TW200936132A - Isoxazole derivatives and pharmaceutical compositions comprising the same - Google Patents

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200936132 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係有關於一種化合物，特別是有關於一種治療 骨質疏鬆及癌症之異卩等峻（isoxazole)衍生物。 【先前技彳标】 諸多異噚唑(isoxaz〇le)化合物中，4,5-二芳基異噚唑衍 生物（4,5-diarylisoxazole derivatives)(於異曙σ坐主結構旁 連接兩芳基取代基）已被發現具有廣大生物性功效，例如 〇

Habeeb, A. G. et. al. J. Med. Chem. 2001, 44, 2921; Habeeb, A. G. et. al. Drug Dev. Res. 2000, 51, 273; Talley, J. J. Patent No. US 1999/5,859,257等文獻揭露的抗發炎 (anti-inflammatory)效果，或例如 Zhang, Q. ei. a/. J. Med. .Chem, 200Ί，50, 749; Swn, C. M. et. al. Bioorg. Med. Chem. .Lett. 2007, 7 7, 1078; Peifer, C. et. al. J. Med. Chem. 2006, 49, 1271; Kaffy, J. et. al. Bioorg. Med. Chem. 2006, J4, 4067; Sanchez Maya, A. B. et. al. Bioorg. Med. Chem. 2005, 〇 73, 2097等文獻揭露的抗癌活性。 目前，4,5-二芳基異噚唑衍生物中已有許多特定結構 的類似物被廣泛地使用作為抗癌製劑，例如cytotoxic combretastatin A-4 (Liou, J. P. et. al. J. Med. Chem. 2004, 47, 4247; Petit, G. R. et. al. Can. J. Chem. 1982, 60, 1374; Lin, C. M. ei. fl/. Mo/. 1988, 3( 200)，其係以 一簡單的乙烯架橋取代原本的異噚唑基團。其他4,5-二芳 基異噚唑類似物，例如以一環戊烯取代異噚唑基團（Gurjar， Μ. K.此 a/· 施4 C/zew. 2007,如，1744)，或以一五圓雜 環取代異卩琴唑基團（Pirali，T.扣.α/. ·/.协汶CTzem. 2006,抑， 200936132 5372; Tron, G. C. ^ a/. J. C72em. 2006,仰，3033)亦已 被合成且評估出本身的抗癌活性。因此，對4,5-二芳基異 噚唑進行結構適化研究可續發現具有潛力的治癌藥物。此 外，由於異Π萼嗤基團可被pyrazolopyrimidine環取代而具 有雌激素受體β拮抗活性，遂4,5_二芳基異Pf唑衍生物亦 可作為抗骨質疏鬆劑的研究（Zhou，Η. B. ez1. a/. A化汶

Chem. 2007, 50, 399; Compton, D. R. et. al. Bioorg. Med. Chem. 2004, 14, 5681; Compton, D. R. et. al. J. Med. Chern. ❿ 2004,47, 5872)。 在某些歐洲國家及曰本，合成型異黃酮素衍生物之一 的異普黃酮（ipriflavone)已被謹實可治療退化性骨質疏鬆 (Kunikata, K. et. al. Patent No. JP 1996/09268187 A; Imamiya, K. et. al. Patent No. JP 1997/11012265 A; • Yamazaki, I. et. al. Patent No. EP 1984/136569 A2; Ferrari, M. Patent No. EP 1999/941992 Al; Ferrari, M. Patent No. EP 2002/941992 Bl)。 ®【發明内容】 本發明之一實施例，提供一種異曙唾(isoxazole)衍生 物，具有下列化學式：

Ώ . ； 〇 ·· 6 200936132 其中RpRrRrR4及Rs獨立地包括氫、經基或Ci_Ci2 烧氧基，該Ci-Cn烧氧基選擇性地取代有環氧基 (oxirane)、噻喃基(thiirane)、氮丙啶基（aziridine)、胺基、 私基（cycloamino)、胺基經基（amin〇hydr〇xyl)或環胺基 經基（cycloaminohydroxyl) 〇 本發明之一實施例’提供一種醫藥組合物，包括一上 述之異噚唑（isoxazole)衍生物或其藥學上可接受之鹽類； ❹以及一藥學上可接受之載體。 本發明之一實施例，提供。_種治療骨質疏鬆 (osteoporosis)之醫藥組合物，包括一上述之異曙唑 (isoxazole)衍生物或其藥學上可接受之鹽類；以及一藥學 上可揍受之載體。 本發明之一實施例，提供一種治療癌症之醫藥組合 物，包括一上述之異噚唑（isoxaz〇le)衍生物或其藥學上可 接受之鹽類；以及一藥學上可接受之載體。 _ 為讓本發明之上述目的、特徵及優點能更明顯易懂， 下文特舉一較佳實施例，並配合所附圖式，作詳細說明如 下： 【實施方式】 本發明之一實施例，提供一種異噚唑（isoxazole)衍生 物’具有下列化學式： 200936132 R4Xr^^R5

Ri 上述結構中，R!、R2、R3、R4及R5可獨立地包括氫、 羥基或（^-(：12烷氧基。CrC12烷氧基可選擇性地取代有環 ® 氧基（oxirane)、噻喃基(thiirane)、氮丙0定基(aziridine)、胺 基、環胺基（cycloamino)、胺基經基（aminohydroxyl)或環 胺基經基（〇}^1〇&111丨!1〇11}^1>〇乂71)。 本發明具有上述化學式的異曙唾（isoxazole)衍生物可 以水合物（hydrate)或立體異構物（stereoisomer)的型式存 在。 本發明之一實施例，提供一種醫藥組合物，包括一上 述之異噚唑（isoxazole)衍生物或其藥學上可接受之鹽類， ❹以及一藥學上可接受之載體。 本發明之一實施例，提供一種治療骨質疏鬆 (osteoporosis)的醫藥組合物，包括一上述之異噚唑 (isoxazole)衍生物或其藥學上可接受之鹽類，以及一藥學 上可接受之載體。 ^ 本發明之一實施例’提供一種治療癌症的醫藥組合 物，包括一上述之異噚唾（isoxazole)衍生物或其藥學上可 接受之鹽類，以及一藥學上可接受之載體。 上述樂學上可接受鹽類（pharmaceutically acceptable salt)可由無機酸、有機酸或氨基酸所製備。無機酸可包括 200936132 鹽酸、氫溴酸(hydrobromic acid)、硫酸或鱗酸。有機酸可 包括醋酸、馬來酸(maleic acid)、酒石酸(tartaric acid)或曱 基確酸（methanesulfonic acid)。氨基酸可包括精氨酸 (arginine)、天門冬氨酸（aspartic acid)或糙氨酸(glutamic acid) ° 上述藥學上可接受載體（pharmaceutically acceptable carrier)可包括任何適當溶劑、崩散劑（disintegrating agent)、黏著劑（binding agent)、賦形劑（excipient)、潤滑 ❹劑（lubricant)、吸收延遲劑（absorption delaying agent)或其 類似物。 & 本發明異噚唑（isoxazole)衍生物或包含此衍生物的醫 藥組合物可有效抑制癌細胞生長及治療骨質疏鬆，其可製 備成任何適當劑型，例如無菌水溶液或分散液、無菌粉 末、錠劑、含片（troche)、丸劑（pill)、膠囊或其類似物， 以注射或口服方式施予病患’此外，本發明異曙η坐 (isoxazole)衍生物或包含此衍生物的醫藥組合物可單獨施 予或配合其他抗骨質疏鬆劑、抗癌劑或藥學上可接受載體 0共同使用。 本發明.異卩亏唾（isoxazole)衍生物可由下述Sc/zeme /及 Sc/zeweJ揭露之合成步驟所製備。 200936132

Scheme 1

首先，將7-羥基-3-(4-甲氧基苯基）-4丑-色酮 (7-hydroxy-3-(4-methoxyphenyl)-4i/-chromen-4-one,化合 物1)與2_漠丙烧(2-bromopropane)反應，以製備3-(4-曱氧 ©基苯基 ）-7- 異 丙氧基 -4E- 色 酮 (3-(4-methoxyphenyl)-7-isopropoxy-4i/-chromen-4-one, 4 匕 合物2)。之後，將化合物2與羥胺(NH2OH)反應，以製備 高產率的5-異丙氧基-2-(4-(4-曱氧基苯基）異噚唑，5-基）酚 (5-isopropoxy-2-(4-(4-methoxyphenyl)isoxazol-5-yl)phenol, 化合物3)。接著，將化合物3與聚二溴乙烯 (polyethylenedibromide)反應，以製備單漠異曙口坐 (monobromoisoxazole，化合物4)。最後，將化合物4與二 級胺反應，即製備出取代有胺基烷氧基的4,5-二苯基-異 200936132 曙0坐（aminoalkoxy-substituted 4,5-diphenylisoxazole,化合 物5)。

Scheme 2

化合物1亦可先轉換為單溴烷氧基異黃酮素 (monobromoalkoxy isoflavone,化合物 6)。接著，進行胺 化，以製備胺基院氧基異黃酮素（aminoalkoxy isoflavone, ❹化合物7)。最後，將化合物7與羥胺(NH2OH)反應，即製 備出取代有胺基烷氧基的4,5·二苯基-異噚唑 (aminoalkoxy-substituted 4,5-diphenylisoxazole, 4匕合物 8)。， 本發明藉由與羥胺（NH2OH)的反應將異黃酮素 (- (isoflavone)轉變為新穎的4,5-二苯基異噚嗤衍生物（Sree Rama, Μ. M. et. al. Indian J. Chem. Section B 1985, 24B, 667)。其他合成4,5-二苯基異噚唑衍生物的方法亦有揭露 (Letourneau, J. J. et. al. Tetrahedron Lett. 2007, 48, 1739; Denmark, S. E. et. al. J. Org. Chem. 2005, 70, 2839; Xie, F. 200936132 ei. a/. J. CowA. 2006, 286)。本發明 4,5-二苯基異 噚唑於烷化後進行胺化，以獲得具備抗骨質疏鬆及抗癌活 性，取代有胺基烷氧基的4,5_二苯基-異噚唑衍生物（化學 式I)。 【實施例】 【實施例1】 3-(4-甲氧基苯基)-7-異丙氧基-475/-色酮（化合物2) (3_(4-methoxyphenyl)-7-isopropoxy_47f-chromen-4-one)之 ❹合成 首先，混合1.34克的化合物1 (5mmol)、0.69克的碳 酸鉀（5mol)、1.23克的2-溴丙烧（lOmmol)與10毫升的 DMF，並迴流攪拌3小時。之後，冷卻上述混合物並進行 真空抽乾，所得的殘留物續以50毫升的水沖洗。接著， 將收集的沈澱物以色層分析管柱（甲醇：二氯曱烷= 1:100) 進行純化。待進一步以乙醇結晶後，即可獲得1.46克的 化合物2，產率94%，熔點245-246〇C。 ^-NMR (400 MHz, DMSO-J6): 1.33 (d, 6H), 3.79 3(s,

P 3H, OMe), 4.83 (septet, 1H), 6.98-7.06 (m, 3H), 7.14 (d, 1H), 7.51-7.54 (m, 2H), 8.01 (d, 1H). 13C-NMR (100 MHz, DMSO-i/6): 21.53, 55.13, 70.39, 101.76, 113.59 (2C), 115.56, 117.31, 123.29, 124.09, 127.02, 130.05 (2C), 153.30, 153.46, 157.47, 158.98, 161.95, 174.58 ° 【實施例2】 5-異丙氧基-2-(4-(4-曱氧基苯棊）異噚唑-5-基）酚(化合物3) (5-isopropoxy-2-(4-(4-methoxyphenyl)isoxazol-5-yl)phenol) 之合成 12 200936132 首先，混合0.31克的化合物2 (lmmol)、0.13克的鹽 酸羥胺(NH2OHHCl)(4mmol)、0.28 克的碳酸鉀(2mmol)與 10毫升的乙醇，並迴流攪拌24小時。之後，冷卻上述混 合物並進行真空抽乾，所得的殘留物續以50毫升的水沖 洗。接著，將收集的沈澱物以乙醇進行結晶，即可獲得 0.30克的化合物3，產率90%，熔點148-149°C。 ^-NMR (400 MHz, DMSO-J6)： 1.28 (d, 6H), 3.73 (s, 3H, OMe), 4.57 (septet, 1H), 6.47-6.49 (m, 2H), 6.88-6.92 0 (m, 2H), 7.16 (m, 1H), 6.28-7.37 (m, 2H), 8.92 (s, 1H), 9.95 (br s, 1H, OH). 13C-NMR<100 MHz, DMSO-d6): 1.80 (2C), 55.7, 69.35, 102.90, 106.59, 107.27, 114.03 (2C), 116.16, 122.37, 127.93 (2C), 131.56, 150.56, 156.93, 158.38, 160.25,161.93。 【實施例3】 5-[2-(4-溴丁氧基)-4-異丙氧基苯基]-4-(4-甲氧基苯基）異 口等嗤（化合物4a, n=4) ©(5-[2-(4-Bromobutoxy)-4-isopropoxyplienyl]-4-(4-methoxy phenyl)isoxazole)之合成

首先，混合0.65克的化合物3 (2mmol)、0.28克的碳 酸鉀（2mmol)、0.65克的1,4-二溴丁烷（3mmol)與5毫升的 DMF，並加熱至60-70°C擾拌3小時。之後，冷卻上述混 13 200936132 合物並進行真空抽乾，所得的殘留物續以50毫升的水沖 洗。接著，將收集的沈澱物以水清洗並乾燥之，以獲得一 固體。之後，以色層分析管柱（曱醇：二氯甲烷= 1:50)進行 純化，即可獲得0.69克如棕色油的化合物4a，產率75%。 ]H-NMR (400 MHz, DMSO-J6): 1.26 (m, 2H), 1.37 (d, 6H), 1.38 (m, 2H), 2.25 (t, 2H), 3.73 (t, 2H), 3.78 (s, 3H, OMe), 4.60 (septet, 1H), 6.44 (d, 1H), 6.53 (dd, 1H), 6.80-6.84 (m, 2H), 7.18-7.22 (m, 2H), 7.38 (d, 1H), 8.44 (s, Q 1H). 13C-NMR (100 MHz, OMSO-d6): 21.95, 22.64, 26.28, 52.28, 55.19, 57.67, 67.69, 69.98, 100.97, 106.29, 109.61, 113.76 (2C), 116.34, 123.34, 128.05 (2C), 131.63, 150.38, 157.54, 158.70, 160.86, 161.92 ° 【實施例4】 5-[2-(6-漠己氧基)-4-異丙氧基苯基]-4-(4-曱氧基苯基）異 曙峻（化合物4b, n=6) (5-[2-(6-Bromohexyloxy)-4-isopropoxyphenyl]-4-(4-metho xyphenyl)isoxazole)之合成

首先，混合0.65克的化合物3 (2mmol)、0.28克的碳 酸卸（2mmol)、0.73克的1，6- 一臭己燒（3mmol)與5毫升的 DMF，並加熱至60-70°C擾拌3小時。之後，冷卻上述混 14 200936132 合物並進行真空抽乾，所得的殘留物續以50毫升的水沖 洗。接著，將收集的沈澱物以水清洗並乾燥之，以獲得一 固體。之後’以色層分析管柱（曱醇:二氯甲烷= 1:100)進行 純化’即可獲得0.51克如棕色油的化合物4b，產率52%。 ]H-NMR (400 MHz, CDC13): 1.07-1.31 (m, 6H), 1.38 (d, 6H), 1.70-1.77 (m, 2H), 3.34 (t, 2H), 3.69 (t, 2H), 3.80 (s, 3H, OMe), 4.61 (septet, 1H), 6.44 (d, 1H), 6.55 (dd, 1H), 6.83 (m, 2H), 7.21 (m, 2H), 7.42 (d, 1H), 8.45 (s, 1H). ❹ 13C-NMR (100 MHz, CDC13): 22.03, 24.84, 27.68, 28.23, 32.48, 33.84, 55.28, 67.85, 70.04, 10Φ.07, 106.25, 109.81, 113.80, 116.39, 123.60, 128.05, 131.71, 150.48, 157.62, 158.76,160.91,161.93。 【實施例5】 5-[2-(7-溴庚氧基)-4-異丙氧基苯基]-4-(4-曱氧基苯基）異 口等嗤（化合物4c, n=7) (5-[2-(7-Bromoheptyloxy)-4-isopropoxyphenyl]-4-(4-metho xyphenyl)isoxazole)之合成 -.

首先’混合0.65克的化合物3 (2mmol)、0.28克的碳 酸鉀（2mmol)、0.77克的1，7-二溴庚烷(3mm〇l)與5毫升的 DMF，並加熱至60-70°C攪拌3小時。之後，冷卻上述混 15 200936132 合物並進行真空抽乾，所得的殘留物續以50毫升的水沖 洗。接著，將收集的沈澱物以水清洗並乾燥之，以獲得一 固體。之後，以色層分析管柱（甲醇:二氯曱烷=1:100)進行 純化，即可獲得0.67克如淡黃色油的化合物4c，產率67%。 ]H-NMR (400 MHz, CDC13)： 1.05-1.39 (m, 14H), 1.79 (m, 2H), 3.38 (t, 2H), 3.69 (t, 2H), 3.80 (s, 3H, OMe), 4.61 (septet, 1H), 6.45 (d, 1H), 6.55 (dd, 1H), 6.83 (m, 2H), 7.21 (m, 2H), 7.42 (d, 1H), 8.45 (s, 1H). 13C-NMR (100 MHz, φ CDC13): 22.04, 25.45, 27.87, 28.28, 32.56, 33.94, 33.99, 52.28, 67.99, 70.03^, 101.09, 106.21, 109.81, 113.79, 115.72, 123.62, 128.08, 131.70, 150.50, 157.68, 158.75, 160.91, 161.95。 【實施例6】 5-{4-異丙氧基-2-[4-(P比洛烧-1-基）丁氧基]苯基}-4-(4-甲 氧基苯基）異噚唑（化合物5a, n=4) (5-{4-Isopropoxy-2-[4-(pyrrolidin-l-yl)butoxy]phenyl}-4-( 4-methoxyphenyl)isoxazole)之合成

首先，混合0.46克的化合物4a (1 mmol)、0.11克的 吡咯烷（1.5mniol)與30毫升的乙醇，並迴流4小時。之後， 冷卻上述混合物並進行真空抽乾，所得的殘留物續以50 16 200936132 毫升的水沖洗。接著，將收集的沈澱物以水清洗並乾燥 之，以獲得一固體。之後，以色層分析管柱(曱醇:二氯曱 烷= 1:20)進行純化。待以乙醇結晶後，即可獲得0.32克的 化合物5a，產率71%。 ^-NMR (400 MHz, CDC13)： 1.26 (m, 2H), 1.37 (d, 6H), 1.74-1.81(m, 4H), 2.34 (m, 3H), 2.48 (m, 5H), 3.73 (m, 2H), 3.80 (s, 3H, OMe), 4.61 (septet, 1H), 6.44 (d, 1H), 6.53 (dd, 1H), 6.81-6.85 (m, 2H), 7.19-7.22 (m, 2H), 7.38 (d, 2H), ❹ 8.43 (s, 1H). 13C_NMR (100 MHz, CDC13): 22.02 (2C)， 23.31 (2C), 24.97, 26.46, 53.96 (2C), 55.26, 55,87, 67.90, 70.04, 101.01, 106.27, 109.66, 113.81 (2C), 116.42, 123.47, 128.14 (2C), 131.70, 150.47, 157.65, 158.76, 160.91, 162.05。 【實施例7】 4_{4-{5-異丙氧基-2-[4-(4-曱氧基苯基）異噚唑-5-基]苯氧 基}丁基}嗎啉(化合物5b，n=4) ❾(4-{4-{5-Isopro'poxy-2-[4-(4-methoxyphenyl)isoxazol-5-yl] phenoxy }butyl}morpholine)之合成

首先，混合0.46克的化合物4a (lmmol)、0.13克的 嗎啉（1.5mmol)與30毫升的乙醇，並迴流4小時。之後， 17 200936132 冷卻上述混合物並進行真空抽乾，所得的殘留物續以50 毫升的水沖洗。接著，將收集的沈澱物以水清洗並乾燥 之，以獲得一固體。之後，以色層分析管柱（曱醇:二氯曱 烷= 1:5)進行純化。待以乙醇結晶後，即可獲得0.34克如 淡黃色油的化合物5b，產率73%。 ^-NMR (400 MHz, CDC13)： 1.28 (m, 4H), 1.37 (d, 6H), 2.17-2.23 (m, 2H), 2.37 (m, 4H), 3.69-3.79 (m, 6H), 3.80 (s, 3H, OMe), 4.61 (septet, 1Π), 6.45 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 6.53 Q (dd, 1H), 6.81-6.85 (m, 2H), 7.19-7.23 (m, 2H), 7.38 (d, 2H), 8.44 (s, 1H). 13C-NMR (100 MHz, CDC13)： 22.03 (2G), 22.57, 26.37, 53.49 (2C), 55.27, 58.39, 66.75, 67.82 (2C), 70.05, 101.11, 106.23, 109.72, 113.82 (2C), 116.41, 123.47, 128.13 (2C), 131.74, 150.44, 157.67, 158.76, 160.92, 162.05。 【實施例8】 5-{4-異丙氧基-2-[4-(脈嗦-1-基）丁氧基]苯基}-4-(4-曱乳 基苯基）異噚唑（化合物5c，n=4) (5-{4-Isopropoxy-2-[4-(piperazin-l-yl)butoxy]pheny 1)-4-(4 _methoxyphenyl)isoxazole)之合成

首先，混合0.46克的化合物4a (lmmol)、0.13克的 18 200936132 哌曝（1.5mmol)與30毫升的乙醇，並迴流4小日孝。, 守。之後， 冷卻上述混合物並進行真空抽乾，所得的殘留物續以 毫升的水沖洗。接著，將收集的沈澱物以水清洗並^ 之，以獲得一固體。之後，以色層分析管柱（曱醇.二^燥 烷= 1:5)進行純化。待以乙醇結晶後，即可獲得〇 克士 無色油的化合物5c，產率45%。 ]H-NMR (400 MHz, DMSO-灿 1.29 (m, 4H)，1 37 (d 6H)，2.28 (t, 2H), 2.68 (m, 4H), 3.20 (m，4H)，3.75 (t, 2H)’ ❹ 3.79 (s，3H, OMe), 4.61 (septet, 1H)，6.44 (d，1H), 6.53 (dd 1H), 6.80-6,84 (m, 2H), 7.19-7.22 (m, 2H), 7.36 (d, 2H>. 8.48 (s，1H)‘ ]3C-NMR (100 MHz, DMSO〇: 21.96 (2C)， 22.55, 26.07, 43.63 (2C), 49.67 (2C), 55.28, 57.29, 67.55-70.01, 101.02, 106.32, 109.58, 113.81 (2C), 116.37, 123.21, 128.05 (2C), 131.68, 150.39, 157.58, 158.72, 160.89, 161.96. Anal, calcd for C27H35N3O4 · 0.9HBr · 1.1H20: C 57.24, H 6.79, N 7.41; found: C 57.49, H 6.92, N 7·04。 【實施例9】 ❹5-{4-異丙氧基-2_[4-(喊η定-1-基）丁氧基]苯基丨-4-(4-甲氧 基苯基）異噚唑(化合物5d, n=4) (5-{4-Isopropoxy-2-[4-(piperidin-l-yl)butoxy]phenyl}-4-(4 _methoxyphenyl)isoxazole)之合成

19 200936132 首先，混合0.46克的化合物4a (1 mmol)、0.13克的 _^(1.5mmol)與30毫升的乙醇，並迴流4小時。之後， 冷卻上述混合物並進行真空抽乾，所得的殘留物續以50 毫升的水沖洗。接著，將收集的沈澱物以水清洗並乾燥 之，以獲得一固體。之後，以色層分析管柱（曱醇：二氯曱 烷= 1:5)進行純化。待以乙醇結晶後，即可獲得0.41克如 棕色油的化合物5d，產率88%。 Q !H-NMR (400 MHz, CDC13)： 1.33 (m, 2H), 1.37 (d, 6H), 1.44-1.46 (m, 2H), 1.54-4.66 (m, 3H), 1,78-1.89 (m, 5H), 2.67 (t, 2H), 3.04 (t, 2H), 3.81 (s, 3H, OMe), 3.84 (t, 2H), 4.61 (septet, 1H), 6.46 (d, 1H), 6.52 (dd, 1H), 6.84-6.85 (m, 2H), 7.21-7.23 (m, 2H), 7.29 (d, 2H), 8.45 (s, 1H). 13C-NMR (100 MHz, CDCI3)： 21.46, 22.00 (2C), 22.57, 23.27, 25.97, 44.52, 47.89, 53.32 (2C), 55.32 (2C), 57.44, 67.63, 70.17, 101.05, 106.74, 109.30, 114.06 (2C)? 116.58, 122.83, 128.23 (2C), 131.80, 150.39, 157.58, 158.92, ❹ 161.08, 162.26。 【實施例10】 5-{4-異丙氧基-2-[6-(B比洛烧-1-基）己氧基]苯基] -4-(4-曱 氧基苯基）異曙唑（化合物5e，n=6) (5-{4-Isopropoxy-2-[6-(pyrrolidin-l-yl)hexyloxy]phenyl}-4 -(4_methoxyphenyl)isoxazole)之合成 20 200936132

首先，混合0.48克的化合物4b (1 mmol)、0.11克的 哌咬（1.5111111〇1)與30毫升的乙醇，並迴流4小時。之後， 冷卻上述混合物並進行真空抽乾，所得的殘留物續以50 0毫升的水沖洗。接著，將收集的沈澱物以水清洗並乾燥 之，以獲得一固體。之後，以色層分析管柱（曱醇：二氯曱 烷= 1:5)進行純化。待以乙醇結晶後，即可獲得0.37克如 淡黃色油的化合物5e，產率77%。 ]H-NMR (400 MHz, CDC13): 1.14 (m, 2H), 1.26 (m, 4H), 1.34 (m, 4H), 1.37 (d, 6H), 2.69 (m, 3H), 2.88 (m, 5H), 3.72 (t, 2H), 3.80 (s, 3H, OMe), 4.62 (septet, 1H), 6.45 (d, 1H), 6.52 (dd, 1H), 6.82-6.84 (m, 2H), 7.20-7.22 (m, 2H), 7.35 (d, 2H), 8.44 (s, 1HJ. 13C-NMR (100 MHz, CDC13)： ❹ 22.04 (2C), 23.36 (2C), 25.26, 26.51, 28.15, 29.68, 53.72, 55.31, 55.34, 55.74, 67.80, 70.09, 101.11, 106.40, 109.65, 113.91, 114.47, 116.53, 123.35, 128.17, 129.61, 131.70, 150.48, 157.78, 158.81, 160.98, 162.18。 【實施例.11】 4-{6-{5-異丙氧基-2-[4-(4-曱氧基苯基）異噚唑-5-基]苯氧 基}己基}嗎啉（化合物5f, n=6) (4-{6-{5-Isopropoxy-2-[4-(4-methoxyphenyl)isoxazol-5-yl] phenoxy }hexyl}morpholine)之合成 21 200936132

首先，混合0.48克的化合物4b (1 mmol)、0.13克的 嗎啉（1.5mmol)與30毫升的乙醇，並迴流4小時。之後， 冷卻上述混合物並進行真空抽乾，所得的殘留物續以50 0毫升的水沖洗。接著，將收集的沈殿物以水清洗並乾燥 之，以.獲得一固體。之後，以色層分析管柱（甲醇：二氯曱 烷= 1:5)進行純化。待以乙醇結晶後，即可獲得0.34克如 淡黃色油的化合物5f，產率68%。 ^-NMR (400 MHz, CDC13)： 1.08-1.24 (m, 6H), 1.38 (d, 6H), 2.25-2.29 (m, 2H), 2.43 (m, 4H), 3.68-3.74 (m, 6H), 3.80 (s, 3H, OMe), 4.60 (septet, 1H), 6.44 (d, 1H), 6.53 (dd, 1H), 6.80-6.84 (m, 2H), 7.18-7.22 (m, 2H), 7.39 (d, 2H), 8.43 (s, IH). 13C-NMR (100 MHz, CDC13)： 22.04 (2C), ® 25.59, 26.24, 27.04, 28.36, 53.67 (2C), 55.27, 58.97, 66.87, 67.96 (2C), 70.03, 101.11, 106.17, 109.79, 113.78 (2C), 116.41, 123.62, 128.11 (2C), 131.70, 150.50, 157.72, 158.73, 160.89, 162.03。 【實施例12】 5-{4-異两氧基-2-[6-(哌嗪-1-基）己氧基]苯基}-4-(4-曱氧 基苯基）異噚唑（化合物5g, n=6) (5-{4-Isopropoxy-2-[6-(piperazin-l-yl)hexyloxy]phenyl}-4 -(4-methoxyphenyl)isoxazole)之合成 22 200936132

首先，混合0.48克的化合物4b (1 mmol)、0.13克的 脈_(1.5111111〇1)與30毫升的乙醇，並迴流4小時。之後， @冷卻上述混合物並進行真空抽乾，所得的殘留物續以50 毫升的水沖洗。接著，將收集的沈澱物以水清洗並乾燥 之，以獲得一固體。之後，以色層分析管柱（曱醇：二氯甲 烷= 1:5)進行純化。待以乙醇結晶後，即可獲得0.34克如 淡黃色油的化合物5g，產率68%。 ^-NMR (400 MHz, CDC13)： 1.09-1.26 (m, 6H), 1.38 (d, 6H), 2.10 (m, 4H), 2.23 (m, 2H), 2.40 (m, 4H), 2.89 (t, 2H), 3.75 (t, 2H), 3.80 (s, 3H, OMe), 4.60 (septet, 1H), 6.44 (d, 1H), 6.53 (dd, 1H), 6.80-6.84 (m； 2H), 7.18-7.22 (m, ® 2H), 7.40 (d, 2H), 8.44 (s, 1H). 13C-NMR (100 MHz, CDC13): 22.04 (2C), 25.61, 26.41, 27.16, 28.38, 45.91 (2C), 46.88, 54.36, 55.27, 59.19, 68.03, 70.04, 101.12, 106.22, 109.82, 113.80 (2C), 116.42, 123.63, 128.11 (2C), 131.69, 150.49, 157.73, 158.75, 160.91, 162.03。 【實施例13】 5-{4-異丙氧基-2-[6-(哌啶-1-基）己氧基]苯基}-4-(4-曱氧 基苯基）異-唑（化合物5h, n=6) (5-{4-isopropoxy-2-[6-(piperidin-l-yl)hexyloxy]phenyl}-4- 23 200936132 (4-methoxyphenyl)isoxazole)之合成

首先，混合0.48克的化合物4b (lmmol)、0.13克的 0哌咬（1.5mmol)與30毫升的乙醇，並迴流4小時。之後， 冷卻上述混合物基進行真空抽乾，所得的殘留物續以50 毫升的水沖洗。接著，將收集的沈澱物以水清洗並乾燥 之，以獲得一固體。之後，以色層分析管柱（曱醇：二氯曱 烷= 1:5)進行純化。待以乙醇結晶後，即可獲得0.35克如 棕色油的化合物5h，產率71%。 ]H-NMR (400 MHz, CDC13)： 1.10-1.24 (m, 5H), 1.37 (d, 6H), 1.42-1.54 (m, 4H), 1.64-1.70 (m, 4H), 2.30-2.34 (m, 3H), 2.48 (m, 4H), 3.68 (t, 2H), 3.80 (s, 3H, OMe), 4.61 ® (septet, 1H), 6.44 (d, 1H), 6.53 (dd, 1H), 6.81-6.84 (m, 2H), 7.18-7.22 (m, 2H), 7.39 (d, 2H), 8.44 (s, 1H). 13C-NMR (100 MHz, CDC13): 22.04 (2C), 24.03, 25.29, 25.55 (2C), 26.06, 27.14, 28.33, 54.30 (2C), 55.29, 59.05, 68.00, 70.06, 101.11, 106.30, 109.80, 113.83 (2C), 116.46, 123.60, 128.14 (2C), 131.69, 150.51, 157.75, 158.78, 160.94, 162.07 〇 【實施例14】 5-{4-異丙氧基-2-[7-(P比洛烧-1-基）己氧基]苯基]^-4-(4-曱 24 200936132 氧基苯基）異曙唑（化合物5i，n=7) (5-{4-Isopropoxy-2-[7-(pyrrolidin-l-yl)heptyloxy]phenyl}-4-(4-methoxyphenyl)isoxazole)之合成

© 4 首先’混合0.50克的化合物4c (lmmol) ii克的呢 11定（1.5mmol)與30毫升的乙醇，並迴流4小時。之彳&，ρ 卻上述混合物並進行真空抽乾，所得的殘留物續以5〇毫 升的水沖洗。接著，將收集的沈澱物以水清洗並乾燥之， 以獲得一固體。之後，以色層分析管柱（甲醇:二氣甲烧'=1. 進行純化。待以乙醇結晶後，即可獲得0.34克如、^十& 油的化合物5i，產率69%。 '哭 、】H-NMR (400 MHz，CDC13): 1.07-1.39 (m，l4) i (m, 2H), 1.03 (m, 4H), 2.78 (m, 2H), 3.03 (m, Λ 3,71 (t. 2H), 3.80 (s, 3H，OMe), 4.61 (septet, 1H), 6.44 (d ^ 6.53 (dd, 1H), 6.81-6.89 (m, 3H), 7.21 (m, 2H), 7 3g ^ ^ 8.47 (s，1H). 13C-NMR (100 MHz, CDC13): 21 94 n ' 23.35 (2C), 25.59, 26.40, 26.86, 28.21，28.55, 53 71，55.32, 55.34, 55.79, 67.98, 70.08, 101.05, 106.34, 109.6Q- ’ · ’ •夕，113.86， 114.52，116.50，123.47, 128.14, 129.62, 131.68 15〇 157.76, 158.79, 160.98, 162.12。 ’ ·54, 【實施例15】 25 200936132 4-{7-{5-異丙氧基-2-[4-(4-曱氧基苯基）異噚唑-5-基]苯氧 基}庚基}嗎啉（化合物5j,n=7) (4-{7-{5-isopropoxy-2-[4-(4-methoxyphenyl)isoxazol-5-yl] phenoxy}heptyl}morpholine)之合成

首先’混合0.50克的化合物4c (1 mmol)、0.13克的嗎 啉（1.5mmol)與30毫升的乙醇，並迴流4小時。之後，冷 卻上述混合物並進行真空抽乾，所得的殘留物續以50毫 升的水沖洗。接著，將收集的沈澱物以水清洗並乾燥之， 以獲得一固體。之後，以色層分析管柱（曱醇:二氯曱院=1:5) 進行純化。待以乙醇結晶後’即可獲得0.44克如棕色油 的化合物5j，產率86%。 ]H-NMR (400 MHz, CDC13): 1.06-1.23 (m, 8H), 1.32-1.46 (m, 8H), 2.27 (m, 2H), 2.43 (m, 4H), 3.66 (t, 2H), 3.71 (m, 4H), 3.80 (s, 3H, OMe), 4.61 (septet, 1H), 6.44 (d, 1H), 6.53 (dd, 1H), 6.80-6.84 (m：, 2H), 7.19-7.22 (m, 2H), 7.40 (d，2H)，8.44 (s，1H). 13C-NMR (100 MHz, CDC13): 22.03 (2C), 25.58, 26.40, 27.28,'28.32, 29.11, 53.73 (2C), 55.25, 59.11, 66.93 (2C), 68.04, 70.01, 101.07, 106.11, 109.77, 113.76 (2C), 116.40, 123.63, 128.10 (2C), 131.68, 150.52, 157.71，158.72, 160.87, 162.01。 26 200936132 【實施例16】 5-{4-異丙氧基-2-[7_(哌嗉-1-基）庚氧基]苯基}-4-(4-曱氧 基苯基）異曙嗤(化合物5k，n=7) (5-{4-Isopropoxy-2-[7-(piperazin-l-yl)heptyloxy]phenyl}-4 -(4-methoxyphenyl)isoxazole)之合成

首先，混合0.5Ό克的化合物4c (lmmol)、0.13克的哌: 嗪（1.5mmol)與30毫升的乙醇，並迴流4小時。之後，冷 卻上述混合物並進行真空抽乾，所得的殘留物續以50毫 升的水沖洗。接著，將收集的沈澱物以水清洗並乾燥之， 以獲得一固體。之後，以色層分析管柱（曱醇:二氯曱烷= 1:5) 進行純化。待以乙醇結晶後，即可獲得0 39克如淡黃色 油的化合物5k，產率77%。 ]H-NMR (400 MHz, CDC13): 1.07-1.18 (m, 8H), 1.31-1.53 (m, 8H), 2.34 (m, 2H), 2.54 (m, 4H), 3.01 (m, 4H), 3.68 (t, 2H), 3.79 (s, 3H, OMe), 4.61 (septet, 1H), 6.44 (d, 1H), 6.53 (dd, 1H), 6.80-6.84 (m, 2H), 7.18-7.22 (m, 2H), 7.40 (d, 2H), 8.44 (s, 1H). 13C-NMR (l〇〇 MHz, CDC13): 22.04 (2C), 25.57, 26.22, 27.21, 28.32, 29.01, 29.68, 45.16 (2C), 53.09, 55.28, 58.86, 68.06, 70.04, 101.11, 106.20, 109.79, 113.80, 114.46, 116.43, 123.62, 128.12, 129.65, 27 200936132 131.69, 150.52, 157.75, 158.75, 160.91，162.05。 【實施例17】 5-{4-異丙氧基-2-[7-(呢σ定-1-基)庚氧基]苯基}·4-(4-曱氧 基苯基）異曙唑（化合物51, η=7) (5-{4-Isopropoxy-2-[7-(piperidin-l-yl)heptyloxy]phenyl}-4 -(4-methoxyphenyl)isoxazole)之合成

首先，混合0.50克的化合物4c (1 mmol)、0.13克的哌 唆（1.5mmol)與30毫升的乙醇，並迴流4小時。之後，冷 卻上述混合物並進行真空抽乾，所得的殘留物續以50毫 升的水沖洗。接著，將收集的沈殿物以水清洗並乾燥之， •以獲得一固體。之後，以色層分析管柱（曱醇:二氯甲烷= 1:5) 〇 進行純化。待以乙醇結晶後，即可獲得0.40克如棕色油 的化合物51，產率78%。 ^-NMR (400 MHz, CDC13)： 1.07-1.21 (m, 8H), 1.30-1.39 (m, 8H), 1.60 (m, 2H), 1.81 (m, 4H), 2.52 (m, 2H), 2.68 (m； 4H), 3.69 (t, 2H), 3.80 (s, 3H, OMe), 4.61 (septet, 1H), 6.44 (d, IH), 6.53 (dd, 1H), 6.81-6.84 (m, 2H), 7.19-7.22 (m, 2H), 7.39 (d, 2H), 8.46 (s, 1H). 13C-NMR (100 MHz, CDC13)： 22.03 (2C), 23.35, 24.32, 25.08, 25.55, 27.09, 28.24, 28.75, 28.90, 53.86 (2C), 55.30, 58.53, 68.00, 28 200936132 70.06, 101.06, 106.30, 109.73, 113.83, 114.49, 123.52, 128.12 (2C), 129.62, 131.66, 150.51, 157.74, 158.77, 160.94, 162.07。 【實施例18】 7-(6-漠己氧基)-3-(4-曱氧基苯基)-4if-色酮（化合.物6a, R3_ =4-OMe, n=6) (7-(6-Bromohexyloxy)-3-(4-methoxyphenyl)-4H-chromen-4 -one)之合成

首先，混合0.54克的化合物1 (R3 = 4-OMe)(2mmol)、 0.28 克的碳酸鉀（2mmol)、0.73 克的 1,6-二漠丁烧（3mmol) 與5毫升的DMF，並加熱至65-70。(：攪拌3小時。之後， ❹冷卻上述混合物並進行真空抽乾，所得的殘留物續以50 毫升的水沖洗。接著，將收集的沈澱物以色層分析管柱（甲 醇:二氯曱烷= 1:50)進行純化。待進一步以乙醇結晶後，即 可獲得0.69克的化合物6a，產率80%，熔點135-136°C。 ^-NMR (400MHz, DMSO-^) : 1.44-1.48 (m, 4H>, 1.76-1.85 (m，4H)，3.55 (t，2H)，3.79 (s，3H，OMe), 4.13 (t， 2H), 7.00 (m，2H), 7.08 (dd, 1H)，7.15 (d, 1H), 7.53 (m, 2H)， 8.02 (d, 1H), 8.42 (s, 1H). 13C-NMR (100 MHz, DMSO-^): 24.59, 27.25, 28.23, 32.14, 35.13, 55.14, 68.37, 100.99, 113.61 (2C), 115.03, 117.48, 123.34, 124.07, 126.93, 130.7 29 200936132 (2C), 153.47, 157.44, 158.99, 163.09, 174.63. Anal, calcd for C22H23Br04: C 61.26, H 5.37; found: C 61.16, H 5.38。 【實施例19】 7-(6-溴己氧基)-3-(3,4-二曱氧基苯基)_4f色酮（化合物6b， R3 = 3-OMe, 4-OMe, n=6) (7-(6-Bromohexyloxy)-3-(3,4-dimethoxyphenyl)-4i/-chrom en-4-one)之合成

首先，混合0.54克的化合物1 (R3 = 3-OMe， 4-OMe)(2mmol)、0.28 克的碳酸鉀(2mmol)、0.73 克的 1,6-二溴丁烷(3mmol)與5毫升的DMF，並加熱至65-70°C攪 拌3小時。之後，冷卻上述混合物並進行真空抽乾，所得 φ 的殘留物續以50毫升的水沖洗。接著，將收集的沈澱物 以色層分析管柱（曱醇：二氯曱烷= 1:50)進行純化。待進一 步以乙醇結晶後，即可獲得0.73克的化合物6b，產率 790/。，熔點 135-136°C 〇 !H-NMR· (400 MHz, DMS0-i/6): 1.44-1.48 (m, 4H>, 1.75-1.85 (m, 4H), 3.43 (t, 2H), 3.92 (s, 3H, OMe), 3.93 (s, 3H, OMe), 4.05 (t, 2H), 6.84 (d, 1H), 6.92 (d, 1H), 6.97 (dd, 1H), 7.06 (dd, 1H), 7.21 (d, 1H), 7.95 (s, 1H), 8.19 (d, 1H). 13C-NMR (100 MHz, DMSO-A): 25.20, 27.82, 28.78, 32.56, 33.72, 55.91, 55.93, 68.39, 100.54, 111.09, 112.44, 114.87, 30 200936132 118.23, 120.98, 124.63, 124.85, 127.67, 148.70, 149.02, 152·20, 157.88, 163.43, 175.89. Anal, calcd for C23H25Br05: C 59.88, H 5.46; found: C 59.90, H 5.4卜 【實施例20】 3-(4-曱.氧基苯基)-7-[6-(呢嗦-1-基）己氧基]-4//色嗣（化合 物 7a, R3 = 4_OMe, n=6) (3-(4-methoxyphenyl)-7-[6-(piperazin-l-yl)hexyloxy]-4if-c hromen-4-one)之合成

Ο 首先，混合0.43克的化合物6a (lmmol)、0.13克的 呃嗪（1.5mmol)與5毫升的1,4-環氧基烷（u-dioxane)，並 加熱至65-70°C攪拌14小時。之後，冷卻上述混合物並 ❿進行真空抽乾，所得的殘留物續以50毫升的水沖洗。接 著，將收集的沈澱物以色層分析管柱（甲醇：二氯曱院=1:1 〇) 進行純化，即可獲得0.21克的化合物7a，產率48%，熔 點 198-1990C。 ]H NMR (400MHz, DMSO-^6) ： 1.3^ (m, 2H), 1.44 (m, 4H), 1.76 (m, 2H), 2.33 (t, 2H), 2.54 (m, 4H), 3.05 (m, 4H), 3.79 (s, 3H, OMe)，4.12 (t，2H)，7.00 (m，2H), 7.07 (dd，1H), 7.14 (d, 1H), 7.53 (m, 2H), 8.02 (d, 2H), 8.42 (s, 1H). 13C-NMR (100 MHz, DMSO-^): 25.33, 25.88, 26.47, 28.37, 31 200936132 43.10 (2C), 49.52 (2C), 55.16, 57.37, 68.46, 100.97, 133.61 (2C), 115.04, 117.47, 123.34, 124.05, 126.94, 130.7 (2C), 153.47, 157.44, 159.00, 163.10, 174.63. Anal, calcd for C26H32N2O4 * 〇.8HBr · 0.4H2O: C 60.53, H 6.57, N 5.43; found: C 60.45, H 5.38 0 【實施例21】 3-(3,4-二曱氧基苯基)·7-[6-(哌啶-1-基）己氧基]-4F-色酮 (化合物 7b，R3 = 3-OMe, 4-OMe, η=6) (3-(3,4-Dimethoxyphenyl)-7-[6-(piperidin-l-yl)hexyloxy]-

首先’混合0.46’克的化合物6b (lmmol)、0.13克的 ❹哌啶（1.5mmol)與5毫升的1,4-環氧基烷（i,4-di〇xane)，並 加熱至65-70。(：攪拌14小時。之後’冷卻上述混合物並 進行真空抽乾.，所得的殘留物續以50毫升的水沖洗。接 著’將收集的沈澱物以色層分析管柱（曱醇：二氯甲烧=1:1〇) 進行純化，即可獲得0.21克的化合物7b，產率45%，熔 點 181-182°C。 ' ]H-NMR (400 MHz, CDCI3): 1.42-1.50 (m, 3H), 1.54-1.61 (m, 2H), 1.83-1.92 (m, 4H), 1.95-2.03 (m, 3H), 2.30-2.40 (m, 2H), 2.61-2.70 (m, 2H), 2.93-2.99 (m, 2H), 32 200936132 3.56-3.59 (m, 2H), 3.92 (s, 3H, OMe), 3.93 (s, 3H, OMe), 4.04 (t, 2H), 6.84 (d, 1H), 6.92 (d, 1H), 6.97 (dd, 1H), 7.05 (dd, 1H), 7.21 (d, 1H), 7.95 (s, 1H), 8.19 (d, 1H). 13C-NMR (100 MHz, DMSO-^6): 22.03, 22.40, 23.42, 25.42, 26.49, 28.62, 53.18, 55.91, 55.93, 57.34, 68.19, 100.57, 111.12, 112.48, 114.86, 118.25, 121.00, 124.63, 124.83, 127.64, 148.71, 149.04, 152.24, 157.88, 163.33, 175.87. Anal, calcd for C28H35N05_0.6H20.0.8HBr: C 61.31，H 6.81, ❹ N 2.55; found: C 61.52, H 6.66, N 2.58。 '【實施例22】 ' ~ 2-(4-(4-甲氧基苯基）異噚唑-5-基)-5-(4-(哌嗪-1-基）丁氧基) 盼（化合物 8a, R3 = 4-OMe，n=6) (2-(4-(4-Methoxyphenyl)isoxazol-5-yl)-5-(4-(piperazin-l-y l)butoxy)phenol)之合成

首先，混合0.44克的化合物7a (lmmol)、0.28克的 碳酸鉀(2mmol)、0.13 克的鹽酸羥胺(NH2OHHCl)(4mmol；) 與10毫升的乙醇，並迴流攪拌24小時。之後，冷卻上述 混合物並進行真空抽乾，所得的殘留物續以50毫升的水 33 200936132 沖洗。接著，將收集的沈澱物以乙醇進行結晶，即可獲得 0.39克的化合物8a，產率87%，熔點192-193°C。 ]H NMR (400MHz, OMSO-d6) : 1.37-1.48 (m, 4H), 1.72-1.76 (m, 4H), 3.09 (m, 2H), 3.30 (m, 4H), 3.45 (m, 4H), 3.74 (s, 3H, OMe), 3.97 (t, 2H), 6.50 (dd, 1H), 6.55 (d, 1H), 6.90 (m, 2H), 7.17 (d，2H), 7.29 (m, 2H)，8.93 (s, 1H), 10.09 (br s, 1H, OH). 13C-NMR (100 MHz, DMSO-J6): 22.95, 25.02, 25.70, 28.35, 47.66 (2C), 55.10 (2C), 55.47, φ 67.33, 102.04, 105.77, 107.52, 114.04 (2C), 116.20, 122.35, 127.93 (2C), 131.54, 150.57, 156.99, 158.39, 161.37, 161.94. Anal, calcd for C28H35N04.0.9H20-0.5HBr: C 65.83, H 7.37, N 2.74; found: C 65.76, H 7.27, N 2.75。 【實施例23】 2-[4-(3,4-二曱氧基苯基）異噚唑-5-基]-5-([6-(哌啶-1-基）己 氧基]紛（化合物 8b, R3 = 3-OMe, 4-OMe，n=6) (2-[4-(3,4-Dimethoxyphenyl)isoxazol-5-yl]-5-([6-(piperidi n-l-yl)hexyloxy]phenol)之合成

首先，混合0.47克的化合物7b (1 mmol)、0.28克的 34 200936132 碳酸鉀（2mmol)、0.13 克的鹽酸羥胺（NH2OH HCl)(4mmol) 與10毫升的乙醇，並迴流攪拌24小時。之後，冷卻上述 混合物並進行真空抽乾，所得的殘留物續以50毫升的水 沖洗。接著，將收集的沈澱物以乙醇進行結晶，即可獲得 0.23克的化合物8b，產率47%，熔點86-87°C。 !H-NMR (400 MHz, CDC13)： 1.32-1.51 (m, 8H), 1.1.63-1.72 (m, 10H), 2.89 (m, 2H), 3.61 (s, 3H, OMe), 3.73 (s, 3H, OMe), 3.97 (t, 2H), 6.51 (dd, 1H), 6.55 (d, 1H), φ 6.89-6.99 (m, 3H)，7.18 (d, 1H)，8.99 (s, 1H，)，10.09 (br s, 1H, OH). ^€-NMR (100 MHz, DMSO-d6): 21.73, 22.78, 23.39, 25.10 (2C), 25.96, 28.35, 52.16 (2C), 55.22, 55.48, 56.07, 67.39, 102.02, 105.80, 107.60, 110.57, 111.87,-116.47, 119.10, 122.51, 131.71, 148.01, 148.57, 150.57, 157.05, 161.40, 162.04。 【實施例24】

細胞毒性試驗I 將 MCF-7 細胞（人類乳腺癌（human breast ❹ adenocarcinoma))、NCI-H460 細胞（非小細胞肺癌 (non-small-cell lung cancer))及 SF-268 細胞（神經膠母細胞 瘤（glioblastoma))分別培養在含有10%胎牛血清（fetal calf serum)與非必需氨基酸（nonessential amino acid)(Life Technologies, Inc.)的 DME 培養基（Dulbecco’s modified Eagle’s medium)，並將培養基置於37°C的濕潤培養器， 通入5%的二氧化碳。 將人類癌細胞培養在96-井微量滴定盤（96-well microtiter plate)井中100μ1的培養基，分別包含MCF-7、 35 200936132 NCI-H460 與 SF-268 細胞，密度各為 6500、2500 及 7500 細胞/井。 待過夜後，加入無血清内含2(^g/ml (最終濃度）測試 化合物的培養基至各別井中。待井中細胞以測試化合物處 理 3 天 後 ’ 以 MTS (3-(4, 5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium salt)還原試驗法測定細胞存 活率（cell viability)。分別以放線菌素 D (Actinomycin ❹Ο)(10μΜ，最終濃度）及DMSO (0.1%，最終濃度）作為正 控制與載體控制。測定結果以相對於DMSO載體控制的 百分比表示之。 【實施例25】 細胞培養及藥物處理 將分離自脂肪組織的人類脂肪組織來源幹細胞 (human adipose tissue derived stem cells, hADSCs)培養在 含有 5%胎牛血清（fetal bovine serum，FBS)、1 OOU/ml 盤尼 T西林（penicillin)及鏈黴素（streptomycin)的無灰清角化細 胞培養基（keratinocyte SFM medium)(Gibco BRL, Gaithersburg，MD)。將上述人類脂肪組織來源幹細胞 (hADSCs)續培養在含有10%胎牛血清與5(^g/mL抗壞血 酸鈉 〇0dium ascorbate)的 DMEM 培養基（Gibco BRL， Gaithersburg，MD) ’並將培養基置於含5%二氧化碳的濕 潤大氣環境，:溫度維持37°C，結果顯示，幹細胞會進行 造骨（osteogenic)。培養基每隔2天會有所變化。 將新合成的化合物溶於DMSO至10mM的最終濃度 並儲存於-20°C環境中。此處所使用的濃度為ΐ〇μΜ，係 36 200936132 以最終濃度0.1%的DMSO對培養基新鮮稀釋而成。控制 培養基亦以相同量的DMSO進行處理。 【實施例26】 細胞存活率測定 以MTT試驗法測定細胞存活率。MTT試驗法為一種 比色試驗法(colorimetric assay)，係依據存活細胞將水溶 性黃色四唑鹽（tetrazolium salt)還原為藍色甲潛(formazan) 結晶的能力（Carmichael，J.以.e/. Ccmcer 1987, ❹47，936)。待化合物處理後，加入350μ[的MTT溶液 (0.5pg/mL in PBS)至各別井中培養4小時。之後，加入 DMSO 0.5小時，以完全溶解上述藍色結晶。接著，以一 酵素免疫分析儀(ELISA reader)量測570nm的吸收值。粒 線體代謝(mitochondrial metabolism)的抑制率顯示於表1 (相對於控制組活性的百分比）。 【實施例27】 細胞毒性試驗Π D 利用一細胞毒性4貞測儀（cytotoxicity detection kit)(Roche, Germany)彳貞測細胞乳酸去氫酶滲漏率（Lactate dehydrogenase (LDH) leakage) ’ 以定量細胞毒性（Crowston， J. G. ei α/ «Scl 1998, 39, 449)。首 先，將細胞培養在48-井盤(4xl04細胞/井）。待以藥物處 理後，收集培養基的懸浮層及細胞層。根據偵測儀製造手 冊，以1 %的TritonX-10 0溶解細胞層，並將細胞溶解物 質與懸浮層分別置於96-井盤。接著，加入ΙΟΟμί的催化 溶液至每一待測井達20分鐘。之後，以一内建有490nm 濾鏡的酵素免疫分析儀(ELISA reader)量測吸收值。乳酸 37 200936132 去氫酶滲漏率顯示於表l (相對於總細胞毒性的百分比）。 【實施例28】 骨向分化及礦化作用之定量 首先，藉由一誘導造骨培養基(osteo-induction medium， OIM)(於低濃度葡萄糖的DMEM中含有10%胎牛血清 (FBS)、Ο.ΙμΜ 腎上腺皮質酮（dexamethasone)、10mM β- 甘油填酸（β-glycerophosphate)及ΙΟΟμΜ L-抗壞血酸-2-填 酸（L-Ascorbic-2-phosphate))的培養細胞誘導進行骨向分 化（osteogenic differentiation)持續 7-14 天。接著，以茜素

A 紅S染色法（Alizarin red S stain)評估細胞外基質 (extracellular matrix)的 I丐 4匕（calcification)(Carl，A. α/ 义⑽/. 2004, 329, 77)。之後，被茜素紅S染色的 礦化物以一造骨定量儀（osteogenesis quantification kit)(CHEMICON®)進行定量，結果顯示於表1。 本發明異曙嗤衍生物（化學式I)抑制癌細胞增生的效 果揭露於表2。表中顯示’當異噚唾衍生物濃度為 20 g/mL時，對MCF-7細胞（人類乳腺癌（human breast ❹ adenocarcinoma))、NCI-H460 細胞（非小細胞肺癌 (non-small-cell lung cancer))及 SF-268 細胞（神經膠母細胞 瘤（glioblastoma))具有100%的抑制率。而當異卩等峻衍生物 濃度為4pg/mL時，以化合物5g (5-{4-異丙氧基-2-[6-(哌 嗦-1-秦）己氧，基]苯泰]·_4-(4-曱氧基苯基）異嗜σ坐).r、· - 'y ) ： ... (5-{4-異丙氧基-2-[6-(哌啶-1-基）己氧基]苯基卜4-(4-曱氧 基苯基）異噚唑）及5k (5-{4-異丙氧基-2-[7-(哌嗪-1-基）庚 氧基]苯基} -4-(4-曱氧基苯基）異噚唑）具有對上述三種癌 細胞最明顯的抑制效果。 38 200936132 本發明異噚唑衍生物（化學式i)誘導成骨細胞活性 (osteoblast activity)的效果（以人類脂肪組織來源幹細胞 (hADSCs)的礦化作用表示）揭露於表1。表中顯示，例如 化合物5a (5-{4-異丙氧基_2-[4-(卩比咯烷-1-基）丁氧基]苯 基}_4-(4-甲氧基苯基）異噚嗤）及5e (5-{4-異丙氧基 -2-[6-(吡咯烷小基）己氧基]苯基}-4-(4-曱氧基苯基）異噚 嗤）均較異普黃酮（ipriflavone)具有更佳誘導成骨細胞活性 的效果，且化合物5a及5e均為非毒性。因此，本發明 @異噚唑衍生物為未來極具發展潛力的抗骨質疏鬆藥。 表1顯示10 Μ異噚唑衍生物之細胞存活率、細胞毒性 及hADSCs之造骨礦化作用 百分比(％) 化合物 n NR]R2 細胞存活率 (3 天，MTT) 細胞毒性 (3 天,LDH) 礦化作用 (10 天） 3 _ 細 6 68 277 5a 4 卜o 71 0 194 5b 4 58 13 130 5c 4 hN^NH 5 v_/ 86 33 108 5d 4 卜o 78 0 114 5e 6 卜Cl 64 0 158 5f 6 卜o 53 17 0 5g 6 5 v_y 60 0 137 39 200936132 5h 6 卜o 57 0 0 5i 7 卜o 63 0 0 5j 7 hN^O 5 \一/ 54 12 158 5k 7 ζ \—/ 68 0 53 51 7 卜o 58 0 124 8a 6 hN^NH ? \/ 64 0 36 8b 6 卜o 11 41 285 異普黃酮 (ipriflavone) 77% 0% 100 % 表2顯示異噚唑衍生物抑制癌細胞增生之效果 生長百分率(％) MCF-7 NCI-H460 SF-268 化合物 n NRiR2 20 4 20 4 20 4 g/mL g/mL g/mL g/mL g/mL g/mL 5a 4 1 83 1 81 2 121 5b 4 hN^O 4 63 1 52 3 58 5c 4 hN^NH ? \一/ -1 7 0 29 -2 68 5d 4 卜o 1 90 1 68 2 119 5e 6 卜o 0 55 1 22 1 38 5f 6 hN^O 5 \/ -1 44 0 17 1 38 5g 6 hN^NH -3 14 -1 0 -1 20 40 200936132 5h 6 卜o -3 13 -1 2 -1 4 5i 7 卜o 2 32 1 11 2 30 5j 7 ^~Nw° 1 25 0 10 2 32 5k 7 hN^NH ? V_/ 1 1 1 0 1 3 51 7 卜o 1 29 1 8 2 25 8a 6 hN^NH s v_y -1 7 0 29 -2 68 8b 6 卜o 4 93 2 89 15 116 雖然本發明已以較佳實施例揭露如上，然其並非用以 限定本發明，任何熟習此項技藝者，在不脫離本發明之精 神和範圍内，當可作更動與潤飾，因此本發明之保護範圍 當視後附之申請專利範圍所界定者為準。 ❹ 41 200936132 【圖式簡單說明】 無。 【主要元件符號說明】 無0

Claims (1)

1. 200936132 十、申請專利範圍： 1.一種異卩坐（isoxazole)衍生物，具有下列化學式

   ❹ ❹ 其t. 丨 R1、R2、R3、R4及R5獨立地包括氮、經基或C1 - C12 烷氧基，該CrC12烷氧基選擇性地取代有環氧基 (oxirane)、噻σ南基(thiirane)、氮丙咬基（aziridine)、胺基、 環胺基（cycloamino)、胺基經基（aminohydroxyl)或環胺基 經基（cycloaminohydroxyl)。 2. —種醫藥組合物，包括： 一如申請專利範圍第1項所述之異噚唑（isoxazole)衍 生物或其藥學上可接受之鹽類；以及 一藥學上可接受之載體。 3. —種治療骨質疏鬆（osteoporosis)之醫藥組合物，包 括： 一如申請專利範圍第1項所述之異曙峻（isoxazole)衍' 生物或其藥學上可接受之鹽類；以及 一藥學上可接受之載體。 4. 一種治療癌症之醫藥組合物，包括： 一如申請專利範圍第1項所述之異曙σ坐（isoxazole)衍 43 200936132 生物或其藥學上可接受之鹽類；以及 一藥學上可接受之載體。

   44 200936132 七、指定代表圖： (一） 本案指定代表圖為：無。 (二) 本代表圖之元件符號簡單說明：無。

   八、本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化學式：

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