TW201014830A - Crystalline form of an alkoxyimidazol-1-ylmethyl biphenyl carboxylic acid - Google Patents

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201014830 六、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於烷氧基咪唑-1-基甲基聯笨羧酸之新穎結 晶型，其具有血管緊張素π丨型受體拮抗劑活性及腎胰島 素殘基溶酶-抑制活性。本發明亦係關於包含該結晶化合 物或自此化合物製備之醫藥組合物、用於製備該結晶化合 物之方法及中間體、及使用此化合物治療諸如高血壓等疾 病之方法。

【先前技術】 共同讓渡之美國公開案第2〇〇8/〇2693〇5號及第2〇〇9/ 0023228號（二者均授予Allegretti等人，在2008年4月23曰 提出申請）揭不擁有ATl受體拮抗劑活性及腎胰島素殘基溶 酶（NEP)酵素抑㈣活性之新穎化合物，該冑案件之揭示内 谷均以引用方式併入本文中。特定言之，化合物4，_{2_乙 氧基-4-乙基_5-[(〇2_巯基_4_曱基戊醯基胺基）甲基]咪唑_ 1-基曱基}-3’-氟聯笨基_2_甲酸具體揭示於此等申請案中。 4 -{2·乙氧基_4·乙基·5[(〇2酼基_4甲基戊醯基胺基） 曱基]咪唑-1·基甲基卜3，_氟聯苯基_2·甲酸之化學結構係藉 由式I表示：

143184.doc (I) 201014830 當製備可長期儲存之化合物時及當製備醫藥組合物及調 配物時，經常要求治療劑之結晶型既不具有吸濕性亦不具 有潮解性。使結晶型具有較高的熔點（即，大於約15〇。〇亦 為有利的，此容許在無顯著降解時對該材料進行處理，例 如，微粉化。 先前未報告過式I化合物之結晶型。因此，需要式J化合 物之穩疋、非潮解性形式，其具有可接受程度的吸濕性及 較高的熔點。 【發明内容】 本發明係關於一種4·-{2-乙氧基-4-乙基-5·[(〇2-酼基- 4-曱基戊醯基胺基）甲基]咪唑·卜基曱基}3，_氟聯苯基_2_甲 酸之結晶型》 本發明之一個態樣係關於用於製備式合物之結晶型 的方法》在一個實施例中，一種用於製備4，_{2_乙氧基_4_ 乙基-5-[((^-2-巯基-4-曱基戊醯基胺基）甲基]咪唑_丨基曱 基}-3·-氟聯苯基-2-甲酸之結晶型的方法包含使4，_{2_乙氧 基-4-乙基-5-[(〇2-巯基-4-曱基戊醯基胺基）曱基]咪唑 基曱基} -3'-氟聯苯基-2-曱酸與惰性稀釋劑接觸以形成混合 物；將該混合物加熱至介於約251至約5〇t之間；及將該 混合物冷卻以形成該結晶型。 本發明之另一態樣係關於一種用於純化2-乙氧基_4_ 乙基-5-[((5>2-疏基-4-甲基戊醯基胺基）甲基]咪唑_丨_基曱 基}-3'-氟聯苯基-2-曱酸之方法。在一個實施例中，此方法 包含形成4’-{2-乙氧基_4_乙基_5·[(⑻_2_巯基_4曱基戊醯 143184.doc -4- 201014830 基胺基）-曱基]咪唑-1-基曱基}_3，_氟聯苯基甲酸之結晶 型。本發明亦係關於藉由本文所述方法製備的產物。 本發明之一個態樣係關於一種包含醫藥上可接受之载劑 及4·-{2-乙氧基-4·乙基-5-[(0-2-疏基-4-曱基戊醯基胺基） 曱基]味唾-1-基甲基}-3'-氟聯苯基-2-曱酸之結晶型的醫藥 組合物。 本發明之另一態樣係關於包含式I化合物之結晶型與一 種或多種其他治療劑之組合的組合物。因此，在一個實施 例中，本發明係關於一種包含下述之組合物：（a)醫藥上可 接受之載劑及治療有效量之式〗化合物的結晶型；及（1?)治 療有效量的選自下述之藥劑：利尿劑、^腎上腺素能受體 阻斷劑、鈣通道阻斷劑、血管緊張素轉化酶抑制劑、ΑΤι 受體括抗劑、腎胰島素殘基溶酶抑制劑、非類固醇抗炎藥 劑、前列腺素、抗脂質藥劑、抗糖尿病藥劑、抗血栓形成 劑、腎素抑制劑、内皮縮血管肽受體拮抗劑、内皮縮血管 肽轉化酶抑制劑、醛固酮拮抗劑、血管緊張素轉化酶/腎 騰島素殘基溶酶抑制劑、加壓素受體拮抗劑、及其組合； 其中該結晶型與該藥劑一起或分開調配。當該藥劑分開調 配時，可包括醫藥上可接受之載劑。 本發明之又一態樣係關於一種用於治療高血壓或心臟衰 竭之方法，其包含對需要治療之患者投與治療有效量之4,_ {2 -乙氧基_4_乙基-5-[((5^-2-巯基-4-甲基戊酿基胺基）甲基] 咪唑-1-基甲基}_3’_氟聯苯基-2-甲酸的結晶型。 本發明亦係關於4’-{2-乙氧基-4-乙基-5-[(⑻_2_疏基_4_ 143l84.doc 201014830 甲基戊醯基胺基）甲基]咪唑_丨_基曱基卜3，_氟聯苯基_2曱酸 之結晶型的用途，其用於製造藥品。另外，本發明係關於 4 -{2-乙氧基-4-乙基-5-[((^j-2-酼基-4-甲基戊醯基胺基）甲 基]米β坐-1-基曱基}-3 -氟聯笨基_2_甲酸之結晶型的用途， 其用於製造藥品；尤其用於製造用於治療高血壓或心臟衰 竭之藥品。 【實施方式】 本發明提供一種4，-{2·乙氡基-4-乙基[(⑻_2_巯基_4_ 曱基戊醯基胺基）甲基]咪唑-1_基甲基μ3，_氟聯苯基_2曱酸 之結晶型。此結晶型與任何抗衡離子無關且在本文中稱作 游離鹼結晶型。 該活性藥劑（即，式I化合物）含有一個具有（s)構型之對 掌性中心。然而，彼等熟習此項技術者應瞭解，除非另外 說明’否則在本發明之各組合物中可存在少量（R)立體異 構體，限制條件為此異構體之存在不會消除該組合物作為 整體之效用。此外，由於該式I化合物含有兩個驗性部分 (咪唑）及一個酸性部分（羧酸），因此其可作為兩性離子存 在。 本發明提供一種4，-{2-乙氧基-4-乙基-5-[(〇2-巯基-4- 甲基戊醯基胺基）甲基]咪唑-1-基f基}_3’_氟聯苯基_2_曱酸 之結晶型。令人感到驚奇的是，發現此結晶型即使在暴露 於大氣水分時亦不具有潮解性。另外’本發明之結晶化合 物具有可接受程度的吸濕性及高熔點。 式I化合物具有AI受體拮抗劑活性及NEP抑制活性。預 143184.doc -6 - 201014830 計，式i化合物之結晶型具有相同活性且因此在治療諸如 高血壓及心臟衰竭等疾病中可具有相同效用。因此，在若 干用途中’式I化合物之結晶型尤其可用於製備用於治療 高血壓或心臟衰竭之醫藥組合物。 可使用市售 AutoNom軟體（MDL，San Leandro, California) 命名式I化合物。 定義 當描述本發明之化合物、組合物、方法及製程時，除非 ❹ 另有說明，否則下述術語具有下述含義。另外，除非所用 上下文明確表示其他含義，否則如本文所用單數形式「一 (a，an)」及「該（the)」包括相應的複數形式。術語「包含 (comprising)」、「包括（including)」及「具有幻」 意欲具有囊括性且意指除所列舉要素外尚有其他要素。除 非另有說明，否則本文所用所有表示成份數量、性質（例 如刀子量）、反應條件等之數字在所有情況下均應理解 ® &受術語「約」修飾°因此’本文所職字係可視本發明 擬尋求獲得之期望性質而變化的近似值。最低限度地且並 非試圖將等效教義之應用限制於申請專利範圍之範疇，至 少應根據所報告有效數字且藉由運用一般捨入法來證釋每 一數字。 如本文所用妞語「具有式」或「具有結構」並非意欲加 以限制㈣以與通常使用術語「包含」相㈣方式 用。 如本文所用術語「熔點」意指針對對應於固相至液相變 143184.doc 201014830 化之熱轉化，由示罢播少—勒θ 差掃描熱1測定所觀測到最大吸熱熱流 處的溫度。 術語「醫藥上可垃Α 你&上 了接又」係扣在用於本發明時，不為生物 學或其他方面不可姑,, J接又的材料。例如，術語「醫藥上可接 又之載劑」係、指可納人組合物中並投與患者，不會造成不 :接又生物學效應或以不可接受方式與該組合物之其他組 4 •料β此等醫藥上可接受之材料通常符合毒 :千及製:^測試所要求的標準，且包括彼等由美國食品與 ::i 局（U.S. Food and Drug Administration)確定為適 宜之非活性成份的材料。 術語「治療有效量」意指在對有需要的患者投與時足以 進订治療之量’亦即’獲得期望治療效果所需藥物之量。 例如，用於治療高血壓之治療有效量係（例如）減少、抑 制、消除或預防高血壓各症狀或者治療高血壓之潛在病因 所需化合物之量。在一個實施例中，治療有效量係降低血 壓所需之量或者維持正常血壓所需藥物之量。另一方面， 術語「有效量」意指足以獲得期望結果之量，該期望結果 可能不一定是治療結果。例如，當研究包含ΑΤι受體之系 統時’ 「有效量」可為拮抗該受體所需之量。 如本文所用術語「治療（treating或忖如⑽价）」意指諸如 哺乳動物（尤其為人類）等患者之疾病或醫學病況（例如，高 血壓）的治療（treating或treatment)，包括：⑷防止該疾病 或醫學病況發生，亦即，患者之預防性治療；（b)改善該疾 病或醫學病況，例如，藉由消除患者之該疾病或醫學病況 143184.doc 201014830 =使其消退；（e)抑制該疾病或醫學病況，例如，藉由減緩 或阻止患者之該疾病或醫學 β 、、 ^ ^ .r- -V1 Μ ^ 幻赞展，或（d)減輕患者之 \病况的症狀。例如，術語「治療高血壓」可 包括防止局血壓發生、改善 壓」了 α现/¾:抑制咼血壓、 ,^壓之症狀（例如，降低▲旬。術語「患者」意欲3 類等需要治療或預防疾病或者目前正在接受具 • 體疾病或醫學症濱+ ^ ^ 「 /疾、病預防或治療的哺乳動物。術語 ❿檢驗之π二體其巾〜本發明化合物之測試個體或用於 檢驗之測減個體’例如，動物模型。 通用合成程序 文：！:=晶化合物可自可容易獲得的起始材料按照下 之結晶所述來合成、。有若干方法可用於製備本發明 (大]及：狀、然而應注意結晶含量以及晶體之慣態 大：及形狀)可部分地基於製備方法以及溶劑組成而變 化。觀測到該等晶體具有盤狀及針狀形態。 ❿ 解：當給出具體製程條件(即，結晶溫度、時間、 則亦之莫耳比、溶劑、麼力等）時，除非另有說明，否 則亦可使用其他製程條件。 ，在室溫下實施 應：：…實施實際溫度量測。應瞭解，室溫可視為 143184.doc 1 至環境中在通常與環境溫度相關之範圍内的溫 通常可介於約25t至約聊之間。在其他情況下，在 至-下實施反應或結晶且實際上量測並記錄該溫度。 ’在適宜惰性稀釋劑或溶劑系統中實施結晶，該惰 性稀釋劑或溶劑系統之實例包括但不限於〒醇、乙醇、異 201014830 丙醇、異丁醇、乙酸乙酯、乙腈、二氣甲烷、曱基第三丁 基醚及諸如此類及其混合物，視情況含有水。在任何上述 結晶完成後，可藉由諸如沉澱、濃縮、離心及諸如此類等 任何習用方式來自反應混合物分離該結晶化合物。 在本發明中所用4，-{2-乙氧基-4-乙基·5-[((^-2-巯基-4-甲基戊醯基胺基）甲基]-咪唑-1-基甲基}-3，-氟聯苯基-2-甲 酸可自市售起始材料及試劑容易地製備，使用在各實例中 所述程序或使用在本申請案背景部分中所述共同讓渡之美 國申凊案中所述程序。在本發明各方法中所述莫耳比可藉 由彼等熟習此項技術者可獲知的各種方法來容易地測定。 例如，可藉由iH NMR容易地測定此等莫耳比。另一選擇 為，可使用元素分析及HPLC方法來測定該莫耳比。 一般而言，式1化合物之結晶型可藉由用惰性稀釋劑處 理4’-{2-乙氧基_4_乙基_5·[((^;_2_巯基_4甲基戊醯基胺基） 曱基]•咪唑_1_基甲基}_3，_氟聯苯基_2曱酸以使之完全溶解 來製備適且惰性稀釋劑包括（舉例說明而非加以限制）丙 酮乙腈、乙酸乙醋、甲基乙基酮、曱醇、乙醇、異丙 酵、水等等。其他適宜惰性稀釋劑包括（舉例說明而非加 以限制）諸如丙酮與水、乙腈與水、及曱醇與水等惰性稀 釋劑之組合。在一個特定實施例中，該惰性稀釋劑係丙 酮、乙腈或丙酮與水之組合。通常，溶解係在介於約2〇{>c 至約50 C間之溫度下實施，在一個實施例中，在介於約 3〇’至45。(：間之溫度下實施，且在另一實施例中，在約 15°C至25。(：之溫度下實施，隨後將該溶液冷卻以形成本發 143184.doc 201014830 明之結晶化合物》在一個特定實施例中，將溶液冷卻至約 20-30 C (例如，；25°C )且在另一實施例中，冷卻至約〇。匚至 8°C(例如’ 4。〇。在適宜時間後，會觀測到晶體。在一個 實施例中，在一段約20-24小時時間後觀測到晶體且在另 一實施例中，在一段約4小時時間後觀測到晶體。一旦觀 測到結晶，母液之體積可能減少且分離並乾燥晶體。 在一個實施例中，本發明之結晶化合物係藉由用丙酮處 理4 _{2·乙氧基_4_乙基-5_[((幻_2-毓基-4-曱基戊醯基胺基） 罾 甲基甲基氣聯苯基·2·甲酸以使之完全溶解 並冷卻以進行結晶來製備。隨後分離並乾燥所得固體以產 生本發明之結晶化合物。通常，此製程可在上述溫度範圍 内之任溫度下實施。在一個實施例中，溶解步驟係在約 30-价下（例如，在約35_4(rc下）實施且冷卻步驟係在約 〇-8°C下（例如，在約4°c下）實施。 在另實施例中，本發明之結晶化合物係藉由用乙腈處 ❹ 理4 _{2-乙氧基-4-乙基-5-[(〇2-毓基_4_甲基戊醯基胺基） 甲基]咪唑-基曱基}_3’_氟聯苯基甲酸以使之完全溶解 並冷卻以進行結晶來製備。隨後分離並乾燥所得固體以產 纟本發明之結晶化合物。通f ’此製程可在上述溫度範圍 内之任-溫度下實施。在一個實施例中，溶解步驟係在約 。C下（例如，在約35 C下）實施且冷卻步驟係在約〇_ 8 C下（例如’在約4〇c下）實施。 實施例中，本發明之結晶化合物係使用乙 氧基-4-乙基_5•[⑽_2_疏基_4_甲基戊酿基·胺基）甲基]味 143184.doc •11 · 201014830 坐 土甲基氟聯苯基-2-曱酸之硫醇保護形式來製 備此方法涉及在甲醇中對4,_(5_[(d2_乙醯基硫烷基 甲基戊醯基胺基)甲基]-2-乙氧基-4-乙基咪唑]-基曱基卜 氣聯本基2-甲酸實施去保護及添加水以使之完全溶解 並冷部以進行結晶。可使用標準去保護技術及試劑（例 Η甲醇納、一級统基胺及肼）來去除該硫醇保護 基團"亥去保護步驟可包括諸如1，4_二硫蘇糖醇等還原 劑。隨後分離並乾燥所得固體以產生本發明之結晶化合 物。通常，此製程可在上述溫度範圍内之任一溫度下實 _ %在個實施例中，去保護步驟係在約_5至5下（例 如，在約〇°CT)實施，溶解步驟係在約15-25°C下（例如， 在約20°C下）實施且冷卻步驟係在約〇8艺下（例如，在約 4°C下）實施。 結晶性質 在其他優點中，發現形成式1化合物之結晶型可用於純

化該化合物本身。舉例而言，本發明之結晶化合物具有 97.8%之純度。 如在粉末X射線繞射領域中所熟知，PXRD譜之相對峰高 度取決於與試樣製備及儀器幾何學有關之許多因素而岭 位置對實驗細節相對不敏感。按照在實例3巾所述獲得 PXRD圖帛。因此’在__個實施例中，本發明之結晶化合 物之特徵在於具有某些峰位置之pXRD圖案。 式I化合物之結晶型之特徵在於其中各峰位置實質上係 與彼等在圖1中所不者_致夕PYRFilSI安 /j, λ* 双t 圖案。彼等峰以相對強 143184.doc •12· 201014830 度遞減之順序列示於下文中。 1% 2-Θ 100 18.121 76 6.658 64 9.801 62 22.621 52 19.324 51 24.561 44 12.682 1% 2-Θ 40 15.019 37 25.296 30 27.318 27 13.543 27 21.199 19 25.958

因此，在一個實施例中，本發明之結晶化合物之特徵在於 粉末X射線繞射（PXRD)圖案包含在6.66士0.20、9.8士0.20及 1 8.12土0.20之2Θ值下之繞射峰且其另一特徵在於具有一個 或多個在選自下述之2Θ值下的額外繞射峰：12.68±0.20、 13.54±0.20 、 15.02±0.20 、 19.32 士 0.20 、 21.20±0.20 、 22.62±0.20 、 24.56±0.20 、 25·30±0.20 、 25·96±0.20 及 27.32±0.20 ° 按照在實例4中所述獲得示差掃描熱量測定（DSC)追蹤 圖。因此，在一個實施例中，本發明之結晶化合物之特徵 在於其DSC溫度記錄圖。在一個實施例中，本發明之結晶 化合物之特徵在於顯示約144°C熔點之DSC溫度記錄圖， 其中在低於約150°C時無明顯熱降解，如在圖2所見。 對本發明之結晶化合物實施熱重分析（TGA)，如在實例4 中所述。因此，在一個實施例中，本發明之結晶化合物之 特徵在於其TGA追蹤圖。在一個實施例中，本發明之結晶 化合物之特徵在於TGA追蹤圖在低於約200°C溫度（此顯著 143184.doc -13 - 201014830 高於熔點）下顯示溶劑及/或水損失（1.8%)，如在圖3中所 見。 已證實本發明之結晶化合物具有可逆吸附/解吸附曲線 圖及可接受程度的吸濕性。舉例而言，式I化合物之結晶 型不具有或具有最小吸濕傾向且在暴露於高達75%相對濕 度時呈現低於約1%重量增加，如在圖4中所見。 按照在實例10中所述獲得本發明結晶化合物之紅外（IR) 吸收光譜。因此，在一個實施例中，本發明之結晶化合物 之特徵在於IR吸收光譜具有在3324士 1、2958±1、2872土 1、 2527±1、1709±1、1643±1、1551±1、1500±1、1357±1、 1254±1、1133±1、1〇62±1、869±1、799土 1、759±1、及 695±1 cm·1下之顯著吸收帶，如在圖5中所見。 另外，已發現本發明之結晶化合物在暴露於高溫時係穩 定的。舉例而言，在4(TC下儲存28天後，藉由高校液相層 析（HPLC)分析結晶游離驗顯示最小化學降解。 本發明結晶化合物之此等性質進一步闡述於下文實例 中。 效用 式I化合物擁有血管緊張素„ i型（ΑΤι)受體拮抗劑活性 及腎胰島素殘基溶酶（NEP)抑制活性，亦即，該化合物能 夠抑制酵素·底物活性。化合物對Μ受體之親和力的一個 量度係與該ATl受體結合之抑制常數⑹。該叫值係心之 以!〇為底數之對數的負&。化合物抑制卿活性之能力的 一個量度係抑制濃度（IC50)，其為對受NEp酵素轉化之底 143184.doc 201014830 物產生半數最大抑制的化合物濃度。pIC5G值係IC5〇之以10 為底數之對數的負值。式I化合物呈現大於或等於約7.0之 ATi受體pKi及呈現大於或等於約7.0之NEP pIC50。 測定式I化合物以及本發明結晶化合物之性質（例如， AT 1受體結合及/或NEP抑制活性）的例示性檢驗闡述於各實 例中且包括（舉例說明而非加以限制）量測AT!及AT2結合 (闡述於檢驗1中）及NEP抑制（闡述於檢驗2中）的檢驗。有 用的二級檢驗包括量測血管緊張素轉化酶（ACE)抑制（亦闡 β 述於檢驗2中）及胺基肽酶Ρ (ΑΡΡ)抑制的檢驗（闡述於

Sulpizio 等人（2005) 315:1306-13 13 中）。在麻醉大鼠 中評估對ACE、ΑΊ^及NEP活體内抑制能力之藥物動力學 檢驗闡述於美國公開案第2008/0269305號及第 2009/0023228號中，二者均授予Allegretti等人。（（亦參見 Seymour 等人 7 (增刊 1):1-35-1-42，1985 及 專尺，Can. J. Physiol. Pharmacol. Ί0·Λ525-\52%， 1992)，其中八乃抑制量測為血管緊張素II升壓響應之百分 比抑制，ACE抑制量測為血管緊張素I升壓響應之百分比 抑制，且ΝΕΡ抑制量測為尿環鳥苷3'，5'-單磷酸（cGMP)輸出 ' 量增加。有用的活體内檢驗包括有意識的具有自發性高血 •壓之大鼠（SHR)模型，其係用於量測AT,受體阻斷之腎素依 賴性高血壓模型（闡述於美國公開案第2008/0269305號及第 2009/0023228號中，二者均授予Allegretti等人；亦參見 Intengan 等人，（1999) CircM/a"o«100(22):2267-2275 及

Badyal 等人（2003) /«山·α« «/owma/ 35:349- 143184.doc -15- 201014830 362);及有意識的去氧皮質酮乙酸鹽（DOCA-鹽）大鼠模 型，其係用於量測NEP活性之體積依賴性高血壓模型（闡述 於美國公開案第2008/0269305號及第2009/0023228號中， 二者均授予Allegretti等人；亦參見Trapani等人（1989) ·/. P/zarwaco/· 14:419-424，Intengan 等人（1999) i/yperiewsz'ow 34(4):907-913 及 Badyal 等人（2003)見上文）。 SHR及DOC A-鹽模型可用於評定測試化合物降低血壓之能 力。DOCA-鹽模型亦可用於量測測試化合物防止或延遲血 壓升高之能力。預計，式I化合物以及本發明之結晶化合 物在上文所列示任何檢驗中或在相似特性的檢驗中可拮抗 AT!受體及抑制NEP酵素。因此，上述檢驗可用於測定本 發明之結晶化合物的治療效用，例如，其作為抗高血壓藥 劑之效用。可使用彼等熟習此項技術者熟知的其他活體外 及活體内檢驗來證實該結晶化合物之其他性質及效用。 因此，預計，式I化合物之結晶型可用於治療及/或預防 響應AT,受體拮抗作用及NEP抑制之醫學病況。例如，預 計，藉由拮抗ATi受體及因此干擾血管緊張素II對其受體 之作用，本發明之結晶化合物在防止由血管緊張素II造成 的jk壓升高中具有效用，一種強效血管加壓劑。此外，亦 預計，藉由抑制NEP，該結晶化合物可強化由NEP代謝之 内源性肽（例如，利納肽、铃墙肽、緩激肽、降妈素、内 皮縮血管肽、腦啡肽、神經降壓肽、P物質及血管活性腸 肽）的生物效應。例如，預計，藉由強化利鈉肽之效應， 該結晶化合物可用於治療青光眼。亦預計，此結晶化合物 143184.doc -16- 201014830 具有其他生理作用’例如，對腎臟、中框神經、生殖系統 及胃腸道系統的作用。 預計，本發明之結晶化合物在治療及/或預防諸如心血 管及腎臟疾病等醫學病況中具有效用。尤其令人感興趣的 心血管疾病包括心臟衰竭，例如，充血性心臟衰竭、急性 心臟衰竭、慢性心臟衰竭、及急性和慢性失代償性心臟衰 竭。尤其令人感興趣的腎臟疾病包括糖尿病性腎病及慢性 腎臟疾病。本發明之一個實施例係關於一種用於治療高血 ® 壓之方法，其包含對患者投與治療有效量之本發明結晶化 合物。通常，該治療有效量係足以降低患者血壓之量。在 一個實施例中’該結晶化合物係作為口服劑型投與。 本發明之另一實施例係關於一種用於治療心臟衰竭之方 法，其包括對患者投與治療有效量之本發明結晶化合物。 通常，該治療有效量係足以降低血壓及/或改善腎臟功能 之量在個實把例中，該結晶化合物係作為靜脈注射劑 φ 型杈與。s用於治療心臟衰竭時，該結晶化合物可與諸如 利尿劑、利納肽及料受體拮抗劑等其他治療劑組合投 與。 亦預期本發明之結晶化合物可用於預防性治療，例如， 防止心肌梗塞後之心功能不全發展、防止血管成形術後動 脈再狹窄、防止血管手術後血管壁變厚、防止動脈粥樣硬 化、及防止糖尿病性血管病。 此外’預期該作為NEP抑難之本發明結晶化合物可抑 制腦啡狀酶，此會抑制内源性腦徘狀降解且因此此等化合 143184.doc •17- 201014830 物亦可作為止痛劑使用。鑒於其NEP抑制性質，亦預期該 結晶化合物可用作止咳劑及止瀉劑（例如，用於治療水 瀉）’且可用於治療下述疾病：月經失調、早產、先兆子 癇、子宮内膜異位症、生殖障礙（例如，男性和女性不 育、多囊卵巢症候群、移植失敗）、及男性和女性性功能 障礙’包括男性勃起功能障礙及女性性喚起障礙。更具體 而言，預期該結晶化合物可用於治療女性性功能障礙，其 經常定義為女性患者難以或不能夠在性表現中獲得滿足。 此涵蓋各種各樣的女性性機能障礙，包括（舉例說明而非 加以限制）機能減退的性欲障礙、性喚起障礙、情欲障礙 及性交疼痛障礙❹當用於治療此等病症時，尤其是女性性 功能障礙，該結晶化合物可與一種或多種下列第二藥劑組 合：PDE5抑制劑、多巴胺激動劑、雌激素受體激動劑及/ 或拮抗劑、雄激素及雌激素。 每一劑量所投與本發明結晶化合物之量或每天所投與總 量可預先確定或可基於個別患者考慮多個因素來確定，多 個因素包括患者病況之特性及嚴重程度、所治療病況、患 者之年齡、體重及總體健康狀況、患者對活性藥劑之耐受 性、投與途徑、考慮的藥理學問題（例如，所投與化合物 及任一第二藥劑之活性、功效、藥物代謝動力學及毒理學 特徵）、及諸如此類。對患有疾病或醫學病況（例如，高2 壓）之患者的治療可以預定劑量或治療醫師所確定的^量 開始’且持續需要的時間段以預防、改善、抑制或減輕該 疾病或醫學病狀之症狀。通常會對經歷該治療之患者實施 143184.doc 201014830 常規監測以測定療法之有效性。例如， 你>〇療咼血壓中， 可利用血壓量測來測定治療之有效性。本文所述其他疾病 及病況之類似指標已熟知且治療内科醫師可容易地得到’。 醫師連續監測可確保在任一給定時間投與最適宜 里、培晶 化a物且有Μ於確定治療之持續時間。此匕在亦投盘第二藥 劑時尤為重要’因為其選擇、劑量及療法持續時間亦；要 調整。這樣’在治療期間對治療方案及投藥時間方案進一 ❹ ❹ 調整，由此投與呈現期望有效性之最低量的活性藥劑且: 外投與僅持續成功治療該疾病或醫學病況所需要的時間。 由於本發明之結晶化合物擁有AT1受體拮抗劑活性及 NEP酵素抑制活性，_，該結晶化合物亦可用作調查或 研究具有ATl受體或NEP酵素之生物系統或試樣的研^工 具以（例如）研究其中ATl受體或NEP酵素起作用之疾病。具 有AT,受體及/或NEP酵素之任何適宜生物系統或試樣都可 用於此等可在活體外或活體内進行的研究中。適用於此等 研究之代表性生物系統或試樣包括但不限於細胞、細胞提 取物、質m、組織試樣、分離的器官、哺乳動物（例如， J鼠大鼠、天竺鼠、兔子、狗、豬、人類等等）及諸如 此類，其中哺乳動物尤其令人感興趣。在本發明之一個特 定實施例中，藉由投與ATl#抗量之該結晶化合物來拮抗 哺乳動物之AT丨受體。在另一特定實施例中，藉由投與 NEP-抑制量之該結晶化合物來抑制哺乳動物之NEp酵素活 性。該結晶化合物亦可藉由使用此化合物實施生物學檢驗 而用作研究工具。 143184.doc •19· 201014830 當用作研究工具時，通常使包含ATl受體及/或nep酵素 之生物系統或試樣與AT!受體拮抗量或NEP酵素抑制量之 該結晶化合物接觸。在該生物系統或試樣暴露於該結晶化 合物之後’使用習用程序及設備來測定拮抗ATl受體及/或 抑制NEP酵素之效果’例如，藉由量測結合檢驗中之受體 結合或量測功能性檢驗中之配體調介的變化。暴露涵蓋使 細胞或組織與該化合物接觸、將該化合物投與哺乳動物 (例如，經腹膜内（i.p.)、靜脈内（i v )或經皮下“ c )投與）等 等。此測定步驟可涉及量測響應（定量分析）或可涉及觀察 (疋性分析）。量測響應涉及（例如）使用習用程序及設備測 定該結晶化合物對生物系統或試樣的影響（例如，放射性 配體結合檢驗）及在功能性檢驗中量測配體調介的變化。 可利用檢驗結果來確定活性水平以及達成期望結果所需化 合物之量（亦即，八^受體-拮抗量及/或NEP酵素_抑制量）。 通常’該測定步驟會涉及測定八1^受體配體調介的效應及/ 或測定抑制NEP酵素之效果。 另外，本發明之結晶化合物可用作評定其他化學化合物 之研究工具，且因此亦可用於篩選檢驗中以發現（例如）具 有AT!受體·拮抗活性及/或NEp酵素_抑制活性之新穎化合 物。如此，該結晶化合物可在檢驗中用作標準物以比較使 用測試化合物及使用該結晶化合物所獲得的結果以識別彼 等具有大致相當或更佳活性之測試化合物（若存在）。例 如，將一測試化合物或一組測試化合物之Ki數據（如藉由 (例如）結合檢驗所測定）與本發明結晶化合物之&數據進行 143184.doc -20· 201014830 比較以識別彼等具有期望性質之測試化合物，例如，具有 與本發明化合物大致相當或優於本發明化合物之Ki值的測 試化合物（若存在）*本發明之此態樣包括（作為單獨實施 例）產生比較數據（使用適當檢驗）並分析測試數據二者以識 別出令人感興趣的測試化合物。因此，測試化合物可在生 •物學檢驗中藉由包含下述步驟之方法予以評定：（a)使用測 試化合物實施生物學檢驗以提供第一檢驗值；化）使用本發 明化合物實施生物學檢驗以提供第二檢驗值；其中步驟（a) ® 係在步驟（b)之前、之後或與步驟（b)同時實施；以及⑷比 較來自步驟（a)之第一檢驗值與來自步驟（b)之第二檢驗 值。例示性生物學檢驗包括ΑΤι受體結合檢驗及NEp酵素 抑制檢驗。 醫藥組合物及調配物 式I之結晶化合物通常係以醫藥組合物或調配物之形式 投與患者。此等醫藥組合物可藉由任何可接受之投與途徑 投予患者，該投與途徑包括但不限於經口、直腸、陰道、 鼻、吸入、局部（包括經皮）、經眼睛及非經腸投與模式。 而且，本發明之化合物可（例如）以每天多個劑量（例如，每 曰兩次、三次或四次）、每曰單個劑量或每週單個劑量經 口投與。彼等熟習此項技術者應瞭解本發明之結晶化合物 -旦經調配，其可不再呈結晶型，即，該結晶化合物可溶 於適宜載劑中。 因此在一個實施例中，本發明係關於一種包含醫藥上 可接受之載劑及4，_{2_乙氧基_4_乙基_5_[(⑻_2巯基4甲 143184.doc •21· 201014830 基戊醯基胺基）曱基]咪唾+基甲基}_3,_氟聯苯基冬甲酸之 結晶型的醫藥組合物。若需要，則此等醫藥組合物亦可包 含其他治療劑及/或調配劑。當論述組合物時，「本發明 之結晶化合物」在本文中亦可稱為「活性藥劑」以將其與 調配物之其他組份（例如，載劑）區別開。 本發明之醫藥組合物通常含有治療有效量之本發明結晶 化合物。然而，彼等熟習此項技術者應認識到，醫藥組合 物可含有大於治療有效量（例如，整體組合物）或小於治療 有效量（亦即，經設計用於多次投與以達成治療有效量之 個別單位劑量）。通常，該組合物會含有約〇 Μ %心之 活性藥劑，包括約0.01-30 wt%，例如，約〇〇11〇 wt〇/〇, 實際量視調配物本身、投與途徑、投藥頻率等等而定。在 一個實施例中，適用於口服劑型之組合物可含有（例如）約 5-70 wt°/〇或約10-60 wt°/〇之活性藥劑。 任何習用載劑或賦形劑均可用於本發明之醫藥組合物 中。具體載劑或賦形劑、或載劑或賦形劑之組合的選擇將 取決於正用於治療特定患者之投與模式或醫學病況之類型 或疾病狀態。就此而言，用於特定投與模式之適宜組合物 的製備同樣在彼等熟習製藥技術者的範圍内。另外，用於 此等組合物之載劑或賦形劑可購得。出於進一步闞釋之目 的’習用調配技術闡述於. 〇/ P/mrwacy，第 20 版，Lippincott Williams & White，Baltimore，Maryland (2000);及 H.C. Ansel 等人之

Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery 143184.doc „ 201014830 办，第 7 版，Lippinccm Williams & ，

Baltimore，Maryland (1999))中。 可用作醫藥上可接受之載劑的#料的代表性實例包括但 不限於下列物質：糖，例如，乳糖、葡萄糖及薦糖；殿 粉，例如，玉米澱粉及馬鈐薯殿粉；纖維素（例如，微晶 纖維素）及其衍生物，例如，幾甲基纖維素納乙基纖維 素及乙酸纖維素；粉狀黃蓍踢；麥芽；明膠；滑石粉；賦

形劑，例如，可可油及栓劑蠟；;由，例如，花生油、棉籽 油、紅花油、芝麻油、撖欖油、玉米油及大豆油；二醇， =如’丙二醇；多元醇’例如，甘油、山梨醇、甘露醇及 聚乙二醇；醋’例如，油酸乙醋及月桂酸乙醋；瓊脂；緩 衝劑’例如’氫氧化鎂及氫氧化铭；耗酸；無致熱源之 水等〇现水，林格氏溶液（Ringer's solution);乙醇；磷 酸鹽緩衝溶液；經壓縮之推進劑氣體，例如，氣氟碳化合 物及氫氟碳化合物；及其他用於醫藥組合物之無毒相容性 物質。 醫藥組合物通常藉由將活性藥劑與醫藥上可接受之載劑 及一種或多種可選成份徹底並充分混合或摻和來製備。隨 後可使用習用程序及設備將所得均勻摻和的混合物製成旋 劑、膠囊、藥丸等或裝填至藥罐、藥筒、分配器等中。 由於本發明之結晶化合物含有硫醇基團，可予以額外考 慮以最小化或消除硫醇氧化形成二硫化物。在固體調配物 中，此可藉由減少乾燥時間、降低該調配物之水分含量及 納入諸如抗壞血酸、抗壞血酸鈉、亞硫酸鈉及亞硫酸氫鈉 143184.doc ►23- 201014830 荨材料以及諸如乳掩與微晶纖維素之混合物等材料來完 成。在液體調配物中，可藉由添加胺基酸、抗氧化劑、： 乙-胺四乙酸二納與抗壞血酸之組合來改善硫醇穩定性。 在-個實施例中，該等醫藥組合物適用於經口投盥 用於經口投與之組合物可呈膠囊、旋劑、藥丸、菱形錠 劑、扁囊劑、糖衣片、粉劑、顆粒劑；存於水性或非水性 液體中之溶液或懸浮液.匕白 ^年及，水包油或油包水液體乳液；酏劑 或糖激；及諸如此類形式；纟自含有預定量之活性藥齊卜 當意欲以固體劑型(膠囊、錠劑、藥丸及諸如此類)經口 投與時，該組合物通常會包含活性藥劑及-種或多種醫藥 上可接受之載劑(例如，檸檬酸鈉或磷酸二鈣)。固體劑型 亦可包含.填充劑或增量劑，例如，殺粉、微晶纖維素、 乳糖、蔵糖、㈣糖、甘露醇及/切酸；黏合劑，例 如，緩曱基纖維素、海藻酸鹽、明膠、聚乙稀料咬嗣、 蔑糖及/或阿拉伯膠η呆濕劑，例如，甘油；崩解劑，例 如’瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯或木薯澱粉、海藻酸、某些矽 酸鹽及/或碳酸鈉；溶液阻滯劑，例如，石蠟；促：收 劑’例如’四級録化合物：潤濕劑，例如，錄蝶醇及/或 甘油單硬脂酸醋；⑨收劑，例如，高嶺土及/或膨潤土； 潤滑劑’例如，滑石粉、硬脂_、硬脂酸鎂、固體聚乙 二醇、月桂基硫酸鈉及/或其混合物；著色劑；及緩衝 劑。 離型劑、潤濕劑、塗佈劑、甜味劑、矯味劑及芳香劑、 防腐劑及抗氧化劑亦可存在於該等醫藥紐合物中。用於錠 143184.doc -24· 201014830 劑、膠囊、藥丸及諸如此類之例示性塗佈劑包括彼等用於 腸溶包膜之試劑，例如，乙酸鄰苯二甲酸纖維素、聚乙酸 鄰苯二甲酸乙烯酯、鄰苯二甲酸羥丙基甲基纖維素、甲基 丙烯酸-甲基丙烯酸酯共聚物、乙酸偏苯三酸纖維素、叛 曱基乙基纖維素、乙酸琥珀酸羥丙基曱基纖維素及諸如此 類。醫藥上可接受之抗氧化劑的實例包括：水溶性抗氧化 劑，例如，抗壞血酸、氫氯酸半胱胺酸、硫酸氫鈉、偏亞 硫酸鈉、亞硫酸鈉及諸如此類；油溶性抗氧化劑，例如， 棕櫚酸抗壞血酸酯、丁基化羥基苯甲醚、丁基化經基甲 苯、卵磷脂、沒食子酸丙酯、α_生育酚及諸如此類；及金 屬螯合劑，例如，擰檬酸、乙二胺四乙酸、山梨醇、酒石 酸、填酸及諸如此類。 亦可使用（例如）各種比例之羥丙基甲基纖維素或其他聚 合物基質、脂質體及/或微球體來調配組合物以減緩或控 制活性藥劑釋放。此外，本發明之醫藥組合物可含有遮光 φ 劑且可調配成可視情況以延遲方式僅（或優先）在胃腸道之 某一部分中釋放活性藥劑。可使用的包埋用組份之實例包 括聚合物質及蠟。該活性藥劑亦可呈視情況具有一種或多 種上述賦形劑之微膠囊形式。 適用於經口投與之液體劑型包括（舉例說明）醫藥上可接 受之乳液、微乳液、溶液、懸浮液、糖漿及關。液體劑 型通常包含活性藥劑及惰性稀釋劑’例如，水或其他溶 劑、增溶劑及乳化齊！，例如，乙醇、異丙醇、碳酸乙醋、 乙酸乙酯、苄醇、#曱酸苄酯、丙二醇、1，3·丁二醇、油 143184.doc •25· 201014830 (例如’棉籽油、注 、 化生油、玉米油、胚芽油、橄欖油、蓖 麻：及之麻油)、甘油、四氫呋喃醇、聚乙二醇及山梨醇 月曰肪酸8日、及其混合物。懸浮液可含有懸浮劑，例如， 乙氧基化異硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇及山梨醇酐酯、微晶 纖維素丨氫氧化銘、膨潤土、瓊脂及黃蓍膠、及其混合 物。 ^ 用於經口投與時，本發明之醫藥組合物可以單位 劑i進行包裝。術語「單位劑型」係指適用於投與患者之 物理離散單位，亦即’每一單位含有經計算可單獨或與—❿ ，或多種額外單位組合產生期望治療效果之預定量的活性 藥劑。例如’此等單位劑型可為膠囊、錠劑、藥丸及諸如 此類。 在另實施例中，本發明之組合物適用於吸入投藥且通 常可呈氣溶膠或粉劑形式。此等組合物通常使用諸如霧化 器、乾粉吸入器、或定量吸入器等熟知的遞送裝置來投 與霧化器裝置產生高速度空氣流，其使該組合物以霧氣 形式嘴霧輸送至患者之呼吸道中。一種例示性霧化調配物© 包含溶於載劑中形成溶液，或微粉化並與載劑組合形成具 有可吸入大小微粉化顆粒之懸浮液的活性藥劑。乾粉吸入 器才又與作為自由流動性粉末的活性藥劑’該自由流動粉末 在吸氣期間分散於患者之氣流中。一種例示性乾粉調配物 包含與諸如乳糖、澱粉、甘露醇、右旋糖、聚乳酸、聚丙 交醋-共-乙交酯、及其組合等賦形劑乾燥摻和的活性藥 劑。定量吸入器使用經壓縮之推進劑氣體排放出測定量之 143184.doc -26- 201014830 活性藥劑。-種例示性定量調配物包含該活性藥劑在諸如 氯氣碳化合物或氫氟垸等液化推進劑中之溶液或懸浮液。 此等調配物之可選組份包括共溶劑（例如，乙醇或戊烷）及 表面活性劑（例如，山梨醇酐三油酸酿、油酸、㈣脂、 #油及月桂基硫酸鈉）。此等組合物通常係藉由將經冷淬 或加壓之氫氟烧添加至含有活性藥劑、乙醇（若存在）及表 面活性劑(若存在)之適宜容器中來製備。將活性藥劑微粉 化並隨後與推進劑組合來製備懸浮液。另一選擇為，懸浮 液調配物可藉由在活性藥劑之微粉化顆粒上嘴霧乾燥表面 活性劑塗層來製備。隨後將該調配物裝填至氣溶膠藥罐 中’其構成吸入器的一部分β 本發明之結晶化合物亦可非經腸投與（例如，藉由經皮 下、靜脈内、肌内或腹膜内注射）β對於此投與而言活 性藥劑以無菌溶液、懸浮液或乳液形式提供。用於^備此 等調配物之例示性溶劑包括水、鹽水、低分子量醇（例 _ 如，丙一酵）、聚乙二醇、油、明膠 '脂肪酸醋⑽如，油 酸乙酯）、及諸如此類。非經腸調配物亦可含有一種或多 種抗氧化劑、增溶劑、穩定劑、防腐劑、潤濕劑、乳化劑 及分散劑。表面活性劑、額外穩定劑或ρΗ_調節劑（酸、鹼 或緩衝劑）及抗氧化劑特別適用於穩定該調配物，例如， 最小化或避免酯及醯胺連接鍵水解或者二聚合可存於該化 合物中之硫醇。此等調配物可藉由使用無菌可注射介質、 無菌劑 '過遽、輻照或加熱使其無菌。在一個特定實施例 中，該非經腸調配物包含水性環糊精溶液作為醫藥上可接 143184.doc -27· 201014830 2之載劑。適宜環糊精包括含有六個或更多個藉由連接鍵 1，4位受到連接的a_D_etb喃葡萄*單元的環狀分子如在 叙酶β環糊精或環庚直鏈澱粉中。例示性 =衍生物，例如，基丙基及…環糊精，= 基丙基-β-環糊精及續丁基醚β_環糊精。用於此等調配 == 劑包括基於㈣之緩衝劑，例如，棒檬酸鹽、 礼酸孤及馬來酸鹽緩衝溶液。 鲁 =明之結晶化合物亦可使用已知經皮遞送㈣及賦形 1皮投與°例如’可將該化合物與滲透促進劑（例如， 二？乙二醇單月桂酸醋、氮雜環烧_2,及諸如此 “並納入到貼片或類似遞送系統中。若需要 =賦形劑（包括膠凝劑、乳化劑及緩衝於 組合物中。 寸'&反 需要則本發明之結晶化合物可與一種或多種其他户 合。因此’在一個實施例中’本發明之醫藥，且 3 、本發明之結晶化合物共投與的其他藥物 _ 二丨Γ:合物可進—步包含一種或多種選自下述之群的治 〜、’、稱作「第二治療藥劑」）：利尿 受體阻斷劑、鉦、s 4 P丨扩上脲素月b ATdH 輕_、血管緊張素轉化酶抑制劑、 。几劑、腎胰島素殘基溶酶抑制劑、非類固醇抗 炎劑、前列腺素、抗 抗 成劑m 尿病藥劑、抗血栓形 管肽轉化酿I制劑、内皮縮血管狀受體抬抗劑、内皮縮血 腎肤島素幾基溶峰抑、及其紐合。此等治療= 143184.doc •28- 201014830 為眾人熟知且實例闡述於下文中。藉由將本發明之結晶化 合物與第二藥劑合併在一起，可進行三合療法⑼iple therapy)，僅使用兩種活性組份可獲得ΑΤι受體拮抗劑活 f生NEP抑制活性、及與該第二治療劑（例如，p丨腎上腺素 能受體阻斷劑）相關之活性。由於含有兩種活性組份之組 〇物與3有二種活性組份之組合物相比通常更易於調配， 因此該兩組份組合物具有優於含有三種活性組份之組合物 的明顯優勢。因此，在本發明之再一實施例中，醫藥組合 ^ 物包含本發明之結晶化合物、第二活性藥劑及醫藥上可接 受之載劑。第三、第四等活性藥劑亦可納入該組合物中。 在組合療法中，所投與本發明結晶化合物之量以及第二藥 劑之量可能小於單一療法中通常所投與之量。 本發明之結晶化合物可與第二活性藥劑物理混合以形成 含有兩種藥劑之組合物；或者各藥劑可存在於分開且不同 的組合物中，該等組合物同時或在不同的時間投與患者。 ❿例如，可使用習用程序及設備將該結晶化合物與第二活性 藥劑組合以形成包含本發明化合物及第二活性藥劑之活性 藥劑組合。另外，可將活性藥劑與醫藥上可接受之載劑組 合以形成包含本發明化合物、第二活性藥劑及醫藥上可接 受之載劑的醫藥組合物。在此實施例中，通常將該組合物 之各組份混合或摻和以產生物理混合物。隨後使用本文所 述任何途徑以治療有效量投與該物理混合物。 另一選擇為，該等活性藥劑在投與患者之前可保持分開 且不同。在此實施例中’投與之前該等試劑並未物理混人 143184.doc •29- 201014830 =物同時間作為—與。此 等，“物了刀開包裝或可包裝在一起作為試劑 同時間投與時’第二藥劑通常會在投與該結晶化合物之後 不足24小時時投與’在從投與該結晶化合物的同時到= 樂後約24小時之間的任意時間。此亦稱為「依序投與」Γ 因此’可使用兩種錠劑·—種鍵劑對應—種活性成份- 時或依序經Π投與本發明之結晶化合物與另—活性藥劑: 其中依序可意指在投與該結晶化合物後立即或在— 時間後（例如’1小時後或3小時後）投與。另-選擇為，該 組合可藉由不同投與途徑來投與，亦即，一種經口投與而 另一種藉由吸入投與。 在本發明之—個實施例中’該試劑^包含足以實施本發 明方法之量的第一劑型，包含本發明化合物；及至少一種 其他劑型’包含一種或多種本文所述第二藥劑。第一劑型 及第二（或第三等）劑型共同包含治療有效量之活性藥劑以 /台療或預防患者之疾病或醫學病況。 § ο括第一藥劑時，其以治療有效量存在以使得其在與 本發明結晶化合物共投與時通常以產生治療有益效果之量 投與。與本發明結晶化合物組合投與之此等第二藥劑的適 宜劑量通常係在約0·05 pg/天至約1〇〇 mg/天之範圍内。第 二藥劑可呈醫藥上可接受之鹽、溶劑合物、光學純立體異 構體等等形式。該第二藥劑亦可呈前藥形式，例如，具有 經酯化羧酸基團之化合物。因此，下文所列示第二藥劑意 欲包括所有此等形式，且可購得，或可使用習用程序及試 143184.doc •30· 201014830 劑來製備。

在一個實施例中，本發明之結晶化合物與利尿劑組合投 與。代表性利尿劑包括但不限於：碳酸酐酶抑制劑，例 如，乙醯嗤胺（acetazolamide)及雙氣非那胺 (dichlorphenamide);袢利尿劑，其包括績酿胺衍生物，例 如，乙醯唾胺、安布赛特（ambuside)、阿佐塞米 (azosemide)、布美他尼（bumetanide)、布他峻胺 (butazolamide)、氯米非那胺（chloraminophenamide)、氣非 那胺（clofenamide)、氣帕胺（clopamide)、氣索隆 (clorexolone)、二續法胺（disulfamide)、依索《坐胺 (ethoxzolamide)、咬塞米（furosemide)、美夫西特 (mefruside)、醋甲 °坐胺（methazolamide)、β比洛他尼 (piretanide)、托拉塞米（torsemide)、曲帕胺（tripamide)及 希帕胺（xipamide)，以及非績酿胺利尿劑，例如，依他尼 酸（ethacrynic acid)及其他苯氧基乙酸化合物，例如，替尼 酸（tienilic acid)、節達立綱（indacrinone)及0i：卡醋 (quincarbate); 滲透壓性利尿劑，例如，甘露醇 (mannitol);保鉀利尿劑，其包括搭固酮拮抗劑，例如， 螺内酯（spironolactone)及Na+通道抑制劑，例如，阿米洛 利（amiloride)及氨苯蝶啶；噻嗪及噻嗪樣利尿劑，例如， 阿爾嘆嗪（althiazide)、节氧嗟嗪（bendroflumethiazide)、节 氫氣噻"秦（benzylhydrochlorothiazide)、苄噻嗪 (benzthiazide)、布噻嗪（buthiazide)、氯噻酮 (chlorthalidone)、氣噻嗪（chlorothiazide)、環戊噻嗪 143184.doc -31 - 201014830 (cyclopenthiazide)、環嗟嗪（cyclothiazide)、依匹 β塞0秦 (epithiazide)、乙°塞°秦（ethiazide)、芬喧"坐（fenquizone)、氟 曱養0秦（flumethiazide) ' 氫氣嗟0秦（hydrochlorothiazide)、 氫氟嘆嗪（hydroflumethiazide)、°弓丨達帕胺（indapamide)、 甲氣雀 °秦（methyclothiazide)、美替克余（meticrane)、美托 拉宗（metolazone)、對氟嗟。秦（paraflutizide)、泊利嗟0秦 (polythiazide)、啥乙宗（quinethazone)、四氯嗟嗪 (teclothiazide)、及三氣嗟嗓（trichloromethiazide);及其組 合。在一個特定實施例中，該利尿劑選自阿米洛利、布美 他尼、氣噻嗪、氣噻酮、雙氣非那胺、依他尼酸、呋塞 米、氫氣噻嗪、氫氟噻嗪、吲達帕胺、甲氯噻嗪、美托拉 宗、托拉塞米、氨苯蝶啶、及其組合。該利尿劑將以足以 提供約5-50 mg/天（更為通常地，6-25 mg/天）之量投與，其 中常用劑量為6.25 mg、12.5 mg或25 mg/天。 本發明之結晶化合物亦可與β1-腎上腺素能受體阻斷劑 組合投與。代表性βι-腎上腺素能受體阻斷劑包括但不限於 醋丁洛爾（acebutolol)、阿普洛爾（alprenolol)、胺確洛爾 (amosulalol)、阿羅洛爾（arotinolol)、阿替洛爾（atenolol)、 苯呋洛爾（befunolol)、倍他洛爾（betaxolol)、貝凡洛爾 (bevantolol)、比索洛爾（bisoprolol)、波吲洛爾 (bopindolol)、布新洛爾（bucindolol)、布庫洛爾 (bucumolol)、布非洛爾（bufetolol)、丁0夫洛爾（bufuralol)、 布尼洛爾（bunitrolol)、布拉洛爾（bupranolol)、布利定 (bubridine)、丁非洛爾（butofilolol)、卡拉洛爾（carazolol)、 H3184.doc -32- 201014830 卡替洛爾（carteolol)、卡維地洛（carvedilol)、塞利洛爾 (celiprolol) ' 塞他洛爾（cetamolol)、氣拉洛爾 (cloranolol)、地來洛爾（dilevalol)、依泮洛爾（epanolol)、 艾司洛爾（esmolol)、茚諾洛爾（indenolol)、拉貝洛爾 (labetalol)、左布諾洛爾（levobunolol)、甲D引洛爾 (mepindolol)、美替洛爾（metipranolol)、美托洛爾 (metoprolol)(例如，琥珀酸美托洛爾及酒石酸美托洛爾）、 曱氧苯心安（moprolol)、納多洛爾（nadolol)、萘肟洛爾 (nadoxolol)、 奈必洛爾（nebivolol)、尼普地洛 (nipradilol)、氧烯洛爾（oxprenolol)、喷布洛爾 (penbutolol)、喷布洛爾（penbutolol)、吲哚洛爾 (pindolol)、普拉洛爾（practolol)、丙萘洛爾（pronethalol)、 普萘洛爾（propranolol)、索他洛爾（sotalol)、硫氧洛爾 (suHnalol)、他林洛爾（talinolol)、特他洛爾（tertatolol)、 替利洛爾（tilisolol)、〇塞嗎洛爾（timolol)、托利洛爾 (toliprolol)、及希苯洛爾（xiben〇l〇l)，及其組合。在一個 特定實施例中，該β!腎上腺素能受艎阻斷劑選自阿替洛 爾、比索洛爾、美托洛爾、普萘洛爾、索他洛爾、及其組 合0 在一個實施例中，本發明之結晶化合物與鈣通道阻斷劑 組合投與。代表性鈣通道阻斷劑包括但不限於氨氣地平、 阿尼帕米（anipamil)、阿雷地平（aranidipine)、巴尼地平 (barnidipine) 节環烧（bencyclane)、貝尼地平 (benidipine)、苄普地爾（bepridn)、克侖硫卓 143184.doc -33· 201014830 (clentiazem)、西尼地平（cilnidipine)、桂利0秦 (cinnarizine)、地爾硫卓（diltiazem)、依福地平 (efonidipine)、依高地平（elgodipine)、依他苯酮 (etafenone)、非洛地平（felodipine)、芬地林（fendiline)、I 桂利°秦（flunarizine)、戈洛帕米（gallopamil)、伊拉地平 (isradipine)、拉西地平（lacidipine)、樂卡地平 (lercanidipine)、利多說 °秦（lidoflazine)、洛美利嗪 (lomerizine)、馬尼地平（manidipine)、米貝拉地爾 (mibefradil)、尼卡地平（nicardipine)、石肖苯地平 (nifedipine)、尼古地平（niguldipine)、尼魯地平 (niludipine)、尼伐地平（nilvadipine)、尼莫地平 (nimodipine)、尼索地平（nisoldipine)、尼群地平 (nitrendipine)、尼伐地平（nivaldipine)、派克昔林 (perhexiline)、普尼拉明（prenylamine)、柳的平 (ryosidine)、司莫地爾（semotiadil)、特羅地林 (terodiline)、嘆帕米（tiapamil)、維拉帕米（verapamil)、及 其組合。在一個特定實施例中，該鈣通道阻斷劑選自氨氣 地平、苄普地爾、地爾硫卓、非洛地平、伊拉地平、拉西 地平、尼卡地平、硝'苯地平、尼古地平、尼魯地平、尼莫 地平、尼索地平、柳的平、維拉帕米、及其組合。 本發明之結晶化合物亦可與血管緊張素轉化酶（ACE)抑 制劑組合投與。代表性ACE抑制劑包括但不限於喹那普利 (accupril)、阿拉普利（alacepril)、貝那普利、貝那普利拉 (benazeprilat)、卡托普利、西那普利（ceranapril)、西拉普 143184.doc -34- 201014830 利（cilazapril)、地拉普利（delapril)、依那普利、依那普利 拉、福辛普利（fosinopril)、福辛普利拉（fosinoprilat)、味 達普利（imidapril)、賴諾普利、莫昔普利（moexipril)、蒙 諾普利（monopril)、莫維普利（moveltipril)、喷托普利 (pentopril)、培 β朵普利（perindopril)、嗜那普利 (quinapril)、喧普利拉（quinaprilat)、雷米普利、雷米普利 拉（ramiprilat)、乙酸沙拉新（saralasin acetate)、螺普利 (spirapril)、替莫普利（temocapril)、群多普利 (trandolapril)、佐芬普利（zofenopril)、及其組合。在一個 特定實施例中，該ACE抑制劑選自：貝那普利、依那普 利、賴諾普利、雷米普利、及其組合。 在一個實施例中，本發明之結晶化合物係與AT!受體拮 抗劑（亦稱作血管緊張素Π 1型受體阻斷劑（ARB))組合投 與。代表性ARB包括但不限於阿比沙坦（abitesartan)、苄基 氣沙坦、坎地沙坦（candesartan)、坎地沙坦西醋、依利沙 坦（elisartan)、恩布沙坦（embusartan)、稀醇他索沙坦 (enoltasosartan)、依普羅沙坦、福沙坦（fonsartan)、福拉 沙坦（forasartan)、甘胺醯洛沙坦（glycyllosartan)、厄貝沙 坦、抑特靈（isoteoline)、氣沙坦、美得希莫（medoximil)、 米法沙坦（milfasartan)、奥美沙坦（olmesartan)、奥普米沙 坦（opomisartan)、普拉沙坦（pratosartan)、利匹沙坦 (ripisartan)、沙普立沙坦（saprisartan)、沙拉新 (saralasin)、薩美辛（sarmesin)、他索沙坦（tasosartan)、替 米沙坦、顯沙坦、佐拉沙坦（zolasartan)、及其組合。在一 143184.doc -35- 201014830 個特定實施例中’該ARB選自坎地沙坦、依普羅沙坦、厄 貝沙坦、氣沙坦、奥美沙坦、厄貝沙坦、沙普立沙坦、他 索沙坦、替米沙坦、及其組合。例示性鹽包括甲磺酸依普 羅沙坦、氣沙坦鉀鹽、及奥美沙坦酯。通常，該ARB將以 足以提供約4-600 mg/劑之量投與，其中例示性日劑量係在 20-320 mg/天範圍内。 在另一實施例中，本發明之結晶化合物與腎胰島素殘基 溶酶（NEP)抑制劑組合投與。代表性nep抑制劑包括但不 限於.坎沙曲，坎沙曲拉，右卡多曲（dexecad〇tril)((+)-N_ 乙醯基硫甲基）_3-苯基丙醯基]甘胺酸苄基酯）； CGS-24128 (3-[3-(聯苯基-4-基）-2-(膦醯基甲基胺基）丙醯 胺基]丙酸）；CGS-24592 ((^)-3-[3-(聯苯基-4-基）-2-(膦醯 基甲基胺基）丙醯胺基]丙酸）；CGS-25155 乙醯 基硫甲基）-10-侧氧基-1-氮雜環癸_2(S)-基羰基]-4(R)-羥基-L-脯胺酸苄基酯）；3-(1-胺基甲醯基環己基）丙酸衍生物， 闡述於授予Hepworth等人（Pfizer公司）之WO 2006/027680 中；JMV-390-1 (2(R)苄基-3-(N-羥基胺基甲醯基）丙醯基-L -異白胺酿基-L -白胺酸），埃卡多曲（ecad〇tril);碟酸阿米 酮（phosphoramidon);反-硫曱基氧代苯丙甘胺酸 (retrothiorphan) ; RU-42827 (2-(酼基甲基）-N-(4-吡啶基）苯 丙醯胺）；RU-44004 (N-(4-嗎啉基）-3-苯基-2-(硫烷基甲基） 丙醯胺）；SCH-32615 ((S)-N-[N-(1-羧基-2-苯基乙基）-L-苯 基丙胺醯基]-β-丙胺酸）及其前藥SCH-34826 ((S)-N-[N-[1-[[(2,2-二甲基-1，3-二氧戊環-4-基）曱氧基]羰基]-2-苯基乙 143184.doc -36- 201014830 基]-L-苯基丙胺醯基]-β-丙胺酸）；希樂吩（sialorphin); SCH-42495 (N-[2(S)-(乙醯基硫烷基甲基）-3-(2-甲基苯基） 丙醯基]-L-甲疏胺酸乙基醋）；斯平吩（spinorphin) ; SQ-28132 (N-[2-(巯基甲基）-1-側氧基-3-苯基丙基]白胺酸）； SQ-28603 (N-[2-(巯基甲基）-1-側氧基-3-苯基丙基]-β-丙胺 酸）；SQ-29072 (7-[[2-(巯基甲基）-1-側氧基-3-苯基丙基]胺 基]庚酸）；硫曱基氧代苯丙甘胺醜及其前藥消旋卡多曲 (racecadotril); UK-69578 (順-4-[[[l-[2-羧基-3-(2-甲氧基 乙氧基）丙基]環戊基]羰基]胺基]環己烷曱酸）；UK-447,841 (2-{l-[3-(4-氯苯基）丙基胺基曱醯基]-環戊基曱基卜4-甲氧 基丁酸）；UK_505,749 ((R)2·甲基甲基苯并噻 唑-6-基）丙基胺基甲醯基]環戊基}丙酸）；5-聯苯基-4-基-4-(3-羧基丙醯基胺基）-2-曱基戊酸及5-聯苯基-4-基-4-(3-叛 基丙醯基胺基）-2-甲基戊酸乙基酯（WO 2007/056546);達 格魯多曲（daglutril)[(3S,2’R)-3-{l_[2i-(乙氧基羰基）-4·-苯 基丁基]-環戊-1-羰基胺基}-2,3,4,5-四氫-2-側氧基-1H-1-苯 丙氮卓-1-乙酸]’闡述於授予Khider等人（Novartis AG)之 WO 2007/1067〇8中；及其組合。在一個特定實施例中，該 NEP抑制劑選自坎沙曲、坎沙曲拉、CGS-24128、填酸阿 米酮、SCH-32615、SCH-34826、SQ-28603、硫曱基氧代 苯丙甘胺酸、及其組合。該NEP抑制劑將以足以提供約2〇_ 800 mg/天之量投與，其中典型曰劑量係在5〇_7〇〇 mg/天範 圍内，更通常地，100-600或100-300 mg/天。 在又一實施例中’本發明之結晶化合物與非類固醇消炎 143184.doc -37- 201014830

藥劑（NSAID)組合投與。代表性NSAID包括但不限於：阿 西美辛（acemetacin)、乙醯基水揚酸、阿氯芬酸 (alclofenac)、阿明洛芬（alminoprofen)、氨芬酸 (amfenac)、氣普立糖（amiprilose)、阿莫西林（amoxiprin)、 阿尼羅酸（anirolac)、阿紮丙宗（apazone)、阿紮丙宗 (azapropazone)、貝諾酯（benorilate)、苯噁洛芬 (benoxaprofen)、苯哌立酮（bezpiperylon)、溴哌莫 (broperamole)、布氣酸（bucloxic acid)、卡洛芬 (carprofen)、環氣茚酸（clidanac)、雙氣芬酸（diclofenac)、 二氟尼柳（diflunisal)、地弗他酮（diftalone)、依諾利康 (enolicam)、依託度酸（etodolac)、依託考昔（etoricoxib)、 芬布芬（fenbufen)、芬氣酸（fenclofenac)、芬克洛酸 (fenclozic acid)、非諾洛芬（fenoprofen)、芬替酸 (fentiazac)、非普拉宗（feprazone)、氟芬那酸（flufenamic acid)、氧苯柳（flufenisal)、I 洛芬（fluprofen)、氣比洛芬 (flurbiprofen)、°夫羅芬酸（furofenac)、異 丁芬酸 (ibufenac)、布洛芬（ibuprofen) 、 β 引 β朵美辛 (indomethacin)、0弓丨0朵洛芬（indoprofen)、伊索克酸 (isoxepac)、伊索昔康（isoxicam)、綱洛芬（ketoprofen)、酮 洛酸（ketorolac)、洛非°米β坐（lofemizole)、氯諾昔康 (lornoxicam)、甲氣滅酸的結合驗（meclofenamate)、曱氣 芬那酸（meclofenamic acid)、曱芬那酸（mefenamic acid)、 美洛昔康（meloxicam)、美沙拉秦（mesalamine)、D米洛芬 (miroprofen)、莫非布宗（mofebutazone)、萘 丁美酿J 143184.doc -38- 201014830

❹ (nabumetone)、萘普生（naproxen)、尼氟酸（niflumic acid)、奥沙普秦（oxaprozin)、歐平納（oxpinac)、經布宗 (oxyphenbutazone)、保泰松（苯基 butazone)、°比羅昔康 (piroxicam)、》比洛芬（pirprofen)、普拉洛芬（pranoprofen)、 雙水楊醋（salsalate)、舒多昔康（sudoxicam)、柳氮確0比咬 (sulfasalazine)、舒林酸（sulindac)、舒洛芬（suprofen)、替 諾昔康（tenoxicam)、硫平酸（tiopinac)、嗟洛芬酸 (tiaprofenic acid)、硫嚼洛芬（tioxaprofen)、托芬那酸 (tolfenamic acid)、托美丁（tolmetin)、三氟米酯 (triflumidate)、齊多美辛（zidometacin)、佐美睃 (zomepirac)、及其組合。在一個特定實施例中，該NSAID 選自依託度酸、氟比洛芬、布洛芬、吲哚美辛、酮洛芬、 酮咯酸、美洛昔康、萘普生、奥沙普秦、羅昔康、及其 組合。 在又一實施例中，本發明之結晶化合物與抗脂質藥劑組 合投與。代表性抗脂質藥劑包括但不限於他汀類藥物 (statins) ’例如’阿托伐他汀（atorvastatin)、氟伐他汀 (fluvastatin)、洛伐他汀（l〇vastatin)、普伐他汀 (pravastatin)、羅舒伐他汀（r0SUvastatin)和辛伐他汀 (simvastatin);膽固醇酯轉移蛋白（CETP);及其組合。 在又一實施例中’本發明之結晶化合物與抗糖尿病藥劑 組合投與。代表性抗糖尿病藥劑包括但不限於：可注射藥 物，例如’胰島素及胰島素衍生物；口服有效的藥物，包 括諸如二甲雙胍等雙胍類藥物、高血糖素拮抗劑、諸如阿 143184.doc -39· 201014830 卡波糖（acarbose)及米格列醇（miglitol)等α-葡糖苦酶抑制 劑、諸如瑞格列奈（repaglinide)等美格替财類 (meglitinides)、°惡二0坐咬二嗣類（oxadiazolidinediones)、 諸如氯績丙脲（chlorpropamide)、格列美腺（glimepiride)、 格列。比唤（glipizide)、格列本脲（glyburide)及妥拉績脲 (tolazamide)等續酿腺類藥物、諸如吼格列酮（pioglitazone) 及羅格列嗣（1：08丨§1!^20116)等°塞嗤咬二酮類；及其組合。 在一個實施例中，本發明之結晶化合物與抗血栓形成劑 組合投與。代表性抗血栓形成劑包括但不限於阿司匹林 (aspirin)、抗血小板劑、肝素（heparin)、及其組合。本發 明之化合物亦可與腎素抑制劑組合投與，該腎素抑制劑之 實例包括但不限於（aliskiren)、依那吉余（enalkiren)、瑞米 吉侖（remikiren)、及其組合。在另一實施例中，本發明之 化合物與内皮縮血管肽受體拮抗劑組合投與，該内皮縮血 管肽受體拮抗劑之代表性實例包括但不限於波生坦 (bosentan)、 達盧生坦（darusentan)、 替唾生坦 (tezosentan)、及其組合。本發明之化合物亦可與内皮縮血 管肽轉化酶抑制劑組合投與，該内皮縮血管肽轉化酶抑制 劑之實例包括但不限於磷酸阿米酮、CGS 26303、及其組 合。在又一實施例中，本發明之化合物與醛固酮拮抗劑組 合投與，該醛固酮拮抗劑之代表性實例包括但不限於依普 利酮（eplerenone)、螺内 S旨（spironolactone)、及其組合。 組合治療劑亦可有助於本發明化合物之進一步組合療 法。例如，ACE抑制劑依那普利（呈馬來酸鹽形式）與利尿 143184.doc -40- 201014830 劑氫氣噻嗪之以商標Vaseretic®出售的組合、或鈣通道阻 斷劑氨氣地平（呈苯磺酸鹽形式）與ARB奥美沙坦（呈奥美沙 坦酯前藥形式）之組合、或鈣通道阻斷劑與抑制素之組合 均亦可與本發明化合物一起使用。雙重作用之藥劑亦可有 助於本發明結晶化合物之組合療法。例如，亦可納入諸如 下述等血管緊張素轉化酶/腎胰島素殘基溶酶（ACE/NEP)抑 制劑：AVE-0848 7又72从〉-7-[3-甲基々^卜硫烷基丁 醯胺基]-6-側氧基 _i，2,3,4,6,7,8，12b-八氫 u比 „定并[2，i_a][2] 苯丙氮卓-4-甲酸）；AVE-7688 (伊利帕曲（iiepatril))及其母 體化合物；BMS-182657 (2-[2-側氧基-3(S)-[3-苯基-2(S)- 硫烷基丙醯胺基]-2,3,4,5-四氫-1H-1-笨丙氮卓基]乙 酸）；CGS-26303 ([N-[2-(聯苯基-4-基）-l(s)-(lH-四唑-5-基）乙基]胺基]甲基膦酸）；CGS-35601 (N-[l-[4-甲基-2(S)-硫烷基戊醯胺基]環戊基羰基]-L-色胺酸）；法西多曲 (fasidotril);法西多曲拉（fasidotrilate);依那普利拉；ER-32935((3R，6S,9aR)-6-[3(S)-甲基-2(S)-硫烷基戊醯胺基]_5_ 氧全氫噻唑并[3,2-a]氮雜卓-3-甲酸）；傑帕曲拉；厘01^ 101264 ((4S，7S，12bR)-7-[2(S)-(2-嗎啉基乙醯基硫基）-3-苯 基丙酿胺基]-6-侧乳基-1，2,3,4,6,7,8，121)-八氮〇比咬并[2，1-a][2]苯丙氮卓-4-曱酸）；MDL-101287 ([4S- [4a，7a(R*)，12bp]]-7-[2-(羧基甲基）-3-苯基丙醯胺基]-6-側 氧基-1，2,3,4,6,7,8，121)-八氫吼啶并[2，14][2]苯丙氮卓-4-甲 酸）；奥馬曲拉；RB-105 (N-[2(S)-(酼基甲基）-3(R)-苯基丁 基]-L-丙胺酸）；山帕曲拉；SA-898 ((2R，4R)-N-[2-(2-羥基 143184.doc -41 - 201014830 苯基）-3-(3-毓基丙醯基）噻唑烷-4-基羰基]-L-苯丙胺酸）； Sch-50690 (N-[1(S)-羧基-2-[N2-(甲烷磺醯基）-L-賴氨醯基 胺基]乙基]-L-纈氨醯基-L-酪胺酸）；及其組合。在一個特 定實施例中，該ACE/NEP抑制劑選自：AVE-7688、依那 普利拉、法西多曲（fasidotril)、 法西多曲拉 (fasidotrilate)、奥馬曲拉、山帕曲拉、及其組合。 諸如α2-腎上腺素能受體激動劑及加壓素受體拮抗劑等 其他治療劑亦可有助於於組合療法。例示性α2-腎上腺素能 受體激動劑包括可樂定（clonidine)、右美托咪定 參 (dexmedetomidine)、及脈法辛（guanfacine)。例示性加壓素 受體拮抗劑包括托伐普坦（tolvaptan)。 下列調配物可闡明本發明之代表性醫藥組合物。 用於經口孜軼之例示性硬明膠膠囊 將本發明之結晶化合物（50 g)、經喷霧乾燥乳糖（440 g) 及硬脂酸鎂（10 g)充分地摻和。隨後將所得組合物裝填到 硬明膠膠囊中（500 mg組合物/膠囊）。另一選擇為，將本發 明之結晶化合物（20 mg)與澱粉（89 mg)、微晶纖維素（89 ® mg)及硬脂酸鎂（2 mg)充分地掺和。隨後使該混合物經過 45號網目美國篩並裝填到硬明膠膠囊中（200 mg組合物/膠 囊）。 用於經口故轶之例示性明膠膠囊調配物 將本發明之結晶化合物（100 mg)與聚氧化乙烯山梨醇酐 單油酸酯（50 mg)及澱粉（25 0 mg)充分地摻和。隨後將該混 合物裝填到明膠膠囊中（400 mg組合物/膠囊）。 143184.doc -42- 201014830 另一選擇為，將該結晶化合物（40 mg)與微晶纖維素 (Avicel PH 103 ; 259_2 mg)及硬脂酸鎂（0.8 mg)充分地摻 和。隨後將該混合物裝填到明膠膠囊（規格1號，白色，不 透明）中（300 mg組合物/膠囊）。 用於經口故毵之例示性錠劑調配物 使本發明之結晶化合物（10 mg)、澱粉（45 mg)及微晶纖 維素（35 mg)經過20號網目美國篩並充分地混合。將如此 製得的顆粒在50°C至60°C下乾燥並使其通過16網目美國 篩。將聚乙烯基吡咯啶酮（4 mg，作為存於無菌水中之1 〇 °/〇溶液）之溶液與羧甲基殿粉鈉（4.5 mg)、硬脂酸鎂（0.5 mg) 及滑石粉（1 mg)混合且隨後使此混合物經過16號網目美國 篩。隨後向該等顆粒中添加羧甲基澱粉鈉、硬脂酸鎂及滑 石粉。在混合後，將該混合物在壓片機上壓製以提供重 100 mg之録:劑。 另一選擇為，將該結晶化合物（250 mg)與微晶纖維素 (400 mg)、發煙二氧化矽（1〇 mg)及硬脂酸（5 mg)充分地摻 和。隨後壓製該混合物以形成錠劑（665 mg組合物/錠劑）。 另一選擇為’將該結晶化合物（400 mg)與玉米澱粉（50 mg)、交聯羧甲基纖維素鈉（25 mg)、乳糖（120 mg)及硬脂 酸鎂（5 mg)充分地摻和。隨後壓製該混合物以形成單痕錠 劑（600 mg組合物/旋劑）。 另一選擇為，將該結晶化合物（1 〇〇 mg)與玉米澱粉（1 〇〇 mg)及明膠水溶液（20 mg)充分地摻和。將該混合物乾燥並 研磨成細粉。將微晶纖維素（5〇 mg)及硬脂酸鎂（5 mg)與明 143184.doc -43- 201014830 膠調配物攙和在一起，製成顆粒並壓製所得混合物以形成 錠劑（100 mg活性成份/錠劑）。 用於經口孜氧之例示性懸浮液調配物 將下列各成份混合以形成每10 mL懸浮液含有100 mg活 性藥劑之懸浮液： 成份 數量

結晶化合物 1.0 g 富馬酸 0.5 g 氣化鈉 2.0 g 對羥基苯曱酸曱酯 0.15 g 對羥基苯曱酸丙酯 0.05 g 砂糖 25.5 g 山梨醇(70%溶液） 12.85 g Veegum®K(矽酸鎂鋁） 1.0 g 橋味劑 0.035 mL 著色劑 0.5 mg 蒸餾水 補足至100 mL 用於經口故軼之例示性液體調配物 適宜液體調配物係一種具有基於羧酸之緩衝液（例如， 檸檬酸、乳酸鹽及馬來酸鹽緩衝溶液）的調配物。例如， 將本發明之結晶化合物（其可預先與DMSO混合）與100 mM 檸檬酸銨緩衝液摻和在一起且將pH調節至pH 5、或者與 100 mM檸檬酸溶液摻和在一起並將pH調節至pH 2。此等 溶液亦可包括諸如環糊精等增溶賦形劑，例如，該溶液可 包括10 wt%羥基丙基-β-環糊精。 其他適宜調配物包括5% NaHC03溶液，含有或不含環糊 143184.doc -44- 201014830 用於注射故％之例示性可注射調配物 將本發明之結晶化合物（〇2 g)與〇4 M乙酸鈉緩衝溶液 (2.0 mL)播和在一起。根據需要使用〇 5 n鹽酸水溶液或〇.5 N氫氧化鈉水溶液將所得溶液之{>11值調整至pH 4，且隨後 添加足夠注射用水以提供2〇 mL之總體積。隨後使該混合 物經過無菌濾器（0.22微米）過濾以提供適合藉由注射投與 之無菌溶液。 用於吸入故氨之例示性組合物 將本發明之結晶化合物（〇·2 mg)微粉化且隨後與乳糖（25 mg)摻和在一起。隨後將此經摻和的混合物裝填到明膠吸 入藥筒中。例如，使用乾粉吸入器投與藥筒内含物。 另一選擇為，使微粉化結晶化合物（1() g)分散在藉由將 卵磷脂（0.2 g)溶解於脫礦質水（2〇〇 mL)中所製成的溶液 中。將所得懸浮液喷霧乾燥且隨後微粉化以形成包含平均 直徑小於約1 · 5 μηι之顆粒的微粉化組合物。隨後將該微粉 化組合物裝填至含有經加壓四氟乙烷之定量式吸 入器藥筒中，當藉由該吸入器投與時裝填量足以提供每劑 量約10 至約500邮之本發明化合物。 另一選擇為，將該結晶化合物（25出幻溶解於檸檬酸鹽 緩衝（pH 5)等滲鹽水（125 mL)中。將該混合物攪拌並實施 超聲處理直至該化合物溶解。檢測該溶液之？11值且若需 要，則藉由緩慢地添加1 N氫氧化納水溶液調整至5。 使用霧化器裝置來投與該溶液，其可提供每劑量約1〇眧 至約500 pg之活性藥劑。 143184.doc •45- 201014830 實例 提供下列製備及實例來舉例說明本發明之具體實施例。 然而，除非明確說明，否則此等具體實施例並非意欲以任 何方式限制本發明之範圍。 除非另有說明，否則下列縮寫具有下述含義且本文使用 且未定義的任何其他縮寫具有其公認的標準含義：

AcOH 乙酸 ATj 血管緊張素III型(受體） at2 血管緊張素II 2型(受體） BSA 牛jk清白蛋白

Bu4NBr 四丁基溴化銨 DCC 1,3-二環己基碳化二亞胺 DCM 二氣曱烧(dichlorometiiane 或methylene chloride) DIPEA 二異丙基乙胺 DMAP 4-二甲基胺基吡啶 DMF N，N-二甲基曱醯胺 DMSO 二甲基亞硪 Dnp DOCA 2,4-二硝基苯基 乙酸去氧皮質酮 DTT 1,4-二硫蘇糖醇 EDC N-(3-二曱基胺基丙基)-Ν'-乙基碳化二亞胺 EDTA 乙二胺四乙酸 EGTA 乙二醇雙(β-胺基乙基醚)-ν,ν，ν'ν·-四乙酸 EtOAc 乙酸乙酯 EtOH 乙醇 HATU 六氟磷酸四甲基-0-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-脲鏽鹽 HCTU (六氣填酸2-(6-氣-1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3,3-四曱基銨） IPAc 乙酸異丙酯 143184.doc -46- 201014830

Mca (7-曱氧基香豆素-4-基)醯基 MeCN 乙腈 MeOH 甲醇 MTBE 曱基第三丁基醚 NaOMe 曱醇鈉 NBS N-溴琥珀醯亞胺 NEP 腎胰島素殘基溶酶(EC 3.4.24.11) PBS 磷酸緩衝鹽溶液 SHR 自髮型高企壓大鼠 TFA 三氟乙酸 THF 四氫呋喃 Tris 三(羥甲基)胺基甲烷 Tween-20 聚乙二醇山梨醇酐單月桂酸酯 除非另外註明，否則諸如試劑、起始材料及溶劑等所有 材料均自商業供應商（例如，Sigma-Alarich，Fluka Riedel-de HaSn及諸如此類）購得且未經進一步純化即使用。

除非另外註明，否則反應係在氮氣氣氛下實施。反應之 進程係藉由薄層層析（TLC)、分析型高效液相層析（分析型 HPLC)及質譜來監測。其細節在各具體實例中給出。在分 析型HPLC中所用溶劑係如下：溶劑A係98°/〇水/2% MeCN / 1.0 mL/L TFA ；溶劑 B 係 90% MeCN/10% 水/1 ·0 mL/L TFA。 按照每一製備或實例中之具體闡述來處理反應物；經常 藉由萃取及其他純化方法（例如，溫度-及溶劑-依賴性結 晶、及沉澱）純化反應混合物。此外，反應混合物按照常 規藉由製備型HPLC純化，通常使用Microsorb C18及 Microsorb BDS管柱填充物及習用洗脫劑。反應產物之表 143184.doc -47- 201014830 徵按照常規藉由質譜及1H-NMR譜來實施。對於NMR量測 而言，將試樣溶於氘代溶劑（CD3OD、CDC13或DMSO-c/6) 中並利用Varian Gemini 2000儀器（400 MHz)在標準觀察條 件下獲得1Η-NMR譜。化合物之質譜識別係使用電喷射電 離法（ESMS)利用API 150 EX型應用型生物系統（Applied Biosystems)(Foster City，CA)儀器或 1200 LC/MSD型 Agilent (Palo Alto, CA)儀器來實施。 製備1 5-溴-2-乙氧基-3H·咪唑-4-甲醛

將 2,4,5-三溴-1Η-β米®坐（la) (98.7 g，324 mmol, 1.0 eq)溶 於1.20 L DCM中並冷卻至0°C。向此混合物中添加DIPEA (62 mL，3 60 mmol, 1.1 eq)，繼而緩慢地添加[β-(三甲基曱 矽烷基）乙氧基]甲基氣（60.2 mL, 340 mmol，1.05 eq)。將該 溶液緩慢地升溫至室溫。在2小時後，用1 Μ Η3Ρ04/飽和 NaCl水溶液（1:10; 2x600 mL)洗滌該混合物。有機層經 MgS04乾燥並蒸發至乾燥，產生微黃色液體狀中間體（lb) (137 g)，其在靜置時固化。

將中間體（lb) (130 g，290 mmol, 1.0 eq)溶於無水EtOH 143184.doc -48- 201014830 (650 mL)中。向此混合物中緩慢地添加第三丁醇鉀（98 6 g， 879 mmol, 3.0 eq)並將該混合物加熱至回流16小時。隨後 將該混合物冷卻至室溫，過濾並濃縮。將所得油狀物溶於 EtOAc (800 mL)中並用飽和NaHC03 (400 mL)洗滌。分離 各層且將有機部分用飽和NaCl水溶液洗滌、經MgS04乾 燥、過濾並濃縮，產生棕色油狀中間體（lc) (U5.3 g)。MS 所/之.[]^+11+]計算得（：11112(^1：21^20281401.9實驗值401.2〇 將中間體（lc) (69·5 g, 174 mmol，1.0 eq)溶於無水 THF (600 mL)中並在氮中冷卻至_78°C。逐滴添加正丁基鋰存於 己院（72.9 mL, 180 mmol，1.05 eq)中之2·5 Μ溶液並將該混 合物在-78°C下攪拌10分鐘。隨後添加DMF (40 mL，520 mmol，3.0 eq)並將該混合物在_78。。下攪拌15分鐘且隨後升 溫至室溫。將反應物用水（1〇 mL)猝滅，用EtOAc (600 mL) 稀釋且用水（100 mL)、飽和NaCl水溶液洗滌、經MgS04乾 燥且在低壓下濃縮。藉由矽膠層析（15-30% EtOAc :己烷） 純化所回收材料以產生淡黃色油狀中間體（ld) (45 。 將中間體（Id) (105.8 g，303 mmol, 1.0 eq)在冰中於 〇°c 下 冷卻。添加TFA (3 00 mL)並將該混合物在〇°c下搜拌15分 鐘’隨後升溫至室溫。在90分鐘後，將該混合物在低壓下 濃縮並重新溶於EtOAc (700 mL)中。將有機部分用飽和碳 酸氫鹽（2x600 mL)、飽和NaCl水溶液洗滌、經MgS04乾燥 並在低壓下濃縮以產生黃色固體。將該材料懸浮於己烷 (300 mL)中並在0°C下攪拌30分鐘》將該材料過濾並用冷 己炫（150 mL)洗務固體以產生蒼白色固體狀標題化合物 143184.doc -49- 201014830 (61.2 g)。W-NMR (CDC13) δ (ppm): 1.4 (m, 3H)，4.5 (m， 2H)，5.2 (s，1H)，9.2 (d，1H)。 製備2 4，-溴甲基-3’-氟聯苯基-2-甲酸第三丁基酯

2c 向 1.0 M DCC存於DCM (800 mL，800 mol)中之在 0°c 下 冷卻的溶液中添加2-溴苯甲酸（2a) (161 g，800 mmol) ’繼 而添加DMAP (9.0 g，740 mmol)及第三丁醇（82.4 mL，880 mmol)。將該混合物在室溫下授掉1〇分鐘’隨後升溫至室 溫並擾拌。在16小時後，隨後過滤該混合物。將有機部分 用飽和NaHC〇3(40〇 mL)、飽和NaCl水溶液洗滌、經 MgS04乾燥、過濾並在低壓下濃縮以產生油狀粗製中間體 (2b) (228.8 g) ° 將粗製中間體（2b) (109.6 g，426 mm〇l)及3_氟·4_甲基苯 基硼酸（72.2 g, 449 mmol)懸浮於異丙醇（360 mL，4.7 mmol)中。添加碳酸鈉存於水（360 mL，720 mmol)中之2.0 Μ溶液並在氮中對該混合物實施脫氣。隨後添加肆（三苯基 膦）纪（0) (4.9 g, 4.3 mmol)並將該混合物在90°C下攪拌46小 時。將該混合物冷卻至室溫’用Et〇Ac (800 mL)稀釋並分 離各層。將有機部分用飽和NaCl水溶液洗蘇並在低壓下濃 143184.doc -50- 201014830 縮。藉由梦膠層析（3x 4_6% Et〇Ac:己烧）純化所回收油狀 物以產生澄清油狀中間體（2c) (93 3居）。 將中間體（2e) (89.8 g，314 mmol，l.G eq)溶於CC14 (620 mL，6.4 mol)中並在氮中實施脫氣。添加NBS (55 8 g，3i4 mmo1) ’繼而添加過氧化苯甲醯（1.5 g，ό·3 mmol)並將該混 合物在90°C下在氮中加熱7小時。將該反應物在冰浴中冷 卻、過濾並在低壓下濃縮。將所回收油狀物與丨5〇 mL 3% EtOAc :己烷一起研磨。將該溶液在-2〇°C下冷淬2小時， 隨後過濾且用冷3% EtOAc :己烷溶液（200 mL)洗滌以產生 灰白色固體狀標題化合物（88.9 g)。iH-NMR (CDC13) δ (ppm): 1.3 (m, 9H), 4.6 (s, 2H), 7.0-7.1 (m, 2H), 7.3 (dd, 1H), 7.4 (m, 1H), 7.5 (m, 1H), 7.8 (dd, 1H) 〇 製備3 4’-(5-胺基甲基-2-乙氧基-4-乙基咪唑-1-基甲基）-3’_氟聯苯 基-2-甲酸第三丁基酯

143184.doc -51- 201014830 將5 -溴-2 -乙氧基-3 Η-味0坐_4 -甲路（42.0 g, 192 mmol)及 4·-溴曱基-3·-氟聯苯基-2-甲酸茗三7~差酯（70.0 g，192 mmol)溶於DMF (890 mL，12 mol)中並將該溶液在〇°C下冷 卻。緩慢地添加碳酸鉀（26.5 g，192 mmol)並將該混合物在 Ot：下攪拌過夜。隨後將該反應物用水猝滅。將該混合物 用EtOAc (3x300 mL)萃取、用飽和NaCl水溶液（500 mL)洗 滌且在低壓下濃縮。將所回收油狀物溶於MeOH (450 mL) 中。緩慢地添加水（112 mL)同時揽拌以沉殿出產物。將該沉 澱再攪拌1小時’然後藉由過濾收集。將該固體溶於EtOAc Q 中且在低壓下濃縮之。使該殘留物靜置過夜且隨後在3%

EtOAc :己烧中擾拌並藉由過濾來收集。將渡液在低壓下漢 縮並藉由矽膠層析純化以獲得中間體（3a) (8.4 g)。 將中間體（3a) (54.2 g，108 mmol)溶於1，2-二甲氧基乙院 (670 mL，6.5 mol)中。添加肆（三苯基膦）鈀（〇) (124〇 mg， 1.1 mmol)。在15分鐘後，添加水（240 mL，13 mol)及碳酸 鉀（14.9 g，108 mmol)並將該混合物在85°C下於氮中加熱。 在此溫度下攪拌10分鐘後，添加2,4,6-三乙烯基環三硼氧 ® 烷吡啶複合物（11.7 g，48.4 mmol)並將該混合物攪拌2小 時。隨後將該混合物用EtOAc (200 mL)稀釋、用水及飽和 NaCl水溶液洗滌並在低壓下濃縮。將該混合物與另一批料 合併在一起並藉由矽膠層析（0-50% EtOAc :己烷）純化以 產生中間體（3b) (47.1 g)。 將中間體（3b) (19.0 g，42·2 mmol)溶於0比咬（250 mL，3.1 mol)中。添加經胺氫氣酸鹽（8.8 g，126 mmol)，繼而添加 143184.doc -52- 201014830 水（75 mL, 4.2 mol)並將該混合物在室溫下攪拌過夜。隨後 添加水（300 mL)並將該混合物擾拌3 0分鐘。將沉澱過濾出 並在真空中乾燥以產生中間體（3c) (17.3 g)。 將中間體（3c) (5.1 g, 11 mmol)溶於乙酸（1〇〇 mL, 1.8 mol)及硫酸（640 pL, 12 mmol)中。在氮中對該混合物實施 脫氣並添加10% Pd/C，Degussa型，經潤濕，50% (0.05:0.45:0.5，纪.炭黑：水 ’ l_5 g，723 μιηοΐ)。隨後於 氫（50 psi)中使用帕爾振盪器（Parr shaker)對該混合物實施 脫氣並在室溫下振盪。在12小時後，將該混合物過濾並在 低壓下濃縮。將所回收材料溶於EtOAc (50mL)中、用飽 和NaHC03 (50 mL)及飽和NaCbX溶液洗滌且隨後蒸發液 體。藉由矽膠層析（0-10% MeOH : DCM)純化該材料以產 生澄清油狀標題化合物（4.6 g，純度為96%)。MS m/z: [M+H+]計算得 C26H32FN3〇3, 454.3 ;實驗值 454.2。4 NMR (CDC13) 7.82 (1H, d), 7.50 (1H, t), 7.42 (1H, t) 7.35 (1H, d), 7.27 (1H, d), 7.12 (1H, s), 7.04 (1H, d), 5.34 (1H, b), 4.65 (2H, s), 4.40 (2H, q), 4.12 (2H, q), 2.70 (1H, b), 1.50 (3H, t)，1.28 (9H，s)，1·17 (3H，t)。 製備4 (S)-2-6鏟基硫烷基_4_曱基戊酸

將D-白胺酸（8.2 g，62.7 mmol)溶於存於水（99 mL，0.3 143184.doc •53- 201014830 mol)中之3·0 M HBr中並冷卻至〇°C。經20分鐘緩慢地添加 NaN02 (6.9 g，100 mmol)存於水（11.3 mL，627 mmol)中之 溶液。將該混合物在0°C下攪拌3小時且隨後用乙醚萃取兩 次、依序用水及飽和NaCl水溶液洗滌、經MgS04乾燥、過 濾並濃縮以提供淺黃色油狀(7^-2-溴-4-甲基戊酸（11.5 g)。 其未經進一步純化即用於下一步驟中。 將硫代乙酸（4.2 g，54.4 mmol)與 DMF (100 mL, 1.0 mol) 合併在一起並在冰浴中冷卻該混合物。添加碳酸鈉（5 8 g， 54.4 mmol)。在30分鐘後，逐滴添加存kDMF (2〇 mL)中 ❹ 之溴-4-甲基戊酸（10.1 g，51.8 mmol)並將該混合物在 〇°C至室溫下攪拌6小時。將該混合物用1〇〇 mL Et0Ac稀釋 並用100 mL的1:1 1 N HC1 :飽和NaCl水溶液萃取。分離各 層且水性相再次用EtOAc (100 mL)萃取。將各有機部分合 併、用飽和NaCl水溶液洗滌 '經MgS〇4乾燥、過濾並在低 壓下濃縮。將所回收油狀物溶於二異丙基醚（45 mL, 320 mmol)中並在〇°C下冷淬。逐滴添加二環己基胺（丨〇丨mL， 50·7 mmol)且自溶液中沉墜出固體。在再攪拌3〇分鐘後，參 將該材料過濾並用75 mL冷二異丙基醚洗滌。將所回收固 體（14 g)懸浮於 1〇〇 mL EtOAc 中。添加 15〇 mL 5% khs〇4 並分離各層。將有機部分用飽和NaC1水溶液洗滌、經

MgS〇4乾燥、過濾並在低壓下濃縮。隨後使所回收油狀物 共沸（3x25 mL甲苯）以產生作為二環己基胺鹽之標題化合 物（6· 1 g)。 實例1 143184.doc •54- 201014830 4’-{2 -乙氧基-4-乙基-5-【（(S)-2-疏基-4·甲基戊班基胺基）甲 基】咪唑-1-基甲基}-3’-氟聯苯基-2-甲酸

TFA鹽之製備製備 ❿ 將4'_(5_胺基甲基-2-乙氧基-4-乙基〇米嗤_1_基甲基）_3，氣 聯苯基_2_甲酸茗三7·差酯（5.0 g，11.0 mm〇1)、乙酿 基硫炫基-4-曱基戊酸（二環己基胺鹽；2.1 g，11() mmQp、 4_甲基嗎啉（1.2 mL，11·0 mmol)及1-羥基_7_氮雜苯并三嗤 (1.5 g，11.0 mmol)合併在一起並溶sDMF (12〇 以， I. 6 111〇1)中且隨後在〇。(：下冷卻10分鐘。添加£〇(：(211^， II. 0 mmol)並將該混合物在0艽下攪拌1小時且隨後在室溫 下攪拌2小時。將該反應物用水（1〇〇 mL)猝滅，用EtOAc _ (100 mL)萃取產物且隨後濃縮。藉由管柱層析（〇 5〇%

EtOAc :己烷）純化該混合物以獲得乙醯基硫烷基酯中間 體，4’-{5-[(「5>2-乙醯基硫烷基_4_甲基戊醯基胺基）曱基]_ 2-乙氧基-4-乙基咪唑-1-基甲基}_3，_氟聯苯基_2_曱酸茗三 酯。 將此酯中間體溶於DCM:TFA (各自為10 mL)中並將該混 合物在室溫下攪拌3小時且隨後濃縮。使殘留物吸收於 EtOAc中，用飽*NaHC〇3溶液洗滌、經MgS〇4乾燥並濃縮 143184.doc .55· 201014830 以產生5.3 g乙醯基硫烷基酸中間體，4’-{5-[((57-2-乙醯基 硫炫> 基-4 -甲基戍酿基胺基）甲基]-2 -乙乳基-4-乙基味°坐-1 _ 基甲基氣聯苯基-2-曱酸。 將此酸中間體溶於MeOH (30 mL)中。對該溶液實施脫 氣、在氮中攪拌並在〇°C下冷卻。添加存於MeOH (25 mL, 2 eq.)中之0.5 M NaOMe並將該混合物在0°C下於氮中攪拌 20分鐘。隨後用1 N HC1 (15 mL)酸化該混合物。將該混合 物濃縮、溶於EtOAc中、用水洗滌、經MgS〇4乾燥、過渡 且隨後濃縮。藉由製備型HPLC 10-70% MeCN :水與0.5% TFA (70分鐘方法）純化該產物以產生2.3 g TFA鹽。 HCI鹽之製備 將 Amberlite IRA-900樹脂（80 g，Aldrich)懸浮於 1M HC1 (600 mL)中。將該混合物間歇性地振盪60分鐘。傾倒出大 部分上清液以提供濕樹脂，隨後將其轉移至100 mL塑性管 柱。藉由用水（200 mL)及50% aq_ MeCN (200 mL)洗脫直至 所經過洗脫劑之pH係〜5來洗滌該管柱。將4'-{2-乙氧基-4-乙基-威基-4-甲基戍酿基-胺基）曱基]°米°坐-1 -基甲 基}-3’-氟聯苯基-2-甲酸之TFA鹽（2.3 g, 3.5 mmol)溶於50% MeCN水溶液（8 mL)中並裝填至製得管柱中。用50% MeCN 水溶液在重力下洗脫該化合物。將各部分以5 mL體積收集 起來並藉由HPLC分析。將具有期望質量之各部分合併在 一起並凍乾，提供作為HC1鹽之標題化合物（1.5 g，純度為 97%) ° 標題化合物之製備 143184.doc -56- 201014830 將此HC1鹽溶於MeOH (5 mL)及水（5 mL)中且該混合物 具有pH 2.2。用一系列100 μΐ^ 1 N NaOH注射液將該材料 緩慢地調節至pH 4.2，隨後用IN HC1 (25 μί)、NaOH (2x 25 μΜ，隨後用HC1 (25 μΙ〇調節以達等電點。觀測到該溶 液渾濁。有油從材料中浸出。添加EtOAc (20 mL)以萃取 該固體，隨後自水性層移除之並濃縮以產生標題化合物 (1.3 g，純度為98%)。使用離子層析分析此材料之離子含 量，獲得：0.06% Na, 0.1% C1 及 <0.1% TFA (w/w)。 ⑩ 實例2 4’- {2 -乙氧基-4-乙基-5- [((5)-2 -疏基-4-甲基戍釀基胺基）曱 基]咪唑-1-基甲基}-3’-氟聯苯基-2-甲酸之結晶游離鹼 藉由粉末X射線繞射測定得按照在實例1中所述製備的 乙乳基-4-乙基- 5- [((57_2 -嫌基-4-曱基戍酿基胺基）甲 基]-咪唑-1-基甲基}-3’-氟聯苯基-2-曱酸為非晶體。 將此非晶型（35.7 mg)添加至丙酮（1 mL)中以產生約36 mg/mL溶液。將該溶液加熱至35-40°C約30分鐘，隨後逐漸 地冷卻至室溫。隨後將該溶液冷藏（4°C )大約44小時。觀測 到沉澱且體積在輕缓氮氣流中於室溫下減少一半。將該等 ‘ 固體分離出並在氮中乾燥以產生標題結晶化合物（22.3 mg)。措由XRPD圖案、DSC溫度記錄圖及TGA追縱圖分析 來驗證產物之結構特性。 實例3 粉末X_射線衍射 藉助Rigaku Miniflex PXRD繞射儀使用 Cu Κα (30.0 kV, 143184.doc -57- 201014830 15.0 mA)輻射來獲得粉末x射線繞射圖案。藉助測角鏡實 施分析，該測角鏡係以2c(2e)/min之連續掃描模式及〇〇3〇 步長在2至40。之2Θ角範圍内運行。使用石英樣本承載器 製備作為粉狀材料薄層之試樣。藉助矽金屬標準物校準儀 器以使2Θ角在±0.02。内。實例2之結晶型試樣之代表性 PXRD圖案示於圖1中。 在圖1中所繪示許多粉末繞射強峰及相對平坦基線強烈 地表明實例2之結晶型擁有良好結晶性。恰恰相反，實例1 之非晶型化合物，在結晶前之起始材料並未顯示任何繞射 峰。 實例4 熱分析 示差掃描熱量測定法（DSC)係使用具有熱分析儀 (Thermal Analyst)控制器之TA儀器Q_1〇〇型模組來實施。 收集數據並使用TA儀器熱解析（Thermal s〇luti〇ns)軟體來 分析。精確地稱取1.64 mg實例2之結晶型試樣並置於有蓋 鋁製盤中。在22t下實施等溫平衡5分鐘後，使用 10°C/min線性加熱斜坡將該試樣自22〇c加熱至25〇t>c。代 表性DSC溫度記錄圖示於圖2中。 該DSC溫度記錄圖表明本發明之結晶化合物具有極佳熱 穩定性’熔點為約144。(：且在低於15CTC時無熱降解。非複 合型熱曲線圖於在144°C下熔融吸熱之前未顯示任何不期 望之吸熱峰或放熱峰，此表明該結晶固體很有可能是無水 結晶型。 143184.doc -58- 201014830 代表性TGA追蹤圖示於圖3中且表明實例2之結晶型試樣 在自室溫至200°C下會有少量失重（約1_8%)，此與殘留水 分或溶劑損失一致。 實例5 動態水分吸附評估 使用 VTI 常壓微量天平（atmospheric microbalance)， SGA-100 系統（VTI公司，Hialeah, FL 33016)對實例 2之結 晶型試樣實施動態水分吸附（DMS)評估（亦稱作水分吸附-參 解吸附曲線圖）。使用大約4.27 mg之試樣大小並在開始分 析時將濕度設定為環境值。該DMS分析係由在2%相對濕 度（RH)至90% RH之完整濕度範圍内之5% RH/步掃描速率 構成。在25°C下以等溫方式實施DMS運行。代表性DMS曲 線圖示於圖4中。 該DMS曲線圖證明本發明之結晶化合物具有可逆吸附/ 解吸附曲線圖及不明顯的吸濕性。該結晶化合物在暴露於 自2% RH至高達90% RH之寬濕度範圍時具有較小重量增 加且在暴露於高達75% RH時重量增加小於約1%，此表明 該結晶型在環境條件下僅具有最小的吸濕風險。 ‘實例6 4’-{2-乙氧基-4-乙基酼基-4-曱基戊醯基胺基）甲 基]味峻-1 -基曱基}-3’-氣聯苯基-2-甲酸之結晶游離驗 標題結晶化合物係以與在實例2中所述者相似的方式來 製備，但使用MeCN代替丙酮： 將非晶型4'-{2-乙氧基-4-乙基- 5- [((57_2 -疏基-4-曱基戍 143184.doc -59- 201014830 醯基胺基）-甲基]咪唑-1-基曱基}-3’-氟聯苯基·2·甲酸（98 8 mg)添加至MeCN (4 mL)中以產生約24.7 mg/mL溶液。將 該溶液加熱至35°C約30分鐘，隨後逐漸地冷卻至室溫。隨 後將該溶液冷藏（4°C )大約42小時。觀測到沉澱且體積在輕 緩氮氣流中於室溫下減少一半。將該等固體分離出並在氣 中乾燥以產生標題結晶化合物（73.8 mg)。 按照在實例2中所述來獲得相同結晶材料，如藉由相似 PXRD圖案、DSC溫度記錄圖及TGA追蹤圖所證實。然 而’此材料與實例2之材料相比呈現改良結晶性，如藉由 約151°C之略高熔點所證實。 製備5 結晶游離檢4’-(5-胺基甲基_夂乙氧基乙基咪唑-1-基甲基）_ 3’-氟聯苯基-2-甲酸農三7"差酯

將5_>臭-2·乙氧基·3Η_味啥·4甲醛（22 〇 g，1〇〇咖以，i」 eq.)、4’-溴甲基_3，_氟聯笨基_2·甲酸襄三τ差酯（33.〇呂，9〇 143184.doc 201014830 mmol, 1 eq·)及Bu4NBr (1.6 g，5 mmol, 0.05 eq.)溶於甲苯 (400 mL)及 1 N NaOH (120 mL, 120 mmol，1.2 eq.)中。將 所得混合物在27°C下攪拌48-60小時。將甲苯層分離出、 用水（2x200 mL)洗滌，隨後藉由蒸餾來移出。向殘留物中 添加EtOH (350 mL)並將該混合物加熱至50-60°C直至固體 溶解。將該混合物經4小時冷卻至室溫，隨後冷卻至4°C並 在4°C下攪拌4小時。將該等固體過濾出、用冷EtOH (60 mL)洗滌且在室溫下於真空中乾燥24小時以產生中間體 (5a)(〜39 g)。 將中間體（5 a) (20.0 g，40 mmol, leq.)、乙基三氟蝴酸鉀 (7.1 g，52 mmol, 1·3 eq.)、乙酸叙（II) (224 mg，1 mmol, 0.025 eq.)、cataCXium®A (丁基二-1 -金鋼烧基膦；CAS號 321921-71-5; 538 mg, 1.45 mmol, 0.04 eq.)及 Cs2C〇3 (45 g， 138 mmol, 3.45 eq.)溶於曱苯（240 mL)及水（80 mL)中。在 真空中向該混合物中通入氮（3x)，隨後加熱至90°C達16小 時。隨後將該混合物冷卻至室溫並分離各層。有機層用水 (2x200 mL)洗滌，隨後在低壓下蒸餾以產生油狀物。將該 油狀物溶於EtOH (240 mL)中。添加水（80 mL)並將該混合 物攪拌30分鐘。將該混合物過濾以移出固體，用75% EtOH (130 mL)洗滌該等固體並收集濾液以產生中間體（5b) 之EtOH溶液，其直接用於下一步驟中。 將中間體（5b) (10 mmol, 1 eq.)之EtOH溶液與氫氯酸羥 胺（27·2 g，52 mmol，1.3 eq·)及 NaHC03 (35.2 g)合併在一 起。將該混合物在40°C下攪拌24小時，隨後冷卻至室溫。 143184.doc -61 - 201014830 將沉殿過濾出、用 75% EtOH (100 mL)及 50% EtOH (200 mL)洗滌’隨後在低壓下於30°C下乾燥24小時以產生中間 體（5c)(15 g)。 將中間體（5c) (5 g)與 EtOH (100 mL)、NH4OH (28%，6 mL)及拉尼鎳（Raney Ni)(濕10 g)合併在一起以形成漿液。 將該混合物在氮中脫氣（3x)、在氫中脫氣（3χ)，隨後在氫 (1 atm)中攪拌3小時。將該混合物過濾以移除觸媒並用 EtOH (20 mL)洗滌該等固體。隨後用活性炭（〇 5 g)處理濾 液並再次過濾。隨後在真空中蒸餾濾液以產生油狀物。添 加庚烧（50 mL)並將該混合物蒸館成油狀物（2χ)。藉由加熱 該混合物並在4°C下攪拌24小時來使殘留油狀物溶液庚烷 (60 mL)中。隨後將固體過濾出，用冷庚烷（1〇 mL)洗滌並 在室溫下乾燥24小時以產生作為結晶材料之標題化合物 (3.8 g)。 製備6 結晶游離鹼4’-{5-丨(6S)_2-乙醢基硫烷基_4_甲基戊醯基胺基） 甲基】-2-乙氧基-4-乙基咪唑基甲基卜3，_氟聯苯基_2甲酸

將結晶4'-(5-胺基甲基-2-乙氧基_4_乙基咪唑-1-基曱基）_ 3’-氟聯苯基-2·曱酸茗_£ J·羞酯（二環己基胺鹽；a g, 40 143184.doc •62- 201014830 mmol, 1 eq.)、乙醯基硫烷基-4-甲基戊酸（18 g，48 mmol, 1.2 eq.)及 HCTU (19 g，48 mmol, 1.2 eq·)在預冷淬容 器（0°C，l〇分鐘）中合併在一起並添加冷DCM (240 mL)。 將該混合物在1士2°C下攪拌5-15小時。添加4% NaHC03 (200 mL)並將該混合物攪拌15分鐘。分離DCM層並蒸餾至 〜100 mL。添加IPAc (150 mL)並蒸德至150 mL。再添加 IPAc (200 mL)並用 4% NaHC〇3 (2x200 mL)及水（200 mL)洗 滌該混合物。將該溶液與15% NH4C1 (300 mL) —起攪拌15 分鐘，用IN HC1將pH調節至5.5且隨後攪拌1小時。過濾出 固體。用IPAc (50 mL)洗滌濾液並分離IPAc層。將IPAc層 與15% NH4C1 (200 mL)—起攪拌3小時並過濾出所有固 體。將濾液用飽和NaCl水溶液（150 mL)洗滌且在真空中蒸 館至〜60 mL。添加DCM (50 mL)並蒸德出。添加DCM (200 mL)並將該混合物冷卻至0-5°C。在低於15°C下緩慢地添加 TFA (70 mL)(輕度放熱）並將該混合物在20°C下攪拌16小 時。將該混合物濃縮至~150 ml並添加IPAc (150 mL)。將 該混合物蒸餾至~150 mL。再添加IPAc (150 mL)並再次蒸 館至〜15 0 mL。添加IP Ac (200 mL)並在低於10C下將所得 溶液經15分鐘缓慢地添加至存於水（250 mL)中之預冷卻 K2C03 (52 g)(中度放熱，pH>7在猝滅期間pH>6)。在轉移 期間監測pH且當pH降低低於6時再添加鹼（8 g)。分離IPAc 層並用飽和水溶液NaCl (150 mL)洗滌之《將該IPAc溶液 蒸餾至〜50 mL。添加MTBE (100 mL)並將該混合物蒸餾至 〜50 mL »再添加MTBE (100 mL)並將該混合物在室溫下攪 143184.doc • 63 - 201014830 拌3小時，形成漿液，隨後將其在4°c下攪拌16小時。將該 等固體過濾出並用MTBE/二異丙基醚（1:1; 100 mL)洗滌。 隨後將該等固體在室溫下於氤中乾燥60小時以產生作為結 晶材料之標題化合物（18.2 g)。 實例7 4’-{2-乙氧基-4-乙基-5·[((^-2-巯基-4-甲基戍醢基胺基）甲 基1味哮-1-基甲基}-3，-氟聨苯基-2-甲酸之結晶游離礆 將結晶4’-{5-[((5>2-乙酿基硫院基-4-甲基戊酿基胺基） 甲基]-2_乙氧基-4-乙基咪唑-1-基曱基}_3，_氟聯苯基_2_甲 酸（2.3 g，4 mmol，1 eq.)及 DTT (62 mg，0.4 mmol，0.1 eq.) 溶於MeOH (30 mL)中。將所得溶液用氮脫氣（3次）並在〇c>c 下冷卻。添加NaOMe (25%，存於Me0H中，工7 mL)並將 該混合物在0°C下攪拌30分鐘。添加AcOH (3 g, 50 mmol，4 eq·)以在0°C下猝滅該反應物。將該混合物升溫至2〇<>c。緩 慢地添加去離子水（1〇 mL)。將該混合物在2〇t：下攪拌3小 時且隨後在代下撲拌！小時直至形成沉激。將固體過滤出 並用1^011/1120(2:1;3〇1^)洗滌，隨後在氮中於2〇。(：下乾 燥48小時以產生標題結晶化合物（1 2 g)。 按照在實例2中所述獲得相同材料，如藉由相似_圖 案、DSC溫度記錄圖及TGA追蹤圖所證實。 實例8 熱穩定性 將如在實例6中所製備的 該試樣僅損失2%純度，因 結晶型試樣在6〇°C下加熱5天。 此本發明之結晶化合物具有極 143184.doc •64- 201014830 佳熱穩疋性。另一方面，實例1之奍晶型化合物試樣在 6〇°C下加熱1天後損失約50%純度。 實例9 微粉化 藉助喷磨機對如在實例7中所製備結晶游離鹼試樣實施 微粉化以獲得自由流動的白色粉末。在微粉化過程期間沒 有遇到問題。粒徑分佈係如下： 微粉化前 微粉化後 D (v, 0.9) 50.73 μιη 7.07 μιη D (v, 0.5) 11 -32 um 2.59 μιη D (v, 0.1) 1.73 um 0.79 μιη 將微粉化材料與未經微粉化材料相比，在粉末x射線繞 射圖案、TGA、DSC、DMS、化學純度、對掌性純度及水 分含量中沒有觀測到明顯變化。舉例而言，如在實例5中 所注明’實例2之結晶游離驗試樣之代表性dmS追蹤圖顯 示在40-75% RH濕度範圍内重量增加小於1%，而如在實例 7中所製備微粉化結晶游離驗顯示在此濕度範圍内之ο.?% 重量增加。 實例10 紅外分析 使用配備有Nicolet衰減全反射（ATR)試樣承载器之 Avatar 360 FT-IR光譜計在4000 cm-i至675 cm]頻率範圍内 測定紅外（1R)吸收光譜。如在實例6中所製備結晶游離驗試 樣之代表性IR吸收光譜示於圖5中且峰值列表提供於下^ 143184.doc •65- 201014830 中ο 位置 強度 694.9 88.819 758.6 67.649 799.4 84.900 869.2 88.068 897.6 88.599 1062.3 79.779 1106.9 89.114 1132.9 74.282 1172.6 79.946 1198.4 78.901 1253.9 64.801 1357.1 68.642 1407.6 70.163 1430.2 66.601 1460.1 66.434 1482.5 59.454 1500.0 55.792 1550.9 55.792 1642.8 54.005 1709.1 62.016 1943.8 82.854 2526.7 78.079 2871.6 76.953 2957.6 68.117 3323.5 87.685 在 3324士1 、 2958土1 、 2872士1 、 2527土1 、 1709±1 、 1643士 1 、 1551士 1 、 1500 士 1 、 1357 士 1 、 1254士 1 、 1133土 1 、 143184.doc -66- 201014830 1062士 1、869±1、799±1、759士1、及 695±1 cm·1 下觀測到 顯著吸收帶。 實例11 固態穩定性評估 將若干如在實例7中所製備結晶游離鹼試樣（各自為約 100 mg)在5°C (密閉容器）、25°C (密閉容器）及40°C (密閉容 器）下儲存於多個瓶中。藉由下列HPLC方法以具體間隔分 析代表性瓶之整個内容物： ⑩管柱：Agilent Zorbox SB-C18，4.6 X 250 mm，5 μιη (部 件號 880975-902)。移動相 A: 80% Η20, 20% MeCN, 0.01% TFA。移動相 B: 80% MeCN, 20% H20，0.01% TFA。流 速：1 mL/min。注射體積：20 μ!·/。檢測器：250 nm。 製備作為在100% MeCN中之0.2-0.5 mg/mL儲備溶液（視 溶解性而定）的試樣以供注入HPLC中。 藉由HPLC面積百分比（％ AUC)測定該等試樣之純度。 在將於全部條件下保持之結晶游離鹼試樣儲存28天後，在 化學純度方面無可檢測變化且在該材料之外觀方面無可觀 測變化。 舉例而言，如在下文中所示，在40°C下儲存28天後，在 該結晶游離鹼之化學純度方面無可檢測變化，而非晶型游 離鹼及TFA鹽（二者均按照在實例1中所述製得）的確顯示純 度下降。 143184.doc -67- 201014830 材料 在0時之 純度 在40°C下7天 後之純度 在40°C下14天 後之純度 在40°C下28天 後之純度 結晶游離鹼 98.5 98.4 98.3 98.4 非晶型游離鹼 97.5 86.8 82.4 n.d. 非晶型TFA鹽 97.7 73.5 62.2 47.1 n.d.=未量測此試樣 檢驗1 八^及AT2放射性配體結合檢驗 此等活體外檢驗用於評估測試化合物結合A。及AT2受 體之能力。 自表現人類ΑΤ^或AT2受體之細胞製備膜 使分別表現選殖人類AT,或AT2受體之中國倉鼠卵巢 (CHO-K1)衍生細胞系在5% c〇2加濕培養箱中在37°C下於 補充有10%胎牛血清、10 pg/ml青黴素/鍵黴素及500 pg/ml 遺傳黴素之HAM's-F12培養基中生長。表現AT2受體之細 胞於另外存在100 nM PD 123,319 (AT2拮抗劑）時生長。當 培養物達80-95%融合時，將該等細胞在PBS中充分洗滌並 用5 mM EDTA提取出來。將細胞藉由離心來沉降並在 MeOH-乾冰中快速冷凍且在-80°C下儲存直至進一步使 用。 對於膜製備而言，將細胞沉降物重新懸浮於溶胞緩衝液 (25 mM Tris/HCl pH 7.5，在 4°C 下，1 mM EDTA及一片完 全蛋白酶抑制劑混合錠劑及2 mM EDTA/50 mL緩衝劑 (Roche目錄號1697498，羅氏分子生化公司（Roche 143184.doc •68- 201014830

Molecular Biochemicals)，Indianapolis，IN))並使用裝配緊 密的當斯（Dounce)破璃均質器〇 〇次衝程）在冰上勻質化。 將該勻漿在lOOOxg下離心，將上清液收集起來並在2〇,〇〇〇 xg下離心。將最終沉降物重新懸浮於膜緩衝劑（75 mM Tris/HCl pH 7.5, 12.5 mM MgCl2, 0.3 mM EDTA, 1 mM EGTA，250 mM蔗糖，在4°c下）中並藉由經由20 G號針頭 擠出來勻質化。藉由在 Bradford (1976) 72:248-54中所述方法來測定該膜懸浮液之蛋白濃度。將膜 在MeOH-乾冰中快速冷凍並在_8〇。(：下儲存直至進一步使 用。 測定化合物對人類at1&at2血管緊張素 受體親和性之配體結合檢驗 在96-孔Acrowell過濾板（Pall公司，目錄號5020)中以100 μί總檢驗體積在檢驗緩衝液（5〇 mM Tris/HCl pH 7.5，在 20°C 下，5 mM MgCl2, 25 μΜ EDTA，0.025% BSA)中對 0.2 pg膜蛋白（針對含有人類八丁丨受體之膜）或2 pg膜蛋白（針對 含有人類AT2受體之膜）實施結合檢驗。使用N-末端經銪標 記之血管緊張素-11([£11]入11§11，11-(£11-]^1)-入11乂-八3卩-八1§· Val-Tyr-Ile-His-Pro-Phe-OH ； PerkinElmer » Boston > ΜΑ) 在8種介於〇. 1 ηΜ至30 ηΜ間之不同濃度下實施測定該配體 之L數值的飽和結合研究。用[Eu]AngII在2 ηΜ及11種介 於1 ρΜ至10 μΜ間之不同濃度下實施置換檢驗以測定測試 化合物之pKi數值。將藥物溶於DMSO中達1 mM濃度且自 此開始在檢驗緩衝劑中進行系列稀釋。在10 μΜ未標記血 143184.doc -69· 201014830 管緊張素-II存在下測定非特異性結合。將檢驗物在黑暗中 於室溫或37°C下培育120分鐘且藉由經由Acrowell過濾板 快速過濾來終止結合反應，繼而使用Waters多孔過濾器用 200 μι冰冷洗滌缓衝劑（50 mM Tris/HCl pH 7.5在4°C 下 ’ 5 mM MgCl2)洗滌3次。將板輕輕拍打至乾燥並與50 μΐ DELFIA增強溶液（PerkinElmer，目錄號 4001-0010)—起在 室溫下於振盪器上培育5分鐘。立即藉助Fusion平板讀數 器（PerkinElmer)使用時間解析螢光（TRF)來定量結合過濾 材料之[Eu]AngII。藉由非線性回歸分析利用GraphPad Prism軟體包（GraphPad軟體公司，San Diego，CA)使用針 對單位點競爭之3參數模型來分析結合數據。確定 BOTTOM(曲線最小值）為非特異性結合之數值，如在1〇 μΜ血管緊張素-II存在下所測定。自觀測得IC5Q數值及[Eu;| Angll之Kd數值根據闌述於Cheng等人（1973)价odew 户/mr則cM22(23):3099-l〇8 中之 Cheng-Prusoff 等式來計算 藥物之Ki數值。將測試化合物相對於AT2受體對AT丨受體之 選擇性計算為比率AH/ATiKi。測試化合物之結合親和 性表達為Ki數值之底數為1〇的對數之負值（pKi)。 在此檢驗中’較高pK,數值表示測試化合物對所測試受 體具有較高結合親和力。發現實例1之化合物具有大於約 7.0之pKi數值。 檢驗2 定量對人類及大鼠NEP以及人類ACE抑制效力（IC50)之活遂 外檢驗 143184.doc -70· 201014830 使用如下文所述活禮方獪發測定化合物對人類及大鼠 NEP以及人類血管緊張素轉化酶（ACE)之抑制活性。 活性NEP自大鼠腎臟中之提取 自成年斯普拉·道來氏（Sprague Dawley)大鼠之腎臟製備 大鼠NEP。將整個腎臟在冷PBS中洗滌並以5 mL緩衝劑/克 腎臟之比率置於冰冷溶胞緩衝液（1% Triton X-114，150 mM NaCl, 50 mM Tris pH 7.5 ； Bordier( 1981) J. Biol. CAd 256: 1604-1607)中。使用波利楚（polytron)手持式組 織礙磨機在冰上勻質化試樣。將勻漿在吊桶式轉頭中在 1000 X g下於3°C下離心5分鐘。將沉降物重新懸浮於20 mL 冰冷溶胞緩衝液中並在冰上培育30分鐘。隨後將試樣（15-20 mL)鋪層於25 mL冰冷緩衝液層（6% w/v嚴糖，50 mM pH 7.5 Tris，150 mM NaCl，0.06%, Triton X-114)上，加熱 至37°C (3-5分鐘）並於吊桶式轉頭中在lOOOxg及室溫下離心 3分鐘。吸出兩個頂層，留下含有豐富膜部分之黏性油狀 沉澱。添加甘油達50%濃度並將試樣儲存在-20°C下。使用 BCA檢測系統用BSA作為標準物來定量蛋白濃度。 酶抑制檢驗 重組人類NEP及重組人類ACE可購得（R&D Systems， Minneapolis, MN，目錄號分別為 1182-ZN及 929-ZN)。對 人類NEP及ACE檢驗使用螢光肽底物Mca-BK2 (Mca-Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-Ala-Phe-Lys (Dnp)-OH ; Johnson等人 (2000) 乂加/. 286: 112-1 18)且對大鼠NEP檢驗使 用 Mca-RRL (Mca-DArg-Arg-Leu-(Dnp)-OH; Medeiros 等人 143184.doc -71 · 201014830 (1997) «/. Λ/^ί/· Βίο/. jRes. 30:1 157-1 162)(兩者均來自

Anaspec, San Jose, CA) ° 將測試化合物在檢驗缓衝劑中稀釋成12種介於10 μΜ至 20 ρΜ間之濃度。藉由向該12種濃度之12.5 pL測試化合物 各自中添加25 μι酵素來開始檢驗。在添加12.5 μΐ^螢光底 物以開始該反應之前使測試化合物與酵素平衡1 〇分鐘。藉 由在培育20分鐘後添加1〇 pL 3.6%冰醋酸來終止反應。 對於含有疏基之測試化合物而言，可在含有4〇〇 μΜ濃度 之氫氣酸叁（2-羧基乙基）膦（Thermo Scientific, Rockford， ❺ IL) (TCEP)之檢驗緩衝劑中稀釋該等測試化合物。隨後使 該等測試化合物在室溫下還原40分鐘，然後添加酵素。使 測試化合物與酵素平衡20分鐘，然後添加螢光底物。按照 上文所述終止反應。 藉助螢光計在激發波長及發射波長分別設定為32〇 405 nm時讀取平板。根據在分別使用三種標準nep及ace 抑制劑時之平均高讀數（無抑制，100%酵素活性）及平均低 讀數（完全抑制，最高抑制劑濃度，0%酵素活性）將原始數 參 據（相對螢光單元）歸一化為％活性。使用一個位點競爭模 型（GraphPad軟體公司，San Diego，CA)實施歸一化數據 之非線性回歸。將數據報告為pICso數值。發現，實例1之 化合物具有大於或等於約7·0之pIC5G數值。 儘管已參考本發明之特定態樣或實施例來描述本發明， 仁彼等此項技術之普通技術人員應理解，在不偏離本發明 之真實精神及範圍的情況下可進行各種改變或可取代等效 143l84.doc -72· 201014830 内容。另外，根據適用專利法及條例所允許的程度，本文 所引用的所有出版物、專利及專利申請案均全文以引用方 式併入本文中，其併入程度如同每一文件均單獨地以引用 方式併入本文中一般。 【圖式簡單說明】 參照附圖來闡明本發明之各個態樣； 圖1顯示式I化合物之結晶型的粉末X射線繞射（PXRD)圖 案； ® 圖2顯示式I化合物之結晶型的示差掃描熱量測定（DSC) 溫度記錄圖； 圖3顯示式I化合物之結晶型的熱重分析（TGA)追蹤圖； 圖4顯示式I化合物之結晶型的動態水分吸附（DMS)曲線 圖； 圖5顯示式I化合物之結晶型的紅外（IR)吸收光譜；及 圖6係式I化合物之結晶型的微顯影圖像。 143184.doc -73-

Claims (1)

1. 201014830 七、申請專利範圍： 1. ~~種4'-{2-乙氧基-4-乙基- 5- [((iS)-2 -疏基-4-曱基戊酿基胺 基）甲基]咪唑-1-基甲基}-3'-氟聯苯基-2-甲酸之結晶游離 鹼，其特徵在於粉末X射線繞射圖案包含在6.66士0.20、 9.8±0.20及18.12±0_20之2Θ值下的繞射峰。 2. 如請求項1之化合物，其特徵在於具有一個或多個在選 自下述之2Θ值下的額外繞射峰：12.68±0.20、 13.54±0.20 、 15.02±0.20 、 19.32±0.20 、 21.20±0.20 、 φ 22.62±0.20 、24.56±0.20 > 25.30±0.20、25.96土0.20、及 27.32土0.20。 3. 如請求項1之化合物，其特徵在於在粉末X射線繞射圖案 中峰位置實質上與在圖1中所示圖案之峰位置一致。 4. 如請求項1之化合物，其特徵在於示差掃描熱量測定追 蹤圖具有在約144°C至約148°C範圍内之熔點。 5. 如請求項1之化合物，其特徵在於示差掃描熱量測定追 蹤圖實質上與在圖2中所示者一致。 ❹ 6.如請求項1之化合物，其特徵在於紅外吸收光譜在 3324±1 、 2958±1 、 2872土1 、 2527士1 、 1709土1 、 1643±1 、 1551士1、1500土1、1357±1、1254±1 ' 1133±1 ' 1062±1、 869±1 、799±1 、759±1 、及 695±1 cnT1 下具有顯著吸欠 帶。 7. 一種醫藥組合物，其包含醫藥上可接受之載劑及如請求 項1之結晶化合物。 8. 如請求項7之醫藥組合物，其進一步包含選自下述之第 143184.doc 201014830 二治療劑：利尿劑、（3〗腎卜始主从 h腎上腺素能受體阻斷劑、辦 阻斷劑、血管緊張素轉 ^ 酶抑制劑、AT丨受體拮抗劑、 腎胰島素殘基溶酶抑制劑'非類固醇抗炎劑、前列腺 素、抗脂質藥劑、抗糠尿病藥劑、抗血栓形成劑、腎素 抑制劑、时縮血管狀受體拮抗劑、时縮i管肽轉化 酶抑制劑、搭_拮抗劑、血管緊張素轉化酶/腎胰島素 殘基溶酶抑制劑、及其組合。 9. 一種用於製備如請求項1之結晶游離驗的方法，其包 含： Θ⑴用丙_理4’_{2_乙氧基_4_乙基_5侧_2_疏基 4-甲基戊醢基胺基)甲基]咪唾小基甲基}_3，氟聯苯二 甲酸，使之完全溶解；或⑴)用乙腈處理4，-{2_乙氧基_4_ 乙基-5-[⑽-2-巯基_4_甲基戊醯基胺基）甲基]味唾二基 甲基}-3’-氟聯苯基·2_甲酸，使之完全溶解；或（出）在$ 醇中脫除4 ]5-[(⑻-2-乙醯基硫烧基_4_甲基戊醯基胺 基）甲基]-2-乙氧基_4_乙基味唾一基甲基}_3,·氣聯_ 2-曱酸之保護基，並添加水，使之完全溶解； 土 b)冷卻，以進行結晶；及 C)分離所得固體，產生如請求項1之結晶游離鹼。 10. —種藉由如請求項9之方法製備的產物。 種純化4 - {2-乙氧基_4_乙基_5_[(〈幻-2-疏基-4-甲基戊醢 .基胺基）甲基]咪唑_丨_基甲基}_3，_氟聯苯基_2_甲酸之方 法’其包括形成如請求項1之結晶游離鹼。 12. —種藉由如請求項n之方法製備之產物。 143184.doc 201014830 13. —種如請求項1之結晶游離鹼的用途，其用於製造藥 品° 14. 如請求項13之用途，其中該藥品用於治療高血壓或心臟 衰竭。

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