TW201408294A - (r)-苯基披喇瑟盪於治療帕金森氏症之用除 - Google Patents

(r)-苯基披喇瑟盪於治療帕金森氏症之用除 Download PDF

Info

Publication number
TW201408294A
TW201408294A TW102123815A TW102123815A TW201408294A TW 201408294 A TW201408294 A TW 201408294A TW 102123815 A TW102123815 A TW 102123815A TW 102123815 A TW102123815 A TW 102123815A TW 201408294 A TW201408294 A TW 201408294A
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
phenyl
agent
day
phenylpyrazine
disease
Prior art date
Application number
TW102123815A
Other languages
English (en)
Inventor
Hermann Russ
Andrzej Dekundy
Wojciech Danysz
Original Assignee
Merz Pharma Gmbh & Co Kgaa
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Merz Pharma Gmbh & Co Kgaa filed Critical Merz Pharma Gmbh & Co Kgaa
Publication of TW201408294A publication Critical patent/TW201408294A/zh

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
    • A61K31/165—Amides, e.g. hydroxamic acids having aromatic rings, e.g. colchicine, atenolol, progabide
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
    • A61K31/197—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group the amino and the carboxyl groups being attached to the same acyclic carbon chain, e.g. gamma-aminobutyric acid [GABA], beta-alanine, epsilon-aminocaproic acid or pantothenic acid
    • A61K31/198—Alpha-amino acids, e.g. alanine or edetic acid [EDTA]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/4015—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil having oxo groups directly attached to the heterocyclic ring, e.g. piracetam, ethosuximide
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/485—Morphinan derivatives, e.g. morphine, codeine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/496—Non-condensed piperazines containing further heterocyclic rings, e.g. rifampin, thiothixene or sparfloxacin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Psychology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本發明係關於對患有帕金森氏症之個體的有效治療，此及時治療包含對於該個體以有效劑量之(R)-苯基披喇瑟盪((R)-phenylpiracetam)及其醫藥上可接受之鹽投藥。

Description

用於治療帕金森氏症之苯基披喇瑟盪之使用
本發明係關於對患有帕金森氏症(Parkinson’s diseases(PD))之個體的有效治療，此及時治療包含對於該個體以有效劑量之(R)-苯基披喇瑟盪((R)-phenylpiracetam)及其醫藥上可接受之鹽投藥。
本發明係關於治療患有帕金森氏症之病患的方法。
帕金森氏症係為最普遍的慢性神經性性疾病中的其中一種。帕金森氏症之典型症狀為動作緩慢(行動遲緩(bradykinesia)/運動失能症(akinesia))、僵硬、和/或顫抖。這些症狀可能具有自發性、毒性、創傷性、或基因的起源(例如是帕金森氏症)或亦可能是治療的結果，例如在精神分裂症(schizophrenia)(帕金森氏症症狀)給予多巴胺受體(receptor)促效劑(antagonist)。如今特別是在患病的早期階段，這些行動上的阻礙都可以各種目前現有之帕金森氏症藥物作有效的治療。
近日，帕金森氏症症狀的主要治療係基於多巴胺替 代療法之投藥(如左旋多巴(levodopa，L-DOPA))和/或多巴胺受體促效劑之療法(如普拉克索(pramipexole))。使用上述其中一種療法之長期治療可能導致運動異常(dyskinesia)的產生，運動異常係為可能發生於帕金森氏症患者中最重要的運動併發症。雖然接受多巴胺受體促效劑治療的患者較不容易發展為運動異常，但已有報導指出，其他非運動(non-motor)的副作用如嗜眠症(somnolence)、便秘(constipation)、眩暈(dizziness)、噁心(nausea)、和幻覺(hallucination)會隨著多巴胺受體促效劑之治療而增加。而長期使用左旋多巴之治療會導致其抗帕金森氏症功效(anti-parkinsonian efficacy)的降低以及發展為左旋多巴誘導的運動異常(L-DOPA-induced dyskinesia，LID)。
此外，近年來日益意識到對於帕金森氏症所謂的非 運動型症狀(non-motor symptoms)之治療卻多半缺乏令人滿意的成效(Gallagher et al.，Mov Disord.25，2493-2500，2010)。非運動症狀包括心血管、泌尿系統和胃腸道的自主神經功能異常(autonomic dysfunctions)、睡眠問題、精神疾病(psychosis)、疼痛、認知缺陷和疲勞。臨床研究證實，帕金森氏症病患的生活品質下降與疲勞和憂鬱具有最強烈的相關性(Beiske et al.，Mov Disord.25，2456-60，2010；Beiske and Svensson，Acta Neurol Scand Suppl.190，78-81，2010)。
帕金森氏症之疲勞為多面向的，包括身體性、精神 性和一般性層面(Havlikova et al.，Parkinsonism Relat Disord.14，187-92，2008；Havlikova et al.，Eur J Neurol.；15(5)：475-80，2008；Havlikova et al.，J Neurol Sci.270，107-13，2008)。帕金 森氏症之疲勞的身體性面向與日常生活的行動性與活動性之問題有關。精神性疲勞之面向則影響認知、感情的幸福、和溝通。此外，一般性疲勞係關於病患之身體不適。
帕金森氏症相關之疲勞必須與健康個體的疲勞症狀區分，更定義如下：健康個體的疲勞症狀是身體與精神受到持久的和/或健康的負擔、工作、精神壓力、過度刺激或受到刺激下、時差、厭煩、或缺乏睡眠下產生自然反應的一種正常結果。健康個體的生理性疲勞為受到體力消耗或壓力之下的正常反應，且其功能係簡單地為保護身體，以防過度負荷導致損傷。一般而言，此種類型的疲勞在短暫的恢復期後便會自發性地消失。此種類型疲勞並非病理性的且不需接受治療處理。故此類型的疲勞排除在需要用以醫藥治療處理的本發明之外。
唯有病理性的疲勞才是本發明之標的，而且除非另有定義，本發明之「疲勞」之術語只會用以代表病理形式的疲勞。
此類型疲勞有一種被廣泛接受的量測方法為疲勞嚴重程度量表(Fatigue Severity Scale，FSS)，為自我管理的一維通用9項目疲勞評估量表(Krupp et al.，Arch Neurol.46，1121-23，1989)。每個項目皆定為7分制李特克量表(seven-graded Likert scale)，範圍從完全不同意的1分至完全同意的7分，如表一所示。疲勞嚴重程度量表總評分(total FSS score)為9個項目個別得分之平均值。疲勞嚴重程度量表總評分為4或更高並於評估前維持2週則可接受而定義為疾病導向疲勞的現象，特別是如帕金森氏症的慢性病。
表一：疲勞嚴重程度量表
治療帕金森氏症之疲勞的選擇頗為受限。最近研究 及所核准的帕金森氏症用藥已被公開，顯示除了對於運動症狀的主要功效之外，對於疲勞的改善也算中等。這些用藥為單胺氧化酶(monoamine oxidase)抑制劑的雷沙吉蘭(rasagiline)(Rascol et al.，Lancet Neurol.10，415-423，2011)以及多巴胺(dopamine)促效劑的普拉克索(pramipexole(普拉克索))(Morita et al.，Intern Med.50，2163-2168，2011)。然而，目前為止仍舊沒有提供帕金森氏症病患耐受性良好並具強烈抗疲勞之功效的特定藥物。
在俄國，已有執行一些有關苯基披喇瑟盪 (phenylpiracetam又稱作phenotropil)對於帕金森氏症的治療功效之研究。
Karabanov等人描述一開放式(open-label)試驗中苯 基披喇瑟盪對於帕金森氏症之病患的效果(Karabanov et al.，Atmosfera.Nervnye Bolezni 4，29-32，2009)。試驗報告中提到，「疲勞」為試驗當中受監控的其中一個參數，並且於圖中顯示出苯基披喇瑟盪對於如「一般活動、身體和精神疲勞、衰弱綜合症(asthenization symptoms)」的組合參數具有正面效果。而Karabanov既未發表苯基披喇瑟盪單獨對於疲勞的效果數據，亦未區分疾病相關疲勞以及生理的疲勞。Karabanov等人特別強調「衰弱(asthenization)」，此為太空人(健康個體)在經過長期的太空飛行之後所經歷的情況，太空人於返回地球後會感到如疲勞、易怒、缺乏胃口與睡眠障礙等症狀。有趣的是，苯基披喇瑟盪源自於作為「太空藥物(cosmic drug)」之化合物的原始用法(Mendonca et al，Mov.Disord.22，2070-2076，2007)。
類似地，Kalinskij與Nazarov描述苯基披喇瑟盪對 於治療衰弱綜合症(asthenic syndrome)之易疲勞(fatigability)的效果(Kalinskij and Nazarov,Zh Nevrol Psikhiatr Im SS Korsakova，107，61-63，2007)，以及Akhapkina等人於「用苯基披喇瑟盪治療衰弱綜合症與慢性疲勞症之功效(Efficacy of Phenotropil in the treatment of asthenic syndrome and chronic fatigue syndrome)」的臨床試驗中提供額外的數據(Akhapkina et al.，Atmosfera.Nervnye Bolezni 3，28-31，2004)。
Vasiliev和Grigorjeva報導於帕金森氏症患者中使 用苯基披喇瑟盪之另一研究結果(Vasiliev，Y.N.，and Grigorjeva， N.A.，Siberian Medical Magazine，2009)。報導中顯示當苯基披喇瑟盪所使用的劑量為100毫克/天或200毫克/天，神經缺陷、運動減退(hypokinesia)、和憂鬱症(depression)的程度皆有所減低，且可預防睡眠品質的惡化，當苯基披喇瑟盪所使用的劑量為100毫克/天時可快速地減少反應性焦慮(reactive anxiety)的程度，然而對於心智能力(mental abilities)卻沒有影響。對於植物人狀態(vegetative status)的效果則相當明確。
Kolesnikova和Vasilyev分析苯基披喇瑟盪對於帕金 森氏症中憂鬱症的功效，並且論斷苯基披喇瑟盪可促使憂鬱症程度的減輕(Kolesnikova，O.A，and Vasilyev，Y.N.，Progress of Modern Natural Sciences 2008，45-46)。
Kolesnikova和Vasilyev比較在帕金森氏症的治療當 中以苯基披喇瑟盪作為神經保護治療之功效以及以安慰劑治療之功效(Vasilyev，Y.N.，and Kolesnikova，O.A.，data presented at Current Issues of Experimental and Clinical Medicine,Bangkok,Pattaya，Thailand，December 20-30，2008)。
因此，儘管已做過多方嘗試，包括致力於(i)改善最 近基於左旋多巴治療的方案以及(ii)發展帕金森氏症相關疲勞之治療，但是目前為止的這些嘗試在病患身上並不見臨床上有意義的成功。
因此，目前在基於左旋多巴的帕金森氏症治療之改 善，和帕金森氏症關聯之疲勞的治療上，對於治療藥劑的確認仍 然有大量之未滿足的需求。
目前已知的習知技術中，均尚未達成或提出本發明所提供之解決問題的方法，也就是一特定化合物的使用方法。
本發明係關於一種用以改善用於帕金森氏症和/或治療疲勞的一種多巴胺替代療法之方法，特別係指精神性疲勞，該精神性疲勞關聯於需要治療之一個體的帕金森氏症。該方法包括給予一有效劑量之(R)-苯基披喇瑟盪或其醫藥上可接受之鹽的步驟。
因此，本發明之一第一方面係關於一種醫藥組合物，將包括(R)-苯基披喇瑟盪或其醫藥上可接受之鹽以及帕金森氏症中多巴胺替代療法之藥劑共同投服予以治療。
本發明之另一方面係關於一種醫藥組合物，包括(R)-苯基披喇瑟盪或其醫藥上可接受之鹽，用以治療疲勞，特別是帕金森氏症關聯之精神性疲勞。
本發明之另一方面係關於治療帕金森氏症關聯之疲勞的方法，包括給予一有效劑量之(R)-苯基披喇瑟盪或其醫藥上可接受之鹽的步驟。
第1圖顯示在腦內的微量透析中，(R)-苯基披喇瑟盪可增加大鼠紋狀體細胞外的多巴胺程度。
第2圖顯示(R)-苯基披喇瑟盪的濃度，該濃度在腹膜內投藥後由腦內的微量透析所確定，其中多巴胺轉運蛋白的親合力大約為13微莫耳濃度(μM)。
第3圖顯示(R)-苯基披喇瑟盪可增加大鼠(測試15分鐘之前進行腹膜內投藥)的活動率(水平活動)。(*：p<0.05 vs.載劑(vehicle)，於每個時段對等級(rank)進行克拉斯卡-瓦立斯單因子變異數分析(Kruskal-Wallis one-way ANOVA)，之後進行等級和檢定(rank sum test))
第4圖顯示中樞神經系統中(R)-苯基披喇瑟盪的腦波儀(electroencephalography，EEG)掃描。
第5圖顯示進步比測試(progressive ratio test)的結果，以確定(R)-苯基披喇瑟盪相較於安非他命(amphetamine)對於運動意願的影響。
第6圖顯示進步比測試(progressive ratio test)的結果，以確定(R)-苯基披喇瑟盪相較於甲基芬尼特(methylphenidate)對於運動意願的影響。
第7圖顯示成本效益測試(cost benefit test)的結果，以確定(R)-苯基披喇瑟盪相較於安非他命(amphetamine)對於運動意願的影響。
第8圖顯示成本效益測試(cost benefit test)的結果，以確定(R)-苯基披喇瑟盪相較於甲基芬尼特(methylphenidate)對於運動意願的影響。
第9圖顯示(R)-苯基披喇瑟盪對於大鼠旋轉的影響，其中該大鼠受到單側黑質(substantia nigra，SNc)損傷(帕金森氏症的實驗模式)。
第10圖顯示(R)-苯基披喇瑟盪對於大鼠旋轉的影響，其中該大鼠受到單側黑質(substantia nigra，SNc)損傷(帕金森氏症的實驗模式)，而該旋轉係由左旋多巴所產生。(R)-苯基披喇瑟盪可增加左旋多巴之旋轉(90-150分鐘)，但是當左旋多巴之效果消失後則產生同側旋轉(ipsilateral rotations)(270-360分鐘)。對側旋轉(contralateral rotations)或同側旋轉皆意指抗帕金森氏症活性(antiparkinsonian activity)，其中對側旋轉係基於突觸後(postsynaptic)機制，而同側旋轉則基於突觸前(presynaptic)機制。
第11圖顯示(R)-苯基披喇瑟盪對於大鼠運動異常(dyskinesia)的影響，其中該大鼠受到單側黑質損傷(帕金森氏症的實驗模式)，而該運動異常係由左旋多巴所產生。(R)-苯基披喇瑟盪並沒有增加左旋多巴的運動異常。
第12圖顯示(R)-苯基披喇瑟盪對於運動減退(hypokinesia)的功效，其中運動減退係由舌根鹼(reserpine)(5毫克/公斤)和α-甲基色胺酸(α-methyl-p-tyrosine，α-MT)(250毫克/公斤)所產生。
第13圖顯示(R)-苯基披喇瑟盪對於運動減退的功效，其中運動減退係由哈泊度(haloperidol)(0.2毫克/公斤)所產生(帕金森氏症的實驗模式)。
第14圖顯示在腦內的微量透析量測結果中，將(R)-苯基披喇瑟盪以腹膜內(i.p.)投藥之後並不會影響腦內左旋多巴之濃度。
第15圖顯示在腦內的微量透析量測結果中，將左旋多巴以 腹膜內(i.p.)投藥之後並不會影響腦內(R)-苯基披喇瑟盪之濃度。
第16圖顯示(S)-苯基披喇瑟盪在劑量50毫克/公斤(第14A圖)與100毫克/公斤(第14B圖)之下對於運動減退(hypokinesia)的功效，其中運動減退係由哈泊度(haloperidol)(0.2毫克/公斤)所產生(帕金森氏症實驗模式)。
與以往的疾病相關疲勞之治療方式相比，特別是疾病相關精神性疲勞之治療方式，本發明之特徵在於目前為止仍未知之苯基披喇瑟盪的治療功效，其可能至少一部分基於(R)-苯基披喇瑟盪之作為多巴胺再攝取抑制劑的新發現活性。
因此，本發明關於(R)-苯基披喇瑟盪及其任何之鹽、溶合物(solvates)、共軛物(conjugates)之使用，其至少擁有多巴胺再攝取轉運蛋白(dopamine re-uptake transporter)之抑制活性。
因此，本發明之第一方面係有關於醫藥組合物，包括將(R)-苯基披喇瑟盪及其醫藥上可接受之鹽和帕金森氏症的多巴胺替代療法之藥劑共同投服予以治療。
本領域之通常知識者明瞭「苯基披喇瑟盪」的術語係表示化合物2-(4-苯基-2氧代吡咯烷-1-基)乙醯胺(2-(4-phenyl-2-oxopyrrolidin-1-yl)acetamide)(C12H14N2O2；MW 218.3g/mol)。苯基披喇瑟盪又稱作fenotropil、phenotropyl、fenotropyl、carphedon或phenotropil，並且於俄國發展，以 "Phenotropil®"之名為可使用的處方藥。如此處所示，苯基披喇瑟盪指的是該物質以及其醫藥上可接受之鹽。
苯基披喇瑟盪具有光學活性並且為外消旋物(racemate)的兩個對掌異構物(enantiomers)，該些對掌異構物為(R)-苯基披喇瑟盪((R)-phenylpiracetam)與(S)-苯基披喇瑟盪((S)-phenylpiracetam)。國際非專有名稱(International Nonproprietary Name，INN)已將「芳妥瑟盪(Fonturacetam)」指派給外消旋的苯基披喇瑟盪。於西元2006年之優先權日期的國際專利申請中第一次揭露兩種掌型異構物的區隔，並證實(R)-掌型異構物主要負責藥理活性(WO 2007/104780)。(R)-苯基披喇瑟盪於偵測抗憂鬱劑、止痛藥、肌肉鬆弛劑、精神興奮劑影響之動物模式中顯示出更為顯著的活性。此專利揭示(R)-苯基披喇瑟盪作為抗憂鬱劑、壓力保護藥劑(stress-protective agent)、活動率調節劑(modulator of locomotor activity)、肌肉鬆弛劑、和鎮痛劑之使用。
(R)-苯基披喇瑟盪之更多詳細的藥理數據最近由同一作者公開(Zvejniece et al.，Basic Clin Pharmacol Toxicol.109，407-12，2011)。於曠野實驗(open-field test)中發現苯基披喇瑟盪對於活動率(locomotor activity)的顯著增加，而(R)-苯基披喇瑟盪的效果只較(S)-苯基披喇瑟盪稍微強烈一些。在憂鬱症模式的強迫游泳實驗(forced swim test)中，(R)-苯基披喇瑟盪的效果也只較(S)-苯基披喇瑟盪稍微強烈一些。然而，於被動迴避試驗(passive avoidance test)中，(R)-苯基披喇瑟盪較(S)-苯基披喇瑟盪更加顯 著地增強記憶功能。作者總結認為，這些結果可能對於臨床上苯基披喇瑟盪之光學單純異構物的使用相當重要。
於本發明人對於(R)-苯基披喇瑟盪作為多巴胺再攝 取轉運蛋白抑制劑之驚人發現之前，苯基披喇瑟盪明確的藥理機轉仍未被闡明。於藥理實驗中發現，苯基披喇瑟盪可活化操作行為、抵制丹祈屏(diazepam)的心理憂鬱(psychodepressant)效果、抑制旋轉之後眼球震顫(post-rotational nystagmus)、和防止逆向失憶症(retrograde amnesia)的發展。苯基披喇瑟盪也展現出抗痙攣的效果(Bobkov et al.，Biull Eksp Biol Med.95，50-53，1983)以及在腦缺血實驗中具有一些神經保護活性(Tiurenkov et al.，Eksp Klin Farmakol.，70，24-29，2007)。因此，苯基披喇瑟盪展現出至今仍未完全明確的額外藥理效果，而且這些效果顯示出苯基披喇瑟盪與其他單純多巴胺再攝取轉運蛋白抑制劑之間的區別。
苯基披喇瑟盪對人類給予口服投藥，並顯示3-5小 時的半衰期。有少數的小規模探索性臨床試驗主要發表於德國期刊當中，顯示攝取苯基披喇瑟盪可能與一些情況和疾病的改善有所連結，包括：衰弱症、腦創傷自發性阻礙(Kalinskij and Nazarov,Zh Nevrol Psikhiatr Im S S Korsakova 107，61-63，2007)、腦器官損傷(Savchenko et al.Zh Nevrol Psikhiatr Im S S Korsakova.，105，22-26，2005)、癲癇(Bel'skaia et al.Zh Nevrol Psikhiatr Im S S Korsakova 107，40-43，2007；Lybzikova et al.，Zh Nevrol Psikhiatr Im S S Korsakova.108，69-70，2008)、口腔問題(Novikova et al. Stomatologiia(Mosk).87，41-45，2008)、血管性腦病變(Gustov et al.Zh Nevrol Psikhiatr Im S S Korsakova.106，52-53，2006)。苯基披喇瑟盪對於中風上免疫結果的效果也已被描述(Gerasimova et al.，Zh Nevrol Psikhiatr Im S S Korsakova，105，63-64，2005)。
根據俄國所核准的藥品仿單，苯基披喇瑟盪為促智 藥物，具有顯著的抗健忘之作用、對於腦部的統合活動(integrative activity)具有直接的活化功效、幫助鞏固記憶、改善專注力和精神的表現、幫助學習過程、增加腦半球間訊息的傳遞、增加腦組織對於缺氧與毒性作用的抵抗力、具有抗痙攣和抗憂鬱的效果、調節中樞神經系統的活化與抑制過程、和改善情緒。苯基披喇瑟盪更對於大腦的新陳代謝與血液週期具有正面的效果，可刺激氧化還原反應的過程以及藉由利用葡萄糖使能量潛力增加，改善腦中缺血區域的區域性血流。苯基披喇瑟盪增加腦中正腎上腺素、多巴胺與血清素的含量，而並不影響γ-胺基丁酸(GABA)的程度，與GABAA和GABAB受體皆無關聯，對於腦中自發性的生物電活動(bioelectric activity)亦無明顯的效果，亦不影響呼吸及心血管系統。苯基披喇瑟盪無顯著的利尿功效，於治療期間也沒有食慾減退的功效。根據俄國的藥品仿單，苯基披喇瑟盪的刺激功效顯示其具有提供運動反應之適當功效以及增強運動表現的能力。藥物之適當的精神興奮劑功效伴隨有鎮痛活性，並且可改善情緒，具有一些止痛功效並提高疼痛的低限(threshold)。苯基披喇瑟盪的適應原功效(adaptogenic effect)顯示其可以增加對於下 列壓力情形的抵抗力：過度的精神與身體超載、疲勞、運動減退(hypokinesia)、固定不動和低溫。
如上述段落[0012]至[0016]所示，苯基披喇瑟盪已於 患有帕金森氏症之病患身上進行一些臨床研究的測試。然而上述的發表只報導苯基披喇瑟盪對於某些帕金森氏症相關症狀的一些正面效果，這些研究並無清楚描述苯基披喇瑟盪具有潛力的有利應用。
雖然(R)-苯基披喇瑟盪係以促智(nootropic)化合物 合成並描述於文獻當中，本發明卻驚人地發現(R)-苯基披喇瑟盪具有不同於促智藥物之類別的特徵。
「促智藥物(nootropics)」一詞創造於1960年代，隨著披喇瑟盪(piracetam)的發現，接續則發現普米喇瑟盪(pramiracetam)、歐西拉瑟盪(oxiracetam)、安尼拉瑟盪(aniracetam)、替尼瑟盪(tenilsetam)與其他化合物，「促智藥物(nootropics)」一詞通常用以描述具有神經保護功能並且無毒的認知增強劑。大部分的促智藥物並不具有清楚定義的運作(actoin)與工作(work)機制，而且似乎可藉由腦血流的改變，能量管理等模式以達到認知和/或神經保護的功效。
與促智藥物相反，(R)-苯基披喇瑟盪似乎具有清楚定義的運作機制，該機制係對於多巴胺攝取之抑制，並且，(R)-苯基披喇瑟盪在腦中所形成的劑量具有行為上的功效，其中該劑量係在體外(in vitro)多巴胺攝取的親合力之內，以及藉由腦內微 量透析量測發現，(R)-苯基披喇瑟盪可使腦中多巴胺濃度增加((R)-苯基披喇瑟盪在50毫克/公斤下之多巴胺濃度為20微莫耳濃度(μM)並具有一親合力常數為6微莫耳濃度(μM)；請參閱實施例)。
再者，於腦波儀(electroencephalography)所示的形態 中，促智藥物與(R)-苯基披喇瑟盪之間具有清楚的差異。以促智藥物而言，在網狀體(reticular formation)中幾乎所有波之功率皆有所減少，然而對於(R)-苯基披喇瑟盪而言，於系塔(theta)，德爾塔(delta)，阿爾伐(alpha)1和貝他(beta)2的波之中皆沒有改變(請參閱實施例)。
此外，相較於正常的動物，(R)-苯基披喇瑟盪對於 受到類帕金森氏症症狀誘導的動物(此處稱為疾病的或帕金森氏症的動物)具有更強烈地反應。因此，(R)-苯基披喇瑟盪似乎更適合於校正缺陷(correct deficits)，如特定於帕金森氏症之疲勞而非一般的每日之疲勞。
最後，(R)-苯基披喇瑟盪在中等至長期的範圍中很 顯然地可增強左旋多巴的功效，且相較於(R)-苯基披喇瑟盪或左旋多巴其中之一的單一投藥，在(R)-苯基披喇瑟盪與左旋多巴兩物質共同投藥時，動物腦內不論是(R)-苯基披喇瑟盪或者是左旋多巴的程度並無較高的現象，故該增強功效並非係由於藥物動力的相互作用所致。
本發明所使用與組合物相關之「醫藥上可接受」一 詞係指當給予如人類的哺乳類投藥時此類組合物的分子體(molecular entities)和其他成分為身體可承受的且無產生典型的不良反應。「醫藥上可接受」一詞亦可指聯邦或州政府的監管機構所核准或美國藥典或其他公認藥典所列舉出，適用於特別是人類的哺乳類。
「鹽」一詞係定義為包含不同電荷成分的化學藥物。「鹽」一詞亦包括水合物或溶合物。
(R)-苯基披喇瑟盪可依據發明中任何一種醫藥上可接受之鹽、溶劑合物和軛合物的形式使用。本發明任何(R)-苯基披喇瑟盪的引用也應了解為此類鹽、溶合物和共軛物。
本發明內容中，「多巴胺替代療法」一詞係指帕金森氏症症狀的主要治療，該療法係基於下述任一方式投藥：(i)一用以替代內生性(endogenous)多巴胺(如左旋多巴)或增加其程度的藥劑之投藥，或(ii)多巴胺受體促效劑(如阿朴嗎啡(apomorphine))之投藥。使用上述其中一種療法之長期治療可能導致運動異常(dyskinesia)的產生，運動異常係為可能發生於帕金森氏症患者中最重要的運動併發症。雖然接受多巴胺受體促效劑治療的患者較不容易發展為運動異常，但已有報導指出，其他非運動(non-motor)的副作用如嗜眠症(somnolence)、便秘(constipation)、眩暈(dizziness)、噁心(nausea)、和幻覺(hallucination)會隨著多巴胺受體促效劑之治療而增加。而長期使用左旋多巴之治療會導致其抗帕金森氏症功效(anti-parkinsonian efficacy)的降低以及發展為左 旋多巴誘導的運動異常(L-DOPA-induced dyskinesia，LID)。
左旋多巴誘導的運動異常(L-DOPA-induced dyskinesia，LID)之特徵係為於左旋多巴投藥後所觀察到的舞蹈症(choreiform)、肌張力失調(dystonic)或彈道式(ballistic)/肌陣攣(myoclonic)動作的混合症狀。有報導指出，30%帕金森氏症患者於投服左旋多巴4-6年之後會經歷運動異常(dyskinesia)，而有接近90%的患者9年後會受苦於此種併發症。雖然運動異常(dyskinesia)的起因仍未清楚，但發展左旋多巴誘導的運動異常(L-DOPA-induced dyskinesia，LID)之主要危險因子係為帕金森氏症於年輕時發病、疾病的嚴重程度和時間長短以及使用高起始劑量的左旋多巴治療。最終，此併發症會嚴重地損害病患的生活品質與福祉，因而限制該藥物之使用以作為最重要的治療藥劑。
根據文獻，左旋多巴誘導的運動異常係有關於左旋多巴療法之脈動式(pulsatile)與間歇式(intermittent)的特性。當給予帕金森氏症病患全身性的左旋多巴投藥時，剩餘的多巴胺神經末梢(dopaminergic terminals)以及表現於紋狀體(striatum)的其他細胞組件(cellular component)(例如血清素神經元(serotoninergic neuron))會形成、儲存與釋放多巴胺。由於大部分帕金森氏症病患的紋狀體(striatum)的血清素(serotonin)系統仍然相對較少，一般相信對於決定左旋多巴療法之功效上，紋狀體的血清素系統扮演重要的角色。
本發明所使用「治療」一詞係指減輕或緩和個體至 少一種的疾病症狀。本發明「治療」一詞亦意指阻止、延遲發病(即疾病於臨床表現之前的時期)和/或降低疾病發展或惡化之風險。因此，本發明所使用之「治療」係包括修正的、治療的和症狀的治療。
本發明所使用「個體」一詞係指包括如動物與人類的哺乳類。
在一些特別的實施例中，該藥劑係指左旋多巴。
在一些特別的實施例中，相較於該組合治療前之治療週期的該藥劑投藥劑量，該藥劑於該組合治療中之劑量係減少。
在一些特別的實施例中，相較於該組合治療前之治療週期的該藥劑投藥頻率，該藥劑於該組合治療中之投藥頻率係減少。
在一些特別的實施例中，該藥劑係為左旋多巴。在此些特別實施例中，左旋多巴係以每日1次投藥
在一些特別的實施例中，其中(R)-苯基披喇瑟盪用於治療包括下列步驟：a.以多巴胺替代療法給予病患(R)-苯基披喇瑟盪之投藥，並與用於多巴胺替代之該藥劑共同投藥；b.該藥劑之劑量每日遞減10%，直到帕金森氏症之症狀重新出現；且c.增加一次該藥劑之劑量，且相較於該藥劑根據步驟b的最後 投藥劑量，該藥劑之劑量係增加10%；以及d.依照步驟c中該藥劑所使用之劑量並利用(R)-苯基披喇瑟盪繼續進行該組合治療。
在特別實施例中，該些步驟依照順序進行，以建立該組合治療。
在特別實施例中，該些步驟依照順序進行，以改善已建立之該組合治療。
本發明之另一方面係關於一種醫藥組合物，包括(R)-苯基披喇瑟盪或其醫藥上可接受之鹽，用以治療疲勞，特別是關聯於帕金森氏症的精神性疲勞。
本發明所使用「疾病相關疲勞」一詞係指病理性疲勞，其獨立於因體力消耗或壓力所致的正常反應之疲勞類型(稱為週邊疲勞)。週邊疲勞係指肌肉疲勞，且由重複的肌肉收縮所引起(如：體育運動)(Chaudhuri and Behan，J Neurol Sci.179(Suppl.1-2)，34-42，2000；Chaudhuri and Behan，Lancet.363，978-988，2004)。疾病導向的疲勞並非由肌肉過度使用或中樞神經之外的身體不適所導致。此重要疲勞為帶有疾病相關精神性疲勞症狀的個人感覺(注意力不集中、記憶力衰退、與言語困難之個人感覺)以及疾病相關身體性疲勞(筋疲力盡與缺乏能量之個人感覺)。此個人疾病相關疲勞起源於中樞神經系統中多巴胺相關系統失調之特殊實施例，特別是缺乏多巴胺與潛在的體內恆定改變，導致不正常程度的持續疲憊、衰弱或虛脫。
雖然苯基披喇瑟盪已描述於包括健康病患中壓力相 關疲勞之治療(如上[0029]和[0033]段落所述)，迄今苯基披喇瑟盪仍未關聯於疲勞之治療，特別是有關於帕金森氏症關聯之精神性疲勞。
如上述段落[0012]所報導，Karabanov等人報導某些 關於苯基披喇瑟盪對於疲勞之影響，並未區分疾病相關疲勞以及「生理性」疲勞，而是強調於「衰弱(asthenization)」。相對地，所謂「帕金森氏疲勞」為只有發生在帕金森氏症患者身上之疾病相關疲勞的特殊實施例。如同Friedman JH等人的關鍵評估所透露，在帕金森氏症患者身上使用普通的疲勞量表將造成問題(Mov.Disorders,25,805-822,2010)。Brown RG等人(Parkinsonism Related Disorders 2005,11(1)：49-55)發展出一種「帕金森氏疲勞量表(Parkinson Fatigue Scale)」，以排除可能發生在一部分疲勞經歷中但也可能獨立地發生在帕金森氏症當中的情緒與認知特徵。由受影響的病患本身報導出此帕金森氏疲勞量表的16個明確項目，並且這些項目能夠清楚地區隔出帕金森氏特定類型之疲勞以及其他類型之疲勞，其中由二進制計算(binary calculation)所得出的截止分數為7。
如上所述，疲勞嚴重程度量表為此類型疲勞廣為接受的量測方式。
在一些特別的實施例中，醫藥組合物係用以治療疲勞，其於疲勞嚴重程度量表之評分至少為4，特別是評分至少為 4並維持至少2週。
在一些特別的實施例中，醫藥組合物係用以治療疲勞，其於帕金森氏疲勞量表之評分至少為7。
在本發明特別實施例之方法中，(R)-苯基披喇瑟盪係為(R)-苯基披喇瑟盪鹽酸鹽((R)-phenylpiracetam hydrochloride)。
在本發明特別實施例之方法中，(R)-苯基披喇瑟盪係以在約1毫克/天至約250毫克/天的範圍內投藥，或(R)-苯基披喇瑟盪係以在約25毫克/天至約200毫克/天的範圍內投藥，或(R)-苯基披喇瑟盪係以在約50毫克/天至約150毫克/天的範圍內投藥。
本發明之「約」一詞係指介於90%和110%之間的給定值或範圍，換句話說，」約100」係指「介於90和110之間」。在較狹隘的實施例中，「約」一詞意指介於95%和105%之間的給定值或範圍，或介於98%至102%之間的給定值或範圍，或介於99%至101%之間的給定值或範圍。
在本發明特別實施例之方法中，(R)-苯基披喇瑟盪或其醫藥上可接受之鹽係每日1次(s.i.d.)、每日2次(b.i.d.)、或每日3次(t.i.d.)投藥。
在本發明特別實施例之方法中，(R)-苯基披喇瑟盪或其醫藥上可接受之鹽係以一口服製劑形式投藥。
在本發明特別實施例之方法中，(R)-苯基披喇瑟盪或其醫藥上可接受之鹽係與至少一額外藥劑共同投服，該藥劑係 已知為具有帕金森氏症治療功效。
在本發明特別實施例之方法中，該至少一額外藥劑選自：左旋多巴，卡比度巴(carbidopa)，其他類型之多巴胺促效劑，依託拉嗪(eltoprazine)，單胺氧化酶抑制劑(monoamine oxidase(MAO)-inhibitors)，兒茶酚-O-甲基轉移酶(catechol-o-methyltransferase，COMT)抑制劑和苄絲肼(benserazide)之至少其中之一。在一些特殊實施例中，該至少一額外藥劑係指左旋多巴，左旋多巴與卡比度巴之組合，或左旋多巴和苄絲肼之組合。
在一些特別的實施例中，(R)-苯基披喇瑟盪或其醫藥上可接受之鹽係與至少一額外的藥劑共同投藥，該藥劑係已知為具有治療疲勞之功效，特別是帕金森氏症關聯之精神性疲勞。
在一些特別的實施例中，該至少一額外的藥劑選自：雷沙吉蘭(rasagiline)和普拉克索(pramipexole)。
本發明之另一方面係關於治療帕金森氏症個體所需之方法，包括以一有效治療劑量的(R)-苯基披喇瑟盪或其醫藥上可接受之鹽投藥之步驟。
應用於劑量或量的「治療有效」一詞係意指給予所需的哺乳類投藥時足以導致所需活性的化合物或醫藥組合物之量。
在一些特別的實施例中，(R)-苯基披喇瑟盪可增加多巴胺替代療法之功效。
在一些特別的實施例中，該多巴胺替代療法係與左旋多巴的治療。
在一些實施例中，該治療係關於一或更多的帕金森氏症之症狀的治療，特別是運動困難(wearing off)、開關(on-off)現象和「劑末(end-of dose)」的肌張力不全(dystonia)。
在一些實施例中，該治療係關於減輕和/或延遲左旋多巴誘導的運動異常之發病。
本發明的另一方面係關於治療帕金森氏症關聯之疲勞個體所需之方法，包括以一有效治療劑量的(R)-苯基披喇瑟盪或其醫藥上可接受之鹽投藥之步驟。
在一些實施例中，該疲勞係指帕金森氏症關聯之精神性疲勞。
在一些特別的實施例中，本發明係關於治療疲勞的方法，醫藥組合物係用以治療疲勞，其於疲勞嚴重程度量表之評分至少為4，特別是評分至少為4並維持至少2週。
在一些特別的實施例中，本發明係關於治療疲勞的方法，其於帕金森氏疲勞量表之評分至少為7。
在一些實施例中，該疲勞之治療係有關於帕金森氏症中疲勞相關症狀的治療，特別是失去活力(inactivity)，運動的缺陷(motivational-deficit)，癱軟(floppiness)，虛脫(exhaustion)，疲倦(lassitude)，和衰竭(prostration)。
在一些實施例中，本發明係關於治療帕金森氏症中 睡眠相關問題之方法，該方法對於患者的生活品質有顯著影響，特別是一般的倦怠和嗜睡症(drowsiness)。
(R)-苯基披喇瑟盪係以單一的抗疲勞藥劑投藥或與 一個或多個的額外藥劑結合以治療疲勞，特別是帕金森氏症關聯之精神性疲勞。
在特別的實施例中，該一個或多個的額外藥劑係選 自於雷沙吉蘭(rasagiline)與普拉克索(pramipexole)。
在本發明一些實施例中之方法，(R)-苯基披喇瑟盪 及其醫藥上可接受之鹽係以在約1毫克/天至約400毫克/天的範圍內投藥。
在本發明又一實施例中之方法，(R)-苯基披喇瑟盪 及其醫藥上可接受之鹽係以在約25毫克/天至約350毫克/天的範圍內投藥。
在本發明又一實施例中之方法，(R)-苯基披喇瑟盪 及其醫藥上可接受之鹽係以在約50毫克/天至約300毫克/天的範圍內投藥，特別係以在約50毫克/天至約150毫克/天的範圍內投藥。
在本發明又一實施例中之方法，(R)-苯基披喇瑟盪 及其醫藥上可接受之鹽係以每日1次投藥，特別係以約200毫克，每日1次投藥。
在本發明又一實施例中之方法，(R)-苯基披喇瑟盪 及其醫藥上可接受之鹽係以多重劑量投藥，如每日2次或每日3 次，特別是每日2次，特別係以100毫克、每日2次之劑量投藥。
在本發明之又一方面，該醫藥組合物包括(R)-苯基 披喇瑟盪，可更包括所有醫藥上可接受的載體(carrier)或賦形劑(excipient)。該醫藥組合物可調製成如每日1次、每日2次、或每日3次投藥。
應用於本發明醫藥組合物的「載體」一詞係指稀釋 液、賦形劑、或載劑，與如(R)-苯基披喇瑟盪的活性化合物一同投藥。此類醫藥載體可能為無菌液體，諸如水，生理食鹽水溶液，水性葡萄糖溶液，水性甘油溶液，及油，包括那些微石油、動物、蔬菜或合成來源者，如花生油、大豆油、礦物油、和芝麻油等。 合適之醫藥載體描述於「”Remington's Pharmaceutical Sciences" by A.R.Gennaro,20th Edition」中。
活性成分(如(R)-苯基披喇瑟盪)或本發明的組合物 可以用以治療至少其中一種上述的疾病，其中治療係採用或適當地製備為本發明所揭露的特定投藥(例如每日1次、每日2次、或每日3次投藥)。為此，藥品仿單和/或病患指示包含有相應的訊息。
活性成分(如(R)-苯基披喇瑟盪)或本發明的組合物 可以用作藥品製造以治療至少其中一種上述的疾病，其中藥品係採用或適當地製備為本發明所揭露的特定投藥(例如每日1次、每日2次、或每日3次投藥)。為此，藥品仿單和/或病患指示包含有相應的訊息。
根據本發明，(R)-苯基披喇瑟盪或其醫藥上可接受 之鹽的劑型可為固態、半固態或液態調製劑。
(R)-苯基披喇瑟盪可經由不同的應用途徑投藥。口 服及腸胃外的途徑為較佳的投藥途徑。(R)-苯基披喇瑟盪可調製成經調味之液體、膠囊或錠片。
為了以錠片或膠囊形式口服投藥，(R)-苯基披喇瑟 盪可與非毒性之醫藥上可接受之賦形劑組合。
最佳的治療有效劑量可經實驗確定以考慮確切的投 藥模式、投藥形式、投藥所針對之指徵、牽涉之個體(如體重、健康、年齡、性別等)以及負責之醫師或獸醫師的偏好和經驗。
本發明活性成分對於人類的每日合適之治療劑量係 在約1毫克/天至約400毫克/天的範圍(基於游離基(free base)的(R)-苯基披喇瑟盪)，如約25毫克/天至約350毫克/天，或約50毫克/天至約300毫克/天，特別是200毫克/天。在另一設定中，每日劑量可能依體重調整，如以約200毫克/天的劑量對體重達80公斤的患者投藥或以約240毫克/天的劑量對體重大於或等於80公斤的患者投藥。在又一設定中，(R)-苯基披喇瑟盪及其醫藥上可接受之鹽係以在從約50毫克/天起始的範圍內投藥，並從50毫克/天的劑量增加直到所需的治療功效達成，但最大值為約400毫克/天的劑量。並且，由於生物可利用性的降低，在修正的釋放調劑中可給予更高的每日活性成分的投藥總量，如達到約500毫克/天。(R)-苯基披喇瑟盪及其醫藥上可接受之鹽、溶合物、軛合 物或衍生物，如(R)-苯基披喇瑟盪鹽酸鹽，可調整相應的劑量以使用等克分子(equimolar)的量。
在一些實施例中，係以(R)-苯基披喇瑟盪投藥，或 以包括有(R)-苯基披喇瑟盪之組合物與一第二藥劑投藥，其中係以結合(conjoint)或分開之形式投藥。
本發明所指「結合形式投藥」一詞係指(R)-苯基披 喇瑟盪與至少一額外的活性藥劑在不同的組合物中同時地或順序地投藥。順序投藥即視為「結合形式」，然而，(R)-苯基披喇瑟盪及至少一額外活性藥劑必須以一時段分開投藥，其仍對於哺乳類之疲勞治療具有有利的組合效果。
實施例
以下實施例係用以描述本發明，但並非用以限定本發明。
第一實施例：確定(R)-苯基披喇瑟盪之標的
利用功能性的單氨轉運蛋白分析(monoamine transporter assays)以確定(R)-苯基披喇瑟盪之潛力藥物標的。
以穩定表現多巴氨轉運蛋白的重組中國倉鼠卵巢(Recombinant Chinese hamster ovary(CHO))細胞CHO-K1(ATCC® CCL-61TM)進行培養。細胞(2 x 105/毫升)與測試化合物(test compound)和/或載劑(vehicle)在經調整的pH7.1 Tris-HEPES緩衝 液中於25℃先培養(pre-incubated)20分鐘，然後再加入[氚]-多巴胺([3H]-dopamine)另外培養15分鐘。以10微莫耳濃度(μM)諾米芬辛(nomifensine)確定非專一(Non-specific)訊號。接著將細胞溶解於1%十二烷基硫酸鈉溶解緩衝液(SDS lysis buffer)。若測試化合物組其[氚]-多巴胺的攝取(uptake)相對於載劑的控制組減少50%或更多(50%)則表示化合物具有顯著的抑制活性。化合物篩選為10，1，0.1，0.01和0.001微莫耳濃度(μM)。僅在觀察到顯著的攝取抑制時，將這些同樣濃度的化合物同時地加入未經處理的(untreated)細胞之個別組別中以評估可能的化合物誘導(compound-induced(誘導的))之細胞毒性。
以表達正腎上腺素(norepinephrine)轉運蛋白的重組 馬-達二氏犬腎(Madin Darby canine kidney，MDCK)細胞(NBL-2)(ATCC® CCL-34TM)培養2週。細胞(1 x 105/毫升)與測試化合物(test compound)和/或載劑(vehicle)在經調整的pH7.1 Tris-HEPES緩衝液中於25℃先培養(pre-incubated)20分鐘，然後再加入5奈米莫爾濃度(nM)的[氚]-正腎上腺素([3H]-norepinephrine)另外培養15分鐘。從溶解的細胞取得溶解產物並計算以確認[氚]-正腎上腺素([3H]-norepinephrine)的攝取。若化合物相對於10微莫耳濃度的脫甲丙咪(desipramine)其[氚]-正腎上腺素([3H]-norepinephrine)的減少達50%或更多則表示其具有顯著的抑制活性。化合物篩選為10，1，0.1，0.01和0.001微莫耳濃度(μM)，僅在觀察到顯著的攝取抑制時，將這些同樣濃度的化合物同時地 加入未經處理的(untreated)細胞之個別組別中以評估可能的化合物誘導(compound-induced(誘導的))之細胞毒性。
這些醫藥上的實驗顯示在功能性分析中13微莫耳 濃度(μM)的(R)-苯基披喇瑟盪對於神經性多巴胺再攝取轉運蛋白(dopamine re-uptake transporter)的親和力。
在微量透析實驗中顯示，在行為上(R)-苯基披喇瑟 盪的活性劑量為100毫克/公斤時，腦中細胞外液之多巴胺游離濃度(free concentration)達50微莫耳濃度(μM)；當(R)-苯基披喇瑟盪劑量為50毫克/公斤時，多巴胺游離濃度則為20微莫耳濃度(μM)。
這些濃度相當高而足以推測多巴胺再攝取轉運蛋白係為腦中的相應標的。
第二實施例：利用腦中的微量透析以量測大鼠的紋狀體中(R)-苯基披喇瑟盪對於細胞外的多巴胺程度-第1圖 測試項目
(R)-苯基披喇瑟盪溶解於生理食鹽水中並採用腹膜內注射(i.p.)。
動物
實驗中使用Sprague-Dawley成年雄性大鼠(n=5，約300克，Harlan，荷蘭)。動物進行手術後，個別飼養(籠30公分 x30公分x40公分)在具有食物與水的標準環境中並可任意採食(ad libitum)。手術後之恢復期至少為48小時。
手術
以異氟烷(isoflurane)(2%，800毫升/分鐘氧氣)對大鼠進行麻醉，放置於立體定位儀(Kopf.儀器，美國)。I形探針(Hospal AN 69膜，暴露表面3毫米，Brainlink，荷蘭)插入紋狀體。探針尖端之座標為：後端(AP)=對於前囪(bregma)+0.9毫米，側面(L)=對於中線+3.0毫米，腹面(V)=對於硬腦膜(dura)-6.5毫米(Paxinos,G.,and Watson,C.(1982)The Rat Brain in Stereotaxic Coordinates.Academic Press,San Diego)。
微量透析實驗
手術後進行24-48小時的實驗。實驗當天，探針以可撓性聚二醚酮(PEEK)管與微灌流幫浦(Syringe pump UV 8301501,Univentor,Malta)連結並且使用人工腦脊液(aCSF)在流速1.5微升/分鐘(μl/min)下灌流，該人工腦脊液包括147毫莫耳濃度(mM)氯化鈉，3.0毫莫耳濃度(mM)氯化鉀，1.2毫莫耳濃度(mM)氯化鈣，與1.2毫莫耳濃度(mM)氯化鎂。利用自動化部分(fraction)收集器(Univentor 820 Microsampler，Antec，荷蘭)收集20分鐘至120分鐘的微量透析樣品，並儲放於-80℃冰箱以待分析。實驗之後將大鼠予以犧牲並移除其腦。對腦進行冠狀切片並根據如上所述 的Paxinos and Watson對每個探針的位置採取組織學上地確認。
確定多巴胺(DA)與3,4-二羥基本乙酸(3,4-Dihydroxyphenylacetic acid，DOPAC) 分離多巴胺與3,4-二羥基苯乙酸
將樣品注射至高效能液相層析儀(HPLC)管柱中(逆相，顆粒大小3微米(μm)，C18，Thermo BDS Hypersil column，150毫米x2.1毫米，Thermo Scientific，美國)，以冷藏的微取樣系統操作，該系統由注射器幫浦(Gilson，model 402，法國)，多管柱注射器(Gilson，model 233 XL，法國)，和溫度調節器(Gilson，model 832，法國)所組成。利用移動相進行層析分離，該移動相包括醋酸鈉緩衝液(6.15克/升)，甲醇(2.5% v/v)，Titriplex(250毫克/升)，辛烷磺酸(1-octanesulfonic acid，OSA，150毫克/升)，並以冰醋酸調整至pH4.1(等強度)。藉由高效能液相層析儀幫浦(Shimadzu，model LC-10AD vp，日本)使移動相在系統中的流速為0.35毫升/分鐘。
偵測
利用高效能液相層析分離與電化學偵測以確定同一樣品中多巴胺與3,4-二羥基苯乙酸之濃度。利用穩壓器(potentiostate，Antec Leyden，model Intro，荷蘭)並配有對銀/氯化銀(Antec Leyden，荷蘭)設定為+500毫伏特(mV)的玻璃碳電極 以電化學偵測多巴胺與3,4-二羥基苯乙酸。以層析數據系統(Chromatography Data System，Shimadzu，class-vp，日本)軟體分析數據。使用外標準法以定量濃度。
統計分析
當傳輸器的程度穩定之後，將四個連續性的處理前微量透析樣品作為基準線，該四個樣品間的差異值小於50%並將其平均值設為100%。操作化合物3-2008(100毫克/公斤)之後取多於13個部分(fraction)。每個部分(fraction)的傳輸器濃度皆表示為基準線的百分比±平均值標準誤差(%±SEM)。
結果
結果顯示(R)-苯基披喇瑟盪增加紋狀體中的多巴胺濃度。
第三實施例：利用腦微量透析測量(R)-苯基披喇瑟盪在腦中的濃度-第2，14，15圖 主題
研究中的成年雄性Sprague-Dawley(240-360公克，Janvier，法國)大鼠飼養於標準環境之中。所有的實驗皆進行於大鼠在白日-黑夜週期中的光照時期。
手術
以戊巴比妥(pentobarbital)麻醉動物，根據前述的Paxinos and Watson圖冊，於尾狀核殼(caudatus putamen，CPu；相對於前囪(bregma)AP：+0.1，LM：±2.6，DV：-3.2毫米；-3.3毫米雙耳(interaural))單側植入矽化導管(MAB 6.14.IC)(MAB，Stockholm，瑞典)。大鼠於手術後至少恢復3天才進行微量透析實驗。
微量透析
微量透析實驗進行於動物家籠之中。降低微量透析探針(MAB 6.14.4.；暴露出之膜長度4毫米，聚醚(polyethersulfone，PES)膜；MAB；Stockholm；瑞典)以穿過導管並進入尾狀核殼(探針尖端的腹側位置於顱骨-7.2毫米的參考位置上)，於整個測試期間皆留於此處，於取樣前達約12小時。
以人工腦脊液灌流探針，利用CMA 102灌流幫浦(CMA，Solna，瑞典)使流速達2微升/分鐘(μl/min)。該人工腦脊液之組成為：147毫莫耳體積(mM)納離子，2.7毫莫耳體積(mM)鉀離子，1.2毫莫耳體積(mM)鈣離子，0.85毫莫耳體積(mM)鎂離子，0.04毫莫耳體積(mM)抗壞血酸(ascorbic acid)。以頭部栓繩系統(head block tether system，Instech，Plymouth Meeting，美國)將動物與雙通道液體轉動軸(dual channel liquid swivel)375/D/22QM(Instech，Plymouth Meeting，美國)連結。使用氟化乙烯-丙烯共聚物(FEP)管以及管之連接器(MAB，Stockholm，瑞典)。在灌流開始時先收取3個20分鐘的部分(fraction)以作為基準線，再於開始的一小時後收集樣品。爾後，每隻大鼠接受腹腔注射(R)-苯基披喇瑟盪和/或左旋多巴胺(L-DOPA，25毫克/公斤+苄絲肼(benserazide)，15毫克/公斤)。樣品(40微升)以自動化的部分收集器(CMA/142；CMA，Solna，瑞典)收集並儲存於-20℃以待分析。
恢復之確定
為執行體外(in vitro)的恢復，探針插入裝有人工腦脊液(37℃)與含有100奈米莫耳濃度(nM)(R)-苯基披喇瑟盪或左旋多巴胺溶液的燒杯之中。共收集5個樣品(40微升(μl))，其中只有最後的2個樣品用以分析(R)-苯基披喇瑟盪或左旋多巴的濃度。
分析
高效能液相層析儀與氣壓離子化串聯質譜儀(API-MS/MS儀(Shimadzu Prominence，Duisburg，德國)聯結於備有TurboIonspray source(ESI)的串聯質譜儀API 4000 Q Trap(三段四級式，Applied Biosystems/MDS Sciex，Darmstadt，德國))。分析管柱為Onyx Monolithic C18 50毫米x 2毫米(Phenomenex， Aschaffenburg，德國)。移動相由皆含有0.1%甲酸的沖提液A水與沖提液B乙腈所組成。層析操作由超過5分鐘的梯度所組成，一開始為水中5%的乙腈直到移動相成為水中50%的乙腈為止。注射至氣壓離子化串聯質譜儀的體積為1毫升(ml)。利用標準曲線以計算本研究中藥劑樣品之濃度。
結果
結果顯示(R)-苯基披喇瑟盪到達腦中的程度足以影響主要標的(多巴胺載體)。並且，當一同注射左旋多巴時並無藥物動力的相互作用，(R)-苯基披喇瑟盪不會影響左旋多巴濃度，且左旋多巴亦不會影響(R)-苯基披喇瑟盪之濃度(請參閱第14和15圖)。結果顯示行為實驗中觀察到的相互作用係為藥效(pharmacodynamic)之本性(nature)而非藥物動力(pharmacokinetic)之本性。
第四實施例：(R)-苯基披喇瑟盪對於大鼠活動率(水平活動)之影響-第3圖 動物
實驗用成年雄性Sprague-Dawley大鼠(230-300克)每四隻飼養於同一籠中，於室內的溫度(21±1℃)與濕度受到控制。食物與水可任意採食，且動物飼養於交替的12小時/12小時白天/黑夜週期中(7點開燈)，實驗開始前讓動物適應至少6天。 每隻動物只使用一次。每個實驗組由8隻動物所組成。
過程
活動率在8個有機玻璃盒(ENV-515-16，43.2毫米x43.2毫米x 30公分)，Med-Associates Inc.)內量測，配置有4個陣列的16個紅外線光束，放置於地面上3公分之處以測量水平活動。行走距離(Distance traveled)用以更進一步的分析，作為一種活動的量測。
處理
將(R)-苯基披喇瑟盪溶於生理實驗水，體積為2毫升/公斤，進行腹膜內投藥。
統計分析
活動率之數據若於等級和檢定(rank sum test)之下達顯著便以克拉斯卡-瓦立斯(Kruskal-Wallis)變異數分析(ANOVA)的方法對等級(ranks)進行分析。
結果
第3圖顯示(R)-苯基披喇瑟盪從100毫克/公斤的劑量開始可增加大鼠的活動率(水平活動)，表示(R)-苯基披喇瑟盪可刺激活動。
第五實施例：(R)-苯基披喇瑟盪於腦波儀掃描之測試-第4圖
(R)-苯基披喇瑟盪具有4種不同的測試濃度(1毫克/公斤，12.5毫克/公斤，25毫克/公斤，和50毫克/公斤)，以腦波儀掃描，方法如Dimpfel所描述(Dimpfel,Neuropsychobiology,58,178-86,2008)。
動物
本系列實驗使用8隻成年Fisher 344大鼠(年齡為8個月，飼養於顛倒的光照-黑暗週期，體重約400克，提供者為Charles River Laboratories，D-97633，Sulzfeld)。將電極植入動物的腦中，並於手術後給予2週的恢復期(詳細描述請參閱6.4)。爾後，插入傳輸器以適應和控制實驗。大鼠於紀錄期間不受限制並可自由活動，但是不可進食(咀嚼會產生太多人為誤差)。
馴化與飼養環境
在研究開始之前，動物可馴化至少4週。馴化環境具自動控制的光週期，溫度和濕度。光照時數為晚間18小時，早上6小時。每日的監測可顯示溫度與濕度分別維持於標的範圍22±2℃和44±5%之內。鼠籠，墊料，和水瓶在定期間隔中更換，如每2-3天。動物可進行標準飲食(Nohrlin H10，Altromin，D-32791 Lage，德國)，採任意進食的方式。動物可任意飲用自來 水。
手術
大鼠以K他命麻醉，於立體手術過程接受4個雙極的同心鋼電極。所有的4個電極皆放置於腦中左半球之中的側邊3毫米，對於前皮質，紋狀體，海馬迴，和網狀體(根據Paxinos and Watson圖冊，1982)的位置分別為背腹座標4，6，4.2，和8毫米，而前側座標為3.7，9.7，5.7，和12.2毫米。一預先構建的底板帶有4個雙極不鏽鋼的半微量電極(神經電極「SNF 100」來自於Rhodes Medical Instruments，Inc.，Summerland，CA 93067，美國)以及一五針插頭藉由牙科用黏著劑固定於顱骨，與3個鋼螺絲釘相互作用，螺絲釘放置於骨頭之中，彼此間具有距離。電極的遠端紀錄點為主動電極而4個電極的近端點則相互連結以作為參考值。帶有插頭的底板可接收稍後的傳輸器(包括電池之重量為5.2克，大小為26毫米x12毫米x6毫米)。
實驗過程
在內部完全受到銅屏蔽的房間中，對於可自由活動的大鼠進行前皮質，海馬迴，紋狀體，和網狀體的腦波訊號記錄。訊號以無線電遙測系統(載體頻率為40兆赫(MHz)，Rhema Labortechnik，Hofheim，德國)無線傳輸，並且將訊號依過去研究的方式(Dimpfel et al.1986；Dimpfel et al.1988；Dimpfel et al. 1989；Dimpfel,2003)放大及處理以獲得0.25赫茲(Hz)解析度的功率頻譜。簡而言之，於4秒期間的範圍中利用Hanning視窗收集後自動人為誤差抵制訊號(after automatic artifact rejection signals)。取樣頻率為512赫茲(Hz)。將4個數值取平均值而獲得一最終取樣頻率為128赫茲(Hz)，其值遠高於尼奎斯特(Nyquist)頻率。將所得的電功率頻譜結果分為6個特定頻率範圍(德爾塔(delta)：0.8-4.5赫茲(Hz)；theta：4.75-6.75赫茲(Hz)；阿爾伐(alpha)1：7.00-9.50赫茲(Hz)；阿爾伐(alpha)2：9.75-12.50赫茲(Hz)；貝他(beta)1：12.75-18.50赫茲(Hz)；貝他(beta)2：18.75-35.00赫茲(Hz))。頻譜於每3分鐘的步驟中取得平均值並線上顯示。
測試項目
將溶於生理食鹽水中的(R)-苯基披喇瑟盪注射於大鼠腹膜內，接著藉由腦內電位場「遙控-立體-腦波(Tele-Stereo-EEG)」的紀錄，並結合影像追蹤系統以偵測動作的變化(GJB Datentechnik GmbH，D-98704 Langewiesen，德國)。該系統藉由動物頭上的黑色傳輸器以及環境間之對比差異辨識移動以及立體型態的行為。已於之前的研究中以不同的咖啡因(caffeine)劑量驗證該系統。
處理組別
動物於手術後隨機分配至處理組別中，因此處理組 別在飼養籠的系統中為平均分配。採交叉設計的方式於兩個投藥時期之間至少停止投藥一週。於投藥前45分鐘之期間過後，作投藥前紀錄，並持續地在螢幕上(人為誤差控制)觀察藥物效果達300分鐘，其中給予5分鐘的延遲時間使動物在接受腹膜內投藥之後可平復，此後將時間細分為15分鐘的期間。電功率之改變係以投藥前45分鐘的絕對頻譜功率值(45min absolute pre-drug spectral power value)的百分比(%)表示。
統計分析
數據表示為百分比±平均值標準誤差(%±S.E.M.)。將特別時段進行載劑注射而獲得之結果，使用Wilcoxon-Mann-Whitney的U檢定計算統計數據。為比對稍早於相同環境下參考化合物測試所得的數據，根據Fischer而進行區別分析。分析共24個(6個頻率範圍乘以4個腦區域)不同的變異。首先，利用3個空間座標作為前3個區別軸，將來自47個參考化合物與生理睡眠結果進行球型投影。接著，將第4至第6的區別分析結果編碼為紅色、綠色和藍色，並進行類比於所謂的RGB模式(如電視所使用)的添色混合。因為更進一步的化合物添加可能會改變投影，故為了分類未知的製劑，此藥物反應的模型(matrix of drug actions)維持常數(冷凍)。
結果
隨著(R)-苯基披喇瑟盪劑量的降低，阿爾伐(alpha)2 與貝他(beta)1的波動亦減緩。於前皮質中，最高劑量導致theta功率增加而產生一種不同的變化模式。活動力有所增加。阿爾伐(alpha)2的波動主要在多巴胺的控制之下(引用於Dimpfel的文獻)。因此，可以預期的，對於多巴胺的神經傳遞，其直接或間接的效果皆來自(R)-苯基披喇瑟盪。給予帕金森氏症所使用的治療藥物(Dimpfel and Hoffmann,Neuropsychobiology,62,213-220,2010)投藥之後，可觀察到阿爾伐(alpha)2與貝他(beta)1波動的減緩。總之，(R)-苯基披喇瑟盪顯示出刺激藥物區域之中的輪廓。
第6實施例：(R)-苯基披喇瑟盪對於運動意願測試的影響-第5，6，7，8圖 測試項目
甲基芬尼特(Methylphenidate)於每天測試時皆溶解於乾淨的蒸餾水中，購買於Sigma(Taufkirchen，德國)。莫達非尼(Modafinil)購買於Sequoia Research Products Limited(Pangbourne，英國)，每天測試時皆溶解於1% w/v甲基纖維素(methylcellulose)(Sigma，Taufkirchen，德國)和0.9%氯化鈉的乾淨水之中。
動物
實驗使用103隻雄性Sprague-Dawley大鼠，體重為225-250公克。
馴化與飼養環境
動物飼養於標準實驗環境之中，每一籠為4隻大鼠，可任意飲用水。給予囓齒類的標準飲食(Altromin)，每隻動物每日可攝取15公克的飼料。
處理組別
以同樣的實驗計畫操作2種實驗。以連續的加強訓練(continuous reinforcement training，CRF)訓練所有的動物之後，分配到處理組別中，使所有組別中動物的表現皆相似。處理組別在飼養籠系統中平均分配。
實驗方法
在2種實驗中皆使用下列的實驗計畫：概述：在接續的日子中以連續的方式進行3個測試。在第1-2天，讓動物個別於施金納箱(Skinner boxes)中適應，適應時期分兩階段，每日一階段，每階段為30分鐘。於隨機的時間給予動物「自由的」食物顆粒(平均每分鐘1個顆粒)。在第3-8天，動物依連續的加強訓練行程(每按壓一次壓桿給予1食物顆粒)在施金納箱中接受訓練。在第9-10天，動物在停藥的情況 下接受進步比測試(progressive ratio test)(第1測試)，在第11-12天則在用藥的情況下進行測試。在第13天，動物在用藥的情況下接受選擇測試(choice test)(第2測試)，在第14天，動物在用藥的情況下接受消耗測試(consumption test)(第3測試)。以下為詳細的實驗描述。
第1測試：進步比(progressive ratio，PR)任務
行為測試執行於12個操作測試箱中(Med Associates，St.Albans，美國)。每個操作箱中具備有可伸縮壓桿，食物供應容器，位於操作箱上面的室內燈光，和兩個刺激燈，刺激燈分別位於壓桿上方和其他食物容器之上。紅外光束可偵測到動物的鼻子在食物容器上撥動。所用的設備藉由電腦系統(SmartControl®-Interface和MedPC-software，Med Associates，St.Albans，美國)控制。食物容器上方的光表示於容器中食物顆粒的傳輸。在連續的2天中，大鼠先在操作箱中進行2階段(每階段30分鐘)的適應。此後，動物依連續的加強訓練行程進行6階段的訓練，每次30分鐘。接著，在每個步驟中以一增加固定比例(increasing fixed ratio，FR)為5的行程進行4個階段(2階段為停藥，2階段為用藥)，每個步驟重複3次(如：1-1-1；5-5-5；10-10-10；...)。當達到每次試驗所需的固定比例值時，容器上的光會指示1個食物顆粒(45毫克，Bioserve，美國)的傳遞，光會持續發亮直到大鼠以鼻子在容器上撥動為止。在光亮時的壓桿按 壓視為固定的壓桿按壓，雖可計數但無程式結果。一階段持續至90分鐘或者當大鼠連續10分鐘沒有按壓壓桿即結束。每一階段中，皆會紀錄最後完成比例(突破點)的值，受到獎勵的數量，固定的壓桿按壓數，階段進行的時間，和回應的潛在因素。於測試前30分鐘，所有處理組別的動物在最後的2個階段皆接受載劑/藥物的給予，該些階段包括在進步比(PR)行程之下的測試。
第2測試：成本效益(Cost-benefit)選擇測試
在此項任務中，大鼠具有2種選擇：在前述的進步比(PR)行程中進行壓桿按壓而能獲得較偏好的食物(Bioserve顆粒)，或者在操作箱中的盤子(約15公克)內可自由取得實驗用食物。食物容器與壓桿放置於操作箱的同一壁面，裝有實驗用食物的盤子則放置於對側的角落。一階段持續至90分鐘或者當大鼠連續10分鐘沒有按壓壓桿即結束。爾後，計算實驗用食物的攝取數量。所有處理組別的動物於測試前30分鐘接受載劑/藥物的給予。
第3測試：消耗測試(consumption test)
動物個別放置於分開的飼養籠(第3型)中，籠中有承裝30公克食物顆粒的玻璃碗。動物可在20分鐘內自由取得獎勵(食物顆粒)，並量測獎勵的消耗數量，量測方法為測試之前每個玻璃碗的重量減去測試之後每個玻璃碗的重量。所有處理組別的動物於測試前30分鐘接受載劑/藥物的給予。
統計分析
數據以單因子或雙因子變異數分析(one or two way ANOVA)，再以杜納事後檢定(Dunnett’s post hoc test)測定。所有的數據運算皆使用STATISTICATM(StatSoft®，Tulsa，美國)。統計上顯著(顯著水準(α-level))程度設為p<0.05。
結果
本實驗數據顯示(R)-苯基披喇瑟盪增加運動意願，例如工作負載，即動物會願意表現以獲得更多的獎勵食物。同時，自由消耗一般的食物並不會增加運動意願。大致上，結果顯示(R)-苯基披喇瑟盪可增加運動意願，因而可以期盼其對於精神性疲勞上的功效。(R)-苯基披喇瑟盪的功效強過甲基芬尼特(Methylphenidate)與安非他命(amphetamine)。此外，(S)-苯基披喇瑟盪在100毫克/公斤時只有非常低的效果，小於(R)-苯基披喇瑟盪效果的2.5倍，而在200毫克/公斤時的效果並不顯著。
第7實施例：(R)-苯基披喇瑟盪對於單側黑質(substantia nigra，SNc)損傷(帕金森氏症的實驗模式)大鼠的功效-第9，10圖
在單側黑質損傷(臨床前的帕金森氏症實驗模式)的大鼠中，進行(R)-苯基披喇瑟盪的測試。在一些實驗中係結合左旋多巴而進行。在本實驗模式中，同側(ipsilateral)旋轉代表突觸前模式作用，與多巴胺攝取的抑制一致，係為主要模式作用。左 旋多巴則產生對側(contralateral)旋轉。
動物
對雄性Sprague-Dawley大鼠使用6-羥基多巴胺(6-hydroxydopamine)以單側進行前腦內側神經束(medial forebrain bundle)損傷，並在安非他命的旋轉測試中顯示明確的同側旋轉偏差。每4隻大鼠飼養在同一籠中，在動物房內控制12小時光照-黑暗週期，和控制溫度(21℃)，並可取得標準實驗室食物(食物顆粒)，以及任意引用自來水。所有的實驗皆進行於9點至16點之間。
化學藥品
將生理食鹽水中之(R)-苯基披喇瑟盪注射至腹膜內。將左旋多巴(25毫克/公斤)與苄絲肼(15毫克/公斤)溶於生理食鹽水中，並注射至腹膜內。
旋轉測試
注射後的老鼠放置於有機玻璃圓柱(Perspex cylinders，直徑30公分)，並利用TSA旋轉量測系統對於旋轉(360°)行為進行評分，以20分鐘為區間，達360分鐘。
統計分析
數據呈現為平均值±平均值標準誤差 (means±S.E.M.)。使用雙因子變異數分析對於整個紀錄期間所有評分的總合進行分析。若為顯著，雙因子變異數分析後接續採用Dunnett氏檢定以進行逐對的多重比較。
結果
本研究顯示(R)-苯基披喇瑟盪在帕金森氏症動物模式中可增加同側旋轉。結果指出(R)-苯基披喇瑟盪可改善疲勞關聯的帕金森氏症。簡而言之，實驗結果皆顯示(R)-苯基披喇瑟盪對於具有疲勞以及疲勞相關症狀的帕金森氏症病患，能夠提供有效且耐受性良好的治療，其中疲勞相關的症狀包括如失去活力，缺乏活動意願，冷漠，懶散，虛脫，疲倦，衰竭等等。
基於這些初步的發現可知，由於(R)-苯基披喇瑟盪對於多巴胺再攝取轉運蛋白的功效，(R)-苯基披喇瑟盪為治療疲勞相關帕金森氏症的候選藥物。
第8實施例：(R)-苯基披喇瑟盪對於左旋多巴誘導的運動異常(dyskinesia)之功效-第11圖 動物
本實驗流程當中所使用之雄性Sprague-Dawley大鼠係為在進行立體黑質與腹側被蓋區(Ventral tegmental area，VTA)損傷實驗中於安非他命旋轉測試之右轉淨值(netright turns)評分 至少達5.0者。動物飼養於標準的實驗室環境中。
化學藥品
左旋多巴(3,4-Dihydroxy-L-phenylalanine methyl ester)與苄絲肼鹽酸鹽(benserazide hydrochloride)(苄絲肼)(苄絲肼溶解於生理食鹽水(每1公斤大鼠1毫升))，分別以6毫克/公斤和15毫克/公斤之劑量同時進行腹膜內投藥。連續每日給予大鼠左旋多巴/苄絲肼投藥達19-21天，直到產生運動異常(dyskinesia)為止。將溶於生理食鹽水中之(R)-苯基披喇瑟盪進行腹膜內注射。
異常不自主運動(abnormal involuntary movements，AIMs)之等級
類運動異常(dyskinetic-like)之運動的等級(rating)係以前述方式評分並且以總評分進行分析(Dekundy et al.,Pharmacological characterization of MRZ-8676,a novel negative allosteric modulator of subtype 5 metabotropic glutamate receptors(mGluR5)：focus on L：-DOPA-induced dyskinesia.J Neural Transm 118,1703-1716,2011)。而該類運動異常(dyskinetic-like)之運動例如活動的運動異常(locomotive dyskinesia)、肢體運動異常(limb dyskinesia)、縱軸肌張力不全(axial dystonia)、口舌運動異常(orolingual dyskinesia)。
數據顯示，使用可增強左旋多巴的抗帕金森氏症(antiparkinsonian)效果之劑量的(R)-苯基披喇瑟盪，並無增加左旋 多巴之後所產生的運動異常。
第9實施例：(R)-苯基披喇瑟盪對於鎮靜(sedation)之功效，其中鎮靜係由蛇根鹼(reserpine)所誘導-第12圖 動物
雄性Sprague-Dawley大鼠體重約達300公克，飼養於標準的實驗室環境中。
化學藥品
動物分別於測試前24小時和3.5小時注射舌根鹼(reserpine)(5毫克/公斤)和α-甲基色胺酸(α-MT)(250毫克/公斤)。(R)-苯基披喇瑟盪(25毫克/公斤、50毫克/公斤或100毫克/公斤)直接於測試前進行腹膜內注射。
舌根鹼處理的大鼠之活動率
活動率量測於4個有機玻璃盒中(ENV-515-16，43.2公分x 43.2公分x 30公分，Med-Associates Inc.system)，盒中備有16個紅外光束的4個陣列，放置於盒中地面的3公分之上。利用行走距離(Distance travelled，DT)更進一步分析活動的量測。將動物放置於公開區域(open field)之後立即開始紀錄。
統計分析
以單因子變異數分析(one-way ANOVA)對所有紀錄期間所得評分之總合加以分析。
結果
數據顯示(R)-苯基披喇瑟盪可緩和鎮靜並支持抗疲勞的活性，其中該鎮靜由舌根鹼所產生。
第10實施例：(R)-苯基披喇瑟盪對於鎮靜的功效，其中鎮靜係由哈泊度(haloperidol)所誘導-第13圖 動物
雄性Sprague-Dawley大鼠體重約達300公克，飼養於標準的實驗室環境中。
化學藥品
直接於測試之前，將(R)-苯基披喇瑟盪(25毫克/公斤，50毫克/公斤，與100毫克/公斤)溶於生理食鹽水中並注射於腹膜內。在測試開始前30分鐘，0.2毫克/公斤劑量的哈泊度亦以腹膜內注射的方式投藥。
以哈泊度處理之大鼠的活動率
活動率量測於4個有機玻璃盒中(ENV-515-16，43.2公分x 43.2公分x 30公分，Med-Associates Inc.system)，盒中備有16個紅外光束的4個陣列，放置於盒中地面的3公分之上。 利用行走距離(Distance travelled，DT)更進一步分析活動的量測。將動物放置於公開區域之後立即開始紀錄。
統計分析
以單因子變異數分析(one-way ANOVA)對所有紀錄期間所得評分之總合加以分析，若具顯著，則採Holm-Sidak檢定。
結果
數據顯示隨著(R)-苯基披喇瑟盪之劑量的增加，哈泊特所產生的運動減退(hypokinesia)作用亦隨著減緩，即(R)-苯基披喇瑟盪具有抗疲勞和抗帕金森氏症(antiparkinsonian)的活性(參閱第13圖)。另外的實驗顯示，(S)-苯基披喇瑟盪較為次要，在50毫克/公斤的劑量下並無產生功效(參閱第16A圖)或者在100毫克/公斤的劑量之下僅具有幾乎可以忽略的功效(參閱第16B圖)。應注意的是，(R)-苯基披喇瑟盪在這些劑量下可產生非常穩健的功效。
參考文獻
Dimpfel, W. (2003). "Preclinical data base of pharmaco-specific rat EEG fingerprints (tele-stereo-EEG)." Eur J Med Res 8(5): 199-207.
Dimpfel, W., M. Spuler, et al. (1988). "Monitoring of the effects of antidepressant drugs in the freely moving rat by radioelectroencephalography (tele-stereo-EEG)." Neuropsychobiology 19(2): 116-120.
Dimpfel, W., M. Spuler, et al. (1989). "Hallucinogenic and stimulatory amphetamine derivatives: fingerprinting DOM, DOI, DOB, MDMA, and MBDB by spectral analysis of brain field potentials in the freely moving rat (Tele-Stereo-EEG)." Psychopharmacology (Berl) 98(3): 297-303.
Dimpfel, W., M. Spuler, et al. (1986). "Radioelectroencephalography (Tele-Stereo-EEG) in the rat as a pharmacological model to differentiate the central action of flupirtine from that of opiates, diazepam and phenobarbital." Neuropsychobiology 16(2-3): 163-168.
Krösser, S. and J. Tillner (2007). "Pharmacokinetics of sarizotan after oral administration of single and repeated doses in healthy subjects." International Journal of Clinical Pharmacology and Therapeutics 45: 271-280.
前述特定的具體實施例並非用以限制本發明的範疇。事實上，本發明所屬技術領域中之技藝人士，基於前述之說明，在不脫離本發明之精神和範圍內，當可作各種之更動與潤
飾。該些更動與潤飾應屬於本發明之申請專利範圍的範疇內。鑒於各國專利法之下的可能情況，此處所列的所有專利、申請案、公開刊物、測試方法、文獻及其他材料均合併於本文中作為參照。

Claims (34)

  1. 一種醫藥組合物，包括(R)-苯基披喇瑟盪((R)-phenylpiracetam)或其醫藥上可接受之鹽，與一藥劑合併為一組合治療，用於帕金森氏症之多巴胺替代療法。
  2. 如申請專利範圍第1項所述之醫藥組合物，其中該藥劑係為左旋多巴(levodopa，L-DOPA)。
  3. 如申請專利範圍第1項或第2項所述之醫藥組合物，其中相較於該組合治療前之治療週期的該藥劑之投藥劑量，該藥劑於該組合治療中之投藥劑量係減少。
  4. 如申請專利範圍第1項或第2項所述之醫藥組合物，其中相較於該組合治療前之治療週期的該藥劑之投藥頻率，該藥劑於該組合治療中之投藥頻率係減少。
  5. 如申請專利範圍第4項所述之醫藥組合物，其中該藥劑係為左旋多巴，係以每日1次投藥。
  6. 如申請專利範圍第1項或第2項所述之醫藥組合物，其中(R)-苯基披喇瑟盪用於治療包括下列步驟：a.以多巴胺替代療法給予一病患(R)-苯基披喇瑟盪之投藥，並與用於多巴胺替代之該藥劑共同投藥；b.該藥劑之劑量每日遞減10%，直到帕金森氏症之症狀重新出現；且c.增加一次該藥劑之劑量，且相較於該藥劑根據步驟b的最後投藥劑量，該藥劑之投藥劑量係增加10%；以及d.依照步驟c中該藥劑所使用之劑量並利用(R)-苯基披喇瑟盪繼續進行該組合治療。
  7. 如申請專利範圍第6項所述之醫藥組合物，其中該些步驟依照順序進行，以建立該組合治療。
  8. 如申請專利範圍第6項所述之醫藥組合物，其中該些步驟依照順序進行，以改善一已建立之該組合治療。
  9. 一種醫藥組合物，包括(R)-苯基披喇瑟盪或其醫藥上可接受之鹽，用以治療疲勞，特別是帕金森氏症關聯之精神性疲勞。
  10. 如申請專利範圍第1項至第9項之任一項所述之醫藥組合物，其中(R)-苯基披喇瑟盪係為(R)-苯基披喇瑟盪鹽酸鹽((R)-phenylpiracetam hydrochloride)。
  11. 如申請專利範圍第1項至第10項之任一項所述之醫藥組合物，其中(R)-苯基披喇瑟盪係以在約1毫克/天至約250毫克/天的範圍內投藥，或(R)-苯基披喇瑟盪係以在約25毫克/天至約200毫克/天的範圍內投藥，或(R)-苯基披喇瑟盪係以在約50毫克/天至約150毫克/天的範圍內投藥。
  12. 如申請專利範圍第1項至第11項之任一項所述之醫藥組合物，其中(R)-苯基披喇瑟盪或其醫藥上可接受之鹽係每日1次、每日2次、或每日3次投藥。
  13. 如申請專利範圍第1項至第12項之任一項所述之醫藥組合物，其中(R)-苯基披喇瑟盪或其醫藥上可接受之鹽係以一口服製劑形式投藥。
  14. 如申請專利範圍第1項至第13項之任一項所述之醫藥組合物，其中(R)-苯基披喇瑟盪或其醫藥上可接受之鹽係與至少一額外的藥劑共同投服，該藥劑係已知為具有帕金森氏症治療功效。
  15. 如申請專利範圍第14項之醫藥組合物，其中該至少一額外的藥劑選自：左旋多巴、卡比度巴(carbidopa)、其他類型之多巴胺促效劑，包括依託拉嗪(eltoprazine)、單胺氧化酶抑制劑(monoamine oxidase(MAO)-inhibitors)、兒茶酚-O-甲基轉移酶(catechol-o-methyltransferase，COMT)抑制劑、和苄絲肼(benserazide)之至少其中之一。
  16. 如申請專利範圍第1項至第15項之任一項所述之醫藥組合物，其中(R)-苯基披喇瑟盪或其醫藥上可接受之鹽係與至少一額外的藥劑共同投服，該藥劑係已知為具有治療疲勞之功效，特別是帕金森氏症關聯之精神性疲勞。
  17. 如申請專利範圍第16項所述之醫藥組合物，其中該至少一額外的藥劑選自雷沙吉蘭(rasagiline)和普拉克索(pramipexole)。
  18. 一種用以改善多巴胺替代療法之方法，包括給予一有效劑量之(R)-苯基披喇瑟盪或其醫藥上可接受之鹽的步驟，其中該多巴胺替代療法係使用於帕金森氏症和/或治療疲勞所需之個體，該疲勞特別係指精神性疲勞。
  19. 如申請專利範圍第18項所述之方法，其中該藥劑係指左旋多巴。
  20. 如申請專利範圍第18項或第19項所述之方法，其中相較於該組合治療前之治療週期的該藥劑投藥劑量，該藥劑於該組合治療中之投藥劑量係減少。
  21. 如申請專利範圍第18項或第19項所述之方法，其中相較於該組合治療前之治療週期的該藥劑投藥頻率，該藥劑於該組 合治療中之投藥頻率係減少。
  22. 如申請專利範圍第21項所述之方法，其中該藥劑係為左旋多巴，係以每日1次投藥。
  23. 如申請專利範圍第18項或第19項所述之方法，其中(R)-苯基披喇瑟盪用於治療包括下列步驟：a.以多巴胺替代療法給予一病患(R)-苯基披喇瑟盪之投藥，並與用於多巴胺替代之該藥劑共同投藥；b.該藥劑之劑量每日遞減10%，直到帕金森氏症之症狀重新出現；且c.增加一次該藥劑之劑量，且相較於該藥劑根據步驟b的最後投藥劑量，該藥劑之劑量係增加10%；以及d.依照步驟c中該藥劑所使用之劑量並利用(R)-苯基披喇瑟盪繼續進行該組合治療。
  24. 如申請專利範圍第23項所述之方法，其中該些步驟依照順序進行，以建立該組合治療。
  25. 如申請專利範圍第23項所述之方法，其中該些步驟依照順序進行，以改善一已建立之該組合治療。
  26. 一種治療帕金森氏症相關疲勞之個體所需的方法，包括給予一有效劑量之(R)-苯基披喇瑟盪或其醫藥上可接受之鹽的步驟。
  27. 如申請專利範圍第18項至第26項之任一項所述之方法，其中(R)-苯基披喇瑟盪係為(R)-苯基披喇瑟盪鹽酸鹽((R)-phenylpiracetam hydrochloride)。
  28. 如申請專利範圍第18項至第27項之任一項所述之方 法，其中(R)-苯基披喇瑟盪係以在約1毫克/天至約250毫克/天的範圍內投藥，或(R)-苯基披喇瑟盪係以在約25毫克/天至約200毫克/天的範圍內投藥，或(R)-苯基披喇瑟盪係以在約50毫克/天至約150毫克/天的範圍內投藥。
  29. 如申請專利範圍第18項至第28項之任一項所述之方法，其中(R)-苯基披喇瑟盪或其醫藥上可接受之鹽係每日1次、每日2次、或每日3次投藥。
  30. 如申請專利範圍第18項至第29項之任一項所述之方法，其中(R)-苯基披喇瑟盪或其醫藥上可接受之鹽係以一口服製劑形式投藥。
  31. 如申請專利範圍第18項至第30項之任一項所述之方法，其中(R)-苯基披喇瑟盪或其醫藥上可接受之鹽係與至少一額外的藥劑共同投藥，該藥劑係已知為具有帕金森氏症治療功效。
  32. 如申請專利範圍第31項之方法，其中該至少一額外的藥劑選自：左旋多巴、卡比度巴(carbidopa)、其他類型之多巴胺促效劑、包括依託拉嗪(eltoprazine)、單胺氧化酶抑制劑(monoarmine oxidase(MAO)-inhibitors)、兒茶酚-O-甲基轉移酶(catechol-o-methyltransferase，COMT)抑制劑、和苄絲肼(benserazide)之至少其中之一。
  33. 如申請專利範圍第18項至第32項之任一項所述之方法，其中(R)-苯基披喇瑟盪或其醫藥上可接受之鹽係與至少一額外的藥劑共同投藥，該藥劑係已知為具有治療疲勞之功效，特別是帕金森氏症關聯之精神性疲勞。
  34. 如申請專利範圍第33項所述之方法，其中該至少一額 外的藥劑選自：雷沙吉蘭(rasagiline)和普拉克索(pramipexole)。
TW102123815A 2012-07-05 2013-07-03 (r)-苯基披喇瑟盪於治療帕金森氏症之用除 TW201408294A (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201261668076P 2012-07-05 2012-07-05
EP12004986 2012-07-05

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TW201408294A true TW201408294A (zh) 2014-03-01

Family

ID=49881370

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW102123815A TW201408294A (zh) 2012-07-05 2013-07-03 (r)-苯基披喇瑟盪於治療帕金森氏症之用除

Country Status (2)

Country Link
TW (1) TW201408294A (zh)
WO (1) WO2014005721A1 (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2891491A1 (en) * 2014-01-03 2015-07-08 Merz Pharma GmbH & Co. KGaA Use of (r)-phenylpiracetam for the treatment of sleep disorders
LV15072B (lv) * 2014-05-14 2016-09-20 Olainfarm, A/S Farmaceitiska kompozīcija izmantošanai patoloģiska stāvokļa, kam raksturīga paaugstināta iNOS gēna ekspresija, profilaksei un ārstēšanai

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB0004297D0 (en) * 2000-02-23 2000-04-12 Ucb Sa 2-oxo-1 pyrrolidine derivatives process for preparing them and their uses
LV13630B (en) 2006-03-16 2007-12-20 Olainfarm As Method of preparation and use of pharmaceutically active n-carbamoylmethyl-4(r)-phenyl-2-pyrrolidinone
EP2331088A4 (en) * 2008-08-06 2011-10-12 Gosforth Ct Holdings Pty Ltd COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING PSYCHIATRIC ILLNESSES
TW201029995A (en) * 2008-12-05 2010-08-16 Merz Pharma Gmbh & Co Kgaa Use of eltoprazine for the treatment of L-DOPA-induced dyskinesia

Also Published As

Publication number Publication date
WO2014005721A1 (en) 2014-01-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2661026C2 (ru) Применение флекаинида в качестве антиконнексинового средства и способ потенцирования эффектов психотропных лекарственных средств
US10004744B2 (en) Therapeutic approaches for treating Parkinson&#39;s disease
CA2586975A1 (en) Method for treatment of movement disorders
US10342768B2 (en) Therapeutic approaches for treating Parkinson&#39;s disease
JP6853791B2 (ja) パーキンソン病及び関連する障害の治療における使用のための組成物
KR102104635B1 (ko) 운동 장애의 개선된 관리에 적합한 경구로 이용 가능한 약학적 제형
ES2633127T3 (es) Uso de albiflorina para mejorar el trastorno de la ansiedad y el sueño
JP2017036271A5 (zh)
KR102232198B1 (ko) 의약으로서 사용되기 위한 (r)-펄린돌 및 약학적으로 허용 가능한 그의 염
TW201408294A (zh) (r)-苯基披喇瑟盪於治療帕金森氏症之用除
RU2423981C2 (ru) Фармацевтическая композиция для лечения болезни паркинсона
Taddei et al. New symptomatic treatments for the management of motor and nonmotor symptoms of Parkinson's disease
TW201408293A (zh) (r)-苯基披喇瑟盪於治療疾病相關疲勞之用途
CN102648915B (zh) 一种治疗或预防神经病理性疼痛的药物组合物
JP7090731B2 (ja) 柿葉抽出物及びその製剤の新規医薬用途
WO2019159110A1 (en) Therapeutic agents for treating restless legs syndrome
Nagal et al. Parkinson’s Disease: Diagnosis, Therapeutics & Management
AU2021390590B2 (en) Antiinflammatory compositions comprising cannabidiol, delta-9- tetrahydrocannabinol and linalool
RU2802288C2 (ru) Терапевтические агенты для лечения синдрома беспокойных ног
US20150258197A1 (en) Eutectic isometheptene mucate
Zare et al. Wake-Promoting agents; insights into clinical use and molecular perspectives
JP2009539941A (ja) Ｓｌｖ３０８およびｌ−ｄｏｐａを含んでなる組み合わせ製剤
Roufs L-tyrosine in the treatment of narcolepsy
CN116421638A (zh) 一种防治帕金森病的中药提取物的制备方法及应用
JP6738797B2 (ja) レット症候群治療薬