TW201809261A - 可食用真菌 - Google Patents

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克里斯托福 馬克多能 伯瑞恩斯
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Abstract

一種減少包含絲狀真菌的生物質中之RNA含量的方法涉及以下步驟：(i)在發酵槽的下游加熱所述生物質至40-69℃範圍內的第一溫度；(ii)加熱所述生物質至高於所述第一溫度6-20℃的第二溫度，以利RNA從絲狀真菌細胞中釋放；及(iii)從其他組分分離具有減少的RNA含量之絲狀真菌。
在步驟(iii)中移除的流體可再循環至熱交換器，其係用於加熱步驟(i)中的生物質。

Description

可食用真菌
本發明係關於可食用真菌，且，雖然非排外地，特定地關於減少可食用真菌之核糖核酸(RNA)含量的方法以及具有減少的RNA含量的可食用真菌本身。
黴菌蛋白(或真菌蛋白)被用於許多食物產品中作為肉的替代品。黴菌蛋白通常得自WO95/23843中所述的真菌金黃色鐮孢菌(Fusarium venenatum)(先前被分類為禾穀鐮孢菌，Fusarium graminearum)。
金黃色鐮孢菌是在無菌發酵槽中在有連續營養饋入的水與葡萄糖溶液中藉由連續或批次有氧發酵來生長。快速生長的真菌細胞產生核酸，諸如RNA。若在食物產品中使用，要考量RNA可能會分解成嘌呤並代謝為尿酸，其可能會導致痛風的發展以及腎結石。
為生產更適於人類消費的基於黴菌蛋白的食物產品，將真菌熱處理以減少RNA含量。規範指出食物產品的核酸含量不應超過以重量計約2%。熱處理去活化真菌蛋白酶及核糖核酸酶(RNAase)抑制劑，因此產生真菌蛋白的高保留並藉由RNAase有效移除大部份的RNA。RNA分解的廢 棄產物穿過真菌細胞壁擴散進入發酵槽培養液中，且之後藉由離心與黴菌蛋白固體分離。
WO95/23843揭示在28℃在生長培養基的存在下使禾穀鐮孢菌(Fusarium Graminaerum)在連續發酵槽中生長，以含有氨氣體的無菌空氣提供連續通氣。接著，為移除RNA，將培養物通過連續攪拌的槽反應器，並將蒸汽注入培養物以對培養物進行熱休克處理，並將其溫度增加至高於72℃的特別較佳溫度。結果，RNA從真菌進到生長培養基中且經處理、具有減少之RNA的真菌可在下游分離。
所述方法之產率相對地低(約70%)。本發明之一個目的為處理此問題。
此外，提高培養物溫度至高於72℃的較佳溫度所需的能量是大量的。本發明較佳具體實例的一個目的為減少此類所述方法中能量的消耗。
根據本發明的第一個態樣，提供減少包含絲狀真菌的生物質中RNA含量的方法，所述方法包含以下步驟：(i)在產生絲狀真菌的發酵槽之下游加熱所述生物質至第一溫度；(ii)將所述包含絲狀真菌的生物質與其他組分分離，例如與步驟(i)或其下游所產生的混合物中之其他組分分離，與在步驟(i)中加熱的生物質中的含量相比，其適當地包含所述具有減少的RNA含量之絲狀真菌。
在所述發酵槽下游之所述包含絲狀真菌的生物質之第一加 熱適當地如所描述地包含將所述生物質加熱至所述第一溫度。所述方法在所述發酵槽下游、在將所述生物質加熱至所述第一溫度之前較佳不涉及其任何加熱(例如：主動加熱)。
步驟(i)中加熱所述生物質較佳使用第一加熱裝置。在所述發酵槽下游之所述包含絲狀真菌的生物質之第一加熱適當地包含使用所述第一加熱裝置將所述生物質加熱至所述第一溫度。適當地，在所述發酵槽的出口(所述絲狀真菌的生物質經由其通往下游)及所述第一加熱裝置之間沒有設置其他加熱裝置。
步驟(i)中所述生物質的第一加熱較佳並未涉及所述生物質與任何加熱流體的直接接觸；第一加熱較佳不涉及所述生物質與蒸汽的直接接觸。
在步驟(i)中，所述生物質可被加熱以增加其溫度至少20℃，例如增加至少25℃。在一些具體實例中(例如，圖6的具體實例及/或下文中所提到的第二個具體實例)，所述生物質可加熱以增加其溫度至少30℃或至少33℃。溫度可增加少於50℃，例如少於45℃。
在步驟(i)中，所述生物質在與所述第一加熱裝置接觸後可經過至少2分鐘，例如至少2.5分鐘，以達到所述第一溫度。所述生物質在與所述第一加熱裝置接觸後可在少於20分鐘，較佳少於12分鐘內達到所述第一溫度。
所述第一溫度可為至少40℃，較佳至少50℃，更加至少55℃，尤其是至少60℃。所述第一溫度可低於80℃，較佳低於75℃，更加低於71℃。
步驟(i)可在容器(A)中進行，例如預熱容器，其適當地具有位於所述發酵槽下游的入口，在所述發酵槽與所述入口間有用於將生物質從所述發酵槽轉移至所述容器(A)的導管(A)。
步驟(i)中的加熱適當地涉及生物質與熱源的接觸，所述熱源具有小於100℃、小於95℃或小於91℃的最大溫度。加熱可涉及生物質與熱源的接觸，所述熱源具有至少60℃、較佳至少76℃的溫度。
步驟(i)中的加熱適當地涉及使生物質經歷不超過99℃的溫度，較佳不超過95℃，尤其是不超過91℃。加熱可涉及使生物質經歷至少55℃、較佳至少75℃的溫度。
較佳地，步驟(i)包含使用適當地與所述生物質接觸的固體物體加熱所述生物質。所述固體物體較佳係經配置以將熱傳導至所述生物質。當步驟(i)是在容器(A)中進行時，熱交換器適當地與所述容器(A)相連以將熱傳遞至所述生物質。所述方法的步驟(i)較佳不涉及所述生物質與用於將所述生物質加熱至所述第一溫度的流體(例如蒸汽)的接觸。
在步驟(i)中，所述生物質較佳係至少部分地被所述方法(例如，在步驟(i)下游及/或在容器(A)下游)中所產生的物質(例如，流體)加熱。較佳地，熱從所述流體傳導至所述生物質；且適當地所述流體並不直接與所述生物質接觸及/或不與所述生物質混合。在步驟(i)中，所述生物質可被在步驟(i)中將所述生物質加熱至所述第一溫度所產生及/或之後所產生的物質加熱。較佳地，在所述方法中產生的所述物質(例如流體)被導入如上所述與容器(A)適當地連結的熱交換器中。
較佳地，在所述方法中，在材料群從發酵槽通行至容器 (A)(其中所述生物質被加熱至所述第一溫度)的入口期間，沒有添加物(例如，用於調整pH或稀釋生物質)與其接觸。因此，在位於所述發酵槽與所述容器(A)的入口之間的導管(A)中及在容器(A)本身中，所述生物質的組成實質上是固定及/或沒有改變的。
在第一具體實例(例示於圖2)中，所述方法在步驟(i)與步驟(ii)之間適當地包括步驟(i)*，其中步驟(i)*包含後續地加熱生物質至高於第一溫度的第二溫度，以利RNA從所述絲狀真菌的細胞中釋放。
在所述方法的步驟(i)*中，所述生物質可被加熱以增加其溫度至少2℃、較佳至少4℃、更加至少6℃。其可被加熱以增加其溫度少於20℃，較佳少於15℃，更加少於12℃。
所述第二溫度可為至少60℃，較佳至少62℃，更加至少64°C。其可為少於68℃，例如少於67℃。
在步驟(i)*中生物質的加熱可涉及將加熱的流體(例如：蒸汽)與生物質接觸(例如：直接接觸)。當步驟(i)發生在容器(A)中時，步驟(i)*中的加熱適當地在所述容器(A)的下游發生。其可發生在導管(B)中，其位於容器(A)下游並與容器(A)相通。導管(B)可經配置以將生物質傳遞至RNA移除容器。
步驟(i)*中生物質的加熱較佳係利用高於100℃，例如高於120℃或高於140℃、壓力大於3barg或大於5barg的蒸汽。
在所述方法中，所述生物質可被維持在所述第二溫度(例如，在60至67℃的範圍內，例如64至66℃)至少10分鐘、至少20分鐘或較佳至少30分鐘。其可被維持在所述溫度少於2小時，例如少於1小時。
在第二具體實例(例示於圖6)中，較佳在加熱至所述第一溫度後，在RNA從絲狀真菌的細胞釋放之前不將所述生物質進一步加熱。因此，在此例中，較佳在所述發酵槽與其中RNA從絲狀真菌的細胞釋放的容器(X)(例如，一個或所述的RNA移除容器)之間，唯一的生物質加熱涉及加熱至所述第一溫度。在所述發酵槽與所述容器(X)之間較佳沒有其他所述生物質的加熱。較佳地，在所述發酵槽與所述容器(X)之間，所述生物質不與任何加熱流體接觸，較佳其不與蒸汽接觸。
雖然並非較佳的，在第二具體實例中，所述生物質可在容器(X)下游被加熱(例如：藉由蒸汽)，例如，出於衛生的考量。在一個較佳的具體實例中，所述生物質在步驟(ii)之前唯一的加熱是如所描述的步驟(i)中的加熱至所述第一溫度。
在第二具體實例中，較佳第一溫度是至少60℃，例如在60-70℃的範圍；且/或在步驟(i)中，所述生物質可被加熱以增加其溫度至少30℃且適當地30-50℃。
在步驟(i)之後，且適當地在步驟(i)*(在包含的情況下)之後，且適當地在所述RNA移除容器下游(若有提供)，所述生物質可與加熱的流體(例如：蒸汽)接觸，例如出於衛生的考量。加熱流體可用於增加生物質的溫度。
在步驟(ii)中，所述生物質可經處理以移除流體(例如：主要為水)，從而產生包含低流體(例如：水)含量的生物質。處理後，所述生物質可包含少於40wt%的水，較佳少於30wt%，例如少於25wt%的水。
步驟(ii)可包含將所述生物質離心。步驟(ii)可包含將脫水的 生物質分離。
步驟(ii)中移除的(例如：包含水的)流體(例如：藉由如所描述的離心所產生的上清液)可為相對地熱的。例如，其可具有高於50℃的溫度，高於60℃或高於70℃。流體(例如；包含水)的溫度可為低於90℃。較佳地，移除的流體(例如：包含水)被用於在步驟(i)中加熱生物質。其合適地經配置以加熱生物質至所述第一溫度。
在所述第一具體實例中，除了環境溫度，沒有除了在步驟(ii)中移除的流體(例如：包含水)以外的熱源被用於加熱所述生物質至所述第一溫度。在所述第二具體實例中，在步驟(ii)中移除的流體可在所述流體被用於在步驟(i)中加熱生物質之前被加熱。於此例中，所述步驟(ii)中移除的流體的所述加熱可涉及將所述步驟(ii)中移除的流體與加熱流體(例如：蒸汽)接觸(例如：直接接觸)。步驟(ii)中移除的流體可被加熱至至少70℃的溫度，例如至少80℃。其可被加熱至低於95℃的溫度。
當在步驟(i)加熱所述生物質使用第一加熱裝置時，步驟(ii)中移除的流體(例如：包含水)可為所述第一加熱裝置之組分。
當步驟(i)在與熱交換器相連的容器(A)中進行時，步驟(ii)中移除的流體(例如：包含水)較佳被導入所述熱交換器以將熱轉移至所述生物質。在所述熱交換器的下游，步驟(ii)中移除的流體(例如：包含水)可作為廢棄物棄置。
在步驟(ii)的分離之後，所述生物質(例如：脫水生物質)可包括少於82wt%、例如少於80wt%的水；且適當地包括至少18wt%、較佳至少20wt%的黴菌蛋白(以乾物質為基準)。
在步驟(ii)之後，所述生物質(例如：脫水的生物質)以乾物質為基準可包括少於2wt%的RNA。
所述絲狀真菌較佳包含真菌菌絲體，且適當地所述調配物中真菌顆粒的至少80wt%、較佳至少90wt%、更佳至少95wt%且特別是至少99wt%包含真菌菌絲體。一些絲狀真菌可包括真菌菌絲體及子實體兩者。所述真菌顆粒較佳包含不產生子實體的絲狀真菌類型。
所述絲狀真菌較佳包含選自的不完全菌類(fungi imperfecti)的真菌。
較佳地，絲狀真菌包含鐮孢菌屬物種的細胞，且較佳基本上由鐮孢菌屬物種的細胞組成，特別是金黃色鐮孢菌A3/5(先前被分類為禾穀鐮抱菌)(IMI 145425；寄存於美國典型培養物保藏中心的ATCC PTA-2684，10801 University Boulevard,Manassas,VA.)。
在步驟(i)中加熱的所述生物質中的所述絲狀真菌可包含長度少於1000μm的絲狀體，較佳少於800μm。所述絲狀體可具有大於100μm的長度，較佳大於200μm。較佳地，所述生物質中少於5wt%的絲狀體具有大於5000μm的長度、較佳地實質上沒有絲狀體具有大於5000μm的長度；且較佳地少於5wt%的絲狀體具有大於2500μm的長度、較佳地實質上沒有絲狀體具有大於2500μm的長度。較佳地，所述調配物中所述絲狀真菌的數平均長度值亦如以上所述。
在步驟(i)中加熱的所述生物質中的所述絲狀真菌可包含直徑小於20μm的絲狀體、較佳小於10μm、更佳5μm或更小。所述絲狀體可具有大於1μm的直徑，較佳大於2μm。較佳地，所述調配物中所述真菌 顆粒的所述直徑的數平均值亦如以上所述。
在步驟(i)中加熱的所述生物質中的所述絲狀真菌可包含長寬比(長度/直徑)小於1000的絲狀體、較佳小於750、更佳小於500、特別是250或更小。長寬比可大於10、較佳大於40、更佳加大於70。較佳地，所述絲狀真菌平均長寬比的值(即：所述調配物中所述絲狀真菌的顆粒長度平均除以直徑平均)亦如以上所述。
所述絲狀真菌可在所述發酵槽中生長。其可以連續或批次有氧發酵方式來生長。發酵可利用水及葡萄糖及其他營養。
在方法的步驟(i)中，所述生物質的加熱適當地在絲狀真菌的生長培養基存在下以所述絲狀真菌進行。就在所述加熱之前，絲狀真菌較佳係處於存活狀態。
在方法中的步驟(i)期間，較佳生物質的pH未以添加任何pH調節物質(例如：酸性或鹼性物質)的方式調整。較佳地，在方法中的步驟(ii)期間，生物質的pH未以添加任何pH調節物質(例如：酸性或鹼性物質)的方式調整。較佳地，在方法中的步驟(i)*期間(在包含的情況下)，生物質的pH未以添加任何pH調節物質(例如：酸性或鹼性物質)的方式調整。較佳地，從步驟(i)加熱生物質到步驟(ii)分離生物質，生物質的pH未以添加任何pH調節物質(例如：酸性或鹼性物質)的方式調整。為避免任何疑惑，蒸汽/水本身不被視為是pH調節物質。
所述方法較佳地係使用包含以下的設備進行：(a)所述發酵槽(b)用於在步驟(i)中加熱所述生物質的所述第一加熱裝置； (c)所述容器(A)，例如預熱容器，在所述發酵槽與所述容器(A)之間有用於將流體從所述發酵槽轉移到容器(A)的所述導管(A)；(d)所述導管(B)，其與所述容器(A)的出口相通；(e)在所述導管(B)下游的所述RNA移除容器；(f)用於在步驟(ii)中離心生物質的離心機，所述離心機在所述RNA移除容器的下游；(g)用於將從生物質移除的離心濾液(centrate)(例如：藉由離心)循環至所述第一加熱裝置(例如：熱交換器)的導管，以在步驟(i)中加熱所述生物質。
如以下所述，第一態樣的方法中分開及/或分離的生物質與比較方法中的所產生的生物質不同。對此，所述生物質中絲狀真菌的尺寸係大於比較方法中所產生者。此外，相較於比較方法中所產生的產率，有利地發現使用所述方法獲致生物質改良的產率。因此，本發明於第二態樣延伸至從第一態樣之方法獲得的產品。在第二態樣中，適當地提供於所述第一態樣的所述方法中所產生的生物質。所述生物質適當地具有第一態樣之生物質的任何特徵。所述生物質可包括絲狀真菌，其絲狀體的平均長度超過與第一態樣的及/或本文所述的比較方法不同的方法所產生者。
根據本發明的第三個態樣，提供一種生物質本身，所述生物質包含絲狀真菌，其中所述生物質是分離自包含所述生物質及液體的混合物，其中所述液體包含絲狀真菌的顆粒，其中所述液體中的顆粒具有一或多項以下特徵(以於本文所述的雷射繞射測量)：-小於1.3μm的中位數尺寸，例如小於1.1μm；-小於1.4μm的平均尺寸，例如小於1.2μm； -小於1.4μm的模態尺寸(mode size)，例如小於1.2μm；-小於0.85μm的D(v,0.1)；-小於1.20μm的D(v,0.5)；-小於1.5μm的D(v,0.9)，例如小於1.2μm。
所述液體中的顆粒較佳可包括至少兩項所述特徵、較佳至少四項所述特徵、更佳所述特徵中的每一項。
中位數尺寸可為至少0.5μm。平均尺寸可為至少0.5μm。模態尺寸可為至少0.5μm。D(v,0.1)尺寸可為至少0.4μm。D(v,0.5)尺寸可為至少0.4μm。D(v,0.9)尺寸可為至少0.5μm。
適當地，所述生物質中所述絲狀真菌的絲狀體中位數、平均及/或模態顆粒尺寸大於所述液體中的中位數、平均及/或模態顆粒尺寸。
適當地，所述液體中的RNA總重量(在絲狀真菌內或否則的話包含在液體中)大於所述生物質中的RNA總重量。
所述生物質中絲狀真菌的總重量除以所述液體中絲狀真菌的總重量適當地係大於2.3。
所述生物質可包括至少20wt%的水，其可包括30wt%或較少的水。
較佳地，所述生物質包括至少5kg、例如至少50kg的絲狀真菌。
所述生物質、所述混合物及所述液體可獨立地具有前述態樣中任一者所描述的任何特徵。
根據第四個態樣，提供製作供人類消費的食品的方法，所述 方法包含：(i)選擇第一態樣之方法製作的生物質或為第二或第三態樣所述的生物質；(ii)使所述生物質與其他作為所述食品的特徵之成分接觸。
所述食品適當地為肉類替代品。其可為以下形式，例如：碎肉、漢堡、香腸或肉狀的片或條。
所述其他成分可包含任何無肉食物成分。所述成分可包括一或多種無肉填充物、風味劑、油、脂肪、蛋白質或蔬菜。
所述方法可包含包裝所述食品，例如包裝於實質上氣密及/或防水包裝中。
在所述方法中，可製作至少5kg、例如至少100kg的所述食品。
由於第一態樣的方法所製作的生物質或第二或第三態樣所述的生物質被認為是具有新穎性的，第四態樣的方法亦被認為具有新穎性。本發明於第五態樣延伸至從第四態樣之方法獲得的食品。
在本發明的第六個態樣，提供包含第二或第三態樣所述的生物質及其他成分(適當地如第四態樣中所述)的食品。所述食品可包括至少1wt%、例如至少5wt%的其他成分。所述食品可包括至少10wt%的水。
本文中所述的任何發明的任何態樣之任何特徵可與本文中所述的任何其他發明的任何特徵組合加上適當的修正。
現以僅作為例示、參照以下圖式的方式描述本發明的具體實例，其中：
100‧‧‧方法
110‧‧‧發酵槽
111‧‧‧導管
112‧‧‧注射口
120‧‧‧容器
121‧‧‧導管
122‧‧‧注射口
130‧‧‧離心機
131‧‧‧導管
132‧‧‧導管
140‧‧‧黴菌蛋白糊
150‧‧‧冷卻器
151‧‧‧導管
160‧‧‧流出液處理設備
200‧‧‧方法
210‧‧‧發酵槽
211‧‧‧導管
220‧‧‧容器
221‧‧‧導管
222‧‧‧注射口
230‧‧‧容器
231‧‧‧導管
232‧‧‧注射口
240‧‧‧離心機
241‧‧‧導管
242‧‧‧導管
243‧‧‧導管
250‧‧‧黴菌蛋白糊
260‧‧‧冷卻器
261‧‧‧導管
270‧‧‧流出液處理設備
300‧‧‧方法
310‧‧‧發酵槽
311‧‧‧導管
320‧‧‧容器
321‧‧‧導管
330‧‧‧容器
331‧‧‧導管
340‧‧‧離心機
342‧‧‧導管
343‧‧‧導管
344‧‧‧注射口
345‧‧‧導管
346‧‧‧導管
350‧‧‧黴菌蛋白糊
360‧‧‧冷卻器
361‧‧‧導管
370‧‧‧流出液處理設備
圖1為顯示目前用來藉由直接蒸汽注入來生產具有減少的RNA含量之黴菌蛋白糊的方法之流程圖；圖2為顯示涉及使用替代方法來生產具有減少的RNA含量之黴菌蛋白糊的步驟之流程圖；圖3為比較在數天之期間使用圖1及2之方法獲得的黴菌蛋白產率的圖；圖4為圖1之方法所產生的廢棄離心濾液之顆粒尺寸分析圖；及圖5為圖2之方法所產生的廢棄離心濾液之顆粒尺寸分析圖；及圖6為顯示涉及使用進一步的替代方法來生產具有減少的RNA含量之黴菌蛋白糊的步驟之流程圖。
本文提到以下材料。
黴菌蛋白糊-指一種黏彈性物質，其包含得自金黃色鐮孢菌A3/5(先前被分類為禾穀鐮孢菌，Fusarium graminearum Schwabe)之可食用絲狀真菌團(IMI 145425；寄存於美國典型培養物保藏中心的ATCC PTA-2684,12301 Parklawn Drive,Rockville Md.20852)。其典型地包含約23-25wt%的固體(剩餘部分為水)，由具有以下特徵的無活性、RNA減少的真菌菌絲構成：長 度約400-750μm、直徑約3-5μm、分支頻率為每個菌絲長度有2-3個頂端。
除非本文中特別提及，顆粒尺寸分析係以雷射繞射進行，例如使用Horiba LA950WET顆粒尺寸分析儀。
參照圖1，現有商業上所使用以生產黴菌蛋白糊的方法100(其完整細節並未公開)，其涉及使真菌培養物在生長培養基存在下於27℃在壓力循環發酵槽110中生長。培養液從發酵槽110經過導管111通行至RNA減少容器120。經由導管111中的蒸汽注射口112對培養液注入蒸汽(7barg及160℃)。蒸汽注射將培養液溫度提升至60-70℃。進行蒸汽注射以減少最終黴菌蛋白糊140的RNA含量。
RNA減少容器120為連續攪拌的槽反應器。將培養液於RNA減少溫度下保持在RNA減少容器120中至少30分鐘。接著，培養液從RNA減少容器120經過導管121通行至離心機130。經由導管121中的蒸汽注射口122對培養液注入蒸汽。此蒸汽注射基於衛生的目的將培養液溫度提升至80-90℃。離心機130以5000g運轉一段時間。離心機130分離黴菌蛋白糊140及廢棄液體離心濾液。黴菌蛋白糊經由導管131離開離心機130。廢棄的液體離心濾液含有從真菌細胞流出至周圍環境水性培養基的RNA及RNA分解產物。廢棄的液體離心濾液在此階段具有80-90℃的溫度，通過導管132至冷卻器150，於此冷卻至30℃。其接著出於棄置的目的經由導管151前往流出液處理設備(effluent treatment plant，ETP)160。最終黴菌蛋白糊140以乾重計具有核酸含量少於2%。
減少RNA含量的替代方法顯示於圖2中。參照此圖，真菌培養物在生長培養基存在下於27℃在壓力循環發酵槽210中生長。培養液 從發酵槽210經過導管211通行至預熱容器220。培養物被方法200中更下游所產生的廢棄液體離心濾液(如以下所述)預熱至55-60℃(並維持在此溫度約3至8分鐘)。廢棄液體離心濾液通過與容器220相連的熱交換器(未顯示)；廢棄液體離心濾液並未與培養物直接接觸。預熱的培養液接著沿著導管221通行至RNA減少容器230。於此段通行中，經由導管221中的蒸汽注射口222對培養液注入蒸汽(7barg及160℃)。蒸汽注射將培養液溫度提升至64-66℃。將培養液於此溫度保持在容器230中至少30分鐘。培養液接著從RNA減少容器230經過導管231通行至離心機240。於此段通行中，經由導管231中的蒸汽注射口232對培養液注入蒸汽(7barg及160℃)。此蒸汽注射基於衛生的目的將培養液溫度提升至80-90℃。
離心機240在約5000g下運轉，並被設置來分離黴菌蛋白糊250及廢棄液體離心濾液。在離心機240之下游，黴菌蛋白糊250通過導管241且被分離。廢棄的液體離心濾液具有80-90℃的溫度，通過導管242到與預熱容器220相連的熱交換器。因此，離心濾液被用於加熱預熱容器220中的培養液。
在經由熱交換器加熱預熱容器後，廢棄的液體離心濾液在此階段具有40-50℃的溫度，通過導管243至冷卻器260。含有廢棄RNA及廢棄RNA分解產物的離心濾液被冷卻至30℃，接著出於棄置的目的經由導管261前往流出液處理設備(ETP)270。
以下實施例說明根據以上所述參照圖1及2的方法所產生的產物之差異。
實施例1-產率評估
分別評估使用圖1及圖2之方法所達成的黴菌蛋白糊140及250的產率。對此，在分離後藉由加熱以使水蒸發來乾燥各別的糊140及250。藉由分別比較於140及250所回收的黴菌蛋白的重量以及發酵槽110及210中所存在的重量來計算回收的%固體黴菌蛋白。結果以圖形呈現於圖3，其中回收的%固體標繪於y軸且樣本收集的時間(以日計)標繪於x軸。實施例1(a)(比較性)說明的使用參照圖1所述之方法所獲得的產率；且實施例1(b)說明的使用參照圖2所述之方法所獲得的產率。
圖3說明經由使用圖2之方法(實施例1(b))與圖1之方法(實施例1(a))相比所達成的產率增加。產率的增加為約5%的增加，其在商業上來說是非常顯著的。此外，對於圖1及圖2兩者的方法，皆發現以乾重為基礎低於1.7%RNA的RNA含量。因此，使用圖2的方法能夠減少黴菌蛋白糊中的RNA含量至可接受的程度且被發現能產生產率的顯著增加。
實施例2-使用圖1及圖2之方法所產生的離心濾液之評估
圖1及圖2中之離心所產生的離心濾液在離心機130及240之下游分離，並進行離心濾液中黴菌蛋白片段的顆粒尺寸分析。
圖4及圖5分別提供參照圖1所述之方法(實施例1(a))所產生之以及參照圖2之方法(實施例2(b))所產生之離心濾液之顆粒尺寸分析的結果。此外，下表提供了圖1及2之具體實例的離心濾液之結果細節。
從圖4及圖5的資料顯示，相較於參照圖2中所描述的方法所產生之離心濾液，參照圖1中所描述的方法所產生之離心濾液具有較大之量以及較多之數的菌絲破碎碎片。此事實能夠用來解釋使用圖1及2中之方法所達成的不同產率。對此，相較於使用圖2之方法，參照圖1中所描述的方法對黴菌蛋白絲狀體造成較大的傷害(例如：較大量的黴菌蛋白絲狀體斷裂)。因此，相較於使用圖2之方法，使用圖1之方法使更多較大的絲狀體斷裂，且在離心濾液中可觀察到這類較大的絲狀體-因此圖4之離心濾液中的片段顆粒尺寸大於圖5之離心濾液。
同樣地，經推論，相較於參照圖1中所描述的方法所產生的黴菌蛋白中的絲狀體，參照圖2中所描述的方法所產生的黴菌蛋白中的絲狀體受損程度較低。因此，可得到以下結論：使用參照圖1及2中所描述的方法產生的是不同的黴菌蛋白糊(至少在絲狀體的各別尺寸分布的方面)。此外，如同已描述的，使用圖2之方法有利地產生較高的產率。
相較於圖1之方法，使用圖2之方法除了在產率及絲狀體尺寸方面的優點，使用圖2之方法藉由使用在導管242中的廢棄液體離心濾液來預熱在預熱容器220中的培養液以產生顯著的能量節約。更特定言之， 相較於圖1的方法，圖2的方法所使用的蒸汽少了約65%。
在一個替代方法中(例示於圖6)，蒸汽並未在任何階段直接注入真菌培養液中，而僅注入再循環的廢棄離心濾液中。參照此圖，真菌培養物在生長培養基存在下於27℃在壓力循環發酵槽310中生長。培養液從發酵槽310通過導管311到預熱容器320。培養物被通過導管345的廢棄液體離心濾液預熱至60-70℃。廢棄離心濾液是在方法300的更下游中產生，且如在圖2具體實例中所述地一般經由熱交換器(未顯示)加熱培養物。預熱的培養液沿著導管321通行至RNA減少容器330中。培養液被維持在RNA減少容器330中在60-70℃下至少30分鐘。接著，培養液從RNA減少容器330經由導管331通行至離心機340。導管331中培養物的溫度維持在約60-70℃。離心機340在約5000g下運轉。直接對離心機340中的黴菌蛋白糊350加熱以維持衛生條件。離心機340分離黴菌蛋白糊350及廢棄液體離心濾液。黴菌蛋白糊350通過導管342。廢棄液體離心濾液從離心機340通行至導管343。將蒸汽經由蒸汽注射口344注入導管343的離心濾液中。加熱的離心濾液通過導管345進入預熱容器320。導管345中的離心濾液具有80-90℃之溫度。使用廢棄離心濾液間接加熱預熱容器320中的培養液。接著，廢棄液體離心濾液通過導管346到冷卻器360。導管361中的廢棄液體離心濾液具有40-50℃之溫度且接著出於棄置的目的前往流出液處理設備(ETP)370。
應認同在圖6的具體實例中，在培養液從發酵槽通行至RNA減少容器330期間的任何時間，培養液沒有與蒸汽直接接觸，且為避免疑惑，RNA溶器中的培養液沒有與蒸汽接觸。雖然在此方法中使用蒸汽，其 係用於加熱導管345中的廢棄液體離心濾液，其經由所描述的熱交換器加熱預熱容器320中的培養液。此將對真菌絲狀體的損害最小化，且因此改良產率。
此發明不受限於前面的具體實例之細節。此發明延伸至此說明書(包括任何伴隨的申請專利範圍、摘要及圖式)中所揭示的特徵之任何新穎的發明或任何新穎組合，或所揭示之任何方法之步驟的任何新穎發明或任何新穎組合。

Claims (26)

  1. 一種減少包含絲狀真菌的生物質中之RNA含量的方法，所述方法包含以下步驟：(i)在產生絲狀真菌的發酵槽之下游加熱所述生物質至第一溫度；(ii)將所述包含絲狀真菌的生物質與其他組分分離，例如與步驟(i)或其下游所產生的混合物中之其他組分分離，與在步驟(i)中加熱的生物質中的含量相比，其適當地包含所述具有減少的RNA含量之絲狀真菌。
  2. 如請求項1之方法，其中在所述發酵槽下游之所述包含絲狀真菌的生物質之第一加熱包含將所述生物質加熱至所述第一溫度。
  3. 如請求項1或請求項2之方法，其中步驟(i)中所述生物質之第一加熱不涉及所述生物質與蒸汽的直接接觸。
  4. 如前述任一請求項之方法，其中，在步驟(i)中，所述生物質被加熱以增加其溫度至少22℃且較佳少於50℃。
  5. 如前述任一請求項之方法，其中所述第一溫度為至少40℃且較佳低於80℃。
  6. 如前述任一請求項之方法，其中步驟(i)中的加熱涉及生物質與熱源的接觸，所述熱源具有低於100℃且較佳至少76℃的最大溫度。
  7. 如前述任一請求項之方法，其中步驟(i)包含使用與所述生物質接觸的固體物體加熱所述生物質。
  8. 如前述任一請求項之方法，其中步驟(i)是在容器(A)中進行且熱交換器與容器(A)相連以將熱傳遞至所述生物質。
  9. 如前述任一請求項之方法，其中，在步驟(i)中，所述生物質至少部 分地被在所述方法中，例如，步驟(i)之下游，所產生的物質加熱。
  10. 如請求項9之方法，其中在所述方法中所產生的所述物質被導入與容器(A)相連的熱交換器中。
  11. 如前述任一請求項之方法，其中所述方法在步驟(i)與步驟(ii)之間包括步驟(i)*，其中步驟(i)*包含後續地加熱生物質至高於第一溫度的第二溫度，以利RNA從所述絲狀真菌的細胞中釋放。
  12. 如請求項11之方法，其中在所述方法的步驟(i)*中，所述生物質被加熱以增加其溫度至少2℃且較佳少於20℃。
  13. 如請求項11或請求項12之方法，其中所述第二溫度為至少60℃且較佳低於68℃。
  14. 如請求項11至13中任一項之方法，其中步驟(i)*中所述生物質的加熱涉及加熱的流體與生物質的接觸。
  15. 如請求項1至10中任一項之方法，其中在加熱至所述第一溫度後，在RNA從絲狀真菌的細胞釋放之前不將所述生物質進一步加熱。
  16. 如請求項1至10或15中任一項之方法，其中所述第一溫度為至少60℃。
  17. 如前述任一請求項之方法，其中步驟(ii)包含分離脫水的生物質。
  18. 如前述任一請求項之方法，其中在步驟(ii)中移除流體且所述流體被用於在步驟(i)中加熱生物質至所述第一溫度。
  19. 如前述任一請求項之方法，其中步驟(i)中的加熱所述生物質利用熱交換器且步驟(ii)中移除的流體為所述熱交換器的組分。
  20. 如前述任一請求項之方法，其中，在步驟(ii)之後，所述生物質以乾 物質為基準包含少於2wt%的RNA。
  21. 如前述任一請求項之方法，其中所述絲狀真菌包含鐮孢菌屬(Fusarium)物種的細胞。
  22. 一種生物質，其係藉由根據前述任一請求項之方法獲得。
  23. 一種生物質本身，所述生物質包含絲狀真菌，其中所述生物質是從包含所述生物質及液體的混合物分離，其中所述液體包含絲狀真菌的顆粒，其中所述液體中的顆粒具有一或多項以下特徵(以於此所述的雷射繞射測量)：-小於1.3μm的中位數尺寸，例如小於1.1μm；-小於1.4μm的平均尺寸，例如小於1.2μm；-小於1.4μm的模態尺寸(mode size)，例如小於1.2μm；-小於0.85μm的D(v,0.1)；-小於1.20μm的D(v,0.5)；-小於1.5μm的D(v,0.9)，例如小於1.2μm。
  24. 如請求項23之生物質，其中所述中位數尺寸可為至少0.5μm及/或所述平均尺寸可為至少0.5μm及/或所述模態尺寸可為至少0.5μm及/或所述D(v,0.1)尺寸可為至少0.4μm及/或所述D(v,0.5)尺寸可為至少0.4μm及/或所述D(v,0.9)尺寸可為至少0.5μm。
  25. 一種製作供人類消費的食品的方法，所述方法包含：(i)選擇根據請求項1至21中任一項所述的方法製作的或根據請求項23至24中任一項所述的生物質；並(ii)使所述生物質與其他作為所述食品的特徵之成分接觸。
  26. 一種食品，其包含根據請求項22至24中任一項所述的生物質及其他成分。
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