TW201536789A - Ｃ型肝炎病毒抑制劑 - Google Patents

Ｃ型肝炎病毒抑制劑 Download PDF

Info

Publication number
TW201536789A
TW201536789A TW103125903A TW103125903A TW201536789A TW 201536789 A TW201536789 A TW 201536789A TW 103125903 A TW103125903 A TW 103125903A TW 103125903 A TW103125903 A TW 103125903A TW 201536789 A TW201536789 A TW 201536789A
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
compound
etoac
group
mmol
esims
Prior art date
Application number
TW103125903A
Other languages
English (en)
Inventor
Yao-Ling Qiu
Hui Cao
xiao-wen Peng
Xuri Gao
Yat Sun Or
Zachary Kevin Sweeney
Original Assignee
Enanta Pharm Inc
Novartis Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Enanta Pharm Inc, Novartis Ag filed Critical Enanta Pharm Inc
Publication of TW201536789A publication Critical patent/TW201536789A/zh

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D519/00—Heterocyclic compounds containing more than one system of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system not provided for in groups C07D453/00 or C07D455/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/13—Amines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/4164—1,3-Diazoles
    • A61K31/4178—1,3-Diazoles not condensed 1,3-diazoles and containing further heterocyclic rings, e.g. pilocarpine, nitrofurantoin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/4164—1,3-Diazoles
    • A61K31/4184—1,3-Diazoles condensed with carbocyclic rings, e.g. benzimidazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/4164—1,3-Diazoles
    • A61K31/4188—1,3-Diazoles condensed with other heterocyclic ring systems, e.g. biotin, sorbinil
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/425—Thiazoles
    • A61K31/427—Thiazoles not condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/7056—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing five-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/21—Interferons [IFN]
    • A61K38/212—IFN-alpha
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/21—Interferons [IFN]
    • A61K38/215—IFN-beta
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/21—Interferons [IFN]
    • A61K38/217—IFN-gamma
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/14—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
    • C07D491/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D491/10—Spiro-condensed systems
    • C07D491/107—Spiro-condensed systems with only one oxygen atom as ring hetero atom in the oxygen-containing ring

Abstract

本發明揭示式(I)化合物及其醫藥上可接受之鹽、酯或前藥， □ 其抑制含RNA病毒、尤其C型肝炎病毒(HCV)。因此，本發明化合物干擾該C型肝炎病毒之生命週期且亦可用作抗病毒劑。本發明另外係關於包括上述化合物之醫藥組合物，其用於投與患有HCV感染之個體。本發明亦係關於藉由投與包括本發明該等化合物之醫藥組合物來治療個體之HCV感染之方法。

Description

C型肝炎病毒抑制劑 相關申請案
本申請案主張2014年7月29日提出申請之美國臨時申請案第61/859,582號之權利。上述申請案之全部教示內容以引用方式併入本文中。
本發明係關於新穎抗病毒劑。更具體而言，本發明係關於可抑制藉由C型肝炎病毒(HCV)編碼之NS5A蛋白之功能之化合物、包括該等化合物之組合物、抑制HCV病毒複製之方法、治療或預防HCV感染之方法及製備化合物之製程。
HCV感染係全世界人類肝病之主要病因。在美國，據估計，450萬美國人慢性感染HCV。儘管僅30%之急性感染係症狀性，但高於85%之經感染個體會發生慢性、持久性感染。據估計，美國在1997年之HCV感染治療成本為54.6億美元。在世界上，超過2億人估計慢性感染。HCV感染造成所有慢性肝病之40-60%及所有肝移植體之30%。在美國，慢性HCV感染造成所有肝硬化、晚期肝病及肝癌之30%。
因病毒表面抗原具有高度可變性、存在多種病毒基因型且顯示免疫性特異性，故在不久的將來不可能研發成功之疫苗。α-干擾素(單獨或與利巴韋林(ribavirin)組合)自其批准之日既已廣泛用於治療慢性HCV感染。然而，不良副效應通常與此治療有關：流感樣症狀、白 血球減少症、血小板減少症、抑鬱以及由利巴韋林誘導之貧血(Lindsay,K.L.(1997)Hepatology 26(增刊1)：71S-77S)。與由其他5種主要HCV基因型引起之感染相比，此療法對由HCV基因型1引起之感染(其構成發達市場中約75%之所有HCV感染)之有效性仍較小。不幸的是，僅約50-80%之患者對此治療具有反應(藉由血清HCV RNA含量減小及肝酶正規化所量測)，且50-70%之反應者在停止治療6個月內復發。隨著聚乙二醇化干擾素(Peg-IFN)之引入，初始反應率及持續反應率皆得以實質上改良。然而，具有基因型1之患者中之與組合療法有關之副效應及受損反應存在改良此疾病管控的可能。
HCV首次在1989年藉由分子選殖鑑別(Choo,Q-L等人(1989)Science 244：359-362)，其現廣泛接受為輸液後非A、非B肝炎之最常見致病因子(NANBH)(Kuo,G等人(1989)Science 244：362-364)。因基因組結構及序列同源性，此病毒可指定為黃病毒科(Flaviviridae)家族中之新屬。如同黃病毒科之其他成員(例如蟲媒病毒(例如黃熱病毒及登革熱病毒(Dengue virus)類型1-4)及瘟病毒(例如牛病毒性腹瀉病毒、邊緣病病毒及典型豬瘟熱病毒)(Choo,Q-L等人(1989)Science 244：359-362；Miller,R.H.及R.H.Purcell(1990)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87：2057-2061))，HCV係含有正極性單鏈RNA分子之被膜病毒。HCV基因組具有大約9.6千鹼基(kb)且具有擁有大約340鹼基並用作內核糖體進入位點(IRES)之長高度保守非遮蓋、5'非轉譯區域(NTR)(Wang CY等人「An RNA pseudoknot is an essential structural e1ement of the internal ribosome entry site located within the hepatitis C virus 5' noncoding region RNA」-A Publication of the RNA Society.1(5)：526-537,1995年7月)。在此要素之後係編碼單一長開放讀碼框(ORF)(其編碼包括結構及非結構病毒蛋白之約3000個胺基酸之多肽)之區域。
在進入細胞之細胞質之後，此RNA直接轉譯成具有約3000個胺基酸且包括結構病毒蛋白及非結構病毒蛋白之多肽。此大多肽隨後由宿主及病毒編碼蛋白酶之組合處理成個別結構及非結構蛋白(Rice,C.M.(1996)，B.N.Fields,D.M.Knipe及P.M.Howley(編輯)Virology第2版，第931-960頁：Raven Press,N.Y.)。存在三種結構蛋白C、E1及E2。P7蛋白具有未知功能且包括高度可變序列。存在若干種非結構蛋白。NS2係與NS3蛋白之一部分結合而行使功能之鋅依賴性金屬蛋白酶。NS3納入兩種催化功能(自其與NS2之締合體分離得到)：N-末端處之絲胺酸蛋白酶(其需要NS4A作為輔因子)及羧基末端處之ATP酶依賴性解旋酶功能。NS4A與絲胺酸蛋白酶密切相關但並非其共價輔因子。NS5A係以基部磷酸化(56kDa)及高度磷酸化(58kDa)之形式觀察到之膜錨定磷蛋白。儘管尚未完全闡釋功能，但據信，NS5A在病毒複製中較為重要。HCV之NS5B蛋白(591個胺基酸，65kDa)of(Behrens,S.E.等人(1996)EMBO J.1512-22)編碼RNA依賴性RNA聚合酶(RdRp)活性且含有存在於其他RNA病毒聚合酶中之規則基序。NS5B蛋白在內-型(在1b分離物中約95-98%胺基酸(aa)一致性)及間-型(在基因型1a及1b分離物之間約85% aa一致性)方面極度保守。用於生成感染性子代病毒粒子之HCV NS5B RdRp活性之必要性已在黑猩猩中得以正式證實(A.A.Kolykhalov等人(2000)Journal of Virology,74(4)：2046-2051)。因此，抑制NS5B RdRp活性(抑制RNA複製)預計可用於治療HCV感染。
期望選擇性抑制HCV病毒複製之可用於治療HCV感染患者之化合物。特定而言，期望有效抑制NS5A蛋白功能之化合物。HCVNS5A蛋白闡述於(例如)下列參考文獻中：S.L.Tan等人，Virology,284：1-12(2001)；K.-J.Park等人，J.Biol.Chem.,30711-30718(2003)；T.L.Tellinghuisen等人，Nature,435,374(2005)；R.A.Love 等人，J.Virol,83,4395(2009)；N.Appel等人，J.Biol.Chem.,281,9833(2006)；L.Huang,J.Biol.Chem.,280,36417(2005)；C.Rice等人，W02006093867；R.Hamatake等人，Ann.Rep.Med.Chem.47,331(2012)；D.G.Cordek等人，Drugs of the Future,36,691(2011)；U.Schmitz等人，Recent Patents on Anti-Infective Drug Discovery,3,77(2008)。
達卡他韋(BMS-790052)係臨床研發中之最高級NS5A抑制劑。已顯示在各種階段2研究中對尤其患有基因型1b(GT 1b)感染之未治療患者具有顯著病毒阻抑。達卡他韋(Daclatasvir)對患有GT 1a(GT 1a)感染之患者之臨床反應通常較不明顯。舉例而言，在探究性研究(A.Lok等人，61st AASLD,The Liver Meeting,Boston,MA，2010年10月29日-11月2日，LB-8)，在向11名先前無反應之GT 1患者投用達卡他韋及NS3蛋白酶抑制劑阿娜普韋(Asunaprevir)時，僅4名患者達到SVR12之主要終點(在治療之後持續病毒學反應12週)。治療失敗之主要原因係病毒突破，其出現於6名感染GT 1a HCV之患者中。與之相比，此組中兩名感染GT 1b之患者皆具有SVR12。最新公開研究亦證實，可達成針對GT 1b之顯著效能(K.Chayama等人，Hepatology,55,742(2012))。此與達卡他韋針對GT 1b-NS5A抗性變體及GT-1a NS5A抗性變體之相對活體外效力一致。已顯示，NS5A抑制劑相關突變主要出現於NS5A蛋白之結構域I中之殘基位置28、30、31及93處(M.Gao等人，Nature,465,96(2010)；R.A.Fridell等人，Antimicrob.Agents Chemother.54,3641(2010)；R.E.Nettles等人，Hepatolgy,54,1956(2011))。最突出突變影響Tyr93。重要的是，此位點處之突變賦予若干NS5A抑制劑交叉抗性且在達卡他韋情形下將藥物敏感性減小約20倍(對於基因型1b亞基因組複製子)及約1,800倍(對於基因型1a亞基因組複製子而言)。
在另一研究中(M.Sulkowski等人，47th EASL Congress,Barcelona,Spain，2012年4月18-22日，P-1422)，在向GT 1、2或3未治療患者投用達卡他韋及核苷酸NS5B抑制劑GS-7977時，GT2及3小組中之治療反應率明顯低於GT1小組。在3天單一療法概念證據研究中，在將另一NS5A抑制劑IDX719投與GT 1-4未治療患者時，發現GT 2小組中之HCV病毒RNA減小顯著低於GT 1、3及4小組(http：//www.idenix.com/hcv/IDX719_HCVClinPharmMtg_FINAL%206%2027%2012.pdf)。該等臨床發現與指示該等藥物針對某些HCV基因型(例如GT 2a-J6菌株)之效力較小之活體外數據一致。舉例而言，據報導，達卡他韋針對GT 2a-J6之效力(EC50=7200pM)遠小於GT1a(EC50=8pM)(M.Gao等人，46th EASL Congress,Berlin,Germany，2011年3月30日-4月，P-787)。HCV GT 2a-J6菌株在L31M處具有點取代，其在臨床上涉及據估計80%之GT 2a感染患者群體，此係基於來自EU HCV序列數據庫euHCVdb(歐洲C型肝炎病毒數據庫(European hepatitis C virus database)，亦參見C.Combet等人，Nucleic Acids Res.2007,35：D363-D366)之序列比對分析。
基於前文，顯著需要鑑別能夠抑制HCV之化合物，尤其係有效抵抗GT 1a抗性變體且針對各種HCV基因型具有活性之化合物。
本發明部分地係關於如下意外發現：具有含有經螺-氧雜環烷基(例如螺四氫呋喃基(THF)取代之吡咯啶基團或螺-四氫吡喃基(THP)取代之吡咯啶基團)取代之吡咯啶基團之各種支架之某些化合物可針對對許多NS5A抑制劑具有抗性的GT 1a變體具有強力活性且針對若干HCV基因型(包含GT 2a-J6病毒)具有活性。令人吃驚的是，該等化合物之抗病毒效力及藥物動力學性質高度取決於螺取代脯胺酸之立體化學及身份。
在一實施例中，該化合物具有螺-四氫呋喃基(THF)取代之吡咯啶且與相應參考化合物相比針對某些HCV GT 1a抗性變體(例如M28T、Q30R、L31V、Y93C及Y93H)具有增加之活性。
在另一實施例中，該化合物具有螺-四氫吡喃基(THP)取代之吡咯啶且與相應參考化合物相比針對某些HCV GT 1a抗性變體(例如M28T、Q30R、L31V、Y93C及Y93H)具有增加之活性。
在本發明中意外發現，含有某些螺-THF或螺-THP取代之吡咯啶且在螺碳中心處具有某一立體化學之化合物(例如在螺碳中心處具有(S)-立體化學之化合物)可與在螺碳中心處具有(R)-立體化學之相應化合物相比針對某些HCV GT 1a抗性變體(例如M28T、Q30R、L31V、Y93C)具有較佳活性。
在本發明中亦意外發現，含有某些螺-THP取代之吡咯啶且在螺碳中心處具有某一立體化學之化合物(例如在螺碳中心處具有(S)-立體化學之化合物)可與在螺碳中心處具有(R)-立體化學之相應化合物相比針對某些HCV基因型(例如GT 2a-J6及GT 3a)具有較佳活性。本發明係關於下文所代表之新穎抗病毒化合物、包括該等化合物之醫藥組合物及使用該等化合物治療或預防需要療法之個體之病毒(尤其HCV)感染之方法。本發明化合物干擾C型肝炎病毒之生命週期且可用作抗病毒劑。
在一實施例中，本發明提供式(I)化合物：
或其醫藥上可接受之鹽，其中：A及Q各自獨立地選自由視情況經取代之苯基組成之群； 另一選擇為，A及Q一起形成視情況經取代之三環芳基或視情況經取代之三環雜芳基；G及W各自獨立地係視情況經取代之咪唑基；其中該等咪唑基C2附接至吡咯啶環；另一選擇為，G及A或Q及W可一起形成視情況經取代之三環，例 如；其中Y係-CH=CH-、-CH2O-、-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-OCH2CH2-或-CH2OCH2-；又一選擇為，G、A及Q或A、Q及W可一起形成視情況經取代之 五環，例如；其中Z在每次出現時獨立地選自由以下組成之群：-CH=CH-、-CH2O-及-CH2CH2；X係選自由-C(R11)2-及-C(R11)2C(R11)2-組成之群；較佳地，X係-C(R11)2-；更佳地，X係-(CH2)2-；R1、R3及R11在每次出現時各自獨立地係氫或視情況經取代之C1-C4烷基；R5在每次出現時獨立地係氫、鹵素、視情況經取代之O(C1-C4烷基)、視情況經取代之C3-C8環烷基或視情況經取代之C1-C4烷基；另一選擇為，兩個孿位R5基團可與其所附接之碳或矽原子一起形成螺環、視情況經取代之C3-C8環烷基或視情況經取代之雜環；較佳地，兩個孿位R5基團可與其所附接之碳原子一起形成螺環、視情況經取代之環丙基、四氫呋喃基或四氫吡喃基；又一選擇為，鄰位R3及R5可與其所附接之碳原子一起形成稠合且視情況經取代之C3-C8環烷基或稠合且視情況經取代之雜環；較佳地，R5及R3與其所附接之碳原子一起形成稠合且視情況經取代之環戊基或環己基；且 R6在每次出現時獨立地係經一或多個選自以下之基團取代之C1-C8烷基：胺基、經保護胺基、N(C1-C4烷基)2、羥基、O(C1-C4烷基)、苯基或四氫吡喃基。較佳地，每一R6獨立地係經以下基團取代之C1-C8烷基：一個選自胺基、經保護胺基及N(C1-C4烷基)2之基團；或一個選自胺基、經保護胺基及N(C1-C4烷基)2之基團；及一個選自羥基、O(C1-C4烷基)、苯基及四氫吡喃基之基團。在某些實施例中，兩個R6基團相同。在其他實施例中，兩個R6基團不同。
在較佳實施例中，螺碳原子之立體化學為(S)-。在下文使用箭頭指定螺碳原子。
上述每一較佳基團可與一個、任一或所有其他較佳基團一起組合。
在較佳實施例中，HCV基因型1a抗性突變體變體係選自M28T、Q30R、L31V、Y93C及Y93H。
在另一實施例中，本發明提供式I化合物或其醫藥上可接受之鹽。
在另一態樣中，本發明提供一種醫藥組合物，其包括治療有效量之本發明之化合物或化合物組合或其醫藥上可接受之鹽與醫藥上可接受之載劑或賦形劑之組合。
在又一態樣中，本發明提供抑制含RNA病毒之複製之方法，其包括使該病毒與治療有效量之本發明之化合物或化合物組合或其醫藥上可接受之鹽接觸。特定而言，本發明係關於抑制HCV複製之方法。
在再一態樣中，本發明提供治療或預防由含RNA病毒引起之感 染之方法，其包括向需要治療之患者投與治療有效量之本發明之化合物或化合物組合或其醫藥上可接受之鹽。特定而言，本發明係關於治療或預防由HCV引起之感染之方法。
本發明之又一態樣提供如下文所定義本發明之化合物或化合物組合或其治療上可接受之鹽的用途，其用以製備用於治療或預防由含RNA病毒、具體而言HCV引起之感染之醫藥。
圖展示使用化合物16或達卡他韋(DCV)處理HCV基因型1b複製子細胞之效應：使用結晶紫染色在3週之後以濃度2×、10×、100×或1000×抑制劑(化合物16或達卡他韋)EC50目測存活複製子細胞。
本發明係關於如上文所闡釋之式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽。
本發明化合物可用於抑制含RNA病毒(包含(例如)HCV)之複製。可用於抑制含RNA病毒之複製及/或用於治療或預防HCV感染之其他化合物闡述於共同待決之以下申請案中：2010年2月9日提出申請且標題為「Linked Dibenzimidiazole Derivatives」之美國申請案第12/702,673號；2010年2月9日提出申請且標題為「Linked Dibenzimidiazole Derivatives」之美國申請案第12/702,692號；2010年2月9日提出申請且標題為「Linked Dibenzimidiazole Derivatives」之美國申請案第12/702,802號；2010年2月17日提出申請且標題為「Linked Diimidazole Antivirals」之美國申請案第12/707,190號；2010年2月17日提出申請且標題為「Linked Diimidazole Derivatives」之美國申請案第12/707,200號；2010年2月17日提出申請且標題為「Hepatitis C Virus Inhibitors」之美國申請案第12/707,210號；2010年3月1日提出申請且標題為「Novel Benzimidazole Derivatives」之美國 申請案第12/714,583號；及2010年3月1日提出申請且標題為「Hepatitis C Virus Inhibitors」之美國申請案第12/714,576號；2010年6月15日提出申請且標題為「Hepatitis C Virus Inhibitors」之美國申請案第12/816,148號；2010年6月15日提出申請且標題為「Hepatitis C Virus Inhibitors」之美國申請案第12/816,171號；2010年9月10日提出申請且標題為「Hepatitis C Virus Inhibitors」之美國申請案第12/879,025號；2010年9月10日提出申請且標題為「Hepatitis C Virus Inhibitors」之美國申請案第12/879,026號；2010年9月10日提出申請且標題為「Hepatitis C Virus Inhibitors」之美國申請案第12/879,027號；2010年9月10日提出申請且標題為「Hepatitis C Virus Inhibitors」之美國申請案第12/879,028號；2010年9月10日提出申請且標題為「Hepatitis C Virus Inhibitors」之美國申請案第12/879,029號；2010年9月10日提出申請且標題為「Hepatitis C Virus Inhibitors」之美國申請案第12/879,031號；2010年12月14日提出申請且標題為「Hepatitis C Virus Inhibitors」之美國申請案第12/967,486號；2010年4月9日提出申請且標題為「Hepatitis C Virus Inhibitors」之美國臨時申請案第61/322,438號；2010年6月4日提出申請且標題為「Hepatitis C Virus Inhibitors」之美國臨時申請案第61/351,327號；2010年8月12日提出申請且標題為「Hepatitis C Virus Inhibitors」之美國臨時申請案第61/372,999號；2010年11月19日提出申請且標題為「Hepatitis C Virus Inhibitors」之美國臨時申請案第61/415,447號；且每一者之內容以引用方式明確併人本文中。
如上所述，研發抗病毒劑之一般策略係使病毒複製必不可少之經病毒編碼之蛋白質(包含NS5A)鈍化。闡述HCV NS5A抑制劑之合成之相關專利揭示內容係：US 2009/0202478；US 2009/0202483；US 2010/0233120；US 2010/0260708；WO 2004/014852；WO 2006/079833；WO 2006/133326；WO 2007/031791；WO 2007/070556；WO 2007/070600；WO 2007/082554；WO 2008/021927；WO 2008/021928；WO 2008/021936；WO 2008/048589；WO 2008/064218；WO 2008/070447；WO 2008/144380；WO 2008/154601；WO 2009/020825；WO 2009/020828；WO 2009/034390；WO 2009/102318；WO 2009/102325；WO 2009/102694；WO 2010/017401；WO 2010/039793；WO 2010/065668；WO 2010/065674；WO 2010/065681；WO 2010/091413；WO 2010/096777；WO 2010/096462；WO 2010/096302；WO 2010/099527；WO 2010/111483；WO 2010/111534；WO 2010/117635；WO 2010/111673；WO 2010/117704；WO 2010/132538；WO 2010/132601；WO 2010/138488；WO 2010/138368；WO 2010/138790；WO 2010/138791；及WO 2010/148006，每一者之內容以引用方式明確併入本文中。
在一實施例中，本發明係關於式(I)化合物及其醫藥上可接受之鹽。
在又一實施例中，式(I)化合物由式(II)代表：
或其醫藥上可接受之鹽，其中X1在每次出現時獨立地選自由以下組成之群：不存在、-CH=CH-、-CH2O-、-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-OCH2CH2-及-CH2OCH2-；且R1、R3、R5、R6及X係如先前所定義。在某些實施例中，存在至少一個X1。
應理解，在X1不存在時，其由附接至連結至本文所陳述任一式中該等變量中之一者之每一碳原子的氫原子代替。
在再一實施例中，式(I)化合物由式(III)代表：
或其醫藥上可接受之鹽，其中X2在每次出現時獨立地選自由以下組成之群：-CH2-、O、-CH=CH-、-CH2O-、-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-OCH2CH2-及-CH2OCH2-；且R1、R3、R5、R6及X係如先前所定義。
在再一實施例中，式(I)化合物由式(IVa)或(IVb)代表：
或其醫藥上可接受之鹽，其中X3在每次出現時各自獨立地選自由以下組成之群：-CH=CH-、-CH2O-及-CH2CH2；且R1、R3、R5、R6及X係如先前所定義。
在再一實施例中，式(I)化合物由式(Va)至(Vc)中之一者代表：
或其醫藥上可接受之鹽，其中R1、R3、R5、R6、X3及X係如先前所定義。
在再一實施例中，本發明係關於式(I)化合物及其醫藥上可接受之鹽，其中A及Q一起形成視情況經取代之聯苯。
在式(I)化合物之某些實施例中，-G-A-Q-W-並非
在再一實施例中，本發明係關於式(I)化合物及其醫藥上可接受之鹽，其中G及A或Q及W一起形成選自下列基團之視情況經取代之三環： 其中上文所展示環狀基團中之每一者視情況經取代。
在再一實施例中，本發明係關於式(I)化合物及其醫藥上可接受之鹽，其中G、A及Q或A、Q及W一起形成選自下列基團之視情況經取代之五環： 其中上文所展示環狀基團中之每一者視情況經取代。
在再一實施例中，式(I)化合物由式(VIa)至(VId)中之一者代表：
或其醫藥上可接受之鹽，其中R1、R3、R5、R6、X3及X係如先前所定義。
在其他實施例中，本發明係關於式(I)化合物及其醫藥上可接受之鹽，其中R5在每次出現時獨立地選自由以下組成之群：氫、鹵素、O(C1-C4烷基)及視情況經取代之C1-C4烷基。
在再一實施例中，本發明係關於式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽；其中每一R6C(O)-獨立地選自下列基團：
在一實施例中，兩個R6相同。
在再一實施例中，式(I)化合物由式(VIIa)至(VIId)中之一者代表：
或其醫藥上可接受之鹽，其中R3及R5與其所附接之碳原子一起形成稠合且視情況經取代之C3-C8環烷基或稠合且視情況經取代之雜環；其中R6係如先前所定義。
在再一實施例中，式(I)化合物由式(VIIIa)至(VIIId)中之一者代表：
或其醫藥上可接受之鹽，其中m=0或1；每一R6獨立地選自下文之基團。
在一實施例中，兩個R6相同。
在再一實施例中，本發明提供製備之方法；其中PG係Boc或Cbz。
在再一實施例中，式(I)化合物由式(VIIIa)代表，或其醫藥上可接受之鹽，其中m為0且每一R6獨立地選自下文之基團。
在一實施例中，兩個R6相同。
在再一實施例中，式(I)化合物由式(VIIIa)代表，或其醫藥上可接受之鹽，其中m為1且每一R6係選自下文之基團。
在一實施例中，兩個R6相同。
在再一實施例中，本發明係關於式(I)化合物或其醫藥上可接受 之鹽；其中獨立地由下列基團圖解說明：
在再一實施例中，本發明係關於式(I)化合物或其醫藥上可接受 之鹽；其中係下列基團中之一者：
本發明之代表性化合物包含彼等陳述於下表中者及其醫藥上可接受之鹽： 。
應瞭解，本文中之本發明說明應根據化學鍵結之定律及原理來加以解釋。在一些情況下，可能需要去除氫原子以在任一給定位置處容納取代基。
分子中特定位置處之任一取代基或變量(例如R1、R3、X、Y等)之定義意欲獨立於其在該分子中其他處之定義。舉例而言，在X係C(R11)2時，兩個R11基團中之每一者可相同或不同。
然而，應瞭解，本發明化合物可含有一或多個不對稱碳原子且可以外消旋、非對映異構體及光學活性形式存在。亦應瞭解，某些本發明化合物可以不同互變異構體形式存在。預計所有互變異構體皆屬本發明範圍內。
應理解，本發明所涵蓋之化合物係彼等對於作為醫藥藥劑之用途適宜地穩定者。
另外應瞭解，本文所提及之療法及/或治療包含但不限於預防(prevention)、遲緩、預防(prophylaxis)、治療及/或治癒疾病。另外應瞭解，本文所提及之治療或預防HCV感染包含治療或預防HCV相關疾病，例如肝纖維化、肝硬化及肝細胞癌。
本發明之另一實施例包含醫藥組合物，其包括本文所描述之任一單一化合物或兩種或更多種化合物之組合或其醫藥上可接受之鹽以及醫藥上可接受之載劑或賦形劑。
本發明之另一實施例係一種醫藥組合物，其包括本文所描述之任一單一化合物或兩種或更多種化合物之組合或其醫藥上可接受之鹽與一或多種業內已知藥劑以及醫藥上可接受之載劑或賦形劑之組合。
另外應瞭解，本發明化合物可作為單獨活性醫藥藥劑投與，或可與一或多種治療或預防C型肝炎感染或與HCV感染有關之症狀之藥劑組合使用。其他可與本發明之化合物或化合物組合組合投與之其他藥劑包含藉由直接或間接機制阻抑HCV病毒複製而用於由HCV感染引起之疾病的治療劑。該等藥劑包含但不限於宿主免疫調節劑(例如干擾素-α、聚乙二醇化干擾素-α、複合干擾素、干擾素-β、干擾素-γ、CpG寡核苷酸及諸如此類)；抑制宿主細胞功能(例如肌苷單磷酸去氫酶)之抗病毒化合物(例如利巴韋林及諸如此類)；調節免疫功能之細胞介素(例如介白素2、介白素6及介白素12)；增強1型輔助T細胞反應之產生之化合物；干擾RNA；反義RNA；包括HCV抗原或針對HCV之 抗原佐劑組合之疫苗；與宿主細胞組份相互作用以藉由抑制HCV病毒複製之內核糖體進入位點(IRES)引發之轉譯步驟來阻斷病毒蛋白合成或使用靶向膜蛋白之病毒孔蛋白家族(例如HCV P7)或宿主細胞信號路徑之藥劑阻斷病毒顆粒成熟及釋放的藥劑，例如PI3K抑制劑及諸如此類；及藉由靶向病毒基因組中涉及病毒複製之其他蛋白質來抑制HCV複製及/或干擾其他病毒靶之功能之任一藥劑或藥劑組合，例如NS3/NS4A蛋白酶、NS3解旋酶、NS5B聚合酶、NS4A蛋白及NS5A蛋白之抑制劑。
根據又一實施例，本發明之醫藥組合物可進一步包括HCV生命週期中其他靶之抑制劑，該等其他靶包含但不限於解旋酶、聚合酶、金屬蛋白酶、NS4A蛋白、NS5A蛋白及內核糖體進入位點(IRES)。
因此，本發明之一實施例係關於治療或預防由含RNA病毒引起之感染的方法，其包括向需要該治療之患者共投與一或多種選自由宿主免疫調節劑及第二或更多種抗病毒劑或其組合組成之群之藥劑以及治療有效量之本發明之化合物或化合物組合或其醫藥上可接受之鹽。宿主免疫調節劑之實例係(但不限於)干擾素-α、聚乙二醇化干擾素-α、干擾素-β、干擾素-γ、細胞介素、疫苗及包括抗原及佐劑之疫苗，且該第二抗病毒劑藉由抑制與病毒複製有關之宿主細胞功能或藉由靶向病毒基因組蛋白來抑制HCV複製。含RNA病毒之非限制性實例係C型肝炎病毒(HCV)。在某些實施例中，C型肝炎病毒係HCV基因型1a抗性變體，例如M28T、Q30R、L31V、Y93C或Y93H。
本發明之另一實施例係關於治療或預防由含RNA病毒引起之感染的方法，其包括向需要該治療之患者共投與治療或緩解HCV感染症狀(包含肝硬化及肝發炎)之藥劑或藥劑組合以及治療有效量之本發明之化合物或化合物組合或其醫藥上可接受之鹽。含RNA病毒之非限制性實例係C型肝炎病毒(HCV)。
本發明之又一實施例提供治療或預防由含RNA病毒引起之感染的方法，其包括向需要該治療之患者共投與一或多種治療患者之由B型肝炎病毒(HBV)感染引起之疾病的藥劑、與治療有效量之本發明之化合物或化合物組合或其醫藥上可接受之鹽。治療患者之由B型肝炎病毒(HBV)感染引起之疾病的藥劑可為(例如但不限於)L-去氧胸苷、阿德福韋(adefovir)、拉米夫定(lamivudine)或替諾福韋(tenfovir)或其任一組合。含RNA病毒之非限制性實例係C型肝炎病毒(HCV)。
本發明之另一實施例提供治療或預防由含RNA病毒引起之感染的方法，其包括向需要該治療之患者共投與一或多種治療患者之由人類免疫缺陷病毒(HIV)感染引起之疾病的藥劑以及治療有效量之本發明之化合物或化合物組合或其醫藥上可接受之鹽。治療患者之由人類免疫缺陷病毒(HIV)感染引起之疾病的藥劑可包含但不限於利托納韋(ritonavir)、洛匹那韋(lopinavir)、英地綱韋(indinavir)、奈非那韋(nelfmavir)、沙奎那韋(saquinavir)、胺普那韋(amprenavir)、阿紮那韋(atazanavir)、替拉那韋(tipranavir)、TMC-114、呋山那韋(fosamprenavir)、齊多夫定(zidovudine)、拉米夫定、去羥肌苷(didanosine)、司他夫定(stavudine)、替諾福韋(tenofovir)、紮昔他賓(zalcitabine)、阿巴卡韋(abacavir)、依法韋侖(efavirenz)、奈韋拉平(nevirapine)、地拉韋定(delavirdine)、TMC-125、L-870812、S-1360、恩夫韋肽(enfuvirtide)(T-20)或T-1249或其任一組合。含RNA病毒之非限制性實例係C型肝炎病毒(HCV)。
會出現患者可能共感染C型肝炎病毒及一或多種其他病毒(包含但不限於人類免疫缺陷病毒(HIV)、A型肝炎病毒(HAV)及B型肝炎病毒(HBV))的情況。因此，本文亦涵蓋組合療法以藉由共投與本發明化合物與HIV抑制劑、HAV抑制劑及HBV抑制劑中之至少一者來治療該等共感染。
此外，本發明提供本發明之化合物或化合物組合或其治療上可接受之鹽及一或多種選自由宿主免疫調節劑及一或多種其他抗病毒劑或其組合組成之群之藥劑用於製備醫藥的用途，該醫藥用於治療患者之由含RNA病毒(尤其C型肝炎病毒)引起之感染。宿主免疫調節劑之實例係(但不限於)干擾素-α、聚乙二醇化-干擾素-α、干擾素-β、干擾素-γ、細胞介素、疫苗及包括抗原及佐劑之疫苗。較佳地，該其他抗病毒劑藉由抑制與病毒複製有關之宿主細胞功能或藉由靶向病毒基因組之蛋白質來抑制HCV複製。
在用於上文或其他治療時，本發明之化合物組合或化合物連同一或多種如上文所定義之藥劑一起可以純形式採用，或其中該等形式以其醫藥上可接受之鹽形式存在。另一選擇為，該治療劑組合可作為醫藥組合物投與，該醫藥組合物含有治療有效量之所關注化合物或化合物組合或其醫藥上可接受之鹽與一或多種如上文所定義之藥劑及醫藥上可接受之載劑之組合。該等醫藥組合物可用於抑制含RNA病毒(尤其C型肝炎病毒(HCV))之複製，此藉由使該病毒與該醫藥組合物接觸來達成。此外，該等組合物可用於治療或預防由含RNA病毒(尤其C型肝炎病毒(HCV))引起之感染。
因此，本發明之另一實施例係關於治療或預防由含RNA病毒(尤其C型肝炎病毒(HCV))引起之感染的方法，其包含向需要該治療之患者投與醫藥組合物，該醫藥組合物包括本發明之化合物或化合物組合或其醫藥上可接受之鹽及一或多種如上文所定義之藥劑以及醫藥上可接受之載劑。
在作為組合投與時，可將治療劑調配成同時或在預定時間段內給予之單獨組合物，或治療劑可作為單一單位劑型給予。
預計用於該組合療法之抗病毒劑包含在哺乳動物中有效抑制病毒形成及/或複製之藥劑(化合物或生物製劑)，包含但不限於在哺乳動 物中干擾病毒形成及/或複製所需之宿主或病毒機制之藥劑。該等藥劑可選自另一抗HCV劑、HIV抑制劑、HAV抑制劑及HBV抑制劑。
可與本發明化合物組合投與之其他藥劑包含細胞色素P450單加氧酶抑制劑(在本文中亦稱為CYP抑制劑)，其預計會抑制本發明化合物之代謝。因此，細胞色素P450單加氧酶抑制劑之量應可有效抑制本發明化合物之代謝。因此，以足以改良本發明化合物之一或多種藥物動力學(PK)特徵(包含但不限於血漿濃度、生物可用性、血漿濃度時間曲線下面積(AUC)、消除半衰期及全身性清除)之量投與CYP抑制劑，此時與不存在CYP抑制劑下相比，該化合物之一或多種其PK特徵得以改良。
在一實施例中，本發明提供改良本發明化合物之藥物動力學之方法。業內已認識到改良藥物之藥物動力學之優點(例如參見美國專利公開案第US 2004/0091527號、第US 2004/0152625號及第US 2004/0091527號)。因此，本發明之一實施例提供包括投與CYP3A4抑制劑及本發明化合物之方法。本發明之另一實施例提供包括投與本發明化合物及同功酶3A4(「CYP3A4」)、同功酶2C19(「CYP2C19」)、同功酶2D6(「CYP2D6」)、同功酶1A2(「CYP1A2」)、同功酶2C9(「CYP2C9」)或同功酶2E1(「CYP2E1」)之抑制劑之方法。在一較佳實施例中，CYP抑制劑較佳地抑制CYP3A4。改良本發明相關化合物之藥物動力學之任一CYP抑制劑可用於本發明方法中。該等CYP抑制劑包含但不限於利托納韋(例如參見WO 94/14436)、酮康唑(ketoconazole)、醋竹桃黴素(troleandomycin)、4-甲基吡唑、環孢素(cyclosporin)、氯美噻唑(clomethiazole)、西咪替丁(cimetidine)、伊曲康唑(itraconazole)、氟康唑(fluconazole)、咪康唑(miconazole)、氟伏沙明(fluvoxamine)、氟西汀(fluoxetine)、奈法唑酮(nefazodone)、舍曲林(sertraline)、英地綱 韋、奈芬納韋(nelfinavir)、胺普那韋、呋山那韋、沙奎那韋、洛匹那韋、地拉韋定、地爾硫卓(ditiazem)、紅黴素(erythromycin)、VX-944及VX-497。較佳CYP抑制劑包含利托納韋、酮康唑、醋竹桃黴素、4-甲基吡唑、環孢素及氯美噻唑。
應理解，藉助單一患者包裝或每一調配物之患者包裝(在包裝內含有指導患者正確使用本發明之插頁)來投與本發明組合係本發明之期望其他特徵。
本發明之另一態樣係一種包裝，其包括至少本發明化合物及CYP抑制劑及資訊插頁(其含有關於使用本發明組合之說明)。在本發明之替代實施例中，包裝進一步包括一或多種如本文所闡述之其他藥劑。一或多種其他藥劑可提供於相一包裝或單獨包裝中。
本發明之另一態樣涉及用於患者以用於治療HCV感染或預防HCV感染之經包裝套組，其包括：每一醫藥組份之單一或複數種醫藥調配物；容器，其在儲存期間及在投與之前容納醫藥調配物；及說明，其用於以有效治療或預防HCV感染之方式實施藥物投與。
因此，之本發明提供同時或依序投與本發明化合物及CYP抑制劑(及視情況其他藥劑)或其衍生物之套組且以習用方式製備。通常，此一套組包括(例如)本發明化合物及視情況其他藥劑於醫藥上可接受之載劑中(及於一種或複數種醫藥調配物中)之組合物及用於同時或依序投與之書寫說明。
在另一實施例中，提供經包裝套組，其含有：一或多個劑型，其用於自投與；較佳地密封容器構件，其用於在儲存期間及在使用之前容納劑型；及患者說明，其用於實施藥物投與。說明通常係位於包裝插頁、標記及/或其他套組組件上之書寫說明，且一或多種劑型係如本文所闡述。可個別地容納每一劑型，例如容納於金屬箔-塑膠壓層之薄片中，其中每一劑型在個別單元或泡狀體中與其他劑型分離， 或可將多個劑型容納於單一容器中，例如容納於塑膠瓶中。本發明套組亦通常包含用於包裝個別套組組件(亦即劑型、容器構件及書寫使用說明)之構件。該包裝構件可採用卡紙板或紙盒、塑膠或箔袋等之形式。
定義
下文列示用於闡述本發明之各術語之定義。除非在特定情況下另有限制，否則在整篇本說明書及申請專利範圍中單獨或作為較大基團之一部分使用該等術語時，該等定義適用於該等術語。
本文所用之術語「芳基」係指包括至少一個芳族環之單環或多環碳環系統，包含但不限於苯基、萘基、四氫萘基、二氫茚基及茚基。多環芳基係包括至少一個芳族環之多環系統。多環芳基可包括稠合環、共價附接環或其組合。
本文所用之術語「雜芳基」係指具有一或多個選自S、O及N之環原子之單-或多環芳族基團；且剩餘環原子係碳，其中環內所含之任一N或S可視情況經氧化。雜芳基包含但不限於吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、噁唑基、異噁唑基、噻二唑基、噁二唑基、噻吩基、呋喃基、喹啉基、異喹啉基、苯并咪唑基、苯并噁唑基、喹喔啉基。多環雜芳基可包括稠合環、共價附接環或其組合。
根據本發明，芳族基團可經取代或未經取代。
術語「雙環芳基」或「雙環雜芳基」係指由兩個環(其中至少一個環係芳族)組成之環系統；且兩個環可稠合或共價附接。
本文所用之術語「C1-C4烷基」、「C1-C6烷基」、「C1-C8烷基」、「C2-C4烷基」或「C3-C6烷基」分別係指含有一至四個、一至六個、一至八個碳原子或諸如此類之飽和直鏈或具支鏈烴基團。C1-C8烷基之實例包含但不限於甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、第 三丁基、新戊基、正己基、庚基及辛基。
本文所用之術語「C2-C8烯基」、「C2-C4烯基」、「C3-C4烯基」或「C3-C6烯基」係指含有二至八個或二至四個碳原子或諸如此類、具有至少一個碳-碳雙鍵(藉由去除單一氫原子)之直鏈或具支鏈烴基團。烯基包含但不限於(例如)乙烯基、丙烯基、丁烯基、1-甲基-2-丁烯-1-基、庚烯基、辛烯基及諸如此類。
本文所用之術語「C2-C8炔基」、「C2-C4炔基」、「C3-C4炔基」或「C3-C6炔基」係指含有二至八個或二至四個碳原子或諸如此類、具有至少一個碳-碳三鍵(藉由去除單一氫原子)之直鏈或具支鏈烴基團。代表性炔基包含但不限於(例如)乙炔基、1-丙炔基、1-丁炔基、庚炔基、辛炔基及諸如此類。
本文所用之術語「C3-C8環烷基」或「C4-C7環烷基」係指單環或多環飽和碳環化合物，且碳原子可視情況經側氧基取代。C3-C8-環烷基之實例包含但不限於環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環戊基及環辛基；且C4-C7-環烷基之實例包含但不限於環戊基、環己基、雙環[2.2.1]庚基及諸如此類。
本文所用之術語「C3-C8環烯基」或「C5-C7環烯基」係指具有至少一個碳-碳雙鍵之單環或多環碳環化合物且碳原子可視情況經側氧基取代。C3-C8-環烯基之實例包含但不限於環丙烯基、環丁烯基、環戊烯基、環己烯基、環庚烯基、環辛烯基及諸如此類；且C5-C7-環烯基之實例包含但不限於環戊烯基、環己烯基、環庚烯基及諸如此類。
應理解，本文所述之任一烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環及環烯基部分亦可為脂肪族基團或脂環族基團。
「脂肪族」基團係包括碳原子、氫原子、鹵素原子、氧、氮或其他原子之任一組合且視情況含有一或多個不飽和單元(例如雙鍵及/或三鍵)之非芳族部分。脂肪族基團之實例係官能基(例如O、OH、 NH、NH2、C(O)、S(O)2、C(O)O、C(O)NH、OC(O)O、OC(O)NH、OC(O)NH2、S(O)2NH、S(O)2NH2、NHC(O)NH2、NHC(O)C(O)NH、NHS(O)2NH、NHS(O)2NH2、C(O)NHS(O)2、C(O)NHS(O)2NH或C(O)NHS(O)2NH2及諸如此類)、包括一或多個官能基之基團、非芳族烴(視情況經取代)及非芳族烴(視情況經取代)之一或多個碳由官能基代替之基團。脂肪族基團之碳原子可視情況經側氧基取代。脂肪族基團可為直鏈、具支鏈、環狀或其組合，且較佳地含有介於約1個與約24個之間之碳原子、更通常介於約1個與約12個之間之碳原子。舉例而言，除脂肪族烴基團外，脂肪族基團亦明確包含(例如)烷氧基烷基、聚烷氧基烷基(例如聚伸烷基二醇)、聚胺及聚亞胺。脂肪族基團可視情況經取代。
術語「雜環」或「雜環烷基」可互換使用且係指非芳族環或雙-或三環基團稠合系統，其中(i)每一環系統含有至少一個獨立地選自氧、硫及氮之雜原子，(ii)每一環系統可飽和或不飽和，(iii)氮及硫雜原子可視情況經氧化，(iv)氮雜原子可視情況經四級銨化，(v)任一上述環可稠合至芳族環，且(vi)剩餘環原子係可視情況經側氧基取代之碳原子。代表性雜環烷基包含但不限於1,3-二氧戊環、吡咯啶基、吡唑啉基、吡唑啶基、咪唑啉基、咪唑啶基、六氫吡啶基、六氫吡嗪基、噁唑啶基、異噁唑啶基、嗎啉基、噻唑啶基、異噻唑啶基、喹喔啉基、噠嗪酮基及四氫呋喃基。該等雜環基團可進一步經取代。雜芳基或雜環基團可為C附接或N附接(若可能)。
應理解，在用作鏈接來連結兩個或更多個可為相同或不同原子之基團或取代基時，本文所闡述之任一烷基、烯基、炔基、脂環族基團、環烷基、環烯基、芳基、雜芳基、雜環基團、脂肪族部分或諸如此類亦可為二價或多價基團。
術語「取代」係指藉由使用取代基獨立代替一個、兩個或三個 或更多個氫原子進行取代，該等取代基包含但不限於-F、-Cl、-Br、-I、-OH、經保護羥基、-NO2、-N3、-CN、-NH2、經保護胺基、側氧基、硫酮基、-NH-C1-C12-烷基、-NH-C2-C8-烯基、-NH-C2-C8-炔基、-NH-C3-C12-環烷基、-NH-芳基、-NH-雜芳基、-NH-雜環烷基、-二烷基胺基、-二芳基胺基、-二雜芳基胺基、-O-C1-C12-烷基、-O-C2-C8-烯基、-O-C2-C8-炔基、-O-C3-C12-環烷基、-O-芳基、-O-雜芳基、-O-雜環烷基、-C(O)-C1-C12-烷基、-C(O)-C2-C8-烯基、-C(O)-C2-C8-炔基、-C(O)-C3-C12-環烷基、-C(O)-芳基、-C(O)-雜芳基、-C(O)-雜環烷基、-CONH2、-CONH-C1-C12-烷基、-CONH-C2-C8-烯基、-CONH-C2-C8-炔基、-CONH-C3-C12-環烷基、-CONH-芳基、-CONH-雜芳基、-CONH-雜環烷基、-OCO2-C1-C12-烷基、-OCO2-C2-C8-烯基、-OCO2-C2-C8-炔基、-OCO2-C3-C12-環烷基、-OCO2-芳基、-OCO2-雜芳基、-OCO2-雜環烷基、-CO2-C1-C12烷基、-CO2-C2-C8烯基、-CO2-C2-C8炔基、CO2-C3-C12-環烷基、-CO2-芳基、CO2-雜芳基、CO2-雜環烷基、-OCONH2、-OCONH-C1-C12-烷基、-OCONH-C2-C8-烯基、-OCONH-C2-C8-炔基、-OCONH-C3-C12-環烷基、-OCONH-芳基、-OCONH-雜芳基、-OCONH-雜環烷基、-NHC(O)H、-NHC(O)-C1-C12-烷基、-NHC(O)-C2-C8-烯基、-NHC(O)-C2-C8-炔基、-NHC(O)-C3-C12-環烷基、-NHC(O)-芳基、-NHC(O)-雜芳基、-NHC(O)-雜環烷基、-NHCO2-C1-C12-烷基、-NHCO2-C2-C8-烯基、-NHCO2-C2-C8-炔基、-NHCO2-C3-C12-環烷基、-NHCO2-芳基、-NHCO2-雜芳基、-NHCO2-雜環烷基、-NHC(O)NH2、-NHC(O)NH-C1-C12-烷基、-NHC(O)NH-C2-C8-烯基、-NHC(O)NH-C2-C8-炔基、-NHC(O)NH-C3-C12-環烷基、-NHC(O)NH-芳基、-NHC(O)NH-雜芳基、-NHC(O)NH-雜環烷基、NHC(S)NH2、-NHC(S)NH-C1-C12-烷基、-NHC(S)NH-C2-C8-烯基、-NHC(S)NH-C2-C8-炔基、-NHC(S)NH-C3-C12-環烷基、-NHC(S)NH-芳 基、-NHC(S)NH-雜芳基、-NHC(S)NH-雜環烷基、-NHC(NH)NH2、-NHC(NH)NH-C1-C12-烷基、-NHC(NH)NH-C2-C8-烯基、-NHC(NH)NH-C2-C8-炔基、-NHC(NH)NH-C3-C12-環烷基、-NHC(NH)NH-芳基、-NHC(NH)NH-雜芳基、-NHC(NH)NH-雜環烷基、-NHC(NH)-C1-C12-烷基、-NHC(NH)-C2-C8-烯基、-NHC(NH)-C2-C8-炔基、-NHC(NH)-C3-C12-環烷基、-NHC(NH)-芳基、-NHC(NH)-雜芳基、-NHC(NH)-雜環烷基、-C(NH)NH-C1-C12-烷基、-C(NH)NH-C2-C8-烯基、-C(NH)NH-C2-C8-炔基、-C(NH)NH-C3-C12-環烷基、-C(NH)NH-芳基、C(NH)NH-雜芳基、-C(NH)NH-雜環烷基、-S(O)-C1-C12-烷基、-S(O)-C2-C8-烯基、-S(O)-C2-C8-炔基、-S(O)-C3-C12-環烷基、-S(O)-芳基、-S(O)-雜芳基、-S(O)-雜環烷基、-SO2NH2、-SO2NH-C1-C12-烷基、-SO2NH-C2-C8-烯基、-SO2NH-C2-C8-炔基、-SO2NH-C3-C12-環烷基、-SO2NH-芳基、-SO2NH-雜芳基、-SO2NH-雜環烷基、-NHSO2-C1-C12-烷基、-NHSO2-C2-C8-烯基、-NHSO2-C2-C8-炔基、-NHSO2-C3-C12-環烷基、-NHSO2-芳基、-NHSO2-雜芳基、-NHSO2-雜環烷基、-CH2NH2、-CH2SO2CH3、-芳基、-芳基烷基、-雜芳基、-雜芳基烷基、-雜環烷基、-C3-C12-環烷基、聚烷氧基烷基、聚烷氧基、-甲氧基甲氧基、-甲氧基乙氧基、-SH、-S-C1-C12-烷基、-S-C2-C8-烯基、-S-C2-C8-炔基、-S-C3-C12-環烷基、-S-芳基、-S-雜芳基、-S-雜環烷基或-甲硫基-甲基。應理解，芳基、雜芳基、烷基及諸如此類可進一步經取代。
本文所用之術語「鹵素」係指選自氟、氯、溴及碘之原子。
術語「氫」包含氫及氘。此外，所引用之原子包含該原子之其他同位素，只要所得化合物在醫藥上可接受。
本文所用之術語「羥基活化基團」係指業內已知活化羥基以便其在合成程序期間(例如在取代或消去反應中)脫離之不穩定化學部 分。羥基活化基團之實例包含但不限於甲磺酸酯基、甲苯磺酸酯基、三氟甲磺酸酯基、對-硝基苯甲酸酯基、膦酸酯基及諸如此類。
本文所用之術語「經活化羥基」係指經如上文所定義之羥基活化基團活化之羥基，舉例而言，該等羥基活化基團包含甲磺酸酯基、甲苯磺酸酯基、三氟甲磺酸酯基、對-硝基苯甲酸酯基、膦酸酯基。
本文所用之術語「羥基保護性基團」係指業內已知在合成程序期間保護羥基免於不期望反應之不穩定化學部分。在該(等)合成程序後，可選擇性去除如本文所闡述之羥基保護性基團。如業內已知之羥基保護性基團概述於T.H.Greene及P.G.M.Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis，第三版，John Wiley & Sons，New York(1999)中。羥基保護性基團之實例包含苄基氧基羰基、4-甲氧基苄基氧基羰基、第三丁氧基-羰基、異丙氧基羰基、二苯基甲氧基羰基、2,2,2-三氯乙氧基羰基、烯丙基氧基羰基、乙醯基、甲醯基、慮乙醯基、三氟乙醯基、甲氧基乙醯基、苯氧基乙醯基、苯甲醯基、甲基、第三丁基、2,2,2-三氯乙基、2-三甲基矽烷基乙基、烯丙基、苄基、三苯基-甲基(三苯甲基)、甲氧基甲基、-甲硫基甲基、苄基氧基甲基、2-(三甲基矽烷基)-乙氧基甲基、甲磺醯基、三甲基矽烷基、三異丙基矽烷基及諸如此類。
本文所用之術語「經保護羥基」係指經如上文所定義之羥基保護性基團保護之羥基，該羥基保護性基團保護(例如)苯甲醯基、乙醯基、三甲基矽烷基、三乙基矽烷基、甲氧基甲基。
本文所用之術語「羥基前藥基團」係指業內已知藉由覆蓋或遮蔽羥基以暫時方式改變母體藥物之物理化學及由此生物性質之前體部分基團。在該(等)合成程序之後，如本文所闡述之羥基前藥基團必須能夠在活體內返回至羥基。如業內已知之羥基前藥基團概述於Kenneth B.Sloan,Prodrugs,Topical and Ocular Drug Delivery, (Drugs and the Pharmaceutical Sciences；第53卷),Marcel Dekker公司，New York(1992)。
本文所用之術語「胺基保護性基團」係指業內已知在合成程序期間保護胺基免於不期望反應之不穩定化學部分。在該(等)合成程序之後，可選擇性去除如本文所闡述之胺基保護性基團。如業內已知之胺基保護性基團概述於T.H.Greene及P.G.M.Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis，第三版，John Wiley & Sons，New York(1999)中。胺基保護性基團之實例包含但不限於甲氧基羰基、第三丁氧基羰基、9-茀基-甲氧基羰基、苄基氧基羰基及諸如此類。
本文所用之術語「經保護胺基」係指經如上文所定義之胺基保護性基團保護之胺基。
術語「離去基團」意指可藉由另一官能基或原子以取代反應(例如親核取代反應)置換之官能基或原子。舉例而言，代表性離去基團包含氯、溴及碘基團；磺酸酯基團，例如甲磺酸酯基、甲苯磺酸酯基、對溴苯磺酸酯基、間硝基苯磺酸酯基及諸如此類；及醯氧基，例如乙醯氧基、三氟乙醯氧基及諸如此類。
本文所用之術語「非質子溶劑」係指具有相對惰性質子活性之溶劑，亦即不充當質子供體。實例包含但不限於烴，例如己烷及甲苯，例如鹵代烴，例如二氯甲烷、二氯乙烷、氯仿及諸如此類；雜環化合物，例如四氫呋喃及N-甲基吡咯啶酮；及醚，例如二乙醚、雙-甲氧基甲基醚。該等化合物已為彼等熟習此項技術者所熟知，且彼等熟習此項技術者顯而易見，個別溶劑或其混合物可較佳用於特定化合物及反應條件，舉例而言，此取決於諸如試劑穩定性、試劑反應性及較佳溫度範圍等因素。非質子溶劑之其他論述可參見有機化學課本或專門著作，例如：Organic Solvents Physical Properties and Methods of Purification，第4版，由John A.Riddick等人編輯，第II卷， Techniques of Chemistry Series,John Wiley & Sons,NY,1986。
本文所用之術語「質子溶劑」係指易於提供質子之溶劑，例如醇，例如甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、丁醇、第三丁醇及諸如此類。該等溶劑已為彼等熟習此項技術者所熟知，且彼等熟習此項技術者顯而易見，個別溶劑或其混合物可較佳用於特定化合物及反應條件，舉例而言，此取決於諸如試劑穩定性、試劑反應性及較佳溫度範圍等因素。給質子溶劑之其他論述可參見有機化學課本或專門著作，例如：Organic Solvents Physical Properties and Methods of Purification，第4版，由John A.Riddick等人編輯，第II卷，Techniques of Chemistry Series,John Wiley & Sons,NY,1986。
本發明所設計之取代基與變量之組合僅係彼等形成穩定化合物者。本文所用之術語「穩定」係指化合物擁有足以達成製造之穩定性且在足夠長之時間段內保持化合物完整性以用於本文詳述之目的(例如治療性或預防性投與個體)。
所合成化合物可自反應混合物分離得到並進一步藉由諸如管柱層析、高壓液相層析或重結晶等方法進行純化。如熟習此項技術者可瞭解，彼等熟習此項技術者已明瞭合成本文式之化合物之其他方法。另外，可以替代序列或順序實施各個合成步驟以得到期望化合物。業內已知可用於合成本文所闡述化合物之合成化學轉變及保護性基團之方法(保護及去保護)且包含(例如)彼等闡述於下列文獻中者：R.Larock,Comprehensive Organic Transformations，第2版，Wiley-VCH(1999)；T.W.Greene及P.G.M.Wuts,Protective Groups in Organic Synthesis，第3版，John Wiley and Sons(1999)；L.Fieser及M.Fieser,Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis,John Wiley and Sons(1994)；及L.Paquette編輯，Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis,John Wiley and Sons(1995)及其後續 版本。
本文所用之術語「個體」係指動物。較佳地，動物係哺乳動物。更佳地，哺乳動物係人類。個體亦係指(例如)狗、貓、馬、牛、豬、豚鼠、魚、鳥及諸如此類。
可藉由附加適當官能基來改質本發明化合物以增強選擇性生物性質。業內已知該等改質且可包含彼等達成以下效果者：增加向給定生物系統(例如血液、淋巴系統、中樞神經系統)中之生物滲透、提高口服利用度、增加溶解性以容許注射投與、改變代謝及改變排泄速率。
本文所闡述之化合物含有一或多個不對稱中心且由此產生對映異構體、非對映異構體及其他立體異構體形式，該等形式可根據絕對立體化學定義為(R)-或(S)-或對於胺基酸而言定義為(D)-或(L)-。本發明意欲包含所有該等可能之異構體以及其外消旋及光學純形式。光學異構體可藉由上述程序自其各別光學活性前體或藉由拆分外消旋混合物來製備。拆分可在拆分劑存在下藉由層析或藉由重複結晶或藉由該等技術之某一組合來實施，該等技術已為彼等熟習此項技術者所習知。關於拆分之其他細節可參見Jacques等人，Enantiomers,Racemates,and Resolutions(John Wiley & Sons,1981)。在本文所闡述之化合物含有烯烴雙鍵、其他不飽和或幾何不對稱性之其他中心時，且除非另外指定，否則化合物意欲包含E及Z幾何異構體二者或順式及反式異構體。同樣，亦意欲包含所有互變異構體形式。互變異構體可為環狀或非環狀。除非文中說明，否則本文中出現之任一碳-碳雙鍵之組態僅係出於便利之目的而選擇且並非意欲指定特定組態；因此，本文任意繪示為反式之碳-碳雙鍵或碳-雜原子雙鍵可為順式、反式或二者以任一比例之混合物。
本發明之某些化合物亦可以不同穩定構形形式存在，該等形式 可分離。由於繞不對稱單鍵之受限旋轉(例如由於位阻或環應變)而存在之扭轉不對稱可允許分離不同構形異構體。本發明包含該等化合物之每一構形異構體及其混合物。
如本文中所使用，術語「醫藥上可接受之鹽」係指彼等在合理醫學判斷範圍內適於接觸人類及低等動物組織而不會產生過度毒性、刺激、過敏反應及諸如此類且具有相當之合理效益/風險比之鹽。醫藥上可接受之鹽為業內所熟知。舉例而言，S.M.Berge等人在J.Pharmaceutical Sciences,66：1-19(1977)中詳細闡述醫藥上可接受之鹽。該等鹽可在本發明化合物之最終分離及純化期間原位製備，或藉由使游離鹼官能基與適宜有機酸反應來單獨製備。醫藥上可接受之鹽之實例包含但不限於無毒酸加成鹽，例如，胺基與下列形成之鹽：無機酸，例如鹽酸、氫溴酸、磷酸、硫酸及高氯酸；或有機酸，例如乙酸、馬來酸、酒石酸、檸檬酸、琥珀酸或丙二酸；或藉由使用業內所用之其他方法(例如離子交換)形成之鹽。其他醫藥上可接受之鹽包含但不限於己二酸鹽、海藻酸鹽、抗壞血酸鹽、天門冬胺酸鹽、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、硫酸氫鹽、硼酸鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、檸檬酸鹽、環戊烷-丙酸鹽、二葡萄糖酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙磺酸鹽、甲酸鹽、富馬酸鹽、葡庚糖酸鹽、甘油磷酸鹽、葡萄糖酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基-乙磺酸鹽、乳糖酸鹽、乳酸鹽、月桂酸鹽、月桂基硫酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、丙二酸鹽、甲磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、菸鹼酸鹽、硝酸鹽、油酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、雙羥萘酸鹽、果膠酸鹽、過硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、磷酸鹽、苦味酸鹽、新戊酸鹽、丙酸鹽、硬脂酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、對甲苯磺酸鹽、十一烷酸鹽、戊酸鹽及諸如此類。代表性鹼金屬或鹼土金屬鹽包含鈉鹽、鋰鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽及諸如此類。其他醫藥上可接受之鹽包含(若適當)使用抗衡 離子(例如鹵離子、氫氧根、羧酸根、硫酸根、磷酸根、硝酸根、具有1至6個碳原子之烷基磺酸根及芳基磺酸根)形成之無毒銨、四級銨及胺陽離子。
如本文中所使用，術語「醫藥上可接受之酯」係指在活體內水解之酯且包含易於在人體內斷裂以留下母體化合物或其鹽者。適宜酯基團包含(例如)彼等衍生自醫藥上可接受之脂肪族羧酸(尤其鏈烷酸、鏈烯酸、環烷酸及烷二酸)者，其中每一烷基或烯基部分有利地具有不超過6個碳原子。特定酯之實例包含但不限於甲酸酯、乙酸酯、丙酸酯、丁酸酯、丙烯酸酯及乙基琥珀酸酯。
本發明亦係關於式(I)化合物之溶劑合物，例如水合物。
醫藥組合物
本發明之醫藥組合物包括與一或多種醫藥上可接受之載劑或賦形劑一起調配之治療有效量之本發明化合物。
如本文中所使用，術語「醫藥上可接受之載劑或賦形劑」意指任一類型之無毒惰性固體、半固體或液體、稀釋劑、囊封材料或調配助劑。可用作醫藥上可接受之載劑之材料之一些實例係糖類，例如乳糖、葡萄糖及蔗糖；澱粉，例如玉米澱粉及馬鈴薯澱粉；纖維素及其衍生物，例如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素及乙酸纖維素；粉狀黃蓍膠；麥芽；明膠；滑石粉；賦形劑，例如可可油及栓劑蠟；油類，例如花生油、棉籽油、紅花油、芝麻油、橄欖油、玉米油及大豆油；二醇，例如丙二醇；酯類，例如油酸乙酯及月桂酸乙酯；瓊脂；緩衝劑，例如氫氧化鎂及氫氧化鋁；海藻酸；無熱原水；等滲鹽水；林格氏溶液(Ringer’s solution)；乙醇及磷酸鹽緩衝溶液以及其他無毒相容潤滑劑，例如月桂基硫酸鈉及硬脂酸鎂，以及著色劑、釋放劑、塗覆劑、甜味劑、矯味劑及芳香劑，根據調配者之判斷，防腐劑及抗氧化劑亦可存在於組合物中。
本發明之醫藥組合物可經口、非經腸、藉由吸入噴霧、局部、經直腸、經鼻、經頰、經陰道或經由植入式貯存器投與，較佳地藉由經口投與或藉由注射投與。本發明之醫藥組合物可含有任一習用無毒之醫藥上可接受之載劑、佐劑或媒劑。在一些情形下，可使用醫藥上可接受之酸、鹼或緩衝劑來調節調配物之pH以增強所調配化合物或其遞送形式之穩定性。本文所用之術語非經腸包含皮下、皮內、靜脈內、肌內、動脈內、關節內、滑膜內、胸骨內、鞘內、病灶內及顱內注射或輸注技術。
用於經口投與之液體劑型包含醫藥上可接受之乳液、微乳液、溶液、懸浮液、糖漿及酏劑。除活性化合物外，液體劑型可含有業內通常使用之惰性稀釋劑(例如水或其他溶劑)、增溶劑及乳化劑，例如乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲醯胺、油(尤其棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄欖油、蓖麻油及芝麻油)、甘油、四氫糠醇、聚乙二醇及山梨醇酐之脂肪酸酯及其混合物。除惰性稀釋劑外，口服組合物亦可包含佐劑，例如潤濕劑、乳化及懸浮劑、甜味劑、矯味劑及芳香劑。
可根據已知技術使用適宜分散或潤濕劑及懸浮劑來調配可注射製劑，例如無菌可注射水性或油性懸浮液。無菌可注射製劑亦可為存於無毒非腸道可接受之稀釋劑或溶劑中之無菌可注射溶液、懸浮液或乳液，例如存於1,3-丁二醇中之溶液。可採用之可接受媒劑及溶劑尤其為水、林格氏溶液、U.S.P.及等滲氯化鈉溶液。此外，通常採用無菌不揮發性油作為溶劑或懸浮介質。出於此目的，可採用包含合成甘油單酸酯或甘油二酸酯之任何溫和之不揮發性油。此外，在可注射劑製備中使用諸如油酸等脂肪酸。
可注射調配物可(例如)藉由經由細菌截留過濾器過濾或藉由納入殺菌劑來進行滅菌，該等殺菌劑呈可在使用前溶解或分散於無菌水或 其他無菌可注射介質中之無菌固體組合物形式。
為延長藥物之效應，通常期望自皮下或肌內注射來減緩藥物吸收。此可藉由使用具有較差水溶性之結晶或非晶型材料之液體懸浮液來達成。因此，藥物吸收速率取決於其溶解速率，而溶解速率繼而可取決於晶體大小及結晶形式。另一選擇為，非經腸投與藥物形式之延遲吸收可藉由使藥物溶解或懸浮於油性媒劑中來達成。藉由在生物可降解聚合物(例如聚交酯-聚乙醇酸交酯)中形成藥物之微膠囊基質來製備可注射儲積形式。可端視藥物對聚合物之比率及所採用特定聚合物之性質來控制藥物釋放速率。其他生物可降解聚合物之實例包含聚(原酸酯)及聚(酸酐)。儲積可注射調配物亦可藉由將藥物包裹入與身體組織相容之脂質體或微乳液中來製備。
用於直腸或陰道投與之組合物較佳為栓劑，其可藉由將本發明化合物與適宜無刺激性賦形劑或載劑(例如可可油、聚乙二醇或栓劑蠟)進行混合來製備，該等賦形劑或載劑在環境溫度下為固體但在體溫下為液體且由此其在直腸或陰道腔內融化並釋放活性化合物。
用於經口投與之固體劑型包含膠囊、錠劑、丸劑、粉劑及粒劑。在該等固體劑型中，將活性化合物與至少一種醫藥上可接受之惰性賦形劑或載劑(例如檸檬酸鈉或磷酸二鈣)及/或以下物質混合：a)填充劑或增量劑，例如澱粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇及矽酸；b)黏合劑，例如羧甲基纖維素、海藻酸鹽、明膠、聚乙烯基吡咯啶酮、蔗糖及阿拉伯膠；c)保濕劑，例如甘油；d)崩解劑，例如瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯或木薯澱粉、海藻酸、某些矽酸鹽及碳酸鈉；e)溶液阻滯劑，例如石蠟；f)吸收促進劑，例如四級銨化合物；g)潤濕劑，例如鯨蠟醇及甘油單硬脂酸酯；h)吸收劑，例如高嶺土及膨潤土；及i)潤滑劑，例如滑石粉、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、月桂基硫酸鈉；及其混合物。在膠囊、錠劑及丸劑之情形下，劑型亦可包括緩 衝劑。
在使用諸如乳糖(lactose或milk sugar)以及高分子量聚乙二醇及諸如此類等賦形劑之軟質及硬質填充明膠膠囊中，亦可採用類似類型之固體組合物作為填充劑。
固體劑型之錠劑、糖衣藥丸、膠囊、丸劑及粒劑可使用包衣及包殼製備，例如腸溶包衣及醫藥調配技術中熟知之其他包衣。其可視情況含有遮光劑且亦可為視情況以延遲方式僅(或優先)在腸道之某一部分中釋放活性成份的組合物。可使用之包埋組合物之實例包含聚合物質及蠟。
用於局部或經皮投與本發明化合物之劑型包含軟膏、膏糊、乳霜、洗劑、凝膠、粉劑、溶液、噴霧劑、吸入劑或貼。若需要，可在無菌條件下將活性組份與醫藥上可接受之載劑及任一所需防腐劑或緩衝劑混合。本發明範圍亦意欲涵蓋眼用調配物、滴耳劑、眼用軟膏、粉劑及溶液。
除本發明之活性化合物外，軟膏、膏糊、乳霜及凝膠亦可含有賦形劑，例如動物及植物脂肪、油、蠟、石蠟、澱粉、黃蓍膠、纖維素衍生物、聚乙二醇、聚矽氧、膨潤土、矽酸、滑石粉及氧化鋅或其混合物。
除本發明化合物外，粉劑及噴霧劑可含有賦形劑，例如乳糖、滑石粉、矽酸、氫氧化鋁、矽酸鈣及聚醯胺粉末或該等物質之混合物。另外，噴霧劑可含有常用推進劑，例如氯氟烴。
經皮貼劑之額外優點係將化合物受控遞送至身體中。可藉由將化合物溶解或分配於合適介質中來製備該等劑型。亦可使用吸收促進劑來增加該化合物經過皮膚之通量。速率可藉由提供速率控制膜或藉由將化合物分配於聚合物基質或凝膠中來控制。
對於經肺遞送而言，調配本發明之治療組合物並藉由直接投與 (例如吸入至呼吸系統中)以固體或液體微粒形式投與患者。經製備用於實踐本發明之活性化合物之固體或液體微粒形式包含可呼吸大小之顆粒：亦即，顆粒大小足夠小以在吸入後吸入通過口腔及喉中並進入肺之支氣管及肺泡中。業內已知遞送氣溶膠化治療劑、尤其氣溶膠化抗生素(例如參見頒予VanDevanter等人之美國專利第5,767,068號、頒予Smith等人之美國專利第5,508,269號及頒予Montgomery之WO 98/43650，其皆以引用方式併入本文中)。經肺遞送抗生素之論述亦參見美國專利第6,014,969號，其以引用方式併入本文中。
抗病毒活性
本發明化合物之抑制量或劑量可介於約0.01mg/Kg至約500mg/Kg之間，或者為約1mg/Kg至約50mg/Kg。抑制量或劑量亦將端視投與途徑以及與其他藥劑共使用之可能性而有所變化。
根據本發明之治療方法，藉由向患者(例如人類或另一動物)投與治療有效量之本發明化合物來治療或預防該患者之細菌感染病狀，該等量及該時間視需要達成期望結果。
本發明化合物之「治療有效量」意指以適用於任一醫學治療之合理效益/風險比賦予所治療個體治療效應之化合物量。治療效應可具有客觀性(亦即可藉由某種測試或標記物量測)或主觀性(亦即個體對效應給出指示或對其有所感覺)。上述化合物之有效量可介於約0.1mg/Kg至約500mg/Kg之間，較佳為約1mg/Kg至約50mg/Kg。有效劑量亦將端視投與途徑以及與其他藥劑共使用之可能性而有所變化。然而，應理解，本發明化合物及組合物之總日用量可由主治醫師在合理醫學判斷範圍內決定。任一特定患者之具體治療有效劑量量取決於多種因素，包含所治療病症及該病症之嚴重程度；所採用具體化合物之活性；所採用具體組合物；患者年齡、體重、總體健康狀況、性別及飲食；所採用具體化合物之投與時間、投與途徑及排泄速率；治療持 續時間；與所採用具體化合物組合或同時使用之藥物；及醫學技術中已為人熟知之類似因素。
以單一或分開劑量投與人類或其他動物之本發明化合物之總日劑量可為(例如)0.01mg/kg體重至50mg/kg體重或更通常0.1mg/kg體重至25mg/kg體重之量。單一劑量組合物可含有該等量或其約數以構成日劑量。一般而言，本發明之治療方案包括每天以單一或多個劑量向需要該治療之患者投與約10mg至約1000mg本發明化合物。
可(例如)藉由以下方式每4至120小時或根據特定藥物之需求來投與本文所闡述之本發明化合物：注射、靜脈內、動脈內、真皮下、腹膜腔內、肌內或皮下；或經口、經頰、經鼻、經黏膜、局部、眼用製劑或藉由吸入，且劑量介於約0.1mg/kg體重至約500mg/kg體重之間，或者劑量介於1mg/劑量與1000mg/劑量之間。本文方法涵蓋投與有效量之化合物或化合物組合物以達成期望或所述效應。通常，本發明之醫藥組合物將投與約1次/天至約6次/天，或另一選擇為以連續輸注形式投與。該投與可用作慢性或急性療法。活性成份可與醫藥賦形劑或載劑組合以產生單一劑型之量隨擬治療主體及特定投與模式而有所變化。典型製劑含有約5%至約95%之活性化合物(w/w)。另一選擇為，該等製劑可含有約20%至約80%之活性化合物。
可能需要低於或高於上文所列舉彼等劑量之劑量。任一特定患者之具體劑量及治療方案應端視各種因素而定，包含所採用具體化合物之活性、年齡、體重、總體健康狀況、性別、飲食、投與時間、排泄速率、藥物組合、疾病、病狀或症狀之嚴重程度及病程、患者對疾病、病狀或症狀之傾向及治療醫師之判斷。
在患者病狀好轉時，若需要，則可投與維持劑量之本發明化合物、組合物或組合。隨後，在症狀已緩解至期望程度時，可根據症狀將投與劑量或頻率或二者降低至保持所改良病狀之程度。然而，在產 生疾病症狀之任一復發後，患者可能需要長期間歇治療。
在本發明組合物包括本文所闡述式之化合物與一或多種其他治療劑或預防劑之組合時，該化合物及該其他藥劑二者均應以介於在單療法方案中通常投與劑量之約1%至100%之間及更佳地介於約5%至95%之間的劑量值存在。其他藥劑可作為多劑量方案之一部分與本發明化合物分開投與。另一選擇為，彼等藥劑可為單一劑型之一部分，其以單一組合物與本發明化合物混合至一起。
該等「其他治療性或預防性藥劑」包含但不限於免疫治療劑(例如干擾素)、治療疫苗、抗纖維化劑、抗發炎劑(例如皮質類固醇或NSAID)、支氣管擴張劑(例如β-2腎上腺素能激動劑及黃嘌呤(例如茶鹼(theophylline)))、黏液溶解劑、抗毒蕈鹼劑、抗白三烯、細胞黏附抑制劑(例如ICAM拮抗劑)、抗氧化劑(例如N-乙醯半胱胺酸)、細胞介素激動劑、細胞介素拮抗劑、肺表面活性劑及/或抗微生物及抗病毒劑(例如利巴韋林及金剛胺(amantidine))。本發明組合物亦可與基因代替療法組合使用。
用於HCV之組合及替代療法
已認識到，HCV之藥物抗性變體可出現於使用抗病毒劑延長治療之後。藥物抗性最通常藉由編碼諸如用於病毒複製之酶等蛋白質之基因之突變而出現，且最通常出現於HCV、RNA聚合酶、蛋白酶或解旋酶之情形下。
最近，已顯示，可藉由將藥物與第二及或許第三抗病毒化合物(其誘導與由主要藥物引起之突變不同之突變)組合或替代投與來延長、增大或恢復藥物針對病毒感染(例如HIV)之效能。另一選擇為，可藉由該組合或替代療法來改變藥物之藥物動力學、生物分佈或其他參數。一般而言，組合療法通常優於替代療法，此乃因其對病毒同時誘導多種應力。
本發明化合物亦可與抗病毒劑組合或替代投與。實例性抗病毒劑包含利巴韋林、干擾素、介白素或其任一穩定化前藥。更廣泛地闡述，化合物可與下表中所列示之任一抗HCV藥物組合或替代投與。
。
除非另有定義，否則本文所用之所有技術及科學術語皆遵照熟習此項技術者通常已知之含義。本文所提及之所有出版物、專利、公開專利申請案及其他參考文獻之全部內容皆以引用方式併入本文中。
縮寫
可用於下文之反應圖及實例之說明之縮寫如下：Ac：乙醯基；AcOH：乙酸；AIBN：偶氮雙異丁晴；BINAP：2,2’-雙(二苯基膦基)-1,1’-聯萘基；Boc2O：二碳酸二第三丁基酯；Boc：第三丁氧基羰基；Bpoc：1-甲基-1-(4-聯苯基)乙基羰基；BtOH：1-羥基-苯并三 唑；Bz：苯甲醯基；Bn：苄基；BocNHOH：N-羥基胺基甲酸第三丁基酯；t-BuOK：第三丁醇鉀；Bu3SnH：三丁基氫化錫；BOP：六氟磷酸(苯并三唑-1-基氧基)叁(二甲基胺基)鏻；鹽水：氯化鈉水溶液；Cbz：苄氧羰基；CDI：羰基-二咪唑；CH2Cl2：二氯甲烷；CH3：甲基；CH3CN：乙腈；Cs2CO3：碳酸銫；CuCl：氯化銅(I)；CuI：碘化銅(I)；dba：二亞苄基丙酮；dppb：二苯基膦基丁烷；DBU：1,8-二氮雜雙環-[5.4.0]十一-7-烯；DCC：N,N’-二環己基碳化二亞胺；DEAD：偶氮二甲酸二乙基酯；DIAD：偶氮二甲酸二異丙基酯；DIBAL-H：二異丁基氫化鋁；DIPEA或(i-Pr)2EtN：N,N-二異丙基乙基胺；戴斯-馬丁過碘烷(Dess-Martinperiodinane)：1,1,1-叁(乙醯基氧基)-1,1-二氫-1,2-苯并碘雜噁唑-3-(1H)-酮；DMAP：4-二甲基胺基-吡啶；DME：1,2-二甲氧基-乙烷；DMF：N,N-二甲基甲醯胺；DMSO：二甲基亞碸；DMT：二(對-甲氧基苯基)-苯基甲基或二甲氧基三苯甲基；DPPA：二苯基磷醯基疊氮化物；EDC：N-(3-二甲基胺基丙基)-N’-乙基碳化二亞胺；EDC HCl：N-(3-二甲基胺基-丙基)-N’-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽；EtOAc：乙酸乙酯；EtOH：乙醇；Et2O：二乙醚；Fmoc：9-茀基甲氧基-羰基；Grubbs-1觸媒：亞苄基雙(三環己基-膦)二氯釕；HATU：六氟磷酸O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓；HCl：氯化氫；HOBT：1-羥基苯并三唑；K2CO3：碳酸鉀；n-BuLi：正丁基鋰；i-BuLi：異丁基鋰；t-BuLi：第三丁基鋰；PhLi：苯基鋰；LDA：二異丙基醯胺鋰；LiTMP：2,2,6,6-四甲基對乙醯基六氫吡啶鋰；MeOH：甲醇；Mg：鎂；MOM：甲氧基甲基；Ms：甲磺醯基或-SO2-CH3；Ms2O：甲磺酸酐(methanesulfonic anhydride或mesyl-anhydride)；NaBH4：硼氫化鈉；NaBH3CN：氰基硼氫化鈉；NaN(TMS)2：雙(三甲基矽烷基)-醯胺鈉；NaCl：氯化鈉；NaH：氫化鈉；NaHCO3：碳酸氫鈉(sodium bicarbonate或sodium hydrogen carbonate)；Na2CO3：碳酸鈉；NaOH：氫氧化鈉；Na2SO4：硫酸鈉；NaHSO3：亞硫酸氫鈉(sodium bisulfite或sodium hydrogen sulfite)；Na2S2O3：硫代硫酸鈉；NH2NH2：肼；NH4HCO3：碳酸氫銨；NH4Cl：氯化銨；NMMO：N-甲基嗎啉N-氧化物；NaIO4：高碘酸鈉；Ni：鎳；OH：羥基；OsO4：四氧化鋨；Pd：鈀；Ph：苯基；PMB：對-甲氧基苄基；POPd：二氫雙(二-第三丁基次膦酸根基-κP)-二氯化鈀(II)；Pd2(dba)3：叁(二亞苄基-丙酮)二鈀(0)；Pd(PPh3)4：四(三苯基膦)鈀(0)；PdCl2(PPh3)2：反式-二氯雙(三苯基-膦)鈀(II)；Pt：鉑；Rh：銠；rt：室溫；Ru：釕；SEM：(三甲基矽烷基)乙氧基-甲基；TBAF：四丁基氟化銨；TBS：第三丁基二甲基矽烷基；TEA或Et3N：三乙胺；Teoc：2-三甲基矽烷基-乙氧基-羰基；TFA：三氟乙酸；THF：四氫呋喃；TMEDA：N,N,N’,N’-四甲基乙二胺；TPP或PPh3：三苯基-膦；Troc：2,2,2-三氯乙基羰基；Ts：甲苯磺醯基或-SO2-C6H4CH3；Ts2O：甲苯基磺酸酐或甲苯磺醯基-酐；TsOH：對-甲苯基-磺酸；TMS：三甲基矽烷基；TMSCl：三甲基矽烷基氯；或Zhan-1b觸媒：1,3-雙(2,4,6-三甲基苯基)-4,5-二氫咪唑-2-亞基[2-(異丙氧基)-5-(N,N-二甲基胺基磺醯基)苯基]-亞甲基二氯化釕(II)。
合成方法
結合下列合成反應圖來更佳地理解本發明之化合物及製程，該等合成反應圖圖解說明可製備本發明化合物之方法。起始材料可自商業來源獲得或藉由彼等熟習此項技術者已知之充分確立之文獻方法製得。熟習此項技術者易於明瞭，可藉由在下文所展示合成中取代適當反應物及藥劑來合成上文所定義之化合物。熟習此項技術者亦易於明瞭，端視變量性質，可以各種順序實施選擇性保護及去保護步驟以及其步驟順序以成功完成下文之合成。除非下文另有所述，否則各變量 係如上文所定義。
可經由若干不同合成途徑自各種咪唑、三環或五環雜芳基藉由使咪唑與雙環或四環芳基或雜芳基及相關中間體稠合來製備本發明化合物。實例性方法展示於反應圖1、2、3及4中。彼等標題化合物之逆合成包含直接形成視情況具有適宜芳基或雜芳基鏈接之適宜雜環，隨後附接適宜封端基團(例如-C(O)R6)，且在其間及/或之後實施一些官能基處理。彼等熟習此項技術者已知具有稠合咪唑中間體之各種咪唑或多環雜芳基，例如參見由A.R.Katrizky等人編輯之百科全書卷「Comprehensive Heterocyclic Chemistry」1984；「Comprehensive Heterocyclic Chemistry II」1996；「Comprehensive Heterocyclic Chemistry III」2008。
藉由使雙環與咪唑稠合進行之一些三環雜芳基相關中間體之一般合成及進一步闡釋匯總於反應圖1中。可使用類似程序藉由使咪唑與三環芳基或雜芳基稠合來合成五環雜芳基相關中間體。
合成始於構建視情況經取代之萘咪唑1-2，其可藉由使胺基酸或其衍生物1-1.1或1-1.2與6-溴萘-1,2-二胺1-1在彼等熟習此項技術者已知之條件下進行縮合來獲得。可以一鍋式藉由加熱視情況在酸及/或去水試劑(例如聚磷酸)存在下或以以下兩個步驟來實現咪唑環閉合：1)使二胺1-1及胺基酸1-1.1或1-1.2在縮合試劑(例如EDC．HCl、DCC或諸如此類)存在下形成醯胺；或經由混合酐方式藉由使酸1-1.1或1-1.2與氯甲酸酯(例如氯甲酸甲酯、氯甲酸異丁基酯或諸如此類)在鹼(例如TEA、DIPEA、DMAP、N-甲基嗎啉或諸如此類)存在下進行反應，隨後使用二胺1-1處理混合酐；及2)在酸(例如乙酸、硫酸或諸如此類)或去水試劑(例如HATU或諸如此類)存在下視情況在加熱下實施雜環閉合。
可使萘咪唑溴化物1-2與不同偶合配偶體經受彼等熟習此項技術者已知之Suzuki、Stille或相關偶合條件(參見以下綜述：A.Suzuki,Pure Applied Chem.,1991,63,419；A.Suzuki,Handbook of Organopalladium Chemistry for Organic Synthesis,2002,1,249；A.Anastasia等人，Handbook of Organopalladium Chemistry for Organic Synthesis,2002,1,311；F.Bellina等人，Synthesis,2004,2419；M.G.Organ等人，Synthesis 2008,2776；A.T.Lindhardt等人，Chem.-A European J.,2008,14,8756；E.A.B.Kantchev等人，Angew.Chem.Int.Ed.,2007,46,2768；V.Farina等人，Advances in Metal-Organic Chem.,1996,5：1)以提供各種關鍵中間體。舉例而言，可藉由與金屬試劑1-2.2在彼等熟習此項技術者已知之Suzuki或Stille條件下選擇性反應來將溴化物1-2轉化成關鍵中間體1-4。另一選擇為，可藉由以下方式來製備中間體1-4：使用二金屬試劑1-2.1處理溴化物1-2以提供有機金屬1-3，隨後與溴碘芳基化合物1-3.1偶合，此二者皆可在Suzuki或Stille反應條件下進行。可利用二金屬試劑1-2.1使用上文闡述用於製備1-3溴化物之條件來將1-4進一步轉化成有機金屬1-5。
應注意，上文所列示萘咪唑相關中間體之NH基團視情況可經胺 基保護性基團(例如SEM(亦即SEM-Cl、NaH)、Boc、Cbz、Teoc、Troc或諸如此類)保護。
咪唑相關中間體之典型合成類似於萘咪唑中間體。如反應圖2中所展示，可藉由以下方式來合成溴-咪唑2-2：使胺基酸衍生醛2-1.1或2-1.2及乙二醛在甲醇氨存在下進行縮合；隨後使咪唑環在彼等熟習此項技術者已知之條件下進行溴化。可以一鍋式藉由NBS、溴、2,4,4,6-四溴-2,5-環己二烯酮或諸如此類或以以下兩個步驟來實現咪唑環溴化：1)在過量溴化試劑(例如NBS、溴、2,4,4,6-四溴-2,5-環己-二烯酮或諸如此類)存在下視情況在加熱下形成二溴化物；及2)在還原試劑(例如NaHSO3、Na2S2O3、Na2SO3或諸如此類)存在下將二溴化物還原成單溴化物。然後可使用反應圖1中所論述之化學方法將溴化物2-2用作用於許多其他咪唑衍生物之常用中間體。舉例而言，可藉由與金屬試劑2-2.1在Suzuki或Stille條件下選擇性反應以提供關鍵中間體2-4來將溴化物2-2轉化成關鍵中間體2-4。另一選擇為，可藉由以 下方式來製備中間體2-4：使用二金屬試劑2-2.2處理溴化物2-2以提供有機金屬2-5，隨後與溴碘芳基化合物2-5.1進行偶合，此二者皆可在先前所闡述之Suzuki或Stille反應條件下進行。可利用二金屬試劑2-4.1使用上文經闡述用於製備中間體2-5之條件來將溴化物2-4進一步轉化成有機金屬2-7。
又一選擇為，芳基溴或雜芳基溴2-4亦可衍生自溴酮2-9，該溴酮可自相應酮2-8在溴化試劑(例如NBS、溴或諸如此類)存在下視情況在酸存在下及/或加熱下製得。溴酮2-9可經由疊氮化物取代隨後實施還原來轉化成相應胺2-11，或與經保護胺基酸1-1.1或1-1.2在鹼(例如Et3N或DIPEA)存在下進行偶合以提供酮酯2-10。類似地，可經由與適當胺基酸在標準醯胺形成條件下進行縮合來將胺2-11轉化成相應酮醯胺2-12。可經由在NH4OAc及熱或微波條件下加熱來將2-12及2-13轉變成關鍵中間體2-4。
4,5-取代之咪唑相關中間體之合成類似於反應圖2中所闡述。另一選擇為，可自酮2-8a(反應圖2a)經由以下方式來合成該等咪唑中間體：亞硝化(亞硝酸鈉、HCl)至酮肟2-9a，其可使用醛2-1.1或2-1.2在氨或氫氧化銨存在下環化至1-羥基咪唑2-4a。使用適宜還原試劑(例如亞磷酸三乙基酯)還原2-4a可得到所需咪唑2-4b。
含有某些螺四氫呋喃基(THF)或四氫吡喃基(THP)脯胺酸中間體(其可自市售4-羥基脯胺酸衍生物(例如3-1)製得)之本發明化合物之合成(反應圖3)。可將含有在吡咯啶環之C4-位處經取代之羥基之化合物3-1轉化成各種雙環胺基酸甲酯3-6至3-12。藉由各種氧化劑(例如氯化釕(III)/NaIO4)在濕CH3CN中氧化3-1可提供酮3-2。用於將醇氧化成酮之其他試劑及條件可參見Comprehensive Organic Transformations,R.C.Larock編輯，Wiley-RCH,1999，第1236-1249頁。3-2然後可用作通用中間體以進一步衍生至具有不同環大小之雙環中間體3-10、3-11及3-12。3-2可藉由各種類型之親核加成(例如格氏加成(Grignard addition)及巴比耶反應(Barbier reaction))或藉由由烯丙基矽烷或烯丙基錫在路易斯酸(Lewis acid)存在下調介之親電加成來實現烯丙基化或高烯丙基化。可經由碘醚化條件(例如I2及NaHCO3)在非質子溶劑中將烯烴3-4轉化成雙環3-7及3-8。可在極端條件下(亦即TMS3SiH及AIBN)於非質子溶劑中在加熱下將該等碘化物進一步還原成3-11及3-12。另一選擇為，可藉由臭氧分解或OsO4/NaIO4將高烯丙基化產物3- 5以氧化方式裂解以經由醛中間體生成半縮醛3-9。可藉由各種還原劑(例如BH3或Et3SiH)視情況在路易斯酸存在下選擇性還原3-9以提供雙環3-12。可藉由環合置換將雙烯丙基化產物3-3轉化成二氫吡喃環3-6，其可在各種氫化條件下進一步轉變成四氫吡喃環3-10。
使用各種經適宜取代之咪唑(例如彼等列示於本文反應圖1及2中者)，可經由各種連結兩個片段之偶合策略或策略組合來製備本發明化合物。該策略可包含但不限於Stille偶合、Suzuki偶合、Sonogashira偶合、Heck偶合、Buchwald醯胺化、Buchwald胺化、醯胺偶合、酯鍵形成、William醚化、Buchwald醚化、烷基化、具有不同變化之周環反應或諸如此類。
可用於連結兩個咪唑片段之策略實例展示於反應圖4中。可使用類似於先前所闡述程序之程序來製備碘化物4-1、4-3及酸酯衍生物4-2。可使碘化物4-3與酸酯4-2在Suzuki條件下於Pd觸媒存在下進行偶合以生成核心結構4-4，其可在選擇性去保護Boc或Cbz並配置封端基團之後轉化成本發明化合物I-1。因此，可以以下兩個步驟獲得4-5：1)藉由酸(例如HCl或TFA)將Boc去保護；及2)可使用羧酸(R6aCOOH)在標準醯化條件(例如偶合試劑(例如HATU或HOBt)及EDC) 下於有機鹼(例如DIPEA)存在下對所釋放胺官能基實施醯化。各種羧酸(包含呈外消旋或光學形式之胺基酸)市面有售，及/或可以外消旋或光學形式合成，參見綜述中所引用之下列參考文獻：D.Seebach等人，Synthesis,2009,1；C.Cativiela及M.D.Diaz-de-Villegas,Tetrahedron：Asymmetry,2007,18,569；2000,11,645；及1998,9,3517；及專利申請案WO 08/021927A2，C.Bachand等人，BMS中彙集之實驗實例，其以引用方式併入本文中。化合物4-5然後可用作常用中間體以用於在Pd催化之氫化去保護及利用羧酸R6bCOOH使用上述類似程序實施醯化之後進一步衍生至標題化合物I-1。
另一選擇為，如反應圖5中所展示，亦可自關鍵中間體5-1及5-2使用前述Suzuki偶合程序來衍生本發明化合物(例如I-1)。中間體5-1及5-2皆具有已自4-2及4-3使用反應圖4中所展示之類似序列配置之期望醯基。
一選擇為，合成含有某些螺四氫呋喃基(THF)或四氫吡喃基 (THP)脯胺酸中間體之本發明化合物，其可自市售經保護(S)-焦麩胺醇(例如6-1)製得(反應圖6)。在使用非質子溶劑或非質子溶劑混合物中使用強鹼(例如t-BuOK、LiHMDS、NaHMDS、NaH、Et3N、DBU、K2CO3、Cs2CO3或諸如此類)處理時，6-1可與至多兩種適宜親電試劑經由彼等熟習此項技術者習知之反應(例如但不限於烷基化、鈀催化烯丙基化、羧基化或邁克爾加成(Michael addition))發生反應以配置孿位取代基(R’及R"，如在化合物6-2中)。兩種親電試劑可相同或不同。適宜親電試劑包含但不限於烷基鹵、烯丙基鹵、炔丙基鹵、碳酸乙酯、氯甲酸酯、丙烯酸酯、乙酸烯丙基酯及碳酸烯丙基酯第三丁基酯。在官能基處理之某些步驟之後，可使用游離羥基及離去基團(LG)將6-2轉化成6-3。在適宜鹼(例如t-BuOK、LiHMDS、NaHMDS、NaH、Et3N、DBU、吡啶、K2CO3、Cs2CO3或諸如此類)存在下，6-3可發生分子內環化以形成期望螺醚鏈接(如在化合物6-4中)。自6-4，對環狀縮醛胺實施去保護並還原內醯胺、隨後對所釋放二級胺實施保護以提供6-6。對一級醇實施氧化以提供期望螺-THF或THP脯胺酸衍生物6-7。
反應圖7例示自經苯甲醛保護之焦麩胺醇7-1來合成含有螺-THP脯胺酸中間體7-7之本發明化合物。在鹼存在下，可經由1,3-二羰基7-2a在配置羧酸酯之後藉由與碳酸烷基酯或氯甲酸烷基酯進行反應來活 化7-1。可使用具有離去基團之烷基化試劑(例如1,3-二溴丙烷、1-溴-3-氯丙烷或諸如此類)在鹼存在下將7-2a進一步烷基化以提供7-2。可使用上述類似條件將自7-1至7-2之上述逐步轉化合併成一鍋式反應形式。可使用適宜還原試劑(例如NaBH4、NaBH(OAc)3、NaBH3CN、LiBHEt3、DIBAL、LiBH4、Ca(BH4)2、CaCl2-NaBH4、LiAlH(OBu-t)3或諸如此類)將7-2中之羧酸酯選擇性還原至醇7-3。可在鹼性條件下視情況在銀鹽(例如氧化銀或碳酸銀)存在下對醚實施分子內環化以形成7-4。可使用LiAlH4將7-4還原至苄基化胺7-5，可使用Boc2O視情況在鹼(例如Et3N、iPr2NEt、吡啶、DMAP、K2CO3、NaHCO3或諸如此類)存在下將該苄基化胺經保護為Boc-衍生物7-6。使用高價金屬試劑(例如氧化釕、氧化鉻或諸如此類)視情況在高碘酸鈉存在下地7-6實施氧化可提供所需7-7。
可使用類似於公開文獻中所闡述程序之程序來製備含有兩個「封端基團」(定義為R6C(O)-)之本發明化合物，該公開文獻係(例如)WO2008021927、WO2012109080及WO2012154777，其以引用方式併入本文中。
應瞭解，使用任一化學官能基之適當處理及保護，藉由類似於彼等上述方法及彼等闡述於實驗部分中之方法的方法來合成式(I)化合物。適宜保護性基團可參見(但不限於)彼等發現於T W Greene及P G M Wuts「Protective Groups in Organic Synthesis」，第3版(1999),J Wiley and Sons。
本文所引用之參考文獻(不論以印刷、電子、電腦可讀儲存媒體或其他形式)之全部內容皆以引用方式明確併入本文中，包含但不限於摘要、文章、期刊、公開案、文件、論文、網際網路網站、數據庫、專利及專利公開案。
實例
結合下列實例將更佳地理解本發明之化合物及製程，該等實例僅意欲作為闡釋且並非限制本發明範圍。彼等熟習此項技術者將明瞭所揭示實施例之各種改變及修改，且可在不背離本發明精神及隨附申請專利範圍之範圍之情況下作出該等改變及修改，其包含但不限於與本發明之化學結構、取代基、衍生物、調配物及/或方法相關者。
儘管已針對各種較佳實施例闡述本發明，但其並不意欲限於此，而是彼等熟習此項技術者應認識到，其中可作出屬本發明精神及隨附申請專利範圍之範圍內之變化及修改。
中間體A1.
步驟A1a.在0℃下，向存於1,4-二噁烷(20mL)中之3-(4-溴苯基)-3-側氧基丙酸乙酯(25g,92.2mmol)之溶液中添加溴(4.73mL,92.2mmol)。將混合物在0℃下攪拌1.5小時，然後蒸發掉所有揮發物以得到黃色油狀物形式之粗製期望產物(32.8g，定量)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。1H NMR(CDCl3)7.88(d,2H),7.66(d,2H),5.59(s,1H),3.31(q,2H),2.27(t,3H)。
步驟A1b.向存於乙腈(200mL)中之來自步驟A1a之化合物(32.8g,92.2mmol)之溶液中添加(S)-1-(第三丁氧基羰基)吡咯啶-2-甲酸(21.0g,96.8mmol)及DIPEA(17.7mL,101.3mmol)。將混合物在室溫下攪拌14小時，然後蒸發所有揮發物。將殘餘物分配於水(100mL)與EtOAc(300mL)之間且分離有機相，乾燥(Na2SO4)並濃縮以提供褐色漿液，經由二氧化矽塞(20g)過濾並使用EtOAc洗脫。收集含義期望化合物之部分並濃縮以提供淺黃色油狀物(42g,94%)，將其再懸浮於甲苯(200mL)中，隨後添加乙酸銨(67g,870mmol)。將混合物在95℃下攪拌16小時，然後分配於NaHCO3水溶液及EtOAc之間。分離有機 相，乾燥(Na2SO4)並濃縮以提供褐色漿液，藉由層析(二氧化矽，EtOAc-己烷)純化以提供淺黃色油狀物。使用EtOAc及己烷重結晶以提供淺黃色粉末形式之期望化合物(16g,39%，經2個步驟)。ESIMS m/z=464.30、466.30[M+H]+。
中間體A2.
步驟A2a.向存於CH3CN(60mL)中之2,4'-二溴苯乙酮(5.00g,18.0mmol)及N-Boc-L-脯胺酸(3.87g,18.0mmol)之混合物中緩慢添加三乙胺(5.40mL,37.8mmol)。在室溫下攪拌混合物直至起始材料消失為止。蒸發揮發物且分配殘餘物(EtOAc-水)。使用鹽水洗滌有機物，乾燥(Na2SO4)，過濾並蒸發。藉由層析(二氧化矽，己烷-乙酸乙酯)純化殘餘物以得到淺黃色發泡體形式之期望化合物(6.73g,91%)。1H NMR(CDCl3)7.76(t,J=8.0Hz,2H),7.63(dd,J=5.0,8.5Hz,2H),5.51,5.16(2d,J=16.0Hz,1H),5.32,5.28(2d,J=16.5Hz,1H),4.48,4.40(dd,J=5.0,8.5Hz,1H),3.56(m,1H),3.43(m,1H),2.30(m,2H),2.06(m,1H),1.92(m,1H),1.46,1.43(2s,9H)。
步驟A2b.向存於甲苯(100mL)中之來自步驟A2a之化合物(6.73g,16.3mmol)之溶液中添加乙酸銨(25.1g,0.327mol)且將混合物在100℃下加熱14小時。蒸發揮發物且分配殘餘物(EtOAc-NaHCO3水溶液)。使用鹽水洗滌有機物，乾燥(Na2SO4)，過濾並蒸發。藉由層析(二氧化矽，己烷-乙酸乙酯)純化殘餘物以得到黃色發泡體形式之期望化合物(6.10g,95%)。ESIMS m/z=392.24、394.24[M+H]+。1H NMR(CDCl3)7.57(bs,1H),7.48(m,3H),7.23(s,1H),4.97(m,1H),3.42(m,2H),2.99(m,1H),2.16(m,2H),1.97(m,1H),1.46(s,9H)。
中間體A3.
步驟A3a.向存於1,2-二甲氧基乙烷(200mL)中之3-溴丙基三苯基溴化鏻(41.03g,88mmol)之懸浮液中添加NaH(60%,7.04g,176.0mmol)及2滴乙醇。將混合物在65℃下攪拌6.5小時。添加(S)-1-(第三丁氧基-羰基)-4-側氧基吡咯啶-2-甲酸(5.05g,22.0mmol)。將混合物在65℃下再攪拌2天，然後冷卻並使用冰驟冷。在濃縮之後，分配殘餘物(H2O-EtOAc)。分離有機相並使用K2CO3(1N,10mL)萃取。在冰/水浴中冷卻合併之水相，添加HCl(濃)以使pH達到1至2。使用EtOAc(×3)萃取此渾濁混合物。乾燥(Na2SO4)合併之有機相並濃縮以得到黃色油狀物且直接用於下一步驟中。
步驟A3b.使用(三甲基矽烷基)重氮甲烷溶液(2.0M，存於己烷中)分小份處理存於苯/MeOH(20mL/20mL)中之來自步驟A3a之粗產物之溶液直至不再生成氮氣為止。濃縮反應液且藉由層析(二氧化矽，EtOAc-己烷)純化以提供無色油狀物(4.62g,78%，經兩個步驟，烯烴區域異構體之混合物)。ESIMS m/z=168.10[M-Boc+2H]+。
步驟A3c.在氫(60psi)及室溫下，使用釕(5wt%，在碳上，250mg)將存於MeOH(40mL)中之來自步驟A3b之化合物(4.62g,177.2mmol)之溶液處理1天。將混合物通過矽膠管柱短塞且濃縮以提供淺黃色油狀物(4.78g)並直接用於下一步驟中。ESIMS m/z=170.10[M-Boc+2H]+。
步驟A3d.在室溫下，向存於EtOH(25mL)及水(20mL)中之來自步驟A3c之粗製化合物之溶液中過夜添加LiOH單水合物(720mg,17.05mol)，然後濃縮以得到黃色油狀物。將此粗產物溶於水中，使用MTBE洗滌，且藉由添加HCl(4M)達到pH 2。使用EtOAc及CH2Cl2萃取所得混合物。乾燥(Na2SO4)合併之有機相並濃縮以得到淺黃色糖 漿(4.32g,90%，經兩個步驟)，其在室溫下靜置後會緩慢固化。ESIMS m/z=156.09[M-Boc+2H]+。
步驟A3e.自來自步驟A3d之化合物及2,4'-二溴苯乙酮遵循類似於中間體A2中所闡述程序的程序來製備期望化合物。ESIMS m/z=432.01、434.01[M+H]+。
中間體A4.
自4-(4-溴苯基)-4-側氧基丁酸甲酯及(S)-1-(第三丁氧基羰基)吡咯啶-2-甲酸根據專利US20090068140來製備期望化合物。ESIMS m/z=464.18、466.18[M+H]+。
中間體A5.
自5-(4-溴苯基)-5-側氧基戊酸乙酯及(S)-1-(第三丁氧基羰基)吡咯啶-2-甲酸使用類似於步驟A1a及A1b中所闡述來闡述的程序來製備期望化合物。ESIMS m/z=492.16、494.16[M+H]+。
中間體A6.
步驟A6a.使用溴(0.12mL,2.43mmol)將存於AcOH(10mL)中之4'-溴苯乙酮-d7(0.500g,2.43mmol)之溶液處理24小時，然後蒸發至乾燥。分配殘餘物(EtOAc-NaHCO3飽和水溶液)且使用鹽水洗滌有機物，乾燥(Na2SO4)，過濾並蒸發以得到白色晶體形式之期望化合物(0.672g,98%)。
步驟A6b.向存於CH3CN(20mL)中之來自步驟A6a之化合物(0.670 g,2.38mmol)及N-Boc-L-脯胺酸(0.511g,2.38mmol)之混合物中緩慢添加DIPEA(0.59mL,4.75mmol)。在室溫下攪拌直至起始材料消失為止。蒸發揮發物且分配殘餘物(EtOAc-水)。使用鹽水洗滌有機物，乾燥(Na2SO4)，過濾並蒸發以得到黃褐色油狀物形式之粗製期望化合物(1.06g)。ESIMS m/z=416.32、418.32[M+H]+。
步驟A6c.向存於甲苯(24mL)中之來自步驟A6b之化合物(至多2.38mmol)之溶液中添加乙酸銨(3.66g,47.5mmol)且將所得混合物在100℃下加熱14小時。蒸發揮發物且分配殘餘物(EtOAc-NaHCO3水溶液)。使用鹽水洗滌有機物，乾燥(Na2SO4)，過濾並蒸發。藉由急驟管柱層析(二氧化矽，己烷-乙酸乙酯)純化殘餘物以得到黃褐色粉末形式之期望化合物(0.749g，2個步驟，78%)。ESIMS m/z=396.20、398.20[M+H]+。
中間體A7.
步驟A7a.向存於乙腈(40mL)中之2-溴-1-(4-碘苯基)乙酮(5g,15.4mmol)及(S)-1-(第三丁氧基羰基)吡咯啶-2-甲酸(3.48g,16.1mmol)之混合物中添加二異丙基乙基胺(2.4mL,17mmol)。將所得混合物在室溫下攪拌3小時，然後分配於EtOAc及NaHCO3水溶液之間。分離有機相，乾燥(Na2SO4)並濃縮以提供褐色油狀物。藉由急驟管柱層析(二氧化矽，己烷-EtOAc)純化以得到淺黃色油狀物形式之期望產物(6.0g,86%)。ESIMS m/z=481.94[M+Na]+。
步驟A7b.將存於甲苯(80mL)中之來自步驟A7a之化合物(6.0g,12.5mmol)及乙酸銨之混合物(15.1g,196mmol)在80℃下攪拌3小時，然後分配於水與NaHCO3水溶液之間。分離有機相，乾燥(Na2SO4)並濃縮以提供深紅色油狀物。藉由急驟管柱層析(二氧化矽，己烷- EtOAc)純化以得到淺黃色固體形式之期望產物(5.34g,93%)。ESIMS m/z=439.83[M+H]+。
中間體A8.
步驟A8a.在室溫下，使用存於1,4-二噁烷中之HCl(4M,50mL)將存於1,4-二噁烷(25mL)中之中間體A7(2.000g,4.553mmol)之溶液處理1.5小時。蒸發掉揮發物以得到黃色固體形式之粗製期望化合物，其直接用於下一步驟中。ESIMS m/z=339.89[M+H]+。
步驟A8b.向存於1,4-二噁烷(140mL)中之L-纈胺酸(50g,0.427mol)之混合物中添加水(630mL)、NaOH(54.7g,1.4mol)及氯甲酸甲酯(65.7mL,0.85mol)。將所得溶液在60℃下攪拌22小時，然後添加CH2Cl2(400mL)。分離水相並使用CH2Cl2(400mL)萃取，然後使用鹽酸(37%，存於水中，90mL)酸化。使用EtOAc(500mL)將渾濁懸浮液萃取兩次且乾燥(Na2SO4)合併之有機相並濃縮以提供白色固體，使用己烷及EtOAc重結晶以提供無色針樣晶體形式之期望產物(54g,72%)。1H NMR(d6-DMSO)12.52(s,1H),7.33(d,1H),3.85(dd,1H),3.56(s,3H),2.06(m,1H),0.98(m,6H)。
步驟A8c.在室溫下，使用HATU(1.644g,4.325mmol)在DIPEA(7.93mL,45.53mmol)存在下將存於DMF(15mL)中之來自步驟A8a之粗製化合物(至多4.553mmol)及A8b(0.798g,4.553mmol)之混合物處理1.5小時且蒸發掉揮發物。分配殘餘物(EtOAc-H2O)。使用鹽水洗滌有機物，乾燥(Na2SO4)，過濾並蒸發。藉由層析(二氧化矽，己烷-含有1% Et3N之乙酸乙酯)純化殘餘物以得到黃色發泡體形式之期望化合物(2.026g,90%，經2個步驟)。ESIMS m/z=496.90[M+H]+。
中間體A9.
步驟A9a.向存於乙腈(100mL)中之(6S)-5-[(第三丁氧基)羰基]-5-氮雜螺[2.4]庚烷-6-甲酸(根據WO 2009/102325製得，3.210g,13.30mmol)及2-溴-1-(4-碘苯基)乙酮(5.044g,13.97mmol)之溶液中逐滴添加DIPEA(5.79mL,33.26mmol)。將所得溶液在室溫下攪拌3小時，然後濃縮。藉由層析(二氧化矽，己烷-乙酸乙酯)純化殘餘物以提供黃色發泡體形式之期望化合物(6.191g,96%)。ESIMS m/z=486.26[M+H]+。
步驟A9b.向存於甲苯(60mL)中之來自步驟A9a之化合物(6.191g,12.76mmol)之溶液中添加乙酸銨(10.82g,0.140mol)。將所得混合物在110℃下加熱15小時，然後冷卻並濃縮。分配殘餘物(EtOAc-H2O)。使用鹽水洗滌有機相，乾燥(Na2SO4)，過濾並濃縮。藉由層析(二氧化矽，己烷-乙酸乙酯)純化粗產物以提供黃色發泡體形式之期望化合物(5.730g,96%)。ESIMS m/z=466.26[M+H]+。
中間體A10.
步驟A10a.向存於THF(65mL)中且在0℃下冷卻之4'-碘苯乙酮(4.000g,16.26mmol)之溶液中添加異戊基腈(4.55mL,32.51mmol)，隨後添加存於1,4-二噁烷中之HCl(4M,5.28mL,21.13mmol)。將所得紅色溶液在0℃下攪拌30分鐘且然後在室溫下攪拌6小時，然後濃縮。分配殘餘物(Et2O-飽和NaHCO3)。使用鹽水洗滌有機物，乾燥(Na2SO4)，過濾並蒸發。藉由層析(二氧化矽，CH2Cl2-乙酸乙酯)純化殘餘物以得到黃色固體形式之期望化合物2-(4-碘苯基)-2-側氧基乙醛肟(1.530g,34%)。
步驟A10b.將存於冰乙酸(4mL)中之來自步驟A10a之化合物(0.183g,0.666mmol)、(S)-6-甲醯基-5-氮雜螺[2.4]庚烷-5-甲酸第三丁基酯(根據WO 2011/006960製得，0.150g,0.666mmol)及乙酸銨(0.257g,3.329mmol)之混合物在120℃下攪拌1.5小時，然後冷卻並濃縮。藉由層析(二氧化矽，己烷-乙酸乙酯)純化殘餘物以得到黃色黏性油狀物形式之期望化合物(S)-6-(1-羥基-4-(4-碘苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-氮雜螺[2.4]庚烷-5-甲酸第三丁基酯(0.106g,33%)。ESIMS m/z=482.09[M+H]+。
中間體A11.
步驟A11a.使用存於1,4-二噁烷中之HCl(4M,20mL)將存於CH2Cl2(12mL)中之中間體A9(1.000g,2.149mmol)之溶液處理2小時。蒸發掉揮發物以得到黃色固體形式之粗製期望化合物，其直接用於下一步驟中。
步驟A11b.向存於CH3CN(20mL)中之來自步驟A11a之粗製化合物(至多2.149mmol)及(R)-(甲氧基羰基)胺基苯基乙酸(根據WO 2008/021927製得，0.450g,2.149mmol)之混合物中添加DIPEA(3.74mL,21.49mmol)，隨後添加HATU(0.817g,2.149mmol)。將反應液在室溫下攪拌1小時。蒸發掉揮發物。藉由層析(二氧化矽，己烷-乙酸乙酯)純化殘餘物以得到黃色發泡體形式之期望化合物(0.930g,78%，經2個步驟)。ESIMS m/z=557.18[M+H]+。
中間體A12。
步驟A12a.在-78℃下，向存於THF(60mL)中之N-苄氧羰基-4-側 氧基-L-脯胺酸(1.00g,4.37mmol)之溶液中添加MeMgBr(3M，存於Et2O中，3.20mL,9.61mmol)。將所得混合物在-78℃下保持1小時，然後升溫至室溫保持14小時。使用1N HCl水溶液將反應液驟冷至pH 2，且蒸發掉揮發物。分配殘餘物(EtOAc-H2O)且乾燥(Na2SO4)有機物，過濾並蒸發以得到黃褐色油狀物形式之粗製期望化合物(0.842g)，其直接用於下一步驟中。ESIMS m/z=246.20[M+H]+。
步驟A12b.向存於MeOH(15mL)及苯(15mL)中之來自步驟A12a之粗製化合物(至多4.37mmol)之溶液中添加TMSCHN2(2M，存於己烷中)直至黃色顏色並不褪去為止。蒸發揮發物且藉由層析(二氧化矽，己烷-乙酸乙酯)純化殘餘物以得到淺黃色固體形式之期望化合物(0.480g，純度為80%)。ESIMS m/z=260.20[M+H]+。
步驟A12c.在0℃下，向存於CH2Cl2(30mL)中之來自步驟A12b之化合物(0.480g，約80%純度，1.57mmol)之溶液中添加DAST(0.42mL,3.15mmol)。將反應液在0℃下保持1小時，然後使用NaHCO3水溶液驟冷。分配殘餘物(CH2Cl2-H2O)且乾燥(Na2SO4)有機物，過濾並蒸發。藉由層析(二氧化矽，己烷-乙酸乙酯)純化殘餘物以得到無色油狀物形式之期望化合物(0.259g,23%，經3個步驟)。ESIMS m/z=262.15[M+H]+。
步驟A12d.自來自步驟A12c之化合物使用類似於步驟C1e中所闡述程序的程序來製備粗製酸化合物。ESIMS m/z=248.08[M+H]+。
步驟A12e.自來自步驟A15d之化合物使用類似於中間體A7中所闡述程序的程序來製備期望化合物。ESIMS m/z=472.09[M+H]+。
中間體A13.
步驟A13a.自化合物(S)-4-亞甲基吡咯啶-1,2-二甲酸1-苄基酯2-甲 酯(呈非對映異構體混合物形式)使用類似於步驟A16b中所闡述程序的程序來製備期望化合物。1H NMR(CDCl3)：4.38,4.25,4.18(m,m,m，全部1 H),3.76,3.74(s,s，全部3 H),3.75,3.67(m,m，全部1 H),2.40(m,1 H),2.23,2.08(m,m，全部1H),1.83,1.55(m,m，全部1 H),1.48,1.41(s,s，全部3 H),1.05(M,3 H)。
步驟A13b.自來自步驟A13a之化合物使用類似於中間體A7中所闡述程序的程序在層析分析(二氧化矽，己烷-乙酸乙酯)之後製備呈主要異構體形式之期望化合物(2S,4S)-2-(4-(4-碘苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯(ESIMS m/z=454.11[M+H]+)。
中間體A14.
在步驟A13b中分離呈次要異構體形式之期望化合物(2S,4R)-2-(4-(4-碘苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯。ESIMS m/z=454.16[M+H]+。
中間體A15.
步驟A15a.在-78℃及N2下，向存於THF(15mL)中之(+)-(3R,7aS)-四氫-3-苯基-3H,5H-吡咯并[1,2-c]噁唑-5-酮(1.51g,7.49mmol)之溶液中添加LiHMDS之溶液(1.0M，存於THF中，34mL,34mmol)。將混合物在-78℃下攪拌30分鐘，然後在-78℃下添加MeI(2.78mL,44.4mmol)。將混合物緩慢升溫至約-10℃，然後使用飽和NH4Cl溶液驟冷並蒸發。分配殘餘物(EtOAc-H2O)。使用鹽水洗滌有機物，乾燥(Na2SO4)，過濾並蒸發。藉由層析(二氧化矽，EtOAc-己烷)純化殘餘物以得到淺黃色固體形式之期望化合物(1.29g,75.4%)。ESIMS m/z= 232.06[M+H]+。
步驟A15b.自來自步驟A15a之化合物使用類似於中間體A9及C6中所闡述程序的程序來製備期望化合物。ESIMS m/z=468.19[M+H]+。
中間體A16.
步驟A16a.使用9-硼雜雙環-[3,3,1]壬烷(9-BBN,0.5M，存於THF中，7mL,0.42mmoL)將存於THF(8mL)中之(S)-4-亞甲基吡咯啶-1,2-二甲酸1-苄基酯2-甲酯(666mg,2.42mmol)之溶液在室溫下處理4小時，然後添加NaOH(2.5N,2mL)，隨後緩慢添加過氧化氫(H2O2，30%，存於水中，1mL)。將混合物在室溫下攪拌過夜，然後濃縮。將殘餘物溶於水中，藉由HCl(4M)酸化至pH約為2並使用EtOAc萃取。乾燥(Na2SO4)有機物，過濾並蒸發。將殘餘物溶於MeOH(14mL)及苯(14mL)中並使用TMSCHN2(2M，存於己烷中)逐滴處理直至持續為黃色顏色為止。濃縮溶液。藉由層析(二氧化矽，己烷-乙酸乙酯)純化殘餘物以得到無色油狀物及異構體混合物形式之期望化合物(401mg,51%)。ESIMS m/z=294.2[M+H]+。
步驟A16b.使用Deoxo-Fluor(376mg,1.7mmol)將存於CH2Cl2(3mL)中之來自A16a之化合物(248mg,0.845mmol)之溶液在室溫下處理兩小時，然後添加第二部分之Deoxo-Fluor(376mg,1.7mmol)。將混合物在室溫下攪拌過夜，然後在0℃下使用NaHCO3水溶液逐滴驟冷並分配(CH2Cl2-H2O)。使用鹽水洗滌有機物，乾燥(Na2SO4)，過濾並蒸發。藉由層析(二氧化矽，己烷-乙酸乙酯)純化殘餘物以得到無色油狀物及異構體混合物形式之期望化合物(130mg,85%)。ESIMS m/z=296.11[M+H]+。
步驟A16c.使用LiOH．H2O(18.5mg,0.44mmol)將存於EtOH(2mL)及水(2mL)中之來自步驟A16b之粗製化合物(130mg,0.44mmol)之溶液在室溫下處理4小時，然後濃縮。將殘餘物溶於H2O(5mL)中並藉由HCl(4N)酸化至pH約為2。使用EtOAc及CH2Cl2萃取混合物。乾燥(Na2SO4)有機物，過濾並蒸發以得到無色油狀物及異構體混合物形式之粗製期望化合物(140mg,113%)。ESIMS m/z=282.10[M+H]+。
步驟A16d.使用Pd/C(10wt%,50mg)將存於MeOH(10mL)中之來自步驟A16c之化合物(至多0.44mmol)及二碳酸二-第三丁基酯(96mg,0.44mmol)之溶液在氫(60psi)及室溫下處理過夜，然後經由矽藻土過濾。濃縮濾液以得到無色油狀物及異構體混合物形式之粗製期望化合物，其直接用於下一步驟中。ESIMS m/z=148.2[M-Boc+2H]+。
步驟A16e.自來自步驟A16d之化合物使用類似於中間體A9中所闡述程序的程序在層析分析(二氧化矽，己烷-乙酸乙酯)之後來製備呈主要異構體形式之期望化合物(2S,4R)-4-(氟甲基)-2-(5-(4-碘苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯(ESIMS m/z=472.17[M+H]+)。
中間體A17.
自步驟A16c分離呈次要異構體形式之期望化合物(2S,4S)-4-(氟甲基)-2-(5-(4-碘苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯。ESIMS m/z=472.21[M+H]+。
中間體A18.
步驟A18a.向存於t-BuOH/H2O(10mL/10mL)中且經冰/水冷卻之 AD-混合物α(2.9g)之懸浮液中添加存於t-BuOH(1mL)中之4-亞甲基吡咯啶-1,2-二甲酸第三丁基酯2-甲酯(505mg,2.1mmol)之溶液。將混合物逐漸升溫至室溫並攪拌過夜，然後添加Na2SO3(3g)。再過一小時之後，分配混合物(CH2Cl2-水)。使用CH2Cl2萃取水相。使用鹽水洗滌合併之有機物，乾燥(Na2SO4)，過濾並蒸發。藉由層析(二氧化矽，己烷-乙酸乙酯)純化殘餘物以得到無色油狀物形式之期望化合物(非對映異構體混合物，515mg,85%)。ESIMS m/z=176.17[M-Boc+2H]+。
步驟A18b.使用DIPEA(0.45mL,2.58mmol)及MsCl(0.16mL,2.07mmol)將存於CH2Cl2(5mL)中之來自步驟A18a之化合物(512mg,1.86mmol)之溶液在0℃下處理2小時，然後分配(CH2Cl2-水)。使用鹽水洗滌有機物，乾燥(Na2SO4)，過濾並蒸發以得到無色油狀物形式之粗製期望化合物(725mg)，其直接用於下一步驟中。ESIMS m/z=254.20[M-Boc+2H]+。
步驟A18c.使用15-冠-5(80mg,0.36mmol)及NaI(1.36g,9.1mmol)在K2CO3(1.12g,8.12mmol)存在下於90℃下將存於DMF(5mL)中之來自步驟A18b之化合物(至多1.82mmol)之溶液處理過夜，然後冷卻並分配(EtOAc-水)。使用水、鹽水洗滌有機物，乾燥(Na2SO4)，過濾並蒸發。藉由層析(二氧化矽，己烷-乙酸乙酯)純化殘餘物以得到含有異構體雜質之無色油狀物形式之期望化合物(396mg,56%)。ESIMS m/z=386.10[M+H]+。
步驟A18d.使用總共4份Bu4SnH(0.36mL,1.34mmol)及AIBN(22mg,0.134mmol)將存於甲苯(10mL)中之來自步驟A18c之化合物(516mg,1.34mmol)之溶液在110℃下處理12小時，然後冷卻並蒸發。藉由層析(二氧化矽，己烷-乙酸乙酯)純化殘餘物以得到無色油狀物形式之期望化合物(177mg,51%，呈單一異構體形式)。ESIMS m/z=260.10[M+H]+。
步驟A18e.使用DAST(0.18mL,1.32mmol)將存於CH2Cl2(3mL)中之來自步驟A18d之化合物(170mg,0.655mmol)之溶液在0℃下處理1小時，然後使用NaHCO3水溶液逐滴驟冷並分配(CH2Cl2-水)。使用鹽水洗滌有機物，乾燥(Na2SO4)，過濾並蒸發。藉由層析(二氧化矽，己烷-乙酸乙酯)純化殘餘物以得到無色油狀物形式之期望化合物(177mg,51%)。ESIMS m/z=260.10[M+H]+。
步驟A18f.自來自步驟A18e之化合物使用類似於中間體A7中所闡述程序的程序來製備期望化合物。ESIMS m/z=472.11[M+H]+。
中間體A19.
自(1R,3S,5R)-2-(第三丁氧基羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-甲酸(根據WO 2009/102325製得)使用類似於中間體A9中所闡述程序的程序來製備期望化合物。ESIMS m/z=452.04[M+H]+。
中間體A20.
步驟A20a.使用9-BBN(0.5M，存於THF中，21.6mL,10.80mmol)將存於THF(20mL)中之(S)-4-亞甲基吡咯啶-1,2-二甲酸1-第三丁基酯2-甲酯(1.98g,7.2mmol)之溶液在室溫下處理6小時，然後在0℃下添加H2O(20mL)，隨後添加四水合過硼酸鈉(NaBO3．4H2O,3.38g,22mmol)。將混合物在室溫下攪拌過夜，然後經由矽藻土過濾。使用EtOAc萃取濾液。乾燥(Na2SO4)有機物，過濾並蒸發。藉由層析(二氧化矽，己烷-乙酸乙酯)純化殘餘物以得到無色油狀物及異構體混合物形式之期望化合物(1.15g,61%)。ESIMS m/z=260.16[M+H]+。
步驟A20b.使用草醯氯(1.02mL,11.7mmol)將存於CH2Cl2(20mL) 中之DMSO(1.11mL,15.6mmol)之溶液在-78℃下處理0.5小時，然後添加存於CH2Cl2(5mL)中之來自步驟A20a之化合物(1.15g,3.9mmol)之溶液。在-78℃下保持1小時之後，將混合物升溫至-30℃，然後添加TEA(3mL)。在1小時之後，在0℃下添加H2O(20mL)。分配混合物(CH2Cl2-H2O)。使用鹽水洗滌有機物，乾燥(Na2SO4)，過濾並蒸發。藉由層析(二氧化矽，己烷-乙酸乙酯)純化殘餘物以得到無色油狀物及異構體混合物形式之期望化合物(0.98g,85%)。
步驟A20c.在0℃下，將存於THF(5mL)中之來自A20b之化合物(840mg,3.26mmol)之溶液添加至存於THF(10mL)中之甲基三苯基溴化鏻(Ph3PCH3Br,2.33g,6.53mmol)及第三丁醇鉀(t-BuOK,660mg,5.88mmol)的懸浮液(預混合1小時)中。將混合物在0℃下攪拌3小時，然後使用H2O(20mL)驟冷並分配(EtOAc-H2O)。使用鹽水洗滌有機物，乾燥(Na2SO4)，過濾並蒸發。藉由層析(二氧化矽，己烷-乙酸乙酯)純化殘餘物以得到無色油狀物及異構體混合物形式之期望化合物(0.55g,70%)。
步驟A20d.使用TFA(0.31mL,4.02mmol)將存於CH2Cl2(5mL)中之來自A20c之化合物(342mg,1.34mmol)之溶液在室溫下處理3小時，然後濃縮。將殘餘物溶於CH2Cl2(5mL)中並使用氯甲酸苄基酯(0.39mL,2.7mol)在DIPEA(1mL)存在下處理過夜，然後分配(EtOAc-H2O)。使用鹽水洗滌有機物，乾燥(Na2SO4)，過濾並蒸發。藉由層析(二氧化矽，己烷-乙酸乙酯)純化殘餘物以得到無色油狀物及異構體混合物形式之期望化合物(410mg,105%，經少量苄基醇污染)。ESIMS m/z=290.12[M+H]+。
步驟A20e.在0℃及N2下，經30分鐘向存於CH2Cl2(30mL)中之二乙基鋅(ZnEt2,2.75mL)之溶液中極緩慢地添加TFA(2.06mL,26.8mmol)。在30分鐘之後，緩慢添加存於CH2Cl2(10mL)中之二碘甲烷 (CH2I2,2.16mL,26.8mmol)之溶液。將混合物在0℃下攪拌30分鐘，然後添加存於CH2Cl2(10mL)中之來自步驟A20d之化合物(至多1.34mmol)之溶液。將所得混合物在室溫下攪拌3天，然後使用NH4Cl水溶液驟冷並分配(CH2Cl2-H2O)。使用鹽水洗滌有機物，乾燥(Na2SO4)，過濾並蒸發。藉由層析(二氧化矽，己烷-乙酸乙酯)純化殘餘物以得到無色油狀物及異構體混合物形式之期望化合物(289mg,70%)。ESIMS m/z=304.16[M+H]+。
步驟A20f.使用氫氧化鈀(Pd(OH)2，在碳上，20wt%,25mg)將存於MeOH(10mL)中之來自步驟A20e之化合物(286mg,0.94mmol)及二碳酸二-第三丁基酯(281mg,1.3mmol)之溶液在氫(60psi)及室溫下處理4.5小時，然後經由矽藻土過濾。蒸發濾液以得到無色油狀物及異構體混合物形式之期望化合物(350mg)，其直接用於下一步驟中。ESIMS m/z=270.16[M+H]+。
步驟A20g.自來自步驟A20f之化合物使用類似於步驟A3d、A9a及A9b中所闡述程序的程序來製備呈次要產物形式之期望化合物。ESIMS m/z=480.40[M+H]+。
中間體A21.
自中間體A19及來自步驟A8b之化合物使用類似於中間體A8中所闡述程序的程序來製備期望化合物。ESIMS m/z=509.15[M+H]+。
中間體A22.
步驟A22a.使用(Boc)2O(8.83g,40.5mmol)將存於乙腈(100mL)中之(S)-5-側氧基吡咯啶-2-甲酸第三丁基酯(5.0g,27.0mmol)之溶液 在DMAP(660mg,5.4mmol)存在下於室溫下處理42小時。在濃縮之後，藉由層析(二氧化矽，己烷-EtOAc)純化殘餘物以得到淺黃色油狀物形式之期望化合物(7.92g,103%)，其直接用於下一步驟中。
步驟A22b.在-70℃(內部)下經30分鐘，向存於THF(50mL)中之來自步驟A22a之化合物(7.92g，至多27mmol)之溶液中緩慢添加DIBAL-H(1M，存於己烷中，40.5mL)。在-70℃下攪拌2小時之後，緩慢添加三氟乙酸(1.0mL,13.5mmol)。在<-65℃(內部)下，依序緩慢添加TEA(22.6mL,162mmol)及三氟乙酸酐(4.88mL,35.1mmol)。內部溫度在1小時內升至-35℃，添加DMAP(220mg,1.8mmol)。去除冷卻浴。將混合物再攪拌一小時，然後添加檸檬酸(10%，存於H2O中，10mL)。過濾並分配(EtOAc-H2O)。使用鹽水洗滌有機相，乾燥並濃縮。藉由層析(二氧化矽，己烷-EtOAc)純化殘餘物以得到淺黃色油狀物形式之標題化合物(4.43g,60%，兩個步驟)。1H NMR(丙酮-d6)6.55(d,1H),4.91(d,1H),4.46(m,1H),3.08(m,1H),2.57(m,1H),1.48(d,9H),1.43(d,9 H)。
步驟A22c.在-30℃(內部)下，向存於甲苯(10mL)及(三氟甲基)苯(PhCF3,12mL)中之來自步驟A22b之化合物(4.43g,17.32mmol)之溶液中添加氯-碘甲烷(ClCH2I,4.8mL,65.8mmol)；隨後經30分鐘添加二乙基鋅(Et2Zn,1.1M，存於甲苯中，30mL,33.0mmol)。在該-30℃下攪拌20小時之後，裝填額外ClCH2I(4.8mL,65.8mmol)及Et2Zn(1.1M，存於甲苯中，30mL,33.0mmol)且將混合物在-20℃再保持24小時。緩慢添加檸檬酸(10%，存於H2O中，50mL)以終止反應。分配混合物(EtOAc-H2O)。使用鹽水洗滌有機相，乾燥並濃縮。藉由層析(二氧化矽，己烷-EtOAc)純化殘餘物以得到無色油狀物形式之期望化合物(2.07g,44%)。1H NMR(CDCl3)4.40,4.32(dd,dd，全部1H),3.46,3.37(m,m，全部1H),2.55,2.45(m,m，全部1H),2.0,1.95(d,d，全部 1H),1.48-1.35(m,19 H),0.82(m,1H),0.62,0.58(m,m，全部1H)。
步驟A22d.使用HCl(4M，存於二噁烷中，8mL)將存於CH2Cl2(4mL)中之來自步驟A22c之化合物(1.0g,3.53mmol)之溶液在室溫下處理44小時。濃縮以得到褐色糖漿形式之期望化合物，其直接用於下一步驟中。
步驟A22e.使用Boc2O(1.15g,5.3mmol)將存於NaOH水溶液(1M,7mL)及二噁烷(10mL)中之來自步驟A22d之粗製化合物(至多3.53mmol)之溶液在室溫下處理14小時。蒸發掉揮發物，分配殘餘物(MTBE-H2O)。使用HCl水溶液(4M)將水相酸化至PH 2且使用EtOAc萃取。濃縮有機相並乾燥以得到白色固體形式之期望化合物(663mg,83%，2個步驟)。1H NMR(CDCl3)4.60(brd m,1H),3.55(brd s,1H),2.65,2.42,2.15(brd s,brd s,brd s，全部2H),1.55,1.45(brd s,brd,s，全部10 H),0.88,0.75,0.68(brd s,brd s,brd s，全部2H)。
步驟A22f.自步驟A22e之化合物及2,4'-二溴苯乙酮使用類似於中間體A2中所闡述程序的程序來製備期望化合物。ESIMS m/z=404.24、406.24[M+H]+。
中間體A23.
自中間體A22使用類似於中間體A8中所闡述程序的程序來製備期望化合物。ESIMS m/z=461.25、463.25[M+H]+。
中間體A24.
自(2S,3aR,6aS)-1-(第三丁氧基羰基)六氫-1H-呋喃并[3,4-b]吡咯-2-甲酸(自(S)-5-苯基嗎啉-2-酮及2-(烯丙基氧基)乙醛藉由類似於JP 2009298713中所闡述程序的程序製得)使用類似於中間體A2中所闡述程序的程序來製備期望化合物。ESIMS m/z=434.22、436.22[M+H]+。
中間體B1.
向存於1,4-二噁烷(20mL)中之來自步驟A2b之化合物(1.00g,2.55mmol)、雙(戊醯)二硼(1.35g,5.33mmol)及乙酸鉀(0.640g,6.53mmol)之混合物中添加Pd(PPh3)4(0.147g,0.128mmol)。將混合物脫氣並在80℃及N2下加熱14小時。蒸發揮發物且分配殘餘物(EtOAc-水)。使用鹽水洗滌有機物，乾燥(Na2SO4)，過濾並蒸發。藉由層析(二氧化矽，己烷-乙酸乙酯)純化殘餘物以得到淺黃色固體形式之期望化合物(0.978g,87%)。ESIMS m/z=440.39[M+H]+。1H NMR(CDCl3)11.03,10.55(2s,1H),7.79(m,3H),7.45(m,1H),7.26(m,1H),4.97(m,1H),3.41(m,2H),3.06,2.91(2m,1H),2.17(m,2H),1.97(m,1H),1.49(s,9H),1.35(s,12H)。
中間體B2.
自(1R,3S,5R)-2-(第三丁氧基羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-甲酸(根據WO 2009/102325製得)遵循類似於中間體A2及B1中所闡述程序的程序來製備期望化合物。ESIMS m/z=451.17[M+H]+。
中間體B3.
自中間體A3及來自步驟A8b之化合物遵循類似於中間體A8及B1 中所闡述程序的程序來製備期望化合物。ESIMS m/z=537.31[M+H]+。
中間體B4.
自(1R,3S,5R)-2-(第三丁氧基-羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-甲酸(根據WO 2009/102325製得)、2,4'-二溴苯乙酮及來自步驟A18b之化合物遵循類似於中間體A2、A8及B1中所闡述程序的程序來製備期望化合物。ESIMS m/z=509.25[M+H]+。
中間體B5.
向存於二噁烷(5mL)中之中間體F4(214mg,0.44mmol)之溶液中添加雙(戊醯)二硼(149mg,0.587mmol)、Pd(dppf)Cl2(22mg,0.03mmol)及乙酸鉀(74mg,0.75mmol)。將混合物脫氣並在100℃下加熱2.5小時，然後冷卻。濃縮以提供褐色油狀物，藉由急驟管柱層析(二氧化矽，EtOAc-己烷)純化以提供褐色發泡體形式之期望化合物(122mg,78%)。ESIMS m/z=525.47[M+H]+。
中間體B6.
向存於1,4-二噁烷(80mL)中之中間體F8(4.12g,7.81mmol)及雙(戊醯)二硼(3.96g,15.62mmol)之溶液中添加乙酸鉀(1.92g,19.53mmol)及Pd(dppf)Cl2(570mg,0.78mmol)。在脫氣之後，將溶液在100℃下攪拌1.5小時，然後冷卻。濃縮至暗色固體，藉由層析(二氧化矽，EtOAc-己烷，兩次)純化以提供黃色發泡體形式之期望化合物 (3.98g,89%)。ESIMS m/z=575.26[M+H]+。
中間體B7.
自中間體F10使用類似於中間體B6中所闡述程序的程序來製備期望化合物。ESIMS m/z=561.34[M+H]+。
中間體B8.
自中間體C3使用類似於中間體B6中所闡述程序的程序來製備期望化合物。ESIMS m/z=567.52[M+H]+。
中間體B9.
將存於1,4-二噁烷(3mL)中之中間體J1(118mg,0.233mmol)、雙(戊醯)二硼(72mg,0.28mmol)、乙酸鉀(68mg,0.70mmol)、2-二環己基膦基-2’,4’,6‘-三異丙基聯苯(Xphos,22mg,0.047mmol)及Pd2(dba)3(21mg,0.047mmol)之混合物脫氣並在100℃及N2下加熱1.5小時。蒸發揮發物且藉由層析(二氧化矽，己烷-乙酸乙酯)純化殘餘物以得到淺黃色固體形式之期望化合物(114mg,81%)。ESIMS m/z=598.63[M+H]+。
中間體B10.
將存於1,4-二噁烷(6mL)中之中間體J2(0.38g,0.69mmol)、雙 (戊醯)二硼(0.353g,1.39mmol)、乙酸鉀(0.204g,2.08mmol)及Pd(dppf)Cl2(51mg,0.069mmol)之混合物脫氣並在95℃及N2下加熱1小時。蒸發揮發物且藉由層析(二氧化矽，己烷-乙酸乙酯)純化殘餘物以得到淺黃色固體形式之期望化合物(0.34g,82%)。ESIMS m/z=594.34[M+H]+。
中間體B11.
自中間體A23使用類似於中間體B1中所闡述程序的程序來製備期望化合物。ESIMS m/z=509.29[M+H]+。
中間體B12.
自中間體F17使用類似於中間體B1中所闡述程序的程序來製備期望化合物。ESIMS m/z=533.36[M+H]+。
中間體B13.
將存於1,4-二噁烷(2mL)中之中間體J3(40.7mg,0.0745mmol)、雙(戊醯)二硼(37.8mg,0.149mmol)、KOAc(18.3mg,0.186mmol)及Pd(dppf)Cl2(5.4mg,7.45μmol)之混合物脫氣且然後在100℃及N2下加熱1.5小時，然後冷卻並濃縮。將殘餘物吸收於二氯甲烷中並過濾。藉由急驟管柱層析(二氧化矽，己烷-乙酸乙酯)直接純化濾液以得到黃色油狀物形式之期望化合物(25.1mg,57%)。ESIMS m/z=594.63[M+H]+。
中間體C1.
步驟C1a.向存於無水THF(100mL)中之活化鋅粉(6.37g,97.5mmol)之懸浮液中逐滴添加烯丙基溴(8.5mL,97.4mmol)。使用冰-水冷卻所得淺黃色溶液，然後逐滴添加4-側氧基吡咯啶-1,2-二甲酸1-苄基酯2-甲酯(18.0g,65mmol)。在0℃下攪拌反應混合物且升溫至室溫並在室溫下保持過夜，然後使用HCl(1N)驟冷。分配混合物(EtOAc-H2O)。使用鹽水洗滌有機物，乾燥(Na2SO4)並蒸發。藉由層析(二氧化矽，EtOAc-己烷)純化殘餘物以提供呈非對映異構體混合物(約6：1)及淺黃色油狀物形式之期望化合物(13.66g,66%)。ESIMS m/z=320.15[M+H]+。
步驟C1b.向存於CH3CN(4mL)中之來自步驟C1a之化合物(0.200g,0.627mmol)之溶液中添加NaHCO3(0.211g,2.51mmol)及碘(0.477g,1.88mmol)。將所得混合物加熱至50℃保持4小時，然後裝填額外之NaHCO3(0.211g,2.51mmol)及碘(0.477g,1.88mmol)。將反應液在50℃下再保持3小時，然後冷卻並藉由Na2S2O3水溶液驟冷。蒸發掉揮發物且分配殘餘物(EtOAc-H2O)。使用鹽水洗滌有機物，乾燥(Na2SO4)，過濾並蒸發。藉由急驟管柱層析(二氧化矽，EtOAc-己烷)純化殘餘物以得到無色油狀物形式之期望化合物(79.8mg,29%)。ESIMS m/z=468.23[M+Na]+。
步驟C1c.向存於甲苯(50mL)中之來自步驟C1b之化合物(1.18g,2.66mmol)之溶液中添加叁(三甲基矽烷基)矽烷(2.05mL,6.66mmol)及2,2'-偶氮-雙-異丁腈(26.2mg,0.160mmol)。將所得混合物脫氣並在N2下加熱至90℃保持3小時，然後冷卻並蒸發至乾燥。藉由急驟管柱層析(二氧化矽，EtOAc-己烷)純化殘餘物以得到無色油狀物形式之期 望化合物(0.333g,39%)。ESIMS m/z=320.16[M+H]+。
步驟C1d.向存於MeOH(6mL)中之來自步驟C1c之化合物(0.170g,0.533mmol)之溶液中添加氫氧化鈀(20wt%，在碳上，50.0mg)及Boc2O(0.174g,0.799mmol)。將所得混合物在60psi氫氣及室溫下氫化1天，然後經由矽藻土塞過濾。濃縮濾液並藉由急驟管柱層析(二氧化矽，EtOAc-己烷)純化以得到無色油狀物形式之期望化合物(0.127g,84%)。ESIMS m/z=308.14[M+Na]+。
步驟C1e.在0℃下，向存於EtOH(4mL)中之來自步驟C1d之化合物(0.127g,0.447mmol)之溶液中添加存於H2O(2mL)中之單水合氫氧化鋰(22.5mg,0.536mmol)。將所得混合物逐漸升溫至室溫保持1天，然後蒸發至乾燥。分配殘餘物(Et2O-H2O)且在0℃下將水相酸化至pH約為2。然後分配混合物(CH2Cl2-H2O)且使用鹽水洗滌有機物，乾燥(Na2SO4)，過濾並蒸發以得到無色油狀物形式之粗製期望化合物(0.122g,100%)。ESIMS m/z=319.14[M+Li+CH3CN]+。
步驟C1f.向存於CH3CN(4mL)中之來自步驟C1e之粗製化合物(至多0.224mmol)之溶液中添加2-溴-1-(4-碘苯基)乙酮(76.2mg,0.235mmol)及DIPEA(56.0μL,0.447mmol)。將所得混合物在室溫下攪拌1小時，然後蒸發至乾燥。分配殘餘物(EtOAc-H2O)且使用鹽水洗滌有機物，乾燥(Na2SO4)，過濾並蒸發。藉由急驟管柱層析(二氧化矽，EtOAc-己烷)純化殘餘物以得到無色油狀物形式之期望化合物(98.8mg，2個步驟，86%)。ESIMS m/z=515.92[M+H]+。
步驟C1g.向存於甲苯(8mL)中之來自步驟C1f之粗製化合物(98.8mg,0.192mmol)之溶液中添加NH4OAc(0.296g,3.84mmol)。在100℃下加熱12小時，然後冷卻並蒸發至乾燥。分配殘餘物(EtOAc-H2O)且使用鹽水洗滌有機物，乾燥(Na2SO4)，過濾並蒸發。藉由急驟管柱層析(二氧化矽，EtOAc-己烷)純化殘餘物以得到淺黃色油狀物形式之標 題化合物(70.8mg,75%)。ESIMS m/z=495.93[M+H]+。
中間體C2.
步驟C2a.在室溫下，向存於乙腈(10mL)中之步驟F5c或F5j之化合物(至多1.40mmol)之溶液中添加2,4’-二溴苯乙酮(389mg,1.40mmol)，隨後添加DIPEA(0.7mL,4.0mmol)。將混合物在室溫下攪拌5小時。蒸發揮發物。藉由急驟管柱層析(二氧化矽，己烷-乙酸乙酯)直接純化殘餘物以提供黃色固體形式之期望化合物(453mg,70%，兩個步驟)。ESIMS m/z=504.17,506.17[M+Na]+。
步驟C2b.將存於二甲苯(10mL)中之來自步驟C2a之化合物(453mg,0.94mmol)及乙酸銨(794mg,10.32mol)之混合物在140℃下於密封管中攪拌4小時，然後冷卻並分配(EtOAc-NaHCO3水溶液)。使用鹽水洗滌有機層，乾燥(Na2SO4)並蒸發。藉由急驟管柱層析(二氧化矽，己烷-乙酸酯)純化殘餘物以提供黃色發泡體形式之期望化合物(390mg,90%)。ESIMS m/z=462.24、464.24[M+H]+。
中間體C3.
自中間體C4及來自步驟A8b之化合物使用類似於中間體F8中所闡述程序的程序來製備期望化合物。ESIMS m/z=519.18、521.18[M+H]+。
中間體C4.
步驟C4a.將存於THF(10mL)中之來自步驟C1a之化合物(596mg, 2mmol，約8：1非對映異構體混合物)、碳酸烯丙基酯第三丁基酯(1.26g,8mmol)、Pd2(dba)3(46mg,0.05mmol)及1,4-雙(二苯基膦基)丁烷(dppb,43mg,0.1mmol)之混合物脫氣且然後在75℃及N2下加熱1.5小時。在冷卻之後，將其濃縮。藉由層析(二氧化矽，己烷-乙酸乙酯)純化殘餘物以得到含有異構體雜質之黃色油狀物形式之期望化合物(605mg,93%)。ESIMS m/z=326.26[M+H]+。
步驟C4b.將存於甲苯(650mL)中之來自步驟C4a之化合物(677mg,2.08mmol)及1,3-雙(2,4,6-三甲基苯基)-4,5-二氫咪唑-2-亞基[2-(異丙氧基)-5-(N,N-二甲基胺基磺醯基)苯基]亞甲基二氯化釕(II)(Zhan-1B觸媒，76.4mg,0.104mmol)之混合物脫氣且然後在75℃及N2下加熱15小時。在冷卻之後，將其濃縮。藉由層析(二氧化矽，己烷-乙酸乙酯)純化殘餘物以得到含有異構體雜質之淺黃色油狀物形式之期望化合物(585mg,94%)。ESIMS m/z=298.19[M+H]+。
步驟C4c.在室溫下，使用氫吹掃存於甲醇(20mL)中之鈀(10wt%，在碳上，0.115g)及來自步驟C4b之化合物(1.150g,3.876mmol)之混合物並在室溫及H2(60psi)下攪拌2天。經由短矽藻土墊過濾並濃縮以提供含有異構體雜質之無色油狀物形式之期望化合物(1.120g,97%)。ESIMS m/z=322.25[M+Na]+。
步驟C4d.將存於EtOH/H2O(1/1,18mL)中之來自步驟C4c之化合物(1.120g,3.741mmol)及LiOH．H2O(0.188g,4.490mmol)之混合物在室溫下攪拌20小時。蒸發掉EtOH。使用3M HCl溶液將水性殘餘物酸化至pH約為2並使用EtOAc及二氯甲烷萃取。使用鹽水洗滌有機物，乾燥(Na2SO4)，過濾並蒸發以提供白色發泡體形式之期望化合物(1.100g,100%)。ESIMS m/z=308.24[M+Na]+。
步驟C4e.在室溫下，向存於乙腈(5mL)中之來自步驟C4d之化合物(0.270g,0.946mmol)及2,4’-二溴苯乙酮(0.289g,1.041mmol)之溶 液中逐滴添加DIPEA(0.33mL,1.892mmol)。在室溫下攪拌2小時，然後濃縮。藉由急驟管柱層析(二氧化矽，EtOAc-己烷)純化殘餘物以提供黃色油狀物形式之期望化合物(0.410g,90%)。ESIMS m/z=504.30,506.30[M+Na]+。
步驟C4f.向存於二甲苯(8mL)中之來自步驟C4d之化合物(0.410g,0.850mmol)之溶液中添加乙酸銨(0.786g,10.20mmol)。在140℃下於密封管中加熱4小時，然後冷卻並分配(NaHCO3水溶液-EtOAc)。使用鹽水洗滌有機相，乾燥(Na2SO4)，過濾並濃縮。藉由急驟管柱層析(二氧化矽，EtOAc-己烷)純化殘餘物以提供黃色發泡體形式之期望化合物(0.280g,71%)。ESIMS m/z=462.32、464.32[M+H]+。
中間體C5.
自步驟C4f分離呈次要產物形式之期望化合物。ESIMS m/z=462.23、464.22[M+H]+。
中間體C6.
步驟C6a.在-78℃及N2下，向存於THF(20mL)中之LiHMDS(1.0M，存於THF中，5.17mL,5.17mmol)之溶液中添加存於THF(10mL)中之(+)-(3R,7aS)-四氫-3-苯基-3H,5H-吡咯并[1,2-c]噁唑-5-酮(0.500g,2.460mmol)之溶液。將混合物在-78℃下攪拌30min，然後在-78℃下添加ClCO2Me(0.19mL,2.460mmol)。在-78℃下保持30分鐘之後，使用飽和NH4Cl溶液終止反應。將混合物升溫至室溫且蒸發揮發物。分配殘餘物(EtOAc-H2O)。使用鹽水洗滌有機物，乾燥(Na2SO4)，過濾並蒸發。藉由層析(二氧化矽，己烷-乙酸乙酯)純化殘餘物以得到無色 油狀物形式之期望化合物(0.598g,93%)。ESIMS m/z=262.13[M+H]+。
步驟C6b.在0℃下，向存於THF(13mL)中之來自步驟C6a之化合物(0.350g,1.340mmol)之溶液中添加Na(60%，存於礦物油中，64.3mg,1.607mmol)。在添加之後，去除冷卻浴。將混合物在室溫下攪拌15分鐘，然後添加烯丙基溴(0.13mL,1.474mmol)。在室溫下保持1小時之後，使用飽和NH4Cl溶液終止反應。分配混合物(EtOAc-H2O)。使用鹽水洗滌有機物，乾燥(Na2SO4)，過濾並蒸發。藉由層析(二氧化矽，己烷-乙酸乙酯)純化殘餘物以得到呈以下兩種經分離非對映異構體形式之期望化合物：次要非對映異構體(極性較小，56.0mg,14%),(3R,6R,7aS)-6-烯丙基-5-側氧基-3-苯基六氫吡咯并[1,2-c]噁唑-6-甲酸甲酯，ESIMS m/z=302.19[M+H]+；1H NMR(CDCl3)7.44-7.33(m,5H),6.32(s,1H),5.75-5.66(m,1H),5.19-5.18(m,1H),5.16(s,1H),4.28-4.22(m,2H),3.78(s,3H),3.57-3.52(m,1H),2.90(dd,J=6.7,13.4Hz,1H),2.85(dd,J=7.9,14.1Hz,1H),2.58(dd,J=6.7,14.1Hz,1H),1.89(dd,J=6.6,13.2Hz,1H)；主要非對映異構體(極性較大，0.222g,55%),(3R,6S,7aS)-6-烯丙基-5-側氧基-3-苯基六氫吡咯并[1,2-c]噁唑-6-甲酸甲酯，ESIMS m/z=302.19[M+H]+；1H NMR(CDC13)7.46-7.33(m,5H),6.33(s,1H),5.82-5.73(m,1H),5.23-5.18(m,2H),4.28(dd,J=6.2,6.5Hz,1H),4.08-4.02(m,1H),3.82(s,3H),3.67(t,J=8.3Hz,1H),2.80(dd,J=7.5,14.0Hz,1H),2.71(dd,J=7.1,14.0Hz,1H),2.54(dd,J=4.9,12.8Hz,1H),2.38(dd,J=7.9,13.8Hz,1H)。
步驟C6c.在室溫下，向存於THF/H2O(1/1,6mL)中之來自步驟C6b之主要非對映異構體(0.160g,0.585mmol)之溶液中添加OsO4(4wt%，存於H2O中，7.5μL,0.012mmol)，隨後添加NaIO4(0.263g, 1.229mmol)。將所得混合物在室溫下攪拌2小時，然後使用飽和Na2S2O3溶液驟冷。分配混合物(EtOAc-H2O)。使用鹽水洗滌有機物，乾燥(Na2SO4)，過濾並蒸發以提供無色油狀物形式之期望化合物(0.133g)，其直接用於下一步驟中。
步驟C6d.在0℃下，向存於EtOH(5mL)中之來自步驟C6c之化合物(0.133g，至多0.438mmol)之溶液中添加NaBH4(33.2mg,0.877mmol)。在0℃下保持20分鐘之後，將所得混合物在室溫下攪拌2.5小時。添加額外NaBH4(16.6mg,0.438mmol)。在室溫下保持2小時之後，使用飽和NH4Cl溶液終止反應。蒸發揮發物。將殘餘物吸收於EtOAc(含有5% MeOH)中並過濾。將濾液蒸發至乾燥。藉由層析(二氧化矽，EtOAc-MeOH)純化殘餘物以得到白色發泡體形式之期望化合物(67.6mg,46%，經2個步驟)。ESIMS m/z=278.17[M+H]+。
步驟C6e.在室溫下，向存於吡啶(28mL)中之來自步驟C6d之化合物(0.793g,2.860mmol)之溶液中添加甲苯磺醯氯(TsCl,0.600g,3.145mmol)。將所得溶液在室溫下攪拌40小時。添加額外TsCl(0.600g,3.145mmol)。在室溫下保持24小時之後，使用飽和NaHCO3溶液終止反應。將混合物蒸發至乾燥。將殘餘物吸收於CH2Cl2中並過濾。藉由層析(二氧化矽，己烷-乙酸乙酯)直接純化濾液以得到無色油狀物形式之期望化合物(0.511g,69%)。ESIMS m/z=260.16[M+H]+。
步驟C6f.在室溫下，向存於THF(20mL)中之來自步驟C6e之化合物(0.540g,2.082mmol)之溶液中添加LiAlH4(1.0M，存於Et2O中，4.16mL,4.16mmol)。將所得混合物在60℃下加熱2小時，然後冷卻。藉由小心添加H2O(0.16mL)、隨後15% NaOH溶液(0.16mL)且然後H2O(0.32mL)來終止反應。經由短矽藻土墊過濾懸浮液。蒸發濾液以得到白色半固體形式之期望化合物(0.572g)，其直接用於下一步驟中。ESIMS m/z=248.20[M+H]+。
步驟C6g.在室溫下，向存於MeOH(15mL)中之來自步驟C6f之化合物(至多2.082mmol)之溶液中添加HOAc(0.16mL,2.71mmol)，隨後添加Pd/C(10wt%,0.100g)。將所得混合物在室溫及H2(60psi)下攪拌2小時，然後經由短矽藻土墊過濾。蒸發濾液以得到無色油狀物形式之期望化合物，其直接用於下一步驟中。ESIMS m/z=158.11[M+H]+。
步驟C6h.在室溫下，向存於1,4-二噁烷/H2O(1/2,21mL)中之來自步驟C6g之化合物(至多2.082mmol)之溶液中添加NaHCO3(1.399g,16.66mmol)，隨後添加(Boc)2O(0.545g,2.498mmol)。將所得混合物在室溫下攪拌15小時。蒸發揮發物。分配殘餘物(EtOAc-H2O)。使用鹽水洗滌有機物，乾燥(Na2SO4)，過濾並蒸發。藉由層析(二氧化矽，己烷-乙酸乙酯)純化殘餘物以得到無色油狀物形式之期望化合物(0.252g,45%，經3個步驟)。ESIMS m/z=258.18[M+H]+。
步驟C6i.在室溫下，向存於CCl4-CH3CN-H2O(3/4/5,12mL)中之來自步驟C6h之化合物(0.252g,0.979mmol)之雙相混合物中添加RuCl3．xH2O(4.1mg,0.020mmol)，隨後添加NaIO4(0.419g,1.959mmol)。將所得混合物在室溫下攪拌2小時。蒸發揮發物。將殘餘物吸收於EtOAc中並過濾。使用鹽水洗滌濾液，乾燥(Na2SO4)並過濾。將來自過濾之固體溶於經稀釋鹽水中，酸化至pH約為2並使用EtOAc萃取。使用鹽水洗滌合併之有機物，乾燥(Na2SO4)，過濾並蒸發。藉由層析(二氧化矽，EtOAc-MeOH)純化殘餘物以得到無色油狀物形式之期望化合物(0.260g,98%)。ESIMS m/z=272.24[M+H]+。
步驟C6j.自步驟C6i之化合物及2,4’-二溴苯乙酮使用類似於中間體C2中所闡述程序的程序來製備期望化合物。ESIMS m/z=448.48、450.48[M+H]+。
中間體C7.
自步驟C6b之次要非對映異構體使用類似於中間體C6中所闡述程序的程序來製備期望化合物。ESIMS m/z=470.31,472.31[M+Na]+。
中間體C8.
自步驟C1a之次要非對映異構體使用類似於中間體C1中所闡述程序的程序來製備期望化合物。ESIMS m/z=470.30,472.30[M+Na]+。
中間體C9.
步驟C9a.在室溫下，向存於THF(25mL)中之來自步驟A18b之次要非對映異構體(1.380g,4.580mmol)之溶液中添加9-BBN(0.5M，存於THF中，22.90mL,11.45mmol)。將所得混合物在室溫下攪拌5小時，然後添加另一批9-BBN(0.5M，存於THF中，36.64mL,18.32mmol)。將溶液在室溫下攪拌15小時。添加H2O(約40mL)，隨後添加NaBO3．4H2O(9.642g,59.53mmol)。將混合物在室溫下攪拌2小時，然後分配(EtOAc-H2O)。使用EtOAc反萃取水層。使用鹽水洗滌合併之有機物，乾燥(Na2SO4)，過濾並蒸發。藉由急驟管柱層析(二氧化矽，己烷-EtOAc)純化殘餘物以得到無色油狀物形式之(3R,6S,7aS)-6-(羥甲基)-6-(3-羥丙基)-3-苯基四氫吡咯并[1,2-c]噁唑-5(1H)-酮(1.140g,85%)。ESIMS m/z=292.15[M+H]+。
步驟C9b.向存於DCM(10mL)中之來自步驟C9a之化合物(957mg,3.28mmol)、Ag2O(1.14g,4.92mmol)及NaI(110mg,0.63mol)之溶液中逐滴添加存於DCM(5mL)中之TsCl(688mg 3.61mmol)之溶液。將所得混合物在室溫下攪拌16小時，然後通過矽藻土墊。濃縮濾 液。藉由急驟管柱層析(二氧化矽，EtOAc-己烷)純化殘餘物以提供黃色固體形式之期望化合物(745mg,51%)。ESIMS m/z=446.23[M+H]+。
步驟C9c.向存於THF(35mL)中之來自步驟C9b之化合物(745mg,1.67mmol)之溶液中添加NaH(180mg,4.5mmol)。將所得混合物在30℃下加熱16小時，然後冷卻並使用冰/水驟冷。分配混合物(EtOAc-H2O)。分離有機相，乾燥(Na2SO4)並濃縮以提供油狀物，藉由急驟管柱層析(二氧化矽，EtOAc-己烷)純化以提供白色固體形式之期望化合物(402mg,88%)。ESIMS m/z=274.16[M+H]+。
步驟C9d.向存於THF(5mL)中之來自步驟C9c之化合物(405mg,1.47mmol)之溶液中添加LiAlH4(1M，存於THF中，3mL,3mmol)。將所得混合物在60℃下加熱2小時，然後冷卻。依序添加H2O(0.1mL)、NaOH(10%,0.15mL)及H2O(0.5mL)。使所得懸浮液通過矽藻土墊。分配濾液(H2O-EtOAc)。分離有機相，乾燥((Na2SO4)並濃縮。藉由急驟管柱層析(二氧化矽，EtOAc-己烷)純化殘餘物以提供無色油狀物形式之期望化合物(337mg,88%)。ESIMS m/z=262.16[M+H]+。
步驟C9e.向存於MeOH(6mL)中之來自步驟C9d之化合物(337mg,1.29mmol)之溶液中添加Pd/C(10%,30mg)。將所得混合物在H2(60psi)下攪拌6小時，然後經由矽藻土墊過濾。濃縮濾液以得到無色油狀物且直接用於下一步驟中。ESIMS m/z=172.13[M+H]+。
步驟C9f.向存於H2O(4mL)及二噁烷(2mL)中之來自步驟C9e之化合物(至多1.29mmol)及NaHCO3(650mg,8mmol)之溶液中添加Boc2O(340mg,1.55mmol)。將所得溶液在室溫下攪拌過夜，然後蒸發揮發物。分配粗產物(EtOAc-H2O)。分離有機相，乾燥((Na2SO4)並濃縮。藉由急驟管柱層析(二氧化矽，EtOAc-己烷)純化殘餘物以提 供白色固體形式之期望化合物(305mg,87%，經兩個步驟)。ESIMS m/z=272.18[M+H]+。
步驟C9g.向存於CCl4(3mL)/ACN(4mL)/H2O(5mL)中之來自步驟C9f之化合物(305mg,1.22mmol)及RuCl3．xH2O(4.6mg,0.0225mmol)之溶液中添加NaIO4(477mg,2.24mmol)。將所得混合物在室溫下攪拌2小時，然後經由矽藻土墊過濾。分配濾液(EtOAc-H2O)。分離有機相，乾燥(Na2SO4)並濃縮以提供油狀物(330mg)，其直接用於下一步驟中。ESIMS m/z=230.11[M+H-56]+
步驟C9h.自步驟C9g之化合物使用類似於中間體C1中所闡述程序的程序來製備期望化合物。ESIMS m/z=462.37、464.37[M+H]+。
中間體C10.
步驟C10a.在-78℃下，向存於THF(60mL)中之(+)-(3R,7aS)-四氫-3-苯基-3H,5H-吡咯并[1,2-c]噁唑-5-酮(2.10g,9.85mmol)之溶液中添加LiHMDS(1M，存於THF中，39.4mL,39.4mmol)。將所得混合物在-78℃下保持30分鐘，然後緩慢添加烯丙基溴(5.0mL,59.1mmol)。將反應液逐漸升溫至0℃並藉由NH4Cl水溶液驟冷。蒸發揮發物且分配殘餘物(EtOAc-H2O)。乾燥(Na2SO4)有機物，過濾並蒸發。藉由層析(二氧化矽，己烷-乙酸乙酯)純化殘餘物以得到極淺黃色油狀物形式之期望二烯丙基化化合物(2.30g,78%)。ESIMS m/z=284.16[M+H]+。
步驟C10b.在-78℃下，使臭氧流(自臭氧生成器生成)鼓泡通過存於MeOH(85mL)中之來自步驟C10a之化合物(2.30g,8.11mmol)之溶液直至出現藍色顏色為止。藉由氧流去除過量臭氧，然後在-78℃下添加NaBH4(2.46g,64.9mmol)。將混合物逐漸升溫至室溫並在室溫下 保持16小時，然後藉由2M HCl水溶液驟冷至pH 5。蒸發掉揮發物且分配殘餘物(EtOAc-H2O)。乾燥(Na2SO4)有機物，過濾並蒸發。藉由層析(二氧化矽，己烷-乙酸乙酯)純化殘餘物以得到無色油狀物形式之期望化合物(1.61g,68%)。ESIMS m/z=292.15[M+H]+。
步驟C10c.向存於CH2Cl2(40mL)中來自步驟C10b之化合物(1.52g,5.21mmol)、Ag2O(1.81g,7.80mmol)及KI(0.173g,1.04mmol)之混合物中緩慢添加存於CH2Cl2(20mL)中之TsCl(1.09g,5.73mmol)。將所得混合物在室溫下攪拌24小時，然後經由矽藻土過濾。蒸發濾液且藉由層析(二氧化矽，己烷-乙酸乙酯)純化殘餘物以得到無色油狀物形式之期望化合物(1.38g,60%)且回收來自步驟568b之化合物(0.473g,31%)。ESIMS m/z=446.07[M+H]+。
步驟C10d.向存於THF(62mL)中之來自步驟C10c之化合物(1.38g,3.11mmol)之溶液中添加NaH(60%，存於礦物油中，0.187g,4.67mmol)。將所得混合物在室溫下攪拌24小時，然後藉由NH4Cl水溶液驟冷。蒸發揮發物且分配殘餘物(EtOAc-H2O)。乾燥(Na2SO4)有機物，過濾並蒸發。藉由層析(二氧化矽，己烷-乙酸乙酯)純化殘餘物以得到無色油狀物形式之期望化合物(0.726g,86%)。ESIMS m/z=274.10[M+H]+。
步驟C10e.向存於THF(50mL)中之來自步驟C10d之化合物(0.726g,2.66mmol)之溶液中添加LiAlH4(1M，存於THF中，5.3mL,5.32mmol)。將所得混合物加熱至60℃保持3小時，然後在0℃下藉由依序添加H2O(0.20mL)、15% NaOH水溶液(0.20mL)及H2O(0.60mL)驟冷。使混合物通過矽藻土且蒸發濾液。分配殘餘物(EtOAc-H2O)且乾燥(Na2SO4)有機物，過濾並蒸發。藉由層析(二氧化矽，己烷-乙酸乙酯)純化殘餘物以得到無色油狀物形式之期望化合物(0.718g)。ESIMS m/z=262.21[M+H]+。
步驟C10f.向存於MeOH(16mL)中之來自步驟C10e之化合物(至多2.66mmol)及AcOH(0.30mL,5.32mmol)之混合物中添加鈀(10wt%，在碳上，54.8mg)。將所得混合物在60psi H2及室溫下氫化4小時，然後經由矽藻土過濾。濃縮濾液以得到無色油狀物形式之粗製期望化合物(0.782g)。ESIMS m/z=172.17[M+H]+。
步驟C10g.向存於1,4-二噁烷(10mL)及H2O(20mL)中之來自步驟C10f之粗製化合物(至多2.66mmol)及NaHCO3(1.79g,21.3mmol)之混合物中添加Boc2O(0.696g,3.19mmol)。將所得混合物在室溫下攪拌1天，然後蒸發至乾燥。分配殘餘物(EtOAc-H2O)且乾燥(Na2SO4)有機物，過濾並蒸發。藉由層析(二氧化矽，己烷-乙酸乙酯)純化殘餘物以得到無色油狀物形式之期望化合物(0.610g，3個步驟，85%)。ESIMS m/z=272.26[M+H]+。
步驟C10h.向存於四氯化碳(9mL)、CH3CN(12mL)及H2O(15mL)中之來自步驟C10g之化合物(0.610g,2.25mmol)之溶液中添加RuCl3 ．XH2O(9.3mg,45.0μmol)及NaIO4(0.963g,4.50mmol)。將所得混合物在室溫下攪拌4小時，然後分配(CH2Cl2-H2O)。將水相酸化至pH 3且藉由CH2Cl2萃取。乾燥(Na2SO4)合併之有機物，過濾並蒸發以得到淺褐色發泡體形式之粗製期望化合物(0.640g)。ESIMS m/z=286.24[M+H]+。
步驟C10i.自步驟C10h之化合物使用類似於中間體C1中所闡述程序的程序來製備期望化合物。ESIMS m/z=462.26、464.26[M+H]+。
中間體F1.
步驟F1a.使用溴(102μL,2mmol)將存於乙酸(10mL)中之2-溴- 6,7,8,9-四氫-5H-苯并[7]輪烯-5-酮(480mg,2mmol)之溶液在室溫下處理2小時，然後分配(EtOAc-水)。使用NaHCO3、鹽水洗滌有機物，乾燥(Na2SO4)，過濾並蒸發以得到黃色固體形式之期望化合物(750mg)，其直接用於下一步驟中。
步驟F1b.使用DIPEA(1.2mL)將存於乙腈(10mL)中之來自步驟F1a之粗製化合物(732mg)及(2S,3aS,7aS)-1-(第三丁氧基羰基)八氫-1H-吲哚-2-甲酸(620mg,2.3mmol)之溶液在60℃下處理7小時，然後冷卻並濃縮。藉由層析(二氧化矽，己烷-EtOAc)純化殘餘物以得到黃色發泡體形式之期望化合物(266mg,22%)。ESIMS m/z=506.07、508.07[M+H]+。
步驟F1c.使用NH4OAc(445mg 5.77mmol)將存於甲苯(10mL)中之來自步驟F1b之化合物(266mg,0.525mmol)之溶液在125℃下處理12小時，然後冷卻並分配(EtOAc-H2O)，使用H2O、NaHCO3水溶液、鹽水洗滌有機相，乾燥並濃縮。藉由層析(二氧化矽，己烷-EtOAc)純化殘餘物以得到淺黃色發泡體形式之期望化合物(39mg,15%)。ESIMS m/z=486.13、488.13[M+H]+。
中間體F2.
步驟F2a.使用存於1,4-二噁烷中之HCl(4M,0.5mL)將存於CH2Cl2(2mL)中之中間體F1(39mg,0.08mmol)之溶液處理1小時。蒸發掉揮發物以得到黃色固體形式之粗製期望化合物，其直接用於下一步驟中。ESIMS m/z=385.99、387.99[M+H]+。
步驟F2b.使用HATU(32mg,0.084mmol)將存於DCM(3mL)中之來自步驟F2a之粗製化合物(至多0.08mmol)及來自步驟A9b之化合物 (15.4mg,0.088mmol)的混合物在DIPEA(0.5mL)存在下於室溫下處理2小時。蒸發掉揮發物以提供褐色糖漿，藉由急驟管柱層析(二氧化矽，EtOAc-己烷)純化以得到淺黃色油狀物形式之標題化合物(37mg,85%,2個步驟)。ESIMS m/z=543.16、545.16[M+H]+。
中間體F3.
步驟F3a.使用羥胺鹽酸鹽(1.15g,16.52mmol)將存於EtOH(20mL)及H2O(20mL)中之7-溴-4-酮(2.50g,11.01mmol)及NaOAc(2.71g,33.04mmol)之混合物在回流下處理25分鐘，然後添加H2O(50ml)。在0℃下冷卻2小時之後，藉由過濾收集黃色固體沈澱物以得到粗製期望化合物(2.2g,83%)，其直接用於下一步驟中。
步驟F3b.使用對甲苯磺醯基酐(3.24g,10mmol)將存於CH2Cl2(80mL)中之來自步驟F3a之粗製化合物(至多9.10mmol)之溶液在TEA(1.71mL,10.9mmol)存在下於室溫下處理2小時，然後分配(CH2Cl2-水)。使用鹽水洗滌有機物，乾燥(Na2SO4)，過濾並蒸發以得到黃色固體形式之期望化合物(3.38g,94%)，其直接用於下一步驟中。
步驟F3c.將乙醇鉀(24% w/w，存於EtOH中，3.41mL,8.96mmol)及H2O(0.6mL)添加至存於EtOH(18mL)及甲苯(36mL)中之來自步驟F3b之粗製化合物(3.38g,8.53mmol)之溶液中。在室溫下攪拌19小時，然後在0℃下添加HCl(4N，存於二噁烷中，8mL)。繼續攪拌0.5小時。將其濃縮。將所得固體在二乙醚(50mL)中攪拌2h，然後過濾以得到黃色固體形式之粗製期望化合物(3.11g)，其直接用於下一步驟中。ESIMS m/z=242.05、244.05[M+H]+。
步驟F3d.使用存於DMF(4mL)中之N-Boc-脯胺酸(430mg,2mmol)、HATU(760mg,2mmol)及N-甲基嗎啉(0.48mL,4.4mmol)之 預製溶液將存於DMF(4mL)中之來自步驟F3c之粗製化合物(557mg,2mmol)及N-甲基嗎啉(0.48mL,4.4mmol)的溶液在室溫下處理2小時，然後分配(EtOAc-H2O)。使用H2O、NaHCO3水溶液、NH4Cl水溶液、鹽水洗滌有機相，乾燥並濃縮。藉由層析(二氧化矽，己烷-EtOAc)純化殘餘物以得到淺黃色固體形式之期望化合物(525mg,60%)。ESIMS m/z=461.21、463.21[M+Na]+。
步驟F3e.使用NH4OAc(1.28g,16.6mmol)將存於二甲苯(10mL)中之來自步驟F3d之化合物(730mg,1.66mmol)之溶液在130℃下處理4小時，然後冷卻並分配(EtOAc-H2O)。使用H2O、NaHCO3水溶液、鹽水洗滌有機相，乾燥並濃縮。藉由層析(二氧化矽，己烷-EtOAc)純化殘餘物以得到淺黃色發泡體形式之期望化合物(324mg,46%)。ESIMS m/z=442.21、444.21[M+Na]+。
中間體F4.
步驟F4a.使用存於1,4-二噁烷中之HCl(4M,1mL)將存於CH2Cl2(2mL)中之中間體F3(121mg,0.29mmol)之溶液處理1小時。蒸發掉揮發物以得到黃色固體形式之粗製期望化合物，其直接用於下一步驟中。ESIMS m/z=319.96、321.96[M+H]+。
步驟F4b.使用HATU(121mg,0.32mmol)將存於CH2Cl2(3mL)中之來自步驟F4a之粗製化合物(至多0.29mmol)及來自步驟A8b之化合物(55mg,0.32mmol)之混合物在DIPEA(0.5mL)存在下於室溫下處理2小時。蒸發掉揮發物以提供褐色糖漿，藉由急驟管柱層析(二氧化矽，EtOAc-己烷)純化以得到淺黃色固體形式之期望化合物(140mg,100%，2個步驟)。ESIMS m/z=477.22、479.22[M+H]+。
中間體F5.
步驟F5a.在-78℃及N2下，向存於THF(20mL)中之LiHMDS(1.0M，存於THF中，5.17mL,5.17mmol)之溶液中添加存於THF(10mL)中之(+)-(3R,7aS)-四氫-3-苯基-3H,5H-吡咯并[1,2-c]噁唑-5-酮(0.500g,2.460mmol)之溶液。將混合物在-78℃下攪拌30min，然後在-78℃下添加ClCO2Me(0.19mL,2.460mmol)。在-78℃下保持30分鐘之後，使用飽和NH4Cl溶液終止反應。將混合物升溫至室溫且蒸發揮發物。分配殘餘物(EtOAc-H2O)。使用鹽水洗滌有機物，乾燥(Na2SO4)，過濾並蒸發。藉由層析(二氧化矽，己烷-乙酸乙酯)純化殘餘物以得到無色油狀物形式之期望化合物(0.598g,93%)。ESIMS m/z=262.13[M+H]+。
步驟F5b.在0℃下，向存於THF(13mL)中之來自步驟F5a之化合物(0.350g,1.340mmol)之溶液中添加Na(60%，存於礦物油中，64.3mg,1.607mmol)。在添加之後，去除冷卻浴。將混合物在室溫下攪拌15分鐘，然後添加烯丙基溴(0.13mL,1.474mmol)。在室溫下保持1小時之後，使用飽和NH4Cl溶液終止反應。分配混合物(EtOAc-H2O)。使用鹽水洗滌有機物，乾燥(Na2SO4)，過濾並蒸發。藉由層析(二氧化矽，己烷-乙酸乙酯)純化殘餘物以得到呈以下兩種經分離非對映異構體形式之期望化合物：次要非對映異構體(極性較小，56.0mg,14%)，(3R,6R,7aS)-6-烯丙基-5-側氧基-3-苯基六氫吡咯并[1,2-c]噁唑-6-甲酸甲酯，ESIMS m/z=302.19[M+H]+；1H NMR(CDCl3)7.44-7.33(m,5H),6.32(s,1H),5.75-5.66(m,1H),5.19-5.18(m,1H),5.16(s,1H),4.28-4.22(m,2H),3.78(s,3H),3.57-3.52(m,1H),2.90(dd,J=6.7,13.4Hz,1H),2.85(dd,J=7.9,14.1Hz,1H),2.58(dd,J=6.7, 14.1Hz,1H),1.89(dd,J=6.6,13.2Hz,1H)；主要非對映異構體(極性較大，0.222g,55%)，(3R,6S,7aS)-6-烯丙基-5-側氧基-3-苯基六氫吡咯并[1,2-c]噁唑-6-甲酸甲酯，ESIMS m/z=302.19[M+H]+；1H NMR(CDCl3)7.46-7.33(m,5H),6.33(s,1H),5.82-5.73(m,1H),5.23-5.18(m,2H),4.28(dd,J=6.2,6.5Hz,1H),4.08-4.02(m,1H),3.82(s,3H),3.67(t,J=8.3Hz,1H),2.80(dd,J=7.5,14.0Hz,1H),2.71(dd,J=7.1,14.0Hz,1H),2.54(dd,J=4.9,12.8Hz,1H),2.38(dd,J=7.9,13.8Hz,1H)。
步驟F5c。自步驟F5b中之主要非對映異構體使用類似於步驟C9a至C9g中所闡述程序的程序來製備期望脯胺酸類似物(3S,5S)-2-(第三丁氧基羰基)-7-氧雜-2-氮雜螺[4.5]癸烷-3-甲酸。ESIMS m/z=308.40[M+Na]+(弱)。
另一選擇為，藉由步驟F5d至F5j製備步驟F5c之期望化合物。
步驟F5d.向裝配有機械攪拌器及溫度計之12L燒瓶中裝填THF(1.2L)。將其冷卻至-20℃。經10分鐘添加NaHMDS(1.0M，存於THF中，3.00L,3.00mol)。將溶液冷卻至-20℃。經由加料漏斗經15分鐘添加存於THF(400mL)中之(+)-(3R,7aS)-四氫-3-苯基-3H,5H-吡咯并[1,2-c]噁唑-5-酮(290.0g,1.427mol)之溶液。將所得橙色溶液在-20℃及N2下攪拌20分鐘。經45分鐘逐滴添加ClCO2Me(110.3mL,1.427mol)，同時保持內部溫度低於-20℃。將所得溶液在-20℃下攪拌20分鐘。經5分鐘添加3-溴-1-氯丙烷(564.4mL,5.708mol)。將混合物升溫並加熱至65℃。將混合物在65℃下攪拌4小時，然後冷卻並在室溫下靜置過夜。使用冰-水浴冷卻懸浮液。添加少許溴甲酚紫晶體。緩慢添加乙酸直至混合物之藍色消失為止(約添加0.8mL)。添加飽和NaHCO3溶液(300mL)。將混合物升溫至室溫。傾析澄清頂層，使用鹽(*2)水洗滌，乾燥(Na2SO4)，過濾並蒸發。將燒瓶中之底層與鹽水 洗滌液合併，使用水稀釋並使用EtOAc(×1)萃取。使用鹽水(×1)洗滌有機層，乾燥(Na2SO4)，過濾並蒸發。合併所有殘餘物並分成4部分，藉由急驟管柱層析(1.5KG矽膠管柱，存於己烷中之0~60%乙酸乙酯)純化以提供黃色蠟狀固體形式之期望化合物(320.0g,66%)。ESIMS m/z=338.20[M+H]+。
步驟F5e.向裝配有機械攪拌器及溫度計之5L燒瓶中裝填MeOH(1.8L)。將其冷卻至-10℃。經2分鐘添加CaCl2(118.3g,1.066mol)。將溶液冷卻回-10℃。經3分鐘添加來自步驟F5d之化合物(120.0g,0.552mol)之粉末。將混合物在-10℃下攪拌20分鐘。化合物粉末完全溶解。分4等份每15分鐘添加NaBH4(24.190g,0.6394mol)，同時維持內部溫度低於-5℃。在添加之後，將乳狀懸浮液在-10℃下攪拌40分鐘。小心添加飽和NH4Cl溶液(200mL)，同時維持內部溫度低於0℃。使用EtOAc(2L)稀釋混合物。添加額外之飽和NH4Cl溶液(約6L)及水(1L)以得到澄清混合物。分離各層。使用EtOAc(4L×2)萃取水層。合併有機層，使用鹽水(×1)洗滌，乾燥(Na2SO4)，過濾並蒸發。藉由經由短矽膠墊(800g)進行過濾來純化殘餘物以提供澄清黃色-綠色油狀物形式之期望化合物(94.0g,85%)。ESIMS m/z=310.24[M+H]+。
步驟F5f.在5℃下經2小時，向存於THF(3.5L)中之NaHMDS(1.0M，存於THF中，1.13L,1.13mol)之溶液中添加存於THF(1L)中之來自步驟F5e之化合物(290g,0.936mol)的溶液。將所得混合物升溫至室溫並在室溫下攪拌1小時。使用冰-水浴冷卻回5℃且添加NH4Cl飽和水溶液以將溶液pH調節至約為7。使用EtOAc(8L)稀釋混合物並使用水、鹽水(×2)洗滌。使用EtOAc(4L)萃取合併之水層並使用鹽水洗滌。乾燥(Na2SO4)合併之有機物，過濾並蒸發。自EtOAc-己烷使殘餘物重結晶以提供白色固體形式之期望化合物(207.7g)。濃縮母液並藉由急驟管柱層析(750g矽膠，存於己烷中之0~100%乙酸乙酯)純化以 提供另一批次(18.0g)白色固體形式之期望產物。ESIMS m/z=274.26[M+H]+。
步驟F5g.在室溫下，向裝配有機械攪拌器及溫度計之12L燒瓶中裝填來自步驟F5f之化合物(325.0g,1.189mol)及THF(3.25L)。經由加料漏斗經40分鐘添加LiAlH4(1.0M，存於THF中，1.427L,1.427mol)。在添加之後，將所得混合物加熱至60℃並在60℃下攪拌2小時，然後使用冰-水浴冷卻。藉由H2O(54.15mL)、隨後15% NaOH溶液(54.15mL)且然後H2O(162.45mL)小心終止反應。經由短矽藻土墊過濾所得懸浮液，使用THF(2L)洗滌。蒸發濾液。藉由經由短矽膠墊(700g)進行過濾使用EtOAc/MeOH(95/5)進一步純化殘餘物以得到黃色固體形式之期望化合物(277.7g,89%)。ESIMS m/z=262.26[M+H]+。
步驟F5h.在室溫下，向存於MeOH(1.4L)中之來自步驟F5g之化合物(286.0g,1.094mol)之溶液中添加10% Pd(OH)2/C(10wt%,28.6g)，隨後添加(Boc)2O(286.6g,1.313mol)。使用氫將所得混合物吹掃3次並在室溫及氫(60psi)下攪拌4小時，然後經由短矽藻土墊過濾。蒸發濾液。藉由急驟管柱層析(2×750g矽膠管柱，存於己烷中之10~100%乙酸乙酯)純化殘餘物以提供無色油狀物形式之期望化合物(285.0g,96%)。ESIMS m/z=272.23[M+H]+。
步驟F5i.瓊斯試劑(Jones reagent)(存於4.1M中之硫酸2.54M三氧化鉻)之製備：在攪拌下，向含有H2O(3.2L)之燒瓶中逐份裝填固體CrO3(2.14kg,21.4mol，高度毒性！)。在冷卻(冰-水浴)下，經由滴液漏斗緩慢裝填95~98% H2SO4(1.84L)，在該時段期間溫度增至35℃。在冷卻至約15℃後，進一步裝填H2O(2.96L)以得到約8.4L濃度為約2.54M之瓊斯試劑。
步驟F5j.將存於丙酮(2.5L)中之來自步驟F5h之化合物(285.0g, 1.050mol)之溶液冷卻至低於5℃。經60分鐘添加來自步驟F5i之瓊斯試劑(存於4.1M硫酸中之2.54M三氧化鉻，500mL，約1.2當量)，同時內部溫度逐漸升至30℃。在結束添加之後15分鐘，添加額外瓊斯試劑(41mL，約0.1當量)。然後去除冰-水浴。將懸浮液在室溫下攪拌30分鐘。藉由經15分鐘添加異丙醇(300mL)來終止反應。將混合物在室溫下攪拌15分鐘以得到上部澄清溶液及下部固體層。傾析上部澄清溶液並濃縮以留下含有大部分產物之油樣殘餘物。將固體溶於水(2.5L)中並與上述濃縮之殘餘油狀物合併。使用甲苯(2L)萃取混合物，且然後使用甲苯/EtOAc(1/1,0.8L)萃取。使用鹽水(0.7L)洗滌合併之有機層以得到存於甲苯中之粗產物溶液。使用1M NaOH(1L*1,0.5L*2)將含有產物之甲苯溶液萃取三次。使用冰-水浴冷卻合併之水性萃取物。添加6M HCl，同時維持內部溫度低於20℃直至pH約為2為止(添加約380mL)。使用EtOAc(1.5L*1,2L*1)萃取混合物。使用鹽水洗滌合併之有機層，藉由Na2SO4乾燥，過濾並濃縮。使用甲苯(*3)及二甲苯(*2)以共沸方式蒸發殘餘物，在真空下乾燥以提供灰白色固體形式之期望化合物(218.7g,73%)。ESIMS m/z=308.25[M+Na]+(弱)。
步驟F5k.自步驟F5a及F3c之化合物使用類似於中間體F3及F4中所闡述程序的程序來製備期望化合物。ESIMS m/z=547.22、549.22[M+H]+。
中間體F6.
自步驟F3c之化合物及(2S,3aS,7aS)-1-(第三丁氧基羰基)八氫-1H-吲哚-2-甲酸使用類似於中間體F3及F4中所闡述程序的程序來製備期望化合物。ESIMS m/z=531.42、533.42[M+H]+。
中間體F7.
步驟F7a.向存於乙腈(100mL)中之(2S,3aS,7aS)-1-(第三丁氧基羰基)八氫-1H-吲哚-2-甲酸(3.18g,11.8mmol)及市售6-溴萘-1,2-二胺(3.08g,13.0mmol)之溶液中添加EDC．HCl(2.96g,15.5mmol)，隨後添加DMAP(144mg,1.18mmol)。將混合物在室溫下攪拌過夜並濃縮以提供暗色糖漿，藉由層析(二氧化矽，EtOAc-己烷)純化以提供暗褐色油狀物形式之期望化合物(區域異構體混合物)(5.42g,94%)。ESIMS m/z=488.14、490.14[M+H]+。
步驟F7b.將存於乙酸(50mL)中之來自步驟F7a之化合物之溶液在60℃下加熱1小時，然後冷卻。濃縮，然後分配於H2O與EtOAc之間。使用NaHCO3水溶液、鹽水洗滌有機相，乾燥(Na2SO4)並濃縮。藉由層析(二氧化矽，EtOAc-己烷)純化殘餘物以提供黃色固體形式之期望化合物(5.42g,95%)。ESIMS m/z=470.18、472.18[M+H]+。
中間體F8.
步驟F8a.使用存於1,4-二噁烷中之HCl(4M,10mL)將存於CH2Cl2(30mL)中之中間體F7(3.94g,8.37mmol)之溶液在室溫下處理1小時。蒸發掉揮發物以得到黃色固體形式之粗製期望化合物，其直接用於下一步驟中。ESIMS m/z=370.08、372.08[M+H]+。
步驟F8b.使用HATU(3.25g,8.54mmol)將存於CH2Cl2(30mL)中之來自步驟F8a及A8b之粗製化合物(1.61g,9.20mmol)之混合物在DIPEA(8mL)存在下於室溫下處理3小時且蒸發掉揮發物。藉由層析(二氧化矽，EtOAc-己烷)純化粗產物以得到黃色固體形式之期望化合 物(4.62g,100%)。ESIMS m/z=527.16、529.16[M+H]+。
中間體F9.
步驟F9a.在室溫下，向存於二氯甲烷(90mL)中之(S,S,S)-2-氮雜雙環[3.3.0]辛烷-3-甲酸苄基酯鹽酸鹽(5.000g,17.74mmol)之溶液中添加(Boc)2O(4.066g,18.63mmol)及DIPEA(6.80mL,39.04mmol)。將混合物在室溫下攪拌2小時，然後濃縮。藉由急驟管柱層析(330g矽膠管柱，存於己烷中之0~40%乙酸乙酯)純化殘餘物以得到無色油狀物形式之期望化合物(6.190g,100%)。
步驟F9b.在室溫下，向存於MeOH(90mL)中之來自步驟F9a(6.190g,17.90mmol)之化合物之溶液中添加20% Pd(OH)2/C(25.1mg,0.2mol%)。使用氫吹掃混合物並在室溫及氫(氣囊)下攪拌過夜，然後經由短矽藻土墊過濾。蒸發濾液以得到無色油狀物形式之期望化合物(7.820g,105%)，其直接用於下一步驟中。
步驟F9c.向存於乙腈(100mL)中之來自步驟F9b之化合物(2.50g,9.79mmol)及6-溴萘-1,2-二胺(2.44g,10.3mmol)之溶液中添加EDC．HCl(2.44g,12.7mmol)及DMAP(119mg,0.979mmol)。將溶液在室溫下攪拌過夜並濃縮以提供暗色糖漿，藉由層析(二氧化矽，EtOAc-己烷)純化以提供暗褐色油狀物形式之期望化合物(區域異構體混合物)(4.18g,90%)。ESIMS m/z=474.12、476.12[M+H]+。
步驟F9d.將存於乙酸(50mL)中之來自步驟F9c之化合物(區域異構體混合物)之溶液在60℃下加熱1h，然後冷卻。濃縮混合物，然後分配於H2O與EtOAc之間。分離有機相，並使用NaHCO3水溶液(*3)、鹽水洗滌，乾燥(Na2SO4)，並濃縮以提供褐色漿液，藉由層析(二氧化矽，EtOAc-己烷)純化以提供黃色發泡體形式之期望化合物(3.98g, 98%)。ESIMS m/z=478.16、480.16[M+Na]+。
中間體F10.
自中間體F9及來自步驟A8b之化合物使用類似於中間體F8中所闡述程序的程序來製備期望化合物。ESIMS m/z=356.11、358.11[M+H]+。
中間體F11.
自步驟F5c或F5j之化合物及6-溴-萘-1,2-二胺使用類似於中間體F7及F9中所闡述程序的程序來製備期望化合物。ESIMS m/z=486.51、488.51[M+H]+。
中間體F12.
自中間體F11及來自步驟A8b之化合物使用類似於中間體F8中所闡述程序的程序來製備期望化合物。ESIMS m/z=543.25、545.26[M+H]+。
中間體F13.
步驟F13a.向存於乙腈(18mL)中之N-Boc-L-脯胺酸(0.386g,1.79mmol)及6-溴-萘-1,2-二胺(0.425g,1.79mmol)之溶液中添加EDC．HCl(0.447g,2.33mmol)及DMAP(21.9mg,0.179mmol)。在室溫下攪拌3小時並濃縮以提供暗色糖漿，藉由層析(二氧化矽，EtOAc-己烷)純化 以提供暗褐色油狀物形式之期望化合物(區域異構體混合物)(0.74g,95%)。ESIMS m/z=434.07.14、436.07[M+H]+。
步驟F13b.將存於乙酸(8mL)中之來自步驟F13a之化合物(區域異構體混合物)之溶液在60℃下加熱2小時，然後冷卻。濃縮，然後分配於H2O、EtOAc與DCM之間。使用NaHCO3水溶液(*2)、鹽水洗滌有機相，乾燥(Na2SO4)，並濃縮。藉由層析(二氧化矽，EtOAc-己烷)純化殘餘物以提供黃色固體形式之期望化合物(0.71g,100%)。ESIMS m/z=438.14、440.14[M+Na]+。
中間體F14.
步驟F14a.使用存於1,4-二噁烷中之HCl(4M,12mL)將存於CH2Cl2-MeOH(3：1,6mL)中之中間體F13(0.71g,1.70mmol)之溶液在室溫下處理2小時。蒸發掉揮發物以得到黃色固體形式之粗製期望化合物，其直接用於下一步驟中。
步驟F14b.使用HATU(0.648g,1.70mmol)將存於MeCN(17mL)中之來自步驟F14a之粗製化合物(至多1.70mmol)及A8b(0.30g,1.70mmol)之混合物在DIPEA(2.97mL,17.0mmol)存在下於室溫下處理1小時。蒸發掉揮發物。藉由層析(二氧化矽，EtOAc-己烷)純化粗製物以得到經四甲基脲污染之黃色發泡體形式之期望化合物(0.92g,100%)。ESIMS m/z=473.21、475.21[M+H]+。
中間體F15.
步驟F15a.在室溫下，向存於CH2Cl2(25mL)中之(2R,3aS,6aR)-1-(第三丁氧基羰基)六氫-1H-呋喃并[3,4-b]吡咯-2-甲酸(自(R)-5-苯基嗎 啉-2-酮及2-(烯丙基氧基)乙醛藉由類似於JP 2009298713中所闡述程序的程序製得，1.13g,4.4mmol)、苄基醇(0.95g,8.8mmol)、DIPEA(2.27g,17.6mmol)及DMAP(54mg,0.44mmol)之溶液中添加HATU(4.18g,11mmol)。將所得溶液在室溫下攪拌過夜。濃縮且藉由層析(二氧化矽，EtOAc-己烷)純化殘餘物以提供經苄基醇污染之期望產物(1.40g,78%)。ESIMS m/z=370.25[M+Na]+。
步驟F15b.向存於CH2Cl2(4mL)中之來自步驟F15a之化合物(1.3g)之溶液中添加存於二噁烷中之4N HCl溶液(6mL,24mmol)。將所得混合物在室溫下攪拌1.5小時，然後濃縮。使用MBTE研磨。將不溶性物質溶於水(20mL)中，使用10% Na2CO3水溶液鹼化至PH 10。然後使用EtOAc萃取混合物。使用鹽水洗滌有機物，乾燥(Na2SO4)，過濾並蒸發。藉由急驟管柱層析(二氧化矽，EtOAc-己烷)純化殘餘物以得到無色油狀物形式之期望化合物(0.77g,83%)。ESIMS m/z=248.21[M+H]+。
步驟F15c.在冰-水浴中，向存於DMF(3mL)中之來自步驟F15b之化合物(0.77g,3.11mmol)及K2CO3(94.6mg,0.684mmol)之混合物中分三份添加NCS(0.482g,3.61mmol)。在0℃下攪拌1小時，然後添加DBU(0.79g,5.2mmol)。將混合物緩慢升溫至室溫並攪拌過夜。分配殘餘物(乙醚-H2O)且使用水、鹽水洗滌有機物，乾燥(Na2SO4)，過濾並蒸發以得到無色油狀物形式之期望化合物(0.75g,97%)。ESIMS m/z=246.2[M+H]+。
步驟F15d.向存於EtOH(5mL)中之來自步驟F15c之化合物(0.170g,0.533mmol)之溶液中添加Pd/C(5wt%，在碳上，400mg)。將混合物在60psi氫氣及室溫下氫化1天，然後經由矽藻土塞過濾。使用40mL MeOH洗滌濾餅。濃縮濾液以得到黃色油狀物形式之粗產物(0.47g,95%)。ESIMS m/z=158.13[M+H]+。
步驟F15e.在室溫下，向存於二噁烷-H2O(6mL-4mL)中之來自步驟F15d之化合物(0.47g,3.0mmol)之溶液中添加NaOH(156mg,3.9mmol)及(Boc)2O(1.31g,6.0mmol)。將混合物在35℃下攪拌過夜，然後分配(Et2O-H2O)。將水相在0℃下酸化至pH~2並使用EtOAc萃取。使用鹽水洗滌有機物，乾燥(Na2SO4)，過濾並蒸發以得到無色油狀物形式之粗製期望化合物(0.24g,31%)。ESIMS m/z=280.13[M+Na]+。
步驟F15f.自步驟F15e之化合物及6-溴-萘-1,2-二胺使用類似於中間體F13中所闡述程序的程序來製備期望化合物。ESIMS m/z=458.15、460.15[M+H]+。
中間體F16.
自步驟A22e之化合物及6-溴-萘-1,2-二胺使用類似於中間體F7中所闡述程序的程序來製備期望化合物。ESIMS m/z=428.23、430.23[M+H]+。
中間體F17.
自中間體F16使用類似於中間體F14中所闡述程序的程序來製備期望化合物。ESIMS m/z=485.23、487.23[M+H]+。
中間體F18.
自Boc-L-八氫吲哚-2-甲酸及6-溴-1-四氫萘酮遵循類似於中間體F2中所闡述程序的程序來製備期望化合物。ESIMS m/z=529.20、531.20[M+H]+。
中間體F19.
步驟F19a.使用9-BBN(0.5M，存於THF中，71mL,35.5mmoL)將存於THF(50mL)中之(S)-4-亞甲基吡咯啶-1,2-二甲酸1-第三丁基酯2-甲酯(5.7g,23.6mmol)之溶液在室溫下處理5小時，然後在0℃下添加H2O(50mL)。添加過硼酸鈉(NaBO3．H2O,12.3g,80mmol)且混合物在室溫下攪拌過夜。經由矽藻土過濾且分配濾液(EtOAc-H2O)。乾燥(Na2SO4)有機物，過濾並蒸發。藉由層析(二氧化矽，己烷-乙酸乙酯)純化粗製物以得到非對映異構體混合物及無色油狀物形式之期望化合物(4.20g,68%)。
步驟F19b.使用LiOH(161mg,6.7mmol)將存於THF(15mL)及H2O(15mL)中之來自步驟F19a之化合物(1.45g,5.6mmol)之溶液在室溫下處理4小時，然後濃縮。將殘餘物溶於水中並藉由HCl(4M)酸化至pH 2。使用EtOAc萃取。乾燥(Na2SO4)有機物，過濾並蒸發以得到白色固體形式之期望化合物(1.30g,95%)，其直接用於下一步驟中。
步驟F19c.使用NaH(60% w/w,466mg,11.7mmol)將存於DMF(10mL)中之來自步驟F19b之化合物(1.30g,5.3mmol)之溶液在0℃下處理30分鐘，添加MeI(0.36mL,5.83mmol)。在室溫下攪拌1.5小時，然後使用冰-水驟冷並使用MTBE萃取。藉由HCl(4M)將水相酸化至pH 2並使用EtOAc萃取。乾燥(Na2SO4)萃取物，過濾並蒸發以得到橙色糖漿形式之期望化合物(0.94g,68%)，其係不可分離非對映異構體之混合物。
步驟F19d.自步驟F19c之化合物及6-溴-萘-1,2-二胺遵循類似於中間體F7中所闡述程序的程序來製備期望化合物並分離為主要產物(極性較大)。ESIMS m/z=460.17、462.17[M+H]+。
中間體F20.
在步驟F19c中，製備期望化合物並分離為次要產物(極性較小)。ESIMS m/z=460.13、462.13[M+H]+。
中間體F21.
步驟F21a.使用第三丁醇鉀(1M溶液，存於THF中，16mL,16mmol)將存於THF(5mL)中之(1-丙基)三苯基溴化鏻(6.16g,16mmol)之懸浮液在室溫下處理1.5小時，然後添加存於THF(5mL)中之(S)-1-(第三丁氧基羰基)-4-側氧基吡咯啶-2-甲酸(0.916g,4.0mmol)。在室溫下攪拌16小時。使用水(100mL)驟冷並使用二乙醚(2×100mL)萃取。分離水層並使用硫酸氫鉀水溶液在室溫下酸化至pH 3，並使用乙酸乙酯(100mL)萃取兩次。使用鹽水洗滌有機物並蒸發以得到呈Z/E異構體混合物形式之粗製期望化合物。使用重氮三甲基矽烷基甲烷(TMSCHN2,4.5mL,2.0M，存於己烷中，9.0mmol)將存於MeOH(20mL)中之此粗製物之溶液在室溫下處理0.5小時。蒸發掉揮發物且藉由層析(二氧化矽，EtOAc-己烷)純化殘餘物以得到呈Z/E異構體混合物形式之期望化合物(0.88g,81%)。ESIMS m/z=292.26[M+Na]+。
步驟F21b.將來自步驟F21a之化合物(0.54g,2.0mmol)及鈀(10%，在碳上，54mg)之混合物在室溫及氫(60psi)下攪拌2天。經由矽藻土過濾，濃縮濾液以得到呈非對映異構體混合物形式之期望化合物(0.53g,97%)。
步驟F21c.使用LiOH(0.16g,3.82mmol)將存於THF-H2O(6mL/2mL)中之來自步驟F21b之粗製化合物(0.52g,1.91mmol)之溶液在室溫 下處理72小時。蒸發掉揮發物且使用水(10mL)稀釋殘餘物並使用乙醚(10mL)萃取。使用硫酸氫鉀水溶液在冰-水浴中將水相酸化至pH 3。使用EtOAc萃取。使用Na2SO4乾燥萃取物並濃縮以提供白色固體形式之期望化合物(0.46g,93%，順式/反式，3/1)。ESIMS m/z=280.23[M+Na]+。
步驟F21d.使用EDC.HCl(0.19g,1.0mmol)及DMAP(9.4mg,0.08mmol)將存於乙腈(8mL)中之來自步驟F21c之化合物(0.20g,0.78mmol)及6-溴萘-1,2-二胺(0.19g,0.81mmol)之溶液在室溫下處理過夜。濃縮以提供暗色糖漿，藉由層析(二氧化矽，EtOAc-己烷)純化以提供暗褐色油狀物形式之期望化合物(區域異構體及非對映異構體之混合物)(0.30g,81%)。ESIMS m/z=498.34、500.34[M+Na]+。
步驟F21e.將存於乙酸(4mL)中之來自步驟F21d之化合物(0.29g,0.61mmol)之溶液在60℃下加熱1小時。濃縮且將殘餘物分配於H2O與EtOAc之間。分離有機相，使用NaHCO3水溶液及鹽水洗滌，並乾燥(Na2SO4)。濃縮以提供褐色漿液，藉由層析(二氧化矽，EtOAc-己烷)純化以提供主要異構體形式之期望化合物(黃色固體，0.20g,71%)。ESIMS m/z=458.38、460.38[M+H]+。
中間體H1.
根據WO 2008/021927中所闡述之程序來製備期望化合物。
中間體H2.
步驟H2a.將存於DMF(15mL)中之(2S,3aS,7aS)-1-(第三丁氧基羰基)八氫-1H-吲哚-2-甲酸(0.808g,3.0mmol)、O,N-二甲基羥胺鹽酸鹽 (0.32g,3.3mmol)、HATU(1.37g,3.6mmol)及DIPEA(0.93g,7.2mmol)之混合物在室溫下攪拌過夜，然後分配(EtOAc-H2O)。使用飽和碳酸氫鈉、水、鹽水洗滌有機物，乾燥(Na2SO4)，過濾並蒸發。將殘餘物溶於二乙醚(30mL)中並使用水洗滌，乾燥(Na2SO4)，過濾並濃縮以得到淺黃色油狀物形式之標題化合物(849mg,90%)。ESIMS m/z=235.1[M+Na-Boc]+。
步驟H2b.使用LiAlH4(1M，存於THF中，3mL,3.0mmol)將存於THF(18mL)中之來自步驟H2a之化合物(849mg,2.7mmol)之溶液在-78℃下處理1小時並在0℃下處理2小時。使用7.7mL硫酸氫鉀溶液(3.0g KHSO4，存於50mL水中)驟冷。在室溫下攪拌15分鐘之後，進行分配(EtOAc-H2O)。使用鹽水洗滌有機物，乾燥(Na2SO4)，過濾並蒸發以得到粗製期望醛(0.71g,100%)。ESIMS m/z=276.16[M+Na]+。
步驟H2c.向存於MeOH-水(6mL/2mL)中之來自步驟H2b之粗製化合物(0.71g，至多2.9mmol)之溶液中添加氫氧化銨(28%,2mL)及乙二醛(40%，存於水中，2mL,13.8mmol)。在室溫下攪拌過夜。添加飽和碳酸氫鈉且使用CH2Cl2萃取混合物。使用水、鹽水洗滌有機物，乾燥(Na2SO4)，過濾並蒸發以得到粗產物，藉由急驟管柱層析(二氧化矽，己烷-EtOAc(1% Et3N))純化以得到淺黃色固體形式之期望化合物(398mg,49%)。ESIMS m/z=292.24[M+H]+。
步驟H2d.在0℃下，向存於THF(6mL)中之來自步驟H2c之化合物(0.39g,1.37mmol)之溶液中添加NBS(0.51g,2.87mmol)。緩慢升溫至室溫並在室溫下攪拌16小時，然後蒸發。藉由急驟管柱層析純化殘餘物以得到黃色固體形式之期望化合物(510mg,83%)。ESIMS m/z=470.19、472.19、474.19[M+Na]+。
步驟H2e.將存於EtOH-H2O(4mL-4mL)中之來自步驟H2d之化合 物及亞硫酸鈉(Na2SO3,1.42g,11.3.mmol)之混合物回流16小時。裝填額外Na2SO3(1.42g,11.3mmol)且再繼續回流24小時。在冷卻之後，分配(EtOAc-H2O)。使用鹽水洗滌有機物，乾燥(Na2SO4)，過濾，濃縮，並藉由矽膠層析純化以得到期望化合物(0.31g,ESIMS m/z=392.28,394.28[M+Na]+)及步驟H3d之化合物(88mg)。
中間體H3.
自步驟F5c或F5j之化合物遵循類似於中間體H2中所闡述程序的程序來製備期望化合物。ESIMS m/z=408.29、410.29[M+Na]+。
中間體J1.
將存於DME-H2O(6mL-2mL)中之2-(8-氯-6H-苯并[c]烯-3-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼(根據WO 2012/068234製得，200mg,0.58mmol)、中間體H3(136mg,0.367mmol)、NaHCO3(123mg,1.47mmol)及Pd(PPh3)4(42.4mg,0.037mmol)之混合物在90℃及N2下攪拌16小時，然後冷卻至室溫並分配(EtOAc-H2O)。使用鹽水洗滌有機物，乾燥(Na2SO4)，過濾，濃縮，並藉由矽膠層析純化以得到期望化合物(0.12g,65%)ESIMS m/z=506.39、508.34[M+H]+。
中間體J2.
步驟J2a.將存於二噁烷(28mL)中之2,7-二溴菲(1.00g,3.0mmol)、三丁基-(1-乙氧基乙烯基)錫(1.08g,3.0mmol)、Pd(PPh3)4(139mg,0.12mmol)及Pd(PPh3)2Cl2(84.2mg,0.12mmol)之混合物在85℃下攪拌過夜，然後冷卻至室溫。依序添加水(8.0mL)及 NBS(561mg,3.15mmol)。在1小時之後，將其分配(EtOAc-水)。使用鹽水洗滌有機物，乾燥(Na2SO4)，過濾並蒸發以得到粗製期望化合物。
步驟J2b.將存於乙腈(30mL)中之來自步驟J2a之粗製化合物(至多3.0mmol)及(2S,3aS,7aS)-1-(第三丁氧基羰基)八氫-1H-吲哚-2-甲酸(1.61g,6.0mmol)及DIPEA(1.04mL,6.0mol)之混合物在室溫下攪拌16小時。蒸發掉揮發物。藉由急驟管柱層析純化殘餘物以得到油狀物形式之期望化合物(0.72g,42%，經2個步驟)。ESIMS m/z=588.41、590.41[M+Na]+。
步驟J2c.將存於二甲苯(10mL)中之來自步驟J2b之化合物(0.72g,1.38mmol)及乙酸銨(1.27g,16.5mmol)之混合物在140℃下於密封管中加熱4小時。蒸發揮發物且分配殘餘物(EtOAc-NaHCO3水溶液)。使用鹽水洗滌有機物，乾燥(Na2SO4)，過濾並蒸發。藉由層析(二氧化矽，己烷-乙酸乙酯)純化殘餘物以得到褐色發泡體形式之期望化合物(0.38g,50%)。ESIMS m/z=546.17、548.17[M+H]+。
中間體J3.
步驟J3a.將存於1,4-二噁烷(9mL)中之2,6-二溴蒽(0.300g,0.893mmol)、三丁基(1-乙氧基-乙烯基)錫(0.31mL,0.893mmol)及Pd(PPh3)4(0.103g,89.3μmol)之混合物脫氣並在85℃及N2下加熱16小時，然後冷卻。添加水(3mL)及NBS(0.167g,0.937mmol)。將懸浮液在室溫下攪拌1小時，然後分配(EtOAc-H2O)。使用鹽水洗滌有機物，乾燥(Na2SO4)，過濾並蒸發以提供黃色固體，其直接用於下一步驟中。
步驟J3b.在室溫下，向存於乙腈(9mL)中之來自步驟J3a之粗製 化合物(至多0.893mmol)及Boc-L-八氫吲哚-2-甲酸(0.481g,1.786mmol)之溶液中逐滴添加DIPEA(0.30mL,1.696mmol)。將溶液在室溫下攪拌3天，然後分配(EtOAc-NaHCO3水溶液)。使用鹽水洗滌有機物，乾燥(Na2SO4)，過濾並蒸發。藉由急驟管柱層析(二氧化矽，EtOAc-己烷)純化殘餘物以提供黃色固體形式之期望化合物(0.145g,29%，經3個步驟)。ESIMS m/z=588.09、590.09[M+Na]+。
步驟J3c.向存於二甲苯(2.5mL)中之來自步驟J3b之化合物(0.145g,0.256mmol)之溶液中添加乙酸銨(0.237g,3.072mmol)。將所得混合物在140℃下於密封管中加熱4h，然後冷卻並分配(NaHCO3水溶液-EtOAc)。使用鹽水洗滌有機相，乾燥(Na2SO4)，過濾並濃縮。藉由急驟管柱層析(二氧化矽，EtOAc-己烷)純化殘餘物以提供黃色油狀物形式之期望化合物(40.7mg,29%)。ESIMS m/z=546.41、548.41[M+H]+。
使用類似於上述程序之程序來製備下列期望中間體。
實例1.
將存於DME(3mL)及H2O(1mL)中之中間體C4(35.0mg,75.7μmol)及B15(47.3mg,90.8μmol)、NaHCO3(25.4mg,0.303mmol)及 Pd(PPh3)4(8.7mg,7.6μmol)之混合物脫氣並在98℃及N2下加熱3小時。蒸發掉揮發物。藉由急驟管柱層析(二氧化矽，己烷-EtOAc-MeOH)純化殘餘物以提供黃色固體形式之標題化合物(41.7mg,71%)。ESIMS m/z=776.74[M+H]+。
實例2.
步驟2a.使用存於1,4-二噁烷中之HCl(4M,2mL)將存於CH2Cl2-MeOH(3：1,2mL)中之來自實例1之化合物(41.7mg,53.7μmol)之溶液在室溫下處理2小時。蒸發掉揮發物以得到黃色固體形式之粗製期望化合物，其直接用於下一步驟中。
步驟2b.使用HATU(20.4mg,53.7μmol)在DIPEA(0.14mL,0.806mmol)存在下將存於DMF(3mL)中之來自步驟2a之粗製化合物(至多53.7μmol)及A8b(9.4mg,53.7μmol)之混合物在室溫下處理1小時。蒸發掉揮發物。藉由急驟管柱層析(二氧化矽，二氧化矽，己烷-EtOAc-MeOH-Et3N)純化殘餘物，且然後藉由反相HPLC(CH3CN-H2O)純化以得到淺黃色固體形式之標題化合物(32mg,71%，經2個步驟)。ESIMS m/z=833.69[M+H]+。
實例3.
自中間體C5及B15及步驟A9b之化合物遵循類似於實例1及2中所闡述程序的程序來製備標題化合物。ESIMS m/z=833.73[M+H]+。
實例4.
自中間體B4及F11遵循類似於實例1中所闡述程序的程序來製備標題化合物。ESIMS m/z=788.68[M+H]+。
實例5.
自實例4之化合物遵循類似於實例2中所闡述程序的程序來製備標題化合物。ESIMS m/z=845.57[M+H]+。
實例6.
自中間體F11及B18及步驟A8b之化合物遵循類似於實例1及2中所闡述程序的程序來製備標題化合物。ESIMS m/z=869.51[M+H]+。
實例7.
自中間體F11及B17及步驟A8b之化合物遵循類似於實例1及2中所闡述程序的程序來製備標題化合物。ESIMS m/z=883.76[M+H]+。
實例8.
自中間體B20及F11及步驟A8b之化合物遵循類似於實例1及2中所 闡述程序的程序來製備標題化合物。ESIMS m/z=859.70[M+H]+。
實例9.
自中間體F11及B7及步驟A8b之化合物遵循類似於實例1及2中所闡述程序的程序來製備標題化合物。ESIMS m/z=897.77[M+H]+。
實例10.
自中間體F12及B21遵循類似於實例1中所闡述程序的程序來製備標題化合物。ESIMS m/z=873.65[M+H]+。
實例11.
自中間體F12及B8遵循類似於實例1中所闡述程序的程序來製備標題化合物。ESIMS m/z=903.79[M+H]+。
實例12.
將存於DME(3mL)及H2O(1mL)中之中間體H3(16.3mg,0.0423mmol)及B13(25.1mg,0.0423mmol)、NaHCO3(14.2mg,0.169mmol)及Pd(PPh3)4(4.9mg,4.23μmol)之混合物脫氣且然後在98℃及N2下加熱4小時，然後冷卻。蒸發揮發物。將殘餘物吸收於二氯甲烷中並過 濾。藉由急驟管柱層析(二氧化矽，己烷-乙酸乙酯，且在乙酸乙酯中含有1% MeOH及1% Et3N)直接純化濾液以得到黃色油狀物形式之期望化合物(12.5mg,38%)。ESIMS m/z=773.48[M+H]+。
實例13.
自來自實例12之化合物遵循類似於實例8中所闡述程序的程序來製備標題化合物。ESIMS m/z=887.73[M+H]+。
實例14.
自中間體F18及B8遵循類似於實例1中所闡述程序的程序來製備標題化合物。ESIMS m/z=889.56[M+H]+。
實例15.
步驟15a.向存於1,2-二甲氧基乙烷(4.5mL)及H2O(1.5mL)中之中間體B9(114mg,0.19mmol)及H3(41mg,0.106mmol)及NaHCO3(35.6mg,0.424mmol)之溶液中添加Pd(PPh3)4(24.5mg,0.021mmol)。將混合物脫氣並在N2下加熱至100℃保持16小時。蒸發揮發物且分配殘餘物(EtOAc-H2O)。使用鹽水洗滌有機相，乾燥(Na2SO4)，過濾並蒸發。對殘餘物實施層析(二氧化矽，CH2Cl2-MeOH)以得到淺黃色固體形式之標題化合物(39mg,50%)。ESIMS m/z=777.81[M+H]+。
步驟15b.使用存於1,4-二噁烷中之HCl(4M,3mL)將存於CH2Cl2 -MeOH(2mL-0.6mL)中之來自步驟15a之化合物(39mg,0.05mmol)之溶液處理2小時。蒸發掉揮發物以得到黃色固體形式之粗製期望化合物，其直接用於下一步驟中。
步驟15c.使用HATU(38mg,0.10mmol)在DIPEA(0.09mL,0.50mmol)存在下將存於DMF(3.0mL)中之來自步驟15b之粗製化合物(至多0.05mmol)及A9b(17.5mg,0.10mmol)之混合物在室溫下處理30min.。蒸發掉揮發物以提供褐色糖漿，藉由層析(二氧化矽，CH2Cl2-MeOH)及Prep-HPLC(MeCN-H2O)純化以得到白色固體形式之標題化合物(22mg,49%，經2個步驟)。ESIMS m/z=891.65[M+H]+。
實例16.
向存於DME(10mL)及水(3mL)中之中間體B7(165mg,0.30mmol)及C3(130mg,0.25mmol)之混合物中裝填NaHCO3(84mg,1.0mmol)及Pd(PPh3)4(29mg,0.025mmol)。脫氣並在98℃下攪拌3小時，然後冷卻。濃縮混合物且藉由層析(二氧化矽，EtOAc/己烷及EtOAc/MeOH/TEA)純化殘餘物以提供黃色固體形式之標題化合物(186mg,85%)。ESIMS m/z=873.54[M+H]+。
實例17.
自中間體B10及H3使用類似於實例15中所闡述程序的程序來製備標題化合物。ESIMS m/z=887.8[M+H]+。
使用類似於上述程序之程序來製備下列標題化合物。
。
SD大鼠中之IV及PO單一劑量藥物動力學研究
在雄性斯普拉-道來氏(Sprague-Dawley，SD)大鼠(250-300g)中表徵所選化合物之藥物動力學。在此研究中，兩組幼稚SD大鼠(N=1/組) 以靜脈內(IV)濃注投藥形式(N=2，2mg/kg或更小(若受限於溶解性))經由尾靜脈或藉由口服管飼(N=3,20mg/kg)接受所選化合物。靜脈內(IV)投藥媒劑係5%乙醇及95%之存於水中之20% 2-羥丙基β-環糊精。口服投藥媒劑係33%之5號微乳預濃縮物(Microemulsion Preconcentrate)(基於脂質之自乳化藥物遞送系統，SEDDS)及67%之50mM檸檬酸鹽緩衝液(最終pH為3.6)。
自頸靜脈或其他適宜靜脈在指定時間點收集連續血樣(大約各0.3mL)。對於IV投藥組而言，在投藥前及開始投藥之後0.08、0.25、0.50、1、3、6、8及24小時時收集血樣。對於口服組而言，在投藥前及投藥之後0.08、0.25、0.50、1、3、6、8及24小時時收集血樣。將血樣收集至含有EDTA-K3作為抗凝血劑之VACUTAINERTM管中且在大約4℃下離心以獲得血漿。將血漿試樣儲存於-20℃下直至藉由LC/MS/MS分析為止。
研發利用偶合至串聯質譜之高效液相層析(LC/MS/MS)之生物分析方法以用於在大鼠血漿中分析所選化合物。使用多反應監測(MRM)實施檢測；在四極1(Q1)中選擇代表前體(M+H)+物質之離子且與氮氣在碰撞單元(Q2)中碰撞以生成特定產物離子，隨後藉由四極3(Q3)檢測。在雄性大鼠血漿中製備標準曲線及品質控制試樣且以與測試試樣相同之方式處理以生成定量數據。
使用非房室藥物動力學分析(Phoenix WinNonlin，6.3版)生成藥物動力學參數。將低於量化下限(LLOQ)之值指定為零值(若在投藥前)且然後按遺漏值處理。使用線性梯形法則計算曲線下面積(AUC)。藉由比較在經口投與後血漿中化合物之曲線下面積(AUC)與在靜脈內投與後所生成者來測定口服生物可用性(F%)。
生物學活性 1. HCV複製子細胞系
自純系分離HCV複製子細胞系(由R.Bartenschlager友好提供)(如由Lohman等人(Lohman等人(1999)Science 285：110-113，其全部內容以引用方式明確併入本文中)所闡述)且用於所有實驗中。HCV複製子具有EMBL登錄編號：AJ242651中所陳述之核酸序列，其編碼序列係來自核苷酸1801至8406。
合成所公開HCV複製子之編碼序列且隨後使用標準分子生物學技術組裝於改質質粒pBR322(Promega,Madison,WI)中。一種複製子細胞系(「SGR 11-7」)穩定表現由以下組成之HCV複製子RNA：(i)融合至衣殼蛋白之前12個胺基酸之HCV 5'UTR，(ii)新黴素磷酸轉移酶基因(neo)，(iii)來自腦心肌炎病毒(EMCV)之IRES及(iv)HCV NS2至NS5B基因及HCV 3'UTR。由Vrolijk等人(Vrolijk等人(2003)Journal of Virological Methods 110：201-209，其全部內容以引用方式明確併入本文中)闡述之另一複製子細胞系(「Huh-luc/neo-ET」)穩定表現由以下組成之HCV複製子RNA：(i)融合至衣殼蛋白之前12個胺基酸之HCV 5'UTR，(ii)螢火蟲螢光素酶報告基因，(iii)泛素基因，(iv)新黴素磷酸轉移酶基因(neo)，(v)來自腦心肌炎病毒(EMCV)之IRES及(vi)具有細胞培養適應性突變(E1202G、T1280I、K1846T)之HCV NS3至NS5B基因及HCV 3'UTR。
將該等細胞系以0.75mg/ml或0.5mg/ml(分別對於11-7及Huh-luc/neo-ET細胞而言)在37℃、5% CO2、100%相對濕度下維持於含有10%胎牛血清(「FCS」,Invitrogen)、1%非必需胺基酸(Invitrogen)、1% Glutamax(Invitrogen)、1% 100X青黴素(penicillin)/鏈黴素(streptomycin)(目錄編號：15140-122,Invitrogen)及遺傳黴素(Geneticin)(目錄編號：10131-027,Invitrogen)之DMEM(目錄編號：11965-084,Invitrogen)中。
2. HCV複製子分析-qRT-PCR
藉由HCV RNA檢測使用定量RT-PCR根據製造商說明利用ABI模型7500溫度循環器上之TAQMAN® One-Step RT-PCR Master Mix Reagents套組(目錄編號：AB 4309169,Applied Biosystems)來測定單一藥劑化合物之EC50值。藉由HCV RNA檢測使用定量RT-PCR以類似方式測定組合之EC50值。自Integrated DNA Technologies獲得用於檢測及量化HCV RNA之TAQMAN引子。將HCV RNA正規化至經藥物處理之細胞中之GAPDH RNA含量，其係使用Human GAPDH Endogenous Control Mix(Applied Biosystems,AB 4310884E)來檢測及量化。自96孔板使用RNAqueous 96套組(Ambion，目錄編號：AM1812)純化總細胞RNA。使用MTS分析根據製造商說明(Promega)來評估化學藥劑細胞毒性。
3. HCV複製子分析-螢光素酶
因通常在單一藥劑療法後於病毒感染中產生臨床藥物抗性，故需要評估組合療法之加和、拮抗或協同性質。使用HCV複製子系統評估本發明化合物或與干擾素α、環孢素類似物及靶向其他HCV蛋白之抑制劑之組合療法之潛在用途。在「Huh-luc/neo-ET」複製子中使用在6點兩倍稀釋曲線(定中心於每一藥物之EC50周圍)中於X或Y方向上滴定之每一化學藥劑研究單一藥物或藥物組合之急性效應。簡言之，將複製子細胞以7,000個細胞/孔接種於90ul DMEM(無酚紅，Invitrogen目錄編號：31053-036)/孔(含有10% FCS、1%非必需胺基酸、1% Glutamax及1% 100X青黴素/鏈黴素)中並在37℃、5% CO2、100%相對濕度下培育過夜。在接種細胞之後16-20h，將測試化合物(先前已溶解且自每一X板及Y板滴定於二甲基亞碸(「DMSO」)中)以1：100稀釋於DMEM(無酚紅，Invitrogen目錄編號：31053-036，含有10% FCS、1%非必需胺基酸、1% Glutamax及1% 100X青黴素/鏈黴素)中，且以1：10稀釋度直接添加至含有細胞及生長培養基之96孔板中以 達成化合物及DMSO之1：1000之最終稀釋度(0.2% DMSO最終濃度)。將經藥物處理之細胞在37℃、5% CO2、100%相對濕度下培育72小時，然後使用100ul/孔BriteLite Plus(Perkin Elmer)根據製造商說明實施螢光素酶分析。數據分析利用由Prichard及Shipman(Antiviral Research,1990.14：181-205)公開之方法。使用此方法，在藉由所稀釋化合物組合產生之整個組合表面上分析組合數據之拮抗、加和或協同組合效應。
4.在HCV複製子系統量測抑制效應
測定化合物針對代表基因型(GT)1a、1b、2a及3a之HCV複製子之活性。為生成穩定之基於Huh-7.5之細胞系，改造HCV複製子以表現融合至新黴素磷酸轉移酶(Neo)基因之Renilla螢光素酶報告子(hRluc)。GT2a及GT3a HCV複製子係基於JFH-1亞基因組複製子(Kato等人，2003 Gastroenterology,125：1808-1817)，其中NS5A基因經菌株J6及S52之基因(分別係GT2a及G3a)代替。亦在瞬態複製分析中測定化合物針對編碼NS5A突變(M28T、Q30R、L31M、Y93C及Y93H)之GT1a複製子之活性。親代GT1a及GT2a複製子(分別係pH/SG-Neo(L+I)及pSG-Neo-JFH1)係自Apath LLC(Saint Louis,MO)許可。親代GT1b複製子(pFKi389lucubineo_3_3’_ET)係自ReBLikon GmbH(Germany)許可。藉由下文所闡述之標準分子生物學技術來構築HCV複製子。藉由限制性酶消化及DNA測序驗證所有複製子構築體。
GT 1a亞基因組複製子之生成：藉由使用pH77-S之相應序列代替pH/SG-Neo(L+I)NS3-NS5A編碼區域從而產生pH/SG-lucubineo-H77S來改質pH/SG-Neo(L+I)以增加螢火蟲螢光素酶報告子基因及其他適用性突變，如(Borawski J等人，2009,J Virol 83：10058-10074)所闡述。隨後，使用hRluc-Neo盒代替螢火蟲螢光素酶-Neo盒。為產生獨特選殖位點，使用QuickChange II XL定點突變套組(Agilent)及下列引子： NotI KO Fwd 5’-CTC AAA CTC ACT CCA ATA GCT GCC GCT GGC CGG CTG GAC-3’(去除NotI位點之G→T突變加以下劃線)(SEQ.ID NO.1)及NotI KO Rev 5’-GTC CAG CGG GCC AGC GGC AGC TAT TGG AGT GAG TTT GAG-3’(去除NotI位點之C→A突變加以下劃線)(SEQ.ID NO.2)來去除NS5B中之NotI限制位點。對所得載體pH/SG-lucubineo-H77S-NotIKO進行測序以證實NS5B基因。自pF9巨細胞病毒(CMV)hRluc-Neo Flexi(R)(Promega)使用Accuprime Super Mix II(Invitrogen)及引入限制位點之下列引子：AscI hRluc-Neo Fwd,5’-GGG CGC GCC ATG GCT TCC AAG GTG TAC G-3’(AscI位點加以下劃線)(SEQ.ID NO.3)及NotI hRluc Rev,5’-CGC GGC CGC TCA GAA GAA CTC GTC AAG-3’(NotI位點加以下劃線)(SEQ ID NO.4)對hRluc-Neo盒實施PCR擴增。將擴增產物亞選殖至pCR2.1-TOPO(Invitrogen)中。使用AscI及NotI消化所得質粒，且使用Promega Rapid Ligation套組(Promega)將切斷之hRluc-Neo片段連接至經相同酶消化之pH/SG-lucubineo-H77S-NotIKO中。
GT 1b亞基因組複製子之生成：自pF9巨細胞病毒(CMV)hRluc-Neo Flexi(R)(Promega)使用Accuprime Super Mix II(Invitrogen)及引入限制位點之下列引子：AscI hRluc-Neo Fwd,5’-GGG CGC GCC ATG GCT TCC AAG GTG TAC G-3’(AscI位點加以下劃線)(SEQ.ID NO.3)及NotI hRluc Rev,5’-CGC GGC CGC TCA GAA GAA CTC GTC AAG-3’(NotI位點加以下劃線)(SEQ ID NO.4)對hRluc-Neo盒實施PCR擴增。將擴增產物亞選殖至pCR2.1-TOPO(Invitrogen)中。使用AscI及NotI消化所得質粒，且使用Roche Quick Ligation套組(Roche)將切斷之hRluc-Neo片段連接至經相同酶消化之pFKi389lucubineo_3_3’_ET中。
表現來自GT2a(菌株J6)及GT3a(菌株S52)之NS5A之GT2a嵌合 複製子之生成：自pSG-Neo-JFH1生成質粒pSG-hRlucNeo-JFH1(Kato等人，2003,Gastroentrology 125：1808-1817)。合成含有JFH-1 5’NTR-hRluc-Neo基因及兩個獨特限制位點(AgeI及PmeI)之片段(Integrated DNA Technologies,Coralville,IA)。使用AgeI及PmeI消化所得合成質粒且將切斷之片段(5’NTR-hRluc-Neo)連接至經相同酶消化之pSG-Neo-JFH1中以生成pSG-hRlucNeo-JFH1。為表現異源性NS5A序列，自pSG-Neo-JFH1生成NS5A穿梭載體，其中使用AfeI限制位點代替NS5A之整個編碼序列以及NS5B之前8個密碼子。藉由Infusion選殖(Clontech,Mountain View,CA)自兩種使用pSG-Neo-JFH1作為模板及下列引子對生成之PCR產物來進行此過程：NsiI-Fwd 5’-AAG TAC ATC GCC ACA TGC ATG CAA GCT GAC CTT GAG GTC ATG ACC-3’(SEQ.ID NO.5)及AfeI-Rev 5’-AGC GCT GCA TGG GAT GGG GCA GTC CTC AG-3’(SEQ.ID NO.6)；AfeI-Fwd 5’-CCC ATC CCA TGC AGC GCT CTA ATA ACT CCC TGT AGC CCC GAA G-3’(SEQ.ID NO.7)及SnaBI-Rev 5’-CAT GGG CCC TCC TAC GTA AAG TCT CTC AGT CAG CGA GTG TAT GG-3’(SEQ.ID NO.8)。加以下劃線之序列表示Infusion選殖所需之重疊區域。遵循製造商說明將經純化PCR產物直接選殖至NsiI/SnaBI消化之pSG-Neo-JFH1中以生成pSG-Neo-JFH1-5A穿梭體。然後將來自pSG-hRlucNeo-JFH1之2023個鹼對AgeI/PmeI片段連接至pSG-Neo-JFH1-5A穿梭體中以生成pSG-hRlucNeo-JFH1-5A穿梭體。為生成2a-2a-(J6)及2a-3a-(S52)NS5A嵌合複製子，藉由GeneArt(Life Technologies,Carlsbad CA)合成來自GT2a菌株J6(登錄編號：AF177036)及GT3a菌株S52(登錄編號：GU814263)且增加JFH-1 NS5B之前8個密碼子(5’-TCC ATG TCA TAC TCC TGG ACC GGG-3’)之全長NS5A序列。然後自合成純系使用適當正向引子：J6NS5A-F 5’-CCC ATC CCA TGC AGC GGC TCG TGG CTC CGC GAT GTG TGG-3’(SEQ.ID NO.9)或S52NS5A-F 5’-CCC ATC CCA TGC AGC GGC GAT TGG CTG CGT GAC ATC TGG-3’(SEQ.ID NO.10)及反向引子JFH-5B-R 5’-GGG AGT TAT TAG AGC CCC GGT CCA GGA GTA TGA CAT GGA-3’(SEQ.ID No.11)對J6及S52NS5A序列實施PCR擴增。加以下劃線之序列表示Infusion選殖所需之與pSG-hRlucNeo-JFH1-5A穿梭體重疊之區域。藉由Infusion選殖遵循製造商說明將經純化PCR產物直接選殖至AfeI消化之穿梭載體中。
GT1a複製子中之NS5A突變之生成：pH/SG-PI-hRluc-H77S係在嵌合HCV脊髓灰質炎病毒IRES控制下表現hRluc之細胞培養液適應性雙順反子GT1a亞基因組複製子。藉由腦心肌炎病毒(EMCV)IRES驅使HCV非結構蛋白NS3至NS5之表現。5種適用性突變(NS3中之Q41R及V629I；NS4A中之K34R；NS5A中之K68R及S232I)容許在細胞培養液中有效複製(Yi及Lemon.2004,J.Virol.78(15)：7904-7915)。使用QuickChange II XL定點突變套組(Agilent Technologies,Santa Clara,CA)及下列引子對將NS5A突變M28T、Q30R、L31V、Y93C及Y93H(GT1a NS5A編號)引人pH/SG-PI-hRluc-H77S質粒中：1a-M28T-f 5’-GCT GAA AGC CAA GCT CAC GCC ACA ACT GCC TGG-3’(SEQ.ID No.12)，1a-M28T-r 5’-CCA GGC AGT TGT GGC GTG AGC TTG GCT TTC AGC-3’(SEQ.ID No.13)；1a-Q30R-f 5’-GCC AAG CTC ATG CCA CGC CTG CCT GGG ATT CC-3’(SEQ.ID No.14)，1a-Q30R-r 5’-GGA ATC CCA GGC AGG CGT GGC ATG AGC TTG GC-3’(SEQ.ID No.15)；1a-L31V-f 5’-GCT CAT GCC ACA AGT GCC TGG GAT TCC CTT TG-3’(SEQ.ID No.16)，1a-L31V-r 5’-CAA AGG GAA TCC CAG GCA CTT GTG GCA TGA GC-3’(SEQ.ID No.17)；1a-Y93C-f 5’-CGT TCC CCA TTA ACG CCT GCA CCA CGG GCC CCT G-3’(SEQ.ID No.18)，1a-Y93C-r 5’-CAG GGG CCC GTG GTG CAG GCG TTA ATG GGG AAC G-3’(SEQ.ID No.19)；1a-Y93H-f 5’-CGT TCC CCA TTA ACG CCC ACA CCA CGG GCC CCT G-3’(SEQ.ID No.20)，1a-Y93H-r 5’-CAG GGG CCC GTG GTG TGG GCG TTA ATG GGG AAC G-3’(SEQ.ID No.21)。
正向引子(-f)中之加以下劃線之序列指示突變位置。
細胞維持及複製子分析：在完整培養基(達爾伯克改良伊戈爾培養基(Dulbecco’s modified Eagle medium)[DMEM]、2mM L-麩醯胺酸、0.1mM必需胺基酸、1mM丙酮酸鈉、10%熱失活胎牛血清)中生長穩定HCV複製子細胞系且添加500μg/ml慶大黴素(gentamycin)(G418)。將Huh7-lunet細胞維持於同一培養基中且並不添加G418。每週兩次以1：4之稀釋度使細胞以常規方式進行傳代。用於螢光素酶報告子HCV複製子及細胞毒性分析之分析培養基使用無酚紅DMEM且缺乏G418。對於每一穩定複製子分析而言，將化合物之16點半對數稀釋系列覆蓋(0.5ul化合物/孔)至三個直接添加細胞(4000個細胞/孔)之重複384孔板中。對於瞬態複製分析而言，使用10ug經純化活體外轉錄HCV複製子RNA對存於冰冷磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)中之Huh7-lunet細胞實施電穿孔(BioRad電穿孔儀；950uF,270V)，隨後再懸浮於完整培養基中並平鋪(8000個細胞/孔)至覆蓋化合物之384孔板中。相對於經DMSO處理之細胞在培育72h之後使用RENILLA-GLOTM 螢光素酶分析(Promega)量測經化合物處理之細胞之螢光素酶活性。使用CELL TITER-GLOTM(Promega)分析GT1b複製子細胞系中之細胞毒性(CC50)。
本發明化合物可藉由除NS5A抑制外之機制來抑制HCV。在一實施例中本發明化合物抑制HCV複製子且在另一實施例中本發明化合物抑制NS5A。
本發明化合物可有效抵抗HCV 1b基因型。亦應理解，本發明化合物可抑制HCV之多個基因型。在一實施例中，本發明化合物有效抵抗1a、1b、2a、2b、3a、4a及5a基因型。在另一實施例中，本發明化合物有效抵抗HCV抗性突變體。下文所陳述之表展示本發明之代表性化合物針對HCV 1a、1b、2a-J6、3a基因型及1a NS5A抗性變體來自上述qRT-PCR或螢光素酶分析之EC50值。針對HCV GT 1a及GT 1b之EC50係以pM表示；且針對GT 2a-J6、GT 3a及GT1a抗性變體(M28T、Q30R、L31V、Y93C及Y93H)係以nM表示。
。
下表呈現某些式(I)化合物及相應參考化合物之對比數據。
。
與達卡他韋之對比
GT3a-S52及GT4a-ED43複製子之生成：藉由Genscript合成GT3a-S52複製子質粒pSGRlucneo-GT3a-S52-HDVR-(ISH)。此質粒編碼GT3a(菌株S52，登錄編號：GU814264)雙順反子亞基因組複製子，後者在第一順反子中編碼hRluc-Neo報告子基因且在第二順反子中編碼NS3-NS5B(由腦心肌炎病毒(EMCV)內核糖體進入位點(IRES)驅使)。D型肝炎核酶(HDVR)包含於HCV 3’NTR之後，且後接用於線性化之獨特SpeI限制位點。此複製子編碼三種細胞培養適用性突變P1226S(NS3)、D1437H(NS3)及S2210I(NS5A)，如先前所闡述(Saeed等人2012 Antimicrob.Agents Chemother.54：1878-1887)。藉由Genscript合成GT4a-ED43複製子質粒pSGRlucneo-GT4a-ED43-HDVR-(KG)。此質粒編碼GT4a(菌株ED43，登錄編號：GU814266)雙順反子亞基因組複製子，後者在第一順反子中表現hRluc-Neo報告子基因且在第二順反子中表現NS3-NS5B(由EMCV IRES驅使)。HDVR包含於HCV 3’NTR之後，且後接用於線性化之獨特XbaI限制位點。此複製子編碼兩種細胞培養適用性突變T1369K(NS3)及R2882G(NS5B)，如先前所闡述(Saeed等人2012 Antimicrob.AgentsChemother.54：1878- 1887)。
為生成穩定複製子細胞系，藉由限制酶消化對複製子質粒實施線性化(GT3a,SpeI；GT4a,XbaI)並使用Qiagen MinElute管柱純化。自線性化複製子模板使用T7 RiboMax Express Large Scale活體外轉錄系統(Promega)來生成RNA。在轉錄後，使用無RNase之DNase處理反應液並使用RNeasy Mini套組(Qiagen)純化。使用10μg活體外轉錄複製子RNA對Huh7.5細胞實施電穿孔(Bio-Rad Gene Pulser：950μF,270V)，平鋪於細胞培養盤中，並培育24h，然後添加含有G418(500μg/mL)之完整培養基。藉由在G418(500μg/mL)存在下傳代大約4-5週來選擇含有複製子之細胞。彙集所選純系，擴增，並冷藏保存，然後測試化合物。
表現來自不同HCV基因型之NS5A之GT2a及嵌合複製子之生成：自pSG-Neo-JFH1生成質粒pSG-hRlucNeo-JFH1(Kato等人，2003,Gastroentrology 125：1808-1817)。合成含有JFH-1 5’NTR-hRluc-Neo基因及兩個獨特限制位點(AgeI及PmeI)之片段(Integrated DNA Technologies,Coralville,IA)。使用AgeI及PmeI消化所得質粒且將切斷之片段(5’NTR-hRluc-Neo)連接至經相同酶消化之pSG-Neo-JFH1中以生成pSG-hRlucNeo-JFH1。為表現異源性NS5A序列，自pSG-Neo-JFH1生成NS5A穿梭載體，其中使用AfeI限制位點代替NS5A之整個編碼序列以及NS5B之前8個密碼子。此係藉由Infusion選殖(Clontech,Mountain View,CA)自兩種使用pSG-Neo-JFH1作為模板及下列引子對生成之PCR產物來進行：NsiI-Fwd 5’-AAGTACATCGCCACATGCATGCAAGCTGACCTTGAGGTCATGACC-3’(SEQ.ID No.5)
AfeI-Rev 5’-AGCGCTGCATGGGATGGGGCAGTCCTCAG-3’(SEQ.ID No.6)
AfeI-Fwd 5’-CCCATCCCATGCAGCGCTCTAATAACTCCCTGTAGCCCCGAA G-3’(SEQ.ID No.7)
SnaBI-Rev 5’-CATGGGCCCTCCTACGTAAAGTCTCTCAGTCAGCGAGTGTATGG-3’(SEQ.ID No.8)。
遵循製造商說明將經純化PCR產物直接選殖至NsiI/SnaBI消化之pSG-Neo-JFH1中以生成pSG-Neo-JFH1-5A穿梭體。然後將來自pSG-hRlucNeo-JFH1之2023個鹼對AgeI/PmeI片段連接至pSG-Neo-JFH1-5A穿梭體中以生成pSG-hRlucNeo-JFH1-5A穿梭體。
為表現GT6a NS5A嵌合序列，藉由Infusion選殖自兩種使用pSG-Neo-JFH1作為模板及下列引子生成之PCR產物來構築基於JFH1之N-末端NS5A(NS5A殘基2-107)穿梭載體：NsiI-Fwd 5’-AAGTACATCGCCACATGCATGCAAGCTGACCTTGAGGTCATGACC-3’(SEQ.ID No.5)
AfeI-Rev 5’-AGCGCTGCATGGGATGGGGCAGTCCTCAG-3’(SEQ.ID No.6)
AfeI-Fwd 5’CCCATCCCATGCAGCGCTATCTGGAGGGTGGCGGCCTCGGAG-3’(SEQ.ID No.10)
SnaBI-Rev 5’-CATGGGCCCTCCTACGTAAAGTCTCTCAGTCAGCGAGTGTATGG-3’。(SEQ.ID No.11)
藉由Infusion選殖遵循製造商說明將經純化PCR產物插入NsiI/SnaBI消化之pSG-Neo-JFH1載體中以生成pSG-Neo-JFH1-Nterm_5A穿梭體。然後將來自pSG-hRlucNeo-JFH1之2023個鹼對AgeI/PmeI片段連接至pSG-Neo-JFH1-5A穿梭體中以生成pSG-hRlucNeo-JFH1-Nterm_5A穿梭體。
為生成NS5A嵌合複製子，合成來自不同HCV基因型之一組NS5A 序列(Life Technologies,Carlsbad CA)並增加JFH-1 NS5B之前8個密碼子(5’-TCC ATG TCA TAC TCC TGG ACC GGG-3’(SEQ ID No.44)。然後自合成構築體使用下列正向及反向引子對來對NS5A序列實施PCR擴增：GT2a-2a-J6-f CCCATCCCATGCAGCGGCTCGTGGCTCCGCGATGTGTGG(SEQ.ID No.22)
GT2a-2a-J6-r GGGAGTTATTAGAGCCCCGGTCCAGGAGTATGACATGGA(SEQ.ID No.23)
GT2a-2b-MD2b-f CCCATCCCATGCAGCGGGTCTTGGCTCCGGGACGTTTGG(SEQ.ID No.24)
GT2a-2b-MD2b-r GGGAGTTATTAGAGCCCCGGTCCAGGAGTATGACATGGA(SEQ.ID No.23)
GT2a-2b-J8-f CCCATCCCATGCAGCGGGTCTTGGCTCCAG(SEQ.ID No.25)
GT2a-2b-J8-r GGGAGTTATTAGAGCCCCGGTCCAGGAGTATGACATGGAGCAGCAGATAACAG(SEQ.ID No.26)
GT2a-3a-S52-f CCCATCCCATGCAGCGGCGATTGGCTGCGTGACATCTGG(SEQ.ID No.27)
GT2a-3a-S52-r GGGAGTTATTAGAGCCCCGGTCCAGGAGTATGACATGGA(SEQ.ID No.23)
GT2a-5a-SA13-f CCCATCCCATGCAGCGGCACATGGCTAAGGGCCATTTGG(SEQ.ID No.28)
GT2a-5a-SA13-r GGGAGTTATTAGAGCCCCGGTCCAGGAGTATGACATGGA(SEQ.ID No.23)
GT2a-6a-EUKH2-f CCCATCCCATGCAGCACCTCATGGTTACGCGACGTGTGG(SEQ.ID No.29)
GT2a-6a-EUKH2-r CACCCTCCAGATAGCGAACTTATAGTTCGGCGCAGGAGG(SEQ.ID No.30)
GT2a-6a-HK6a-f CCCATCCCATGCAGCACCTCATGGTTGCGCGACGTGTGG(SEQ.ID No.31)
GT2a-6a-HK6a-r CACCCTCCAGATAGCGAACTTATAGTTCGGCGCAGGAGG(SEQ.ID No.32)
GT2a-7a-QC69-f CCCATCCCATGCAGCGGGAGCTGGCTCCGGGAGGTGTGG(SEQ.ID No.33)
GT2a-7a-QC69-r GGGAGTTATTAGAGCCCCGGTCCAGGAGTATGACATGGA(SEQ.ID No.23)
藉由Infusion選殖遵循製造商說明將經純化PCR產物直接選殖至AfeI消化之穿梭載體中。
為生成穩定複製子細胞系，藉由限制酶消化對複製子質粒實施線性化(XbaI)並使用Qiagen MinElute管柱純化。自線性化複製子模板使用T7 RiboMax Express Large Scale活體外轉錄系統(Promega)來生成RNA。在轉錄後，使用無RNase之DNase處理反應液並使用RNeasy Mini套組(Qiagen)純化。使用10μg活體外轉錄複製子RNA對Huh7.5細胞實施電穿孔(Bio-Rad Gene Pulser：950μF,270V)，平鋪於細胞培養盤中，並培育24h，然後添加含有G418(500μg/mL)之完整培養基。藉由在G418(500μg/mL)存在下傳代大約4-5週來選擇含有複製子之細胞。彙集所選純系，擴增，並冷藏保存，然後測試化合物。
GT1a複製子中之NS5A突變之生成：pH/SG-PI-hRluc-H77S係在嵌合HCV脊髓灰質炎病毒IRES控制下表現hRluc之細胞培養液適應性雙順反子GT1a亞基因組複製子。藉由EMCV IRES驅使HCV非結構蛋白NS3至NS5之表現。5種適用性突變(NS3中之Q41R及V629I；NS4A中之K34R；NS5A中之K68R及S232I)容許在細胞培養液中有效複製 (Yi及Lemon.2004,J.Virol.78(15)：7904-7915)。使用QuickChange II XL定點突變套組(Agilent Technologies,Santa Clara,CA)及下列引子對來合成NS5A突變(Genscript)或引入pH/SG-PI-hRluc-H77S中：1a-M28T-f 5’-GCT GAA AGC CAA GCT CAC GCC ACA ACT GCC TGG-3’(SEQ.ID No.34),1a-M28T-r 5’-CCA GGC AGT TGT GGC GTG AGC TTG GCT TTC AGC-3’(SEQ.ID No.35)；1a-Q30R-f 5’-GCC AAG CTC ATG CCA CGC CTG CCT GGG ATT CC-3’(SEQ.ID No.36),1a-Q30R-r 5’-GGA ATC CCA GGC AGG CGT GGC ATG AGC TTG GC-3’(SEQ.ID No.37)；1a-L31V-f 5’-GCT CAT GCC ACA AGT GCC TGG GAT TCC CTT TG-3’(SEQ.ID No.38),1a-L31V-r 5’-CAA AGG GAA TCC CAG GCA CTT GTG GCA TGA GC-3’(SEQ.ID No.39)；1a-Y93C-f 5’-CGT TCC CCA TTA ACG CCT GCA CCA CGG GCC CCT G-3’(SEQ.ID No.40),1a-Y93C-r 5’-CAG GGG CCC GTG GTG CAG GCG TTA ATG GGG AAC G-3’(SEQ.ID No.41)；1a-Y93H-f 5’-CGT TCC CCA TTA ACG CCC ACA CCA CGG GCC CCT G-3’(SEQ.ID No.42),1a-Y93H-r 5’-CAG GGG CCC GTG GTG TGG GCG TTA ATG GGG AAC G-3’(SEQ.ID No.43)。
正向引子(-f)中之加以下劃線之序列指示突變位置。
細胞維持及複製子分析：在完整培養基(達爾伯克改良伊戈爾培養基[DMEM]、2mM L-麩醯胺酸、0.1mM必需胺基酸、1mM丙酮酸 鈉、10%胎牛血清)中生長穩定HCV複製子細胞系且添加500μg/ml慶大黴素(G418)。將Huh7-lunet細胞維持於同一培養基中且並不添加G418。每週兩次以1：5之稀釋度使細胞以常規方式進行傳代。對於穩定複製子分析(GT1a-H77、GT1b-Con1、GT2a-JFH、GT2a-J6、GT2a-2b-MD2b、GT2a-2b-J8、GT2a-3a-S52、GT3a-S52、GT4a-ED43、GT2a-5a-SA13、GT2a-6a-EUKH2、GT2a-6a-HK6a及GT2a-7a-QC69)而言，將化合物之8點3倍或半對數稀釋系列轉移至三個含有1×104個細胞/孔且存於無酚紅完整培養基(無G418)中之重複96孔板中。對於瞬態複製分析而言，使用10μg經純化活體外轉錄HCV複製子RNA對存於冰冷磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)中之Huh7-lunet細胞實施電穿孔(Bio-Rad Gene脈衝發生器：950uF,270V)，隨後再懸浮於並無G418之無酚紅完整培養基中並平鋪(1×104個細胞/孔，存於200μL培養基中)至三個重複96孔板中，然後添加化合物(1μl化合物/孔)。對於穩定及瞬態複製子分析而言，相對經DMSO處理之細胞在培育72h之後使用RENILLA-GLOTM螢光素酶分析(Promega)量測經化合物處理之細胞之螢光素酶活性。
下表呈現代表不同NS5A基因型組化合物16及參考化合物(達卡他韋，DCV)針對HCV複製子之對比性效力數據(EC50,nM)。
下表呈現化合物16及參考化合物(達卡他韋，DCV)針對野生型(wt)HCV基因型1a及突變(NS5A編號格式：wt：位置：突變)之對比性效力數據(EC50,nM)。
C型肝炎病毒基因型1b複製子細胞中之抗性障壁分析：將穩定HCV基因型1b複製子Huh7-lunet細胞平鋪於100mm細胞培養盤中(對於經DMSO對照及化合物處理之細胞而言分別為1.5×105及3×105個細胞/盤)並培育24hr(37℃,5% CO2)，然後添加化合物。在完整培養基(最終0.5% DMSO)中製備化合物(溶於DMSO中)並添加至細胞中。將細胞在化合物(或DMSO)及G418(500μg/mL)存在下維持3週，其中每週更換培養基兩次。然後固定細胞(4%低聚甲醛，30min，在室溫下)並染色(0.5%結晶紫/25%甲醇，20min，室溫)以目測存活細胞。然後使用水洗滌板以去除過量染色劑並過夜風乾，然後成像(BioRad Gel Doc XR+分子成像儀)。
本發明化合物展現令人吃驚之高抗性產生障壁。圖1圖解說明在提供抗性產生之定性指示之測試中本發明化合物與達卡他韋之對比。圖1展示在G418及化合物16或達卡他韋(如上文所闡述製得)存在下3週之後存活HCV基因型1b複製子細胞之結晶紫染色。僅含有DMSO之對照板(無化合物16或達卡他韋)幾乎完全不透明。在2×及10×EC50下，達卡他韋減小複製子存活，但許多抗性細胞純系存活；僅在100×EC50下達卡他韋大大消除複製子細胞。與之對比，化合物16僅在2×EC50下幾乎完全防止複製子細胞存活。基於此，預計化合物16會極為有效地消除抵抗其他NS5A抑制劑(例如達卡他韋)之HCV突變體菌 株。
儘管已尤其參照本發明之較佳實施例展示及闡述本發明，但彼等熟習此項技術者應理解，可對其形式及細節作出各種改變，此並不背離隨附申請專利範圍所涵蓋之本發明範圍。
<110> 美商安塔製藥公司 瑞士商諾華公司 邱瑤林 曹暉 彭小文 高淑琳 柯日新 史維寧 賽卓利 凱文
<120> C型肝炎病毒抑制劑
<130> 4163.1237 TW
<150> 61/859,582
<151> 2013-07-29
<160> 44
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> misc_feature
<223> NotI KO正向引子
<400> 1
<210> 2
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> misc_feature
<223> NotI KO反向引子
<400> 2
<210> 3
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> misc_feature
<223> AscI hRluc-Neo正向引子
<400> 3
<210> 4
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> misc_feature
<223> NotI hRluc反向引子
<400> 4
<210> 5
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> misc_feature
<223> NsiI正向引子
<400> 5
<210> 6
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> misc_feature
<223> AfeI反向引子
<400> 6
<210> 7
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> misc_feature
<223> AfeI正向引子
<400> 7
<210> 8
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> misc_feature
<223> SnaBI反向引子
<400> 8
<210> 9
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> misc_feature
<223> J6NS5A正向引子
<400> 9
<210> 10
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> misc_feature
<223> S52NS5A正向引子
<400> 10
<210> 11
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> misc_feature
<223> JFH-5B反向引子
<400> 11
<210> 12
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> misc_feature
<223> 1a-M28T正向引子
<400> 12
<210> 13
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> misc_feature
<223> 1a-M28T反向引子
<400> 13
<210> 14
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> misc_feature
<223> 1a-Q30R正向引子
<400> 14
<210> 15
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> misc_feature
<223> 1a-Q30R反向引子
<400> 15
<210> 16
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> misc_feature
<223> 1a-L31V正向引子
<400> 16
<210> 17
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> misc_feature
<223> 1a-L31V反向引子
<400> 17
<210> 18
<211> 34
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> misc_feature
<223> 1a-Y93C正向引子
<400> 18
<210> 19
<211> 34
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> misc_feature
<223> 1a-Y93C反向引子
<400> 19
<210> 20
<211> 34
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> misc_feature
<223> 1a-Y93H正向引子
<400> 20
<210> 21
<211> 34
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> misc_feature
<223> 1a-Y93H反向引子
<400> 21
<210> 22
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> misc_feature
<223> GT2a-2a-J6正向引子
<400> 22
<210> 23
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> misc_feature
<223> GT2a-2a-J6反向引子
<220>
<221> misc_feature
<223> GT2a-2b-MD2b反向引子
<220>
<221> misc_feature
<223> GT2a-3a-S52反向引子
<220>
<221> misc_feature
<223> GT2a-5a-SA13反向引子
<220>
<221> misc_feature
<223> GT2a-7a-QC69反向引子
<400> 23
<210> 24
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> misc_feature
<223> GT2a-2b-MD2b正向引子
<400> 24
<210> 25
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> misc_feature
<223> GT2a-2b-J8正向引子
<400> 25
<210> 26
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> misc_feature
<223> GT2a-2b-J8反向引子
<400> 26
<210> 27
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 27
<210> 28
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> misc_feature
<223> GT2a-5a-SA13正向引子
<400> 28
<210> 29
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> misc_feature
<223> GT2a-6a-EUKH2正向引子
<400> 29
<210> 30
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> misc_feature
<223> GT2a-6a-EUKH2反向引子
<400> 30
<210> 31
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> misc_feature
<223> GT2a-6a-HK6a正向引子
<400> 31
<210> 32
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> misc_feature
<223> GT2a-6a-HK6a反向引子
<400> 32
<210> 33
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> misc_feature
<223> GT2a-7a-QC69正向引子
<400> 33
<210> 34
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> misc_feature
<223> 1a-M28T正向引子
<400> 34
<210> 35
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> misc_feature
<223> 1a-M28T反向引子
<400> 35
<210> 36
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> misc_feature
<223> 1a-Q30R正向引子
<400> 36
<210> 37
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> misc_feature
<223> 1a-Q30R反向引子
<400> 37
<210> 38
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> misc_feature
<223> 1a-L31V正向引子
<400> 38
<210> 39
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> misc_feature
<223> 1a-L31V反向引子
<400> 39
<210> 40
<211> 34
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> misc_feature
<223> 1a-Y93C正向引子
<400> 40
<210> 41
<211> 34
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> misc_feature
<223> 1a-Y93C反向引子
<400> 41
<210> 42
<211> 34
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<222>
<221> misc_feature
<223> 1a-Y93H正向引子
<400> 42
<210> 43
<211> 34
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> misc_feature
<223> 1a-Y93H反向引子
<400> 43
<210> 44
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 44

Claims (26)

  1. 一種由式(I)代表之化合物， 或其醫藥上可接受之鹽，其中：A及Q各自獨立地係視情況經取代之苯基；另一選擇為，A及Q一起形成視情況經取代之三環芳基或視情況經取代之三環雜芳基；G及W各自獨立地係視情況經取代之咪唑基；其中該等咪唑基C2附接至吡咯啶環；另一選擇為，G及A或Q及W可一起形成視情況經取代之三 環，例如；其中Y係-CH=CH-、-CH2O-、-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-OCH2CH2-及-CH2OCH2-；又一選擇為，G、A及Q或A、Q及W可一起形成視情況經取 代之五環，例如；其中Z在每次出現時獨立地選自由以下組成之群：-CH=CH-、-CH2O-及-CH2CH2；X係選自由-C(R11)2-及-C(R11)2C(R11)2-組成之群；R1、R3及R11在每次出現時各自獨立地係氫或視情況經取代之C1-C4烷基；R5在每次出現時獨立地係氫、鹵素、視情況經取代之O(C1-C4烷基)、視情況經取代之C3-C8環烷基或視情況經取代之C1- C4烷基；另一選擇為，兩個孿位R5基團可與其所附接之碳或矽原子一起形成螺環、視情況經取代之C3-C8環烷基或視情況經取代之雜環；又一選擇為，鄰位R3及R5可與其所附接之碳原子一起形成稠合且視情況經取代之C3-C8環烷基或稠合且視情況經取代之雜環；且R6在每次出現時獨立地係經胺基、經保護胺基、N(C1-C4烷基)2、羥基、O(C1-C4烷基)、苯基或四氫吡喃基取代之C1-C8烷基。
  2. 如請求項1之化合物，其由式(II)代表： 或其醫藥上可接受之鹽，其中X1在每次出現時獨立地選自由以下組成之群：不存在、-CH=CH-、-CH2O-、-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-OCH2CH2-及-CH2OCH2-。
  3. 如請求項1之化合物，其由式(III)代表： 或其醫藥上可接受之鹽，其中X2在每次出現時各自獨立地選自由以下組成之群：不存在、-CH2-、O、-CH=CH-、-CH2O-、-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-OCH2CH2-及-CH2OCH2-。
  4. 如請求項1之化合物，其由式(IVa-IVb)代表： 或其醫藥上可接受之鹽，其中X3在每次出現時各自獨立地選自由以下組成之群：-CH=CH-、-CH2O-及-CH2CH2。
  5. 如請求項1之化合物，其由式(Va-Vc)代表： 或其醫藥上可接受之鹽，其中X3在每次出現時各自獨立地選自由以下組成之群：-CH=CH-、-CH2O-及-CH2CH2。
  6. 如請求項1之化合物，其由式(VIa-VId)代表： 或其醫藥上可接受之鹽，其中X3在每次出現時各自獨立地選自由以下組成之群：-CH=CH-、-CH2O-及-CH2CH2。
  7. 如請求項1之化合物，其由式(VIIa-VIId)代表： 或其醫藥上可接受之鹽，其中R3及R5與其所附接之碳原子一起形成稠合且視情況經取代之C3-C8環烷基或稠合且視情況經取 代之雜環。
  8. 如請求項1之化合物，其由式(VIIIa-VIIId)代表： 或其醫藥上可接受之鹽，其中m=0或1；R6係
  9. 如請求項1之化合物，其選自化合物5至11及13至51之群： 。
  10. 一種醫藥組合物，其包括：如請求項1之化合物或該等化合物之組合或其醫藥上可接受之鹽與醫藥上可接受之載劑或賦形劑之組合。
  11. 一種抑制含RNA病毒之複製之方法，其包括使該病毒與治療有效量之如請求項1之化合物或該等化合物之組合或其醫藥上可接受之鹽接觸。
  12. 一種治療或預防由含RNA病毒引起之感染之方法，其包括向需要該治療之患者投與治療有效量之如請求項1之化合物或該等化合物之組合或其醫藥上可接受之鹽。
  13. 如請求項11之方法，其中該含RNA病毒係C型肝炎病毒。
  14. 如請求項11之方法，其進一步包括共投與一或多種選自由宿主免疫調節劑及抗病毒劑或其組合組成之群之藥劑之步驟。
  15. 如請求項13之方法，其中該宿主免疫調節劑係選自由以下組成之群：干擾素-α、聚乙二醇化-干擾素-α、干擾素-β、干擾素-γ、複合干擾素、細胞介素及疫苗。
  16. 如請求項13之方法，其中該等抗病毒劑藉由抑制與病毒複製有關之宿主細胞功能來抑制HCV複製。
  17. 如請求項13之方法，其中該等抗病毒劑藉由靶向病毒基因組之蛋白質來抑制該HCV複製。
  18. 如請求項13之方法，其中該抗病毒劑係HCV病毒蛋白、複製過 程或其組合之抑制劑，其中該靶向蛋白或複製過程係選自由以下組成之群：解旋酶、蛋白酶、聚合酶、金屬蛋白酶、NS4A、NS4B、NS5A、組裝、進入及IRES。
  19. 如請求項11之方法，其進一步包括共投與治療或緩解選自肝硬化及肝發炎之HCV感染症狀之藥劑或藥劑組合之步驟。
  20. 如請求項11之方法，其進一步包括共投與一或多種治療患者之由B型肝炎(HBV)感染引起之疾病之藥劑的步驟。
  21. 如請求項11之方法，其進一步包括共投與一或多種治療患者之由人類免疫缺陷病毒(HIV)感染引起之疾病之藥劑的步驟。
  22. 如請求項10之醫藥組合物，其進一步包括選自以下之藥劑：干擾素、聚乙二醇化干擾素、利巴韋林(ribavirin)、金剛烷胺(amantadine)、HCV蛋白酶抑制劑、HCV聚合酶抑制劑、HCV解旋酶抑制劑或內核糖體進入位點抑制劑。
  23. 如請求項10之組合物，其進一步包括細胞色素P450單加氧酶抑制劑或其醫藥上可接受之鹽。
  24. 如請求項23之組合物，其中該細胞色素P450單加氧酶抑制劑係利托納韋(ritonavir)。
  25. 一種治療有需要之個體之C型肝炎感染之方法，其包括向該個體共投與細胞色素P450單加氧酶抑制劑或其醫藥上可接受之鹽及如請求項1之化合物或其醫藥上可接受之鹽。
  26. 一種製備之方法，其包括： i)在鹼存在下經由羧基化或烷基化將逐步或一鍋式雙 取代為；其中R係烷基；LG係離去基團；ii)藉由還原試劑將選擇性還原為醇；iii)在鹼存在下經由醚形成自分子內環化為； iv)藉由諸如LiAlH4等還原試劑將還原為；v)自去苄基化隨後胺基保護為；其中PG係Boc或Cbz；及vi)藉由諸如瓊斯試劑(Jones reagent)、RuCl3-NaIO4等氧化試劑 將氧化為。
TW103125903A 2013-07-29 2014-07-29 Ｃ型肝炎病毒抑制劑 TW201536789A (zh)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201361859582P 2013-07-29 2013-07-29

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TW201536789A true TW201536789A (zh) 2015-10-01

Family

ID=52432368

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW103125903A TW201536789A (zh) 2013-07-29 2014-07-29 Ｃ型肝炎病毒抑制劑

Country Status (3)

Country Link
US (1) US10407445B2 (zh)
TW (1) TW201536789A (zh)
WO (1) WO2015017382A1 (zh)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9717712B2 (en) 2013-07-02 2017-08-01 Bristol-Myers Squibb Company Combinations comprising tricyclohexadecahexaene derivatives for use in the treatment of hepatitis C virus
CN105530933B (zh) 2013-07-17 2018-12-11 百时美施贵宝公司 用于治疗hcv的包含联苯衍生物的组合产品
WO2017023631A1 (en) 2015-08-06 2017-02-09 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis c virus inhibitors
CN107814789B8 (zh) * 2017-11-27 2021-01-01 常州寅盛药业有限公司 一种达卡他韦起始原料的合成方法

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2008525459A (ja) * 2004-12-23 2008-07-17 ノバルティス アクチエンゲゼルシャフト Ｈｃｖ処置用組成物
BRPI0920513A2 (pt) * 2008-09-26 2019-09-24 F Hoffamann La Roche Ag derivados de pirina ou pirazina para tratar hcv
AU2009331660A1 (en) * 2008-12-22 2011-06-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Heterocyclic antiviral compounds
US8420686B2 (en) * 2009-02-17 2013-04-16 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Linked diimidazole antivirals
US8101643B2 (en) 2009-02-27 2012-01-24 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Benzimidazole derivatives
US9765087B2 (en) 2009-02-27 2017-09-19 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Benzimidazole derivatives
US8673954B2 (en) 2009-02-27 2014-03-18 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Benzimidazole derivatives
US8507522B2 (en) * 2009-03-06 2013-08-13 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Hepatitis C virus inhibitors
SG174252A1 (en) * 2009-03-06 2011-10-28 Hoffmann La Roche Heterocyclic antiviral compounds
US8221737B2 (en) * 2009-06-16 2012-07-17 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Hepatitis C virus inhibitors
BR112012005616A2 (pt) * 2009-09-21 2016-06-21 Hoffmann La Roche compostos antivirais heterocíclicos
EP2542074A4 (en) * 2010-03-04 2014-05-14 Enanta Pharm Inc PHARMACEUTICAL COMBINATION ACTIVE AGENTS AS HCV REPLICATION INHIBITORS
WO2011153396A1 (en) * 2010-06-04 2011-12-08 Enanta Pharmaceuticals, Inc Hepatitis c virus inhibitors

Also Published As

Publication number Publication date
WO2015017382A1 (en) 2015-02-05
US20160222034A1 (en) 2016-08-04
US10407445B2 (en) 2019-09-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP5628841B2 (ja) Ｃ型肝炎ウイルスインヒビター
US8815928B2 (en) Hepatitis C virus inhibitors
US8927709B2 (en) Hepatitis C virus inhibitors
US8759332B2 (en) Hepatitis C virus inhibitors
US8785487B2 (en) Hepatitis C virus inhibitors
US8221737B2 (en) Hepatitis C virus inhibitors
US9156818B2 (en) Hepatitis C virus inhibitors
US8609648B2 (en) Hepatitis C virus inhibitors
US9676802B2 (en) Hepatitis C virus inhibitors
US8697704B2 (en) Hepatitis C virus inhibitors
US20100221214A1 (en) Linked dibenzimidazole derivatives
US20100260715A1 (en) Hepatitis c virus inhibitors
US20110250172A1 (en) Hepatitis c virus inhibitors
EP2575819A1 (en) Hepatitis c virus inhibitors
EP2475254A1 (en) Hepatitis c virus inhibitors
WO2010096462A1 (en) Linked diimidazole derivatives
US20090060874A1 (en) Bicyclic pyrrolidine derivatives
WO2010091413A1 (en) Linked dibenzimidazole derivatives
US8933110B2 (en) Hepatitis C virus inhibitors
TW201536789A (zh) Ｃ型肝炎病毒抑制劑
US20100135960A1 (en) Antiviral acylsulfonamide derivatives