TARIFNAME SAGLIK VE TIP ALANINDA KULLANIMA UYGUN BIR çiNKo TANI KITI Teknik Alan Bu bulus; saglik ve tip sektöründe hizmet veren, laboratuvar sistemine sahip saglik kuruluslarinda kullanima uygun; spesifitesi ve sensitivitesi yükseltilmis, uzun raf ömrüne sahip ve stabil bir çinko ölçüm kiti ile ilgilidir. Teknigin Bilinen Durumu Günümüz teknolojisinde, çogu metalin ve bazi ametallerin analizi atomik absorpsiyon spektroskopisi ile gerçeklestirilmektedir. Atomik absorpsiyon spektrometri (AAS), elementlerin derisimlerini ölçen bir analiz teknigidir. Genel olarak hava/asetilen veya azot- oksiti'asetilen gazlari kullanilarak alev üretilmektedir. Bununla birlikte ölçülen elemente özel kullanilan oyuklu katot lambasindan yayilan isinim mevcut alevden geçirilerek dedektör tarafindan ölçülür. Analizi yapilacak örnek alevin üstüne püskürtülür, örnegin içinde ilgili element mevcutsa, Iambadan gelen isigi absorplar ve böylece detektöre giden isigin siddeti azalir. Absorplanan isik miktari örnegin içinde bulunan elementin derisimiyle dogru orantili esasina bagli olarak ölçüm gerçeklestirilir. Bu metot günümüzde eser element ölçümü ile ilgili en çok kullanilan yöntem olmasina ragmen beraberinde birçok sorunlar meydana getirmektedir. Karsilasilan teknik problemlerden birisi alev kaynagindan kaynaklanir. Alev sicakliginin artmasi ile uyarilmis düzeydeki atom sayisi ve buna bagli olarak da yayilan isimanin siddeti artar. Fakat sicakligi çok yüksek alevlerin kullanilmasi durumunda analiz elementinin iyonlasmasi yöntemin duyarligini azaltir. Bu da cihazdan cihaza farkli sonuçlara neden olabilmektedir. Problemlerden bir digeri de alev sicakligindaki dalgalanmalarin, uyarilmis düzeydeki atom sayisini önemli ölçüde etkileyerek duyarliligin degismesine neden olmasidir. Bunun önüne geçilebilmesi için, iç standart yöntemi kullanilir. Bu yöntemde analiz elementini içeren örnege ve standart çözeltilere bilinen derisimde baska bir element eklenir. Eklenen bu elemente iç standart adi verilir. Fakat çinko ölçümünde bu gibi standartlarin eklenmesi, istenmeyen interferanslara sebep olmaktadir. Çinkonun, standart çözelti içerigi ile etkilesime girmesi istenmeyen herhangi bir madde ile etkilesmesine ve dolayisiyla gerçek ölçüm sonucunu yansitmamasina sebep olabilmektedir. Bu interferans durumu, eser elementlerin ölçümünde istenmeyen, kabul edilirligi olmayan verilere sebep olmaktadir. Alevli sistemin dezavantajlari göz önüne alindiginda teknikte uygulanan bir diger element ölçüm yöntemi ise grafit firin atomik absorpsiyon spektrometresidir (GFAAS). Bu yöntem alevli atomik absorpsiyon ile benzer özelliklere sahip olup en önemli farki grafit firinlarin kullanilmasidir. GFAAS'de, numuneler buharlastirilmak ve atomize edilmek üzere isitilabilen küçük bir grafit tüp içinde biriktirilir ve alevli AAS*ye göre çok daha yüksek sicakliklarda çok daha küçük miktarlardaki eser elementler ölçülmeye çalisilir. Grafit firinlar 2-3 cm uzunlugunda 1 cm iç çapindaki tüpler olarak bilinir. Bu tüp, her iki yanina baglanmis elektrik akimi ile isitilarak elektrotermal atomlastirici olarak kullanilir. Ancak GFAASSni standardize etmek çok zor olmakla beraber tekrarli ölçüm sonuçlari oldukça problemlidir. Ornegin JPHO3146853 sayili patent dokümaninda kan gibi biyonumunelerin elementel analizi için kullanilan, alevsiz sekilde uygulanan, grafit veya metal hücre ve grafit elektrotlarin kullanimina dayanan bir atomik absorpsiyon analizi yönteminden bahsedilmektedir. Yöntemde numune, bir enjeksiyon portu ile bir tüp içerisine enjekte edilmekte ve bir güç kaynagi vasitasiyla isitilmaktadir. Sicakligin etkisiyle numunede bulunan elementler atomize edilmekte ve isik geçirme pencerelerinden absorbe edilen isik vasitasiyla ölçüm alinmaktadir. Mevcut teknikteki bir diger yöntem olan indüktif olarak eslesmis plazma atomik emisyon spektrometresinde de düsük derisimdeki elementler ölçülmektedir. Bu yöntemde plazma (gaz halindeki iyon akimi) kaynakli atomlastirici kullanilir. Plazma kaynagi olarak argon gazi vardir. Numunenin, yaklasik 6000-10000'C sicakliktaki plazmaya püskürtülmesi ile gaz fazina geçerek uyarilan atomlarin yaptiklari emisyonun ölçümüne dayanir. Analiz örneginin atomlastirilmasi ve uyarilmasi için alev disindaki düzeneklerin kullanildigi cihazlarda, alev yerine elektrotlarin veya plazmanin yerlestirilmesinden baska bir degisiklik yoktur. Analizi yapilacak elemente ait izotopun kütlesine sahip bir baska kütlenin birlikte bulunmasi girisim olarak adlandirilir. Atomik emisyon spektroskopisinde, plazmali atomlastiricilardaki kimyasal girisimler ve matriks etkisi diger atomlastiricilara göre oldukça düsüktür. Ancak düsük analit derisimlerinde elektronlarla argon katyonlarinin birlesmesinden dolayi, zemin emisyonu düzeltme gerektirecek kadar büyüktür. Bir de çogu elementin emisyon spektrumu birden fazla çizgi içerdiginden, bunlarin çakismamasina dikkat edilmelidir. Indüktif olarak eslesmis plazma kütle spektrometresinde (lCP-MS) ise genel olarak bir iyonlastirici kaynagi, bir kütle spektrometresi ve bir dedektör içermektedir. Kütle spektrometresi (MS) molekülleri önce iyonize edip sonra da diger moleküllerden ayiran ve ölçen analiz cihazlaridir. Moleküller manyetik alana firlatilir ve birbirlerinden kütle/yük oranlarina göre ayrilirlar ve detektör tarafindan ölçülürler. Inorganik ve organik malzemelerin kantitatif element analizini gerçeklestirmek için kullanilan yüksek hassasiyete sahip bir tekniktir. lCP-MS metodu elektromanyetik indüksiyonla 10000 oK sicakliga ulastirilan argon plazmasi tarafindan örnegin iyonize edilmesi; iyonize elementlerin kütle spektrometresi tarafindan ayristirilmasi ve element derisimlerinin elektron çoklayici bir dedektör tarafindan ölçülmesi asamalarini içerir. Ornegin CN110704810A sayili patent dokümaninda seminal sivinin kalitesinin analiz edildigi bir yöntemden bahsedilmektedir. Bu amaçla söz konusu biyonumune içerisindeki arsenik, kadmiyum ve civa seviyeleri ICP-MS ile ölçülmektedir. Ancak ICP-MS'de de tüm bu avantajlara ragmen analizin dogrulugu hakkinda birtakim dezavantajlar ortaya çikmaktadir. Ayni kütlede olusabilecek baska moleküller, çift yüklü iyonlar veya ayni kütleye sahip baska izotoplar sonuçlarin yaniltici olabilmesine neden olmaktadir. Bu nedenle +2 yüklü çinko için bu ölçüm riskli yöntemler arasindadir. Bazi elementlere ait birden fazla izotop vardir. Bu gibi durumlarda alternatif diger izotoplarla çalisabilmektedir. Analizi yapilacak elemente ait izotopun kütlesine sahip bir baska kütlenin birlikte bulunmasi girisim olarak adlandirilir. Girisimler numune matrisinden kaynakli veya numune hazirlamada kullanilan asitlerden olabilecegi gibi cihazda kullanilan argon gazindan veya suda bulunan iyonlardan da kaynaklanabilir. Bu gibi dezavantaj durumlari özellikle hassas çinko tani ve ölçüm kiti için önem arz eder. Ornegin çinko ölçümü için örnek hazirlamada kullanilan bir asit, matristen gelen farkli bir girisim ya da suda bulunan ekstra çinko iyonu sebebiyle, numunedeki çinko ölçümü gerçek sonucu yansitmayacaktir. Universite hastanelerinde veya hasta potansiyeli fazla olan saglik kurumlarinda ICP-MS gibi cihazlar bulunamamaktadir. Çinko ölçümüne bagli bu dezavantajlar sebebiyle çinko ölçümlerinin kurum içerisinde gerçeklestirilememesi büyük bir problemdir. Dolayisiyla dis hizmet alimiyla hem pahali hem de sonuç süresi uzun olan bir yöntemin, rutin isleyisteki Iaboratuvarlar için çok da uygun olmadigi bilinmektedir. Ornegin; normal sartlarda, ICP-MS analiz sonuçlarinin teslim süresi 10 is gününü bulmaktadir. Analiz yogunluguna, örnek matrisine bagli olarak bu süre uzayabilir. Hizli analiz talepleri dahi 3 gün içerisinde tamamlanir ve iki kat fiyat ile ücretlendirilir. Yukarida sayilan tüm spektrometre yöntemleri, üzerinde çalisilan biyolojik sivinin ölçüm öncesi seyreltilmesini gerektirmektedir. Bu durum, ölçüm öncesi bir ön islem, yani vakit kaybi anlamina gelmektedir. Yüksek hasta kapasiteli ve günlük sonuç vermekle sorumlu taraftan bahsi geçen bu ön islem otomatize olmadigi için, ayrica bir personelin isgücüne mal olmakta ve sonuçlarda hastanin gerçek çinko degerinden sapmalar gösterebilmektedir. Bundan kaynakli olarak gerekli tedaviler aksayabilmekte ve Insan hayati riske girebilmektedir. Diger taraftan saglik alaninda spesifik olarak çinko tanisinda kullanima uygun, yüksek spesifite ve sensitivite gösteren tani kitleri konusunda yeterli ilerlemenin yapilmadigi görülmektedir. Hayati bir öneme sahip olan çinko, biyolojik sistemlerde çesitli enzim ve proteinlerin yapisinda yer alan, yeryüzünde en çok bulunan yirmi dördüncü elementtir. Insan metabolizmasindaki önemi, eksikligi sonucu gözlenen bulgular sonucunda anlasilmistir. Çinko (Zn) insan vücudundaki en yaygin ikinci eser elementtir. Çinko, immün sistemin gelismesi, düzenlenmesi, hormonlarin depolanmasi, salinmasi ve enzimatik katalizleri, hücre içi iletisim, hücreler arasi iletisim, protein ve nükleik asit sentezi ile ilgilidir. Transkripsiyon faktörlerinin olusumunda yer alan birçok proteinde yapisal bir eleman olarak önemli bir rol oynar. Hafiza, görme, tat ve koku gibi birçok metabolik olaya karismaktadir. Çinko, kofaktörlerle birlikte 300 kadar enzimin ve DNA'ya baglanarak gen ekspresyonunu düzenlemek için gereken 200'den fazla transkripsiyon faktörünün aktivitesinde temel bir elementtir. Çinko tüm organlarda, dokularda ve vücut sivilarinda bulunur ve yetiskin bir insan vücudunda ortalama 3 gramdir. Bu miktarin bir kismi iskelet Çinko ayrica yara iyilesmesinde, tat keskinliginde, bagisiklik sistemi fonksiyonunda, prostaglandin üretiminde, kemik mineralizasyonunda, uygun tiroid fonksiyonunda, kanin pihtilasmasinda, bilissel fonksiyonlarda, fetal gelisimde ve sperm üretiminde kritik öneme sahiptir. Vücut sivisi pH'ini düzenler, saç, cilt, tirnak yapmak için kollajen olusumunu tesvik eder ve hafizayi güçlendirmeye yardimci olur ve zihinsel gelisimi gelistirir, prostatin normal islevini korur ve testosteron salgisinda önemli bir etkisi vardir. Ayrica, Zn++ immün tepkilerde, oksidatif streste, apoptozda ve yaslanmada yer almaktadir. Bu yüzden çinko seviyelerinin pratik ve kolay ulasilabilir, her hastanenin rutin biyokimya laboratuvarinda uygulanabilecek yöntemlerle ölçülebilmesi önem tasir. Ozetle mevcut teknikte uygulanan çinko tanisinda da kullanilabilecek elementel yöntemleri incelendiginde, sonuç alma sürelerinin uzunlugu, tekrarlanabilirlige uygun olmamalari, interferansa bagli yanlis analiz sonuçlarinin elde edilmesi riski, dis laboratuvar ihtiyaci, stabilite sorunlari ve çöktürmeye bagli olarak ön islem gerektirmeleri gibi dezavantajlari oldugu görülmektedir. Bu dogrultuda, spesifik olarak çinko ölçümünde kullanilacak, interferans problemini ortadan kaldiran, stabil, güvenilir, spesifitesi ve sensitivitesi yüksek, hemen kullanima hazir, tam otomatik tani kitlerine halen ihtiyaç oldugu düsünülmektedir. Bulusun Kisa Açiklamasi Mevcut bulus; yukarida bahsedilen gereksinimleri karsilayan, tüm dezavantajlari ortadan kaldiran ve ilave bazi avantajlar getiren, saglik ve tip alaninda kullanima uygun bir çinko tani kiti ile ilgilidir. Bulusun öncelikli amaci; tip ve saglik alaninda islem gören, rutin laboratuvar sistemi olan tüm saglik kurumlari ve üniversitelerde kullanima uygun, biyolojik sivilardan çinko seviyesinin ölçümünü saglayan bir tani kiti gelistirmektir. Bulusun bir diger amaci; biyonumuneden, ön islem gerektirmeksizin, direkt olarak ölçüm alinabilmesini mümkün kilan bir çinko tani kiti gelistirmektir. Bulusun bir diger amaci; kan, serum, plazma, beyin omurilik sivisi ve idrar da dahil olmak gelistirmektir. Bulusun bir diger amaci; mevcut teknikte çinko tespit ve ölçümünde kullanilan 5-Br-PAPS ile reaksiyon veren kalan bakir ve demir gibi iyonlarin interferansini elimine eden bir çinko tani kiti gelistirmektir. Bulusun diger bir amaci, spesifik pH degerine sahip olmasi sayesinde bakir, kobalt ve nikel gibi eser elementlerin interferansini da elimine eden bir çinko tani kiti gelistirmektir. Bulusun bir diger amaci; numunelerin kurum disina gönderilmesi ihtiyacini ortadan kaldirmanin yani sira numuneden sonuç alimini hizlandiran, spesifitesi ve sensitivitesi arttirilmis bir çinko tani kiti gelistirmektir. Bulusun bir diger amaci; stabilitesi iyilestirilmis ve raf 'Ömrü uzatilmis bir çinko tani kiti gelistirmektir. Yukarida anlatilan amaçlarin yerine getirilmesi için bulus saglik ve tip alaninda kullanima uygun bir çinko tani kiti olup, - 8.5-9.5 araliginda bir pH degerinde bir tampon ortamina sahip bir birinci reaktif çözeltisi ve - 5-Br-PAPS ve zincon içeren bir ikinci reaktif çözeltisi içermektedir. Bulus ayni zamanda, söz konusu çinko tani kitinin kullanildigi bir tani yöntemi olup; i. En az 8 saat aç kalmis hastadan numune alinmasi ii. Numunenin jelsiz vakumlu tüplerde veya iz element tüplerinde muhafaza edilmesi iii. Analiz cihazinin kalibratör ve kontrol çözeltileri ile kalibre edilmesi iv. Analizi yapilacak numunenin analiz cihazina aktarilmasi ve analiz cihazi tarafindan karistirilmasi v. Numunenin 'üzerine birinci reaktif çözeltisinin eklenerek absorbans ölçümün'ün yapilmasi vi. Ayni numunenin 'üzerine ikinci reaktif çözeltisinin eklenerek absorbans ölçümün'un yapilmasi vii. Olç'ülen absorbans degerleri 'üzerinden numunedeki çinko miktarinin hesaplanmasi adimlarini içermektedir. Bulusun yapisal ve karakteristik 'Özellikleri ve tüm avantajlari asagida verilen detayli açiklama sayesinde daha net olarak anlasilacaktir. Bu nedenle degerlendirmenin, detayli açiklama göz önüne alinarak yapilmasi gerekmektedir. Bulusun Detayli Açiklamasi Bu detayli açiklamada, bulus konusu saglik ve tip alaninda kullanima uygun bir çinko tani kitinin tercih edilen yapilanmalari, konunun daha iyi anlasilmasina yönelik olarak ve hiçbir sinirlayici etki olusturmayacak sekilde açiklanmaktadir. Bulus konusu çinko tani kiti, en genel anlamda hastadan alinan biyolojik sivi içerisinde bulunan çinko elementinin spesifik olarak tespitini ve seviye ölçümünü saglamaktadir. Klinik biyokimya laboratuvarlarinda, hastaliklarin tanisi, ayirici tanisi, siddetinin belirlenmesi, bulgu vermeyen bir hastaligin ortaya çikarilmasi amaciyla biyolojik materyaller üzerinde laboratuvar analizleri yapilir. Bu analizler yapilirken gelistirilen çözelti içerisinde aranan maddenin ölçümünü mümkün kilan kimyasal maddeler içeren karisimlar kullanilir ve bu karisimlara kit adi verilir. Bulus; saglik ve tip alaninda kullanima uygun bir çinko tani kiti olup; - 8.5-9.5 araliginda bir pH degerinde bir tampon ortamina sahip bir birinci reaktif çözeltisi ve - 5-Br-PAPS ve zincon içeren bir ikinci reaktif çözeltisi içermektedir. Bulusun tercih edilen uygulamasinda tampon ortami tercihen pH=9.01 degerine sahiptir. Burada bahsi geçen 5-Br-PAPS bileseninin kimyasal adi 2-(5-bromo-2- piridilazo)-5-(N- propiI-N-sülfo-propilamino)-fenol'dür. Burada bahsi geçen zincon molekülünün kimyasal adi 2-[[(Z)-N-(2-hidroksi-S-sülfoanilin0)- C-fenilkarbonimidoil]diazenil]benzoikasititir. Bahsi geçen ikinci reaktif çözeltisi, içerigindeki 5Br-PAPs ve Zincon kimyasallarindan dolayi turuncu-kirmizi arasi bir renge sahiptir. Elementel analizde en sik karsilasilan sorunlarin basinda interferans gelmektedir. interferans, numune çözelti içerisinde ölçümü yapilacak olan elementin disindaki elementlerin de ölçümleri etkilemesi ve test sonuçlarinda sapmalara neden olmasi Bulus konusu çinko tani kitinin çalisma prensibi alkali pH degerlerinde çinkonun 5-Br- PAPS ile renkli stabil bir kompleks olusturmasi ve bu kompleksin renk yogunlugunun çözelti içerisindeki çinko miktariyla orantili olmasina dayanir. Elde edilen renk çözelti içerisindeki maddelerin isigi farkli dalga boylarinda tutmasi prensibine dayanarak ölçüm yapan spektrofotometre ile ölçülür. Çalismamizda içindeki çinko miktari bilinen standart çözeltiler kullanilmistir. 5-Br-PAPS içeren reaktif çözeltileri bu standartlar üzerinde denenmistir. Bulus kapsaminda, çinko ölçüm kimyasali olarak kullanilan 5-Br-PAPSyin pH=8.5-9.5 degerinde iken çok yüksek spesifite ve sensitivite gösterdigi görülmüstür. Bu pH'in altindaki ve `üstündeki degerlerde spesifite ve sensitivitenin düsmesinin yani sira çözeltinin stabilitesinin bozuldugu ve birçok tamponla iyi geçinemedigi kesfedilmistir. Bulusun tercih edilen uygulamasinda, çinko tani kitinin reaksiyon gücü ve stabilitesinin arttirilmasi için birinci reaktif çözelti ve ikinci reaktif çözelti ayrica sürfaktan içermektedirler. Sürfaktan olarak kullanilan bilesen veya bilesenlerde bakir elementinin bulunmasi ve 5-Br-PAPS ile reaksiyon vermesi muhtemeldir. Ancak söz konusu pH degerinde 5-Br-PAPS, çinko ile renkli bir kompleks olustururken ayni zamanda bu pH'ta zincon molekülünün de bakir elementini bagladigi ve böylelikle bakira bagli interferansi ortadan kaldirdigi görülmüst'ür. Zincon normalde çinko ölçümü için kullanilabilen bir metal baglayici maddedir. Ancak olusturulan uygun pH ve tampon ortaminda zincon çinkoyu degil ortamdaki bakir ve varsa kobalt ve nikel gibi eser elementleri baglamaktadir. Böylece -Br-PAPS ile reaksiyona girebilecek çinko disi metaller ortamdan uzaklastirilmis olmaktadir. Dolayisiyla bulusun orijinalligi 5-Br-PAPS ve zincon molekül'ün'ün spesifik olarak belirlenmis pH=8.5-9.5 araligindaki bir degere, daha spesifik olarak pH=9.01 degerine sahip çözelti içerisinde beraberce kullanimindan ileri gelmektedir. Burada yaratilan sinerji sayesinde saglanan yüksek spesifite ve sensitivite sayesinde çinko disinda çözeltide bulunmasi muhtemel bakir, demir, kobalt ve nikel gibi eser miktardaki tüm elementlerin filtrelenmeleri ve test sonucunda sapmalara sebebiyet vermemeleri saglanmaktadir. Bulusun tercih edilen uygulamasinda, bahsi geçen s'ürfaktan t-oktiIfenoksipolietoksietanol ve sigir serum alb'üminini içeren gruptan seçilmektedir. En tercih edilen uygulamaya göre, birinci reaktif çözelti hem t-oktiIfenoksipolietoksietanol hem de sigir serum albümini içerirken, ikinci reaktif çözelti t-oktiIfenoksipolietoksietanol içermektedir. Burada bahsi geçen sürfaktanlar maddeler arasi yüzey geriliminin azaltilmasi amaciyla kullanilmaktadir. Bulusun tercih edilen uygulamasinda, bahsi geçen tampon ortamini içeren birinci reaktif çözelti en az bir baz ve en az bir asit içermektedir. Tercih edilen uygulamaya göre, bahsi geçen baz tris(hidroksimetil)aminometan, bahsi geçen asit ise sitrik asittir. Sitrik asit ayni zamanda demir interferansini elimine etmekte de destekleyici rol oynamaktadir. Bulusun bir uygulamasinda, birinci reaktif çözelti ve ikinci reaktif çözelti ayrica kitin stabilitesini ve raf ömrünü uzatmak amaciyla en az bir koruyucu içerirler. Tercih edilen uygulamaya göre, koruyucu olarak ticari adi ProCIin 950 olan 2-metiI-4-izotiazolin-3-on kullanilmaktadir. Bulusun tercih edilen bir uygulamasinda, birinci reaktif çözelti molar olarak; amin0metan 4-10 miVl miktarinda sitrik asit 7,5-15 mM miktarinda sigir serum albümini 0,15-1 mM miktarinda t-oktiIfenoksipolietoksietanol 1-2 mM miktarinda 2-metiI-4-izotiazolin-3-0n içermektedir. Bulusun tercih edilen bir uygulamasinda, ikinci reaktif çözelti molar olarak; -10 uM miktarinda 5-Br-PAPS -10 uM miktarinda Zincon 2-7 mM miktarinda NaOH 0,15-1 mM miktarinda t-oktiIfenoksipolietoksietanol 1-2 mM miktarinda 2-metiI-4-izotiazolin-3-0n içermektedir. Bulusun tercih edilen uygulamasinda, bahsi geçen birinci reaktif çözeltisi ve ikinci reaktif çözeltisi iki ayri tüpte yer almaktadir. Bulusun bir uygulamasinda göre çinko tani kiti ayrica bir kalibratör çözeltisi ve en az üç kontrol çözeltisi içermektedir. Bulusun bir uygulamasina göre tani kitinde kullanilan birimler ve degerler asagida Tablo 1 ile verilmistir. Tablo 1. Çinko tani kitine iliskin bir uygulama Birinci reaktif çözeltisi 170 uL hacim Ikinci reaktif çözeltisi 30 uL hacim Kalibratör çözeltisi Zn içerigi : 262 ug/dl Birinci kontrol çözeltisi Zn içerigi : 132 ug/dl Ikinci kontrol çözeltisi Zn içerigi : 327 ug/dl Üçüncü kontrol çözeltisi Zn içerigi : 32 ug/dl Bulus konusu çinko tani kiti, +4°C'deki saklama kosullari altinda 12 aya kadar stabil kalmaktadir. Bulus konusu kit, plate okuyucusunda ve otomatik biyokimya analiz cihazlarinda (oto-analizörlerde) spektrofotometrik yöntem ile ölçüm alinmasini saglamaktadir. Oto-analizörler, otomatik numune ve reaktif pipetleme sistemleri ile çesitli ölçüm metotlarini birlestiren cihazlardir. Standardize edilmis reaktif ve numune pipetleme imkani ve kisa sürede çok sayida örnegin çalisabilme olanagi gibi özellikleri sayesinde rutin klinik biyokimya laboratuvarlarinda kullanildiginda güvenilir ve çabuk sonuç verirler. Bulus konusu çinko tani kiti sayesinde hasta numuneleri ön islem gerektirmeksizin oto- analizörlerde test edilmekte ve test sonuçlarinin günlük olarak hastaya ulastirilmasi mümkün olmaktadir. Bulus ayni zamanda, söz konusu çinko tani kitinin kullanildigi bir tani yöntemi olup; viii. En az 8 saat aç kalmis hastadan numune alinmasi ix. Numunenin jelsiz vakumlu tüplerde veya iz element tüplerinde muhafaza edilmesi x. Analiz cihazinin kalibratör ve kontrol çözeltileri ile kalibre edilmesi xi. Analizi yapilacak numunenin analiz cihazina aktarilmasi ve analiz cihazi tarafindan karistirilmasi xii. Numunenin üzerine birinci reaktif çözeltisinin eklenerek absorbans ölçümünün yapilmasi xiii. Ayni numunenin üzerine ikinci reaktif çözeltisinin eklenerek absorbans ölçümünün yapilmasi xiv. Olçülen absorbans degerleri üzerinden numunedeki çinko miktarinin hesaplanmasi adimlarini içermektedir. Bulusun tercih edilen uygulamasindai (i) nolu islem adiminda bahsi geçen hastadan 8 ila saat açlik durumundayken numune alinmaktadir. Burada bahsi geçen numune; serum, plazma, beyin omurilik sivilari, doku homojenati veya idrar olabilmektedir. Bulusun tercih edilen uygulamasinda (ii) nolu islem adiminda bahsi geçen muhafaza islemi 1 haftaya kadar + 4°C'de, 2 aya kadar -20°C'de veya 6 aya kadar -80°C'de gerçeklestirilmektedir. Burada bahsi geçen muhafaza tüpleri iz element testi için üretilen lacivert kapakli toplama tüpleri olmali, içerisinde ayirma jeli olan tüpler kullanilmamalidir. Çünkü jeIIi tüplerde santrifüj sonrasinda serum ve kan hücreleri arasinda fiziksel bir engel olusmakta, santrifüjleme etkisiyle jelin bir miktari serum veya plazmaya dökülebilmektedir. Bu durum gerçek çinko ölçümünde hem interferansa hem de olmasi gerekenden daha yüksek çinko ölçümüne sebebiyet verecektir. Bulusun tercih edilen uygulamasinda, (iii) nolu islem adiminda bahsi geçen kalibratör deiyonize su içerisinde 262 pg/dl ZnSO4 çözeltisi seklindedir. Kalibrasyon materyalinin deyonize suyla hazirlanmasinda birçok avantaj vardir. Söz konusu kalibratör ön çalisma gerektirmeden, hizli ve kolay bir teknikle ekonomik sekilde hazirlanabilmekte ve baska bir madde ile interferans göstermemektedir. Yine ayni adimda kullanilan kontrol çözeltileri 3 farkli seviyede belirlenmis olup, deyonize su içerisinde hazirlanan ve çözülen çinko sülfattan meydana gelmektedir. Bulusun tercih edilen bir uygulamasinda; bu seviyeler 32, 132 ve 327 ug/dl olarak belirlenmistir. Materyallerimizin +4°C saklanma ko sulu ile 1 yil raf ömrü oldugu 2 yillik stabilite çalismalari sonucunda standardize edilmistir. Kalibrasyon materyalinde oldugu gibi sadece deyonize su ve çinkosülfat (ZnSO4) kullanilmasi, kontroller için de ayni avantajlari saglamistir. Farkli firmalara ait çinko kitindeki kalibrasyon ve kontrol materyallerinin farkli iyonlari da ölçtügü (yani interferense sebep oldugu) fark edilmistir. Bulusun kalibrasyon ve kontrol materyalinde ZnSO4 kullanimi, pratik ve dogrudan çinko ölçümü yapabilen bir çözüm getirilmistir. Bulusun tercih edilen uygulamasinda, (iv) nolu islem adiminda bahsi geçen aktarma islemi 12 pL numunenin cihaz içerisindeki küvete pipetlenmesi seklinde gerçeklestirilmektedir. Yine bu uygulamaya göre takip eden (v) nolu islem adiminda numune üzerine 160 pL miktarinda birinci reaktif çözeltisinden eklenmektedir. Söz konusu ekleme islemi farkli bir otomatize pipet ile gerçeklestirilmektedir. Bu islem adiminda bahsi geçen absorbans ölçümü 548-748 nm araligindaki dalga boyunda yapilmaktadir. Takip eden (vi) nolu islem adiminda ayni numune üzerine 30 uL miktarinda ikinci reaktif çözeltisinden eklenmektedir. Söz konusu ekleme islemi farkli bir otomatize pipet ile gerçeklestirilmektedir. Bu islem adiminda bahsi geçen absorbans ölçümü de 548-748 nm araligindaki dalga boyunda yapilmaktadir. (iv), (v) ve (vi) islem adimlarinda kullanilan pipetlerin her biri birbirinden farkli olup her bir ekleme isleminin ardindan özel solüsyon ile yikanmaktadir. Son olarak (vii) nolu islem adiminda ise (v) ve (vi) islem adimlarinda cihaz tarafindan ölçülen absorbans degerlerinin farkindan numunedeki çinko miktarina ulasilmaktadir. Bulusun tercih edilen uygulamasinda analiz süresi yaklasik 10 dakikadir. Bulus konusu çinko tani kiti, gelistirilmesi sürecinde dogruluk, tekrarlanabilirlik, spesifiklik, interferans egilimi gibi birçok performans degerlendirme testine maruz birakilmistir. Bulus konusu çinko tani kiti gerçeklestirilen tüm degerlendirmelerden basariyla geçmistir. Klinik biyokimya alaninda stabil, güvenilir, tekrarlanabilir, spesifitesi ve sensitivitesi yüksek, uzun ömürlü ve tam otomatik çinko tani kitinin gerekliligi göz önüne alinarak, gelistirilen kit validasyon isleminden geçirilmistir. Kitin deiyonize suda 2.5-5 uM 5-Br-PAPS tampon ortaminda tampon ortaminda 50-100 micM 5-Br-PAPS araliginda pembe renk verdigi görülmüstür. Bu örneklerde çinko, alkali kosullar altinda 5-Br-PAPSiin turuncu rengini açik pembeye dogru döndürmektedir. 548 nm'de absorbans degisimi, numunedeki toplam çinko seviyesi ile dogrudan orantilidir. Yeni kitin standartlarinin deyonize su içerisinde olmasi teknik personele sagladigi kolaylik ve is gücünü azaltmasi ile daha avantajlidir. Çünkü firmalardaki mevcut referans ya da standart materyalleri oda isisinda çözdürülüp yaklasik 30 dk. gibi bir süre içerisinde bekletilmesi ve sonra kullanima hazir hale gelebilmesi gibi ön hazirlik gerekmektedir. Bu metot çalisan için pratik ve standardize olamamaktadir. Ayni sekilde zaman kaybina, özellikle hasta yogunlugu fazlaca olan rutin laboratuarlardaki isleyisin kismen aksamasina ve sonuçlarin ötelenmesine sebebiyet vermektedir. Bulus konusu çinko tani kiti ile personel +4"C sicaklikta agzi kapali olarak sakladigi standardi istedigi zaman diliminde alip, hiçbir ön islem gerektirmeden dogrudan cihazda kalibrasyon kontrol islemini yapabilecektir. Materyal problemleri, ekonomik, ulasilabilir, ön çalisma veya oda isisinda çözdürme islemi gerektirmeyen sekilde çözüme ulastirilmistir. Gerçeklestirilen kalibrasyon ve kontrol testlerinde sonuçlar belirlenen araliklar içerisinde olup süreklilik göstermektedir. Bulusun arge sürecinde ayrica 100 gönüllü hastanin her birinden, jel içermeyen sari kapakli vakumlu tüp ve lacivert kapakli iz elementi ölçüm tüpü ile kan alinmistir. Sonuçlar çinko içerigi bilinen referans materyali ile karsilastirilmistir. Bu testler sonucunda jelsiz sari kapakli vakumlu tüp ile alinan kan örneklerinin çinko sonuçlari ile iz elementi tüplerindeki örneklerin sonuçlarinda çok farklilik gözlenmemistir. Bu iki tüp sonuçlarinin referans materyal çinko sonucu ile korelasyonu bulunmustur. Ayrica sabah (8-10 saatlik açliktan sonra alinan) açlik kani ile yapilan çinko ölçümü ile, ögleden sonra tokluk kani ile yapilan çinko ölçümü arasinda yaklasik -15 birim fark oldugu belirlenmistir. Kit ile yapilan çalisma, gönüllü hastalardan sabah açlik kani ile ve ayni hastalardan ögle yemeginden sonraki tokluk kani ile gerçeklestirilmistir. Ornegin sabahki hastadan alinan açlik serumundaki çinko miktari 86 ug/dl iken ögleden sonraki tokluk serumundaki çinko sonucu 72 ug/dl olarak çikmistir. Bu da çinko tani ve ölçüm testi Için en az 8 saat aç kaldiktan sonra toplanan serum örneklerinin kullanilmasi gerektigini göstermektedir. Kit üretim sektöründe karsilasilan ve farkindaligi profesyonellik gerektiren önemli problemlerden birisi interferanslardir. interferans klinik biyokimyada test sonuçlarini bozan istenmeyen durumlardir. interferans deneyleri, sabit sistematik hata (CE) hakkinda bilgi saglar, yöntemin özgüllügünde problem oldugunu gösterir. interferans testi için, ölçümünü yapacagimiz analiti içeren örnege, interferans olusturabilecegi öngörülen materyal eklenmistir. Diger bir tarafta ayni miktardaki örnege, materyalin eklendigi miktardaki saf dilüent eklenmistir. Her iki örnek analiz edilerek, aralarindaki fark saptanmistir. Oto- analizörde yapilan deney için hazirlanan numuneler baska bir isleme tabi tutulmadan sonuçlandirilmistir. Analiz sonucunda interferansa sebep olabilecegi düsünülen maddelerdeki sonuçlar belirli dar bir aralikta (0-4 pg/dl) kalmistir. Bu degerler interferansin ölçüm sonuçlarini etkileyecek oranda olmadigini göstermektedir. Bu çalisma molaritesi ve miktari bilinen deyonize su içerisinde hazirlanan CuSO4, CuCIz, FeCIg, FeCIg, IVlnCI, CaCIg ve hepsinin esit molaritelerde oldugu karisim standartlari ile denenmis, ayni gün ve sartlarda hazirlanan standartlarin sonuçlari otomatize çinko tani kiti ile tekrarli olarak ölçülmüstür. Sonuçlar en az 30 tekrarli olarak yapilmis ve ortalamalari alinmistir. Çalismalar sonucunda 1048 ug/dl ZnSOaün Iinear oldugunu belirlenmis, rapor edilebilecek son limit (cut off) degeri 1000 pg/dl olarak tespit edilmistir. Bulus konusu çinko tani kiti ayrica dogruluk, gerçeklik, özgüllük ve hassasiyet analizine de tabi tutulmustur. Yöntemin tekrarlanabilirligini ölçmek için 3 farkli konsantrasyonda hazirlanan analit 3 kopya ve 10 kopya ile ayni konsantrasyonda test edilmistir. Gerçeklik testi standart referans materyali ( kullanilarak yapilmistir. Sertifikali referans materyali 1: 100'den 1: 2000'e seyreltilmis ve ölçümler alinmistir. Geri kazanim çalismalari için serum havuzu hazirlanmis, hazirlanan serum havuzuna farkli konsantrasyonlarda çinko eklenmis ve ölçümleri alinmistir. Analiz sonuçlari yaklasik %99 oraninda tespit edilmistir. Stabilite çalismalari için reaktifler ve standartlar 2-8°C ve oda sicakligi olarak 2 farkli durumda muhafaza edilmis ve her iki grubun stabiliteleri izlenmistir. Bunu takiben reaktifler -86°C, +60°C, +4"C ve oda sicakli ginda 24 saat tutulmus sonuçlar degerlendirilmistir. Dogrusalligin belirlenmesi için ZnSO4 analiti 1100 ug ila 0 pg (1:2 dilüsyon) olarak hazirlanmis, yapilan ölçümlere göre sonuçlar LCD: 4 pg/dL, LOQ: 12 ugi'dL olarak elde edilmistir. Ayrica bulus konusu çinko tani kitinin her ay takibinin yapildigi ve degerlendirildigi eksternal kalite kontrol analizi de gerçeklestirilmis ve teknikte standart olarak kullanilan atomik absorpsiyon teknigi ile kolere sonuçlar verdigi görülmüstür. Sonuç olarak, bulusa konu olan çinko tani kitinin, mevcut teknikte yer alan çinko tani ve ölçüm analiz yöntemleriyle karsilastirildiginda gelistirilmis analitik spesifite, analitik sensitivite, dogruluk, geri kazanim, tekrarlanabilirlik, raf ömrü, stabilite gösterdigi görülmüstür. Bunlarin yani sira ön islem gerektirmeksizin oto-analizöre entegre edilebilirligi, ekonomik ve hizli olarak gün içerisinde sonuç almayi saglamasi sayesinde saglik sektöründe tercih edilirligi yüksek görülmektedir. TR TR TR TR TR DESCRIPTION A ZINC DIAGNOSTIC KIT SUITABLE FOR USE IN HEALTH AND MEDICINE Technical Field This invention; Suitable for use in healthcare institutions with laboratory systems serving in the health and medical sector; It is about a zinc measurement kit with increased specificity and sensitivity, long shelf life and stability. State of the Art: In today's technology, the analysis of most metals and some nonmetals is carried out by atomic absorption spectroscopy. Atomic absorption spectrometry (AAS) is an analysis technique that measures the concentrations of elements. Generally, flame is produced using air/acetylene or nitrous oxide-acetylene gases. In addition, the radiation emitted from the hollow cathode lamp used specifically for the measured element is passed through the existing flame and measured by the detector. The sample to be analyzed is sprayed on the flame. If the relevant element is present in the sample, it absorbs the light coming from the lamp and thus the intensity of the light reaching the detector decreases. Measurement is carried out on the basis that the amount of light absorbed is directly proportional to the concentration of the element in the sample. Although this method is the most used method for trace element measurement today, it causes many problems. One of the technical problems encountered arises from the flame source. As the flame temperature increases, the number of atoms in the excited state increases and, accordingly, the intensity of the radiation emitted increases. However, if flames with very high temperatures are used, ionization of the analysis element reduces the sensitivity of the method. This may cause different results from device to device. Another problem is that fluctuations in flame temperature significantly affect the number of atoms in the excited state, causing the sensitivity to change. To prevent this, the internal standard method is used. In this method, another element of known concentration is added to the sample and standard solutions containing the analyzed element. This added element is called the internal standard. However, the addition of such standards in zinc measurement causes undesirable interference. Interaction of zinc with the content of the standard solution may cause it to interact with any undesirable substance and therefore not reflect the real measurement result. This interference situation causes unwanted and unacceptable data in the measurement of trace elements. Considering the disadvantages of the flame system, another element measurement method applied in the technique is graphite furnace atomic absorption spectrometry (GFAAS). This method has similar features to flame atomic absorption, but its most important difference is the use of graphite furnaces. In GFAAS, samples are deposited in a small graphite tube that can be heated to vaporize and atomize, attempting to measure much smaller amounts of trace elements at much higher temperatures than in flamed AAS. Graphite furnaces are known as tubes of 2-3 cm length and 1 cm inner diameter. This tube is used as an electrothermal atomizer by heating it with electric current connected to both sides. However, although it is very difficult to standardize GFAASS, repeated measurement results are quite problematic. For example, in the patent document numbered JPHO3146853, an atomic absorption analysis method based on the use of graphite or metal cells and graphite electrodes, applied in a flameless manner, is mentioned, which is used for the elemental analysis of biosamples such as blood. In the method, the sample is injected into a tube through an injection port and heated by a power source. Under the influence of temperature, the elements in the sample are atomized and measurements are taken through the light absorbed through the light transmission windows. Elements at low concentrations are also measured in inductively coupled plasma atomic emission spectrometry, which is another method in the current technique. In this method, a plasma (gaseous ion flow) source atomizer is used. There is argon gas as the plasma source. It is based on the measurement of the emission of atoms excited by passing into the gas phase by spraying the sample into plasma at a temperature of approximately 6000-10000 °C. In devices where mechanisms other than flame are used to atomize and excite the analysis sample, there is no change other than placing electrodes or plasma instead of flame. The presence of another mass with the mass of the isotope of the element to be analyzed is called interference. In atomic emission spectroscopy, chemical interference and matrix effects in plasma atomizers are much lower than other atomizers. However, at low analyte concentrations, due to the combination of electrons and argon cations, the background emission is large enough to require correction. Also, since the emission spectrum of most elements contains more than one line, care should be taken to ensure that they do not overlap. Inductively coupled plasma mass spectrometry (ICP-MS) generally includes an ionizer source, a mass spectrometer and a detector. Mass spectrometers (MS) are analysis devices that first ionize molecules and then separate and measure them from other molecules. Molecules are thrown into the magnetic field and separated from each other according to their mass/charge ratios and measured by the detector. It is a highly sensitive technique used to perform quantitative elemental analysis of inorganic and organic materials. lCP-MS method: ionization of the sample by argon plasma reaching a temperature of 10000 oK by electromagnetic induction; It includes the steps of separating ionized elements by a mass spectrometer and measuring elemental concentrations by an electron multiplexing detector. For example, in the patent document numbered CN110704810A, a method for analyzing the quality of seminal fluid is mentioned. For this purpose, arsenic, cadmium and mercury levels in the biosample are measured by ICP-MS. However, despite all these advantages, ICP-MS also has some disadvantages regarding the accuracy of the analysis. Other molecules that may form with the same mass, doubly charged ions, or other isotopes with the same mass may cause the results to be misleading. For this reason, this measurement is among the risky methods for +2 charged zinc. Some elements have more than one isotope. In such cases, the alternative can work with other isotopes. The presence of another mass with the mass of the isotope of the element to be analyzed is called interference. Interferences may arise from the sample matrix or the acids used in sample preparation, as well as the argon gas used in the device or the ions present in the water. Such disadvantages are especially important for sensitive zinc diagnostic and measurement kits. For example, due to an acid used in sample preparation for zinc measurement, a different interference from the matrix, or an extra zinc ion in the water, the measurement of zinc in the sample will not reflect the actual result. Devices such as ICP-MS cannot be found in university hospitals or health institutions with high patient potential. Due to these disadvantages related to zinc measurement, it is a big problem that zinc measurements cannot be carried out in-house. Therefore, it is known that outsourcing a method that is both expensive and has a long result time is not very suitable for laboratories with routine operation. For example; Under normal conditions, the delivery time for ICP-MS analysis results reaches 10 business days. This time may take longer depending on the analysis intensity and sample matrix. Even quick analysis requests are completed within 3 days and charged at twice the price. All spectrometry methods listed above require dilution of the biological fluid studied before measurement. This means a pre-treatment before measurement, meaning a waste of time. Since this pre-process, which is mentioned by the party responsible for high patient capacity and providing daily results, is not automated, it also costs the labor of a staff member and the results may deviate from the patient's actual zinc value. As a result, necessary treatments may be disrupted and human life may be at risk. On the other hand, it appears that not enough progress has been made in the field of healthcare regarding diagnostic kits with high specificity and sensitivity that are suitable for use specifically in the diagnosis of zinc. Zinc, which is of vital importance, is the twenty-fourth most abundant element on earth and is included in the structure of various enzymes and proteins in biological systems. Its importance in human metabolism was understood as a result of the findings observed as a result of its deficiency. Zinc (Zn) is the second most common trace element in the human body. Zinc is involved in the development and regulation of the immune system, storage, release and enzymatic catalysis of hormones, intracellular communication, intercellular communication, protein and nucleic acid synthesis. It plays an important role as a structural element in many proteins involved in the formation of transcription factors. It is involved in many metabolic events such as memory, vision, taste and smell. Zinc, together with cofactors, is an essential element in the activity of approximately 300 enzymes and more than 200 transcription factors required to regulate gene expression by binding to DNA. Zinc is found in all organs, tissues and body fluids, and there is an average of 3 grams in an adult human body. Some of this amount is skeletal Zinc is also critical in wound healing, taste acuity, immune system function, prostaglandin production, bone mineralization, proper thyroid function, blood clotting, cognitive functions, fetal development, and sperm production. It regulates body fluid pH, promotes collagen formation to make hair, skin, nails and helps strengthen memory and improves mental development, maintains the normal function of the prostate and has a significant effect on testosterone secretion. Additionally, Zn++ is involved in immune responses, oxidative stress, apoptosis and aging. Therefore, it is important to measure zinc levels with practical and easily accessible methods that can be applied in the routine biochemistry laboratory of every hospital. In summary, when the elemental methods that can be used in the diagnosis of zinc applied in the current technique are examined, it is seen that they have disadvantages such as long lead times, not being suitable for repeatability, the risk of obtaining incorrect analysis results due to interference, the need for an external laboratory, stability problems and requiring pre-treatment due to precipitation. In this regard, it is thought that there is still a need for fully automatic diagnostic kits that will be used specifically for zinc measurement, eliminate the problem of interference, are stable, reliable, have high specificity and sensitivity, are ready for immediate use. Brief Description of the Invention The present invention; It concerns a zinc diagnostic kit that meets the above-mentioned requirements, eliminates all disadvantages and brings some additional advantages, and is suitable for use in the field of health and medicine. The primary purpose of the invention is; Our aim is to develop a diagnostic kit that enables the measurement of zinc levels in biological fluids, suitable for use in all health institutions and universities that operate in the field of medicine and health and have a routine laboratory system. Another purpose of the invention is; Our aim is to develop a zinc diagnostic kit that enables direct measurement from a biosample, without requiring pre-treatment. Another purpose of the invention is; including blood, serum, plasma, cerebrospinal fluid and urine. Another purpose of the invention is; The aim is to develop a zinc diagnostic kit that eliminates the interference of remaining ions such as copper and iron that react with 5-Br-PAPS, which is used in the detection and measurement of zinc in the current technique. Another aim of the invention is to develop a zinc diagnostic kit that eliminates the interference of trace elements such as copper, cobalt and nickel, thanks to its specific pH value. Another purpose of the invention is; The aim is to develop a zinc diagnostic kit with increased specificity and sensitivity, which not only eliminates the need to send samples outside the institution, but also accelerates obtaining results from the sample. Another purpose of the invention is; To develop a zinc diagnostic kit with improved stability and extended shelf life. In order to fulfill the purposes described above, the invention is a zinc diagnostic kit suitable for use in the field of health and medicine, and contains - a first reagent solution with a buffer environment at a pH value in the range of 8.5-9.5 and - a second reagent solution containing 5-Br-PAPS and zincon. . The invention is also a diagnostic method using the zinc diagnostic kit in question; I. Taking a sample from the patient who has fasted for at least 8 hours ii. Preservation of the sample in gel-free vacuum tubes or trace element tubes iii. Calibrating the analyzer with calibrator and control solutions iv. Transferring the sample to be analyzed to the analyzer and mixing it by the analyzer. Measurement of absorbance by adding the first reagent solution onto the sample vi. Measurement of absorbance by adding the second reagent solution to the same sample vii. It includes the steps of calculating the amount of zinc in the sample based on the measured absorbance values. The structural and characteristic features and all the advantages of the invention will be more clearly understood thanks to the detailed explanation given below. Therefore, the evaluation must be made taking into account the detailed explanation. Detailed Description of the Invention In this detailed description, the preferred embodiments of a zinc diagnostic kit suitable for use in the field of health and medicine, which is the subject of the invention, are explained for a better understanding of the subject and in a way that does not create any limiting effect. The zinc diagnostic kit of the invention provides, in the most general sense, the specific detection and level measurement of the zinc element in the biological fluid taken from the patient. In clinical biochemistry laboratories, laboratory analyzes are performed on biological materials in order to diagnose diseases, differentiate them, determine their severity, and reveal an asymptomatic disease. While performing these analyses, mixtures containing chemical substances that enable the measurement of the substance sought in the developed solution are used and these mixtures are called kits. Meet; It is a zinc diagnostic kit suitable for use in the field of health and medicine; - a first reagent solution having a buffer medium at a pH in the range of 8.5-9.5; and - a second reagent solution containing 5-Br-PAPS and zincon. In the preferred embodiment of the invention, the buffer medium preferably has a pH = 9.01. The chemical name of the 5-Br-PAPS component mentioned here is 2-(5-bromo-2-pyridylazo)-5-(N-propyl-N-sulfo-propylamino)-phenol. The chemical name of the zincon molecule mentioned here is 2-[[(Z)-N-(2-hydroxy-S-sulfoaniline0)-C-phenylcarbonimidoyl]diazenyl]benzoic acid. The second reagent solution mentioned has an orange-red color due to the chemicals 5Br-PAPs and Zincon it contains. Interference is one of the most common problems in elemental analysis. interference, elements other than the element to be measured in the sample solution affecting the measurements and causing deviations in the test results. The working principle of the zinc diagnostic kit of the present invention is that zinc forms a colorful stable complex with 5-Br-PAPS at alkaline pH values and the color intensity of this complex depends on the zinc in the solution. It is based on being proportional to the amount. The resulting color is measured with a spectrophotometer, which measures based on the principle that the substances in the solution retain light at different wavelengths. In our study, standard solutions with known zinc content were used. Reagent solutions containing 5-Br-PAPS were tested on these standards. Within the scope of the invention, it has been observed that 5-Br-PAPS, which is used as a zinc measurement chemical, shows very high specificity and sensitivity at pH = 8.5-9.5. It has been discovered that at values below and above this pH, specificity and sensitivity decrease, as well as the stability of the solution deteriorates and it does not get along well with many buffers. In the preferred embodiment of the invention, the first reactive solution and the second reactive solution also contain surfactant in order to increase the reaction power and stability of the zinc diagnostic kit. It is possible that the component or components used as surfactants contain the element copper and may react with 5-Br-PAPS. However, while 5-Br-PAPS forms a colored complex with zinc at the pH value in question, it has also been observed that at this pH the zincon molecule binds the copper element, thus eliminating copper-related interference. Zincon is a metal binding agent that can normally be used for zinc measurement. However, in the appropriate pH and buffer environment, zincon binds trace elements such as copper and, if present, cobalt and nickel, not zinc. Thus, non-zinc metals that may react with -Br-PAPS are removed from the environment. Therefore, the originality of the invention comes from the use of 5-Br-PAPS and zincon molecule together in a solution with a specifically determined pH value between 8.5-9.5, more specifically pH = 9.01. Thanks to the high specificity and sensitivity provided by the synergy created here, all trace elements such as copper, iron, cobalt and nickel that may be present in the solution, except zinc, are filtered and do not cause deviations in the test results. In the preferred embodiment of the invention, said surfactant is selected from the group consisting of t-octylphenoxypolyethoxyethanol and bovine serum albumin. According to the most preferred embodiment, the first reactive solution contains both t-octyphenoxypolyethoxyethanol and bovine serum albumin, while the second reactive solution contains t-octyphenoxypolyethoxyethanol. The surfactants mentioned here are used to reduce the surface tension between substances. In the preferred embodiment of the invention, the first reactive solution containing the said buffer medium contains at least one base and at least one acid. According to the preferred embodiment, said base is tris(hydroxymethyl)aminomethane and said acid is citric acid. Citric acid also plays a supportive role in eliminating iron interference. In one embodiment of the invention, the first reactive solution and the second reactive solution also contain at least one preservative in order to extend the stability and shelf life of the kit. According to the preferred embodiment, 2-methyl-4-isothiazolin-3-one, trade name ProCIin 950, is used as a preservative. In a preferred embodiment of the invention, the first reagent solution is molar; It contains amine0methane, 4-10 ml of citric acid, 7.5-15 mM of bovine serum albumin, 0.15-1 mM of t-octyphenoxypolyethoxyethanol and 1-2 mM of 2-methyl-4-isothiazoline-3-0n. In a preferred embodiment of the invention, the second reagent solution is molar; It contains -10 uM of 5-Br-PAPS -10 uM of Zincon, 2-7 mM of NaOH, 0.15-1 mM of t-octyphenoxypolyethoxyethanol and 1-2 mM of 2-methyl-4-isothiazoline-3-0n. In the preferred embodiment of the invention, the first reagent solution and the second reagent solution are located in two separate tubes. According to an embodiment of the invention, the zinc diagnostic kit also includes a calibrator solution and at least three control solutions. The units and values used in the diagnostic kit according to an embodiment of the invention are given in Table 1 below. Table 1. An application of the zinc diagnostic kit First reagent solution 170 uL volume Second reagent solution 30 uL volume Calibrator solution Zn content: 262 ug/dl First control solution Zn content: 132 ug/dl Second control solution Zn content: 327 ug/dl Zn content of the third control solution: 32 ug/dl. The zinc diagnostic kit of the invention remains stable for up to 12 months under storage conditions at +4°C. The kit of the invention enables measurements to be taken using the spectrophotometric method in plate readers and automatic biochemistry analyzers (auto-analyzers). Auto-analyzers are devices that combine automatic sample and reagent pipetting systems with various measurement methods. Thanks to their features such as standardized reagent and sample pipetting and the ability to work with a large number of samples in a short time, they provide reliable and rapid results when used in routine clinical biochemistry laboratories. Thanks to the zinc diagnostic kit of the invention, patient samples are tested in auto-analyzers without requiring pre-treatment, and it is possible to deliver the test results to the patient on a daily basis. The invention is also a diagnostic method using the zinc diagnostic kit in question; viii. Taking samples from the patient who has fasted for at least 8 hours ix. Storage of the sample in gel-free vacuum tubes or trace element tubes x. Calibrating the analyzer with calibrator and control solutions xi. Transferring the sample to be analyzed to the analyzer and mixing it by the analyzer xii. Adding the first reagent solution onto the sample and measuring the absorbance xiii. Adding the second reagent solution to the same sample and measuring the absorbance xiv. It includes the steps of calculating the amount of zinc in the sample based on the measured absorbance values. In the preferred application of the invention, in step (i), a sample is taken from the patient in question while he is fasting for 8 to 8 hours. The sample mentioned here; It can be serum, plasma, cerebrospinal fluids, tissue homogenate or urine. In the preferred embodiment of the invention, the preservation process mentioned in the process step (ii) is carried out at + 4°C for up to 1 week, at -20°C for up to 2 months, or at -80°C for up to 6 months. The preservation tubes mentioned here should be collection tubes with dark blue caps produced for trace element testing, and tubes containing separating gel should not be used. Because after centrifugation in gel tubes, a physical barrier is formed between the serum and blood cells, and some of the gel may be poured into the serum or plasma due to the centrifugation effect. This will cause both interference in the actual zinc measurement and a higher zinc measurement than it should be. In the preferred embodiment of the invention, the calibrator mentioned in the process step (iii) is in the form of a 262 pg/dl ZnSO4 solution in deionized water. There are many advantages in preparing calibration material with deionized water. The calibrator in question can be prepared economically, with a quick and easy technique, without requiring any preliminary work, and does not interfere with any other substance. The control solutions used in the same step were determined at 3 different levels and consist of zinc sulfate prepared and dissolved in deionized water. In a preferred embodiment of the invention; These levels were determined as 32, 132 and 327 ug/dl. As a result of 2-year stability studies, it has been standardized that our materials have a shelf life of 1 year under +4°C storage conditions. Using only deionized water and zinc sulfate (ZnSO4) as in the calibration material provided the same advantages for the controls. It has been noticed that the calibration and control materials in the zinc kits of different companies also measure different ions (that is, cause interference). By using ZnSO4 in the calibration and control material of the invention, a practical and direct zinc measurement solution has been provided. In the preferred application of the invention, the transfer process mentioned in step (iv) is carried out by pipetting 12 pL of the sample into the cuvette in the device. Again, according to this application, in the following process step (v), 160 pL of the first reagent solution is added to the sample. The addition process in question is carried out with a different automated pipette. In this process step, the absorbance measurement is made at the wavelength between 548-748 nm. In the following step (vi), 30 uL of the second reagent solution is added to the same sample. The addition process in question is carried out with a different automated pipette. In this process step, the absorbance measurement mentioned is also made at the wavelength between 548-748 nm. Each of the pipettes used in the process steps (iv), (v) and (vi) are different from each other and are washed with a special solution after each addition. Finally, in the process step (vii), the amount of zinc in the sample is reached from the difference of the absorbance values measured by the device in the process steps (v) and (vi). In the preferred embodiment of the invention, the analysis time is approximately 10 minutes. The zinc diagnostic kit of the invention was subjected to many performance evaluation tests such as accuracy, repeatability, specificity and interference tendency during its development process. The zinc diagnostic kit that is the subject of the invention has successfully passed all evaluations. Considering the necessity of a stable, reliable, reproducible, long-lasting and fully automatic zinc diagnostic kit with high specificity and sensitivity in the field of clinical biochemistry, the developed kit has undergone a validation process. It was observed that the kit gave a pink color in the range of 2.5-5 µM 5-Br-PAPS in deionized water and 50-100 µM 5-Br-PAPS in buffer medium. In these samples, zinc turns the orange color of 5-Br-PAPS towards light pink under alkaline conditions. The absorbance change at 548 nm is directly proportional to the total zinc level in the sample. The fact that the new kit standards are in deionized water is more advantageous as it provides convenience to technical personnel and reduces labor force. Because the reference or standard materials available in companies are thawed at room temperature for approximately 30 minutes. Preliminary preparation is required, such as waiting for a period of time and then being ready for use. This method cannot be practical or standardized for the employee. Likewise, it causes loss of time, partial disruption of the functioning of routine laboratories, especially in routine laboratories with high patient density, and postponement of results. With the zinc diagnostic kit of the invention, the personnel will be able to take the standard, which is kept closed at +4"C, at any time they want and perform the calibration control process directly on the device without requiring any pre-treatment. Material problems can be solved in an economical, accessible way that does not require preliminary work or thawing at room temperature. In the calibration and control tests performed, the results were within the specified ranges and were consistent. During the R&D process of the invention, blood was taken from each of 100 volunteer patients with a gel-free yellow capped vacuum tube and a dark blue capped trace element measuring tube. As a result of these tests, no significant difference was observed in the zinc results of the blood samples taken with the yellow-capped vacuum tube without gel and the results of the samples in the trace element tubes. A correlation was also found between the results of these two tubes and the zinc result of the reference material. It was determined that there was a difference of approximately -15 units between the zinc measurement made with blood test and the zinc measurement made with postprandial blood in the afternoon. The study with the kit was carried out with morning fasting blood samples from volunteer patients and postprandial blood samples from the same patients after lunch. For example, while the amount of zinc in the fasting serum taken from the patient in the morning was 86 ug/dl, the zinc result in the afternoon fasting serum was 72 ug/dl. This shows that serum samples collected after fasting for at least 8 hours should be used for zinc diagnosis and measurement testing. One of the important problems encountered in the kit production sector and requiring professional awareness is interference. Interference is an undesirable situation that distorts test results in clinical biochemistry. Interference experiments provide information about the constant systematic error (CE), indicating that there is a problem with the specificity of the method. For the interference test, material predicted to cause interference was added to the sample containing the analyte we will measure. On the other hand, the same amount of pure diluent in which the material was added was added to the same amount of sample. Both samples were analyzed and the difference between them was determined. The samples prepared for the experiment performed on the auto-analyzer were finalized without being subjected to any other processing. As a result of the analysis, the results of the substances thought to cause interference remained within a certain narrow range (0-4 pg/dl). These values show that the interference is not at a level that would affect the measurement results. This study was tested with CuSO4, CuClz, FeClg, FeClg, IVlnCI, CaClg and mixed standards of equal molarity prepared in deionized water of known molarity and amount, and the results of the standards prepared on the same day and under the same conditions were measured repeatedly with an automated zinc diagnostic kit. The results were obtained at least 30 times and their averages were taken. As a result of the studies, it was determined that 1048 ug/dl ZnSO was linear, and the last limit (cut off) value that could be reported was determined as 1000 pg/dl. The zinc diagnostic kit of the invention was also subjected to accuracy, realism, specificity and sensitivity analysis. To measure the reproducibility of the method, the analyte prepared at 3 different concentrations was tested in 3 copies and 10 copies at the same concentration. The authenticity test was carried out using standard reference material (certified reference material was diluted from 1: 100 to 1: 2000 and measurements were taken. A serum pool was prepared for recovery studies, different concentrations of zinc were added to the prepared serum pool and measurements were taken. Analysis results are approximately % For stability studies, reagents and standards were stored in two different conditions: 2-8°C and room temperature, and the stability of both groups was monitored following this. The results were kept at room temperature for 24 hours and evaluated. To determine the linearity, ZnSO4 analyte was prepared as 1100 ug to 0 pg (1:2 dilution), and according to the measurements, the results were obtained as LCD: 4 pg/dL, LOQ: 12 ugi'dL. External quality control analysis, in which the zinc diagnostic kit subject to the invention is monitored and evaluated every month, was also carried out and it was observed that it gave results that were inconsistent with the atomic absorption technique used as a standard in the technique. As a result, it has been observed that the zinc diagnostic kit, which is the subject of the invention, shows improved analytical specificity, analytical sensitivity, accuracy, recovery, repeatability, shelf life and stability when compared to the zinc diagnostic and measurement analysis methods in the current technique. In addition to these, it is highly preferred in the healthcare sector due to its ability to be integrated into the auto-analyzer without requiring pre-processing and its ability to obtain results within the day economically and quickly. TR TR TR TR TR