本申請案主張於2016年7月6日提出申請之美國臨時專利申請案第62/359,092號、於2016年7月15日提出申請之美國臨時專利申請案第62/363,115號及於2017年5月19日提出申請之美國臨時專利申請案第62/508,854號的優先權益；該等申請案中每一者之內容之全文皆以引用方式併入本文中。 本發明係關於誘導個體中之PRR (例如，STING)表現之方法。在一些實施例中，該方法包含投與式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽。
定義
如本文所用冠詞「一(a及an)」係指一個或一個以上(例如指至少一個)的該冠詞之文法受詞。 「約」及「大約」通常應意指在給出量測之性質或精確度下所量測量之可接受之誤差度。實例性誤差度係在給定值或值之範圍之百分之20 (%)內，通常在10%內，且更通常在5%內。 如本文所用術語「獲取(acquire或acquiring)」在該等術語用於本文中時係指藉由「直接獲取」或「間接獲取」物理實體或值獲得物理實體(例如樣品，例如血液樣品或肝生檢樣本)或值(例如數值)之佔有。「直接獲取」意指實施製程(例如，分析方法)以獲得物理實體或值。「間接獲取」係指自另一團體或來源(例如，直接獲取物理實體或值之第三方實驗室)接收物理實體或值。直接獲取值包括實施包括樣品或另一物質之物理變化之方法，例如實施包括物質(例如樣品)之物理變化之分析方法、實施分析方法(例如如本文所述之方法)，例如藉由例如質譜術(例如LC-MS)之體液(例如血液)樣品分析。 如本文所用術語「誘導」或「之誘導」係指功能之增加或增強，例如模式識別受體(例如，STING)之表現之增加或增強。在一些實施例中，「誘導PRR表現」係指誘導PRR RNA (例如STING RNA (例如mRNA))之轉錄(例如，增加或增強)或PRR蛋白(例如STING蛋白)之轉譯(例如，增加或增強)。在一些實施例中，誘導PRR表現(例如，STING表現)係指增加或增強例如細胞中PRR RNA (例如STING RNA (例如mRNA))或STING蛋白之濃度。在一些實施例中，誘導PRR表現(例如，STING表現)係指增加例如細胞中PRR RNA (例如STING RNA (例如mRNA))或PRR蛋白(例如STING蛋白)之拷貝數。在一些實施例中，以誘導PRR (例如，STING)之表現可指起始PRR RNA (例如，STING RNA (例如，mRNA))轉錄或PRR蛋白(例如，STING蛋白)轉譯。在一些實施例中，以誘導PRR (例如，STING)之表現可指增加PRR RNA (例如，STING RNA (例如，mRNA))轉錄之速率或增加PRR蛋白(例如，STING蛋白)表現之速率。 如本文所用術語「活化(activate或activation)」係指功能(例如下游路徑，例如下游信號傳導路徑)之刺激或觸發。在一些實施例中，模式識別受體(PRR) (例如，STING)之活化係指例如經由與下游信號傳導伴侶(例如，IFN-β啟動子刺激物1 (IPS-1)、IRF3、IRF7、NF-κB、干擾素(例如，IFN-α或IFN-β)及/或細胞介素)相互作用刺激特定蛋白質或路徑。在一些實施例中，活化不同於PRR表現之誘導。在一些實施例中，PRR可經活化且不引起PRR表現(例如，STING表現)之誘導。在一些實施例中，活化可包括誘導PRR (例如，STING)之表現。在一些實施例中，與參考標準(例如，PRR (例如，STING)之基底表現量)相比，PRR之活化可觸發約0.1%、約0.5%、約1%、約5%、約10%、約15%、約20%、約25%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%、約90%、約95%或更大的PRR (例如，STING)表現之誘導。 如本文所用，化合物、偶聯物或物質之可有效地治療病症(例如，本文所述之病症)之量、「治療有效量」、「有效量」或「有效病程」係指，在單一或多個劑量投與個體後，可有效地治療個體或治癒、緩和、減輕或改良患有超出在該治療不存在下所預期之病症(例如，微生物感染)之個體的化合物、物質或組合物之量。 如本文所用術語「潛伏」係指微生物已進入休眠期(例如，在細胞中)且不再實質上複製之微生物感染(例如，病毒感染)。在一些實施例中，病毒潛伏係指病毒複製週期之溶源性部分。在一些實施例中，潛伏可指宿主(例如，本文所述之個體)之微生物感染。在該等情形下，受感染個體可經歷與感染相關之症狀，或者可實質上無症狀。 如本文所用術語「預防(prevent或preventing)」當在病症或疾病之背景下使用時係指向個體投與藥劑，例如向個體投與本發明化合物(例如，式(I)化合物)，使得與在不投與該藥劑下可見相比延遲病症或疾病之至少一種症狀之發作。 如本文所用術語「參考治療」或「參考標準」係指用作比較之基礎之標準化程度或標準化治療。在一些實施例中，參考標準或參考治療係業內公認、熟知或經充分表徵之標準或治療。在一些實施例中，參考標準闡述本文所述方法之結果。在一些實施例中，參考標準闡述例如在用例如本文所述之化合物或組合物開始處理之前個體或樣品中標記物之含量(例如，PRR (例如STING)之誘導量)。在一些實施例中，參考標準闡述例如在用例如本文所述之化合物或組合物開始處理之前疾病或其症狀之存在、進展或嚴重程度之量度。 如本文所用術語「個體」意欲包括人類及非人類動物。實例性人類個體包括患有病症(例如本文所述之病症)之人類患者或正常個體。術語「非人類動物」包括所有脊椎動物，例如非哺乳動物(例如雞、兩棲動物、爬行動物)及哺乳動物(例如非人類靈長類動物、家養及/或農業上有用之動物，例如綿羊、狗、貓、牛、豬等)。在本發明之實例性實施例中，個體係土撥鼠(例如，東方土撥鼠(北美土撥鼠(
Marmota monax
)))。 如本文所用術語「治療(treat或treating)」患有病症或疾病之個體係指使個體經受方案，例如投與式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽或包含式(I)或其醫藥上可接受之鹽之組合物，使得病症或疾病之至少一種症狀治癒、痊癒、緩和、減輕、改變、補救、改善或改良。治療包括投與可有效地緩和、減輕、改變、補救、改善、改良或影響病症或疾病或該病症或疾病之症狀之量。治療可抑制病症或疾病之症狀之劣化或加重。 如本文所用術語「Cmd」係指詞語「化合物(compound或Compound)」，且其皆可互換使用。 本文提供多個範圍，例如每天投與藥物之量之範圍。在一些實施例中，範圍包括兩個終點。在其他實施例中，範圍不包括一個或兩個終點。舉例而言，範圍可不包括下終點。因此，在該實施例中，250 mg/天至400 mg/天之範圍(不包括下終點)將涵蓋大於250 mg/天且小於或等於400 mg/天之量。
定義
如本文所用術語「烷基」係指單價飽和、直鏈或具支鏈烴，例如1-12、1-10或1-6個碳原子之直鏈或具支鏈烴，在本文中分別稱為C
1
-C
12
烷基、C
1
-C
10
烷基及C
1
-C
6
烷基。烷基之實例包括(但不限於)甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、第二丁基、第二戊基、異戊基、第三丁基、正戊基、新戊基、正己基、第二己基及諸如此類。 術語「烯基」及「炔基」為業內公認且分別係指長度及對上文所述烷基之可能取代類似、但含有至少一個雙鍵或三鍵之不飽和脂肪族基團。實例性烯基包括(但不限於) -CH=CH
2
及-CH
2
CH=CH
2
。 術語「伸烷基」係指烷基之雙自由基。 術語「伸烯基」及「伸炔基」分別係指烯基及炔基之雙自由基。 術語「亞甲基單元」係指存在於烷基、烯基、炔基、伸烷基、伸烯基或伸炔基部分中之二價-CH
2
-基團。 如本文所用術語「碳環系統」意指單環或稠合、螺稠合及/或橋接二環或多環烴環系統，其中每一環為完全飽和的或含有一或多個不飽和單元，但其中環不為芳香族。 術語「碳環基」係指碳環系統之基團。代表性碳環基包括環烷基(例如，環戊基、環丁基、環戊基、環己基及諸如此類)及環烯基(例如，環戊烯基、環己烯基、環戊二烯基及諸如此類)。 術語「芳香族環系統」為業內公認且係指單環、二環或多環烴環系統，其中至少一個環為芳香族。 術語「芳基」係指芳香族環系統之基團。代表性芳基包括完全芳香族環系統(例如苯基、萘基及蒽基)及芳香族碳環稠合至一或多個非芳香族碳環之環系統(例如二氫茚基、鄰苯二甲醯亞胺基、鄰萘二甲醯亞胺基或四氫萘基及諸如此類)。 術語「雜烷基」係指其中至少一個碳分子已經諸如O、S或N等雜原子替代之「烷基」部分。 術語「雜芳香族環系統」為業內公認且係指單環、二環或多環系統，其中至少一個環為芳香族且包含雜原子；且其中其他環不為雜環基(如下文所定義)。在某些情況下，為芳香族且包含雜原子之環在該環中含有1個、2個、3個或4個經獨立選擇之環雜原子。 術語「雜芳基」係指雜芳香族環系統之基團。代表性雜芳基包括以下環系統：(i) 每一環包含雜原子且為芳香族，例如咪唑基、噁唑基、噻唑基、三唑基、吡咯基、呋喃基、苯硫基吡唑基、吡啶基、吡嗪基、嗒嗪基、嘧啶基、吲嗪基、嘌呤基、萘啶基及蝶啶基；(ii) 每一環為芳香族或碳環基，至少一個芳香族環包含雜原子且至少一個其他環係烴環或例如吲哚基、異吲哚基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、二苯并呋喃基、吲唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、喹啉基、異喹啉基、㖕啉基、呔嗪基、喹唑啉基、喹喏啉基、咔唑基、吖啶基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁嗪基、吡啶并[2,3-b]1,4-噁嗪-3(4H)-酮、5,6,7,8-四氫喹啉基及5,6,7,8-四氫異喹啉基；及(iii) 每一環為芳香族或碳環基，且至少一個芳香族環與另一芳香族環(例如4H-喹嗪基)共享橋頭雜原子。在某些實施例中，雜芳基係單環或二環，其中該等環中之每一者含有5個或6個環原子，其中該等環原子中之1者、2者、3者或4者係獨立地選自N、O及S之雜原子。 術語「雜環系統」係指單環或稠合、螺稠合及/或橋接二環及多環系統，其中至少一個環為飽和或部分不飽和的(但非芳香族)且包含雜原子。雜環可在產生穩定結構之任一雜原子或碳原子處附接至其側基，且任一環原子可視情況經取代。 術語「雜環基」係指雜環系統之基團。代表性雜環基包括以下環系統：(i) 每個環為非芳香族且至少一個環包含雜原子，例如四氫呋喃基、四氫噻吩基、吡咯啶基、吡咯啶酮基、六氫吡啶基、吡咯啉基、十氫喹啉基、噁唑啶基、六氫吡嗪基、二噁烷基、二氧戊環基、二氮呯基、氧氮呯基、硫氮呯基、嗎啉基及奎寧環基；(ii) 至少一個環為非芳香族且包含雜原子且至少一個其他環係芳香族碳環，例如1,2,3,4-四氫喹啉基、1,2,3,4-四氫異喹啉基；及(iii) 至少一個環為非芳香族且包含雜原子且至少一個其他環係芳香族且包含雜原子，例如3,4-二氫-1H-吡喃并[4,3-c]吡啶及1,2,3,4-四氫-2,6-萘啶。在某些實施例中，雜環基係單環或二環，其中該等環中之每一者含有3-7個環原子，其中該等環原子中之1者、2者、3者或4者係獨立地選自N、O及S之雜原子。 術語「飽和雜環基」係指其中每個環為飽和之雜環系統之基團，例如四氫呋喃、四氫-2H-吡喃、吡咯啶、六氫吡啶及六氫吡嗪。 「部分不飽和」係指包括至少一個雙鍵或三鍵之基團。「部分不飽和」之環系統另外意欲涵蓋具有多個不飽和位點之環，但不欲包括如本文所定義之芳香族基團(例如芳基或雜芳基)。同樣，「飽和」係指不含雙鍵或三鍵、即皆含單鍵之基團。 如本文所用術語「核鹼基」係發現連接至去氧核糖核酸(DNA)及核糖核酸(RNA)之基礎結構單元核苷內之糖之含氮生物化合物。一級或天然核鹼基係胞嘧啶(DNA及RNA)、鳥嘌呤(DNA及RNA)、腺嘌呤(DNA及RNA)、胸腺嘧啶(DNA)及尿嘧啶(RNA)，分別縮寫為C、G、A、T及U。由於A、G、C及T出現於DNA中，故該等分子稱為DNA鹼基；A、G、C及U稱為RNA鹼基。腺嘌呤及鳥嘌呤屬雙環類分子，稱為嘌呤(縮寫為R)。胞嘧啶、胸腺嘧啶及尿嘧啶皆為嘧啶類。未用作遺傳密碼之正常部分之其他核鹼基稱為非天然。 如本文所用，當每一表述(例如烷基、m、n等)在任一結構中出現一次以上時，其定義意欲獨立於其在相同結構中之別處之定義。 如本文所述，本發明化合物可含有「視情況經取代」之部分。一般而言，無論術語「視情況」是否在前面，術語「經取代」皆意指指定部分之一或多個氫經適當取代基替代。除非另有指示，否則「視情況經取代」之基團可在該基團之每一可取代位置具有適當取代基，且在任一給定結構中之一個以上位置可經一個以上選自指定基團之取代基取代時，在每一位置之取代基可相同或不同。本發明設想之取代基之組合較佳係可形成穩定或化學上可行化合物之彼等。如本文所用術語「穩定」係指如下化合物：在出於本文所揭示之一或多個目的而經受各條件以允許其產生、檢測及在某些實施例中其回收、純化及使用時，其實質上不發生變化。
模式識別受體
本文所呈現本發明之特徵在於活化及誘導個體(例如患有微生物感染(例如，病毒感染、細菌感染、真菌感染或寄生蟲感染)之個體)中之PRR表現(例如，STING表現)之方法。模式識別受體(PRR)係一大類識別在病原性侵入物內保守之病原體相關分子模式(PAMP)之蛋白質。PAMP通常係對病原體之存活及/或感染力至關重要之生物合成路徑之產物，例如脂多醣、醣蛋白及核酸。PAMP藉由其同源PRR之識別活化信號傳導路徑，從而產生免疫防禦因子，例如促發炎及抗發炎細胞介素、I型干擾素(IFN-α、IFN-β)及/或干擾素刺激基因(ISG)。業內熟知誘導先天免疫信號傳導亦可活化T細胞反應以及誘導適應性免疫性。該等下游免疫效應為經由細胞凋亡清除病毒及經由細胞毒性T淋巴球及其他防禦機制殺死受感染細胞所必需。業內亦熟知干擾素作用於ISRE (干擾素反應元件)，其可觸發在抗病毒細胞防禦中起重要作用之ISG之產生。 干擾素基因之刺激物(STING)係胞質微生物源DNA感測器，其已顯示對雙鏈DNA及環狀二核苷酸(例如，環狀二-GMP)尤其敏感(Burdette, D. L.及Vance, R. E. (2013)
Nat Immunol
14:19-26)。兩個STING分子形成由存在於C末端二聚化結構域中之α-螺旋調介之同二聚體，且分子結合研究已揭露每一STING二聚體結合一個微生物核酸分子，例如DNA或環狀二核苷酸。在配體結合後，STING經由與RIG-I及IPS-1相互作用活化先天免疫反應，從而引起干擾素產生(例如，IFN-α及IFN-β)及其他下游信號傳導事件。由於其發現，已顯示STING用作病毒(例如，腺病毒、單純皰疹病毒、B型肝炎病毒、水皰性口炎病毒、C型肝炎病毒)、細菌(例如，單核球增多性李氏菌(
Listeria monocytogenes
)、嗜肺軍團菌(
Legionella pneumopholia
)、結核分枝桿菌(
Mycobacterium tuberculosis
))及原生動物(惡性瘧原蟲(
Plasmodium falciparum
)、伯氏瘧原蟲(
Plasmodium berghei
))之關鍵感測器。另外，已顯示STING在針對腫瘤抗原之先天免疫反應、驅動樹突細胞活化及若干癌症中之後續T細胞啟動中起主要作用(Woo, S.R.等人，
Trends in Immunol
(2015) 36:250-256)。 另一類PRR包括RIG-I，其係主要檢測衍生自外源來源之RNA之PRR (稱為RIG-I樣受體(RLR))家族之創始成員。其係大多數細胞中微生物感染(例如，病毒感染)之關鍵感測器且在胞質液中以低量組成性表現。在配體結合後，RIG-I之表現快速增強，從而增加細胞中之RIG-I濃度(Jensen, S.及Thomsen, A.R.
J Virol
(2012) 86:2900-2910；Yoneyama M.等人，
Nat Immunol
(2004) 5:730-737)。RIG-I係含有中心DExD/H盒ATPase結構域及調介下游信號傳導之串聯N末端半胱天冬酶招募結構域(CARD)之ATP依賴性解旋酶。RIG-I之C末端包含ssRNA/dsRNA結合結構域，其在未結合時用於沉默N末端之CARD功能。不期望受限於理論，人們認為在識別靶RNA結構後，兩個N末端CARD暴露，從而允許與下游結合伴侶IFN-β啟動子刺激物1 (IPS-1) (亦稱為粒線體抗病毒信號傳導分子(MAVS)及CARDIF)之CARD相互作用。此相互作用進而觸發進一步下游信號傳導，例如誘導IRF3、IRF7、NF-κB、IFN及細胞介素產生，從而起始宿主免疫反應。 其他RLR與RIG-I同源且以相似方式發揮作用，包括MDA5、LGP2及RNase L。MDA5與RIG-I高度同源，且已顯示對感染小核糖核酸病毒(例如，腦心肌炎病毒(EMCV)、泰勒病毒(Theiler’s virus)及門果病毒(Mengo virus))、仙台病毒、狂犬病毒、西尼羅病毒、狂犬病毒、輪狀病毒、鼠類肝炎病毒及鼠類諾羅病毒(murine norovirus)後觸發細胞介素反應至關重要。LPG2缺少在RIG-I及MDA5中發現之CARD結構域，其負責與IPS-1直接相互作用以起始下游信號傳導。因此，認為LPG2結合其他帶有CARD之RLR (例如RIG-I及MDA5)起先天免疫反應之調節劑作用。 另一類PRR涵蓋核苷酸結合及寡聚結構域(NOD)樣受體或NLR家族(Caruso, R.等人，Immunity (2014) 41:898-908)，其包括微生物感測器NOD2。NOD2係由N末端CARD、中心定位之核苷酸結合寡聚結構域及負責結合微生物PAMP (例如細菌肽聚醣片段及微生物核酸)之C末端富含白胺酸之重複結構域構成。配體結合活化NOD2且認為驅動與含CARD激酶RIPK2之相互作用，此進而活化多種下游蛋白質，包括NF-κB、MAPK、IRF7及IRF3，其後者可誘導1型干擾素。NOD2在不同組細胞類型(包括巨噬細胞、樹突細胞、班尼斯細胞(paneth cell)、上皮細胞(例如，肺上皮細胞、腸上皮)及成骨細胞)中表現。NOD2已確立為諸如以下等多種病原性侵入物之感染之感測器：原生動物(例如，弓蟲(
Toxoplasma gondii
)及伯氏瘧原蟲)、細菌(例如，炭疽桿菌(
Bacillus anthracis
)、伯氏疏螺旋體(
Borrelia burgdorferi
)、類鼻疽伯克氏菌(
Burkholderia pseudomallei
)、肝螺桿菌(
Helicobacter hepaticus
)、嗜肺軍團菌、結核分枝桿菌、
痤瘡丙酸桿菌
(
Propionibacterium acne
)、牙齦卟啉單胞菌(
Porphyromonas gingivalis
)、腸道沙門氏菌(
Salmonella enterica
)及肺炎鏈球菌(
Streptococcus pneumonia
))及病毒(例如，呼吸道融合病毒及鼠類諾羅病毒-1) (Moreira, L. O.及Zamboni, D. S.
Front Immunol
(2012) 3:1-12)。最新工作已顯示，NOD2突變可促進發炎性疾病，例如克隆氏病(Crohn’s disease)，從而在刺激後引起異常發炎反應。
化合物
本發明之特徵在於誘導個體(例如，患有微生物感染(例如病毒感染、細菌感染、真菌感染或寄生蟲感染)之個體)中之PRR表現(例如，STING表現)之化合物及方法，該等方法包含投與式(I)化合物或其前藥或醫藥上可接受之鹽。 在一些實施例中，本發明之特徵在於式(I)化合物，其中一個核苷之3’-OH末端經由鍵聯連接至另一核苷之5’-OH，如所顯示。在一些其他實施例中，一個核苷之2’-OH末端可經由鍵聯連接至另一核苷之5’-OH。
式(I) 或其醫藥上可接受之鹽或立體異構物，其中： Z係S或O B
1
及B
2
中之每一者獨立地係嘌呤基核鹼基或嘧啶基核鹼基； X
1
及X
2
中之每一者獨立地係O或S； Y
1
及Y
2
中之每一者獨立地係O、S或NR
5
； L
1
及L
2
中之每一者獨立地係不存在、C
1
-C
6
烷基或C
1
-C
6
雜烷基，其中每一C
1
-C
6
烷基及C
1
-C
6
雜烷基視情況經R
6
取代； R
1
及R
2
中之每一者獨立地係氫、鹵基、-CN、C
1
-C
20
烷基(例如，C
1
-C
6
烷基)或OR
7
； R
3
及R
4
中之每一者獨立地係氫、C
1
-C
20
烷基(例如，C
1
-C
6
烷基)、C
1
-C
20
雜烷基(例如，C
1
-C
6
雜烷基)、環烷基、雜環基、OC(O)OC
1
-C
20
烷基(例如，C
1
-C
6
烷基)、芳基或雜芳基，其中每一C
1
-C
20
烷基、C
1
-C
20
雜烷基、環烷基、雜環基、芳基、OC(O)OC
1
-C
20
烷基(例如，C
1-6
烷基)及雜芳基視情況經1-5個R
8
取代； 每一R
5
獨立地係氫或C
1
-C
20
烷基(例如，C
1
-C
6
烷基)； R
6
係鹵基、-CN、C
1
-C
20
烷基(例如，C
1
-C
6
烷基)、OR
7
、側氧基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，其中每一C
1
-C
20
烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基視情況經1-5個R
9
取代； R
7
係氫、C
1
-C
20
烷基(例如，C
1
-C
6
烷基)、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，其中每一C
1
-C
20
烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基視情況經1-5個R
9
取代； 每一R
8
獨立地係C
1
-C
20
烷基(例如，C
1
-C
6
烷基)、O-芳基、OC(O)NR
5
-C
1
-C
20
烷基(例如，C
1
-C
6
烷基)、S(O)
2
NR
5
-芳基、NR
5
C(O)-芳基、NR
5
R
5
C(O)-芳基、C(O)-芳基、C(O)-雜芳基、OC(O)-芳基或OC(O)-雜芳基、OC(O)-C
1
-C
20
烷基(例如，C
1
-C
6
)、OC(O)O-C
1
-C
20
烷基(例如，C
1
-C
6
)，其中每一C
1
-C
20
烷基、O-芳基、OC(O)NR
5
-C
1
-C
20
烷基、S(O)
2
NR
5
-芳基、NR
5
C(O)-芳基、CH
2
NR
5
C(O)-芳基、C(O)-芳基、C(O)-雜芳基、OC(O)-芳基或OC(O)-雜芳基、OC(O)-C
1
-C
20
烷基(例如，C
1
-C
6
)、OC(O)O-C
1
-C
20
烷基(例如，C
1
-C
6
)視情況經1-5個R
9
取代；且 每一R
9
獨立地係C
1
-C
20
烷基(例如，C
1
-C
6
烷基)、鹵基、-CN、OH、O-C
1
-C
20
烷基、O-C
1
-C
20
雜烷基、O-芳基、O-雜芳基。 在一些實施例中，化合物係式(I-a)化合物：
式(I-a) 或其醫藥上可接受之鹽或立體異構物，其中B
1
及B
2
中之每一者獨立地係嘌呤基核鹼基或嘧啶基核鹼基；X
1
及X
2
中之每一者獨立地係O或S；Y
1
及Y
2
中之每一者獨立地係O、S或NR
5
；L
1
及L
2
中之每一者獨立地係不存在、C
1
-C
20
烷基或C
1
-C
20
雜烷基，其中每一C
1
-C
20
烷基及C
1
-C
20
雜烷基視情況經R
6
取代；R
1
及R
2
中之每一者獨立地係氫、鹵基、-CN、C
1
-C
20
烷基或OR
7
；R
3
及R
4
中之每一者獨立地係氫、C
1
-C
20
烷基、C
1
-C
20
雜烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，其中每一C
1
-C
20
烷基、C
1
-C
20
雜烷基、環烷基、雜環基、芳基及雜芳基視情況經1-5個R
8
取代；R
5
係氫或C
1
-C
20
烷基；R
6
係鹵基、-CN、C
1
-C
20
烷基、OR
7
、側氧基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，其中每一C
1
-C
20
烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基視情況經1-5個R
9
取代；R
7
係氫、C
1
-C
20
烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，其中每一C
1
-C
20
烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基視情況經1-5個R
9
取代；每一R
8
獨立地係C
1
-C
20
烷基、C(O)-芳基、C(O)-雜芳基、OC(O)-芳基或OC(O)-雜芳基，其中每一C
1
-C
20
烷基、C(O)-芳基、C(O)-雜芳基、OC(O)-芳基或OC(O)-雜芳基視情況經1-5個R
9
取代；且每一R
9
獨立地係C
1
-C
20
烷基、鹵基、-CN、OH、O-C
1
-C
20
烷基、O-C
1
-C
20
雜烷基、O-芳基或O-雜芳基。 在一些實施例中，化合物係式(I-b)、(I-c)、(I-d)或(I-e)化合物：
式(I-b) 式(I-c)
式(I-d) 式(I-e) 或其醫藥上可接受之鹽，其中B
1
、B
2
、X
1
、X
2
、Y
1
、Y
2
、L
1
、L
2
、R
1
、R
2
、R
3
、R
4
及其次變量中之每一者係如先前所述。 在實施例中，B
1
或B
2
之核鹼基係天然核鹼基，例如天然嘌呤基核鹼基或天然嘧啶基核鹼基。在實施例中，B
1
或B
2
之核鹼基係經修飾核鹼基，例如經化學修飾之嘌呤基核鹼基或嘧啶基核鹼基。在一些實施例中，B
1
係嘌呤基核鹼基且B
2
係嘧啶基核鹼基。在一些實施例中，B
1
係腺苷基或鳥苷基且B
2
係胞嘧啶基、胸腺嘧啶基或尿嘧啶基。在一些實施例中，B
1
及B
2
中之每一者係尿嘧啶基。 在一些實施例中，B
1
係嘌呤基核鹼基。在一些實施例中，B
2
係嘌呤基核鹼基。在一些實施例中，B
1
係嘌呤基核鹼基且B
2
係嘧啶基核鹼基。 在一些實施例中，B
1
係腺苷基或鳥苷基。在一些實施例中，B
2
係胞嘧啶基、胸腺嘧啶基或尿嘧啶基。 在一些實施例中，B
1
或B
2
中之每一者選自：
其中「
」指示核鹼基至核糖環之鍵聯。 在一些實施例中，B
1
或B
2
中之一者選自天然核鹼基且B
1
或B
2
中之另一者係經修飾核鹼基。在一些實施例中，B
1
或B
2
中之一者係腺苷基、鳥苷基、胸腺嘧啶基、胞嘧啶基或尿嘧啶基，且B
1
或B
2
中之另一者係5’-甲基胞嘧啶基、5’-氟尿嘧啶基、5’-丙炔基尿嘧啶基或7-去氮腺苷基。 在一些實施例中，B
1
係腺苷基或鳥苷基。在一些實施例中，B
2
係胞嘧啶基、胸腺嘧啶基或尿嘧啶基。在一些實施例中，B
1
係腺苷基或鳥苷基且B
2
係胞嘧啶基、胸腺嘧啶基或尿嘧啶基。在一些實施例中，B
1
及B
2
中之每一者獨立地係尿嘧啶基。在一些實施例中，B
1
及B
2
中之每一者獨立地係腺苷基。 在一些實施例中，R
1
及R
2
中之每一者獨立地係氫、鹵基或OR
6
。在一些實施例中，R
1
及R
2
中之每一者獨立地係鹵基(例如，氟)。在一些實施例中，R
1
及R
2
中之每一者不為氫或OR
7
。 在一些實施例中，X
1
係O。在一些實施例中，X
2
係O。在一些實施例中，X
1
及X
2
中之每一者獨立地係O。 在一些實施例中，Y
1
係O或S。在一些實施例中，Y
2
係O或S。在一些實施例中，Y
1
及Y
2
中之每一者獨立地係O或S。在一些實施例中，Y
1
或Y
2
中之一者係O且Y
1
或Y
2
中之另一者係S。在一些實施例中，Y
1
或Y
2
中之每一者獨立地係S。在一些實施例中，Y
1
或Y
2
中之每一者獨立地係O。 在一些實施例中，L
1
及L
2
中之每一者獨立地係C
1
-C
6
烷基(例如，CH
2
)。在一些實施例中，L
2
係C
1
-C
6
烷基(例如，CH
2
)。在一些實施例中，L
1
及L
2
中之每一者獨立地係C
1
-C
6
烷基(例如，CH
2
)。 在一些實施例中，R
3
係氫、芳基或雜芳基，其中芳基及雜芳基視情況經1-5個R
8
取代。在一些實施例中，R
3
係芳基或雜芳基，其中之每一者視情況經1-5個R
8
取代。在一些實施例中，R
3
係經1個R
8
取代之苯基。 在一些實施例中，R
4
獨立地係氫、芳基或雜芳基，其中芳基及雜芳基視情況經1-5個R
8
取代。在一些實施例中，R
4
係芳基或雜芳基，其中之每一者視情況經1-5個R
8
取代。在一些實施例中，R
4
係經1個R
8
取代之苯基。 在一些實施例中，R
3
及R
4
中之每一者獨立地係氫、芳基或雜芳基，其中芳基及雜芳基視情況經1-5個R
8
取代。在一些實施例中，R
3
係芳基或雜芳基，其中之每一者視情況經1-5個R
8
取代，且R
4
係氫。在一些實施例中，R
3
係經1個R
8
取代之苯基且R
4
係氫。在一些實施例中，R
3
及R
4
中之每一者獨立地係經1個R
8
取代之苯基。 在一些實施例中，Y
1
及Y
2
中之每一者係O且R
3
及R
4
中之每一者獨立地係氫。在一些實施例中，Y
2
係O且R
4
係氫。在一些實施例中，Y
1
及Y
2
中之每一者獨立地係S且R
3
及R
4
中之每一者獨立地經1個R
8
取代。在一些實施例中，Y
1
係S且R
3
經1個R
8
取代。 在一些實施例中，R
8
係視情況經1-5個R
9
(例如，1個R
9
)取代之OC(O)-芳基。在一些實施例中，R
9
係O-C
1
-C
20
烷基(例如，O-CH
2
(CH
2
)
8
CH
3
)。在一些實施例中，R
9
係O-C
1
-C
12
烷基(例如，O-CH
2
(CH
2
)
8
CH
3
)。在一些實施例中，R
9
係O-C
1
-C
10
烷基(例如，O-CH
2
(CH
2
)
8
CH
3
)。在一些實施例中，R
9
係O-C
1
-C
8
烷基(例如，O-CH
2
(CH
2
)
6
CH
3
)。在一些實施例中，R
9
係O-C
1
-C
6
烷基(例如，O-CH
2
(CH
2
)
4
CH
3
)。 在一些實施例中，化合物由式(I-f)表示：
式(I-f) 或其醫藥上可接受之鹽或立體異構物，其中B
1
及B
2
中之每一者獨立地係嘌呤基核鹼基或嘧啶基核鹼基；X
1
及X
2
中之每一者獨立地係O或S；Y
1
及Y
2
中之每一者獨立地係O、S或NR
5
；L
1
及L
2
中之每一者獨立地係不存在、C
1
-C
6
烷基或C
1
-C
6
雜烷基，其中每一C
1
-C
6
烷基及C
1
-C
6
雜烷基視情況經R
6
取代；R
1
及R
2
中之每一者獨立地係鹵基；R
3
及R
4
中之每一者獨立地係氫、C
1
-C
20
烷基、C
1
-C
6
雜烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，其中每一C
1
-C
20
烷基、C
1
-C
6
雜烷基、環烷基、雜環基、芳基及雜芳基視情況經1-5個R
8
取代；R
5
係氫或C
1
-C
20
烷基；R
6
係鹵基、-CN、C
1
-C
20
烷基、OR
7
、側氧基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，其中每一C
1
-C
20
烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基視情況經1-5個R
9
取代；R
7
係氫、C
1
-C
20
烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，其中每一C
1
-C
20
烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基視情況經1-5個R
9
取代；每一R
8
獨立地係C
1
-C
20
烷基、C(O)-芳基、C(O)-雜芳基、OC(O)-芳基或OC(O)-雜芳基，其中每一C
1
-C
20
烷基、C(O)-芳基、C(O)-雜芳基、OC(O)-芳基或OC(O)-雜芳基視情況經1-5個R
9
取代；且每一R
9
獨立地係C
1
-C
20
烷基、鹵基、-CN、OH、O-C
1
-C
20
烷基、O-C
1
-C
20
雜烷基、O-芳基或O-雜芳基。 在一些實施例中，化合物由式(I-g)表示：
式(I-g) 或其醫藥上可接受之鹽或立體異構物，其中B
1
及B
2
中之每一者獨立地係嘌呤基核鹼基或嘧啶基核鹼基；X
1
及X
2
中之每一者獨立地係O；Y
1
及Y
2
中之每一者獨立地係O或S；L
1
及L
2
中之每一者獨立地係不存在或C
1
-C
6
烷基；R
1
及R
2
中之每一者獨立地係鹵基或OH；R
3
及R
4
中之每一者獨立地係氫或視情況經1-5個R
8
取代之芳基；每一R
8
獨立地係視情況經1-5個R
9
取代之OC(O)-芳基；且每一R
9
獨立地係O-C
1
-C
20
烷基。 在一些實施例中，化合物選自表1中所繪示之化合物：
在實施例中，本文所述之化合物呈醫藥上可接受之鹽形式。本文闡述實例性鹽，例如銨鹽。在一些實施例中，化合物係單鹽。在一些實施例中，化合物係二鹽。 式(I)化合物係組合抗病毒及免疫調節活性二者之小分子核酸雜合(環狀二核苷酸)化合物。後者活性經由刺激先天免疫反應調介例如感染病毒之肝細胞之受控細胞凋亡，此類似於亦藉由患有病毒感染之患者中之IFN-α療法所達成者。 不期望受限於理論，式(I)化合物之作用機制可分成兩個組成部分。第一組成部分需要式(I)化合物之宿主免疫刺激活性，其可經由活化PRR (例如，RIG-I、NOD2及STING)誘導內源IFN。活化可藉由使式(I)化合物結合至PRR (例如，STING)之核苷酸結合結構域來進行，如先前所述，且可進一步誘導PRR表現(例如，STING表現)。 式(I)化合物之作用機制之第二組成部分涉及其直接抗病毒活性，其藉由在空間上阻斷病毒聚合酶來抑制病毒核酸之合成。阻斷可藉由如先前所述式(I)化合物與PRR (例如，STING)之相互作用、其隨後進而可防止聚合酶與用於複製之核酸模板(例如，病毒源RNA)接合來達成。在一些實施例中，式(I)化合物直接與PRR (例如，STING)接合。在一些實施例中，式(I)化合物直接與PRR (例如，STING)接合且誘導下游路徑(例如，IFN信號傳導)。 本文所提供之化合物可含有一或多個不對稱中心，且因此可以外消旋物及外消旋混合物、單一鏡像異構物、個別非鏡像異構物及非鏡像異構物混合物形式存在。該等化合物之所有該等異構形式明確包括在範疇內。除非另有指示，否則當化合物係根據未指定立體化學之結構命名或繪示且具有一或多個手性中心時，應理解其代表化合物之所有可能立體異構物。本文所提供之化合物亦可含有可限制鍵旋轉(例如因存在環或雙鍵產生之限制)之鍵聯(例如，碳-碳鍵、磷-氧鍵或磷-硫鍵)或取代基。 在一些實施例中，本文所述之方法包含投與式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽。在一些實施例中，式(I)化合物包含式(I)化合物之異構物(例如，Rp異構物或Sp異構物)或異構物之混合物(例如，Rp異構物或Sp異構物)。
使用方法
本發明係關於經由投與式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽誘導個體中之PRR (例如，STING)表現之方法。在一些實施例中，個體可患有下文所述之病況，例如病毒感染(例如病毒潛伏)、細菌感染或癌症。
病毒感染之治療
已顯示諸如STING、RIG-I及NOD2等模式識別受體係宿主識別來自多個不同病毒家族之大量RNA病毒之重要因子。在一些實施例中，誘導本文所揭示PRR (例如，STING)之表現之方法包含向感染微生物感染之個體投與式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽。在一些實施例中，微生物感染係病毒。在一些實施例中，病毒係RNA病毒(例如，雙鏈RNA (dsRNA)病毒、單鏈RNA (ssRNA)病毒(例如，正鏈(有義) ssRNA病毒或負鏈(反義) ssRNA病毒)或ssRNA反轉錄病毒)或DNA病毒(例如，dsDNA病毒、ssDNA病毒或dsDNA反轉錄病毒)。在一些實施例中，例如根據Baltimore分類系統，病毒可為I群、II群、III群、IV群、V群、VI群或VII群類病毒。 在一些實施例中，病毒係dsRNA病毒，例如III群病毒。在一些實施例中，PRR (例如，STING)之表現係經由宿主產生之RNA或病毒源RNA來誘導。在一些實施例中，病毒係dsRNA病毒，且係以下各科之成員：雙核糖核酸病毒科(
Birnaviridae
)、金色病毒科(
Chrysoviridae
)、囊狀病毒科(
Cystoviridae
)、內源RNA病毒科(
Endornaviridae
)、低毒性病毒科(
Hypoviridae
)、巨大雙核糖核酸病毒科(
Megabirnaviridae
)、分體病毒科(
Partitiviridae
)、小雙核糖核酸病毒科(
Picobirnaviridae
)、呼腸孤病毒科(
Reoviridae
)或整體病毒科(
Totiviridae
)或其他dsRNA病毒科。實例性dsRNA病毒及病毒屬包括(但不限於)小雙核糖核酸病毒(
Picobirnavirus
)、輪狀病毒(
Rotavirus
)、東南亞十二節段RNA病毒屬(
Seadornavirus
)、科羅拉多壁蝨熱病毒(
Coltivirus
)、環狀病毒(
Orbivirus
)及正裡奧病毒(
Orthoreovirus
)或其亞型、種或變體。 在一些實施例中，病毒係ssRNA病毒，例如正鏈(有義) ssRNA病毒，例如IV群病毒。在一些實施例中，PRR (例如，STING)之表現係經由宿主產生之RNA或病毒源RNA來誘導。在一些實施例中，病毒係正鏈(有義) ssRNA病毒，且係以下各科之成員：動脈炎病毒科(
Arteriviridae
)、冠狀病毒科(
Coronaviridae
)、中等套病毒科(
Mesoniviridae
)、桿狀套病毒科(
Roniviridae
)、二順反子病毒科(
Dicistroviridae
)、傳染性軟化病毒科(
Iflaviridae
)、海洋RNA病毒科(
Marnaviridae
)、小RNA病毒科(
Piconaviridae
)、伴生豇豆病毒科(
Secoviridae
)、α彎曲病毒科(
Alphaflexiviridae
)、β彎曲病毒科(
Betaflexiviridae
)、γ彎曲病毒科(
Gammaflexiviridae
)、蕪菁變黃鑲嵌病毒科(
Tymoviridae
)、α四病毒科(
Alphatetraviridae
)、艾維病毒科(
Alvernaviridae
)、星狀病毒科(
Astroviridae
)、桿狀RNA病毒科(
Barnaviridae
)、雀麥花葉病毒科(
Bromoviridae
)、杯狀病毒科(
Caliciviridae
)、卡爾莫四病毒科(
Carmotetraviridae
)、修道院病毒科(
Closteroviridae
)、黃病毒科(
Flaviviridae
)、光滑病毒科(
Leviviridae
)、黃症病毒科(
Luteoviridae
)、裸露RNA病毒科(
Narnaviridae
)、野田病毒科(
Nodaviridae
)、有表四病毒科(
Permutotetraviridae
)、馬鈴薯Y病毒科(
Potyviridae
)、披膜病毒科(
Togaviridae
)或帚狀病毒科(
Virgaviridae
)或其他正鏈(有義) ssRNA病毒科。實例性正鏈(有義) ssRNA病毒及病毒屬包括(但不限於)黃熱病毒(Yellow fever virus)、西尼羅病毒、C型肝炎病毒、登革熱病毒、德國麻疹病毒(Rubella virus)、羅氏河病毒(Ross River virus)、辛得比斯病毒(Sindbis virus)、屈公病毒(Chikungya virus)、諾沃克病毒(Norwalk virus)、日本腦炎病毒、蜱傳腦炎病毒、聖路易腦炎病毒(St. Louis encephalitis virus)、墨累穀腦炎病毒(Murray Valley encephalitis virus)、科薩努森林病病毒(Kyasanur Forest disease virus) (例如，猴疾病病毒)、西方馬腦炎病毒(Western Equine encephalitis virus)、東方馬腦炎病毒(Eastern Equine encephalitis virus)、委內瑞拉馬腦炎病毒(Venezuelan Equine encephalitis virus)、沙波病毒(Sapporo virus)、諾羅病毒(
Norovirus
)、沙波病毒屬(
Sapovirus
)、卡裡西病毒屬(
Calicivirus
)、雙埃可病毒屬(
Parechovirus
)、A型肝炎病毒、鼻病毒屬(例如，鼻病毒A、鼻病毒B及鼻病毒C)、腸病毒屬(例如，腸病毒A、腸病毒B、腸病毒C (例如，脊髓灰白質炎病毒)、腸病毒D、腸病毒E、腸病毒F、腸病毒G或腸病毒H)、口瘡病毒屬(
Apthovirus
) (例如，手足口病病毒)、網巢病毒目(
Nidovirales
) (例如，昆蟲套式病毒(Cavally virus)、南定病毒(Nam Dinh virus)、中東呼吸症候群冠狀病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus，MERS-CoV)、冠狀病毒HKU1、冠狀病毒NL63、SARS-CoV、冠狀病毒OC43及冠狀病毒229E)、布尼亞病毒屬(
Benyvirus
)、布魯尼病毒屬(
Blunevirus
)、柑橘粗糙病毒屬(
Cilevirus
)、肝炎病毒屬(
Hepevirus
) (例如，E型肝炎病毒)、木槿綠斑病毒屬(
Higrevirus
)、懸鉤子病毒屬(
Idaeovirus
)、尼格病毒屬(
Negevirus
)、歐爾密病毒屬(
Ourmiavirus
)、一品紅潛隱病毒屬(
Polemovirus
)、南方菜豆花葉病毒屬(
Sobemovirus
)或幽影病毒屬(
Umbravirus
)或其亞型、種或變體。 在一些實施例中，病毒係諾羅病毒或其亞型、種或變體之成員。在一些實施例中，病毒係諾沃克病毒、夏威夷病毒(Hawaii virus)、雪山病毒(Snow Mountain virus)、莫斯科病毒(Mexico virus)、沙漠風暴病毒(Desert Shield virus)、南安普頓病毒(Southampton virus)、洛茲達雷病毒(Lordsdale virus)或威爾金森病毒(Wilkinson virus)或其亞型或變體。在一些實施例中，病毒係諾羅病毒之成員且可分類為基因群GI、基因群GII、基因群GIII、基因群GIV或基因群GV。 在一些實施例中，病毒係ssRNA病毒，例如負鏈(反義) ssRNA病毒，例如V群病毒。在一些實施例中，PRR (例如，STING)之表現係經由宿主產生之RNA或病毒源RNA來誘導。在一些實施例中，病毒係負鏈(反義) ssRNA病毒，且係以下各科之成員：玻那病毒科(
Bornaviridae
)、絲狀病毒科(
Filoviridae
)、副黏液病毒科、桿狀病毒科、奈米病毒科(
Nyamiviridae
)、沙粒病毒科、布尼亞病毒科、蛇形病毒科(
Ophioviridae
)或正黏液病毒科或其他負鏈(反義) ssRNA病毒科。實例性負鏈(反義) ssRNA病毒及病毒屬包括(但不限於)博納病(Brona disease)病毒、伊波拉病毒(Ebola virus)、馬堡病毒(Marburg virus)、麻疹病毒、腮腺炎病毒、立百病毒(Nipah virus)、亨德拉病毒(Hendra virus)、呼吸道融合病毒、流行性感冒及副流行性感冒病毒、間質肺炎病毒、新城雞瘟病毒、δ病毒(例如，D型肝炎病毒)、地抽病毒(
Dichohavirus
)、歐洲山梣環斑病毒屬(
Emaravirus
)、尼亞病毒屬(
Nyavirus
)、纖細病毒屬(
Tenuivirus
)、葉脈曲張病毒屬(
Varicosavirus
)或其亞型、種或變體。 在一些實施例中，病毒係ssRNA反轉錄病毒(ssRNA RT病毒)，例如VI群病毒。在一些實施例中，PRR (例如，STING)之表現係經由宿主產生之RNA或病毒源RNA來誘導。在一些實施例中，病毒係ssRNA RT病毒且係轉座病毒科(
Metaviridae
)、假病毒科(
Pseudoviridae
)或反轉錄病毒科(
Retroviridae
)或其他ssRNA RT病毒科之成員。實例性ssRNA RT病毒及病毒屬包括(但不限於)變換病毒屬(
Metavirus
)、漂遊病毒屬(
Errantivirus
)、α反轉錄病毒屬(
Alpharetrovirus
) (例如，禽白血病病毒、勞斯肉瘤病毒(Rous sarcoma virus))、β反轉錄病毒屬(
Betaretrovirus
) (例如，小鼠乳房腫瘤病毒)、γ反轉錄病毒屬(
Gammaretrovirus
) (例如，鼠類白血病病毒、貓白血病病毒)、δ反轉錄病毒屬(
Deltaretrovirus
) (例如，人類嗜T淋巴球病毒)、ε反轉錄病毒屬(
Epsilonretrovirus
) (例如，大眼梭鱸皮膚肉瘤病毒(Walleye dermal sarcoma virus))、慢病毒屬(
Lentivirus
) (例如，人類免疫缺失病毒1 (HIV))或其亞型、種或變體。 在一些實施例中，病毒係DNA病毒，例如dsDNA病毒或ssDNA病毒。在一些實施例中，病毒係dsDNA病毒，例如I群病毒，且PRR (例如，STING)之表現係經由宿主產生之RNA或病毒源RNA來誘導。在一些實施例中，病毒係dsDNA病毒且係以下各科之成員：肌病毒科(
Myoviridae
)、短尾病毒科(
Podoviridae
)、長尾病毒科(
Siphoviridae
)、異皰疹病毒科(
Alloherpesviridae
)、皰疹病毒科(
Herpesviridae
)、軟體動物皰疹病毒科(
Malacoherpesviridae
)、脂毛病毒科(
Lipothrixviridae
)、古噬菌體科(
Rudiviridae
)、腺病毒科(
Adenoviridae
)、壺狀病毒科(
Ampullaviridae
)、囊泡病毒科(
Ascoviridae
)、非洲豬瘟病毒科(
Asfarviridae
)、棒狀病毒科(
Baculoviridae
)、雙尾病毒科(
Bicaudaviridae
)、克拉病毒科(
Clavaviridae
)、被脂病毒科(
Corticoviridae
)、微小紡錘體形病毒科(
Fuselloviridae
)、球狀病毒科(
Globuloviridae
)、滴狀病毒科(
Guttaviridae
)、唾液腺肥大病毒科(
Hytrosaviridae
)、虹彩病毒科(
Iridoviridae
)、馬賽病毒科(
Marseilleviridae
)、線極病毒科(
Nimaviridae
)、潘多拉病毒科(
Pandoraviridae
)、乳頭瘤病毒科(
Papillomaviridae
)、藻類DNA病毒科(
Phycodnaviridae
)、多DNA病毒(
Polydnaviruses
)、多瘤病毒科(
Polymaviridae
)、痘病毒科(
Poxviridae
)、塞若普病毒科(
Sphaerolipoviridae
)、蓋病毒科(
Tectiviridae
)或特瑞病毒科(
Turriviridae
)或其他dsDNA病毒科。實例性dsDNA病毒及病毒屬包括(但不限於)腰鞭毛蟲病毒屬(
Dinodnavirus
)、裸桿狀病毒(
Nudivirus
)、天花、人類皰疹病毒、水痘帶狀皰疹病毒、多瘤病毒6、多瘤病毒7、多瘤病毒9、多瘤病毒10、JC病毒、BK病毒、KI病毒、WU病毒、默克細胞(Merkel cell)多瘤病毒、棘狀毛髪發育不良相關之多瘤病毒、MX多瘤病毒、猿猴病毒40或其亞型、種或變體。 在一些實施例中，病毒係ssDNA病毒，例如II群病毒，且PRR (例如，STING)之表現係經由宿主產生之RNA或病毒源RNA來誘導。在一些實施例中，病毒係ssDNA病毒且係以下各科之成員：指環病毒科(
Anelloviridae
)、貝塞病毒科(
Bacillariodnaviridiae
)、二分DNA病毒科(
Bidnaviridae
)、圓環病毒科(
Circoviridae
)、雙生病毒科(
Geminiviridae
)、絲形病毒科(
Inoviridae
)、微小噬菌體科(
Microviridae
)、矮化病毒科(
Nanoviridae
)、小DNA病毒科(
Parvoviridae
)或圈形病毒科(
Spiraviridae
)或其他ssDNA病毒科。實例性ssDNA病毒及病毒屬包括(但不限於)細環病毒、中細環病毒、小細環病毒、環轉病毒屬(
Gyrovirus
)、環狀病毒(
Circovirus
)、小病毒B19、博卡小病毒(
Bocaparvovirus
)、地潘度小病毒(
Dependoparvovirus
)、赤小病毒(
Erythroparvovirus
)、原小病毒屬(
Protoparvovirus
)、四小病毒(
Tetraparvovirus
)、家蠶濃核病毒2型、淋巴器官細小樣病毒、肝胰臟細小樣病毒或其亞型、種或變體。 在一些實施例中，病毒係dsDNA反轉錄酶(RT)病毒，例如VII群病毒，且PRR (例如，STING)之表現係經由宿主產生之RNA或病毒源RNA來誘導。在一些實施例中，病毒係dsDNA RT病毒且係肝脫氧核糖核酸病毒科(
Hepadnaviridae
)或花椰菜病毒科(
Caulimoviridae
)或其他dsDNA RT病毒科之成員。實例性dsDNA RT病毒及病毒屬包括(但不限於) B型肝炎病毒或其亞型、種或變體。 在一些實施例中，病毒(例如，本文所述之病毒)潛伏在例如細胞內。在一些實施例中，病毒係RNA病毒(例如，雙鏈RNA (dsRNA)病毒、單鏈RNA (ssRNA)病毒(例如，正鏈(有義) ssRNA病毒或負鏈(反義) ssRNA病毒)或ssRNA反轉錄病毒)或DNA病毒(例如，dsDNA病毒、ssDNA病毒或dsDNA反轉錄病毒)且潛伏在例如細胞內。在一些實施例中，例如根據Baltimore分類系統，病毒係I群、II群、III群、IV群、V群、VI群或VII群類病毒，且潛伏在例如細胞內。 在一些實施例中，病毒係RNA病毒(例如，本文所述之RNA病毒)且潛伏在例如細胞內。在一些實施例中，病毒係ssRNA反轉錄病毒(ssRNA RT病毒)，例如VI群病毒，且潛伏在例如細胞內。在一些實施例中，病毒係人類免疫缺失病毒1 (HIV))或其亞型、種或變體，且潛伏在例如細胞內。 在一些實施例中，誘導患有本文所揭示病毒感染之個體中之PRR (例如，STING)表現之方法可增加PRR表現(例如，STING表現)。在一些實施例中，誘導約1.1倍、約1.2倍、約1.3倍、約1.4倍、約1.5倍、約1.6倍、約1.7倍、約1.8倍、約1.9倍、約2倍、約2.5倍、約3倍、約4倍、約5倍、約7.5倍、約10倍、約15倍、約20倍、約25倍、約30倍、約40倍、約50倍、約75倍、約100倍、約150倍、約200倍、約250倍、約500倍、約1000倍、約1500倍、約2500倍、約5000倍、約10,000倍或更大的PRR (例如，STING)表現。在一些實施例中，PRR (例如STING)表現之誘導發生在投與式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽之約5分鐘內。在一些實施例中，PRR (例如，STING)表現之誘導發生在向個體投與式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽後約10分鐘、約15分鐘、約20分鐘、約25分鐘、約30分鐘、約45分鐘、約1小時、約1.5小時、約2小時、約3小時、約4小時、約5小時、約6小時、約7小時、約8小時、約10小時、約12小時或更長時間內。
細菌感染之治療
最新研究已顯示，PRR (例如，STING)在宿主識別源自多個種之細菌感染方面起關鍵作用(Dixit, E.及Kagan, J.C.
Adv Immunol
(2013) 117:99-125)。在一些情形下，細菌可在指數生長期期間分泌核酸(例如，單核球增多性李氏菌；Abdullah, Z.等人，
EMBO J
(2012) 31:4153-4164)，其進而藉由諸如RIG-I等PRR檢測到且因此有助於進一步PRR表現之誘導。在其他情形下，例如對於嗜肺軍團菌，細菌DNA在感染進程期間進入胞質液中且轉錄至RIG-I之RNA配體中(Chiu, Y. H.等人，
Cell
(2009) 138:576-591)，由此觸發下游PRR介導之信號傳導事件。PRR表現(例如，STING表現)可在識別在吞噬作用攝取細菌期間釋放之RNA後進一步經誘導。另外，諸如肽聚醣(例如胞壁醯二肽，即MDP)等細菌細胞壁組份可用作活化及誘導PRR (即NOD2)之配體，且諸如環狀二核苷酸(例如，環狀二-GMP)等細菌源核酸可結合且活化PRR、尤其STING。在一些實施例中，一或多種PRR之表現可經由本文未明確列舉之其他方式來誘導。 在一些實施例中，誘導本文所揭示PRR (例如，STING)表現之方法包含向患有微生物感染(例如，細菌感染)之個體投與式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽。在一些實施例中，誘導本文所揭示PRR (例如，STING)表現之方法包含向患有微生物感染(例如，細菌感染)之個體投與式(I-a)化合物或其醫藥上可接受之鹽。在一些實施例中，細菌係革蘭氏陰性(Gram-negative)細菌或革蘭氏陽性細菌。實例性細菌包括(但不限於)李氏菌屬(
Listeria
) (例如，單核球增多性李氏菌)、弗朗西斯氏菌屬(
Francisella
) (例如，土倫病弗朗西斯氏菌(
Francisella tularensis
))、分枝桿菌(
Mycobacteria
) (例如，結核分枝桿菌(
Mycobacteria tuberculosis
))、布氏桿菌屬(Brucella) (例如，流產布氏桿菌(Brucella abortis))、鏈球菌屬(
Streptococcus
) (例如，B群鏈球菌(group B Streptococcus))、軍團菌屬(
Legionella
) (例如，嗜肺軍團菌)、大腸桿菌屬(
Escherichia
) (例如，大腸桿菌(
Escherichia coli
))、假單胞菌屬(
Pseudomonas
) (例如，銅綠假單胞菌(
Psuedomonas aeruginosa
))、沙門桿菌屬(Salmonella) (例如，傷寒沙門桿菌(
Salmonella typhi
))、志賀桿菌屬(
Shigella
) (例如，弗氏志賀桿菌(
Shigella flexneri
))、曲狀桿菌屬(
Campylobacter
) (例如，空腸曲狀桿菌(
Campylobacter jejuni
))、梭菌屬(
Clostridium
) (例如，肉毒桿菌(
Clostrodium botulinum
))、腸球菌屬(
Enterococcus
) (例如，糞腸球菌(
Enterococcus faecalis
))、弧菌屬(
Vibrio
) (例如，霍亂弧菌(
Vibrio cholera
))、耶爾辛氏菌屬(
Yersinia
) (例如，鼠疫耶爾辛氏菌(
Yersinia pestis
))、葡萄球菌屬(
Staphylococcus
) (例如，金黃色葡萄球菌(
Staphylococcus aureus
))或其他屬、種、其亞型或變體。 在一些實施例中，誘導患有本文所揭示細菌感染之個體中之PRR (例如，STING)表現之方法可增加PRR表現(例如，STING表現)。在一些實施例中，誘導約1.1倍、約1.2倍、約1.3倍、約1.4倍、約1.5倍、約1.6倍、約1.7倍、約1.8倍、約1.9倍、約2倍、約2.5倍、約3倍、約4倍、約5倍、約7.5倍、約10倍、約15倍、約20倍、約25倍、約30倍、約40倍、約50倍、約75倍、約100倍、約150倍、約200倍、約250倍、約500倍、約1000倍、約1500倍、約2500倍、約5000倍、約10,000倍或更大的PRR (例如，STING)表現。在一些實施例中，PRR (例如STING)表現之誘導發生在投與式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽之約5分鐘內。在一些實施例中，PRR (例如，STING)表現之誘導發生在投與式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽後約10分鐘、約15分鐘、約20分鐘、約25分鐘、約30分鐘、約45分鐘、約1小時、約1.5小時、約2小時、約3小時、約4小時、約5小時、約6小時、約7小時、約8小時、約10小時、約12小時或更長時間內。
醫藥組合物
本發明之特徵在於誘導個體中之PRR (例如，STING)表現之方法，該等方法包含投與式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽。 儘管可單獨投與本發明化合物(例如，式(I)化合物)，但較佳投與呈醫藥組合物或調配物形式之該化合物，其中該等化合物與一或多種醫藥上可接受之稀釋劑、賦形劑或載劑組合。本發明化合物可經調配以任一便捷方式投與用於人類或獸醫醫學中。在某些實施例中，醫藥製劑中所包括之化合物可自身有活性，或可為前藥，例如能夠在生理環境中轉化成活性化合物。無論所選投與途徑如何，藉由熟習此項技術者已知之其他習用方法，將可以適宜水合形式使用之本發明化合物及/或本發明醫藥組合物調配成例如下文所述之醫藥上可接受之劑型。 醫藥組合物中之本發明化合物(例如式(I)化合物)之量及濃度以及投與個體之醫藥組合物之量可基於諸如以下等臨床相關因素來選擇：個體之醫療相關特徵(例如，年齡、體重、性別、其他醫療條件及諸如此類)、醫藥組合物中之化合物之溶解度、化合物之功效及活性以及醫藥組合物之投與方式。關於投與途徑及劑量方案之其他資訊，讀者可參照Comprehensive Medicinal Chemistry (Corwin Hansch; Chairman of Editorial Board), Pergamon Press 1990之第5卷中之第25.3章。 因此，本發明之另一態樣提供醫藥上可接受之組合物，其包含與一或多種醫藥上可接受之載劑(添加劑)及/或稀釋劑調配在一起之治療有效量或預防有效量之本文所述化合物(例如，式(I)化合物)。如下文詳細闡述，本發明之醫藥組合物可經特殊調配用於以固體或液體形式投與，該等形式包括適於經口或非經腸投與、例如藉由經口劑量或藉由以例如無菌溶液或懸浮液形式皮下、肌內或靜脈內注射之彼等。然而，在某些實施例中，可僅將標的化合物溶解或懸浮於無菌水中。在某些實施例中，醫藥製劑係無熱原的，即不會升高患者之體溫。 如本文所用片語「全身投與」、「以全身方式投與」、「周邊投與」及「以周邊方式投與」意指化合物並非直接投與至中樞神經系統中，使得其進入患者全身(system)且因此經歷代謝及其他類似過程，例如皮下投與。 如本文所用片語「醫藥上可接受」係指彼等在合理藥學判斷範疇內適於與人類及動物組織接觸使用且無過度毒性、刺激性、過敏反應或其他問題或併發症且與合理益處/風險比相稱之彼等化合物、材料、組合物及/或劑型。 如本文所用片語「醫藥上可接受之載劑」意指醫藥上可接受之材料、組合物或媒劑，例如液體或固體填充劑、稀釋劑、穩定劑、賦形劑、溶劑或囊封材料，其參與將標的拮抗劑自身體之一個器官或部分攜載或轉運至身體之另一器官或部分。在可與調配物之其他成分相容且不損害患者之意義上，每一載劑必須係「可接受的」。可充當醫藥上可接受之載劑之材料之一些實例包括(但不限於)：(1) 糖，例如乳糖、葡萄糖及蔗糖；(2) 澱粉，例如玉米澱粉及馬鈴薯澱粉；(3) 纖維素及其衍生物，例如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素及乙酸纖維素；(4) 粉末狀黃蓍膠；(5) 麥芽；(6) 明膠；(7) 滑石；(8) 賦形劑，例如可可脂及栓劑蠟；(9) 油，例如花生油、棉籽油、紅花油、芝麻油、橄欖油、玉米油及大豆油；(10) 二醇，例如丙二醇；(11) 多元醇，例如甘油、山梨醇、甘露醇及聚乙二醇；(12) 酯，例如油酸乙酯及月桂酸乙酯；(13) 瓊脂；(14) 緩衝劑，例如氫氧化鎂及氫氧化鋁；(15) 海藻酸；(16) 抗壞血酸；(17) 無熱原水；(18) 等滲鹽水；(19) 格林氏溶液(Ringer's solution)；(20) 乙醇；(21) 磷酸鹽緩衝溶液；(22) 環糊精，例如Captisol®；及(23) 醫藥調配物中所採用之其他無毒相容性物質，例如抗氧化劑及抗微生物劑。 如上所述，本文所述化合物之某些實施例可含有鹼性官能基(例如胺)，且因此能夠與醫藥上可接受之酸形成醫藥上可接受之鹽。就此而言，術語「醫藥上可接受之鹽」係指本發明化合物之相對無毒之無機及有機酸加成鹽。該等鹽可在本發明化合物之最後分離及純化期間原位製備，或藉由使呈游離鹼形式之經純化本發明化合物與適宜有機或無機酸單獨反應並分離由此形成之鹽來製備。代表性鹽包括氫溴酸鹽、鹽酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、硝酸鹽、乙酸鹽、戊酸鹽、油酸鹽、棕櫚酸鹽、硬脂酸鹽、月桂酸鹽、苯甲酸鹽、乳酸鹽、磷酸鹽、甲苯磺酸鹽、檸檬酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、萘酸鹽、甲磺酸鹽、葡庚糖酸鹽、乳糖酸鹽及月桂基磺酸鹽類及諸如此類(參見例如Berge等人(1977) 「Pharmaceutical Salts」,
J. Pharm. Sci.
66:1-19)。 在其他情形下，本發明化合物可含有一或多個酸性官能基，且因此能夠與醫藥上可接受之鹼形成醫藥上可接受之鹽。在該等情況下，術語「醫藥上可接受之鹽」係指本發明化合物(例如式(I)化合物)之相對無毒之無機及有機鹼加成鹽。同樣，該等鹽可在化合物之最後分離及純化期間原位製備，或藉由使呈游離酸形式之經純化化合物與適宜鹼(例如，醫藥上可接受之金屬陽離子之氫氧化物、碳酸鹽或碳酸氫鹽)、與氨或與醫藥上可接受之有機一級、二級或三級胺單獨反應來製備。代表性鹼金屬鹽或鹼土金屬鹽包括鋰鹽、鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽及鋁鹽及諸如此類。可用於形成鹼加成鹽之代表性有機胺包括乙胺、二乙胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、六氫吡嗪及諸如此類(參見例如Berge等人，上文文獻)。 潤濕劑、乳化劑及潤滑劑(例如月桂基硫酸鈉及硬脂酸鎂)以及著色劑、釋放劑、包覆劑、甜味劑、矯味劑及芳香劑、防腐劑及抗氧化劑亦可存在於組合物中。醫藥上可接受之抗氧化劑之實例包括：(1) 水溶性抗氧化劑，例如抗壞血酸、半胱胺酸鹽酸鹽、硫酸氫鈉、偏亞硫酸氫鈉、亞硫酸鈉及諸如此類；(2) 油溶性抗氧化劑，例如抗壞血酸棕櫚酸酯、丁基化羥基苯甲醚(BHA)、丁基化羥基甲苯(BHT)、卵磷脂、沒食子酸丙酯、α-生育酚及諸如此類；及(3) 金屬螯合劑，例如檸檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨醇、酒石酸、磷酸及諸如此類。 醫藥上可接受之載劑以及潤濕劑、乳化劑、潤滑劑、著色劑、釋放劑、包覆劑、甜味劑、矯味劑、芳香劑、防腐劑、抗氧化劑及其他額外組分可以介於本文所述組合物之約0.001%與99%之間之量存在。舉例而言，該等醫藥上可接受之載劑以及潤濕劑、乳化劑、潤滑劑、著色劑、釋放劑、包覆劑、甜味劑、矯味劑、芳香劑、防腐劑、抗氧化劑及其他額外組分可以本文所述組合物之約0.005%、約0.01%、約0.05%、約0.1%、約0.25%、約0.5%、約0.75%、約1%、約1.5%、約2%、約3%、約4%、約5%、約6%、約7%、約8%、約9%、約10%、約15%、約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約85%、約90%、約95%或約99%存在。 本發明之醫藥組合物可呈適於經口投與之形式，例如液體或固體經口劑型。在一些實施例中，液體劑型包含懸浮液、溶液、舔劑、乳液、飲料、酏劑或糖漿。在一些實施例中，固體劑型包含膠囊、錠劑、粉末、糖衣片或粉末。醫藥組合物可呈適於單一投與確切劑量之單位劑型。除本文所述之化合物(例如，式(I)化合物)或其醫藥上可接受之鹽外，醫藥組合物可包含醫藥上可接受之載劑，且可視情況進一步包含一或多種醫藥上可接受之賦形劑，例如穩定劑(例如黏合劑，例如聚合物，例如沈澱抑制劑)、稀釋劑、黏合劑及潤滑劑。 在一些實施例中，本文所述之組合物包含用於經口投與之液體劑型，例如溶液或懸浮液。在其他實施例中，本文所述之組合物包含能夠直接壓縮成錠劑之用於經口投與之固體劑型。另外，該錠劑可包括其他藥劑或醫藥劑、載劑及/或佐劑。實例性醫藥組合物包括例如包含本發明化合物(例如，式(I)化合物)或其醫藥上可接受之鹽之壓縮錠劑(例如，直接壓縮錠劑)。 本發明調配物包括適於非經腸投與之彼等。調配物可以便捷方式以單位劑型呈現且可藉由醫藥領域內熟知之任何方法製備。可與載劑材料組合產生單一劑型之活性成分之量將端視所治療主體、具體投與模式而變化。可與載劑材料組合產生單一劑型之活性成分之量通常將為產生治療效應之化合物的量。通常，除100%外，此量將介於活性成分之約1%至約99%之間，較佳約5%至約70%之間，最佳約10%至約30%之間。適於非經腸投與之本發明醫藥組合物包含本發明化合物與一或多種醫藥上可接受之無菌等滲水性或非水性溶液、分散液、懸浮液或乳液或無菌粉末的組合，該等無菌粉末可在即將使用之前重構成無菌可注射溶液或分散液，該等醫藥組合物可含有抗氧化劑、緩衝劑、抑菌劑、可使調配物與預期接受者之血液等滲之溶質或懸浮劑或增稠劑。 可用於本發明醫藥組合物中之適當水性及非水性載劑之實例包括水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、聚乙二醇及諸如此類)及其適當混合物、植物油(例如橄欖油)及可注射有機酯(例如油酸乙酯)。可例如藉由使用諸如卵磷脂等包衣材料、藉由維持所需粒徑(在分散液之情形下)及藉由使用表面活性劑來維持適當流動性。 該等組合物亦可含有佐劑，例如防腐劑、潤濕劑、乳化劑及分散劑。微生物作用之預防可藉由納入各種抗細菌及抗真菌劑(例如對羥基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚山梨酸及諸如此類)來確保。亦可期望將等滲劑(例如糖、氯化鈉及諸如此類)納入組合物中。另外，可藉由納入延遲吸收之藥劑(例如單硬脂酸鋁及明膠)來達成可注射醫藥形式之延長吸收。 在一些情形下，為延長本發明化合物(例如，式(I)化合物)之效應，可期望減緩來自皮下或肌內注射之藥物之吸收。此可藉由使用具有較差水溶解度之結晶或非晶形材料之液體懸浮液來實現。因此，藥物之吸收速率取決於其溶解速率，而溶解速率進而可取決於晶體大小及結晶形式。或者，本發明化合物之非經腸投與形式之延遲吸收係藉由將化合物溶解或懸浮於油性媒劑中來實現。 在一些實施例中，可有利地以持續方式投與本發明化合物(例如，式(I)化合物)。應瞭解，可使用提供持續吸收特徵之任何調配物。在某些實施例中，持續吸收可藉由組合本發明化合物與減緩其釋放至體循環中之性質之其他醫藥上可接受之成分、稀釋劑或載劑來達成。
投與途徑
用於本文所述方法中之化合物及組合物可端視所選投與途徑以多種形式投與個體，如熟習此項技術者所理解。用於本文所述方法中之組合物之實例性投與途徑包括局部、經腸或非經腸施用。局部施用包括(但不限於)皮上、吸入、灌腸劑、滴眼劑、滴耳劑及經由身體中之黏膜施用。經腸施用包括經口投與、直腸投與、陰道投與及胃飼管。非經腸投與包括靜脈內、動脈內、囊內、眶內、心內、真皮內、經氣管、角質層下、關節內、囊下、蛛網膜下、脊椎內、硬膜外、胸骨內、腹膜內、皮下、肌內、穿皮、經鼻、肺內、鞘內、直腸及局部投與模式。非經腸投與可藉由在所選時間段內連續輸注來進行。在本發明之某些實施例中，包含式(I)化合物之本文所述組合物係經口投與。在本發明之其他實施例中，包含式(I)化合物之本文所述組合物係非經腸(例如，腹膜內)投與。在本發明之某些實施例中，包含式(I-a)化合物之本文所述組合物係經口投與。在本發明之其他實施例中，包含式(I-a)化合物之本文所述組合物係非經腸(例如，腹膜內)投與。 對於靜脈內、腹膜內或鞘內遞送或直接注射，組合物必須係無菌的且流化至組合物可藉由注射器遞送之程度。除水外，載劑可為等滲緩衝鹽水溶液、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇及液體聚乙二醇及諸如此類)及其適宜混合物。可例如藉由使用諸如卵磷酯等包衣、藉由維持所需粒徑(在分散液之情形下)及藉由使用表面活性劑來維持適當流動性。在許多情形下，較佳將等滲劑(例如糖、多元醇(例如甘露醇或山梨醇)及氯化鈉)納入組合物中。可藉由向組合物中納入延遲吸收之藥劑(例如，單硬脂酸鋁或明膠)來達成可注射組合物之長期吸收。 投與途徑之選擇將端視欲達成之局部或全身效應而定。舉例而言，對於局部效應，組合物可經調配用於局部投與且在期望其作用時直接施用。對於全身長期效應，組合物可經調配用於經腸投與且經由消化道給予。對於全身、立即及/或短期效應，組合物可經調配用於非經腸投與且藉由除經由消化道外之途徑給予。
劑量
藉由熟習此項技術者已知之習用方法將本發明組合物調配成可接受之劑型。可改變本發明組合物中活性成分(例如，式(I)化合物)之實際劑量值以獲得可在對個體無毒之情況下有效地達成針對特定個體、組合物及投與模式之期望治療反應的活性成分之量。所選劑量值將取決於多種藥物動力學因素，包括所用本發明具體組合物之活性、投與途徑、投與時間、所用具體藥劑之吸收速率、治療持續時間、與所用具體組合物組合使用之其他藥物、物質及/或材料、所治療個體之年齡、性別、體重、狀況、總體健康狀況及先前醫療史以及醫療技術中所熟知之類似因素。具有一般技術之醫師或獸醫可容易地確定並開列(prescribe)所需醫藥組合物之有效量。舉例而言，醫師或獸醫可以低於達成期望治療效應所需之量開始投用組合物中所用之本發明物質，並逐漸增加劑量直至達成期望效應。一般而言，本發明組合物之適宜日劑量將為可有效地產生治療效應之最低劑量之物質量。該有效劑量通常將端視上述因素而定。較佳地，治療組合物之有效日劑量可以分開投與之2個、3個、4個、5個、6個或更多個分次劑量以適宜間隔全天視情況以單位劑型投與。 每天投與(例如，經口或腹膜內)患有本文所述病症(例如，HBV感染)之個體之組合物之較佳治療劑量值介於約0.1 mg/kg至約1000 mg/kg之間(例如，約0.2 mg/kg、0.5 mg/kg、1.0 mg/kg、1.5 mg/kg、2 mg/kg、3 mg/kg、4 mg/kg、5 mg/kg、10 mg/kg、15 mg/kg、20 mg/kg、25 mg/kg、30 mg/kg、35 mg/kg、40 mg/kg、45 mg/kg、50 mg/kg、60 mg/kg、70 mg/kg、80 mg/kg、90 mg/kg、100 mg/kg、125 mg/kg、150 mg/kg、175 mg/kg、200 mg/kg、250 mg/kg、300 mg/kg、350 mg/kg、400 mg/kg、450 mg/kg、500 mg/kg、600 mg/kg、700 mg/kg、800 mg/kg、900 mg/kg或1000 mg/kg)。每天投與(例如，經口或腹膜內)個體之組合物之較佳預防劑量值介於約0.1 mg/kg至約1000 mg/kg之間(例如，約0.2 mg/kg、0.5 mg/kg、1.0 mg/kg、1.5 mg/kg、2 mg/kg、3 mg/kg、4 mg/kg、5 mg/kg、10 mg/kg、15 mg/kg、20 mg/kg、25 mg/kg、30 mg/kg、35 mg/kg、40 mg/kg、45 mg/kg、50 mg/kg、60 mg/kg、70 mg/kg、80 mg/kg、90 mg/kg、100 mg/kg、125 mg/kg、150 mg/kg、175 mg/kg、200 mg/kg、250 mg/kg、300 mg/kg、350 mg/kg、400 mg/kg、450 mg/kg、500 mg/kg、600 mg/kg、700 mg/kg、800 mg/kg、900 mg/kg或1000 mg/kg)。亦可調定該劑量(例如，可逐漸升高劑量直至出現毒性跡象，例如頭痛、腹瀉或噁心)。 亦可改變治療頻率。可對個體每天一或多次(例如，一次、兩次、三次、四次或更多次)治療或每如此多時間(例如，約每2小時、每4小時、每6小時、每8小時、每12小時或每24小時)治療。組合物可以1次或2次/24小時投與。治療時程可為不同持續時間，例如持續2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天或更多天、2週、1個月、2個月、4個月、6個月、8個月、10個月或1年以上。舉例而言，治療可為每天兩次持續3天、每天兩次持續7天、每天兩次持續10天。可以由不給予治療之時段分開之間隔(例如每週、每兩月或每月)重複治療週期。治療可為單一治療或可持續長至個體之壽命(例如，多年)。
患者選擇及監測
本文所述本發明之方法需要向個體投與式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽來誘導PRR (例如，STING)之表現。在一些實施例中，個體患有或經診斷患有病況，例如微生物感染。因此，可藉由首先評估患者及/或個體以確定個體是否感染微生物感染(例如，病毒感染或細菌感染)來選擇患者及/或個體以使用式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽治療。可使用業內已知之方法將個體評估為感染微生物感染(例如，病毒感染或細菌感染)。亦可例如在投與本文所述之化合物(例如，式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽後監測個體。 在一些實施例中，個體係哺乳動物。在一些實施例中，個體係人類。在一些實施例中，個體係成人。在一些實施例中，個體患有微生物感染(例如，病毒感染、細菌感染、真菌感染或寄生蟲感染)。在一些實施例中，個體患有病毒感染(例如，由RNA病毒或DNA病毒引起之感染)。在一些實施例中，個體患有細菌感染。 在一些實施例中，個體感染病毒。在一些實施例中，個體感染病毒，且病毒處於潛伏期。在一些實施例中，個體感染RNA病毒(例如，雙鏈RNA (dsRNA)病毒、單鏈RNA (ssRNA)病毒(例如，正鏈(有義) ssRNA病毒或負鏈(反義) ssRNA病毒)或ssRNA反轉錄病毒)或DNA病毒(例如，dsDNA病毒、ssDNA病毒或dsDNA反轉錄病毒)且病毒處於潛伏期。在一些實施例中，例如根據Baltimore分類系統，個體感染I群、II群、III群、IV群、V群、VI群或VII群類病毒，且病毒處於潛伏期。在一些實施例中，個體感染RNA病毒(例如，本文所述之RNA病毒)，且病毒處於潛伏期。在一些實施例中，病毒係ssRNA反轉錄病毒(ssRNA RT病毒)，例如VI群病毒，且潛伏在例如細胞內。在一些實施例中，病毒係人類免疫缺失病毒1 (HIV))或其亞型、種或變體，且潛伏在例如細胞內。 在一些實施例中，個體感染ssRNA病毒，例如正鏈(有義) ssRNA病毒，例如IV群病毒。在一些實施例中，個體感染諾羅病毒或其亞型、種或變體。在一些實施例中，個體感染諾沃克病毒、夏威夷病毒、雪山病毒、莫斯科病毒、沙漠風暴病毒、南安普頓病毒、洛茲達雷病毒或威爾金森病毒或其亞型或變體。在一些實施例中，個體感染諾羅病毒(例如諾羅病毒基因群GI、基因群GII、基因群GIII、基因群GIV或基因群GV)中之成員。 在一些實施例中，個體感染病毒且有症狀。在一些實施例中，個體感染病毒且無症狀。在一些實施例中，個體感染ssRNA反轉錄病毒(ssRNA RT病毒)，例如VI群病毒，且無症狀。
組合療法
在一些實施例中，其他治療劑可與本發明組合物一起投與來治療微生物感染(例如，病毒感染、細菌感染、真菌感染或寄生蟲感染)或其任何症狀或相關病況。當採用組合療法時，其他治療劑可以單獨調配物形式投與或可與本文所述之任一組合物組合。 舉例而言，本文所述方法中之任一者可進一步包含投與治療有效量之另一藥劑。在一些實施例中，另一藥劑係抗病毒劑、抗細菌劑或抗癌劑。在一些實施例中，抗病毒劑包含干擾素、核苷類似物、非核苷抗病毒或免疫增強子(例如，非干擾素免疫增強子或小分子免疫增強子)。在一些實施例中，抗病毒劑係衣殼抑制劑、進入抑制劑、分泌抑制劑、微小RNA、反義RNA劑、RNAi劑或經設計以抑制病毒RNA或DNA之其他藥劑。在一些實施例中，抗病毒劑選自恩替卡韋(entecavir)、拉夫米定(lamuvidine)、阿德福韋(adefovir)、達如那韋(darunavir)、索非不韋(sofosbuvir)、特拉匹韋(telaprevir)、泰諾福韋(tenofovir)、齊多夫定(zidovudine)及利巴韋林(ribavirin)。在一些實施例中，抗細菌劑選自慶大黴素(gentamicin)、康黴素(kanamycin)、鏈黴素(streptomycin)、氯黴素(chloramphenicol)、頭孢托羅(ceftobiprole)、阿莫西林(amoxicillin)、青黴素(penicillin)、枯草菌素(bacitracin)、四環素(tetracycline)、利福布汀(rifabutin)、替吉環素(tigecycline)及萬古黴素(vancomycin)。
實例
藉由以下實例及合成方案進一步說明本發明，該等實例及合成方案不應理解為將本發明之範疇或精神限於本文所述之特定程序。應理解，提供該等實例以說明某些實施例且不欲藉此限制本發明之範疇。進一步應理解，熟習此項技術者可在不背離本發明之精神及/或隨附申請專利範圍之範疇下，採用其自身可建議之多個其他實施例、其修改及等效內容。 以下實例及本文中別處所用之縮寫係： DCA 二氯乙酸 DCC
N,N'
-二環己基碳化二亞胺 DCM 二氯甲烷 DMAP 4-二甲基胺基吡啶 ETT 5-(乙基硫基)-1
H
-四唑 h 小時 IPA 異丙醇 LCMS 液相層析-質譜 MeOH 甲醇 PTSA 對甲苯磺酸 r.t. 室溫 THF 四氫呋喃 TLC 薄層層析
實例 1. 本發明實例性化合物之合成 步驟 1 ： 合成 5’-OH-3’- 乙醯丙基 -2’F-dA (2) ： 將乙醯丙酸(2.148 g, 18.5 mmol)溶解於無水二噁烷(50 mL)中且將溶液在冰水浴上冷卻至5-10℃。經1 h逐份添加DCC (1.939 g, 9.4 mmol)。移除冰水浴且將混合物升溫至室溫並攪拌2小時。過濾掉二環己基尿素沈澱物，且用無水二噁烷(10 mL)洗滌沈澱物。然後將濾液添加至5’DMT-2’F-3’OH-dA ((
1
), 5.0 g, 7.4 mmol)於無水吡啶(50 mL)中之溶液中且在氬下添加催化量之DMAP。在室溫下攪拌2小時後，將混合物蒸發至乾燥。將殘餘物溶解於DCM (150 mL)中且用5% NaHCO
3
(100 mL)及鹽水(100 mL)洗滌。分離有機相，經Na
2
SO
4
乾燥並在減壓下濃縮，以獲得白色固體狀期望產物(
2)
。產物不經進一步純化即用於下一步驟中。
步驟 2 ( 三苯甲基化 ) ： 合成 4- 側氧基戊酸 (2R,3R,4R,5R)-5-(6- 苯甲醯胺基 -9H- 嘌呤 -9- 基 )-4- 氟 -2-( 羥基甲基 ) 四氫呋喃 -3- 基酯 (3) ： 將5’-OH-3’-乙醯丙基-2’F-dA (
1
)溶解於DCM (100 mL)中且然後添加水(1.33 mL, 74 mmol)。添加DCM (100 mL)中之6% DCA，將反應混合物在室溫下攪拌10-15 min。藉由添加甲醇(25 mL)淬滅反應混合物。用5% NaHCO
3
溶液(150 mL)及鹽水(150 mL)洗滌所得混合物。分離有機層，經Na
2
SO
4
乾燥並在減壓下濃縮，以獲得粗殘餘物。在combi-flash矽膠管柱層析上用DCM中之0-5% MeOH溶析來純化粗殘餘物，以獲得3.45 g (62%產率)白色固體狀期望產物(
3
)。
步驟 3 ： 4- 側氧基戊酸 (2R,3R,4R,5R)-5-(6- 苯甲醯胺基 -9H- 嘌呤 -9- 基 )-2-((((2- 氰基乙氧基 )(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4- 二側氧基 -3,4- 二氫嘧啶 -1(2H)- 基 )-4- 氟 -2-( 羥基甲基 ) 四氫呋喃 -3- 基 ) 氧基 ) 硫代磷醯基 ) 氧基 ) 甲基 )-4- 氟四氫呋喃 -3- 基酯 (5) (1) (i)( 偶合 ) ：
將5’OH-3’-乙醯丙基化-2’F-去氧-腺苷((
3
), 700 mg, 1.48 mmol)及5’DMT-2’F-3’CED-亞磷醯胺-去氧-尿苷((
4
), 1.66 g, 2.22 mmol)混合物在高真空下乾燥1-2小時。用氬沖洗整個含有反應混合物之R.B.燒瓶。將無水乙腈(40 mL)添加至反應混合物中，然後在氬氣氛下添加乙腈溶液(5.0 mL)中之ETT (279 mg, 2.146 mmol)。將所得混合物在室溫下在氬下攪拌2 h。TLC分析顯示反應完成後，立即添加水(80 µL, 2當量至醯胺)。所得混合物用於下一步驟中。
(ii) ( 硫化 ) ：
在矽化燒瓶中，將Beaucage試劑(3H-BD) (592 mg, 2.96 mmol)溶解於乙腈(5.0 mL)中。將含有(
5
)之上述偶合反應混合物在氬氣氛下添加至硫化試劑(3H-BD)於乙腈中之溶液中且將所得混合物在室溫下攪拌45分鐘以允許硫化反應完成。然後添加甲醇(10 mL)且將所得混合物攪拌30 min。在減壓下濃縮反應混合物。將粗殘餘物溶解於DCM (100 mL)中並用水(75 mL)洗滌。分離有機層，經Na
2
SO
4
乾燥，且用於下一步驟(脫三苯甲基化)中。
(2) 脫三苯甲基化：
將含有來自先前步驟之產物之DCM溶液冷卻至R.B.燒瓶中之冰水浴。添加DCM:MeOH (7:3, 100 mL)中之5% PTSA溶液且將所得混合物攪拌15分鐘以允許脫三苯甲基化反應完成。然後添加水(50 mL)並將所得混合物再攪拌15分鐘。將反應混合物轉移至分液漏斗水且分離各相。用5% NaHCO
3
溶液(100 mL)洗滌有機層直至將水層之pH添加至7.0以上。然後經Na
2
SO
4
乾燥有機層並在減壓下濃縮。使用Combiflash矽膠管柱層析用DCM中之0-5% MeOH溶析來純化粗產物，以獲得960 mg白色固體狀期望產物(
5
)。
步驟 4 ( 乙醯丙基去保護 ) ： 硫代磷酸 O-(((2R,3R,4R,5R)-5-(6- 苯甲醯胺基 -9H- 嘌呤 -9- 基 )-4- 氟 -3- 羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲基 )O-(2- 氰基乙基 )O-((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4- 二側氧基 -3,4- 二氫嘧啶 -1(2H)- 基 )-4- 氟 -2-( 羥基甲基 ) 四氫呋喃 -3- 基 ) 酯 (6) 用吡啶:乙酸(3:2)混合物中之0.5M一水合肼處理3’-乙醯丙基保護之二核苷酸硫代磷酸酯且將所得混合物在室溫下攪拌15分鐘。TLC分析顯示反應完成後，然後立即將2,4-戊二酮(2.0 mL)添加至反應混合物中以淬滅未反應之水合肼。在減壓下移除揮發物且將所得混合物分配於DCM (50 mL)中之25% IPA與水(50 mL)之間。分離有機層並在減壓下濃縮至乾燥以獲得稠液體，將其與甲苯(2 × 15 mL)共蒸發，以獲得粗殘餘物。使用Combiflash矽膠管柱層析用DCM中之0-10% MeOH溶析來純化粗產物，以獲得725 mg白色固體狀期望產物(
6
)。
步驟 5a ： N-(9-((2R,3R,3aR,7aR,9R,10R,10aR,14aR)-5,12- 雙 (2- 氰基乙氧基 )-9-(2,4- 二側氧基 -3,4- 二氫嘧啶 -1(2H)- 基 )-3,10- 二氟 -5,12- 二硫代八氫 -2H,7H- 二呋喃并 [3,2-d:3',2'-j][1,3,7,9] 四氧雜 [2,8] 二磷環十二烷 -2- 基 )-9H- 嘌呤 -6- 基 ) 苯甲醯胺 (7) (i) 環化 ：
將二核苷酸硫代磷酸三酯(
6
) (1當量)及2-氰基乙基四異丙基亞磷醯胺(雙醯胺) (1當量)溶解於無水乙腈及無水DCM之混合物(2:1, 30 mL)中。然後在惰性氣氛下經1小時之時段將二異丙基胺基四唑(1當量)分4份添加至反應混合物中。將溶液在室溫下再攪拌2 h且然後添加ETT (2.0當量)並將反應混合物攪拌過夜。然後將去氧水(29 μL)添加至反應混合物中。粗產物不經進一步純化即用於下一步驟。
(ii)
硫化(合成經保護環狀磷酸硫代二磷酸酯)：將Beaucage試劑(3H-BD) (2.0當量)溶解於矽化燒瓶中之乙腈中。將上述環化產物之一部分(三分之二)在氬氣氛下添加至硫化試劑中。將所得混合物在室溫下攪拌45分鐘。然後添加甲醇(10 mL)並將反應混合物攪拌30分鐘。在減壓下移除溶劑並將粗殘餘物溶解於DCM (50 mL)中且用水(50 mL)洗滌。經Na
2
SO
4
乾燥合併之有機層並在減壓下濃縮。使用Combiflash矽膠管柱層析用DCM中之0-10% MeOH溶析來純化粗產物，以獲得150 mg期望產物(
7
)。
步驟 5b ( 氧化 ) ： N-(9-((2R,3R,3aR,7aR,9R,10R,10aR,14aR)-5,12- 雙 (2- 氰基乙氧基 )-9-(2,4- 二側氧基 -3,4- 二氫嘧啶 -1(2H)- 基 )-3,10- 二氟 -5- 氧離子基 -12- 硫代八氫 -2H,7H- 二呋喃并 [3,2-d:3',2'-j][1,3,7,9] 四氧雜 [2,8] 二磷環十二烷 -2- 基 )-9H- 嘌呤 -6- 基 ) 苯甲醯胺 (8) 將TBHP (4.0當量)在0℃下添加至來自步驟5(a) (i)之環化產物之第二部分(三分之一)之攪拌溶液中且經15分鐘將反應混合物升溫至室溫。然後藉由添加飽和亞硫酸氫鈉溶液淬滅過量TBHP。在減壓下蒸發所得混合物。將所得殘餘物溶解於DCM (25 mL)中並用水(20 mL)洗滌。分離有機層，經Na
2
SO
4
乾燥並在減壓下濃縮，以獲得粗產物。使用Combiflash矽膠管柱層析用DCM中之0-10% MeOH溶析來純化粗產物，以獲得60 mg期望產物(
8
)。
合成化合物 2 ： (2R,3R,3aR,7aR,9R,10R,10aR,14aR)-2-(6- 胺基 -9H- 嘌呤 -9- 基 )-9-(2,4- 二側氧基 -3,4- 二氫嘧啶 -1(2H)- 基 )-3,10- 二氟八氫 -2H,7H- 二呋喃并 [3,2-d:3',2'-j][1,3,7,9] 四氧雜 [2,8] 二磷環十二烷 -5,12- 雙 ( 硫醇 ) 銨 5,12- 二氧化物 將經保護環狀磷酸硫代二磷酸酯(
8
) (60 mg)溶解於濃NH
4
OH (2.0 mL)中且在室溫下攪拌過夜。LCMS顯示反應完成後，立即在減壓下蒸發反應混合物以移除氨。用乙酸乙酯(5 × 5 mL)洗滌水層，分離且凍乾，以提供100 mg白色鬆散固體狀化合物2。
合成化合物 4 ：雙 (4-( 癸基氧基 ) 苯甲酸 )((((2R,3R,3aR,7aR,9R,10R,10aR,14aR)-2-(6- 胺基 -9H- 嘌呤 -9- 基 )-9-(2,6- 二側氧基 -2H-1,3- 噁嗪 -3(6H)- 基 )-3,10- 二氟 -5,12- 二氧離子基八氫 -2H,7H- 二呋喃并 [3,2-d:3',2'-j][1,3,7,9] 四氧雜 [2,8] 二磷環十二烷 -5,12- 二基 ) 雙 ( 硫烷二基 )) 雙 ( 亞甲基 )) 雙 (4,1- 伸苯基 ) 酯 將化合物2 (25 mg)溶解於水(250 µL)中且然後添加4-(癸基氧基)苯甲酸4-(碘甲基)苯基酯(42 mg)於THF:丙酮混合物(1:1, 2.0 mL)中之溶液。反應混合物之pH大約為3.5-4.0。然後將反應混合物在室溫下攪拌40小時。使用Combiflash矽膠管柱層析用DCM中之0-10% IPA溶析來純化粗產物，以獲得25 mg黃棕色固體狀化合物4。
合成化合物 3 ： (2R,3R,3aR,7aR,9R,10R,10aR,14aR)-2-(6- 胺基 -9H- 嘌呤 -9- 基 )-9-(2,4- 二側氧基 -3,4- 二氫嘧啶 -1(2H)- 基 )-3,10- 二氟 -12- 硫代八氫 -2H,7H- 二呋喃并 [3,2-d:3',2'-j][1,3,7,9] 四氧雜 [2,8] 二磷環十二烷 -5- 醇銨 5,12- 二氧化物 將經保護環狀磷酸單硫代磷酸酯(
8
) (60 mg)溶解於濃NH
4
OH (5.0 mL)中且在室溫下攪拌過夜。LCMS顯示反應完成後，立即在減壓下濃縮反應混合物以移除氨。用乙酸乙酯(5 × 5 mL)洗滌水層，分離且凍乾，以提供50 mg白色鬆散固體狀化合物3。
合成化合物 9
：
(2R,3R,3aR,7aR,9R,10R,10aR,14aR)-2-(6- 胺基 -9H- 嘌呤 -9- 基 )-12-((4-((4-( 癸基氧基 ) 苯甲醯基 ) 氧基 ) 苄基 ) 硫基 )-9-(2,4- 二側氧基 -3,4- 二氫嘧啶 -1(2H)- 基 )-3,10- 二氟八氫 -2H,7H- 二呋喃并 [3,2-d:3',2'-j][1,3,7,9] 四氧雜 [2,8] 二磷環十二烷 -5- 醇銨 5,12- 二氧化物 將化合物3 (20 mg)溶解於水(200 µL)中且然後添加4-(癸基氧基)苯甲酸4-(碘甲基)苯基酯(18 mg)於THF:丙酮混合物(1:1, 1.4 mL)中之溶液。反應混合物pH大約為4.0。然後將反應混合物在室溫下攪拌過夜。在減壓下移除溶劑且將粗產物再溶解於水:乙腈(1:1, 2.0 mL)中。然後藉由離心移除所得沈澱物(無反應之烷基化試劑)。將母液凍乾以提供12 mg粗產物，藉由使用C
18
Sep pack管柱(Waters, 4.0 g)使用0.2 M乙酸銨緩衝液純化該粗產物。用乙腈:水(1:1)溶析化合物。收集純部分且凍乾，以提供5-6 mg白色鬆散固體狀化合物9。
實例 2. IRF 及 NF- κβ 於 THP1 細胞中之活體外誘導 表 2
：本發明實例性化合物之EC
50
值
實例 3. ISG54 及 NF- κβ 於 HEK293 細胞中之活體外活化
在本實驗中，用本發明實例性化合物(例如，化合物1、化合物2及化合物3)或作為對照之2’,3’-cGAMP處理一式兩份穩定表現ISG54 ISRE-luc報導基因或NF-κβ-luc報導基因之HEK293細胞(SZ14)，使其各自於毛地黃皂苷緩衝液中保持5小時，以篩選潛在STING激動劑。使用Steady-glo緩衝液系統(Promega)測定ISG54或NF-κβ活性，且匯總於圖7A-7B及圖8中。數據顯示為相對於僅接受DMSO (化合物載劑)之細胞之倍數誘導，其呈每種刺激物二重孔之平均值+/-標準偏差形式。
實例 4. THP 細胞 及原始 Lucia 細胞 中之 I 型 IRF IFN 活性之評估
用不同濃度之於lipofectamine中之本發明實例性化合物(例如，化合物2或化合物3)或作為對照之於lipofectamine中之2’,3’-cGAMP將一式三份THP1-dual細胞處理22小時。使用Quanti-luc試劑分析細胞培養物上清液中之IRF誘導型螢光素酶報導基因活性量，且匯總於圖9中。數據顯示為相對於僅接受DMSO (化合物載劑)之細胞之倍數誘導，其呈每種刺激物二重孔之平均值+/-標準偏差形式。 或者，僅用本文所揭示之化合物將一式三份於96孔板中之THP1-Dual細胞(人類單核球))及原始Lucia細胞(小鼠巨噬細胞(RAW))刺激24 hr。使用Invivogen之Quanti-luc量測細胞培養物上清液中分泌性螢光素酶之活性。數據顯示為相對於DMSO處理之細胞之倍數誘導(每種刺激物三重孔之平均值±標準偏差)。 如圖31A-31B中所顯示，相對於天然STING配體3’,3’-cGAMP，Cmd 1、Cmd 5、Cmd 12、Cmd 13、Cmd 14及Cmd 15在人類單核球(圖31A)及小鼠巨噬細胞(圖31B)中更具活性。
實例 5. 實例性化合物對諾羅病毒、 RSV 、胡寧病毒、登革熱病毒及 HCV 之效能
. 使用HG23 (肝細胞瘤)細胞系中之諾羅病毒株GI NoV之複製子且藉由RNA雜交及定量PCR評價活性。經由中性紅方法量測細胞毒性。用本文所揭示之化合物或2’-C-甲基胞苷(陽性對照)處理受感染細胞。結果顯示於下表3中。
表 3 ：
化合物對諾羅病毒之抗病毒活性
化合物1顯示對諾羅病毒株GI NoV幾乎300之高選擇性指數。對於HG23細胞系，CC
50
為100 µM，而EC
50
為0.342 µM。
化合物 1 對 RSV 之效能 .
使用RSVA2感染(0.5 MOI)之A549細胞且藉由病毒溶菌斑分析估計病毒效價。用DMSO或50 μM、100 μM或200 μM本文所揭示化合物處理RSV感染之細胞。基於病毒效價值來計算RSV感染百分比。100%感染表示媒劑處理之細胞中之RSV感染。對於媒劑對本發明化合物處理之細胞，使用司徒頓T測試(Student’s t test)，p ≤ 0.05。 與媒劑相比，用50 μM、100 μM及200 μM化合物1處理RSVA-2 A549細胞皆會減小RSV效價及RSV感染百分比(圖12A及12B)。
化合物 1 對胡寧病毒及登革熱病毒之效能 .
在Vero細胞中分別使用株系JV 4454及DENV-2 (株系NGC)實施針對胡寧(JUNV)及登革熱病毒血清型2 (DSV-2)之活性且藉由溶菌斑分析測定細胞外DENV/JUNV產率。藉由中性紅、MTT或MTS方法平行進行細胞毒性分析。用媒劑或本文所揭示化合物處理受感染細胞。 如圖15A中所顯示，與未處理之A549感染之細胞相比，在經化合物1處理之A549感染之細胞中病毒產率減小1 log，二者皆在感染後24小時及48小時(h p.i.)量測。在感染後24小時(h p.i.)，與未處理之A549感染之細胞相比，在感染DSV2之A549細胞中登革熱病毒血清型2 (DSV2)之病毒產率減小1 log。在感染後48小時，未發現顯著差異。(圖15B)
化合物 1 對 HCV 之效能
使用捕獲融合分析來測試針對HCV基因型1a及1b之活性。將THP-1細胞簡短暴露於融合有Huh7衍生物細胞之供體血清且使用qPCR來評價HCV複製。用不同濃度之本文所揭示化合物來處理細胞。 如圖13A-13G中所顯示，HCV RNA複製在用遞增濃度之化合物1處理後減少。 化合物1引發針對所有所測試RNA病毒之強效抗病毒活性，其中EC
50
介於0.34至5.5 μM之間且具有高選擇性指數。STING激動劑化合物1顯示針對若干RNA病毒(包括出血熱病毒)之強效抗病毒活性，此與其作用機制一致。
實例 6 ： IRF 及 NF-KB 之誘導之評估
用不同濃度之本發明化合物或DMSO對照處理生長於完全培養基中之THP1 dual細胞。Dual細胞攜載在融合至5拷貝NF-kB共有轉錄反應元件之IFN-β最小啟動子控制下之分泌性胚胎鹼性磷酸酶(SEAP)報導基因(以量測NF-kB活性)及在ISG54最小啟動子控制下之Lucia報導基因(以量測IRF活性)二者。培育20 h後，使用QUANTI-luc量測Lucia之含量來評價IRF活性且藉由在620-655 nm下量測SEAP含量來確定NF-kB活性。根據與DMSO處理之樣品相比發光/吸光度之倍數變化來計算誘導%。給予任何負值基值1用於以log標度繪製數據以準確地展示劑量反應。藉由Xlfit中之曲線擬合生成EC
50
值。 用不同濃度之本發明化合物或DMSO對照處理生長於完全培養基中之細胞。Dual細胞攜載在融合至5拷貝NF-kB共有轉錄反應元件之IFN-β最小啟動子控制下之分泌性胚胎鹼性磷酸酶(SEAP)報導基因(以量測NF-kB活性)及在ISG54最小啟動子控制下之Lucia報導基因(以量測IRF活性)二者。培育20 h後，使用QUANTI-luc量測Lucia之含量來評價IRF活性且藉由在620-655 nm下量測SEAP含量來確定NF-kB活性。根據與DMSO處理之樣品相比發光/吸光度之倍數變化來計算誘導%。藉由Xlfit中之曲線擬合生成EC
50
值。 Cmd 1、Cmd 1A、Cmd 1B、Cmd 12、Cmd 13、Cmd 14、Cmd 15皆顯示IRF及NF-kB之誘導。(參見圖17A、17B、18A-18D、19A-19B、20A-20D、21A-21D、22A-22D、23A-23D及24A-24B)。結果指示，Cmd 1、Cmd 1A、Cmd 1B、Cmd 12、Cmd 13、Cmd 14、Cmd 15在不使用轉染劑下由細胞吸收。Cmd 3顯示無NF-kB活性(圖19A-19B)。 圖27A-27B及35A-35B比較Cmd 15、Cmd 15-A及Cmd 15-B (Cmd 15之異構物)及Cmd 16對IRF (圖27A及35A)及NF-κB (圖27B及35B)之誘導。
實例 7. 實例性化合物之穩定性之測定 血清穩定性研究：
在37℃下將0.5 mM本文所揭示化合物與兔血清一起培育不同時間點。藉由添加1 mL乙腈淬滅反應。在急凍並在4℃下離心5 min後收集含有化合物之上清液。隨後在HPLC中分析含有化合物之上清液。
微粒體穩定性研究：
在37℃下將0.5 mM本文所揭示化合物與人類微粒體一起培育不同時間點。用20 mM NADPH起始反應，培育，然後藉由添加1 mL乙腈淬滅。在急凍並在4℃下離心5 min後收集含有化合物之上清液。隨後在HPLC中分析含有化合物之上清液。 如在圖25A-25B中可見，Cmd 1之異構物Cmp1-A及Cmd 1-B在兔血清及人類微粒體中穩定。峰1及峰2代表Cmd 1-A及1-B。Cmd 15亦在兔血清及人類微粒體中穩定。圖26A-26B顯示Cmd 1之異構物Cmd 15 1-A及Cmd 15B在兔血清及人類微粒體中之穩定性。
實例 8. 實例性化合物之細胞毒性之測定
使用Cell titer Glo分析
(Promega)
來評價THP1細胞中實例性化合物之細胞毒性。用不同濃度之化合物或DMSO對照處理生長於完全培養基中之THP1 dual細胞。藉由基於螢光素酶反應所產生之「輝光型」發光信號呈現之ATP之定量評價培養物中之活細胞數來確定CellTiter-Glo®發光細胞活力/細胞毒性。根據與DMSO處理之樣品相比發光之倍數變化來計算細胞凋亡%。 圖28顯示用不同濃度(5 μM、14 μM、41 μM、123 μM、370 μM、1111 μM、3333 μM及1000 μM)之Cmd 15及其異構物Cmd 15-A及Cmd 15-B處理時，經由THP1細胞之細胞毒性%之細胞凋亡誘導。
實例 9. STING 結合之量化
在毛地黃皂苷存在下用本文所揭示化合物、2`3`-cGAMP (天然STING配體)或DMSO將穩定表現ISG54 ISRE-luc報導基因之SZ14 HEK293細胞處理5-6 hr。測定ISRE螢光素酶活性且正規化至DMSO處理之細胞(每種刺激物三重孔之平均值±標準偏差)。 如圖29A-29B中所顯示，Cmd 1與STING之結合活化1型IFN信號傳導，此與用2’,3’-cGAMP所觀察到之1型IFN信號傳導之活化相似。 或者，在37℃、5% CO
2
下，用化合物/lipo、cGAMP/lipo複合物或單獨化合物將一式三份於96孔板中之原始ISG-Dual細胞刺激22-24小時。使用Invivogen Quanti-luc量測細胞培養物上清液中分泌性螢光素酶之活性。數據顯示為相對於DMSO處理之細胞之倍數誘導(每種刺激物三重孔之平均值±標準偏差)。 如圖30中所顯示，Cmd 1在小鼠巨噬細胞中之活化1型IFN信號傳導方面有高活性，此與用2’,3’-cGAMP所觀察到之1型IFN信號傳導之活化相似。
實例 10. 實例性化合物對 THP 細胞中之 III 型 IFN (IL-29) 產生之誘導
用單獨實例性化合物或cGAMP/lipo將一式三份THP1-Dual (WT)細胞處理21 hr。使用ELISA測定培養物上清液中之IL-29含量。所顯示結果係二重孔之平均值±標準偏差。 用Cmd 1及Cmd 15處理細胞誘導THP1細胞中之III型干擾素(IL-29)產生(圖33A)。此指示Cmd 1及Cmd 15二者在不使用轉染試劑下由細胞吸收(圖33B)。
實例 11 ： 實例性化合物對 THP 細胞中之 I 型 IFN 產生之誘導
用化合物/毛地黃皂苷緩衝液將一式三份SZ14細胞(穩定表現ISG54 ISRE-luc報導基因之HEK293)處理5 hr。使用Promega Steady-Glo螢光素酶分析緩衝液測定ISG54 ISRE-luc活性且正規化至DMSO處理之細胞(三重孔之平均值±標準偏差)。 或者，僅用化合物將一式三份THP1-Dual (WT)細胞處理3-22h。使用Quanti-luc緩衝液測定I型IRF IFN活性且正規化至DMSO處理之細胞(三重孔之平均值±標準偏差)。圖32A-B及圖34 圖32A-32B及34A-34B顯示經Cmd 1及其異構物Cmd 1A (Cmd 1-PK1)及Cmd 1B (Cmd 1-PK2)處理之HEK293 (圖32A)及THP1 (圖32B)細胞中之I型IFN信號傳導之誘導。與對照相比，Cmd 1、Cmd 1-A、Cmd 1-B、Cmd 13及Cmd 15皆誘導I型IFN信號傳導。
等效形式
本文所引用之每個專利、專利申請案及公開案之揭示內容之全文皆以引用方式併入本文中。儘管已參考特定態樣闡述本發明，但顯而易見，熟習此項技術者可在不背離本發明之真實精神及範疇下設計其他態樣及變化形式。隨附申請專利範圍意欲理解為包括所有該等態樣及等效變化形式。聲稱以引用方式完全或部分併入本文中之任何專利、公開案或其他揭示材料併入本文中之程度僅為所併入材料不與本發明中所述之現有定義、陳述或其他揭示材料衝突。因此且就必要性而言，如本文明確闡釋之揭示內容代替以引用方式併入本文中之任何衝突材料。 儘管已參照本發明之實施例具體顯示並闡述本發明，但熟習此項技術者應理解，可在不背離隨附申請專利範圍所涵蓋之本發明範疇下對其形式及細節作出各種改變。
式(I) 或其醫藥上可接受之鹽或立體異構物，其中： Z係S或O B1
及B2
中之每一者獨立地係嘌呤基核鹼基或嘧啶基核鹼基； X1
及X2
中之每一者獨立地係O或S； Y1
及Y2
中之每一者獨立地係O、S或NR5
； L1
及L2
中之每一者獨立地係不存在、C1
-C6
烷基或C1
-C6
雜烷基，其中每一C1
-C6
烷基及C1
-C6
雜烷基視情況經R6
取代； R1
及R2
中之每一者獨立地係氫、鹵基、-CN、C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
烷基)或OR7
； R3
及R4
中之每一者獨立地係氫、C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
烷基)、C1
-C20
雜烷基(例如，C1
-C6
雜烷基)、環烷基、雜環基、OC(O)OC1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
烷基)、芳基或雜芳基，其中每一C1
-C20
烷基、C1
-C20
雜烷基、環烷基、雜環基、芳基、OC(O)OC1
-C20
烷基(例如，C1-6
烷基)及雜芳基視情況經1-5個R8
取代； 每一R5
獨立地係氫或C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
烷基)； R6
係鹵基、-CN、C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
烷基)、OR7
、側氧基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，其中每一C1
-C20
烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基視情況經1-5個R9
取代； R7
係氫、C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
烷基)、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，其中每一C1
-C20
烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基視情況經1-5個R9
取代； 每一R8
獨立地係C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
烷基)、O-芳基、OC(O)NR5
-C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
烷基)、S(O)2
NR5
-芳基、NR5
C(O)-芳基、NR5
R5
C(O)-芳基、C(O)-芳基、C(O)-雜芳基、OC(O)-芳基或OC(O)-雜芳基、OC(O)-C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
)、OC(O)O-C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
)，其中每一C1
-C20
烷基、O-芳基、OC(O)NR5
-C1
-C20
烷基、S(O)2
NR5
-芳基、NR5
C(O)-芳基、CH2
NR5
C(O)-芳基、C(O)-芳基、C(O)-雜芳基、OC(O)-芳基或OC(O)-雜芳基、OC(O)-C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
)、OC(O)O-C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
)視情況經1-5個R9
取代；且 每一R9
獨立地係C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
烷基)、鹵基、-CN、OH、O-C1
-C20
烷基、O-C1
-C20
雜烷基、O-芳基、O-雜芳基。 在一些實施例中，化合物係式(I-a)化合物：
式(I-a) 或其醫藥上可接受之鹽或立體異構物，其中： B1
及B2
中之每一者獨立地係嘌呤基核鹼基或嘧啶基核鹼基； X1
及X2
中之每一者獨立地係O或S； Y1
及Y2
中之每一者獨立地係O、S或NR5
； L1
及L2
中之每一者獨立地係不存在、C1
-C6
烷基或C1
-C6
雜烷基，其中每一C1
-C6
烷基及C1
-C6
雜烷基視情況經R6
取代； R1
及R2
中之每一者獨立地係氫、鹵基、-CN、C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
烷基)或OR7
； R3
及R4
中之每一者獨立地係氫、C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
烷基)、C1
-C20
雜烷基(例如，C1
-C6
雜烷基)、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，其中每一C1
-C20
烷基、C1
-C20
雜烷基、環烷基、雜環基、芳基及雜芳基視情況經1-5個R8
取代； R5
係氫或C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
烷基)； R6
係鹵基、-CN、C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
烷基)、OR7
、側氧基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，其中每一C1
-C20
烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基視情況經1-5個R9
取代； R7
係氫、C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
烷基)、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，其中每一C1
-C20
烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基視情況經1-5個R9
取代； 每一R8
獨立地係C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
烷基)、C(O)-芳基、C(O)-雜芳基、OC(O)-芳基或OC(O)-雜芳基，其中每一C1
-C20
烷基、C(O)-芳基、C(O)-雜芳基、OC(O)-芳基或OC(O)-雜芳基視情況經1-5個R9
取代；且 每一R9
獨立地係C1
-C20
烷基、鹵基、-CN、OH、O-C1
-C20
烷基、O-C1
-C20
雜烷基、O-芳基或O-雜芳基。 在一些實施例中，化合物係式(I-b)、(I-c)、(I-d)或(I-e)化合物：
式(I-b) 式(I-c)
式(I-d) 式(I-e) 或其醫藥上可接受之鹽，其中B1
、B2
、X1
、X2
、Y1
、Y2
、L1
、L2
、R1
、R2
、R3
、R4
及其次變量中之每一者係如針對式(I)所定義。 在一些實施例中，B1
係嘌呤基核鹼基。在一些實施例中，B2
係嘌呤基核鹼基。在一些實施例中，B1
係嘌呤基核鹼基且B2
係嘧啶基核鹼基。 在一些實施例中，B1
係腺苷基或鳥苷基。在一些實施例中，B2
係胞嘧啶基、胸腺嘧啶基或尿嘧啶基。在一些實施例中，B1
係腺苷基或鳥苷基且B2
係胞嘧啶基、胸腺嘧啶基或尿嘧啶基。在一些實施例中，B1
及B2
中之每一者獨立地係尿嘧啶基。 在一些實施例中，R1
及R2
中之每一者獨立地係氫、鹵基或OR6
。在一些實施例中，R1
及R2
中之每一者獨立地係鹵基(例如，氟)。在一些實施例中，R1
及R2
中之每一者不為氫或OR7
。 在一些實施例中，X1
係O。在一些實施例中，X2
係O。在一些實施例中，X1
及X2
中之每一者皆係O。 在一些實施例中，Y1
係O或S。在一些實施例中，Y2
係O或S。在一些實施例中，Y1
及Y2
中之每一者獨立地係O或S。在一些實施例中，Y1
或Y2
中之一者係O且Y1
或Y2
中之另一者係S。在一些實施例中，Y1
或Y2
中之每一者獨立地係S。在一些實施例中，Y1
或Y2
中之每一者獨立地係O。 在一些實施例中，L1
係C1
-C6
烷基(例如，CH2
)。在一些實施例中，L2
係C1
-C6
烷基(例如，CH2
)。在一些實施例中，L1
及L2
中之每一者獨立地係C1
-C6
烷基(例如，CH2
)。 在一些實施例中，R3
係氫、芳基或雜芳基，其中芳基及雜芳基視情況經1-5個R8
取代。在一些實施例中，R3
係芳基或雜芳基，其中之每一者視情況經1-5個R8
取代。在一些實施例中，R3
係經1個R8
取代之苯基。 在一些實施例中，R4
獨立地係氫、芳基或雜芳基，其中芳基及雜芳基視情況經1-5個R8
取代。在一些實施例中，R4
係芳基或雜芳基，其中之每一者視情況經1-5個R8
取代。在一些實施例中，R4
係經1個R8
取代之苯基。 在一些實施例中，R3
及R4
中之每一者獨立地係氫、芳基或雜芳基，其中芳基及雜芳基視情況經1-5個R8
取代。 在一些實施例中，R3
係芳基或雜芳基，其中之每一者視情況經1-5個R8
取代，且R4
係氫。 在一些實施例中，R3
係經1個R8
取代之苯基且R4
係氫。在一些實施例中，R3
及R4
中之每一者獨立地係經1個R8
取代之苯基。 在一些實施例中，Y1
及Y2
中之每一者係O且R3
及R4
中之每一者獨立地係氫。在一些實施例中，Y2
係O且R4
係氫。在一些實施例中，Y1
及Y2
中之每一者獨立地係S且R3
及R4
中之每一者獨立地經1個R8
取代。在一些實施例中，Y1
係S且R3
經1個R8
取代。 在一些實施例中，R8
係視情況經1-5個R9
(例如，1個R9
)取代之OC(O)-芳基。在一些實施例中，R9
係O-C1
-C12
烷基(例如，O-CH2
(CH2
)8
CH3
)。在一些實施例中，R9
係O-C1
-C10
烷基(例如，O-CH2
(CH2
)8
CH3
)。在一些實施例中，R9
係O-C1
-C8
烷基(例如，O-CH2
(CH2
)6
CH3
)。在一些實施例中，R9
係O-C1
-C6
烷基(例如，O-CH2
(CH2
)4
CH3
)。 在一些實施例中，化合物由式(I-f)表示：
式(I-f) 或其醫藥上可接受之鹽或立體異構物，其中： B1
及B2
中之每一者獨立地係嘌呤基核鹼基或嘧啶基核鹼基； X1
及X2
中之每一者獨立地係O或S； Y1
及Y2
中之每一者獨立地係O、S或NR5
； L1
及L2
中之每一者獨立地係不存在、C1
-C6
烷基或C1
-C6
雜烷基，其中每一C1
-C6
烷基及C1
-C6
雜烷基視情況經R6
取代； R1
及R2
中之每一者獨立地係鹵基； R3
及R4
中之每一者獨立地係氫、C1
-C6
烷基、C1
-C6
雜烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，其中每一C1
-C6
烷基、C1
-C6
雜烷基、環烷基、雜環基、芳基及雜芳基視情況經1-5個R8
取代； R5
係氫或C1
-C6
烷基； R6
係鹵基、-CN、C1
-C6
烷基、OR7
、側氧基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，其中每一C1
-C6
烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基視情況經1-5個R9
取代； R7
係氫、C1
-C6
烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，其中每一C1
-C6
烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基視情況經1-5個R9
取代； 每一R8
獨立地係C1
-C6
烷基、C(O)-芳基、C(O)-雜芳基、OC(O)-芳基或OC(O)-雜芳基，其中每一C1
-C6
烷基、C(O)-芳基、C(O)-雜芳基、OC(O)-芳基或OC(O)-雜芳基視情況經1-5個R9
取代；且 每一R9
獨立地係C1
-C20
烷基、鹵基、-CN、OH、O-C1
-C20
烷基、O-C1
-C20
雜烷基、O-芳基或O-雜芳基。 在一些實施例中，化合物由式(I-g)表示：
式(I-g) 或其醫藥上可接受之鹽或立體異構物，其中： B1
及B2
中之每一者獨立地係嘌呤基核鹼基或嘧啶基核鹼基； X1
及X2
中之每一者獨立地係O； Y1
及Y2
中之每一者獨立地係O或S； L1
及L2
中之每一者獨立地係不存在或C1
-C6
烷基； R1
及R2
中之每一者獨立地係鹵基或OH； R3
及R4
中之每一者獨立地係氫或視情況經1-5個R8
取代之芳基； 每一R8
獨立地係視情況經1-5個R9
取代之OC(O)-芳基；且 每一R9
獨立地係O-C1
-C20
烷基。 在一些實施例中，化合物選自表1：
式(I) 或其醫藥上可接受之鹽或立體異構物，其中： Z係S或O B1
及B2
中之每一者獨立地係嘌呤基核鹼基或嘧啶基核鹼基； X1
及X2
中之每一者獨立地係O或S； Y1
及Y2
中之每一者獨立地係O、S或NR5
； L1
及L2
中之每一者獨立地係不存在、C1
-C6
烷基或C1
-C6
雜烷基，其中每一C1
-C6
烷基及C1
-C6
雜烷基視情況經R6
取代； R1
及R2
中之每一者獨立地係氫、鹵基、-CN、C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
烷基)或OR7
； R3
及R4
中之每一者獨立地係氫、C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
烷基)、C1
-C20
雜烷基(例如，C1
-C6
雜烷基)、環烷基、雜環基、OC(O)OC1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
烷基)、芳基或雜芳基，其中每一C1
-C20
烷基、C1
-C20
雜烷基、環烷基、雜環基、芳基、OC(O)OC1
-C20
烷基(例如，C1-6
烷基)及雜芳基視情況經1-5個R8
取代； 每一R5
獨立地係氫或C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
烷基)； R6
係鹵基、-CN、C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
烷基)、OR7
、側氧基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，其中每一C1
-C20
烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基視情況經1-5個R9
取代； R7
係氫、C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
烷基)、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，其中每一C1
-C20
烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基視情況經1-5個R9
取代； 每一R8
獨立地係C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
烷基)、O-芳基、OC(O)NR5
-C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
烷基)、S(O)2
NR5
-芳基、NR5
C(O)-芳基、NR5
R5
C(O)-芳基、C(O)-芳基、C(O)-雜芳基、OC(O)-芳基或OC(O)-雜芳基、OC(O)-C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
)、OC(O)O-C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
)，其中每一C1
-C20
烷基、O-芳基、OC(O)NR5
-C1
-C20
烷基、S(O)2
NR5
-芳基、NR5
C(O)-芳基、CH2
NR5
C(O)-芳基、C(O)-芳基、C(O)-雜芳基、OC(O)-芳基或OC(O)-雜芳基、OC(O)-C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
)、OC(O)O-C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
)視情況經1-5個R9
取代；且 每一R9
獨立地係C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
烷基)、鹵基、-CN、OH、O-C1
-C20
烷基、O-C1
-C20
雜烷基、O-芳基、O-雜芳基。 在一些實施例中，本發明闡述治療個體之微生物感染之方法，該方法包含向該個體投與式(I-a)化合物，
式(I) 或其醫藥上可接受之鹽或立體異構物，其中： B1
及B2
中之每一者獨立地係嘌呤基核鹼基或嘧啶基核鹼基； X1
及X2
中之每一者獨立地係O或S； Y1
及Y2
中之每一者獨立地係O、S或NR5
； L1
及L2
中之每一者獨立地係不存在、C1
-C6
烷基或C1
-C6
雜烷基，其中每一C1
-C6
烷基及C1
-C6
雜烷基視情況經R6
取代； R1
及R2
中之每一者獨立地係氫、鹵基、-CN、C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
烷基)或OR7
； R3
及R4
中之每一者獨立地係氫、C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
烷基)、C1
-C20
雜烷基(例如，C1
-C6
雜烷基)、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，其中每一C1
-C20
烷基、C1
-C20
雜烷基、環烷基、雜環基、芳基及雜芳基視情況經1-5個R8
取代； R5
係氫或C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
烷基)； R6
係鹵基、-CN、C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
烷基)、OR7
、側氧基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，其中每一C1
-C20
烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基視情況經1-5個R9
取代； R7
係氫、C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
烷基)、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，其中每一C1
-C20
烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基視情況經1-5個R9
取代； 每一R8
獨立地係C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
烷基)、C(O)-芳基、C(O)-雜芳基、OC(O)-芳基或OC(O)-雜芳基，其中每一C1
-C20
烷基、C(O)-芳基、C(O)-雜芳基、OC(O)-芳基或OC(O)-雜芳基視情況經1-5個R9
取代；且 每一R9
獨立地係C1
-C20
烷基、鹵基、-CN、OH、O-C1
-C20
烷基、O-C1
-C20
雜烷基、O-芳基或O-雜芳基。 在一態樣中，本發明闡述誘導患有微生物感染之個體中之模式識別受體表現之方法，該方法包含向該個體投與式(I)化合物，
式(I) 或其醫藥上可接受之鹽或立體異構物，其中： Z係S或O B1
及B2
中之每一者獨立地係嘌呤基核鹼基或嘧啶基核鹼基； X1
及X2
中之每一者獨立地係O或S； Y1
及Y2
中之每一者獨立地係O、S或NR5
； L1
及L2
中之每一者獨立地係不存在、C1
-C6
烷基或C1
-C6
雜烷基，其中每一C1
-C6
烷基及C1
-C6
雜烷基視情況經R6
取代； R1
及R2
中之每一者獨立地係氫、鹵基、-CN、C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
烷基)或OR7
； R3
及R4
中之每一者獨立地係氫、C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
烷基)、C1
-C20
雜烷基(例如，C1
-C6
雜烷基)、環烷基、雜環基、OC(O)OC1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
烷基)、芳基或雜芳基，其中每一C1
-C20
烷基、C1
-C20
雜烷基、環烷基、雜環基、芳基、OC(O)OC1
-C20
烷基(例如，C1-6
烷基)及雜芳基視情況經1-5個R8
取代； 每一R5
獨立地係氫或C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
烷基)； R6
係鹵基、-CN、C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
烷基)、OR7
、側氧基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，其中每一C1
-C20
烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基視情況經1-5個R9
取代； R7
係氫、C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
烷基)、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，其中每一C1
-C20
烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基視情況經1-5個R9
取代； 每一R8
獨立地係C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
烷基)、O-芳基、OC(O)NR5
-C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
烷基)、S(O)2
NR5
-芳基、NR5
C(O)-芳基、NR5
R5
C(O)-芳基、C(O)-芳基、C(O)-雜芳基、OC(O)-芳基或OC(O)-雜芳基、OC(O)-C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
)、OC(O)O-C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
)，其中每一C1
-C20
烷基、O-芳基、OC(O)NR5
-C1
-C20
烷基、S(O)2
NR5
-芳基、NR5
C(O)-芳基、CH2
NR5
C(O)-芳基、C(O)-芳基、C(O)-雜芳基、OC(O)-芳基或OC(O)-雜芳基、OC(O)-C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
)、OC(O)O-C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
)視情況經1-5個R9
取代；且 每一R9
獨立地係C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
烷基)、鹵基、-CN、OH、O-C1
-C20
烷基、O-C1
-C20
雜烷基、O-芳基、O-雜芳基。 在一些實施例中，本發明闡述誘導患有微生物感染之個體中之模式識別受體表現之方法，該方法包含向該個體投與式(I-a)化合物，
式(I-a) 或其醫藥上可接受之鹽或立體異構物，其中： B1
及B2
中之每一者獨立地係嘌呤基核鹼基或嘧啶基核鹼基； X1
及X2
中之每一者獨立地係O或S； Y1
及Y2
中之每一者獨立地係O、S或NR5
； L1
及L2
中之每一者獨立地係不存在、C1
-C6
烷基或C1
-C6
雜烷基，其中每一C1
-C6
烷基及C1
-C6
雜烷基視情況經R6
取代； R1
及R2
中之每一者獨立地係氫、鹵基、-CN、C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
烷基)或OR7
； R3
及R4
中之每一者獨立地係氫、C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
烷基)、C1
-C20
雜烷基(例如，C1
-C6
雜烷基)、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，其中每一C1
-C20
烷基、C1
-C20
雜烷基、環烷基、雜環基、芳基及雜芳基視情況經1-5個R8
取代； R5
係氫或C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
烷基)； R6
係鹵基、-CN、C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
烷基)、OR7
、側氧基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，其中每一C1
-C20
烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基視情況經1-5個R9
取代； R7
係氫、C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
烷基)、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，其中每一C1
-C20
烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基視情況經1-5個R9
取代； 每一R8
獨立地係C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
烷基)、C(O)-芳基、C(O)-雜芳基、OC(O)-芳基或OC(O)-雜芳基，其中每一C1
-C20
烷基、C(O)-芳基、C(O)-雜芳基、OC(O)-芳基或OC(O)-雜芳基視情況經1-5個R9
取代；且 每一R9
獨立地係C1
-C20
烷基、鹵基、-CN、OH、O-C1
-C20
烷基、O-C1
-C20
雜烷基、O-芳基或O-雜芳基。
式(I) 或其醫藥上可接受之鹽或立體異構物，其中： Z係S或O B1
及B2
中之每一者獨立地係嘌呤基核鹼基或嘧啶基核鹼基； X1
及X2
中之每一者獨立地係O或S； Y1
及Y2
中之每一者獨立地係O、S或NR5
； L1
及L2
中之每一者獨立地係不存在、C1
-C6
烷基或C1
-C6
雜烷基，其中每一C1
-C6
烷基及C1
-C6
雜烷基視情況經R6
取代； R1
及R2
中之每一者獨立地係氫、鹵基、-CN、C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
烷基)或OR7
； R3
及R4
中之每一者獨立地係氫、C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
烷基)、C1
-C20
雜烷基(例如，C1
-C6
雜烷基)、環烷基、雜環基、OC(O)OC1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
烷基)、芳基或雜芳基，其中每一C1
-C20
烷基、C1
-C20
雜烷基、環烷基、雜環基、芳基、OC(O)OC1
-C20
烷基(例如，C1-6
烷基)及雜芳基視情況經1-5個R8
取代； 每一R5
獨立地係氫或C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
烷基)； R6
係鹵基、-CN、C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
烷基)、OR7
、側氧基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，其中每一C1
-C20
烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基視情況經1-5個R9
取代； R7
係氫、C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
烷基)、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，其中每一C1
-C20
烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基視情況經1-5個R9
取代； 每一R8
獨立地係C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
烷基)、O-芳基、OC(O)NR5
-C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
烷基)、S(O)2
NR5
-芳基、NR5
C(O)-芳基、NR5
R5
C(O)-芳基、C(O)-芳基、C(O)-雜芳基、OC(O)-芳基或OC(O)-雜芳基、OC(O)-C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
)、OC(O)O-C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
)，其中每一C1
-C20
烷基、O-芳基、OC(O)NR5
-C1
-C20
烷基、S(O)2
NR5
-芳基、NR5
C(O)-芳基、CH2
NR5
C(O)-芳基、C(O)-芳基、C(O)-雜芳基、OC(O)-芳基或OC(O)-雜芳基、OC(O)-C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
)、OC(O)O-C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
)視情況經1-5個R9
取代；且 每一R9
獨立地係C1
-C20
烷基(例如，C1
-C6
烷基)、鹵基、-CN、OH、O-C1
-C20
烷基、O-C1
-C20
雜烷基、O-芳基、O-雜芳基。 在一些實施例中，化合物係式(I-a)化合物：
式(I-a) 或其醫藥上可接受之鹽或立體異構物，其中B1
及B2
中之每一者獨立地係嘌呤基核鹼基或嘧啶基核鹼基；X1
及X2
中之每一者獨立地係O或S；Y1
及Y2
中之每一者獨立地係O、S或NR5
；L1
及L2
中之每一者獨立地係不存在、C1
-C20
烷基或C1
-C20
雜烷基，其中每一C1
-C20
烷基及C1
-C20
雜烷基視情況經R6
取代；R1
及R2
中之每一者獨立地係氫、鹵基、-CN、C1
-C20
烷基或OR7
；R3
及R4
中之每一者獨立地係氫、C1
-C20
烷基、C1
-C20
雜烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，其中每一C1
-C20
烷基、C1
-C20
雜烷基、環烷基、雜環基、芳基及雜芳基視情況經1-5個R8
取代；R5
係氫或C1
-C20
烷基；R6
係鹵基、-CN、C1
-C20
烷基、OR7
、側氧基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，其中每一C1
-C20
烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基視情況經1-5個R9
取代；R7
係氫、C1
-C20
烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，其中每一C1
-C20
烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基視情況經1-5個R9
取代；每一R8
獨立地係C1
-C20
烷基、C(O)-芳基、C(O)-雜芳基、OC(O)-芳基或OC(O)-雜芳基，其中每一C1
-C20
烷基、C(O)-芳基、C(O)-雜芳基、OC(O)-芳基或OC(O)-雜芳基視情況經1-5個R9
取代；且每一R9
獨立地係C1
-C20
烷基、鹵基、-CN、OH、O-C1
-C20
烷基、O-C1
-C20
雜烷基、O-芳基或O-雜芳基。 在一些實施例中，化合物係式(I-b)、(I-c)、(I-d)或(I-e)化合物：
式(I-b) 式(I-c)
式(I-d) 式(I-e) 或其醫藥上可接受之鹽，其中B1
、B2
、X1
、X2
、Y1
、Y2
、L1
、L2
、R1
、R2
、R3
、R4
及其次變量中之每一者係如先前所述。 在實施例中，B1
或B2
之核鹼基係天然核鹼基，例如天然嘌呤基核鹼基或天然嘧啶基核鹼基。在實施例中，B1
或B2
之核鹼基係經修飾核鹼基，例如經化學修飾之嘌呤基核鹼基或嘧啶基核鹼基。在一些實施例中，B1
係嘌呤基核鹼基且B2
係嘧啶基核鹼基。在一些實施例中，B1
係腺苷基或鳥苷基且B2
係胞嘧啶基、胸腺嘧啶基或尿嘧啶基。在一些實施例中，B1
及B2
中之每一者係尿嘧啶基。 在一些實施例中，B1
係嘌呤基核鹼基。在一些實施例中，B2
係嘌呤基核鹼基。在一些實施例中，B1
係嘌呤基核鹼基且B2
係嘧啶基核鹼基。 在一些實施例中，B1
係腺苷基或鳥苷基。在一些實施例中，B2
係胞嘧啶基、胸腺嘧啶基或尿嘧啶基。 在一些實施例中，B1
或B2
中之每一者選自：
其中「
」指示核鹼基至核糖環之鍵聯。 在一些實施例中，B1
或B2
中之一者選自天然核鹼基且B1
或B2
中之另一者係經修飾核鹼基。在一些實施例中，B1
或B2
中之一者係腺苷基、鳥苷基、胸腺嘧啶基、胞嘧啶基或尿嘧啶基，且B1
或B2
中之另一者係5’-甲基胞嘧啶基、5’-氟尿嘧啶基、5’-丙炔基尿嘧啶基或7-去氮腺苷基。 在一些實施例中，B1
係腺苷基或鳥苷基。在一些實施例中，B2
係胞嘧啶基、胸腺嘧啶基或尿嘧啶基。在一些實施例中，B1
係腺苷基或鳥苷基且B2
係胞嘧啶基、胸腺嘧啶基或尿嘧啶基。在一些實施例中，B1
及B2
中之每一者獨立地係尿嘧啶基。在一些實施例中，B1
及B2
中之每一者獨立地係腺苷基。 在一些實施例中，R1
及R2
中之每一者獨立地係氫、鹵基或OR6
。在一些實施例中，R1
及R2
中之每一者獨立地係鹵基(例如，氟)。在一些實施例中，R1
及R2
中之每一者不為氫或OR7
。 在一些實施例中，X1
係O。在一些實施例中，X2
係O。在一些實施例中，X1
及X2
中之每一者獨立地係O。 在一些實施例中，Y1
係O或S。在一些實施例中，Y2
係O或S。在一些實施例中，Y1
及Y2
中之每一者獨立地係O或S。在一些實施例中，Y1
或Y2
中之一者係O且Y1
或Y2
中之另一者係S。在一些實施例中，Y1
或Y2
中之每一者獨立地係S。在一些實施例中，Y1
或Y2
中之每一者獨立地係O。 在一些實施例中，L1
及L2
中之每一者獨立地係C1
-C6
烷基(例如，CH2
)。在一些實施例中，L2
係C1
-C6
烷基(例如，CH2
)。在一些實施例中，L1
及L2
中之每一者獨立地係C1
-C6
烷基(例如，CH2
)。 在一些實施例中，R3
係氫、芳基或雜芳基，其中芳基及雜芳基視情況經1-5個R8
取代。在一些實施例中，R3
係芳基或雜芳基，其中之每一者視情況經1-5個R8
取代。在一些實施例中，R3
係經1個R8
取代之苯基。 在一些實施例中，R4
獨立地係氫、芳基或雜芳基，其中芳基及雜芳基視情況經1-5個R8
取代。在一些實施例中，R4
係芳基或雜芳基，其中之每一者視情況經1-5個R8
取代。在一些實施例中，R4
係經1個R8
取代之苯基。 在一些實施例中，R3
及R4
中之每一者獨立地係氫、芳基或雜芳基，其中芳基及雜芳基視情況經1-5個R8
取代。在一些實施例中，R3
係芳基或雜芳基，其中之每一者視情況經1-5個R8
取代，且R4
係氫。在一些實施例中，R3
係經1個R8
取代之苯基且R4
係氫。在一些實施例中，R3
及R4
中之每一者獨立地係經1個R8
取代之苯基。 在一些實施例中，Y1
及Y2
中之每一者係O且R3
及R4
中之每一者獨立地係氫。在一些實施例中，Y2
係O且R4
係氫。在一些實施例中，Y1
及Y2
中之每一者獨立地係S且R3
及R4
中之每一者獨立地經1個R8
取代。在一些實施例中，Y1
係S且R3
經1個R8
取代。 在一些實施例中，R8
係視情況經1-5個R9
(例如，1個R9
)取代之OC(O)-芳基。在一些實施例中，R9
係O-C1
-C20
烷基(例如，O-CH2
(CH2
)8
CH3
)。在一些實施例中，R9
係O-C1
-C12
烷基(例如，O-CH2
(CH2
)8
CH3
)。在一些實施例中，R9
係O-C1
-C10
烷基(例如，O-CH2
(CH2
)8
CH3
)。在一些實施例中，R9
係O-C1
-C8
烷基(例如，O-CH2
(CH2
)6
CH3
)。在一些實施例中，R9
係O-C1
-C6
烷基(例如，O-CH2
(CH2
)4
CH3
)。 在一些實施例中，化合物由式(I-f)表示：
式(I-f) 或其醫藥上可接受之鹽或立體異構物，其中B1
及B2
中之每一者獨立地係嘌呤基核鹼基或嘧啶基核鹼基；X1
及X2
中之每一者獨立地係O或S；Y1
及Y2
中之每一者獨立地係O、S或NR5
；L1
及L2
中之每一者獨立地係不存在、C1
-C6
烷基或C1
-C6
雜烷基，其中每一C1
-C6
烷基及C1
-C6
雜烷基視情況經R6
取代；R1
及R2
中之每一者獨立地係鹵基；R3
及R4
中之每一者獨立地係氫、C1
-C20
烷基、C1
-C6
雜烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，其中每一C1
-C20
烷基、C1
-C6
雜烷基、環烷基、雜環基、芳基及雜芳基視情況經1-5個R8
取代；R5
係氫或C1
-C20
烷基；R6
係鹵基、-CN、C1
-C20
烷基、OR7
、側氧基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，其中每一C1
-C20
烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基視情況經1-5個R9
取代；R7
係氫、C1
-C20
烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，其中每一C1
-C20
烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基視情況經1-5個R9
取代；每一R8
獨立地係C1
-C20
烷基、C(O)-芳基、C(O)-雜芳基、OC(O)-芳基或OC(O)-雜芳基，其中每一C1
-C20
烷基、C(O)-芳基、C(O)-雜芳基、OC(O)-芳基或OC(O)-雜芳基視情況經1-5個R9
取代；且每一R9
獨立地係C1
-C20
烷基、鹵基、-CN、OH、O-C1
-C20
烷基、O-C1
-C20
雜烷基、O-芳基或O-雜芳基。 在一些實施例中，化合物由式(I-g)表示：
式(I-g) 或其醫藥上可接受之鹽或立體異構物，其中B1
及B2
中之每一者獨立地係嘌呤基核鹼基或嘧啶基核鹼基；X1
及X2
中之每一者獨立地係O；Y1
及Y2
中之每一者獨立地係O或S；L1
及L2
中之每一者獨立地係不存在或C1
-C6
烷基；R1
及R2
中之每一者獨立地係鹵基或OH；R3
及R4
中之每一者獨立地係氫或視情況經1-5個R8
取代之芳基；每一R8
獨立地係視情況經1-5個R9
取代之OC(O)-芳基；且每一R9
獨立地係O-C1
-C20
烷基。 在一些實施例中，化合物選自表1中所繪示之化合物：
步驟 1 ： 合成 5’-OH-3’- 乙醯丙基 -2’F-dA (2) ： 
將乙醯丙酸(2.148 g, 18.5 mmol)溶解於無水二噁烷(50 mL)中且將溶液在冰水浴上冷卻至5-10℃。經1 h逐份添加DCC (1.939 g, 9.4 mmol)。移除冰水浴且將混合物升溫至室溫並攪拌2小時。過濾掉二環己基尿素沈澱物，且用無水二噁烷(10 mL)洗滌沈澱物。然後將濾液添加至5’DMT-2’F-3’OH-dA ((1
), 5.0 g, 7.4 mmol)於無水吡啶(50 mL)中之溶液中且在氬下添加催化量之DMAP。在室溫下攪拌2小時後，將混合物蒸發至乾燥。將殘餘物溶解於DCM (150 mL)中且用5% NaHCO3
(100 mL)及鹽水(100 mL)洗滌。分離有機相，經Na2
SO4
乾燥並在減壓下濃縮，以獲得白色固體狀期望產物(2)
。產物不經進一步純化即用於下一步驟中。步驟 2 ( 三苯甲基化 ) ： 合成 4- 側氧基戊酸 (2R,3R,4R,5R)-5-(6- 苯甲醯胺基 -9H- 嘌呤 -9- 基 )-4- 氟 -2-( 羥基甲基 ) 四氫呋喃 -3- 基酯 (3) ： 
將5’-OH-3’-乙醯丙基-2’F-dA (1
)溶解於DCM (100 mL)中且然後添加水(1.33 mL, 74 mmol)。添加DCM (100 mL)中之6% DCA，將反應混合物在室溫下攪拌10-15 min。藉由添加甲醇(25 mL)淬滅反應混合物。用5% NaHCO3
溶液(150 mL)及鹽水(150 mL)洗滌所得混合物。分離有機層，經Na2
SO4
乾燥並在減壓下濃縮，以獲得粗殘餘物。在combi-flash矽膠管柱層析上用DCM中之0-5% MeOH溶析來純化粗殘餘物，以獲得3.45 g (62%產率)白色固體狀期望產物(3
)。步驟 3 ： 4- 側氧基戊酸 (2R,3R,4R,5R)-5-(6- 苯甲醯胺基 -9H- 嘌呤 -9- 基 )-2-((((2- 氰基乙氧基 )(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4- 二側氧基 -3,4- 二氫嘧啶 -1(2H)- 基 )-4- 氟 -2-( 羥基甲基 ) 四氫呋喃 -3- 基 ) 氧基 ) 硫代磷醯基 ) 氧基 ) 甲基 )-4- 氟四氫呋喃 -3- 基酯 (5) 
(1) (i)( 偶合 ) ：
將5’OH-3’-乙醯丙基化-2’F-去氧-腺苷((3
), 700 mg, 1.48 mmol)及5’DMT-2’F-3’CED-亞磷醯胺-去氧-尿苷((4
), 1.66 g, 2.22 mmol)混合物在高真空下乾燥1-2小時。用氬沖洗整個含有反應混合物之R.B.燒瓶。將無水乙腈(40 mL)添加至反應混合物中，然後在氬氣氛下添加乙腈溶液(5.0 mL)中之ETT (279 mg, 2.146 mmol)。將所得混合物在室溫下在氬下攪拌2 h。TLC分析顯示反應完成後，立即添加水(80 µL, 2當量至醯胺)。所得混合物用於下一步驟中。(ii) ( 硫化 ) ：
在矽化燒瓶中，將Beaucage試劑(3H-BD) (592 mg, 2.96 mmol)溶解於乙腈(5.0 mL)中。將含有(5
)之上述偶合反應混合物在氬氣氛下添加至硫化試劑(3H-BD)於乙腈中之溶液中且將所得混合物在室溫下攪拌45分鐘以允許硫化反應完成。然後添加甲醇(10 mL)且將所得混合物攪拌30 min。在減壓下濃縮反應混合物。將粗殘餘物溶解於DCM (100 mL)中並用水(75 mL)洗滌。分離有機層，經Na2
SO4
乾燥，且用於下一步驟(脫三苯甲基化)中。(2) 脫三苯甲基化：
將含有來自先前步驟之產物之DCM溶液冷卻至R.B.燒瓶中之冰水浴。添加DCM:MeOH (7:3, 100 mL)中之5% PTSA溶液且將所得混合物攪拌15分鐘以允許脫三苯甲基化反應完成。然後添加水(50 mL)並將所得混合物再攪拌15分鐘。將反應混合物轉移至分液漏斗水且分離各相。用5% NaHCO3
溶液(100 mL)洗滌有機層直至將水層之pH添加至7.0以上。然後經Na2
SO4
乾燥有機層並在減壓下濃縮。使用Combiflash矽膠管柱層析用DCM中之0-5% MeOH溶析來純化粗產物，以獲得960 mg白色固體狀期望產物(5
)。步驟 4 ( 乙醯丙基去保護 ) ： 硫代磷酸 O-(((2R,3R,4R,5R)-5-(6- 苯甲醯胺基 -9H- 嘌呤 -9- 基 )-4- 氟 -3- 羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲基 )O-(2- 氰基乙基 )O-((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4- 二側氧基 -3,4- 二氫嘧啶 -1(2H)- 基 )-4- 氟 -2-( 羥基甲基 ) 四氫呋喃 -3- 基 ) 酯 (6) 
用吡啶:乙酸(3:2)混合物中之0.5M一水合肼處理3’-乙醯丙基保護之二核苷酸硫代磷酸酯且將所得混合物在室溫下攪拌15分鐘。TLC分析顯示反應完成後，然後立即將2,4-戊二酮(2.0 mL)添加至反應混合物中以淬滅未反應之水合肼。在減壓下移除揮發物且將所得混合物分配於DCM (50 mL)中之25% IPA與水(50 mL)之間。分離有機層並在減壓下濃縮至乾燥以獲得稠液體，將其與甲苯(2 × 15 mL)共蒸發，以獲得粗殘餘物。使用Combiflash矽膠管柱層析用DCM中之0-10% MeOH溶析來純化粗產物，以獲得725 mg白色固體狀期望產物(6
)。步驟 5a ： N-(9-((2R,3R,3aR,7aR,9R,10R,10aR,14aR)-5,12- 雙 (2- 氰基乙氧基 )-9-(2,4- 二側氧基 -3,4- 二氫嘧啶 -1(2H)- 基 )-3,10- 二氟 -5,12- 二硫代八氫 -2H,7H- 二呋喃并 [3,2-d:3',2'-j][1,3,7,9] 四氧雜 [2,8] 二磷環十二烷 -2- 基 )-9H- 嘌呤 -6- 基 ) 苯甲醯胺 (7) 
(i) 環化 ：
將二核苷酸硫代磷酸三酯(6
) (1當量)及2-氰基乙基四異丙基亞磷醯胺(雙醯胺) (1當量)溶解於無水乙腈及無水DCM之混合物(2:1, 30 mL)中。然後在惰性氣氛下經1小時之時段將二異丙基胺基四唑(1當量)分4份添加至反應混合物中。將溶液在室溫下再攪拌2 h且然後添加ETT (2.0當量)並將反應混合物攪拌過夜。然後將去氧水(29 μL)添加至反應混合物中。粗產物不經進一步純化即用於下一步驟。(ii)
硫化(合成經保護環狀磷酸硫代二磷酸酯)：將Beaucage試劑(3H-BD) (2.0當量)溶解於矽化燒瓶中之乙腈中。將上述環化產物之一部分(三分之二)在氬氣氛下添加至硫化試劑中。將所得混合物在室溫下攪拌45分鐘。然後添加甲醇(10 mL)並將反應混合物攪拌30分鐘。在減壓下移除溶劑並將粗殘餘物溶解於DCM (50 mL)中且用水(50 mL)洗滌。經Na2
SO4
乾燥合併之有機層並在減壓下濃縮。使用Combiflash矽膠管柱層析用DCM中之0-10% MeOH溶析來純化粗產物，以獲得150 mg期望產物(7
)。步驟 5b ( 氧化 ) ： N-(9-((2R,3R,3aR,7aR,9R,10R,10aR,14aR)-5,12- 雙 (2- 氰基乙氧基 )-9-(2,4- 二側氧基 -3,4- 二氫嘧啶 -1(2H)- 基 )-3,10- 二氟 -5- 氧離子基 -12- 硫代八氫 -2H,7H- 二呋喃并 [3,2-d:3',2'-j][1,3,7,9] 四氧雜 [2,8] 二磷環十二烷 -2- 基 )-9H- 嘌呤 -6- 基 ) 苯甲醯胺 (8) 
將TBHP (4.0當量)在0℃下添加至來自步驟5(a) (i)之環化產物之第二部分(三分之一)之攪拌溶液中且經15分鐘將反應混合物升溫至室溫。然後藉由添加飽和亞硫酸氫鈉溶液淬滅過量TBHP。在減壓下蒸發所得混合物。將所得殘餘物溶解於DCM (25 mL)中並用水(20 mL)洗滌。分離有機層，經Na2
SO4
乾燥並在減壓下濃縮，以獲得粗產物。使用Combiflash矽膠管柱層析用DCM中之0-10% MeOH溶析來純化粗產物，以獲得60 mg期望產物(8
)。合成化合物 2 ： (2R,3R,3aR,7aR,9R,10R,10aR,14aR)-2-(6- 胺基 -9H- 嘌呤 -9- 基 )-9-(2,4- 二側氧基 -3,4- 二氫嘧啶 -1(2H)- 基 )-3,10- 二氟八氫 -2H,7H- 二呋喃并 [3,2-d:3',2'-j][1,3,7,9] 四氧雜 [2,8] 二磷環十二烷 -5,12- 雙 ( 硫醇 ) 銨 5,12- 二氧化物 
將經保護環狀磷酸硫代二磷酸酯(8
) (60 mg)溶解於濃NH4
OH (2.0 mL)中且在室溫下攪拌過夜。LCMS顯示反應完成後，立即在減壓下蒸發反應混合物以移除氨。用乙酸乙酯(5 × 5 mL)洗滌水層，分離且凍乾，以提供100 mg白色鬆散固體狀化合物2。合成化合物 4 ：雙 (4-( 癸基氧基 ) 苯甲酸 )((((2R,3R,3aR,7aR,9R,10R,10aR,14aR)-2-(6- 胺基 -9H- 嘌呤 -9- 基 )-9-(2,6- 二側氧基 -2H-1,3- 噁嗪 -3(6H)- 基 )-3,10- 二氟 -5,12- 二氧離子基八氫 -2H,7H- 二呋喃并 [3,2-d:3',2'-j][1,3,7,9] 四氧雜 [2,8] 二磷環十二烷 -5,12- 二基 ) 雙 ( 硫烷二基 )) 雙 ( 亞甲基 )) 雙 (4,1- 伸苯基 ) 酯 
將化合物2 (25 mg)溶解於水(250 µL)中且然後添加4-(癸基氧基)苯甲酸4-(碘甲基)苯基酯(42 mg)於THF:丙酮混合物(1:1, 2.0 mL)中之溶液。反應混合物之pH大約為3.5-4.0。然後將反應混合物在室溫下攪拌40小時。使用Combiflash矽膠管柱層析用DCM中之0-10% IPA溶析來純化粗產物，以獲得25 mg黃棕色固體狀化合物4。合成化合物 3 ： (2R,3R,3aR,7aR,9R,10R,10aR,14aR)-2-(6- 胺基 -9H- 嘌呤 -9- 基 )-9-(2,4- 二側氧基 -3,4- 二氫嘧啶 -1(2H)- 基 )-3,10- 二氟 -12- 硫代八氫 -2H,7H- 二呋喃并 [3,2-d:3',2'-j][1,3,7,9] 四氧雜 [2,8] 二磷環十二烷 -5- 醇銨 5,12- 二氧化物 
將經保護環狀磷酸單硫代磷酸酯(8
) (60 mg)溶解於濃NH4
OH (5.0 mL)中且在室溫下攪拌過夜。LCMS顯示反應完成後，立即在減壓下濃縮反應混合物以移除氨。用乙酸乙酯(5 × 5 mL)洗滌水層，分離且凍乾，以提供50 mg白色鬆散固體狀化合物3。合成化合物 9
：(2R,3R,3aR,7aR,9R,10R,10aR,14aR)-2-(6- 胺基 -9H- 嘌呤 -9- 基 )-12-((4-((4-( 癸基氧基 ) 苯甲醯基 ) 氧基 ) 苄基 ) 硫基 )-9-(2,4- 二側氧基 -3,4- 二氫嘧啶 -1(2H)- 基 )-3,10- 二氟八氫 -2H,7H- 二呋喃并 [3,2-d:3',2'-j][1,3,7,9] 四氧雜 [2,8] 二磷環十二烷 -5- 醇銨 5,12- 二氧化物 
將化合物3 (20 mg)溶解於水(200 µL)中且然後添加4-(癸基氧基)苯甲酸4-(碘甲基)苯基酯(18 mg)於THF:丙酮混合物(1:1, 1.4 mL)中之溶液。反應混合物pH大約為4.0。然後將反應混合物在室溫下攪拌過夜。在減壓下移除溶劑且將粗產物再溶解於水:乙腈(1:1, 2.0 mL)中。然後藉由離心移除所得沈澱物(無反應之烷基化試劑)。將母液凍乾以提供12 mg粗產物，藉由使用C18
Sep pack管柱(Waters, 4.0 g)使用0.2 M乙酸銨緩衝液純化該粗產物。用乙腈:水(1:1)溶析化合物。收集純部分且凍乾，以提供5-6 mg白色鬆散固體狀化合物9。實例 2. IRF 及 NF- κβ 於 THP1 細胞中之活體外誘導 表 2
：本發明實例性化合物之EC50
值實例 3. ISG54 及 NF- κβ 於 HEK293 細胞中之活體外活化
在本實驗中，用本發明實例性化合物(例如，化合物1、化合物2及化合物3)或作為對照之2’,3’-cGAMP處理一式兩份穩定表現ISG54 ISRE-luc報導基因或NF-κβ-luc報導基因之HEK293細胞(SZ14)，使其各自於毛地黃皂苷緩衝液中保持5小時，以篩選潛在STING激動劑。使用Steady-glo緩衝液系統(Promega)測定ISG54或NF-κβ活性，且匯總於圖7A-7B及圖8中。數據顯示為相對於僅接受DMSO (化合物載劑)之細胞之倍數誘導，其呈每種刺激物二重孔之平均值+/-標準偏差形式。實例 4. THP 細胞 及原始 Lucia 細胞 中之 I 型 IRF IFN 活性之評估
用不同濃度之於lipofectamine中之本發明實例性化合物(例如，化合物2或化合物3)或作為對照之於lipofectamine中之2’,3’-cGAMP將一式三份THP1-dual細胞處理22小時。使用Quanti-luc試劑分析細胞培養物上清液中之IRF誘導型螢光素酶報導基因活性量，且匯總於圖9中。數據顯示為相對於僅接受DMSO (化合物載劑)之細胞之倍數誘導，其呈每種刺激物二重孔之平均值+/-標準偏差形式。 或者，僅用本文所揭示之化合物將一式三份於96孔板中之THP1-Dual細胞(人類單核球))及原始Lucia細胞(小鼠巨噬細胞(RAW))刺激24 hr。使用Invivogen之Quanti-luc量測細胞培養物上清液中分泌性螢光素酶之活性。數據顯示為相對於DMSO處理之細胞之倍數誘導(每種刺激物三重孔之平均值±標準偏差)。 如圖31A-31B中所顯示，相對於天然STING配體3’,3’-cGAMP，Cmd 1、Cmd 5、Cmd 12、Cmd 13、Cmd 14及Cmd 15在人類單核球(圖31A)及小鼠巨噬細胞(圖31B)中更具活性。實例 5. 實例性化合物對諾羅病毒、 RSV 、胡寧病毒、登革熱病毒及 HCV 之效能
. 使用HG23 (肝細胞瘤)細胞系中之諾羅病毒株GI NoV之複製子且藉由RNA雜交及定量PCR評價活性。經由中性紅方法量測細胞毒性。用本文所揭示之化合物或2’-C-甲基胞苷(陽性對照)處理受感染細胞。結果顯示於下表3中。表 3 ：
化合物對諾羅病毒之抗病毒活性
化合物1顯示對諾羅病毒株GI NoV幾乎300之高選擇性指數。對於HG23細胞系，CC50
為100 µM，而EC50
為0.342 µM。 化合物 1 對 RSV 之效能 .
使用RSVA2感染(0.5 MOI)之A549細胞且藉由病毒溶菌斑分析估計病毒效價。用DMSO或50 μM、100 μM或200 μM本文所揭示化合物處理RSV感染之細胞。基於病毒效價值來計算RSV感染百分比。100%感染表示媒劑處理之細胞中之RSV感染。對於媒劑對本發明化合物處理之細胞，使用司徒頓T測試(Student’s t test)，p ≤ 0.05。 與媒劑相比，用50 μM、100 μM及200 μM化合物1處理RSVA-2 A549細胞皆會減小RSV效價及RSV感染百分比(圖12A及12B)。 化合物 1 對胡寧病毒及登革熱病毒之效能 .
在Vero細胞中分別使用株系JV 4454及DENV-2 (株系NGC)實施針對胡寧(JUNV)及登革熱病毒血清型2 (DSV-2)之活性且藉由溶菌斑分析測定細胞外DENV/JUNV產率。藉由中性紅、MTT或MTS方法平行進行細胞毒性分析。用媒劑或本文所揭示化合物處理受感染細胞。 如圖15A中所顯示，與未處理之A549感染之細胞相比，在經化合物1處理之A549感染之細胞中病毒產率減小1 log，二者皆在感染後24小時及48小時(h p.i.)量測。在感染後24小時(h p.i.)，與未處理之A549感染之細胞相比，在感染DSV2之A549細胞中登革熱病毒血清型2 (DSV2)之病毒產率減小1 log。在感染後48小時，未發現顯著差異。(圖15B) 化合物 1 對 HCV 之效能
使用捕獲融合分析來測試針對HCV基因型1a及1b之活性。將THP-1細胞簡短暴露於融合有Huh7衍生物細胞之供體血清且使用qPCR來評價HCV複製。用不同濃度之本文所揭示化合物來處理細胞。 如圖13A-13G中所顯示，HCV RNA複製在用遞增濃度之化合物1處理後減少。 化合物1引發針對所有所測試RNA病毒之強效抗病毒活性，其中EC50
介於0.34至5.5 μM之間且具有高選擇性指數。STING激動劑化合物1顯示針對若干RNA病毒(包括出血熱病毒)之強效抗病毒活性，此與其作用機制一致。實例 6 ： IRF 及 NF-KB 之誘導之評估
用不同濃度之本發明化合物或DMSO對照處理生長於完全培養基中之THP1 dual細胞。Dual細胞攜載在融合至5拷貝NF-kB共有轉錄反應元件之IFN-β最小啟動子控制下之分泌性胚胎鹼性磷酸酶(SEAP)報導基因(以量測NF-kB活性)及在ISG54最小啟動子控制下之Lucia報導基因(以量測IRF活性)二者。培育20 h後，使用QUANTI-luc量測Lucia之含量來評價IRF活性且藉由在620-655 nm下量測SEAP含量來確定NF-kB活性。根據與DMSO處理之樣品相比發光/吸光度之倍數變化來計算誘導%。給予任何負值基值1用於以log標度繪製數據以準確地展示劑量反應。藉由Xlfit中之曲線擬合生成EC50
值。 用不同濃度之本發明化合物或DMSO對照處理生長於完全培養基中之細胞。Dual細胞攜載在融合至5拷貝NF-kB共有轉錄反應元件之IFN-β最小啟動子控制下之分泌性胚胎鹼性磷酸酶(SEAP)報導基因(以量測NF-kB活性)及在ISG54最小啟動子控制下之Lucia報導基因(以量測IRF活性)二者。培育20 h後，使用QUANTI-luc量測Lucia之含量來評價IRF活性且藉由在620-655 nm下量測SEAP含量來確定NF-kB活性。根據與DMSO處理之樣品相比發光/吸光度之倍數變化來計算誘導%。藉由Xlfit中之曲線擬合生成EC50
值。 Cmd 1、Cmd 1A、Cmd 1B、Cmd 12、Cmd 13、Cmd 14、Cmd 15皆顯示IRF及NF-kB之誘導。(參見圖17A、17B、18A-18D、19A-19B、20A-20D、21A-21D、22A-22D、23A-23D及24A-24B)。結果指示，Cmd 1、Cmd 1A、Cmd 1B、Cmd 12、Cmd 13、Cmd 14、Cmd 15在不使用轉染劑下由細胞吸收。Cmd 3顯示無NF-kB活性(圖19A-19B)。 圖27A-27B及35A-35B比較Cmd 15、Cmd 15-A及Cmd 15-B (Cmd 15之異構物)及Cmd 16對IRF (圖27A及35A)及NF-κB (圖27B及35B)之誘導。實例 7. 實例性化合物之穩定性之測定 血清穩定性研究：
在37℃下將0.5 mM本文所揭示化合物與兔血清一起培育不同時間點。藉由添加1 mL乙腈淬滅反應。在急凍並在4℃下離心5 min後收集含有化合物之上清液。隨後在HPLC中分析含有化合物之上清液。 微粒體穩定性研究：
在37℃下將0.5 mM本文所揭示化合物與人類微粒體一起培育不同時間點。用20 mM NADPH起始反應，培育，然後藉由添加1 mL乙腈淬滅。在急凍並在4℃下離心5 min後收集含有化合物之上清液。隨後在HPLC中分析含有化合物之上清液。 如在圖25A-25B中可見，Cmd 1之異構物Cmp1-A及Cmd 1-B在兔血清及人類微粒體中穩定。峰1及峰2代表Cmd 1-A及1-B。Cmd 15亦在兔血清及人類微粒體中穩定。圖26A-26B顯示Cmd 1之異構物Cmd 15 1-A及Cmd 15B在兔血清及人類微粒體中之穩定性。實例 8. 實例性化合物之細胞毒性之測定
使用Cell titer Glo分析(Promega)
來評價THP1細胞中實例性化合物之細胞毒性。用不同濃度之化合物或DMSO對照處理生長於完全培養基中之THP1 dual細胞。藉由基於螢光素酶反應所產生之「輝光型」發光信號呈現之ATP之定量評價培養物中之活細胞數來確定CellTiter-Glo®發光細胞活力/細胞毒性。根據與DMSO處理之樣品相比發光之倍數變化來計算細胞凋亡%。 圖28顯示用不同濃度(5 μM、14 μM、41 μM、123 μM、370 μM、1111 μM、3333 μM及1000 μM)之Cmd 15及其異構物Cmd 15-A及Cmd 15-B處理時，經由THP1細胞之細胞毒性%之細胞凋亡誘導。實例 9. STING 結合之量化
在毛地黃皂苷存在下用本文所揭示化合物、2`3`-cGAMP (天然STING配體)或DMSO將穩定表現ISG54 ISRE-luc報導基因之SZ14 HEK293細胞處理5-6 hr。測定ISRE螢光素酶活性且正規化至DMSO處理之細胞(每種刺激物三重孔之平均值±標準偏差)。 如圖29A-29B中所顯示，Cmd 1與STING之結合活化1型IFN信號傳導，此與用2’,3’-cGAMP所觀察到之1型IFN信號傳導之活化相似。 或者，在37℃、5% CO2
下，用化合物/lipo、cGAMP/lipo複合物或單獨化合物將一式三份於96孔板中之原始ISG-Dual細胞刺激22-24小時。使用Invivogen Quanti-luc量測細胞培養物上清液中分泌性螢光素酶之活性。數據顯示為相對於DMSO處理之細胞之倍數誘導(每種刺激物三重孔之平均值±標準偏差)。 如圖30中所顯示，Cmd 1在小鼠巨噬細胞中之活化1型IFN信號傳導方面有高活性，此與用2’,3’-cGAMP所觀察到之1型IFN信號傳導之活化相似。實例 10. 實例性化合物對 THP 細胞中之 III 型 IFN (IL-29) 產生之誘導
用單獨實例性化合物或cGAMP/lipo將一式三份THP1-Dual (WT)細胞處理21 hr。使用ELISA測定培養物上清液中之IL-29含量。所顯示結果係二重孔之平均值±標準偏差。 用Cmd 1及Cmd 15處理細胞誘導THP1細胞中之III型干擾素(IL-29)產生(圖33A)。此指示Cmd 1及Cmd 15二者在不使用轉染試劑下由細胞吸收(圖33B)。實例 11 ： 實例性化合物對 THP 細胞中之 I 型 IFN 產生之誘導
用化合物/毛地黃皂苷緩衝液將一式三份SZ14細胞(穩定表現ISG54 ISRE-luc報導基因之HEK293)處理5 hr。使用Promega Steady-Glo螢光素酶分析緩衝液測定ISG54 ISRE-luc活性且正規化至DMSO處理之細胞(三重孔之平均值±標準偏差)。 或者，僅用化合物將一式三份THP1-Dual (WT)細胞處理3-22h。使用Quanti-luc緩衝液測定I型IRF IFN活性且正規化至DMSO處理之細胞(三重孔之平均值±標準偏差)。圖32A-B及圖34 圖32A-32B及34A-34B顯示經Cmd 1及其異構物Cmd 1A (Cmd 1-PK1)及Cmd 1B (Cmd 1-PK2)處理之HEK293 (圖32A)及THP1 (圖32B)細胞中之I型IFN信號傳導之誘導。與對照相比，Cmd 1、Cmd 1-A、Cmd 1-B、Cmd 13及Cmd 15皆誘導I型IFN信號傳導。等效形式
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式(I-b) 式(I-c)
式(I-d) 式(I-e) 或其醫藥上可接受之鹽，其中B1 、B2 、X1 、X2 、Y1 、Y2 、L1 、L2 、R1 、R2 、R3 、R4 及其次變量中之每一者係如請求項1中所定義。
