TW201840585A - 用於白斑病的治療的抗人cxcr3抗體 - Google Patents
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Abstract
提供了抗CXCR3抗體治療CXCR3-相關病症如白斑病的方法和用途。在一些實施方案中，抗CXCR3抗體是人類化的抗人CXCR3抗體，其針對在其表面表現CXCR3的細胞具有增強的效應功能。
Description
本發明涉及抗體和使用抗體治療與CXCR3信號傳導相關的病症如白斑病的方法。
白斑病是一種損害容貌的自體免疫性皮膚病，其中自體反應性CD8+ T細胞殺死表皮中的黑素細胞，導致斑片狀脫色。雖然它是世界上最常見的自體免疫疾病之一，影響全球人口的1%，但目前還沒有FDA批准的白斑病治療方法。
C-X-C基序趨化因子受體3(CXCR3)主要表現於經歷抗原(記憶)、效應和活化的T細胞上並響應於其主要配體CXCL9(MIG)、CXCL10(IP-10)和CXCL11(I-TAC)而參與這些T細胞亞組向組織炎症位點的募集。CXCR3和CXCL10表現在人T1D患者中(Uno等，Endocr J 57：991-96(2010)；Roep等，Clin Exp Immunol 159：338-43(2003)；Tanaka等，Diabetes 58：2285-2291(2009))。在這些患者中，CXCL10在胰島中剩餘的產生胰島素的β細胞中表現。CXCR3在胰島周圍的侵入性T細胞上表現。類似的表現模式已經在非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠(1型糖尿病小鼠模型)中重現(Morimoto等，J Immunol 173：7017-24(2004)；Li等，World J Gastroenterol 11(30)：4750-2(2005)；Sarkar等，Diabetes 61(2)：436-46(2012))。
CXCR3由皮膚CD3+淋巴細胞和漿細胞樣樹突狀細胞表現，且其趨化因子配體CXCL10和CXCL9在銀屑病病變中上調(Rottman等，Lab Invest 81(3)：335-47(2001)；Chen等，Arch Dermatol Res 302(2)：113-23(2010))。CXCR3也表現於某些類型的炎症組織中存在的浸潤性T細胞中，而CXCL9、CXCL10和CXCL11常常由炎性病症中的局部細胞產生。
CXCR3上調涉及一系列自體免疫病症。很大程度上不存在初始T細胞時，CXCR3表現在以抗原啟動時上調。響應於其主要配體，CXCR3將這些細胞(包括T輔助1(Th1)細胞)募集到組織炎症位點。朗格漢斯胰島中的β細胞表現CXCL9和CXCL10(Frigerio等，Nat Med 8：1414-20(2002))，且浸潤胰腺的T細胞表現CXCR3(Christen等，J Immunol 171：6838-45(2003)；Van Halteren等，Diabetologia 48：75-82(2005)；Uno等，Endocr J 57：991-96(2010)；Roep等，Clin Exp Immunol 159：338-43(2003)；Tanaka等，Diabetes 58：2285-2291(2009)；Sarkar等，Diabetes 61(2)：436-46(2012))。授予Youd等的美國專利號8,865,870描述了抗CXCR3抗體。
鑒於白斑病和CXCR3所涉及的其他病症的普遍性，需要另外的靶向CXCR3信號傳導的方法，例如以治療或減少患者中病症如白斑病的進展。
本文提供通過投與特異性结合CXCR3的人類化抗體或其抗原结合片段治療CXCR3-相關疾病和病症如白斑病的方法。在一些實施方案中，提供的用於本文該方法和用途的抗CXCR3抗體具有指導CXCR3表現細胞的耗竭的能力，或可經工程化而具有增強的指導CXCR3表現細胞耗竭的能力以治療CXCR3-相關疾病和病症如白斑病。
在一些實施方案中，當比較除VH的D區殘基外的VH和VL鏈的全部殘基時，提供的用於本文該人類化抗體或其抗原结合片段具有至少0.885或至少0.950(當僅比較如通過IMTG確定的框架區的殘基時)的種系評分(germinality score)。在一些實施方案中，本文提供的人類化抗體或其抗原结合片段具有至少1 x 10-9M的KD。在一些實施方案中，本文提供的人類化抗體或其抗原结合片段具有少於7 x 10-5l/Ms的kd。在一些實施方案中，本文提供的人類化抗體或其抗原结合片段具有至少0.885(當比較除VH的D區殘基外的VH和VL鏈的全部殘基時)或至少0.950(當僅比較如通過IMTG確定的框架區的殘基時)的種系評分和至少1 x 10-9M的KD，和至少0.885(當比較除VH的D區殘基外的VH和VL鏈的全部殘基時)或至少0.950(當僅比較如通過IMTG確定的框架區的殘基時)的種系評分。在一些實施方案中，本文提供的人類化抗體或其抗原结合片段當比較除VH的D區殘基外的VH和VL鏈的全部殘基時具有至少0.885或至少0.950(當僅比較如通過IMTG確定的框架區的殘基時)的種系評分和至少1 x 10-9M的KD，和至少0.885(當比較除VH的D區殘基外的VH和VL鏈的全部殘基時)或至少0.950(當僅比較如通過IMTG確定的框架區的殘基時)的種系評分，至少1 x 10-9M的KD和少於7 x 10-5l/Ms的kd。
在一些實施方案中，提供包含與特定重鏈可變區配對的特定輕鏈可變區的人類化CXCR3抗體。在一些實施方案中，本文提供的人類化的CXCR3抗體包含賦予針對在其表面表現人CXCR3的細胞的增強的效應功能的變體人IgG1 Fc區。
在第一態樣，本文提供人類化的抗人CXCR3抗體或其醫藥组合物，其用於耗竭受試者中CXCR3表現細胞的方法中使用，其中該人類化的抗人CXCR3抗體包含具有重鏈可變區(VH)的重鏈(HC)和具有輕鏈可變區(VL)的輕鏈(LC)。在一些實施方案中，耗竭CD4+ T細胞。在一些實施方案中，耗竭CD8+ T細胞。在一些實施方案中，耗竭CD4+和CD8+ T細胞。在一些實施方案中，耗竭CD4+記憶T細胞。在一些實施方案中，耗竭CD8+記憶T細胞。在一些實施方案中，耗竭CD4+記憶T細胞和CD8+記憶T細胞。在一個實施方案中，受試者具有T細胞介導的自體免疫病症。在另一個實施方案中，受試者具有白斑病。
在第一態樣的一個實施方案中，本文提供的人類化的抗人CXCR3抗體的VH和VL包含表1中所示的序列對的胺基酸序列且HC进一步包含含有SEQ ID NO：2、3、4、5、6、7、8、9、10或11任一項的胺基酸序列的人IgG1 Fc區。
在第一態樣的另一個實施方案中，本文提供的人類化的抗人CXCR3抗體的VH包含SEQ ID NO：20的胺基酸序列且VL包含SEQ ID NO：24的胺基酸序列。在一些實施方案中，人類化的人IgG1 Fc區包含SEQ ID NO：2、或SEQ ID NO：9、或SEQ ID NO：10、或SEQ ID NO：11的胺基酸序列。
在第一態樣的另一個實施方案中，本文提供的人類化的抗人CXCR3抗體的VH包含SEQ ID NO：18的胺基酸序列且VL包含SEQ ID NO：22的胺基酸序列。在一些實施方案中，該抗體包含人IgG1 Fc區。在一些實施方案中，人IgG1 Fc區包含SEQ ID NO：2、或SEQ ID NO：9、或SEQ ID NO：10、或SEQ ID NO：11的胺基酸序列。
在第一態樣的其他實施方案中，本文提供的人類化的抗人CXCR3抗體的HC和LC包含表2中所示的SEQ ID NO對的胺基酸序列。
在第一態樣的另一個實施方案中，本文提供的人類化的抗人CXCR3抗體的HC包含具有減少的岩藻糖含量的人IgG1 Fc區。在一些實施方案中，提供的人類化的抗人CXCR3抗體在包含糖基化抑制劑的介質中培養的宿主細胞中產生。在一個實施方案中，糖基化抑制劑是几夫碱(kifunensine)。
在第二態樣，本文提供人類化的抗人CXCR3抗體或其醫藥组合物，其用於在治療T細胞介導的自體免疫性疾病的方法中使用，其中該人類化的抗人CXCR3抗體包含具有重鏈可變區(VH)的重鏈(HC)和具有輕鏈可變區(VL)的輕鏈(LC)。在一個實施方案中，T細胞介導的疾病是白斑病。
在第三態樣，本文提供治療T細胞介導的自體免疫性疾病的方法，其包括 對有需要的受試者投與人類化的抗人CXCR3抗體，該人類化的抗人CXCR3抗體包含具有重鏈可變區(VH)的重鏈(HC)和具有輕鏈可變區(VL)的輕鏈(LC)。在一些實施方案中，T細胞介導的自體免疫性疾病是白斑病。
在第四態樣，本文提供治療T細胞介導的自體免疫性疾病的方法，其包括提供對有需要的受試者投與人類化的抗人CXCR3抗體的說明，該人類化的抗人CXCR3抗體包含具有重鏈可變區(VH)的重鏈(HC)和具有輕鏈可變區(VL)的輕鏈(LC)。在一些實施方案中，T細胞介導的自體免疫性疾病是白斑病。
在第五態樣，本文提供用於治療T細胞介導的自體免疫性疾病的套组，其包含人類化的抗人CXCR3抗體和對有需要的受試者投與人類化的抗人CXCR3的說明，該人類化的抗人CXCR3抗體包含具有重鏈可變區(VH)的重鏈(HC)和具有輕鏈可變區(VL)的輕鏈(LC)。
在本文提供的第一、第二、第三、第四和第五態樣的一些實施方案中，人類化的抗人CXCR3抗體的VH和VL包含表1中所示的序列對的胺基酸序列且HC包含含有SEQ ID NO：2、3、4、5、6、7、8、9、10或11的胺基酸序列的人IgG1 Fc區。在另一個實施方案中，VH包含SEQ ID NO：20的胺基酸序列且VL包含SEQ ID NO：24的胺基酸序列。在另一個實施方案中，VH包含SEQ ID NO：20的胺基酸序列且VL包含SEQ ID NO：24的胺基酸序列且人IgG1 Fc區包含SEQ ID NO：2、或SEQ ID NO：9、或SEQ ID NO：10、或SEQ ID NO：11的胺基酸序列。
在本文提供的第二、第三、第四、第五、第六和第七態樣的其他實施方案中，VH包含SEQ ID NO：18的胺基酸序列且VL包含SEQ ID NO：22的胺基酸序列。在一些實施方案中，人類化的人IgG1 Fc區包含SEQ ID NO：2、或SEQ ID NO：9、或SEQ ID NO：10、或SEQ ID NO：11的胺基酸序列。
在本文提供的第一、第二、第三、第四和第五態樣的其他實施方案中，抗體的HC和LC包含表2中所示的序列對的胺基酸序列。
在本文提供的第一、第二、第三、第四和第五態樣的其他實施方案中，本 文提供的人類化的抗人CXCR3抗體的HC包含具有減少的岩藻糖含量的人IgG1 Fc區。在一些實施方案中，提供的人類化的抗人CXCR3抗體在包含糖基化抑制劑的介質中培養的宿主細胞中產生。在一些實施方案中，糖基化抑制劑是几夫碱。
圖1是一系列的六個圖，其顯示如下的抗體處理後血液中多種T細胞亞組的量：“倉鼠CXCR3-173”(倉鼠抗小鼠CXCR3)、“CXCR3 mIgG2a Dab”(倉鼠CXCR3-173，其經工程化以突變取代小鼠IgG2a恆定區以移除效應功能)、“CXCR3 mIgG2a WT”(倉鼠CXCR3-173，其經工程化以取代小鼠野生型IgG2a恆定區)、“CXCR3 mIgG1-agly”(倉鼠CXCR3-173，其經工程化以N297G突變取代小鼠IgG1恆定區)且“未處理”代表未處理的對照。
圖2A是一系列的六個圖，其描繪了通過重組小鼠FcγRI(mFcRI)的CXCR3-173的多種Fc工程化形式的結合，如由表面等離子體共振(Biacore)結合測定法所測量。BMP5，抗BMP5 mIgG1同型對照；mIgG1 agly，CXCR3-173，其經工程化以N297G突變取代小鼠IgG1恆定區；mIgG2a WT，CXCR3-173，其經工程化以取代小鼠野生型IgG2a恆定區；mIgG2a Dab，CXCR3-173，其經工程化以突變取代小鼠IgG2a恆定區來移除效應功能；mIgG3，CXCR3-173，其經工程化以取代小鼠野生型IgG3恆定區；倉鼠CXCR3，親代倉鼠單抗CXCR3-173。
圖2B是一系列的六個圖，其描繪了通過重組小鼠FcγRIIb(mFcRIIb)的CXCR3-173的多種Fc工程化形式的結合，如通過Biacore結合測定法所測量。抗體名稱與圖2A相同。
圖2C是一系列的六個圖，其描繪了通過重組小鼠FcγRIII(mFcRIII)的CXCR3-173的多種Fc工程化形式的結合，如通過Biacore結合測定法所測量。抗體名稱與圖2A相同。
圖2D是一系列的六個圖，其描繪了通過重組小鼠FcγRIV(mFcRIV)的CXCR3-173的多種Fc工程化形式的結合，如通過Biacore結合測定法所測量。抗體名稱與圖2A相同。
圖3A是表，其總結了具有工程化的人IgG1恆定區的抗人CXCR3抗體的結構-效應功能特性。
圖3B是條形圖，其描繪了以所示濃度和5：1的效應比靶標(E：T)比率使用多種抗人CXCR3抗體的CHO-人CXCR3靶細胞的體外抗體依賴性細胞毒性(ADCC)介導的裂解。效應細胞是來自單個捐贈者的自然殺傷(NK)細胞。IgG，人IgG1同型對照。測試的抗人CXCR3單抗是克隆4(CXCR3 CL4)、克隆12(CXCR3 CL12)、克隆82(CXCR3 CL82)、克隆135(CXCR3 CL135)、53Hu37和53Hu37 M1、M2和M3的工程化的Fc變體，如圖3A中該。Kif，幾夫堿處理。ALEM，阿侖單抗。
圖3C是條形圖，其描繪了以所示濃度和3：1的效應比靶細胞(E：T)比率使用多種抗體的CHO-人CXCR3靶細胞的體外ADCC介導的裂解。效應細胞來自NK樣細胞系(NK92-CD16V)。IgG，人IgG1同型對照。測試的抗人CXCR3單抗是53Hu37和工程化Fc變體M1，如圖3A中。CXCR3 CL4，抗人CXCR3單抗克隆4。Kif，幾夫堿處理。ALEM是阿侖單抗。
圖4是表，其總結了53Hu37和所示變體的Biacore數據，顯示了與人FcγRIIa(rhFcγRIIa)、人FcγRIII-F158(rhFcγRIII-F158)、人FcγRIII-V158(rhFcγRIII-V158)和小鼠FcγRIV(rmFcγRIV)結合親和力KD。M1-M3如圖3A中該且kif去岩藻糖化53Hu37。
圖5A是一系列的六個圖，其描繪了用以2mg/kg體重的劑量投與的所示抗體處理的食蟹猴中所示T細胞亞組的體內耗竭。M1：53Hu37的S239D/I332E變體；Kif：去岩藻糖化53Hu37；Veh：媒介對照。對於CXCR3抗體組N=8。對於媒介組N=6。
圖5B是圖，其描繪了組合的藥代動力學數據，其評估了用以2mg/kg體 重的劑量投與的單劑量的所示抗體預先所示量的時間處理的食蟹猴血清中所示抗體的濃度。測試的抗人CXCR3單抗為53Hu37、幾夫堿處理的53Hu37(53Hu37 kif)和53Hu37的M1變體(53Hu37 M1)。
圖6是表，其顯示SEQ ID NO和相應序列。
現在將詳細參考根據本公開的某些示例性實施方案，其中的某些實例在附圖中示出。
本文提供了特異性結合人CXCR3的人類化抗體或其抗原結合片段的方法和用途。在一些實施方案中，本文提供的抗CXCR3抗體具有指導CXCR3表現細胞的耗竭的能力，或經工程化具有指導CXCR3表現細胞耗竭的增強的能力以治療CXCR3-相關疾病和病症。在一些實施方案中，公開了用於靶向CXCR3以治療白斑病的療法。
抗體
如本文使用，術語"抗體"指包含四個多肽鏈(兩條重(H)鏈和兩條輕(L)鏈通過二硫鍵相互連接)的免疫球蛋白分子，以及其多聚物(例如IgM)。每條重鏈包含重鏈可變區(簡稱VH或VH)和重鏈恆定區(CH或CH)。重鏈恆定區包含三個結構域，CH1、CH2和CH3。重鏈的Fc部分包含CH2和CH3。
每條輕鏈包含輕鏈可變區(簡稱VL)和輕鏈恆定區(CL或CL)。輕鏈恆定區包含一個結構域(CL1)。
VH和VL區可進一步細分為高變區，稱為互補決定區(CDR)，其與更保守的稱為框架區(FR)的區穿插。每個VH和VL由三個CDR和四個FR組成，自氨基末端向羧基末端以如下順序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。
如本文使用的術語抗體的"抗原結合片段"包括任何天然存在的、酶法可獲得的、合成或基因工程化的多肽或糖蛋白，其與抗原特異性結合以形成複合 物。抗體的抗原結合片段可使用任何適當的標準技術如蛋白水解消化或重組基因工程技術衍生自例如完整的抗體分子，該技術涉及編碼抗體可變區和任選地恆定區的DNA的操縱和表現。抗原結合部分的非限制性實例包括：(i)Fab片段；(ii)F(ab')2片段；(iii)Fd片段；(iv)Fv片段；(v)單鏈Fv(scFv)分子；(vi)dAb片段；和(vii)包含模擬抗體高變區(例如分離的互補決定區(CDR))的胺基酸殘基的最小識別單元。其他工程化的分子如雙、三、四特異性抗體和微抗體也涵蓋在表述"抗原結合片段"內。
在一些實施方案中，CXCR3抗體或抗原結合片段包含至少一個抗原結合域。在一些實施方案中，抗體或片段是多重特異性的且包含兩個或多個(例如2、3、4、5或更多)個抗原結合域，進而抗體或片段能夠在相同或不同的表位結合兩個或多個CXCR3分子，或能夠以高親和力與CXCR3和至少一個其他抗原結合。抗原結合部分可包含保留與抗原特異性結合的能力的抗體的一個或多個片段。這些片段可包含來自親代抗體的重鏈和/或輕鏈可變區或來自親代抗體的變體。
如本文使用，術語"抗原"指由抗體或其抗原結合片段識別的結合位點或表位。
“表位”或“抗原決定基”是負責與抗體的抗原結合域特異性相互作用的抗原分子的部分。
如本文使用，對於抗體或其抗原結合片段的“結合”指抗體或抗原結合片段通過抗體的抗體結合位點和抗原間的非共價相互作用從而與同族抗原形成一個或多個非共價鍵的能力。抗原可以是分離的抗原或可與另一實體結合存在，如在細胞表面上的多肽的語境中。
如本文使用，術語"特異性結合"指抗體或其抗原結合片段與抗原以至少約1 x 10-6M、1 x 10-7M、1 x 10-8M、1 x 10-9M、1 x 10-10M、1 x 10-11M、1 x 10-12M或更大的Kd結合的能力。在一些實施方案中，術語指抗體或其抗原結合片段與抗原以其對於非特異性抗原的親和力至少兩倍的親和力結合的能力。然而，應該理解的是，抗體或其抗原結合片段能夠特異性地與序列上相關的兩個 或多個抗原(例如人和食蟹猴CXCR3)特異性結合。非特異性結合通常以中至高容量具有低親和力。如果需要，可通過改變結合條件減少非特異性結合而基本上不影響特異性結合。這樣的條件為本領域已知，且使用常規技術本領域的技術人員能夠選擇適當的條件。該條件經常就抗體濃度、溶液的離子強度、溫度、允許結合的時間和封閉分子如血清白蛋白和牛乳酪蛋白的濃度而言限定。
親和常數可通過抗體反應的標準動力學方法例如免疫測定(例如ELISA)或表面等離子體共振(SPR)確定。用於實施檢測和監測結合速率的儀器和方法為已知且是市售可獲得的(例如Biacore 2000,Biacore AB,Upsala,Sweden and GE Healthcare Life Sciences)。
如本文使用，“互補決定區”或“CDR”指抗體或抗原結合片段的每個可變區內的一個或多個部分，其共同形成抗體的抗原結合位點。每個可變區結構域包含稱為CDR1、CDR2和CDR3的三個CDR。因此，可變重鏈結構域(VH)包含CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，且可變輕鏈結構域(VL)包含CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3。三個CDR沿綫性胺基酸序列是非連續的，但在折疊的肽中是接近的。CDR位於接合可變結構域β片層的平行鏈的環內。
如本文使用的術語"框架(FR)胺基酸殘基"指Ig鏈框架區中的那些胺基酸。如本文使用的術語"框架區"或"FR區"包括為可變區的一部分但並非CDR一部分的胺基酸殘基。因此，可變區框架長度為約100-120個胺基酸但僅包括CDR外的那些胺基酸。
如本文使用的術語“%相同”或“百分比相同”意為在兩序列該區的比較中，兩序列在相同位置具有該數目的相同殘基。術語“%相似”或“百分比相似”具有相似的含義，但除兩序列間相同胺基酸的數目外，其還給出胺基酸在何處不同但為保守取代的態樣。百分比同一性可使用已知的計算機演算法如BLASTP、BLASTN和FASTA程式確定(Altschul,SF，等，J Mol Biol 215：403(1990))，使用例如Pearson等，Proc Natl Acad Sci USA 85：2444(1988)中的默認參數。舉例來說，National Center for Biotechnology Information(NCBI)數據庫的BLAST功能 可用於確定同一性。
在一些實施方案中，本文提供的抗體是人類化抗體。“人類化抗體”是結合預期抗原的抗體分子，其具有一個或多個來自非人物種的CDR(例如小鼠抗體)且具有至少一部分來自人免疫球蛋白分子的框架區和/或恆定區。已知的人Ig序列公開於例如ncbi.nlm.nih.gov/entrez-/query.fcgi；atcc.org/phage/hdb.html；sciquest.com；abcam.com；Antibody resource.com/onlinecomp.html；和Kabat等，Sequences of Proteins of Immunological Interest,U.S.Dept.Health(1983)。導入的人序列可用於減少免疫原性或減少、增強或修飾結合、親和力、結合速度、解離速率、親合力、特異性，半衰期或任何其他適當的特徵，如本領域已知。本領域認可的用於抗體人類化的方法描述於Jones等，Nature 321：522(1986)；Verhoeyen等，Science 239：1534(1988)；Sims等，J Immunol 151：2296(1993)；Chothia and Lesk,J Mol Biol 196：901(1987)；Carter等，Proc Natl Acad Sci USA 89：4285(1992)；Presta等，J Immunol 151：2623(1993)；美國專利號5,589,205；5,565,332；6,180,370；6,632,927；7,241,877；7,244,615；7,244,832；7,262,050；和美國專利公開號2004/0236078(2004年4月30日提交)，其在本文通過提述以其整體並入。
在一些實施方案中，本文提供的人類化抗體中的一些框架殘基以來自CDR供體抗體的相應殘基取代，例如以來自小鼠抗人CXCR3抗體的框架殘基取代，進而改變例如改進抗原結合。這些框架取代已通過如下鑑定：CDR和框架殘基的相互作用的建模以鑑定對抗原結合重要的框架殘基和序列比較以鑑定在特定位置的不尋常框架殘基。在一些實施方案中，將4D人類化用於製備本發明的人類化抗體變體。參見WO 2009/032661(其通過提述以其整體並入本文)，例如，對於4D人類化中使用的方法參見段落[0037]-[0044]。簡言之，4D人類化可包括：(a)建立待人類化的可變結構域的3-D模型；(b)使用結構域3-D模型的分子動力學模擬鑑定可變結構域中的柔性殘基；(c)通過將3-D模型的分子動力學軌道與49個人種系的分子動力學軌道進行比較以鑑定最接近的人種 系；和(d)將並非CDR一部分的柔性殘基突變成為其人種系的對應物(如步驟(c)中所鑑定)。
在一些實施方案中，提供了表1中該的包含VH和VL序列的人類化的CXCR3抗體或其抗原結合片段。
在一些實施方案中，提供了表2中該的包含重鏈(HC)和輕鏈(LC)序列的人類化的CXCR3抗體或其抗原結合片段。
抗體效應功能/耗竭活性
在一些實施方案中，本文公開的抗CXCR3抗體具有指導CXCR3表現細胞的耗竭的能力，或可經工程化具有增強的指導CXCR3表現細胞耗竭的能力以治療CXCR3-相關疾病和病症。可通過本文公開的抗體耗竭的CXCR3表現細胞可包括CD4+ T細胞和/或CD8+ T細胞。可通過本文公開的抗體耗竭的CXCR3表現細胞可包括CD4+記憶T細胞和/或CD8+記憶T細胞。如本文使用，對應CXCR3+細胞(即，在其細胞表面表現CXCR3的細胞)的“耗竭”指從細胞群移除這些細胞。對耗竭的指代包括完全或部分耗竭。此外，耗竭可以是永久或臨時的，且可在幅度和/或位置的程度上有所變化。耗竭可以是細胞死亡如細胞雕亡或壞死的結果。可通過在暴露至本文提供的抗體或抗原結合片段之前和之後，在本文提供的抗體或抗原結合片段不存在和存在下，使用任何本領域已知的方法(例如，流式細胞術、免疫組化等)通過測量群體中的CXCR3+細胞的數目來評估耗竭。暴露至本文提供的抗體或抗原結合片段後，CXCR3+細胞可耗竭至少或約10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或更多。
在一些實施方案中，相比具有野生型Fc區的相應的人類化的抗人CXCR3抗體例如野生型人IgG1 Fc，人類化的抗人CXCR3抗體針對在其表面表現人CXCR3的細胞呈現增強的效應功能。如本文使用，“增強的效應功能”指相比在相同的條件下具有相同抗原特異性和野生型人IgG1 Fc區的參照抗體，抗體指導針對適當靶細胞的抗體依賴性細胞毒性(ADCC)、補體介導的細胞毒性 (CDC)或抗體依賴性細胞介導的吞噬作用(ADCP)的任一種或多種的可測量的增加的能力。在一些實施方案中，參照抗體包括變體人Fc區。在一些實施方案中，效應功能是ADCC、ADCP或CDC或其任意組合。在一些實施方案中，效應功能是ADCC，或CDC，或ADCC和CDC二者。在一些實施方案中，效應功能是ADCC。在一些實施方案中，效應功能是CDC。在一些實施方案中，效應功能是ADCC和CDC二者。在一些實施方案中，效應功能是ADCP。
如本文使用，“變體人IgG1 Fc區”指相比野生型人IgG1 Fc已工程化或修飾而包括一種或多種胺基酸突變或胺基酸修飾的人IgG1 Fc區。在一些實施方案中，野生型人IgG1 Fc區包含胺基酸序列 (Eu編號192-446)(SEQ ID NO：2)。
在一些實施方案中，變體人IgG1 Fc區包含至少一種下述胺基酸取代：G236A、S239D、S267E、H268F、S324T、I332E(Eu編號)或其任意組合。在一些實施方案中，變體人IgG1 Fc區包含至少一組下述胺基酸取代：S239D/I332E、G236A/S267E/H268F/S324T/I332E和S239D/H268F/S324T/I332E(Eu編號)。在一些實施方案中，變體人IgG1 Fc區包含胺基酸取代S239D/I332E。在其他實施方案中，變體人IgG1 Fc區包含胺基酸取代G236A/S267E/H268F/S324T/I332E。在其他實施方案中，變體人IgG1 Fc區包含胺基酸取代S239D/H268F/S324T/I332E。
例如，在一些實施方案中，變體人IgG1 Fc區包含SEQ ID NO：3、4、5、6、7或8的胺基酸序列。
在一些實施方案中，變體人IgG1 Fc區包含與SEQ ID NO：3-8的任一項或 多項至少90%相同的序列，前提是在每種情況中，維持了詳明的胺基酸取代。在多個實施方案中，變體人IgG1 Fc區包含與SEQ ID NO：3-8的任一項或多項至少90%相同、至少91%相同、至少92%相同、至少93%相同、至少94%相同、至少95%相同、至少96%相同、至少97%相同、至少98%相同、至少99%相同的序列，前提是在每種情況中，維持了詳明的胺基酸取代。
在一些實施方案中，變體人IgG1 Fc區包含至少一組下述胺基酸取代：S239D/I332E、G236A/S267E/H268F/S324T/I332E和S239D/H268F/S324T/I332E(Eu編號)。例如，在一些實施方案中，變體人IgG1 Fc區包含SEQ ID NO：9、10或11的胺基酸序列。
在一些實施方案中，至少一種胺基酸取代是S239D/I332E(Eu編號)。在其他實施方案中，至少一種胺基酸取代是G236A/S267E/H268F/S324T/I332E(Eu編號)。在一些實施方案中，至少一種胺基酸取代是S239D/H268F/S324T/I332E(Eu編號)。
在一些實施方案中，本文提供的人類化的抗CXCR3抗體的變體人IgG1 Fc區包含與SEQ ID NO：9-11的任一項至少90%相同的序列，前體是在每種情況中，維持了詳明的胺基酸取代和增強的效應功能。在多個實施方案中，變體人IgG1 Fc區包含與SEQ ID NO：9-11的任一項或多項至少90%相同、至少91%相同、至少92%相同、至少93%相同、至少94%相同、至少95%相同、至少96%相同、至少97%相同、至少98%相同、至少99%相同的序列，前體是在每種情況中，維持了詳明的胺基酸取代。
CDR變體：
除上述實施方案，本文提供了包含6個CDR的抗CXCR3抗體，其中VH包含具有下述胺基酸序列的CDR：(i)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：35和SEQ ID NO：14；(ii)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：35和SEQ ID NO：45；(iii)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：36和SEQ ID NO：45； (iv)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：37和SEQ ID NO：14；(v)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：37和SEQ ID NO：45；(vi)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：37和SEQ ID NO：46(vii)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：38和SEQ ID NO：14；(viii)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：38和SEQ ID NO：45；(ix)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：39和SEQ ID NO：14；(x)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：39和SEQ ID NO：47；(xi)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：40和SEQ ID NO：14；(xii)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：45(xiii)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：46；(xiv)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：48；(xv)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：49；(xvi)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：50；(xvii)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：51；(xviii)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：52；(xix)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：53；(xx)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：54；(xxi)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：55；(xxii)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：56；(xxiii)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：57；(xxiv)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：58；(xxv)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：59；(xxvi)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：60；(xxvii)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：61；(xxviii)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：62；(xxix)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：63； (xxx)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：64；(xxxi)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：65；(xxxii)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：66；(xxxiii)SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：14；(xxxiv)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：41和SEQ ID NO：14；(xxxv)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：41和SEQ ID NO：46；(xxxvi)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：42和SEQ ID NO：14；(xxxvii)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：42和SEQ ID NO：45；(xxxviii)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：43和SEQ ID NO：14；(xxxix)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：44和SEQ ID NO：14；(xl)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：41和SEQ ID NO：14；或(xli)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：68；且其中VL包含具有下述胺基酸序列的CDR：(i)SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：17；(ii)SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：17；(iii)SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：17；(iv)SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：75；(v)SEQ ID NO：72、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：17；(vi)SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：17；(vii)SEQ ID NO：74、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：17；(viii)SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：75；(ix)SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：76；(x)SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：77；(xi)SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：78；或(xii)SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：79。
除上述實施方案，本文提供了包含6個CDR的抗CXCR3抗體，其中VH 包含具有下述胺基酸序列的CDR：(i)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：35和SEQ ID NO：14；(ii)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：35和SEQ ID NO：45；(iii)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：36和SEQ ID NO：45；(iv)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：37和SEQ ID NO：14；(v)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：37和SEQ ID NO：45；(vi)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：37和SEQ ID NO：46；(vii)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：38和SEQ ID NO：14；(viii)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：38和SEQ ID NO：45；(ix)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：39和SEQ ID NO：14；(x)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：39和SEQ ID NO：47；或(xi)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：40和SEQ ID NO：14；且其中VL包含具有下述胺基酸序列的CDR：(i)SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：17；(ii)SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：17；(iii)SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：17；(iv)SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：100；(v)SEQ ID NO：72、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：17；(vi)SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：17；(vii)SEQ ID NO：74、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：17；(viii)SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：75；(ix)SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：76；(x)SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：77；(xi)SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：78；或(xii)SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：79。
除上述實施方案，本文提供了包含6個CDR的抗CXCR3抗體，其中VH 包含具有下述胺基酸序列的CDR：(xii)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：45(xiii)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：46；(xiv)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：48；(xv)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：49；(xvi)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：50；(xvii)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：51；(xviii)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：52；(xix)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：53；(xx)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：54；(xxi)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：55；或(xxii)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：56；且其中VL包含具有下述胺基酸序列的CDR：(i)SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：17；(ii)SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：17；(iii)SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：17；(iv)SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：75；(v)SEQ ID NO：72、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：17；(vi)SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：17；(vii)SEQ ID NO：74、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：17；(viii)SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：75；(ix)SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：76；(x)SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：77；(xi)SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：78；或(xii)SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：79。
除上述實施方案，本文提供包含6個CDR的抗CXCR3抗體，其中VH包 含具有下述胺基酸序列的CDR：(xxiii)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：57；(xxiv)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：58；(xxv)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：59；(xxvi)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：60；(xxvii)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：61；(xxviii)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：62；(xxix)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：63；(xxx)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：64；(xxxi)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：65；或(xxxii)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：66；且其中VL包含具有下述胺基酸序列的CDR：(i)SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：17；(ii)SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：17；(iii)SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：17；(iv)SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：75；(v)SEQ ID NO：72、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：17；(vi)SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：17；(vii)SEQ ID NO：74、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：17；(viii)SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：75；(ix)SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：76；(x)SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：77；(xi)SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：78；或(xii)SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：79。
除上述實施方案，本文提供包含6個CDR的抗CXCR3抗體，其中VH包含具有下述胺基酸序列的CDR： (xxxiii)SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：14；(xxxiv)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：41和SEQ ID NO：14；(xxxv)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：41和SEQ ID NO：71；(xxxvi)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：42和SEQ ID NO：14；(xxxvii)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：42和SEQ ID NO：70；(xxxviii)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：43和SEQ ID NO：14；(xxxix)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：44和SEQ ID NO：14；(xl)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：41和SEQ ID NO：14；或(xli)SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：68；且其中VL包含具有下述胺基酸序列的CDR：(i)SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：17(ii)SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：17；(iii)SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：17；(iv)SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：75；(v)SEQ ID NO：72、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：17；(vi)SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：17；(vii)SEQ ID NO：74、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：17；(viii)SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：75；(ix)SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：76；(x)SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：77；(xi)SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：78；或(xii)SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：79。
除上述實施方案，本文提供了包含含有選自下述胺基酸序列的VH的抗CXCR3抗體：SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：86、SEQ ID NO：87、SEQ ID NO： 88、SEQ ID NO：89或SEQ ID NO：90。
除上述實施方案，本文提供了包含含有選自下述胺基酸序列的VH的抗CXCR3抗體：SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：96、SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：99、SEQ ID NO：100或SEQ ID NO：101。
除上述實施方案，本文提供了包含含有選自下述胺基酸序列的VH的抗CXCR3抗體：SEQ ID NO：102、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：104、SEQ ID NO：105、SEQ ID NO：106、SEQ ID NO：107、SEQ ID NO：108、SEQ ID NO：109、SEQ ID NO：110或SEQ ID NO：111。
除上述實施方案，本文提供了包含含有選自下述胺基酸序列的VH的抗CXCR3抗體：SEQ ID NO：112、SEQ ID NO：113、SEQ ID NO：114、SEQ ID NO：115、SEQ ID NO：116、(SEQ ID NO：117、SEQ ID NO：118、SEQ ID NO：119、SEQ ID NO：120、SEQ ID NO：121或SEQ ID NO：122。
除上述實施方案，本文提供了包含含有選自下述胺基酸序列的VL的抗CXCR3抗體：SEQ ID NO：123、SEQ ID NO：124、SEQ ID NO：125、SEQ ID NO：126、SEQ ID NO：127、SEQ ID NO：128、SEQ ID NO：129、SEQ ID NO：130、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：132、SEQ ID NO：133或SEQ ID NO：134。
在一些實施方案中，抗人CXCR3抗體包含分別含有表3中所示的胺基酸序列的VH/VL對。(所示變化分別對應相應的53Hu37 VH或VL序列(SEQ ID NO：20和24))：
中和抗體
在一些實施方案中，本文提供的人類化的抗人CXCR3抗體是CXCR3中和抗體。在一些示例性的實施方案中，除增強的效應功能外，CXCR3抗體具有中和活性。當預期減少或消除CXCR3介導的作用例如T細胞募集時，CXCR3中和和CXCR3+細胞耗竭的組合作用可以是有利的。
“CXCR3中和抗體”與CXCR3結合並阻斷受體活性，如CXCR3配體與CXCR3結合導致的典型生理和基因響應。中和活性可以是完全(100%中和)或部分的，例如約10、20、30、40、50、60、70、80、90、95(或其間的任何百分比)或更多中和，且將取決於本領域技術人員已知的多種因素，如抗體濃度、親和力和表位以及用於評價中和活性的特定測定法。CXCR3中和抗體的中和活性可通過測量例如配體結合、GTP結合、鈣動員、細胞趨化和/或受體內化的抑制的測定法顯示。用於確定中和抗體和特定CXCR3中和抗體的活性的多種測定法為本領域的技術人員已知且可容易地適應以驗證特定的抗體是中和的。
例如，在一些實施方案中，抗CXCR3抗體的中和活性可通過趨化性測定評估，基本上如通過克隆49801產生並通過R&D Systems®(目錄號MAB160)銷售的抗體的包裝插頁中該。中和劑量-50(ND50)定義為在特定rhCXCL11濃度，在應答細胞系中，獲得細胞表面CXCR3介導的重組人CXCL11(rhCXCL11)響應的一半最大抑制所需要的抗體濃度。為測量抗體阻斷hCXCR3轉染的BaF/3細胞的rhCXCL11誘導的趨化的能力，以7ng/mL將rhCXCL11 添加至96孔趨化室(NeuroProbe、Cabin John、Md.)的較低區室。隨後使用無PVP聚碳酸酯過濾器(5μm孔徑)組裝趨化室。將系列稀釋的抗體(例如0.001至10000μg/mL)和0.25x106細胞/孔添加至室的上孔。在5% CO2-濕潤的溫育器中在37℃溫育3小時後，將室拆卸並將遷移通過較低室的細胞轉染至工作平板並使用例如刃天青螢光(Resazurin Fluorescence)定量。
在一些實施方案中，Colvin等，Mol Cell Biol 26：5838-49(2006)描述了可以使用以確定中和抗CXCR3抗體的中和活性的其他測定。簡言之，可使用300-19細胞，一種功能性表現CXCR4的鼠類前B細胞白血病細胞系。轉染後，該細胞系可功能性表現其他趨化因子受體，例如人CXCR3(參見例如美國專利申請公開號2010/0061983的段落201-209，其在本文通過提述並入)。表現人CXCR3的300-19細胞可在包含10%胎牛血清(FBS)的完全RPMI介質中生長。為評估候選中和CXCR3抗體存在下，CXCR3配體與CXCR3的結合，將400,000 CXCR3/300-19細胞置於150μL總體積的結合緩衝液(0.5% BSA、5mM MgCl2、1mM CaCl2、50mM HEPES、pH 7.4)的96孔組織培養平板中。可將共0.04nM 125I標記的CXCL10(New England Nuclear,Boston,Mass.)或CXCL11(Amersham Biosciences Piscataway,N.J.)和5x106nM至500nM未標記的CXCL10或CXCL11(Peprotech、Rocky Hill、N.J.)添加至細胞並在室溫伴隨振蕩溫育90分鐘。將細胞轉染至在0.3%聚乙烯亞胺中預浸的96孔過濾平板(Millipore,Billerica,Mass.)上並使用補充了0.5M NaCl的200μL結合緩衝液洗滌三次。乾燥該平板，並在添加閃爍流體於Wallac Microbeta閃爍計數器(Perkin-Elmer Life Sciences,Boston,Mass.)中後測量放射性。可以類似於CXCL10和CXCL11評估CXCL9的結合。
在一些實施方案中，本文公開的抗體可預防或減少進入CXCR3表現細胞的鈣通量。在一些實施方案中，鈣通量可在細胞如CXCR3/300-19細胞中檢測。將5x106細胞懸浮於2mL具有1%牛血清白蛋白(BSA)的RPMI介質中。添加15微克的Fura-2(Molecular Probes,Eugene,OR)並在37℃溫育細胞 20分鐘。在PBS中洗滌細胞兩次並重懸於2mL的鈣通量緩衝液(145mM NaCl,4mM KCl,1mM NaHPO4,1.8mM CaCl2,25mM HEPES,0.8mM MgCl2和22mM葡萄糖)中。在DeltaRAM螢光計中於37℃測量螢光讀數(Photon Technology International,Lawrenceville,N.J.)。添加趨化因子(例如CXCL9,CXCL10或CXCL11)之前和之後，將細胞內鈣濃度記錄為響應在340nm和380nm的順序激發的在510nm發射的激發螢光強度並表示為340nm處螢光比380nm處螢光的相對比率。
在一些實施方案中，CXCR3中和可通過測量受體內化中的減少來評估。在一些實施方案中，受體內化測定可通過在具有1% BSA的RPMI介質中將約2.5x105細胞如CXCR3/300-19細胞與多種濃度的CXCL10、CXCL11或CXCL9在37℃溫育30分鐘實施。隨後使用冰冷的流式細胞染色緩衝液洗滌細胞且接下來使用PE偶聯的CXCR3抗體分析CXCR3的表面表現。
如通過任何上述測定所評估，在一些實施方案中，中和抗CXCR3抗體可具有約0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、40、50或100μg/mL的ND50。在具體的實施方案中，ND50可以是0.5-12μg/mL，且在更具體的實施方案中為1-6μg/mL。
通過本文提供的抗體或抗原結合片段對細胞遷移、募集或積累的抑制可通過任何本領域的技術人員已知的方法評估。這樣的方法可包括例如通過免疫組化、流式細胞術、RT-PCR等的活檢分析以評估在一種或多種細胞群或體內或器官內的一個或多個位置中細胞如CXCR3+細胞的數目。相比本文提供的抗體或抗原結合片段不存在下的遷移、募集或積累，細胞的遷移、募集或積累可被抑制至少或約10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或更多。
核苷酸序列
本文還提供了編碼本文公開的胺基酸序列的核苷酸序列。在一些實施方案中，核苷酸序列編碼能夠在體外和/或體內耗竭CXCR3+細胞的抗體或片段。在 一些實施方案中，核苷酸序列可用於製備在細胞中表現抗CXCR3抗體或其抗原結合片段的表現載體(例如在哺乳動物細胞中表現)。
在一些實施方案中，本文還公開了與編碼本文公開的胺基酸序列的那些基本上相同的多核苷酸。基本上相同的序列可以是多態性序列即群體中的可選序列或等位基因。基本上相同的序列還可包含誘變的序列，包括含有沉默突變的序列。突變可包含一個或多個核苷酸殘基變化，一個或多個核苷酸殘基缺失或一個或多個其他核苷酸殘基的插入。由於核酸密碼的簡並性，基本上相同的序列還可包含多種核苷酸序列，其編碼在本文公開的胺基酸序列中任何給定的胺基酸位置處的相同胺基酸。基本上相同的序列中還包括的是序列，其編碼保持在體外和/或體內耗竭CXCR3+細胞的能力的抗體的一條或多條鏈。
在一些實施方案中，本文提供的核酸編碼能夠耗竭本文提供的CXCR3表現細胞的抗體或片段中的一條或多條鏈的胺基酸序列，或該核酸可在嚴格條件下與核酸雜交，該核酸編碼抗體或其抗原結合片段中的一條或多條鏈的胺基酸序列。
在一些實施方案中，本文公開了多核苷酸序列，其包含編碼抗CXCR3抗體或其抗原結合片段的VH結構域的胺基酸序列的核苷酸序列，且其與編碼抗體重鏈的核苷酸序列至少約80-100%(例如約80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)(或其間的任何百分比)相同。在一些實施方案中，多核苷酸序列可包含相對編碼抗體重鏈的核苷酸序列具有0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10突變(包括添加、缺失和取代如保守取代)的核苷酸序列。
在一些實施方案中，本文公開了多核苷酸序列，其包含編碼抗CXCR3抗體或其片段的VL結構域的胺基酸序列的核苷酸序列，且其與編碼抗體輕鏈的核苷酸序列至少約80-100%(例如約80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)(或其間的任何百分比)相同。在一些實施方案中，多核苷酸序列可包含相對編碼抗體輕鏈的核苷酸序列具有 0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10突變(包括添加、缺失和取代如保守取代)的核苷酸序列。
在具體的實施方案中，本文公開了多核苷酸序列，其包含與VH胺基酸序列至少約80%、85%、90%、91%92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同(或其間的任何百分比)且與VL胺基酸序列至少約80%、85%、90%、91%92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同(或其間的任何百分比)的核苷酸序列，其中該核苷酸序列編碼本文公開的任何抗體的重鏈和輕鏈胺基酸序列。
公開的多核苷酸可通過任何本領域已知的方法獲得。例如，如果抗體的核苷酸序列是已知的，編碼抗體的多核苷酸可自化學合成的寡核苷酸組裝。其可涉及例如重疊寡核苷酸(包含編碼抗體的序列的部分)的合成、退火和連接那些寡核苷酸及隨後通過PCR擴增連接的寡核苷酸。公開的多核苷酸還可自任何其他合適的核酸來源生成，如抗體cDNA文庫或從表現抗體的任何組織或細胞(例如，從經選擇以表現抗體的雜交瘤細胞)分離的cDNA文庫。
抗CXCR3抗體或其抗原結合片段的表現
操作編碼本文提供的人類化的抗CXCR3抗體或其抗原結合片段的核酸後，通常將編碼核酸插入用於引入宿主細胞的表現載體，該宿主細胞可用於產生預期的量的編碼的抗體或其抗原結合片段。用於表現的合適的載體為本領域已知。合適的宿主細胞包括例如CHO、COS、Sf9和/或其他人或非人細胞系。在一些實施方案中，當在培養基中培養時，宿主細胞在載體上瞬時或穩定表現核酸，由此提供用於產生本文提供的抗體或片段的方法。
本文使用"載體"或"表現載體"以描述用於在細胞中引入和表現預期基因的媒介。如本領域的技術人員已知，這樣的載體包括例如質粒、噬菌體、病毒和逆轉錄病毒。一般而言，適當的載體可包含選擇標記物、適當的限制位點以促進預期基因的克隆和在真核或原核細胞中進入和/或複製的能力。
出於表現本文提供的抗CXCR3抗體的目的，可採用多種表現載體系統。 例如，一類載體利用源自動物病毒如牛乳頭瘤病毒(bovine papilloma virus)、多瘤病毒(polyoma virus)、腺病毒(adenovirus)、牛痘病毒(vaccinia virus)、杆狀病毒(baculovirus)、逆轉錄病毒(RSV、MMTV或MOMLV)或SV40病毒的DNA元件。其他設計使用具有內部核糖體結合位點的多順反子系統。此外，將DNA整合入其染色體的細胞可通過引入允許選擇轉染的宿主細胞的一種或多種標記物來進行選擇。該標記物可為營養缺陷型宿主提供原養型、殺生物劑抗性(例如抗生素)或對重金屬如銅的抗性。可選擇的標記物基因可直接與待表現的DNA序列連接，或通過共轉化引入相同的細胞。對於mRNA的最優合成還可需要其他元件。這些元件可包括信號序列、剪接信號以及轉錄啟動子、增強子和終止信號。在一些實施方案中，克隆的可變區基因可與如上文討論的重鏈和輕鏈恆定區基因共同插入表現載體。在一些實施方案中，重鏈和輕鏈恆定區是人的。
在其他實施方案中，本文提供的抗CXCR3抗體或其抗原結合片段可使用多順反子構建體表現。在這樣的表現系統中，感興趣的多個基因產物如抗體的重鏈和輕鏈可從單個多順反子構建體產生。這些系統有利地使用內部核糖體進入位點(IRES)以在真核宿主細胞中提供相對高水準的本文提供的多肽。美國專利號6,193,980公開了相容的IRES序列，其在本文通過提述並入。本領域的技術人員會理解，這樣的表現系統可用於有效產生完整範圍的本申請公開的多肽。
一旦製備了編碼抗體或其抗原結合片段的載體或DNA序列，可將表現載體引入適當的宿主細胞。也就是說，可轉化宿主細胞。將質粒引入宿主細胞可通過多種本領域的技術人員已知的技術實現。這些包括但不限於轉染(包括電泳和電穿孔)、原生質體融合、磷酸鈣沉澱、與包膜DNA的細胞融合、顯微注射和使用完整病毒的感染。參見Ridgway,A.A.G."Mammalian Expression Vectors"第24.2章，第470-472頁，Vectors,Rodriguez和Denhardt編(Butterworths,Boston,Mass.1988)。在一些實施方案中，經由電穿孔將質粒引入宿主。轉化的細胞在適於產生編碼的胺基酸序列例如抗體輕鏈和重鏈的條件下生長，並測定編碼胺基酸序列的產生。示例性的測定技術包括，酶聯免疫吸附測定 (ELISA)、放射免疫測定(RIA)、流式細胞術、免疫組化等。
“宿主細胞”指其中已經引入使用重組核酸技術構建並編碼至少一種異源蛋白的載體的細胞。在對於從重組宿主分離多肽的過程的描述中，術語“細胞”和“細胞培養”可互換使用以指代所編碼的蛋白(例如抗體或其抗原結合片段)的來源，除非另外清楚地詳明。換言之，從“細胞”回收多肽意為或來自離心出的完整細胞或來自包含介質和懸浮細胞的細胞培養物。
在一個實施方案中，用於抗體表現的宿主細胞系是哺乳動物來源；本領域的技術人員可確定最適於預期基因產物在其中表現的特定宿主細胞系。示例性的宿主細胞系包括但不限於DG44和DUXB11(中國倉鼠卵巢細胞系、DHFR-)、HELA(人宮頸癌細胞系)、CVI(猴腎細胞系)、COS(具有SV40 T抗原的CVI的衍生物)、R1610(中國倉鼠成纖維細胞)、BALBC/3T3(小鼠成纖維細胞)、SP2/O(小鼠骨髓瘤)、BFA-1c1BPT(牛內皮細胞)、RAJI(人淋巴細胞)、293(人腎細胞)。在一個實施方案中，可使用NS0細胞。一些實施方案中，使用CHO細胞。宿主細胞系通常可從商業服務機構American Tissue Culture Collection或從公開的文獻獲得。
在一個實施方案中，細胞系為從其表現的抗體提供改變的糖基化例如去岩藻糖化(例如PER.C6.RTM.(Crucell)或FUT8敲除CHO細胞系(Potelligent.RTM.細胞)(Biowa,Princeton,N.J.))。可替換地，細胞可在N-聚糖早期處理所需的一種或多種糖苷酶中是缺陷的和/或培養條件可使得一種或多種這些糖苷酶的活性受到抑制。例如，細胞可在一種或多種糖苷酶如α-葡萄糖苷酶I、α-葡萄糖苷酶II和α-甘露糖苷酶I中是缺陷的。此外或可替換地，可將工程化的細胞與一種或多種糖苷酶如α-葡萄糖苷酶I、α-葡萄糖苷酶II和α-甘露糖苷酶I的抑制劑接觸。該抑制劑是α-甘露糖苷酶I的抑制劑例如α-甘露糖苷酶I特異性抑制劑幾夫堿。用於將宿主細胞與幾夫堿和其他抑制劑培養的示例性方法公開於美國專利號8,071,336中，其在本文通過提述以其整體並入。在一些實施方案中，幾夫堿處理導致抗體具有至少50% Man5-9(GlcNAc)2 N-聚糖，其中含有 Man8和Man9的N-聚糖一起為主要的類型。
體外生成允許放大以提供大量預期的多肽。用於在組織培養條件下培養哺乳動物細胞的技術為本領域已知且包括均質懸浮培養，例如在氣升反應器中或在連續攪拌反應器中，或固定化的或包埋的細胞培養，例如在中空纖維、微膠囊、瓊脂糖微珠或陶瓷藥筒上。如果需要和/或預期，可通過常規層析方法例如凝膠過濾、離子交換層析或DEAE-纖維素上的層析和/或(免疫)親和層析來純化多肽的溶液。
本文提供的編碼抗CXCR3抗體或其片段的核酸還可在非哺乳動物細胞如細菌或酵母或植物細胞中表現。在此態樣，會理解的是，也可將多種單細胞非哺乳動物微生物如細菌用於表現本文提供的抗體和其抗原結合片段，即能夠在培養物或發酵中生長的那些。合適的細菌包括下述成員：腸桿菌科(enterobacteriaceae)如大腸桿菌(Escherichia coli)或沙門氏菌屬(Salmonella)的菌株；芽孢桿菌科(Bacillaceae)如枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)；肺炎球菌屬(Pneumococcus)；鏈球菌屬(Streptococcus)和流感嗜血桿菌(Haemophilus influenzae)。可進一步理解的是，當在細菌中表現時，多肽可變為包涵體的一部分。多肽必須分離、純化且隨後組裝成為功能性分子。
除原核細胞，還可使用真核微生物。儘管通常可獲得許多其他菌株，但釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)或常用的麵包酵母(baker's yeast)在真核微生物中最常使用的。對於在釀酒酵母中的表現，通常使用例如質粒YRp7(Stinchcomb等，Nature,282：39(1979)；Kingsman等，Gene,7：141(1979)；Tschemper等，Gene,10：157(1980))。該質粒已包含TRP1基因，其為缺乏在色氨酸中生長的能力的酵母突變株例如ATCC No.44076或PEP4-1(Jones,Genetics,85：12(1977))提供選擇標記物。作為酵母宿主細胞基因組的特徵的Trpl損害的存在隨後為通過不存在色氨酸的情況下生長而檢測轉化提供有效的環境。
藥物製劑和投與方法
本文提供醫藥組合物，其包含本文公開的人類化的抗人CXCR3抗體和藥物上可接受的載劑。
製備和向受試者投與本文提供的抗體或其抗原結合片段的方法是已知的且可由本領域的技術人員容易地確定。抗體或其片段的投與途徑可為口服、腸胃外(如靜脈內、肌內、腹膜內或皮下)、通過吸入或局部。在一些實施方案中，本文提供的抗體經配製用於靜脈內投與。在一些實施方案中，適於注射的醫藥組合物包含緩衝液(例如醋酸鹽、磷酸鹽或檸檬酸鹽緩衝液)、表面活性劑(如聚山梨酸酯)，任選的穩定劑(例如人白蛋白)等。
適於可注射用途的醫藥組合物包括無菌水溶液(水溶性的情況)或用於無菌可注射溶液或分散液的臨時製備的分散劑和無菌粉末。載劑可以是溶劑或分散介質，其包括例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液體聚乙二醇等)及其合適的混合物。適當的流動性可通過例如使用塗層如卵磷脂、在分散液的情況中通過維持所需細微性以及通過使用表面活性劑來維持。預防微生物的作用可通過多種抗細菌和抗真菌劑例如對羥基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、抗壞血酸、硫柳汞等實現。在多個情況中，優選在組合物中包含等滲劑，例如糖、多元醇如甘露醇、山梨醇或氯化鈉。可注射組合物的延長吸收可通過在組合物中包含延遲吸收的作用劑例如單硬脂酸鋁和明膠帶來。
在任何情況中，根據需要，無菌可注射溶液可通過以所需的量在適當溶劑中並入活性化合物(例如抗體本身或與其他活性成分的組合)以及本文列舉的一種成分或成分的組合隨後過濾滅菌而製備。一般，分散物通過將活性化合物並入包含基礎分散介質和來自上文列舉的那些的所需其他成分的無菌媒介物而製備。在用於製備無菌可注射溶液的無菌粉末的情況中，優選的製備方法是真空乾燥和冷凍乾燥，其獲得活性成分的粉末加上來自其先前已無菌過濾的溶液的任何其他預期成分。將用於注射的製備物處理並填充入容器如安瓿、袋、瓶、注射器或小瓶，並根據本領域已知的方法在無菌條件下密封。這樣的製品優選具有標簽或包裝插頁，其指示相關組合物可用於治療患有或易患自體免疫性或 腫瘤性病症的受試者。
本文提供用於治療上述病況的抗體或其抗原結合片段的劑量取決於多種不同因素而變化，包括投與方式、靶位元點、患者的生理狀態、患者是人還是動物、投與的其他藥物、和治療是預防性的還是治療性的。通常，患者是人，但也可治療包括轉基因動物在內的非人哺乳動物。
在一些實施方案中，劑量的範圍為例如約0.0001至100mg/kg或0.01至5mg/kg的宿主體重。
受試者可每日、隔日、每週或根據經驗分析確定的任何其他方案投與這樣的劑量。本文提供的抗體或其抗原結合片段可在多次投與。單次劑量之間的時間間隔可以是例如每日、每週、每月或每年。時間間隔還可以是不規律的，如通過測量患者中的多肽或靶分子的血液水準所指示。
本文提供的抗體或其抗原結合片段可任選與在治療需要治療(例如預防或治療性的)病症或病況使用的其他作用劑組合投與。優選的其他作用劑是本領域認可且被標準投與於特定病症的那些。
治療CXCR3-相關疾病或病症的方法
本文提供的CXCR3抗體或其抗原結合片段可用於拮抗CXCR3活性。在一些實施方案中，抗體和抗原結合片段用於抑制CXCR3與一種或多種配體如CXCL9、CXCL10和/或CXCL11結合；抑制CXCR3+細胞的遷移、積累、募集或浸潤(如至炎症位點)和/或耗竭CXCR3+細胞的方法。在一些實施方案中，抗體和抗原結合片段用於在體內耗竭CXCR3+細胞的方法。CXCR3+細胞包括但不限於CXCR3+/CD4+ T細胞、CXCR3+/CD8+ T細胞和CXCR3+/CD19+ B細胞亞組。
在一些實施方案中，提供了通過對有需要的受試者投與包含一種或多種CXCR3抗體或其抗原結合片段的醫藥組合物而治療CXCR3-相關疾病或病症的方法。在一個實施方案中，提供了治療T細胞介導的自體免疫性疾病或減少其進展的方法。該方法包括對有需要的受試者投與本文公開的人類化的抗人CXCR3抗體或其抗原結合片段的步驟，由此治療T細胞介導的自體免疫性疾 病或減少其進展。在一些實施方案中，T細胞介導的自體免疫性疾病是白斑病。在一些實施方案中，有需要的受試者包括已診斷患有CXCR3-相關疾病或T細胞介導的自體免疫性疾病或易發生如本文該的CXCR3-相關疾病或T細胞介導的自體免疫性疾病的受試者。
待通過本文提供的方法治療的受試者可包括人或其他哺乳動物。在一個實施方案中，受試者是人。在多個實施方案中，可預防性地或在與異常CXCR3活性相關的任何病況或其中CXCR3信號傳導的破壞可為治療上有益的任何病況發病後治療受試者。
在一些實施方案中，可預防性地或在白斑病發病後治療受試者。“具有白斑病的受試者”是具有(通常由自體免疫或未知原因所致的)與白斑病醫療診斷一致的片狀減少的皮膚色素沉著的任何受試者。受影響的區域可包括面部、手、足、臂、腿、嘴唇或其任何組合，但也可涉及其他區域如頸部或軀幹。在一些實施方案中，存在減少的毛髮色素。
抗體、物質的组合物和方法通過下述實例進一步說明，該實例不應该解釋为进一步限制性的。遍及此申请引用的序列表、附图和全部参考文献、专利和公开的专利申请的內容通過提述明確地并入本文。
實例1：人類化的抗CXCR3單克隆抗體的生成
如WO2013/109974中該生成抗CXCR3單克隆抗體。如下文該生成人類化的克隆53單克隆抗體。
製成克隆53的人類化形式，其能夠指導CXCR3表現細胞的耗竭。生成人類化的克隆53單克隆抗體，其具有如表4中所示的VH和VK序列。
對於每種人類化變體的種系指標分數示於表4。將重鏈與IGHV3-23*03/IGHJ4*03種系序列進行比較；將輕鏈與IGKV1-9*01/IGKJ2*01種系序 列進行比較。
本文提供的每種人類化單克隆抗體的結合特性示於表5中。
表6顯示克隆53(53)、嵌合克隆53(Ch53)和克隆53的人類化形式(53Hu1-53Hu20)的結合特性和種系。
如通過上述數據所指示，本文提供的人類化抗體具有顯著改善的結合特性 且同時具有有利的種系指標。
實例2：CDR優化
製成多種VH CDR和/或VL CDR變體。使用Biacore測量了與重組人CXCR3的結合親合力。具有至少對於53Hu37一樣強的結合的突變體示於表3。
實例3：CXCR3-173是耗竭抗體
將倉鼠抗小鼠CXCR3單克隆(克隆CXCR3-173)用作臨床前實驗中的替代抗體。先前已將CXCR3-173描述為在體內不耗竭CD4+ T細胞的阻斷抗體。(參見Uppaluri等，Transplantation 86：137-47(2008))。
製備了下述倉鼠CXCR3-173單抗的Fc變體以測試抗體的效應功能：小鼠IgG1的去糖基化N297G變體(CXCR3 mIgG1 agly)；野生型小鼠IgG2a嵌合體(CXCR3 mIgG2a野生型)；經修飾以廢除耗竭能力的小鼠IgG2a嵌合體(CXCR3 mIgG2a Dab)；和野生型小鼠IgG3(CXCR3 mIgG3)。
對8至10周齡的C57BL/6小鼠(Jackson Laboratories，n=5每組)投與單次5mg/kg靜脈內劑量的抗體且隨後在24小時後收穫血液用於使用下述標記物的流式細胞術分析：通過TCRab、CD4和CD8的CD4和CD8 T細胞；通過TCRab、CD4、CD8、CD62L和CD44的記憶CD4和CD8 T細胞。根據製造商的方案使用Count Bright珠(Invitrogen)對細胞定量以確定血液的總細胞/微升。
來自對總T淋巴細胞和T淋巴細胞亞組進行門控的結果示於圖1。如圖所示，令人驚訝地首次證明瞭當向小鼠投與時倉鼠CXCR3-173耗竭CD4+和CD8+記憶T細胞。
實例4：CXCR3-173 Fc變體的效應功能
使用抗體捕獲方式將Biacore 3000儀器用於評估Fc工程化形式的CXCR3-173的小鼠Fcγ受體結合。使用胺化學將重組蛋白A/G(Pierce)共價固定於 CM5傳感器晶片。將CXCR3-173抗體在HBS-EP緩衝液中稀釋至5μg/mL並以10μL/分鐘的流速注射至蛋白A/G晶片達30秒。將來自R&D SYSTEMS的重組小鼠FcγRI(CD64)、FcγRIIb(CD32)、FcγRIII(CD16)和FcγIV(CD16-2)稀釋三倍，在HBS-EP緩衝液中從300至3.7nM並以30μL/分鐘的流速一式兩份注射至捕獲的抗體。使用甘氨酸2.0(GE Healthcare)再生表面。將結合響應標準化至蛋白A/G捕獲的RU量。結果示於圖2A-2D。
如圖所示，經修飾具有野生型鼠類IgG2a同型的倉鼠CXCR3-173與全部四種重組小鼠(rm)Fcγ受體結合，儘管dAB突變顯著減少此結合。經修飾具有野生型鼠類IgG3同型的CXCR3-173還與全部四種重組小鼠Fcγ受體結合。原始的、未修飾的倉鼠CXCR3-173比IgG2a同型變體更好地與rmFcγRIIb和rmFcγRIII結合，且去糖基化的mIgG1同型變體不與任何rmFcγR結合。
實例5：體外效應功能
在ADCC系列測定中研究了人類化抗CXCR3單抗及其Fc工程化形式。使用標準方法製備人類化的抗CXCR3單抗的Fc工程化形式。通過在幾夫堿存在下培養表現人類化單抗的細胞製備了去岩藻糖化的形式。
使用過表現具有纈氨酸多態性的CD16的原代人NK細胞或NK9.2細胞系(Conkwest)作為效應細胞並使用過表現人CXCR3(A同型)的CHO轉染細胞作為靶細胞進行了ADCC測定。
對於當將NK細胞用作效應的測定，從普通供體的Leucopak純化NK細胞並在IL-2中培養24小時，隨後與已用鉻過夜標記CHO-人CXCR3靶細胞以5：1 E：T的比率鋪板。在組織培養溫育器中溫育培養物3小時，隨後洗滌並用1% Tritron-X裂解然後在γ計數器上讀取上清。
對於當將NK9.2細胞用作效應的測定，依照製造商的推薦將NK9.2細胞在IL-2中擴增2周。在測定日，使用鈣黃綠素AM(Invitrogen)標記NK9.2細胞(70,000細胞)並與適當稀釋的抗體溫育30分鐘以允許抗體與靶細胞上的 CXCR3結合。將NK細胞以3：1效應比靶細胞比率鋪板並在組織培養溫育器中將培養物溫育1小時。在培養期結束時用Triton X-100裂解細胞並使用M5平板讀取器(492nm激發和515nm發射)讀取平板。
將人IgG1(Sigma)用作陰性對照並將用阿侖單抗(單克隆抗CD52抗體)處理的過表現CD52的CHO細胞的裂解物用作裂解的陽性對照。以任意螢光單位(AFU)表現信號。細胞毒性百分比表示為(實驗裂解-自發裂解)/(最大裂解-自發裂解)x 100%。
在ADCC測定中測試了具有人a IgG1 Fc和Fc工程化形式的人類化抗CXCR3單抗53Hu37。Fc工程化形式的M1(S239D/D332E(EU標記)、M2(G236A/S267E/H268F/S324T/I332E(EU標記)，“AEFTE”)和M3(S239D/H268F/S324T/I332E(EU標記)，“DFTE”)包含允許增強的ADCC或CDC活性的胺基酸改變。通過幾夫堿處理生成野生型抗體的細胞系產生第四種Fc工程化形式。
還測試了抗人CXCR3克隆4(CXCR3 CL4)、克隆12(CXCR3 CL12)、克隆82(CXCR3 CL82)、克隆135(CXCR3 CL135)。在獨立實驗中，用不同的效應細胞、效應：靶標(E：T)比率和抗體濃度運行測定。代表性的結果示於圖3B和圖3C。
圖3A總結了M1、M2、M3和53Hu37的去岩藻糖基化形式的效應功能。圖3B顯示了使用原代NK細胞作為效應的測定的結果。圖3C顯示了使用NK9.2細胞作為效應的測定的結果。
實例6：Fcγ受體結合
將Biacore T200儀器用於評估人類化的抗CXCR3單抗53Hu37和53Hu37的Fc工程化形式的人和小鼠Fcγ受體的結合親和力。使用胺化學將來自Sigma的蛋白A固定於CM5系列S晶片。將抗體注射入蛋白A晶片，並將多種濃度的重組人和小鼠Fcγ受體(R&D Systems)注射入捕獲的抗體。將廣泛濃度 範圍的受體用於跨越低親和力結合劑和高親和力結合劑(1.2nM直至5μM)。一式二份注射每種樣品。將結合傳感圖擬合至1：1動力學結合模型。定量結果總結於圖4。
如圖4所示，M1和M3的Fc工程化形式對hFcγRIII和mFcγRIV二者都具有改進的親和力，M2對hFcγRIIa具有增加的結合，而與Fc工程化形式相比，幾夫堿處理的53Hu37在hFcγRIII和mFcγRIV中顯示了中度增加。
實例7：
食蟹猴接受了單次靜脈內輸注的2mg/kg體重的53Hu37、M1變體或幾夫堿處理的形式(n=8每抗體處理組)或媒介對照(n=6)。輸注前和輸注後1、3、7和14天收集血液樣品並通過流式細胞術分析總T細胞和T細胞亞組。對於流式細胞術，裂解紅血球細胞並用抗體針對下述標記物染色細胞以鑑定總的和記憶CD4和CD8 T細胞：CD3(克隆SP34-2)、CD4(克隆OKT4)、CD8a(克隆RPA-T8)、CD45RA(克隆5H9)、CCR7(克隆G043H7)和CXCR3(克隆1C6)。使用Count Bright珠(Invitrogen)定量細胞以確定細胞/微升(細胞/μL)。數據表示為對於該組隨時間每種細胞亞組的取血前平均百分比。通過使用抗人CXCR3克隆4抗體和適當的二抗對CXCR3的固定樣品切片進行染色研究了輸注後14天獲得自各處理組的亞組的脾樣品的組化。結果示於圖5A-5C。使用肽ELISA，還對來自血液樣品的血清進行了藥代動力學測定，測量了所投與的抗體的循環水準。
如圖所示，53Hu37、53Hu37的M1形式和Kif處理的53Hu37減少了效應記憶CD4 T細胞且53Hu37、Hu37的M1形式和Kif處理的53Hu37減少了效應記憶CD8 T細胞。此外，單次靜脈內輸注抗體後14天，53Hu37的M1形式和Kif處理的53Hu37顯著減少了脾中的CXCR3染色。
實例8：生化分析
測量了53Hu37、M1形式和幾夫堿處理的53Hu37的熱穩定性、針對剪切壓力和病毒滅活的穩定性、針對冷凍-融解壓力的穩定性、針對攪拌壓力的穩定性和pH穩定性。
差示掃描量熱法(DSC)
使用高通量VP-DSC(Microcal)分析了樣品。使用相應的緩衝液將樣品稀釋至約0.5mg/mL並加載至96孔板上。掃描參數由25℃的初始溫度和100℃的結束溫度構成。使用了200℃/h的掃描速率。
濁度
在Spectramax Plus(Molecular Devices)上測量了340-360nm增量為5nm的樣品吸收並將值平均化以獲得最終的濁度測量。將96孔UV平底平板以150-200μL的材料使用。預讀取平板然後添加樣品並將路徑檢查應用至樣品值。基於Brigitte Eckhardt,Technology Applications Vol.48,No.2 Mar.-Apr.1994的“A Turbidimetric Method to Determine Visual Appearances of Protein Solutions”，將樣品與從濁度標準物的UV吸收獲得的值進行了比較以濁度的程度進行分類。
尺寸排阻層析(SEC)
HP1100或1200系列系統配備了TSK SWXL尺寸排阻柱，該柱偶聯了SWXL保護柱。使用20mM磷酸鈉、500mM NaCl、pH 6.0的流動相運行樣品35分鐘。使用了0.5mL/分鐘的流速。實施了50μg的注射並在280nm監測UV信號。
熱誘導的相對聚集傾向(TI-RAP)
通過在PBS緩衝液以及10mM組氨酸和9%蔗糖緩衝液中於5℃(對照)、64℃、67℃、70℃或73℃溫育0.2mg/mL抗人CXCR3抗體(單個或抗體混合物)10分鐘產生溫度誘導的聚集。熱溫育後，將樣品在7000 x g於5℃離心2分鐘以移除不溶的蛋白沉澱並通過陽離子交換層析(CEX)分析上清。使用對照(5℃)樣品的峰面積，通過標準化熱壓力樣品的層析峰面積計算了可溶性單體的百分比(和相對聚集傾向)。
攪拌誘導的相對聚集傾向(AI-RAP)
對於攪拌誘導的相對聚集傾向，將在PBS緩衝液中包含0.2mg/mL最終蛋白濃度的抗人CXCR3抗體和10mM組氨酸和9%蔗糖緩衝液中及0和0.01%聚山梨酯80的溶液在5℃經受在5℃的嚴格的攪拌壓力。從VX-2500多管渦旋振蕩器(VWR,West Chester,PA)以最高速度攪拌抗人CXCR3抗體的溶液達24小時的總持續時間。
在整個研究中通過去除用於CEX分析的小樣品等分試樣來分析多個時間點。將樣品等分試樣在7000xg(於5℃)離心2分鐘以除去不溶蛋白沉澱，並通過CEX分析上清液。使用對照(0小時)樣品的峰面積通過標準化攪拌樣品的層析峰面積計算了可溶性單體的百分比(和相對聚集傾向)。
陽離子交換層析(CEX)
使用ProPac WCX-10分析柱(弱陽離子交換，4×250mm，Thermo Scientific)於25℃在Agilent 1290 Infinity HPLC系統上進行CEX分析。將20微克蛋白質樣品加載到柱上並以0.8mL/分鐘的流速分析。用緩衝液A(20mM乙酸鈉，0.0025%疊氮化鈉，pH5.2)平衡管柱，以在40分鐘從0到100%的緩衝液B(20mM乙酸鈉，1M氯化鈉，0.0025%疊氮化鈉，pH 5.2)的綫性梯度洗脫蛋白質。測量280nm處的吸收並對280nm吸收峰進行積分以確定蛋白峰面積。
實驗設計
pH/溫度壓力
使用Slide-A-Lyzers(Thermo Scientific PN 66810)將來自每個克隆的一部分材料透析到20mM磷酸鈉pH 5.0和磷酸鈉pH 7.0中。使用相應的緩衝液稀釋此材料並使用Millex GV過濾器(Millipore PN SLGV033RB)過濾至約2mg/mL。在3和5周的測試之前，在磷酸鈉pH 5和pH 7中的樣品都儲存在37℃。
凍融壓力
使用Slide-A-Lyzers(Thermo Scientific PN 66810)將所示的抗人CXCR3抗體透析到20mM磷酸鈉pH6.0中。使用相應的緩衝液稀釋此材料並使用Millex GV過濾器(Millipore PN SLGV033RB)過濾至約1mg/mL。將凍融壓力樣品在80℃冷凍並在室溫下解凍總共5次。經過1次和3次凍融循環之後，移出材料用於通過選擇測定法測試。在最終的凍融後進行測試的完整的分析組。
剪切壓力
使用Slide-A-Lyzers(Thermo Scientific PN 66810)將抗體樣品透析到20mM磷酸鈉pH6.0中。使用相應的緩衝液稀釋此材料並使用Millex GV過濾器(Millipore PN SLGV033RB)過濾至約1mg/mL。用200μL移液管反復抽吸剪切壓力樣品總共50次。
模擬病毒滅活
使用Slide-A-Lyzers(Thermo Scientific PN 66810)將抗體樣品透析到20mM磷酸鈉pH6.0中。使用相應的緩衝液稀釋此材料並使用Millex GV過濾器(Millipore PN SLGV033RB)過濾至約1mg/mL。用1N HCl將病毒滅活樣品調至pH3.5，並於室溫在該pH值保持100分鐘。保持期後，使用1N NaOH使樣品恢復至pH 7.2並保持100分鐘。然後使用1N HCl將樣品調至pH6.0並測試。
結果
差示掃描量熱法：
發現M1形式(D/E突變體)比Kif形式稍微不穩定，而Kif形式又比53Hu37稍微不穩定。
剪切壓力：
發現M1形式(D/E突變體)比53Hu37和Kif形式稍微不穩定，後兩者幾乎同樣穩定。
病毒滅活壓力：
發現M1形式(D/E突變體)比Kif形式更穩定，兩者均不如53Hu37穩定。
凍融壓力：
發現M1形式(D/E突變體)、Kif形式和53Hu37大致等同。
激動誘導的相對聚集傾向：
所有形式的抗體的大約80%在攪拌2小時內沉澱，儘管在pH5.5，M1形式(D/E突變型)比其它兩種形式相對更穩定。
聚集形成：
在pH5.0的對照(未加速)條件下，M1形式(D/E突變體)和53Hu37在5週期間基本穩定，但Kif形式變成乳白色；此相同的模式在加速條件下被發現。在pH7.0的對照(未加速)條件下，抗體的三種形式在5週期間內大致相同。在加速條件下，DE突變體比53Hu37稍微穩定，而後者比Kif形式更穩定。
實例9：耗竭的(而不是非耗竭的)抗CXCR3在白斑病小鼠模型中是保護性和治療性的
小鼠KRT14-Kitl*4XTG2Bjl(Krt14-Kitl*)小鼠為來自BJ Longley,University of Wisconsin的饋贈。PMEL TCR轉基因小鼠為Thy1.1+，且獲得自The Jackson Laboratory，保存號005023,B6.Cg Thy1a/CyTg(TcraTcrb)8Rest/J。所有小鼠為C57BL/6J背景，在無病原體的設施中保存，且根據實驗動物護理和使用的NIH指南進行操作。
抗體. δAB CXCR3是中和CXCR3活性的抗體(且本文稱作IgG2a-dAB、dAB或△AB)。野生型小鼠CXCR3是具有有耗竭活性的野生型小鼠IgG2a Fc的抗體。
白斑病誘導&抗體治療。如前該，通過過繼轉移前黑素體特異性(PMEL)CD8+ T細胞誘導白斑病。Harris等，J.Invest.Dermatol.132：1869-76(2012)。簡言之，根據製造商的說明通過對微珠(Miltenyi Biotech)陰性選擇，自PMEL TCR轉基因小鼠(Jackson Laboratory，保存號005023)的脾分離PMEL CD8+ T細胞。將經純化的CD8+ T細胞(1×106)靜脈內注射到亞致死輻射的(轉移前1天500rad)Krt14-Kit1*宿主((Jackson Laboratory保存號009687,8-12周齡)。在轉移當日受體小鼠也接受腹膜內(i.p.)注射的1×106pfu rVV-hPMEL(N Restifo,NCI,NIH)。
通過每週腹膜內注射100μg的抗體或同型對照三次達觀察期的持續時間實施治療。
對於預防研究，在白斑病誘導後2-6周處理小鼠。這個時間段是重要的，因為它在清除用於誘導疾病的病毒之後，但在自體免疫性發病之前發生。使用基於四個易於觀察的位置(包括如前該的耳朵、鼻子、後腳掌和尾巴)的脫色程度的分數量表來量化白斑病評分。Harris等，J.Invest.Dermatol.132：1869-76(2012)。檢查每個位置，估計脫色程度作為解剖部位的百分比；左右耳朵和左右後腳墊一起估計並因此評估為單一位置。得分如下：沒有任何脫色的證據(0%)得分為0，>0-10%=1分，>10-25%=2分，>25-75%=3分，>75-<100%=4分，100%=5分。“白斑病評分”是所有四個位點評分的總和，最大評分為20分。
對於色素再生研究，當疾病通常穩定時，在白斑病誘導後12-20周，用野生型小鼠CXCR3耗竭抗體或同型對照處理在其尾部具有大於75%脫色的小鼠。如前該用ImageJ進行色素再生分析。Agarwal等，J.Invest.Dermatol.135：1080-8(2015)。
CXCR3抗體對血液和脾臟中細胞計數的影響。使用100μg的每種抗體輸注小鼠，並在24小時評估來自血液(使用Countbright珠確定的細胞/微升)和脾(使用來自Becton Coulter的Via-Cell XR儀的總細胞計數)的記憶CD8+ T細胞計數。因為投與的抗體為與用於CXCR3染色的抗體基本相同的抗體(相同的CDR)且可以阻止染色抗體與CXCR3結合，所以通過評估記憶CD8+ T細胞的數目(如通過CD44和CD62L染色定義)使用CXCR3非依賴性測量來評估耗竭，因為超過50%的這些細胞表現CXCR3。
流式細胞術. 收穫血液、尾巴、脾和皮膚引流淋巴結並經由流式細胞術分析。將脾臟破碎，並使用RBC裂解緩衝液(Sigma Aldrich)裂解紅血球細胞。按照製造商的方案將血液樣品染色並用Biolegend裂解/固定緩衝液處理。為了分離真皮和表皮，將尾部皮膚樣品與5U mL-1分散酶II(Roche)一起於37℃溫育1小時。移除表皮並用70μm細胞過濾器機械破碎，並將真皮樣品與含有1-2mg mL-1 DNAse I(Sigma-Aldrich)的1mg mL-1膠原酶IV一起於37℃溫育1小時。分析前所有細胞通過70μm篩網過濾。為了鑑定PMEL及其表型，用FACS緩衝液(PBS中的1%BSA)中1：200的下列抗體對樣品進行染色：CD45 AF700、CD8b PerCP-Cy5.5、Thy1.1 Pacific Blue,(Biolegend)。Live/Dead Blue(Invitrogen)在FACS緩衝液中以1：1000使用而區分活細胞。使用BD LSR II流式細胞儀(BD Biosciences)和FlowJo軟件版本10(Tree Star,Inc.)收集和分析數據。
結果
CXCR3抗體對血液和脾中細胞計數的影響. 在血液和脾臟中，用野生型小鼠或倉鼠CXCR3抗體處理的小鼠中，記憶CD8+ T細胞的總數顯著減少，而用△AB CXCR3處理的小鼠中，細胞數與未處理的小鼠相比未改變。
預防. 用倉鼠抗小鼠CXCR3(耗竭的)，野生型小鼠CXCR3(較多耗竭的)、△AB CXCR3(中和的；非耗竭的)或同型對照抗體處理小鼠。其中，耗竭抗體野生型小鼠CXCR3在預防臨床疾病中表現最好，如通過治療後5周得分顯著降低所證明(單因素ANOVA p=0.0066，Dunnett事後檢驗對比同型ns；Tukey事後檢驗對於△AB對比野生型以及△AB對比倉鼠而言是顯著的)。此觀察結果與數據一致，指示野生型小鼠CXCR3抗體比倉鼠CXCR3抗體具有更好的耗竭活性。在小鼠中的白斑病預防中測試的所有抗體導致皮膚中較少PMEL。用任何CXCR3抗體處理後，表皮中PMEL數目顯著減少(與同型對照相比，雙因素ANOVA p<0.0001及Bonferroni事後檢驗)並趨於真皮減少。然而，儘管其能夠減少皮膚中的PMEL數，但是中和抗體不如耗竭抗體有效，這可能是由於PMEL的低閾值數對於全部臨床疾病是充分的事實所致。通過測量淋巴結(LN)、脾臟、血液、表皮和真皮中的宿主CD8+ T細胞和總CD45+細胞的數目來評估CXCR3耗竭抗體對宿主T細胞的作用。通過倉鼠或野生型小鼠CXCR3抗體處理，旁觀宿主CD8+ T細胞數目在脾臟和淋巴結(LN)中顯著減少，但在皮膚中並非如此(與同型對照相比，雙因素ANOVA p<0.0001及Bonoffroni事後檢驗)。然而，在用任何CXCR3抗體處理後，CD45+細胞的總 數沒有變化。
色素再生. 小鼠野生型CXCR3抗體治療顯著逆轉臨床疾病，並減少表皮中的PMEL數目。宿主CD8+ T細胞數在治療的小鼠中略微減少，儘管總的CD45+細胞數目沒有變化。綜上該，這些數據指示，CXCR3耗竭抗體可減少自體反應性T細胞數目並逆轉疾病，同時對免疫系統的其他區室具有最小的影響。
前述實例意欲說明而絕非限制本公開。考慮到本文公開的化合物和方法的詳述和實踐，公開的化合物和方法的其他實施方案對於本領域技術人員會是顯而易見的。
<110> 法商賽諾菲公司
<120> 用於白斑病的治療的抗人CXCR3抗體
<130> US2016/044-EP-EPA
<140> 106145025
<141> 2017-12-21
<150> 62/437,889
<151> 2016-12-22
<160> 141
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 368
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<213> 智人
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<400> 20
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<213> 人工序列
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<400> 23
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<223> /註="人工序列之敘述：合成多肽"
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<210> 26
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列之敘述：合成多肽"
<400> 26
<210> 27
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列之敘述：合成多肽"
<400> 27
<210> 28
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列之敘述：合成多肽"
<400> 28
<210> 29
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列之敘述：合成多肽"
<400> 29
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<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列之敘述：合成多肽"
<400> 30
<210> 31
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列之敘述：合成多肽"
<400> 31
<210> 32
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列之敘述：合成多肽"
<400> 32
<210> 33
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<220>
<221> 來源
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
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<212> PRT
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<221> 來源
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
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<221> 來源
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<221> 來源
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
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<221> 來源
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<221> 來源
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<220>
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<221> 來源
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<221> 來源
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<221> 來源
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<220>
<221> 來源
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列之敘述：合成胜肽"
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<220>
<221> 來源
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
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<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
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<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
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<213> 人工序列
<220>
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
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<212> PRT
<213> 人工序列
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<221> 來源
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列之敘述：合成胜肽"
<400> 61
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<212> PRT
<213> 人工序列
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<221> 來源
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
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<212> PRT
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<221> 來源
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<400> 64
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<211> 16
<212> PRT
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<221> 來源
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
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<212> PRT
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<221> 來源
<223> /註="人工序列之敘述：合成胜肽"
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<212> PRT
<213> 人工序列
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<221> 來源
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列之敘述：合成胜肽"
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列之敘述：合成胜肽"
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<211> 5
<212> PRT
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<220>
<221> 來源
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<212> PRT
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<220>
<221> 來源
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
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<220>
<221> 來源
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<212> PRT
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<220>
<221> 來源
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<220>
<221> 來源
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<220>
<221> 來源
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<220>
<221> 來源
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<400> 79
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列之敘述：合成多肽"
<400> 80
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<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列之敘述：合成多肽"
<400> 81
<210> 82
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列之敘述：合成多肽"
<400> 82
<210> 83
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列之敘述：合成多肽"
<400> 83
<210> 84
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列之敘述：合成多肽"
<400> 84
<210> 85
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列之敘述：合成多肽"
<400> 85
<210> 86
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列之敘述：合成多肽"
<400> 86
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<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列之敘述：合成多肽"
<400> 87
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<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列之敘述：合成多肽"
<400> 88
<210> 89
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列之敘述：合成多肽"
<400> 89
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<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列之敘述：合成多肽"
<400> 90
<210> 91
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列之敘述：合成多肽"
<400> 91
<210> 92
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列之敘述：合成多肽"
<400> 92
<210> 93
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列之敘述：合成多肽"
<400> 93
<210> 94
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列之敘述：合成多肽"
<400> 94
<210> 95
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列之敘述：合成多肽"
<400> 95
<210> 96
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列之敘述：合成多肽"
<400> 96
<210> 97
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列之敘述：合成
多肽"
<400> 97
<210> 98
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列之敘述：合成多肽"
<400> 98
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<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列之敘述：合成多肽"
<400> 99
<210> 100
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列之敘述：合成多肽"
<400> 100
<210> 101
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列之敘述：合成多肽"
<400> 101
<210> 102
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列之敘述：合成多肽"
<400> 102
<210> 103
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列之敘述：合成多肽"
<400> 103
<210> 104
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列之敘述：合成多肽"
<400> 104
<210> 105
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列之敘述：合成多肽"
<400> 105
<210> 106
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列之敘述：合成多肽"
<400> 106
<210> 107
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列之敘述：合成多肽"
<400> 107
<210> 108
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列之敘述：合成多肽"
<400> 108
<210> 109
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列之敘述：合成多肽"
<400> 109
<210> 110
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列之敘述：合成多肽"
<400> 110
<210> 111
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列之敘述：合成多肽"
<400> 111
<210> 112
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列之敘述：合成多肽"
<400> 112
<210> 113
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列之敘述：合成多肽"
<400> 113
<210> 114
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列之敘述：合成多肽"
<400> 114
<210> 115
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列之敘述：合成 多肽"
<400> 115
<210> 116
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列之敘述：合成多肽"
<400> 116
<210> 117
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列之敘述：合成多肽"
<400> 117
<210> 118
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列之敘述：合成多肽"
<400> 118
<210> 119
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列之敘述：合成多肽"
<400> 119
<210> 120
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列之敘述：合成多肽"
<400> 120
<210> 121
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
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Claims (32)
- 一種人類化的抗人C-X-C基序趨化因子受體3(CXCR3)抗體或其醫藥組合物，其用於在治療白斑病的方法中使用，其中該人類化的抗人CXCR3抗體包含具有重鏈可變區(VH)的重鏈(HC)和具有輕鏈可變區(VL)的輕鏈(VL)，其中a)該VH和VL分別包含選自由如下組成之群組的序列對的胺基酸序列：SEQ ID NO：24/20、22/18、80/130、81/24、82/130、82/24、83/126、83/130、83/24、84/126、84/24、85/24、86/126、87/126、87/133、87/24、88/24、89/24、90/126、91/126、91/130、92/130、92/24、93/126、94/126、95/126、96/126、97/126、98/126、99/126、100/126、101/126、102/126、103/126、104/126、105/126、106/126、107/126、108/126、109/126、110/126、111/126、121/24、113/130、113/24、114/130、115/126、115/130、115/24、116/126、116/130、116/24、117/126、118/126、20/123、20/124、20/125、20/126、20/127、20/128、20/129、20/130、20/131、20/132、20/133、20/134、119/126、122/126和120/130，且其中b)該重鏈包含具有選自由如下組成之群組的胺基酸序列的人IgG1 Fc區：SEQ ID NO：2、3、4、5、6、7、8、9、10和11。
- 如請求項1的人類化的抗人CXCR3抗體，其中該VH包含SEQ ID NO：20的胺基酸序列且該VL包含SEQ ID NO：24的胺基酸序列。
- 如請求項2的人類化的抗人CXCR3抗體，其中該人IgG1 Fc區包含SEQ ID NO：2的胺基酸序列。
- 如請求項2的人類化的抗人CXCR3抗體，其中該人IgG1 Fc區包含SEQ ID NO：9的胺基酸序列。
- 如請求項2的人類化的抗人CXCR3抗體，其中該人IgG1 Fc區包含SEQ ID NO：10的胺基酸序列。
- 如請求項2的人類化的抗人CXCR3抗體，其中該人IgG1 Fc區包含SEQ ID NO：11的胺基酸序列。
- 如請求項1的人類化的抗人CXCR3抗體，其中該VH包含SEQ ID NO：18的胺基酸序列且該VL包含SEQ ID NO：22的胺基酸序列。
- 如請求項7的人類化的抗人CXCR3抗體，其中該人IgG1 Fc區包含SEQ ID NO：2的胺基酸序列。
- 如請求項8的人類化的抗人CXCR3抗體，其中該人IgG1 Fc區包含SEQ ID NO：9的胺基酸序列。
- 如請求項8的人類化的抗人CXCR3抗體，其中該人IgG1 Fc區包含SEQ ID NO：10的胺基酸序列。
- 如請求項8的人類化的抗人CXCR3抗體，其中該人IgG1 Fc區包含SEQ ID NO：11的胺基酸序列。
- 如請求項35的人類化的抗人CXCR3抗體或其藥物製劑，其中a)該HC包含SEQ ID NO：25的胺基酸序列且該LC包含SEQ ID NO：135的胺基酸序列，b)該HC包含SEQ ID NO：26的胺基酸序列且該LC包含SEQ ID NO：135的胺基酸序列，c)該HC包含SEQ ID NO：27的胺基酸序列且該LC包含SEQ ID NO：135的胺基酸序列，d)該HC包含SEQ ID NO：139的胺基酸序列且該LC包含SEQ ID NO：135的胺基酸序列，e)該HC包含SEQ ID NO：31的胺基酸序列且該LC包含SEQ ID NO：137的胺基酸序列，f)該HC包含SEQ ID NO：32的胺基酸序列且該LC包含SEQ ID NO：137的胺基酸序列，g)該HC包含SEQ ID NO：32的胺基酸序列且該LC包含SEQ ID NO： 137的胺基酸序列，h)該HC包含SEQ ID NO：140的胺基酸序列且該LC包含SEQ ID NO：137的胺基酸序列。
- 如請求項1-12任一項的人類化的抗人CXCR3抗體或其藥物製劑，其中該IgG1 Fc區具有減少的海藻糖含量。
- 如請求項1-12任一項的人類化的抗人CXCR3抗體或其藥物製劑，其中該抗體在糖基化抑制劑存在下培養的宿主細胞中產生。
- 如請求項14的人類化的抗人CXCR3抗體或其藥物製劑，其中該糖基化抑制劑是幾夫堿(kifunensine)。
- 一種治療白斑病的方法，其包括對有需要的受試者投與人類化的抗人CXCR3抗體，該人類化的抗人CXCR3抗體包含具有重鏈可變區(VH)的重鏈(HC)和具有輕鏈可變區(VL)的輕鏈(LC)，其中a)該VH和VL分別包含選自由如下組成之群組的序列對的胺基酸序列：SEQ ID NO：24/20、22/18、80/130、81/24、82/130、82/24、83/126、83/130、83/24、84/126、84/24、85/24、86/126、87/126、87/133、87/24、88/24、89/24、90/126、91/126、91/130、92/130、92/24、93/126、94/126、95/126、96/126、97/126、98/126、99/126、100/126、101/126、102/126、103/126、104/126、105/126、106/126、107/126、108/126、109/126、110/126、111/126、121/24、113/130、113/24、114/130、115/126、115/130、115/24、116/126、116/130、116/24、117/126、118/126、20/123、20/124、20/125、20/126、20/127、20/128、20/129、20/130、20/131、20/132、20/133、20/134、119/126、122/126和120/130，且其中b)該重鏈包含選自由如下組成之群組的人IgG1 Fc區：SEQ ID NO：2、3、4、5、6、7、8、9、10和11。
- 如請求項16的方法，其中該VH包含SEQ ID NO：20的胺基酸序列且該VL包含SEQ ID NO：24的胺基酸序列。
- 如請求項17的人類化的抗人CXCR3抗體，其中該人IgG1 Fc區包含SEQ ID NO：2的胺基酸序列。
- 如請求項17的人類化的抗人CXCR3抗體，其中該人IgG1 Fc區包含SEQ ID NO：9的胺基酸序列。
- 如請求項17的人類化的抗人CXCR3抗體，其中該人IgG1 Fc區包含SEQ ID NO：10的胺基酸序列。
- 如請求項17的人類化的抗人CXCR3抗體，其中該人IgG1 Fc區包含SEQ ID NO：11的胺基酸序列。
- 如請求項16的方法，其中該VH包含SEQ ID NO：18的胺基酸序列且該VL包含SEQ ID NO：22的胺基酸序列。
- 如請求項22的人類化的抗人CXCR3抗體，其中該人IgG1 Fc區包含SEQ ID NO：2的胺基酸序列。
- 如請求項22的人類化的抗人CXCR3抗體，其中該人IgG1 Fc區包含SEQ ID NO：9的胺基酸序列。
- 如請求項22的人類化的抗人CXCR3抗體，其中該人IgG1 Fc區包含SEQ ID NO：10的胺基酸序列。
- 如請求項22的人類化的抗人CXCR3抗體，其中該人IgG1 Fc區包含SEQ ID NO：11的胺基酸序列。
- 如請求項16的方法，其中其中a)該HC包含SEQ ID NO：25的胺基酸序列且該LC包含SEQ ID NO：135的胺基酸序列，b)該HC包含SEQ ID NO：26的胺基酸序列且該LC包含SEQ ID NO：135的胺基酸序列，c)該HC包含SEQ ID NO：27的胺基酸序列且該LC包含SEQ ID NO：135的胺基酸序列， d)該HC包含SEQ ID NO：139的胺基酸序列且該LC包含SEQ ID NO：135的胺基酸序列，e)該HC包含SEQ ID NO：31的胺基酸序列且該LC包含SEQ ID NO：137的胺基酸序列，f)該HC包含SEQ ID NO：32的胺基酸序列且該LC包含SEQ ID NO：137的胺基酸序列，g)該HC包含SEQ ID NO：32的胺基酸序列且該LC包含SEQ ID NO：137的胺基酸序列，h)該HC包含SEQ ID NO：140的胺基酸序列且該LC包含SEQ ID NO：137的胺基酸序列。
- 如請求項16-27任一項的方法，其中該HC包含具有減少的海藻糖含量的人IgG1 Fc區。
- 如請求項16-27任一項的方法，其中該抗體在糖基化抑制劑存在下培養的宿主細胞中產生。
- 如請求項29的方法，其中該糖基化抑制劑是幾夫堿。
- 一種治療白斑病的方法，其包括提供對有需要的受試者投與人類化的抗人CXCR3抗體的說明，其中該人類化的抗人CXCR3抗體包含具有重鏈可變區(VH)的重鏈(HC)和具有輕鏈可變區(VL)的輕鏈(LC)，其中a)該VH和VL分別包含選自由如下組成之群組的序列對的胺基酸序列：SEQ ID NO：24/20、22/18、80/130、81/24、82/130、82/24、83/126、83/130、83/24、84/126、84/24、85/24、86/126、87/126、87/133、87/24、88/24、89/24、90/126、91/126、91/130、92/130、92/24、93/126、94/126、95/126、96/126、97/126、98/126、99/126、100/126、101/126、102/126、103/126、104/126、105/126、106/126、107/126、108/126、109/126、110/126、111/126、121/24、113/130、113/24、114/130、115/126、115/130、115/24、116/126、116/130、116/24、117/126、118/126、20/123、20/124、20/125、20/126、 20/127、20/128、20/129、20/130、20/131、20/132、20/133、20/134、119/126、122/126和120/130，且其中b)該重鏈包含具有選自由如下組成之群組的胺基酸序列的人IgG1 Fc區：SEQ ID NO：2、3、4、5、6、7、8、9、10和11。
- 一種用於治療白斑病的套組，其包含a)人類化的抗人CXCR3抗體，該人類化的抗人CXCR3抗體包含具有重鏈可變區(VH)的重鏈(HC)和具有輕鏈可變區(VL)的輕鏈(LC)，其中i)該VH和VL分別包含選自由如下組成之群組的序列對的胺基酸序列：SEQ ID NO：24/20、22/18、80/130、81/24、82/130、82/24、83/126、83/130、83/24、84/126、84/24、85/24、86/126、87/126、87/133、87/24、88/24、89/24、90/126、91/126、91/130、92/130、92/24、93/126、94/126、95/126、96/126、97/126、98/126、99/126、100/126、101/126、102/126、103/126、104/126、105/126、106/126、107/126、108/126、109/126、110/126、111/126、121/24、113/130、113/24、114/130、115/126、115/130、115/24、116/126、116/130、116/24、117/126、118/126、20/123、20/124、20/125、20/126、20/127、20/128、20/129、20/130、20/131、20/132、20/133、20/134、119/126、122/126和120/130，且其中ii)該HC進一步包含含有選自由如下組成之群組的胺基酸序列的人IgG1 Fc區：SEQ ID NO：2、3、4、5、6、7、8、9、10或11；和b)對有需要的人受試者投與該人類化的抗人CXCR3的說明。
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