或其多者)或細胞與醫藥學上可接受之載劑、佐劑、賦形劑或稀釋劑混合來調配醫藥組合物或藥劑。 使用本揭露內容之製品之方法

本揭露內容之製品適用於採用Fc效應功能之方法。

特定而言，本文中所描述之抗原結合分子、Fc區、多肽、核酸、表現載體、細胞及組合物適用於採用Fc介導之效應功能，諸如抗體依賴性細胞毒性(ADCC)、抗體依賴性細胞介導之吞噬作用(ADCP)、補體依賴性細胞毒性(CDC)、膜攻擊複合物(MAC)之形成、細胞去顆粒、細胞介素及/或趨化因子產生或抗原處理及呈遞的方法中。

此等方法包括：殺死表現目標抗原之細胞的方法、減少表現目標抗原之細胞數目的方法、抑制表現目標抗原之細胞活性的方法、增強針對表現目標抗原之細胞的免疫反應之方法、促進表現目標抗原之細胞溶解的方法、增大表現目標抗原之細胞之吞噬作用的方法。

方法可包含使表現目標抗原之一或多種細胞與本文所描述之抗原結合分子、細胞或組合物接觸。在一些實施例中，方法進一步包含使表現目標抗原之細胞與相關活性之效應細胞(例如NK細胞、巨噬細胞、嗜酸性球、嗜中性球(針對ADCC)、吞噬細胞(單核球、巨噬細胞、嗜中性球、組織樹突狀細胞、肥大細胞))接觸。方法可為活體外、活體內或離體方法。

本文中所描述之抗原結合分子、核酸、表現載體、細胞及組合物用於治療及預防方法中。

本發明提供本文中所描述之抗原結合分子、核酸(或其多者)、表現載體(或其多者)、細胞或組合物，其用於醫學治療或預防方法中。亦提供一種本文中所描述之抗原結合分子、核酸(或其多者)、表現載體(或其多者)、細胞或組合物的用途，其用於製造用於治療或預防疾病或病況之藥劑。亦提供一種治療或預防疾病或病況之方法，其包含向個體投與治療或預防有效量的本文中所描述之抗原結合分子、核酸(或其多者)、表現載體(或其多者)、細胞或組合物。

方法可有效減少疾病/病況之出現或進展，緩解疾病/病況之症狀或減輕疾病/病況之病理。方法可有效預防疾病/病況之進展，例如以預防疾病/病況惡化，或減緩疾病/病況之出現率。在一些實施例中，方法可引起疾病/病況改良，例如疾病/病況之症狀減輕或疾病/病況之嚴重程度/活性之一些其他相關方面降低。在一些實施例中，方法可預防出現疾病/病況晚期(例如慢性期或轉移)。

應瞭解，本發明之製品可用於治療/預防任何疾病/病況，從而將由減少表現目標抗原之細胞的數目及/或活性而得到治療效益或預防效益。舉例而言，疾病/病況可為病理學上涉及表現目標抗原之細胞的疾病/病況，例如目標抗原之位準增加或表現目標抗原之細胞的數目/比例增加與疾病/病況之發作、出現或進展及/或疾病/病況之一或多種症狀的嚴重程度正相關，或目標抗原之位準增加或表現目標抗原之細胞的數目/比例增加為疾病/病況之發作、出現或進展之風險因素的疾病/病況。

在一些實施例中，待治療/預防之疾病/病況為一種疾病/病況，其特徵為例如與在不存在疾病/病況的情況下表現目標抗原之細胞之數目/比例/活性相比，表現目標抗原之細胞之數目/比例/活性增加。

在一些實施例中，待治療/預防之疾病/病況為癌症。癌症可為任何不希望之細胞增殖(或任何藉由不希望的細胞增殖顯示自身之疾病)、贅瘤或腫瘤。癌症可為良性或惡性的且可為原發性或繼發性(轉移性)的。贅瘤或腫瘤可為細胞之任何異常生長或增殖且可位於任何組織中。癌症可係衍生自以下之組織/細胞，例如腎上腺腺體、腎上腺髓質、肛門、闌尾、膀胱、血液、骨骼、骨髓、大腦、乳房、盲腸、中樞神經系統(包括或不包括大腦)小腦、子宮頸、結腸、十二指腸、子宮內膜、上皮細胞(例如腎上皮)、膽囊、食管、膠細胞、心臟、迴腸、空腸、腎臟、淚腺、喉、肝臟、肺、淋巴、淋巴結、淋巴母細胞、上頜骨、縱隔、腸系膜、子宮肌層、鼻咽、腸網膜、口腔、卵巢、胰腺、腮腺、周邊神經系統、腹膜、胸膜、前列腺、唾液腺、乙狀結腸、皮膚、小腸、軟組織、脾、胃、睪丸、胸腺、甲狀腺、舌、扁桃體、氣管、子宮、外陰、白血球。

待治療之腫瘤可為神經或非神經系統腫瘤。神經系統腫瘤可起源於中樞或周邊神經系統，例如神經膠質瘤、神經管胚細胞瘤、腦膜瘤、神經纖維瘤、室管膜瘤、神經鞘瘤、神經纖維肉瘤、星形細胞瘤及少突神經膠質瘤。非神經系統癌症/腫瘤可起源於任何其他非神經組織，實例包括黑色素瘤、間皮瘤、淋巴瘤、骨髓瘤、白血病、非霍奇金氏淋巴瘤(Non-Hodgkin's lymphoma；NHL)、霍奇金氏淋巴瘤、慢性骨髓性白血病(chronic myelogenous leukemia；CML)、急性骨髓性白血病(acute myeloid leukemia；AML)、骨髓發育不良症候群(MDS)、皮膚T細胞淋巴瘤(CTCL)、慢性淋巴球性白血病(CLL)、肝腫瘤、表皮樣癌瘤、前列腺癌、乳癌、肺癌、結腸癌、卵巢癌、胰臟癌、胸腺癌、NSCLC、血液癌及肉瘤。

治療/預防可旨在以下中之一或多者：延緩/預防癌症症狀之發作/進展，減輕癌症症狀之嚴重程度，減少癌症細胞之存活率/生長/侵入/轉移，減少癌症細胞之數目及/或提高個體之存活率。

在一些實施例中，待治療/預防之癌症包含表現目標抗原之細胞。在一些實施例中，待治療/預防之癌症為針對目標抗原為陽性之癌症。在一些實施例中，癌症過度表現目標抗原。目標抗原之過度表現可藉由偵測大於等效非癌細胞/非腫瘤組織之表現位準之目標抗原的表現位準來測定。

可藉由任何適合的手段測定目標抗原表現。表現可為基因表現或蛋白質表現。基因表現例如可藉由偵測編碼目標抗原之mRNA，例如藉由定量即時PCR (qRT-PCR)來測定。蛋白質表現例如可藉由偵測目標抗原，例如藉由基於抗體之方法，例如藉由西方墨點(western blot)、免疫組織化學、免疫細胞化學、流式細胞量測術或ELISA來測定。

在一些實施例中，患者可基於偵測表現目標抗原或過度表現目標抗原之癌症(例如在自個體獲得之樣品中)來選擇以進行本文中所描述之治療。

在一些實施例中，根據本發明之待治療/預防的癌症選自：實體癌、液體癌、胃癌(例如胃癌瘤、胃腺癌、胃腸腺癌)、肝癌(肝細胞癌瘤、膽管癌瘤)、頭頸癌(例如頭頸部鱗狀細胞癌)、乳癌、卵巢癌(例如卵巢癌瘤)、肺癌(例如NSCLC、肺腺癌、鱗狀肺細胞癌瘤)、腦癌(例如神經膠母細胞瘤)、皮膚癌(例如黑色素瘤)、前列腺癌、口腔癌症(例如口咽癌)、腎癌(例如腎細胞癌瘤)、結腸直腸癌(例如結腸直腸癌瘤)、食道癌、胰臟癌、膀胱癌、惡性血液病、骨髓惡性血液病、淋巴母細胞惡性血液病、骨髓發育不良症候群(MDS)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓白血病(CML)、急性淋巴母細胞白血病(ALL)、淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、胸腺瘤或多發性骨髓瘤(MM)。

在一些實施例中，疾病/病況為感染性疾病(亦即，由感染物所引起之疾病/病況)。在此等實施例中，治療可旨在減少感染細胞之數目(例如在與胞內病原體之感染相關的感染性疾病之情況下)及/或殺死感染物。

感染可為任何感染或感染性疾病，例如病毒、細菌、真菌或寄生蟲感染。在一些實施例中，疾病/病症可能與胞內病原體之感染相關。在一些實施例中，疾病/病症可能與病毒之感染相關。在一些實施例中，可能尤其需要治療慢性/持續性感染。感染可為慢性的、持續的、潛伏的或緩慢的，且可為病毒、細菌、真菌或寄生蟲感染之結果。因此，可向患有細菌、病毒或真菌感染之患者提供治療。

可治療之細菌感染的實例包括芽孢桿菌屬(Bacillus spp.)、百日咳桿菌(Bordetella pertussis)、梭菌屬(Clostridium spp.)、棒狀桿菌屬(Corynebacterium spp.)、霍亂弧菌(Vibrio chloerae)、葡萄球菌屬(Staphylococcus spp.)、鏈球菌屬(Streptococcus spp.)、埃希氏菌屬(Escherichia)、克雷伯氏菌屬(Klebsiella)、變形桿菌屬(Proteus)、耶爾森菌屬(Yersinia)、歐文氏菌屬(Erwina)、沙門氏菌屬(Salmonella)、李斯特菌屬(Listeria sp)、幽門螺旋桿菌(Helicobacter pylori)、分枝桿菌屬(mycobacteria) (例如結核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis))及綠膿桿菌(Pseudomonas aeruginosa)感染。舉例而言，細菌感染可為敗血症或肺結核。可治療之病毒感染的實例包括流感病毒、麻疹病毒、B型肝炎病毒(HBV)、C型肝炎病毒(HCV)、人類免疫缺陷病毒(HIV)、淋巴球性脈絡叢腦膜炎病毒(LCMV)、單純疱疹病毒及人類乳頭狀瘤病毒(HPV)感染。可治療之真菌感染的實例包括交鏈孢屬(Alternaria sp)、曲黴菌屬(Aspergillus sp)、假絲酵母屬(Candida sp)及組織漿菌屬(Histoplasma sp)。真菌感染可為真菌性敗血症或組織漿菌病。可治療之寄生蟲感染的實例包括瘧原蟲屬(Plasmodium species) (例如惡性瘧原蟲(Plasmodium falciparum)、約氏瘧原蟲(Plasmodium yoeli)、卵形瘧原蟲(Plasmodium ovale)、間日瘧原蟲(Plasmodium vivax)或夏氏夏氏瘧原蟲(Plasmodium chabaudi chabaudi))感染。寄生蟲感染可為諸如瘧疾、利什曼體病(leishmaniasis)及弓蟲病之疾病。

在一些實施例中，疾病/病況為自體免疫疾病。在一些實施例中，自體免疫疾病選自：1型糖尿病、乳糜瀉、格雷夫氏病、發炎性腸病、多發性硬化症、牛皮癬、類風濕性關節炎及全身性紅斑狼瘡症。

本發明之製品的投藥較佳為「治療有效」或「預防有效」量，此足以向個體展示治療效益或預防效益。所投與之實際量以及投藥之速率及時程將視疾病/病況之性質及嚴重程度以及所投與之特定製品而定。例如對劑量之決定等治療處方屬於全科醫師及其他醫生之責任，且通常考慮待治療之疾病/病症、個別個體之病況、遞送部位、投藥方法及醫師已知之其他因素。上文所提及之技術及方案之實例可見於Remington's Pharmaceutical Sciences, 第20版, 2000,出版 Lippincott, Williams & Wilkins。

視待治療之病況而定，可單獨或與其他治療組合同時或依序投藥。可同時或依序投與本文所描述之抗原結合分子或組合物及治療劑。

同時投與係指將本發明之製品及另一治療劑一起投與(例如作為含有兩種試劑之醫藥組合物(組合製劑))，或在彼此之後立即及任擇地經由相同投藥途徑，例如至相同動脈、靜脈或其他血管。依序投與係指投與一種藥劑，繼而在既定時間間隔之後單獨投與另一種藥劑。不要求二種藥劑藉由相同途徑投與，但在一些實施例中投與途徑相同。時間間隔可為任何時間間隔。

化學療法及放射療法分別係指用藥物或電離輻射治療癌症(例如使用X射線或γ射線之放射療法)。藥物可為化學實體，例如小分子醫藥、抗生素、DNA嵌入劑、蛋白質抑制劑(例如激酶抑制劑)或生物製劑，例如抗體、抗體片段、適體、核酸(例如DNA、RNA)、肽、多肽或蛋白質。藥物可調配為醫藥組合物或藥劑。調配物可包含一或多種藥物(例如一或多種活性劑)連同一或多種醫藥學上可接受之稀釋劑、賦形劑或載劑。

治療可涉及投與多於一種藥物。藥物可視待治療之病況而單獨或與其他治療組合同時或依序投與。舉例而言，化學療法可為涉及投與二種藥物之協同療法，該等藥物中的一或多者可能意欲治療癌症。

化學療法可藉由一或多個投與途徑，例如非經腸、靜脈內注射、經口、皮下、皮內或瘤內來投與。

化學療法可根據治療方案投與。治療方案可為化學療法投與之預定時間表、規劃、流程或計劃，其可由醫師或醫療人員制定且可經定製以適合需要治療之患者。治療方案可指示以下中之一或多者：向患者投與之化學療法的類型；各藥物或輻射之劑量；投藥之間的時間間隔；各治療之長度；若存在，任何治療假期之數目及性質等。針對協同療法，可提供指示如何投與各藥物之單個治療方案。

化學治療藥物可選自：阿貝力布(Abemaciclib)、乙酸阿比特龍(Abiraterone Acetate)、艾比西特(Abitrexate) (甲胺喋呤)、凱素(Abraxane) (太平洋紫杉醇白蛋白穩定之奈米粒子調配物(Paclitaxel Albumin-stabilized Nanoparticle Formulation))、ABVD、ABVE、ABVE-PC、AC、阿卡替尼(Acalabrutinib)、AC-T、阿德曲斯(Adcetris) (維多汀本妥昔單抗(Brentuximab Vedotin))、ADE、曲妥珠單抗-美坦新偶聯物(Ado-Trastuzumab Emtansine)、阿德力黴素(Adriamycin) (鹽酸阿黴素(Doxorubicin Hydrochloride))、雙馬來酸鹽阿法替尼(Afatinib Dimaleate)、飛尼妥(Afinitor) (依維莫司(Everolimus))、阿克恩澤(Akynzeo) (奈妥吡坦及鹽酸帕洛諾司瓊(Netupitant and Palonosetron Hydrochloride))、阿爾達拉(Aldara) (咪喹莫特(Imiquimod))、阿地白介素(Aldesleukin)、艾樂替尼(Alecensa) (艾樂替尼(Alectinib))、艾樂替尼、阿侖單抗(Alemtuzumab)、力比泰(Alimta) (培美曲塞二鈉(Pemetrexed Disodium))、阿利瓊帕(Aliqopa) (鹽酸考班昔布(Copanlisib Hydrochloride))、注射用愛克蘭(Alkeran for Injection) (鹽酸美法侖(Melphalan Hydrochloride))、愛克蘭片(Alkeran Tablet) (美法侖)、阿樂喜(Aloxi) (鹽酸帕洛諾司瓊(Palonosetron Hydrochloride))、阿倫布尼(Alunbrig) (布加替尼(Brigatinib))、安伯氯林(Ambochlorin) (氯芥苯丁酸(Chlorambucil))、安伯洛林(Amboclorin) (氯芥苯丁酸)、阿米福汀(Amifostine)、胺基乙醯丙酸(Aminolevulinic Acid)、阿那曲唑(Anastrozole)、阿瑞匹坦(Aprepitant)、阿可達(Aredia) (帕米膦酸二鈉(Pamidronate Disodium))、瑞寧得(Arimidex) (阿那曲唑)、阿諾新(Aromasin) (依西美坦(Exemestane))、阿拉儂(Arranon) (奈拉濱(Nelarabine))、三氧化二砷(Arsenic Trioxide)、阿瑞拉(Arzerra) (奧法木單抗(Ofatumumab))、菊歐文氏菌屬天冬醯胺酶(Asparaginase Erwinia chrysanthemi)、阿特珠單抗(Atezolizumab)、安維汀(Avastin) (貝伐珠單抗(Bevacizumab))、阿維魯單抗(Avelumab)、西卡思羅(Axicabtagene Ciloleucel)、阿西替尼(Axitinib)、阿紮胞苷(Azacitidine)、巴文西亞(Bavencio) (阿維魯單抗)、BEACOPP、貝森(Becenum) (卡莫司汀(Carmustine))、貝牛達克(Beleodaq) (貝林司他(Belinostat))、貝林司他、鹽酸苯達莫司汀(Bendamustine Hydrochloride)、BEP、貝松薩(Besponsa) (奧英妥珠單抗(Inotuzumab Ozogamicin))、貝伐珠單抗、貝沙羅汀(Bexarotene)、百克沙(Bexxar) (托西莫單抗(Tositumomab))及碘I 131托西莫單抗)、比卡魯胺(Bicalutamide)、BiCNU (卡莫司汀)、博萊黴素(Bleomycin)、博納吐單抗(Blinatumomab)、博啉妥(Blincyto) (博納吐單抗)、硼替佐米(Bortezomib)、伯舒立夫(Bosulif) (伯舒替尼(Bosutinib))、伯舒替尼、維多汀本妥昔單抗、布加替尼、BuMel、白消安(Busulfan)、白舒非(Busulfex) (白消安)、卡巴他賽(Cabazitaxel)、卡博替尼(Cabometyx) (卡博替尼-S-蘋果酸(Cabozantinib-S-Malate))、卡博替尼-S-蘋果酸、CAF、卡昆斯(Calquence) (阿卡替尼(Acalabrutinib))、坎帕斯(Campath) (阿侖單抗)、開普拓(Camptosar) (鹽酸伊立替康(Irinotecan Hydrochloride))、卡培他濱(Capecitabine)、CAPOX、氟尿嘧啶霜劑(Carac) (局部用氟尿嘧啶(Fluorouracil--Topical))、卡鉑(Carboplatin)、CARBOPLATIN-TAXOL、卡非佐米(Carfilzomib)、卡莫布瑞斯(Carmubris) (卡莫司汀)、卡莫司汀、卡莫司汀植入膜劑(Carmustine Implant)、康士得(Casodex) (比卡魯胺)、CEM、色瑞替尼(Ceritinib)、柔紅黴素(Cerubidine) (鹽酸道諾黴素(Daunorubicin Hydrochloride))、卉妍康(Cervarix) (重組HPV二價疫苗)、西妥昔單抗(Cetuximab)、CEV、氯芥苯丁酸、CHLORAMBUCIL-PREDNISONE、CHOP、順鉑(Cisplatin)、克拉屈濱(Cladribine)、克拉芬(Clafen) (環磷醯胺)、氯法拉濱(Clofarabine)、克羅法萊(Clofarex) (氯法拉濱)、氯拉(Clolar) (氯法拉濱)、CMF、考比替尼(Cobimetinib)、考美曲克(Cometriq) (卡博替尼-S-蘋果酸)、鹽酸考班昔布、COPDAC、COPP、COPP-ABV、更生黴素(Cosmegen) (放線菌素d (Dactinomycin))、柯托里克(Cotellic) (考比替尼)、克唑替尼(Crizotinib)、CVP、環磷醯胺、塞夫斯(Cyfos) (異環磷醯胺(Ifosfamide))、絲蘭紮(Cyramza) (雷莫蘆單抗(Ramucirumab))、阿糖胞苷(Cytarabine)、阿糖胞苷脂質體(Cytarabine Liposome)、賽德薩-U (Cytosar-U) (阿糖胞苷)、環磷氮介(Cytoxan) (環磷醯胺)、達拉菲尼(Dabrafenib)、達卡巴嗪(Dacarbazine)、達克金(Dacogen) (地西他濱(Decitabine))、放線菌素d、達雷木單抗(Daratumumab)、達拉蘭西(Darzalex) (達雷木單抗)、達沙替尼(Dasatinib)、鹽酸道諾黴素、鹽酸道諾黴素及阿糖胞苷脂質體、地西他濱、去纖苷鈉(Defibrotide Sodium)、去纖苷(Defitelio) (去纖苷鈉)、地加瑞克(Degarelix)、地尼白介素(Denileukin Diftitox)、地諾單抗(Denosumab)、德泊噻(DepoCyt) (阿糖胞苷脂質體)、地塞米松(dexamethasone)、鹽酸右雷佐生(Dexrazoxane Hydrochloride)、迪奴圖單抗(Dinutuximab)、多西他賽(Docetaxel)、多希(Doxil) (鹽酸阿黴素脂質體(Doxorubicin Hydrochloride Liposome))、鹽酸阿黴素、鹽酸阿黴素脂質體、Dox-SL (鹽酸阿黴素脂質體)、DTIC-Dome (達卡巴嗪)、德瓦魯單抗(Durvalumab)、氟尿嘧啶藥膏(Efudex) (局部用氟尿嘧啶)、埃立特(Elitek) (拉布立酶(Rasburicase))、艾倫斯(Ellence) (鹽酸表柔比星(Epirubicin Hydrochloride))、埃羅妥珠單抗(Elotuzumab)、艾洛汀(Eloxatin) (奧沙利鉑(Oxaliplatin))、艾曲波帕(Eltrombopag Olamine)、止敏吐(Emend) (阿瑞匹坦)、艾洛替(Empliciti) (埃羅妥珠單抗)、甲磺酸艾那尼布(Enasidenib Mesylate)、恩雜魯胺(Enzalutamide)、鹽酸表柔比星、EPOCH、艾必妥(Erbitux) (西妥昔單抗)、甲磺酸艾日布林(Eribulin Mesylate)、艾麗維吉(Erivedge) (維莫德吉(Vismodegib))、鹽酸埃羅替尼(Erlotinib Hydrochloride)、門冬醯胺酶(Erwinaze) (菊歐文氏菌屬天冬醯胺酶)、益護爾(Ethyol) (阿米福汀(Amifostine))、凡畢複(Etopophos) (磷酸依託泊苷(Etoposide Phosphate))、依託泊苷(Etoposide)、磷酸依託泊苷、艾瓦西特(Evacet) (鹽酸阿黴素脂質體)、依維莫司(Everolimus)、伊維斯他(Evista) (鹽酸雷諾昔酚(Raloxifene Hydrochloride))、優維寧(Evomela) (鹽酸美法侖(Melphalan Hydrochloride))、依西美坦(Exemestane)、5-FU (氟尿嘧啶注射液)、5-FU (局部用氟尿嘧啶)、法樂通(Fareston) (托瑞米芬(Toremifene))、法瑞達克(Farydak) (帕比司他(Panobinostat))、法洛德克斯(Faslodex) (氟維司群(Fulvestrant))、FEC、弗隆(Femara) (來曲唑(Letrozole))、非格司亭(Filgrastim))、氟達拉(Fludara) (磷酸氟達拉濱(Fludarabine Phosphate))、磷酸氟達拉濱、氟普克斯(Fluoroplex) (局部用氟尿嘧啶)、氟尿嘧啶注射液、局部用氟尿嘧啶、氟他胺(Flutamide)、氟萊克斯(Folex) (甲胺喋呤)、氟萊克斯PFS (甲胺喋呤)、FOLFIRI、FOLFIRI-BEVACIZUMAB、FOLFIRI-CETUXIMAB、FOLFIRINOX、FOLFOX、弗洛汀(Folotyn) (普拉曲沙(Pralatrexate))、FU-LV、氟維司群、加德西(Gardasil) (重組HPV四價疫苗)、加德西9 (重組HPV九價疫苗)、加澤瓦(Gazyva) (奧濱尤妥珠單抗(Obinutuzumab))、吉非替尼(Gefitinib)、鹽酸吉西他濱(Gemcitabine Hydrochloride)、GEMCITABINE-CISPLATIN、GEMCITABINE-OXALIPLATIN、奧佐米星吉妥單抗(Gemtuzumab Ozogamicin)、健擇(Gemzar) (鹽酸吉西他濱)、吉諾特夫(Gilotrif) (雙馬來酸阿法替尼)、格列維克(Gleevec) (甲磺酸伊馬替尼(Imatinib Mesylate))、格立得(Gliadel) (卡莫司汀植入膜劑)、格立得晶圓(Gliadel wafer) (卡莫司汀植入膜劑)、穀卡匹酶(Glucarpidase)、乙酸戈舍瑞林(Goserelin Acetate)、哈拉溫(Halaven) (甲磺酸艾日布林)、哈馬那歐(Hemangeol) (鹽酸普萘洛爾(Propranolol Hydrochloride))、赫賽汀(Herceptin) (曲妥珠單抗(Trastuzumab))、重組HPV二價疫苗、重組HPV九價疫苗、重組HPV四價疫苗、和美新(Hycamtin) (鹽酸拓朴替康(Topotecan Hydrochloride))、愛治(Hydrea) (羥基脲(Hydroxyurea))、羥基脲、Hyper-CVAD、愛博新(Ibrance) (帕博西尼(Palbociclib))、替伊莫單抗(Ibritumomab Tiuxetan)、依魯替尼(Ibrutinib)、ICE、依克魯西格(Iclusig) (鹽酸普納替尼(Ponatinib Hydrochloride))、艾達米星(Idamycin) (鹽酸伊達比星(Idarubicin Hydrochloride))、鹽酸伊達比星、艾代拉里斯(Idelalisib)、恩西地平(Idhifa) (甲磺酸艾那尼布(Enasidenib Mesylate))、艾菲克斯(Ifex) (異環磷醯胺)、異環磷醯胺、匹服平(Ifosfamidum) (異環磷醯胺)、IL-2 (阿地白介素(Aldesleukin))、甲磺酸伊馬替尼、依布魯維卡(Imbruvica) (依魯替尼(Ibrutinib))、英菲尼(Imfinzi) (德瓦魯單抗)、咪喹莫特(Imiquimod)、伊米萊克(Imlygic) (塔里穆尼拉赫韋克(Talimogene Laherparepvec))、因塔(Inlyta) (阿西替尼(Axitinib))、奧英妥珠單抗、重組干擾素α-2b (Interferon Alfa-2b, Recombinant)、介白素-2 (阿地白介素)、內含子A (重組干擾素α-2b)、碘I 131托西莫單抗及托西莫單抗、伊匹單抗(Ipilimumab)、艾瑞莎(Iressa) (吉非替尼(Gefitinib))、鹽酸伊立替康、鹽酸伊立替康脂質體(Irinotecan Hydrochloride Liposome)、伊斯達斯(Istodax) (羅米地辛(Romidepsin))、伊沙匹隆(Ixabepilone)、檸檬酸依薩佐米(Ixazomib Citrate)、艾克斯普拉(Ixempra) (伊沙匹隆)、傑克菲(Jakafi) (磷酸盧佐替尼(Ruxolitinib Phosphate))、JEB、傑維坦(Jevtana) (卡巴他賽(Cabazitaxel))、卡德克拉(Kadcyla) (曲妥珠單抗-美坦新偶聯物)、雷洛昔芬(Keoxifene) (鹽酸雷諾昔酚(Raloxifene Hydrochloride))、克皮文(Kepivance) (帕利夫明(Palifermin))、克珠達(Keytruda) (派姆單抗(Pembrolizumab))、瑞博西林(Kisqali) (瑞博昔布(Ribociclib))、威爾瑞(Kymriah) (替沙津魯(Tisagenlecleucel))、凱普羅里斯(Kyprolis) (卡非佐米(Carfilzomib))、乙酸蘭瑞肽(Lanreotide Acetate)、二甲苯磺酸拉帕替尼(Lapatinib Ditosylate)、拉特維(Lartruvo) (奧拉單抗(Olaratumab))、來那度胺(Lenalidomide)、甲磺酸樂伐替尼(Lenvatinib Mesylate)、冷韋納(Lenvima) (甲磺酸樂伐替尼)、來曲唑(Letrozole)、甲醯四氫葉酸鈣(Leucovorin Calcium)、瘤可寧(Leukeran) (氯芥苯丁酸)、乙酸亮甲瑞林(Leuprolide Acetate)、祿斯得停(Leustatin) (克拉屈濱)、蘭維倫(Levulan) (胺基乙醯丙酸)、林福利嗪(Linfolizin) (氯芥苯丁酸)、力得(LipoDox) (鹽酸阿黴素脂質體)、洛莫司汀(Lomustine)、洛斯氟(Lonsurf) (曲氟尿苷及鹽酸替吡嘧啶(Trifluridine and Tipiracil Hydrochloride))、抑那通(Lupron) (乙酸亮甲瑞林)、抑那通德波特(Lupron Depot) (乙酸亮甲瑞林)、抑那通德波特-匹德(Lupron Depot-Ped) (乙酸亮甲瑞林)、靈帕雜(Lynparza) (奧拉帕尼(Olaparib))、瑪奇博(Marqibo) (長春新鹼硫酸鹽脂質體(Vincristine Sulfate Liposome))、甲基苄肼(Matulane) (鹽酸丙卡巴肼(Procarbazine Hydrochloride))、鹽酸氮芥(Mechlorethamine Hydrochloride)、乙酸甲地孕酮(Megestrol Acetate)、美凱尼(Mekinist) (曲美替尼(Trametinib))、美法侖(Melphalan)、鹽酸美法侖、巰基嘌呤(Mercaptopurine)、美司鈉(Mesna)、美斯萊(Mesnex) (美司鈉)、梅塞唑拉斯通(Methazolastone) (替莫唑胺(Temozolomide))、甲胺喋呤、甲胺喋呤LPF (甲胺喋呤)、溴化甲基納曲酮(Methylnaltrexone Bromide)、美西特(Mexate) (甲胺喋呤)、美西特-AQ (甲胺喋呤)、米哚妥林(Midostaurin)、絲裂黴素(Mitomycin) C、鹽酸米托蒽醌(Mitoxantrone Hydrochloride)、米托曲士(Mitozytrex) (絲裂黴素C)、MOPP、莫唑比(Mozobil) (普樂沙福(Plerixafor))、木斯塔根(Mustargen) (鹽酸氮芥)、突變黴素(Mutamycin) (絲裂黴素C)、馬利蘭(Myleran) (白消安)、麥洛薩(Mylosar) (阿紮胞苷)、麥羅塔(Mylotarg) (奧佐米星吉妥單抗)、奈米粒子太平洋紫杉醇(Nanoparticle Paclitaxel) (太平洋紫杉醇白蛋白穩定奈米粒子調配物)、溫諾平(Navelbine) (酒石酸長春瑞賓(Vinorelbine Tartrate))、萊西單抗(Necitumumab)、奈拉濱(Nelarabine)、尼歐薩(Neosar) (環磷醯胺)、馬來酸來那替尼(Neratinib Maleate)、樂寧克斯(Nerlynx) (馬來酸來那替尼)、奈妥吡坦及鹽酸帕洛諾司瓊、紐拉思塔(Neulasta) (派非格司亭(Pegfilgrastim))、雷普根(Neupogen) (非格司亭(Filgrastim))、雷沙瓦(Nexavar) (甲苯磺酸索拉非尼(Sorafenib Tosylate))、尼蘭得隆(Nilandron) (尼魯胺(Nilutamide))、尼羅替尼(Nilotinib)、尼魯胺、恩萊瑞(Ninlaro) (檸檬酸依薩佐米)、尼拉帕尼甲苯磺酸鹽單水合物(Niraparib Tosylate Monohydrate)、納武單抗(Nivolumab)、諾瓦得士(Nolvadex) (檸檬酸他莫昔芬(Tamoxifen Citrate))、普萊特(Nplate) (羅米司亭(Romiplostim))、奧濱尤妥珠單抗(Obinutuzumab)、奧多唑(Odomzo) (索尼得吉(Sonidegib))、OEPA、奧法木單抗、OFF、奧拉帕尼、奧拉單抗、高三尖杉酯鹼(Omacetaxine Mepesuccinate)、昂卡司帕(Oncaspar) (培門冬酶(Pegaspargase)、鹽酸昂丹司瓊(Ondansetron Hydrochloride)、安能得(Onivyde) (鹽酸伊立替康脂質體)、恩塔克(Ontak) (地尼白介素)、歐狄沃(Opdivo) (納武單抗)、OPPA、奧希替尼(Osimertinib)、奧沙利鉑、太平洋紫杉醇、太平洋紫杉醇白蛋白穩定奈米粒子調配物、PAD、帕博西尼、帕利夫明、鹽酸帕洛諾司瓊、鹽酸帕洛諾司瓊及奈妥吡坦、帕米膦酸二鈉(Pamidronate Disodium)、帕尼單抗(Panitumumab)、帕比司他(Panobinostat)、帕拉普特(Paraplat) (卡鉑)、鉑爾定(Paraplatin) (卡鉑)、鹽酸帕唑帕尼(Pazopanib Hydrochloride)、PCV、PEB、培門冬酶、派非格司亭(Pegfilgrastim)、聚乙二醇化干擾素(Peginterferon) α-2b、PEG-內含子(聚乙二醇化干擾素α-2b)、派姆單抗、培美曲塞二鈉、帕傑它(Perjeta) (帕妥珠單抗(Pertuzumab))、帕妥珠單抗、普拉迪諾(Platinol) (順鉑)、普拉迪諾-AQ (順鉑)、普樂沙福、泊馬度胺(Pomalidomide)、泊馬斯特(Pomalyst) (泊馬度胺)、鹽酸普納替尼(Ponatinib Hydrochloride)、泊特納(Portrazza) (萊西單抗)、普拉曲沙、潑尼松(Prednisone)、鹽酸丙卡巴肼、普留淨(Proleukin) (阿地白介素)、博力加(Prolia) (地諾單抗(Denosumab))、普若瑪塔(Promacta) (艾曲波帕乙醇胺(Eltrombopag Olamine))、鹽酸普萘洛爾(Propranolol Hydrochloride)、普羅旺(Provenge) (西普亮塞-T (Sipuleucel-T))、嘌呤托(Purinethol) (巰基嘌呤)、普利坦(Purixan) (巰基嘌呤)、鐳223二氯化物、鹽酸雷諾昔酚、雷莫蘆單抗(Ramucirumab)、拉布立酶(Rasburicase)、R-CHOP、R-CVP、重組人類乳頭狀瘤病毒(Human Papillomavirus；HPV)二價疫苗、重組人類乳頭狀瘤病毒(HPV)九價疫苗、重組人類乳頭狀瘤病毒(HPV)四價疫苗、重組干擾素α-2b、瑞戈非尼(Regorafenib)、雷利斯托(Relistor) (溴化甲基納曲酮)、R-EPOCH、雷利米得(Revlimid) (來那度胺)、赫瑪瑞斯(Rheumatrex) (甲胺喋呤)、瑞博昔布(Ribociclib)、R-ICE、美羅華(Rituxan) (利妥昔單抗(Rituximab))、美羅華海瑟拉(Rituxan Hycela) (利妥昔單抗及人類玻尿酸酶(Rituximab and Hyaluronidase Human))、利妥昔單抗、利妥昔單抗及人類玻尿酸酶、鹽酸羅拉匹坦(Rolapitant Hydrochloride)、羅米地辛、羅米司亭、紅比黴素(Rubidomycin) (鹽酸道諾黴素)、魯胞卡(Rubraca) (瑞卡帕布樟腦磺酸鹽Rucaparib Camsylate))、瑞卡帕布樟腦磺酸鹽、磷酸盧佐替尼、雷德帕斯(Rydapt) (米哚妥林(Midostaurin))、司蘭索胸膜內氣霧劑(Sclerosol Intrapleural Aerosol) (滑石(Talc))、司妥昔單抗(Siltuximab)、西普亮塞-T、索嗎特啉德波特(Somatuline Depot) (乙酸蘭瑞肽(Lanreotide Acetate))、索尼得吉、甲苯磺酸索拉非尼(Sorafenib Tosylate)、施達塞(Sprycel) (達沙替尼(Dasatinib))、STANFORD V、無菌滑石粉(Sterile Talc Powder) (滑石)、史特瑞陀克(Steritalc) (滑石)、斯蒂瓦加(Stivarga) (瑞戈非尼(Regorafenib))、蘋果酸舒尼替尼(Sunitinib Malate)、舒癌特(Sutent) (蘋果酸舒尼替尼)、塞拉曲(Sylatron) (聚乙二醇化干擾素α-2b)、塞文特(Sylvant) (司妥昔單抗)、塞瑞博(Synribo) (高三尖杉酯鹼)、塔博洛得(Tabloid) (硫鳥嘌呤(Thioguanine))、TAC、塔芬拉(Tafinlar) (達拉菲尼(Dabrafenib))、泰格莎(Tagrisso) (奧希替尼)、滑石、塔里穆尼拉赫韋克(Talimogene Laherparepvec)、檸檬酸他莫昔芬、塔拉濱(Tarabine) PFS (阿糖胞苷)、得舒(Tarceva) (鹽酸埃羅替尼(Erlotinib Hydrochloride))、塔格瑞汀(Targretin) (貝沙羅汀(Bexarotene))、塔希納(Tasigna) (尼羅替尼)、紫杉醇(Taxol) (太平洋紫杉醇)、克癌易(Taxotere) (多西他賽)、特森催克(Tecentriq) (阿特珠單抗)、特莫多(Temodar) (替莫唑胺)、替莫唑胺、坦羅莫司(Temsirolimus)、沙立度胺(Thalidomide)、沙洛米得(Thalomid) (沙立度胺)、硫鳥嘌呤、噻替派(Thiotepa)、替沙津魯、托來克(Tolak) (局部用氟尿嘧啶)、鹽酸拓朴替康、托瑞米芬(Toremifene)、托瑞斯(Torisel) (坦羅莫司)、托西莫單抗及碘I 131托西莫單抗、托泰克(Totect) (鹽酸右雷佐生(Dexrazoxane Hydrochloride))、TPF、曲貝替定(Trabectedin)、曲美替尼(Trametinib)、曲妥珠單抗、特瑞達(Treanda) (鹽酸苯達莫司汀)、曲氟尿苷及鹽酸替吡嘧啶、三氧化砷(Trisenox) (三氧化二砷(Arsenic Trioxide))、泰克泊(Tykerb) (二甲苯磺酸拉帕替尼)、優尼圖辛(Unituxin) (迪奴圖單抗)、尿苷三乙酸酯(Uridine Triacetate)、VAC、戊柔比星(Valrubicin)、瓦爾斯塔爾(Valstar) (戊柔比星)、凡德他尼(Vandetanib)、VAMP、瓦瑞比(Varubi) (鹽酸羅拉匹坦)、維必施(Vectibix) (帕尼單抗)、VeIP、長春鹼(Velban) (硫酸長春花鹼(Vinblastine Sulfate))、萬珂(Velcade) (硼替佐米)、維爾薩(Velsar) (硫酸長春花鹼)、維羅非尼(Vemurafenib)、維耐托克(Venclexta) (維納妥拉(Venetoclax))、維納妥拉、維則尼歐(Verzenio) (阿貝力布(Abemaciclib))、韋亞德(Viadur) (乙酸亮甲瑞林)、維達紮(Vidaza) (阿紮胞苷)、硫酸長春花鹼、文卡薩(Vincasar) PFS (硫酸長春新鹼(Vincristine Sulfate))、硫酸長春新鹼、硫酸長春新鹼脂質體(Vincristine Sulfate Liposome)、酒石酸長春瑞賓(Vinorelbine Tartrate)、VIP、維莫德吉(Vismodegib)、維圖蓋得(Vistogard) (尿苷三乙酸酯)、沃納克(Voraxaze) (穀卡匹酶(Glucarpidase))、伏立諾他(Vorinostat)、維曲特(Votrient) (鹽酸帕唑帕尼)、維克斯(Vyxeos) (鹽酸道諾黴素及阿糖胞苷脂質體(Daunorubicin Hydrochloride and Cytarabine Liposome))、韋康瑞林(Wellcovorin) (甲醯四氫葉酸鈣)、夏克瑞(Xalkori) (克唑替尼(Crizotinib))、希羅達(Xeloda) (卡培他濱)、XELIRI、XELOX、狄諾塞麥(Xgeva) (地諾單抗(Denosumab))、西奧弗果(Xofigo) (鐳223二氯化物)、安可坦(Xtandi) (恩雜魯胺)、易沃伊(Yervoy) (伊匹單抗)、耶斯卡塔(Yescarta) (西卡思羅)、永德利斯(Yondelis) (曲貝替定(Trabectedin))、紮爾拉普(Zaltrap) (阿柏西普(Ziv-Aflibercept))、紮希歐(Zarxio) (非格司亭)、則樂(Zejula) (尼拉帕尼甲苯磺酸鹽單水合物)、澤波拉夫(Zelboraf) (維羅非尼(Vemurafenib))、澤瓦林(Zevalin) (替伊莫單抗(Ibritumomab Tiuxetan))、新內卡(Zinecard) (鹽酸右雷佐生)、阿柏西普(Ziv-Aflibercept)、樞複寧(Zofran) (鹽酸昂丹司瓊)、諾雷德(Zoladex) (乙酸戈舍瑞林)、唑來膦酸((Zoledronic Acid)、佐林紮(Zolinza) (伏立諾他(Vorinostat))、唑美塔(Zometa) (唑來膦酸)、澤利格(Zydelig) (艾代拉里斯(Idelalisib))、賽瑞替尼(Zykadia) (色瑞替尼(Ceritinib))以及茲替伽(Zytiga) (乙酸阿比特龍(Abiraterone Acetate))。

在一些實施例中，治療可包含投與皮質類固醇，例如地塞米松及/或潑尼松。

可提供產生抗原結合分子、多肽、CAR、核酸(或其多者)、表現載體(或其多者)、細胞或組合物之多次劑量。劑量中之一或多者或每一者可伴隨著同時或依序投與另一治療劑。

多次劑量可以由可選擇為以下中之一者的預定時間間隔分隔開：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30或31天；或1、2、3、4、5或6個月。藉助於實例，可每7天、14天、21天或28天(加或減3天、2天或1天)給藥一次。 個體

根據本文中所描述之本發明之態樣的個體可為任何動物或人類。個體較佳為哺乳動物，更佳為人類。個體可為非人類哺乳動物，但更佳為人類。個體可為雄性或雌性。個體可為患者。個體可已診斷患有需要治療之疾病或病況(例如癌症)，可疑似患有此類疾病/病況，或可處於患上/感染此類疾病/病況之風險下。

在根據本發明之實施例中，個體較佳為人類個體。在一些實施例中，待根據本發明之治療或預防方法治療的個體在本文中為患有癌症或處於患上癌症之風險下的個體。在根據本發明之實施例中，個體可經選擇以根據基於此類疾病/病況之某些標誌物之特徵的方法來治療。 套組

在本文中所描述之本發明之一些態樣中，提供一種分裝部分的套組。在一些實施例中，套組可具有至少一個容器，其具有預定量之本文所描述的抗原結合分子、Fc區、多肽、核酸(或其多者)、表現載體(或其多者)、細胞或組合物。

在一些實施例中，套組可包含用於產生本文所描述之抗原結合分子、Fc區、多肽、核酸(或其多者)、表現載體(或其多者)、細胞或組合物的材料。

套組可提供抗原結合分子、Fc區、多肽、核酸(或其多者)、表現載體(或其多者)、細胞或組合物連同用於向患者投與以便治療指定疾病/病況的說明。

在一些實施例中，套組可進一步包含至少一個容器，其具有預定量之另一治療劑(例如抗感染劑或化學治療劑)。在此等實施例中，套組亦可包含第二藥劑或醫藥組合物，使得二種藥劑或醫藥組合物可同時或分開投與以使得其提供特定疾病或病況之組合治療。治療劑亦可經調配以適用於注射或輸注至腫瘤或血液。 序列一致性

如本文所使用，「序列一致性」係指在比對序列且必要時引入空隙以實現序列之間的最大序列一致性百分比後，主題序列中與參考序列中之核苷酸/胺基酸殘基一致的核苷酸/胺基酸殘基之百分比。出於測定二個或多於二個胺基酸或核酸序列之間的序列一致性百分比之目的，成對及多個序列比對可以熟習此項技術者所已知之各種方式實現，例如使用可供公開使用的電腦軟體，諸如ClustalOmega (Söding, J. 2005, Bioinformatics 21, 951-960)、T-coffee (Notredame等人 2000, J. Mol. Biol. (2000) 302, 205-217)、Kalign (Lassmann and Sonnhammer 2005, BMC Bioinformatics, 6(298))及MAFFT (Katoh及Standley 2013, Molecular Biology and Evolution, 30(4) 772-780)軟體。當使用此軟體時，較佳使用例如空隙罰分及擴展罰分之預設參數。 序列

SEQ ID NO:	描述	序列
1	人類IgG1 G1m1同種異型恆定區(IGHG1；UniProt：P01857-1，v1)	ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
2	CH1 IgG1 (P01857-1，v1之位置1至98)	ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV
3	鉸鏈IgG1 (P01857-1，v1之位置99至110)	EPKSCDKTHTCP
4	CH2 IgG1 (P01857-1，v1之位置111至223)	PCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK
5	CH3 IgG1 (P01857-1，v1之位置224至330)	GQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
6	CH2-CH3 IgG1	PCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
7	Cκ CL (IGCK；UniProt：P01834-1，v2)	RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
8	CH2_GASD	PCPAPELLAGPDVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK
9	CH2_GASDIE	PCPAPELLAGPDVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPEEKTISKAK
10	CH2_GASDALIE	PCPAPELLAGPDVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPLPEEKTISKAK
11	CH2_LCKC	PCPAPELLGGPSVFCFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIECTISKAK
12	CH2_GASDLCKC	PCPAPELLAGPDVFCFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIECTISKAK
13	CH2_GASDIELCKC	PCPAPELLAGPDVFCFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPEECTISKAK
14	CH2 _GASDALIELCKC	PCPAPELLAGPDVFCFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPLPEECTISKAK
15	CH3_EKEG	GQPRKPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHGALHNHYTQKSLSLSPGK
16	CH2-CH3_GASD	PCPAPELLAGPDVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
17	CH2-CH3_GASDIE	PCPAPELLAGPDVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPEEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
18	CH2-CH3 _GASDALIE	PCPAPELLAGPDVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPLPEEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
19	CH2-CH3_LCKC	PCPAPELLGGPSVFCFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIECTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
20	CH2-CH3 _GASDLCKC	PCPAPELLAGPDVFCFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIECTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
21	CH2-CH3 _GASDIELCKC	PCPAPELLAGPDVFCFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPEECTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
22	CH2-CH3 _GASDALIELCKC	PCPAPELLAGPDVFCFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPLPEECTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
23	CH2-CH3_EKEG	PCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPRKPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHGALHNHYTQKSLSLSPGK
24	CH2-CH3 _LCKCEKEG	PCPAPELLGGPSVFCFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIECTISKAKGQPRKPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHGALHNHYTQKSLSLSPGK
25	小鼠Ig γ-2A鏈C區，A對偶基因(UniProt：P01863-1，v1)	AKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK
26	G4S連接子	GGGGS
27	(G4S)3連接子	GGGGSGGGGSGGGGS
28	人類IgG1恆定區(G1m3同種異型)	ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
29	CH1 IgG1 (G1m3)	ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRV
30	CH3 IgG1 (G1m3)	GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
31	CH2-CH3 (G1m3)	PCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
32	CH3_EKEG (G1m3)	GQPRKPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHGALHNHYTQKSLSLSPGK
33	CH2-CH3_GASD (G1m3)	PCPAPELLAGPDVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
34	CH2-CH3_GASDIE (G1m3)	PCPAPELLAGPDVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPEEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
35	CH2-CH3 _GASDALIE (G1m3)	PCPAPELLAGPDVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPLPEEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
36	CH2-CH3_LCKC (G1m3)	PCPAPELLGGPSVFCFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIECTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
37	CH2-CH3 _GASDLCKC (G1m3)	PCPAPELLAGPDVFCFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIECTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
38	CH2-CH3 _GASDIELCKC (G1m3)	PCPAPELLAGPDVFCFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPEECTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
39	CH2-CH3 _GASDALIELCKC (G1m3)	PCPAPELLAGPDVFCFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPLPEECTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
40	CH2-CH3_EKEG (G1m3)	PCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPRKPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHGALHNHYTQKSLSLSPGK
41	CH2-CH3 _LCKCEKEG (G1m3)	PCPAPELLGGPSVFCFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIECTISKAKGQPRKPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHGALHNHYTQKSLSLSPGK

***

本發明包括所描述之態樣及較佳特徵之組合，當此組合明顯不允許或明確避免時除外。

本文中所使用之部分標題僅出於組織目的且不應理解為限制所描述之主題。

現將參考隨附圖式，藉助於實例說明本發明之態樣及實施例。其他態樣及實施例對於熟習此項技術者將為顯而易見的。本文中所提及之所有文獻均以引用之方式併入本文中。

在整個本說明書，包括隨後之申請專利範圍中，除非本文另有規定，否則「包含(comprise)」一詞及變化形式(諸如「包含(comprises/comprising)」)應理解為暗示包涵所陳述整體或步驟或整體或步驟之群，但不排除任何其他整體或步驟或步驟或整體或步驟之群。

應注意，除非上下文明確另外指定，否則如本說明書及隨附申請專利範圍中所使用，單數形式「一(a/an)」及「該(the)」包括多個指示物。範圍可在本文中表示為「約」一個特定值及/或至「約」另一個特定值。當表示此等範圍時，另一實施例包括自一個特定值及/或至另一個特定值。類似地，當值藉由使用先行詞「約」表示為近似值時，應理解特定值形成另一個實施例。

當在本文中揭示核酸序列時，亦明確考慮其反向互補序列。

本文中所描述之方法可較佳地活體外執行。術語「活體外」意欲涵蓋用培養物中之細胞進行之程序，而術語「活體內」意欲涵蓋用完整多細胞生物體/在完整多細胞生物體上之程序。 實例 實例1：包含經工程處理之Fc區之抗原結合分子的製備

本發明者製備包含重鏈之抗原結合分子，該等重鏈包括CH2及/或CH3區中之位置的胺基酸取代，以研究取代對Fc效應功能之影響。

製備包含以下之抗原結合分子：(i)輕鏈，其包含對HER3具有特異性之抗體的輕鏈可變區(VL)及恆定區輕鏈(Cκ)；以及(ii)重鏈，其包含對HER3具有特異性之抗體的重鏈可變區(VH)及人類免疫球蛋白G 1 (G1m3同種異型)重鏈恆定區1 (CH1)、鉸鏈區、重鏈恆定區2 (CH2)以及重鏈恆定區3 (CH3)。

CH2及CH3區未經取代或提供有如下之取代組合：

抗原結合分子使用1) Expi293短暫表現系統套組(Transient Expression System Kit) (Life Technologies，USA)或2) HEK293-6E短暫表現系統(CNRC-NRC，Canada)按照製造商之說明來表現。 1) Expi293短暫表現系統：細胞株維持：

HEK293F細胞(Expi293F)自Life Technologies，Inc (USA)獲得。將細胞在37℃下，在具有搖動平台之8% CO₂ 及80%潮濕培育箱中培養於無血清、無蛋白質、化學成分確定的培養基(Expi293表現培養基，Thermo Fisher,USA)中，該培養基補充有50 IU/ml青黴素及50 µg/ml鏈黴素(Gibco，USA)。轉染：

使用ExpiFectamine 293反應劑套組(Gibco，USA)，根據其製造商之方案使Expi293F細胞轉染有編碼重鏈及輕鏈之表現質體。簡言之，處於維持下之細胞進行培養基交換以藉由短暫離心(spinning down)培養物來移除抗生素，將細胞集結粒在轉染前1天再懸浮於不含抗生素之新製培養基中。在轉染之當天，將2.5 × 10⁶ /ml之活細胞接種於各轉染之搖動燒瓶中。使DNA-ExpiFectamine複合物形成於血清減少之培養基Opti-MEM (Gibco，USA)中，在添加至細胞之前在室溫下保持25 min。在轉染後16至18 h，將強化子添加至經轉染細胞中。在轉染後第4天，將等量之培養基注滿至轉染體以防止細胞聚集。轉染體在第7天藉由在4000×g 下離心15 min來收集，且經由0.22 µm無菌過濾器單元過濾。 2) HEK293-6E短暫表現系統：細胞株維持 ：

HEK293-6E細胞自National Research Council Canada獲得。將細胞在37℃下，在具有搖動平台之5% CO₂ 及80%潮濕培育箱中培養於無血清、無蛋白質、化學成分確定的自由式F17培養基(Invitrogen，USA)中，該培養基補充有0.1% Kolliphor-P188及4 mM L-麩醯胺酸(Gibco，USA)以及25 µg/ml G-418。轉染 ：

使用PEIproTM (Polyplus，USA)，根據其製造商之方案使HEK293-6E細胞轉染有編碼重鏈及輕鏈之表現質體。簡言之，處於維持下之細胞進行培養基交換以藉由離心移除抗生素，細胞集結粒在轉染前1天用不含抗生素之新鮮培養基再懸浮。在轉染當天，將1.5至2 × 10⁶ 個細胞/毫升之活細胞接種於各轉染之搖動燒瓶中。DNA及PEIproTM以1:1之比率混合且使複合物形成於F17培養基中，在添加至細胞之前在室溫下持續5 min。在轉染後24至48 h，將0.5% (w/v)之胰蛋白腖N1饋入至轉染體。轉染體在第6至7天藉由在4000×g下離心15 min來收集，且上清液經由0.22 µm無菌過濾器單元過濾。親和純化、緩衝液交換及儲存：

藉由經轉染細胞分泌至培養上清液中之抗原結合分子使用液相層析系統AKTA Start (GE Healthcare，UK)純化。特定而言，將上清液以5 ml/min之結合速率裝載至HiTrap蛋白G管柱(GE Healthcare，UK)上，接著用10管柱體積之洗滌緩衝液(20 mM磷酸鈉，pH 7.0)洗滌管柱。結合mAb用溶離緩衝液(0.1 M甘胺酸，pH 2.7)溶離且溶離物經分餾至含有適量之中和緩衝液(1 M Tris，pH 9)的收集試管中。使用30K MWCO蛋白質濃縮器(Thermo Fisher，USA)或3.5K MWCO透析卡匣(Thermo Fisher，USA)，將含有經純化mAb之經中和之溶離緩衝液交換至PBS中。單株抗體藉由穿過0.22 µm過濾器殺菌，等分且急凍於-80℃下以儲存。 實例2：藉由差示掃描螢光法分析包含經工程處理之Fc區的抗原結合分子之熱穩定性

如實例1中所描述來製備之抗原結合分子的熱穩定性藉由差示掃描螢光法來評估。

簡言之，將0.2 mg/mL之抗體及SYPRO橙染料(Orange dye) (ThermoFisher)的三份反應混合物製備於25 μL之PBS中，轉移至MicroAmp光學96孔反應盤(ThermoFisher)之孔中，且用MicroAmp光學黏著劑膜(ThermoFisher)密封。在選擇TAMRA為報導子且ROX為被動參考之7500快速即時PCR系統(Applied Biosystems)中運行解構曲線。熱分佈包括在25℃下2 min之起始步驟及在99℃下2 min之最終步驟，其中斜率為1.2%。將原始資料之一階導數繪製為溫度之函數以獲得導數解構曲線。

未配對之重鏈的解構溫度(Tm)根據導數曲線之峰值測定。

結果展示於圖1A至1E中。

亦測定與抗原結合分子之Fab區中的重鏈未配對之輕鏈之Tm值。

差示掃描螢光實驗之結果概括於圖2A中所展示之表中。

LCKC取代之引入使所測試之所有經工程處理之變異體的Fc區(亦即，GASD、GASDIE、GASDALIE、EKEG)穩定，但使WT Fc區不穩定。LCKC使經工程處理之Fc變異體的Tm增加在9.9℃與23.2℃之間。LCKC使WT Fc之Tm降低8.5℃。

缺乏LCKC取代之經工程處理之Fc變異體的熱穩定性之等級順序如下：WT (69.7℃) > GASD (63.6℃) > EKEG (60.3℃) > GASDALIE (48.1℃)≈GASDIE (40.0℃)。

包含LCKC取代之經工程處理之Fc變異體的熱穩定性之等級順序如下：GASD_LCKC (75.9℃) > EKEG_LCKC (70.2℃) > GASDALIE_LCKC (63.3℃)≈GASDIE_LCKC (63.2℃) > WT_LCKC (61.2℃)。

具有LCKC取代之經工程處理之Fc變異體相對於Fc WT之熱穩定性的變化如下：GASD_LCKC (+6.2℃) > EKEG_LCKC (+0.5℃) > GASDALIE_LCKC (-6.4℃) ≈ GASDIE_LCKC (-6.5℃)。

LCKC取代之引入並不顯著影響Fab區之熱穩定性。 實例3：包含經工程處理之Fc區的抗原結合分子對於人類Fc受體FcγRIIIa-158V之親和力分析

如實例1中所描述來製備之抗原結合分子藉由生物膜層干涉量測術(BLI)，使用Pall ForteBio Octet Red384系統評估與人類Fc受體FcγRIIIa (包含多晶型158V)之結合。

抗Penta-HIS (HIS1K)生物感測器購自Forte Bio (18-5120)，且在PBS緩衝液(pH 7.2)中培育60秒以獲得第一基線，並且隨後在PBS pH 7.2中用組胺酸標記之人類FcγRIIIa-158V加載120秒。在加載之後，生物感測器在PBS緩衝液(pH 7.2)中培育60秒以獲得第二基線，接著與在範圍介於15.6 nM至500 nM之濃度下之稀釋系列的測試抗原結合分子在PBS pH 7.2中培育60秒以獲得締合曲線。最後，生物感測器在PBS pH 7.2中培育120秒以獲得解離曲線。

藉由將締合及解離資料整體擬合為1:1結合模型來計算動力學及親和力常數。

結果展示於圖3A至3J中，且概括於圖4中所展示之表中。

GASD、GASDIE、GASDALIE及EKEG Fc變異體顯示與WT Fc相比，對人類FcγRIIIa-158V之結合親和力增加。

親和力之等級順序如下：GASDALIE≈GASDIE > GASD≈EKEG > WT。

所觀測之經工程處理之Fc變異體的結合親和力增加看起來主要係由於解離動力學之減少。

LCKC取代之引入並不顯著改變WT Fc或GASD、GASDIE、GASDALIE及EKEG Fc變異體與人類FcγRIIIa-158V之結合親和力。

親和力之等級順序與缺乏LCKC取代之分子相同(亦即，GASDALIE_LCKC≈GASDIE_LCKC > GASD_LCKC≈EKEG_LCKC > WT_LCKC)。 實例4：包含經工程處理之Fc區的抗原結合分子對於人類及小鼠Fc受體之親和力分析

如實例1中所描述來製備之抗原結合分子WT及GASDALIE_LCKC對於以下之結合藉由生物膜層干涉量測術(BLI)，使用Pall ForteBio Octet Red384系統來分析： ‧ 人類Fc受體：hFcγRIIIa-158F、hFcγRIIIa-158V、hFcγRIIa-167H、hFcγRIIa-167R、hFcγRIIb及hFcRn；以及 ‧ 小鼠Fc受體：mFcγRIV (hFcγRIIIa之直系同源物)、mFcγRIII (hFcγRIIa之直系同源物)、mFcγRIIb (hFcγRIIb之直系同源物)及mFcRn。

抗Penta-HIS (HIS1K)生物感測器在PBS緩衝液中培育60秒以獲得第一基線，且隨後在PBS中用組胺酸標記之Fc受體加載120秒。在加載之後，生物感測器在PBS緩衝液(針對Fcγ受體為pH 7.2及針對FcRn為pH 5.8)中培育60秒以獲得第二基線，接著與稀釋系列之測試抗原結合分子(在範圍介於125 nM至4000 nM (針對研究與Fcγ受體結合之實驗)或75 nM至1000 nM (針對研究與FcRn受體結合之實驗)的濃度下)在PBS (針對Fcγ受體為pH 7.2及針對FcRn為pH 5.8)中培育60秒，以獲得締合曲線。最後，生物感測器在PBS (針對Fcγ受體為pH 7.2及針對FcRn為pH 5.8)中培育120秒以獲得解離曲線。

PBS pH 7.2用於研究與Fcγ受體結合之實驗，而PBS pH 5.8用於研究與FcRn受體結合之實驗。

藉由將締合及解離資料整體擬合為1:1結合模型來計算動力學及親和力常數。

結果展示於圖5A至5J、圖6A至6F、7A至7D中且概括於圖8中所展示之表中。

GASDALIE_LCKC變異體Fc顯示對活化性Fcγ受體及FcRn受體之親和力相對於WT Fc增加：hFcγRIIIa-158F、hFcγRIIIa-158V、hFcγRIIa-167H及hFcγRIIa-167R、hFcRn、mFcγRIV以及mFcRn。

GASDALIE_LCKC變異體Fc顯示對抑制性Fcγ受體hFcγRIIb之親和力相對於WT Fc減少。

GASDALIE_LCKC變異體Fc在其與mFcγRIII及mFcγRIIb結合之親和力中相對於WT Fc無顯著差異。

總體而言，GASDALIE_LCKC變異體Fc顯示對人類及小鼠活化性Fcγ受體及FcRn之親和力增加，且與人類抑制性Fcγ受體相比，對人類活化性Fcγ受體之選擇率增加。 實例5：包含經工程處理之Fc區的抗原結合分子之抗體依賴性細胞介導的細胞毒性(ADCC)之分析

在活體外分析中，如實例1中所描述來製備之抗原結合分子WT及GASDALIE_LCKC針對其對表現目標抗原之細胞(HER3)產生ADCC的能力進行分析。

經編碼人類HER3之構築體穩定轉染的HEK 293 T細胞在分析中用作目標細胞(HER3在細胞表面之表現藉由流式細胞量測術之分析，使用HER3特異性抗體來確認)。

簡言之，將目標細胞以20,000個細胞/孔之密度接種於96孔U形底盤之孔中。將細胞與稀釋系列之WT或GASDALIE_LCKC抗原結合分子一起培育，其中最終濃度範圍為50,000 ng/ml至0.18 ng/ml (50,000 ng/ml、8,333 ng/ml、1,389 ng/ml、231 ng/ml、38.6 ng/ml、6.4 ng/ml、1.1 ng/ml及0.18 ng/ml)，或保持未經處理。將細胞在37℃及5% CO₂ 下培育30 min。

隨後將效應細胞(人類自然殺手細胞株NoGFPCD16.NK92；176V)以60,000個細胞/孔之密度(亦即，效應子:目標細胞之比率為3:1)添加至孔。

包括以下控制條件：目標細胞最大LDH釋放(僅含有目標細胞)、自發性釋放(在不存在抗原結合分子之情況下，含有目標細胞及效應子細胞)及背景(僅細胞培養基)。

將盤短暫離心且在37℃及5% CO₂ 下培育21小時。

LDH釋放分析使用Pierce LDH細胞毒性分析套組執行。將10 μl溶解緩衝液(10×)添加至目標細胞最大LDH釋放控制孔，且在37℃及5% CO₂ 下培育20 min。在培育之後，將盤短暫離心，且將50 ml上清液轉移至透明平底96孔盤。藉由將50 μl含有LDH基質之分析混合物添加至上清液來開始反應，且反應物在37℃下培育30 min。藉由添加50 μl停止溶液來停止反應，且在490 nm及680 nm下之吸光度使用BioTek Synergy HT微量盤讀數器記錄。

測試樣品之吸光度經校正為背景及自發性釋放控制條件所獲得之值，且細胞毒性百分比相對於目標細胞最大LDH釋放控制來計算，並且繪製為抗體濃度之函數。計算EC50值(ng/ml)。

結果展示於圖9A及9B中。包含WT Fc及GASDALIE_LCKC Fc二者之抗原結合分子對表現目標抗原之細胞引發濃度依賴性ADCC。

與包含WT Fc之抗原結合分子相比，包含GASDALIE_LCKC Fc之抗原結合分子具有經增加之最大細胞毒性，且相對於WT，EC50有效降低6倍(圖9B)。 實例6：活體內藉由包含經工程處理之Fc區的抗原結合分子來分析腫瘤生長抑制

近似6至8週齡之雌性NCr裸小鼠購自InVivos (Singapore)。將動物圈養於無特定病原體之條件下且按照機構動物護理及使用委員會(Institutional Animal Care and Use Committee；IACUC)指南處理。

異位腫瘤藉由將5 × 10⁶ 個 A549細胞(表現HER3之肺癌細胞)皮下注射至右側腹中來建立。用25 mg/kg之包含WT-Fc (n=6)的抗原結合分子或包含GASDALIE_LCKC取代(n=6)之抗原結合分子的IP注射液每兩週投與小鼠，總計6週。對照處理組接受等體積之PBS (媒劑；n=8)。

一週使用數位卡尺量測腫瘤體積3次且使用式[L×W2/2]計算。一旦對照組之腫瘤長度經量測>1.5 cm，則視為已到達研究終點。

結果展示於圖10中。發現包含GASDALIE_LCKC取代之抗原結合分子在抑制腫瘤生長時比包含WT-Fc之抗原結合分子更顯著有效。 實例7：藉由GASDALIE_LCKC取代引入之可能序列可靠性/免疫性序列的分析

本發明者隨後研究將GASDALIE_LCKC取代引入至人類化IgG1抗體曲妥珠單抗中是否影響與抗體產生有關之特性或治療之用途。

本發明者藉由電子雜交分析曲妥珠單抗及包含GASDALIE_LCKC取代之曲妥珠單抗變異體的成分多肽之胺基酸序列來研究預測GASDALIE_LCKC取代是否影響N-糖基化、O-糖基化、C-甘露糖基化、Asn去醯胺化、可溶性及免疫原性。

將GASDALIE_LCKC取代引入至曲妥珠單抗之Fc區中經預測不影響N-糖基化、O-糖基化、C-甘露糖基化、Asn去醯胺化，亦不引入任何免疫性肽，且經預測導致可溶性增加2%。 實例8：結論

證實相對於WT Fc，包含GASDALIE_LCKC Fc之抗原結合分子提供有以下有利特性之組合： (i)對活化性Fcγ受體之親和力增加(在與人類FcγRIIIa活化性受體結合及與鼠類FcγRIV活化性受體類似結合中>12倍增加)； (ii)對新生兒Fc受體FcRn之親和力增加； (iii)對抑制性Fcγ受體之親和力降低； (iv)對比抑制性Fcγ受體，對活化性Fcγ受體之選擇率增加 (v)類似的熱穩定性 (vi)活體外ADCC活性增加(6倍增加) (vii)改良活體內之腫瘤生長抑制； (viii)無額外序列可靠性/免疫原性。

現將參考隨附圖式論述說明本發明之原理的實施例及實驗。

圖1A 至1E. 曲線展示藉由差示掃描螢光法分析包含不同Fc區之抗原結合分子的熱穩定性來獲得之原始資料的一階導數。(1A )展示WT Fc及LCKC Fc之資料，(1B )展示GASD Fc及GASD_LCKC Fc之資料，(1C )展示GASDIE Fc及GASDIE_LCKC Fc之資料，(1D )展示GASDALIE Fc及GASDALIE_LCKC Fc之資料，且(1E )展示EKEG Fc及EKEG_LCKC Fc之資料。

圖2A 及2B. 表及條形圖概述圖1A至1E中所展示之資料。(2A )概述所有分子之資料。(2B )提供LCKC Fc (LCKC)、GASDIE_LCKC Fc (GASDIE-LCKC)及GASDIE Fc (GASDIE)格式抗原結合分子相對於WT Fc (WT IgG1)的以℃為單位之Tm偏移的圖形表示。

圖3A 至3J. 感測圖譜展示包含不同Fc區之抗原結合分子與人類FcγRIIIa-158V之結合。(3A )展示WT Fc之資料，(3B )展示GASD Fc之資料，(3C )展示GASDIE Fc之資料，(3D )展示LCKC Fc之資料，(3E )展示GASD_LCKC Fc之資料，(3F )展示GASDIE_LCKC Fc之資料，(3G )展示GASDALIE Fc之資料，(3H )展示EKEG Fc之資料，(3I )展示GASDALIE_LCKC Fc之資料，且(3J )展示EKEG_LCKC Fc之資料。

圖4. 圖表概述圖3A至3J中所展示之資料。

圖5A 至5J. 感測圖譜展示包含不同Fc區之抗原結合分子與人類Fcγ受體之結合。(5A )展示WT Fc與hFcγRIIIa-158F結合之資料，(5B )展示WT Fc與hFcγRIIIa-158V結合之資料，(5C )展示WT Fc與hFcγRIIa-167H結合之資料，(5D )展示GASDALIE_LCKC Fc與hFcγRIIIa-158F結合之資料，(5E )展示GASDALIE_LCKC Fc與hFcγRIIIa-158V結合之資料，(5F )展示GASDALIE_LCKC Fc與hFcγRIIa-167H結合之資料，(5G )展示WT Fc與hFcγRIIa-167R結合之資料，(5H )展示WT Fc與hFcγRIIb結合之資料，(5I )展示GASDALIE_LCKC Fc與hFcγRIIa-167R結合之資料，且(5J )展示GASDALIE_LCKC Fc與hFcγRIIb結合之資料。

圖6A 至6F. 感測圖譜展示包含不同Fc區之抗原結合分子與小鼠Fcγ受體之結合。(6A )展示WT Fc與mFcγRIV結合之資料，(6B )展示WT Fc與mFcγRIII結合之資料，(6C )展示WT Fc與mFcγRIIb結合之資料，(6D )展示GASDALIE_LCKC Fc與mFcγRIV結合之資料，(6E )展示GASDALIE_LCKC Fc與mFcγRIII結合之資料，且(6F )展示GASDALIE_LCKC Fc與mFcγRIIb結合之資料。

圖7A 至7D. 感測圖譜展示包含不同Fc區之抗原結合分子與人類(h)及小鼠(m) FcRn受體之結合。(7A )展示WT Fc與hFcRn結合之資料，(7B )展示WT Fc與mFcRn結合之資料，(7C )展示GASDALIE_LCKC Fc與hFcRn結合之資料，且(7D )展示GASDALIE_LCKC Fc與mFcRn結合之資料。

圖8. 圖表概述圖5A至5J、6A至6F及7A至7D中所展示之資料。

圖 9A 及 9B. 曲線圖及條形圖展示由包含靶向抗原表現細胞之不同Fc區之抗原結合分子介導的ADCC，如藉由LDH釋放分析所測定。(9A )展示靶向抗原表現細胞之WT Fc或GASDALIE_LCKC Fc區之ADCC活性。展示EC50值。(9B )展示靶向抗原表現細胞之WT Fc、GASDALIE_LCKC Fc或N297Q Fc之相對ADCC活性。

圖 10. 曲線圖展示在A549細胞株衍生之小鼠肺腺癌模型中腫瘤體積隨時間推移之分析結果。包含WT Fc或GASDALIE_LCKC Fc之抗原結合分子以25 mg/kg每兩週腹膜內(IP)投與，持續總計6週。對照處理組接受等體積之PBS (媒劑)。

Claims (24)

1. 一種任擇地經分離之抗原結合分子，其包含一Fc區，該Fc區包含一具有以下之多肽：(i)在對應於位置242之位置的C及在對應於位置334之位置的C；以及(ii)以下中之一或多者：在對應於位置236之位置的A、在對應於位置239之位置的D、在對應於位置332之位置的E、在對應於位置330之位置的L、在對應於位置345之位置的K及在對應於位置430之位置的G。
2. 如請求項1之抗原結合分子，其中該Fc區包含一具有以下之多肽：(i)在對應於位置242之位置的C及在對應於位置334之位置的C；以及(ii)在對應於位置236之位置的A、在對應於位置239之位置的D、在對應於位置332之位置的E及在對應於位置330之位置的L；或在對應於位置236之位置的A、在對應於位置239之位置的D及在對應於位置332之位置的E；或在對應於位置236之位置的A及在對應於位置239之位置的D；或在對應於位置345之位置的K及在對應於位置430之位置的G。
3. 如請求項1或請求項2之抗原結合分子，其中該Fc區包含一具有以下之多肽：(i)在對應於位置242之位置的C及在對應於位置334之位置的C；以及(ii)在對應於位置236之位置的A、在對應於位置239之位置的D、在對應於位置332之位置的E及在對應於位置330之位置的L。
4. 如請求項1或請求項2之抗原結合分子，其中該Fc區包含一具有以下之多肽：(i)在對應於位置242之位置的C及在對應於位置334之位置的C；以及(ii)在對應於位置236之位置的A、在對應於位置239之位置的D及在對應於位置332之位置的E。
5. 如請求項1或請求項2之抗原結合分子，其中該Fc區包含一具有以下之多肽：(i)在對應於位置242之位置的C及在對應於位置334之位置的C；以及(ii)在對應於位置236之位置的A及在對應於位置239之位置的D。
6. 如請求項1或請求項2之抗原結合分子，其中該Fc區包含一具有以下之多肽：(i)在對應於位置242之位置的C及在對應於位置334之位置的C；以及(ii)在對應於位置345之位置的K及在對應於位置430之位置的G。
7. 如請求項1至6中任一項之抗原結合分子，其中該Fc區包含一多肽，該多肽包含一與SEQ ID NO:39、38、37、41、22、21、20或24具有至少60%序列一致性之胺基酸序列。
8. 一種任擇地經分離之多肽，其包含一與SEQ ID NO:31或6具有至少60%序列一致性之胺基酸序列，其中該多肽包含以下在相對於SEQ ID NO:31或6編號之指定位置的胺基酸殘基：(i)在位置15之C及在位置107之C；以及(ii)以下中之一或多者：在位置9之A、在位置12之D、在位置103之L、在位置105之E、在位置118之K及在位置203之G。
9. 如請求項8之多肽，其中該多肽包含以下在相對於SEQ ID NO:31或6編號之指定位置的胺基酸殘基：(i)在位置15之C及在位置107之C，以及(ii)在位置9之A、在位置12之D、在位置103之L及在位置105之E；或在位置9之A、在位置12之D及在位置105之E；或在位置9之A及在位置12之D；或在位置118之K及在位置203之G。
10. 如請求項8或請求項9之多肽，其中該多肽包含以下在相對於SEQ ID NO:31或6編號之指定位置的胺基酸殘基：(i)在位置15之C及在位置107之C；以及(ii)在位置9之A、在位置12之D、在位置103之L及在位置105之E。
11. 如請求項8或請求項9之多肽，其中該多肽包含以下在相對於SEQ ID NO:31或6編號之指定位置的胺基酸殘基：(i)在位置15之C及在位置107之C；以及(ii)在位置9之A、在位置12之D及在位置105之E。
12. 如請求項8或請求項9之多肽，其中該多肽包含以下在相對於SEQ ID NO:31或6編號之指定位置的胺基酸殘基：(i)在位置15之C及在位置107之C；以及(ii)在位置9之A及在位置12之D。
13. 如請求項8或請求項9之多肽，其中該多肽包含以下在相對於SEQ ID NO:31或6編號之指定位置的胺基酸殘基：(i)在位置15之C及在位置107之C；以及(ii)在位置118之K及在位置203之G。
14. 一種任擇地經分離之多肽，其包含SEQ ID NO:39、38、37、41、22、21、20或24之胺基酸序列。
15. 一種任擇地經分離之Fc區，其包含一如請求項8至14中任一項之多肽。
16. 一種任擇地經分離之抗原結合分子，其包含如請求項7至13中任一項之多肽或如請求項14之Fc區。
17. 一種任擇地經分離之核酸或多種核酸，其編碼如請求項1至7或16中任一項之抗原結合分子、如請求項8至14中任一項之多肽或如請求項15之Fc區。
18. 一種表現載體或多種表現載體，其包含如請求項17之一種核酸或多種核酸。
19. 一種細胞，其包含如請求項1至7或16中任一項之抗原結合分子、如請求項8至14中任一項之多肽、如請求項15之Fc區、如請求項17之一種核酸或多種核酸，或如請求項18之一種表現載體或多種表現載體。
20. 一種方法，其包含在適合於由該等核酸或該等表現載體表現該抗原結合分子、該多肽或該Fc區之條件下，培養一包含以下之細胞：如請求項17之一種核酸或多種核酸或如請求項18之一種表現載體或多種表現載體。
21. 一種組合物，其包含如請求項1至7或16中任一項之抗原結合分子、如請求項8至14中任一項之多肽、如請求項15之Fc區、如請求項17之一種核酸或多種核酸、如請求項18之一種表現載體或多種表現載體或如請求項19之細胞。
22. 一種如請求項1至7或16中任一項之抗原結合分子、如請求項8至14中任一項之多肽、如請求項15之Fc區、如請求項17之一種核酸或多種核酸、如請求項18之一種表現載體或多種表現載體、如請求項19之細胞或如請求項21之組合物，其用於一醫藥治療或防治的方法中。
23. 一種如請求項1至7或16中任一項之抗原結合分子、如請求項8至14中任一項之多肽、如請求項15之Fc區、如請求項17之一種核酸或多種核酸、如請求項18之一種表現載體或多種表現載體、如請求項19之細胞或如請求項21之組合物，其用於一治療或預防一癌症、一感染性疾病或一自體免疫疾病的方法中。
24. 一種殺死表現一目標抗原之細胞的方法，任擇地一活體外方法，其包含使表現該目標抗原之細胞與如請求項1至7或16中任一項之抗原結合分子、如請求項8至14中任一項之多肽、如請求項15之Fc區、如請求項19之細胞或如請求項21之組合物接觸。

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