TW201506403A - 丙戊酸及其代謝物的量測方法及其系統 - Google Patents

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Abstract

本發明提供一種量測丙戊酸及其代謝物的方法，其包含：(a)提供一含有丙戊酸或丙戊酸代謝物之樣本；(b)利用一溶劑萃取分離出該樣本中的丙戊酸或丙戊酸代謝物，以得到一萃取物；(c)提供一內部標準品，並加入該萃取物中；(d)將一衍生反應試劑加入該萃取物，並加熱進行衍生反應，以得到一含有具衍生反應試劑標記的產物之衍生溶液；及(e)利用基質輔助雷射脫附游離法及質量分析器以分析測定該具衍生反應試劑標記的產物，並計算丙戊酸或丙戊酸代謝物的含量。本發明另提供一種量測丙戊酸及其代謝物的系統及套組。

Description

丙戊酸及其代謝物的量測方法及其系統
本發明是關於一種量測丙戊酸及其代謝物的方法、系統及套組。
丙戊酸(valproic acid，VPA)為臨床上常用的小分子脂肪酸藥物，其廣泛用來治療各類癲癇症和做為情緒穩定用藥，神經醫學常使用此藥物預防神經退化性疾病和作為保護神經系統功用。
目前丙戊酸可做為口服製劑、糖漿和注射等劑型，在治療各適應症有不同的血中濃度，此外，因丙戊酸主要是透過肝臟進行藥物代謝，使用過量會造成肝毒性，且造成胎兒畸形與神經管發與缺陷等副作用。近年來，癌症研究中發現丙戊酸可抑制癌細胞的增生做為治療癌症的新用途。
在臨床治療應用上，劑量不當可能造成產生副作用，如肝衰竭、小兒胰臟炎與高氨血症。代謝中，丙戊酸主要透過肝臟CYP450酵素進行代謝，產生50種代謝產物，其中主要代謝物2-丙基-4-戊烯酸(2-propyl-4-pentenoic acid)具有肝毒性，可進行二次代謝轉換為(E)-2,4-二烯VPA((E)-2,4-diene VPA)，造成藥物引起肝臟損傷(drug-induced liver injury，DILI)。因此，無論單一使用或是用於合併療法上，在臨床上，必須 謹慎監控病人丙戊酸的血中濃度。
在血液中的丙戊酸超過90%會與血液中的蛋白質(albumin protein)結合，並增加血液中監測的困難度。由於血液檢體成分複雜，包含血漿血球抗體與血漿蛋白等，過去文獻使用血液萃取方式，包含有機溶液萃取(liquid liquid extraction，LLE)及固相萃取法(solid-phase extraction，SPE)。
固相萃取法是常用於過濾與分離的技術，依照待測樣本種類有不同的萃取相，使用固相萃取管匣來進行血液前處理，萃取步驟包含活化管柱(activate)、潤洗(washing)、加入(loading)及沖提(elute)，獲得待測物後再以其他方法進行分析。
另一方面，目前可透過包含液相層析質譜儀(liquid chromatography mass spectrometry)和氣相層析質譜儀(gas chromatography mass spectrometry)測量丙戊酸濃度。在測量過程中，以固相萃取法進行前處理，加入內部標準品並搭配上述質譜儀以測定血液丙戊酸的濃度；此外，另有文獻(名稱：Simultaneous determination of mycophenolic acid and valproic acid based on derivatization by high-performance liquid chromatography with fluorescence detection，Biomedical Chromatography 2006，20(4)：319-26)利用具螢光偵測的液相層析儀用以同時測量血漿中黴酚酸及丙戊酸的方法，其在前處理時需利用含氯的有機溶劑處理樣本，在透過分析儀器測量過程中，並無法分析化合物結構；此外，該文獻使用此儀器分析樣本的時間相當冗長。
上述的分析方法，其缺點在於在分析過程中僅能分析一個樣 本，前處理耗費成本高，且血液前處理步驟加上液相分析儀平衡及分析時間冗長。因此，市場上仍期待開發一套快速及安全之偵測丙戊酸的方法，以作為個體醫療上臨床用藥的依據。
有鑑於過去分析丙戊酸及其代謝物方法的缺點，本發明利用丙戊酸化學衍生方法，並利用基質輔助雷射脫附游離法及質量分析器進行應用結構分析及定量。
本發明的定量方法可選用丙戊酸同位素或丙戊酸代謝物同位素，如d6-丙戊酸(valproic acid-d6，丙戊酸之氘標定形式)作為內部標準品(internal standard)。
在本文中所述的「丙戊酸同位素或丙戊酸代謝物之同位素」是丙戊酸或其代謝物利用有機化學合成，在甲基團(-CH3)以氘取代氫原子的同位素化合物，d6-丙戊酸與丙戊酸及其代謝物2-丙基-4-戊烯酸(4-ene valproic acid)均具有羧基團(-COOH)，如圖1所示，本發明利用此內部標準品d6-丙戊酸共同經由化學衍生反應，以衍生反應試劑標記，基質輔助雷射脫附游離法及質量分析器。根據質譜儀質量分析器分析內部標準品之波峰面積，與待測樣本的波峰面積相比，將其數值帶入丙戊酸或其代謝物2-丙基-4-戊烯酸的檢量線，即可偵測待測樣本中的丙戊酸或2-丙基-4-戊烯酸的含量。
是以，本發明提供一種量測丙戊酸及其代謝物的方法，其包含以下步驟：(a)提供一含有丙戊酸或丙戊酸代謝物之樣本；(b)利用一溶 劑萃取分離出該樣本中的丙戊酸或丙戊酸代謝物，以得到一萃取物；(c)提供一內部標準品，並加入該萃取物中，其中該內部標準品為丙戊酸同位素或丙戊酸代謝物同位素；(d)將一衍生反應試劑加入該萃取物，並加熱進行化學衍生反應，一含有具衍生反應試劑標記的產物之衍生溶液，其中該具衍生反應試劑標記的產物包含具衍生反應試劑標記的丙戊酸、具衍生反應試劑標記的丙戊酸代謝物或具衍生反應試劑標記的內部標準品；及(e)利用基質輔助雷射脫附游離法及質量分析器以分析測定該衍生溶液，並利用該具衍生反應試劑標記的內部標準品計算丙戊酸或丙戊酸代謝物的含量。
在一具體實施例中，該樣本為血液樣本或藥品樣本。當該樣本為血液樣本時，可在步驟(a)與(b)之間包含以下前處理步驟：將該血液樣本離心以分離出血球部份及血清部份；及取出該血清部份並與一酸性溶液混合進行酸化而得到一待測樣本。在另一具體實施例中，該酸性溶液可為磷酸、鹽酸或硫酸。當該樣本為藥品樣本時，可在步驟(a)與(b)之間包含：將該藥品樣本研磨至細粉狀。
在一具體實施例中，本發明用來萃取分離出丙戊酸或丙戊酸代謝物的溶劑為正己烷、甲苯、二氯甲烷或乙腈。
在一具體實施例中，本發明所使用的衍生反應試劑是4-溴甲基-6,7-二甲氧基香豆素(BrDMC)或4-溴甲基-7-甲氧基香豆素(BrMMC)，其濃度範圍約為0.25-5mM。
在一具體實施例中，本發明所使用的丙戊酸同位素為d6-丙戊酸。
在一具體實施例中，本發明所使用的基質輔助雷射脫附游離法，其基質可為α-氰基-4-羥基桂皮酸、二羥基苯甲酸或3,5-二甲氧基-4-羥基桂皮酸。
在一具體實施例中，本發明可利用的質量分析器包括但不限於，飛行式時間質量分析器(time of flight analyzer,TOF analyzer)、四極棒質量分析器(quadrupole analyzer)、離子阱質量分析器(ion trap analyzer)或傅立葉轉換質量分析器(Fourier transform-ion cyclotron resonance，FT-ICR)。
在另一實施例中，本發明可利用高效液相層析紫外光儀(HPLC-UV)或液態層析質譜儀(LC/MS/MS)測定樣本濃度。
本文所述的丙戊酸代謝物包含2-丙基-4-戊烯酸(4-ene VPA)、2-丙基-3-羥基戊烯酸(3-OH丙戊酸)、2-丙基-4-羥基戊烯酸(4-OH丙戊酸)、2-丙基-5-羥基戊烯酸(5-OH丙戊酸)、2-丙基-2-戊烯酸(2-ene VPA)、2-丙基-3-戊烯酸(3-ene VPA)、2-丙基-3-酮基戊烯酸(3-keto VPA)或2-丙基-4-酮基戊烯酸(4-keto VPA)、2,4二烯丙戊酸(2,4-diene VPA)。
在一具體實施例中，本發明量測方法的萃取物可為萃取液或萃取液乾燥而得的萃取物。
在一具體實施例中，本發明量測方法於步驟(d)中可另將活化劑及/或催化劑加入該萃取物中，催化劑可增加化學衍生反應效率。在一較佳實施例中，該活化劑為碳酸鉀或碳酸氫鉀，其濃度範圍約為0.5-6毫克；在另一較佳實施例中，該催化劑可為1,4,7,10,13,16-六氧雜環十八烷，其濃度範圍約為0.01-25mM。
另一方面，本發明另提供一種用於量測丙戊酸及其代謝物之 系統，其包含：一內部標準品，其為丙戊酸同位素或丙戊酸代謝物同位素；一衍生反應試劑，用以在化學衍生反應中標記丙戊酸、丙戊酸代謝物或內部標準品；一加熱器，用以加熱進行化學衍生反應；一基質，其可吸收波長330-360nm雷射光束，其中該基質為α-氰基-4-羥基桂皮酸、二羥基苯甲酸或3,5-二甲氧基-4-羥基桂皮酸；一雷射光源，用以發射一雷射光；及一質量分析器，用以分析測定樣本中丙戊酸或丙戊酸代謝物的含量。
在一具體實施例中，本發明系統所使用的衍生反應試劑為4-溴甲基-6,7-二甲氧基香豆素(BrDMC)或4-溴甲基-7-甲氧基香豆素(BrMMC)，其濃度範圍約為0.25-5mM。
在一具體實施例中，本發明系統另包含一活化劑及/或一催化劑。在一較佳實施例中，本發明系統所使用的活化劑為碳酸鉀或碳酸氫鉀，其濃度範圍約為0.5-6毫克；在另一較佳實施例中，本發明系統所使用的催化劑為1,4,7,10,13,16-六氧雜環十八烷，其濃度範圍約為0.01-25mM。
本發明亦提供一種用於量測丙戊酸及其代謝物之套組，其包含：一內部標準品，其包含丙戊酸同位素或丙戊酸代謝物同位素；一衍生反應試劑，其用以在化學衍生反應中標記丙戊酸、丙戊酸代謝物或內部標準品；及一基質，其可吸收波長330-360nm雷射光束。
在一具體實施例中，本發明套組的衍生反應試劑為4-溴甲基-6,7-二甲氧基香豆素(BrDMC)或4-溴甲基-7-甲氧基香豆素(BrMMC)。
在一具體實施例中，本發明套組的基質為α-氰基-4-羥基桂 皮酸、二羥基苯甲酸或3,5-二甲氧基-4-羥基桂皮酸。
在一具體實施例中，本發明套組另包含一活化劑及/或一催化劑。在一較佳實施例中，本發明套組所使用的活化劑為碳酸鉀或碳酸氫鉀，其濃度範圍約為0.5-6毫克；在另一較佳實施例中，本發明套組所使用的催化劑為1,4,7,10,13,16-六氧雜環十八烷，其濃度範圍約為0.01-25mM。
在一具體實施例中，本發明套組另包含一加熱器，用以加熱進行化學衍生反應。
在一具體實施例中，本發明套組另包含一質量分析器，用以分析測定樣本中丙戊酸或丙戊酸代謝物的含量。
在一較佳實施例中，本發明的量測方法的檢測時間僅需約50分鐘，透過基質輔助雷射脫附游離飛行時間質譜儀(MALDI-TOF MS)分析，可直接分析300個以上的血液樣本，適用於大量的檢體檢測。另一方面，在藥物製劑應用上，可用於藥物分析及藥廠生產品質管理。此外，利用本發明的量測套組，待測樣本進行化學衍生反應過程，以一般的微波爐加熱，即可進行分析。
本發明方法及套組可專一性檢測丙戊酸及其代謝物，相對於其他量測方法，可完全避免生物性干擾，僅需微量的樣本及試劑即可獲得精確的數值，無論應用在醫學檢測或製藥藥物分析，均為快速、有效率及具環保特質的分析方法。
本說明書及申請專利範圍中所用之詞語『包含』、『具有』、『包括』或『含有』為包括在內的或開放式的，且其不排除額外未引用之元件 或方法步驟。
茲以下列具體實施態樣以進一步例示說明本發明，其中該些實施態樣僅提供作為說明，而非用以限制本發明之範疇。
圖1為本發明的化學衍生反應流程圖。
圖2為本發明量測丙戊酸及其代謝物的化學衍生反應步驟過程。
圖3為丙戊酸血液檢量線。
圖4為2-丙基-4-戊烯酸血液檢量線。
圖2為本發明量測丙戊酸及其代謝物的步驟過程。本發明除了可分析服用丙戊酸藥品病患的血液，亦可應用分析丙戊酸藥品的純度與含量。
實施例1：血液樣本
樣本取得及前處理(步驟101)
取得受檢測者的血液樣本，進行前處理(pretreatment)：將血液樣本分離出血球部份及血清部份，採取20μL血清作為待測樣本，由於血清為組成複雜的生化樣本，需進一步將酸性溶液(磷酸、鹽酸或硫酸)加入待測的血液樣本調整pH值使其酸化以便從血清部份取出丙戊酸或2-丙基-4-戊烯酸。將1μL 85%磷酸與待測樣本均勻混合，其目的在於將血液中游離態丙戊酸經酸化成還原態丙戊酸，而游離態2-丙基-4-戊烯酸經酸化 後成為還原態2-丙基-4-戊烯酸。
樣本萃取(步驟102)
加入溶劑萃取，可選擇脂溶性溶劑，如正己烷、甲苯或二氯甲烷，本實例選用100μL甲苯作為萃取的溶劑。將溶劑和樣本震盪30秒至2分鐘後，以高速冷凍離心機離心1-30分鐘(10000-13000rpm，4℃)，取出80μL萃取液至另一微量離心管，並將取出的有機層以真空抽氣濃縮機乾燥後，接續化學衍生反應步驟。
內部標準品與化學衍生反應(步驟103、104)
將5μL丙戊酸同位素或丙戊酸代謝物同位素(如80-100μM d6-丙戊酸)加入含有丙戊酸及2-丙基-4-戊烯酸的萃取物，作為內部標準品(步驟103)，並加入活化劑、催化劑及衍生反應試劑進行化學衍生反應(步驟104)以增加偵測敏感度。
本實例所使用的活化劑為2mg碳酸鉀，催化劑為5μL 1,4,7,10,13,16-六氧雜環十八烷(18-crown-6，10mM)和衍生反應試劑為5μL 4-溴甲基-6,7-二甲氧基香豆素(4-bromomethyl-6,7-dimethoxy coumarin，BRDMC)。
接著，透過乾式加熱法(30℃-80℃、10-60分鐘)或微波加熱法(150-190W、2-10分鐘)加熱進行化學衍生反應，以獲得具標記(tag)的衍生溶液，其中該衍生溶液包含具衍生反應試劑標記的丙戊酸、具衍生反應試劑標記的2-丙基-4-戊烯酸及/或具衍生反應試劑標記的d6-丙戊酸。
樣本分析測定(步驟105)
取出0.5μL衍生溶液進行基質輔助雷射脫附游離法，將衍生溶液放置(loading)於樣本盤上，覆蓋0.5μL的基質溶液(5mg/mL)，使衍生溶液與基質溶液均勻混合，待乾揮發後，基質和衍生溶液中具衍生反應試劑標記的產物形成結晶狀固態物。
本發明所使用的基質溶液可選擇吸收波長330-360nm雷射光束的α-氰基-4-羥基桂皮酸(α-cyano-4-hydroxycinnamic acid，CHCA)、二羥基苯甲酸(2,5-dihydroxybenzoic acid，DHB)或3,5-二甲氧基-4-羥基桂皮酸(3,5-dimethoxy-4-hydroxycinnamic acid，sinapic acid，SA)。在本實施例中，基質溶液係使用5-10mg/mL α-氰基-4-羥基桂皮酸(CHCA)。
接著利用雷射光束(波長330-360nm)照射該結晶狀固態物，使該結晶狀固態物被激發以形成氣相離子，該氣相離子可經由電場加速進入一質量分析器，進一步偵測該氣相離子之荷質比(m/z)，以獲得待測物的分子量。
在本實例中，該質量分析器可選擇飛行式時間質量分析器(time of flight analyzer，TOF analyzer)、、四極棒質量分析器(quadrupole analyzer)、離子阱質量分析器(ion trap analyzer)或傅立葉轉換質量分析器(Fourier transform-ion cyclotron resonance，FT-ICR)。
最後根據質譜儀的質量分析器分析具衍生反應試劑標記的d6-丙戊酸的波峰面積，與具衍生反應試劑標記的丙戊酸及具衍生反應試劑標記的2-丙基-4-戊烯酸(4-ene valproic acid)的樣本之波峰面積相比，將數值帶入丙戊酸或2-丙基-4-戊烯酸的檢量線，即可計算出該待測樣本中的丙戊酸或2-丙基-4-戊烯酸的含量。
另一方面，本實例亦可使用高效液相層析紫外光儀(HPLC-UV)或液態層析質譜儀(LC/MS/MS)偵測待測樣本的濃度。
實施例2：藥品樣本
樣本取得及前處理(步驟101)
將錠劑劑型的藥品以物理性方法將藥品研磨至細粉，如研缽工具磨碎。
樣本萃取(步驟102)
取藥品細粉，加入溶劑溶解萃取，如甲苯、乙腈，本實例選用乙腈(藥品與溶劑比例：1毫克/μL)，並利用超音波震盪5-15分鐘，萃取出丙戊酸，接著以10000-13000rpm高速離心3-10分鐘，接續化學衍生反應步驟。
內部標準品與化學衍生反應(步驟103、104)
取出萃取液10μL加入丙戊酸同位素或丙戊酸代謝物同位素，作為內部標準品(步驟103)，並加入活化劑、催化劑及衍生反應試劑進行化學衍生反應(步驟104)。
本實例所使用的活化劑為2mg碳酸鉀，催化劑為10μL 1,4,7,10,13,16-六氧雜環十八烷(18-crown-6，0-25mM)和衍生反應試劑為5μL 4-溴甲基-6,7-二甲氧基香豆素(4-bromomethyl-6,7-dimethoxy coumarin，BRDMC)。
透過乾式加熱法(30℃-80℃、10-60分鐘)或微波加熱法(150-190W、2-10分鐘)加熱進行化學衍生反應，以獲得具標記(tag)的衍生溶液，其中該衍生溶液包含具衍生反應試劑標記的丙戊酸及/或具衍 生反應試劑標記的d6-丙戊酸。
樣本分析測定(步驟105)
取出0.5μL衍生溶液進行基質輔助雷射脫附游離法，將衍生溶液放置於樣本盤上，覆蓋0.5μL的基質溶液(10mg/mL)，使衍生溶液與基質溶液均勻混合，待乾揮發後，基質和衍生溶液中具衍生反應試劑標記的產物形成結晶狀固態物。
本發明所使用的基質溶液可選擇吸收波長330-360nm雷射光束的α-氰基-4-羥基桂皮酸(α-cyano-4-hydroxycinnamic acid，CHCA)、二羥基苯甲酸(2,5-dihydroxybenzoic acid，DHB)或3,5-二甲氧基-4-羥基桂皮酸(3,5-dimethoxy-4-hydroxycinnamic acid，sinapic acid，SA)。在本實施例中，基質溶液係使用5-10mg/mL α-氰基-4-羥基桂皮酸(CHCA)。
接著利用雷射光束(波長330-360nm)照射該結晶狀固態物，使該結晶狀固態物被激發以形成氣相離子，該氣相離子可經由電場加速進入一質量分析器，進一步偵測該氣相離子之荷質比(m/z)，以獲得待測物的分子量。
在本實例中，該質量分析器可選擇飛行式時間質量分析器(time of flight analyzer，TOF analyzer)、四極棒質量分析器(quadrupole analyzer)、離子阱質量分析器(ion trap analyzer)或傅立葉轉換質量分析器(Fourier transform-ion cyclotron resonance，FT-ICR)。
最後根據質譜儀的質量分析器分析具衍生反應試劑標記的d6-丙戊酸的波峰面積，與具衍生反應試劑標記的丙戊酸的樣本之波峰面積相比，將數值帶入丙戊酸的檢量線，即可計算出該待測樣本中丙戊酸的含 量。
另一方面，本實例亦可使用高效液相層析紫外光儀(HPLC-UV)或液態層析質譜儀(LC/MS/MS)偵測待測樣本的濃度。
表一為實施例1及實施例2中不同樣本在化學衍生步驟及分析步驟中的反應試劑列表。
實施例3：將丙戊酸或其代謝物直接添加至血液中分析
經由同日與異日分析結果，透過本發明的量測方法，血液中的丙戊酸及其代謝物2-丙基-4-戊烯酸(4-ene valproic acid)經衍生反應標記後呈現良好的線性關係，分別設計六個濃度建立丙戊酸及2-丙基-4-戊烯酸的檢量線如圖3及4。
丙戊酸血液定量範圍10-1000μM，毒性代謝物2-丙基-4-戊烯酸血液定量範圍為5-500μM，決定係數(coefficient of determination，R2)大於0.999，相對標準偏差(relative standard deviation，RSD)小於5.73%。上述結果證實本發明的方法具高穩定性與再現性，可量測病患使用丙戊酸 藥物後血液的丙戊酸及代謝物之含量，同時可監控藥物治療濃度，作為個體醫療上用藥的依據。
實施例4
本實例的受檢測者口服500毫克丙戊酸製劑後4小時，利用本發明方法步驟檢測丙戊酸及其代謝物的平均濃度，其結果如表二所示。由表二的結果可得知，當相對標準差的數值越小，表示利用本發明之檢測步驟越精準，且數據信賴度越高。
實施例5
又，利用本發明之量測方法應用於藥物分析上，以臨床藥物作為樣本，進行藥物含量分析(tablet assay)均勻度檢測(uniformity assay)，並建立標準品檢量線進行定量，決定係數(coefficient of determination，R2)大於0.998，且從表三結果來看，本實例中的相對標準差(relative standard deviation，RSD)小於2.77%，藥物純度在藥廠標示的範圍內，故本發明的檢測步驟所造成的分析結果符合生產管理標準。
本實例所述的「回收率」是指利用本發明方法定量含丙戊酸藥物實際重量/藥物製造商標示含丙戊酸藥物重量×100%，當回收率越高及越接近100%，代表本發明方法越精準。
在本發明中敘述的具體實施例是為了說明及描述本發明，並不代表這些具體實施例就已詳述或侷限本發明於一定的形式或內容。從上述教導中可做出許多可能的修改及變化。
選擇上述的事實與例子僅為了用於解釋本發明之原理及其實際用途，俾使熟悉本領域或專業之人士能夠運用或實施本發明，甚至於修改而適用於其他各種狀況。熟悉本領域或專業之人士亦可因而啟發出另外的應用，只要不悖離本發明之宗旨，均屬於本發明之內容。因此本發明的範圍係定義於申請專利範圍中，而非這些敘述及範例中。

Claims (22)

  1. 一種丙戊酸及其代謝物的量測方法，其包含以下步驟：(a)提供一含有丙戊酸或丙戊酸代謝物之樣本；(b)利用一溶劑萃取分離出該樣本中的丙戊酸或丙戊酸代謝物，以得到一萃取物；(c)提供一內部標準品，並加入該萃取物中，其中該內部標準品為丙戊酸同位素或丙戊酸代謝物同位素；(d)將一衍生反應試劑加入該萃取物，並加熱進行化學衍生反應，以得到一含有具衍生反應試劑標記的產物之衍生溶液，其中該具衍生反應試劑標記的產物包含具衍生反應試劑標記的丙戊酸、具衍生反應試劑標記的丙戊酸代謝物或具衍生反應試劑標記的內部標準品；及(e)利用基質輔助雷射脫附游離法及質量分析器以分析測定該衍生溶液，並利用該具衍生反應試劑標記的內部標準品計算丙戊酸或丙戊酸代謝物的含量。
  2. 如申請專利範圍第1項所述之量測方法，其中該樣本為血液樣本或藥品樣本。
  3. 如申請專利範圍第2項所述之量測方法，其中該血液樣本可在步驟(a)與(b)之間包含以下前處理步驟：將該血液樣本離心以分離出血球部份及血清部份；及取出該血清部份並與一酸性溶液混合進行酸化而得到一待測樣本。
  4. 如申請專利範圍第3項所述之量測方法，其中該酸性溶液為磷酸、鹽酸或硫酸。
  5. 如申請專利範圍第2項所述之量測方法，其中該藥品樣本可在步驟(a)與(b)之間包含：將該藥品樣本研磨至細粉狀。
  6. 如申請專利範圍第1項所述之量測方法，其中該溶劑為正己烷、甲苯、二氯甲烷或乙腈。
  7. 如申請專利範圍第1項所述之量測方法，其中該衍生反應試劑為4-溴甲基-6,7-二甲氧基香豆素(BrDMC)或4-溴甲基-7-甲氧基香豆素(BrMMC)。
  8. 如申請專利範圍第7項所述之量測方法，其中該衍生反應試劑的濃度範圍為0.25-5mM。
  9. 如申請專利範圍第1項所述之量測方法，其中該丙戊酸同位素為d6-丙戊酸。
  10. 如申請專利範圍第1項所述之量測方法，其中該質量分析器為飛行式時間質量分析器、四極棒質量分析器、離子阱質量分析器、傅立葉轉換質量分析器。
  11. 如申請專利範圍第1項所述之量測方法，其中該丙戊酸代謝物包含2-丙基-4-戊烯酸(4-ene VPA)、2-丙基-3-羥基戊烯酸(3-OH丙戊酸)、2-丙基-4-羥基戊烯酸(4-OH丙戊酸)、2-丙基-5-羥基戊烯酸(5-OH丙戊酸)、2-丙基-2-戊烯酸(2-ene VPA)、2-丙基-3-戊烯酸(3-ene VPA)、2-丙基-3-酮基戊烯酸(3-keto VPA)或2-丙基-4-酮基戊烯酸(4-keto VPA)、2,4二烯丙戊酸(2,4-diene VPA)。
  12. 如申請專利範圍第1項所述之量測方法，其中於步驟(d)中可另將活化劑及/或催化劑加入該萃取物中。
  13. 如申請專利範圍第12項所述之量測方法，其中該活化劑為碳酸鉀或碳酸氫鉀；該催化劑為1,4,7,10,13,16-六氧雜環十八烷。
  14. 如申請專利範圍第13項所述之量測方法，其中該活化劑的濃度範圍為0.5-6毫克；該催化劑的濃度範圍為0.01-25mM。
  15. 一種用於量測丙戊酸及其代謝物之系統，其包含：一內部標準品，其為丙戊酸同位素或丙戊酸代謝物同位素；一衍生反應試劑，用以在化學衍生反應中標記丙戊酸、丙戊酸代謝物或內部標準品；一加熱器，用以加熱進行化學衍生反應；一基質，其可吸收波長330-360nm雷射光束，其中該基質為α-氰基-4-羥基桂皮酸、二羥基苯甲酸或3,5-二甲氧基-4-羥基桂皮酸；一雷射光源，用以發射一雷射光；及一質量分析器，用以分析測定樣本中丙戊酸或丙戊酸代謝物的含量。
  16. 如申請專利範圍第15項所述之系統，其中該衍生反應試劑為4-溴甲基-6,7-二甲氧基香豆素(BrDMC)或4-溴甲基-7-甲氧基香豆素(BrMMC)。
  17. 如申請專利範圍第15項所述之系統，其另包含一活化劑及/或一催化劑。
  18. 如申請專利範圍第17項所述之系統，其中該活化劑為碳酸鉀或碳酸氫鉀；該催化劑為1,4,7,10,13,16-六氧雜環十八烷。
  19. 一種用於量測丙戊酸及其代謝物之套組，其包含：一內部標準品，其包含丙戊酸同位素或丙戊酸代謝物同位素；一衍生反應試劑，其用以在化學衍生反應中標記丙戊酸、丙戊酸代謝物或內部標準品，該衍生反應試劑為4-溴甲基-6,7-二甲氧基香豆素 (BrDMC)或4-溴甲基-7-甲氧基香豆素(BrMMC)；及一基質，其可吸收波長330-360nm雷射光束，該基質為α-氰基-4-羥基桂皮酸、二羥基苯甲酸或3,5-二甲氧基-4-羥基桂皮酸。
  20. 如申請專利範圍第19項所述之套組，其另包含一活化劑及/或一催化劑。
  21. 如申請專利範圍第19項所述之套組，其另包含一加熱器，用以加熱進行化學衍生反應。
  22. 如申請專利範圍第19項所述之套組，其另包含一質量分析器，用以分析測定樣本中丙戊酸或丙戊酸代謝物的含量。
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