TW201805234A - 以抗體-功能化碳奈米管為基礎之場效電晶體及其於紫杉醇免疫測定之用途 - Google Patents

以抗體-功能化碳奈米管為基礎之場效電晶體及其於紫杉醇免疫測定之用途 Download PDF

Info

Publication number
TW201805234A
TW201805234A TW106118346A TW106118346A TW201805234A TW 201805234 A TW201805234 A TW 201805234A TW 106118346 A TW106118346 A TW 106118346A TW 106118346 A TW106118346 A TW 106118346A TW 201805234 A TW201805234 A TW 201805234A
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
ser
thr
gly
tyr
leu
Prior art date
Application number
TW106118346A
Other languages
English (en)
Inventor
弗恩 翠伍
Original Assignee
奧托德里克有限公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 奧托德里克有限公司 filed Critical 奧托德里克有限公司
Publication of TW201805234A publication Critical patent/TW201805234A/zh

Links

Classifications

    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B82—NANOTECHNOLOGY
    • B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
    • B82Y15/00—Nanotechnology for interacting, sensing or actuating, e.g. quantum dots as markers in protein assays or molecular motors
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
    • G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
    • G01N27/403—Cells and electrode assemblies
    • G01N27/414—Ion-sensitive or chemical field-effect transistors, i.e. ISFETS or CHEMFETS
    • G01N27/4145—Ion-sensitive or chemical field-effect transistors, i.e. ISFETS or CHEMFETS specially adapted for biomolecules, e.g. gate electrode with immobilised receptors
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
    • G01N33/54346—Nanoparticles
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57407—Specifically defined cancers
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57407—Specifically defined cancers
    • G01N33/57434—Specifically defined cancers of prostate
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/94—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving narcotics or drugs or pharmaceuticals, neurotransmitters or associated receptors
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B82—NANOTECHNOLOGY
    • B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
    • B82Y5/00—Nanobiotechnology or nanomedicine, e.g. protein engineering or drug delivery
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
    • G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
    • G01N27/403—Cells and electrode assemblies
    • G01N27/414—Ion-sensitive or chemical field-effect transistors, i.e. ISFETS or CHEMFETS
    • G01N27/4146—Ion-sensitive or chemical field-effect transistors, i.e. ISFETS or CHEMFETS involving nanosized elements, e.g. nanotubes, nanowires

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • Electrochemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Microelectronics & Electronic Packaging (AREA)
  • Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

有效偵測及定量一生理樣本內的紫杉醇之以紫杉醇抗體-功能化碳奈米管為基礎之場效電晶體感測器，以及使用該感測器的紫杉醇免標記免疫測定方法。

Description

以抗體-功能化碳奈米管為基礎之場效電晶體及其於紫杉醇免疫測定之用途
相關申請案之交叉引述 本申請案主張2016年6月2日提申之美國申請案第62/344,431號之利益，其在此係以其之整體明確地併入以作為參考資料。
本發明係有關於以抗體-功能化碳奈米管為基礎之場效電晶體及其於紫杉醇免疫測定之用途。
發明背景 生物感測器為一種分析裝置，其併入與轉換元件接觸的生物識別元件以及提供生物事件快速的換算成可偵測的信號。於生物感測體系結構之中，以場效電晶體(FETs)為基礎之裝置引起了極大的關注，因為其等為一類生物感測器能不需要標記而將標靶分子(如，生物分子)及電晶體表面之間的交互作用直接轉換成可讀的電信號。於標準的場效電晶體中，電流沿著連接至兩電極，(源極與汲極)，之導電路徑(通道)流動。源極與汲極之間的通道電導係藉由通過薄介電層予以電容式偶合之第三(閘極)電極來接通和關閉。場效電晶體偵測標靶化學物及測量廣大範圍的商業應用之化學濃度。
場效電晶體的問題是其等之靈敏度極限。已藉由納入碳奈米管，例如單壁碳奈米管(SWNTs)，至場效電晶體內來探索增高的靈敏度。
於分子奈米電子學的領域中，包含中空的石墨圓筒、直徑為埃的碳奈米管，由於其等之電氣特徵而為吸引力的材料。奈米管已經提供給電子裝置，例如二極管及電晶體。奈米管由於其等之尺寸、形狀及物理性質而為獨特的。結構上碳奈米管類似碳的六方晶格捲成圓筒。
於裝置的環境中，碳奈米管展現出至少二種重要特徵：奈米管能為金屬或半導體。金屬奈米管能攜帶大電流密度加上不變的電阻率。半導體奈米管能如場效電晶體般電氣接通和關閉。
儘管碳奈米管於場效電晶體體系結構用途上有進步，對於偵測生理樣本內的分析物具有增高的靈敏度之經改良的裝置存在有需求。本發明力求滿足這需求以及提供進一步相關的優勢。
發明概要 本發明提供以抗體功能化碳奈米管為基礎之場效電晶體感測器以及使用該場效電晶體感測器於免標記免疫測定的方法。
於一個態樣中，本發明提供一種以抗體-功能化碳奈米管場效電晶體感測器。
在一個具體例中，該感測器包含： (a)一第一電極(源極電極)； (b)一第二電極(汲極電極)； (c)與該第一及第二電極可操縱地偶合之一導電通道；以及 (d)與該導電通道(閘極)偶合之一紫杉醇抗體或其之功能片段。
在一個具體例中，該導電通道為一種碳奈米管。代表性碳奈米管包括一種單壁碳奈米管。
在另一個具體例中，該導電通道為包含複數個碳奈米管的一種膜。
在某些具體例中，該感測器為一種單分子感測器。
在某些具體例中，該紫杉醇抗體或其之功能片段係與該導電通道非共價地偶合。在某些具體例中，該紫杉醇抗體或其之功能片段係藉由一雙功能連接子與該導電通道偶合。合適的雙功能連接子包括雙功能連接子，其具有第一官能基用於非共價地偶合該連接子與該導電通道，以及第二官能基用於共價地偶合該抗體或其之功能片段與該連接子。代表性紫杉醇抗體包括3C6、8A10或其之功能片段。在某些具體例中，該紫杉醇抗體或其之功能片段係一單-半胱胺酸變異體。
於另一個態樣中，本發明提供一種偵測一生理樣本內的紫杉醇之方法。
在一個具體例中，該感測器包含使含有紫杉醇的一樣本與本發明之以抗體-功能化碳奈米管場效電晶體感測器接觸。
在某些具體例中，該方法有效判定自約20 pM至約100 nM的紫杉醇濃度。在某些具體例中，紫杉醇濃度係自約1至約10 nM。
在某些具體例中，該生理樣本包含血液或血液產生物(如，血漿、血清)。
較佳實施例之詳細說明 本發明提供以抗體功能化碳奈米管為基礎之場效電晶體感測器以及使用該場效電晶體感測器於免標記免疫測定的方法。 以抗體-功能化碳奈米管為基礎之場效電晶體
於一個態樣中，本發明提供一種以紫杉醇抗體-功能化碳奈米管(CNT)為基礎之場效電晶體(FET)，其對於偵測及定量一生理樣本內的紫杉醇是有效的。該裝置利用一生理樣本內存在的紫杉醇與一種會結合紫杉醇的抗體之結合作用這一發現，可以藉由以紫杉醇抗體-功能化碳奈米管為基礎之場效電晶體予以有效地測量藥理學相關濃度。
於本發明的實施方面，碳奈米管為基礎之裝置係修改為納入一種紫杉醇抗體以提供碳奈米管為基礎之場效電晶體感測器用於測定紫杉醇。因而，於另一個態樣中，本發明提供使用CNT為基礎之FET感測器的紫杉醇偵測之免標記免疫測定方法。
可用於根據本發明修改之代表性碳奈米管為基礎之場效電晶體包括美國專利號6,891,227、7,897,960、8,138,491及9,164,053內所述的該等，各者在此係以其之整體明確地併入以作為參考資料。
可用於本發明的方法中之本發明的代表性以紫杉醇抗體-功能化碳奈米管(CNT)為基礎之場效電晶體係於圖1A、1B及2內示意說明。
轉到圖1A及1B，圖示一種例示性以抗體-功能化碳奈米管場效電晶體感測器。如所顯示，以抗體-功能化碳奈米管場效電晶體感測器20包括一第一電極22、一第二電極24，以及連接且與該第一電極22及該第二電極24導電通訊的一導電通道26。該感測器20進一步包括與該導電通道26偶合之一紫杉醇抗體或其之功能片段28。如所顯示，該紫杉醇抗體或其之功能片段28係通過一連接子36，與該導電通道26，於此為一單一單壁碳奈米管偶合。如本文他處所述，該連接子36可以為共價連接子或非共價連接子。
在一個具體例中，該第一電極22及該第二電極24係塗覆且覆蓋一絕緣體30。此一絕緣體使該第一電極22及該第二電極24與和該導電通道26接觸的一電解質溶液，例如一樣本電氣絕緣，藉此防止以抗體-功能化碳奈米管場效電晶體感測器20內之電氣短路。在一個具體例中，該絕緣體30為絕緣體聚合物，例如聚(甲基丙烯酸甲酯)。在一個具體例中，該絕緣體30為一種金屬氧化物，例如氧化鋁。
如所顯示，該絕緣體30覆蓋該第一電極22及該第二電極24，使該導電通道26的至少一部件暴露。在一個具體例中，該導電通道的暴露部件係介於約1 nm和約50 nm之間寬。該導電通道26的暴露部件包括與該紫杉醇抗體或其之功能片段28偶合之該導電通道26的部件。因為該紫杉醇抗體或其之功能片段28係與該導電通道26的暴露部件偶合，所以該紫杉醇抗體28與接觸該以抗體功能化碳奈米管場效電晶體感測器20之樣本內的紫杉醇可不受約束地結合。
如本文他處所述，該感測器20係構形成要產生紫杉醇結合至該感測器的信號指示。在一個具體例中，該感測器20係構形成要產生一單紫杉醇分子結合至該感測器20的信號指示。
如本文他處所述，在操作中將一電位施加至選自於該第一電極22及該第二電極24的一電極。在一個具體例中，電壓係介於約0 mV和約100 mV之間。此驅動介於約10 nA和約100 nA之間的DC電流。當一紫杉醇分子與該紫杉醇抗體或其之功能片段28偶合時，電流產生離散的躍升，其能測量且與紫杉醇分子結合事件相關聯。
在一個具體例中，該第一電極22、該第二電極24及該導電通道26係由一基板承載。在一個具體例中，該基板包括成層於矽層34上方的氧化矽層32。
在一個具體例中，該碳奈米管為基礎之場效電晶體感測器20包括一導電通道，其含括複數個導電元件與紫杉醇抗體或其之功能片段偶合。此一構形允許許多紫杉醇結合抗體及其之功能片段要被暴露於一樣本。在某些具體例中，含括與紫杉醇抗體或其之功能片段偶合之複數個導電元件的該感測器，係構形成要產生多個紫杉醇結合事件之擬集體的(quasi-ensemble)信號指示。
轉到圖2，圖示一種碳奈米管為基礎之場效電晶體感測器20，其包括一第一電極22及一第二電極24以及一導電通道，該導電通道包含與該第一電極22及該第二電極24導電通訊的複數個單壁碳奈米管26A、26B及26C。如所顯示，單壁碳奈米管26A、26B及26C各者係與一紫杉醇抗體或其之功能片段28A、28B及28C偶合。在一個具體例中，並非所有的單壁碳奈米管都與一紫杉醇抗體或其之功能片段偶合(未顯示)。在一個具體例中，一或更多單壁碳奈米管係與二或更多紫杉醇抗體或其之功能片段偶合(未顯示)。如所顯示，該紫杉醇抗體或其之功能片段28A、28B、28C係通過連接子36A、36B及36C而分別與單壁碳奈米管26A、26B及26C偶合。
在一個具體例中，含括複數個導電元件之複數個導電通道形成由一基板承載之稀釋膜(dilute film)。如圖2所顯示，該基板可包括成層於矽層34上方的氧化矽層32，其承載該第一電極22、該第二電極24及導電元件之稀釋膜。
如上，在一個具體例中該第一電極22及該第二電極24係由一絕緣體予以覆蓋，使該複數個導電元件26A、26B及26C的至少一部件暴露，藉此促進無標記的紫杉醇免疫測定。
下列為可用於根據本發明修改之代表性CNT為基礎之FET感測器之說明。
在一個具體例中，碳奈米管為基礎之場效電晶體包含沈積於一基板上的碳奈米管、分別形成於該碳奈米管的第一端與第二端之源極與汲極，以及實質形成於該碳奈米管的一部分之閘極，由介電膜而與該碳奈米管分隔開。該基板可包括沈積於一矽基板上的熱氧化物。閘極可進一步由氧化物層而與該碳奈米管分隔開。閘極的一部分係由氮化物間隙物(spacer)而與該源極與汲極分隔開。裝置進一步包含鈍化介電層於裝置上。
在另一個具體例中，碳奈米管為基礎之場效電晶體包含包裹在介電材料中之垂直的碳奈米管、分別形成於該碳奈米管的第一側與第二側上之源極與汲極、雙層氮化物複合物—源極與汲極各者通過雙層氮化物複合物形成帶卷捆紮帶而使包裹在介電材料中的碳奈米管與源極與汲極連接，以及實質形成於該碳奈米管的一部分之閘極。裝置可包括金屬催化劑於碳奈米管的基部。
在另外的具體例中，碳奈米管為基礎之場效電晶體為一單分子感測裝置，其包括一第一電極、一第二電極及連接至該第一及第二電極之碳奈米管，例如單壁碳奈米管(SWNT)。
於本發明的實施方面，以上所述之代表性CNT為基礎之FET感測器可修改成包括一紫杉醇抗體(即， 一種結合紫杉醇的抗體)或其之功能片段。
合適的結合紫杉醇的抗體及其之功能片段與衍生物包括本技藝已知的該等。在某些具體例中，該紫杉醇抗體係單株抗體。本發明可用的代表性紫杉醇抗體為市售的如3C6及8A10。其他代表性紫杉醇抗體及其之功能片段包括親和力試劑，例如US 2017/0102401內所述者，在此係以其之整體明確地併入以作為參考資料。
當使用於本文中，術語"抗體"含括衍生自任何生產抗體的哺乳動物(諸如小鼠、大鼠、兔、駱駝(camelid)及靈長類動物，包括人類)或合成或重組生產的整個抗體或其功能抗體片段，其等專一性結合感興趣的標靶(即，紫杉醇)或其抗原決定位。例示性的抗體種類包括多株、單株及重組型抗體；多專一性抗體(例如，雙專一性抗體)；人化抗體；鼠類抗體；嵌合、小鼠-人類、小鼠-靈長類動物、靈長類動物-人類單株抗體；及抗個體基因型抗體，以及可以為任何完整的分子或其片段，例如抗原結合片段。如本文所述，單株抗體為有利的，因為其等提供增高的紫杉醇之結合專一性。然而，僅含一種抗體片段或衍生物的"株系(clonal)"組成物也是可能的。
當使用於本文中，術語"抗體片段"可以指抗原結合(即，結合紫杉醇)片段。術語"抗原"或"紫杉醇結合片段"係指來自全長抗體或全長抗體相關的抗原結合或變異區。作例證的抗體片段實例包括Fab、Fab'、F(ab)2 、F(ab')2 及Fv片段、scFv片段、雙價抗體(diabodies)、奈米抗體、線性抗體、單鏈抗體分子以及來自抗體片段的多專一性抗體。
當使用於本文中，"單鏈Fv"或"scFv"抗體片段包含一抗體之VH 及VL 域，其中此等域係存在於一單多肽鏈內。一般而言，Fv多肽進一步包含一多肽連接子於VH 及VL 域之間，該多肽連接子使scFv形成所欲的抗原結合結構。
術語"嵌合抗體"係指一種重組蛋白，其包含衍生自一物種的(諸如齧齒目動物)抗體之變異域及/或互補性決定區域，而抗體分子剩餘部分係衍生自另一物種的(諸如人類)抗體。嵌合抗體典型係使用於治療應用上，但是也能應用於如本文所述之偵測技術。當使用於本文中，"人化抗體"為一種嵌合抗體，其包含移植至人類抗體框架之內、符合衍生自非人類免疫球蛋白之定互補性決定區域的最小序列。人化抗體典型係重組蛋白，其中只有互補性決定區域為非人類來源。
當使用於本文中，術語"衍生物"表示業已自一種參考抗體生產的抗體或抗體片段。舉例而言，有時希望藉由突變來修飾或提升一種參考抗體(或其之片段)的結合特徵。帶有經修改的性質之生成的抗體產物繼而稱為參考抗體的"衍生物"。舉例而言，一種抗體衍生物可以為一種含有由參考抗體(或編碼參考抗體的核酸)應用的親和力成熟方法所產生的突變之抗體。此等突變可以導致帶有經修改的(如，經改良的)結合親和力、選擇性等等之抗體。
因而，本發明的裝置及方法可以包括親和力試劑，例如抗體為基礎之組成物，其包括結合紫杉醇的抗體變異體、抗體片段及抗體衍生物。在某些具體例中，紫杉醇抗體係單株抗體或結合紫杉醇的片段或其衍生物。在一個具體例中，親和力試劑包含六個互補性決定區域，那就是三個於輕鏈框架上(即，亦稱為CDRL1、CDRL2及CDRL3)及三個於重鏈框架上(即，亦稱為CDRH1、CDRH2及CDRH3)。本發明可用的非限制性、代表性紫杉醇抗體為市售的，如3C6及8A10。US 2017/0102401內更詳盡地說明3C6及8A10，以及其之片段與衍生物(包括帶有經修飾的結合特徵之突變變異體)，其在此係以其之整體併入以作為參考資料。
如U.S. Pub.號碼2017/0102401中更詳盡地描述，代表性8A10及3C6單株抗體經受各種修飾，包括編碼DNA經受之突變，以改變結合性質。單株抗體，8A10及3C6，以及其等之衍生物展現出會結合紫杉醇且有用於偵測一生理樣本內的紫杉醇。參考8A10及3C6抗紫杉醇抗體之各CDR的每個位置納入單一胺基酸序列變異體的庫(Libraries)係予以建構。庫予以篩選展現會與紫杉醇抗原結合之變異體Fab域。"陽性"變異體特定的突變繼而於組合庫內組合且再次篩選以確認結合作用。此等結果表示能從已知的紫杉醇結合抗體，例如8A10及3C6，生成有用於，舉例而言，作為紫杉醇結合、單離及/或偵測的組成物之親和力試劑。
依據前述，於一個態樣中本揭露內容納入結合紫杉醇的抗體、抗體片段及/或抗體衍生物親和力試劑以促進使用本揭示的方法、裝置及系統來偵測紫杉醇。在本揭露內容包含的任一親和力試劑具體例中，親和力試劑與紫杉醇結合，其可以用本技藝已知的任何技術來決定。
以下僅為了說明之用提供了對本揭露內容有作用的代表性8A10及3C6抗體、片段與衍生物之非限制性說明。 8A10及8A10衍生的親和力試劑
在一個具體例中，親和力試劑包含8A10 mAb內所含的一個、二個、三個、四個、五個或全部六個互補性決定區域。具體地，親和力試劑能包含帶有序列辨識編號:11內列舉的胺基酸序列之CDRL1、帶有序列辨識編號:31內列舉的胺基酸序列之CDRL2、帶有序列辨識編號:45內列舉的胺基酸序列之CDRL3、帶有序列辨識編號:58內列舉的胺基酸序列之CDRH1、帶有序列辨識編號:68內列舉的胺基酸序列之CDRH2，及/或帶有序列辨識編號:99內列舉的胺基酸序列之CDRH3，及/或其之任一組合。在一些具體例中，親和力試劑包含8A10抗體變異輕鏈(VLC)及/或8A10變異重鏈(VHC)域的胺基酸序列。8A10 VLC域的8A10胺基酸序列能包含序列辨識編號:8內列舉的序列以及能由序列辨識編號:7內列舉的核酸所編碼。8A10抗體VHC的胺基酸序列可以是序列辨識編號:10內列舉的序列以及能由序列辨識編號:9內列舉的核酸所編碼。整個8A10 mAb的序列為本技藝具有通常技術人員已知且可辨別的。
在另外的具體例中，親和力試劑包含8A10 mAb的胺基酸序列相關的至少一個胺基酸差異，如以下更詳盡地說明者。在一個具體例中，親和力試劑於8A10重鏈或輕鏈變異區的框架(即，非CDR)序列內包含至少一個胺基酸差異。
在另一個具體例中，親和力試劑包含對應於8A10 mAb的CDRs之一個、二個、三個、四個、五個或全部六個CDRs，但也包含至少一個突變，譬如一個胺基酸差異，於8A10 mAb相關的六個CDRs之一者或多者內，以任何組合。具體地，親和力試劑能包含至少一個胺基酸差異於下列相關的至少一個CDRs內：帶有序列辨識編號:11內列舉的胺基酸序列之CDRL1、帶有序列辨識編號:31內列舉的胺基酸序列之CDRL2、帶有序列辨識編號:45內列舉的胺基酸序列之CDRL3、帶有序列辨識編號:58內列舉的胺基酸序列之CDRH1、帶有序列辨識編號:68內列舉的胺基酸序列之CDRH2，及/或帶有序列辨識編號:99內列舉的胺基酸序列之CDRH3，及/或其之任一組合。
在一個具體例中，親和力試劑具體包含： 一輕鏈互補性決定區域CDR1，其帶有如序列辨識編號:1內列舉的胺基酸序列KPXQXVXSXVX， 其中位置3的X是S或V， 其中位置5的X是N、T、D、M、R或K， 其中位置7的X是G或F， 其中位置9的X是A、P或R， 其中位置11的X是T、N或A； 一輕鏈互補性決定區域CDR2，其帶有如序列辨識編號:2內列舉的胺基酸序列XXXXRYX， 其中位置1的X是S或Y， 其中位置2的X是A、H或T， 其中位置3的X是S或T， 其中位置4的X是N或R， 其中位置7的X是T、M或R； 一輕鏈互補性決定區域CDR3，其帶有如序列辨識編號:3內列舉的胺基酸序列QQYXSXPYX， 其中位置4的X是S或P， 其中位置6的X是Y、K、R或V， 其中位置9的X是T或R； 一重鏈互補性決定區域CDR1，其帶有如序列辨識編號:4內列舉的胺基酸序列GXXFXDXXXX， 其中位置2的X是Y或S， 其中位置3的X是T或R， 其中位置5的X是T、S或H， 其中位置7的X是S或Y， 其中位置8的X是T或R， 其中位置9的X是M或T， 其中位置10的X是N或K； 一重鏈互補性決定區域CDR2，其帶有如序列辨識編號:5內列舉的胺基酸序列XIXPXXXXXXXNQXFXX， 其中位置1的X是E或K， 其中位置3的X是D、F、W或A， 其中位置5的X是N、T、M、S、K、W或R， 其中位置6的X是N、S、D或R， 其中位置7的X是G或L， 其中位置8的X是G、W或R， 其中位置9的X是T或A， 其中位置10的X是N、R或A， 其中位置11的X是Y或T， 其中位置14的X是K或N， 其中位置16的X是K或S， 其中位置17的X是G或L；及/或 一重鏈互補性決定區域CDR3，其帶有如序列辨識編號:6內列舉的胺基酸序列ARXXWG， 其中位置3的X是G、R或P， 其中位置4的X是V、P或S； 其中該單株抗體、抗體片段或抗體衍生物係與紫杉醇結合。
在一些具體例中，輕鏈互補性決定區域CDR1具有如序列辨識編號:1內列舉的胺基酸序列KPXQXVXSXVX，其中位置3的X是S或V，其中位置5的X是N、R或K，其中位置7的X是G，其中位置9的X是A、P或R，以及其中位置11的X是T、N或A。
在一些具體例中，輕鏈互補性決定區域CDR2具有如序列辨識編號:2內列舉的胺基酸序列XXXXRYX，其中位置1的X是S，其中位置2的X是A或T，其中位置3的X是S或T，其中位置4的X是N或R，以及其中位置7的X是T或R。
在一些具體例中，輕鏈互補性決定區域CDR3具有如序列辨識編號:3內列舉的胺基酸序列QQYXSXPYX，其中位置4的X是S，其中位置6的X是Y、K、R或V，以及其中位置9的X是T。
在一些具體例中，重鏈互補性決定區域CDR1具有如序列辨識編號:4內列舉的胺基酸序列GXXFXDXXXX，其中位置2的X是Y，其中位置3的X是T或R，其中位置5的X是T或H，其中位置7的X是S，其中位置8的X是T或R，其中位置9的X是M，以及其中位置10的X是N。
在一些具體例中，重鏈互補性決定區域CDR2具有如序列辨識編號:5內列舉的胺基酸序列XIXPXXXXXXXNQXFXX，其中位置1的X是E，其中位置3的X是D、F、W或A，其中位置5的X是N、S、K、W或R，其中位置6的X是N或R，其中位置7的X是G，其中位置8的X是G、W或R，其中位置9的X是T，其中位置10的X是N，其中位置11的X是Y，其中位置14的X是K，其中位置16的X是K，以及其中位置17的X是G。
在一些具體例中，重鏈互補性決定區域CDR3具有如序列辨識編號:6內列舉的胺基酸序列ARXXWG，其中位置3的X是G，以及其中位置4的X是V或S。
在一些具體例中，親和力試劑包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多個突變於8A10 mAb的CDRs域相關之6個CDR域內，如本文所述。
如以上所示，在一些具體例中，親和力試劑可以為不同於8A10抗體之8A10單株抗體、8A10抗體片段或抗體衍生物。在一些具體例中，親和力試劑為不同於8A10抗體片段之單株抗體、抗體片段或抗體衍生物(譬如，含一或更多突變)。在此具體例中，親和力試劑具有不同於8A10 mAb的任何單一連續序列之胺基酸序列。
在一些具體例中，親和力試劑為一種單株抗體、抗體片段或抗體衍生物，其包含與8A10抗體對應的CDR胺基酸序列的至少一個胺基酸差異於一個CDR胺基酸序列內，如序列辨識編號: 11、31、45、58、68及99內列舉者。
在一些具體例中，親和力試劑為一種單株抗體、抗體片段或抗體衍生物，其包含選自於下列之一胺基酸序列內於一個CDR內：序列辨識編號:12-30、32-44、46-57、59-67、69-98及100-103。
在一些具體例中，親和力試劑為一種單株抗體、抗體片段或抗體衍生物，其包含下列胺基酸取代之一者或多者：有關序列辨識編號:11為N5R、N5K、A9R、T11N及T11A，有關序列辨識編號:31為A2T、S3T、N4R及T7R，有關序列辨識編號:45為Y6R、Y6K及Y6V，有關序列辨識編號:58為T3R、T5H及T8R，有關序列辨識編號:68為D3F、D3W、D3A、N6R、G8R及G8W。在另外的具體例中，該單株抗體、抗體片段或抗體衍生物否則就是包含8A10抗體相同的CDR序列，如序列辨識編號: 11、31、45、58、68及99內列舉者。
現在將說明個別的CDRs另外具體例，其反映可合併至本揭示偵測紫杉醇的方法、裝置及系統之所欲的8A10 CDRs衍生物。除非另有指明，否則很明顯地一種特定CDR之任何特定的具體例能與本文所述之另一種特定CDR之任何特定的具體例組合於親和力試劑之內。
在一些具體例中，親和力試劑包含一輕鏈CDR1，其帶有選自序列辨識編號:104-110之胺基酸序列。
在一些具體例中，親和力試劑包含一輕鏈CDR2，其帶有選自序列辨識編號:111-117之胺基酸序列。
在一些具體例中，親和力試劑包含一重鏈CDR1，其帶有選自序列辨識編號:118-124之胺基酸序列。
在一些具體例中，親和力試劑包含一重鏈CDR2，其帶有選自序列辨識編號:125-132之胺基酸序列。
在一些具體例中，親和力試劑包含8A10 mAb之VLC及/或VHC變異體。8A10 VLC區域變異體之代表性胺基酸序列係列舉於序列辨識編號:190-197內。8A10 VHC區域變異體之代表性胺基酸序列係列舉於序列辨識編號:198-205內。
一般而言如上所述，所揭示的抗紫杉醇親和力試劑具體例可以衍生自8A10抗體。親和力試劑可以包含與8A10 mAb之CDR(如序列辨識編號:11、31、45、58、68及99內列舉者)、8A10變異輕或重鏈序列之框架(非CDR)區域，或8A10 mAb之其他域相關的一或更多突變，譬如，胺基酸取代缺失、加入及/或取代。8A10變異輕或重鏈序列於此係分別列舉於序列辨識編號:8及10內。在一些具體例中，親和力試劑具有組合的CDR序列(考慮所有的六個CDR序列)，其係至少約60、65、70、75、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100%同一於8A10抗體之組合的CDR序列。在其他的具體例中，親和力試劑具有變異輕或重鏈，其帶有一胺基酸序列其係至少約60、65、70、75、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100%對8A10抗體之變異輕或重鏈序列的序列。抗紫杉醇親和力試劑仍然可能與8A10參考單株抗體不同對於通常技藝者會是顯而易見的，以及當一個域與8A10參考序列之對應域有完美的同一性時，不同域內仍會納入一差異。
當使用於本文中，術語"同一性百分率(percent identity)"或"同一百分率(percent identical)"當與多肽一起使用時，係定義為在排列序列以達到最大的同一性百分率之後，一多肽序列之胺基酸殘基與一指定的參考多肽(例如序列辨識編號:8之胺基酸序列)之胺基酸序列同一的百分比。胺基酸序列同一性可以依據本技藝已知的任何演算法或技術來決定。
當使用於本文中，一種"胺基酸"係指蛋白質內發現的20種天然存在的胺基酸之任一者、天然存在的胺基酸之D-立體異構物(譬如，D-蘇胺酸)、非自然的胺基酸，以及化學修飾的胺基酸。此等種類的胺基酸各者不相互排斥。α-胺基酸包含一個碳原子，該碳原子與一個胺基基團、一個羧基基團、一氫原子及一個稱為"側鏈"之有特色的基團結合。天然存在的胺基酸之側鏈為本技藝熟知且包括，舉例而言，氫(譬如，如於甘胺酸)、烷基(譬如，如於丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、脯胺酸)、經取代的烷基(譬如，如於蘇胺酸、絲胺酸、甲硫胺酸、半胱胺酸、天冬胺酸、天冬醯胺酸、麩胺酸、麩醯胺酸、精胺酸及離胺酸)、芳基烷基(譬如，如於苯丙胺酸及色胺酸)、經取代的芳基烷基(譬如，如於酪胺酸)，以及雜芳基烷基(譬如，如於組胺酸)。
下列的縮寫係用於20種天然存在的胺基酸：丙胺酸(Ala；A)、天冬醯胺酸(Asn；N)、天冬胺酸(Asp；D)、精胺酸(Arg；R)、半胱胺酸(Cys；C)、麩胺酸(Glu；E)、麩醯胺酸(Gln；Q)、甘胺酸(Gly；G)、組胺酸(His；H)、異白胺酸(Ile；I)、白胺酸(Leu；L)、離胺酸(Lys；K)、甲硫胺酸(Met；M)、苯丙胺酸(Phe；F)、脯胺酸(Pro；P)、絲胺酸(Ser；S)、蘇胺酸(Thr；T)、色胺酸(Trp；W)、酪胺酸(Tyr；Y)及纈胺酸(Val；V)。
通常，參考8A10序列(或3C6序列，如以下所述)的任何部分相關的所欲胺基酸取代包括用一相似的胺基酸之取代作用，相似的胺基酸係由參考及經取代的殘基展現的相似特徵予以定義。因而，在一些具體例中，變異體親和力試劑包含與參考8A10序列(或3C6序列)相比為守恆的胺基酸的取代。任何的取代突變為守恆的因為其最低限度地瓦解蛋白質的生化性質。被導入以取代守恆的胺基酸殘基之突變的非限制性實例包括：以帶正電的殘基取代帶正電的殘基(譬如，H、K及R)；以帶負電的殘基取代帶負電的殘基(譬如，D及E)；以不帶電極性的殘基取代不帶電極性的殘基(譬如，C、G、N、Q、S、T及Y)；以及以不帶電非極性的殘基取代不帶電非極性的殘基(譬如，A、F、I、L、M、P、V及W)。也可以進行非守恆的取代(譬如，脯胺酸取代甘胺酸)。
胺基酸，且更具體地說，其等之側鏈，可以特徵在於其等之化學特徵。舉例而言，胺基酸側鏈可以為帶正電的、帶負電的或不帶電的。溶液的pH影響某些側鏈的電荷本質，如本熟悉此藝者已知的。可以為帶正電的側鏈之非限制性實例包括組胺酸、精胺酸及離胺酸。可以為帶正負電的側鏈之非限制性實例包括天冬胺酸及麩胺酸。可特徵在於不帶電的側鏈之非限制性實例包括甘胺酸、丙胺酸、苯丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、半胱胺酸、天冬醯胺酸、麩醯胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、甲硫胺酸、脯胺酸及色胺酸。
側鏈之空間(Sterics)亦可以用來特徵化一種胺基酸。原子直徑表可協助判定是否一側鏈比另一者更大。電腦模式亦可以幫助此判定。
胺基酸亦可以特徵在於其等之側鏈極性。極性的側鏈，其典型比非極性的側鏈為更親水的，包括，舉例而言，絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、半胱胺酸、天冬醯胺酸及麩醯胺酸之該等。非極性的側鏈，其典型比極性的側鏈為更疏水的，包括，舉例而言，甘胺酸、丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、脯胺酸、甲硫胺酸、苯丙胺酸及色胺酸之該等。吾人可以使用本技藝已知的習用技術來決定側鏈之極性，其涉及側鏈之陰電性判定及三維結構評估。吾人亦可以使用本技藝已知的習用技術來比較側鏈之疏水性/親水性，例如比較各胺基酸的辛醇/水分佈係數。
任擇地，吾人可以考慮胺基酸的親水指數(hydropathic index)。已經以各胺基酸之疏水性及/或電荷特徵為基礎來指定其等之親水指數，此等為：異白胺酸(+4.5)；纈胺酸(+4.2)；白胺酸(+3.8)；苯丙胺酸(+2.8)；半胱胺酸/胱胺酸(+2.5)；甲硫胺酸(+1.9)；丙胺酸(+1.8)；甘胺酸(-0.4)；蘇胺酸(-0.7)；絲胺酸(-0.8)；色胺酸(-0.9)；酪胺酸(-1.3)；脯胺酸(-1.6)；組胺酸(-3.2)；麩胺酸鹽(-3.5)；麩醯胺酸(-3.5)；天門冬胺酸鹽(-3.5)；天冬醯胺酸(-3.5)；離胺酸(-3.9)；及/或精胺酸(-4.5)。賦予蛋白質交互式生物功能之親水胺基酸指數的重要性一般為本技藝瞭解的。大家都知道某些胺基酸可以取代具有相似親水指數及/或分數及/或仍保持相似的生物活性之其他胺基酸。在根據親水指數做出改變上，胺基酸的取代其之親水指數可以落在±2之內；±1之內或±0.5之內。
本技藝也瞭解相似的胺基酸之取代作用可以以親水性為基礎有效地進行。如同於美國專利4,554,101中詳細說明的，其在此併入以作為參考資料，胺基酸殘基已經指定下列的親水性值：精胺酸(+3.0)；離胺酸(+3.0)；天門冬胺酸鹽(+3.0 ± 1)；麩胺酸鹽(+3.0 ± 1)；絲胺酸(+0.3)；天冬醯胺酸(+0.2)；麩醯胺酸(+0.2)；甘胺酸(0)；蘇胺酸(-0.4)；脯胺酸(-0.5 ± 1)；丙胺酸(-0.5)；組胺酸(-0.5)；半胱胺酸(-1.0)；甲硫胺酸(-1.3)；纈胺酸(-1.5)；白胺酸(-1.8)；異白胺酸(-1.8)；酪胺酸(-2.3)；苯丙胺酸(-2.5)；色胺酸(-3.4)。在根據相似的親水性值做出改變上，預期的是胺基酸的取代其之親水性值可以落在±2之內；±1之內或±0.5之內的該等。 3C6及3C6衍生的親和力試劑
在一個具體例中，親和力試劑包含3C6 mAb內所含的一個、二個、三個、四個、五個或全部六個互補性決定區域。具體地，親和力試劑能包含帶有序列辨識編號:143內列舉的胺基酸序列之CDRL1、帶有序列辨識編號:155內列舉的胺基酸序列之CDRL2、帶有序列辨識編號:160內列舉的胺基酸序列之CDRL3、帶有序列辨識編號:166內列舉的胺基酸序列之CDRH1、帶有序列辨識編號:172內列舉的胺基酸序列之CDRH2，及/或帶有序列辨識編號:184內列舉的胺基酸序列之CDRH3，及/或其之任一組合。在一些具體例中，親和力試劑包含3C6抗體變異輕鏈(VLC)及/或3C6變異重鏈(VHC)域的胺基酸序列。3C6 VLC域的3C6胺基酸序列能包含序列辨識編號:140內列舉的序列以及能由序列辨識編號:139內列舉的核酸所編碼。3C6抗體VHC的胺基酸序列可以是序列辨識編號:142內列舉的序列以及能由序列辨識編號:141內列舉的核酸所編碼。整個3C6 mAb的序列為本技藝具有通常技術人員已知且可辨別的。
在另外的具體例中，親和力試劑包含3C6 mAb的胺基酸序列相關的至少一個胺基酸差異。在一個具體例中，親和力試劑於3C6重鏈或輕鏈變異區的框架(即，非CDR)序列內包含至少一個胺基酸差異。
在另一個具體例中，親和力試劑包含對應於3C6 mAb的CDRs之一個、二個、三個、四個、五個或全部六個CDRs，但也包含至少一個突變，譬如一個胺基酸差異，於3C6 mAb相關的六個CDRs的一者或多者內，以任何組合。具體地，親和力試劑能包含至少一個胺基酸差異於下列相關的至少一個CDRs內：帶有序列辨識編號:143內列舉的胺基酸序列之CDRL1、帶有序列辨識編號:155內列舉的胺基酸序列之CDRL2、帶有序列辨識編號:160內列舉的胺基酸序列之CDRL3、帶有序列辨識編號:166內列舉的胺基酸序列之CDRH1、帶有序列辨識編號:172內列舉的胺基酸序列之CDRH2，及/或帶有序列辨識編號:184內列舉的胺基酸序列之CDRH3，及/或其之任一組合。
在一個具體例中，親和力試劑具體包含： 一輕鏈互補性決定區域CDR1，其帶有如序列辨識編號:133內列舉的胺基酸序列XSXQXLXHXXGNXYXH， 其中位置1的X是R或H， 其中位置3的X是R、G或N， 其中位置5的X是S、M或G， 其中位置7的X是V或L， 其中位置9的X是S或I， 其中位置10的X是N或V， 其中位置13的X是T或S， 其中位置15的X是L或W； 一輕鏈互補性決定區域CDR2，其帶有如序列辨識編號:134內列舉的胺基酸序列XVSXXXS， 其中位置1的X是K或N， 其中位置4的X是N或R， 其中位置5的X是R或L， 其中位置6的X是F或R； 一輕鏈互補性決定區域CDR3，其帶有如序列辨識編號:135內列舉的胺基酸序列SXSTHXXPX， 其中位置2的X是Q或P， 其中位置6的X是V或G， 其中位置7的X是P或S， 其中位置9的X是T或R； 一重鏈互補性決定區域CDR1，其帶有如序列辨識編號:136內列舉的胺基酸序列XDSITXGYXX， 其中位置1的X是G或P， 其中位置6的X是S或I， 其中位置9的X是W或F， 其中位置10的X是N、R或K； 一重鏈互補性決定區域CDR2，其帶有如序列辨識編號:137內列舉的胺基酸序列XISYXGXXYXXPXLKX， 其中位置1的X是Y或F， 其中位置5的X是S、R或T， 其中位置7的X是S或D， 其中位置8的X是T或I， 其中位置10的X是Y或F， 其中位置11的X是N或K， 其中位置13的X是S或F， 其中位置16的X是S或N；及/或 一重鏈互補性決定區域CDR3，其帶有如序列辨識編號:138內列舉的胺基酸序列XXXXY， 其中位置1的X是G、A或E， 其中位置2的X是D或W， 其中位置3的X是G或T， 其中位置4的X是A、D、G或Q； 其中該單株抗體、抗體片段或抗體衍生物係與紫杉醇結合。
如以上所示，在一些具體例中，親和力試劑可以為不同於3C6抗體之3C6單株抗體、3C6抗體片段或抗體衍生物。在一些具體例中，親和力試劑為不同於3C6抗體片段之單株抗體、抗體片段或抗體衍生物(譬如，含一或更多突變)。在此具體例中，親和力試劑具有不同於3C6 mAb的任何單一連續序列之胺基酸序列。
在一些具體例中，親和力試劑為一種單株抗體、抗體片段或抗體衍生物，其包含與3C6抗體對應的CDR胺基酸序列的至少一個胺基酸差異於一CDR胺基酸序列內，如序列辨識編號:143、155、160、166、172及184內列舉者。
在一些具體例中，親和力試劑為一種單株抗體、抗體片段或抗體衍生物，其包含選自於下列之一胺基酸序列內於一CDR內：序列辨識編號:144-154、156-159、161-165、167-171、173-183、185-189及246-248。
在一些具體例中，親和力試劑包含3C6 mAb之VLC及/或VHC變異體。3C6 VLC區域變異體之代表性胺基酸序列係列舉於序列辨識編號:206-225內。3C6 VHC區域變異體之代表性胺基酸序列係列舉於序列辨識編號: 226-245內。
一般而言如上所述，所揭示的親和力試劑具體例可以衍生自3C6抗體，且與3C6抗體有至少一些胺基酸序列差異。親和力試劑可以包含與3C6 mAb之CDR(如序列辨識編號:143、155、160、166、172及184內列舉者)、3C6變異輕或重鏈序列之框架(非CDR)區域，或3C6 mAb之其他域相關的一或更多突變，譬如，胺基酸取代缺失、加入及/或取代。3C6變異輕或重鏈序列於此係分別列舉於序列辨識編號:140及142內。在一些具體例中，親和力試劑具有組合的CDR序列(考慮所有的六個CDR序列)，其係至少約60、65、70、75、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100%同一於3C6抗體組合的CDR序列。在其他的具體例中，親和力試劑具有一變異輕或重鏈，其帶有一胺基酸序列其係至少約60、65、70、75、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100%對3C6抗體之變異輕或重鏈序列的序列。
在一個具體例中，衍生自3C6抗體之親和力試劑為一種單株抗體、抗體片段或抗體衍生物，其包含下列胺基酸取代之一者或多者：有關於序列辨識編號:143或序列辨識編號:144為S5G以及有關於序列辨識編號:184為A4Q及A4G。 序列索引
下列為同此提交的序列表內列舉的序列索引。該等序列係以其等如序列表內列舉的各別序列辨識編號來談論 1. 8A10 CDRL1的一致胺基酸序列 2. 8A10 CDRL2的一致胺基酸序列 3. 8A10 CDRL3的一致胺基酸序列 4. 8A10 CDRH1的一致胺基酸序列 5. 8A10 CDRH2的一致胺基酸序列 6. 8A10 CDRH3的一致胺基酸序列 7.編碼8A10 VLC區域的核酸 8.8A10 VLC區域的胺基酸序列 9.編碼8A10 VHC區域的核酸 10. 8A10 VHC區域的胺基酸序列 11. 8A10 CDRL1的胺基酸序列 12. 8A10 CDRL1變異體的胺基酸序列 13. 8A10 CDRL1變異體的胺基酸序列 14. 8A10 CDRL1變異體的胺基酸序列 15. 8A10 CDRL1變異體的胺基酸序列 16. 8A10 CDRL1變異體的胺基酸序列 17. 8A10 CDRL1變異體的胺基酸序列 18. 8A10 CDRL1變異體的胺基酸序列 19. 8A10 CDRL1變異體的胺基酸序列 20. 8A10 CDRL1變異體的胺基酸序列 21. 8A10 CDRL1變異體的胺基酸序列 22. 8A10 CDRL1變異體的胺基酸序列 23. 8A10 CDRL1變異體的胺基酸序列 24. 8A10 CDRL1變異體的胺基酸序列 25. 8A10 CDRL1變異體的胺基酸序列 26. 8A10 CDRL1變異體的胺基酸序列 27. 8A10 CDRL1變異體的胺基酸序列 28. 8A10 CDRL1變異體的胺基酸序列 29. 8A10 CDRL1變異體的胺基酸序列 30. 8A10 CDRL1變異體的胺基酸序列 31. 8A10 CDRL2的胺基酸序列 32. 8A10 CDRL2變異體的胺基酸序列 33. 8A10 CDRL2變異體的胺基酸序列 34. 8A10 CDRL2變異體的胺基酸序列 35. 8A10 CDRL2變異體的胺基酸序列 36. 8A10 CDRL2變異體的胺基酸序列 37. 8A10 CDRL2變異體的胺基酸序列 38. 8A10 CDRL2變異體的胺基酸序列 39. 8A10 CDRL2變異體的胺基酸序列 40. 8A10 CDRL2變異體的胺基酸序列 41. 8A10 CDRL2變異體的胺基酸序列 42. 8A10 CDRL2變異體的胺基酸序列 43. 8A10 CDRL2變異體的胺基酸序列 44. 8A10 CDRL2變異體的胺基酸序列 45. 8A10 CDRL3的胺基酸序列 46. 8A10 CDRL3變異體的胺基酸序列 47. 8A10 CDRL3變異體的胺基酸序列 48. 8A10 CDRL3變異體的胺基酸序列 49. 8A10 CDRL3變異體的胺基酸序列 50. 8A10 CDRL3變異體的胺基酸序列 51. 8A10 CDRL3變異體的胺基酸序列 52. 8A10 CDRL3變異體的胺基酸序列 53. 8A10 CDRL3變異體的胺基酸序列 54. 8A10 CDRL3變異體的胺基酸序列 55. 8A10 CDRL3變異體的胺基酸序列 56. 8A10 CDRL3變異體的胺基酸序列 57. 8A10 CDRL3變異體的胺基酸序列 58. 8A10 CDRH1的胺基酸序列 59. 8A10 CDRH1變異體的胺基酸序列 60. 8A10 CDRH1變異體的胺基酸序列 61. 8A10 CDRH1變異體的胺基酸序列 62. 8A10 CDRH1變異體的胺基酸序列 63. 8A10 CDRH1變異體的胺基酸序列 64. 8A10 CDRH1變異體的胺基酸序列 65. 8A10 CDRH1變異體的胺基酸序列 66. 8A10 CDRH1變異體的胺基酸序列 67. 8A10 CDRH1變異體的胺基酸序列 68. 8A10 CDRH2的胺基酸序列 69. 8A10 CDRH2區段A的胺基酸序列 70. 8A10 CDRH2區段A變異體的胺基酸序列 71. 8A10 CDRH2區段A變異體的胺基酸序列 72. 8A10 CDRH2區段A變異體的胺基酸序列 73. 8A10 CDRH2區段A變異體的胺基酸序列 74. 8A10 CDRH2區段A變異體的胺基酸序列 75. 8A10 CDRH2區段A變異體的胺基酸序列 76. 8A10 CDRH2區段A變異體的胺基酸序列 77. 8A10 CDRH2區段A變異體的胺基酸序列 78. 8A10 CDRH2區段A變異體的胺基酸序列 79. 8A10 CDRH2區段A變異體的胺基酸序列 80. 8A10 CDRH2區段A變異體的胺基酸序列 81. 8A10 CDRH2區段A變異體的胺基酸序列 82. 8A10 CDRH2區段A變異體的胺基酸序列 83. 8A10 CDRH2區段A變異體的胺基酸序列 84. 8A10 CDRH2區段A變異體的胺基酸序列 85. 8A10 CDRH2區段A變異體的胺基酸序列 86. 8A10 CDRH2區段A變異體的胺基酸序列 87. 8A10 CDRH2區段A變異體的胺基酸序列 88. 8A10 CDRH2區段A變異體的胺基酸序列 89. 8A10 CDRH2區段A變異體的胺基酸序列 90. 8A10 CDRH2區段A變異體的胺基酸序列 91. 8A10 CDRH2區段B的胺基酸序列 92. 8A10 CDRH2區段B變異體的胺基酸序列 93. 8A10 CDRH2區段B變異體的胺基酸序列 94. 8A10 CDRH2區段B變異體的胺基酸序列 95. 8A10 CDRH2區段B變異體的胺基酸序列 96. 8A10 CDRH2區段B變異體的胺基酸序列 97. 8A10 CDRH2區段B變異體的胺基酸序列 98. 8A10 CDRH2區段B變異體的胺基酸序列 99. 8A10 CDRH3的胺基酸序列 100. 8A10 CDRH3變異體的胺基酸序列 101. 8A10 CDRH3變異體的胺基酸序列 102. 8A10 CDRH3變異體的胺基酸序列 103. 8A10 CDRH3變異體的胺基酸序列 104. 8A10組合的變異體CP2的CDRL1之胺基酸序列 105. 8A10組合的變異體CP3的CDRL1之胺基酸序列 106. 8A10組合的變異體CP4的CDRL1之胺基酸序列 107. 8A10組合的變異體CP6的CDRL1之胺基酸序列 108. 8A10組合的變異體CP7的CDRL1之胺基酸序列 109. 8A10組合的變異體CP8的CDRL1之胺基酸序列 110.組合的變異體CP9之CDRL1 8A10的胺基酸序列 111. 8A10組合的變異體CP2的CDRL2之胺基酸序列 112.組合的變異體CP3的CDRL2 8A10之胺基酸序列 113. 8A10組合的變異體CP4的CDRL2之胺基酸序列 114. 8A10組合的變異體CP6的CDRL2之胺基酸序列 115. 8A10組合的變異體CP7的CDRL2之胺基酸序列 116. 8A10組合的變異體CP8的CDRL2之胺基酸序列 117. 8A10組合的變異體CP9的CDRL2之胺基酸序列 118. 8A10組合的變異體CP2的CDRH1之胺基酸序列 119. 8A10組合的變異體CP3的CDRH1之胺基酸序列 120. 8A10組合的變異體CP4的CDRH1之胺基酸序列 121. 8A10組合的變異體CP6的CDRH1之胺基酸序列 122. 8A10組合的變異體CP7的CDRH1之胺基酸序列 123. 8A10組合的變異體CP8的CDRH1之胺基酸序列 124. 8A10組合的變異體CP9的CDRH1之胺基酸序列 125. 8A10組合的變異體CP2的CDRH2之胺基酸序列 126. 8A10組合的變異體CP3的CDRH2之胺基酸序列 127. 8A10組合的變異體CP4的CDRH2之胺基酸序列 128. 8A10組合的變異體CP5的CDRH2之胺基酸序列 129. 8A10組合的變異體CP6的CDRH2之胺基酸序列 130. 8A10組合的變異體CP7的CDRH2之胺基酸序列 131. 8A10組合的變異體CP8的CDRH2之胺基酸序列 132. 8A10組合的變異體CP9的CDRH2之胺基酸序列 133. 3C6 CDRL1的一致胺基酸序列 134. 3C6 CDRL2的一致胺基酸序列 135. 3C6 CDRL3的一致胺基酸序列 136. 3C6 CDRH1的一致胺基酸序列 137. 3C6 CDRH2的一致胺基酸序列 138. 3C6 CDRH3的一致胺基酸序列 139.編碼3C6 VLC區域的核酸 140. 3C6 VLC區域的胺基酸序列 141.編碼3C6 VHC區域的核酸 142. 3C6 VHC區域的胺基酸序列 143. 3C6 CDRL1的胺基酸序列 144. 3C6 CDRL1區段A的胺基酸序列 145. 3C6 CDRL1區段A變異體的胺基酸序列 146. 3C6 CDRL1區段A變異體的胺基酸序列 147. 3C6 CDRL1區段A變異體的胺基酸序列 148. 3C6 CDRL1區段A變異體的胺基酸序列 149. 3C6 CDRL1區段A變異體的胺基酸序列 150. 3C6 CDRL1區段B的胺基酸序列 151. 3C6 CDRL1區段B變異體的胺基酸序列 152. 3C6 CDRL1區段B變異體的胺基酸序列 153. 3C6 CDRL1區段B變異體的胺基酸序列 154. 3C6 CDRL1區段B變異體的胺基酸序列 155. 3C6 CDRL2的胺基酸序列 156. 3C6 CDRL2變異體的胺基酸序列 157. 3C6 CDRL2變異體的胺基酸序列 158. 3C6 CDRL2變異體的胺基酸序列 159. 3C6 CDRL2變異體的胺基酸序列 160. 3C6 CDRL3的胺基酸序列 161. 3C6 CDRL3變異體的胺基酸序列 162. 3C6 CDRL3變異體的胺基酸序列 163. 3C6 CDRL3變異體的胺基酸序列 164. 3C6 CDRL3變異體的胺基酸序列 165. 3C6 CDRL3變異體的胺基酸序列 166. 3C6 CDRH1的胺基酸序列 167. 3C6 CDRH1變異體的胺基酸序列 168. 3C6 CDRH1變異體的胺基酸序列 169. 3C6 CDRH1變異體的胺基酸序列 170. 3C6 CDRH1變異體的胺基酸序列 171. 3C6 CDRH1變異體的胺基酸序列 172. 3C6 CDRH2的胺基酸序列 173. 3C6 CDRH2區段A的胺基酸序列 174. 3C6 CDRH2區段A變異體的胺基酸序列 175. 3C6 CDRH2區段A變異體的胺基酸序列 176. 3C6 CDRH2區段A變異體的胺基酸序列 177. 3C6 CDRH2區段A變異體的胺基酸序列 178. 3C6 CDRH2區段A變異體的胺基酸序列 179. 3C6 CDRH2區段B的胺基酸序列 180. 3C6 CDRH2區段B變異體的胺基酸序列 181. 3C6 CDRH2區段B變異體的胺基酸序列 182. 3C6 CDRH2區段B變異體的胺基酸序列 183. 3C6 CDRH2區段B變異體的胺基酸序列 184. 3C6 CDRH3的胺基酸序列 185. 3C6 CDRH3變異體的胺基酸序列 186. 3C6 CDRH3變異體的胺基酸序列 187. 3C6 CDRH3變異體的胺基酸序列 188. 3C6 CDRH3變異體的胺基酸序列 189. 3C6 CDRH3變異體的胺基酸序列 190. 8A10 VLC區域變異體的胺基酸序列 191. 8A10 VLC區域變異體的胺基酸序列 192. 8A10 VLC區域變異體的胺基酸序列 193. 8A10 VLC區域變異體的胺基酸序列 194. 8A10 VLC區域變異體的胺基酸序列 195. 8A10 VLC區域變異體的胺基酸序列 196. 8A10 VLC區域變異體的胺基酸序列 197. 8A10 VLC區域變異體的胺基酸序列 198. 8A10 VHC區域變異體的胺基酸序列 199. 8A10 VHC區域變異體的胺基酸序列 200. 8A10 VHC區域變異體的胺基酸序列 201. 8A10 VHC區域變異體的胺基酸序列 202. 8A10 VHC區域變異體的胺基酸序列 203. 8A10 VHC區域變異體的胺基酸序列 204. 8A10 VHC區域變異體的胺基酸序列 205. 8A10 VHC區域變異體的胺基酸序列 206. 3C6 VLC區域變異體的胺基酸序列 207. 3C6 VLC區域變異體的胺基酸序列 208. 3C6 VLC區域變異體的胺基酸序列 209. 3C6 VLC區域變異體的胺基酸序列 210. 3C6 VLC區域變異體的胺基酸序列 211. 3C6 VLC區域變異體的胺基酸序列 212. 3C6 VLC區域變異體的胺基酸序列 213. 3C6 VLC區域變異體的胺基酸序列 214. 3C6 VLC區域變異體的胺基酸序列 215. 3C6 VLC區域變異體的胺基酸序列 216. 3C6 VLC區域變異體的胺基酸序列 217. 3C6 VLC區域變異體的胺基酸序列 218. 3C6 VLC區域變異體的胺基酸序列 219. 3C6 VLC區域變異體的胺基酸序列 220. 3C6 VLC區域變異體的胺基酸序列 221. 3C6 VLC區域變異體的胺基酸序列 222. 3C6 VLC區域變異體的胺基酸序列 223. 3C6 VLC區域變異體的胺基酸序列 224. 3C6 VLC區域變異體的胺基酸序列 225. 3C6 VLC區域變異體的胺基酸序列 226. 3C6 VHC區域變異體的胺基酸序列 227. 3C6 VHC區域變異體的胺基酸序列 228. 3C6 VHC區域變異體的胺基酸序列 229. 3C6 VHC區域變異體的胺基酸序列 230. 3C6 VHC區域變異體的胺基酸序列 231. 3C6 VHC區域變異體的胺基酸序列 232. 3C6 VHC區域變異體的胺基酸序列 233. 3C6 VHC區域變異體的胺基酸序列 234. 3C6 VHC區域變異體的胺基酸序列 235. 3C6 VHC區域變異體的胺基酸序列 236. 3C6 VHC區域變異體的胺基酸序列 237. 3C6 VHC區域變異體的胺基酸序列 238. 3C6 VHC區域變異體的胺基酸序列 239. 3C6 VHC區域變異體的胺基酸序列 240. 3C6 VHC區域變異體的胺基酸序列 241. 3C6 VHC區域變異體的胺基酸序列 242. 3C6 VHC區域變異體的胺基酸序列 243. 3C6 VHC區域變異體的胺基酸序列 244. 3C6 VHC區域變異體的胺基酸序列 245. 3C6 VHC區域變異體的胺基酸序列 246. 3C6 CDRL1區段A變異體的胺基酸序列 247. 3C6 CDRH3變異體的胺基酸序列 248. 3C6 CDRH3變異體的胺基酸序列
為了最佳化CNT為基礎之FET的功能化，在某些具體例中，該紫杉醇抗體係一種單-半胱胺酸變異體(即，紫杉醇抗體包括一種單-半胱胺酸以及抗體與碳奈米管之偶合，選擇性地通過雙功能連接子，係通過單-半胱胺酸的硫醇基團發生)。
於本發明的實施方面，該抗體係與FET之碳奈米管組件(即，導體)偶合。該抗體可以藉由各種方法與CNT為基礎之FET偶合，包括本技藝已知的該等。較佳的抗體與碳奈米管組件偶合方法會維持抗體與紫杉醇之結合親和力，以及能夠藉由感測器測量紫杉醇與偶合的抗體之結合。在某些具體例中，抗體係直接或通過使用連接子，而與FET之碳奈米管組件共價地偶合。在其他的具體例中，抗體係直接或通過使用連接子，而與FET之碳奈米管組件非共價地偶合。在使用連接子之非共價具體例中，連接子包括至少一種官能基其透過非共價締合作用(譬如，靜電、疏水/疏水締合作用)而有效地偶合抗體與碳奈米管組件，以及至少一種第二官能基其有效地偶合抗體與連接子。抗體與連接子之偶合可以共價地或非共價地達成。在某些具體例中，抗體係用一連接子與碳奈米管組件偶合，該連接子具有第一官能基其藉由非共價締合作用來偶合該連接子(且最終為抗體)與該碳奈米管，以及第二官能基其共價地偶合該連接子與該抗體。
連接子合適的官能基為本技藝已知的。關於包括一種連接子之具體例，該連接子具有第一官能基其提供非共價地偶合至該碳奈米管以及第二官能基其提供共價地偶合至該抗體，代表性第一官能基包括烴基團，例如芘、苯、環己烷或2,3-二氯-5,6-二氰基-1,4-苯醌基團，以及代表性第二官能基包括與抗體的胺基酸殘基(譬如，胺基及硫醇反應基)反應的基團，例如順丁烯二醯亞胺或其他活化酯基團。
在一個具體例中，本發明的CNT為基礎之FET感測器為一種單分子(譬如，紫杉醇)感測裝置，其包括一第一電極及一第二電極。一種碳奈米管(譬如，單壁碳奈米管(SWNT)分別連接至該第一電極及第二電極。該裝置包括具有第一及第二官能基之至少一種連接子分子，該至少一種連接子分子具有第一官能基非共價地偶合至碳奈米管的側壁。一種單感測分子(譬如，紫杉醇抗體)具有至少一種官能基，該單感測分子之至少一種官能基能與該至少一種連接子分子之第二官能基反應。
在此一具體例中，單分子感測裝置為帶有偶合的抗體作為電路之"閘極"的一種場效電晶體。在此具體例中，一種單感測分子使用作為裝置的單分子閘極。電晶體具體例可以包括二或三端電晶體。該裝置的導電通道亦可以由金屬、金屬氧化物、半導體，或奈米級導體例如奈米線、石墨烯或碳奈米管形成。在某些具體例中，導電通道為一種單碳奈米管(譬如，SWNT)。
於本發明的實施方面，該碳奈米管側壁的暴露部件係以連接子分子之一或更多官能基予以非共價地功能化。一種碳奈米管非共價地功能化的方法為本技藝熟知的，以及本發明包括以稀釋塗層塗覆碳奈米管之任何合適的方法。完成稀釋塗層包括(a)製備一種含有連接子分子的溶液，(b)浸泡含有暴露的碳奈米管之製備裝置於含有連接子分子之製備溶液內，(c)沖洗裝置以去除過量的連接子分子，(d)沖洗裝置以去除過量的試劑，以及(e)在流動的去離子水下沖洗裝置。
一般而言，選擇碳奈米管的暴露部件的尺寸以使得於統計上，製造的裝置只有少量的(譬如1至1,000)連接子分子與碳奈米管締合。影響與碳奈米管締合之連接子分子數目(且因此感測分子可能的附著位址)的參數包括碳奈米管長度、連接子分子的性質、孵育時間以及連接子分子的濃度。一般而言，更短的孵育時間或更低的連接子分子濃度轉變成碳奈米管上較少的締合位址。
連接子分子附著之後，該裝置接著接觸一種感測分子溶液(譬如，抗體)。感測分子的性質、特定的附著化學作用(譬如，順丁烯二醯亞胺-對-硫醇)、溶液的性質(譬如，pH、溫度、鹽及界面活性劑的濃度)、孵育時間以及感測分子的濃度會影響成功結合連接子的感測分子產量。實施例1說明一種用於偶合抗體與CNT為基礎之FET裝置之代表性程序。 使用以抗體-功能化碳奈米管為基礎之場效電晶體的免疫測定的方法
於另一個態樣中，本發明提供一種紫杉醇抗體-功能化碳奈米管場效電晶體感測器，其對於偵測及定量一生理樣本內的紫杉醇是有效的。於本態樣中，本發明提供一種偵測一生理樣本內紫杉醇之方法。
在一個具體例中，該方法包含使含有紫杉醇的一樣本與本文所述之以抗體-功能化碳奈米管場效電晶體感測器接觸。
該方法可有效判定樣本內自約20 pM至約100 nM的濃度之紫杉醇。在某些具體例中，紫杉醇濃度係自約1至約10 nM。
合適的生理樣本包括血液及血液產生物，例如血漿及血清。 代表性以抗體-功能化碳奈米管為基礎之場效電晶體及相關的免疫測定
建立及評估奈米管為基礎之紫杉醇感測器。3C6抗體附著至個別的奈米管及奈米管膜，以及產生電信號並比較來自二種狀況的電信號。
於單分子的狀況，紫杉醇與抗體之結合及未結合產生兩個不同位準的時變信號。結果，電信號代表單分子結合及未結合事件的即時記錄。事件的數目取決於紫杉醇的濃度，結合事件於低濃度下很少見且未結合於高濃度下很少見。使用比較器電路校正以列舉此等事件，監測紫杉醇降至濃度20 pM。
包含5至500個抗體分子之感測器實現的靈敏度較差。喪失了個別結合事件的即時靈敏度，以及100個抗體分子產生的總信號幅度實質上不大於單一抗體產生的信號。
結果，喪失了時間解析度但信號幅度沒有任何補償性改善。時間平均信號係用於偵測高濃度的紫杉醇(＞10 nM)，以及校正的感測估計有可能在10 nM降至約500 pM的有限動態範圍。
結果展現出紫杉醇的單分子感測可以使用碳奈米管電晶體來完成。單分子解析度提供關於紫杉醇結合動力學、不同抗體複本之間的變異性及集體感測器內作用的機制詳細的資料。原理驗證(Proof-of-principle)裝置係以20 pM至100 nM(單分子)及1至10 nM(集體)之動態範圍運作。
抗體附著至碳奈米管電晶體。生物功能化程序係改編自其他蛋白質之操作。使芘-順丁烯二醯亞胺連接子黏著至乾淨的二氧化矽(SiO2 )表面上的單壁碳奈米管(SWNTs)，然後半胱胺酸-順丁烯二醯亞胺反應予以複合(conjugated)抗體至SWNT側壁。
使用解析度0.4 nm的原子力顯微術(AFM)來直接成像並計數專一性附著之抗體數目。藉由稀釋抗體於磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)內至約15 µg/mL然後於室溫下以稀釋溶液孵育表面30分鐘且不搖動，來獲得合理的附著產量。
使用順丁烯二醯亞胺化學作用可以接受的附著產量需要活性半胱胺酸基團。抗體老化導致產量減少此可歸因於半胱胺酸氧化作用。使用已經儲存於4 ℃不到1個月的抗體可獲得可再現的產量；儲存3個月之後沒有成功的附著發生。此等數值可比得上商業供應商(Abcam7)提供的儲存壽命。
一旦已經修改附著程序以符合所欲的功能化表面密度，便於場效電晶體(FET)裝置內電氣連接的SWNTs上重複步驟。此等裝置係使用本技藝已知的標準技術來製造。各SWNT FET係於生物功能化之前藉由AFM予以成像以確認沒有(譬如，來自平版印刷加工)污染物以及再次於生物功能化之後判定新近附著分子的數目。
圖3顯示以多個3C6抗體標記的二個SWNT FET裝置。影像顯示各SWNT上抗體的數目比非專一性附著至二氧化矽表面的背景濃度高得多，表示經由芘-順丁烯二醯亞胺連接子方案可以接受的專一性。
圖3圖示出每µm為5-10個分子之附著產量且每個附著分子的視高變異性很大。
使用商業抗體3C6及8A10，其含有多個表面半胱胺酸，且影像符合多個可能的附著位址及附著定向。
用AFM技術成功後，於多重連接的SWNTs及SWNT膜上重複功能化方案。SWNT膜內表面的無序妨礙了個別抗體的單分子解析度，所以從單一-SWNT平均來估計附著的絕對數目。
由抗體結合產生的信號。測量如上所述所製備的裝置以判定其等對紫杉醇之電子靈敏度。首先，使裝置的有效區浸入懸浮於磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)內之特定濃度的紫杉醇中。以聚(甲基丙烯酸甲酯) (PMMA)聚合物層來保護平版印刷電極，所以只有SWNTs及其等附著之抗體接觸溶液。將微小的電位(0-100 mV)施加至源極端，驅動10-100 nA範圍的DC電流。FET後閘極及電極提供二額外的端子用於控制電流設定點。記錄電流I(t)持續幾分鐘，同時裝置接觸不同的測試溶液。
第一個目標是要判定紫杉醇結合及未結合是否會產生I(t)的變化。3C6之結合親和力據報告是KD = 10 nM，所以用此範圍的紫杉醇的濃度來探測裝置。
圖4顯示單分子裝置的代表性數據子集。在缺少紫杉醇之下，I(t)穩定在大約35 nA(圖4A)，加上SWNTs於溶液內典型的噪音頻帶。
當添加濃度0.2 nM及2 nM的紫杉醇，I(t)發生越來越多自35 nA基線高至約55 nA離散的躍升(圖4B及4C)。此等偏移可能代表紫杉醇與抗體-FET混合(hybrid)裝置個別的結合及未結合事件。紫杉醇的濃度增加至200 nM(即，20 KD)使電流固定在更高的、55 nA位準(圖4D)。於此濃度下，觀察到非常少的未結合事件且電流代表結合的抗體-紫杉醇複合物。
圖5為高倍放大信號，其圖解更快的速度之二位準波動的清晰度。信號獲取之後，使用調整到二位準之間的中點之數位濾波器及比較器來將原始數據轉變成更簡單的、二進制信號。二進制信號使各事件自動分析簡化，允許可個別研究結合及未結合期間或任何濃度的機率分布。在這個數據中，舉例而言，二進制信號闡明於僅僅60 ms內發生的17個結合事件產生280 s-1 之平均週轉率(turnover rate)。在這個數據中結合狀態比未結合狀態為大概2:1的比例是很有可能的。結合狀態期間遵循卜瓦松(Poisson)機率分布且平均壽命為大概2.5 ms。
相似的分析應用於不同的紫杉醇濃度獲得的數據集。週轉率、結合狀態壽命及結合狀態機率之平均的單分子動力學數值係各自藉由10分鐘數據記錄之半自動化分析來判定。圖6A顯示一種3C6分子之結合及未結合壽命的濃度依賴性的實例。在KD 以下，結合事件的期間大致固定在0.2至0.5 ms。另一方面，未結合數目和濃度成比例地減少且導致平均未結合時間增加為長的期間。在KD 以上，開啟了不同的機制。結合的期間戲劇性地延長，暗示抗體附近擁擠的紫杉醇抑制單分子釋放事件。於最高的濃度下，未結合狀態具有0.1 ms以下的平均期間，因為過量的紫杉醇很容易被抗體結合。圖6B圖解此等瞬間動力學對於平均週轉率之效應。接近KD 之速率超過1000 s-1以及當抗體主要困在其結合或未結合構形時，降到10 s-1 之下。
為了紫杉醇感測的目的，此等參數任一者可以成功地使用來判定紫杉醇的濃度。於非常低的濃度下，紫杉醇分子擴散限制到達(diffusion-limited arrival)非常好的代理物是未結合狀態的期間。測試延伸至20 pM的濃度，但是可以用相同技術來探測更低的濃度。更接近KD ，週轉率之指數上升暗示分析類型會是靈敏的濃度指標。
奈米管膜感測的集體(ensemble)。電氣測試集中在小量抗體的集體。
實驗使用圖3相似的裝置，除了於非常稀釋膜內有多個SWNTs。該構形允許許多抗體要同時被暴露以產生自10至1000個分子之擬集體的(quasi-ensemble)信號。
圖7顯示一種裝置對溶液內存在或缺少紫杉醇之代表性反應。測量說明半導體SWNT FETs對於電解質電位VG 及紫杉醇結合二者之靈敏情況。I(VG )電晶體特徵的形狀主要由SWNT裝置物理學來決定，但是絕對x軸位置係由SWNT附近的局部(分子)電荷來確定。於此實施例中，添加至測量溶液的紫杉醇使I(VG )特徵沿著x軸向左位移50-70 mV。圖5插入的圖描繪相同的資訊於對數軸上，顯示FET的截止閾值附近能獲得增強的靈敏度。科學文獻處處都有描述相似的位移及適度的變化。
提供下列的實施例進一步說明本發明，但不是限制本發明。 實施例 代表性抗體-功能化CNT為基礎之FET感測器
於此實施例中，描述一種製備本發明的抗體-功能化CNT為基礎之FET感測器之代表性方法。
碳奈米管功能化。於此實施例中，使用芘順丁烯二醯亞胺作為連接子分子。已知芘官能基會非共價功能化一種碳奈米管側壁。製備一種配於乙醇之1 mM N-(1-芘基)順丁烯二醯亞胺溶液。使裝置浸泡在配於乙醇之1 mM N-(1-芘基)順丁烯二醯亞胺溶液內30分鐘沒有攪拌。用配於乙醇之0.1%聚山梨醇酯20清洗裝置30分鐘伴隨搖動以去除過量的1 mM N (1-芘基)順丁烯二醯亞胺。裝置繼而於一種配於乙醇之50%聚山梨醇酯20(0.1%)溶液及50%磷酸鹽緩衝液(20 mM Na2 HPO4 ，pH 7)沖洗十分鐘沒有搖動以去除過量的試劑。裝置最後在流動的去離子水下沖洗5分鐘。
抗體與功能化碳奈米管之偶合。如以上描述所製備的功能化碳奈米管之連接子分子的一或更多官能基，係與紫杉醇抗體的一或更多官能基反應。
雖然業已闡釋及描述本發明的較佳具體例，將可以理解的是，在不背離本發明的精神和範疇的情況下，可以在其中進行各種改變。
本發明之實施例，其中所請求之專屬所有權或特權係如下所界定。
20‧‧‧感測器
22‧‧‧第一電極
24‧‧‧第二電極
26‧‧‧導電通道
26A、26B、26C‧‧‧單壁碳奈米管/導電元件
28‧‧‧紫杉醇抗體或其之功能片段/紫杉醇抗體
28A、28B、28C‧‧‧紫杉醇抗體或其之功能片段
30‧‧‧絕緣體
32‧‧‧氧化矽層
34‧‧‧矽層
36、36A、36B、36C‧‧‧連接子
前述本發明的態樣及許多伴隨的優點將變得顯而易知，因其等在參照下列的詳細說明，結合附圖時將變得更好理解。
圖1A為依據本揭露內容的態樣之一種代表性感測器具體例的側視圖。
圖1B為圖1A所圖示之感測器的頂視圖。
圖2為依據本揭露內容的態樣之另一個代表性感測器具體例的頂視圖。
圖3A及3B圖示3C6抗體(本發明的場效電晶體及方法中有用的代表性紫杉醇抗體)之二個實例附著(箭頭)至單壁碳奈米管(SWNT)場效電晶體(FETs)。各裝置具有一種以多個3C6抗體標記的單一SWNT。各影像的左側及右側顯示PMMA鈍化聚合物層的邊緣。與各SWNT之電氣源極與汲極連接處存在於PMMA底下，超出各影像的界線大概0.5 µm。
圖4A-4D比較來自一種代表性單分子抗體裝置的電信號，使用四種紫杉醇濃度：0 nM(4A)、0.2 nM(4B)、2 nM(4C)及200 nM(4D)。約35及約55 nA之電流位準分別對應於未結合及結合組態。此等二位準之間的波動對應於單一結合及未結合事件。
圖5為3C6抗體於70 nM紫杉醇濃度之代表性結合-未結合動力學之高倍放大圖。
圖6A及6B比較結合及未結合狀態之平均期間(4A)以及C36抗體相對紫杉醇濃度之週轉率(turnover rate) (4B)。
圖7顯示一種代表性集體(ensemble)的電信號，其係由帶有多個抗體的SWNT FETs所感測。各陰影部分顯示於小滴的磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)或有紫杉醇的PBS內測得的多重覆蓋的I(VG)特徵。數據係以鉑線計數器及參考電極、透過升高電化學液體電位而於VSD = 50 mV獲取。插入的圖顯示相同的數據於半對數軸。
【序列表】<110> 奧托德里克有限公司 <120> 以抗體-功能化碳奈米管為基礎之場效電晶體及其於紫杉醇免疫測定之用途<130> ATLC-1-58790<150> US 62/344,431<151> 2016-06-02<160> 248 <170> PatentIn版本3.5<210> 1<211> 11<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<220><221> 其他特徵<222> (3)..(3)<223> 其中位置3的X是S或V<220><221> 其他特徵<222> (5)..(5)<223> 其中位置5的X是N、T、D、M、R或K<220><221> 其他特徵<222> (7)..(7)<223> 其中位置7的X是G或F<220><221> 其他特徵<222> (9)..(9)<223> 其中位置9的X是A、P或R<220><221> 其他特徵<222> (11)..(11)<223> 其中位置11的X是T、N或A<400> 1Lys Pro Xaa Gln Xaa Val Xaa Ser Xaa Val Xaa 1 5 10 <210> 2<211> 7<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<220><221> 其他特徵<222> (1)..(1)<223> 其中位置1的X是S或Y<220><221> 其他特徵<222> (2)..(2)<223> 其中位置2的X是A、H或T<220><221> 其他特徵<222> (3)..(3)<223> 其中位置3的X是S或T<220><221> 其他特徵<222> (4)..(4)<223> 其中位置4的X是N或R<220><221> 其他特徵<222> (7)..(7)<223> 其中位置7的X是T、M或R<400> 2Xaa Xaa Xaa Xaa Arg Tyr Xaa 1 5 <210> 3<211> 9<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<220><221> 其他特徵<222> (4)..(4)<223> 其中位置4的X是S或P<220><221> 其他特徵<222> (6)..(6)<223> 其中位置6的X是Y、K、R或V<220><221> 其他特徵<222> (9)..(9)<223> 其中位置9的X是T或R<400> 3Gln Gln Tyr Xaa Ser Xaa Pro Tyr Xaa 1 5 <210> 4<211> 10<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<220><221> 其他特徵<222> (2)..(2)<223> 其中位置2的X是Y或S<220><221> 其他特徵<222> (3)..(3)<223> 其中位置3的X是T或R<220><221> 其他特徵<222> (5)..(5)<223> 其中位置5的X是T、S或H<220><221> 其他特徵<222> (7)..(7)<223> 其中位置7的X是S或Y<220><221> 其他特徵<222> (8)..(8)<223> 其中位置8的X是T或R<220><221> 其他特徵<222> (9)..(9)<223> 其中位置9的X是M或T<220><221> 其他特徵<222> (10)..(10)<223> 其中位置10的X是N或K<400> 4Gly Xaa Xaa Phe Xaa Asp Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 <210> 5<211> 17<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<220><221> 其他特徵<222> (1)..(1)<223> 其中位置1的X是E或K<220><221> 其他特徵<222> (3)..(3)<223> 其中位置3的X是D、F、W或A<220><221> 其他特徵<222> (5)..(5)<223> 其中位置5的X是N、T、M、S、K、W或R<220><221> 其他特徵<222> (6)..(6)<223> 其中位置6的X是N、S、D或R<220><221> 其他特徵<222> (7)..(7)<223> 其中位置7的X是G或L<220><221> 其他特徵<222> (8)..(8)<223> 其中位置8的X是G、W或R<220><221> 其他特徵<222> (9)..(9)<223> 其中位置9的X是T或A<220><221> 其他特徵<222> (10)..(10)<223> 其中位置10的X是N、R或A<220><221> 其他特徵<222> (11)..(11)<223> 其中位置11的X是Y或T<220><221> 其他特徵<222> (14)..(14)<223> 其中位置14的X是K或N<220><221> 其他特徵<222> (16)..(16)<223> 其中位置16的X是K或S<220><221> 其他特徵<222> (17)..(17)<223> 其中位置17的X是G或L<400> 5Xaa Ile Xaa Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Asn Gln Xaa Phe Xaa 1 5 10 15 Xaa <210> 6<211> 6<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<220><221> 其他特徵<222> (3)..(3)<223> 其中位置3的X是G、L或P<220><221> 其他特徵<222> (4)..(4)<223> 其中位置4的X是V、P或S<400> 6Ala Arg Xaa Xaa Trp Gly 1 5 <210> 7<211> 323<212> DNA<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 7gacattgtga tgacccagtc tcaaaaattc atgtccataa cactaggaga gagggtcagc 60atcacctgca agcccagtca gaatgtgggt tctgctgtaa cctggtggca acagaaacca 120ggacaatctc ctaaactact gatttactca gcttccaatc ggtatactgg agtccctgat 180cgcttcacag gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccattagtaa tgtgcagtct 240gaagacctgg cagattattt ctgtcaacaa tatagcagct atccgtacac gttcggaggg 300gggaccaagc tggaaataaa acg 323<210> 8<211> 106<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 8Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Gln Lys Phe Met Ser Ile Thr Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Pro Ser Gln Asn Val Gly Ser Ala 20 25 30 Val Thr Trp Trp Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 9<211> 333<212> DNA<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 9gaggtccagc tgcaacaatc tggacctgaa ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagatt 60tcctgtaagg cttctggata cacgttcact gactccacca tgaactgggt gaagcagagc 120catggaaaga gccttgagtg gattggagag attgatccta acaatggtgg tactaactac 180aatcagaagt tcaagggcaa ggccacattg actgtagaca agtcctccag cacagcctat 240atggagctcc gcagcctgac atctgaggac tctgcagtct attactgtgc aagaggggtc 300tggggccaag gcaccactct cacagtctcc tca 333<210> 10<211> 111<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 10Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Ser 20 25 30 Thr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Asp Pro Asn Asn Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 100 105 110 <210> 11<211> 11<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 11Lys Pro Ser Gln Asn Val Gly Ser Ala Val Thr 1 5 10 <210> 12<211> 11<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 12Lys Pro Ser Gln Asn Val Phe Ser Ala Val Thr 1 5 10 <210> 13<211> 11<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 13Lys Pro Ser Gln Thr Val Gly Ser Ala Val Thr 1 5 10 <210> 14<211> 11<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 14Lys Pro Val Gln Asn Val Gly Ser Ala Val Thr 1 5 10 <210> 15<211> 11<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 15Lys Pro Ser Gln Asn Val Phe Ser Ala Val Thr 1 5 10 <210> 16<211> 11<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 16Lys Pro Ser Gln Asp Val Gly Ser Ala Val Thr 1 5 10 <210> 17<211> 11<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 17Lys Pro Ser Gln Asn Val Phe Ser Ala Val Thr 1 5 10 <210> 18<211> 11<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 18Lys Pro Ser Gln Met Val Gly Ser Ala Val Thr 1 5 10 <210> 19<211> 11<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 19Lys Pro Ser Gln Asn Val Gly Ser Pro Val Asn 1 5 10 <210> 20<211> 11<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 20Lys Pro Ser Gln Arg Val Gly Ser Ala Val Thr 1 5 10 <210> 21<211> 11<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 21Lys Pro Ser Gln Arg Val Gly Ser Ala Val Thr 1 5 10 <210> 22<211> 11<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 22Lys Pro Ser Gln Lys Val Gly Ser Ala Val Thr 1 5 10 <210> 23<211> 11<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 23Lys Pro Ser Gln Asn Val Gly Ser Arg Val Thr 1 5 10 <210> 24<211> 11<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 24Lys Pro Ser Gln Lys Val Gly Ser Ala Val Thr 1 5 10 <210> 25<211> 11<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 25Lys Pro Ser Gln Asn Val Gly Ser Ala Val Asn 1 5 10 <210> 26<211> 11<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 26Lys Pro Ser Gln Asn Val Gly Ser Ala Val Ala 1 5 10 <210> 27<211> 11<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 27Lys Pro Ser Gln Asn Val Gly Ser Arg Val Thr 1 5 10 <210> 28<211> 11<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 28Lys Pro Ser Gln Asn Val Gly Ser Arg Val Thr 1 5 10 <210> 29<211> 11<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 29Lys Pro Val Gln Asn Val Gly Ser Ala Val Thr 1 5 10 <210> 30<211> 11<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 30Lys Pro Ser Gln Lys Val Gly Ser Ala Val Thr 1 5 10 <210> 31<211> 7<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 31Ser Ala Ser Asn Arg Tyr Thr 1 5 <210> 32<211> 7<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 32Ser Ala Thr Asn Arg Tyr Thr 1 5 <210> 33<211> 7<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 33Ser Ala Ser Asn Arg Tyr Met 1 5 <210> 34<211> 7<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 34Tyr Ala Ser Asn Arg Tyr Thr 1 5 <210> 35<211> 7<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 35Ser His Ser Asn Arg Tyr Thr 1 5 <210> 36<211> 7<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 36Ser Thr Ser Asn Arg Tyr Thr 1 5 <210> 37<211> 7<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 37Ser Ala Thr Asn Arg Tyr Thr 1 5 <210> 38<211> 7<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 38Ser Thr Ser Asn Arg Tyr Thr 1 5 <210> 39<211> 7<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 39Ser Ala Ser Arg Arg Tyr Thr 1 5 <210> 40<211> 7<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 40Ser Ala Ser Arg Arg Tyr Thr 1 5 <210> 41<211> 7<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 41Ser Ala Ser Arg Arg Tyr Thr 1 5 <210> 42<211> 7<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 42Ser Ala Ser Arg Arg Tyr Thr 1 5 <210> 43<211> 7<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 43Ser Ala Ser Asn Arg Tyr Arg 1 5 <210> 44<211> 7<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 44Ser Ala Ser Arg Arg Tyr Thr 1 5 <210> 45<211> 9<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 45Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Tyr Thr 1 5 <210> 46<211> 9<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 46Gln Gln Tyr Ser Ser Lys Pro Tyr Thr 1 5 <210> 47<211> 9<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 47Gln Gln Tyr Pro Ser Tyr Pro Tyr Thr 1 5 <210> 48<211> 9<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 48Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Tyr Arg 1 5 <210> 49<211> 9<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 49Gln Gln Tyr Ser Ser Arg Pro Tyr Thr 1 5 <210> 50<211> 9<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 50Gln Gln Tyr Ser Ser Arg Pro Tyr Thr 1 5 <210> 51<211> 9<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 51Gln Gln Tyr Ser Ser Arg Pro Tyr Thr 1 5 <210> 52<211> 9<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 52Gln Gln Tyr Ser Ser Arg Pro Tyr Thr 1 5 <210> 53<211> 9<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 53Gln Gln Tyr Ser Ser Lys Pro Tyr Thr 1 5 <210> 54<211> 9<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 54Gln Gln Tyr Ser Ser Lys Pro Tyr Thr 1 5 <210> 55<211> 9<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 55Gln Gln Tyr Ser Ser Val Pro Tyr Thr 1 5 <210> 56<211> 9<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 56Gln Gln Tyr Ser Ser Arg Pro Tyr Thr 1 5 <210> 57<211> 9<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 57Gln Gln Tyr Ser Ser Lys Pro Tyr Thr 1 5 <210> 58<211> 10<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 58Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Ser Thr Met Asn 1 5 10 <210> 59<211> 10<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 59Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Thr Met Asn 1 5 10 <210> 60<211> 10<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 60Gly Ser Thr Phe Thr Asp Ser Thr Met Asn 1 5 10 <210> 61<211> 10<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 61Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Ser Thr Thr Asn 1 5 10 <210> 62<211> 10<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 62Gly Tyr Thr Phe Ser Asp Ser Thr Met Asn 1 5 10 <210> 63<211> 10<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 63Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Ser Thr Met Lys 1 5 10 <210> 64<211> 10<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 64Gly Tyr Arg Phe Thr Asp Ser Thr Met Asn 1 5 10 <210> 65<211> 10<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 65Gly Tyr Thr Phe His Asp Ser Thr Met Asn 1 5 10 <210> 66<211> 10<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 66Gly Tyr Arg Phe Thr Asp Ser Thr Met Asn 1 5 10 <210> 67<211> 10<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 67Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Ser Arg Met Asn 1 5 10 <210> 68<211> 17<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 68Glu Ile Asp Pro Asn Asn Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 69<211> 8<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 69Glu Ile Asp Pro Asn Asn Gly Gly 1 5 <210> 70<211> 8<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 70Glu Ile Asp Pro Thr Asn Gly Gly 1 5 <210> 71<211> 8<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 71Glu Ile Asp Pro Asn Asn Leu Gly 1 5 <210> 72<211> 8<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 72Glu Ile Asp Pro Asn Asn Gly Trp 1 5 <210> 73<211> 8<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 73Glu Ile Asp Pro Asn Ser Gly Gly 1 5 <210> 74<211> 8<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 74Lys Ile Asp Pro Asn Asn Gly Gly 1 5 <210> 75<211> 8<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 75Glu Ile Asp Pro Met Asn Gly Gly 1 5 <210> 76<211> 8<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 76Glu Ile Asp Pro Asn Asp Gly Gly 1 5 <210> 77<211> 8<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 77Glu Ile Asp Pro Ser Asn Gly Gly 1 5 <210> 78<211> 8<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 78Glu Ile Asp Pro Lys Asn Gly Gly 1 5 <210> 79<211> 8<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 79Glu Ile Asp Pro Trp Asn Gly Gly 1 5 <210> 80<211> 8<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 80Glu Ile Asp Pro Arg Asn Gly Gly 1 5 <210> 81<211> 8<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 81Glu Ile Asp Pro Asn Asn Gly Arg 1 5 <210> 82<211> 8<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 82Glu Ile Asp Pro Arg Asn Gly Gly 1 5 <210> 83<211> 8<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 83Glu Ile Asp Pro Trp Asn Gly Gly 1 5 <210> 84<211> 8<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 84Glu Ile Phe Pro Asn Asn Gly Gly 1 5 <210> 85<211> 8<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 85Glu Ile Phe Pro Asn Asn Gly Gly 1 5 <210> 86<211> 8<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 86Glu Ile Trp Pro Asn Asn Gly Gly 1 5 <210> 87<211> 8<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 87Glu Ile Ala Pro Asn Asn Gly Gly 1 5 <210> 88<211> 8<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 88Glu Ile Asp Pro Asn Arg Gly Gly 1 5 <210> 89<211> 8<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 89Glu Ile Trp Pro Asn Asn Gly Gly 1 5 <210> 90<211> 8<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 90Glu Ile Asp Pro Asn Asn Gly Trp 1 5 <210> 91<211> 9<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 91Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Gly 1 5 <210> 92<211> 9<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 92Thr Arg Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Gly 1 5 <210> 93<211> 9<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 93Thr Asn Thr Asn Gln Lys Phe Lys Gly 1 5 <210> 94<211> 9<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 94Ala Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Gly 1 5 <210> 95<211> 9<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 95Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Ser Gly 1 5 <210> 96<211> 9<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 96Thr Asn Tyr Asn Gln Asn Phe Lys Gly 1 5 <210> 97<211> 9<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 97Thr Ala Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Gly 1 5 <210> 98<211> 9<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 98Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Leu 1 5 <210> 99<211> 6<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 99Ala Arg Gly Val Trp Gly 1 5 <210> 100<211> 6<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 100Ala Ala Arg Val Trp Gly 1 5 <210> 101<211> 6<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 101Ala Arg Gly Pro Trp Gly 1 5 <210> 102<211> 6<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 102Ala Arg Pro Val Trp Gly 1 5 <210> 103<211> 6<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 103Ala Arg Gly Ser Trp Gly 1 5 <210> 104<211> 11<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 104Lys Pro Ser Gln Lys Val Gly Ser Arg Val Thr 1 5 10 <210> 105<211> 11<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 105Lys Pro Ser Gln Arg Val Gly Ser Arg Val Thr 1 5 10 <210> 106<211> 11<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 106Lys Pro Ser Gln Lys Val Gly Ser Ala Val Thr 1 5 10 <210> 107<211> 11<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 107Lys Pro Ser Gln Lys Val Gly Ser Ala Val Thr 1 5 10 <210> 108<211> 11<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 108Lys Pro Ser Gln Lys Val Gly Ser Arg Val Thr 1 5 10 <210> 109<211> 11<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 109Lys Pro Ser Gln Lys Val Gly Ser Arg Val Thr 1 5 10 <210> 110<211> 11<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 110Lys Pro Ser Gln Lys Val Gly Ser Ala Val Thr 1 5 10 <210> 111<211> 7<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 111Ser Ala Ile Asn Arg Tyr Thr 1 5 <210> 112<211> 7<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 112Ser Thr Ile Asn Arg Tyr Thr 1 5 <210> 113<211> 7<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 113Ser Thr Asn Asn Arg Tyr Thr 1 5 <210> 114<211> 7<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 114Ser Thr Ile Arg Arg Tyr Thr 1 5 <210> 115<211> 7<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 115Ser Ala Asn Asn Arg Tyr Thr 1 5 <210> 116<211> 7<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 116Ser Thr Asn Asn Arg Tyr Thr 1 5 <210> 117<211> 7<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 117Ser Ala Asn Arg Arg Tyr Thr 1 5 <210> 118<211> 10<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 118Gly Tyr Arg Phe Thr Asp Ser Thr Met Asn 1 5 10 <210> 119<211> 10<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 119Gly Tyr Arg Phe Thr Asp Ser Thr Met Asn 1 5 10 <210> 120<211> 10<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 120Gly Tyr Arg Phe Thr Asp Ser Thr Met Asn 1 5 10 <210> 121<211> 10<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 121Gly Tyr Arg Phe Thr Asp Ser Thr Met Asn 1 5 10 <210> 122<211> 10<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 122Gly Tyr Arg Phe Thr Asp Ser Thr Met Asn 1 5 10 <210> 123<211> 10<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 123Gly Tyr Arg Phe Thr Asp Ser Thr Met Asn 1 5 10 <210> 124<211> 10<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 124Gly Tyr Arg Phe Thr Asp Ser Thr Met Asn 1 5 10 <210> 125<211> 17<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 125Glu Ile Trp Pro Asn Asn Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 126<211> 17<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 126Glu Ile Phe Pro Asn Asn Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 127<211> 17<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 127Glu Ile Phe Pro Asn Asn Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 128<211> 17<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 128Glu Ile Asp Pro Asn Asn Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 129<211> 17<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 129Glu Ile Phe Pro Asn Asn Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 130<211> 17<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 130Glu Ile Trp Pro Asn Asn Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 131<211> 17<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 131Glu Ile Trp Pro Asn Asn Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 132<211> 17<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 132Glu Ile Phe Pro Asn Asn Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 133<211> 16<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<220><221> 其他特徵<222> (1)..(1)<223> 其中位置1的X是R或H<220><221> 其他特徵<222> (3)..(3)<223> 其中位置3的X是R、G或N<220><221> 其他特徵<222> (5)..(5)<223> 其中位置5的X是S、M或G<220><221> 其他特徵<222> (7)..(7)<223> 其中位置7的X是V或L<220><221> 其他特徵<222> (9)..(9)<223> 其中位置9的X是S或I<220><221> 其他特徵<222> (10)..(10)<223> 其中位置10的X是N或V<220><221> 其他特徵<222> (13)..(13)<223> 其中位置13的X是T或S <220><221> 其他特徵<222> (15)..(15)<223> 其中位置15的X是L或W<400> 133Xaa Ser Xaa Gln Xaa Leu Xaa His Xaa Xaa Gly Asn Xaa Tyr Xaa His 1 5 10 15 <210> 134<211> 7<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<220><221> 其他特徵<222> (1)..(1)<223> 其中位置1的X是K或N<220><221> 其他特徵<222> (4)..(4)<223> 其中位置4的X是N或R<220><221> 其他特徵<222> (5)..(5)<223> 其中位置5的X是R或L<220><221> 其他特徵<222> (6)..(6)<223> 其中位置6的X是F或R<400> 134Xaa Val Ser Xaa Xaa Xaa Ser 1 5 <210> 135<211> 9<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<220><221> 其他特徵<222> (2)..(2)<223> 其中位置2的X是Q或P<220><221> 其他特徵<222> (6)..(6)<223> 其中位置6的X是V或G<220><221> 其他特徵<222> (7)..(7)<223> 其中位置7的X是P或S<220><221> 其他特徵<222> (9)..(9)<223> 其中位置9的X是T或R<400> 135Ser Xaa Ser Thr His Xaa Xaa Pro Xaa 1 5 <210> 136<211> 10<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<220><221> 其他特徵<222> (1)..(1)<223> 其中位置1的X是G或P<220><221> 其他特徵<222> (6)..(6)<223> 其中位置6的X是S或I<220><221> 其他特徵<222> (9)..(9)<223> 其中位置9的X是W或F<220><221> 其他特徵<222> (10)..(10)<223> 其中位置10的X是N、R或K<400> 136Xaa Asp Ser Ile Thr Xaa Gly Tyr Xaa Xaa 1 5 10 <210> 137<211> 16<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<220><221> 其他特徵<222> (1)..(1)<223> 其中位置1的X是Y或F<220><221> 其他特徵<222> (5)..(5)<223> 其中位置5的X是S、R或T<220><221> 其他特徵<222> (7)..(7)<223> 其中位置7的X是S或D<220><221> 其他特徵<222> (8)..(8)<223> 其中位置8的X是T或I<220><221> 其他特徵<222> (10)..(10)<223> 其中位置10的X是Y或F<220><221> 其他特徵<222> (11)..(11)<223> 其中位置11的X是N或K<220><221> 其他特徵<222> (13)..(13)<223> 其中位置13的X是S或F<220><221> 其他特徵<222> (16)..(16)<223> 其中位置16的X是S或N<400> 137Xaa Ile Ser Tyr Xaa Gly Xaa Xaa Tyr Xaa Xaa Pro Xaa Leu Lys Xaa 1 5 10 15 <210> 138<211> 5<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<220><221> 其他特徵<222> (1)..(1)<223> 其中位置1的X是G、A或E<220><221> 其他特徵<222> (2)..(2)<223> 其中位置2的X是D或W<220><221> 其他特徵<222> (3)..(3)<223> 其中位置3的X是G或T<220><221> 其他特徵<222> (4)..(4)<223> 其中位置4的X是A、D、G或Q<400> 138Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr 1 5 <210> 139<211> 337<212> DNA<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 139gatgttgtga tgacccaaac tccactctcc ctgcctgtca gtctgggaga tcaagcctcc 60atctcttgca gatctcgtca gagccttgta cacagtaatg gaaacaccta tttacattgg 120tacctgcaga agccaggcca gtctccaaag ctcctgatct acaaagtttc caaccgattt 180tctggggtcc cagacaggtt cagtggtagt ggatcaggga cagaattcac actcgagatc 240agcagagtgg aggctgagga tctgggagtt tatttctgct ctcaaagtac acatgttcct 300ccgacgttcg gtggaggcac caagctggaa atcaaac 337<210> 140<211> 112<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 140Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Arg Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Glu Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 141<211> 339<212> DNA<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 141gaggtgcagc ttcaggagtc gggacctagt ctcgtgaaac cttctcagac tctgtccctc 60acctgttctg tcactggcga ctccatcacc agtggttact ggaactggat ccggaaattc 120ccagggaata gacttgagta catggggtac ataagctaca gtggtagcac ttactacaat 180ccgtctctca aaagtcgaat ctccatcact cgagacacat ccaagaacca gtactaccta 240catttgactt ctgtgactac tgaggacaca gccacatatt actgtgccca aggggatggc 300gcctactggg gccaaggcac cactctcaca gtctcctca 339<210> 142<211> 113<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 142Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly 20 25 30 Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Lys Phe Pro Gly Asn Arg Leu Glu Tyr Met 35 40 45 Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Tyr Leu 65 70 75 80 His Leu Thr Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Gln Gly Asp Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser 100 105 110 Ser <210> 143<211> 16<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 143Arg Ser Arg Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His 1 5 10 15 <210> 144<211> 8<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 144Arg Ser Arg Gln Ser Leu Val His 1 5 <210> 145<211> 8<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 145Arg Ser Arg Gln Met Leu Val His 1 5 <210> 146<211> 8<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 146Arg Ser Arg Gln Ser Leu Leu His 1 5 <210> 147<211> 8<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 147His Ser Arg Gln Ser Leu Val His 1 5 <210> 148<211> 8<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 148Arg Ser Gly Gln Ser Leu Val His 1 5 <210> 149<211> 8<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 149Arg Ser Asn Gln Ser Leu Val His 1 5 <210> 150<211> 8<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 150Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His 1 5 <210> 151<211> 8<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 151Ser Asn Gly Asn Ser Tyr Leu His 1 5 <210> 152<211> 8<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 152Ile Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His 1 5 <210> 153<211> 8<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 153Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Trp His 1 5 <210> 154<211> 8<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 154Ser Val Gly Asn Thr Tyr Leu His 1 5 <210> 155<211> 7<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 155Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser 1 5 <210> 156<211> 7<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 156Asn Val Ser Asn Arg Phe Ser 1 5 <210> 157<211> 7<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 157Lys Val Ser Arg Arg Phe Ser 1 5 <210> 158<211> 7<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 158Lys Val Ser Asn Arg Arg Ser 1 5 <210> 159<211> 7<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 159Lys Val Ser Asn Leu Phe Ser 1 5 <210> 160<211> 9<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 160Ser Gln Ser Thr His Val Pro Pro Thr 1 5 <210> 161<211> 9<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 161Ser Gln Ser Thr His Val Ser Pro Thr 1 5 <210> 162<211> 9<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 162Ser Gln Ser Thr His Val Pro Pro Arg 1 5 <210> 163<211> 9<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 163Ser Gln Ser Thr His Gly Pro Pro Thr 1 5 <210> 164<211> 9<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 164Ser Pro Ser Thr His Val Pro Pro Thr 1 5 <210> 165<211> 9<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 165Ser Gln Ser Thr His Val Ser Pro Thr 1 5 <210> 166<211> 10<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 166Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly Tyr Trp Asn 1 5 10 <210> 167<211> 10<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 167Pro Asp Ser Ile Thr Ser Gly Tyr Trp Asn 1 5 10 <210> 168<211> 10<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 168Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly Tyr Trp Arg 1 5 10 <210> 169<211> 10<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 169Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly Tyr Phe Asn 1 5 10 <210> 170<211> 10<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 170Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly Tyr Trp Lys 1 5 10 <210> 171<211> 10<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 171Gly Asp Ser Ile Thr Ile Gly Tyr Trp Asn 1 5 10 <210> 172<211> 16<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 172Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 173<211> 8<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 173Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr 1 5 <210> 174<211> 8<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 174Phe Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr 1 5 <210> 175<211> 8<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 175Tyr Ile Ser Tyr Arg Gly Ser Thr 1 5 <210> 176<211> 8<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 176Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Ile 1 5 <210> 177<211> 8<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 177Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Asp Thr 1 5 <210> 178<211> 8<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 178Tyr Ile Ser Tyr Thr Gly Ser Thr 1 5 <210> 179<211> 8<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 179Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 1 5 <210> 180<211> 8<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 180Tyr Tyr Lys Pro Ser Leu Lys Ser 1 5 <210> 181<211> 8<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 181Tyr Tyr Asn Pro Phe Leu Lys Ser 1 5 <210> 182<211> 8<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 182Tyr Phe Asn Pro Ser Leu Lys Ser 1 5 <210> 183<211> 8<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 183Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Asn 1 5 <210> 184<211> 5<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 184Gly Asp Gly Ala Tyr 1 5 <210> 185<211> 5<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 185Gly Asp Gly Asp Tyr 1 5 <210> 186<211> 5<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 186Gly Asp Thr Ala Tyr 1 5 <210> 187<211> 5<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 187Ala Asp Gly Ala Tyr 1 5 <210> 188<211> 5<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 188Gly Trp Gly Ala Tyr 1 5 <210> 189<211> 5<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 189Glu Asp Gly Ala Tyr 1 5 <210> 190<211> 107<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 190Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Gln Lys Phe Met Ser Ile Thr Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Pro Ser Gln Lys Val Gly Ser Arg 20 25 30 Val Thr Trp Trp Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ile Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 191<211> 107<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 191Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Gln Lys Phe Met Ser Ile Thr Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Pro Ser Gln Arg Val Gly Ser Arg 20 25 30 Val Thr Trp Trp Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Thr Ile Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 192<211> 107<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 192Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Gln Lys Phe Met Ser Ile Thr Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Pro Ser Gln Lys Val Gly Ser Ala 20 25 30 Val Thr Trp Trp Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Thr Asn Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 193<211> 107<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 193Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Gln Lys Phe Met Ser Ile Thr Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Pro Ser Gln Asn Val Gly Ser Ala 20 25 30 Val Thr Trp Trp Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 194<211> 107<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 194Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Gln Lys Phe Met Ser Ile Thr Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Pro Ser Gln Lys Val Gly Ser Ala 20 25 30 Val Thr Trp Trp Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Thr Ile Arg Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 195<211> 107<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 195Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Gln Lys Phe Met Ser Ile Thr Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Pro Ser Gln Lys Val Gly Ser Arg 20 25 30 Val Thr Trp Trp Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Asn Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 196<211> 107<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 196Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Gln Lys Phe Met Ser Ile Thr Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Pro Ser Gln Lys Val Gly Ser Arg 20 25 30 Val Thr Trp Trp Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Thr Asn Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 197<211> 107<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 197Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Gln Lys Phe Met Ser Ile Thr Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Pro Ser Gln Lys Val Gly Ser Ala 20 25 30 Val Thr Trp Trp Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Asn Arg Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 198<211> 111<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 198Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Arg Phe Thr Asp Ser 20 25 30 Thr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Trp Pro Asn Asn Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 100 105 110 <210> 199<211> 111<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 199Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Arg Phe Thr Asp Ser 20 25 30 Thr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Phe Pro Asn Asn Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 100 105 110 <210> 200<211> 111<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 200Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Arg Phe Thr Asp Ser 20 25 30 Thr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Phe Pro Asn Asn Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 100 105 110 <210> 201<211> 111<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 201Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Ser 20 25 30 Thr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Asp Pro Asn Asn Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 100 105 110 <210> 202<211> 111<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 202Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Arg Phe Thr Asp Ser 20 25 30 Thr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Phe Pro Asn Asn Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 100 105 110 <210> 203<211> 111<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 203Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Arg Phe Thr Asp Ser 20 25 30 Thr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Trp Pro Asn Asn Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 100 105 110 <210> 204<211> 111<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 204Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Arg Phe Thr Asp Ser 20 25 30 Thr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Trp Pro Asn Asn Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 100 105 110 <210> 205<211> 111<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 205Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Arg Phe Thr Asp Ser 20 25 30 Thr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Phe Pro Asn Asn Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 100 105 110 <210> 206<211> 112<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 206Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Arg Gln Met Leu Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Glu Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 207<211> 112<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 207Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Arg Gln Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Glu Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 208<211> 112<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 208Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys His Ser Arg Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Glu Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 209<211> 112<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 209Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Gly Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Glu Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 210<211> 112<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 210Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Asn Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Glu Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 211<211> 109<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 211Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Gln Ala Ser Ile Arg Ser Arg Gln Ser Val His Ser Asn Gly Asn 20 25 30 Ser Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu 35 40 45 Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Glu Ile Ser Arg Val 65 70 75 80 Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser Thr His Val 85 90 95 Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 212<211> 112<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 212Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Arg Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Glu Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 213<211> 112<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 213Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Arg Gln Ser Leu Val His Ile 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Glu Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 214<211> 112<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 214Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Arg Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Trp His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Glu Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 215<211> 112<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 215Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Arg Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30 Val Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Glu Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 216<211> 112<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 216Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Arg Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asn Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Glu Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 217<211> 112<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 217Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Arg Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Arg Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Glu Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 218<211> 112<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 218Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Arg Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Arg Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Glu Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 219<211> 112<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 219Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Arg Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Glu Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 220<211> 112<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 220Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Arg Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Leu Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Glu Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 221<211> 112<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 221Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Arg Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Glu Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Val Ser Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 222<211> 112<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 222Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Arg Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Glu Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Val Pro Pro Arg Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 223<211> 112<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 223Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Arg Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Glu Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Gly Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 224<211> 112<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 224Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Arg Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Glu Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Pro Ser 85 90 95 Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 225<211> 112<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 225Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Arg Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Glu Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Val Ser Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 226<211> 112<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 226Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Pro Asp Ser Ile Thr Ser Gly 20 25 30 Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Lys Pro Gly Asn Arg Leu Glu Tyr Met Gly 35 40 45 Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 50 55 60 Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Tyr Leu His 65 70 75 80 Leu Thr Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gln 85 90 95 Gly Asp Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 100 105 110 <210> 227<211> 112<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 227Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly 20 25 30 Tyr Trp Arg Trp Ile Arg Lys Pro Gly Asn Arg Leu Glu Tyr Met Gly 35 40 45 Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 50 55 60 Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Tyr Leu His 65 70 75 80 Leu Thr Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gln 85 90 95 Gly Asp Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 100 105 110 <210> 228<211> 112<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 228Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly 20 25 30 Tyr Phe Asn Trp Ile Arg Lys Pro Gly Asn Arg Leu Glu Tyr Met Gly 35 40 45 Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 50 55 60 Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Tyr Leu His 65 70 75 80 Leu Thr Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gln 85 90 95 Gly Asp Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 100 105 110 <210> 229<211> 112<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 229Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly 20 25 30 Tyr Trp Lys Trp Ile Arg Lys Pro Gly Asn Arg Leu Glu Tyr Met Gly 35 40 45 Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 50 55 60 Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Tyr Leu His 65 70 75 80 Leu Thr Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gln 85 90 95 Gly Asp Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 100 105 110 <210> 230<211> 112<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 230Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ile Gly 20 25 30 Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Lys Pro Gly Asn Arg Leu Glu Tyr Met Gly 35 40 45 Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 50 55 60 Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Tyr Leu His 65 70 75 80 Leu Thr Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gln 85 90 95 Gly Asp Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 100 105 110 <210> 231<211> 112<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 231Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly 20 25 30 Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Lys Pro Gly Asn Arg Leu Glu Tyr Met Gly 35 40 45 Phe Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 50 55 60 Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Tyr Leu His 65 70 75 80 Leu Thr Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gln 85 90 95 Gly Asp Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 100 105 110 <210> 232<211> 112<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 232Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly 20 25 30 Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Lys Pro Gly Asn Arg Leu Glu Tyr Met Gly 35 40 45 Tyr Ile Ser Tyr Arg Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 50 55 60 Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Tyr Leu His 65 70 75 80 Leu Thr Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gln 85 90 95 Gly Asp Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 100 105 110 <210> 233<211> 112<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 233Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly 20 25 30 Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Lys Pro Gly Asn Arg Leu Glu Tyr Met Gly 35 40 45 Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Ile Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 50 55 60 Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Tyr Leu His 65 70 75 80 Leu Thr Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gln 85 90 95 Gly Asp Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 100 105 110 <210> 234<211> 112<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 234Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly 20 25 30 Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Lys Pro Gly Asn Arg Leu Glu Tyr Met Gly 35 40 45 Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Asp Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 50 55 60 Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Tyr Leu His 65 70 75 80 Leu Thr Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gln 85 90 95 Gly Asp Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 100 105 110 <210> 235<211> 112<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 235Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly 20 25 30 Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Lys Pro Gly Asn Arg Leu Glu Tyr Met Gly 35 40 45 Tyr Ile Ser Tyr Thr Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 50 55 60 Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Tyr Leu His 65 70 75 80 Leu Thr Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gln 85 90 95 Gly Asp Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 100 105 110 <210> 236<211> 112<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 236Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly 20 25 30 Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Lys Pro Gly Asn Arg Leu Glu Tyr Met Gly 35 40 45 Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Lys Pro Ser Leu Lys Ser 50 55 60 Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Tyr Leu His 65 70 75 80 Leu Thr Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gln 85 90 95 Gly Asp Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 100 105 110 <210> 237<211> 112<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 237Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly 20 25 30 Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Lys Pro Gly Asn Arg Leu Glu Tyr Met Gly 35 40 45 Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Phe Leu Lys Ser 50 55 60 Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Tyr Leu His 65 70 75 80 Leu Thr Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gln 85 90 95 Gly Asp Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 100 105 110 <210> 238<211> 112<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 238Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly 20 25 30 Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Lys Pro Gly Asn Arg Leu Glu Tyr Met Gly 35 40 45 Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Phe Asn Pro Ser Leu Lys Ser 50 55 60 Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Tyr Leu His 65 70 75 80 Leu Thr Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gln 85 90 95 Gly Asp Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 100 105 110 <210> 239<211> 112<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 239Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly 20 25 30 Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Lys Pro Gly Asn Arg Leu Glu Tyr Met Gly 35 40 45 Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Asn 50 55 60 Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Tyr Leu His 65 70 75 80 Leu Thr Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gln 85 90 95 Gly Asp Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 100 105 110 <210> 240<211> 112<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 240Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly 20 25 30 Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Lys Pro Gly Asn Arg Leu Glu Tyr Met Gly 35 40 45 Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 50 55 60 Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Tyr Leu His 65 70 75 80 Leu Thr Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gln 85 90 95 Gly Asp Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 100 105 110 <210> 241<211> 112<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 241Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly 20 25 30 Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Lys Pro Gly Asn Arg Leu Glu Tyr Met Gly 35 40 45 Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 50 55 60 Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Tyr Leu His 65 70 75 80 Leu Thr Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gln 85 90 95 Gly Asp Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 100 105 110 <210> 242<211> 112<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 242Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly 20 25 30 Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Lys Pro Gly Asn Arg Leu Glu Tyr Met Gly 35 40 45 Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 50 55 60 Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Tyr Leu His 65 70 75 80 Leu Thr Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gln 85 90 95 Gly Asp Thr Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 100 105 110 <210> 243<211> 112<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 243Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly 20 25 30 Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Lys Pro Gly Asn Arg Leu Glu Tyr Met Gly 35 40 45 Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 50 55 60 Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Tyr Leu His 65 70 75 80 Leu Thr Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gln 85 90 95 Ala Asp Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 100 105 110 <210> 244<211> 112<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 244Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly 20 25 30 Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Lys Pro Gly Asn Arg Leu Glu Tyr Met Gly 35 40 45 Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 50 55 60 Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Tyr Leu His 65 70 75 80 Leu Thr Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gln 85 90 95 Gly Trp Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 100 105 110 <210> 245<211> 112<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 245Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly 20 25 30 Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Lys Pro Gly Asn Arg Leu Glu Tyr Met Gly 35 40 45 Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 50 55 60 Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Tyr Leu His 65 70 75 80 Leu Thr Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gln 85 90 95 Glu Asp Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 100 105 110 <210> 246<211> 8<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 246Arg Ser Arg Gln Gly Leu Val His 1 5 <210> 247<211> 5<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 247Gly Asp Gly Gln Tyr 1 5 <210> 248<211> 5<212> PRT<213> 人工序列<220><223> 合成的<400> 248Gly Asp Gly Gly Tyr 1 5
20‧‧‧感測器
22‧‧‧第一電極
24‧‧‧第二電極
26‧‧‧導電通道
28‧‧‧紫杉醇抗體或其之功能片段/紫杉醇抗體
30‧‧‧絕緣體
32‧‧‧氧化矽層
34‧‧‧矽層
36‧‧‧連接子

Claims (15)

  1. 一種抗體功能化碳奈米管場效電晶體感測器，其包含： (a)一第一電極(源極電極)； (b)一第二電極(汲極電極)； (c)與該第一及第二電極可操縱地偶合之一導電通道；以及 (d)與該導電通道(閘極)偶合之一紫杉醇抗體或其之功能片段。
  2. 如請求項1之感測器，其中該導電通道為一碳奈米管。
  3. 如請求項1之感測器，其中該導電通道為一單壁碳奈米管。
  4. 如請求項1之感測器，其中該導電通道為包含複數個碳奈米管的一膜。
  5. 如請求項1之感測器，其中該感測器為一單分子感測器。
  6. 如請求項1-5中任一項之感測器，其中該紫杉醇抗體或其之功能片段係與該導電通道非共價地偶合。
  7. 如請求項1-5中任一項之感測器，其中該紫杉醇抗體或其之功能片段係藉由一雙功能連接子與該導電通道偶合。
  8. 如請求項1-5中任一項之感測器，其中該紫杉醇抗體或其之功能片段係藉由一雙功能連接子與該導電通道偶合，該雙功能連接子具有一第一官能基用於非共價地偶合該連接子與該導電通道以及一第二官能基用於共價地偶合該抗體或其之功能片段與該連接子。
  9. 如請求項1-5中任一項之感測器，其中該紫杉醇抗體或其之功能片段係一單-半胱胺酸變異體。
  10. 如請求項1-5中任一項之感測器，其中該紫杉醇抗體係3C6、8A10或其之功能片段。
  11. 一種偵測生理樣本內的紫杉醇之方法，其包含使含有紫杉醇的一樣本與如請求項1-10中任一項之感測器接觸。
  12. 一種判定生理樣本內的紫杉醇濃度之方法，其包含使含有紫杉醇的一樣本與如請求項1-10中任一項之感測器接觸。
  13. 如請求項12之方法，其中紫杉醇濃度係自約20 pM至約100 nM。
  14. 如請求項12之方法，其中紫杉醇濃度係自約1至約10 nM。
  15. 如請求項11-14中任一項之方法，其中該生理樣本包含血液或血液產生物(血漿、血清)。
TW106118346A 2016-06-02 2017-06-02 以抗體-功能化碳奈米管為基礎之場效電晶體及其於紫杉醇免疫測定之用途 TW201805234A (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201662344431P 2016-06-02 2016-06-02
US62/344,431 2016-06-02

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TW201805234A true TW201805234A (zh) 2018-02-16

Family

ID=60479159

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW106118346A TW201805234A (zh) 2016-06-02 2017-06-02 以抗體-功能化碳奈米管為基礎之場效電晶體及其於紫杉醇免疫測定之用途

Country Status (2)

Country Link
TW (1) TW201805234A (zh)
WO (1) WO2017210626A1 (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115166124A (zh) * 2022-07-25 2022-10-11 宁波熙宁检测技术有限公司 一种测定血浆中游离紫杉醇和总紫杉醇浓度的方法

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7858918B2 (en) * 2007-02-05 2010-12-28 Ludwig Lester F Molecular transistor circuits compatible with carbon nanotube sensors and transducers
US9187330B2 (en) * 2008-09-15 2015-11-17 The Invention Science Fund I, Llc Tubular nanostructure targeted to cell membrane
US9926194B2 (en) * 2010-03-11 2018-03-27 University Of Louisville Research Foundation, Inc. Method and device for detecting cellular targets in bodily sources using carbon nanotube thin film
US10082501B2 (en) * 2013-03-24 2018-09-25 Biomedomics, Inc. Nanotube based lateral flow device for biomarker detection
US9714953B2 (en) * 2014-04-04 2017-07-25 Autotelic Llc Methods, devices, and reagents for monitoring paclitaxel concentration in plasma for pharmacokinetic-guided dosing of paclitaxel
WO2015197736A1 (en) * 2014-06-26 2015-12-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-brdu antibodies and methods of use

Also Published As

Publication number Publication date
WO2017210626A1 (en) 2017-12-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Lerner et al. Hybrids of a genetically engineered antibody and a carbon nanotube transistor for detection of prostate cancer biomarkers
Filipiak et al. Highly sensitive, selective and label-free protein detection in physiological solutions using carbon nanotube transistors with nanobody receptors
US10809222B2 (en) Opioid detection based on high quality graphene transistor arrays and a synthetic mu receptor
US9162885B2 (en) Graphene-encapsulated nanoparticle-based biosensor for the selective detection of biomarkers
US8072008B2 (en) Biosensor having ultra fine fiber
US10006879B2 (en) Site specific chemically modified nanopore devices
US20090155800A1 (en) Biosensor having nano wire and manufacturing method thereof
US9064965B2 (en) Zinc oxide-based thin film transistor biosensors with high sensitivity and selectivity
Okuda et al. Horizontally aligned carbon nanotubes on a quartz substrate for chemical and biological sensing
JP2014504854A (ja) 感度改良ナノワイヤ電界効果トランジスタバイオセンサ
US9316612B2 (en) Regenerative nanosensor devices
JPWO2006103872A1 (ja) カーボンナノチューブ電界効果トランジスタ
WO2013033359A1 (en) Carbon nanotube biosensors and related methods
JP2008258594A (ja) カーボンナノチューブ電界効果トランジスタの製造方法およびバイオセンサ装置
Sharma et al. A novel piezoelectric immunosensor for the detection of malarial Plasmodium falciparum histidine rich protein-2 antigen
US20190331673A1 (en) Method of functionalization of a gate electrode of a field-effect transistor sensor
Takeda et al. Application of carbon nanotubes for detecting anti-hemagglutinins based on antigen–antibody interaction
Kutovyi et al. Highly sensitive and fast detection of C-reactive protein and troponin biomarkers using liquid-gated single silicon nanowire biosensors
US20180299399A1 (en) Electrochemical assay for a protein analyte
TW201805234A (zh) 以抗體-功能化碳奈米管為基礎之場效電晶體及其於紫杉醇免疫測定之用途
US20200058953A1 (en) Methods and compositions for gold dendrite-based biosensors
KR101048478B1 (ko) 극미량 시료 검출용 바이오센서 및 그 제조방법
Canton-Vitoria et al. Field-effect transistor antigen/antibody-TMDs sensors for the detection of COVID-19 samples
US20240060893A1 (en) Sensor, detection method, and detection apparatus
JP2009250633A (ja) センサおよび検出方法