Claims (6)
1. การวิเคราะห์ทางอิมมูโนที่อาศัยการกระจายแสงของอนุภาคเป็นหลัก สำหรับวัดอานา ไลท์ (สารต้องการวิเคราะห์) ในตัวอย่างของไหล ที่ประกอบด้วยขั้นตอนของ: a) การรวมเข้ากับตัวอย่างของไหลดังกล่าวด้วยชุดของสารเข้าทำปฏิกิริยาที่รวมถึงไมโคร สเฟียร์ชนิดที่มีขนาดสม่ำเสมอที่เคลือบด้วยโมเลกุลยึดเหนี่ยวชนิดที่หนึ่ง และอนุภาคโลหะคอล ลอย์ ที่เคลือบด้วยโมเลกุลยึดเหนี่ยวชนิดที่สองที่มีขนาดเล็กกว่าไมโครสเฟียร์หรือสารเชิงซ้อน ทางอิมมู ที่ประกอบด้วย ไมโครสเฟียร์ชนิดที่มีขนาดสม่ำเสมอดังกล่าว และอนุภาคโลหะคอล ลอย์ดังกล่าวเพื่อทำเป็นของผสม และยอมให้ปฏิกิริยาเกิดขึ้น ที่ซึ่งอย่างน้อยชนิดหนึ่งของโมเลกุล ยึดเหนี่ยวชนิดที่หนึ่งและโมเลกุลยึดเหนี่ยวชนิดที่สองดังกล่าวจะยึดกับอานาไลท์ดังกล่าวปฏิกิริยา ดังกล่าวจะก่อให้เกิด หรือสลายการเกิดเชิงซ้อนของสารเชิงซ้อนทางอิมมูโนดังกล่าว เพื่อที่ของผสม ที่ถูกทำปฏิกิริยาจะรวมถึงไมโครสเฟียร์ดังกล่าวที่อยู่ในรูปที่ไม่เป็นสารเชิงซ้อนในสารเชิงซ้อนนทาง อิมมูโนหรือทั้งคู่ ระดับของการยึดเหนี่ยวของไมโครเฟียร์ในของผสมที่ถูกทำปฏิกิริยาดังกล่าวกับ อนุภาคโลหะคอลลอยด์ดังกล่าวจะขึ้นอยู่กับการมีอยู่ หรือปริมาณของอานาไลท์ดังกล่าวในตัวอย่าง ของไหลดังกล่าว b) การวัดแสงที่กระจายโดยไมโครสเฟียร์ดังกล่าวในของผสมที่ถูกทำปฏิกิริยา โดยวิธีการ ใช้เครื่องวิเคราะห์อนุภาคไหลด้วยแสงเพื่อให้มีสัญญาณการกระจายแสงแก่ไมโครสเฟียร์ดังกล่าว c) การหาขนาดของการกระจายทางสถิติของสัญญาณการกระจายแสงดังกล่าว สำหรับไม โครสเฟียร์ดังกล่าวในของผสมที่ถูกทำปฏิกิริยาดังกล่าว ในลักษณะที่ขนาดของการกระจายสถิติดัง กล่าว จะเปลี่ยนแปลงตามระกับการยึดเหนี่ยวของไมโครสเฟียร์ดังกล่าวกับอนุภาคโลหะคอลลอยด์ ดังกล่าวในของผสมที่ถูกทำปฏิกิริยาดังกล่าวและ d) การทำสหสัมพันธ์ระหว่างขนาดของการกระจายทางสถิติของสัญญาณการกระจายแสง สำหรับไมโครสเฟียร์ดังกล่าวในของผสมที่ถูกทำปฏิกิริยาดังกล่าว กับปริมาณของอานาไลท์ดังกล่าว ในตัวอย่างของไหลดังกล่าว 2. วิธีการตามข้อถือสิทธิที่ 1ที่ซึ่งอนุภาคโลหะคอลลอยด์ที่เคลือบด้วยโมเลกุลยึดเหนี่ยว ชนิดที่สองดังกล่าวจะเป็นอนุภาคโลหะคอลลอยด์ที่มีขนาดไม่สม่ำเสมอ 3. การวิเคราะห์ทางอิมมูโนที่อาศัยการกระจายแสงของอนุภาคเป็นหลักสำหรับวัดอานา ไลท์ในตัวอย่างของไหลที่ประกอบด้วยขั้นตอนของ a) การรวมเข้ากับตัวอย่างของไหลดังกล่าวด้วย ชุดของสาร เข้าทำปฏิกิริยาที่รวมถึงไมโคร สเฟียร์โพลีเมอร์ชนิดที่มีขนาดสม่ำเสมอที่เคลือบด้วยโมเลกุลยึดเหนี่ยวชนิดที่หนึ่งและอนุภาคโลหะ คอลลอย์ที่เคลือบด้วยโมเลกุลยึดเหนี่ยวชนิดที่สองที่มีขนาดเล็กทำไมโครสเฟียร์ หรือสารเชิงซ้อน ทางอิมมูโน ที่ประกอบด้วย ไมโครสเฟียร์ชนิดที่มีขนาดสม่ำเสมอดังกล่าว และอนุภาคโลหะคอล ลอย์ดังกล่าว เพื่อทำเป็นของผสม และยอมให้ปฏิกิริยาเกิดขึ้น ที่ซึ่งอย่างน้อยชนิดหนึ่งของโมเลกุล ยึดเหนี่ยวชนิดที่หนึ่ง และชนิดที่สองดังกล่าวจะยึดกับอานาไลท์ดังกล่าวปฏิกิริยาดังกล่าวจะก่อให้ เกิดหรือสลายการเกิดเชิงซ้อนของสารเชิงซ้อนทางอิมมูโนดังกล่าวที่อยู่ในรูปที่ไม่เป็นสารเชิงซ้อน ใน สารเชิงซ้อนนทางอิมมูโนหรือทั้งคู่ ระดับของการยึดเหนี่ยวของไมโครเฟียร์ในของผสมที่ถูกทำ ปฏิกิริยาดังกล่าวกับอนุภาคโลหะคอลลอยด์ดังกล่าวจะขึ้นอยู่กับการมีอยู่หรือปริมาณของอานาไลท์ ดังกล่าวในตัวอย่างของไหลดังกล่าว b) การวัดแสงที่ถูกกระจายโดยไมโครสเฟียร์ดังกล่าวในของผสมที่ถูกทำปฏิกิริยาโดยวิธี การใช้เครื่องวิเคราะห์อนุภาคไหลด้วยแสง เพื่อให้มีสัญญาณการกระจายแสงแก่ไมโครสเฟียร์ ดังกล่าว c) การหาขนาดการกระจายทางสถิติในรูปของฮิสโตแกรมของความสูงของพัลส์ของ สัญญาณการกระจายแสงสำหรับไมโครสเฟียร์ดังกล่าวในของผสมที่ถูกทำปฏิกิริยาดังกล่าว ที่ซึ่งฮิส โตแกรมของความสูงของพัลส์ สำหรับไมโครสเพียร์ดังกล่าวจะไม่เหลื่อมกับฮิสโตแกรมของความ สูงของพัลส์ สำหรับอนุภาคโลหะคอลลอยด์ดังกล่าว ในลักษณะที่ขนาดของฮิสโตแกรมดังกล่าวจะ เปลี่ยนแปลงตามระดับการยึดเหนี่ยวของไมโครสเฟียร์ดังกล่าวกับโลหะคอลลอยด์ดังกล่าวในของ ผสมที่ถูกทำปฏิกิริยาดังกล่าว และ d) การทำสหสัมพันธ์ระหว่างขนาดของฮิสโตแกรมของสัญญาณการกระจายแสงดังกล่าว สำหรับไมโครสเฟียร์ดังกล่าวในของผสมที่ถูกทำปฏิกิริยาดังกล่าว กับปริมาณของอานาไลท์ดังกล่าว ในตัวอย่างของไหลดังกล่าว 4. วิธีตามข้อถือสิทธิที่ 3 ยังประกอบด้วยขั้นตอนการวัดสัญญาณการกระจายแสง สำหรับของผสมที่เป็นตัวควบคุม ที่รวมถึงไมโครสเฟียร์ดังกล่าวในเครื่องวิเคราะห์อนุภาคไหลด้วย แสงดังกล่าว การหาขนาดของฮิสโตแกรมของสัญญาณการกระจายแสงดังกล่าวจากไมโครสเฟียร์ ในของผสมที่เป็นตัวควบคุมดังกล่าว ขั้นตอนการทำสหสัมพันธ์ดังกล่าวของฮิสโตแกรมของ สัญญาณการกระจายแสงดังกล่าวจากไมโครสเฟียร์ดังกล่าวในของผสมที่ถูกทำปฏิกิริยาที่รวมถึงขั้น ตอนการเปรียบเทียบขนาดดังกล่าวกับขนาดของฮิสโตแกรมของสัญญาณการกระจายแสงดังกล่าว จากไมโครสเฟียร์ในของผสมที่เป็นตัวควบคุมดังกล่าว เพื่อหาการเปลี่ยนแปลงของขนาดดังกล่าวที่ เกิดจากการทำปฏิกิริยา 5. วิธีการตามข้อถือสิทธิที่ 1-3 ข้อใดข้อหนึ่ง ที่ซึ่งสัญญาณการกระจายแสงดังกล่าวจะ เป็นสัญญาณการกระจายแสงไปข้างหน้าด้วยมุมต่ำ 6. วิธีการตามข้อถือสิทธิที่ 1-3 ข้อใดข้อหนึ่ง ที่ซึ่งสัญญาณการกระจายแสงดังกล่าวจะ เป็นสัญญาณการกระจายแสงที่ค่อนข้างจะเป็นมุมฉาก 7. วิธีการตามข้อถือสิทธิที่ 3 ที่ซึ่งการยึดเหนี่ยวของอนุภาคคอลลอยด์ที่เคลือบด้วย โมเลกุลยึดเหนี่ยวชนิดที่สองดังกล่าว เข้ากับไมโครสเฟียร์โพลีเมอร์ที่เคลือบด้วยโมเลกุลยึดเหนี่ยว ชนิดที่หนึ่งดังกล่าว จะเพิ่มขึ้นโดยอานาไลท์ดังกล่าว และการเพิ่มขึ้นดังกล่าวจะเป็นผลให้มีกาเพิ่ม ขนาดของฮิสโตแกรมดังกล่าว 8. วิธีการตามข้อถือสิทธิที่ 3 ที่ซึ่งการยึดเหนี่ยวของอนุภาคคอลลอยด์ที่เคลือบด้วย โมเลกุลยึดเหนี่ยวชนิดที่สองดังกล่าว เข้ากับไมโครสเฟียร์โพลีเมอร์ที่เคลือบด้วยโมเลกุลยึดเหนี่ยว ชนิดที่หนึ่งดังกล่าว จะลดลงโดยอานาไลท์ดังกล่าว และการลดลงดังกล่าวจะเป็นผลให้มีการลด ขนาดของฮิสโตแกรมดังกล่าวของ 9. วิธีการตามข้อถือสิทธิที่ 3 ที่ซึ่งขนาดของฮิสโตแกรมดังกล่าวประกอบด้วยความกว้าง ของพีคที่ทำให้ปกติของการแสดงด้วยกราฟของฮิสโตแกรมดังกล่าว 1 0. วิธีการตามข้อถือสิทธิที่ 1-3 ข้อใดข้อหนึ่งยังประกอบด้วยขั้นตอนของการจัดให้มีอัตรา ส่วนของอนุภาคโลหะดังกล่าวต่อไมโครสเฟียร์โพลีเมอร์ดังกล่าว ที่มีผลในการลดการรบกวนใน การวิเคราะห์ทางอิมมูโนดังกล่าวโดยสารยึดเกาะอย่างที่ไม่จำเพาะ 1 1. วิธีการตามข้อถือสิทธิที่ 10 ที่ซึ่งอัตราส่วนดังกล่าวอยู่ในช่วงระหว่าง 2 ถึง 100,000 ต่อ 1 1 2. วิธีการตามข้อถือสิทธิที่ 10 ที่ซึ่งอัตราส่วนดังกล่าวอยู่ในช่วงระหว่าง 1,000 ถึง 10,000 ต่อ 1 1 3. วิธีการตามข้อถือสิทธิที่ 1-3 ข้อใดข้อหนึ่ง ที่ซึ่งไมโครสเฟียร์ชนิดที่มีขนาดสม่ำเสมอ ดังกล่าวประกอบด้วยไมโครสเฟียร์โพลีเมอร์ที่สม่ำเสมอ 1 4. วิธีการตามข้อถือสิทธิที่ 1-3 ข้อใดข้อหนึ่ง ที่ซึ่งไมโครสเฟียร์ดังกล่าวประกอบด้วยไม โครสเฟียร์ที่มีเส้นผ่าศูนย์กลางเฉลี่ยอยู่ในช่วงระหว่างประมาณ 0.02 ถึงประมาณ100 ไมโครเมตร 1 5. วิธีการตามข้อถือสิทธิที่ 1-3 ข้อใดข้อหนึ่ง ที่ซึ่งไมโครสเฟียร์ดังกล่าวประกอบด้วยไม โครสเฟียร์ที่มีเส้นผ่าศูนย์กลางเฉลี่ยอยู่ในช่วงระหว่างประมาณ 0.05 ถึงประมาณ10.0 ไมโครเมตร 1 6. วิธีการตามข้อถือสิทธิที่ 1-3 ข้อใดข้อหนึ่ง ที่ซึ่งไมโครสเฟียร์ดังกล่าวประกอบด้วย ไมโคร สเฟียร์ที่มีเส้นผ่าศูนย์กลางเฉลี่ยอยู่ในช่วงระหว่างประมาณ 0.5 ถึงประมาณ 5.0ไมโครเมตร 1 7. วิธีการตามข้อถือสิทธิที่ 3 ที่ซึ่งการยึดเหนี่ยวของอนุภาคคอลลอยด์ดังกล่าวถูกเลือกจาก กลุ่มที่ประกอบด้วยอนุภาคทอง,แพลตตินัม, เงิน และทองแดง 1 8. วิธีการตามข้อถือสิทธิที่ 1-3 ข้อใดข้อหนึ่ง ที่ซึ่งอนุภาคโลหะคอลลอยด์ดังกล่าวคือ อนุภาคทอง 1 9. วิธีการตามข้อถือสิทธิที่ 1-3 ข้อใดข้อหนึ่ง ที่ซึ่งขนาดเส้นผ่าศูนย์กลางเฉลี่ยของอนุภาค คอลลอยด์ดังกล่าวอยู่ในช่วงระหว่างประมาณ 20 นาโนเมตร ถึงประมาณ 120 นาโนเมตร 2 0. วิธีการตามข้อถือสิทธิที่ 1-3 ข้อใดข้อหนึ่ง ที่ซึ่งขนาดเส้นผ่าศูนย์กลางเฉลี่ยของอนุภาค คอลลอยด์ดังกล่าวอยู่ในช่วงระหว่างประมาณ 50 นาโนเมตร ถึงประมาณ 80 นาโนเมตร 2 1. วิธีการตามข้อถือสิทธิที่ 1-3 ข้อใดข้อหนึ่ง ที่ซึ่งขนาดเส้นผ่าศูนย์กลางเฉลี่ยของไมโคร สเฟียร์ดังกล่าว ต่อเส้นผ่าศูนย์กลางเฉลี่ยของอนุภาคโลหะ จะอยู่ระหว่างประมาณ15:1 ถึงประมาณ 30:1 2 2. วิธีการตามข้อถือสิทธิที่ 4 ที่ซึ่งไมโครสเฟียร์ดังกล่าวในของผสมที่เป็นตัวควบคุม ดังกล่าว จะเป็นไมโครสเฟียร์โพลีเมอร์ชนิดที่มีขนาดสม่ำเสมอที่ไม่ถูกกระตุ้นโดยทางเคมีอิมมูโน และที่ซึ่งขั้นตอนการวัดสัญญาณการกระจายแสงในเครื่องวิเคราะห์อนุภาคไหลด้วย แสงจะรวมถึง ขั้นตอนการควบคุมเส้นผ่าศูนย์กลางของกระแสตัวอย่างของผสมดังกล่าว ในเครื่องวิเคราะห์ดัง กล่าวให้อยู่ภายในช่วงระหว่างประมาณ 3 ไมโครเมตร ถึง 10 ไมโครเมตร เพื่อจะได้สัมประสิทธิ์ ของการเปลี่ยนแปลงของสัญญาณการกระจายแสงดังกล่าว บริเวณการแสดงด้วยกราฟค่าเฉลี่ยฮิสโต แกรมไม่เกินกว่าประมาณ 2% สำหรับไมโครสเฟียร์โพลิเมอร์ชนิดที่มีขนาดสม่ำเสมอที่ไม่ถูก กระตุ้นโดยทางเคมีอิมมูในของผสมที่เป็นตัวควบคุมดังกล่าว 2 3. วิธีการตามข้อถือสิทธิที่ 1-3 ข้อใดข้อหนึ่ง ที่ซึ่งขั้นตอนดังกล่าวของการรวบรวมชุดของ สารเข้าทำปฏิกิริยาเข้ากับตัวอย่างของไหลดังกล่าวจะรวมถึงขั้นตอนการรวบรวมอนุภาคโลหะคอล ลอยด์ที่เคลือบด้วยโมเลกุลยึดเหนี่ยวชนิดที่สองดังกล่าวเข้ากับตัวอย่างของไหลดักล่าว เพื่อทำเป็น ของผสมชนิดที่หนึ่งและบ่มของผสมชนิดที่หนึ่งไว้เพื่อที่อนุภาคโลหะคอลลอยด์ที่เคลือบด้วย โมเลกุลยึดเหนี่ยวชนิดที่สองดังกล่าวจะยึดเหนี่ยวกับอานาไลท์ดังกล่าวและเพื่อที่ปริมาณของ อนุภาคโลหะคอลลอยด์ที่ไม่ถูกยึดเหนี่ยวในของผสมชนิดที่หนึ่งจะมีความสัมพันธ์ผกผันกับปริมาณ ของอานาไลท์ในตัวอย่างของไหลดังกล่าวและจากนั้นจะทำการรวมของผสมชนิดที่หนึ่งดังกล่าว เข้ากับไมโครสเฟียร์ ที่เคลือบด้วยโมเลกุลยึดเหนี่ยวชนิดที่หนึ่งดังกล่าวเพื่อให้ได้เป็นของผสมที่ถูก ทำปฏิกิริยาดังกล่าว 2 4. วิธีการตามข้อถือสิทธิที่ 1-3 ข้อใดข้อหนึ่ง ที่ซึ่งตัวอย่างของไหลดังกล่าวจะรวมถึง อานาไลท์จำนวนหนึ่ง ขั้นตอนการรวมกันดังกล่าวจะรวมถึงขั้นตอนการจัดให้มีชุดของสารเข้าทำ ปฏิกิริยาที่แยกจากกัน สำหรับแต่ละอานาไลท์ดังกล่าวและทำการรวมชุดของสารที่เข้าทำปฏิกิริยาดัง กล่าวทั้งหมดเข้ากับตัวอย่างของไหลดังกล่าว เพื่อที่ของผสมที่ถูกทำปฏิกิริยาดังกล่าวจะรวมถึงไม โครสเฟียร์จากชุดสารเข้าทำปฏิกิริยาดังกล่าวทั้งหมด ขั้นตอนการวัดจะรวมถึงขั้นตอนการวัด 2 5. สัญญาณการกระจายแสง สำหรับไมโครสเฟียร์ดังกล่าวทั้งหมด ไมโครสเฟียร์ในแต่ละ ชุดของสารเข้าทำปฏิกิริยาดังกล่าวจะมีเส้นผ่าศูนย์กลาง หรือดัชนีการหักเหที่แตกต่างจากไมโคร สเฟียร์ในแต่ละชุดของสารเข้าทำปฏิกิริยาอื่น ๆ และขั้นตอนดังกล่าวของการหาขนาดการกระจายทาง สถิติของสัญญาณการกระจายแสงดังกล่าว จะรวมถึงขั้นตอนการแยกสัญญาณการกระจายแสงที่ใช้ แทนไมโครสเฟียร์จากชุดของสารเข้าทำปฏิกิริยาที่ต่างกัน เพื่อทำเป็นการกระจายทางสถิติที่แยกจาก กันที่เกี่ยวกับอานาไลท์แต่ละตัว และการหาขนาดสำหรับการกระจายที่แยกจากกันแต่ละค่า a) การใส่ลงในภาชนะทำปฏิกิริยาด้วยไมโครสเฟียร์โพลิเมอร์ชนิดที่มีขนาดสม่ำเสมอที่ เคลือบด้วยโมเลกุลยึดเหนี่ยวชนิด ที่ซึ่งยึดเหนี่ยวอานาไลท์ดังกล่าว,อนุภาคโลหะคอลลอยด์ชนิดที่ มีขนาดไม่สม่ำเสมอที่เคลือบด้วยโมเลกุลยึดเหนี่ยวชนิดที่สองซึ่งยึดเหนี่ยวอานาไลท์ดังกล่าว และ ตัวอย่างของไหลที่มีอานาไลท์ดังกล่าว เป็นช่วงระยะเวลาหนึ่งที่มีผลให้เกิดเป็นของผสมที่ถูก ปฏิกิริยาที่รวมถึงสารเชิงซ้อนทางอิมมูโน ในระหว่างสามองค์ประกอบโดบวิธีนี้อย่างน้อยไมโครส เฟียร์บางส่วนจะถูกรวมเข้าไปในสารเชิงซ้อนทางอิมมูโนดังกล่าว b) การวัดแสงที่ถูกกระจายโดยไมโครสเฟียร์ดังกล่าวในของผสมที่ถูกปฏิกิริยาที่รวมถึง ไมโครสเฟียร์ในสารเชิงซ้อนทางอิมมูโน โดยวิธีการใช้เครื่องวิเคราะห์อนุภาคไหลด้วยแสง เพื่อจัด ให้มีสัญญาณการกระจายแสงสำหรับไมโครสเฟียร์ดังกล่าว และ c) การวัดขนาดของฮิสโตแกรมการกระจายความสูงของพัลส์ของสัญญาณการกระจาย แสงดังกล่าว d) การเปรียบเทียบขนาดในข้อ c) กับขนาดสำหรับของผสมที่เป็นตัวควบคุมที่ประกอบ ด้วยไมโครสเฟียร์โพลีเมอร์ชนิดที่มีขนาดสม่ำ เสมอซึ่งถูกวิเคราะห์ในขณะที่ไม่มีอานาไลท์ หรือ อนุภาคโลหะคอลลอยด์ เพื่อหาการเปลี่ยนแปลงในขนาดของฮิสโตแกรมในข้อ c)ดังกล่าวและ e) การหาความสัมพันธ์ของการเปลี่ยนแปลงขนาดของฮิสโตแกรมดังกล่าวกับความเข้ม ข้นของอานาไลท์ดังกล่าวในตัวอย่างของไหลดังกล่าว 2 6. วิธีการตามข้อถือสิทธิที่ 25 ที่ซึ่ง อานาไลท์ดังกล่าว คือ แอนติเจน หรือแฮปเทน โมเลกุล ยึดเหนี่ยวชนิดที่หนึ่งดังกล่าว ประกอบด้วย แอนติ-อานาไลท์แอนติบอดีชนิดที่หนึ่ง และโมเลกุลยึด เหนี่ยวชนิดที่สอง ประกอบด้วย แอนติ-อานาไลท์แอนติบอดีชนิดที่สอง 2 7. วิธีการตามข้อถือสิทธิที่ 25 ที่ซึ่งอานาไลท์ดังกล่าว คือ แอนติบอดี และโมเลกุลยึด เหนี่ยวชนิดที่หนึ่งและชนิดที่สองดังกล่าว แต่ละชนิด คือ แนติเจน หรือแฮปเทน ซึ่งยึดเหนี่ยวกับ อานาไลท์แอนติบอดีดังกล่าวหรือที่ซึ่งโมเลกุลยึดเหนี่ยวชนิดที่หนึ่งดังกล่าวประกอบด้วย แอนติเจน ซึ่งยึดเหนี่ยวกับอานาไลท์แอนติบอดีดังกล่าวและโมเลกุลยึดเหนี่ยวที่สองดังกล่าว ประกอบด้วย แอนติบอดีที่เจาะจงต่ออานาไลท์แอนติบอดีดังกล่าว 2 8. วิธีการตรวจหาอานาไลท์ในตัวอย่างของไหลโดยปฏิกิริยาแทนที่ที่มีอานาไลท์เป็นสื่อ กลาง ซึ่งประกอบด้วยขั้นตอนของ a) การจัดให้มีสารเข้าทำปฏิกิริยาที่เป็นสารเชิงซ้อนทางอิมมูโนที่รวมถึงไมโครสเฟียร์โพ ลิเมอร์ชนิดที่มีขนาดสม่ำเสมอที่เคลือบด้วยอานาไลท์ และอนุภาคโลหะคอลลอยด์ชนิดที่มีขนาดไม่ สม่ำเสมอที่เคลือบด้วยโมเลกุลยึดเหนี่ยวซึ่งยึดเหนี่ยวอานาไลท์หรืออนุภาคโลหะคอลลอยด์ที่ เคลือบด้วยอานาไลท์ และไมโครสเฟียร์โพลิเมอร์ที่เคลือบด้วยโมเลกุลยึดเหนี่ยวซึ่งยึดเหนี่ยวอานา ไลท์ ดังกล่าว b) การผสมสารเข้าทำปฏิกิริยาที่เป็นสารเชิงซ้อนทางอิมมูโนเข้ากับตัวอย่างของไหล ที่มี อานาไลท์ดังกล่าวเป็นช่วงระยะเวลาหนึ่งที่เพียงพอ สำหรับอานาไลท์ดังกล่าวที่จะแทนที่ส่วนหนึ่ง ของอนุภาคโลหะคอลลอยด์ดังกล่าวจากสารเชิงซ้อนทางอิมมูโนดังกล่าว c) การวัดแสงที่ถูกกระจายโดยไมโครสเฟียร์ดังกล่าวทั้งก่อนและหลังการแทนที่ด้วยอานา ไลท์ในข้อ b) โดยวิธีการใช้เครื่องวิเคราะห์อนุภาคไหลด้วยแสง เพื่อให้ได้สัญญาณการกระจายแสง สำหรับไมโครสเฟียร์ดังกล่าว d) การหาขนาดของฮิสโตแกรมกระจายความสูงของพัลส์ สำหรับสัญญาณการกระจาย แสงดังกล่าว สำหรับไมโครสเฟียร์ดังกล่าวทั้งก่อนและหลังการแทนที่ด้วยอานาไลท์ในข้อ b ) เพื่อ หาการเปลี่ยนแปลงในขนาดดังกล่าว และ e) การหาความสัมพันธ์ของการเปลี่ยนแปลงขนาดของฮิสโตแกรมดังกล่าวกับความเข้ม ข้นของอานาไลท์ดังกล่าวในตัวอย่างของไหลดังกล่าว 2 9. วิธีการตามข้อถือสิทธิที่ 28 ที่ซึ่งอานาไลท์ดังกล่าวคือ แอนติเจนหรือแฮปเทน 3 0. วิธีการตามข้อถือสิทธิที่ 28 ที่ซึ่งอานาไลท์ดังกล่าวคือ แอนติบอดี และโมเลกุลยึด เหนี่ยวดังกล่าวคือแอนติเจนที่ตรงกัน 31. Immunohistochemical analysis based on particle-based light distribution. For measuring analite (analytical substance) in a fluid sample. That consists of steps of: a) the integration of the sample fluid with a series of reagents that include micro Uniform size spheres coated with type I binder molecules. And metallic colloid particles coated with a second type of binding molecule smaller than the microspheres or the immature complex containing Such a uniform microspheres And metal particles The lock to make a mixture And allow the reaction to take place. Where at least one type of molecule The first type of binding and the second type of binding molecules are attached to the analite. Such will cause Or degrade the complex formation of the immunoglobulin complex For the mix The reactive microspheres include the non-complex microspheres in the intrinsic complexes. Immunoglobulin or both The degree of adherence of the microsphere in the reaction mixture to Such colloidal metal particles are subject to the presence of Or the quantity of that analite in the sample B) Measurement of the light diffused by the microsphere in the reacted mixture by means of a light flow particle analyzer to provide a diffuse signal to the microsphere. c) the magnitude of the statistical distribution of the diffuse signal for the aforementioned microspheres in the reaction mixture. In such a way that the magnitude of the statistical distribution changes with respect to the binding of the microspheres to colloidal metal particles. And d) correlation between the statistical distribution size of the diffuse signal. For the above microspheres in the reaction mixture With the quantity of the aforementioned light In the example of such fluid. 2. Method of claims that 1 where colloidal metal particles are coated with a binding molecule. The second type is a colloidal metal particle with irregular size. 3. Immunohistochemical analysis based on particle-based light distribution for measurement of ara. Light in a sample of a fluid consisting of a phase of a) the integration of the sample fluid with a series of reagents including micro Uniform sized spherical polymers coated with type I binder molecules and metal particles. The colos, coated with a second type of small binding molecule, make microspheres. Or immunoglobulin complexes containing Such a uniform microspheres And the colloidal metal particles to make a mixture And allow the reaction to take place. Where at least one type of molecule Type one And the second type is attached to the analite. Forms or decomposes of immunoglobulin complexes in non-complex form in immunoglobulin complexes, or both. The degree of adhesion of the microsphere in the mixture being made. Such reactions with colloidal metal particles are dependent on the presence or quantity of analite. B) The measurement of the light diffused by the microspheres in the reaction mixture. Optical particle flow analyzer C) determination of the statistical distribution magnitude as a histogram of the pulse height of the microspheres. The light distribution signal for the said microsphere in the reaction mixture where the pulse height histogram The microspeer does not overlap with the pulse height histogram for the colloidal metal particles. In such a way that the size of the histogram will Changes according to the degree of adhesion of the microspheres to the colloidal metals in the And d) correlation between the magnitude of the histogram of the diffuse signal. For the above microspheres in the reaction mixture With the quantity of the aforementioned light In the example of the aforementioned fluid 4. Method of claim 3 also consists of a procedure for measuring the diffusion signal. For controlled mixtures This includes the microspheres in the particle flow analyzer, the histogram size of the scattering signal from the microspheres. In such a controlled mixture The correlation procedure of the histogram of The diffuse signal from the aforementioned microspheres in the reactive mixtures including the When comparing this size to the size of the histogram of the diffuse signal. From the microspheres in the control mixture To find the change in the size at Caused by reaction 5. Method of claim 1-3, any one Where the diffuse signal will It is a signal to distribute light forward with a low angle 6. Method of claim 1-3, any one of Where the diffuse signal will It is a rather orthogonal diffusion signal. 7. Method according to claim 3, where the binding of coated colloidal particles The second type of binding molecule With microspheres polymers coated with molecular bond One such type Will be increased by the said analite And the increase will result in an increase 8. Method of claim 3, where the binding of coated colloidal particles The second type of binding molecule With microspheres polymers coated with molecular bond One such type Will be reduced by the said analite And the reduction will result in a reduction. Size of the aforementioned histogram of 9. Method for claim 3, where the size of the aforementioned histogram consists of width The normalization of peaks of such histogram graphing 1 0. Any of the 1-3 Claim Methods also includes the process of providing a rate. Parts of the metal particles to the microspheres of polymers Resulting in reducing interference in Such immunoglobulin analysis by non-specific adhesion 1 1. Claim Method 10, where the ratio ranges between 2 and 100,000 to 1 1 2. Claim Method No. 10, where the ratio ranges between 1,000 and 10,000: 1. 3. Claim method 1-3. Any one of Where the uniformly sized microspheres It consists of a consistent microspheres polymers. 1 4. Method in accordance with Claim 1-3. Where the microspheres contain The average diameter chromosphere ranged from approximately 0.02 to approximately 100 μm. 1 5. One of the Claims 1-3 method. Where the microspheres contain The average diameter chromosphere ranged from approximately 0.05 to approximately 10.0 μm. 1 6. Method for one of the claims 1-3. Where the microsphere consists of a microspheres with a mean diameter ranging from approximately 0.5 to approximately 5.0 μm 1 7. Method according to claim 3, where the binding of the colloidal particles is Choose from A group consisting of gold, platinum, silver and copper particles 1 8. Methods of claim 1-3. Where the colloidal metal particles are gold particles 1. 9. One of the claims 1-3 method. Where the average diameter of the particle The colloids range between approximately 20 nm and approximately 120 nm. 2 0. Method for one of the claims 1-3. Where the average diameter of the particle The colloids range from approximately 50 nm to approximately 80 nm. 2 1. Method of claim 1-3. Where the average diameter of the micro Such spheres Per average diameter of metal particles It is between approximately 15: 1 and approximately 30: 1 2 2. The method according to claim 4, where the microsphere in the controlled mix is a microsphere. Uniform sized aminoids that are not chemically induced by immunoglobulin. And where the measurement of the scattering signal in the optical particle analyzer includes the procedure for controlling the diameter of the sample stream of the mixture. In the analyzer loud Say to be within the range of approximately 3 m to 10 m for the coefficient Of changes in the aforementioned diffuse signal Display area with histo average graph The gram is not more than approximately 2% for uniform sized microsphere polymers that are not Chemically stimulated, impulses the controlling mixture. 2 3. Method of claim 1-3. Any one of Where the aforementioned stage of the collection of The substance reacts with the sample of the fluid, including the process of collecting metal particles. Lloyds coated with a second bond molecule with the sample fluid is said to make a type I mix and then curing the first mix so that the coated colloidal metal particles are used. The second type of binding molecule binds to the analite and so that the quantity of Non-bonded colloidal metal particles in first mixtures are inversely related to quantity. Of the analite in the sample of the fluid and then the first combination of the mixture is Into the microspheres That is coated with the aforementioned binding molecules to form a React to the said action 2 4. One of the claims 1-3 method. Where the example of such fluid will include Some anal lights The combined process includes the process of organizing a batch of substances. Separate reactions For each of the aforementioned analogues and to combine a series of reactive substances To say it all with such an example of fluid So that the reaction mixture does not include The chromosphere from all the aforementioned reagent series. The measurement procedure will include the measurement procedure 2 5. Light distribution signal. For all such microspheres Microspheres in each The set of reagents will have a diameter. Or the index of refraction that is different from the micro The spheres in each other set of reactants and the step of determination of the way distribution Statistics of such diffuse signals It includes the process of splitting the light distribution signal used. Instead of microspheres from a different set of reactants. To make a statistical distribution separate from Related to each analite And size determination for each separate distribution; a) the application of uniformly sized microspheres of polymer reaction vessels at Coated with molecular binder type Where analite binds, colloidal metal particles It is an irregular size coated with a second type of binding molecule that binds the analite and the sample of the fluid containing it. Is a period of time that results in a mixture that is Reactions including immunoglobulin complexes In between the three elements by at least micros Some of the fires are incorporated into the immunoglobulin complexes. B) Metering of the light diffused by the microspheres in the reacted mixtures including Microspheres in immunoglobulin complexes By means of an optical particle-flow analyzer to provide a scattering signal for such microspheres, and c) the measurement of the magnitude of the pulse-height distribution histogram of the diffusion signal. D) Comparison of dimensions in item c) with dimensions for the assembled controller mixture. With micro-spherical polymers of a small size It is analyzed while there are no analites or colloidal metal particles. To find changes in the size of the histogram in the clause c) and e) correlation of the change in magnitude of the histogram with the intensity 2 6. Method according to claim 25, where such analite is an antigen or haptane, the first type of binding molecule contains antigens. - Analite Antibody Type I And molecules seized The second type of induction consisted of the second type of antibody-antinolyte 2. 7. Method according to claim 25, where such analite is antibody and seizure molecule. Each of these first and second inductors is the natic or haptane, which is bound to Analite Antibody, or where the first bind molecule contains Antigens which bind to the analite Antibody and the Second Binder Molecule Contains Antigen-Specific Antigens 2 8 The method for the determination of analites in a fluid sample by an analite-mediated substitution, consisting of the steps of a) the arrangement of the reagent as a combined immunoglobulin complex. To the microspheres Consistent sized polymer coated with analite And colloidal metal particles that are not Uniformly coated with bond molecules that bind analite or colloidal metal particles that Coated with analite And microspheres of polymers coated with bonded molecules that b) the mixing of the reagent in an immunoglobulin complex with a sample of the analite fluid as A period of time is sufficient For the aforementioned to replace the part C) The measurement of the light diffused by the microspheres before and after the analite displacement in point b) by means of the method of colloidal metal particles. Using a particle-flow analyzer To obtain a light distribution signal For such microspheres, d) magnitude of the pulse height distribution histogram. For the aforementioned diffusion signal for the microspheres, both before and after the analite replacement in point b) to find the change in such magnitude, and e) to find the correlation of the hi-magnitude change. Such strograms and their intensity The concentration of the analite in the aforementioned fluid example. Antigens or hapten 3 0. Method according to claim 28, where such analites are antibodies and seizure molecules. Such induced is the corresponding antigen 3.
1. วิธีการสำหรับตรวจหาอานาไลท์ที่เป็นแอนติเจน หรือแฮปเทนในตัวอย่างของไหลโดย ปฏิกิริยาการแข่งขัน ซึ่งประกอบด้วยขั้นตอนของ: a) การผสมอนุภาคโลหะชนิดที่มีขนาดไม่สม่ำเสมอที่เคลือบด้วยแอนติ-อานาไลท์ แอนติบอดี, อานาไลท์,แอนติเจนหรือไมโครสเฟียร์โพลีเมอร์ชนิดที่มีขนาดสม่ำเสมอที่เคลือบด้วย แฮปเทน และตัวอย่างของไหลที่มีอานาไลท์แอนติเจน หรือแฮปเทนเพื่อทำเป็นอของผสม และปล่อย ของผสมดังกล่าวไว้เป็นระยะเวลาหนึ่ง ที่เพียงพอสำหรับการเกิดสารเชิงซ้อนทางอิมมูโนแบบการ แข่งขันในของผสมดังกล่าว โดยที่อย่างน้อยบางส่วนของไมโครสเฟียร์จะรวมอยู่ในสารเชิงซ้อนทาง อิมมูโนดังกล่าว b) การวัดแสงที่ถูกกระจายโดยไมโครสเฟียร์ดังกล่าวในของผสมดังกล่าวก่อน และหลัง การเกิดสารเชิงซ้อนทางอิมมูโนแบบการแข่งขันดังกล่าว โดยวิธีการใช้เครื่องวิเคราะห์อนุภาคไหล ด้วยแสง เพื่อให้ได้สัญญาณการกระจายแสงสำหรับไมโครสเฟียร์ดังกล่าว c) การหาขนาดของฮิสโตแกรมกระจายความสูงของพัลส์สำหรับสัญญาณการกระจาย แสงก่อนและหลังการเกิดสารเชิงซ้อนทางอิมมูโนแบบการแข่งขันดังกล่าว และ d) การหาความสัมพันธ์ของการเปลี่ยนแปลงขนาดของฮิสโตแกรมดังกล่าวกับความเข้ม ข้นของอานาไลท์ดังกล่าวในตัวอย่างของไหลดังกล่าว 31. Methods for the detection of antigenic analites Or hapten in the example fluid by Competition reaction This consists of the steps of: a) mixing of irregularly sized metal particles coated with antimicrobial antibodies, analites, antigens or microspheres of polymers. Uniform size coated with haphthane and sample fluid with analite antigen Or hapten to form a mixture and leave the mixture for a period of time. Sufficient for the formation of immunoglobulin complexes. Compete in the above mix Where at least some of the microspheres are included in the complex B) The measurement of light diffused by the said microspheres in the mixture before and after the formation of the competitive immunoglobulin complex. By means of an optical particle-flow analyzer to obtain a diffuse signal for the microsphere, c) the magnitude of the pulse-height scatter histogram for the scatter signal. Light before and after the formation of the competitive immunoglobulin complex; and d) the correlation of the magnitude change of the histogram with the intensity. The concentration of the analite in the aforementioned fluid sample 3
2. วิธีการตรวจหาอานาไลท์แอนติบอดีในตัวอย่างของไหลโดยปฏิกิริยากรแข่ง ขันประกอบด้วยขั้นตอนของ : a) การผสมอนุโลหะชนิดที่มีขนาดไม่สม่ำเสมอที่เคลือบด้วยแอนติเจน หรือแฮปเทน ซึ่ง ยึด เหนี่ยวกับอานาไลท์แอนติบอดี ตัวอย่างของไหลที่มีอานาไลท์แอนติบอดี และไมโครสเฟียร์โพลี เมอร์ชนิดที่มีขนาดสม่ำเสมอที่เคลือบด้วยโมเลกุลยึดเหนี่ยวแอนติเจน หรือแฮปเทนดังกล่าว เพื่อทำ เป็นของผสมและปล่อยของผสมที่ถูกทำปฏิกิริยาดังกล่าวไว้เป็นระยะเวลาหนึ่งที่เพียงพอสำหรับการ เกิดสารเชิงซ้อนทางอิมมูโนแบบการแข่งขัน b) การวัดแสงที่ถูกกระจายโดยไมโครสเฟียร์ดังกล่าวในของผสมที่ถูกทำปฏิกิริยาก่อน และหลังการเกิดสารเชิงซ้อนทางอิมมูโนแบบการแข่งขันดังกล่าว โดยวิธีการใช้เครื่องวิเคราะห์ อนุภาคไหลด้วยแสง เพื่อให้ได้สัญญาณการกระจายแสงสำหรับไมโครสเฟียร์ดังกล่าว c) การหาขนาดของฮีสโตแกรมการกระจายความสูงของพัลส์การกระจายแสง สำหรับ สัญญาณการกระจายแสงดังกล่าวก่อนและหลังการเกิดสารเชิงซ้อนทางอิมมูในแบบการแข่งขัน และ d) การหาความสัมพันธ์การเปลี่ยนแปลงขนาดของฮิสโตแกรมดังกล่าวกับความเข้มข้น ของอานาไลท์ดังกล่าวในตัวอย่างของไหลดังกล่าว 32. Method for the detection of analite antibody in fluid sample by racing reaction. The bowl consists of the steps of: a) mixing of irregular sized submetals coated with antigens or haphthane induced with analite antibodies. Samples of fluids containing antibodies And poly spheres Uniform sized polymers coated with antigen-binding molecules. Or the said haptane to form a mixture and leave the reacted mixture for a period sufficient to A competitive immunoglobulin complex was formed. B) The metering of the light distributed by such microspheres in the pre-reacted mixture. And after the formation of such competitive immunoglobulin complexes By the way of using the analyzer Particles flowing with light C) determination of the magnitude of the distribution histogram, the height of the diffusion pulse for such diffuse signal before and after the occurrence of the substance. And d) the correlation of the magnitude change of the histogram with the concentration. Of the analite in the example of the aforementioned fluid 3
3. วิธีการสำหรับตรวจหาอานาไลท์ในตัวอย่างของไหลที่ประกอบด้วยปฏิกิริยายับยั้ง ซึ่ง ประกอบด้วยขั้นตอนของ: a) การจัดให้มีไมโครสเฟียร์โพลีเมอร์ชนิดที่ขนาดสม่ำเสมอ ที่เคลือบด้วยโมเลกุลยึด เหนี่ยวชนิดที่หนึ่งที่เชื่อมต่อ (คอนจูเกต) อยู่กับอานาไลท์เพื่อให้เกิดเป็นสารเข้าทำปฏิกิริยาชนิดที่ หนึ่ง b) การจัดให้มีอนุภาคโลหะชนิดที่มีขนาดไม่สม่ำเสมอที่เคลือบด้วยโมเลกุลยึดเหนี่ยว ชนิดที่สองที่ยึดเหนี่ยวอานาไลท์เพื่อให้เกิดเป็นสารเข้าทำปฏิกิริยาชนิดที่สอง c) การรวมตัวอย่างของไหลที่มีอานาไลท์เข้ากับสารเข้าทำปฏิกิริยาชนิดที่สองเพื่อให้เกิด เป็นของผสมชนิดที่หนึ่ง และทำการบ่มของผสมชนิดที่หนึ่งดังกล่าวเป็นระยะเวลาหนึ่งที่เพียงพอ สำหรับการเกิดสารเชิงซ้อนทางอิมมูโนชนิดที่หนึ่งที่รวมอยู่กับอนุภาคโลหะดังกล่าว และปล่อย อนุภาคโลหะที่ไม่ถูกยึดเหนี่ยวไว้บางส่วน ในลักษณะที่ปริมาณของอนุภาคโลหะที่ไม่ถูกยึดเหนี่ยว ในของผสมชนิดที่หนึ่งดังกล่าว จะมีความสัมพันธ์ผกผันกับความเข้มข้นของอานาไลท์ในตัวอย่าง ดังกล่าว d) การรวมของผสมชนิดที่หนึ่งดังกล่าวเข้ากับสารเข้าทำปฏิกิริยาชนิดที่หนึ่งเพื่อให้ได้ ของผสมชนิดที่สอง และทำการบ่มของผสมชนิดที่สองดังกล่าว เพื่อให้ได้สารเชิงซ้อนทางอิมมูโน ชนิดที่สองระหว่างไมโครสเฟียร์ดังกล่าวกับอนุภาคโลหะที่ไม่ถูกยึดเหนี่ยวดังกล่าว e) การวัดแสงที่ถูกกระจายโดยไมโครสเฟียร์ในของผสมชนิดที่สองโดยวิธีการใช้เครื่อง วิเคราะห์อนุภาคไหลด้วยแสง เพื่อจัดให้มีสัญญาณการกระจายแสงสำหรับไมโครสเฟียร์ดังกล่าว และ f) การวัดขนาดของฮิสโตแกรมการกระจายความสูงของพัลส์ ของสัญญาณการกระจาย แสงดังกล่าว g) การเปรียบเทียบขนาดดังกล่าวในข้อf) กับขนาดชนิดเดียวกันสำหรับของผสมการ ปฏิกิริยาที่เป็นตัวควบคุมที่ประกอบด้วยไมโคร สเฟียร์โพลีเมอร์ชนิดที่มีขนาดสม่ำเสมอที่ถูกเคลือบ ในขณะที่ไม่มีอานาไลท์ หรืออนุภาคโลหะ เพื่อหาการเปลี่ยนแปลงทางสถิติในขนาดของฮิสโต แกรมในข้อ f)ดังกล่าวและ h) การหาความสัมพันธ์ของการเปลี่ยนแปลงขนาดของฮิสโตแกรมดังกล่าวกับความเข้ม ข้นของอานาไลท์ดังกล่าวในตัวอย่างของไหลดังกล่าว 33. A method for the detection of analites in a sample of an inhibitory fluid consisting of the steps of: a) the arrangement of uniform sized microspheres of polymers. Coated with fastening molecules The first type of inductance is connected (conjugate) with the analite to form the first reagent; b) the arrangement of irregular sized metallic particles coated with bonding molecules. The second type binds an analite to form a second reagent. C) Combining an analite fluid sample with a second reagent to produce a second reagent. Is the first combination And incubation of the first mix for a sufficient time For the formation of a type I immunoglobulin complex that is combined with such metallic particles and partially emitted non-binding metal particles. In such a way that the amount of metal particles that are not bonded In one of the above ingredients D) Combining the first mix with the first reagent to obtain Second mix And incubation of the second mixture To obtain immunoglobulin complexes E) The measurement of the light diffused by the microspheres in the second mixture by means of an apparatus method, a second type of microspheres between the microspheres and the non-binding metal particles. Analysis of particles flowing with light To provide a diffuse signal for such microsphere and f) the magnitude of the pulse height distribution histogram. G) Comparison of the magnitude in point f) with the same type for the distribution mix. Controlled reactions that contain micro Uniform sized spherical polymers that are coated. While there is no analite Or metal particles To find the statistical change in the magnitude of the histogram in f) and h), the correlation of the change in the magnitude of the histogram with the intensity. The concentration of the analite in the aforementioned fluid sample 3
4. วิธีการตามข้อถือสิทธิที่ 33 ที่ซึ่งอานาไลท์ดังกล่าว คือ แฮปเทน หรือแอนติเจน และ โมเลกุลยึดเหนี่ยวชนิดที่สองดังกล่าว คือ แอนติ-แฮปเทน หรือแอนติ-แอนติเจนบอดี 34. Method according to claim 33, where such analite is haptane or antigens and second type of binding molecules is antihaphthanes or antigens bodies. 3
5. วิธีการตามข้อถือสิทธิที่ 33 ที่ซึ่งอานาไลท์ดังกล่าวคือ แอนติบอดี และโมเลกุล ยึดเหนี่ยวชนิดที่สองดังกล่าวจะยึดเหนี่ยวแอนติบอดีดังกล่าว 35. Method according to claim 33, where the analite is an antibody, and a second type of binding molecule binds the antibody 3.
6. วิธีการตามข้อถือสิทธิที่ 25-35 ข้อใดข้อหนึ่ง ที่ซึ่งขนาดของฮิสโตแกรมดังกล่าว คือ ความกว้างของพีคที่ทำให้ปกติของการแสดงด้วยกราฟของฮีสโตแกรมดังกล่าว6. Procedures under Claim 25-35, any one Where the magnitude of the histogram is the amplitude of the normalized peak of the graph of that histogram.