TW200803726A - Antimycotic rhamnolipid compositions and related methods of use - Google Patents

Description

(1) 200803726 % 九、發明說明 【發明所屬之技術領域】 本發明關於抗真菌組成物及其製備方法與用途。本發 明之組成物可包含抗真菌組分且結合鼠李糖脂介面活性劑 ，且展現拮抗廣泛範圍的酵母菌及真菌之活性。 【先前技術】 術語黴菌（mycotic)通常意指真菌（fungi)、覃 (mushrooms)、馬勃菌（puffballs)、酵母菌（yeasts)及黴菌 (molds)。一些專家估計有 1 50萬的真菌種，其中大約 1 0 0，0 0 0已被鑑定出。真菌對於人類、植物及動物來說可 以是病原的（pathogenic)，特別是那些缺乏免疫力 (compromised)的免疫系統者。尤其某些黴菌釋放能夠造成 中毒或死亡的黴菌毒素（mycotoxins)。真菌及黴菌病 (fungal diseases)亦使農業遭受嚴重的損害。事實上，每 年有百萬美元計的農作物（包括水果、蔬菜、榖物及其他 植物）因爲真菌損害或感染而損失。水果與蔬菜在收穫後 的真菌感染造成此類食物商品的過早腐化（Premature decay)及腐敗（spoilage)。真菌感染及疾病破壞花丼、樹木 及灌木。 廣泛範圍的化學劑及生物劑是用以預防及/或治療酵 母菌及真菌感染。然而，耐受性（tolerance)或抗性 (resistance)對於疾病管理（disease management)來說可能 是一個値得注意的問題。例如，要降低抗性的策略包括限 -5- (2) (2)200803726 制特定類型的系統性殺真菌劑組成物及/或在具有不同作 用模式的殺真菌劑之間輪替或組合不同作用模式的殺真菌 劑。然而，此成功是有限的。病原出現對現有策略的抗性 及/或現今無法治療的病原已提高對於有效抗真菌劑的需 要。 另擇地，廣泛範圍或多部位（multi-site)的習用抗黴劑 可被使用’但是典型上需要高活性成分量及/或高施用速 率（亦即，高施用頻率及/或此殺真菌劑所需要施用的體積） 。對抗性的考量有關於潛在性的環境損害，其包括淡水及 食物產品污染，及/或在植物、動物及人類上的反效果。 因此，此技藝持續硏究鑑定具有廣泛、長期活性的新 穎抗真菌（例如抗真菌/殺真菌）組成物。此硏究包括使用天 然衍生的化合物以使潛在性環境衝擊降至最低。例如，植 物細菌蘋果水泡細菌病菌syr/wgae)製造出一 系列的抗真菌及/或抗微生物肽做爲二級代謝物，其中一 些是以小的環脂肽（lipodepsipeptides)爲特徵，其被知曉爲 丁香黴素（syringomycins，SRs)。此化合物包含帶有正電荷 及長的，無分支的3 -羥基脂肪酸與在C端的9個胺基酸之 親水性環。彼之分子量落在約1 〇 0 0至約1 3 0 0。最爲常見 的是丁香黴素E(SRE)，其具有帶有3個正電荷及1個負 電荷的肽內酯環頭部，與一個3 -羥基十二酸烴尾部。小的 環脂肽群包括其他丁香黴素（例如丁香黴素A!及G)、丁香 施德丁（syringostatins， SSs) 、 丁香假單胞毒素 (syringotoxins，STs)及假單胞黴素（pseudomycins, PSs)。 200803726 (3) % 這些代謝物對廣泛範圍的真菌（包括酵母菌及人類病 原）是具殺真菌性。例如，硏究顯示：丁香黴素E具有拮 抗諸如灰黴菌5* cher ea)、念珠狀地絲菌 {Geotrichum c an did um)及果蠅紅酵母(Rhodotorula ί /im a w)之真菌與酵母菌的抑制活性。近來的硏究專注 在環脂九肽（cy clic lipodepsinonapeptides)之作用的真菌機 轉（Hama, H·，D. A. Young，J. A. Radding，D. Ma，J. Tang， S. D. Stock, and J. Y. T akemo t o. 2 0 0 0. Requirement of sphingolipid alpha-hydro xylati on for fungicidal action of syringomycin E. FEB S Lett. 478:26-8 )。例如丁 香黴素 E (S RE)被顯示爲在磷脂雙層中形成通道（channels)，推論類 似的機轉發生在標的真菌細胞膜上（Dalla Serra，M.，I. Bernhart, P. Nordera, D. Di Giorgio, A. Ballio, and G. Menestrina. 1 9 9 9. Conductive properties and gating of channels formed by syringopeptin 2 5 A 5 a bioactive lipodepsipeptide from Pseudomonas syringae p v. syringae， in planar lipid membrane. Mol. Plant Microbe Interact. 12:40 1-9)。經證實：由於離子通過細胞膜膜孔的流入造成 膠體-滲壓休克（colloid-osmotic shock)，通道形成能夠致 使導致溶解（lysis)的陽離子諸如 H+、K+及 Ca + 2流入 (T akemoto, J. Y. 1 9 9 2. in Bacterial phytotoxin syringomycin and its interaction with host membranes. (Verma，D. S” e d.), Molecular signals in plant-microbe communications.:247-260) o 200803726 (4) % 雖然丁香黴素在提供真菌的廣效控制方面是有用的， 硏究中的抗真菌有效濃度引起環境衝擊及對人類與動物體 的慢性低劑量健康影響。更確切地，由於該等化合物對於 人類、動物及植物的潛在毒性，被認爲是供目前廣泛應用 在抗真菌組成物的濃度/水準之環脂肽的管制性核准 (regulatory approval)迄今已被排除。 【發明內容】 根據前述，本發明之一主要目的在於提供如本文所述 類型之廣泛一系列的抗真菌及/或殺真菌組成物，及/或製 備方法及後續用途，其包括但不限定於使用一種或多種殺 真菌組分（諸如脂肽組分）且結合一種或多種鼠李糖脂組分 以增強抗真菌活性及/或減少此組分的殺真菌有效濃度， 藉以克服習知技藝的各種不同缺點與不足之處，其包括那 些被槪述於上面的。 本發明之一目的在於提供各種不同的組成物、配方或 製備物，其包括以減量展現增加的抗真菌效力之組分。 因此本發明之一相關目的在於藉由表現例如在工業上 之具廣效抗真菌活性及/或調節性可接受的毒性水準之濃 度及於有效施用速率’提供包含抗真菌組分（諸如脂肽組 分）的各種不同系統。 本發明之又一目的在於提供各種不同的環境安全及/ 或無毒性抗真菌組成物於商業、家庭及/或農業使用’包 括土壤處理、種子處理、作物/葉片處理及/或收穫後的施 -8- (5) 200803726 % 用以供真菌及酵母菌感染的預防及治療。 將被那些習於該技藝者所理解的是：此發明的一個或 多個方面可滿足特定目的，而一個或多個其他方面可滿足 其他特定目的。各個目的就其所有方面來說，並不是可以 平均地適用於本發明的每個方面，就其本身來說，這些與 其他目的可以是與本發明的任一方面交替地被考慮。 從特定具體例的摘要及下列描述，本發明的其他目的 、特色、益處及優點是清楚的，並且對於那些具有殺真菌 劑組分、生物介面活性劑及彼等在預防與治療真菌感染上 的用途知識之習於此技藝者來說是易於明白的。從上面結 合隨附實施例、數據、圖式及所有從其被推導而來的合理 推論，這些目的、特色、益處及優點將是清楚的。 部分地，本發明可包含包含選自至少一丁香黴素、至 少一假單胞黴素或彼等之組合的抗真菌組分及包含鼠李糖 脂的載體組分之組成物。在特定具體例中，鼠李糖脂選自 單鼠李糖脂、雙鼠李糖脂或彼等之組合。此一鼠李糖脂量 足以減少該抗真菌組分的有效濃度至低於大約其之5 0%。 類似地’在特定具體例中，不論鼠李糖脂本身及/或量， 此組成物可包含丁香黴素，或另擇地在特定其他具體例中 ，假單胞黴素。 依據本發明，如同將被那些習於本技藝者所理解的， 鼠李糖脂可包含一種或多種被描述於美國專利第 5,455,232及5,767,090號中之化合物種類，各專利案以其 整體被倂入此處以作爲參考文獻。此鼠李糖脂化合物，不 -9- (6) 200803726 瓤 論是目前該技藝中已知的或者之後被分離的及/或鑑定出 的’可以是一種揭露於此或是如同被那些習於本技藝者所 理解之變化的結構。例如但不需限定，不論是合成所衍生 或天然的[例如從一假單胞菌屬species)或其 一品系]的以酸形式及/或如一對應酸式鹽，此一化合物可 以是在一個或多個糖類羥基位置上被烷基及/或醯基（分別 例如甲基及/或乙醯基，及其更高的同源物）所取代。類似 地’不論是單及/或雙鼠李糖形式，任何此類化合物可藉 由疏水性部分（h y d r 〇 p h 〇 b i c m 〇 i e t y)而改變。作爲非限定的 實例，參照第1 A及1 B圖，m及η可獨立地落在從大約4 至大約2 0的範圍，不論此部分是否爲飽和的，單飽和的 或多飽和的，不論該疏水性部分是質子化的（protonated)， 呈現如同與任何相對離子的共軛鹼或其他衍生而來的。與 本發明的較廣方面相符的是，應用於此組成物的鼠李糖脂 在結構上僅受限於與一丁香黴素及/或假單胞黴素組合所 生成的表面活性功能及/或抗真菌效果。因此，被描述於 國際公開案W0 99/43 334結構變化類型亦被考慮於本發明 的背景內，此公開案以其整體被倂入此處作爲參考文獻。 亦參見第2圖的非限定鼠李糖脂組分/結構。 丁香黴素抗真菌組分可包含一種或多種丁香黴素化合 物，還有目前該技藝中爲已知的或之後被分離出的或被鑑 定的其任何鹽類或衍生物，其包括但不限定於表現抗真菌 /殺真菌特性的一種或多種化合物（例如丁香黴素、丁香施 德丁，及丁香假單胞毒素），如同在美國專利第5,8 3 0,8 5 5 -10- (7) 200803726 蓦 及6,3 1 0,0 3 7號內有其中所引用的任何參考文獻所描述的 ，其各自以其整體被倂入此處以作爲參考文獻。雖然在內 文中胺基酸或經修飾的胺基酸殘基之特定數目及/或順序 是廣泛地被理解的，此化合物可隨著長度及/或殘基特性 或序列而變化，不限定於天然的、重組型及/或突變體的 表現（例如依據鑛果水泡細囷病囷或其品系）或可利用的合 成技術。例如，雖然此特定化合物能夠以具有N-端絲胺 酸殘基與包含絲胺酸羥基及C端殘基的內酯部分作爲特徵 ，各種不同其他的內酯/環肽結構是可以被預期的，不論 介於N-與C-端間的殘基特性、數目或序列。類似地，不 論是天然的或合成所衍生的，此組分可隨著N端（例如N-醯基）取代基的長度、分支及/或飽和程度，還有位在上面 之羥基取代的位置及程度而改變。不受限制地，參照前述 倂入之’8 5 5號專利及其中所討論的丁香黴素 A(SRA)、 E(SRE)及G(SRG)。如同本發明之一較廣方面，此丁香黴 素組分僅受到抗真菌效果所限定，其單獨地或結合如上面 所述的鼠李糖脂種類。 假單胞黴素抗真菌組分可包含一種或多種假單胞黴素 化合物，還有目前該技藝中爲已知的或之後被分離出的或 被鑑定的其任何鹽類或衍生物，此化合物包括但不限定於 表現抗真菌特性的一種或多種化合物種類，如同在美國專 利第6,919，188及6,7 93,92 5號內還有其中所引用的參考 文獻所描述的，其各自以其整體被倂入此處以作爲參考文 獻。雖然在本文中胺基酸或經修飾的胺基酸殘基之特定數 -11 - (8) 200803726 豢 目及/或順序是廣泛地被理解的，此化合物可隨著長度及/ 或殘基特性或序列而變化，不限定於天然的、重組型及/ 或突變體的表現（例如依據蘋果水泡細菌病菌或其品系）或 可利用的合成技術。例如，雖然此特定化合物能夠以具有 N-端絲胺酸殘基與包含絲胺酸羥基及C端殘基的內酯部分 作爲特徵，各種不同其他的內酯/環肽結構是可以被預期 的，不論介於N-與C-端間的殘基特性、數目或序列。類 似地，不論是天然的或合成所衍生的，此組分可隨著N端 (例如N-醯基）取代基的長度、分支及/或飽和程度，還有 位在上面之羥基取代的位置及程度而變化。不受限制地， 參照前述倂入之’ 1 8 8號專利及其中所討論的假單胞黴素A 、八’、：8、：6’、（：及Cf。如同本發明之一較廣方面，此假 單胞黴素組分僅受到抗真菌效果所限定，其單獨地或結合 如上所述的鼠李糖脂種類。 雖然本案組成物可被描述爲如同包含一種或多種衍生 自或分離自微生物發酵產物的組分，理應被理解的是：本 發明亦預期一種或多種原位（/« / / w)被製造出的此組分之 存在’此即，在要被以此組成物治療的任何區域上來被生 物合成或要被以此組成物治療的任何鄰近要被治療之區域 上被生合成。例如，生產鼠李糖脂及/或生產抗真菌劑的 生物可以連同如此處所述被使用的對應產物被生長以提供 一種或多種本案組成物。此生長可被理解爲需要或不需要 適當的培養基或支持培養基，如同將被那些習於該技藝者 所理解的而知曉本發明。 -12- (9) (9)200803726 無關乎抗真菌劑或鼠李糖脂本身，本案組成物之載體 組分可包含選自但不限定爲水、醇、油、氣體及彼等之組 合的流體。例如，雖然此組成物並不受限於抗真菌劑或鼠 李糖脂量（quantities)的量（amount)，包含水及/或醇的載體 可被應用在促進所想要的配方、運輸、儲存及/或施用特 性上，還有有效濃度及所形成的活性。因此，各種具體例 亦可包含氣體載體組分，諸如可與適當推進劑（propellant) 或如同噴霧劑（aerosol)被投藥的組成物。 在本發明的特定具體例中，此一組成物可以是在，或 如可被施予支持或支持真菌（例如酵母菌及/或真菌）生長的 底物或表面。因此，此底物或表面可包含任何能夠或確實 支持真菌生長的材料。此底物可包含但不限定於木材、陶 瓷、瓷器、石材、石膏、石牆、水泥、織物、皮革、塑膠 或類似物。因此，此底物可被選自建築材料/表面與消費 產品之可用範圍。 在特定其他具體例中，此組成物可以是在，或可被施 予一包含一纖維素組分的底物上，其能夠或確實支持真菌 生長。不受限定地’特定具體例可包含植物、植物組分（ 例如根、莖、葉、產物及類似物）及任何產生的幼芽或種 子。特別地，不受限定地，此組成物可以是在任何植物產 物上，不論是稱爲果實、蔬菜、塊莖、花、種子或果仁， 不論是在收穫前或後。由此而來的特定植物及/或產物在 本技藝中被單獨地或共同地認定爲農作物。因此，在特定 具體例中，於生長、收穫前及/或收穫後的任何時間，此 -13- 200803726 (10) 發明之組成物可在或施予此作物上。 在特定其他具體例中，此發明的各種組成物可在其上 接觸’或如同被施予或被投予包含哺乳動物或人類組織（ 包括但不限於指甲、毛髮、皮膚及其他細胞原料）的底物 或表面，在有關於治療或預防酵母菌及真菌生長或感染的 藥學配方的背景內。 部分地，本發明的亦可指向一種用於抑制或預防真菌 生長的組成物，此組成物包含如此處所述的抗真菌組分種 類及也在此處所述的鼠李糖脂介面活性劑組分種類。有鑑 於各個組分分開地或獨立地能夠具有特定的抗真菌活性， 彼等之組成物可提供一種大於任一組分活性或其總和的增 強之抗真菌活性。就像下面所證明的，鼠李糖脂介面活性 劑組分量可以是至少部分地足以減少該抗真菌組分的有效 量至低於大約50%，以維持基本上相同或可比的上之活性 水準。不論鼠李糖脂本身或其量，此組成物可包含丁香黴 素及/或假單胞黴素抗真菌組分。類似地，此組成物可進 一步包含一種或多種其他組分或活性劑以提供該組成物多 重活性。例如，此組成物可包括但不限定於抗微生物、除 草及殺蟲組分，還有那些其他提供一系列殺生物活性者。 因此，如下面所證實的，本發明亦可包含一種方法， 其使用鼠李糖脂以增進抗真菌效果。此方法可包含提供選 自丁香黴素、假單胞黴素及彼等之組合的抗真菌組分，此 一組分具有第一抑制濃度用以抑制真菌生長；並且令抗真 菌組分與鼠李糖脂介面活性劑組分接觸，該鼠李糖脂組分 -14- (11) 200803726 爲 量是至少部分足以增進抗真菌效果並且抗真菌組分是低於 第一抑制濃度的第二抑制濃度。如此，藉由在抗真菌組分 的較低濃度下維持或基本上未改變之透明圏（zone of inhibition) ’ 一改善可被定量地及/或定性地被證明。此方 法學的各種不同具體例可如需要地包含降低鼠李糖脂組分 的濃度，在基本上未喪失抗真菌效果的情形下。 可供選擇地，本發明可指向一種包含一種或多種本案 組成物在一底物上或與底物接觸的系統，該底物包含酵母 菌膜及真菌膜的至少之一。此組成物可包含包含鼠李糖脂 的載體組分，該鼠李糖脂量是至少部分地足以減少抗真菌 組分相對於該酵母菌或真菌膜的有效濃度。在特定具體例 中，鼠李糖脂組分可有益地呈現足以減少抗真菌組分對哺 乳動物的毒性之量。在一些此或特定其他具體例中，抗真 菌組分的有效濃度能夠被降低至高及/或大於大約 50%。 不論鼠李糖脂本身，此一系統的酵母菌及/或真菌膜可在 一底物上或與該底物接觸，該底物選自建築表面及消費產 品及/或那些包含纖維素組分的底物。 無論在任何時間點出現真菌生物，本發明可提供一種 抑制真菌生長的方法。此方法可包含提供一種如此處所述 的組成物種類，並且令其與一底物接觸。在特定具體例中 ，如同下面所述的，此底物可包含纖維素組分，諸如但不 限於植物或種子。接觸可透過生長培養基諸如土壤或水耕 環境（hydroponic environment)、灌溉培養基（irrigation medium)，及/或藉由一底物表面塗層的方法，諸如種子上 -15- 200803726 (12) 的膜或殘餘物（residue)。另擇地，此組成物可被直接地施 予植物或其產品，不論在收穫前或後，以抑制目前及/或 預期的生長。 參照下列實施例，本發明證明：包含抗真菌組分（特 別地脂肽組分）及鼠李糖脂生物介面活性劑的組成物相較 於習知技藝，能夠提供抗真菌組分水準的實質降低，在不 犧牲抗真菌（例如殺真菌）效力的情況下。 在沒有任何特定理論或操作模式的限制下，至少在某 種程度上，所展現的增加之活性及/或效果可能是因爲鼠 李糖脂組分的表面活性特性。特別地，鼠李糖脂生物介面 活性劑可打開及/或增強宿主生物的細胞膜形成孔洞，提 高細胞通透性並且因此細胞對於抗真菌組分的易受性 (susceptibility)。此處所提供的數據支持：在鼠李糖脂的 存在下，抗真菌劑到達其標的並且更爲有效率地改變細胞 膜功能的能力。如此，有效的配方能夠使用較低濃度水準 的一抗真菌劑或一鼠李糖脂組分而被實現。 如同在下面實施例3中所證實的，此效果在SRE-鼠 李糖脂組成物中被發現到。相較於SRE單獨濃度爲2.4 mg/ml之活性，SRE-鼠李糖脂組合物（SYRA)於2.4 mg/ml 的SRE及2.6 mg/ml的鼠李糖脂展現拮抗747之品系 的升高殺真菌活性（亦參見表2及3)。鼠李糖脂組分的加 入被發現到增加SRE效力，至少一部分是因爲，對真菌細 胞膜使用殺真菌劑，暗示SRE及鼠李糖脂交互作用以提高 拮抗747的抗真菌活性。 -16- (13) (13)200803726 再者，表3指出：SRE-鼠李糖脂組合物（SYRA)的抗 真菌活性是隨著出現在SYRA中的SRE及鼠李糖脂的比例 而定的。例如，在殺真菌劑及生物介面活性劑組分的最低 濃度水準（例如2.4 mg/ml的SRE及2.6 mg/ml的鼠李糖脂 ，透明圈爲2 1 mm)所觀察到的活性是大於那些有關測試的 抗真菌及生物介面活性劑組分的最高濃度水準（例如1 〇. 3 mg/ml的SRE及85 mg/ml的鼠李糖脂，20.5 mm)所觀察 到的。 參照實施例4與5，本發明的配方可在未實質犧牲效 力之情況下，被應用於減少組分任一者的有效劑量及/或 施用速率。例如，如表 7A到 7C中所說明的，本發明 SRE-鼠李糖脂組成物的稀釋配方以較低的SRE濃度來提 供可比的上的或增加的活性。例如，在75%、5.3 mg/ml 的鼠李糖脂與25 %的SRE稀釋液之情況下，以2.4 mg/ml SRE的濃度來拮抗果蠅紅酵母之抗真菌活性（29.5 mm)是 實質上可比的上以5.6 mg/ml SRE者（30 mm)的抗真菌活 性-以實質上可比的上之效力降低抗真菌組分濃度大約 5 0%。 如上面所說明的，本發明可指向一種方法，其有關使 用鼠李糖脂來降低所需用於達到預定水準之抑制或活性的 抗真菌組分之有效量。在特定具體例中，如下列數個實施 例中所說明的，抗真菌組分的濃度可被減少至或低於使用 之調節及/或政府可接受的及/或核准的水準。特別地，參 照實施例2至4，如此處所述的使用鼠李糖脂能夠在實質 -17- 200803726 (14) 上未放棄效力的情形下，減少丁香黴素（例如SRE)組分量 低於大約4 pg/ml的濃度（被認爲是基本上安全/無毒的水 準）。減少用於抗真菌活性的預定水準之抗真菌或生物介 面活性劑組分的有效量，可提供一系列的組成配方，其相 較於傳統殺真菌劑在一食物產品上遺留較少殺真菌劑殘留 物-符合或超出調節環境及毒性標準，造成較低的生產及 實施成本。 在本發明的殺真菌劑組成物中，抗真菌組分及生物介 面活性劑組分的相對量或濃度可在有效範圍內廣泛地變化 ，如同下面實施例中所證實的。使用的濃度及/或殺真菌 劑劑量是較佳地被選定以達到超過個別組分單獨之提昇或 增加的活性，及/或將以最低有效組分濃度來最大化組成 物的活性。因此，產生此提高活性之重量比例及/或濃度 不僅僅視所用的特定抗真菌組分或生物介面活性劑組分而 定，也視該組成物的特定最終用途而定，其包括但不限於 氣候、土壤組成、宿主特性及/或潛在暴露於一特定酵母 菌或真菌。 此外，本發明的組成物可包含額外的化學性及/或生 物性的多部位及/或單部位的抗真菌（antimycotic)或抗真菌 劑（antifungal agents)，具有類似及/或不同的作用模式， 如同將被那些習於本技藝者所熟知的。此劑包括但不限定 於以鉀、碳酸氫鹽、矽、銅或硫爲主的化合物及/或植物 油（例如苦楝油）。再者，此劑可包括但不限定於吡咯環 (azoles)； 多烯（P 〇 1 y e n e s)， 諸如雙性殺黴素 B( -18- 200803726 (15) amphotericin B)及制黴素（nystatin);曝B令或嚼D定核苷酸抑 制劑，諸如氟胞嚼D定（flucytosine);保粒黴素（polyoxins) 諸如煙黴素（nikkomycins);其他幾丁質抑制劑、延伸因子 抑制劑，諸如糞殼菌素（sordarin)及其類似物；粒線體呼吸 的抑制劑、固醇生合成的抑制劑及/或任何爲那些習於本 技藝者所知適於治療或預防植物、動物及/或人類之酵母 菌或真菌感染的殺真菌組成物。 在特定具體例中，本發明的組成物亦可包括一種或多 種防腐劑組分，包括但不限定於山梨酸或苯甲酸；苯甲酸 、山梨酸、羥甲基甘胺酸及丙酸的鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽及銨 鹽；及甲基、乙基、丙基及丙基對羥苯甲酸酯及彼等之組 合。 本發明之組成物可如水性分散劑或乳劑被使用並且能 夠以含有高比例之抗真菌-生物介面活性劑系統之如同可 被稀釋（例如水或另一種流體組分）的濃縮物形式被利用。 這些濃縮物較佳地理應可禁得起歷經長期間的儲存，及在 此儲存之後，能夠以水稀釋而形成水性製備物，其維持均 質以供在一足夠時間以使它們可藉由習用方法及器械而被 施用。 依據最終用途的應用類型，本發明之組成物亦可包含 任何其他所需的組分，包括但不限於有助於施用的固體或 液體載體、介面活性劑、保護膠體、黏著劑、增稠劑、搖 變減黏劑（thixotropic agents)、滲透劑（penetrating agents) 、安定劑、鉗合劑（sequestrants)、變形加工劑（texturing -19· 200803726 (16) agents)、調味劑（供收穫後的應用）、糖、著色劑等等，如 同將由那些習於本項技藝者所知曉的。 舉例來δ兌’該寺組成物可以供農業用途而被使用並且 以此一載體或稀釋劑來配製。該等組成物可經配製或未經 配製地直接被施予植物的葉片上，至種子或至植物生長其 中或被種植的其他培養基，或者它們可被噴灑（sprayed)、 噴灑（dusted)在其上或如同乳膏（cream)或糊劑（paste)配方 被施用，或者它們可如同蒸氣或如同緩釋顆粒地被施用。 施用可以在植物的任何部分，包括葉片、莖、枝或根，或 圍繞根的土壤、或在其被種植之前的種子、或通常地至土 壤，至灌溉水或至水耕培養系統。本案組成物亦可被注射 到植物中或使用電動噴灑技術（electrodynamic spraying techniques)或其他低容積方法來被噴灑在植物上。 在特定具體例中，該等組成物能夠呈現含有一固體稀 釋劑或載體的可噴灑粉末或顆粒形式，例如，塡料諸如高 嶺土、皂土、砂藻土（kieselguhr)、白雲石、碳酸銘、滑石 、氧化鎂粉、漂白土、石膏、Ϊ夕藻土（diatomaceous earth) 及瓷土。此顆粒可以是適用於施予土壤而無須進一步處理 的預成形顆粒（preformed granules)。這些顆粒可藉著以有 效成分浸漬塡料的沈澱物（pellets)或藉由沈澱有效成分及 塡料粉的混合物來被製得。供包覆種子的組成物可包括用 以協助組成物黏附到種子的劑（例如礦物油）；另擇地該有 效成分可使用有機溶劑被配製以供種子包覆用途。該等組 成物亦可呈現包含潤溼或分散劑以促進在液體中分散的可 -20- 200803726 (17) 潤溼性粉末或水分散性顆粒之形式。粉末及顆粒亦可含有 塡料及懸浮劑。另擇地，該等組成物能夠以微膠囊形式來 被使用。它們也可被配製在生物可降解聚合配方中以獲得 低的、控制釋放的活性物質。 無論如何，此固體配方可包含一系列的形式與形態， 包括但不限於柱、桿、塊、囊劑、錠劑、九劑、小粒、帶 、釘及類似者。另擇地，顆粒化或粉末化的原料可被壓縮 成錠劑或被用於塡充一系列的膠囊或殼（shell)。不管怎樣 ，此配方可被用於將本案組成物導入一土壤或相關的生長 培養基，大約在植物根部的近端。在此具體例中，不論組 成包含粉末、粉塵（dust)、或顆粒，此組成物能夠以釘、 桿或其他成形造模的形式被嵌入土壤中。 可乳化的濃縮物或乳劑可藉由溶解本發明之有效成分 於一有機溶劑（其選擇性地含有潤溼或乳化劑）中並且接著 將該混合物加入水（其可能亦含有潤溼或乳化劑）中。適當 的有機溶劑爲芳族溶劑，諸如院基苯（a 1 k y 1 b e n z e n e s )及院 基萘（alkylnaphthalenes)、酮諸如環己酮（cyclohexanone) 及甲基環己酮（methylcyclohexanone)、氯化烴諸如氯苯 (chlorobenzene)及三氯乙院（trichlorethane)，及醇諸如节 醇（benzyl alcohol)、呋喃甲醇（furfuryl alc〇hol)、丁醇 (butanol)及乙二醇醚（glycol ethers)。要如同噴霧被使用的 組成物可以呈噴霧劑的形式，其中該配方於一推進劑（例 如氟三氯甲烷或二氯二氟甲烷）的壓力下被限制在一容器 中。 -21 - 200803726 (18) 如上面所述的，此發明的特定組成物及方法可在藥學 背景中找到實用性。因此，此發明的抗真菌及鼠李糖脂組 分含有一種或多種酸性或鹼性官能基基團並且因而是可與 藥學上可接受的酸或鹼形成鹽類及藥學上可接受的鹽類。 術語”藥學上可接受的鹽類”意指此化合物之相對無毒性、 無機或有機酸及鹼加成鹽。此鹽類可透過組分化合物與一 適當的酸或鹼反應而被製得。適當的鹼包括包括藥學上可 接受的金屬陽離子之氫氧化物、碳酸鹽或碳酸氫鹽、氨， 或藥學上可接受的有機一級、二級或三級胺。代表性的鹼 性或鹼土族鹽類包括鋰鹽、鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽及鋁 鹽及類似物。應用於形成鹼性加成鹽的代表性有機胺包括 乙胺、二乙胺、乙二胺、乙胺醇、二乙胺醇、哌嗪及類似 物。代表性的酸性加成鹽包括氫溴酸鹽、氫氯酸鹽、硫酸 鹽、磷酸鹽、硝酸鹽、乙酸鹽、戊酸鹽、油酸鹽、軟脂酸 鹽、硬脂酸鹽、月桂酸鹽、苯甲酸鹽、乳酸鹽、磷酸鹽、 甲苯磺酸鹽、檸檬酸鹽、馬來酸鹽、延胡索酸鹽、琥珀酸 鹽、酒石酸鹽、萘酸鹽、甲磺酸鹽、葡萄庚酸鹽、乳糖酸 鹽，及月桂基磺酸鹽及類似物。 如上面所說明的，本發明之組分、組成物及藥學上可 接受鹽類是抗真菌抑制劑。關於酵母菌及真菌抑制的試驗 、方法及分析在該技藝中是已知的。因此，酵母菌或真菌 可藉著令生長與一有效量的本案組成物接觸，或藉著令一 支持此生長的底物/表面與一有效量的此組成物接觸而被 抑制。此接觸可發生在活體外或活體內。”接觸 - 22- 200803726 (19) (contact ing)”表示抗真菌組成物及該底物/表面被帶在一起 以使得組成物可與其上或稍後生成的生長交互作用。有效 來抑制真菌生長的組成物量可依據經驗而被決定，並且做 出此決定是落在該技藝的技術中。抑制包括減少並且消滅 酵母菌或真菌生長。 爲了治療帶有真菌生長或者遭受感染的動物或人類個 體，一有效量的一種或多種本案組成物（選擇性地包括一 種或多種藥學上可接受的組分鹽類）可如同該技藝中所理 解地被投藥。投藥與劑量的有效劑量形式、模式將依據經 驗而被決定，且做出此決定是落在該技藝的技術中。被那 些習於本技藝者所理解的是：劑量將隨著所用的特定化合 物之活性、感染的嚴重性、投藥途徑、化合物的排出速率 、治療的期間、要被投藥給該動物/個體之任何其他藥物 本身、動物/個體的年紀、身材及品種，及醫學及獸醫學 技藝中已知的類似因子而改變。通常，適當的每日劑量將 是有效產生治療效果之最低劑量的量。每日總劑量將由照 料的醫師或獸醫師在聲響醫學診斷（sound medical judgment)的範疇內來被決定。若需要的，此一組成物的每 曰有效劑量可如兩次、三次、四次、五次、六次或更多次 劑量（sub-doses)在整天之內以適當間隔來被分開地投藥。 依據本發明治療的動物包括哺乳動物。依據本發明可治療 的哺乳動物包括狗、貓、其他馴養的動物，及人類。 本發明之組成物可藉由任何適當投藥途徑被投藥給動 物/病患以供治療，包括口服地、經鼻地、直腸地、膣內 -23- 200803726 (20) 地、非經口地、囊內的及局部的，如同透過粉末、軟膏或 滴劑，包括頰內地或舌下地。較被偏好的投藥途徑是口服 地與局部地。 雖然對此組成物的有效成分來說可以個別地或依序地 被投藥，投藥作爲一藥學配方（組成物）的有效成分是較佳 的。本發明之組成物可包含有效成分混合一種或多種藥學 上可接受的載體及，選擇性地加上一種或多種其他化合物 、藥物或其他原料。各個載劑必須是’’可接受的”意思爲： 與該配方的其他成分相容並且不會傷害病患。 不論選定的投藥途徑爲何，該（等）有效成分是透過被 那些習於本項技藝者所熟知的習用方法來被配製成藥學上 可接受的劑量形式。將與載體原料結合以製出單一劑量形 式的有效成分或組分之量將隨著要被治療的宿主、特定的 投藥模式及所有如上所述之其他因子而改變。將與載體原 料結合以製出單一劑量形式之有效成分量通常將是有效來 產生治療效果之最低劑量的有效成分量。 製備藥學配方或組成物的方法包括下列步騾：使該（ 等）組分與載體以及，選擇性一種或多種附加成分連結。 通常，該等配方是藉由均句地並且嫻熟地使有效成分與液 體載劑或被細分的固體載體或是兩者連結，並且接著，若 需要的話，成形該產品來被製備。 適用於口服投藥的本發明之配方可以是呈囊劑、膠囊 、九劑、錠劑（tablets)、錠劑（lozenges)(使用經調味的基 質，通常蔗糖及阿拉伯膠或膠黃蓍樹膠）、粉末、顆粒， -24- 200803726 (21) 或者是如呈一水性或非水性液體的一溶液劑或一懸浮液’ 或者是如同一水包油或油包水的液體乳劑，或者如一酏劑 或糖漿，或者如錠劑（pastilles)(使用一惰性基質，諸如明 膠及甘油，或蔗糖與阿拉伯膠），及/或漱口藥及類似者’ 各個含有預定量的有效成分。該（等）有效成分或組分亦可 如同一食團、舐劑或糊劑來被投藥。 供用於口服投藥之本發明的固體劑量形式（囊劑、錠 劑、九劑、糖衣錠、粉末、顆粒及類似物）中，該（等）有效 成分是與一種或多種藥學上可接受的載體（諸如檸檬酸鈉 或磷酸二鈣），及/或下列的任一者混合··（ 1 )塡料或增量劑 (extenders)，諸如澱粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇 ，及/或矽酸；（2)黏結劑，諸如例如羥甲基纖維素、褐藻 酸鹽、明膠、聚乙烯氫吡咯酮、蔗糖及/或阿拉伯膠；（3) 潤濕劑（humectants)，諸如甘油；（4)崩解劑（disintegrating agents)，諸如瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯或樹薯澱粉、褐藻酸 、某些矽酸，及碳酸鈉；（5)溶液阻滯劑（solution retarding agents)，諸如石蠟；（6)吸收促進劑（absorption accelerators)，諸如四級銨化合物；（7)潤濕劑，諸如例如 十六醇及單硬脂酸甘油酯；（8 )吸收劑，諸如高嶺土及膨土 ;(9)潤滑劑，諸如滑石、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙 二醇、月桂硫酸鈉，及彼等之混合物；及（1 〇)著色劑。在 囊劑、錠劑及九劑的情況下’該等藥學組成物亦可包含緩 衝劑。一相似類型的固體組成物亦可使用如乳糖（lactose) 或乳糖（milk sugars)，還有高分子量的聚乙二醇及類似物 -25- 200803726 (22) 的賦形劑，如同軟及硬塡充明膠膠囊中的塡料般地被採用 〇 一錠劑可以藉由壓縮或造模，選擇性地加上一種或多 種附加成分來被製得。經壓縮的錠劑能夠使用黏結劑（例 如明膠或羥丙基甲基纖維素）、潤滑劑、惰性稀釋劑、防 腐劑、崩解劑（例如澱粉羥基乙酸鈉或交聯的羥甲基纖維 素鈉）、表面活性或分散劑而被製備。經造模的錠劑可藉 由在一適當的機器中將以一惰性液體稀釋劑予以潤濕的有 效成分粉模鑄而被製成。 該錠劑，及本發明之藥學組成物的其他固體劑量形式 ，諸如糖衣錠、囊劑、九劑及顆粒，可選擇性地被刻畫 (scored)或以塗層與外殻（諸如腸衣及其他在藥學配製技藝 中已知的塗層）來予以製備。它們也可以被配置以提供其 內之有效成分的緩釋或控制釋放，使用例如呈現不同比例 的羥丙基甲基纖維素以提供所欲的釋放圖形（release profile)、其他聚合物基質（polymer matrices)、脂質體 (liposomes)及/或微球體（microspheres)。它們可透過例如 經由細菌·留置濾器（bacterial-retaining filter)的過濾來被 滅菌。這些組成物亦可選擇性地含有失透劑（opacifying agents)並且可以是一種組成物，其僅釋放有效成分或優先 地，在一特定的胃腸管道之部分中選擇性地以延遲的方式 。可被使用的包埋組成物之實例包括聚合物質及蠟。該（ 等）有效成分也能夠以微膠囊的形式。 供有效成分之口服投藥的液體劑量形式包括藥學上可 -26- 200803726 (23) 接受的乳劑、微乳液（microemulsions)、溶液劑、懸 、糖漿及酏劑。除了有效成分之外，液體劑量形式可 通常被用於該技藝中的惰性稀釋劑，諸如，例如水或 溶劑、助溶劑（S ο 1 u b i 1 i Z i n g a g e n t S)及乳化劑，諸如乙 異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苯甲 丙二醇、1，3-丁二醇、油（特別地，棉籽、花生、玉米 芽、橄欖、蓖麻及芝麻）、甘油、呋喃甲醇、乙二醇 水山梨醇的脂肪酸酯，與彼等之混合物。 除了惰性稀釋劑之外，口服組成物也能夠包括佐 如潤濕劑、乳化及懸浮劑、甜味劑、調味劑、著色劑 化及防腐劑。除了有效成分之外，懸浮液可含有懸浮 像例如乙氧化的異硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇與山梨糖 、微晶纖維素、偏氫氧化鋁、皂土、瓊脂及膠黃耆樹 及彼等之混合物。 供直腸或膣內投藥之本發明的藥學組成物配方可 栓劑來被呈現，其可藉由混合有效成分與一種或多種 的非刺激性賦形劑或載體（其包含例如可可脂、聚乙 、栓劑蠟或水楊酸鹽），且其於室溫下爲固體但於體 爲液體，並且因而將在直腸或膣腔內融化且釋放有效 。適用於膣內投藥之本發明的配方也包括含有在該技 已被知曉爲適當載劑的陰道栓劑（pessaries)、塡 (tampons)、乳膏（cream)、凝膠（ge 1 s)、糊劑（pastes) 沬（foams)或噴霧劑配方。 供有效成分之局部或穿皮投藥的劑量形式包括粉 浮液 含有 其他 醇、 醇、 、胚 及去 劑諸 、香 劑， 醇酯 膠， 如同 適當 二醇 溫下 成分 藝中 塞物 、泡 末、 -27- (24) (24)200803726 噴霧劑、軟膏、糊劑、乳膏、洗劑（lotion)、凝膠、溶液 劑、貼布（patches)及吸入劑（inhalants)。有效成分可在滅 菌狀態下與一藥學上可接受的載體，及與任何可能被需要 之緩衝劑或推進劑混合。 除了有效成分之外，軟膏、糊劑、乳膏及凝膠可含有 賦形劑，諸如動物與植物脂、油、蠟、石蠟、澱粉、膠黃 耆樹膠、纖維素衍生物、聚乙二醇、聚矽氧、皂土、矽酸 、滑石及氧化鋅，或彼等之混合物。除了有效成分之外， 粉末及噴霧劑可包含賦形劑諸如乳糖、滑石、矽酸、氫氧 化鋁、矽酸鈣及聚醯胺粉末，或這些物質的混合物。噴霧 劑可額外地含有慣用的推進劑，諸如氯氟烴及揮發性未經 取代的烴，諸如丁烷及丙烷。 穿皮的貼布具有提供控制有效成分投遞至身體的附加 優點。此劑量形式可藉著溶解、分散或其他將有效成分倂 入一適當的介質（諸如一彈性基質原料）而被製得。吸收促 進劑亦可被用於增進有效成分通過皮膚的流動（flux)。此 流動的速率可藉由提供速率控制膜（rate-controlling membrane)或分散該有效成分於一聚合物基質或凝膠中而 被控制。 適用於非經口投藥的本發明之藥學組成物包含有效成 分組合一種或多種藥學上可接受的滅菌等張水性或非水性 溶液、分散液、懸浮液或乳劑，或可在使用之前，於滅菌 注射溶液劑或分散劑中被復原（reconstituted)之滅菌粉末 ’其可含有抗氧化劑、緩衝液、使得該配方與所欲受體之 -28- 200803726 (25) 血液爲等張的溶質及懸浮或增稠劑。 可被使用於本發明之藥學組成物中之適當水性及非水 性載體的實例包括水、乙醇、多元醇（諸如甘油、丙二醇 、聚乙二醇，及類似物），及彼等之適當混合物、蔬菜油（ 諸如橄欖油），及可注射的有機酯（諸如油酸乙酯）。恰當的 流動性（fluidity)可被維持著，例如透過使用諸如卵磷脂的 塗覆原料，藉著在分散的情況下維持所需的顆粒大小，及 透過使用介面活性劑。 這些組成物亦可含有諸如潤濕劑、乳化劑及分散劑的 佐劑。在該組成物中包括諸如糖、氯化鈉及類似物的等張 劑是需要的。除此之外，可注射的藥學形式之延長吸收可 藉由包括諸如單硬脂酸鋁及明膠之延遲吸收的劑而被造出 〇 在某些情況下，爲了延長有效成分的效果，減緩從藥 物從皮下或肌肉內注射的吸收是需要的。這可以透過使用 具有差的水溶解度之微晶或無定形原料之液體懸浮液而被 達成。有效成分的吸收速率接著是隨其溶解速率而定，依 次將視結晶大小及晶體形式而定。另擇地’非經口投藥的 有效成分之延遲吸收是透過溶解或懸浮有效成分於一油載 體中而被達成。 可注射的儲存形式是透過於生物可降解聚合物（諸如 聚交酯-聚乙交酯）中形成有效成分之微膠囊基質而被製得 。根據有效成分相對於聚合物的比例’及所採用之特定聚 合物特性，有效成分的釋放速率可被控制。其他生物可降 -29- 200803726 (26) 解聚合物的實例包括聚（原酸酯）及聚（酐）°儲存可注射配 方亦可透過使有效成分陷入（entraPPing)脂質體或微乳液（ 其可與身體組織相容）中而被製備。可注射的原料能夠例 如藉著經由細菌-留置濾器的過濾來被滅菌。 該等配方能夠以單位劑量或多劑量密封的容器來被呈 現，例如安瓿及小玻璃瓶’並且能夠呈現凍乾狀態來被儲 存，其在使用之前僅需要立即添加滅菌液體載體（例如用 於注射的水）°臨時的注射溶液劑或懸浮液可從上述滅菌 粉末、穎粒及錠劑的類型來製備。 雖然先前的討論部份是被提供於藥學組成物的背景中 ，將被那些習於該技藝者所理解的是：其各種方面亦可施 用在指向植物及彼等之產品的生長、處理與生存力 (viability)之組成物與方法上。因此，如同將被那些技藝 者所理解的’此組成物可包含及/或呈糊劑、凝膠’植物 或產品表面上的塗層而被施用°再者’該等組成物可包含 及/或如粉麈、粉末或顆粒地被施予任何此植物或產品。 不論固體或半固體’此組成物可包含及/或使用該技藝中 已知爲促進潤濕或黏附於此植物或產品上的組分而被施用 【實施方式】 下列非限定實施例及數據說明與本發明之組成物及方 法相關的各種方面與特色。此方面及特色包括在製備本發 明組成物時，使用一系列的抗真菌組分結合鼠李糖脂’獲 -30- 200803726 (27) 得令人驚訝並且未預期到的結果；特別地，此抗真菌-鼠 李糖脂組合物在無毒性及/或降低的抗真菌組分水準/濃度 下，展現超過此一組分單獨使用之提升或增加的活性。 其理應被理解的是，這些實施例僅是被含括以供說明 爲目的而本發明並未被限定於如此處所提出之原料、條件 、特色或類似者的組合。比較的效用及優點可使用各種不 同其他方法學及/或與此發明範疇一致的組成具體例來被 實現。 與本發明組合使用的所有組分及/或成分是商業上可 得自於對那些習於本技藝者爲已知的來源。類似的，此處 所述的各種不同步驟參數可隨著個體或者如所需要的來被 修飾以說明此組分與成分的本身或濃度之改變，以達到依 據那些在此處所述的相同結果。 實施例1 具有如第3圖中所說明之結構並且依照商標Zonix™ Biofungicide 來販售的鼠李糖脂是得自於 Jeneil Biosurfactant Inc·，Saukville, WI。鼠李糖脂的原液（stock solution)含有大約8.5%(以重量計）鼠李糖脂生物介面活性 劑（85 mg/ml)，由大約4.25%的R1及4.25%的R2所組成 〇 具有如第4圖中所說明之化學式的丁香黴素E是藉由 Bidwai 等人（Bidwai. A· P·，L· A” Robert C· Bachmann， and Jon Y. Takemoto. 1 987. Mechanism of Action of -31 - 200803726 (28)

Pseudomonas syringae phototoxin, s y r i n g o my c i n. Plant Physiol. 83:3 9-43.)的方法自蘋果水泡細菌病菌品系B301D 及Μ 1中被純化出。所使用的S R E濃度包括1 0.3 m g / m 1、 5.6 mg/ml 及 2·4 mg/ml 〇 一系列的假單胞黴素組分可得自於 Eli Lily (Indianapolis，IN)或可如前述’188專利案中所描述的，其 數個代表例被提供於第5A-C圖中。

實施例2A 有關於抗真菌測試之類似於那些在NCCLS步驟中所 描述的濾紙圓盤擴散法（disk diffusion methods) (Washington, G. L. W. a. J. A. 1 99 5. Antibacterial Susceptibility Tests: Dilution and Disk Diffusion

Methods, p. 1327-1341. in P. R. Murray (e d.), Manual of Clinical Microbiology，sixth ed.)係被使用。第 2(A)至 2(D)圖說明典型觀察到的有關於使用濾紙圓盤擴散法之抗 微生物組合物的結果評估。 在下面實施例中要被使用的測試真菌是生長在RPMI 培養基中並且調整至5xl04 CFU/ml，並且被轉移到適當生 長培養基的固體瓊脂培養基上。培養物如同薄膜被塗敷在 表面上。直徑爲4毫米的滅菌紙錠（paper disk)被放置在表 面上並且丁香黴素E與鼠李糖脂被個別施予錠1及錠2上 (以大約7至大約1 0 μΐ的小分量）。錠間的距離是相等於 被單獨施用之藥物的透明圈半徑總和。平板被培養在大約 -32- (29) (29)200803726 35°C歷時大約24-72小時。

實施例2B 西洋棋盤法（checkerboard method)被頻繁地使用來活 體外地評估抗微生物組合物（Lorian, V.，M. D. 1 996. Antibiotics in Laboratory Medicine，4th ed·)。測試是藉著 使用微量稀釋法（micro dilution method)以實驗室水準來被 簡單地施行。從此硏究所得到的結果在S RE及鼠李糖脂之 間的交互作用特性提供較佳的了解。 西洋棋盤法是如同由Sabath等人（Sabath，L. D. 1 967. Synergy of antibacterial substances by apparently known mechanisms. Antimicrob. Agents Chemother. 7:210-7)及

Garrod 等人（Garrod L. P. amd Ρ· M. Waterworth. 1 962. Methods of testing combined antibiotic bactericidal action and the significance of the results. J. Clin. Pathol. 1 5 :3 2 8 -3 8)所描述的。96井的平板被用於決定微量抑制濃 度（fractional inhibitory concentrations, FICs)。SRE 及鼠 李糖脂的連續兩倍稀釋被分別地製備。接著不同濃度的2 5 μΐ 丁香黴素以垂直方向被加入而鼠李糖脂以水平方向被加 入。井的最終體積含有50 μΐ的主旨組成物與50 μΐ的測 試培養物。平板被培養於35 °C歷時24-72小時且FICs係 使用等式：（A/MICa) + (B/MICb) = FICa + FICb = FIC index來被計算，其中A及B分別爲SRE及鼠李糖脂的濃 度，MICa及MICb爲最小抑制濃度，而FICa及FICb是 -33- 200803726 (30)

S RE及鼠李糖脂的微量抑制濃度。 實施例3 A 如同顯示於表1中，SRE及鼠李糖脂拮抗各種不同酵 母菌及真菌的抗真菌活性係被測試。在兩個例外的情形下 ，鼠李糖脂單獨不顯示拮抗測試真菌及酵母菌的活性。然 而，如表1及2兩者中所說明的，SRE顯示強烈拮抗這些 生物的活性。 SRE及Rh溶液以顯示的濃度（mg/ml)被製備，接著被 稀釋並用於決定各個的最低抑制濃度（MIC, pg/ml)，單獨 或與它者的組合者（SYRA 及 SYRA2)。參照黃麴菌 //avw)，SRE濃度被稀釋至64倍以供於7.8 pg/ml觀察到MIC，但Rh在顯示的濃度沒有提供抑制（NI) 。相反地，依據SYRA濃度的稀釋（對於SRE爲64倍，及 對於Rh爲128倍），與它者的組合物（SYRA)有關於Rh的 MIC於5.8 5 pg/ml及有關於SRE於3.9 Mg/ml被觀察到。 比較7.8及3.9的SRE數値顯示使用本發明的鼠李糖脂在 MIC方面降低50%。此發明的一更顯著之實施例是透過與 有關於果蠅紅酵母（及的MC數値來被 顯示，其中使用鼠李糖脂降低有關於SRE的MIC從3.9 到〇 . 9 7。拮抗其他測試生物的有益效果是透過對應數據的 檢驗及分析來被証實。 -34- (31) (31)200803726 表1.SYRA的抗真菌MIC MIC (pg/ml) 生物 SRE (0.5 mg/ml) Rh (3 mg/ml) SYRA SRE 0.25 mg/ml Rh 0.75 mg/ml SYRA2 SRE 0.75 mg/ml Rh 0.25 mg/ml MIC (μβ/ml) MIC (μβ/ιηΐ) MIC (妗咖1) MIC (pg/ml) 2*黃麹菌 (Aspergillus flavus) 7.8 NI Rh 5.85 Sre 3.9 1 *果蠅紅酵母 piliminae) 3.9 93.75 Rh 2.92 Sre 0.97 2#白色念珠菌<2⑹c<ms) 3.9 NI Rh 5.85 Sre 1.95 1+匍枝根黴 7.8 NI Rh 11.7 Sre 3.9 鍾形黴菌oxysporwm) 7.8 NI Rh 11.7 Sre 3.9 ”青黴菌屬1 叹7) 7.8 NI Rh 23.43 Sre 7.8 Rh 5.85 Sre 1.95 1+灰黴菌屬沿π) 3.9 93.75 Rh 2.92 Sre 0.975 1 * 立枯絲核菌(Λ/zizociowa solani) 3.9 NI Rh 5.85 Sre 1.95 2*分枝孢子菌屬*yp) 3.9 NI Rh 5.85 Sre 1.95 ”青黴菌屬 2 CPewc////_ 5/λ2) 7.8 NI Rh 5.85 Sre 1.95 ”及2+數値是從三重複被獲得。 有關於”的結果在三重複中是相同的。 有關於2+的結果在前兩個重複中式相同的。第三個重複中MICs是低於被報導之MICs的兩倍。 微生物是被培養於28°C歷時2至5天。 -35- (32) (32)200803726 測試的丁香黴素E(S RE)濃度中，拮抗任何測試真菌 的最大殺真菌活性在最高濃度1〇 mg/ml的SRE被觀察到 ，當SRE濃度如同下表2顯示地從2.4 mg/ml的SRE被增 加到1 0.3 mg/ml的SRE，殺真菌活性增加。 表2. SRE單獨的抗真菌活性 SRE (mg/ml) BY4741 W3 03 C 8 A-1 B 果蠅紅酵母 (if. pil imana e) 透明圈 （mm) _ 10.3 23.0 29.0 20.0 23.0 一 5.6 2 1.0 28.0 19.0 2 1.5 一 2.4 19.0 26.0 17.5 19.0 _

實施例3 B SYRA是藉由以不同的相對濃度混合SRE及鼠李糖脂 而被獲得。SYRA是被測試拮抗各種不同酵母菌及真菌且 透明圈是如參照實施例2A及2B所描述的被測量。 如表3中所顯示，相較於濃度爲2.4 mg/ml的SRE單 獨活性（亦見表 2)，SRE-鼠李糖脂組合物（SYRA)於2.4 mg/ml的SRE及2.6 mg/ml的鼠李糖脂展現拮抗5以747 的升高殺真菌活性，暗示SRE及鼠李糖脂的協同作用，造 成組合物拮抗747的提升之殺真菌活性。 再者，表3指出：SRE-鼠李糖脂組合物（SYRA)的抗 真菌活性是隨著出現在SYRA中的SRE與鼠李糖脂的比例 而定。例如，於殺真菌與生物介面活性劑組分的最低濃度 水準（例如2.4 mg/ml的SRE與2.6 mg/ml的鼠李糖脂；透 -36- (33) (33)200803726 明圈2 1 m m)被發現到的殺真菌活性是大於有關測試殺真^ 劑與生物介面活性劑組分的最高濃度水準（例如^ 〇 3 mg/ml的SRE與85 mg/ml的鼠李糖脂；透明圈2〇5inm) 所觀察到的。 如所顯示的’於預定的SRE濃度下增加鼠李糖脂濃度 並不會對應增加該組成物拮抗真菌病原的抑制活性。再；^ ，對所有被指明的SRE濃度來說，SYRA的殺真菌活性在 鼠李糖脂組分的最低濃度（例如5.3與2.6 胃X。 特別地，如同在S R E的最低濃度（2.4 m g / m 1)被觀察到的， SRE-Rh組成物的活性隨著鼠李糖脂濃度增加而減少，暗 示最佳或最大的協同性抑制效果可在殺真菌劑與生物j #胃 活性劑組分的特定濃度範圍內被達到。 表3· SYRA A拮抗的抗真菌活性 SRE (mg/ml) 10.3 5.6 2.4 Rh (mg/ml) 透明圈（mm) 85.0 20.5 19.5 18.0 42.5 19.5 19.5 19.0 2 1.2 2 1.0 20.5 19.5 10.6 21.5 20.5 20.0 5.3 22.0 2 1.0 __ 20.0 2.6 2 1.0 2 1.0 2 1.0

實施例3 C 如同表4中所顯示的，相較於SRE單獨於濃度2·4 mg/ml的活性，SRE-鼠李糖S旨組合物（SYRA)於2 4 mg/ml -37- 200803726 (34) 的SRE及2.6 mg/ml的鼠李糖脂展現拮抗果蠅紅酵母的增 加之殺真菌活性（亦參見表2)，暗示SRE及鼠李糖脂的協 同作用，造成拮抗果蠅紅酵母的組合物之升高的殺真菌活 性。 與有關於BY474 1所得到的結果相符，於預定的SRE 濃度下增加鼠李糖脂濃度並不會對應增加該組成物拮抗真 菌病原的抑制活性。再者，對於所有被指明的SRE濃度來 說，SYRA的殺真菌活性在鼠李糖脂組分的最低濃度（例如 5.3 與 2.6 mg/ml)爲最大。 表4. SYRA A拮抗果蠅紅酵母的抗真菌活性 SRE (mg/ml) 10.3 5.6 2.4 Rh (mg/ml) 透明圈 （mm) 85.0 27.0 24.5 22.5 42.5 26.0 24.0 22.0 21 .2 24.0 23.0 22.0 10.6 25.0 24.0 20.0 5.3 28.0 27.0 25.0 2.6 26.0 24.0 2 1.0

實施例3 D 如同表5中所說明的，結果指出：SYRA的抗真菌活 性是隨著出現在S YR A中的S RE及鼠李糖脂的比例而定。 於SRE爲0.6 mg/ml時（即大約1 .95 mg/ml的鼠李糖脂在 S YR A中），協同效果被發現拮抗所有測試的生物。 -38- (35) (35)200803726 表5.依據透明圈(mm)之SYRA的抗真菌活性 SRE 輪黴菌屬 (Verticillium) 錘形黴菌 (Fusarium oxysporium) 果蠅紅酵母 (R. pilminae) 灰黴菌屬 (Botrytis) 2.4 mg/ml* 13 10 22 16 1.8 mg/ml* 14 10 19 18 0.6 mg/ml* 22 17 34 30 Rh(單獨） NI NI NI 9 *施用至錠之SYRA中的SRE濃度

實施例4A SRE-鼠李糖脂殺真菌活性是以不同濃度及/或SRE及 鼠李糖脂組分的稀液拮抗BY4 74 1品系而被硏究。 就像這些結果所暗示的，鼠李糖脂能夠組合殺真菌活 性SRE組分，在實質上未犧牲效力的情況下來被使用以減 少所需的施用速率及/或任一種組分所需要的殺真菌有效 劑量。例如，稀釋的配方（如同表6B中所說明的包括75 % 鼠李糖脂及25% SRE及如同表6B中所說明的50%鼠李糖 脂及50% SRE)相對於濃縮配方（表6A)展現增加的殺真菌 活性。 此外，稀釋配方以較低的SRE濃度提供可比的上或增 升的殺真菌活性。例如，於75%，5.3 mg/ml的鼠李糖脂 及25%的SRE稀液，在2.4 mg/ml的SRE(透明圈 26mm) 及5.6 mg/ml的SRE(透明圈 2 9 m m)，可比的上之抗真菌 活性被發現到-以實質可比的上之殺真菌效力在殺真菌組 分上降低50%。亦參照表6C，其中於50%、5.3 mg/ml的 鼠李糖脂及50%的SRE稀液，於2.4 mg/ml的SRE(透明 -39- (36) (36)200803726 圈 25mm)及5.6 mg/ml的SRE(透明圈 26mm)，可比的上 之抗真菌活性被發現。這些結果暗示：在抗真菌及生物介 面活性劑組分的協同配方上，戲劇性地降低所需於預定水 準之殺真菌活性的殺真菌劑組分之殺真菌有效量的能力。 表6A.透明圏 （mm) SRE (mg/ml) Rh 10.3 5.6 2.4 (mg/ml) 85.0 20.5 19.5 18.0 10.6 21.5 20.5 20.0 5.3 22.0 2 1.0 20.0 表6Β·透明圈 （mm) 25% 的 SRE (mg/ml) 75% 的 Rh 10.3 5.6 2.4 (mg/ml) 85.0 2 1.0 15.0 NI 10.6 29.0 28.0 27.0 5.3 28.0 29.0 26.0 表6C.透明圈 （mm) 50% 的 Rh (mg/ml) 50% SRE (mg/ml) 10.3 5.6 2.4 85.0 23.0 22.5 15.0 10.6 29.0 27.0 27.0 5.3 23.0 26.0 25.0 -40- (37) (37)200803726

實施例4B SRE-鼠李糖脂殺真菌活性是以不同濃度及/或sre及 鼠李糖脂組分的稀液拮抗果蠅紅酵母而被硏究。 與以BY47 4 1所獲得的結果相符，稀釋配方於較低的 S R E濃度提供可比的上或增加的殺真菌活性。例如，於 75%、5.3 mg/ml的鼠李糖脂及25%的SRE稀液，於2.4 mg/ml 的 SRE(透明圈 29.5 mm)及 5.6 mg/ml 的 SRE(透明 圏3 0 mm)，可比的上之抗真菌活性被發現到-以實質可比 的上之殺真菌效力在殺真菌組分方面減少大約5 0%。 表7A.透明圈 （mm) 25 %的 Rh (mg/ml) 25% SRE (mg/ml) 10.3 5.6 2.4 85.0 29.0 27.0 27.0 10.6 20.0 30.0 29.0 5.3 20.0 21.0 20.0 表7Β·透明圈（mm) 7 5% 的 Rh (mg/ml) 25% SRE (mg/ml) 10.3 5.6 2.4 85.0 30.0 25.0 25.0 10.6 30.0 30.0 3 1.0 5.3 29.0 30.0 29.5 -41 - (38) (38)200803726 表7C.透明圈（mm) 5 0% 的 Rh (mg/ml) 50% SRE (mg/mn 10.3 5.6 2.4 85.0 34.0 30.0 30.0 10.6 29.0 30.0 3 1.0 5.3 25.0 35.0 25.0

實施例4C 表8A至8C說明SRE-鼠李糖脂組成物的特定配方及 稀液的活性’其中以1 〇〇%的2.4 mg/ml SRE及以1 〇〇%的 2.6 mg/ml Rh 〇 表8Α·透明圈 （mm) 毛黴菌屬 麴菌屬 黑黴菌 {Mu cor) (Aspergillus) (Rhizopus) SRE 12 11.5 11.5 75% SRE > 10.0 11.0 5 0% SRE > 10.0 11.0 25% SRE > 18.0 20.0 表8Β·透明圈 （mm) 白色念珠菌 (Candida) 青黴菌 {P enicillium) 分支孢子菌 (Cladosporium) SRE 21 13 15 75% SRE 2 1 17 13 25% SRE 40 > ΝΑ Rh > > > -42- (39) 200803726 表8C.透明圈（mm) 輪黴菌屬 錘形黴菌 灰黴菌屬 (Verticillium) (Fusarium oxvsporium) (Botrytis) SRE 13 10 16 75% SRE 14 10 18 25% SRE 22 17 30 Rh NI NI 9 實施例5 爲測試pH對S RE-鼠李糖脂組合物的效果’如參照實 施例2A所述的圓盤擴散被使用。表9說明PH的效果。 S R E - R h組成物在有關大約5 -大約6的ρ Η範圍是最爲有效 的。 表9. pH對SRE-鼠李糖脂拮抗果蠅紅酵母的活性之效果 SRE 75% SRE 2 5% SRE 透明圈 (mm) ___ pH 4 22.0 2 1.5 25.0 pH 5 24.0 24.0 40.0 pH 6 22.0 19.0 34.0 pH 7 20.0 18.0 26.0 100% 的 SRE = 2.4 mg/ml ; 100% 的 Rh = 2.6 mg/ 實施例6 爲測試溫度對SRE-鼠李糖脂組合物的’效果’ $CI # 照實施例2Α所述的圓盤擴散被使用。樣品胃# 121 ^ 的溫度下被高壓滅菌歷時經指定的時間° _ 1 ^ ^ -43- (40) (40)200803726 高壓滅菌之前及之後的樣品活性。 表10.溫度對SRE-鼠李糖脂活性拮抗果蠅紅酵母的效果 SRE 30分鐘 45分鐘 透明圈 （mm) SRE-AU 22 20 ΝΑ 25% SRE AU-B NI NI ΝΑ RH-AU NI NI ΝΑ 25% SRE-AU-S 34 32 ΝΑ AU =高溫滅菌的 R =鼠李糖脂 S = 丁香黴素 實施例7 爲了硏究 SYRA 的作用機轉，啤酒酵母菌 (iSacc/zarow少ces cereWWae)神經脂質（sphingolipid)及固醇 生合成突變體係被使用。啤酒酵母菌母株8A-1B、W303、 BY4741及SRE抗性突變品系smr/、」λ·少、/1 e/以、係如同先前描述地被使用（Stock，S. D·，H. Hama，J. A. Radding，D· A. Young，and J· Υ· Takemoto. 2000· Syringomy cin E inhibition of Saccharomyces cerevisiae: requirement for biosynthesis of -44 - (41) 200803726 sphinogolipids with v e r y -1 ο n g - c h a i n fatty acids and mannose- and phosphoinositol-containing head groups. Antimicrob. Agents Chemother. 44:1 174-80)。有關於生長 抑制，複製平板法（replica plate method) (Hama，J·，D. A. Young，J. A. Radding，D. Ma，J. Tang，S. D. Stock，and J. Y. Takemo to. 2 0 0 0. Requirement of sphingolipid alpha- hydroxylation for fungicidal action of syringomy cin E. FEBS Lett. 478:26-8)係被使用。新鮮細胞被平板複製到含 有不同濃度之SYRA的酵母抽出物-蛋白腺-左旋糖（yeast extract-peptone-dextrose，YPD)瓊脂上。在有或沒有 SYRA 添加下的生長係被比較已決定相對敏感度。 如同與野生型比較，在突變體中SRE的生長抑制活性 是少的，顯示：神經脂質及麥角固醇（ergo sterol)在SRE 拮抗酵母菌的作用上扮演角色。在不受到任一種理論或操 作模型的限定下，SYRA可能經由類似於SRE的作用機轉 與真菌細胞膜交互作用。 實施例8 刺激抗真菌效果、SYRA對細胞膜的活性是使用由 Della Serra等人及Sorensen等人所描述的方法來被硏究 (Dalla Serra9 M., G. Fagiuoli, P. Nordera, I. Bernhart, C. Della Volpe, D. Di Giorgio, A. Ballio, and G. Menestrina. 1 9 9 9. The interaction of 1 i p o d e p s i p e p t i d e toxins from Pseudomonas syringae p v. syringae with biological and •45- (42) (42)200803726 model membranes: a comparison of syringotoxin， syringomycin，and two syringopeptins. Mol. Plant Microbe Interact. 1 2:3 9 1 -400; Sorensen，K. N.，K. H. Kim，and J. Y. T akemoto. 1 9 9 6. In vitro antifungal and fungicidal activities and erythrocyte toxicities of cyclic lipodepsinonapeptides produced by Pseudomonas syringae p v. syringae. Antimicr ob. Agents Chemother. 40:2710-3.) 。綿羊紅血球被用於測試S YR A活性。溶解百分比是使用 等式：％溶血 =100(Ai-Af) / (Ai-Aw)來被計算，其中Ai 及Af是在實驗開始及終點的吸光率（A650)，而Aw(A65 0) 是在使用純水的低張溶解後所取得的。 有關於SRE、Rh及以50% SRE與25% SRE的組合物 之結果是在第4圖中被說明並且顯示鼠李糖脂增強溶解。 此結果可被延伸至顯示在鼠李糖脂組分的存在下，增強之 細胞膜活性真菌與酵母菌細胞對抗真菌組分的通透性。被 預期的是：SYRA的最小抑制濃度將如同透過鼠李糖脂增 強SRE抗真菌活性般地被降至低於SRE。 實施例9 前面的實施例僅爲代表性的。比較結果可通過一系列 的組合具體例而被取得。例如，此組成物可包含介於大約 0.01至大約99.99%(依據組成物的重量）的抗真菌組分，不 論是丁香黴素、假單胞黴素或彼等之組合，及介於大約 99.99及大約0.01%(依據組成物的重量）的鼠李糖脂組分。 -46- (43) 200803726 實施例1 〇 如上面所說明的，關於一系列濃度的鼠李糖脂可得自 於Jeneil Biotech, Inc·。此產物可以如需要來被修飾。此 發明之組成物的一方面代表例，若需要，一水性濃縮物（ 例如25重量％)能夠以水或另一種流體組分予以稀釋（若需 要以乳化劑）以提供5%的組分，其可如需要地在與一抗真 菌組分組合之前或之時被稀釋高至大約5…大約20…大約 5 0···大約75···或大約100或更高倍。 實施例11 如同將被那些習於本技藝者所理解的，在一系列的組 成物具體例配方中，任一種前述鼠李糖脂組分可被使用。 例如，不論在引入抗真菌組分及任何其他添加物、成分或 活性組分之前或之後，鼠李糖脂組分可與適當載體組分混 合以提供對應固體、凝膠、液體或噴霧劑，以供使用在此 處所述類型的物質上或與此處所述類型的任何物質使用。 實施例1 2 包含假單胞黴素的本案組成物可如同前述· 9 2 5號專利 案及美國專利第6,63 0,1 47號（其各自以整體被倂入此處以 作爲參考文獻）中所描述地被配製。例如，此組成物可被 配製成（a)如其中實施例7的配方1中所描述之明膠囊劑； (b)如其中實施例7的配方3所描述之噴霧劑；（c)如其中 實施例7的配方4中所描述之錠劑；及（d)如其中實施例7 -47- 200803726 (44) 的配方7所描述之懸浮液。如同將被那些習於本技藝者所 理解的是：這些及其他此組成物/配方（包括在’925及’147 號專利案中的它者）能夠如此處所述般被修飾以包括鼠李 糖脂組分，其供任何最終用途應用的量能夠以直接而不需 過度實驗的方式來被決定，及/或減少或將假單胞黴素含 量降至最低。類似地，此組成物能夠被進一步修飾以倂入 丁香黴素組分，在假單胞黴素組分之外或作爲有關假單胞 黴素的取代物。 實施例1 3 此發明的各種不同組成物能夠被配製以包含假單胞黴 素，以供拮抗一系列植物病原性真菌（包括但不限定於那 些被描述於美國專利第5，981，264號中的生物，其以整體 被倂入此處以作爲參考文獻）的應用。例如，此組成物可 如同將被那些習於本技藝者所理解地使用適當溶劑、載體 及/或此處所描述的鼠李糖脂種類來被配製。如同’ 2 6 4號 專利案中所描述的試驗範圍，本案組成物可與植物或另一 種纖維素底物接觸以抑制其上的真菌生長或預防將來的生 長。如同將被那些習於本技藝者所理解的，此組成物/配 方能夠如同此處所述般被修飾以包括鼠李糖脂組分，其供 任何組合物或最終用途應用的量能夠以直接而不需過度實 驗的方式來被決定，及/或以減少或將假單胞黴素含量降 至最低。類似地，此組成物能夠被進一步修飾以倂入丁香 黴素組分，在假單胞黴素組分之外或作爲有關於假單胞黴 -48- 200803726 ^ (45) 素的取代物。 實施例1 4 類似地，參照前述264號專利案，一系列包含假單胞 黴素組分的組成物可使用鼠李糖脂組分，選擇性地加上惰 性藥學上可接受的載體來被配製。此載體及其他組成組分 可以是此處所述的種類或在 Remington’s Pharmaceutical Sciences的最新版本中所顯示的（其以整體被倂入此處以 作爲參考文獻）。此組成物能夠經由任何在該技藝中已知 的方法來被投藥，如同在 Remington’s Pharmaceutical Sciences中所顯示的。劑量是根據投藥類型而定，依據該 技藝中的已知方法來被計算，並且能夠被投藥給如此處所 述的或者爲習於該技藝者所熟知的人類或動物個體。 實施例1 5 代表其他非限定具體例之本發明的各種不同組成物可 使用一種或多種如先前PCT申請案 PCT/US 0 1 /2 5 724(在 2001年8月17日被提申並於2002年2月28日被公開爲 國際公開案WO 02/ 1 5 69 6)中所述的假單胞黴素組分，並依 據本案方法學來被使用於治療或預防遭受真菌挑戰或者是 條列於實施例1中的疾病狀態之植物。本案組成物及方法 可如同將被那些習於本技藝者所理解般地被使用，參照本 發明或前述公開案（現在美國申請號1 0/343,1 99，其整體 被倂入此處以作爲參考文獻）。特別地，本案組成物及方 -49- 200803726 (46) 法可被應用於治療斐濟球腔菌（M. 及香蕉植物與 大蕉的黑葉斑病（Black Sigatoka disease)。類似地，如同 將被那些習於本技藝者所理解的是：這些及其他此組成物 與方法能夠如同此處所述般被修飾以包括鼠李糖脂組分， 其供任何組成物或最終用途應用的量能夠以直接而不需過 度實驗的方式來被決定，及/或以減少或將假單胞黴素含 量降至最低。類似地，此組成物能夠被進一步修飾以倂入 丁香黴素組分，在假單胞黴素組分之外或作爲有關於假單 胞黴素的取代物。 實施例1 6 參照前面的實施例及下表1 1的結果，此發明的各種 不同組成物可包含一種或多種丁香黴素組分，以抑制及/ 或控制微生物斐濟球腔菌（My 的生長 ，如同能夠被使用於治療香蕉植物及大蕉的黑葉斑病。如 同表11中所顯示的，重複的試驗顯示：不論是PDB +緩衝 液或PDB +緩衝液+鼠李糖脂對拮抗斐濟球腔菌都是無效的 ，如同跟據顯示時間之生長所計算般。當鼠李糖脂與丁香 黴素組分結合，於1 6 8個小時內在培養基中無斐濟球腔菌 生長或72個小時內在PDA(馬鈴薯左旋糖瓊脂平板）。此 發明的代表例，包含大約〇 . 6 0 m g / m 1的丁香黴素及大約 1 .8 mg/ml的鼠李糖脂之組成物有效地控制斐濟球腔菌的 生長。斐濟球腔菌在香蕉/大蕉作物上造成被知曉爲”黑葉 斑病’’之破壞性疾病的原因，且表1 1的結果將對那些習於 -50- 200803726 (47) 本技藝者所理解爲象徵本發明在治療或保護免於此疾病狀 態的能力。參照前面的實施例，特別是實施例9-1 1，各種 不同其他的丁香黴素/鼠李糖脂組成物可以被配製並且如 同將被那些習於本技藝者所理解地使用，這些與其他此組 成物及方法可如此處所述般被修飾以包括鼠李糖脂組分， 其供任何組成物或最終用途應用的量能夠以直接而不需過 度實驗的方式來被決定，及/或以減少或將丁香黴素含量 降至最低。 表11.拮抗斐濟球腔菌的丁香黴素-鼠李糖脂活性

燒瓶# 培養基組分 生物 在燒瓶中的生 長(168小時） 在PDA平板上的 生長(72小時） 1 PDB+緩衝液 斐濟球腔菌 是 是 2 PDB+緩衝液 斐濟球腔菌 是 是 3 PDB+緩衝液+RL 斐濟球腔菌 是 是 4 PDB+緩衝液+RL 斐濟球腔菌 是 是 5 PDB+緩衝液+RL+ 丁香黴素 斐濟球腔菌 Μ y\\\ Μ 6 PDB+緩衝液+RL+ 丁香黴素 斐濟球腔菌 Μ j\ \\ Μ 7 PDB+緩衝液 白色念珠菌 (C. albicans) 是 是 8 PDB +緩衝液+RL 白色念珠囷 是 是 9 ΙΌΒ+緩衝液+RL+ 丁香黴素 白色念珠菌 fiBE j\\\ > \\N 鼠李糖脂濃度(例如大約1.8mg/ml) 丁香黴素濃度(例如大約0.6 mg/ml) RL=鼠李糖脂 PDB=馬鈴薯左旋糖肉汁 緩衝液=乙酸緩衝液 -51 - 200803726 (48) 【圖式簡單說明】 第1 A-B及2圖說明一些非限定、代表性的單鼠李糖 脂與雙鼠李糖脂化合物的結構。 第3圖提供鼠李糖脂組份的兩種具體例，標示R1與 R2分別爲單-以及雙鼠李糖脂結構，其可被應用於與它者 組合，如同在下列數個實施例中所描述般。 第4圖提供丁香黴素E的結構，一種抗真菌組分，被 使用於本發明的特定組成物中。 第5A圖顯示一些假單胞黴素化合物的結構，其中 R 是一個親脂性部分。在假單胞黴素組成物A、A1 ' B、B’ 、C、C’中，R是如下列：假單胞黴素A ，R = 3,4-雙羥 基十四醯基；假單胞黴素A’，R = 3,4-雙羥基十五酸酯基 ;假單胞黴素B，R = 3 -經基十四醯基；假單胞黴素Bf’ R = 3-羥基十二酸酯；假單胞黴素C，R = 3,4-雙羥基十六 醯基；及假單胞黴素C，，R = 3-羥基十六醯基。假單胞黴 素化合物A，及B，是分別在第5B及5C圖中被提供。 -52-

Claims (1)

1. (1) 200803726 十、申請專利範圍 1 · 一種組成物，其包含選自至少一種丁香黴素、至少 一種假單胞黴素或彼等之組合的抗真菌組分及包含鼠李糖 脂的載體組分。 2·如申請專利範圍第1項之組成物，其中該鼠李糖脂 量是足以減少該抗真菌組分之有效濃度至低於大約其之 5 0%。 3 .如申請專利範圍第1項之組成物，其中該鼠李糖脂 選自單鼠李糖脂、雙鼠李糖脂或彼等之組合。 4·如申請專利範圍第3項之組成物，其包含丁香黴素 〇 5 ·如申請專利範圍第3項之組成物，其包含假單胞黴 素。 6 ·如申i靑專利範圍第1項之組成物，其中該載體組分 包含選自水、醇、油、氣體或彼等之組合的流體。 7 ·如申請專利範圍第1項之組成物，其係在支持真菌 生長的底物上。 8 ·如申請專利範圍第7項之組成物，其中該底物爲農 作物。 9·如申請專利範圍第7項之組成物，其中該底物是選 自建築表面或消費產品。 1 〇 · —種用於抑制或預防真菌生長之組成物，該組成 物包含選自丁香黴素、假單胞黴素或彼等之組合的抗真菌 組分’該抗真菌組分具有抗真菌活性及具有另一抗真菌活 -53- (2) 200803726 性的鼠李糖脂介面活性劑組分，該組成物提供大於該等組 分活性之總和的抗真菌活性。 1 1 ·如申請專利範圍第1 〇項之組成物，其中該鼠李糖 脂介面活性劑組分量是足以減少該抗真菌組分之有效量至 低於大約其之50%。 1 2 ·如申請專利範圍第1 0項之組成物，其中該鼠李糖 脂組分是選自單鼠李糖脂、雙鼠李糖脂或彼等之組合。 1 3 ·如申請專利範圍第1 0項之組成物，其中該抗真菌 組分包含丁香黴素。 1 4 ·如申請專利範圍第1 0項之組成物，其中該抗真菌 組分包含假單胞黴素。 1 5 . —種利用鼠李糖脂以改善抗真菌效果之方法，該 方法包含： 提供選自丁香黴素、假單胞黴素或彼等之組合的抗真 菌組分，該組分對於抑制真菌生長具有第一抑制濃度；及 令該抗真菌組分與鼠李糖脂介面活性劑組分接觸，該 鼠李糖脂組分量是至少部分地足以改善該抗真菌組分之效 果，該抗真菌組分係處於低於該第一抑制濃度的第二抑制 濃度。 1 6 .如申請專利範圍第1 5項之方法，其中該鼠李糖脂 組分量係減少該抗真菌組分之抑制濃度達至少約50% ° 17.如申請專利範圍第16項之方法，其中在未實質損 失抗真菌效果之情況下減少該鼠李糖脂組分濃度。 i 8 .如申請專利範圍第1 5項之方法，其中該抗真菌組 -54- (3) (3)200803726 分爲丁香黴素。 19.如申請專利範圍第15項之方法，其中該抗真菌組 分爲假單胞黴素。 2〇·—種系統，其包含包含酵母菌膜及真菌膜之至少 一者之底物及位在該底物上的組成物，該組成物包含選自 丁香黴素、假單胞黴素或彼等之組合的抗真菌組分及包含 鼠李糖脂的載體組分，該鼠李糖脂量是至少部分地足以減 少真菌膜上的抗真菌組分之有效濃度。 2 1 ·如申請專利範圍第20項之系統，其中該鼠李糖脂 量是足以降低該抗真菌組分對哺乳動物之毒性。 22 ·如申請專利範圍第2 1項之系統，其中該鼠李糖脂 量是足以減少該抗真菌組分之有效濃度達大於約50% ^ 23.如申請專利範圍第20項之系統，其中該載體組分 選自單鼠李糖脂、雙鼠李糖脂或彼等之組合。 24·如申請專利範圍第20項之系統，其中該膜是位在 選自建築表面或消費產品之底物上。 2 5 ·如申請專利範圍第2 0項之系統，其中該膜是位在 包含纖維素的底物上。 2 6 · —種抑制真菌生長之方法，該方法包含： 提供一組成物，其包含選自丁香黴素、假單胞黴素或 彼等之組合的抗真菌組分及鼠李糖脂組分；及 令一底物與該組成物接觸。 2 7 ·如申請專利範圍第2 6項之方法，其中該底物包含 纖維素。 -55- 200803726 (4) 2 8 .如申請專利範圍第2 6項之方法，其中該底物包含 植物。 29.如申請專利範圍第28項之方法，其中該接觸是經 由灌溉培養基、生長培養基及底物表面塗層的至少之一者 〇 3 〇 .如申請專利範圍第2 8項之方法，其中該組成物被 施予至植物產物。 3 1.如申請專利範圍第30項之方法，其中該施予爲該 產物的收穫後。 3 2 .如申請專利範圍第2 6項之方法，其中該組成物包 含流體組分，其選自水、醇、油、脂、鱲、氣體或彼等之 組合。 3 3 .如申請專利範圍第2 6項之方法，其中該組成物包 含固體微粒。 -56-