TW201601753A

TW201601753A - 蛋白質生物標記及其用途

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Publication number: TW201601753A
Application number: TW103133966A
Authority: TW
Inventors: 馬修斯施耐德; 莎賓布隆; 哈拉利芮妮Ｊ門德爾; 丹尼爾Ｊ弗里曼; 羅伯特Ａ貝克曼; 金小平; 米坂仁雄; 中川和彥
Original assignee: 第一三共股份有限公司; Ｕ３製藥有限責任公司; 學校法人近畿大學
Priority date: 2013-09-30
Filing date: 2014-09-30
Publication date: 2016-01-16
Also published as: US20200115467A1; JP2016540993A; US11873344B2; US20240084037A1; EP3052129A2; US20170166654A1; WO2015048804A3; WO2015048804A2; US20150147326A1; WO2015048802A2

Abstract

本發明係針對識別及治療懷有腫瘤或其他疾病之人類主體的方法，其包含：評估人類主體的HRG基因表現之蛋白質位準，以及對HRG基因表現之蛋白質位準評估為高的該人類主體，投與包含抗HER3抗體之治療。本發明係亦針對識別懷有腫瘤或其他疾病之人類主體的方法，其包含：評估人類主體的HRG基因表現之蛋白質位準，以及HRG基因表現之蛋白質位準評估為低的該人類主體，拒給包含抗HER3抗體之治療。本發明係亦針對執行ELISA的方法，其包括以下循序的步驟：使一固體表面與數個溶液接觸，該數個溶液依序各包含捕獲抗體、阻斷劑、懷疑含有分析物的樣本、偵測抗體以及酵素結合物，其中該固體表面在各循序的步驟之後經歷清洗方法。

Description

蛋白質生物標記及其用途

發明領域

本發明領域為分子生物學、腫瘤學、臨床診斷學、臨床治療，且本文中亦說明執行酵素結合免疫吸附分析法(ELISA)的方法。

發明背景

多數的癌症藥物於一些病人體內為有效的，但是於其餘的病人體內不是。此起因於腫瘤之間的遺傳變異，以及甚至在同一個病人的腫瘤中間觀察到。多變的病人反應在標靶治療學方面是特別顯著的。因此，在沒有判定哪些病人能從該等藥物獲益的合適的測試下，無法實現標靶療法充分的潛力。根據國家衛生研究院(National Institutes of Health)(NIH)，術語「生物標記」係定義為「一種經客觀測量及估計的特徵，作為正常的生物或致病過程之指標或是對治療介入之藥理學的反應之指標」。(Biomarkers Definitions Working Group,2001,Clin.Pharmacol.Ther.69：89-95)

以發現生物標記為基礎來發展改良的診斷學具有促使新藥發展的潛力，其係藉由提前識別出最可能對藥物顯現臨床反應的該等病人。此會顯著降低臨床試驗的規模、期間，及成本。像是基因體學、蛋白質體學及分子影像學之技術現在能快速、敏感及可靠的偵測特定的基因突變、特別的基因之表現位準，以及其他的分子生物標記。儘管可利用各種分子特徵化腫瘤的技術，但是仍然癌症生物標記之臨床利用大部分尚未被察覺，因為已經發現的癌症生物標記是很少的。舉例而言，最近的一篇文章寫到：「對於促進發展生物標記以及其等改良癌症的診斷和治療之用途有迫切的需要」。(Cho，2007，Molecular Cancer 6：25)另一篇最近對於癌症生物標記的回顧文章包含下列評論：「挑戰是要發現癌症生物標記。縱然在使用分子標靶劑來標定(targeting)經分子界定的數種腫瘤類型-例如慢性骨髓球系白血病、胃腸基質瘤、肺癌以及多形性神經膠質母細胞瘤-的子集上已經有臨床上的成功，但是應用此種成功在更廣的場合的能力嚴重地受限於缺少有效的策略來估計病人體內之標靶劑。問題主要在於無法選擇具有經分子界定的病人供臨床試驗，來估計此等令人興奮的新藥。解決方案需要能可靠地識別最可能從特定的製劑獲益的該等病人之生物標記。(Sawyers，2008，Nature 452：548-552，於548)像是前述的評論闡明確認有必要找到以此等生物標記為基礎，臨床上有用的生物標記及診斷方法。

癌症生物標記有三種相異的類型：(1)預後性生物標記，(2)預測性生物標記，以及(3)藥物動力學生物標記。預後性生物標記係根據侵犯性，亦即生長速率及/或轉移，及治療折射性(refractiveness to treatment)，而用來分類癌症，譬如實性(solid)腫瘤。此有時稱為區別「好結果」腫瘤與「差結果」腫瘤。預測性生物標記係用來評估特定的病人會從特定的藥物獲益之機率。舉例而言，具有ERBB2(HER2)基因擴增的乳癌病人是可能從曲妥珠單抗(trastuzumab)(HERCEPTIN^®)之治療獲益的，反之沒有ERBB2基因擴增的病人不太可能從曲妥珠單抗(trastuzumab)之治療獲益。藥物動力學生物標記是病人服藥時，藥物對於其之分子標靶之作用的指示。於是，藥物動力學生物標記在新藥臨床發展早期期間，通常用來引導劑量位準及用藥頻率。關於癌症生物標記之討論，參見，舉例而言Sawyers，2008，Nature 452：548-552。

EGFR或HER2所驅動的腫瘤通常會對EGFR或HER2抑制劑之治療起反應，但是此等腫瘤總是會發展對此等抑制劑之抗性。至少一種對抗EGFR或抗HER2之後天抗性之機轉是HER3(亦已知為ERBB3)訊息發送之活化。參見，舉例而言Engelman等人，2006，Clin.Cancer Res.12：4372；Ritter等人，2007，Clin.Cancer Res.13：4909；Sergina等人，2007，Nature 445：437。HER3在藥物抗性的發展上扮演重要的角色，以及通過其與EGFR及HER2之異二聚體形成(heterodimerization)，而涉及腫瘤的起始和維持。結果，業已對發展HER3抑制劑發生興趣，尤其是抗HER3抗體，因HER3缺乏激酶活性。

如同其他類型的標靶療法，一些，但非全部的腫瘤會對抗HER3療法起反應。因此，對於以預測性生物標記為基礎的診斷方法是有需要的，其可以使用來識別具有可能(或不太可能)對HER3抑制劑，如抗HER3抗體起反應之腫瘤的病人。

發明概要

本發明係針對治療懷有局部晚期或轉移性非小細胞肺癌(NSCLC)腫瘤之人類主體的方法，其包含：對經診斷具有局部晚期或轉移性NSCLC、HRG基因表現之蛋白質位準評估為高的人類主體，投與包含抗HER3抗體之治療。

一些具體例包含評估經診斷具有局部晚期或轉移性NSCLC之人類主體的HRG基因表現之蛋白質位準，以及投與包含抗HER3抗體之治療至HRG基因表現之蛋白質位準評估為高的人類主體。

一些具體例包含下命令評估經診斷具有局部晚期或轉移性NSCLC之人類主體之HRG基因表現之蛋白質位準，以及對HRG基因表現之蛋白質位準評估為高的該人類主體，投與包含抗HER3抗體之治療。

於本發明特定的具體例中，設若從經診斷具有局部晚期或轉移性NSCLC的該主體取得的生物樣本，觀察到蛋白質濃度值高於預定閾(predetermined threshold)，則該HRG基因表現之蛋白質位準評估為高的。

於一些具體例中，該預定閾係以統計方式選出，以使非所欲的偽陽性和偽陰性的作用減到最小。於一較佳具體例中，該預定閾係選自於以下所構成的群組：大約0pg/mL、大約980pg/mL、大約1622pg/mL、大約2000pg/mL、大約3000pg/mL、大約4000pg/mL，以及大約5000pg/mL。

於一些具體例中，該主體懷有野生型EGFR。於較佳具體例中，該腫瘤亦已經進行至少一種先前的全身性療法。

一些具體例包含評估經診斷具有局部晚期或轉移性NSCLC之人類主體的HRG基因表現之蛋白質位準，其之HRG基因表現之蛋白質位準係使用ELISA或免疫組織化學技術來評估。

於一些具體例中，該生物樣本包含全血或血清樣本。

於一些具體例中，該抗HER3抗體係選自於以下所構成的群組：派崔單抗(patritumab)、杜李格單抗(duligotumab)(MEHD-7945A)、西羅巴珠單抗(seribantumab)(MM-121)、MM-111、LJM716、RG-7116、三專一性抗EGFR/ERBB3 zybody(tri-specific anti-EGFR/ERBB3 zybody)、huHER3-8，或是此等中任一者之衍生物或片段。

於一些具體例中，該治療包含抗HER3抗體組合以下列中的一者或多者：(i)HER抑制劑，(ii)化學療法，以及(ii)放射線。

舉例而言，於一些具體例中，該HER抑制劑係選自於以下所構成的群組：曲妥珠單抗(trastuzumab)、T-DM1、拉帕替尼(lapatinib)、帕妥珠單抗(pertuzumab)、西妥昔單抗(cetuximab)、帕尼單抗吉非替尼(panitumumab gefitinib)、阿法替尼(afatinib)、達克替尼(dacomitinib)、KD-019以及埃羅替尼(erlotinib)。

於一些具體例中，該化學療法係選自於以下所構成的群組：順鉑(cisplatin)、卡鉑(carboplatin)、吉西他濱(gemcitabine)、培美曲塞(pemetrexed)、伊立替康(irinotecan)、5-氟尿嘧啶(5-fluoruracil)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、多烯紫杉醇(docetaxel)，以及卡培他濱(capecitabine)。然而，也可以應用其他的化學療法。

本發明亦針對治療懷有局部晚期或轉移性非小細胞肺癌(NSCLC)腫瘤之人類主體的方法，其包含：評估經診斷具有局部晚期或轉移性NSCLC之人類主體的HRG基因表現之蛋白質位準，以及HRG基因表現之蛋白質位準評估為低的人類主體，拒給(withholding)包含抗HER3抗體之治療。

一些具體例包含下命令評估經診斷具有局部晚期或轉移性NSCLC之人類主體之HRG基因表現之蛋白質位準，以及HRG基因表現之蛋白質位準評估為低的該人類主體，拒給包含抗HER3抗體之治療。

於一些具體例中，設若從經診斷具有局部晚期或轉移性NSCLC的該主體取得的生物樣本，觀察到蛋白質濃度值位於(at)預定閾或者低於預定閾，則該HRG基因表現之蛋白質位準評估為低的。

於一些具體例中，該預定閾係以統計方式選出，以使非所欲的偽陽性和偽陰性的作用減到最小。於一些具體例中，該預定閾值係選自於以下所構成的群組：0pg/mL、大約980pg/mL、大約1622pg/mL、大約2000pg/mL、大約3000pg/mL、大約4000pg/mL，以及大約5000pg/mL。

於一些具體例中，該主體懷有野生型EGFR。於較佳具體例中，該腫瘤已經進行至少一種先前的全身性療法。

於一些具體例中，HRG基因表現之蛋白質位準係使用ELISA或免疫組織化學技術來評估。

於一些具體例中，該生物樣本包含全血或血清樣本。

於一些具體例中，拒給的該治療(the treatment withheld)包含抗HER3抗體組合以下列中的一者或多者：(i)HER抑制劑，(ii)化學療法，以及(ii)放射線。

一些具體例包含用HER抑制劑來治療HRG基因表現之蛋白質位準評估為低的人類主體，該HER抑制劑係選自於以下所構成的群組：曲妥珠單抗(trastuzumab)、T-DM1、拉帕替尼(lapatinib)、帕妥珠單抗(pertuzumab)、西妥昔單抗(cetuximab)、帕尼單抗吉非替尼(panitumumab gefitinib)、阿法替尼(afatinib)、達克替尼(dacomitinib)、KD-019以及埃羅替尼(erlotinib)。

一些具體例包含用化學療法來治療HRG基因表現之蛋白質位準評估為低的人類主體，該化學療法係選自於以下所構成的群組：順鉑(cisplatin)、卡鉑(carboplatin)、吉西他濱(gemcitabine)、培美曲塞(pemetrexed)、伊立替康(irinotecan)、5-氟尿嘧啶(5-fluoruracil)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、多烯紫杉醇(docetaxel)，以及卡培他濱(capecitabine)。然而，也可以應用其他的化學療法。

一些具體例包含用克唑替尼(crizotinib)來治療HRG基因表現之mRNA位準評估為低的人類主體。於一些具體例中，用克唑替尼(crizotinib)來治療的主體有ALK基因重排或融合。

本發明亦針對促進評估HRG基因表現之蛋白質位準的套組。

本發明亦針對識別經診斷具有局部晚期或轉移性非小細胞肺癌(NSCLC)之人類病人的方法，該病人可能從包含抗HER3抗體之治療獲益，該方法包含：從經診斷具有局部晚期或轉移性NSCLC的人類病人獲得一生物樣本，使用該樣本，判定該人類病人的HRG基因表現之蛋白質位準的值，以及選擇性地，記錄判定的該值。

一些具體例包含從經診斷具有局部晚期或轉移性NSCLC的人類病人接收一生物樣本，使用該樣本，判定該人類主體的HRG基因表現之蛋白質位準，以及選擇性地，記錄判定的該值。

一些具體例包含評估是否判定的該值係低於預定閾值、位於(at)預定閾值，或者高於預定閾值。於一些具體例中，該預定閾值係選自於以下所構成的群組：0pg/mL、大約980pg/mL、大約1622pg/mL、大約2000pg/mL、大約3000pg/mL、大約4000pg/mL，以及大約5000pg/mL。

一些具體例涉及，設若判定的該值高於該預定閾值，則該HRG基因表現之蛋白質位準被定特徵(characterizing)為高的。

一些具體例涉及，設若判定的該值位於(at)該預定閾值或者低於該預定閾值，則該HRG基因表現之蛋白質位準被定特徵為低的。

一些具體例包含向主治醫師或其他開業醫師報告判定的該值。

於一些具體例中，該樣本包含全血或血清樣本。

於一些具體例中，該主體不懷有表皮生長因子受體(EGFR)感應性突變(sensitizing mutation)。於較佳具體例中，該主體懷有野生型EGFR。於更佳的具體例中，該腫瘤已在至少一個先前的全身性療法上有所進展。

本發明亦針對以隨機化的臨床資料為基礎，來評估HRG基因表現為高的方法。

本發明亦針對接收(receiving)或接受(undergoing)局部晚期或轉移性非小細胞肺癌(NSCLC)腫瘤之治療或是由此戒絕(abstaining therefrom)治療的方法。於一些具體例中，該方法包含提供自體的組織樣本或同意拿取自體的組織樣本(taking of same)，以促進經診斷具有局部晚期或轉移性NSCLC之人類主體之HRG基因表現之蛋白質位準的評估；以及設若HRG基因表現之蛋白質位準評估為高的，則接收包含抗HER3抗體之治療，或是設若HRG基因表現之蛋白質位準評估為低的，則戒絕包含抗HER3抗體之治療。

本發明亦針對選定(electing)用於局部晚期或轉移性非小細胞肺癌(NSCLC)腫瘤之治療的方法。於一些具體例中，該方法包含經診斷具有局部晚期或轉移性NSCLC之人類主體接收HRG基因表現之蛋白質位準的評估；以及設若HRG基因表現之蛋白質位準評估為低的，則選定為拒給包含抗HER3抗體之治療，或是設若HRG基因表現之蛋白質位準評估為高的，則選定為投與包含抗HER3抗體之治療。

本發明亦針對執行ELISA的方法，其包括以下循序的步驟：使一固體表面與數個溶液接觸，該數個溶液依序各包含捕獲抗體、阻斷劑、懷疑含有分析物的樣本、偵測抗體以及酵素結合物(enzyme conjugate)，其中該固體表面在各循序的步驟之後經歷清洗方法，該清洗方法包含(a)使清洗緩衝液快速循環於該固體表面上及離開該固體表面(on and off the solid surface)直到觀察到氣泡，於此時移去該循環的清洗緩衝液，(b)選擇性地使用新鮮的清洗緩衝液來重複步驟(a)；以及(c)用新鮮的清洗緩衝液來沖洗該固體表面，但有條件是在該清洗方法完成之後接續酵素結合循序的步驟，該固體表面與包含酵素基質的溶液接觸。

一些具體例包含添加停止溶液至該固體表面。

一些具體例包含獲得分光光度讀數，以得到該樣本內存在分析物的量之分量(measure)，設若有的話。

於一些具體例中，該清洗緩衝液包含界面活性劑。

於一些具體例中，該清洗緩衝液包含磷酸鹽緩衝液鹽水(PBS)。

於較佳具體例中，該清洗緩衝液具有範圍從7.2-7.4之pH。

於一些具體例中，該循環步驟包含使用「活塞」動作來施用該清洗緩衝液於該固體表面上及抽吸該清洗緩衝液離開該固體表面(applying and aspirating the wash buffer on and off the solid surface)。

於一些具體例中，該清洗緩衝液循環於該固體表面上及離開該固體表面(on and off the solid surface)20次或更多次。

於一些具體例中，該清洗方法的該沖洗步驟實質移除該固體表面上全部的氣泡。

於一些具體例中，該包含偵測抗體之該溶液排除正常山羊血清。

於一些具體例中，藉由使用吸量管來促進該「活塞」動作。

於一些具體例中，該捕獲抗體及該偵測抗體專一地辨識人類人表皮生長因子受體調節蛋白 (heregulin)(HRG)。

於一些具體例中，該包含該樣本之溶液包含未稀釋的血清或未稀釋的血漿。

於一些具體例中，該捕獲抗體為小鼠抗人類HRG。

於一些具體例中，該偵測抗體為生物素化的山羊抗人類HRG。

於一些具體例中，該酵素結合物為鏈黴抗生物素蛋白-山葵過氧化酶(streptavidin-horse radish peroxidase)。

於一些具體例中，該酵素基質為過氧化氫及四甲基聯苯胺之混合物。

於一些具體例中，該固體表面在65℉至80℉範圍內的溫度下，與該包含該捕獲抗體之溶液接觸歷時至少8小時。

於一些具體例中，該包含該阻斷劑之溶液包含配於7.2至7.4範圍內的pH之磷酸鹽緩衝液鹽水內的1%牛血清白蛋白。

於一些具體例中，該固體表面在大約65℉至80℉範圍內的溫度下，與該包含該阻斷劑之溶液接觸歷時至少一小時。

於一些具體例中，該固體表面在大約65℉至80℉範圍內的溫度下，與該包含該樣本之溶液接觸歷時大約2小時。

於一些具體例中，該固體表面在大約65℉至80 ℉範圍內的溫度下，與該包含該偵測抗體之溶液接觸歷時大約2小時。

於一些具體例中，該固體表面在大約65℉至80℉範圍內的溫度下，與該包含該酵素結合物之溶液接觸歷時大約20分鐘。

於一些具體例中，該固體表面在大約65℉至80℉範圍內的溫度下，與該包含該酵素基質之溶液接觸歷時大約20分鐘。

於一些具體例中，該固體表面為包含一個或更多個井的微量平盤。

於一些具體例中，在執行該沖洗步驟(c)之前，執行該循環步驟(a)二次。

於一些具體例中，該界面活性劑為聚乙二醇山梨醇酐單月桂酸酯(polyethylene glycol sorbitan monolaurate)。

本發明包括下列(1)至(105)，但不限於此。

(1)一種治療懷有局部晚期或轉移性非小細胞肺癌(NSCLC)腫瘤之人類主體的方法，其包含：評估經診斷具有局部晚期或轉移性NSCLC之人類主體的HRG基因表現之蛋白質位準；以及投與包含抗HER3抗體之治療至HRG基因表現之蛋白質位準評估為高的人類主體。

(2)如(1)之方法，其中設若從經診斷具有局部晚期或轉移性NSCLC的該主體取得的生物樣本，觀察到蛋白質濃度值高於預定閾，則該HRG基因表現之蛋白質位準評估為高的。

(3)如(2)之方法，其中該預定閾係以統計方式選出，以使非所欲的偽陽性和偽陰性的作用減到最小。

(4)如(1)之方法，其中該預定閾值係選自於以下所構成的群組：大約0pg/mL、大約980pg/mL、大約1622pg/mL、大約2000pg/mL、大約3000pg/mL、大約4000pg/mL，以及大約5000pg/mL。

(5)如(1)之方法，其中該主體懷有野生型EGFR。

(6)如(5)之方法，其中該腫瘤已在至少一個先前的全身性療法上有所進展。

(7)如(1)之方法，其中HRG基因表現之蛋白質位準係使用ELISA或免疫組織化學技術來評估。

(8)如(2)之方法，其中該生物樣本包含全血或血清樣本。

(9)如(1)之方法，其中該抗HER3抗體係選自於以下所構成的群組：派崔單抗(patritumab)、杜李格單抗(duligotumab)(MEHD-7945A)、西羅巴珠單抗(seribantumab)(MM-121)、MM-111、LJM716、RG-7116、三專一性抗EGFR/ERBB3 zybody(tri-specific anti-EGFR/ERBB3 zybody)、huHER3-8，或是此等中任一者之衍生物或片段。

(10)如(1)之方法，其中該治療包含抗HER3抗體組合以下列中的一者或多者：(i)HER抑制劑，(ii)化學療法，(iii)放射線，以及(iv)其他的標靶劑(targeted agent)。

(11)如(10)之方法，其中該HER抑制劑係選自於以下所構成的群組：曲妥珠單抗(trastuzumab)、T-DM1、拉帕替尼(lapatinib)、帕妥珠單抗(pertuzumab)、西妥昔單抗(cetuximab)、帕尼單抗吉非替尼(panitumumab gefitinib)、阿法替尼(afatinib)、達克替尼(dacomitinib)、KD-019以及埃羅替尼(erlotinib)。

(12)如(10)之方法，其中該化學療法係選自於以下所構成的群組：順鉑(cisplatin)、卡鉑(carboplatin)、吉西他濱(gemcitabine)、培美曲塞(pemetrexed)、伊立替康(irinotecan)、5-氟尿嘧啶(5-fluoruracil)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、多烯紫杉醇(docetaxel)，以及卡培他濱(capecitabine)。

(13)一種治療懷有局部晚期或轉移性非小細胞肺癌(NSCLC)腫瘤之人類主體的方法，其包含：評估經診斷具有局部晚期或轉移性NSCLC之人類主體的HRG基因表現之蛋白質位準；以及HRG基因表現之蛋白質位準評估為低的人類主體，拒給包含抗HER3抗體之治療。

(14)如(13)之方法，其中設若從經診斷具有局部晚期或轉移性NSCLC的該主體取得的生物樣本，觀察到蛋白質濃度值位於(at)預定閾或者低於預定閾，則該HRG基因表現之蛋白質位準評估為低的。

(15)如(14)之方法，其中該預定閾係以統計方式選出，以使非所欲的偽陽性和偽陰性的作用減到最小。

(16)如(14)之方法，其中該預定閾值係選自於以下所構成的群組：0pg/mL、大約980pg/mL、大約1622pg/mL、大約2000pg/mL、大約3000pg/mL、大約4000pg/mL，以及大約5000pg/mL。

(17)如(13)之方法，其中該主體懷有野生型EGFR。

(18)如(17)之方法，其中該腫瘤已在至少一個先前的全身性療法上有所進展。

(19)如(13)之方法，其中HRG基因表現之蛋白質位準係使用ELISA或免疫組織化學技術來評估。

(20)如(14)之方法，其中該生物樣本包含全血或血清樣本。

(21)如(13)之方法，其中拒給的該治療包含抗HER3抗體組合以下列中的一者或多者：(i)HER抑制劑，(ii)化學療法，(iii)放射線，以及(iv)其他的標靶劑。

(22)如(13)之方法，其進一步包含用HER抑制劑來治療HRG基因表現之蛋白質位準評估為低的人類主體，該HER抑制劑係選自於以下所構成的群組：曲妥珠單抗(trastuzumab)、T-DM1、拉帕替尼(lapatinib)、帕妥珠單抗(pertuzumab)、西妥昔單抗(cetuximab)、帕尼單抗吉非替尼(panitumumab gefitinib)、阿法替尼(afatinib)、達克替尼(dacomitinib)、KD-019以及埃羅替尼(erlotinib)。

(23)如(13)之方法，其進一步包含用化學療法來治療HRG基因表現之蛋白質位準評估為低的人類主體，該化學療法係選自於以下所構成的群組：順鉑(cisplatin)、卡鉑(carboplatin)、吉西他濱(gemcitabine)、培美曲塞 (pemetrexed)、伊立替康(irinotecan)、5-氟尿嘧啶(5-fluoruracil)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、多烯紫杉醇(docetaxel)，以及卡培他濱(capecitabine)。

(24)一種促進評估HRG基因表現之蛋白質位準的套組。

(25)一種識別經診斷具有局部晚期或轉移性非小細胞肺癌(NSCLC)之人類病人的方法，該病人可能從包含抗HER3抗體之治療獲益，該方法包含：從經診斷具有局部晚期或轉移性NSCLC的人類病人獲得一生物樣本；使用該樣本，判定該人類病人的HRG基因表現之蛋白質位準的值；以及記錄判定的該值。

(26)如(25)之方法，其進一步包含評估是否判定的值係低於預定閾值、位於(at)預定閾值，或者高於預定閾值。

(27)如(26)之方法，其中該預定閾值係選自於以下所構成的群組：0pg/mL、大約980pg/mL、大約1622pg/mL、大約2000pg/mL、大約3000pg/mL、大約4000pg/mL，以及大約5000pg/mL。

(28)如(26)之方法，其進一步包含，設若判定的該值高於該預定閾值，則該HRG基因表現之蛋白質位準被定特徵(characterizing)為高的。

(29)如(26)之方法，其進一步包含，設若判定的該值位於(at)該預定閾值或者低於該預定閾值，則該HRG基因表現之蛋白質位準被定特徵為低的。

(30)如(25)之方法，其進一步包含向主治醫師或其他開業醫師報告判定的該值。

(31)如(25)之方法，其中該樣本包含全血或血清樣本。

(32)如(25)之方法，其中該主體不懷有EGFR感應性突變(sensitizing mutation)。

(33)如(25)之方法，其中該主體懷有野生型EGFR。

(34)如(33)之方法，其中該腫瘤已在至少一個先前的全身性療法上有所進展。

(35)如(25)之方法，其中該治療包含抗HER3抗體組合以下列中的一者或多者：(i)HER抑制劑，(ii)化學療法，(iii)放射線，以及(iv)其他的標靶劑。

(36)一種執行ELISA的方法，其包括以下循序的步驟：使一固體表面與數個溶液接觸，該數個溶液依序各包含捕獲抗體、阻斷劑、懷疑含有分析物的樣本、偵測抗體以及酵素結合物，其中該固體表面在各循序的步驟之後經歷清洗方法，該清洗方法包含：(a)使清洗緩衝液快速循環於該固體表面上及離開該固體表面(on and off the solid surface)直到觀察到氣泡，於此時移去該循環的清洗緩衝液；(b)選擇性地使用新鮮的清洗緩衝液來重複步驟(a)；以及(c)用新鮮的清洗緩衝液來沖洗該固體表面；但有條件是在該清洗方法完成之後接續酵素結合循序的步驟，該固體表面與包含酵素基質的溶液接觸。

(37)如(36)之方法，其進一步包含添加停止溶液至該固體表面。

(38)如(37)之方法，其進一步包含獲得分光光度讀數，以得到該樣本內存在分析物的量之分量，設若有的話。

(39)如(36)之方法，其中該清洗緩衝液包含界面活性劑。

(40)如(39)之方法，其中該清洗緩衝液包含磷酸鹽緩衝液鹽水(PBS)。

(41)如(40)之方法，其中該清洗緩衝液具有範圍從7.2-7.4之pH。

(42)如(36)之方法，其中該循環步驟包含使用「活塞」動作來施用該清洗緩衝液於該固體表面上及抽吸該清洗緩衝液離開該固體表面(applying and aspirating the wash buffer on and off the solid surface)。

(43)如(42)之方法，其中該清洗緩衝液循環於該固體表面上及離開該固體表面(on and off the solid surface)20次或更多次。

(44)如(36)之方法，其中該清洗方法的該沖洗步驟實質移除該固體表面上全部的氣泡。

(45)如(36)之方法，其中該包含偵測抗體之該溶液排除正常山羊血清。

(46)如(42)之方法，其中藉由使用吸量管來促進該「活塞」動作。

(47)如(36)之方法，其中該捕獲抗體及該偵測抗體專一地辨識人類人表皮生長因子受體調節蛋白(HRG)。

(48)如(36)之方法，其中該包含該樣本之溶液包含未稀釋的血清或未稀釋的血漿。

(49)如(47)之方法，其中該捕獲抗體為小鼠抗人類HRG抗體。

(50)如(49)之方法，其中該偵測抗體為生物素化的山羊抗人類HRG抗體。

(51)如(50)之方法，其中該酵素結合物為鏈黴抗生物素蛋白-山葵過氧化酶(streptavidin-horse radish peroxidase)。

(52)如(51)之方法，其中該酵素基質為過氧化氫及四甲基聯苯胺之混合物。

(53)如(49)之方法，其中該固體表面在65℉至80℉範圍內的溫度下，與該包含該捕獲抗體之溶液接觸歷時至少8小時。

(54)如(36)之方法，其中該包含該阻斷劑之溶液包含配於7.2至7.4範圍內的pH之磷酸鹽緩衝液鹽水內的1%牛血清白蛋白。

(55)如(54)之方法，其中該固體表面在大約65℉至80℉範圍內的溫度下，與該包含該阻斷劑之溶液接觸歷時至少一小時。

(56)如(48)之方法，其中該固體表面在大約65℉至80℉範圍內的溫度下，與該包含該樣本之溶液接觸歷時大約2小時。

(57)如(50)之方法，其中該固體表面在大約65℉至80℉範圍內的溫度下，與該包含該偵測抗體之溶液接觸歷時大約2小時。

(58)如(51)之方法，其中該固體表面在大約65℉至80℉範圍內的溫度下，與該包含該酵素結合物之溶液接觸歷時大約20分鐘。

(59)如(52)之方法，其中該固體表面在大約65℉至80℉範圍內的溫度下，與該包含該酵素基質之溶液接觸歷時大約20分鐘。

(60)如(36)之方法，其中該固體表面為包含一個或更多個井的微量平盤。

(61)如(43)之方法，其中在執行該沖洗步驟(c)之前，執行該循環步驟(a)二次。

(62)如(40)之方法，其中該界面活性劑為聚乙二醇山梨醇酐單月桂酸酯。

(63)如(1)至(35)中任一項之方法，其中以隨機化的臨床資料為基礎，來評估HRG基因表現為高的。

(64)一種接收(receiving)或接受(undergoing)局部晚期或轉移性非小細胞肺癌(NSCLC)腫瘤之治療或是由此戒絕(abstaining therefrom)治療的方法，其包含：提供自體的組織樣本或同意拿取自體的組織樣本(taking of same)，以促進經診斷具有局部晚期或轉移性NSCLC之人類主體之HRG基因表現之蛋白質位準的評估；以及設若HRG基因表現之蛋白質位準評估為高的，則接收或接受包含抗HER3抗體之治療，或是設若HRG基因表現之蛋白質位準評估為低的，則戒絕包含抗HER3抗體之治療。

(65)一種選定(electing)用於局部晚期或轉移性非小細胞肺癌(NSCLC)腫瘤之治療的方法，其包含：經診斷具有局部晚期或轉移性NSCLC之人類主體接收HRG基因表現之蛋白質位準的評估；以及設若HRG基因表現之蛋白質位準評估為低的，則選定為拒給或戒絕包含抗HER3抗體之治療，或是設若HRG基因表現之蛋白質位準評估為高的，則選定為接收或接受包含抗HER3抗體之治療。

(66)一種識別經診斷具有局部晚期或轉移性非小細胞肺癌(NSCLC)之人類病人的方法，該病人可能從包含抗HER3抗體之治療獲益，該方法包含：從經診斷具有局部晚期或轉移性NSCLC的人類病人接收一生物樣本；使用該樣本，判定該人類病人的HRG基因表現之蛋白質位準的值；以及選擇性地，記錄判定的該值。

(67)一種治療懷有局部晚期或轉移性非小細胞肺癌(NSCLC)腫瘤之人類主體的方法，其包含：下命令評估經診斷具有局部晚期或轉移性NSCLC之人類主體之HRG基因表現之蛋白質位準；以及對HRG基因表現之蛋白質位準評估為高的該人類主體，投與包含抗HER3抗體之治療。

(68)一種拒給懷有局部晚期或轉移性非小細胞肺癌(NSCLC)腫瘤之人類主體治療的方法，其包含：下命令評估經診斷具有局部晚期或轉移性NSCLC之人類主體之HRG基因表現之蛋白質位準；以及HRG基因表現之蛋白質位準評估為低的該人類主體，拒給包含抗HER3抗體之治療。

(69)一種治療懷有局部晚期或轉移性非小細胞肺癌(NSCLC)腫瘤之人類主體的方法，其包含：對經診斷具有局部晚期或轉移性NSCLC、HRG基因表現之蛋白質位準評估為高的人類主體，投與包含抗HER3抗體之治療。

(70)如(69)之方法，其中設若從經診斷具有局部晚期或轉移性NSCLC的該主體取得的生物樣本，觀察到蛋白質濃度值高於預定閾，則該HRG基因表現之蛋白質位準評估為高的。

(71)如(70)之方法，其中該預定閾係以統計方式選出，以使非所欲的偽陽性和偽陰性的作用減到最小。

(72)如(69)之方法，其中該預定閾值係選自於以下所構成的群組：大約0pg/mL、大約980pg/mL、大約1622pg/mL、大約2000pg/mL、大約3000pg/mL、大約4000pg/mL，以及大約5000pg/mL。

(73)如(69)之方法，其中該主體懷有野生型EGFR。

(74)如(73)之方法，其中該腫瘤已在至少一個先前的全身性療法上有所進展。

(75)如(69)之方法，其進一步包含評估該經診斷具有局部晚期或轉移性NSCLC之人類主體的基因表現之蛋白質位準，其中HRG基因表現之蛋白質位準係使用ELISA或免疫組織化學技術來評估。

(76)如(70)之方法，其中該生物樣本包含全血或血清樣本。

(77)如(69)之方法，其中該抗HER3抗體係選自於以下所構成的群組：派崔單抗(patritumab)、杜李格單抗(duligotumab)(MEHD-7945A)、西羅巴珠單抗(seribantumab)(MM-121)、MM-111、LJM716、RG-7116、三專一性抗EGFR/ERBB3 zybody(tri-specific anti-EGFR/ERBB3 zybody)、huHER3-8，或是此等中任一者之衍生物或片段。

(78)如(69)之方法，其中該治療包含投與抗HER3抗體組合以下列中的一者或多者：(i)HER抑制劑，(ii)化學療法，以及(ii)放射線。

(79)如(78)之方法，其中該HER抑制劑係選自於以下所構成的群組：曲妥珠單抗(trastuzumab)、T-DM1、拉帕替尼(lapatinib)、帕妥珠單抗(pertuzumab)、西妥昔單抗(cetuximab)、帕尼單抗吉非替尼(panitumumab gefitinib)、阿法替尼(afatinib)、達克替尼(dacomitinib)、KD-019以及埃羅替尼(erlotinib)。

(80)如(78)之方法，其中該化學療法係選自於以下所構成的群組：順鉑(cisplatin)、卡鉑(carboplatin)、吉西他濱 (gemcitabine)、培美曲塞(pemetrexed)、伊立替康(irinotecan)、5-氟尿嘧啶(5-fluoruracil)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、多烯紫杉醇(docetaxel)，以及卡培他濱(capecitabine)。

(81)一種治療懷有局部晚期或轉移性非小細胞肺癌(NSCLC)腫瘤之人類主體的方法，其包含：對經診斷具有局部晚期或轉移性NSCLC、HRG基因表現之蛋白質位準評估為低的人類主體，拒給包含抗HER3抗體之治療。

(82)如(81)之方法，其中設若從經診斷具有局部晚期或轉移性NSCLC的該主體取得的生物樣本，觀察到蛋白質濃度值位於(at)預定閾或者低於預定閾，則該HRG基因表現之蛋白質位準評估為低的。

(83)如(82)之方法，其中該預定閾係以統計方式選出，以使非所欲的偽陽性和偽陰性的作用減到最小。

(84)如(82)之方法，其中該預定閾值係選自於以下所構成的群組：0pg/mL、大約980pg/mL、大約1622pg/mL、大約2000pg/mL、大約3000pg/mL、大約4000pg/mL，以及大約5000pg/mL。

(85)如(81)之方法，其中該主體懷有野生型EGFR。

(86)如(85)之方法，其中該腫瘤已在至少一個先前的全身性療法上有所進展。

(87)如(81)之方法，其進一步包含評估該經診斷具有局部晚期或轉移性NSCLC之人類主體的HRG基因表現之蛋白質位準，其中HRG基因表現之蛋白質位準係使用ELISA或免疫組織化學技術來評估。

(88)如(82)之方法，其中該生物樣本包含全血或血清樣本。

(89)如(81)之方法，其中拒給的該治療包含投與抗HER3抗體組合以下列中的一者或多者：(i)HER抑制劑，(ii)化學療法，以及(ii)放射線。

(90)如(81)之方法，其進一步包含用HER抑制劑來治療HRG基因表現之蛋白質位準評估為低的人類主體，該HER抑制劑係選自於以下所構成的群組：曲妥珠單抗(trastuzumab)、T-DM1、拉帕替尼(lapatinib)、帕妥珠單抗(pertuzumab)、西妥昔單抗(cetuximab)、帕尼單抗吉非替尼(panitumumab gefitinib)、阿法替尼(afatinib)、達克替尼(dacomitinib)、KD-019以及埃羅替尼(erlotinib)。

(91)如(81)之方法，其進一步包含用化學療法來治療HRG基因表現之蛋白質位準評估為低的人類主體，該化學療法係選自於以下所構成的群組：順鉑(cisplatin)、卡鉑(carboplatin)、吉西他濱(gemcitabine)、培美曲塞(pemetrexed)、伊立替康(irinotecan)、5-氟尿嘧啶(5-fluoruracil)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、多烯紫杉醇(docetaxel)，以及卡培他濱(capecitabine)。

(92)一種識別經診斷具有局部晚期或轉移性非小細胞肺癌(NSCLC)之人類病人的方法，該病人可能從包含投與抗HER3抗體至其之治療獲益，該方法包含：獲得取自於經診斷具有局部晚期或轉移性NSCLC的人類病人之生物樣本；使用該樣本，判定該人類病人的HRG基因表現之蛋白質位準的值；以及選擇性地，記錄判定的該值。

(93)如(92)之方法，其進一步包含評估是否判定的值係低於預定閾值、位於(at)預定閾值，或者高於預定閾值。

(94)如(93)之方法，其中該預定閾值係選自於以下所構成的群組：0pg/mL、大約980pg/mL、大約1622pg/mL、大約2000pg/mL、大約3000pg/mL、大約4000pg/mL，以及大約5000pg/mL。

(95)如(93)之方法，其進一步包含，設若判定的該值高於該預定閾值，則該HRG基因表現之蛋白質位準被定特徵為高的。

(96)如(93)之方法，其進一步包含，設若判定的該值位於(at)該預定閾值或者低於該預定閾值，則該HRG基因表現之蛋白質位準被定特徵為低的。

(97)如(92)之方法，其進一步包含向主治醫師或其他開業醫師報告判定的該值。

(98)如(92)之方法，其中該樣本包含全血或血清樣本。

(99)如(92)之方法，其中該主體不懷有EGFR感應性突變(sensitizing mutation)。

(100)如(92)之方法，其中該主體懷有野生型EGFR。

(101)如(100)之方法，其中該腫瘤已在至少一個先前的全身性療法上有所進展。

(102)如(92)之方法，其中該治療包含抗HER3抗體組合以下列中的一者或多者：(i)HER抑制劑，(ii)化學療法，以及(ii)放射線。

(103)如(69)-(102)中任一項之方法，其中以隨機化的臨床資料為基礎，來評估HRG基因表現為高的。

(104)如(1)至(103)中任一項之方法，其中HRG基因表現係使用管理機構許可的測試來評估。

(105)如(104)之方法，其中該管理機構許可的測試為FDA-許可的、EMA-許可的或是PMDA-許可的測試。

(106)如(2)之方法，其中該預定閾值係選自於以下所構成的群組：0pg/mL、大約980pg/mL、大約1622pg/mL、大約2000pg/mL、大約3000pg/mL、大約4000pg/mL、大約5000pg/mL、大約6000pg/mL、大約7000pg/mL、大約8000pg/mL、大約9000pg/mL、大約10000pg/mL、大約11000pg/mL、大約12000pg/mL、大約13000pg/mL、大約14000pg/mL、大約15000pg/mL、大約16000pg/mL、大約17000pg/mL、大約18000pg/mL、大約19000pg/mL、大約20000pg/mL、大約22000pg/mL、大約24000pg/mL、大約26000pg/mL、大約28000pg/mL、大約30000pg/mL、大約35000pg/mL、大約40000pg/mL、大約50000pg/mL、大約60000pg/mL、大約70000pg/mL、大約80000pg/Lm、大約90000pg/mL，以及大約100000pg/mL。

(107)如(14)之方法，其中該預定閾值係選自於以下所構成的群組：0pg/mL、大約980pg/mL、大約1622pg/mL、大約2000pg/mL、大約3000pg/mL、大約4000pg/mL、大約5000pg/mL、大約6000pg/mL、大約7000pg/mL、大約8000pg/mL、大約9000pg/mL、大約10000pg/mL、大約11000pg/mL、大約12000pg/mL、大約13000pg/mL、大約14000pg/mL、大約15000pg/mL、大約16000pg/mL、大約17000pg/mL、大約18000pg/mL、大約19000pg/mL、大約20000pg/mL、大約22000pg/mL、大約24000pg/mL、大約26000pg/mL、大約28000pg/mL、大約30000pg/mL、大約35000pg/mL、大約40000pg/mL、大約50000pg/mL、大約60000pg/mL、大約70000pg/mL、大約80000pg/Lm、大約90000pg/mL，以及大約100000pg/mL。

(108)如(26)之方法，其中該預定閾值係選自於以下所構成的群組：0pg/mL、大約980pg/mL、大約1622pg/mL、大約2000pg/mL、大約3000pg/mL、大約4000pg/mL、大約5000pg/mL、大約6000pg/mL、大約7000pg/mL、大約8000pg/mL、大約9000pg/mL、大約10000pg/mL、大約11000pg/mL、大約12000pg/mL、大約13000pg/mL、大約14000pg/mL、大約15000pg/mL、大約16000pg/mL、大約17000pg/mL、大約18000pg/mL、大約19000pg/mL、大約20000pg/mL、大約22000pg/mL、大約24000pg/mL、大約26000pg/mL、大約28000pg/mL、大約30000pg/mL、大約35000pg/mL、大約40000pg/mL、大約50000pg/mL、大約60000pg/mL、大約70000pg/mL、大約80000pg/Lm、大約90000pg/mL，以及大約100000pg/mL。

(109)如(6)之方法，其中供(for)評估或用於(with)評估HRG基因表現之腫瘤組織或片段已經在進行任何療法之前先從該主體移除。

(110)如(18)之方法，其中供評估或用於評估HRG基因表現之腫瘤組織或片段已經在進行任何療法之前先從該主體移除。

(111)如(34)之方法，其中供評估或用於評估HRG基因表現之腫瘤組織或片段已經在進行任何療法之前先從該主體移除。

圖1描繪來自實施例2的研究所有的主體之無進展存活期(progression-free survival)(顯示高及低劑量派崔單抗(patritumab)+埃羅替尼(erlotinib)vs.安慰劑+埃羅替尼)。

圖2描繪來自實施例2的研究所有的主體之整體存活期(overall survival)(顯示高及低劑量派崔單抗(patritumab)+埃羅替尼(erlotinib)vs.安慰劑+埃羅替尼)。

圖3描繪來自實施例3的研究，評估為具有高的HRG基因表現之蛋白質位準的主體之無進展存活期(顯示高及低劑量派崔單抗(patritumab)+埃羅替尼(erlotinib)vs.安慰劑+埃羅替尼)。

圖4描繪來自實施例3的研究，評估為具有高的HRG基因表現之蛋白質位準的主體之無進展存活期(顯示儲集的派崔單抗(pooled patritumab)+埃羅替尼(erlotinib)vs. 安慰劑+埃羅替尼)。

圖5描繪來自實施例4的研究，評估為具有高的HRG基因表現之蛋白質位準的主體之整體存活期(顯示高及低劑量派崔單抗(patritumab)+埃羅替尼(erlotinib)vs.安慰劑+埃羅替尼)。

圖6描繪來自實施例4的研究，評估為具有高的HRG基因表現之蛋白質位準的主體之整體存活期(顯示儲集的派崔單抗(patritumab)+埃羅替尼(erlotinib)vs.安慰劑+埃羅替尼)。

圖7描繪來自實施例5的研究，評估為具有低的HRG基因表現之蛋白質位準的主體之無進展存活期(顯示儲集的派崔單抗(patritumab)+埃羅替尼(erlotinib)vs.安慰劑+埃羅替尼)。

圖8描繪來自實施例5的研究，評估為具有低的HRG基因表現之蛋白質位準的主體之整體存活期(顯示儲集的派崔單抗(patritumab)+埃羅替尼(erlotinib)vs.安慰劑+埃羅替尼)。

圖9描繪活體外效應，其係藉由透過西方印漬術(Western blotting)來測量磷酸化(Phospho)-HER3及磷酸化-AKT位準的降低而判定。

圖10描繪西方印漬術，其顯示U3-1287能封阻配體依賴性基礎HER3磷酸化。

較佳實施例之詳細說明定義

當使用於本文中，除非另有指明，當提及數值時，術語「大約」係指列舉值的加或減10%。

術語「抗體」係指完整的抗體、單株抗體或多株抗體。抗體可以使用重組DNA的技術來產生。該抗體可以源自於舉例而言，小鼠、大鼠、兔或是任何其他的哺乳動物。該抗體亦可以為一種人類抗體，其可以舉例而言，從能夠表現人類Ig基因之基因轉殖的非人類哺乳動物獲得。該抗體亦可以為一種人類化抗體(humanised antibody)，其可以包含舉例而言，一個或更多個非人類來源的互補性決定區域。其亦可以包含一種人類抗體之表面殘基及/或一種人類抗體之框架區域。該抗體亦可以為一種嵌合抗體，其可以包含舉例而言，非人類抗體之可變異領域及人類抗體之恆定(constant)領域。

當使用於本文中，「癌」及「腫瘤」為可互換的。

當使用於本文中，「治療」係意指給主體或病人的醫療照顧，或是藥物劑量的投與。於一些具體例中，「治療」可以為包含HER抑制劑，例如抗HER3抗體之「藥學組成物」、「藥物」或是「製劑(agent)」。於一些具體例中，「治療」可以為「化學療法」、「免疫療法(immune therapy)」、「免疫療法(immunotherapy)」或是「放射療法」。

當使用於本文中，「EGFR突變」係意指EGFR基因之任何突變。「EGFR突變」可以為，舉例而言EGFR外顯子19刪失及/或外顯子21(L858R)取代突變。然而，「EGFR 突變」不限於該等。

當使用於本文中，「HER」為選自於HER1(EGFR)、HER2、HER3以及HER4所構成的群組之中的一者。

當使用於本文中，「HER3」係意指由Entrez Gene識別號碼2065所識別的基因，以及其之對偶變異體所編碼的人類蛋白質。

當使用於本文中，「HER抑制劑」係意指一種會抑制、中和、阻止或消除至少一部份的HER生物活性之分子(小分子或巨分子，例如抗體或其抗原結合片段)。較佳地，HER抑制劑會結合至HER。然而，「HER抑制劑」可以為不直接結合至HER的一種分子，只要該分子會抑制、中和、阻止或消除至少一部份的HER生物活性。HER1抑制劑(EGFR抑制劑)之實例包括拉帕替尼(lapatinib)、埃羅替尼(erlotinib)、西妥昔單抗(cetuximab)、吉非替尼(gefitinib)、阿法替尼(afatinib)、達克替尼(dacomitinib)、帕尼單抗(panitumumab)以及KD-019。HER2抑制劑之實例包括曲妥珠單抗(trastuzumab)、帕妥珠單抗(pertuzumab)以及賀癌寧(trastuzumab emtansine)(T-DM1)。

當使用於本文中，「HER3抑制劑」係意指一種會抑制、中和、阻止或消除至少一部份的HER3生物活性之分子(小分子或巨分子，例如抗體或其抗原結合片段)。較佳地，HER3抑制劑會結合至HER3。然而，「HER3抑制劑」可以為不直接結合至HER3的一種分子，只要該分子會抑制、中和、阻止或消除至少一部份的HER3生物活性。「生物活性」的作用可以為直接或間接的，例如下游訊息傳導及和其他HER家族分子，如EGFR、HER2及HER4，之異二聚體形成(heterodimerization)。舉例而言，HER3抑制劑可以為一種EGFR/HER3、HER2/HER3或HER4/HER3異二聚體形成之抑制劑，或者衍生自此等異二聚體形成之任一者之訊息傳導抑制劑。就此而論，「HER3抑制劑」可以包括，舉例而言帕妥珠單抗(pertuzumab)、尼妥珠單抗(nimotuzumab)、MM-111及西妥昔單抗(cetuximab)。再者，不願被理論所束縛，據信HER3會與非HER受體，例如MET(c-MET)，形成異二聚體。因而，於一些具體例中，「HER3抑制劑」可以包括，舉例而言MET抑制劑，例如翁那妥珠單抗(onartuzumab)、及/或tivantinive。

當使用於本文中，「HRG」(業已知為神經調節蛋白(neuregulin-1)、NRG1、人表皮生長因子受體調節蛋白(heregulin)，以及HRG1)係意指由Entrez Gene識別號碼3084所識別的基因，以及其之對偶變異體所編碼的人類蛋白質。

當使用於本文中，「非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer)」及「非小細胞肺癌(non-small cell lung carcinoma)」為可互換的。

當使用於本文中，「預定閾(值)」係意指閾的數值，分類器給予該數值偽陰性和偽陽性(的成本)之間希望的平衡(balance)。

較佳地，「預定閾(值)」係意指可能的閾的數值，以將(病人或主體的)整個母體劃分成為二個(或更多個)子群，以便與具有比閾低的(HRG)基因表現之病人(本文中使用為「低HRG」子群)相比之下，其能對具有閾或較高的(HRG)基因表現之病人(本文中使用為「高HRG」子群)帶來臨床的益處。

在閾值是dCt的情況下，較佳地，「預定閾(值)」係意指可能的閾的數值，以將(病人或主體的)整個母體劃分成為二個(或更多個)子群，以便與具有比閾更高值的病人(本文中使用為「低HRG」子群)相比之下，其能對具有閾或更低值的病人(本文中使用為「高HRG」子群)帶來臨床的益處。

於一些具體例中，「預定閾」係通過、憑藉，或者根據臨床研究及其結果分析(共同稱為「臨床資料」)，及/或臨床前或非臨床研究(共同稱為「非臨床資料」)，以統計(及臨床)方式判定、推敲、調整及/或確認，以便使非所欲的偽陽性和偽陰性的作用減到最小。

於一些具體例中，「預定閾」係憑藉，或者根據臨床資料(及選擇性地非臨床資料)，進一步更佳地隨機的臨床資料(及選擇性地非臨床資料)，以統計(及臨床)方式判定、推敲、調整及/或確認，以確保從治療獲益的所有病人係含括在HRG高子群內。

更佳地，「預定閾」係通過、憑藉，或者根據藥理學的特徵(亦即，作用機轉)、臨床前或非臨床研究資料、臨床研究資料，以及從外面的公司購買的商業樣本資料等等，來判定、推敲、調整及/或確認，俾以與「低HRG」子群相比之下，使「高HRG」子群臨床的益處增加至最大。一些統計方法，例如Adaptive Biomarker Threshold Design(亦即，最大概似法)，Jiang W，Freidlin B，Simon R.Biomarker-Adaptive Threshold Design：A Procedure for Evaluating Treatment With Possible Biomarker-Defined Subset Effect,J Natl Cancer Inst.2007；99(13)：1036-43，及類似方法係利用所有可得的臨床前/非臨床研究、臨床研究、商業樣本等等的資料，而用來判定、推敲、調整及/或確認閾(以確保從治療獲益的所有病人係含括在HRG高子群內)。於一些具體例中，判定「預定閾」以便使高HRG子群可以更大，或者可以含括從治療驅動益處(drive benefit)之所有病人。

當使用於本文中，「主體」、「人類主體」及「病人」為可互換的。

當使用於本文中，「罹患癌症的主體」及「懷有癌症的主體」為可互換的。

於一些較佳具體例中，在藉由投與HER3抑制劑或安慰劑，加上或未加上另外的藥物，來治療罹患癌症的一組病人，且使用該預定閾將該組劃分成「高HRG」子群及「低HRG」子群的時候，在「高HRG」子群中，投與HER3抑制劑之平均抗癌效應比起安慰劑(或對照)之平均抗癌效應為更好且具有臨床(上)(有意義的)益處，而在「低HRG」子群中，投與HER3抑制劑之平均抗癌效應比安慰劑(或對照)之平均抗癌效應稍微好一些或沒有比較好且沒有臨床(上)(有意義的)益處。於更佳的具體例中，在「高HRG」子群中，投與HER3抑制劑之平均抗癌效應比起安慰劑(或對照)之平均抗癌效應為統計上顯著更好的且具有臨床(上)(有意義的)益處，而在「低HRG」子群中，投與HER3抑制劑之平均抗癌效應在統計上沒有比安慰劑(或對照)之平均抗癌效應顯著更好且沒有臨床(上)(有意義的)益處。

於其他較佳具體例中，在使用該預定閾將罹患癌症的一組病人劃分成「高HRG」子群及「低HRG」子群，且各組係藉由投與HER3抑制劑或安慰劑，加上或未加上另外的藥物來治療的時候，在「高HRG」子群中，投與HER3抑制劑之平均抗癌效應比起安慰劑(或對照)之平均抗癌效應為更好且具有臨床(上)(有意義的)益處，而在「低HRG」子群中，投與HER3抑制劑之平均抗癌效應比安慰劑(或對照)之平均抗癌效應稍微好一些或沒有比較好且沒有臨床(上)(有意義的)益處。於更佳的具體例中，在「高HRG」子群中，投與HER3抑制劑之平均抗癌效應比起安慰劑(或對照)之平均抗癌效應為統計上顯著更好的且具有臨床(上)(有意義的)益處，而在「低HRG」子群中，投與HER3抑制劑之平均抗癌效應在統計上沒有比安慰劑(或對照)之平均抗癌效應顯著更好且沒有臨床(上)(有意義的)益處。

於其他具體例中，「預定閾」可以為臨床前/非臨床研究、臨床研究及/或商業樣本中測定的HRG位準之中位數，舉例而言，用罹患癌症的一組病人，其等之HRG位準為可測量(可以測定的)或可偵測的。於其他較佳具體例中，在藉由投與HER3抑制劑或安慰劑，加上或未加上另外的藥物，來治療罹患癌症，例如非小細胞肺癌(NSCLC)的一組病人，且使用該等病人之中位數HRG位準作為該預定閾來將該組劃分成高HRG子群及低HRG子群的時候，在「高HRG」子群中，投與HER3抑制劑之平均抗癌效應比起安慰劑(或對照)之平均抗癌效應為更好的且具有臨床(上)(有意義的)益處，而在「低HRG」子群中，投與HER3抑制劑之平均抗癌效應比安慰劑(或對照)之平均抗癌效應稍微好一些或沒有比較好且沒有臨床(上)(有意義的)益處。於更佳的具體例中，在「高HRG」子群中，投與HER3抑制劑之平均抗癌效應比起安慰劑(或對照)之平均抗癌效應為統計上顯著更好的且具有臨床(上)(有意義的)益處，而在「低HRG」子群中，投與HER3抑制劑之平均抗癌效應在統計上沒有比安慰劑(或對照)之平均抗癌效應顯著更好且沒有臨床(上)(有意義的)益處。於一些具體例中，該預定閾為罹患癌症的一組病人的HRG位準之中位數，以及可以推敲或調整該預定閾(以確保從治療獲益的所有病人係含括在HRG高子群內)。

於其他較佳具體例中，在使用該預定閾將罹患癌症的一組病人劃分成「高HRG」子群及「低HRG」子群，且該「高HRG」子群係藉由投與HER3抑制劑或安慰劑，加上或未加上另外的藥物來治療的時候，在「高HRG」子群中，投與HER3抑制劑之平均抗癌效應比起安慰劑(或對照)之平均抗癌效應為更好的且具有臨床(上)(有意義的)益處。於更佳的具體例中，在「高HRG」子群中，投與HER3抑制劑之平均抗癌效應比起安慰劑(或對照)之平均抗癌效應為統計上顯著更好的且具有臨床(上)(有意義的)益處。

於其他較佳具體例中，在使用該預定閾來識別罹患癌症的「高HRG」病人，且該等病人係藉由投與HER3抑制劑或安慰劑，加上或未加上另外的藥物來治療的時候，投與HER3抑制劑之平均抗癌效應比起安慰劑(或對照)之平均抗癌效應為更好且具有臨床(上)(有意義的)益處。於更佳的具體例中，投與HER3抑制劑之平均抗癌效應比起安慰劑(或對照)之平均抗癌效應為統計上顯著更好的且具有臨床(上)(有意義的)益處。

當使用於本文中，「另外的藥物」係意指除了要使用來組合該分子的HER3抑制劑之外，任何治療性或預防性分子。於一些具體例中，「另外的藥物」為HER抑制劑、化學療法或是放射線療法中的一者或多者。

於一些具體例中，「抗癌效應」之指標(指數)可以為無進展存活期(PFS)或整體存活期(OS)，但不限於該等。該指標可以為HER3抑制劑的抗癌效應之代用標誌。

當使用於本文中，「高HRG」為代表(representing)，或代表(represents)HRG基因表現位準位於(at)或者高於預定閾的一個數值。於本發明中，「高HRG」、「高HRG(子)群」以及「高HRG病人(或主體)」分別意指HRG基因表現位準位於(at)或者高於(預定)閾，具有位於(at)或者高於(預定)閾之HRG基因表現位準的(子)群，以及具有位於(at)或者高於 (預定)閾之HRG基因表現位準的病人(或主體)。HRG分類舉例而言，可以建立在HRG基因表現之蛋白質位準的基礎上。

當使用於本文中，「低HRG」為代表(representing)，或代表(represents)HRG基因表現位準位於(at)或者低於預定閾的一個數值。於本發明中，「低HRG」、「低HRG(子)群」以及「低HRG病人(或主體)」分別意指HRG基因表現位準位於(at)或者低於(預定)閾，具有位於(at)或者低於(預定)閾之HRG基因表現位準的(子)群，以及具有位於(at)或者低於(預定)閾之HRG基因表現位準的病人(或主體)。HRG分類舉例而言，可以建立在HRG基因表現之蛋白質位準的基礎上。

當使用於本文中，對治療之「反應(response)」或「反應(responding)」係意指，關於經治療的腫瘤而言，該腫瘤顯示出(a)生長減慢，(b)生長停止，或(c)消退(regression)。

本文中所揭示的方法可以使用於識別懷有或者經診斷具有腫瘤或癌症細胞的主體，舉例而言一人類主體。於一些具體例中，該主體懷有實性(solid)或液體腫瘤，其等可以為由HER3途徑所驅動，或者其等可能對於HER3途徑所媒介的其他療法有抗性。於一些具體例中，該主體懷有肺癌、結腸直腸癌(colorectal cancer)、頭頸部癌、乳癌、胃腸癌、胰臟癌、前列腺癌、卵巢癌、子宮內膜癌、唾液腺癌、腎臟癌、結腸癌、胃(gastric)癌(胃(stomach)癌)、甲狀腺癌、膀胱癌、神經膠瘤、黑色素瘤、轉移性乳癌、表皮樣癌、食道癌、子宮頸癌、鱗狀細胞癌、小細胞肺癌或非小細胞肺癌。於一些具體例中，本文中所揭示的方法可以使用於識別一主體，例如懷有局部晚期或轉移性NSCLC(腫瘤)的主體，其很可能從包含抗HER3抗體或低分子量的HER3抑制劑之治療獲益。於一些具體例中，該主體懷有第III期，譬如第IIIb期，或第IV期的腫瘤。識別一主體的方法可以包含舉例而言，評估經診斷具有腫瘤或是癌症之人類主體的HRG基因表現之蛋白質位準。

於一些具體例中，本文中所揭示的方法可以使用於識別懷有局部晚期或轉移性NSCLC(腫瘤)的主體，其很可能從包含(投與)抗HER3抗體或低分子量的HER3抑制劑之治療獲益，但有條件是有ALK基因融合或重排的任何主體被排除在應用該等方法之主體之外。

於一些具體例中，本文中所揭示的方法可以使用於治療經識別為懷有腫瘤或癌症細胞的主體。於一些具體例中，識別或治療懷有局部晚期或轉移性NSCLC(腫瘤)的人類主體之方法包含，評估經診斷具有局部晚期或轉移性NSCLC之人類主體的HRG基因表現之蛋白質位準。於一些具體例中，該主體不懷有表皮生長因子受體(EGFR)感應性突變。於一些具體例中，該主體懷有野生型EGFR。於一些具體例中。該主體不懷有ALK基因融合或重排。於一些具體例中，該疾病或腫瘤已經進行至少一種先前的全身性療法，例如化學療法。一些具體例包含投與包含抗HER3抗體之治療至HRG基因表現之蛋白質位準評估為高的人類主體。於一些具體例中，治療包含(投與)抗HER3抗體組合以至少一製劑，其會抑制除了HER3之外的HER家族受體。於一些具體例中，治療包含投與抗HER3抗體組合以至少一製劑，其會抑制非HER家族酪胺酸激酶受體。於一些具體例中，抗HER3抗體係組合以非特異性的化學療法來投與。

於一些較佳具體例中，可以應用本文中所揭示的方法之病人為，具有局部晚期或轉移性非小細胞肺癌、人表皮生長因子受體調節蛋白為高的、EGFR野生型之主體，其已經進行至少一種先前的全身性療法。於一些具體例中，該等病人未曾接受過HER抑制劑(HER inhibitor naïve)。

於一些較佳具體例中，可以應用本文中所揭示的方法之病人包括具有第一線轉移性或局部晚期頭頸部癌的主體，其會同時用西妥昔單抗(cetuximab)、順鉑(cisplatin)、帕尼單抗(panitumumab)、5-氟尿嘧啶(5-fluoruracil)、放射療法，及放射線療法(僅有局部晚期)予以治療。

於一些具體例中，可以應用本文中所揭示的方法之病人包括具有第二線轉移性NSCLC或其他癌症的主體，其會同時用多西紫杉醇(docataxel)予以治療。

於一些具體例中，可以應用本文中所揭示的方法之病人包括具有NSCLC或其他癌症的主體，其會同時用免疫療法予以治療。

於一些具體例中，可以應用本文中所揭示的方法之病人包括具有第三線、HER2陽性、(轉移性)乳癌的主體，其會同時用PI3K途徑抑制劑予以治療。

於一些具體例中，可以應用本文中所揭示的方法之病人包括具有HER2陰性(轉移性)乳癌的主體，其會同時用激素療法或PI3K途徑抑制劑予以治療。

於本發明中，PI3K途徑抑制劑包括PI3K抑制劑、mTOR抑制劑以及AKT抑制劑。

於一些具體例中，可以應用本文中所揭示的方法之病人包括具有NSCLC第一線轉移性EGFR感應性突變陽性或其他癌症的主體，其會同時用埃羅替尼(erlotinib)、吉非替尼(gefitini)以及阿法替尼(afatinib)中的一者或多者予以治療。

於一些具體例中，可以應用本文中所揭示的方法之病人包括具有第一線轉移性NSCLC或其他癌症的主體，其會同時用鉑基(platinum-based)化學療法予以治療。

於一些具體例中，可以應用本文中所揭示的方法之病人包括具有RAS野生型結腸直腸癌的主體，其會同時用西妥昔單抗(cetuximab)、帕尼單抗(panitumumab)，及化學療法中的一者或多者予以治療。

於一些具體例中，可以應用本文中所揭示的方法之病人包括具有HER2陽性第一線轉移性乳癌或其他癌症的主體，其會同時用曲妥珠單抗(trastuzumab)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、多西紫杉醇(docataxel)、T-DM1，及帕妥珠單抗(pertuzumab)中的一者或多者予以治療。

於一些具體例中，可以應用本文中所揭示的方法之病人包括具有HER2陽性第二線或更後線的(later line)轉移性乳癌或其他癌症的主體，其會同時用拉帕替尼(lapatinib)、卡培他濱(capecitabine)、曲妥珠單抗(trastuzumab)以及太平洋紫杉醇(paclitaxel)中的一者或多者予以治療。

於一些具體例中，用更早線的療法(earlier line of therapy)沒有失敗的病人可以應用本文中所揭示的方法。於一些具體例中，用更早線的療法沒有失敗的病人及已經分類為「高HRG」的病人可應用本文中所揭示的方法。

於一些具體例中，本文中所揭示的方法可以用來識別及/或治療具有局部晚期或轉移性NSCLC之HRG高、EGFR野生型主體，其會從派崔單抗(patritumab)組合以HER抑制劑之治療獲益。

於一些具體例中，本文中所揭示的方法可以用來識別及/或治療具有局部晚期或轉移性NSCLC之HRG高、EGFR野生型主體，其會從派崔單抗(patritumab)組合以化學療法之治療獲益。

於一些具體例中，本文中所揭示的方法可以用來識別及/或治療HRG高、EGFR突變型主體，舉例而言具有局部晚期或轉移性NSCLC之主體，其會從派崔單抗(patritumab)組合以HER抑制劑之治療獲益。

於一些具體例中，本文中所揭示的方法可以用來識別及/或治療具有局部晚期或轉移性NSCLC之HRG高、EGFR突變型主體，其會從派崔單抗(patritumab)組合以化學療法之治療獲益。

於一些具體例中，本文中所揭示的方法可以用來識別及/或治療罹患癌症的「HRG高」病人，其會從派崔單抗(patritumab)組合以免疫療法(immune therapy)或是免疫療法(immunotherapy)之治療獲益。此等癌症包括NSCLC。

於一些具體例中，本文中所揭示的方法可以用來識別及/或治療罹患癌症的「HRG高」病人，其會從派崔單抗(patritumab)組合以激素療法或PI3K(磷脂肌醇-3-激酶)途徑抑制劑之治療獲益。此等癌症包括乳癌，較佳為HER2陰性乳癌。此等PI3K途徑抑制劑包括PI3K抑制劑、AKT抑制劑及mTOR(雷帕黴素(Rapamycin)在哺乳類動物(mammallian)的標靶)抑制劑。

於一些具體例中，本文中所揭示的方法可以用來識別及/或治療罹患癌症的「HRG高」病人，其會從派崔單抗(patritumab)組合以PI3K抑制劑之治療獲益。此等癌症包括乳癌，較佳為HER2陽性乳癌。

於一些具體例中，本文中所揭示的方法可以用來識別及/或治療罹患癌症的「HRG高」病人，其會從派崔單抗(patritumab)組合以ALK抑制劑之治療獲益。此等癌症包括NSCLC。此等ALK(未分化淋巴癌激酶)抑制劑包括克唑替尼(crizotinib)(截剋瘤(Xalkori))。

於一些具體例中，本文中所揭示的方法可以用來識別及/或治療急性呼吸窘迫症候群、肺纖維化、精神分裂症、心臟病、動脈粥狀硬化，以及裘馨氏肌肉萎縮症 (Duchenne’s muscular dystrophy)。

HER3抗體

適用於治療之抗體不特別受限制，以及可以為任何能與HER3結合之蛋白質或配體。於一些具體例中，該抗體可以為能與HER3結合之結合蛋白質或其片段。於一些較佳具體例中，該抗體可以抑制、中和、阻止或消除至少一部份的HER3生物活性。

抗HER3抗體可以為，舉例而言下列之一者或多者：派崔單抗(patritumab)、杜李格單抗(duligotumab)(MEHD-7945A)、西羅巴珠單抗(seribantumab)(MM-121)、MM-111、LJM716、RG-7116(經糖基工程化的抗HER3單株抗體)、三專一性抗EGFR/ERBB3 zybody(tri-specific anti-EGFR/ERBB3 zybody)、huHER3-8，或是此等能與HER3結合之任一者之衍生物或片段。

抗體片段包括舉例而言，Fab片段、Fab’片段、F(ab’)₂片段、Fv片段、雙價抗體(diabodies)(Hollinger等人，(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.90：6444-6448)、單鏈抗體分子(Plückthun in：The Pharmacology of Monoclonal Antibodies 113,Rosenburg and Moore,eds.,Springer Verlag,N.Y.(1994),269-315)、scFv片段，以及其他能抑制HER3之片段。

抗體或抗體片段之衍生物可包括舉例而言，雙專一性抗體(bispecific antibody)、多專一性抗體(multispecific antibody)、雙scFv片段(biscFv fragment)、雙價抗體、奈米抗體(nanobody)、抗體藥物共軛物、免疫毒素，及/或免疫細胞介素(immunocytokine)，但不限於該等。

可以於舉例而言，US專利第7,705,130號內找到適合的抗體之另外的實例，其之整體係併入至本文中以作為參考資料。

依據本發明，一種能結合HER3之經單離的蛋白質會與HER3之細胞外部分的至少一抗原決定位交互作用。該抗原決定位較佳位於領域(domain)L1內，其為胺基端領域，位於領域S1及S2內，其等為二個富含半胱胺酸之領域，或是位於領域L2內，其位於該二個富含半胱胺酸領域之側面。該抗原決定位亦可能位於領域之組合物中，諸如但不限於由L1及S1之部分所組成之抗原決定位。

生物樣本

可以使用取自於一主體，例如經診斷具有局部晚期或轉移性NSCLC主體，的生物樣本作為蛋白質的來源或是免疫組織化學(IHC)薄切片的來源，如此可以判定樣本內HRG基因表現之位準。該生物樣本可以包含舉例而言血液，諸如全血，或是血液衍生物，包括外切體(exosome)、血清、血漿、組織、細胞，及/或循環的腫瘤細胞。於一些具體例中，該生物樣本可以取自於腫瘤。

生物樣本可以藉由任何已知的方法來獲得，諸如靜脈穿刺或用傳統的腫瘤活體組織切片(biopsy)儀器或程序。熟悉此藝者可以使用來獲得腫瘤樣本、經認可的醫療程序之實例為內視鏡活體組織切片、切除式活體組織切片、切開式活體組織切片、細針活體組織切片、穿刺活體組織切片、刮除式活體組織切片，以及皮膚活體組織切片。生物樣本應該要夠大以提供足夠的蛋白質或薄切片用於測量HRG基因表現。

於一些具體例中，本文中所說明的方法包含提供自體的組織樣本或同意拿取自體的組織樣本，舉例言之，以促進經診斷具有局部晚期或轉移性NSCLC之人類主體之HRG基因表現之蛋白質位準的評估。

生物樣本可以以允許測量HRG表現或含量之任何形式存在。換言之，樣本必須足夠用於蛋白質萃取或製備薄切片。因此，樣本可為新鮮、通過合適的低溫技術來保存，或者通過非低溫技術來保存。舉例而言，處理臨床活體組織切片檢體的標準方法是要固定組織樣本於福馬林內，以及接而包埋於石蠟內。此形式的樣本通常被稱為福馬林固定、石蠟包埋的(FFPE)組織。合適供後續分析的組織製備技術為熟悉此藝者熟知的。

HRG基因表現

如本文中所述，判定或測量生物樣本內HRG基因表現之位準可以藉由任何合適的方法來執行。熟悉此藝者已知數種此等方法。舉例而言，判定HRG基因表現可以藉由測量樣本內之HRG蛋白質的位準或量來完成。

HRG基因表現後立即產生許多的同質體(isoform)之HRG。不願被理論所束縛，據信HRG之似EGF(EGF-like)領域對結合HER3是不可缺的。因此，當如本文中所述來判定HRG基因表現之位準時，HRG分析較佳可以，舉例而言設計成要偵測至少HRG之似EGF領域，俾以偵測多數，設若不是全部存在的HRG同質體。假如使用抗HRG抗體來偵測HRG蛋白質，該抗體可辨識似EGF領域。然而，於一些具體例中，用來偵測HRG蛋白質之抗HRG抗體無法辨識似EGF領域。

HRG基因表現可以藉由任何已知的方法來偵測。合適用於測量HRG基因表現之蛋白質位準的偵測方法之非限制性實例，包括酵素結合免疫吸附分析法(ELISA)及IHC分析。

ELISA

執行HRG ELISA需要至少一種對抗HRG之抗體，例如一種偵測抗體。可以使來自一種要分析的樣本之HRG蛋白質固定(immobilized)於固體撐體上，例如聚苯乙烯微滴定平盤。此固定化可以透過，例如通過吸附作用之非專一性結合至該表面。任擇地，固定化可以透過專一性結合，例如通過「三明治」ELISA之捕獲抗體結合來自樣本之HRG。在固定HRG之後，可以添加偵測抗體，以及偵測抗體能與結合的HRG形成複合體。偵測抗體能夠不論是直接地或間接地，例如通過一種會專一辨識偵測抗體之二級抗體，而與酵素連接。在各步驟之間，可以用一種溫和的洗潔劑溶液來清洗該平盤及結合的HRG。典型的ELISA協定可以包括一個或更多個阻斷步驟，阻斷步驟涉及利用非專一性結合的蛋白質，例如牛血清白蛋白，來阻斷蛋白質製劑與該平盤不需要的非專一性結合。在最終的清洗步驟之後，該平盤透過添加適當的酵素基質來產生可見的訊號以表示樣本內HRG的量。基質可以為，例如顯色基質或螢光基質。ELISA方法、試劑及儀器系統為熟悉此藝者熟知的以及為商業上可得的。

執行ELISA的一些具體例說明如下。當對各種樣本類型執行ELISA時，本揭示的方法提供準確的結果，樣本包括含有高量多樣的不同蛋白質之生物樣本(諸如血漿及血清之樣本)。在一個態樣中，可以執行揭示的ELISA方法來偵測天然及/或重組型人類人表皮生長因子受體調節蛋白(HRG)。

本文中所揭示的ELISA的方法包含以下循序的步驟：使一固體表面與數個溶液接觸，該數個溶液依序各包含捕獲抗體、阻斷劑、懷疑含有分析物的樣本、偵測抗體以及酵素結合物，其中該固體表面在各循序的步驟之後經歷清洗方法，該清洗方法包含：(a)使清洗緩衝液快速循環於該固體表面上及離開該固體表面(on and off the solid surface)直到觀察到氣泡，於此時移去該循環的清洗緩衝液；(b)選擇性地使用新鮮的清洗緩衝液來重複步驟(a)；以及(c)用新鮮的清洗緩衝液來沖洗該固體表面；但有條件是在該清洗方法完成之後接續酵素結合循序的步驟，該固體表面與包含酵素基質的溶液接觸。

清洗緩衝液之循環可以包含使用「活塞」動作來快速且重複地施用該清洗緩衝液於該固體表面上，及抽吸該清洗緩衝液離開該固體表面(applying and aspirating the wash buffer on and off the solid surface)。執行「活塞」動作可以藉由重複泵抽吸量管(例如，舉例而言，吸量管(air displacement pipette)、正壓式吸量管(positive displacement pipette)或多道移液器(multichannel pipettor))的柱塞端，以使該清洗緩衝液移動進入及離開組合的吸量管吸管(pipette tip)。任擇地，可以重複擠壓及釋放移液吸管或巴斯德吸量管(Pasteur pipette)之球形端來進行活塞動作。可以使用其他可比較的分配及移除構件。

不願被理論所束縛，據信此種活塞動作有效地使非專一性吸附的蛋白質接觸到該清洗緩衝液，有效地移除該等蛋白質。該清洗緩衝液循環於該固體表面上及離開該固體表面(on an off the solid surface)，直到觀察到氣泡，表示該固體表面已經發生充分地清洗。於一些具體例中，該清洗緩衝液循環於該固體表面上及離開該固體表面(on and off the solid surface)10次至30次。於一些具體例中，該清洗緩衝液循環於該固體表面上及離開該固體表面(on and off the solid surface)約20次。於一些具體例中，該清洗緩衝液循環於該固體表面上及離開該固體表面(on and off the solid surface)至少10次，至少20次，或者至少30次。

於一些具體例中，在執行該沖洗步驟(c)之前，執行該循環步驟(a)一次至二次、三次或四次。於一特定的具體例中，在執行該沖洗步驟(c)之前，執行該循環步驟(a)二次。於一些具體例中，在執行該沖洗步驟(c)之前執行該循環步驟(a)至少二次。

該沖洗步驟涉及對該固體表面施用清洗緩衝液且從該固體表面移除該清洗緩衝液(applying and removing wash buffer to and from the solid surface)。該沖洗步驟可以涉及標準的「填滿及抽吸(fill and aspirate)」方法學，藉此該固體表面與該清洗緩衝液接觸一次(one time)，然後立即經由抽吸而移除。任擇地，可以透過傾析法而移除該清洗緩衝液。進行該沖洗步驟是要確保該固體表面上沒有餘留氣泡。因此，於一些具體例中，該沖洗步驟不需要執行多重的循環或是活塞動作(pistoning action)。設若該固體表面含有井(wells)或是凸起的邊緣，可以在移除該清洗緩衝液之後，使該表面上下顛倒且於乾燥、平坦的吸水面上吸乾，以確保全部的清洗緩衝液被移除。

ELISA固體表面

於一些具體例中，本文中所揭示的ELIS方法係於固體表面上執行，該固體表面為一種含有一個或更多個井的細胞培養平盤。所揭示的ELIS方法中使用的一種例示性固體表面為微滴定平盤(業已知為微量平盤(microplate)或微井平盤(microwell plate))。合適的平盤可以由聚苯乙烯、聚碳酸酯或聚丙烯製成。於一特定的具體例中，利用96井微量平盤來執行ELISA。

包含捕獲抗體的ELISA溶液

揭示的ELISA方法涉及使一固體表面與包含捕獲抗體的溶液接觸。該捕獲抗體可以為一種單株抗體或多株抗體，以及會辨識有興趣的抗原，其為ELISA內待偵測的分析物。於一些具體例中，該捕獲抗體為對抗特定人類蛋白質或胜肽而提升之小鼠抗體。於一特定的具體例中，該捕獲抗體為小鼠抗人類HRG抗體。

該包含捕獲抗體的溶液可以包含用磷酸鹽緩衝液鹽水(PBS)予以重組的(reconstituted)抗體。於一些具體例中，該溶液可以包含大約1.5至大約5.0ug/mL的抗體。於一特定的具體例中，該溶液包含配於PBS內大約4.0ug/mL的抗體。

於一些具體例中，該固體表面可以在大約65℉至大約80℉的溫度下，用該包含捕獲抗體的溶液予以孵育歷時至少4小時。於一些具體例中，該固體表面在大約70℉的溫度下，用該溶液予以孵育歷時大約8小時或過夜。於一特定的具體例中，該固體表面在與該捕獲抗體溶液接觸的時候，是被遮蓋及/或密封的。

包含阻斷劑的ELISA溶液

該固體表面係藉由添加包含阻斷劑的溶液予以阻斷。於一些具體例中，該阻斷劑溶液包含配於pH大約7.2至大約7.4之間的PBS內，大約1%牛血清白蛋白(BSA)。於一些具體例中，該阻斷劑溶液包含低於低於(less than less than)大約0.5%蛋白酶。

該固體表面可以用該阻斷劑溶液予以孵育歷時至少一小時。於一些具體例中，該固體表面在大約70℉下，用該阻斷劑溶液予以孵育。

ELISA樣本溶液

包含懷疑含有分析物的樣本溶液可由未稀釋的生物樣本組成，或者其可包含用一種溶液稀釋的生物樣本例如，舉例而言PBS。於一特定的具體例中，該樣本溶液由未稀釋的血清或血漿組成，以及血清或血漿直接與該固體表面接觸。

分析物可以為，舉例而言一種抗原，例如蛋白質或胜肽。於一特定的具體例中，該分析物為一種生長因子，例如HRG，或特別地為可溶性HRG。

該固體表面可以在大約70℉下，用該樣本溶液予以孵育歷時2小時或更久。於一特定的具體例中，該固體表面在與該溶液孵育的期間，是被遮蓋及/或密封的。

包含偵測抗體的ELISA溶液

偵測抗體為一種會辨識有興趣的抗原之抗體，有興趣的抗原為ELISA內待偵測的分析物。因此，該捕獲抗體及該偵測抗體二者都會辨識相同的抗原。然而，此等二種抗體可能不會辨識該抗原相同的區域或抗原決定位。該偵測抗體可以為一種單株抗體或多株抗體。於一些具體例中，該偵測抗體為對抗特定人類蛋白質或胜肽而提升之山羊抗體。於一特定的具體例中，該捕獲抗體為山羊抗人類HRG抗體。

該包含偵測抗體的溶液可包含用磷酸鹽緩衝液鹽水(PBS)或BSA溶液予以重組的抗體。於一些具體例中，該溶液可以包含配於pH 7.2-7.4的PBS之1% BSA溶液內，大約100至大約200ng/mL的抗體。於一特定的具體例中，該溶液包含配於pH 7.2-7.4的PBS之1% BSA溶液內，大約150ng/mL的抗體。於一些具體例中，該偵測抗體溶液不含正常山羊血清。

該偵測抗體與一種偵測劑接合(conjugated)，例如，舉例而言生物素。此一種偵測劑允許該偵測抗體與酵素/基質偵測系統結合，例如，舉例而言抗生物素蛋白或鏈黴抗生物素蛋白連接的酵素。於一特定的具體例中，該偵測抗體為生物素化的抗人類HRG抗體。

於一些具體例中，該固體表面在大約70℉的溫度下，用該偵測抗體溶液予以孵育歷時至少1.5、2或是3小時。於一些具體例中，該固體表面在與該偵測抗體溶液接觸的時候，是被遮蓋及/或密封的。

包含酵素結合物的ELISA溶液

揭示的ELISA方法涉及使該固體表面與酵素結合物接觸，該酵素結合物包含與受體酵素，如鹼性磷酸酶(AP)或山葵過氧化酶(HRP)偶合之黏結劑。該黏結劑結合至與該偵測抗體接合之偵測劑。鏈黴抗生物素蛋白(streptavidin)為一種例示性黏結劑，其與生物素化的抗體結合。該受體酵素將無色的基質轉化成可偵測的、有色的產物。一種例示性酵素為山葵過氧化酶(HRP)，其將過氧化氫/四甲基聯苯胺基質混合物轉化成可偵測的色素原。於一些具體例中，ELISA中使用的該酵素結合物為鏈黴抗生物素蛋白-山葵過氧化酶(HRP)。

於一些具體例中，該酵素結合物溶液包含於pH 7.2-7.4的PBS之1% BSA溶液內稀釋的酵素結合物。於一些具體例中，該固體表面可以在大約70℉且遠離直接光線下，用該酵素結合物溶液予以孵育歷時大約20分鐘。該固體表面在孵育的期間可以是被遮蓋及/或密封的。

包含酵素基質的ELISA溶液

在該清洗方法完成之後接續酵素結合循序的步驟，該固體表面與包含酵素基質的溶液接觸。合適的基質包括無色的產物，其等在接觸連接至該酵素結合物的黏結劑之酵素時，轉化成有色的產物。一旦從無色的產物轉化成有色的產物，可以於ELISA平盤讀數器上測量該固體表面上的該酵素基質溶液之標的波長之光學密度。

例示性合適的酵素基質包括硝基藍四唑鎓(Nitroblue Tetrazolium)(NBT)加上5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸鹽(BCIP)(鹼性磷酸酶基質)、固紅TR/萘酚AS-MX(Fast Red TR/Naphthol AS-MX)加上4-氯-2-甲基重氮苯/3-羥基-2-萘甲酸2,4-二甲基醯胺苯(anilide)磷酸鹽(alkalai phosphate substrate)，以及過氧化氫(H₂O₂)及四甲基聯苯胺(HRP基質混合物)之1：1混合物。

於一些具體例中，該酵素基質溶液在大約70℉下、遠離直接光線，與該固體表面孵育至少20分鐘。

ELISA清洗緩衝液

在清洗該固體表面之後，使固體表面與捕獲抗體、阻斷劑、樣本、偵測抗體以及酵素結合物溶液各者接觸。清洗緩衝液包含一種界面活性劑，諸如聚山梨醇酯界面活性劑。一種特定合適的界面活性劑為聚乙二醇山梨醇酐單月桂酸酯(諸如TWEEN® 20，Sigma Aldrich，密蘇里(Missouri)，USA)。界面活性劑可以存在於，舉例而言PBS pH 7.2-7.4或是托立斯(Tris)緩衝液鹽水，pH 8.0。於一特定的具體例中，清洗緩衝液包含配於pH 7.2-7.4的PBS之0.05%聚乙二醇山梨醇酐單月桂酸酯。

ELISA之固體表面在完成酵素基質溶液孵育之後，可以接觸一種停止溶液。於一些具體例中，該停止溶液包含2-NH₂SO₄。該停止溶液可以在添加之後，與現存的溶液於平盤上徹底混合。

在該固體表面接觸該停止溶液之後，可以藉由分光光度讀數來判定該ELISA固體表面之光學密度。於一些具體例中，在添加該停止溶液之後立即判定該光學密度。

於揭示的ELISA方法之具體例中，該方法係用DuoELISA發展套組(DuoELISA Development kit)來執行或是偵測人類NRG1-b1/HRG1-b1(R&D Systems,Inc.，明尼阿波里斯(Minneapolis)，USA；目錄編號DY377)。

免疫組織化學

樣本內之HRG存在及位準可以藉由免疫組織化學(IHC)或免疫螢光法(IF)來判定。用IHC或IF來分析HRG需要至少一種對抗HRG之抗體。適用於IHC或IF之抗HRG 抗體為商業上可得的。舉例而言，可以從R&D Systems(明尼阿波里斯(Minneapolis)，MN)、abeam(劍橋(Cambridge)，MA)、Santa Cruz Biotechnology,Inc.((聖克魯茲Santa Cruz)，CA)，或者Novus Biologicals(利特爾頓(Littleton)，CO)購買合適的抗體。可以使用HRG抗體、利用標準的技術來偵測來自腫瘤之薄切片，諸如5微米切片內HRG蛋白質之存在，包括FFPE切片及冷凍腫瘤切片。典型地，初以能提取開始的採集和保存腫瘤材料的方法中，被固定的蛋白質之抗原結構的方式來處理腫瘤切片。載玻片接而予以阻斷以防止抗HRG偵測抗體之非專一性結合。然後透過抗HRG抗體(初級抗體)與HRG蛋白質之結合來偵測HRG蛋白質之存在。會辨識並結合初級抗體之偵測抗體(二級抗體)連接至可偵測的酵素或螢光團。典型地，在步驟之間清洗腫瘤切片，以及用非專一性蛋白質來阻斷，例如牛血清白蛋白。設若偵測抗體係連接至可偵測的酵素，則使用適當的酵素基質來產生可見的訊號。設若偵測抗體係連接至螢光團，則透過使用螢光顯微鏡來觀看載玻片。樣本可以用舉例而言，蘇木素(hematoxylin)來複染(counterstained)。

評估HRG基因表現

可以評估來自人類病人的生物樣本之HRG基因表現，例如獲得自、取自，或接收自人類病人的生物樣本。一些具體例包含下命令或接收HRG基因表現之蛋白質位準的評估。一些具體例包含判定HRG基因表現之蛋白質位準的值，以及選擇性地，記錄判定的該值。

於一些具體例中，HRG基因表現之蛋白質位準係使用管理機構許可的測試來評估。於一些具體例中，該管理機構許可的測試為FDA-許可的測試、EMA-許可的測試，或是JPMA-許可的測試。

HRG基因表現位準可以就預定閾來解釋。HRG基因表現位準等於或高於閾分數可以解釋為，預測主體會對HER3抑制劑，例如抗HER3抗體之治療起反應的概度(likelihood)。於一些具體例中，HRG基因表現位準低於閾分數可以解釋為，預測腫瘤對HER3抑制劑之治療為有抗性(不反應)的概度。

於一些具體例中，HRG基因表現可以以代表生物樣本內HRG基因表現位準的數值為基礎，而評估為「高HRG」或「低HRG」。舉例而言，可以以HRG表現之蛋白質位準為基礎，而評估一個主體為高HRG或低HRG。表現位準可透過任何已知的方法來評估，例如以上說明的該等。

舉例而言，設若觀察到來自生物樣本之蛋白質濃度值位於(at)預定閾或者高於預定閾，則HRG基因表現之蛋白質位準可以評估為「高HRG」。於一些具體例中，該預定閾係以統計方式選出，以使非所欲的偽陽性和偽陰性的作用減到最小，以及可以為，舉例來說0pg/mL、大約980pg/mL、大約1622pg/mL、大約2000pg/mL、大約3000pg/mL、大約4000pg/mL、大約5000pg/mL、大約5000pg/mL、大約6000pg/mL、大約7000pg/mL、大約8000pg/mL、大約9000pg/mL、大約10000pg/mL、大約11000pg/mL、大約 12000pg/mL、大約13000pg/mL、大約14000pg/mL、大約15000pg/mL、大約16000pg/mL、大約17000pg/mL、大約18000pg/mL、大約19000pg/mL、大約20000pg/mL、大約22000pg/mL、大約24000pg/mL、大約26000pg/mL、大約28000pg/mL、大約30000pg/mL、大約35000pg/mL、大約40000pg/mL、大約50000pg/mL、大約60000pg/mL、大約70000pg/mL、大約80000pg/Lm、大約90000pg/mL，或是大約100000pg/mL。於一些具體例中，設若生物樣本內之蛋白質濃度值超過以下值，則HRG表現可以評估為「高HRG」：大約0pg/mL、大約980pg/mL、大約1622pg/mL、大約2000pg/mL、大約3000pg/mL、大約4000pg/mL、大約5000pg/mL、大約6000pg/mL、大約7000pg/mL、大約8000pg/mL、大約9000pg/mL、大約10000pg/mL、大約11000pg/mL、大約12000pg/mL、大約13000pg/mL、大約14000pg/mL、大約15000pg/mL、大約16000pg/mL、大約17000pg/mL、大約18000pg/mL、大約19000pg/mL、大約20000pg/mL、大約22000pg/mL、大約24000pg/mL、大約26000pg/mL、大約28000pg/mL、大約30000pg/mL、大約35000pg/mL、大約40000pg/mL、大約50000pg/mL、大約60000pg/mL、大約70000pg/mL、大約80000pg/Lm、大約90000pg/mL，或是大約100000pg/mL。於一些具體例中，設若蛋白質濃度值低於以下值，則HRG表現評估為「低HRG」：大約980pg/mL、大約1622pg/mL、大約2000pg/mL、大約3000pg/mL、大約4000pg/mL、大約5000pg/mL、大約6000pg/mL、大約7000pg/mL、大約8000pg/mL、大約9000pg/mL、大約10000pg/mL、大約11000pg/mL、大約12000pg/mL、大約13000pg/mL、大約14000pg/mL、大約15000pg/mL、大約16000pg/mL、大約17000pg/mL、大約18000pg/mL、大約19000pg/mL、大約20000pg/mL、大約22000pg/mL、大約24000pg/mL、大約26000pg/mL、大約28000pg/mL、大約30000pg/mL、大約35000pg/mL、大約40000pg/mL、大約50000pg/mL、大約60000pg/mL、大約70000pg/mL、大約80000pg/Lm、大約90000pg/mL，或是大約100000pg/mL。

於一些具體例中，可以以來自一個或多個來源之可溶性HRG為基礎，來評估HRG基因表現之蛋白質位準。舉例而言，於一些具體例中，HRG基因表現之蛋白質位準可以來自正常或腫瘤細胞二者。

於一些具體例中，較高的HRG基因表現係與較好的風險比(hazard ratio)及p值相關。

治療

於一些具體例中，主體可以藉由以下方式來治療：投與包含抗HER3抗體之治療至罹患癌症或是其他疾病、且HRG基因表現評估為高的主體。於一些具體例中，主體可以藉由以下方式來治療：拒給包含抗HER3抗體之治療，至罹患癌症或是其他疾病且HRG基因表現評估為低的主體。

於一些具體例中，主體可以藉由以下方式來治療：設若HRG基因表現之蛋白質位準評估為高的，則接收或是接受包含抗HER3抗體之治療，或是設若HRG基因表現之蛋白質位準評估為低的，則戒絕包含抗HER3抗體之治療。

於一些具體例中，主體可以藉由以下方式來治療：設若HRG基因表現之蛋白質位準評估為低的，則選定為拒給或戒絕包含抗HER3抗體之治療，或是設若HRG基因表現之蛋白質位準評估為高的，則選定為投與包含抗HER3抗體之治療。

抗HER3抗體可以是能與HER3結合之任何蛋白質或配體，例如以上所討論的該等。於一些具體例中，抗HER3抗體為下列之一者或多者：派崔單抗(patritumab)(U3-1287)、杜李格單抗(duligotumab)(MEHD-7945A)、MM-111、LJM716、RG-7116、三專一性抗EGFR/ERBB3 zybody(tri-specific anti-EGFR/ERBB3 zybody)、huHER3-8以及西羅巴珠單抗(seribantumab)(MM-121)。

可以以任何合適的劑量來投與抗HER3抗體。舉例而言，可以以大約9mg/kg或更多、大約12mg/kg或更多、大約15mg/kg或更多，或是大約18mg/kg或更多來投與抗體。於一些具體例中，可以以大約9mg/kg或更少、大約12mg/kg或更少、大約15mg/kg或更少，或是大約18mg/kg或更少來投與抗體。

可以以任何合適的方法來投與抗HER3抗體。舉例而言，於一些具體例中抗體係靜脈內投與。然而，投與途徑不限於靜脈內一者，而且也可以是任何其他合適的一途徑。

於一些具體例中，抗HER3抗體係每週或是更頻繁，或者，每二週或每三週，或更不頻繁，投與一次或更多次。

於一些具體例中，該治療包含投與抗HER3抗體組合以酪胺酸激酶或HER抑制劑，例如表皮生長因子受體抑制劑。該治療包含投與抗HER3抗體組合以，舉例而言下列中的一者或多者：曲妥珠單抗(trastuzumab)、T-DM1、拉帕替尼(lapatinib)、帕妥珠單抗(pertuzumab)、西妥昔單抗(cetuximab)、帕尼單抗吉非替尼(panitumumab gefitinib)、阿法替尼(afatinib)、達克替尼(dacomitinib)、KD-019以及埃羅替尼(erlotinib)。

於一些具體例中，該治療包含投與抗HER3抗體組合以化學療法。該治療可以包含投與抗HER3抗體組合以舉例而言，例如下列中的一者或多者：順鉑(cisplatin)、5-氟尿嘧啶(5-fluoruracil)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、卡培他濱(capecitabine)，以及其他的化學療法。

於一些具體例中，該治療包含投與抗HER3抗體組合以酪胺酸激酶或HER抑制劑以及化學療法二者。該治療可以包含投與抗HER3抗體組合以，舉例而言，例如曲妥珠單抗(trastuzumab)、T-DM1、拉帕替尼(lapatinib)、帕妥珠單抗(pertuzumab)、西妥昔單抗(cetuximab)、帕尼單抗(panitumumab)、吉非替尼(gefitinib)、達克替尼(dacomitinib)、KD-019、阿法替尼(afatinib)、達克替尼(dacomitinib)、 KD-019及埃羅替尼(erlotinib)中的一者或多者，以及順鉑(cisplatin)、卡鉑(carboplatin)、吉西他濱(gemcitabine)、培美曲塞(permetrexed)、伊立替康(irinotecan)、5-氟尿嘧啶(5-fluoruracil)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、多烯紫杉醇(docetaxel)、卡培他濱(capecitabine)，以及其他的化學療法中的一者或多者。

於一些具體例中，該治療包含投與抗HER3抗體組合以放射療法。於一些具體例中，治療包含投與抗HER3抗體組合以放射療法以及下列中的一者或多者：酪胺酸激酶、HER抑制劑及化學療法。

於一些具體例中，抗HER3抗體可以組合以轉移性或局部晚期頭頸部癌之第一線治療予以投與，例如放射療法或放射線療法、西妥昔單抗(cetuximab)、順鉑(cisplatin)，及/或5-氟尿嘧啶(5-fluoruracil)。

於一些具體例中，抗HER3抗體可以組合以轉移性或局部晚期頭頸部癌之第一線治療予以投與，例如西妥昔單抗(cetuximab)、順鉑(cisplatin)，及/或5-氟尿嘧啶(5-fluoruracil)。

於一些具體例中，抗HER3抗體可以組合以NSCLC之第一線治療予以投與，例如埃羅替尼(erlotinib)或鉑基(platinum-based)的化學療法。

於一些具體例中，抗HER3抗體可以組合以NSCLC之第二線治療予以投與，例如多烯紫杉醇(docetaxel)。

於一些具體例中，抗HER3抗體可以組合以RAS野生型癌症結腸直腸癌及其他的癌症之治療予以投與，例如西妥昔單抗(cetuximab)、帕尼單抗(panitumumab)，及/或化學療法。

於一些具體例中，抗HER3抗體可以組合以放射線、順鉑(cisplatin)、西妥昔單抗(cetuximab)、5-氟尿嘧啶(5-fluoruracil)，及/或其他的HER抑制劑或化學療法予以投與。

於一些具體例中，抗HER3抗體可以組合以下列中的一者或多者予以投與：曲妥珠單抗(trastuzumab)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、拉帕替尼(lapatinib)、卡培他濱(capecitabine)，及/或其他的HER抑制劑或化學療法。

測試套組

於一些具體例中，測試套組包括供IHC判定HRG含量之材料。舉例而言，一種IHC套組可以含有對抗HRG之初級抗體，以及接合至報導子(reporter)酵素，如山葵過氧化酶(horseradish peroxidase)之二級抗體。於一些具體例中，用專一地辨識初級抗體之共軛聚合物來取代二級抗體。

實施例

下列實施例進一步闡釋本發明。該等實施例僅提供作為說明之用，以及無論如何並非解釋為限制本發明之範疇或內容。

縮寫：AE-不良事件；CI-信賴區間(confidence interval)；CR-完全性反應(complete response)；DLT-劑量限制性毒性(dose limiting toxicity)；FAS-全分析集(full analysis set)；FFPE-福馬林固定、石蠟包埋(FFPEformalin-fixed，paraffin-embedded)；HR-風險比(hazard ratio)；IN-靜脈內；ITT-治療意向(intent to treat)；MTD-最大耐受劑量(maximum tolerated dose)；OS-整體存活期(overall survival)；PD-進行性疾病(progressive disease)；PFS-無進展存活期(progression-free survival)；PH-比例風險(proportional hazards)；PO-口服；PR-部分反應(partial response)；SD-穩定性疾病(stable disease)。

實施例1-第1b期/第2期(Phase 1b/2)臨床試驗

此實施例與其他實施例提供隨機、安慰劑對照、雙盲的第1b期/第2期(Phase 1b/2)研究結果，其等設計用於在具有第IIIb/IV期(Stage IIIb/IV)NSCLC、未曾接受過EGFR抑制劑治療(EGFR-inhibitor treatment-naïve)的主體內，估計派崔單抗(patritumab)組合以埃羅替尼(erlotinib)之安全及效應，該主體在至少一種先前的化學療法攝生法之後已經進展(who had progressed after at least 1 prior chemotherapy regimen)。

本研究包含第1b期開放標記單一組別部分(open-label，single-arm portion)，來評估派崔單抗(patritumab)組合以埃羅替尼(erlotinib)之安全及耐受性(tolerability)，以及要判定第2期部分之劑量，接著進行隨機、安慰劑對照的第2期部分，來評估組合療法相對於埃羅替尼 (erlotinib)加上安慰劑之效應及安全。基於第1期研究結果未達到最大耐受劑量，初步的人類藥物動力學剖繪支持以每3週一次靜脈內投與派崔單抗(patritumab)9mg/kg或超過9mg/kg，以達到能超越實驗動物模式內顯示最大效應及藥物動力學的循環位準之循環位準。亦含括更高的維持劑量位準18mg/kg以便適應，相對於動物模式，臨床環境可能降低的腫瘤組織滲透作用。由於第1期研究單一療法沒有劑量限制性毒性，所以第1b期設計為劑量逐步上升(dose-de-escalation)研究，口服投與150mg的埃羅替尼(erlotinib)每天一次及IV投與18mg/kg的派崔單抗(patritumab)每三週一次，條件是設若其超越MTD，由此最大劑量而逐步上升劑量(dose-de-escalation)。因為於此第1b期定群(cohort)沒有DLTs，所以第2期部分容許此位準及低於此位準之劑量。

在本研究的二個部分期間，主體每天一次口服接收150mg的埃羅替尼(erlotinib)。在每三週的治療週期開始時，主體接收IV輸注派崔單抗(patritumab)或安慰劑(於第2期部分期間)。估計三種治療攝生法：每天150mg的埃羅替尼(erlotinib)及每三週18mg/kg的派崔單抗(patritumab)之組合(「高劑量」)；每天150mg的埃羅替尼(erlotinib)及每三週18mg/kg的派崔單抗(patritumab)裝料(loading)加上9mg/kg派崔單抗維持劑量(maintenance)之組合(「低劑量」)；以及每天150mg的埃羅替尼(erlotinib)及每三週安慰劑(「安慰劑」)。每六週(±3天)評估腫瘤到研究的第一個24週，接而每十二週(±7天)評估腫瘤，獨立於治療週期。

一個「HRG高」的主體係定義為一個具有觀察到可溶性HRG濃度高於樣本集之第三四分位數(Quartile 3)，980pg/mL的主體。可溶性HRG濃度係藉由本文所揭示改良的ELISA方法來測量。

於本研究中，從215個隨機的主體收集202個血清樣本。於五個批次中測量樣本內可溶性HRG的濃度，及得到各主體之可溶性HRG的濃度之平均值。在測量的期間，藉由重複測量對照樣本來確認分析之再現性，對照樣本為配於胎牛血清之濃度4000pg/m的重組型人表皮生長因子受體調節蛋白。70個主體得到大於0pg/mL之HRG的資料。使用全部的202個樣本來判定第三四分位數(Quartile 3)。

第2期部分之樣本大小係以單側對數秩檢定(one-sided log-rank test)為基礎來計算，有80%檢定力(power)以偵測任何派崔單抗組別(patritumab arm)與對照比較之間，3.3 vs 2.2個月的中位數PFS之50%改進(亦即，HR為0.667)，在單側α(one-sided alpha)=0.1之顯著水準(significance level)。

當已觀察162 PFS事件(以及每次比較派崔單抗(patritumab)18mg/kg+埃羅替尼(erlotinib)及對照組別，以及派崔單抗9mg/kg+埃羅替尼及對照組別，有110 PFS事件)時，發生此研究之原始分析。在原始分析時，所有主體之治療分派是非盲的(Unblinded)以在使資料相符及清理之後指定分析的研究人員，以及對該經清理的資料庫建立約略的了解(snapshot)。為了使可能的偏誤減到最少，一直到研究結束都沒有對主體或研究者洩露個別的治療分派。

對全分析集執行所有效應分析，全分析集包括隨機分析集(randomized analysis set)內所有的主體，其等接收至少一劑量之隨機研究藥物。主要效應的終點是PFS。PFS係定義為從隨機化的日期到放射線疾病進展(radiographic disease progression)或因任何原因而死亡，而製作第一次客觀文件的日期較早的時間。一個活著且在資料截止日期之前，沒有製作(放射線)疾病進展的客觀文件的主體，在最後的可評價腫瘤評估日要設限(censored)。關鍵次要效應的終點，整體存活期，係定義為從隨機化的日期到因任何原因而死亡的時間，以及以如同主要效應終點PFS相同的方式來分析。

關於劑量反應關係，PFS之原始分析係使用分層的對數秩線性趨勢檢定，接著使用分層的對數秩檢定進行各派崔單抗組別(patritumab arm)與對照之成對比較，說明隨機化的分層因子：組織學(腺癌vs非腺癌)以及對先前療法(CR/PR vs SD vs PD)之最佳反應。產生PFS之卡本-麥爾(Kaplan-Meier)曲線以及用來計算各治療組之中位數及95% CIs。使用一種分層的Cox比例風險模型(Cox’s proportional hazards model)來計算各派崔單抗組別及對照之間的HR之估計值以及95% CIs。

高HRG組之FAS的PFS之原始分析係使用分層的對數秩線性檢定，來比較各派崔單抗組別與對照，以及比較組合的派崔單抗組別與對照。分層因子包括組織學(腺癌vs非腺癌)以及對先前療法(CR/PR/SD vs PD)之最佳反應。各派崔單抗組別及對照之間以及組合的派崔單抗組別及對照之間的HR之估計值95% CIs之計算，係使用一種分層的Cox比例風險模型(Cox’s proportional hazards model)加上分層的對數秩檢定使用的相同分層因子。

除非另有指明，PFS和OS之對數秩p值及HRs係如上所述以隨機化的分層因子調整之原始分析為基礎。

第1b期試驗登記7個主體(4位男性；年齡中位數[範圍]，68歲[48-78])，全體接收每天150mg的埃羅替尼(erlotinib)及每三週18mg/kg的派崔單抗(patritumab)之組合。2個主體出現等級3的AEs：一個等級3的病例疼痛、疲勞、頭痛、脫水、腹瀉，以及血液肌酸酐(creatinine)各者均增加；無一與派崔單抗(patritumab)相關。三個主體有四種嚴重的AEs：等級3的疼痛(與研究治療無關)、等級3的脫水(與埃羅替尼(erlotinib)相關的)，以及等級1的食慾下降(與埃羅替尼(erlotinib)及派崔單抗(patritumab)相關的)以及等級1的發燒(無關的)於一個主體。最多報告的AEs是等級1或2的以及被認為是與埃羅替尼(erlotinib)相關的AEs。在2個主體中唯一報告與派崔單抗(patritumab)相關的AE是食慾下降(2個主體)。

四個主體沒有記載到反應及記錄為穩定性疾病(83、87、90，以及117天)。7個主體全體由於疾病進展而中止研究治療；追蹤6個主體到死亡為止，以及1個主體撤回追蹤同意書。

在第1b期研究的期間沒有DLTs。因此，第2期劑量攝生法為18mg/kg的派崔單抗(patritumab)裝料劑量(loading dose)，加上每三週後續投與9mg/kg派崔單抗或是18mg/kg的派崔單抗維持劑量。該等主體在第2期試驗的期間亦投與150mg/天的埃羅替尼(erlotinib)。

關於第2期部分，隨機化選擇3個主體但不治療，因而FAS及安全分析集內有212個主體。以下呈現的分析結果係以來自閉鎖的(locked)資料庫(資料截止日期2012年十月30日之前者)之效應資料(除了OS以外)的原始分析為基礎。OS資料在原始分析該時還不成熟，以及以2013年四月19日之資料截止日期為基礎，已更新的OS分析之初步結果呈現於以下。

表1中概述隨機化研究的第2期部分所登記的215個主體之素質(Disposition)。表2中概述全分析集之人口統計學的資訊。治療組的人口統計特徵之間沒有有意義的差異。

表3顯示有關於NSCLC歷史以及先前療法之主體基線特徵。治療組之間的主體大體而言看來為很平衡的。

法攝生法的基線，使用最近的化學療法攝生法(排除'不適用')之最佳反應。

實施例2-全分析集之無進展存活期及整體存活期

表4內呈現FAS的PFS之原始分析。圖1內呈現FAS的無進展存活期之卡本-麥爾(Kaplan-Meier)之估計值(顯示高及低劑量派崔單抗(patritumab)+埃羅替尼(erlotinib)vs.安慰劑+埃羅替尼)。表5及圖2內呈現未選擇的FAS之整體存活期(OS)的結果(顯示高及低劑量派崔單抗(patritumab)+埃羅替尼(erlotinib)vs.安慰劑+埃羅替尼)。當與埃羅替尼(erlotinib)加上安慰劑相比，派崔單抗(patritumab)加上埃羅替尼(erlotinib)之組合於全分析集之PFS或OS沒有顯著的改良，以及該研究對於未選擇的ITT母體被認為是負的(negative)。

低劑量及高劑量派崔單抗(patritumab)治療組中反應為CR/PR之主體數目分別為9(12.9%)及5(7.1%)vs安慰劑4(5.6%)。

法來估算中位數之CI。[b]：分層對數秩及分層Cox PH係藉由對先前療法之最佳反應以及組織學亞型(腺癌vs非腺癌)來分層。

實施例3-具有表現高可溶性HRG位準的腫瘤主體之無進展存活期

圖3(顯示高及低劑量派崔單抗(patritumab)+埃羅替尼(erlotinib)vs.安慰劑+埃羅替尼)及圖4(顯示儲集的派崔單抗(patritumab)+埃羅替尼(erlotinib)vs.安慰劑+埃羅替尼)內呈現具有表現高HRG之蛋白質位準，定義為蛋白質濃度>980pg/mL，的腫瘤主體之無進展存活期之卡本-麥爾(Kaplan-Meier)之估計值。

實施例4-具有表現高可溶性HRG位準的腫瘤主體之整體存活期

圖5(顯示高及低劑量派崔單抗(patritumab)+埃羅替尼(erlotinib)vs.安慰劑+埃羅替尼)及圖6(顯示儲集的派崔單抗(patritumab)+埃羅替尼(erlotinib)vs.安慰劑+埃羅替尼)內呈現具有表現高HRG位準之蛋白質位準，定義為蛋白質濃度>980pg/mL，的腫瘤主體子集之初步OS結果。

實施例5-具有表現低可溶性HRG位準的腫瘤主體之效應

與表現高HRG位準的腫瘤主體形成對比，具有表現低HRG位準的腫瘤主體於PFS及OS方面沒有顯示出清楚的治療差異。圖7(顯示儲集的派崔單抗(patritumab)+埃羅替尼(erlotinib)vs.安慰劑+埃羅替尼)內呈現具有表現低HRG之蛋白質位準，定義為蛋白質濃度<980pg/mL，的腫瘤主體之PFS之卡本-麥爾(Kaplan-Meier)之估計值。圖8(顯示儲集的派崔單抗(patritumab)+埃羅替尼(erlotinib)vs.安慰劑+埃羅替尼)內呈現具有表現低HRG之蛋白質位準，定義為蛋白質濃度<980pg/mL，的腫瘤主體之OS之卡本-麥爾(Kaplan-Meier)之估計值。

實施例6-可溶性HRG蛋白質濃度可能的截止值vs.臨床的益處

根據幾個可能的HRG蛋白質濃度之截止值，資料亦用來計算儲集劑量的派崔單抗(patritumab)及安慰劑之間的風險比。表6內顯示出此等風險比。看來較高的HRG表現一般與PFS方面更大的臨床益處有相關。截止(cutoff)從980pg/mL提升至，舉例而言3000pg/mL，會導致由風險比來評斷之平均益處有額外的改良。

實施例7-改良的ELISA方法

使用人類NRG1-b1/HRG1-b1 DuoSet ELISA發展套組(Development kit)(R&D Systems,Inc.，明尼阿波里斯(Minneapolis)，MN；目錄#DY377)來執行ELISA，以偵測血清樣本內可溶性HRG。為了執行分析，添加100μl含有配於PBS之4.0μg/ml小鼠抗人類NRG1-b1的捕獲抗體溶液至96井平盤的各井內。捕獲抗體溶液係藉由用PBS稀釋180倍來製備(諸如，添加5μl套組內的原始溶液至895μl的PBS共8個井)。然後遮蓋平盤並保持於室溫下過夜。

捕獲抗體溶液接而予以抽吸，以及用以下方式來清洗：(i)「對照清洗(control wash)」法，其中使用注射瓶將400μl的清洗緩衝液填滿各井，之後移除清洗緩衝液，以及重複該方法額外的二次，總計三次的清洗，或是(ii)「改良的清洗(improved wash)」法。關於「改良的清洗」法，使用多道移液器將180μl的清洗緩衝液添加至各井，以及透過執行活塞動作20次來使該清洗緩衝液循環直到該清洗緩衝液起泡。然後抽吸該清洗緩衝液，以及用另外的180μl的清洗緩衝液、使用活塞動作20次來重複該循環，直到該清洗緩衝液起泡。接著抽吸該清洗緩衝液，以及執行沖洗的步驟，其中將200μl的清洗緩衝液添加至各井，然後立即進行抽吸，以確保全部的氣泡被移除。因而，改良的清洗法涉及使用活塞動作的二個清洗步驟以及一個沖洗步驟。清洗緩衝液包含配於pH 7.2-7.4的PBS之0.05% TWEEN® 20洗潔劑，以及藉由用蒸餾水稀釋提供的溶液25倍來製備(亦即，4ml的原始溶液+96ml的蒸餾水)。

接而將0.2um過濾過的、配於pH 7.2-7.4的PBS、包含1% BSA溶液之300μl的試劑稀釋液添加至各井，以及遮蓋平盤並保持於室溫下歷時一小時。在此時間期間，製備人表皮生長因子受體調節蛋白標準品(說明如下)。在1小時孵育之後，抽吸該該試劑稀釋液，以及使用如以上所說明的對照清洗法或是改良的清洗法來清洗該等井。

然後添加100μl未經稀釋的血清或血漿(或人表皮生長因子受體調節蛋白標準品)至各井內，之後遮蓋平盤並保持於室溫下歷時2小時。抽吸該樣本(或標準品)，以及使用對照清洗法或是改良的清洗法來清洗該等井。

然後添加配於試劑稀釋液、含有150ng/ml生物素化的山羊抗人類NRG1-b1抗體之100μl偵測抗體溶液至各井內，以及遮蓋平盤並保持於室溫下歷時2小時。偵測抗體溶液係藉由用試劑稀釋液來稀釋原始溶液180倍而製備(諸如，5μl的原始溶液+895μl的試劑稀釋液共8個井)。縱然套組的操作指南需要添加2%熱不活化的正常山羊血清(NGS)，但是此等實驗之偵測抗體溶液不含括NGS。

抽吸該偵測抗體溶液，以及使用對照清洗法或是改良的清洗法來清洗該等井。然後添加100μl的鏈黴抗生物素蛋白-HRP溶液之使用溶液(working solution)至各井，以及讓其於遮蔽條件下在室溫下孵育歷時20分鐘。套組提供的鏈黴抗生物素蛋白-HRP溶液小玻璃瓶含有1.0mL接合(conjugated)至HRP的鏈黴抗生物素蛋白，以及使用濃度係藉由依照小玻璃瓶標籤上之指示、用試劑稀釋液來稀釋小玻璃瓶之內含物而製備。在20分鐘孵育之後，抽吸該鏈黴抗生物素蛋白-HRP溶液，以及使用對照清洗法或是改良的清洗法來清洗該等井。

繼而添加含有H₂O₂(呈色試劑A)及四甲基聯苯胺(呈色試劑B)的1：1混合物之100μl的基質溶液至各井，以及讓其於遮蔽條件下在室溫下孵育歷時20分鐘，之後添加50μL的停止溶液至各井。停止溶液含有2-NH₂SO₄。然後測量各井於OD₄₅₀(以OD₅₇₀校正)之光學密度。

人表皮生長因子受體調節蛋白標準品係製備如下：

使用已公布的套組操作指南(加上對照清洗法)來偵測可溶性HRG的嘗試始終為失敗的。然而，利用該方法加上改良的清洗法，能夠測量血清內不同範圍的可溶性HRG且具有高度再現性。

實施例8-生物標記識別

HRG生物標記之識別係藉由分析抗HER3抗體U3-1287對於活體內各種人類癌症異種移植(xenograft)的抗腫瘤活性，以及分析此等細胞株活體外之HRG表現。各種適應症(indication)的人類腫瘤細胞株係如異種移植一般生長於小鼠體內，以及用抗HER3抗體U3-1287來治療數週。藉由比較對照小鼠和U3-1287治療小鼠的腫瘤體積，來分析腫瘤生長的抑制。人類腫瘤細胞株係於活體外生長且透過西方印漬術(Western blotting)來分析HRG蛋白質表現。表8顯示此分析的結果。西方印漬術所測量的HER3之基礎活性，並未與主要為FISH陽性乳癌模式的U3-1287之活體內效應相關。相比之下，HRG表現與U3-1287之活體內效應非常相關，如同分析的17種模式之15種中可見的。

U3-1287效應係藉由測量活體外磷酸化(Phospho)-HER3及磷酸化-AKT位準的降低來判定。內源性地表現人表皮生長因子受體調節蛋白之細胞株(A549)，以及不具有基礎HER3活化作用但會被外源性人表皮生長因子受體調節蛋白刺激之細胞(CaOV3)，內之基礎HER3磷酸化會被封阻。圖9顯示U3-1287效應的結果。

出人意料地，具有基礎HER3磷酸化但是不表現人表皮生長因子受體調節蛋白之細胞，顯示出對於U3-1287治療沒有效應(BT474基礎)，且更驚人地，此可以被外源添加的人表皮生長因子受體調節蛋白所克服(BT474+HRG)，如圖10中所示。

參引合併

本文中引述的各專利文件及科學文章實際上係以完整揭示併入以作為參考資料。

Claims

一種治療懷有局部晚期或轉移性非小細胞肺癌(NSCLC)腫瘤之人類主體的方法，其包含：評估經診斷具有局部晚期或轉移性NSCLC之人類主體的HRG基因表現之蛋白質位準；以及投與包含抗HER3抗體之治療至HRG基因表現之蛋白質位準評估為高的人類主體。
如請求項1之方法，其中設若從經診斷具有局部晚期或轉移性NSCLC的該主體取得的生物樣本，觀察到蛋白質濃度值高於預定閾(predetermined threshold)，則該HRG基因表現之蛋白質位準評估為高的。
如請求項2之方法，其中該預定閾係以統計方式選出，以使非所欲的偽陽性和偽陰性的作用減到最小。
如請求項1之方法，其中該預定閾值(the predetermined threshold value)係選自於以下所構成的群組：大約0pg/mL、大約980pg/mL、大約1622pg/mL、大約2000pg/mL、大約3000pg/mL、大約4000pg/mL，以及大約5000pg/mL。
如請求項1之方法，其中該主體懷有野生型EGFR(表皮生長因子受體)。
如請求項5之方法，其中該腫瘤已在至少一個先前的全身性療法上有所進展。
如請求項1之方法，其中該HRG基因表現之蛋白質位準係使用ELISA或免疫組織化學技術來評估。
如請求項2之方法，其中該生物樣本包含全血或是血清樣本。
如請求項1之方法，其中該抗HER3抗體係選自於以下所構成的群組：派崔單抗(patritumab)、杜李格單抗(duligotumab)(MEHD-7945A)、西羅巴珠單抗(seribantumab)(MM-121)、MM-111、LJM716、RG-7116、三專一性抗EGFR/ERBB3 zybody(tri-specific anti-EGFR/ERBB3 zybody)、huHER3-8，或是此等中任一者之衍生物或片段。
如請求項1之方法，其中該治療包含抗HER3抗體組合以下列中的一者或多者：(i)HER抑制劑，(ii)化學療法，(iii)放射線，以及(iv)其他的標靶劑(targeted agent)。
如請求項10之方法，其中該HER抑制劑係選自於以下所構成的群組：曲妥珠單抗(trastuzumab)、T-DM1、拉帕替尼(lapatinib)、帕妥珠單抗(pertuzumab)、西妥昔單抗(cetuximab)、帕尼單抗吉非替尼(panitumumab gefitinib)、阿法替尼(afatinib)、達克替尼(dacomitinib)、KD-019以及埃羅替尼(erlotinib)。
如請求項10之方法，其中該化學療法係選自於以下所構成的群組：順鉑(cisplatin)、卡鉑(carboplatin)、吉西他濱(gemcitabine)、培美曲塞(pemetrexed)、伊立替康(irinotecan)、5-氟尿嘧啶(5-fluoruracil)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、多烯紫杉醇(docetaxel)，以及卡培他濱 (capecitabine)。
一種治療懷有局部晚期或轉移性非小細胞肺癌(NSCLC)腫瘤之人類主體的方法，其包含：評估經診斷具有局部晚期或轉移性NSCLC之人類主體的HRG基因表現之蛋白質位準；以及HRG基因表現之蛋白質位準評估為低的人類主體，拒給(withholding)包含抗HER3抗體之治療。
如請求項13之方法，其中設若從經診斷具有局部晚期或轉移性NSCLC的該主體取得的生物樣本，觀察到蛋白質濃度值位於(at)預定閾或者低於預定閾，則該HRG基因表現之蛋白質位準評估為低的。
如請求項14之方法，其中該預定閾係以統計方式選出，以使非所欲的偽陽性和偽陰性的作用減到最小。
如請求項14之方法，其中該預定閾值(the predetermined threshold value)係選自於以下所構成的群組：0pg/mL、大約980pg/mL、大約1622pg/mL、大約2000pg/mL、大約3000pg/mL、大約4000pg/mL，以及大約5000pg/mL。
如請求項13之方法，其中該主體懷有野生型EGFR。
如請求項17之方法，其中該腫瘤已在至少一個先前的全身性療法上有所進展。
如請求項13之方法，其中該HRG基因表現之蛋白質位準係使用ELISA或免疫組織化學技術來評估。
如請求項14之方法，其中該生物樣本包含全血或是血清樣本。
如請求項13之方法，其中拒給的該治療(the treatment withheld)包含抗HER3抗體組合以下列中的一者或多者：(i)HER抑制劑，(ii)化學療法，(iii)放射線，以及(iv)其他的標靶劑。
如請求項13之方法，其進一步包含用HER抑制劑來治療HRG基因表現之蛋白質位準評估為低的人類主體，該HER抑制劑係選自於以下所構成的群組：曲妥珠單抗(trastuzumab)、T-DM1、拉帕替尼(lapatinib)、帕妥珠單抗(pertuzumab)、西妥昔單抗(cetuximab)、帕尼單抗吉非替尼(panitumumab gefitinib)、阿法替尼(afatinib)、達克替尼(dacomitinib)、KD-019以及埃羅替尼(erlotinib)。
如請求項13之方法，其進一步包含用化學療法來治療HRG基因表現之蛋白質位準評估為低的人類主體，該化學療法係選自於以下所構成的群組：順鉑(cisplatin)、卡鉑(carboplatin)、吉西他濱(gemcitabine)、培美曲塞(pemetrexed)、伊立替康(irinotecan)、5-氟尿嘧啶(5-fluoruracil)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、多烯紫杉醇(docetaxel)，以及卡培他濱(capecitabine)。
一種促進評估HRG基因表現之蛋白質位準的套組。
一種識別經診斷具有局部晚期或轉移性非小細胞肺癌(NSCLC)之人類病人的方法，該病人可能從包含抗HER3抗體之治療獲益，該方法包含：從經診斷具有局部晚期或轉移性NSCLC的人類病人獲得一生物樣本；使用該樣本，判定該人類病人的HRG基因表現之蛋白質位準的值；以及記錄判定的該值。
如請求項25之方法，其進一步包含評估是否判定的該值係低於預定閾值、位於(at)預定閾值，或者高於預定閾值。
如請求項26之方法，其中該預定閾值係選自於以下所構成的群組：0pg/mL、大約980pg/mL、大約1622pg/mL、大約2000pg/mL、大約3000pg/mL、大約4000pg/mL，以及大約5000pg/mL。
如請求項26之方法，其進一步包含，設若判定的該值高於該預定閾值，則該HRG基因表現之蛋白質位準被定特徵(characterizing)為高的。
如請求項26之方法，其進一步包含，設若判定的該值位於(at)該預定閾值或者低於該預定閾值，則該HRG基因表現之蛋白質位準被定特徵為低的。
如請求項25之方法，其進一步包含向主治醫師或其他開業醫師報告判定的該值。
如請求項25之方法，其中該樣本包含全血或是血清樣本。
如請求項25之方法，其中該主體不懷有EGFR感應性突變(sensitizing mutation)。
如請求項25之方法，其中該主體懷有野生型EGFR。
如請求項33之方法，其中該腫瘤已在至少一個先前的全身性療法上有所進展。
如請求項25之方法，其中該治療包含抗HER3抗體組合以下列中的一者或多者：(i)HER抑制劑，(ii)化學療法，(iii)放射線，以及(iv)其他的標靶劑。
一種執行ELISA的方法，其包括以下循序的步驟：使一固體表面與數個溶液接觸，該數個溶液依序各包含捕獲抗體、阻斷劑、懷疑含有分析物的樣本、偵測抗體以及酵素結合物(enzyme conjugate)，其中該固體表面在各循序的步驟之後經歷清洗方法，該清洗方法包含：(a)使清洗緩衝液快速循環於該固體表面上及離開該固體表面(on and off the solid surface)直到觀察到氣泡，於此時移去該循環的清洗緩衝液；(b)選擇性地使用新鮮的清洗緩衝液來重複步驟(a)；以及(c)用新鮮的清洗緩衝液來沖洗該固體表面；條件是在該清洗方法完成之後接續酵素結合循序的步驟，該固體表面與包含酵素基質的溶液接觸。
如請求項36之方法，其進一步包含添加停止溶液至該固體表面。
如請求項37之方法，其進一步包含獲得分光光度讀數，以得到該樣本內存在分析物的量之分量(measure)，設若有的話。
如請求項36之方法，其中該清洗緩衝液包含界面活性劑。
如請求項39之方法，其中該清洗緩衝液包含磷酸鹽緩衝液鹽水(PBS)。
如請求項40之方法，其中該清洗緩衝液具有範圍從7.2-7.4之pH。
如請求項36之方法，其中該循環步驟包含使用「活塞」動作來施用該清洗緩衝液於該固體表面上及抽吸該清洗緩衝液離開該固體表面(applying and aspirating the wash buffer on and off the solid surface)。
如請求項42之方法，其中該清洗緩衝液循環於該固體表面上及離開該固體表面(on and off the solid surface)20次或是更多次。
如請求項36之方法，其中該清洗方法的該沖洗步驟實質移除該固體表面上全部的氣泡。
如請求項36之方法，其中該包含該偵測抗體之溶液排除正常山羊血清。
如請求項42之方法，其中藉由使用吸量管來促進該「活塞」動作。
如請求項36之方法，其中該捕獲抗體及該偵測抗體專一地辨識人類人表皮生長因子受體調節蛋白(heregulin)(HRG)。
如請求項36之方法，其中該包含該樣本之溶液包含未稀釋的血清或未稀釋的血漿。
如請求項47之方法，其中該捕獲抗體為小鼠抗人類HRG抗體。
如請求項49之方法，其中該偵測抗體為生物素化的山羊抗人類HRG抗體。
如請求項50之方法，其中該酵素結合物為鏈黴抗生物素蛋白-山葵過氧化酶(streptavidin-horse radish peroxidase)。
如請求項51之方法，其中該酵素基質為過氧化氫及四甲基聯苯胺之混合物。
如請求項49之方法，其中該固體表面在65℉至80℉範圍內的溫度下，與該包含該捕獲抗體之溶液接觸歷時至少8小時。
如請求項36之方法，其中該包含該阻斷劑之溶液包含配於7.2至7.4範圍內的pH之磷酸鹽緩衝液鹽水內的1%牛血清白蛋白。
如請求項54之方法，其中該固體表面在大約65℉至80℉範圍內的溫度下，與該包含該阻斷劑之溶液接觸歷時至少一小時。
如請求項48之方法，其中該固體表面在大約65℉至80℉範圍內的溫度下，與該包含該樣本之溶液接觸歷時大約2小時。
如請求項50之方法，其中該固體表面在大約65℉至80℉範圍內的溫度下，與該包含該偵測抗體之溶液接觸歷時大約2小時。
如請求項51之方法，其中該固體表面在大約65℉至80℉範圍內的溫度下，與該包含該酵素結合物之溶液接觸歷時大約20分鐘。
如請求項52之方法，其中該固體表面在大約65℉至80℉範圍內的溫度下，與該包含該酵素基質之溶液接觸歷時大約20分鐘。
如請求項36之方法，其中該固體表面為包含一個或更多個井的微量平盤。
如請求項43之方法，其中在執行該沖洗步驟(c)之前，執行該循環步驟(a)二次。
如請求項40之方法，其中該界面活性劑為聚乙二醇山梨醇酐單月桂酸酯(polyethylene glycol sorbitan monolaurate)。
如請求項1至35中任一項之方法，其中以隨機化的臨床資料為基礎，來評估HRG基因表現為高的。
一種接收(receiving)或接受(undergoing)局部晚期或轉移性非小細胞肺癌(NSCLC)腫瘤之治療或是由此戒絕(abstaining therefrom)治療的方法，其包含：提供自體的組織樣本或同意拿取自體的組織樣本(taking of same)，以促進經診斷具有局部晚期或轉移性NSCLC之人類主體之HRG基因表現之蛋白質位準的評估；以及設若HRG基因表現之蛋白質位準評估為高的，則接收或接受包含抗HER3抗體之治療，或是設若HRG基因表現之蛋白質位準評估為低的，則戒絕包含抗HER3抗體之治療。
一種選定(electing)用於局部晚期或轉移性非小細胞肺癌(NSCLC)腫瘤之治療的方法，其包含：經診斷具有局部晚期或轉移性NSCLC之人類主體接收HRG基因表現之蛋白質位準的評估；以及設若HRG基因表現之蛋白質位準評估為低的，則選定為拒給或戒絕包含抗HER3抗體之治療，或是設若HRG基因表現之蛋白質位準評估為高的，則選定為接收或接受包含抗HER3抗體之治療。
一種識別經診斷具有局部晚期或轉移性非小細胞肺癌(NSCLC)之人類病人的方法，該病人可能從包含抗HER3抗體之治療獲益，該方法包含：從經診斷具有局部晚期或轉移性NSCLC的人類病人接收一生物樣本；使用該樣本，判定該人類病人的HRG基因表現之蛋白質位準的值；以及選擇性地，記錄判定的該值。
一種治療懷有局部晚期或轉移性非小細胞肺癌(NSCLC)腫瘤之人類主體的方法，其包含：下命令評估經診斷具有局部晚期或轉移性NSCLC之人類主體之HRG基因表現之蛋白質位準；以及對HRG基因表現之蛋白質位準評估為高的該人類主體，投與包含抗HER3抗體之治療。
一種拒給懷有局部晚期或轉移性非小細胞肺癌(NSCLC)腫瘤之人類主體治療的方法，其包含：下命令評估經診斷具有局部晚期或轉移性NSCLC之人類主體之HRG基因表現之蛋白質位準；以及對HRG基因表現之蛋白質位準評估為低的該人類主體，拒給包含抗HER3抗體之治療。
如請求項2之方法，其中該預定閾值係選自於以下所構成的群組：0pg/mL、大約980pg/mL、大約1622pg/mL、大約2000pg/mL、大約3000pg/mL、大約4000pg/mL、大約5000pg/mL、大約6000pg/mL、大約7000pg/mL、大約8000pg/mL、大約9000pg/mL、大約10000pg/mL、大約11000pg/mL、大約12000pg/mL、大約13000pg/mL、大約14000pg/mL、大約15000pg/mL、大約16000pg/mL、大約17000pg/mL、大約18000pg/mL、大約19000pg/mL、大約20000pg/mL、大約22000pg/mL、大約24000pg/mL、大約26000pg/mL、大約28000pg/mL、大約30000pg/mL、大約35000pg/mL、大約40000pg/mL、大約50000pg/mL、大約60000pg/mL、大約70000pg/mL、大約80000pg/Lm、大約90000pg/mL，以及大約100000pg/mL。
如請求項14之方法，其中該預定閾值係選自於以下所構成的群組：0pg/mL、大約980pg/mL、大約1622pg/mL、大約2000pg/mL、大約3000pg/mL、大約4000pg/mL、大約5000pg/mL、大約6000pg/mL、大約7000pg/mL、大約8000pg/mL、大約9000pg/mL、大約10000pg/mL、大約11000pg/mL、大約12000pg/mL、大約13000pg/mL、大約14000pg/mL、大約15000pg/mL、大約16000pg/mL、大約17000pg/mL、大約18000pg/mL、大約19000pg/mL、大約20000pg/mL、大約22000pg/mL、大約24000pg/mL、大約26000pg/mL、大約28000pg/mL、大約30000pg/mL、大約35000pg/mL、大約40000pg/mL、大約50000pg/mL、大約60000pg/mL、大約70000pg/mL、大約80000pg/Lm、大約90000pg/mL，以及大約100000pg/mL。
如請求項26之方法，其中該預定閾值係選自於以下所構成的群組：0pg/mL、大約980pg/mL、大約1622pg/mL、大約2000pg/mL、大約3000pg/mL、大約4000pg/mL、大約5000pg/mL、大約6000pg/mL、大約7000pg/mL、大約8000pg/mL、大約9000pg/mL、大約10000pg/mL、大約11000pg/mL、大約12000pg/mL、大約13000pg/mL、大約14000pg/mL、大約15000pg/mL、大約16000pg/mL、大約17000pg/mL、大約18000pg/mL、大約19000pg/mL、大約20000pg/mL、大約22000pg/mL、大約24000pg/mL、大約26000pg/mL、大約28000pg/mL、大約30000pg/mL、大約35000pg/mL、大約40000pg/mL、大約50000pg/mL、大約60000pg/mL、大約70000pg/mL、大約80000pg/Lm、大約90000pg/mL，以及大約100000pg/mL。
如請求項6之方法，其中供(for)評估或用於(with)評估HRG基因表現之腫瘤組織或片段已經在進行任何療法之前先從該主體移除。
如請求項18之方法，其中供評估或用於評估HRG基因表現之腫瘤組織或片段已經在進行任何療法之前先從該主體移除。
如請求項34之方法，其中供評估或用於評估HRG基因表現之腫瘤組織或片段已經在進行任何療法之前先從該主體移除。