TW201639591A

TW201639591A - 使用抗格拉替雷醋酸鹽抗體反應之方法

Info

Publication number: TW201639591A
Application number: TW104143903A
Authority: TW
Inventors: 大衛雷坎尼; 娜塔莉亞阿許坦克; 席洛莫巴克錫; 布拉洽緹曼
Original assignee: 泰瓦藥品工業有限公司
Priority date: 2015-01-28
Filing date: 2015-12-25
Publication date: 2016-11-16
Also published as: WO2016123344A1; AR103461A1; UY36537A; US20160213633A1

Abstract

本發明提供在罹患多發性硬化症之人類個體中誘導抗格拉替雷醋酸鹽特異性抗體之方法，其包含向該人類個體每週三次皮下注射投與40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽，持續至少12個月，使得該人類個體之血液或血清中抗GA特異性抗體之含量i)在向該人類個體投與該投藥之初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後，持續長達約6個月增加；ii)與在該初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後的第一個月至第三個月之後的增加速率相比，在該初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後的第一個月期間以更高速率增加；iii)在該初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後，在約3個月或約6個月時或在約3個月與約6個月之間達到峰值；及iv)在該初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後至少約12個月高於基線。

Description

使用抗格拉替雷醋酸鹽抗體反應之方法

在本申請案通篇中，引用各種公開案，包括以阿拉伯數字(Arabic numeral)引用。可發現以阿拉伯數字引用之公開案的完整引用列於申請專利範圍之前所緊接著的本說明書之結尾處。所有引用之公開案的揭示內容在此以全文引用的方式併入本申請案中，以便更充分描述本發明所關於的目前先進技術。

多發性硬化症(MS)為一種慢性、使人衰弱的中樞神經系統(CNS)自體免疫疾病，其具有導致神經退化及失能的復發緩解型(RR)或進行性病程。在初始診斷時，RRMS為該疾病之最常見形式(1)，其特徵在於神經功能障礙(復發)之不可預測的急性發作，繼之以不同的恢復及臨床穩定期。絕大部分RRMS患者最終患有具有或不具有疊加復發之繼發性進行性(SP)疾病。約15%患者自開始即患有其神經功能之持續退化；此形式稱為原發性進行性(PP)MS。已經歷單一臨床事件(臨床上分離症候群或「CIS」)之患者及根據McDonald之標準在後續磁共振成像(MRI)掃描上展示病變傳播之患者亦視為具有復發性MS(2)。

MS在全世界的盛行率顯著不同，其為青少年中慢性神經失能之最常見病因(3、4)。Anderson等人估計，在1990年美國約有350,000個經醫師診斷患有MS的患者(大約每100,000人口中140個)(5)。據估計，在世界範圍內約有250萬個個體受影響(6)。一般而言，在世界範圍內已有MS盛行率及發病率增加的趨勢，但此趨勢之原因尚不完全清楚(5)。

目前治療方法由i)對症治療、ii)用皮質類固醇治療急性復發及iii)旨在修改疾病之病程的治療組成。目前經批准之療法靶向該疾病之發炎過程。其中大多數視為充當免疫調節劑，但其作用機制尚未完全闡明。免疫抑制劑或細胞毒性劑亦用於在習知療法失敗之後的某些患者。若干藥物已經批准且在臨床上確定為對於RR-MS之治療有效；包括BETASERON®、AVONEX®及REBIF®，其為細胞激素干擾素β(IFNB)之衍生物，其在MS中之作用機制一般歸因於其免疫調節效應、拮抗促炎反應及誘導抑制細胞。其他經批准用於治療MS之藥物包括米托蒽醌(Mitoxantrone)及那他珠單抗(Natalizumab)(7)。

指示Copaxone®(Teva Pharmaceutical Industries Ltd.)用於治療患有復發形式之多發性硬化症的患者。Copaxone®為用於皮下注射之澄清、無色至微黃色無菌非熱解溶液(8)。每1mL Copaxone®溶液含有20mg或40mg活性成分格拉替雷醋酸鹽(GA)、40mg非活性成分甘露糖醇(8)。

Copaxone®之活性成分GA由合成多肽之醋酸鹽組成，合成多肽含有四種天然存在之平均莫耳分率分別為0.141、0.427、0.095及0.338之胺基酸：L-麩胺酸、L-丙胺酸、L-酪胺酸及L-離胺酸。格拉替雷醋酸鹽係由特異性抗體鑑別(8)。

GA在具有慢性炎症及神經變性病之各種動物模型中引發抗炎作用以及神經保護作用(9-13)，且已展示在長期治療之後在減少MS患者復發及延遲神經失能方面為安全且有效的(14)。

GA治療活性之根本機制尚未完全闡明，但GA對免疫細胞之活性已得到充分展現。GA似乎充當髓鞘鹼性蛋白(MBP)內的致腦炎抗原決定基之變構肽配位體(APL)(15)，且在體液及細胞層級上展現與MBP的交叉反應性(16-22)。GA多肽混合物之獨特抗原序列與髓鞘抗原競爭結合至抗原呈現細胞(APC)上的MHC II類分子且呈現至T細胞受體(TCR)，導致誘導自體反應性MBP反應性T細胞之失能或缺失及GA反應性T細胞之增殖。在Copaxone^®治療開始時，來自MS患者之GA反應性CD4+ T細胞株分泌1型促炎T輔助細胞(Th1)及抗炎Th2細胞激素(20、23)，但繼續暴露於Copaxone^®在GA反應性T細胞中誘導向Th2表型移位(20、22、24-27)。在用每日皮下Copaxone 20mg/ml治療之MS患者中，抗GA抗體在治療開始之後3個月達到峰值，在6個月減少且保持較低，且IgG1抗體含量比IgG2抗體含量高2至3倍(28)。

Copaxone^®亦增加CD4+CD25+FOXP3+調節性T細胞之數量及抑制能力，該等細胞的功能在MS患者中減弱(29-31)。此外，治療導致APC功能之抗原非特異性調節。Copaxone^®治療促進抗炎II型單核細胞的發展，其特徵在於介白素(IL)-10及轉型生長因子-β(TGF-β)增加且IL-12及腫瘤壞死因子(TNF)的產生減少(32)。

本發明提供一種在罹患多發性硬化症之人類個體中誘導抗格拉替雷醋酸鹽(anti-glatiramer acetate；GA)特異性抗體之方法，其包含向該人類個體每週三次皮下注射投與40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽，持續至少12個月，使得該人類個體之血液或血清中抗GA特異性抗體之含量i)在向該人類個體投與該投藥之初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後，持續長達約6個月增加；ii)與在初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後的第一個月至第三個月之後的增加速率相比，在初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後的第一個月期間以更高速率增加； iii)在初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後，在約3個月或約6個月或在約3個月與約6個月之間達到峰值；及iv)在初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後至少約12個月高於基線。

本發明提供一種產生罹患多發性硬化症之人類個體之格拉替雷醋酸鹽反應曲線的方法，其包含以下步驟：a)由罹患多發性硬化症之人類個體在投與初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後每週三次皮下注射投與40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽，持續至少約12個月或至少約24個月，定期收集血液或血清樣本；b)分析該人類個體之血液或血清中抗格拉替雷醋酸鹽(GA)特異性抗體之含量是否i)在初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後，持續長達約6個月增加；ii)與在初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後的第一個月至第三個月之後的增加速率相比，在初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後的第一個月期間以更高速率增加；iii)在初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後，在約3個月或約6個月或在約3個月與約6個月之間達到峰值；及iv)在初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後約12個月及約24個月高於基線，c)產生人類個體之包含步驟b)中確定的抗GA特異性抗體含量之格拉替雷醋酸鹽反應曲線。

本發明提供一種在罹患多發性硬化症之人類個體中誘導抗格拉替雷醋酸鹽(GA)特異性抗體之方法，其包含向該人類個體每週三次皮下注射投與40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽，持續至少12個月，使得該人類個體之血液或血清中抗GA特異性抗體之含量i)在向該人類個體投與該投藥之初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後，持續長達6個月增加；ii)與在初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後的第一個月至第三個月之後的增加速率相比，在初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後的第一個月期間以更高速率增加；iii)在初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後，在3個月或6個月或在3個月與6個月之間達到峰值；及iv)在初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後至少12個月高於基線，其中40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽係在預填充注射器中，該預填充注射器含有40mg/ml格拉替雷醋酸鹽及40mg/ml甘露糖醇之1ml藥物水溶液，且其中該藥物水溶液a)具有2.0至3.5cPa範圍內的黏度；或b)具有270至330mosmol/Kg範圍內的重量莫耳滲透濃度。

圖1. 用每日皮下Copaxone® 20mg/ml治療9個月之患者中之抗GA特異性抗體反應曲線。使用酶聯免疫吸附分析(ELISA)偵測抗GA特異性抗體。表示切點值的直線以7.1(RA%)穿過Y軸。

圖2. 用每日皮下Copaxone® 20mg/ml治療2年之患者中之抗GA特異性抗體反應。使用(A)放射免疫分析(RIA)及(B)ELISA技術偵測抗GA特異性抗體。

圖3. 用每週三次皮下Copaxone® 40mg/ml治療2年之患者中之抗GA特異性抗體反應。表示切點值的直線以1.4(RA%)穿過Y軸。

本發明提供一種在罹患多發性硬化症之人類個體中誘導抗格拉替雷醋酸鹽(GA)特異性抗體之方法，其包含向該人類個體每週三次皮下注射投與40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽，持續至少12個月，使得該人類個體之血液或血清中抗GA特異性抗體之含量i)在向該人類個體投與該投藥之初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後，持續長達約6個月增加；ii)與在初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後的第一個月至第三個月之後的增加速率相比，在初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後的第一個月期間以更高速率增加；iii)在初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後，在約3個月或約6個月或在約3個月與約6個月之間達到峰值；及iv)在初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後至少約12個月高於基線。

在一些實施例中，在初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後，人類個體之血液或血清中抗GA特異性抗體之含量持續約3個月至約6個月增加。

在一些實施例中，向人類個體每週三次皮下注射投與40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽，持續至少18個月，且在初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後約18個月，人類個體之血液或血清中抗GA特異性抗體之含量高於基線。

在一些實施例中，向人類個體每週三次皮下注射投與40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽，持續至少24個月，且在初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後約24個月，人類個體之血液或血清中抗GA特異性抗體之含量高於基線。

在一些實施例中，抗GA特異性抗體不同於IgM或IgE抗體。

在一些實施例中，人類個體之血液或血清中抗GA特異性抗體之含量增加 i)如藉由酶聯免疫吸附分析(ELISA)所量測，在初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後約1、約3、約6、約9、約12、約18或約24個月內，達到至少約25、約30、約35、約40、約45、約50、約55、約60、約65、約67.5、約70、約75、約80、約25至約50、約29至約106、約29至約60、約31至約60、約35至約70、約39至約71、約50至約75、約75至約80或約50至約80RA%；ii)如藉由ELISA所量測，在初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後約1、約3、約6、約9、約12、約18或約24個月內，RA%相比於基線增加了至少約5、約10、約15、約20、約25、約30、約35、約40、約45、約50、約55、約60、約65、約70、約75、約80、約85、約90、約95、約100、約110、約120、約130、約140、約150、約25.9至約975或約100至約200倍；或iii)相比於基線達到至少約5、約10、約15、約20、約25、約30、約35、約40、約45、約50、約55、約60、約65、約70、約75、約80、約85、約90、約95、約100、約110、約120、約130、約140、約150或約100至約200倍。

在一些實施例中，如藉由ELISA所量測，在初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後約1個月內，人類個體之血液或血清中抗GA特異性抗體之含量增加至至少約34、約35或約35至約70RA%。

在一些實施例中，如藉由ELISA所量測，在初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後約3個月內，人類個體之血液或血清中抗GA特異性抗體之含量增加至至少約67.5或約29至約106RA%。

在一些實施例中，如藉由ELISA所量測，在初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後約6個月內，人類個體之血液或血清中抗GA特異性抗體之含量增加至至少約40或約39至約71RA%。

在一些實施例中，如藉由ELISA所量測，在初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後約9個月內，人類個體之血液或血清中抗GA特異性抗體之含量增加至至少約30或約31至約60RA%。

在一些實施例中，如藉由ELISA所量測，在初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後約12個月內，人類個體之血液或血清中抗GA特異性抗體之含量增加至至少約30或約30至約60RA%。

在一些實施例中，如藉由ELISA所量測，在初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後約18個月內，人類個體之血液或血清中抗GA特異性抗體之含量增加至至少約25或約25至約50RA%。

在一些實施例中，如藉由ELISA所量測，在初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後約24個月內，人類個體之血液或血清中抗GA特異性抗體之含量增加至至少約25或約25至約50RA%。

本發明提供一種產生罹患多發性硬化症之人類個體之格拉替雷醋酸鹽反應曲線的方法，其包含以下步驟：a)由罹患多發性硬化症之人類個體在投與初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後每週三次皮下注射投與40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽，持續至少約12個月或至少約24個月，定期收集血液或血清樣本；b)分析該人類個體之血液或血清中抗格拉替雷醋酸鹽(GA)特異性抗體之含量是否i)在初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後，持續長達約6個月增加；ii)與在初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後的第一個月至第三個月之後的增加速率相比，在初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後的第一個月期間以更高速率增加；iii)在初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後，在約3個月或約6個月或在約3個月與約6個月之間達到峰值；及 iv)在初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後約12個月及約24個月高於基線，c)產生人類個體之包含步驟b)中確定的抗GA特異性抗體含量之格拉替雷醋酸鹽反應曲線。

在一些實施例中，該方法包含分析在初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後，人類個體之血液或血清中抗GA特異性抗體之含量是否持續約3個月至約6個月增加。

在一些實施例中，該方法進一步包含分析抗GA特異性抗體是否不同於IgM或IgE抗體，及步驟c)中產生的人類個體之格拉替雷醋酸鹽反應曲線將抗GA特異性抗體鑑別為不同於IgM或IgG抗體。

在一些實施例中，格拉替雷醋酸鹽反應曲線為書面格拉替雷醋酸鹽反應曲線報告。

在一些實施例中，步驟b)包含分析人類個體之血液或血清中抗GA特異性抗體之含量是否增加i)如藉由酶聯免疫吸附分析(ELISA)所量測，在初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後約1、約3、約6、約9、約12、約18或約24個月內，達到至少約25、約30、約35、約40、約45、約50、約55、約60、約65、約67.5、約70、約75、約80、約25至約50、約29至約106、約29至約60、約31至約60、約35至約70、約39至約71、約50至約75、約75至約80或約50至約80RA%；ii)如藉由ELISA所量測，在初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後約1、約3、約6、約9、約12、約18或約24個月內，RA%相比於基線增加了至少約5、約10、約15、約20、約25、約30、約35、約40、約45、約50、約55、約60、約65、約70、約75、約80、約85、約90、約95、約100、約110、約120、約130、約140、約150、約25.9至約975或約100至約200倍；或 iii)相比於基線達到至少約5、約10、約15、約20、約25、約30、約35、約40、約45、約50、約55、約60、約65、約70、約75、約80、約85、約90、約95、約100、約110、約120、約130、約140、約150或約100至約200倍。

在一些實施例中，三次皮下注射係在每週選自由以下組成之群的三天進行：第1天、第3天及第5天；第1天、第3天及第6天；第1天、第4天及第6天；第2天、第4天及第6天；第2天、第4天及第7天；第2天、第5天及第7天；及第3天、第5天及第7天。

在一些實施例中，格拉替雷醋酸鹽以1ml醫藥組合物形式存在於人類個體自我投藥之預填充注射器中。

在一些實施例中，醫藥組合物進一步包含甘露糖醇且具有5.5至7.0範圍內的pH。

在一些實施例中，40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽係在預填充注射器中，該預填充注射器含有40mg格拉替雷醋酸鹽及40mg甘露糖醇。

在一些實施例中，預填充注射器含有40mg/ml格拉替雷醋酸鹽及40mg/ml甘露糖醇之1ml藥物水溶液。

在一些實施例中，該藥物水溶液a)具有2.0至3.5cPa範圍內的黏度；或b)具有270至330mosmol/Kg範圍內的重量莫耳滲透濃度。

在一些實施例中，該藥物水溶液a)具有2.2至3.0cPa範圍內的黏度；或b)具有275至325mosmol/Kg範圍內的重量莫耳滲透濃度。

在一些實施例中，40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽為包含40mg/ml格拉替雷醋酸鹽及40mg/ml甘露糖醇之藥物水溶液，其中該藥物水溶液a)具有2.0至3.5cPa範圍內的黏度；或b)具有275至325mosmol/Kg範圍內的重量莫耳滲透濃度。

在一些實施例中，該藥物水溶液具有2.0至3.5cPa範圍內的黏度。

在一些實施例中，該藥物水溶液具有2.61至2.92cPa範圍內的黏度。

在一些實施例中，該藥物水溶液具有275至325mosmol/Kg範圍內的重量莫耳滲透濃度。

在一些實施例中，該藥物水溶液具有300至303mosmol/Kg範圍內的重量莫耳滲透濃度。

在一些實施例中，人類個體罹患復發緩解型多發性硬化症(RRMS)。

在一些實施例中，人類個體罹患不同於RRMS之多發性硬化症。

在一些實施例中，人類個體罹患進行性復發性多發性硬化症、繼發性進行性多發性硬化症或原發性進行性多發性硬化症。

在一些實施例中，人類個體先前已接受20mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽的投與。

在一些實施例中，人類個體為未曾處理過之個體或先前已投與不同於格拉替雷醋酸鹽之多發性硬化症藥物。

在一些實施例中，不同於格拉替雷醋酸鹽之多發性硬化症藥物為干擾素β-1a、干擾素β-1b、米托蒽醌、那他珠單抗、芬戈莫德(fingolimod)、特立氟胺(teriflunomide)或反丁烯二酸二甲酯。

在一些實施例中，人類個體具有包含以下之基因型：在選自由以下組成之群的一或多種單一核苷酸多形現象(SNP)之位置的一或多個A對偶基因：kgp10152733、kgp10224254、kgp10305127、kgp10351364、kgp10372946、kgp10404633、kgp10564659、kgp10591989、kgp10594414、kgp10619195、kgp10620244、kgp10633631、kgp10974833、kgp11002881、kgp11285862、kgp11328629、kgp11407560、kgp11514107、kgp11627530、kgp11702474、kgp11711524、kgp11768533、kgp11804835、kgp12083934、kgp12182745、kgp12230354、 kgp1224440、kgp124162、kgp12557319、kgp1371881、kgp1699628、kgp1753445、kgp1779254、kgp1786079、kgp18379774、kgp18525257、kgp20163979、kgp2023214、kgp20478926、kgp21171930、kgp2262166、kgp22778566、kgp2465184、kgp24753470、kgp25191871、kgp25216186、kgp25952891、kgp26026546、kgp26533576、kgp27500525、kgp27571222、kgp28532436、kgp28586329、kgp28817122、kgp2958113、kgp29794723、kgp30282494、kgp304921、kgp3205849、kgp3218351、kgp3276689、kgp337461、kgp345301、kgp355027、kgp355723、kgp3593828、kgp3812034、kgp3951463、kgp4162414、kgp4223880、kgp4418535、kgp4543470、kgp4573213、kgp4634875、kgp4755147、kgp4842590、kgp485316、kgp5068397、kgp5334779、kgp5483926、kgp5564995、kgp5869992、kgp5908616、kgp6032617、kgp6038357、kgp6076976、kgp6091119、kgp6127371、kgp61811、kgp6214351、kgp6228750、kgp6236949、kgp6469620、kgp6505544、kgp6507761、kgp6666134、kgp6700691、kgp6772915、kgp6959492、kgp7077322、kgp7117398、kgp7178233、kgp7186699、kgp7506434、kgp759150、kgp7730397、kgp7802182、kgp7804623、kgp7924485、kgp8030775、kgp8036704、kgp8046214、kgp8106690、kgp8110667、kgp8178358、kgp8200264、kgp8372910、kgp841428、kgp8602316、kgp8615910、kgp8793915、kgp8796185、kgp8990121、kgp9018750、kgp9354462、kgp9368119、kgp9410843、kgp9450430、kgp9530088、kgp9627338、kgp9669946、kgp97310、kgp974569、kgp9806386、kgp9884626、rs10049206、rs10124492、rs10125298、rs10162089、rs10203396、rs10251797、rs10278591、rs10489312、rs10492882、rs10498793、rs10501082、rs10510774、rs10512340、rs10815160、 rs10816302、rs10841337、rs11029892、rs11029928、rs11192469、rs11559024、rs11648129、rs12013377、rs13394010、rs13415334、rs1478682、rs1544352、rs1545223、rs1604169、rs1621509、rs1644418、rs17029538、rs17400875、rs17449018、rs17577980、rs1858973、rs1894406、rs1894407、rs197523、rs2058742、rs2071469、rs2071472、rs2139612、rs2241883、rs2309760、rs241440、rs241442、rs241444、rs241445、rs241446、rs241449、rs241453、rs241456、rs2453478、rs2660214、rs2824070、rs2845371、rs2857103、rs2926455、rs343087、rs343092、rs3767955、rs3792135、rs3829539、rs3899755、rs4075692、rs4143493、rs423239、rs4254166、rs4356336、rs4584668、rs4780822、rs4782279、rs5024722、rs6032209、rs6110157、rs623011、rs6497396、rs6845927、rs6895094、rs6899068、rs7024953、rs7028906、rs7029123、rs7062312、rs7187976、rs7191155、rs720176、rs7228827、rs7496451、rs7563131、rs759458、rs7666442、rs7670525、rs7677801、rs7725112、rs7850、rs7862565、rs7948420、rs8035826、rs8053136、rs8055485、rs823829、rs9315047、rs9501224、rs9508832、rs950928、rs9597498、rs9670531、rs9671124、rs9817308、rs9834010、rs9876830或rs9931211；在選自由以下組成之群的一或多種SNP之位置的一或多個C對偶基因：kgp10910719、kgp11077373、kgp11453406、kgp12426624、kgp2045074、kgp22811918、kgp23298674、kgp2709692、kgp28687699、kgp3496814、kgp3669685、kgp3730395、kgp4056892、kgp4370912、kgp5053636、kgp5216209、kgp5292386、kgp6023196、kgp652534、kgp7059449、kgp7189498、kgp7521990、 kgp7792268、kgp8303520、kgp9320791、kgp9795732、rs10201643、rs11022778、rs11136970、rs11147439、rs11691553、rs1579771、rs16901784、rs2136408、rs2325911、rs241443、rs2857104、rs3803277、rs3885907、rs4738738、rs4894701、rs502530、rs6032205、rs6687976、rs6718758、rs6835202、rs714342、rs7524868、rs7844274、rs9393727或rs9671182；或在選自由以下組成之群的一或多種SNP之位置的一或多個G對偶基因：kgp10090631、kgp1009249、kgp10412303、kgp10523170、kgp1054273、kgp10558725、kgp10632945、kgp10679353、kgp10788130、kgp10826273、kgp10922969、kgp10948564、kgp10967046、kgp1098237、kgp11010680、kgp11141512、kgp11206453、kgp11210903、kgp1124492、kgp11281589、kgp11356379、kgp11467007、kgp11543962、kgp11580695、kgp11633966、kgp11686146、kgp11843177、kgp12008955、kgp12371757、kgp1285441、kgp13161760、kgp1355977、kgp15390522、kgp1683448、kgp1688752、kgp1912531、kgp19568724、kgp2092817、kgp2245775、kgp22793211、kgp22823022、kgp2282938、kgp2299675、kgp2356388、kgp23672937、kgp23737989、kgp2388352、kgp2391411、kgp24131116、kgp24415534、kgp2446153、kgp2451249、kgp24729706、kgp25543811、kgp25921291、kgp26271158、kgp2638591、kgp26528455、kgp2688306、kgp26995430、kgp270001、kgp2715873、kgp27640141、kgp2788291、kgp2923815、kgp29367521、kgp293787、kgp2959751、kgp297178、kgp3048169、kgp3182607、kgp3202939、kgp3267884、kgp3418770、kgp3450875、kgp3477351、kgp3598409、kgp3651767、kgp3854180、kgp3933330、 kgp3984567、kgp4011779、kgp4096263、kgp4127859、kgp4155998、kgp4346717、kgp4420791、kgp4479467、kgp4524468、kgp4559907、kgp4705854、kgp4734301、kgp4812831、kgp487328、kgp4898179、kgp5002011、kgp5014707、kgp5017029、kgp512180、kgp5144181、kgp5159037、kgp5388938、kgp5409955、kgp5440506、kgp5441587、kgp55646、kgp5579170、kgp5680955、kgp6190988、kgp6539666、kgp6567154、kgp6599438、kgp6603796、kgp6737096、kgp6768546、kgp6835138、kgp6996560、kgp7063887、kgp7092772、kgp7121374、kgp7181058、kgp7331172、kgp7416024、kgp7481870、kgp767200、kgp7714238、kgp7747883、kgp8107491、kgp8169636、kgp8174785、kgp8183049、kgp8192546、kgp8335515、kgp8437961、kgp8440036、kgp85534、kgp8599417、kgp8767692、kgp8777935、kgp8817856、kgp8869954、kgp9071686、kgp9078300、kgp9354820、kgp9421884、kgp9551947、kgp9601362、kgp9627406、kgp9699754、kgp971582、kgp9854133、rs1079303、rs10841322、rs10954782、rs11002051、rs11029907、rs11083404、rs11085044、rs11192461、rs1157449、rs12494712、rs12943140、rs13002663、rs13419758、rs1380706、rs1387768、rs1410779、rs1508102、rs1532365、rs16886004、rs16895510、rs16927077、rs16930057、rs17224858、rs17238927、rs17329014、rs17638791、rs1886214、rs1894408、rs196295、rs196341、rs196343、rs1979992、rs1979993、rs2043136、rs2071470、rs2074037、rs2175121、rs241435、rs241447、rs241451、rs241452、rs241454、rs2598360、rs2621321、rs2621323、rs2816838、rs2839117、rs2857101、rs2934491、rs3135388、rs3218328、rs3799383、rs3815822、rs3818675、rs419132、rs4360791、rs4449139、rs4669694、rs4709792、rs4769060、 rs4822644、rs484482、rs543122、rs6535882、rs6840089、rs7020402、rs7217872、rs7348267、rs7579987、rs7672014、rs7860748、rs7864679、rs7928078、rs8050872、rs858341、rs931570、rs9346979、rs9376361、rs9579566、rs9913349或rs9931167，或在kgp18432055、kgp279772、kgp3991733或kgp7242489之位置的一或多個T對偶基因。

如請求項1至30中任一項之方法，其中分析抗GA特異性抗體之含量包含酶聯免疫吸附分析(ELISA)或放射免疫分析。

如請求項31之方法，其中分析抗GA特異性抗體之含量包含ELISA。

在一些實施例中，抗GA特異性抗體之基線含量為i)相應未曾處理過之罹患多發性硬化症之人類個體中抗GA特異性抗體之含量；ii)相應未曾處理過之健康人類個體中抗GA特異性抗體之含量；iii)在人類個體已投與初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之前，人類個體中抗GA特異性抗體之含量；或iv)在投與初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽的同時，人類個體中抗GA特異性抗體之含量。

在一些實施例中，抗GA特異性抗體之基線含量為以下各者之RA%i)相應未曾處理過之罹患多發性硬化症之人類個體中抗GA特異性抗體之含量；ii)相應未曾處理過之健康人類個體中抗GA特異性抗體之含量；iii)在人類個體已投與初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之前，人類個體中抗GA特異性抗體之含量；或iv)在投與初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽的同時，人類個體中抗GA特異性抗體之含量。

在一些實施例中，ELISA為固相ELISA。

本發明提供一種在罹患多發性硬化症之人類個體中誘導抗格拉替雷醋酸鹽(GA)抗體之方法，其包含向該人類個體每週三次皮下注射投與40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽，持續至少12個月，使得該人類個體之血液或血清中抗GA抗體之含量i)在向該人類個體投與該投藥之初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後，持續長達6個月增加；ii)與在初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後的第一個月至第三個月之後的增加速率相比，在初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後的第一個月期間以更高速率增加；iii)在初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後，在3個月或6個月或在3個月與6個月之間達到峰值；及iv)在初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後至少12個月高於基線，其中40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽係在預填充注射器中，該預填充注射器含有40mg/ml格拉替雷醋酸鹽及40mg/ml甘露糖醇之1ml藥物水溶液，且其中該藥物水溶液a)具有2.0至3.5cPa範圍內的黏度；或b)具有270至330mosmol/Kg範圍內的重量莫耳滲透濃度。

本文所描述之各種要素之所有組合均在本發明之範疇內。

定義

如本文所用，「格拉替雷醋酸鹽」為合成多肽之醋酸鹽之複雜混合物，合成多肽含有四種天然存在之胺基酸：L-麩胺酸、L-丙胺酸、 L-酪胺酸及L-離胺酸。格拉替雷醋酸鹽之峰平均分子量在5,000與9,000道爾頓之間。格拉替雷醋酸鹽在化學上命名為L-麩胺酸與L-丙胺酸、L-離胺酸及L-酪胺酸之聚合物的醋酸鹽(鹽)。其結構式為：(Glu,Ala,Lys,Tyr)x.X CH3COOH(C₅H₉NO₄.C₃H₇NO₂.C₆H₁₄N₂O₂.C₉H₁₁NO₃)_x.xC₂H₄O₂ CAS-147245-92-9 (8)。

「RA%」或「RA(%)」係藉由以下方程式計算：

其中「AVG測試樣本ABS」意謂各測試樣本及/或對照物之平均吸光度(ABS)；其中「空白」為用GA塗佈之一或多個孔而無人類血清樣本；其中「AVG空白ABS」為空白之平均吸光度(ABS)；其中「SST」為系統適用性測試，其為用經純化之人類IgG塗佈的一或多個孔；其中「AVG SST ABS」為SST之平均吸光度(ABS)；且其中「SST空白」為僅用阻斷緩衝液塗佈之一或多個孔，既無hIgG亦無人類血清樣本。

格拉替雷醋酸鹽可在本文中縮寫為「GA」。

如本文所用，「抗GA抗體」及「抗GA特異性抗體」為特異性識別GA之免疫球蛋白(Ig)分子。

如本文所用，格拉替雷醋酸鹽之「投與」可為口服、經鼻、經肺、非經腸、靜脈內、關節內、經皮、皮內、皮下、局部、肌肉內、經直腸、鞘內、眼內、經頰或藉由管飼。

如本文所用，「良性多發性硬化症」為回溯性診斷，其特徵在於：1至2次惡化，完全恢復，在初始發作之後10至15年內無持續失能且無疾病進展。然而，良性多發性硬化症可能會發展成其他形式之多發性硬化症。

如本文所用，「復發緩解型多發性硬化症」(RRMS)之特徵在於患者經歷偶發性惡化或復發以及緩解期。對於患有RRMS之患者，病變及軸突損失之跡象可能在MRI上可見或不可見。

如本文所用，「繼發性進行性多發性硬化症」(SPMS)之特徵在於患者具有復發、在緩解期間的恢復程度衰減、緩解較不頻繁及神經缺損比RRMS患者更顯著。在患有SPMS之患者的MRI上可見擴大的心室，其為胼胝體、中線中心及脊髓萎縮之標記。

如本文所用，「原發性進行性多發性硬化症」(PPMS)之特徵在於神經缺損增加而無明顯發作或緩解之穩定進程。腦病變、擴散脊髓損傷及軸突損失之跡象在患有PPMS之患者的MRI上顯而易見。

如本文所用，「進行性復發性多發性硬化症」(PRMS)之特徵在於在沿神經缺損增加而無緩解之病程行進時具有急性惡化期。病變在罹患PRMS之患者的MRI上顯而易見。

臨床上分離症候群(CIS)為單次單症狀之與MS相容的發作，諸如視神經炎、腦幹症狀及部分脊髓炎。一般認為經歷第二次臨床發作之CIS患者患有臨床確診的多發性硬化症(CDMS)。超過80%之患有CIS及MRI病變的患者繼續發展MS，而大約20%具有自限性病程。(29、30)經歷與MS一致的單次臨床發作之患者可能在臨床確診的多發性硬化症顯現之前具有至少一個與多發性硬化症一致的病變。

多發性硬化症可呈現視神經炎、視力模糊、複視、非自主快速眼動、失明、平衡損失、震顫、共濟失調、頭暈、肢笨拙、協調缺乏、一或多個末端虛弱、肌肉張力改變、肌肉僵硬、痙攣、發麻、感覺異常、灼燒感、肌肉疼痛、面部疼痛、三叉神經痛、尖銳刺痛、灼燒發麻疼痛、說話減緩、字詞含糊、說話節奏改變、吞咽困難、疲勞、膀胱問題(包括緊急程度、頻率、不完全排空及失禁)、腸道問題(包括便秘及腸控制損失)、陽萎、性喚起減弱、對熱之感覺、靈敏度損失、短期記憶損失、注意力損失或判斷或推理損失。

術語復發性MS包括：1)患有RRMS之患者；2)患有SPMS且具有疊加復發之患者；及3)根據McDonald之標準，在後續MRI掃描上展示病變傳播之患有CIS之患者。

如本文所用，多發性硬化症之復發性形式包括：復發緩解型多發性硬化症(RRMS)，其特徵在於神經功能障礙之不可預測的急性發作(復發)，繼之以不同的恢復及臨床穩定期；繼發性進行性MS(SPMS)，其中患有RRMS之患者在具有或不具有疊加復發的情況下顯現持續惡化；及原發性進行性復發性多發性硬化症(PPRMS)或進行性復發性多發性硬化症(PRMS)，一種患者自開始即顯現進行性惡化之不常見形式，亦可隨後顯現復發。

臨床復發，在本文中亦可用作「復發」、「確認復發」或「臨床上定義的復發」，定義為一或多個新神經異常出現或一或多個先前觀測到的神經異常再現。

臨床狀態之此變化必須持續至少48小時且其後緊接著至少30天之相對穩定或改良的神經狀態。此標準不同於惡化之臨床定義「至少24小時症狀持續時間」，如部分「復發評估」中詳述。

僅當個體之症狀伴隨觀測到的客觀神經變化時才將事件視為復發，該等變化與以下各者一致：a)EDSS評分增加至少0.5，或七個FS中之兩者或兩者以上之評分上升一個等級；或， b)與先前評估相比，FS中之一者之評分中之兩個等級。

個體一定不能正在經歷任何急性代謝變化，諸如發熱或其他醫學異常。腸道/膀胱功能或認知功能之變化一定不是造成EDSS或FS評分變化的全部原因。

如本文所用，「多發性硬化症藥物」為意欲治療臨床上定義的MS、CIS、任何形式之神經退化性或脫髓鞘疾病或上述疾病中之任一者之症狀的藥物或藥劑。「多發性硬化症藥物」可包括(但不限於)：抗體、免疫抑制劑、抗炎劑、免疫調節劑、細胞激素、細胞毒性劑及類固醇，且可包括經批准之藥物、在臨床試驗或替代治療中之藥物，其意欲治療臨床上定義的MS、CIS或任何形式之神經退化性或脫髓鞘疾病。「多發性硬化症藥物」包括(但不限於)干擾素及其衍生物(包括BETASERON®、AVONEX®及REBIF®)、米托蒽醌及那他珠單抗。用於治療其他自體免疫疾病之經批准或在試驗中但已用於MS或CIS患者以治療MS或CIS之藥劑亦定義為多發性硬化症藥物。

如本文所用，「未曾處理過之人類」為尚未用任何多發性硬化症藥物治療之人類。

如本文所用，用於鑑別罹患多發性硬化症之人類個體是否為對格拉替雷醋酸鹽(GA)療法的可能反應者之「測試陣列」包括(但不限於)任何分析方法測試(諸如活體外測試)或生物分析(諸如離體測試)。鑑別罹患多發性硬化症之人類個體是否為對格拉替雷醋酸鹽(GA)療法的可能反應者之實例揭示於美國專利第8,759,302號、第8,709,433號及第8,815,511號及美國專利申請案第US 2014-0107208號中，以上所有者之揭示內容均以全文引用的方式併入本文中。

如本文所用，關於所陳述的數值之「約」涵蓋該陳述值之+10%至-10%範圍。藉助於實例，約100mg因此包括範圍90-110mg，且因此亦包括90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、 102、103、104、105、106、107、108、109及110mg。因此，在一個實施例中，約100mg包括100mg。

本文所揭示之任何範圍意謂該範圍內之所有百分之一、十分之一及整數單位量均作為本發明之一部分而特定揭示。因此，例如1mg至50mg意謂包括1.1、1.2……1.9；及2、3……49mg單位量作為本發明之實施例。

本文所揭示之各實施例預期適用於其他所揭示之實施例中之每一者。因此，本文所描述之各種要素之所有組合均在本發明之範疇內。

參考以下實驗細節將更好地理解本發明，但熟習此項技術者將容易瞭解，詳述之特定實驗僅為本發明之說明，本發明如在其後的申請專利範圍中得以更充分描述。

可基於基因型選擇患者亞群

如本文所用，SNP或「單一核苷酸多形現象」係指基因組中之特異性位點，在該位點處個體之間在DNA鹼基上存在差異。

可自其檢索關於與人類疾病相關聯的SNP或基因的資訊之資料庫之幾個非限制性實例包括：NCBI資源、The SNP Consortium LTD、NCBI dbSNP資料庫、International HapMap Project、1000 Genomes Project、Glovar Variation Browser、SNPStats、PharmGKB、GEN-SniP及SNPedia。

SNP在本文中係使用根據NCBI dbSNP資料庫之rs標識符編號來鑑別，該rs標識符編號在<URL：ncbi.nlm.nih.gov/projects/SNP/>下公開可用，或使用由Illumina產生之kgp標識符編號來鑑別。在kgp SNP處之基因型可藉由使用Illumina基因分型陣列來獲得。另外，SNP可藉由在經指示用於特異性SNP之染色體上的特異性位置來鑑別。

關於鑑別SNP之額外資訊可自位於<URL ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK3848/>之NCBI資料庫SNP FAQ檔案獲得，或可自在位於<URL：illumina.com/applications/genotyping/literature.ilmn>之Illumina網站上的可用文獻獲得。

在SNP之位置處的基因型(「在」SNP「處」之基因型)可由對應於在SNP處的核苷酸之標識的單一字母表示，其中A表示腺嘌呤，T表示胸腺嘧啶，C表示胞嘧啶且G表示鳥嘌呤。在單一SNP處的兩個對偶基因之標識可由A、T、C及G中之兩個字母的組合表示，其中兩個字母的組合之第一個字母表示一個對偶基因且第二個字母表示第二個對偶基因，且其中A表示腺嘌呤，T表示胸腺嘧啶，C表示胞嘧啶且G表示鳥嘌呤。因此，在SNP處之兩個對偶基因基因型可表示為例如AA、AT、AG、AC、TT、TG、TC、GG、GC或CC。應理解，AT、AG、AC、TG、TC及GC分別等效於TA、GA、CA、GT、CT、及CG。

SNP可在罹患多發性硬化症之個體中用作對GA之反應的預測指標。對於一或多個SNP或某一組SNP之存在，可經由獲得患者DNA樣本及評估患者樣本來偵測SNP之存在。可提取患者DNA樣本，且可經由一般技術者已知之任何手段在樣本中偵測SNP。已知技術之一些非限制性實例包括經由限制性片段長度多形現象(RFLP)分析、包括(但不限於)平面微陣列或珠粒陣列之陣列、定序、單股構形多形現象分析(SSCP)、錯配化學裂解法(CCM)、聚合酶鏈反應(PCR)及變性高效液相層析(DHPLC)之偵測。

基因分型陣列為全基因組基因分型陣列。全基因組基因分型陣列為含有數十萬至數百萬個遺傳序列之陣列(其亦可命名為「探針」)。

SNP可經由PCR擴增及包含SNP的DNA區域之定序來偵測。SNP可使用陣列偵測、藉由基因晶片例示，包括(但不限於)DNA陣列或微陣列、DNA晶片及全基因組基因分型陣列，以上所有者均可為例如平面陣列或珠粒陣列，或TaqMan open Array。用於偵測DNA序列中諸如SNP之遺傳多形現象、變化或突變(一般而言，遺傳變異)的陣列/微陣列可包含通常為玻璃的固體表面，在該固體表面上寄存大量遺傳序列(探針)，其與待研究之遺傳變異互補。使用標準機器人印表機向陣列施加探針可獲得高密度之個別探針特徵，例如通常可達成每平方公分600個特徵或600個特徵以上之探針密度。探針在陣列上之定位由印刷裝置(機器人、噴墨印表機、光微影遮罩等)精確控制，且探針以柵格之形式對準。探針在陣列上之組織促進對特異性探針靶向相互作用之後續鑑別。另外，常見但非必要的是將陣列特徵分成亦為柵格形的較小區段，其隨後稱為子陣列。子陣列通常包含32個個別探針特徵，但較少(例如，16個)或較多(例如，64個或64個以上)特徵可構成各子陣列。在一些陣列中，探針連接至珠粒而非固體載體。該等陣列稱為「珠粒陣列」或「珠粒晶片」。

SNP之偵測可藉由與特異性識別衍生自測試樣本之DNA的片段中之正常及突變對偶基因之序列雜交來達成。通常，該片段已例如藉由使用聚合酶鏈反應(PCR)擴增，且例如用螢光分子標記。可使用雷射偵測晶片上之結合標記片段，且因此對於正常對偶基因為同種接合子之個體可特異性地區別於異種接合子個體(在常染色體顯性條件的情況下則此等個體稱為攜帶者)或對於突變對偶基因為同種接合子之彼等個體。擴增反應及/或延伸反應係在微陣列或珠粒自身上進行。對於不同的基於雜交之方法，存在多種用於分析基因分型之雜交資料的方法：

●雜交程度提高：比較與正常及突變對偶基因互補之探針之雜交程度。

●雜交程度降低：對照樣本與測試樣本之間的序列差異可藉由降低與參考序列完全互補的寡核苷酸之雜交程度來鑑別。

在突變同種接合子個體中產生接近100%之損失，而在異型接合子中僅存在大約50%損失。在用於檢查一連串的兩條鏈長度之「n」核苷酸(「寡核苷酸」)之所有鹼基的微陣列中，在除核苷酸以外的所有序列中與前一寡核苷酸重疊之最低「2n」寡核苷酸為必要的。通常，寡核苷酸之尺寸為約25個核苷酸。然而應瞭解，寡核苷酸可為如一般技術者將理解之任何適當長度。用於重建構序列之數目增加的寡核苷酸降低衍生自雜交程度波動之誤差。

然而，精確的序列變化無法用此方法鑑別；此方法與定序組合用於鑑別突變。當擴增或延伸在微陣列或珠粒自身上進行時，藉助於實例呈現三種方法：在微定序策略中，將突變特異性引子固定在載片上，且在與螢光雙脫氧核苷酸之延伸反應之後，用掃描儀捕捉微陣列之影像。在引子延伸策略中，兩個寡核苷酸經設計以分別用於偵測野生型及突變序列。隨後用一個螢光標記核苷酸及剩餘未經標記之核苷酸進行延伸反應。在任一情況下，起始物質可為RNA樣本或藉由PCR擴增之DNA產物。在標籤陣列策略中，在具有特異性引子的溶液中進行延伸反應，該等特異性引子攜帶經確定之5¹序列或「標籤」。使用具有與此等序列或「標籤」互補的寡核苷酸之微陣列允許捕捉延伸之所得產物。

本文使用表1中所列之以下縮寫。

實驗細節 實例1

此報導呈現在此研究之生物分析實驗階段A、B及C中測試的262個經GA治療之患者的群組之人類血清樣本中的抗格拉替雷醋酸鹽(GA)IgG特異性抗體量測之結果。患者來源於參與如下標題之臨床研究的1404個患者：「在患有復發緩解型多發性硬化症(RRMS)之個體中進行多國多中心隨機平行組研究以評估一週投與三次之格拉替雷醋酸鹽(GA)注射40mg與雙盲設計中的安慰劑相比之療效、安全及耐受性」(8)

患者在安慰劑對照(PC)階段用40mg GA藉由一週三次(TIW)皮下注射治療12個月，且在開放標記延伸階段伴以相同治療(40mg GA，藉由一週三次皮下注射)。

●安慰劑對照(PC)階段：12個月皮下注射格拉替雷醋酸鹽40mg，一週三次投與或匹配安慰劑注射。

●開放標記(OL)延伸階段：完成PC階段之個體將有機會進入開放標記(OL)延伸階段，在開放標記延伸階段中所有個體將繼續用一週三次投與GA 40mg治療直至此劑量為市售用於治療復發緩解型多發性硬化症(RRMS)患者或直至此GA劑量的發展由贊助商停止。視患者何時招募至研究中而定，此階段對於各個體將具有可變持續時間。

在第0個月(基線)、第1個月、第3個月、第6個月、第9個月、第12個月(PC階段結束)、第18個月及第24個月收集經分析以偵測抗GA特異性IgG抗體之血清樣本。

對於抗GA特異性IgG Ab之量測，使用酶聯免疫吸附分析(ELISA)方法。

使用50個基線樣本之結果來計算研究篩選切點及驗證切點。此研究之所計算的篩選切點值為1.4%相對吸光度(RA)。驗證切點係由外加GA的基線樣本之OD值相對於相同未外加處理樣本之OD值計算。驗證切點為50.6%。

在兩種稀釋液(1/500及1/1,000)中分析各患者之所有樣本以偵測抗GA IgG Ab之存在。1/500稀釋液之篩選結果以RA%呈現。1809個非基線樣本中之1740個的經測定之RA%高於篩選切點，且此等非基線樣本在篩選步驟中視為陽性。

各患者之各篩選陽性樣本之樣本陽性係在進一步測試中藉由與驗證切點比較來確認。在驗證測試中，在具有及不具有GA經外加處理樣本(亦即樣本外加GA參考標準)下測試樣本，得到在1：500稀釋血清中125μg/ml最終GA濃度。在99.9%篩選陽性非基線樣本中證實樣本陽性。

在滴定測試中進一步分析經確認之陽性樣本。在該方法中所描述之500倍稀釋液上進行樣本之十倍連續稀釋(亦即以1/500樣本為起始物，變為1/500,000稀釋液)，且測定各陽性樣本之抗GA IgG Ab效價。

生物分析研究包括測試262個患者之所有時間點。篩選血清樣本之抗GA IgG Ab。在驗證測試中測試已發現為篩選陽性之所有樣本。亦自所有確認之陽性樣本測定抗GA Ab效價。

研究群體 納入標準：

個體必須符合所有納入標準以便符合研究條件：

1.個體必須具有如由修訂的McDonald標準[Ann Neurol 2005：58：840-846]所定義之經確認及記錄之MS診斷，具有復發緩解型疾病病程。

2.個體在篩選及基線訪問中必須能走動，EDSS評分為0-5.5。

3.個體在篩選(1個月)之前30天及在篩選與基線(0個月)訪問之間必須處於無復發、穩定神經條件且無皮質類固醇治療[靜脈內(IV)、肌肉內(IM)及/或經口(PO)]或ACTH(促腎上腺皮質激素)。

4.個體必須已經歷以下之一：●在篩選之前12個月內至少一次記錄復發，或●在篩選之前24個月內至少兩次記錄復發，或●在篩選之前12個月與24個月之間一次記錄復發，其中在篩選之前12個月內進行的MRI中有至少一次記錄T1-Gd增強病變。

5.個體年齡必須在18歲與55歲之間，包括18歲及55歲。

6.育齡婦女必須實踐可接受的節育方法[此研究中之可接受的節育方法包括：絕育手術、宮內節育器、口服避孕藥、避孕貼片、長效注射避孕藥、伴侶之輸精管結紮術或雙屏障法(含殺精子劑之避孕套或隔膜)]。

7.個體必須能夠在進入研究之前簽署書面知情同意書且註明日期。

8.個體必須願意且能夠遵守用於持續研究之協議要求。

排除標準：

以下條件中之任一者將排除個體進入研究：

1.具有MS之進行性形式的個體。

2.在篩選之前6個月內使用實驗或研究用藥物及/或參與藥物臨床研究。

3.在篩選訪問之前6個月內使用免疫抑制劑(包括米托蒽醌及芬戈莫德)或細胞毒性劑。

4.在篩選之前2年內使用那他珠單抗(Tysabri®)或任何其他單株抗體。

5.在篩選之前2年內使用克拉屈濱(cladribine)。

6.在篩選之前2個月內用免疫調節劑[包括IFNβ 1a及1b，及IV免疫球蛋白(IVIg)]先前治療。

7.先前使用GA或任何其他格拉替雷類似物(glatiramoid)。

8.在篩選訪問之前6個月內慢性(超過30個連續日)全身性(IV、PO或IM)皮質類固醇治療。

9.先前全身照射或全身淋巴照射。

10.先前幹細胞治療、自體骨髓移植或同種骨髓移植。

11.壞孕或母乳哺育。

12.如藉由病史、身體檢查、ECG、異常實驗室測試或胸部X射線所測定，患有將排除安全及完整研究參與之臨床上顯著或不穩定的醫學或手術病狀之個體。該等病狀可包括肝、腎或代謝疾病、全身性疾病、急性感染、當前惡性腫瘤或近期惡性腫瘤病史(5年)、主要精神病症、根據研究者之判斷可能為有害的藥物及/或酒精濫用及過敏之病史。

13.已知對釓的敏感性病史。

14.不能成功地進行MRI掃描。

15.已知對甘露糖醇的藥物過敏。

16.經歷血管內治療慢性腦脊髓靜脈功能不全(CCSVI)之個體。

研究樣本

在階段III平行組雙盲及開放標記延伸研究中產生測試樣本。

根據臨床協議及臨床研究用實驗室手冊在第0個月(基線)、第1個月、第3個月、第6個月、第9個月、第12個月(PC階段結束)、第18個月及第24個月收集用於在實驗階段A及B中偵測抗GA特異性抗體之血清樣本。

將血清樣本分成3個等分試樣，樣本體積為每個等分試樣0.6至0.8mL。來自各血液收集點之所有等分試樣用以下資訊標記：「抗GA血清」、研究編號、患者ID、樣本ID。在實驗階段A及B中，分析總共2133個血清樣本(來自經GA治療之研究組的270個患者)之抗GA IgG Ab(50個基線樣本用於切點及驗證切點確定)。

在生物測試部門轉移及儲存樣本期間未鑑別出可能影響樣本完整性之因素。

選擇大多數時間點樣本為可用之患者用於測試。分析之樣本如下來源於270個患者：

- 來自根據臨床協議在8個時間點收集之243個患者的1945個樣本，加來自患者601027在TERMOL/ETOL取樣點之額外樣本

- 來自每個患者7個時間點的27個患者之188個樣本，基線樣本為全血而非血清之患者537113除外，且不分析彼樣本。

來自262患者之總共在基線的261個樣本及在治療後不同時間點的1809個樣本具有可報導結果。

測定抗GA IgG抗體

目的為偵測自參與GA臨床研究的個體獲得之人類血清樣本中的抗GA特異性IgG抗體。

使用ELISA進行分析。用GA(Teva Pharmaceutical Industries,Ltd.)參考標準(RS)塗佈微量滴定盤。在洗滌過量未結合抗原及阻斷暴露之孔表面之後，將人類血清樣本(呈1：500及1：1000之連續稀釋液)添加至GA RS預塗佈孔中。隨後使用二級抗體HRP結合之小鼠抗人類IgG偵測抗GA IgG抗體。在洗滌過量未結合抗體-酶試劑之後，將基質溶液添加至各孔中，且顏色與血清樣本中抗GA IgG抗體之量成比例顯現。

根據切點，經測試之人類血清樣本視為處於或高於抗GA IgG抗體之存在的正常範圍。各研究之切點係由自彼研究之未經治療個體(治療前投與或安慰劑個體)或來自儘可能類似於研究群體的群體之未經治療個體獲得的未經處理之人類血清(NHS)樣本測定。

試劑概述於表2中。

在進行分析之前，使緩衝液達到室溫。

各盤應包括以下樣本：

●系統適用性測試(SST)-用純化人類IgG塗佈之孔。

●SST空白-僅用阻斷緩衝液塗佈之孔(不含hIgG及人類血清樣本)。自SST陽性對照減去。

●陽性人類血清(PHS)-呈1/500稀釋液之陽性人類血清池。

●陰性人類血清(NHS)-呈1/500稀釋液之正常人類血清池。

●空白-用GA塗佈之孔(不含人類血清樣本)。自NHS及PHS對照及人類測試血清樣本減去。

●樣本1至樣本13-不同測試血清樣本。各樣本以兩種稀釋液(1/500及1/1000)施用

在可能時應在相同盤中測試(以一式三份)來自相同個體的不同時間點之所有測試人類血清樣本以允許比較。

對於塗佈，藉由在9.8ml包被緩衝液中稀釋200ul GA RS儲備溶液(1：50)來製備20ug/ml GA RS溶液。製備1.0ug/ml hIgG包被抗體稀釋液，且以100微升/孔塗佈盤。

對於洗滌，清空盤且倒出殘餘液體，用300ul洗滌緩衝液填充各孔且隨後使盤倒置變空，將殘餘液體倒至紙巾上。

對於阻斷，添加300微升/孔之阻斷緩衝液至各孔中，密封盤且在室溫下培育1小時，且洗滌盤三次。

對於樣本裝載，添加100ul稀釋之測試樣本及/或對照樣本及/或樣本緩衝液至各孔中。密封盤且在室溫下培育2小時，清空盤，倒出殘餘液體且洗滌三次。

對於偵測抗體，藉由將2.5ul生物素標記抗hIgG抗體稀釋成10ml阻斷緩衝液來製備生物素標記抗hIgG偵測抗體之1：4000稀釋液。製備每盤10ml生物素標記抗人類IgG偵測抗體溶液，且添加100ul之所製備偵測抗體至各孔中。密封盤且在室溫下培育1小時。隨後清空盤，倒出殘餘液體且洗滌五次。

對於抗生蛋白鏈菌素結合之辣根過氧化酶(HRP)，製備抗生蛋白鏈菌素結合之HRP於阻斷緩衝液中之操作稀釋液。隨後添加100微升/孔之所製備的抗生蛋白鏈菌素結合之HRP溶液，隨後震盪盤幾秒。隨後在室溫下在暗處培育盤1小時，隨後洗滌五次。

對於酶促反應，使用TMB(3,3,5,5-四甲基聯苯胺過氧化酶)。在使用前即刻將相同體積之TMB過氧化酶基質(部分1)及過氧化酶基質溶液B在清潔玻璃容器中混合。將100ul TMB溶液分配至各孔中，且在暗處在37℃下培育盤15-30分鐘。用每孔100ul停止溶液(1N硫酸)停止反應，且震盪盤幾秒。讀取各孔在450nm下的吸光度(ABS)。

對於ELISA測試中之一式三份分析及離群排斥反應，使用SOP進行一式三份及離群排斥反應之評估。對於疑似具有離群值之各一式三份，記錄所有離群排斥反應計算及結論。

對於空白減去，自SST之平均(AVG)ABS值減去SST空白之所計算的平均吸光度(ABS)。自包括PHS及NHS對照樣本的各測試樣本之AVG ABS值減去空白之所計算的AVG ABS。低於0.000之所有資料點均設定為等於0.000。

為克服板間變化，藉由用SST之吸光度除以各測試樣本(包括對照物)之吸光度(ABS)使結果標準化。此值為相對吸光度(RA)比率且乘以100(以百分比表示)。此等值為測試之所報導的反應值。RA值係根據以下方程式計算：

AVG測試樣本意謂各測試樣本及/或對照物(PHS及NHS)之AVG ABS。

使用自未經治療個體獲得的正常人類血清樣本之RA值來計算測試之切點值。切點值用於區分陰性與陽性人類血清樣本。在研究之所計算切點值低於研究之偵測極限(2×空白)的RA之情況下，如下計算切點：

盤驗收標準為以下：

●空白對照之AVG ABS應不大於(NMT)SST對照之AVG ABS的20%。

●SST之AVG ABS在450nm下應不小於0.8。

●陰性對照(NHS)之RA應小於或等於所計算切點值之RA值。

●陽性對照(PHS)之RA應大於所計算切點值之RA值。

●在測試結果之一不符合以上盤驗收標準之情況下，測試無效且應重複。

對於抗GA IgG抗體之存在，測試之人類血清樣本僅在其在1/500稀釋液中的RA值高於彼研究之所計算切點值時才視為陽性。將報導另一種稀釋液(1/1000)之結果以便監測，允許定義為陽性之測試血清之半定量比較。

血清對照

陰性人類血清池(NHS)係由用於切點測定之50個基線樣本製備。抗GA IgGAb陽性人類血清池(PHS)係由自早期臨床研究獲得的用GA治療之6個MS(多發性硬化症)患者之抗GA IgG Ab陽性血清樣本製備。

分析

各盤在一式三份孔中包括以下對照：

●系統適用性測試(SST)

●SST空白

●陽性人類血清(PHS)

●陰性人類血清(NHS)

●試劑空白

除以上對照之外，PHS外加GA得到125μg/ml之最終GA濃度(在1：500稀釋樣本中)，且在驗證切點測定及確認樣本陽性之測試期間亦在與測試樣本相同的稀釋液中測試PHS與溶劑。

如下進行樣本分析： 篩選切點值及驗證切點測定：

為區分篩選步驟中之陽性樣本與陰性樣本及確認樣本之陽性，測定篩選切點及驗證切點。根據生物分析研究計劃在1/500稀釋液中在未外加及外加125μg/ml GA(1：500稀釋樣本中125μg/ml GA濃度)下分析五十個基線樣本。兩個分析員在兩個不同日分析各樣本4次(各自2次操作)。

樣本篩選：

對於篩選分析，在一式三份孔中兩種稀釋液(1/500及1/1000)中測試來自經GA治療之研究組的270個患者之所有可用時間點樣本。每當可能時均在相同盤上測試各患者之所有樣本。

確認樣本陽性：

在不外加及外加GA(溶解於淨化水中)下測試各患者之各篩選陽性樣本。經外加處理樣本中之最終GA濃度在方法所需的1：500稀釋之後為125μg/ml。未外加及經外加處理樣本係根據該方法測試但僅呈1/500稀釋液。

抗GA IgG Ab效價測定：

在陽性經確認之所有樣本上進行測定抗GA IgG Ab效價之滴定測試。進行樣本之十倍連續稀釋(自1：500稀釋液至1/500,000稀釋液)，且根據該方法測試。

切點計算 篩選切點計算：

此研究之目的為測定自臨床研究中未經治療個體獲得的人類血清樣本中之抗GA IgG Ab之篩選切點。五十個患者參與此研究且測試在基線(治療前)的IgG抗體含量。

所計算之篩選RA%切點為1.4。

各樣本以兩個複本且由兩個分析員測試。使每個個體四個值平均化，產生用於以下計算之資料集。

使用以下方程式將ELISA OD 1/500稀釋液讀數(ABS)轉化為相對吸光度百分比(RA%)：

初始RA%分佈隨一些觀測到的離群值向右偏斜。顯然，此分佈不遵循常態分佈模型。此分佈之形狀建議使用對數換算。在採用對數換算之後，僅可見一個離群值，且未拒絕假定常態分佈之虛無假設(Pv=0.165)。假定常態分佈，對數標度上的95%分位數為0.370。使用此值之反向換算，產生1.447之切點。總之，抗GA IgG抗體之所計算的RA%切點為1.4%。

驗證切點計算：

此研究之目的為測定自臨床研究中未經治療個體獲得的人類血清樣本中之抗GA IgG Ab之驗證切點。五十位患者參與此研究且測試在基線(治療前)的IgG抗體含量。

使用In(未外加處理樣本平均OD/經外加處理樣本平均OD)之非參數99%百分位估計驗證切點(CCP)及抑制%。所得CCP為2.024且所得抑制%切點為50.589。

驗證分析意欲藉由比較沒有外加GA之篩選樣本與外加GA之相應樣本來測試抗體結合之特異性。計算驗證切點因子時，將偽陽性率設定在1%。所報告之數值(RV)為未外加處理樣本平均ODA及經外加處理樣本平均OD。RV係來自50位未曾經過處理之原始個體，各自由2位分析員歷經2天量測4次。

計算未外加處理樣本平均OD與經外加處理樣本平均OD之間的比率之自然對數(亦即，In(未外加處理樣本平均OD/經外加處理樣本平均OD))，且用於計算CCP及抑制%切點。

抑制%切點係基於下式：抑制%=100×(1-(1/CCP))

取每位個體四個值之平均值，產生用於CCP之資料集。由於In(未外加處理樣本平均OD/經外加處理樣本平均OD)之分佈並非常態分佈(夏皮羅-威爾克(Shapiro-Wilk)pv<0.0001)且偏斜度大於1，使用exp(In(未外加處理樣本平均OD/經外加處理樣本平均OD)數據集之非參數1-α百分位)計算切點。

以In(未外加處理樣本平均OD/經外加處理樣本平均OD)計之分佈與一些觀測到的離群值右偏斜。顯然，此分佈不遵循常態分佈(夏皮羅-威爾克=0.675752，pv<0.0001)，因此切點計算為非參數99%分位數。在99%分位數下的CCP(未外加/外加)為2.024，且抑制%切點為50.589。

確認樣本之陽性

認為在所計算之RA%抑制高於所計算之驗證切點(50.6%)時確認抗GA IgG抗體之樣本陽性。

RA%抑制係根據以下方程式計算：抑制%=100×(1-(外加之RA)/(未外加之RA))

發現99.9%之經測試的篩選陽性非基線樣本之抑制%值比驗證切點(50.6%)更高。

測定抗GA IgG Ab效價

效價係使用以下方程式計算：樣本效價=測試陽性之最後一次稀釋之-log稀釋因子

(RA%高於切點)

測定所有確認陽性樣本之抗GA IgG Ab效價。

測定年復發率

年復發率定義為每年患者經歷之確認復發的總數。其計算為確認復發總數除以治療組內總曝光(以年計)。

將在第-1個月(篩選)、第0個月(基線)、第3個月、第6個月、第9個月、第12個月(PC階段結束)進行完整神經評估。在OL延伸階段中，將每6個月進行神經檢查。另外，將在OL階段之終止訪問時進行神經檢查。

亦將在復發之隨訪中進行完整神經評估。

關於神經變化是否視為確認復發之決策將由治療神經學家/醫師(或如可適用的研究神經學家/醫師)基於轉換之EDSS或FS評分進行，如由檢查神經學家/醫師(或如可適用的研究神經學家/醫師)評估。

監測復發病程之隨訪將在治療神經學家/醫師(或如可適用的研究神經學家/醫師)判斷及在初始復發之後一個月內正在進行/不穩定復發之情況下進行，下一次預定訪問時的評估除外，但神經評估將由檢查神經學家/醫師(或如可適用的研究神經學家/醫師)進行。

黏度量測

除Copaxone®水溶液40mg/mL在填充至注射器中之前在低溫而非控制室溫下過濾以外，Copaxone® 40mg/mL之製造方法係基於用於製造市售Copaxone® 20mg/mL之相同方法。

Copaxone® 40mg/mL批次之平均黏度(cPa)係使用Rheocalc V2.5 模型LV，主軸CP40，速度80rpm，剪切速率6001/sec，溫度25℃±0.1量測。

重量莫耳滲透濃度量測

Copaxone® 40mg/mL批次之平均重量莫耳滲透濃度(mosmol/Kg)係一式三份地量測。

結果

預定及分析之患者編號的數目為270，但報導262之結果。分析係在總共690個盤上進行。此等盤中之三十七個由於以下原因而失效：

●NHS池樣本之相對吸光度(RA%)值高於31個篩選盤、2個驗證盤及1個滴定盤上之切點

●系統適用性測試(SST)樣本之吸光度(ABS)值高於3個驗證盤上的盤式讀取器之量測範圍

重新測試失效盤之樣本。在切點測定、篩選、驗證及滴定測試之有效的653個盤中，所有盤對照結果符合該方法之驗收標準。

在653個盤操作中獲得的空白對照，亦即試劑空白及SST空白樣本之平均ABS值分別為0.054及0.045。如表3中所展示，在所有盤操作中，發現兩個空白對照之背景%不大於(NMT)該方法中所指定的背景%(NMT 20%)。

陽性對照樣本(PHS及SST)之平均ABS分別為1.406及1.840。如表3中所展示，在所有653個盤中，SST之ABS值不小於0.8，如在該方法之SST驗收標準中所指定。

在所有653個報導盤操作中，NHS池樣本之RA%值小於或等於所計算之切點(1.4%)，且PHS池樣本之RA%結果高於所計算之切點。

報導來自262個患者的總計2070個血清樣本之抗GA IgG Ab結果。其中261個為基線樣本，其中1809個為非基線樣本(第1個月、第3個月、第6個月、第9個月、第12個月、第18個月、第24個月)。

1/500稀釋樣本之RA%結果展示於表4中。基於1：500稀釋樣本之RA%值，發現1809個非基線樣本中之1740個(96.2%)高於切點值(RA%為1.4)。

圖3中呈現GA治療組中平均抗GA IgG反應(平均RA%值)之免疫反應曲線。總抗體含量在治療開始後約3個月內增加至少50至80RA%。抗體含量在治療開始後約3個月與約6個月之間達到峰值，且在初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後約12個月高於基線。與在第一個月至第三個月之後的增加速率相比，抗體含量在第一個月期間以更高速率增加。如圖3中所展示，抗體含量在峰值之後仍較低但在第24個月未達到基線含量。

表4中列出抑制%結果及驗證測試結論。表4中亦展示所測定之效價。

GA治療組在基線之平均抗GA IgG反應(篩選RA%)為0.456818182，標準差為0.683615214。

GA治療組在第1個月之平均抗GA IgG反應(篩選RA%)為34.7515625，標準差為35.27291909。

GA治療組在第3個月之平均抗GA IgG反應(篩選RA%)為67.7229572，標準差為38.6096852。

GA治療組在第6個月之平均抗GA IgG反應(篩選RA%)為39.69111969，標準差為32.3192211。

GA治療組在第9個月之平均抗GA IgG反應(篩選RA%)為30.60694981，標準差為29.94922134。

GA治療組在第12個月之平均抗GA IgG反應(篩選RA%)為28.94263566，標準差為29.45298377。

GA治療組在第18個月之平均抗GA IgG反應(篩選RA%)為24.8980695，標準差為26.5184687。

GA治療組在第24個月之平均抗GA IgG反應(篩選RA%)為23.35938697，標準差為26.93304872。

結論

在治療期間不同時間點自用40mg/ml GA一週皮下注射三次治療之患者獲得血清樣本。測試樣本之抗GA IgG抗體的存在。在篩選測試中，發現1809個非基線樣本中之1740個樣本為陽性，且在驗證測試中證實99.9%非基線樣本之陽性。

對於抗GA IgG Ab之存在，每一測試患者確認為陽性。測定所有確認樣本之總抗GA IgG Ab效價。

40mg/ml GA治療組中平均抗GA IgG反應(平均RA%值)之免疫反應曲線之特徵在於所測試血清中總抗GA IgG Ab含量在第一個治療月期間顯著且快速增加，隨後在3個月時間點記錄為相對較慢額外增加。總抗GA IgG含量截至治療6個月降低，但在第24個月未達到基線含量。參見圖3。

論述

每日皮下(sc)Copaxone® 20mg/mL為含有活性成分GA之批准藥品，其安全及療效由歷經二十年之臨床研究及歷經十年之上市後經驗支持。已進行關於每日sc Copaxone® 20mg/mL之臨床效果的許多研究，其中之一為在MS患者中抗體對GA之反應(28)。

對選自先導臨床試驗且用每日sc Copaxone® 20mg/ml治療之90個MS患者進行對照研究，且持續9個月追蹤Ab含量。總抗GA特異性抗體含量在約3個月與約6個月之間達到峰值，達到至少50倍基線值。參見圖1。抗GA特異性抗體含量在治療開始與1個月之間的增加速率大於在1個月與3個月之間的增加速率。通常自治療開始後6個月偵測到抗GA抗體含量降低。6個月後，抗體含量下降且仍較低，但其含量仍高於基線。

與在先導試驗中用每日sc Copaxone® 20mg/ml治療且持續9個月追蹤Ab含量之90個MS患者的結果一致，在亦用每日Copaxone^® 20mg/mL治療2年之217個患者之另一對照臨床試驗中，抗GA特異性抗體含量在治療開始後約3個月與約6個月之間達到峰值，達到至少8倍基線值。參見圖2。然而，截至治療6個月，觀測到抗GA抗體含量降低。6個月後，抗體含量下降且仍較低，但其含量仍稍高於基線。抗體僅為IgG亞型而非IgE或IgM，且在所有檢查時間點，IgG1含量比IgG2含量高2至3倍(28)。

此等結果一起顯示MS患者對每日sc投與Copaxone 20mg/mL產生免疫反應，該免疫反應為總體免疫調節活性之一部分，其對於Copaxone 20mg/mL之臨床療效可能重要。

儘管有臨床療效，Copaxone^® 20mg/mL療法之顯著缺點為要求每日注射，其可能不方便。此外，在所有臨床試驗中，注射位點反應視為最常出現之不良反應且大多數接受Copaxone^® 20mg/mL之患者均會提報。在對照研究中，在接受Copaxone^® 20mg/mL治療之後提報此等反應至少一次的患者之比例(70%)高於注射安慰劑者(37%)。最常提報之注射位點反應(接受Copaxone^® 20mg/Ml之患者中提報頻率高於安慰劑治療之患者之反應)為紅斑、疼痛、腫塊、瘙癢、水腫、炎症及過敏。

然而，解決當前Copaxone^® 20mg/mL療法存在的缺點之可能方法具有若干障礙及侷限性。首先，皮下藥物遞送受到可接受之注射體積限制。通常，容許不超過1至2ml溶液(33)。其次，在注射位點存在藥物降解的可能性，導致生物可用性降低。第三，基於藥物之生理化學特性，有效化合物可能變得局部截留在間質性空間中，可導致進一步局部刺激、藥物沈澱及與濃度相關之副作用(34)。最後，由於藥物之複雜藥物動力學表現，與任何投與頻率變化相關之療效及安全為不可預測的且需要經驗測試。舉例而言，雖然對照臨床試驗已展現IFNβ-1b在治療MS中之療效，但患者順應性、療效及耐受性仍受所採用投藥方案影響。僅提高IFNβ-1b之劑量不足以提高療效，亦必須增加投與頻率(35)。

用Copaxone® 40mg/ml一週三次治療一年之MS患者之抗GA特異性抗體資料(描述於實例1中)出人意料地與上文所論述之針對每日20mg/ml GA的兩個臨床研究一致。活性成分GA之新研發調配物，亦即Copaxone® 40mg/ml一週三次不僅例如藉由減少注射頻率及可能的注射相關不良事件及注射位點反應來解決Copaxone^® 20mg/mL之缺點(38)，而且不綜合考慮在投與Copaxone^® 20mg/mL之後觀測到的在圖1及圖2中所呈現之抗體反應。

參考文獻：

1. Noseworthy JH, Lucchinetti C, Rodriguez M, Weinshenker BG. Multiple sclerosis. N Engl J Med 2000; 343:938-52.

2. Guideline on clinical investigation of medicinal products for the treatment of multiple sclerosis EMEA, London 16 September 2006.

3. Bjartmar C, Fox RJ. Pathological mechanisms and disease progression of multiple sclerosis: therapeutic implications. Drugs of Today 2002; 38:17-29.

4. Fleming JO. Diagnosis and management of multiple sclerosis. 1st ed. New York: Professional communications, Inc., 2002.

5. Anderson DW, Ellenberg JH, Leventhal CM et al. Revised estimate of the prevalence of multiple sclerosis in the United States. Ann Neurol 1992; 31:333-36.

6. Compston A, Lassmann H, McDonald I. The story of multiple sclerosis. In: Compston A, Confavreux C, Lassman H, Mcdonald I, Miller D, Noseworthy JH, Smith K, Wekerle H, editors. McAlpine's Multiple Sclerosis. London: Churchill Livingstone; 2006. p. 3-68.

7. Revel M., Pharmacol. Ther., 100(1):49-62 (2003).

8. Copaxone, Food and Drug Administration Approved Labeling (Reference ID: 3443331) [online], TEVA Pharmaceutical Industries Ltd., 2014 [retrieved on December 24, 2014], Retrieved from the Internet: <URL: www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/label/2014/020622s089lbl.pdf>.

9. Filippi M, et al. (2001) Glatiramer acetate reduces the proportion of new MS lesions evolving into "black holes". Neurology 57:731-733.

10. Kipnis J, Schwartz M (2002) Dual action of glatiramer acetate (Cop-1) in the treatment of CNS autoimmune and neurodegenerative disorders. TRENDS in Molecular Medicine 8:319-323.

11. Teitelbaum D, Aharoni R, Arnon R, Sela M (1988) Specific inhibition of the T-cell response to myelin basic protein by the synthetic copolymer Cop 1. Proc Natl Acad Sci U S A 85:9724-9728.

12. Putheti P, Soderstrom M, Link H, Huang YM (2003) Effect of glatiramer acetate (Copaxone^®) on CD4+CD25high T regulatory cells and their IL-10 production in multiple sclerosis. J Neuroimmunol 144:125-131.

13. Stadelmann C, et al. (2002) BDNF and gp145trkB in multiple sclerosis brain lesions: neuroprotective interactions between immune and neuronal cells？ Brain 125:75-85.

14. Ford C, et al. (2010) Continuous long-term immunomodulatory therapy in relapsing multiple sclerosis: results from the 15-year analysis of the US prospective open-label study of glatiramer acetate. Mult Scler 16:342-350.

15. Aharoni R, Teitelbaum D, Arnon R, Sela M (1999) Copolymer 1 acts against the immunodominant epitope 82-100 of myelin basic protein by T cell receptor antagonism in addition to major histocompatibility complex blocking. Proc Natl Acad Sci U S A 96:634-639.

16. Arnon R, Aharoni R (2004) Mechanism of action of glatiramer acetate in multiple sclerosis and its potential for the development of new applications. Proc Natl Acad Sci U S A 101 Suppl 2:14593-14598.

17. Teitelbaum D, Aharoni R, Sela M, Arnon R (1991) Cross-reactions and specificities of monoclonal antibodies against myelin basic protein and against the synthetic copolymer 1. Proc Natl Acad Sci U S A 88:9528-9532.

18. Webb C, Teitelbaum D, Arnon R, Sela M (1973) In vivo and in vitro immunological cross-reactions between basic encephalitogen and synthetic basic polypeptides capable of suppressing experimental allergic encephalomyelitis. Eur J Immunol 3:279-286.

19. Duda PW, et al. (2000) Human and murine CD4 T cell reactivity to a complex antigen: recognition of the synthetic random polypeptide glatiramer acetate. J Immunol 165:7300-7307.

20. Duda PW, et al. (2000) Glatiramer acetate (Copaxone) induces degenerate, Th2-polarized immune responses in patients with multiple sclerosis. J Clin Invest 105:967-976.

21. Brenner T, et al. (2001) Humoral and cellular immune responses to Copolymer 1 in multiple sclerosis patients treated with Copaxone. J Neuroimmunol 115:152-160.

22. Aharoni R, Teitelbaum D, Sela M, Arnon R (1997) Copolymer 1 induces T cells of the T helper type 2 that crossreact with myelin basic protein and suppress experimental autoimmune encephalomyelitis. Proc Natl Acad Sci U S A 94:10821-10826.

23. Wiesemann E, et al. (2003) Correlation of serum IL-13 and IL-5 levels with clinical response to Glatiramer acetate in patients with multiple sclerosis. Clin Exp Immunol 133:454-460.

24. Aharoni R, Teitelbaum D, Sela M, Arnon R (1998) Bystander suppression of experimental autoimmune encephalomyelitis by T cell lines and clones of the Th2 type induced by copolymer 1. J Neuroimmunol 91:135-146.

25. Aharoni R, et al. (2003) Glatiramer acetate-specific T cells in the brain express T helper 2/3 cytokines and brain-derived neurotrophic factor in situ. Proc Natl Acad Sci U S A 100:14157-14162.

26. Miller A, et al. (1998) Treatment of multiple sclerosis with copolymer-1 (Copaxone): implicating mechanisms of Th1 to Th2/Th3 immune-deviation. J Neuroimmunol 92:113-121.

27. Neuhaus O, et al. (2000) Multiple Sclerosis: Comparison of copolymer-1-reactive T cell Lines from treated and untreated subjects reveals cytokine shift From T helper 1 to T helper 2 cells. Proceedings of the National Academy of Sciences 97:7452-7457.

28. Brenner T, et al. (2001) Humoral and cellular immune responses to Copolymer 1 in multiple sclerosis patients treated with Copaxone. J Neuroimmunol 115:152-160.

29. Venken K, et al. (2008) Natural naive CD4+CD25+CD127low regulatory T cell (Treg) development and function are disturbed in multiple sclerosis patients: recovery of memory Treg homeostasis during disease progression. J Immunol 180:6411-6420.

30. Haas J, et al. (2009) Glatiramer acetate improves regulatory T-cell function by expansion of naive CD4(+)CD25(+)FOXP3(+)CD31(+) T-cells in patients with multiple sclerosis. J Neuroimmunol 216:113-117.

31. Hong J, et al. (2005) Induction of CD4+CD25+ regulatory T cells by copolymer-I through activation of transcription factor Foxp3. Proc Natl Acad Sci U S A 102:6449-6454.

32. Weber MS, et al. (2007) Type II monocytes modulate T cell- mediated central nervous system autoimmune disease. Nat Med 13:935-943.

33. Kansara V, Mitra A, Wu Y, Subcutaneous Delivery. Drug Deliv Technol, June 2009; 9(6):38-42.

34. Kansara V, Mitra A, Wu Y, Subcutaneous Delivery. Drug Deliv Technol, June 2009; 9(6):38-42.

35. Luca Durelli, (2003) Dose and frequency of interferon treatment matter--INCOMIN and OPTIMS. J Neurol. 250 Suppl 4:IV9-IV14.

36. Glacier, GA-MS-303, An Open-label, Randomized, Multicenter Study to Assess the Safety and Tolerability of Glatiramer Acetate 40 mg/1 mL Three-times Weekly Versus 20 mg/1 mL Daily in Patients With Relapsing-remitting Multiple Sclerosis by Jerry S. Wolinsky, T. Erik Borresen, Dennis W. Dietrich, Beverly F. Gilder, Daniel Wynn, Yulia Sidi, Abi Vainstein-Haras, Volker Knappertz, and Scott Kolodny [online]. Projects In Knowledge, 1997 [retrieved on 2015-01-27]. Retrieved from the Internet: <URL: www.projectsinknowledge.com/Activity/pdfs/2181.07.pdf>.

Claims

一種在罹患多發性硬化症之人類個體中誘導抗格拉替雷醋酸鹽(anti-glatiramer acetate；GA)特異性抗體之方法，其包含向該人類個體每週三次皮下注射投與40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽，持續至少12個月，使得該人類個體之血液或血清中抗GA特異性抗體之含量i)在向該人類個體投與該投藥之初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後，持續長達約6個月增加；ii)與在該初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後的第一個月至第三個月之後的增加速率相比，在該初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後的第一個月期間以更高速率增加；iii)在該初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後，在約3個月或約6個月時或在約3個月與約6個月之間達到峰值；及iv)在該初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後至少約12個月高於基線。
如請求項1之方法，其中在該初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後，該人類個體之血液或血清中抗GA特異性抗體之含量持續約3個月至約6個月增加。
如請求項1或2之方法，其中向該人類個體每週三次皮下注射投與40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽，持續至少18個月，且在該初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後約18個月，該人類個體之血液或血清中抗GA特異性抗體之含量高於基線。
如請求項3之方法，其中向該人類個體每週三次皮下注射投與40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽，持續至少24個月，且在該初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後約24個月，該人類個體之血液或血清中抗GA特異性抗體之含量高於基線。
如請求項1至4中任一項之方法，其中該等抗GA特異性抗體不同於IgM或IgE抗體。
如請求項1至5中任一項之方法，其中該人類個體之血液或血清中抗GA特異性抗體之含量增加i)如藉由酶聯免疫吸附分析(ELISA)所量測，在該初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後約1、約3、約6、約9、約12、約18或約24個月內，達到至少約25、約30、約35、約40、約45、約50、約55、約60、約65、約67.5、約70、約75、約80、約25至約50、約29至約106、約29至約60、約31至約60、約35至約70、約39至約71、約50至約75、約75至約80或約50至約80RA%；ii)如藉由ELISA所量測，在該初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後約1、約3、約6、約9、約12、約18或約24個月內，RA%相比於基線增加了至少約5、約10、約15、約20、約25、約30、約35、約40、約45、約50、約55、約60、約65、約70、約75、約80、約85、約90、約95、約100、約110、約120、約130、約140、約150、約25.9至約975或約100至約200倍；或iii)相比於基線達到至少約5、約10、約15、約20、約25、約30、約35、約40、約45、約50、約55、約60、約65、約70、約75、約80、約85、約90、約95、約100、約110、約120、約130、約140、約150或約100至約200倍。
一種使罹患多發性硬化症之人類個體產生格拉替雷醋酸鹽反應曲線的方法，其包含以下步驟：a)由罹患多發性硬化症之人類個體在投與初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後每週三次皮下注射投與40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽，持續至少約12個月或至少約24個月，定期收集血液或血清樣本；b)分析該人類個體之血液或血清中抗格拉替雷醋酸鹽(GA)特異性抗體之含量i)是否在該初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後持續長達約6個月增加；ii)與在該初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後的第一個月至第三個月之後的增加速率相比，是否在該初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後的第一個月期間以更高速率增加；iii)是否在該初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後約3個月或約6個月時或在約3個月與約6個月之間達到峰值；及iv)是否在該初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後約12個月及約24個月高於基線，c)產生該人類個體之包含步驟b)中測定的抗GA特異性抗體含量之格拉替雷醋酸鹽反應曲線。
如請求項7之方法，其包含分析在該初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後，該人類個體之血液或血清中抗GA特異性抗體之含量是否持續約3個月至約6個月增加。
如請求項7或8之方法，其進一步包含分析該等抗GA特異性抗體是否不同於IgM或IgE抗體，且步驟c)中產生的該人類個體之該格拉替雷醋酸鹽反應曲線判別該等抗GA特異性抗體為不同於IgM或IgG抗體。
如請求項9之方法，其中該格拉替雷醋酸鹽反應曲線為書面格拉替雷醋酸鹽反應曲線報告。
如請求項7至10中任一項之方法，其中步驟b)包含分析該人類個體之血液或血清中抗GA特異性抗體之含量是否增加i)如藉由酶聯免疫吸附分析(ELISA)所量測，在該初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後約1、約3、約6、約9、約12、約18或約24個月內，達到至少約25、約30、約35、約40、約45、約50、約55、約60、約65、約67.5、約70、約75、約80、約25至約50、約29至約106、約29至約60、約31至約60、約35至約70、約39至約71、約50至約75、約75至約80或約50至約80RA%；ii)如藉由ELISA所量測，在該初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後約1、約3、約6、約9、約12、約18或約24個月內，RA%相比於基線增加了至少約5、約10、約15、約20、約25、約30、約35、約40、約45、約50、約55、約60、約65、約70、約75、約80、約85、約90、約95、約100、約110、約120、約130、約140、約150、約25.9至約975或約100至約200倍；或iii)相比於基線達到至少約5、約10、約15、約20、約25、約30、約35、約40、約45、約50、約55、約60、約65、約70、約75、約80、約85、約90、約95、約100、約110、約120、約130、約140、約150或約100至約200倍。
如請求項1至11中任一項之方法，其中該三次皮下注射係在每週選自由以下組成之群的三天進行：第1天、第3天及第5天；第1天、第3天及第6天；第1天、第4天及第6天；第2天、第4天及第6天；第2天、第4天及第7天；第2天、第5天及第7天；及第3天、第5天及第7天。
如請求項1至12中任一項之方法，其中該格拉替雷醋酸鹽以1ml醫藥組合物形式存在於用於該人類個體自我投藥之預填充注射器中。
如請求項1至13中任一項之方法，其中該醫藥組合物進一步包含甘露糖醇且具有5.5至7.0範圍內的pH。
如請求項1至14中任一項之方法，其中該40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽係在預填充注射器中，該預填充注射器含有40mg格拉替雷醋酸鹽及40mg甘露糖醇。
如請求項15之方法，其中該預填充注射器含有40mg/ml格拉替雷醋酸鹽及40mg/ml甘露糖醇之1ml藥物水溶液。
如請求項16之方法，其中該藥物水溶液a)具有2.0至3.5cPa範圍內的黏度；或b)具有270至330mosmol/Kg範圍內的重量莫耳滲透濃度。
如請求項17之方法，其中該藥物水溶液a)具有2.2至3.0cPa範圍內的黏度；或b)具有275至325mosmol/Kg範圍內的重量莫耳滲透濃度。
如請求項1至16中任一項之方法，其中該40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽為包含40mg/ml格拉替雷醋酸鹽及40mg/ml甘露糖醇之藥物水溶液，其中該藥物水溶液a)具有2.0至3.5cPa範圍內的黏度；或b)具有275至325mosmol/Kg範圍內的重量莫耳滲透濃度。
如請求項19之方法，其中該藥物水溶液具有2.0至3.5cPa範圍內的黏度。
如請求項19或20之方法，其中該藥物水溶液具有2.61至2.92cPa範圍內的黏度。
如請求項19至21中任一項之方法，其中該藥物水溶液具有275至325mosmol/Kg範圍內的重量莫耳滲透濃度。
如請求項22之方法，其中該藥物水溶液具有300至303mosmol/Kg範圍內的重量莫耳滲透濃度。
如請求項1至23中任一項之方法，其中該人類個體罹患復發緩解型多發性硬化症(RRMS)。
如請求項1至23中任一項之方法，其中該人類個體罹患不同於RRMS之多發性硬化症。
如請求項25之方法，其中該人類個體罹患進行性復發性多發性硬化症、繼發性進行性多發性硬化症或原發性進行性多發性硬化症。
如請求項1至26中任一項之方法，其中該人類個體先前已接受20mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽的投與。
如請求項1至27中任一項之方法，其中該人類個體為未曾處理過之個體或先前已投與不同於格拉替雷醋酸鹽之多發性硬化症藥物。
如請求項28之方法，其中該不同於格拉替雷醋酸鹽之多發性硬化症藥物為干擾素β-1a、干擾素β-1b、米托蒽醌(mitoxantrone)、那他珠單抗(natalizumab)、芬戈莫德(fingolimod)、特立氟胺(teriflunomide)或反丁烯二酸二甲酯。
如請求項1至29中任一項之方法，其中該人類個體具有包含以下之基因型：在選自由以下組成之群的一或多種單一核苷酸多形現象(SNP)之位置的一或多個A對偶基因：kgp10152733、kgp10224254、kgp10305127、kgp10351364、kgp10372946、kgp10404633、kgp10564659、kgp10591989、kgp10594414、kgp10619195、kgp10620244、kgp10633631、kgp10974833、kgp11002881、kgp11285862、kgp11328629、kgp11407560、kgp11514107、kgp11627530、kgp11702474、kgp11711524、kgp11768533、kgp11804835、kgp12083934、kgp12182745、kgp12230354、 kgp1224440、kgp124162、kgp12557319、kgp1371881、kgp1699628、kgp1753445、kgp1779254、kgp1786079、kgp18379774、kgp18525257、kgp20163979、kgp2023214、kgp20478926、kgp21171930、kgp2262166、kgp22778566、kgp2465184、kgp24753470、kgp25191871、kgp25216186、kgp25952891、kgp26026546、kgp26533576、kgp27500525、kgp27571222、kgp28532436、kgp28586329、kgp28817122、kgp2958113、kgp29794723、kgp30282494、kgp304921、kgp3205849、kgp3218351、kgp3276689、kgp337461、kgp345301、kgp355027、kgp355723、kgp3593828、kgp3812034、kgp3951463、kgp4162414、kgp4223880、kgp4418535、kgp4543470、kgp4573213、kgp4634875、kgp4755147、kgp4842590、kgp485316、kgp5068397、kgp5334779、kgp5483926、kgp5564995、kgp5869992、kgp5908616、kgp6032617、kgp6038357、kgp6076976、kgp6091119、kgp6127371、kgp61811、kgp6214351、kgp6228750、kgp6236949、kgp6469620、kgp6505544、kgp6507761、kgp6666134、kgp6700691、kgp6772915、kgp6959492、kgp7077322、kgp7117398、kgp7178233、kgp7186699、kgp7506434、kgp759150、kgp7730397、kgp7802182、kgp7804623、kgp7924485、kgp8030775、kgp8036704、kgp8046214、kgp8106690、kgp8110667、kgp8178358、kgp8200264、kgp8372910、kgp841428、kgp8602316、kgp8615910、kgp8793915、kgp8796185、kgp8990121、kgp9018750、kgp9354462、kgp9368119、kgp9410843、kgp9450430、kgp9530088、kgp9627338、 kgp9669946、kgp97310、kgp974569、kgp9806386、kgp9884626、rs10049206、rs10124492、rs10125298、rs10162089、rs10203396、rs10251797、rs10278591、rs10489312、rs10492882、rs10498793、rs10501082、rs10510774、rs10512340、rs10815160、rs10816302、rs10841337、rs11029892、rs11029928、rs11192469、rs11559024、rs11648129、rs12013377、rs13394010、rs13415334、rs1478682、rs1544352、rs1545223、rs1604169、rs1621509、rs1644418、rs17029538、rs17400875、rs17449018、rs17577980、rs1858973、rs1894406、rs1894407、rs197523、rs2058742、rs2071469、rs2071472、rs2139612、rs2241883、rs2309760、rs241440、rs241442、rs241444、rs241445、rs241446、rs241449、rs241453、rs241456、rs2453478、rs2660214、rs2824070、rs2845371、rs2857103、rs2926455、rs343087、rs343092、rs3767955、rs3792135、rs3829539、rs3899755、rs4075692、rs4143493、rs423239、rs4254166、rs4356336、rs4584668、rs4780822、rs4782279、rs5024722、rs6032209、rs6110157、rs623011、rs6497396、rs6845927、rs6895094、rs6899068、rs7024953、rs7028906、rs7029123、rs7062312、rs7187976、rs7191155、rs720176、rs7228827、rs7496451、rs7563131、rs759458、rs7666442、rs7670525、rs7677801、rs7725112、rs7850、rs7862565、rs7948420、rs8035826、rs8053136、rs8055485、rs823829、rs9315047、rs9501224、rs9508832、rs950928、rs9597498、rs9670531、rs9671124、rs9817308、rs9834010、rs9876830或rs9931211；在選自由以下組成之群的一或多種SNP之位置的一或多個C對偶基因：kgp10910719、kgp11077373、kgp11453406、kgp12426624、kgp2045074、kgp22811918、kgp23298674、kgp2709692、kgp28687699、kgp3496814、kgp3669685、kgp3730395、kgp4056892、kgp4370912、kgp5053636、kgp5216209、kgp5292386、kgp6023196、kgp652534、kgp7059449、kgp7189498、kgp7521990、kgp7792268、kgp8303520、kgp9320791、kgp9795732、rs10201643、rs11022778、rs11136970、rs11147439、rs11691553、rs1579771、rs16901784、rs2136408、rs2325911、rs241443、rs2857104、rs3803277、rs3885907、rs4738738、rs4894701、rs502530、rs6032205、rs6687976、rs6718758、rs6835202、rs714342、rs7524868、rs7844274、rs9393727或rs9671182；或在選自由以下組成之群的一或多種SNP之位置的一或多個G對偶基因：kgp10090631、kgp1009249、kgp10412303、kgp10523170、kgp1054273、kgp10558725、kgp10632945、kgp10679353、kgp10788130、kgp10826273、kgp10922969、kgp10948564、kgp10967046、kgp1098237、kgp11010680、kgp11141512、kgp11206453、kgp11210903、kgp1124492、kgp11281589、kgp11356379、kgp11467007、kgp11543962、kgp11580695、kgp11633966、kgp11686146、kgp11843177、kgp12008955、kgp12371757、kgp1285441、kgp13161760、kgp1355977、kgp15390522、kgp1683448、kgp1688752、kgp1912531、kgp19568724、kgp2092817、kgp2245775、kgp22793211、kgp22823022、kgp2282938、kgp2299675、kgp2356388、kgp23672937、kgp23737989、kgp2388352、kgp2391411、kgp24131116、kgp24415534、kgp2446153、 kgp2451249、kgp24729706、kgp25543811、kgp25921291、kgp26271158、kgp2638591、kgp26528455、kgp2688306、kgp26995430、kgp270001、kgp2715873、kgp27640141、kgp2788291、kgp2923815、kgp29367521、kgp293787、kgp2959751、kgp297178、kgp3048169、kgp3182607、kgp3202939、kgp3267884、kgp3418770、kgp3450875、kgp3477351、kgp3598409、kgp3651767、kgp3854180、kgp3933330、kgp3984567、kgp4011779、kgp4096263、kgp4127859、kgp4155998、kgp4346717、kgp4420791、kgp4479467、kgp4524468、kgp4559907、kgp4705854、kgp4734301、kgp4812831、kgp487328、kgp4898179、kgp5002011、kgp5014707、kgp5017029、kgp512180、kgp5144181、kgp5159037、kgp5388938、kgp5409955、kgp5440506、kgp5441587、kgp55646、kgp5579170、kgp5680955、kgp6190988、kgp6539666、kgp6567154、kgp6599438、kgp6603796、kgp6737096、kgp6768546、kgp6835138、kgp6996560、kgp7063887、kgp7092772、kgp7121374、kgp7181058、kgp7331172、kgp7416024、kgp7481870、kgp767200、kgp7714238、kgp7747883、kgp8107491、kgp8169636、kgp8174785、kgp8183049、kgp8192546、kgp8335515、kgp8437961、kgp8440036、kgp85534、kgp8599417、kgp8767692、kgp8777935、kgp8817856、kgp8869954、kgp9071686、kgp9078300、kgp9354820、kgp9421884、kgp9551947、kgp9601362、kgp9627406、kgp9699754、kgp971582、kgp9854133、rs1079303、rs10841322、rs10954782、rs11002051、 rs11029907、rs11083404、rs11085044、rs11192461、rs1157449、rs12494712、rs12943140、rs13002663、rs13419758、rs1380706、rs1387768、rs1410779、rs1508102、rs1532365、rs16886004、rs16895510、rs16927077、rs16930057、rs17224858、rs17238927、rs17329014、rs17638791、rs1886214、rs1894408、rs196295、rs196341、rs196343、rs1979992、rs1979993、rs2043136、rs2071470、rs2074037、rs2175121、rs241435、rs241447、rs241451、rs241452、rs241454、rs2598360、rs2621321、rs2621323、rs2816838、rs2839117、rs2857101、rs2934491、rs3135388、rs3218328、rs3799383、rs3815822、rs3818675、rs419132、rs4360791、rs4449139、rs4669694、rs4709792、rs4769060、rs4822644、rs484482、rs543122、rs6535882、rs6840089、rs7020402、rs7217872、rs7348267、rs7579987、rs7672014、rs7860748、rs7864679、rs7928078、rs8050872、rs858341、rs931570、rs9346979、rs9376361、rs9579566、rs9913349或rs9931167，或在kgp18432055、kgp279772、kgp3991733或kgp7242489之位置的一或多個T對偶基因。
如請求項1至30中任一項之方法，其中分析抗GA特異性抗體之含量包含酶聯免疫吸附分析(ELISA)或放射免疫分析。
如請求項31之方法，其中分析抗GA特異性抗體之含量包含ELISA。
如請求項1至32中任一項之方法，其中抗GA特異性抗體之基線含量為i)相應未曾處理過之罹患多發性硬化症之人類個體中抗GA特異性抗體之含量； ii)相應未曾處理過之健康人類個體中抗GA特異性抗體之含量；iii)在該人類個體已投與該初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之前，該人類個體中抗GA特異性抗體之含量；或iv)在投與該初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽的同時，該人類個體中抗GA特異性抗體之含量。
如請求項1至32中任一項之方法，其中抗GA特異性抗體之基線含量為以下各者之RA%i)相應未曾處理過之罹患多發性硬化症之人類個體中抗GA特異性抗體之含量；ii)相應未曾處理過之健康人類個體中抗GA特異性抗體之含量；iii)在該人類個體已投與該初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之前，該人類個體中抗GA特異性抗體之含量；或iv)在投與該初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽的同時，該人類個體中抗GA特異性抗體之含量。
如請求項1至34中任一項之方法，其中該ELISA為固相ELISA。
一種在罹患多發性硬化症之人類個體中誘導抗格拉替雷醋酸鹽(GA)特異性抗體之方法，其包含向該人類個體每週三次皮下注射投與40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽，持續至少12個月，使得該人類個體之血液或血清中抗GA特異性抗體之含量i)在向該人類個體投與該投藥之初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後，持續長達6個月增加；ii)與在該初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後的第一個月至第三個月之後的增加速率相比，在該初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後的第一個月期間以更高速率增加； iii)在該初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後，在3個月或6個月時或在3個月與6個月之間達到峰值；及iv)在該初始40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽之後至少12個月高於基線，其中該40mg/ml劑量之格拉替雷醋酸鹽係在預填充注射器中，該預填充注射器含有40mg/ml格拉替雷醋酸鹽及40mg/ml甘露糖醇之1ml藥物水溶液，且其中該藥物水溶液a)具有2.0至3.5cPa範圍內的黏度；或b)具有270至330mosmol/Kg範圍內的重量莫耳滲透濃度。