TW200418814A - Cardioprotective delta opioid receptor agonists and methods of using same - Google Patents

Description

200418814 玫、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明關於用於保護心臟的組合物及治療方法，尤其關 於轉介局部缺血預適應之保護心臟效果之非肽類5鴉片受 體激動劑化合物。 【先前技術】 失血和缺氧之組織經歷局部缺血壞疽或梗塞可造成不 可逆器官損害。由於局部缺血損害之緣故，於心肌梗塞後 存活之患者的能活心肌減少。然而，具有先於心臟侵襲之 心絞痛之人，由於流入心肌之減少的氧流，故相對於不具 心絞痛者顯示較少的心肌組織損害。因此，部分局部缺血 具有保護心肌免於局部缺血損害之效果。 局部缺血預適應（p c)為一種廣泛地於許多物種，包含人 類所展現的現象，因為心肌受到先前短暫局部缺血或組織 缺氧期間之主要局部缺血事件並接著為再灌注或再充氧保 護。Murry等人已證實使用短持續時間、短暫局部缺血以 保護免於接續及更多延長局部缺血事件之損害 (C 1 r c u 1 a t i ο η， 1 9 8 6 : 7 4 : 1 1 2 4 - 1 1 3 6 )。試驗結果顯示於主 要之長期事件前以短期間局部缺血處理可使犬之心臟組織 壞疽減少約3 0 %。局部缺血預適應現象已引起治療具局部 缺血心臟病患者於臨床上極大之興趣。 局部缺血預適應需要物理性降低血量供應，此對大部分 患者而言可能是困難及不實際的。經發現運動具有局部缺 血預適應持續約24小時之效果，但許多患者無法全然地達 5 3 12/發明說明·(補件)/93-/03/93 丨 00032 200418814 到獲致局部缺血預適應利益所需之心臟輸出水準。於冠狀 繞道手術前由大主動脈交叉夾鉗所誘導之間歇性局部缺血 已用作局部缺血預適應之臨床應用。發現於外科程序後， 於具有心肌預適應之患者中，心臟輸出明顯地較高。再者， 相較於無預適應之患者，預適應之患者展現改良的術後血 液動力學。然而，許多潛在問題可能與大主動脈交叉失钳 於心肌實行減少血液供應有關，因而藉藥理方式具有使局 部缺血預適應成為可能之治療是合宜的。 經確定若干膜受體涉及預適應，含鴉片受體。三種主要 鴉片受體亞型為V 、/c及（5 。 5鴉片受體興奮劑甚至在非 冬眠動物中模擬天然冬眠，且據報告當輸送至組織之氧氣 最少時可增進組織存活。因此，（5鴉片受體興奮劑已顯示 涉及局部缺血預適應。已使用肽類及非肽類（5鴉片受體拮 抗劑進行許多研究，俾降低局部缺血預適應之效果。 S c h u 1 t z及G r 〇 s s (美國專利第6，1 0 3，7 2 2號）測試數種展現 局部缺血預適應效果之非肽類（5鴉片受體拮抗劑化合物， 含（-)-2-甲基- 4a. α - (3-羥苯基）-1，2, 3, 4, 4a，5, 12, 12a .-八氫喳啉基[2，3 ]異喳啉（T A N 6 7 ( -））； （ ± ) -4-((a R*)- α - (2S*，5R*)-4-烯丙基-2,5-二甲基-1-六氫咄 畊基）-3 -羥¥基）-N , N -二乙基苯醯胺（B W 3 7 3 U 8 6 );及 ( + )_4-[(d R)-a - ((2S,5R)-4-稀丙基·~2,5-二甲基-1-六 氫咄畊基）-3 -曱氧基苄基]-Ν，Ν -二乙基苯醯胺（S N C 8 0 )。然 而，此等非肽類化合物不是沒有問題的，尤其因為此等化 合物被視為止痛劑，且已知若干此等化合物可通過血腦障 3 12/發明說明書(補件)/93-/03/93 100032 6 200418814 壁而造成服藥患者發病。 因此，藉藥理方式使局部缺血預適應成為可能之治療是 合宜的，此避免有關減少供應血液於心肌的問題，以及由 施用若干（5鴉月受體拮抗劑化合物造成之發病可能性。 【發明内容】

本發明於一態樣係關於一種對付局部缺血損害及/或實 行局部缺血預適應之治療組成物，該組成物包含有效量具 下式之二芳基曱基六氫吼畊化合物：

200418814 部分之芳烧基或C 5 _ C 1。芳基； 式S0R8之亞砜，其中R8與以上相同； 式S〇2Rs之砜，其中R8與以上相同； 月惫； C 1 - C 6 S蓝基； 式N H C 0 2 R 8之烷氧基羰基胺基（胺曱醯基），其中R8與以 上相同； 羧酸或酯、醯胺或其鹽類； 式CH2NR4I()之胺基曱基，其中R9及R"可相同或相異， 且可為氫、Ci-Cg炫基、C2- Cg稀基、C2- Cg快基、C2-Cg 羥烷基、C 2 - C 6曱氧基烷基、C 3 - C 6環烷基或C 5 - C i。芳基， 或R9與R1 fl可一起形成5或6個原子之環，環原子係選 自由N及C組成之群； 式C 0 N R 9 R 111之羧醯胺，其中R 9及R 1 °與以上相同，或其 C 2 — C 月太類共幸厄物；且 式S 0 ‘2 N R 9 R M)之磺胺，其中R 9及R 1 ϋ與以上相同；且 X係選自由氫、羥基、鹵素及烷氧基組成之群， 或其醫藥上可接受的酯類或鹽類。 本發明之另一態樣係關於一種降低患者局部缺血損害 之方法，其包含：施予有效量具下式之二芳基曱基六氫咄 喷化合物之治療組成物：

3 12/發叫説 Φ」書(補件)/93-/03/93 100032 (2) 200418814 或其醫藥上可接受的鹽類或酯類。 本發明之又一態樣係關於一種降低患者局部缺血損害 及/或實行局部缺血預適應之方法，該方法包含：施予該患 者有效量具下式之（5鴉片受體：

或其醫藥上可接受的鹽類或酯類。 本發明之二芳基曱基六氫吼畊化合物可於若干不同有 效時間架構下施藥，包括：同時地於局部缺血事件開始時； 於局部缺血開始前作為預防療法，俾防止疾病於局部缺血 心臟疾病之症狀階段於個體中進行；於有血液凝塊或其他 類型心臟局部缺血之患者之外科手術前；或於局部缺血事 件開始後。 藉使用受影響區.之非侵入性局部成像法，例如電磁共振 成像（M R I )，以決定損害面積之大小，可評估本發明化合物 之功效。 本發明之一態樣係關於含有下式化合物之保存分離器 官存活能力之溶液：

3 12/發明説明:(浦件)/93-/03/93 丨 00032 9 (2) 200418814 或其醫藥上可接受的鹽類或酯類，其係以有效保護器官免 於局部缺血損害之濃度進行。分離器官係選自由心臟、肝 臟、腎臟、角膜及/或肺臟。 治療組成物可藉任一種適合的施藥模式，例如選自由口 服、直腸、局部、舌下腺、黏膜、鼻部、目艮部、皮下、肌 肉内、靜脈内、經皮、脊髓、腦脊髓膜内、關節内、動脈 内、蛛網膜下、支氣管、淋巴腺及子宮内施藥法組成之群 之施藥模式。 本發明之再一態樣係關於一種保護哺乳動物中免於延 長局部缺血發作及再灌注損害之方法，該方法包含：施予 該患者有效量具下式之5鴉片受體拮抗劑：

或其醫藥上可接受的酯類及鹽類；以及具有抗局部缺血效 應之第二化合物，含精胺酸鹽酸（其係用以對抗局部缺血事 件後之心臟功能衰退）以及其他適用於類似目的之氧化氮 潛在來源。 本發明之許多其他態樣、特徵及具體例由隨後之說明及 如附申請專利範圍當可明白。 【實施方式】 10 312/發明說明書(補件)/93-/03/93100032 200418814 於本發明之一廣泛態樣中，如下更詳細地說明之二芳基 曱基六氫咄畊化合物係施藥於患者以轉介局部缺血預適 應，俾提供減少的組織壞疽、改良的後局部缺血能收縮功 能及減少後局部缺血節律障礙。根據本發明之治療可有利 地包含單療法治療，其中本發明之化合物係以治療組成物 中之單一治療劑或共同療法治療而施用，其中根據本發明 之化合物係同時地，例如同時或接續地與另一心臟治療組 成物以轉介矯正或保護心臟反應而一起施用。其他治療組 成物包含，但不限於硝酸鹽、/3 -腎上腺素阻斷劑、鈣離子 通道激動劑、A C E抑制劑、非肽類血管收縮素I I激動劑、 I I b / I I I a激動劑及阿斯匹靈。. 本發明中所用之「烷基」一詞意欲廣泛地涵蓋：（i )具 直鏈及分支鏈特性之烷基基團；（i i )未經取代及經取代的 烷基基團，其中未經取代的烷基基團之取代基可代表任一 種空間上可接受的取代基，其可與此等烷基基團相容且不 會妨礙二芳基曱基六氫吼畊化合物用於其所欲應用之功 效，經取代的烷基基團之取代基實施例包含鹵素（例如氟、 氣、溴及碘）、胺基、醯胺基、C ! - C 4烷基、C ! _ C 4烷氧基、 硝基、羥基等；（1 i i )飽和的烷基基團以及不飽和的烷基基 圑，後者包含基團為例如烯基取代的烷基基團（例如烯丙 基、曱基烯丙基、丙基烯丙基、丁烯基曱基等）、炔基取代 的烷基基團及任一種含有空間上可接受的不飽和度之其他 烷基基團C可與此等烷基基團相容且不會妨礙二芳基曱基 六氫σ比畊化合物用於其所欲應用之功效）；及（i v )含有鏈節 11 3 12/發明說明窗⑽件)/93-/03/93 100032 200418814 或架橋部分（例如雜原子，例如氮、氧、硫等）之烷基基團。 本發明中所用之「芳基」一詞意欲廣泛地代表碳環（例 如苯基、萘基）及雜環芳族基團（例如吼啶基、噻嗯基、呋 喃基等）且涵蓋未經取代及經取代的芳基基團，其中未經取 代的芳基基團之取代基可包含任一種含有空間上可接受的 不儉和度之其他炫基基團（可與此等院基基團相容且不會 妨礙二芳基曱基六氫吼畊化合物用於其所欲應用之功 效）。經取代的芳基基團之取代基實施例包含鹵素（例如 氟、氣、溴及碘）、胺基、醯胺基、C i - C 4烷基、C ! - C 4烷氧 基、硝基、三氟曱基、基、含C 1 - C 4烧基部分之輕纟完基 等。 式（1 )、（ 2 )及（3 )化合物之醫藥上可接受的酯類實施例 包含於其中Χ = 0Η之式（1)化合物以及式（2)及（3)中之羥基 之羧酸酯，其中酯基團之羧酸部分的非羰基部分係選自由 直鏈或分支鏈烷基（例如正丁基、第三丁基、正丁基）、烷 氧基烷基（例如曱氧基曱基）、芳烷基（例如苄基）、芳氧基 烧基（例如苯氧基甲基）及芳基（例如苯基）、坑基硬基、芳 基砜基或芳烷基砜基（例如曱烷砜基）、胺基酸酯（例如異纈 草胺醯基或L -異白醯胺基）、二羧酸酯（例如半琥珀酸 酯）、碳酸酯（例如乙氧基羰基）、胺基甲酸酯（例如二曱基 胺基羰基、（2 -胺基乙基）胺基羰基）及無機酯（例如單磷酸 酯、二磷酸酯或三磷酸酯）組成之群。 式（1 )、（ 2 )及C 3 )化合物之醫藥上可接受的鹽類實施例 包含衍生自適當驗之鹽類，例如驗金屬（例如鈉、钾）、鹼 12 3 12/發明說明密(補件)/93-/03/93丨00032 200418814 土金屬（例如妈、鎖）、敍及N R ’ <ι (其中R ’為C I - C 4 醫藥上可接受的胺基基團之鹽類包含以下之鹽類： 酸（例如醋酸、乳S曼、酒石酸、蘋果酸、乳二酸、反 酸及玻拍酸）、有機石黃酸（例如曱烧石黃酸、乙院石黃酸 石黃酸、苯績酸及對-曱苯續酸）及無機酸（例如氫氯 酸、硫酸、磷酸及磺胺酸）。具有羥基基團之化合物 上可接受的鹽類係由該化合物之陰離子合併適合的 子，例如N a _、Ν Η Γ或N R ’ Γ，其中R ’ 例如為C i - C 團而組成。 本發明亦涵蓋同時用於獸醫及或人類醫療用途之 組成物，其包含作為活性劑之一或多種本發明之二 基六氫σ比哨1化合物。 於此等醫藥組成物中，活性劑較佳係與一或多種 上可接受的載體及視需要選用任一種其他治療成分 用。載體必須是醫藥上可接受的，就某種意義而言 與配方之其他成分相容且未過度地造成採用的接受 害。所提供之二芳基曱基六氫吼畊化合物係足以獲 藥理效果之有效含量及適當地獲致所需的每日劑量 量。 S己方包含適用於非經腸胃以及經腸胃施藥者，且 施藥形式包含口服、直腸、局部、舌下腺、黏膜、 眼部、皮下、肌肉内、靜脈内、經皮、脊骨遺、腦脊银 關節内、動脈内、蛛網膜下、支氣管、淋巴腺及子 藥法。 3 12/發明說明書(補件)/93-/03/93丨00032 完基）。 有機羧 丁烯二 、羥乙 、氫溴 之醫藥 陽離 坑基基 醫藥 芳基曱 其醫藥 一起使 必須可 者毒 致所欲 之用 特殊的 鼻部、 膜内、 宮内施 13 200418814 當二芳基曱基六氫呲畊化合物用於含液態溶液之配方 中時，s己方可有利地非經腸胃施藥。當二芳基曱基六氫吼 畊化合物以液態懸浮液使用或在生物可相容載體配方中為 粉末時，S己方口有利地口服、經直腸或經支氣管施藥。 當二芳基曱基六氫°比畊化合物直接以粉狀固形物使用 時，其可有利地口月艮或舌下腺施藥。另外，可透過載體氣 體中之粉末霧化經支氣管施藥，俾形成粉末之氣態分散 劑，其係由患者自含有適合喷霧裝置之呼吸循環吸入。 於某些應用中，使用「載體化」形式之二芳基曱基六氫 °比畊化合物是有利的，例如藉包膠活性劑於微脂體或其他 包膠媒介中，或藉固定活性化合物，例如藉共價結合、鉗 合或相關配位作用於適合的生物分子，例如選自蛋白質、 脂蛋白、糠蛋白及多醣上。 含有本發明二芳基曱基六氫吡畊化合物之配方可權宜 地以單.位劑量形式存在，且可藉藥學技藝中熟知之任一方 法製得。此等方法通常包含步驟為使二芳基甲基六氫吼畊 化合物與構成一或多種輔助成分之載體結合。一般而言， 配方係藉均勾地及密切地使二芳基甲基六氫咄畊化合物與 液態載體、細分散的固態載體或兩者結合而製得，且必要 時接著使產物成形為所欲配方之劑量形式。 適用於口服施藥之本發明配方可以分開單元存在，例如 膠囊、扁囊藥、藥片或錠劑，每一者含有預定量為粉末或 顆粒之二芳基甲基六氫咄喷化合物；或於水性溶液或非水 性液體中之懸浮液，例如糖漿、萬能藥、乳液或藥水。 14 3 12/發明說明審(補件)/93-/03/93100032 200418814 可藉壓製或模塑（視需要含一或多種輔助成分）製造藥 片。經壓製的藥片可藉著於適合的機器中壓縮而製得，其 中二芳基曱基六氫吼σ井化合物係為自由流動形式，例如粉 末或顆粒，視情況與黏合劑、碎裂劑、潤滑劑、惰性稀釋 劑、表面活性劑或排出劑混合。由粉狀二芳基曱基六氫咄 畊化合物與適合載體組成之模塑藥片可藉著於適合的機器 中模塑而製得。 可藉添加本發明化合物於濃縮的糖（例如蔗糖）水溶液 中而製得糖漿，其中亦可添加任何輔助成分。此等輔助成 分可包含香料、適合的防腐劑、阻止糖結晶之藥劑及提高 任一種其他成分溶解度之藥劑，例如多經基醇如甘油或山 梨糖醇。 適用於非經腸胃施藥之配方合宜地包含本發明化合物 之無菌水性製劑，其較佳係與接受者血液等滲透壓，例如 生理食鹽水。此等配方可包含懸浮劑及增稠劑及微脂體或 其他微顆粒系統，經設計使化合物對準血液成分或一或多 個器官。s己方可以單位劑量或多劑量形式存在。 鼻噴霧配方包含本發明化合物與有防腐劑和等滲透壓 劑之經純化的水溶液。較佳調整此等配方之ρ Η及等滲透壓 狀態以與鼻黏膜相容。 供直腸施藥用之配方可為具適合載體，例如可可油、經 氫化的油脂或經氫化的脂肪緩酸之栓劑。 眼部配方係藉與鼻噴霧類似的方法製得，除pH及等滲 透壓因子較佳調整至與眼相符外。 15 12/發叫説明办(抓件)/93-/03/93丨00032 200418814 局部配方含有溶解或懸浮於一或多種媒介，例如碟物 油、石油、多羥基醇或其他用於局部醫藥組成物之鹼中 至少一種本發明之化合物。 經皮施藥配方可藉合併本發明化合物於觸變性或凝膠 態載體，例如纖維素介質，例如曱基纖維素或羥基纖維 中，其中所生成的配方接著包裝於適合與穿戴者皮膚接 之經皮施藥裝置中。 除了上述成分外，本發明配方尚可含有一或多種輔助 分，其係選自稀釋劑、緩衝劑、調味劑、黏合劑、碎裂劑 表面活性劑、增稠劑、潤滑劑、防腐劑（含抗氧化劑）及 似物。 於某些情形下，為了延長本發明二芳基曱基六氫吼畊 合物之效果，減緩二芳基甲基六氫吼畊化合物自皮下或 肉内注射之吸收是合宜的。此可藉使用具有難溶於水之 晶或非結晶材料的液態懸浮液而達成。二芳基曱基六氫 畊化合物之吸收速率則取決於其溶解速率，此亦可取決 晶體尺寸及結晶形式。另外，藉溶解或懸浮藥物於油脂 形劑中可完成非經腸胃施藥的二芳基甲基六氫呲畊化合 之延遲吸收。 藉形成至少一種本發明化合物之微膠囊材料於生物可 降解聚合物，例如聚丙交酯-聚乙交酯中可製得可注射之 藏形式。視活性成分對聚合物之比例及所用之特殊聚合 的天性而定，可控制活性成分之釋放速率。其他生物可 解聚合物之實施例包含聚（原酯）及聚（酸酐）。藉包陷活 3 12/發明說明 _(補件)/93-/03/93 100032 之 素 觸 成 、 類 化 肌 結 口比 於 賦 物 貯 物 降 性 16 200418814 成分於可與體組織相容的微脂體或微乳液中，亦可製得貯 藏的可注射配方。可注射材料亦可藉例如通過攔菌濾器而 消毒。 取決於治療之特殊狀態，可採任一種適合的具療效及安 全劑量施藥予動物患者，此可容易地由熟悉本技藝之人士 測定，而不需過度進行試驗。 一般而言，雖然本發明化合物用於治療用途之有效劑量 可廣泛地於本發明概括實施中改變，根據相關之特殊狀 態，此可容易地由熟悉本技藝之人士測定，然而對每一此 中所述之有關組成物及於治療每一此中所述狀態達成具療 效利益而言，本發明化合物之適合的具療效劑量通常將於 每曰每公斤接受者體重為1 〇微克（e g )至1 0 0毫克（m g )範 圍内，較佳於每曰每公斤體重為5 0微克至7 5毫克範圍内， 最佳於每日每公斤體重為1 0 0微克至5 0毫克範圍内。所需 的劑量較佳以二、三、四、五、六或更多次劑量（s u b - d 〇 s e ) 於每日適當間隔施藥方式提供，尤其接近手術時。此外， 單劑量之時點較佳為在局部缺血發作開始後至多4小時。 所需劑量可重複數次，以便使心肌更能抗任一種接續較長 的局部缺血發作。 以下實施例係為可有利地用以合成本發明化合物之合 成程序的例證。 (實施例1 ) 4 - ( C 2 R , 5 S ) - 4 - [ C R ) - ( 4 -二乙基胺曱醯基苯基）（3 -羥苯基） 甲基]-2，5 -二曱基-1 -六氫咄畊基曱基}苯曱酸 17 3丨2/發明說明書(補件)/93-/03/93丨00032 200418814

於室溫下攪拌3 -溴酚（4 0 0克，2 . 3 1莫耳）、第三丁基氣 二曱基矽烷（391克，2. 54莫耳）及咪唑（346克，5. 08莫耳） 於5 0 0 0毫升二氯曱烷中之溶液過夜。將反應溶液倒入2 0 0 0 毫升水中，並且分層。於通過矽膠墊（4 0 0克，矽膠6 0， 2 3 0 - 4 0 0網目）前，以1 N水性氫氧化鈉溶液（3 X 1 5 0 0毫升） 及水（2 X 1 5 0 0毫升）清洗有機層。以二氯曱烷（2 X 5 0 0毫升） 清洗矽膠，合併濾液，並且於減壓下移除溶液，以得到6 6 9 克（9 8 . 4 % )為透明淺黃色液體之3 -溴苯氧基-第三丁基二 曱基矽烷。1 Η N M R ( C D C 1 3，3 Ο Ο Μ Η z ) : (5 7.1 (in, 2H)； 7 . Ο ( b r s，1 H ) ； 6 . 7 5 (丨ii，1 H) ； 1.0 ( s, 9 H ) ; 0.2 ( s, 6 H ) ° 藉緩慢添加3 -溴苯氧基-第三丁基二曱基矽烷（4 5 . 9 7 克，1 6 0毫莫耳）及1，2 -二溴乙烷（6 · 0 1克，3 2毫莫耳）之 混合物（於1 5 0毫升不含抑制劑之無水四氫呋喃中）至鎂碎 片C 4 . 2 8克，1 7 6毫莫耳）於4 0 0毫升不含抑制劑之無水四 氫呋喃之溶液中（於迴流下），而形成溴化3 -第三丁基二曱 基矽烷基氧基笨基鎂。於迴流下攪拌1小時後，使透明淺 才宗色混合物冷卻至室溫。 將4 -羧基苯曱醛（1 0 0 . 3克，0 . 6 7莫耳）溶解/懸浮於曱 苯（1 2 0 0毫升）中，添加N，N -二曱基曱醯胺（0 . 1 5毫升）， 並且於逐滴添加亞硫醯氣（5 3 . 5毫升，8 7 . 2克，0 . 7 3莫耳） 18 3 12/發明說明谱(補件)/93-/03/93 100032 200418814 期間攪拌懸浮液。使反應混合物於氮氣下加熱至迴流且攪 拌2小時，於此期間，大部分但非所有醛基-酸通過溶液。 添加額外量之亞硫醯氣（2 0毫升，3 2 . 6克，0 . 2 7莫耳）且 持續迴流過夜。使透明反應混合物蒸發，並且將殘餘物溶 解於無水四氫呋喃（1 5 0 0毫升）中。將溶液冷卻於冰/水浴 中，並且將二乙基胺（1 7 3毫升，1 2 2克，1 · 6 7莫耳（2 · 5 當量））逐滴地添加於搜拌溶液中。移走冰浴且持續彳覺拌 2 . 5小時。過濾反應混合物，以便移除白色結晶二乙基胺 鹽酸副產物。以醋酸乙酯（2 X 6 0 0毫升）清洗晶體，並且撇 開清洗液。使四氫呋喃濾液蒸發，並且將殘餘物溶解於醋 酸乙酯清洗液中。接續地以1 Μ氫氣酸（2 X 6 0 0毫升）、水 (2 X 3 0 0毫升）、稀釋的碳酸鈉溶液（飽和：Η 2 0 / 1 : 1，2 X 6 0 0毫升）、水（2 X 3 0 0毫升）及飽和氯化納溶液（3 0 0毫升） 清洗溶液。分離有機層、通過無水硫酸納乾燥及蒸發，以 便生成為淺棕色油之4 -曱醯基-Ν , Ν -二乙基苯醯胺，其不 需進一步純化而使用（產量：1 1 5 · 7克，8 4 % )。 於具有冷凝器及D e a η - S t a r k捕集器之3升圓底燒瓶 中，合併4-曱醯基- N，N -二乙基苯醯胺（20. 53克，100毫 莫耳）、苯并三唑（1 1 . 9 1克，1 0 0毫莫耳）及（2 R，5 S ) - 1 -烯 丙基-2, 5 -二曱基六氫吼畊基（15. 43克，100毫莫耳， Chirotech Technology, Ltd·， Cambridge，英國）與 1000 毫升曱苯。於氮氣下將反應加熱至迴流，直到未於補集器 中觀察到額外水為止（約3小時）。將反應冷卻至室溫且於 真空下濃縮，至留下體積為約3 0 0毫升。於氮氣下添加無 19 3丨2/發明說明書(補件)/93-/03/93 100032 200418814 水四氫呋喃（5 0 0毫升）於苯并三唑加合物中，並且攪 提供完全溶液。於室溫下經由雙端針將此溶液添加於 3 -第三丁基二曱基石夕烧基氧基苯基鎮（如上）之溶液。 拌1 . 5小時，藉添加飽和氣化銨溶液（5 0毫升）而驟冷 拌1 5分鐘。添加無水硫酸鎭（5 0克）、攪拌1 . 5小時 濾反應物。於減壓下移除溶劑，並且將殘餘物溶解於 乙酯（1000毫升）中。以1Μ氫氧化鈉（5x400毫升）、 X 4 0 0毫升）及飽和水性氯化納溶液（4 0 0毫升）清洗醋 酯溶液。使有機層通過無水硫酸鈉乾燥，且移除溶劑 生成為深色油脂。將油脂溶解於5 0 0毫升四氫呋喃及 毫升3 Μ氫氣酸中，且於室溫下攪拌1 . 5小時。以水 毫升）稀釋反應物，且於真空下濃縮至約一半原始體積 5 Μ氫氧化鈉將水性層調整至ρ Η 8 - 9，且以醋酸乙酯 毫升）萃取。使層分離，且以更多醋酸乙S旨（2 5 0毫升） 水性部分。以飽和水性氣化鈉溶液清洗合併的有機萃 物、通過無水硫酸鈉乾燥，並且於減壓下移除溶劑以 棕色油脂。7将此殘餘物溶解於醋酸乙酿（2 5毫升）中、 實化合物之晶體播種，且使其結晶過夜（M i c h a e 1 J . B i and Robert W. McNutt, Seed Crystals Obtained Froi] 2 - p r o p a η o 1 W i t h A d d i t i ο η o f W a t e r (伴隨添加水虐 2 —丙醇製得之籽晶）），B i 〇〇 r g . Med. C h e ηι. Lett. ( 1 9 5，1 3 1 1 - 1 4 )。謹慎地以冷醋酸乙醋過濾·及清洗晶體。 溫下，於5毫米Hg下乾燥而生成為白色晶體之 4 - [ ( R ) - U 2 S , 5 R ) - 4 -烯丙基-2，5 _二曱基-卜六氫咄畊 312/發明說明_:(補件)/93-/03/93 〗00032 半至 溴化 於攪 且攪 及過 醋酸 水（4 酸乙 以便 300 (300 。以 (250 萃取 取 得到 以真 shop II Hot 3熱 95)， 於室 基甲 20 200418814 基）（3 -羥苯基）甲基]N，N -二乙基苯醯胺（1 4 . 1 5克， 3 2.5%，自4 -曱醯基-N，N -二乙基苯醯胺）。產物於Η P L C (Ζ 〇 r b a X R X C 8，4、6 毫米 X 2 5 公分，等強度 4 0 % 0 . 0 1 Μ Ν Η』A c於M e 0 Η中，3分鐘；線性梯度至1 0 0 % M e 0 Η，4 5分 鐘；等強度M e 0 Η，5分鐘；1 . 0毫升/分鐘；入视測=2 1 0毫 微米，R t = 3 2 . 2 1分鐘）上顯示單1%。針對C 2 7 Η 3 7 N 3 0 2之計算 值·· ％ C，7 4.4 5； Η, 8.56； Ν，9.65。實驗值：％ C，7 4.4 8； Η，8.60; Ν, 9.62° 1 Η N M R(C D C13，3 0 0 MHz): ο 7.42 ( d, J二8.1 Hz, 2H) ； 7.28 (d，J = 8.4Hz, 2H) ； 7. 08 ( t, J二7.8 Hz, 1 H ) ; 6. 6 4 - 6. 5 7 ( m, 3H) ； 5. 9 4 - 5. 8 3 ( ni, 1 H) ； 5.22 (d, J = 8. 7 Hz, 1H) ； 5.18 (s, 1H) ； 5.14 (br s, 1H); 3.60 ~ 3.47 (m, 2 H) ; 3.42 (d d，J-5. 2, 13.7 Hz, 1 H ); 3.37-3.20 (br m, 2H) ； 2.91 (dd， J二8.1， 13.5 Hz, 1H)； 2.85 (d d, J 二 2. 6， 11.4 Hz, 1H) ； 2.7 0 - 2.4 7 ( m， 3H)； 2. 17 ( t， J二 1 0· 7 Hz ，1H); 1 .98 | (t，J: :11.1 Hz, 1I-I)； 1 . 23 ( 丨】1 , 3 Η ) 1 1 . 14 (d，J: 6, 1 Hz, 3H, 與ill重疊： ，3H); 1 . 02 ( d, J = 6 |.2 1 z, 3H) ° 使 4- -[( ；R)- ((： 2S ，5 R ) - 4 -稀 丙 基-2 ，5 -二 曱基- 1 -六 氫"比 畊 基 曱 基 )(3- .羥 苯 基 )甲基] N, N-二 乙基苯 酿胺（ 10. 89 克 25 毫 莫耳 )與 硫代水楊酸（ 4.6 3 克，3 0毫莫 耳） 於無水 四 氫 呋 0南 (50 毫 升 )中 之溶液 伴 隨著 藉溶解雙（2 -亞： ¥基丙 酮 )鈀（ 0 . 7 18 克 1. 25毫莫 耳 )與1 ，4 -雙 (二苯 基膦 基）丁 烷 (0.533 克， 1 . 2 [ 5毫 莫耳）於四氫呋喃（1 0毫升 )中 之溶液 於 室 ：\Ώ /ML 於 氤氣 下 攪 拌 1 , 5小 時 ° (J. ,P. Genet, S, 3 12/發明說明書⑽件)/93-/03/93 100032 21 200418814 L e m a i r e- A u d 〇 i r e, M. S a v i g n a c, Tetrahedron Letters, ϋ, 1 2 6 7 - 1 2 7 0 ( 1 9 9 5 ))。於減壓下濃縮反應混合物，並且 將殘餘物分開於醋酸乙酯（1 5 0毫升）與水性碳酸鈉溶液 (2 5 0毫升）間。以5 %碳酸鈉溶液（2 X 1 5 0毫升）萃取之。以 戊烷（5 0 0毫升）稀釋有機層，並且以3 Μ氫氣酸（6 X 3 0毫 升）萃取有機層。以飽和水性碳酸鈉溶液將水溶液調整至 ρ 11 9 - 1 0，且以二氣曱烷（3 X 1 0 0毫升）萃取。使合併的有 機萃取物通過無水硫酸鈉乾燥，並且於減壓下移除溶劑以 生成為易碎淡黃色泡沫（1 0 . 2 4克）之4 - [ ( R ) - ( ( 2 S，5 S )-2, 5-二甲基-1-六氫咄畊基曱基）（3 -羥苯基）甲基]Ν，Ν -二 乙基苯醯胺。產物於Η P L C ( Ζ〇r b a X C - 8，等強度4 0 % ◦ · 0 1 Μ N Η 4 0 A c於M e 0 H中，3分鐘；線性梯度至1 0 0 % M e〇Η，4 5 分鐘；等強度M e〇Η，5分鐘；1 . 0毫升/分鐘；；I视测二2 1 0 毫微米，R t = 1 9 . 2 4分鐘）上顯示單峰。針對C 2 4 Η 3 3 Ν 3 0 2 0 . 1 E t 〇 A c 0 · 4 C Η 2 C 1 2 之計算值：％ C，6 7.9 6; Η, 7 . 96； Ν, 9.59。 實 驗 值： %C, 67.90 ;H， 8 .03 ； N, 9.54° 1 H NMR(CDC13, 3 0 0 MHz ):o 7 .42 (d， J-8. 1 Hz, 2H) ； 7 .26 (d， J = 8 . 3 Hz 7 2 Η ) ；7. 1 1 (t， J = 7. ,8 Hz, 1 H) ；6.72 (d, J = 8. 1 Hz, 1 Η ) ;6 . 65 ( s 1 II ) ；6. 59 (d， J = 7. 6 Hz, 1 H )； 5. 1 6 ( s , 1 11 ) ；4 . 9 3 ( V b r s , 2H ) ; 3.51 (b r in, 2 H ) ；3. 27 ( b r m , 211 ) ；3. 02-2 :. 97 (m， 1H) ; 2.92 (d， J二10. 5 Hz, 1 H)； 2.66 (b Γ d, J = 8 · 5 H z , 2H)； 2.60- 2.45 (m，1 H); 1.84 (dd， J 二 11.3, 8 . 3 H z , 1H) ；1 . 27 -1.1 5 (in ，3 H ); 1.10 (d , J = 6 . 1 Hz 3H, 與 111 重 疊， 3H) ； 1.02 (d， J 二 6. 1 Hz, 3H ) 〇 3 12/發明説明窗(補件)/93-/03/93 100032 22 200418814 4 - U 2 R，5 S ) - 4 - [ ( R ) - ( 4 -二乙基胺甲醯基苯基）（3 -羥苯基） 曱基]-2，5 -二曱基-1 -六氫咄畊基曱基丨苯曱酸 方法A :還原性烷基化作用 將冰醋酸（0 . 6 3 5毫升，1 1 · 1毫莫耳）添加於4 - [ ( R)-( 2 S ， 5 R ) - 2 ， 5 - 二曱基 - 1 - 六氫吼 畊基 曱基] ( 3 - 羥苯基 ） 曱 基]N，N -二乙基苯醯胺（1 . 9 8克，5毫莫耳）及4 -羧基苯甲 醛（1 . 5 0克，1 0毫莫耳）於無水四氫呋喃（3 5毫升）之溶液 中。伴隨迅速地攪拌，以5 0 - 1 0 0毫克份量添加三乙SI氧基 硼氰化物（2 . 1 2克，1 0毫莫耳），使得每次添加後之冒泡消 退。藉Η P L C監測反應物為缺乏起始材料。於在室溫下攪拌 1 6小時後，添加更多4 -羧基苯曱醛（0 . 7 5克，5毫莫耳）、 醋酸（0 , 3 1 8毫升，5毫莫耳）及三乙醯氧基硼氰化物（1 . 0 6 克，5毫莫耳）。於攪拌另外4小時後，於減壓下濃縮反應 混合物，並且將殘餘物分開於醋酸乙酯（5 0毫升）與3 Μ氫 氣酸（1 0毫升）間。分層且以再度3 Μ氫氣酸（5 X 1 0毫升） 萃取有機層。以飽和水性碳酸鈉溶液將水溶液調整至pH 4.5-5，且以二氣曱烷（3 X 5 0毫升）萃取。使合併的有機萃 取物通過無水硫酸鈉乾燥，並且於減壓下移除溶劑以生成 為易碎白色泡沫（2.34克）之4-{(21^，53)-4-[(1〇-(4-二乙 基胺曱醯基笨基）（3 -羥苯基）曱基]-2 , 5 -二曱基-1 -六氫吼 畊基曱基}苯曱酸。產物於Η P L C ( Z〇1- b a X R X - C 8，4 · 6毫米 x 2 5公分，等強度4 0 % 0 . 0 1 Μ N L 0 A c於M e 0 Η中，3分鐘； 線性梯度至1 0 0 % M e 0 Η，4 5分鐘；等強度M e 0 Ι·1，5分鐘； 1 . 0毫升/分鐘；λ說测=2 1 0毫微米，R t = 1 3 , 7 5分鐘）上顯 23 3 1W發明說明密(補件)/93-/03/93丨00032 200418814 示單峰 〇 將4 - u 2 R , 5 S ) - 4 - [ ( R ) - ( 4 -二乙基胺曱醯基苯基）（3 -羥 苯基）曱基]-2 , 5 -二曱基-1 -六氫吼畊基甲基}苯曱酸（2 · 0 9 克，3 . 5毫莫耳）溶解於乙醇（6毫升）中，並且添加0 . 9 8 6 N 氫氣酸（3 . 6 0毫升）。以蒸德水（3 0毫升）稀釋此溶液、過 濾、急速冷凍及凍乾，俾提供白色固形物（2 . 1 7克）。針對 C , 2I I ；i 1. N 0 1.6 H C 1 1 . 6 Η 2 0 之計算值：％ C，6 2，3 1 ; Η，7 . 1 6 ; N，6.81； Cl, 9 . 2 0 ° 實驗值：％ C，6 2.3 2； H, 7 . 19 ; N , 6.74；

Cl, 9.28。Mi NMR(D2〇 + 50% v/v 卜INaOD 於 D2〇 中，300 MHz): 5 7.57 (d，J = 8. 1 Hz, 2H) ； 7.17 (d, J = 8. 0 Hz, 2H) ； 7.11 (d，J = 8.1 Hz, 2H) ； 6.99 ( d, J = 8. 1 Hz, 2H)； 6.81 (t, J 二 7. 8 Hz, 1H) ； 6.30 (s， 1H) ; 6.29 (部分重 曼 d, J = 7.5，1 H) ； 6.13 (d, J = 7.5Hz, 1 H ) ； 4.89 ( s , 1 H )； 3.78 ( d , J = 1 2 · 7 H z，1 H ) ； 3.22 (q, J = 7 · 2 Η z，2H) ； 3.05 (d，J = 12.9 Hz, 1 H) ； 2.95 ( q, J = 7. 2 Hz, 2H) ； 2.60 (d, J = 1 1 . 2 H z , 1 H ) ； 2.35 (d, J - 1 1 . 4 Hz, 1 H ) ； 2 . 3 1 - 2 . 19 ( m , 2 H ) ; 1.8 7 - 1.7 4 ( 111, 2 H ) ; 0.94 ( t, J-7. 3 Hz, 3H) ； 0.87 (t, J = 7. 3 Hz, 3H) ； 0.77 (d, J = 6 . 3 Hz, 3 H) ; 0.75 ( d， J = 6 · 3 H z， 3 H ;二個雙重重疊）。 方法B :直接烷基化作用 將4 - [ ( R ) - ( 2 S，5 R ) - 2，5 -二甲基-1 -六氫咄畊基曱基] C 3 -羥笨基）曱基]N，N -二乙基苯醯胺（1 · 4 1克，3 · 5 6毫莫 耳）C於1 5毫升乙腈中）添加於峡化鈉（8 0毫克，0 . 5 3毫莫 耳），並且於添加三乙基胺（2 . 0毫升，1 4 . 3毫莫耳）、接著 24 3 12/發明說明·(浦件)/93-/03/93 100032 200418814 4 -(溴甲基）笨曱酸曱酯（1 . 6 3克，7 . 1 2毫莫耳）期間攪拌。 於氤氣下密封反應混合物，並且於環境溫度下攪拌2 0小 時。於減壓下濃縮反應混合物，並且將殘餘物分開於醋酸 乙醋（5 0毫升）與水（2 5毫升）間。分層，且以5 %碳酸鈉溶 液（2 X 5 0毫升）、接著水（5 0毫升）萃取水性層。以戊烷（1 0 0 毫升）稀釋有機層，並且以1 Μ氫氣酸（5 X 3 0毫升）萃取有 機層。以飽和水性碳酸鈉溶液將水溶液調整至ρ Η 8 . 5 - 9， 且以二氣曱烷（3 X 5 0毫升）萃取。使合併的有機萃取物通 過無水硫酸鈉及硫酸鎂乾燥。於減壓下移除溶劑以生成淡 黃色固形物（1 . 9 0克）。將殘餘物溶解於二氣曱烷（5毫升） 中，且塗佈於預堆積的（4 X 7公分）B i 〇 t a g e石夕膠管柱，且 以梯度為2 0 %至6 0 %溶液A (於B中）[A =含2 % Ν Η 4 0 Η之醋酸 乙酯，Β =二氣甲烷]。於減壓下濃縮含有產物[矽土 t. 1 . c ·(含有 2 % N Η '1 〇 H : CH2CI2/I ： 1 )之 E t 0 A c ，R f = 0 . 3 9 ] 之所需餾分，並且於室溫下，於2毫米Hg下進一步乾燥， 俾生成為灰白色固形物（1 . 3 4克）之4 -丨（2 R , 5 S ) - 4 -[(R)-(4~-二乙基胺曱酸基苯基）（3~~經苯基）曱基]_2，5_二 曱基-1 -六氫吼哜基曱基}苯曱酸曱醋。針對C 3 3 Η 4 i N 3 0 4之計 算值：%C, 7 2.9 0； Η, 7.60； Ν，7.73° 實驗值：％ C，7 2.6 8； Η, 7.57; Ν, 7.64° 'HNMIKCDCl ” 300MHz): ο 7.95 (d, J 二 8. 4 Η z, 2 Η ) ; 7.44 ( d，J = 8 . 1 Hz, 2 H) ; 7.37 (d, J = 8 · 2 H z，2 H ) ; 7 · 2 8 ( d，J，8 . 2 H z , 2 H ) ; 7 . 1 4 ( t，J = 7 . 8 H z， 1 II ) ； 6.7 3 - 6.6 9 (丨 11, 2 H ) ； 6.64 ( s , 1 H ) ； 6 . 0 5 ( b r s，1 H ); 5 , 0 0 ( s， 1 H ) ; 3 . 9 4 ( d， J = 1 4 H z， 1 H 與 s， 3 H 部分重疊）； 25 3 12/發明說明_:(補件)/93-/03/93 100032 200418814 3.89 ( s，3 Η ) ; 3.54 (br in, 2 H ) ; 3.29 ( b r in, 2H) ； 3.24 (d， J = 1 4 Hz, 1 H ) ； 2.6 8 - 2.5 3 ( ni，4H) ； 2. 0 5 - 1 . 9 4 ( in, 2 H ) ; 1 · 2 6 ( b r in， 3 H ) ; 1 . 2 3 ( b r in， 3 H ) ; 1 · 0 6 (重疊之 d， J = 5 . 9 Hz , 3 H) ; 1.04 (重疊之 d， J-5. 9 Hz, 3 H) ° 將此固形物（0 . 8 8克，1 . 6 2毫莫耳）溶解於乙醇（1 0毫升） 中，並且添加約每份1毫升之2 . 5 Μ氫氧化鈉溶液（6 . 4毫 升，1 6毫莫耳），經最後一次添加以生成黃色溶液，並於 環境溫度下攪拌1 6小時後，使稍混濁的反應混合物澄清約 5分鐘。以等體積水及乙醇稀釋溶液，並且藉蒸發（連同約 5 0 %水性體積）移除乙醇。使用3 Μ氫氯酸將溶液調整為ρ Η 4。藉過濾收集所生成的絨毛狀白色固形物，且謹慎地以冷 水清洗。於空氣乾燥後，使固形物進一步於5毫米H g真空 下（於室溫）乾燥，俾生成主題化合物（0 · 9 0克，8 5 . 9 % )。 此材料與由方法A經由HPLC製得之化合物相同。 針對 C 3 2 Η 3N 3 〇 4 1 _ 5 N a C 1 1 . 6 Η 2 〇之計算值：％ C，5 9 . 4 8 ; II, 6.58； Ν, 6. 5 0 ° 實驗值：％ C，5 9.5 0； Η, 6.45； Ν, 6.32° 1 Η N M R ( d「D M S 0 + 2 0 % ν / ν 卜 £ N a 〇 D 於 h 〇中，3 0 0 Μ Η ζ ): ο 0.93 ( d， J = 6. 0 Hz, 3 Η ) ; 0.98 (d， J = 5· 9 Hz, 3 H ; 兩雙重重疊 b r m， 6 H ) ; 1 · 9 ( m， 2 H ) ; 2 . 5 4 (in， 2 H，受到 D M S 0 部分地遮掩）；3 . 1 3 ( b r m , 2 H ) ; 3.22 (d, J = 1 4 . 2 H z， 111); 3.3 4 ( b r in，2 H ) ; 3.71 ( d，J = 1 4 . 0 Hz, 1H) ； 4,66 (s，1 H) ； 5.97 (d, J = 6. 9 H z，1 H ) ； 6. 1 6 C d, J 二 7 . 9，1H); 6.23 ( s, III)； 6.72 ( t , J = 7 . 7 H z，1 H ) ; 7 . 1 6 ( d，J 二 7 · 8 H z， 4 H ) ; 7 · 3 8 ( d， J = 8 . 1 H z， 2 H ) ; 7 · 7 2 ( d， J = 8 . 1 H z， 26 3 12/發叫說明(補件 V93-/03/93 100032 200418814 2 Η) ° 質譜：C E S I -，DP- 1 20V, MeOH) ； m/z ： 5 2 9. 0, (M + , 10 0%) ； 5 2 8, ((M - 1 ) +， 57%) ； 512.6， （（ M - 1 7 ) +，95%)° (實施例2) 4 -丨（2 R，5 S ) - 4 - [ ( S ) - ( 4 -二乙基胺曱醯基苯基）（3 -羥苯基） 曱基]-2 , 5 -二曱基-1 -六氫吼畊基曱基丨笨曱酸

秤取4 -羧基苯曱醛（1 0 0克，6 6 6毫莫耳）於2 0 0 0毫升三 頸圓底燒瓶中，並且於氮氣下於1 2 0 0毫升曱苯中攪拌。添 加亞硫醯氣（5 3 . 5毫升，7 3 3毫莫耳）於混合物，接著添加 〇 . 1 5毫升二甲基甲醯胺。將迴流冷凝器（具有氣化鈣乾燥 管）放置於燒瓶上。將反應物放置於油浴中，並且於維持在 1 2 0 °C之浴溫下加熱。於得到透明溶液後，使混合物迴流1 小時，且接著冷卻至室溫。以無水曱苯稀釋此溶液，並且 於真空下移除所有揮發物。 將粗製的酸氣化物溶解於1 5 0 0毫升無水四氫呋喃中， 且於冰/水浴中冷¥卩。經由加料漏斗逐滴地添加二乙基胺 (1 7 3毫升，1 . 6 7莫耳，2 . 5當量）。於1小時期間内使混 濁溶液升溫至室溫，且攪拌過夜。過濾反應混合物，以便 移除白色結晶二乙基胺鹽酸副產物。以醋酸乙酯（2 X 6 0 0 毫升）清洗晶體。使四氫呋喃濾液蒸發，並且將殘餘物溶解 於醋酸乙醋清洗液中。接續地以1 Μ氫氣酸（2 X 6 0 0毫升）、 27 3丨2/發明說明書(補件)/93-/03/93丨00032 200418814 水（2 x 3 0 0毫升）、稀釋的碳酸鈉溶液（飽和：Η 2 0 / 1 : 1，2 X 6 0 0毫升）、水（2 X 3 0 0毫升）及飽和氣化鈉溶液（3 0 0毫升） 清洗溶液。分離有機層、通過硫酸鈉乾燥，並且於真空下 移除溶劑。製得為淡黃色油脂之4 -曱醯基-N，N -二乙基苯 醯胺（1 1 7 · 1 4克），其不需進一步純化而使用（8 5 (/◦未色層分 析之產率）。NMR (300 MHz，CDCIO: 5 1.09-1.25 (ηι, 6 II ) ； 3.19-3.31 ( d，J 二 6 · 4 Η z，2 Η ) ; 3 . 5 4 - 3 . 5 6 ( d , J = 6 . 6 Hz, 2 Η ) ； 7.4 9 - 7.5 2 ( d, J-8. 1 Hz, 2 H) ； 7.8 9 - 7.9 2 (d, J-8. 2 Hz, 2H) ； 9.98 (s， 1H) ° 將3 -碘酚（1 1 0克，5 0 0毫莫耳）及咪唑（9 3 . 6克，1 7 3 5 毫莫耳，2 . 7 5當量）置於1 1 5 0毫升無水二氯甲烷中（於2 0 0 0 毫升燒瓶中），且於冰/水浴中（於氮氣下）冷卻至1 5 °C。經 由加料漏斗，逐滴地添加第三丁基二曱基石夕院基氣（8 2 . 9 克，5 5 0毫莫耳）於2 0 0毫升無水二氣曱烷中。於氮氣下攪 拌反應混合物過夜及過濾、，以二氣曱烧清洗。以水（4 0 0毫 升）、0 . 5 N N a Ο Η溶液（6 0 0毫升）及水（2 X 3 0 0毫升）清洗 合併的萃取物。使有機層通過N a 2 S Ch / N a C 1乾燥，並且蒸 發以生成淺黃色油脂（1 6 6克）。 將3 -碘苯氧基第三丁基二曱基矽烷（4 8 . 8 5克，1 4 6毫莫 耳）置於具有1 8 0毫升無水四氫呋喃（於室溫，於氮氣下） 之2 5 0毫升燒瓶中。經由加料漏斗添加氣化異丙基鎮（7 3 毫升，1 4 6毫莫耳，2 . Ο Μ溶於四氫呋喃中），以便形成淺 黃色溶液。使反應物於室溫下攪拌1小時。其間，將3 0 克4 -曱醯基-Ν , Ν -二乙基苯醯胺溶解3 0 0毫升無水四氫呋 28 3 12/發叫説叫得(補件V93-/03/93 100032 200418814 喃中（於另一 1 0 0 0毫升燒瓶中），並且於氮氣下冷卻至-7 2 °C。緩慢地添加新鮮製備的3 -碘笨氧基第三丁基二曱基矽 烷氣化鎂於1 0 0 0毫升燒瓶中。監測轉移速率，以便維持反 應溫度低於-7 0 °C。使反應升溫至室溫，同時攪拌過夜。以 2 4毫升飽和水性氣化銨使混合物驟冷，以6 0 0毫升二乙醚 稀釋，並且以6 0 0毫升水、接著以1 5 0毫升飽和氣化鈉清 洗。使_溶液通過硫酸鈉乾燥，且移除溶劑，以便提供為 黃色油脂之粗製的4 -丨[3 -(第三丁基二曱基矽烷基氧基） 笨基]羥曱基丨-N，N -二乙基苯醯胺。粗產率為〜1 0 0 °/◦。使粗 產物在2 0 %醋酸乙酯於戊烷之溶液中為淤漿。藉過濾收集 所生成的白色沉澱物、以戊烧清洗及乾燥過夜（3 0毫米 H g，4 0 〇C )。 將4 -丨[3_(第三丁基二曱基石夕烧基氧基）苯基]經曱 基丨-N，N -二乙基苯醯胺（5 0克，1 2 0 . 9毫莫耳）溶解於8 0 0 毫升二氣甲烷中，並且逐滴添加1 3 . 2 3毫升（1 8 1 . 3毫莫耳） 亞硫醯氣。使反應溶液於室溫下攪拌5小時，並且於真空 下移除溶劑。藉矽膠上之色層分析（1 7 % E t 0 A c於戊烷中， 接著為3 0 % E t〇A c於戊烧中）而純化殘餘的黃色油月旨，俾製 得2 2 . 5 8克（5 2 . 2 6毫莫耳）為黃色油脂之所欲產物。 將純4 -丨[3 -(第三丁基二曱基矽烷基氧基）苯基]氣甲 基丨-N，N -二乙基笨醯胺（2 2 . 5 8克，5 2 . 2 6毫莫耳）溶解於 3 5 0毫升乙腈中。添加石典化鈉（7 . 8 3克，5 2 , 2 6毫莫耳）、 二異丙基乙基胺（13.69毫升，78.39毫莫耳）及（21^，53)-卜 烯丙基-2 , 5 -二曱基六氫咄畊（8 . 0 6克，5 2 . 2 6毫莫耳）。使 29 3丨2/發明說明書(補件)/93-/03/93100032 200418814 混合物於氮氣下（伴隨著迴流）攪拌3小時。於減壓下移除 乙腈，並且將反應混合物倒入醋酸乙酯（4 0 0毫升）及碳酸 鉀溶液（1 5 0毫升2 Μ水溶液）中。將有機層分離、以水及 鹽水清洗、通過固態碳酸鉀乾燥以及於真空下濃縮。可製 得為深棕色之粗產物（3 0克，具粗產率〜1 0 0 % )。 藉矽膠上之色層分析而純化粗產物，俾提供二種二苯曱 基差向異構體。首先以2 0 % E t 0 A c於戊烷中，接著逐步地 以3 0 %、4 0 %、5 0 %及8 0 % E t 0 A c於戊烷中部分進行洗提， 俾提供1 1 · 0 0克（2 0 . 0 0毫莫耳）為黃色油脂之4 -丨（R ) -（（2S，5R)-4 -烯丙基-2,5 -二曱基六氫吼畊-1-基）[3-(第 二丁基二曱基石夕少完基氧基）苯基]甲基丨- N，N -二乙基苯S篮胺 及9.27克4-丨（3)-((23,51〇-4-烯丙基-2,5-二甲基六氫吼 畊-卜基）[3-(第三丁基二甲基矽烷基氧基）苯基]曱 基} - N , N -二乙基苯醯胺（1 6 · 8 6毫莫耳，黃色油脂）。藉T L C 比較而鑑定之異構物係為實施例1中所述之已知純異構 物。 將4 - { ( S ) - ( 2 S，5 R ) - 4 -烯丙基-2，5 -二曱基六氫吼畊-1 -基）[3-(第三丁基二曱基矽烷基氧基）苯基]曱基}-N,N -二 乙基苯醯胺（9 . 2 7克，1 6 . 8 6毫莫耳）溶解於3 5毫升無水乙 腈、接著氟化四乙基銨二水合物（4. 6 9克，2 5 . 2 9毫莫耳） 中，並且攪拌過夜。將反應溶液濃縮至乾燥，將殘餘物溶 解於4 0毫升醋酸乙酯中，且以2 %水性N a H C 0 3溶液（3 X 4 0 毫升）及水（4 0毫升）萃取。使有機層通過硫酸鈉乾燥及蒸 發，俾提供8 · 5 5克為紅色非結晶固形物之4 - {(S)- 30 3 12/發明說明書(補件)/93-/03/93 100032 200418814 (2 S，5 R ) - 4 -烯丙基-2，5 -二曱基六氫吼畊-1 _基）[3 -羥苯基] 曱基丨-N , N -二乙基苯醯胺。 於硫代水楊酸存在下，藉實施例1上所討論之G e n e t 法，使用P d ( d b a ) 2 / D P P B移除烯丙基基團。使反應物濃縮， 並且將殘餘物倒入2 0 0毫升醋酸乙酯及3 0 0毫升二乙醚 中。於以3 4 0毫升水清洗後，以1 0 %檸檬酸（5 X 8 0毫升） 萃取有機層。過濾合併的酸萃取物，以便移除少量懸浮的 固形物，並且使用1 5 % N a 0 Η溶液將p Η調整至8 - 8 . 5。以 二氯曱烷（3 X 3 0 0毫升）萃取所生成的油性懸浮液。乾燥合 併的有機溶劑（N a 2 S 0 4 / M g S 0 4)，並且於減壓下濃縮。殘餘 物為淺橙色固形物。 將 4 - [ ( S ) - ( ( 2 S , 5 R ) - 2，5 -二曱基六氫啦畊基-1 -基）（3 -羥苯基）曱基]-N，N -二乙基苯醯胺（0.51克，1.29毫莫耳） 溶解於1 0毫升無水乙腈中。添加於碘化鈉（2 0毫克，0 . 1 3 毫莫耳），並且於添加三乙基胺（0.72毫升，5. 16毫莫耳）、 接著4 -(溴甲基）苯曱酸曱酯（0.59克，2.58毫莫耳）期間 攪拌（於室溫下，於氮氣下）。於氮氣下攪拌反應混合物。 藉蒸發移除溶劑，並且將殘餘物分開於醋酸乙酯與飽和碳 酸氫鈉間。以水清洗有機層、通過N a 2 S 0 4 / M g S 0 4乾燥以及 在減壓下濃縮。藉矽膠上之色層分析（5 0 % E t 0 A c於C Η 2 C 1 2 中）而純化殘餘的淺黃色油脂，俾提供0 . 4 5克（0 , 8 3毫莫 耳）為白色非結晶之4-{(2R,5S)-4-[(S) - (4-二乙基胺曱 醯基苯基）（3 -羥苯基）曱基]-2，5 -二曱基-1 -六氫吼畊基曱 基}笨曱s纪曱a旨。 31 3 12/發叫說明(補件)/93-/03/93 100032 200418814 以1毫升1 0 % N a 0 Η溶液於3毫升乙醇中進行以上酯類 之水解作用。將反應混合物蒸發至乾燥，並且添加2毫升 水。以2毫升E t 0 A c / E 12 0萃取溶液二次，以便移除不純物， 接.著逐滴添加1 Μ H C 1至沉澱點（p Η 4 - 4 · 5 )。藉過濾形成 及收集白色凝膠，以少量冷水清洗。於真空烘箱中（3 0毫 米H g，4 0 °C )乾燥4 -丨（2 R , 5 S ) - 4 - [ ( S ) - ( 4 -二乙基胺曱醯基 苯基）（3 -羥苯基）甲基]-2，5 -二曱基六氫吼畊基-1 -基曱基} 苯曱酸，俾提供1 8 0毫克白色固形物。1 Η N M R ( 3 Ο Ο Μ Η z， dr,-DM SO) ： δ 0.98-1.16 ( m , 1 2 H ) ； 1.8 9 - 2.0 5 ( m , 2 H ); 2 . 4 8 - 2 . 6 5 ( ni, 5H) ； 3. 10-3. 50 (m, 5 H ) ; 3. 7 6 - 3. 8 0 ( d， J = 1 3 . 9 H z，1 II) ； 4.94 ( s, 1 H) ； 6.5 3 - 6.9 5 ( d , J 二 8 . 0 H z， 1 H ) ； 6 , 7 5 - 6 . 8 5 ( in，2H) ； 7 . 0 2 - 7 . 0 9 ( t，1 H ) ； 7.29-7.40 (in, 6H) ； 7.8 0 - 7.8 4 ( d，J 二 8 . 3 Hz, 2 H ) ; 9.29 ( s, 1 H ) ° (實施例3 ) 3 - U 2 R，5 S ) - 4 - [ ( R ) - ( 4 -二乙基胺曱醯基苯基）（3 -羥苯基） 曱基]-2 , 5 -二曱基-1 -六氫吼畊基甲基丨苯甲酸

4 -丨[(R ) - ( 2 S，5 R ) - 4 -烯丙基-2，5 -二曱基六氫咄畊-1 -基][3 -(第三丁基二曱基矽烷基氧基）苯基]曱基丨- Ν,Ν -二 乙基苯醯胺（1 1 . 0 0克，2 0 · 0毫莫耳，實施例2 )溶解於4 0 毫升無水乙腈中，並且添加氟化四乙基銨二水合物（5 . 5 6 32 3丨2/發明說明書(補件)/93-/03/93100032 200418814 克，3 0 . 0毫莫耳）且攪拌過夜。將反應溶液濃縮至乾燥， 使殘餘物濃縮於4 0毫升醋酸乙酯中，且以2 %水性N a H C 0 3 溶液（3 χ 4 0毫升）及水（4 0毫升）清洗。使有機層通過硫酸 鈉乾燥及蒸發，俾提供為黃色非結晶固形物之4 -丨[(R ) -(2 S，5 R ) - 4 -烯丙基-2，5 -二曱基六氫呲畊-卜基][3 -羥苯 基]曱基}-N，N -二乙基苯酸胺（10.30克）。 於硫代水揚酸存在下，藉實施例1上所討論之G e n e t 法，使用P d ( d b a h / D P P B移除烯丙基基團。使反應物濃縮， 並且將殘餘物倒入2 0 0毫升醋酸乙酯及3 0 0毫升二乙醚 中。於以3 4 0毫升水清洗後，以1 0 %檸檬酸（5 χ 8 0毫升） 萃取有機層。過濾合併的酸萃取物，以便移除少量懸浮的 固形物，並且使用1 5 % N a〇Η溶液將p Η調整至8 - 8 . 5。以 二氣曱烷（3 χ 3 0 0毫升）萃取所生成的油性懸浮液。乾燥合 併的有機溶劑（N a 2 S 0 4 / M g S 0 4 )，並且於減壓下濃縮。殘餘 物為淺撥色固形物。 .將 4 - [ ( R ) - ( ( 2 S，5 R ) - 2，5 -二曱基六氫口比畊基-：1 -基）（3 -羥笨基）曱基]-N , N -二乙基苯醯胺（2 . 5 0克，6 . 3 2毫莫耳） 及3 -羧基苯甲醛（1 . 9 0克，1 2 · 6 4毫莫耳）置於具有6 0毫 升四氫呋喃及0 . 8 0毫升（1 3 . 9 1毫莫耳）醋酸之2 5 0毫升燒 瓶。於室溫下攪拌反應物2 0分鐘，並且逐點地添加三乙醯 氧基硼氰化物（2 . 6 8克，1 2 . 6 4毫莫耳）。反應溶液變得非 常混濁，並且在氮氣下密封及攪拌過夜。將反應混合物蒸 發至乾燥，並且分開於醋酸乙酯（6 0毫升）與3 Μ H C 1 ( 1 2毫 升）間。以另夕卜5 χ 1 2毫升3 Μ H C 1萃取有機層。以0 , 5 Μ N a 0 Η 3 12/發明說明街(補件)/93-/03/93 100032 33 200418814 溶液及固態N a 2 C 0 3將合併的水性萃取物調整至ρ Η 4 . 5 - 5。 藉過濾收集所生成的凝膠，溶解於3 0毫升0 . 5 Μ N a Ο Η溶液 中，並且以2 0毫升E t 0 A c / E 12 0萃取二次，以便移除不純 物。逐滴添加1 Μ H C 1於水溶液至沉澱點（於ρ Η 4 - 4 · 5 )。 藉過濾收集所生成的白色凝膠，並且以少量冷水清洗。於 真空烘箱中（3 0毫米H g，4 0 °C )乾燥3 - { ( 2 R , 5 S ) - 4 -[(R )-( 4 -二乙基胺甲酸基苯基）（3 -經苯基）曱基]_2，5 -二 曱基六氫吼畊基-1 -基曱基丨苯曱酸，俾提供1 . 5 5克白色固 形物 ° 1 Η N M R ( 3 Ο Ο Μ H z，d〇-DMSO) ： ο 0.9 9 - 1.2 0 (丨 n，1 2 Η )； 1 . 8 9 - 2. 0 5 ( ni, 2 Η ) ; 2.4 8 - 2.6 5 (in, 5 Η ) ; 3.0 6 - 3.5 7 (丨 n， 5 Η ) ; 3. 7 8 - 3. 8 3 ( d，J = 1 2. 5 Hz, 1H) ; 4.94 (s， 1H); 6.6 3 - 6.8 4 ( in, 3 H ) ; 7.09-7.91 ( m , 9 H ) ; 9.36 ( s，1 H ) ° (實施例4 ) 針對以上確認之式（3 )化合物（以下稱為彳匕合物1 )評估 鼠輸精管（Μ 〇 u s e V a s D e f e r e n s E D )受體系統中之活體外 鴉片受體活性。用於此類受體活性測定用之鑑定程序茲說 明如下。 活體外之生物鑑定： 自鼠移走鼠輸精管（Μ V D )，C D - 1品種（H a r 1 a η，R a 1 e i g h， NC)，並且懸浮於含有具以下組成（毫莫耳）之經改質的Mg… 自由克勒勃氏（K r e b s )緩衝液器官浴室（〇 r g a n b a t h c h a ni b e r )中具 0 . 5 克張力之 16 電極間：N a C 1，1 1 7 · 5 ; K C 1， 4.75; C a C 1 2 ， 2.6; K H 2 P ， 1.20； N a H C 0 3 ， 24.5;及葡萄 糖，1 1。以9 5 % (h / 5 % C 0 2使緩衝液飽和，並且保持於3 7 34 3 12/發丨1]」説丨]]」):丨](件)/93-/03/93 100032 200418814 Ό。以具1 0 Η z脈衝串之超極大電壓刺激組織4 0 0毫秒（串 間隔為1 0秒）；並且於最大電壓下持續1 . 0毫秒。5受體 活性係於1 // M C Τ Ο Ρ (高選擇性"拮抗.；K.Gulya,J.T· P e 1 t ο η , V . J . Η r u b y 及 H . I . Y a in a in u r a , Life S c i . 3 8 : 2 2 2 1 - 2 2 2 9 , ( 1 9 8 6 ))及 1 5 η Μ η o r - B N I (—種選擇性 /( 才吉考充劑；P . S . Portoghese, A . W . L i p k o w s k i 及 A . E . T a k e in o r i， L i f e S c i · 4 0， 1 2 8 7 ( 1 9 8 7 ))存在下，藉添加 適當濃度的測試化合物至器官浴中且於添加下一較高濃度 前提供最大回應而測得。//受體活性係以類似方式進行， 但於3 " Μ T I P P ( —種高選擇性5拮抗劑；？.界.3以11161、 T. Μ. - D. Nguyen, G . W e 1 t r o w s k a , B. C. Wilkes, B. J. Marsden, C. Leinieux 及 N. N. Chung, P r o c, Natl. Acad. S c i . 8 9，1 1 8 7 1 ( 1 9 9 2 ))及 1 5 η M 選擇性 /c 拮抗劑 η o r - B N I 存在下進行。 於1 // M高選擇性v拮抗劑CTOP及3 // M高選擇性5 拮抗劑Τ I Ρ Ρ存在下測定/(受體活性。 電誘導肌肉收縮之抑制百分率係針對改變累積濃度之 化合物而測定。自顯示劑量濃度對回應繪圖之曲線外插 Ε 1) r)"值（J . A . H . L 〇 r d， A . A . W a t e r f i e 1 d， J · H u g h e s， Η · W · K 〇 s t e r 1 i t z， N a t u r e 2 6 7， 4 9 5 , ( 1 9 7 7 ))。結果顯示於以 下表1中： 35 3 12/發明説丨川'1 KM 件)/93-/03/93 100032 200418814 表1 4匕合物# 結構 鼠輸精管E D 5。（ η M ) 1 β K >10 0 0 17.3 1 0 8 7 0 (實施例5 ) 亦評估化合物1於鼠腦膜（//及5鴉片）及天竺鼠小腦 (/ί鸦片受體）之活體外鴉片受體親和性。供放射性配位體 結合（r a d i〇1 i g a n d b i n d i n g )用之膜狀物係製自鼠全腦或 天竺鼠小月甾（供應自Pe1 -Freeze Bi〇1〇gica 1 Inc. (Rogers, A R .))。使組織於含有5 0微克/毫升大豆胰蛋白晦抑制劑、 1 η〗Μ E D T A (乙二胺四醋酸）及1 0 0 a Μ P M S F (苯基曱基磺醯 基氟）之5 0丨丨丨Μ T R I S (三[羥曱基]胺基曱烷）緩衝液（ρ Η 7 · 4 ) 中均質化。以5 0 0 X g使經均質的腦組織離心3 0分鐘（4 t )，俾移除大碎片。使上層清液均質地超音波震盪1 0秒 (P . E .設定為2，4 °C )。接著使用1 0 m Μ T R I S -蔗糖緩衝液 (ρ Η 7 . 4 )添加蔗糖溶液至最終濃度為0 . 3 5 Μ，接著以 4 0，0 0 0 X g使腦膜離心3 0分鐘（4 °C )。接著以含5 0微克/ 毫升大豆胰蛋白腾抑制劑、1 ηι Μ E D T A及1 0 0 Μ P M S F之 1 0 in Μ T R I S緩衝液（ρ Η 7 . 4 )清洗膜顆粒狀物。 於含5 0微克/毫升大豆騰蛋白晦抑制劑、1 in Μ E D T A、5 ηι Μ M g C 1 及 1 0 0 ν Μ P M S F 之 1 0 ηι Μ 丁 R I S 緩衝液（ρ Η 7 , 4 ) 進行放射性ffi己位體結合鑑定。氚標記之D A M G 0 ( e )、 1) e 1 t o r p h i η I I ( (5 )或 U 6 9 5 9 3 ( /ί )(購自 N e w E n g 1 a n d 36 3 12/發明說明 if(補件)/93-/03/93 100032 200418814 N u c 1 e a r )係用作藉 0 · 5 χ 1 (Γ () Μ N a 1 ο x ◦ n e (購自 S I G M A C h e I丨丨i c a 1 C ◦.)定義之非特定結合競爭試驗中之配位體（最 終濃度為2至3 χ 1 0 1 ϋ Μ )。所有結合鑑定係於室溫下操 作9 0分鐘，且接著使用B r a n d e 1半自動細胞收取器（Μ〇d e 1 M 4 8 , B r a n d e 1，G a i ΐ h e r s b u r g , M D )，藉著於具 5 0 in Μ T R I S 緩衝液（4 °C ，p H 7 . 4 )之G F / C玻璃纖維濾器（W h a t m a n， 11 i 1 1 s b o r o，0 R )上快速過濾·而終止。以5 0 η〗Μ T R I S緩衝液 (4 °C ，p 11 7 . 4 )清洗濾器二次，並且將濾器放於液態閃爍雞 尾酒（liquid scintillation cocktail)中，且於 Beckman 閃爍計數器上計數結合的放射活性。化合物抑制放射標記 的 1) A M G 〇（β )、D e 1 t 〇 r p h i η I I ( δ )或 U 6 9 5 9 3 (凡）之功效係 自全濃度效果曲線（full concentration-effect curve) 決定。以電腦程式 P r i s 丨n ( G r a p h P a d S o f 1: w a r e I n c . , S a η Diego, C A )，使用單邊非線性回歸分析放射性配基結合數 據以決定I C w數值。接著使用C h e n g - P r u s〇f f方程式將I C 5 〇 數值轉換為K i值（C h e n g Y a n d P r u s o f f W Η ( 1 9 7 3 )抑制常 數（K ,)與造成酵素反應5 0 %抑制率（I 5。）之抑制劑濃度間之 關係。B i 〇 c h e in P h a r in . , 2 2 : 3 0 9 9 - 3 1 0 8 )。 放射性配位體結合分析結果顯示於以下表2 : 37 200418814 表2 化合物# 結構 鼠腦膜 K , ( η Μ ) 天竺鼠小腦膜 Κ 丨（η Μ ) β 0 1 15 19 1.89 1 7, 360 結果.：明顯地發現，就不同類型之受試受體而言，式（3 ) 之化合物（1 )展現可區別的及不同的結合親和性。可藉抑制 經標記化合物所需之極低濃度顯示化合物對於6受體之強 親和性。 (實施例6 ) 使用尾部夾痛測試，鑑定鼠之止痛效果。於1 - 2小時期 間内得到感受傷害回應值。將動脈夾置於尾部上（離尾尖1 英吋）一段短暫期間，直到脫逃回應（即尾部彈掉或發聲） 出現為止。藉秒錶記錄脫逃回應潛伏期。使用2 0秒切斷時 間防止不必要的組織損害。觀察鼠之感受傷害回應（發聲或 疼痛性身體移動）。記錄引起疼痛回應之消逝時間為尾部夾 痛潛伏期（以秒計）。 藉一半動物於2 0秒内對於動脈夾未顯示任何感受傷害 Θ應之劑量測定止痛效力之E D 5 u值如表3所示，化合物1 顯示無止痛活性，因此代表受試化合物未越過血腦障壁， 且視為非止痛化合物。再者，此化合物主要在周圍δ鴉片 受體處發揮作用。更重要地，甚至在5 0毫克/公斤之高劑 量下，未於任一測試動物中觀察到發病現象，代表化合物 (.1 )大體上受限於周圍（5受體。 38 3 12/發丨丨)]説明 Τ:丨—KfllH4:V93-/03/93 100032 200418814 表3 化合物？ 結構 止痛E D 5 η毫 克/公斤 發病 1 >50 無 (實施例7 ) 於自S p r a g u e - D a w 1 e y鼠分離的心臟中之左前降枝（L A D ) 冠狀動脈閉塞前，以濃度為1 η Μ、2 η Μ及1 0 η Μ化合物1 施藥約1 5分鐘。依L a η g e η d〇r f f方式，透過主動脈，使分 離的心臟逆注滿充氧的K r e b s - H e n s e 1 e i t緩衝液。藉3 5 分鐘局部缺血、接著1 2 0分鐘再灌注而誘導梗塞。使6 - 0 縫合線通過（L A D )冠狀動脈主枝以形成勒除器。 藉繃緊L A D附近之勒除器誘導局部缺血。於3 5分鐘之 局部缺血後，鬆開勒除器，並且以充氧生理緩衝液再灌注 1 2 0分鐘。於再灌注結束時重新繃緊L A D閉塞，並且經由 主動脈將含0 . 1 2 5 % E v a n s藍之鹽水注入心臟，以供目視非 局部缺血區。接著將心臟組織切片，並且於以1 . 5 %於生理 緩衝液中之氣化三苯基四唑Λ ( T T C )染色1 5分鐘後評估梗 塞大小。於在1 0 %緩衝福馬林中固定後，將切片安裝於玻 璃載片間，並且使用掃描器數位地獲致影像。使用Adobe P h〇t〇s h ο p 5 . 0處理影像。使用0 p t i m a s 6 . 2影像分析軟 體，使用電腦化測面器定量非局部缺血區、危險中之面積 及梗塞。 39

3 12/發叫説明·(補件)/93-/03/93 100032 200418814 一組結果顯示於圖1中，其顯示於以1 nM化合物1劇 烈治療後自控制及受治療動物割去之組織中之梗塞大小的 生理染熱載片。據發現相較於控制組，預處理降低梗塞尺 寸之7 1 %。 表4顯示於此製劑中由化合物1製得之局部缺血損害減 少（為風險面積之百分率（％ I S / A A R ))。 表 4 濃度（η Μ化合物1 ) % I S / A A R 對照 55± 1 1 1 8±5 2 9土 2 10 20 士 6 於控制條件下，3 5分鐘局部缺血降低5 4 . 7 ± 1 . 2 %危險中 面積之細胞損害。藉2 η Μ化合物1產生最大保護，俾保護 免於控制組中幾乎9 0 %之損害百分率。 於3 5分鐘局部缺血後之血液動力學參數及1 2 0分鐘再 灌注係顯示於以下表5中。 表5 化合物1之含量 CnM) 1IRXDP% 抑制率 + dP/dt°/〇 抑制率 -dP/dt% 抑制率 CF% 抑制率 控制 6 1.8 54.2 54.8 59.7 0.1 η Μ 32 26 19 4 3 1 · 0 η Μ 17 7 10 13 1 0 η Μ 32 2 1 18 38 Μ X D Ρ，心臟速率X發展壓力；+ d P / d t，收縮壓（i η 〇 t r 〇 p y ); -cl P / d t，舒張壓（1 u s t i t r o p y ) ; C F，冠狀流動 血液動力學參數之結果顯示無藥理預治療時有61. 8%之 11 R X j) P抑制率且於收縮壓及舒張壓（具有減少的冠狀流動） 有至少5 0 %之抑制率。相較之下，倘若以本發明化合物1 40 3 12/發叨說明(補 ί牛)/93-/03/93 100032 200418814 預治療動物，則心臟參數大大地改善。平均而論，心 織於至少7 5 %範圍内（且某些參數達正常之9 0 % )起作月 等結果顯示當於計畫的局部缺血前施藥時，化合物1 用可賦予心臟保護。 (實施例8 ) 藉腹膜内注射戊巴比妥鈉產生麻醉。自胸骨中線之 反射形成中央切口。藉齧齒目動物通風機（H a r v a r d齧 動物通風機），以混合氧氣之室内空氣提供通風。以有 鼠可注意到正常胸部擴張。精緻解剖是需要的，並且 切割，以胸骨切開剪沿著胸骨左側切割通過肋骨至約 胸骨而開胸。於胸骨頭部處需要精緻解剖，以便避免 雙側靜脈匯流。藉使用5 - 0絲製品或單絲縫合線而縮 部。以7 - 0絲製縫合線進行結紮（以一頭逐漸變尖細之 正常定位的左耳廓尖通過冠狀動脈左前降枝下方1至 米）。將1毫米截面之P E - 1 0管件置於容器頂部，並且 置於管件頂部上，以便閉塞冠狀動脈。於閉塞3 5分鐘 以編號1 1手術刀切割P E - 1 0管件頂部上之結而進行# 注。於L Λ D冠狀動脈結紮前1 5分鐘，以0 . 1毫克/公 1 . 0毫克/公斤經靜脈施用化合物1。於局部缺血及再 後，藉Ε ν a n s藍及T T C染色2小時、2 4小時及1 6 7小 測定梗塞大小。 將化合物1溶解於0 , 9 %鹽水中，且注入測試動物中 L Λ D冠狀動脈閉塞，並且將P a t e n t藍色染料注入靜脈 中，以便使心臟之正常灌注區染色。割去心臟，並且 3 12/發1曜切1/摘(_牛)/93-/㈤ 臟組 丨。此 之施 皮膚 齒目 知覺 藉側 中央 大量 進胸 針自 3毫 將結 後， 卜灌 斤或 灌注 時而 。將 導管 移走 41 200418814 左心室且切片為橫切片。此程序提供正常非局部缺血區、 風險面積及梗塞大小之目視觀察。TTC係用作分離出能活 與不能活組織之指標（K1 e i η , Η . Η .等人，V i r c h 〇 w s A r c h ( 1 9 8 1 ) 3 9 3:2 8 7 - 2 9 7 )。將組織組存於曱醛溶液中過夜。次 曰，使用如實施例7中所述之數位影像技術計算梗塞大小 (I S )為風險面積之百分率（％ )。 相較於表6中所示之控制組，據發現梗塞大小明顯地小 於以化合物1預治療之鼠。 表6 梗塞大小之測量時間 梗塞大小相較於未治療的控 制組之減少率 於急性施予1毫克/公斤化合 物1後測量 48% 於施予1毫克/公斤化合物1 後]5 6小時取出測量 4 3% 於急性施藥後，相較於控制組，以化合物1預治療顯示 出4 8 %減少率。於初步治療後約7日時，相較於控制組， 梗塞大小仍展現43%減少率。 (實施例9 ) 以I n a c t i η (硫代丁巴比妥鈉鹽，1 7 8毫克/公斤i . p .) 或U r e t h a n e ( 1 . 2克/公斤i . p .)麻醉雄鼠。於手術台上， 進行氣管切開術（p e - 2 4 0管件），並且以p e - 5 0管件插管於 頸靜脈（針對1 . v .化合物及染料施藥）及頸動脈（用於測量 血壓），接著將動物置於連接於0 2源且以3 6 - 4 2 b p m呼吸 之通風機上C H a r v a r d，6 8 3型）。經由三通注射針閥將頸動 脈導管連接於PT 300壓力傳動器，以便測量動脈血壓及心 42 3 12/發叫說明牛)/93-/03/93 100032 (150 200418814 跳。於動物已安定後，自頸動脈插管抽取少量血液樣品 微升）以供血液氣體分析用。 於第5肋間處進行左胸廓造口術，接著進行心包膜 放液術以及調整左心耳，以便露出左冠狀動脈。使結 〔6 - 0 1〕r ο 1 e n e )通過左心耳至心室右方區。使縫合線末 過聚乙烯管（已於一端加凸緣，使得凸緣端緊鄰心室； 以便形成結。藉拉緊縫合線及以止血劑將結夾於周圍 上使冠狀動脈閉塞。藉心外膜發紺及血壓下降以查驗 動脈閉塞。使閉塞維持3 0分鐘。藉鬆開結而引發再讀 且藉目視觀察心外膜充寫回應而確認。再灌注期間為 至2小時。於再灌注期間結束時，使用結再度地閉塞 動脈，以及經由i . v .導管注射P a ΐ e n t藍色染料（0 . 4 1 0 % w / v於鹽水中）。於透過循環散佈染料後，立gp地 心臟。快速地一走心房及右心室，並且將剩下的左心 開為4至5片。自風險面積（A A R，未染為藍色）分開定 正常之面積（染為藍色），並且將組織置入2 0毫升含肩 in Μ K Η 2 P 0 ‘，及 0 . 1 8 7 % 氣化 2，3，5 -三苯基四唑 H ( T T C )之 瓶中，且於3 7 °C下培養5至1 0分鐘。接著將組織置 有1 0 %緩衝曱酸溶液之分離瓶中過夜以供固定用。接 非梗塞面積切開梗塞面積。重力地測量正常、A A R (非4 及梗塞組織。 於L A D閉塞前（、預局部缺血施藥），經由i . v .導管， 0.0 1毫克/公斤至].0毫克/公斤範圍内之劑量注射化 3丨2/發明說明誓(補件)/93-/03/93丨00032 穿刺 紮線 端穿 壁）， 表面 冠狀 ί注， 1.5 冠狀 毫升 移走 室切 義為 -100 分離 於含 著自 更塞） 以 合物 43 200418814 兩分開研究之結果顯示於以下表7中。 表7 藥物治療 (毫克/公斤化合物1 ) 研究1 (% I S / A A R ) 研究2 (% I S / A A R ) 控制 5 4 ± 1 0 54± 3 0.01 56±5 0.03 44± 1 0 40±3 0 . 1 39 士 3 0 . 3 35±1 1 38±3 1.0 40±8 化合物1之施用對於兩研究（測試至劑量1 . 0毫克/公斤） 產生明顯保護效果。控制組顯示出風險面積（A A R )〜5 0至 5 5 %之局部缺血損害。於兩研究中，化合物1 (以高於0 . 1 之劑量）保護免於約3 0與4 0 %間之損害。 (實施例1 0 ) 除了於釋放閉塞L A D之結紮線前立即地（即於最初局部 缺血損害後及於再灌注前）施用化合物1外，使用如實施例 9相同的實驗方法。依此模式以0 . 3毫克/公斤測試化合 物，並且證實明顯的保護效果。 控制組局部缺血損害為風險面積之〜5 0 % (如實施例9之 控制組）。然而，當於再灌注損害期間施藥時，化合物1 保護免於3 0至4 0 %損害（此與如實施例9中所述之局部缺 血損害前相反）。 雖然本發明已參照特殊態樣、特徵及本發明之例證具體 例說明，但應可理解本發明之應用不受限於此，而可擴展 及涵蓋許多其他態樣、特徵及具體例。因此，如附申請專 利範圍係意欲對應地廣泛建立，然而包含本發明精神及範 44 3 12/發丨丨4:0:^1^(^.^/93-/03/93100032 200418814 圍内之所有態樣、特徵及具體例。 【圖式簡單說明】 圖1顯示控制組及經治療動物之梗塞 品。 大小之組織學樣 %

3 12/發明說明書(補件)/93-/03/93 100032 45

Claims (1)

1. 200418814 拾、申請專利範圍： 1 . 一種對付局部缺血損害之治療組成物，該組成物包含 有效量具以下通式之二芳基曱基六氫吼畊化合物：

   Z係選自由以下組成之群： 氫； 鹵素； C I - C 少完基、C 2 _ C G歸基、C 2 - C 6快基； C I _ C 鹵4完基； C I - C 6烧氧基； C - C 6環烧氧基； 式SR8之硫化物，其中R8為Cl-C(5烧基、C2-C6稀基、C2_Cg 快基、C 3 - C 6環完氧基、具C 5 - C I。芳基部分及C 1 _ C 6焼基 部分之芳烧基或C 5 - C丨ϋ芳基； 式SO R8之亞砜，其中R8與以上相同； 式S(hR8之砜，其中R8與以上相同； 月t ; C I _ C ϋ酸基， 式N H C 0 2 R lS之烷氧基羰基胺基（胺甲醯基），其中R 8與以 46 3丨2/發明說明書(補件)/93-/03/93100032 200418814 上相同； 羧酸或酯、醯胺或其鹽類； 式C Η 2 N R 9 R 111之胺基曱基，其中R 9及R 1 ϋ可相同或相異， 且可為氮、Cl-C(3炫基、C2-Cg歸基、C2-C(3快基、C〗-C(i 羥烷基、C 2 - C ϋ曱氧基烷基、C 3 - C 6環烷基或C 5 - C i ◦芳基， 或Rϋ與R 1"可一起形成5或6個原子之環，環原子係選 自由Ν及C組成之群； 式CONITRU之羧醯胺，其中R9及R1U與以上相同，或其 C2-Cw肽類共軛物；且 X係選自由氫、羥基、iS素及烷氧基組成之群， 或其醫藥上可接受的酯類或鹽類。 2 .如申請專利範圍第1項之組成物，其中該組成物尚包 含有效量用於治療心臟失調之第二化合物。 3 .如申請專利範圍第2項之組成物，其中該第二化合物 係選自由硝酸鹽、卢-腎‘上腺素阻斷劑、妈離子通道激動 劑、A C E抑制劑、非肽類血管收縮素I I激動劑、I I b / I I I a 激動劑及阿斯匹靈組成之群。 4 .如申請專利範圍第2項之組成物，其中該第二化合物 係同時地與二芳基甲基六氫吼畊化合物一起施藥。 5 .如申請專利範圍第1項之組成物，其中該二芳基曱基 六氫吼畊化合物係為非止痛化合物。 6 .如申請專利範圍第5項之組成物，其中該二芳基曱基 六氫吼畊化合物主要充當周圍5鴉片受體。 7 .如申請專利範圍第1項之組成物，其中該二芳基曱基 47 3 12/發明說明窗(補件)/93-/03/93 100032 200418814 六氫°比畊化合物係同時地於局部缺血事件開始時、於局部 缺血開始前、於外科手術前或於局部缺血事件開始後施藥。 8 . —種降低患者局名卩缺血損害之方法，其包含：施予有 效量如申請專利範圍第1項之組成物。 9 . 一種對付局部缺血損害之治療組成物，該組成物包含 有效量具下式之非止痛的二芳基曱基六氫吼畊化合物：

   或其醫藥上可接受的酯類或鹽類。 1 0 .如申請專利範圍第9項之組成物，其中該組成物尚 包含用於轉介保護或矯正心臟回應或活性之第二化合物。 1 1 .如申請專利範圍第1 0項之組成物，其中該第二化合 物係選自由硝酸鹽、/3 -腎上腺素阻斷劑、鈣離子通道激動 劑、A C E抑制劑、非肽類血管收縮素I I激動劑、I I b / I I I a 激動劑及阿斯匹靈組成之群。 1 2 .如申請專利範圍第1 0項之組成物，其中該第二化合 物係同時地與二芳基曱基六氫°比畊化合物一起施藥。 _1 3 .如申請專利範圍第9項之組成物，其中該二芳基曱 基六氫呲ϋ井化合物係同時地於局部缺血事件開始時、於局 部缺血開始前、於外科手術前或於局部缺血事件開始後施 藥 48

   3丨2/發明說明靈(補件)/93-/03/93 100032 200418814 予有 1 4 . 一種降低患者局部缺血損害之方法，其包含^ 效量具下式之非止痛的二芳基曱基六氫吼嘴化合物

   或其醫藥上可接受的酯類或鹽類。 1 5 . —種對付局部缺血損害之治療組成物，該組； 含有效量具下式之非止痛的二芳基曱基六氫吼°井化 L物包 合物

   或其醫藥上可接受的鹽類或酯類。 1 6 .如申請專利範圍第1 5項之組成物，其中該組 包含用於轉介保護或矯正心臟回應或活性之第二化 1 7 .如申請專利範圍第1 6項之組成物，其中該第 物係選自由硝酸鹽、/3 -腎上腺素阻斷劑、鈣離子通 劑、A C E抑制劑、非肽類血管收縮素I I激動劑、I I 激動劑及阿斯匹靈組成之群。 1 8 ,如申請專利範圍第1 6項之組成物，其中該組 包含醫藥上可接受的載體。 1 9 .如申請專利範圍第1 5項之組成物，其中該二 3 12/發明說明福:(補件)/93-/03/93 100032 成物尚 合物。 二化合 道激動 b/ III a 成物尚 芳基曱 49 200418814 基六氫吡畊化合物係同時地於局部缺血事件開始時、於局 部缺血開始前、於外科手術前或於局部缺血事件開始後施 藥。 2 0 . —種降低心臟組織中局部缺血損害之方法，其包含 施予該哺乳動物有效量具下式之非止痛的二芳基甲基六氫 吼喷化合物：

   或其醫藥上可接受的鹽類或酯類。 2 1 .如申請專利範圍第1 8項之方法，其中該二芳基曱基 六氫咄畊化合物係同時地於局部缺血事件開始時施藥數 2 2 .如申請專利範圍第2 0項之方法，其中該二芳基曱基 六氫吼畊化合物係施予患者作為預防療法，俾防止疾病於 局部缺血心臟疾病之症狀階段中於個體中進行。 2 3 .如申請專利範圍第2 0項之方法，其中該二芳基曱基 六氫咄畊化合物係於局部缺血事件開始後施藥。 2 4 .如申請專利範圍第2 0項之方法，尚包含施予可實行 保護或矯正心臟回應之第二化合物。 2 5 .如申請專利範圍第2 4項之方法，其中該第二化合物 係選自由硝酸鹽、/3 -腎上腺素阻斷劑、妈離子通道激動 劑、A C E抑制劑、非肽類血管收縮素I I激動劑、I I b / I I I a 50 3 12/發明說明書(補件)/93-/03/93 100032 200418814 激動劑及阿斯匹靈組成之群。 2 6 .如申請專利範圍第2 4項之方法，其中該第二化合物 係同時地與二芳基曱基六氫吼ϋ井化合物一起施藥。

   2 7 .如申請專利範圍第2 0項之方法，其中該二芳基曱基 六氫吼畊化合物係藉選自由非經腸胃、經腸胃、口服、直 腸、局部、鼻部、目艮部、皮下、肌肉内、靜脈内、經皮、 脊髓、腦脊髓膜内、關節内、動脈内、蛛網膜下、舌下腺、 口腔黏膜、支氣管、淋巴腺及子宮内施藥法組成之群之施 藥模式施藥。 2 8 .如申請專利範圍第2 0項之方法，其中該哺乳動物為 人類。 2 9 . —種用於保存分離器官之溶液，其包含具下式之化 合物

   (2) 或其醫藥上可接受的鹽類或酯類。 3 0 .如申請專利範圍第2 9項之溶液，其中該分離器官係 選自由心臟、肝臟、腎臟、角膜、肺臟及其組合組成之群。 3 1 . —種防護哺乳動物免於局部缺血及再灌注損害之方 法，其包含施予該哺乳動物有效量具下式之5鴉片受體激 動劑： 51 3 丨 2/發明說明®(補件)/93-/03/93 100032 (2) 200418814

   或其醫藥上可接受的酯類及鹽類；以及實行抗局部缺血 之第二化合物。 3 2 .如申請專利範圍第3 1項之方法，其中該第二化合物 係為精胺酸鹽酸。 3 3 . —種實行患者中心臟組織局部缺血預適應之方法， 其包含施予該患者有效量具下式之二芳基甲基六氫吼畊化 合物：

   或其醫藥上可接受的酯類及鹽類。 3 4 .如申請專利範圍第3 3項之方法，其中該二芳基曱基 六氫咄畊化合物係藉選自由經腸胃、非經腸胃、口服、直 腸、局部、鼻部、目艮部、皮下、肌肉内、靜脈内、經皮、 脊髓、腦脊髓膜内、關節内、動脈内、蛛網膜下、舌下腺、 口腔黏膜、支氣管、淋巴腺及子宮内施藥法組成之群之施 藥模式施藥。 3 5 ,如申請專利範圍第3 3項之方法，尚包含施予可實行 保護或矯正心臟回應之第二化合物。 52 3 12/發明說明書(補件)/93-/03/93 100032 200418814 3 6 .如申請專利範圍第3 5項之方法，其中該第二化合物 係選自由硝酸鹽、/3 -腎上腺素阻斷劑、鈣離子通道激動 劑、A C E抑制劑、非肽類血管收縮素I I激動劑、I I b / I I I a 激動劑及阿斯匹靈組成之群。 3 7 .如申請專利範圍第3 5項之方法，其中該第二化合物 係同時地與二芳基曱基六氫吼畊化合物一起施藥。 3 8 . —種不誘導患者之受體-轉介止痛而保護患者免於 潛在局部缺血之方法，其包含施予有效量如申請專利範圍 第3 3項之二芳基曱基六氫咄畊化合物。 3 9 .如申請專利範圍第3 8項之方法，其中該患者為人類。 4 0 .如申請專利範圍第3 9項之方法，其中該二芳基曱基 六氫咄畊化合物係經口服施藥。 53 3 12/發明説明窗(補件)/93-/03/93100032 200418814 柒、指定代表圖： (一) 本案指定代表圖為：第（1 )圖。 (二) 本代表圖之元件代表符號簡單說明： 益

   捌、本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化學式： 312/發明說明書(補件)/93-/03/93100032