TW202023522A

TW202023522A - 含衍生自馬拉色菌(malassezia)之化合物及/或其化學類似物的光防護組合物

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Publication number: TW202023522A
Application number: TW108130297A
Authority: TW
Inventors: 麥可恩濟格; 安瑪麗辛普森
Original assignee: 麥可恩濟格; 安瑪麗辛普森
Priority date: 2018-08-24
Filing date: 2019-08-23
Publication date: 2020-07-01
Also published as: CA3110495A1; KR20210071963A; IL281078A; BR112021003490A2; EP3841103A1; JP2021535123A; WO2020041663A1; US20220110848A1; SG11202101835UA; CN113795494A; MX2021002170A; US20200060952A1; PH12021550315A1; AU2019325408A1; WO2020041663A8; US11202748B2

Abstract

本發明係關於用於個體調控皮膚色素沈著及治療或預防UV誘發之皮膚損傷、紅斑、皮膚老化、曬傷及色素沈著過度的化合物、組合物及方法。本發明之化合物、組合物及方法一般涉及衍生自馬拉色菌(Malassezia )之化合物，其包括馬拉色菌素(malassezin)及靛玉紅(indirubin)，及/或其化學類似物。本文所揭示之化合物及組合物之其他應用包括(但不限於)：改良由色素沈著過度病症引起之色素沈著過度，誘導黑素細胞凋亡，及調控芳基烴受體(AhR)活性、黑素生成、黑素產生、黑素體生物合成、黑素體轉移、黑素細胞活性及黑素濃度。

Description

含衍生自馬拉色菌(MALASSEZIA)之化合物及/或其化學類似物的光防護組合物

本發明係關於一種由馬拉色酵母菌(Malassezia yeast)產生或自其衍生之化合物以及其化學類似物。除其他有益特性之外，本發明化合物及含有該等化合物之組合物具有光防護特性。亦涵蓋使用本發明之化合物及組合物之方法。

世界各地之個人使用皮膚增亮劑以達成多種化妝目的，包括產生抗老化作用、修正日光損傷及符合某些審美文化標準。許多市售皮膚增亮產品，儘管有效程度不同，但含有有害成分，其中一些有害成分與癌症相關。因此，需要一種比目前市售的試劑呈現更高水平之安全性及/或功效之新穎皮膚增亮劑及調配物。

馬拉色菌(Malassezia )為通常在人類皮膚之正常菌群中發現之親脂性酵母菌屬。馬拉色菌引起多種皮膚病，包括花斑癬(變色糠疹)、脂溢性皮膚炎及異位性皮膚炎。

糠秕馬拉色菌(M. furfur )之天然生活環境為上表皮。然而，暴露於紫外光破壞其天然環境中之生物體。因此，UV過濾劑可為生物體存活所必需的。已鑑別出由生物體產生之兩種此類UV過濾吲哚：糠疹檸檬素(pityriacitrin)及糠疹內酯(pityrialactone)。糠疹檸檬素首先描述於Mayser等人, 2002中，其由糠秕馬拉色菌合成。其為在UVA、UVB及UVC光譜中顯示寬吸收之穩定黃色親脂性化合物。已分離出來自副球菌屬(Paracoccus )之類似化合物且作為UV防護劑申請專利。(Zhang等人, 2018)。

Gambichler等人, 2007使用活體外及活體內測試方法研究糠疹檸檬素在人類中之UV防護作用。在290 nm至400 nm波長範圍中進行糠疹檸檬素乳膏及媒劑之分光光度測量法。評估不同乳膏調配物之UV透射及防曬係數(「SPF」)。使用比色法，作者評價了經乳膏防護及未經防護之健康個體之皮膚在照射後的紅斑及色素沈著。隨著糠疹檸檬素濃度上升，UVB以及UVA透射減少。糠疹檸檬素濃度上升1.25%、2.5%及5%分別與SPF略微增加1.4、1.5及1.7相關。活體內測試證實活體外測定之糠疹檸檬素乳膏的SPF有效性為5%。總體而言，糠疹檸檬素之UV防護作用極弱，表明在日曬後糠疹檸檬素可能僅為在白色變色糠疹病變(pityriasis versicolor alba lesion)之色素過少發展中的較弱輔因子。

在人類皮膚微生物群上進行糠疹檸檬素之UV過濾作用之進一步研究(Machowinski等人, 2006)。作者測定糠疹檸檬素在測試範圍中對於白色念珠菌(Candida albicans )及葡萄球菌(staphylococci)具有UV防護作用且無毒性。亦已在酵母菌模型中證實糠疹內酯之UV防護特性(Mayser等人, 2003)。在伍氏光檢查(Wood's Light examination)下，糠疹內酯似乎引起花斑癬之黃色螢光。

花斑癬為由馬拉色菌過度生長引起之非觸染性皮膚病，其局部改變色素沈著量。馬拉色酵母菌具有兩個用於合成黑素及色胺酸衍生之吲哚色素的代謝路徑。馬拉色菌素(Malassezin)及靛玉紅為馬拉色菌之色胺酸代謝物，其可促進馬拉色菌過度生長之去色素特徵。

本文所揭示之發明利用由馬拉色酵母菌產生或自其衍生之化合物(包括馬拉色菌素、靛玉紅及其化學類似物)作為安全及有效皮膚增亮及皮膚暗化組合物之基礎。本文亦揭示光防護組合物，其包含馬拉色菌素、靛玉紅及其化學類似物。

本發明之一個實施例為一種組合物。組合物包含表1或圖3中所列之一或多種化合物或其化學類似物、結晶型、水合物或醫藥學上或化妝品上可接受之鹽。

本發明之另一實施例為用於在個體中增亮皮膚之方法。方法包含使個體與以下接觸：表1或圖3中所列之一或多種化合物或其化學類似物、結晶型、水合物或醫藥學上或化妝品上可接受之鹽。

本發明之一另外實施例為用於在個體中誘導黑素細胞凋亡之方法。方法包含使個體與以下接觸：表1或圖3中所列之一或多種化合物或其化學類似物、結晶型、水合物或醫藥學上或化妝品上可接受之鹽。

本發明之一額外實施例為用於在個體中調控芳基烴受體(AhR)活性之方法。方法包含使個體與以下接觸：表1或圖3中所列之一或多種化合物或其化學類似物、結晶型、水合物或醫藥學上或化妝品上可接受之鹽。

本發明之另一實施例為用於在個體中調控黑素生成之方法。方法包含使個體與以下接觸：表1或圖3中所列之一或多種化合物或其化學類似物、結晶型、水合物或醫藥學上或化妝品上可接受之鹽。

本發明之另一實施例為用於在個體中調控黑素濃度之方法。方法包含使個體與以下接觸：表1或圖3中所列之一或多種化合物或其化學類似物、結晶型、水合物或醫藥學上或化妝品上可接受之鹽。

本發明之一額外實施例為一種組合物。組合物包含表1或圖3中所列之一或多種化合物或其化學類似物、結晶型、水合物或醫藥學上或化妝品上可接受之鹽。

本發明之一另外實施例為用於增亮皮膚之組合物。組合物包含表1或圖3中所列之一或多種化合物或其化學類似物、結晶型、水合物或醫藥學上或化妝品上可接受之鹽。

本發明之另一實施例為用於誘導黑素細胞凋亡之組合物。組合物包含表1或圖3中所列之一或多種化合物或其化學類似物、結晶型、水合物或醫藥學上或化妝品上可接受之鹽。

本發明之一額外實施例為用於調控芳基烴受體(AhR)活性之組合物。組合物包含表1或圖3中所列之一或多種化合物或其化學類似物、結晶型、水合物或醫藥學上或化妝品上可接受之鹽。

本發明之一另外實施例為用於調控黑素生成之組合物。組合物包含表1或圖3中所列之一或多種化合物或其化學類似物、結晶型、水合物或醫藥學上或化妝品上可接受之鹽。

本發明之另一實施例為用於調控黑素濃度之組合物。組合物包含表1或圖3中所列之一或多種化合物或其化學類似物、結晶型、水合物或醫藥學上或化妝品上可接受之鹽。

本發明之一額外實施例為用於在個體中增亮皮膚之方法。方法包含使個體與組合物接觸，組合物包含表1或圖3中所列之一或多種化合物或其化學類似物、結晶型、水合物或醫藥學上或化妝品上可接受之鹽。

本發明之一另外實施例為用於在個體中誘導黑素細胞凋亡之方法。方法包含使個體與組合物接觸，組合物包含表1或圖3中所列之一或多種化合物或其化學類似物、結晶型、水合物或醫藥學上或化妝品上可接受之鹽。

本發明之另一實施例為用於在個體中調控芳基烴受體(AhR)活性之方法。方法包含使個體與組合物接觸，組合物包含表1或圖3中所列之一或多種化合物或其化學類似物、結晶型、水合物或醫藥學上或化妝品上可接受之鹽。

本發明之一額外實施例為用於在個體中調控黑素生成之方法。方法包含使個體與組合物接觸，組合物包含表1或圖3中所列之一或多種化合物或其化學類似物、結晶型、水合物或醫藥學上或化妝品上可接受之鹽。

本發明之一另外實施例為用於在個體中調控黑素濃度之方法。方法包含使個體與組合物接觸，組合物包含表1或圖3中所列之一或多種化合物或其化學類似物、結晶型、水合物或醫藥學上或化妝品上可接受之鹽。

本發明之另一實施例為一種組合物。組合物包含馬拉色酵母菌及化妝品上或醫藥學上可接受之媒劑、稀釋劑或載劑。

本發明之一額外實施例為一種組合物。組合物包含具有下式之結構的化合物：

其中： X係選自由NR₁₄ 及O組成之群；Y為共價鍵、CR₅ R₆ 、O或NR₁₅ ；R₁ 、R₂ 、R₃ 、R₄ 、R₇ 、R₈ 、R₉ 、R₁₀ 及R₁₁ 獨立地選自由以下各者組成之群：氫、鹵素、CN、羥基、R₁₆ 或OR₁₆ ；R₁₃ 、R₁₄ 及R₁₅ 獨立地為氫或R₁₆ ；R₅ 及R₆ 獨立地選自由以下各者組成之群：氫、羥基、OR₁₆ 、R₁₆ 及C_3-6 環烷基，或R₅ 與R₆ 組合以形成側氧(=O)基或C_3-6 環烷基；R₁₂ 係選自由氫、-COR^a 及R₁₆ 組成之群；各R₁₆ 獨立地為甲醯基、C_1-9 烷基、C_2-9 烯基或C_2-9 炔基；及R^a 係選自由氫、羥基及OR₁₆ 組成之群；或其結晶型、水合物或化妝品上或醫藥學上可接受之鹽，及化妝品上或醫藥學上可接受之媒劑、稀釋劑或載劑。

本發明之一另外實施例為一種組合物。組合物包含具有下式之結構的化合物：

其中： R₁ 、R₄ 、R₅ 、R₆ 、R₉ 及R₁₀ 獨立地選自由以下各者組成之群：氫、羥基、鹵素、CN、R₁₃ 、OR₁₃ 、OCOR₁₃ 及-CHO；R₂ 及R₃ 獨立地選自由以下各者組成之群：氫、羥基、鹵素、CN、R₁₃ 、OR₁₃ 、OCOR₁₃ 及-CHO，或R₂ 與R₃ 組合以形成5員或6員雜環基；R₇ 及R₈ 獨立地選自由以下各者組成之群：氫、羥基、鹵素、CN、R₁₃ 、OR₁₃ 、OCOR₁₃ 及-CHO，或R₇ 與R₈ 組合以形成5員或6員雜環基；R₁₁ 及R₁₂ 獨立地為氫或R₁₃ ；及各R₁₃ 獨立地為C_1-9 烷基、C_2-9 烯基或C_2-9 炔基；或其結晶型、水合物或化妝品上或醫藥學上可接受之鹽，及化妝品上或醫藥學上可接受之媒劑、稀釋劑或載劑。

本發明之另一實施例為一種組合物。組合物包含表1或圖3中所列之化合物中或其化學類似物、結晶型、水合物或化妝品上或醫藥學上可接受之鹽，及化妝品上或醫藥學上可接受之媒劑、稀釋劑或載劑。

本發明之一額外實施例為治療或預防個體中之UV誘導之皮膚損傷的方法。方法包含使個體與本文所揭示之組合物中之任一者接觸。

本發明之一另外實施例為治療或預防個體中之UV誘導之紅斑的方法。方法包含使個體與本文所揭示之組合物中之任一者接觸。

本發明之另一實施例為治療或預防個體中之UV誘導之皮膚老化的方法。方法包含使個體與本文所揭示之組合物中之任一者接觸。

本發明之一額外實施例為治療或預防個體中之曬傷的方法。方法包含使個體與本文所揭示之組合物中之任一者接觸。

本發明之一另外實施例為治療或預防個體中之UV誘導之色素沈著過度的方法。方法包含使個體與本文所揭示之組合物中之任一者接觸。

本發明之另一實施例為用於在個體中增亮皮膚之方法。方法包含使個體與本文所揭示之組合物中之任一者接觸。

本發明之一額外實施例為用於在個體中誘導黑素細胞凋亡之方法。方法包含使個體與本文所揭示之組合物中之任一者接觸。

本發明之一另外實施例為用於在個體中調控芳基烴受體(AhR)活性之方法。方法包含使個體與本文所揭示之組合物中之任一者接觸。

本發明之另一實施例為用於在個體中調控黑素生成之方法。方法包含使個體與本文所揭示之組合物中之任一者接觸。

本發明之一額外實施例為用於在個體中調控黑素濃度之方法。方法包含使個體與本文所揭示之組合物中之任一者接觸。

相關申請案之交叉參考

本發明主張2018年8月24日申請之美國臨時申請案第62/722,412號及2018年10月8日申請之美國臨時申請案第62/742,657號之權利。前述申請案之全部內容以引用之方式併入。另外，以下之全部內容以引用之方式併入本文中：2016年3月10日申請之美國臨時申請案第62/306,468號、2018年4月12日申請之美國臨時申請案第62/656,769號、2018年5月7日申請之美國臨時申請案第62/668,007號、2018年6月15日申請之美國臨時申請案第62/685,800號、2018年6月19日申請之美國臨時申請案第62/686,912號、2017年3月10日申請之美國專利申請案第15/455,932號(現美國專利第10,131,631號)、2019年4月12日申請之美國專利申請案第16/382,891號、2019年5月7日申請之美國專利申請案第16/405,127號及2019年6月14日申請之美國專利申請案第16/441,522號。

本發明之另一實施例為用於增亮皮膚之組合物。組合物包含表1或圖3中所列之一或多種化合物或其化學類似物、結晶型、水合物或醫藥學上或化妝品上可接受之鹽。

本發明之一另外實施例為用於誘導黑素細胞凋亡之組合物。組合物包含表1或圖3中所列之一或多種化合物或其化學類似物、結晶型、水合物或醫藥學上或化妝品上可接受之鹽。

本發明之另一實施例為用於調控黑素生成之組合物。組合物包含表1或圖3中所列之一或多種化合物或其化學類似物、結晶型、水合物或醫藥學上或化妝品上可接受之鹽。

本發明之一另外實施例為用於調控黑素濃度之組合物。組合物包含表1或圖3中所列之一或多種化合物或其化學類似物、結晶型、水合物或醫藥學上或化妝品上可接受之鹽。

本發明之另一實施例為用於在個體中誘導黑素細胞凋亡之方法。方法包含使個體與組合物接觸，組合物包含表1或圖3中所列之一或多種化合物或其化學類似物、結晶型、水合物或醫藥學上或化妝品上可接受之鹽。

本發明之一另外實施例為用於在個體中調控芳基烴受體(AhR)活性之方法。方法包含使個體與組合物接觸，組合物包含表1或圖3中所列之一或多種化合物或其化學類似物、結晶型、水合物或醫藥學上或化妝品上可接受之鹽。

本發明之另一實施例為用於在個體中調控黑素濃度之方法。方法包含使個體與組合物接觸，組合物包含表1或圖3中所列之一或多種化合物或其化學類似物、結晶型、水合物或醫藥學上或化妝品上可接受之鹽。

在較佳實施例中，本發明之組合物包含表5中所列之化合物。

在其他較佳實施例中，本發明之組合物包含表6中所列之化合物。

在額外較佳實施例中，本發明之組合物包含表7中所列之化合物。

在另外較佳實施例中，本發明之組合物包含表8中所列之化合物。

在其他較佳實施例中，本發明之組合物包含表9中所列之化合物。

在額外較佳實施例中，本發明之方法包含使個體與包含表5中所列之化合物的組合物接觸。

在另外較佳實施例中，本發明之方法包含使個體與包含表6中所列之化合物的組合物接觸。

在其他較佳實施例中，本發明之方法包含使個體與包含表7中所列之化合物的組合物接觸。

在額外較佳實施例中，本發明之方法包含使個體與包含表8中所列之化合物的組合物接觸。

在另外較佳實施例中，本發明之方法包含使個體與包含表9中所列之化合物的組合物接觸。

本發明之一另外實施例為一種組合物。組合物包含馬拉色酵母菌及化妝品上或醫藥學上可接受之媒劑、稀釋劑或載劑。

本發明之另一實施例為一種組合物。組合物包含具有下式之結構的化合物：

本發明之一另外實施例為一種組合物。組合物包含表1或圖3中所列之化合物中或其化學類似物、結晶型、水合物或化妝品上或醫藥學上可接受之鹽，及化妝品上或醫藥學上可接受之媒劑、稀釋劑或載劑。

在較佳實施例中，本發明之組合物中之任一者預防個體中之UV誘導之紅斑。

在較佳實施例中，本發明之組合物中之任一者減少個體中之表皮黑素。

在較佳實施例中，本發明之組合物中之任一者在個體中產生光防護或UV防護作用。

在較佳實施例中，本發明之組合物中之任一者過濾、吸收或反射UV。

在較佳實施例中，本發明之組合物中之任一者預防色素沈著過度及/或促進色素過少。

在較佳實施例中，本發明之組合物中之任一者為防曬劑、光防護劑及/或UV防護劑。

本發明之另一實施例為治療或預防個體中之UV誘導之紅斑的方法。方法包含使個體與本文所揭示之組合物中之任一者接觸。

本發明之一另外實施例為治療或預防個體中之UV誘導之皮膚老化的方法。方法包含使個體與本文所揭示之組合物中之任一者接觸。

本發明之另一實施例為治療或預防個體中之UV誘導之色素沈著過度的方法。方法包含使個體與本文所揭示之組合物中之任一者接觸。

本發明之一另外實施例為用於在個體中增亮皮膚之方法。方法包含使個體與本文所揭示之組合物中之任一者接觸。

本發明之另一實施例為用於在個體中調控芳基烴受體(AhR)活性之方法。方法包含使個體與本文所揭示之組合物中之任一者接觸。

本發明之一另外實施例為用於在個體中調控黑素生成之方法。方法包含使個體與本文所揭示之組合物中之任一者接觸。

本發明之一額外實施例為用於在個體中調控黑素濃度之方法。方法包含使個體與本文所揭示之組合物中之任一者接觸。定義

如本文所用，術語「化合物」係指藉由一或多個化學鍵連接之兩個或更多個原子。在本發明中，化學鍵包括(但不限於)共價鍵、離子鍵、氫鍵及凡得瓦爾相互作用(van der Waals interaction)。本發明之共價鍵包括單鍵、雙鍵及參鍵。本發明之化合物包括(但不限於)有機分子。

本發明之有機化合物/分子包括具有或不具有官能基團之直鏈、分支鏈及環狀烴。當與諸如烷基、烯基、炔基或烷氧基之化學部分結合使用時，術語「C_x-y 」意欲包括鏈中含有x至y個碳的基團。舉例而言，術語「C_x-y 烷基」意謂經取代或未經取代之飽和烴基，其包括鏈中含有x至y個碳之直鏈烷基及分支鏈烷基，其包括諸如三氟甲基及2,2,2-三氟乙基之鹵烷基，及其類似物。術語「C_x-y 烯基」及「C_x-y 炔基」係指經取代或未經取代之不飽和脂族基，其長度上類似且可取代上述烷基，但分別含有至少一個雙鍵或參鍵。

如本文所用，術語「脂族」意謂包含碳原子及氫原子之基團，其不含有芳族環。因此，脂族基團包括烷基、烯基、炔基及碳環基。

如本文所用，術語「烷基」意謂非環狀直鏈及分支鏈烴基，例如「C₁ -C₂₀ 烷基」係指具有1至20個碳之烷基。烷基可為直鏈或分支鏈。烷基之實例包括(但不限於)甲基、乙基、正丙基、異丙基、丁基、異丁基、第二丁基、第三丁基、戊基、異戊基第三戊基己基、異己基及其類似物。鑒於本發明之益處，對於熟習此項技術者，其他烷基為容易地顯而易見的。烷基可未經取代或經如本文所描述之一或多個取代基取代。舉例而言，烷基可經一或多個(例如1、2、3、4、5或6個獨立選擇之取代基)以下各者取代：鹵素、-CO₂ R'、-COOH、-CN、-OH、-OR'、-NH₂ 、-NHR'、-N(R')₂ 、-SR'或-SO₂ R'，其中在每次出現時R'獨立地為C₁ -C₃ 烷基。在實施例中，烷基未經取代。在實施例中，烷基為經取代的(例如經1、2、3、4、5或6個如本文所描述之取代基取代)。舉例而言，術語「羥烷基」係指包含羥基(-OH)取代基之如本文所描述之烷基，且包括諸如-CH₂ OH之基團。

如本文所用，「烯基」意謂具有一或多個可存在於沿鏈之任何穩定點中的不飽和碳-碳雙鍵之任何直鏈或分支鏈烴鏈，例如「C₂ -C₂₀ 烯基」係指具有2至20個碳的烯基。舉例而言，烯基包括丙-2-烯基、丁-2-烯基、丁-3-烯基、2-甲基丙-2-烯基、己-2-烯基、己-5-烯基、2,3-二甲基丁-2-烯基及其類似物。在實施例中，烯基包含1、2或3個碳-碳雙鍵。在實施例中，烯基包含單個碳-碳雙鍵。在實施例中，多個雙鍵(例如2或3個)共軛。烯基可未經取代或經一或多個如本文所描述之取代基取代。舉例而言，烯基可經一或多個(例如1、2、3、4、5或6個獨立選擇之取代基)以下各者取代：鹵素、-CO₂ R'、-CN、-OH、-OR'、-NH₂ 、-NHR'、-N(R')₂ 、-SR'或-SO₂ R'，其中在每次出現時R'獨立地為C₁ -C₃ 烷基。在實施例中，烯基未經取代。在實施例中，烯基經取代(例如經1、2、3、4、5或6個如本文所描述之取代基取代)。

如本文所用，「炔基」意謂具有直鏈或分支鏈組態之任何烴鏈，其具有一或多個存在於沿鏈之任何穩定點中的碳-碳參鍵，例如「C₂ -C₂₀ 炔基」係指具有2至20個碳的炔基。炔基之實例包括丙-2-炔基、丁-2-炔基、丁-3-炔基、戊-2-炔基、3-甲基戊-4-炔基、己-2-炔基、己-5-炔基及其類似物。在實施例中，炔基包含一個碳-碳參鍵。炔基可未經取代或經一或多個如本文所描述之取代基取代。舉例而言，炔基可經一或多個(例如1、2、3、4、5或6個獨立選擇之取代基)以下各者取代：鹵素、-CO₂ R'、-CN、-OH、-OR'、-NH₂ 、-NHR'、-N(R')₂ 、-SR'或-SO₂ R'，其中在每次出現時R'獨立地為C₁ -C₃ 烷基。在實施例中，炔基未經取代。在實施例中，炔基經取代(例如經1、2、3、4、5或6個如本文所描述之取代基取代)。

如本文所用，術語「環烷基」意謂非芳族飽和環基，例如「C₃ -C₁₀ 環烷基」。在實施例中，環烷基為單環。在實施例中，環烷基為多環(例如雙環或三環)。在多環環烷基中，個別環可經稠合、橋連或螺環。環烷基之實例包括環丙基、環丁基、環戊基、環己基、降冰片烷基、雙環[3.2.1]辛基、八氫-并環戊二烯基及螺[4.5]癸基及其類似物。術語「環烷基」可與術語「碳環」互換使用。環烷基可未經取代或經一或多個如本文所描述之取代基取代。舉例而言，環烷基可經一或多個(例如1、2、3、4、5或6個獨立選擇之取代基)以下各者取代：鹵素、-CO₂ R'、-CN、-OH、-OR'、-NH₂ 、-NHR'、-N(R')₂ 、-SR'或-SO₂ R'，其中在每次出現時R'獨立地為C₁ -C₃ 烷基。在實施例中，環烷基未經取代。在實施例中，環烷基經取代(例如經1、2、3、4、5或6個如本文所描述之取代基取代)。

如本文所用，術語「鹵素」意謂氟、氯、溴或碘。

如本文所用，「芳族化合物」、「芳族」或含有「芳族環」之化合物為芳基或雜芳基化合物。如本文所用，術語「芳基」包括經取代或未經取代之單環芳族基團，其中環上之每一原子為碳。較佳地，環為3員至8員環，更佳地6員環。術語「芳基」亦包括具有兩個或更多個環之多環系統，其中兩個或更多個碳為兩個鄰接環所共用，兩個鄰接環中至少一個環為芳族，例如其他環可為環烷基、環烯基、環炔基、芳基、雜芳基及/或雜環基。芳基包括苯、萘、菲、酚、苯胺及其類似物。術語「雜芳基」包括經取代或未經取代之芳族單環結構，較佳地為3員至8員環，更佳地為5員至7員環，甚至更佳地為5員至6員環，其環結構包括至少一個雜原子，較佳地為一至四個雜原子，更佳地一個或兩個雜原子。術語「雜芳基」亦包括具有兩個或更多個環之多環系統，其中兩個或更多個碳為兩個鄰接環所共用，兩個鄰接環中至少一個環為雜芳族，例如其他環可為環烷基、環烯基、環炔基、芳基、雜芳基及/或雜環基。雜芳基包括例如吡咯、呋喃、噻吩、吲哚、咪唑、噁唑、噻唑、吡唑、吡啶、吡嗪、噠嗪及嘧啶及其類似物。較佳地，本發明之某些化合物包括至少一個、較佳地兩個吲哚基以及至少一個醛基。

術語「經取代」意謂部分具有至少一個置換主鏈之一或多個碳上之氫原子的取代基。應理解，「取代」或「經……取代」包括隱含限制條件，即此類取代係依照經取代原子及取代基的允許價，且取代產生穩定化合物，例如不自發地經歷轉型作用，諸如藉由重排、環化、消除及其類似物。對於合適有機化合物，准許的取代基可為一或多個及相同或不同。

如本文所用，術語「雜環」或「雜環的」意謂含有至少一個雜原子之單環、雙環或三環系統。雜原子包括(但不限於)氧、氮及硫。

單環雜環由例如含有至少一個雜原子之3員、4員、5員、6員、7員、8員、9員或10員環組成。單環雜環之代表性實例包括(但不限於)氮雜環丁烷基、氮雜環庚烷基、氮雜環丙烷基、二氮雜環庚烷基、1,3-二氧雜環己烷基、1,3-二氧戊環基、1,3-二硫㖦基、1,3-二噻烷基、咪唑啉基、咪唑啶基、異噻唑啉基、異噻唑啶基、異噁唑啉基、異噁唑啶基、嗎啉基、噁二唑啉基、噁二唑啶基、噁唑啉基、噁唑啶基、哌嗪基、哌啶基、哌喃基、吡唑啉基、吡唑啶基、吡咯啉基、吡咯啶基、四氫呋喃基、四氫噻吩基、噻二唑啉基、噻二唑啶基、噻唑啉基、噻唑啶基、硫代嗎啉基、1,1-二氧離子基硫代嗎啉基(硫代嗎啉碸)、硫代哌喃基及三噻烷基。

藉由非限制性實例，雙環雜環為稠合至遠端芳族環之單環雜環、或稠合至遠端環烷基環之單環雜環、或稠合至遠端環烯基環之單環雜環、或稠合至遠端單環雜環之單環雜環、或稠合至遠端單環雜芳基環之單環雜環。雙環雜環之代表性實例包括(但不限於) 1,3-苯并二氧雜環戊烯基、1,3-苯并二硫雜環戊烯基、2,3-二氫-1,4-苯并二氧雜環己烯基、2,3-二氫-1-苯并呋喃基、2,3-二氫-1-苯并噻吩基、2,3-二氫-1H-吲哚基及1,2,3,4-四氫喹啉基。

藉由非限制性實例，三環雜環為稠合至苯基之雙環雜環、或稠合至環烷基之雙環雜環、或稠合至環烯基之雙環雜環、或稠合至另一單環雜環之雙環雜環。三環雜環之代表性實例包括(但不限於) 2,3,4,4a,9,9a-六氫-1H-咔唑基、5a,6,7,8,9,9a-六氫二苯并[b,d]呋喃基及5a,6,7,8,9,9a-六氫二苯并[b,d]噻吩基。

藉由非限制性實例，本發明之雜環可經獨立地選自以下之取代基取代：烯基、烷氧基、烷氧基烷基、烷氧基炔基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、烷氧基-NH═C(烷基)-、烷基、烷基羰基、烷基羰基烷基、烷基羰基氧基、烷基磺醯基、烷基硫基、炔基、芳基、芳基烷氧基、芳基烷基、芳基羰基、芳基氧基、羧基、羧基烷基、氰基、氰基烷基、環烷基、羰基、環烷基烷基、甲醯基、鹵素、鹵代烷基、羥基、羥基烷基、羥基環烷基、巰基、硝基、側氧基及苯基。

如本文所用，「皮膚色素沈著調控」及其文法變體一般係指本發明之化合物及組合物的皮膚增亮以及皮膚暗化作用。

如本文所用，「皮膚增亮」及其文法變體一般係指任何實際地或感知地減少皮膚色素沈著。皮膚增亮方法已用於減少由年齡、日曬或色素沈著過度病症造成之皮膚色素沈著過度區域的色素沈著。向例如個體之皮膚施加本發明之化合物及組合物可減少色素沈著，使得皮膚看起來比施加該等化合物及組合物之前更亮或更白。皮膚色素沈著可以多種方式來評估，該等方式包括(但不限於)視覺評估，其使用例如馮盧尚色彩量表(von Luschan chromatic scale)、菲茨帕特里克皮膚分型測試(Fitzpatrick skin typing test) (Fitzpatrick 等人, 1988)及泰勒色素沈著過度量表(Taylor Hyperpigmentation Scale) (Taylor 等人, 2005)以及反射分光光度測量法(Zonios等人, 2001)。舉例而言，菲茨帕特里克皮膚分型測試包括六種皮膚類型(I至VI)，且成為V型或更低之VI型皮膚已經「增亮」，如本文所用的術語。如下文進一步論述，皮膚增亮可由於多種現象而產生，多種現象包括(但不限於)調控黑素細胞活性、誘導黑素細胞凋亡，或調控芳基烴受體(AhR)活性、黑素生成、黑素體生物合成、黑素體轉移或黑素濃度。

同樣地，如本文所用，「皮膚暗化」及其文法變體一般係指任何實際地或感知地增加皮膚色素沈著。皮膚暗化方法已用於增加由例如色素過少病症造成之皮膚色素過少區域的色素沈著。向例如個體之皮膚施加本發明之化合物及組合物可增加色素沈著，使得皮膚看起來比施加該等化合物及組合物之前更暗。

本發明之某些化合物係由馬拉色酵母菌產生、自其衍生、自其分離或可自其分離。馬拉色酵母菌為馬拉色菌屬之酵母菌，且包括(但不限於)球形馬拉色菌(Malassezia globosa )、限制性馬拉色菌(Malassezia restricta )、糠秕馬拉色菌(Malassezia furfur )、合軸馬拉色菌(Malassezia sympodialis )、斯洛菲馬拉色菌(Malassezia slooffiae )、鈍形馬拉色菌(Malassezia obtusa )、厚皮馬拉色菌(Malassezia pachydermatis )、皮膚馬拉色菌(Malassezia dermatis )、日本馬拉色菌(Malassezia japonica )、娜娜馬拉色菌(Malassezia nana )、大和馬拉色菌(Malassezia yamatoensis )、馬馬拉色菌(Malassezia equine )、羊馬拉色菌(Malassezia caprae )及兔馬拉色菌(Malassezia cuniculi )。(Guého等人, 1996; Gaitanis等人, 2013)。馬拉色酵母菌為正常人類皮膚菌群之一部分，且通常不產生病原性作用。然而，馬拉色酵母菌可引起多種疾病，包括(但不限於)變色糠疹(色素沈著過度及色素過少兩種)、脂溢性皮膚炎、皮屑、異位性皮膚炎、馬拉色菌毛囊炎、牛皮癬及融合性網狀乳頭瘤症。(Gaitanis等人, 2013)。

如本文所用，術語「化學類似物」係指結構上與母化合物相關且含有不同官能基團或取代基的化合物。舉例而言，本發明之母化合物包括馬拉色菌素及靛玉紅，且馬拉色菌素及靛玉紅之化學類似物含有分別不同於馬拉色菌素及靛玉紅之某些官能基團及取代基。本發明之化學類似物可具有優於給定母化合物之顯著優點，包括適合於化妝或醫藥用途之藥物動力學概況。在一些實施例中，化學類似物係藉由一或多個化學反應自母分子產生。在其他實施例中，不始於母化合物之替代合成流程可用於產生本發明之化學類似物。

若在馬拉色酵母菌生命週期過程內其在合適生長條件下合成、分泌、累積或以其他方式生成化合物，則由馬拉色酵母菌產生本發明化合物。馬拉色酵母菌視其所補充的生長介質而分泌不同化合物。(Nazzaro-Porro等人, 1978)。本發明包括在任何生長條件下由馬拉色酵母菌產生之任何化合物，但較佳的化合物包括例如馬拉色菌素、靛玉紅及其化學類似物。

若在酵母菌生命週期過程內之任何時間時，化合物存在於酵母菌上或存在於其中，則本發明化合物由馬拉色酵母菌衍生。

馬拉色菌素為由本發明之馬拉色酵母菌產生的化合物之一個實例。馬拉色菌素，亦稱為2-(1H -吲哚-3-基甲基)-1H -吲哚-3-甲醛，為最初由糠秕馬拉色菌分離的色胺酸代謝物。馬拉色菌素為芳基烴受體(AhR)之已知促效劑，芳基烴受體(AhR)為一種牽涉到細胞生長、分化及基因表現之受體。(Wille 等人, 2001)。馬拉色菌素亦在初級人類黑素細胞中誘導細胞凋亡。(Krämer等人, 2005)。最近，由溫斯頓-麥克弗森(Winston-McPherson)及同事合成了馬拉色菌素之某些化學類似物，其對類似物之AhR促效劑活性進行了檢測。(Winston-McPherson等人, 2014)。

靛玉紅為由本發明之馬拉色酵母菌產生的化合物之另一實例。靛玉紅為自糠秕馬拉色菌分離之代謝物。靛玉紅為芳基烴受體(AhR)之已知促效劑，芳基烴受體(AhR)為牽涉到細胞生長、分化及基因表現之受體。

如本文所用，術語「黑素細胞」係指表皮之樹突狀細胞，其通常合成酪胺酸酶及在黑素體內合成色素黑素。本發明之黑素細胞呈現出某些基因的上調，包括(但不限於)以下中之一或多者：酪胺酸酶(眼皮膚白化症IA)、小眼畸形相關轉錄因子、α-2-巨球蛋白、酪胺酸酶相關蛋白質1、溶質載體家族16、GS3955蛋白、v-套組哈地-紮克曼4貓科肉瘤(v-kit Hardy-Zuckerman 4 feline sarcoma)、眼白化病1、Rag D蛋白、肝醣核心蛋白2、G蛋白偶聯受體家族C、眼皮膚白化症II、食道癌1中缺失、melan-A、SRY-box 10、V類10C型ATP酶、基質金屬蛋白酶1、潛伏轉型生長因子βb、ATP-結合盒子家族C、羥前列腺素脫氫酶15、跨膜蛋白7超家族成員1、麩醯胺醯基-肽環轉移酶及由李(Lee)及同事鑑別之其他基因。(Lee等人, 2013)。

類似許多其他細胞類型，黑素細胞經歷細胞計劃性死亡或細胞凋亡。黑素細胞凋亡路徑為熟習此項技術者已知的(Wang等人, 2014)，且細胞凋亡路徑一般已由艾爾莫(Elmore)綜述(Elmore, 2007)。本發明之化合物或組合物「誘導」黑素細胞凋亡，其藉由例如在黑素細胞中引起某些對促細胞凋亡信號轉導路徑的活化或引起對某些抗細胞凋亡路徑的遏制。設想本發明之化合物或組合物可直接活化/遏制細胞凋亡相關路徑，其藉由直接與路徑之信號傳導分子相互作用，或經由與通常不在路徑內起作用之一或多個中間分子直接相互作用而間接地與路徑之分子相互作用。

可以本發明中涵蓋之多種方式調控黑素細胞活性，該等方式包括(但不限於)誘導黑素細胞凋亡或改變黑素細胞基因表現、細胞運動性、細胞生長、黑素產生、黑素體生物合成或黑素體轉移。

如本文所用，術語「調控/調節(modulate/modulating)」及其文法變體係指將生物活性或現象調整至所需水準。設想本發明之「調控」包括提昇或降低生物活性或現象水平的調整。

如本文所用，術語「促效劑」、「促效」及其文法變體係指觸發(例如引發或促進)、部分地或完全增強、刺激或活化一或多種生物活性之分子。本發明之促效劑可與受體相互作用及活化受體，由此引發為彼受體特有的生理學或藥理學反應。本發明之促效劑包括天然產生的物質以及合成物質。

如本文所用，術語「拮抗劑」、「拮抗」及其文法變體係指部分或完全遏止、抑制或去活化一或多種生物活性之分子。本發明之拮抗劑可在與促效劑相同的位點處競爭性地結合至受體，但不活化由受體之活性形式引發的細胞內反應。本發明之拮抗劑可抑制促效劑或部分促效劑之細胞內反應。

本發明之芳基烴受體(AhR)為如本文所描述天然存在於個體中之任何芳基烴受體。芳基烴受體為熟習此項技術者所已知的。(Noakes, 2015)。芳基烴受體之促效劑包括(但不限於)色胺酸相關化合物，諸如犬尿胺酸、犬尿酸、朱砂精酸及6-甲醯吲哚[3,2-b]咔唑(FICZ)。馬拉色菌素亦稱為芳基烴受體促效劑。(Wille等人, 2001)。

如本文所用，本發明之化合物、組合物及方法可用於改良由色素沈著過度病症引起的色素沈著過度，藉由例如降低由色素沈著過度病症影響之區域中的色素沈著過度水準、減緩進一步色素沈著過度或預防進一步色素沈著過度。然而，因為每一個體可能不會對特定給藥方案、療程、過程有反應，改良由色素沈著過度病症引起的色素沈著過度不需要在每一個體或個體群體中達成所需生理反應或結果。因此，給定個體或個體群體可能對給藥無反應或反應不充分，但其他個體或個體群體可有反應，且因此經歷其色素沈著過度病症之改良。

如本文所用，術語「色素沈著過度」為實際的或感知的顏色過暗之皮膚病症。皮膚損害可為實際的，例如歸因於年齡、日曬過度或引起較暗皮膚區域之疾病或病狀。較暗皮膚區域可呈斑點、斑塊或相對大的暗色區域形式。皮膚損害亦可為感知的，例如個人感知到他/她的皮膚色調過暗。個體可能具有亮化皮膚色調的化妝需要。

色素沈著過度病症係一種以色素沈著過度為主要症狀的病症以及其中色素沈著過度作為次要症狀存在的病症。本發明之色素沈著過度病症包括(但不限於)先天性色素沈著過度病症及後天性色素沈著過度病症。本發明之先天性色素沈著過度病症包括(但不限於)彼等涉及以下之病症：表皮色素沈著過度(痣細胞痣、施皮茨痣(Spitz nevus)及斑痣)、皮膚色素沈著過度(藍痣、太田母斑(nevus Ohta)、皮膚黑變症、伊藤母斑(nevus Ito)及蒙古斑)、雀斑、網狀肢端色素沈著症、施皮茨色素/肢端色素沈著症(Spitzenpigment/acropigmentation)及色素小斑症(一般化的色素小斑症、利歐帕症候群(LEOPARD syndrome)、遺傳性圖案化色素小斑症、卡尼綜合症(Carney complex)、珀茨-傑格斯症候群(Peutz-Jeghers syndrome)、蘭格-韓茲克-巴郎症候群(Laugier-Hunziker-Baran syndrome)及克龍基特-加拿大症候群(Cronkhite-Canada syndrome))。(Yamaguchi等人, 2014)。本發明之後天性色素沈著過度病症包括(但不限於)老年棕斑/老年性雀斑樣痣、肝斑/黃褐斑、里爾氏黑變症(Riehl's melanosis)、唇黑色素斑、陰莖/陰道黑變症、北村面部毛囊性紅斑黑變病(erythromelanosis follicularis faciei Kitamura)、UV誘導色素沈著(光線性花卉狀曬黑及色素沈著)、炎症後色素沈著(摩擦黑變病及灰白皮膚病)、化學/藥物誘導色素沈著(多氯聯苯、砷、5-FU、博萊黴素(bleomycin)、環磷醯胺、甲胺喋呤、氯丙嗪、苯妥英(phenytoin)、四環素及氯喹)、色素性分界線及外源材料沈積(諸如胡蘿蔔素、銀、金、汞、鉍及紋身)。與全身性病症相關之色素沈著過度包括代謝/酶病症(血色素沈著病、威爾森氏病(Wilson's disease)、高歇氏病(Gaucher's disease)、尼曼-皮克病(Niemann-Pick's disease)、澱粉樣變性、褐黃病、黑棘皮病及緩發性皮膚病變紫質症)、內分泌病症(阿狄森氏病(Addison's disease)、庫興症候群(Cushing syndrome)及甲狀腺高能症)、營養病症(糙皮病、維生素B12缺乏症、葉酸缺乏症、寄生性黑皮病(vagabond's disease)及色素性癢疹)、肥大細胞增多症、膠原蛋白疾病、肝功能障礙及腎臟功能障礙。色素沈著過度亦可與以下相關：傳染性疾病(麻疹、梅毒及糠秕馬拉色菌)及症候群(馮雷克林霍遜氏病(von Recklinghausen's disease)、索托氏症候群(Sotos syndrome)、POEMS症候群、內格利症候群(Naegeli syndrome)、坎圖症候群(Cantu syndrome)、馬科恩-亞百特氏症候群(McCune-Albright syndrome)、瓦生症候群(Watson syndrome)及波羅姆症候群(Bloom syndrome))。(Yamaguchi等人, 2014)。

黑素係一種天然產生的色素，其為皮膚及頭髮賦予顏色。黑素在稱為黑素體之細胞器中由黑素細胞藉由稱為黑素生成之過程產生。本發明之化合物或組合物藉由例如調控黑素體生物合成及在酶水平上直接地或間接地抑制黑素合成來調控個體中之黑素產生(又稱黑素生成)。

黑素體生物合成經由四個階段發生：階段I之特徵在於前黑素體，其基本上為未著色之液泡。在階段II中，前黑素體產生條紋，在階段III中黑素沈積於該等條紋上。階段IV產生富含黑素含量之成熟黑素體。本發明之化合物及組合物藉由抑制或減弱通常促進任何或所有此等階段之生物過程來調控黑素體生物合成。(Wasmeier等人, 2008)。

黑素合成主要涉及三種酶：酪胺酸酶、酪胺酸酶相關蛋白1及多巴色素互變異構酶。影響此等酶之細胞內遷移的額外因子包括(但不限於) BLOC-1、OA1及SLC45A2。本發明之化合物及組合物可藉由例如抑制或減弱此等酶或因子中之任一者的活性來調控黑素產生。(Yamaguchi等人, 2014)。

一旦形成黑素體且合成黑素，則黑素體需要自表皮黑素細胞轉移至皮膚及毛髮角質細胞。黑素體在黑素細胞之細胞核附近產生，且沿微管及肌動蛋白纖維運輸至黑素細胞之邊緣。本發明之化合物及組合物藉由干擾生物過程中之任一者來調控黑素體轉移，該等生物過程引起黑素體自核周區域運輸至黑素細胞邊緣及運輸至相鄰角質細胞中。

黑素濃度可藉由例如增加或減少個體中之黑素生成或促進黑素降解或自個體消除黑素來調控。

在分離之前，自本發明之馬拉色酵母菌分離之化合物必然存在於馬拉色酵母菌中或由馬拉色酵母菌產生。因此，由馬拉色酵母菌分離之化合物衍生自實際酵母菌細胞。用於自細胞材料提取化合物之標準方案為熟習此項技術者所已知的。

可自馬拉色酵母菌分離之化合物不需衍生自實際酵母菌細胞。取而代之地，可使用合成反應生成在酵母菌中產生之化合物，而無實際酵母菌細胞參與。有機合成反應為熟習此項技術者所熟知的，且可用於此方面。

如本文所用，術語「表皮黑素」係指在表皮中產生、運輸至或以其他方式存在於表皮中之黑素。

如本文所用，術語「降低/減少」及其文法變體意謂引起對給定生物現象或物種之水準降低。舉例而言，本發明之化合物及組合物減少個體中之表皮黑素，其意謂本發明之化合物及組合物引起個體中之表皮黑素之水準降低。術語「降低/減少」及其文法變體可意謂對例如給定現象或物種之水準降低至少5%、10%、25%、50%、75%或100%。

如本文所用，術語「接觸」及其文法變體係指使兩種或更多種材料足夠接近使其可相互作用。因此，僅出於說明性目的，可藉由例如與黑素細胞表面上之受體相互作用使本發明之化合物接觸黑素細胞。類似地，可藉由例如直接施加至個體之皮膚使本發明之組合物接觸人類個體。

如本文所用，「個體」意謂哺乳動物細胞、其組織、生物體或群體。本發明之個體較佳地為人類，包括人類細胞、人類組織及人類，但另外包括靈長類動物、農畜動物、家畜動物、實驗室動物及其類似物。農業動物之一些實例包括牛、豬、馬、山羊及其類似物。家畜之一些實例包括狗、貓及其類似物。實驗室動物之一些實例包括靈長類動物、大鼠、小鼠、兔、天竺鼠及其類似物。

如本文所用，「需要」改良由色素沈著過度病症引起之色素沈著過度的個體包括具有真實的或感知的改良需要之個體。

如本文所用，術語「治療(treat/treating/treatment)」及其文法變體意謂使個體接受方案、療程、過程或醫療，其中希望在個體(例如患者)中得到生理反應或結果。特定言之，本發明之方法及組合物可用於減緩疾病症狀之發展或延遲疾病或病狀之發作，或阻止疾病發展之進展。然而，因為每一治療個體可能不會對特定治療方案、療程、過程或醫療有反應，治療不需要在每一個體或個體群體(例如患者群體)中達成所需生理反應或結果。因此，給定個體或個體群體(例如患者群體)可能對治療無反應或反應不充分。

如本文所用，術語「預防(prevent/preventing/prevention)」及其文法變體意謂本發明之化合物在投與患者時適用，該患者在投藥時尚未診斷為可能患有病症或疾病，但其通常預期會患上病症或疾病或處於病症或疾病之風險增加下。本發明之化合物及組合物例如減緩病症或疾病症狀之發展、延遲病症或疾病之發作或徹底預防個人發展病症或疾病。預防亦包括向彼等被認為由於年齡、家族病史、基因或染色體異常及/或由於存在病症或疾病之一或多個生物標記而易患該病症或疾病的個人投與本發明化合物。

如本文所用，術語「促進」及其文法變體意謂允許、增進、准許、有助於、促成、鼓勵、誘導或者幫助產生。

如本文所用，術語「產生」及其文法變體意謂致使特定結果發生、出現或形成。藉由非限制性實例，本發明之化合物及組合物在個體中產生光防護或UV防護作用。

如本文所用，術語「紅斑」係指皮膚發紅。紅斑可由表面毛細管擴張及/或刺激引起。術語「UV誘導之紅斑」係指由於UV暴露而產生之皮膚發紅。如本文所用，「曬傷」及其文法變體係指由暴露於日光或人工UV源(例如日曬床)引起之UV誘導紅斑。

如本文所用，術語「色素沈著過度」一般係指色素沈著多於相鄰皮膚區域之色素沈著的皮膚區域(例如色素點、老年斑、痣及其類似物)。本發明之色素沈著過度包括(但不限於)藉由黑素細胞高活性之區域性色素沈著過度、藉由良性黑素細胞高活性及增殖之其他局部色素沈著過度、疾病相關之色素沈著過度及偶發性色素沈著過度，諸如歸因於以下之色素沈著過度：光敏作用、基因組成、化學物質攝取或其他暴露(例如UV暴露)、老化及病變後疤痕。如本文所用，「UV誘導之色素沈著過度」係指由暴露於天然或人工UV引起的任何色素沈著過度。

如本文所用，術語「色素過少」一般係指色素沈著少於相鄰皮膚區域之色素沈著的皮膚區域。本發明之色素過少包括(但不限於)白斑病、脫色、白色糠疹、局部色素過少、發炎後色素過少、斑狀白化症、白化症、花斑癬、光敏性、白變、黑素減少症、異位性皮膚炎、牛皮癬及其類似物。

如本文所用，「UV誘導之皮膚損傷」意謂由UV (包括UVA、UVB及UVC)暴露造成之皮膚損傷。本發明之UV誘導之皮膚損傷包括(但不限於)皺紋、色素沈著過度、發育不良、日光性角化症及皮膚癌。

如本文所用，「UV誘導之皮膚老化」意謂由UV (包括UVA、UVB及UVC)暴露造成之皮膚老化。本發明之UV誘導之皮膚老化表現為自身例如皺紋、細紋、老年斑、痣、皮膚乾燥、皮膚薄或皮膚彈性降低、膚色不均勻及其他完全或部分地由UV暴露引起的皮膚光亮度、質地、回彈性、堅實度、鬆垂度及澄清度降低。

如本文所用，術語「光防護」及其文法變體當用於描述本發明之化合物及組合物之作用時，意謂本文所描述之化合物及組合物預防及/或緩和由光(尤其日光)引起之損傷。同樣地，本發明之「光防護劑」為預防及/或緩和由光(尤其日光)引起之損傷的本文所描述之彼等化合物及組合物。

如本文所用，術語「UV防護」及其文法變體當用於描述本發明之化合物及組合物之作用時，意謂本文所描述之化合物及組合物預防及/或緩和由紫外(「UV」)光引起之損傷。同樣地，本發明之「UV防護劑」為預防及/或緩和由UV引起之損傷的本文所描述之彼等化合物及組合物。本發明之紫外光包括例如UVA (320 nm至240 nm)、UVB (290 nm至320 nm)及UVC (200 nm至290 nm)。

如本文所用，術語「過濾」及其文法變體意謂阻斷、反射、吸收或散射UV。本發明之「防曬劑」包括阻斷、反射、吸收或散射UV之所有本發明的化合物及組合物。

如本文所用，術語「吸收」及其文法變體意謂吸收UV或將UV轉化為熱能。藉由非限制性實例，本發明之化合物及組合物可吸收UV，且因此將熱能輻射至其環境中。

如本文所用，當術語「反射」及其文法變體用於UV之上下文中時，意謂將UV返回或反彈回而不將其吸收。

如本文所用，術語「組合物」意謂包含一或多種本發明化合物之實體，以及直接地或間接地自一或多種本發明化合物與其他成分之組合產生的任何實體。本發明之組合物可用作例如活體外或活體內研究試劑。為了化妝或醫藥作用，本發明之組合物亦可直接施加至人類或非人類個體之皮膚。另外，本發明之組合物包含表1或圖3中所列之一或多種化合物，或其化學類似物、結晶型、水合物或醫藥學上或化妝品上可接受之鹽。

對於活體外及活體內施加兩者，本發明之組合物可以任何所需及有效方式投與：對於經口攝取或非經腸或其他以任何合適的投藥方式，諸如腹膜內、皮下、局部、皮內、吸入、肺內、經直腸、經陰道、舌下、肌肉內、靜脈內、動脈內、鞘內或淋巴管內。此外，本發明之組合物可和其他組合物一起投與。若需要，可將本發明之組合物囊封或用其他方式保護，免受胃或其他分泌物影響。

本發明之組合物包含一或多種活性成分，與一或多種化妝品上或醫藥學上可接受之載劑及視情況一或多種其他化合物、成分及/或材料混合。不論所選擇之投藥途徑，均可藉由熟習此項技術者已知之習知方法，將本發明之化合物及組合物調配成化妝品上或醫藥學上可接受之劑型。

化妝品上或醫藥學上可接受之媒劑、稀釋劑及載劑為此項技術中所熟知，且包括適用於與人類及非人類之組織接觸的材料，沒有不當毒性、不相容性、不穩定性、刺激性、過敏反應及其類似性質。化妝品上或醫藥學上可接受之媒劑、稀釋劑及載劑包括任何實質上無毒物質，其常用於例如：局部、經口、經腹膜或皮下投與化妝品或藥物，其中當施加、攝取、注射或用其他方式投與至人類或非人類個體時，本發明之化合物及組合物將保持穩定性及生物可用性。適用於局部施加之化妝品上或醫藥學上可接受之載劑為熟習此項技術者已知，且包括化妝品上或醫藥學上可接受之液體、乳霜、油、洗劑、軟膏、凝膠或固體，諸如習知化妝晚霜、粉底霜、防曬乳液、防曬劑、護手霜、美妝用品及美妝底霜、面膜及其類似物。適用於所選擇劑型及計劃投藥途徑之載劑為此項技術中所熟知，且可採用相關技藝之一般技術來決定所選擇劑型及投藥方法可接受之載劑。

本發明組合物可含有化妝品中習知之其他成分，包括香料；雌激素；維生素A、維生素C及維生素E；α-羥基或α-酮基酸，諸如丙酮酸、乳酸或乙醇酸；羊毛脂；凡士林；蘆薈；對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯；色素及其類似物。本發明之非限制性化妝品上或醫藥學上可接受之媒劑、稀釋劑及載劑包括糖(例如乳糖、蔗糖、甘露糖醇及山梨糖醇)、澱粉、纖維素製劑、磷酸鈣(例如磷酸二鈣、磷酸三鈣及磷酸氫鈣)、檸檬酸鈉、水、水性溶液(例如鹽水、氯化鈉注射液、林格氏注射液(Ringer's injection)、右旋糖注射液、右旋糖及氯化鈉注射液、乳酸林格氏注射液)、醇類(例如乙醇、丙醇及苄醇)、多元醇(例如甘油、丙二醇及聚乙二醇)、有機酯類(例如油酸乙酯及三酸甘油酯)、生物可降解聚合物(例如聚乳酸交酯-聚乙交酯、聚(原酸酯)及聚(酸酐))、彈性基質、脂質體、微球體、油類(例如玉米、胚芽、橄欖、蓖麻、芝麻、棉籽及花生)、可可脂、蠟類(例如栓劑蠟)、石蠟、聚矽氧、滑石、silicylate及其類似物。

本發明之組合物可視情況含有化妝品組合物中常用之額外成分及/或材料。此等成分及材料為此項技術中所熟知的，且包括例如：(1)填充劑或增充劑，諸如澱粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇及矽酸；(2)黏合劑，諸如羧甲基纖維素、海藻酸酯、明膠、聚乙烯吡咯啶酮、羥丙基甲基纖維素、蔗糖及阿拉伯膠；(3)保濕劑，諸如甘油；(4)崩解劑，諸如瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯或木薯澱粉、褐藻酸、某些矽酸鹽、羥基乙酸澱粉鈉、交聯羧甲基纖維素鈉及碳酸鈉；(5)溶液阻滯劑，諸如石蠟；(6)吸收促進劑，諸如第四銨化合物；(7)潤濕劑，諸如鯨蠟醇及甘油單硬脂酸酯；(8)吸附劑，諸如高嶺土及膨潤土；(9)潤滑劑，諸如滑石、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇及月桂基硫酸鈉；(10)懸浮劑，諸如乙氧基化異硬脂醇、聚氧乙烯山梨糖醇及脫水山梨糖醇酯、微晶纖維素、偏氫氧化鋁、膨潤土、瓊脂及黃蓍；(11)緩衝劑；(12)賦形劑，諸如乳糖(lactose)、乳糖(milk sugar)、聚乙二醇、動物及植物脂肪、油、蠟、石蠟、可可脂、澱粉、黃蓍、纖維素衍生物、聚乙二醇、聚矽氧、膨潤土、矽酸、滑石、水楊酸酯、氧化鋅、氫氧化鋁、矽酸鈣及聚醯胺粉末；(13)惰性稀釋劑，諸如水或其他溶劑；(14)防腐劑；(15)表面活性劑；(16)分散劑；(17)控制釋放或吸收延遲劑，諸如羥丙基甲基纖維素、其他聚合物基質、生物可降解聚合物、脂質體、微球體、單硬脂酸鋁、明膠及蠟；(18)乳濁劑；(19)佐劑；(20)潤濕劑；(21)乳化及懸浮劑；(22)增溶劑及乳化劑，諸如乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、油(特定言之，棉籽、花生、玉米、胚芽、橄欖、蓖麻及芝麻油)、甘油、四氫呋喃醇、聚乙二醇及脫水山梨糖醇之脂肪酸酯；(23)推進劑，諸如氯氟烴及揮發性未經取代之烴，諸如丁烷及丙烷；(24)抗氧化劑；(25)使得調配物與意欲接受者之血液等張之試劑，諸如糖及氯化鈉；(26)增稠劑；(27)包衣材料，諸如卵磷脂；及(28)甜味劑、調味劑、著色劑、芳香劑及防腐劑。各此類成分或材料必須在與調配物之其他成分相容且對個體無害的意義上為「可接受的」。適用於所選擇劑型的成分及材料及意欲投藥途徑為此項技術中所熟知的，且用於所選擇劑型及投藥方法之可接受成分及材料可使用此項技術中之一般技術確定。

適用於經口投與之本發明之組合物可呈以下形式：膠囊、扁囊劑、丸劑、錠劑、散劑、顆粒、於水性液體或非水性液體中之溶液或懸浮液、水包油或油包水液體乳液、酏劑或糖漿、片劑、藥團、舐劑或糊狀物。此等調配物可藉由此項技術中已知之方法製備，例如借助於習知鍋包衣、混合、粒化或凍乾方法。

用於經口投與之固體劑型(膠囊、錠劑、丸劑、糖衣藥丸、散劑、顆粒及其類似物)可例如藉由以下來製備：將活性成分與一或多種化妝品上或醫藥學上可接受之載劑及視情況一或多種填充劑、增充劑、黏合劑、保濕劑、崩解劑、溶液阻滯劑、吸收促進劑、潤濕劑、吸附劑、潤滑劑及/或著色劑混合。類似類型的固體組合物可使用適合賦形劑在軟及硬填充明膠膠囊中用作填充劑。錠劑可藉由視情況與一或多種附屬成分一起壓縮或模製來製造。壓縮錠劑可使用適合的黏合劑、潤滑劑、惰性稀釋劑、防腐劑、崩解劑、表面活性劑或分散劑來製備。模製錠劑可藉由在適合的機器中模製來製造。錠劑及其他固體劑型，諸如膠囊、丸劑及顆粒，可視情況用包衣及外殼(諸如腸溶包衣及在化妝調配技術中熟知之其他包衣)得到或製備。亦可將其調配以便對其中活性成分提供緩慢或控制釋放。其可藉由例如經由細菌截留過濾器過濾來滅菌。此等組合物亦可視情況含有乳濁劑，且可為使得其視情況以延遲方式僅在或優先在胃腸道之某部分中釋放活性成分之組合物。活性成分亦可呈微膠囊化形式。

用於經口投與之液體劑型包括化妝品上或醫藥學上可接受之乳液、微乳液、溶液、懸浮液、糖漿及酏劑。液體劑型可含有此項技術中常用之適合惰性稀釋劑。除惰性稀釋劑之外，經口組合物亦可包括佐劑，諸如潤濕劑、乳化劑及懸浮劑、甜味劑、調味劑、著色劑、芳香劑及防腐劑。懸浮液可含有懸浮劑。

用於經直腸或經陰道投與之本發明之組合物可呈現為栓劑，其可藉由將一或多種活性成分與一或多種適合的無刺激性載劑混合來製備，一或多種適合的無刺激性載劑在室溫下為固體但在體溫下為液體且因此將在直腸或陰道腔中融化且釋放活性化合物。適用於經陰道投與之本發明的組合物亦包括含有如此項技術中已知合適之此類化妝品上或醫藥學上可接受之載劑的子宮托、棉塞、乳膏、凝膠、糊狀物、泡沫或噴霧調配物。

用於局部或經皮投與之劑型包括散劑、噴霧、軟膏、糊狀物、乳膏、乳劑、凝膠、溶液、貼片、滴劑、乳液、懸浮液、霧劑及吸入劑。可向調配物中添加任何所需習知媒劑、助劑及視情況選用之另外活性成分。

較佳助劑來源於包含以下之群：防腐劑、抗氧化劑、穩定劑、增溶劑、維生素、著色劑、氣味改良劑、成膜劑、增稠劑及保濕劑。

溶液及乳液可包含習知媒劑，諸如溶劑、增溶劑及乳化劑，例如水、乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-乙二醇丁醚(1,3-butyl glycol)、油(特別是棉籽油、花生油、玉蜀黍油、橄欖油、蓖麻油及芝麻油)、甘油脂肪酸酯、聚乙二醇，及脫水山梨糖醇之脂肪酸酯，或此等物質之混合物。

乳液可以各種形式存在。因此，其可為例如油包水(W/O)類型或水包油(O/W)類型之乳液或微乳液，或多重乳液，例如水包油包水(W/O/W)類型之乳液。

根據本發明之組合物亦可呈不含乳化劑之分散製劑形式。其可為例如水分散液或皮克林乳液(Pickering emulsion)。

懸浮液可包含習知媒劑，諸如液體稀釋劑，例如水、乙醇或丙二醇；懸浮液介質，例如乙氧基化異硬脂醇、聚氧乙烯山梨糖醇酯及聚氧乙烯脫水山梨糖醇酯；微晶纖維素；偏氫氧化鋁；膨潤土；瓊脂-瓊脂及黃蓍，或此等物質之混合物。

糊劑、軟膏、凝膠及乳膏可包含習知媒劑，例如動物及植物脂肪、蠟、石蠟、澱粉、黃蓍、纖維素衍生物、聚乙二醇、聚矽氧、膨潤土、矽酸、滑石及氧化鋅，或此等物質之混合物。

面部及身體油可包含習知媒劑，諸如合成油(諸如脂肪酸酯、脂肪醇、聚矽氧油)、天然油(諸如植物油及油性植物萃取物)、石蠟油、綿羊油(lanolin oils)，或此等物質之混合物。

噴霧可包含習知推進劑，例如氯氟碳化物、丙烷/丁烷或二甲醚。

適用於非經腸投與之本發明組合物包含一或多種化合物與以下組合：一或多種化妝品上或醫藥學上可接受之無菌等張水性或非水性溶液、分散液、懸浮液或乳液，或可在臨用前復原成無菌可注射溶液或分散液的無菌散劑，其可含有適合抗氧化劑、緩衝劑、使調配物與欲接受者之血液等張之溶質，或懸浮劑或增稠劑。適當流動性可例如藉由使用包衣材料、在分散液之情況下藉由維持所需粒度及藉由使用界面活性劑來維持。此等組合物亦可含有適合的佐劑，諸如潤濕劑、乳化劑及分散劑。其亦可需要包括等張劑。此外，可注射化妝品形式之延長吸收可藉由包括延遲吸收劑來實現。

在一些情況下，為延長作用，需要減緩自皮下或肌肉內注射之吸收。此可藉由使用具有不良水溶性之結晶或非晶形材料之液體懸浮液來實現。

活性劑/藥物之吸收速率隨後取決於其溶解速率，其又可取決於晶體大小及結晶型。或者，可藉由使活性組合物溶解或懸浮於油性媒劑中實現對非經腸投與之組合物的延遲吸收。可注射積存形式可藉由在生物可降解聚合物中形成活性成分之微膠囊基質製造。取決於活性成分與聚合物之比率及所採用特定聚合物的性質，可控制活性成分釋放之速率。亦藉由將藥物包覆於與身體組織相容之脂質體或微乳液中製備積存可注射調配物。可注射材料可例如藉由經由細菌截留過濾器過濾來滅菌。

本發明之組合物可呈單位劑量或多劑量密封容器(例如安瓿及小瓶)存在，且可儲存在凍乾條件下，僅需要在即將使用之前添加無菌液體載劑，例如注射用水。可自上文所描述之類型的無菌散劑、顆粒及錠劑製備即用型注射溶液及懸浮液。

在本發明中，術語「結晶型」意謂化合物之晶體結構。化合物可以一或多種結晶型存在，一或多種結晶型可具有不同結構、物理、藥理學或化學特徵。不同結晶型可使用在晶核形成、生長動力學、附聚及斷裂中之變體獲得。當克服相躍遷能障壁時晶核形成，由此允許自過飽和溶液形成粒子。晶體生長為由化學化合物沈積於晶體之現有表面上引起之晶體粒子的增大。晶核形成及生長之相對速率決定所形成晶體之粒度分佈。晶核形成及生長兩者之熱力學驅動力為過飽和，其定義為自熱力學平衡之偏差。附聚為經由兩個或更多個粒子(例如晶體)黏著在一起及形成較大結晶結構而形成較大粒子。

如本文所用，術語「水合物」意謂分子複合物中含有水之化學化合物的固體或半固體形式。水一般具有相對於化學化合物之化學計算量。

如本文所用，「化妝品上或醫藥學上可接受之鹽」係指本文所揭示之化合物之衍生物，其中化合物藉由產生其酸或鹼鹽來修飾。化妝品上或醫藥學上可接受之鹽之實例包括(但不限於)鹼性殘基(諸如胺)的無機或有機酸鹽；酸性殘基(諸如羧酸)的鹼金屬或有機鹽；及其類似物。舉例而言，此類鹽包括來自以下之鹽：氨、L-精胺酸、甜菜鹼、苯明、苄星、氫氧化鈣、膽鹼、丹醇、二乙醇胺(2,2'-亞胺基雙(乙醇))、二乙胺、2-(二乙胺基)-乙醇、2-胺基乙醇、乙二胺、N-乙基-還原葡糖胺、海卓胺、1H-咪唑、離胺酸、氫氧化鎂、4-(2-羥乙基)-嗎啉、哌嗪、氫氧化鉀、1-(2-羥基-乙基)-吡咯啶、氫氧化鈉、三乙醇胺(2,2',2"-氮基參(乙醇))、緩血酸-胺、氫氧化鋅、乙酸、2.2-二氯-乙酸、己二酸、褐藻酸、抗壞血酸、L-天冬胺酸、苯磺酸、苯甲酸、2,5-二羥基苯甲酸、4-乙醯胺基-苯甲酸、(+)-樟腦磺酸、(+)-樟腦-10-磺酸、碳酸、肉桂酸、檸檬酸、環己胺磺酸、癸酸、十二基硫酸、乙烷-1,2-二磺酸、乙磺酸、2-羥基-乙磺酸、乙二胺四乙酸、甲酸、反丁烯二酸、半乳糖二酸、龍膽酸、D-葡糖庚酸、D-葡萄糖酸、D-葡糖醛酸、麩胺酸、谷胺酸、戊二酸、2-側氧基-戊二酸、甘油-磷酸、甘胺酸、乙醇酸、己酸、馬尿酸、氫溴酸、鹽酸異丁酸、DL-乳酸、乳糖酸、十二酸、離胺酸、順丁烯二酸、(-)-L蘋果酸、丙二酸、DL-杏仁酸、甲磺酸、半乳糖二酸、萘-1,5-二磺酸、萘-2-磺酸、1-羥基-2-萘甲酸、菸鹼酸、硝酸、辛酸、油酸、乳清酸、草酸、棕櫚酸、雙羥萘酸(恩波酸)、磷酸、丙酸、(-)-L-焦麩胺酸、水楊酸、4-胺基-水楊酸、癸二酸、硬脂酸、丁二酸、硫酸、鞣酸、(+)-l-酒石酸、硫氰酸、對甲苯磺酸及十一烯酸。另外的化妝品上或醫藥學上可接受之鹽可由來自金屬(如鋁、鈣、鋰、鎂、鉀、鈉、鋅及其類似物)之陽離子形成。

本發明之化妝品上或醫藥學上可接受之鹽可由本文所揭示之含有鹼性或酸性部分的化合物合成，其藉由習知化學方法。一般而言，此類鹽可藉由以下來製備：於水中或有機稀釋劑(如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、異丙醇或乙腈或其混合物)中使此等化合物之游離酸或鹼形式與足量之合適鹼或酸反應。

設想本發明之化合物及組合物可包括於化妝或醫藥組合物中，以用於活體外及活體內施加兩者。

設想可向個體共投與本發明之化合物及組合物(包括表1或圖3中所列之一或多種化合物或其化學類似物、結晶型、水合物或醫藥學上或化妝品上可接受之鹽)，以實現本發明之調控皮膚色素沈著之目的。

亦設想本發明之組合物可包含表1或圖3中所列之一或多種化合物或其化學類似物、結晶型、水合物或醫藥學上或化妝品上可接受之鹽。舉例而言，本發明之組合物可包含與馬拉色菌素或其化學類似物組合之靛玉紅或其化學類似物。

此外，設想本發明化合物包括由馬拉色菌產生之化合物或其化學類似物、結晶型、水合物或醫藥學上或化妝品上可接受之鹽。另外，設想本發明之組合物及方法可涉及一或多種由馬拉色菌產生之化合物或其化學類似物、結晶型、水合物或醫藥學上或化妝品上可接受之鹽。舉例而言，由馬拉色菌產生或衍生之化合物包括(但不限於)圖3中所示之化合物。

另外設想本發明之方法可涉及共投與兩種或更多種本發明之化合物及/或組合物以實現本文所描述之調控皮膚色素沈著之目的。

共投與的本發明之化合物及組合物可例如在基本上同時或一個接一個地與個體接觸。

含有一或多種衍生自馬拉色菌之化合物或其化學類似物的本發明之組合物可在以下各種功效標準上展現出優於單獨組分化合物的協同效應，各種功效標準包括(但不限於)平均組織生存率、黑素濃度、皮膚增亮、皮膚暗化、黑素細胞凋亡之誘導及芳基烴(AhR)活性之調控、黑素生成或黑素濃度。

本文中所用的術語僅出於描述特定實施例的目的且不意欲為限制性的。除非上下文另外明確指示，否則如本說明書及隨附申請專利範圍中所使用，單數形式「一(a/an)」及「該(the)」包括複數個提及物。

對於本文中數值範圍的敍述，明確地涵蓋其間具有相同精確程度之每一中間數值。舉例而言，對於6至9之範圍，除6與9以外涵蓋數值7與8，且對於6.0至7.0之範圍，明確涵蓋數值6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9及7.0。

提供以下實例以進一步說明本發明之方法。此等實例僅為說明性的且不意欲以任何方式限制本發明之範疇。實例實例1 化合物命名

下表1中展示本發明之化合物的結構及名稱。表 1

化合物編碼	化合物名稱	結構
CV-8684	馬拉色菌素
不適用	馬拉色菌素前驅體
CV-8685	吲哚并[3,2-b]咔唑
CV-8686	化合物I
CV-8687	化合物IV
CV-8688	化合物II
CV-8802	化合物C
CV-8803	化合物K
CV-8804	化合物A
AB12508	化合物E
CV-8819	化合物A5
AB12509	化合物H
CV-8877	化合物B
不適用	化合物B10
AB11644	不適用
AB12976	O52
AB17011	馬拉色菌吲哚A
AB17014	糠疹檸檬素
AB17151	不適用
AB17225	化合物VI
AB17227	馬拉色菌乳酸
AB12507	不適用
AB17219	化合物V
不適用	FICZ
AB17220	化合物VIII
AB17221	化合物VII
不適用	靛玉紅
AB17590	不適用
AB17653	不適用
AB17654	不適用
AB17655	不適用
AB17656	不適用
AB17657	不適用
AB17658	不適用
不適用	化合物C1
不適用	化合物C2

實例2 靛玉紅及靛玉紅衍生物之細胞凋亡誘導活性試劑

Alexa Fluor 488磷脂結合蛋白V(Annexin V)/死亡細胞細胞凋亡套組，胎牛血清(FBS)，0.25%胰蛋白酶-EDTA (1×)，半胱天冬酶-螢光(Caspase-Glo) 3/7分析法，RPMI 1640培養基，達爾伯克氏改良伊格爾培養基(Dulbecco's Modified Eagle Medium)及抗生素抗黴菌素溶液(100×)。

將細胞株MeWo (ATCC® HTB-65™)、WM115 (ATCC® CRL-1675)及B16F1 (ATCC® CRL-6323)維持在以下培養基中：用於MeWo及B16F1的培養基：補充有10% FBS之DMEM；用於WM115的培養基：補充有10% FBS之RPMI 1640。實驗方法

採集細胞且使用Countess細胞計數器(Countess Cell Counter)測定細胞數目。將細胞用培養基稀釋至所需密度。最終細胞密度可為例如：對於6小時及24小時處理，每孔4,000個細胞；及對於48小時及72小時處理，每孔2,000個細胞。對於磷脂結合蛋白V分析法，採用384孔透明底盤(Corning 3712)，而將384孔白色底盤(Corning 3570)用於半胱天冬酶-螢光分析法。所有盤均用蓋子覆蓋，且在37℃下及5%的CO₂ 下置放隔夜以用於細胞附著。

將測試化合物溶解於DMSO中成為30 mM儲備液。進行10倍稀釋以產生3 mM及0.3 mM濃度。採用0.9 mM星形孢菌素(Staurosporine)作為陽性對照組，且採用DMSO作為陰性對照組(NC)。使用液體處理器Echo550將132.5 nL化合物自化合物源盤轉移至384孔細胞培養盤。在指示培育時間之後，將培育盤自培育箱移出以用於偵測。

對於磷脂結合蛋白V分析法，將培育盤自培育箱移出且移除培養基。用40 μL的PBS洗滌細胞兩次，且每孔添加15 μL預混合磷脂結合蛋白V-FITC與Hoechst 33342染料操作溶液。將培育盤在室溫下培育20分鐘，密封且在1,000 rpm下離心1分鐘以移除氣泡。使用ImageXpress Nano讀取培育盤數據。

對於半胱天冬酶-螢光分析法，將培育盤自培育箱移出且在室溫下平衡15分鐘。亦在實驗之前使半胱天冬酶-螢光 3/7試劑解凍，且平衡至室溫。以與培養基比率為1:1向所需孔添加半胱天冬酶-螢光試劑。將培育盤在室溫下培育15分鐘且使用EnSpire™讀盤儀讀取。根據下式計算誘導倍數：誘導倍數=Lum_樣品 /Lum_NC 。磷脂結合蛋白 V 分析法及半胱天冬酶 3/7 分析法結果

預期本發明之化合物及組合物(包括靛玉紅及其化學類似物)將誘導細胞死亡。預期靛玉紅之化學類似物相較於靛玉紅呈現例如更強效的細胞凋亡誘導活性。同樣地，預期靛玉紅之某些化學類似物相較於靛玉紅展現例如更低效的細胞凋亡誘導活性。此類化合物相較於更強效化合物可具有更有利的毒性概況。實例3 暴露於靛玉紅及靛玉紅衍生物後之細胞生存率試劑

CellTiter-Glo® 2.0分析法。實驗方法

對於CellTiter-Glo分析法，在10 mM的DMSO溶液中製備測試化合物。將化合物連續稀釋成12個濃度。將40 μL來自100,000個細胞/毫升懸浮液之細胞分配至384孔盤(Corning 3570)之各孔中。在37℃下，將培育盤在、5%的CO₂ 及95%的濕度下培育隔夜。添加測試化合物，其中DMSO作為媒劑對照組。在37℃下，將培育盤在、5%的CO₂ 及95%的濕度下培育6、24或48小時，且向孔添加40 μL的CellTiter-Glo試劑以評估細胞生存率。結果

預期本發明之化合物及組合物(包括靛玉紅及其化學類似物)將誘導細胞死亡。預期靛玉紅之化學類似物相較於靛玉紅呈現例如更強效的細胞凋亡誘導活性。同樣地，預期靛玉紅之某些化學類似物相較於靛玉紅展現例如更低效的細胞凋亡誘導活性。此類化合物相較於更強效化合物可具有更有利的毒性概況。實例4 靛玉紅及靛玉紅衍生物之芳基烴受體活化潛能分析法程序

藉由用高葡萄糖及L-麩醯胺酸以及10% FBS補充DMEM來製備用於穩定轉染HepG2細胞之培養基。

在37℃、5%的CO₂ 及95%相對濕度下，將HepG2-AhR-Luc細胞於T-75燒瓶中培養。在脫離及分離之前，使細胞達到80%至90%融合率。

用5 mL的PBS沖洗培養細胞。抽吸掉PBS，向燒瓶中添加1.5 mL胰蛋白酶，且將細胞在37℃下培育大致5分鐘或直至細胞脫離且漂浮。藉由添加過量含血清介質使胰蛋白酶不活化。

將細胞懸浮液轉移至錐形管，且在120 g下離心10分鐘以使細胞形成集結粒。使細胞以適當密度再懸浮於接種介質中。將40 µL細胞轉移至384孔培養盤(5×10³ 個細胞/孔)。在37℃下，將培育盤置於培育箱中24小時。

之後，製備測試化合物及奧美拉唑(omeprazole)陽性對照組之儲備溶液。使用Echo550將化合物溶液轉移至分析法盤中。隨後，將培育盤置放回培育箱中進行化合物處理。

隨後，在24小時處理之後，將培育盤自培育箱移出且使其在環境溫度下冷卻。在各孔中添加等於培養基之彼者之30 µL的One-Glo試劑。使細胞裂解至少3分鐘，且隨後在光度計中量測。

在XLfit中使用非線性回歸分析對劑量反應進行圖示，且亦計算EC₅₀ 值。結果

預期本發明之化合物及組合物(包括靛玉紅及其化學類似物)將調控AhR活性。預期靛玉紅之化學類似物相較於靛玉紅呈現例如更強效的AhR促效劑活性。同樣地，預期靛玉紅之某些化學類似物相較於靛玉紅展現例如更低效的AhR促效劑活性。實例5 MelanoDerm™分析法

此研究之目的為在將測試物品反覆暴露之後評價該測試物品於MelanoDerm™皮膚模型中作為皮膚黑素生成調控劑的潛在作用。其次，此研究之目的為在將測試物品反覆暴露之後評價該測試物品對於MelanoDerm™皮膚模型的潛在皮膚刺激。藉由量測相較於陰性/溶劑對照組處理的組織，測試物品處理組織中之MTT (3-[4,5-二甲基噻唑-2-基]-2,5-二苯基溴化四唑)之相對轉化率來測定毒性。藉由量測相較於陰性/溶劑對照組處理的組織，由測試物品處理組織產生之黑素濃度測定對於黑素產生的潛在影響。測試物質及分析法對照組之鑑別 表 2 以稀釋形式測試的測試物品

測試物品命名	贊助人命名	給藥濃度	製備說明
17AA70	DMSO (溶劑對照組)	0.5% (v/v)	將測試物品用EPI-100-LLMM稀釋(v/v)至最終濃度為0.5%；使經稀釋之測試物品渦旋至少1分鐘，且使用25 µL的給藥體積給藥至組織上。對於各組織處理製備~0.5 mL之總體積。
17AD45	化合物K (CV-8803)	500 µM	始於所提供之儲備液濃度，將測試物品用EPI-100-LLMM稀釋(v/v)至最終濃度為500 μM。使測試物品稀釋液渦旋至少1分鐘，在37℃±1℃ (在水浴中)下加熱15分鐘，再次渦旋至少1分鐘，且使用25 μL之給藥體積給藥至組織上。對於各組織處理製備~0.5 mL之總體積。
17AJ41	馬拉色菌素(CV-8684)	500 µM
17AJ43	化合物B (CV-8877)	500 µM
17AJ44	化合物E (AB12508)	500 µM
18AA14	AB17151	500 µM
18AD42	靛玉紅	500 µM	始於所提供之固體材料，在DMSO中製備~100 mM的儲備溶液。將儲備稀釋液在-15℃至-25℃下儲存。自由此製備之儲備液濃度，將測試物品用EPI-100-LLMM進一步稀釋至最終濃度為500 μM。使測試物品稀釋液渦旋至少1分鐘，在37℃±1℃ (在水浴中)下加熱15分鐘，再次渦旋至少1分鐘，且使用25 μL之給藥體積給藥至組織上。對於各組織處理製備~0.5 mL之總體積。

表 3 作為組合測試之測試物品

測試物品命名	贊助人命名	給藥濃度	製備說明
17AJ41	馬拉色菌素(CV-8684)	250 µM	如下對於各組織處理製備總體積~1.0 mL之組合測試物品： 2 μL之17AJ41 (100 mM) 2 μL之18AD42 (100 mM) 796 μL之EPI-100-LLMM 使測試物品組合渦旋至少1分鐘，在37℃±1℃ (在水浴中)下加熱15分鐘，再次渦旋至少1分鐘，且使用25 μL之給藥體積給藥至組織上。
18AD42	靛玉紅	250 µM
18AD42	靛玉紅	250 µM	如下對於各組織處理製備總體積~1.0 mL之組合測試物品： 2 μL之18AD42 (100 mM) 2 μL之18AA14 (100 mM) 796 μL之EPI-100-LLMM 使測試物品組合渦旋至少1分鐘，在37℃±1℃ (在水浴中)下加熱15分鐘，再次渦旋至少1分鐘，且使用25 μL之給藥體積給藥至組織上。
18AA14	AB17151	250 µM
17AJ44	化合物E (AB12508)	100 µM	如下對於各組織處理製備總體積~1.0 mL之組合測試物品： 1 μL之17AJ44 (100 mM) 1 μL之17AJ43 (100 mM) 998 μL之EPI-100-LLMM 使測試物品組合渦旋至少1分鐘，在37℃±1℃ (在水浴中)下加熱15分鐘，再次渦旋至少1分鐘，且使用25 μL之給藥體積給藥至組織上。
17AJ43	化合物B (CV-8877)	100 µM
17AJ43	化合物B (CV-8877)	100 µM	如下對於各組織處理製備總體積~1.0 mL之組合測試物品： 1 μL之17AJ43 (100 mM) 1 μL之18AA14 (100 mM) 998 μL之EPI-100-LLMM 使測試物品組合渦旋至少1分鐘，在37℃±1℃ (在水浴中)下加熱15分鐘，再次渦旋至少1分鐘，且使用25 μL之給藥體積給藥至組織上。
18AA14	AB17151	100 µM

分析法對照組包括：陽性對照組為1%曲酸；陰性對照組為無菌去離子水；及溶劑對照組為於EPI-100-LLMM中製備的DMSO (二甲亞碸)。

對於此研究，不使用陰性對照組。取而代之地，使用溶劑對照組(17AA70)校正分別關於陽性對照組及測試物品處理之組織的資料。

另外，將測試物品及對照組施加於4個組織之組，其中2個組分別用於組織生存率(MTT)終點及2個組用於黑素終點。測試系統

在此研究中使用由MatTek Corporation (Ashland, MA)提供之MelanoDerm™皮膚模型。MelanoDerm™組織由以下組成：正常人類衍生表皮角質細胞(NHEK)及黑素細胞(NHM)，其已經培養形成多層高度分化之人類表皮模型。共培養物中之NHM經歷自發性黑素生成，產生具有不同色素沈著量之組織。培養物在細胞培養插入件上在空氣-液體界面處生長，允許局部施加皮膚調控劑。MelanoDerm™模型呈現類似活體內之形態及超微結構特徵。位於MelanoDerm™組織基細胞層中之NHM為樹突狀的，且自發地產生逐漸填入組織層之黑素顆粒。因此，測試系統用於篩選相對於陰性對照組可抑制或刺激黑素產生的材料。實驗設計及方法論

此研究之實驗設計由以下組成：若可能，對純測試物品(及/或合適給藥溶液)的pH值進行測定；及在反覆暴露之後測定相對組織生存率及測試物品作為對於MelanoDerm™皮膚模型的皮膚黑素生成調控劑之潛在作用的確定性分析法。測試物品暴露於MelanoDerm™皮膚模型總共7天。每48小時(在距先前處理48+2小時之時間段內)，將測試物品局部施加至MelanoDerm™皮膚模型。藉由對照組及測試物品處理的組織中之NAD(P)H依賴性微粒體酶之MTT降低(及在較小程度上，藉由琥珀酸去氫酶之MTT降低)來測定測試物品的毒性。資料以相對存活率(關於陰性/溶劑對照組之MTT轉化率)形式展現。藉由測定相較於陰性/溶劑對照組處理的組織，測試物品處理的組織中產生之黑素濃度，評價對於黑素產生的潛在影響。資料以使用黑素標準曲線測定之由測試物品處理的組織產生之黑素濃度形式展現。或者，資料可展現為關於陰性/溶劑對照組處理之組織的黑素濃度之百分比變化。

所用方法為經修改的由MatTek Corporation供應之程序。介質及試劑

MelanoDerm™維持培養基(EPI-100-LLMM)係購自MatTek Corporation。MelanoDerm™皮膚模型(MEL-300-A)係購自MatTek Corporation。1%曲酸(製備於無菌去離子水中)係購自Sigma。MTT (3-[4,5-二甲基噻唑-2-基]-2,5-二苯基溴化四唑)係購自Sigma。含有2 mM的L-麩醯胺酸之達爾伯克氏改良伊格爾氏培養基(Dulbecco's Modified Eagle's Medium，DMEM) (MTT添加培養基)係購自Quality Biological。提取溶劑(異丙醇)係購自Aldrich。無菌Ca++及Mg++游離杜爾貝科氏磷酸鹽緩衝鹽水(Sterile Ca++ and Mg++ Free Dulbecco's Phosphate Buffered Saline，CMF-DPBS)係購自Invitrogen。黑素係購自Sigma。無菌去離子水係購自Quality Biological。可溶解物係購自Perkin Elmer。測試物品之製備及遞送

除非在此方案內另外規定，否則將二十五微升之各測試物品直接施加於組織上，以便覆蓋上表面。取決於測試物品(液體、凝膠、乳膏、泡沫等)之性質，可能需要使用給藥裝置、網狀物或其他輔助物使測試物品均勻展佈在組織表面上。投藥途徑

在7天試驗期間，每48小時(在距先前處理48+2小時之時間段內)將測試物品局部施加至MelanoDerm™組織。將二十五微升各測試物品施加至各組織。將二十五微升的陽性及陰性/溶劑對照組分別施加至各組織。 pH值測定

若可能，對純液體測試物品(及/或合適給藥溶液)的pH值進行測定。使用pH試紙測定pH值(例如在0至14之pH值範圍進行估計，及/或在5至10之pH值範圍測定更精確值)。較窄範圍pH試紙上之典型pH值增量為大致0.3至0.5個pH單位。pH試紙上之最大增量為1.0個pH單位。對照組

確定性分析法包括陰性對照組、陽性對照組及一個溶劑對照組(DMSO)。用25 μL無菌去離子水處理對分析法陰性對照組所指定之MelanoDerm™組織。使用二十五微升1%曲酸(於無菌去離子水中製備，且在製備時過濾)向對分析法陽性對照組指定之組織給藥。1%曲酸儲存於覆蓋有鋁箔之試管中，直至在製備2小時內使用。陰性/溶劑及陽性對照組暴露時間與用於測試物品之彼等暴露時間一致。未處理組織亦用作對照組。對直接測試物品MTT降低之評估

必需評估各測試物品直接降低MTT之能力。在MTT添加培養基中製備1.0 mg/mL的MTT溶液。向1 mL的MTT溶液中添加大致25 μL測試物品，且在37±1℃下將混合物在暗處培育一至三個小時。同時測試陰性對照組(25 μL無菌去離子水)。若MTT溶液顏色變成藍色/紫色，則推測測試物品已降低MTT。不可溶於水的測試材料可僅在測試物品與培養基之間的界面處顯示直接減少(暗化)。 MelanoDerm™之接收

在接收MelanoDerm™皮膚套組後，按製造商指示儲存溶液。MelanoDerm™組織儲存在2℃至8℃下，直至使用。

在接受(給藥前一天)當天，移出合適體積之MelanoDerm™維持培養基(EPI-100-LLMM)且升溫至37±1℃。將每孔十分之九(0.9) mL的EPI-100-LLMM等分至6孔盤之合適孔中。在打開密封包裝之前，檢驗各MelanoDerm™組織之瓊脂糖凝膠與細胞培養插入件之間的氣泡。不使用氣泡大於50%之細胞培養插入區域的組織。自塑膠袋移出24孔運送容器，且用70%乙醇進行表面消毒。將合適數目之MelanoDerm™組織自24孔運送容器無菌轉移至6孔盤中。在37±1℃下，將MelanoDerm™組織在空氣中含5±1%之CO₂ 的加濕氛圍中(標準培養條件)培育隔夜(至少16小時)以使組織適應新環境。在打開袋後，對在組織轉移時殘留在運送瓊脂上之任何未使用組織短暫地用5%的CO₂ /95%的空氣氛圍充氣，且將袋密封並儲存在2℃至8℃下以供後續使用。確定性分析法

組織暴露：在培養物開始至少16小時之後，使用數位相機對五個MelanoDerm™組織(視為在第0天未處理)拍照，以輔助在分析法之零時對組織之色素沈著程度進行視覺評估。用CMF-DPBS沖洗兩個MelanoDerm™組織，在無菌吸收性試紙上揩乾且清除過量液體。在沖洗之後，將MelanoDerm™組織轉移至含有MTT之合適孔中，且在MTT分析法中處理。用CMF-DPBS沖洗三個MelanoDerm™組織，在無菌吸收性試紙上揩乾且清除過量液體。使用無菌解剖刀，將MelanoDerm™組織自細胞培養插入件移出，置於經標記之1.5 mL微量離心管中，且儲存在＜-60℃下以供後續黑素分析。

在培養物開始至少16小時之後，將組織的其餘部分轉移至每孔含有0.9 mL之新鮮預熱EPI-100-LLMM的新6孔盤上。在7天時間段內進行試驗。在第一天且每48小時(在距先前處理48+2小時之時間段內)用25 μL各測試物品局部處理五個組織。每天(在距先前再進料之24+2小時時間段內)更新培養基；將組織轉移至每孔含有0.9 mL之新鮮預熱EPI-100-LLMM的新6孔盤。

在第一天且每48小時(在距先前處理48+2小時之時間段內)分別用25 μL陽性及陰性/溶劑對照組局部處理五個組織。每天(在距先前再進料之24+2小時時間段內)更新培養基；將組織轉移至每孔含有0.9 mL之新鮮預熱EPI-100-LLMM的新6孔盤。在37±1℃下，將組織在空氣中含5±1%之CO₂ 的加濕氛圍中(標準培養條件)培育持續合適暴露時間。

在給藥當天，首先將MelanoDerm™組織溫和地沖洗三次以移除任何殘餘測試物品，每次沖洗使用~500 μL的CMF-DPBS。將CMF-DPBS溫和地吸移至孔中，且隨後用無菌吸引器抽出。將組織轉移至含有0.9 mL新鮮預熱EPI-100-LLMM之新6孔盤中，且用合適測試物品、陰性/溶劑或陽性對照組給藥。在37±1℃下，將組織在空氣中含5±1%之CO₂ 的加濕氛圍中(標準培養條件)培育持續合適暴露時間。

在7天試驗結束時，使用數位相機對用陰性/溶劑或陽性對照組及用各測試物品處理之MelanoDerm™組織拍照，以輔助在分析法結束時(第7天)對組織之色素沈著程度進行視覺評估。隨後，藉由MTT降低測定分別用陽性及陰性對照組以及用各測試物品處理之兩個組織的生存率。在7天試驗結束時，分別測定用各測試物品、陽性及陰性/溶劑對照組處理之三個組織所產生的黑素。

MTT分析法：將製備於PBS中之MTT 10×儲備液(在分批製備時過濾)解凍，且在不超過使用之前兩小時稀釋於溫熱MTT添加培養基中以產生1.0 mg/mL溶液。向預標記24孔盤之各指定孔中添加三百μL的MTT溶液。

在暴露時間之後，用CMF-DPBS沖洗指定用於MTT分析法之各MelanoDerm™組織(使用對此步驟可接受的噴霧瓶)，在無菌吸收性試紙上揩乾且清除過量液體。在沖洗之後，將MelanoDerm™組織轉移至含有MTT之合適孔中。將24孔盤在標準條件下培育3±0.1小時。

在3±0.1小時之後，將MelanoDerm™組織在無菌吸收性試紙上揩乾，清除過量液體，且轉移至在各指定孔中含有2.0 mL之異丙醇的預標記24孔盤中。用封口膜覆蓋盤且儲存於冰箱(2℃至8℃)中，直至最後暴露時間收穫。在提取MTT之前，視需要將培育盤在冰箱中儲存隔夜(或在最後暴露時間收穫之後至多24小時)。隨後，將培育盤在室溫下震盪持續至少2小時。在提取時段結束時，將細胞培養插入件內之液體傾析至孔中，自該孔中取出細胞培養插入件。混合提取溶液，且將200 μL轉移至96孔盤之合適孔。向指定為空白組之孔中添加兩百μL的異丙醇。用Molecular Devices Vmax讀盤儀量測各孔之550 nm下之吸光度(OD550)。

黑素分析法：在合適暴露時間結束時，將指定用於黑素分析法之MelanoDerm™組織溫和地沖洗至少三次以移除任何殘餘測試物品或來自培養基之過量酚紅，每次沖洗使用~500 μL的CMF-DPBS，在無菌吸收性試紙上揩乾且清除過量液體。在分析法結束時，使用數位相機對MelanoDerm™組織拍照。使用無菌解剖刀或無菌穿孔器，將MelanoDerm™組織自細胞培養插入件移出，置於經標記之1.5 mL微量離心管中，且儲存在＜-60℃下以供後續黑素分析。

在黑素提取分析法當天，將切除組織在室溫下解凍大致10分鐘。向各微量離心管中添加250 μL可溶解物，且將試管在60+2℃下培育至少16小時。藉由將黑素溶解於可溶解物中來製備1 mg/mL黑素標準儲備溶液。自1 mg/mL儲備液製備在0 mg/mL至0.33 mg/mL範圍內之一系列黑素標準溶液。藉由向1.2 mL可溶解物添加0.6 mL之1 mg/mL黑素標準儲備溶液來製備標準溶液系列，且隨後製造一系列五個更多稀釋液(稀釋因數為3)。可溶解物用作零標準溶液。將黑素標準溶液系列及可溶解物在60+2℃下培育至少16小時。

在黑素提取開始至少16小時之後，將含有樣品(表示自MelanoDerm™組織提取的黑素)及標準溶液的試管在室溫下冷卻，且在室溫下在13,000 rpm下離心5分鐘。將200 μL樣品(單個孔)或標準溶液(重複孔)轉移至96孔盤之合適孔。向重複孔中指定為空白組之孔添加兩百μL可溶解物。用Molecular Devices Vmax讀盤儀(用選定Automix功能)量測各孔在490 nm下之吸光度(OD490)。用於評估殘餘測試物品MTT降低之經殺滅對照組

為了展現可能殘餘測試物品未直接降低MTT，在確定性分析法中進行功能性檢查，以展示測試材料不與組織結合且產生錯誤MTT降低信號。

為了測定殘餘測試物品是否起直接降低MTT作用，使用經冷凍殺滅的對照組組織。藉由將未處理MelanoDerm™/EpiDerm™ (不具有黑素細胞之Melanoderm™)組織置放於-20℃冷凍器中至少隔夜，解凍至室溫且隨後再冷凍來製備經冷凍殺滅組織。組織一經殺滅，則可無限儲存於冷凍器中。可自MatTek Corporation接收已製備的經冷凍殺滅組織，且儲存於-20℃冷凍器中直至使用。為了測試殘餘測試物品減少，以普通方式用測試物品處理經殺滅組織。以與活組織相同的方式進行所有分析法程序。同時測試用無菌去離子水處理之至少一個經殺滅對照組(陰性經殺滅對照組)，此係由於在經殺滅組織中預期自殘餘NADH及相關酶降低少量MTT。

若在測試物品處理之經殺滅對照組中觀測到很少或無MTT降低，則可將測試物品處理之活組織中觀測到的MTT降低歸因於活細胞。若在經處理之經殺滅對照組中存在可觀的MTT降低(相對於經處理之活組織中之量)，則必須進行額外步驟以解釋化學物質減少或測試物品可在此系統中視為不可測的。

資料分析

計算空白組孔之平均OD550值。陰性/溶劑對照組之校正平均OD550值係由自其平均OD550值減去空白組孔之平均OD550值測定。測試物品暴露及陽性對照組暴露之個別校正OD550值係由自各者減去空白組孔之平均OD550值測定。使用Excel試算表進行所有計算。儘管進行所論述之演算法以計算在處理組水平下之最終終點分析，但相同計算可應用於個別複本。校正測試物品暴露OD₅₅₀ =測試物品暴露OD₅₅₀ -空白組平均OD₅₅₀

若使用經殺滅對照組(KC)，則進行以下額外計算以校正直接由測試物品殘餘物降低之MTT量。自各測試物品處理之經殺滅對照組的原始OD550值減去陰性對照組經殺滅對照組的原始OD550值，以測定測試物品處理之經殺滅對照組的淨OD550值。各測試物品KC之淨OD₅₅₀ =測試物品KC之原始OD₅₅₀ -陰性/溶劑對照組KC之原始OD₅₅₀

淨OD550值表示在特定暴露時間時由測試物品殘餘物所直接降低之MTT降低量。一般而言，若淨OD550值大於0.150，則自活經處理組織之校正OD550值減去淨MTT降低量，以得到最終校正OD550值。隨後使用此等最終校正OD550值測定對照組生存率百分比。最終校正OD₅₅₀ =校正測試物品OD₅₅₀ (活)-測試物品(KC)之淨OD₅₅₀

最終，將進行以下對照組百分比計算：生存率百分比=[(測試物品或陽性對照組之最終校正OD₅₅₀ )/(陰性/溶劑對照組之校正平均OD₅₅₀₎ ]×100

黑素分析：捕捉原始吸光度資料，保存為列印檔案且導入至Excel試算表中。測定各測試樣品(表示在第0天自未處理MelanoDerm™組織提取的黑素、在第7天自用各測試物品、陰性/溶劑或陽性對照組處理之MelanoDerm™組織提取的黑素)及黑素標準溶液的OD490值。藉由減去空白組孔之平均OD490值測定測試樣品及各黑素標準物的校正OD490值。將標準曲線繪製為以mg/mL為單位之標準溶液濃度(y軸)相對於對應校正吸光度。自標準曲線(線性)內插各個別組織中之黑素之量。最終，分別計算各測試物品或對照處理組之黑素濃度的平均值。結果

圖1概述了測試物品、陽性對照組及未處理組織之平均組織生存率及黑素濃度結果。初步結果表明，將本發明之咔唑化合物應用至某些調配物可獨立地呈現出中度皮膚增亮作用，其減弱咔唑之皮膚暗化活性。

圖2概述了在單獨實驗中觀測到之測試物品及未處理組織的平均組織生存率及黑素濃度結果。包含例如馬拉色菌素及靛玉紅之組合處理呈現出比任一化合物獨自時更有效的皮膚增亮作用。實例6 靛玉紅及靛玉紅衍生物之黑素生成潛能

此研究之目的係觀測及報導暴露於靛玉紅及靛玉紅衍生物之B16黑素細胞的黑素生成及生存率。材料及試劑

平板介質將包括不具有L-麩醯胺酸的DMEM、FBS、青黴素/鏈黴素及L-麩醯胺酸。分析法介質將包括不具有酚紅及L-麩醯胺酸的DMEM、FBS、青黴素/鏈黴素、L-麩醯胺酸及aMSH。其他試劑將包括曲酸、DMSO及MTT。所測試細胞將為B16細胞(ATCC CRL-6475)。方案

培養B16黑素細胞直至70%融合且收穫。以每孔4000個細胞的密度在96孔盤中接種細胞且使其附著隔夜。第二天，將測試物品及對照組稀釋於B16分析法介質中。抽吸隔夜介質且施加200 μL測試物品及對照組。將細胞在37℃及10% CO₂ 下培育72小時。在72小時培育之後，在540 nm下讀取吸光度。移除介質且用100 μL含有1 mg/mL的MTT之平板介質置換，且在37℃及10% CO₂ 下培育2小時。移除MTT介質且用200 μL的95%乙醇/5%異丙醇置換，且將其震盪15分鐘。隨後在570 nm下讀取MTT吸光度。結果

預期本發明之化合物及組合物(包括靛玉紅及其化學類似物)將抑制黑素生成。預期靛玉紅之化學類似物相較於靛玉紅呈現例如更強效的黑素生成抑制活性。同樣地，預期靛玉紅之某些化學類似物相較於靛玉紅展現例如更低效的黑素生成抑制活性。實例7 活體外功效

預期本發明之化合物及組合物將至少與靛玉紅類似強效地誘導黑素細胞凋亡及調控黑素細胞活性、黑素產生、黑素體生物合成及/或黑素體轉移。亦設想本發明之某些化合物及組合物將比靛玉紅更弱地影響此等生物過程。此類化合物及組合物相較於更強效物種可具有更有利的毒性概況。實例8 活體內功效

預期本發明之化合物及組合物將至少與靛玉紅類似有效地調控皮膚色素沈著，包括增亮皮膚及改良由各種病症引起的色素沈著過度/色素過少。另外預期本發明之化合物及組合物將在例如半衰期及吸收方面呈現有利的藥物動力學概況。某些化合物將呈現較長半衰期，而其他將呈現較短半衰期。類似地，某些化合物將呈現不同吸收概況，其中對於一些化合物完全吸收花費較長時間，且其他完全吸收花費較短時間。實例9 含有衍生自馬拉色菌之化合物及/或其化學類似物之組合物的細胞凋亡誘導活性試劑

Alexa Fluor 488磷脂結合蛋白V/死亡細胞細胞凋亡套組，胎牛血清(FBS)，0.25%胰蛋白酶-EDTA (1×)，半胱天冬酶-螢光 3/7分析法，RPMI 1640培養基，達爾伯克氏改良伊格爾培養基及抗生素抗黴菌素溶液(100×)。

細胞株MeWo (ATCC® HTB-65™)、WM115 (ATCC® CRL-1675)及B16F1 (ATCC® CRL-6323)係維持在以下培養基中：用於MeWo及B16F1的培養基：補充有10% FBS之DMEM；用於WM115的培養基：補充有10% FBS之RPMI 1640。實驗方法

採集細胞且使用Countess細胞計數器測定細胞數目。使用培養基稀釋細胞至所需密度。最終細胞密度可為例如：對於6小時及24小時處理，每孔4,000個細胞；及對於48小時及72小時處理，每孔2,000個細胞。對於磷脂結合蛋白V分析法，採用384孔透明底盤(Corning 3712)，而採用384孔實心白色底盤(Corning 3570)用於半胱天冬酶-螢光(Caspase -Glo)分析法。所有盤子均用蓋子覆蓋，且在37℃及5% CO₂ 下置放隔夜讓細胞附著。

將測試化合物溶解於DMSO中成為30 mM儲備液。進行10倍稀釋，產生3 mM及0.3 mM濃度。採用0.9 mM星形孢菌素作為陽性對照組，且採用DMSO作為陰性對照組(NC)。使用液體處理器Echo550，將132.5 nL化合物自化合物源盤轉移至384孔細胞培養盤。在指定培育時間之後，將培育盤自培育箱移出用於偵測。

將測試組合物溶解於DMSO、EPI-100-LLMM或任何合適溶劑中，且可根據下表2至表7中之說明製備。合適溶劑為熟習此項技術者所熟知。

對於磷脂結合蛋白V分析法，將培育盤自培育箱移出且移除培養基。用40 μL的PBS洗細胞兩次，且每孔添加15 μL預混合磷脂結合蛋白V-FITC與Hoechst 33342染料操作溶液。將培育盤在室溫培育20分鐘，密封，且在1,000 rpm離心1分鐘以移除氣泡。使用ImageXpress Nano讀取培育盤。

對於半胱天冬酶-螢光分析法，將培育盤自培育箱移出且在室溫平衡15分鐘。亦在實驗之前使半胱天冬酶-螢光 3/7試劑解凍且平衡至室溫。向所需孔添加半胱天冬酶-螢光試劑，其與培養基比率為1:1。將培育盤在室溫培育15分鐘且使用EnSpire™讀盤儀讀取。根據下式計算誘導倍數：誘導倍數=Lum_樣品 /Lum_NC 。磷脂結合蛋白 V 分析法及半胱天冬酶 3/7 分析法結果

預期本發明之化合物及組合物(包括組合物1號至5號)將誘導細胞死亡。預期本發明之組合物將呈現例如比至少一種單獨組分化合物較強效的細胞凋亡誘導活性。同樣地，預期本發明之組合物將證實例如比至少一種單獨組分化合物較低效的細胞凋亡誘導活性。此組合物可能比較強效組合物具有較有利的毒性型態。實例10 在暴露於含有衍生自馬拉色菌之化合物及/或其化學類似物之組合物後的細胞生存率試劑

CellTiter-Glo® 2.0分析法。實驗方法

對於CellTiter-Glo分析法，在10 mM的DMSO溶液中製備測試化合物。將化合物連續稀釋成12個濃度。將40 μL來自100,000個細胞/毫升懸浮液之細胞分配至384孔盤(Corning 3570)之各孔中。在37℃下，將培育盤在5%的CO₂ 及95%的濕度下培育隔夜。添加測試化合物，其中DMSO作為媒劑對照組。在37℃下，將培育盤在5%的CO₂ 及95%濕度下培育6小時、24小時或48小時，且向孔添加40 μL CellTiter-Glo試劑以評估細胞生存率。

將測試組合物溶解於DMSO、EPI-100-LLMM或任何合適溶劑中，且可根據下表4至表9中之說明製備。合適溶劑為熟習此項技術者所熟知的。結果

預期本發明之化合物及組合物(包括組合物1號至5號)將誘導細胞死亡。預期本發明之組合物相較於單獨至少一種組分化合物呈現出例如更強效的細胞凋亡誘導活性。同樣地，預期本發明之組合物相較於單獨至少一種組分化合物展現例如更低效的細胞凋亡誘導活性。此類組合物相較於更強效組合物可具有更有利的毒性概況。實例11 含有衍生自馬拉色菌之化合物及/或其化學類似物之組合物的芳基烴受體活化潛能分析法程序

之後，製備測試化合物、測試組合物及奧美拉唑陽性對照組之儲備溶液。使用Echo550將化合物及組合物溶液轉移至分析法盤中。隨後，將培育盤置放回培育箱中進行化合物/組合物處理。

預期本發明之化合物及組合物(包括組合物1號至5號)將調控AhR活性。預期本發明之組合物相較於至少一種單獨組分化合物呈現例如更強效的AhR促效劑活性。同樣地，預期本發明之組合物相較於單獨至少一種組分化合物展現例如更低效的AhR促效劑活性。亦預期本發明之組合物相較於至少一種單獨組分化合物呈現例如更強效的AhR拮抗劑活性。同樣地，亦預期本發明之組合物相較於單獨至少一種組分化合物展現例如更低效的AhR拮抗劑活性。實例12 MelanoDerm™分析法

此研究之目的為在將測試物品反覆暴露之後評價該測試物品於MelanoDerm™皮膚模型中作為皮膚黑素生成調控劑的潛在作用。其次，此研究之目的為在將測試物品反覆暴露之後評價該測試物品對於MelanoDerm™皮膚模型的潛在皮膚刺激。藉由量測相較於陰性/溶劑對照組處理的組織，測試物品處理組織中之MTT (3-[4,5-二甲基噻唑-2-基]-2,5-二苯基溴化四唑)之相對轉化率來測定毒性。藉由量測相較於陰性/溶劑對照組處理的組織，由測試物品處理組織產生之黑素濃度測定對於黑素產生的潛在影響。測試物質及分析法對照組之鑑別 表 4 以稀釋形式測試的測試物品

測試物品命名	贊助人命名	給藥濃度	製備說明
18AH47	DMSO (溶劑對照組)	0.5 % (v/v)	將溶劑對照組用EPI-100-LLMM稀釋(v/v)至最終濃度為0.5%；使經稀釋之溶劑對照組渦旋至少1分鐘，且使用25 µL之給藥體積給藥至組織上。對於各組織處理製備至多0.5 mL之總體積。
17AJ41	馬拉色菌素(CV-8684) (陽性對照組)	500 μM	始於由贊助人提供/自由贊助人提供之固體材料製備的儲備液濃度，將測試物品/對照組用EPI-100-LLMM稀釋(v/v)至所列之給藥濃度。使測試物品稀釋液渦旋至少1分鐘，在37℃±1℃ (在水浴中)下加熱15分鐘，再次渦旋至少1分鐘，且使用25 μL之給藥體積給藥至組織上。對於各組織處理製備至多~0.5 mL之總體積。
17AJ55	O52	650 μM
18AA21	馬拉色菌吲哚A	650 μM
18AF50	AB17151	300 μM
18AH15	AB17590	300 μM
18AH21	AB11644	650 μM
18AH38	吲哚-3-甲醛	500 μM
18AH39	D-吲哚-3-乳酸	500 μM

表 5 組合物 1 號

測試物品命名	贊助人命名	用於使用儲備溶液之製備說明	給藥濃度	用於組織給藥之稀釋液的製備說明
17AD42	吲哚-咔唑(ICZ)	如下在DMSO中由頂部儲備溶液製備360 μM之使用儲備溶液：使儲備溶液在室溫下解凍，且渦旋~1分鐘。將製備至多~0.5 mL/1.0 mL之使用儲備溶液所需的合適體積轉移至新瓶且用EPI-100-LLMM稀釋至360 μM。使稀釋液渦旋至少1分鐘，在37℃±1℃ (在水浴中)下加熱15分鐘，且在隨後稀釋之前再次渦旋至少1分鐘。	組分中之每一者之給藥濃度為18 μM。	將五十(50) μL之各工作儲備溶液轉移至新瓶(組合體積700 μL)中，且與300 μL EPI-100-LLMM混合，得到1000 μL之總體積。在施加至組織上之前，使稀釋液渦旋至少1分鐘。
17AJ41	馬拉色菌素(CV-8684) (陽性對照組)
17AJ47	化合物A5 (亦稱為酮基馬拉色菌素)
17AJ55	O52
18AA21	馬拉色菌吲哚A
18AA22	糠疹檸檬素
18AA24	FICZ
18AD42	靛玉紅
18AH16	色胺酮
18AH20	馬拉色菌-乳酸
18AH24	2-羥基-1-(1H-吲哚-3-基)乙酮
18AH38	吲哚-3-甲醛
18AH39	D-吲哚-3-乳酸
18AH44	(吲哚-3-基)丙酮酸

表 6 組合物 2 號

測試物品命名	贊助人命名	用於使用儲備溶液之製備說明	給藥濃度	所需體積 (µL)	用於組織給藥之稀釋液的製備說明
17AD42	吲哚-咔唑(ICZ)	如下在DMSO中自頂部儲備溶液製備360 μM之使用儲備溶液：使儲備溶液在室溫下解凍，且渦旋~1分鐘。將製備至多~0.5 mL/1.0 mL之使用儲備溶液所需的合適體積轉移至新瓶且用EPI-100-LLMM稀釋至360 μM。使稀釋液渦旋至少1分鐘，在37℃±1℃ (在水浴中)下加熱15分鐘，且在隨後稀釋之前再次渦旋至少1分鐘。	12.6 µM	35	將各組分的所列給藥濃度之體積轉移至新瓶中，且與297 μL EPI-100-LLMM混合。在施加至組織上之前，使稀釋液渦旋至少1分鐘。
17AJ41	馬拉色菌素(CV-8684) (陽性對照組)	50.4 µM	140
17AJ47	化合物A5 (亦稱為酮基馬拉色菌素)	10.1 µM	28
17AJ55	O52	10.1 µM	28
18AA21	馬拉色菌吲哚A	10.1 µM	28
18AA22	糠疹檸檬素	50.4 µM	140
18AA24	FICZ	10.1 µM	28
18AD42	靛玉紅	24.5 µM	68
18AH16	色胺酮	24.5 µM	68
18AH20	馬拉色菌-乳酸	10.1 µM	28
18AH24	2-羥基-1-(1H-吲哚-3-基)乙酮	10.1 µM	28
18AH38	吲哚-3-甲醛	10.1 µM	28
18AH39	D-吲哚-3-乳酸	10.1 µM	28
18AH44	(吲哚-3-基)丙酮酸	10.1 µM	28

表 7 組合物 3 號

測試物品命名	贊助人命名	用於使用儲備溶液之製備說明	給藥濃度 (µM)	所需體積 (µL)	用於組織給藥之稀釋液之製備說明
17AJ41	馬拉色菌素(CV-8684) (陽性對照組)	如下在DMSO中自頂部儲備溶液製備360 μM之使用儲備溶液：使儲備溶液在室溫下解凍，且渦旋~1分鐘。將製備至多~0.5 mL/1.0 mL之使用儲備溶液所需的合適體積轉移至新瓶且用EPI-100-LLMM稀釋至360 μM。使稀釋液渦旋至少1分鐘，在37℃±1℃ (在水浴中)下加熱15分鐘，且在隨後稀釋之前再次渦旋至少1分鐘。	50.4	140	將各組分的所列給藥濃度之體積轉移至新瓶中，且與568 μL EPI-100-LLMM混合。在施加至組織上之前，使稀釋液渦旋至少1分鐘。
17AD46	化合物A5 (CV-8819) (亦稱為酮基馬拉色菌素)	10.1	28
17AJ55	O52 (AB12976)	10.1	28
18AA21	馬拉色菌吲哚A (AB17011)	10.1	28
18AD42	靛玉紅	24.5	68
18AH20	AB17227 (亦稱為馬拉色菌-乳酸)	10.1	28
18AH24	2-羥基-1-(1H-吲哚-3-基)乙酮	10.1	28
18AH38	吲哚-3-甲醛	10.1	28
18AH39	D-吲哚-3-乳酸	10.1	28
18AH44	(吲哚-3-基)丙酮酸	10.1	28

表 8 組合物 4 號

測試物品命名	贊助人命名	用於使用儲備溶液之製備說明	給藥濃度 (µM)	所需體積 (µL)	用於組織給藥之稀釋液之製備說明
17AD42	CV-8685 (亦稱為吲哚-咔唑或ICZ)	如下在DMSO中自頂部儲備溶液製備360 μM之使用儲備溶液：使儲備溶液在室溫下解凍，且渦旋~1分鐘。將製備至多~0.5 mL/1.0 mL之使用儲備溶液所需的合適體積轉移至新瓶且用EPI-100-LLMM稀釋至360 μM。使稀釋液渦旋至少1分鐘，在37℃±1℃ (在水浴中)下加熱15分鐘，且在隨後稀釋之前再次渦旋至少1分鐘。	12.6	35	將各組分的所列給藥濃度之體積轉移至新瓶中，且與505 μL EPI-100-LLMM混合。在施加至組織上之前，使稀釋液渦旋至少1分鐘。
17AJ41	馬拉色菌素(CV-8684) (陽性對照組)		50.4	140
17AD46	化合物A5 (CV-8819) (亦稱為酮基馬拉色菌素)	10.1	28
17AJ55	O52 (AB12976)	10.1	28
18AA21	馬拉色菌吲哚A (AB17011)	10.1	28
18AA24	FICZ	10.1	28
18AD42	靛玉紅	24.5	68
18AH20	AB17227 (亦稱為馬拉色菌-乳酸)	10.1	28
18AH24	2-羥基-1-(1H-吲哚-3-基)乙酮	10.1	28
18AH38	吲哚-3-甲醛	10.1	28
18AH39	D-吲哚-3-乳酸	10.1	28
18AH44	(吲哚-3-基)丙酮酸	10.1	28

表 9 組合物 5 號

測試物品命名	贊助人命名	用於使用儲備溶液之製備說明	給藥濃度 (µM)	所需體積 (µL)	用於組織給藥之稀釋液之製備說明
17AD42	CV-8685 (亦稱為吲哚-咔唑或ICZ)	如下在DMSO中自頂部儲備溶液製備360 μM之使用儲備溶液：使儲備溶液在室溫下解凍，且渦旋~1分鐘。將製備至多~0.5 mL/1.0 mL之使用儲備溶液所需的合適體積轉移至新瓶且用EPI-100-LLMM稀釋至360 μM。使稀釋液渦旋至少1分鐘，在37℃±1℃ (在水浴中)下加熱15分鐘，且在隨後稀釋之前再次渦旋至少1分鐘。	74.9	208	將各組分的所列給藥濃度之體積轉移至新瓶中，且與306 μL EPI-100-LLMM混合。在施加至組織上之前，使稀釋液渦旋至少1分鐘。
17AJ41	馬拉色菌素(CV-8684) (陽性對照組)		10.1	28
18AA22	糠疹檸檬素(AB17014)	10.1	28
18AA24	FICZ	74.9	208
18AD42	靛玉紅	24.8	69
18AH16	色胺酮	10.1	28
18AH24	2-羥基-1-(1H-吲哚-3-基)乙酮	10.1	28
18AH39	D-吲哚-3-乳酸	24.8	69
18AH44	(吲哚-3-基)丙酮酸	10.1	28

分析法對照組包括：陽性對照組為馬拉色菌素(CV-8684) (500 µM) (17AJ41)；及溶劑對照組為於EPI-100-LLMM中製備的DMSO (二甲亞碸)。

另外，測試物品及對照組施加於4個組織之組，其中2個組分別用於組織生存率(MTT)終點及2個組用於黑素終點。測試系統

在此研究中使用由MatTek Corporation (Ashland, MA)提供之MelanoDerm™皮膚模型。MelanoDerm™組織由以下組成：正常人類衍生表皮角質細胞(NHEK)及黑素細胞(NHM)，其已經培養以形成多層高度分化之人類表皮模型。共培養物中之NHM經歷自發性黑素生成，產生具有不同色素沈著量之組織。培養物在細胞培養插入件上在空氣-液體界面處生長，允許局部施加皮膚調控劑。MelanoDerm™模型呈現類似活體內之形態及超微結構特徵。位於MelanoDerm™組織基細胞層中之NHM為樹突狀的，且自發地產生逐漸填入組織層之黑素顆粒。因此，測試系統用於篩選相對於陰性對照組可抑制或刺激黑素產生的材料。實驗設計及方法論

此研究之實驗設計由以下組成：若可能，對純測試物品(及/或合適給藥溶液)的pH值進行測定；及在反覆暴露之後測定相對組織生存率及測試物品作為對於MelanoDerm™皮膚模型的皮膚黑素生成調控劑之潛在作用的確定性分析法。測試物品暴露於MelanoDerm™皮膚模型總共7天。每48小時(在距先前處理48±2小時之時間段內)，將測試物品局部施加至MelanoDerm™皮膚模型。藉由對照組及測試物品處理的組織中之NAD(P)H依賴性微粒體酶之MTT降低(及在較小程度上，藉由琥珀酸去氫酶之MTT降低)來測定測試物品的毒性。資料以相對存活率(關於陰性/溶劑對照組之MTT轉化率)形式展現。藉由測定相較於陰性/溶劑對照組處理的組織，測試物品處理的組織中產生之黑素濃度，評價對於黑素產生的潛在影響。資料以使用黑素標準曲線測定之由測試物品處理的組織產生之黑素濃度形式展現。或者，資料可展現為關於陰性/溶劑對照組處理之組織的黑素濃度之百分比變化。

MelanoDerm™維持培養基(EPI-100-LLMM)係購自MatTek Corporation。MelanoDerm™皮膚模型(MEL-300-A)係購自MatTek Corporation。1%曲酸(製備於無菌去離子水中)係購自Sigma。MTT (3-[4,5-二甲基噻唑-2-基]-2,5-二苯基溴化四唑)係購自Sigma。含有2 mM的L-麩醯胺酸之達爾伯克氏改良伊格爾氏培養基(DMEM) (MTT添加培養基)係購自Quality Biological。提取溶劑(異丙醇)係購自Aldrich。無菌Ca++及Mg++游離杜爾貝科氏磷酸鹽緩衝鹽水(CMF-DPBS)係購自Invitrogen。黑素係購自Sigma。無菌去離子水係購自Quality Biological。可溶解物係購自Perkin Elmer。測試物品之製備及遞送

除非在此方案內另外規定，否則將二十五微升之各測試物品直接施加於組織上，以便覆蓋上表面。取決於測試物品(液體、凝膠、乳膏、泡沫及其類似物)之性質，可能需要使用給藥裝置、網狀物或其他輔助物以使測試物品均勻展佈在組織表面上。投藥途徑

在7天試驗期間，每48小時(在距先前處理48+2小時之時間段內)將測試物品局部施加至MelanoDerm™組織。將二十五微升各測試物品施加至各組織。分別將二十五微升的陽性及陰性/溶劑對照組施加至各組織。 pH值測定

若可能，對純液體測試物品(及/或合適給藥溶液)的pH值進行測定。使用pH試紙測定pH值(例如在0至14之pH值範圍進行估計，及/或5至10之pH值範圍測定更精確值)。較窄範圍pH試紙上之典型pH值增量為大致0.3至0.5個pH單位。pH試紙上之最大增量為1.0個pH單位。對照組

確定性分析法包括陰性對照組、陽性對照組及一個溶劑對照組(DMSO)或陽性對照組及溶劑對照組(DMSO)。用25 μL無菌去離子水或DMSO處理對分析法陰性/溶劑對照組所指定之MelanoDerm™組織。用25 μL的1%曲酸、500 μM的馬拉色菌素(CV-8684) (17AJ41)或組合物2號處理對分析法陽性對照組指定之組織。1%曲酸儲存於覆蓋有鋁箔之試管中，直至在製備2小時內使用。陰性/溶劑及陽性對照組暴露時間與用於測試物品之彼等暴露時間一致。未處理組織亦用作對照組。對直接測試物品MTT降低之評估

必需評估各測試物品直接降低MTT之能力。在MTT添加培養基中製備1.0 mg/mL的MTT溶液。向1 mL MTT溶液中添加大致25 μL測試物品，且在37±1℃下將混合物在暗處培育一至三個小時。同時測試陰性對照組(25 μL無菌去離子水)或溶劑對照組(25 μL DMSO)。若MTT溶液顏色變成藍色/紫色，則推測測試物品已降低MTT。不可溶於水的測試材料可僅在測試物品與培養基之間的界面處顯示直接減少(暗化)。 MelanoDerm™之接收

組織暴露：在培養物開始至少16小時之後，使用數位相機對五個MelanoDerm™組織(視為在第0天未處理)拍照，以輔助在分析法之零時對組織之色素沈著程度進行視覺評估。用CMF-DPBS沖洗兩個MelanoDerm™組織，在無菌吸收性試紙上揩乾且清除過量液體。在沖洗之後，將MelanoDerm™組織轉移至含有MTT之合適孔中，且在MTT分析法中處理。用CMF-DPBS沖洗兩個或三個MelanoDerm™組織，在無菌吸收性試紙上揩乾且清除過量液體。使用無菌解剖刀，將MelanoDerm™組織自細胞培養插入件移出，置於經標記之1.5 mL微量離心管中，且儲存在＜-60℃下以供後續黑素分析。

在培養物開始至少16小時之後，將組織的其餘部分轉移至每孔含有0.9 mL之新鮮預熱EPI-100-LLMM的新6孔盤上。在7天時間段內進行試驗。在第一天且每48小時(在距先前處理48+2小時之時間段內)用25 μL各測試物品局部處理四個或五個組織。每天(在距先前再進料之24+2小時時間段內)更新培養基；將組織轉移至每孔含有0.9 mL之新鮮預熱EPI-100-LLMM的新6孔盤。

在第一天且每48小時(在距先前處理48+2小時之時間段內)分別用25 μL陽性及陰性/溶劑對照組局部處理四個或五個組織。每天(在距先前再進料之24+2小時時間段內)更新培養基；將組織轉移至每孔含有0.9 mL之新鮮預熱EPI-100-LLMM的新6孔盤。在37±1℃下，將組織在空氣中含5±1%之CO₂ 的加濕氛圍中(標準培養條件)培育持續合適暴露時間。

在黑素提取開始至少16小時之後，將含有樣品(表示自MelanoDerm™組織提取之黑素)及標準溶液的試管在室溫下冷卻，且在室溫下在13,000 rpm下離心5分鐘。將200 μL樣品(單個孔)或標準溶液(重複孔)轉移至96孔盤之合適孔。向重複孔中指定為空白組之孔添加兩百μL可溶解物。用Molecular Devices Vmax讀盤儀(用選定Automix功能)量測各孔在490 nm下之吸光度(OD490)。用於評估殘餘測試物品MTT降低之經殺滅對照組

為了測定殘餘測試物品是否起直接降低MTT作用，使用經冷凍殺滅的對照組組織。藉由將未處理MelanoDerm™/EpiDerm™ (不具有黑素細胞之Melanoderm™)組織置放於-20℃冷凍器中至少隔夜，解凍至室溫且隨後再冷凍來製備經冷凍殺滅組織。組織一經殺滅，則可無限儲存於冷凍器中。可自MatTek Corporation接收已製備的經冷凍殺滅組織，且儲存於-20℃冷凍器中直至使用。為了測試殘餘測試物品減少，以普通方式用測試物品處理經殺滅組織。以與活組織相同的方式進行所有分析法程序。同時測試用無菌去離子水處理之至少一個經殺滅對照組(陰性經殺滅對照組)，此係由於在經殺滅組織中預期殘餘NADH及相關酶降低少量MTT。

若在測試物品處理之經殺滅對照組中觀測到很少或無MTT降低，則可將測試物品處理之活組織中觀測到的MTT降低歸因於活細胞。若在經處理之經殺滅對照組中存在可觀的MTT降低(相對於經處理之活組織中之量)，則必須進行額外步驟以解釋化學物質減少或測試物品可在此系統中視為不可測的。資料分析

最終，將進行以下對照組百分比計算：生存率百分比=[(測試物品或陽性對照組之最終校正OD₅₅₀ )/(陰性/溶劑對照組之校正平均OD₅₅₀ )]×100

黑素分析：捕捉原始吸光度資料，保存為列印檔案且導入至Excel試算表中。測定各測試樣品(表示在第0天自未處理MelanoDerm™組織的黑素、在第7天自用各測試物品、陰性/溶劑或陽性對照組處理之MelanoDerm™組織提取的黑素)及黑素標準溶液的OD490值。藉由減去空白組孔之平均OD490值測定測試樣品及各黑素標準物的校正OD490值。將標準曲線繪製為以mg/mL為單位之標準溶液濃度(y軸)相對於對應校正吸光度。自標準曲線(線性)內插各個別組織中之黑素之量。最終，分別計算各測試物品或對照處理組之黑素濃度的平均值。結果

圖4概述了測試物品、測試組合物、陽性對照組及溶劑對照組之平均組織生存率及黑素濃度結果。包含組合物1號及2號之化合物在組合於單一組合物中時展現出協同效應。

圖5概述了測試物品、測試組合物、陽性對照組及溶劑對照組之平均組織生存率及黑素濃度結果。包含組合物2號、3號、4號及5號之化合物在組合於單一組合物中時展現出協同效應。實例13 含有衍生自馬拉色菌之化合物及/或其化學類似物之組合物的黑素生成潛能

此研究之目的係觀測及報導暴露於含有衍生自馬拉色菌之化合物及/或其化學類似物的組合物之B16黑素細胞的黑素生成及生存率。材料及試劑

培養B16黑素細胞直至70%融合且收穫。以每孔4000個細胞的密度在96孔盤中接種細胞且使其附著隔夜。第二天，將測試物品、測試組合物及對照組稀釋於B16分析法介質中。抽吸隔夜介質且施加200 μL測試物品及對照組。將細胞在37℃及10% CO₂ 下培育72小時。在72小時培育之後，在540 nm下讀取吸光度。移除介質且用100 μL含有1 mg/mL的MTT之平板介質置換，且在37℃及10% CO₂ 下培育2小時。移除MTT介質且用200 μL的95%乙醇/5%異丙醇置換，且將其震盪15分鐘。隨後在570 nm下讀取吸MTT光度。結果

預期本發明之化合物及組合物(包括組合物1號至5號)將抑制黑素生成。預期本發明之組合物相較於至少一種組分化合物呈現例如更強效的黑素生成抑制活性。同樣地，預期某些組合物相較於至少一種組分化合物展現例如更低效的黑素生成抑制活性。實例14 活體外功效

預期本發明之化合物及組合物將誘導黑素細胞凋亡及調控黑素細胞活性、黑素產生、黑素濃度、黑素體生物合成及/或黑素體轉移。亦設想本發明之某些化合物及組合物將較弱地影響此等生物過程。此類化合物及組合物相較於更強效物種可具有更有利的毒性概況。實例15 活體內功效

預期本發明之化合物及組合物將調控皮膚色素沈著，包括增亮皮膚及改良由各種病症引起之色素沈著過度/色素過少。另外預期本發明之化合物及組合物將在例如半衰期及吸收方面呈現有利的藥物動力學概況。某些化合物將呈現較長半衰期，而其他將呈現較短半衰期。類似地，某些化合物將呈現不同吸收概況，其中對於一些化合物完全吸收花費較長時間，且其他完全吸收花費較短時間。實例16 馬拉色菌素及靛玉紅之化學類似物的合成AB17590 之合成

如圖6A中所示，在0℃下向化合物1a (25.0 g，0.357 mol，1.0當量)於四氫呋喃(250 mL)中之溶液添加溴化乙炔基鎂(0.5 M於THF中，1.07 L，0.535 mol，1.5當量)，且將反應混合物升溫至室溫且攪拌2小時。隨後，用飽和氯化銨水溶液淬滅混合物，且用乙酸乙酯萃取。有機層經無水Na₂ SO₄ 乾燥且在減壓下濃縮。藉由矽膠層析法(0-10%乙酸乙酯/石油醚)來純化殘餘物，以得到化合物1b (9.5 g，27%)。TLC： PE:EA = 20:1, 254 nm; R_f (化合物1a ) = 0.3; R_f (化合物1b ) = 0.7。

在0℃下在氮氣氛圍下，向化合物1b (9.5 g，98.96 mmol，1.0當量)於四氫呋喃(100 mL)中之混合物中添加60%氫化鈉(4.7 g，0.119 mol，1.2當量)於二甲基甲醯胺(50 mL)中之溶液。在30分鐘之後，在0℃下添加硫酸二甲酯(22.4 g，0.178 mol，1.8當量)。在添加之後，使反應混合物升溫至室溫，且在室溫下攪拌30分鐘，且隨後緩慢添加乙酸(1 ml)。直接自反應混合物蒸餾出產物。其為由此獲得的化合物1c (10.0 g，91%產率)。

在室溫下在氮氣氛圍下，向化合物1 (8.0 g，24.02 mmol，1.0當量)及化合物1c (2.9 g，26.43 mmol，1.1當量)於三乙胺(80 mL)中之溶液添加碘化亞銅(456 mg，2.40 mmol，0.1當量)及Pd(PPh₃ )₂ Cl₂ (337 mg，0.480 mmol，0.02當量)。在室溫下攪拌混合物2小時。藉由TLC監測反應混合物進程。將反應混合物用水稀釋且用乙酸乙酯萃取。有機層經無水硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。藉由矽膠層析法(0~10%乙酸乙酯/石油醚)來純化殘餘物，以得到化合物2 (7.0 g，92%)。TLC：PE：EA=10:1, 254 nm; R_f (化合物1 ) =0.8; R_f (化合物2 ) =0.6。

向烘乾燒瓶添加二氯化鉑(694 mg，2.06 mmol，0.1當量)、碳酸鈉(3.3 g，30.95 mmol，1.5當量)、參(五氟苯基)膦(2.2 g，4.13 mmol，0.2當量)、6-甲基吲哚(4.8 g，41.27 mmol，2.0當量)及化合物2 (6.5 g，20.63 mmol，1.0當量)於二噁烷(650 mL)中之混合物。燒瓶經氮氣脫氣，密封且加熱至100℃持續16 h。藉由TLC監測反應混合物進程。在減壓下濃縮溶劑。將殘餘物用乙酸乙酯稀釋，且用水、飽和鹵水萃取。有機層經無水硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。藉由矽膠層析法(0~10%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，以得到化合物3 (3.0 g，36%)。TLC：PE：EA=10:1, 254 nm; R_f (化合物2 ) =0.6; R_f (化合物3 ) =0.2。

在0℃下，向化合物3 (3.0 g，7.50 mmol，1.0當量)於四氫呋喃(30 mL)中之溶液添加甲醇鈉(5 M於MeOH中，6.0 mL，29.98 mmol，4.0當量)。使反應混合物升溫至室溫，且攪拌2小時。藉由TLC監測反應混合物進程。在減壓下濃縮反應混合物。藉由矽膠層析法(0~10%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，以得到化合物4 (1.5 g，66%)。TLC：PE：EA=5:1, 254 nm; R_f (化合物3 ) =0.7; R_f (化合物4 ) =0.4。

在氬氣下在0℃下，向乾燥的500 mL三頸圓底燒瓶添加二甲基甲醯胺(10 mL)。隨後，在維持內部溫度低於5℃的同時，在10分鐘內緩慢添加氧氯化磷(1.2 g，7.60 mmol，1.2當量)。在0℃下攪拌30分鐘之後，在維持內部溫度低於5℃的同時，在10分鐘內緩慢添加化合物4 (1.9 g，6.33 mmol，1.0當量)於二甲基甲醯胺(20 mL)中之溶液。在室溫下攪拌所得混合物16小時。在反應完成(使用20%乙酸乙酯/己烷藉由TLC監測)之後，將反應混合物倒入飽和碳酸氫鈉水溶液(50 mL)中且攪拌1小時。用乙酸乙酯(2×100 mL)萃取所得混合物。將合併之有機層用水、飽和鹵水洗滌，且經硫酸鈉乾燥。過濾溶劑且在減壓下濃縮。藉由矽膠層析法(10-50%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，以得到化合物5 (1.8 g，89%)。TLC：PE：EA=1:1, 254 nm; R_f (化合物4 ) =0.8; R_f (化合物5 ) =0.5。

在0℃下，向化合物5 (1.8 g，5.49 mmol，1.0當量)於四氫呋喃(20 mL)中之溶液添加二碳酸二第三丁酯(3.0 g，13.72 mmol，2.5當量)及4-二甲胺基吡啶(1.4 g，11.25 mol，2.05當量)。使反應混合物升溫至室溫，且攪拌3小時。藉由TLC監測反應混合物進程。在減壓下濃縮反應混合物，且殘餘物用乙酸乙酯稀釋及用1N氫氯酸、飽和碳酸氫鈉水溶液(300 mL)及鹵水(300 mL)洗滌。分離有機層且經無水硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮。藉由矽膠層析法(0-10%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，以得到化合物6 (2.4 g，82%)。TLC：PE：EA=10:1, 254 nm; R_f (化合物5 ) =0.1; R_f (化合物6 ) =0.5。

在0℃下，向化合物6 (2.4 g，4.55 mmol，1.0當量)於第三丁醇(60 mL)中之溶液添加2-甲基-2-丁烯(30 mL)，隨後添加亞氯酸鈉(8.2 g，90.91 mmol，20.0當量)、磷酸二氫鈉(14.2 g，90.91 mmol，20.0當量)及水(60 mL)。使混合物緩慢升溫至室溫且在室溫下攪拌15小時。藉由TLC監測反應混合物進程。將反應混合物用二氯甲烷(100 mL)稀釋且分離。將有機層用水(80 mL)、鹵水(80 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮，以得到粗化合物7 (2.5 g，99%)。TLC：PE：EA=2:1, 254 nm; R_f (化合物6 ) =0.7; R_f (化合物7 ) =0.3。

在0℃下向化合物7 (2.5 g，4.60 mmol，1.0當量)於二甲基甲醯胺(30 mL)中之溶液添加碳酸鉀(952 mg，6.89 mmol，1.5當量)及碘代甲烷(978 mg，6.89 mmol，1.5當量)。使反應混合物升溫至室溫，且攪拌2小時。藉由TLC監測反應混合物進程。將反應混合物用乙酸乙酯(100 mL)稀釋，且用水(100 mL)及鹵水(100 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。藉由矽膠層析法(5-17%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，以得到化合物8 (2.3 g，89%)。TLC：PE：EA=5:1, 254 nm; R_f (化合物7 ) =0.1; R_f (化合物8 ) =0.6。

在室溫下，將化合物8 (1.3 g，2.33 mmol，1.0當量)於氫氯酸(3 M於EA中，30 mL)中之混合物攪拌持續16小時。藉由TLC監測反應。隨後在減壓下濃縮混合物。藉由矽膠層析法(10-25%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，以得到呈黃色固體之化合物AB17590 (502 mg，61%)。TLC：PE：EA=3:1, 254 nm; R_f (化合物8 ) =0.8; R_f (化合物AB17590 ) =0.5; LC-MS：359 (M+1)⁺ ;¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ 8.12 (d, J = 19.7 Hz, 2H), 7.94 (s, 1H), 7.42 (s, 1H), 7.35 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.13 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.04 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.93 (dd, J = 15.7, 8.6 Hz, 2H), 5.04 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 3.95 (s, 3H), 2.45 (s, 3H), 1.42 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 0.78 - 0.68 (m, 1H), 0.62 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 0.54 - 0.41 (m, 2H)。AB17653 之合成

如圖6B中所示，在氮氣氛圍下在室溫下將化合物1 (721 mg，3.20 mmol，1.0當量)、化合物1a (560 mg，3.20 mmol，1.0當量)及碳酸鈉(866 mg，8.17 mmol，2.55當量)於甲醇(10 mL)中之混合物攪拌持續3小時。藉由TLC監測反應混合物進程。反應完成後，過濾混合物且用甲醇及水洗滌濾餅，以得到呈紅色固體之化合物AB17653 (979 mg，89%)。TLC： PE/EA = 3/1, 254 nm; R_f (化合物1 ) = 0.6; R_f (化合物AB17653 ) = 0.4; LC-MS：338.95 (M-1)^- ;¹ H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ11.01 (d, J = 21.5 Hz, 2H), 8.64 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.62 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.55 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.39 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.18 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.00 (dd, J = 8.8, 4.6 Hz, 2H)。AB17654 之合成

如圖6B中所示，在氮氣氛圍下在120℃下將化合物AB17653 (979 mg，2.88 mmol，1.0當量)及羥胺鹽酸鹽(520 mg，7.49 mmol，2.6當量)於吡啶(30 mL)中之混合物攪拌持續2小時。藉由LCMS監測反應混合物進程。反應完成後，在減壓下濃縮混合物且添加1 N HCl直至固體出現。過濾混合物，且將濾餅溶解於1 N NaOH中。隨後添加3 N HCl以調整pH值=5且過濾。用1 N HCl洗滌濾餅，以得到呈紅色固體之化合物AB17654 (500 mg，48%)。LC-MS：357.95 (M+1)⁺ ;¹ H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 13.59 (s, 1H), 11.71 (s, 1H), 10.82 (s, 1H), 8.53 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.19 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.42 - 7.35 (m, 2H), 7.11 - 6.96 (m, 3H)。AB17655 之合成

如圖6B中所示，在氮氣氛圍下在室溫下將化合物2 (637 mg，3.86 mmol，1.0當量)、化合物1a (676 mg，3.86 mmol，1.0當量)及碳酸鈉(1044 mg，9.84 mmol，2.55當量)於甲醇(10 mL)中之混合物攪拌持續3小時。藉由TLC監測反應混合物進程。反應完成後，過濾混合物且用甲醇及水洗滌濾餅，以得到呈紅色固體之化合物AB17655 (1027 mg，95%)。LC-MS：281.05 (M+1)⁺ ;¹ H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ11.06 (s, 1H), 10.86 (s, 1H), 8.54 (dd, J = 10.5, 2.7 Hz, 1H), 7.67 - 7.53 (m, 2H), 7.41 - 7.38 (m, 1H), 7.09 - 6.98 (m, 2H), 6.85 (dd, J = 8.5, 4.8 Hz, 1H)。AB17656 之合成

如圖6B中所示，在氮氣氛圍下在110℃下將化合物AB17655 (1027 mg，3.67 mmol，1.0當量)及羥胺鹽酸鹽(663 mg，9.54 mmol，2.6當量)於吡啶(30 mL)中之混合物攪拌持續2小時。藉由LCMS監測反應混合物進程。反應完成後，在減壓下濃縮混合物且添加1 N HCl直至固體出現。過濾混合物，且將濾餅溶解於1 N NaOH中。隨後添加3 N HCl以調整pH值=5且過濾。用1 N HCl洗滌濾餅，以得到呈紅色固體之化合物AB17656 (500 mg，48%)。LC-MS：296.00 (M+1)⁺ ;¹ H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ13.60 (s, 1H), 11.77 (s, 1H), 10.69 (s, 1H), 8.43 (s, 1H), 8.20 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.39 (d, J = 5.7 Hz, 2H), 7.02 (s, 1H), 6.91 (s, 1H), 6.83 (d, J = 4.9 Hz, 1H)。AB17657 之合成

如圖6B中所示，在氮氣氛圍下在室溫下將化合物3 (362 mg，2.46 mmol，1.0當量)、化合物1a (431 mg，2.46 mmol，1.0當量)及碳酸鈉(666 mg，6.28 mmol，2.55當量)於甲醇(10 mL)中之混合物攪拌持續3小時。藉由TLC監測反應混合物進程。反應完成後，過濾混合物且用甲醇及水洗滌濾餅，以得到化合物4 (606 mg，93%)。TLC： PE/EA = 1/1, 254 nm; R_f (化合物3 ) = 0.7; R_f (化合物4 ) = 0.5。

在氮氣氛圍下在120℃下將化合物4 (606 mg，2.31 mmol，1.0當量)及羥胺鹽酸鹽(418 mg，6.01 mmol，2.6當量)於吡啶(20 mL)中之混合物攪拌持續2小時。藉由TLC監測反應混合物進程。反應完成後，在減壓下濃縮混合物且添加1 N HCl直至固體出現。過濾混合物，且將濾餅溶解於1 N NaOH中。隨後添加3 N HCl以調整pH值=5且過濾。用1 N HCl洗滌濾餅，以得到呈褐色固體之化合物AB17657 (500 mg，78%)。TLC： PE/EA = 1/1, 254 nm; R_f (化合物4 ) = 0.5; R_f (化合物AB17657 ) = 0.4; LC-MS：278.10 (M+1)⁺ ;¹ H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ13.60 (s, 1H), 11.77 (s, 1H), 10.69 (s, 1H), 8.43 (s, 1H), 8.20 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.39 (d, J = 5.7 Hz, 2H), 7.02 (s, 1H), 6.91 (s, 1H), 6.83 (d, J = 4.9 Hz, 1H)。AB17658 之合成

如圖6B中所示，在氮氣氛圍下在35℃下將化合物5a (337 mg，1.73 mmol，1.0當量)、化合物5b (554 mg，1.73 mmol，1.0當量)及氫氧化鉀(1114 mg，3.46 mmol，2.0當量)於乙腈(10 mL)中之混合物攪拌持續1.5小時。藉由TLC監測反應混合物進程。反應完成後，在減壓下濃縮混合物且藉由矽膠層析法純化殘餘物，以得到化合物5c (436 mg，99%)。TLC： PE/EA = 1/1, 254 nm; R_f (化合物5a ) = 0.8; R_f (化合物5c ) = 0.5。

在氮氣氛圍下在室溫下，將化合物5 (330 mg，1.72 mmol，1.0當量)、化合物5c (436 mg，1.72 mmol，1.0當量)及碳酸鈉(465 mg，4.38 mmol，2.55當量)於甲醇(10 mL)中之混合物攪拌持續3小時。藉由TLC監測反應混合物進程。反應完成後，過濾混合物且用甲醇及水洗滌濾餅，以得到化合物6 (617 mg，93%)。TLC： PE/EA = 1/1, 254 nm; R_f (化合物5 ) = 0.5; R_f (化合物6 ) = 0.4。

在氮氣氛圍下在110℃下，將化合物6 (617 mg，1.60 mmol，1.0當量)及羥胺鹽酸鹽(290 mg，4.17 mmol，2.6當量)於吡啶(20 mL)中之混合物攪拌持續2小時。藉由TLC監測反應混合物進程。反應完成後，在減壓下濃縮混合物且添加1 N HCl直至固體出現。過濾混合物，且將濾餅溶解於1 N NaOH中。隨後添加3 N HCl以調整pH值=5且過濾。用1 N HCl洗滌濾餅，以得到呈紅色固體之化合物AB17658 (500 mg，78%)。TLC： PE/EA = 1/1, 254 nm; R_f (化合物6 ) = 0.4; R_f (化合物AB17658 ) = 0.3; LC-MS：402.95 (M+1)⁺ ;¹ H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ11.86 (s, 1H), 11.39 (s, 1H), 9.40 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 8.33 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 8.06 (dd, J = 8.6, 2.4 Hz, 1H), 7.59 (dd, J = 8.4, 2.0 Hz, 1H), 7.43 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.02 (d, J = 8.6 Hz, 1H)。實例17 馬拉色菌素、其他自馬拉色菌衍生之化合物及其化學類似物之光防護特性的活體內評估馬拉色菌素 1% 調配物

在此研究中使用之馬拉色菌素1%調配物含有以下成分：水(Water) (水(aqua))為65.939%；二甲基異山梨酯為20.000%；橄欖油甘油聚醚-8酯為3.000%；甘油為2.991%；椰子烷烴為2.700%；丙烯酸羥乙酯/丙烯醯二甲基牛磺酸鈉共聚物為1.700%；馬拉色菌素為1.000%；戊二醇為1.000%；苯氧基乙醇為0.640%；可可-辛酸酯/癸酸酯為0.300%；辛醯基乙二醇為0.200%；氯苯甘醚為0.160%；脫水山梨糖醇異硬脂酸酯為0.140%；生育酚為0.100%；聚山梨醇酯60為0.080%；及二鈉EDTA為0.050%。實驗設計

此概念驗證研究中包括39歲IV型皮膚女性。

在實驗第1天，使用靶向寬帶雙光UVB裝置評價個體以測定最小紅斑劑量(「MED」)。將6個方形模板置於測試個體背部左下方(1.5 cm×1.5 cm)上。參見圖7。

個體皮膚類型之MED光測試劑量以mJ/cm² 為單位列於圖8中。在照射二十四小時之後，個體返回進行MED評估。如圖12中所示，個體之MED為120 mJ。

隨後，個體每日兩次在右背部之上部測試方形中施加馬拉色菌素1%持續7天。自第4天至第7天，每日兩次處理第二右下方方形，且在第7天對第三中間方形施加一次。在左背部上每日兩次施加產物媒劑持續7天。參見圖13在第7天，個體返回研究中心進行照射。參見圖9。用120 mJ的UVB暴露照射各測試位點。個體在24小時內返回進行光毒性/光防護評估。參見圖14。

個體繼續實驗，接受馬拉色菌素1%持續總共14天。圖15至圖16展示暴露於以下處理的個體皮膚區域：在位點14上，一日兩次施加馬拉色菌素1%，持續14天；在位點10上，一日兩次施加馬拉色菌素1%，持續11天；在位點8上，一日兩次施加馬拉色菌素1%，持續8天；在位點3上，一日兩次施加馬拉色菌素1%，持續3天；在位點1上，施加馬拉色菌素1%一次；及在媒劑位點上，一日兩次施加媒劑，分別持續7及9天。結果

如圖14中所示，在UVB暴露24小時之後，個體在媒劑測試位點處顯現1加至2加紅斑。關於紅斑量表，參見圖11。相比之下，注意到在馬拉色菌素1%在7天處理位點處存在較輕紅斑(輕度)。對處理3天位點之評價展示出紅斑最小，且第1天施加位點無紅斑。使用Mexameter MX16及支持臨床觀測自各位點獲取比色法量測。在媒劑位點中，隨後在馬拉色菌素第7天處理位點中，觀測到最大紅斑讀數。最低值分別在馬拉色菌素第3天及第1天位點觀測到。參見圖9。

個體繼續實驗，且在第14天返回進行重複UVB照射，以及在第15天進行解釋。參見圖15。在第15天之臨床評價揭示在第7天的媒劑位點處之中度紅斑，且在第9天處顯著較輕。參見圖16。在馬拉色菌素1%處理位點處注意到較輕紅斑(輕度)，包括第14天、第10天及第8天位點。在第1天及第3天之馬拉色菌素1%位點處注意到紅斑最小。自各位點獲取比色法讀數以量測紅斑及黑素指數。結果支持在馬拉色菌素1%處理位點處紅斑較輕之臨床觀測。參見圖10。

自在第9天之媒劑位點及第1天及第3天之馬拉色菌素1%處理位點獲取活檢體。分析樣本之蘇木精及曙紅、芳塔納梅森染色(Fontana Masson staining)及MART I以用於黑素細胞之定量與affymetrix研究。

診斷：(A)皮膚-處理第1天(馬拉色菌素1%)：籃式編織角質層，正常出現之黑素細胞(藉由用Mart-1之免疫過氧化酶染色證實)及表皮黑素(藉由用芳塔納梅森之免疫過氧化酶染色證實)。

診斷：(B)皮膚-處理第3天(馬拉色菌素1%)：籃式編織角質層，當相較於C及D時樹突狀黑素細胞較少(藉由用MART-1/Melan A之免疫過氧化酶染色證實)，且其中表皮黑素輕微減少作為跳躍區域(藉由用芳塔納梅森之免疫過氧化酶染色證實)。

診斷：(C)皮膚-媒劑：正常出現之表皮黑素細胞(藉由用Mart-1之免疫過氧化酶染色證實)及表皮黑素(藉由用芳塔納梅森之免疫過氧化酶染色證實)。

診斷：(D)皮膚-正常：正常出現之表皮黑素細胞(藉由用Mart-1之免疫過氧化酶染色證實)及表皮黑素(藉由用芳塔納梅森之免疫過氧化酶染色證實)。結論

此概念驗證研究之結果展現馬拉色菌素的UV防護特性。

設想涉及額外患者之進一步研究將展現馬拉色菌素之等效的或更有效的UV防護特性。亦設想額外研究將闡明與馬拉色菌素誘導之光防護作用相關之分子信號傳導路徑。文獻 Berridge, M.V., Tan, A.S., McCoy, K.D., Wang, R. The Biochemical and Cellular Basis of Cell Proliferation Assays That Use Tetrazolium Salts. Biochemica 4:14-19 (1996)。 Black等人 Athymic Nude Mice and Human Skin Grafting. In：Maibach等人 (編者). Models in Dermatology Vol. 1. Karger, Basel, 1985, 228-39。 Costin, G.-E., Raabe, R. Optimized in vitro pigmentation screening assay using a reconstructed three dimensional human skin model. Rom. J. Biochem. 50 (1), 15-27 (2013)。 Donato等人 A Microassay for Measuring Cytochrome P450IA1 and P450IIB1 Activities in Intact Human and Rat Hepatocytes Cultured on 96-Well Plates. Anal Biochem. 1993; 213(1):29-33。 Elmore. Apoptosis：A Review of Programmed Cell Death. Toxicologic Pathology 2007; 35:495-516。 Fitzpatrick等人 The Validity and Practicality of Sun-Reactive Skin Types I Through VI. 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本申請案中所引用之所有文獻均以引用之方式併入本文中，如同在本文中全文引述一般。

儘管本文已描述本發明之說明性實施例，但應理解，本發明不限於所描述之彼等實施例，且在不脫離本發明之範疇或精神之情況下，熟習此項技術者可作出各種其他改變或修改。

該專利或申請案文件含有至少一張彩製圖。在申請且支付必要費用後，專利局將提供具有彩色圖式之本專利或專利申請公開案之複本。

圖1至圖2為展示用不同濃度之所示測試物品處理MelanoDerm™基質之由獨立實驗確認的平均組織生存率及黑素濃度資料之表。

圖3展示由馬拉色菌產生之化合物。

圖4至圖5為展示用不同濃度之所示測試物品/測試組合物處理MelanoDerm™基質之由獨立實驗確認的平均組織生存率及黑素濃度資料之表。

圖6A至圖6B展示以下之合成流程：AB17590 (圖6A)及AB17653、AB17654、AB17655、AB17656、AB17657與AB17658 (圖6B)。

圖7為展示用於IV型皮膚患者之皮膚治療模板的示意圖。值指示以mJ/cm² 為單位的給定區域之UV劑量。

圖8為展示用於I型至VI型皮膚之雙光量表的表。

圖9為展示在第7天照射之後在第8天時黑素及紅斑之Mexameter MX 16量測結果的表。

圖10為展示在第14天照射之後在第15天時黑素及紅斑之Mexameter MX 16量測結果的表。

圖11為展示與各種紅斑程度相關之紅斑數值量表的表。

圖12為展示在用根據圖7中所示之皮膚治療模板的各種水平之UV照射24小時之後個體之皮膚的像片。在照射24小時之後，最小紅斑劑量(「MED」)為120 mJ的UVB。

圖13為展示在第7天時個體皮膚上之測試位點之像片。

圖14為展示用120 mJ UVB照射24小時後在第8天時個體皮膚上之測試位點的像片。

圖15為展示在額外一週的馬拉色菌素療法之後在第14天時個體皮膚上之測試位點的像片。對治療區域給藥120 mJ UVB。

圖16為展示用120 mJ UVB照射24小時後在第15天時個體皮膚上之測試位點的像片。注意到在第7天及第9天之媒劑位點處之紅斑。亦注意到在第14天、第10天及第8天之馬拉色菌素1%治療位點處之最小至輕度紅斑，在第1天及第3天出現痕量紅斑。

Claims

一種組合物用於製造用於個體中增亮皮膚之製劑的用途，其中該組合物包含表1或圖3中所列化合物中之一或多者，或其化學類似物、結晶型、水合物或醫藥學上或化妝品上可接受之鹽。
如請求項1之用途，其中該組合物包含表5中所列之化合物。
如請求項1之用途，其中該組合物包含表6中所列之化合物。
如請求項1之用途，其中該組合物包含表7中所列之化合物。
如請求項1之用途，其中該組合物包含表8中所列之化合物。
如請求項1之用途，其中該組合物包含表9中所列之化合物。
一種組合物用於製造用於個體中誘導黑素細胞凋亡之製劑的用途，其中該組合物包含表1或圖3中所列化合物中之一或多者，或其化學類似物、結晶型、水合物或醫藥學上或化妝品上可接受之鹽。
如請求項7之用途，其中該組合物包含表5中所列之化合物。
如請求項7之用途，其中該組合物包含表6中所列之化合物。
如請求項7之用途，其中該組合物包含表7中所列之化合物。
如請求項7之用途，其中該組合物包含表8中所列之化合物。
如請求項7之用途，其中該組合物包含表9中所列之化合物。
一種組合物用於製造用於個體中調節芳基烴受體(AhR)活性之製劑的用途，其中該組合物包含表1或圖3中所列化合物中之一或多者，或其化學類似物、結晶型、水合物或醫藥學上或化妝品上可接受之鹽。
如請求項13之用途，其中該組合物包含表5中所列之化合物。
如請求項13之用途，其中該組合物包含表6中所列之化合物。
如請求項13之用途，其中該組合物包含表7中所列之化合物。
如請求項13之用途，其中該組合物包含表8中所列之化合物。
如請求項13之用途，其中該組合物包含表9中所列之化合物。
一種組合物用於製造用於個體中調節黑素生成之製劑的用途，其中該組合物包含表1或圖3中所列化合物中之一或多者，或其化學類似物、結晶型、水合物或醫藥學上或化妝品上可接受之鹽。
如請求項19之用途，其中該組合物包含表5中所列之化合物。
如請求項19之用途，其中該組合物包含表6中所列之化合物。
如請求項19之用途，其中該組合物包含表7中所列之化合物。
如請求項19之用途，其中該組合物包含表8中所列之化合物。
如請求項19之用途，其中該組合物包含表9中所列之化合物。
一種組合物用於製造用於個體中調節黑素濃度之製劑的用途，其中該組合物包含表1或圖3中所列化合物中之一或多者，或其化學類似物、結晶型、水合物或醫藥學上或化妝品上可接受之鹽。
如請求項25之用途，其中該組合物包含表5中所列之化合物。
如請求項25之用途，其中該組合物包含表6中所列之化合物。
如請求項25之用途，其中該組合物包含表7中所列之化合物。
如請求項25之用途，其中該組合物包含表8中所列之化合物。
如請求項25之用途，其中該組合物包含表9中所列之化合物。
一種組合物，其包含表1或圖3中所列化合物中之一或多者，或其化學類似物、結晶型、水合物或醫藥學上或化妝品上可接受之鹽。