TW200922619A - Cancerous disease modifying antibodies - Google Patents

Description

200922619 九、發明說明： 【合作研究協議的聲明】 本發明，如同由本文中申請專利範圍所定義，為Arius

Research Inc·與 Takeda Pharmaceutical Company Limited 雙 方所達成之關卽研究協議（Joint Research Agreement)(“協 議由於在該協議之範圍内從事之活動的結果。該協議在 本發明的日期之前就是有效的。 【發明所屬之技術領域】

本發明係關於緩和癌症疾病之抗體（cancer〇us disease modifying antibodies，CDMAB)的分離和生產，以及該等 CDMAB在治療和診斷方法中的用途，可視需要與一或多個 化療劑併用。本發明進一步關於利用本發明之CDMAB的結 合測定。 發明背景 【先前技術】 單株抗 特的，並具 如此，現存 癌症、在相 第一線療法 治療失敗、 是對個別個 有手術。不 本身在大多 有因個人特性而與其他癌症不同的癌症。儘管 的療法以相同的方式，、、△底# 士 φ J々八，⑺療所有患有相同類型 同階段的患者。在這此串去由^， 、坚患者中仍有至少30%對 是失敗的，因此導致P炙广！人ϋ 等蚁更多回合的治療並增加了 轉移、最後死亡的可能性。治療的較好方法會 體的客製化療法。現存唯—能客製化的療法只 能對患者量身訂做化瘃釦诂& ^ ^和放射線治療，而手術 數的情況下’都不足以導致治癒。 200922619 單株抗體的問世，使得發展客製化療法之方法的可能 性變成更實際，因為可使每個抗體針對單一的抗原決定 位。此外，亦有可能產生抗體之組合，其針對獨特定義— 特定個體之腫瘤的一群抗原決定位。 已經辨識出在癌症和正常細胞之間的顯著差 細胞含有抗原，其對經轉化的細胞是專一的，科學團體已 長期支持可設計藉著專一地結合該等癌症抗原而專—地靶 定經轉化的細胞的單株抗體；因此相信單株抗體可作為，，魔 術子彈’’以排除癌細胞。然而，現在廣泛地認定沒有單一的 單株抗體可適用於所有的癌症情況，且單株抗體可（呈— 類）被部署作為乾定性癌症治療。根據立即揭示之本發明 教示分離的單株抗體已經顯示以有利於患者之方式（例如 藉著降低腫瘤負荷）緩和癌症疾病進展’並將在本文中不 同地破稱為緩和癌症疾病之抗體（CDMAB)或，，抗-癌，，抗體。 現在，癌症患者通常有數個治療選擇。對癌症療法的 嚴格管制方法’已經在全面存活和死亡率上產生改良。然 而，對於特殊的個體，該等經改良的統計學不一定與在其 等個人狀況上的改善有關。 、 因此，若已經盡力使方法學得以讓醫師能夠獨立地治 療在同'组中其他患者的每個腫瘤，這會允許以獨特的方 法，為一個人量身訂做療法。該治療過程，確實會增加治 癒率，並產生較佳的結果，藉此滿足長期_感覺到的^要: 在歷史上，已經使用多株抗體的用途，在人類癌症之 治療上得到有限的成功。已經利用人類血漿治療淋巴瘤和 200922619 白血病，但僅有少數延長的緩和或反應。此外，缺少再現 性，且與化療相比並沒有額外的益處。亦已經利用人類血 液、黑猩猩血清、人類血漿和馬血清治療固體腫瘤，如乳 癌、黑色素瘤和腎細胞癌，有相當不可預測和無效的結果。 已經有許多單株抗體治療固體腫瘤的臨床試驗。在 1980年代，有至少四個人類乳癌的臨床試驗，其使用對抗 特定抗原或基於組織專一性的抗體，從至少47個患者中僅 產生一個反應者。直到1998年才有使用與順氯氨鉑 (CISPLATIN)混合之人類化抗_Her2/neu抗體（贺癌平 (Herceptin)®)的成功臨床試驗。在該試驗中’針對反應評估 37個患者，其中大約四分之一有部分反應比例，而另外四 分之一有少量或穩定的疾病進行。在反應者中進行的中間 時間為8,4個月，在5.3個月的期間有中間的反應。 在1998年核准賀癌平⑧與紫杉醇（tax〇1)⑧併用為第一 線。臨床研究的結果顯示與僅接受紫杉醇⑧的組別相比較 (3.0個月），對接受抗體療法加紫杉醇⑧的該等病人，增加 了疾病進行的中間時間（6.9個月）。在中間存活上亦稍有增 加；賀癌平⑧加紫杉醇⑧治療武器對僅有紫杉醇⑧治療武器 為22對18個月。此外，在比較抗體加紫杉醇⑧組合組與僅 有糸杉醇®，在完全（8對2%)和部分反應者（34對1 5%)兩者 的數目上亦有增加。然而，與僅有紫杉醇⑧治療相比較，以 賀癌平®和紫杉醇®治療，導致較高的心臟毒性發生率（分別 為13對1%)。再者，賀癌平®治療僅對過度表現（經由免疫 組織化學（immunohistochemistry，IHC)分析測定）人類上皮 200922619 生長因子受體 2(human epidermal growth factor receptor 2 ’ Her2/neu)(—種受體’目前沒有已知功能或生物學重要 性之配體）的患者是有效的；將近25%患者有轉移的乳癌。 因此’對乳癌患者仍有大量未解決的需求。即使是那些受 益於賀癌平®治療的患者，仍需要化療，因此至少在某種程 度上，仍涉及這類治療的副作用。 研究結直腸癌的臨床s式驗，涉及對抗糖蛋白和糖脂目 標兩者的抗體。諸如17-1A之類的抗體，其對腺癌有一些 專一性’在超過60個業已接受第2期臨床試驗的患者中， 只有1個患者有部分反應。在其他試驗中，在使用額外環 鱗醯胺（cyclophosphamide )的計劃中，17-1A的使用僅在 5 2個患者中產生1個完全反應和2個少量的反應。到目前 為止，π-ι a的第m期臨床試驗尚未證實有像第羾期結腸癌 之佐劑療法一樣的經改良效力。為了顯影一開始批准使用 人類化之老鼠單株抗體，也沒有產生腫瘤退化。 只有最近，已經從使用單株抗體之結直腸癌的臨床研 究中獲得任何陽性的結果。在2004年，核准愛必妥 (ERBITUX)®為患有表現EGFR之轉移性結直腸癌的患者 (其為基於伊立替康（irinotecan)之化療難以醫治的）的第二 線治療。得自雙臂第Π期臨床研究和單臂研究兩者的結 果，顯示愛必妥⑧與伊立替康之組合，分別有23和丨5%的 反應率，疾病進行的中間時間分別為41和6·5個月。得自 相同的雙臂第31期臨床研究和另一單臂研究之纟士果，•顯厂、 僅以愛必妥®治療，結果分別為丨丨和9%的反應率，应 病 200922619 進行的中間時間分別為1.5和4.2個月。 因此’在瑞士和美國’已經核准愛必妥⑧治療與伊立替 二：組合，且在美國亦已經核准愛必妥⑧的單獨治療，作為 第一線伊立替康療法業已失敗之結直腸癌患者的第二線户 療。因此’就像贺癌平⑧’在瑞士僅核准為單株抗體和㈣ 之組合的治療。此外’在瑞士和美國兩者中的治療，僅核 =為患者的第二線療法。再者，在，已經核准癌 Wavastin)®與基於靜脈内5氟尿心定之化療併用，作 為轉移性結直腸癌的第-線治療。第ΠΙ期臨床研究的結 果，證實與僅以5·氟尿㈣治療之患者相比較，以癌思停⑧ 加5-氟尿嘲咬治療之患者有延長的中間存活（分別為個 月對16個月）。然而，再度像賀癌平⑧和愛必妥⑧一樣，僅 核准以單株抗體與化療組合之治療。 對肺、腦、印巢、騰臟、前列腺和胃癌持續有不充足 的結果。最近，非-小細胞肺癌最有希望的結果是來自第π 期臨床試驗，其中該治療涉及與殺細胞藥物-阿黴素 (doxorubicin)結合之單株抗體（SGN15 ; d〇x BR96、抗 -Sialyl-Lex)與化療劑剋癌易（TAX〇TERE)⑧的組合。剋癌易 ⑧是唯- * FDA#准之肺癌第二線治療的化療齊卜最初的 數據指出與僅有剋癌易⑧相比較，改善了整體存活。在研究 招募的62個患者中，三分之二接受SGN_15與剋癌易⑧之組 合，而剩下的三分之一僅接受剋癌易⑧。關於接受sqn_i5 與剋癌易®之組合的患者，與僅接受剋癌易⑧之患者的5·9 個月相比較，有7.3個月的中間整體存活。與僅接受勉癌易 200922619 ®之患者（其整體存活1年和18個月分別為24和)相 比較，接受SNG-15加剋癌易®之患者分別為29和。 計畫更多的臨床試驗。 在臨床前，在使用單株抗體治療黑色素瘤方面，有一 些有限的成功。該等抗體極少進入臨床試驗，且迄今尚未 核准或在第皿期臨床試驗中證實有利的結果。 由於在可能促成疾病發狀30，_個已知基因的產物 中，缺少對相關目標的鑑認，阻礙了治療疾病之新藥物的 發現。在癌症學研究中，經常因為其等在腫瘤細胞中過度· 表現的事實，而簡單地選擇可能的藥物目標。如此鐘認^ 的目標接著針對與眾多化合物之交互作用篩選。在有潛力 之抗體療法的情況下’肖等候選化合物經常衍生自根據由 Kohier 和 Milstein(1975, Nature，256, 495 497, K〇hier 和 MUstein)主張的基本原則的單株抗體產製的傳統方法。從以 抗原（例如整個細胞、細胞碎片、經純化之抗原）免疫的老鼠 中收集脾臟細⑯，並與永存不朽的融合瘤夥伴融合。針對 最渴望與目標結合之抗體的分泌，筛選並選擇所得之融人 瘤。使用該等方法，並以其等之親和力為基礎來選擇； 經產生許多針對癌細胞的治療和診斷抗體，包括贺癌平⑧和 美羅華（RITUXIMAB)。該策略之缺點為兩倍，選擇 適合治療或診斷抗體結合的目標，其受限於缺少組織專— j癌過程周邊的知識，而藉著所得的過分簡化之方法（如 藉著過度表現來選擇)以鑑認該等目標。其次，假定以 親和力與受體結合的藥物分子通常有最高的可能性開始或 200922619 « 抑制信號，可能並非總是實情。 不管治療乳癌和結腸癌的某些進展，有效抗體療法（單 一製劑或共同-治療）的鑑認和發展，已經不適合所有類型的 癌症。 先前專利： 美國專利第5,750，102號揭示了其中以MHC基因（其可 從得自患者之細胞或組織中選殖）轉移感染得自患者腫瘤之 , 細胞的方法。然後使用這些經轉移感染的細胞接種患者。 美國專利第4,861，581號揭示了包括下列步驟的方法： 獲得對哺乳動物之贅瘤和正常細胞的内在細胞組份專—， 但對外在組份則否的單株抗體，標示該單株抗體，使該經 標不之抗體與已經接受治療以殺死贅瘤細胞之哺乳動物的 組織接觸，並藉著測量該經標示之抗體與退化性贅瘤細胞 之内在細胞組份的結合’測定該療法的效力。在製備針對 人類細胞内抗原之抗體時，專利權所有人承認惡性細胞代 表這類抗原的便利來源。 ./ 美國專利第5，171，665號提供了新穎抗體及其生產方 法。明確地說’該專利教示單株抗體的形成，其具有強有 力地結合與人類腫瘤（例如結腸和肺的踵瘤）有關之蛋白質 抗原’但以少很多之程度與正常細胞結合的特性。 美國專利第5,484,596號提供了癌症治療之方法，其包 括以手術從人類癌症患者中移除腫瘤組織，處理該腫瘤組 織以獲得腫瘤細胞，照射該腔瘤細胞使其為能生存的但無· 致腫瘤性，並使用這些細胞以製備患者的疫苗，其能夠抑 11 200922619 制原發性腫瘤的復發，同時抑制轉移。該專利教示單株抗 體的發展，其與腫瘤細胞的表面抗原反應。如同在第 第45行及以下陳述的，專利權所有人在發展單株抗體時利 用自身的腫瘤細胞，在人類贅瘤中表現出主動專一的 療法。 免 美國專利第5,693,763號教示人類癌特有的糖蛋白抗 原’且與起源的上皮組織無關。 美國專利第5,783，186號針對至抗_Her2抗體（其在表 現Her2之細胞中誘導細胞計）、產生該抗體之融合瘤細 胞株、使用該抗體和包括該抗體之醫藥組合物治療癌症的 方法。 美國專利第5,849,876號描述新㈣融合瘤細胞株，用 以產生對從腫瘤和非-腫瘤組織來源中純化之黏液素抗原的 單株抗體。 美國專利第5,869,268號針對至產製人類淋巴細胞（其 產生對想要的抗原專—之抗體）的方法、產生單株抗體的方 法，以及由該方法產生之單株抗體。該專利特別針對至有 助於診斷和治療癌症的抗_HD人類單株抗體的生產。 美國專利第5,869,045號係關於與人類癌細胞反應之抗 體 '抗體片段、抗體結合物和單.鏈免疫毒素。該等抗體藉 以發揮功能的機制是兩倍，因為該分子與出現在人類癌表 的-田胞膜抗原反應’更因為該抗體有能力内化至癌細 胞内’隨後結合’使其等在形成抗體·藥物和抗體-毒素結合 物上是特別有用的。以其等未經修改之形 <，該抗體亦在 12 200922619 特定的濃度下顯示出細胞毒性特性。 美國專利第5,780,033號揭示自 揭不自身抗體對於腫瘤療法和

外，還有產生單株抗核自身抗體的融合瘤細胞株。 【發明内容】 發明概述 本申請案利用在美國專利第6，180,357號中教示之產生 患者專一之抗-癌抗體的方法以分離編碼緩和癌症疾病之單 株抗體的融合瘤細胞株。可專一地替—腫瘤製造該等抗 體，並因此使癌症療法之客製化成為可能的。在本申請案 之前後文中，將具有殺死細胞（細胞毒性的）或抑制細胞生長 (、’’田胞靜止的）特性之抗_癌抗體，在後文中稱為細胞毒性 的。可使用該等抗體協助癌症的分期和診斷，並可用來治 療腫瘤轉移。藉著預防性治療，該等抗體亦可用來預防癌 症。不像根據傳統藥物發現方式產製的抗體，該方法產製 的抗體可靶定先前未顯示對於惡性組織之生長及/或存活是 必要的分子和路徑。此外，這些抗體的結合親和力適合細 胞毒性事件的啟始需要，其可能並未順從較強的親和力交 互作用。再者，在本發明之範圍内，將標準化療模式（例如 放射性核素）與本發明之CDMAB結合，藉此集中在該化療 13 200922619 劑的使用。亦可將CDMAB與毒素、細胞毒性部分、酵素（例 如經生物素結合之酵素）或血原細胞結合，藉此形成抗體結 合物。 個人化抗-癌治療的希望，會導致病人管理方式的改 變。可能的臨床假想情況是在出現時獲得腫瘤試樣並儲 存。從該試樣中’可從現存的緩和癌症疾病之抗體的名單 中，定出腫瘤的類型。仍按慣例將患者分期，但可使用可 利用之抗體將患者進一步分期。可立即以現存的抗體治療 患者，並可使用在本文中概述之方法，或經由使用噬菌體 展示庫（phage display libraries )，連同在本文中揭示之篩 選方法，產生對腫瘤專一之抗體的名單。會將所有所產製 的抗體加至抗-癌抗體庫中，因為有其他腫瘤可能攜帶一些 與正在處理者相同之抗原決定位的可能性。根據該方法產 生的抗體，可在任何數目的患有與該等抗體結合之癌症的 患者中用來治療癌症疾病。 除了抗-癌抗體之外，患者可選擇接受目前建議的療 法，作為治療之多-模式攝生法的一部分。經由目前方法分 離之抗體對非-癌症細胞是相對上較無毒性的事實，允許使 用高劑量的抗體組合’單獨或與傳統療法結合。高治療指 數亦允許以短時間之規模再-治療，其應該減少了出現對治 療有抵抗力之細胞的可能性。 若患者是初期療程難醫治的或發展出轉移，可為了再_ 治療而重複產製對該腫瘤專一之抗體的製程。此外，可將 抗·•癌抗體與獲自患者的紅血球結合，並為了治療轉移再度_ 200922619 已經有少許有效的治療，

球結合的抗-癌抗體也可有效地就地對抗腫瘤。或者，可將 ，例如淋巴細胞、巨噬細胞、單 注入。對於轉移性癌症和轉移， 通常預示很差的結果而導致死亡 是完全血管化的，而藉由叙△坫 抗體與其他血原細胞結合 核細胞、自然殺手細胞等等。 有五種抗體，並分別與由其重鏈賦予之功能有關。通 常認為藉著裸露的抗體殺死癌細胞，是經由抗體依賴性細 胞之細胞毒性或補體依賴性細胞毒性介導。例如，老鼠IgM 和IgG2a抗體可藉著結合補體系統的c_ 1組份，而活化人 類補體，藉此活化典型的補體活化路徑，其可導致腫瘤溶 解。至於人類抗體，大多數有效的補體活化抗體通常是IgM 和IgGl。老鼠抗體的lgG2a和IgG3同型物，有效地招募具 有F c受體的細胞毒性細胞，其會導致細胞被單核細胞、巨 噬細胞、粒性細胞和某些淋巴細胞殺死。人類抗體的IgG1 和IgG3同型物兩者介導ADCC。 抗體介導殺死癌症的其他可能機制，可能是經由使用 具有催化在細胞膜及其相關糖蛋白或糖脂中的各種化學鍵 結水解之功能的抗體，所謂的催化性抗體。 有三種抗體-介導之殺死癌細胞的額外機制。第一種是 使用抗體作為疫苗，以誘導身體產生對抗居留在癌細胞上 之假定抗原的免疫反應。第二種是使用靶定生長受體並干 15 200922619 擾其功能或向下調節該受體的抗髅 ^ ^ L , j机镀，而得以有效地喪失其 功能。第三種是這類抗體對細胞表面部分之直接連接的影 響，其可能導致直接的細胞死亡，如死亡受體的連接，如 TRAIL R1 或 TRAIL R2，或整聯幕 &.

-耸白（integrin)分子，如α V 冷3，以及類似者。 可接受的風險範圍下， ’存活通常是最尋求的 還有許多其他已完全認 癌症藥物的臨床效用是基於在 藥物對患者的益處。在癌症療法中 益處，然而，除了延長壽命之外， 可的益處。該等其他的益處（其中治療對存活並沒有不利的 影響）’包括減輕症狀、防止有害事件、延長復發的時間或 無疾病存活’以及延長進行的時間。該等判斷標準通常是 破採納的，且管理團體，如美國食品與藥物管理局（u s_ Food and Drug Administrati〇n，F D A )批准產生該等益處

Critical Reviews in 的藥物（Hirschfeld 等人

Oncology/Hematology 42:137_143 2〇〇2)。除了 該等判斷標準 之外，咸認為有其他結束點可以預知該等類型之益處。在 某種程度上，由U.S. F.D.A.授予的加速核准過程，承認有 可能會預測患者利益的代用者。到2〇〇3年底，已經有十六 種藥物在該過程下被批准，且其中四種已經繼續至完全批 准，即追蹤研究已經證實直接的患者利益，如同由代理人 結束點預測的^ 一個在固體腫瘤中測定藥物效力之重要結 束點，是藉著測量對治療之反應，評估腫瘤負荷（Therasse 等人 Journal 〇f the National Cancer Institute 92(3):205-216 2000)。已經由在固體腫瘤研究團體中的反應評估判斷標準 16 200922619 (Response Evaluation Criteria in Solid Tumors Workin Group)-—群國際癌症專家，頒布了這類評估的臨床判斷= 準（RECIST判斷標準）。經證實對腫瘤負荷有影響的藥物（= 據RECIS丁判斷標準藉著客觀的反應顯示），在與適當的對 照組相比較時，最後有產生直接之患者利益的傾向。在臨 床前環境中，通常較直接地評估和證明腫瘤負荷。因為可 將臨床前研究改變成臨床環境，在臨床前模式中產生延長 存活的藥物，有最大預期的臨床效用。類似對臨床治療產 生的肯定反應，在前臨床環境中降低腫瘤負荷的藥物，亦 可能對疾病有重大的直接影響。雖然延長存活是來自癌症 藥物治療最尋求的臨床成果，但亦有其他具有臨床效用的 利益，且明顯使腫瘤負荷降低，其可能與延遲疾病的進行、 延長存活或兩者都有關’亦可能導致直接的利益並具有臨 床影響（Eckhardt等人發育治療：經靶定化合物之臨床試驗 〇又 口十的成功和失敗（Developmental Therapeutics: Successes and Failures of Clinical Trail Designs of Targeted

Compounds) , ASCO Educational Book,第 39 次年會，2003 第 209-219 頁）。 本發明描述藉著其在細胞毒性測定中以及在人類癌症 之動物模式中的效力鑑認之AR104A1289.2.2的發展和用 途。本發明描述試劑’其專一地與出現在目標分子上之抗 原決定位結合，且其亦具有對抗惡性腫瘤細胞（但不對抗正 常細胞）的試管内細胞毒性特性（如同裸露的抗體），且其亦 直接介導（如同裸露的抗體）腫瘤生長的抑制。在抗_癌抗體 17 200922619 之用途上有更多的進步，如靶定表現同族抗原標記的腫 瘤’以達到腫瘤生長之抑制’以及其他癌症治療的陽性結 束點。

總之’本發明教示AR104A1289.2.2抗原作為治療劑之 目標的用途，在投藥時可降低在哺乳動物中表現該抗原之 癌症的腫瘤負荷。本發明亦教示CDMAB(AR104A1289.2.U 及其衍生物，及其抗原結合片段的用途，還有誘導其配體 的細胞毒性’以靶定其等抗原而降低在哺乳動物中表現該 抗原之癌症的腫瘤負荷。此外’本發明亦教示了在癌細胞 中檢測AR104A 1289.2.2抗原的用途，其可用於診斷、療法 的預測’以及攜帶表現該抗原之腫瘤之哺乳動物的預後。 因此’本發明之目標是利用產生緩和癌症疾病之抗體 (CDMAB)的方法，該抗體對衍生自特定個體的癌細胞，或 一或多個特定的癌細胞株而升高，該CDMAB對癌細胞是細 胞毋丨生的’同時對非_癌症細胞是相對上較無_毒性的，以便 分離融合瘤細胞株，以及該融合瘤細胞株編碼之相對應的 經分離單株抗體及其抗原結合片段。 本發明額外的目標是教示緩和癌症疾病之抗體、配體 及其抗原結合片段。 本發明的另一目標是產生緩和癌症疾病之抗體，係經 由抗體依賴性細胞之毒性介導其等的細胞毒性。 本發明的另一目標是產生緩和癌症疾病之抗體，係經 由補體依賴性細胞之毒性介導其等的細胞毒性。 本發明的另一目標是產生緩和癌症疾病之抗體，其等 18 200922619 之細胞毒性為其等催化細胞之化學鍵結水解的功能。 本發明的另一目標是產生緩和癌症疾病之抗體，其可 用在結合測疋上’以供癌症的診斷、預後和監視。 從下列的說明中，本發明之其他目標和優點會變得更 清楚，其中藉著解釋和實例陳述本發明的某些具體事實。 【實施方式】 發明之詳細說明 通常，當在概述、說明、實施例和申請專利範圍中使 用時，下列的字或片語具有指定之定義。 以最廣泛之意義使用”抗體，，一詞，且特別涵蓋，例如單 一的單株抗體（包括激動劑、拮抗劑和中和抗體、去_免疫化 (de-Immunized)、老鼠、嵌合型或人類化 原決定位™體組合物、單_鏈抗體、免)疫 抗體片段（參見下文）。 當在本文中使用”單株抗體，，一詞時，意指獲自實質上均 一之抗體族群的抗體，即除了可能天然存在的突變（其可能 以最/的量出現)之外’包括相同族群的個別抗體。單株抗 體為高度專一的，且係針對單一的抗原位置。此外，與二 株抗體製劑(其包括針對不同決定位(抗原決定位)的不’同抗 體）相反，每個單株抗體均針對在抗原上單一的決定位。除 :二等：專一性，單株抗體的優點亦在於可藉著不被其他 式被合成。料語“單株的”代表抗體的特徵， 抗體族群，且不應將其解釋為需要藉 者任何特殊方法產生抗體族群。 ^ 例如，欲根據本發明使用 200922619 之單株抗體，可藉著首先由 Kohler等人，Nature， 256:495 (1975)描述的融合瘤（老鼠或人類）方法來製造，或可 藉著重組DNA方法（參見，例如美國專利第4,816,567號） 來製造。“單株抗體”也可以分離自噬菌體抗體庫，使用例如 在 Clackson 等人，Nature，352:624-628(1991)和 Marks 等人， J_ Mol_ Biol.，222:581-597(1991)中描述的技術。 “抗體片段”包括完整抗體的一部分，較佳的是包括其抗 原-結合或可變區。抗體片段的實例包括小於全長的抗體、 Fab、Fab’、F(ab’）2 和 Fv 片段；微型雙功能抗體（diabodies); 直線抗體；單-鏈抗體分子；單-鏈抗體、單功能部位抗體分 子、融合蛋白、重組蛋白質和從抗體片段形成的多專一性 抗體。 “完整”抗體是包括抗原-結合之可變區，以及輕鏈恆定 功能部位（CL)和重鏈恆定功能部位CH1、CH2和CH3的抗 體。恆定功能部位可以是天然的序列恆定功能部位（例如人 類天然序列恆定功能部位）或其胺基酸序列變體^較佳的 是’完整抗體具有一或多個效應物功能。 依據其重鏈之恆定功能部位的胺基酸序列，可將完整 抗體指派為不同的“種類”。有五大類完整抗體：IgA、IgD、 IgE、IgG和IgM，有些又可再細分成“亞類’，（同型物），例如 IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgA 和 IgA2。分別將與不同種 類抗體相對應之重鏈恆定功能部位稱為α、5、ε、7和 //。不同種類免疫球蛋白的次單元結構和三_維構型是已熟 知的。 20 200922619 抗體“效應物功能’，意指該等可歸因於抗體之Fc區（天 然序列Fc區或胺基酸序列變體Fc區）的生物活性。抗體效 應物功能的實例包括C1 q結合；補體依賴性細胞毒性；Fc 受體結合；抗體-依賴性細胞-介導之細胞毒性 (antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity，ADCC);吞 嗤作用；細胞表面受體的向下調節（例如B細胞受體；BCR) 等等。 “抗體-依賴性細胞-介導之細胞毒性”和“ADCC”意指細 胞-介導之反應’其中非-專一的細胞毒性細胞（其表現Fc受 體（FcRs))(例如自然殺手（NK)細胞、嗜中性白血球和巨噬細 胞）認出已經結合在目標細胞上的抗體，並隨後引起目標細 胞的溶解。介導ADCC的主要細胞-NK細胞’僅表現Fc y R 瓜’而單核細胞則表現Fc 7 r I、Fc 7 R Π和Fc r RIE。在

Ravetch 和 Kinet，Annu. Rev. Immunol 9:457-92(1991)第 464 頁的表3中，概述了在造血細胞上的pcR表現。欲評估感 興趣分子的ADCC活性，可進行如在美國專利第5,500,362 號或5,821，33 7號中描述之試管内的ADCC測定。對該類測 定有用的效應物細胞包括周圍血液單核細胞（PBMC)和自然 殺手（NK)細胞。或者或另外，可在活體内，例如在動物模 式，如在 Clynes 等人 pnaS(USA) 95:652-656(1998)中揭示 的動物模式中，評估感興趣分子的ADCC活性。 效應物細胞是表現一或多個FcRs並執行效應物功能 的白血球。較佳的是，至少表現Fc7»Rni並執行ADCC效 應物功能的細胞。介導ADCC之人類白血球的實例，包括 21 200922619 周圍血液單核細胞（PBMC)、自然殺手（NK)細胞、單核細胞、 細胞毒性Τ細胞和嗜中性白血球；較佳的是PBMCs和ΝΚ 細胞。可從其天然來源中分離效應物細胞，例如從血液或 PBMCs，如在本文中的描述。 使用“Fc受體”或“FcR”一詞來描述與抗體之Fc區結合 的受體。較佳的FcR是天然序列人類FcR。然而，較佳的 FcR是與IgG抗體結合的FcR( τ*受體），並包括FcyRI、 FcrRII和FcYRHI亞類的受體，包括對偶基因變體，以及 該等受體以供選擇之方式接合的形式。FcyRII受體包括Fc r RII A(“活化受體”）和Fc y Rn B(“抑制受體”），其具有類 似的胺基酸序列，差異主要是在於其細胞質功能部位。活 化受體Fc 7 RIIA在其細胞質功能部位中含有免疫受體酪 胺酸-為基礎之活化基序（immunoreceptor tyrosine-based activation motif，ITAM)。抑制受體 Fc γ R Π B 在其細胞質 功能部位中含有免疫受體酪胺酸-為基礎之抑制基序 (immunoreceptor tyrosine-based inhibition motif，ITIM)。（參 見 M. Daeron 在 Annu. Rev. Immunol. 15:203-234(1997)中的 回顧）。在 Ravetch 和 Kinet，Annu. Rev. Immunol 9.457-92(1991) ， Capel 等人 Immunomethods 4:25-34(1994);以及 de Haas 等人，J. Lab. Clin. Med. 126:330-41(1995)中回顧了 FcRs。將其他的FcRs(包括在 未來鑑認的那些），納入在本文中之名詞”FcR，，内。該名詞 亦包括新生兒受體FcRn，其負責將母親的IgGs轉移至胎兒 (Guyer 等人，J. Immunol. 117:587(1976)和 Kim 等人，Eur. J_ 22 200922619

Immunol. 24:2429(1994)) 〇 補體依賴性細胞毒性，，或“CDC ( c〇mplement dependent cytotoxicity) ’’意指分子在補體存在下溶解目標的能力。由 補體系統的第一個組份（c丨q)與與同族抗原複合之分子（例 如抗體）的結合來啟使補體活化路徑。欲評估補體活化，可 進打CDC測定，例如像是在Gazzan〇_Sant〇r〇等人，j Immunol· Methods 2〇2:163 (1996)中描述的。 可變的’’ 一詞意指可變功能部位的某些部分，在抗體中 有廣泛的序列差異，並被用在每個特殊抗體與其特殊抗原 之結合和專一性上的事實。然而，變異性並非均勻地分布 在抗體的可變功能部位中。其集中在輕鏈和重鏈可變功能 邛位兩者中之叫做尚變區的三段中。將可變功能部位之較 同度保留的部分稱為架構區（FRs) ^天然重和輕鏈的可變功 迠部位分別包括四個FRs，大多採用召片構型，由三個高 變區連接，其形成環連接片結構，且在某些情況下形成 該結構的一部分。在每個鏈中的高變區均藉著FRs與得自 其他鏈之同變區非常接近地結合在一起，有助於抗體之抗 原-結合位置的形成（參見Kabat等人，免疫學上感興趣之蛋 白貝的序列（Sequences of Proteins of Immunological terest)，第 5 版 Publish Health Service, National Institutes 〇f Health, Bethesda，Md·第 15-17 頁；48-53(1991))。恆定 功at部位不直接涉及抗體與抗原的結合，但顯示各種效應 物功此’如抗體參與抗體依賴性細胞之細胞毒性（ADcC)。 當在本文中使用“高變區，’一詞時，意指抗體中負責抗原 23 200922619 -結合的胺基酸殘基。高變區通常包括得自“互補性決定區” 或“CDR”的胺基酸殘基（例如在輕鏈可變功能部位中的殘基 24-34(L)、50-56(L2)和89-97(L3)，以及在重鍵可變功能部 位中的殘基 31-35(H1)、50-65(H2)和 95-102(H3) ; Kabat 等 人，免疫學上感興趣之蛋白質的序列（Sequences of Proteins of Immunological Interest)，第 5 版 Publish Health Service， National Institutes of Health, Bethesda, Md.第 15-17 頁； 48-53(1991)) ’及/或得自“高變環”的那些殘基（例如在輕鏈 可變功能部位中的殘基26-32(Ll)、50-52(L2)和91-96(L3)， 以及在重鏈可變功能部位中的殘基26-32(Η1)、53-55(H2) 和 96-101(H3) ； Chothia 和 Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917(1987))。“架構區”或“FR”殘基是如在本文中定 義之高變區殘基以外的那些可變功能部位殘基。抗體的木 瓜蛋白酶消化，產生兩個相同的抗原_結合片段，稱為 片段，分別有單一抗原-結合位置，以及剩餘的“Fc，，片段， 其名稱反映其迅速結晶化的能力。胃蛋白酶處理產生 F(ab )2片·^又，其具有兩個抗原結合位置，且仍能夠交又·連 接抗原。 “Fv”是最小的抗體片段，其含有完整的抗原_認知和抗 原-結合位置。该區由—個重鏈和一個輕鏈可變功能部位的 —聚體，以緊密、非-共價結合所組成。在該構型中，每個 可變功能部位的三個高變區交互作用，以定義在Vh_Vl二 聚體之表面上的抗原·結合位置。六個高變區集體賦予抗體 之抗原-結合專一性。然而，即使是單一的可變功能部位（或 24 200922619 僅^括對抗原專-之三個高變區的半個Fv)，亦具有認出並 與抗原結合的能力，雖然親和力比整個結合位置低。F讣片 段亦含有輕鏈的恆定功能部位和重鏈的第一個恆定功能部 位（CHi^Fab，片段與Fab片段之差異在於在重鏈chi功能 部位之羧基端添加了幾個殘基，包括得自抗體鉸鏈區的一 或多個半胱胺酸。Fab，-SH是在本文中對其中恆定功能部位 之半胱胺酸殘基攜帶至少一個自由硫醇基團之Fab，的稱 呼。F(ab’）2抗體片段一開始是以一對Fab，片段之形式產 生，在其等之間具有鉸鏈半胱胺酸。抗體片段的其他化學 偶聯亦是已知的。 可基於其等之恆定功能部位的胺基酸序列，將得自任 何脊椎動物物種之抗體的“輕鏈，，分派至兩個明顯不同類型 之一，叫做卡巴u )和蘭達（λ )。 ‘‘單-鏈Fv”或“scFv”抗體片段包括抗體的νΗ和vL功能 位，其中該等功能部位以單一多肽鏈出現。較佳的是， Fv多肽更在Vh和Vl功能部位之間包括多肽連接子，其使 scFv得以形成想要的結構以供抗原結合。關於scFv的回 顧，參見Pluckthun在單株抗體之藥理學（The pharmac〇1〇gy of Monoclonal Antibodies)，第 j 13 冊，R〇senburg 和 M〇〇re 編輯，Springer-Verlag，New York，第 269-315 頁（1994)中。 “微型雙功能抗體”一詞意指小型抗體片段，具有兩個抗 原結合位置’該片段包括在相同的多肽鏈（Vh_vl)中與可變 輕功旎部位（VL)連接的可變重功能部位（Vjj)。藉著使用太短 以致於不允許在相同鏈上兩個功能部位之間配對的連接 25 200922619

子’迫使該功能部位與其他鏈之互補功能部位配對，並創 造兩個抗原-結合位置。在例如歐洲專利4〇4,〇97 ; WO 93/11161 ’ 和 Hollinger 等人，proc· Natl· Acad. Sci. USA， 90:6444-6448(1993)中更充分地描述了微型雙功能抗體。 “經分離之”抗體是已經鑑認並分離，及/或從其天然環 境之組份中回收的抗體。其天然環境之污染組份是會干擾 該抗體之診斷或治療用途的物質，並可能包含酵素、激素 及其他蛋白質或非蛋白質的溶質。經分離之抗體包括在重 組細胞内在原4的抗冑，因μ缺少抗體之天然環境的至 少一個組份。然而，例行地會藉著至少一個純化步驟製備 經分離之抗體。 “結合，，感興趣之抗原的抗體，1能夠以足夠之親和力與 抗原結合的抗體，使得該抗體在靶定表現該抗原之細胞 時，可用來作為治療或診斷劑。在抗體為與抗原部分結合 者之處’其經常會優先結合與其他受體對立的抗原部分， 且不包3偶發的結合’如非·專一的h接觸，或與轉譯後斑 其他抗原共有的修飾結合’並可能與其他蛋白質沒有顯著 的交又·反應。檢測與感興趣抗原結合之抗體的方法， 技術領域中已熟知的’並可包含但不限於諸如MS、細胞 ELISA和西方墨點法之類的測定。 當在本文中使用時，可交替使用名詞“細胞”、“細胞株” 和細胞培養物”，且所有的、士絲 士“ 的&類稱呼均包含後代。亦瞭解所 =後代可能在腿内含物上實際上不是相同的，因 意或偶然的突變。具有和在原始經轉化的細胞内筛選者相 26 200922619 同的功能或生物活性的突變後代係被納入。從前後文中 清楚在哪裡想要不同的稱呼。 會 “療法或治療，’意指治療性的治療和預防性或預防上的 測量，其中目標是防止或減緩（減少）經靶定之病理學疾病或 病症。需要治療的那些包括業已罹患病症的那些，以及= 患病傾向的那些，或欲在其中預防病症的那些。因此，在 本文中欲治療之哺乳動物可能已經診斷出罹患病症或可 能易罹患病症或易受病症影響者。

“癌症”或“癌症的’’一詞意指或描述在哺乳動物中的病 理學疾病，其典型地特徵在於不受調節的細胞生長或死 亡。癌症的實例包括，但不限於癌、淋巴瘤、胚細胞瘤、 肉瘤和白血病或淋巴樣惡性。這類癌症更特殊的實例包括 鱗狀細胞癌（例如上皮鱗狀細胞癌）、肺癌，包括小_細胞肺 癌、非·小細胞肺癌、肺腺癌和肺的鱗狀細胞癌、腹膜的癌 症、肝細胞癌、包括胃腸癌的胃或胃癌、胰臟癌、神經膠 質母細胞瘤、子宮頸癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝細胞 瘤、乳癌、結腸癌、直腸癌、結直腸癌、子宮内膜或子宮 癌、唾液腺癌、腎臟或腎癌、前列腺癌、外陰癌、曱狀腺 癌、肝癌、肛門癌、陰莖癌，以及頭和頸部的癌症。 “化療劑”為可用來治療癌症的化學化合物。化療劑的實 例包括烷基化劑，如塞替派（thiotepa)和環磷醯胺（赛托神 (CYTOXAN)™);烧基續酸酯，如白消安（busulfan)、英丙舒 凡（improsulfan)和哌泊舒凡（piposulfan);吖丙啶類，如苯佐 替派（benzodopa)、卡波酿（carboquone)、美妥替口辰 27 200922619 (meturedopa)和烏瑞替哌（ured〇pa);亞乙基亞胺和甲蜜胺類 (methylamelamines)，包括六曱蜜胺（aitretainine)、曲他胺 (triethylenemelamine) 、 三 亞乙基 磷醯胺 (triethylenephosphoramide) 、 。塞 替派 (triethylenethiophosphoramide)和三經 甲蜜胺 (trimethylolomelamine)；氮芥類，如苯丁 酸氮芥 (chlorambucil)、萘氮芥（chl〇rnaphazine)、克洛磷醯胺 (cholophosphamide)、雌莫司丁（estramustine)、異環磷醯胺

(ifosfamide)、氮芥（mechlorethamine)、氧氮芥 (mechlorethamine oxide)鹽酸鹽、美法侖（melphalan)、新氮 芥（novembichin)、苯芥膽固醇（phenesterine)、潑尼氮芬 (prednimustine)、曲磷胺（trof〇sfamide)、尿嘧啶氮芥（uracil mustard) ’亞硝基脲類’如卡莫司汀（carrnustine)、氯脲菌素 (chlorozotocin)、福莫司、汀（f〇temustine)、洛莫司汀 (lomustine)、尼莫司汀（nimustine)、雷莫司汀（ranimustine); 抗生素’如阿克拉黴素（aclacinomysins)、放線菌素、奥色 拉黴素（authramycin)、重氮絲胺酸（azaserine)、博菜黴素、 放線菌素 C(cactinomycin)、加里剎黴素（calicheamicin)、卡 拉比辛（carabicin)、卡諾徽素（carnoniycin)、嗜癌素 (carzinophilin)、色徽素（chromomycins)、更生徽素 (dactinomycin)、道諾紅菌素、地托比星（det〇rubicin)、6_ 重氣-5-氧基-L-正免胺酸、阿徽素、表柔比星（epjrubinie)、 依索比星（esorubicin)、伊達比星（idarubicin)、麻西羅黴素 (marcellomycin)、絲裂黴素、黴酚酸（mycophenolic acid)、 28 200922619 諾拉黴素（nogalamycin)、橄欖黴素（olivomycins)、培洛黴素 (peplomycin)、波菲羅黴素（potfiromycin)、嗓羅黴素 (puromycin)、三鐵阿黴素（quelamycin)、羅多比星 (rodorubicin)、绛色黴素（streptonigrin)、鏈佐星 (streptozocin)、殺結核菌素（tubercidin)、烏苯美司 (ubenimex)、淨司他丁（zinostatin)、佐柔比星（zorubicin); 抗-代謝產物’如胺曱碟吟和5 -氟尿嘴咬（5-FU);葉酸類似 物’如二甲葉酸（denopterin)、胺甲碟吟、蝶羅吟 (pteropterin)、三甲曲沙（trimetrexate);嘌呤類似物，如氟 達拉濱（fludarabine)、6-酼基嘌呤、硫咪嘌呤（thiamiprine)、 硫代鳥嘌呤（thioguanine);嘧淀類似物，如環胞苷 (ancitabine)、阿扎胞苷（azacitidine)、6-氮尿苷（azauridine)、 卡莫氟（carmofur)、阿糖胞苷（cytarabine)、二脫氧尿苷 (dideoxyuridine)、去氧氟尿苷（doxifluridine)、依諾他濱 (enocitabine)、氣尿苷（floxuridine)、5-FU;雄激素，如卡 魯睪酮（calusterone)、屈他雄酮丙酸鹽（dromostanolone propionate)、環硫雄醇（epitiostanol)、美雄醇 (mepitiostanol)、睪内酯（testolactone);抗腎上腺藥物，如 氨魯米特（aminoglutethimide)、米托坦（mitotane)、曲洛司坦 (trilostane);葉酸補充劑，如弗林尼酸（frolinic acid);醋葡 酸·内自旨（aceglatone);路填酿胺糖普（aldophosphamide glycoside);胺基乙酿丙酸（aminolevulinic acid);安 °丫 0定 (amsacrine);百垂布西（bestrabucil);比生群（bisantrene); 依達曲沙（edatraxate);芥填胺（defosfamide);地美可辛 29 200922619 (demecolcine);地 〇丫 酿(diaziquone)；艾福米辛 (elformithine);依利醋錢（elliptinium acetate);依托格魯 (etoglucid);硝酸鎵；羥基脲；蘑菇多糖（ientinan);氣尼達 明（lonidamine);米托脈腙（mitoguazone);米托蒽醌 (mitoxantrone);莫哌達醇（mopidamol);二胺硝吖咬 (nitracrine);喷司他丁（pentostatin);非那麥特（phenamet); 吡柔比星（pirarubicin);鬼臼酸（podophyllinic acid) ; 2-乙基 酿胁，丙卡巴拼（procarbazine) ; PSK® ;雷佐生（razoxane); 西佐喝（sizofiran);鍺螺胺（spirogermanium);細格孢氮雜酸 (tenuazonic acid);三亞胺醌（triaziquone); 2,2，，2”-三氣三 乙胺；胺基曱酸S旨；長春地辛（vindesine);甲唤0米〇坐胺 (dacarbazine);甘露莫司汀（mannomustine);二漠甘露醇 (mitobronitol);二溴衛矛醇（mitolactol);哌泊溴烷 (pipobroman);加胞苷（gaCytosine);阿拉伯糖苷 (arabinoside)(“Ara-C”）；環磷醯胺；塞替派；紫杉烷 (taxane) ’ 例如紫杉醇（paciitaxei)(紫杉醇⑧，Brist〇i_Myers Squibb Oncology，Princeton，N.J.)和多舍他昔（docetaxel)(剋 癌易 ® ’ Aventis，Rhone-Poulenc Rorer，Antony，France);苯 丁酸氮芥；吉西他濱（gemcitabine) ; 6-硫代鳥嘌呤；酼基嘌 吟，fe甲碟吟，翻類似物’如順氯氨始和卡翻（carb〇platin); 長春花鹼（vinblastine);鉑；依托泊苷（et〇poside)(VP-16); 異環磷醯胺；絲裂黴素C ;米托蒽醌；長春新鹼；長春瑞賓 (vinorelbine);溫諾平（naveibine);諾凡蒽醌（novantrone); 替尼泊苷（teniposide);道諾黴素；胺基蝶呤；截瘤達 200922619 (xeloda);伊班膦酸鹽（ibandronate) ; CPT-l 1 ;拓撲異構酶 抑制劑RFS 2000，二氟甲基鳥胺酸（dmf 0));視黃酸；埃 斯培拉黴素（esperamicins);卡培他濱（capecitabine);以及 任何上述者在藥學上可接受之鹽類、酸類或衍生物。在該 定義中亦包括抗-激素劑，其作用為調節或抑制對腫瘤的激 素作用，如抗-雌激素藥，包括例如他莫昔芬（tam〇xifen)、 雷洛昔芬（raloxifene)、抑制 4(5)-咪唑的芳香化酶 (aromatase)、4_羥基他莫昔芬、曲沃昔芬（tri〇xifene)、雷洛 昔芬（keoxifene)、LY117018、奥那司酮（onaprist〇ne)和托瑞 米芬（t〇remifene)(法樂通（Fareston));以及抗雄激素藥，如 氟他胺（flutamide)、尼魯米特（nHutamide)、比卡魯米 (bicalutamide)、亮丙里德（leuprolide)和戈舍瑞林 (goserelin);以及任何上述者在藥學上可接受之鹽類、酸類 或衍生物。 為了治療’哺乳動物”意指任何分類為哺乳動物的動 物’包括人類、老鼠、SCID或裸鼠或老鼠品系、家畜和農 場動物，以及動物園、競賽用或同伴動物，如綿羊、狗、 馬、貓、牛等等。較佳的是，在本文中的哺乳動物是人類。 “募核苷酸”是長度短、單-或雙·股的聚脫氧核苷酸，其 藉著已知的方法以化學方式合成（如磷酸三酯、亞磷酸鹽或 亞磷醯胺化學，使用如在1988年5月4日發表之歐洲專利 266，03 2中描述的固相技術，或經由脫氧核苷η-膦酸g旨中間 物’如同由 Froehler 等人，Nucl· Acids Res·, 14:5399-5407 1986描述的）。然後在聚丙稀醯胺凝膠上純化其等。 31 200922619 根據本發明，非·人類（例如老鼠）免疫球蛋白之“人類 化”及/或“嵌合型，，形式，意指含有特定的嵌合型免疫球蛋 白、免疫球蛋白鏈或其片段（如Fv、Fab、Fab，、F(ab，）2或 抗體之其他抗原_結合亞序列）的抗體，與原始抗體相比較， 結果降低了人類抗-老鼠抗體（HAMA)、人類抗·嵌合型抗體 (HACA)或人類抗_人類抗體（HAHA)反應，並含有衍生自該 非-人類免疫球蛋白，使想要效果再現所需的必要部分（例如 CDR、抗原結合區、可變功能部位等等），同時仍保留結合 特徵（其可與該非-人類免疫球蛋白相比擬）。大抵來說，人 類化抗體是人類的免疫球蛋白（接受者抗體），其中藉著得自 非-人類物種（捐贈者抗體），如老鼠、大鼠或兔子之cdRs 的殘基（其具有想要的專一性、親和力和性能），置換得自接 受者抗體之互補性決定區（CDRs)的殘基。在某些情況下， 藉著相對應的非-人類FR殘基置換人類免疫球蛋白的巧架 構區㈣殘基。此外’人類化抗體可包括不是在接受者抗體 中’也不是在所輸人之CDR或FR序列中找到的殘基。可 進行這些修飾，以便更進一步琢磨並使抗體效能最適化。 通常，人類化抗體實質上會包括所有的至少一個，且典型 地兩個可變功能部位’其中全部或實質上全部的cdr區與 非-人類免疫球蛋白的那些相#，且全部或實質上全部的fr 殘基與人類免疫球蛋白—致序列的那些相符。人類化抗體 亦可視而要包括至-部分的免疫球蛋白怔定區（Fe)，典型 地是人類免疫球蛋白的恆定區。 去-免疫化抗體是對一特定物種為非-免疫原性或較 32 200922619 低免疫原性的免疫球蛋白。可經由使抗體的結構改變，而 達成去-免疫化。可使用任何熟諳此藝者已知的去·免疫化技 術。在例如2000年6月15日發表之w〇 〇〇/34317中描述 了一使抗體去免疫化的適當技術。 誘導“細胞调亡，，的抗體是藉著任何方法誘導程式化細 胞死亡的抗體，例如但不限於臈聯蛋白（annexin)v的結合、 卡斯蛋白酶活性、DNA的碎裂、細胞收縮、内 質網的膨脹、細胞碎裂，及/或膜囊（叫做細胞凋亡體）的形 成。 當在本文中使用時’瞭解“抗體誘導之細胞毒性，，意指衍 生自融合瘤上清液或由以登錄編號19〇6〇7_〇4寄存在idac 之嘁合瘤產生的抗體的細胞毒性影響，其影響不一定與結 合的程度有關。 在本說明書中，融合瘤細胞株，以及從其中產生的經 分離之單株抗體，可另行藉著其等的内部名稱 AR104A 1289.2.2或寄存名稱IDAC 19〇6〇7 〇4來稱呼它。 田在本文中使用時，“抗體_配體”包含對目標抗原之至 =一個抗原決定位展現出結合專一性的部分，且其可能是 完整的抗體分子、抗體片段’以及具有至少—個抗原結合 區或其一部分（即抗體分子之可變部分）的任何分子，例如 Fv分子、Fab分子、Fab，分子、F(ab，）2分子、雙專一性抗 體、、融合蛋白或任何以遺傳方式时的分子，其專一地認 出並與抗原的至少—個抗原決^位結合，該抗原係與由稱 為IDAC 190607-04之融合瘤細胞株產生的經分離之單株抗 33 200922619 體結合（IDAC 190607-04 抗原）。 當在本文中使用時，“緩和癌症疾病之抗體，，（Cdmab) 意指單株抗體，其以有利於患者之方式修改癌症疾病過 程，例如藉著降低腫瘤負荷，或延長攜帶踵瘤之個體的存 活’及其抗體-配體。 當在本文中使用時，“抗原-結合區，，意指認出目標抗原 之分子的一部分。 當在本文中使用時，“競爭性抑制，，意指使用傳統的交互 抗體競爭測定指出能夠認出並與決定位位置結合，該決定 位係藉著叫做IDAC 190607_04的融合瘤細胞株對其產生單 株抗體（IDAC 190607-04 抗體）。（Belanger L，SyWestre c 和Dufour D.(1973),藉著競爭性和三明治程序進行“胎兒 蛋白的酵素連接免疫測寒（Enzyme Hnked immun〇assay alpha fetoprotein by competitive and sandwich procedures.) Clinica Chimica Acta 48, 15) 〇 當在本文中使用時，“目標抗原，，為IDAC 19〇6〇7_〇4抗 原或其一部分。 當在本文中使用時，“免疫結合物，，意指任何分子或 CDMAB，如以化學或生物學方式與細胞毒性素、放射性製 劑、酵素、毒素、抗-腫瘤藥或治療劑連接的抗體。可使抗 體或CDMAB在分子中的任何地方與細胞毒性素、放射性製 劑、抗-腫瘤藥或治療劑連接，只要其能夠與其目標結合即 可。免疫結合物的實例包括抗體毒素化學結合物和抗體-毒 素融合蛋白。 34 200922619 當在本文中使用時，“融合蛋白”意指任何嵌合型蛋白 質，其中抗原結合區與具有生物活性之分子，例如毒素、 酵素或蛋白質藥物連接。 為了可更充分地瞭解在本文中描述的本發明，陳述以 下的說明。 本發明提供 CDMABs(即 IDAC 190607-04 CDMAB)，其 專一地認出並與IDAC 190607-04抗原結合。 藉著以登錄編號190607-04寄存在IDAC之融合瘤產生 的經分離單株抗體之CDMAB，可以是任何形式，只要其具 有競爭性地抑制由融合瘤IDAC 190607-04產生之經分離單 株抗體對其目標抗原的免疫專一性結合的抗原-結合區即 可。因此，任何重組蛋白質（例如融合蛋白，其中該抗體與 第二個蛋白質，如淋巴細胞活素或腫瘤抑制生長因子結 合），具有像IDAC 190607-04抗體一樣的結合專一性，便落 在本發明之範圍内。 在本發明之一具體事實中，CDMAB是IDAC 190607-04 抗體。 在其他的具體事實中，CDMAB是抗原結合片段，其可 以是Fv分子（如單鏈Fv分子）、Fab分子、Fab’分子、F(ab’）2 分子、融合蛋白、雙專一性抗體、異種抗體或任何具有IDAC 190607-04抗體之抗原-結合區的重組分子。本發明之 CDMAB針對IDAC 190607-04單株抗體所針對的抗原決定 位。 本發明之CDMAB可能是經修飾的，即藉著在分子内的 35 200922619 胺基酸修飾’而得以產生衍生物分子。化學修飾亦是可能 的。 衍生物分子會保留多肽的功能特性，也就是說具有如 此取代的分子仍會允許該多肽與IDAC 190607-04抗原或其 部分的結合。 這些胺基酸取代包括，但不限於在技術領域中已知為 “保留性的”胺基酸取代。 例如，已經完全確立蛋白質化學的原則，可經常在蛋 白質中進行某些胺基酸取代，名叫“保留性胺基酸置換，，，不 改變蛋白質之構象或功能。 這類改變包括以任何其他的這些疏水性胺基酸取代任 何的異亮胺酸（I)、纈胺酸（V)和亮胺酸（L);天冬胺酸（〇)取 代榖胺酸（E)反之亦然，榖胺醯胺（q)取代天冬醯胺（n)反之 亦然；以及絲胺酸（S)取代蘇胺酸（τ)反之亦然。亦認為其他 的取代是保留性的，視特定胺基酸的環境及其在蛋白質之 二維結構中的角色而定。例如，甘胺酸（G)和丙胺酸（Α)經常 是可交換的’如同丙胺酸和纈胺酸（v)。甲硫胺酸（M)，其為 相對上較疏水的’經常可與亮胺酸和異亮胺酸交換，且有 時可與類胺酸交換。離胺酸（κ)和精胺酸（R)在其中胺基酸殘 基之明顯特徵為其電荷’而且這兩個胺基酸殘基不同的 pK’s是不重要的位置’經常是可交換的。在特殊的環境中 仍可將其他改變視為“保留性的，，。 實施例1 融合瘤的產生-融合瘤細胞株AR104A1289.2.2 36 200922619 於2007年5月29日’根據布達佩斯條約，將融合瘤 細胞株AR104A1289.2.2以登錄編號190607-04寄存在加拿 大衛生署’微生物處，國際寄存機構（Internati〇nal Depository Authority of Canada > IDAC, Bureau 〇f Microbiology, Health Canada)，1015 Arlington Street »

Winnipeg’ Manitoba’ Canada’ R3E 3R2。根據 37 CFR 1 808， 寄存者確保所有強加在對大眾利用所寄存之物質上的限 制’會在專利獲准後以不可取消之方式移除。若寄存處不 能分配可存活之試樣，便會替換寄存物。 欲生產產生抗-癌抗體AR104A1289.2.2的融合瘤，在 PBS.IMMUNEASYTM(Qiagen，Venlo，Netherlands)佐劑（為了 使用，藉著溫和地混合來製備）中，製備與分離自冷凍人類 腹腔液（在知情同意下獲得的患者捐贈）之轉移卵巢癌一致 的惡性細胞。藉著皮下注射在50微升抗原-佐劑中的1千萬 個細胞，免疫五到七週齡的BALB/c老鼠。在開始免疫之後 2和5週，使用新近製備的抗原-佐劑，以在5〇微升中的i 千萬個細胞腹腔内補強免疫老鼠。在最後一次免疫之後三 天，使用脾臟進行融合。藉著將經分離之脾臟細胞與NSO-i 骨髓瘤夥伴融合，製備融合瘤。從融合瘤之繼代純種系， 測試得自融合的上清液。 欲測定由融合瘤細胞分泌的抗體是否屬於IgG或 同型物，使用EUSA測定。在代下，將在塗覆緩衝溶液 (0.1M碳酸鹽/碳酸氫鹽緩衝溶液，pH9 2_9 6)中濃度為2 4 微克/毫升的U)0微升/孔山羊抗_老鼠4(}+181^(11^口至 37 200922619 ELISA培養盤中過夜。以沖洗緩衝溶液（PBS + O.〇5%吐溫）沖 洗培養盤三次。將100微升/孔的阻斷緩衝溶液（在沖洗緩衝 溶液中5%牛奶）加至培養盤中，在室溫下持續1小時，然後 以沖洗緩衝溶液沖洗三次。加入1 〇〇微升/孔的融合瘤上清 液，並在室溫下培養該盤1小時。以沖洗緩衝溶液沖洗該 盤三次，並以100微升/孔加入1/1〇〇,〇〇〇稀釋的山羊抗·老 鼠IgG或IgM辣根過氧化酶結合物（以含有5%牛奶之PBS 稀釋）。在室溫下培養該盤1小時之後，以沖洗緩衝溶液沖 洗培養盤三次。在室溫下，與1 〇〇微升/孔的TMB溶液培養 1-3分鐘。藉著加入50微升/孔的2M H2S04使顏色反應終 止，並以Perkin-Elmer HTS7〇00培養盤判讀儀在45〇奈米 處判讀該盤。如同在圖1中所示，AR1 〇4A 1289.2.2融合瘤 主要分泌IgG同型物的抗體。 欲判定由融合瘤細胞分泌之抗體的亞類，使用老鼠單 株抗體同型物定型套組（HyCuh Biotechnology，Frontstraat， Netherlands)進行同型物定型實驗。將500微升緩衝溶液加 至含有大鼠抗-老鼠亞類之專一抗體的測試條上。將500微 升融合瘤上清液加至試管内，並藉著溫和地搖動將其淹 沒。藉著與膠體顆粒偶聯的二級大鼠單株抗體，直接檢測 所捕捉到的老鼠免疫球蛋白。這兩種蛋白質的組合，產生 用以分析同型物的視覺信號。抗·癌抗體Ari〇4A1 289.2.2 是屬於IgG 1，/c同型物。 在一輪限制稀釋之後，在細胞ELISA測定中，針對與 目標細胞結合的抗體來測試融合瘤上清液。分別測試一個 38 200922619 人類結腸癌細胞株，一個人類乳癌細胞株、一個人類卵巢 細胞株和一個人類非-癌症皮膚細胞株：Lovo、 MDA-MB-23 1、OVCAR-3和CCD-27sk。所有的細胞株均獲 自美國典型組織收集中心（American Type Tissue

Collection(ATCC)，Manassas，VA)。在使用之前，先固定經 平舖的細胞。在室溫下以含有MgCh和CaCl2的PBS沖洗 培養盤三次。在每孔中加入1〇〇微升以PBS稀釋之2%仲甲 酿’在室溫下10分鐘’然後拋棄。再度在室溫下以含有 MgCh和CaCh的PBS沖洗培養盤三次。在室溫下，以1〇〇 微升/孔，在沖洗緩衝溶液（PBS + 0.05%吐溫）中之5%牛奶進 行阻斷1小時。以沖洗緩衝溶液沖洗培養盤三次，並在室 溫下以75微升/孔加入融合瘤上清液1小時。以沖洗緩衝溶 液沖洗该盤二次’並以1〇〇微升/孔加入1/25,〇〇〇稀釋的與 辣根過氧化酶共扼之山羊抗-老鼠IgG或igM抗體（以含有 50/〇牛奶之PBS稀釋）。在室溫下培養1小時之後，以沖洗緩 衝/谷液冲洗g亥盤二次，並在室溫下與1 〇〇微升/孔的Tmb受 質一起培養1-3分鐘。利用50微升/孔的2M H2S04使該反 應終止’並以Perkin-Elmer HTS7000培養盤判讀儀在45〇 奈米處判讀該盤。在圖1中將結果作成表，以與在公司内 之IgG同型物對照組（先前已經顯示不與受試之細胞株結合） 相比較’超過背景的倍數來表示。得自融合瘤 AR104A1289.2.2 之抗體，顯示對 Lovo 結腸癌、MDA-MB-231 乳癌和CCD-27sk非-癌症皮膚細胞株有可檢測的結合。 連同對抗體結合的測試，在細胞株中測試融合瘤上清 39 200922619 液的細胞毒性影響（抗體誘導之細胞毒性）^ L〇vo、 MDA-MB-231、OVCAR-3 和 CCD-27sk。從 Molecular

Probes(Eugene，OR)獲得鈣黃綠素（calcein)AM，並如下文概 述進行該測定。在測定之前，以預定之適當密度將細胞平 舖。在2天之後，將75微升的上清液從融合瘤微量滴定盤 移至該細胞培養盤，並在5%c〇2恆溫箱中培養5天。對作 為陽性對照組的孔送氣直到排空，並加入〗〇〇微升溶解於 培養基中的疊氮化納（NaN3, 0.1%, Sigma，Oakville, ON)或 環己亞胺（CHX，0.5微莫耳濃度，sigma，Oakville, ON)。在 處理5天之後，藉著倒轉並吸乾，將培養盤排空。從多通 道擠壓瓶中’將含有MgCb和CaC〗2的室溫DPBS(杜貝可氏 (Dulbecco’s)磷酸緩衝之生理鹽水）分配到每孔内，輕敲三 次，藉著倒轉排空，然後吸乾。在每孔中加入5〇微升以含 有MgCb和CaCh之DPBS稀釋的螢光鈣黃綠素染料，並在 37t：下在5%C〇2恆溫箱中培養3〇分鐘。在perkin Eimer HTS7000螢光盤判讀器中判讀該培養盤，並在Microsoft Excel中分析數據。在圖】中將結果作成表。得自 AR1 04A1 289.2.2融合瘤的上清液對L〇v〇細胞產生丨5%的專 、、胞毒丨生這分別為對Lovo利用陽性對照組疊氮化鈉和 環己亞胺所獲得之細胞毒性的5〇〇和31%。對非-癌症肺細 胞株CCD-27sk則沒有可觀察到的細胞毒性。已知的非·專 ! 生、’田胞毒性劑裱己亞胺和Να%，通常如預期產生細胞毒 性。 侍自圖1的結果證實八尺104八1289 2 2對不同細胞株的 200922619 細胞毒性影響，與結合的水平無關。雖然對MDA-MB-23 1 細胞株有最高水平的結合，但針對Lovo細胞株有最高水平 的細胞毒性。AR104A1289.2.2在CCD-27sk非-癌症皮膚細 胞株中不產生細胞毒性，縱使其與該細胞株結合。因此， 抗體顯示出功能專一性，其不一定與結合的程度有關。 實施例2 在試管内的結合 藉著在 CL-1000 燒瓶（BD Biosciences, Oakville, ON)中 培養融合瘤，每週兩次收集和再播種，生產AR104 A1289.2.2 單株抗體。依據標準抗體純化程序，利用蛋白質G瓊脂糖4 速流（Amersham Biosciences，Baie d’Urfe，QC)。利用為人類 化、去-免疫化、嵌合型或老鼠的單株抗體，亦在本發明之 範圍内。 藉著流式細胞技術（FACS)，評估AR104A1289.2.2對卵 巢（ES-2、OV2008、OVCAR-3 和 SK-OV-3)、乳房 (MDA-MB-231 和 SK-BR-3)、肺（A549)、胰臟（BxPC-3)、結 腸（Lovo)和前列腺（PC-3)癌細胞株和得自皮膚之非-癌症細 胞株（CCD-27sk)的結合。除了兩個卵巢癌細胞株之外，所有 的細胞株均獲自美國典型組織收集中心（ATCC，Manassas, VAVOV2008和ES-2卵巢癌細胞株係獲自渥太華地區性癌 症中心（Ottawa Regional Cancer Center)(Ottawa，ON)。 為了 FACS，藉著一開始以DPBS(不含Ca++和Mg++)沖 洗細胞單層來製備細胞。然後在37°C下，使用細胞解離緩 衝溶液（Invitrogen，Burlington, ON)，將細胞從其等之細胞 41 200922619 培養盤中移出。在離心和收集之後，將細胞再懸浮於在4 °C下，含有MgCl2、CaCl2和2%胎牛血清的DPBS(染色介 質）中並計數，等分成適當的細胞密度，旋轉下降使細胞形 成小球，並在受試抗體（AR104A1289.2.2)或對照組抗體（同 型物對照組’抗-EGFR(c225，IgGl, /c, Cedarlane，Hornby ON))的存在下，再懸浮於4。〇的染色介質中。以20微克/ 毫升評估同型物對照組和受試抗體，而在冰上以5微克/毫 升評估抗-EGFR ’持續30分鐘。在加入與Alexa螢光546-結合之二級抗體之前，先以染色介質沖洗細胞一次。然後 在4°C下加入在染色介質中與Alexa螢光546-結合之抗體 30分鐘。然後沖洗細胞最後一次’並再懸浮於固定介質（含 有1.5°/〇仲甲醛的染色介質）中。藉著在FACSarray™上跑試 樣，使用 FACSarrayTM系統軟體（BD Biosciences, Oakville， ON) ’評估流式細胞技術獲得的細胞。藉著調整在FSC和 ssc偵測器上的電壓和振幅增益，設定細胞的前面（FSC)和 側面散射（SSC)。藉著跑未經染色之細胞（如具有均一高峰， 大約1-5單位之中間螢光強度的細胞），調整螢光（Alexa_546) 通道的偵測器。對於每個試樣，獲得大約1〇,〇〇〇個有機會 進行分析的事件（經染色固定之細胞），並在圖2中提交結 果。 圖2提交增加超過同型物對照組的平均螢光強度倍 率。圖3編輯AR104A 1289.2.2抗體的代表性分布函數圖》 AR104A 1289.2.2證實對受試細胞株的結合，除了卵巢癌細 胞株OVCAR-3和結腸癌細胞株l〇v〇。對卵巢eS-2(2.9- 42 200922619 倍）、OV2008(2.6-倍）和 SK-OV-3(1.9-倍）；乳房 ]\40八-]\0-231(4.4-倍）和8〖-811-3(1.8-倍）；肺入549(5.2-倍）；胰臟BxPC-3(7.3-倍）和前列腺pc-3(9.5-倍）癌細胞株， 以及非-癌症皮膚細胞株CCD-27sk(2.0-倍）有結合。這些數 據證實AR104A 1289.2.2與數個不同的細胞株結合，其具有 各種程度的抗原表現。 實施例3 在活體内利用BxPC-3細胞的腫瘤實驗 實施例1證實AR104A1 289.2.2具有對抗人類癌細胞株 的抗-癌特性。欲證實在活體内對抗人類癌細胞株的效力， 在BxPC-3騰臟癌異種移植模式中測試AR104A1289.2.2。 參考圖4和5’以在100微升pbs溶液中的五百萬個人類胰 臟癌細胞（BxPC-3) ’皮下注射到右腹側中，植入6至8週齡 的雌性SCID老鼠。將老鼠隨機分成2個處理組，每組8隻。 在植入後當天，在利用稀釋劑（其含有2.7mM KC1、ImM KH2P04、137mM NaCl 和 20mM Na2HP04)從原料濃度稀釋 之後，以300微升之體積，對每個組腹腔内投與2〇毫克/ 公斤的AR1 04A 1289.2.2党試抗體或緩衝溶液對照組。然後 在研究期間’每週一次投與抗體和對照組試樣。大約每7 天利用測徑器測量腫瘤生長。在8劑抗體之後完成研究。 在研究期間，每週一次記錄動物的體重。在研究結束時， 根據CCAC指導方針’將所有的動物安樂死。 在活體内人類胰臟癌的預防模式中，AR104A 1289.2.2 在BxPC-3中降低了腫瘤生長。在第56天（在最後一劑抗體 43 200922619 之後6天）時判定，以Arius抗體AR104A1289.2.2處理，與 緩衝溶液處理組相比較，降低了 BxPC_3腫瘤的生長達 53_3%(p=〇_0010，t_ 檢定）（圖 4)。 在整個研究中，並沒有毒性的臨床症狀。每週間隔測 里的體重，是康樂和發育不正常的代表（圖5)。在處理期間 結束時’在各組之間的平均體重上並沒有顯著差異。從研 究開始到結束，在每組中的平均體重上也沒有顯著差異。 總而言之’在該人類肺癌異種移植模式中，完全能容 忍AR104A1289.2.2，並減少了腫瘤負荷。 實施例4 在活體内利用MDA-MB-23 1細胞的腫瘤實驗 實施例1和3證實了 ARl〇4A1289.2.2具有對抗結腸和 胰臟人類癌症適應症的抗-癌特性。欲證實在乳癌模式中的 效力，在MDA-MB-231乳癌異種移植模式中測試 AR104A1289.2.2。參考圖6和7，以在100微升PBS溶液 中的五百萬個人類乳癌細胞（MDA-MB-23 1)，皮下注射到右 腹側中’植入6至8週齡的雌性SCID老鼠。將老鼠隨機分 成2個處理組，每組8隻。在植入後當天，在利用稀釋劑（其

含有 2.7mM KCM、ImM KH2P〇4、137mM NaCl 和 20mM

Na2HP〇4)從原料濃度稀釋之後，以300微升之體積，對每 個組腹腔内投與20毫克/公斤的AR104A 1289.2.2受試抗體 或緩衝溶液對照組。然後在研究期間，每週一次投與抗體 和對照組試樣。大約每7天利用測徑器測量腫瘤生長。在8 劑抗體之後完成研究。在研究期間，每週一次記錄動物的 44 200922619 體重。在研究結束時，根據CCAC指導方針，將所有的動 物安樂死。 在活體内人類乳癌的預防模式中’ AR104A1289.2.2在 mda-MB_231中降低了腫瘤生長。在第76天（在最後一劑抗 體之後26天）時判定，以Arius抗體ARl〇4Ai289 2.2處理， 與緩衝溶液處理組相比較，降低了 MDA_MB_23 i腫瘤的生 長達 94.2%(p = 〇.〇〇〇3，t_檢定）（圖 6)。 在整個研究中，並沒有毒性的臨床症狀。每週間隔測 量的體重，是康樂和發育不良的代表（圖7)。在處理期間結 束時，在各組之間的平均體重上並沒有顯著差異。從研究 開始到結束，在每組中的平均體重上也沒有降低。 總而言之，在該人類乳癌異種移植模式中，完全能容 忍AR104A 1289.2.2，並明顯減少了腫瘤負荷。 實施例5 在活體内利用PC-3細胞的腫瘤實驗 實施例1、3和4證實了 ARl〇4A1289.2.2具有對抗結 腸、膜臟和乳房人類癌症適應症的抗·癌特性。欲證實在前 列腺癌模式中的效力，在PC_3前列腺癌異種移植模式中測 試AR104A1289.2.2。參考圖8和9，苡在1〇〇微升PBS溶 液中的一百萬個人類前列腺癌細胞（PC-3)，皮下注射到右腹 側中’植入6至8週齡的雌性SCID老鼠。將老鼠隨機分成 2個處理組，每組8隻.在植入後當天，在利用稀釋劑（其

含有 2.7mM KCM、ImM KH2P〇4、137mM NaCl 和 2〇mM

Na2HP〇4)從原料濃度稀釋之後，以300微升之體積，對每 45 200922619 個組腹腔内投與20毫克/公斤的AR104A 1289.2.2受試抗體 或緩衝溶液對照組。然後在研究期間’每週一次投與抗體 和對照組試樣。大約每7天利用測徑器測量腫瘤生長。在8 劑抗體之後完成研究。在研究期間’每週一次記錄動物的 體重。在研究結束時，根據CCAC指導方針，將所有的動 物安樂死。 在活體内人類前列腺癌的預防模式中， AR104 A1 289.2.2在PC-3中降低了腫瘤生長。在第33天（在 ^ 第五劑抗體之後4天）時判定，以Arius抗體AR104A1289.2.2 處理’與緩衝溶液處理組相比較，降低了 pc_3腫瘤的生長 達76_5%(ρ = 〇·〇〇〇3 ’ t-檢定）（圖8)。所有老鼠在第33天時 都活著。繼續研究直到第53天，在最後一劑之後3天。第 53天，移除在對照組中的三隻老鼠和在抗體-處理組中的一 隻老咏，因為大的腫瘤體積和腫瘤病灶，為研究的結束點。 然而，在第53天，AR104A1289.2.2仍明顯降低PC-3腫瘤 的生長達 61.3°/〇(p = 〇.〇483，t-檢定）。 並沒有毒性的臨床症狀。按每週間隔

在整個研究中， 測量的體重，是康樂

能容忍 AR104A1289.2.2， 則列腺癌異種移植模式中，完全 並明顯減少了腫瘤負荷。已經證 46 200922619 貝AR104A1289.2.2對四種不同人類癌症適應症的效力：結 腸、胰臟、乳房和前列腺。在數個已完全_認可之人類癌症 疾病模式中觀察到治療利益，暗示該抗體對於在其他喷乳 動物匕括人類中之治療的藥理學和藥物利益。總括而論， 該數據證實AR1G4A1289.2 2抗原是與癌症有關的抗原，並 在人類癌細胞上表現，且為在病理學上有關的癌症目標。 實施例6 競爭性結合劑的分離 給予一抗體，一般技藝人士便可產製競爭抑制性 CDMAB，例如競爭性抗體，其為認得相同抗原決定位的抗 體（Belanger L 等人 ciinica Chimica Acta 48:15-18 (1973))。一種方法需要以表現被抗體認出之抗原的免疫原 來免疫。試樣可包括但不限於組織、經分離之蛋白質或細 胞株。可使用競爭測定篩選所得的融合瘤，其為鑑認抑制 受试抗體結合之抗體的測定’如ELIS A、FACS或西方墨點 法。其他方法可使用嗟菌體展示抗體庫，並挑選認出該抗 原之至少一個抗原決定位的抗體（RubinsteinJL等人Anal Biochem 314:294-3 00 (2003))。在任一情況下，基於其等取 代原始經標示抗體與其目標抗原之至少一個抗原決定位結 合的能力來選擇抗體。因此’這類抗體會像原始抗體一樣， 擁有認出該抗原之至少一個抗原決定位的特徵。 實施例7 選殖AR104A1289.2.2單株抗體之可變區 可測定得自由AR104A1289.2.2融合瘤細胞株產生之單 47 200922619 株抗體的重（vH)和輕（vL)鏈之可變區的序列。可使用涉及以 異硫氰酸胍使細胞增溶的標準方法，從問題融合瘤中萃取 編碼免疫球蛋白之重和輕鏈的RNA(Chirgwin等人 Biochem. 18:5294-5299(1979))。可使用 mRNA 製備 eDNA， 以便藉著在技術領域中已知的PCR方法，隨後分離vh和 VL基因（Sambrook等人，編輯，分子選殖（心心^犯

Cloning)，第 14 章，Cold Spring Harbor laboratories Press， Ν·Υ·(1989))。可藉著自動Edman定序，獨立地測定重和輕 鏈的N-端胺基酸序列。亦可藉著Vh和火片段的胺基酸定 序測定CDRs和位在側面之FRs的進一步延伸。然後可為了 從AR1 04A1289.2.2單株抗體中分離Vh和&基因設計而合 成的引子，並可將經分離之基因連接至適當的載體内，以 供定序。欲產製嵌合型和人類化IgG，可將可變輕和可變重 功能部位繼代選殖至適當的載體内，以供表現。 (i)單株抗體 使用傳統的程序（例如，藉著使用寡核苷酸探針，其能 夠專一地結合編碼該單株抗體之重和輕鏈的基因）迅速地分 離並定序編碼單株抗體（如在實施例丨中概述）的dna。融 合瘤細胞成為這類DNA的較佳來源。一旦分離，便可將dna 放到表現載體内，然後將其轉移感染到宿主細胞内，如大 腸桿菌細胞、猿cos細胞、中國倉鼠卵巢（CH〇)細胞或不 另行產生免疫球蛋白的骨髓瘤細胞，以便在重組宿主細胞 中獲得單株抗體的合成。亦可修改DNA，例如藉著以人類 重和輕鏈恆定功能部位之密碼序列取代同種的老鼠序列。 48 200922619 亦可在試管内使用在合成蛋白質化學中已知的方法，包括 涉及交聯劑的那些，來製備嵌合型或雜種抗體。例如，可 使用二硫父換反應或藉著形成硫醚鍵結，建構免疫毒素。 為了該目的’適當試劑之實例包括亞胺硫醇鹽和曱基_4_毓 基丁基亞胺酸酯。 (ii)人類化抗體 人類化抗體具有一或多個經導入其中，來自非-人類來 源的胺基酸殘基。經常將這些非-人類胺基酸殘基稱為，，輸 入”殘基，其典型地取自”輸入”可變功能部位。可藉著Winter 及同事的方法，以人類抗體的相對應序列取代嚅齒類CI)Rs 或CDR序列，進行人類化（J〇nes等人，Nature 321.522-525(1986); Rieehmann 等人，Nature 332:323-327 (1988) ’ Verhoeyen 等人，Science 239:1534-1536(1988);在

Clark，Immunol. Today 21:397-402(2000)中回顧）。 可藉著使用親代和人類化序列的三_維模式，分析親代 序列和各種概念上之人類化產物的過程，製備人類化抗 體。三維的免疫球蛋白模式通常是可獲得的，並為熟諳此 藝者所熟悉的。可利用電腦程式，其解釋並展示所選出之 候選免疫球蛋白序列可能的三_維構象結構。檢查這些展示 允許分析殘基在候選免疫球蛋白序列之功能上的可能角 色，即分析影響候選免疫球蛋白與其抗原結合之能力的殘 基。這樣子，可選出FR殘基，並與一致和輸入序列混合， 而知以達到想要的抗體特徵，如增加對目標抗原的親和 力。通常，CDR殘基直接且大多數實質上涉及影響抗原結 49 200922619 合。 (iii)抗體片段 已經發展各種技術來生產抗體片段。可藉著重組宿主 細胞產生這些片段（在1111(13〇11，€111*1>.0卩111.11111111111〇1· 1 1:548-557( 1999) ; Little 等人，Immunol. Today 2 1:364-370(2000)中回顧）。例如，可直接從大腸桿菌中回收 Fab’-SH片段，並以化學方式偶聯，以形成F(ab’）2片段 (Carter 等人，Biotechnology 10:163-167(1992))。在另一具體 事貫中’使用亮胺酸拉鍊GCN4形成F(ab，）2,以促進F(ab，）2 分子的組裝。根據其他的途徑，可從重組宿主細胞培養物 中直接分離Fv、Fab或F(ab，）2片段。 實施例8 包括本發明之抗體的組合物 可使用本發明之抗體，作為預防/治療癌症的組合物。 用以預防/治療癌症的組合物，其包括本發明之抗體，其為 低-毒性的，並可以液體製劑之形式，或以適當製劑之醫藥 組合物，以口服或非經腸（脈管内、腹腔内、皮下等等）方式 將其投與人類或哺乳動物（例如大鼠、兔子、綿羊、猪、牛" 描、狗、猿等等）。可投與本發明之抗體本身，或可、 之組合物投藥。用以投藥的組合物可含有在藥學 ： 之載劑，冑同本發明之抗體或其鹽、稀釋劑或賦形劑二 適合口服或非經腸投藥之藥學製劑的形式提供這類组八 非經腸投藥之組合物的實例 為注射用製劑 拾劑等 50 200922619 等。注射用製劑可包含如靜脈内 射、滴注輸液、關節内注射等等的=纟内和肌肉内注

町寻寻的劑型。可藉荖A 的方法製備這此注射用_ #,丨错者a開已知 卜上 用製齊1。例如，可藉著在注射慣用之 無菌含水介質或含油介質貫用 抗體或其鹽*解“或乳化本發明之 的有，例如生理越水、人右二為庄射用之含水介質 液耸蓉i 孤 3萄糖及其他輔助劑的等張溶 液等專，其可與適當的促溶劑併用，如醇(例如乙醇)、多元 醇（例如丙二醇、聚乙二醇）、 L赳撼“ 醇）#離子性表面活性劑(例如聚 山梨糖醇醋8〇、HCO_50(氯化葱麻油的聚環氧乙烧（5〇莫耳） :合：)等等。作為含油介質’使用例如芝麻油、大豆油等 等’其可用來與促㈣m合，如苯甲酸”、苯甲醇等等。 通常將如此製備的注射劑裝在適當的安瓿中。可藉著將本 發明之抗體或其鹽與傳統的栓劑基 合，來製備直腸投 ㈣的栓劑。口服投藥的組合物包括固體或液體製劑，特 別是鍵劑（包含糖衣錠和塗膜錠劑）、藥丸、顆粒、粉狀製劑、 膠囊（包含軟膠囊）、糖聚、乳劑、懸浮劑等等。藉著公開已 知的方法製造這類組合物，並可含有在藥物製備之領域中 ^用的媒劑、稀釋劑或賦形劑。錠劑用之媒劑或賦形劑的 只例為乳糖、殿粉、薦糖、硬脂酸鎮等等。 、有利的是，將上述之口服或非經腸使用的組合物製備 成具有單位劑量的藥學製劑，與—劑量的活性成分一致。 這類單位劑量製劑包括，例如錠齊j、藥丸、膠囊、注射劑（安 瓶）、检劑等等。所含有之前述化合物的量，通常每個單位 劑型為5到500毫& ;較佳的是’特別是在注射劑形式中， 51 200922619 含有大約5到大約100毫克的上述抗體，且對於其他的形 式，含有10到250毫克。 則述包括本發明抗體之預防/治療劑或調節劑的劑量， 可視欲投藥之個體、目標疾病、病症、投藥路徑等等而改 變。例如，當用於治療/預防之目的時，例如成人的乳癌， 以大約0.01到大約20毫克/公斤體重，較佳的是大約〇 ι 到大約ίο毫克/公斤體重，且更佳的是大約〇1到大約5毫 克/公斤體重之劑量，大約丨到5次/天，較佳的是大約1到 3次/天，靜脈内投與本發明之抗體是有利的。在其他的非 經腸和口服投藥+，可以與上文提供之劑量相當的劑量投 與製劑。當病症特別嚴重時，可根據病症增加劑量。 本發明之抗體可以其現狀或以適當組合物之形式來投 藥。用以投藥之組合物可含有在藥學上可接受之載劑，連 同前述之抗體或其鹽類、稀釋劑或賦形劑。以適合口服或 非經腸投藥（例如脈管内注射、皮下注射等等）之藥學製劑的 形式提供這類組合物。上述的每種組合物均可進一步含有 其他的活性成分。此外，本發明之抗體亦可與其他藥物併 用，例如烷基化劑（例如環磷醯胺、異環磷醯胺等等）、代謝 產物拮抗劑（例如胺甲碟呤、5_氟尿嘧啶等等）、抗-腫瘤抗生 素（例如絲裂黴素、亞德里亞黴素等等）、植物_衍生之抗-腫 瘤劑（例如長春新鹼、長春地辛、紫杉醇等等）、順氣氨鉑、 卡鉑、依托泊[伊立替康等等。可同時或以錯開的時間， 將本發明之抗體和上述藥物投與患者。 有優勢證據’顯示AR1〇4A1289.2.2經由連接出現在癌 52 200922619 細胞株上之抗原決定位，而介導抗_癌影響。更進一步顯示 可使用AR1〇4A1289.2.2抗體，來檢測表現與其專一结合2 抗原決定位的細胞；利用技術，例如但不限於咖二胞 ELISA 或 IHC 〇 所有在本說明書中提及的專利和公開案，代表孰以 發明所屬之技藝者的層面。在本文中所有的專利和公開 案，係以引用的方式納入本文中，該引用的程度就如同已 特定地及個別地將各個公開案以引用的方式納入一般 應瞭解雖然解釋了本發明的某些形式，但無意限制在 本文中描述和出示之部分的特殊形式或排列。熟諸此藝者 應知曉可進行各種不違背本發明範 靶圍的改變，且不應將 本發明視為受限於在說明書中出示和描述的那些。 熟諳此藝者會迅速地知曉本發明非常適合用以實現目 的二獲得所提及之結果和益處，以及其中固有的那些。 壬何在本文中描述之的寡核苷酸、、 之化合物、方法、程序和技術 、物學相關 打目則代表較佳的具體事實， 打异將其當做範例，且無意作 藝者而言其中會出現的改變及二諳此 之接、山 茭U用途’亦包括在本發明 於特著附錄之申請專利範圍來定義。雖然已關 太^之較佳具趙事實來描述本發明，應瞭解如所申請之 =應不當地受限於這類特定的具體事實。確實，為 =發明而對經描述之模式的各種修改，對熟諸此藝 内疋明顯的，並打算納人下列之中請專利範圍的範圍 53 200922619 【圖式簡單說明】 圖1比較融合瘤上清液對細胞株A549、NCI-H23、 NCI-H460、MDA-MB-231和Hs888.Lu的細胞毒性百分比和 結合水平。 圖2表示AR104A1289 2 2對癌症和正常細胞株的結 合。將數據作成表，以增加超過同型物對照組之倍率來表 示平均螢光強度。 圖3包含AR104A1289.2.2和抗_EGFIUjt體針對數個癌 症和非·癌症細胞株的代表性FACS分布函數圖。 圖4 s登實AR104A1289.2.2在預防性八549肺癌模式中 對腫瘤生長的影響。垂直的虛線代表投與抗體的期間。數 據點代表平均值±SEM。 圖5證實AR104A1289.2 2在預防性A549肺癌模式中 對體重的影響。數據點代表平均值±SEM。 圖6證實AR104AI289.2.2在預防性MDA-MB-231乳癌 板式中對腫瘤生長的影響。垂直的虛線代表投與抗體的期 間。數據點代表平均值±SEM。 圖7證實ARl〇4Al289.2·2在預防性MDA-MB-231乳癌 模式中對體重的影響。數據點代表平均值±SEM。 圖8證實ARl〇4A1289.2.2在預防性PC_3前列腺癌模 式中對腫瘤生長的影響。垂直的虛線代表投與抗體的期 間。數據點代表平均值土SEM。 圖9證實AR1(MA1289.2·2在預防性PC-3前列腺癌模 式中對體重的影響。數據點代表平均值±SEM。 54 200922619 【主要元件符號說明】 無 55

Claims (1)

1. 200922619 十、申锖專利範面： K一種由以登錄編號190607-04寄存在IDAC中之融合 瘤產生的經分離之單株抗體。 2·如申請專利範圍第1項之經分離的單株抗體，其與選 自由細胞毒性部分、酵素、放射性化合物、和血原細胞所 組成之群組的成員結合。 3. 一種由以登錄編號190607-04寄存在IDAC之融合瘤 產生的經分離之單株抗體的人類化抗體或從該人類化抗體 產生的抗原結合片段。 4. 如申請專利範圍第3項之人類化抗體，其與選自由細 胞毒性部分、酵素、放射性化合物、和血原細胞所組成之 群組的成員結合。 5. —種由以登錄編號ι9〇6〇7_〇4寄存在IDAc之融合瘤 產生的經分離之單株抗體的嵌合型抗體或從該嵌合型抗體 產生的抗原結合片段。 6 ·如申請專利範圍第5項之嵌合型抗體，其與選自由細 胞毒性部分、酵素、放射性化合物、和血原細胞所組成之 群組的成員結合。 7· —種經分離之融合瘤細胞株，其以登錄編號 190607-04 寄存在 idac。 8. —種在選自人類腫瘤之組織試樣中開始癌細胞之抗 體誘導之細胞毒性的方法，包括： 提供得自該人類腫瘤之組織試樣； 提供由以登錄編號190607-04寄存在IDAC之融合瘤產 56 200922619 生的經分離之單株抗體、由以登錄編號190607-04寄存在 IDAC之融合瘤產生的經分離單株抗體之人類化抗體、由以 登錄編號190607-04寄存在IDAC之融合瘤產生的經分離單 株抗體之嵌合型抗體或其CDMAB，該CDMAB之特徵在於 競爭性抑制該經分離之單株抗體與其目標抗原結合的能 力；並 使該經分離之單株抗體、該人類化抗體、該嵌合型抗 體或其CDMAB與該組織試樣接觸； 其中該經分離之單株抗體、該人類化抗體、該嵌合型 抗體或其CDMAB與該組織試樣的結合誘導了細胞毒性。 9. 一種如申請專利範圍第1項之經分離單株抗體的 CDMAB。 10. 如申請專利範圍第9項之CDMAB，其與選自由細胞 毒性部分、酵素、放射性化合物、和血源細胞所組成之群 組的成員結合。 11. 一種如申請專利範圍第 3項之人類化抗體的 CDMAB。 12. 如申請專利範圍第11項之CDMAB，其與選自由細 胞毒性部分、酵素、放射性化合物、和血原細胞所組成之 群組的成員結合。 13. —種如申請專利範圍第5項之嵌合型抗體的 CDMAB。 14. 如申請專利範圍第13項之CDMAB，其與選自由細 胞毒性部分、酵素、放射性化合物、和血原細胞所組成之 57 200922619 群組的成員結合。 1 5 · —種抗體在製造用於治療在哺乳動物中易受抗體誘 導之細胞毒性影響的人類腫瘤的醫藥品的用途，其中該抗 體是由以登錄編號190607-04寄存在IDAC之融合瘤產生的 經分離單株抗體或其CDMAB，該CDMAB之特徵在於競爭 性抑制該經分離之單株抗體與其目標抗原結合的能力，其 中該人類腫瘤表現專一地與該抗體結合的抗原之至少一個 原決定位。 16.如申請專利範圍第ι5項之用途，其中該經分離之單 株抗體與細胞毒性部分結合。 17 _如申請專利範圍第1 6項之用途，其中該細胞毒性部 分為放射性同位素。 18. 如申請專利範圍第15項之用途，其中該經分離之單 株抗體或其CDMAB激活補體。 19. 如申請專利範圍第15項之用途，其中該經分離之單 株抗體或其COMAB介導抗體依賴性細胞之細胞毒性。 2〇.如申請專利範圍第15項之用途，其中該經分離之單 株抗體是經人類化的。 21·如申請專利範圍第15項之用途，其中該經分離之單 株抗體是嵌合型的。 22·種單株抗體，其能夠與由以登錄編號19〇6〇7_〇4 寄存在IDAC之融合瘤產生的經分離單株抗體專一地結合 相同的抗原決定位。 23.-種抗體在製造用於在哺乳動物中治療人類腫瘤的 58 200922619 醫藥品的用途，其中該抗體是由以登錄編號190607-04寄存 在IDAC之融合瘤產生的經分離之單株抗體或其CDMAB， 該CDMAB之特徵在於競爭性抑制該經分離之單株抗體與 其目標抗原結合的能力，其中該人類腫瘤表現專一地與該 抗體結合的抗原之至少一個抗原決定位。 24. 如申請專利範圍第23項之用途，其中該經分離之單 株抗體與細胞毒性部分結合。 25. 如申請專利範圍第24項之用途，其中該細胞毒性部 分為放射性同位素。 26. 如申請專利範圍第23項之用途，其中該經分離之單 株抗體或其CDMAB激活補體。 27. 如申請專利範圍第23項之用途，其中該經分離之單 株抗體或其CDMAB介導抗體依賴性細胞之細胞毒性。 28. 如申請專利範圍第23項之用途，其中該經分離之單 株抗體是經人類化的。 29. 如申請專利範圍第23項之用途，其中該經分離之單 株抗體是嵌合型的。 3 0. —種抗體在製造用於在哺乳動物中治療人類腫瘤的 醫藥品的用途，其中該抗體是由以登錄編號190607-04寄存 在IDAC之融合瘤產生的經分離之單株抗體或其CDMAB， 該CDMAB之特徵在於競爭性抑制該經分離之單株抗體與 其目標抗原結合的能力，其中該人類腫瘤表現專一地與該 抗體結合的抗原之至少一個抗原決定位，其中該醫藥品與 至少一種化療劑一起投與。 59 200922619 3 1 ·如申請專利範圍第3〇項之用途’其中該經分離之單 株抗體與細胞毒性部分結合。 32.如申請專利範圍第3丨項之用途’其中該細胞毒性部 分為放射性同位素。 33 ·如申請專利範圍第30項之用途，其中該經分離之單 株抗體或其CDMAB激活補體。 34. 如申請專利範圍第30項之用途’其中該經分離之單 株抗體或其CDMAB介導抗體依賴性細胞之細胞毒性。 35. 如申請專利範圍第項之用途，其中該經分離之單 株抗體是經人類化的。 36. 如申請專利範圍第3〇項之用途’其中該經分離之單 株抗體是拔合型的。 37. —種用於在選自人類腫瘤之組織試樣中測定癌細胞 的存在的結合測定’該癌細胞專一地被由融合瘤細胞株 AR104A1289.2.2(其具有IDAC登錄編號19〇6〇7_〇4)生產的 經分離之單株抗體、由以登錄編號19〇6〇7_〇4寄存在IDAC 之融合瘤產生的經分離單株抗體之人類化抗體、或由以登 錄編號190607-04寄存在IDAC之融合瘤產生的經分離單株 抗體之嵌合型抗體結合，包括： 提供得自該人類腫瘤之組織試樣； 提仏至J/ 一種該經分離之單株抗體、該人類化抗體、 該喪合型抗體或其CDMAB，其認出與該等被由融合瘤細胞 株AR1〇4A1289,2.2(其具有IDAC登錄蝙號19〇6〇7_〇4)產生 之經分離單株抗體認出者相同的抗原決定位； 200922619 使该至少一種所提供之抗體或其cdmab與該組織試 樣接觸；並 測定該至少一種所提供之抗體或其CDMAB與該組織 試樣的結合； 藉此指出該癌細胞在該組織試樣中的存在。 38· —種單株抗體在製造用於降低人類腫瘤負荷的醫藥 品的用途，其中該抗體是由以登錄編號19〇6〇7_〇4寄存在 IDAC之融合瘤產生的經分離單株抗體或其cdmab ,該 CDMAB之特徵在於競爭性抑制該經分離之單株抗體與其 目標抗原結合的能力’其中該人類腫瘤表％專—地與該抗 體結合的抗原之至少一個抗原決定位。 39.如申請專利範圍第38項之用途，其中該經分離之單 株抗體與細胞毒性部分結合。 40·如申味專利範圍第％項之用途其中該細胞毒性部 分為放射性同位素。 41.如申請專利範圍第38項之用途，其中該經分離之單 株抗體或其CDMAB激活補體。 42·如申吻專利範圍第38項之用途，其中該經分離之單 株抗體或# CDMAB介導抗體依賴性細胞之細胞毒性。 43_如申印專利範圍第38項之用途，其中該經分離之單 株抗體是經人類化的。 44_如申靖專利範圍第38項之用途，其中該經分離之單 株抗體疋嵌合型的。 45 · 一種翠株抗體在製造用於降低人類腫瘤負荷的醫藥 61 200922619 品的用途’其中該抗體是由以登錄編號190607-04寄存在 IDAC之融合瘤產生的經分離單株抗體或其CDMAB，該 CDMAB之特徵在於競爭性抑制該經分離之單株抗體與其 目標抗原結合的能力，其中該人類腫癌表現專一地與該抗 體結合的抗原之至少一個抗原決定位，其中該醫藥品與至 少一種化療劑一起投與。 46.如申請專利範圍第45項之用途，其中該經分離之單 株抗體與細胞毒性部分結合。 47_如申請專利範圍第46項之用途，其中該細胞毒性部 分為放射性同位素。 48. 如申請專利範圍第45項之用途，其中該經分離之單 株抗體或其CDMAB激活補體。 49. 如申請專利範圍第45項之用途，其中該經分離之單 株抗體或其CDMAB介導抗體依賴性細胞之細胞毒性。 50. 如申請專利範圍第45項之用途，其中該經分離之單 株抗體是經人類化的。 5 1.如申請專利範圍第45項之用途，其中該經分離之單 株抗體是嵌合型的。 52. —種有效治療人類癌症腫瘤的組合物，其包括以下 組合： 如申請專利範圍第1、3、5、9、11、13或22項中任 一項之抗體或CDMAB ; §亥抗體或其抗原結合片段與選自由細胞毒性部分、酵 素、放射性化合物、和血原細胞所組成之群組的成員的結 62 200922619 合物；以及 需要量的在藥學上可接受之載劑； 其中該組合物對於治療該人類癌症踵瘤是有效的。 53·-種用於治療在哺乳動物中易受抗體誘導之細胞毒 性影響的人類腫瘤的醫藥組合物，其包括治療有效量的經 分離之單株抗m CDMAB以結果降低該哺乳動物之腫 瘤負荷，其中該經分離之單株抗體是由以登錄編號 190607-04寄存在IDAC之融合瘤產生，且該CDMAB之特 徵在於競爭性抑制該經分離之單株抗體與其目標抗原結合 的能力，其中該人類腫瘤表現專一地與該經分離之單株抗 體或CDMAB結合的抗原之至少一個抗原決定位。 54. 如申請專利範圍第53項之醫藥組合物，其中該經分 離之單株抗體與細胞毒性部分結合。 55. 如申請專利範圍第54項之醫藥組合物，其中該細胞 毒性部分為放射性同位素。 56_如申請專利範圍第53項之醫藥組合物，其中該經分 離之單株抗體或其CDMAB激活補體。 5 7.如申請專利範圍第5 3項之醫藥組合物’其中該經分 離之單株抗體或其CDMAB介導抗體依賴性細胞之細胞毒 性。 58. 如申請專利範圍第53項之醫藥組合物，其中該經分 離之單株抗體是經人類化的。 59. 如申請專利範圍第53項之醫藥組合物，其中該經分 離之單株抗體是嵌合型的。 63 200922619 6〇.一種用於在哺乳動物中治療人類腫瘤的醫藥組合 物’其包括治療有效量的經分離之單株抗體或其CD·以 結果降低W動物之腫瘤負荷，其巾該經分離之單株抗 體是由以登錄編號190607_04寄存在idaC2融合瘤產生， 且該CDMAB之特徵在於料性抑㈣經分離之單株抗體 與其目標抗原結合的能力’彡中該人類腫瘤表現專一地與 該經分離之單株抗體或CD_、结合的抗原之至少一個抗 原決定位。 如申請專利範圍第60項之醫藥組合物，其中該經分 離之單株抗體與細胞毒性部分結合。 62.如申請專利範圍第61項之醫藥組合物，其中該細胞 毒性部分為放射性同位素。 如申請專利範圍第6〇項之醫藥組合物，其中該經分 離之單株抗體或其CDM AB激活補體。 64.如申請專利範圍第6〇項之醫藥組合物，其中該經分 離之單株抗體或其CDMAB料抗體依賴性細胞之細胞毒 性。 65. 如申請專利範圍第6〇項之醫藥組合物，其中該經分 離之單株抗體是經人類化的。 66. 如申請專利範圍第6〇項之醫藥組合物，其中該經分 離之單株抗體是嵌合型的。 67· —種用於在哺乳動物中治療人類腫瘤的醫藥組合 =其包括治療有效量的經分離之單株抗體或其CDMAB以 、’。果降低該哺乳動物之腫瘤負荷，其中該經分離之單株抗 64 200922619 體是由以登錄編號190607-04寄存在IDAC之融合瘤產生， 且該CDMAB之特徵在於競爭性抑制該經分離之單株抗體 與其目標抗原結合的能力，其中該人類腫瘤表現專一地與 該經分離之單株抗體或CDMAB結合的抗原之至少一個抗 原決定位，其中該組合物與至少一種化療劑一起投與。 68. 如申請專利範圍第67項之醫藥組合物，其中該經分 離之單株抗體與細胞毒性部分結合。 69. 如申請專利範圍第68項之醫藥組合物，其中該細胞 毒性部分為放射性同位素。 70. 如申請專利範圍第67項之醫藥組合物，其中該經分 離之單株抗體或其CDMAB激活補體。 71. 如申請專利範圍第67項之醫藥組合物，其中該經分 離之單株抗體或其CDMAB介導抗體依賴性細胞之細胞毒 性。 72. 如申請專利範圍第67項之醫藥組合物，其中該經分 離之單株抗體是經人類化的。 73. 如申請專利範圍第67項之醫藥組合物，其中該經分 離之單株抗體是嵌合型的。 74. —種用於降低人類腫瘤負荷的醫藥組合物，其包括 治療有效量的經分離之單株抗體或其CDMAB以結果降低 該哺乳動物之腫瘤負荷，其中該經分離之單株抗體是由以 登錄編號 190607-04寄存在IDAC之融合瘤產生，且該 CDMAB之特徵在於競爭性抑制該經分離之單株抗體與其 目標抗原結合的能力，其中該人類腫瘤表現專一地與該經 65 200922619 分離之單株抗體或CDMAB結合的抗原之至少一個抗原決 定位。 75. 如申請專利範圍第74項之醫藥組合物，其中該經分 離之單株抗體與細胞毒性部分結合。 76. 如申請專利範圍第75項之醫藥組合物，其中該細胞 毒性部分為放射性同位素。 77. 如申請專利範圍第74項之醫藥組合物，其中該經分 離之單株抗體或其CDMAB激活補體。 78. 如申請專利範圍第74項之醫藥組合物，其中該經分 離之單株抗體或其CDMAB介導抗體依賴性細胞之細胞毒 性。 79. 如申請專利範圍第74項之醫藥組合物，其中該經分 離之單株抗體是經人類化的。 80. 如申請專利範圍第74項之醫藥組合物，其中該經分 離之單株抗體是嵌合型的。 8 1. —種用於降低人類腫瘤負荷的醫藥組合物，其包括 治療有效量的經分離之單株抗體或其CDMAB以結果降低 該哺乳動物之腫瘤負荷，其中該經分離之單株抗體是由以 登錄編號 190607-04寄存在IDAC之融合瘤產生，且該 CDMAB之特徵在於競爭性抑制該經分離之單株抗體與其 目標抗原結合的能力，其中該人類腫瘤表現專一地與該經 分離之單株抗體或CDMAB結合的抗原之至少一個抗原決 定位，其中該組合物與至少一種化療劑一起投與。 82.如申請專利範圍第8 1項之醫藥組合物，其中該經分 66 200922619 離之單株抗體與細胞毒性部分結合。 83. 如申請專利範圍第82項之醫藥組合物，其中該細胞 母性部分為放射性同位素。 84. 如申請專利範圍第8 1項之醫藥組合物，其中該經分 <早株抗體或其CDMAB激活補體。 85·如申請專利範圍第81項之醫藥組合物，其中該經分 離之單株抗體或其CDMAB介導抗體依賴性細胞之細胞毒 , 性。 t： 86.如申請專利範圍第81項之醫藥組合物’其中該經分 離之單株抗體是經人類化的。 87·如申請專利範圍第81項之醫藥組合物，其中該經分 離之單株抗體是嵌合型的。 十一、明式： 如次頁 67