TR202010523A2 - İmmün plazma elde etmeye yönelik bir yöntem - Google Patents

Abstract

Buluş, geçirilmiş COVID19 laboratuvar kanıtlarına ilaveten, COVID19 PCR RNA testi negatif, COVID IgG pozitif ve COVID IgM negatif test sonucuna sahip farklı bağışçılardan toplanan plazmaların patojen inaktivasyonu, kriyopoor plazmaların ekstraksiyonu, ve havuzlanması işlemlerini içeren bir yöntem ve bu yöntem ile elde edilen patojen free, konsantre edilmiş, havuzlanmış COVID19 immün plazma ürünleri ile ilgilidir.

Description

TARIFNAME Immün plazma elde etmeye yönelik bir yöntem Teknik Alan Bulus, patojen free, konsantre edilmis, havuzlanmis COVID19 immün plazma elde etme yöntemi ve bu yöntemle elde edilen plazma ürünü ile ilgiidir. Teknigin Bilinen Durumu Çin'in Wuhan kentinde 2019 Aralik ayinda baslayan ve tüm dünyayi etkisi altina alan SARS-CoVZ olarak adlandirilan Corona virüs kaynakli COVID19 pandemisine karsi bilinen, standart ve kesin tedavi bulunmamaktadir. Baska virüs hastaliklari sirasinda daha önce kullanilan tedaviler ile hastalik belirtilerine uygun destek tedavileri, COVID19 hastaliginda da tüm dünyada denenmektedir. Bu tedavilerden biri; daha 'önce hastaligi geçirmis olan kisilerin olusturacagi immun cevaptan yararlanmak için bu kisilerin plazmasinin hastalara pasif bagisiklik olusturmak amaciyla verilmesidir. Dünya Saglik Örgütü, acil durumlarda asiya ve antiviral ilaçlara ulasilamadiginda immün plazma kullanimini önermektedir. Ayrica Amerika Birlesik Devletleri'nde FDA (Food and Drug Administration), COVID19 pnbmonisinde kullanilacak immune plazma hakkinda rehber ve standartlar yayinlamistir. Türkiye'de "TC Saglik Bakanligi Saglik Hizmetleri Genel Müdürlügü, Kan ve Kan Urünleri Dairesi Baskanliginin COVID-19 Immün (Konvelans) Plazma tedarik ve kullanim rehberi Nisan 2020" de yayinlamis, bagisçi seçim kriterleri, ürün hazirlama sekli, özellikleri ve klinik endikasyonlar tanimlanmistir. Saglik Bakanliginin rehberi ile FDA rehberi oldukça uyumlu olup mevcut bulustan bazi fakliliklara sahiptir: 3. Bagisçi seçiminde taburculuk 'Öncesi alinan iki negatif PCR 'Örnegi istenmekte ve klinik iyilesmenin ardindan 14 gün geçmis olmasi gerektigi bildirilmektedir. Yapilan çalismalarda negatif PCR testinin %30 oraninda pozitiflesebildigi bildirilmistir. Bu nedenle, bagisçinin basvuru aninda kontrol (COVID19 PCR RNA) testinden geçirilmesi Önemlidir. b. Nbtralizan antikor bakilmasi önerilmekte ancak zorunlu tutulmamaktadir. Oysa n'otralizan antikorlarin yetersizligi ADE (antibody dependent enhancement of infection)'ye neden olabilecektir. Bu sebeple, hazirlanan plazma içerisindeki antikorlarin sonradan degil kullanilmadan önce titre edilmesi 1:80 üzerinde titrelerin kullanilmasi saglanmalidir. c. Bagisçi kaynakli plazma kullanimi, patojen bulasi konusunda her zaman risk tasimakta, bu riskin iyilesme dönemindeki bir hastanin bagisçi oldugu durumda daha yüksek olacagi bilinmektedir. Yayinlanmis rehberlerde patojen inaktivasyonu önerilmekte ama zorunlu tutulmamaktadir. Oysaki, gerek olasi viremi (SARS-COV2) gerekse diger patojenlerin (bakteri, protozoa vb) bulas riski sebebiyle ürün, inaktivasyona tabii tutulmalidir. d. Mevcut rehberler plazmanin bagisçidan alindigi sekliyle infüzyonunu yeterli bulmaktadir. COVID19 pnömonisi olan ve yogun bakimda tedavi gören hastalarda yaygin mikrovasküler trombüslerin görüldügü bildirilmektedir. Artmis koagülopati, virusun hücre içi replikasyonuna yardimci olan proteazlar sebebiyle, plazmanin faktör, proteaz ve sitokinden yogun olan "kriyopresipitat" kisminin ayristirilmasi uygun olacaktir. 9. Rehberlerde her bir bagisçidan alinan plazmanin bir ya da birden fazla hasta için direkt infüzyonu önerilmektedir. Bu durumda, nötralizan antikor titresinin zaten bilinmedigi bir plazmada muhtemel düsük antikor titresi ADE etkisine ya da cevapsizliga yol açacaktir. f. Kan grubu uygunlugu ile rehberlerde transfüzyon yapilmasi gerektigi belirtilmistir. Bu durum, bagisçi sayisinin yetersiz oldugu bu zamanlarda hastalarin plazma temininde ciddi sorun yaratacaktir. Plazma ürünlerinin elde edilmesine yönelik karsilasilan patent basvurularindan biri olan bir yöntem açiklanmaktadir. EP311652781 nolu patentte ise multikolon kromatografisi kullanilarak kan plazmasindan bir plazma proteini konsantresinin hazirlanmasina yönelik bir yöntem açiklanmaktadir. Mevcut teknikteki plazma ürünlerine yönelik önerilen yöntemler yukarida bahsedilen sorunlara çözüm sunamamaktadir. Sonuç olarak yukarida anlatilan olumsuzluklardan dolayi ve mevcut çözümlerin konu hakkindaki yetersizligi nedeniyle ilgili teknik alanda bir gelistirme yapilmasi gerekli kilinmistir. Bulusun Kisa Açiklamasi Mevcut bulus, yukarida bahsedilen gereksinimleri karsilayan, tüm dezavantajlari ortadan kaldiran ve ilave bazi avantajlar getiren COVID19 immün plazma ürünleri hazirlanmasina iliskin yöntem ile ilgilidir. Bulusun 'öncelikli amaci, COVID19 pn'omonili agir hastalik tablosunda seyreden hastalara, iyilesmis hastalardan elde edilen immün plazma ile bagisikligin aktarimini saglamaktir. Bulusun bir diger amaci uygun bagisçilarin seçilmesini saglamaktir. Bu sebeple, bagisçilar, plazma toplanmadan hemen önce tekrar PCR COVID RNA testine tabii tutulmaktadir. ilaveten, akut iyilesme döneminde viremi riskini en aza indirmek için immünokromatografik olarak lgG ve lglVI testleri çalisilmaktadir. Bu testlerden lgG pozitif ve lgM negatif olan bagisçilar uygun kabul edilmektedir. Bulusun bir diger amaci, nötralizan antikorlarin yetersizligi sebebiyle ADE riskinin ortadan kaldirilmasidir. Bulus içerisindeki nötralizan antikor titresinin 1:80 ve üzerinde olmasi hedeflenmistir. Bu risk, bulusta havuzlama yapilarak da minimale indirilmektedir. Zira bazi hastalarda antikor cevabi çok yüksek titrelerde iken bazi hastalarda düsük (yetersiz) titrede gelisebilmektedir. Bulusun bir diger amaci, bagisçi kaynakli patojen bulasi riskini ortadan kaldirmaktir. Bunu saglamak için bulus konusu plazma inaktivasyona tabii tutularak, patojen inaktive olarak hazirlanmaktadir. Bulusun bir diger amaci, tedavi gören hastalarda uygulanacak immun plazmada pihtilasma artis riskinin ortadan kaldirilmasidir. Bulus, pihtilasma faktörleri, proteazlar ve sitokinlerin en düsük miktarda olacagi sekilde planlanmis ve kriyopresipitati uzaklastirilmis kriyopoor plazmalardan hazirlanmaktadir. Bulusun bir diger amaci, her kan grubundaki hastaya kullanilabilen immun plazma elde etmektir. Bulus, farkli kan gruplarindan izohemaglütinin titresi minimumda tutulacak sekilde havuz yapilarak hazirlandigindan "universal"dir. Yukaridaki amaçlarin yerine getirilmesi için bulus geçirilmis COVID19 laboratuvar kanitlarina ilaveten, COVID19 PCR RNA testi negatif, COVlD lgG pozitif ve COVID lgM negatif test sonucuna sahip bagisçilardan toplanan plazmalardan, patojen free, konsantre edilmis, havuzlanmis COVID19 immün plazma elde etme yöntemi olup, en temel halinde; plazmalarin patojen free hale getirilmek üzere inaktive edilmesi; plazmalarin kriyopresipitattan fakir hale getirilmesi; farkli bagisçilardan elde edilen kriyopoor plazmalarin havuzlanmasi islemlerini içermektedir. Bulusun yapisal ve karakteristik özellikleri ve tüm avantajlari asagida verilen sekiller ve bu sekillere atiflar yapilmak suretiyle yazilan detayli açiklama sayesinde daha net olarak anlasilacaktir ve bu nedenle degerlendirmenin de bu sekiller ve detayli açiklama göz önüne alinarak yapilmasi gerekmektedir. Bulusun Anlasilmasina Yardimci Olacak Sekiller Sekil 1, Patojen free, konsantre edilmis, havuzlanmis COVID19 imm'un plazma hazirlama yönteminin sematik gösterimidir. Sekil 2, ACU-lP 1.0 Ur'i'in Bilgi Formu örnegidir. Referanslarin Kisa Açiklamasi iyilesme Ornek alimi ve uygunluk kontrolü Plazmaferez 40 Patojen inaktivasyon 50 Etiketleme 60 Dondurma 70 Çözme 80 Santrifüjleme 90 Ekstraksiyon 100 Havuzlama 110 Son 'ürün kalite kontrol testleri 120 Bölme 130 Direkt kullanim 140 Dondurma 150 Çözme 160 Kullanim Bulusun Detayli Açiklamasi Bu detayli açiklamada bulus konusu yontem sadece konunun daha iyi anlasilmasina yönelik olarak ve hiçbir sinirlayici etki olusturmayacak sekilde açiklanmaktadir. Bulus, iyilesmis hastalardan, patojen free, konsantre edilmis, havuzlanmis COVID19 immün plazma ürünü elde ederek, COVID19 pnömonili agir hastalik tablosunda seyreden hastalara infüzyonu ile bagisikligin aktarimini saglayan bir yöntem saglamakta olup, en temel halinde; - elde edilen plazmalarin patojen free hale getirilmek üzere inaktive edilmesi , - plazmalarin kriyopresipitattan fakir hale getirilmesi, - farkli bagisçilardan elde edilen kriyopoor plazmalarin havuzlanmasi, islemlerini içermektedir. Bulusun tercih edilen bir uygulamasi asagidaki islem adimlarindan olusmaktadir: 0 COVID19 geçirmis ve iyilesmis hastalarin bagisçi olarak degerlendirilmesi (10), o Geçirilmis COVID19 laboratuvar kanitlarina ilaveten her bagisçida COVID PCR RNA ve IgG/IgM testlerinin tekrar çalisilmasi (20), o Uygun bagisçilardan aferez cihazi ile, bagisçi plazma hacmine göre hesaplanarak tercihen 200-600 ml arasinda, plazma toplanmasi (30), o Toplanan plazmalarin patojen free hale getirilmek üzere Amotosalen & UVA ile inaktive edilmesi (40), o inaktive edilen plazmalarin etiketlenmesi (50), o Plazmalarin, dondurularak -40°C'de saklamaya alinm asi (60), o Plazmalarin kriyopresipitattan fakir hale getirilmek için eritilmesi (70), . Çözünen plazmalar yari buz haldeyken santrifüj edilmesi (80), o Santrifüj edilen plazmalarin buza yapisik presipitatlari birakilip, üst kisimdaki kriyosüpernatan kismi ayri bir torbaya alinmasi (90), 0 Farkli bagisçilardan elde edilen kriyopoor plazmalarin tek bir torbaya alinarak havuzlanmasi (100), - Havuzlanmis plazma ürününden alinan brneklerde, son ürün kalite kontrol testleri olan: bakteri ve mantar kültürü, endotoksin analizi, nötralizan antikor titresi ve izohemaglütinin titresi çalisilmasi (110), o Havuzlanmis plazma ürününün tercihen 200 ml olacak sekilde torbalara alinmasi (120), - Uygun endikasyonda kullanilmak üzere hastaya çikisi yapilmasi (130), - Uygun endikasyonda hasta çikincaya kadar -40°C'de dondurularak saklanmasi (140), o Donmus ürünün uygun endikasyondaki hastaya g'onderilmeden eritilmesi (150), . Uygun endikasyonda kullanilmak üzere hastaya çikisi yapilmasi (160). COVID19 laboratuvar tanisi (COVID19 PCR RNA pozitif) almis ve tedavi görmüs tüm hastalar, sikayetlerinin geçmesi üzerinden en az 14 gün geçtikten sonra bagista bulunmak üzere davet edilir. Bagisçi olarak basvuranlardan kan/aferez bagisi için gerekli olan test ve degerlendirmeleri kan ve kan ürünleri kanunu-yönetmeligi ve ulusal kan ve kan bilesenleri, hazirlama, kullanim ve kalite güvencesi rehberi'ne göre yapilir . Yasal mevzuat ve rehbere göre uygun bagisçilar, ilave olarak COVID19 PCR RNA ve COVlD IgG/IgM testlerine tabii tutulur. Uygun bagisçilarin COVID19 PCR RNA testi negatif; COVlD IgG pozitif ve COVID IgM negatif test sonucuna sahip olmalari gereklidir. Bagisçilardan aferez cihazi yardimiyla, toplam plazma hacimlerine uygun hacimde tercihen 200-600 ml plazma toplanir; toplanan plazma Cerus patojen inaktivasyon cihazi kullanilarak Amotosalen + UVA ile inaktive edilir. Patojen inaktivasyonu: Kan ürünlerinde (trombosit süspansiyonu ve plazma) patojenleri ultraviyole A (UVA) isigi kullanarak inaktif hale getirmek için kullanilmaktadir. Cerus marka aydinlatici ve set birlikte kullanilmaktadir. Bu sekilde kapali bir sistem olusturularak inaktivasyonun gerçeklestirilmesi saglanir. Her ürün için yeni bir isleme seti kullanilir. Islem genel olarak asagidaki basamaklari kapsamaktadir: - Plazmaferez yoluyla toplanan plazma, steril torba birlestirme cihazi ile isleme setine baglanir. - Plazma amotosalen HCI ile karistirilir. o Karistirilan torba havasi alinarak aydinlatici cihazina yerlestirilir. o Amotosalen kan ürününde eger virüs, bakteri, parazit veya lökosit varsa DNA veya 0 Amotosalenli plazma UVA isigi altinda DNA veya RNA ile kovalent bag olusturur ve bu sekilde patojenlerin çogalmasi önlenebilir. . Islem bitimini takiben ürün cihazdan çikarilir ve kalan amotosalen isleme seti üzerindeki filtreden geçirilerek uzaklastirilir. . Patojen inaktive plazma ürünü hacmine göre esit hacimde torbalara bölünür. . Torbalarin havasi alinarak saklama islemi gerçeklestirilir. Inaktivasyon islemi sonrasinda her bir plazma ürünü tercihen 200 ml'lik porsiyonlara ayrilip etiketlenir. Universal havuz olusturmak için yeterli sayida bagis toplanincaya kadar saklanmak üzere plazma ürünleri, -4OCC'de derin don durucuya alinir. Universal havuz olusturmaktaki amaç, içerisindeki Anti-A ve Anti-B izohemaglütinin titrelerinin 1:32*nin altinda olmasidir. Bunun için plazmalarin farkli gruptan olmasi (A, B, AB, 0) ve havuzlama öncesi ölçülmüs titrelerin dengelenmesi gereklidir. Havuzlanacak 8 plazmanin tüm kan gruplarini içerebilmesi ya da uygun izohemaglütinin titresine sahip olmasi için yeterli örnek sayisina ulasilmasi beklenir. Donmus plazma ürünleri, içerisinde büyüme ve koagülasyon faktörlerinin, sitokinlerin yogun oldugu kriyopresipitati uzaklastirmak için bir gece önce buzdolabinda erimeye birakilir. Yari buz hale gelen plazma ürünleri, santrifüj edildikten sonra, ekstraktör yardimiyla 20-30 ml kriyopresipitat kalacak sekilde ayrilir ve yaklasik 150-180 ml olan üstte toplanan kismi yeni bir torbaya alinir. Bu sekilde elde edilen farkli sekiz bagisçiya ait plazma ürünleri, kan grubu izohemaglütinin titreleri uygun olacak (1:32) sekilde tek bir torbada havuzlanir. Havuzlanan plazma ürününden, son ürünü temsil edecek özellikte oldugundan son ürün kalite kontrol testlerini (bakteri ve mantar kültürü, endotoksin analizi, nötralizan antikor titresi, izohemaglütinin titresi) çalisilmak üzere örnek Son ürüne ait kalite kontrol testleri: Bakteri kültürü: Uründe bakteri kontaminasyonunun olmadigini göstermek amaciyla yapilir (Referans deger: üreme olmadi). Mantar kültürü: Uründe mantar kontaminasyonunun olmadigini göstermek amaciyla yapilir (Referans deger: üreme olmadi). Endotoksin analizi: Urün içerisinde kontaminasyona yol açabilecek gram negatif bakterilerin parçalanmasiyla açiga çikan toksik maddelerin gösterilmesi prensibine dayanan testtir (Referans deger: negatif). Nötralizan antikor titresi: Ozellikle viral enfeksiyonlardan sonra olusan ve patojeni inaktive eden antikorlarin bu inaktivasyonu yaptigi son dilüsyondur (Referans deger: 1:80). izohemaglütinin titresi: Kari grubu antijenlerine göre (A, B) insanlarin serumlarinda dogal olarak var olan antikorlarin tespit edilebildigi son dilüsyondur. Kural olarak kisinin eritrosit yüzeyinde bulunmayan antijene karsi dogal olarak plazmasinda antikor bulunmaktadir (Referans deger: < 1:32). Havuzlanmis plazma ürünü, 200 ml lik hacimde olacak sekilde ayri torbalara bölünür. Urün, son haline gelmistir; uygun endikasyonda bekleyen hasta mevcut ise direk kullanim için Sekil 2'de bir örnegi verilen form ile çikis yapilir. COVlD-19 Imm'ün (Konvalesan) Plazma Klinik Kullanim Kriterleri (Saglik Bakanligi, COVID-19 Immün Plazma Tedarik ve Klinik Kullanim Rehberi, Nisan 2020): a. BT bulgularinin COVID-19 ile uyumlu olmasi ve 24-48 saat içinde akciger infiltrasyonunda °/o50 artis b. Solunum sayisi 30/dakika c. PaOZ / Fi02 <300 mm Hg d. 5 litre/dakika ve üstünde nazal oksijen destegine ragmen oksijen saturasyonu TR TR

Claims (6)

ISTEMLER
1. Geçirilmis COVID19 laboratuvar kanitlarina ilaveten, COVID19 PCR RNA testi negatif, COVID lgG pozitif ve COVID lgM negatif test sonucuna sahip bagisçilardan toplanan plazmalardan, patojen free, konsantre edilmis, havuzlanmis COVID19 immün plazma elde etme yöntemi olup; özelligi; - plazmalarin patojen free hale getirilmek üzere inaktive edilmesi , - plazmalarin kriyopresipitattan fakir hale getirilmesi, - farkli bagisçilardan elde edilen kriyopoor plazmalarin havuzlanmasi islemlerini içermektedir.
2. Istem 1'e uygun yöntem olup, özelligi; plazmalarin patojen free hale getirilmek üzere Amotosalen & UVA ile inaktive edilmesi (40), plazmalarin, dondurularak saklamaya alinmasi (60), plazmalarin kriyopresipitattan fakir hale getirilmek için eritilmesi (70), çözünen plazmalar yari buz haldeyken santrifüj edilmesi (80), santrifüj edilen plazmalarin buza yapisik presipitatlari birakilip, üst kisimdaki kriyosüpernatan kisminin ayirilmasi (90), farkli bagisçilardan elde edilen kriyopoor plazmalarin bir yerde havuzlanmasi (100), islem adimlarini içermesidir.
3. Istem 1veya 25ye uygun yöntem olup, özelligi; havuzlanmis plazmadan alinan örneklerde, son ürün kalite kontrol testleri olan bakteri ve mantar kültürü, endotoksin analizi, nötralizan antikor titresi ve izohemaglütinin titresi çalisilmasi (110), islemini içermesidir.
4. Istem 1 veya 2*ye uygun yöntem olup, özelligi; inaktive edilen plazmalarin etiketlenmesi (50) islemini içermesidir.
5. Istem 1 ila 3'ten herhangi birine uygun yöntem olup, özelligi; havuzlanmis plazma ürününün torbalara alinmasi (120) , uygun endikasyonda kullanilmak üzere çikisinin yapilmasi (130), veya - uygun endikasyon çikincaya kadar dondurularak saklanmasi (140), islemlerini içermesidir.
6. 6. Istem 553 uygun yöntem olup, özelligi; - donmus ürünün uygun endikasyona gönderilmeden eritilmesi (150), - uygun endikasyonda kullanilmak üzere çikisinin yapilmasi (160), islemlerini içermesidir.