TW201944987A - 多重ｐＨ緩衝配方與尿素酶活性抑制劑之組合物及其用途 - Google Patents

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Abstract

本發明為一種抑制尿素酶之一活性之組合物，包括至少一酸成分，其中該至少一酸成分係一有機酸、一磷酸及其組合其中之一；至少一鹼成分，其中該至少一鹼成分係一有機鹼、一磷酸鹼及其組合其中之一、該至少一酸成分及該至少一鹼成分具一共軛關係、且該至少一酸成分及該至少一鹼成分形成一緩衝配方；以及一尿素酶活性抑制劑，為一抗壞血酸、其鹽類及其組合其中之一，其中該緩衝配方用以穩定該尿素酶活性抑制劑的活性。

Description

多重pH緩衝配方與尿素酶活性抑制劑之組合物及其用途
本發明有關一種在人類或動物或土壤中抑制尿素酶活性的組合物。更詳細而言，本發明關於一種於跨酸鹼範圍內抑制尿素酶活性的組合物及其用途。
尿素酶具高度同源性且能將尿素迅速水解為二氧化碳和氨.它常見於人和動物胃腸道的細菌感染，是人類和動物中某些致病菌的致病因子之一。
尿素酶可分成細胞質的尿素酶(cytoplasmic urease)以及細胞表面尿素酶(surface urease)兩大類，同時具兩種尿素酶的病原菌具較強的抗酸性，而僅具細胞質的尿素酶的病原菌則抗酸性較弱(Helicobacter pylori：Physiology and Genetics(2001))。
幽門螺旋桿菌寄生在人體消化道內，通常存在於胃黏膜上皮，亦可在口腔內繁殖。幽門螺旋桿菌所產生之尿素酶可迅速酶解尿素產生鹼性的氨，所以幽門螺旋桿菌在胃內較不易受胃酸侵襲。
尿素是主要的氮肥，氮素含量約46%。當尿肥施用於土壤時，尿素酶促使尿素快速酶解，生成易於揮發流失的氨氣，氨氣也是環境汙染源之一。
鑑於尿素酶所造成的上述問題，本案申請人發展出一種在人類或動物或土壤中抑制尿素酶活性的非藥物抑制劑劑且對環境友善，能彌補現行產品之不足，以下為本案之簡要說明。
本發明之主要目的係在提供一種在人類或動物的腸胃道或土壤中抑制尿素酶活性的組合物。為了不影響腸胃道的正常生理機能，本發明提供一種多重pH緩衝配方組合，其在消化道之不同pH環境下皆能以最適化表現運作來抑制尿素酶活性。
本發明的多重pH緩衝配方組合配合腸胃道的不同pH值環境，在跨酸鹼環境(pH 5~8)下均可抑制尿素酶活性且在pH 6.8~7.3具顯著尿素酶活性抑制效果。為了達到上述效果，本發明之多重pH緩衝配方組合包括至少一酸成分、至少一鹼成分以及尿素酶活性抑制劑，其中該至少一酸成分為有機酸、磷酸或其組合，該至少一鹼成分為有機鹼、磷酸鹼或其組合，該尿素酶活性抑制劑為抗壞血酸、其鹽類或其組合。該酸成分與該鹼成分形成一緩衝配方，使該尿素酶活性抑制劑在該緩衝配方中呈現穩定之高活性。
本發明提出一種抑制尿素酶之活性之組合物，包括：至少一酸成分、至少一鹼成分以及尿素酶活性抑制劑，其中該至少一酸成分為一有機酸、一磷酸及其組合其中之一，該至少一鹼成分為一有機鹼、一磷酸鹼及其組合其中之一、該至少一酸成分與該至少一鹼成分具一共軛關係、且該至少一酸成分及該至少一鹼成分形成一緩衝配方，該尿素酶活性抑制劑為一抗壞血酸、其鹽類及其組合其中之一，其中該緩衝配方用以穩定該 尿素酶抑制劑的活性。
本發明的上述目的及優點在參閱以下詳細說明及附隨圖式之後對那些所屬技術領域中具有通常知識者將變得更立即地顯而易見。
第一圖為一柱狀圖，其中顯示在磷酸鹽緩衝溶液中對照組(含有尿素酶)及含有不同濃度抗壞血酸(120ppm、240ppm及480ppm)的實驗組在pH 5、6、6.8、7.0、7.3及8環境下測得的尿素水解抑制率。
第二圖為一柱狀圖，其中顯示在檸檬酸鹽緩衝溶液中對照組(含有尿素酶)及含有不同濃度抗壞血酸(120ppm、240ppm及480ppm)的實驗組在pH 6.8、7.0、及7.3環境下測得的的尿素水解抑制率。
本發明中提供的緩衝配方組合包括至少一酸成分、至少一鹼成分及一尿素酶活性抑制劑。由於本發明之緩衝配方組合可添加於人類或動物的營養補充品或動物飼料，亦可添加於土壤或尿肥中來減少氨氣排放，亦有助減少尿肥被尿素酶迅速酶解而造成之尿肥損耗。因此所使用成分必須對生物體無毒且對環境友善。本發明所指之酸成分為有機酸，鹼成分為有機鹼，尿素酶活性抑制劑為抗壞血酸、其鹽類或其組合。此外，磷酸及磷酸鹽是被廣泛應用的食物添加劑，因此也在本發明酸成分及鹼成分的涵蓋範圍內。
酸成分與鹼成分具有一共軛關係，例如一有機酸與其共軛鹼、或者一有機鹼與其共軛酸，兩者配製成一緩衝配方。緩衝配方的pH值係由酸成分的解離常數(pKa)和酸成分與鹼成分的比例來決定。一般來說， pH值約在pKa值±1的範圍內。常用有機酸、磷酸及抗壞血酸的pKa值如表一所示(參見Lab Manual for Zumdahl/Zumdahl’s Chemistry第6版)。在這些酸成分中，磷酸較高之pKa值有利在鹼性環境的效能發揮，因此是本發明緩衝配方中酸成分的最佳選擇。
選擇合適的酸成分與鹼成分搭配所形成的緩衝配方可具有多重pH值，因此可適應腸胃道環境的改變，確保其中的尿素酶活性抑制劑能在腸胃道中發揮作用。
本發明中使用的酸成分包括甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、蘋果酸、延胡索酸、乳酸、檸檬酸及磷酸。在較佳實施例中，酸成分為磷酸或檸檬酸。本發明中使用的鹼成分為有機鹼或磷酸鹼，較佳地，有機鹼或磷 酸鹼係指鹼金屬鹽或鹼土金屬鹽。在較佳實施例中，磷酸鹼為磷酸氫二鉀及磷酸氫二鈉其中之一，有機鹼為為檸檬酸鈉及檸檬酸鉀其中之一。
本發明之緩衝配方亦可包括多種有機酸與其共軛鹼、或者多種有機鹼與其共軛酸。有機酸亦可與磷酸搭配作為本發明緩衝配方中的酸成分，有機鹼亦可與磷酸鹼搭配作為本發明緩衝配方中的鹼成分。只要能調配出適合腸胃道pH值環境的緩衝配方，皆在本發明涵蓋的範圍內。
本發明中使用的尿素酶活性抑制劑為抗壞血酸、其鹽類或其組合，較佳地，抗壞血酸的鹽類為其鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽及其組合其中之一。
抗壞血酸(左旋抗壞血酸)也可稱為維他命C，是一種溶於水且易被吸收的化合物。由於抗壞血酸單獨存在水溶液中時，在pH大於4的環境下容易降解，本發明的緩衝配方可使抗壞血酸、其鹽類或其組合在pH大於4的環境下仍能維持活性，因而能達到在人類或動物的腸胃道之跨酸鹼環境或土壤中抑制尿素酶活性之目的。
另一方面，本發明的組合物可作為一種抑制尿素酶活性之組合物，例如添加於配方奶粉、動物飼料或肥料等營養補充品之添加物，或可直接製成飲品，在pH 5~8的環境下抑制尿素酶活性，更佳地是在pH 6.8~7.3的環境下抑制尿素酶活性。
根據本發明之構想，在上述組合物中包含至少一酸成分、至少一鹼成分及尿素酶活性抑制劑，其中至少一酸成分與至少一鹼成分形成一緩衝配方，該緩衝配方使尿素酶活性抑制劑在跨酸鹼環境下維持高活性。在一實施例中，該尿素酶活性抑制劑分佈於該緩衝配方中。在另一實 施例中，該緩衝配方與該尿素酶活性抑制劑均勻混合。
在本發明中，該尿素酶活性抑制劑為抗壞血酸、其鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽或其組合。在一較佳實施例中，該尿素酶活性抑制劑為抗壞血酸，尤其是左旋抗壞血酸，較佳地，抗壞血酸的濃度介於120ppm至480ppm之間，更佳地為480ppm。當然，只要符合人體每日攝取量的規範(每日最高約2g)，本發明的抗壞血酸可以有較高的濃度。
根據本發明之構想，上述組合物的劑型包括粉末、顆粒、錠劑、微米顆粒、液體、膠囊及噴劑。上述劑型也可設計為緩釋劑型，如緩釋錠劑、緩釋微米顆粒或緩釋膠囊，亦可以製成人類或動物之飲品、或添加於人或動物之飲水中、或製成土壤肥料之噴劑。
以下為本發明的實施例
(一)實驗方法
1.尿素酶活性抑制實驗(磷酸鹽緩衝溶液，pH 5.0)
1.1對照組
取20μL緩衝溶液及25μL 50ppm尿素酶(U7752，Sigma-Aldrich)置於96孔盤，經37℃反應5分鐘後，加入40μL 20mM尿素溶液。經37℃反應10分鐘後，於每孔加入55μL伯特洛(Berthelot)試劑A(稱取5g苯酚、25mg亞硝基氰化鈉，以純水定容至500mL)及60μL Berthelot試劑B(稱取2.5g氫氧化鈉、4.2mL次氯酸鈉，以純水定容至500mL)，在37℃避光靜置30分鐘後，以連續式酵素免疫分析儀(ELISA)在波長625nm下測定吸光值。每樣品至少三重複。
1.2 抗壞血酸樣品組
取10μL緩衝溶液、10μL抗壞血酸溶液及25μL 50ppm尿素酶置於96 孔盤，經37℃反應5分鐘後，加入40μL 20mM尿素溶液，使抗壞血酸最終濃度分別為120ppm、240ppm及480ppm。經37℃反應10分鐘後，於每孔加入55μL Berthelot試劑A及60μL Berthelot試劑B，在37℃避光靜置30分鐘後，以連續式酵素免疫分析儀(ELISA)在波長625nm下測定吸光值。每樣品至少三重複。尿素酶活性抑制率(Inhibitory%)=100-((樣品組吸光值/對照組吸光值)×100)。
2.尿素酶活性抑制實驗(磷酸鹽緩衝溶液，pH 6.0)
2.1對照組
取20μL緩衝溶液及25μL 50ppm尿素酶置於96孔盤，經37℃反應5分鐘後，加入40μL 20mM尿素溶液。經37℃反應10分鐘後，於每孔加入55μL Berthelot試劑A及60μL Berthelot試劑B，在37℃避光靜置30分鐘後，以連續式酵素免疫分析儀(ELISA)在波長625nm下測定吸光值。每樣品至少三重複。
2.2 抗壞血酸樣品組
取10μL緩衝溶液、10μL抗壞血酸溶液及25μL 50ppm尿素酶置於96孔盤，經37℃反應5分鐘後，加入40μL 20mM尿素溶液，使抗壞血酸最終濃度分別為120ppm、240ppm及480ppm。經37℃反應10分鐘後，於每孔加入55μL Berthelot試劑A及60μL Berthelot試劑B，在37℃避光靜置30分鐘後，以連續式酵素免疫分析儀(ELISA)在波長625nm下測定吸光值。每樣品至少三重複。尿素酶活性抑制率(Inhibitory%)=100-((樣品組吸光值/對照組吸光值)×100)。
3.尿素酶活性抑制實驗(磷酸鹽緩衝溶液，pH 6.8)
3.1對照組
取20μL緩衝溶液及25μL 50ppm尿素酶置於96孔盤，經37℃反應5分 鐘後，加入40μL 20mM尿素溶液。經37℃反應10分鐘後，於每孔加入55μL Berthelot試劑A及60μL Berthelot試劑B，在37℃避光靜置30分鐘後，以連續式酵素免疫分析儀(ELISA)在波長625nm下測定吸光值。每樣品至少三重複。
3.2 抗壞血酸樣品組
取10μL緩衝溶液、10μL抗壞血酸溶液及25μL 50ppm尿素酶置於96孔盤，經37℃反應5分鐘後，加入40μL 20mM尿素溶液，使抗壞血酸最終濃度分別為120ppm、240ppm及480ppm。經37℃反應10分鐘後，於每孔加入55μL Berthelot試劑A及60μL Berthelot試劑B，在37℃避光靜置30分鐘後，以連續式酵素免疫分析儀(ELISA)在波長625nm下測定吸光值。每樣品至少三重複。尿素酶活性抑制率(Inhibitory%)=100-((樣品組吸光值/對照組吸光值)×100)。
4.尿素酶活性抑制實驗(磷酸鹽緩衝溶液，pH 7.0)
4.1對照組
取20μL緩衝溶液及25μL 50ppm尿素酶置於96孔盤，經37℃反應5分鐘後，加入40μL 20mM尿素溶液。經37℃反應10分鐘後，於每孔加入55μL Berthelot試劑A及60μL Berthelot試劑B，在37℃避光靜置30分鐘後，以連續式酵素免疫分析儀(ELISA)在波長625nm下測定吸光值。每樣品至少三重複。
4.2 抗壞血酸樣品組
取10μL緩衝溶液、10μL抗壞血酸溶液及25μL 50ppm尿素酶置於96孔盤，經37℃反應5分鐘後，加入40μL 20mM尿素溶液，使抗壞血酸最終濃度分別為120ppm、240ppm及480ppm。經37℃反應10分鐘後，於每孔加入55μL Berthelot試劑A及60μL Berthelot試劑B，在37℃避光靜置30分鐘後， 以連續式酵素免疫分析儀(ELISA)在波長625nm下測定吸光值。每樣品至少三重複。尿素酶活性抑制率(Inhibitory%)=100-((樣品組吸光值/對照組吸光值)×100)。
5.尿素酶活性抑制實驗(磷酸鹽緩衝溶液，pH 7.3)
5.1對照組
取20μL緩衝溶液及25μL 50ppm尿素酶置於96孔盤，經37℃反應5分鐘後，加入40μL 20mM尿素溶液。經37℃反應10分鐘後，於每孔加入55μL Berthelot試劑A及60μL Berthelot試劑B，在37℃避光靜置30分鐘後，以連續式酵素免疫分析儀(ELISA)在波長625nm下測定吸光值。每樣品至少三重複。
5.2 抗壞血酸樣品組
取10μL緩衝溶液、10μL抗壞血酸溶液及25μL 50ppm尿素酶置於96孔盤，經37℃反應5分鐘後，加入40μL 20mM尿素溶液，使抗壞血酸最終濃度分別為120ppm、240ppm及480ppm。經37℃反應10分鐘後，於每孔加入55μL Berthelot試劑A及60μL Berthelot試劑B，在37℃避光靜置30分鐘後，以連續式酵素免疫分析儀(ELISA)在波長625nm下測定吸光值。每樣品至少三重複。尿素酶活性抑制率(Inhibitory%)=100-((樣品組吸光值/對照組吸光值)×100)。
6.尿素酶活性抑制實驗(磷酸鹽緩衝溶液，pH 8.0)
6.1對照組
取20μL緩衝溶液及25μL 50ppm尿素酶置於96孔盤，經37℃反應5分鐘後，加入40μL 20mM尿素溶液。經37℃反應10分鐘後，於每孔加入55μL Berthelot試劑A及60μL Berthelot試劑B，在37℃避光靜置30分鐘後，以連續式酵素免疫分析儀(ELISA)在波長625nm下測定吸光值。每樣品至少三重 複。
6.2 抗壞血酸樣品組
取10μL緩衝溶液、10μL抗壞血酸溶液及25μL 50ppm尿素酶置於96孔盤，經37℃反應5分鐘後，加入40μL 20mM尿素溶液，使抗壞血酸最終濃度分別為120ppm、240ppm及480ppm。經37℃反應10分鐘後，於每孔加入55μL Berthelot試劑A及60μL Berthelot試劑B，在37℃避光靜置30分鐘後，以連續式酵素免疫分析儀(ELISA)在波長625nm下測定吸光值。每樣品至少三重複。尿素酶活性抑制率(Inhibitory%)=100-((樣品組吸光值/對照組吸光值)×100)。
7.尿素酶活性抑制實驗(檸檬酸鹽緩衝溶液，pH 6.8)
7.1對照組
取20μL緩衝溶液及25μL 50ppm尿素酶置於96孔盤，經37℃反應5分鐘後，加入40μL 20mM尿素溶液。經37℃反應10分鐘後，於每孔加入55μL Berthelot試劑A及60μL Berthelot試劑B，在37℃避光靜置30分鐘後，以連續式酵素免疫分析儀(ELISA)在波長625nm下測定吸光值。每樣品至少三重複。
7.2 抗壞血酸樣品組
取10μL緩衝溶液、10μL抗壞血酸溶液及25μL 50ppm尿素酶置於96孔盤，經37℃反應5分鐘後，加入40μL 20mM尿素溶液，使抗壞血酸最終濃度分別為120ppm、240ppm及480ppm。經37℃反應10分鐘後，於每孔加入55μL Berthelot試劑A及60μL Berthelot試劑B，在37℃避光靜置30分鐘後，以連續式酵素免疫分析儀(ELISA)在波長625nm下測定吸光值。每樣品至少三重複。尿素酶活性抑制率(Inhibitory%)=100-((樣品組吸光值/對照組吸光值)×100)。
8.尿素酶活性抑制實驗(檸檬酸鹽緩衝溶液，pH 7.0)
8.1對照組
取20μL緩衝溶液及25μL 50ppm尿素酶置於96孔盤，經37℃反應5分鐘後，加入40μL 20mM尿素溶液。經37℃反應10分鐘後，於每孔加入55μL Berthelot試劑A及60μL Berthelot試劑B，在37℃避光靜置30分鐘後，以連續式酵素免疫分析儀(ELISA)在波長625nm下測定吸光值。每樣品至少三重複。
8.2 抗壞血酸樣品組
取10μL緩衝溶液、10μL抗壞血酸溶液及25μL 50ppm尿素酶置於96孔盤，經37℃反應5分鐘後，加入40μL 20mM尿素溶液，使抗壞血酸最終濃度分別為120ppm、240ppm及480ppm。經37℃反應10分鐘後，於每孔加入55μL Berthelot試劑A及60μL Berthelot試劑B，在37℃避光靜置30分鐘後，以連續式酵素免疫分析儀(ELISA)在波長625nm下測定吸光值。每樣品至少三重複。尿素酶活性抑制率(Inhibitory%)=100-((樣品組吸光值/對照組吸光值)×100)。
9.尿素酶活性抑制實驗(檸檬酸鹽緩衝溶液，pH 7.3)
9.1對照組
取20μL緩衝溶液及25μL 50ppm尿素酶置於96孔盤，經37℃反應5分鐘後，加入40μL 20mM尿素溶液。經37℃反應10分鐘後，於每孔加入55μL Berthelot試劑A及60μL Berthelot試劑B，在37℃避光靜置30分鐘後，以連續式酵素免疫分析儀(ELISA)在波長625nm下測定吸光值。每樣品至少三重複。
9.2 抗壞血酸樣品組
取10μL緩衝溶液、10μL抗壞血酸溶液及25μL 50ppm尿素酶置於96 孔盤，經37℃反應5分鐘後，加入40μL 20mM尿素溶液，使抗壞血酸最終濃度分別為120ppm、240ppm及480ppm。經37℃反應10分鐘後，於每孔加入55μL Berthelot試劑A及60μL Berthelot試劑B，在37℃避光靜置30分鐘後，以連續式酵素免疫分析儀(ELISA)在波長625nm下測定吸光值。每樣品至少三重複。尿素酶活性抑制率(Inhibitory%)=100-((樣品組吸光值/對照組吸光值)×100)。
(二)實驗結果
1.實驗例一
在本實施例中，利用磷酸及磷酸鹽形成磷酸鹽緩衝溶液(PBS)，搭配不同濃度之抗壞血酸(120ppm、240ppm及480ppm)，在不同pH環境下測量各組別對尿素酶活性的抑制率。
請參閱表二和圖一，其中顯示對照組(含有尿素酶)及含有不同濃度抗壞血酸(120ppm、240ppm及480ppm)的實驗組的尿素水解抑制率。由表二結果可觀察到，尿素水解抑制率與抗壞血酸濃度呈現正相關，以50%抑制率為比較指標，含有480ppm抗壞血酸的組別在pH 6.0-8.0之抑制率>50%，且在pH 6.8-7.3之抑制率>93%，顯示，含有480ppm抗壞血酸的組別相較於對照組有顯著的抑制效果。
2.實驗例二
在本實施例中，利用檸檬酸及檸檬酸鹽形成檸檬酸鹽緩衝溶液(CBS)，搭配不同濃度之抗壞血酸(120ppm、240ppm及480ppm)，在不同pH環境下測量各組別對尿素酶活性的抑制率。
請參閱表三和圖二，其中顯示對照組(含有尿素酶)及含有不同濃度抗壞血酸(120ppm、240ppm及480ppm)的實驗組的尿素水解抑制率。由表三和圖二結果可觀察到，尿素水解抑制率與抗壞血酸濃度呈現正相關，以50%抑制率為比較指標，含有480ppm抗壞血酸的組別在pH 6.8-7.3之抑制率>50%，且在pH 6.8-7.0之抑制率>90%，顯示含有480ppm抗壞血酸的組別相較於對照組有顯著的抑制效果。
比對各pH環境的光密度值(OD)，光密度值越高代表所測得的氨濃度越高。在pH 5~8環境下，以對照組之光密度值作為比較指標，觀察到抗壞血酸在pH 5~8環境下對尿素酶水解作用具有抑制效果，特別是在pH 6.8~7.3環境下對尿素酶水解作用的抑制率達90%以上。
由於本發明的組合物中不含藥物成分，較無抗藥性和食安之疑慮。本發明之組合物作為人類或動物的營養補充品之添加劑時，具可抑制尿素酶活性之效能。
本發明實屬難能的創新發明，深具產業應用價值，援依法提出申請。此外，本發明可以由所屬技術領域中具有通常知識者做任何修改， 但不脫離如所附申請專利範圍所要保護的範圍。

Claims (15)

  1. 一種組合物之用途，其係用於在人類或動物體內或土壤中抑制尿素酶活性，其中該組合物包括：至少一酸成分，其中該至少一酸成分係一有機酸、一磷酸及其組合其中之一；至少一鹼成分，其中該至少一鹼成分係一有機鹼、一磷酸鹼及其組合其中之一、該至少一酸成分及該至少一鹼成分具一共軛關係、且該至少一酸成分及該至少一鹼成分形成一緩衝配方；以及一尿素酶活性抑制劑，為一抗壞血酸、其鹽類及其組合其中之一，其中該緩衝配方用以穩定該尿素酶活性抑制劑的一活性。
  2. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該緩衝配方的酸鹼值介於pH 5~8。
  3. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該緩衝配方用以提高該抗壞血酸在pH大於4之環境下的穩定性。
  4. 一種抑制尿素酶之一活性之組合物，包括：至少一酸成分，其中該至少一酸成分係一有機酸、一磷酸及其組合其中之一；至少一鹼成分，其中該至少一鹼成分係一有機鹼、一磷酸鹼及其組合其中之一、該至少一酸成分及該至少一鹼成分具一共軛關係、且該至少一酸成分及該至少一鹼成分形成一緩衝配方；以及一尿素酶活性抑制劑，為一抗壞血酸、其鹽類及其組合其中之一，其中該緩衝配方用以穩定該尿素酶活性抑制劑的活性。
  5. 如申請專利範圍第4項所述之組合物，其中該組合物用以添加於一營養補充品或一飲品中，且該營養補充品為一配方奶粉及一動物飼料其中之 一。
  6. 如申請專利範圍第4項所述之組合物，其中該有機酸選自由甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、蘋果酸、延胡索酸、乳酸及檸檬酸所組成的群組其中之一，且該有機鹼及該磷酸鹼為一鹼金屬鹽及一鹼土金屬鹽其中之一。
  7. 如申請專利範圍第6項所述之組合物，其中該至少一酸成分為磷酸及檸檬酸其中之一，該磷酸鹼為磷酸氫二鉀及磷酸氫二鈉其中之一，且該有機鹼為為檸檬酸鈉及檸檬酸鉀其中之一。
  8. 如申請專利範圍第4項所述之組合物，其中該緩衝配方與該尿素酶活性抑制劑均勻混合。
  9. 如申請專利範圍第4項所述之組合物，其中該緩衝配方的酸鹼值介於pH 5~8。
  10. 如申請專利範圍第4項所述之組合物，其中該抗壞血酸的濃度介於120ppm至480ppm之間。
  11. 如申請專利範圍第4項所述之組合物，其中該抗壞血酸之鹽類為一鈉鹽、一鉀鹽、一鈣鹽、一鎂鹽及其組合其中之一。
  12. 如申請專利範圍第4項所述之組合物，其中該組合物用以在pH 5~8的環境下抑制尿素酶活性。
  13. 如申請專利範圍第12項所述之組合物，其中該組合物用以在pH 6.8~7.3的環境下抑制尿素酶活性。
  14. 如申請專利範圍第4項所述之組合物，其中該組合物的劑型選自由粉末、顆粒、錠劑、微米顆粒、液體、膠囊及噴劑所組成的群組其中之一。
  15. 如申請專利範圍第4項所述之組合物，其中該抗壞血酸為一左旋抗壞血酸。
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