TW201825510A - 細胞穿透肽序列 - Google Patents

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Abstract

揭示細胞穿透環肽。該等肽可用於傳遞肽及其他生物活性部份至細胞中。亦描述含有細胞穿透環肽之配方。

Description

細胞穿透肽序列 相關申請案之交互參照
本申請案主張於2016年11月22日提出之美國申請案第62/425,550號、2016年11月22日提出之美國申請案第62/425,438號、2016年12月22日提出之美國申請案第62/438,141號、及2017年5月17日提出之美國申請案第62/507,483號之優先權，各案內容全文以引用方式併入本文中以符合所有目的。
聯邦贊助研究聲明
本發明在獲得國家衛生研究院計畫編號GM062820及GM110208之政府支持下進行。美國政府對本發明享有特定權利。
本發明係有關於細胞穿透肽序列。
細胞膜為藥物發現帶來重大挑戰，特別是對生物製劑諸如肽、蛋白質及核酸而言。一種克服膜障礙並傳遞生物製劑至細胞中之潛在策略，是將它們附接至「細胞穿透肽(cell-penetrating peptide,CPP)」。儘管經過三十年的研究，CPP活性的根本基礎仍然不明。經由胞飲作用進入細胞的CPP必須離開胞飲囊泡才能到達胞質液。不幸的是，胞內體膜已證實是這些CPP進行細胞質傳遞的顯著障礙。因此 所需要的是可用於傳遞藥劑至各種細胞類型之新穎的細胞穿透肽及包含該等肽之組成物。
在本文中揭示之組成物及方法解決這些及其他需求。
在一些實施例中，本揭露提供根據式I-A至I-E中之一者的環肽： 其中AA1、AA2、AA3、AA4、AA5、AA6、AA7、AA8、AA9、及AA10中之各者當存在時係獨立地選自胺基酸；且其中：AA1、AA2、AA3、AA4、AA5、AA6、AA7、AA8、AA9、或AA10中之二或三者當存在時係精胺酸，且其餘的胺基酸係除精胺酸以外的胺基酸；且 AA1、AA2、AA3、AA4、AA5、AA6、AA7、AA8、AA9、或AA10中之至少二者當存在時獨立地係疏水性胺基酸。
在一些實施例中，各疏水性胺基酸係獨立地選自由苯甘胺酸、白胺酸、異白胺酸、正白胺酸、甲硫胺酸、苯丙胺酸、升苯丙胺酸、環己基丙胺酸、酪胺酸、哌啶-2-羧酸酯、色胺酸、脯胺酸、3-(3-苯并噻吩基)-丙胺酸、及萘丙胺酸所組成之群組，其各者係可選地經一或多個取代基取代。在其他實施例中，各疏水性胺基酸獨立地係哌啶-2-羧酸酯、萘丙胺酸、色胺酸、3-(3-苯并噻吩基)-丙胺酸、或苯丙胺酸，其各者係可選地經一或多個取代基取代。在一些實施例中，至少一個疏水性胺基酸具有大於或等於苯丙胺酸之疏水性。
在某些實施例中，該等胺基酸中之至少二者具有相對掌性。在進一步實施例中，該等胺基酸中之至少二者具有相同掌性。
在一些實施例中，一個精胺酸係相鄰於一個疏水性胺基酸。在進一步實施例中，該精胺酸具有與該相鄰的疏水性胺基酸相同的掌性。
在一些實施例中，至少二個精胺酸係彼此相鄰。在其他實施例中，三個精胺酸係彼此相鄰。在一些實施例中，至少二個疏水性胺基酸係彼此相鄰。在其他實施例中，至少三個疏水性胺基酸係彼此相鄰。
在一些實施例中，任四個相鄰胺基酸係AAH2-AAH1-R-r、AAH2-AAH1-r-R、R-r-AAH1-AAH2、或r-R-AAH1-AAH2，其中AAH1及AAH2中之各者獨立地係疏水性胺基酸。
因此，在各種實施例中，在本文中揭示之環肽(例如，根據式I、及I-A至I-E之環肽)具有根據式II-A至II-D中任一者之結構： 其中：AAH1及AAH2中之各者獨立地係疏水性胺基酸；AAu及AAz每次出現時獨立地係任何胺基酸；且各AAu及各AAz中之至多一者係精胺酸；且其中：m及n中之各者獨立地係0至6的數字，惟m或n中之至少一者不是0且胺基酸之總數係6至10。
在一些實施例中，AAH1及AAH2中之各者獨立地係哌啶-2-羧酸酯、萘丙胺酸、色胺酸、3-(3-苯并噻吩基)-丙胺酸、或苯丙胺酸，其各者係可選地經一或多個取代基取代。在其他實施例中，AAH1及AAH2中之各者獨立地係具有大於或等於苯丙胺酸之疏水性(例如，使用本文表2提供之任何標度)的疏水性胺基酸。在仍其他實施例中，AAH1係萘丙胺酸。在又仍其他實施例中，AAH1及AAH2係萘丙胺酸。
在一些實施例中，AAH1係側鏈具有大的溶劑可達表面積(SASA)之疏水性胺基酸。在進一步實施例中，該大的SASA係至少約200Å2。在仍進一步實施例中，該大的SASA係在約200Å2至約1,000Å2的範圍內。在其他實施例中，AAH2係側鏈的SASA小於或等於AAH1之該側鏈的該SASA之疏水性胺基酸。在仍其他實施例中，當任何AAU或任何AAZ係疏水性胺基酸時，該疏水性胺基酸具有小於AAH1之SASA的側鏈。
在一些實施例中，AAH1及AAH2具有相同或相對掌性。在一些其他實施例中，AAH1及AAH2具有相對掌性。在仍其他實施例中，AAH1具有與該相鄰的精胺酸相同的掌性。
在某些實施例中，在本文中揭示之肽包含下列序列中之一者：AAH2-AAH1-R-r-R、AAH2-AAH1-R-r-r、AAH2-AAH1-r-R-R、AAH2-AAH1-r-R-r、R-R-r-AAH1-AAH2、r-R-r-AAH1-AAH2、r-r-R-AAH1-AAH2、或R-r-R-AAH1-AAH2。在其他實施例中，該等肽具有下列序列中之一者：AAH2-LAAH1-R-r-R、AAH2-DAAH1-r-R-r、r-R-r-DAAH1-AAH2、或R-r-R-LAAH1-AAH2。
在一些實施例中，在本文中揭示之環肽的相對胞質液傳遞效率相較於環(FΦRRRRQ)(SEQ ID NO：10)改善約50%至約500%之範圍的量。在一些實施例中，該環肽具有相較於環(FΦRRRRQ)(SEQ ID NO：10)改善約175%至約250%之相對胞質液傳遞效率。在一些該等實施例中，該環肽包含下列序列：FfFRr，例如環(FfFRrQ)(SEQ ID NO：96)。在其他實施例中，該環肽具有相較於環(FΦRRRRQ) (SEQ ID NO：10)改善約150%至約400%之相對胞質液傳遞效率。在一些該等實施例中，該環肽包含下列序列：fFfrRr(SEQ ID NO：132)，例如環(fFfrRrQ)(SEQ ID NO：97)。在仍其他實施例中，該環肽具有相較於環(FΦRRRRQ)(SEQ ID NO：10)改善約75%至約275%之胞質液傳遞效率。在一些該等實施例中，該環肽包含下列序列：fFfRrR(SEQ ID NO：133)，例如環(fFfRrRQ)(SEQ ID NO：98)。在又仍其他實施例中，該環肽具有相較於環(FΦRRRRQ)(SEQ ID NO：10)改善約150%至約250%之胞質液傳遞效率。在一些該等實施例中，該環肽包含下列序列：FfFrRr(SEQ ID NO：134)，例如環(FfFrRrQ)(SEQ ID NO：99)。在一些實施例中，該環肽具有相較於環(FΦRRRRQ)(SEQ ID NO：10)改善約200%至約450%之胞質液傳遞效率。在一些該等實施例中，該環肽包含下列序列：fFΦrRr(SEQ ID NO：135)，例如環(fFΦrRrQ)(SEQ ID NO：100)。在其他實施例中，肽具有相較於環(FΦRRRRQ)(SEQ ID NO：10)改善約250%至約450%之胞質液傳遞效率。在一些該等實施例中，該環肽包含下列序列：fΦfrRr(SEQ ID NO：136)，例如環(fΦfrRrQ)(SEQ ID NO：101)。
本文中亦揭示根據式III-A至III-D的環肽： 其中：AA1、AA2、AA3、及AA4中之各者係獨立地選自胺基酸；AAU及AAZ中之各者每次出現時係獨立地選自胺基酸；m及n中之各者係0至6的數字，惟m或n中之至少一者不是0；Xn係其貨物部份；L係連接子部份；其中：AA1、AA2、AA3、AA4、各AAU、及各AAZ中之二或三者係精胺酸，且其餘的胺基酸係除精胺酸以外的胺基酸；AA1、AA2、AA3、AA4、各AAU、及各AAZ中之至少二者獨立地係疏水性胺基酸；且其中當Xn附接至AAU時，m不是0。
在一些實施例中，各疏水性胺基酸係獨立地選自由苯甘胺酸、白胺酸、異白胺酸、正白胺酸、甲硫胺酸、苯丙胺酸、升苯丙胺酸、環己基丙胺酸、酪胺酸、哌啶-2-羧酸酯、色胺酸、脯胺酸、3-(3-苯并噻吩基)-丙胺酸、及萘丙胺酸所組成之群組，其各者係可選地經一或多個取代基取代。在其他實施例中，各疏水性胺基酸獨立地係哌啶-2-羧酸酯、萘丙胺酸、色胺酸、3-(3-苯并噻吩基)-丙胺酸、或苯丙胺酸，其各者係可選地經一或多個取代基取代。在一些實施例中，至少一個疏水性胺基酸具有大於或等於苯丙胺酸之疏水性。
在某些實施例中，該等胺基酸中之至少二者具有相對掌性。在進一步實施例中，該等胺基酸中之至少二者具有相同掌性。
在一些實施例中，一個精胺酸係相鄰於一個疏水性胺基酸。在進一步實施例中，該精胺酸具有與該相鄰的疏水性胺基酸相同的掌性。
在一些實施例中，至少二個精胺酸係彼此相鄰。在其他實施例中，三個精胺酸係彼此相鄰。在一些實施例中，至少二個疏水性胺基酸係彼此相鄰。在其他實施例中，至少三個疏水性胺基酸係彼此相鄰。
在一些實施例中，任四個相鄰胺基酸係AAH2-AAH1-R-r、AAH2-AAH1-r-R、R-r-AAH1-AAH2、或r-R-AAH1-AAH2，其中AAH1及AAH2中之各者獨立地係疏水性胺基酸。
在一些實施例中，式III-A至III-D之環肽具有根據式IV-A至IV-P中任一者之結構： 其中AAH1及AAH2中之各者獨立地係疏水性胺基酸。
在一些實施例中，AAH1及AAH2中之各者獨立地係哌啶-2-羧酸酯、萘丙胺酸、色胺酸、3-(3-苯并噻吩基)-丙胺酸、或苯丙胺酸，其各者係可選地經一或多個取代基取代。在其他實施例中，AAH1及AAH2中之各者獨立地係具有大於或等於苯丙胺酸之疏水性(例如，使用本文表2提供之任何標度)的疏水性胺基酸。在仍其他實施例中，AAH1係萘丙胺酸。在又仍其他實施例中，AAH1及AAH2係萘丙胺酸。
在一些實施例中，AAH1係側鏈具有大的溶劑可達表面積(SASA)之疏水性胺基酸。在進一步實施例中，該大的SASA係至少約200Å2。在仍進一步實施例中，該大的SASA係在約200Å2至約 1,000Å2的範圍內。在其他實施例中，AAH2係側鏈的SASA小於或等於AAH1之該側鏈的該SASA之疏水性胺基酸。在仍其他實施例中，當任何AAU或任何AAZ係疏水性胺基酸時，該疏水性胺基酸具有小於AAH1之SASA的側鏈。
在一些實施例中，AAH1及AAH2具有相同或相對掌性。在一些其他實施例中，AAH1及AAH2具有相對掌性。在仍其他實施例中，AAH1具有與該相鄰的精胺酸相同的掌性。
在某些實施例中，在本文中揭示之肽包含下列序列中之一者：AAH2-AAH1-R-r-R、AAH2-AAH1-R-r-r、AAH2-AAH1-r-R-R、AAH2-AAH1-r-R-r、R-R-r-AAH1-AAH2、r-R-r-AAH1-AAH2、r-r-R-AAH1-AAH2、或R-r-R-AAH1-AAH2。在其他實施例中，該等肽具有下列序列中之一者：AAH2-LAAH1-R-r-R、AAH2-DAAH1-r-R-r、r-R-r-DAAH1-AAH2、或R-r-R-LAAH1-AAH2。
本文中亦揭示包含式V-A至V-D之肽： 其中：AAH1及AAH2中之各者係獨立地選自疏水性胺基酸；AAU及AAZ每次出現時係獨立地選自胺基酸，且各AAU及各AAZ中之至多一者係精胺酸；且 m及n中之各者係0至6的數字，惟m或n中之至少一者不是0。
在一些實施例中，式V-A至V-D中之任一者的N端上之胺基或C端上之羧酸酯基團獨立地形成肽鍵。在其他實施例中，式V-A至V-D之肽進一步包含藉以形成環肽的環化部份。在仍其他實施例中，環化部份與式V-A至V-D中之任一者的N端上之胺基或C端上之羧酸酯基團獨立地形成肽鍵。在一些實施例中，式V-A至V-D之肽進一步包含貨物部份Xn，其中至少一個原子或鍵結被連至Xn的鍵結置換。
在一些實施例中，AAH1及AAH2中之各者獨立地係哌啶-2-羧酸酯、萘丙胺酸、色胺酸、3-(3-苯并噻吩基)-丙胺酸、或苯丙胺酸，其各者係可選地經一或多個取代基取代。在一些實施例中，AAH1及AAH2中之各者獨立地係具有大於或等於苯丙胺酸之疏水性的疏水性胺基酸。在一些實施例中，AAH1係萘丙胺酸。在一些實施例中，AAH1及AAH2係萘丙胺酸。在一些實施例中，AAH1係側鏈具有大的溶劑可達表面積(SASA)之疏水性胺基酸。在進一步實施例中，該大的SASA係至少約200Å2。在仍進一步實施例中，該大的SASA係在約200Å2至約1,000Å2的範圍內。在其他實施例中，AAH2係側鏈的SASA小於或等於AAH1之該側鏈的該SASA之疏水性胺基酸。在仍其他實施例中，當任何AAU或任何AAZ係疏水性胺基酸時，該疏水性胺基酸具有小於AAH1之SASA的側鏈。
在一些實施例中，AAH1及AAH2具有相同或相對掌性。在一些其他實施例中，AAH1及AAH2具有相對掌性。在仍其他實施例中，AAH1具有與該相鄰的精胺酸相同的掌性。
在某些實施例中，式V-A至V-D之肽包含下列序列中之一者：AAH2-AAH1-R-r-R、AAH2-AAH1-R-r-r、AAH2-AAH1-r-R-R、AAH2-AAH1-r-R-r、R-R-r-AAH1-AAH2、r-R-r-AAH1-AAH2、r-r-R-AAH1-AAH2、或R-r-R-AAH1-AAH2。在其他實施例中，該等肽具有下列序列中之一者：AAH2-LAAH1-R-r-R、AAH2-DAAH1-r-R-r、r-R-r-DAAH1-AAH2、或R-r-R-LAAH1-AAH2。
在一些實施例中，包含式V-A至V-D中之任一者的肽具有相較於環(FΦRRRRQ)(SEQ ID NO：10)改善約50%至約500%之範圍的量之胞質液傳遞效率。在一些實施例中，該等肽包含下列序列：FfFRrR(SEQ ID NO：131)。在其他實施例中，該等肽包含下列序列：fFfrRr(SEQ ID NO：132)。在仍其他實施例中，該等肽包含下列序列：fFfRrR(SEQ ID NO：133)。在又仍其他實施例中，該等肽包含下列序列：FfFrRr(SEQ ID NO：134)。在甚至仍其他實施例中，該等肽包含下列序列：fFΦrRr(SEQ ID NO：135)。在一些實施例中，包含式V-A至V-D中之任一者的該等肽包含下列序列：fΦfrRr(SEQ ID NO：136)。
在各種實施例中，本揭露提供治療或診斷有此需要之病患之方法，其包含投予在本文中揭示之環肽。
在各種實施例中，本揭露提供包含在本文中描述之環肽之組成物。
定義
在通篇說明書的說明及申請專利範圍中，用語「包含(comprise)」及該用語的其他形式諸如「包含(comprising及comprises)」意指包括但不限於，且無意排除例如其他添加物、組分、整數、或步驟。
如說明及隨附申請專利範圍中所使用，單數形式之「一(a,an)」及「該(the)」包括複數指稱物，除非上下文以其他方式清楚說明。因此，舉例來說，指稱「組成物(a composition)」包括二或更多個該等組成物之混合物、指稱「藥劑(an agent)」包括二或更多個該等藥劑之混合物、指稱「該組分(the component)」包括二或更多個該等組分之混合物、及類似物。
「可選的(optional)」或「可選地(optionally)」意指其後描述之事件或情況可發生或可不發生，且說明包括該事件或情況發生之例子及該事件或情況不發生之例子。
範圍可在本文中表示為自「約(about)」一個特定值及/或至「約」另一特定值。當該種範圍經表示時，另一態樣包括自一個特定值及/或至其他特定值。類似地，當值藉由前置用語「約」表示為 近似值時，將理解該特定值形成另一態樣。將進一步理解各範圍的端點相對於另一端點均為顯著，且獨立於另一端點。亦將理解當提供範圍時，該範圍涵蓋在該範圍內的各個及每個值及子範圍。
如本文中所使用，「對象(subject)」係指個體。因此，「對象」可包括馴養動物(例如貓、犬、等)、家畜(例如牛、馬、豬、綿羊、山羊、等)、實驗動物(例如小鼠、兔、大鼠、天竺鼠、等)、及鳥。「對象」亦可包括哺乳動物，諸如靈長動物或人類。因此，對象可為人類或獸醫病患。用語「病患(patient)」係指在臨床醫師例如內科醫師治療下之對象。
用語「抑制(inhibit)」係指降低活性、反應、病況、疾病、或其他生物參數。此可包括但不限於完全剝蝕活性、反應、病況、或疾病。此亦可包括例如活性、反應、病況、或疾病相較於天然或對照水準減少10%。因此，減少可為相較於天然或對照水準減少10、20、30、40、50、60、70、80、90、100%、或任何之間的量。
「減少(reduce)」或該用語的其他形式諸如「減少(reducing或reduction)」意指降低事件或特徵(例如腫瘤生長)。應理解此一般係與一些標準或期望值有關，換言之係相對的，但不一定需要指稱出標準或相對值。例如，「減少腫瘤生長(reduces tumor growth)」意指減少腫瘤相對於標準或對照之生長速率。
「預防(prevent)」或該用語的其他形式諸如「預防(preventing或prevention)」意指停止特定事件或特徵、穩定或延遲特定事件或特徵的發展或進展、或最小化特定事件或特徵將發生的機 會。預防不需要與對照比較，因為其一般而言比例如減少更為絕對。如本文中所使用，有可能減少但無法預防某事，但被減少的某事也可能被預防。同樣地，有可能預防但無法減少某事，但被預防的某事也可能被減少。應理解所使用之減少或預防，除非以其他方式具體指示，否則亦明確揭示另一用語的使用。例如，用語「預防(prevent)」或「抑制(suppress)」可指稱預先阻止或減緩疾病或病況的發病或減少疾病或病況的嚴重性的治療。因此，若治療可治療具有疾病症狀之對象的疾病，其亦可在尚未出現一些或所有症狀的對象中預防或抑制該疾病。
用語「治療(treatment)」係指對病患進行之用意在治癒、改善、穩定、或預防疾病、病理病況、或病症的醫學管理。此用語包括主動治療，也就是具體針對疾病、病理病況、或病症之改善的治療，也包括成因治療，也就是針對移除相關疾病、病理病況、或病症之成因的治療。此外，此用語包括安寧治療，也就是設計用來舒緩症狀而非治癒疾病、病理病況、或病症之治療；預防治療，也就是目的為最小化或部分或完全抑制相關疾病、病理病況、或病症之發展的治療；及支持治療，也就是經採用以補充另一種目的為改善相關疾病、病理病況、或病症的特定療法之治療。
用語「抗癌(anticancer)」係指以任何濃度治療或控制細胞性增生及/或腫瘤生長的能力。
用語「治療有效(therapeutically effective)」係指所使用之組成物的量係足以改善疾病或病症的一或多個成因或症狀的量。該改善僅需要減少或改變，不一定需要消除。
用語「醫藥上可接受(pharmaceutically acceptable)」係指該些在合理醫學判斷之範疇內適合用於與人類及動物之組織接觸而無過度毒性、刺激、過敏反應、或其他問題或併發症且符合合理利益/風險比之化合物、材料、組成物、及/或劑型。
用語「載劑(carrier)」意指當與化合物或組成物組合時幫助或促進化合物或組成物之製備、儲存、投予、傳遞、有效性、選擇性、或任何其他特徵以達其預定用途或目的之化合物、組成物、物質、或結構。例如，可選擇載劑以最小化活性成分的任何降解及最小化對象之任何不良反應。
如本文中所使用，用語「醫藥上可接受之載劑(pharmaceutically acceptable carrier)」係指無菌水溶液或非水溶液、分散液、懸浮液或乳劑、以及在要使用前才用於重構成無菌注射用溶液或分散液之無菌粉劑。合適水溶液及非水溶液載劑、稀釋劑、溶劑或媒劑的實例包括水、乙醇、多元醇(諸如甘油、丙二醇、聚乙二醇及類似物)、羧甲基纖維素及其合適混合物、蔬菜油(諸如橄欖油)、及注射用有機酯諸如油酸乙酯。適當之流動性可例如藉由使用包覆材料諸如卵磷酯、藉由維持以分散液為例之所需粒徑及藉由使用界面活性劑來維持。這些組成物亦可含有佐劑諸如保存劑、潤濕劑、乳化劑及分散劑。預防微生物作用可藉由包括各種抗菌劑及抗真菌劑諸如對 羥基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸及類似物加以確保。亦可為所欲的是包括等張劑諸如糖、氯化鈉及類似物。注射用醫藥形式之延長吸收可藉由包括延遲吸收之劑諸如單硬脂酸鋁及明膠達成。注射用貯劑形式係藉由在生物可降解聚合物諸如聚乳酸-聚乙交酯、聚(原酸酯)及聚(酐)中形成藥物之微膠囊基質製備。根據藥物對聚合物之比例及所採用之特定聚合物之本質，可控制藥物釋放速率。貯劑注射用配方亦可藉由將藥物包封於與身體組織相容之脂質體或微乳劑加以製備。注射用配方可經滅菌，例如，藉由過濾通過留置細菌之過濾器，或藉由併入呈無菌固體組成物形式之滅菌劑，該無菌固體組成物可在要使用前才溶解或分散於無菌水或其他無菌注射用介質。合適惰性載劑可包括糖諸如乳糖。所欲的是，至少95%重量的活性成分粒子具有0.01至10微米範圍之有效粒徑。
用語「肽(peptide)」、「蛋白質(protein)」、及「多肽(polypeptide)」可交換使用，係指包含二或更多個胺基酸的天然或合成分子，該二或更多個胺基酸藉由一個胺基酸的羧基連接至另一個胺基酸的α胺基。
如本文中所使用，用語「相鄰(adjacent)」係指藉由共價鍵連接之二個毗連胺基酸。
如本文中所使用，用語「掌性(chirality)」係指胺基酸之「D」及「L」異構物。
用語「醯基(acyl)」係指基團-C(O)R，其中R係如本文中定義之氫、烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、環烷基、或雜環 基。除非在說明書中以其他方式具體陳述，否則醯基可為可選地經取代。
「烷基(Alkyl或alkyl group)」係指具有一至十二個碳原子之完全飽和、直鏈或分支烴鏈自由基，且其係藉由單鍵附接至分子的其他部分。包含1至12之任何數目的碳原子之烷基皆包括。包含至多12個碳原子之烷基係C1-C12烷基、包含至多10個碳原子之烷基係C1-C10烷基、包含至多6個碳原子之烷基係C1-C6烷基且包含至多5個碳原子之烷基係C1-C5烷基。C1-C5烷基包括C5烷基、C4烷基、C3烷基、C2烷基及C1烷基(即甲基)。C1-C6烷基包括C1-C5烷基的所有上述部份但亦包括C6烷基。C1-C10烷基包括C1-C5烷基及C1-C6烷基的所有上述部份，但亦包括C7、C8、C9及C10烷基。類似地，C1-C12烷基包括所有前述部份，但亦包括C11及C12烷基。C1-C12烷基之非限制性實例包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、二級丙基、正丁基、異丁基、二級丁基、三級丁基、正戊基、三級戊基、正己基、正庚基、正辛基、正壬基、正癸基、正十一基、及正十二基。除非在說明書中以其他方式具體陳述，否則烷基可為可選地經取代。
「烯基(Alkenyl或alkenyl group)」係指具有二至十二個碳原子且具有一或多個碳-碳雙鍵之直鏈或分支烴鏈自由基。各烯基係藉由單鍵附接至分子的其他部分。包含2至12之任何數目的碳原子之烯基皆包括。包含至多12個碳原子之烯基係C2-C12烯基、包含至多10個碳原子之烯基係C2-C10烯基、包含至多6個碳原子之烯基係C2-C6烯基且包含至多5個碳原子之烯基係C2-C5烯基。C2-C5烯基包 括C5烯基、C4烯基、C3烯基、及C2烯基。C2-C6烯基包括C2-C5烯基的所有上述部份但亦包括C6烯基。C2-C10烯基包括C2-C5烯基及C2-C6烯基的所有上述部份，但亦包括C7、C8、C9及C10烯基。類似地，C2-C12烯基包括所有前述部份，但亦包括C11及C12烯基。C2-C12烯基之非限制性實例包括乙烯基(ethenyl)(乙烯基(vinyl))、1-丙烯基、2-丙烯基(烯丙基)、異丙烯基、2-甲基-1-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、4-戊烯基、1-己烯基、2-己烯基、3-己烯基、4-己烯基、5-己烯基、1-庚烯基、2-庚烯基、3-庚烯基、4-庚烯基、5-庚烯基、6-庚烯基、1-辛烯基、2-辛烯基、3-辛烯基、4-辛烯基、5-辛烯基、6-辛烯基、7-辛烯基、1-壬烯基、2-壬烯基、3-壬烯基、4-壬烯基、5-壬烯基、6-壬烯基、7-壬烯基、8-壬烯基、1-癸烯基、2-癸烯基、3-癸烯基、4-癸烯基、5-癸烯基、6-癸烯基、7-癸烯基、8-癸烯基、9-癸烯基、1-十一烯基、2-十一烯基、3-十一烯基、4-十一烯基、5-十一烯基、6-十一烯基、7-十一烯基、8-十一烯基、9-十一烯基、10-十一烯基、1-十二烯基、2-十二烯基、3-十二烯基、4-十二烯基、5-十二烯基、6-十二烯基、7-十二烯基、8-十二烯基、9-十二烯基、10-十二烯基、及11-十二烯基。除非在說明書中以其他方式具體陳述，否則烷基可為可選地經取代。
「烷氧基(Alkoxy)」係指基團-OR，其中R係如本文中定義之烷基、烯基、炔基、環烷基、或雜環基。除非在說明書中以其他方式具體陳述，否則烷氧基可為可選地經取代。
「烷基胺甲醯基(Alkylcarbamoyl)」係指基團-O-C(O)-NRaRb，其中Ra及Rb係相同或不同且獨立地係如本文中定義之烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、環烷基、或雜環基，或RaRb可合在一起以形成如本文中定義之雜環基。除非在說明書中以其他方式具體陳述，否則烷基胺甲醯基可為可選地經取代。
「烷基羧醯胺基(Alkylcarboxamidyl)」係指基團-C(O)-NRaRb，其中Ra及Rb係相同或不同且獨立地係如本文中定義之烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、環烷基、環烯基、環炔基、或雜環基，或RaRb可合在一起以形成如本文中定義之環烷基。除非在說明書中以其他方式具體陳述，否則烷基羧醯胺基可為可選地經取代。
「烷氧羰基(Alkoxycarbonyl)」係指基團-C(O)OR，其中R係如本文中定義之烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、環烷基、環烯基、環炔基、或雜環基。除非在說明書中以其他方式具體陳述，否則烷氧羰基可為可選地經取代。
「烷基硫基(Alkylthio)」係指-SR或-S(O)n=1-2-R，其中R係如本文中定義之烷基、烯基、炔基、環烷基、環烯基、環炔基、或雜環基。除非在說明書中以其他方式具體陳述，否則烷基硫基可為可選地經取代。
「芳基硫基(Arylthio)」係指-SR或-S(O)n=1-2-R，其中R係如本文中定義之芳基或雜芳基。除非在說明書中以其他方式具體陳述，否則芳基硫基可為可選地經取代。
「炔基(Alkynyl或alkynyl group)」係指具有二至十二個碳原子且具有一或多個碳-碳參鍵之直鏈或分支烴鏈自由基。各炔基係藉由單鍵附接至分子的其他部分。包含2至12之任何數目的碳原子之炔基皆包括。包含至多12個碳原子之炔基係C2-C12炔基、包含至多10個碳原子之炔基係C2-C10炔基、包含至多6個碳原子之炔基係C2-C6炔基且包含至多5個碳原子之炔基係C2-C5炔基。C2-C5炔基包括C5炔基、C4炔基、C3炔基、及C2炔基。C2-C6炔基包括C2-C5炔基的所有上述部份但亦包括C6炔基。C2-C10炔基包括C2-C5炔基及C2-C6炔基的所有上述部份，但亦包括C7、C8、C9及C10炔基。類似地，C2-C12炔基包括所有前述部份，但亦包括C11及C12炔基。C2-C12烯基之非限制性實例包括乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基及類似物。除非在說明書中以其他方式具體陳述，否則烷基可為可選地經取代。
「芳基(Aryl)」係指包含氫、6至18個碳原子及至少一個芳環之烴環系自由基。就本發明之目的而言，芳基自由基可為單環、雙環、三環或四環環系，其可包括稠合或橋聯環系。芳基自由基包括但不限於衍生自乙烯合蒽、乙烯合萘、乙烯合菲、蒽、薁、苯、、、茀、as-二環戊二烯并苯、s-二環戊二烯并苯、茚烷、茚、萘、萉、菲、、芘、及聯三伸苯之芳基自由基。除非在說明書中以其他方式具體陳述，否則用語「芳基」意在包括可選地經取代的芳基自由基。
「芳氧基(Aryloxy)」係指基團-OAr，其中Ar係如本文中定義之芳基或雜芳基。除非在說明書中以其他方式具體陳述，否則芳氧基可為可選地經取代。
「環烷基(Cycloalkyl)」係指僅由碳及氫原子所組成的穩定非芳族單環或多環完全飽和烴自由基，其可包括稠合或橋聯環系、具有三至二十個碳原子較佳地具有三至十個碳原子、且係藉由單鍵附接至分子的其他部分。單環環烷基自由基包括例如環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、及環辛基。多環環烷基自由基包括例如金剛烷基、降基、十氫萘基、7,7-二甲基-雙環[2.2.1]庚烷基、及類似物。除非在說明書中以其他方式具體陳述，否則環烷基可為可選地經取代。
「環烯基(Cycloalkenyl)」係指僅由碳及氫原子所組成的穩定非芳族單環或多環烴自由基，其具有一或多個碳-碳雙鍵、可包括稠合或橋聯環系、具有三至二十個碳原子較佳地具有三至十個碳原子、且係藉由單鍵附接至分子的其他部分。單環環烯基自由基包括例如環戊烯基、環己烯基、環庚烯基、環辛烯基、及類似物。多環環烯基自由基包括例如雙環[2.2.1]庚-2-烯基及類似物。除非在說明書中以其他方式具體陳述，否則環烯基可為可選地經取代。
「環炔基(Cycloalkynyl)」係指僅由碳及氫原子所組成的穩定非芳族單環或多環烴自由基，其具有一或多個碳-碳參鍵、可包括稠合或橋聯環系、具有三至二十個碳原子較佳地具有三至十個碳原子、且係藉由單鍵附接至分子的其他部分。單環環炔基自由基包括例 如環庚炔基、環辛炔基、及類似物。除非在說明書中以其他方式具體陳述，否則環炔基可為可選地經取代。
「雜環基(Heterocyclyl)」、「雜環(heterocyclic ring或heterocycle)」係指穩定3至20員非芳環自由基，其係由二至十二個碳原子及一至六個選自由氮、氧及硫所組成之群組之雜原子所組成。雜環基或雜環包括如下文中定義之雜芳基。除非在說明書中以其他方式具體陳述，否則雜環基自由基可為單環、雙環、三環或四環環系，其可包括稠合或橋聯環系；且雜環基自由基中之氮、碳或硫原子可為可選地氧化；氮原子可為可選地季銨化；且雜環基自由基可為部分或完全飽和。該等雜環基自由基之實例包括但不限於二氧雜環戊烷基、噻吩基[1,3]二硫雜環己烷基、十氫異喹啉基、咪唑啉基、咪唑啶基、異四氫噻唑基、異唑啶基、啉基、八氫吲哚基、八氫異吲哚基、2-側氧基哌基、2-側氧基哌啶基、2-側氧基吡咯啶基、唑啶基、哌啶基、哌基、4-哌啶酮基、吡咯啶基、吡唑啶基、啶基、四氫噻唑基、四氫呋喃基、三硫雜環己烷基、四氫哌喃基、硫啉基、噻啉基、1-側氧基-硫啉基、及1,1-二側氧基-硫啉基。除非在說明書中以其他方式具體陳述，否則雜環基可為可選地經取代。
「雜芳基(Heteroaryl)」係指5至20員環系自由基，其包含氫原子、一至十三個碳原子、一至六個選自由氮、氧及硫所組成之群組之雜原子、及至少一個芳環。就本發明之目的而言，雜芳基自由基可為單環、雙環、三環或四環環系，其可包括稠合或橋聯環系；且雜芳基自由基中之氮、碳或硫原子可為可選地氧化；氮原子可為可 選地季銨化。實例包括但不限於氮呯基、吖啶基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、苯并吲哚基、苯并二呃基、苯并呋喃基、苯并唑基、苯并噻唑基、苯并噻二唑基、苯并[b][1,4]二氧呯基、1,4-苯并二烷基、苯并萘并呋喃基、苯并唑基、苯并二呃基、苯并二氧雜環己烯基、苯并哌喃基、苯并哌喃酮基、苯并呋喃基、苯并呋喃酮基、苯并噻吩基(苯并苯硫基)、苯并三唑基、苯并[4,6]咪唑并[1,2-a]吡啶基、咔唑基、啉基、二苯并呋喃基、二苯并苯硫基、呋喃基、呋喃酮基、異噻唑基、咪唑基、吲唑基、吲哚基、吲唑基、異吲哚基、吲哚啉基、異吲哚啉基、異喹啉基、吲哚基、異唑基、啶基、二唑基、2-側氧基氮呯基、唑基、環氧乙烷基、1-氧橋基吡啶基、1-氧橋基嘧啶基、1-氧橋基吡基、1-氧橋基嗒基、1-苯基-1H-吡咯基、啡基、啡噻基、啡基、吠基、喋啶基、嘌呤基、吡咯基、吡唑基、吡啶基、吡基、嘧啶基、嗒基、喹唑啉基、喹啉基、喹啉基、啶基、異喹啉基、四氫喹啉基、噻唑基、噻二唑基、三唑基、四唑基、三基、及苯硫基(即噻吩基)。除非在說明書中以其他方式具體陳述，否則雜芳基可為可選地經取代。
在本文中使用之用語「經取代(substituted)」意指任何上述基團(即烷基、烯基、炔基、環烷基、環烯基、環炔基、雜環基、芳基、雜芳基、烷氧基、芳氧基、醯基、烷基胺甲醯基、烷基羧醯胺基、烷氧羰基、烷基硫基、或芳基硫基)中之至少一個氫原子被連至非氫原子之鍵結置換，該非氫原子諸如但不限於：鹵素原子諸如F、Cl、Br、及I；在諸如羥基、烷氧基、及酯基團之基團中之氧原 子；在諸如氫硫基、硫烷基、碸基團、磺醯基、及亞碸基團之基團中之硫原子；在諸如胺、醯胺、烷基胺、二烷基胺、芳基胺、烷基芳基胺、二芳基胺、N-氧化物、醯亞胺、及烯胺之基團中之氮原子；在諸如三烷基矽基、二烷基芳基矽基、烷基二芳基矽基、及三芳基矽基之基團中之矽原子；及在各種其他基團中之其他雜原子。「經取代」亦意指其中一或多個氫原子被連至雜原子的較高階鍵結(例如雙鍵或參鍵)置換之任何上述基團，該雜原子諸如在側氧基、羰基、羧基、及酯基團中之氧；及在諸如亞胺、肥、腙、及腈之基團中之氮。例如，「經取代」包括其中一或多個氫原子被-NRgRh、-NRgC(=O)Rh、-NRgC(=O)NRgRh、-NRgC(=O)ORh、-NRgSO2Rh、-OC(=O)NRgRh、-ORg、-SRg、-SORg、-SO2Rg、-OSO2Rg、-SO2ORg、=NSO2Rg、及-SO2NRgRh置換之任何上述基團。「經取代」亦意指其中一或多個氫原子被-C(=O)Rg、-C(=O)ORg、-C(=O)NRgRh、-CH2SO2Rg、、CH2SO2NRgRh置換之任何上述基團。在前述中，Rg及Rh係相同或不同且獨立地係氫、烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷基胺基、硫烷基、芳基、芳烷基、環烷基、環烯基、環炔基、環烷基烷基、鹵烷基、鹵烯基、鹵炔基、雜環基、N-雜環基、雜環烷基、雜芳基、N-雜芳基及/或雜芳基烷基。「經取代」進一步意指其中一或多個氫原子被連至胺基、氰基、羥基、亞胺基、硝基、側氧基、硫酮基、鹵基、烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷基胺基、硫烷基、芳基、芳烷基、環烷基、環烯基、環炔基、環烷基烷基、鹵烷基、鹵烯基、鹵炔基、雜環基、N-雜環基、雜環烷基、雜芳基、N-雜芳基及/或雜芳基烷基的鍵結置換之 任何上述基團。此外，前述取代基中之各者亦可可選地經一或多個上述取代基取代。
細胞穿透肽
本文中揭示具有如細胞穿透肽(CPP)之活性的化合物。在一些實施例中，CPP包括介於二或三個精胺酸與至少二個疏水性胺基酸之間的任何組合，且CPP中之胺基酸總數在4至約20個胺基酸的範圍內。在一些實施例中，在本文中揭示之CPP包含約4至約至約13個胺基酸，例如約5、約6、約7、約8、約9、約10、或約11個胺基酸、或約12個胺基酸，包括所有介於之間的範圍及子範圍。在具體實施例中，在本文中揭示之CPP包含約6至約10個胺基酸、或約6至約8個胺基酸。
各胺基酸可為天然或非天然胺基酸。用語「非天然胺基酸(non-natural amino acid)」係指屬於天然胺基酸之同源物的有機化合物，其具有與天然胺基酸類似的結構，以使其模擬天然胺基酸之結構及反應性。非天然胺基酸可為非20種常見天然發生胺基酸或罕見天然胺基酸硒代半胱胺酸或吡咯離胺酸中之一者的經修飾胺基酸及/或胺基酸類似物。非天然胺基酸亦可為天然胺基酸的D-異構物。因此，如本文中所使用，用語「胺基酸(amino acid)」係指天然及非天然胺基酸、及其類似物及衍生物。合適胺基酸之實例包括但不限於丙胺酸、別異白胺酸、精胺酸、天冬醯胺酸、天冬胺酸、半胱胺酸、麩醯胺酸、麩胺酸、甘胺酸、組胺酸、異白胺酸、白胺酸、離胺酸、甲硫胺 酸、萘丙胺酸、苯丙胺酸、脯胺酸、焦麩胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、色胺酸、酪胺酸、纈胺酸、衍生物、或其組合。這些及其他連同彼等在本文中使用之縮寫列於表1。
在一些實施例中，本揭露提供具有根據式I之結構的環肽： 其中：AA1、AA2、AA3、AA4、AA5、及AA6中之各者係獨立地選自胺基酸；且AA7、AA8、AA9、及AA10中之各者係獨立地不存在或選自胺基酸；且其中：AA1、AA2、AA3、AA4、AA5、AA6、AA7、AA8、AA9、或AA10中之二或三者係精胺酸，且其餘的胺基酸係除精胺酸以外的胺基酸；且AA1、AA2、AA3、AA4、AA5、AA6、AA7、AA8、AA9、或AA10中之至少二者獨立地係疏水性胺基酸。
式I之胺基酸及其排列係詳細描述於下。
在一些實施例中，在本文中揭示之CPP(即式I之環肽)具有根據式I-A至I-E中任一者之結構： 其中AA1、AA2、AA3、AA4、AA5、AA6、AA7、AA8、AA9、及AA10中之各者當存在時係獨立地選自胺基酸；且其中：AA1、AA2、AA3、AA4、AA5、AA6、AA7、AA8、AA9、或AA10中之二或三者當存在時係精胺酸，且其餘的胺基酸係除精胺酸以外的胺基酸；且AA1、AA2、AA3、AA4、AA5、AA6、AA7、AA8、AA9、或AA10中之至少二者當存在時獨立地係疏水性胺基酸。
當環肽具有根據式I-A之結構時，AA1、AA2、AA3、AA4、AA5、及AA6中之二或三者係精胺酸。當環肽具有根據式I-B之結構時，AA1、AA2、AA3、AA4、AA5、AA6、及AA7中之二或三者係精胺酸。當環肽具有根據式I-C之結構時，AA1、AA2、AA3、AA4、AA5、AA6、AA7、及AA8中之二或三者係精胺酸。當環肽具有根據式I-D之結構時，AA1、AA2、AA3、AA4、AA5、AA6、AA7、 AA8、及AA9中之二或三者係精胺酸。當環肽具有根據式I-E之結構時，AA1、AA2、AA3、AA4、AA5、AA6、AA7、AA8、AA10、及AA10中之二或三者係精胺酸。因此，根據式I、I-A、I-B、I-C、I-D、及I-E之環肽序列包括二或三個精胺酸，但不多於三個精胺酸。
在一些實施例中，各疏水性胺基酸係獨立地選自甘胺酸、丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、甲硫胺酸、苯丙胺酸、色胺酸、脯胺酸、萘丙胺酸、苯甘胺酸、升苯丙胺酸、酪胺酸、環己基丙胺酸、哌啶-2-羧酸酯、3-(3-苯并噻吩基)-丙胺酸、或正白胺酸，其各者係可選地經一或多個取代基取代。在具體實施例中，各疏水性胺基酸獨立地係疏水性芳族胺基酸。在一些實施例中，芳族疏水性胺基酸係萘丙胺酸、苯甘胺酸、升苯丙胺酸、苯丙胺酸、色胺酸、3-(3-苯并噻吩基)-丙胺酸、3-(2-喹啉基)-丙胺酸、O-苄基絲胺酸、3-(4-(苄氧基)苯基)-丙胺酸、S-(4-甲基苄基)半胱胺酸、N-(萘-2-基)麩醯胺酸、3-(1,1'-聯苯-4-基)-丙胺酸、3-(3-苯并噻吩基)-丙胺酸或酪胺酸，其各者係可選地經一或多個取代基取代。這些非天然芳族疏水性胺基酸的幾個結構(在併入在本文中揭示之肽之前)係提供於下。在具體實施例中，疏水性胺基酸係哌啶-2-羧酸酯、萘丙胺酸、色胺酸、3-(3-苯并噻吩基)-丙胺酸、或苯丙胺酸，其各者係可選地經一或多個取代基取代。
所屬技術領域中具有通常知識者將理解上述非天然芳族疏水性胺基酸的N端及/或C端在併入在本文中揭示之肽(例如式I、I-A至I-E、II-A至II-D、III-A至III-D、IV-A至IV-P、及V-A至V-D之肽)時形成醯胺鍵結。
可選的取代基可為任何不顯著減少CPP之胞質液傳遞效率的原子或基團，例如不減少相對胞質液傳遞效率至小於c(FΦRRRRQ)(SEQ ID NO：10)之相對胞質液傳遞效率的取代基。在一些實施例中，可選的取代基可為疏水性取代基或親水性取代基。在某些實施例中，可選的取代基係疏水性取代基。在一些實施例中，取代基增加疏水性胺基酸的溶劑可達表面積(如本文中以下定義者)。在一 些實施例中，取代基可為鹵素、烷基、烯基、炔基、環烷基、環烯基、環炔基、雜環基、芳基、雜芳基、烷氧基、芳氧基、醯基、烷基胺甲醯基、烷基羧醯胺基、烷氧羰基、烷基硫基、或芳基硫基。在一些實施例中，取代基係鹵素。
可選擇具有較高疏水性值之胺基酸，以相對於具有較低疏水性值之胺基酸改善CPP胞質液傳遞效率。在一些實施例中，各疏水性胺基酸獨立地具有大於甘胺酸的疏水性值之疏水性值。在其他實施例中，各疏水性胺基酸獨立地係具有大於丙胺酸的疏水性值之疏水性值之疏水性胺基酸。在仍其他實施例中，各疏水性胺基酸獨立地具有大於或等於苯丙胺酸的疏水性值之疏水性值。疏水性可使用所屬技術領域中已知之疏水性標度測量。下表2列出Eisenberg及Weiss(Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.1984；81(1)：140-144)、Engleman，等人(Ann.Rev.of Biophys.Biophys.Chem..1986；1986(15)：321-53)、Kyte及Doolittle(J.Mol.Biol.1982；157(1)：105-132)、Hoop及Woods(Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.1981；78(6)：3824-3828)、及Janin(Nature.1979；277(5696)：491-492)所報告的各種胺基酸之疏水性值，其各者全文以引用方式併入本文中。在具體實施例中，疏水性係使用Engleman等人所報告的疏水性標度測量。
可選擇胺基酸的掌性以改善胞質液攝取效率。在一些實施例中，胺基酸中之至少二者具有相對掌性。在一些實施例中，至少二個具有相對掌性之胺基酸可彼此相鄰。在一些實施例中，至少三個胺基酸具有相對於彼此交替之掌性。在一些實施例中，至少三個相對於彼此具有交替掌性之胺基酸可彼此相鄰。在一些實施例中，胺基酸中之至少二者具有相同掌性。在一些實施例中，至少二個具有相同掌性之胺基酸可彼此相鄰。在一些實施例中，至少二個相鄰胺基酸具有相同掌性且至少二個相鄰胺基酸具有相對掌性。在一些實施例中，至少二個具有相對掌性之胺基酸可相鄰於至少二個具有相同掌性之胺基 酸。因此，在一些實施例中，在CPP中之相鄰胺基酸可具有任何下列序列：D-L；L-D；D-L-L-D；L-D-D-L；L-D-L-L-D；D-L-D-D-L；D-L-L-D-L；或L-D-D-L-D。
在一些實施例中，精胺酸係相鄰於疏水性胺基酸。在一些實施例中，精胺酸具有與疏水性胺基酸相同的掌性。在一些實施例中，至少二個精胺酸係彼此相鄰。在其他實施例中，三個精胺酸係彼此相鄰。在一些實施例中，至少二個疏水性胺基酸係彼此相鄰。在其他實施例中，至少三個疏水性胺基酸係彼此相鄰。在其他實施例中，在本文中描述之CPP包含至少二個連續疏水性胺基酸及至少二個連續精胺酸。在進一步實施例中，一個疏水性胺基酸係相鄰於精胺酸中之一者。在仍其他實施例中，在本文中描述之CPP包含至少三個連續疏水性胺基酸及三個連續精胺酸。在進一步實施例中，一個疏水性胺基酸係相鄰於精胺酸中之一者。這些胺基酸之各種組合可具有任何D及L胺基酸的排列，例如在前段中描述之任何序列。
在一些實施例中，在本文中描述之CPP(例如根據式IA至I-D之CPP)中的任四個相鄰胺基酸可具有下列序列中之一者：AAH2-AAH1-R-r、AAH2-AAH1-r-R、R-r-AAH1-AAH2、或r-R-AAH1-AAH2，其中AAH1及AAH2中之各者獨立地係疏水性胺基酸。
因此，在一些實施例中，在本文中描述之CPP具有根據式II-A至II-D中任一者之結構： 其中：AAH1及AAH2中之各者獨立地係疏水性胺基酸；AAU及AAZ每次出現時獨立地係任何胺基酸；且各AAU及各AAZ中之至多一者係精胺酸；且其中：m及n中之各者獨立地係0至6的數字，惟m或n中之至少一者不是0且胺基酸之總數係6至10。
在一些實施例中，在式II-A至II-D之CPP中的胺基酸(包括r、R、AAH1、AAH2)總數係在6至10的範圍內。在一些實施例中，胺基酸總數係6。在一些實施例中，胺基酸總數係7。在一些實施例中，胺基酸總數係8。在一些實施例中，胺基酸總數係9。在一些實施例中，胺基酸總數係10。
在一些實施例中，m及n的總和係2至6。在一些實施例中，m及n的總和係2。在一些實施例中，m及n的總和係3。在一些實施例中，m及n的總和係4。在一些實施例中，m及n的總和係5。在一些實施例中，m及n的總和係6。在一些實施例中，m係0。在一些實施例中，m係1。在一些實施例中，m係2。在一些實施例中，m係3。在一些實施例中，m係4。在一些實施例中，m係5。在 一些實施例中，m係6。在一些實施例中，n係0。在一些實施例中，n係1。在一些實施例中，n係2。在一些實施例中，n係3。在一些實施例中，n係4。在一些實施例中，n係5。在一些實施例中，n係6。
在一些實施例中，各疏水性胺基酸係獨立地選自甘胺酸、丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、甲硫胺酸、苯丙胺酸、色胺酸、脯胺酸、萘丙胺酸、苯甘胺酸、升苯丙胺酸、酪胺酸、環己基丙胺酸、哌啶-2-羧酸酯、或正白胺酸，其各者係可選地經一或多個取代基取代。在具體實施例中，各疏水性胺基酸獨立地係疏水性芳族胺基酸。在一些實施例中，芳族疏水性胺基酸係萘丙胺酸、苯甘胺酸、升苯丙胺酸、苯丙胺酸、色胺酸、3-(3-苯并噻吩基)-丙胺酸、3-(2-喹啉基)-丙胺酸、O-苄基絲胺酸、3-(4-(苄氧基)苯基)-丙胺酸、S-(4-甲基苄基)半胱胺酸、N-(萘-2-基)麩醯胺酸、3-(1,1'-聯苯-4-基)-丙胺酸、3-(3-苯并噻吩基)-丙胺酸或酪胺酸，其各者係可選地經一或多個取代基取代。在具體實施例中，疏水性胺基酸係哌啶-2-羧酸酯、萘丙胺酸、色胺酸、3-(3-苯并噻吩基)-丙胺酸、或苯丙胺酸，其各者係可選地經一或多個取代基取代。
在一些實施例中，AAH1及AAH2中之各者獨立地係具有大於甘胺酸的疏水性值之疏水性值之疏水性胺基酸。在其他實施例中，AAH1及AAH2中之各者獨立地係具有大於丙胺酸的疏水性值之疏水性值之疏水性胺基酸。在仍其他實施例中，AAH1及AAH2中之各者獨立地係具有大於苯丙胺酸的疏水性值之疏水性值之疏水性胺基酸，例如使用上述之疏水性標度測量，包括Eisenberg及Weiss(Proc. Natl.Acad.Sci.U.S.A.1984；81(1)：140-144)、Engleman，等人(Ann.Rev.of Biophys.Biophys.Chem..1986；1986(15)：321-53)、Kyte及Doolittle(J.Mol.Biol.1982；157(1)：105-132)、Hoop及Woods(Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.1981；78(6)：3824-3828)、及Janin(Nature.1979；277(5696)：491-492)(見上表1)。在具體實施例中，疏水性係使用Engleman等人所報告的疏水性標度測量。
亦已發現，疏水性胺基酸存在於D-Arg或L-Arg的N端或C端上、或其組合上改善CPP(及附接貨物)的胞質液攝取。例如，在一些實施例中，在本文中揭示之CPP可包括AAH1-D-Arg或D-Arg-AAH1。在其他實施例中，在本文中揭示之CPP可包括AAH1-L-Arg或L-Arg-AAH1。在-些實施例中，疏水性胺基酸存在於CPP中的D-Arg或L-Arg的N端或C端上、或其組合上相較於否則相同的序列改善胞質液傳遞效率約1.1倍至約30倍，例如約1.2倍、約1.3倍、約1.4倍、約1.5倍、約1.6倍、約1.7倍、約1.8倍、約1.9倍、約2.0倍、約2.5倍、約3.0倍、約3.5倍、約4.0倍、約4.5倍、約5.0倍、約5.5倍、約6.0倍、約6.5倍、約7.0倍、約7.5倍、約8.0倍、約8.5倍、約9.0倍、約10倍、約10.5倍、約11.0倍、約11.5倍、約12.0倍、約12.5倍、約13.0倍、約13.5倍、約14.0倍、約14.5倍、約15.0倍、約15.5倍、約16.0倍、約16.5倍、約17.0倍、約17.5倍、約18.0倍、約18.5倍、約19.0倍、約19.5倍、約20倍、約20.5倍、約21.0倍、約21.5倍、約22.0倍、約22.5倍、約23.0倍、約23.5倍、約24.0倍、約24.5倍、約25.0 倍、約25.5倍、約26.0倍、約26.5倍、約27.0倍、約27.5倍、約28.0倍、約28.5倍、約29.0倍、或約29.5倍，包括所有介於之間的值及子範圍。在一些實施例中，疏水性胺基酸存在於CPP中的D-Arg及/或L-Arg的N端及/或C端上改善胞質液攝取效率約20倍。
可選擇在D-Arg或L-Arg的N端或C端上、或其組合上的疏水性胺基酸(即AAH1)的大小，以改善CPP的胞質液傳遞效率。例如，在D-Arg或L-Arg的N端或C端上、或其組合上的較大疏水性胺基酸相較於具有較小疏水性胺基酸否則相同的序列改善胞質液傳遞效率。疏水性胺基酸的大小可就疏水性胺基酸的分子量、疏水性胺基酸的立體效應、側鏈的溶劑可達表面積(SASA)、或其組合測量。在一些實施例中，疏水性胺基酸的大小係就疏水性胺基酸的分子量測量，且較大疏水性胺基酸具有分子量至少約90g/mol、或至少約130g/mol、或至少約141g/mol的側鏈。在具體實施例中，胺基酸的大小係就疏水性側鏈的SASA測量，且較大疏水性胺基酸具有SASA大於丙胺酸之SASA、或大於甘胺酸之SASA的側鏈。在其他實施例中，AAH1具有SASA大於或等於約哌啶-2-羧酸酯、大於或等於約色胺酸、大於或等於約苯丙胺酸、或等於或大於約萘丙胺酸的疏水性側鏈。在一些實施例中，AAH1及AAH2獨立地具有SASA在約200Å2至約1000Å2的範圍內之側鏈，例如約250Å2、300Å2、350Å2、400Å2、450Å2、500Å2、550Å2、650Å2、700Å2、750Å2、800Å2、850Å2、900Å2、及約950Å2，包括所有介於之間的值及子範圍。
在一些實施例中，AAH1具有SASA至少約200Å2、至少約210Å2、至少約220Å2、至少約240Å2、至少約250Å2、至少約260Å2、至少約270Å2、至少約280Å2、至少約290Å2、至少約300Å2、至少約310Å2、至少約320Å2、或至少約330Å2之側鏈。在一些實施例中，AAH2具有SASA至少約200Å2、至少約210Å2、至少約220Å2、至少約240Å2、至少約250Å2、至少約260Å2、至少約270Å2、至少約280Å2、至少約290Å2、至少約300Å2、至少約310Å2、至少約320Å2、或至少約330Å2之側鏈。在一些實施例中，AAH1及AAH2之側鏈具有至少約350Å2、至少約360Å2、至少約370Å2、至少約380Å2、至少約390Å2、至少約400Å2、至少約410Å2、至少約420Å2、至少約430Å2、至少約440Å2、至少約450Å2、至少約460Å2、至少約470Å2、至少約480Å2、至少約490Å2、大於約500Å2、至少約510Å2、至少約520Å2、至少約530Å2、至少約540Å2、至少約550Å2、至少約560Å2、至少約570Å2、至少約580Å2、至少約590Å2、至少約600Å2、至少約610Å2、至少約620Å2、至少約630Å2、至少約640Å2、大於約650Å2、至少約660Å2、至少約670Å2、至少約680Å2、至少約690Å2、或至少約700Å2之合併SASA。在一些實施例中，AAH2係側鏈的SASA小於或等於AAH1之疏水性側鏈的SASA之疏水性胺基酸。舉例說明且非限制之用，具有Nal-Arg模體之CPP相較於具有Phe-Arg模體否則相同的CPP展現改善的胞質液傳遞效率；具有Phe-Nal-Arg模體之CPP相較於具有Nal-Phe-Arg模體否則相同的CPP展現改 善的胞質液傳遞效率；且phe-Nal-Arg模體相較於具有nal-Phe-Arg模體否則相同的CPP展現改善的胞質液傳遞效率。在一些實施例中，較大疏水性胺基酸存在於CPP中的D-Arg或L-Arg的N端或C端上、或其組合上相較於否則相同的序列改善胞質液傳遞效率約1.1倍至約30倍，例如約1.2倍、約1.3倍、約1.4倍、約1.5倍、約1.6倍、約1.7倍、約1.8倍、約1.9倍、約2.0倍、約2.5倍、約3.0倍、約3.5倍、約4.0倍、約4.5倍、約5.0倍、約5.5倍、約6.0倍、約6.5倍、約7.0倍、約7.5倍、約8.0倍、約8.5倍、約9.0倍、約10倍、約10.5倍、約11.0倍、約11.5倍、約12.0倍、約12.5倍、約13.0倍、約13.5倍、約14.0倍、約14.5倍、約15.0倍、約15.5倍、約16.0倍、約16.5倍、約17.0倍、約17.5倍、約18.0倍、約18.5倍、約19.0倍、約19.5倍、約20倍、約20.5倍、約21.0倍、約21.5倍、約22.0倍、約22.5倍、約23.0倍、約23.5倍、約24.0倍、約24.5倍、約25.0倍、約25.5倍、約26.0倍、約26.5倍、約27.0倍、約27.5倍、約28.0倍、約28.5倍、約29.0倍、或約29.5倍，包括所有介於之間的值及子範圍。在具體實施例中，較大疏水性胺基酸存在於CPP中的D-Arg及/或L-Arg的N端及/或C端上改善胞質液攝取效率約20倍。
如本文中所使用，「疏水性表面積(hydrophobic surface area)」或「SASA」係指溶劑可到達之胺基酸側鏈的表面積(報告為平方埃；Å2)。在具體實施例中，SASA係使用Shrake & Rupley發展的「滾球」演算法(J Mol Biol. 79(2)：351-71)計算，其全文以引用方 式併入本文中以符合所有目的。此演算法使用具有特定半徑之溶劑「球體(sphere)」以探測分子的表面。球體的典型值係1.4Å，其近似水分子的半徑。
某些側鏈的SASA值係顯示於下表3。在某些實施例中，在本文中描述之SASA值係基於下表3所列之理論值，由Tien等人報告(PLOS ONE 8(11)：e80635.https：//doi.org/10.1371/journal.pone.0080635)，其全文以引用方式併入本文中以符合所有目的。
在一些實施例中，CPP在AAH2-AAH1-R-r、AAH2-AAH1-r-R、R-r-AAH1-AAH2、或r-R-AAH1-AAH2的N端及/或C端上不包括疏水性胺基酸。在替代實施例中，CPP不包括側鏈大於(如本文中描述者)AAH1或AAH2中之至少一者的疏水性胺基酸。在進一步實施例中，CPP不包括側鏈的表面積大於AAH1之疏水性胺基酸。也就是說，當任何AAU或任何AAZ係疏水性胺基酸時(例如在式I、I-A至I-E、II-A至II-D、III-A至III-D、IV-A至IV-P、及V-A至V-D中)，該疏水性胺基酸的側鏈之SASA小於AAH1。例如，在AAH1或AAH2中之至少一者係苯丙胺酸的實施例中，CPP不進一步包括萘丙胺酸(雖然CPP可包括至少一個小於AAH1及AAH2之疏水性胺基酸，例如白胺酸)。在仍其他實施例中，CPP除了在AAH2-AAH1-R-r、AAH2-AAH1-r-R、R-r-AAH1-AAH2、或r-R-AAH1-AAH2中的疏水性胺基酸以外不包括萘丙胺酸(或較大疏水性胺基酸)。
可選擇胺基酸的掌性(即D或L胺基酸)以改善CPP(及如下述之附接貨物)的胞質液傳遞效率。在一些實施例中，在精胺酸之N端或C端上的疏水性胺基酸(例如AAH1、AAu或AAz)具有與相鄰的精胺酸相同或相對的掌性。在一些實施例中，AAH1具有與相鄰的精胺酸相對的掌性。例如，當精胺酸係D-arg(即「r」)時，AAH1係D-AAH1，且當精胺酸係L-Arg(即「R」)時，AAH1係L-AAH1。因此，在一些實施例中，在本文中揭示之CPP可包括下列模體中之至少一者：D-AAH1-D-arg、D-arg-D-AAH1、L-AAH1-L-Arg、或L-Arg-LAAH1。在具體實施例中，當精胺酸係D-arg時，AAH1可為 D-pip、D-nal、D-trp、D-bta、或D-phe。在另一非限制性實例中，當精胺酸係L-Arg時，AAH1可為L-Pip、L-Nal、L-Trp、L-Bta、或L-Phe。在一些實施例中，與相鄰的精胺酸具有相同掌性之疏水性胺基酸的存在相較於否則相同的序列改善胞質液傳遞效率約1.1倍至約30倍，例如約1.2倍、約1.3倍、約1.4倍、約1.5倍、約1.6倍、約1.7倍、約1.8倍、約1.9倍、約2.0倍、約2.5倍、約3.0倍、約3.5倍、約4.0倍、約4.5倍、約5.0倍、約5.5倍、約6.0倍、約6.5倍、約7.0倍、約7.5倍、約8.0倍、約8.5倍、約9.0倍、約10倍、約10.5倍、約11.0倍、約11.5倍、約12.0倍、約12.5倍、約13.0倍、約13.5倍、約14.0倍、約14.5倍、約15.0倍、約15.5倍、約16.0倍、約16.5倍、約17.0倍、約17.5倍、約18.0倍、約18.5倍、約19.0倍、約19.5倍、約20倍、約20.5倍、約21.0倍、約21.5倍、約22.0倍、約22.5倍、約23.0倍、約23.5倍、約24.0倍、約24.5倍、約25.0倍、約25.5倍、約26.0倍、約26.5倍、約27.0倍、約27.5倍、約28.0倍、約28.5倍、約29.0倍、或約29.5倍，包括所有介於之間的值及子範圍。在一些實施例中，與相鄰的精胺酸具有相同掌性之疏水性胺基酸的存在改善胞質液攝取效率約2.5倍。
在一些實施例中，在本文中描述之CPP包括三個精胺酸。因此，在一些實施例中，在本文中描述之CPP包括下列序列中之一者：AAH2-AAH1-R-r-R、AAH2-AAH1-R-r-r、AAH2-AAH1-r-R-R、AAH2-AAH1-r-R-r、R-R-r-AAH1-AAH2、r-R-r-AAH1-AAH2、r-r-R- AAH1-AAH2、或R-r-R-AAH1-AAH2。在具體實施例中，CPP具有下列序列中之一者：AAH2-AAH1-R-r-R、AAH2-AAH1-r-R-r、r-R-r-AAH1-AAH2、或R-r-R-AAH1-AAH2。在一些實施例中，AAH1及AAH2的掌性可經例如如上述之選擇以改善胞質液攝取效率，其中AAH1具有與相鄰的精胺酸相同的掌性，且AAH1及AAH2具有相對掌性。
在一些實施例中，在本文中描述之CPP包括三個疏水性胺基酸。因此，在一些實施例中，在本文中描述之CPP包括下列序列中之一者：AAH3-AAH2-AAH1-R-r、AAH3-AAH2-AAH1-R-r、AAH3-AAH2-AAH1-r-R、AAH3-AAH2-AAH1-r-R、R-r-AAH1-AAH2-AAH3、R-r-AAH1-AAH2-AAH3、r-R-AAH1-AAH2-AAH3、或r-R-AAH1-AAH2-AAH3，其中AAH3係上述之任何疏水性胺基酸，例如哌啶-2-羧酸酯、萘丙胺酸、色胺酸、3-(3-苯并噻吩基)-丙胺酸、或苯丙胺酸。在一些實施例中，AAH1、AAH2、及AAH3的掌性可經例如如上述之選擇以改善胞質液攝取效率，其中AAH1具有與相鄰的精胺酸相同的掌性，且AAH1及AAH2具有相對掌性。在其他實施例中，AAH1、AAH2、及AAH3的大小可經例如如上述之選擇以改善胞質液攝取效率，其中AAH3具有小於或等於AAH1及分開地/或AAH2之SAS。
在一些實施例中，AAH1及AAH2具有相同或相對掌性。在某些實施例中，AAH1及AAH2具有相對掌性。因此，在一些實施例中，在本文中揭示之CPP包括下列序列中之至少一者：D-AAH2-L-AAH1-R-r；L-AAH2-D-AAH1-r-R；R-r-D-AAH1-L-AAH2；或r-R-L-AAH1-D-AAH1，其中D-AAH1及D-AAH2中之各者係具有D組態之疏 水性胺基酸，且L-AAH1及L-AAH2中之各者係具有L組態之疏水性胺基酸。在一些實施例中，D-AAH1及D-AAH2中之各者係獨立地選自由D-pip、D-nal、D-trp、D-bta、及D-phe所組成之群組。在具體實施例中，D-AAH1或D-AAH2係D-nal。在其他具體實施例中，D-AAH1係D-nal。在一些實施例中，L-AAH1及L-AAH2中之各者係獨立地選自由L-Pip、L-Nal、L-Trp、L-Bta、及L-Phe所組成之群組。在具體實施例中，L-AAH1及L-AAH2中之各者係L-Nal。在其他具體實施例中，L-AAH1係L-Nal。在一些實施例中，具有相對掌性之AAH1及AAH2的存在相較於否則相同的序列改善胞質液傳遞效率約1.1倍至約30倍，例如約1.2倍、約1.3倍、約1.4倍、約1.5倍、約1.6倍、約1.7倍、約1.8倍、約1.9倍、約2.0倍、約2.5倍、約3.0倍、約3.5倍、約4.0倍、約4.5倍、約5.0倍、約5.5倍、約6.0倍、約6.5倍、約7.0倍、約7.5倍、約8.0倍、約8.5倍、約9.0倍、約10倍、約10.5倍、約11.0倍、約11.5倍、約12.0倍、約12.5倍、約13.0倍、約13.5倍、約14.0倍、約14.5倍、約15.0倍、約15.5倍、約16.0倍、約16.5倍、約17.0倍、約17.5倍、約18.0倍、約18.5倍、約19.0倍、約19.5倍、約20倍、約20.5倍、約21.0倍、約21.5倍、約22.0倍、約22.5倍、約23.0倍、約23.5倍、約24.0倍、約24.5倍、約25.0倍、約25.5倍、約26.0倍、約26.5倍、約27.0倍、約27.5倍、約28.0倍、約28.5倍、約29.0倍、或約29.5倍，包括所有介於之間的值及子範圍。在一些實施例中，具有相對掌性之AAH1及AAH2的存在改善胞質液傳遞效率約1.5倍。
如上所討論，本揭露提供可改善胞質液傳遞效率之環肽序列的各種修飾。在一些實施例中，改善的胞質液攝取效率可藉由將具有經修飾序列之CPP的胞質液傳遞效率與適當對照序列比較來測量。在一些實施例中，對照序列不包括特定修飾(例如R與AAH1之相符掌性)，否則即與經修飾序列相同。在其他實施例中，對照具有下列序列：環狀(FΦRRRRQ)(SEQ ID NO：10)。
在本文中使用之胞質液傳遞效率係指CPP橫越細胞膜且進入胞質液的能力。在實施例中，CPP之胞質液傳遞效率不取決於受體或細胞類型。胞質液傳遞效率可指絕對胞質液傳遞效率或相對胞質液傳遞效率。
絕對胞質液傳遞效率係CPP(或CPP-貨物接合物)之胞質液濃度對CPP(或CPP-貨物接合物)於生長介質中之濃度的比例。相對胞質液傳遞效率係指CPP於胞質液中之濃度相較於對照CPP於胞質液中之濃度。定量可藉由螢光標示CPP(例如使用FTIC染料)並使用所屬技術領域中廣為周知之技術測量螢光強度達成。
在具體實施例中，相對胞質液傳遞效率係藉由比較下列判定：(i)本發明之CPP被細胞類型(例如HeLa細胞)內化之量與(ii)對照CPP被相同細胞類型內化之量。為了測量相對胞質液傳遞效率，可將細胞類型在本發明之細胞穿透肽存在下孵養特定時間期間(例如30分鐘、1小時、2小時、等)，之後被細胞內化之CPP的量係使用所屬技術領域中已知之方法例如螢光顯微法定量。分開地，將相同濃度 之對照CPP在細胞類型存在下孵養相同時間期間，且定量被細胞內化之對照CPP的量。
在其他實施例中，相對胞質液傳遞效率可藉由測量具有經修飾序列之CPP對細胞內目標的IC50，並將具有經修飾序列之CPP的IC50與適當對照序列(如本文中描述者)比較來判定。
在一些實施例中，在本文中描述之CPP的相對胞質液傳遞效率係在相較於環(FΦRRRRQ)(SEQ ID NO：10)約50%至約450%的範圍內，例如約60%、約70%、約80%、約90%、約100%、約110%、約120%、約130%、約140%、約150%、約160%、約170%、約180%、約190%、約200%、約210%、約220%、約230%、約240%、約250%、約260%、約270%、約280%、約290%、約300%、約310%、約320%、約330%、約340%、約350%、約360%、約370%、約380%、約390%、約400%、約410%、約420%、約430%、約440%、約450%、約460%、約470%、約480%、約490%、約500%、約510%、約520%、約530%、約540%、約550%、約560%、約570%、約580%、或約590%，包括所有介於之間的值及子範圍。在其他實施例中，在本文中描述之CPP的相對胞質液傳遞效率相較於環(FΦRRRRQ)(SEQ ID NO：10)改善大於約600%。在某些實施例中，CPP包含FfFRrR(SEQ ID NO：131)例如環(FfFRrRQ)(SEQ ID NO：96)，且相較於環(FΦRRRRQ)(SEQ ID NO：10)具有175%至約250%之相對胞質液傳遞效率。在某些實施例中，CPP包含fFfrRr(SEQ ID NO：132)例如 環(fFfrRrQ)(SEQ ID NO：97)，且相較於環(FΦRRRRQ)(SEQ ID NO：10)具有約150%至約400%之相對胞質液傳遞效率。在某些實施例中，CPP包含fFfRrR(SEQ ID NO：133)例如環(fFfRrRQ)(SEQ ID NO：98)，且相較於環(FΦRRRRQ)(SEQ ID NO：10)具有約75%至約275%之相對胞質液傳遞效率。在某些實施例中，CPP包含FfFrRr(SEQ ID NO：134)例如環(FfFrRrQ)(SEQ ID NO：99)，且相較於環(FΦRRRRQ)(SEQ ID NO：10)具有約150%至約250%之相對胞質液傳遞效率。在某些實施例中，CPP包含fFΦrRr(SEQ ID NO：135)例如環(fFΦrRrQ)(SEQ ID NO：100)，且具有相較於環(FΦRRRRQ)(SEQ ID NO：10)改善約200%至約450%之相對胞質液傳遞效率。在某些實施例中，CPP包含fΦfrRr(SEQ ID NO：136)例如環(fΦfrRrQ)(SEQ ID NO：101)，且具有相較於環(FΦRRRRQ)(SEQ ID NO：10)改善約250%至約450%之相對胞質液傳遞效率。
在其他實施例中，絕對胞質液傳遞效率係約40%至約100%，例如約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約91%、約92%、約93%、約94%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%，包括所有介於之間的值及子範圍。在某些實施例中，CPP係環(FfFRrRQ)(SEQ ID NO：96)，且具有40%至約50%之絕對胞質液傳遞效率。在某些實施例中，CPP係環(fFfrRrQ)(SEQ ID NO：97)，且具有約50%至約70%之絕對胞質液傳遞效率。在某些實施例中，CPP係環(fFfRrRQ)(SEQ ID NO：98)，且具有約30%至約60%之絕對胞質液傳遞效率。在某些實施 例中，CPP係環(FfFrRrQ)(SEQ ID NO：99)，且具有約40%至約55%之絕對胞質液傳遞效率。在某些實施例中，CPP係環(fFΦrRrQ)(SEQ ID NO：100)，且具有約55%至約75%之絕對胞質液傳遞效率。在某些實施例中，CPP係環(fΦfrRrQ)(SEQ ID NO：101)，且具有約60%至約80%之絕對胞質液傳遞效率。
在一些實施例中，在本文中揭示之CPP(例如式I、I-A至I-E、II-A至II-D、III-A至III-D、IV-A至IV-P、及V-A至V-D)係選自下表4提供之序列。
在一些實施例中，在本文中揭示之CPP序列(即根據式I、I-A至I-E、II-A至II-D、III-A至III-D、IV-A至IV-P、及V-A至V-D之序列)不包括在PCT/US2015/032043中揭示之序列，例如SEQ ID NO：10 c(FΦRRRRQ)；SEQ ID NO：120 c(FfΦRrRrQ)；SEQ ID NO：94c(fΦRrRrQ)；SEQ ID NO：121 c(fΦRrRrRQ)；SEQ ID NO：122c(FΦrRrRq)；SEQ ID NO：123c(FΦrRrRQ)；SEQ ID NO：124c(FΦRRRRRQ)；SEQ ID NO：125 c(RRFRΦRQ)；SEQ ID NO：126 c(FFΦRRRRQ)；SEQ ID NO：127 c(RFRFRΦRQ)；SEQ ID NO：128 c(FΦRRRQ)；SEQ ID NO：129 c(FRRRRΦQ)；SEQ ID NO：130 c(rRFRΦRQ)；或SEQ ID NO：131 c(RRΦFRRQ)。
貨物
在一些實施例中，在本文中揭示之CPP可進一步包括貨物部份，其可包含肽(「Xn」)。貨物部份可包含一或多個可偵測部 份、一或多個治療部份、一或多個靶向部份、或其任何組合。在一些實施例中，貨物部份可為肽序列或非肽基治療劑。在一些實施例中，貨物部份可偶合至CPP中之一或多個胺基酸的胺基(例如N端)、羧酸酯基團(例如C端)、或側鏈。在一些實施例中，CPP與貨物部份一起係環狀(在本文中稱為「內環(endocyclic)」)。在一些實施例中，CPP係環狀且貨物部份附加至環狀細胞穿透肽部份結構(在本文中稱為「外環(exocyclic)」)。在一些實施例中，貨物部份係環狀且CPP係環狀，且彼等一起形成雙環系統(在本文中稱為「雙環(bicyclic)」)。
在某些實施例中，CPP中之至少一個鍵結(例如介於胺基酸之間的醯胺鍵)被連至Xn的鍵結置換以形成內環CPP及貨物部份。在某些實施例中，Xn偶合至CPP中之胺基酸的側鏈(例如半胱胺酸、離胺酸、麩醯胺酸、或天冬醯胺酸、或其類似物)，形成外環CPP及Xn。在某些實施例中，CPP進一步包含連接子基團(「L」)，且Xn附接至連接子基團，形成雙環CPP及貨物部份。在某些實施例中，CPP進一步包含連接子基團(「L」)，且Xn附接至連接子基團及CPP之胺基酸的側鏈，形成雙環CPP及貨物部份。
在本文中亦揭示內環結構，CPP中的一些胺基酸亦可為貨物部份的一部分。例如，肽穿透部份FNalRR可自FNal形成且貨物部份包含二個Args。在此情況中，二個Arg殘基執行雙重功能。因此，在一些情況中，當指稱肽穿透部份時，考慮貨物部份的序列。
在一些實施例中，在本文中揭示之CPP具有根據式III-A至III-D中之一者之結構： 其中：AA1、AA2、AA3、及AA4中之各者係獨立地選自胺基酸；AAU及AAZ每次出現時係獨立地選自胺基酸；m及n中之各者係0至6的數字，惟m或n中之至少一者不是0；Xn係包含治療部份、靶向部份、可偵測部份、或其組合之貨物部份；L係連接子部份；其中：AA1、AA2、AA3、AA4、各AAU、及各AAZ中之二或三者係精胺酸，且其餘的胺基酸係除精胺酸以外的胺基酸；AA1、AA2、AA3、AA4、各AAU、及各AAZ中之至少二者每次出現時獨立地係疏水性胺基酸；且其中當Xn附接至AAU時，m不是0；在一些實施例中，AA1、AA2、AA3、及AA4中之各者係獨立地選自天然或非天然胺基酸，諸如但不限於該些上表1描述者。在一些實 施例中，AAU及AAZ中之各者係獨立地選自胺基酸，諸如但不限於該些上表1描述者。
在一些實施例中，AA1、AA2、AA3、AA4、各AAU、及各AAZ中之至少二者獨立地係疏水性胺基酸。在一些實施例中，各疏水性胺基酸係獨立地選自甘胺酸、丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、甲硫胺酸、苯丙胺酸、色胺酸、脯胺酸、萘丙胺酸、苯甘胺酸、升苯丙胺酸、酪胺酸、環己基丙胺酸、哌啶-2-羧酸酯、3-(3-苯并噻吩基)-丙胺酸、或正白胺酸，其各者係可選地經一或多個取代基取代。在具體實施例中，各疏水性胺基酸獨立地係疏水性芳族胺基酸。在一些實施例中，芳族疏水性胺基酸係萘丙胺酸、苯甘胺酸、升苯丙胺酸、苯丙胺酸、色胺酸、3-(3-苯并噻吩基)-丙胺酸、3-(2-喹啉基)-丙胺酸、O-苄基絲胺酸、3-(4-(苄氧基)苯基)-丙胺酸、S-(4-甲基苄基)半胱胺酸、N-(萘-2-基)麩醯胺酸、3-(1,1'-聯苯-4-基)-丙胺酸、3-(3-苯并噻吩基)-丙胺酸或酪胺酸，其各者係可選地經一或多個取代基取代。在具體實施例中，疏水性胺基酸係哌啶-2-羧酸酯、萘丙胺酸、色胺酸、3-(3-苯并噻吩基)-丙胺酸、或苯丙胺酸，其各者係可選地經一或多個取代基取代。
如上所述，可選的取代基可為任何不顯著減少CPP之胞質液傳遞效率的原子或基團，例如不減少相對胞質液傳遞效率至小於SEQ ID NO：10 c(FΦRRRRQ)之相對胞質液傳遞效率的取代基。在一些實施例中，可選的取代基可為疏水性取代基或親水性取代基。在某些實施例中，可選的取代基係疏水性取代基。在一些實施例中，取 代基增加疏水性胺基酸的溶劑可達表面積(如本文中定義者)。在一些實施例中，取代基可為鹵素、烷基、烯基、炔基、環烷基、環烯基、環炔基、雜環基、芳基、雜芳基、烷氧基、芳氧基、醯基、烷基胺甲醯基、烷基羧醯胺基、烷氧羰基、烷基硫基、或芳基硫基。在一些實施例中，取代基係鹵素。
如上所討論，可選擇具有較高疏水性值之胺基酸，以相對於具有較低疏水性值之胺基酸改善CPP胞質液傳遞效率。在一些實施例中，各疏水性胺基酸獨立地具有大於甘胺酸的疏水性值之疏水性值。在其他實施例中，各疏水性胺基酸獨立地具有大於丙胺酸的疏水性值之疏水性值(見上表2)。在仍其他實施例中，各疏水性胺基酸獨立地具有大於或等於苯丙胺酸的疏水性值之疏水性值(見上表2)。
如上所討論，可選擇胺基酸的掌性以改善胞質液攝取效率。在一些實施例中，胺基酸中之至少二者具有相對掌性。在一些實施例中，至少二個具有相對掌性之胺基酸可彼此相鄰。在一些實施例中，至少三個胺基酸具有相對於彼此交替之立體化學。在一些實施例中，至少三個相對於彼此具有交替掌性之胺基酸可彼此相鄰。在一些實施例中，胺基酸中之至少二者具有相同掌性。在一些實施例中，至少二個具有相同掌性之胺基酸可彼此相鄰。在一些實施例中，至少二個胺基酸具有相同掌性且至少二個胺基酸具有相對掌性。在一些實施例中，至少二個具有相對掌性之胺基酸可相鄰於至少二個具有相同掌性之胺基酸。因此，在一些實施例中，在CPP中之相鄰胺基酸可具有 任何下列序列：D-L；L-D；D-L-L-D；L-D-D-L；L-D-L-L-D；D-L-D-D-L；D-L-L-D-L；或L-D-D-L-D。
在一些實施例中，精胺酸係相鄰於疏水性胺基酸。在一些實施例中，精胺酸具有與疏水性胺基酸相同的掌性。在一些實施例中，至少二個精胺酸係彼此相鄰。在仍其他實施例中，三個精胺酸係彼此相鄰。在一些實施例中，至少二個疏水性胺基酸係彼此相鄰。在其他實施例中，至少三個疏水性胺基酸係彼此相鄰。在其他實施例中，在本文中描述之CPP包含至少二個連續疏水性胺基酸及至少二個連續精胺酸。在進一步實施例中，一個疏水性胺基酸係相鄰於精胺酸中之一者。在仍其他實施例中，在本文中描述之CPP包含至少三個連續疏水性胺基酸及三個連續精胺酸。在進一步實施例中，一個疏水性胺基酸係相鄰於精胺酸中之一者。這些胺基酸之各種組合可具有任何D及L胺基酸的排列，例如上述之序列。
在一些實施例中，m及n的總和係2至6。在一些實施例中，m及n的總和係2。在一些實施例中，m及n的總和係3。在一些實施例中，m及n的總和係4。在一些實施例中，m及n的總和係5。在一些實施例中，m及n的總和係6。在一些實施例中，m係0。在一些實施例中，m係1。在一些實施例中，m係2。在一些實施例中，m係3。在一些實施例中，m係4。在一些實施例中，m係5。在一些實施例中，m係6。在一些實施例中，n係0。在一些實施例中，n係1。在一些實施例中，n係2。在一些實施例中，n係3。在一些實施例中，n係4。在一些實施例中，n係5。在一些實施例中，n係6。
在一些實施例中，連接子(「L」)可為任何能夠形成二個肽鍵且亦含有至少一個適合附接貨物部份(Xn)的官能基之部份。在一些實施例中，連接子可為一或多個天然或非天然胺基酸。可作用為連接子之天然胺基酸之非限制性實例係麩醯胺酸、離胺酸、及半胱胺酸、及其類似物。在某些實施例中，連接子具有一個用於附接貨物部份之官能基，且貨物部份亦結合至CPP中之胺基酸(例如麩醯胺酸、天冬醯胺酸、2,3-二胺基丙酸、或離胺酸、或其類似物)的側鏈以形成雙環系統的第二環。在一些實施例中，連接子含有至少二個用於附接貨物部份之官能基。
在一些實施例中，連接子在併入CPP之前可具有下列結構 其中連至-OH基團之各鍵結獨立地被連至CPP或貨物的胺基之肽鍵置換。
在其他實施例中，連接子在併入CPP之前可具有下列結構中之一者： 其中連至-OH基團之各鍵結獨立地被連至CPP的胺基之肽鍵置換，且在芳基與硫之間的各硫醚鍵獨立地被與貨物及可選地與CPP之雙硫鍵置換，惟貨物及CPP中之各者獨立地包括半胱胺酸或其他含氫硫基之非天然胺基酸，例如該些美國臨時專利申請案第62/438,141號所揭示者。
在一些實施例中，Xn係貨物部份(如上述)，其包含治療部份、靶向部份、可偵測部份、或其組合。可附接至在本文中描述之CPP的治療部份、靶向部份、及可偵測部份之非限制性實例係如下描述。
在一些實施例中，在本文中描述之環肽(例如根據式III-A至III-D)具有根據式IV-A至IV-P之結構： 其中：各AAu及AAz獨立地係任何胺基酸，例如，如上文中關於式III-A至III-D定義之AAU每次出現時或AAZ每次出現時中之任一者；AAH1及AAH2中之各者獨立地係疏水性胺基酸；且且各AAU及各AAZ中之至多一者係精胺酸；m及n中之各者獨立地係0至6的數字，惟m或n中之至少一者不是0且胺基酸之總數係6至10。
在一些實施例中，在式IV-A至IV-P之CPP中的胺基酸(包括r、R、AAH1、AAH2)總數係在6至10的範圍內。在一些實施例中，胺基酸總數係6。在一些實施例中，胺基酸總數係7。在一些實施例中，胺基酸總數係8。在一些實施例中，胺基酸總數係9。在一些實施例中，胺基酸總數係10。
在一些實施例中，m及n的總和係2至6。在一些實施例中，m及n的總和係2。在一些實施例中，m及n的總和係3。在一些實施例中，m及n的總和係4。在一些實施例中，m及n的總和係 5。在一些實施例中，m及n的總和係6。在一些實施例中，m係0。在一些實施例中，m係1。在一些實施例中，m係2。在一些實施例中，m係3。在一些實施例中，m係4。在一些實施例中，m係5。在一些實施例中，m係6。在一些實施例中，n係0。在一些實施例中，n係1。在一些實施例中，n係2。在一些實施例中，n係3。在一些實施例中，n係4。在一些實施例中，n係5。在一些實施例中，n係6。
在一些實施例中，AAH1及AAH2中之各者獨立地係具有大於甘胺酸的疏水性值之疏水性值之疏水性胺基酸。在其他實施例中，AAH1及AAH2中之各者獨立地係具有大於丙胺酸的疏水性值之疏水性值之疏水性胺基酸。在仍其他實施例中，AAH1及AAH2中之各者獨立地係具有大於苯丙胺酸的疏水性值之疏水性值之疏水性胺基酸，例如使用上述之疏水性標度測量，包括Eisenberg及Weiss(Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.1984；81(1)：140-144)、Engleman，等人(Ann.Rev.of Biophys.Biophys.Chem..1986；1986(15)：321-53)、Kyte及Doolittle(J.Mol.Biol.1982；157(1)：105-132)、Hoop及Woods(Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.1981；78(6)：3824-3828)、及Janin(Nature.1979；277(5696)：491-492)(見上表1)。在具體實施例中，疏水性係使用Engleman等人所報告的疏水性標度測量。
如上所述，亦已發現疏水性胺基酸存在於D-Arg或L-Arg的N端或C端上、或其組合上改善CPP(及附接貨物)的胞質液攝取。例如，在一些實施例中，在本文中揭示之CPP可包括AAH1-D-Arg或D-Arg-AAH1。在其他實施例中，在本文中揭示之CPP可包括 AAH1-L-Arg或L-Arg-AAH1。在一些實施例中，疏水性胺基酸存在於CPP中的D-Arg或L-Arg的N端或C端上、或其組合上相較於否則相同的序列改善胞質液傳遞效率約1.1倍至約30倍，例如約1.2倍、約1.3倍、約1.4倍、約1.5倍、約1.6倍、約1.7倍、約1.8倍、約1.9倍、約2.0倍、約2.5倍、約3.0倍、約3.5倍、約4.0倍、約4.5倍、約5.0倍、約5.5倍、約6.0倍、約6.5倍、約7.0倍、約7.5倍、約8.0倍、約8.5倍、約9.0倍、約10倍、約10.5倍、約11.0倍、約11.5倍、約12.0倍、約12.5倍、約13.0倍、約13.5倍、約14.0倍、約14.5倍、約15.0倍、約15.5倍、約16.0倍、約16.5倍、約17.0倍、約17.5倍、約18.0倍、約18.5倍、約19.0倍、約19.5倍、約20倍、約20.5倍、約21.0倍、約21.5倍、約22.0倍、約22.5倍、約23.0倍、約23.5倍、約24.0倍、約24.5倍、約25.0倍、約25.5倍、約26.0倍、約26.5倍、約27.0倍、約27.5倍、約28.0倍、約28.5倍、約29.0倍、或約29.5倍，包括所有介於之間的值及子範圍。
如上所討論，可選擇在D-Arg或L-Arg的N端或C端上、或其組合上的疏水性胺基酸(即AAH1)的大小，以改善CPP的胞質液傳遞效率。例如，在D-Arg或L-Arg的N端或C端上、或其組合上的較大疏水性胺基酸相較於具有較小疏水性胺基酸否則相同的序列改善胞質液傳遞效率。如上所討論，疏水性胺基酸的大小可就疏水性胺基酸的分子量、疏水性胺基酸的立體效應、側鏈的溶劑可達表面積(SASA)、或其組合測量。在一些實施例中，疏水性胺基酸的大小係 就疏水性胺基酸的分子量測量，且較大疏水性胺基酸具有分子量至少約90g/mol、或至少約130g/mol、或至少約141g/mol的側鏈。在其他實施例中，胺基酸的大小係就疏水性側鏈的SASA測量，且較大疏水性胺基酸具有SASA大於丙胺酸之SASA、或大於甘胺酸之SASA的側鏈。在其他實施例中，AAH1具有SASA大於或等於約哌啶-2-羧酸酯、大於或等於約色胺酸、大於或等於約苯丙胺酸、或等於或大於約萘丙胺酸的疏水性側鏈。在一些實施例中，AAH1及AAH2獨立地具有SASA在約200Å2至約1000Å2的範圍內之側鏈，例如約250Å2、300Å2、350Å2、400Å2、450Å2、500Å2、550Å2、650Å2、700Å2、750Å2、800Å2、850Å2、900Å2、及約950Å2，包括所有介於之間的值及子範圍。
在一些實施例中，AAH1具有SASA至少約200Å2、至少約210Å2、至少約220Å2、至少約240Å2、至少約250Å2、至少約260Å2、至少約270Å2、至少約280Å2、至少約290Å2、至少約300Å2、至少約310Å2、至少約320Å2、或至少約330Å2之側鏈。在一些實施例中，AAH2具有SASA至少約200Å2、至少約210Å2、至少約220Å2、至少約240Å2、至少約250Å2、至少約260Å2、至少約270Å2、至少約280Å2、至少約290Å2、至少約300Å2、至少約310Å2、至少約320Å2、或至少約330Å2之側鏈。在一些實施例中，AAH1及AAH2之側鏈具有至少約350Å2、至少約360Å2、至少約370Å2、至少約380Å2、至少約390Å2、至少約400Å2、至少約410Å2、至少約420Å2、至少約430Å2、至少約440Å2、至少約450 Å2、至少約460Å2、至少約470Å2、至少約480Å2、至少約490Å2、大於約500Å2、至少約510Å2、至少約520Å2、至少約530Å2、至少約540Å2、至少約550Å2、至少約560Å2、至少約570Å2、至少約580Å2、至少約590Å2、至少約600Å2、至少約610Å2、至少約620Å2、至少約630Å2、至少約640Å2、大於約650Å2、至少約660Å2、至少約670Å2、至少約680Å2、至少約690Å2、或至少約700Å2之合併SASA。在一些實施例中，AAH2係側鏈的SASA小於或等於AAH1之疏水性側鏈的SASA之疏水性胺基酸。在一些實施例中，較大疏水性胺基酸存在於CPP中的D-Arg或L-Arg的N端或C端上、或其組合上相較於否則相同的序列改善胞質液傳遞效率約1.1倍至約30倍，例如約1.2倍、約1.3倍、約1.4倍、約1.5倍、約1.6倍、約1.7倍、約1.8倍、約1.9倍、約2.0倍、約2.5倍、約3.0倍、約3.5倍、約4.0倍、約4.5倍、約5.0倍、約5.5倍、約6.0倍、約6.5倍、約7.0倍、約7.5倍、約8.0倍、約8.5倍、約9.0倍、約10倍、約10.5倍、約11.0倍、約11.5倍、約12.0倍、約12.5倍、約13.0倍、約13.5倍、約14.0倍、約14.5倍、約15.0倍、約15.5倍、約16.0倍、約16.5倍、約17.0倍、約17.5倍、約18.0倍、約18.5倍、約19.0倍、約19.5倍、約20倍、約20.5倍、約21.0倍、約21.5倍、約22.0倍、約22.5倍、約23.0倍、約23.5倍、約24.0倍、約24.5倍、約25.0倍、約25.5倍、約26.0倍、約26.5倍、約27.0倍、約27.5倍、約28.0倍、約28.5倍、約29.0倍、或約29.5倍，包括所有介於之間的值及子範圍。
在一些實施例中，CPP在AAH2-AAH1-R-r、AAH2-AAH1-r-R、R-r-AAH1-AAH2、或r-R-AAH1-AAH2的N端及/或C端上不包括疏水性胺基酸。在進一步實施例中，CPP不包括側鏈大於(如本文中描述者)AAH1或AAH2中之至少一者的疏水性胺基酸。在進一步實施例中，CPP不包括側鏈的表面積大於AAH1之疏水性胺基酸。例如，在AAH1或AAH2中之至少一者係苯丙胺酸的實施例中，CPP不進一步包括萘丙胺酸(雖然CPP包括至少一個小於AAH1及AAH2之疏水性胺基酸，例如白胺酸)。在仍其他實施例中，CPP除了在AAH2-AAH1-R-r、AAH2-AAH1-r-R、R-r-AAH1-AAH2、或r-R-AAH1-AAH2中的疏水性胺基酸以外不進一步包括萘丙胺酸。
如上所討論，可選擇胺基酸的掌性(即D或L胺基酸)以改善CPP(及如下述之附接貨物)的胞質液傳遞效率。在一些實施例中，在精胺酸之N端或C端上的疏水性胺基酸(例如AAH1)具有與相鄰的精胺酸相同或相對的掌性。在一些實施例中，AAH1具有與相鄰的精胺酸相對的掌性。例如，當精胺酸係D-arg(即「r」)時，AAH1係D-AAH1，且當精胺酸係L-Arg(即「R」)時，AAH1係L-AAH1。因此，在一些實施例中，在本文中揭示之CPP可包括下列模體中之至少一者：D-AAH1-D-arg、D-arg-D-AAH1、L-AAH1-L-Arg、或L-Arg-LAAH1。在具體實施例中，當精胺酸係D-arg時，AAH1可為D-pip、D-nal、D-trp、D-bta、或D-phe。在另一非限制性實例中，當精胺酸係L-Arg時，AAH1可為L-Pip、L-Nal、L-Trp、L-Bta、或L-Phe。在一些實施例中，與相鄰的精胺酸具有相同掌性之疏水性胺基酸 的存在相較於否則相同的序列改善胞質液傳遞效率約1.1倍至約30倍，例如約1.2倍、約1.3倍、約1.4倍、約1.5倍、約1.6倍、約1.7倍、約1.8倍、約1.9倍、約2.0倍、約2.5倍、約3.0倍、約3.5倍、約4.0倍、約4.5倍、約5.0倍、約5.5倍、約6.0倍、約6.5倍、約7.0倍、約7.5倍、約8.0倍、約8.5倍、約9.0倍、約10倍、約10.5倍、約11.0倍、約11.5倍、約12.0倍、約12.5倍、約13.0倍、約13.5倍、約14.0倍、約14.5倍、約15.0倍、約15.5倍、約16.0倍、約16.5倍、約17.0倍、約17.5倍、約18.0倍、約18.5倍、約19.0倍、約19.5倍、約20倍、約20.5倍、約21.0倍、約21.5倍、約22.0倍、約22.5倍、約23.0倍、約23.5倍、約24.0倍、約24.5倍、約25.0倍、約25.5倍、約26.0倍、約26.5倍、約27.0倍、約27.5倍、約28.0倍、約28.5倍、約29.0倍、或約29.5倍，包括所有介於之間的值及子範圍。
在一些實施例中，在本文中描述之CPP(例如根據式IV-A至IV-P之CPP)包括三個精胺酸。因此，在一些實施例中，在本文中描述之CPP包括下列序列中之一者：AAH2-AAH1-R-r-R、AAH2-AAH1-R-r-r、AAH2-AAH1-r-R-R、AAH2-AAH1-r-R-r、R-R-r-AAH1-AAH2、r-R-r-AAH1-AAH2、r-r-R-AAH1-AAH2、或R-r-R-AAH1-AAH2。在具體實施例中，在本文中描述之CPP具有下列序列中之一者：AAH2-LAAH1-R-r-R、AAH2-DAAH1-r-R-r、r-R-r-DAAH1-AAH2、或R-r-R-LAAH1-AAH2。在一些實施例中，AAH1及AAH2的掌性可經 例如如上述之選擇以改善胞質液攝取效率，其中AAH1具有與相鄰的精胺酸相同的掌性，且AAH1及AAH2具有相對掌性。
在一些實施例中，在本文中描述之CPP(例如根據式IV-A至IV-P之CPP)包括三個疏水性胺基酸。因此，在一些實施例中，在本文中描述之CPP包括下列序列中之一者：AAH3-AAH2-AAH1-R-r、AAH3-AAH2-AAH1-R-r、AAH3-AAH2-AAH1-r-R、AAH3-AAH2-AAH1-r-R、R-r-AAH1-AAH2-AAH3、R-r-AAH1-AAH2-AAH3、r-R-AAH1-AAH2-AAH3、或r-R-AAH1-AAH2-AAH3，其中AAH3係上述之任何疏水性胺基酸，例如哌啶-2-羧酸酯、萘丙胺酸、色胺酸、3-(3-苯并噻吩基)-丙胺酸、或苯丙胺酸。在一些實施例中，AAH1、AAH2、及AAH3的掌性可經例如如上述之選擇以改善胞質液攝取效率，其中AAH1具有與相鄰的精胺酸相同的掌性，且AAH1及AAH2具有相對掌性。在其他實施例中，AAH1、AAH2、及AAH3的大小可經例如如上述之選擇以改善胞質液攝取效率，其中AAH3具有小於或等於AAH1及分開地/或AAH2之SAS。
在一些實施例中，AAH1及AAH2具有相同或相對掌性。在某些實施例中，AAH1及AAH2具有相對掌性。因此，在一些實施例中，在本文中揭示之CPP包括下列序列中之至少一者：D-AAH2-L-AAH1-R-r；L-AAH2-D-AAH1-r-R；R-r-D-AAH1-L-AAH2；或r-R-L-AAH1-D-AAH1，其中D-AAH1及D-AAH2中之各者係具有D組態之疏水性胺基酸，且L-AAH1及L-AAH2中之各者係具有L組態之疏水性胺基酸。在一些實施例中，D-AAH1及D-AAH2中之各者係獨立地選自由 D-pip、D-nal、D-trp、D-bta、及D-phe所組成之群組。在具體實施例中，D-AAH1或D-AAH2係D-nal。在其他具體實施例中，D-AAH1係D-nal。在一些實施例中，L-AAH1及L-AAH2中之各者係獨立地選自由L-Pip、L-Nal、L-Trp、L-Bta、及L-Phe所組成之群組。在具體實施例中，L-AAH1或L-AAH2係L-Nal。在其他具體實施例中，L-AAH1係L-Nal。在一些實施例中，具有相對組態之AAH1及AAH2的存在相較於否則相同的序列改善胞質液傳遞效率約1.1倍至約30倍，例如約1.2倍、約1.3倍、約1.4倍、約1.5倍、約1.6倍、約1.7倍、約1.8倍、約1.9倍、約2.0倍、約2.5倍、約3.0倍、約3.5倍、約4.0倍、約4.5倍、約5.0倍、約5.5倍、約6.0倍、約6.5倍、約7.0倍、約7.5倍、約8.0倍、約8.5倍、約9.0倍、約10倍、約10.5倍、約11.0倍、約11.5倍、約12.0倍、約12.5倍、約13.0倍、約13.5倍、約14.0倍、約14.5倍、約15.0倍、約15.5倍、約16.0倍、約16.5倍、約17.0倍、約17.5倍、約18.0倍、約18.5倍、約19.0倍、約19.5倍、約20倍、約20.5倍、約21.0倍、約21.5倍、約22.0倍、約22.5倍、約23.0倍、約23.5倍、約24.0倍、約24.5倍、約25.0倍、約25.5倍、約26.0倍、約26.5倍、約27.0倍、約27.5倍、約28.0倍、約28.5倍、約29.0倍、或約29.5倍，包括所有介於之間的值及子範圍。
貨物部份
貨物部份可包含任何受到關注之貨物，例如連接子部份、可偵測部份、治療部份、靶向部份、及類似物、或其任何組合。 在一些實例中，貨物部份可包含一或多個額外胺基酸(例如K、UK、TRV)；連接子(例如雙官能性連接子LC-SMCC)；輔酶A；磷香豆素基(phosphocoumaryl)胺基丙酸(pCAP)；8-胺基-3,6-二氧雜辛酸(miniPEG)；L-2,3-二胺基丙酸(Dap或J)；L-β-萘丙胺酸；L-2-哌啶甲酸(Pip)；肌胺酸；苯均三甲酸；7-胺基-4-甲基香豆素(Amc)；螢光異硫氰酸鹽(FITC)；L-2-萘丙胺酸；正白胺酸；2-胺基丁酸；玫瑰紅B(Rho)；地塞米松(DEX)；或其組合。
在一些實例中，貨物部份可包含任何表5所列者、或其衍生物或組合。
可偵測部份
可偵測部份可包含任何可偵測標示。合適的可偵測標示之實例包括但不限於UV-Vis標示、近紅外線標示、發光基團、磷光基團、磁自旋共振標示、光敏感劑、光可切割部份、螫合中心、重原 子、放射性同位素、同位素可偵測自旋共振標示、順磁部份、發色團、或其任何組合。在一些實施例中，標示不需添加進一步試劑即可偵測。
在一些實施例中，可偵測部份係生物可相容之可偵測部份，以使該化合物可適用於多種生物應用。在本文中使用之「生物可相容(biocompatible及biologically compatible)」通常係指通常對細胞及組織不具毒性之化合物連同其任何代謝物或降解產物，且當細胞及組織在彼等存在下孵養(例如培養)時不對細胞及組織造成任何顯著不良效應。
可偵測部份可含有發光團諸如螢光標示或近紅外線標示。合適發光團之實例包括但不限於金屬卟啉；苯并卟啉；氮苯并卟啉；萘并卟啉；酞青素；多環芳族烴諸如苝、苝二亞胺、芘；偶氮染料；染料；硼二吡咯亞甲基、氮雜-硼二吡咯亞甲基、花青染料、金屬-配體錯合物諸如釕及銥的聯吡啶、聯吡啶基、啡啉、香豆素、及乙醯丙酮化物；吖啶、衍生物諸如苯并啡；氮雜-輪烯、方酸；8-羥喹啉、聚甲炔、發光產生奈米粒子諸如量子點、奈米晶體；2-羥喹啉；鋱錯合物；無機磷光體；離子載體諸如冠醚附著或衍生染料；或其組合。合適發光團之特定實例包括但不限於Pd(II)八乙基卟啉；Pt(II)-八乙基卟啉；Pd(II)四苯基卟啉；Pt(II)四苯基卟啉；Pd(II)內消旋-四苯基卟啉四苯并卟吩；Pt(II)內消旋-四苯基甲基苯并卟啉；Pd(II)八乙基卟啉酮；Pt(II)八乙基卟啉酮；Pd(II)內消旋-四(五氟苯基)卟啉；Pt(II)內消旋-四(五氟苯基)卟啉；Ru(II)參(4,7-二苯基- 1,10-啡啉)(Ru(dpp)3)；Ru(II)參(1,10-啡啉)(Ru(phen)3)、參(2,2’-聯吡啶)氯化釕(II)六水合物(Ru(bpy)3)；紅螢素B；螢光素；螢光異硫氰酸鹽(FITC)；伊紅；銥(III)((N-甲基-苯并咪唑-2-基)-7-(二乙基胺基)-香豆素))；銦(III)((苯并噻唑-2-基)-7-(二乙基胺基)-香豆素))-2-(乙醯丙酮化物)；Lumogen染料；Macroflex螢光紅；Macrolex螢光黃；Texas Red；玫瑰紅B；玫瑰紅6G；硫玫瑰紅；間甲酚；瑞香酚藍；茬酚藍；甲酚紅；氯苯酚藍；溴甲酚綠；溴甲酚紅；溴瑞香酚藍；Cy2；Cy3；Cy5；Cy5.5；Cy7；4-硝基苯酚；茜素；酚酞；鄰甲苯酚酞；氯酚紅；鈣鎂指示劑；溴-茬酚；酚紅；中性紅；硝嗪黃；3,4,5,6-四溴酚酞；剛果紅；螢光素；伊紅；2',7'-二氯螢光黃；5(6)-羧基-螢光素；羧基萘并螢光素；8-羥基芘-1,3,6-三磺酸；半-萘并羅丹螢(semi-naphthorhodafluor)；半-萘并螢光素；參(4,7-二苯基-1,10-啡啉)二氯化釕(II)；(4,7-二苯基-1,10-啡啉)釕(II)四苯基硼；鉑(II)八乙基卟啉；二烷基羰花青；雙十八基環氧雜碳花青；茀基甲基氧基羰基氯；7-胺基-4-甲基香豆素(Ame)；綠色螢光蛋白質(GFP)；及其衍生物或組合。
在一些實例中，可偵測部份可包含玫瑰紅B(Rho)、螢光異硫氰酸鹽(FITC)、7-胺基-4-甲基香豆素(Amc)、綠螢光蛋白質(GFP)、或其衍生物或組合。
可偵測部份可在細胞穿透肽部份中任何胺基酸之胺基、羧酸酯基團、或側鏈處(例如在CPP中任何胺基酸之胺基、羧酸酯基團、或側鏈處)附接至細胞穿透肽部份。
治療部份
揭示化合物亦可包含治療部份。在一些實例中，貨物部份包含治療部份。可偵測部份可連接至治療部份或可偵測部份亦可作為治療部份。治療部份係指當向對象投予將減少疾病或病症之一或多個症狀的基團。
治療部份可包含各式各樣的藥物，包括拮抗劑例如酶抑制劑、及促效劑例如導致所欲基因產物表現增加之轉錄因子(不過如所屬技術領域中具有通常知識者將理解亦可使用拮抗性轉錄因子)皆包括其中。此外，治療部份包括該些能夠引導毒性及/或能夠誘導毒性至身體中健康及/或不健康細胞之劑。此外，治療部份可為能夠誘導及/或促發免疫系統針對潛在病原體。
治療部份可例如包含抗癌劑、抗病毒劑、抗微生物劑、消炎劑、免疫抑制劑、麻醉劑、或其任何組合。
治療部份可包含抗癌劑。抗癌劑實例包括13-順-視黃酸、2-胺基-6-巰基嘌呤、2-CdA、2-氯去氧腺苷、5-氟尿嘧啶、6-硫鳥嘌呤、6-巰嘌呤、Accutane、放線菌素-D、阿黴素、Adrucil、Agrylin、Ala-Cort、阿地白介素、阿來組單抗、阿裏維A酸、Alkaban-AQ、Alkeran、全反-視黃酸、α干擾素、六甲蜜胺、胺甲喋呤、胺磷汀、胺魯米特、阿那格雷、Anandron、阿那曲唑、阿拉伯糖基胞嘧啶、Aranesp、Aredia、Arimidex、Aromasin、三氧化二砷、門冬醯胺酶、ATRA、Avastin、BCG、BCNU、貝伐珠單抗、貝沙羅 汀、比卡魯胺、BiCNU、Blenoxane、博來黴素、硼替佐米、白消安、Busulfex、C225、菊白葉酸鈣、Campath、Camptosar、喜樹鹼-11、卡培他濱、Carac、卡鉑、卡莫司汀、卡莫司汀薄片劑、Casodex、CCNU、CDDP、CeeNU、Cerubidine、西妥昔單抗、苯丁酸氮芥、順鉑、嗜橙菌因子、克拉屈濱、可的松、Cosmegen、CPT-11、環磷醯胺、Cytadren、阿糖胞苷、阿糖胞苷脂質體、Cytosar-U、Cytoxan、達卡巴嗪、放線菌素D、Darbepoetin alfa、Daunomycin、道諾黴素、道諾黴素鹽酸鹽、道諾黴素脂質體、DaunoXome、Decadron、δ-Cortef、Deltasone、地尼白介素-毒素連接物、DepoCyt、地塞米松、地塞米松乙酸酯、地塞米松磷酸鈉、Dexasone、右雷佐生、DHAD、DIC、Diodex、多西他賽、Doxil、多柔比星、多柔比星脂質體、Droxia、DTIC、DTIC-Dome、杜拉隆、Efudex、艾里咖、艾倫斯、樂沙定、愛施巴、Emcyt、表柔比星、阿法依伯汀、愛必妥、歐文氏菌L-天冬醯胺酶、雌莫司汀、Ethyol、凡畢複、依扥泊苷、依扥泊苷磷酸鹽、Eulexin、易維特、依西美坦、法樂通、法洛德、複乳納、非格司亭、氟尿苷、福達華、氟達拉濱、Fluoroplex、氟尿嘧啶、氟尿嘧啶(乳膏劑)、氟甲睾酮、氟他胺、亞葉酸、FUDR、氟維司群、G-CSF、吉非替尼、吉西他濱、吉妥珠單抗奧唑米星、Gemzat、Gleevec、Lupron、Lupron Depot、Matulane、Maxidex、甲基二(氯乙基)胺、甲基二(氯乙基)胺鹽酸鹽、美卓龍、Medrol、Megace、甲地孕酮、甲地孕酮乙酸酯、美法侖、巰嘌呤、美司鈉、Mesnex、甲胺蝶呤、甲胺蝶呤鈉、甲潑尼龍、 Mylocel、來曲唑、Neosar、Neulasta、紐密伽、優保津、Nilandron、尼魯米特、氮芥、Novaldex、Novantrone、奧曲肽、奧曲肽乙酸酯、Oncospar、長春新鹼、Ontak、Onxal、歐普瑞維爾金、Orapred、Orasone、奧沙利鉑、太平洋紫杉醇、帕米膦酸、Panretin、Paraplatin、Pediapred、PEG干擾素、培門冬酶、培非司亭、PEG-INTRON、PEG-L-天冬醯胺酶、苯丙胺酸氮芥、Platinol、Platinol-AQ、潑尼松龍、潑尼松、Prelone、丙卡巴肼、PROCRIT、普留淨、具有卡莫司汀植入物的普羅非泮20、Purinethol、雷洛昔芬、Rheumatrex、Rituxan、利妥昔單抗、Roveron-A(干擾素α-2a)、Rubex、紅比黴素鹽酸鹽、善得定、善得定LAR、沙格莫丁、Solu-Cortef、Solu-Medrol、STI-571、鏈佐星、它莫西芬、塔格雷丁、紫杉醇、剋癌易、Temodar、替莫唑胺、替尼泊苷、TESPA、沙利度胺、撒利多邁、TheraCys、硫鳥嘌呤、硫鳥嘌呤藥片、硫代磷醯胺、Thioplex、塞替派、TICE、Toposar、托泊替康、托瑞米芬、曲妥珠單抗、維甲酸、Trexall、Trisenox、TSPA、VCR、Velban、Velcade、VePesid、Vesanoid、Viadur、長春鹼、長春鹼硫酸鹽、Vincasar Pfs、長春新鹼、長春瑞濱、長春瑞濱酒石酸鹽、VLB、VP-16、威猛、截瘤達、Zanosar、澤娃靈、Zinecard、諾雷德、唑來膦酸、Zometa、Gliadel薄片劑、Glivec、GM-CSF、戈舍瑞林、顆粒球集落刺激因子、氟羥甲睪酮、Herceptin、Hexadrol、Hexalen、六甲基三聚氰胺、HMM、癌康定、愛治、氫可的松乙酸鹽、氫可的松、氫可的松磷酸鈉、氫可的松琥珀酸鈉、氫可的松磷酸鹽、羥基尿素、伊莫單抗、 替伊莫單抗、伊達黴素、伊達比星、Ifex、IFN-α、依弗醯胺、IL 2、IL-11、伊馬替尼甲磺酸酯、咪唑羧醯胺、干擾素α、干擾素α-2b(PEG接合物)、介白素2、介白素-11、Intron A(干擾素α-2b)、菊白葉酸、瘤克寧、Leukine、亮丙瑞林、聞克斯丁、樂司他丁、脂質體Ara-C、液體Pred、洛莫司汀、L-PAM、L-沙可來新、Meticorten、絲裂黴素、絲裂黴素-C、米托蒽醌、M-潑尼松、MTC、MTX、Mustargen、氮芥、突變黴素、Myleran、Iressa、伊立替康、異維甲酸、Kidrolase、Lanacort、L-天冬醯胺酶、及LCR。治療部份亦可包含生物藥劑諸如例如抗體。
在一些實例中，治療部份可包含抗病毒劑諸如更昔洛韋(ganciclovir)、疊氮胸苷(AZT)、拉米夫定(lamivudine)(3TC)、等。
在一些實例中，治療部份可包含抗菌劑，諸如醋胺苯碸；乙醯碸鈉；阿萊黴素；阿萊西定；美西林；匹美西林；阿米環素；胺氟沙星；胺氟沙星甲磺酸酯；阿米卡星；阿米卡星硫酸鹽；胺基水楊酸；胺基水楊酸鈉；阿莫西林；兩性黴素；安比西林；安比西林鈉；阿帕西林鈉；安普黴素；門冬托星；阿司米星硫酸鹽；阿維黴素；阿伏帕星；阿奇毒素；阿洛西林；阿洛西林鈉；巴胺西林鹽酸鹽；桿菌肽；桿菌肽亞甲基二水楊酸鹽；桿菌肽鋅；班貝黴素；苯沙酸鈣；紅黴素B；倍他米星硫酸鹽；比阿培南；比尼黴素；鹽酸苯柳胺酯；硫酸鎂雙巰氧吡啶；布替卡星；布替羅星硫酸鹽；卷麯黴素硫酸鹽；卡巴多司；羧苄青黴素二鈉；羧苄青黴素茚基鈉；羧苄青黴素苯鈉；羧苄青黴素鉀；卡蘆莫南鈉；頭孢可若；頭孢卓西；頭孢孟 多；頭孢孟多酯鈉；頭孢孟多鈉；頭孢帕羅；頭孢曲嗪；頭孢氮氟鈉；頭孢若林；頭孢若林鈉；頭孢拉宗；頭孢地尼；頭孢吡肟；頭孢吡肟鹽酸鹽；頭孢替考；希復欣敏；頭孢甲肟鹽酸鹽；西福每他唑；西福每他唑鈉；頭孢尼西單鈉；頭孢尼西鈉；頭孢匹拉鈉；頭孢雷特；頭孢噻肟鈉；西弗特坦；西弗特坦二鈉；頭孢替安鹽酸鹽，頭孢西丁；頭孢西丁鈉；頭孢咪唑；頭孢咪唑鈉；頭孢匹胺；頭孢匹胺鈉；頭孢匹羅硫酸鹽；頭孢泊肟酯；頭孢丙烯；頭孢沙定；西弗連拉定鈉；頭孢他定；頭孢布烯；頭孢唑肟鈉；頭孢曲松鈉；頭孢呋辛；頭孢呋辛酯；頭孢呋辛匹賽酯；頭孢呋辛鈉；頭孢乙腈鈉；頭孢力欣；頭孢力欣鹽酸鹽；頭孢甘酸；頭孢噻啶；頭孢噻吩鈉；頭孢匹林鈉；頭孢華定；西托環素鹽酸鹽；乙醯氯黴素；氯黴素；氯黴素棕櫚酸鹽；氯黴素泛酸鹽錯合物；氯黴素琥珀酸鈉；胺基苯磷酸氯己定；氯二甲酚；金黴素硫酸氫鹽；金黴素鹽酸鹽；西諾沙星；環丙沙星，環丙沙星鹽酸鹽；西羅黴素；克拉黴素；克林沙星鹽酸鹽；克林黴素；克林黴素鹽酸鹽；克林黴素棕櫚酸鹽酸鹽；克林黴素磷酸鹽；氯法齊明；氯唑西林苄星；氯唑西林鈉；氯羥喹；粘菌素甲磺酸鈉；粘菌素硫酸鹽；香豆黴素；香豆黴素鈉；環西林；環絲胺酸；達福普汀；胺苯碸；達托黴素；地美環素；地美環素鹽酸鹽；去甲環素；地奴真菌素；二胺藜蘆啶；二氯噻青黴素；二氯噻青黴素鈉；硫酸二氫鏈黴素；二吡啶硫酮；地紅黴素；多西環素，多西環素鈣；多西環素磷酸複合物；鹽酸多西環素；屈克沙星鈉；依諾沙星；依匹西林；表四環素鹽酸鹽；紅黴素；醋硬脂紅黴素；依託紅黴素；琥乙紅黴素； 葡庚糖酸紅黴素；乳糖醛酸紅黴素；紅黴素丙酸鹽；紅黴素硬脂酸鹽；乙胺丁醇鹽酸鹽；乙硫異菸醯胺；氟羅沙星；氟氯西林；氟氘丙胺酸；氟甲喹；磷黴素；磷黴素胺基丁三醇；呋莫西林；呋唑氯銨；酒石酸呋噻咪唑；夫西地酸鈉；夫西地酸；硫酸建它黴素；格洛莫南；短桿菌肽；鹵普羅近；海他西林；海他西林鉀；海克西定；伊巴沙星；亞胺培南；異康唑；異帕米星；異菸酸酊；交沙黴素；卡那黴素硫酸鹽；吉他黴素；左呋喃他酮；左普匹西林鉀；來紅黴素；林可黴素；林可黴素鹽酸鹽；洛美沙星；洛美沙星鹽酸鹽；洛美沙星甲磺酸酯；氯碳頭孢；磺胺米隆；甲氯環素；甲氯環素磺水楊酸鹽；巨黴素磷酸鉀；美喹多司；美羅培南；美他環素；美他環素鹽酸鹽；六亞甲四胺；六亞甲四胺馬尿酸鹽；六亞甲四胺扁桃酸鹽；二甲氧苯青黴素鈉；美替普林；甲硝唑鹽酸鹽；甲硝唑磷酸鹽；美洛西林；美洛西林鈉；米諾環素；米諾環素鹽酸鹽；米林黴素鹽酸鹽；莫能星；莫能星鈉；萘夫西林鈉；萘啶酸鈉；萘哌酸；納他黴素；尼拉黴素；新黴素棕櫚酸鹽；新黴素硫酸鹽；新黴素十一烯酸酯；奈替米星硫酸鹽；中性黴素；硝呋唑烯；硝呋地腙；硝呋太爾；硝呋隆；硝呋達齊；硝呋米特；硝呋吡醇；硝呋喹唑；硝呋噻唑；硝基環素；呋喃妥因；硝基米特；諾氟沙星；新生黴素鈉；氧氟沙星；昂納妥普瑞；苯唑西林；苯唑西林鈉；肟莫南；肟莫南鈉；奧索利酸；氧四環素；氧四環素鈣；氧四環素鹽酸鹽，帕地黴素；對氯酚；保洛黴素；培氟沙星；培氟沙星甲磺酸酯；培那西林；青黴素G苄星；青黴素G鉀；青黴素G普魯卡因；青黴素G鈉；青黴素V；青黴素V苄星；海巴青黴素 V；青黴素V鉀；戊齊酮鈉；苯基胺基水楊酸鹽；哌拉西林鈉；吡苄西林鈉；吡地西林鈉；吡利黴素鹽酸鹽；匹胺西林鹽酸鹽；匹胺西林雙羥萘酸鹽；匹胺西林丙苯酸鹽；多粘菌素B硫酸鹽；泊非黴素；普匹卡星；吡嗪醯胺；吡硫翁鋅；喹地卡明乙酸酯；奎奴普丁；消旋甲碸黴素；雷莫拉寧；雷尼黴素；雷洛黴素；瑞普米星；利福布汀；利福美坦；利福克昔；利福米特；雷發平；利福噴汀；利福昔明；羅利環素；羅利環素硝酸鹽；羅沙米星；羅沙米星丁酸酯；羅沙米星丙酸酯；羅沙米星磷酸鈉；羅沙米星硬脂酸鹽；羅梭沙星；羅沙胂；羅紅黴素；山環素；山費培南鈉；沙莫西林；沙匹西林；司可芬淨；西索米星；西索米星硫酸鹽；司帕沙星；大觀黴素鹽酸鹽；螺旋黴素；司他黴素鹽酸鹽；司替黴素；鏈黴素硫酸鹽；煙肼鏈黴素；磺胺苯；磺胺苯醯；乙醯磺胺；乙醯磺胺鈉；磺胺西汀；磺胺嘧啶；磺胺嘧啶鈉；磺胺多辛；磺胺林；磺胺甲嘧啶；磺胺對甲氧嘧啶；磺胺二甲嘧啶；磺胺甲二唑；磺胺甲噁唑；磺胺間甲氧嘧啶；磺胺噁唑；胺苯磺酸鋅；磺胺硝苯；柳氮磺胺吡啶；磺胺異噻唑；磺胺噻唑；磺胺吡唑；磺胺異唑；磺胺異唑乙醯基；磺胺異唑二乙醇胺；磺粘菌素；硫培南；舒他西林；森西林鈉；酞胺西林鹽酸鹽；替考拉寧；替馬沙星鹽酸鹽；替莫西林；四環素；四環素鹽酸鹽；四環素磷酸鹽錯合物；四氧普林；甲碸黴素；噻吩西林鉀；替考西林甲苯酚鈉；替考西林二鈉；替考西林單鈉；替克拉酮；氯化氯苯噻碘；妥布黴素；妥布黴素硫酸鹽；托氟沙星；甲氧苄啶；甲氧苄啶硫酸鹽；三磺嘧啶； 醋竹桃黴素；丙大觀黴素硫酸鹽；短桿菌素；萬古黴素；萬古黴素鹽酸鹽；維及黴素；或拉來黴素。
在一些實例中，治療部份可包含抗發炎劑。
在一些實例中，治療部份可包含地塞米松(Dex)。
在其他實例中，治療部份包含治療蛋白質。例如，一些人具有某些酶缺陷(例如溶酶體貯積病)。在本文中揭示藉由將酶/蛋白質連接至揭示細胞穿透肽中之一者以傳遞該等酶/蛋白質至人類細胞。揭示細胞穿透肽已用蛋白質(例如GFP、PTP1B、肌動蛋白、鈣調蛋白、肌鈣蛋白C)測試並顯示可作用。
在一些實例中，治療部份包含靶向部份。靶向部份可包含例如可靶向一或多個酶結構域之胺基酸序列。在一些實例中，靶向部份可包含針對可在疾病諸如癌症、囊腫纖維化、糖尿病、肥胖、或其組合中作用之酶的抑制劑。例如，靶向部份可包含表6所列之任何序列。
靶向部份及細胞穿透肽部份可重疊。也就是說，形成細胞穿透肽部份之殘基亦可為形成靶向部份之序列的一部分，且反之亦然。
治療部份可在細胞穿透肽部份中任何胺基酸之胺基、羧酸酯基團、或側鏈處(例如在CPP中任何胺基酸之胺基、羧酸酯基團、或側鏈處)附接至細胞穿透肽部份。在一些實例中，治療部份可附接至可偵測部份。
在一些實例中，治療部份可包含可作為針對Ras(例如K-Ras)、PTP1B、Pin1、Grb2 SH2、CAL PDZ、及類似物、或其組合之抑制劑的靶向部份。
Ras係在人類中由RAS基因編碼之蛋白質。正常Ras蛋白質在正常組織傳訊中執行必需功能，且已知Ras基因突變涉及許多癌症發展。Ras可作為分子開/關的開關，一旦被打開Ras吸引並活化傳播生長因子及其他受體信號所需的蛋白質。已知Ras的突變形式涉及各種癌症，包括肺癌、結腸癌、胰癌、及各種白血病。
蛋白質-酪胺酸磷酸酶1B(PTP1B)係PTP超家族的原型成員，且在真核細胞傳訊期間有許多作用。PTP1B係胰島素傳訊途徑的負調節子，且被視為有希望的潛在治療目標，特別是用於治療第II型糖尿病。亦已知PIP1B涉及乳癌的發展。
Pin1係結合至蛋白質子集之酶，且在調節蛋白質功能上發揮後磷酸化控制的作用。Pin1活性可調節脯胺酸引導激酶傳訊之結果且因此可調節細胞增生及細胞存活。Pin1之下調可在各種疾病中有 所作用。Pin1之上調可能涉及某些癌症，且Pin1之下調可能涉及阿茲海默症。Pin1抑制劑可對癌症及免疫病症具有治療影響。
Grb2係涉及信號轉導及細胞溝通的轉接蛋白質。Grb2蛋白質含有一個SH2結構域，其可結合酪胺酸磷酸化序列。Grb2表現廣泛，且係多種細胞性功能所必需。抑制Grb2功能可損害發育過程且可阻斷各種細胞類型的轉變及增生。
最近報告囊腫纖維化膜傳導調節蛋白(CFTR)(一種在囊腫纖維化(CF)病患中突變的氯離子通道蛋白質)的活性受到CFTR-相關配體(CAL)經由其PDZ結構域(CAL-PDZ)的負調節(Wolde,M等人J.Biol.Chem.2007,282,8099)。抑制CFTR/CAL-PDZ交互作用顯示改善最常見的CFTR突變形式△Phe508-CFTR之活性(Cheng,SH等人Cell 1990,63,827；Kerem,BS等人Science 1989,245,1073)，其係藉由減少其蛋白酶體媒介之降解(Cushing,PR等人Angew.Chem.Int.Ed.2010,49,9907)。因此，在本文中揭示藉由投予有效量的在本文中揭示之化合物或組成物治療具有囊腫纖維化對象之方法。向對象投予之化合物或組成物可包含治療部份，該治療部份可包含可作為針對CAL PDZ之抑制劑的靶向部份。此外，在本文中揭示之化合物或組成物可與改正CFTR功能的分子一起投予。
在本文中亦揭示包含在本文中描述之化合物之組成物。
在本文中亦揭示該揭示化合物之醫藥上可接受之鹽及前藥。醫藥上可接受之鹽包括取決在化合物上發現之特定取代基而用酸或鹼製備之揭示化合物之鹽。在其中在本文中揭示之化合物係足夠鹼 性或酸性以形成穩定非毒性酸式或鹼式鹽的條件下，以鹽形式投予化合物可為適當。醫藥上可接受之鹼加成鹽之實例包括鈉、鉀、鈣、銨、或鎂鹽。生理上可接受之酸加成鹽之實例包括氫氯酸、氫溴酸、硝酸、磷酸、碳酸、硫酸及有機酸如乙酸、丙酸、苯甲酸、琥珀酸、反丁烯二酸、苦杏仁酸、草酸、檸檬酸、酒石酸、丙二酸、抗壞血酸、α-酮戊二酸、α-乙二醇磷酸、順丁烯二酸、甲苯磺酸、甲磺酸、及類似物。因此，在本文中揭示者係鹽酸鹽、硝酸鹽、磷酸鹽、碳酸鹽、碳酸氫鹽、硫酸鹽、乙酸鹽、丙酸鹽、苯甲酸鹽、琥珀酸鹽、反丁烯二酸鹽、扁桃酸鹽、草酸鹽、檸檬酸鹽、酒石酸鹽、丙二酸鹽、抗壞血酸鹽、α-酮戊二酸鹽、α-乙二醇磷酸鹽、順丁烯二酸鹽、甲苯磺酸鹽、及甲磺酸鹽。化合物之醫藥上可接受之鹽可使用所屬技術領域中廣為周知之標準程序獲得，例如藉由使足夠鹼性之化合物諸如胺與合適酸反應，提供生理上可接受之陰離子。亦可製備羧酸之鹼金屬(例如鈉、鉀或鋰)或鹼土金屬(例如鈣)鹽。
製造方法
在一些實施例中，在本文中揭示之CPP係使用根據式V-A至V-D中任一者之肽製備： 其中：AAH1及AAH2中之各者係獨立地選自疏水性胺基酸；AAU及AAZ每次出現時係獨立地選自胺基酸，且各AAU及各AAZ中之至多一者係精胺酸(即，前提是該環肽不包括超過3個精胺酸)；且m及n中之各者係0至6的數字，惟m或n中之至少一者不是0。
在一些實施例中，製備在本文中揭示之肽之方法包含使根據式V-A至V-D中任一者之肽(或其任何胺基酸)與撐體(如下述者)接觸。在一些實施例中，式V-A、V-B、V-C、或V-D之肽的N端上之胺基及C端上之羧酸酯基團分別獨立地形成肽鍵。例如，在一些實施例中，肽之N端可與肽之C端形成肽鍵，藉此形成環肽。在替代實施例中，N端及C端可獨立地與環化部份形成肽鍵，藉此形成環肽。在仍其他實施例中，式V-A、V-B、V-C、或V-D之肽中之胺基酸的側鏈可形成共價鍵結，藉此形成環肽。在一些實施例中，肽進一步包含藉以形成環肽的環化部份。環化部份可為任何適合與式V-A、V-B、V-C、或V-D中之任一者的胺基酸交互作用以藉此形成環肽的部份。在一些實施例中，環化部份獨立地與式V-A、V-B、V-C、或V-D中任一者之肽的相對端上之胺基酸的N端上之胺基及C端上之羧酸酯基團胺基酸形成肽鍵。在實施例中，環化部份可為天然或非天然胺基酸。在一些實施例中，CPP中之一或多個胺基酸亦可為環化部份的一部分。在一些實施例中，環化部份係麩醯胺酸。
在一些實施例中，肽進一步包含貨物部份Xn，其中至少一個原子或鍵結被連至Xn之鍵結置換，且其中Xn包含例如如上述之治療部份、靶向部份、可偵測部份、或其組合。
在一些實施例中，在式V-A至V-D之CPP中的胺基酸(包括r、R、AAH1、AAH2)總數係在6至10的範圍內。在一些實施例中，胺基酸總數係6。在一些實施例中，胺基酸總數係7。在一些實施例中，胺基酸總數係8。在一些實施例中，胺基酸總數係9。在一些實施例中，胺基酸總數係10。
在一些實施例中，m及n的總和係2至6。在一些實施例中，m及n的總和係2。在一些實施例中，m及n的總和係3。在一些實施例中，m及n的總和係4。在一些實施例中，m及n的總和係5。在一些實施例中，m及n的總和係6。在一些實施例中，m係0。在一些實施例中，m係1。在一些實施例中，m係2。在一些實施例中，m係3。在一些實施例中，m係4。在一些實施例中，m係5。在一些實施例中，m係6。在一些實施例中，n係0。在一些實施例中，n係1。在一些實施例中，n係2。在一些實施例中，n係3。在一些實施例中，n係4。在一些實施例中，n係5。在一些實施例中，n係6。
如上所討論，在本文中揭示之CPP中的胺基酸之疏水性可經選擇以改善攝取效率。在一些實施例中，AAH1及AAH2中之各者獨立地係具有大於甘胺酸的疏水性值之疏水性值之疏水性胺基酸。在其他實施例中，AAH1及AAH2中之各者獨立地係具有大於丙胺酸的疏水性值之疏水性值之疏水性胺基酸。在仍其他實施例中，AAH1及 AAH2中之各者獨立地係具有大於苯丙胺酸的疏水性值之疏水性值之疏水性胺基酸，例如使用上述之疏水性標度測量，包括Eisenberg及Weiss(Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.1984；81(1)：140-144)、Engleman，等人(Ann.Rev.of Biophys.Biophys.Chem..1986；1986(15)：321-53)、Kyte及Doolittle(J.Mol.Biol.1982；157(1)：105-132)、Hoop及Woods(Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.1981；78(6)：3824-3828)、及Janin(Nature.1979；277(5696)：491-492)(見上表1)。在具體實施例中，疏水性係使用Engleman等人所報告的疏水性標度測量。
如上所述，亦已發現疏水性胺基酸存在於D-Arg或L-Arg的N端或C端上、或其組合上改善CPP(及附接貨物)的胞質液攝取。例如，在一些實施例中，在本文中揭示之CPP可包括AAH1-D-Arg或D-Arg-AAH1。在其他實施例中，在本文中揭示之CPP可包括AAH1-L-Arg或L-Arg-AAH1。
如上所討論，可選擇在D-Arg或L-Arg的N端或C端上、或其組合上的疏水性胺基酸(即AAH1)的大小，以改善CPP的胞質液傳遞效率。例如，在D-Arg或L-Arg的N端或C端上、或其組合上的較大疏水性胺基酸相較於具有較小疏水性胺基酸否則相同的序列改善胞質液傳遞效率。如上所討論，疏水性胺基酸的大小可就疏水性胺基酸的分子量、疏水性胺基酸的立體效應、側鏈的溶劑可達表面積(SASA)、或其組合測量。在一些實施例中，疏水性胺基酸的大小係就疏水性胺基酸的分子量測量，且較大疏水性胺基酸具有分子量至少 約90g/mol、或至少約130g/mol、或至少約141g/mol的側鏈。在其他實施例中，胺基酸的大小係就疏水性側鏈的SASA測量，且較大疏水性胺基酸具有SASA大於丙胺酸、或大於甘胺酸的側鏈。在其他實施例中，AAH1具有SASA大於或等於約哌啶-2-羧酸酯、大於或等於約色胺酸、大於或等於約苯丙胺酸、或等於或大於約萘丙胺酸的疏水性側鏈。在一些實施例中，AAH1及AAH2獨立地具有SASA在約200Å2至約1000Å2的範圍內之側鏈，例如約250Å2、300Å2、350Å2、400Å2、450Å2、500Å2、550Å2、650Å2、700Å2、750Å2、800Å2、850Å2、900Å2、及約950Å2，包括所有介於之間的值及子範圍。
在一些實施例中，AAH1具有SASA至少約200Å2、至少約210Å2、至少約220Å2、至少約240Å2、至少約250Å2、至少約260Å2、至少約270Å2、至少約280Å2、至少約290Å2、至少約300Å2、至少約310Å2、至少約320Å2、或至少約330Å2之側鏈。在一些實施例中，AAH2具有SASA至少約200Å2、至少約210Å2、至少約220Å2、至少約240Å2、至少約250Å2、至少約260Å2、至少約270Å2、至少約280Å2、至少約290Å2、至少約300Å2、至少約310Å2、至少約320Å2、或至少約330Å2之側鏈。在一些實施例中，AAH1及AAH2之側鏈具有至少約350Å2、至少約360Å2、至少約370Å2、至少約380Å2、至少約390Å2、至少約400Å2、至少約410Å2、至少約420Å2、至少約430Å2、至少約440Å2、至少約450Å2、至少約460Å2、至少約470Å2、至少約480Å2、至少約490 Å2、大於約500Å2、至少約510Å2、至少約520Å2、至少約530Å2、至少約540Å2、至少約550Å2、至少約560Å2、至少約570Å2、至少約580Å2、至少約590Å2、至少約600Å2、至少約610Å2、至少約620Å2、至少約630Å2、至少約640Å2、大於約650Å2、至少約660Å2、至少約670Å2、至少約680Å2、至少約690Å2、或至少約700Å2之合併SASA。在一些實施例中，AAH2係側鏈的SASA小於或等於AAH1之疏水性側鏈的SASA之疏水性胺基酸。
在一些實施例中，CPP在AAH2-AAH1-R-r、AAH2-AAH1-r-R、R-r-AAH1-AAH2、或r-R-AAH1-AAH2的N端及/或C端上不包括疏水性胺基酸。在替代實施例中，CPP不包括側鏈大於(如本文中描述者)AAH1或AAH2中之至少一者的疏水性胺基酸。在進一步實施例中，CPP不包括側鏈的表面積大於AAH1之疏水性胺基酸。例如，在AAH1或AAH2中之至少一者係苯丙胺酸的實施例中，CPP不進一步包括萘丙胺酸(雖然CPP包括至少一個小於AAH1及AAH2之疏水性胺基酸，例如白胺酸)。在仍其他實施例中，CPP除了在AAH2-AAH1-R-r、AAH2-AAH1-r-R、R-r-AAH1-AAH2、或r-R-AAH1-AAH2中的疏水性胺基酸以外不包括萘丙胺酸。
如上所討論，可選擇胺基酸的掌性(即D或L胺基酸)以改善CPP(及如下述之附接貨物)的胞質液傳遞效率。在一些實施例中，在精胺酸之N端或C端上的疏水性胺基酸(例如AAH1)具有與相鄰的精胺酸相同或相對的掌性。在一些實施例中，AAH1具有與相鄰的精胺酸相對的掌性。例如，當精胺酸係D-arg(即「r」)時， AAH1係D-AAH1，且當精胺酸係L-Arg(即「R」)時，AAH1係L-AAH1。因此，在一些實施例中，在本文中揭示之CPP可包括下列模體中之至少一者：D-AAH1-D-arg、D-arg-D-AAH1、L-AAH1-L-Arg、或L-Arg-LAAH1。在具體實施例中，當精胺酸係D-arg時，AAH1可為D-pip、D-nal、D-trp、D-bta、或D-phe。在另一非限制性實例中，當精胺酸係L-Arg時，AAH1可為L-Pip、L-Nal、L-Trp、L-Bta、或L-Phe。
在一些實施例中，在本文中描述之CPP(例如根據式V-A至V-D之CPP)包括三個精胺酸。因此，在一些實施例中，在本文中描述之CPP包括下列序列中之一者：AAH2-AAH1-R-r-R、AAH2-AAH1-R-r-r、AAH2-AAH1-r-R-R、AAH2-AAH1-r-R-r、R-R-r-AAH1-AAH2、r-R-r-AAH1-AAH2、r-r-R-AAH1-AAH2、或R-r-R-AAH1-AAH2。在具體實施例中，在本文中描述之CPP具有下列序列中之一者：AAH2-AAH1-R-r-R、AAH2-AAH1-r-R-r、r-R-r-AAH1-AAH2、或R-r-R-AAH1-AAH2。在一些實施例中，AAH1及AAH2的掌性可經例如如上述之選擇以改善胞質液攝取效率，其中AAH1具有與相鄰的精胺酸相同的掌性，且AAH1及AAH2具有相對掌性。
在一些實施例中，在本文中描述之CPP(例如根據式V-A至V-D之CPP)包括三個疏水性胺基酸。因此，在一些實施例中，在本文中描述之CPP包括下列序列中之一者：AAH3-AAH2-AAH1-R-r、AAH3-AAH2-AAH1-R-r、AAH3-AAH2-AAH1-r-R、AAH3-AAH2-AAH1-r-R、R-r-AAH1-AAH2-AAH3、R-r-AAH1-AAH2-AAH3、r-R-AAH1- AAH2-AAH3、或r-R-AAH1-AAH2-AAH3，其中AAH3係上述之任何疏水性胺基酸，例如哌啶-2-羧酸酯、萘丙胺酸、色胺酸、3-(3-苯并噻吩基)-丙胺酸、或苯丙胺酸。在一些實施例中，AAH1、AAH2、及AAH3的掌性可經例如如上述之選擇以改善胞質液攝取效率，其中AAH1具有與相鄰的精胺酸相同的掌性，且AAH1及AAH2具有相對掌性。在其他實施例中，AAH1、AAH2、及AAH3的大小可經例如如上述之選擇以改善胞質液攝取效率，其中AAH3具有小於或等於AAH1及分開地/或AAH2之SAS。
在一些實施例中，AAH1及AAH2具有相同或相對掌性。在某些實施例中，AAH1及AAH2具有相對掌性。因此，在一些實施例中，在本文中揭示之CPP包括下列序列中之至少一者：D-AAH2-L-AAH1-R-r；L-AAH2-D-AAH1-r-R；R-r-D-AAH1-L-AAH2；或r-R-L-AAH1-D-AAH1，其中D-AAH1及D-AAH2中之各者係具有D組態之疏水性胺基酸，且L-AAH1及L-AAH2中之各者係具有L組態之疏水性胺基酸。在一些實施例中，D-AAH1及D-AAH2中之各者係獨立地選自由D-pip、D-nal、D-trp、D-bta、及D-phe所組成之群組。在具體實施例中，D-AAH1或D-AAH2係D-nal。在其他具體實施例中，D-AAH1係D-nal。在一些實施例中，L-AAH1及L-AAH2中之各者係獨立地選自由L-Pip、L-Nal、L-Trp、L-Bta、及L-Phe所組成之群組。在具體實施例中，L-AAH1及L-AAH2中之各者係L-Nal。在其他具體實施例中，L-AAH1係L-Nal。
在本文中描述之化合物可以有機合成領域中具有通常知識者已知之各種方式或其如所屬技術領域中具有通常知識者所理解之變化技術製備。在本文中描述之化合物可自輕易可得之起始材料製備。最佳反應條件可隨使用的具體反應物或溶劑變化，但該等條件可由所屬技術領域中具有通常知識者判定。
在本文中描述之化合物的變化包括描述用於各化合物之各種成分的添加、刪減、或移動。類似地，當一或多個掌性中心存在於分子中，分子之掌性可改變。此外，化合物合成可涉及各種化學基團的保護及去保護。保護及去保護的使用及適當保護基的選擇可由所屬技術領域中具有通常知識者判定。保護基化學可見例如Wuts and Greene,Protective Groups in Organic Synthesis,4th Ed.,Wiley & Sons,2006，其全文以引用方式併入本文中。
用於製備揭示化合物及組成物之起始材料及試劑可購自商業供應商諸如Aldrich Chemical Co.,(Milwaukee,WI)、Acros Organics(Morris Plains,NJ)、Fisher Scientific(Pittsburgh,PA)、Sigma(St.Louis,MO)、Pfizer(New York,NY)、GlaxoSmithKline (Raleigh,NC)、Merck(Whitehouse Station,NJ)、Johnson & Johnson(New Brunswick,NJ)、Aventis(Bridgewater,NJ)、AstraZeneca(Wilmington,DE)、Novartis(Basel,Switzerland)、Wyeth(Madison,NJ)、Bristol-Myers-Squibb(New York,NY)、Roche(Basel,Switzerland)、Lilly(Indianapolis,IN)、Abbott(Abbott Park,IL)、Schering Plough(Kenilworth,NJ)、或Boehringer Ingelheim (Ingelheim,Germany)，或者可藉由所屬技術領域中具有通常知識者已知之方法遵照參考文獻中闡述之程序製備，諸如Fieser and Fieser’s Reagents for Organic Synthesis,Volumes 1-17(John Wiley and Sons,1991)；Rodd’s Chemistry of Carbon Compounds,Volumes 1-5 and Supplementals(Elsevier Science Publishers,1989)；Organic Reactions,Volumes 1-40(John Wiley and Sons,1991)；March’s Advanced Organic Chemistry,(John Wiley and Sons,4th Edition)；及Larock’s Comprehensive Organic Transformations(VCH Publishers Inc.,1989)。其他材料諸如在本文中揭示之醫藥載劑可獲自商業來源。
產生在本文中描述之化合物的反應可在溶劑中進行，該溶劑可由有機合成領域中具有通常知識者選擇。溶劑在反應進行的條件即溫度及壓力下可為實質上不與起始材料(反應物)、中間物、或產物反應。反應可在一種溶劑或超過一種溶劑之混合物中進行。產物或中間物形成可根據所屬技術領域中已知之任何合適方法監測。例如，產物形成可藉由光譜分析手段諸如核磁共振光譜法(例如1H或13C)、紅外線光譜法、分光光度法(例如UV可見光)、或質譜法監測，或者藉由層析法諸如高效液相層析法(HPLC)或薄層層析法監測。
揭示化合物可藉由固相肽合成製備，其中胺基酸α-N端經酸或鹼保護基保護。該等保護基應具有對肽鍵聯形成條件穩定的性質，同時可被輕易移除而不破壞生長中的肽鏈或其中含有之任何掌性中心的消旋化。合適保護基係9-茀基甲基氧基羰基(Fmoc)、三級丁基 氧基羰基(Boc)、苄氧羰基(Cbz)、聯苯異丙基氧基羰基、三級戊基氧基羰基、異莰基氧基羰基、α,α-二甲基-3,5-二甲氧基苄基氧基羰基、鄰硝基苯基次磺醯基、2-氰基-三級丁基氧基羰基、及類似物。以揭示化合物的合成而言，9-茀基甲基氧基羰基(Fmoc)保護基係特別較佳。其他較佳的側鏈保護基係：對側鏈胺基如離胺酸及精胺酸而言，2,2,5,7,8-五甲基唍-6-磺醯基(pmc)、硝基、對甲苯磺醯基、4-甲氧苯-磺醯基、Cbz、Boc、及金剛烷基氧基羰基；對酪胺酸而言，苄基、鄰溴苄氧基-羰基、2,6-二氯苄基、異丙基、三級丁基(t-Bu)、環己基、環戊基及乙醯基(Ac)；對絲胺酸而言，三級丁基、苄基及四氫哌喃基；對組胺酸而言，三苯甲基、苄基、Cbz、對甲苯磺醯基及2,4-二硝基苯基；對色胺酸而言，甲醯基；對天冬胺酸及麩胺酸而言，苄基及三級丁基；及對半胱胺酸而言，三苯基甲基(三苯甲基)。
在固相肽合成方法中，α-C端胺基酸係附接至合適撐體或樹脂。可用於上述合成之合適撐體係該些對逐步縮合-去保護反應之試劑及反應條件呈惰性且不可溶於使用介質之材料。用於合成α-C端羧基肽之撐體係可購自Applied Biosystems(Foster City,Calif.)之4-羥基甲基苯氧基甲基-共聚(苯乙烯-1%二乙烯基苯)或4-(2',4'-二甲氧苯基-Fmoc-胺甲基)苯氧基乙醯胺基乙基樹脂。α-C端胺基酸藉由下列偶合至樹脂：N,N'-二環己基碳二亞胺(DCC)、N,N'-二異丙基碳二亞胺(DIC)或O-苯并三唑-1-基-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸鹽(HBTU)，在有或無4-二甲基胺基吡啶(DMAP)、1-羥基苯并三唑(HOBT)、苯并三唑-1-基氧基-參(二甲基胺基)鏻六氟磷酸鹽(BOP)或雙(2-側氧基-3- 唑啶基)膦氯化物(BOPCl)下，在介於10℃及50℃之間的溫度下於溶劑諸如二氯甲烷或DMF中媒介偶合約1至約24小時。當撐體係4-(2',4'-二甲氧苯基-Fmoc-胺甲基)苯氧基-乙醯胺基乙基樹脂時，先用二級胺(較佳的是哌啶)切割Fmoc基團，之後如上述與α-C端胺基酸偶合。用於偶合至去保護的4(2',4'-二甲氧苯基-Fmoc-胺甲基)苯氧基-乙醯胺基乙基樹脂之一個方法係O-苯并三唑-1-基-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸鹽(HBTU,1 equiv.)及1-羥基苯并三唑(HOBT,1 equiv.)於DMF中。連續的經保護胺基酸的偶合可在自動多肽合成儀中進行。在一個實例中，生長中肽鏈的胺基酸之α-N端係經Fmoc保護。移除生長中肽的α-N端側Fmoc保護基係用二級胺(較佳的是哌啶)處理完成。接著將每個經保護胺基酸以約3倍莫耳過剩導入，且偶合較佳係於DMF中進行。偶合劑可為O-苯并三唑-1-基-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸鹽(HBTU,1 equiv.)及1-羥基苯并三唑(HOBT,1 equiv.)。在固相合成結束時，將多肽以連續或以單一操作方式自樹脂移除並去保護。移除多肽及去保護可藉由將樹脂結合多肽用包含大茴香硫醚、水、乙二硫醇及三氟乙酸的切割試劑處理，以單一操作方式完成。在其中多肽的α-C端係烷基醯胺的情況中，將樹脂用烷基胺進行胺解切割。替代地，肽可藉由例如用甲醇轉酯，隨後進行胺解或直接轉醯胺移除。經保護肽可在此時純化或直接用於下一步驟。移除側鏈保護基可使用上述之切割雞尾酒完成。完全去保護肽可藉由一系列採用任何或所有下列類型之層析步驟純化：在弱鹼性樹脂(乙酸鹽形式)上的離子交換；在未經衍生聚苯乙烯-二乙烯基苯(例如Amberlite XAD) 上的疏水性吸附層析法；矽膠吸附層析法；在羧甲基纖維素上的離子交換層析法；分配層析法，例如在Sephadex G-25、LH-20或逆流分配上；高效液相層析法(HPLC)，特別是在辛基-或十八基矽基-矽石鍵結相管柱填充上的逆相HPLC。
使用方法
在本文中亦提供在本文中描述之化合物或組成物的使用方法。在本文中亦提供用於治療有此需要之對象的疾病或病狀之方法，該方法包含向該對象投予有效量的任何在本文中描述之化合物或組成物。
在本文中亦提供治療對象的癌症之方法。該等方法包括向對象投予有效量的一或多種在本文中描述之化合物或組成物、或其醫藥上可接受之鹽。在本文中描述之化合物及組成物或其醫藥上可接受之鹽可用於治療人類(例如小兒及老年族群)及動物(例如獸醫應用)的癌症。揭示方法可選地可包括識別需要或可能需要治療癌症的病患。可藉由在本文中描述之化合物及組成物治療之癌症類型的實例包括膀胱癌、腦癌、乳癌、結直腸癌、子宮頸癌、胃腸道癌、泌尿生殖道癌、頭頸癌、肺癌、卵巢癌、胰癌、前列腺癌、腎癌、皮膚癌、及睪丸癌。進一步實例包括肛門、膽管、骨、骨髓、腸(包括結腸及直腸)、眼、膽囊、腎、口、喉、食道、胃、睪丸、子宮頸、間皮瘤、神經內分泌、陰莖、皮膚、脊髓、甲狀腺、陰道、陰門、子宮、肝臟、肌肉、血液細胞(包括淋巴細胞及其他免疫系統細胞)的癌症及/ 或腫瘤。可藉由在本文中描述之化合物及組成物治療之癌症的進一步實例包括癌、Karposi’s肉瘤、黑色素瘤、間皮瘤、軟組織肉瘤、胰癌、肺癌、白血病(急性淋巴胚細胞性、急性骨髓樣、慢性淋巴球性、慢性骨髓樣、及其他)、及淋巴瘤(Hodgkin’s及非Hodgkin’s)、及多發性骨髓瘤。
治療或預防在本文中描述之癌症的方法可進一步包括以一或多個額外劑(例如抗癌劑或游離輻射)治療。一或多個額外劑及如本文中描述之化合物及組成物或其醫藥上可接受之鹽可以任何順序投予，包括同時投予、以及至多相隔數天之時間性間隔順序投予。該等方法亦可包括超過單次投予一或多個額外劑及/或如本文中描述之化合物及組成物或其醫藥上可接受之鹽。投予一或多個額外劑及如本文中描述之化合物及組成物或其醫藥上可接受之鹽可藉由相同或不同途徑。當以一或多個額外劑治療時，如本文中描述之化合物及組成物或其醫藥上可接受之鹽可組合至包括該一或多個額外劑之醫藥組成物中。
例如，如本文中描述之化合物或組成物或其醫藥上可接受之鹽可與額外抗癌劑組合至醫藥組成物中，該額外抗癌劑諸如13-順-視黃酸、2-胺基-6-巰基嘌呤、2-CdA、2-氯去氧腺苷、5-氟尿嘧啶、6-硫鳥嘌呤、6-巰嘌呤、Accutane、放線菌素-D、阿黴素、Adrucil、Agrylin、Ala-Cort、阿地白介素、阿來組單抗、阿裏維A酸、Alkaban-AQ、Alkeran、全反-視黃酸、α干擾素、六甲蜜胺、胺甲喋呤、胺磷汀、胺魯米特、阿那格雷、Anandron、阿那曲唑、阿拉 伯糖基胞嘧啶、Aranesp、Aredia、Arimidex、Aromasin、三氧化二砷、門冬醯胺酶、ATRA、Avastin、BCG、BCNU、貝伐珠單抗、貝沙羅汀、比卡魯胺、BiCNU、Blenoxane、博來黴素、硼替佐米、白消安、Busulfex、C225、菊白葉酸鈣、Campath、Camptosar、喜樹鹼-11、卡培他濱、Carac、卡鉑、卡莫司汀、卡莫司汀薄片劑、Casodex、CCNU、CDDP、CeeNU、Cerubidine、西妥昔單抗、苯丁酸氮芥、順鉑、嗜橙菌因子、克拉屈濱、可的松、Cosmegen、CPT-11、環磷醯胺、Cytadren、阿糖胞苷、阿糖胞苷脂質體、Cytosar-U、Cytoxan、達卡巴嗪、放線菌素D、Darbepoetin alfa、Daunomycin、道諾黴素、道諾黴素鹽酸鹽、道諾黴素脂質體、DaunoXome、Decadron、δ-Cortef、Deltasone、地尼白介素-毒素連接物、DepoCyt、地塞米松、地塞米松乙酸酯、地塞米松磷酸鈉、Dexasone、右雷佐生、DHAD、DIC、Diodex、多西他賽、Doxil、多柔比星、多柔比星脂質體、Droxia、DTIC、DTIC-Dome、杜拉隆、Efudex、艾里咖、艾倫斯、樂沙定、愛施巴、Emcyt、表柔比星、阿法依伯汀、愛必妥、歐文氏菌L-天冬醯胺酶、雌莫司汀、Ethyol、凡畢複、依扥泊苷、依扥泊苷磷酸鹽、Eulexin、易維特、依西美坦、法樂通、法洛德、複乳納、非格司亭、氟尿苷、福達華、氟達拉濱、Fluoroplex、氟尿嘧啶、氟尿嘧啶(乳膏劑)、氟甲睾酮、氟他胺、亞葉酸、FUDR、氟維司群、G-CSF、吉非替尼、吉西他濱、吉妥珠單抗奧唑米星、Gemzar、Gleevec、Lupron、Lupron Depot、Matulane、Maxidex、甲基二(氯乙基)胺、甲基二(氯乙基)胺鹽酸鹽、 美卓龍、Medrol、Megace、甲地孕酮、甲地孕酮乙酸酯、美法侖、巰嘌呤、美司鈉、Mesnex、甲胺蝶呤、甲胺蝶呤鈉、甲潑尼龍、Mylocel、來曲唑、Neosar、Neulasta、紐密伽、優保津、Nilandron、尼魯米特、氮芥、Novaldex、Novantrone、奧曲肽、奧曲肽乙酸酯、Oncospar、長春新鹼、Ontak、Onxal、歐普瑞維爾金、Orapred、Orasone、奧沙利鉑、太平洋紫杉醇、帕米膦酸、Panretin、Paraplatin、Pediapred、PEG干擾素、培門冬酶、培非司亭、PEG-INTRON、PEG-L-天冬醯胺酶、苯丙胺酸氮芥、Platinol、Platinol-AQ、潑尼松龍、潑尼松、Prelone、丙卡巴肼、PROCRIT、普留淨、具有卡莫司汀植入物的普羅非泮20、Purinethol、雷洛昔芬、Rheumatrex、Rituxan、利妥昔單抗、Roveron-A(干擾素α-2a)、Rubex、紅比黴素鹽酸鹽、善得定、善得定LAR、沙格莫丁、Solu-Cortef、Solu-Medrol、STI-571、鏈佐星、它莫西芬、塔格雷丁、紫杉醇、剋癌易、Temodar、替莫唑胺、替尼泊苷、TESPA、沙利度胺、撒利多邁、TheraCys、硫鳥嘌呤、硫鳥嘌呤藥片、硫代磷醯胺、Thioplex、塞替派、TICE、Toposar、托泊替康、托瑞米芬、曲妥珠單抗、維甲酸、Trexall、Trisenox、TSPA、VCR、Velban、Velcade、VePesid、Vesanoid、Viadur、長春鹼、長春鹼硫酸鹽、Vincasar Pfs、長春新鹼、長春瑞濱、長春瑞濱酒石酸鹽、VLB、VP-16、威猛、截瘤達、Zanosar、澤娃靈、Zinecard、諾雷德、唑來膦酸、Zometa、Gliadel薄片劑、Glivec、GM-CSF、戈舍瑞林、顆粒球集落刺激因子、氟羥甲睪酮、Herceptin、Hexadrol、Hexalen、六甲基三聚氰 胺、HMM、癌康定、愛治、氫可的松乙酸鹽、氫可的松、氫可的松磷酸鈉、氫可的松琥珀酸鈉、氫可的松磷酸鹽、羥基尿素、伊莫單抗、替伊莫單抗、伊達黴素、伊達比星、Ifex、IFN-α、依弗醯胺、IL 2、IL-11、伊馬替尼甲磺酸酯、咪唑羧醯胺、干擾素α、干擾素α-2b(PEG接合物)、介白素2、介白素-11、Intron A(干擾素α-2b)、菊白葉酸、瘤克寧、Leukine、亮丙瑞林、聞克斯丁、樂司他丁、脂質體Ara-C、液體Pred、洛莫司汀、L-PAM、L-沙可來新、Meticorten、絲裂黴素、絲裂黴素-C、米托蒽醌、M-潑尼松、MTC、MTX、Mustargen、氮芥、突變黴素、Myleran、Iressa、伊立替康、異維甲酸、Kidrolase、Lanacort、L-天冬醯胺酶、及LCR。額外抗癌劑亦可包括生物藥劑諸如例如抗體。
許多腫瘤及癌症具有病毒基因體存在腫瘤或癌症細胞中。例如，E-B病毒(EBV)與一些哺乳動物惡性病有關。在本文中揭示之化合物亦可單獨或與抗癌或抗病毒劑諸如更昔洛韋(ganciclovir)、疊氮胸苷(AZT)、拉米夫定(lamivudine)(3Tc)、等組合使用，以治療感染可造成細胞性轉變之病毒的病患及/或治療具有與病毒基因體存在細胞中有關之腫瘤或癌症的病患。在本文中揭示之化合物亦可與基於病毒之腫瘤疾病治療組合使用。
在本文中亦描述殺滅對象的腫瘤細胞之方法。該方法包括使腫瘤細胞與有效量的如本文中描述之化合物或組成物接觸，且可選地包括以有效量的游離輻射照射腫瘤細胞之步驟。此外，腫瘤的放射療法方法係在本文中提供。該等方法包括使腫瘤細胞與有效量的如 本文中描述之化合物或組成物接觸，及以有效量的游離輻射照射腫瘤。如本文中所使用，用語游離輻射係指包含具有足夠能量或可經由核交互作用產生足夠能量以產生游離之粒子或光子的輻射。游離輻射之實例係x-輻射。游離輻射的有效量係指當與在本文中描述之化合物組合投予時產生細胞傷害或死亡增加的游離輻射劑量。游離輻射可根據所屬技術領域中已知之方法傳遞，包括投予放射標示的抗體及放射性同位素。
如本文中描述之方法及化合物可用於預防性及治療性治療兩者。在本文中使用之用語治療(treating或treatment)包括預防；延遲發病；減少、根除、或延遲發病後徵候或症狀的惡化；及預防復發。就預防性用途而言，治療有效量之如本文中描述之化合物及組成物或其醫藥上可接受之鹽係在發病前(例如在明顯癌症徵候之前)、在早期發病期間(例如出現癌症的初始徵候及症狀)、或在癌症確定發展之後向對象投予。預防性投予可在感染症狀顯現之前數天至數年發生。預防性投予可用於例如呈現癌前病灶之對象、該些經診斷為早期惡性病者、及對特定癌症具有易感性的子群(例如家族、種族、及/或職業)的化學預防性治療。治療性治療涉及在癌症診斷後向對象投予治療有效量之如本文中描述之化合物及組成物或其醫藥上可接受之鹽。
在治療對象的癌症或腫瘤之方法的一些實例中，向對象投予之化合物或組成物可包含治療部份，該治療部份可包含可作為針 對Ras(例如K-Ras)、PTP1B、Pin1、Grb2 SH2、或其組合之抑制劑的靶向部份。
揭示的主題也關於用於治療具有代謝病症或病況之對象的方法。在一實施例中，將有效量的一或多種在本文中揭示之化合物或組成物向具有代謝病症且需要此治療之對象投予。在一些實例中，代謝病症可包含第II型糖尿病。在治療對象的代謝病症之方法的一些實例中，向對象投予之化合物或組成物可包含治療部份，該治療部份可包含可作為針對PTP1B之抑制劑的靶向部份。在此方法之一特定實例中，對象係肥胖的且該方法包含藉由投予在本文中揭示之組成物治療對象之肥胖。
揭示的主題也關於用於治療具有免疫病症或病況之對象的方法。在一實施例中，將有效量的一或多種在本文中揭示之化合物或組成物向具有免疫病症且需要此治療之對象投予。在治療對象的免疫病症之方法的一些實例中，向對象投予之化合物或組成物可包含治療部份，該治療部份可包含可作為針對Pin1之抑制劑的靶向部份。
揭示的主題也關於用於治療具有發炎病症或病況之對象的方法。在一實施例中，將有效量的一或多種在本文中揭示之化合物或組成物向具有發炎病症且需要此治療之對象投予。
揭示的主題也關於用於治療具有囊腫纖維化之對象的方法。在一實施例中，將有效量的一或多種在本文中揭示之化合物或組成物向具有囊腫纖維化且需要此治療之對象投予。在治療對象的囊腫纖維化之方法的一些實例中，向對象投予之化合物或組成物可包含治 療部份，該治療部份可包含可作為針對CAL PDZ之抑制劑的靶向部份。
在一些實施例中，在本文中揭示之CPP可用於偵測或診斷對象的疾病或病況。例如，CPP可包含可與目標例如腫瘤交互作用的靶向部份及/或可偵測部份。
組成物、配方及投予方法
揭示化合物及含有彼等之組成物的體內應用可藉由所屬技術領域中具有通常知識者目前或前瞻性已知之任何合適方法及技術完成。例如，揭示化合物可調製成生理上或醫藥上可接受之形式且藉由所屬技術領域中已知之任何合適途徑投予，包括例如口服、經鼻、直腸、局部、及非經腸投予途徑。如本文中所使用，用語非經腸包括諸如藉由皮下、皮內、靜脈內、肌肉內、腹膜內、及胸骨內注射投予。揭示化合物或組成物之投予可為單次投予，或可由所屬技術領域中具有通常知識者輕易判定以連續或不同間隔投予。
在本文中揭示之化合物及包含彼等之組成物亦可利用脂質體技術、緩釋膠囊、植入泵、及可生物降解容器投予。這些傳遞方法可有利地在一段延長的時間期間提供均勻劑量。化合物亦可以彼等之鹽衍生物形式或結晶形式投予。
在本文中揭示之化合物可根據用於製備醫藥上可接受之組成物的已知方法調製。配方係在所屬技術領域中具有通常知識者廣為週知且輕易可得之一些來源中詳細描述。例如，Remington’s Pharmaceutical Science by E.W.Martin(1995)描述可與揭示方法關聯使用的配方。一般來說，在本文中揭示之化合物可調製為使得有效量的化合物與合適載劑組合，以促進化合物的有效投予。使用的組成物亦可呈現各種形式。這些包括例如固體、半固體、及液體劑型，諸如錠劑、丸劑、粉劑、液體溶液或懸浮液、栓劑、注射用及輸注用溶液、及噴劑。較佳形式取決於預定投予模式及治療應用。組成物亦較佳地包括所屬技術領域中具有通常知識者已知之習知醫藥上可接受之載劑及稀釋劑。與化合物一起使用之載劑或稀釋劑之實例包括乙醇、二甲亞碸、甘油、氧化鋁、澱粉、鹽水、及等效載劑及稀釋劑。為了提供用於所欲治療性治療的該等劑量之投予，在本文中揭示之組成物可有利地包含基於包括載劑或稀釋劑之組成物的總重量，總重量介於約0.1%及100%的一或多種主題化合物。
適用於投予之配方包括例如無菌注射水溶液，其可含有抗氧化劑、緩衝劑、抑菌劑、及使配方與預定接受者的血液等張之溶質；及水性及非水性無菌懸浮液，其可包括懸浮劑及增稠劑。配方可存在於單位劑量或多劑量容器中，例如密封安瓿及小瓶，且可儲存為使用前僅需無菌液體載劑例如注射用水調理之冷凍乾燥(凍乾)狀態。臨時注射溶液及懸浮液可自無菌粉劑、顆粒、錠劑等製備。應理解除了以上特別提及之成分之外，在考慮所討論的配方類型後，本文中揭示之組成物可包括所屬技術領域中習知之其他劑。
在本文中揭示之化合物及包含彼等之組成物可經由與細胞直接接觸或經由載劑手段傳遞至細胞。用於傳遞化合物及組成物至 細胞的載劑手段係所屬技術領域中已知且包括例如將組成物包封於脂質體部份中。另一用於傳遞在本文中揭示之化合物及組成物至細胞之手段包含將化合物連接至靶向傳遞至目標細胞之蛋白質或核酸。美國專利第6,960,648號及美國申請公開號20030032594及20020120100揭示可偶合至另一組成物且允許該組成物轉位穿過生物膜之胺基酸序列。美國申請公開號20020035243亦描述用於運輸生物部份穿過細胞膜以進行細胞內傳遞之組成物。化合物亦可併入聚合物中，其實例包括用於顱內腫瘤之聚(D-L乳交酯-共-乙交酯)聚合物；聚[雙(對羧基苯氧基)丙烷：癸二酸](20：80莫耳比)(如GLIADEL中所使用)；軟骨素；幾丁質；及聚葡萄胺糖。
就腫瘤病症之治療而言，在本文中揭示之化合物可與其他抗腫瘤或抗癌物質及/或與輻射及/或光動力療法及/或與移除腫瘤之外科治療組合投予至需要治療之病患。這些其他物質或治療可與本文中揭示之化合物同時給予或不同時間給予。例如，在本文中揭示之化合物可與有絲分裂抑制劑諸如紫杉醇或長春鹼、烷化劑諸如環磷醯胺或依弗醯胺、抗代謝劑諸如5-氟尿嘧啶或羥基尿素、DNA嵌入劑諸如多柔比星或博來黴素、拓撲異構酶抑制劑諸如依扥泊苷或喜樹鹼、抗血管生成劑諸如血管抑素、抗雌激素諸如它莫西芬、及/或其他分別諸如例如GLEEVEC(Novartis Pharmaceuticals Corporation)及HERCEPTIN(Genentech,Inc.)之抗癌藥或抗體、或免疫治療劑諸如伊匹單抗及硼替佐米組合使用。
在某些實例中，在本文中揭示之化合物及組成物可在一或多個解剖部位諸如非所要細胞生長之部位(諸如腫瘤部位或良性皮膚生長，例如注射或局部施用至腫瘤或皮膚生長)可選地與醫藥上可接受之載劑諸如惰性稀釋劑組合進行局部投予。在本文中揭示之化合物及組成物可系統性投予，諸如靜脈內或口服，其可選地與醫藥上可接受之載劑諸如惰性稀釋劑或用於口服傳遞之可吸收可食載劑組合。彼等可封閉在硬殼或軟殼明膠膠囊中、可壓製成錠劑、或可直接併入病患飲食的食物中。就口服治療性投予而言，活性化合物可與一或多種賦形劑組合且以可攝食錠劑、口頰錠、口含錠、膠囊、酏劑、懸浮液、漿料、薄片劑、氣霧噴劑、及類似物之形式使用。
揭示組成物係生物可利用且可口服傳遞。口服組成物可為錠劑、口含錠、丸劑、膠囊、及類似物，且亦可含有下列：黏合劑諸如黃蓍膠、阿拉伯膠、玉米澱粉或明膠；賦形劑諸如磷酸二鈣；崩散劑諸如玉米澱粉、馬鈴薯澱粉、海藻酸及類似物；潤滑劑諸如硬脂酸鎂；及甜味劑諸如蔗糖、果糖、乳糖或阿司巴丹或可添加矯味劑諸如薄荷、冬青油、或櫻桃風味。當單位劑量形式係膠囊時，其除了上述類型的材料之外可含有液體載劑，諸如植物油或聚乙二醇。各種其他材料可存在為包衣或以其他方式修飾固體單位劑量形式的物理形式。例如，錠劑、丸劑、或膠囊可用明膠、蠟、蟲膠、或糖及類似物包覆。漿料或酏劑可含有活性化合物、作為甜味劑的蔗糖或果糖、作為保存劑的甲基及丙基對羥基苯甲酸酯、染料及矯味劑諸如櫻桃或橘子口味。當然，任何用於製備任何單位劑量形式之材料應為醫藥上可 接受者且所採用的量實質上不具毒性。此外，活性化合物可併入持續釋放製劑及裝置中。
在本文中揭示之化合物及組成物包括其醫藥上可接受之鹽或前藥可藉由輸注或注射靜脈內、肌肉內、或腹膜內投予。活性劑或其鹽之溶液可在水中製備，可選地與非毒性界面活性劑混合。分散液亦可在甘油、液體聚乙二醇、甘油三乙酸酯、及其混合物中及在油中製備。在尋常儲存條件及使用下，這些製劑可含有保存劑以預防微生物生長。
適用於注射或輸注之醫藥劑型可包括無菌水溶液或分散液或包含活性成分之無菌粉劑，其經調適用於臨時製備可選地包封於脂質體中之無菌注射用或輸注用溶液或分散液。最終劑型在製造及儲存條件下應為無菌、流體且穩定。液體載劑或媒劑可為溶劑或液體分散介質，包含例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、液體聚乙二醇、及類似物)、植物油、非毒性甘油酯、及其合適混合物。適當之流動性可例如藉由形成脂質體、藉由維持以分散液為例之所需粒徑或藉由使用界面活性劑來維持。可選地，預防微生物作用可藉由各種其他抗菌劑及抗真菌劑例如對羥基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞及該類似物達成。在許多情況下，較佳的是包括等張劑，例如糖、緩衝劑或氯化鈉。注射用組成物之延長吸收可藉由包括延遲吸收之劑例如單硬脂酸鋁及明膠達成。
無菌注射用溶液之製備係藉由將所需量的本文中揭示之化合物及/或劑併入視需要含有如上列舉之各種其他成分之適當溶劑 中，接著過濾滅菌。以用於製備無菌注射用溶液之無菌粉劑為例，較佳製備方法係真空乾燥及冷凍乾燥技術，其產生活性成分加上存在於先前過濾滅菌之溶液中之任何額外所欲成分之粉劑。
就局部投予而言，在本文中揭示之化合物及劑可作為液體或固體施用。然而，大致上所欲的是將彼等作為組成物與皮膚學上可接受之載劑(可為固體或液體)組合以局部投予至皮膚。在本文中揭示之化合物及劑及組成物可局部施用至對象的皮膚，以減少惡性或良性生長的大小(且可包括完全移除)、或治療感染部位。在本文中揭示之化合物及劑可直接施用至生長或感染部位。較佳地，化合物及劑係以諸如軟膏、乳膏劑、乳液、溶液、酊劑、或類似物之配方施用至生長或感染部位。
可用固體載劑包括細分固體，諸如滑石、黏土、微晶型纖維素、矽石、氧化鋁及類似物。可用液體載劑包括水、醇或二醇或水-醇/二醇摻合物，其中化合物可選地在非毒性界面活性劑的幫助下，以有效水準溶解或分散。可添加佐劑諸如香料及額外抗菌劑以最佳化給定用途之性質。所得液體組成物可自吸收墊施用、用於浸漬繃帶及其他敷料，或使用例如泵型或氣霧噴器噴至受影響區域上。
增稠劑諸如合成聚合物、脂肪酸、脂肪酸鹽及酯、脂肪醇、經修飾的纖維素或經修飾的礦物材料亦可與液體載劑一起採用以形成可塗抹的糊劑、膠體、軟膏、肥皂、及類似物，以直接施用至使用者的皮膚。
在本文中揭示之化合物及劑及醫藥組成物的可用劑量可藉由比較彼等之體外活性及動物模型中之體內活性判定。將小鼠及其他動物中的有效劑量外推至人類之方法係所屬技術領域已知。
組成物的投予劑量範圍係該些大到足以產生可影響症狀或病症之所欲效應的劑量範圍。劑量不應大到造成不良反應，諸如非所要交叉反應、過敏性反應、及類似者。通常，劑量將隨病患的年齡、病況、性別及疾病範圍變化且可由所屬技術領域中具有通常知識者判定。劑量可由個別醫師視任何禁忌症之情況調整。劑量可變化，且可每天投予一或多次，共一或多天。
亦揭示包含在本文中揭示之化合物與醫藥上可接受之載劑組合的醫藥組成物。調適用於口服、局部或非經腸投予且包含一量之化合物的醫藥組成物構成較佳態樣。向病患特別是人類投予之劑量應足以在合理時段內在病患中達成治療反應、無致死毒性、且較佳地造成不大於可接受水準之不良反應或發病率。所屬技術領域中具有通常知識者將認可劑量將取決於多種因子包括對象的病況(健康)、對象的體重、併用治療(若有的話)的種類、治療頻率、治療比例、以及病理病況的嚴重性及階段。
亦揭示在一或多個容器中包含在本文中揭示之化合物之套組。揭示套組可選地可包括醫藥上可接受之載劑及/或稀釋劑。在一實施例中，套組包括一或多種如本文中描述之其他組分、添加劑、或佐劑。在另一實施例中，套組包括一或多種抗癌劑，諸如該些在本文中描述之劑。在一實施例中，套組包括描述如何投予套組之化合物或 組成物的說明或包裝材料。套組的容器可為任何合適材料，例如玻璃、塑膠、金屬、等且為任何合適大小、形狀、或組態。在一實施例中，在本文中揭示之化合物及/或劑在套組中提供為固體，諸如錠劑、丸劑、或粉劑形式。在另一實施例中，在本文中揭示之化合物及/或劑在套組中提供為液體或溶液。在一實施例中，套組包含安瓿或注射器，該安瓿或注射器含有呈液體或溶液形式之在本文中揭示之化合物及/或劑。
實例 實例1. CPP合成
肽係在Rink醯胺樹脂LS(0.2mmol/g)上使用標準Fmoc化學合成。一般偶合反應含有5當量Fmoc-胺基酸、5當量2-(7-氮-1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸鹽(HATU)及10當量二異丙基乙胺(DIPEA)，並允許在混合下進行75min。在添加最後的(N端)殘基後，C端Glu殘基上之烯丙基藉由含Pd(PPh3)4、苯基矽烷(分別為0.1及10當量)之無水DCM(3×15min)處理移除。N端Fmoc基團藉由含20%哌啶之DMF處理移除，並將肽藉由含苯并三唑-1-基-氧基-參-吡咯啶-鏻六氟磷酸鹽(PyBOP)/HOBt/DIPEA(5、5、及10當量)之DMF處理3h環化。藉由82.5：5：5：5：2.5(v/v)TFA/大茴香硫醚/水/酚/乙二硫醇處理2h將肽去保護並自樹脂釋放。將肽用冷乙醚(3x)研磨並藉由逆相HPLC在C18管柱上純化。產物純 度(>98%)係藉由配備有分析型C18管柱之逆相HPLC評估。各肽的真實性藉由MALDI-TOF質譜法證實。
為了產製螢光標示肽，將N e -4-甲氧基三苯甲基-L-離胺酸在肽合成之前添加至C端。在固相合成完成後但在切割前，將離胺酸側鏈使用含1%(v/v)TFA之DCM選擇性去保護。將樹脂與5當量的反應性螢光標示試劑(螢光異硫氰酸鹽、麗絲胺玫瑰紅B磺醯氯、或萘并螢光素琥珀醯亞胺基酯)及5當量的DIPEA於DMF中孵養整夜。將標示肽如上述去保護、研磨、純化、並藉由MALDI-TOF MS分析。
實例2.細胞攝取效率
為了判定在本文中揭示之CPP的細胞攝取效率，將HeLa細胞培養於12孔板(每孔1.5×105個細胞)整夜。將細胞與5mM萘并螢光素(NF)標示肽於細胞性介質中孵養2h。在孵養結束時，將細胞用DPBS洗滌二次、用0.25%胰蛋白酶自板脫離、稀釋至透明DMEM中、以250g成團塊5min、用DPBS洗滌二次、重懸於DPBS中、並在BD FACS LSR II流動式細胞測量儀上分析。就NF標示肽而言，使用633-nm雷射激發並在APC通道中分析螢光發射。絕對細胞攝取效率係藉由比較在胞質液中之CPP的濃度(經由螢光強度)與在細胞外介質中之濃度判定。相對細胞攝取效率係藉由比較CPP的胞質液濃度與對照CPP環(FΦRRRRQ)(SEQ ID NO：10)的胞質液濃度判定。
已描述本發明之一些實施例。然而，將理解在不背離本發明之精神及範疇下可進行各種修飾。因此，其他實施例亦屬於下列申請專利範圍之範疇內。
<110> 美商俄亥俄州立創新基金會
<120> 細胞穿透肽序列
<130> 10336-333WO1
<140> 106140322
<141> 2017-11-21
<160> 136
<170> PatentIn版本3.5
<210> 1
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
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<210> 2
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
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<223> 合成建構體
<400> 2
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<212> PRT
<213> 人工序列
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<223> 合成建構體
<400> 3
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<223> 合成建構體
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<221> misc_feature
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<223> Xaa可為任何天然發生胺基酸
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<223> 2-胺基丁酸
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<221> MOD_RES
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<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> D-胺基酸
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<223> 合成建構體
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<223> 合成建構體
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<223> 合成建構體
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
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<213> 人工序列
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<223> 合成建構體
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<221> MOD_RES
<222> (5)..(5)
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<223> 合成建構體
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<213> 人工序列
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<223> 合成建構體
<220>
<221> MOD_RES
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<220>
<221> MOD_RES
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<223> D-胺基酸
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<220>
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<223> 合成建構體
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<223> 合成建構體
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<220>
<223> 合成建構體
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<220>
<223> 合成建構體
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<221> MOD_RES
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<220>
<221> MOD_RES
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<223> D-胺基酸
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<220>
<221> MOD_RES
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<223> D-胺基酸
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<220>
<221> MOD_RES
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<212> PRT
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<220>
<223> 合成建構體
<220>
<221> MOD_RES
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<220>
<223> 合成建構體
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<220>
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<220>
<223> 合成建構體
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<220>
<223> 合成建構體
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<220>
<221> MOD_RES
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<212> PRT
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<220>
<223> 合成建構體
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<212> PRT
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<220>
<223> 合成建構體
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<220>
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<220>
<223> 合成建構體
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<220>
<223> 合成建構體
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<220>
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<220>
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<223> 合成建構體
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<220>
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<212> PRT
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<220>
<223> 合成建構體
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<220>
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<220>
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<220>
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<220>
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<220>
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<220>
<223> 合成建構體
<220>
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<220>
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<220>
<221> MOD_RES
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<211> 1
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<220>
<221> MOD_RES
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<212> PRT
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<220>
<223> 合成建構體
<220>
<221> MOD_RES
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<220>
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<220>
<221> MOD_RES
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<223> D-胺基酸
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<220>
<221> MOD_RES
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<223> D-胺基酸
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> D-胺基酸
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<211> 1
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<220>
<221> MOD_RES
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<223> D-胺基酸
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<211> 1
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> D-胺基酸
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<211> 1
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> D-胺基酸
<400> 105
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<211> 1
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> D-胺基酸
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
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<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
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<210> 109
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<400> 109
<210> 110
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<400> 110
<210> 111
<211> 1
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> D-胺基酸
<400> 111
<210> 112
<211> 1
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> D-胺基酸
<400> 112
<210> 113
<211> 1
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> D-胺基酸
<400> 113
<210> 114
<211> 1
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> D-胺基酸
<400> 114
<210> 115
<211> 1
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> D-胺基酸
<400> 115
<210> 116
<211> 1
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> D-胺基酸
<400> 116
<210> 117
<211> 1
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> D-胺基酸
<400> 117
<210> 118
<211> 1
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> D-胺基酸
<400> 118
<210> 119
<211> 1
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> D-胺基酸
<400> 119
<210> 120
<211> 1
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> Xaa可為任何天然發生胺基酸
<400> 120
<210> 121
<211> 1
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> D-胺基酸
<400> 121
<210> 122
<211> 1
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> D-胺基酸
<400> 122
<210> 123
<211> 1
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> D-胺基酸
<400> 123
<210> 124
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> L-2-萘丙胺酸
<400> 124
<210> 125
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<220>
<221> MOD_RES
<222> (5)..(5)
<223> L-2-萘丙胺酸
<400> 125
<210> 126
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)..(3)
<223> L-2-萘丙胺酸
<400> 126
<210> 127
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> L-2-萘丙胺酸
<400> 127
<210> 128
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> L-2-萘丙胺酸
<400> 128
<210> 129
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> L-2-萘丙胺酸
<400> 129
<210> 130
<211> 1
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> D-胺基酸
<400> 130
<210> 131
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)..(3)
<223> L-2-萘丙胺酸
<400> 131
<210> 132
<211> 1
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> D-胺基酸
<400> 132
<210> 133
<211> 1
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> D-胺基酸
<400> 133
<210> 134
<211> 1
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> D-胺基酸
<400> 134
<210> 135
<211> 1
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> D-胺基酸
<400> 135
<210> 136
<211> 1
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成建構體
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> D-胺基酸
<400> 136

Claims (94)

  1. 一種根據式I-A至I-E中之一者的環肽： 其中AA 1、AA 2、AA 3、AA 4、AA 5、AA 6、AA 7、AA 8、AA 9、及AA 10中之各者當存在時係獨立地選自胺基酸；且其中：AA 1、AA 2、AA 3、AA 4、AA 5、AA 6、AA 7、AA 8、AA 9、或AA 10中之二或三者當存在時係精胺酸，且其餘的胺基酸係除精胺酸以外的胺基酸；且AA 1、AA 2、AA 3、AA 4、AA 5、AA 6、AA 7、AA 8、AA 9、或AA 10中之至少二者當存在時獨立地係疏水性胺基酸。
  2. 如請求項1之環肽，其中各疏水性胺基酸係獨立地選自由苯甘胺酸、白胺酸、異白胺酸、正白胺酸、甲硫胺酸、苯丙胺酸、升苯丙胺酸、環己基丙胺酸、酪胺酸、哌啶-2-羧酸酯、色胺酸、脯胺酸、3-(3-苯并噻吩基)-丙胺酸、及萘丙胺酸所組成之群組，其各者係可 選地經一或多個取代基取代。
  3. 如請求項1之環肽，其中各疏水性胺基酸獨立地係哌啶-2-羧酸酯、萘丙胺酸、色胺酸、3-(3-苯并噻吩基)-丙胺酸、或苯丙胺酸，其各者係可選地經一或多個取代基取代。
  4. 如請求項1之環肽，其中至少一個疏水性胺基酸具有大於或等於苯丙胺酸之疏水性。
  5. 如請求項1之環肽，其中該等胺基酸中之至少二者具有相對掌性。
  6. 如請求項1至5中任一項之環肽，其中該等胺基酸中之至少二者具有相同掌性。
  7. 如請求項1至6中任一項之環肽，其中一個精胺酸係相鄰於一個疏水性胺基酸。
  8. 如請求項7之環肽，其中該精胺酸具有與該相鄰的疏水性胺基酸相同的掌性。
  9. 如請求項1至8中任一項之環肽，其中至少二個精胺酸係彼此相鄰。
  10. 如請求項1至9中任一項之環肽，其中三個精胺酸係彼此相鄰。
  11. 如請求項1至10中任一項之環肽，其中至少二個疏水性胺基酸係彼此相鄰。
  12. 如請求項1至11中任一項之環肽，其中至少三個疏水性胺基酸係彼此相鄰。
  13. 如請求項1至12中任一項之環肽，其中任四個相鄰胺基酸係AA H2-AA H1-R-r、AA H2-AA H1-r-R、R-r-AA H1-AA H2、或r-R-AA H1- AA H2，其中AA H1及AA H2中之各者獨立地係疏水性胺基酸。
  14. 一種環肽，其具有根據式II-A至II-D中任一者之結構： 其中：AA H1及AA H2中之各者獨立地係疏水性胺基酸；AA U及AA Z每次出現時獨立地係任何胺基酸；且各AA U及各AA Z中之至多一者係精胺酸；且其中：m及n中之各者獨立地係0至6的數字，惟m或n中之至少一者不是0且胺基酸之總數係6至10。
  15. 如請求項13或14之環肽，其中AA H1及AA H2中之各者獨立地係哌啶-2-羧酸酯、萘丙胺酸、色胺酸、3-(3-苯并噻吩基)-丙胺酸、或苯丙胺酸，其各者係可選地經一或多個取代基取代。
  16. 如請求項13至15中任一項之環肽，其中AA H1及AA H2中之各者獨立地係具有大於或等於苯丙胺酸之疏水性的疏水性胺基酸。
  17. 如請求項13至16中任一項之環肽，其中AA H1係萘丙胺酸。
  18. 如請求項13至17中任一項之環肽，其中AA H1及AA H2係萘丙胺酸。
  19. 如請求項13至18中任一項之環肽，其中AA H1係側鏈具有大的溶劑可達表面積(SASA)之疏水性胺基酸。
  20. 如請求項19之環肽，其中該大的SASA係至少約200Å 2。
  21. 如請求項13至20中任一項之環肽，其中AA H2係側鏈的SASA小於或等於AA H1之該側鏈的該SASA之疏水性胺基酸。
  22. 如請求項13至21中任一項之環肽，其中當任何AA U或任何AA Z係疏水性胺基酸時，該疏水性胺基酸具有小於AA H1之SASA的側鏈。
  23. 如請求項13至22中任一項之環肽，其中AA H1及AA H2具有相同或相對掌性。
  24. 如請求項23之環肽，其中AA H1及AA H2具有相對掌性。
  25. 如請求項13至24中任一項之環肽，其中AA H1具有與該相鄰的精胺酸相同的掌性。
  26. 如請求項13至25中任一項之環肽，其具有下列序列中之一者：AA H2-AA H1-R-r-R、AA H2-AA H1-R-r-r、AA H2-AA H1-r-R-R、AA H2-AA H1-r-R-r、R-R-r-AA H1-AA H2、r-R-r-AA H1-AA H2、r-r-R-AA H1-AA H2、或R-r-R-AA H1-AA H2。
  27. 如請求項13至26之環肽，其具有下列序列中之一者：AA H2-LAA H1-R-r-R、AA H2-DAA H1-r-R-r、r-R-r-DAA H1-AA H2、或R-r-R-LAA H1-AA H2。
  28. 如請求項1至27中任一項之環肽，其具有相較於環(FΦRRRRQ)(SEQ ID NO：10)改善約50%至約500%之範圍的量之相對胞質液傳 遞效率。
  29. 如請求項28之環肽，其中該環肽具有相較於環(FΦRRRRQ)(SEQ ID NO：10)改善約175%至約250%之相對胞質液傳遞效率。
  30. 如請求項29之環肽，其包含下列序列：FfFRrR(SEQ ID NO：131)。
  31. 如請求項28之環肽，其中該環肽具有相較於環(FΦRRRRQ)(SEQ ID NO：10)改善約150%至約400%之相對胞質液傳遞效率。
  32. 如請求項31之環肽，其包含下列序列：fFfrRr(SEQ ID NO：132)。
  33. 如請求項32之環肽，其中該環肽具有相較於環(FΦRRRRQ)(SEQ ID NO：10)改善約75%至約275%之胞質液傳遞效率。
  34. 如請求項33之環肽，其包含下列序列：fFfRrR(SEQ ID NO：133)。
  35. 如請求項28之環肽，其中該環肽具有相較於環(FΦRRRRQ)(SEQ ID NO：10)改善約150%至約250%之胞質液傳遞效率。
  36. 如請求項35之環肽，其包含下列序列：FfFrRr(SEQ ID NO：134)。
  37. 如請求項36之環肽，其中該環肽具有相較於環(FΦRRRRQ)(SEQ ID NO：10)改善約200%至約450%之胞質液傳遞效率。
  38. 如請求項37之環肽，其包含下列序列：fFΦrRr(SEQ ID NO：135)。
  39. 如請求項28之環肽，其中該肽具有相較於環(FΦRRRRQ)(SEQ ID NO：10)改善約250%至約450%之胞質液傳遞效率。
  40. 如請求項39之環肽，其包含下列序列：fΦfrRr(SEQ ID NO：136)。
  41. 一種根據式III-A至III-D的環肽： 其中：AA 1、AA 2、AA 3、及AA 4中之各者係獨立地選自胺基酸；AA U及AA Z每次出現時係獨立地選自胺基酸；m及n中之各者係0至6的數字，惟m或n中之至少一者不是0；X n係貨物部份；L係連接子部份；其中：AA 1、AA 2、AA 3、AA 4、各AA U、及各AA Z中之二或三者係精胺酸，且其餘的胺基酸係除精胺酸以外的胺基酸；AA 1、AA 2、AA 3、AA 4、各AA U、及各AA Z中之至少二者獨立地係疏水性胺基酸；且 其中當X n附接至AA u時，m不是0。
  42. 如請求項41之環肽，其中各疏水性胺基酸係獨立地選自由苯甘胺酸、白胺酸、異白胺酸、正白胺酸、甲硫胺酸、苯丙胺酸、升苯丙胺酸、環己基丙胺酸、酪胺酸、哌啶-2-羧酸酯、色胺酸、脯胺酸、3-(3-苯并噻吩基)-丙胺酸、及萘丙胺酸所組成之群組，其各者係可選地經一或多個取代基取代。
  43. 如請求項41之環肽，其中各疏水性胺基酸獨立地係哌啶-2-羧酸酯、萘丙胺酸、色胺酸、3-(3-苯并噻吩基)-丙胺酸、或苯丙胺酸，其各者係可選地經一或多個取代基取代。
  44. 如請求項41之環肽，其中至少一個疏水性胺基酸具有大於或等於苯丙胺酸之疏水性。
  45. 如請求項41之環肽，其中該等胺基酸中之至少二者具有相對掌性。
  46. 如請求項41至45中任一項之環肽，其中該等胺基酸中之至少二者具有相同掌性。
  47. 如請求項41至46中任一項之環肽，其中一個精胺酸係相鄰於一個疏水性胺基酸。
  48. 如請求項47之環肽，其中該精胺酸具有與該相鄰的疏水性胺基酸相同的掌性。
  49. 如請求項41至48中任一項之環肽，其中至少二個精胺酸係彼此相鄰。
  50. 如請求項41至49中任一項之環肽，其中三個精胺酸係彼此相鄰。
  51. 如請求項41至50中任一項之環肽，其中至少二個疏水性胺基酸係彼此相鄰。
  52. 如請求項41至51中任一項之環肽，其中至少三個疏水性胺基酸係彼此相鄰。
  53. 如請求項41至52中任一項之環肽，其中任四個相鄰胺基酸係AA H2-AA H1-R-r、AA H2-AA H1-r-R、R-r-AA H1-AA H2、或r-R-AA H1-AA H2，其中AA H1及AA H2中之各者獨立地係疏水性胺基酸。
  54. 如請求項41至52中任一項之環肽，其中該肽具有根據式IV-A至IV-P中任一者之結構： 其中：AA H1及AA H2中之各者獨立地係疏水性胺基酸。
  55. 如請求項52或54之環肽，其中AA H1及AA H2中之各者獨立地係哌啶-2-羧酸酯、萘丙胺酸、色胺酸、3-(3-苯并噻吩基)-丙胺酸、或苯丙胺酸，其各者係可選地經一或多個取代基取代。
  56. 如請求項53至55中任一項之環肽，其中AA H1及AA H2中之各者獨立地係具有大於或等於苯丙胺酸之疏水性的疏水性胺基酸。
  57. 如請求項53至56中任一項之環肽，其中AA H1係萘丙胺酸。
  58. 如請求項53至57中任一項之環肽，其中AA H1及AA H2係萘丙胺酸。
  59. 如請求項53至57中任一項之環肽，其中AA H1係側鏈具有大的溶劑可達表面積(SASA)之疏水性胺基酸。
  60. 如請求項59之環肽，其中該大的SASA係至少約200Å 2。
  61. 如請求項53至50中任一項之環肽，其中當任何AA U或任何AA Z係疏水性胺基酸時，該疏水性胺基酸具有小於AA H1之SASA的側 鏈。
  62. 如請求項53至61中任一項之環肽，其中該環肽不包括側鏈的SASA大於AA H1之疏水性胺基酸。
  63. 如請求項53至62中任一項之環肽，其中AA H1及AA H2具有相同或相對掌性。
  64. 如請求項63之環肽，其中AA H1及AA H2具有相對掌性。
  65. 如請求項53至64中任一項之環肽，其中AA H1具有與該相鄰的精胺酸相同的掌性。
  66. 如請求項53至65中任一項之環肽，其具有下列序列中之一者：AA H2-AA H1-R-r-R、AA H2-AA H1-R-r-r、AA H2-AA H1-r-R-R、AA H2-AA H1-r-R-r、R-R-r-AA H1-AA H2、r-R-r-AA H1-AA H2、r-r-R-AA H1-AA H2、或R-r-R-AA H1-AA H2。
  67. 如請求項53至66之環肽，其具有下列序列中之一者：AA H2-LAA H1-R-r-R、AA H2-DAA H1-r-R-r、r-R-r-DAA H1-AA H2、或R-r-R-LAA H1-AA H2。
  68. 一種包含式V-A至V-D之肽： 其中：AA H1及AA H2中之各者係獨立地選自疏水性胺基酸； AA U及AA Z每次出現時係獨立地選自胺基酸，且各AA U及各AA Z中之至多一者係精胺酸，且m及n中之各者係0至6的數字，惟m或n中之至少一者不是0。
  69. 如請求項68之肽，其中式V-A至V-D中之任一者的N端上之胺基或C端上之羧酸酯基團獨立地形成肽鍵。
  70. 如請求項68之肽，其進一步包含環化部份，其中可藉由該環化部份形成環肽。
  71. 如請求項70之肽，其中該環化部份與式V-A至V-D中之任一者的N端上之胺基或C端上之羧酸酯基團獨立地形成肽鍵。
  72. 如請求項68至71中任一項之肽，其進一步包含貨物部份(X n)，其中至少一個原子或鍵結被連至X n的鍵結置換。
  73. 如請求項68至72中任一項之環肽，其中AA H1及AA H2中之各者獨立地係哌啶-2-羧酸酯、萘丙胺酸、色胺酸、3-(3-苯并噻吩基)-丙胺酸、或苯丙胺酸，其各者係可選地經一或多個取代基取代。
  74. 如請求項68至73中任一項之環肽，其中AA H1及AA H2中之各者獨立地係具有大於或等於苯丙胺酸之疏水性的疏水性胺基酸。
  75. 如請求項68至74中任一項之環肽，其中AA H1係萘丙胺酸。
  76. 如請求項68至75中任一項之環肽，其中AA H1及AA H2係萘丙胺酸。
  77. 如請求項68至76中任一項之環肽，其中AA H1係側鏈具有大的溶劑可達表面積(SASA)之疏水性胺基酸。
  78. 如請求項77之環肽，其中該大的SASA係至少約200Å 2。
  79. 如請求項68至78中任一項之環肽，其中AA H2係側鏈的SASA小於或等於AA H1之該疏水性側鏈的該SASA之疏水性胺基酸。
  80. 如請求項68至79中任一項之環肽，其中當任何AA U或任何AA Z係疏水性胺基酸時，該疏水性胺基酸具有小於AA H1之SASA的側鏈。
  81. 如請求項68至80中任一項之環肽，其中AA H1及AA H2具有相同或相對掌性。
  82. 如請求項81之環肽，其中AA H1及AA H2具有相對掌性。
  83. 如請求項68至82中任一項之環肽，其中AA H1具有與該相鄰的精胺酸相同的掌性。
  84. 如請求項68至83中任一項之環肽，其具有下列序列中之一者：AA H2-AA H1-R-r-R、AA H2-AA H1-R-r-r、AA H2-AA H1-r-R-R、AA H2-AA H1-r-R-r、R-R-r-AA H1-AA H2、r-R-r-AA H1-AA H2、r-r-R-AA H1-AA H2、或R-r-R-AA H1-AA H2。
  85. 如請求項68至84之環肽，其具有下列序列中之一者：AA H2-LAA H1-R-r-R、AA H2-DAA H1-r-R-r、r-R-r-DAA H1-AA H2、或R-r-R-LAA H1-AA H2。
  86. 一種治療或診斷有此需要之病患之方法，其包含投予如請求項41至67中任一項之環肽。
  87. 一種組成物，其包含如請求項41至67中任一項之環肽。
  88. 如請求項68至85中任一項之肽，其中包含式V-A至V-D中之任 一者的該肽之該胞質液傳遞效率相較於環(FΦRRRRQ)(SEQ ID NO：10)改善約50%至約500%之範圍的量。
  89. 如請求項88之肽，其中包含式V-A至V-D中之任一者的該肽包含下列序列：FfFRrR(SEQ ID NO：131)。
  90. 如請求項88之肽，其中包含式V-A至V-D中之任一者的該肽包含下列序列：fFfrRr(SEQ ID NO：132)。
  91. 如請求項88之肽，其中包含式V-A至V-D中之任一者的該肽包含下列序列：fFfRrR(SEQ ID NO：133)。
  92. 如請求項88之肽，其中包含式V-A至V-D中之任一者的該肽包含下列序列：FfFrRr(SEQ ID NO：134)。
  93. 如請求項88之肽，其中包含式V-A至V-D中之任一者的該肽包含下列序列：fFΦrRr(SEQ ID NO：135)。
  94. 如請求項88之肽，其中包含式V-A至V-D中之任一者的該肽包含下列序列：fΦfrRr(SEQ ID NO：136)。
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