TW201536279A - Ｕｇｏｎｉｎ化合物於抗皮膚發炎之用途 - Google Patents

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Chia-Hua Liang
Chih-Chuang Liaw
Leong Perng Chan
Tsai-Hsuan Yi
Chu-Yun Huo
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Univ Chia Nan Pharm & Sciency
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Abstract

本發明係有關於一種Ugonin化合物於抗皮膚發炎之用途，其係施予Ugonin化合物一有效劑量於皮膚，以抑制有絲分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)與轉錄因子NF-κB活性，達到抗氧化性壓力及降低發炎反應之用途；藉此，可進一步利用Ugonin化合物作為皮膚消炎劑或減緩發炎反應之化妝材料組成物或醫藥組成物。

Description

Ugonin化合物於抗皮膚發炎之用途
本發明係有關於一種Ugonin化合物於抗皮膚發炎之用途，尤其係指Ugonin化合物具有優異抗氧化及調解免疫分子之能力，並且對細胞毒性低，因此可發展為抗氧化及抗發炎相關之功效性化妝品與醫藥品。
按，隨著地球臭氧層破壞，皮膚暴露於紫外線(ultraviolet,UV)下所造成的皮膚病變逐年增加。紫外線依據波長可分為長波紫外線(UVA)、短波紫外線(UVB)及超短波紫外線(UVC)；長波紫外線(UVA)及短波紫外線(UVB)會使皮膚產生紅斑及曬傷、傷害皮膚細胞DNA、以及造成皮膚免疫系統異常及皮膚癌等。皮膚發炎(inflammation)係指一種生物體對抗外部壓力刺激或病原體的保護機制，適度發炎反應雖然可以保護人體免於外來物制質之侵害，但是過度發炎卻會造成該發炎部位持續出現紅、腫、熱、痛等不適症狀，如過敏或自體免疫疾病。
傳統抗發炎藥物例如「非固醇類抗發炎藥物(nonsteroidal anti-inflammatory drugs，NSAIDs)」，雖然可用以治療或減緩許多發炎反應，然而，這些人工化合物仍伴隨程度不等的副作用，造成患者使用上的困擾；因此如何提出一種較佳的抗發炎產品實是一發展重點。
錫蘭七指蕨(Helminthostachys zeylanica(L)Hook.)屬於瓶爾小草目(Ophioglossacrae)，七指蕨科(Helminthostachyaceae)，俗稱：倒麒麟、蜈蚣草、釘地蜈蚣，為台灣、東南亞及印度等地區民間常用的抗發炎草藥，其根莖乾燥後煎服，具有解熱、活血、消炎、止痛、生肌之功效，也可應用於內傷疼痛、結核病及毒蛇傷等。在植物化學成分方面，目前研究顯示從錫蘭七指蕨根莖部萃取純化獲得的化合物包括：黃酮類化合物(flavonoids)、具有異戊二烯骨架的新黃酮類化合物(Ugonin A~Ugonin T)、新芪類化合物(Ugonstilbene A~Ugonstilbene C)與槲皮素等。由研究結果發現錫蘭七指蕨萃取物的優異抗氧化、抗發炎、保護細胞與抗細胞增殖活性，但是目前對於錫蘭七指蕨所萃取純化之化合物對於皮膚細胞之作用卻未被報導，在抗發炎新藥的開發領域仍尚待研究。
今，發明人即是鑑於上述現有之抗發炎產品於實際實施使用時仍具有多處缺失，於是乃一本孜孜不倦之精神，並藉由其豐富專業知識及多年之實務經驗所輔佐，而加以改善，並據此研創出本發明。
本發明主要目的為提供一種具有抗氧化及調解免疫分子用途之Ugonin化合物，此Ugonin化合物對於細胞毒性低，因此可發展為抗氧化及抗發炎相關之功效性化妝品與醫藥品。
為了達到上述實施目的，本發明一種Ugonin化合物於抗皮膚發炎之用途，其係施予Ugonin化合物一有效劑量於皮膚，以抑制有絲分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)與轉錄因子NF-κB活性，達到抗氧化性壓力及降低發炎反 應之用途；其中，Ugonin化合物係選自Ugonin J、Ugonin K及Ugonin L所構成之群組，最佳係Ugonin K，並且Ugonin化合物可例如由錫蘭七指蕨之根莖部所分離製得。
於本發明之一實施例中，絲分裂原活化蛋白激酶係選自c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal Kinase，JNK)、細胞外訊息調控蛋白激酶(extracellular signal-regulated protein kinase，ERK)以及p38蛋白質所構成之群組。
於本發明之一實施例中，Ugonin化合物可抑制UV照射引起之皮膚發炎反應。
據此，Ugonin化合物可進一步作為抗發炎之化妝材料組成物或醫藥組成物，例如作為一皮膚消炎劑。
第一圖：Ugonin化合物之細胞存活率試驗
第二圖-A：Ugonin化合物於細胞內ROS含量之影響
第二圖-B：Ugonin化合物於細胞內GSH含量之影響
第三圖-A：Ugonin化合物於細胞內過氧化氫酶活性之影響
第三圖-B：Ugonin化合物於細胞內榖胱甘肽過氧化酶活性之影響
第四圖-A：照射紫外線之細胞存活率試驗
第四圖-B：Ugonin化合物於細胞光保護之影響
第五圖-A：環丁嘧啶二聚體(CPD)生成量之示意圖
第五圖-B：Ugonin化合物於環丁嘧啶二聚體(CPD)生成量之影響
第六圖-A：螢光顯微鏡(200x)下細胞核受損情形之示意圖
第六圖-B：Ugonin化合物於HaCaT細胞的DNA保護性效果
第七圖：發炎相關蛋白p-ERK、p-JNK、p-p38和NF-κB之表現量測試
第八圖：Ugonin化合物於p-ERK、p-JNK、p-p38和NF-κB之表現量測試
第九圖：Ugonin化合物於p-ERK、p-JNK、p-p38和NF-κB表現量之影響
本發明之目的及其結構功能上的優點，將依據以下圖面所示之結構，配合具體實施例予以說明，俾使審查委員能對本發明有更深入且具體之瞭解。
本發明一種Ugonin化合物於抗皮膚發炎之用途，其係施予Ugonin化合物一有效劑量於皮膚，以抑制有絲分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)與轉錄因子NF-κB活性，達到抗氧化性壓力及降低發炎反應之用途；其中，Ugonin化合物可例如由錫蘭七指蕨(Helminthostachys zeylanica)之根莖部所分離製得，並且Ugonin化合物係選自Ugonin J、Ugonin K 及Ugonin L所構成之群組，最佳係Ugonin K，可用以抑制UV照射引起之皮膚發炎反應。
於本發明之一態樣中，有絲分裂原活化蛋白激酶(MAPK)係選自c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal Kinase，JNK)、細胞外訊息調控蛋白激酶(extracellular signal-regulated protein kinase，ERK)以及p38蛋白質所構成之群組。
此外，藉由下述具體實施例，可進一步證明本發明可實際應用之範圍，但不意欲以任何形式限制本發明之範圍。
〈Ugonin化合物來源〉
將錫蘭七指蕨(H.zeylanica)乾燥根莖部部位粉碎後，以甲醇浸泡，再以分配萃取法、管柱層析法與高效液相層析分離純化，得到包含如化學式(I)之Ugonin J(分子量422)、化學式(II)之Ugonin K(分子量436)及化學式(III)之Ugonin L(分子量436)之化合物。關於錫蘭七指蕨之萃取步驟及實驗參數，可依中國醫藥大學陳勝智教授指導之論文「錫蘭七指蕨根莖部抗發炎活性成分之研究」據以實施，其為本發明所屬技術領域中具有通常知識者所能理解者，故在此不多做贅述。
實驗一：Ugonin化合物之細胞存活率試驗
〈細胞存活率試驗〉
採用MTT assay檢測。將細胞數1×105/mL之人類皮膚角質細胞株HaCaT培養於96孔盤，置於37℃及5% CO2培養箱中 培養24小時，加入不同濃度(0~25μM)的Ugonin J、K、L，於37℃、5% CO2培養箱中反應24小時。達反應時間，移除培養液，再以PBS清洗後，更換新的培養液，加入10μL的MTT(3-(4,5-cimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide)溶液反應四小時後，於波長490nm下測定吸光值(BioTek,SynergyTM2,USA)。
請參閱第一圖，將Ugonin化合物以5、10、15、20、25μM濃度，作用於HaCaT細胞24小時後，以MTT試驗評估細胞存活率(cell viability)；結果顯示，Ugonin三種化合物對HaCaT細胞存活率為先上升後下降的趨勢，在低濃度5μM和10μM有促使細胞生長效能，但在高濃度25μM具有細胞毒性。後續將以低濃度不具細胞毒性的Ugonin化合物作為細胞抗氧化測定之細胞模組。
實驗二：Ugonin化合物之抗氧化作用試驗
1.〈細胞內反應性氧化物質(ROS)和麩胱甘肽(glutathione,GSH)測定〉
將HaCaT細胞(1.5×105/mL)培養在24孔盤至少24小時，經10μM Ugonin化合物或10μM標準品維生素C(ascorbic acid)作用24小時，並移除含藥物的培養液。加入0.1mM H2O2反應1小時誘導ROS產生。移除H2O2培養液後，(1)加入含有10μM DCFH-DA(2,7-dichlorofluorescein diacetate)的培養液於37℃與三氯乙酸(trichloroacetic acid,TCA)反應30分鐘，(2)加入新鮮培 養液並含有50μg/mL o-phthalaldehyde(0.1M Na2HPO4-5mM EDTA緩衝溶液)避光於25℃反應1小時。用PBS清洗兩次後，於Ex：504nm；Em：524nm偵測DCF螢光表現；於Ex：355nm；Em：460nm偵測GSH螢光表現。
由於細胞內之活性氧物質會對細胞造成損傷、老化甚至有致癌風險。而GSH可代謝H2O2以保護體內免受於自由基之攻擊。本實驗主要係以給予Ugonin化合物及標準品維生素C作用於HaCaT細胞，再加入H2O2誘發產生ROS以對細胞造成傷害，分析其抑制ROS及GSH活性之效果。結果如第二圖-A顯示，細胞未經任何處理的控制組(control)定為100%；當未受到抗氧化劑保護，且又受到H2O2誘導後，其細胞內ROS誘發率(intracellular ROS activity)為160.6%；而經過Ugonin化合物及維生素C(ascorbic acid)前處理，其ROS誘發率分別降為145.4%、108.9%、130.0%及115.0%；其中以先經Ugonin K處理後，抑制ROS之作用最為顯著。因此，結果顯示Ugonin化合物可降低H2O2的生成，進而降低ROS對細胞的傷害。再者，分析H2O2消耗細胞內GSH含量(intracellular GSH activity)之結果如第二圖-B，細胞未經任何處理的控制組(control)定為100%；當未受到抗氧化劑保護，且又受到H2O2誘導後，因細胞進行保護作用，使得消耗GSH的含量而減少至81.9%；但隨著Ugonin J、K、L及維生素C(ascorbic acid)前處理，細胞內GSH含量也增加至90.3%、102.5%、97.5%及89.6%；其 中以先經Ugonin K處理後，其GSH提升含量高於標準品維生素C。結果顯示Ugonin J、K、L可藉由提升GSH含量而降低ROS對細胞的傷害。
2.〈細胞內過氧化氫酶(catalsase)和榖胱甘肽過氧化酶(glutathione peroxidase,GPx)活性測定〉
過氧化氫酶係體內代謝H2O2之重要酵素，可避免H2O2生成對人體具有極大傷害性之氫氧自由基。而GPx係細胞內主要保護細胞不受自由基攻擊的水溶性抗氧化物。以硒元素做輔助因子，將H2O2還原成H2O或將有機的過氧化物(R-O-O-H)還原成穩定的醇類(R-O-H)。故提高過氧化氫酶與GPx抗氧化酵素之活性亦是當前抗氧能力訴求之一。
將HaCaT細胞(1.5×105/mL)培養在24孔盤至少24小時，再經10μM Ugonin化合物作用24小時，並移除含藥物的培養液。以0.1mM H2O2反應1小時誘導ROS產生。移除培養液後，收集細胞，離心並除去上清液，加入PBS使細胞懸浮後，進行冷凍、解凍、超音波震盪60W、10秒三循環使細胞裂解後，離心並取得上清液，進行catalase和GPx測定：(1)取40μg細胞裂解物混合10μL、5mM H2O2，用10mM phosphate buffer將體積補足至100μL，於240nm進行3分鐘內吸光值變化測定，以測定catalase活性；(2)取40μg細胞裂解物混合1mM GSH、1unit/mL glutathione reductase(GR)、1mM NaN3,、1mM EDTA和0.2mM NADPH 於室溫反應五分鐘後，再加入2.5mM H2O2，用10mM phosphate buffer將體積補足至100μL，於340nm進行3分鐘內吸光值變化，測定GPx活性。
過氧化氫酶活性(catalase activity)測試結果如第三圖-A，細胞未經任何處理的控制組(control)，其細胞內過氧化氫酶活性為17.9unit/mg protein；未受到抗氧化劑保護，且又受到H2O2處理的負控制組，其細胞內過氧化氫酶活性為下降至13.0unit/mg protein；而經過Ugonin J、K、L前處理，並以H2O2處理後其細胞內過氧化氫酶活性分別提升為30.8、45.9及43.8unit/mg protein，其中以Ugonin K處理後的效果最為顯著，相較於負控制組，提昇過氧化氫酶活性約3.5倍。
榖胱甘肽過氧化酶活性(GPx activity)測試結果如第三圖-B，細胞未經任何處理的控制組(control)，其細胞內GPx活性為10.7unit/mg protein；未受到抗氧化劑保護，且又受到H2O2處理的負控制組，其細胞內GPx活性下降至4.0unit/mg protein；而經過Ugonin J、K、L前處理，並以H2O2處理後其細胞內GPx活性分別提升為9.37、45.0.1及30.8unit/mg protein，其中以先經Ugonin L處理後的效果最為顯著，相較於負控制組，提昇GPx活性約7.7倍。
實驗三：Ugonin化合物之抗發炎作用試驗
1.〈照射紫外線UVB之細胞存活率試驗〉
皮膚最外層的角質層具有保護皮膚的功能，皮膚內之免疫細胞具有防禦功能，皮膚之黑色素能吸收紫外線，防止光之傷害；但過量的紫外線曝露下可能使皮膚細胞發炎產生突變。為了找出適當的紫外線照射劑量以進行光保護試驗，本實驗以HaCaT細胞分別照射0~50J/m2不同劑量(如第四圖-A所示)之紫外線後，以無血清培養液培養4小時使細胞修復，並利用MTT試劑計算細胞死亡數目以評估其傷害程度。
結果如第四圖-A所示，細胞存活率(cell viability)隨著紫外線UVB劑量增強而降低，顯示紫外線照射對HaCaT細胞會引起細胞死亡現象。之後的實驗係選用對細胞具有傷害但存活率仍有80%以上的5、20J/m2兩個劑量進行光保護實驗。
2.〈Ugonin化合物於細胞光保護之試驗〉
將細胞以10μM Ugonin化合物進行前處理4小時，再以紫外線照射HaCaT細胞後，以無血清培養液培養4小時使細胞修復，利用MTT試劑計算細胞死亡數目評估其傷害程度。
結果如第四圖-B所示，細胞未經任何處理的控制組(control)定為100%；未添加Ugonin化合物並照射紫外線UVB的負控制組，其細胞存活率降至87.9%及73.3%；而經過Ugonin化合物前處理的細胞，以Ugonin K和Ugonin L細胞存活率與負控制組相比提昇10%，顯示其具有光保護效果；但Ugonin J細胞存活率87.9%及74.2與負控制組相近，無明顯降低細胞死亡數效果。
3.〈偵測DNA損傷之環丁嘧啶二聚體(CPD)生成量〉
過量紫外線照射引起DNA損傷的原因在於其能誘發DNA同條鏈內相鄰的嘧啶鹼基產生環丁嘧啶二聚體(cyclobutane pyrimidine dimers,CPD)光產物，使DNA空間結構發生變化，從而阻礙DNA複製、轉錄，並影響蛋白質的生物功能。因此，紫外線照射造成DNA損傷的修復顯得至關重要。
將1.5×105/mL HaCaT細胞培養於24孔盤至少24小時，分別加入10μM Ugonin化合物作用4小時後進行UVB(20或50J/m2)照射，更換不含血清培養液培養4小時。移除培養液以PBS清洗，以冰甲醇固定細胞，再以Triton X-100作用，加入2M HCl作用1小時，以1% BSA填補細胞間隙，再以CPD一級抗體於37℃搖晃反應1小時，去除一級抗體後，再加入二級抗體避光反應30分鐘，以PBS清洗於Ex：504nm；Em：524nm偵測螢光表現。再加入Hoechst 33342(10mg/mL)進行細胞核染色，以PBS清洗後再以Ex：355nm；Em：460nm偵測螢光表現，並於螢光顯微鏡下觀察拍照。
結果請參閱第五圖-A，隨著UVB照射劑量增加，CPD螢光表現顯著增加，而經UgoninJ、K、L參與作用之HaCaT細胞中，明顯的降低CPD之螢光含量。定量結果請參閱第五圖-B，細胞未經任何處理的控制組(control)定為100%；經UgoninJ、K、L作用，CPD產生量(CPD fluorescence intensity)與負控制組相比最多可減 少約40.0%。結果証實Ugonin化合物具有保護細胞DNA並減少因紫外線誘發的光產物CPD含量。
4.〈彗星法分析(Comet assay)〉
將1.5×105/mL HaCaT細胞培養於24孔盤至少24小時，分別加入10μM Ugonin化合物作用4小時後進行UVB(50J/m2)照射，更換不含血清培養液培養2小時。移除培養液以PBS清洗，以Trypsin-EDTA處理收集細胞後，加入100μL PBS分散細胞，再以等比例細胞液混合0.65%低熔點洋菜膠。取100μL含細胞的膠體於預先舖上1%洋菜膠的磨砂玻片上，並用蓋玻片壓平膠面，置於冰上凝固5分鐘。凝固後的細胞膠體再舖上一層90μL、0.65%低熔點洋菜膠，並用蓋玻片壓平膠面，置於冰上凝固5分鐘。將蓋玻片移除後，將玻片浸泡於lysis buffer(5M NaCl,100mM EDTA,100mM Tris,10% Triton X-100,10% DMSO)1小時，再浸泡於Alkaline buffer(0.3M NaOH,1mM EDTA,pH>13)中15分鐘，以Neutralize buffer(0.4M Tris-HCl)潤洗三次後進行膠體電泳分析45分鐘。以10μg/mL ethidium bromide(EtBr)染色約5分鐘，並蓋上蓋玻片使染液平均分佈。以螢光顯微鏡下觀察玻片上細胞的螢光圖像，評估DNA的損傷程度。再使用Comet Assay Software Project軟體分析Tail DNA(%)、Tail length(μm)和Tail moment之DNA損傷情形。
本實驗選用20和50J/m2兩個劑量進行實驗，係為了在彗星試驗中能夠有明顯的拖尾，確定紫外線確實有傷害DNA的作用，另一方面也易於觀察比較細胞修復DNA的程度。無DNA損傷的細胞，在螢光顯微鏡下可見一明亮圓點；有DNA損傷的細胞，電泳後細胞類似彗星的拖尾，拖尾長度越長代表DNA損傷越嚴重。
結果請參閱第六圖-A，隨著UVB劑量增加，細胞受到的DNA傷害隨之增大，螢光拖尾比例也隨之提高。而經過Ugonin化合物前處理的細胞可發現螢光拖尾較短且部分細胞成圓點並無拖尾現象；再者，於第六圖-B定量結果顯示，照射50J/m2紫外線UVB條件下，係以Ugonin K對於細胞的保護性最佳，其DNA受損細胞(DNA damage cell)與負控制組相比可減少約33.3%。顯示Ugonin化合物的確具有光保護性，可降低因紫外線造成的細胞DNA損傷。
5.〈流式細胞儀免疫螢光分析〉
為了探討UVB造成HaCaT細胞發炎之機制，測量紫外線影響細胞在不同時間下釋放發炎MAPK蛋白(p-ERK、p-JNK、p-p38)和轉錄因子(NF-κB)含量。
將3×105/mL HaCaT細胞培養在24孔盤至少24小時，並在37℃及5% CO2培養箱中培養至少24小時。分別加入10μM Ugonin化合物作用4小時後進行UVB(50J/m2)照射，更換不含血清培養液培養達反應時間後，以Trypsin-EDTA處理收集細胞後以 1,200rpm離心5分鐘，移除上清液並將細胞移至微量離心管中，加入500μL、4%冰的三聚甲醛(paraformaldehyde)在4℃反應30分鐘使細胞固定。之後加入0.1% Triton X-100將細胞打洞後，以1,200rpm離心5分鐘去除上清液，加入一級抗體於4℃搖晃反應3小時，去除一級抗體後，加入二級抗體，於4℃避光搖晃2小時後，利用流式細胞分析儀並配合Winmidi電腦軟體來分析特定蛋白質螢光量的變化。
結果請參閱第七圖，HaCaT細胞經過50J/m2紫外線UVB照射後以血清培養液培養1、2、4和6個小時，將細胞標定各種發炎因子抗體，以流式細胞儀分析細胞內螢光量，螢光量越強表示該蛋白質表現量越明顯。經過紫外線照射後的細胞，其細胞內MAPK蛋白(p-ERK、p-JNK、p-p38)和轉錄因子(NF-κB)螢光表現量均先增加而後漸減少，尤其於照後2小時的螢光表現量達到最高。與細胞急性發炎機制在短時間大量表現MAPK家族蛋白導致轉錄因子NF-κB活化進而釋放發炎因子造成細胞的發炎反應相符。故以照射紫外線後培養2小時的時間點作為往後抗發炎相關的實驗條件。
6.〈西方墨點(western blotting)分析蛋白質表現〉
將3×105/mL HaCaT細胞培養在10cm培養皿，並在37℃及5% CO2培養箱中培養至少24小時。分別加入10μM Ugonin化合物作用4小時後進行UVB(50mJ/cm2)照射，更換不含血清培養液培養達反應時間後，以Trypsin-EDTA處理收集細胞後以 1,200rpm離心5分鐘去除上清液後再將細胞移至微量離心管，加入100μl RIPA溶解液使細胞完全的溶解，隨後以12,000rpm離心10分鐘，收集上清液，並用BSA蛋白質做蛋白質定量分析，蛋白質萃取液保存在-80℃。取40μg的蛋白質樣本進行SDS-PAGE電泳，接著將凝膠上的蛋白質藉由轉漬槽轉漬到硝化纖維紙(polyvinylidene difluoride,PVDF paper)上。在轉漬緩衝液[25mM Tris,192mM glycine,20%(v/v)methanol,pH8.3]中以固定電壓200轉漬2小時。以5%脫脂奶粉之PBS/Tween-20(PBST)緩衝液覆蓋PVDF paper，其目的是將PVDF paper上之非特異性結合位置覆蓋(blocking)住，於室溫反應30~60分鐘。之後移除blocking緩衝液，加入稀釋過的一級抗體，於4℃反應至隔夜。一級抗體反應結合後，以PBS-T緩衝液清洗PVDF paper三次，每次5分鐘。接著加入稀釋的二級抗體，在室溫緩慢震盪2小時，再以PBST緩衝液清洗PVDF paper五次，每次五分鐘。最後洗淨之PVDF paper加入ECL冷光感應試劑(chemiluminescent-based detection system)作用後，以冷光照相系統拍攝並分析欲測定之蛋白質在細胞內的表現。其中，所使用MAPK家族與轉錄因子之相關抗體如表一。
請參閱第八圖，本實驗先將細胞以10μM Ugonin化合物進行前處理4小時，再以紫外線照射HaCaT細胞後，以無血清培養液培養2小時使細胞修復，將細胞標定各種發炎因子抗體，以流式細胞儀分析細胞內螢光量，螢光量越強表示該蛋白質表現量越明顯。結果顯示，經過紫外線照射的負控制組(control)，其p-ERK、p-JNK、p-p38、NF-κB螢光表現量均上升，而經過Ugonin化合物前處理並照射UVB的細胞可發現發炎蛋白(p-ERK、p-JNK、p-p38)和轉錄因子(NF-κB)的螢光表現則明顯下降。
再者，利用西方墨點法偵測p-ERK、p-JNK、p-p38蛋白質之表現。結果如第九圖所示，經Ugonin化合物前處理的細胞其發炎蛋白因子的表現量較UVB照射組減少；其轉錄因子NF-κB的基因及蛋白質表現量也較UVB照射組減少。結果顯示Ugonin化合物能降低UVB照射引起的發炎相關的MAPK途徑，且調控下游轉錄因子NF-κB以減少細胞的發炎反應。
綜上所述，Ugonin化合物具有高安全性(低毒性)、減緩皮膚細胞受紫外線傷害以及降低發炎反應之功效，故Ugonin化合物可單獨或搭配醫藥上可接受之載體或賦型劑應用於作為消炎或抗 發炎之化妝材料組成物、保養品或醫藥組成物；可例如為一皮膚消炎劑，提供使用者以一適當量塗抹於皮膚，進而達到保護皮膚免於紫外線傷害及抗發炎之功效。本發明所述之“醫藥上可接受之載體或賦型劑”包括，但不限於，水、生理食鹽水、有機溶劑、安定劑、螯合劑、防腐劑、乳化劑、懸浮劑、稀釋劑、凝膠劑、脂質體等。
由上述之實施說明可知，本發明與現有技術相較之下，本發明具有以下優點：
1.本發明人首先藉由實驗證實Ugonin化合物於抗發炎之用途，據此，Ugonin化合物可進一步作為抗發炎之化妝材料組成物或醫藥組成物，例如一皮膚消炎劑以治療或減緩許多發炎反應；相較於傳統常使用固醇類或非固醇類抗發炎藥物，可能伴隨程度不等之副作用，此來自天然物之Ugonin化合物可避免此虞慮。
2.以往中醫對於錫蘭七指蕨的功效認知雖有解熱、消炎、止痛等功效，未針對其抗發炎機制所探討。而本發明藉由實驗證實源自錫蘭七指蕨根莖部分之Ugonin化合物，其調節發炎因子之機制係透過抑制有絲分裂原活化蛋白激酶(MAPK)與轉錄因子NF-κB活性，有效達到減緩發炎反應之功效。
綜上所述，本發明之Ugonin化合物於抗皮膚發炎之用途，的確能藉由上述所揭露之實施例，達到所預期之使用功效，且本發明亦未曾公開於申請前，誠已完全符合專利法之規定與要求。爰依法提出發明專利之申請，懇請惠予審查，並賜准專利，則實感德便。
惟，上述所揭之圖示及說明，僅為本發明之較佳實施例，非為限定本發明之保護範圍；大凡熟悉該項技藝之人士，其所依本發明之特徵範疇，所作之其它等效變化或修飾，皆應視為不脫離本發明之設計範疇。

Claims (7)

  1. 一種Ugonin化合物於抗皮膚發炎之用途，其係施予Ugonin化合物一有效劑量於皮膚，以抑制有絲分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)與轉錄因子NF-κB活性，達到抗氧化性壓力及降低發炎反應之用途。
  2. 如申請專利範圍第1項所述之Ugonin化合物於抗皮膚發炎之用途，其中該Ugonin化合物係選自Ugonin J、Ugonin K及Ugonin L所構成之群組。
  3. 如申請專利範圍第1項所述之Ugonin化合物於抗皮膚發炎之用途，其中該Ugonin化合物係由錫蘭七指蕨(Helminthostachys zeylanica)之根莖部所分離製得。
  4. 如申請專利範圍第1項所述之Ugonin化合物於抗皮膚發炎之用途，其中該有絲分裂原活化蛋白激酶係選自c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal Kinase，JNK)、細胞外訊息調控蛋白激酶(extracellular signal-regulated protein kinase，ERK)以及p38蛋白質所構成之群組。
  5. 如申請專利範圍第1項所述之Ugonin化合物於抗皮膚發炎之用途，其中該Ugonin化合物係抑制UV照射引起之皮膚發炎反應。
  6. 如申請專利範圍第1項所述之Ugonin化合物於抗皮膚發炎之用途，其中該Ugonin化合物係進一步作為抗發炎之化妝材料組成物或醫藥組成物。
  7. 如申請專利範圍第1項所述之Ugonin化合物於抗皮膚發炎之用途，其中該Ugonin化合物係作為皮膚消炎劑。
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