TW201306862A - 非相關抗原於抑制第１型超敏性免疫反應上之用途 - Google Patents

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Abstract

本發明關於經由抗原之旁路抑制以抑制超敏性免疫反應之抗原及方法，該抗原係與引發個體之超敏性免疫反應(諸如過敏反應)之過敏原無關。本發明提供包括投予該非相關抗原至口腔(例如舌下黏膜)與同時、併行、分開或依序之方式投予該非相關抗原至呼吸道、胃腸道或皮膚的組合之治療配方。

Description

非相關抗原於抑制第1型超敏性免疫反應上之用途
本發明係屬於免疫療法、治療超敏性(hypersensitivity)免疫反應及旁路抑制之領域。
過敏原特異性免疫療法(SIT)係於近1個世紀以前被導入臨床醫學以用於治療第1型超敏性免疫反應，目前SIT是唯一能導致長期耐受過敏原之治療方式。在SIT中，該特異性過敏原或彼之交叉反應過敏原係於一段較長之時間期間(通常超過1年)經重複投予至個體，通常藉由皮下投予或藉由舌下投予。通常，該病患在治療數周或數個月之後因再度暴露於該(等)過敏原所經歷之症狀強度分數降低(Allergens and Allergen Immunotherapy 4th Ed,2008,Ed by R Lockey and D Ledford,Informa healthcare)。
SIT療法所面臨的挑戰之一係過敏原需要被識別，而且接受SIT之個體發生嚴重系統性不良反應如過敏性反應(anaphylaxis)之風險顯著提高，也會發生局部不良反應如腫脹及發癢。因此，需要改善對超敏性免疫反應之治療。
大約20年前，Miller et al(1991)示範提供對抗原(髓磷脂鹼性蛋白(MBP))之週邊耐受性之原則，其藉由在未經MBP抗原致敏之未參加過試驗之大鼠首次暴露於MBP之前，經胃內投予OVA(與MBP無關之抗原)加以治療。Miller et al(1991)發現若該些大鼠在首次暴露於MBP時係經共暴露於非相關抗原(OVA)，該些大鼠僅具有不發生實驗性自體免疫性腦脊髓炎(EAE)之保護效果。
後來有些研究人員藉由投予與引發免疫反應之抗原無關之抗原以研究旁路抑制該免疫反應。
舉例來說，Dahlman-Hoglund et al(1995)探討在經口餵食第一抗原給未參加過試驗的大鼠之後以第二抗原刺激該未參加過試驗之大鼠以便引發意外免疫反應，其中該動物之免疫反應受到抑制。研究人員發現，在引發該意外之免疫反應時，由該第二抗原所引起之免疫反應僅在該大鼠暴露於同時包含該第一抗原及該第二抗原之混合物之處受到抑制。相反地，當該第一及第二抗原被分開投予至該大鼠之二個分開之身體部分時不能達到抑制免疫反應。
Millington et al(2004)之發表文獻係關於餵食小鼠可溶性蛋白質(OVA)以便誘發對非相關抗原之旁路抑制。
Oliveira CR et al(2005)指出，非相關抗原之旁路效應是一種有趣的機轉，其可控制已經被一種過敏原致敏之個體對新過敏原之致敏化。該些作者指出，口服OVA之預先治療導致旁路下調對抗過敏原之特定抗體，但只有在該後續免疫接種存在OVA時。
Wang Lifang et al(2009)之發表文獻係關於抗原驅使之旁路效應加速新的蛋白過敏原之經皮致敏。Brimnes et al(2009)之發表文獻係關於未參加過試驗之小鼠的舌下免疫療法之研究。Kildsgaard et al(2005)之發表文獻係關於經致敏小鼠之舌下免疫療法之研究。Weiner et al(1997)之發表文獻係關於口服耐受性及自體免疫性疾病之治療。Rask et al(2010)之發表文獻係關於舌下免疫療法於過敏性發炎之小鼠模型中的研究。Brimnes et al(2007)之發表文獻係關於舌下免疫療法於鼻炎小鼠模型中的研究。Kildsgaard et al(2007)之發表文獻係關於經致敏小鼠之舌下免疫療法之研究。
國際專利申請案WO 2004/082710係關於一種產品，其包含i)Notch傳訊途徑之調節劑；及ii)過敏原或過敏原旁路抗原或彼之抗原決定簇，或編碼過敏原或過敏原旁路抗原或彼之抗原決定簇之多核苷酸；以作為供同時、併行、分開或依序使用以調節免疫系統之組合製劑。
與習用之過敏原特異性免疫療法(其中個體係經引發該超敏性免疫反應之特異性過敏原(包括過敏原或彼之交叉反應性過敏原之混合物)治療)不同的是，本發明關於以和引發個體之超敏性免疫反應之過敏原無關之抗原治療(包括預防性治療)個體之超敏性免疫反應。也就是說，本發明亦關於旁路抑制超敏性免疫反應。
本發明之發明人提供證據證明，由示範性抗原引發小鼠之超敏性免疫反應可被顯著減少，如果該小鼠預先經另一與該「引發」抗原無關之抗原治療。有趣的是，超敏性免疫反應之緩和亦反映於過敏性免疫反應之臨床相關讀數，例如打噴嚏次數減少或呼吸道過度反應性降低。甚至更有趣的是，該超敏性免疫反應之緩和可被顯示於經該「引發」抗原預先致敏之小鼠以及未經該「引發」抗原致敏之小鼠。本發明人亦發現該免疫反應僅能在當該非相關抗原可在該小鼠經該「引發」抗原刺激/暴露時與該「引發」抗原一起被獲得之情形下降低。
因此，應了解的是本發明利用和該「引發」抗原無關之抗原治療免疫反應僅能在該「引發」抗原之靶向器官亦在暴露於該「引發」抗原時同時暴露於該非相關抗原時作用。舉例來說，可能設想到以非相關抗原治療個體因為暴露於吸入性過敏原所引起之超敏性免疫反應時，只有在該非相關抗原亦暴露至該個體之呼吸道時才有作用。
如本發明人所認知的，要確認該引發意外免疫反應之抗原及該非相關抗原二者在天然暴露於「引發」抗原之靶向器官處的共可用性/共暴露性係高度挑戰之任務。至少，可以設想到當該靶向器官係呼吸道時，要確保花粉過敏原及非相關抗原之共暴露係高度挑戰性，除非直接同時投予該非相關抗原與該空氣過敏原材料(例如花粉)至該個體之呼吸道。
也很有趣的是，本發明人發現若該非相關抗原係經投予至口腔黏膜(諸如口腔舌下部分之黏膜)而非胃腸道之黏膜，旁路抑制將更為有效。就本發明人所知，他們是最先發現若非相關抗原係經投予至口腔黏膜，則旁路抑制將更有效的人。
因此，本發明之第一態樣係關於一種用於治療或預防性治療有彼等需要之個體的呼吸道超敏性免疫反應之方法，諸如用於旁路抑制有需要旁路抑制之個體的呼吸道超敏性免疫反應之方法，其中該免疫反應係當該個體暴露於包含過敏原之環境源材料時由該過敏原引發且其中
i)　該抗原係與引發該個體之超敏性免疫反應之該(等)過敏原無關，且
ii)　該抗原係以治療有效量投予至該個體之口腔，且
iii)　該抗原亦在該個體暴露於該源材料之至少部分或完全重疊期間被投予至呼吸道。
換句話說，本發明之第一態樣係關於一種用於治療或預防性治療有彼等需要之個體的呼吸道超敏性免疫反應之抗原，諸如用於旁路抑制有需要旁路抑制之個體的呼吸道超敏性免疫反應之抗原，其中該免疫反應係當該個體暴露於包含過敏原之環境源材料時由該過敏原引發且其中
i)　該抗原係與引發該個體之超敏性免疫反應之該(等)過敏原無關，且
ii)　該抗原係以治療有效量投予至該個體之口腔，且
iii)　該抗原亦在該個體暴露於該源材料之至少部分或完全重疊期間被投予至呼吸道。
本發明之第二態樣係關於一種用於治療或預防性治療有彼等需要之個體的胃腸道超敏性免疫反應之方法，諸如用於旁路抑制有需要旁路抑制之個體的胃腸道超敏性免疫反應之方法，其中該免疫反應係當該個體暴露於包含過敏原之飲食源材料時由該過敏原引發且其中
i)　該抗原係與引發該個體之超敏性免疫反應之該(等)過敏原無關，且
ii)　該抗原係以治療有效量投予至該個體之口腔，且
iii)　該抗原亦在該個體暴露於該源材料之至少部分或完全重疊期間被投予至呼吸道。
換句話說，本發明之第二態樣係關於一種用於治療或預防性治療有彼等需要之個體的胃腸道超敏性免疫反應之抗原，諸如用於旁路抑制有需要旁路抑制之個體的胃腸道超敏性免疫反應之抗原，其中該免疫反應係當該個體暴露於包含過敏原之飲食源材料時由該過敏原引發且其中
i)　該抗原係與引發該個體之超敏性免疫反應之該(等)過敏原無關，且
ii)　該抗原係以治療有效量投予至該個體之口腔，且
iii)　該抗原亦在該個體暴露於該源材料之至少部分或完全重疊期間被投予至胃腸道。
本發明之第三態樣係關於一種用於治療或預防性治療有彼等需要之個體的皮膚超敏性免疫反應之方法，諸如用於旁路抑制有需要旁路抑制之個體的皮膚超敏性免疫反應之方法，其中該免疫反應係當該個體暴露於包含過敏原之環境源材料時由該過敏原引發且其中
i)　該抗原係與引發該個體之超敏性免疫反應之該(等)過敏原無關，且
ii)　該抗原係以治療有效量投予至該個體之口腔，且
iii)該抗原亦在該個體暴露於該源材料之至少部分或完全重疊期間被投予至呼吸道。
換句話說，本發明之第三態樣係關於一種用於治療或預防性治療有彼等需要之個體的皮膚超敏性免疫反應之抗原，諸如用於旁路抑制有需要旁路抑制之個體的皮膚超敏性免疫反應之抗原，其中該免疫反應係當該個體暴露於包含過敏原之環境源材料時由該過敏原引發且其中
i)　該抗原係與引發該個體之超敏性免疫反應之該(等)過敏原無關，且
ii)　該抗原係以治療有效量投予至該個體之口腔，且
iii)該抗原亦在該個體暴露於該源材料之至少部分或完全重疊期間被投予至皮膚。
換句話說，本發明之第一、第二及第三態樣係關於一種抗原用於製造供治療或預防性治療有彼等需要之個體的呼吸道、胃腸道或皮膚超敏性免疫反應之藥物上之用途，諸如抗原用於製造供旁路抑制有需要旁路抑制之個體的呼吸道、胃腸道或皮膚超敏性免疫反應之藥物上之用途，其中該免疫反應係當該個體暴露於包含過敏原之環境源材料或飲食源材料時由該過敏原引發且其中
i)　該抗原係與引發該個體之超敏性免疫反應之該(等)過敏原無關，且
ii)　該抗原係以治療有效量投予至該個體之口腔，且
iii)該抗原亦在該個體暴露於該源材料之至少部分或完全重疊期間被分別投予至呼吸道、胃腸道及皮膚。
在本發明之子態樣中，應了解的是當該方法/抗原係用於治療個體之超敏性免疫反應時，該個體具有抗該(等)過敏原之特異性IgE抗體，諸如特異性血清IgE抗體。另外應了解的是，此個體在接受治療之時不一定呈現超敏性免疫反應之臨床症狀，但該個體係經過敏原致敏。
在本發明之另一子態樣中，應了解的是當該方法/抗原係用於預防性治療個體之超敏性免疫反應時，該個體在開始接受預防性治療之時不具有抗該過敏原之特異性IgE抗體，諸如特異性血清IgE抗體。通常觀察到的是具有特應性疾病家族病史之個體可能具有發生超敏性免疫反應之風險，這些人當中許多和已經致敏個體一樣，被相同之過敏原致敏。因此，當該子態樣係關於預防性治療超敏性免疫反應時，用於治療已經被過敏原致敏之個體的同一種非相關抗原可被用於個體之預防性治療。
如本發明人所了解的，該「引發」抗原與該非相關抗原二者在靶向器官之共可用性之條件可利用多種手段達成。在本發明中，共可用性係藉由亦投予該非相關抗原至該過敏原暴露之重要靶向器官達成，諸如藉由投予該非相關抗原至呼吸道、胃腸道或皮膚，這些器官被視為經吸入及接觸皮膚之環境過敏原或經攝取食物之飲食過敏原的主要靶向器官。
本發明之詳細說明 定義
下列用語及片語應具有下列意義：
用語「一」(“a”或“an”)係指不確定數量且不應僅視為「一」但亦應視為「一些」或「有些」之意義。
用語「過敏原」應被視為一或多種過敏原。
用語「過敏原」係用以表示能在個體體內(諸如在動物體內，諸如在人體內)誘發超敏性免疫反應之過敏原。該過敏原可為致敏性過敏原或交叉反應性過敏原。
用語「致敏性過敏原」係指能引發個體體內之免疫系統產生IgE抗體之過敏原。
用語「交叉反應性過敏原」係指對原本因拮抗致敏性過敏原所產生之IgE抗體有所反應之過敏原。也就是說，交叉反應性過敏原係因為致敏性過敏原所引發之交叉反應性IgE抗體而能誘發超敏性免疫反應之過敏原。舉例來說，蘋果的過敏原Mal d 1係樺樹花粉之Bet v 1的蛋白質同源物，因為其刺激負載抗Bet v 1之IgE的肥胖細胞之能力因此能在經bet v 1過敏原預先致敏之個體體內誘發超敏性免疫反應。
用語「主要過敏原」應指在具有因暴露於包含過敏原之該過敏原源材料而引發之超敏性免疫反應的病患族群中造成超過50%之病患族群致敏之過敏原。
用語「次要過敏原」應指在具有因暴露於包含過敏原之該過敏原源材料而引發之超敏性免疫反應的病患族群中造成少於50%之病患族群致敏之過敏原。
用語「與過敏原非相關之抗原」與用語「非相關抗原」係可交換使用之用語，其用於表示與過敏原截然不同之蛋白質抗原，諸如與致敏性過敏原或與交叉反應性過敏原不同。
「與引發個體之超敏性免疫反應之過敏原無關之抗原」之詞組係用來表示與過敏原截然不同之蛋白質抗原，諸如與能引發個體之超敏性免疫反應之致敏性過敏原或交叉反應性過敏原不同。
用語「可得自源材料之抗原」係用於表示該抗原係自包含該過敏原之源材料分離或以其他方式自另一源材料分離/獲得，但仍與存在於包含該能引發個體之超敏性免疫反應之過敏原的原始源材料中之該非相關抗原相同或至少實質上相同。
用語「可衍生自源材料之抗原」係用來表示與存在於包含該能引發有此需要之個體之超敏性免疫反應之過敏原的源材料中之該非相關抗原相同或至少實質上相同之抗原，但係藉由化學及/或生物方法諸如根據在蛋白質領域中廣為周知之方法藉由肽合成及/或重組蛋白質技術複製。
用語「與非相關抗原實質上相同之抗原」係用來代表該抗原相較於該存在於或分離自包含該過敏原之源材料之非相關分子係經輕微修飾。典型修飾係於此處進一步定義。
用語「旁路抑制」通常係用於包含藉由以另一種非相關抗原(B)治療個體以抑制該個體對一種抗原(A)之免疫反應之能力。
用語「耐受性誘導之旁路抑制」通常係用於包含藉由以另一種非相關抗原(B)治療個體以抑制該個體對一種抗原(A)之免疫反應之能力。
此處所使用之用語「共可用性」係用來代表該非相關抗原係經表現給該「引發」過敏原經由包含該過敏原之源材料之天然暴露所到達之相同靶向器官，諸如相同之黏膜或皮膚。這不一定表示該非相關抗原及該過敏原可在確切相同之時間被用於或表現給該靶向器官，但在時間上足夠靠近以確保旁路抑制之發生。舉例來說，該非相關抗原係在該「引發」過敏原到達該靶向器官數小時、數天或數周之前或之後表現給/用於該靶向器官。然而，該非相關抗原係較佳地在至少與該引發過敏原被暴露至該相同靶向器官之期間部分或完全重疊(諸如部分或完全併行)之期間內表現給該靶向器官。
此處所使用之用語「共暴露」係用於包含該疾病誘發性抗原(諸如「引發」過敏原)及該非相關抗原係於該個體被暴露於「引發」過敏原時經暴露至該相同之靶向器官，例如該相同之黏膜。這不一定表示該非相關抗原及該致敏過敏原可在確切相同之時間被用於或表現給該相同之身體部分，但在時間上足夠靠近以確保旁路抑制之發生。舉例來說，該非相關抗原係在該「引發」過敏原到達該靶向器官數小時、數天或數周之前或之後表現給/用於該靶向器官。然而，該非相關抗原係較佳地在至少與該引發過敏原被暴露至該相同靶向器官之期間部分或完全重疊(諸如部分或完全併行)之期間內表現給該靶向器官。
用語「免疫療法」係用於包含療法，其中該治療性活性劑(該免疫調節劑)係抗原。免疫療法通常包含在一段延長之時間內(通常為期數個月或數年)重複投予足夠劑量之抗原(通常為微克量)，其中該抗原係每天、每周、每二周或每月投予。
用語「個體」係用於表示具有適應性免疫系統之哺乳動物，諸如人、寵物(如犬或貓)、及農場動物(如馬或牛)。
用語「有此需要之個體」係用於包含具有超敏性免疫反應之個體、經過敏原致敏之個體、以及具有經過敏原致敏之風險或發生超敏性免疫反應之風險之個體。該個體可能出現超敏性免疫反應之臨床症狀或該個體可能僅經過敏原之致敏但尚未出現超敏性免疫反應之臨床症狀。具有經過敏原致敏風險之個體可能因為有特應性個體之家族史被識別。
用語「經過敏原致敏之個體」係用於包含具有拮抗該過敏原之特異性IgE抗體(諸如血清抗體)之個體。
用語「預防性治療」係用於包含目的是緩和個體之超敏性免疫反應或完全預防該個體發生超敏性免疫反應之治療，諸如藉由免疫療法。預防性治療諸如預防性免疫療法因此係在該個體變成被過敏原致敏之前開始。此可藉由在該個體之能與該致敏性過敏原特異性結合之可檢測之血清IgE抗體上升之前或在自該個體分離之生物樣本中可檢測到任何其他顯示超敏性免疫反應之生化標記之前開始免疫療法實現。另外，預防性免疫療法應亦表示在該個體發展出疾病之臨床症狀(諸如過敏性鼻炎或過敏性氣喘之症狀)之前開始的免疫療法。
用語「治療」係指任何類型之授予好處給個體之治療或預防，該個體罹患受到關注之過敏原的超敏性免疫反應或具有發生該受到關注之過敏原的超敏性免疫反應之風險，該好處包括改善該個體之狀況(例如改善一或多種症狀)、延遲症狀之發生或延緩症狀之進展等。此處所使用之「治療」不一定用於表示治癒或完全停止症狀，但係指任何類型之授予好處給病患之治療。
用語「治療有效量」係用來表示有效治療之量，諸如足以達成所欲效應之量。舉例來說，治療有效量係指為了達成預定療效，在免疫療法期間經投予之非相關抗原之總劑量，或在給定期間之內之最大耐受劑量。該總劑量可依投予途徑被分成每天、每周二次、每周、每二周、每四周、或每月投予之單一劑量。該總劑量可以不同濃度投予。一般預期單一劑量係在微克之範圍，諸如依該非相關抗原而定之5至500微克之範圍。
用語「經過敏原致敏」通常係用來包含該個體已經暴露於過敏原，該暴露之方式使該個體之適應性免疫系統顯示對該過敏原之記憶，諸如具有增加之可檢測之抗該過敏原之IgE抗體，或者在活體外經刺激之T細胞能在該致敏性過敏原存在下增生。
用語「舌下途徑」及用語「舌下投予」係可互相交換之用語，它們用來表示該非相關抗原係經局部或經黏膜投予至個體之舌下黏膜。較佳地，該非相關抗原係經提供為適用於此目的之醫藥調製劑，諸如錠劑(例如快速崩解錠)，或用於滴劑投予之溶液。
用語「佐劑」係指增進對抗抗原之免疫反應之物質。根據該佐劑之性質，其可增進細胞媒介性免疫反應、體液性免疫反應或二者混合之反應。
本發明提供之資料摘要
如本發明之實施方式中之實施例所示，本發明人藉由使用各種小鼠模型之試驗設計以研究旁路抑制。
其中一種試驗設計係用於實施例1及2之預防性小鼠模型。此模型允許用於研究一種抗原之預防性治療是否能下調由與該第一抗原無關之另一種抗原(引發抗原)所引起之系統性發炎免疫反應。另外，此模型允許用於研究該下調是否取決於該非相關抗原在系統性刺激時之存在與否。第一步，未參加過試驗之小鼠接受非相關抗原之舌下免疫療法(SLIT)以誘發耐受性。接著，該SLIT治療之效應係藉由經腹膜內(i.p.)注射明礬吸附之「引發」抗原(即過敏原)誘導系統性免疫反應評估。由此產生之免疫反應通常具有在以該過敏原進行活體外再刺激時脾T細胞增生及產製Th2細胞介素之特徵。因此，在此簡單預防性小鼠模型中產生之免疫反應反映入之情況，其中個體接受預防性免疫反應之目的為預防被Th2誘發性過敏原致敏及/或預防由Th2誘發性過敏原所引發之免疫反應。
為了研究旁路抑制，一組小鼠係經過敏原及非相關抗原二者之i.p.注射刺激。若衍生自經該非相關抗原舌下治療之小鼠的脾T細胞在以Th2誘發性過敏原活體外再刺激時相較於衍生自經安慰劑(緩衝液)舌下治療之小鼠的T細胞顯示減少之T細胞增生，則該小鼠獲得旁路抑制。在目前之實施例中，二種單一抗原OVA及草花粉之梯牧草p 5過敏原以及梯牧草p過敏原之混合物(梯牧草(Phleum Pratense)之草花粉的水性過敏原萃取物)以被用來作為示範性非相關抗原。二種不同之Th2誘發性過敏原OVA及Ph1 p萃取物已被用來作為在小鼠模型中引發Th2樣免疫反應之示範性過敏原。舉例來說，當OVA被用來作為非相關抗原時，該小鼠係經Ph1 p過敏原萃取物之刺激，相反地使用OVA作為刺激過敏原。
另一種預防性小鼠模型之試驗設計係用於實施例3及6，其目的是證實呼吸道發炎之旁路抑制及因此證實臨床相關免疫反應之旁路抑制，以臨床相關參數如在肺及呼吸道高反應性中之嗜酸性球之組分作為評估。在此模型中，在預防性SLIT治療後之腹膜內注射可被視為致敏步驟，因為在此腹膜內致敏步驟之後將以該步驟中所使用之相同過敏原進行鼻內刺激。該鼻內刺激之額外步驟僅是用來誘導與過敏性氣喘及鼻炎臨床上相關之呼吸道發炎。
為了研究旁路抑制，一組小鼠係經過敏原及非相關抗原二者之i.p.注射刺激。若該經非相關抗原舌下治療之小鼠相較於經安慰劑(緩衝液)舌下治療之小鼠顯示減少之嗜酸性球增多症及/或減少之呼吸道高反應性，則該小鼠獲得旁路抑制。
治療性小鼠模型之試驗設計係用於實施例4及5。該等小鼠先被過敏原經腹膜內注射致敏，接著以非相關抗原之舌下免疫療法治療。為了研究臨床相關免疫反應之旁路抑制，該等小鼠接著經鼻內注入過敏原刺激，該過敏原係經單獨或與非相關抗原一起注入以達成發生呼吸道發炎之目的，可能觀察到像是肺中嗜酸性球之組分增加、呼吸道高反應性增加或打噴嚏增加，這些均為過敏性氣喘及鼻炎之相關臨床症狀。若該經非相關抗原舌下治療之小鼠相較於經安慰劑(緩衝液)舌下治療之小鼠顯示減少之嗜酸性球增多症及/或減少之呼吸道高反應性或打噴嚏，則該小鼠獲得旁路抑制。
此處所使用之小鼠模型係研究特異性過敏原免疫療法之領域中所使用之廣為周知之方法(J Brimnes et al,Clinical and Experimental Allergy 37,488-497,2007)，且係合理預測具有如此處所使用之小鼠模型所呈現之相同免疫學及臨床讀數之人的治療療效之模型。應注意的是，該小鼠模型呈現許多與人過敏性鼻炎及氣喘有關之臨床及免疫學特徵，包括打噴嚏、呼吸道高反應性增加、嗜酸性球流入以及局部及系統性之IL-5及抗原特異性IgE二者之量增加(J Brimnes et al 2007之第489頁)。Brimnes et al 2007之小鼠模型的有效性已經由Brimnes文章發表之期刊編輯證實，見"New allergy intervention strategies: hitting the mucosal road",U Wiederrnann et aI.,Clinical and Experimental Allergy 37,473-475,2007。
此處所顯示之結果可摘列於下：圖2A及3A分別顯示在使用OVA作為「引發過敏原」及Ph1 p作為非相關抗原之預防性小鼠模型中之T細胞增生及Th2細胞介素IL-4產製之旁路抑制。圖4A顯示使用Ph1 p作為「引發過敏原」及OVA作為非相關抗原之預防性小鼠模型中之T細胞增生之旁路抑制。圖5A及B兩圖顯示在經非相關抗原舌下治療之小鼠與經該非相關抗原口服治療之小鼠中經改善之T細胞增生率之旁路抑制。A與B之間的差別是用於再刺激該脾T細胞之OVA的劑量。圖8A、C及E分別顯示在使用OVA作為「引發過敏原」及Ph1 p萃取物作為非相關抗原之預防性小鼠模型中之呼吸道高反應性、嗜酸性球流入及T細胞增生率之旁路抑制。圖10A、11A及12A顯示在使用OVA作為「引發」過敏原及Ph1 p萃取物作為非相關抗原之治療性小鼠模型中之嗜酸性球流入、IL-5細胞介素量及呼吸道高反應性之旁路抑制。圖14A、15A及16分別顯示在使用「ph1 p萃取物」作為「引發」過敏原及OVA作為非相關抗原之治療性小鼠模型中關於打噴嚏次數、嗜酸性球流入及IL-5細胞介素之量的旁路抑制。圖18A、B及C分別顯示在使用OVA作為「引發過敏原」及Phl p萃取物作為非相關抗原之預防性小鼠模型中之呼吸道高反應性、支氣管肺泡灌洗(BAL)中之嗜酸性球流入及T細胞增生率之旁路抑制。圖19A及B分別顯示在使用OVA作為「引發過敏原」及Phl p 5(單一抗原)作為非相關抗原之預防性小鼠模型中之BAL中之嗜酸性球流入及T細胞增生率之旁路抑制。
被注意到的是，旁路抑制只有在小鼠受到該「引發過敏原」之刺激時也受到該非相關抗原刺激才會表現。因此，圖2B、3B、8B、8D、8F、10B、11B、12B、14B及15B不顯示旁路抑制，因為這些圖係指小鼠僅受到該「引發」過敏原之刺激。同樣會注意到的是，通常被定義為過敏原(Phl p 5或Phl p萃取物)之抗原在此處被當作示範性非相關抗原。然而，該等過敏原仍為示範性非相關抗原，因為小鼠在該等使用Phl p 5或Phl p萃取物作為非相關抗原之實驗當中非經該等過敏原致敏而是經OVA致敏。
因此，本發明人已經提出許多資料指出，與該「引發」過敏原非相關之抗原能夠提供超敏性免疫反應(諸如呼吸道發炎)之旁路抑制。另外，本發明所提供之許多資料顯示，旁路抑制亦可藉由使用其他尚未經測試之非相關抗原達成，且旁路抑制亦可在胃腸道(食物過敏)或皮膚(異位性皮膚炎或接觸性皮膚炎)之超敏性免疫反應中顯示。由飲食過敏原(如花生、乳、蛋或大豆之過敏原)所引發之超敏性免疫反應的旁路抑制可利用如實施例8中概述之小鼠模型研究，由接觸性皮膚炎或異位性皮膚炎相關性過敏原所引發之超敏性免疫反應的旁路抑制可利用如實施例9中概述之小鼠模型研究。
非相關抗原
如上所述，本發明之用途及方法包含投予與引發超敏性反應之過敏原(即一或多種過敏原)無關之抗原至口腔黏膜及該暴露於「引發」過敏原之靶向器官。
原則上，任何抗原皆可作為本發明之非相關抗原之候選物，只要該非相關抗原係與引發需要彼等治療之特定個體體內的超敏性免疫反應之一或多種過敏原截然不同，唯其該「引發」過敏原及該非相關抗原可在靶向器官中達成共可用性。因此，本發明之非相關抗原可能藉由測定該非相關抗原是否能或不能(至少在可檢測之程度上)與得自該將被治療之個體的IgE抗體(諸如血清IgE抗體)結合加以識別。其他用於篩選本發明之療法所使用之適當非相關抗原之標準包括該非相關抗原不能(至少在可檢測之程度上)與得自個體群之IgE抗體(諸如血清IgE抗體)結合，該個體群具有特異性IgE抗體，諸如拮抗受到關注之預選源材料(例如草花粉或各屬、種之花粉)之過敏原的特異性血清IgE抗體。
因此，在本發明較佳之實施態樣中，該抗原係與該「引發」過敏原無關，因為該抗原不能(至少在可檢測之程度上)與得自具有特異性IgE抗體(諸如拮抗該(等)過敏原之血清IgE抗體)之個體群的IgE抗體(諸如血清抗體)結合。
拮抗過敏原之特異性IgE抗體可藉由該領域廣為周知之方法測試，諸如使用檢測拮抗懷疑或已知過敏原之特異性IgE抗體之放射性免疫測定之RAST測試。在該測試中，該懷疑之過敏原係與不可溶性材料結合，並加入病患之血清。若該血清包含抗該過敏原之抗體，該些抗體將與該過敏原結合。加入經放射標記之抗人IgE抗體，其將與該些已經和該不可溶性材料結合之IgE抗體結合。未結合之抗人IgE抗體被清洗移除。放射活性之量係與抗該過敏原之血清IgE成正比。近幾年，更優異之檢測系統ImmunoCAP特異性IgE血液檢測在文獻中亦可能被稱為CAP RAST、CAP FEIA(螢光酶聯免疫測試)及Pharmacia CAP。該檢測之定量檢測極限可低至約0.1kU/l。在本發明上下文之用途中，當使用該ImmunoCAP特異性IgE血液檢測或相等檢測時，該定量檢測極限可低於1kU/l，諸如低於0.5 kU/l，諸如低於0.3kU/l。
較佳地，該抗原係與該(等)過敏原無關，因為有需要治療之個體及/或個體群之能與該抗原結合之特異性IgE抗體(諸如血清IgE抗體)之檢測係呈陰性。也就是說，該IgE抗體至少不可被檢測或至少不以可量化之量存在。
很明顯地，該抗原亦可與該(等)過敏原區別，因為該抗原不能在需要治療之個體及/或個體群中引發超敏性免疫反應。因此，在本發明之一些實施態樣中，該抗原係與該(等)過敏原無關，因為在以各種濃度之該抗原進行皮膚點刺測試時，該抗原不能在需要治療之個體及/或個體群引發立即皮膚反應。
在本發明之其他實施態樣中，該抗原係與該(等)過敏原無關，因為在使用所欲治療之個體或個體群的血液之活體外嗜鹼性球/肥胖細胞測試中，該抗原不能誘導組織胺釋放。
如上所述，在本發明之一些實施態樣中，該抗原係與由得自個體群而非所欲治療之個體的IgE抗體所定義之過敏原無關。該族群之代表量可能不同。不過一般預期個體群係由至少4個體之個體數量組成，諸如至少5、10、15、20、30、40、50或至少100個體。當所希望的是篩選用於治療更大群個體之抗原時，該抗原可能與所有使病患群具有升高之特異性IgE抗體之致敏性過敏原或彼等之交叉反應性過敏原不同。本發明可能關於測試一群至少30、更佳地40、甚至更佳地50個體之病患群。因此，在本發明之有趣實施態樣中，個體群具有30至1000個體，諸如30至500、諸如30至400、諸如30至300、諸如30至250、諸如30至100之個體數量。
另外，非相關抗原可藉由測定該抗原是否具有相較於該過敏原不同之抗原決定簇加以識別，諸如與有問題之過敏原共享B細胞及/或T細胞表位，包括構型表位及線性表位。因此在本發明之較佳實施態樣中，該抗原係與該(等)過敏原無關，因為該抗原不與該(等)過敏原共享任何B細胞或T細胞表位。表位可根據該領域已知之方法加以「定位」，即識別及特徵化能被免疫系統辨識之最小分子結構之方法，例如蛋白質微陣列、ELISPOT或ELISA技術等。在一些實施態樣中，與MHC第二型分子結合之T細胞表位係利用四聚體表位作圖技術(TGEM)定位。見Kwok et al.之美國專利第7,094,555號，其係以參照方式整體納入此處。表位亦可根據電腦模型預測，例如TEPITOPE程式。見例如Kwok et al.,Trends in Immunology,2001,22(11): 583-588。
因此，在本發明之較佳實施態樣中，該非相關抗原具有與該過敏原之胺基酸序列低於70%一致性之胺基酸序列(較佳地低於65、60)，諸如低於65%、低於60%、低於55%，諸如低於50%、諸如低於45%、諸如低於40%一致性，諸如低於30%，諸如低於25%，諸如低於20%一致性。
另外，用於本發明之非相關抗原可能較佳地不與(諸如不得與)得自所欲治療之個體的IgE抗體(諸如血清IgE抗體)結合。
該非相關抗體也不與(至少非可檢測之量)在經預選源材料之一或多種或所有過敏原對動物免疫接種之後升高之IgG抗體例如兔抗IgG結合。
由於屬於蛋白質抗原，因此該非相關抗原本質上具有免疫學特性且會被個體之免疫系統辨識為外來。因此，非相關抗原能誘導根據暴露/投予途徑而定之能與該非相關抗原專一性結合之特異性IgG抗體(諸如IgG4或IgG1抗體)、IgM或IgA抗體。
該非相關抗原在本質上係蛋白質，包括糖蛋白、脂蛋白及彼之轉譯後衍生物例如磷醯基蛋白質。該非相關抗原亦可被提供為免疫原性肽，包括糖肽、脂肽及彼之轉譯後衍生物例如磷醯基肽，唯其此肽不與過敏原之肽片段相同或同源。
另外，在本發明之更佳實施態樣中，該非相關抗原係水溶性抗原。在本發明之仍更有趣之實施態樣中，該非相關抗原係可萃取自pH介於6至8之水溶液(諸如特別是6.5至7.5)，該溶液可任意選擇地含有鹽水及/或含有相關酶。舉例來說，在本發明之有趣實施態樣中，該抗原可萃取自水溶液(諸如pH介於6至8(較佳地6.5至7.5)之水性鹽水溶液)不超過60分鐘，諸如較佳地不超過45、30、20、15、10或6分鐘。
根據本發明，本發明之抗原係與引發該超敏性免疫反應之過敏原無關。一般來說，不是含過敏原源材料中之所有過敏原皆可引發超敏性免疫反應。通常僅涉及主要過敏原。也就是說，在本發明之更有趣之實施態樣中，本發明之抗原係與一或多種含過敏原源材料中之主要過敏原無關。舉例來說，選擇與過敏原(諸如特別是存在於含過敏原之環境源材料或含過敏原之飲食源材料中之過敏原)無關之非相關抗原可能有利。
非相關抗原之來源
非相關抗原可見於各種源材料，包括該些包含一或多種過敏原之源材料，該一或多種過敏原可於需要治療之個體或具有抗預選源材料之一或多種過敏原之特異性IgE抗體(諸如血清IgE抗體)的個體群引發超敏性免疫反應。然而，該非相關抗原較佳地不能得自或衍生自含過敏原源材料，該含過敏原源材料包含該一或多種能引發需要治療之個體或個體群之超敏性免疫反應之過敏原。
該含過敏原源材料可為天然發生之源材料，如環境源材料(例如花粉、動物皮屑、毒液及樹膠)或飲食源材料(例如堅果及穀物)。
在源材料中發現之非相關抗原可利用廣為周知之蛋白質分離技術識別，並謹記蛋白質很容易變性且三級結構很容易被破壞。首先，應先識別包含該過敏原之源材料。該源材料接著可經各種萃取方法處理，較佳地著重於分離水溶性非相關抗原。舉例來說，該非相關抗原可自主要包含水性萃取溶劑之源材料被分離。也就是說，該非相關抗原係存在於該源材料之水性萃取組分中，諸如在層析萃取及純化期間被洗脫於水性萃取溶劑中。脂質萃取溶劑仍可被用於去脂該源材料或移除非所欲之物質之目的。來自該萃取程序之各種組分接著可經適合用於檢測該非相關抗原之方法處理。交叉放射免疫電泳(CRIE)係適用於此目的之方法。簡言之，用於提供非相關抗原之適當方法係提供源材料(例如花粉)之水溶性蛋白質萃取物，該萃取物接著藉由電泳分離，隨後經由包含抗該有問題之水溶性蛋白質萃取物所產生之IgG抗體的膠體進行另一電泳。IgG抗體可藉由免疫接種兔以產生。該形成之抗體：抗原複合物(Ab:Ag複合物)接著可藉由考馬斯藍染色以視覺化，或與經花粉致敏之個體的血清然後與抗人IgE抗體一起培養，以視覺化該花粉萃取物之過敏原。該等不與病患血清中之IgE抗體結合之抗原被認為是非相關抗原之候選物。
本發明之實施例7關於檢測三種不同源材料中之非相關抗原，也就是草花粉及二個不同種之家庭塵蟎。如前所述，數種候選物可藉由上述方法檢測。
如前所述，該非相關抗原係較佳地非衍生自含過敏原之源材料，但應了解的是，本發明之非相關抗原在一些實施態樣中可能得自含過敏原之源材料。
含過敏原源材料之典型實例包括：
‧　衍生自主要分類群之環境源材料或飲食源材料，該等主要分類群係選自動物界節肢動物門、動物界脊索動物門、真菌界子囊菌綱、植物界松柏綱、植物界百合綱或植物界木蘭綱；
‧　衍生自屬於下列目之屬的環境源材料或飲食源材料，該等目係選自無氣門亞目、雙翅目、膜翅目、食肉目、奇蹄目、煤炱目、散囊菌目、肉座菌目、格孢腔菌目、酵母菌目、松柏目、穎花目、菊目、殼斗目、橡膠樹屬、野芝麻目或山龍眼目；
‧　主要分類群動物界節肢動物門之蟎產物及蟎糞便、衍生自主要分類群動物界脊索動物門之皮屑、毛髮、唾液、糞便或其他分泌物、衍生自主要分類群真菌界子囊菌綱之孢子或顆粒、衍生自主要分類群松柏綱之花粉、衍生自主要分類群植物界木蘭綱之花粉、衍生自主要分類群植物界百合綱之花粉、衍生自主要分類群動物界節肢動物門之毒液或分泌物、或衍生自主要分類群植物界木蘭綱之樹的膠或包含該膠之製品；
‧　主要分類群動物界節肢動物門之蝦或含蝦食物、主要分類群動物界節肢動物門之龍蝦或含龍蝦食物、衍生自主要分類群植物界百合綱之果實、豆莢、穀類或豆類或包含該等果實、豆莢、穀類及/或豆類之食物產品、衍生自主要分類群植物界木蘭綱之果實、豆莢、穀類或豆類或包含該等果實、豆莢、穀類及/或豆類之食物產品、或來自主要分類群植物界木蘭綱之堅果或含堅果食物；
‧　牛奶、含牛奶食物、雞蛋蛋白、含雞蛋蛋白食物、魚或含魚食物；
‧　選自粉蟎屬、食甜蟎屬、嗜鱗蟎屬、腐食蟎屬、無爪蟎屬、表皮蟎屬、嗜黴蟎屬、姬蠊屬或大蠊屬之蟎的蟎產物及/或糞便；
‧　犬屬、貓屬或馬屬之動物的皮屑、毛髮、唾液或糞便；
‧　選自分枝孢子菌屬、麴菌屬、青黴菌屬、交錯道黴菌屬或假絲酵母屬之酵母菌、黴菌或真菌；
‧　主要分類群松柏綱、植物界百合綱或植物界木蘭綱之花粉；
‧　選自扁柏屬、柳杉屬、柏屬、檜屬、黃花茅屬、狗牙根屬、雞腳茅屬、羊茅屬、絨毛草屬、大麥屬、獨麥屬、稻屬、雀稗屬、鷸草屬、梯牧草屬、早熟禾屬、黑麥屬、蜀黍屬、小麥屬、玉蜀黍屬、豚草屬、苦艾屬、赤楊屬、樺木屬、榛屬、梣屬、齊墩果屬或懸鈴木屬之花粉；
‧　選自蜜蜂屬、熊蜂屬、黃蜂屬、馬蜂屬、長腳蜂屬、胡蜂屬或黃胡蜂屬之蜜蜂的毒液；
‧　衍生自橡膠樹屬之膠或包含該膠之製品；
‧　衍生自大麥屬、稻屬、黑麥屬、小麥屬、玉蜀黍屬、花生屬、榛屬、胡桃屬、李屬、檟如樹屬、黃連木屬或大豆屬之飲食源材料(食物成分或包含該食物成分之製品)；
‧　衍生自大麥屬、稻屬、黑麥屬、小麥屬、玉蜀黍屬、花生屬、榛屬、胡桃屬、李屬、檟如樹屬、黃連木屬或大豆屬之飲食源材料(食物成分或包含該食物成分之製品)；及/或
‧　衍生自牛奶、含奶食物、雞蛋蛋白、含雞蛋蛋白食物、魚或含魚食物之飲食源材料(食物成分或包含該食物成分之製品)。
另外，該非相關抗原係與一或多種或所有之下列過敏原無關：
‧　Aca s 13、Gly d 2、Lep d 2、Lep d 5、Lep d 7、Lep d 10、Lep d 13、Tyr p 2、Tyr p 3、Tyr p 10、Tyr p 13、Tyr p 24、Blo t 1、Blo t 2、Blo t 3、Blo t 4、Blo t 5、Blo t 6、Blo t 10、Blo t 11、Blo t 12、Blo t 13、Blo t 19、Blo t 21、Der f 1、Der f 2、Der f 3、Der f 6、Der f 7、Der f 10、Der f 11、Der f 13、Der f 14、Der f 15、Der f 16、Der f 17、Der f 18、Der f 22、Der m 1、Der p 1、Der p 2、Der p 3、Der p 4、Der p 5、Der p 6、Der p 7、Der p 8、Der p 9、Der p 10、Der p 11、Der p 14、Der p 20、Der p 21、Der p 23、Eur m 1、Eur m 2、Eur m 3、Eur m 4、Eur m 14、Bla g 1、Bla g 2、Bla g 4、Bla g 5、Bla g 6、Bla g 7、Bla g 8、Per a 1、Per a 3、Per a 6、Per a 7、Per a 9或Per a 10；
‧　Can f 1、Can f 2、Can f 3、Can f 4、Can f 5、Can f 6、Fel d 1、Fel d 2、Fel d 3、Fel d 4、Fel d 5w、Fel d 6w、Fel d 7、Fel d 8、Equ c 1、Equ c 2、Equ c 3、Equ c 4或Equ c 5；
‧　Cla c 9m、Cla c 14、Cla h 2、Cla h 5、Cla h 6、Cla h 7、Cla h 8、Cla h 9、Cla h 10、Cla h 12、Asp fl 13、Asp f 1、Asp f 2、Asp f 3、Asp f 4、Asp f 5、Asp f 6、Asp f 7、Asp f 8、Asp f 9、Asp f 10、Asp f 11、Asp f 12、Asp f 13、Asp f 15、Asp f 16、Asp f 17、Asp f 18、Asp f 22、Asp f 23、Asp f 27、Asp f 28、Asp f 29、Asp f 34、Asp n 14、Asp n 18、Asp n 25、Asp o 13、Asp o 21、Pen b 13、Pen b 26、Pen ch 13、Pen ch 18、Pen ch 20、Pen ch 31、Pen ch 33、Pen ch 35、Pen c 3、Pen c 13、Pen c 19、Pen c 22、Pen c 24、Pen c 30、Pen c 32、Pen o 18、Fus c 1、Fus c 2、Alt a 1、Alt a 3、Alt a 4、Alt a 5、Alt a 6、Alt a 7、Alt a 8、Alt a 10、Alt a 12、Alt a 13、Cand a 1、Cand a 3或Cand b 2；
‧Cha o 1、Cha o 2、Cup a 1、Cup s 1、Cup s 3、Jun a 1、Jun a 2、Jun a 3、Jun o 4、Jun s 1、Jun v 1、Jun v 3、Ant o 1、Cyn d 1、Cyn d 7、Cyn d 12、Cyn d 15、Cyn d 22w、Cyn d 23、Cyn d 24、Dac g 1、Dac g 2、Dac g 3、Dac g 4、Dac g 5、Fes p 4、Hol 1 1、Hol 1 5、Hor v 1、Hor v 5、Lol p 1、Lol p 2、Lol p 3、Lol p 4、Lol p 5 、Lol p 11、Pas n 1、Pha a 1、Pha a 5、Phl p 1、Phl p 2、Phl p 4、Phl p 5、Phl p 6、Phl p 7、Phl p 11、Phl p 12、Phl p 13、Poa p 1、Poa p 5、Sec c 1、Sec c 5、Sec c 20、Sor h 1、Tri a 15、Tri a 21、Tri a 27、Tri a 28、Tri a 29、Tri a 30、Tri a 31、Tri a 32、Tri a 33、Tri a 34、Tri a 35、Zea m 1、Zea m 12、Amb a 1、Amb a 2、Amb a 3、Amb a 4、Amb a 5、Amb a 6、Amb a 7、Amb a 8、Amb a 9、Amb a 10、Amb p 5、Amb t 5、Art v 1、Art v 2、Art v 3、Art v 4、Art v 5、Art v 6、Aln g 1、Aln g 4、Bet v 1、Bet v 2、Bet v 3、Bet v 4、Bet v 6、Bet v 7、Cor a 10、Fra e 1、Ole e 1、Ole e 2、Ole e 3、Ole e 4、Ole e 5、Ole e 6、Ole e 7、Ole e 8、Ole e 9、Ole e 10、Ole e 11、Pla a 1、Pla a 2、Pla a 3、Pla or 1、Pla or 2或Pla or 3；
‧　Api c 1、Api d 1、Api m 1、Api m 2、Api m 3、Api m 4、Api m 5、Api m 6、Api m 7、Api m 8、Api m 9、Api m 10、Api m 11、Bom p 1、Bom p 4、Bom t 1、Bom t 4、Dol a 5、Dol m 1、Dol m 2、Dol m 5、Pol a 1、Pol a 2、Pol a 5、Pol d 1、Pol d 4、Pol d 5、Pol e 1、Pol e 4、Pol e 5、Pol f 5、Pol g 1、Pol g 5、Poly p 1、Poly s 5、Vesp c 1、Vesp c 5、Vesp ma 2、Vesp ma 5、Vesp m 1、Vesp m 5、Ves g 5、Ves m 1、Ves m 2、Ves m 5、Ves p 5、Ves s 1、Ves s 5、Ves vi 5、Ves v 1、Ves v 2、Ves v 3或Ves v 5；
‧　Hev b 1、Hev b 2、Hev b 3、Hev b 4、Hev b 5、Hev b 6、Hev b 7、Hev b 8、Hev b 9、Hev b 10、Hev b 11、Hev b 12、Hev b 13或Hev b 14；
‧　Hor v 12、Hor v 15、Hor v 16、Hor v 17、Hor v 21、Ory s 12、Sec c 20、Tri a 12、Tri a 14、Tri a 18、Tri a 19、Tri a 21、Tri a 25、Tri a 26、Tri a 36、Zea m 14、Zea m 25、Ara h 1、Ara h 2、Ara h 3、Ara h 4、Ara h 5、Ara h 6、Ara h 7、Ara h 8、Ara h 9、Ara h 10、Ara h 11、Cor a 1、Cor a 2、Cor a 8、Cor a 9、Cor a 11、Cor a 12、Cor a 13、Cor a 14、Jug n 1、Jug n 2、Jug r 1、Jug r 2、Jug r 3、Jug r 4、Pru du 3、Pru du 4、Pru du 5、Pru du 6、Ana o 1、Ana o 2、Ana o 3、Pis v 1、Pis v 2、Pis v 3、Pis v 4、Pis v 5、Gly m 1、Gly m 2、Gly m 3、Gly m 4、Gly m 5或Gly m 6；及/或
‧　牛奶之酪蛋白、牛奶之β-乳球蛋白、雞蛋蛋白之卵白蛋白、雞蛋蛋白之類卵黏蛋白、或魚之過敏原M。
可以總結出源自花粉之環境源材料之典型實例包括但不限於：
-下列各屬之不同物種之植物及樹花粉：豚草屬(豚草)、榿木屬(赤楊)、苦艾屬、樺木屬(樺樹)、雞腳茅屬(果園草)、櫟屬(橡樹)、齊墩果屬(橄欖油樹)、墻草屬(雜草)、柏屬(紅杉)、檜屬(圓柏)、羊茅屬(牛毛草)、燕麥屬、絨毛草屬、黃花茅屬、燕麥草屬、小糠草屬、梯牧草屬(梯牧草)、早熟禾屬(藍草)、狗牙根屬(百慕達草)、鷸草屬、雀稗屬、獨麥屬(黑麥草)。
動物來源之環境源材料之典型實例包括但不限於：
-犬屬、貓科、馬屬、大蠊屬(美國蟑螂)、無爪蟎屬(儲藏室蟎)及表皮蟎屬之皮屑、毛髮、尿液或糞便。
真菌孢子、酵母菌及黴菌之環境源材料之典型實例包括但不限於：交錯道黴菌屬、麴菌屬及分枝孢子菌屬之各物種之真菌孢子、酵母菌及黴菌。
環境源材料之其他實例為衍生自昆蟲之毒液，諸如衍生自名為膜翅目之昆蟲之毒液，更特別地衍生自名為蜜蜂科(諸如蜜蜂及熊蜂)及名為胡蜂科(諸如胡蜂(黃胡蜂屬)、大黃蜂及紙巢蜂)之昆蟲。
在特別有趣之實施態樣中，該環境源材料係豚草屬(豚草)、榿木屬(赤楊)、樺木屬(樺樹)、齊墩果屬(橄欖油樹)、柏屬(紅杉)、檜屬(圓柏)及梯牧草屬之中各物種之花粉。
如前所述，本發明之源材料亦可為飲食包含食物、飼料、飲料及工業飲食產品。該等源材料之典型實例包括但不限於各種堅果，諸如樹堅果包括澳洲胡桃、巴西胡桃、腰果、杏仁、核桃、胡桃、開心果、栗子、山毛櫸堅果、榛子、松子、白果、山胡桃及彼等之工業飲食產品。
其他食物來源係含麩質之穀類(即小麥、黑麥、大麥、燕麥、斯卑爾脫小麥)、魚、甲殼動物、蛋、花生、大豆(大豆蛋白、結構性植物蛋白TPV、水解植物蛋白、水解大豆蛋白、水解蔬菜蛋白)、奶及包括乳糖之乳製品(乳糖)、堅果(例如杏仁(扁桃樹(Amygdalus communis))、榛子(歐洲榛樹(Corylus avellana))、核桃(胡桃樹(Juglans regia))、腰果(檟如樹(Anacardium occidentale))、胡桃(美洲山核桃(Carya illinoiesis))、巴西胡桃(巴西栗(Bertholletia excelsa))、開心果(阿月渾子(Pistacia vera))、澳洲胡桃、昆士蘭果(Macadamia ternifolia))、傘形科(Umbelliferae)之芹菜及其他食物、芥末、芝麻及彼等之工業飲食產品。
治療及投予非相關抗原至口腔
如前所述，本發明之抗原係用於治療超敏性免疫反應。更特別地，該超敏性免疫反應係與過敏性疾病/過敏性免疫反應有關，諸如第1型或第4型超敏性免疫反應。
由超敏性免疫反應所媒介之疾病的典型實例包括但不限於過敏性疾病如異位性皮膚炎、蕁麻疹、接觸性皮膚炎、過敏性結膜炎、過敏性鼻炎、過敏性氣喘、過敏性反應、食物過敏、藥物過敏。
由第1型超敏性免疫反應所媒介之疾病的典型實例包括但不限於過敏性疾病如異位性皮膚炎、過敏性結膜炎、過敏性鼻炎、過敏性氣喘、過敏性反應、食物過敏、藥物過敏及乾草熱。
特別是，呼吸道之超敏性免疫反應係與過敏性鼻炎及/或過敏性氣喘有關，胃腸道之超敏性免疫反應係與食物過敏有關，及皮膚之超敏性免疫反應係與接觸性皮膚炎及/或異位性皮膚炎有關。
一般預期口腔黏膜之投予可藉由局部遞送該抗原至口腔上皮之表面處實施，該抗原係自該處被吸收進入黏膜及黏膜下層。舉例來說，該抗原係經投予至舌下部分之上皮，包括口腔底部，該抗原係自該處被吸收進入黏膜及黏膜下層。應了解在本發明之更為有趣之實施態樣中，該抗原係藉由舌下投予之方式投予。
因此，在本發明之其他實施態樣中，本發明之抗原係藉由舌下投予之方式投予，即局部投予至舌下上皮或直接投予至舌下黏膜。由於舌下途徑形成口腔之一部分，亦為較佳的是諸如藉由經頰投予之方式投予該非相關抗原至口腔之上皮或黏膜。經頰投予之意圖係施予該非相關抗原之適當醫藥調製劑至口腔之黏膜上(諸如舌下黏膜)、舌頭之上表面、牙齦或腮頰處，以遞送該非相關抗原至口腔之黏膜，其中該意圖並非遞送該非相關抗原至胃腸道。因此，在本發明之更佳之實施態樣中，該抗原係經投予至口腔黏膜，諸如舌下投予，但是該個體係經指示在投予該非相關抗原之後至少經過1分鐘之前不要吞嚥該非相關抗原，諸如更佳地在投予該非相關抗原之後2分鐘、3分鐘、4分鐘、或5分鐘。
如前所述，本發明之非相關抗原可被用於治療超敏性免疫反應。相關之給藥方案可能為通常應用於過敏原特異性免疫療法之領域的方案，例如就選擇劑量、每天給藥次數、治療期間及投藥頻率而言。因此，可能設想到在達成所欲效應之前在一段較長的時間內經常投予非相關抗原，諸如在至少6個月期間每天投予至口腔黏膜(例如舌下黏膜)。也可能設想的是，當該超敏性免疫反應係由季節性過敏原造成時，該第一劑量可在該過敏原季節之前投予。亦設想到的是，該治療係藉由劑量遞增期開始，其中該非相關抗原在一天或數天期間以遞增之劑量投予直到到達維持劑量。
應了解的是，該非相關抗原係本治療方案中唯一經投予至口腔之抗原。特別是，過敏原(個體具有抗該過敏原之特異性IgE抗體)不應與該非相關抗原共投。最適當的是，絕對不共投過敏原與非相關抗原。亦應了解的是，該非相關抗原不像WO 2004/082710所述之與缺口(Notch)傳訊途徑之調節劑以同時、併行、分開或依序使用之組合製劑方式投予以調節免疫系統。
共暴露/共可用性
如前所述，對本發明來說很重要的是，該個體至少在暴露於含過敏原之源材料之時共暴露於該非相關抗原，該源材料包含引發該個體之超敏性免疫反應之過敏原。
因此，該非相關抗原亦在該個體暴露於該源材料之至少部分或完全重疊期間被投予至靶向器官，諸如呼吸道、胃腸道或皮膚。
用語「該抗原亦在該個體暴露於源材料之至少部分或完全重疊期間被投予」係用來表示該非相關抗原係經投予至暴露於該「引發」過敏原之靶向器官，且該非相關抗原之投予應至少在過敏原暴露之整體期間實施或其應於部分之該期間投予。
因此，在本發明之各種實施態樣中，該非相關抗原係藉由同時、併行、分開或以任何順序依序實施之組合投予該非相關抗原至口腔黏膜與投予該相同之非相關抗原或彼之變異體以投予至有該等需要之個體。
不要認為該非相關抗原不需在該靶向器官暴露於該過敏原之同時及相同期間內被投予至該靶向器官，例如呼吸道、胃腸道或皮膚，因為該時間期可能經調整以達到旁路抑制。這是表示該用語「暴露...重疊期間」係用來包含該非相關抗原係於暴露前投予、暴露開始時投予、暴露結束時投予、在整個暴露期間投予、幾乎在暴露期間投予，及在暴露期間之現在及過去投予。舉例來說，該非相關抗原係在該過敏原暴露發生於該靶向器官之前的數小時(1至6小時)、數天(1至4天)、數周(1至5周)或數月(1至5個月)呈現給該靶向器官。然而較佳地，該非相關抗原係於實質上和該「引發」過敏原相同之期間內(諸如至少同時地)經投予、暴露或可用於該靶向器官。
舉例來說，當該含過敏原之源材料係到達呼吸道之空氣環境源材料時(例如花粉、蟎糞便、蟎產物、動物皮屑、動物毛髮、動物糞便)，該非相關抗原可被額外地投予至該呼吸道，諸如鼻腔。舉例來說，投藥配方可包括投予該非相關抗原至口腔黏膜(諸如以舌下錠之形式)及額外投予該非相關抗原至鼻腔(諸如鼻噴劑或鼻滴劑之形式)。
另外，當該含過敏原之源材料係飲食源材料時，例如食物或含食物製品，該非相關抗原可能額外地被投予至該胃腸道，諸如藉由攝取或經口投予錠劑或膠囊。
同樣地，當該含過敏原之源材料係環境源材料時，例如與皮膚之過敏反應有關之環境源材料(例如膠或含膠製品)，該非相關抗原可能額外地被投予該皮膚，諸如以乳霜、糊料、膠或貼布之形式。
亦應了解的是，該額外投予至呼吸道、胃腸道或皮膚之非相關抗原不需被限制於該過敏原之暴露期間，而是可以在該過敏原引發超敏性免疫反應之暴露期間以外的時間另行發生。
一般預期在該等實施態樣中，當該非相關抗原係經投予至口腔黏膜以及不論是呼吸道、胃腸道或皮膚時，該組合可能以同時、併行、分開或以任一順序依序投予：i)治療有效量之非相關抗原至口腔；及ii)有效量之該相同之非相關抗原或彼之變異體至呼吸道、胃腸道或皮膚之方式實施。至少可能設想到的是，該治療或預防性治療之第一步係投予該非相關抗原至口腔黏膜。另外，額外投予該非相關抗原至呼吸道、胃腸道或皮膚係在之後開始，諸如在開始投予該非相關抗原至口腔黏膜之後數天、數月或數年。因此，在本發明之一些實施態樣中，投予該非相關抗原至口腔係始於投予該非相關抗原至呼吸道、胃腸道或皮膚之前。
亦設想到該額外投予之非相關抗原至少在該個體暴露於該「引發」過敏原之期間實施，諸如在花粉季節期間或當攝取含過敏原之食物時。亦設想到的是，該額外投予之非相關抗原可在投予該非相關抗原至口腔黏膜停止之後繼續實施。因此，在本發明之各種實施態樣中，投予該非相關抗原至呼吸道、胃腸道或皮膚係至少在該個體暴露於受到關注之含過敏原之源材料期間實施，諸如暴露於致敏該個體之過敏原期間，諸如暴露於引發個體或受到關注之個體群之超敏性免疫反應之過敏原期間；投予該非相關抗原至呼吸道、胃腸道或皮膚係始於投予該非相關抗原至口腔之期間並持續於該口腔投予中止後；投予該非相關抗原至口腔係實施每天一次、每周二次、每周一次或每個月二次，及/或投予該非相關抗原至呼吸道、胃腸道或皮膚係實施每天一次、每周二次、每周一次或每月二次。
在本發明之有趣實施態樣中，該非相關抗原係經投予至口腔，諸如藉由舌下投予，諸如藉由舌下投予錠劑(包括快速崩解錠、冷凍乾燥錠)，且該相同之非相關抗原或彼之變異體係以鼻噴劑或鼻滴劑之形式經投予至鼻腔。
用於投予至口腔與投予至呼吸道、胃腸道或皮膚之非相關抗原之間的輕微差異
一般也應認為該被投予至呼吸道、胃腸道或皮膚之非相關抗原不需與被投予至口腔之非相關抗原完全相同。因此，在本發明之一些實施態樣中，該經投予至呼吸道、胃腸道或皮膚之非相關抗原係該經投予至口腔之非相關抗原之非相關抗原之變異體或反之亦然。然而仍為較佳地是，在投予該非相關抗原至口腔之步驟中所使用之非相關抗原係與投予非相關抗原至呼吸道(例如鼻腔)、胃腸道(例如經口投予或攝食)或皮膚所使用之非相關抗原相同。
然而，一般認為該非相關抗原之變異體係經化學修飾或生物改質，以調整彼之可溶性、生物利用性或穩定性。實例為具有化學修飾之抗原變異體，諸如N-或O-連接糖基化或自該非相關抗原之N端或硫醇基衍生。其他實例係經生物改質之抗原變異體，諸如藉由轉譯後改質，諸如舉例來說：糖基化、乙醯化、烷化(甲基化、乙基化)、生物素基化、麩胺醯基化、甘胺醯基化、異戊二烯化、脂化、磷酸泛醯硫基乙胺基化、磷酸化、硫酸化、硒化及C端醯胺化。
應了解的是，該變異體與該原始非相關抗原具有顯著之同源性或一致性，諸如與投予至口腔之非相關抗原之胺基酸序列具有至少50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%及/或100%之同源性或一致性。
示範性蛋白質變異體可為取代變異體、刪除變異體、複製變異體、插入變異體、插入-刪除變異體或讀框移位變異體或任何其他適當之變異體。
舉例來說，該變異體具有不超過30%之該經投予至口腔之非相關抗原之胺基酸經取代、刪除、複製、插入或彼等之混合之處理。更佳地不超過25%，諸如甚至更佳地不超過20%、諸如不超過15%、諸如不超過10%、諸如不超過5%之該原始檢測之非相關抗原之胺基酸係經取代、刪除、複製、插入或彼等之混合之處理。亦可預期的是，該經投予至口腔之非相關抗原之變異體具有少於20%，諸如少於15%、少於10、8、6、5、4、或3%之胺基酸係經衍生化之處理，諸如糖基化、乙醯化、烷化(甲基化、乙基化)、生物素基化、麩胺醯基化、甘胺醯基化、異戊二烯化、脂化、磷酸泛醯硫基乙胺基化、磷酸化、硫酸化、硒化及C端醯胺化。
調製劑
當該抗原在胃酸中展現不佳之穩定性時，該非相關抗原較佳地係以避免接觸胃酸之形式投予，諸如防止該非相關抗原於胃液中降解之形式。此可藉由併入該非相關抗原於抗胃酸之醫藥調製劑或藉由併入其他能避免蛋白質在胃液中降解之醫藥遞送技術達成。
本發明之抗原可與治療非活性成分及/或免疫調節劑如佐劑一起調製。通常，該調製劑係固體劑型諸如快速崩解之錠劑或液體包括溶液、懸浮液、分散液、膠狀液。或者，該調製劑係乳液或可再溶解之粉末、顆粒或凍乾粉，其可在投予前被溶解以形成液體。
用於調製劑中之賦形劑係該領域之技藝人士所廣為周知，包括溶劑、乳化劑、潤濕劑、塑化劑、著色劑、填料、保存劑、黏性調整劑、緩衝劑、pH調整劑、滲透壓調整劑、黏膜黏著劑及該類似物。調製策略之實例係該領域之技藝人士所廣為周知。
該佐劑可為任何方便之佐劑，包括含氧金屬鹽，例如氫氧化鋁、聚葡萄胺糖、不耐熱腸毒素(LT)、霍亂毒素(CT)、霍亂毒素B亞單位(CTB)、聚合脂質體、突變毒素(例如LTK63及LTR72)、微膠囊、介白素(例如IL-1β、IL-2、IL-7、IL-12、INFGAMMA)、GM-CSF、MDF衍生物、CpG寡核苷酸、LPS、MPL、磷腈、磷酸鋁佐劑(Adju-Phos(R))、葡聚糖、抗原調製劑、脂質體、DDE、DHEA、DMPC、DMPG、DOC/明礬複合物、弗氏(Freund’s)不完全佐劑、ISCOM(R)、LT經口佐劑、胞壁醯基二肽、單磷醯脂A、胞壁醯基三肽、及磷脂醯乙醇胺。
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 實施例1 以非相關抗原預防性治療未參加過試驗之小鼠 方法：
梯牧草(Phleum Pratense)之草花粉的萃取物(Phl p)係藉由以水性鹽水溶液萃取脫脂草花粉獲得。
動物
6至10周齡之BALB/cJ母鼠係於實驗室內部培育，並餵飼不包含會與抗Phl p之抗血清交叉反應之成份的限定飲食。各實驗組包含8隻動物。
動物試驗
未參加過試驗之小鼠接受40 μg Phl p萃取物或緩衝液之舌下免疫療法(SLIT)治療二周，接著經免疫接種以產生抗另一抗原之免疫反應。SLIT係藉由抓住小鼠之頸背並小心地將5 μl之過敏原溶液滴在舌下進行。保持抓住該小鼠頸背再20秒，以防止該動物吞下該過敏原溶液。該小鼠接著係經吸附於氫氧化鋁之8 μg Phl p萃取物與250 μg雞卵白蛋白(OVA)之混合物，或吸附於氫氧化鋁之單獨OVA之腹膜內注射刺激以產生免疫反應。經過十至十二天之後使小鼠安樂死，取出脾臟並製備細胞以進行活體外再刺激試驗。在此試驗中，細胞係經引發免疫反應之抗原(OVA)刺激，以評估以存在於該Phl p萃取物中之非相關抗原對小鼠進行SLIT治療在產生OVA特異性免疫反應上之影響。在另一試驗中，小鼠係經OVA之SLIT治療，並以與OVA混合之Phl p萃取物或單獨之Phl p萃取物經腹膜內注射。在安樂死後，脾細胞係經Phl p再刺激，以評估以OVA進行舌下前治療對Phl p特異性免疫反應之影響。試驗大綱係描述於圖1。
T細胞增生試驗
脾臟被製備成單細胞懸浮液，並以培養基清洗三次。細胞係經計數並調整成1.67 x 106細胞/mL。3 x 105細胞被添加至96孔平底培養盤中之各孔，細胞係經0、5、25及125 μg/mL OVA之刺激。該等細胞係於37℃及5% CO2中培養6天。增生係藉由在培養期之最後18小時添加0.5 μCi之3H-胸苷至各孔，接著收集細胞並計算該經併入之放射標記測量。
細胞介素測量
脾臟被製備成單細胞懸浮液，並以培養基清洗三次。細胞係經計數並調整成3 x 106細胞/mL。5 x 106細胞被添加至96孔培養盤中之各孔，細胞係經0及125 μg/mL OVA之刺激。上清液在第5天收集，並利用中尺度(Mesoscale)小鼠Th1/Th2 ELISA套組分析細胞介素IL-4及IL-5之存在。
結果 Phl p之SLIT治療
圖2顯示經Phl p或緩衝液之SLIT預治療之小鼠的脾細胞之增生速率。在SLIT治療之後，小鼠係經OVA加Phl p(A圖)或OVA單獨(B圖)之i.p.免疫接種，接著脾細胞係於活體外經OVA之再刺激。圖2之結果顯示以和引發免疫反應之抗原(OVA)無關之抗原(Phl p)進行預防性SLIT治療下調抗OVA之脾臟T細胞反應。然而，此僅發生在免疫接種時Phl p係與OVA一起存在之情況。圖3亦顯示，以Phl p進行SLIT預治療可下調經OVA刺激之T細胞培養中細胞介素IL-4及IL-5之量。細胞介素IL-4及IL-5係由腹膜內免疫接種OVA抗原所誘導，且通常是在Th2驅動之免疫反應中所誘導之細胞介素。
OVA之SLIT治療
圖4顯示經OVA或緩衝液之SLIT治療之小鼠的脾細胞之增生。在SLIT治療之後，小鼠係經Phl p加OVA(A圖)或Phl p單獨(B圖)之i.p.免疫接種，接著脾細胞係於活體外經Phl p之再刺激。結果顯示OVA(非相關抗原)之預防性SLIT治療能下調抗Phl p之脾臟T細胞反應。
總結這些資料顯示，藉由與引發免疫反應之抗原無關之抗原對小鼠進行SLIT治療可獲得免疫反應(特徵為Th2細胞介素)之抑制，不論是以OVA或Phl p萃取物作為該非相關抗原之模型抗原。
實施例2 比較投予非相關抗原之舌下途徑及經口途徑 方法：
梯牧草(Phleum Pratense)之草花粉的萃取物(Phl p)係藉由以水性鹽水溶液萃取脫脂草花粉獲得。
動物
6至10周齡之BALB/cJ母鼠係於實驗室內部培育，並餵飼不包含會與抗Phl p之抗血清交叉反應之成份的限定飲食。各實驗組包含8隻動物。
動物試驗
未參加過試驗之小鼠係經舌下或經口(胃內灌食管)途徑以40 μg Phl p萃取物每天一次治療共治療二周。該小鼠接著經腹膜內注射免疫接種以產生抗另一抗原之免疫反應。此注射包含吸附於氫氧化鋁之8 μg Phl p萃取物與250 μg卵白蛋白(OVA)之混合物。經過十至十二天之後使小鼠安樂死，取出脾臟並製備細胞以進行活體外再刺激試驗。在此試驗中，細胞係經OVA刺激以評估該非相關抗原Phl p之SLIT治療對OVA特異性免疫反應之影響。試驗大綱係描述於圖5。
T細胞增生試驗
脾臟被製備成單細胞懸浮液，並以培養基清洗三次。細胞係經計數並調整成1.67 x 106細胞/mL。3 x 105細胞被添加至96孔平底培養盤中之各孔，細胞係經0、5、25及125 μg/mL OVA之刺激。該等細胞係於37℃及5% CO2中培養6天。增生係藉由在培養期之最後18小時添加0.5 μCi之3H-胸苷至各孔，接著收集細胞並計算該經併入之放射標記測量。
結果：
如圖6所示，在經Phl p與OVA之混合物腹膜內免疫接種之前，以Phl p之SLIT治療之小鼠的脾細胞之OVA特異性增生相較於以緩衝液治療之小鼠顯著降低。不論該脾細胞係經高或低劑量之OVA刺激，結果均相同。相反地，以和SLIT治療小鼠相同劑量之Phl p經口治療之小鼠的脾細胞增生不被下調至在該SLIT治療小鼠中所觀察到之相同程度。這些資料顯示SLIT相較於經口治療在抑制由另一抗原所引發之免疫反應上係更為有效。
實施例3 以非相關抗原預防性治療未參加過試驗之小鼠以減少超敏性免疫反應之臨床相關症狀 方法：
梯牧草(Phleum Pratense)之草花粉的萃取物(Phl p)係藉由以水性鹽水溶液萃取脫脂草花粉獲得。
動物
6至10周齡之BALB/cJ母鼠係於實驗室內部培育，並餵飼不包含會與抗梯牧草(Phl p)之抗血清交叉反應之成份的限定飲食。各實驗組包含8隻動物。
動物試驗
未參加過試驗之小鼠係經40 μg Phl p萃取物之舌下免疫療法(SLIT)治療二周。接著，該小鼠係經吸附於氫氧化鋁之10 μg OVA與8 μg Phl p萃取物之混合物或單獨10 μg OVA之每周一次腹膜內注射免疫接種共三次。接著，該小鼠係以50 μg之OVA經鼻內(IN)刺激四天，以誘導Th2驅動之免疫反應之臨床相關讀數。該小鼠在最後一次刺激後一天安樂死，收集血液、支氣管肺泡灌洗液(BAL)、脾及頸淋巴結以供分析。試驗大綱係描述於圖7。
評估臨床相關讀數
臨床相關讀數(諸如呼吸道高反應性及嗜酸性球之組分)係於IN刺激之最後一天獲得。
呼吸道高反應性：使用全身呼吸測量系統，藉由增加刺激小鼠之氣霧化乙醯甲膽鹼之濃度以誘導呼吸道阻塞。肺氣流阻塞係藉由在投予乙醯甲膽鹼之後的6分鐘期間之延長暫停(penh)測量。
BAL液之區別計數：該BAL液係經離心及移除上清液。得到之團塊以PBS重懸，用自動細胞計數器(Sysmex公司)測定嗜酸性球之組分。
T細胞增生試驗
脾臟被製備成單細胞懸浮液，並以培養基清洗三次。細胞係經計數並調整成1.67 x 106細胞/mL。3 x 105細胞被添加至96孔平底培養盤中之各孔，細胞係經0、5、25及125 μg/mL OVA之刺激。該等細胞係於37℃及5% CO2中培養6天。增生係藉由在培養期之最後18小時添加0.5 μCi之3H-胸苷至各孔，接著收集細胞並計算該經併入之放射標記測量。
結果
藉由這些試驗，發明人想測試該預防性SLIT治療是否也能治療過敏性氣喘。簡言之，未參加過試驗隻小鼠在誘導過敏性氣喘之前係經非相關抗原(Phl p)或緩衝液之SLIT治療。該氣喘係藉由以OVA(引發該免疫反應之抗原)與Phl p之組合或單獨OVA先經腹膜內注射免疫接種該小鼠，接著以該相同之OVA鼻內刺激誘導。如圖8之結果所示，經Phl p SLIT治療之小鼠相較於經緩衝液治療之小鼠(A圖)顯示減少之呼吸道高反應性，然而此抑制無法在僅接受OVA免疫接種之小鼠(B圖)中觀察到。C及D圖顯示在支氣管肺泡灌洗液(BAL)中之嗜酸性球百分比。在此可發現，經非相關抗原SLIT治療之小鼠的嗜酸性球組分相較於經緩衝液SLIT治療之小鼠被下調。同樣地此抑制僅見於該非相關抗原(Phl p)係與該致敏性抗原(OVA)組合共投於腹膜內免疫接種時。E及F圖顯示頸淋巴結細胞之活體外增生。和下調BAL中之嗜酸性球之能力相符的是，該cLN細胞之OVA特異性活體外增生係於經Phl p SLIT治療之小鼠中下調，但惟有在該致敏性抗原及該非相關抗原二者於腹膜內注射期間同時存在之時才得以下調。
此系列試驗中之資料顯示，非相關抗原之預防性SLIT治療抑制小鼠之過敏性氣喘的臨床相關讀數。
實施例4 以非相關抗原治療經致敏之小鼠以減少超敏性免疫反應之臨床相關症狀 方法：
梯牧草(Phleum Pratense)之草花粉的萃取物(Phl p)係藉由以水性鹽水溶液萃取脫脂草花粉獲得。
動物
6至10周齡之BALB/cJ母鼠係於實驗室內部培育，並餵飼不包含會與抗梯牧草(Phl p)之抗血清交叉反應之成份的限定飲食。各實驗組包含8隻動物。
動物試驗
在一組試驗中，小鼠藉由腹膜內注射吸附至氫氧化鋁之8 μg Phl p萃取物每周一次共三次以致敏。接著，該小鼠係藉由250 μg OVA舌下免疫療法(SLIT)治療4周，接著以8 μg Phl p與10 μg OVA之組合或單獨使用Phl p經鼻內刺激2周。試驗大綱係描述於圖9。
在另一組試驗中，小鼠藉由腹膜內注射吸附至氫氧化鋁之10 μg OVA每周一次共二次以致敏。接著，該小鼠係藉由40 μg Phl p SLIT治療4周，接著小鼠經100 μg OVA與8 μg Phl p之組合或單獨使用8 μg OVA經鼻內刺激4天。此試驗大綱係描述於圖13。
在這二組試驗中，該小鼠在最後一次刺激後一天安樂死，收集血液、支氣管肺泡灌洗液(BAL)、脾及頸淋巴結以供分析。
評估臨床相關讀數
臨床相關讀數(諸如打噴嚏、呼吸道高反應性及嗜酸性球之存在)係於IN刺激之最後一天獲得。
打噴嚏：在經鼻投予Phl p後之8分鐘期間觀察小鼠，並計算在此期間內之打噴嚏次數。
呼吸道高反應性：使用全身呼吸測量系統，藉由增加氣霧化乙醯甲膽鹼之濃度以誘導呼吸道阻塞。肺氣流阻塞係藉由在投予乙醯甲膽鹼之後的6分鐘期間之延長暫停(penh)測量。
BAL液之區別計數：該BAL液係經離心及移除上清液。得到之團塊以PBS重懸，用自動細胞計數器(Sysmex公司)測定嗜酸性球之組分。
結果 Phl p之SLIT治療所誘導之抑制
在此組試驗中，發明人想探討一種抗原(Phl p)之SLIT治療是否能在氣喘小鼠動物模型中預防由另一抗原(OVA)所誘導之氣喘的臨床徵候。如圖10之A圖所示，當後續以OVA(引發免疫反應之抗原)與Phl p之組合鼻內刺激時，經Phl p(非相關抗原)SLIT治療之OVA致敏小鼠相較於經緩衝液SLIT治療之小鼠之BAL液中之嗜酸性球組分係經顯著降低。若該鼠係經單獨OVA之鼻內刺激，則無法觀察到此嗜酸性球之下調(圖10之B圖)。另外，如圖11A所示，Phl p之SLIT治療相較於經SLIT緩衝液治療之小鼠抑制BAL液中之IL-5之量，惟其該小鼠在鼻內刺激時係暴露於OVA及Phl p二者。當小鼠僅經單獨OVA鼻內刺激時，無法觀察到此下調(圖11B)。最後，圖12顯示在經Phl p SLIT治療小鼠中抑制呼吸道高反應性之傾向。同樣地，此效應係取決於在鼻內刺激期間共暴露於OVA及Phl p二者。
OVA之SLIT治療所誘導之抑制
在此組試驗中，發明人探討非相關抗原(OVA)之SLIT治療是否能在鼻炎小鼠動物模型中預防由另一抗原(phl p)所誘導之氣喘的臨床及免疫徵候。在該使用之鼻炎模型中，該主要臨床讀數係打噴嚏之次數。如圖14之A圖所示，經Phl p致敏之小鼠在以OVA SLIT治療後相較於以緩衝液SLIT治療之小鼠在經鼻內刺激時打噴嚏之次數顯著較少。此打噴嚏次數之減少係取決於用於SLIT治療之抗原(OVA)及負責誘導過敏性鼻炎之抗原(Phl p)二者之存在(圖14之B圖)。另外，如圖15之A圖所示，在自OVA SLIT治療小鼠所分離之BAL液中之嗜酸性球組分有減少之傾向，但唯有在Phl p及OVA(非相關抗原)二者同時存在於鼻內刺激時(圖15之B圖)。最後，如圖16所示，在得自經phl p預致敏並經OVA SLIT治療之小鼠的cLN細胞之細胞培養上清液中之IL-5之量亦可在經該致敏性抗原(Phl p)與OVA(非相關抗原)二者之組合的鼻內刺激時被顯著抑制。
總結來說，這些結果顯示有可能藉由非相關抗原之SLIT治療小鼠以抑制經抗原預致敏之小鼠的過敏性鼻炎之臨床相關讀數，惟其在以該引發抗原刺激該小鼠之呼吸器官時，該小鼠係經暴露於該引發過敏性鼻炎之抗原與該非相關抗原二者。
實施例5 以非相關抗原治療經致敏之小鼠以減少超敏性免疫反應之臨床相關症狀 方法：
梯牧草(Phleum Pratense)之草花粉的萃取物(Phl p)係藉由以水性鹽水溶液萃取脫脂草花粉獲得。
動物
6至10周齡之BALB/cJ母鼠係於實驗室內部培育，並餵飼不包含會與抗梯牧草(Phl p)之抗血清交叉反應之成份的限定飲食。各實驗組包含8隻動物。
動物試驗
小鼠藉由腹膜內注射吸附至氫氧化鋁之10 μg OVA每周一次共二次以致敏。接著，該小鼠係藉由40 μg Phl p SLIT治療4周，然後小鼠經50 μg OVA與8 μg Phl p之組合或單獨使用OVA經鼻內刺激4天。在鼻內刺激之最後一天，呼吸道高反應性係利用全身呼吸測量系統測量。該小鼠在最後一次刺激後一天安樂死，收集血液、支氣管肺泡灌洗液(BAL)、脾及頸淋巴結以供分析。試驗大綱係描述於圖17。
評估臨床相關讀數
臨床相關讀數(諸如呼吸道高反應性及嗜酸性球之存在)係於IN刺激之最後一天獲得。
呼吸道高反應性：使用全身呼吸測量系統，藉由增加氣霧化乙醯甲膽鹼之濃度以誘導呼吸道阻塞。肺氣流阻塞係藉由在投予乙醯甲膽鹼之後的6分鐘期間之延長暫停(penh)測量。
BAL液之區別計數：該BAL液係經離心及移除上清液。得到之團塊以PBS重懸，用自動細胞計數器(Sysmex公司)測定嗜酸性球之組分。
結果
在此組試驗中，發明人想證實實施例4之結果。
如圖18之A圖所觀察到的，以OVA(疾病誘發性抗原)及Phl p之組合的鼻內刺激所產生之呼吸道高反應性在經OVA預致敏接著以Phl p(非相關抗原)之SLIT治療之小鼠相較於接著以緩衝液之SLIT治療之小鼠係顯著降低。另外，可觀察到在經Phl p SLIT治療之小鼠的BAL中嗜酸性球之組分有降低傾向(圖18之B圖)。最後，活體外脾細胞增生之減少係在以OVA刺激時見於經phl p SLIT治療之小鼠(圖18C)。
總結來說，這些結果證實施例4之結果，並強化過敏性免疫反應可藉由以非相關抗原治療經預致敏之小鼠加以抑制之觀察。
實施例6 以非相關抗原預防性治療未參加過試驗之小鼠以減少超敏性免疫反應 方法： 動物
6至10周齡之BALB/cJ母鼠係於實驗室內部培育，並餵飼不包含會與抗梯牧草(Phl p)之抗血清交叉反應之成份的限定飲食。各實驗組包含8隻動物。
動物試驗
未參加過試驗之小鼠係以50或200 μg Phl p 5之舌下免疫療法(SLIT)治療2周，接著以吸附於氫氧化鋁之10 μg OVA與10 μg Phl p 5之混合物進行腹膜內注射每周一次共三次。接著，該小鼠以50 μg之OVA進行鼻內刺激四天。該小鼠在最後一次刺激後一天安樂死，收集血液、支氣管肺泡灌洗液(BAL)、脾及頸淋巴結以供分析。試驗大綱係描述於圖7。
臨床資料
臨床資料係於IN刺激之最後一天後24小時獲得。
BAL液之區別計數：該BAL液係經離心及移除上清液。得到之團塊以PBS重懸，用自動細胞計數器(Sysmex公司)測定嗜酸性球之組分。
T細胞增生試驗
脾臟被製備成單細胞懸浮液，並以培養基清洗三次。細胞係經計數並調整成1.67 x 106細胞/mL。3 x 105細胞被添加至96孔平底培養盤中之各孔，細胞係經0、5、25及125 μg/mL OVA之刺激。該等細胞係於37℃及5% CO2中培養6天。增生係藉由在培養期之最後18小時添加0.5 μCi之3H-胸苷至各孔，接著收集細胞並計算該經併入之放射標記測量。
結果：
在此試驗中，實施例3之結果係藉由使用單一抗原之SLIT治療誘導耐受性以取代實施例3所使用之Phl p萃取物加以證實。此係藉由以Phl p 5或緩衝液之SLIT治療未參加過試驗之小鼠進行。在SLIT治療之後，過敏性氣喘係藉由以OVA與Phl p 5之組合或單獨使用OVA之IP刺激，然後以OVA之鼻內刺激誘導。如圖19A所示，在經Phl p 5之SLIT治療之小鼠相較於經緩衝液治療之小鼠的BAL液之嗜酸性球組分係經減少(其中該小鼠接著係經OVA與Phl p之組合致敏及以OVA鼻內刺激)。圖19B顯示當以OVA活體外再刺激時，該脾細胞之增生。在此圖中可見，當IP致敏化時該Phl p係存在時，Phl p 5之SLIT治療能下調脾細胞之OVA特異性活體外增生。
此試驗之資料顯示，單一劑之預防性SLIT治療誘導旁路耐受性，該旁路耐受性對後續誘導之過敏性氣喘的臨床讀數具有效應。
實施例7 檢測過敏原源材料中之非相關抗原 方法
多種不與過敏病患之血清結合之抗原(非相關抗原)係藉由交叉放射免疫電泳(CIE)於花粉過敏原萃取物或蟎過敏原萃取物中檢測。
梯牧草(Phleum Pratense)(Phl p)之花粉過敏原或蟎(屋塵蟎(Dermatophagoides pteronyssinus)(Der p)及粉塵蟎(Dermatophagoides farinae)(Der f))過敏原(蟎身體及培養基)之水性萃取物係藉由下列萃取方法製備：為了萃取整隻動物(蟎身體)，該蟎身體在萃取前係於研缽中研磨。蟎培養基及花粉係經直接萃取。
萃取1:10係如下進行；1 g之花粉(Phl p)或1 g之蟎身體+蟎培養基(Der p或Der f)係經懸浮於10 ml之0.125 M NH4HCO3及15 mM NaN3之水性溶液，並於+5℃中攪拌隔夜。該懸浮液係於+5℃中以27.000 g離心30分鐘，接著若有需要則加以過濾。丟棄沉澱物。該萃取物係以5 mM NH4HCO3透析3×4小時，之後以純水透析4小時。透析水之體積係透析袋中之體積的20至50倍。該經透析之萃取物接著於-80℃中冷凍乾燥，並儲存於-20℃之氣密容器中。
分別收集21名草過敏病患及21名蟎(Der p及/或Der f)過敏病患之血清。過敏類型=2之血清係包括於本試驗中。病患分別具有陽性之抗Phl p及蟎(Der f及Der p)之過敏原的皮膚點刺測試及/或存有IgE抗體。
分別以Phl p及蟎(Der p及Der f)之水性過敏原萃取物免疫接種兔子(3至4月齡，以前從未受過免疫接種)以製備含有多株IgG抗體之血清。血清係自凝集血液收集並加入0.09% NaN3。
每個個體之血清進行一次交叉放射免疫電泳，藉由添加Phl p或Der p或Der f之水性過敏原萃取物及各別兔抗體以沉澱該抗原至CIE盤上。使該盤於冷空氣中乾燥，在小盒子中加入300μl病患血清+7700μl磷酸鹽緩衝液隔夜培養。該盤以4×10分鐘之0.9% NaCl清洗，並加入總體積8 ml之I125-antiIgE(法瑪西亞(Pharmacia)公司)(300.000 cpm/盤)隔夜培養。在清洗後(4×10分鐘之NaCl)，該盤係經乾燥並放置於X光卡匣中，膠體面朝上及X光片(Retina)在上方。該片係於-80℃暴露1天、3天及10天。該CIE盤係經染色(考馬斯染色)，各放射顯影係經標示及切割。
所有沉澱物(放射性+非放射性沉澱物)係經檢測、計分及編號。該經放射性染色之沉澱物係能與病患血清之IgE結合之抗原，因此是過敏原，其計分方式係若沉澱物在1天後可被看見則得3分(強)，若在3天後被看見則得2分(中)，若在10天後被看見則得1分(弱)。沉澱物中無放射性染色之沉澱物係不被過敏病患之IgE抗體識別之抗原，表示係本發明之非相關抗原。
過敏原圖(Allergogram)係利用參考圖之沉澱物編號及對各沉澱物有反應之病患人數繪製。
結果 Phl p：
總共可看見30個沉澱物，其中22個被視為過敏原，8個係本發明之非相關抗原。CIE圖(51-990282)係顯示於圖20，過敏原圖係顯示於圖21。如在過敏原圖中所觀察到的，編號2、5、7、12、14、16、17及31之抗原係非放射性沉澱物，它們是本發明之非相關抗原之候選物。
Der p：
總共可看見24個沉澱物，其中19個被視為過敏原，5個係本發明之非相關抗原。CIE圖係顯示於圖22，過敏原圖係顯示於圖22。如在過敏原圖中所觀察到的，編號1、3、7、8及9之抗原係非放射性沉澱物，它們是本發明之非相關抗原之候選物。
Der f：
總共可看見22個沉澱物，其中16個被視為過敏原，6個係本發明之非相關抗原。CIE圖係顯示於圖24，過敏原圖係顯示於圖21。如在過敏原圖中所觀察到的，編號2、3、4、5、10及17之抗原係非放射性沉澱物，它們是本發明之非相關抗原之候選物。
因此，非相關抗原可見於各種過敏原之源。該非相關抗原之進一步識別可藉由該領域廣為周知之技術完成，包括純化該沉澱物及進行質譜分析。
實施例8
在異位性皮膚炎之小鼠模型中研究旁路抑制將被研究的是，SLIT在異位性皮膚炎之小鼠模型中是否也具有旁路效應。舉例來說，得自乳膠之過敏原將被用來作為「引發」過敏原。
方法
異位性皮膚炎將根據Spergel et al(1999)及Jin H et al(2009)所發展之模型誘發。簡言之，小鼠將藉由膠布撕脫皮膚及以無菌紗布和生物性吸收敷料固定投予OVA之經皮致敏。小鼠將接受總共3次之每次一周間隔2周之暴露。
異位性皮膚炎之程度接著將藉由在第三次致敏之貼布被移除後24小時取得該皮膚貼布區域之樣本加以評估。
該樣本將被用於組織學分析以評估該真皮及表皮之增厚及該細胞流入(例如嗜酸性球)。
另外，該樣本將藉由免疫組織化學染色細胞標誌諸如CD3、CD4及CD8以測量免疫細胞之細胞流入。最後，收集血液並利用中尺度TH1/TH2 ELISA套組測量細胞介素。
SLIT之效應將於此模型中探討，不論是預防性SLIT治療或在第一或第二次經皮投予OVA和OVA非相關抗原(例如Phl p或乳膠過敏原)之後的SLIT治療。
實施例9 在食物過敏之小鼠模型中研究旁路抑制
將被研究的是，SLIT在食物過敏之小鼠模型中是否也具有旁路效應。
方法：
食物過敏將根據Dunkin et al(2011)所描述之模型加以誘導。簡言之，小鼠將藉由投予50 μL中之0,1 mg OVA於麻醉小鼠之腹部皮膚上經皮致敏。該致敏程序將每周重複一次共進行6次。在最後一次致敏後一周，藉由增加OVA之口服劑量以經口刺激該小鼠，並且每10分鐘記錄一次過敏性之症狀及體溫。
除了上述之臨床讀數以外，在經口刺激之後收集小鼠血液，測量血清中之特異性IgE。最後，亦測量脾臟及局部引流淋巴結中之T細胞反應性。
SLIT之效應將於此模型中探討，不論是以OVA非相關抗原(例如Phl p或花生過敏原)致敏前之預防性SLIT治療或在致敏程序後之SLIT治療。
圖1：小鼠之非相關抗原的預防性SLIT治療計畫之概要。
圖2：A圖表示分離自Phl p與緩衝液SLIT治療小鼠之脾細胞的增生結果，該小鼠接著以OVA與Phl p之組合經腹膜內免疫接種，然而B圖顯示分離自接著僅接受OVA腹膜內免疫接種之類似小鼠的脾細胞之增生。每一點代表一隻小鼠。
圖3：A及B圖分別代表在第5天細胞介素IL-4及IL-5之量，其係於得自經Phl p或緩衝液SLIT治療小鼠接著經OVA與Phl p之組合腹膜內免疫接種之脾細胞培養之上清液測量。每一點代表一隻小鼠。
圖4：A圖表示分離自Phl p與緩衝液SLIT治療小鼠之脾細胞的增生結果，該小鼠接著以Phl p與OVA之組合經腹膜內免疫接種，然而B圖顯示分離自接著僅接受Phl p腹膜內免疫接種之類似小鼠的脾細胞之增生。
圖5：說明小鼠之非相關抗原的預防性SLIT或經口治療之概要。
圖6：該圖顯示以Phl p萃取物經舌下SLIT或經口(胃內灌食)途徑治療二周之小鼠的脾細胞之增生。這些治療之後為腹膜內注射Phl p與OVA之組合。在安樂死後，以低劑量之OVA(5μg/mL，A圖)或高劑量之OVA(125 μg/mL，B圖)再刺激脾細胞。每一點代表一隻小鼠。
圖7：說明經非相關抗原之預防性SLIT治療之小鼠的Th2驅動免疫反應之臨床相關讀數之概要。
圖8：該圖顯示先以非相關抗原預防性SLIT治療未參加過試驗之小鼠，再以另一抗原免疫接種及鼻內刺激該小鼠以誘導過敏性氣喘之臨床相關讀數之結果。A及B圖分別顯示以OVA與Phl p之組合及僅以OVA免疫接種之經SLIT治療小鼠的呼吸道高反應性。C及D圖分別顯示得自以OVA與Phl p之組合及僅以OVA免疫接種之經SLIT治療小鼠的支氣管肺泡灌洗液(BAL)中之嗜酸性球百分比。E及F圖分別顯示分離自以OVA與Phl p之組合及僅以OVA免疫接種之經LIT治療小鼠的頸淋巴結細胞之活體外增生。
圖9：在經OVA抗原預致敏之小鼠以非相關抗原(phl p)進行SLIT治療之概述，該小鼠發展抗OVA抗原之免疫反應，其具有Th2驅動免疫反應之臨床相關讀數。
圖10：A及B圖分別顯示，當後續以OVA與Phl p之組合或單獨以OVA鼻內刺激時，經Phl p(非相關抗原)SLIT治療之OVA預致敏小鼠相較於經緩衝液SLIT治療之小鼠之BAL液中之嗜酸性球組分。
圖11：得自經OVA預致敏且經SLIT phl p治療小鼠相較於SLIT緩衝液治療小鼠之BAL液中之IL-5之量。A圖代表在鼻內刺激時暴露於OVA與Phl p(非相關抗原)二者之小鼠。B圖代表在鼻內刺激時暴露於OVA(引發免疫反應之抗原)之小鼠。
圖12：經OVA預致敏且經SLIT phl p治療小鼠相較於SLIT緩衝液治療小鼠之呼吸道高反應性。A圖代表在鼻內刺激時暴露於OVA與Phl p(非相關抗原)二者之小鼠。B圖代表在鼻內刺激時暴露於OVA(引發免疫反應之抗原)之小鼠。
圖13：在經Phl p抗原預致敏之小鼠以非相關抗原(OVA)進行SLIT治療之概述，該小鼠發展抗Phl p抗原之免疫反應，其具有Th2驅動免疫反應之臨床相關讀數。
圖14：A及B圖顯示經Phl p致敏小鼠以OVA SLIT治療相較於緩衝液SLIT治療小鼠在以Phl p鼻內刺激時之打噴嚏次數。A圖代表經Phl p與OVA二者鼻內刺激之小鼠，B圖代表僅以Phl p鼻內刺激之小鼠。
圖15：A及B圖分別顯示，當後續以Phl p與OVA之組合或單獨以Phl p鼻內刺激時，經OVA(非相關抗原)SLIT治療之Phl p預致敏小鼠相較於經緩衝液SLIT治療之小鼠之BAL液中之嗜酸性球組分。
圖16：顯示得自經Phl p預致敏且經SLIT OVA治療之小鼠相較於經SLIT緩衝液治療之小鼠的頸LN細胞之細胞培養上清液的IL-5之量。
圖17：在經OVA抗原預致敏之小鼠以非相關抗原(phl p)進行SLIT治療之概述，該小鼠發展抗Phl p抗原之免疫反應，其具有Th2驅動免疫反應之臨床相關讀數。
圖18：A圖顯示經OVA預致敏且經SLIT phl p治療小鼠(空心圓圈)相較於經SLIT緩衝液治療小鼠(空心三角形)之呼吸道高反應性。B圖顯示經OVA預致敏且經SLIT phl p治療小鼠(實心圓圈)相較於經SLIT緩衝液治療小鼠(實心三角形)之BAL液中之嗜酸性球組分。C圖顯示經OVA預致敏且經SLIT phl p治療小鼠(實心圓圈)相較於經SLIT緩衝液治療小鼠(實心三角形)之脾細胞之活體外增生。
圖19：A圖顯示小鼠之BAL液中之嗜酸性球組分，該小鼠係經Phl p 5或緩衝液之SLIT治療，接著以OVA與Phl p 5之組合經腹膜內致敏，然後以OVA經鼻內刺激。B圖顯示如上述當以OVA再刺激時該相同小鼠之脾細胞的活體外增生。
圖20：CIE圖顯示血清IgE抗體與梯牧草(Phleum Pratense)之草花粉萃取物之抗原的沉澱物(放射性+非放射性)。
圖21：過敏原圖顯示在個體血清中檢測到具有梯牧草之草花粉萃取物的各種抗原(過敏原)之個體人數。其中當沉澱物無法被計分為強、中或弱時，在過敏原圖中以空白區域表示。空白區域表示非相關抗原。
圖22：CIE圖顯示血清IgE抗體與屋塵蟎(Dermatophagoides pteronyssinus)(Der p)之蟎過敏原萃取物之抗原的沉澱物(放射性+非放射性)。
圖23：過敏原圖顯示在個體血清中檢測到具有屋塵蟎(Der p)之各種編號抗原(過敏原)之個體人數。
圖24：CIE圖顯示血清IgE抗體與粉塵蟎(Dermatophagoides farinae)(Der f)之蟎過敏原萃取物之抗原的沉澱物(放射性+非放射性)。
圖25：過敏原圖顯示在個體血清中檢測到具有粉塵蟎(Der f)之各種編號抗原(過敏原)之個體人數。

Claims (34)

  1. 一種用於治療或預防性治療有彼等需要之個體的呼吸道超敏性(hypersensitivity)免疫反應之抗原，其中該免疫反應係當該個體暴露於包含過敏原之環境源材料時由該過敏原引發且其中i)　該抗原係與引發該個體之超敏性免疫反應之該(等)過敏原無關，且ii)　該抗原係以治療有效量投予至該個體之口腔，且iii)該抗原亦在該個體暴露於該源材料之至少部分或完全重疊期間被投予至呼吸道。
  2. 一種用於治療或預防性治療有彼等需要之個體的胃腸道超敏性免疫反應之抗原，其中該免疫反應係當該個體暴露於包含過敏原之飲食源材料時由該過敏原引發且其中i)　該抗原係與引發該個體之超敏性免疫反應之該(等)過敏原無關，且ii)　該抗原係以治療有效量投予至該個體之口腔，且iii)該抗原亦在該個體暴露於該源材料之至少部分或完全重疊期間被投予至胃腸道。
  3. 一種用於治療或預防性治療有彼等需要之個體的皮膚超敏性免疫反應之抗原，其中該免疫反應係當該個體暴露於包含過敏原之環境源材料時由該過敏原引發且其中i)　該抗原係與引發該個體之超敏性免疫反應之該(等)過敏原無關，且ii)　該抗原係以治療有效量投予至該個體之口腔，且iii)　該抗原亦在該個體暴露於該源材料之至少部分或完全重疊期間被投予至皮膚。
  4. 如申請專利範圍第1至3項中任一項所使用之抗原，其中當該抗原係用於治療有需要該治療之個體的超敏性免疫反應時，該個體具有抗該(等)過敏原之特異性IgE抗體。
  5. 如申請專利範圍第1至3項中任一項所使用之抗原，其中當該抗原係用於預防性治療有需要預防性治療之個體的超敏性免疫反應時，該個體在開始該預防性治療之時不具有抗該過敏原之特異性IgE抗體。
  6. 如申請專利範圍第1至3項中任一項所使用之抗原，其中該抗原係與該(等)過敏原無關，因為該抗原不能與得自需要被治療之個體的IgE抗體結合。
  7. 如申請專利範圍第1至3項中任一項所使用之抗原，其中該抗原係與該(等)過敏原無關，因為該抗原不能與得自具有抗該(等)過敏原之特異性IgE抗體的個體群之血清IgE抗體結合。
  8. 如申請專利範圍第1至3項中任一項所使用之抗原，其中該抗原係與該(等)過敏原無關，因為該抗原不與該(等)過敏原共享任何B細胞及/或T細胞表位。
  9. 如申請專利範圍第1至3項中任一項所使用之抗原，其中該抗原之胺基酸序列相較於該(等)過敏原之胺基酸序列具有低於70%之一致性。
  10. 如申請專利範圍第1至3項中任一項所使用之抗原，其中該抗原不與得自該被治療之個體的IgE抗體結合。
  11. 如申請專利範圍第1至3項中任一項所使用之抗原，其中該抗原係水溶性抗原。
  12. 如申請專利範圍第1至3項中任一項所使用之抗原，其中該抗原係可萃取自pH介於6至8之水溶液中之源材料。
  13. 如申請專利範圍第1至3項中任一項所使用之抗原，其中該抗原係與含過敏原源材料之主要過敏原無關。
  14. 如申請專利範圍第1至3項中任一項所使用之抗原，其中該抗原係與含過敏原源材料之所有過敏原無關。
  15. 如申請專利範圍第1至3項中任一項所使用之抗原，其中該超敏性免疫反應係與過敏(allergic)免疫反應有關。
  16. 如申請專利範圍第1至3項中任一項所使用之抗原，其中該超敏性免疫反應係第1型超敏性免疫反應。
  17. 如申請專利範圍第1項所使用之抗原，其中該超敏性免疫反應係與異位性皮膚炎、蕁麻疹、接觸性皮膚炎、過敏性結膜炎、過敏性鼻炎、過敏性氣喘、過敏性反應、食物過敏及/或藥物過敏有關。
  18. 如申請專利範圍第1項所使用之抗原，其中該呼吸道超敏性免疫反應係與過敏性鼻炎及/或過敏性氣喘有關。
  19. 如申請專利範圍第2項所使用之抗原，其中該胃腸道超敏性免疫反應係與食物過敏有關。
  20. 如申請專利範圍第3項所使用之抗原，其中該皮膚超敏性免疫反應係與接觸性皮膚炎及/或異位性皮膚炎有關。
  21. 如申請專利範圍第1至3項中任一項所使用之抗原，其中投予至口腔係投予至舌下黏膜。
  22. 如申請專利範圍第1至3項中任一項所使用之抗原，其中投予至口腔不包含後續吞下該抗原。
  23. 如申請專利範圍第1至3項中任一項所使用之抗原，其中過敏原不與該非相關抗原共同投予。
  24. 如申請專利範圍第1至3項中任一項所使用之抗原，其中組合投予該非相關抗原至口腔黏膜與投予該相同之非相關抗原或彼之變異體係同時、併行、分開或以任何順序依序進行。
  25. 如申請專利範圍第1至3項中任一項所使用之抗原，其中該經投予至呼吸道、胃腸道或皮膚之非相關抗原係該經投予至口腔之非相關抗原之非相關抗原之變異體或反之亦然。
  26. 如申請專利範圍第1至3項中任一項所使用之抗原，其中投予該非相關抗原至呼吸道、胃腸道或皮膚係於引發該超敏性免疫反應之過敏原暴露期間以外進行。
  27. 如申請專利範圍第1至3項中任一項所使用之抗原，其中投予該非相關抗原至口腔係始於投予該非相關抗原至呼吸道、胃腸道或皮膚之前。
  28. 如申請專利範圍第1至3項中任一項所使用之抗原，其中投予該非相關抗原至呼吸道、胃腸道或皮膚係至少在該個體暴露於引發該個體之超敏性免疫反應之過敏原之期間進行。
  29. 如申請專利範圍第1至3項中任一項所使用之抗原，其中投予該非相關抗原至呼吸道、胃腸道或皮膚係始於投予該非相關抗原至口腔之期間並持續於該口腔投予中止後。
  30. 如申請專利範圍第1至3項中任一項所使用之抗原，其中投予該非相關抗原至口腔係每天、每週二次、每週一次或每月二次進行。
  31. 如申請專利範圍第1至3項中任一項所使用之抗原，其中投予該非相關抗原至呼吸道、胃腸道或皮膚係每天、每週二次、每週一次或每月二次進行。
  32. 一種抗原用於製備供治療或預防性治療有彼等需要之個體的呼吸道超敏性免疫反應之藥物上之用途，其中該免疫反應係當該個體暴露於包含過敏原之環境源材料時由該過敏原引發且其中i)　該抗原係與引發該個體之超敏性免疫反應之該(等)過敏原無關，且ii)　該抗原係以治療有效量投予至該個體之口腔，且iii)　該抗原亦在該個體暴露於該源材料之至少部分或完全重疊期間被投予至呼吸道。
  33. 一種抗原用於製備供治療或預防性治療有彼等需要之個體的胃腸道超敏性免疫反應之藥物上之用途，其中該免疫反應係當該個體暴露於包含過敏原之飲食源材料時由該過敏原引發且其中i)　該抗原係與引發該個體之超敏性免疫反應之該(等)過敏原無關，且ii)　該抗原係以治療有效量投予至該個體之口腔，且iii)　該抗原亦在該個體暴露於該源材料之至少部分或完全重疊期間被投予至胃腸道。
  34. 一種抗原用於製備供治療或預防性治療有彼等需要之個體的皮膚超敏性免疫反應之藥物上之用途，其中該免疫反應係當該個體暴露於包含過敏原之環境源材料時由該過敏原引發且其中i)　該抗原係與引發該個體之超敏性免疫反應之該(等)過敏原無關，且ii)　該抗原係以治療有效量投予至該個體之口腔，且iii)　該抗原亦在該個體暴露於該源材料之至少部分或完全重疊期間被投予至皮膚。
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