TW200938634A - Pancreatic islet cell preparation and transplantation - Google Patents

Description

200938634 六、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明大體係關於胰島移植領域，且更特定言之，係關 於用於改良胰島細胞之分離、存活力及移植的新穎組合物 及方法。 【先前技術】 在不限制本發明之範_之情況下，結合胰島移植來描述 本發明之背景。 胰島細胞移植可用於恢復1型（青少年）糖尿病之胰島素 產生及血糖控制。目前結果及毒性並未驗證廣泛應用，但 兩者之改良可服從於此技術之臨床（並非實驗）應用且可使 其成為1型糖尿病之較佳及主要治療。 一種此類方法可見於頒予Habener等人之美國專利第 6,923,959號中’其為針對在器官移植前預先誘發免疫耐受 狀態之方法。簡言之，描述使用能分化成多種胰島細胞 (包括產生胰島素之β細胞）以及肝細胞之新鑑別之幹細胞來 治療I型胰島素依賴型糖尿病及其他病狀之組合物及方 法。巢蛋白已經鑑別為胰臟幹細胞之分子標誌，而細胞角 蛋白-19充當獨特類別之胰島管細胞之標誌。已描述可將 巢蛋白陽性幹細胞自胰島分離且培養以獲得其他幹細胞或 偽胰島樣結構之方法。揭示用於離體分化胰臟幹細胞之方 法》已描述可將胰臟肝細胞分離、擴展且移植（同種異體 移植、同源移植或異源移植）入有需要之患者體内以提供 喪失或損壞之胰島素分泌細胞或其他細胞之替代物的方 137953.doc 200938634 法0 另一種增加用於移植之組織的存活力之方法教示於頒予

Cochrum等人之美國專利第5,578,314號中，其揭示用於移 植之生物組織的多層海藻酸鹽塗層β簡言之，已教示用於 移植之生物組織及細胞的多層塗覆法，其中對細胞或組織 移植物塗以多個經純化海藻酸鹽塗層。該方法包括塗覆以 二價陽離子膠凝之海藻酸鈉的第一塗層，隨後以锶、鋇或

其他二價陽離子進行可選處理，將經單層塗覆之液滴再懸 浮於海藻酸鈉中且經由將二價陽離子自單個塗層交換或擴 散至周圍可溶性海藻酸鹽中，移除過量塗層且以二價陽離 子膠凝剩餘可溶性海藻酸鹽薄層，而在第一塗層周圍形成 光暈層。經塗覆之移植物具有獨特結構，丨中生物組織或 細胞核覆蓋有第一海藻酸鹽塗層，該層環繞有經外部塗層 覆蓋之中間光暈層。

Goto等人申請之美國專利申請案第2〇〇8〇〇〇9〇6ι號係針 對保存騰島之方法、保存騰島之容器及移㈣島之套組。 簡口之4 呆存姨島之方法包括保存姨島之容器及移植姨島 之套組以有效保存胰島。

Brand等人中sf之美國專利中請案第細⑽丨奶職係針 對糖尿病治療’其中提供利用持續釋放傳遞及局部傳遞至 目標器官之調配物、裝置及方法進行胰㈣生療法之組合 ，方法該胰島新生療法包含補充胃泌素（gastrin)/ccK 文體配位體之因子群的一員。 【發明内容】 137953.doc 200938634 本發明用於特定藉由以下步驟改良胰島異體移植之結 果：（a)在接受者體内藉由投予阿那白滞素（Anakinra)(重組 人類介白素 1受體拮抗劑，例如Kinert®)阻斷移入期之介 白素-1活化來保護胰島使其免於發炎引起的破壞，（b)藉由 管注射ET-Kyoto溶液來增加自供體胰臟獲得之胰島的產 量，及/或（c)藉由在胰臟消化期間使用胰蛋白酶抑制劑（例 如，烏司他丁（ulinastatin))產生的胰蛋白酶抑制來增加自 供體胰臟獲得之胰島的產量。 ❹ 更特定言之，本發明包括製備可移植胰島製劑之組合物 及方法’該方法包括採集供體胰臟；將ET_Ky〇t〇溶液或其 相等物注射入胰管中；分離胰臟β胰島細胞；及在胰島移 植時以人類介白素_ 1拮抗劑治療患者。在一實施例中其 中以合適膠原蛋白酶（例如人類膠原蛋白酶）處理胰臟ρ騰島 細胞。在一特定實例中’自胰臟提取胰島後將其在ΕΤ_ Kyoto溶液中處理。在一態樣中，人類介白素丨拮抗劑係 ❿ 選自：一或多種介白素·1β(ΙΙΜβ)基因轉錄之修飾劑；一 或多種IL-Ιβ基因轉譯之修飾劑；一或多種靶向ILip表現 之siRNA ; —或多種比·…受體阻斷劑；一或多種介白素^ 受體括抗劑蛋白f ; 一或多種介白素-1受趙拮抗劑肽；一 或多種改良IL-Ιβ釋放之活性劑；一或多種中和IL“p之抗 體；一或多種阻斷IL-Ιβ受體之抗體；一或多種重組之天 然存在之IL-Ιβ受體拮抗劑；抑制ILlp釋放之一或多種陰 離子運送抑制劑、脂氧素（lip〇xin)及…生育給；一或多種 抑制將無活性仄-0前驅物轉化為其成熟活性形式之蛋白 137953.doc 200938634 水解酶的類鴉片物質；一痞客接ττ 次多種中和1L-Ιβ生物功能之抗 體，其混合物及組合。在一牲金杳 ^特疋實例中，IL-Ιβ拮抗劑為 阿那白滯素〇該方法可進一 ^步包括同時向患者提供選自基 因轉錄抑制劑、失活腫瘤壞死因子、腫瘤壞死因子受體阻 _及可溶性腫瘤壞死因子受體之腫瘤壞死因子拮抗劑。 本發明之另-態樣為製備可移植騰島製劑之方法，該方 '法包括以下步驟：採集供體之騰臟；將打^_容液或其 ㈣物注射入胰管中；在胰蛋白酶抑制劑存在下自所採集 發之騰臟分離胰臟β胰島細胞；及在肤島移植時以人類介白 素-丄括抗劑處理患者。肤蛋白酶抑制劑之實例包括血清α-1抗姨蛋白酶、利馬豆（lima bean)騰S白酶抑制劑、孔尼 兹抑制劑（Kunitz inhibitor)、類印黏蛋白（〇v〇muc〇id)抑制 劑或大豆抑制劑。 本發明之另一實施例為藉由採集供體之胰臟；在胰蛋白 酶抑制劑存在下自所採集之胰臟分離胰臟P胰島細胞；及 _ 在胰島移植時以人類介白素-1拮抗劑及腫瘤壞死因子拮抗 劑治療患者來製備可移植胰島製劑之方法。 【實施方式】 為更完全瞭解本發明之特徵及優勢，現參考本發明之 [實施方式]以及隨附圖式加以說明。 儘管下文詳細論述本發明各種實施例之製造及使用，但 應瞭解本發明提供許多可應用之本發明概念，其可在多種 特定情形下實施《本文所述之特定實施例僅說明製造及使 用本發明之特定方式且不限定本發明之範疇。 137953.doc 200938634 為便於理解本發明，下文定義多個術語。本文所定義之 術語具有一般熟習本發明相關領域之技術者通常瞭解之含 義°諸如"一"及"該，'之術語不欲僅指單數實體，而是包括 可用於說明之特定實例的一般類別。本文之術語係用於描 述本發明之特定實施例，但除非申請專利範圍中說明，否 則其使用不限制本發明。 ❹

縮寫清單 2-D 二維 ABO 血型系統(A、B、AB及〇) AE 不良事件 AIDS 後天免疫缺乏症候群 ALT 丙胺酸轉胺酶 ANC 絕對嗜中性白血球計數 AST 天冬胺酸胺基轉移酶 BCC 基底細胞癌 BUMC 貝勒大學醫藥研究中心 (Baylor University Medical Center [Dallas]) BUN 血腺氮 CBC 全血細胞計數 CFR 美國聯邦法典(Code of Federal Regulations) CMP 完全新陳代謝檢驗 CRF 個案報告表 DL 分升 DM 糖展病

Mg 鎂 mg 毫克 mL 毫升 mm 毫米 mm3 立方毫米 MMF 黴酚酸酯(CellCept) Na 鈉 NCI 美國國家癌症研究所 (National Cancer Institute) ng 毫微克 OGTT 經口葡萄糖耐量測試 PA 後前位 PAK 胰臟在腎臟後移植 PCP 卡氐肺孢子蟲肺炎 (Pneumocystis carinii Pneumonia) PO 經口 PPD 經純化蛋白質衍生物 PRA 群體反應性抗艎 137953.doc 200938634

❷ DRI 糖尿病研究機構[Miami] EBV 艾伯斯坦-巴爾病毒(Epstein Barr Virus) EU 肉毒素單位 FDA 食品及藥物管理局 Fr 法國 G 線規 g 公克 GFR 腎小球濾過率 Glofil 碘酞GFR評估 Hb 血色素 HbAlc 血色素Ale HBsAg B型肝炎表面抗原 HBV B型肝炎病毒 HCV c型肝炎病毒 Hg 汞 HIV 人類免疫缺陷病毒 HLA 人類白血球抗體 HTLV-I 人類嗜T淋巴細胞病毒I HTN 面血壓 ICT 胰島細胞移植 ICU 重症加護病房 IE 胰島當量 IgG 免疫球蛋白G IgM 免疫球蛋白Μ IND 新藥臨床研究 INH 異煙肼鹽酸鹽 IRB 倫理審查委員會 PSA 前列腺特異性抗原 ΡΤ 凝血酶原時間 ΡΤΑ 單獨胰臟移植 ΡΤΤ 部分凝血酶時間 PV 門靜脈 RBC 紅血球 SAE 嚴重不良事件 see 鱗狀細胞癌 SIR 西羅莫司(Sirolimus) SPK 同時胰臟-腎臟移植 TAC 他克莫司(Tacrolimus， Prograf) TB 結核病 TC 總膽固醇 TGC 甘油三酯 UNOS 器官共享聯合網路 uw 威斯康星大學(University of Wisconsin) WBC 白血球 137953.doc 200938634 ιυ 國際單位 IV 靜脈内 IVGTT靜脈内葡萄糖耐量測試 K 鉀 kg 公斤 LDL 低密度脂蛋白 LFT 肝功能測試 MAGE血糖振動幅度之平均振幅 1型糖尿病（DM)為具有重大社會及經濟影響之疾病。該 φ 疾病在美國的流行率約為120,000個19歲或19歲以下之個 體及300,000至500,000個所有年齡段個體且全世界為 150,000,000例。美國每年診斷出30,000個新病例。DM在 美國為兒童的最常見慢性病之一 1。此疾病在美國之治療 成本及併發症成本為每年900億美元。 本發明之新穎特徵包括：（a)在胰島細胞移植接受者中使 用介白素-1阻斷劑，（b)在器官獲得時藉由使用保存溶液 ET-Kyoto來管式保存供體胰臟，及/或（c)在供體胰臟消化 ® 期間使用胰蛋白酶抑制。ET-Kyoto溶液及其改質形式包括 在各種壓力條件下使細胞膜穩定之海藻糖作為非還原性二 ^ 醣。ET-Kyoto溶液之兩個變體具有不同電解質含量，例如

Na 100 mmol/L、K 44 mmol/L(所謂胞外”溶液）及"胞内型” IT-Kyoto溶液，例如 Na 20 mmol/L、K 130 mmol/L，其中 海藻糖為35 gr/1。完整溶液概述於表1中。 137953.doc 200938634 表1.保存溶液。 溶液 E-C C-S UW LPD- G ET- Kyoto IT- Kyoto n£t- Kyoto C Na+ 10 17 30 165 100 20 107 100 K+ 115 115 125 4 44 130 44 15 Mg++ 5 5 5 2 - - - 13 Ca-H- - - - - - - 0.25 Cl- 15 15 - 101 - - - _ co3h- 10 10 - - - - - P04H2- 58 58 25 36 26 25 25 - S〇4= 5 5 5 - - - - 葡萄糖 195 - - 56 - - 葡萄糖酸盥 - - - 100 100 100 - 乳糖酸鹽 - - 100 - - - - 80 腺苷 - - 5 - - - - 1 麩胺醢胺 - - 3 - - - 1 嘌呤酵 - 1 - - - - 1 海藻糖 - - - - 120 - 120 - 棉籽糖 - 30 - - - - - 葡聚糖40(g/L) _ 20 _ - - 甘露糖醇(g/L) - 37,5 - - - 60 EDTA(g/L) - 0,075 - - - - HES(g/L) -' - 50 - 30 30 30 NAC - - - - _ 10 Db c-AMP - - - 2 _ 硝化甘油 - - - - - 0,44 - pH值 7,4 7,4 7,4 7,4 7,4 7,4 7,4 7,3 容積滲透濃度 (**) 355 420 325 335 370 370 600 360 E-C : Euro-Collins。C-S : Collins-Sacks。UW :烕斯康辛大學_Beiteer。LpD_G :低 钟葡聚糖-葡萄糖。ET-K :胞外型Kyoto。ΙΤ-Κ :胞内型Ky〇t〇。nET-K :新ET-K ; C . Celsior。EDTA ·乙二胺四乙酸》HES :經乙基狹粉。nac : N-乙酿半脱胺酸。 Db c-AMP :二丁基環AMP。所有浪度以mMol/L計，（*) gr/L除外。（**)容積滲透濃 度表示為Osm/L。 137953.doc -10- 200938634 a膦蛋白酶抑制劑實例包括（但不限於）血清α-l抗胰蛋白 酶利馬且胰蛋白酶抑制劑、孔尼茲抑制劑、類卵黏蛋白 抑制劑或大豆抑制劑。 迄7為止，沒有機械裝置能根據患有DM之患者體内的 i糖含量有效調整所注射胰島素之劑量。此導致次佳糖控 制’及有危險的低血糖事件。

I 胰臟移植·效益。胰臟移植為1型DM之充分確立之治 療其係伴隨腎臟移植[同時胰臟及腎臟移植（SPK)]、在腎 移植後[胰臟在腎臟後"（PAK)]或單獨胰臟移植（pTA)進 行。同時胰臟及腎臟移植1999年在美國佔移植胰臟的 75 /。，且保留所選程序以供處理其他適合歲以下具有腎 衰竭之1型糖尿病患者2。佔總數10%以下的PTA適應症問 題較小，但包括必須護理者一直在場的威脅生命之無症狀 低血糖及铋襲性糖尿病性神經病。無症狀低血糖之緩解為 接受終生免疫抑制之風險的最令人信服之理由。認為同一 參組選用於PTA之患者為分離胰島細胞移植的適當候選者。 胰臟移植的主要成就為胰島素獨立性及避免、暫停或減 輕一些於DM有關之併發症。受益於成功胰臟移植的生活 方式不成問題，且可實現長期血糖量正常μ。或許關於糖 尿病次級併發症的最大效益為自主及周邊神經病之改良； 心臟功能較佳使得患者存活率較佳6 ^不僅神經傳導速度 得以改良（表明神經鞘内的神經元修復），而且神經傳導幅 度亦得以改良（表明軸突再生）7。然而，移植必須發生於開 始重度感覺運動神經病之前以便患者獲得效益。一般而 137953.doc 200938634 言，糖尿病性視網膜病在移植後未獲改良，因為90% SPK 患者在移植時已具有永久損傷8。 胰臟移植-發病率及死亡率。胰臟移植為充分確立之手 術程序。認為其為與發病率及死亡率有關的主要手術程 序。額外發病率及死亡率係與固有免疫抑制療法有關。所 用技術需要整體移植具有内分泌及外分泌組份的完整胰臟 器官以及十二指腸環路。 與手術程序有關之特定併發症為感染性及代謝性血管吻 合瘺。其可導致死亡、重複手術及移植失敗9。最近資料 表明技術失敗率對於SPK而言為約8%，對PAK而言為13% 且對PTA而言為11%。移植物血栓形成（通常靜脈）在2-14〇/〇 的病例中發生，導致早期移植失敗10。 特定併發症與同種異體移植物：腸或膀胱的腸道引流術 類型有關。對於膀胱引流術而言，併發症包括術後立即血 尿、尿漏、尿液反流胰腺炎、液體及碳酸氫鹽由外分泌胰 臟分泌進膀胱引起的代謝性酸中毒及脫水，及由於外分泌 胰腺酶對膀胱及尿道上皮細胞之作用引起的無菌性膀胱 炎。在8%至23%病例中，此等併發症必需手術轉化為腸引 流n。對於腸引流而言’主要併發症為腹内形成膿腫之腸 道吻合瘺，潛在地引起敗血症、多器官衰竭及死亡。上文 提及之大量併發症係與所移植胰臟或所移植十二指腸環路 之外分泌部分有關。儘管通常使用強免疫抑制，但胰臟移 植後的排斥率約為30% ’其中移植失敗率為1〇%。UNOS記 錄之全國移植存活率為88.5%(3個月），80〇/〇(1年），52.9%(3 137953.doc 12 200938634 年）及40.7%(5年）。腎臟·胰臟 移植的結果較佳（分別為 87.7%、83.8%、77.2%及 67.5%)。10年期間（1991-2000)， 每年死亡率範圍為每1000名胰臟移植患者中死亡36.3至 82·3例’及每100〇名腎臟騰臟移植患者中死亡31.1至63.2 例12。

I 胰島細胞移植-全器官胰臟移植的替代。全器官胰臟移 植的新興替代為胰島細胞移植（ICT)。該方法係基於自由 屍體供體獲得之器官酶促分離郎格罕氏（Langerhans)胰島 ’將獲得之胰島經門靜脈系統之經皮導管插入注射至 接受者肝臟中16。此程序允許避免開放性手術以及移植十 二指腸及外分泌胰臟及其相關發病率來選擇性移植產生胰 島素之細胞群。 胰島細胞移植中目前存在兩個趨勢，使用立即輸注法及 延遲輸注法。立即移植關注於在胰島分離及胰島輸注之間 使用最短可能時間。一替代方法包含在分離之後且在移植 〇 之别紐期培養胰島。此確保增加胰島分離物之純度，同時 其不I響胰島之存活力及功能且看似產生良好結果，而該 程序係在半選擇性環境中進行^s。 嘗試在不同解剖部位移入胰島細胞19·21。目前，門靜脈 目2相對容易進人、肝臟的雙重循環系統（動脈及門靜脈） 的南靜脈血流而為較佳輸注部位。肝臟具有良好再生能力 且為胰島素作用的主要部位之一。肝臟部位亦看似賦予胰 島一些免疫特權❶當與全器官胰臟移植比較時，ICT具有 降低之手術風險，較快速且較便宜，作為門診患者程序進 137953.doc -13· 200938634 行且因此獲得良好患者接受度。 ICT的初始努力僅具有平常結果。免疫抑制方案類似於 實體器官移植中所用的方案，其基於高劑量之類固醇及鈣 調神經磷酸酶抑制劑，兩種藥劑均具有致糖尿病作用22。 結果以胰島操作中之改變丨3,丨5及免疫抑制改變而得以顯著 改良，因此避免較高劑量的類固醇且使用由University of

Alberta(Edmonton，Canada)之研究組發起的西羅莫司 (sirolimus)、他克莫司（tacr〇limus)及達利珠單抗 (dacluzimab)。其方案一般需要兩次胰島細胞輸注以獲得 實現胰島素獨立性必需之臨界細胞質量。治療中之改變適 用作"艾德蒙頓方案（Edmonton Protocol)"，其在全世界若 干移植中心使用16, 23 艾德蒙頓組的最近報導顯示，65名 患者已在此中心接受胰島移植且44名患者變得具有胰島素 獨立性。在隨後5年，約80°/。顯示存在表明所移植胰島起 作用的C肽，然而僅約10〇/。仍無胰島素。USA的其他中心 已報導類似結果25。在此領域中的另一新近進展中，明尼 蘇達組（Minnesota group)已展示自單獨供體胰臟分離之胰 島的邊緣劑量足以在受嚴重影響的j型糖尿病患者體内實 現胰島素獨立性26。 與該程序有關之發病率包括與肝穿刺、門靜脈插管及肝 功能測試（LFT)升高有關之併發症。與肝穿刺有關之併發 症為囊下或腦實f内出血、腹膜内出血（累_率：4%必 需輸血）、膽囊穿孔（2%)、膽漏（1%)β氣胸及/或血胸極少 見。已報導在肝臟中形成脂肪塊（脂肪變性尸、藉由使用較 137953.doc 200938634 小導管及使用超音引導進入門靜脈24及使用纖維蛋白膠閉 合肝臟中的穿刺孔可能會降低此等併發症之發生率。門靜 脈插管及輸注之併發症包括門靜脈支路血检形成（2%)及部 分微小門靜脈血栓形成（2%)。在系列報導中，其均不必需 手術或另一侵入性程序。 « , [FT的瞬時升高為常見的（病例的93%)，高達46%患者發 . 展出顯著升高（AST兩倍於基線或更高），但水準一般在移 植兩週内回復至正常28。該程序期間遭遇疼痛，主要因為 肋間進入及門靜脈壓升高》該程序後疼痛不常見29 ^ 供體因素包括年齡、先前存在之胰島損壞性外傷未辨 識之DM、澱粉狀蛋白、脂肪滲透、長期ICU居住、血液動 力學穩定性及變力藥物需求。獲得之器官的品質為重要 的，包括避免熱缺血及胰囊損傷。 使用正規運送介質的冷缺血時間（供體橫斷鉗閉與開始 分離之間)應不超過8 h。此包括供體胰臟在浸泡於威斯康 瘳 I大學（UW)溶液中時的運送及儲存。新穎器官保存方法 使用兩層保存技術Μ。此涉及使用兩種溶液，威斯康星大 學（UV)溶液及全氟十氳萘。全氟十氫萘為具有儲存氧且將 其緩慢傳遞至所儲存器官之能力的全氣碳化物，因此保存 對於器官儲存環境中的細胞存活力重要的細胞Ατρ含量。 兩層技術允許較長冷缺血時間’而在比較在⑽溶液中儲 存6-8 h與使用兩層法之至多24 h儲存時具有相等結果3〇。 影響臨床級胰島分離之因素包括：最佳酶批次1S、過程中 的溫度控制、試劑品質及胰島培養。吾人先前已展示以具 I37953.doc 200938634 有烏司他丁（ulinastatin)之M-Kyoto溶液保存之肤管32改良 胰管完整性，此對於膠原蛋白酶傳遞而言不可缺少。使用 此技術自無心跳供體成功分離出臨床級胰島32，因此預期 吾人應能夠在本研究中自有心跳供體獲得可移植胰島。 在18-35%所用胰臟中實現臨床級胰島回收。胰島細胞輸 注傳遞正常細胞質量之40-85%，但移入經估算為25-50%29 »因此’在多數狀況中第二次胰島細胞輸注對於實 現胰島素獨立性而言為必要的。所移植胰島的總數影響胰 島素獨立性的實現。就目前分離及保存技術而言，每公斤 輸注總共9000個以上胰島當量與良好移植結果有關ίο ;此 通常藉由使用兩個供體胰臟實現。 接受者因素包括抗凝血及避免細胞因子活化，及避免騰 島細胞毒性或胰島素抵抗之免疫抑制。 用於移植之膦島分離方法在多數中心係在經特定設計之 設備中在清潔環境中使用確定之方案在FDA嚴格監督下進 行。新設備的確定相繼需要大量物質投入及適當驗證過程 且必需熟練技工31。 狹島細胞移植（ICT)的研究焦點集中於研發將最終替代 外科手術胰臟移植的安全且有效之程序以及提供對排斥反 應之安全且有效之預防，同時使不利地影響移植接受者生 活品質之副作用最小化的理想免疫抑制方案。 作為免疫抑制劑的皮質類固醇及高劑量鈣調神經磷酸酶 抑制劑與所移植的胰島衰竭有關且回復為胰島素治療。高 度需要使用提供適當免疫抑制以預防早期及晚期排斥事 137953.doc 16 200938634 件，且使作為免疫抑制劑的類固醇用量以及高劑量之鈣調 神經碟酸酶抑制劑最小化的方案。 在吾人機構中，此研究係作為ICT之艾德蒙頓方案的修 改形式進行。遵循艾德蒙頓方案，其中例外為：a)在移植 . 早期可投予依那西普（Etanercept)及阿那白滯素以使發炎引 起的胰島損失最小，此又將使得胰島移入得以改良；…可 投予抗胸腺球蛋白（Thymoglobulin)替代達利珠單抗進行誘 導，C)可使用斯塔利平（Sitaglipin , Januvia)來增強胰島移 植物功能。文獻中未描述以此方式使用依那西普及阿那白 滞素，且根據吾人的知識，目前在該國的任何胰島細胞方 案中均未應用。然而，預期的副作用毒性較低且由此方法 可獲得潛在相當之免疫效益：亦即，若雷帕黴素 (Rapamycin)或他克莫司劑量具有毒性則能降低此兩種藥 劑的劑量。使用依那西普及阿那白滯素為自艾德蒙頓方案 修改吾人之方案的主要方式之一。 φ 此外，吾人將引入最初在日本研發用於無心跳供體胰臟 的新穎胰島分離方案。特定言之，胰臟獲取時的胰管保 存、胰臟消化期間的胰蛋白酶抑制及胰島友好性純化溶液 應改良胰島之品質及量。 吾人亦增加生活品質詢問表（患者管理），其目標為識別 可改良患者順應性的因素。 胰島培養。儘管一些胰島細胞移植中心仍嘗試在移植前 將細胞培養至多72 h，但共識胰島細胞移植實踐（包括在艾 德蒙頓）仍遵循分離完成且產物釋放測試已令人滿意地完 137953.doc -17- 200938634 成後立刻移植細胞之”即時"模式。本發明方案消除此—需 要，且目的在於在分離及產物釋放測試後儘可能快地 移植。 然而，可能存在需要培養細胞以允許接受者準備，或當 發生意外事件（例如，陽性交叉匹配）時迫使吾人針對所製 備細胞使用替代接受者的狀況》在此等狀況下，細胞培養 將防止浪費所分離之細胞。鑒於該領域一般仍爭論"經培 養”與’’新鮮"胰島之效益，應注意吾人研究群體的即時移 植中與結果尤其相關的任何差異。 研究4 &十。設計開放標記、預期單中心研究來評估患有 1型糖尿病之患者體内胰島細胞移植的安全性及功效。 研究持續時間。在最終移植後患者參與將持續2年（24個 月），且登記期可為約18個月。預期患者登記在2〇〇7年下 半年開始。研究可在最後一名患者接受最終移植24個月後 完成。 個鱧參與持續時間》研究中之個體參與可在最終移植後 歷時24個月的時期◊此外，自研究撤出之患者將繼續被追 蹤歷時研究的整個24個月持續時期。 研九群體.樣本量。此試驗中包括之患者可為丨型糖尿 病的胰島細胞移植候選者。在研究中在單個中心可登記15 名患者。 接梵者納入及排除標準。胰島細胞移植資格係由貝勒地 區移植協會的腎臟及胰臟移植選擇委員會（Kidney and Pancreas Transplant Selection Committee at Baylor 137953.doc ,〇 200938634 g 1 Transpiant institute)決定，類似於全器官胰臟移 植候選者。不符合全器官胰臟移植條件之患者對ict而言 將不合格。針對移植進行評估的過程係在研究登記之前進 行。 納入標準。患者完全知情且其已簽署IRB核可之知情同 意書表格，且願意及能夠跟隨研究程序歷時整個24個月》 1. 持續5年以上的丨型糖尿病 2. 年齡介於18與65歲之間 儘g在如下文定義考慮移植之前，由糖尿病學護理小 組專業管理歷時至少6個月，但仍未穩定控制糖尿 病： a) 過去6個月期間（或在強化糖尿病護理期間广如不 能識別低於5G mg/dL之血糖含量定義的㈣無症狀 低血糖事件，或喪失認知功能之事件；或有症狀低 血糖的頻繁事件，或供認因低血糖或高血糖住院； 及 b) HbAlc>6.5 4. 根據研究員判斷，心理上能遵從 5. 育齡女性患者在住院時或在登記前7天内必需具有陰 性尿或血清姓娠測試且同意在整個研究期間以及研究 完成後6週内採用有效節育控制。 排除標準。 1·患者先前已接受或正接受器官或骨髓移植。 2.已知患者對他克莫司、西羅莫司或過敏。 137953.doc -19- 200938634 3. 患者正懷孕或處於哺乳期（必需提供有效避孕法）。 4. 患者在登記三個月内參與雙盲試驗或參與涉及未市售 (研究）藥物之試驗。 5. 患者在在試驗開始30天内參與涉及市售藥物或輸注裝 置之試驗。 6. 患者展現以下臨床標準中之任一者： --Glofil<60 mL/min

--血清肌酸酐一直大於1.6 mg/dL --體重指數>28 --除BCC及SCC之外的惡性疾病 --肺部感染的放射線照相證據 --由 AST、ALT、Aik Phos.或 T. bili.>2X ULN證實的 肝臟疾病證據。 --活動性感染 --高凝狀態（復發性靜脈血栓形成史，定義為血栓形 成傾向） …出血/凝血病症 --基礎 C 肽 >0.3 ng/mL --HbAlc>12% --胰島素需求 >每天1 IU/kg --對 HIV、HBV、HCV、HTLV-I 呈血清陽性 --Pap塗片異常，活動性婦科感染 --陽性運動或化學耐受性測試 --可排除目前在需要以潑尼松（prednisone)劑量〉每天 137953.doc -20- 200938634 5 mg慢性使用類固醇之醫學病狀治療下之患者。 --物質/酒精濫用 --未治療之增生性糖尿病性視網膜病 --PPD轉化或無INH之陽性PPD --無初級護理醫生或初級護理醫生少於6個月 --最近6個月吸煙

• 異常CBC/血色素<12g/dL --大量白蛋白尿>300 mg/24 h © --未治療之高脂質血症-TC>200 mg/dL，TGC>200

mg/dL，LDL>130 mg/dL --未治療之低鈉血症、低鉀血症、高#5 jk症、低妈 血症 --埃造影劑過敏症 --PSA>4 -PRA>20% --活動性胃潰瘍疾病/膽結石/血·管瘤 --乳房X射線攝影異常 --患者接受第6.8部分中所列之違禁藥物療法中之任 一者。 1 移植前評估：檢驗及測試。所有患者將經歷可接受性的 初步評估。評估後，患者檔案可提交給腎臟及胰臟移植選 擇委員會來決定其對胰島移植程式的合適性。 醫師及其他健康護理專業人員隨訪 --糖尿病專家 137953.doc -21 - 200938634 --移植腎病專家 --心臟病專家 —移植外科醫生 --社會工作者 --移植營養學家 --其他會診根據臨床指標安排。 :實驗室測試 --CBC、CMP、澱粉酶、ΡΤ、PTT、INR、甲狀腺功能 ❹測試(T4、TSH、FT4)

--ABO血型 -PRA --HbAic、C-狀 --脂質組 --尿分析、尿藥物篩選、尿培養 --HBsAg、HCV抗體、CMV IgM及 IgG、EBV、HIV、 HTLV-I、VZV IgG及 IgM --愈創木糞便測試 --24 h尿液微量白蛋白 -Glofil % --PSA(45歲以後的男性患者）

-PPD 成像及其他測試 --胸X射線，PA及側位 --EKG、2-D超音心動圖及壓力超音心動圖測試 137953.doc -22- 200938634 --肝臟夕普勒超音譜圖（D0ppier uitras〇n〇gram) --下肢動脈多普勒研究 --結腸鏡檢查-50歲以後及/或具有陽性愈創木糞便測試 之患者 --乳房X射線攝影（40歲以後的婦女），Pap塗片 --由眼科專家進行眼部檢查以評估與糖尿病有關的眼晴 問題’諸如糖尿病性視網臈病。 程序。器官獲取及運送。用於胰島分離之胰臟的獲取當 今係作為根據全國性器官共享聯合網路（the United Network for 〇rgan Sharing，UN〇s)指南之標準器官獲取的 部分自屍體供體進行^器官獲取係由合格移植手術小組聯 合地方器官獲取組織進行。外科醫生及〇p〇必需熟悉採集 及裝運用於胰島細胞分離之胰臟。此外，其必需具有適當 儀器及裝運材料以達較長冷缺血時間之目的。 供體胰臟根據標準供體胰臟的UNOS法規裝運至處理設 備。在運送期間將其單獨儲存於威斯康星大學（uw)溶液 中或與氧化全氟碳化物（PFC)溶液或適當運送介質一起儲 存。胰管亦以具有烏司他丁 32之M-Kyoto溶液或適當保存 溶液保存。 在各種及一切狀況下，可盡一切努力在實驗室小組及醫 學才曰導者認為已準備好移植膝島細胞後立即移植。研究標 的將不針對此研究之各步驟（獲取、分離、接受者準備、 肤島輸注）中之每一者指定不同時限。然而，在供體操 作或在分離姨島的實驗室工作中，或在放射線套件時序 137953.doc -23· 200938634 女排:《在接觉者準備時可能存在物流延遲。為了防 胞損耗刀離前的儲存可藉由向威斯康星大學溶液中添 加^氟碳化物來延長，且分離後但移植前的儲存可藉由在 培月器中培養騰島來延長。因為此等時限可在患者之間有 . a變化’所以可注意到患者之間的時間點差異且與建立血 控制的成功或失敗相關聯。同樣，全氟碳化物溶液的使 用及/或胰島培養物的使用可在患者之間相關聯。 胰島細胞移植的供體選擇標準：胰島細胞移植-供體特 ㈣納人標準：多器官供體；適當原位低溫灌注；上述條 件下最大18小時冷缺血；最少15歲至7〇歲。 胰島細胞移植·供體特異性排除標準： 3)先前存在疾病： —1型或2型糖尿病 ―除原發性腦瘤之外的惡性疾病 ·-敗血症 ❷ 一般供體消除/排除。以下為經常遭遇之疾病病況或其 他病狀’其可為排斥潛在供體的絕對背景。此外，若研究 員認為必要’則可因任何理由排除潛在供體。 a) 臨床或活動性病毒性肝炎（a、b或c) b) 後天免疫缺乏症候群（AIDS) c) HIV血清陽性（HIV-I 或 HIV-II)

d) HTLV-I 或 II e) 梅毒 f) 活動性病毒性腦炎或未知起源之腦炎 137953.doc • 24- 200938634 g) 庫賈氏症（Creutzfeldt-Jacob Disease) h) 狂犬病 i) 經治療或活動性結核病 j) 敗血症 k) 癡呆 l) 接受pit-hGH(垂體生長激素）之個體 m) 除原發性腦瘤之外的惡性疾病 η)未知病因的嚴重疾病 供體行為-病史排除標準： a) 在過去5年與另一男性有性行為之男性 b) 在過去5年報導存在非藥用靜脈内、肌肉内或皮下注 射藥物之個體 c) 已接受人類來源之凝血因子濃縮物的患有血友病或相 關凝血障礙之個體 d) 在過去5年從事賣淫之男性及女性 e) 上述個體之性伴侣 f) 在先前12個月經由偶然性針刺或經由與開放性傷口、 不完整皮膚或黏膜接觸而暴露於已知或涉嫌HIV感染 企液之個體 g) 在組織捐贈之前12個月内接受紋身、耳朵及/或身體 穿刺或針灸之個體 h) 懲教系統的同室者。 供體的實驗室及其他醫學排除標準 a)因為拒絕、不當血液樣本（例如，可導致假陰性測試 137953.doc 200938634 之血·液稀釋）或任何其他原因不能測試HIV感染之個艎 b) 不管補充檢定之結果’針對hiv-I或HIV-II抗體進行重 複反應性篩選檢定之個體。 c) 病史、身體檢查、醫學記錄或屍檢報告揭示mv感染 或尚風險行為之其他證據的個體，諸如確診aids、 無法解釋的體重減輕、盜汗、皮膚或黏膜上藍色或紫 色斑點（通常為卡波氏肉瘤（Kap0si's sarcoma))、持續1 個月以上的不可解釋之淋巴結病、歷時1〇天以上之不 可解釋的體溫高於100.5卞（38.6 °C)、不可解釋之持久 性咳漱及呼吸短促、機會性感染、不可解釋之持久性 腹渴、男性與男性性接觸、性傳播疾病，或針跡或非 經腸藥物濫用的其他跡象。 胰島分離。胰島自供體胰臟之分離將在貝勒大學醫藥研 九中心胰島为離處理實驗室（Bayi〇r University Medical

Center Islet Cell Processing Laboratory ’ ICPL)使用 Ricordi 等人所述之"自動法"的修改形式進行^ i5ICPL包括用於處 理胰島之10,000型清潔套件、進行產物釋放測試之QA/Qc 實驗室及儲存樣本及試劑之速凍室。ICPL目前已進行29次 胰島分離以供驗證。此外，實驗室已在FDA核可方案 11731A下處理5個胰島產物用於移植以測試遠程分離之胰 島產物的安全性及功效。遠程驗證方案與糖尿病研究機構 (Miami，Florida)合作同時進行。最近JCPL·以臨床級姨臟進 行了 8次胰島分離且將5個經分離胰島成功移植入4名1型糖 尿病患者體内。最近，吾人使用來自SERVA的膠原蛋白酶 137953.doc -26- 200938634 進仃了 3次額外胰島分離以供驗證。所有3次分離的胰島產 量及πσ質將有資格用於根據此方案進行移植。 ICPL可接受人類屍體供體胰臟且可根據先前由實驗室驗 證之方法分離胰島。器官、胰島及騰島細胞產物的所有操 作係在100型生物安全櫃中進行，該櫃係容納於1〇〇〇〇型 清潔套件中。 此等方法如下··胰臟係經器官獲取組織（〇rgan procurement organization，OPO)獲得且於運送介質中運 送胰s較佳亦以具有烏司他丁之M-Kyoto溶液或適當保 存溶液保存。介質將視器官由哪一 〇p〇取得而變化。可對 此變化介質/運送進行仔細研究。 a) 接著將器官運送至BUMC ICPL。可記錄冷缺血時間且 其將視器官獲取方法而變化。 b) 實驗室的經訓練人員將胰臟收入1〇 〇〇〇型清潔室中且 自運送介質中無菌移出器官。 C)必要時將姨臟在1〇,〇〇〇清潔套件中的型生物安全 櫃中清洗。清洗由移除脂肪及非内分泌組織組成。清 洗完成後’將器官浸泡於一系列溶液中以防止任何潛 在污染物自獲取過程擴散。將經清洗之器官置於優碘 (betadine)溶液中，隨後將其浸泡於含有慶大黴素 (gentamycin)、兩性徽素B(amphotericin B)及頭孢峻琳 (cefazolin)之混合物的抗生素溶液中。最後，將器官 置於無菌亨克緩衝液（Hank's buffer)中。 d)接著將經清洗之胰臟以無菌膠原蛋白酶灌注，該酶起 137953.doc -27- 200938634 始胰臟組織的消化》 e) —旦灌注完成’則將姨職切成小塊。將塊連同酶溶液 置於與加熱線圈及收集儲集器以環路連接的無菌"里 科爾迪室（Ricordi Chamber)"中μ。該室含有用於機械 破壞騰臟組織之無菌大理石。將該室緩慢手動振蘯且 .將酶溶液之溫度增加至37。(：以釋放胰島且定期監測 ‘ 胰臟消化是否出現"游離”胰島。 f) 在適當時間藉由將胰臟消化產物以冷緩衝液稀釋且以 人類血清白蛋白處理來阻止酶作用。將經消化組織收 集入無菌拋棄式錐形瓶中。 g) 使用COBE2991血球處理器上的梯度離心自腺泡組織 分離胰島。 h) 接著將經純化胰島置於含有人類血清白蛋白之無血清 CMRL 1066基培養基中。 0將胰島立即移植或在5% C02氣氛下培養至多72 h。 ❹ 驗證程序-胰島輸注之前的釋放測試。各胰島製備最終 產物的測試包括胰島細胞計數、純度、存活力、無菌性、 : 内毒素及效能。胰島細胞計數、純度、存活力及内毒素之 • …果可在輸注之前獲得，且須滿足檢定的多數釋放標準。 無菌性及效能測試的最終結果直至輸注後才可獲得。若此 等結果不滿足釋放標準，則一知道結果就採取校正步驟。 此外’在決定最終部署之前測試胰島分離產物。若臨時測 "式未通過釋放標準，則細胞將 不會移植。 釋放胰島製劑用於輸注之標準。 137953.doc -28- 200938634 --供體與接受者之間的ABO相容性及陰性交又匹配 —除非據醫學指導者判斷必需進行額外輸注，否則胰島 質量 24000 IE/kg —直至移植當天的革蘭氏陰性菌株及培養物 —内毒素負荷S5 EU/kg接受者體重 --存活力>70% --純度230% 移植後測試

—在移植後進行葡萄糖激發之胰島素釋放測試且胰島素 釋放激發指數應大於1。 -·無菌性培養物之最終結果僅在移植後可獲得且應為陰 性。 胰鳥細胞輸注：位置H細胞輸注係在貝勒大學醫藥 研究中心或貝勒聖徒醫學中心(Bayl〇r All Saints Medical Center)的介入放射治療室由介入放射 針對侵人性料料的制㈣技術之套件（必要 全身麻醉的入口）中進行。 準備及麻醉H人院且準備料行程序q得針對該 程序之知情同意書。 々工 狀久上腹部區域 七卜胸側 ^ ^ …，一—研丞眾劑進行預備為 :菌：使用1V鎮靜劑之局部麻醉-般為足夠的。如介入放 的2判定使精選麻㈣進行局部麻醉，同時將該區域 的肋間神經阻斷。 門靜脈插管。以即時超音波探測術使用3 5 MHz探針獲 137953.doc •29· 200938634 得門靜脈插管的引導。 穿刺部位。該程序係藉由經皮直接穿刺肝臟來進行，可 選擇門靜脈的右分支或左分支用於插管且由介入放射專家 相應選擇穿刺部位》 技術。使用22G千葉針（Chiba needle)接入門靜脈，隨後 使用塞爾丁格技術（Seldinger technique)經導線進行門靜脈 導管插管。將4-5Fr導管引入門靜脈。針及導管尺寸可根 據執行程序之介入放射專家的判斷而變化。 門靜脈造影照片。藉由手動注射低容積滲透濃度碘化造 影劑經導管獲得門靜脈造影，以評估解剖結構及流動。推 薦最小造影劑用量。 騰島細胞輸注，包系統。胰島細胞輸注包系統由6〇〇 mL 輸注包構成，該包含有體積為200 mL之胰島懸浮液。胰島 細胞輸注使用1或2個包系統。當用於輸注之胰島體積超過 5 mL時，需要一個以上包。含有胰島之各包添加有35 IU/kg肝素。輸注中最大肝素劑量為7〇 iU/kg。若輸注過早 結束’則剩餘肝素劑量經計算應達到總共35 iU/kg且應給 予至門靜脈’隨後進行標準生理食鹽水沖洗。 包内容物係僅使用重力輸注入接受者門靜脈系統中。接 著將包以50 mL移植介質沖洗且將沖洗液自包輸注入門靜 脈中。接著以其他含有胰島之包重複該程序。 輸注完成。輸注完成後，將輸注導管及包以額外移植介 質沖洗，確保包埠或三通閥中未截留胰島。在輸注後不重 複門靜脈造影以避免胰島毒性。 137953.doc -30- 200938634 5靜脈廢評估。藉由經三通連接器直接在線量測獲得門 靜脈壓。在系統適當調零後在心血管監測器上讀取量測 門靜脈量測時程。可在程序之前、各胰島細胞包輸注中 途及以沖洗溶液每次洗滌包結束時獲得門靜脈（ρν)壓力。 亦記錄最終門靜脈壓。 門靜脈壓變化的處理。在胰島細胞輸注期間預期門靜脈 會升咼以下情形需要調整治療：程序前門靜脈壓高於 20 mm Hg為胰島細胞輸注的禁忌。 右在輸注期間的任何時間，pv壓超過基線值的兩倍但 ;1 8 mm Hg ’則輸注可保持1 〇 min且可再次量測壓力。 *壓力低於基線值的兩倍且小於18 mm jjg，則可繼續輸 注。否則，在1〇 min後再進行一次量測。 右PV壓力超過基線值的兩倍但小於18 mm Hg，則可繼 續該程序。若在任何時間Pv壓力超過22随Hg，則保持 mm Hg。若PV壓力高於22 mm mm HG超過20 min，則終止程 移除門靜脈導營。兹峪Μ抵Μ β i . . d . 輸注直至壓力降至低於18 mm Hg超過1〇 min，或高於18 mm 序。

則安置第二栓塞。 137953.doc 200938634 恢復。在該程序後，在介入放射恢復區域觀測患者歷時 據醫生判斷必要長的時間且接著轉移至移植服務區隔夜居 住。該程序第二天獲得肝功能測試及肝臟多普勒超音譜 圖。 住院。恢復後，患者在移植服務區住院供1 -2天的觀 測。住院長度可根據患者在第〇天时受初始劑量的抗胸腺 - 球蛋白的程度來決定。在移植後第2、4及6天，患者將回 到醫院接受後續劑量之抗胸腺球蛋白。出院標準包括：實 ® 驗室測試結果不指示出血，包括（但不排除）血色素及血球 比容含量。可接受限度内之LFT(小於正常上限的兩倍）且 根據胰島細胞輸注第二天的多普勒超音譜圖，主、左及右 PV無顯著出jk或彙集。 重複胰島細胞輸注。根據預定程序（參見第7部分）可評 估第一次胰島細胞移植的臨時結果。第二次輸注在多數患 者中可能為必要的，但並非強惜生的。與第一程序有關之 ❹ 所有步驟（5.1至5.7)應在後續輸注中加以重複。患者將回 至第二及（若必要）第三次輸注的第丨天，給藥將在第7天開 Μ遵循書面程序。需要後續姨島細胞輸注不認為是治療 失敗。若必要，則患者可接受總共三次胰島輸注。 卩下標準可Μ駭何時進行㈣移植：⑴當患者接 :少於最佳劑量⑽肩騰島當量/公斤體重朗基於先 則移植未實現姨島雜立性時；及（2)患者*具有㈣與先 前移植或免疫抑制有關的未解決之嚴重不良事件。、 研究藥物。胰島素及血糖护制 _ . . ^ 椐控制。胰島素劑量可隨胰島功 137953.doc -32- 200938634 食b改善而逐漸降低且可在接受者以低K7%iHbAic實現 良好葡萄糖控制且具有陽性c肽含量時中斷（血清葡萄糖範 圍：80-120 mg/dL)。 葡萄糖監測。患者將接受LifeScan 〇neT〇uch Uhra毛細 血糖汁，其為向患者顯示即時血糖量測的FDA核可之量測 裝置，該血糖計與Gluc〇M〇NTM連接，此為與主要研究員 •或其指疋人員操作的電腦無線通信的研究通信裝置。 可連續兩天使用每天8個毛細葡萄糖計讀數進行血糖振 動幅度之平均振幅（MAGE)的測定，MAGE為血糖不穩定 性之指數。該等測試可空腹、進食後2 h(視情況在下午⑺ 點及上午3點）進行。可在移植前（參見移植前評估）、在第 一次胰島細胞移植後第21天及移植後每月測定MAgE。 個體將經受靜脈内葡萄糖耐量測試（IVGTT)。可在移植 後第28天及第6個月進行iVGT7^隔夜空腹後，插入靜脈 内管線。經靜脈切開術抽取基線樣本用於測定葡萄糖及c_ 參肽含量且接著經1分鐘靜脈内給予5〇%右旋糖（3〇〇 mg/kg)。在下一 30分鐘内經指尖獲得樣本用於在〇、3、 5、10、20及30 min測定葡萄糖，其中第0時間定義為輸注 開始。輸注後30分鐘，亦經靜脈切開術抽取樣本用於葡萄 糖及C肽測定》 血色素Ale。用於血糖控制的藥物。斯塔利平 (Sitaglipin ·’ januvia®)可在移植後立刻開始每天^欠ι〇〇 Ο 經口投予’且個體將無限期繼續藥物。醫生可基於血糖控 制及藥物副作用調整劑量。 137953.doc -33- 200938634 胰島移植後第一個月的強化胰島素療法。胰島移植後的 強化胰島素療法將改良所移植胰島的植入。出於此目的， 吾人將繼續進行強化胰島素療法至少一個月。胰島移植候 選者根據預設使用強化胰島素療法控制其糖尿病。 強化膜島素療法定義為每天3次以上血糖測量，繼之以 每天3次以上胰島素注射（皮下）或用於連續肤島素注射之胰 I；素泵。對於多次胰島素注射而言，通常使用長效肤島素 (例如甘精胰島素（Glargine)/地特胰島素（Levemir))及速效 ® 胰島素（例如賴脯胰島素（Lispro)/門冬胰島素（Aspart))。長 效胰島素的注射時間通常為晚餐前或睡前，速效胰島素的 注射時間通常為每餐前。當患者使用泵時，基礎胰島素相 等於長效胰島素，團式（bolus)胰島素相等於短效胰島素。 (患者可僅使用泵中一種類型的騰島素若彼等採取團式 注射另一類型之胰島素，則該等劑量須皮下投予。 胰島移植後，經口攝食可保持最少8小時，且可使用靜 ❷ 脈内胰島素療法。當開始經口攝食時，患者將繼續強化胰 島素療法。胰島素之量可視需要降低。 P0D 〇:可根據當前貝勒健康護理系統（Baylor Health . Care System)標準方案投予靜脈内胰島素療法》 免疫抑制：依那西普（Enbrel®) »可以50 mg之起始劑量 在即將移植前期靜脈内投予。後續劑量可以25 mg之劑量 在移植後第3、7及1〇天皮下給予。 他克莫司（Prograf®)。可經口起始·開始劑量為每12小時 1 mg P〇 ’在即將移植前期内開始。所投予劑量可修改以 137953.doc -34- 200938634 在起始、，0藥72小時内達到全血谷漠度（tr〇ugh c〇ncentrati〇n) 3-6 ng/mL，且保持此範圍。 西羅莫司（Rapamune®)。可在移植前以負荷劑量〇 2 mg/kg PO單獨給藥起始。接著劑量可降低至每天〇】mg/kg p〇 ,且經調整以保持治療之前三個月期間1215叫/爪[的 藥物濃度水準。治療3個月後，可調整劑量以保持藥物濃 度水準為7·1〇 ng/mL。 抗胸腺細胞球蛋白（家兔）（Thymoglobulin⑧）。可靜脈内 投予·起始劑量為近移植期間給予15毫克/公斤體重。後續 劑量可以1.5 mg/kg之劑量在移植後第2、4及6天靜脈内給 予。術則用藥包括投予多至5〇〇叫靜脈内甲潑尼龍 (methylprednisolone)、650 mg 乙醯胺酚及 25-50 mg 苯海拉 明（diphenhydramine)。因為投予抗胸腺球蛋白可導致血小 板減少症及白血球減少症，所以若血小板計數介於5〇,〇〇〇 與100,000個細胞/mm3之間或若白血球計數介於2〇〇〇與 3000個細胞/mm3之間，則所計算之抗胸腺球蛋白劑量可減 少50%。若血小板計數小於5〇,〇〇〇個細胞/mm3或若白血球 計數小於2000個細胞/mm3，則可保持抗胸腺球蛋白劑量。 黴酚酸酯（CellCept®)。可用作存在毒性的其他藥物之替 代：以起始給藥每天2-3 gm p〇之起始劑量（分為2次相等 劑量）投予’且歷時研究持續時間。可靜脈内投予或以膠 囊調配物形式投予。劑量可因不良事件而改變。 黴酚酸延遲釋放錠劑（麥考酚酸（Myf0rtic)) 〇可用作存在 毒性的其他藥物之替代：以起始給藥每天144〇 mg p〇之起 137953.doc •35· 200938634 始劑量（分為2次相等劑量）投予，且歷時研究持續時間。劑 量可因不良事件而改變。 阿那白滞素（Kineret®)。可皮丁投予_起始劑量為ι〇〇 mg，在即將移植前期給予。後續劑量可以1〇〇 ^^之劑量在 第1至7天POD給予。 抗凝血。胰島細胞輸注在輸注液中含有肝素。 (L〇venox®)，一種低分子量肝素，係在移植後4小時以上 但12小時以内起始，每12小時皮下使用3〇 ，歷時μ 天。 不良事件的處理。胰島輸注後的併發症。術後出血及視 重症加護病房中需要必需關閉血液動力學監測。抗凝血之 輸血逆轉及對強化程序的需要由護理患者的手術小組決 定。 若發生門靜脈血栓形成，則將使用依諾肝素的抗凝企作 用延長3個月且如所指示排列追蹤圖像。部分或完全門靜 脈血栓形成為重複膦島輸注之禁忌。 肝酶升高。LFT異常為常見的（93%患者），峰值為移植3_ 4天後出現。 由不良事件引起的西羅莫司（SIR)及Pr〇graf®(TAC)的劑 量調整。應增加或降低西羅莫司（SIR)或Pr〇graf®(TAC)劑 量以實現不存在不可接受之毒性或排斥狀況下的目標全血 /農度°在不良事件中，應首先藉由降低SIR及TAC劑量使 得SIR/TAC含量在所要目標範圍的較低端來控制毒性。若 脅！·生持續存在且必須治療，則可使用較低目標含量。 137953.doc -36- 200938634 由白血球減少症引起的CellCept®(MMF)劑量調整。 CellCept®(MMF)劑量可視患有白血球減少症之患者的需要 而降低。 由腸胃毒性引起的西羅莫司（SIR)、Prograf®(TAC)及 CellCept®(MMF)的劑量調整。包括》惡心、》區吐、腹瀉及腹 部疼痛之腸胃毒性之症狀需要決定是否改變SIR、TAC及/ 或MMF劑量。決定應基於若干因素，包括：毒性之性質及 嚴重性及TAC含量。 腹瀉可如下治療： 1. 排除感染原因（艱難梭菌（Clostridium difficile)及腸道 病原體）且若需要時進行治療。 2. 在不同時間單獨投予SIR、TAC及MMF(較佳間隔2小 時）。 3. 測定TAC含量且調整劑量以保持接近所要目標範圍的 較低水準。 4. 若SIR及TAC含量接近所要治療範圍的較低端且已排 除腹瀉的感染原因，則投予諸如止瀉寧（L〇m〇til)或鴉 片ST劑之藥劑以減輕腹瀉，使得可保持免疫抑制劑 量。 5·若腹瀉持續，則最終將CellCept®劑量每天減少250-500 mg之增量且就進一步治療處理諮詢主要研究員。 考慮使用麥考酚酸作為CellCept的替代。 若改變患者的免疫抑制方案以控制不良事件，則患者應 在解決不良事件之後立即回復到其先前基線免疫抑制方 137953.doc -37- 200938634 案。免疫抑制藥物的所有劑量調整必須記錄於患者的個案 報告表上。 藥物供應、問責性、儲存、重構/稀釋及投藥。作為研 究方案之部分的藥物可貝勒大學醫藥研究中心（Dallas,

Texas)藥房或貝勒聖徒醫學中心（ρ〇Γΐ w〇rth，Texas)供應。 可根據藥劑學標準進行製備。住院病人之藥物投藥及記錄 將遵循在場護理人員的指令。護理人員及研究員將確保在 患者出院前傳遞關於藥物的適當患者教育。 ® 治療順應性。可藉由在研究員及/或指定工作人員指導 下投予免疫抑制藥物，同時患者保持住院來保證順應性。 可藉由每次患者隨訪的谷含量監測來監測順應性^ Tac之 全血含量將證明患者保持所指定之方案。 伴隨藥物及療法。巨細胞病毒預防。不管供體及接受者 巨細胞病毒血清學狀態投予經口纈更昔洛韋 (valganciclovir)歷時最少14週以免將來之淋巴細胞增生病 ❷ 症或移植失敗。可在纈更昔洛韋不可用之事件中利用任何 FDA核可之替代療法。 卡氏肺孢子蟲肺炎預防。根據協會方案之標準卡氏肺孢

子蟲肺炎預防方案在研究持續期間應統一給予所有治療小 組U 細菌預防。操作前之細菌預防應使用以下各物給予： --移植刖靜脈内投予萬古黴素（Vancomycin)500 mg且每 12小時再進行兩次給藥，歷時24小時； --移植刖靜脈内投予美羅培南（Merrem)5〇〇 mg且每$小 137953.doc •38- 200938634 時繼續3次給藥，歷時24小時。 雜項 待在移植後第7天開始的腸溶包衣阿司匹靈（aspirin)(每 天81 mg)。可停止阿司匹靈以進行預定之任何後續輸注， 且在移植後第7天再開始。可經口投予維生素A(每天 25,000 IU)、維生素B6(每天1〇〇 mg)及維生素E(每天800 IU)歷時1個月。亦將在移植後第1天開始投予潰瘍預防（每 天 40 mg)。 違禁藥物，方案中不允許以下藥物： •巴利昔單抗（Simulect®) •皮質類固醇 •環孢黴素（Cyclosporine) •特非那疋（Terfenadine)、阿司味峻（astemizole)、娘迷 清（pimozide)、網康嗤（ketoconazole)-在雷帕黴素起始 前必須中斷。 •貫葉連紐提取物（St. John’s wort) •氟康唑（Fluconazole)禁止用於預防經口念珠菌病。其 可用於治療念珠菌感染至多2週，其中密切監測SIR及 TAC含量。 •應避免使用細胞色素P-450誘導劑或抑制劑，除非研 究員認為其為必要治療且由主要研究員核可。 輔助研究程序之時程及描述。篩選程序。可針對納入/ 排除標準篩選已鍛別用於胰島細胞移植之患者。患者資格 可錢於資格個案報告表上。須在研究登記前完成以下基 137953.doc -39- 200938634 線評估： •獲得經簽署且註有日期的知情同意書。 •醫生將進行臨床檢驗。 •記錄供體及接受者針對B型及C型肝炎、人類免疫缺 陷病毒（HIV)及人類嗜T淋巴細胞病毒l(HTLV-l)的血 清學狀態。 •記錄供體及接受者針對巨細胞病毒（CMV)及艾伯斯 坦-巴爾病毒之血清學狀態。 ® •對育齡女性進行尿或血清妊娠測試（醫院許可）。 •在移植前獲得病史。包括移植診斷、第二次診斷伴隨 藥物治療及研究前藥物治療在移植前用時至多7天。 •獲得身高及體重。 •記錄胰島素需求（產品及劑量）、血糖含量、不良事件 及低血糖事件。 •進行實驗室評估： ^ 。CBC(jk色素、血球比容、WBC分類及血小板計數）

。凝血測試：PT、INR、PTT 。血清化學：血·清肌酸酐、BUN、Mg、填、Na、K、 : 白蛋白、鈣及葡萄糖 1 。血清澱粉酶及脂肪酶 。甲狀腺激素概況（T4、TSH及游離T4) 。肝概況：總膽紅素、AST、ALT及鹼性磷酸酶 。脂質概況 。血·色素A1C及C肽。 137953.doc -40- 200938634 。尿分析及尿培養 。24小時尿液微量白蛋白 。Glofil 。DNA微陣列、自身抗體、Epimax、ImmuKnow • MAGE測定 移植前1天（第-1天） •在移植前1天（第-1天），可針對以下各項再次測試經篩 選患者（參見第7· 1部分）以繼續確保研究資格。獲得經 簽署且註有有曰期的知情同意書。 •記錄供體針對CMV及EBV之血清學狀態 •確認納入及排除標準 •醫生將進行臨床檢驗 •對育齡女性進行尿或血清妊娠測試（醫院許可）。 •在移植前獲得病史。包括移植診斷、第二次診斷伴隨 藥物治療及研究前藥物治療在移植前用時至多7天。 •獲得身高及體重。 •記錄胰島素需求（產品及劑量）、血糖含量、不良事件 及低血糖事件。 •如第6部分所述投予藥物 •進行實驗室評估： 。CBC(血色素、血球比容、WBC分類及血小板計數）

。凝血測試：PT、INR、PTT 。血清化學：血清肌酸針、BUN、Mg、填、Na、K、 白蛋白、鈣及葡萄糖 137953.doc -41 - 200938634 。血清澱粉酶及脂肪酶 。甲狀腺激素概況（T4、TSH及游離T4) 。肝概況：總膽紅素、AST、ALT及鹼性碟酸酶 。脂質概況 。血色素Aic及C狀。 。尿分析及尿培養 ° PRA。 。DNA微陣列、自身抗體、Epimax、ImmuKnow ® 治療期間之研究程序 可進行以下程序且在隨後幾日如所述記錄資料。移植當 天：對於已簽署述同意書、已滿足納入/排除標準及已進 行胰島細胞移植之患者而言，可在第〇天（移植當天）進行該 等程序： •量測且記錄門靜脈壓（程序内） •如第6部分所述投予藥物 φ •獲得移植資訊，包括移植日期及冷缺血時間 •記錄接受者年齡、性別及種族 •記錄供體年齡、性別及種族 .·記錄特定胰島素需求（產品及劑量）、血糖含量、低血 糖事件、免疫抑制藥物劑量、伴隨藥物治療、不良事 件及體重。 •進行實驗室評估： 。移植後每8小時1次CBC(血色素、血球比容、WBc 分類及血小板計數），歷時24小時。 137953.doc -42· 200938634 ° ΡΤ、INR、PTT。 。血清化學：血清肌酸酐、BUN、Mg、Na、Κ、構、 白蛋白、鈣及葡萄糖。 。肝概況：移植後每8小時1次總膽紅素、AST、ALT 及驗性碗酸酶，歷時24小時》 0 C狀。 。移植後每8小時1次澱粉酶，歷時24小時。 。脂肪酶 。阿那白滞素.即將移植前皮下注射mg 。依那西普：即將移植前靜脈内注射5〇 mg 移植後第1天： •記錄免疫抑制藥物劑量、伴隨藥物治療、不良事件、 低赢糖事件及機會性感染。 •記錄胰島素需求（產品及劑量）及血糖含量。 •進行移植存活率的臨床評估。 •醫生將進行患者臨床檢驗，包括體重。 •進行實驗室評估： 。移植後每8小時1次CBC(血色素、血球比容、WBc 分類及血小板計數），歷時24小時。 。PT、inr、ρττ 血’月化學：金清肌酸酐、BUN、Mg、Na、K、白蛋 白、磷、鈣及葡萄糖 肝概況：移植後每8小時1次總膽紅素、AST、ALT 及鹼性磷酸酶，歷時24小時。 137953.doc •43- 200938634 。移植後每8小時1次澱粉酶，歷時24小時 。脂肪酶 。DNA微陣列、自身抗體 •他克莫司：谷含量，在經口給藥後1〇12小時 •雷帕黴素谷含量 # •肝臟多普勒超音譜圖。 •阿那白滞素：皮下注射1〇〇 mg ® 移植後第2及第4天： •記錄免疫抑制藥物劑量、伴隨藥物治療、 * R事件、 低血糖事件及機會性感染。 •可以1.5 mg/kg之劑量靜脈内給予抗胸腺球蛋白。 • a己錄騰島素需求（產品及劑量）及企糖含量。 •進行移植存活率的臨床評估 •進行實驗室評估： φ 。CBC(血色素、血球比容、WBC分類及血小板計數） 。血清化學：血清肌酸酐、BUN、Mg、Na、K、白蛋 白、磷、鈣及葡萄糖 。肝概況：總膽紅素、AST、ALT及鹼性磷酸酶 〇 C肽 ° DNA微陣列、immuKnow •阿那白滯素：皮下注射1〇〇 mg •他克莫司：谷含量，在經口給藥後10-12小時獲得 •雷帕黴素谷含量。 137953.doc •44- 200938634 移植後第3及第5天： •記錄免疫抑制藥物劑量、伴隨藥物治療、不良事件、 低血糖事件及機會性感染。可經由電話或郵件自患者 獲得資訊。 • 6己錄騰島素需求（產品及劑量）及血糖含量。可經由 GlucoMON自患者獲得資訊。需要患者寫一份書面日 誌作為備份》 •依那西普：皮下注射25 mg(第3天） •阿那白滯素：皮下注射1〇〇 mg 移植後第6天： •記錄免疫抑制藥物劑量、伴隨藥物治療、不良事件、 低血糖事件及機會性感染。 •可以1.5 mg/kg之劑量靜脈内給予抗胸腺球蛋白。 •記錄胰島素需求（產品及劑量）及血糖含量。 •進行移植存活率的臨床評估 •醫生將進行患者臨床檢驗，包括體重。 •進行實驗室評估： 。CBC(血色素、血球比容、WBc分類及血小板計數） 。血清化學：血清肌酸酐、BUN、Mg、Na、K、白 蛋白、磷、鈣及葡萄糖 肝概況：總膽紅素、AST、ALT及鹼性磷酸酶 〇 C肽 。DNA微陣列、自身抗體 、ImmuKnow •阿那白滞素：皮下注射100 mg 137953.doc •45· 200938634 •依那西普：皮下注射25 mg(第7天） •他克莫司：谷含量，在經口給藥後1(M2小時獲得 •雷帕黴素谷含量 移植後第10天 •依那西普：皮下注射25 mg •抗胸腺球蛋白 移植後第14天： •記錄免疫抑制藥物劑量、伴隨藥物治療、不良事件、 低血糖事件及機會性感染。 •記錄胰島素需求（產品及劑量）及企糖含量。 •進行移植存活率的臨床評估 •醫生將進行患者臨床檢驗，包括體重。 •進行實驗室評估： ❹ 。CBC(血色素、血球比容' WBC分類及血小板計數） 。血清化學：血清肌酸酐、BUN、Mg、仏、κ、白蛋 白、磷、鈣及葡萄糖 。（：肽 。DNA微陣列、自身抗體、ImmuKn〇w •他克莫司：谷含量，在經口給藥後1〇12小時獲得 •雷帕黴素谷含量。 移植後第21天： •記錄免疫抑制藥物劑量、伴隨藥物治療、不良事件、 低血糖事件及機會性感染。 •記錄胰島素需求（產品及劑量）及血糖含量。 137953.doc -46- 200938634 •進行移植存活率的臨床評估 •醫生將進行患者臨床檢驗，包括體重。 •進行實驗室評估： 。CBC(血色素、血球比容、WBC分類及血小板計數） 。血清化學：血清肌酸酐、BUN、Mg、Na、K、白蛋 白、磷、妈及葡萄糖

。肝概況：總膽紅素、AST、ALT及鹼性磷酸酶 。C肽 ° HbAlc 。尿分析 。DNA微陣列、自身抗體、ImmuKnow •他克莫司：谷含量，在經口給藥後10-12小時獲得 •雷帕黴素谷含量 •肝臟多普勒超音譜圖。 • Ensure® 激發 • M AGE測定 移植後第28天： •記錄免疫抑制藥物劑量、伴隨藥物治療、不良事件、 低血糖事件及機會性感染。 •記錄胰島素需求（產品及劑量）及血糖含量。 •進行移植存活率的臨床評估 •醫生將進行患者臨床檢驗，包括體重。

• IVGTT •進行實驗室評估： 137953.doc -47- 200938634 。CBC(血色素、血球比容、WBC分類及血小板計數） 。血清化學：血清肌酸針、BUN、Mg、Na、K、白蛋 白、磷、妈及葡萄糖 。（：肽 。脂質概況 。DNA微陣列、自身抗體、ImmuKnow '•他克莫司：谷含量，在經口給藥後10-12小時獲得 •雷帕黴素谷含量。 ⑩ · PRA。 在第2個月期間每兩週一次且其後每月一次直至研究結 束： •記錄免疫抑制藥物劑量、伴隨藥物治療、不良事件、 低血糖事件及機會性感染。 •記錄胰島素需求（產品及劑量）及金糖含量。 •進行移植存活率的臨床評估 I •醫生將進行患者臨床檢驗，包括體重。 擊 •進行實驗室評估： 。CBC(血色素、血球比容、WBC分類及血小板計數） . 。血清化學：血清肌酸Sf、BUN、Mg、Na、K、白蛋 1 白、磷、鈣及葡萄糖 。HbAlc(每月一次） 。C肽 。脂質概況（自移植起始，前6個月每月一次，6個月 後每隔一個月一次且第一年後每三個月一次） 137953.doc -48- 200938634 。PRA(每月一次） 。DNA微陣列、自身抗體、ImmuKnow •他克莫司：谷含量，在經口給藥後10-12小時獲得 •雷帕黴素谷含量。 •第2個月MAGE測定。 移植後三個月每月一次直至移植後兩年： •記錄免疫抑制藥物劑量、伴隨藥物治療、不良事件、 低金糖事件及機會性感染。 ® •記錄胰島素需求（產品及劑量）及血糖含量。 •進行移植存活率的臨床評估 •進行實驗室評估： 。CBC(血色素、血球比容、WBC分類及血小板計數） 。jk清化學：血清肌酸Sf、BUN、Mg、Na、K、白蛋 白、磷、鈣及葡萄糖 。HbAlc(每月一次） 。C肽 參 。PRA。（每月一次） 。DNA微陣列、自身抗體、ImmuKnow \ •他克莫司：谷含量，在經口給藥後10-12小時獲得 •雷帕黴素谷含量。 • MAGE測定。 移植後3、6、9、12、1 8、24個月： •記錄免疫抑制藥物劑量、伴隨藥物治療、不良事件、 低血糖事件及機會性感染。 137953.doc -49- 200938634 •記錄胰島素需求（產品及劑量）及血·糖含量。 •進行移植存活率的臨床評估 •醫生將進行患者臨床檢驗，包括體重（每三個月一 次）。 •進行實驗室評估： 。CBC(血色素、血球比容、WBC分類及血小板計數） 。血清化學：血清肌酸針、BUN、Mg、Na、K、白蛋 白、磷、鈣及葡萄糖 。C肽 。肝概況：總膽紅素、AST、ALT及鹼性磷酸酶（每三 個月一次） 。HbAlc(每月一次） 。脂質概況（自移植起始，前6個月每月一次，6個月 後每隔一個月一次且第一年後每三個月一次） 。尿分析（每3個月一次） 。24小時尿收集用於測定微量白蛋白（第12及24個月） 。Glo-fil(第 3、6及 18個月） 。IVGTT(第6個月） 。PRA。（每月一次） 。DNA微陣列、自身抗體、ImmuKnow 。Epimax(第3及第9個月） •他克莫司：谷含量，在經口給藥後10-12小時獲得 •雷帕黴素谷含量 •肝臟多普勒超音譜圖 137953.doc -50- 200938634 • MAGE測定 •患者將完成自身投予之"生活品質"詢問表 •第一及第二功效參數評估 •確保激發（第3、12、18及24個月） . •評估由糖尿躬丨起之眼部異常（諸如，糖尿病性視網 膜病）的眼部檢查（第6、12、18及24個月）。檢查可由 ' 外來眼科專家進行。 其他預定隨訪。在第二次联島細胞輸注事件_，預定程 序可類似於第-次移植進行之彼等程序。第二次移植四週 後，患者根據起始時間安排(timeframe)將再進入起 程。 未預定之額外隨訪1患者在預㈣訪之間需要治療， 則可向患者樓案中添加與治療有關的所有資料。 評估及終點的定義及詳細描述。 安全性。安全性評估可基於不良事件、機會性感染、惡 ❿ &疾病及實*室值或成像研究中的醫學上顯著之改變進 行。在患者經歷不良事件的事件中，可請研究員評定研究 帛序及/或藥物治療的因果關係且與治療有關之事件應記 .錄在不良事件個案報告表中。 不良事件n不良事件（AE)為暫時但不必在原因上 與程序（膜島細胞移植）或與程序有關之藥物或治療有關的 任何反應、副作用或其他不幸醫學事故。出於本研究之目 的，可針對統一報導定義以下額外不良事件。 出血。可記錄在程序後具有腹部成像（超音波探測術或 137953.doc -51 - 200938634 電腦斷層掃描）之出血證據的與超過2 §/几的1115降低有關 的任何事件且作為3級不良事件處理。必需輸血之出血表 示為SAE。 門靜脈血栓形成。如多普勒超音譜圖所證明在門靜脈或 其分支之一中形成血凝塊（阻塞性或非阻塞性）可記錄為彼 靜脈、’、σ構的血栓形成。展示一些流動限制但其中在門靜脈 分支中保持正常定向流動的部分堵塞之血栓可記錄為2級 ❺不良事件。導致流動逆轉之分支門靜脈的部分或全部血栓 可δ己錄為3級不良事件。不管是否導致流動逆轉，主門靜 脈之血栓可記錄為3級不良事件。 細菌、病毒及真菌感染。可記錄細菌、病毒及真菌感染 及其他機會性感染。感染可定義為以下需要住院且以抗菌 劑、抗病毒劑或抗真菌劑（非預防）治療情形中之任一者： •來自正常無菌部位之陽性培養物。 •微生物劑之病理學鑑別。 φ •與臨床症狀有關的顯著血清學變化。 研九員或適當顧問記錄的疾病/感染的典型臨床代 表0 -在此等患者中合理預期的感染數目及/或嚴重程度之增 • 加可作為3級不良事件處理。 肝中毒僅在組織學上確認生物化學變化且排除所有其 他#斷（亦即，門靜脈血栓形成、肝臟血腫、病毒性肝炎 等）時考慮肝中毒之診斷。肝中毒須藉由活組織檢查診斷 且區別於排斥反應、病毒性肝炎等。若活組織檢查確認肝 137953.doc -52· 200938634 中毒則主要研究員須判斷其是否與免疫抑制劑有關。應 聯繫主要研究M諮詢藥物中斷事宜。在所有肝中毒病例 中’應抽取TAC谷含量及西羅莫司含量且提交供分析。 其他不良事件：可記錄之其他不良事件包括：

•白血球減少症’定義為WBC<3,0〇〇^L 貧血，定義為血色素<9mg/dL· •血小板減少症，定義為血小板計數<50,000/μ[ •嗜中性球減少症（ANC<500/pL) &丨生疾病、淋巴瘤及淋巴細胞增生疾病。研究期間發 生的任何移植後惡性疾病之發展至多且在第730天評 估。 •經拖延且不視為正常移植後恢復之部分的其他不良事 件。 不良事件之報導。所有不良事件不管是否經患者訪問、 身體檢查 '實驗室調查或其他方式查實均被記錄。可註解 Φ 肖研究程序或藥物的關聯性°各不良事件待記錄於不良事 件個案報告表中。研究員將提供開始及解決曰期、嚴重程 : [與研究程序/藥物之關聯性、所採取之措施、免疫抑 :㈣量或伴隨藥物治療的變化，及結果。可追蹤最終隨訪 _正在&歷之不良事件歷時充分評估患者安全性所需要的 長又或直至事件穩定°若事件在研究或追縱期間解 決貝J解決日期應記錄於個案報告表中。一旦不良事件得 以解決，則應嘗試使患者回復其基線療法。 停止條例。不良事件可分級為輕度（1級）、中度（2級）、 137953.doc -53- 200938634 重度（3級）或威脅生命（4級）。因為患者的潛在疾病，所以 停止條例中將不包括低血糖及高企糖毒性；然而其仍將包 括於研究報導中。一或多種肝酶升高可作為單獨不良事件 進行分級。以下不良事件（如上文所述）可作為3級不良事件 處理：出血、門靜脈血栓形成及機會性感染的數目及/或 嚴重程度增加。

❹ 製備及臨床騰島移植小組可討論任何單獨3級不良事 件。若事件本身受幾乎無或無臨床重要性限制，則試驗可 繼續。然而，任何單獨4級不良事件或兩種或兩種以上3級 不良事件將導致立即停止進一步移植且通知FD a及irb兩 者。試驗將保持暫停直至FDA批准繼續。以每年為基礎向 FDA及IRB兩者進行所有不良事件的完全報導。 嚴重不良事件。定義。嚴重不良事件（SAE)為所發生的 任何不良事件（AE)，其導致以下結果中之任一者： 1 ·亡。 2. 脅生命之AE。 3. 該等程序或免疫抑制治療有關的住院病人住院或延長 現有住院。 4_久或顯著失能或無能力。 5.天異常或出生缺陷。 項的重要醫學事件。 見，研究參與者（個體/患者） 立即死亡的風險中。重要醫 中之一者，但可能妨害研究 6.潛在地導致條款1-5中任一 威脅生命意謂根據研究員意 在出現反應時處於因該反應而 學事件為可能不導致上述結果 137953.doc -54- 200938634 參與者（個體/患者）健康或需要醫學或手術介入以防止上文 SAE定義中所列結果中之一者的的任何醫學事件。研究員 認為嚴重的任何其他事件亦應報導。 術語"重度"係用於強度分級且與術語"嚴重”不同義。 無需記錄與移植或相關治療無關之選擇性手術程序導致 的住院或延長住院。 - 報導。在SAE事件中（包括死亡），研究員（或協調員）須 立即（亦即，在研究員或協調員得知事件24小時内）與主要 ^ 研究員及IND主辦人電話聯繫。應使用嚴重不良事件工作 表傳遞書面SAE資訊。 若必要，則在7天内向主要研究員提供事件的追蹤資 訊。所有妊娠須以與SAE相同之方式向IRB/FDA報導。 IND主辦人在得知事件後將在15個日曆日（致命或威脅生命 事件為7天）内肖FDA及（若必要）其他管理機構提交麵安全 性報告，且將通知研究員該等管理報告。研究員鬚根據偷 ❹ 理審查委Μ會卿）要求提交安全性報告ilRB提交及 IRB接收之文件應保留。MedWatch或相等物報導可視需 要歸檔。 β U可就與研究參與者（健/患者）的安全性福利或 權利有關的任何其他問題聯繫主要研究員。 妊娠。儘管不為不良事件’但鑒於研究對胎兒結果的潛 牵連^㈣與嚴重不良事件—樣報導。所有關於姓 報導後j跟隨關於姓娠及傳遞過程，以及嬰兒狀況的 應以及時方式向主要研究員提供關於姓娠及傳遞過 137953.doc -55· 200938634 程，以及嬰兒狀況之追蹤資訊。 終點定義。具有或不具有外來胰島素的持續血糖正常。 以低於7%的HbAlc及高於0.5 ng/dL之C肽含量而不使用姨 島素來實現動萄糖控制（血糖範圍：80-120 mg/dL)，歷時2 個月》 無症狀低血糖。在血糖低於50 mg/dL之情形下認知能力 : 喪失的臨床照片 胰島素需求降低。每日胰島素需求相較於移植前胰島素 ® 需求的任何降低為50%。 移植物功能及移植失敗。若存在可偵測之高於移植前含 量的經激發血清C肽含量，則假定存在移植物功能。經激 發之血清C肽含量回復至基線或〇則表示移植失敗。 功效。可基於以下參數進行胰島細胞移植程序的功效評 估： 主要終點。評估胰S移植安全性及評估經歷姨島細胞移 ❹ 植之患者體内的12個月及24個月最終移植後終點。終點將 由無需外來胰島素或以胰島素劑量降低回復至持續血糖正 常組成。 將在研究持續期間針對安全性評估及第二終點繼續追蹤 不滿足此等標準之患者。 、、點如下疋義不存在無症狀低企糖：在血糖低於 50 mg/dL之情形下認知能力喪失的臨床照片 額外°平估可收集及分析資料來評估以下各情形： •低血糖事件之發生率。 137953.doc -56- 200938634 •未變得具有胰島素獨立性之患者體内的胰島素需求。 •使用或不使用外來胰島素實現持續血糖正常所需的總 胰島質量。 •使用或不使用外來胰島素實現持續血糖正常所需的總 胰島輸注數目。 •使用兩層保存法運送、遠程處理及胰島培養後獲得之 胰島細胞質量、其存活力及功能。 •腎功能。 ® •與免疫抑制方案有關之發病率。 •與騰島細胞輸注有關之發病率。 •接受者的生活品質。 可結合運送方法、運送介質、冷缺血時間、胰島劑量及 細胞培養時間/溫度來分析上述資料以確定胰島細胞移植 的理想標準。 HYPO計分。每年可在胰島移植之前及之後藉由財⑽等 φ 人所述之HYP0計分來評估低血糖33。此計分為所經歷無 症狀低血糖程度的量度。低計分反映幾乎沒有至沒有無症 : 純血糖。使心匕計分將幫助評估騰島細胞移植降低/消 . 除無症狀低血糖之功效。 1 m值。可使用m值評估血糖含量穩定性。 可使用6次血糖量測（早餐、中餐及晚餐的前後）之平均 值。個別m值公式為=! (10><1〇以〇[血糖（mg/di)/i〇〇])3卜可 採用每日m值的6次量測之平均值。 免疫測試。已限定關於騰島移植之前及之後的免疫學概 137953.doc -57- 200938634 況之研究。在此研究中，吾人將使用DNA微陣列進行全基 因表現且使用Epimax技術進行細胞因子概況分析，其皆在 貝勒免疫研究所（Baylor Institute of Immunology Research) 研發。對於自身抗體檢定而言，可在科羅拉多大學健康科 學中心（University of Colorado Health Science Center)(PI， Dr. George Eisenbarth)量測 GAD 65、IA-2、騰島素及 Znt8。對於免疫功能檢定而言，吾人將使用Cylex免疫細 胞功能檢定。 對於微陣列而言，可如下文所述在胰島移植之前及之後 收集3 ml血液。可以微陣列檢驗血液來分析由1型糖尿 病、胰島移植及免疫抑制藥物方案引起的基因型變化。此 將鑑別與移植排斥反應相關聯之免疫事件且提供調整免疫 抑制方案之標準。 對於Epimax而言，可在胰島移植之前（在初始篩選及列 出時）及之後（操作後第30天及第90天）收集30 ml血液，因 此總共4個時間點。可使用Epimax技術檢驗丘液來分析由1 型糖尿病及胰島移植引起的細胞因子類型變化。 對於自身抗體檢定而言，可如附表A中所示在胰島移植 之前及之後收集1 cc血液。可將血液旋轉且收集300 kL血 清且保存於速凍室中直至運送。可將血清送至科羅拉多大 學健康科學中心。最近，吾人發現多個與可能之自體免疫 疾病復發引起之不良結果有關的陽性自身抗體。因此，知 道患者是否具有自身抗體是重要的。 FDA批准Cylex免疫細胞功能檢定（ImmuKnow檢定）用於 137953.doc -58 - 200938634 偵測免疫抑制群體中細胞介導之免疫◊最近，吾人在肝臟 移植後使用Cylex免疫細胞功能檢定來鑑別具有極佳臨床 結果之排斥或感染^ Cylex免疫細胞功能檢定在胰島移植 後應尤其適用，因為活組織檢查幾乎不可能偵測排斥反應 或感染。可如附表A中所示在胰島移植之前及之後收集3 cc血液樣本用於Cylex免疫細胞功能檢定。 研究撤出標準。患者可由於以下原因自研究撤出： •患者撤出同意書。

A •研究員認為由於安全性或功效問題，患者繼續研究不 再符合其最佳利益。 •患者懷孕。 •對患者失去追蹤。 •患者必需進行研究方案所禁止的免疫抑制治療。 自研究撤出之患者將繼續追蹤歷時研究的整個24個月持 續時期。可進行合理嘗試來發現失去追蹤的個體。 ❷ 研究終止。主要研究員根據其判斷在書面通知IRB及 FDA後應有權終止此研究。 研究終止的可能原因包括（但不限於）：

I - 1.記的數量或品質不令人滿意。 2.究中不良事件的發生率及/或嚴重程度，此指示由研 究程序治療引起的潛在健康危害。 在所有事件中，須對終止時仍在研究中的各個體以及因 任何原因過早終止的任何患者進行最終檢驗。研究員將儘 可能完整地在個案報告表中輸入資料。在研究結束時，主 137953.doc -59· 200938634 要研究員將接著收集所有研究材料β 在研究終止後將繼續追蹤所有患者以進行安全性評估， 歷時至少24個月。 研究完成後的護理。最終胰島移植後兩年，患者將在貝 勒接受連續追蹤。移植之胰島可能功能衰退.在該等狀況 下，吾人計劃補充胰島移植。研究風險及效益。研究中涉 - 及之患者的潛在風險與胰島細胞輸注及/或伴隨之治療有 _ H細胞輸注之風險。輸注程序之風I在靜脈内鎮 罾 #劑下經由使用放射引導經皮插人門靜脈之導管進行姨島 細胞輸注程序。 程序之最常見併發症為穿刺部位出血（腹内或肝内，囊 下或實質内）。而微小出血.事件是頻繁的，其在14%病例中 臨床上明顯且2%需要輸血。全世界少於5個病例中報導用 於止血之手術。其他併發症包括膽囊穿孔（2%)、膽道出血 (1%)、膽漏（1%)。在2%病例中可能發生門靜脈分支的也 ❿ t形成。其追蹤顯示受影響靜脈再通且未出現血栓形成產 生永久損傷之報導。主門靜脈之血栓形成風險低於0 5%。 其在組合之肝臟及肤島移植中報導但未在姨島細胞移植程 序中報導。 血胸或氣胸極少見。理論上可能形成肝膿腫，但目前為 止並未報導。該程序期間常見直接由該程序引起或由門靜 脈壓升高引起的疼痛。該程序結束後，疼痛不常見。與該 程序-起使用之清醒鎮靜劑可涉及呼吸抑制或驟停之風 險’且（若需要）在放射線套件中及治療時密切監測患者。 137953.doc 200938634 移植程序涉及來自導管放置及門靜脈造影術之輻射暴 露。亦可能存在來自若干標準測試的輻射暴露，諸如臨床 指不的胸X射線。預期兩年方案之總輻射劑量小於輻射專 業工作人員最大一年轄射暴露。此量為每一年背景轄射暴 露的10至15倍。 輸注的其他風險》肝功能測試中的臨時升高為常見的 (至多93%病例），且其中至多46%為顯著的q此一般將在 移植兩週内回復正常且對肝功能不具有長期影響。 胰島移植的另一可能風險為經胰島引入感染。此應藉由 針對感染適當篩選供體、向接受者投予預防性抗生素且藉 由顯微鏡檢驗胰島製劑是否存在細菌來實質上減少。儘管 胰島製劑可藉由培養來評估，但結果一般將在移植完成後 才能獲得。然而，此資訊對指導治療而言可為重要的（若 需要）。 胰島細胞製劑可傳播病毒感染，諸如Β型或c型肝炎、 φ HIV、HTLV及CMV。傳播風險因供體選擇過程而極低且 實際上並未已知胰島細胞攜帶上述病毒。 门種異體組織（包括騰島）的移植不管成功與否均可能在 • 接受者體内誘發免疫反應且針對供體HLA抗原產生細胞毒 I1 生抗體。實體器官移植亦發生此現象，且此在個體需要進 一步移植之事件中可能成為問題。 免疫抑制藥物之風險。長期免疫抑制具有一般風險的機 會性感染及少量但可辨識的發展惡性疾病的風險。在實體 器官接受者中’註冊資料已鑑別出三種癌症類型具有超過 137953.doc -61 - 200938634 般群體的增加之發生率：外陰癌、非黑色素皮膚癌及淋 巴瘤★未報導有膦島細胞接受者發展惡性疾病。 儘管在X德蒙頓方案或其任何衍生方案下在超過5〇〇名 胰島移植患者巾未報導淋e瘤病例，但淋巴瘤風險在成年 實體器官移植接受者中經估算為0.5%至1%。 胰島細胞移植接受者與彼等實體器官接受者一樣，一般 處於比一般群體高的發展感染之風險下且此等感染變得 更嚴重的風險高於—般群體。該等常見感染之實例包括細 菌、病毒或真菌性肺炎、細菌或真菌性尿道感染、巨細胞 病毒感染、卡氏肺孢子蟲感染，及諸如普通感冒之常見病 毒感染。迄今為止，沒有胰島細胞接受者死於感染。特定 預防一些高危感染（尤其CMV及肺囊蟲屬（Pneum〇cysitis)) 且在此等患者中未經報導。由於1型糖尿病患者亦比一般 群體處於較高感染風險下，因此胰島患者增加感染之風險 可能小於非糖尿病患者（一般群體）將產生的增加風險。 所用之各免疫抑制劑亦產生如下文詳述之特定副作用： 依那西普：Enbrel®之可能副作用包括極少發生的對嚴 重感染之易感性、神經系統疾病、缺乏足夠量的紅血球產 量、心臟問題及過敏反應。 其他更多常見副作用包括：注射部位之皮膚發紅、皮 疹、腫脹、搔癢或淤傷、上呼吸道感染及頭痛。 他克莫司：Prograf®之最頻繁副作用為：震顫、頭痛、 腹瀉或便秘、腹部疼痛、高血壓、腎功能損傷及失眠。 可能發生之其他副作用包括：肢體之感覺異常、感覺遲 I37953.doc -62- 200938634 非特異性疼痛 二其:管二莫:1之最常見副作用為發…瘍(至 療。其他：制’但一些患者需要因此中斷治 療其他常見副作用包括：高膽 脂 (必需降脂質藥物仏旅… 呼纟及4質企症 藥物…療）、血小板減少症及白血

貧血、肺炎、低鉀血症、浮腫、由會Λ Λ 痛 皮膚皮療、肝酶升高、頭 + Λ、其㈣化系統症狀、骨絡及關節貞。儘管極 /’但雷帕黴素可引起過敏反應。 、、阿那白滯素（Kin〇:㈤那白滯素之最常見副作用為 主射。P位的反應’包括發紅、腔服、發炎及疼痛。此等反 應一般在第—個月後消失。其他副作用可包括：腹部疼 痛、骨絡及關節感染、腹瀉、類似流感的症狀、頭痛、噁

心、嚴重感染（諸如蜂窩組織炎及肺炎、鼻賨炎上呼吸 道感染）。 相較於安慰劑與依那西普組合使用，阿那白滞素與嚴重 感染之發生率增加有關。此等研究進行多達28週，而此研 九中之患者將接受此兩種藥物總共1 〇天，且可密切監測感 染。 抗胸腺細胞球蛋白（家兔）(Thymoglobulin®):與ATG有 關之最常見副作用包括發熱及寒戰。個體亦有較低程度之 腹填、頭痛、酸痛/疼痛、°惡心、肢體腫服、呼吸短促、 虛弱、脈頻及血壓升高。 137953.doc •63- 200938634 研究中所用其他藥物之風險。 肝素.可增加肝穿刺部位之出血風險'容易於傷血 腫、血小板減少症》肝素或低分子量肝素（L〇ven〇x)的其 他風險包括抗血小板抗體形成直接引起的肝功能測試升高 • 】板減少、症。右使用低分子量肝素（Lovenox)，則估 "十肝素誘發血小板減少症的發生率較低，且在該環境中感 - 覺為0.2%。 ❹ 斯塔利平（JanuvU⑧）：斯塔利平所報導之最常見副作用 為.上呼吸道感染、鼻塞或流鼻水、咽喉痛及頭痛。斯塔 利平偶爾會引起胃不適及腹瀉。在研究中，此等副作用一 般為輕微的且不會致使患者停止服用斯塔利平。亦可能發 生上文未列出之其他副作用。 其他風險。心理影響：臨床胰島移植作為Z型糖尿病的 潛在療法已在媒體討論，糖尿病以一個樂觀程度發表，但 迄今未在臨床結果的基礎上得到驗冑。因Λ，該手術不能 ❹ ㈣高血糖及在使用或不使用外來胰島素的情況下保持持 續血糖正常可能與失望心理可能發展臨床抑鬱之程产有 關。 研九效益。成功胰島細胞移植提供一定程度之血糖正常 控制’外來騰島素療法不可能實現此控制。此包括消除危 S*糖事彳。血糖正常控制降低糖展病的微脈管併發症 風險（諸如，腎病、視網琪病、神經病、心臟病）且甚至逆 轉一些長期併發症。當個體變得無需联島素注射時，產生 最大效益。具有持續血糖正常之個體儘管仍需要外來每日 137953.doc 200938634 胰島素，但將受益於葡萄糖控制的長期作用。 未實現持續血糖正常控制之個體（在使用或不使用胰島 素情況下）仍可受益於作為研究之部分的比其常規追蹤更 密切的追蹤。 風險/效益比。使用此方案之移植誘發之長期血糖正常 的署在效益須以個體為基礎對每一患者針對免疫抑制的其 他非必要風險進行權衡。此等患者體内之危險低血糖事件 及重大血糖偏移的其他急_性後遺症之潛在發病率或死亡率 對其而言必定為比騰島移植程序大的風險，且需要長期免 疫抑制》 統計方法。分析群體。研究中登記之患者若接受過至少 一次胰島細胞輸注則可包括於分析中。分析將包括因某些 參數及時間安排分析最終將退出研究之患者。由於對移植 患者研究的先前經驗，吾人預期2/15(13.3%)的退出或不可 評估患者比例。 在BB-IND 11731及BB-IND 12916下初始登記及移植的 患者可獨立於僅在BB-IND 12916下在此新方案下接受移植 之患者進行分析。 樣本量及統計效力。選擇15名患者之樣本量作為適當量 來提供使用或不使用外來胰島素之持續血糖正常的初步估 算樣本量汁算係基於在以下假定下第一功效終點變數灰 色素Ale與C肽的比較： •假定成對t測試可用於比較基線與追蹤來評估效力 •對於血色素A1C而言，假設8.5至6.0的變化具有〇83之 137953.doc -65· 200938634 差異的標準偏差。 •對於C肽而言’假設〇·2至2.0的變化具有113之差異的 標準偏差。 •可在0.05置信度下進行雙側測試。 •參變量比較的統計效力：80%。 基於此等假定，以及13°/。的可能退出率，13名患者之樣 本量對於相較於基線參數時偵測追蹤中假設之第一功效終 點中的差異之最小80%效力可為足夠的。 第一功效參數。第一功效終點變數為最終胰島細胞移植 3、6、12及24個月後，不使用外來胰島素或使用降低之胰 島素劑量恢復持續血糖正常之患者的比例β假設之第一功 效終點失敗率：20%。 可收集以下資料評估胰島素依賴性：作為糖尿病控制之 量度的血色素A1C、MAGE、m值及c肽；未變得具有胰島 素獨立性之患者㈣島素冑求；㈣或不使用夕卜來騰島素 實現持續血糖正常所需的總胰島質量。 SUITO指數=15〇〇X(^ /[血糖含量（mg/di) 63(mg/di)](空 腹）。第二功效參數。可在最終移植後3、6、12及24個月 »平估以下第二功效參數中之每一者。假設之第二終點失敗 率：15% 〇 待收集之其他資料包括：存在/不存在無症狀低血糖； 低血糖事件發生率（儘管可使用值的數值區間）·使用或不 使用外來姨島素情況下實現持續血糖正常所需的胰島細胞 輸注數(儘管可使用值的數值區間）；腎功能評估；與免疫 137953.doc -66 - 200938634 抑制方案有關之發病率；與胰島細胞輸注有關之發病率； 待經吾等小組用於其他34名移植後患者的"生活品質"詢問 表由患者自身評估收集之接受者的生活品質評估。就如何 使胰島移植更令患者滿意來收集患者意見。 統计方法。可使用McNemar測試來分析分類變數。當違 反發病率假定時，可使用方差重複量測分析及弗里德曼測 試（Friedman’s test)來分析連續資料。可使用邦費羅尼多次 比較程序（Bonferroni multiple comparisons procedure)以 0.05置信度進行追蹤逐對比較。可使用患者及移植存活率 的卡普蘭明治估算（Kaplan Meier estimate) » 行政及管理因素《起始研究之前。在第一批患者登記前 向貝勒大學醫藥研究中心及/或貝勒聖徒醫學中心提供以 下各項： 1. 成之食品及藥物管理局（FDA)1572表。 2. 究員及助理研究員的履歷及行醫執照。 3. 案之研究員簽署"頁及任何適用修訂由研究員簽署及 註明日期。 4· RB成員清單或irb保障編號。 5_案的IRB批准之書面確認、修訂（若需要）及知情同意 書係遵照聯邦法規21CFR第50部分及21 (:^尺第56部 分。 6.務狀況彼露之書面文件係遵照聯邦法規2lcFR第54部 分。 7·驗室認證文獻及正規參考範圍。 137953.doc -67- 200938634 儉理審查委貢會批准《«在執行前’此方案（包括任何後 續修訂）須提交給FDA且由根據FDA法規設立之IRB批准。 核可方案之任何其他修訂或偏差須提交給舰且由根據 FDA法規設立之irb批准。 經簽署之知情同意書。在進行任何方案指定之程序之 : 冑’研究員或指定人員有義務自各患者，或患者之法定代 -表（亦即，雙親/法定監護人）獲得經簽署且標註曰期的irb 批准之書面知情同意書。 ❹ 知情同意書之修訂及/或變化。可在執行影響患者安全 性或安全性及/或功效之評估的任何修訂之前獲得交予fda 的提交及IRB批准的書面確認。行政本質之方案修正不需 要IRB批准，但可提交至IRB及FDA進行通知。若知情同意 書存在變化’則須獲得IRB批准之書面確認。 研究員職責。研究員有義務根據如簽署表FDA 1572、適 用之國家法律及國際協調會議：良好臨床實踐：鞏固方針 ❹ 所說明的聯邦法規21 CFR 312.60-69進行此研究。研究員 負責通知IRB與研究及研究程序有關的任何安全性問題， 包括嚴重不良事件報告（若需要）及所有IND安全性報告。 研究監測。IND主辦人將雇用監測人員根據保證良好臨 床實踐及方案程序順應性需要之頻率對研究進行審閱。可 確認源文件以確保準確完成個案報告表且將回顧位於研究 場所之管理文件《個案報告表（CRF)可為僅確認安全性及 功效變數的100%源文件。對於其餘變數而言，監測人員 將對20%資料進行源文件確認^ FDA代表保留在任何時間 137953.doc -68· 200938634 視察研究場所之權利。 由BUMC及外部成員組成之資料安全性監測委員會 (DSMB)每年將會面*少於料以對此臨床試驗的安全性 及功效資料進行審閱。 W究記錄。在料得料可或麗撤出且已通報FDA I，研究員有責任將與進行研究有關的所有記錄及文件保 留2年％九員贊同在處置、移動或轉移任何與研究有關 之s己錄之前獲得主要研究員同意。 ❹ 方案中所述方法產生之資料可記錄於患者的醫學記錄及/ 或研究進程註釋中。在提供給各患者之個案報告表上可明 瞭地謄寫所有資料。研究員將贊同提供對進入此研究之所 有患者的辦公室、門診、實驗室及/或醫院記錄的訪問。 對此等記錄之訪問及檢視可為貝勒大學醫藥研究中心或貝 勒聖徒醫學中心及主要研究員所需。此外，所有記錄可經 爻食品及藥物管理局或其他衛生主管部門官員的檢視。 φ 研究員應以適當間隔（不超過1年）向FDA及IRB作出準確 且足夠的書面進展報告❶主要研究員應在研究完成或終止 後3個月内向FDA及IRB作出準確且足夠的最終報告。 . 患者隱私。貝勒大學醫藥研究中心及貝勒聖徒醫學中心 月疋患者保護隱私不受侵犯的權利。僅患者識別編號將鑑 別出貝勒大學醫藥研究中心或貝勒聖徒醫學中心檢索之患 者資料。然而，遵照聯邦法規，要求研究員允許貝勒大學 醫藥研究中心或貝勒聖徒醫學中心及（若需要）FDA或其他 政府機構之代表根據需要審閱及/或複製與研究有關的任 137953.doc -69- 200938634 何醫學記錄。 訪問醫學記錄應需要獨立於知情同意書之患者陳述的棄 權聲明或授權，研究員負責自適當個體以書面形式獲得該 許可。 結果公布。由此研究獲得之資料最終可在專業科學會議 呈現及/或在科學期刊發表。可藉由在所有公開案中使用 :編碼或編號來保護研究個體的身份。 表2.免疫抑制藥物及調整。 西羅莫司劑量調整 SIR目標範圍 SIR實際谷含量 所提議之作用 12-15 ng / mL (ICT後的前3個 月） < 6 ng / mL 第1天投予負荷劑量及新維持劑 量，此後投予新維持劑量 6-12 ng / mL 根據式#1調整劑量 12-15 ng / mL 無需調整 > 15 ng / mL 根據式#1降低劑量 7-10 ng / mL (ICT後3個月以 上） < 4 ng / mL 在第1天投予負荷劑量及新維持劑 量，此後投予新維持劑量 4-7 ng / mL 根據式#2調整劑量 7-10 ng / mL 無需調整 >10 ng / mL 根據式#2降低劑量 式#1 : SIR目標含量為12-15 ng/dL之劑量調整： 新劑量（mg)a=目前劑量b(mg) X [16/SIR谷含量e (ng/mL)] 式#2 : SIR目標含量為7-10 ng/dL之劑量調整： 新劑量（mg)a=目前劑量b(mg) X [16/SIR谷含量e (ng/mL)] 式#3 :負荷劑量之計算式： SIR負荷劑量（mg)=3 X[新維持劑量（mg)-目前維持劑量 137953.doc -70· 200938634 (mg)] 註釋： a西羅莫司展現1至12 mg/m2的劑量比例 b如目前給出 c若西羅莫司谷含量小於定量限度（1_5 ng/mL)，則出於計 算目的起見假定目前谷含量為1.5 ng/mL。 西羅莫司具有約3天之半衰期。因此，在劑量改變後需 要2週達到新穩態含量。若谷含量低於所要較低目標谷含 量的一半，則必需負荷劑量。 個體應首先藉由飲食調整及標準藥物治療來治療高膽固 醇血症及高甘油三酯血症（兩者皆定義為高於200 mg/dL)。 若治療已經優化，則應考慮SIR劑量調整。 表3.西羅莫司-毒性指南 下文概述藥物毒性之劑量調整。在排除或治療其他毒性起因後應降低劑量。應向主要 研究員提出關於劑量修改之問題。. 實驗室測試 SIR 含量;£ 10 ng/mL SIR 含量 >10 ng/mL and <20 ng/mL SIR含量 £ 20 ng/mL 血小板計數 <75,000/mm3 在48-72小時内重複含 量，考慮保持SIR未決 結果及其後的監測 將目前SIR劑量降低 25% 將目前SIR劑量降低 50%。在5-7天内重複 含量 < 50,000/ mm3 保持或中斷SIR 將目前SIR劑量降低 25-33% 將目前SIR劑量降低 75%。在5-7天内重複 含量 WBC <3000/mm3 在5-7天内重複含量且 監測 將目前SIR劑量降低 25% 將目前SIR劑量降低 50%。在5-7天内重複 含量 <2000/mm3 保持或中斷SIR 將目前SIR劑量降低 25-33% 將目前SIR劑量降低 75%。在5·7天内重複 137953.doc -71 - 200938634 ' ' 甘 油三酯* > 750 mg /dL 在5-7天内重複含量且 監測 將目前SIR劑量降低 25% 將目前SIR劑量降低 50%。在5-7天内重複 含量 > 1000mg/dL 中斷SIR 將目前SIR劑量降低 25-33% 將目前SIR劑量降低 75%。在5-7天内重複 含量 膽固酵* > 500 mg /dL 在5-7天内重複含量且 監測 將目前SIR劑量降低 25% 將目前SIR劑量降低 50%。在5-7天内重複 含量 > 750 mg /dL 中斷SIR 將目前SIR劑量降低 25-33% 將目前SIR劑量降低 75%。在5-7天内重複 含量 西羅莫司及他克莫司：細胞色素P-450的重要臨床誘導 劑及抑制劑。 SIR及TAC為細胞色素P-450(CYP)及P-醣蛋白兩者的受 質。其廣泛由腸壁及肝臟中之CYP3A4同功酶代謝。吸收 及隨後之代謝受影響此同功酶之藥物影響。 藥物相互作用： 參 地爾硫卓（Diltiazem)-可增加SIR/TAC含量。若絕對必 要，則必需小心監測地爾硫卓之投藥且SIR/TAC劑量調整 可為必要的。 酮康唑-可顯著升高SIR/TAC含量，因此應避免使用酮康 嗤〇 137953.doc •72- 200938634 表4 可增加SIR/TAC血液濃度之其他藥物或產品： 鈣通道阻斷劑 尼卡地平 (Nicardipine) 維拉帕米 (Verapamil) 硝苯地平(Nifedipine)、 地爾硫卓 抗真菌劑 克黴唑 (Clotrimazole) 氟康唑 伊曲康唑 (Itroconazole) 大環内酯抗生素 紅黴素 (Erythromicin) 克拉黴素 (Clarithromycin) 醋竹桃黴素 (Troleandomycin) 腸胃螺動促進劑 甲氧氣普胺 (Metoclopramide) 紅徽素 西沙必利 (Cisapride) HIV蛋白酶抑制劑 , 利托那韋 (Ritonavir) 茚地那韋 (Indinavir) 達那唑 (Danazol) 其他藥物/前藥 -------- 溴隱亭 (Bromocriptine) 西咪替丁 (Cimetidine) 甲氧氣普胺 蛋白酶抑制制 —---- 葡萄柚汁 利福平（Rifampin)-可實質上降低SIR/TAC含量。替代治

療劑-應考慮。 表5 可降低SIR/TAC含量之其他藥物 ---- 其他藥物/前藥 卡馬西平 (Carbamazepine) 苯巴比妥 (Phenobarbital) 苯妥英 (Phenytoin) 利福布>丁 (Rifabutin) 利福平 (Rifampin) 利福噴丁 (Rifapentine) 貫葉連翹提取物 抗驚厥藥 抗生素

註釋 · I A凊單並未包括一切。在開始或停止任何藥物 (包括相/5太 久屋品）之前，個體應經研究員檢查。研究員應結 合藥物審閱息者飲食。 137953.doc •73- 200938634 西羅莫司-毒性指南。若SIR因為實驗室異常而遭停止， 那麼若置疑之實驗室值回復至基線則其可重新開始且保持 給藥不超過ίο天。重新開始SIR之個體應以降低之劑量開 始’接著可逐漸增加至完全劑量。 在研究期間的任何時間，若獲得小於6 ng/mL之SIR含 量，則可進行重複測定。除非主要研究員另外批准，否則 由於毒性不能耐受28 ng/mL之SIR谷含量的個體可永久中 斷測試條款，且將開始替代免疫抑制。註釋：此不適用於 SIR劑量滴定初始期獲得之SIR谷含量。 在起始劑量降低前應獲得用於測定SIR含量之金液樣 本。接受基於SIR之療法的個體在不存在鈣調神經磷酸酶 抑制劑的狀況下具有較高低鉀血症及/或低磷酸鹽血症頻 率。在臨床上顯著之電解質擾亂的事件中，推薦適當替代 療法及對電解質的進一步監測。亦可能需要調整來補償可 能由利尿劑治療產生之電解質紊亂。向WR醫學監測人員 Φ 報告任何嚴重研究事件，包括機會性感染。在研究員判斷 中’對於血清膽固醇或甘油三酯濃度分別保持>75〇 mg/dL *>!，000 mg/dL之個體而言，儘管只有至少8週，但其仍 • 為最佳降脂質療法： 除非主要研究員另外批准，否則若谷SIR濃度3 ng/mL ’則患者將中斷SIR且將開始替代免疫抑制療法。 若相應谷SIR濃度>8 ng/mL，則SIR劑量可根據上表4降 低0 137953.doc •74· 200938634 表6 白血球減少症之麥考酚酸@或(^11(:印0劑量降低 WBC 細胞/ram3 目前CellCept®劑量降低 >3000 無 < 3000 -> 2000 i自目前劑量降低25% $ 2000其中ANC仝1000個細胞/mm3 4自目前劑量降低50% ANC S 1000個細胞/mm3 保持直至ANC 2 1000個細胞/mm3 遠程毛細葡萄糖監測。葡萄糖監測為胰島移植後之患者 追縱的重要部分。即時通信使得能夠及時治療介入，此可 能避免喪失移植功能。 葡萄糖量測裝置為市售毛細葡萄糖計（LifeScan OneTouch Ultra，由 Johnson and Johnson的一個部門LifeScan製造）， 其由FDA批准用於人類用作2類醫學裝置。與正在使用的 其他毛細葡萄糖計一樣，在葡萄糖讀取後，患者作出關於 葡萄糖控制之治療決定。 φ GlucoMON®為附屬於毛細葡萄糖計之自動無線血糖收 集及報導系統，其可用於經由安全網際網路連接發送加密 葡萄糖資料供患者及經授權糖尿病護理小組審閱。裝置由 Diabetech, LP製造及提供，且目前在IRB批准之方案下在II 期及III期臨床試驗中用作非重大風險研究裝置（參見臨床 試驗政府識別碼：NCT00322478)。Diabetech未對葡萄糖 計作出變化。此外，在作出關於治療之決定之時間及地 點，GlucoMON不向現場護理之患者提供資料。在患者使 137953.doc -75- 200938634 用LifeScan OneTouch Ultra葡萄糖計作出治療決定之後， 患者可將葡萄糖計與GlucoMON附屬裝置連接以傳遞資 料。

GlucoMON接著根據儀錶之510(k)經清除應用程式設計 員介面且在儀錶使用示值内讀取葡萄糖計中儲存之資料。 一旦資料自儀錶複製，則GlucoMON將資料加密且使用兩 通道通信方案傳遞至遠程系統以確保資料在通信期間及在 遠程系統儲存時的完整性。 資料經Diabetech全國無線網路傳遞至Diabetech基礎飼 服器（包括主體患者記錄（hosted patient record))。根據吾 人之組態’資料每天一次轉達至主要研究員或其指定人 員。 資料的即時製備及傳遞確保結果之正確通信，使健康護 理小組能評估葡萄糖控制之有效性、患者順應性及需要介 入之臨界值的問題警示。使用此系統確保不必完全依賴患 者來進行準確葡萄糖記錄及報導。

Diabetech作為供應者小組的延伸進行操作且就患者資料 確保患者隱私及安全。出於在Diabetech與研究員小組之間 交流患者資料之目的，可使用不可識別患者之獨特識別碼 描述個體，該識別碼不與一般公認之識別碼（諸如，HIPAA 中所列之名字、出生日期、標識號）或其部分關聯。 Diabetech將就包括將儀器直達運輸至患者住處之問題與患 者交流且將對患者進行技術支持以確保及時且準確之系統 處理。Diabetech與貝勒大學醫藥研究中心或貝勒聖徒醫學 137953.doc -76- 200938634 中心出於資料傳遞之目的共用用戶患者識別碼，主要研究 員及Diabetech指定人員擁有將用戶識別碼與實際識別碼聯 繫之受保護資料庫（在患者同意時”經授權護理小組内通 常保持患者保密性及患者資料之保護且此亦在知情同意書 文件中描述。 在對治療作出任何改變之前，醫生將與患者聯繫來討論 其血糖含量及目前胰島素劑量水準，包括經由服用指定劑

量來測定患者順應性。此亦將用作電子傳遞資料之確認。 除了使用GlUC〇MON系統之外，亦可要求患者保持其血 糖含里之日誌，包括毛細葡萄糖計未捕獲到之細節，諸如 飲食及鍛煉水準。GlucoMON系統未添加患者請求之文 件。此外，葡萄糖計本身儲存定期門診患者隨訪期間患者 及醫學小組可用的15〇個讀數。 出於資料安全性之目的，Diabetech與貝勒大學醫藥研究 中心或貝勒聖徒醫學中心出於資料傳遞之目的共用用戶患 者識別碼，該識別@不與一般公認之識別碼（諸如，Η·二 中2列之名字、出生曰期、標識號）或其部分關聯。主要 研究員及Diabetech指定人員擁有將用戶識別 碼聯繫之受保護資料庫（在患者同意時）。貫際^ 為了確保準確資料保護及儲存，Diabetech在適當位置具 有多個安全層： 模組安全性及監測 1. 私有無線網路 2. AES加密 137953.doc -77- 200938634 3. 對稱密碼管理 4. 遠程管理 5. 用於網路識別之嵌入模組ID 網路及伺服器安全性及監測。 1. 硬體防火牆 2. 聲脈衝信號偵測 3. Ο/S更新及補丁 4. 網路入侵偵測系統（IDS) 5. 服務監測 6. 系統監測 7. 過程監測 8. 受限物理伺服器接入 9. 具有硬體防火牆之加固伺服器 10. 僅經公用密碼及安全外殼（secure shell)接入伺服 器。 11. 入侵監測及補救軟體 12. 分布式拒絕服務攻擊（DDOS)監測及預防（Cisco Guard DDoS) 13. Dallas，TX之現有技術資料中心提供多餘物理伺服器 位置99.9%之SLA保障 14. 現場手及眼 15· 24/7/365現場支持 16·功率、HVAC、滅火（fire suppression)、網路連通性 及安全性中之完全冗餘量。 137953.doc -78- 200938634 17. 由具有PowerWare UPS備用電池電源及現場雙柴油 發電機之TXU電機（electric)驅動之多個電網。 18. HVAC系統為冷凝單元，其藉由Data Aire在與10個經 管理支架供應器偶合之冷卻中提供冗餘量。另外12 個第三團體支架供應器經交又連接在建築中可用。 19. 滅火包括預先作用之無水管道系統内容物 20. VESDA(極早期煙偵測設備） 訓練患者使用Diabetech之GlucoMON裝置。因為裝置依 ® 賴於LifeScan製造的標準OneTouch Ultra計，所以訓練涉 及工業規範且僅涉及觸發自動資料收集的對接過程以及攜 帶型裝置之定期充電。若患者具有與護理及技術維護有關 的任何疑問，則其亦可獲得用戶支持。 當使用電腦系統來創建、修改、轉移或儲存食品及藥物 管理局（FDA)管理之任何資訊或過程的電子表述時，21 CFR第11部分適用。Diabetech已完成對其整個系統的大規 _ 模分析，該系統包括GlucoMON裝置及系統發展生命週期 (SDLC)中所用之程序。因為21 CFR第11部分要求一直關 注以保持順應性，所以Diabetech採用人員負責管理此法規 . 之動態特性。

Diabetech已進行多個確認及驗證測試以藉由比較葡萄糠 計資料與系統輸出資料來確保資料完整性。此外，吾人亦 已進行内部檢查以確保每一過程及過程之每一步的準確且 完全之資料收集、通信及儲存。 此外，Diabetech可或可不商業出售GlucoMON裝置的目 137953.doc •79· 200938634 前版本。在吾人決定探尋此裝置之市場純益的事件中， Diabetech自身已接受在FDA市售前批准過程之研究裝置免 稅方針（Investigational Device Exemption guidelines of the FDA’s Pre Market Approval process)之條款下的額外順應 性負擔。GlucoMON已在一些試驗中作為非重大風險研究 裝置展開。因此，應永遠不單獨基於此裝置報導之資料作 出療法調整。 本質上，GlucoMON裝置及GlucoDYNAMIX報導系統實 現使患者血糖日誌自動傳遞至護理小組的作用；此為一般 涉及經傳真手動傳遞書面日誌的過程。 總之，Diabetech採用嚴格軟艘研發法，包括作為吾人對 CFR21第11部分之順應性努力之部分的資料完整性保證。 Diabetech在IRB批准之方案下運作，該方案迄今與 GlucoMON裝置呈遞'’非重大風險”之主要研究員分類一向 符合。因此，Diabetech由簡短且可理解之揭示内容遵守患 者的知情同意書且遵守裝置上的標記要求，該等標記要求 描述裝置的研究特性而其性能特徵尚未確定。 實例1。 使用腦死亡供體之胰臟，使用管注射進行7次胰島分離 (DI組）且不使用管注射進行8次胰島分離（標準組）。基於關 於移植的艾德蒙頓方案評估經分離胰島。DI組相較於標準 組具有顯著較高之胰島產率（588,566 ± 64,319 IE比354,836 ± 89,649 IE，P<0.01)及存活力（97.3 土 1.2% 比 92.6 土 1.2%，Ρ<0·02)。DI組中所有7個經分離胰島製劑（100%)， 137953.doc -80- 200938634 標準組中8個經分離胰島製劑中之三個（38%)滿足移植標 準。將來自DI組之胰島移植入三名1型糖尿病患者體内且 所有三名患者變得具有胰島素獨立性。 發現管注射（DI)顯著改良經分離胰島之數量及品質，使 得臨床胰島移植具有高成功率。此簡單修改將對臨床胰島 移植產生重大影響。 無法一直獲得高數量及品質之胰島為臨床胰島移植的主 要障礙之一。甚至高級胰島中心亦僅實現50%臨床胰島分 離成功率（1-3)。最近’吾人證明對里科爾迪胰島分離法之 修改使吾人能使用無心跳供體（NHBD)實現高於80%的臨床 胰島分離成功率（4，5)。此經修改之胰島分離方法由在心 博停止後原位冷卻胰臟、以經改質Kyoto溶液管式保存、 兩層胰臟保存、胰臟消化之里科爾迪法、密度調整繼之以 使用埃克沙醇（iodixanol)及Kyoto溶液進行胰島純化組成 (6) »在此等程序中，吾人在此研究中針對腦死亡供體 (BDD)引入胰管注射以闡明此技術之實用性。揭示騰管注 射之引入使吾人能夠實現7次連續成功的臨床胰島分離》 材料及方法。供體背景。經西南部移植聯盟（Southwest Transplant Alliance，Dallas，TX)或 LifeGift(Fort Worth， TX)在2005年4月16曰與2008年5月17曰之間獲取15個來自 BDD之胰臟。基於艾德蒙頓方案進行供體選擇（7)。將供體 胰臟分配至管注射（DI)組（N=7)或標準組（N=8)。 胰臟獲取、胰島分離及純化。所有胰臟係由貝勒地區移 植協會（Dallas & Fort Worth，TX)的移植外科醫生獲取。 137953.doc -81 - 200938634 對於DI組而言，吾人在獲取地點自胰臟移除十二指腸及脾 臟。此過程由貝勒胰島小組進行。將胰臟稱重且將套管自 胰臟頭部方向經主胰管立即插入所獲取之胰臟中。管内投 予約 1 ml/g胰臟 ET-Kyoto溶液（Otsuka Pharm Factory Inc.， Naruto，Japan)(4-6)。對於標準組而言，進行管注射法。 所有胰臟藉由靜態充氧兩層（氧化全氟碳化物/UW溶液）法 保存歷時少於6小時（8)。 根據良好製造規範（Good'Manufacturing Practice，GMP) 在貝勒研究所（Dallas，Texas)的細胞處理設備中操縱胰島 製備。根據里科爾迪法進行胰島分離（7, 9)。簡言之，在 肤臟去汙後，在受控方式下以冷酶溶液灌注該等管。接著 將擴大之胰臟切成9塊且轉移至里科爾迪室。藉由在37°C 下經里科爾迪室重複循環酶溶液來消化胰臟。I期階段定 義為將胰臟置於里科爾迪室與開始收集經消化胰臟之間的 時間。II期階段定義為收集開始與結束之間的時間。 使用於速凍單采系統中之Biocoll(COBE 2991細胞處理 器，Gambro Laboratories，Denver，CO)以連續密度梯度 純化胰島（7，9)。 胰島評估。由兩個研究員獨立判斷胰島評估。在光學量 板下使用雙硫腙（dithizone)染色（Sigma Chemical Co.，St. Louis, MO)(2 mg/ml)測定胰島產量且將其轉化為標準數目 之胰島當量（IE，直徑標準化為1 50 μιη)(6，9)。藉由比較 雙硫腙染色組織與未染色外分泌組織的相對數量評估純 度。使用二乙酸螢光素（FDA)及碘化丙啶（ΡΙ)染色同時目 137953.doc -82- 200938634 測活及死細胞來評估胰島存活力（6，9)。 胰島移植入1型糖尿病患者體内》—旦胰島製劑滿足關 於移植的艾德蒙頓方案之標準，則認為彼等分離成功。基 於艾德蒙頓方案’吾人批准臨床移植的目前標準為：胰島 產量超過4000 IE/kg體重，純度超過3〇%，存活力超過 70% ’組織體積小於1〇 n^，内毒素含量小於5 EU/kg體重 ‘及革蘭氏陰性菌株（7)〇 基於艾德蒙頓方案進行接受者選擇使患者鎮靜且 對所有6名患者使用經皮肝穿刺法獲得門靜脈之接入。一 旦確認接入’則使用塞爾丁格技術將康普（Kuinpe)導管置 於主門靜脈内。藉由重力及使用包技術輸注胰島（5)。 經移植肤島功能之評估。根據胰島移植之前及之後的每 曰血糖含量、也清€肽、胰島素需求量及111)八1(：來評估胰 島功能。 統計分析。所收集資料的值表示平均值± SE。使用不成 ❹ 對t測試比較兩個組。兩組之間的比率經費氏精確測試 (Fisher’s exact test)比較。P值小於〇.05視為顯著。 供體及胰島特徵。與供體有關之變數展示於表7中。在 ； 陡別比、年齡、體重指數、葡萄糖、丙胺酸轉胺酶（ALT) 及肌酸酐的峰值血液含量中不存在顯著差異。 137953.doc -83- 200938634 表7 人類胰臟供體之供體相關變數 組 性別（3F/M) 年齡⑽ BML 〇cg/m2) 峰值血液含量 葡萄糖(mg/dl) ALT (IUjL) Crea (mg/dl) DI 2/5 36 317±28 227.6± 17.5 37.3 ±8.3 l-3±0.2 / 標準 2/6 37 5士2.3 29.7 ± 1.8 221.4 ±26.1 33.1*7.8 15±0.2 Ρ值 0 99 0.6? 072 0.85 0 72 041 DI代表管注射，BMI代表體重指數，ALT代表丙胺酸轉胺酶，crea代表肌酐酸。值表示 為平均值± SE。P值係使用學生t測試計算（性別除外）。性別之p值係使用費氏精確測 φ 試計算。 胰島分離變數展示於表8中。在胰臟重量、冷缺血時 間、I期階段及未消化組織體積中不存在顯著差異。所有 胰臟保存少於6小時^ II期階段顯著長於DI組。 表8 胰島分離變數 組 胰臟重量（g) CIT (min) I期（min) Π期(mm) 未消化組織（g) DI 115.5± 16,9 157.4 ± 18 3 12 7±19 68.3±3.3 18.1±2.9 標準 93.3 ±8.3 218.6±20.6 15.4i2.2 38.7±4.9 18.4 土 2,1 P值 0.24 0 05 0 38 <0.001 0 92 CIT代表冷缺血時間。值表示為平均值±SE e P值係使用學生t測試計算。 在姨島純化之前，DI組中之胰島產量顯著較高（DI比標 準；902,350 土 139,397 IE 比 497,457 土 89,414 IE ； Ρ<0·03)(圖1右側）。在胰島純化之後，〇1組中之胰島產量 亦顯著較高（DI 比標準；588,566 ± 64,319 ΙΕ 比 354,836 士 137953.doc -84 · 200938634 89,649 IE ; P<0.01)(圖1左側）。胰島變數展示於表9中。DI 組中之可變性顯著較高。DI組中之純度顯著較低。 表9 胰島變數 組 存活力（％) 純度(％) 離心塊 尺寸(ml) DI 97.3 土 1.2 53.3土 5 5 74±1.0 標準 92.6± 1.2 72.9 ±5.4 5.9 土 1.7 P值 <0.02 <0.03 051 值表示為平均值± SE。P值係使用學生t測試計算》

胰島分離之成功率。DI組中之所有經分離胰島製劑均有 資格用於移植（表10)。標準組中8個經分離胰島製劑中之3 個有資格用於移植；其餘5個胰島產量不足。吾人嘗試移 植DI組中所有7個胰島製劑，然而在一病例中，放射專家 不能接入門靜脈且製劑未移植。因此，僅6個製劑移植入3 名1型糖尿病患者體内。各患者接受兩個胰島製劑。在標 準組中，兩個成功製劑移植入兩名1型糖尿病患者體内。 表10 移植資格評定 組 合格 移植 DI 7)7(100%) W (89%) 標準 3/8(37.5%) 2/8 (25%) P值 <0.03 <0.05 P值係使用學生t測試計算》 137953.doc -85- 200938634 DI組中之臨床結果。在DI組中，所有三名患者之空腹企 糖在單次胰島移植後得以改良且在第二次胰島移植後繼續 改良（圖2)。重要的是，在第二次胰島移植後，沒有患者再 經歷重度低血糖。 在DI組中’所有3名患者變得具有胰島素獨立性（圖3)。 1^八10：在移植前為8.3%(第一名患者）、8.3%(第二名患者） 及7.4%(第二名患者）且在移植後分別為6.0%、5.8%及 5.8%。空腹C肽含量在移植前均偵測不到。第一名患者之 目前空腹C肽為2.2 ng/dl，第二名患者為3.2 ng/dl且第三名 患者為2.1 ng/dl。 據吾人所知’此對於使用腦死亡供鱧（BDD)之臨床胰島 移植而言為在供體部位胰管注射的第一次研究。此簡單修 改使吾人能具有7次連續成功的臨床胰島分離。因為胰島 分離失敗由於損失供體胰臟、浪費金錢及努力而為臨床胰 島移植的主要問題之一（1 〇)，因此此簡單修改對於胰島移 植而言具有重大價值。 先前’本發明者已展示包括管注射之里科爾迪法的修改 改良使用NHBD的胰島產量（4，5)。對於NHBD而言，吾人 使用ET-Kyoto溶液以及烏司他丁（4，5);然而，此研究排 除了烏司他丁，因為在USA購買不到烏司他丁。此外， BDD之騰蛋白酶抑制的實用性存在爭議（11，12)。在此研 究中，吾人確認單獨之ET-Kyoto溶液對於管式保存而士有 效。胰蛋白酶抑制在BDD之管式保存溶液中的實用性為五 人目前研究之目標。 137953.doc -86- 200938634 最近’吾人已展示在豬科動物模型中1 0%以上外分泌組 織在胰島分離之前的保存期間經受凋亡細胞死亡且經改質 Kyoto溶液的管注射將該比率降至2%以下（13)。此外，使 用UW溶液及經改質Kyoto溶液管注射改良豬科動物模型中 細胞組份中的ATP活性（13)。然而，UW溶液抑制膠原蛋白 酶活性（13)，且因此吾人選擇ET-Kyoto溶液用於人類胰島 分離。 管注射之一種機制為保護外分泌組織及胰島兩者免於凋 亡細胞死亡。重要的是，DI組與標準組之間I期時間無差 異’表明ET-Kyoto溶液之管注射在人類胰臟消化期間不抑 制膠原蛋白酶活性。 DI組中之純度顯著較低。此可能由於較健康外分泌組織 在胰島分離過程期間良好生存，產生低純度之胰島製劑。 此外，DI組中顯著延長之Π期時間表明較健康外分泌組織 具有較少自溶作用，產生延長之收集期。因為自溶外分泌 組織釋放若干消化酶，因此較少自溶作用對於防止經分離 胰島之過度消化而言可為重要的。有理由考慮管注射防止 外分泌細胞死亡且因此使得經分離胰島的過度消化得以避 免。關注到低純度隨組織體積而增加。DI組中的組織體積 較高’即使差異未達到統計顯著性。然而，所有胰島製劑 經調整至小於10 mL且吾人不具有與相對大組織體積有關 的移植順應性。 DI組中之經分離胰島的存活力顯著較高。此表明DI亦改 良經分離胰島之品質。 137953.doc -87- 200938634

Sawada等人證明少量1；〜溶液的管注射在齧齒動物模型 中保護胰管（14)。此為管注射的實用性之另一重要機制， 因為必需保持膠原蛋白酶傳遞之胰管的良好通暢。獲取部 位之管式保存允許吾人保持胰管在保存及運送期間通暢； 因此可僅使用一個套管用於膠原蛋白酶傳遞❶單插管技術 優於一般的雙插管技術，因為此技術消除切割胰臟用於插 官。因為胰臟未經切割，所以存在極佳胰臟膨脹且使膠原 蛋白酶滲漏最少。 ® 在此研究中，在純化過程期間損失約35。/。胰島。先前， 使用ET-Kyoto及碘克沙醇溶液調整密度以供Nhbd純化， 產生約80%回收率（5)。若吾人能實現與bdd相同之回收 率’則吾人可能自單個供體獲得超過7〇〇,〇〇〇 IE。目前， 10,000 IE/kg接受者體重為胰島素獨立性之目標（7)，因此 此咼產量將使吾人能在至多70 kg體重之患者體内進行單 供體胰島移植。引入密度經調整之ET_Ky〇t〇及碘克沙醇溶 ❹ 液用於純化吾人實驗室目前正在研究。 DI組中的所有三名經移植患者變得具有胰島素獨立性， 且使用％性C肽具有經改良血糖控制。所有患者無嚴重低 血糖。此臨床結果表明管注射不僅適用於獲得高胰島產 量’而且亦促成高胰島品質。 在標準組中，一名患者接受過第一次胰島移植且另一名 患者接受過第一及第一次胰鳥移植（使用遠程中心分離之 胰島）（15)，因此目前胰島移植為其第二及第三次移植。在 吾人之騰島移植後，兩名患者皆實現暫時胰島素獨立性； 137953.doc -88- 200938634 然而吾人不能證明標準組的臨床結果，因為兩名患者均接 收自混合來源。 總之，ET-Kyoto溶液之瞢妳私姑 又官主射使吾人能夠實現7次連績 成功之臨床胰島分離（自BDD)e此簡單修改將對改良騰島 为離及成功臨床膜島移植產生重大影響。 . 預期本說明書中所論述之任何實施例均可關於本發明之 ' ㈣方法、套組、試劑或組合物加以實施，且反之亦然。 此外，本發明組合物可用於實現本發明之方法。 應瞭解，本文所述之特定實施例係由說明之方式展示， 而非用於限制本發明。本發明之主要特徵可在不脖離本發 明範鳴之狀況下用於各種實施例中。彼等熟習此項技術者 將認識到或能夠僅使用常規實驗來確定本文中所述之特定 程序的眾多相等形式。該等相等形式視為屬於本發明範鳴 内且由申請專利範圍所涵蓋。本說明書中提及之所有公開 案及專利申請案均指示彼等熟習本發明相關技術者之技術 ❹ 所有公開案及專利中請案係以引用的方式併入本文 中"亥引用的程度如同已特定地且個別地將各個別公開案 或專利申請案以引用的方式併入一般。 一 當在申請專利範圍及/或說明書中結合術語,,包含”一起使 用時，使用單詞可意謂"一個"，但其亦與 -或多個”、”至少一種/至少一個”及，，一種或一種以上/ 一 個或一個以上丨丨+ , 物及”及/或4: 儘管本揭示案支持僅指替代 之定義，但除非明確地指示僅指替代物或替代 物為互斥的，否則在申請專利範圍中使用術語"或”係用以 137953.doc -89- 200938634 意謂”及/或”。在本申請案全文中，術語"約"係用以指示對 於用以測定值或研究個體中存在之變化的裝置、方法而 言，值包括固有誤差變化。 如本說明書及申請專利範圍中所用，單詞”包含，,（及包含 之任何形式）、”具有”（及具有之任何形式）、"包括"（及包= 之任何形式）或"含有"（及含有之任何形式）為包含性或可開 放的且並不排除其它、未陳述之要素或方法步驟。

❹ 如本文所用之術語，，或其組合，，係指該術語前面所列項目 之所有排列及組合。舉例而言，”A、B、C或其組合"意欲 包括A、B、C、AB、AC、BC或ABC中之至少一者，且若 在特定環境中順序具有重要性，則亦包括BA、CA、cb、 CBA、BCA、ACB、BAC或CAB。繼續此實例明確包括 含有重複出現一或多個項目或術語的組合，諸如bb、 AAA > MB ^ BBC ^ AAABCCCC > CBBAAA ^ CABABB 等。熟練技術人員應瞭解，除非自上下 通常在任何组合中均不存在對項目或術語之數 本文中所揭不及主張之所有組合物及/或方法可根據本 揭示案在無需不當實驗之狀況下製備及執行。雖然已根據 較佳實施例描述本發明之組合物及方法，但對彼等熟習此 項技術者而言可明顯，變更可在不脖離本發明之概念、精 神及範_的狀況下應用於本文所述之組合物及/或方法及 應用於本文所述之方法的步驟或步驟順序中。對彼等熟習 項技術者顯見之所有該等類似替代及修改形式應視 為在如隨附申請專利範圍所界定之本發明之精神、範峰及 I37953.doc 200938634 概念範圍内。 參考文獻 1. LaPorte RE, Matsushima M, Chang YF: Prevalence and Incidence of Insulin-Dependent Diabetes. In: "Diabetes In America,” 第 2版.National Diabetes Data Group, National

Institutes of Health, National Institute of Diabetes and Digestive and Kidney Diseases, NIH Publication第 95-1468 期 > 1995, 37-47 °

2. Allen RD, Nankivell BJ, Hawthorne WJ, O'Connell PJ, Chapman JR: Pancreas and islet transplantation: an unfinished journey. Transplant Proc 2001;33(7-8):3485-8。 3. Gruessner RWG, Sutherland DER, Drangstveit MB, Bland BJ, Gruessner AC: Pancreas transplants from living donors: short-and long-term outcome. Transplantation Proc 2001, 33 (1-2): 819-820 〇 4. Sutherland DE, Gruessner RW, Dunn DL, Matas, AJ, Humar A, Kandaswamy R, Mauer SM, Kennedy WR, Goetz FC, Robertson RP, Gruessner AC, Najarian JS: Lessons learned from more than 1,000 pancreas transplants at a single institution. Ann Surg 2001, 233(4): 463-501 o 5. Robertson RP, Sutherland DE, Lanz KJ: Normoglycemia and preserved insulin secretory reserve in diabetic patients 10-18 years after pancreas transplantation. Diabetes 1999, 48(9): 1737-1740。 137953.doc -91 - 200938634 6. Fiorina P, La Rocca E, Astorri E, Lucignani G, Rossetti C, Fazio F, Giudici D, di Carlo V, Cristallo M, Pozza G, Secchi A: Reversal of left ventricular diastolic dysfunction after kidney-pancreas transplantation in type 1 diabetic uremic patients. Diabetes Care 2000，23(12): 1804-1810。

7. Allen RD, Al-Harbi IS, Morris JG, Clouston PD, O'Connell PJ, Chapman JR, Nankivell BJ: Diabetic neuropathy after pancreas transplantation: determinants of recovery. Transplantation 1997，63(6): 830-838。 8. Chow VCC, Pai RP, Chapman JR, O'Connell PJ, Allen RDM, Mitchell P, Nankivell BJ: Diabetic retinopathy after combined kidney-pancreas transplantation. Clinical Transplantation 1999，13(4): 356-362。 9. Sollinger HW, Odorico JS, Knechtle SJ, D'Alessandro AM, Kalayoglu M, Pirsch JD: Experience with 500 simultaneous pancreas-kidney transplants. Ann Surg 1998, 228(3):284-96 〇 10. Reddy KS, Stratta RJ, Shokouh-Amiri MH, Alloway R, Egidi MF, Gaber AO: Surgical complications after pancreas transplantation with portal-enteric drainage. J Am Coll Surg 1999;189(3): 305-313 〇

11. Gruessner AC, Sutherland DE: Pancreas transplant outcomes for United States (US) cases reported to the United Network for Organ Sharing (UNOS) and non-US 137953.doc -92- 200938634 cases reported to the International Pancreas Transplant Registry (IPTR) as of October, 2000. Clinical Transplants 2000,(1):45-72 ° 12. 2001 Annual Report of the U.S. Organ Procurement and Transplantation Network and the Scientific Registry for Transplant Recipients: Transplant Data 1991 -2000.

Department of Health and Human Services, Health Resources and Services Administration, Office of Special Programs, Division of Transplantation, Rockville, MD; United Network for Organ Sharing, Richmond, VA; University Renal Research and Education Association, Ann Arbor，MI。 13. Linetsky E, Bottino R, Lehmann R, Alejandro R, Inverardi L, Ricordi C: Improved human islet isolation using a new enzyme blend, liberase. Diabetes 1997,46(7):1120-1123。 14. Lakey JRT, Warnock GL, Shapiro AMJ, Korbutt GS, Ao Z, Kneteman NM, Rajotte RV: Intraductal collagenase delivery into the human pancreas using syringe loading or controlled perfusion. Cell Transplant 1999，8(3): 285-292。 15. Ricordi C, Lacy PE, Scharp DW: Automated islet isolation from human pancreas. Diabetes 1989，38 (Suppl. 1): 140-142。 16. Shapiro AMJ, Lakey JRT, Ryan EA, Korbutt GS, Toth 137953.doc -93- 200938634 EL, Warnock GL, Kneteman NN, Rajotte RV: Islet transplantation in seven patients with Type 1 diabetes mellitus using a glucocorticoid-free immunosuppressive regimen. N Engl J Med 343:230-238, 2000 » 17. Rutzky LP, Bilinski S, Kloc M, Phan T, Zhang H, Katz SM, Stepkowski SM: Microgravity culture condition reduces immunogenicity and improves function of pancreatic islets. Transplantation 2002 Jul 15, 74(1): 13- 18. Gaber AO, Fraga DW, Callicutt CS, Gerling IC, Sabek OM, Kotb MY: Improved in vivo pancreatic islet function after prolonged in vitro islet culture. Transplantation 2001, 72(11): 1730-1736。

19. Matarazzo M, Giardina MG, Guardasole V, Davalli AM, Horton ES, Weir GC, Sacca L, Napoli R: Islet transplantation under the kidney capsule corrects the defects in glycogen metabolism in both liver and muscle of streptozocin-diabetic rats. Cell Transplant 2002, 11(2): 103-112。 20. Hirshberg B, Montgomery S, Wysoki MG, Xu H,

Tadaki D, Lee J, Hines K, Gaglia J, Patterson N, Leconte J,

Hale D, Chang R, Kirk AD, Harlan DM: Pancreatic islet « transplantation using the nonhuman primate (rhesus) model predicts that the portal vein is superior to the celiac artery 137953.doc • 94- 200938634 as the islet infusion site. Diabetes 2002, 51(7): 2135-2140。 21. Levy MM, Ketchum RJ, Tomaszewski JE, Naji A, Barker CF, Brayman KL: Intrathymic islet transplantation in the canine: I. Histological and functional evidence of autologous intrathymic islet engraftment and survival in pancreatectomized recipients. Transplantation 2002, 73(6): 842-852 。 ❹

22. Drachenberg CB, Klassen DK, Weir MR, Wiland A, Fink JC, Bartlett ST, Cangro CB, Blahut S, Papadimitriou JC: Islet cell damage associated with tacrolimus and cyclosporine: morphological features in pancreas allograft biopsies and clinical correlation. Transplantation 1999, 68(3): 396-402 ° 23. Ricordi C, Strom, TB: Clinical islet transplantation: Advances and immunological challenges. Nat Rev Immunol. 2004 Apr;4(4):259-68。 24. Ryan EA, Paty BW, Senior PA, Bigam D, Alfadhli E, Kneteman NM, Lakey JRT, Shapiro AMJ. Five-year followup after clinical islet transplantation. Diabetes 2005 54:2060-2069 ° 25. Froud T, Ricordi C, Baidal DA, Hafiz MH, Ponte G, Cure P, Pileggi A, Poggioli R, Ichii H, Khan A, Ferreiraa JV, Pugliese A, Esquenazi VV, Kenyon NS, Alejandro R. 137953.doc -95- 200938634

Islet transplantation in type 1 diabetes mellitus using cultured islets and steriod-free immunosuppression: Miami experience· Am J Transplantation 2005 5(8):2037-2046。 26. Hering BJ, Kandaswamy R, Ansite JD, Eckman PM, Nakano M, Sawada T, Matsumoto I, Ihm S-H, Zhang H-J, Parkey J, Hunter DW, Sutherland DER. Single-donor, marginal-dose islet transplantation in patients with type 1 diabetes JAMA 2005 293(7):830-835 °

27. Markmann JF, Rosen M, Sigelman ES, Soulen MC, Deng S, Barker CF, Naji A. Magnetic resonance-defined periportal steatosis following intraportal islet transplantation: a functional footprint of islet graft survival? Diabetes 2003 52(7):1591-1594。 28. Ryan EA, Lakey JR, Rajotte, RV, Korbutt GS, Kin T, Imes S, Rabinovitch A, Elliott JF, Bigam D: Kneteman NM, Warnock GL, Larsen I, Shapiro AM: Clinical outcomes and insulin secretion after islet transplantation with the Edmonton protocol. Diabetes 2001，50(4): 710-719。 29. Owen, RJT, Ryan, EA, O'Kelly, K, Lakey, JRT,

McCarthy, MC, Paty, BW, Bigam, DL, Kneteman, NM, Korbutt, GS, Rajotte, RV, Shapiro, AMJ: Percutaneous transhepatic pancreatic islet cell transplantation in type 1 diabets mellitus: Radiologic aspects. Radiology 2003, 229: 165-170 。 137953.doc -96- 200938634 30. Matsumoto S, Qualley SA, Goel S, Hagman DK, Sweet IR, Poitout V, Strong DM, Robertson RP, Reems JA: Effect of the two-layer (University of Wisconsin solution-perfluorochemical plus 02) method of pancreas preservation on human islet isolation, as assessed by the Edmonton Isolation Protocol. Transplantation 2002, 74(10): 1414- 1419。

31. Rastellini C, Braun M, Cicalese L, Benedetti E: Construction of an optimal facility for clinical pancreatic islet isolation. Transplant Proc 2001，33(7-8): 3524 ° 32. Matsumoto S, Okitsu T, Iwanaga Y, Noguchi H, Nagata H, Yonekawa Y, Yamada Y, Fukuda K, Shibata T, Kasai Y, Maekawa T，Wada H, Nakamura T, Tanaka K. Successful islet transplantation from nonheartbeating donor pancreata using modified Ricordi islet isolation method. Transplantation 2006 82(4): 460-5。 33. Ryan EA, Shandro T, Green K, Paty BW, Senior PA, Bigam D, Shapiro AM, Vantyghem MC. Assessment of the severity of hypoglycemia and glycemic lability in type 1 diabetic subjects undergoing islet transplantation. Diabetes. 2004年4月；53(4): 955-62 。 34. Levy MF, Jennings L, Abouljoud MS, Mulligan DC, Goldstein RM, Husberg BS, Gonwa TA, Klintmalm GB. Quality of life improvements at one, two, and five years 137953.doc -97- 200938634 after liver transplantation Transplantation 1995 59(4): 515-518。 參考實例1。

Kin T，Mirbolooki M，Salehi P等人Islet isolation and transplantation outcomes of pancreas preserved with University of Wisconsin solution versus two-layer method using preoxygenated perfluorocarbon. Transplantation 2006; 82:1286。

Matsumoto I，Sawada T，Nakano等人Improvement in islet yield from obese donors for human islet transplants. Transplantation 2004; 78:880 0

Ichii H，Pileggi A，Molano RD等人Rescue purification maximizes the use of human islet preparations for transplantation. Am J Transplant 2005; 5: 21 o

Matsumoto S, Tanaka K. Pancreatic islet cell transplantation using non-heart-beating donors (NHBDs). J Hepatobiliary Pancreat Surg 2005; 12: 227 o

Matsumoto S，Okitsu T，Iwanaga Y 等人 Successful islet transplantation from nonheartbeating donor pancreata using modified Ricordi islet isolation method. Transplantation 2006; 82: 460 °

Matsumoto S，Noguchi H，Naziruddin B等人Improvement of pancreatic islet isolation for transplantation. Baylor University Medical Center Proceedings 2007; 20: 357 o 137953.doc -98 - 200938634

Shapiro AM，Lakey JR, Ryan EA等人 Islet transplantation in seven patients with type 1 diabetes mellitus using a glucocorticoid-free immunosuppressive regimen. N Engl J Med 2000; 343: 230 °

Matsumoto S，Rigley TH，Qualley SA等人 Efficacy of the oxygen-charged static two-layer method for short-term pancreas preservation and islet isolation from nonhuman primate and human pancreata. Cell Transplant 2002; 11: 769。

Matsumoto S，Qualley S，Goel S等人Effect of the two-layer (University of Wisconsin solution-perfluorochemical plus 02) method of pancreas preservation on human islet isolation, as assessed by the Edmonton Isolation Protocol. Transplantation 2002; 74: 1414 o

Markmann JF, Kaufman DB, Ricordi C, Schwab PM, Stock PG. Financial issues constraining the use of pancreata recovered for islet transplantation: A white paper. Am J Transplant 2008; 8: 1 °

Rose NL, Palcic MM, Helms LM, Lakey JR. Evaluation of Pefabloc as a serine protease inhibitor during human-islet isolation. Transplantation 2003; 75:462 〇

Matsumoto S，Rigley T，Reems J 等人 Improved islet yields from macaca nemestrina and marginal human pancreata after two-layer method preservation and 137953.doc -99- 200938634 endogenous trypsin inhibition. Am J Transplant 2003; 3: 53 〇

Noguchi H，Ueda M，Hayashi S 等人 Ductal injection of preservation solution increases islet yields in islet isolation and improves islet graft function. Cell Transplant 2008; 17: 69 〇

Sawada T, Matsumoto I, Nakano M, Kirchhof N, Sutherland DE, Hering BJ. Improved islet yield and function with ductal injection of University of Wisconsin solution before pancreas preservation. Transplantation 2003; 75: 1965 °

Ichii H，Sakuma Y, Pileggi A 等人 Shipment of human islets for transplantation. Am J Transplant 2007; 7: 1010 o 【圖式簡單說明】 圖1展示管注射組（DI)及標準組（標準）中純化之前及之後 的胰島產量。在胰島純化之前及之後，DI組中之胰島產量 皆顯著較高。 圖2展示DI組中三個患者在胰島移植之前及之後的空腹 血糖含量。所有患者在胰島移植後血糖控制得以改良。 圖3展示DI組中三個患者在胰島移植之前及之後的每曰 胰島素劑量。所有三名患者變得具有胰島素獨立性。 137953.doc

Claims (1)

1. 200938634 七、申請專利範团： ι_ -種製備可移植騰島製劑的活體外方法，該方法包含以 下步驟： 採集供體胰臟； 以ET-Kyoto溶液或其相等物注射胰管；及 •分離胰臟β胰島細胞 : 纟中該胰島製劑係用於胰島移植，在胰島移植時，接 受者以人類介白素-1拮抗劑治療。 用求項1之方法’其中該分離胰臟⑽島細胞之步驟係 使用膠原蛋白酶執行。 月求項2之方法’其中該膠原蛋白酶包含人類膠原蛋 白酶。 其中該等胰島自胰臟提取後在ET- 4.如請求項1之方法 Kyoto溶液中處理， 奪求項1之方法，其中分離胰臟^姨島細胞之步驟係在 胰蛋白酶抑制劑存在下進行。 6.如請求項1之方法，其 人^支 具中該人類介白素-1拮抗劑係選自： 因:譯之-或多種修飾劑；一或多種乾向IL_1P表現之 iRNAs，—或多種 IL_ P又骽阻斷劑，一或多種介白素-1 :=劑蛋白質；-或多種介…受趙拮抗劑肽； 之^種改良IL_轉放之活性劑；一或多種中和IL-1P 之：財：或多種阻斷1L，受體之抗體；-或多種重組 然存在…β受體拮抗劑；抑制IL，放之一或 137953.doc 200938634 多種陰離子運送抑制劍、备 ,.v . 月场氧素（lip0xin)及a-生月盼； 或多種類鴉Mopioids) ’其抑制將無活性江^前驅物 轉化為其成熟活性形式之蛋自水—或多種中和IL_ 1β生物功能之抗體，其混合物及組合。 7. ❹8, 9. 10. 11. 如請求項1之方法’其中該接受者另用一種選自基因轉 錄抑制劑、失活腫瘤壞死因子、腫瘤壞死因子受艎阻斷 劑及可溶性腫瘤壞死因子受體之腫瘤壞死因子拮抗劑治 療。 一種製備可移植胰島製劑的活體外方法，該方法包含以 下步驟： 採集供體胰臟； 以ET-Kyoto溶液或其相等物注射胰管；及 在胰蛋白酶抑制劑存在下自所採集之胰臟分離胰臟p 膜島細胞； 其中該胰島製劑係用於胰島移植，在胰島移植時，接 受者以人類介白素-1拮抗劑治療。 如請求項8之方法，其中該胰蛋白酶抑制劑係選自血清α-1抗姨蛋白酶、利馬豆（lima bean)胰蛋白酶抑制劑、孔尼 4 抑制劑（Kunitz inhibitor)、類印黏蛋白（ovomucoid)抑 制劑或大豆抑制劑。 如請求項8之方法，其中該等胰島自胰臟提取後在ET-Ky〇t〇溶液中處理。 如清求項8之方法，其中該等胰島係以膠原蛋白酶處 理。 137953.doc 200938634 12. 如請求項u之方法’其中該膠原蛋白酶包含人類膠原蛋 白酶。 13. 如哨求項8之方法，其中該人類介白素」拮抗劑係選自： 介白素基因轉錄之一或多種修飾劑；α戦 因轉譯之-或多種修飾劑；一或多種靶向IL，表現之 siRNAs ; 一或多種比_邛受體阻斷劑；一或多種介白素] ’ 受體拮抗劑蛋白質；-或多種介白素_1受體拮抗劑肽； ❹ 或夕種改良1L_1P釋放之活性劑；一或多種中和IL-Ιβ 之抗體一或多種阻斷江，受體之抗體；一或多種重組 之天然存在之IL-Ιβ受體拮抗劑；抑制IL1p釋放之一或 多種陰離子運送抑制劑、脂氧素及α-生育酚；一或多種 類鴉片，其抑制將無活性1L-Ιβ前驅物轉化為其成熟活性 形式之蛋白水解酶；一或多種中和IL1(3生物功能之抗 體’其混合物及組合。 14. 如請求項8之方法，其中該接受者另用一種選自基因轉 〇 錄抑制劑、失活腫瘤壞死因子、腫瘤壞死因子受體阻斷 劑及可溶性腫瘤壞死因子受體之腫瘤壞死因子拮抗劑治 療。 15. —種製備可移植胰島製劑的活體外方法，該方法包含以 下步驟： 採集供體胰臟；及 在胰蛋白酶抑制劑存在下自所採集之胰臟分離胰臟p 胰島細胞； 其中該胰島製劑係用於胰島移植，在胰島移植時，接 137953.doc 200938634 受者以人類介白素-ι拮抗刺治療。 16·如明求項15之方法’其中該提取係使用適合膠原蛋白酶 在ΕΤ-Kyoto溶液中進行。 17.如請求項15之方法，其中該等胰島自胰臟提取後在π Kyoto溶液中處理。 18. 如請求項15之方法’其十該胰蛋白酶抑制劑係選自血生 α 1抗胰蛋白酶、利馬豆胰蛋白酶抑制劑、孔尼茲 劑、類卵黏蛋白抑制劑或大豆抑制劑。 ' 19. 如請求項15之方法，其中 白酶。 、中該膝原蛋白酶包含人類膠原蛋 20.如請求項15之方法，其中該接受者另用—種選 錄抑制劑、失活腫瘤壞死因 、土因轉 劑及可溶性腫瘤壞死因子受體 j死因子受體阻斷 療。 《腫瘤壞死因子拮抗劑治

   137953.doc