TW201525005A

TW201525005A - 用於膽固醇治療之標靶人類第９型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶（ｐｃｓｋ９）之技術

Info

Publication number: TW201525005A
Application number: TW103144065A
Authority: TW
Inventors: 傑斯帕克魯伯
Original assignee: 凱美寶有限公司
Priority date: 2013-12-17
Filing date: 2014-12-17
Publication date: 2015-07-01

Abstract

本發明係關於所關注之人類標靶(TOI)、抗TOI配位體、套組組成物及方法。

Description

用於膽固醇治療之標靶人類第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)之技術

發明領域

本文所描述之技術係關於配位體，例如用於治療疾病之抗體。

發明背景

已公認人類個體之序列有差異且近來已有數人定序其基因組，例如James Watson及Craig Venter。個體基因組序列之比較已揭示其基因組之編碼及非編碼部分的序列差異。此等人類變異中之一些為顯著的且造成個體間的表型差異。在極端情況中，此等變異將導致遺傳疾病。千人基因組計劃(1000 Genomes Project)之目標為將人類基因組之序列編目，涉及定序來自技術公認的不同人類種族群體之極大取樣個體的基因組。

第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(Proprotein convertase subtilisin/kexin type 9,PCSK9)為參與調節低密度脂蛋白受體(LDLR)蛋白位準的絲胺酸蛋白酶 (Horton等，2007；Seidah及Prat，2007)。活體外實驗已展示添加PCSK9至HepG2細胞降低細胞表面LDLR位準(Benjannet等，2004；Lagace等，2006；Maxwell等，2005；Park等，2004)。對小鼠的實驗已展示增加PCSK9蛋白位準降低肝臟中之LDLR蛋白位準(Benjannet等，2004；Lagace等，2006；Maxwell等，2005；Park等，2004)，而PCSK9基因剔除小鼠具有增加之肝臟中的LDLR位準(Rashid等，2005)。另外，已識別各種導致增加或減少血漿LDL位準之人類PCSK9突變(Kotowski等，2006；Zhao等，2006)。PCSK9已展示直接與LDLR蛋白相互作用，與LDLR一起經吞噬，且在內體路徑中與LDLR共免疫螢光(Lagace等，2006)。

PCSK9為絲胺酸蛋白酶之枯草桿菌蛋白酶(S8) 家族中的前激素-前蛋白轉換酶(Seidah等，2003)。人類具有九個可分為S8A與S8B子族的前激素-前蛋白轉換酶(Rawlings等，2006)。弗林蛋白酶(furin)、PC1/PC3、PC2、PACE4、PC4、PC5/PC6及PC7/PC8/LPC/SPC7歸類於S8B子族中。來自小鼠弗林蛋白酶及PC1之不同域的晶體及NMR結構揭示枯草桿菌蛋白酶類前域(pro-domain)及催化域，且P域直接位於催化域之C-末端(Henrich等，2003；Tangrea等，2002)。基於此子族內之胺基酸序列相似性，預測所有七個成員均具有類似結構(Henrich等，2005)。SKI-1/S1P及PCSK9歸類於S8A子族中。與此等蛋白之序列比較亦表明枯草桿菌蛋白酶類前域及催化域之存在(Sakai等，1998；Seidah等，2003；Seidah等，1999)。在此等蛋白中位於催化域之C-末端的胺基酸序列更可變，且並未表明P域之存在。

前激素-前蛋白轉換酶以酶原形式表現，且其經由多步驟過程成熟。在此過程中，前域之功能為雙重的。前域首先充當伴隨蛋白，且為催化域之適當摺疊所需(Ikemura等，1987)。在催化域摺疊後，在前域與催化域之間發生自催化。此初始裂解反應之後，前域仍結合至催化域，其隨後充當催化活性之抑制劑(Fu等，2000)。當條件恰當時，在前域內之位點處經第二自催化作用進行成熟作用(Anderson等，1997)。在此第二裂解作用發生之後，前域及催化域解離，產生活性蛋白酶。

PCSK9酶原之自催化發生在Gln152與Ser153(VFAQ|SIP(SEQ ID NO：67))之間(Naureckiene等，2003)，且已展示為其自細胞分泌所需(Seidah等，2003)。尚未觀察到在PCSK9之前域內的位點處之第二自催化作用。經純化之PCSK9由可藉由非還原SDS-PAGE分離之兩種物質製成；為17Kd之前域及65Kd之催化域加C-末端域。在無其抑制性前域之情況下PCSK9尚未經分離，且PCSK9之催化活性之量測值已為可變的(Naureckiene等，2003；Seidah等，2003)。

在某些實施例中，PCSK9多肽包括末端殘基，諸如(但不限於)前導序列殘基、靶向殘基、胺基末端甲硫胺酸殘基、離胺酸殘基、標記殘基及/或融合蛋白殘基。「PCSK9」亦已稱為FH3、NARC1、HCHOLA3、第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶/kexin及神經凋亡調節轉換酶1。PCSK9基因編碼屬於分泌枯草桿菌酶(subtilase)家族之蛋白酶K子族之前蛋白轉換酶蛋白。「PCSK9」一詞表示前蛋白及前蛋白之自催化之後生成的產物兩者。當僅提及自催化產物(諸如結合至裂解PCSK9之抗原結合蛋白或配位體)時，蛋白可稱為「成熟」、「裂解」、「經處理」或「活性」PCSK9。當僅提及非活性形式時，蛋白可稱為PCSK9之「非活性」、「前形式」或「未經處理」形式。PCSK9一詞亦涵蓋併有PCSK9胺基酸序列之轉譯後修飾的PCSK9分子，諸如已糖基化之PCSK9序列、訊號序列已自其裂解之PCSK9序列、其前域已自催化域裂解但未與催化域分離之PCSK9序列(參看例如，US20120093818A1之圖1A及圖1B)。

發明概要

經由應用人類遺傳變異分析及經合理設計之序列選擇，本發明提供經改良的基於人類PCSK9變異之人類患者診斷及療法。重要的是，本發明能夠定製滿足個別人類患者基因型或表型之藥品。

本發明者對大量天然存在之基因組人類PCSK9序列的分析揭示不同人類群體存在顯著變異且提供使個別人類患者與針對標靶之定製醫療及診斷方法之間相關的能力。按照本發明，此等發現之技術應用因此有助於人類之較佳治療、預防及診斷，且藉由實現個人化藥品及療法而為患者提供裨益。此舉提供較佳處方、藥品消耗較少及藥物功效幾率提昇與患者之診斷較佳的優勢。

此外，發明者意外地意識到一些較罕見的天然形式，儘管以相比常見形式低得多的頻率存在於人類中，仍然呈現在多個及種族不同的人類群體中且通常每一呈現種族群體具有許多人類實例。因此，發明者意識到靶向此類較罕見形式將在許多人類種族群體提供有效治療、預防或診斷，從而擴展本發明之效用且較佳地服務彼等群體中之患者。

由此，發明者意識到本發明在引導抗PCSK9配位體之選擇以便投與人類患者用於治療及/或預防PCSK9介導或相關疾病及病狀方面存在顯著工業及醫療應用。以此方式，患者接受如由患者之遺傳或表型組成所決定的按其需要定製之藥物及配位體。與此同時，本發明提供患者之基因分型及/或表型分型與此類治療結合，從而使得藥物與患者適當匹配。此舉提高醫療功效之幾率、降低使用與患者不匹配之藥物或配位體的較差治療之可能性(例如功效不佳及/或副作用)且避免醫藥處方不當及浪費。

為此目的，本發明提供：在第一組態中

一種抗人類PCSK9配位體，其用於治療及/或預防人類中之PCSK9介導之疾病或病狀的方法，該人類之基因組包含選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列，其中該方法包含向該人類投與該配位體。

在第二組態中

一種結合包含選自由SEQ ID NO：4-27組成之群的胺基酸序列之人類PCSK9之配位體，該配位體用於包含使用配位體靶向人類中的該PCSK9以治療及/或預防藉由PCSK9介導之疾病或病狀之步驟的方法，該方法包含向該人類投與該配位體。

在第三組態中

一種用於治療及/或預防PCSK9介導之病狀或疾病的醫藥組成物或套組。

在第四組態中

一種產生抗人類PCSK9抗體結合位點之方法，該方法包含獲得多個抗PCSK9抗體結合位點，篩檢該等用於結合至選自由形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群的人類PCSK9或其包含與對應序列SEQ ID NO：1、2或3之胺基酸變異之催化域或C-末端域或肽的抗體結合位點，及分離在篩檢步驟中結合之抗體結合位點，以及視情況產生形式f、c、r、p、m、e、h、aj或q PCSK9結合片段或經分離抗體之衍生物。

在第五組態中

一種產生抗人類PCSK9抗體之方法，該方法包含使用包含選自由形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q之胺基酸序列組成之群的胺基酸序列之人類PCSK9或其包含與對應序列SEQ ID NO：1、2或3之胺基酸變異的催化域或C-末端域或肽使非人類脊椎動物(例如小鼠或大鼠)免疫，及分離結合包含選自由形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群的人類PCSK9或其包含與對應序列SEQ ID NO：1、2或3之胺基酸變異之催化域或C-末端域或肽的抗體，以及視情況產生形式f、c、r、p、m、e、h、aj或q PCSK9結合片段或經分離抗體之衍生物。

在第六組態中

一種用於PCSK9將人類基因分型之套組，其中該套組包含核酸，該核酸(i)包含連續核苷酸序列，該連續核苷酸序列特異性雜交至選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列或至少其催化域或C-末端域編碼序列，或特異性雜交至該序列之反義序列或RNA轉錄物，其中該連續核苷酸序列雜交至至少一個存在於該選定序列中而不存在於SEQ ID NO：28中之核苷酸或雜交至其反義序列或RNA轉錄物；及/或(ii)包含至少10個具有選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列之連續核苷酸序列或包含該連續核苷酸之反義序列或RNA型式，其中該連續核苷酸序列包含至少一個存在於該選定序列中而不存在於SEQ ID NO：28中的核苷酸。

在第七組態中

結合選自由形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群的人類PCSK9之抗PCSK9配位體之用途，其用於製造用於治療及/或預防人類中的PCSK9介導之疾病或病狀之藥劑，該人類之基因組包含選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列。

在第八組態中

結合選自由形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群的人類PCSK9之抗PCSK9配位體之用途，其用於製造用於靶向人類中的該PCSK9以治療及/或預防藉由PCSK9介導之疾病或病狀的藥劑。

在第九組態中

一種靶向PCSK9以便治療及/或預防人類中的 PCSK9介導之疾病或病狀之方法，該方法包含向包含選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列之人類投與抗PCSK9配位體，藉此靶向藉由該核苷酸序列編碼之PCSK9。

在第十組態中

一種治療及/或預防人類中的藉由PCSK9介導之疾病或病狀之方法，該方法包含藉由向人類投與結合該PCSK9的配位體來靶向選自由形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群的人類PCSK9，從而治療及/或預防人類中之該疾病或病狀。

在第十一組態中

一種PCSK9將人類核酸樣品基因分型之方法，該方法包含識別樣品中選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列或其催化域或C-末端域編碼序列之存在。

在第十二組態中

一種PCSK9分型人類蛋白樣品之方法，該方法包含識別樣品中選自由形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群的人類PCSK9之存在。

在第十三組態中

一種治療及/或預防人類患者中之心血管疾病或病狀、或與較高LDL膽固醇相關聯之疾病或病狀(例如高膽固醇血症)的方法，其中患者接受或已預先接受該疾病或病狀之他汀(statin)治療，該方法包含使用本發明之方法將患者分型且投與根據本發明之配位體，藉此治療人類或預防該疾病或病狀；視情況亦減少或停止他汀治療。

在第十四組態中

一種用於在有需要之人類中降低膽固醇位準或維持先前降低的膽固醇位準之方法的抗體或抗體片段，其中該抗體或片段包含人類γ-1重鏈恆定區，該人類γ-1重鏈恆定區包含對應於SEQ ID NO：42之位置204的Asp或對應於SEQ ID NO：42之位置206的Leu，且該抗體或片段特異性地結合包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)胺基酸序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之突變I474V或E670G，其中該人類包含編碼該胺基酸序列之核苷酸序列且包含IGHG1*01人類重鏈恆定區基因節段，或該人類表現包含人類γ-1恆定區之抗體，該等人類γ-1恆定區包含此類Asp及Leu。

在第十五組態中

一種在有需要之人中降低膽固醇位準或維持先前降低的膽固醇位準之方法，該方法包含向該人類投與特異性地結合包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)的抗體或抗體片段，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之突變I474或E670G，其中該抗體或片段包含人類γ-1重鏈恆定區，該人類γ-1重鏈恆定區包含對應於SEQ ID NO：42之位置204的Asp或對應於SEQ ID NO：42之位置206的Leu，且其中該人類包含(i)IGHG1*01人類重鏈恆定區基因節段，或該人類表現包含人類γ-1重鏈恆定區之抗體，該等人類γ-1重鏈恆定區包含此類Asp及Leu；及(ii)編碼該包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)的核苷酸序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G。

在第十六組態中

一種用於在有需要之人類中降低膽固醇位準或維持先前降低的膽固醇位準之方法的抗體或抗體片段，其中該抗體包含人類γ-2重鏈恆定區，該人類γ-2重鏈恆定區包含選自由以下各者對應於SEQ ID NO：44之位置72的Pro、對應於SEQ ID NO：44之位置75的Asn、對應於SEQ ID NO：44之位置76的Phe、對應於SEQ ID NO：44之位置161的Val及對應於SEQ ID NO：44之位置257的Ala組成之群的胺基酸，且該抗體或片段特異性地結合包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)胺基酸序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之突變I474V或E670G，其中該人類包含編碼該胺基酸序列之核苷酸序列且包含IGHG2*01人類重鏈恆定區基因節段，或該人類表現包含人類γ-2恆定區，該等人類γ-2恆定區包含此類Pro、Asn、Phe、Val及Ala。

在第十七組態中

一種在有需要之人類中降低膽固醇位準或維持先前降低的膽固醇位準之方法，該方法包含向該人類投與特異性地結合包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)之抗體或抗體片段，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之突變I474或E670G，其中該抗體或片段包含人類γ-2重鏈恆定區，該人類γ-2重鏈恆定區包含選自由對應於SEQ ID NO：44之位置72的Pro、對應於SEQ ID NO：44之位置75的Asn、對應於SEQ ID NO：44之位置76的Phe、對應於SEQ ID NO：44之位置161的Val及對應於SEQ ID NO：44之位置257的Ala組成之群之胺基酸，且其中該人類包含(i)IGHG2*01人類重鏈恆定區基因節段，或該人類表現包含人類γ-2重鏈恆定區之抗體，該等人類γ-2重鏈恆定區包含此類Pro、Asn、Phe、Val及Ala；及(ii)編碼該包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)的核苷酸序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G。

在第十八組態中

一種用於在有需要之人類中降低膽固醇位準或維持先前降低的膽固醇位準之方法的抗體或抗體片段，其中該抗體或片段包含人類κ輕鏈恆定區，該人類κ輕鏈恆定區包含對應於SEQ ID NO：50之位置84的Val或對應於SEQ ID NO：50之位置87的Cys，且該抗體或片段特異性地結合包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)胺基酸序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之突變I474V或E670G，其中該人類包含編碼該胺基酸序列之核苷酸序列且包含IGKC*01人類輕鏈恆定區基因節段，或該人類表現包含人類κ輕鏈恆定區之抗體，該等人類κ輕鏈恆定區包含此類Val及Cys。

在第十九組態中

一種在有需要之人中降低膽固醇位準或維持先前降低的膽固醇位準之方法，該方法包含向該人類投與特異性地結合包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)的抗體或抗體片段，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之突變I474或E670G，其中該抗體或片段包含人類κ輕鏈恆定區，該人類κ輕鏈恆定區包含對應於SEQ ID NO：50之位置84的Val或對應於SEQ ID NO：50之位置87的Cys，且其中該人類包含(i)IGKC*01人類輕鏈恆定區基因節段，或該人類表現包含人類κ輕鏈恆定區之抗體，該等人類κ輕鏈恆定區包含此類Val及Cys；及(ii)編碼該包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)之核苷酸序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G。

在第二十組態中

一種用於在有需要之人類中降低膽固醇位準或維持先前降低的膽固醇位準之方法的抗體或抗體片段，其中該抗體或片段包含人類IGLC2*01 λ輕鏈恆定區，且該抗體或片段特異性地結合包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)胺基酸序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之突變I474V或E670G，其中該人類包含編碼該胺基酸序列之核苷酸序列且包含人類IGLC2*01 λ輕鏈恆定區基因節段，或該人類表現包含人類IGLC2*01 λ輕鏈恆定區之抗體。

在第二十一組態中

一種在有需要之人類中降低膽固醇位準或維持先前降低的膽固醇位準之方法，該方法包含向該人類投與特異性地結合包含C-末端域的第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)之抗體或抗體片段，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之突變I474或E670G，其中該抗體或片段包含人類IGLC2*01 λ輕鏈恆定區，且其中該人類包含(i)IGLC2*01人類輕鏈恆定區基因節段，或該人類表現包含人類IGLC2*01 λ輕鏈恆定區之抗體；及(ii)編碼該包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)的核苷酸序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G。

在第二十二組態中

一種用於在有需要之人類中降低膽固醇位準或維持先前降低的膽固醇位準之方法的抗體或抗體片段，其中該抗體或片段包含衍生自人類VH基因節段、人類D基因節段與人類JH基因節段之重組的人類可變域，其中VH基因節段衍生自人類VH基因節段、人類D基因節段與人類JH基因節段之重組，其中VH基因節段係選自由以下各者組成之群：(i)IGHV1-18*01，且人類基因組包含人類IGHV1-18*01核苷酸序列，或該人類表現包含衍生自人類IGHV1-18*01之重組的可變域之抗體；或(ii)IGVH1-46*01，且人類基因組包含人類IGHV1-46*01核苷酸序列，或該人類表現包含衍生自人類IGHV1-46*01之重組的可變域之抗體，且該抗體或片段特異性地結合包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)胺基酸序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之突變I474V或E670G，其中該人類包含編碼該胺基酸序列之核苷酸序列，且包含該VH基因節段或表現包含衍生自該人類VH基因節段、人類D基因節段與人類JH基因節段之重組的VH域之抗體。

在第二十三組態中

一種在有需要之人類中降低膽固醇位準或維持先前降低的膽固醇位準之方法，該方法包含向該人類投與特異性地結合包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)的抗體或抗體片段，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之突變I474或E670G，其中(i)該抗體或片段包含衍生自人類VH基因節段、人類D基因節段與人類JH基因節段之重組的人類可變域，其中VH基因節段係選自由以下各者組成之群：(a)IGHV1-18*01，且人類基因組包含人類IGHV1-18*01核苷酸序列或該人類表現包含衍生自人類IGHV1-18*01之重組的可變域之抗體；及(b)IGVH1-46*01，且人類基因組包含人類IGHV1-46*01核苷酸序列或該人類表現包含衍生自人類IGHV1-46*01之重組的可變域之抗體，且其中該人類包含(ii)編碼該包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)的核苷酸序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或 E670G。

在第二十四組態中

一種藉由靶向包含C-末端域胺基酸多形現象(相比於SEQ ID NO：1)之PCSK9來治療人類中的PCSK9介導之疾病或病狀之方法，該方法包含向人類投與已確定特異性結合至包含C-末端域的PCSK9之配位體(例如抗體或片段)，該C-末端域包含I474V或670G(根據SEQ ID NO：1編號)；其中該人類表現該PCSK9或人類基因組包含編碼該PCSK9之核苷酸序列；其中治療該人類之該疾病或病狀。

在第二十五組態中

一種在有需要之人類中降低膽固醇位準或維持先前降低的膽固醇位準之方法，該方法包含：a.藉由向該人類投與抗人類PCSK9配位體(例如抗體或片段)進行該人類之初始治療歷時初始治療時間段，其中(i)配位體已確定特異性結合至包含C-末端域的PCSK9，該C-末端域包含I474V或670G(根據SEQ ID NO：1編號)；(ii)該人類表現該PCSK9或人類基因組包含編碼該PCSK9之核苷酸序列；及(III)該人類已接受或正接受他汀治療以降低或維持膽固醇位準；其中初始治療包含向該人類投與單劑量或多劑量之配位體；b.判斷在該初始治療時間段之後(i)終止他汀治療(ii)使人類停止他汀治療；或(iii)減少他汀治療；及c.在該時間週期已逾期之後持續向該患者投與配位體，從而在該人類中降低膽固醇位準或維持先前降低的膽固醇位準。

在第二十六組態中

一種用於在有需要之人類中降低膽固醇位準或維持先前降低的膽固醇位準之方法的抗體或抗體片段，其中該抗體或片段包含人類(例如γ)重鏈恆定區，該人類重鏈恆定區包含藉由人類(例如γ)重鏈恆定區基因節段SNP編碼之第一胺基酸，且該抗體或片段特異性地結合包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)胺基酸序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中的突變I474V或E670G，其中該人類包含編碼該PCSK9胺基酸序列之核苷酸序列，且包含人類(例如γ)重鏈恆定區基因節段，該人類重鏈恆定區基因節段包含該SNP，或該人類表現包含人類(例如γ)恆定區之抗體，該等人類恆定區包含該第一胺基酸。

在第二十七組態中

一種用於在有需要之人類中降低膽固醇位準或維持先前降低的膽固醇位準之方法的抗體或抗體片段，其中該抗體或片段包含人類(例如κ或λ)輕鏈恆定區，該人類輕鏈恆定區包含藉由人類(例如分別地κ或λ)輕鏈恆定區基因節段SNP編碼之第一胺基酸，且該抗體或片段特異性地結合包含C-末端域的第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶/kexin(PCSK9)胺基酸序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之突變I474V或E670G，其中該人類包含編碼該PCSK9胺基酸序列之核苷酸序列，且包含人類(例如分別地κ或λ)輕鏈恆定區基因節段，該人類輕鏈恆定區基因節段包含該 SNP，或該人類表現包含人類(例如分別地κ或λ)恆定區之抗體，該等人類恆定區包含該第一胺基酸。

在第二十八組態中

一種用於在有需要之人類中降低膽固醇位準或維持先前降低的膽固醇位準之方法的抗體或抗體片段，其中該抗體或片段包含人類可變(例如VH、Vκ或Vλ)域，該人類可變域包含藉由V(例如分別地VH、Vκ或Vλ)基因節段SNP編碼之第一胺基酸，且該抗體或片段特異性地結合包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)胺基酸序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中的突變I474V或E670G，其中該人類包含編碼該PCSK9胺基酸序列之核苷酸序列，且包含人類V(例如分別地VH、Vκ或Vλ)基因節段，該人類V基因節段包含該SNP，或該人類表現包含V(例如分別地VH、Vκ或Vλ)域之抗體，該等V域包含該第一胺基酸。

圖1展示PCSK9表面變異殘基之電子雜交模型化。

圖2描繪包含SNP rs56069819之人類VH3-23對偶基因(此類對偶基因表示「C」，且最頻繁對偶基因(其不包含此SNP)表示「A」)之千人基因組計劃資料庫中的累積對偶基因頻率分佈。

圖3描繪如獲自IMGT資料庫(可在全球資訊網上在www.IMGT.org獲得)之藉由VH3-23*04編碼之構架及 CDR。圖3揭示按出現之次序分別為如核苷酸序列SEQ ID NO 69、69、69、71、71、71、72、74、76、39及77。圖3揭示按出現之次序分別為如SEQ ID NO 70、70、70、70、70、70、73、75、75、38及78之經編碼胺基酸序列。

圖4描繪VH3-23*04之序列。描繪包含rs56069819 之FW1殘基改變的VH3-23*04之部分(SEQ ID NO：38)。描繪編碼rs56069819之核酸序列之部分(SEQ ID NO：39)。描繪藉由VH3-23*04編碼之FW1(SEQ ID NO：40)。

較佳實施例之詳細說明

熟習此項技術者將知曉轉譯成胺基酸變異體之SNP或其他改變可導致待針對之人類標靶的構形或活性之變異。此舉已產生對個人化藥品之極大興趣，其中使用蛋白與核苷酸變異之基因分型及知識以更有效地定製患者之藥品及診斷。本發明提供定製藥劑及特定針對所關注之人類標靶(TOI)之較罕見變異形式的測試，標靶為人類PCSK9。

本發明利用人類遺傳變異分析之能力及經合理設計的序列選擇。按照本發明，此等方法之技術應用有助於人類之較佳治療、預防及診斷，且藉由提供選擇並實現個人化藥品及療法而為患者提供裨益。此舉提供較佳處方、藥品消耗較少及藥物功效幾率提昇與患者之診斷更佳的優勢。

作為基因組序列變異資料之來源，熟習此項技術者將瞭解藉由以下各者提供之可獲得的資料庫及資源(包括其更新)：

1. HapMap(國際HapMap聯盟(The International HapMap Consortium).2003；http：//hapmap.ncbi.nlm.nih.gov/index.html.en)。 HapMap計劃為旨在比較不同個體之遺傳序列以識別含有共享遺傳變異之染色體區的國際計劃。HapMap www站點提供識別染色體區及其中之變異的工具，以及深入至群體位準頻率資料之選項。

2. 千人基因組計劃(千人基因組計劃聯盟2010；在全可球資訊網上http：//www.1000genomes.org/處獲得)。此資源提供來自25個相異群組中之一者的至少2500個未識別的個體之完整基因組序列。

3. 日本SNP資料庫(H.Haga等2002；可在全球資訊網上http：//snp.ims.u-tokyo.ac.jp/index.html處獲得)。基於識別190,562個人類遺傳變異之研究。

本發明涉及識別及編目天然存在之人類基因組標靶序列變異，包括發現為相對低頻率或罕有變異者，該等變異與特定人類種族群體隔離及在許多個別人類中。

本發明之一態樣係基於滿足較罕見但又較大人類個體群組之定製藥劑及診斷的合意性之序列選擇之合理設計，該等人類個體罹患或可能罹患(亦即有罹患之風險)由所關注之標靶介導或與其相關聯之疾病或病狀。在設計本發明之之本態樣之此合理設計中，發明者考慮在多個不同人類種族群體中擴展天然存在的標靶變異序列之佔有率，以及分析滿足此類群體的重要性，該等群體中許多個體可能顯示具有一或多個變異之基因型及/或表型。作為此設計之部分，發明者瞭解採納本領域公認的人類種族群體分類之重要性，且就此而言發明者基於由千人基因組計劃所採納之公認的人類種族群體來分析及設計，此係因為此為且將繼續為由科學及醫療群體廣泛採納之資源。

圖2展示包含SNP rs56069819之人類VH3-23對偶基因(此類對偶基因表示「C」，且最頻繁對偶基因(其不包含此SNP)表示「A」)之千人基因組計劃資料庫中的累積對偶基因頻率分佈。該圖展示包含SNP rs56069819之VH3-23對偶基因以累積頻率11%存在於視為整體的所有人類種族群體中，而在某些特定人類種族子群體(ASW、LWK、YRI、CEU及GBR)中此類對偶基因以平均以上的累積頻率存在。在該圖中指示發現於各個子群體中之彼等人類PCSK9變異形式(標記「變異」)，該等子群體具有平均以上的包含SNP rs56069819之人類VH3-23對偶基因出現率。

因此，在本發明之此態樣中，發明者設計以下變異序列選擇準則，此等準則為發明者意識到將提供有用醫療藥物及診斷以滿足人類群體之定製要求的準則。

選擇準則

以下各者中之三個或四個：˙累積人類對偶基因頻率為35%或以下的天然存在之人類PCSK9變異序列；˙總人類基因型頻率為40%或以下的天然存在之人類 PCSK9變異序列；˙發現於許多不同人類種族群體(使用千人基因組計劃之標準分類；參看下表4)中之天然存在之人類PCSK9變異序列；及˙發現於分佈在許多不同種族群體中之許多個體中的天然存在之人類PCSK9變異序列。

作為一考慮因素，本發明者之選擇包括相較於並不更改標靶蛋白中之胺基酸殘基的沉默變異選擇在對應PCSK9形式中產生胺基酸變異(亦即非同義變異)之核苷酸變異。

視情況，其他序列分析及3D電子雜交模型化(例如參看圖1)亦可用作額外的選擇準則：其變異胺基酸殘基(對比人類PCSK9之最常見形式)表面暴露於標靶上之變異合乎選擇需要，此係因為發明者瞭解此等變異為有助於決定標靶之表面狀況且可能有助於如何及在何處發生配位體結合於標靶上。

在一實施例中，累積人類對偶基因頻率為30%、25%、20%、15%、10%或5%或以下，例如在1%至20%或1%至15%或1%至10%範圍內。

在一實施例中，總人類基因型頻率為35%、30%、25%、20%、15%、10%或5%或以下，例如在1%至25%、1%至20%、1%至15%、1%至約15%、1%至10%、1%至約10%或1%至5%或1%至約5%範圍內。

在一實施例中，天然存在之人類標靶變異序列發現於至少9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個不同人類種族群體(使用千人基因組計劃之標準分類)中。

在一實施例中，天然存在之人類標靶變異序列發現於分佈在許多不同種族群體中的至少20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、130、140或150個個體中。

在一實例中，應用以下準則：˙累積人類對偶基因頻率為15%或以下的天然存在之人類PCSK9變異序列；˙總人類基因型頻率為20%或以下的天然存在之人類PCSK9變異序列；˙發現於至少5個不同人類種族群體(使用千人基因組計劃之標準分類)中的天然存在之人類PCSK9變異序列；及˙發現於分佈在許多不同種族群體中之許多個體中的天然存在之人類PCSK9變異序列。

在本文任何態樣、組態、實例、實施例、條項或概念中，可使用生物資訊測定頻率。

在本文任何態樣、組態、實例、實施例、條項或概念中，可參考包含至少1000或2000個人類序列之資料庫測定頻率。

在本文任何態樣、組態、實例、實施例、條項或概念中，「異型接合人類基因型頻率」意謂在樣品或資料庫中或在人類中罕見變異對偶基因出現一次且另一對偶基因出現一次(異型接合態)之所有基因型(例如千人基因組資料庫中的基因型)之累積頻率。

在本文任何態樣、組態、實例、實施例、條項或概念中，「同型接合人類基因型頻率」意謂變異對偶基因出現兩次(同型接合態)(例如千人基因組計劃資料庫中的基因型)之累積頻率。

在本文任何態樣、組態、實例、實施例、條項或概念中，「總人類基因型頻率」意謂異型接合加同型接合人類基因型頻率之總和。

在本文任何態樣、組態、實例、實施例、條項或概念中，「累積人類對偶基因頻率」係指樣品或資料庫中或人類中變異對偶基因之所有出現的總和，例如在千人基因組計劃資料庫中。

在一實例中，參考如本文所描述之一或多個人類基因組序列資料庫應用準則。舉例而言，準則為如應用於千人基因組資料庫者。

舉例而言，在本發明之任何態樣、實例、實施例或組態中，千人基因組資料庫版本13。舉例而言，千人基因組資料庫呈其最新版本，如2013年10月1日。

設想以下生物資訊方案以志別用於本發明中之人類序列：

(a)識別含有所關注之PCSK9標靶序列之基因組區(『標靶基因組區』，且使用匹配由千人基因組計劃或國際HapMap計劃(或其他所選擇之選定人類基因資料庫)所用之序列裝配的座標來計算基因組座標。

(b)識別映射至先前在(a)中所識別之基因組區的基因組變異。擷取各超群體且較佳地可獲得此類資料之子群體的變異之對偶基因頻率。千人基因組計劃之VWC工具可用於此步驟。

(c)過濾來自標靶基因組區之基因組變異的清單以僅含有列為『非同義』單核苷酸多形現象(SNP)或基因組『插入或刪除』(插入缺失)之變異。進一步過濾以僅包括存在於外顯子序列中者。「非同義」係指產生胺基酸變異(亦即排除沉默突變)之核苷酸變異。

(d)使各超群體(例如『歐洲血統』、『東亞血統』、『西非血統』、『美洲血統』及『南亞血統』)之各經識別的變異之群體頻率資料相關以識別彼等與少於兩個超群體隔離之變異。進一步使所有經識別的變異與各子群體(例如『歐洲血統』超群體可細分為諸如『具有北歐或西歐血統之CEU-Utah居民』、『意大利之TSI Toscani』及『來自英格蘭及蘇格蘭之英國人』之群組)相關，且產生超群體內之變異的罕見性之第二評分。

(e)收集展示與用於本發明中之特定子群體之隔離的一或多個序列，例如根據如本文所描述之選擇準則。

人類群體

視情況種族群體係選自千人基因組計劃資料庫中經識別者。就此而言，參看提供種族群體詳情之表4，千人基因組計劃資料庫係基於該等種族群體。

N A Rosenberg等(Science 2002年12月20日：第 298卷第5602期2342-2343)研究不同地理血統人類群體之遺傳結構。總計取樣52個群體，此等群體為以下群體：非洲血統

(姆布蒂俾格米人(Mbuti Pygmies)、巴卡俾格米人(Biaka Pygmies)、桑人(San peoples)及尼日爾-科爾多凡(Niger-Kordofanian)語言者(斑圖(Bantu)、約魯巴(Yoruba)或曼登卡(Mandenka)群體)，歐亞血統

(歐洲血統(奧克尼人(Orcadian)、阿迪格人(Adygel)、巴斯克人(Basque)、法國人、俄羅斯人、意大利人、撒丁島人(Sardinian)、托斯卡納人(Tuscan))，中東血統(莫紮比特人(Mozabite)、貝都因人(Bedouin)、德魯士人(Druze)、巴勒斯坦人(Palestinians))，中/南亞血統(俾路支人(Balochl)、布拉灰人(Brahul)、莫克蘭人(Makrani)、信德人(Sindhi)、帕坦人(Pathan)、布魯肖人(Burusho)、哈紮拉人(Hazara)、維吾爾人(Uygur)、卡拉什人(Kalash)))，東亞血統

(漢族人、傣族人(Dal)、達斡爾族人(Daur)、赫哲族人(Hezhen)、拉祐族人(Lahu)、苗族人(Miao)、鄂倫春族人(Oroqen)、佘族人(She)、土家族人(Tujia)、土族人(Tu)、錫伯族人(Xibo)、彝族人(Yi)、蒙古族人(Mongola)、納西族人(Naxi)、柬埔寨人(Cambodian)、日本人、雅庫特人(Yakut))，海洋血統(美拉尼西亞人(Melanesian)、巴布亞人(Papuan))；或美洲血統

(卡利吉亞納人(Karitiana)、蘇魯族人(Surui)、哥倫比亞人(Colombian)、馬雅人(Maya)、皮馬人(Pima))。

The International HapMap Project,Nature,2003年12月18日；426(6968)：789-96揭示HapMap計劃之目標：藉由在來自具有部分非洲、亞洲及歐洲血統之群體的DNA樣品中測定一百萬或更多序列變異體之基因型、其頻率及其之間的關聯程度來測定人類基因組中DNA序列變異之常見型式。不同地理血統之相關人類群體包括約魯巴、日本、中國、北歐及西歐群體。更特定言之：具有北歐或西歐血統之猶他州群體(在1980年由人類多形性研究中心(Centre d'Etude du Polymorphisme Humain，CEPH)採集之樣品)；來自尼日利亞伊巴丹(Ibadan,Nigeria)之具有約魯巴人血統的群體；具有日本血統之群體；及來自中國之具有中國漢族血統的群體。

作者引用較早出版物表明祖先地理為取樣人類群體之合理根據。

本發明中所用之人類群體的適合樣品如下：

(a)歐洲血統

(b)北歐血統；西歐血統；圖西卡尼血統；英國血統、芬蘭血統或伊比利亞(Iberian)血統。

(c)更特定言之，具有北歐及/或西歐血統之猶他州居民群體；意大利之圖西卡尼人群體；英格蘭及/或蘇格蘭之英國人群體；芬蘭之芬蘭人群體；或西班牙之伊比利亞人群體。

(a)東亞血統

(b)日本血統；中國血統或越南血統。

(c)更特定言之，日本東京之日本人群體；中國北京之中國漢族人群體；西雙版納之中國傣族人群體；越南胡志明市(Ho Chi Minh City,Vietnam)之京族人(Kinh)群體；或美國科羅拉多州丹佛(Denver,Colorado,USA)之中國人群體。

(a)西非血統

(b)約魯巴血統；盧希亞血統(Luhya ancestry)；岡比亞血統(Gambian ancestry)；或馬拉維血統(Malawian ancestry)。

(c)更特定言之，尼日利亞伊巴丹之約魯巴人群體；肯尼亞威布耶(Webuye,Kenya)之盧赫雅人群體；岡比亞西部地區(Western Division,The Gambia)之岡比亞人群體；或馬拉維布蘭太爾(Blantyre,Malawi)之馬拉維人群體。

(a)美洲人群體

(b)美國本土血統；非洲-加勒比海血統(Afro-Caribbean ancestry)；墨西哥血統；波多黎各血統；哥倫比亞血統；或秘魯血統。

(c)更特定言之，美國西南部之非洲血統群體；密西西比州傑克遜(Jackson,MS)之非裔美國人群體；巴巴多斯(Barbados)之非洲加勒比海人群體；加利福尼亞州洛杉磯(Los Angeles,CA)之墨西哥血統群體；波多黎各之波多黎各人群體；哥倫比亞麥德林(Medellin,Colombia)之哥倫比亞人群體；或秘魯利馬(Lima,Peru)之秘魯人群體。

(a)南亞血統

(b)阿洪血統(Ahom ancestry)；克亞薩血統(Kayadtha ancestry)；雷迪血統(Reddy ancestry)；馬拉地人(Maratha)；或旁遮普血統(Punjabi ancestry)。

(c)更特定言之，印度阿薩姆邦(State of Assam,India)之阿洪人群體；印度加爾各答(Calcutta,India)之克亞薩人群體；印度海德拉巴(Hyderabad,India)之雷迪人群體；印度孟買(Bombay,India)之馬拉地人群體；或巴基斯坦拉合爾(Lahore,Pakistan)之旁遮普人群體。

在本發明之任何組態中，在一個實施例中，每一人類群體係選自以上標記「(a)」之群體。

在本發明之任何組態中，在另一實施例中，每一人類群體係選自以上標記「(b)」之群體。

在本發明之任何組態中，在另一實施例中，每一人類群體係選自以上標記「(c)」之群體。

在一個實施例中，種族群體係選自由以下組成之群：具有歐洲血統之種族群體、東亞種族群體、具有西非血統之種族群體、具有美洲血統之種族群體及具有南亞血統之種族群體。

在一個實施例中，種族群體係選自由以下組成之群：具有北歐血統之種族群體；或具有西歐血統之種族群體；或具有圖西卡尼血統之種族群體；或具有英國血統之種族群體；或具有冰島血統之種族群體；或具有芬蘭血統之種族群體；或具有伊比利亞血統之種族群體；或具有日本血統之種族群體；或具有中國血統之種族群體；或越南血統種族群體；或具有約魯巴血統之種族群體；或具有盧赫雅血統之種族群體；或具有岡比亞血統之種族群體；或具有馬拉維血統之種族群體；或具有美國本土血統之種族群體；或具有非洲-加勒比海血統之種族群體；或具有墨西哥血統之種族群體；或具有波多黎各血統之種族群體；或具有哥倫比亞血統之種族群體；或具有秘魯血統之種族群體；或具有阿洪血統之種族群體；或具有克亞薩血統之種族群體；或具有雷迪血統之種族群體；或具有馬拉地人之種族群體；或具有旁遮普血統之種族群體。

抗標靶配體

本發明提供針對罹患或可能罹患由PCSK9介導或與PCSK9相關聯之疾病或病狀之人類的有用抗標靶配位體。舉例而言，該配位體按照本發明特異性結合至PCSK9變異體。該配位體可抑制或拮抗PCSK9標靶之活性，例如，該配位體中和該標靶。熟習此項技術者應熟悉一般中和配位體，諸如抗體或抗體片段，且可易於活體外或在活體內分析中測試特異性結合及/或中和標靶之適合配位體。

在一個實例中，該配位體為(或已測定為)PCSK9 之中和劑。在一個實例中，在人類中(例如在臨床試驗中)進行測定。在一個實例中，在非人類中，例如在小鼠、大鼠、兔、豬、狗、綿羊或非人類靈長類(例如食蟹獼猴、恆河猴或狒狒)中進行測定。

抗體「片段」包含完整抗體之一部分，較佳為完整抗體之抗原結合及/或可變區。抗體片段的實例包括dAb、Fab、Fab'、F(ab')₂以及Fv片段；由抗體片段形成的雙功能抗體；線性抗體；單鏈抗體分子以及多特異性抗體。

在一個實施例中，本發明之配位體為或包含抗體或抗體片段，例如包含人類可變區(及亦視情況存在之人類恆定區)之抗體或片段。抗PCSK9或PCSK9結合或靶向抗體及片段可根據任何已知方法來製備，例如使用經PCSK9免疫之轉殖基因小鼠(例如Kymouse^TM或Velocimouse^TM、或Omnimouse^TM、Xenomouse^TM、HuMab Mouse^TM或MeMo Mouse^TM)、大鼠(例如Omnirat^TM)、駱駝、鯊魚、兔、雞或其他非人類動物，隨後視情況使恆定區及/或可變區人類化以產生人類或人類化抗體。在一個實例中，可使用呈現技術，諸如酵母、噬菌體或核糖體呈現，如熟習此項技術者應顯而易知。在自轉殖基因動物、噬菌體呈現庫或其他庫分離抗體前導物後，可在另一步驟中進行例如使用呈現技術之標準親和力成熟。適合技術之代表性實例描述於US20120093818(Amgen,Inc)中，其以全文引用的方式併入本文中，例如在段落[0309]至[0346]中所陳述之方法。

一般而言，VELOCIMMUNE^TM或其他小鼠或大鼠可用所關注之抗原攻擊，且自表現抗體之小鼠回收淋巴細胞(諸如B細胞)。淋巴細胞可與骨髓瘤細胞株融合以製備永生融合瘤細胞株，且此類融合瘤細胞株經篩檢及選擇以鑑別產生特異性針對所關注之抗原之抗體的融合瘤細胞株。可分離編碼重鏈及輕鏈之可變區的DNA且連接至該重鏈及輕鏈之所需同型恆定區。此類抗體蛋白質可在諸如CHO細胞之細胞中產生。或者，編碼抗原特異性嵌合抗體或輕鏈及重鏈之可變域的DNA可直接自抗原特異性淋巴細胞分離。

起初，分離具有人類可變區及小鼠恆定區之高親和力嵌合抗體。如下所述，對抗體進行表徵且選擇所需特徵，包括親和力、選擇性、抗原決定基等。用所需人類恆定區替換小鼠恆定區以產生本發明之完全人類抗體，例如野生型或經修飾之IgG1或IgG4(例如US2011/0065902(其以全文引用的方式併入本文中)中之SEQ ID NO：751、752、753，其序列以引用之方式併入本文中以用於本發明之配位體中)。雖然所選恆定區可根據特定用途而改變，但高親和力抗原結合及標靶特異性特徵存在於可變區。

在一個實例中，本發明之配位體為或包含在嚴格條件下雜交至PCSK9變異序列之核酸，例如RNA，例如siRNA，例如雜交包含一或多個變異核苷酸(對比最常見PCSK9序列，例如參考千人基因組計劃資料庫)之核苷酸序列。

舉例而言，該核酸雜交至立即側接核苷酸之區，該核苷酸與具有最高累積人類對偶基因頻率及/或最高總人類基因型頻率之PCSK9核苷酸序列的對應核苷酸相比為變異體。在一個實例中，該核酸雜交至兩個或兩個以上此類變異核苷酸。

特異性雜交在如熟習此項技術者應顯而易知的嚴格條件下，例如在65℃下5×SSC、5×登哈特氏試劑(Denhardt's reagent)及0.5% SDS之條件。

標靶結合能力、特異性及親和力(Kd、K_off及/或 K_on)可藉由此項技術中之任何常規方法來測定，例如藉由表面電漿子共振(SPR)。如本文所用，「Kd」一詞意欲指特定抗體-抗原相互作用之平衡解離常數。

在一個實施例中，表面電漿子共振(SPR)係在 25℃下進行。在另一實施例中，SPR係在37℃下進行。

在一個實施例中，SPR係在生理pH下進行，諸如約pH 7或在pH 7.6(例如使用pH 7.6之Hepes緩衝鹽水(亦稱為HBS-EP))下。

在一個實施例中，SPR係在生理鹽位準下進行，例如150mM NaCl。

在一個實施例中，SPR係在以體積計不超過 0.05%之清潔劑位準下進行，例如在0.05%之P20(聚山梨醇酯20；例如Tween-20^TM)及3mM之EDTA存在下。

在一個實例中，SPR係在25℃或37℃下在pH 7.6 之緩衝液中、150mM NaCl、0.05%清潔劑(例如P20)及3mM EDTA下進行。緩衝液可含有10mM Hepes。在一個實例中， SPR係在25℃或37℃下在HBS-EP中進行。HBS-EP係購自Teknova Inc(California；目錄號H8022)。

在一個實例中，配位體(例如抗體)之親和力藉由以下步驟使用SPR來測定：1.使抗小鼠(或物種匹配之其他相關人類、大鼠或非人類脊椎動物抗體恆定區)IgG(例如Biacore^TM BR-1008-38)偶合至生物感測器晶片(例如GLM晶片)，諸如藉由一級胺偶合；2.使抗小鼠IgG(或其他匹配物種抗體)暴露於測試IgG抗體以捕獲晶片上之測試抗體；3.在1024nM、256nM、64nM、16nM、4nM以及0nM(亦即僅緩衝液)下在晶片之捕獲表面上傳遞測試抗原；及4.且例如在如上文所述之SPR條件(例如在25℃下在生理緩衝液中)下使用表面電漿子共振測定測試抗體與測試抗原之結合的親和力。SPR可使用任何標準SPR設備進行，諸如藉由Biacore^TM或使用ProteOn XPR36^TM(Bio-Rad®)。

捕獲表面之再生可使用10mM甘胺酸在pH 1.7下進行。此移除所捕獲之抗體且使得表面可用於其他相互作用。結合資料可使用標準技術擬合至固有1：1模型，例如使用ProteOn XPR36^TM分析軟體之固有模型。

在一個實例中，本發明之配位體容納於醫學容器中，例如小瓶、注射器、IV容器或注射裝置(例如眼內或玻璃體內注射裝置)。在一個實例中，該配位體為活體外的，例如在無菌容器中。在一個實例中，本發明提供一種包含本發明之配位體、封裝及使用說明書之套組，用於治療或預防或診斷人類之由PCSK9介導之疾病或病狀。在一個實例中，說明書指示人類應在該配位體投與人類之前對本發明之PCSK9變異序列進行基因分型。在一個實例中，說明書指示人類應在該配位體投與人類之前對本發明之PCSK9變異體進行表型分型。在一個實例中，人類為中國(例如漢或CHS)民族且說明書為中文(例如國語)。在一個實例中，說明書包含向該人類投與阿利若單抗(alirocumab)或依伏洛單抗(evolocumab)的說明。

本發明解決治療具有天然存在之較罕見天然 PCSK9對偶基因、基因型及表現型(較罕見蛋白質形式)的人類的需要。就此而言，本發明提供以下態樣。

在第一態樣中：一種抗人類PCSK9配位體，其用於治療及/或預防人類中之PCSK9介導之疾病或病狀的方法，該人類之基因組包含選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列，其中該方法包含向該人類投與該配位體。

在一實例中，核苷酸序列係選自由SEQ ID NO：29-35及37組成之群；或選自由SEQ ID NO：29-32及34-37組成之群；或選自由SEQ ID NO：29-32、34、35及37組成之群。此等序列為並未編碼46L且滿足上文陳述之準則的天然存在之對偶基因(單體型)序列。此等群組包含與較高LDL-C相關聯之變異。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：34，該核苷酸序列編碼425S，其與較高LDL-C相關聯(Pisciotta等 2006)。

在一實例中，核苷酸序列選自由SEQ ID NO：31及37組成之群，該核苷酸序列編碼為冠狀動脈粥樣硬化嚴重度之標記的670G(Chen等2005)。

在一實例中，核苷酸序列選自由SEQ ID NO：31、32、34、35、36及37組成之群；或選自由SEQ ID NO：31、32、34、35及37組成之群。此等序列為具有與SEQ ID NO：28(a形式)之天然存在的差異組合且滿足上文陳述之準則之對偶基因(單體型)序列。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：29。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：30。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：31。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：32。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：33。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：34。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：35。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：36。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：37。

PCSK9變異並非最頻繁。

在本文任何組態、實例、實施例或態樣之一實施例中，本發明之配位體、抗體、片段或結合位點為重組型。

在第二態樣中：態樣1之配位體，其中配位體已經測定或經測定為能夠結合選自由形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群的人類PCSK9。

在任何態樣之一實例中，配位體結合(或已測定為結合)兩個、三個、四個或更多選自由形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群的人類PCSK9。

在任何態樣之一實例中，配位體包含特異性結合至PCSK9(例如選自由形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群的人類PCSK9)之蛋白域。

「特異性結合」一詞或類似者意謂配位體(例如抗體或其抗原結合片段)與在生理條件下相對穩定的抗原形成複合物。特異性結合之特徵可在於平衡解離常數為至少約1×10^-6M或以下(例如較小KD表示較緊密的結合)。判斷兩個分子是否特異性結合之方法在此項技術中為吾人所熟知，且包括例如平衡透析、表面電漿子共振及類似者。然而，特異性結合人類PCSK9之經分離抗體可展現與其他抗原(諸如來自其他物種之PCSK9分子)之交叉反應性。此外，仍然認為結合至人類PCSK9及一或多個額外抗原之多特異性抗體(例如雙特異性)為如本文所用之「特異性結合」PCSK9之抗體。

在任何態樣之一實例中，配位體包含或由模擬 LDL受體之EGFA域且特異性結合至PCSK9(例如選自由形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群的人類PCSK9)之蛋白組成。

在任何態樣之一實例中，配位體對抗PCSK9(例如選自由形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群的人類PCSK9)。

在任何態樣之一實例中，該方法包含(在投與配位體之前)確定配位體能夠結合選自由形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群的人類PCSK9之步驟。

在任何態樣之一實例中，藉由SPR確定結合。在任何態樣之一實例中，藉由ELISA確定結合。

在任何態樣之一實例中，該等形式為成熟形式。

在任何態樣之一實例中，該等形式為前形式。

本文中「經確定」、「經基因分型」或「經表型分型」等詞及類似者意謂方法包含此類確定、基因分型或表型分型之步驟。

在第三態樣中：結合包含選自由SEQ ID NO：4-27 組成之群的胺基酸序列之人類PCSK9之配位體，該配位體用於包含使用配位體靶向人類中的該PCSK9以治療及/或預防藉由PCSK9介導之疾病或病狀之步驟的方法，該方法包含向該人類投與該配位體。

在一實例中，疾病或病狀係藉由包含選自由SEQ ID NO：4-27組成之群的胺基酸序列之人類PCSK9介導。

在一實例中，胺基酸序列選自由SEQ ID NO：4-23、26及27組成之群；或選自由SEQ ID NO：4-14及18-27組成之群；或選自由SEQ ID NO：4-14、18-23、26及27組成之群。此等序列為不包含46L且符合上文陳述之準則的天然存在之序列。此等群組包含與較高LDL-C相關聯之變異。

在一實例中，胺基酸序列為SEQ ID NO：18、19 或20，該胺基酸序列包含425S，其與較高LDL-C相關聯(Pisciotta等2006)。

在一實例中，胺基酸序列選自由SEQ ID NO：10、11、12、26及27組成之群，該胺基酸序列包含為冠狀動脈粥樣硬化嚴重度之指標的670G(Chen等2005)。

在一實例中，胺基酸序列選自由SEQ ID NO：10-14及18-27組成之群；或選自由SEQ ID NO：10-14、18-23、26及27組成之群。此等序列為具有與SEQ ID NO：1-3(形式a)之天然存在的差異組合且符合上文陳述之準則的序列。

在一實例中，胺基酸序列為SEQ ID NO：4。

在一實例中，胺基酸序列為SEQ ID NO：5。

在一實例中，胺基酸序列為SEQ ID NO：6。

在一實例中，胺基酸序列為SEQ ID NO：7。

在一實例中，胺基酸序列為SEQ ID NO：8。

在一實例中，胺基酸序列為SEQ ID NO：9。

在一實例中，胺基酸序列為SEQ ID NO：10。

在一實例中，胺基酸序列為SEQ ID NO：11。

在一實例中，胺基酸序列為SEQ ID NO：12。

在一實例中，胺基酸序列為SEQ ID NO：13。

在一實例中，胺基酸序列為SEQ ID NO：14。

在一實例中，胺基酸序列為SEQ ID NO：15。

在一實例中，胺基酸序列為SEQ ID NO：16。

在一實例中，胺基酸序列為SEQ ID NO：17。

在一實例中，胺基酸序列為SEQ ID NO：18。

在一實例中，胺基酸序列為SEQ ID NO：19。

在一實例中，胺基酸序列為SEQ ID NO：20。

在一實例中，胺基酸序列為SEQ ID NO：21。

在一實例中，胺基酸序列為SEQ ID NO：22。

在一實例中，胺基酸序列為SEQ ID NO：23。

在一實例中，胺基酸序列為SEQ ID NO：24。

在一實例中，胺基酸序列為SEQ ID NO：25。

在一實例中，胺基酸序列為SEQ ID NO：26。

在一實例中，胺基酸序列為SEQ ID NO：27。

在第四態樣中：態樣3之配位體，其中人類基因組包含選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列。

在一實例中，核苷酸序列係選自由SEQ ID NO：29-35及37組成之群；或選自由SEQ ID NO：29-32及34-37組成之群；或選自由SEQ ID NO：29-32、34、35及37組成之群。此等序列為並未編碼46L且符合上文陳述之準則的天然存在之對偶基因(單體型)序列。此等群組包含與較高LDL-C相關聯之變異。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：34，該核苷酸序列編碼425S，其與較高LDL-C相關聯(Pisciotta等2006)。

在一實例中，核苷酸序列選自由SEQ ID NO：31及37組成之群，該核苷酸序列編碼為冠狀動脈粥樣硬化嚴重度之指標的670G(Chen等2005)。

在一實例中，核苷酸序列選自由SEQ ID NO：31、32、34、35、36及37組成之群；或選自由SEQ ID NO：31、32、34、35及37組成之群。此等序列為具有與SEQ ID NO：28(形式a)之天然存在的差異組合且符合上文陳述之準則之對偶基因(單體型)序列。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：29。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：30。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：31。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：32。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：33。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：34。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：35。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：36。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：37。

在第五態樣中：如前述態樣中任一項之配位體，其中已將人類基因分型或將人類基因分型為對選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列或至少其催化域或C-末端域編碼序列為陽性。

在一實例中，核苷酸序列係選自由SEQ ID NO：29-35及37組成之群；或選自由SEQ ID NO：29-32及34-37組成之群；或選自由SEQ ID NO：29-32、34、35及37組成之群。

此等序列為並未編碼46L且符合上文陳述之準則的天然存在之對偶基因(單體型)序列。此等群組包含與較高LDL-C相關聯之變異。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：29。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：30。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：31。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：32。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：33。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：34。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：35。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：36。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：37。

在第六態樣中：如前述態樣中任一項之配位體，其中已將人類表型分型或將人類表型分型為對選自由形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群的人類PCSK9或至少其催化域或C-末端域為陽性。

在一實例中，該等形式為成熟形式。

在一實例中，該等形式為前形式。

在第七態樣中：如前述態樣中任一項之配位體，其中方法包含將人類基因分型為對選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列或至少其催化域或C-末端域編碼序列為陽性。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：29。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：30。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：31。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：32。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：33。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：34。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：35。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：36。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：37。

在第八態樣中：如前述態樣中任一項之配位體，其中方法包含將人類表型分型為對選自由形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群的人類PCSK9或至少其催化域或C-末端域為陽性。

在一實例中，該等形式為成熟形式。

在一實例中，該等形式為前形式。

在第九態樣中：如前述態樣中任一項之配位體，其中已將人類基因分型或將人類基因分型為對選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列或至少其催化域或C-末端域編碼序列為異型接合；視情況其中已將人類基因分型或將人類基因分型為包含核苷酸序列SEQ ID NO：28或至少其催化域或C-末端域編碼序列以及選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列或至少其催化域或C-末端域編碼序列。

本文中「異型接合」意謂在人類基因型中一個對偶基因包含選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列或至少其催化域或C-末端域編碼序列，且其他對偶基因可為任何PCSK9(例如形式a、a'或包含選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列或至少其催化域或C-末端域編碼序列之對偶基因)。

在一實例中，該方法包含(在投與配位體之前)將人類基因分型為對選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列或至少其催化域或C-末端域編碼序列為異型接合；視情況亦將人類基因分型為包含核苷酸序列SEQ ID NO：28或至少其催化域或C-末端域編碼序列以及選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列或至少其催化域或C-末端域編碼序列。

在一實例中，核苷酸序列選自由SEQ ID NO：31 及37組成之群，該核苷酸序列編碼為冠狀動脈粥樣硬化嚴重度之指標的670G(Chan等2005)。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：29。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：30。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：31。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：32。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：33。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：34。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：35。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：36。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：37。

在第十態樣中：態樣1至9中任一項之配位體，其中已將人類基因組基因分型或將人類基因組基因分型為對選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列或至少其催化域或C-末端域編碼序列為同型接合。

本文中「同型接合」意謂在人類基因型中各對偶基因包含相同的選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列或至少其催化域或C-末端域編碼序列。

在一實例中，該方法包含將人類基因分型為對選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列或至少其催化域或C-末端域編碼序列為同型接合。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：34，該核苷酸序列編碼425S，其與較高LDL-C相關聯(Pisciotte等2006)。

在一實例中，核苷酸序列選自由SEQ ID NO：31 及37組成之群，該核苷酸序列編碼為冠狀動脈粥樣硬化嚴重度之指標的670G(Chen等2005)。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：29。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：30。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：31。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：32。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：33。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：34。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：35。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：36。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：37。

在第十一態樣中：如前述態樣中任一項之配位體，其中該配位體包含結合人類PCSK9且視情況已經確定或經確定為能夠實現此類結合之抗體結合位點，該人類PCSK9包含選自由SEQ ID NO：4-27組成之群的胺基酸序列。

在一實例中，該方法包含(在投與配位體之前)確定配位體能夠結合至該人類PCSK9之步驟。

在一實例中，結合為特異性結合。在一實例中，配位體結合(或已確定為結合)至親和力(Kd)為1mM、100nM、10nM或1nM或以下之PCSK9。在一實施例中，親和力不低於10、100、或1000fM。

在一實例中，藉由SPR或ELISA確定結合或親和力。

在一實例中，胺基酸序列為SEQ ID NO：4。

在一實例中，胺基酸序列為SEQ ID NO：5。

在一實例中，胺基酸序列為SEQ ID NO：6。

在一實例中，胺基酸序列為SEQ ID NO：7。

在一實例中，胺基酸序列為SEQ ID NO：8。

在一實例中，胺基酸序列為SEQ ID NO：9。

在一實例中，胺基酸序列為SEQ ID NO：10。

在一實例中，胺基酸序列為SEQ ID NO：11。

在一實例中，胺基酸序列為SEQ ID NO：12。

在一實例中，胺基酸序列為SEQ ID NO：13。

在一實例中，胺基酸序列為SEQ ID NO：14。

在一實例中，胺基酸序列為SEQ ID NO：15。

在一實例中，胺基酸序列為SEQ ID NO：16。

在一實例中，胺基酸序列為SEQ ID NO：17。

在一實例中，胺基酸序列為SEQ ID NO：18。

在一實例中，胺基酸序列為SEQ ID NO：19。

在一實例中，胺基酸序列為SEQ ID NO：20。

在一實例中，胺基酸序列為SEQ ID NO：21。

在一實例中，胺基酸序列為SEQ ID NO：22。

在一實例中，胺基酸序列為SEQ ID NO：23。

在一實例中，胺基酸序列為SEQ ID NO：24。

在一實例中，胺基酸序列為SEQ ID NO：25。

在一實例中，胺基酸序列為SEQ ID NO：26。

在一實例中，胺基酸序列為SEQ ID NO：27。

在第十二態樣中：態樣11之配位體，其中該配位體為抗體或抗體片段。舉例而言，抗體或抗體片段為PCSK9拮抗劑，例如中和PCSK9。此類抗體之實例揭示於例如WO 2008/057457、WO2008/057458、WO 2008/057459、WO 2008/063382、WO 2008/133647、WO 2009/100297、WO 2009/100318、WO 201 1/037791、WO 201 1/053759、WO 2011/053783、WO 2008/125623、WO 2011/072263、WO 2009/055783、WO 2010/029513、WO 2011/11 1007、WO 2010/077854中，揭示內容及此類抗體之序列以全文引用之方式併入本文中用於本發明。一個特定實例為AMG 145(Amgen)、LY3015014(Eli Lilly)或阿利若單抗(alirocumab)或其PCSK9結合衍生物。有利地，配位體為或包含阿利若單抗。

或者，配位體為或包含依伏洛單抗 (evolocumab)。

在一實例中，配位體為SAR236553/REGN727 (Sanofi Aventis/Regeneron)或其PCSK9結合衍生物。

在一實例中，配位體包含或由結合至PCSK9之中和抗體組成，其中該抗體結合至PCSK9且降低PCSK9結合至LDLR的可能性。

態樣11之配位體，其中該配位體為PCSK9拮抗劑，例如中和PCSK9。

在本發明之任何態樣之一實例中，配位體包含或由選自依伏洛單抗、1D05-IgG2(Merck&Co.)、ALN-PCS02(Alnylam)、RN316(Pfizer-Rinat)、LY3015014(Eli Lilly)及阿利若單抗或其PCSK9結合衍生物組成。在一實例中，配位體為SAR236553/REGN727(Sanofi Aventis/Regeneron)或其PCSK9結合衍生物。

在第十三態樣中：態樣1至10中任一項之配位體，其中(i)該配位體包含連續核苷酸序列，該連續核苷酸序列特異性雜交至選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列或至少其催化域或C-末端域編碼序列或特異性雜交至該序列之反義序列或RNA轉錄物，其中該連續核苷酸序列雜交至至少一個存在於該選定序列中而不存在於SEQ ID NO：28中之核苷酸或分別雜交至其反義序列或RNA轉錄物；及/或(ii)該配位體包含至少10個具有選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列之連續核苷酸序列或為該連續核苷酸之反義序列或RNA型式，其中該連續核苷酸序列包含至少一個存在於該選定序列中而不存在於SEQ ID NO：28中的核苷酸。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：29。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：30。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：31。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：32。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：33。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：34。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：35。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：36。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：37。

在一實施例中，配位體包含至少10、11、12、13、 14、15、20、25、30、35、40、45、50或100個具有該核苷酸序列之連續核苷酸。

在第十四態樣中：如前述態樣中任一項之配位體，其中該疾病或病狀為高脂質血症、高膽固醇血症(例如家族性高膽固醇血症)、心臟病發作、中風、冠心病、動脈粥樣硬化或心血管疾病或病狀。

如前述態樣中任一項之配位體，其中疾病或病狀為高膽固醇血症、高脂質血症、高膽固醇血症、血脂異常、膽汁鬱積性肝病、腎病症候群、甲狀腺功能低下、肥胖症、動脈粥樣硬化或心血管疾病。

在一實例中，該疾病或病狀為高膽固醇血症。如本文所用，「高膽固醇血症」一詞係指膽固醇位準高於所需位準之病狀。在一些實施例中，此表示血清膽固醇位準較高。在一些實施例中，所需位準考慮為熟習此項技術者已知(且在US20120093818中所描述或所提及)之各個「風險因子」。

如前述態樣中任一項之配位體，其中將人類識別為對家族性高膽固醇血症為異型接合、不耐受他汀、不受他汀控制或處於罹患高膽固醇血症、血脂異常、膽汁鬱積性肝病、腎病症候群、甲狀腺功能低下、肥胖症、動脈粥樣硬化或心血管疾病之風險。

在第十五態樣中：如前述態樣中任一項之配位體，其中該疾病或病狀與較高LDL膽固醇相關聯。

在美國及一些其他國家中以毫克(mg)膽固醇/分升(dL)血液來量測膽固醇位準。加拿大及歐洲大部分國家以毫莫耳(mmol)/公升(L)血液來量測膽固醇。下方為通用指南理想範圍及較高範圍。

*加拿大及歐洲指南略微不同於美國指南。此等轉化率係基於美國指南。

因此，較高LDL膽固醇為160mg/dL或以上(4.1 mmol/L或以上)。

在第十六態樣中：如前述態樣中任一項之配位體，其中該配位體抑制結合至人類LDL受體之人類PCSK9且視情況已確定或確定為能夠實現此類抑制。

在一實例中，該方法包含(在投與配位體之前)確定該配位體能夠實現此類抑制。

抑制確定為例如在rtp、pH 7、37攝氏度下及/或在人體生理條件下在血液或血清樣品中抑制。

在第十七態樣中：如前述態樣中任一項之配位體，其中人類為耐或實質上耐該疾病或病狀之他汀(例如阿伏他汀(avorstatin)及/或氟伐他汀(fluvastatin))治療的。

在第十八態樣中：如前述態樣中任一項之配位體，其中該配位體用於治療及/或預防人類中之PCSK9介導之疾病或病狀

(i)該人類之基因組包含SEQ ID NO：29且其中人類具有ASW、YRI、GBR、TSI、CLM、LWK、MXL、JPT、PUR、IBS、FIN或CEU血統；或(ii)該人類之基因組包含SEQ ID NO：30且其中人類具有ASW、YRI、GBR、TSI、CLM、CHB、LWK、CHS、JPT、PUR、FIN或CEU血統；或(iii)該人類之基因組包含SEQ ID NO：32且其中人類具有ASW、GBR、TSI、CLM、JPT、PUR、IBS、FIN或CEU血統；或(iv)該人類之基因組包含SEQ ID NO：33且其中人類具有LWK、ASW、YRI或CLM血統；或(v)該人類之基因組包含SEQ ID NO：34且其中人類具有LWK、ASW或YRI血統；或(vi)該人類之基因組包含SEQ ID NO：35且其中人類具有PUR、TSI、FIN或CEU血統；或(vii)該人類之基因組包含SEQ ID NO：36且其中人類具有LWK、ASW或YRI血統；或(viii)該人類之基因組包含SEQ ID NO：37且其中人類具有CHS、ASW、JPT、PUR或CHB血統。

在第十九態樣中：如前述態樣中任一項之配位體，其中該配位體用於治療及/或預防人類中之PCSK9介導之疾病或病狀

(i)該人類表現PCSK9形式f，且其中人類具有ASW、YRI、GBR、TSI、CLM、LWK、MXL、JPT、PUR、IBS、FIN或CEU血統；或(ii)該人類表現PCSK9形式c，且其中人類具有ASW、YRI、GBR、TSI、CLM、CHB、LWK、CHS、JPT、PUR、FIN或CEU血統；或(iii)該人類表現PCSK9形式p，且其中人類具有ASW、GBR、TSI、CLM、JPT、PUR、IBS、FIN或CEU血統；或(iv)該人類表現PCSK9形式m，且其中人類具有LWK、ASW、YRI或CLM血統；或(v)該人類表現PCSK9形式e，且其中人類具有LWK、ASW或YRI血統；或(vi)該人類表現PCSK9形式h，且其中人類具有PUR、TSI、FIN或CEU血統；或(vii)該人類表現PCSK9形式aj，且其中人類具有LWK、ASW或YRI血統；或(viii)該人類表現PCSK9形式q，且其中人類具有CHS、ASW、JPT、PUR或CHB血統。

在一實例中，該等形式為成熟形式。

在一實例中，該等形式為前形式。

在第二十態樣中：一種用於治療及/或預防 PCSK9介導之病狀或疾病(例如如態樣14或15中所列舉)之醫藥組成物或套組，該組成物或套組包含如前述態樣中任一項之配位體及視情況存在之他汀(例如塞若伐他汀(cerovastatin)、阿托伐他汀(atorvastatin)、辛伐他汀(simvastatin)、匹伐他汀(pitavastin)、羅素他汀(rosuvastatin)、氟伐他汀、洛伐他汀(lovastatin)或普伐他汀(pravastatin)；及視情況與標識或使用說明書組合以治療及/或預防人類中之該疾病或病狀(例如涵蓋治療態樣18或19中所列舉的人類)；視情況其中標識或說明書包含銷售授權號(例如FDA或EMA授權號)；視情況其中標識或說明書包含向該人類投與阿利若單抗或依伏洛單抗之說明；視情況其中套組包含IV或包含配位體(及例如亦為他汀)之注射裝置。

在第二十一態樣中：一種產生抗人類PCSK9抗體結合位點之方法，該方法包含獲得多個抗PCSK9抗體結合位點，篩檢該等用於結合至選自由形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群的人類PCSK9或其包含與對應序列SEQ ID NO：1、2或3之胺基酸變異之催化域或C-末端域或肽的抗體結合位點，及分離在篩檢步驟中結合之抗體結合位點，以及視情況產生形式f、c、r、p、m、e、h、aj或q PCSK9結合片段或經分離抗體之衍生物。

在一實例中，該等形式為成熟形式。

在一實例中，該等形式為前形式。

在此態樣及下一態樣之一實例中，多個結合位點包含或由多個4-鏈抗體或其片段(例如dAb、Fab或scFv)組成。適合之用於產生多個結合位點用於篩檢之方法包括噬菌體展示(產生抗體結合位點之噬菌體展示庫)、核糖體展示(產生抗體結合位點之核糖體展示庫)、酵母展示(產生抗體結合位點之酵母展示庫)或使用PCSK9抗原決定基使非人類脊椎動物之免疫(例如嚙齒動物，例如小鼠或大鼠，例如Velocimouse^TM、Kymouse^TM、Xenomouse^TM、Aliva Mouse^TM、HuMab Mouse^TM、Omnimouse^TM、Omnirat^TM或MeMo Mouse^TM)且分離抗體產生細胞(例如B細胞、血漿細胞或之成漿細胞譜系)及/或經分離抗體之譜系。

在一實例中，該方法包含選擇一或多個分別特異性結合至人類PCSK9抗原決定基之抗體結合位點，該人類PCSK9抗原決定基包含與SEQ ID NO：1、2或3之對應序列的胺基酸變異。

舉例而言，配位體特異性結合至抗原決定基，該抗原決定基包含相比於藉由SEQ ID NO：1、2或3編碼之PCSK9的對應胺基酸變異之胺基酸。在一實例中，配位體特異性結合至包含兩個或兩個以上此類變異胺基酸之抗原決定基。在一實例中，特異性結合意謂如藉由SPR所測定結合之親和力(Kd)為1mM、100nM、10nM或1nM或以下。

「抗原決定基」一詞為藉由抗體結合之抗原區。抗原決定基可定義為結構性或功能性的。功能性抗原決定基通常為結構性抗原決定基之子組且具有彼等直接有助於相互作用之親和力的殘基。抗原決定基亦可為構形的，亦即由非線性胺基酸組成。在某些實施例中，抗原決定基可包括為分子(諸如胺基酸、糖側鏈、磷醯基、或磺醯基)之化學活性表面分組的決定子，且在某些實施例中，可具有特定三維結構特徵及/或比電荷特徵。

在第二十二態樣中：一種產生抗人類PCSK9抗體之方法，該方法包含使用包含選自由形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q之胺基酸序列組成之群的胺基酸序列之人類PCSK9或其包含與對應序列SEQ ID NO：1、2或3之胺基酸變異的催化域或C-末端域或肽使非人類脊椎動物(例如小鼠或大鼠)免疫，及分離結合包含選自由形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群的人類PCSK9或其包含與對應序列SEQ ID NO：1、2或3之胺基酸變異之催化域或C-末端域或肽的抗體，以及視情況產生形式f、c、r、p、m、e、h、aj或q PCSK9結合片段或經分離抗體之衍生物。

在一實例中，該等形式為成熟形式。

在一實例中，該等形式為前形式。

在第二十三態樣中：態樣21或22之方法，包含獲得編碼抗體、片段、衍生物或結合位點之核酸及視情況將核酸插入表現載體中之步驟。

舉例而言，該方法包含分離包含核酸之細胞(例如B細胞、成漿細胞、血漿細胞或記憶細胞)，其中細胞係獲自已使用PCSK9抗原決定基免疫在非人類脊椎動物。

在第二十四態樣中：一種用於PCSK9將人類基因分型之套組，其中該套組包含核酸，該核酸(i)包含10個或更多個(例如10、15、20、30、40、50、60、70、80、90、100個或更多個)連續核苷酸之序列，該連續核苷酸序列特異性雜交至選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列或至少其催化域或C-末端域編碼序列，或特異性雜交至該序列之反義序列或RNA轉錄物，其中該連續核苷酸序列雜交至至少一個存在於該選定序列中而不存在於SEQ ID NO：28中的核苷酸或雜交至其反義序列或RNA轉錄物；及/或(ii)包含至少10個或更多個(例如10、15、20、30、40、50、60、70、80、90、100個或更多個)具有選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列之核苷酸序列或包含該連續核苷酸之反義序列或RNA型式，其中該連續核苷酸序列包含至少一個存在於該選定序列為而不存在於SEQ ID NO：28中的核苷酸。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：29。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：30。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：31。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：32。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：33。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：34。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：35。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：36。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：37。

在第二十五態樣中：一種用於PCSK9將人類基因分型或表型分型之套組，其中該套組包含如態樣1至19中任一項之配位體或藉由態樣21至23中任一項之方法產生的抗體、片段或衍生物。

在第二十六態樣中：結合選自由形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群的人類PCSK9之抗PCSK9配位體之用途，其用於製造用於治療及/或預防人類中之PCSK9介導之疾病或病狀的藥劑，該人類之基因組包含選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列，視情況用於治療及/或預防如態樣18或19中所列舉的人類中之PCSK9介導之疾病或病狀。

在一實例中，該等形式為成熟形式。

在一實例中，該等形式為前形式。

在第二十七態樣中：結合選自由形式f、c、r、p、 m、e、h、aj及q組成之群的人類PCSK9之抗PCSK9配位體之用途，其用於製造用於靶向人類中之該PCSK9以治療及/或預防藉由PCSK9介導之疾病或病狀的藥劑，視情況用於靶向如態樣18或19中所列舉的人類中之PCSK9。

在一實例中，該等形式為成熟形式。

在一實例中，該等形式為前形式。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：29。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：30。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：31。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：32。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：33。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：34。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：35。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：36。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：37。

配位體可為本文揭示之任何抗PCSK9配位體。

在第二十八態樣中：態樣26或27之用途，其中配位體、人類、疾病或病狀如態樣1至19中任一項。

在第二十九態樣中：一種靶向PCSK9以便治療及/或預防人類中的PCSK9介導之疾病或病狀之方法，該方法包含向包含選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列之人類投與抗PCSK9配位體，藉此靶向藉由該核苷酸序列編碼之PCSK9。

配位體可為本文揭示之任何抗PCSK9配位體。

在第三十態樣中：態樣29之方法，其中該方法包含使用該配位體靶向選自由形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群的人類PCSK9以治療及/或預防該人類中之該疾病或病狀。

在一實例中，該等形式為成熟形式。

在一實例中，該等形式為前形式。

在第三十一態樣中：一種治療及/或預防人類中的藉由PCSK9介導之疾病或病狀之方法，該方法包含藉由向人類投與結合該PCSK9的配位體來靶向選自由形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群的人類PCSK9，從而治療及/或預防人類中之該疾病或病狀。

在一實例中，該等形式為成熟形式。

在一實例中，該等形式為前形式。

配位體可為本文揭示之任何抗PCSK9配位體。

在第三十二態樣中：態樣31之方法，其中人類基因組包含選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：29。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：30。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：31。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：32。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：33。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：34。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：35。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：36。

在一實例中，核苷酸序列為SEQ ID NO：37。

在第三十三態樣中：態樣29至32中任一項之方法，其中已將人類基因分型或將人類基因分型為對選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列或至少其催化域或C-末端域編碼序列為陽性。

在第三十四態樣中：態樣29至33中任一項之方法，其中已將人類表型分型或將人類表型分型為對選自由形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群之人類PCSK9為陽性。

在一實例中，該等形式為成熟形式。

在一實例中，該等形式為前形式。

在第三十五態樣中：態樣29至34中任一項之方法，其中該方法包含將人類基因分型為對選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列或至少其催化域或C-末端域編碼序列為陽性。

在第三十六態樣中：態樣29至35中任一項之方法，其中該方法包含將人類表型分型為對選自由形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群的人類PCSK9序列為陽性。

在一實例中，該等形式為成熟形式。

在一實例中，該等形式為前形式。

在第三十七態樣中：態樣29至36中任一項之方法，其中已將人類基因分型或將人類基因分型為對選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列或至少其催化域或C-末端域編碼序列為異型接合；視情況其中已將人類基因分型或將人類基因分型為包含核苷酸序列SEQ ID NO：28或其催化域或C-末端域編碼序列以及選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列或其催化域或C-末端域編碼序列。

在第三十八態樣中：態樣29至37中任一項之方法，其中已將人類基因組基因分型或將人類基因組基因分型為對選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列或其催化域或C-末端域編碼序列為同型接合。

在第三十九態樣中：態樣29至38中任一項之方法，其中該方法包含在向人類投與配位體之前針對選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列或其催化域或C-末端域編碼序列將人類基因分型，其中該配位體經確定為能夠結合至藉由該選定序列編碼之PCSK9。

在第四十態樣中：態樣29至39中任一項之方法，其中配位體、人類、疾病或病狀如態樣1至19中任一項。

在第四十一態樣中：一種如態樣29至40中任一項之用於治療及/或預防如態樣14或15中所列舉的病狀或疾病之方法，該方法包含向該人類投與該配位體及他汀(例如塞若伐他汀、阿托伐他汀、辛伐他汀、匹伐他汀、羅素他汀、氟伐他汀、洛伐他汀或普伐他汀)。

在第四十二態樣中：態樣41之方法，其中配位體及他汀係分開投與。

在第四十三態樣中：態樣41之方法，其中配位體及他汀係同時投與。

在第四十四態樣中：態樣29至43中任一項之方法，其中配位體係藉由皮下注射投與。

在第四十五態樣中：一種PCSK9將人類核酸樣品基因分型之方法，該方法包含識別樣品中選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列或其催化域或C-末端域編碼序列之存在。

在第四十六態樣中：一種PCSK9分型人類蛋白樣品之方法，該方法包含識別樣品中選自由形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群的人類PCSK9之存在。

在一實例中，該等形式為成熟形式。

在一實例中，該等形式為前形式。

在一實例中，該方法包含自人類獲得PCSK9蛋白樣品且隨後進行識別步驟。

在第四十七態樣中：態樣45或46之方法，包含自人類獲得血清、血液、糞便、頭髮、組織、細胞、尿液或唾液樣品，藉此獲得核酸或蛋白樣品且用於識別該序列之步驟中。

在第四十八態樣中：態樣45至47中任一項之方法，包含使用如態樣1至19中任一項之配位體以進行該識別步驟。

在第四十九態樣中：一種治療及/或預防人類患者中之心血管疾病或病狀或與較高LDL膽固醇相關聯之疾病或病狀(例如高膽固醇血症)的方法，其中患者接受或已預先接受該疾病或病狀之他汀治療，該方法包含使用態樣45至48中任一項之方法將患者分型且投與根據態樣1至19中任一項之配位體，藉此治療人類或預防該疾病或病狀；視情況亦減少或停止他汀治療。

在一實例中，該減少或停止包含減少他汀之劑量及/或給藥頻率。

在第五十態樣中：一種診斷性、治療性或預防性套組，該套組包含能夠結合至或已確定或確定為能夠結合至選自SEQ ID NO：4-27之胺基酸序列的配位體及用於進行態樣46至49中任一項之方法的說明書及/或標識或指示或涵蓋向向如態樣1至19中任一項所定義之人類投與配位體之說明書。

在第五十一態樣中：一種診斷性、治療性或預防性套組，該套組包含核酸探針及用於進行態樣45、47或48之方法的說明書，該核酸探針包含特異性雜交至選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列或其反義序列或RNA轉錄物之核苷酸序列。

在本文所描述之態樣中任一項之實施例中，視情況PCSK9為人類PCSK9，例如成熟、裂解、自催化或活性PCSK9。在一實例中，疾病為心血管疾病，諸如高脂質血症。

在本發明之實例中，配位體特異性結合至人類 PCSK9，例如本文揭示之一或多種罕見的PCSK9變異體(例如一個、兩個、三個更多個或所有成熟形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q)及視情況亦包括a形式及/或形式。舉例而言，配位體特異性結合至成熟形式f及/或c以及形式a。

此類結合之確定可藉由如本領域中已知之任何抗體結合測試來進行，例如藉由表面電漿子共振。舉例而言，與此類形式之結合的Kd分別為至少1mM、100nM、1nM、100pM、10pM或1pM。

在一實例中，配位體結合形式a及選自由形式f、 c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群的PCSK9，其中結合至該選定形式之配位體的Kd(藉由SPR測定)為結合至形式a之配位體的Kd之至少60%、70%、80%、90%或95%。在一實施例中，兩種形式皆為成熟形式。在一實施例中，兩種形式皆為前形式。

在一實例中，配位體結合形式a及形式f，其中結合至形式f之配位體的Kd(藉由SPR測定)為結合至形式a之配位體的Kd之至少60%、70%、80%、90%或95%。在一實施例中，兩種形式皆為成熟形式。在一實施例中，兩種形式皆為前形式。

在一實例中，配位體結合形式a及形式c，其中結合至形式c之配位體的Kd(藉由SPR測定)為結合至形式一種之配位體的Kd之至少60%、70%、80%、90%或95%。在一實施例中，兩種形式皆為成熟形式。在一實施例中，兩種形式皆為前形式。

在一實例中，配位體結合形式a及形式r，其中結合至形式r之配位體的Kd(藉由SPR測定)為結合至形式a之配位體的Kd之至少60%、70%、80%、90%或95%。在一實施例中，兩種形式皆為成熟形式。在一實施例中，兩種形式皆為前形式。

在一實例中，配位體結合形式a及形式p，其中結合至形式p之配位體的Kd(藉由SPR測定)為結合至形式a之配位體的Kd之至少60%、70%、80%、90%或95%。在一實施例中，兩種形式皆為成熟形式。在一實施例中，兩種形式皆為前形式。

在一實例中，配位體結合形式a及形式m，其中結合至形式m之配位體的Kd(藉由SPR測定)為結合至形式a之配位體的Kd之至少60%、70%、80%、90%或95%。在一實施例中，兩種形式皆為成熟形式。在一實施例中，兩種形式皆為前形式。

在一實例中，配位體結合形式a及形式e，其中結合至形式e之配位體的Kd(藉由SPR測定)為結合至形式a之配位體的Kd之至少60%、70%、80%、90%或95%。在一實施例中，兩種形式皆為成熟形式。在一實施例中，兩種形式皆為前形式。

在一實例中，配位體結合形式a及形式h，其中結合至形式h之配位體的Kd(藉由SPR測定)為結合至形式a之配位體的Kd之至少60%、70%、80%、90%或95%。在一實施例中，兩種形式皆為成熟形式。在一實施例中，兩種形式皆為前形式。

在一實例中，配位體結合形式a及形式aj，其中結合至形式aj之配位體的Kd(藉由SPR測定)為結合至形式a之配位體的Kd之至少60%、70%、80%、90%或95%。在一實施例中，兩種形式皆為成熟形式。在一實施例中，兩種形式皆為前形式。

在一實例中，配位體結合形式a及形式q，其中結合至形式q之配位體的Kd(藉由SPR測定)為結合至形式a之配位體的Kd之至少60%、70%、80%、90%或95%。在一實施例中，兩種形式皆為成熟形式。在一實施例中，兩種形式皆為前形式。

在本發明之實例中，配位體中和人類PCSK9，例如本文揭示之一或多種罕見的PCSK9變異體(例如一個、兩個、三個更多個或所有成熟形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q)及視情況亦包括a形式及/或形式。舉例而言，配位體中和成熟形式f及/或c以及形式a。舉例而言，中和之確定可藉由揭示於US20120093818A1(Amgen,Inc)或US20110065902A1(Regeneron Pharmaceuticals,Inc)中之任何中和分析方法來進行。本發明之結合或靶向PCSK9之配位體有用的，例如用於揭示於US20120093818A1及US20110065902A1中之治療性及預防性應用，此等特定揭示內容以全文引用之方式併入本文中用於本發明中及用於本文技術方案中可能的內容。

在配位體用於治療性應用之實施例中，抗原結合蛋白可抑制、干擾或調變PCSK9(例如本文揭示之一或多個罕見變異及視情況亦包括a及/或a'形式)之一或多個生物活性。在一個實施例中，配位體特異性結合至人類PCSK9(例如本文揭示之一或多個罕見變異及視情況亦包括a及/或a'形式)及/或實質上抑制人類PCSK9(例如該等一或多個本文揭示之罕見變異及視情況亦包括a及/或a'形式)與LDLR的結合至少20%，例如20%-40%、40%-60%、60%-80%、80%-85%或更多(例如藉由在活體外競爭性結合分析中量測結合)。在一實例中，配位體一種抗體。

在一實施例中，配位體結合至本文揭示之一個、兩個或更多個罕見變異及視情況亦a及/或a'形式之Kd小於(結合更緊密)、10^-7、10^-8、10^-9、10^-10、10^-11、10^-12、10^-13M。在一實例中，使用SPR測定Kd。

在一實施例中，配位體阻斷LDLR與本文揭示之一或多個罕見PCSK9變異體(及視情況亦包括a及/或a'形式)之結合的IC50為小於1mM、1000nM至100nM、100nM至10nM、10nM至1nM、1000pM至500pM、500pM至200pM、小於200pM、200pM至150pM、200pM至100pM、100pM至10pM、10pM至1pM。

在一實施例中，配位體阻斷LDLR與PCSK9之a及/或a'形式之結合的IC50為比阻斷LDLR與本文揭示之一或多個罕見PCSK9變異體(例如一或多個包含選自SEQ ID NO：4至27之序列的PCSK9蛋白)之結合的IC50大(亦即抑制性更大)不超過1000、100、90、80、70、60、50、40、30、20或10倍。舉例而言，另外或替代地配位體阻斷LDLR與(i)a及/或a'形式之結合的IC50為小於1mM、1000nM至100nM、100nM至10nM、10nM至1nM、1000pM至500pM、500pM至200pM、小於200pM、200pM至150pM、200pM至100pM、100pM至10pM、10pM至1pM，例如在1mM至1pM範圍內(例如1mM至100pM；10nM至100pM；1nM至10pM或100pM至1pM)及阻斷LDLR與(ii)一或多個包含選自SEQ ID NO：4至27的序列之PCSK9蛋白之結合的IC50為小於1mM、1000nM至100nM、100nM至10nM、10nM 至1nM、1000pM至500pM、500pM至200pM、小於200pM、200pM至150pM、200pM至100pM、100pM至10pM、10pM至1pM，例如在1mM至1pM範圍內(例如1mM至100pM；10nM至100pM；1nM至10pM或100pM至1pM)。

在一實施例中，配位體結合至PCSK9之a及/或a' 形式的結合親和力(Kd)相對於結合至包含選自SEQ ID NO：4至27的序列之PCSK9的結合親和力超過至多10%、超過至多20%、超過至多40%、超過至多50%、超過至多55%、超過至多60%、超過至多65%、超過至多70%、超過至多75%、超過至多80%、超過至多85%、超過至多90%、超過至多95%或超過至多100%(亦即雙倍)。此類結合量測可使用本領域中已知之各種結合分析來進行，例如使用表面電漿子共振(SPR)，諸如藉由Biacore^TM或使用ProteOn XPR36^TM(Bio-Rad®)或使用KinExA®(Sapidyne Instruments,Inc)。

在一個實施例中，SPR係在生理鹽位準下進行，例如150mM NaCl。

在一個實施例中，SPR係在以體積計不超過 0.05%之清潔劑位準下進行，例如在0.05%之P20(聚山梨醇酯20；例如Tween-20TM)及3mM之EDTA存在下。

在一個實例中，SPR係在25℃或37℃下在pH 7.6 之緩衝液中、150mM NaCl、0.05%清潔劑(例如P20)及3mM EDTA下進行。緩衝液可含有10mM Hepes。在一個實例中，SPR係在25℃或37℃下在HBS-EP中進行。HBS-EP係購自Teknova Inc(California；目錄號H8022)。

在一實例中，配位體(其為抗體)之親和力係使用 SPR藉由以下各者來測定

1.諸如藉由一級胺偶合將抗小鼠(或其他相關脊椎動物)IgG(例如Biacore BR-1008-38)偶合至生物感測器晶片(例如GLM晶片)；2.將抗小鼠IgG(脊椎動物抗體)暴露於測試IgG抗體以捕獲晶片上之測試抗體；3.在1024nM、256nM、64nM、16nM、4nM以及0nM(亦即僅緩衝液)下在晶片之捕獲表面上傳遞測試抗原；及4.且例如在如上文所述之SPR條件(例如在25℃下在生理緩衝液中)下使用表面電漿子共振測定測試抗體與測試抗原之結合的親和力。SPR可使用任何標準SPR設備進行，諸如藉由BiacoreTM或使用ProteOn XPR36TM(Bio-Rad®)。

在一實施例中，本發明之配位體之分析或測試係在pH 7(例如對於活體外測試及分析而言)下或實質上在pH 7下及在rtp下或實質上在rtp下進行。

本發明之抗PCSK9抗體之IgG2重鏈恆定域的一個實例具有如SEQ ID NO：154(US20120093818A1之圖3KK)中所展示之胺基酸序列，該序列以引用之方式併入本文中。

本發明之抗PCSK9抗體之IgG4重鏈恆定域的一實例具有如SEQ ID NO：155(US20120093818A1之圖3KK)中所展示之胺基酸序列，該序列及揭示內容以全文引用的方式併入本文中。

抗PCSK9抗體之κ輕鏈恆定域之一個實例具有如 SEQ ID NO：157(US20120093818A1的圖3KK)中所展示之胺基酸序列，該序列及揭示內容以全文引用的方式併入本文中。

抗PCSK9抗體之λ輕鏈恆定域之一個實例具有如 SEQ ID NO：156(US20120093818A1的圖3KK)中所展示之胺基酸序列，該序列及揭示內容以全文引用的方式併入本文中。

在本發明之實例中，配位體結合成熟PCSK9，例如本文揭示之一或多個罕見變異體的成熟形式及視情況亦包括a及/或a'形式。

在本發明之實例中，配位體結合PCSK9之催化域，例如本文揭示的一或多個罕見變異體之成熟形式及視情況亦包括a及/或a'形式之催化域。

在本發明之實例中，配位體結合PCSK9之前域，例如本文揭示的一或多個罕見變異體之成熟形式及視情況亦包括a及/或a'形式之前域。

在一些實施例中，配位體結合至PCSK9之V域，例如本文揭示的一或多個罕見變異體之成熟形式及視情況亦包括a及/或a'形式之V域。在一些實施例中，配位體結合至PCSK9(例如本文揭示之一或多個罕見變異體之成熟形式及視情況亦包括a及/或a'形式)的V域且阻止(或減少例如至少10%)PCSK9結合至LDLR。在一些實施例中，配位體結合至PCSK9之(例如本文揭示之一或多個罕見變異體之成熟形式及視情況亦包括a及/或a'形式之)V域，且儘管其並不阻止(或減少)PCSK9與LDLR之結合，但該配位體阻止或減少(例如至少10%)經由PCSK9介導之對LDLR之有害活性。

在本發明之實例中，配位體為或包含全部人類抗體。在一實例中，配位體包含人類可變區或人類化可變區。

在一實例中，本發明之配位體特異性結合至選自由形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群的人類PCSK9之抗原決定基，其中抗原決定基包含至少一個形式a中未發現之胺基酸。舉例而言，胺基酸係選自由以下各者組成之群：46L、53V、425S、443T、474V、619P及670G(如SEQ ID NO：1中所使用編號)。舉例而言，胺基酸係選自由以下各者組成之群：425S、443T、474V、619P及670G(如SEQ ID NO：1中所使用編號)。舉例而言，胺基酸係選自由以下各者組成之群：425S及443T(如SEQ ID NO：1中所使用編號)。舉例而言，胺基酸係選自由以下各者組成之群：474V、619P及670G(如SEQ ID NO：1中所使用編號)。在一實例中，PCSK9形式為成熟形式。在一實例中，PCSK9形式為前形式。在一實例中，配位體亦特異性結合至形式a及/或a'。在一實施例中，配位體特異性結合至形式f PCSK9之抗原決定基，其中抗原決定基包含至少一個形式a中未發現之胺基酸。在一實施例中，配位體特異性結合至形式c PCSK9之抗原決定基，其中抗原決定基包含至少一個形式a中未發現之胺基酸。在一實施例中，配位體特異性結合至形式r PCSK9之抗原決定基，其中抗原決定基包含至少一個形式a中未發現之胺基酸。在一實施例中，配位體特異性結合至形式p PCSK9之抗原決定基，其中抗原決定基包含至少一個形式a中未發現之胺基酸。在一實施例中，配位體特異性結合至形式m PCSK9之抗原決定基，其中抗原決定基包含至少一個形式a中未發現之胺基酸。在一實施例中，配位體特異性結合至形式e PCSK9之抗原決定基，其中抗原決定基包含至少一個形式a中未發現之胺基酸。在一實施例中，配位體特異性結合至形式h PCSK9之抗原決定基，其中抗原決定基包含至少一個形式a中未發現之胺基酸。在一實施例中，配位體特異性結合至形式aj PCSK9之抗原決定基，其中抗原決定基包含至少一個形式a中未發現之胺基酸。在一實施例中，配位體特異性結合至形式q PCSK9之抗原決定基，其中抗原決定基包含至少一個形式a中未發現之胺基酸。

在一實施例中，配位體特異性結合至選自由形式 f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群的人類PCSK9之前域。在一實例中，配位體亦特異性結合至形式a及/或a'之前域。在一實施例中，配位體特異性結合至形式f PCSK9之前域，其中抗原決定基包含至少一個形式a中未發現之胺基酸。在一實施例中，配位體特異性結合至形式c PCSK9之前域，其中抗原決定基包含至少一個形式a中未發現之胺基酸。在一實施例中，配位體特異性結合至形式r PCSK9之前域，其中抗原決定基包含至少一個形式a中未發現之胺基酸。在一實施例中，配位體特異性結合至形式p PCSK9之前域，其中抗原決定基包含至少一個形式a中未發現之胺基酸。在一實施例中，配位體特異性結合至形式m PCSK9之前域，其中抗原決定基包含至少一個形式a中未發現之胺基酸。在一實施例中，配位體特異性結合至形式e PCSK9之前域，其中抗原決定基包含至少一個形式a中未發現之胺基酸。在一實施例中，配位體特異性結合至形式h PCSK9之前域，其中抗原決定基包含至少一個形式a中未發現之胺基酸。在一實施例中，配位體特異性結合至形式aj PCSK9之前域，其中抗原決定基包含至少一個形式a中未發現之胺基酸。在一實施例中，配位體特異性結合至形式q PCSK9之前域，其中抗原決定基包含至少一個形式a中未發現之胺基酸。

在一實施例中，配位體特異性結合至選自由形式 f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群的人類PCSK9之催化域。在一實例中，配位體亦特異性結合至形式a及/或a'之催化域。在一實施例中，配位體特異性結合至形式f PCSK9 之催化域，其中抗原決定基包含至少一個形式a中未發現之胺基酸。在一實施例中，配位體特異性結合至形式c PCSK9之催化域，其中抗原決定基包含至少一個形式a中未發現之胺基酸。在一實施例中，配位體特異性結合至形式r PCSK9之催化域，其中抗原決定基包含至少一個形式a中未發現之胺基酸。在一實施例中，配位體特異性結合至形式p PCSK9之催化域，其中抗原決定基包含至少一個形式a中未發現之胺基酸。在一實施例中，配位體特異性結合至形式m PCSK9之催化域，其中抗原決定基包含至少一個形式a中未發現之胺基酸。在一實施例中，配位體特異性結合至形式e PCSK9之催化域，其中抗原決定基包含至少一個形式a中未發現之胺基酸。在一實施例中，配位體特異性結合至形式h PCSK9之催化域，其中抗原決定基包含至少一個形式a中未發現之胺基酸。在一實施例中，配位體特異性結合至形式aj PCSK9之催化域，其中抗原決定基包含至少一個形式a中未發現之胺基酸。在一實施例中，配位體特異性結合至形式q PCSK9之催化域，其中抗原決定基包含至少一個形式a中未發現之胺基酸。

在一實施例中，配位體特異性結合至選自由形式 f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群的人類PCSK9之C-末端域。在一實例中，配位體亦特異性結合至形式a及/或a'之C-末端域。在一實施例中，配位體特異性結合至形式f PCSK9之C-末端域，其中抗原決定基包含至少一個形式a中未發現之胺基酸。在一實施例中，配位體特異性結合至形式c PCSK9之C-末端域，其中抗原決定基包含至少一個形式a中未發現之胺基酸。在一實施例中，配位體特異性結合至形式r PCSK9之C-末端域，其中抗原決定基包含至少一個形式a中未發現之胺基酸。在一實施例中，配位體特異性結合至形式p PCSK9之C-末端域，其中抗原決定基包含至少一個形式a中未發現之胺基酸。在一實施例中，配位體特異性結合至形式m PCSK9之C-末端域，其中抗原決定基包含至少一個形式a中未發現之胺基酸。在一實施例中，配位體特異性結合至形式e PCSK9之C-末端域，其中抗原決定基包含至少一個形式a中未發現之胺基酸。在一實施例中，配位體特異性結合至形式h PCSK9之C-末端域，其中抗原決定基包含至少一個形式a中未發現之胺基酸。在一實施例中，配位體特異性結合至形式aj PCSK9之C-末端域，其中抗原決定基包含至少一個形式a中未發現之胺基酸。在一實施例中，配位體特異性結合至形式q PCSK9之C-末端域，其中抗原決定基包含至少一個形式a中未發現之胺基酸。

在一實施例中，配位體特異性結合至選自由形式 f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群的人類PCSK9受質結合溝槽(參看Cunningham等，Nat Struct Mol Biol.2007年5月；14(5)：413-9電子版2007年4月15日，「Structural and biophysical studies of PCSK9 and its mutants linked to familial hypercholesterolemia」，以全文引用之方式併入本文中)。在一實例中，配位體亦特異性結合至形式a及/或a'之受質結合溝槽。在一實施例中，配位體特異性結合至形式f PCSK9之受質結合溝槽，其中抗原決定基包含至少一個形式a中未發現之胺基酸。在一實施例中，配位體特異性結合至形式c PCSK9之受質結合溝槽，其中抗原決定基包含至少一個形式a中未發現之胺基酸。在一實施例中，配位體特異性結合至形式r PCSK9之受質結合溝槽，其中抗原決定基包含至少一個形式a中未發現之胺基酸。在一實施例中，配位體特異性結合至形式p PCSK9之受質結合溝槽，其中抗原決定基包含至少一個形式a中未發現之胺基酸。在一實施例中，配位體特異性結合至形式m PCSK9之受質結合溝槽，其中抗原決定基包含至少一個形式a中未發現之胺基酸。在一實施例中，配位體特異性結合至形式e PCSK9之受質結合溝槽，其中抗原決定基包含至少一個形式a中未發現之胺基酸。在一實施例中，配位體特異性結合至形式h PCSK9之受質結合溝槽，其中抗原決定基包含至少一個形式a中未發現之胺基酸。在一實施例中，配位體特異性結合至形式aj PCSK9之受質結合溝槽，其中抗原決定基包含至少一個形式a中未發現之胺基酸。在一實施例中，配位體特異性結合至形式q PCSK9之受質結合溝槽，其中抗原決定基包含至少一個形式a中未發現之胺基酸。

參考US20120093818A1(Amgen,Inc)，其全部揭示內容以引用之方式併入本文中。本專利申請案揭示用於本發明中之相關配位體以及可參考本發明使用的產生及測試配位體之實例及方法。

在一實例中，配位體為或包含揭示於 US20120093818A1(Amgen,Inc)之表2中的抗體或為其PCSK9結合衍生物。

在一實施例中，本發明之PCSK9結合配位體係選自揭示於US20120093818A1(Amgen,Inc)中(例如US20120093818A1之第[0009]至[0014]及[0058]至[0063]段中)的抗原結合蛋白；此等揭示內容之全部(包括此類蛋白之序列)以引用之方式併入本文中，如同在本文中明確列舉及用於一或多個技術方案中之可能的內容或用於本發明。

在此段落中SEQ ID NO為如在 US20120093818A1(Amgen,Inc)中出現者且此等序列以引用之方式併入本文中，如同在本文中明確列舉及用於一或多個技術方案中可能的內容或用於本發明中。在一些態樣中，本發明之配位體包含結合PCSK9之經分離抗原結合蛋白，PCSK9包含：A)一或多個選自由以下各者組成之群之重鏈互補決定區(CDRH)：(i)來自選自由SEQ ID NO：74、85、71、72、67、87、58、52、51、53、48、54、55、56、49、57、50、91、64、62、89、65、79、80、76、77、78、83、69、81及60組成之群的序列中CDRH1之CDRH1；(ii)來自選自由SEQ ID NO：74、85、71、72、67、87、58、52、51、53、48、54、55、56、49、57、50、91、64、62、89、65、79、80、76、77、78、83、69、81及60組成之群的序列中CDRH2之CDRH2；(iii)來自選自由SEQ ID NO：74、85、71、72、67、87、58、52、51、53、48、54、55、56、49、57、50、91、64、62、89、65、79、80、76、77、78、83、 69、81及60組成之群的序列中CDRH3之CDRH3；及(iv)含有一或多個不超過4個胺基酸之胺基酸取代、刪除或插入的(i)、(ii)及(iii)之CDRH；B)一或多個選自由以下各者組成之群的輕鏈互補決定區(CDRL)：(i)來自選自由SEQ ID NO：5、7、9、10、12、13、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、26、28、30、31、32、33、35、36、37、38、39、40、42、44及46組成之群的序列中CDRL1之CDRL1；(ii)來自選自由SEQ ID NO：5、7、9、10、12、13、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、26、28、30、31、32、33、35、36、37、38、39、40、42、44及46組成之群的序列中CDRL2之CDRL2；(iii)來自選自由SEQ ID NO：5、7、9、10、12、13、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、26、28、30、31、32、33、35、36、37、38、39、40、42、44及46組成之群的序列中CDRL3之CDRL3；及(iv)含有一或多個不超過4個胺基酸之胺基酸取代、刪除或插入的(i)、(ii)及(iii)之CDRL；或C)一或多個A)之重鏈CDRH及一或多個B)之輕鏈CDRL。在一些實施例中，經分離抗原結合蛋白包含至少一個A)之CDRH及至少一個B)之CDRL。在一些實施例中，經分離抗原結合蛋白包含至少兩個A)之CDRH及至少兩個B)之CDRL。在一些實施例中，經分離抗原結合蛋白包含該等CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2及CDRL3在一些實施例中，A)之CDRH係選自由以下各者組成的群組中之至少一者：(i)選自選自由SEQ ID NO：67、79、89及49組成之群的序列中CDRH1之CDRH1胺基酸序列；(ii)選自選自由SEQ ID NO：67、79、89及49組成之群的序列中CDRH2之CDRH2胺基酸序列；(iii)選自選自由SEQ ID NO：67、79、89、及49組成之群的序列中CDRH3之CDRH3胺基酸序列；及(iv)含有一或多個不超過2個胺基酸之胺基酸取代、刪除或插入的(i)、(ii)及(iii)之CDRH。另外，B)之CDRL係選自由以下各者組成的群組中之至少一者：(i)選自選自由SEQ ID NO：12、35、32及23組成之群的序列中CDRL1之CDRL1胺基酸序列；(ii)選自選自由SEQ ID NO：12、35、32及23組成之群的序列中CDRL2之CDRL2胺基酸序列；(iii)選自選自由SEQ ID NO：12、35、32及23組成之群的序列中CDRL3之CDRL3胺基酸序列；及(iv)含有一或多個不超過2個胺基酸之胺基酸取代、刪除或插入的(i)、(ii)及(iii)之CDRL；或C)一或多個A)之重鏈CDRH及一或多個B之輕鏈CDRL。在一些實施例中，A)之CDRH係選自由以下各者組成的群組中之至少一者：(i)SEQ ID NO：67中CDRH1胺基酸序列之CDRH1胺基酸序列；(ii)SEQ ID NO：67中CDRH2胺基酸序列之CDRH2胺基酸序列；(iii)SEQ ID NO：67中CDRH3胺基酸序列之CDRH3胺基酸序列；及(iv)含有一或多個不超過2個胺基酸之胺基酸取代、刪除或插入的(i)、(ii)及(iii)之CDRH；該B)之CDRL係選自由以下各者組成的群組中之至少一者：(i)SEQ ID NO：12中CDRL1胺基酸序列之CDRL1胺基酸序列；(ii)SEQ ID NO：12中CDRL2胺基酸序列之CDRL2胺基酸序列；(iii)SEQ ID NO：12中CDRL3胺基酸序列之CDRL3胺基酸序列；及(iv)含有一或多個不超過2個胺基酸之胺基酸取代、刪除或插入的(i)、(ii)及(iii)之CDRL；或C)一或多個A)之重鏈CDRH及一或多個B)之輕鏈CDRL。在一些實施例中，抗原結合蛋白包含A)SEQ ID NO：67中CDRH1序列之CDRH1、SEQ ID NO：67中CDRH2序列之CDRH2及SEQ ID NO：67中CDRH3序列之CDRH3，與B)SEQ ID NO：12中CDRL1序列之CDRL1、SEQ ID NO：12中CDRL2序列之CDRL2及SEQ ID NO：12中CDRL3序列之CDRL3。在一些實施例中，抗原結合蛋白包含與選自由SEQ ID NO：74、85、71、72、67、87、58、52、51、53、48、54、55、56、49、57、50、91、64、62、89、65、79、80、76、77、78、83、69、81及60組成之群的胺基酸序列具有至少80%序列一致性之重鏈可變區(VH)及/或與選自由SEQ ID NO：5、7、9、10、12、13、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、26、28、30、31、32、33、35、36、37、38、39、40、42、44及46組成之群的胺基酸序列具有至少80%序列一致性之輕鏈可變區(VL)。在一些實施例中，VH與選自由SEQ ID NO：74、85、71、72、67、87、58、52、51、53、48、54、55、56、49、57、50、91、64、62、89、65、79、80、76、77、78、83、69、81及60組成之群的胺基酸序列具有至少90%序列一致性及/或VL與選自由SEQ ID NO：5、7、9、10、12、13、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、26、28、30、31、32、33、35、36、37、38、39、40、42、44及46組成之群的胺基酸序列具有至少90%序列一致性。在一些實施例中，VH係選自由SEQ ID NO：74、85、71、72、 67、87、58、52、51、53、48、54、55、56、49、57、50、91、64、62、89、65、79、80、76、77、78、83、69、81及60組成之群，及/或VL係選自由SEQ ID NO：5、7、9、10、12、13、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、26、28、30、31、32、33、35、36、37、38、39、40、42、44及46組成之群。

在本發明之任何態樣之一實例中，PCSK9靶向或結合配位體包含或由揭示於US20120093818A1(Amgen,Inc)中的AMG145或31H4、16F12、11F1、8A3或21B12或包含AMG145、31H4、16F12、11F1、8A3或21B12之可變域的抗體組成，其揭示內容(包括序列)以引用之方式併入本文中，如同在本文中明確列舉及用於一或多個技術方案中之可能的內容或用於本發明。較佳地，PCSK9靶向或結合配位體包含或由AMG145組成。

在一實例中，本發明之AMG145或其他配位體經糖基化，例如具有人類糖基化(例如藉由CHO、Cos或Hek293細胞產生)。在一實例中，本發明之配位體產生於CHO中。

參考US20110065902A1(Regeneron Pharmaceuticals, Inc)，其全部揭示內容以引用之方式併入本文中。本專利申請案揭示用於本發明中之相關配位體以及可參考本發明使用的產生及測試配位體與測定醫療功效之實例及方法。

參考以下PCT申請案，其全部揭示內容以引用之方式併入本文中。此等PCT申請案揭示用於本發明中之相關配位體以及可參考本發明使用的產生及測試配位體與測定醫療功效之實例及方法。

WO2008057457

WO2008057458

WO2008057459

WO2008063382

WO2008133647

WO2009100297

WO2009100318

WO2011037791

WO2011053759

WO2011053783

WO2008125623

WO2011072263

WO2009055783

WO2010029513

WO2011111007

WO2010077854

PCSK9之抗體配位體描述於例如WO 2008/057457、WO 2008/057458、WO 2008/057459、WO 2008/063382、WO 2008/125623及US 2008/0008697中。

在一實例中，配位體為或包含揭示於US20110065902A1之實例(例如316P或300N)中之抗體或其PCSK9結合衍生物。此等揭示內容之全部(包括此類蛋白之序列及對應核苷酸序列)均以引用之方式併入本文中，如同在本文中明確列舉及用於一或多個技術方案中之可能的內容或用於本發明。在一實施例中，配位體為或包含揭示於US20110065902A1中之抗體316P或300N之可變域或為(或包含)此類抗體或其PCSK9結合衍生物。前述參考文獻以全文引用之方式併入本文中。

在一實施例中，配位體為或包含抗體阿利若單抗或SAR236553/REGN727(Sanofi Aventis/Regeneron)之可變域或為(或包含)此類抗體或其PCSK9結合衍生物。在一實例中，抗體經糖基化，例如具有人類糖基化(例如藉由CHO、Cos或Hek293細胞產生)。較佳地，配位體為阿利若單抗或SAR236553/REGN727。

在一實施例中，配位體為或包含抗體依伏洛單抗之可變域或為(或包含)此類抗體或其PCSK9結合衍生物。在一實例中，抗體經糖基化，例如具有人類糖基化(例如藉由CHO、Cos或Hek293細胞產生)。較佳地，配位體為依伏洛單抗。

在一實施例中，配位體係選自依伏洛單抗、 1D05-IgG2(Merck&Co.)、ALN-PCS02(Alnylam)、RN316(Pfizer-Rinat)及阿利若單抗。

在一實施例中，配位體係選自以下(序列及定義按照US2011/0065902，以全文引用的方式併入本文中)：

1.特異性結合hPCSK9之抗體或其抗原結合片段，其中抗體或抗原結合片段包含具有SEQ ID NO：218/226之HCVR/LCVR胺基酸序列配對的重鏈及輕鏈CDR。

2.包含具有SEQ ID NO：220、222、224、228、230及232之重鏈及輕鏈CDR胺基酸序列的概念1之抗體或抗原結合片段。

3.包含具有SEQ ID NO：218之胺基酸序列的HCVR及具有SEQ ID NO：226之胺基酸序列的LCVR之概念2之抗體或抗原結合片段。

4.結合至與包含重鏈及輕鏈CDR胺基酸序列之抗體相同的hPCSK9上之抗原決定基之抗體或其抗原結合片段，該等重鏈及輕鏈CDR胺基酸序列具有SEQ ID NO：220、222、224、228、230及232。

5.為結合至hPCSK9而與包含重鏈及輕鏈CDR胺基酸序列之抗體競爭之抗體或其抗原結合片段，該等重鏈及輕鏈CDR胺基酸序列具有SEQ ID NO：220、222、224、228、230及232。

在一實施例中，配位體係選自以下(序列及定義按照US2012/0093818，以全文引用的方式併入本文中)：

1.結合至包含胺基酸序列SEQ ID NO：1之PCSK9蛋白之經分離中和抗原結合蛋白，其中該中和抗原結合蛋白減少PCSK9對LDLR的LDLR降低效應，其中抗原結合蛋白包含輕鏈，該輕鏈包含胺基酸序列SEQ ID NO：46，且其中抗原結合蛋白包含重鏈，該重鏈包含胺基酸序列SEQ ID NO：60。

2.概念2之經分離中和抗原結合蛋白，其中該抗原結合蛋白為LDLR非競爭性中和抗原結合蛋白。

3.概念2之經分離中和抗原結合蛋白，其中該抗原結合蛋白為LDLR競爭性中和抗原結合蛋白。

4.選擇性地結合至PCSK9之抗原結合蛋白，其中該抗原結合蛋白結合至PCSK9，且Kd小於100pM。

5.以第一方式結合至具有SEQ ID NO：303之PCSK 9蛋白之抗原結合蛋白，其中該抗原結合蛋白以第二方式結合至PCSK9的變異體，其中該PCSK9變異體具有至少一個在選自由以下各者組成之群的位置處之點突變：SEQ ID NO：303之207、208、185、181、439、513、538、539、132、351、390、413、582、162、164、167、123、129、311、313、337、519、521及554，其中第一方式包含第一EC50、第一Bmax或第一EC50與第一Bmax，其中第二方式包含第二EC50、第二Bmax或第二EC50與第二Bmax，且其中第一方式之值不同於第二方式之值，且其中抗原結合蛋白包含輕鏈，該輕鏈包含胺基酸序列SEQ ID NO：46，且其中抗原結合蛋白包含重鏈，該重鏈包含胺基酸序列SEQ ID NO：60。

6.概念6之抗原結合蛋白，其中第一方式包含第一Bmax，其中第二方式包含不同於第一Bmax之第二Bmax，且其中該PCSK9變異體具有至少一個選自由以下各者組成之群的點突變：D162R、R164E、E167R、S123R、E129R、A311R、D313R、D337R、R519E、H521R及Q554R。

7.概念6之抗原結合蛋白，其中抗原結合蛋白在與LDLR結合至PCSK9的位置重疊之位置處結合至PCSK9。

8.一種製備結合至包含胺基酸序列SEQ ID NO：1之 PCSK9蛋白之抗原結合蛋白的方法，其中抗原結合蛋白減少PCSK9對LDLR之LDLR降低效應，該方法包含：提供包含編碼抗原結合蛋白之核酸序列的宿主細胞；及將宿主細胞維持在表現抗原結合蛋白之條件下，其中抗原結合蛋白包含輕鏈，該輕鏈包含胺基酸序列SEQ ID NO：46，且其中抗原結合蛋白包含重鏈，該重鏈包含胺基酸序列SEQ ID NO：60。

9.一種治療或預防與個體之較高血清膽固醇位準相關聯之病狀的方法，該方法包含向有需要之個體同時或依序投與有效量之經分離中和抗原結合蛋白與提昇LDLR蛋白之可用性的試劑，其中經分離抗原結合蛋白結合至包含胺基酸序列SEQ ID NO：1之PCSK9蛋白，其中中和抗原結合蛋白減少PCSK9對LDLR之LDLR降低效應，其中抗原結合蛋白包含輕鏈，該輕鏈包含胺基酸序列SEQ ID NO：46，且其中抗原結合蛋白包含重鏈，該重鏈包含胺基酸序列SEQ ID NO：60。

10.概念10之方法，其中提昇LDLR蛋白之可用性的試劑包含他汀。

11.結合至PCSK9之抗原結合蛋白，其中當將抗原結合蛋白結合至PCSK9時，將抗體安置與距以下PCSK9之殘基中的至少一者8埃或以下：S153、S188、I189、Q190、S191、D192、R194、E197、G198、R199、V200、D224、R237、D238、K243、S373、D374、S376、T377、F379、I154、T187、H193、E195、I196、M201、V202、C223、T228、 S235、G236、A239、G244、M247、I369、S372、C375或C378，其中抗原結合蛋白包含輕鏈，該輕鏈包含胺基酸序列SEQ ID NO：46，且其中抗原結合蛋白包含重鏈，該重鏈包含胺基酸序列SEQ ID NO：60。

配位體可用於一或多種疾病或病狀或對其之易感性的治療、療法、預防及/或診斷，其中此類疾病或病狀包含揭示於US20120093818A1(Amgen,Inc)及US20110065902A1(Regeneron Pharmaceuticals,Inc)中者，例如揭示於US20120093818A1之第[0375]至[0383]段中之疾病或病狀，以全文引用的方式併入本文中揭示內容用於本文中一或多個技術方案之內容。

可向特徵如US20120093818A1(Amgen,Inc)或 US20110065902A1中所描述之人類投與配位體；各以全文引用的方式併入本文中。

可以揭示於US20120093818A1(Amgen,Inc)或 US20110065902A1中之形式或組合投與配位體，揭示內容以引用之方式併入本文中。舉例而言，配位體與如US20120093818A1(Amgen,Inc)或US20110065902A1中所描述(例如如US20120091818A1之第[0384]至[0412]段中所揭示)之藥物、賦形劑、稀釋劑或載劑，揭示內容以引用之方式併入本文中，且本發明亦關於對應的包含本發明之配位體與此類其他試劑之組合的醫藥組成物。前述參考文獻中之每一者均以全文引用的方式併入本文中。

配位體可用於如US20120093818A1(Amgen,Inc) 或US20110065902A1中(例如在US20120093818A1之第[0413]至[0415]段中)陳述之診斷方法，揭示內容以引用之方式併入本文中。前述參考文獻中之每一者均以全文引用的方式併入本文中。

診斷性應用

在一些實施例中，本發明之配位體為診斷性工具。配位體可用於分析樣品及/或個體中所存在之PCSK9之量。如熟習此項技術者將瞭解，此類配位體不必為中和配位體。在一些實施例中，診斷性配位體不為中和配位體。在一些實施例中，診斷性配位體結合至與中和配位體所結合的抗原決定基不同的抗原決定基。在一些實施例中，兩種配位體不彼此競爭。

在一些實施例中，在用於偵測哺乳動物組織或細胞中之PCSK9的分析套組及/或方法中使用或提供本發明之配位體以便篩檢/診斷與PCSK9位準之改變相關聯的疾病或病症。套組包含結合PCSK9之配位體及用於指示配位體與PCSK9之結合(若存在)及視情況存在的PCSK9蛋白位準之構件。可使用用於指示配位體之存在的各個構件。舉例而言，可將螢光團、其他分子探針或酶連接至配位體且可以各種方式觀測配位體之存在。此類病症之篩檢方法可涉及使用套組，或僅使用所揭示的抗體中之一者且判定該配位體是否結合至樣品中之PCSK9。如熟習此項技術者將瞭解，高或較高位準PCSK9將促使較大量配位體結合至樣品中之PCSK9。因此，配位體結合程度可用於確定樣品中 PCSK9的多少。具有超過預定量(例如未患有PCSK9相關病症之人將具有的量或範圍)之量的PCSK9之個體或樣品可表徵為患有PCSK9介導之病症。在一些實施例中，本發明提供一種方法，其中向服用他汀之個體投與配位體以便確定他汀是否已增加個體中PCSK9之量。

在一些實施例中，配位體為非中和配位體且用於測定接受ABP及/或他汀治療之個體中PCSK9之量。

在一些實施例中，本發明之配位體可特異性結合人類PCSK9(例如一個、兩個或更多個本文揭示之罕見變異形式)，且其特徵在於以下中之至少一者：(i)能夠相對於給藥前位準減少血清總膽固醇至少約25%-35%且維持該減少經至少24天時間段；(ii)能夠相對於給藥前位準減少血清LDL膽固醇至少約65%-80%且維持該減少經至少24天時間段；(iii)能夠相對於給藥前位準減少血清LDL膽固醇至少約40%-70%且維持該減少經至少60或90天時間段；(iv)能夠相對於給藥前位準減少血清三酸甘油酯至少約25%-40%；(v)相對於給藥前位準並未減少血清HDL膽固醇或減少血清HDL膽固醇不超過5%。在一些實施例中，提供經分離核酸分子且其編碼配位體。在一些實施例中，提供表現載體且包含核酸分子。在一些實施例中，提供醫藥組成物且其可包含配位體及醫藥學上可接受之載劑。在一些實施例中，提供一種治療使用本發明之PCSK9拮抗劑配位體改善、改良、抑制或預防之疾病或病狀的方法。方法可包含向有需要之個體投與治療量之醫藥組成物或配位體。在一些實施例中，個體為罹患高膽固醇血症、高脂質血症；指示LDL清除術；識別為對家族性高膽固醇血症為異型接合；不耐受他汀；不受他汀控制；處於罹患高膽固醇血症、血脂異常、膽汁鬱積性肝病、腎病症候群、甲狀腺功能低下、肥胖症、動脈粥樣硬化及心血管病之風險的人類個體。在一些實施例中，向個體提供一種提供治療或療法之方法。在一些實施例中，該方法包含減少血清膽固醇至少約40%-70%經至少60至90天。在一些實施例中，提供一種接受治療或療法之方法，方法可包含以每60至90天一次之頻率接受其配位體。

在一個態樣中，本發明提供本發明之配位體，該配位體為或包含特異性結合且抑制人類第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(hPCSK9，例如本文揭示之一個、兩個或更多個罕見變異形式及視情況存在之形式a及/或形式a')的人類抗體或人類抗體之抗原結合片段，其特徵在於如藉由ALT及AST量測所測定能夠相對於給藥前位準減少人類中之血清LDL膽固醇40%-80%經24、60或90天時間段，而極少或未減少血清HDL膽固醇及/或極小或無可測量的對肝功能之效應。

在一個實施例中，本發明之配位體包含特異性結合hPCSK9的抗體或抗體之抗原結合片段，且其特徵在於以下中之至少一者： (i)能夠相對於給藥前位準減少血清總膽固醇至少約25%-35%且維持該減少經至少24天時間段，較佳地血清總膽固醇之減少為至少約30%-40%；(ii)能夠相對於給藥前位準減少血清LDL膽固醇至少約65%-80%且維持該減少經至少24天時間段；(iii)能夠相對於給藥前位準減少血清三酸甘油酯至少約25%-40%；(iv)相對於給藥前位準並未減少血清HDL膽固醇或減少血清HDL膽固醇不超過5%。

參看US2011/0065902得到此等詞語之定義及視情況存在之特徵，其揭示內容以全文引用的方式併入本文中。

在一個實施例中，本發明包含特異性結合hPCSK9之抗體或抗體之抗原結合片段，且其特徵在於以下中之至少一者：(i)能夠相對於給藥前位準減少血清LDL膽固醇至少約40%-70%且維持該減少經至少60或90天時間段；(ii)能夠相對於給藥前位準減少血清三酸甘油酯至少約25%-40%；(iii)相對於給藥前位準並未減少血清HDL膽固醇或減少血清HDL膽固醇不超過5%。

在一個實施例中，如藉由電漿子表面共振所量測，抗體或抗原結合片段特徵在於在pH 5.5下展現相對於在pH 7.4下對hPCSK9之結合親和力(KD)而言增強的KD。在一特定實施例中，如藉由表面電漿子共振所量測，抗體或其片段在酸性pH下展現相對於中性pH而言至少20倍、至少40倍或至少50倍增強的對PCSK9之親和力。

在一個實施例中，如藉由表面電漿子共振所量測，抗體或抗原結合片段特徵在於在酸性pH下未展現相對於中性pH而言增強的對PCSK9之結合親和力。在一特定實施例中，抗體或其片段在酸性pH下展現降低的結合親和力。

在另一實施例中，抗體或抗原結合片段結合人類、人類GOF突變D374Y、食蟹獼猴、恆河猴、小鼠、大鼠及倉鼠PCSK9。

在一個實施例中，抗體或抗原結合片段結合人類及猴PCSK9，但並未結合小鼠、大鼠或倉鼠PCSK9。

在一個實施例中，本發明包含揭示於 US2011/0065902之第[023]-[037]段中任一段中的抗體或抗體之抗原結合片段，該抗體或抗體之抗原結合片段包含一或多個重鏈可變區(HCVR)、輕鏈可變區(LCVR)、HCDR1、HCDR2、HCDR3，其揭示內容以全文引用的方式併入本文中。

在相關實施例中，本發明包含特異性結合 hPCSK9之抗體或抗體之抗原結合片段，其中抗體或片段包含重鏈及輕鏈CDR域，該等重鏈及輕鏈CDR域為選自由以下各者組成之群的重鏈及輕鏈序列對內所含：SEQ ID NO(使用US2011/0065902中之序列編號)：2/10、18/20、22/24、26/34、42/44、46/48、50/58、66/68、70/72、74/82、90/92、94/96、98/106、114/116、118/120、122/130、138/140、142/144、146/154、162/164、166/168、170/178、186/188、190/192、194/202、210/212、214/216、218/226、234/236、 238/240、242/250、258/260、262/264、266/274、282/284、286/288、290/298、306/308、310/312、314/322、330/332、334/336、338/346、354/356、358/360、362/370、378/380、382/384、386/394、402/404、406/408、410/418、426/428、430/432、434/442、450/452、454/456、458/466、474/476、478/480、482/490、498/500、502/504、506/514、522/524、526/528、530/538、546/548、550/552、554/562、570/572、574/576、578/586、594/596、598/600、602/610、618/620、622/624、626/634、642/644、646/648、650/658、666/668、670/672、674/682、690/692、694/696、698/706、714/716、718/720、722/730、738/740及742/744。在一個實施例中，CDR序列為選自之以下胺基酸序列對之HCVR及LCVR內所含：SEQ ID NO：50/58、66/68、70/72、74/82、90/92、94/96、122/130、138/140、142/144、218/226、234/236、238/240、242/250、258/260、262/264、314/322、330/332及334/336。在更特定實施例中，CDR序列包含在選自SEQ ID NO：90/92或218/226之HCVR/LCVR序列內。前述參考文獻中之每一者均以全文引用的方式併入本文中。

在一實例中，本發明提供一種包含本發明之配位體的醫藥組成物，其中該配位體包含或由特異性結合hPCSK9之重組人類抗體或其片段與醫藥學上可接受之載劑組成。在一個實施例中，本發明提供一種組成物，該組成物為本發明之配位體(例如抗體或抗體之抗原結合片段)與第二治療劑的組合。第二治療劑可為有利地與本發明之配位體組合的任何試劑，例如能夠藉由抑制3-羥基-3-甲基戊二醯基(HMG)-輔酶A(CoA)還原酶誘導膽固醇合成的細胞消耗之試劑，諸如例如塞若伐他汀、阿托伐他汀、辛伐他汀、匹伐他汀、羅素他汀、氟伐他汀、洛伐他汀、普伐他汀等；能夠抑制膽固醇吸收及或膽酸再吸收之試劑；能夠增加脂蛋白代謝之試劑，諸如菸酸；及/或在膽固醇消除中起作用的LXR轉錄因子之活化劑，諸如22-羥基膽固醇。

在一實例中，本發明提供一種使用本發明之抗 PCSK9配位體(例如本發明之抗體或抗體的抗原結合部分)抑制hPCSK9活性之方法，其中治療性方法包含投與治療有效量之包含本發明的抗體或抗體之抗原結合片段之醫藥組成物。所治療之病症為藉由移除、抑制或降低PCSK9活性來改良、改善、抑制或預防的任何疾病或病狀。藉由本發明之治療性方法可治療的特異性群體包括指示LDL清除術之個體、患有PCSK9-活化突變(增加功能突變，「GOF」)之個體、患有異型接合家族性高膽固醇血症(heFH)之個體；患有原發性高膽固醇血症的不耐受他汀或不受他汀控制之個體；及處於罹患高膽固醇血症之風險經可預防之治療的個體。其他適應症包括與繼發性病因相關聯之血脂異常，諸如2型糖尿病、膽汁鬱積性肝病(原發性膽汁性肝硬化)、腎病症候群、甲狀腺功能低下、肥胖症；及動脈粥樣硬化與心血管病之預防及治療。

在本發明之方法的特定實施例中，本發明之配位體(例如本發明之抗hPCSK9抗體或抗體片段)適用於減少較高總膽固醇、非HDL膽固醇、LDL膽固醇及/或載脂蛋白B(載脂蛋白B100)。

本發明之配位體(例如抗體或抗原結合片段)可單獨或與第二試劑組合(例如HMG-CoA還原酶抑制劑及/或其他脂質降低藥物)使用。

舉例而言，在任何態樣、組態、實例或實施例中，關於配位體、抗體或蛋白之「經分離」一詞意謂(1)不含至少一些將通常與其一起發現的其他蛋白，(2)基本不含來自相同來源(例如來自相同物種)的其他蛋白，(3)藉由來自不同物種之細胞表現，(4)已與至少約50%的在自然界中與其締合之聚核苷酸、脂質、碳水化合物或其他材料分離，(5)以可操作方式與在自然界中未與其締合的多肽締合(藉由共價或非共價相互作用)或(6)在自然界中不存在之個體配位體、抗體、蛋白等。典型地，「經分離」配位體、抗體、蛋白等構成既定樣品之至少約5%、至少約10%、至少約25%、或至少約50%。合成來源之基因組DNA、cDNA、mRNA或其他RNA或其任何組合可編碼此類經分離配位體、抗體蛋白等。較佳地，經分離配位體、抗體蛋白等實質上不含發現於其天然環境中將干擾其治療性、診斷性、預防性、研究或其他用途之蛋白或多肽或其他污染物。

舉例而言，「經分離」抗體為已自其產生環境之組分識別、分離及/或回收(例如以天然或重組方式)者。較佳地，經分離多肽不與所有來自其產生環境之其他組分締合，例如使得抗體已經分離至FDA可核準的或核準標準。其產生環境之污染物組分(諸如由經重組轉染細胞產生的)為將典型地干擾抗體之研究、診斷性或治療性用途之材料，且可包括酶、激素及其他蛋白質或非蛋白質溶質。在較佳實施例中，多肽將經純化：(1)藉由例如Lowry方法所測定至超過95wt%之抗體，且在一些實施例中，至超過99wt%；(2)至藉由使用自旋杯式定序儀足以獲得至少15個具有N-末端之殘基或固有胺基酸序列的程度或(3)藉由SDS-PAGE在非還原或還原條件下使用庫馬斯藍(Coomassie blue)或較佳地銀染料至均質性。經分離抗體在重組細胞內包括原位抗體，因為抗體之天然環境的至少一個組分將不存在。然而，通常，經分離多肽或抗體將藉由至少一個純化步驟來製備。

免疫結合物

本發明涵蓋結合至諸如細胞毒素、化學治療藥物、免疫抑制劑或放射性同位素之治療性部分(「免疫結合物」)的配位體(例如抗體)。細胞毒素試劑包括對細胞不利的任何試劑。用於形成免疫結合物之適合的細胞毒素試劑及化學治療劑之實例為本領域中已知，參看例如WO 05/103081，其以全文引用的方式併入本文中。

雙特異性

本發明之抗體可為單特異性、雙特異性或多特異性。多特異性mAb可對一個標靶多肽之不同抗原決定基具有特異性或可含有對一個以上標靶多肽具有特異性之抗原結合域。參看例如Tutt等(1991)J.Immunol.147：60-69。人類抗PCSK9(抗PCSK9)mAb可連接至其他功能性分子(例如其他肽或蛋白)或與其他功能性分子共表現。舉例而言，抗體或其片段可功能上連接(例如藉由化學偶合、遺傳融合、非共價締合或以其他方式)至一或多個其他分子實體(諸如其他抗體或抗體片段)以產生具有第二結合特異性之雙特異性或多特異性抗體。

可用於本發明之情形的示例性雙特異性抗體形式涉及使用第一免疫球蛋白(Ig)CH3域及第二Ig CH3域，其中第一及第二Ig CH3域因至少一個胺基酸彼此不同，且其中相比於缺乏胺基酸差異之雙特異性抗體至少一個胺基酸差異減小雙特異性抗體與蛋白質A之結合。在一個實施例中，第一Ig CH3域結合蛋白質A且第二Ig CH3域含有減小或消除蛋白質A結合之突變，諸如H95R修飾(藉由IMGT外顯子編號；H435R藉由EU編號)。第二CH3可進一步包含Y96F修飾(藉由IMGT；Y436F藉由EU)。可發現於第二CH3內之其他修飾在IgG1抗體之情形下包括：D16E、L18M、N44S、K52N、V57M、及V821(藉由IMGT；D356E、L358M、N384S、K392N、V397M、及V422I藉EU)；在IgG2抗體之情形下包括：N44S、K52N及V82I(IMGT；N384S、K392N及V422I藉由EU)；及在IgG4抗體之情形下包括：Q15R、N44S、K52N、V57M、R69K、E79Q及V82I(藉由IMGT；Q355R、N3845、K392N、V397M、R409K、E419Q及V422I藉由EU)。上文所描述的雙特異性抗體形式上之變異涵蓋在本發明之範疇內。

治療群體

本發明提供用於治療需要本發明之組成物或配位體之人類患者的治療方法。儘管生活方式之改良及習知藥物治療通常成功地減少膽固醇位準，但並非所有患者能夠使用此類方法獲得推薦目標膽固醇位準。儘管積極使用習知療法，但諸如家族性高膽固醇血症(FH)之各種病狀似乎對LDL-C位準之降低具有抗性。同型接合及異型接合家族性高膽固醇血症(hoFH、heFH)為與早期動脈粥樣硬化血管疾病相關聯之病狀。然而，使用hoFH診斷之患者基本上對習知藥物療法無反應且具有限制治療選擇。具體言之，使用藉由抑制膽固醇合成及上調肝LDL受體來減少LDL-C之他汀治療可對LDL受體不存在或有缺陷的患者具有極小效應。近來已報導在用最大劑量之他汀治療之患有基因型確定的患者hoFH中平均LDL-C減少僅為小於約20%。向此方案添加依澤替米貝(ezetimibe)10毫克/天產生27%之LDL-C位準之總減少，其與最佳值相距甚遠。同樣，許多患者對他汀無反應、使用他汀療法不受充分控制的或不能耐受他汀療法；一般而言，此等患者不能使用替代性治療獲得膽固醇控制。存在大量未滿足的對可解決當前治療選擇之短處的新型治療之醫療需求。

藉由本發明之治療性方法可治療的特定群體包括指示LDL清除術之個體、患有PCSK9-活化(GOF)突變、異型接合家族性高膽固醇血症(heFH)之個體；患有原發性高膽固醇血症的不耐受他汀或不受他汀控制之個體；及處於罹患高膽固醇血症之風險經可預防之治療的個體。

治療性投與及調配物

本發明提供包含本發明之抗PCSK9配位體、抗體或其抗原結合片段的治療性組成物。根據本發明之治療性組成物之投與將與適合之載劑、賦形劑及併入調配物中以提供經改良的轉移、遞送、耐受性及類似者的其他試劑一起投與。可於所有醫藥化學家已知之處方集中查詢眾多適當調配物：Remington's Pharmaceutical Sciences,Mack Publishing Company,Easton,Pa。舉例而言，此等調配物包括散劑、糊劑、軟膏、凝膠劑、蠟、油、脂質、含有囊泡之脂質(陽離子型或陰離子型)(諸如LIPOFECTINT^TM)、DNA結合物、無水吸收糊劑、水包油及油包水乳液、聚乙二醇乳液(具有各種分子量之聚乙二醇)、半固體凝膠及含有聚乙二醇之半固體混合物。亦參看Powell等「Compendium of excipients for parenteral formulations」PDA(1998)J Pharm Sci Technol 52：238-311。

視年齡及待投與之個體的身材、靶向疾病、病狀投與路徑及類似者而定劑量可改變。當本發明之配位體(例如抗體)用於治療與成年患者之PCSK9相關聯的各種病狀及疾病(包括高膽固醇血症)、與LDL及載脂蛋白B相關聯之病症及脂質代謝病症及類似者時，通常以約0.01mg/kg體重至約20mg/kg體重、更佳地約0.02mg/kg體重至約7mg/kg體重、約0.03mg/kg體重至約5mg/kg體重或約0.05mg/kg體重至約3mg/kg體重之單劑量靜脈內投與本發明之配位體或抗體為有利的。視病狀之嚴重度而定，可調節治療之頻率及持續時間。

各種遞送系統為吾人已知且可用於投與本發明之醫藥組成物，因此本發明之組成物藉由例如囊封於脂質體中、微米粒子、微膠囊、能夠表現突變病毒之重組細胞、受體介導內吞作用來提供配位體(參看例如Wu等(1987)J.Biol.Chem.262：4429-4432)。引入方法包括(但不限於)皮內、肌肉內、腹膜內、靜脈內、皮下、鼻內、硬膜外及經口途徑。組成物可藉由任何便利途徑投與，例如藉由輸液或快速注射、藉由經由上皮或黏膜與皮膚內層(例如口腔黏膜、直腸及腸黏膜等)吸收且可與其他生物學活性劑一起投與。可全身性或局部投與。

醫藥組成物亦可在囊泡(尤其脂質體)中遞送(參看Langer(1990)Science 249：1527-1533；Treat等(1989)Liposomes in the Therapy of Infectious Disease and Cancer中，Lopez Berestein及Fidler(編)，Liss,New York，第353-365頁；Lopez-Berestein，同上，第317-327頁；參看同上)。

在某些情形中，醫藥組成物可在受控釋放系統中遞送。在一個實施例中，可使用抽吸(參看Langer，見上文；Sefton(1987)CRC Crit.Ref.Biomed.Eng.14：201)。在另一實施例中，可使用聚合材料；參看Medical Applications of Controlled Release,Langer及Wise(編)，CRC Pres.,Boca Raton,Fla.(1974)。在又一實施例中，可將受控釋放系統接近組成物之標靶置放，因此僅需要全身劑量之部分(參見例如，Goodson,Medical Applications of Controlled Release中，見上文，第2卷，第115-138頁，1984)。

可注射製劑可包括用於靜脈內、皮下、皮內及肌肉內注射、滴液輸液等之劑型。此等可注射製劑可藉由公開已知之方法製備。舉例而言，可注射製劑可(例如)藉由將上文所描述之抗體或其鹽溶解、懸浮或乳化於習知地用於注射劑之無菌水性介質或油性介質中來製備。例如生理鹽水、含有葡萄糖及其他輔助試劑之等張溶液等作為用於注射劑之水性介質，其可與適當助溶劑組合使用，適當助溶劑為諸如醇(例如乙醇)、多元醇(例如丙二醇、聚乙二醇)、非離子型界面活性劑[例如聚山梨醇酯80、HCO-50(氫化蓖麻油之聚氧化乙烯(50mol)加合物)]等。採用例如芝麻油、大豆油等作為油性介質，其可與助溶劑(諸如苯甲酸苯甲酯、苄醇等)組合使用。較佳將由此製備之注射劑充於適當安瓿中。可使用標準針及針筒皮下或靜脈內遞送本發明之醫藥組成物。另外，就皮下遞送而言，已容易地將筆式遞送裝置應用於遞送本發明之醫藥組成物中。此類筆式遞送裝置可為可再用的或拋棄式的可再用的筆式遞送裝置通常利用含有醫藥組成物之可替換套筒。在已投與套筒內之所有醫藥組成物且套筒為空的後，可容易地丟棄空套筒且用含有醫藥組成物之新套筒替換。隨後可再使用筆式遞送裝置。在拋棄式筆式遞送裝置中，不存在可替換套筒。確切而言，拋棄式筆式遞送裝置預填充有保存於裝置內之儲集層中的醫藥組成物。在清空儲集層之醫藥組成物後，丟棄整個裝置。

諸多可再用筆式及自動注射遞送裝置應用於本發明之醫藥組成物的皮下遞送中。僅提名少量而言，實例包括(但當然不限於)AUTOPEN^TM(Owen Mumford,Inc.,Woodstock,UK)，DISETRONIC^TM筆(Disetronic Medical Systems,Burghdorf,Switzerland)，HUMALOG MIX 75/25^TM筆，HUMALOG^TM筆，HUMALIN 70/30^TM筆(Eli Lilly and Co.,Indianapolis,Ind.)，NOVOPEN^TMI、II及III(Novo Nordisk,Copenhagen,Denmark)，NOVOPEN JUNIOR^TM(Novo Nordisk,Copenhagen,Denmark)，BD^TM筆(Becton Dickinson,Franklin Lakes,N.J.)，OPTIPENT^TM，OPTIPEN PRO^TM，OPTIPEN STARLET^TM及OPTICLIKT^TM(sanofi-aventis,Frankfurt,Germany)。應用於本發明之醫藥組成物之皮下遞送的拋棄式筆式遞送裝置之實例包括(但當然不限於)SOLOSTAR^TM筆(sanofi-aventis)、FLEXPEN^TM(Novo Nordisk)及KWIKPEN^TM(Eli Lilly)。

有利地，將用於上文所描述的經口或非經腸用途之醫藥組成物製備成呈適合於配合活性成分之劑量的單位劑量之劑型。此類呈單位劑量之劑型包括例如錠劑、丸劑、膠囊、注射劑(安瓿)、栓劑等。所含有的前述抗體之量通常為於單位劑量中約5mg/劑型至約500mg/劑型；尤其呈注射液形式，較佳地對於其他劑型而言所含有的前述抗體為約5mg至約100mg及約10mg至約250mg。

本發明提供治療性方法，在該等治療性方法中本發明之配位體(例如抗體或抗體片段)適用於治療與各種涉及hPCSK9之病狀相關聯的高膽固醇血症。本發明之抗PCSK9配位體(例如抗體或抗體片段)特別適用於治療高膽固醇血症及類似者。組合療法可包括本發明之抗PCSK9配位體與(例如)任何(1)藉由抑制3-羥基-3-甲基戊二醯基(HMG)-輔酶A(CoA)還原酶誘發膽固醇合成之細胞消耗的試劑，諸如西立伐他汀、阿托伐他汀、辛伐他汀、匹伐他汀、羅素他汀、氟伐他汀、洛伐他汀、普伐他汀；(2)抑制膽固醇吸收及或膽酸再吸收的試劑；(3)增加脂蛋白代謝的試劑(諸如菸酸)；及在膽固醇(22-羥基膽固醇)消除中起作用的LXR轉錄因子之活化劑或諸如依澤替米貝加辛伐他汀之固定組合；具有膽液樹脂之他汀(例如消膽胺(cholestyramine)、考來替潑(colestipol)、考來維侖(colesevelam))、菸酸加他汀之固定組合(例如菸酸與洛伐他汀)；或使用其他脂質降低試劑，諸如Ω-3-脂肪酸乙酯(例如(omacor))中之一或多者。

本發明之配位體適用於例如特異性結合分析、將人類基因分型或表型分型、PCSK9之親和力純化及篩檢分析以識別PCSK9活性之其他拮抗劑。本發明之一些配位體適用於抑制PCSK9結合至同源人類受體或蛋白，或抑制PCSK9介導之活性。

本發明涵蓋具有經調節之糖基化型式之抗 PCSK9(例如PCSK9)抗體配位體。在一些應用中，移除非所需糖基化位點之修飾可為有用的，或例如移除海藻糖部分以增加抗體依賴性細胞細胞毒性(ADCC)功能(參看Shield等(2002)JBC 277：26733)。在其他應用中，可進行半乳糖基化修飾以便調節補體依賴性細胞毒性(CDC)。

在一實例中，本發明提供一種包含本發明之配位體的醫藥組成物，其中該配位體為或包含特異性結合PCSK9(例如如本文所描述之罕見變異體)之重組人類抗體或其片段及醫藥學上可接受之載劑。在一個實施例中，本發明提供一種組成物，其為本發明之抗體配位體或抗體之抗原結合片段與第二治療劑之組合。第二治療劑可為抗炎劑、抗血管生成劑、止痛劑、利尿劑、化學治療劑、抗贅生劑、血管舒張劑、血管收縮劑、他汀、β阻斷劑、營養劑、佐劑、抗肥胖劑及抗糖尿病劑中之任一者。

「醫藥學上可接受」係指由美國聯邦或州政府之監管機構核準或可核準，或在美國藥典或用於動物(包括人類)之其他一般公認藥典中列出。「醫藥學上可接受之載劑、賦形劑或佐劑」係指可與試劑(例如本文所描述之任何抗體或抗體鏈)一起向個體投與且當以足以遞送治療量之該試劑的劑量投與時不破壞該其藥理學活性且無毒性的載劑、賦形劑或佐劑。

在一實例中，本發明提供一種使用本發明之抗 PCSK9配位體(例如本發明之抗體或抗體之抗原結合部分)抑制PCSK9活性的方法，其中該治療性方法包含投與治療有效量之包含該配位體之醫藥組成物。所治療之病症為藉由移除、抑制或降低PCSK9活性來改良、改善、抑制或預防的任何疾病或病狀。

「治療有效量」一詞意謂投與產生所需效應之量。精確量將視治療目的而定，且將由熟習此項技術者使用已知技術可確定(參看例如Lloyd(1999)The Art,Science and Technology of Pharmaceutical Compounding)。

基因分型及表型分型

熟習此項技術者將熟悉可用於精確基因分型且應用於本發明之技術。此等技術包括以下。

1 基於雜交之方法

1.1 動態對偶基因特異性雜交

1.2 分子信標

1.3 SNP微陣列

2 基於酶之方法

2.1 限制性片段長度多態性

2.2 基於PCR之方法

2.3 片狀核酸內切酶

2.4 引子延伸

2.5 5'-核酸酶

2.6 寡核苷酸連接分析

3 基於DNA物理特性之其他擴增後方法

3.1 單股構形多形現象

3.2 溫度梯度凝膠電泳

3.3 變性高效液相層析

3.4 整個擴增子之高解析度熔融

3.5 使用DNA失配結合蛋白

3.6 SNPlex(SNPlex^TM為由Applied Biosystems銷售之專屬基因分型平台)。

諸如焦磷酸定序之下一代定序技術亦為有用的。

亦參考GB2444410A及其中揭示之基因分型方法，其以全文引用之方式併入本文中。

經常提議將小型化分析(諸如固定在較小表面上之微陣列與寡核苷酸試劑)用於大規模突變分析及高處理量基因分型(人類基因組中之大規模識別、映射及單核苷酸多形現象的基因分型(Wang DG,Fan JB,Siao CJ,Berno A,Young P,Sapolsky R,Ghandour G,Perkins N,Winchester E,Spencer J,Kruglyak L,Stein L,Hsie L,Topaloglou T,Hubbell E,Robinson E,Mittmann M,Morris MS,Shen N,Kilburn D,Rioux J,Nusbaum C,Rozen S,Hudson TJ,Lipshutz R,Chee M,Lander ES,Science.1998 May 15；280(5366)：1077-82))。其他高處理量方法藉由對偶基因特異性探針之差異性雜交、引子延伸、連接及裂解辨別對偶基因(Review Accessing genetic variation：genotyping single nucleotide polymorphisms,Syvänen AC,Nat Rev Genet.2001年12月；2(12)：930-42；Review Techniques patents for SNP genotyping,Twyman RM,Primrose SB,Pharmacogenomics.2003年1月；4(1)：67-79)。

一種用於完全自動化、大規模SNP分析之方法為『均質』分析，亦即在無分離步驟之情況下的單相分析，允許在擴增期間持續不斷的監測。最初設計用於定量即時PCR之TaqMan^TM分析(Applied Biosystems)為亦用於DNA之突變狀態之測定的均質、單步驟分析(參看例如A.A.Komar(編)，Single Nucleotide Polymorphisms,Methods in Molecular Biology 578,DOI 10.1007/978-1-60327-411-1_19,Humana Press,Springer Science+Business Media之一部分，LLC；及Single Nucleotide Polymorphisms,Methods in Molecular Biology^TM第578卷，2009，第293-306頁，The TaqMan Method for SNP Genotyping,Gong-Qing Shen等)。 TaqMan SNP基因分型分析利用AmpliTaq Gold^TM DNA聚合酶之5'-核酸外切酶活性以裂解雜交至ssDNA之含有SNP之序列的雙重標記探針。裂解使5'-螢光團與3'-抑止劑分離，產生可偵測的螢光訊號。使用攜帶不同螢光團之兩個對偶基因特異性探針准許在無任何PCR後處理的情況下在同一管中進行SNP測定。基因型係由在擴增結束時兩個螢光探針之強度的比率來測定。因此，僅使用端點資料而非利用定量研究中即時PCR資料之完整集合。

藉由使用經驗證之預製成的TaqMan^®基因分型分析有助於以高處理量、自動化方式TaqMan SNP基因分型，但亦可使用Custom TaqMan^®分析(High-throughput genotyping with single nucleotide polymorphisms,Ranade K,Chang MS,Ting CT,Pei D,Hsiao CF,Olivier M,Pesich R,Hebert J,Chen YD,Dzau VJ,Curb D,Olshen R,Risch N, Cox DR,Botstein D,Genome Res.2001年7月；11(7)：1262-8；Assessment of two flexible and compatible SNP genotyping platforms：TaqMan SNP Genotyping Assays and the SNPlex Genotyping System,De la Vega FM,Lazaruk KD,Rhodes MD,Wenz MH,Mutat Res.2005年6月3日；573(1-2)：111-35)。分析結果可藉由配備有即時熱循環儀之基因分型軟體(例如Bio-Rad之IQ軟體、Applied Biosystems之序列偵測軟體)自動測定。

單核苷酸多形現象(SNP)可使用TaqMan^TM即時 PCR分析(Applied Biosystems)及在擴增結束時基於報導探針訊號指派基因型之市售軟體加以測定。使用TaqMan即時資料之完整過程的用於SNP之自動基因型caling之算法可供使用(A.Callegaro等，Nucleic Acids Res.2006；34(7)：e56,Published online 2006年4月14日.doi：10.1093/nar/gkl185,PMCID：PMC1440877)。該算法為獨特的，在於其根據與異型接合樣品叢集之空白(無DNA樣品)的特性將樣品分類。此分類方法消除對陽性對照之需要且准許甚至在不存在基因型類別的情況下(例如當一個對偶基因為罕見的時)進行精確基因分型。

熟習此項技術者將熟悉可用於精確表型分型且應用於本發明之技術。此等技術包括使用經分離標靶蛋白之胺基酸定序及不同變異體(例如與最常見變異體)之序列的比較。在嚴格條件下在SNP區域中特異性及選擇性結合之抗體亦可用於識別特定變異體。在另一方法中，測定基因型且例如藉由電子雜交轉譯測定對應胺基酸序列(表型)。

為方便起見，下文提供本說明書、實例及隨附申請專利範圍中所用之某些術語及短語之含義。除非另外說明或上下文暗示，否則以下術語及短語包括下文所提供之含義。提供該等定義以輔助描述特定實施例，且不意欲限制所主張之發明，因為本發明之範疇僅藉由申請專利範圍限制。除非另外定義，否則本文中所用之所有技術及科學術語具有與本發明所屬領域之一般技術者通常所理解相同之含義。在此項技術中術語之用法與本文提供之其定義之間存在顯而易見的不一致，應以本說明書內提供之定義為準。

為方便起見，此處收集本文中、本說明書、實例及所附申請專利範圍中採用的某些術語。

本文中使用「減少(decrease)」、「減少(reduced)」或「減少(reduction)」等詞均意謂減少統計學上顯著之量。在一些實施例中，「減少(reduce)」、「減少(reduction)」或「減少(decrease)」典型地意謂相比於參考位準(例如缺少既定治療)減少至少10%，且可包括例如減少至少約10%、至少約20%、至少約25%、至少約30%、至少約35%、至少約40%、至少約45%、至少約50%、至少約55%、至少約60%、至少約65%、至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約98%、至少約99%或更多。如本文所用，「減少(reduction)」並未涵蓋相比於參考位準完全減少。較佳地減少可低至對於無既定病症之個體而言正常範圍內接受之位準。舉例而言，然而出於降低或減少膽固醇位準的目的，例如減少約5-10個點可視為「減少(decrease)」或「減少(reduction)」。

在本發明之所有實施例之某些態樣中，使用「抑制」一詞。抑制係指相比於參考位準(例如缺少既定治療)減少至少10%，且可包括例如減少至少約10%、至少約20%、至少約25%、至少約30%、至少約35%、至少約40%、至少約45%、至少約50%、至少約55%、至少約60%、至少約65%、至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約98%、至少約99%或更多(包括相比於參考位準100%抑制)。「完全抑制」係指相比於參考位準100%抑制。

本文中使用「增加(increased)」、「增加(increase)」、「提高(enhance)」或「活化(activate)」等詞均意謂增加統計學上顯著之量。在一些實施例中，「增加(increased)」、「增加(increase)」、「提高(enhance)」或「活化(activate)」等詞可意謂相比於參考位準增加至少10%，例如相比於參考位準增加至少約20%、或至少約30%、或至少約40%、或至少約50%、或至少約60%、或至少約70%、或至少約80%、或至少約90%或至多及包括100%增加或任何10%-100%之間的增加，或相比於參考位準至少約2倍、或至少約3倍、或至少約4倍、或至少約5倍或至少約10倍增加，或在2倍與10倍之間的任何增加或以上。在指標或症狀之情形下，「增加(increase)」為此類位準之統計學上顯著之增加。

如本文所用，「實質上」一詞係指展現所關注之特徵或特性之全部或接近全部程度(extent/degree)的定性病狀。生物技術中之一般技術者應理解生物及化學現象很少(若曾經)進行完全及/或繼續進行至完全或獲得或避免絕對結果。因而本文中使用「實質上」一詞以獲得許多生物及化學現象中所固有的完整性之可能存在的缺乏。為了去除疑問，「實質上」可指所關注之特徵或特性之至少90%程度(extent/degree)，例如至少90%、至少92%、至少95%、至少98%、至少99%或以上。

如本文所用，「個體」意謂人類或動物。通常動物為諸如靈長類、嚙齒動物、馴養動物或賽事動物之脊椎動物。靈長類包括黑猩猩、瀰猴、蜘蛛猴、及短尾猿，例如恆河猴。嚙齒動物包括小鼠、大鼠、土撥鼠、雪貂、兔及倉鼠。在一些實施例中，個體為哺乳動物，例如靈長類(例如人類)。本文中「個體(individual)」、「患者(patient)」及「個體(subject)」等詞可互換使用。在一些實施例中，個體可為非人類脊椎動物，例如靈長類、嚙齒動物、小鼠、大鼠、豬、綿羊、斑馬魚、蛙等。

較佳地，個體為哺乳動物。哺乳動物可為人類、非人類靈長類、小鼠、大鼠、犬、貓、馬或牛，但不限於此等實例。除人類以外的哺乳動物可有利地用作代表疾病或病狀(例如心臟血管病狀)之動物模型的個體。個體可為雄性或雌性。

個體可為先前已診斷帶有或識別為罹患或患有需要治療之病狀或與此類病狀相關的一或多種併發症者，且視情況已針對該病狀或與該病狀相關的一或多種併發症對其進行治療。或者，個體亦可為先前尚未診斷為患有病狀或一或多種與該病狀相關的併發症者。舉例而言，個體可為展現病狀或與該病狀相關的一或多種併發症之一或多個風險因素者或並未展現風險因素之個體。

對於特定病狀之治療「有需要之個體」或「有需要之人類」可為患有該病狀(諸如增加之膽固醇位準)、診斷為患有該病狀或處於罹患該病狀之風險的個體。

如本文所用，本文中「蛋白」及「多肽」等詞可互換使用以指定一系列藉由鄰接殘基之α胺基與羧基之間的肽鍵彼此連接之胺基酸殘基。「蛋白」及「多肽」等詞係指胺基酸與天然胺基酸之聚合物。當提及「經修飾之多肽」時，吾人係指包括經修飾之胺基酸(例如磷酸化、糖化、糖基化等)及胺基酸類似物之多肽，與其尺寸或功能無關。關於相對較大的多肽通常使用「蛋白」及「多肽」，而關於較小多肽通常使用「肽」一詞，但在此項技術中此等術語之用法重疊。當提及基因產物及其片段時本文中「蛋白」及「多肽」等詞可互換使用。由此，示例性多肽或蛋白包括基因產物、具有指定序列之天然存在之蛋白。吾人亦可使用肽同源物、肽直系同源物、肽旁系同源物、肽片段及其他等效物，肽之變異體、片段及類似物，因為此等術語為一般技術者所理解。

如本文所用，「核酸」或「核酸序列」一詞係指任何分子，較佳地併有核糖核酸、去氧核糖核酸之單元的聚合分子。核酸可為單股或雙股。單股核酸可為變性雙股DNA之一個核酸股。或者，其可為非來源於任何雙股DNA之單股核酸。在一個態樣中，核酸可為DNA。在另一態樣中，核酸可為RNA。適合之核酸分子為DNA，包括基因組DNA或cDNA。其他適合之核酸分子為RNA，包括mRNA。在一些態樣中，吾人亦可使用核酸之類似物。

如本文所用，「核酸探針」一詞係指具有可雜交至標靶核酸序列(例如特異性雜交至標靶序列)之核酸序列的經分離寡核苷酸分子。在一些實施例中，核酸探針可進一步包含可偵測標識。在一些實施例中，可將核酸探針附著至固體表面。在一些實施例中，核酸之長度為約5個核苷酸至約100個核苷酸。

如本文所用，「siRNA」一詞係指形成包含實質上彼此互補的兩個單獨RNA股之RNA分子之核酸。典型地，siRNA之長度為至少約15-40個核苷酸(例如雙股siRNA之各互補序列的長度為約15-40個核苷酸，且雙股siRNA之長度為約15-40個鹼基對，較佳地長度約為19-25個鹼基核苷酸，例如19、20、21、22、23、24或25個核苷酸)。在一些實施例中，siRNA可為鈍頭端基的。在一些實施例中，siRNA可包含長度為約0、1、2、3、4或5個核苷酸的各股上之3'及/或5'懸垂物。兩股之間的懸垂物之長度為獨立的，亦即一個股上之懸垂物的長度並非視第二股上之懸垂物的長度而定。siRNA分子亦可包含3'經基。在一些實施例中，siRNA可包含5'磷酸基團。當在與標靶基因(例如標靶RNA)相同的細胞中存在或表現siRNA時，siRNA能夠減少或抑制基因或標靶RNA之表現。基因表現之siRNA依賴性轉錄後靜默涉及在藉由siRNA引導之位點處切割標靶RNA分子。

如本文所用，「PCSK9」或「第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶/kexin」係指參與調節低密度脂蛋白受體(LDLR)蛋白之位準的絲胺酸蛋白酶(Horton等，2007；Seidah及Prat,2007)。PCSK9已展示直接與LDLR蛋白相互作用，與LDLR一起經吞噬，且在內體路徑中與LDLR共免疫螢光(Lagace等，2006)。PCSK9為絲胺酸蛋白酶之枯草桿菌蛋白酶(S8)家族中的前激素-前蛋白轉換酶(Seidah等，2003)。已知各種物種之PCSK9之序列，例如人類PCSK9(NCBI Gene ID No：255738)。本文提供多種PCSK9同功異構物之核苷酸及多肽序列，例如，SEQ ID NO：1-37。

PCSK9以前形式及成熟形式兩者存在。PCSK9前形式之自催化發生在Gln152與Ser153(VFAQ|SIP(SEQ ID NO：67))之間(Naureckiene等，2003)，且已展示為其自細胞分泌所需(Seidah等，2003)。在本文中可將此裂解之前的非活性形式稱為PCSK9之「非活性」、「前形式」或「未經處理」形式。在本文中可將藉由自催化作用產生的C-末端片段稱為「成熟」、「裂解」、「經處理」或「活性」PCSK9。本文提供前形式及成熟PCSK9同功異構物之實例，參看例如SEQ ID NO：1-27。

如本文所用，PCSK9之「催化域」係指對應於PCSK9之(例如SEQ ID NO：1之)位置153至449的PCSK9多肽之部分。如本文所用，PCSK9之「C-末端域」係指對應於PCSK9之(例如SEQ ID NO：1之)位置450-692的PCSK9多肽之部分。

如本文所用，「藉由PCSK9介導之」疾病或病狀係指起因於或特徵在於PCSK9之變化(例如表現量之變化、活性之變化)及/或PCSK9之變異或突變的存在之疾病或病狀。此類疾病或病狀之非限制性實例可包括例如脂質失調、高脂蛋白血症、高脂質血症；血脂異常；高膽固醇血症、心臟病發作、中風、冠心病、動脈粥樣硬化、周邊血管疾病、跛行、II型糖尿病、高血壓及心血管疾病或病狀。在一實例中，疾病或病狀為發炎或自體免疫疾病或病狀。識別及/或診斷此類疾病及病狀之方法為一般技術之醫療醫師所熟知。

處於患有或罹患藉由PCSK9介導之疾病或病狀的個體可為展現此類疾病或病狀之一或多種病徵或症狀或具有此類疾病或病狀之一或多個風險因素的個體，例如過重、具有較高膽固醇位準、包含已知的一或多種易患疾病或病狀(例如較高膽固醇位準)之遺傳性多形現象，諸如在LDLR(編碼低密度脂蛋白受體)或APOB(編碼載脂蛋白B)中或在PCSK9基因中具有突變及/或具有此類疾病或病狀之家族病史。

如本文所用，「配位體」係指可結合(例如特異性結合)至第二分子或受體之分子。在一些實施例中，配位體可為例如抗體、抗體片段、抗體部分及/或親和抗體。

如本文所用之「變異體」一詞係指因一或多個胺基酸或核酸刪除、添加而不同於多肽或核酸(例如人類中最常見者，例如如本文所揭示之資料庫(諸如千人基因組計劃資料庫)中最常見的)又保持天然存在之分子的一或多個特異性功能或生物活性之肽或核酸。胺基酸取代包括用不同的天然存在之胺基酸殘基置換一個胺基酸之更改。在用具有類似的與極性、側鏈官能基或尺寸有關之特徵的其他天然存在之胺基酸置換多肽中所含有的胺基酸殘基情況下，此類取代可歸類為「保守性」。此類保守性取代在此項技術中為吾人所熟知。當存在於肽中之胺基酸殘基經具有不同特性之胺基酸(諸如來自不同基團之天然存在之胺基酸)取代(例如用丙胺酸取代帶電或疏水性胺基酸)時，或替代地當天然存在之胺基酸經非習知胺基酸取代時，本發明所包涵之取代亦可為「非保守性」。在一些實施例中，胺基酸取代為保守性。亦包涵在變異體一詞內，當參考聚核苷酸或多肽使用時係指相比於參考聚核苷酸或多肽(例如相比於野生型聚核苷酸或多肽)可分別在一級、二級或三級結構方面改變的聚核苷酸或多肽。

在本文中在別處提供PCSK9之變異體。PCSK9之變異體可包括本文中描述為a、f、c、r、p、m、e、h、aj及q之形式。本文提供此等變異體之序列，參看例如SEQ ID NO：1-27及表1、2及5中。

在一些態樣中，吾人可使用使用此項技術中熟知之方法分離或產生的「合成變異體」、「重組變異體」或「經化學修飾之」聚核苷酸變異體或多肽變異體。「經修飾之變異體」可包括如下文所描述之保守性或非保守性胺基酸變化。聚核苷酸變化可引起藉由參考序列編碼之多肽中的胺基酸取代、添加、刪除、融合及截斷。一些態樣使用包括插入變異體、刪除變異體或經取代變異體，其以通常並不存在於為變異體之主體的肽序列中之胺基酸來取代(包括胺基酸及其他分子之插入及取代)，例如，但不限於，插入通常並不存在於人類蛋白中之鳥胺酸。當描述多肽時，「保守取代」一詞係指並未實質上更改多肽活性的多肽之胺基酸組成之變化。舉例而言，保守性取代係指用具有類似化學特性之不同胺基酸殘基取代胺基酸殘基。保守性胺基酸取代包括用異白胺酸或纈胺酸置換白胺酸，用麩胺酸置換天冬胺酸或用絲胺酸置換蘇胺酸。

「保守性胺基酸取代」由用其他具有類似結構及/或化學特性之胺基酸置換一個胺基酸產生，諸如用異白胺酸或纈胺酸置換白胺酸，用麩胺酸置換天冬胺酸或用絲胺酸置換蘇胺酸。由此，特定胺基酸序列之「保守性取代」係指取代彼等對於多肽活性並不關鍵的胺基酸，或用其他具有類似特性(例如酸性、鹼性、帶正電或帶負電、極性或非極性等)之胺基酸取代胺基酸從而即使取代關鍵胺基酸並未減少肽之活性(亦即肽穿透血液大腦障壁(BBB)之能力)。提供功能上類似之胺基酸的保守性取代表為此項技術中所熟知。舉例而言，以下六個組各含有彼此保守性取代的胺基酸：1)丙胺酸(A)、絲胺酸(S)、蘇胺酸(T)；2)天冬胺酸(D)麩胺酸(E)；3)天冬醯胺(N)、麩醯胺酸(Q)；4)精胺酸(R)、離胺酸(K)；5)異白胺酸(I)、白胺酸(L)、甲硫胺酸(M)、纈胺酸(V)；及6)苯丙胺酸(F)、酪胺酸(Y)、色胺酸(W)。(亦參看Creighton,Proteins,W.H.Freeman and Company(1984)，以全文引用之方式併入本文中)。在一些實施例中，若變化並未減少肽之活性，則更改、添加或刪除單個胺基酸或胺基酸之較小百分比的單獨取代、刪除或添加亦可視為「保守性取代」。插入或刪除典型地在約1個胺基酸至5個胺基酸範圍內。保守性胺基酸之選擇可基於待取代之胺基酸在肽中的位置選定，例如若胺基酸在肽之外部上且暴露於溶劑或在內部上且未暴露於溶劑。

在替代實施例中，吾人可基於現有胺基酸之位置(亦即其暴露於溶劑)(亦即若相比於未暴露於溶劑的定位於內部之胺基酸而言胺基酸暴露於溶劑或存在於肽或多肽之外表面上)選擇將取代現有胺基酸之胺基酸。此類保守性胺基酸取代之選擇在此項技術中為吾人所熟知，例如如Dordo等，J.MoI Biol,1999,217,721-739及Taylor等，J.Theor.Biol.119(1986)；205-218與S.French及B.Robson,J.MoI.Evol.19(1983)171中所揭示。因此，吾人可選擇適合於在蛋白或肽之外部上的胺基酸(亦即暴露於溶劑之胺基酸)之保守性胺基酸取代，可使用例如(但不限於)以下取代：用F取代Y、用S或K取代T、用A取代P、用D或Q取代E、用D或G取代N、用K取代R、用N或A取代G、用S或K取代T、用N或E取代D、用L或V取代I、用Y取代F、用T或A取代S、用K取代R、用N或A取代G、用R取代K、用S、K或P取代A。

在替代實施例中，吾人亦可選擇所包涵之適合於在蛋白或肽之內部上的胺基酸之保守性胺基酸取代，例如吾人可使用適合於在蛋白或肽之內部上的胺基酸(亦即胺基酸並不暴露於溶劑)之保守性取代，吾人可使用例如(但不限於)以下保守性取代：其中Y經F取代、T經A或S取代、I經L或V取代、W經Y取代、M經L取代、N經D取代、G經A取代、T經A或S取代、D經N取代、I經L或V取代、F經Y或L取代、S經A或T取代且A經S、G、T或V取代。在一些實施例中，非保守性胺基酸取代亦包涵在變異體一詞內。

如本文所使用，「抗體」係指IgG、IgM、IgA、IgD或IgE分子或其抗原特異性抗體片段(包括(但不限於)Fab、F(ab')2、Fv、連接Fv之二硫化物、scFv、單域抗體、封閉構形多特異性抗體、連接scfv之二硫化物、雙功能抗體)，無論來源於任何天然產生抗體之物種或藉由重組DNA技術形成；無論分離自血清、B細胞、融合瘤、轉染瘤細胞、酵母菌或細菌。可使用常規技術使抗體人類化。

如本文所描述，「抗原」為藉由抗體試劑上之結合位點結合的分子。典型地，抗原係藉由抗體配位體結合且能夠提高活體內抗體反應。抗原可為多肽、蛋白、核酸或其他分子或其部分。「抗原決定子」一詞係指藉由抗原結合分子、且更特定言之藉由該分子之抗原結合位點辨識的抗原上之抗原決定基。

如本文所用，「抗體片段」一詞係指包括至少一個免疫球蛋白可變域或免疫球蛋白可變域序列且特異性結合既定抗原之多肽。抗體片段可包含抗體或包含抗體之抗原結合域的多肽。在一些實施例中，抗體片段可包含單株抗體或包含單株抗體之抗原結合域的多肽。舉例而言，抗體可包括重(H)鏈可變區(在本文中縮寫為VH)及輕(L)鏈可變區(在本文中縮寫為VL)。在另一實例中，抗體包括兩個重(H)鏈可變區及兩個輕(L)鏈可變區。「抗體片段」一詞涵蓋抗體之抗原結合片段(例如單鏈抗體、Fab及sFab片段、F(ab')2、Fd片段Fv片段、scFv及結構域抗體(dAb)片段(參看例如德Wildt等，Eur J.Immunol.1996；26(3)：629-39；其以全文引用的方式併入本文中))以及完整抗體。抗體可具有結構特徵IgA、IgG、IgE、IgD、IgM(以及其亞型及組合)。抗體可來自任何來源，包括小鼠、兔、豬、大鼠及靈長類(人類及非人類靈長類)及靈長類化抗體。抗體亦包括中間體、人類化抗體、嵌合抗體及類似者。

如本文所用，「抗體可變域」係指包括互補決定區(CDR；亦即CDR1、CDR2及CDR3)及構架區(FR)之胺基酸序列的抗體分子之輕鏈及重鏈之部分。VH係指重鏈之可變域。VL係指輕鏈之可變域。根據本發明中所用之方法，分到CDR及FR之胺基酸位置可根據Kabat(Sequences of Proteins of Immunological Interest(National Institutes of Health,Bethesda,Md.,1987及1991))或根據IMGT命名法來定義。

D域或區係指抗體鏈之相異域或區。J域或區係指抗體鏈之接合域或區。

抗體「基因節段」，例如VH基因節段、D基因節段或JH基因節段係指具有編碼抗體之部分的核酸序列之寡核苷酸，例如VH基因節段為包含編碼多肽VH域之核酸序列的寡核苷酸。

VH及VL區可進一步細分成高變區，稱為「互補決定區」(「CDR」)，穿插有更保守的區，稱為「構架區」(「FR」)。已準確定義構架區及CDR之程度(參看IMGT或Kabat,E.A.，等(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest，第五版，U.S.Department of Health and Human Services,NIH Publication第91-3242期，及Chothia,C.等(1987)J.Mol.Biol.196：901-917；其以全文引用之方式併入本文中)。各VH及VL典型地由自胺基末端至羧基末端按以下順序配置之三個CDR及四個FR組成：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。

在本文中可互換使用的「抗原結合片段」或「抗原結合域」等詞係用於指保留特異性結合至所關注之標靶的能力之全長抗體之一或多個片段。包涵在全長抗體之「抗原結合片段」一詞內的結合片段之實例包括(i)Fab片段，由VL、VH、CL及CH1域組成之單價片段；(ii)F(ab')2片段，包括兩個藉由處於鉸鏈區的雙硫橋鍵連接之Fab片段之二價片段；(iii)由VH及CH1域組成的Fd片段；(iv)由抗體之單個組之VL及VH域組成的Fv片段；(v)由VH或VL域組成之dAb片段(Ward等，(1989)Nature 341：544-546；其以全文引用的方式併入本文中)；及(vi)保持特異性抗原結合官能基的經分離互補決定區(CDR)。

如本文所用，「抗體結合位點」一詞係指包含抗體之一或多個CDR且能夠結合抗原之多肽或域。舉例而言，多肽包含CDR3(例如HCDR3)。舉例而言，多肽包含CDR 1及2(例如HCDR 1及2)或抗體之可變域的CDR 1-3(例如HCDR 1-3)。在一實例中，藉由單個可變域(例如VH或VL域)提供抗體結合位點。在另一實例中，結合位點包含一個VH/VL對或兩個或兩個以上此類對。

如本文所用，「特異性結合」一詞係指兩個分子、化合物、細胞及/或顆粒之間的化學相互作用，其中第一實體結合至第二標靶實體，具有比該第一實體結合至為非標靶之第三實體大的特異性及親和力。舉例而言，在診斷性測試中配位體之特異性結合可在如本文所描述之兩個變異PCSK9蛋白之間區分。在一些實施例中，特異性結合可指第一實體對於第二標靶實體之親和力為其對於第三非標靶實體之親和力的至少10倍、至少50倍、至少100倍、至少500倍、至少1000倍或更多倍。在經由雜交相互作用的寡核苷酸股之情形下，特異性結合可為「特異性雜交」。

另外及如本文所描述，重組人類(化)抗體可經進一步最佳化以減小可能存在之免疫原性同時維持功能性活性，以用於人類之療法。就此而言，功能性活性意謂多肽能夠顯示一或多個與如本文所描述之重組抗體或其抗體試劑相關聯之已知功能性活性。此類功能性活性包括例如結合至標靶分子之能力。

「免疫」一詞係指向動物投與一或多個抗原以使得可在動物中培養抗體之步驟，一般而言，免疫包含將抗原注射至動物中。免疫可涉及一或多次投與抗原。適合之方法為如此項技術中之技術人員所已知的加強免疫及RIMMS程序。

如本文所用，「親和抗體」係指對於標靶蛋白(例如對於PCSK9或其變異體)具有高結合親和力之相對較小的合成蛋白分子。親和抗體由三個來源於葡萄球菌蛋白質A之IgG結合域之螺旋束域組成。蛋白域由58個胺基酸序列組成，具有13個隨機化胺基酸以得到一系列親和抗體變異體。儘管顯著小於抗體(親和抗體稱重約6kDa，而抗體通常稱重約150kDa)，親和抗體分子像抗體一樣起作用，此係因為其結合位點與抗體之結合位點的表面積大致相等。

如本文所用，「VH3-23*04」係指包含多肽序列SEQ ID NO：38之人類VH域變異體。相較於參考序列，由於編碼VH域之核酸序列中rs56069819 SNP之存在，VH3-23*04具有纈胺酸殘基而非白胺酸殘基(參看圖3及圖4；L24V，編號包括訊號序列；位置5處的纈胺酸展示於圖4中)。如本文所用，「rs56069819」係指自腺苷至胞嘧啶(或胸腺嘧啶至鳥嘌呤，視所讀取之DNA的股而定)之VH基因節段中之突變或變異，產生編碼VH3-23*04的VH域。 Rs56069819描繪於圖4及顯示T->G突變之SEQ ID NO：39中(應指出RS5606819之dbSNP項描繪包含A->C突變之其他股)。VH3-23*04之進一步描述可發現於例如美國專利公開案2013/0071405中；其以全文引用的方式併入本文中。

如本文所用，「測定(determine)」或「測定(determining)」係指例如藉由定量或定性分析確定。如本文所用，「已測定」可指基於先前獲得的資訊或同時獲得的資訊確定。

在本發明之所有實施例之一些態樣中，選擇可包括自動化，諸如在輸入相關資料(諸如種族或一組SNP資料)後電腦實施軟體程式可進行基於在本文中所列舉之說明書的測定。

如本文所用，「分析」係指評估、評價、定量、量測或表徵分析物，例如量測樣品分析物之位準、識別分析物或偵測樣品中是否存在分析物。在一些實施例中，分析係指偵測所關注之分析物是否存在。在一些實施例中，分析係指定量分析物之量，例如提供分析物豐度的濃度或位準之量測。在一些實施例中，分析係指計數存在於樣品及/或樣本中的分析物分子之數目，例如測定分析物複本數。

如本文所使用，「多重」係指同時且在同一反應容器中對兩個或兩個以上(典型地三個或三個以上)不同標靶序列(例如對PCSK9之兩個或兩個以上同功異構物或PCSK9及其他標靶)進行方法或製程。多重分析典型地包括以多重格式分析10-50；10-100；10-1000、10-5000、10-10000個反應，諸如多壁、陣列或多通道反應。

通常亦使用機器人技術使分析或多重分析自動化，且典型地軟體藉由電腦執行且可包括樣品之機器人處置、正結果或負結果之自動或機器人選擇、分析標靶(諸如核酸多形現象或蛋白變異體)是否存在。

如本文所使用，「生物樣品」或「測試樣品」一詞表示自生物體獲取或分離之樣品，例如來自個體之樣品。示例性生物樣品包括(但不限於)生物流體樣品；血清；血漿；尿液；唾液；頭髮、上皮細胞、皮膚、腫瘤活檢及/或組織樣品等。該詞亦包括上述樣品之混合物。「測試樣品」或「生物樣品」一詞亦包括未經處理(untreated)或經預處理(pretreated/pre-processed)之生物樣品。對於核酸之分析，生物樣品應典型地包含至少一個包含核酸之細胞。

可藉由自個體移除細胞樣品獲得測試樣品，但亦可藉由使用經預先分離的細胞(例如在先前的時間點分離且由同一或其他人分離)完成。另外，可從新收集或預先收集測試樣品，冷卻、冷凍或以其他方式保藏樣品。

在一些實施例中，測試樣品可為未經處理之測試樣品。如本文所用，短語「未經處理之測試樣品」係指除稀釋及/或懸浮於溶液中以外尚未進行任何先前樣品預處理之測試樣品。處理測試樣品之示例性方法包括(但不限於)離心、過濾、音波處理、均質化、加熱、冷凍及解凍及其組合。在一些實施例中，測試樣品可為冷凍測試樣品，例如冷凍組織。冷凍樣品可在採用本文所描述之方法、分析及系統之前解凍。在解凍之後，可在經受本文所描述之方法、分析及系統之前離心冷凍樣本。在一些實施例中，測試樣品為經澄清測試樣品，例如藉由離心及收集包含經澄清的測試樣品之上清液。在一些實施例中，測試樣品可為經預處理的測試樣品，例如由選自由離心、過濾、解凍、純化及其任何組合組成之群的處理產生之上清液或濾液。在一些實施例中，測試樣品可經化學及/或生物試劑處理。在處理期間可採用化學及/或生物試劑保護及/或維持樣品(包括其中之生物分子(例如核酸及蛋白))之穩定性。一個示例性試劑為蛋白酶抑制劑，其通常用於在處理期間保護或維持蛋白之穩定性。熟練技術人員充分瞭解適合於測定如本文所描述之表現產物之位準所需的生物樣品之預處理之方法及過程。

如本文所用，「基因分型」係指確定基因組內一或多個位置處的細胞及/或標的物之特異性對偶基因組成之過程，例如藉由確定該位置處的核酸序列。基因分型係指核酸分析及/或核酸位準之分析。如本文所用，「表型分型」係指確定細胞及/或標的物之表現產物之身分及/或組成之過程，例如藉由確定表現產物之多肽序列。表型分型係指蛋白分析及/或蛋白位準之分析。

如本文所用，「核酸擴增」一詞係指核酸序列之其他複本之產生，且典型地使用此項技術中熟知之聚合酶鏈反應(PCR)或接合酶鏈反應(LCR)技術進行(Dieffenbach, C.W.及G.S.Dveksler(1995)PCR Primer,a Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Press,Plainview,N.Y.)。其他擴增方法亦涵蓋在本發明之態樣中。

「對偶基因特異性擴增」一詞係指一個反應(例如PCR反應)，其中引子(例如對偶基因特異性引子)中之至少一者係選自基因之多形性區域(例如單核苷酸多形現象)，其中該多形現象位於或接近引子之3'末端。失配引子將不引發擴增，而匹配引子將引發擴增。擴增產物之出現指示多形現象之存在。

如本文所用，「定序」係指測定DNA(去氧核糖核酸)或RNA(核糖核酸)股中核苷酸鹼基之精確順序或蛋白中胺基酸殘基或肽之精確順序。可使用Sanger定序或下一代高處理量定序進行核酸定序。

如本文所使用，「下一代定序」係指具有以大於使用習知定序方法(例如Sanger定序)可能的速度之速度定序寡核苷酸之能力的寡核苷酸定序技術，歸因於進行且讀出數千至數百萬並聯定序反應。下一代定序方法/平台之非限制性實例包括Massively Parallel Signature Sequencing(Lynx Therapeutics)；454焦磷酸定序(454 Life Sciences/Roche Diagnostics)；固相、可逆染料-終止子定序(Solexa/Illumina)：SOLiD技術(Applied Biosystems)；Ion半導體定序(ION Torrent)；DNA奈米球定序(Complete Genomics)；及購自Pacific Biosciences、Intelligen Bio-systems、Oxford Nanopore Technologies及Helicos Biosciences之技術。下一代定序技術及相關定序引子之限制及設計參數在此項技術中為吾人所熟知(參看例如Shendure等，「Next-generation DNA sequencing」,Nature,2008，第26卷，第10期，1135-1145；Mardis,「The impact of next-generation sequencing technology on genetics」,Trends in Genetics,2007，第24卷，第3期，第133-141頁；Su等，「Next-generation sequencing and its applications in molecular diagnostics」Expert Rev Mol Diagn,2011,11(3)：333-43；Zhang等，「The impact of next-generation sequencing on genomics」,J Genet Genomics,2011,38(3)：95-109；(Nyren,P.等Anal Biochem 208：17175(1993)；Bentley,D.R.Curr Opin Genet Dev 16：545-52(2006)；Strausberg,R.L.等Drug Disc Today 13：569-77(2008)；美國專利第7,282,337號；美國專利第7,279,563號；美國專利第7,226,720號；美國專利第7,220,549號；美國專利第7,169,560號；美國專利第6,818,395號；美國專利第6,911,345號；美國公開案第2006/0252077；2007/0070349；及20070070349號；其以全文引用之方式併入本文中)。

如本文所用，「核酸雜交」係指互補RNA及DNA股之配對以及互補DNA單股之配對。在一些實施例中，核酸雜交可指藉由將核酸樣品與探針雜交來確定核酸序列及/或身分之方法，例如北方或南方墨點分析或微陣列分析。

如本文所用，「治療(treat)」、「治療(treatment)」、「治療(treating)」或「改善(amelioration)」等詞係指治療性治療，其中目標為逆轉、緩解、改善、抑制減緩或終止與疾病或病症相關聯之病狀的進展或嚴重度。「治療(treating)」一詞包括減少或緩解病狀、疾病或病症之至少一個有害效應或症狀。若減少一或多個症狀或臨床指標，則治療通常為「有效的」。或者，若減輕或暫停疾病之進展，則治療為「有效的」。亦即，「治療」包括不僅為症狀或指標之改良，且亦為與在不存在治療下將預期的相比症狀之進展或惡化之停止或至少減緩。有益的或所需臨床結果包括(但不限於)可偵測或不可偵測地緩解一或多個症狀，減輕疾病程度，穩定(亦即不惡化)疾病狀態，延遲或減緩疾病進展，改善或緩和疾病病況、緩解(部分或全部)及/或減少死亡。疾病之「治療」一詞亦包括提供疾病之症狀或副作用的緩解(包括緩解性治療)。對於有效的治療而言，不涵蓋完全治癒。在某些態樣中，方法亦可包括治癒。

如本文所用，「醫藥組成物」一詞係指活性劑與醫藥學上可接受之載劑(例如通常用於醫藥工業中之載劑)的組合。短語「醫藥學上可接受」在本文中用於指在合理醫學判斷範疇內，適用於與人類及動物之組織接觸而無過度毒性、刺激、過敏反應或其他問題或併發症，與合理益處/風險比相匹配之化合物、物質、組合物及/或劑型。

如本文所用，「投與」一詞係指藉由使得將試劑至少部分遞送於所需位點處之方法或途徑將如本文所揭示之化合物放置至個體中。包含本文揭示之化合物的醫藥組成物可藉由產生個體之有效治療之任何適當途徑來投與。

可分開或同時投與多種組成物。分開投與係指在不同時間(例如相隔至少10、20、30或10-60分鐘，或相隔1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12小時)投與兩個組成物。吾人亦可相隔24小時亦或相隔更長時間投與組成物。或者，可同時投與兩個或兩個以上組成物，例如相隔小於10分鐘或小於5分鐘。在一些態樣中，可以混合物形式投與同時投與的組成物，組分中之每一者具有或不具有類似或不同的延時釋放機制。

如本文所用，「接觸」係指用於遞送或使試劑暴露至至少一個複合物、酶或細胞之任何適合之方式。示例性遞送方法包括(但不限於)直接遞送至細胞培養基、灌注、注射或熟習此項技術者熟知之其他遞送方法。

如本文所用，「獲得」係指任何獲取、保持、取得或擁有例如樣品之方法。自個體獲得生物樣品可包含在具有或不具有個體之主動參與情況下自個體物理移除樣品(例如抽血或獲取頭髮或唾液樣品)；自個體接受樣品(例如個體自身收集唾液或頭髮樣品且例如在出於該目的提供之容器中提供該唾液或頭髮樣品)；或自儲存設施、醫療設施或醫療提供者取得樣品。自人類或個體獲得係指例如抽血或獲取組織或細胞樣品之主動步驟。

如本文所用，「膽固醇位準」係指全部膽固醇、LDL膽固醇、HDL膽固醇及/或三酸甘油酯中一或多者之位準。膽固醇位準可為個體之血液中膽固醇之位準。

如本文所使用，關於膽固醇位準，「維持」係指預防位準惡化(例如增加)。在一些實施例中，維持特定位準係指使得隨時間推移膽固醇位準不增加超過10%之過程。維持亦可指維持先前獲得的位準。舉例而言，若人類已接受他汀治療，吾人可維持使用該治療獲得的膽固醇位準。

在一些實施例中，根據本文所描述之方法治療的個體先前已使得其膽固醇位準減少。如本文所用，「先前減少之」指示在先前的時間點，個體經歷膽固醇位準之減少。減少可歸因於投與醫藥組成物(例如投與如本文所描述之組成物或其他組成物，例如他汀)或歸因於其他原因，例如飲食及/或運動之變化。

針對高膽固醇位準之現有治療為投與他汀。如本文中所提及，「他汀」(亦稱為HMG-CoA還原酶抑制劑)為酶HMG-coA還原酶之抑制劑，其介導肝臟中之膽固醇產生。藉由競爭性結合HMG-CoA還原酶他汀阻止HMG-CoA結合至酶且藉此抑制還原酶之活性(例如甲羥戊酸之產生)。他汀之非限制性實例可包括阿托伐他汀(LIPITOR^TM)、氟伐他汀(LESCOL^TM)、洛伐他汀(MEVACOR^TM、ALTOCOR^TM)、匹伐他汀(LIVALO^TM)、普伐他汀(PRAVACHOL^TM)、羅素他汀(CRESTOR^TM)及辛伐他汀(ZOCOR^TM)。他汀可與其他試劑組合投與，例如依澤替米貝與辛伐他汀組合。

一些個體為或變得對他汀治療具有抗性。如本文所用，「對他汀治療具有抗性」或「對他汀治療反應減小的」係指相比於參考位準個體展現對於他汀之投與統計上顯著降低的反應。參考位準可為例如早先日期個體群體之平均反應或單獨個體之位準。熟習此項技術者容易地量測他汀治療之反應，例如膽固醇位準之量測、膽固醇位準之變化及/或HMG-CoA還原酶活性。

如本文所用，「可偵測標識」一詞係指可偵測到(例如量測及/或測定)是否存在之分子或部分。可偵測標識可包含(例如)光吸收染料、螢光染料或放射性標識。可偵測標識、偵測其之方法及將其併入至試劑(例如抗體及核酸探針)中之方法在此項技術中為吾人所熟知。

在一些實施例中，可偵測標識可包括可藉由光譜、光化學、生物化學、免疫化學、電磁波、放射性化學或化學方式(諸如螢光、化學螢光或化學發光)或任何其他適當方式偵測到之標識。本文所描述之方法中所用的可偵測標識可為一級標識(其中該標識包含可直接偵測之部分或產生可直接偵測之部分)或二級標識(其中可偵測標識結合至另一部分以產生可偵測訊號，例如如使用二級及三級抗體免疫標識中常見的)。可偵測標識可藉由共價或非共價方式連接至該試劑。或者，可藉由諸如直接標記經由配位體受體結合對配置實現結合至試劑的分子或其他此類特異性辨識分子來連接可偵測標識。可偵測標識可包括(但不限於)放射性同位素、生物發光化合物、發色團、抗體、化學發光化合物、螢光化合物、金屬螯合物及酶。

在其他實施例中，可偵測標識可為螢光化合物。當螢光標識暴露於適當波長之光時，可隨後由於螢光而偵測其存在。在一些實施例中，可偵測標識可為螢光染料分子或螢光團，包括(但不限於)螢光素、藻紅素、藻藍蛋白、鄰苯二甲醛、胺螢、Cy3^TM、Cy5^TM、別藻藍蛋白、Texas Red、派瑞丹寧葉綠素、花青、聯合結合物(諸如藻紅素-Cy5^TM)、綠色螢光蛋白、若丹明、螢光異硫氰酸鹽(FITC)及Oregon Green^TM、若丹明及衍生物(例如Texas red及四若丹明異硫氰酸(TRITC))、生物素、藻紅素、AMCA、CyDyes^TM、6-羧基螢光素(通常藉由縮寫FAM及F已知)、6-羧基-2',4',7',4,7-六氯螢光素(HEX)、6-羧基-4',5'-二氯-2',7'-二甲氧基螢光素(JOE或J)、N,N,N',N'-四甲基-6-羧基若丹明(TAMRA或T)、6-羧基-X-若丹明(ROX或R)、5-羧基若丹明-6G(R6G5或G5)、6-羧基若丹明-6G(R6G6或G6)及若丹明110；花青染料，例如Cy3、Cy5及Cy7染料；香豆素例如傘酮、苯甲亞胺染料，例如Hoechst 33258；啡啶染料，例如Texas Red；乙錠染料；吖啶染料；氮雜芴染料；啡噁嗪染料；卟啉染料；聚甲川染料，例如花青染料(諸如Cy3、Cy5等)；BODIPY染料及喹啉染料。在一些實施例中，可偵測標識可為放射性標記，包括(但不限於)3H、¹²⁵I、³⁵S、¹⁴C、³²P及³³P。在一些實施例中，可偵測標識可為酶，包括(但不限於)辣根過氧化酶及鹼性磷酸酶。酵素標識可產生，例如化學發光訊號、顏色訊號或螢光訊號。所涵蓋的用作可偵測標識之酶可包括(但不限於)蘋果酸去氫酶、葡萄球菌核酸酶、△-V-類固醇異構酶、酵母菌醇去氫酶、α-甘油磷酸酯去氫酶、丙醣磷酸異構酶、辣根過氧化酶、鹼性磷酸酶、天冬醯胺酶、葡萄糖氧化酶、β-半乳糖苷酶、核糖核酸酶、尿素酶、過氧化氫酵素、葡萄糖-VI-磷酸去氫酶、澱粉酶及乙醯膽鹼酯酶。在一些實施例中，可偵測標識為化學發光標識，包括(但不限於)光澤精、流明諾、螢光素、異魯米諾、羅馬迪克吖錠酯、咪唑、吖錠鹽及乙二酸酯。在一些實施例中，可偵測標識可為光譜比色標識，包括(但不限於)膠狀金或染色玻璃或塑膠(例如聚苯乙烯、聚丙烯及乳膠)珠粒。

在一些實施例中，試劑亦可用可偵測標記標識，諸如c-Myc、HA、VSV-G、HSV、FLAG、V5、HIS或生物素。亦可使用其他偵測系統，例如生物素抗生蛋白鏈菌素系統。在此系統中，對所關注之生物標記物具有免疫反應性(亦即具有特異性)的抗體為經生物素標記的。使用抗生蛋白鏈菌素-過氧化酶結合物及產色受質測定結合至生物標記物的生物素標記抗體之量。此類抗生蛋白鏈菌素過氧化酶偵測套組為市售可得，例如來自DAKO；Carpinteria,CA。試劑亦可使用螢光發射金屬(諸如¹⁵²Eu)或其他鑭系元素系列可偵測地標識。可使用諸如二伸乙三胺五乙酸(DTPA)或乙二胺四乙酸(EDTA)之金屬螯合基將此等金屬附著至試劑。

如本文所使用，「授權號」或「銷售授權號」係指藉由監管機構在該機構確定特定醫療產物及/或組成物可在該機構之司法管轄權下的區域中出售及/或提供用於銷售時頒佈的編號。如本文所使用，「監管機構」係指負責評價(例如醫療產物及/或組成物之安全性及功效)及控制此類產物及/或組成物在既定區域中之出售/銷售之機構中之一者。美國的食品與藥物管理局(FDA)及歐洲的歐洲藥物管理局(EPA)僅為此類監管機構之兩個實例。其他非限制性實例可包括SDA、MPA、MHPRA、IMA、ANMAT、香港衛生署藥物辦公室、CDSCO、Medsafe及KFDA。

如本文所使用，「注射裝置」係指設計用於進行注射之裝置，注射包括臨時流體偶合該注射裝置至人體之組織(典型地皮下組織)的步驟。注射進一步包括投與一定量之液體藥物至組織中且自該組織去偶合或移除該注射裝置。在一些實施例中，注射裝置可為靜脈內裝置或IV裝置，其為當目標組織為循環系統內之血液(例如靜脈中的血液)時使用的注射裝置之類型。注射裝置之常見但非限制性示例為針及針筒。

如本文所使用，「緩衝液」係指能夠在pH未經歷強變化的情況下吸收某一量之酸或鹼的化學試劑。

如本文所使用，「封裝」係指如何將組分組織及/或約束至適於分配及/或使用的單元中。封裝可包括例如盒子、袋子、注射器、安瓿、小瓶、管子、貝殼掀蓋式封裝、屏障及/或容器以維持無菌性、標識等。

如本文所使用，「說明書」係指即時容器上顯示的物件之書面、印刷或圖形事項，例如顯示於含有醫藥活性劑之小瓶上的書面材料或包括於含有所關注之組成物的套組中之關於組成物及產物之用途的詳情。說明書列舉投與或進行如預期的治療之方法。

如本文所使用，「固體表面」係指適合於生物分子之附著的物體。固體表面之非限制性實例可包括顆粒(包括(但不限於)瓊脂糖或乳膠珠粒或顆粒或磁性顆粒)、珠粒、奈米顆粒、聚合物、受質、載片、蓋玻片、培養盤、培養皿、孔、膜及/或格柵。固體表面可包括許多不同材料，包括(但不限於)聚合物、塑膠、樹脂、多糖、基於矽或二氧化矽之材料、碳、金屬、無機玻璃及膜。

如本文所使用，個體之「分類」，例如個體之血統之分類係指確定個體是否具有起源於特定地理區域中之生物血統，且因而可能具有存在於歷史上曾佔據該區域之群體中的特定遺傳變異體。分類可包含例如獲得關於該個體之家族的資訊，訪問個體或家族成員關於其生物家族血統及/或遺傳測試。分類可基於用於千人基因組計劃之根據，如熟習此項技術者將熟悉的。在一些實施例中，若至少該個體之基因組包含大量數目(例如至少10、20、30、40、50或100或更多個共同對偶基因)之與具有該血統之其他人類相同的不同對偶基因(例如參照千人基因組計劃資料庫測定)，則該個體可歸類為具有特定血統。特定血統群組之縮寫提供於表4中。

「統計學上顯著」或「顯著」一詞係指統計學顯著性且通常意謂兩個標準差(2SD)或較大差異。

應瞭解，除操作實例中或其中另有說明之外，本文中所使用之表示成分之量或反應條件的所有數字可在所有情況下藉由「約」一詞修飾。「約」一詞當與百分比結合使用時可意謂±1%。

如本文所使用，關於組成物、方法及其相應組分使用「包含(comprising)」或「包含(comprises)」一詞，該等相應組分對該方法或組成物而言為必需的，而對於未規定的要素之內容而言為開放的，無論其是否為必需的。

「由...組成」一詞係指如本文所描述之組成物、方法及其相應組分，其排除實施例之該描述中未列舉的任何要素。

如本文所使用，「主要由...組成」一詞係指既定實施例所需的彼等要素。該詞准許並不顯著影響實施例之基本的及新穎的或功能性特徵之要素的存在。

除非上下文明確另外指示，否則「一(a/an)」及「該(the)」單數詞包括複數個指示物。類似地，除非上下文明確另外指示，否則詞語「或」意欲包括「及」。儘管類似或等效於本文中所描述者之方法及材料可用於實踐或測試本揭示案，但下文描述適合之方法及材料。縮寫「例如(e.g.)」係來源於拉丁語exempli gratia，且本文中用以指示非限制性示例。由此，縮寫「例如(e.g.)」與「例如(for example)」一詞同義。

細胞生物學及分子生物學中的常見詞之定義可在「The Merck Manual of Diagnosis and Therapy」，第19版本，由Merck Research Laboratories出版，2006(ISBN 0-911910-19-0)；Robert S.Porter等(編)，The Encyclopedia of Molecular Biology，由Blackwell Science Ltd.出版，1994(ISBN 0-632-02182-9)；Benjamin Lewin,Genes X，由Jones & Bartlett Publishing出版，2009(ISBN-10：0763766321)；Kendrew等(編)，Molecular Biology and Biotechnology：a Comprehensive Desk Reference，由VCH Publishers,Inc.出版，1995(ISBN 1-56081-569-8)及Current Protocols in Protein Sciences 2009,Wiley Intersciences,Coligan等編中查詢。

除非另外陳述，否則本發明使用如例如在以下各者中所描述之標準程序進行：Sambrook等，Molecular Cloning：A Laboratory Manual(第4版)，Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,N.Y.,USA(2012)；Davis等，Basic Methods in Molecular Biology,Elsevier Science Publishing,Inc.,New York,USA(1995)；或Methods in Enzymology：Guide to Molecular Cloning Techniques第152卷，S.L.Berger及A.R.Kimmel編，Academic Press Inc.,San Diego,USA(1987)；Current Protocols in Protein Science(CPPS)(John E.Coligan等編，John Wiley and Sons,Inc.),Current Protocols in Cell Biology(CPCB)(Juan S.Bonifacino等編，John Wiley and Sons,Inc.)，及Culture of Animal Cells：A Manual of Basic Technique by R.Ian Freshney，出版商：Wiley-Liss；第5版(2005),Animal Cell Culture Methods(Methods in Cell Biology，第57卷，Jennie P.Mather及David Barnes編，Academic Press，第1版，1998)，該等文獻均以全文引用之方式併入本文中。

其他詞在本文中定義於本發明之各種態樣的描述中。

所有專利及其他公開案；包括參考文獻、所頒佈之專利、公開專利申請案及同在申請中之專利申請案；本申請案通篇引用出於描述及揭露例如此類公開案中所述可與本文所述之技術結合使用之方法之目的明確地以引用的方式併入本文中。在本申請案之申請日期之前僅提供此等公開案之揭示內容。在此方面不應將任何內容理解為承認由於先前發明或因任何其他原因本發明人未授權提前該等揭示案之日期。關於日期之所有陳述或關於此等文獻之內容的表述係基於本申請者可用的資訊且不構成任何關於此等文獻之日期或內容的正確性的承認。

本發明之實施例之描述並不意欲為詳盡的或將本發明限制於所揭示之精確形式。雖然本文中出於說明性目的描述本發明之特定實施例及實例，但相關領域的技術人員將認識到，在本發明之範疇內各種等效修改為可能的。舉例而言，雖然方法步驟或功能以給定順序提出，但替代實施例可以不同順序執行功能或功能可實質上同時執行。本文所提供之本發明之教示內容可按需要應用於其他程序或方法。可組合本文所述之各種實施例以提供其他實施例。本發明之態樣可經修改(若需要)以採用以上參考文獻及申請案之組成物、功能及概念，得到本發明之其他實施例。此外，由於生物學功能等效性考慮因素，可對蛋白質結構進行一些改變而不影響種類或量之生物學或化學作用。可鑒於實施方式來對本發明進行此等及其他改變。所有此類修改均意欲包括在隨附申請專利範圍之範疇內。

上述實施例中之任一者的特定要素可組合或取代其他實施例中之要素。另外，雖然在此等實施例之內容中已描述與本發明之某些實施例相關聯之優勢，但其他實施例亦可展現該等優勢，且並非所有實施例必定需要展示該等優勢以屬於本發明之範疇內。

應瞭解，本文所述之特定組態、態樣、實例、條項及實施例以說明方式展示且並不作為本發明之限制。可在不背離本發明之範疇的情況下在各種實施例中採用本發明之主要特徵。熟習此項技術者應認識到或能夠使用不超過常規之研究確定本文所述之特定程序的許多等效物。此類等效物視為在本發明之範疇內且由申請專利範圍所涵蓋。本說明書中提及之所有公開案及專利申請案指示熟習本發明所屬技術者之技術水準。所有公開案及專利申請案均以引用之方式併入本文，其程度如同每一個別公開案或專利申請案特定且單獨地指示為以引用的方式併入。當與「包含」一詞結合用於申請專利範圍及/或本說明書中時，詞語「一(a/an)」之使用可意謂「一個(one)」，但其亦與「一或多個」、「至少一個」及「一個或多於一個」之含義相符。儘管本發明支持涉及僅替代及「及/或」之定義，但除非明確指示為僅替代或替代相互排斥，否則「或」一詞在申請專利範圍中之使用用於意謂「及/或」。在本申請案通篇，「約」一詞用於指示值包括裝置、用以測定該值之方法之固有誤差變異或研究個體當中存在的變異。

如本說明書及申請專利範圍中所用，詞語「包含(comprising)」(及包含之任何形式，諸如「包含(comprise)」及「包含(comprises)」)、「具有(having)」(及具有之任何形式，諸如「具有(have)」及「具有(has)」)、「包括(including)」(及包括之任何形式，諸如「包括(includes)」及「包括(include)」)或「含有(containing)」(及含有之任何形式，諸如「含有(contains)」及「含有(contain)」為包括性或開放的且並不排除額外未列出之要素或方法步驟。

除非自上下文另外顯而易見，否則本發明之任何部分可與本發明之任何其他部分組合閱讀。

本文中所揭示或主張之所有組成物及/或方法可根據本發明在無不當實驗的情況下製備及執行。雖然已根據較佳實施例描述本發明之組成物及方法，但熟習此項技術者應清楚變化可在不背離本發明之概念、精神及範疇的情況下應用於本文所述之組成物及/或方法及方法之步驟或步驟順序中。對熟習此項技術者顯而易見的所有該等類似取代及修改視為在由隨附申請專利範圍所定義之本發明之精神、範疇及概念內。

本發明更詳細地描述於以下非限制性實例中。

本發明解決治療具有天然存在之較罕見天然PCSK9對偶基因、基因型及表現型(較罕見蛋白質形式)的人類的需要。就此而言，本發明提供以下態樣。

在第一態樣中：一種在有需要之人類中減少膽固醇位準或維持先前減少的膽固醇位準之方法，其包含 a.選擇包含(i)選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)核苷酸序列；及/或(ii)其編碼PCSK9蛋白之催化域或C-末端域的核苷酸序列之人類；及b.向該人類投與特異性結合一或多個藉由該人類所包含之該核苷酸序列編碼的PCSK9胺基酸序列之抗體或抗體片段。

在一實例中，步驟(a)包含選擇包含藉由(i)或(ii)之核苷酸序列編碼之PCSK9蛋白的人類。

在一實例中，抗體或抗體片段特異性結合該PCSK9胺基酸序列。在一實例中，抗體或抗體片段結合第二PCSK9蛋白，該第二PCSK9蛋白包含藉由(i)選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列；及/或(ii)其編碼PCSK9蛋白之催化域或C-末端域的核苷酸序列編碼之胺基酸序列。在一實例中，抗體包含來源於人類VH基因節段、人類D基因節段與人類JH節段之重組的VH域，該VH基因節段包含以下核苷酸序列，該核苷酸序列包含具有如在rs56069819(CTGTACCAAGCCTCCCCCAGACTCCA[A/C]CAGCTGCACCTCACACTGGACACCT)(SEQ ID NO：68)中所指示之核苷酸C的單核苷酸多形現象。在一實例中，VH基因節段為藉由包含SEQ ID NO：39之序列編碼的VH3-23*04(SEQ ID NO：38)。在一實例中，抗體包含VH域，其中該VH域包含SEQ ID NO.40之構架1序列。

在一實例中，已確定人類包含(i)及/或(ii)之核苷酸序列。在一實例中，已確定人類包含藉由(i)及/或(ii)之核苷酸序列編碼的第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)變異蛋白。在一實例中，方法進一步包括確定人類包含(i)及/或(ii)之核苷酸序列的步驟。

在一實例中，在向人類投與抗體之前進行該確定步驟。在一實例中，方法進一步包含確定人類包含藉由(i)及/或(ii)之核苷酸序列編碼的第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)變異蛋白之步驟。在一實例中，在向人類投與抗體之前進行該確定步驟。在一實例中，確定步驟包含針對(i)選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列；及/或(ii)編碼PCSK9變異蛋白之催化域或C-末端域之核苷酸序列分析來自該人類的生物樣品。在一實例中，分析包含使生物樣品接觸

c.至少一個包含至少10個連續核苷酸之序列的寡核苷酸探針，該序列可在生物樣品中特異性雜交至且識別選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列或至少其催化域或C-末端域編碼序列，或特異性雜交至該序列之反義，其中該核酸雜交至至少一個存在於該選定序列而不存在於SEQ ID NO：28中的核苷酸或雜交至反義序列，從而當存在至少一個選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列或至少其催化域或C-末端域編碼序列時形成複合物；及/或d.至少一個寡核苷酸探針，該寡核苷酸探針包含至少10個具有選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列之連續核苷酸之序列或包含該等連續核苷酸的反義序列，其中該連續核苷酸序列包含至少一個存在於該選定序列而不存在於SEQ ID NO：28中之核苷酸，從而當存在選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列時形成複合物；及偵測是否存在該複合物，其中偵測到該複合物之存在確定該人類包含該PCSK9變異蛋白。

在一實例中，分析包含核酸擴增及視情況存在之一或多種選自定序、下一代定序、核酸雜交及對偶基因特異性擴增之方法。在一實例中，以多重格式進行分析。在一實例中，方法進一步包含獲得來自該人類的生物樣品。在一實例中，該生物樣品包含該人類之血清、血液、糞便、組織、細胞、尿液及/或唾液。

在一實例中，進一步確定或已進一步確定該人類實質上對他汀治療具有抗性。在一實例中，人類正接受或已接受他汀治療或對他汀治療反應減小。

在一實例中，另外向人類投與他汀。在一實例中，該抗體或抗體片段及該他汀係分開或同時投與。

在一實例中，該人類指示為對選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列及/或其編碼PCSK9蛋白之催化域或C-末端域編碼序列之核苷酸序列為異型接合。在一實例中，該人類進一步指示為包含核苷酸序列SEQ ID NO：28及/或其催化域至C-末端域編碼序列。

在一實例中，該人類指示為對選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列及/或其催化域或C-末端域編碼序列為同型接合。

在一實例中，該人類已診斷為患有至少一種選自脂質失調、高脂蛋白血症、高脂質血症；血脂異常；高膽固醇血症、心臟病發作、中風、冠心病、動脈粥樣硬化、周邊血管疾病、跛行II型糖尿病、高血壓及心血管疾病或病狀之病狀。

在一實例中，該方法治療或預防該人類中之至少一種選自脂質失調、高脂蛋白血症、高脂質血症；血脂異常；高膽固醇血症、心臟病發作、中風、冠心病、動脈粥樣硬化、周邊血管疾病、跛行II型糖尿病、高血壓及心血管疾病或病狀之病狀。

本文所描述之技術之一些實施例可根據以下編號段落中任一項來定義：

1.一種治療及/或預防已確定包含及/或選定為包含PCSK9變異蛋白之人類中的藉由第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)介導之疾病或病狀之方法，該方法包含向人類投與結合該PCSK9變異蛋白之配位體以治療及/或預防該疾病或病狀。

在替代方案中，段落1提供：一種在有需要之人類中減少膽固醇位準或維持先前減少的膽固醇位準之方法，該方法包含向該人類投與特異性結合包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)的抗體或抗體片段，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中如本文所定義之突變(例如I474V或E670G)，其中該抗體包含來源於人類VH節段、人類D基因節段與人類JH節段之重組的VH域，該人類VH節段編碼對應於SEQ ID NO：40之位置5的胺基酸處之纈胺酸，且其中該人類包含(i)編碼SEQ ID NO：40之構架1的VH基因節段及(ii)編碼包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)的核苷酸序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變。

在替代方案中，段落1提供：一種在有需要之人類中減少膽固醇位準或維持先前減少的膽固醇位準之方法，該方法包含向該人類投與特異性結合包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)的抗體或抗體片段，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之如本文所定義之突變(例如I474V或E670G)，其中該抗體包含來源於人類VL節段與人類JL節段之重組的VL域，該人類VL節段為本文揭示之Vλ或Vκ，且其中該人類包含(i)該VL基因節段及(ii)編碼包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)的核苷酸序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變。

在替代方案中，段落1提供：一種在有需要之人類中減少膽固醇位準或維持先前減少之膽固醇位準之方法，該方法包含向該人類投與特異性結合包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)的抗體或抗體片段，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之如本文所定義的突變(例如I474V或E670G)，其中該抗體包含藉由本文揭示之人類CH、Cλ或Cκ基因節段編碼的C域，且其中該人類包含(i)該C基因節段及(ii)編碼包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)的核苷酸序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變。

2.如段落1之方法，其中該PCSK9變異蛋白係選自由PCSK9變異蛋白形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群。

3.如段落2之方法，其中該變異體為成熟PCSK9。

4.如段落1、2或3之方法，其進一步包含針對該PCSK9變異蛋白形式分析來自該人類之生物樣品。

5.一種治療及/或預防藉由第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)變異蛋白介導之疾病或病狀的方法，該第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)變異蛋白藉由(i)選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列；及/或(ii)人類中之編碼其催化域或C-末端域之核苷酸序列來編碼，該人類已確定為包含及/或選定為包含(i)選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列；及/或(ii)其編碼PCSK9蛋白之催化域或C-末端域之核苷酸序列，該方法包含向該人類投與結合該PCSK9變異蛋白之配位體以治療及/或預防該疾病或病狀。

6.如段落5之方法，其進一步包含針對(i)選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列；及/或(ii)其編碼PCSK9蛋白之催化域或C-末端域之核苷酸序列分析來自該人類的生物樣品。

7.如段落6之方法，其中該分析包含核酸擴增及/或一或多種選自定序、下一代定序、核酸雜交及對偶基因特異性擴增之方法。

8.如段落6之方法，其中該分析以多重格式進行。

9.如段落1至8中任一項之方法，其進一步包括獲得來自該人類之該生物樣品。

10.如段落1至9中任一項之方法，其中該人類已進一步確定為及/或選定為對該疾病或病狀之斯達汀治療具有抗性。

11.如段落1至10中任一項之方法，其中該配位體係選自抗體、抗體部分、抗體片段或親和抗體。

12.如段落11之方法，其中該配位體為特異性結合至選自形式f、c、m、e、h、p、q及aj之人類PCSK9的抗體或抗體片段，其中該抗體或片段包含來源於人類VH基因節段、人類D基因節段與人類JH基因節段之重組的VH域，該VH基因節段包含以下核苷酸序列，該核苷酸序列包含SNP rs56069819(SEQ ID NO：41)。

13.如段落12之配位體，其中該VH基因節段為VH3-23*04。

14.如段落1至13中任一項之方法，其中該投與進一步包括向該人類投與他汀。

15.如段落1至14中任一項之方法，其中該配位體及該他汀係分開或同時投與。

16.如段落1至15中任一項之方法，其中該生物樣品包含該人類之血清、血液、糞便、頭髮、組織、細胞、尿液及/或唾液。

17.如段落1至16中任一項之方法，其中該人類指示為對選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列及/或其編碼PCSK9蛋白之催化域或C-末端域編碼序列的核苷酸序列為異型接合。

18.如段落1至17中任一項之方法，其中該人類指示為包含核苷酸序列SEQ ID NO：28及/或其催化域或C-末端域編碼序列。

19.如段落1至18中任一項之方法，其中該人類指示為對選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列及/或其編碼PCSK2蛋白之催化域或C-末端域編碼序列的核苷酸序列為同型接合。

20.如段落1至19中任一項之方法，其中當該人類經確定為包含及/或選定為包含：a. SEQ ID NO：29且歸類為具有ASW、YRI、GBR、TSI、CLM、LWK、MXL、JPT、PUR、IBS、FIN或CEU血統時，則向該人類投與特異性結合該包含藉由SEQ ID NO：29編碼之變異的PCSK9變異蛋白之配位體；或b. SEQ ID NO：30且歸類為具有ASW、YRI、GBR、TSI、CLM、CHB、LWK、CHS、JPT、PUR、FIN或CEU血統時，則向該人類投與特異性結合該包含藉由SEQ ID NO：30編碼之變異的PCSK9變異蛋白之配位體；或c. SEQ ID NO：32且歸類為具有ASW、GBR、TSI、CLM、JPT、PUR、IBS、FIN或CEU血統時，則向該人類投與特異性結合該包含藉由SEQ ID NO：32編碼之變異的PCSK9變異蛋白之配位體；或 d. SEQ ID NO：33且歸類為具有LWK、ASW、YRI或CLM血統時，則向該人類投與特異性結合該包含藉由SEQ ID NO：33編碼之變異的PCSK9變異蛋白之配位體；或e. SEQ ID NO：34且歸類為具有LWK、ASW或YRI血統時，則向該人類投與特異性結合該包含藉由SEQ ID NO：34編碼之變異的PCSK9變異蛋白之配位體；或f. SEQ ID NO：35且歸類為具有PUR、TSI、FIN或CEU血統時，則向該人類投與特異性結合該包含藉由SEQ ID NO：35編碼之變異的PCSK9變異蛋白之配位體；或g. SEQ ID NO：36且歸類為具有LWK、ASW或YRI血統時，則向該人類投與特異性結合該包含藉由SEQ ID NO：36編碼之變異的PCSK9變異蛋白之配位體；或h. SEQ ID NO：37且歸類為具有CHS、ASW、JPT、PUR或CHB血統時，則向該人類投與特異性結合該包含藉由SEQ ID NO：37編碼之變異的PCSK9變異蛋白之配位體。

21.如段落1至19中任一項之方法，其中當該人類經確定為包含及/或選定為包含：a. PCSK9蛋白形式f且歸類為具有ASW、YRI、GBR、TSI、CLM、LWK、MXL、JPT、PUR、IBS、FIN或CEU血統時，則歷時一段時間且以可有效地治療及/或預防該人類中的該疾病或病狀之量投與特異性結合該PCSK9蛋白形式f之配位體，從而治療及/或預防該人類中之該疾病或病狀；或b. PCSK9蛋白形式c且歸類為具有ASW、YRI、GBR、 TSI、CLM、CHB、LWK、CHS、JPT、PUR、FIN或CEU血統，則歷時一段時間且以可有效地治療及/或預防該人類中之該疾病或病狀之量投與特異性結合該PCSK9蛋白形式c的配位體，從而治療及/或預防該人類中之該疾病或病狀；或c. PCSK9蛋白形式p且歸類為具有ASW、GBR、TSI、CLM、JPT、PUR、IBS、FIN或CEU血統時，則歷時一段時間且以可有效地治療及/或預防該人類中之該疾病或病狀之量投與特異性結合該PCSK9蛋白形式p的配位體，從而治療及/或預防該人類中之該疾病或病狀；或d. PCSK9蛋白形式m且歸類為具有LWK、ASW、YRI或CLM血統時，則歷時一段時間且以可有效地治療及/或預防該人類中之該疾病或病狀之量投與特異性結合該PCSK9蛋白形式m的配位體，從而治療及/或預防該人類中之該疾病或病狀；或e. PCSK9蛋白形式e且歸類為具有LWK、ASW或YRI血統時，則歷時一段時間且以可有效地治療及/或預防該人類中之該疾病或病狀之量投與特異性結合該PCSK9蛋白形式e的配位體，從而治療及/或預防該人類中之該疾病或病狀；或f. PCSK9蛋白形式h且歸類為具有PUR、TSI、FIN或CEU血統時，則歷時一段時間且以可有效地治療及/或預防該人類中之該疾病或病狀之量投與特異性結合該PCSK9蛋白形式h的配位體，從而治療及/或預防該人類中之該疾病或病狀；或g. PCSK9蛋白形式aj且歸類為具有LWK、ASW或YRI血統時，則歷時一段時間且以可有效地治療及/或預防該人類中之該疾病或病狀之量投與特異性結合該PCSK9蛋白形式aj的配位體，從而治療及/或預防該人類中之該疾病或病狀；或h. PCSK9蛋白形式q且歸類為具有CHS、ASW、JPT、PUR或CHB血統時，則歷時一段時間且以可有效地治療及/或預防該人類中之該疾病或病狀之量投與特異性結合該PCSK9蛋白形式q的配位體，從而治療及/或預防該人類中之該疾病或病狀。

22.如段落1至21中任一項之方法，其中該配位體能夠特異性結合該PCSK9變異蛋白或編碼該PCSK9變異蛋白之核酸。

23.如段落1至21中任一項之方法，其中該配位體特異性結合兩個或兩個以上人類PCSK9變異蛋白或其選自由SEQ ID NO：4-27組成之群的片段。

24.如段落23之方法，其中該配位體特異性結合兩個或兩個以上人類PCSK9蛋白或其片段，其中該蛋白片段中之至少一者包含選自SEQ ID NO：4-14、18-23、26及27之胺基酸序列。

25.如段落4及6至23中任一項之方法，其中在該樣品中分析之該人類PCSK9蛋白呈成熟形式。

26.如段落4及6至24中任一項之方法，其中在該樣品中分析之該人類PCSK9蛋白呈前形式。

27.如段落1至26之方法，其中該疾病或病狀係選自脂質失調、高脂蛋白血症、高脂質血症；血脂異常；高膽固醇血症、心臟病發作、中風、冠心病、動脈粥樣硬化、周邊血管疾病、跛行、II型糖尿病、高血壓及心血管疾病或病狀。

28.一種用於將人類核酸樣品中之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)基因變異體基因分型之套組，該人類感染或處於PCSK9介導的疾病之風險，該套組包含a.至少一個包含至少10個連續核苷酸之序列的核酸探針，該序列可在生物樣品中特異性雜交至選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列及其編碼PCSK9蛋白之催化域或C-末端域的序列且識別該核苷酸序列之存在，或可在生物樣品中特異性雜交至該核苷酸序列之反義且識別該核苷酸序列之反義的存在，其中該核酸探針雜交至至少一個存在於該選定序列而不存在於SEQ ID NO：28中之核苷酸或其反義序列；及/或b.至少兩個核酸探針，該等核酸探針包含至少兩個各具有至少10個連續核苷酸之序列或包含該等連續核苷酸之反義序列，該等連續核苷酸具有選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列，其中該等寡核苷酸探針中之至少一者包含至少一個存在於該選定核苷酸序列而不存在於SEQ ID NO：28中之核苷酸或其反義序列，及c.視情況存在之以下中之至少一者：一或多種緩衝劑、封裝、標識及/或用於包含獲自人類之核酸的生物樣品中之PCSK9基因分型的說明書。

29.如段落28之套組，其中該核酸探針附著至固體表面。

30.如段落28至29中任一項之套組，其進一步包含附著至該核酸探針之可偵測標識。

31.一種用於將生物樣品中之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)蛋白表型分型之套組，該套組包含多個抗體或抗體部分或片段，其中各抗體或抗體片段或部分對選自由形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群的PCSK9變異蛋白或其包含與對應序列SEQ ID NO：1、2或3之胺基酸變異之催化域或C-末端域或肽具有特異性；及視情況存在之以下中之至少一者：一或多種緩衝劑、封裝及/或標識或用於包含獲自人類的PCSK9之生物樣品中的PCSK9表型分型之說明書或標識。

32.如段落31之套組，其進一步包含他汀。

33.一種醫藥組成物，其包含能夠特異性結合選自由形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群的第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)變異體或其包含與對應序列SEQ ID NO：1、2或3之胺基酸變異之催化域或C-末端域或肽的配位體。

34.如段落33之醫藥組成物，其中該配位體為對選自由形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群的PCSK9變異體或其包含與對應序列SEQ ID NO：1、2或3之胺基酸變異之催化域或C-末端域或肽具有特異性的抗體、抗體部分、抗體片段或親和抗體。

35.如段落33至34中任一項之醫藥組成物，其進一步包含他汀。

36.如段落35之醫藥組成物，其中該他汀為阿托伐他汀。

37.一種藥物遞送系統，其包含如段落33或34之醫藥組成物及注射或IV裝置。

38.一種包含如段落33之醫藥組成物、封裝及用於向人類投與該配位體之說明書或標識的套組，該人類感染或處於PCSK9介導之疾病或病狀之風險，其中該人類表現選自由形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群的變異PCSK9蛋白形式或其催化域或C-末端域或肽。

39.如段落38之套組，其中該說明書或標識指示向指示他汀治療或已投與他汀或對他汀治療具有減少的反應之人類投與他汀。

40.如段落38或39之套組，其中該人類已經確定為及/或選定為對使用他汀治療具有抗性。

41.如段落39或40之套組，其中該說明書或標識指示向已接受他汀之人類投與且進一步指示減少向人類投與他汀。

42.如段落38之套組，其進一步包含至少一種緩衝液、封裝及/或用於獲自人類之生物樣品中之PCSK9基因分型的說明書或標識。

43.如段落38之套組，其中該標識包含由監管機構頒佈之銷售授權號。

44.如段落43之套組，其中該監管機構係選自FDA或EMA。

45.如段落38之套組，其中該等標識或說明書進一步包含向該人類投與阿利若單抗或依伏洛單抗之說明。

46.如段落38至45中任一項之套組，其進一步包含視情況包含阿利若單抗或依伏洛單抗之IV或注射裝置。

47.一種用於治療及/或預防已確定為包含及/或選定為包含PCSK9變異蛋白之人類中的藉由第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)介導之疾病或病狀的套組，該套組包含(a)在密封容器中之阿利若單抗或依伏洛單抗，及(b)指示向人類投與阿利若單抗或依伏洛單抗之標識或說明書，該人類表現選自由形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群的變異PCSK9蛋白形式或其催化域或C-末端域或肽。

48.如段落47之套組，其中該標識進一步指示若該人類已經投與或正加以投與他汀，則該他汀治療應持續。

49.如段落47之套組，其中該標識進一步指示若該人類已經投與或正加以投與他汀，則該他汀治療應減少或中斷。

50.一種治療及/或預防人類中之藉由第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)介導之疾病或病狀的方法，該方法包含a.針對一或多個選自由PCSK9形式f、c、r、p、m、e、 h、aj及q組成之群的PCSK9蛋白變異體之存在分析來自該人類的生物樣品；及b.當偵測到該等PCSK9形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q中之一或多者時向該人類投與治療有效量之人類PCSK9結合配位體。

51.如段落50之方法，其中該配位體特異性結合該等PCSK9形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q中之一或多者。

52.一種治療及/或預防人類中之藉由第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)介導之疾病或病狀的方法，該方法包含a.針對一或多個選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的PSCK9核酸變異體或至少其催化域或C-末端域編碼序列之存在分析來自該人類的生物樣品；及b.當偵測到該等PCSK9核酸變異體中之一或多者時向該人類投與治療有效量之人類PCSK9結合配位體。

53.如段落52之方法，其中該配位體特異性結合該等PCSK9形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q中之一或多者。

54.一種選擇用於使用人類PCSK9結合配位體治療及/或預防藉由第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)蛋白介導之疾病的人類之方法，該方法包含：a.針對選自由形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群的PCSK9蛋白變異體之存在分析取自於該人類的生物樣品，及b.當偵測到該等選自由形式f、c、r、p、m、e、h、 aj及q組成之群的PCSK9蛋白變異體中之至少一者時，選擇該人類用於使用該人類PCSK9結合配位體治療。

55.如段落54之方法，其中該人類指示他汀治療或已經投與他汀。

56.如段落54或55之方法，其中該人類已識別為實質上對他汀治療具有抗性或對他汀治療反應減小。

57.如段落54至56中任一項之方法，其中該疾病或病狀係選自脂質失調、高脂蛋白血症、高脂質血症；血脂異常；高膽固醇血症、心臟病發作、中風、冠心病、動脈粥樣硬化、周邊血管疾病、跛行、II型糖尿病、高血壓及心血管疾病或病狀。

58.如段落54至57中任一項之方法，其中所投與之人類PCSK9結合配位體對偵測到之PCSK9形式具有特異性。

59.如段落54至58中任一項之方法，其中該PCSK9蛋白形式包含選自由SEQ ID NO：4-27組成之群的胺基酸序列。

60.如段落54至59中任一項之方法，其中該PCSK9蛋白形式包含成熟PCSK9形式。

61.一種用於選擇感染第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)蛋白介導之疾病或病狀、符合使用人類PCSK9結合配位體治療之條件的人類的分析，該方法包含a.使來自該人類之生物樣品與至少一個包含至少10個連續核苷酸之序列的寡核苷酸探針接觸，該序列可在該生物樣品中特異性雜交至且識別選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列或至少其催化域或C-末端域編碼序列，或特異性雜交至該序列之反義，其中該核酸雜交至至少一個存在於該選定序列而不存在於SEQ ID NO：28中之核苷酸或雜交至反義序列，從而當存在至少一個選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列或至少其催化域或C-末端域編碼序列時形成複合物；及/或b.偵測是否存在該複合物；及c.當偵測到存在至少一個包含藉由SEQ ID NO：29-37編碼之PCSK9形式或其催化域或C-末端域編碼序列時，選擇符合使用人類PCSK9結合配位體治療條件的人類。

62.一種選擇符合使用人類第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)結合配位體治療條件的人類之分析，該方法包含a.使來自患有PCSK9介導之疾病或病狀的人類之生物樣品與一或多個能夠結合至選自由PCSK9形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群的PCSK9變異形式之抗體、抗體部分或抗體片段接觸，從而當存在一或多個PCSK9形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q時形成複合物；b.偵測是否存在該複合物；及c.當偵測到存在至少一種包含PCSK9形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q之複合物時，選擇符合使用人類PCSK9結合配位體治療條件的人類。

63.如段落61或62之分析，其中該疾病或病狀係選自脂質失調、高脂蛋白血症、高脂質血症；血脂異常；高膽固醇血症、心臟病發作、中風、冠心病、動脈粥樣硬化、周邊血管疾病、跛行、II型糖尿病、高血壓及心血管疾病或病狀。

64.如段落61至63中任一項之分析，其中該人類PSCK9結合配位體對偵測到之PCSK9形式具有特異性。

65.如段落61至64中任一項之分析，其進一步包含擴增來自該生物樣品之核酸。

66.如段落61至65中任一項之分析，其進一步包含分離來自該生物樣品之核酸。

67.如段落61至66中任一項之分析，其進一步包含向該人類投與該PCSK9結合配位體。

68.一種產生抗人類第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)抗體結合位點之方法，該方法包含獲得多個抗PCSK9抗體結合位點，篩檢該等用於結合至選自由形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群的人類PCSK9或其包含與對應序列SEQ ID NO：1、2或3之胺基酸變異之催化域或C-末端域或肽的抗體結合位點，及分離在篩檢步驟中結合之抗體結合位點，及視情況產生形式f、c、r、p、m、e、h、aj或q PCSK9結合片段或該經分離抗體之衍生物。

69.一種產生抗人類第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)抗體之方法，該方法包含使用包含選自由f、c、r、p、m、e、h、aj及q形式之胺基酸序列組成之群的胺基酸序列之人類PCSK9或其包含與對應序列SEQ ID NO：1、2或3之胺基酸變異的催化域或C-末端域或肽使非人類脊椎動物(例如小鼠或大鼠)免疫，及分離結合包含選自由f、c、 r、p、m、e、h、aj及q形式組成之群的人類PCSK9或其包含與對應序列SEQ ID NO：1、2或3之胺基酸變異之催化域或C-末端域或肽的抗體，及視情況產生形式f、c、r、p、m、e、h、aj或q PCSK9結合片段或該經分離抗體之衍生物。

70.如段落68至69之方法，其中該非人類脊椎動物為小鼠或大鼠。

71.如段落68至70中任一項之方法，其包含獲得編碼該抗體、片段、衍生物或結合位點之核酸且視情況將該核酸插入表現載體中的步驟。

72.一種用於第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)將人類基因分型之套組，其中該套組包含核酸，該核酸(i)包含連續核苷酸序列，該連續核苷酸序列特異性混雜至選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列或至少其催化域或C-末端域編碼序列，或特異性混雜至該序列之反義序列或RNA轉錄物，其中該連續核苷酸序列混雜至至少一個存在於該選定序列而不存在於SEQ ID NO：28中的核苷酸或混雜至其反義序列或RNA轉錄物；及/或(ii)包含至少10個具有選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列之連續核苷酸之序列或包含該等連續核苷酸之反義序列或RNA型式，其中該連續核苷酸序列包含至少一個存在於該選定序列而不存在於SEQ ID NO：28中的核苷酸。

73.一種用於第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)將人類基因分型或表型分型之套組，其中該套組包含配位體抗體或藉由如段落68至71中任一項之方法產生的抗體、片段或衍生物，該配位體抗體結合包含選自由形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群的人類PCSK9或其包含與對應序列SEQ ID NO：1、2或3之胺基酸變異之催化域或C-末端域或肽。

74.一種靶向第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)用於治療及/或預防人類中之PCSK9介導之疾病或病狀的方法，該方法包含向包含選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列之人類投與抗PCSK9配位體，藉此靶向藉由該核苷酸序列編碼之PCSK9。

75.如段落74之方法，其中該方法包含使用該配位體靶向選自由形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群的人類PCSK9以治療及/或預防該人類中之該疾病或病狀。

76.一種治療及/或預防人類中之藉由第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)介導之疾病或病狀的方法，該方法包含藉由向該人類投與結合該PCSK9之配位體來靶向選自由形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群的人類PCSK9，從而治療及/或預防該人類中之該疾病或病狀。

77.如段落76之方法，其中該人類之該基因組包含選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列。

78.如段落74至77中任一項之方法，其中已將該人類基因分型或將該人類基因分型為對選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列或其催化域或C-末端域編碼序列為陽性。

79.如段落74至78中任一項之方法，其中已將該人類表型分型或將該人類表型分型為對選自由形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群的人類PCSK9為陽性。

80.如段落74至79中任一項之方法，其中該方法包含將該人類基因分型為對選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列或其催化域或C-末端域編碼序列為陽性。

81.如段落74至80中任一項之方法，其中該方法包含將該人類表型分型為對選自由形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群的人類PCSK9序列為陽性。

82.如段落74至81中任一項之方法，其中已將該人類基因分型或將該人類基因分型為對選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列或其催化域或C-末端域編碼序列為異型接合；視情況其中已將該人類基因分型或將該人類基因分型為包含核苷酸序列SEQ ID NO：28或其催化域或C-末端域編碼序列以及選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列或其催化域或C-末端域編碼序列。

83.如段落74至82中任一項之方法，其中已將該人類基因組基因分型分型或將該人類基因組基因分型為對選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列或其催化域或C-末端域編碼序列為同型接合。

84.如段落74至83中任一項之方法，其中該方法包含在向該人類投與該配位體之前針對選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列或其催化域或C-末端域編碼序列將該人類基因分型，其中該配位體經確定為能夠結合至藉由該選定序列編碼的PCSK9。

85.如段落74至84中任一項之方法，其進一步包含向該人類投與該配位體與他汀(例如阿托伐他汀)。

86.如段落85之方法，其中該配位體及他汀係分開投與。

87.如段落85之方法，其中該配位體及他汀係同時投與。

88.如段落74至87中任一項之方法，其中該配位體係藉由皮下注射投與。

89.一種在有需要之人類中減少膽固醇位準或維持先前減少的膽固醇位準之方法，其包含a.選擇包含(i)選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)核苷酸序列；及/或(ii)其編碼PCSK9蛋白之催化域或C-末端域的核苷酸序列之人類；及b.向該人類投與特異性結合一或多個藉由該人類所包含之該核苷酸序列編碼的PCSK9胺基酸序列之抗體或抗體片段。

90.如段落89之方法，其中步驟(a)包含選擇包含藉由(i)或(ii)之該核苷酸序列編碼之PCSK9蛋白之人類。

91.如段落89或90之方法，其中該抗體或抗體片段特異性結合該PCSK9胺基酸序列。

92.如段落89或90之方法，其中該抗體或抗體片段結合第二PCSK9蛋白，該第二PCSK9蛋白包含藉由(i)選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列；及/或(ii)其編碼 PCSK9蛋白之催化域或C-末端域的核苷酸序列編碼之胺基酸序列。

93.如段落89或90之方法，其中該抗體包含來源於人類VH基因節段、人類D基因節段與人類JH節段之重組的VH域，該VH基因節段包含以下核苷酸序列，該核苷酸序列包含具有如在rs56069819(SEQ ID NO：41)中所指示之核苷酸C的單核苷酸多形現象。

94.如段落93之方法，其中該VH基因節段為VH3-23*04。

95.如段落89至93中任一項之方法，其中該抗體包含VH域，其中該VH域包含SEQ ID NO：38之構架1序列。

96.如段落89至95中任一項之方法，其中該人類已確定為包含(i)及/或(ii)之核苷酸序列。

97.如段落89至96中任一項之方法，其中該人類已確定為包含藉由(i)及/或(ii)之核苷酸序列編碼的第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)變異蛋白。

98.如段落89至97中任一項之方法，其包含確定該人類包含(i)及/或(ii)之核苷酸序列之步驟。

99.如段落98之方法，其中在向該人類投與該抗體之前進行該確定步驟。

100.如段落89至99中任一項之方法，其包含確定該人類包含藉由(i)及/或(ii)之核苷酸序列編碼的第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)變異蛋白之步驟。

101.如段落100之方法，其中在向該人類投與該抗體之前進行該確定步驟。

102.如段落100或101之方法，其中該確定步驟包含針對(i)選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列；及/或(ii)編碼該PCSK9變異蛋白之催化域或C-末端域之核苷酸序列分析來自該人類的生物樣品。

103.如段落102之方法，其中該分析包含使該生物樣品接觸

a.至少一個包含至少10個連續核苷酸之序列的寡核苷酸探針，該序列可在生物樣品中特異性雜交至且識別選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列或至少其催化域或C-末端域編碼序列，或特異性雜交至該序列之反義，其中該核酸雜交至至少一個存在於該選定序列而不存在於SEQ ID NO：28中的核苷酸或雜交至反義序列，從而當存在至少一個選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列或至少其催化域或C-末端域編碼序列時形成複合物；及/或b.至少一個寡核苷酸探針，該寡核苷酸探針包含至少10個具有選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列之連續核苷酸之序列或包含該等連續核苷酸的反義序列，其中該連續核苷酸序列包含至少一個存在於該選定序列而不存在於SEQ ID NO：28中之核苷酸，從而當存在選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列時形成複合物；及偵測是否存在該複合物，其中偵測到該複合物之存在確定該人類包含該PCSK9變異蛋白。

104.如段落102或103之方法，其中該分析包含核酸擴增及視情況存在之一或多種選自定序、下一代定序、核酸雜交及對偶基因特異性擴增之方法。

105.如段落102至104中任一項之方法，其中該分析以多重格式進行。

106.如段落102至105中任一項之方法，其進一步包含獲得來自該人類之該生物樣品。

107.如段落89至106中任一項之方法，其中該人類經進一步確定或已經進一步確定為實質上對他汀治療具有抗性。

108.如段落89至107中任一項之方法，其中該人類正接受或已接受他汀治療或對他汀治療反應減小。

109.如段落89至108中任一項之方法，其中該人類經進一步投與他汀。

110.如段落89至108中任一項之方法，其中該抗體或抗體片段及該他汀係分開或同時投與。

111.如段落106至110中任一項之方法，其中該生物樣品包含該人類之血清、血液、糞便、組織、細胞、尿液及/或唾液。

112.如段落89至111中任一項之方法，其中該人類指示為對選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列及/或其編碼PCSK9蛋白之催化域或C-末端域編碼序列之核苷酸序列為異型接合。

113.如段落89至112中任一項之方法，其中該人類進一步指示為包含核苷酸序列SEQ ID NO：28及/或其催化域或C-末端域編碼序列。

114.如段落89至113中任一項之方法，其中該人類指示為對選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列及/或其催化域或C-末端域編碼序列為同型接合。

115.如段落89至114中任一項之方法，其中該人類已診斷為患有至少一種選自脂質失調、高脂蛋白血症、高脂質血症；血脂異常；高膽固醇血症、心臟病發作、中風、冠心病、動脈粥樣硬化、周邊血管疾病、跛行II型糖尿病、高血壓及心血管疾病或病狀之病狀。

116.如段落89至115中任一項之方法，其中該方法治療或預防該人類中之至少一種選自脂質失調、高脂蛋白血症、高脂質血症；血脂異常；高膽固醇血症、心臟病發作、中風、冠心病、動脈粥樣硬化、周邊血管疾病、跛行、II型糖尿病、高血壓及心血管疾病或病狀之病狀。

額外定製人類患者之基因型及/或表型之配位體

如本文所描述，本發明涵蓋結合位點特異性已匹配至一或多個變異人類PCSK9之配位體(例如抗體及片段)。在本文中在別處將人類PCSK9稱為「TOI」。另外或替代地(及如下文非限制性實例中所進一步說明)，本發明之視情況存在之態樣提供該配位體的其他特徵與患者之基因型或表型匹配。就此而言，舉例而言，本發明包括使人類患者中之胺基酸序列變異與一或多個配位體序列或該等結合位點外之域匹配的能力。舉例而言，其中該配位體包含或由人類PCSK9結合抗體或抗人類PCSK9受體Fc融合物組成，本發明之此態樣提供一或多個恆定區結構域(例如Fc)與該患者基因型或表型之更多定製匹配。另外或替代地，預期該結合位點中之序列變異可類似地匹配該患者之基因型或表型。本發明者已藉由考慮編碼該配位體之一或多個部分的序列中之SNP出現(一個、多個或所有衍生可變域及/或恆定區結構域之基因節段中之SNP出現)來進行此。本發明者意識到將配位體與發現於待治療上及/或預防上治療之患者中的一或多個對應變異SNP匹配將為合乎需要的。匹配可涉及針對具有已知表型及/或基因型之患者特定地設計該配位體，或匹配可涉及藉由確定在該患者的表型或基因型中的變異與該配位體胺基酸及/或對應核苷酸中之變異之間存在對應關係來選擇配位體。

本發明者之關鍵考慮因素為需要促進配位體與該患者之身體之相容性，且尤其對所投與之配位體之可能的患者免疫系統反應。舉例而言，已觀察到接受人類或人類化抗體藥物之人類患者可建立針對輸入抗體之免疫反應(所謂的HAHA反應)，其使得該患者而產生抗藥物抗體，因為該患者之免疫系統識別該藥物為外來的。舉例而言，研究已表明一些患者接受目前出售最多的抗體藥品HUMIRA^TM(阿達木單抗(adalimumab))，建立針對該藥品之HAHA免疫反應，且此可不利地影響治療。參考JAMA.2011；305(14)：1460-1468.doi：10.1001/jama.2011.406：「Development of Antidrug Antibodies Against Adalimumab and Association With Disease Activity and Treatment Failure During Long-term Follow-up」,GM Bartelds等。作者推斷此研究之結果展示抗藥物抗體之發展與人類RA患者中之阿達木單抗治療的負面結果相關聯。據報導具有抗阿達木單抗抗體之患者不僅比不含抗阿達木單抗抗體之患者更通常且更早停止治療，在治療期間其亦具有更高疾病活性且僅很少緩解。另外，據報道該資料展示三分之二的抗阿達木單抗抗體陽性患者在治療之最初28週中出現此等抗體，且抗阿達木單抗抗體之存在實質上影響血清阿達木單抗濃度。

因此，此HAHA主題為重要關注點且監管當局已考慮此。舉例而言，歐洲藥物管理局(EMA)已頒佈「關於欲用於活體內臨床用途之單株抗體的免疫原性評估之指南(Guideline on immunogenicity assessment of monoclonal antibodies intended for in vivo clinical use)」(可在全球資訊網上www.ema.europa.eu/docs/en_GB/document_library/Scientific_guideline/2012/06/WC500128688.pdf處獲得；EMEA/CHMP/BMWP/14327/2006之附錄EMA/CHMP/BMWP/86289/2010)，其於2012年12月1日開始實行。因而，研究人員識別及評估抗抗體藥物出現及效應之風險為較好的做法。

本發明之本態樣，當設計及投與抗人類PCSK9藥品用於治療及/或預防人類PCSK9相關疾病及病狀時，藉由更接近地針對患者定製配位體自身(以及其特異性)來幫助解決此等考慮因素。

本發明者亦考慮定製配位體恆定區(例如含有配位體之抗體或Fc)中之變異之合意性，注意隨後將使向患者投與之恆定區適應各個組分(諸如將與患者中之恆定區相互作用的患者之Fc受體)。良好Fc/Fc受體相互作用對於藥物再循環(經由FcRn)以得到有用的活體內半衰期或用於細胞殺滅(例如用於癌症適應症)而言可為至關重要的。因此，以此方式有可能使恆定區(例如Fc)之效應功能更接近適應該患者以提高功效。舉例而言，更有效的藥物為更佳的患者治療所需要且可提供降低劑量及/或給藥頻率之可能性。

由此，在此態樣之實例中，本發明提供以下(以條項形式陳述)：1.本發明之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中(i)該配位體(例如抗體或片段)包含(a)藉由人類V區核苷酸序列編碼之可變域，其中該V核苷酸序列係來源於人類VH、D及JH基因節段或人類VL及JL基因節段之重組；或(b)藉由C區基因節段編碼之恆定區結構域；其中(a)之該等基因節段之第一基因節段或(b)之該C區基因節段包含編碼第一胺基酸多形現象之第一單核苷酸多形現象(SNP)；及(ii)該人類之該基因組包含該第一SNP或其中該人類表現(a')包含該第一胺基酸多形現象之抗體可變域或(b')包含該第一胺基酸多形現象之抗體恆定域。

2.如條項1之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中如活體外結合分析所確定，該人類之血液實質上不包含特異性結合至結構域的抗體，該結構域包含該第一胺基酸多形現象。

3.如條項2之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中SPR係用於進行該分析。

在替代方案中，使用ELISA。

4.如條項1至3中任一項之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中該人類之該基因組包含該第一基因節段(當應用(a)時)或該C區基因節段(當應用(b)時)。

5.如條項1至4中任一項之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中(a)之該等節段的該第一節段或第二節段或(b)之該C區基因節段包含編碼第二胺基酸多形現象之第二SNP；且；且其中其中該人類之該基因組包含該第二SNP或其中該人類表現(a")包含該第二胺基酸多形現象的抗體可變域或(b")包含該第一及第二胺基酸多形現象之抗體恆定區結構域。

6.如條項5之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中該人類表現包含該第一及第二胺基酸多形現象之抗體可變域。

7.如條項5或6之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中該基因組之該第一及第二SNP為同一抗體基因節段所包含。

舉例而言，該基因組之該第一及第二SNP為IGHG1*01 基因節段所包含且(a)之該第一節段為IGHG1*01基因節段。

舉例而言，該基因組之該第一及第二SNP為IGHG2*01基因節段所包含且(a)之該第一節段為IGHG2*01基因節段。

8.如條項1至7中任一項之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中各SNP為可變區基因節段SNP。

9.如條項1至7中任一項之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中各SNP為恆定區基因節段SNP，例如各SNP為γ-1恆定區基因節段SNP或γ-2恆定區基因節段SNP或γ-3恆定區基因節段SNP或γ-4恆定區基因節段SNP。

10.如條項9之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中該第一SNP為CH1、CH2、CH3或CH4基因節段SNP及/或該第二SNP為CH1、CH2、CH3或CH4基因節段SNP。

11.如條項1至8中任一項之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中各SNP為可變域SNP，例如VH結構域SNP或Vκ域SNP或Vλ SNP。

12.如條項1至11中任一項之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中(b)之該恆定區結構域為抗體Fc區所包含。

13.如條項1至12中任一項之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中該配位體(例如抗體或片段)已確定為特異性結合如本文所揭示之一或多個人類PCSK9變異體，例如其中如藉由SPR所測定KD為1nM或以下(例如100pM或10pM或以下)。

14.本發明(例如如條項1至13中任一項)之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中該配位體包含或由抗體或片段組成，該抗體或片段包含來源於人類V基因節段與人類J基因節段(及當該等可變域為VH域時視情況存在之人類D基因節段)之重組的人類抗體可變域；且其中該人類之該基因組包含該人類V基因節段及/或該人類表現包含來源於該人類V基因節段與人類J基因節段(及視情況存在之人類D基因節段)之重組的抗體可變域之抗體。

在一實例中，該V基因節段為揭示於WO2013041844中之V基因節段中之任一者千人基因組資料庫及/或www.imgt.org、其揭示內容(包括與序列相關之揭示內容)明確地以引用之方式併入本文中用於本發明。

15.本發明(例如如條項1至14中任一項)之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中該配位體(例如包含或由抗體或片段或融合Fc之人類PCSK9受體組成)包含藉由第一恆定區核苷酸序列編碼之人類重鏈恆定域；且其中該人類之該基因組包含與該第一恆定區核苷酸序列一致的重鏈恆定區核苷酸序列及/或該人類表現包含該人類恆定域之抗體。

16.本發明(例如如條項1至15中任一項)之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中該配位體(例如包含或由抗體或片段或融合Fc的人類PCSK9受體組成)包含藉由CH1核苷酸序列編碼之人類γ重鏈CH1域；且其中該人類之該基因組包含與該CH1核苷酸序列一致的γ重鏈恆定區核苷酸序列及/或該人類表現包含該人類γCH1域之抗體。

17.本發明(例如如條項1至16中任一項)之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中該配位體(例如包含或由抗體或片段或融合Fc的人類PCSK9受體組成)包含藉由CH2核苷酸序列編碼之人類γ重鏈CH2域；且其中該人類之該基因組包含與該CH2核苷酸序列一致的γ重鏈恆定區核苷酸序列及/或該人類表現包含該人類γ CH2域之抗體。

18.本發明(例如如條項1至17中任一項)之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中該配位體(例如包含或由抗體或片段或融合Fc的人類PCSK9受體組成)包含藉由CH3核苷酸序列編碼之人類γ重鏈CH3結構域；且其中該人類之該基因組包含與該CH3核苷酸序列一致的γ重鏈恆定區核苷酸序列及/或該人類表現包含該人類γ CH3域之抗體。

19.本發明(例如如條項1至18中任一項)之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中該配位體(例如包含或由抗體或片段或融合Fc的人類PCSK9受體組成)包含藉由CH4核苷酸序列編碼之人類γ重鏈CH4結構域；且其中該人類之該基因組包含與該CH4核苷酸序列一致的γ重鏈恆定區核苷酸序列及/或該人類表現包含該人類γ CH4域之抗體。

20.本發明(例如如條項1至19中任一項)之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中該配位體(例如包含或由抗體或片段或融合Fc的人類PCSK9受體組成)包含藉由Fc核苷酸序列編碼之人類γ重鏈Fc區；且其中該人類之該基因組包含與該Fc核苷酸序列一致的γ重鏈恆定區核苷酸序列及/或該人類表現包含該人類γ Fc區之抗體。

21.如條項16至20中任一項之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中該人類γ重鏈為人類γ-1重鏈。

22.如條項16至20中任一項之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中該人類γ重鏈為人類γ-2重鏈。

23.如條項16至20中任一項之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中配位體包含人類IGHG1*01 γ-1重鏈恆定區。

24.如條項16至20中任一項之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中配位體包含人類IGHG2*01 γ-1重鏈恆定區。

25.如條項15至24中任一項之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中已將該人類基因分型或將該人類基因分型為對該重鏈恆定區核苷酸序列為陽性。

26.如條項23之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中已將該人類基因分型或將該人類基因分型為對人類IGHG1*01核苷酸序列為陽性。

27.如條項24之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中已將該人類基因分型或將該人類基因分型為對人類IGHG2*01核苷酸序列為陽性。

28.如條項16至24中任一項之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中已將該人類表型分型或將該人類為該γ重鏈恆定域、CH1、CH2、CH3、CH4或Fc為陽性。

29.如條項28之配位體、方法、用途、套組或組成物，(i)當附屬條項23時，其中已將該人類表型分型或將該人類表型分型為對人類IGHG1*01 γ重鏈恆定域、CH1、CH2、 CH3、CH4或Fc為陽性或(ii)當附屬條項24時，其中已將該人類表型分型或將該人類表型分型為對人類IGHG2*01γ重鏈恆定域、CH1、CH2、CH3、CH4或Fc為陽性。

30.如條項16至24及26至29中任一項之方法或用途，其包含將該人類基因分型為對該γ重鏈恆定區核苷酸序列為陽性，例如對該γ重鏈恆定域、CH1、CH2、CH3、CH4或Fc核苷酸序列為陽性；對該人類IGHG1*01 γ重鏈恆定區、CH1、CH2、CH3、CH4或Fc核苷酸序列為陽性；或對該人類IGHG2*01 γ重鏈恆定區、CH1、CH2、CH3、CH4或Fc核苷酸序列為陽性。

31.如條項16至24及26至30中任一項之方法或用途，其包含將人類表型分型為對該γ重鏈恆定區為陽性，例如對該γ重鏈恆定域、CH1、CH2、CH3、CH4或Fc為陽性；對該人類IGHG1*01 γ重鏈恆定域、CH1、CH2、CH3、CH4或Fc為陽性；或對該人類IGHG2*01 γ重鏈恆定域、CH1、CH2、CH3、CH4或Fc為陽性。

定製配位體之實例

本發明者分析大量代表性人類樣品中之胺基酸變異及分佈。分析之結果(例如抗體基因節段)展示於表8中。

在第一實例中，本發明者識別滿足單獨或組合形式之較罕見IGH-γ-1 SNP 204D(觀察到的累積頻率為0.296)與206L(觀察到的累積頻率為0.283)之可能性。此等殘基為CH3域之部分，且因而其形成抗體Fc區之部分。由此，出於如上文所論述之原因，將此等CH3變異與患者匹配尤其有益。由此，此實例提供在以下條項中所陳述之態樣。

32.本發明(例如如條項1至31中任一項)之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中該配位體(例如包含或由抗體或片段或融合Fc的TOI受體組成)包含人類γ-1重鏈恆定區，該人類γ-1重鏈恆定區包含對應於SEQ ID NO：42之位置204的Asp或對應於SEQ ID NO：42之位置206的Leu，且其中該人類之該基因組包含編碼此類Asp或Leu之γ-1重鏈恆定區核苷酸序列，或該人類表現包含人類γ-1恆定區之抗體，該等人類γ-1恆定區包含此類Asp或Leu。

熟習此項技術者將熟悉用於確定人類之基因組序列之技術，例如藉由使用含有基因組DNA及/或RNA的樣品、使用生物資訊或其他電腦工具定序及比較以比較取樣序列與人類對偶基因之序列(例如如本文所揭示之IMGT、百人基因組或其他資料庫中所展示)。在一實例中，樣品為血液或唾液或臉頰拭子樣品。

33.如條項32之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中該配位體包含人類γ-1重鏈恆定區，該人類γ-1重鏈恆定區包含天對應於SEQ ID NO：42之位置204的Asp及對應於SEQ ID NO：42之位置206的Leu。

34.如條項32或33之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中該人類之該基因組包含編碼此類Asp及Leu之γ-1重鏈恆定區核苷酸序列，或該人類表現包含人類γ-1恆定區之抗體，該等人類γ-1恆定區包含此類Asp及Leu。

35.如條項32、33或34之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中該配位體包含人類IGHG1*01 γ-1重鏈恆定區，例如藉由人類IGHG1*01編碼之Fc、CH1、CH2及/或CH3域。

36.如條項32至35中任一項之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中該人類之該基因組包含人類IGHG1*01核苷酸序列，或該人類表現包含藉由人類IGHG1*01核苷酸序列編碼之人類恆定域的抗體。

37.如條項32至36中任一項之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中該配位體包含藉由人類IGHG1*01編碼之鉸鏈區。

38.如條項32至37中任一項之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中該配位體包含或由抗體組成，其中該抗體包含重鏈，該等重鏈包含SEQ ID NO：61。

39.如條項32至38中任一項之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中該人類具有歐洲血統。如表8中所展示，204D及206L發現於此類人類中。

40.如條項32至39中任一項之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中已將該人類基因分型或將該人類基因分型為對該Asp及/或Leu為陽性。

41.如條項32至40中任一項之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中已將該人類基因分型或將該人類基因分型為對人類IGHG1*01為陽性。

42.如條項32至41中任一項之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中已將該人類表型分型或將該人類表型分型為對人類IGHG1*01 CH3為陽性。

43.如條項32至42中任一項之方法或用途，其包含選擇該人類，該人類之基因組包含編碼該Asp及/或Leu之密碼子；包含人類IGHG1*01；或包含人類IGHG1*01 CH3。

44.如條項32至43中任一項之方法或用途，其包含選擇該人類，該人類之表型包含該Asp及/或Leu；人類IGHG1*01區；或人類IGHG1*01 CH3。

44a.如條項32至44中任一項之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中該人類表現包含人類γ-1恆定區之抗體，該等人類γ-1恆定區包含此類Asp及Leu。

在第二實例中，本發明者識別針對IGH-γ-2 SNP之可能性。此包括Fc區變異之考慮因素，就此而言，本發明者集中於Fc區中之位置161及257。由此，此實例提供在以下條項中所陳述之態樣。

45.本發明(例如如條項1至31中任一項)之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中該配位體(例如包含或由抗體或片段或融合Fc的TOI受體組成)包含人類γ-2重鏈恆定區，該人類γ-2重鏈恆定區包含選自由對應於SEQ ID NO：44之位置72的Pro、對應於SEQ ID NO：44之位置75的Asn、對應於SEQ ID NO：44之位置76的Phe、SEQ ID NO：44之對應於位置161的Val及對應於SEQ ID NO：44之位置257的Ala組成之群的胺基酸；且其中該人類之該基因組包含編碼此類選定胺基酸之γ-2重鏈恆定區核苷酸序列，或該人類表現包含人類γ-2恆定區之抗體，該等人類γ-2恆定區包含此類選定胺基酸。

46.如條項45之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中該配位體包含人類γ-2重鏈恆定區，該人類γ-2重鏈恆定區包含(i)對應於SEQ ID NO：44之位置72的Pro、對應於SEQ ID NO：44之位置75的Asn、對應於SEQ ID NO：44之位置76的Phe及視情況存在之(ii)對應於SEQ ID NO：44之位置161的Val及/或對應於SEQ ID NO：44之位置257的Ala；且其中該人類之該基因組包含編碼(i)之此類胺基酸的γ-2重鏈恆定區核苷酸序列，或該人類表現包含人類γ-2恆定區之抗體，該等人類γ-2恆定區包含(i)之此類胺基酸。

此實例集中於CH1變異。

47.如條項45或46之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中該配位體包含人類γ-2重鏈恆定區，該人類γ-2重鏈恆定區包含(i)選自由以下各者組成之群的胺基酸：對應於SEQ ID NO：44之位置161的Val、對應於SEQ ID NO：44之位置257的Ala及視情況存在之(ii)選自由對應於SEQ ID NO：44之位置72的Pro、對應於SEQ ID NO：44之位置75的Asn及對應於SEQ ID NO：44之位置76的Phe組成之群的胺基酸；且其中該人類之該基因組包含編碼(i)之此類胺基酸的γ-2重鏈恆定區核苷酸序列，或該人類表現包含人類γ-2恆定區之抗體，該等人類γ-2恆定區包含(i)之此類胺基酸。

此實例集中於Fc變異。

48.如條項45至47中任一項之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中該配位體包含人類IGHG2*01 γ-2重鏈恆定區，例如藉由人類IGHG2*01編碼之Fc、CH1、CH2及/或CH3域。

49.如條項45至48中任一項之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中該人類之該基因組包含人類IGHG2*01核苷酸序列，或該人類表現包含藉由人類IGHG2*01核苷酸序列編碼之人類恆定域的抗體。

50.如條項45至49中任一項之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中該配位體包含藉由人類IGHG2*01編碼之鉸鏈區。

51.如條項45至50中任一項之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中該配位體包含或由抗體組成，其中該抗體包含重鏈，該等重鏈包含SEQ ID NO：63或65。

52.如條項45至51中任一項之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中該人類具有歐洲、非裔美國人或歐裔美國人血統。

53.如條項45至52中任一項之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中已將該人類基因分型或將該人類基因分型為對該等Pro、Asn、Phe、Val及Ala中之一者、多者或全部為陽性。

54.如條項45至53中任一項之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中已將該人類基因分型或將該人類基因分型為對人類IGHG2*01為陽性。

55.如條項45至54中任一項之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中已將該人類表型分型或將該人類表型分型為對人類IGHG2*01 CH1為陽性。

56.如條項45至55中任一項之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中已將該人類表型分型或將該人類表型分型為對人類IGHG2*01 CH2為陽性。

57.如條項45至56中任一項之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中已將該人類表型分型或將該人類表型分型為對人類IGHG2*01 CH3為陽性。

58.如條項45至57中任一項之方法或用途，其包含選擇該人類，該人類之基因組包含編碼該等Pro、Asn、Phe、Val及Ala中之一者、多者或全部的密碼子；包含人類IGHG2*01；或包含人類IGHG2*01 CH1、CH2及/或CH3。

59.如條項45至58中任一項之方法或用途，其包含選擇該人類，該人類之表型包含該等Pro、Asn、Phe、Val及Ala中之一者、多者或全部；人類IGHG2*01區；或人類IGHG2*01CH1、CH2及/或CH3。

60.如條項45至59中任一項之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中該人類表現包含人類γ-2恆定區之抗體，該等人類γ-2恆定區包含此類Pro、Asn、Phe、Val及Ala。

在第三實例中，本發明者闡述人類κ恆定區變異。由此，本發明之本態樣亦提供以下各者。

61.本發明(例如如條項1至60中任一項)之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中該配位體(例如包含或由抗體或片段或融合Fc的TOI受體組成)包含人類κ輕鏈恆定區，該人類κ輕鏈恆定區包含對應於SEQ ID NO：50之位置84 的Val或對應於SEQ ID NO：50之位置87的Cys；且其中該人類之該基因組包含編碼此類Val或Cys之κ輕鏈恆定區核苷酸序列，或該人類表現包含人類κ輕鏈恆定區之抗體，該等人類κ輕鏈恆定區包含此類Val或Cys。

62.如條項61之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中該配位體包含人類κ輕鏈恆定區，該人類κ輕鏈恆定區包含對應於SEQ ID NO：50之位置84的Val及對應於SEQ ID NO：50之位置87的Cys。

63.如條項61或62之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中該人類之該基因組包含編碼此類Val及Cys之κ輕鏈恆定區核苷酸序列，或該人類表現包含人類κ恆定區之抗體，該等人類κ恆定區包含此類Val及Cys。

64.如條項61至63中任一項之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中該抗體或片段包含人類IGKC*01 κ輕鏈恆定區。

65.如條項61至64中任一項之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中該配位體包含或由抗體組成，其中該抗體包含輕鏈，該等輕鏈包含SEQ ID NO：62或66。

66.如條項61至65中任一項之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中該配位體包含或由抗體組成，其中該抗體包含來源於人類Vκ基因節段與人類Jκ基因節段之重組的輕鏈可變域，其中該Jκ基因節段為IGKJ2*01(SEQ ID NO：57)。

67.如條項61至66中任一項之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中已將該人類表型分型或將該人類表型分型為對該Val及/或Cys為陽性。

68.如條項61至67中任一項之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中已將該人類基因分型或將該人類基因分型為對人類IGKC*01為陽性。

69.如條項61至68中任一項之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中已將該人類表型分型或將該人類表型分型為對人類IGKC*01域為陽性。

70.如條項61至69中任一項之方法或用途，其包含選擇該人類，該人類之基因組包含編碼該Val及/或Cys之密碼子；或包含人類IGKC*01。

71.如條項61至70中任一項之方法或用途，其包含選擇該人類，該人類之表型包含此類Val及/或Cys；或包含人類IGKC*01域。

72.如條項61至71中任一項之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中該人類表現包含人類κ恆定域之抗體，該等人類κ恆定域包含此類Val及Cys，例如表現人類IGKC*01恆定域。

在第四實例中，本發明者闡述人類λ恆定區變異。由此，此實例提供在以下條項中所陳述之態樣。

73.本發明(例如如條項1至60中任一項)之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中該配位體(例如包含或由抗體或片段或融合Fc的TOI受體組成)包含人類IGLC2*01輕鏈恆定區；且其中該人類之該基因組包含人類IGLC2*01核苷酸序列，或該人類表現包含人類輕鏈IGLC2*01恆定區之抗體。

74.如條項73之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中該抗體包含輕鏈，該等輕鏈包含SEQ ID NO：64。

75.如條項73或74之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中已將該人類基因分型或將該人類基因分型為對人類IGLC2*01為陽性。

76.如條項73至75中任一項之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中已將該人類表型分型或將該人類表型分型為對人類IGLC2*01域為陽性。

77.如條項73至76中任一項之方法或用途，其包含選擇該人類，該人類之基因組包含人類IGLC2*01。

78.如條項73至77中任一項之方法或用途，其包含選擇該人類，該人類之表型包含人類IGLC2*01域。

79.如條項73至78中任一項之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中該人類表現包含人類λIGLC2*01恆定域之抗體。

在第五實例中，本發明者闡述人類重鏈可變區變異。由此，此實例提供在以下條項中所陳述之態樣。

80.本發明(例如如條項1至79中任一項)之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中該配位體包含或由抗體或片段組成，其中該抗體或片段包含來源於人類VH基因節段、人類D基因節段與人類JH基因節段之重組的VH結構域，其中該VH基因節段係選自由以下組成之群：(i) IGHV1-18*01且該人類之該基因組包含人類IGHV1-18*01核苷酸序列或人類表現包含來源於人類IGHV1-18*01之重組的可變域之抗體；或(ii)IGVH1-46*01且該人類之該基因組包含人類IGHV1-46*01核苷酸序列或該人類表現包含來源於人類IGHV1-46*01之重組的可變域之抗體。

81.如條項80之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中該抗體或片段包含藉由人類IGHG2*01編碼之CH1域、CH2域、CH3域、鉸鏈或Fc中之一者、多者或全部。

82.如條項80或81之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中該抗體或片段包含重鏈，該等重鏈包含SEQ ID NO：63或65。

83.如條項80至82中任一項之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中已將該人類基因分型或將該人類基因分型為對該選定VH基因節段為陽性、對人類IGHV1-18*01或IGVH1-46*01為陽性。

84.如條項80至83中之任一項之方法或用途，其包含將人類基因分型為對該選定VH基因節段為陽性，例如對人類IGHV1-18*01或IGVH1-46*01為陽性。

在第六實例中，本發明者闡述人類輕鏈可變區變異。由此，此實例提供在以下條項中所陳述之態樣。

85.本發明(例如如條項1至84中任一項)之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中該配位體包含或由抗體或片段組成，其中該抗體或片段包含來源於人類VL基因節段與人類JL基因節段之重組的VL域，其中該VL基因節段係選自由以下組成之群：(i)IGKV4-1*01且該人類之該基因組包含人類IGKV4-1*01核苷酸序列，或該人類表現包含來源於人類IGKV4-1*01之重組的可變域之抗體；(ii)IGLV2-14*01且該人類之該基因組包含人類IGLV2-14*01核苷酸序列，或該人類表現包含來源於人類IGLV2-14*01之重組的可變域之抗體；或(iii)IGKV1-13*02且該人類之該基因組包含人類IGKV1-13*02核苷酸序列或該人類表現包含來源於人類IGKV1-13*02之重組的可變域之抗體。

86.如條項85之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中該抗體包含輕鏈，該等輕鏈包含SEQ ID NO：62、64或66。

87.如條項85或86之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中該抗體或片段包含來源於人類Vκ基因節段與人類Jκ基因節段之重組的輕鏈可變結構域，其中該Jκ基因節段為IGKJ2*01(SEQ ID NO：57)；其中應用(i)或(iii)。

88.如條項85至87中任一項之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中已將該人類基因分型或將該人類基因分型為對該選定VL基因節段為陽性，例如對人類IGKV4-1*01、IGLV2-14*01或IGKV1-13*02為陽性。

89.如條項88之方法或用途，其包含將該人類基因分型為對該選定VL基因節段為陽性，例如將該人類基因分型為對人類IGKV4-1*01、IGLV2-14*01或IGKV1-13*02為陽性。

90.如條項1至89中任一項之配位體、方法、用途、套組或組成物，其中該配位體(例如抗體或片段)結合該人類PCSK9，其中藉由SPR所確定解離常數(Kd)為1nM或以下(例如100pM、10pM或1pM或以下)。

其他示例性配體如以下段落1-17。

1.一種用於在有需要之人類中減少膽固醇位準或維持先前減少的膽固醇位準之方法的抗體或抗體片段，其中該抗體或片段包含人類γ重鏈恆定區，該人類γ重鏈恆定區包含藉由人類γ重鏈恆定區基因節段SNP編碼之第一胺基酸，且該抗體或片段特異性結合包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)胺基酸序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中的突變I474V或E670G，其中該人類包含編碼該PCSK9胺基酸序列之核苷酸序列且包含人類γ重鏈恆定區基因節段，該人類γ重鏈恆定區基因節段包含該SNP，或該人類表現包含人類γ恆定區之抗體，該等人類γ恆定區包含該第一胺基酸。

在替代方案中，段落1提供：一種用於在有需要之人類中減少膽固醇位準或維持先前減少的膽固醇位準之方法的抗體或抗體片段，其中該抗體或片段包含人類γ-1重鏈恆定區，該人類γ-1重鏈恆定區包含對應於SEQ ID NO：42之位置204的Asp或對應於SEQ ID NO：42之位置206的Leu，且該抗體或片段特異性結合包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)胺基酸序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之突變I474V或E670G，其中該人類包含編碼該胺基酸序列之核苷酸序列且包含IGHG1*01人類重鏈恆定區基因節段，或該人類表現包含人類γ-1恆定區之抗體，該等人類γ-1恆定區包含此類Asp及Leu。在一實施例中，該突變為I474V。在另一實施例中，該突變為E670G。一實例提供：一種用於在有需要之人類中減少膽固醇位準或維持先前減少的膽固醇位準之方法的抗體或抗體片段，其中該抗體或片段包含人類γ-1重鏈恆定區，該人類γ-1重鏈恆定區包含對應於SEQ ID NO：42之位置204的Asp及對應於SEQ ID NO：42之位置206的Leu，且該抗體或片段特異性結合包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)胺基酸序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之突變I474V，其中該人類包含編碼該胺基酸序列之核苷酸序列且包含IGHG1*01人類重鏈恆定區基因節段。視情況，該抗體或片段包含IGHG1*01人類重鏈恆定區。

另一實例提供：一種用於在有需要之人類中減少膽固醇位準或維持先前減少的膽固醇位準之方法的抗體或抗體片段，其中該抗體或片段包含人類γ-1重鏈恆定區，該人類γ-1重鏈恆定區包含對應於SEQ ID NO：42之位置204的Asp及對應於SEQ ID NO：42之位置206的Leu，且該抗體或片段特異性結合包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)胺基酸序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之突變E670G，其中該人類包含編碼該胺基酸序列之核苷酸序列且包含IGHG1*01人類重鏈恆定區基因節段。視情況，該抗體或片段包含IGHG1*01人類重鏈恆定區。

在一實例中，該抗體或抗體片段已確定特異性結合包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之突變I474或E670G，其中該抗體或片段包含人類γ-1重鏈恆定區，該人類γ-1重鏈恆定區包含對應於SEQ ID NO：42之位置204的Asp或對應於SEQ ID NO：42之位置206的Leu，且其中該人類包含(i)IGHG1*01人類重鏈恆定區基因節段；及(ii)編碼該包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)之核苷酸序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G。

2.如段落1之抗體或抗體片段，其中該抗體包含人類γ-1重鏈恆定區，該人類γ-1重鏈恆定區包含天對應於SEQ ID NO：42之位置204的Asp及對應於SEQ ID NO：42之位置206的Leu。

3.如段落1或2之抗體或抗體片段，其中該抗體包含IGHG1*01人類重鏈恆定區。

4.如段落1至3中任一項之抗體或抗體片段，其中該人類已確定包含編碼以下之核苷酸序列：包含C-末端域之PCSK9，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G；及/或藉由SEQ ID NO：29或30之核苷酸序列編碼的第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)變異蛋白。

5.如段落1至4中任一項之抗體或抗體片段，該方法包含確定該人類包含編碼以下之核苷酸序列之步驟：包含C- 末端域之PCSK9，該C-末端域包含該突變I474V或E670G；及/或包含該突變I474V或E670G的第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)變異蛋白，視情況，其中在向該人類投與該抗體之前進行該確定步驟。

6.如段落5之抗體或抗體片段，其中該確定步驟包含針對編碼該包含C-末端域之PCSK9的核苷酸序列分析來自該人類之生物樣品，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G。

7.如段落6之抗體或抗體片段，其中該分析包含使該生物樣品接觸

a.至少一個包含至少10個連續核苷酸之序列的寡核苷酸探針，該序列可在該生物樣品中特異性雜交至且識別編碼包含C-末端域之PCSK9的核苷酸序列或特異性雜交至該序列之反義，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G，其中該核酸雜交至至少一個存在於該選定序列而不存在於SEQ ID NO：28中的核苷酸或雜交至反義序列，從而當存在至少一個編碼包含C-末端域之PCSK9的核苷酸序列時形成複合物，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G；及/或b.至少一個寡核苷酸探針，該寡核苷酸探針包含具有編碼該包含該C-末端域之PCSK9的核苷酸序列之具有至少10個連續核苷酸之序列或包含該等連續核苷酸之反義序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變突變I474V或E670G，其中該連續核苷酸序列包含至少一個存在於該選定序列中而不存在於SEQ ID NO：28中之核苷酸，從而當存在編碼該包含該C-末端域之PCSK9的核苷酸序列時形成複合物，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G；及偵測是否存在該複合物，其中偵測到該複合物之存在確定該人類包含有包含該C-末端域之該PCSK9，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G。

8.如段落6或7之抗體或抗體片段，其中該分析包含核酸擴增及視情況存在之一或多種選自定序、下一代定序、核酸雜交及對偶基因特異性擴增之方法，及/或其中該分析係以多重格式進行。

9.如段落1至8中任一項之抗體或抗體片段，其中該抗體或抗體片段係用於向經進一步確定或已經進一步確定為實質上對他汀治療具有抗性的人類投藥。

10.如段落1至9中任一項之抗體或抗體片段，其中該抗體或抗體片段係用於向正接受或已接受他汀治療或對他汀治療之反應減小之人類投與。

11.如段落9或10之抗體或抗體片段，其中該抗體或抗體片段係用於與該他汀治療分開或同時向人類投與。

12.如段落6至10中任一項之抗體或抗體片段，其中該生物樣品包含該人類之血清、血液、糞便、組織、細胞、尿液及/或唾液。

13.如段落1至12中任一項之抗體或抗體片段，其中該人類指示為對編碼包含該突變I474V或E670G之PCSK9 C- 末端域的核苷酸序列為異型接合，視情況，其中該人類進一步指示為包含核苷酸序列SEQ ID NO：28，或該人類指示為對編碼包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G的PCSK9 C-末端域之核苷酸序列為同型接合。

14.如段落1至13中任一項之抗體或抗體片段，其中該人類已診斷為患有至少一種選自脂質失調、高脂蛋白血症、高脂質血症、血脂異常、高膽固醇血症、心臟病發作、中風、冠心病、動脈粥樣硬化、周邊血管疾病、跛行及高血壓之病狀。

15.如段落1至14中任一項之抗體或抗體片段，其中該抗體或抗體片段治療該人類中至少一種選自脂質失調、高脂蛋白血症、高脂質血症、血脂異常、高膽固醇血症、低脂質血症、低膽固醇血症、心臟病發作、中風、冠心病、動脈粥樣硬化、周邊血管疾病、跛行及高血壓之病狀或減小發生該病狀的風險。

16.如段落1至15中任一項之抗體或抗體片段，其中該核苷酸序列為SEQ ID NO：29或30。

17.如段落1至16中任一項之抗體或抗體片段，其中該抗體或抗體片段係用於藉由靜脈內投與或皮下投與及/或包含在可注射製劑中。

其他示例性方法如以下段落1-18。

1.一種在有需要之人類中降低膽固醇位準或維持先前降低的膽固醇位準之方法，該方法包含向該人類投與特異性地結合包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)的抗體或抗體片段，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之突變I474或E670G，其中該抗體或片段包含人類γ-1重鏈恆定區，該人類γ-1重鏈恆定區包含對應於SEQ ID NO：42之位置204的Asp或對應於SEQ ID NO：42之位置206的Leu，且其中該人類包含(i)IGHG1*01人類重鏈恆定區基因節段，或該人類表現包含人類γ-1重鏈恆定區之抗體，該等人類γ-1重鏈恆定區包含此類Asp及Leu；及(ii)編碼該包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)之核苷酸序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G。

在一實施例中，該突變為I474V。在另一實施例中，該突變為E670G。

一實例提供：一種在有需要之人類中降低膽固醇位準或維持先前降低的膽固醇位準之方法，該方法包含向該人類投與特異性地結合包含C-末端域的第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)之抗體或抗體片段，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之突變I474，其中該抗體或片段包含人類γ-1重鏈恆定區，該人類γ-1重鏈恆定區包含對應於SEQ ID NO：42之位置204的Asp及對應於SEQ ID NO：42之位置206的Leu，且其中該人類包含(i)IGHG1*01人類重鏈恆定區基因節段；及(ii)編碼該包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)之核苷酸序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V。視情況，該抗體或片段包含IGHG1*01人類重鏈恆定區。

另一實例提供：一種在有需要之人類中降低膽固醇位準或維持先前降低的膽固醇位準之方法，該方法包含向該人類投與特異性地結合包含C-末端域的第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)之抗體或抗體片段，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之突變E670G，其中該抗體或片段包含人類γ-1重鏈恆定區，該人類γ-1重鏈恆定區包含對應於SEQ ID NO：42之位置204的Asp及對應於SEQ ID NO：42之位置206的Leu，且其中該人類包含(i)IGHG1*01人類重鏈恆定區基因節段；及(ii)編碼該包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)之核苷酸序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變E670G。視情況，該抗體或片段包含IGHG1*01人類重鏈恆定區。

在一實例中，該抗體或抗體片段已確定特異性結合包含C-末端域的第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之突變I474或E670G，其中該抗體或片段包含人類γ-1重鏈恆定區，該人類γ-1重鏈恆定區包含對應於SEQ ID NO：42之位置204的Asp及對應於SEQ ID NO：42之位置206的Leu，且其中該人類包含(i)IGHG1*01人類重鏈恆定區基因節段；及(ii)編碼該包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)之核苷酸序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G。

2.如段落1之方法，其在該投與之前包含選擇包含(ii)之該核苷酸序列的人類，其中該人類為段落1之人類。

3.如段落1或2之方法，其中該抗體包含人類γ-1重鏈恆定區，該人類γ-1重鏈恆定區包含對應於SEQ ID NO：42之位置204的Asp及對應於SEQ ID NO：42之位置206的Leu。

4.如段落1、2或3之方法，其中該抗體包含IGHGI*01人類重鏈恆定區。

5.如段落1至4中任一項之方法，其中該人類已確定包含編碼以下之核苷酸序列：包含C-末端域之PCSK9，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G；及/或藉由SEQ ID NO：29或30之核苷酸序列編碼的第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)變異蛋白。

6.如段落1至5中任一項之方法，其包含確定該人類包含編碼以下之核苷酸序列之步驟：包含C-末端域之PCSK9，該C-末端域包含該突變I474V或E670G；及/或包含該突變I474V或E670G之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)變異蛋白，視情況，其中在向該人類投與該抗體之前進行確定步驟。

7.如段落6之方法，其中該確定步驟包含針對編碼包含C-末端域之PCSK9的核苷酸序列分析來自該人類之生物樣品，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G。

8.如段落7之方法，其中該分析包含使該生物樣品接觸

a.至少一個包含具有至少10個連續核苷酸之序列的寡核苷酸探針，該序列可在該生物樣品中特異性雜交至且識別編碼包含C-末端域之PCSK9的核苷酸序列或特異性雜交至該序列之反義序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G，其中該核酸雜交至至少一個存在於該選定序列中而不存在於SEQ ID NO：28中的核苷酸或雜交至反義序列，從而當存在至少一個編碼包含C-末端域之PCSK9的核苷酸序列時形成複合物，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G；及/或b.至少一個寡核苷酸探針，該寡核苷酸探針包含具有編碼該包含該C-末端域之PCSK9的核苷酸序列之具有至少10個連續核苷酸之序列或包含該等連續核苷酸之反義序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變突變I474V或E670G，其中該連續核苷酸序列包含至少一個存在於該選定序列中而不存在於SEQ ID NO：28中之核苷酸，從而當存在編碼該包含該C-末端域之PCSK9的核苷酸序列時形成複合物，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G；及偵測是否存在該複合物，其中偵測到該複合物之存在確定該人類包含有包含該C-末端域之該PCSK9，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G。

9.如段落7或8之方法，其中該分析包含核酸擴增及視情況存在之一或多種選自定序、次世代定序、核酸雜交及對偶基因特異性擴增之方法，及/或其中該分析以多重形式進行。

10.如段落1至9中任一項之方法，其中該人類經進一步確定或已經進一步確定為實質上對他汀治療具有抗性。

11.如段落1至10中任一項之方法，其中該人類正接受或已接受他汀治療或對他汀治療之反應減小。

12.如段落10或11之方法，其中該抗體或抗體片段係與該他汀治療分開或同時向該人類投與。

13.如段落7至9中任一項之方法，其中該生物樣品包含該人類之血清、血液、糞便、組織、細胞、尿液及/或唾液。

14.如段落1至13中任一項之方法，其中該人類指示為對於編碼包含該突變I474V或E670G之PCSK9 C-末端域的核苷酸序列之異型接合，視情況，其中該人類進一步指示為對於包含核苷酸序列SEQ ID NO：28，或該人類指示為編碼包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G的PCSK9 C-末端域之核苷酸序列之同型接合。

15.如段落1至14中任一項之方法，其中該人類已診斷為患有至少一種選自脂質失調、高脂蛋白血症、高脂質血症、血脂異常、高膽固醇血症、心臟病發作、中風、冠心病、動脈粥樣硬化、周邊血管疾病、跛行及高血壓之病狀。

16.如段落1至15中任一項之方法，其中該抗體或抗體片段治療該人類中至少一種選自脂質失調、高脂蛋白血症、高脂質血症、血脂異常、高膽固醇血症、低脂質血症、低膽固醇血症、心臟病發作、中風、冠心病、動脈粥樣硬化、周邊血管疾病、跛行及高血壓之病狀或減小發生該病狀的風險。

17.如段落1至16中任一項之方法，其中該核苷酸序列為SEQ ID NO：29或30。

18.如段落1至17中任一項之方法，其中該抗體或抗體片段係藉由靜脈內投與或皮下投與及/或包含在可注射製劑中。

其他示例性配位體如以下段落1-17。

1.一種用於在有需要之人類中降低膽固醇位準或維持先前降低的膽固醇位準之方法的抗體或抗體片段，其中該抗體包含人類γ-2重鏈恆定區，該人類γ-2重鏈恆定區包含選自由以下各者組成之群之胺基酸：對應於SEQ ID NO：44之位置72的Pro、對應於SEQ ID NO：44之位置75的Asn、對應於SEQ ID NO：44之位置76的Phe、對應於SEQ ID NO：44之位置161的Val及對應於SEQ ID NO：44之位置257的Ala，且該抗體或片段特異性地結合包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)胺基酸序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之突變I474V或E670G，其中該人類包含編碼該胺基酸序列之核苷酸序列且包含IGHG2*01人類重鏈恆定區基因節段，或該人類表現包含人類γ-2恆定區之抗體，該等人類γ-2恆定區包含此類Pro、Asn、Phe、Val及Ala。

一實例提供：一種用於在有需要之人類中降低膽固醇位準或維持先前降低的膽固醇位準之方法的抗體或抗體片段，其中該抗體包含人類γ-2重鏈恆定區，該人類γ-2重鏈恆定區包含對應於SEQ ID NO：44之位置72的Pro、對應於SEQ ID NO：44之位置75的Asn、對應於SEQ ID NO：44之位置76的Phe、對應於SEQ ID NO：44之位置161的Val及對應於SEQ ID NO：44之位置257的Ala，且該抗體或片段特異性地結合包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)胺基酸序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之突變I474V，其中該人類包含編碼該胺基酸序列之核苷酸序列且包含IGHG2*01人類重鏈恆定區基因節段。視情況，該抗體或片段包含IGHG2*01人類重鏈恆定區。

另一實例提供：一種用於在有需要之人類中降低膽固醇位準或維持先前降低的膽固醇位準之方法的抗體或抗體片段，其中該抗體包含人類γ-2重鏈恆定區，該人類γ-2重鏈恆定區包含對應於SEQ ID NO：44之位置72的Pro、對應於SEQ ID NO：44之位置75的Asn、對應於SEQ ID NO：44之位置76的Phe、對應於SEQ ID NO：44之位置161的Val及對應於SEQ ID NO：44之位置257的Ala，且該抗體或片段特異性地結合包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)胺基酸序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之突變E670G，其中該人類包含編碼該胺基酸序列之核苷酸序列且包含IGHG2*01人類重鏈恆定區基因節段。視情況，該抗體或片段包含IGHG2*01人類重鏈恆定區。

在一實例中，該抗體或抗體片段已確定特異性結合包含C-末端域的第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之突變I474或E670G，其中該抗體或片段包含人類γ-2重鏈恆定區，該人類γ-2重鏈恆定區包含對應於SEQ ID NO：44之位置72的Pro、對應於SEQ ID NO：44之位置75的Asn、對應於SEQ ID NO：44之位置76的Phe、對應於SEQ ID NO：44之位置161的Val及對應於SEQ ID NO：44之位置257的Ala，且其中該人類包含(i)IGHG2*01人類重鏈恆定區基因節段；及(ii)編碼該包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)之核苷酸序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G。

2.如段落1之抗體或抗體片段，其中該抗體包含人類γ-2重鏈恆定區，該人類γ-2重鏈恆定區包含對應於SEQ ID NO：44之位置72的Pro、對應於SEQ ID NO：44之位置75的Asn、對應於SEQ ID NO：44之位置76的Phe、對應於SEQ ID NO：44之位置161的Val及對應於SEQ ID NO：44之位置257的Ala。

3.如段落1或2之抗體或抗體片段，其中該抗體包含IGHG2*01人類重鏈恆定區。

4.如段落1至3中任一項之抗體或抗體片段，其中該人類已確定包含編碼以下之核苷酸序列：包含C-末端域之PCSK9，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或 E670G；及/或藉由SEQ ID NO：29或30之核苷酸序列編碼的第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)變異蛋白。

5.如段落1至4中任一項之抗體或抗體片段，該方法包含確定該人類包含編碼以下之核苷酸序列之步驟：包含C-末端域之PCSK9，該C-末端域包含該突變I474V或E670G；及/或包含該突變I474V或E670G的第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)變異蛋白，視情況，其中在向該人類投與該抗體之前進行該確定步驟。

8.如段落6或7之抗體或抗體片段，其中該分析包含核酸擴增及視情況存在之一或多種選自定序、次世代定序、核酸混雜及對偶基因特異性擴增之方法，及/或其中該分析係以多重形式進行。

9.如段落1至8中任一項之抗體或抗體片段，其中該抗體或抗體片段係用於向經進一步確定或已經進一步確定為實質上對他汀治療具有抗性的人類投與。

11.如段落9或10之抗體或抗體片段，其中該抗體或抗體片段係用於與該他汀治療分別或同時向人類投與。

12.如段落6至8中任一項之抗體或抗體片段，其中該生物樣品包含該人類之血清、血液、糞便、組織、細胞、尿液及/或唾液。

13.如段落1至12中任一項之抗體或抗體片段，其中該人類指示為對於編碼包含該突變I474V或E670G之PCSK9 C-末端域的核苷酸序列之異型接合，視情況，其中該人類進一步指示為包含核苷酸序列SEQ ID NO：28，或該人類指示為對於編碼包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G的PCSK9 C-末端域之核苷酸序列之同型接合。

其他示例性方法如以下段落1-18。

1.一種在有需要之人類中降低膽固醇位準或維持先前降低的膽固醇位準之方法，該方法包含向該人類投與特異性地結合包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)之抗體或抗體片段，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之突變I474或E670G，其中該抗體或片段包含人類γ-2重鏈恆定區，該人類γ-2重鏈恆定區包含選自由以下各者組成之群之胺基酸：對應於SEQ ID NO：44之位置72的Pro、對應於SEQ ID NO：44之位置75的Asn、對應於SEQ ID NO：44之位置76的Phe、對應於SEQ ID NO：44之位置161的Val及對應於SEQ ID NO：44之位置257的Ala，且其中該人類包含(i)IGHG2*01人類重鏈恆定區基因節段，或該人類表現包含人類γ-2重鏈恆定區之抗體，該等人類γ-2重鏈恆定區包含此類Pro、Asn、Phe、Val及Ala；及(ii)編碼該包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)的核苷酸序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G。

一實例提供：一種在有需要之人中降低膽固醇位準或維持先前降低的膽固醇位準之方法，該方法包含向該人類投與特異性地結合包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)的抗體或抗體片段，該C-末端域包含SEQ ID NO：1 中之突變I474，其中該抗體或片段包含人類γ-2重鏈恆定區，該人類γ-2重鏈恆定區包含對應於SEQ ID NO：44之位置72的Pro、對應於SEQ ID NO：44之位置75的Asn、對應於SEQ ID NO：44之位置76的Phe、對應於SEQ ID NO：44之位置161的Val及對應於SEQ ID NO：44之位置257的Ala，且其中該人類包含(i)IGHG2*01人類重鏈恆定區基因節段；及(ii)編碼該包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)之核苷酸序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V。視情況，該抗體或片段包含IGHG2*01人類重鏈恆定區。

另一實例提供：一種在有需要之人中降低膽固醇位準或維持先前降低的膽固醇位準之方法，該方法包含向該人類投與特異性地結合包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)的抗體或抗體片段，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之突變E670G，其中該抗體或片段包含人類γ-2重鏈恆定區，該人類γ-2重鏈恆定區包含對應於SEQ ID NO：44之位置72的Pro、對應於SEQ ID NO：44之位置75的Asn、對應於SEQ ID NO：44之位置76的Phe、對應於SEQ ID NO：44之位置161的Val及對應於SEQ ID NO：44之位置257的Ala，且其中該人類包含(i)IGHG2*01人類重鏈恆定區基因節段；及(ii)編碼該包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)之核苷酸序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變E670G。視情況，該抗體或片段包含IGHG2*01人類重鏈恆定區。

2.如段落1之方法，其在該投與之前包含選擇包含(ii)之該核苷酸序列之該人類。

3.如段落1或2之方法，其中該抗體包含人類γ-1重鏈恆定區，該人類γ-1重鏈恆定區包含對應於SEQ ID NO：44之位置72的Pro、對應於SEQ ID NO：44之位置75的Asn、對應於SEQ ID NO：44之位置76的Phe、對應於SEQ ID NO：44之位置161的Val及對應於SEQ ID NO：44之位置257的Ala。

4.如段落1、2或3之方法，其中該抗體包含IGHG2*01人類重鏈恆定區。

5.如段落1至4中任一項之方法，其中該人類已確定包含編碼以下之核苷酸序列：包含C-末端域之PCSK9，該C- 末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G；及/或藉由SEQ ID NO：29或30之核苷酸序列編碼的第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)變異蛋白。

7.如段落6之方法，其中該確定步驟包含針對編碼該包含C-末端域之PCSK9的核苷酸序列分析來自該人類之生物樣品，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G。

8.如段落7之方法，其中該分析包含使該生物樣品接觸a.至少一個包含具有至少10個連續核苷酸之序列的寡核苷酸探針，該序列可在該生物樣品中特異性雜交至且識別編碼包含C-末端域之PCSK9的核苷酸序列或特異性雜交至該序列之反義序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G，其中該核酸雜交至至少一個存在於該選定序列中而不存在於SEQ ID NO：28中的核苷酸或雜交至反義序列，從而當存在至少一個編碼包含C-末端域之PCSK9的核苷酸序列時形成複合物，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G；及/或 b.至少一個寡核苷酸探針，該寡核苷酸探針包含具有編碼該包含該C-末端域之PCSK9的核苷酸序列之具有至少10個連續核苷酸之序列或包含該等連續核苷酸之反義序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變突變I474V或E670G，其中該連續核苷酸序列包含至少一個存在於該選定序列中而不存在於SEQ ID NO：28中之核苷酸，從而當存在編碼該包含該C-末端域之PCSK9的核苷酸序列時形成複合物，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G；及偵測是否存在該複合物，其中偵測到該複合物之存在確定該人類包含有包含該C-末端域之該PCSK9，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G。

其他示例性配位體如以下段落1-17。

1.一種用於在有需要之人類中降低膽固醇位準或維持先前降低的膽固醇位準之方法的抗體或抗體片段，其中該抗體或片段包含人類κ輕鏈恆定區，該人類κ輕鏈恆定區包含對應於SEQ ID NO：50之位置84的Val或對應於SEQ ID NO：50之位置87的Cys，且該抗體或片段特異性地結合包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)胺基酸序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之突變I474V或E670G，其中該人類包含編碼該胺基酸序列之核苷酸序列且包含IGKC*01人類輕鏈恆定區基因節段，或該人類表現包含人類κ輕鏈恆定區之抗體，該等人類κ輕鏈恆定區包含此類Val及Cys。

一實例提供：一種用於在有需要之人類中降低膽固醇位準或維持先前降低的膽固醇位準之方法的抗體或抗體片段，其中該抗體或片段包含人類κ輕鏈恆定區，該人類κ輕鏈恆定區包含對應於SEQ ID NO：50之位置84的Val及對應於SEQ ID NO：50之位置87的Cys，且該抗體或片段特異性地結合包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)胺基酸序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之突變I474V，其中該人類包含編碼該胺基酸序列之核苷酸序列且包含IGKC*01人類輕鏈恆定區基因節段。視情況，該抗體或片段包含IGKC*01人類輕鏈恆定區。

另一實例提供：一種用於在有需要之人類中降低膽固醇位準或維持先前降低的膽固醇位準之方法的抗體或抗體片段，其中該抗體或片段包含人類κ輕鏈恆定區，該人類κ輕鏈恆定區包含對應於SEQ ID NO：50之位置84的Val及對應於SEQ ID NO：50之位置87的Cys，且該抗體或片段特異性地結合包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)胺基酸序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之突變E670G，其中該人類包含編碼該胺基酸序列之核苷酸序列且包含IGKC*01人類輕鏈恆定區基因節段。視情況，該抗體或片段包含IGKC*01人類輕鏈恆定區。

在一實例中，該抗體或抗體片段已確定特異性結合包含C-末端域的第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之突變I474或E670G，其中該抗體或片段包含人類κ輕鏈恆定區，該人類κ輕鏈恆定區包含對應於SEQ ID NO：50之位置84的Val及對應於SEQ ID NO：50之位置87的Cys，且其中該人類包含(i)IGKC*01人類重鏈恆定區基因節段；及(ii)編碼該包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)之核苷酸序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G。

2.如段落1之抗體或抗體片段，其中該抗體包含人類κ輕鏈恆定區，該人類κ輕鏈恆定區包含對應於SEQ ID NO：50之位置84的Val或對應於SEQ ID NO：50之位置87的Cys。

3.如段落1或2之抗體或抗體片段，其中該抗體包含IGKC*01人類κ鏈恆定區。

a.至少一個包含具有至少10個連續核苷酸之序列的寡核苷酸探針，該序列可在該生物樣品中特異性雜交至且識別編碼包含C-末端域之PCSK9的核苷酸序列或特異性雜交至該序列之反義序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G，其中該核酸雜交至至少一個存在於該選定序列中而不存在於SEQ ID NO：28中的核苷酸或雜交至反義序列，從而當存在至少一個編碼包含C-末端域之 PCSK9的核苷酸序列時形成複合物，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G；及/或b.至少一個寡核苷酸探針，該寡核苷酸探針包含具有編碼該包含該C-末端域之PCSK9的核苷酸序列之具有至少10個連續核苷酸之序列或包含該等連續核苷酸之反義序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變突變I474V或E670G，其中該連續核苷酸序列包含至少一個存在於該選定序列中而不存在於SEQ ID NO：28中之核苷酸，從而當存在編碼該包含該C-末端域之PCSK9的核苷酸序列時形成複合物，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G；及偵測是否存在該複合物，其中偵測到該複合物之存在確定該人類包含有包含該C-末端域之該PCSK9，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G。

其他示例性方法如以下段落1-18。

1.一種在有需要之人中降低膽固醇位準或維持先前降低的膽固醇位準之方法，該方法包含向該人類投與特異性地結合包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)的抗體或抗體片段，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之突變I474或E670G，其中該抗體或片段包含人類κ輕鏈恆定區，該人類κ輕鏈恆定區包含對應於SEQ ID NO：50之位置84的Val或對應於SEQ ID NO：50之位置87的Cys，且其中該人類包含(i)IGKC*01人類輕鏈恆定區基因節段，或該人類表現包含人類κ輕鏈恆定區之抗體，該等人類κ輕鏈恆定區包含此類Val及Cys；及(ii)編碼該包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)之核苷酸序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G。

一實例提供：一種在有需要之人中降低膽固醇位準或維持先前降低的膽固醇位準之方法，該方法包含向該人類投與特異性地結合包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)的抗體或抗體片段，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之突變I474，其中該抗體或片段包含人類κ輕鏈恆定區，該人類κ輕鏈恆定區包含對應於SEQ ID NO：50之位置84的Val及對應於SEQ ID NO：50之位置87的Cys，且其中該人類包含(i)IGKC*01人類輕鏈恆定區基因節段；及(ii)編碼該包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)之核苷酸序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V。視情況，該抗體或片段包含IGKC*01人類輕鏈恆定區。

另一實例提供：一種在有需要之人中降低膽固醇位準或維持先前降低的膽固醇位準之方法，該方法包含向該人類投與特異性地結合包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)的抗體或抗體片段，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之突變E670G，其中該抗體或片段包含人類κ輕鏈恆定區，該人類κ輕鏈恆定區包含對應於SEQ ID NO：50之位置84的Val及對應於SEQ ID NO：50之位置87的Cys，且其中該人類包含(i)IGKC*01人類輕鏈恆定區基因節段；及(ii)編碼該包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)之核苷酸序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變E670G。視情況，該抗體或片段包含IGKC*01人類輕鏈恆定區。

在一實例中，該抗體或抗體片段已確定特異性結合包含C-末端域的第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之突變I474或E670G，其中該抗體或片段包含人類κ輕鏈恆定區，該人類 κ輕鏈恆定區包含對應於SEQ ID NO：50之位置84的Val及對應於SEQ ID NO：50之位置87的Cys，且其中該人類包含(i)IGKC*01人類重鏈恆定區基因節段；及(ii)編碼該包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)之核苷酸序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G。

3.如段落1或2之方法，其中該抗體包含人類κ輕鏈恆定區，該人類κ輕鏈恆定區包含對應於SEQ ID NO：50之位置84的Val或對應於SEQ ID NO：50之位置87的Cys。

4.如段落1、2或3之方法，其中該抗體包含IGKC*01人類κ鏈恆定區。

8.如段落7之方法，其中該分析包含使該生物樣品接觸

a.至少一個包含具有至少10個連續核苷酸之序列的寡核苷酸探針，該序列可在該生物樣品中特異性雜交至且識別編碼包含C-末端域之PCSK9的核苷酸序列或特異性雜交至該序列之反義，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G，其中該核酸雜交至至少一個存在於該選定序列而不存在於SEQ ID NO：28中的核苷酸或雜交至反義序列，從而當存在至少一個編碼包含C-末端域之PCSK9的核苷酸序列時形成複合物，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G；及/或b.至少一個寡核苷酸探針，該寡核苷酸探針包含具有編碼該包含該C-末端域之PCSK9的核苷酸序列之具有至少10個連續核苷酸之序列或包含該等連續核苷酸之反義序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變突變I474V或E670G，其中該連續核苷酸序列包含至少一個存在於該選定序列中而不存在於SEQ ID NO：28中之核苷酸，從而當存在編碼該包含該C-末端域之PCSK9的核苷酸序列時形成複合物，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G；及偵測是否存在該複合物，其中偵測到該複合物之存在確定該人類包含有包含該C-末端域之該PCSK9，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G。

其他示例性配位體如以下段落1-15。

1.一種用於在有需要之人類中降低膽固醇位準或維持先前降低的膽固醇位準之方法的抗體或抗體片段，其中該抗體或片段包含人類IGLC2*01 λ輕鏈恆定區，且該抗體或片段特異性地結合包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)胺基酸序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之突變I474V或E670G，其中該人類包含編碼該胺基酸序列之核苷酸序列且包含人類IGLC2*01 λ輕鏈恆定區基因節段，或該人類表現包含人類IGLC2*01 λ輕鏈恆定區之抗體。

一實例提供：一種用於在有需要之人類中降低膽固醇位準或維持先前降低的膽固醇位準之方法的抗體或抗體片段，其中該抗體或片段包含人類IGLC2*01 λ輕鏈恆定區，且該抗體或片段特異性地結合包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)胺基酸序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之突變I474V，其中該人類包含編碼該胺基酸序列之核苷酸序列且包含人類IGLC2*01 λ輕鏈恆定區基因節段。視情況，抗體或片段況包含人類IGLC2*01 λ輕鏈恆定區。

另一實例提供：一種用於在有需要之人類中降低膽固醇位準或維持先前降低的膽固醇位準之方法的抗體或抗體片段，其中該抗體或片段包含人類IGLC2*01 λ輕鏈恆定區，且該抗體或片段特異性地結合包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)胺基酸序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之突變E670G，其中該人類包含編碼該胺基酸序列之核苷酸序列且包含人類IGLC2*01 λ輕鏈恆定區基因節段。視情況，抗體或片段包含人類IGLC2*01 λ輕鏈恆定區。

在一實例中，該抗體或抗體片段已確定特異性結合包含C-末端域的第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之突變I474或E670G，其中該抗體或片段包含人類IGLC2*01 λ輕鏈恆定區，且其中該人類包含(i)IGKC2*01人類重鏈恆定區基因節段；及(ii)編碼該包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)之核苷酸序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G。

2.如段落1之抗體或抗體片段，其中該人類已確定包含編碼以下之核苷酸序列：包含C-末端域之PCSK9，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G；及/或藉由SEQ ID NO：29或30之核苷酸序列編碼的第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)變異蛋白。

3.如段落1或2之抗體或抗體片段，該方法包含確定該人類包含編碼以下之核苷酸序列之步驟：包含C-末端域之PCSK9，該C-末端域包含該突變I474V或E670G；及/或包含該突變I474V或E670G的第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)變異蛋白，視情況，其中在向該人類投與該抗體之前進行該確定步驟。

4.如段落3之抗體或抗體片段，其中該確定步驟包含針對編碼該包含C-末端域之PCSK9的核苷酸序列分析來自該人類之生物樣品，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G。

5.如段落4之抗體或抗體片段，其中該分析包含使該生物樣品接觸

6.如段落4或5之抗體或抗體片段，其中該分析包含核酸擴增及視情況存在之一或多種選自定序、次世代定序、核酸混雜及對偶基因特異性擴增之方法，及/或其中該分析係以多重形式進行。

7.如段落1至6中任一項之抗體或抗體片段，其中該抗體或抗體片段係用於向經進一步確定或已經進一步確定為實質上對他汀治療具有抗性的人類投與。

8.如段落1至7中任一項之抗體或抗體片段，其中該抗體或抗體片段係用於向正接受或已接受他汀治療或對他汀治療之反應減小之人類投與。

9.如段落7或8之抗體或抗體片段，其中該抗體或抗體片段係用於與該他汀治療分別或同時向人類投與。

10.如段落4至8中任一項之抗體或抗體片段，其中該生物樣品包含該人類之血清、血液、糞便、組織、細胞、尿液及/或唾液。

11.如段落1至10中任一項之抗體或抗體片段，其中該人類指示為對於編碼包含該突變I474V或E670G之PCSK9 C-末端域的核苷酸序列之異型接合，視情況，其中該人類進一步指示為包含核苷酸序列SEQ ID NO：28，或該人類指示為對於編碼包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G的PCSK9 C-末端域之核苷酸序列之同型接合。

12.如段落1至11中任一項之抗體或抗體片段，其中該人類已診斷為患有至少一種選自脂質失調、高脂蛋白血症、高脂質血症、血脂異常、高膽固醇血症、心臟病發作、中風、冠心病、動脈粥樣硬化、周邊血管疾病、跛行及高血壓之病狀。

13.如段落1至12中任一項之抗體或抗體片段，其中該抗體或抗體片段治療該人類中至少一種選自脂質失調、高脂蛋白血症、高脂質血症、血脂異常、高膽固醇血症、低脂質血症、低膽固醇血症、心臟病發作、中風、冠心病、動脈粥樣硬化、周邊血管疾病、跛行及高血壓之病狀或減小發生該病狀的風險。

14.如段落1至13中任一項之抗體或抗體片段，其中該核苷酸序列為SEQ ID NO：29或30。

15.如段落1至14中任一項之抗體或抗體片段，其中該抗體或抗體片段係用於藉由靜脈內投與或皮下投與及/或包含在可注射製劑中。

其他示例性方法如以下段落1-16。

1.一種在有需要之人類中降低膽固醇位準或維持先前降低的膽固醇位準之方法，該方法包含向該人類投與特異性地結合包含C-末端域的第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)之抗體或抗體片段，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之突變I474或E670G，其中該抗體或片段包含人類IGLC2*01 λ輕鏈恆定區，且其中該人類包含(i)IGLC2*01人類輕鏈恆定區基因節段，或該人類表現包含人類IGLC2*01 λ輕鏈恆定區之抗體；及(ii)編碼該包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)的核苷酸序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G。

一實例提供：一種在有需要之人類中降低膽固醇位準或維持先前降低的膽固醇位準之方法，該方法包含向該人類投與特異性地結合包含C-末端域的第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)之抗體或抗體片段，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之突變I474，其中該抗體或片段包含人類IGLC2*01 λ輕鏈恆定區，且其中該人類包含(i)IGLC2*01人類輕鏈恆定區基因節段；及(ii)編碼該包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)的核苷酸序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V。視情況，該抗體或片段包含IGLC2*01人類輕鏈恆定區。

另一實例提供：一種在有需要之人類中降低膽固醇位準或維持先前降低的膽固醇位準之方法，該方法包含向該人類投與特異性地結合包含C-末端域的第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)之抗體或抗體片段，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之突變E670G，其中該抗體或片段包含人類IGLC2*01 λ輕鏈恆定區，且其中該人類包含(i)IGLC2*01人類輕鏈恆定區基因節段；及(ii)編碼該包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)的核苷酸序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變E670G。視情況，該抗體或片段包含IGLC2*01人類輕鏈恆定區。

3.如段落1或2之方法，其中該人類已確定包含編碼以下之核苷酸序列：包含C-末端域之PCSK9，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G；及/或藉由SEQ ID NO：29或30之核苷酸序列編碼的第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)變異蛋白。

4.如段落1至3中任一項之方法，其包含確定該人類包含編碼以下之核苷酸序列之步驟：包含C-末端域之PCSK9，該C-末端域包含該突變I474V或E670G；及/或包含該突變I474V或E670G之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)變異蛋白，視情況，其中在向該人類投與該抗體之前進行確定步驟。

5.如段落4之方法，其中該確定步驟包含針對編碼該包含C-末端域之PCSK9的核苷酸序列分析來自該人類之生物樣品，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G。

6.如段落5之方法，其中該分析包含使該生物樣品接觸

7.如段落5或6之方法，其中該分析包含核酸擴增及視情況存在之一或多種選自定序、次世代定序、核酸雜交及對偶基因特異性擴增之方法，及/或其中該分析以多重形式進行。

8.如段落1至7中任一項之方法，其中該人類經進一步確定或已經進一步確定為實質上對他汀治療具有抗性。

9.如段落1至8中任一項之方法，其中該人類正接受或已接受他汀治療或對他汀治療之反應減小。

10.如段落8或9之方法，其中該抗體或抗體片段係與該他汀治療分開或同時向該人類投與。

11.如段落5至7中任一項之方法，其中該生物樣品包含該人類之血清、血液、糞便、組織、細胞、尿液及/或唾液。

12.如段落1至11中任一項之方法，其中該人類指示為對於編碼包含該突變I474V或E670G之PCSK9 C-末端域的核苷酸序列之異型接合，視情況，其中該人類進一步指示為對於包含核苷酸序列SEQ ID NO：28，或該人類指示為編碼包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G的PCSK9 C-末端域之核苷酸序列之同型接合。

13.如段落1至12中任一項之方法，其中該人類已診斷為患有至少一種選自脂質失調、高脂蛋白血症、高脂質血症、血脂異常、高膽固醇血症、心臟病發作、中風、冠心病、動脈粥樣硬化、周邊血管疾病、跛行及高血壓之病狀。

14.如段落1至13中任一項之方法，其中該抗體或抗體片段治療該人類中至少一種選自脂質失調、高脂蛋白血症、高脂質血症、血脂異常、高膽固醇血症、低脂質血症、低膽固醇血症、心臟病發作、中風、冠心病、動脈粥樣硬化、周邊血管疾病、跛行及高血壓之病狀或減小發生該病狀的風險。

15.如段落1至14中任一項之方法，其中該核苷酸序列為SEQ ID NO：29或30。

16.如段落1至15中任一項之方法，其中該抗體或抗體片段係藉由靜脈內投與或皮下投與及/或包含在可注射製劑中。

其他示例性配位體如以下段落1-15。

1.一種用於在有需要之人類中降低膽固醇位準或維持先前降低的膽固醇位準之方法的抗體或抗體片段，其中該抗體或片段包含衍生自人類VH基因節段、人類D基因節段及人類JH基因節段之重組的人類可變域，其中該VH基因節段係如條項80至90中任一項所定義，且該抗體或片段特異性地結合包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)胺基酸序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之突變I474V或E670G，其中該人類包含編碼該胺基酸序列之核苷酸序列且包含該VH基因節段或表現包含衍生自該人類VH基因節段、人類D基因節段及人類JH基因節段之重組的VH域之抗體。

其他示例性方法如以下段落1-16。

1.一種在有需要之人類中降低膽固醇位準或維持先前降低的膽固醇位準之方法，該方法包含向該人類投與特異性地結合包含C-末端域的第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)之抗體或抗體片段，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之突變I474或E670G，其中該抗體或片段包含衍生自人類VH基因節段、人類D基因節段及人類JH基因節段之重組的人類可變域，其中該VH基因節段係如條項80至90中任一項所定義且其中該人類包含(i)該VH基因節段或表現包含衍生自人類VH基因節段、人類D基因節段及人類JH基因節段之重組的VH域之抗體；及(ii)編碼該包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)的核苷酸序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G。

6.如段落5之方法，其中該分析包含使該生物樣品接觸

方案

A：本發明另外提供以下方案、配位體及套組。

1.一種藉由靶向罕見變異人類PCSK9治療人類中的人類PCSK9介導之疾病或病狀之方法，該方法包含向該人類投與已確定特異性結合至該PCSK9變異體之配位體(例如抗體或片段)；其中該人類表現該PCSK9變異體或該人類之基因組包含編碼該PCSK9變異體之核苷酸序列；其中該人類之該疾病或病狀得以治療。

該變異體PCSK9可例如為如本文所述之任何罕見變異體。

舉例而言，提供：

1a.一種藉由靶向包含C-末端域胺基酸多形現象(相比於SEQ ID NO：1)之PCSK9來治療人類中的PCSK9介導之疾病或病狀之方法，該方法包含向該人類投與已確定特異性結合至包含C-末端域的PCSK9之配位體(例如抗體或片段)，該C-末端域包含I474V或670G(根據SEQ ID NO：1編號)；其中該人類表現該PCSK9或該人類基因組包含編碼該PCSK9之核苷酸序列；其中該人類之該疾病或病狀得以治療。

在一實施例中，該特異性結合之確定參考結合分析資料，例如如使用SPR或ELISA來確定。確定可例如參考已印刷之公開案中之資訊，例如利用本發明或另一專利申請案中或期刊論文中存在之資料信息來進行。一旦具備了該等信息(例如在不存在另一結合測試之情況下)，技術人員即能夠藉由本發明之指示治療基因型或表現型符合該配位體之結合特異性之相關人類。

該抗體或片段可根據本文中之任何組態、實例、實施例、態樣、條項或段落。在一實施例中，該方法包含在該投與之前選擇包含編碼該PCSK9之該核苷酸序列之人類，其中該人類為條項1(例如1a)中之該人類。

2.如條項1之方法，包含在該投與之前例如使用SPR或ELISA確定該配位體特異性地結合至該PCSK9之步驟。

3.如條項1或2之方法，其中該特異性結合至該PCSK9為以1nM或1nM以下，例如100、10或1pM或1pM以下之解離常數(Kd)結合。

4.如條項1至3中任一項(例如條項1a)之方法，其中該病狀為高LDL-膽固醇或由高LDL-膽固醇所引起。

5.如條項4(例如當依賴於條項1a時)之方法，其中該病狀係選自脂質失調、高脂蛋白血症、高脂質血症、血脂異常、高膽固醇血症、心臟病發作、中風、冠心病、動脈粥樣硬化、周邊血管疾病、跛行及高血壓。

6.如條項1至5中任一項(例如當依賴於條項1a時)之方法，其中該人類已確定包含編碼以下之核苷酸序列：包含C-末端域之PCSK9，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G；及/或藉由SEQ ID NO：29或30之核苷酸序列編碼的第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)變異蛋白。

7.如條項1至6中任一項(例如當依賴於條項1a時)之方法，其包含確定該人類包含編碼以下之核苷酸序列之步驟：包含C-末端域之PCSK9，該C-末端域包含該突變I474V或E670G；及/或包含該突變I474V或E670G的第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)變異蛋白，視情況，其中在向該人類投與該抗體之前進行該確定步驟。

8.如條項7之方法，其中該確定步驟包含針對編碼該包含C-末端域之PCSK9的核苷酸序列分析來自該人類之生物樣品，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G。

9.如條項8之方法，其中該分析包含使該生物樣品接觸

10.如條項8或9之方法，其中該分析包含核酸擴增及視情況存在之一或多種選自定序、次世代定序、核酸雜交及對偶基因特異性擴增之方法，及/或其中該分析以多重形式進行。

11.如條項1至10中任一項之方法，其中該人類經進一步確定或已經進一步確定為實質上對他汀治療具有抗性。

12.如條項1至11中任一項之方法，其中該人類正接受或已接受他汀治療或對他汀治療之反應減小。

13.如條項11或12之方法，其中該抗體或抗體片段係與該他汀治療分開或同時向該人類投與。

14.如條項8至10中任一項之方法，其中該生物樣品包含該人類之血清、血液、糞便、組織、細胞、尿液及/或唾液。

15.如條項1至14中任一項之方法，其中該人類指示為對於編碼包含該突變I474V或E670G之PCSK9 C-末端域的核苷酸序列之異型接合，視情況，其中該人類進一步指示為對於包含核苷酸序列SEQ ID NO：28，或該人類指示為編碼包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G的PCSK9 C-末端域之核苷酸序列之同型接合。

16.如條項1至15中任一項之方法，其中該人類已診斷為患有至少一種選自脂質失調、高脂蛋白血症、高脂質血症、血脂異常、高膽固醇血症、心臟病發作、中風、冠心病、動脈粥樣硬化、周邊血管疾病、跛行及高血壓之病狀。

17.如條項1至16中任一項之方法，其中該抗體或抗體片段治療該人類中至少一種選自脂質失調、高脂蛋白血症、高脂質血症、血脂異常、高膽固醇血症、低脂質血症、低膽固醇血症、心臟病發作、中風、冠心病、動脈粥樣硬化、周邊血管疾病、跛行及高血壓之病狀或減小發生該病狀的風險。

18.如條項1至17中任一項之方法，其中該核苷酸序列為SEQ ID NO：29或30。

19.如條項1至18中任一項之方法，其中該抗體或抗體片段係藉由靜脈內投與或皮下投與及/或包含在可注射製劑j中。

20.一種用於如條項1至19中任一項之方法的配位體(例如抗體或片段)，其中該配位體特異性地結合該PCSK9。

21.一種套組，其包含如條項20之配位體及實施如條項1至19中任一項之方法的說明書。

B：本發明另外提供以下方案、配位體及套組。

1.一種在有需要之人類中降低膽固醇位準或維持先前降低的膽固醇位準之方法，該方法包含：a.藉由向該人類投與抗人類PCSK9配位體(例如抗體或片段)進行該人類之初始治療歷時初始治療時間段，其中(i)配位體已確定特異性地結合至包含C-末端域的PCSK9，該C-末端域包含I474V或670G(根據SEQ ID NO：1編號)；(ii)該人類表現該PCSK9或該人類基因組包含編碼該PCSK9之核苷酸序列；及(iii)該人類已接受或正接受斯達汀治療以降低或維持膽固醇位準；其中初始治療包含向該人類投與單劑量或多劑量之配位體；b.確定在該初始治療時間段之後(i)終止斯達汀治療；(ii)使人類停止斯達汀治療；或(iii)減少斯達汀治療；及 c.在該時間週期已逾期之後持續向該患者投與該配位體，從而在該人類中降低膽固醇位準或維持先前降低的膽固醇位準。

在一實施例中，該特異性結合之確定參考結合分析資料，例如如使用SPR或ELISA來確定。確定可例如參考印刷之公開案中之資訊，例如利用本發明或另一專利申請案中或期刊論文中存在之資料信息來進行。一旦具備了此類信息(例如在不存在另一結合測試之情況下)，技術人員即能夠藉由本發明之指示治療基因型或表現型符合配位體之結合特異性之相關人類。

該抗體或片段可根據本文中之任何組態、實例、實施例、態樣、條項或段落。

投與醫藥有效量之該配位體。

在一實施例中，該方法包含在該投與之前選擇包含編碼該PCSK9之該核苷酸序列之人類，其中該人類為條款1中之該人類。

在一實例中，初始治療時間段為7天、14天、21天、28天、1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月或1年。

2.如條項1之方法，其中該人類已罹患或罹患斯達汀相關之記憶缺失或斯達汀相關之神經退化病狀，或具有發生糖尿病(例如斯達汀相關糖尿病)之風險或發生糖尿病之風險增加。

3.如條項1或2之方法，其包含在該初始治療之前確定人類已罹患或罹患斯達汀相關之記憶缺失或斯達汀相關之神經退化病狀或具有發生糖尿病(例如斯達汀相關糖尿病)之風險或發生糖尿病之風險增加之步驟。

4.如條項2或3之方法，其包含在步驟(b)之後(例如在步驟(c)期間)確定該記憶缺失或該神經退化病狀改良。

5.如條項1至4中任一項之方法，其中該人類之年齡超過40歲(例如50歲或50歲以上、55歲或55歲以上、60歲或60歲以上、65歲或65歲以上或70歲或70歲以上)。

6.如條項1至5中任一項之方法，其中步驟(c)包含確定以在該初始治療時間段之後增加該待投與之配位體之劑量及向該人類中投與該增加之劑量。

7.如條項1至6中任一項之方法，其中步驟(b)包含確定人類對於藉由斯達汀治療不耐受或耐受。

8.如條項1至7中任一項之方法，其中該初始治療包含除該配位體之外向該人類投與斯達汀、非諾貝特(例如Tricor^TM或Lofibra^TM)或依澤替米貝。

9.如條項1至8中任一項之方法，其中步驟(b)包含在步驟(c)期間終止或減少斯達汀、非諾貝特(例如Tricor^TM或Lofibra^TM)或依澤替米貝治療。

10.如條項1至9中任一項之方法，其包含在步驟(c)期間使該配位體劑量增加(亦即與初始治療劑量相比增加)。

11.如條項1至10中任一項之方法，其中在該初始治療之前該人類已接受高劑量斯達汀治療，且其中步驟(c)包含除該配位體之外投與較低(例如中或低)劑量斯達汀治療。

技術人員熟悉高、中及低劑量治療之含義(及如何根據各患者，例如患者之身體質量確定)。舉例而言，斯達汀係選自羅素他汀、阿托伐他汀及辛伐他汀。

舉例而言，每日斯達汀劑量如下：低：10至20mg(例如10mg)；中：>20及<60mg(例如40mg)；高：60-100mg(例如80mg)。

12.如條項1至10中任一項之方法，其中在該初始治療之前該人類已接受中等較劑量斯達汀治療，且其中步驟(c)包含除該配位體之外投與較低(例如中)劑量斯達汀治療或無斯達汀。

13.如條項1至10中任一項之方法，其中在該初始治療之前該人類已接受低劑量斯達汀治療，且其中步驟(c)包含除該配位體之外未投與斯達汀。

14.如條項1至13中任一項之方法，其包含在該初始治療之前例如使用SPR或ELISA確定該配位體特異性地結合至該PCSK9之步驟。

15.如條項1或14之方法，其中特異性結合至該PCSK9為以1nM或1nM以下，例如100、10或1pM或1pM以下之解離常數(Kd)結合。

16.如條項1至15中任一項之方法，其中該人類具有發生選自以下之病狀之風險或罹患選自以下之病狀：脂質失調、高脂蛋白血症、高脂質血症、血脂異常、高膽固醇血症、心臟病發作、中風、冠心病、動脈粥樣硬化、周邊血管疾病、跛行及高血壓。

17.如條項16之方法，其中步驟(c)在該人類中治療該病狀或降低發生該病狀之風險。

18.如條項1至17中任一項之方法，其中該人類已確定包含編碼以下之核苷酸序列：包含C-末端域之PCSK9，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G；及/或藉由SEQ ID NO：29或30之核苷酸序列編碼的第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)變異蛋白。

19.如條項1至18中任一項之方法，其包含確定該人類包含編碼以下之核苷酸序列之步驟：包含C-末端域之PCSK9，該C-末端域包含該突變I474V或E670G；及/或包含該突變I474V或E670G之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)變異蛋白，視情況，其中在向該人類投與該抗體之前進行確定步驟。

20.如條項19之方法，其中該確定步驟包含針對編碼該包含C-末端域之PCSK9的核苷酸序列分析來自該人類之生物樣品，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G。

21.如條項20之方法，其中該分析包含使該生物樣品接觸

22.如條項20或21之方法，其中該分析包含核酸擴增及視情況存在之一或多種選自定序、次世代定序、核酸雜交及對偶基因特異性擴增之方法，及/或其中該分析以多重形式進行。

23.如條項1至22中任一項之方法，其中該人類經進一步確定或已經進一步確定為實質上對他汀治療具有抗性。

24.如條項20至22中任一項之方法，其中該生物樣品包含該人類之血清、血液、糞便、組織、細胞、尿液及/或唾液。

25.如條項1至24中任一項之方法，其中該人類指示為對於編碼包含該突變I474V或E670G之PCSK9 C-末端域的核苷酸序列之異型接合，視情況，其中該人類進一步指示為對於包含核苷酸序列SEQ ID NO：28，或該人類指示為編碼包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G的PCSK9 C-末端域之核苷酸序列之同型接合。

26.如條項1至25中任一項之方法，其中該人類已診斷為患有至少一種選自脂質失調、高脂蛋白血症、高脂質血症、血脂異常、高膽固醇血症、心臟病發作、中風、冠心病、動脈粥樣硬化、周邊血管疾病、跛行及高血壓之病狀。

27.如條項1至26中任一項之方法，其中該核苷酸序列為SEQ ID NO：29或30。

28.如條項1至27中任一項之方法，其中該配位體(例如抗體或抗體片段)係藉由靜脈內投與或皮下投與及/或包含在可注射製劑中。

29.一種用於如條項1至28中任一項之方法的配位體(例如抗體或片段)，其中該配位體特異性地結合該PCSK9。

30.一種套組，其包含如條項29之配位體及實施如條項1至28中任一項之方法的說明書。

在本發明之任何態樣之一實例中，向該人類中以75至150mg之劑量每週兩次投與(例如75至150mg，經兩週時間段投與一次或兩次)該配位體(例如抗體或片段，例如阿利若單抗、玻可昔單抗或依伏洛單抗，或包含316P或31H4 之可變結構域之抗體或片段)。在一實例中，配位體用於該向人類投與。

實例 實例1：罕見PCSK9變異體

本發明提供抗PCSK9配位體；及如本文所描述之PCSK9結合或靶向配位體。配位體具有各種效用。舉例而言，一些配位體適用於特異性結合分析、用於將人類基因分型或表型分型、PCSK9之親和力純化，尤其人類PCSK9或其配位體及在篩檢分析中以識別PCSK9活性之其他拮抗劑。本發明之一些配位體適用於抑制PCSK9與LDLR之結合或抑制PCSK9介導活性。

已基於靶向及中和所謂的「野生型」人類PCSK9(其為通常存在之形式)產生抗PCSK9配位體(例如抗體及反義RNA)(參看例如US20120093818A1及US20110065902A1)。儘管此類療法適用於攜帶此形式的人類PCSK9之人類患者，但本發明者認為其適用於研究靶向人類群體中PCSK9之罕見得多但又天然存在之形式的可能性。以此方式，本發明者能夠洞察可充當有用標靶(以蛋白或核酸位準)之較罕見人類PCSK9形式之天然存在及分佈，該等有用標靶用於切合由PCSK9活性介導或與PCSK9活性相關聯之疾病及病狀的人類治療、預防及診斷。此尤其提供缺乏常見PCSK9基因或蛋白(亦即如US20120093818A1及US20110065902A1中用以產生抗體的形式a或a')之人類的定製療法、預防及診斷。

熟習此項技術者將知曉轉譯成胺基酸變異體之SNP或其他變化可導致待針對之人類標靶的活性及/或構形之變異。此舉已產生對個人化藥品之極大興趣，其中使用蛋白與核苷酸變異之基因分型及知識以更有效地定製患者之藥品及診斷。因此，本發明提供定製藥劑且測試針對較罕見PCSK9多態性變異體形式之特異性。在許多實例中由本發明者所測定，此類形式或「對偶基因」(以核苷酸位準)包含與對應常見形式核苷酸及胺基酸序列在核苷酸及胺基酸位準方面的多個變化，亦即存在多個核苷酸位準方面之非同義變化，該等變化轉譯成人類之蛋白標靶中的多個對應變化。

此外，發明者意外地意識到一些較罕見的天然形式儘管以相比常見形式低得多的頻率存在於人類中，仍然呈現在多個及種族不同的人類群體中且通常每個呈現的種族群體具有許多人類實例。由此，本發明者意識到靶向此類較罕見形式將在許多人類種族群體中提供有效治療、預防或診斷，從而擴展本發明之效用。

由此認識，發明者意識到本發明在引導抗PCSK9配位體之選擇以便投與人類患者用於治療及/或預防PCSK9介導或相關疾病及病狀方面存在顯著工業及醫學應用。以此方式，患者接受如由患者之遺傳或表型組成所決定的按其需要定製之藥物及配位體。與此同時，本發明提供患者之基因分型及/或表型分型與此類治療結合，從而使得藥物與患者適當匹配。此舉提高醫療功效之幾率、降低使用與患者不匹配之藥物或配位體的較差治療之可能性(例如功效不佳及/或副作用)且避免醫藥處方不當及浪費。

就此想法，在此非限制性實例中本發明者決定基於以下準則測定一組人類PCSK9變異體，此等準則為本發明者意識到將提供有用醫療藥物及診斷以滿足人類群體之定製需求的準則。本發明者選擇具有至少以下4個準則之3者的變異體：˙累積人類對偶基因頻率在1%至10%範圍內之PCSK9變異體；˙總人類基因型頻率在1%至約15%範圍內之PCSK9變異體；˙發現於許多不同人類種族群體(使用千人基因組計劃之標準分類，其為此項技術中接受之標準；參看下表4)中之PCSK9變異體；及˙發現於分佈於此類許多不同種族群體中之許多個體中的PCSK9變異體。

基於此等準則，本發明者識別下表1中列舉的變異體(排除形式a)。

變異對偶基因核苷酸序列

由此，(i)對偶基因f之核苷酸序列與SEQ ID NO：28一致，其例外之處在於對偶基因f之核苷酸序列在SEQ ID NO：28中標註「I474V」之位置處包含GTC密碼子而非ATC密碼子；(ii)對偶基因c之核苷酸序列與SEQ ID NO：28一致，其例外之處在於對偶基因c之核苷酸序列在SEQ ID NO：28中標註「E670G」之位置處包含GGG密碼子而非GAG密碼子；(iii)對偶基因r之核苷酸序列與SEQ ID NO：28一致，其例外之處在於對偶基因r之核苷酸序列在SEQ ID NO：28中標註「I474V」之位置處包含GTC密碼子而非ATC密碼子；及在SEQ ID NO：28中標註「E670G」之位置處包含GGG密碼子而非GAG密碼子；(iv)對偶基因p之核苷酸序列與SEQ ID NO：28一致，其例外之處在於對偶基因p之核苷酸序列在SEQ ID NO：28中標註「A53V」之位置處包含GTC密碼子而非GCC密碼子；及在SEQ ID NO：28中標註「I474V」之位置處包含GTC密碼子而非ATC密碼子；(v)對偶基因m之核苷酸序列與SEQ ID NO：28一致，其例外之處在於對偶基因m之核苷酸序列在SEQ ID NO：28中標註「A443T」之位置處包含ACC密碼子而非GCC密碼子；(vi)對偶基因e之核苷酸序列與SEQ ID NO：28一致，其例外之處在於對偶基因e之核苷酸序列在SEQ ID NO：28中標註「N425S」之位置處包含AGT密碼子而非AAT密碼子；及在SEQ ID NO：28中標註「I474V」之位置處包含GTC密碼子而非ATC密碼子；(vii)對偶基因h之核苷酸序列與SEQ ID NO：28一致，其例外之處在於對偶基因h之核苷酸序列在SEQ ID NO：28中標註「A443T」之位置處包含ACC密碼子而非GCC密碼子；及在SEQ ID NO：28中標註「Q619P」之位置處包含CCG密碼子而非CAG密碼子；(viii)對偶基因aj之核苷酸序列與SEQ ID NO：28一致，其例外之處在於對偶基因aj之核苷酸序列在SEQ ID NO：28中標註「R46L」之位置處包含CTT密碼子而非CGT密碼子；及在SEQ ID NO：28中標註「I474V」之位置處包含GTC密碼子而非ATC密碼子；及(ix)對偶基因q之核苷酸序列與SEQ ID NO：28一致，其例外之處在於對偶基因q之核苷酸序列在SEQ ID NO：28中標註「A53V」之位置處包含GTC密碼子而非GCC密碼子；及在SEQ ID NO：28中標註「E670G」之位置處包含GGG密碼子而非GAG密碼子。

變異前形式胺基酸序列(編號按照上文所列舉的SEQ ID NO：1)

(A)形式f之胺基酸序列與SEQ ID NO：1之胺基酸編號31至(且包括)胺基酸編號692的胺基酸序列一致，其例外之處在於形式f之胺基酸序列包含位置474處之纈胺酸；(B)形式c之胺基酸序列與SEQ ID NO：1之胺基酸編號31至(且包括)胺基酸編號692的胺基酸序列一致，其例外之處在於形式c之胺基酸序列包含位置670處之甘胺酸；(C)形式r之胺基酸序列與SEQ ID NO：1之胺基酸編號31至(且包括)胺基酸編號692的胺基酸序列一致，其例外之處在於形式r之胺基酸序列包含位置474處之纈胺酸及位置670處之甘胺酸；(D)形式p之胺基酸序列與SEQ ID NO：1之胺基酸編號31至(且包括)胺基酸編號692的胺基酸序列一致，其例外之處在於形式p之胺基酸序列包含位置53處之纈胺酸及位置474處之纈胺酸；(E)形式m之胺基酸序列與SEQ ID NO：1之胺基酸編號31至(且包括)胺基酸編號692的胺基酸序列一致，其例外之處在於形式m之胺基酸序列包含位置443處之蘇胺酸；(F)形式e之胺基酸序列與SEQ ID NO：1之胺基酸編號31至(且包括)胺基酸編號692的胺基酸序列一致，其例外之處在於形式e之胺基酸序列包含位置425處之絲胺酸及位置474處之纈胺酸；(G)形式h之胺基酸序列與SEQ ID NO：1之胺基酸編號31至(且包括)胺基酸編號692的胺基酸序列一致，其例外之處在於形式h之胺基酸序列包含位置443處之蘇胺酸及位置619處之脯胺酸；(H)形式aj之胺基酸序列與SEQ ID NO：1之胺基酸編號31至(且包括)胺基酸編號692的胺基酸序列一致，其例外之處在於形式aj之胺基酸序列包含位置46處之白胺酸及位置474處之纈胺酸；及 (I)形式q之胺基酸序列與SEQ ID NO：1之胺基酸編號31至(且包括)胺基酸編號692的胺基酸序列一致，其例外之處在於形式q之胺基酸序列包含位置53處之纈胺酸及位置670處之甘胺酸。

變異成熟形式胺基酸序列(編號按照上文所列舉的SEQ ID NO：1)

(A')形式f之胺基酸序列與SEQ ID NO：2一致，其例外之處在於形式f的胺基酸序列包含位置474處之纈胺酸；(B')形式c之胺基酸序列與SEQ ID NO：2一致，其例外之處在於形式c的胺基酸序列包含位置670處之甘胺酸；(C')形式r之胺基酸序列與SEQ ID NO：2一致，其例外之處在於形式r的胺基酸序列包含位置474處之纈胺酸及位置670處之甘胺酸；(D')形式p之胺基酸序列與SEQ ID NO：2一致，其例外之處在於形式p的胺基酸序列包含位置474處之纈胺酸；(E')形式m之胺基酸序列與SEQ ID NO：2一致，其例外之處在於形式m的胺基酸序列包含位置443處之蘇胺酸；(F')形式e之胺基酸序列與SEQ ID NO：2一致，其例外之處在於形式e的胺基酸序列包含位置425處之絲胺酸及位置474處之甘胺酸；(G')形式h之胺基酸序列與SEQ ID NO：2一致，其例外之處在於形式h的胺基酸序列包含位置443處之蘇胺酸及位置619處之脯胺酸；(H')形式aj之胺基酸序列與SEQ ID NO：2一致，其例外之處在於形式aj的胺基酸序列包含位置474處之纈胺酸；及(I')形式q之胺基酸序列與SEQ ID NO：2一致，其例外之處在於形式q的胺基酸序列包含位置670處之甘胺酸。

p之成熟形式與f及aj之成熟形式一致。

c之成熟形式與q之成熟形式一致。

進一步序列分析及3D電子雜交模型化(參看圖1)揭示選定的變異體亦滿足以下額外選擇準則：˙變異胺基酸殘基(對比人類PCSK9之常見形式)發現於標靶之成熟形式中(亦即在前域外)的PCSK9變異體；及˙變異胺基酸殘基(對比人類PCSK9之常見形式)表面暴露於標靶上之PCSK9變異體，本發明者將其看作有助於測定標靶之表面狀況且可能有助於確定標靶上之配位體結合如何及在何處發生。

如圖1中所展示，經識別的位置425、443、474、619及670(發現於本發明之選定變異體中)均為表面暴露的且在前域之外。變異位置425及443表面暴露於催化域上，而變異位置474、619及670表面暴露於C-末端域上。

由此，本發明者應用新穎選擇準則以測定人類PCSK9之罕見變異形式、認識其核苷酸及胺基酸序列在在本文中本發明之各個組態、態樣、條項、實施例及實例中的效用，且藉此提供如上文所描述之新穎個人化醫療及診斷性應用。

定製罕見PCSK9變異體型態之抗體

如上文所概述，本發明包括進一步藉由選擇具有基於基因節段之可變域的基於抗體之配位體來定製人類之治療的可能性，該等基因節段通常存在於發現其變異PCSK9形式符合本發明之選擇準則的種族群體之人類中。下文提供包含來源於人類VH3-23之重組的抗體VH域之配位體之實例。

本發明者分析各個人類VH3-23對偶基因之頻率及分佈，且意識到使用基於包含SNP rs56069819之人類VH3-23對偶基因的配位體之合意性。此SNP對應於經編碼之蛋白序列中位置24處之白胺酸至該位置處之纈胺酸的變化(L24V變化)，且SNP處於人類染色體14上之座標106268889。

圖2展示包含SNP rs56069819之人類VH3-23對偶基因(此類對偶基因表示「C」，且最頻繁對偶基因(其不包含此SNP)表示「A」)之千人基因組計劃資料庫中的累積對偶基因頻率分佈。該圖展示包含SNP rs56069819之VH3-23對偶基因以累積頻率11%存在於視為整體的所有人類種族群體中，而在某些特定人類種族子群體(ASW、LWK、YRI、CEU及GBR)中此類對偶基因以平均以上的累積頻率存在。在該圖中指示發現於各個子群體中之彼等人類PCSK9變異形式(標記「變異」)，該等子群體具有平均以上的包含SNP rs56069819之人類VH3-23對偶基因出現率。表6展示其所包含之VH3-23變異及SNP以及如千人基因組計劃資料庫中所查詢的其累積對偶基因頻率。

值得注意地，包含SNP rs56069819之人類VH3-23 對偶基因以所有群體之頻率11%之幾乎雙倍的頻率發現於CEU群體中。對於ASW及YRI群體而言，頻率為超過該群體之四分之一。由此，本發明有利地允許吾人選擇包含抗體或抗體片段之配位體，其中該抗體或片段包含來源於人類VH基因節段、人類D基因節段與人類JH基因節段之重組的VH域，VH基因節段包含以下核苷酸序列，該核苷酸序列包含SNP rs56069819(dbSNP編號，如上文所列舉的建立編號)。

在一實例中，吾人可進一步藉由選擇此類特異性結合至選自形式：f、c、m、e、h、p、q及aj之人類PCSK9之配位體來定製治療，此類形式為出現在人類群體ASW、LWK、YRI、CEU及GBR中者。

在一實例中，VH基因節段為VH3-23*04，其為通常存在的包含人類群體ASW、LWK、YRI、CEU及GBR中之SNP rs56069819之變異體。

在一實例中，配位體係用於治療及/或預防人類中之PCSK9介導之疾病或病狀，該人類表現選自形式：f、c、m、e、h、p、q及aj之人類PCSK9。

在一實例中，配位體係用於治療及/或預防具有ASW、LWK、YRI、CEU或GBR血統之人類中的PCSK9介導之疾病或病狀。

在一實施例中，配位體係用於治療及/或預防具有ASW血統之人類中的PCSK9介導之疾病或病狀，其中該人類表現選自f、c、m、e、h、p及q之PCSK9，或該人類包含如表5中所陳述之對應核苷酸或胺基酸序列。視情況此配位體包含來源於人類VH3-23*04之重組的VH域。

在一實施例中，配位體係用於治療及/或預防具有LWK血統之人類中的PCSK9介導之疾病或病狀，其中該人類表現選自f、c、m、e及h之PCSK9，或該人類包含如表5中所陳述之對應核苷酸或胺基酸序列。視情況此配位體包含來源於人類VH3-23*04之重組的VH域。

在一實施例中，配位體係用於治療及/或預防具有YRI血統之人類中的PCSK9介導之疾病或病狀，其中該人類表現選自f、c、m、e及h之PCSK9，或該人類包含如表5中所陳述之對應核苷酸或胺基酸序列。視情況此配位體包含來源於人類VH3-23*04之重組的VH域。

在一實施例中，配位體係用於治療及/或預防具有CEU血統之人類中的PCSK9介導之疾病或病狀，其中該人類表現選自f、c、p及aj之PCSK9，或該人類包含如表5中所陳述之對應核苷酸或胺基酸序列。視情況此配位體包含來源於人類VH3-23*04之重組的VH域。

在一實施例中，配位體係用於治療及/或預防具有GBR血統之人類中的PCSK9介導之疾病或病狀，其中該人類表現選自f、c及p之PCSK9，或該人類包含如表5中所陳述之對應核苷酸或胺基酸序列。視情況此配位體包含來源於人類VH3-23*04之重組的VH域。

舉例而言，在本發明之任何態樣、實例、實施例或組態中，抗TOI(例如PCSK9或IL4Ra)配位體(例如捕獲劑、抗體或片段)包含來源於人類VH節段(例如人類VH3-23*04)、人類D基因節段及人類JH節段之重組的VH結構域，該人類VH節段編碼SEQ ID NO：40之構架1且其中該人類包含編碼SEQ ID NO：40之構架1的VH基因節段，或該人類表現包含SEQ ID NO：40之構架1的VH結構域。在一替代方案中，配位體包含來源於人類VH節段(例如人類VH3-23*04)、人類D基因節段與人類JH節段之重組的VH域，該人類VH節段包含SNP rs56069819且其中該人類包含VH基因節段，該VH基因節段包含SNP rs56069819。

SNP rs56069819根據千人基因組階段I資料庫以11%之平均累積頻率存在於人類，但在AFR(23%)、EUR(13%)、ASW(27%)、LWK(15%)、YRI(28%)、CEU(19%)及GBR(15%)群體中較高，因此在一個實施例中，當抗TOI(例如PCSK9或IL4Ra)抗體或片段包含SEQ ID NO：40之構架1或包含來源於人類VH節段(例如人類VH3-23*04)、人類D基因節段及人類JH節段之重組的VH結構域，該人類VH節段包含SNP rs56069819時，該人類具有選自由AFR、EUR、ASW、LWK、YRI、CEU及GBR血統組成之群的血統。舉例而言，該人類具有AFR血統。舉例而言，該人類具有EUR血統。舉例而言，該人類具有ASW血統。舉例而言，該人類具有LWK血統。舉例而言，該人類具有YRI血統。舉例而言，該人類具有CEU血統。舉例而言，該人類具有GBR血統。在一個實例中，所選人類血統為此等列出的血統中之一者且TOI包含由SNP編碼之胺基酸變異(突變)，該SNP 以高於根據千人基因組之平均累積頻率存在於該人類群體。舉例而言，該配位體(例如抗體或片段)特異性結合包含突變S752A之IL4R蛋白質且該人類具有YRI血統。在此情況下，編碼該突變之SNP以及SNP rs56069819以高於平均累積頻率存在於YRI群體。本發明之此通用態樣因此尤其適用於定製該群體成員之基因組概況。

在一個實例中，該配位體特異性結合至人類PCSK9形式f。

在一個實例中，該人類表現選自以下形式之人類PCSK9：f、e、p及aj。

在一個實例中，該人類具有ASW、LWK、YRI、CEU或GBR血統。

在一個實例中，該人類具有ASW血統且該人類表現選自以下形式之人類PCSK9：f、e、p及aj；視情況該配位體包含來源於人類VH3-23*04之重組的VH結構域。

在一個實例中，該人類具有LWK血統且該人類表現選自以下形式之人類PCSK9：f、e、p及aj；視情況該配位體包含來源於人類VH3-23*04之重組的VH結構域。

在一個實例中，該人類具有YRI血統且該人類表現選自以下形式之人類PCSK9：f、e、p及aj；視情況該配位體包含來源於人類VH3-23*04之重組的VH結構域。

在一個實例中，該人類具有CEU血統且該人類表現選自以下形式之人類PCSK9：f、e、p及aj；視情況該配位體包含來源於人類VH3-23*04之重組的VH結構域。

在一個實例中，該人類具有GBR血統且該人類表現選自以下形式之人類PCSK9：f、e、p及aj；視情況該配位體包含來源於人類VH3-23*04之重組的VH結構域。

在一個實例中，該人類之該基因組包含選自由SEQ ID NO：29、32、34及36組成之群的核苷酸序列，其中該抗體或片段分別特異性結合至選自以下形式之人類PCSK9：f、e、p及aj，其中該抗體或片段包含來源於人類VH基因節段、人類D基因節段及人類JH基因節段之重組的VH結構域，該VH基因節段包含具有SEQ ID NO：39或其互補序列之核苷酸序列。視情況，其中VH基因節段為VH3-23*04(SEQ ID NO：38)。

在一實例中，配位體為阿利若單抗。

在其他實施例中，如上文更全面解釋，本發明提供基於替代性人類VH基因節段或基於Vκ、Vλ或恆定區基因節段針對人類接受者之基因型及/或表型而定製的配位體(參看代表性變異體之另一表8)。

舉例而言，本發明之配位體包含或由抗體組成，該抗體包含來源於人類VH基因節段、人類D基因節段與人類JH基因節段之重組的VH域，其中該VH基因節段係選自由以下各者組成之群：(i)IGHV1-18*01，且該人類之該基因組包含人類IGHV1-18*01核苷酸序列，或該人類表現包含來源於人類IGHV1-18*01之重組的可變域之抗體；或(ii)IGVH1-46*01且該人類之該基因組包含人類IGHV1-46*01核苷酸序列，或該人類表現包含來源於人類IGHV1-46*01 之重組的可變域之抗體。

舉例而言，本發明之配位體包含或由抗體組成，該抗體包含來源於人類VL基因節段與人類JL基因節段之重組的VL域，其中該VL基因節段係選自由以下各者組成之群：(i)IGKV4-1*01，且該人類之該基因組包含人類IGKV4-1*01核苷酸序列，或該人類表現包含來源於人類IGKV4-1*01之重組的可變域之抗體；(ii)IGLV2-14*01，且該人類之該基因組包含人類IGLV2-14*01核苷酸序列，或該人類表現包含來源於人類IGLV2-14*01之重組的可變域之抗體；或(iii)IGKV1-13*02，且該人類之該基因組包含人類IGKV1-13*02核苷酸序列，或該人類表現包含來源於人類IGKV1-13*02之重組的可變域之抗體。

舉例而言，本發明者識別滿足單獨或組合形式之較罕見IGH-γ-1 SNP 204D(觀察到的累積頻率為0.296)及206L(觀察到的累積頻率為0.283)之可能性。此等殘基為CH3域之部分，且因而其形成抗體Fc區之部分。由此，出於如上文所論述之原因，將此等CH3變異與患者匹配尤其有益。由此，在此實例中，本發明之配位體包含或由抗體組成，該抗體包含人類γ-1重鏈恆定區。該人類γ-1重鏈恆定區包含對應於SEQ ID NO：42之位置204的Asp或對應於SEQ ID NO：42之位置206的Leu，且其中人類之基因組包含編碼此類Asp或Leu之γ-1重鏈恆定區核苷酸序列，該人類表現包含人類γ-1恆定區之抗體，該等人類γ-1恆定區包含此類Asp或Leu。此類配位體之實例為阿利若單抗。

在另一實例中，本發明者識別滿足IGH-γ-2 SNP之可能性。此包括Fc區變異之考慮因素，就此而言，本發明者集中於Fc區中之位置161及257。由此，在此實例中，本發明之配位體包含或由抗體組成，該抗體包含人類γ-2重鏈恆定區，該人類γ-2重鏈恆定區包含選自由以下各者組成之群的胺基酸：對應於SEQ ID NO：44之位置72的Pro、對應於SEQ ID NO：44之位置75的Asn、對應於SEQ ID NO：44之位置76的Phe、對應於SEQ ID NO：44之位置161的Val及對應於SEQ ID NO：44之位置257的Ala；且其中該人類之該基因組包含編碼此類選定胺基酸之γ-2重鏈恆定區核苷酸序列，或該人類表現包含人類γ-2恆定區之抗體，該等人類γ-2恆定區包含此類選定胺基酸。此類配位體之實例為依伏洛單抗或玻可昔單抗(bococizumab)。

在另一實例中，本發明者闡述人類κ恆定區變異。由此，在此實例中，本發明之配位體包含或由抗體組成，該抗體包含人類κ輕鏈恆定區，該人類κ輕鏈恆定區包含對應於SEQ ID NO：50之位置84的Val或對應於SEQ ID NO：50之位置87的Cys；且其中該人類之該基因組包含編碼此類Val或Cys之κ輕鏈恆定區核苷酸序列，或該人類表現包含人類κ輕鏈恆定區之抗體，該等人類κ輕鏈恆定區包含此類Val或Cys。此類配位體之實例為阿利若單抗或玻可昔單抗。

在另一實例中，本發明者闡述人類λ恆定區變異。由此，在此實例中，本發明之配位體包含或由抗體組成，該抗體包含人類IGLC2*01輕鏈恆定區；且其中該人類之該基因組包含人類IGLC2*01核苷酸序列或該人類表現包含人類輕鏈IGLC2*01恆定區之抗體。此類配位體之實例為依伏洛單抗。

實例2：測定本發明之配位體與PCSK9變異體之特異性結合

SPR測定結合之方法

藉由SPR使用ProteOnXPR36^TMArray系統(BioRad)進行抗體與PCSK9變異體之結合。藉由一級胺偶合在GLC生物感測器晶片上形成抗人類IgG表面(Jackson Labs 109-005-008)。在此表面上以配位體形式捕獲測試抗體。將PCSK9變異體用作分析物且以256nM、64nM、16nM、4nM及1nM傳遞所捕獲的抗體。使用緩衝液注射液(亦即0nM)使參考結合曲線加倍以移除基線偏移及注射液人工製品。使用移除捕獲抗體之100mM磷酸使捕獲表面再生以得到另一捕獲與結合循環。使用ProteOn XPR36 Array系統分析軟體固有的1：1模型分析所產生的結合感測器圖譜。在25℃下進行分析且使用1xHBS-EP(Teknova)作為操作緩衝液。

資料

測試三個抗體且所得結合資料呈現於下文(表3)。抗體316P及31H4為揭示於US20110065902A1中之抗體(此等抗體之序列及其可變域以引用之方式併入本文中用於本發明中之可能的用途及本文中申請專利範圍中之可能的內容)。抗體316P包含來源於人類VH3-23*04與JH2*01(具有 D)之重組的重鏈可變域及來源於人類Vκ4-1*01與Jκ2*01之重組的輕鏈可變域。

依伏洛單抗包含人類IGHG2*01重鏈及人類IGLC2*01λ輕鏈、來源於人類IGHV1-18*01與IGHJ6*01(具有D節段)之重組的VH及來源於人類IGLV2-14*01與IGLJ2*01之重組的Vλ。

結果

結果展示所有測試抗體相等地結合至PCSK9變異體，且看到任何結合變異體在此類強親和力相互作用之實驗誤差內。

由此，本發明確定具有以下型態之抗體可特異性結合本發明之一或多個變異體：1.包含來源於人類IGHV3-23*04與1GHJH2*01(具有D)之重組的重鏈可變域及來源於人類IGKV4-1*01與IGKJ2*01之重組的輕鏈可變域之抗體(例如316P或阿利若單抗)；或2.包含來源於人類IGHV1-18*01與IGHJ6*01(具有D節段)之重組的人類重鏈可變域及來源於人類IGLV2-14*01與IGLJ2*01之重組的輕鏈可變域之抗體(例如依伏洛單抗)。

由此，根據本發明，熟習此項技術者據此考慮到所需的配位體與PCSK9變異體之特異性結合之測定。在上文本發明之方法及其他態樣之內容中陳述此測定之應用。

參考文獻：所引用之參考文獻以全文引用的方式併入本文中。

1)Horton等，Trends Biochem Sci. 2007年2月；32(2):71-7. Epub 2007年1月9日，Molecular biology of PCSK9: its role in LDL metabolism.

2)Seidah及Prat, J Mol Med (Berl). 2007年7月；85(7):685-96. Epub 2007年3月10日，The proprotein convertases are potential targets in the treatment of dyslipidemia.

3)Benjannet等，J Biol Chem. 2004年11月19日；279(47):48865-75. Epub 2004年9月9日，NARC-1/PCSK9 and its natural mutants: zymogen cleavage and effects on the low density lipoprotein (LDL) receptor and LDL cholesterol.

4)Lagace等，J Clin Invest. 2006年11月；116(11):2995-3005, Secreted PCSK9 decreases the number of LDL receptors in hepatocytes and in livers of parabiotic mice.

5)Maxwell等，Proc Natl Acad Sci U S A. 2005年2月8日；102(6):2069-74. Epub 2005年1月27日，Overexpression of PCSK9 accelerates the degradation of the LDLR in a post-endoplasmic reticulum compartment.

6)Park等，J Biol Chem. 2004年11月26日；279(48):50630-8. Epub 2004年2月22日，Post-transcriptional regulation of low density lipoprotein receptor protein by proprotein convertase subtilisin/kexin type 9a in mouse liver.

7)Rashid等，Proc Natl Acad Sci U S A.2005年4月12日；102(15):5374-9. Epub 2005年4月1日，Decreased plasma cholesterol and hypersensitivity to statins in mice lacking Pcsk9.

8)Kotowski等，Am J Hum Genet. 2006年3月；78(3):410-22. Epub 2006年1月20日，A spectrum of PCSK9 alleles contributes to plasma levels of low-density lipoprotein cholesterol.

9)Chen等，J Am Coll Cardiol. 2005年5月17日；45(10):1611-9. Epub 2005年4月21日，A common PCSK9 haplotype, encompassing the E670G coding single nucleotide polymorphism, is a novel genetic marker for plasma low-density lipoprotein cholesterol levels and severity of coronary atherosclerosis.

10)Pisciotta等，Atherosclerosis. 2006年6月；186(2):433-40. Epub 2005年9月23日，Additive effect of mutations in LDLR and PCSK9 genes on the phenotype of familial hypercholesterolemia.

11)Zhao等，Am J Hum Genet. 2006年9月；79(3):514-23. Epub 2006年7月18日，Molecular characterization of loss-of-function mutations in PCSK9 and identification of a compound heterozygote.

12)Seidah等，Proc Natl Acad Sci U S A. 2003年2月4日；100(3):928-33. Epub 2003年1月27日，The secretory proprotein convertase neural apoptosis-regulated convertase 1 (NARC-1): liver regeneration and neuronal differentiation.

本說明書通篇提及序列位置係指如描述及表格中經識別的序列位置。舉例而言，SEQ ID NO：1之位置474為表5中SEQ ID NO：1中識別的位置。

3. 2013年4月25日發佈的NCBI dbSNP Build 138。

4. 用於代表性變異頻率分析之人類群體。

群體

A 此群體包括662個來自ClinSeq計劃之具有歐洲血統的參與者，已使用Agilent之38Mb或50Mb捕獲套組對其全部進行整體外顯子組定序。

B 千人基因組資料庫。

C ESP6500：非裔美國人。

D ESP6500：歐裔美國人。

5. 發現代表性群體中之許多個體具有對偶基因。

6. 異型接合人類基因型頻率，亦即變異對偶基因出現一次且其他對偶基因(異型接合狀態)出現一次的所有基因型(例如群體中之ac基因型)之累積頻率；

7. 同型接合人類基因型頻率，亦即變異對偶基因出現兩次(同型接合狀態)(例如群體中之cc基因型)之累積頻率。

8. 總人類基因型頻率，亦即異型接合加同型接合人類基因型頻率之總和。

9. 群體中變異對偶基因之所有出現的累積人類對偶基因頻率。

本發明之申明

1.一種用於在有需要之人類中調節膽固醇位準或維持先前經調節之膽固醇位準的抗體或抗體片段，其中該抗體包含來源於人類VH基因節段之重組的VH域、人類D基因節段及人類JH基因節段，該人類VH節段包含在對應於SEQ ID NO：40之位置5的胺基酸處之纈胺酸，且該抗體特異性結合包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)胺基酸序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中的突變R46L、A53V、N425S、A443T、I474V、Q619P或E670G(例如包含突變I474V、E670G、N425S或Q619P)，其中該人類包含編碼該胺基酸序列之核苷酸序列及編碼SEQ ID NO：40之構架1的VH基因節段。

2.一種在有需要之人類中調節膽固醇位準或維持先前經調節之膽固醇位準的方法，該方法包含向該人類投與抗體或其片段，其中該抗體包含來源於人類VH基因節段之重組的VH域、人類D基因節段及人類JH基因節段，該人類VH節段包含在對應於SEQ ID NO：40之位置5的胺基酸處之纈胺酸，且該抗體特異性結合包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)胺基酸序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之突變R46L、A53V、N425S、A443T、I474V、Q619P或E670G(例如包含突變I474V、E670G、N425S或Q619P)，其中人類包含編碼該胺基酸序列的核苷酸序列及編碼SEQ ID NO：40之構架1的VH基因節段。

3.如申明1之抗體或抗體片段或申明2之方法，其中該VH域來源於SEQ ID NO：39之人類VH基因節段VH3-23*04與人類D節段及人類JH節段之重組。

4.如前述申明中任一項之抗體或抗體片段或方法，其中人類所包含之該VH基因節段為SEQ ID NO：39之VH3-23*04。

5.如前述申明中任一項之抗體或抗體片段或方法，其中該抗體包含VH域，其中該VH域包含SEQ ID NO：40之構架1序列。

6.如前述申明中任一項之抗體或抗體片段或方法，其中已確定該人類包含編碼包含C-末端域之PCSK9的核苷酸序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之突變E670G及/或藉由核苷酸序列SEQ ID NO：30編碼的第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)變異蛋白。

7.如前述申明中任一項之抗體或抗體片段或方法，其包含確定該人類包含編碼包含C-末端域之PCSK9及/或包含突變E670G的第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)變異蛋白之核苷酸序列之步驟，該C-末端域包含突變E670G，視情況，其中在向該人類投與該抗體之前進行確定步驟。

8.如申明7之抗體或抗體片段或方法，其中該確定步驟包含針對編碼包含C-末端域之PCSK9的核苷酸序列分析來自人類之生物樣品，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變E670G。

9.如申明8之抗體或抗體片段或方法，其中該分析包含使生物樣品與以下各者接觸

a.至少一個包含至少10個連續核苷酸之序列的寡核苷酸探針，該序列可在生物樣品中特異性雜交至且識別編碼包含C-末端域之PCSK9的核苷酸序列或特異性雜交至該序列之反義，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變E670G，其中該核酸雜交至至少一個存在於該選定序列而不存在於SEQ ID NO：28中的核苷酸或雜交至反義序列，從而當存在至少一個編碼包含C-末端域之PCSK9的核苷酸序列時形成複合物，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變E670G；及/或b.至少一個寡核苷酸探針，該寡核苷酸探針包含至少10個具有編碼該包含該C-末端域之PCSK9的核苷酸序列之連續核苷酸之序列或包含該等連續核苷酸之反義序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變E670G，其中該連續核苷酸序列包含至少一個存在於該選定序列而不存在於SEQ ID NO：28中之核苷酸，從而當存在編碼該包含該C-末端域之PCSK9的核苷酸序列時形成複合物，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變E670G；及偵測是否存在該複合物，其中偵測到該複合物之存在確定該人類包含有該包含該C-末端域之PCSK9，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變E670G。

10.如申明8之抗體或抗體片段或方法，其中該分析包含核酸擴增及視情況存在之一或多種選自定序、下一代定序、核酸雜交及對偶基因特異性擴增之方法，及/或其中該分析係以多重格式進行。

11.如前述申明中任一項之抗體或抗體片段或方法，其中該抗體或抗體片段係用於向經進一步確定或已經進一步確定為實質上對他汀治療具有抗性的人類投與。

12.如前述申明中任一項之抗體或抗體片段或方法，其中該抗體或抗體片段係用於向正接受或已接受他汀治療或對他汀治療反應減小之人類投與。

13.如申明11或12之抗體或抗體片段或方法，其中該抗體或抗體片段係用於與該他汀治療分開或同時向人類投與。

14.如申明8至10中任一項之抗體或抗體片段或方法，其中該生物樣品包含該人類之血清、血液、糞便、組織、細胞、尿液及/或唾液。

15.如前述申明中任一項之抗體或抗體片段或方法，其中該人類指示為對編碼包含突變E670G之PCSK9 C-末端域的核苷酸序列為異型接合，視情況，其中該人類進一步指示為包含核苷酸序列SEQ ID NO：28，或該人類指示為對編碼包含SEQ ID NO：1中之突變E670G的PCSK9 C-末端域之核苷酸序列為同型接合。

16.如前述申明中任一項之抗體或抗體片段或方法，其中該人類已診斷患有至少一種選自脂質失調、高脂蛋白血症、高脂質血症、血脂異常、高膽固醇血症、低脂質血症、低膽固醇血症、心臟病發作、中風、冠心病、動脈粥樣硬化、周邊血管疾病、跛行及高血壓之病狀。

17.如前述申明中任一項之抗體或抗體片段或方法，其中該抗體或抗體片段治療該人類中至少一種選自脂質失調、高脂蛋白血症、高脂質血症、血脂異常、高膽固醇血症、低脂蛋白血症、低脂質血症、低膽固醇血症、心臟病發作、中風、冠心病、動脈粥樣硬化、周邊血管疾病、跛行及高血壓之病狀或減小發生該病狀的風險。

18.如前述申明中任一項之抗體或抗體片段或方法，其中該核苷酸序列為SEQ ID NO：30。

19.如前述申明中任一項之抗體或抗體片段或方法，其中該抗體或抗體片段係用於藉由靜脈內投與或皮下投與及/或包含在可注射製劑中。

20.如前述申明中任一項之抗體或抗體片段或方法，其中該突變為I474V、E670G、N425S及/或Q619P，且該抗體或抗體片段係用於降低膽固醇位準或維持先前減少的膽固醇位準(例如用於治療高脂質血症)，或該方法為減少膽固醇位準或維持先前減少的膽固醇位準之方法(例如治療高脂質血症之方法)。

21.如申明1至19中任一項之抗體或抗體片段或方法，其中該突變為R46L、A53V及/或A443T，且該抗體或抗體片段係用於增加膽固醇位準或維持先前增加的膽固醇位準(例如用於治療低脂質血症)，或該方法為增加膽固醇位準或維持先前增加的膽固醇位準之方法(例如治療低脂質血症之方法)。

22.如申明1至20中任一項之抗體或抗體片段或方法，其中該突變為SEQ ID NO：1中之I474V及/或E670G。

23.如申明1至20或22中任一項之抗體或抗體片段或方法，其中該突變為SEQ ID NO：1中之I474V。

24.如申明1至20或22中任一項之抗體或抗體片段或方法，其中該突變為SEQ ID NO：1中之E670G。

25.如申明1至20中任一項之抗體或抗體片段或方法，其中該突變為SEQ ID NO：1中之N425S。

26.如申明1至20中任一項之抗體或抗體片段或方法，其中該突變為SEQ ID NO：1中之Q619P。

27.如申明1至19及21中任一項之抗體或抗體片段或方法，其中該突變為SEQ ID NO：1中之R46L。

28.如申明1至19及21中任一項之抗體或抗體片段或方法，其中該突變為SEQ ID NO：1中之A53V。

29.如申明1至19及21中任一項之抗體或抗體片段或方法，其中該突變為SEQ ID NO：1中之A443T。

本發明之其他申明

1.一種治療及/或預防已確定包含及/或選定為包含PCSK9變異蛋白之人類中的藉由第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)介導之疾病或病狀的方法，該方法包含向人類投與結合該PCSK9變異蛋白之配位體以治療及/或預防該疾病或病狀。

2.如申明1之方法，其中該PCSK9變異蛋白係選自由PCSK9變異蛋白形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群。

3.如申明2之方法，其中該變異體為成熟PCSK9。

4.如申明1、2或3之方法進一步包含針對該PCSK9變異蛋白形式分析來自該人類之生物樣品。

6.如申明5之方法進一步包含針對(i)選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列；及/或(ii)其編碼PCSK9蛋白之催化域或C-末端域的核苷酸序列分析來自該人類之生物樣品。

7.如申明6之方法，其中該分析包含核酸擴增及/或一或多種選自定序、下一代定序、核酸雜交及對偶基因特異性擴增之方法。

8.如申明6之方法，其中該分析以多重格式進行。

9.如申明1至8中任一項之方法，其進一步包括獲得來自該人類之該生物樣品。

10.如申明1至9中任一項之方法，其中該人類已進一步確定為及/或選定為對該疾病或病狀之他汀治療具有抗性。

11.如申明1至10中任一項之方法，其中該配位體係選自抗體、抗體部分、抗體片段或親和抗體。

12.如申明11之方法，其中該配位體為特異性結合至選自形式f、c、m、e、h、p、q及aj之人類PCSK9的抗體或抗體片段，其中該抗體或片段包含來源於人類VH基因節段、人類D基因節段與人類JH基因節段之重組的VH域，該VH基因節段包含以下核苷酸序列，該核苷酸序列包含SNP rs56069819(SEQ ID NO：41)。

13.如申明12之配位體，其中該VH基因節段為VH3-23*04。

14.如申明1至13中任一項之方法，其中該投與進一步包括向該人類投與他汀。

15.如申明1至14中任一項之方法，其中分開或同時投與該配位體及該他汀。

16.如申明1至15中任一項之方法，其中該生物樣品包含該人類之血清、血液、糞便、頭髮、組織、細胞、尿液及/或唾液。

17.如申明1至16中任一項之方法，其中該人類指示為對選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列及/或其編碼PCSK9蛋白之催化域或C-末端域編碼序列的核苷酸序列為異型接合。

18.如申明1至17中任一項之方法，其中該人類指示為包含核苷酸序列SEQ ID NO：28及/或其催化域或C-末端域編碼序列。

19.如申明1至18中任一項之方法，其中該人類指示為對選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列及/或其編碼PCSK2蛋白之催化域或C-末端域編碼序列的核苷酸序列為同型接合。

20.如申明1至19中任一項之方法，其中當該人類確定為包含及/或選定為包含：a. SEQ ID NO：29且歸類為具有ASW、YRI、GBR、TSI、CLM、LWK、MXL、JPT、PUR、IBS、FIN或CEU血統時，則向該人類投與特異性結合該包含藉由SEQ ID NO：29編碼之變異的PCSK9變異蛋白之配位體；或b. SEQ ID NO：30且歸類為具有ASW、YRI、GBR、TSI、CLM、CHB、LWK、CHS、JPT、PUR、FIN或CEU血統時，則向該人類投與特異性結合該包含藉由SEQ ID NO：30編碼之變異的PCSK9變異蛋白之配位體；或c. SEQ ID NO：32且歸類為具有ASW、GBR、TSI、CLM、JPT、PUR、IBS、FIN或CEU血統時，則向該人類投與特異性結合該包含藉由SEQ ID NO：32編碼之變異的PCSK9變異蛋白之配位體；或d. SEQ ID NO：33且歸類為具有LWK、ASW、YRI或CLM血統時，則向該人類投與特異性結合該包含藉由SEQ ID NO：33編碼之變異的PCSK9變異蛋白之配位體；或e. SEQ ID NO：34且歸類為具有LWK、ASW或YRI血統時，則向該人類投與特異性結合該包含藉由SEQ ID NO：34編碼之變異的PCSK9變異蛋白之配位體；或f. SEQ ID NO：35且歸類為具有PUR、TSI、FIN或CEU血統時，則向該人類投與特異性結合該包含藉由SEQ ID NO：35編碼之變異的PCSK9變異蛋白之配位體；或g. SEQ ID NO：36且歸類為具有LWK、ASW或YRI血統時，則向該人類投與特異性結合該包含藉由SEQ ID NO：36編碼之變異的PCSK9變異蛋白之配位體；或h. SEQ ID NO：37且歸類為具有CHS、ASW、JPT、PUR或CHB血統時，則向該人類投與特異性結合該包含藉由SEQ ID NO：37編碼之變異的PCSK9變異蛋白之配位體。

21. 如申明1至19中任一項之方法，其中當該人類確定為包含及/或選定為包含：a. PCSK9蛋白形式f且歸類為具有ASW、YRI、GBR、TSI、CLM、LWK、MXL、JPT、PUR、IBS、FIN或CEU血統時，則歷時一段時間且以可有效地治療及/或預防該人類中之該疾病或病狀之量投與特異性結合該PCSK9蛋白形式f的配位體，從而治療及/或預防該人類中之該疾病或病狀；或b. PCSK9蛋白形式c且歸類為具有ASW、YRI、GBR、TSI、CLM、CHB、LWK、CHS、JPT、PUR、FIN或CEU血統，則歷時一段時間且以可有效地治療及/或預防該人類中之該疾病或病狀之量投與特異性結合該PCSK9蛋白形式c的配位體，從而治療及/或預防該人類中之該疾病或病狀；或c. PCSK9蛋白形式p且歸類為具有ASW、GBR、TSI、CLM、JPT、PUR、IBS、FIN或CEU血統時，則歷時一段時間且以可有效地治療及/或預防該人類中之該疾病或病狀之量投與特異性結合該PCSK9蛋白形式p的配位體，從而治療及/或預防該人類中之該疾病或病狀；或d. PCSK9蛋白形式m且歸類為具有LWK、ASW、YRI或CLM血統時，則歷時一段時間且以可有效地治療及/或預防該人類中之該疾病或病狀之量投與特異性結合該PCSK9蛋白形式m的配位體，從而治療及/或預防該人類中之該疾病或病狀；或e. PCSK9蛋白形式e且歸類為具有LWK、ASW或YRI血統時，則歷時一段時間且以可有效地治療及/或預防該人類中之該疾病或病狀之量投與特異性結合該PCSK9蛋白形式e的配位體，從而治療及/或預防該人類中之該疾病或病狀；或f. PCSK9蛋白形式h且歸類為具有PUR、TSI、FIN或CEU血統時，則歷時一段時間且以可有效地治療及/或預防該人類中之該疾病或病狀之量投與特異性結合該PCSK9蛋白形式h的配位體，從而治療及/或預防該人類中之該疾病或病狀；或g. PCSK9蛋白形式aj且歸類為具有LWK、ASW或YRI血統時，則歷時一段時間且以可有效地治療及/或預防該人類中之該疾病或病狀之量投與特異性結合該PCSK9蛋白形式aj的配位體，從而治療及/或預防該人類中之該疾病或病狀；或h. PCSK9蛋白形式q且歸類為具有CHS、ASW、JPT、PUR或CHB血統時，則歷時一段時間且以可有效地治療及/ 或預防該人類中之該疾病或病狀之量投與特異性結合該PCSK9蛋白形式q的配位體，從而治療及/或預防該人類中之該疾病或病狀。

22.如申明1至21中任一項之方法，其中該配位體能夠特異性結合該PCSK9變異蛋白或編碼該PCSK9變異蛋白之核酸。

23.如申明1至21中任一項之方法，其中該配位體特異性結合兩個或兩個以上人類PCSK9變異蛋白或其選自由SEQ ID NO：4-27組成之群的片段。

24.如申明23之方法，其中該配位體特異性結合兩個或兩個以上人類PCSK9蛋白或其片段，其中該等蛋白片段中之至少一者包含選自SEQ ID NO：4-14、18-23、26及27之胺基酸序列。

25.如申明4及6至23中任一項之方法，其中在該樣品中分析之該人類PCSK9蛋白呈成熟形式。

26.如申明4及6至24中任一項之方法，其中在該樣品中分析之該人類PCSK9蛋白呈前形式。

27.如申明1至26之方法，其中該疾病或病狀係選自脂質失調、高脂蛋白血症、高脂質血症；血脂異常；高膽固醇血症、心臟病發作、中風、冠心病、動脈粥樣硬化、周邊血管疾病、跛行、II型糖尿病、高血壓及心血管疾病或病狀。

28.一種用於將人類核酸樣品中之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)基因變異體基因分型之套組，該人類感染或處於PCSK9介導的疾病之風險，該套組包含a.至少一個包含至少10個連續核苷酸之序列的核酸探針，該序列可在生物樣品中特異性雜交至選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列及其編碼PCSK9蛋白之催化域或C-末端域之序列且識別該核苷酸序列之存在，或可在生物樣品中特異性雜交至該核苷酸序列之反義且識別該核苷酸序列之反義的存在，其中該核酸探針雜交至至少一個存在於該選定序列而不存在於SEQ ID NO：28中之核苷酸或其反義序列；及/或b.至少兩個核酸探針，該等核酸探針包含至少兩個各具有至少10個連續核苷酸之序列或包含該等連續核苷酸之反義序列，該等連續核苷酸具有選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列，其中該等寡核苷酸探針中之至少一者包含至少一個存在於該選定核苷酸序列而不存在於SEQ ID NO：28中之核苷酸或其反義序列，及c.視情況存在之以下中之至少一者：一或多種緩衝劑、封裝、標識及/或用於包含獲自人類之核酸的生物樣品中之PCSK9基因分型的說明書。

29.如申明28之套組，其中該核酸探針附著至固體表面。

30.如申明28至29中任一項之套組，其進一步包含附著至該核酸探針之可偵測標識。

32.如申明31之套組，其進一步包含他汀。

34.如申明33之醫藥組成物，其中該配位體為對選自由形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群的PCSK9變異體或其包含與對應序列SEQ ID NO：1、2或3之胺基酸變異之催化域、C-末端域或肽具有特異性之抗體、抗體部分、抗體片段或親和抗體。

35.如申明33至34中任一項之醫藥組成物，其進一步包含他汀。

36.如申明35之醫藥組成物，其中該他汀為阿托伐他汀。

37.一種藥物遞送系統，其包含如申明33或34之醫藥組成物及注射或IV裝置。

38.一種包含如申明33之醫藥組成物、封裝及用於向感染或處於PCSK9介導的疾病或病狀之風險的人類投與配位體之說明書或標識之套組，其中該人類表現選自由形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群的變異PCSK9蛋白形式或其催化域或C-末端域或肽。

39.如申明38之套組，其中該說明書或標識指示向指示他汀治療或已投與他汀或對他汀治療具有減少的反應之人類投與他汀。

40.如申明38或39之套組，其中該人類已確定為及/或選定為對使用他汀治療具有抗性。

41.如申明39或40之套組，其中該說明書或標識指示向已接受他汀之人類投與且進一步指示減少向人類投與他汀。

42.如申明38之套組，其進一步包含至少一種緩衝液、封裝及/或用於獲自人類之生物樣品中的PCSK9基因分型之說明書或標識。

43.如申明38之套組，其中該標識包含由監管機構頒佈之銷售授權號。

44.如申明43之套組，其中該監管機構係選自FDA或EMA。

45.如申明38之套組，其中該等標識或說明書進一步包含向該人類投與阿利若單抗或依伏洛單抗之說明。

46.如申明38至45中任一項之套組，其進一步包含視情況包含阿利若單抗或依伏洛單抗之IV或注射裝置。

47.一種用於治療及/或預防已確定為包含及/或選定為包含PCSK9變異蛋白之人類中的藉由第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)介導之疾病或病狀的套組，該套組包含(a)在密封容器中之阿利若單抗或依伏洛單抗及(b)指示向人類投與阿利若單抗或依伏洛單抗之標識或說明書，該人類表現選自由形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群的變異PCSK9蛋白形式或其催化域或C-末端域或肽。

48.如申明47之套組，其中該標識進一步指示若該人類已經投與或正加以投與他汀，則他汀治療應持續。

49.如申明47之套組，其中該標識進一步指示若該人類已經投與或正加以投與他汀，則該他汀治療應減少或中斷。

50.一種治療及/或預防人類中之藉由第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)介導之疾病或病狀的方法，該方法包含a.針對一或多個選自由PCSK9形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群的PCSK9蛋白變異體之存在分析來自該人類的生物樣品；及b.當偵測到該等PCSK9形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q中之一或多者時向該人類投與治療有效量之人類PCSK9結合配位體。

51.如申明50之方法，其中該配位體特異性結合該等PCSK9形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q中之一或多者。

53.如申明52之方法，其中該配位體特異性結合該等PCSK9形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q中之一或多者。

54.一種選擇用於使用人類PCSK9結合配位體治療及/或預防藉由第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)蛋白介導之疾病的人類之方法，該方法包含：a.針對選自由形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群的PCSK9蛋白變異體之存在分析取自於該人類的生物樣品，及b.當偵測到該等選自由形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群的PCSK9蛋白變異體中之至少一者時，選擇該人類用於使用該人類PCSK9結合配位體治療。

55.如申明54之方法，其中該人類指示他汀治療或已經投與他汀。

56.如申明54或55之方法，其中該人類已識別為實質上對他汀治療具有抗性或對他汀治療反應減小。

57.如申明54至56中任一項之方法，其中該疾病或病狀係選自脂質失調、高脂蛋白血症、高脂質血症；血脂異常；高膽固醇血症、心臟病發作、中風、冠心病、動脈粥樣硬化、周邊血管疾病、跛行、II型糖尿病、高血壓及心血管疾病或病狀。

58.如申明54至57中任一項之方法，其中所投與之人類PCSK9結合配位體對偵測到之PCSK9形式具有特異性。

59.如申明54至58中任一項之方法，其中該PCSK9蛋白形式包含選自由SEQ ID NO：4-27組成之群的胺基酸序列。

60.申明54至59中任一項之方法，其中該PCSK9蛋白形式包含成熟PCSK9形式。

61.一種用於選擇感染第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)蛋白介導之疾病或病狀、符合使用人類PCSK9結合配位體治療之條件的人類的分析，該方法包含a.使來自該人類之生物樣品與至少一個包含至少10個連續核苷酸之序列的寡核苷酸探針接觸，該序列可在該生物樣品中特異性雜交至且識別選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列或至少其催化域或C-末端域編碼序列或特異性雜交至該序列之反義，其中該核酸雜交至至少一個存在於該選定序列而不存在於SEQ ID NO：28中之核苷酸或雜交至反義序列，藉此當存在至少一個選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列或至少其催化域或C-末端域編碼序列時形成複合物；及/或b.偵測是否存在該複合物；及c.當偵測到存在至少一個包含藉由SEQ ID NO：29-37編碼之PCSK9形式或其催化域或C-末端域編碼序列時，選擇符合使用人類PCSK9結合配位體治療條件的人類。

62.一種選擇符合使用人類第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)結合配位體治療條件的人類之分析，該方法包含a.使來自患有PCSK9介導之疾病或病狀的人類之生物樣品與一或多個能夠結合至選自由PCSK9形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群的PCSK9變異形式之抗體、抗體部分或抗體片段接觸，藉此當存在一或多個PCSK9形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q時形成複合物；b.偵測是否存在該複合物；及c.當偵測到存在至少一種包含PCSK9形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q之複合物時，選擇符合使用人類PCSK9結合配位體治療條件的人類。

63.如申明61或62之分析，其中該疾病或病狀係選自脂質失調、高脂蛋白血症、高脂質血症；血脂異常；高膽固醇血症、心臟病發作、中風、冠心病、動脈粥樣硬化、周邊血管疾病、跛行、II型糖尿病、高血壓及心血管疾病或病狀。

64.如申明61至63中任一項之分析，其中該人類PSCK9結合配位體對偵測到之PCSK9形式具有特異性。

65.如申明61至64中任一項之分析，其進一步包含擴增來自該生物樣品之核酸。

66.如申明61至65中任一項之分析，其進一步包含分離來自該生物樣品之核酸。

67.如申明61至66中任一項之分析，其進一步包含向該人類投與該PCSK9結合配位體。

68.一種產生抗人類第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)抗體結合位點之方法，該方法包含獲得多個抗PCSK9抗體結合位點，篩檢該等用於結合至選自由形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群的人類PCSK9或其包含與對應序列SEQ ID NO：1、2或3之胺基酸變異之催化域或C-末端域或肽的抗體結合位點，及分離在該篩檢步驟中結合之抗體結合位點，及視情況產生形式f、c、r、p、m、e、h、aj或q PCSK9結合片段或該經分離抗體之衍生物。

69.一種產生抗人類第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)抗體之方法，該方法包含使用包含選自由f、c、r、p、m、e、h、aj及q形式之胺基酸序列組成之群的胺基酸序列之人類PCSK9或其包含與對應序列SEQ ID NO：1、2或3之胺基酸變異的催化域或C-末端域或肽使非人類脊椎動物(例如小鼠或大鼠)免疫，及分離結合包含選自由f、c、r、p、m、e、h、aj及q形式組成之群的人類PCSK9或其包含與對應序列SEQ ID NO：1、2或3之胺基酸變異之催化域或C-末端域或肽的抗體，以及視情況產生形式f、c、r、p、m、e、h、aj或q PCSK9結合片段或經分離抗體之衍生物。

70.如申明68至69之方法，其中該非人類脊椎動物為小鼠或大鼠。

71.如申明68至70中任一項之方法，其包含獲得編碼抗體、片段、衍生物或結合位點之核酸及視情況將該核酸插入表現載體中之步驟。

72.一種用於人類第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)將人類基因分型之套組，其中該套組包含核酸，該核酸(i)包含連續核苷酸序列，該連續核苷酸序列特異性雜交至選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列或至少其催化域或C-末端域編碼序列或特異性雜交至該序列之反義序列或RNA轉錄物，其中該連續核苷酸序列雜交至至少一個存在於該選定序列而不存在於SEQ ID NO：28中的核苷酸或雜交至其反義序列或RNA轉錄物；及/或(ii)包含至少10個具有選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列之連續核苷酸之序列或包含該等連續核苷酸之反義序列或RNA型式，其中該連續核苷酸序列包含至少一個存在於該選定序列而不存在於SEQ ID NO：28中的核苷酸。

73.一種用於第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)將人類基因分型或表型分型之套組，其中該套組包含配位體抗體或藉由申明68至71中任一項之方法所產生的抗體、片段或衍生物，該配位體抗體結合包含選自由形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群的人類PCSK9或其包含與對應序列SEQ ID NO：1、2或3之胺基酸變異之催化域或C-末端域或肽。

75.如申明74之方法，其中該方法包含使用該配位體靶向選自由形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群的人類PCSK9以治療及/或預防該人類中之該疾病或病狀。

76.一種治療及/或預防人類中之藉由第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)介導之疾病或病狀的方法，該方法包含藉由向該人類投與結合該PCSK9之配位體來靶向選自由形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群的人類PCSK9，藉此治療及/或預防該人類中之該疾病或病狀。

77.如申明76之方法，其中該人類基因組包含選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列。

78.如申明74至77中任一項之方法，其中已將該人類基因分型或將該人類基因分型為對選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列或至少其催化域或C-末端域編碼序列為陽性。

79.如申明74至78中任一項之方法，其中已將該人類表型分型或將該人類表型分型為對選自由形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群之人類PCSK9為陽性。

80.如申明74至79中任一項之方法，其中該方法包含將該人類基因分型為對選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列或至少其催化域或C-末端域編碼序列為陽性。

81.如申明74至80中任一項之方法，其中該方法包含將該人類表型分型為對選自由形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群的人類PCSK9序列為陽性。

82.如申明74至81中任一項之方法，其中已將人類基因分型或將人類基因分型為對選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列或至少其催化域或C-末端域編碼序列為異型接合；視情況其中已將該人類基因分型或將該人類基因分型為包含核苷酸序列SEQ ID NO：28或其催化域或C-末端域編碼序列以及選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列或其催化域或C-末端域編碼序列。

83.如申明74至82中任一項之方法，其中已將該人類基因組基因分型或將該人類基因組基因分型為對選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列或其催化域或C-末端域編碼序列為同型接合。

84.如申明74至83中任一項之方法，其中該方法包含在向該人類投與該配位體之前針對選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列或其催化域或C-末端域編碼序列將人類基因分型，其中該配位體經確定為能夠結合至藉由該選定序列編碼之PCSK9。

85.如申明74至84中任一項之方法，其進一步包含向該人類投與該配位體及他汀(例如阿托伐他汀)。

86.如申明85之方法，其中該配位體及他汀係分開投與。

87.如申明85之方法，其中該配位體及他汀係同時投與。

88.如申明74至87中任一項之方法，其中該配位體係藉由皮下注射投與。

90.如申明89之方法，其中步驟(a)包含選擇包含藉由(i)或(ii)之該核苷酸序列編碼之PCSK9蛋白之人類。

91.如申明89或90之方法，其中該抗體或抗體片段特異性結合該PCSK9胺基酸序列。

92.如申明89或90之方法，其中該抗體或抗體片段結合第二PCSK9蛋白，該第二PCSK9蛋白包含藉由(i)選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列；及/或(ii)其編碼PCSK9蛋白之催化域或C-末端域之核苷酸序列編碼的胺基酸序列。

93.如申明89或90之方法，其中該抗體包含來源於人類VH基因節段、人類D基因節段與人類JH節段之重組的VH域，該VH基因節段包含以下核苷酸序列，該核苷酸序列包含與如指示於rs56069819(SEQ ID NO 41)中之核苷酸C的單核苷酸多形現象。

94.如申明93之方法，其中該VH基因節段為 VH3-23*04。

95.如申明89-93中任一項之方法，其中該抗體包含VH域，其中該VH域包含SEQ ID NO：38之構架1序列。

96.如申明89-95中任一項之方法，其中該人類已確定為包含(i)及/或(ii)之核苷酸序列。

97.如申明89至96中任一項之方法，其中該人類已確定為包含藉由(i)及/或(ii)之核苷酸序列編碼的第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)變異蛋白。

98.如申明89至97中任一項之方法，其包含確定該人類包含(i)及/或(ii)之核苷酸序列的步驟。

99.如申明98之方法，其中在向該人類投與該抗體之前進行該確定步驟。

100.如申明89-99中任一項之方法，其包含確定人類包含藉由(i)及/或(ii)之核苷酸序列編碼的第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)變異蛋白之步驟。

101.如申明100之方法，其中在向該人類投與該抗體之前進行該確定步驟。

102.如申明100或101之方法，其中該確定步驟包含針對(i)選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列；及/或(ii)編碼該PCSK9變異蛋白之催化域或C-末端域之核苷酸序列分析來自該人類的生物樣品。

103.如申明102之方法，其中該分析包含使該生物樣品接觸

a.至少一個包含至少10個連續核苷酸之序列的寡核苷酸探針，該序列可在生物樣品中特異性雜交至且識別選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列或至少其催化域或C-末端域編碼序列，或特異性雜交至該序列之反義，其中該核酸雜交至至少一個存在於該選定序列而不存在於SEQ ID NO：28中的核苷酸或雜交至反義序列，藉此當存在至少一個選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列或至少其催化域或C-末端域編碼序列時形成複合物；及/或b.至少一個寡核苷酸探針，該寡核苷酸探針包含至少10個具有選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列之連續核苷酸之序列或包含該等連續核苷酸的反義序列，其中該連續核苷酸序列包含至少一個存在於該選定序列而不存在於SEQ ID NO：28中之核苷酸，藉此當存在選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列時形成複合物；及偵測是否存在該複合物，其中偵測到該複合物之存在確定該人類包含該PCSK9變異蛋白。

104.如申明102或103之方法，其中該分析包含核酸擴增及視情況存在之一或多種選自定序、下一代定序、核酸雜交及對偶基因特異性擴增之方法。

105.如申明102至104中任一項之方法，其中該分析以多重格式進行。

106.如申明102至105中任一項之方法，其進一步包含獲得來自該人類之該生物樣品。

107.如申明89至106中任一項之方法，其中該人類經進一步確定或已經進一步確定為實質上對他汀治療具有抗性。

108.如申明89至107中任一項之方法，其中該人類正接受或已接受他汀治療或對他汀治療反應減小。

109.如申明89至108中任一項之方法，其中另外向該人類投與他汀。

110.如申明89至108中任一項之方法，其中該抗體或抗體片段及該他汀係分開或同時投與。

111.如申明106至110中任一項之方法，其中該生物樣品包含該人類之血清、血液、糞便、組織、細胞、尿液及/或唾液。

112.如申明89至111中任一項之方法，其中該人類指示為對選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列及/或其編碼PCSK9蛋白之催化域或C-末端域編碼序列的核苷酸序列為異型接合。

113.如申明89至112中任一項之方法，其中該人類進一步指示為包含核苷酸序列SEQ ID NO：28及/或其催化域或C-末端域編碼序列。

114.如申明89至113中任一項之方法，其中該人類指示為對選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列及/或其催化域或C-末端域編碼序列為同型接合。

115.如申明89至114中任一項之方法，其中該人類已診斷為患有至少一種選自脂質失調、高脂蛋白血症、高脂質血症；血脂異常；高膽固醇血症、心臟病發作、中風、冠心病、動脈粥樣硬化、周邊血管疾病、跛行II型糖尿病、高血壓及心血管疾病或病狀之病狀。

116.如申明89至115中任一項之方法，其中該方法治療或預防該人類中之至少一種選自脂質失調、高脂蛋白血症、高脂質血症；血脂異常；高膽固醇血症、心臟病發作、中風、冠心病、動脈粥樣硬化、周邊血管疾病、跛行、II型糖尿病、高血壓及心血管疾病或病狀之病狀。

本發明之其他申明

1.一種抗人類PCSK9配位體，其用於治療及/或預防人類中之PCSK9介導之疾病或病狀的方法，該人類之基因組包含選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列，其中該方法包含向該人類投與該配位體。

2.如申明1之配位體，其中該配位體已經確定或經確定為能夠結合選自由形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群的人類PCSK9。

3.一種結合包含選自由SEQ ID NO：4-27組成之群的胺基酸序列之人類PCSK9之配位體，該配位體用於包含使用配位體靶向人類中的該PCSK9以治療及/或預防藉由PCSK9介導之疾病或病狀之步驟的方法，該方法包含向該人類投與該配位體。

4.如申明3之配位體，其中該人類基因組包含選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列。

5.如前述申明中任一項之配位體，其中已將該人類基因分型或將該人類基因分型為對選自由SEQ ID NO：29-37 組成之群的核苷酸序列或至少其催化域或C-末端域編碼序列為陽性。

6.如前述申明中任一項之配位體，其中已將該人類表型分型或將該人類表型分型為對選自由形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群的人類PCSK9或至少其催化域或C-末端域為陽性。

7.如前述申明中任一項之配位體，其中方法包含將該人類基因分型為對選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列或至少其催化域或C-末端域編碼序列為陽性。

8.如前述申明中任一項之配位體，其中方法包含將該人類表型分型為對選自由形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群的人類PCSK9或至少其催化域為陽性。

9.如前述申明中任一項之配位體，其中已將該人類基因分型或將該人類基因分型為對選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列或至少其催化域或C-末端域編碼序列為異型接合；視情況其中已將該人類基因分型或將該人類基因分型為包含核苷酸序列SEQ ID NO：28或至少其催化域或C-末端域編碼序列以及選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸或至少其催化域或C-末端域編碼序列序列。

10.如申明1至9中任一項之配位體，其中已將該人類基因組基因分型或將該人類基因組基因分型為對選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列或至少其催化域或C-末端域編碼序列為同型接合。

11.如前述申明中任一項之配位體，其中該配位體包含結合人類PCSK9且視情況已經確定或經確定為能夠實現此類結合之抗體結合位點，該人類PCSK9包含選自由SEQ ID NO：4-27組成之群的胺基酸序列。

12.如申明11之配位體，其中該配位體為抗體或抗體片段。

13.如申明1至10中任一項之配位體，其中(i)該配位體包含連續核苷酸序列，該連續核苷酸序列特異性雜交至選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列或至少其催化域或C-末端域編碼序列，或特異性雜交至該序列之反義序列或RNA轉錄物，其中該連續核苷酸序列雜交至至少一個存在於該選定序列中而不存在於SEQ ID NO：28中之核苷酸或分別雜交至其反義序列或RNA轉錄物；及/或(ii)該配位體包含至少10個具有選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列之連續核苷酸序列或為該連續核苷酸之反義序列或RNA型式，其中該連續核苷酸序列包含至少一個存在於該選定序列中而不存在於SEQ ID NO：28中的核苷酸。

14.如前述申明中任一項之配位體，其中該疾病或病狀為高脂質血症、高膽固醇血症、心臟病發作、中風、冠心病、動脈粥樣硬化或心血管疾病或病狀。

15.如前述申明中任一項之配位體，其中該疾病或病狀與較高LDL膽固醇相關聯。

16.如前述申明中任一項之配位體，其中該配位體抑制結合至人類LDL受體之人類PCSK9且視情況已確定或確定為能夠實現此類抑制。

17.如前述申明中任一項之配位體，其中該人類實質上對該疾病或病狀之他汀治療具有抗性。

18.如前述申明中任一項之配位體，其中該配位體用於治療及/或預防人類中之PCSK9介導之疾病或病狀

(i)該人類之基因組包含SEQ ID NO：29，且其中該人類具有ASW、YRI、GBR、TSI、CLM、LWK、MXL、JPT、PUR、IBS、FIN或CEU血統；或(ii)該人類之基因組包含SEQ ID NO：30，且其中該人類具有ASW、YRI、GBR、TSI、CLM、CHB、LWK、CHS、JPT、PUR、FIN或CEU血統；或(iii)該人類之基因組包含SEQ ID NO：32，且其中該人類具有ASW、GBR、TSI、CLM、JPT、PUR、IBS、FIN或CEU血統；或(iv)該人類之基因組包含SEQ ID NO：33，且其中該人類具有LWK、ASW、YRI或CLM血統；或(v)該人類之基因組包含SEQ ID NO：34，且其中該人類具有LWK、ASW或YRI血統；或(vi)該人類之基因組包含SEQ ID NO：35，且其中該人類具有PUR、TSI、FIN或CEU血統；或(vii)該人類之基因組包含SEQ ID NO：36，且其中該人類具有LWK、ASW或YRI血統；或(viii)該人類之基因組包含SEQ ID NO：37，且其中該人類具有CHS、ASW、JPT、PUR或CHB血統。

19.如前述申明中任一項之配位體，其中該配位體用於治療及/或預防人類中的PCSK9介導之疾病或病狀

(i)該人類表現PCSK9 f形式，且其中該人類具有ASW、YRI、GBR、TSI、CLM、LWK、MXL、JPT、PUR、IBS、FIN或CEU血統；或(ii)該人類表現PCSK9 c形式，且其中該人類具有ASW、YRI、GBR、TSI、CLM、CHB、LWK、CHS、JPT、PUR、FIN或CEU血統；或(iii)該人類表現PCSK9 p形式，且其中該人類具有ASW、GBR、TSI、CLM、JPT、PUR、IBS、FIN或CEU血統；或(iv)該人類表現PCSK9 m形式，且其中該人類具有LWK、ASW、YRI或CLM血統；或(v)該人類表現PCSK9 e形式，且其中該人類具有LWK、ASW或YRI血統；或(vi)該人類表現PCSK9 h形式，且其中該人類具有PUR、TSI、FIN或CEU血統；或(vii)該人類表現PCSK9 aj形式，且其中該人類具有LWK、ASW或YRI血統；或(viii)該人類表現PCSK9 q形式，且其中該人類具有CHS、ASW、JPT、PUR或CHB血統。

20.如前述申明中任一項之配位體，其中該配位體為特異性結合至選自形式f、c、m、e、h、p、q及aj之人類PCSK9的抗體或抗體片段，其中該抗體或片段包含來源於人類VH基因節段、人類D基因節段與人類JH基因節段之重組的VH 域，該VH基因節段包含以下核苷酸序列，該核苷酸序列包含SEQ ID NO：39或其互補序列。

21.如申明20之配位體，其中該VH基因節段為VH3-23*04(SEQ ID NO：38)。

22.如申明20或21之配位體，其中該配位體用於治療及/或預防人類中的PCSK9介導之疾病或病狀，該人類表現選自形式f、c、m、e、h、p、q及aj之人類PCSK9。

23.如申明20至22中任一項之配位體，其中該配位體用於治療及/或預防具有ASW、LWK、YRI、CEU或GBR血統之人類中的PCSK9介導之疾病或病狀。

24.一種用於治療及/或預防PCSK9介導之病狀或疾病(例如如申明15或16中所列舉)之醫藥組成物或套組，該組成物或套組包含如前述申明中任一項的配位體及視情況存在之他汀(例如阿托伐他汀)；及視情況與標識或使用說明書組合以治療及/或預防人類中的該疾病或病狀(例如涵蓋治療如申明18或19中所列舉的人類)；視情況其中該等標識或說明書包含銷售授權號(例如FDA或EMA授權號)；視情況其中該等標識或說明書包含向該人類投與阿利若單抗或依伏洛單抗之說明；視情況其中該套組包含IV或注射裝置，該IV或注射裝置包含該配位體(及例如亦包括他汀)。

25.一種產生抗人類PCSK9抗體結合位點之方法，該方法包含獲得多個抗PCSK9抗體結合位點，篩檢該等用於結合至選自由形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群的人類PCSK9或其包含與對應序列SEQ ID NO：1、2或3之胺基酸變異之催化域或C-末端域或肽的抗體結合位點，及分離在該篩檢步驟中結合之抗體結合位點，且視情況產生形式f、c、r、p、m、e、h、aj或q PCSK9結合片段或該經分離抗體之衍生物。

26.一種產生抗人類PCSK9抗體之方法，該方法包含使用包含選自由形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q之胺基酸序列組成之群的胺基酸序列之人類PCSK9或其包含與對應序列SEQ ID NO：1、2或3之胺基酸變異之催化域或C-末端域或肽使非人類脊椎動物(例如小鼠或大鼠)免疫，及分離結合包含選自由形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群的人類PCSK9或其包含與對應序列SEQ ID NO：1、2或3之胺基酸變異的催化域或C-末端域或肽的抗體，以及視情況產生形式f、c、r、p、m、e、h、aj或q PCSK9結合片段或經分離抗體之衍生物。

27.如申明25或26之方法，其包含獲得編碼該抗體、片段、衍生物或結合位點之核酸及視情況將該核酸插入表現載體中之步驟。

28.一種用於PCSK9將人類基因分型之套組，其中該套組包含核酸，該核酸(i)包含連續核苷酸序列，該連續核苷酸序列特異性雜交至選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列或至少其催化域或C-末端域編碼序列或特異性雜交至該序列之反義序列或RNA轉錄物，其中該連續核苷酸序列雜交至至少一個存在於該選定序列而不存在於SEQ ID NO：28中的核苷酸或雜交至其反義序列或RNA轉錄物；及/或(ii)包含至少10個具有選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列之連續核苷酸之序列或包含該等連續核苷酸之反義序列或RNA型式，其中該連續核苷酸序列包含至少一個存在於該選定序列而不存在於SEQ ID NO：28中的核苷酸。

29.一種用於PCSK9將人類基因分型或表型分型之套組，其中該套組包含如申明1至23中任一項之配位體或藉由申明25至27中任一項之方法產生的抗體、片段或衍生物。

30.一種結合選自由形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群的人類PCSK9之抗PCSK9配位體之用途，其用於製造藥劑，該藥劑用於治療及/或預防基因組包含選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列之人類中的PCSK9介導之疾病或病狀，視情況用於治療及/或預防如申明18或19中所列舉的人類中之PCSK9介導之疾病或病狀。

31.一種結合選自由形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群的人類PCSK9之抗PCSK9配位體之用途，其用於製造藥劑，該藥劑用於靶向人類中的該PCSK9以治療及/或預防藉由PCSK9介導之疾病或病狀，視情況用於靶向如申明18或19中所列舉的人類中之PCSK9。

32.如申明30或31之用途，其中該配位體、人類、疾病或病狀如申明1至19中任一項。

33.一種PCSK9將人類核酸樣品基因分型之方法，該方法包含識別該樣品中選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列或其催化域或C-末端域編碼序列之存在。

34.一種PCSK9將人類蛋白樣品分型之方法，該方法包含識別該樣品中選自由形式f、c、r、p、m、e、h、aj及q組成之群的人類PCSK9之存在。

35.如申明33或34之方法，其包含自人類獲得血清、血液、糞便、頭髮、組織、細胞、尿液或唾液樣品，藉此獲得核酸或蛋白樣品且用於識別該序列之步驟中。

36.如申明33至35中任一項之方法，其包含使用如申明1至19中任一項之配位體以進行該識別步驟。

37.一種診斷性、治療性或預防性套組，該套組包含能夠結合至或已經確定或經確定為能夠結合至選自SEQ ID NO：4-27之胺基酸序列的配位體及用於進行申明34至36中任一項之方法的說明書及/或指示或涵蓋向如申明1至23中任一項中所定義的人類投與該配位體之標識或說明書。

38.一種診斷性、治療性或預防性套組，該套組包含核酸探針及用於進行申明33、35或36之方法的說明書，該核酸探針包含特異性雜交至選自由SEQ ID NO：29-37組成之群的核苷酸序列或其反義序列或RNA轉錄物之核苷酸序列。

本發明之其他申明

A.一種在有需要之人類中減少膽固醇位準或維持先前減少的膽固醇位準之方法，該方法包含向該人類投與特異性結合包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)的抗體或抗體片段，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之突變I474或E670G，其中該抗體或片段包含人類 γ-2重鏈恆定區，該人類γ-2重鏈恆定區包含選自由對應於SEQ ID NO：44之位置72的Pro、對應於SEQ ID NO：44之位置75的Asn、對應於SEQ ID NO：44之位置76的Phe、對應於SEQ ID NO：44之位置161的Val及對應於SEQ ID NO：44之位置257的Ala組成之群的胺基酸，且其中該人類包含(i)IGHG2*01人類重鏈恆定區基因節段，或該人類表現包含人類γ-2重鏈恆定區之抗體，該等人類γ-2重鏈恆定區包含對應於SEQ ID NO：44之位置72的Pro、對應於SEQ ID NO：44之位置75的Asn、對應於SEQ ID NO：44之位置76的Phe、對應於SEQ ID NO：44之位置的Val及對應於SEQ ID NO：44之位置257的Ala；及(ii)編碼該包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)之核苷酸序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中的該突變I474V或E670G。

B.如申明A之方法，其中該抗體或片段包含人類γ-2重鏈恆定區，該人類γ-2重鏈恆定區包含(i)對應於SEQ ID NO：44之位置72的Pro、對應於SEQ ID NO：44之位置75的Asn、對應於SEQ ID NO：44之位置76的Phe及視情況存在之(ii)對應於SEQ ID NO：44之位置161的Val及/或對應於SEQ ID NO：44之位置257的Ala；且其中該人類基因組包含編碼(i)之此類胺基酸的γ-2重鏈恆定區核苷酸序列或該人類表現包含人類γ-2恆定區之抗體，該等人類γ-2恆定區包含(i)之此類胺基酸。

C.如申明A或B之方法，其中該抗體或片段包含人類γ-2重鏈恆定區，該人類γ-2重鏈恆定區包含(i)對應於SEQ ID NO：44之位置161的Val及對應於SEQ ID NO：44之位置257的Ala及視情況存在之(ii)選自由對應於SEQ ID NO：44之位置72的Pro、對應於SEQ ID NO：44之位置75的Asn及對應於SEQ ID NO：44之位置76的Phe組成之群的胺基酸；且其中該人類基因組包含編碼(i)之此類胺基酸之γ-2重鏈恆定區核苷酸序列或該人類表現包含人類γ-2恆定區之抗體，該等人類γ-2恆定區包含(i)之此類胺基酸。

D.如前述申明中任一項之方法，其中該抗體或抗體片段特異性結合包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之突變I474或E670G，其中該抗體或片段包含人類γ-2重鏈恆定區，該人類γ-2重鏈恆定區包含對應於SEQ ID NO：44之位置72的Pro、對應於SEQ ID NO：44之位置75的Asn、對應於SEQ ID NO：44之位置76的Phe、對應於SEQ ID NO：44之位置161的Val及對應於SEQ ID NO：44之位置257的Ala，且其中該人類包含(i)IGHG2*01人類重鏈恆定區基因節段及(ii)編碼該包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)之核苷酸序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變。

E.如前述申明中任一項之方法，其中該抗體或片段包含IGHG2*01人類重鏈恆定區。

F.如前述申明中任一項之方法，在該投與之前包含選擇包含(ii)之該核苷酸序列的人類，其中該人類為申明1之人類。

G.如前述申明中任一項之方法，其中已確定該人類包含編碼包含C-末端域之PCSK9的核苷酸序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G及/或藉由核苷酸序列SEQ ID NO：29或30編碼的第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)變異蛋白。

H.如前述申明中任一項之方法，其包含確定該人類包含編碼包含C-末端域之PCSK9的核苷酸序列之步驟，該C-末端域包含該突變I474V或E670G及/或包含該突變I474V或E670G之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)變異蛋白，視情況，其中在向該人類投與該抗體之前進行確定步驟。

I.如申明H之方法，其中該確定步驟包含針對編碼包含C-末端域之PCSK9的核苷酸序列分析來自人類之生物樣品，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之突變I474V或E670G。

J.如申明I之方法，其中該分析包含使該生物樣品接觸

a.至少一個包含至少10個連續核苷酸之序列的寡核苷酸探針，該序列可在生物樣品中特異性雜交至且識別編碼包含C-末端域之PCSK9的核苷酸序列或特異性雜交至該序列之反義，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之突變I474V或E670G，其中該核酸雜交至至少一個存在於該選定序列而不存在於SEQ ID NO：28中的核苷酸或雜交至反義序列，藉此當存在至少一個編碼該包含C-末端域之PCSK9的核苷酸序列時形成複合物，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G；及/或b.至少一個寡核苷酸探針，該寡核苷酸探針包含至少10個具有編碼包含C-末端域之PCSK9的核苷酸序列之連續核苷酸之序列或包含該等連續核苷酸之反義序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之突變I474V或E670G，其中該連續核苷酸序列包含至少一個存在於該選定序列而不存在於SEQ ID NO：28中之核苷酸，藉此當存在編碼該包含C-末端域之PCSK9的核苷酸序列時形成複合物，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G；及偵測是否存在該複合物，其中偵測到該複合物之存在確定該人類包含有該包含C-末端域之PCSK9，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G。

K.如申明I之方法，其中該分析包含核酸擴增及視情況存在之一或多種選自定序、下一代定序、核酸雜交及對偶基因特異性擴增之方法，及/或其中該分析以多重格式進行。

L.如前述申明中任一項之方法，其中該人類經進一步確定或已經進一步確定為實質上對他汀治療具有抗性。

M.如前述申明中任一項之方法，其中該人類正接受或已接受他汀治療或對他汀治療反應減小。

N.如前述申明中任一項之方法，其中該人類經進一步確定或已經進一步確定為實質上對他汀治療具有抗性。

O.如申明G之方法，其中該人類正接受或已接受他汀治療或對他汀治療反應減小。

P.如前述申明中任一項之方法，其中該抗體或抗體片段係與該他汀治療分開或同時向該人類投與。

Q.如申明M之方法，其中該抗體或抗體片段係與該他汀治療分開或同時向該人類投與。

R.如申明O之方法，其中該抗體或抗體片段係與該他汀治療分開或同時向該人類投與。

S.如申明I之方法，其中該生物樣品包含該人類之血清、血液、糞便、組織、細胞、尿液及/或唾液。

T.如前述申明中任一項之方法，其中該人類指示為對編碼包含該突變I474V或E670G之PCSK9 C-末端域的核苷酸序列為異型接合，視情況，其中該人類進一步指示為包含核苷酸序列SEQ ID NO：28，或該人類指示為對編碼包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G的PCSK9 C-末端域之核苷酸序列為同型接合。

U.如前述申明中任一項之方法，其中該人類已診斷為患有至少一種選自脂質失調、高脂蛋白血症、高脂質血症、血脂異常、高膽固醇血症、心臟病發作、中風、冠心病、動脈粥樣硬化、周邊血管疾病、跛行及高血壓之病狀。

V.如前述申明中任一項之方法，其中該抗體或抗體片段治療該人類中至少一種選自脂質失調、高脂蛋白血症、高脂質血症、血脂異常、高膽固醇血症、低脂質血症、低膽固醇血症、心臟病發作、中風、冠心病、動脈粥樣硬化、周邊血管疾病、跛行及高血壓之病狀或減小發生該病狀的風險。

W.如申明Q之方法，其中該人類已診斷為患有至少一種選自脂質失調、高脂蛋白血症、高脂質血症、血脂異常、高膽固醇血症、心臟病發作、中風、冠心病、動脈粥樣硬化、周邊血管疾病、跛行及高血壓之病狀。

X.如申明Q之方法，其中該抗體或抗體片段治療該人類中至少一種選自脂質失調、高脂蛋白血症、高脂質血症、血脂異常、高膽固醇血症、低脂質血症、低膽固醇血症、心臟病發作、中風、冠心病、動脈粥樣硬化、周邊血管疾病、跛行及高血壓之病狀或減小發生該病狀的風險。

Y.如前述申明中任一項之方法，其中該核苷酸序列為SEQ ID NO：29或30。

Z.如前述申明中任一項之方法，其中該抗體或抗體片段係藉由靜脈內投與或皮下投與，及/或包含在可注射製劑中。

AA.如申明Q之方法，其中該抗體或抗體片段係藉由靜脈內投與或皮下投與，及/或包含在可注射製劑中。

本發明之其他申明

1.一種抗體或抗體片段，其用於在有需要之人類中減少膽固醇位準或維持先前減少的膽固醇位準之方法，其中該抗體或片段包含人類γ-2重鏈恆定區，該人類γ-2重鏈恆定區包含選自由對應於SEQ ID NO：44之位置72的Pro、對應於SEQ ID NO：44之位置75的Asn、對應於SEQ ID NO：44之位置76的Phe、對應於SEQ ID NO：44之位置161的Val及對應於SEQ ID NO：44之位置257的Ala組成之群的胺基酸，且該抗體特異性結合包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之突變I474V或E670G，其中該人類包含(i)IGHG2*01人類重鏈恆定區基因節段，或該人類表現包含人類γ-2重鏈恆定區之抗體，該等人類γ-2重鏈恆定區包含該選自由對應於SEQ ID NO：44之位置72的Pro、對應於SEQ ID NO：44之位置75的Asn、對應於SEQ ID NO：44之位置76的Phe、對應於SEQ ID NO：44之位置的Val及對應於SEQ ID NO：44之位置257的Ala組成之群的胺基酸；及(ii)編碼該包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)之核苷酸序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G。

2.如申明1之抗體或抗體片段，其中該抗體或片段包含人類γ-2重鏈恆定區，該人類γ-2重鏈恆定區包含(a)對應於SEQ ID NO：44之位置72的Pro、對應於SEQ ID NO：44之位置75的Asn、對應於SEQ ID NO：44之位置76的Phe及視情況存在之(b)對應於SEQ ID NO：44之位置161的Val及/或對應於SEQ ID NO：44之位置257的Ala；且其中該人類基因組包含編碼(a)之此類胺基酸的γ-2重鏈恆定區核苷酸序列或該人類表現包含人類γ-2恆定區之抗體，該等人類γ-2恆定區包含(a)之此類胺基酸。

3.如申明1之抗體或抗體片段，其中該抗體或片段包含人類γ-2重鏈恆定區，該人類γ-2重鏈恆定區包含(c)對應於SEQ ID NO：44之位置161的Val及對應於SEQ ID NO：44之位置257的Ala及視情況存在之(d)選自由對應於SEQ ID NO：44 之位置72的Pro、對應於SEQ ID NO：44之位置75的Asn及對應於SEQ ID NO：44之位置76的Phe組成之群的胺基酸；且其中該人類基因組包含編碼(c)之此類胺基酸之γ-2重鏈恆定區核苷酸序列或該人類表現包含人類γ-2恆定區之抗體，該等人類γ-2恆定區包含(c)之此類胺基酸。

4.如申明1之抗體或抗體片段，其中該抗體或抗體片段特異性結合包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之突變I474V或E670G，其中該抗體或片段包含人類γ-2重鏈恆定區，該人類γ-2重鏈恆定區包含對應於SEQ ID NO：44之位置72的Pro、對應於SEQ ID NO：44之位置75的Asn、對應於SEQ ID NO：44之位置76的Phe、對應於SEQ ID NO：44之位置161的Val及對應於SEQ ID NO：44之位置257的Ala，且其中該人類包含(e)IGHG2*01人類重鏈恆定區基因節段及(f)編碼該包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)之核苷酸序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變。

5.如申明1至4中任一項之抗體或抗體片段，其中該抗體或片段包含IGHG2*01人類重鏈恆定區。

6.如申明1至5中任一項之抗體或抗體片段，在投與該抗體或片段之前該方法包含選擇包含(ii)之該核苷酸序列之人類，其中該人類為申明1之人類。

7.如申明1至6中任一項之抗體或抗體片段，其中已確定該人類包含編碼包含C-末端域之PCSK9的核苷酸序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G及/或藉由核苷酸序列SEQ ID NO：29或30編碼的第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)變異蛋白。

8.如申明1至7中任一項之抗體或抗體片段，該方法包含確定該人類包含編碼包含C-末端域之PCSK9及/或包含該突變I474V或E670G的第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)變異蛋白之核苷酸序列之步驟，該C-末端域包含該突變I474V或E670G，視情況，其中在向該人類投與該抗體之前進行確定步驟。

9.如申明8之抗體或抗體片段，其中該確定步驟包含針對編碼該包含C-末端域之PCSK9的核苷酸序列分析來自該人類之生物樣品，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G。

10.如申明9之抗體或抗體片段，其中該分析包含使該生物樣品接觸

a.至少一個包含至少10個連續核苷酸之序列的寡核苷酸探針，該序列可在該生物樣品中特異性雜交至且識別編碼包含C-末端域之PCSK9的核苷酸序列或特異性雜交至該序列之反義，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G，其中該核酸雜交至至少一個存在於該選定序列而不存在於SEQ ID NO：28中的核苷酸或雜交至反義序列，藉此當存在至少一個編碼包含C-末端域之PCSK9的核苷酸序列時形成複合物，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G；及/或 b.至少一個寡核苷酸探針，該寡核苷酸探針包含至少10個具有編碼包含C-末端域之PCSK9的核苷酸序列之連續核苷酸之序列或包含該等連續核苷酸之反義序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G，其中該連續核苷酸序列包含至少一個存在於該選定序列而不存在於SEQ ID NO：28中之核苷酸，藉此當存在編碼該包含C-末端域之PCSK9的核苷酸序列時形成複合物，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G；及偵測是否存在該複合物，其中偵測到該複合物之存在確定該人類包含有該包含C-末端域之PCSK9，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G。

11.如申明9之抗體或抗體片段，其中該分析包含核酸擴增及視情況存在之一或多種選自定序、下一代定序、核酸雜交及對偶基因特異性擴增之方法，及/或其中該分析係以多重格式進行。

12.如申明1至11中任一項之抗體或抗體片段，其中進一步確定或已進一步確定該人類實質上對他汀治療具有抗性。

13.如申明1至12中任一項之抗體或抗體片段，其中該人類正接受或已接受他汀治療或對他汀治療反應減小。

14.如申明12或13之抗體或抗體片段，其中該抗體或抗體片段係用於與該他汀治療分別或同時向人類投與。

15.如申明9至11中任一項之抗體或抗體片段，其中該生物樣品包含該人類之血清、血液、糞便、組織、細胞、尿液及/或唾液。

16.如申明1至15中任一項之抗體或抗體片段，其中該人類指示為對編碼包含該突變I474V或E670G之PCSK9 C-末端域的核苷酸序列為異型接合，視情況，其中該人類進一步指示為包含核苷酸序列SEQ ID NO：28，或該人類指示為對編碼包含SEQ ID NO：1中之該突變I474V或E670G的PCSK9 C-末端域之核苷酸序列為同型接合。

17.如申明1至16中任一項之抗體或抗體片段，其中該人類已診斷為患有至少一種選自脂質失調、高脂蛋白血症、高脂質血症、血脂異常、高膽固醇血症、心臟病發作、中風、冠心病、動脈粥樣硬化、周邊血管疾病、跛行及高血壓之病狀。

18.如申明1至17中任一項之抗體或抗體片段，其中該抗體或抗體片段係用於治療該人類中至少一種選自脂質失調、高脂蛋白血症、高脂質血症、血脂異常、高膽固醇血症、心臟病發作、中風、冠心病、動脈粥樣硬化、周邊血管疾病、跛行及高血壓之病狀或減少發生該病狀的風險。

19.如申明1至18中任一項之抗體或抗體片段，其中該核苷酸序列為SEQ ID NO：29或30。

20.如申明1至19中任一項之抗體或抗體片段，其中該抗體或抗體片段係用於藉由靜脈內投與或皮下投與及/或包含在可注射製劑中。

<110> 凱美寶有限公司

<120> 用於膽固醇治療之標靶人類第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)之技術

<130> 069496/080094

<140>

<141>

<160> 78

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 692

<212> PRT

<213> 智人

<400> 1

<210> 2

<211> 662

<212> PRT

<213> 智人

<400> 2

<210> 3

<211> 540

<212> PRT

<213> 智人

<400> 3

<210> 4

<211> 692

<212> PRT

<213> 智人

<400> 4

<210> 5

<211> 662

<212> PRT

<213> 智人

<400> 5

<210> 6

<211> 540

<212> PRT

<213> 智人

<400> 6

<210> 7

<211> 692

<212> PRT

<213> 智人

<400> 7

<210> 8

<211> 662

<212> PRT

<213> 智人

<400> 8

<210> 9

<211> 540

<212> PRT

<213> 智人

<400> 9

<210> 10

<211> 692

<212> PRT

<213> 智人

<400> 10

<210> 11

<211> 662

<212> PRT

<213> 智人

<400> 11

<210> 12

<211> 540

<212> PRT

<213> 智人

<400> 12

<210> 13

<211> 692

<212> PRT

<213> 智人

<400> 13

<210> 14

<211> 662

<212> PRT

<213> 智人

<400> 14

<210> 15

<211> 692

<212> PRT

<213> 智人

<400> 15

<210> 16

<211> 662

<212> PRT

<213> 智人

<400> 16

<210> 17

<211> 540

<212> PRT

<213> 智人

<400> 17

<210> 18

<211> 692

<212> PRT

<213> 智人

<400> 18

<210> 19

<211> 662

<212> PRT

<213> 智人

<400> 19

<210> 20

<211> 540

<212> PRT

<213> 智人

<400> 20

<210> 21

<211> 692

<212> PRT

<213> 智人

<400> 21

<210> 22

<211> 662

<212> PRT

<213> 智人

<400> 22

<210> 23

<211> 540

<212> PRT

<213> 智人

<400> 23

<210> 24

<211> 692

<212> PRT

<213> 智人

<400> 24

<210> 25

<211> 662

<212> PRT

<213> 智人

<400> 25

<210> 26

<211> 692

<212> PRT

<213> 智人

<400> 26

<210> 27

<211> 662

<212> PRT

<213> 智人

<400> 27

<210> 28

<211> 2080

<212> DNA

<213> 智人

<400> 28

<210> 29

<211> 2080

<212> DNA

<213> 智人

<400> 29

<210> 30

<211> 2080

<212> DNA

<213> 智人

<400> 30

<210> 31

<211> 2080

<212> DNA

<213> 智人

<400> 31

<210> 32

<211> 2080

<212> DNA

<213> 智人

<400> 32

<210> 33

<211> 2080

<212> DNA

<213> 智人

<400> 33

<210> 34

<211> 2080

<212> DNA

<213> 智人

<400> 34

<210> 35

<211> 2080

<212> DNA

<213> 智人

<400> 35

<210> 36

<211> 2080

<212> DNA

<213> 智人

<400> 36

<210> 37

<211> 2080

<212> DNA

<213> 智人

<400> 37

<210> 38

<211> 98

<212> PRT

<213> 智人

<400> 38

<210> 39

<211> 296

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(294)

<400> 39

<210> 40

<211> 25

<212> PRT

<213> 智人

<400> 40

<210> 41

<211> 990

<212> DNA

<213> 智人

<400> 41

<210> 42

<211> 330

<212> PRT

<213> 智人

<400> 42

<210> 43

<211> 978

<212> DNA

<213> 智人

<400> 43

<210> 44

<211> 326

<212> PRT

<213> 智人

<400> 44

<210> 45

<211> 296

<212> DNA

<213> 智人

<400> 45

<210> 46

<211> 98

<212> PRT

<213> 智人

<400> 46

<210> 47

<211> 296

<212> DNA

<213> 智人

<400> 47

<210> 48

<211> 98

<212> PRT

<213> 智人

<400> 48

<210> 49

<211> 321

<212> DNA

<213> 智人

<400> 49

<210> 50

<211> 107

<212> PRT

<213> 智人

<400> 50

<210> 51

<211> 318

<212> DNA

<213> 智人

<400> 51

<210> 52

<211> 106

<212> PRT

<213> 智人

<400> 52

<210> 53

<211> 365

<212> DNA

<213> 智人

<400> 53

<210> 54

<211> 101

<212> PRT

<213> 智人

<400> 54

<210> 55

<211> 654

<212> DNA

<213> 智人

<400> 55

<210> 56

<400> 56

000

<210> 57

<211> 39

<212> DNA

<213> 智人

<400> 57

<210> 58

<211> 12

<212> PRT

<213> 智人

<400> 58

<210> 59

<211> 38

<212> DNA

<213> 智人

<400> 59

<210> 60

<211> 12

<212> PRT

<213> 智人

<400> 60

<210> 61

<211> 329

<212> PRT

<213> 智人

<400> 61

<210> 62

<211> 107

<212> PRT

<213> 智人

<400> 62

<210> 63

<211> 326

<212> PRT

<213> 智人

<400> 63

<210> 64

<211> 105

<212> PRT

<213> 智人

<400> 64

<210> 65

<211> 326

<212> PRT

<213> 智人

<400> 65

<210> 66

<211> 107

<212> PRT

<213> 智人

<400> 66

<210> 67

<211> 7

<212> PRT

<213> 智人

<400> 67

<210> 68

<211> 52

<212> DNA

<213> 智人

<400> 68

<210> 69

<211> 296

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(294)

<400> 69

<210> 70

<211> 98

<212> PRT

<213> 智人

<400> 70

<210> 71

<211> 294

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(294)

<400> 71

<210> 72

<211> 296

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(294)

<400> 72

<210> 73

<211> 98

<212> PRT

<213> 智人

<400> 73

<210> 74

<211> 294

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(294)

<400> 74

<210> 75

<211> 98

<212> PRT

<213> 智人

<400> 75

<210> 76

<211> 296

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(294)

<400> 76

<210> 77

<211> 294

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(294)

<400> 77

<210> 78

<211> 98

<212> PRT

<213> 智人

<400> 78

Claims

一種抗體或抗體片段，其用於在有需要之人類中減少膽固醇位準或維持先前減少的膽固醇位準，其中該抗體包含衍生自人類VH基因節段、人類D基因節段與人類JH基因節段之重組的一VH域，該人類VH節段包含在對應於SEQ ID NO：40之位置5的胺基酸處之纈胺酸，且該抗體特異性結合一包含C-末端域之第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)胺基酸序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中的突變I474V、E670G、N425S或Q619P，其中該人類包含編碼該胺基酸序列之核苷酸序列及編碼SEQ ID NO：40之構架1的VH基因節段。
如請求項1之抗體或抗體片段，其中該VH域係衍生自SEQ ID NO：39之人類VH基因節段VH3-23*04與人類D節段及人類JH節段之重組。
如請求項1之抗體或抗體片段，其中由該人類所包含的該VH基因節段為SEQ ID NO：39之VH3-23*04。
如請求項1至3中任一項之抗體或抗體片段，其中該抗體包含VH域，其中該VH域包含SEQ ID NO：40之構架1序列。
如請求項1至4中任一項之抗體或抗體片段，其中該人類已被確定包含以下核苷酸序列，該核苷酸序列編碼包含C-末端域之PCSK9及/或藉由核苷酸序列SEQ ID NO：30編碼的第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)變異蛋白，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之突變E670G。
如請求項1至4中任一項之抗體或抗體片段，其包含確定該人類包含核苷酸序列之步驟，該核苷酸序列編碼包含C-末端域的PCSK9及/或包含突變E670G的第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶(PCSK9)變異蛋白，該C-末端域包含突變E670G，選擇性地，其中在向該人類投與該抗體之前進行該確定步驟。
如請求項6之抗體或抗體片段，其中該確定步驟包含針對來自該人類之生物樣品分析有關編碼該包含該C-末端域之PCSK9的核苷酸序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變E670G。
如請求項7之抗體或抗體片段，其中該分析包含使該生物樣品接觸a.至少一個包含至少10個連續核苷酸之序列的寡核苷酸探針，其可在該生物樣品中特異性雜交至且識別編碼該包含該C-末端域之PCSK9的核苷酸序列，或其特異性雜交至該序列之反義，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變E670G，其中該核酸雜交到至少一個存在於該選定序列而不存在於SEQ ID NO：28中的核苷酸或者雜交至反義序列，藉此當至少一個編碼該包含該C-末端域之PCSK9的核苷酸序列存在時形成複合物，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變E670G；及/或b.至少一個寡核苷酸探針，該寡核苷酸探針包含至少10個具有編碼該包含該C-末端域之PCSK9的核苷酸序列之連續核苷酸之序列，或者包含該等連續核苷酸之反義序列，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變E670G，其中該連續核苷酸序列包含至少一個存在於該選定序列而不存在於SEQ ID NO：28中之核苷酸，藉此當編碼該包含該C-末端域之PCSK9的核苷酸序列存在時形成複合物，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變E670G；及偵測該複合物之存在或不存在，其中偵測到該複合物之存在確定該人類包含有該包含C-末端域之PCSK9，該C-末端域包含SEQ ID NO：1中之該突變E670G。
如請求項7之抗體或抗體片段，其中該分析包含核酸擴增及選擇性一或多種選自定序、下一代定序、核酸雜交及對偶基因特異性擴增之方法，及/或其中該分析係以多重格式進行。
如請求項1至9中任一項之抗體或抗體片段，其中該抗體或抗體片段係用於投與至一人類，該人類經進一步確定或已經進一步確定為實質上對他汀治療具有抗性。
如請求項1至10中任一項之抗體或抗體片段，其中該抗體或抗體片段係用於投與至一人類，該人類正接受或已接受他汀治療或對他汀治療反應降低。
如請求項10或11之抗體或抗體片段，其中該抗體或抗體片段係用於與該他汀治療分別或同時投與至該人類。
如請求項7至9中任一項之抗體或抗體片段，其中該生物樣品包含該人類之血清、血液、糞便、組織、細胞、尿液及/或唾液。
如請求項1至13中任一項之抗體或抗體片段，其中該人類被指徵為對編碼包含突變E670G之PCSK9 C-末端域的核苷酸序列為異型接合，選擇性地，其中該人類進一步被指徵為包含核苷酸序列SEQ ID NO：28，或該人類被指徵為對編碼包含SEQ ID NO：1中之突變E670G的PCSK9 C-末端域之核苷酸序列為同型接合。
如請求項1至14中任一項之抗體或抗體片段，其中該人類已診斷為患有至少一種選自脂質失調、高脂蛋白血症、高脂質血症、血脂異常、高膽固醇血症、心臟病發作、中風、冠心病、動脈粥樣硬化、周邊血管疾病、跛行及高血壓之病狀。
如請求項1至15中任一項之抗體或抗體片段，其中該抗體或抗體片段治療該人類中至少一種選自下列之症狀，或降低該症狀之風險脂質失調、高脂蛋白血症、高脂質血症、血脂異常、高膽固醇血症、心臟病發作、中風、冠心病、動脈粥樣硬化、周邊血管疾病、跛行及高血壓。
如請求項1至16中任一項之抗體或抗體片段，其中該核苷酸序列為SEQ ID NO：30。
如請求項1至17中任一項之抗體或抗體片段，其中該抗體或抗體片段係用於藉由靜脈內投與或皮下投與及/或包含在可注射製劑中。
如前述請求項中任一項之抗體或抗體片段，其中該突變為SEQ ID NO：1中之I474V或E670G。
如前述請求項中任一項之抗體或抗體片段，其中該突變為SEQ ID NO：1中之I474V。
如前述請求項中任一項之抗體或抗體片段，其中該突變為SEQ ID NO：1中之E670G。
如前述請求項中任一項之抗體或抗體片段，其中該抗體或片段特異性結合至人類PCSK9形式f。
如前述請求項中任一項之抗體或抗體片段，其中該人類表現選自形式f、e、p及aj之PCSK9。
如前述請求項中任一項之抗體或抗體片段，其中該人類具有ASW、LWK、YRI、CEU或GBR血統。
如請求項24之抗體或抗體片段，其中該人類具有ASW血統且該人類表現選自形式f、e、p及aj之人類PCSK9，選擇性地，其中該抗體或其片段包含衍生自人類VH-23*04之重組的一VH域。
如請求項24之抗體或抗體片段，其中該人類具有LWK血統，且該人類表現選自形式f、e、p及aj之人類PCSK9，選擇性地，其中該抗體或其片段包含衍生自人類VH-23*04之重組的一VH域。
如請求項24之抗體或抗體片段，其中該人類具有YRI血統且該人類表現選自形式f、e、p及aj之人類PCSK9，選擇性地，其中該抗體或其片段包含衍生自人類VH-23*04之重組的一VH域。
如請求項24之抗體或抗體片段，其中該人類具有CEU血統且該人類表現選自形式f、e、p及aj之人類PCSK9，選擇性地，其中該抗體或其片段包含衍生自人類VH-23*04之重組的一VH域。
如請求項24之抗體或抗體片段，其中該人類具有GBR血統且該人類表現選自形式f、e、p及aj之人類PCSK9，選擇性地，其中該抗體或其片段包含衍生自人類VH-23*04之重組的一VH域。
如請求項24之抗體或抗體片段，其中該人類之基因組包含選自由SEQ ID NO 29、32、34及36組成之群的核苷酸序列，其中該抗體或片段分別特異性結合至選自形式f、e、p及aj之人類PCSK9，且其中該VH節段包含一核苷酸序列，該核苷酸序列包含SEQ ID NO 39或其互補序列，選擇性地，其中該VH基因節段為VH3-23*04(SEQ ID NO 38)。